TW202309024A - 吡啶并[3,2-d]嘧啶化合物、包含其的組成物以及其用途 - Google Patents
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Abstract
化合物、組成物及其在治療增殖性疾病或病狀中之用途，諸如該增殖性疾病或病症與RAF基因突變及/或RAS基因突變相關。所揭露之化合物具有式I或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，其中R1、R2、R3、X1、X2、X3及X4如下文所定義：
Description
相關申請案
本申請案根據適用法律主張2021年4月19日申請之美國臨時申請案第63/201,219號之優先權，該申請案之揭露內容出於所有目的以全文引用之方式併入本文中。
本揭示案大體上係關於吡啶并[3,2-d]嘧啶化合物、包含其之醫藥組成物及其在治療及預防表徵為RAS-ERK路徑失調之疾病(例如癌症、RAS病)中的用途。
RAS-RAF-MEK-ERK(RAS：大鼠肉瘤；RAF：急速加速性纖維肉瘤；MEK：促分裂原活化蛋白激酶；ERK：胞外信號調節激酶)信號傳遞路徑(下文稱為RAS-ERK路徑)在將由生長因子受體產生之增殖信號自質膜傳送至細胞核中起至關重要的作用。由於受體酪胺酸激酶(receptor tyrosine kinase；RTK)(例如
ERBB1、ERBB2、FLT3、RET、KIT)之活化、RAS調節因子(SOS1及NF1)之活化或失活，以及RAS基因(HRAS、KRAS及NRAS；總計30%癌症)及BRAF基因(8%癌症)之持續性活化突變，該路徑在大部分癌症中失調。KRAS突變之盛行率在胰臟癌(>90%)、結腸直腸癌(50%)及肺癌(30%)中尤其高。就其而言，在惡性黑色素瘤(70%)、甲狀腺癌(40%)及結腸直腸癌(10%)中發現BRAF突變之頻率極高(突變頻率基於2021年11月24日發行的第95版Catalogue Of Somatic Mutations In Cancer(COSMIC；Wellcome Trust Sanger研究所))。
RAS蛋白為小型GTP酶，其可將胞外生長信號傳遞至效應子以控制如細胞分化、增殖及存活之生命過程(Nat.Rev.Cancer 2003,3,459)。RAS之生理活化發生在PTK刺激後之質膜處，其導致GTP負載GTP酶且因此該RAS活化。活化的RAS相互作用且活化一系列效應分子，其中在癌症發展之情況下，RAF激酶為最關鍵的RAS相互作用物(Nature Rev.Drug Discov.2014,13,828)。RAS同種型中之甘胺酸12、甘胺酸13或麩醯胺酸61之致癌突變導致人類癌症中之異常且持續的信號傳遞(Nat.Rev.Cancer 2003,3,459)(2021年11月24日發行的第95版COSMIC)。
在RAS下游，哺乳動物細胞表現三種RAF同種同源物(ARAF、BRAF及CRAF)，該等同種同源物共享保
守C端激酶域(kinase domain；KD)(Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2015,16,281)及包含RAS結合域(RBD)之N端調節域(NTR)。在未刺激的細胞中，RAF蛋白作為單體在細胞質中螯合。GTP結合活化之RAS與RBD之結合誘導RAF激酶之膜錨定(Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2015,16,281)。同時，RAF蛋白經歷激酶域側對側二聚化及催化活化(Nature 2009,461,542)。活化的RAF蛋白經由磷酸化級聯將信號自RAF傳遞至MEK且隨後自MEK傳遞至ERK，導致ERK對一系列受質進行磷酸化，從而引發細胞特異性反應(Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2020年10月；21(10),607)。
迄今為止，活化RAF同種型突變主要受限於BRAF基因，儘管在ARAF及CRAF中觀測到罕見變異體，強調了此同種型之功能重要性(2021年11月24日發行的第95版COSMIC)。BRAF中之最常見癌症突變，即位置600處之纈胺酸取代麩胺酸(稱為BRAFV600E)，藉由穩定其活性形式來增強BRAF活性(Cell 2004,116,855)。除V600E對偶基因以外，在其他殘基(例如G466V、D594G等)處發生一系列突變，其經由多種機制導致RAF信號傳遞增加(Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2015,16,281)。此等突變已視其對RAS活性及RAF二聚化之依賴程度分為三個主要類別(1至3)(Nature 2017年8月10日，548(7666),234-238)。野生型BRAF及CRAF在藉由刺激ERK信號傳遞來介導RAS驅動之腫瘤形成中的關鍵
作用已得到廣泛驗證(Cancer Cell 2011,19,652；Cancer Discov.2012,2,685；Nat.Commun.2017,8,15262)。因此，腫瘤細胞依賴於經由RAS及RAF活化之RAS-ERK路徑的升高及持續的信號傳遞，從而為在癌症中靶向RAF家族激酶之概念提供強有力的支持。
為滿足現有的醫療需求，在過去十年中，已見證開發了一系列廣泛的ATP競爭性RAF抑制劑(Nat.Rev.Cancer 2017,17,676)。努力主要集中在最常見的RAS非依賴性BRAF突變(BRAFV600E)上，導致開發及FDA批准之磺醯胺衍生物，諸如威羅菲尼(vemurafenib)及達拉非尼(dabrafenib)。此等RAF抑制劑中之一些已針對攜帶反復的BRAFV600E對偶基因之轉移性黑色素瘤展示出令人印象深刻的療效且已經批准用於治療此患者群體(N.Engl.J.Med.2011,364,2507；Lancet 2012,380,358)。針對BRAFV600E依賴性黑色素瘤之臨床反應係由此特定二聚非依賴性BRAF突變蛋白之單體形式的強效ATP競爭性抑制引起的(Cancer Cell 2015,28,370)。不幸地，對此等藥劑之獲得性耐藥性總是會發生，該耐藥性主要由RAS-ERK路徑之重新活化，部分係藉由刺激RAF二聚化之機制引起。此等包括RTK信號傳遞上調、RAS突變及BRAFV600E擴增或截短(Sci.Signal.2010,3,ra84；Nature 2010,468,973；Nature 2011,480,387；Nature Commun.2012,3,724)。
同時，展現RAS活性(由於活化RAS突變或升高的RTK信號傳遞，但在其他方面為BRAF之野生型)之腫瘤展示出對BRAFV600E抑制劑的主要耐藥性(Nature 2010,464,431)。相反地，發現RAF抑制劑在RAS活性升高之條件下誘導ERK信號傳遞，且因此增強細胞增殖(Nature 2010,464,431)。稱為反常效應之此違反直覺現象亦在依賴生理RAS活性的正常組織中觀測到且為黑色素瘤患者使用RAF抑制劑所見之不良效應中之一些(諸如新的續發腫瘤(例如鱗狀上皮細胞瘤及角質棘皮瘤)之發展)的基礎(Nat.Rev.Cancer 2014,14,455)。因此，BRAFV600E對RAS驅動之癌症無效且甚至禁忌。潛在機制由化合物在活性RAS存在下促進RAF激酶域二聚化之能力產生(Nature 2010,464,431)。此事件不限於BRAF，但亦涉及其他RAF家族成員且由化合物結合模式及親和力決定(Nat.Chem.Biol.2013,9,428)。
近來執行兩種策略來規避第一代RAF抑制劑在RAS突變癌症中之局限性。第一策略依賴於觀測到反常ERK活化為一種劑量依賴性現象，亦即誘導發生於亞飽和抑制劑濃度下，但當化合物佔據RAF二聚體之兩個單元體時，該路徑在飽和濃度下經抑制。因此，此第一策略專注於開發對所有RAF同種同源物具有更高結合親和力的分子，以便在較低藥物濃度下使RAF蛋白飽和，從而減少反常路徑誘導(Bioorg.Med.Chem.Lett.2012,22,6237；Cancer Res.2013,73,7043；J. Med.Chem.2015,58,4165；Cancer Cell 2017,31,466；J Med Chem.2020,63,2013；Clin Cancer Res.2021,27,2061；Nature 2021,594,418)。然而，此等化合物保留強大的RAF二聚體誘導能力且因此反常地刺激RAS-ERK信號傳遞，儘管其幅度低於前幾代RAF抑制劑。儘管此類化合物展示改良的特性，但進來研究展示該等化合物中之大部分不存在ARAF同種型，其導致反常路徑活化及原發性耐藥性，以及活體外及臨床背景下出現之獲得性耐藥性(Clin Cancer Res.2021,27,2061；Nature 2021,594,418)。第二策略在於設計在非活化狀態下構形上偏向BRAF激酶域且因此並不反常誘導ERK信號傳遞之化合物。此產生了「反常破壞子」(Paradox Breaker；PB)分子PLX8394，即PLX4032/威羅菲尼之衍生物(Nature 2015,526,583)。此等分子保留針對BRAFV600E之高效力且因此應證明適用於治療BRAFV600E-依賴性黑色素瘤。然而，儘管PLX8394並不在已測試的RAS突變細胞株中誘導ERK信號傳遞，但其仍然無效且對RAS突變腫瘤不適用。
仍然需要有效且持續阻斷攜帶多種RAS及RAF基因型之人類腫瘤細胞中之RAS-ERK信號傳遞及細胞內增殖的抑制劑。重要的是，開發在多種RAS突變腫瘤細胞株中亦不存在反常路徑誘導的此類抑制劑為高度理想的。
根據一個態樣，本技術係關於一種I化合物：
其中：
R1選自經取代或未經取代之OR3、SR3、NH2、NHR3、N(R3)2、C3-8環烷基、C4-8雜環烷基、C6-10芳基及C5-10雜芳基，例如選自經取代或未經取代之C6-10芳基及C5-10雜芳基；
R2選自經取代之C6芳基或C5-10雜芳基、經取代或未經取代之C4-8雜環烷基及N(R3)2；
R3在每次出現時獨立地選自經取代或未經取代之C1-8烷基、C3-8環烷基、C4-8雜環烷基、C6-10芳基及C5-10雜芳基；
X1為鹵基或拉電子基團；
X2選自H、鹵基及拉電子基團；
X3及X4各自選自H、鹵基、拉電子基團、C1-3烷基、C3-4環烷基及OC1-3烷基；
或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。
式I化合物亦根據貫穿本文檔所描述之實施例單獨或組合，及實例中之任一者來定義。
根據另一態樣，本技術係關於一種用於如前述實施例中之任一者所定義之用途的醫藥組成物，該組成物包含如本文所定義之化合物以及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
在另一態樣中，本技術係關於如本文所定義之化合物用於治療選自以下之疾病或病症的用途：增殖性疾病或病症、RAS-ERK傳訊級聯失調所致的發育異常(RAS病)，或發炎性疾病或免疫系統失調。
本技術亦進一步係關於用於治療選自以下之疾病或病症的方法：增殖性疾病或病症、RAS-ERK傳訊級聯失調所致的發育異常(RAS病)，或發炎性疾病或免疫系統失調，該方法包括向有需要之受試者投與如本文所定義之化合物。亦考慮用於抑制異常細胞增殖之方法，該方法包括使該等細胞與如本文所定義之化合物接觸。
在上述用途及方法之一個實施例中，疾病或病症選自贅瘤及發育異常，例如與RAF基因突變相關之疾病或病症(例如ARAF、BRAF或CRAF)、與RAS基因突變相關之疾病或病症(例如KRAS)或與RAF基因突變及RAS基因突變兩者相關之疾病或病症。在一個實施例中，疾病或病症與受體酪胺酸激酶突變或擴增(例如EGFR、HER2)或該受體下游RAS之調節因子的突變(例如SOS1功能獲得、NF1功能喪失)相關。
舉例而言，該疾病或病症為贅瘤，諸如選自黑色素瘤、甲狀腺癌(例如乳突甲狀腺癌)、結腸直腸癌、卵巢癌、乳癌、子宮內膜癌、肝癌、肉瘤、胃癌、胰臟癌、巴瑞特氏腺癌(Barret's adenocarcinoma)、神經膠質瘤(例如室管膜瘤)、肺癌(例如非小細胞肺癌)、頭頸癌、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、非何杰金氏淋巴癌(non-Hodgkin's lymphoma)及毛細胞白血病彼等贅瘤。舉例而言，贅瘤選自結腸癌或結腸直腸癌、肺癌、胰臟癌、甲狀腺癌、乳癌及黑色素瘤。舉例而言，本用途及方法中之任一者包括抑制RAS-ERK信號傳遞路徑而基本上不誘導反常路徑。
本化合物、組成物、方法及用途之額外目的及特徵在閱讀以下例示性實施例及實例章節之非限制性描述後將變得更顯而易見，該等例示性實施例及實例不應解釋為限制本發明之範疇。
第1圖示出了如本文所描述之並不誘導RAS突變HCT116細胞(實例99、113、128、139、140)中之pERK信號傳遞之反常誘導(YMIN>-20%)的化合物及在同一細胞株中引起該路徑之強烈誘導(YMIN~-600%)之化合物(PLX4720；CAS# 918505-84-7)的代表性IC50抑制劑量反應曲線。
第2圖示出了RAS突變HCT-116細胞之免疫墨點分析，該等細胞經並不誘導pERK或pMEK信號傳遞之反常誘導之代表性化合物(實例99；上圖)處理，且相比之下，經誘導同一細胞株中之路徑的化合物(PLX4720；下圖)處理。
第3圖(A及B)示出了與媒劑(Veh.)相比，攜帶代表一系列具有各種突變背景(A375、A101D、A2058、RKO、HT29 SK-MEL 30、Calu-6、HepG2、Lovo、NCI-H2122、NCIH1666及NCIH1755)的癌細胞株之異種移植腫瘤之小鼠中的pERK生物標記的藥效學分析結果。小鼠以150mg/kg(mpk)經口投與實例99。在口服投與實例99之懸浮液4h之後，使用pERK及總ERK AlphaLISA® SureFire® UltraTM套組測定ERK路徑抑制。
第4圖示出了在A375(A)及HCT116(B)中進行的腫瘤生長抑制(tumor growth inhibition；TGI)實驗的結果。各數據點代表在處理開始之前及之後的給定天腫瘤大小之平均值的平均標準誤差(SEM)；處理期對應於標有「Rx」之箭頭。±小鼠每日一次或兩次(QD或BID)經口投與實例99之懸浮液(劑量以mg/kg或mpk表示)或空白調配物(媒劑)。用電子測微計每週三次量測腫瘤。
本文所用之所有技術及科學術語以及表述均具有與熟悉本技術所屬領域的技術者通常所理解之定義相同的定義。儘管如此，下文提供了一些術語及表述之定義。若以引用之方式併入本文中之公開、專利及專利申請案中之術語之定義與本說明書中所闡述之定義相反，則以本發明中之定義為準。本文所用之章節標題僅用於組織目的且不應解釋為限制所揭露之主題。
i.定義
本文所描述之化學結構係根據習用標準繪製。此外，當所繪製之原子(諸如碳原子)似乎包括不完全價態時，則假定該價態由一或多個氫原子滿足，即使此等氫原子未必明確繪出。氫原子應推斷為該化合物之一部分。
本文所用之術語僅出於描述特定實施例之目的且不欲具有限制性。應注意，除非上下文另外清楚指示，否則單數形式「一(a/an)」及「該」亦包括複數形式。因此，例如，對含有「一化合物」之組成物的提及亦涵蓋兩種或更多種化合物之混合物。亦應注意，除非上下文另外清楚指示，否則術語「或」通常在其包括「及/或」之意義上加以使用。此外，在術語「包括(including/includes)」、「具有(having/has/with)」或其變化形式用於實施方式及/或申請專利範圍中之情況下，此類術語旨在以與術語「包含(comprising)」類似之方式為包括性的。
術語「約」或「大致」意謂在如一般熟悉此項技術者所測定之關於特定值之可接受的誤差範圍內，該誤差範圍將部分地取決於如何量測或測定該值，亦即量測系統之限制。舉例而言，根據此項技術中之實踐，「約」可意謂1之內的標準偏差或大於1之標準偏差。替代地，「約」可意謂給定值之至多20%、較佳至多10%、更佳至多5%且再更佳至多1%之範圍。替代地，尤其關於生物系統或過程，該術語可意謂在一個值之一數量級內，較佳在5倍內且更佳在2倍內。在本申請案及申請專利範圍中描述特定值之情況下，除非另有規定，否則應假定術語「約」意謂處於該特定值之可接受誤差範圍內。
如本文所用，術語「化合物」、「本文所描述之化合物」、「本申請案之化合物」、「吡啶并[3,2-d]嘧啶化合物」、「吡啶并嘧啶化合物」及等效表述係指本申請案中所描述之化合物，例如結構式I所涵蓋的視情況參考適用實施例中之任一者之彼等化合物且亦包括例示性化合物，諸如實例1至691之化合物，以及其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、酯及前藥(若適用)。當兩性離子形式係可能的，化合物可出於實際目的繪製為其中性形式，但該化合物應理解為包括其兩性離子形式。本文中之實施例可亦排除一或多種化合物。化合物可藉由其化學結構或其化學名稱來鑑別。在化學結構及化學名稱發生衝突之情況下，則以化學結構為準。
除非另外陳述，否則本文所述之結構亦意謂包括該結構之所有異構(例如鏡像異構、非鏡像異構及幾何(或構形))形式(若適用)；例如各不對稱中之R及S組態。因此，本發明化合物之單一立體化學異構物以及鏡像異構、非鏡像異構及幾何(或構形)混合物在本說明書之範疇內。除非另外指出，否則治療化合物亦涵蓋所說明之化合物之所有可能的互變異構形式(若存在)。該術語亦包括同位素標誌化合物，其中一或多個原子之原子質量不同於自然界中最豐富存在之原子質量。可併入本發明化合物中之同位素之實例包括但不限於：2H(D)、3H(T)、11C、13C、14C、15N、18O、17O、硫之同位素中之任一者等。該化合物可亦以非溶劑化形式以及溶劑化形式，包括水合形式存在。化合物可以多種結晶或非晶形形式存在。一般而言，所有實體形式關於本文所涵蓋之用途皆等效且意欲處於本發明之範疇內。
當一特定對映異構物較佳時，在一些實施例中，其可在基本上不含相應對映異構物下提供，且亦可為經對映異構物增濃。「經對映異構物增濃」意謂化合物由顯著較大比例之一種對映異構物構成。在某些實施例中，化合物由至少約90重量%之較佳對映異構物構成。在其他實施例中，化合物由至少約95重量%、98重量%或99重量%之較佳對映異構物構成。較佳對映異構物可藉由熟習此項技術者已知之任何方法(包括掌性載體上之高壓液相層析(high-pressure liquid chromatography；HPLC)
及形成掌性鹽並使其結晶)自外消旋混合物分離，或藉由不對稱合成製備。
表述「醫藥學上可接受之鹽」係指在合理的醫學診斷之範疇內，適用於與人類及低等動物之組織接觸而無不當毒性、刺激、過敏反應及其類似反應，且與合理的效益/風險比率相稱之本發明之化合物的彼等鹽。醫藥學上可接受之鹽為此項技術中熟知的。舉例而言，S.M.Berge,等人在J.Pharmaceutical Sciences,66：1-19(1977)中詳細描述了醫藥學上可接受之鹽。該等鹽可在本說明書之化合物之最終分離及純化期間原位製備，或藉由使化合物之遊離鹼官能基與適合的有機或無機酸(酸加成鹽)反應或藉由使化合物之酸性官能基與適合的有機或無機鹼(鹼加成鹽)反應來單獨製備。
術語「溶劑合物」係指一種本發明化合物與一或多種溶劑分子，包括水分子及非水性溶劑分子之物理締合。此物理締合可包括氫鍵結。在某些情況下，溶劑合物將能夠分離，例如當一或多種溶劑分子併人結晶固體之晶格中時。術語「溶劑合物」涵蓋溶液相溶劑合物及可分離溶劑合物兩者。例示性溶劑合物包括但不限於：水合物、半水合物、乙醇化物、半乙醇化物、正丙醇化物、異丙醇化物、1-丁醇化物、2-丁醇化物及其他生理學上可接受之溶劑的溶劑合物，諸如International Conference on Harmonization(ICH),Guide for Industry,Q3C Impurities：Residual Solvents(1997)中所描述之
3類溶劑。因此，如本文所描述之化合物亦包括其溶劑合物中之每一者及其混合物。
如本文所用，表述「醫藥學上可接受之酯」係指藉由本發明之方法形成之化合物的酯，其可活體內水解且包括在人體內容易地分解以留下母化合物或其鹽的彼等酯。適合的酯基包括例如衍生自醫藥學上可接受之脂族羧酸的彼等酯基，該等脂族羧酸尤其為鏈烷酸、鏈烯酸、環鏈烷酸及鏈烷二酸，其中各烷基或烯基部分宜具有不超過6個碳原子。特定酯之實例包括但不限於具有羥基之甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯及乙基丁二酸酯，以及酸性基團之烷基酯。其他酯基包括磺酸酯或硫酸酯。
如本文所用，表述「醫藥學上可接受之前藥」係指藉由本發明之方法形成之化合物的彼等前藥，其在合理的醫學診斷範疇內，適用於與人類及低等動物之組織接觸而無不當毒性、刺激、過敏反應及其類似反應，與合理的效益/風險比率相稱且對其預期用途有效。如本文所用之「前藥」意謂可藉由代謝方式(例如藉由水解)活體內轉化以提供由本發明之化學式描述之任何化合物的化合物。
縮寫亦可用於本申請案之通篇中，除非另外指出，否則此類縮寫意欲具有本領域通常所理解之含義。此類縮寫之實例包括Me(甲基)、Et(乙基)、Pr(丙基)、i-Pr(異丙基)、Bu(丁基)、t-Bu(三級丁基)、i-Bu(異丁基)、s-Bu(二級丁基)、c-Bu(環丁基)、Ph(苯基)、Bn(苄基)、Bz(苯甲醯基)、CBz或Cbz或Z(碳酸苯甲
氧基)、Boc或BOC(三級丁氧基羰基)及Su或Suc(丁二醯亞胺)。為更加確定，特定縮寫之額外定義亦包括於實例章節之介紹中。
烴基取代基中之碳原子之數目可藉由前綴「Cx-Cy」或「Cx-y」指示，其中x為取代基中之碳原子之最小數目且y為最大數目。然而，當前綴「Cx-Cy」或「Cx-y」與根據定義併有一或多個雜原子之基團(例如雜環烷基、雜芳基等)相關時，則x及y分別定義為環中之原子的最小及最大數目，包括碳原子以及一或多個雜原子。
如本文所用，術語「烷基」係指通常含有1至20個碳原子之飽和直鏈或分支鏈烴基。舉例而言，「C1-C8烷基」含有一至八個碳原子。烷基之實例包括但不限於：甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、三級丁基、新戊基、正己基、庚基、辛基及類似烷基。
如本文所用，術語「烯基」指示含有一或多個雙鍵且通常含有2至20個碳原子之直鏈或分支鏈烴基。舉例而言，「C2-8烯基」含有二至八個碳原子。烯基包括但不限於例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基、庚烯基、辛烯基及類似烯基。
如本文所用，術語「烯基」指示含有一或多個三鍵且通常含有2至20個碳原子之直鏈或分支鏈烴基。舉例而言，「C2-8炔基」含有二至八個碳原子。代表性炔基包括但不限於例如乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、庚炔基、辛炔基及類似炔基。
術語「環烷基」、「脂環族」、「碳環」、「碳環族」及等效表述係指在單環或多環系統中包含飽和或部分不飽和(非芳族)碳環之具有三至十五個環成員之基團，該多環系統包括螺環接(共享一個原子)、稠合(共享至少一個鍵)或橋聯(共享兩個或更多個鍵)碳環系統。環烷基之實例包括但不限於：環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯-1-基、環戊烯-2-基、環戊烯-3-基、環己基、環己烯-1-基、環己烯-2-基、環己烯-3-基、環庚基、雙環[4,3,0]壬基、降莰基及類似環烷基。術語環烷基包括未經取代之環烷基及經取代之環烷基兩者。舉例而言，術語「C3-Cn環烷基」係指在環結構中具有3至所指示「n」個碳原子數之環烷基。除非碳原子數另外指明，否則如本文所用之「低碳數環烷基」在其環結構中具有至少3個且等於或少於8個碳原子。
如本文所用，術語「雜環」、「雜環烷基」、「雜環基」、「雜環基團」及「雜環之環」可互換使用且係指飽和或部分不飽和且除碳原子之外亦具有一或多個，較佳一至四個如上文所定義之雜原子的化學穩定的3至7員單環或7-10員雙環雜環部分。當關於雜環之環原子使用時，術語「氮」包括經取代之氮。舉例而言，在具有1-3個選自氧、硫或氮之雜原子之飽和或部分不飽和環中，氮可為N(如在3,4-二氫-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯啶基中)或NR(如在N取代之吡咯啶基中)。雜環可在任何雜原子或碳原子處附接於其側基以得到化學穩定結構且環原子中之任一者可視情況經取代。雜環烷基之實例包括但不限於：1,3-二
氧雜環己基、吡咯啶基、吡咯酮基、吡唑啉基、吡唑啶基、咪唑啉基、咪唑啶基、哌啶基、哌嗪基、噁唑啶基、異噁唑啶基、嗎啉基、四氫噻唑基、異四氫噻唑基、四氫呋喃基、四氫哌喃基、四氫噻喃基、四氫聯噻吩基、四氫噻吩基、硫代嗎啉基、噻噁基、吖呾基、氧雜環丁基、硫雜環丁基、高哌啶基、氧雜環丙基、硫雜環庚基、氧氮雜卓基、二吖呯基、硫氮雜卓基、1,2,3,6-四氫吡啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、2H-哌喃基、4H-哌喃基、二噁烷基、二噻吩基、二噻囒基、二氫哌喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、3-氮雜二環[3,1,0]己基、3-氮雜二環[4,1,0]庚基、喹嗪基、奎寧環基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基及類似雜環烷基。雜環基亦包括與一或多個芳基、雜芳基或環脂族環稠合之基團，諸如吲哚啉基、3H-吲哚基、苯并二氫哌喃基、苯并哌喃基、啡啶基、2-氮雜二環[2.2.1]庚基、八氫吲哚基或四氫喹啉基，其中基團或附接點係在雜環基環上。雜環基可為單環或雙環。術語「雜環基烷基」係指經雜環基取代之烷基，其中烷基及雜環基部分獨立地視情況經取代。術語「C3-n雜環烷基」係指在環結構中具有3至所指示「n」個原子數之雜環烷基，該原子包括碳原子及雜原子。
如本文所用，術語「部分不飽和的」係指在環原子之間包括至少一個雙鍵或三鍵，但不為芳族之環部分。術語「部分不飽和的」意欲涵蓋具有多個不飽和位點之環但不意欲包括如本文所定義之芳基或雜芳基部分。
單獨使用或作為如「芳烷基」、「芳烷氧基」、「芳氧基」或「芳氧基烷基」之較大部分之一部分使用的術語「芳基」係指在具有總計六至15個環成員之單環部分或雙環或三環稠合環系統中具有4n+2個共軛π(pi)電子之芳族基團，其中n為1至3之整數，其中系統中之至少一個環為芳族的且其中系統中之各環含有三至七個環成員。術語「芳基」可與術語「芳基環」互換使用。在本發明之某些實施例中，「芳基」係指可帶有一或多個取代基之芳環系統，其包括但不限於苯基、聯苯、萘基、薁基、蒽基及類似基團。術語「芳烷基」或「芳基烷基」係指附接至芳環之烷基殘基。芳烷基之實例包括但不限於苄基、苯乙基及類似基團。在如本文所用之術語「芳基」之範疇內亦包括芳環稠合於一或多個非芳環之基團，諸如二氫茚基、茚基、鄰苯二甲醯亞胺基、萘醯亞胺基(naphthimidyl)、茀基、啡啶基或四氫萘基及類似基團。舉例而言，術語「C6-n芳基」係指在環結構中具有6至所指示「n」個原子數之芳基。
單獨使用或作為例如「雜芳烷基」或「雜芳烷氧基」之較大部分之一部分使用的術語「雜芳基」係指具有4n+2個共軛π(pi)電子之芳族基團，其中n為1至3之整數(例如具有5至18個環原子，較佳5、6或9個環原子；在環陣列中共享6、10或14個π電子)；除碳原子之外，具有一至五個雜原子。術語「雜原子」包括但不限於氮、氧或硫，且包括氮或硫之任何氧化形式，及鹼性氮之任何四級銨化
形式。雜芳基可為單環，或兩個或更多個稠合環。如本文所用，術語「雜芳基」亦包括雜芳環稠合至一或多個芳基環、環脂族環或雜環之基團，其中基團或附接點係在雜芳環上。雜芳基之非限制性實例包括噻吩基、呋喃基(furan yl/furyl)、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、吡啶基、嗒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、異吲哚基、吲哚嗪基、苯并噻吩基(benzothienyl/benzothiophenyl)、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、吡咯并吡啶基(例如吡咯并[3,2-b]吡啶基或吡咯并[3,2-c]吡啶基)、吡唑并吡啶基(例如吡唑并[1,5-a]吡啶基)、呋喃吡啶基、嘌呤基、咪唑并吡嗪基(例如咪唑并[4,5-b]吡嗪基)、喹啉基(quinolyl/quinolinyl)、異喹啉基(isoquinolyl/isoquinolinyl)、喹啉酮、異喹啉酮、噌啉基、呔嗪基、喹唑啉基、喹噁啉基、4H-喹嗪基、萘啶基及喋啶基咔唑基、吖啶基、啡啶基、啡嗪基、啡噻嗪基、啡噁嗪基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基及吡啶并[2,3-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮。雜芳基可為單環或雙環。雜芳基包括視情況經取代之環。術語「雜芳烷基」係指經雜芳基取代之烷基，其中烷基及雜芳基部分獨立地視情況經取代。實例包括但不限於吡啶基甲基、嘧啶基乙基及類似基團。舉例而言，術語「C5-n雜芳基」係指在環結
構中具有5至所指示「n」個原子數之雜芳基，該等原子包括碳原子及雜原子。
如本文所描述，本發明化合物可含有「視情況經取代之」部分。一般而言，術語「經取代」無論前置有術語「視情況」或無前置，均意謂指定部分之一或多個氫經適合取代基置換。除非另外指示，否則「視情況經取代之」基團可在基團之各可取代位置具有適合的取代基，且當任何給定結構中之超過一個位置可經超過一個選自指定群之取代基取代時，在各位置處之取代基可相同或不同。在本發明下設想之取代基之組合較佳為使得形成化學穩定或化學可行化合物之組合。如本文所用，術語「化學穩定」係指化合物在經受允許其產生、偵測及在某些實施例中其回收、純化及用於本文揭露之一或多種目的之條件時不會實質上改變。
術語「鹵基」表示鹵素原子，亦即氟、氯、溴或碘原子，較佳為氟或氯。
術語「視情況經取代」係指藉由其上一個、兩個或三個或更多個氫原子經包括但不限於以下之取代基獨立置換而經取代或未經取代之基團：F、CI、Br、I、OH、CO2H、烷氧基、側氧基、硫代側氧基、NO2、CN、CF3、NH2、NH烷基、NH烯基、NH炔基、NH環烷基、NH芳基、NH雜芳基、NH雜環、二烷基胺基、二芳基胺基、二雜芳基胺基、O-烷基、O-烯基、O-炔基、O-環烷基、O-芳基、O-雜芳基、O-鹵烷基、O-雜環、C(O)烷基、C(O)
烯基、C(O)炔基、C(O)環烷基、C(O)芳基、C(O)雜芳基、C(O)雜環烷基、CO2烷基、CO2烯基、CO2炔基、CO2環烷基、CO2芳基、CO2雜芳基、CO2雜環烷基、OC(O)烷基、OC(O)烯基、OC(O)炔基、OC(O)環烷基、OC(O)芳基、OC(O)雜芳基、OC(O)雜環烷基、C(O)NH2、C(O)NH烷基、C(O)NH烯基、C(O)NH炔基、C(O)NH環烷基、C(O)NH芳基、C(O)NH雜芳基、C(O)NH雜環烷基、OCO2烷基、OCO2烯基、OCO2炔基、OCO2環烷基、OCO2芳基、OCO2雜芳基、OCO2雜環烷基、OC(O)NH2、OC(O)NH烷基、OC(O)NH烯基、OC(O)NH炔基、OC(O)NH環烷基、OC(O)NH芳基、OC(O)NH雜芳基、OC(O)NH雜環烷基、NHC(O)烷基、NHC(O)烯基、NHC(O)炔基、NHC(O)環烷基、NHC(O)芳基、NHC(O)雜芳基、NHC(O)雜環烷基、NHCO2烷基、NHCO2烯基、NHCO2炔基、NHCO2環烷基、NHCO2芳基、NHCO2雜芳基、NHCO2雜環烷基、NHC(O)NH2、NHC(O)NH烷基、NHC(O)NH烯基、NHC(O)NH烯基、NHC(O)NH環烷基、NHC(O)NH芳基、NHC(O)NH雜芳基、NHC(O)NH雜環烷基、NHC(S)NH2、NHC(S)NH烷基、NHC(S)NH烯基、NHC(S)NH炔基、NHC(S)NH環烷基、NHC(S)NH芳基、NHC(S)NH雜芳基、NHC(S)NH雜環烷基、NHC(NH)NH2、NHC(NH)NH烷基、NHC(NH)NH烯基、NHC(NH)NH烯基、NHC(NH)NH環烷基、NHC(NH)NH芳基、
NHC(NH)NH雜芳基、NHC(NH)NH雜環烷基、NHC(NH)烷基、NHC(NH)烯基、NHC(NH)烯基、NHC(NH)環烷基、NHC(NH)芳基、NHC(NH)雜芳基、NHC(NH)雜環烷基、C(NH)NH烷基、C(NH)NH烯基、C(NH)NH炔基、C(NH)NH環烷基、C(NH)NH芳基、C(NH)NH雜芳基、C(NH)NH雜環烷基、P(O)(烷基)2、P(O)(烯基)2、P(O)(炔基)2、P(O)(環烷基)2、P(O)(芳基)2、P(O)(雜芳基)2、P(O)(雜環烷基)2、P(O)(O烷基)2、P(O)(OH)2、P(O)(O烯基)2、P(O)(O炔基)2、P(O)(O環烷基)2、P(O)(O芳基)2、P(O)(O雜芳基)2、P(O)(O雜環烷基)2、S(O)烷基、S(O)烯基、S(O)炔基、S(O)環烷基、S(O)芳基、S(O)2烷基、S(O)2烯基、S(O)2炔基、S(O)2環烷基、S(O)2芳基、S(O)雜芳基、S(O)雜環烷基、SO2NH2、SO2NH烷基、SO2NH烯基、SO2NH炔基、SO2NH環烷基、SO2NH芳基、SO2NH雜芳基、SO2NH雜環烷基、NHSO2烷基、NHSO2烯基、NHSO2炔基、NHSO2環烷基、NHSO2芳基、NHSO2雜芳基、NHSO2雜環烷基、CH2NH2、CH2SO2CH3、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、環烷基、碳環、雜環、聚烷氧基烷基、聚烷氧基、甲氧基甲氧基、甲氧基乙氧基、SH、S-烷基、S-烯基、S-炔基、S-環烷基、S-芳基、S-雜芳基、S-雜環烷基或甲硫基甲基。
ii.化合物
本文中對變數之任何定義中之化學基團列表的敘述包括該變數作為任何單一基團或所列基團之組合之定義。本文對變數之實施例之敘述包括作為任何單一實施例或與任何其他實施例或其部分組合之實施例。本文對實施例之敘述包括作為任何單一實施例或與任何其他實施例或其部分組合之實施例。因此，若適用，以下實施例單獨呈現或組合呈現。
本發明化合物呈現吡啶并[3,2-d]嘧啶核結構，其上附接有所定義之取代基以實現產物之有利活性。如本文所定義之吡啶并嘧啶化合物之實例由通式I示出：
其中：
R1選自經取代或未經取代之OR3、SR3、NH2、NHR3、N(R3)2、C3-8環烷基、C4-8雜環烷基、C6-10芳基及C5-10雜芳基，例如選自經取代或未經取代之C6-10芳基及C5-10雜芳基；
R2選自經取代之C6芳基或C5-10雜芳基、經取代或未經取代之C4-8雜環烷基及N(R3)2；
R3在每次出現時獨立地選自經取代或未經取代之C1-8烷基、C3-8環烷基、C4-8雜環烷基、C6-10芳基及C5-10雜芳基，較佳R3為經取代或未經取代之C1-8烷基(例如C1-3烷基)；
X1為鹵基或拉電子基團；
X2選自H、鹵基及拉電子基團；
X3及X4各自選自H、鹵基、拉電子基團、C1-3烷基、C3-4環烷基及OC1-3烷基；
或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。
舉例而言，拉電子基團選自過鹵烷基(例如CF3或CCl3)、CN、NO2、磺酸酯、烷基磺醯基(例如SO2Me或SO2CF3)、烷基羰基(例如C(O)Me)、羧酸酯、烷氧基羰基(例如C(O)OMe)及胺基羰基(例如C(O)NH2)。在一個實施例中，X1為Cl且X2為F，或X1為F且X2為H，或X1及X2均為F。在另一實施例中，X3及X4各自為H。在又另一實施例中，X3為F且X4為H。
舉例而言，式I中之胺基芳基磺醯胺部分指定為L且較佳選自：
其中虛線(---)表示一鍵。
在一個實例中，R2為經取代之C6芳基或C5-10雜芳基，例如R2為經至少一個選自以下之基團取代之C6芳
基：F、Cl、Br、CN、NO2及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基。舉例而言，R2為具有下式之基團：
其中：
R4選自H、F、Cl、Br、CN及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基，例如R4選自H、F、Cl、Br、Me、Et、CN、CHF2及CF3；
R5選自H、F、Cl、CN及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基，例如R5選自H、F、Me、CF3、CN及Cl；
R6選自H、F、Cl、Br、NO2、NH2及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基，例如R6選自H、F、Cl、Br及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基，或R6選自H、F、Cl、Me、Et及OMe；
R7選自H、F、Cl及經取代或未經取代之C1-3烷基，例如R7選自H、Me、F及Cl；
R8選自H、F及經取代或未經取代之C1-3烷基，例如R8選自H、Me及F；
或R4及R5或R5及R6與其相鄰的碳原子一起形成經取代或未經取代之碳環或雜環，前提條件係雜環(R2)不為苯并噁唑啉酮；並且
(---)表示一鍵；
其中當R4為H或F時，則R5、R6、R7或R8中之至少一者不為H或F；以及
其中當R5為CN，則R4、R6、R7或R8中之至少一者不為H。
在一個實施例中，R8為H。在另一實施例中，R4選自F、Cl、Et及Me，R5、R7及R8各自為H，且R6選自H、Cl、Me及OMe。在另一實施例中，R4選自F、Cl及Me，R5選自F及Cl，且R6、R7及R8各自為H。
在另一實施例中，R4選自Cl、Br及Me，R5選自H、F、Cl或甲基，R6選自H、F、Cl、Me及OMe，且R7及R8各自為H。
在另一實施例中，R4選自Cl及經取代或未經取代之C1-3烷基(例如Me)，較佳地，R4為Cl或Me；R5選自H、F、Cl及經取代或未經取代之C1-3烷基(例如Me)，較佳地，R5為F、Cl或Me；R6選自H、F、Cl、經取代或未經取代之C1-3烷基(例如Me)及經取代或未經取代之OC1-3烷基(例如OCH3)，較佳地，R6為H或F，或R6為Cl或經取代或未經取代之C1-3烷基或經取代或未經取代之OC1-3烷基、或CH3或OCH3；且R7及R8各自為H。在又另一實施例中，R6為經取代之C1-3烷基。
在另一實例中，R2為經取代之C5-10雜芳基，諸如具有下式之基團：
其中：
X5選自NH、NC1-3烷基、NC3-4環烷基、O及S；
R9、R10、R11各自獨立地選自H、F、Cl、CN及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基、C(O)OC1-3烷基或OC1-3烷基，前提條件係R9及R11中之一者為H且另一者不為H；並且
(---)表示一鍵。
替代地，R2為具有下式之基團：
其中：
X5選自NH、NC1-3烷基、NC3-4環烷基、O及S；
R9選自F、Cl、CN及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基、C(O)OC1-3烷基或OC1-3烷基；
R10及R12各自獨立地選自H、F、Cl、CN及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基、C(O)OC1-3烷基或OC1-3烷基；並且
(---)表示一鍵。
在一較佳實施例中，R9及R10各自獨立地選自F、Cl、CN及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基、C(O)OC1-3烷基或OC1-3烷基，較佳為Cl及經取代或未經
取代之C1-3烷基，更佳地，R9及R10均為Cl。在另一實施例中，X5為O或S，較佳為S。
在另一實施例中，R2為經取代之C5-10雜芳基，諸如具有下式之基團：
其中：
X9、X10、X11、X12及X13獨立地選自N及C，其中X9、X10、X11、X12及X13中之至少一者且至多兩者為N；以及
R19、R20、R21、R22及R23選自H、F、Cl、Br、CN、NO2、NH2及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基，或當其所附接之X9、X10、X11、X12或X13為N時不存在；
其中X9及X13中之至少一者不為N；並且
其中當X9及X13中之一者為N時，則另一者不為N或CH。
在另一實例中，R2為C5-7雜環烷基。舉例而言，R2為具有下式之基團：
其中：
R13在每次出現時獨立地選自F、Cl及經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或C1-3烷氧基；
n為選自0至8之整數；或
n介於2與8之間，且兩個R13與其相鄰的碳原子一起形成C3-4環烷基
；並且
(---)表示一鍵。
在一個實施例中，R13處於3-位置。在另一實施例中，n為1或2，且R13選自F、Me、OMe及CH2OMe。舉例而言，R13為甲氧基且n為1。
在另一實施例中，R2為N(R3)2，例如其中R3選自經取代或未經取代之C1-8烷基或C3-8環烷基。
R2之非限制性實例如下：
其中(---)表示一鍵。
在一個實施例中，R2為選自以下之基團：
其中(---)表示一鍵。
在另一實施例中，R2為選自以下之基團：
其中(---)表示一鍵。
在另一實施例中，式I之化合物為式II之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物：
其中R1、R4、R5及R6各自獨立地如本文所定義，較佳地，R4選自Cl、Br及Me，R5選自H、F、Cl及甲基，且R6選自H、F、Cl、Me及Ome。
在又另一實施例中，式I之化合物為式III之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物：
其中R1、R9、R10、R12及X5各自獨立地如本文所定義。
在式I或II化合物之一個實施例中，R1為經取代或未經取代之C5-6雜芳基，或經取代或未經取代之C9雜芳基。在另一實施例中，R1為選自以下之經取代或未經取代的基團：噻吩基、咪唑基、吡唑基、三唑基、噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吡咯并吡啶基(例如吡咯并[3,2-b]吡啶基或吡咯并[3,2-c]吡啶基)、吡唑并吡啶基(例如吡唑并[1,5-a]吡啶基)、嘌呤基、咪唑并吡嗪基(例如咪唑并[4,5-b]吡嗪基)及喹啉基(quinolyl/quinolinyl)。
R1之實例包括選自以下之經取代或未經取代的基團：
其中(---)表示一鍵。
舉例而言，R1為選自以下之經取代或未經取代的基團：
其中(---)表示一鍵。
在一個實施例中，R1為上述基團中之一者，其進一步經至少一個選自以下之取代基取代：OH、鹵基、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、OC1-6烷基、C5-10雜芳基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C(O)R15、C(O)N(R14)2、SO2R15、SO2N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、N(R16)C(O)N(R14)2、N(R16)SO2N(R14)2、N(R14)2、P(O)(R15)2、CH2C(O)R15、CH2C(O)N(R14)2、CH2SO2R15、CH2SO2N(R14)2、CH2N(R16)C(O)R15、CH2N(R16)SO2R15、CH2N(R16)C(O)N(R14)2、CH2N(R16)SO2N(R14)2及CH2N(R14)2；
其中：
R14在每次出現時獨立地選自H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C6芳基及C5-10
雜芳基，或兩個R14與其相鄰的氮原子一起形成C4-10雜環烷基；
R15在每次出現時獨立地選自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6芳基及C5-6雜芳基；並且
R16在每次出現時獨立地選自H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6芳基及C5-6雜芳基；
其中包括於R1(包括在R14、R15及R16之定義中)中之該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基視情況經進一步取代。
在另一實施例中，R1為具有下式之基團：
其中：
R17選自H、OH、鹵基、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、OC1-6烷基、C5-10雜芳基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C(O)R15、C(O)N(R14)2、SO2R15、SO2N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、N(R16)C(O)N(R14)2、N(R16)SO2N(R14)2、N(R14)2、P(O)(R15)2、CH2C(O)R15、CH2C(O)N(R14)2、CH2SO2R15、CH2SO2N(R14)2、CH2N(R16)C(O)R15、CH2N(R16)SO2R15、CH2N(R16)C(O)N(R14)2、CH2N(R16)SO2N(R14)2及CH2N(R14)2；
X6為N或CH；並且
X7為N且R18不存在；或
X7為C且R18選自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、OC1-6烷基、C5-10雜芳基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C(O)R15、C(O)N(R14)2、SO2R15、SO2N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、N(R16)C(O)N(R14)2、N(R16)SO2N(R14)2、N(R14)2、P(O)(R15)2、CH2C(O)R15、CH2C(O)N(R14)2、CH2SO2R15、CH2SO2N(R14)2、CH2N(R16)C(O)R15、CH2N(R16)SO2R15、CH2N(R16)C(O)N(R14)2、CH2N(R16)SO2N(R14)2及CH2N(R14)2；
其中R14、R15及R16如上文所定義；
其中包括於R1(包括在R14、R15、R16、R17及R18之定義中)中之該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基或雜芳基視情況經進一步取代；以及
其中(---)表示一鍵。
在另一實施例中，R1為具有下式之基團：
其中：
X14選自C及N；
X15、X16、X17及X18獨立地選自O、N、S及CR17，其中R17如本文所定義；
其中X14、X15、X16、X17及X18中之至少一者且至多三者為O、N或S且兩個雙鍵存在於該環中以保持芳香性。
在另一實施例中，式I之化合物為式IV或V之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物：
其中R4、R5、R6、R17、R18、X6、X7、X14、X15、X16、X17及X18各自獨立地如本文所定義，較佳地，R4選自Cl、Br及Me，R5選自H、F、Cl及甲基，且R6選自H、F、Cl、Me及OMe。
在另一實施例中，式I之化合物為式VI或VII之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物：
其中R9、R10、R12、R17、R18、X5、X6、X7、X14、X15、X16、X17及X18各自獨立地如本文所定義。
在上述化學式之一個實施例中，X6為N。在另一實施例中，X6為CH。
在另一實施例中，X7為N，R17選自H、OH、CN、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、OC1-6烷基、C5-10雜芳基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C(O)R15、C(O)N(R14)2、SO2R15、SO2N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、N(R16)C(O)N(R14)2、N(R16)SO2N(R14)2、N(R14)2、P(O)(R15)2、CH2C(O)R15、CH2C(O)N(R14)2、CH2SO2R15、CH2SO2N(R14)2、CH2N(R16)C(O)R15、CH2N(R16)SO2R15、CH2N(R16)C(O)N(R14)2、CH2N(R16)SO2N(R14)2及CH2N(R14)2，且R18不存在，其中R14、R15、R16或R17中之該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基或雜芳基視情況經進一步取代，較佳地，R17選自C1-6烷基、C5-10雜芳基、C4-10雜環烷基、N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、C(O)N(R14)2及SO2N(R14)2，其中R14、R15、
R16或R17中之該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基或雜芳基視情況經進一步取代。舉例而言，R17選自R17為H、NH2及視情況經取代之C5-10雜芳基或C4-10雜環烷基，較佳地，R17為視情況經取代之C5-10雜芳基或C4-10雜環烷基。
在另一實施例中，R17為視情況經取代之C4-10雜環烷基，其中該雜環烷基可為單環或雙環且包括1至3個雜原子，較佳地，其中X7為N。在一較佳實施例中，雜環烷基例如經至少一個選自以下之基團取代：F、OH、側氧基、CN、C1-4烷基及OC1-4烷基，其中該C1-4烷基視情況經進一步取代(例如經F、OH、OC1-3烷基等取代)。舉例而言，雜環烷基可選自視情況經取代之哌啶基團、哌嗪基團、硫代嗎啉基團及嗎啉基團，或含有哌啶、哌嗪、硫代嗎啉或嗎啉環之環狀結構(橋聯或螺環接)。
在另一實施例中，X7為C，例如X7為C且R18選自C1-6烷基、C5-10雜芳基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C(O)R15、C(O)N(R14)2、SO2R15、SO2N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、N(R16)C(O)N(R14)2、N(R16)SO2N(R14)2、N(R14)2、P(O)(R15)2、CH2C(O)R15、CH2C(O)N(R14)2、CH2SO2R15、CH2SO2N(R14)2、CH2N(R16)C(O)R15、CH2N(R16)SO2R15、CH2N(R16)C(O)N(R14)2、CH2N(R16)SO2N(R14)2及CH2N(R14)2，其中R14、R15、R16或R18中之該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基或雜芳基視情
況經進一步取代，較佳地，R18選自C(O)N(R14)2、SO2R15及SO2N(R14)2。在此等實施例之一子類中，R17選自H、OH、C1-6烷基、N(R14)2及視情況經取代之C5-10雜芳基。舉例而言，R17選自H、NH2及視情況經取代之C5-10雜芳基，較佳為H或NH2。
在又另一實施例中，R14在每次出現時獨立地選自H、視情況經取代之C1-6烷基、視情況經取代之C3-10環烷基、視情況經取代之C4-10雜環烷基及視情況經取代之C5-6雜芳基，或兩個R14與其相鄰的氮原子一起形成C4-10雜環烷基。
在另一實施例中，R17為N(R14)2，其中該R14與其相鄰的氮原子一起形成C4-10雜環烷基，其中該雜環烷基可為單環或雙環且包括1至3個雜原子，較佳地，其中X7為N。在一較佳實施例中，雜環烷基例如經至少一個選自以下之基團取代：F、OH、側氧基、CN、C1-4烷基及OC1-4烷基，其中該C1-4烷基視情況經進一步取代(例如經F、OH、OC1-3烷基等取代)。舉例而言，雜環烷基可選自視情況經取代之哌啶基團、哌嗪基團、硫代嗎啉基團及嗎啉基團，或含有哌啶、哌嗪、硫代嗎啉或嗎啉環之環狀結構(橋聯或螺環接)。
在另一實施例中，R1選自：
其中R14如本文所定義且(---)表示一鍵。
在另一實例中，R1選自：
其中R14如本文所定義且(---)表示一鍵。
在另一實施例中，R1為經取代或未經取代之C4-6雜環烷基。在另一實例中，R1為視情況經一個或兩個選自以下之基團取代之C4-5雜環烷基：鹵基、OH、C1-6烷基及OC1-6烷基。舉例而言，R1為視情況經一個或兩個選自F及OH之基團取代之N-吡咯啶基。
其他亞類實施例亦呈現於實例章節中，包括各R1(A基團)、R2(B基團)及L基團。亦在下文及表3、4及5中進一步闡述組合之實例。本文亦描述了實例1至691之代表性較佳化合物。
更特定言之，R1之較佳實例選自如下定義之基團A1至A514：
其中(---)表示充當R1與分子之其餘部分之間的附接點的鍵。
R2之較佳實例選自如下定義之基團B1至B56：
其中(---)表示充當R2與分子之其餘部分之間的附接點的鍵。
以下實施例描繪了可組合以產生式I化合物之R1(A1至A514)、R2(B1至B56)及L(L1至L3)基團之組合。
A1-L-B1；A1-L-B2；A1-L-B3；A1-L-B4至B54；A1-L-B55；A1-L-B56；
A2-L-B1；A2-L-B2；A2-L-B3；A2-L-B4至B54；A2-L-B55；A2-L-B56；
A3-L-B1；A3-L-B2；A3-L-B3；A3-L-B4至B54；A3-L-B55；A3-L-B56；
A4至A512-L-B1；A4至A512-L-B2；A4至A512-L-B3；A4至A512-L-B4至B54；A4至A512-L-B55；A4至A512-L-B56；
A513-L-B1；A513-L-B2；A513-L-B3；A513-L-B4至B54；A513-L-B55；A513-L-B56；
A514-L-B1；A514-L-B2；A514-L-B3；A514-L-B4至B54；A514-L-B55；A514-L-B56；
如本文所定義之例示性化合物包括在實例1至691下之表3、4及5中所涵蓋之各單一化合物。
較佳化合物之實例為，即來自表3、4及5之實例3、6、8、19、20-22、30、31、43、46、48、68、76、83、84、91-93、99-102、111、113-115,123、124-128、131、139-141、168、171、176、177、180、188-190、198、202-206、240、244、247、248、250-253、261、262、264-275、277-280、282、284-286、290、292、294-299、304、305、307-310、312-315、317-319、321-323、325、328、331、333-337、342、346、347、350、351、354、355、356、359、361、364-367、370、372、377、378、381、385-389、395-398、400、401、403、408-412、416-419、421-423、426-429、431-433、435-439、441-445、447-453、454、456、458、461、462、464、466-469、484、486、488、490、497、502、509、511、514、517、520、524、529、530、533、
538-543、546、548、552-554、556、557、560、561、562、568、569、571、572、574、575、578、580-583、585、586、588-590、592、596-600、602、604、605、608-612、614-617、619-621、623、625-630、632、636、638、640、641、643-652、654-660、665及667-691，或其鹽及/或溶劑合物。
更佳化合物之實例包括來自表3、4及5之實例3、6、20-22、43、46、48、68、76、84、91-93、99-102、123、125、168、171、177、188、202、205、206、251、266、272、296-299、304、305、307-310、312、318、321、331、342、354、355、359、364、366、377、378、381、385-387、389、395、397、400、401、403、411、412、416-419、421-423、426-429、431-433、435-438、441、443-445、451-454、456、458、462、466-469、486、497、502、509、517、520、524、527、529、530、538-540、546、552、554、556、558、560、562、571、572、578、580-583、585、586、588、589、592、597、599、600、604、605、608-610、615、617、619-621、623、625-628、630、632-638、640、641、643、645-649、665、671-680、682、683、685及688-690，或其鹽及/或溶劑合物。
更特定言之，化合物可選自來自表3、4及5之實例20、84、99-102、123、205、251、266、296-299、
308、312、318、321、342、355、385、387、412、421、432、462、509、517、520、524、529、530、538、539、546、554、556、560、562、568、571、572、578、580-583、586、588、592、597、600、605、608、609、615、617,621、628、630、632、633、636、637、641、643、648、649、665、672-675、679、682及688，或其鹽及/或溶劑合物。
應理解，上述化合物中之任一者可呈任何非晶形、結晶或多形形式，包括任何鹽或溶劑合物形式，或其混合物。本發明之化合物可經由本文所述之任何合成手段藉由附加各種功能來進一步修飾，以增強選擇性生物特性。此類修飾為此項技術中已知的且包括增加對給定生物系統(例如血液、淋巴系統、中樞神經系統)之生物滲透、增加口服可用性、增加溶解性以允許藉由注射投與、改變代謝及改變排泄率之彼等修飾。
此等化合物可藉由習知化學合成，諸如在本揭示案之流程及實例中所例示之彼等化學合成來製備。如可由熟悉此項技術者所瞭解的，合成本文化學式之化合物的其他方法對於一般熟悉此項技術者將為顯而易見的。另外，可以交替順序或次序進行各種合成步驟以得到所需化合物。
iii.方法、用途、調配物及投與
如本文所用，術語「有效量」意謂在組織、系統、動物或人類中引發例如研究人員或臨床醫師所尋求之生物反應或醫學反應的藥物或醫藥劑之量。此外，術語「治療有效量」意謂與尚未接受此量之相應受試者相比，導致疾病、病症或其症狀之治療、治癒、預防或改善，或降低疾病或病症之進展速率的任何量。該術語亦包括在其範疇內有效增強正常生理學功能之量。
如本文所用，術語「治療(treatment/treat/treating)」係指使如本文所描述之疾病或病症或其一或多種症狀逆轉、減輕、延遲發作或抑制進展。在一些實施例中，治療可在一或多種症狀已顯現之後投與。在其他實施例中，治療可在不存在症狀下投與。舉例而言，治療可在症狀發作之前(例如鑒於症狀史及/或鑒於遺傳或其他易感性因素)向易感個體投與。治療亦可在症狀已消除之後繼續例如以預防或延遲其復發。
在一個實施例中，待治療之疾病或病狀為增殖性疾病或病症或激酶介導之疾病或病症。更特定言之，待治療之疾病或病症包括增殖性疾病或病症、RAS-ERK傳訊級聯失調所致的發育異常(RAS病)、發炎性疾病或免疫系統失調。
根據一些實例，待治療之增殖性疾病或病症為贅瘤、發炎性疾病或病狀或發育異常，涉及RAS及/或RAF基因之持續性活化突變(例如KRAS及/或ARAF、BRAF或CRAF突變)。疾病或病症亦可進一步與受體酪胺酸激酶
突變或擴增(例如EGFR、HER2)或該受體下游RAS之調節因子的突變(例如SOS1功能獲得、NF1功能喪失)相關。舉例而言，如本文所定義之化合物為信號酶抑制劑(例如BRAF及CRAF)，其不僅參與控制攜帶RAF突變(例如BRAFV600E)腫瘤之細胞增殖，且重要的是亦參與突變的RAS驅動之癌症之細胞增殖。因此，本發明化合物可例如用於治療與此等信號酶之活性相關且特徵在於過度或異常細胞增殖之疾病。
根據一個實施例，疾病或病症之特徵在於不受控制之細胞增殖，亦即「增殖性病症」或「增殖性疾病」。更特定言之，此等疾病及病症與具有自主生長能力之細胞有關，亦即由細胞快速增殖表徵之異常病狀狀態，該細胞快速增殖通常形成展示部分或完全缺乏結構組織及與正常細胞之功能協調的明顯的腫塊。
舉例而言，增殖性病症或疾病定義為「贅瘤」、「腫瘤性病症」、「贅瘤形成」、「癌症」及「腫瘤」，該等術語統稱為涵蓋造血贅瘤(例如淋巴瘤或白血病)以及實體贅瘤(例如肉瘤或癌)，包括癌前及癌性生長，或致癌過程、轉移組織或惡性轉化型細胞、組織或器官中之所有類型，不論組織病理學類型或侵襲性階段如何。造血贅瘤為影響造血結構(與血球形成相關之結構)及免疫系統組分之惡性腫瘤，包括源自骨髓、淋巴或紅血球譜系之白血病(與血液及骨髓中之白血球(白細胞)及其前驅物相關)，及淋巴瘤(與淋巴球相關)。實體贅瘤包括肉瘤，其為源自結
締組織，諸如肌肉、軟骨、血管、纖維組織、脂肪或硬骨之惡性贅瘤。實體贅瘤亦包括癌，其為由上皮結構產生之惡性贅瘤，包括外部上皮(例如皮膚及胃腸道、肺及子宮頸之襯膜)，及襯裡各種腺體(例如胸、胰臟、甲狀腺)之內部上皮。贅瘤之實例包括白血病及肝細胞癌、肉瘤、血管內皮癌、乳癌、中樞神經系統癌(例如星形細胞瘤、神經膠肉瘤、神經胚細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤及神經膠母細胞瘤)、前列腺癌、肺及支氣管癌、喉癌、食道癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃腸癌、黑色素瘤、卵巢癌及子宮內膜癌、腎癌及膀胱癌、肝癌、內分泌癌(例如甲狀腺)及胰臟癌。舉例而言，疾病或病症選自結腸癌、肺癌、胰臟癌、甲狀腺癌、乳癌及皮膚癌。贅瘤之實例包括黑色素瘤、乳突甲狀腺癌、結腸直腸癌、卵巢癌、乳癌、子宮內膜癌、肝癌、肉瘤、胃癌、巴瑞特氏腺癌、神經膠質瘤(包括室管膜瘤)、肺癌(包括非小細胞肺癌)、頭頸癌、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、非何杰金氏淋巴癌及毛細胞白血病。
在一實施例中，呈現上文所提及之造血或實體贅瘤中之一者的患者先前已接受靶向RAS-ERK路徑之抑制劑(包括RTK、RAF、MEK或ERK抑制劑)之治療，但已對該抑制劑產生耐藥性。抑制劑包括標準照護治療，諸如威羅菲尼、達拉非尼、考比替尼(cobimetinib)、曲美替尼(trametinib)、YERVOY、OPDIVO或此等醫藥劑之任何組合。
在一實施例中，待治療之疾病定義為由RAS-ERK傳訊級聯失調所致的發育異常(RAS病：例如努南症候群(Noonan syndrome)、可斯洛症候群(Costello syndrome)、LEOPARD症候群、心-顏面-皮膚症候群(cardiofaciocutaneous syndrome)及肥厚性心肌症)。
在一實施例中，待治療之疾病定義為發炎性疾病或免疫系統失調。此類發炎性疾病或免疫系統失調之實例包括發炎性腸道疾病、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、全身性紅斑性狼瘡(systemic lupus erythematosis；SLE)、風濕性關節炎、多發性硬化症、甲狀腺炎、1型糖尿病、類肉瘤病、牛皮癬、過敏性鼻炎、氣喘病、慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease；COPD)。
在一個實施例中，如本文所定義之化合物為攜帶至少一種突變的RAS或RAF基因型之腫瘤細胞中RAS-ERK信號傳遞及細胞增殖的抑制劑，不誘導或基本上不誘導反常路徑。
如本文所用，術語「患者或受試者」係指動物，諸如哺乳動物。因此，受試者可指例如小鼠、大鼠、狗、貓、馬、牛、豬、天竺鼠、包括人類之靈長類動物及其類似者。受試者較佳為人類。
因此，本發明進一步係關於一種治療罹患增殖性疾病或病症(例如RAF突變及/或突變的RAS驅動之癌症)
之受試者，諸如人類受試者之方法。方法包括向需要此類治療之受試者投與治療有效量之如本文所定義之化合物。
在某些實施例中，本發明提供一種治療受試者之病症(如本文所描述的)的方法，該方法包括向鑑定為有需要之受試者投與本發明之化合物。鑑別需要治療上文所描述之病症的彼等患者完全在熟悉此項技術者之能力及知識範圍內。用於鑑別處於罹患可藉由主題方法治療之上述病症之風險下的患者之某些方法在醫學領域為公認的，諸如家族史，以及存在與主題患者之疾病狀態之發展相關的風險因素。熟悉此項技術之臨床醫師可藉由使用例如臨床試驗、體檢、病史/家族史及基因測定來容易地鑑別此類候選患者。
評估受試者治療之功效的方法包括藉由此項技術中熟知的方法決定病症之治療前症狀，且隨後向受試者投與治療有效量之本發明化合物。在投與該化合物後的適當時段(例如1週、2週、一個月、六個月)之後，再次決定病症之症狀。病症之症狀及/或生物標記(例如pERK或pMEK)之調節(例如減少)指示治療之功效。在整個治療過程中，可週期性地決定病症之症狀及/或生物標記。舉例而言，可每幾天、幾週或幾個月偵測病症之症狀及/或生物標記以評估治療之進一步功效。病症之症狀及/或生物標記之減少指示治療係有效的。
在一些實施例中，治療有效量之如本文所定義之化合物可單獨投與患者或以與醫藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑摻合之組成物投與患者。
表述「醫藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑」及等效表述係指不破壞其與之一起調配之化合物之藥理學活性的無毒載劑、佐劑或媒劑。可用於本揭示案之組成物中之醫藥學上可接受之載劑、佐劑及媒劑包括但不限於：離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂(lecithin)、血清蛋白(諸如人類血清白蛋白)、緩衝物質(諸如磷酸鹽)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸之偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(諸如硫酸魚精蛋白(protamine sulfate))、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態二氧化矽、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯啶酮、基於纖維素之物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧化丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。
本文所描述之組成物可經口、非經腸、藉由吸入噴霧劑、局部、經直腸、經鼻、經頰或經由植入儲集囊投與。如本文所用，術語「非經腸」包括皮下、靜脈內、肌肉內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、病變內及顱內注射或輸注技術。投與之其他模式亦包括皮內或經皮投與。
用於口服投與之液體劑型包括但不限於：醫藥學上可接受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。除活性化合物之外，液體劑型亦可含有常用於此項技術中
之惰性稀釋劑，諸如水或其他溶劑；增溶劑及乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙脂、苄醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油(特定言之為棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇以及去水山梨醇之脂肪酸酯，及其混合物。除惰性稀釋劑之外，口服組成物亦可包括佐劑，諸如濕潤劑、乳化劑及懸浮劑、界面活性劑、甜味劑、調味劑及芳香劑。
例如無菌可注射水性或油性懸浮液之可注射製劑可使用適合分散劑或濕潤劑及懸浮劑根據已知技術加以調配。無菌可注射製劑亦可為於無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液、懸浮液或乳液，例如呈於1,3-丁二醇中之溶液形式。可採用之可接受之媒劑及溶劑包括水、U.S.P.林格氏溶液(Ringer's solution)及等張氯化鈉溶液。此外，習知地將無菌、非揮發性油用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可使用包括合成單甘油酯或二甘油酯之任何溫和非揮發性油。此外，將諸如油酸之脂肪酸用於製備可注射劑。
可注射調配物可例如藉由經細菌截留過濾器過濾，或藉由併有呈可在使用之前溶解或分散於無菌水或其他無菌可注射介質中之無菌固體組成物形式之滅菌劑來滅菌。
為延長所提供之化合物之作用，常需要減緩化合物自皮下或肌肉內注射之吸收。此可藉由使用水溶性不良
之結晶或非晶形物質之液體懸浮液來達成。化合物之吸收速率則取決於其溶解速率，該溶解速率繼而可取決於晶體大小及結晶形式。替代地，藉由將化合物溶解或懸浮於油媒劑中來實現非經腸投與之化合物形式的延遲吸收。可注射儲槽形式係藉由在諸如聚乳酸-聚甘胺酸交酯之生物可降解聚合物中形成化合物之微膠囊基質來製備。視化合物與聚合物之比及所使用特定聚合物之性質而定，可控制化合物釋放速率。
其他生物可降解聚合物之實例包括聚(原酸酯)及聚(酸酐)。儲槽可注射調配物亦藉由將化合物包埋在與身體組織相容之脂質體或微乳液中來製備。
用於經直腸投與之組成物較佳為栓劑，其可藉由將本發明化合物與在環境溫度下為固體但在體溫下為液體，且因此在直腸中融化且釋放活性化合物之適合的非刺激性賦形劑或載劑(諸如可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟)混合來製備。
用於經口投與之固體劑型包括膠囊、錠劑、丸劑、散劑及顆粒。在此類固體劑型中，活性化合物與以下各者混合：至少一種惰性的醫藥學上可接受之賦形劑或載劑，諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣及/或a)填充劑或增量劑，諸如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇及矽酸，b)黏合劑，諸如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、蔗糖及阿拉伯膠，c)保濕劑，諸如甘油，d)崩解劑，諸如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、海藻酸、某
些矽酸鹽及碳酸鈉，e)溶液阻滯劑，諸如石蠟，f)吸收加速劑，諸如四級銨化合物，g)濕潤劑，諸如鯨蠟醇及單硬脂酸甘油酯，h)吸附劑，諸如高嶺土及膨潤土，及i)潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物。在膠囊、錠劑及丸劑之情況下，劑型亦可包含緩衝劑。
類似類型之固體組成物亦可在使用諸如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及其類似物之此類賦形劑的軟及硬填充明膠膠囊中用作填充劑。錠劑、糖衣錠、膠囊、丸劑及顆粒之固體劑型可用諸如腸溶衣及醫藥調配技術中熟知之其他包衣的包衣及殼衣來製備。其可視情況含有失透劑且亦可具有使其視情況以延遲方式僅在或優先在腸道某一部分中釋放活性成分之組成。可使用之包埋組成之實例包括聚合物質及蠟。類似類型之固體組成物亦可在使用諸如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及其類似物之此類賦形劑的軟及硬填充明膠膠囊中用作填充劑。
組成物亦可呈具有一或多種如上所示之賦形劑之微囊封形式。錠劑、糖衣錠、膠囊、丸劑及顆粒之固體劑型可用諸如腸溶衣、釋放控制包衣及醫藥調配技術中熟知之其他包衣的包衣及殼衣來製備。在此等固體劑型中，活性化合物可與至少一種惰性稀釋劑，諸如蔗糖、乳糖或澱粉摻合。如同正常實踐一般，此等劑型亦可包含除惰性稀釋劑以外之其他物質，例如製錠潤滑劑及其他製錠助劑，
諸如硬脂酸鎂及微晶纖維素。在膠囊、錠劑及丸劑之情況下，劑型亦可包含緩衝劑。其可視情況含有失透劑且亦可具有使其視情況以延遲方式僅在或優先在腸道某一部分中釋放活性成分之組成。可使用之包埋組成之實例包括聚合物質及蠟。
用於局部或經皮投與本發明化合物之劑型包括軟膏劑、糊劑、乳膏劑、洗劑、凝膠劑、散劑、溶液、噴霧劑、吸入劑或貼片。活性組分在無菌條件下與醫藥學上可接受之載劑及如可為所需之任何所需防腐劑或緩衝劑摻合。經眼調配物、滴耳劑及滴眼劑亦涵蓋在本發明之範疇內。另外，本發明考慮使用經皮貼片，其具有提供化合物至身體之受控遞送的附加優勢。此等劑型可藉由將化合物溶解或分散於適當介質中來製備。吸收增強劑亦可用於增加化合物穿過皮膚之通量。速率可藉由提供速率控制膜或藉由將化合物分散於聚合物基質或凝膠中加以控制。
本文所提供之醫藥學上可接受之組成物亦可藉由經鼻氣霧劑或吸入劑投與。此等組成物係根據醫藥調配技術中熟知之技術製備且可採用苯甲醇或其他適合的防腐劑、增強生物可用性之吸收促進劑、氟碳化合物及/或其他習知溶解劑或分散劑來製備成於鹽水中之溶液。
本文所提供之醫藥學上可接受之組成物可經調配用於經口投與。此等調配物可與或不與食物一起投與。在一些實施例中，本揭示案之醫藥學上可接受之組成物不與
食物一起投與。在其他實施例中，本揭示案之醫藥學上可接受之組成物係與食物一起投與。
可與載劑物質組合以產生呈單一劑型之組成物之化合物的量將視待治療之患者及特定投與模式而變化。可調配所提供之組成物以使在每天每公斤體重0.01-100mg之間的劑量之抑制劑可向接受此等組成物之患者投與。
亦應理解，用於任何特定患者之特定劑量及治療方案均取決於多種因素，包括年齡、體重、一般健康狀況、性別、膳食、投與時間、排泄速率、藥物組合、治療醫師之診斷及與增殖性疾病或病症相關之症狀的嚴重性。組成物中所提供之化合物之量亦將取決於組成物中之特定化合物。
可使用有效治療本文所考慮之症狀或減輕其嚴重性之任何量及任何投與途徑來投與本文所描述之化合物或組成物。所需精確量將在受試者與受試者之間不同，視受試者之物種、年齡及一般狀況；感染之嚴重性；特定藥劑；其投與模式及其類似因素而定。所提供之化合物較佳以單位劑型調配以便於劑量之投與及均一性。如本文所用，表述「單位劑型」係指適於待治療患者之藥劑的實體上分散單元。然而，應理解本揭示案之化合物及組成物之總日劑量將由主治醫師在合理醫學診斷之範疇內決定。
視所治療感染之嚴重性而定本揭示案之醫藥學上可接受之組成物可向人類及其他動物經口、經直腸、非經腸、腦池內、腹膜內、局部(如藉由散劑、軟膏劑或滴劑)、
經頰(以經口或經鼻噴霧劑形式)或以其類似方式投與。在某些實施例中，所提供之化合物可在每天每公斤受試者體重約0.01mg至約50mg且較佳約1mg至約25mg之劑量下一天一或多次經口或非經腸投與以獲得所要治療效果。
應理解，本發明之化合物及組成物之總日劑量將由主治醫師在合理醫學診斷之範疇內決定。以單一劑量或以分劑量向受試者投與之本發明之化合物的總每日抑制劑量可呈例如每公斤體重0.01mg至50mg或更通常每公斤體重0.1mg至25mg之量。單一劑量組成物可含有此類量或其子倍數以構成每日劑量。在一個實施例中，根據本發明之治療方案包括以單一劑量或多次劑量每天向需要此類治療之患者投與約10mg至約1000mg之一或多種本發明之化合物。
取決於待治療之疾病或病症，額外治療劑亦可存在於本揭示案之組成物中，或作為劑量方案之一部分單獨投與，例如額外化療劑。可用於與本發明化合物組合之額外治療劑之非限制性實例包括抗增殖化合物，諸如芳香酶抑制劑；抗雌性素；抗雄性素；性釋素促效劑；拓樸異構酶I抑制劑；拓樸異構酶II抑制劑；微管活化劑；烷化劑；類視色素、類胡蘿蔔素、生育酚；環氧化酶抑制劑；MMP抑制劑；抗代謝物質；鉑化合物；甲硫胺酸胺肽酶抑制劑；雙膦酸鹽類；抗增殖抗體；肝素酶抑制劑；Ras致癌同種型抑制劑；端粒酶抑制劑；蛋白酶體抑制劑；用於治療血
液學惡性病之化合物；驅動蛋白紡綞體蛋白抑制劑；Hsp90抑制劑；mTOR抑制劑；PI3K抑制劑；Flt-3抑制劑；CDK4/6抑制劑；HER2抑制劑(赫賽汀(Herceptin)，曲妥珠單抗(Trastuzumab))；EGFR抑制劑(易瑞沙(Iressa)、特羅凱(Tarceva)、來那替尼(Nerlynx)、拉帕替尼(Tykerb)、愛必妥(Erbitux))；RAS抑制劑；MEK抑制劑(曲美替尼、貝美替尼(Binimetinib)、考比替尼(Cobimetinib))；ERK抑制劑(優立替尼(Ulixertinib))；抗PD-1抗體(Opdivo，Keytruda)；抗CTLA4抗體(Yervoy)；抗腫瘤抗體；亞硝基脲；靶向/降低蛋白質或脂質激酶活性之化合物、靶向/降低蛋白質或脂質磷酸酶活性之化合物，或任何其他抗生成血管化合物。
治療亦可輔以其他治療或干預，諸如手術、放射治療(例如γ輻射、中子束放射治療、電子束放射治療、質子療法、近接治療及全身性放射性同位素)、生物反應調節劑(例如干擾素、介白素、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor；TNF))及用於減輕不良反應之藥劑。
本文對變數之實施例之敘述包括作為任何單一實施例或與任何其他實施例或其部分組合之實施例。本文對實施例之敘述包括作為任何單一實施例或與任何其他實施例或其部分組合之實施例。
實例
縮寫之清單：
Ac：乙醯基
AcOEt或EtOAc：乙酸乙酯
AcOH：乙酸
Ar：芳基
ATCC：美國典型培養物保藏中心
ATP：腺苷三磷酸
BINOL：[1,1'-聯萘]-2,2'-二醇
Boc：三級丁氧基羰基
BOP：六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)參(二甲基胺基)鏻
br：寬頻帶
BSA：牛血清白蛋白
CCL：癌細胞株
CDCl3：氘化氯仿
DCE：1,2-二氯乙烷
DCM：二氯甲烷
DIEA(或DIPEA)：N,N-二異丙基乙胺(惠寧氏鹼(Huenig’s base))
DME：1,2-二甲氧基乙烷
DMF：N,N-二甲基甲醯胺
DMSO：二甲亞碸
DMSO-d6：氘化二甲亞碸
DTT：二硫蘇糖醇
EA：乙酸乙酯
EC50：半數最大有效濃度
ECL：增強的化學螢光
EDTA：乙二胺四乙酸
Et2O：二乙醚
EtOH：乙醇
Eu：銪
FBS：胎牛血清
GST：麩胱甘肽S-轉移酶
HATU：O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’,-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽
HEPES：4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸
Het：雜環
Hex：己烷
HRMS：高解析質譜法
HPLC：高效液相層析
HRP：山葵過氧化酶
IC50：半數最大抑制濃度
IPA：異丙醇
iPrOH：異丙醇
LCMS：液相層析質譜法
MeCN：乙腈
MS：質譜法
NMP：N-甲基吡咯啶酮
NMR：核磁共振
ON：隔夜
PBS：磷酸鹽緩衝鹽水
pERK：磷酸化胞外信號調控激酶
PMB：對甲氧基苄基
PMSF：苯甲基磺醯氟
Rf：滯留因子
RPMI-1640：羅斯威爾公園紀念研究所中等
RT：室溫
SDS：十二烷基硫酸鈉
SDS-PAGE：十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳
SEM：三甲基矽烷基乙氧甲基
SNAr：親核芳族取代
TBST：含0.2% Tween-20之Tris緩衝鹽水
TBTU：O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟硼酸鹽
TEV：煙草蝕紋病毒蛋白酶
TFA：三氟乙酸
THF：四氫呋喃
TLC：矽膠薄層層析
Ts：對甲苯磺酸鹽
YMIN：劑量-活性曲線之最小數據點
以下非限制性實例為說明性實施例且不應解釋為進一步限制本發明之範疇。參考附圖將更好地理解此等實例。
下文所闡述之實例提供針對某些例示性化合物獲得之合成及實驗結果。正如熟悉此項技術者所熟知的，在需要保護反應組分免受空氣及水分影響之情況下，反應係在惰性氛圍(氮氣或氬氣)中進行。溫度以攝氏溫度(℃)給出。除非另外陳述，否則溶液百分比及比率表示體積與體積之間的關係。以下實例中所用之反應物可如本文所描述獲得，或若本文未描述，則該等反應物本身可商購或可藉由此項技術中已知之方法由可商購材料製備。使用Teledyne Isco Rf Combiflash儀器在254nm處使用商業正相二氧化矽在二氧化矽(SiO2)上進行急速層析。質譜分析係使用電灑質譜法記錄。NMR記錄於400MHz Varian儀器上。
製備型HPLC係使用Agilent儀器，使用Phenomenex-Kinetex C18(21×100mm，5μm)管柱以20mL/min之流動速率(RT)以及在220nm及254nm下UV偵測進行。除非另外陳述，否則移動相由溶劑A(5% MeOH，95%水+0.1%甲酸)及溶劑B(95% MeOH，5%水+0.1%甲酸)組成。如文中所述，在兩種溶劑中偶爾使用0.05% TFA或0.1% AcOH或其他添加劑代替0.1%甲酸作為添加劑。如文中所述，在兩種移動相中亦使用MeCN代替MeOH，以實現更具挑戰性的分離。實例中亦提供了特定的梯度條件，但以下具有代表性：T(0)→T(3min)等度，視化合物極性而定，使用10%至
50%之間的溶劑B，接著12分鐘梯度至100%溶劑B。最後5分鐘使用100%溶劑B。
LCMS分析係在Agilent儀器上進行。液相層析係在220nm及254nm下之UV偵測下，以1.5mL/min之流動速率(RT)在Phenomenex Kinetex C18管柱(2.6μm；100Å；3×30mm)上進行。移動相由溶劑A(95% H2O/5% MeOH/0.1% AcOH)及溶劑B(95% MeOH/5% H2O/0.1% AcOH)組成，使用以下梯度：T(0)100% A→T(0.5min)100% B→等度100% B至T(2min)。MS偵測係在正及負模式下使用APCI偵測並行進行。
除非另外指示，否則本說明書及申請專利範圍中所用之表示成分之量、反應條件、濃度、特性、穩定性等之所有數字應理解為在所有情況下均由術語「約」修飾。至少，應至少根據所報告之有效數位的數目且藉由應用一般捨入技術來理解各數值參數。因此，除非相反地指示，否則在本說明書及隨附申請專利範圍中提出的數值參數為近似值，其可視試圖獲得之特性而變化。儘管闡述實施例之廣泛範疇之數值範圍及參數為近似值，但在特定實例中闡述之數值儘可能精確地報告。然而，任何數值固有地含有由於實驗、測試量測、統計分析等之變化而產生之某些誤差。
實例之合成、生物活性及表徵：
本文所定義之所有化合物係根據表3至5中所示之方法製備。為實例中之每一者提供了質譜及NMR的表徵數據。化合物在生物實驗章節所描述之分析中進行測試。用於報告生物資料之慣例在各別表中以註腳提供。
合成方法A：
可商購之2,6-二氟-3-硝基苯甲酸A-1(合成方法A)可按照J.Med.Chem.2003,46,1905中所描述之程序經由柯提斯反應(Curtius reaction)轉化為胺甲酸酯A-2。使用氫氣及催化劑(諸如碳載鈀金屬或碳載氫氧化鈀(珀爾曼催化劑(Pearlman’s catalyst)))來催化硝基芳烴A-2氫解生成苯胺A-3。苯胺A-3與磺醯化劑(諸如磺醯氯)在有機鹼(諸如可用作溶劑之吡啶)存在下，在有或無催化劑(諸如4-二甲胺基吡啶)之情況下，以及在諸如二氯甲烷或四氫呋喃之額外溶劑存在或不存在下反應生成磺醯胺中間物A-4，該中間物可使用強酸(例如於二噁烷中之無水鹽酸溶液)去保護為苯胺鹽，諸如A-5。替代地，2,6-二氟苯胺A-6可使用諸如乙酸酐之乙醯化劑轉化為其乙醯苯胺A-7且轉化為如WO 2012/101238A1中所描述之單保護二苯胺A-8。磺醯化為磺醯胺A-9係在用於使用磺醯化試劑在諸如吡啶之有機鹼存在下，在有或無諸如4-二甲胺基吡啶之催化劑及諸如二氯甲烷或四氫呋喃之溶劑的情況下將胺甲酸酯A-3轉化為磺醯胺A-4的類似條件下達成。在諸如醇之共溶劑存在下，用鹽酸水溶液處理乙醯苯胺A-9提供苯胺鹽A-5。
合成方法A
可商購之3-胺基-6-氯-2-吡啶甲醯胺A-10可藉由採用J.Med.Chem.2014,57,3484中所描述之程序轉化為吡啶并嘧啶酮A-11且在催化量之DMF存在下，使
用諸如亞硫醯氯或氯化磷醯酯氯化劑，按照J.Med.Chem.2014,57,3484中所描述之程序轉化為二氯衍生物A-12。
按照與WO 2012/101238A1中所描述之程序類似的程序，可藉由在諸如乙酸之有機酸中加熱二氯吡啶A-12與苯胺鹽A-5來獲得中間物A-13。隨後，含有N-連接之雜環的通用結構W-I之最終抑制劑可藉由在催化量之銅粉、配位體(例如BINOL)及無機鹼(諸如碳酸銫)存在下，在諸如DMSO或N-甲基吡咯酮(NMP)之溶劑中加熱氯吡啶A-13中間物與含有遊離NH基團之雜環(諸如咪唑、三唑、吡唑、苯并咪唑、苯并三唑、吲哚、吲唑及類似雜環)來獲得。在一些情況下，銅粉及配位體之存在不係必需的，且偶合係在與上文所描述的相同的鹼及溶劑之存在下，在典型的SNAr條件下，在介於80℃至140℃範圍內之溫度下加熱來進行。
合成方法B：
方法B提供了構築通用結構W-I之抑制劑的替代方法。使用與方法A中所描述的相同的中間物A-2作為起始物質，3-硝基苯胺鹽B-1可藉由在酸性條件(例如使用無水氯化氫於二噁烷或三氟乙酸中之溶液)解胺甲酸酯保護基來獲得。使用與WO 2012/101238A1中所描述的類似的條件，使苯胺鹽B-1與二氯-吡啶并嘧啶A-12反應以提供中間物B-2。使用金屬鹽(諸如於醇溶劑中之氯化錫(II))將硝基還原為相應的苯胺B-3。隨後，在催化量之銅粉、
配位體(例如BINOL)及無機鹼(諸如碳酸銫)存在下，在諸如DMSO或N-甲基吡咯酮之溶劑中加熱氯吡啶B-3中間物與含有遊離NH基團之雜環(諸如咪唑、三唑、吡唑、苯并咪唑、苯并三唑、吲哚、吲唑及類似雜環)產生在吡啶環上含有N-連接之雜環的苯胺B-4。最終，苯胺B-4可在諸如吡啶之有機鹼存在下，具有或不具有諸如4-二甲胺基吡啶之催化劑及諸如二氯甲烷或四氫呋喃之溶劑的情況下，使用諸如磺醯氯之磺醯化劑轉化為含有N-連接之雜環的通式W-I之抑制劑。
合成方法B
合成方法C：
在吡啶環之2-位置處含有C-連接之芳基或雜環之W-II型抑制劑可藉由按照典型鈴木-宮浦(Suzuki-Miyaura)方案，使氯吡啶A-13與芳基或雜芳
基硼酸及包括硼酸酯之衍生物的金屬催化之交叉偶合來獲得。在普通熱條件下或在微波照射下，在70℃-110℃範圍內之溫度下，在諸如1,4-二噁烷或1,2-二甲氧基乙烷(DME)之溶劑中，諸如碳酸鈉或碳酸鉀或磷酸鉀之無機水性鹼可用作鹼。替代地，在諸如三乙胺之有機鹼存在下，按照典型施蒂勒偶合(Stille coupling)方案，可在類似條件下使用有機錫物質。
合成方法C
合成方法D：
在使用無機氫氧化物(諸如氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰)之水溶液皂化之後，使用合成方法A中所描述之方案，將氯吡啶A-13與3-吲哚或3-吲唑羧酸之甲酯偶合，以分別提供中間物D-1或D-2。隨後，使用用於構築醯胺鍵(例如在環境溫度下，在溶劑(諸如NMP、DMF、THF或DMSO)中之有機鹼(諸如DIEA或三乙胺)存在下的BOP、HATU或TBTU及類似者)之典型程序使羧酸D-1及D-2與一級胺及二級胺反應。在胺試劑上之官能基在形成醯胺鍵(例如額外胺官能基)之條件下為反應性的情況下，可保護反應性取代基(例如呈三級丁胺甲酸酯)且移除保護基作為最後一步以顯示所需式W-III抑制劑。
合成方法D
合成方法E：
溴苯并咪唑E-2可藉由使3-溴-1,2-苯二胺E-1與甲酸反應來獲得且如WO 2004/076411中所描述，在低溫下使用強鹼(諸如無機氫化物與烷基鋰(例如三級丁基鋰)之組合)及甲醯化劑(諸如於諸如THF之非質子性溶劑中的DMF)來甲醯化以提供甲醯基苯并咪唑E-3。苯并咪唑E-3與氯吡啶A-13之偶合可在方法A之一般方案下進行，以提供醛中間物E-4。E-4與胺在標準還原胺化條件下(例如在諸如AcOH之弱有機酸存在下，使用諸如無機硼氫化物或氰基硼氫化物的還原劑)之反應提供如一般合成方法E中所示之通式W-IV的抑制劑。
合成方法E
合成方法F：
溴苯并咪唑E-2為可商購的或可如一般方法E(步驟1)中所描述製備。與雜芳基硼酸或硼酸酯之交叉偶合可在鈀催化之鈴木-宮浦交叉偶合條件下，在諸如碳酸鈉或碳酸鉀之鹼存在下，在溶劑(諸如二噁烷或二甲氧基乙烷及水)中進行，以提供中間物F-1。隨後，經取代之苯并咪唑衍生物F-1與氯吡啶A-13之偶合可在方法A之一般方案下進行，以提供通用結構W-V之抑制劑。
合成方法F
合成方法G：
在用諸如KOH之水性無機鹼處理移除甲苯磺醯基保護基之後，在諸如THF之溶劑中且在三級鹼(諸如DIEA或三乙胺)存在下，使N-甲苯磺醯基保護之吲哚-3-磺醯氯G-1(藉由Chemical and Pharmaceutical Bulletin 2009,57,591中所描述之程序製備)與一級胺或二級胺反應，以提供中間物磺醯胺G-2。隨後，藉由在如先前所描述之通常條件下加熱磺醯胺G-2與氯吡啶A-13中間物來獲得通用結構W-VI之最終抑制劑。
合成方法G
合成方法H：
3-吲哚硫氰酸酯H-1(按照Phosphorus,Sulfur and Silicon and the Related Elements 2014,189,1378中所描述之程序製備)係使用諸如九水合硫化鈉之還原劑還原成相應的硫化物鹽，且在不與烷基鹵化物分離之情況下直接烷基化以提供硫化物中間物
H-2。隨後，使用諸如3-氯過氧苄酸之氧化劑將硫化物中間物H-2轉化為碸中間物H-3。隨後，藉由在如先前所描述之通常條件下加熱吲哚碸H-3與氯吡啶A-13中間物來獲得通用結構W-VII之最終抑制劑。
合成方法H
合成方法I：
在諸如MeCN、DMSO或NMP之溶劑中且在無機鹼(諸如碳酸鉀)或有機鹼(諸如DIEA)存在下，使可商購之3-氟-2-硝基苯胺I-1之鮮紅色溶液與一級胺或二級胺反應以在熱或微博條件下在40℃至120℃範圍內之溫度下加熱時提供中間物I-2。中間物I-2之硝基的還原可在氯化銨存在下，在40℃至80℃範圍內之溫度下，在諸如異丙醇之醇溶劑中使用金屬(諸如Fe或Zn)來達成。隨後，在40℃至80℃範圍內之溫度下與甲酸一起加熱時，1,2-苯二胺中間物(參見J-1)直接轉化為所需苯并咪唑中間物I-3。隨後藉由在如先前所描述之通常條件下加熱苯并咪唑I-3與氯吡啶A-13中間物來獲得通用結構W-VIII之最終抑制劑。
合成方法I
合成方法J：
如在合成方法I下所描述獲得之硝基苯胺I-2在氯化銨存在下，在40℃至80℃範圍內之溫度下，在諸如異丙醇之醇溶劑中使用金屬(諸如Fe或Zn)來還原成1,2-苯二胺J-1。隨後，在酸性條件(例如AcOH)下，一旦用諸如亞硝酸鈉之無機亞硝酸鹽處理，1,2-苯二胺中間物(參見J-1)即轉化為所需苯并三唑中間物J-2。隨後，藉由在如先前所描述之通常條件下加熱中間物I-3與氯吡啶A-13中間物來獲得通用結構W-IX之最終抑制劑。
合成方法J
下文具體描述了不屬於或僅部分屬於上述一般合成程序的製備抑制劑之程序。
磺醯氯：
以下磺醯氯係自商業來源獲得且按原樣使用：4-甲氧苯磺醯氯、2,4-二氯苯磺醯氯、2,4-二甲苯磺醯氯、2-氯苯磺醯氯、2-甲苯磺醯氯、4-乙苯磺醯氯、2-氰苯磺醯氯、2,4-二甲氧苯磺醯氯、2-三氟甲苯磺醯氯、3-氯苯磺醯氯、3-甲苯磺醯氯、2,3-二氯苯磺醯氯、3-氯-2-甲苯磺醯氯、2-溴苯磺醯氯、2-氯-4-氟苯磺醯氯、2-氯-6-氟苯磺醯氯、2,5-二氯苯磺醯氯、2,5-二甲苯磺醯氯、2-氯-6-甲苯磺醯氯、3-氟-2-甲苯磺醯氯、2-氯-4-甲苯磺醯氯、1,3-苯并二氧呃-5-磺醯氯、2-氯-4-(三氟甲基)-苯磺醯氯、2-甲基-4-硝基苯磺醯氯、2-(二氟甲基)苯磺醯氯。
其他磺醯氯係藉由使用或改編如下文所描述之文獻程序製備。
2-氟-4-甲氧苯磺醯氯：
按照EP2752410A1中所描述之程序，將2-氟-4-甲氧基苯胺(1.00g，7.1mmol)溶解於乙腈(25mL)中且添加濃HCl(10mL)。在冰鹽浴中將混合物冷卻至0℃。隨後按份添加NaNO2(0.59g，8.5mmol)於水
(1mL)中之溶液且將混合物在0℃下攪拌1.5h(懸浮有少量白色固體之淺褐色溶液)。向所得混合物中添加AcOH(12mL)且在0℃下攪拌10分鐘之後添加NaHSO3(7.37g，10當量，71mmol)。在攪拌5min之後，添加氯化銅(II)(0.96g，1當量)及CuCl(70mg，0.1當量)且將綠色懸浮液在冰浴中攪拌，使溫度在1h內上升至RT，之後在RT下再攪拌該懸浮液18h(在2：1己烷/EtOAc中，TLC Rf：0.45)。隨後將反應混合物傾入水(100mL)中且用EtOAc萃取。將萃取物用水洗滌，經MgSO4乾燥且藉由使用1：1己烷/EA作為溶離劑之矽膠(15mL)墊過濾。在減壓下移除揮發成分得到1.22g澄清的淺褐色油狀物(TLC展示在水溶液處理後存在更多極性未鑑別雜質)。1H NMR(CDCl3)δ：7.88(t,J=8.6Hz,1H),6.76-6.93(m,2H),3.93(s,3H)。藉由1H NMR之均勻性為約70%。
4-氯-2-甲苯磺醯氯：
按照Acta Crystallographica Section E 2009,65(4),o800中所描述之程序由間氯甲苯之氯磺醯化來製備。將間氯甲苯(1mL)溶解於CHCl3(4mL)中且將溶液在冰浴中冷卻。隨著HCl氣體緩慢逸出，歷時15min逐滴添加氯磺酸(2.5mL)。在完成之後，使反應
混合物升溫至RT。TLC展示無更多的起始物質(在8：2己烷/EA中Rf=0.8)且形成略微落後的新光點(在8：2己烷/EA中Rf=0.7)。將反應混合物傾至冰(50mL)上，添加DCM(15mL)且分離產物有機相，用冷水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮成無色油狀物(0.87g)，其不經進一步純化即使用：1H NMR(CDCl3)δ：8.01(d,J=8.6Hz,1H),7.43(s,1H),7.40(dd,J=8.6,2.0Hz,1H),2.78(s,3H)。
使用進行如下所描述之一些修改的類似程序製備以下磺醯氯：
4-甲氧基-2-甲苯磺醯氯：
將3-甲氧基甲苯(6.00g)溶解於CHCl3(30mL)中且將溶液冷卻至-35℃(浴溫)。歷時20min，逐滴添加氯磺酸(15mL)(無明顯的HCl/SO2氣體逸出)。隨後在-30℃至-25℃下攪拌澄清溶液15min(未注意到氣體逸出)。將反應混合物小心地傾至冰(50mL)上，添加DCM(50mL)且分離輕微乳狀的產物有機相，用冷水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮成無色油狀物，將其在真空下乾燥(8.28g，76%產率)。NMR展示存在單一異構物：1H NMR(CDCl3)δ：8.01(d,J=8.6Hz,1H),6.72-6.95(m,2H),3.90(s,3H),2.75(s,3H)。
2-氯-4-甲氧苯磺醯氯：
將3-氯苯基甲基醚(1.00g)溶解於CHCl3(4mL)中且將溶液冷卻至約-35℃。歷時15min，逐滴添加於CHCl3(2mL)中之氯磺酸(2.5mL)。在完成之後，TLC(在8：2己烷/EA中SM Rf=0.8)僅偵測出基線物質。一旦將反應混合物升溫至RT，即注意到氣體逸出且藉由TLC(在8：2己烷/EA中Rf=0.30及0.25)注意到異構產物。在RT下攪拌30min之後，開始形成白色沉澱。將反應混合物傾至冰(50mL)上，添加DCM(15mL)且分離有機產物相，用冷水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮成無色油狀物，其靜置後結晶為白色針狀物(0.89g)。1H NMR展示呈60：40之比的2種異構物之混合物，該等異構物藉由使用8：2己烷/EtOAc作為溶離劑之矽膠急速層析分離。所需異構物(更具極性)：1H NMR(CDCl3)δ：7.90(d,J=8.6Hz,1H),7.04-7.19(m,2H),4.08(s,3H)。
2,3-二甲苯磺醯氯：
如WO2003/055478中所描述，在鄰-二甲苯氯磺醯化之後分離為次要異構物。1H NMR(CDCl3)δ：7.96(d,J=7.8Hz,1H),7.52(d,J=7.4Hz,1H),
7.30(t,J=7.8Hz,1H),2.71(s,3H),2.41(s,3H)。
3-氟-2-甲基-4-甲氧苯磺醯氯：
步驟1：向2-氟-3-甲基苯酚(4.32mL，39.7mmol)於丙酮(50mL)中之溶液中添加碳酸鉀(6.58g，47.6mmol)，接著添加碘甲烷(2.75mL，43.7mmol)。隨後，將反應混合物在60℃下回流隔夜。隨後將反應混合物冷卻至RT，過濾(2×10mL丙酮用於沖洗)且在減壓下濃縮。將粗產物自水(30mL)及EtOAc(2×50mL)中萃取。隨後分離有機層，經Na2SO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。殘餘物係藉由使用0至5% EtOAc/己烷之矽膠急速層析純化，以得到呈澄清無色液體之2-氟-3-甲苯基甲醚(5.30g，95%產率)：1H NMR(CDCl3)δ：6.95(td,J=8.0,1.4Hz,1H),6.85-6.71(m,2H),3.87(s,3H),2.28(d,J=2.3Hz,3H)。
步驟2：歷時5分鐘時段，向來自步驟1之2-氟-3-甲苯基甲醚(1.00g，7.13mmol)於DCM(5.6mL)中之溶液中添加氯磺酸(1.13mL，16.5mmol)於DCM(5.6mL)中之溶液。將含有黏性液體層之淡褐色反應混合物在RT下攪拌10min，且隨後藉由傾入水(10mL)及冰(5g)之混合物中來淬滅。水相用DCM(2×10mL)萃取，
經Na2SO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮以得到呈無色液體之所需磺醯氯(1.70g，100%產率)。該物質不經進一步純化即使用：1H NMR(CDCl3)δ：7.87(dd,J=9.0,1.8Hz,1H),6.97-6.86(m,1H),3.97(s,3H),2.66(d,J=2.8Hz,3H)。
3-氯-2-甲基-4-甲氧苯磺醯氯：
按照與3-氟-2-甲基-4-甲氧苯磺醯氯類似的程序(步驟1)，且自2-氯-3-甲基苯酚開始，以定量產率獲得呈無色液體之2-氯-3-甲苯基甲醚：1H NMR(CDCl3)δ：7.12(t,J=7.9Hz,1H),6.87-6.83(m,1H),6.79(d,J=8.2Hz,1H),3.89(s,3H),2.38(s,3H)。
如針對3-氟-2-甲基-4-甲氧苯磺醯氯(步驟2)所描述的，用氯磺酸處理以96%產率提供呈無色液體的所需3-氯-2-甲基-4-甲氧苯磺醯氯：1H NMR(CDCl3)δ：8.02(d,J=9.1Hz,1H),6.90(d,J=9.1Hz,1H),4.00(s,3H),2.83(s,3H)。
2-乙苯磺醯氯：
將2-乙苯硫醇(1.46mL，10.3mmol)及KCl(776mg，10.3mmol)溶解於水(38mL)中且逐小份添加oxone®(15.8g，25.8mmol)。在RT下攪拌1h之後，藉由LCMS分析認為反應完成且反應混合物用EtOAc(4×5mL)萃取。將萃取物乾燥(Na2SO4)且在減壓下濃縮以得到白色結晶固體(1.43g，68%產率)，其按原樣使用：1H NMR(CDCl3)δ：8.07(dd,J=8.1,1.3Hz,1H),7.66(td,J=7.6,1.3Hz,1H),7.49(d,J=7.7Hz,1H),7.45-7.38(m,1H),3.20(q,J=7.5Hz),1.36(t,J=7.5Hz)。
3-氟-2-乙苯磺醯氯
步驟1：將2-溴-6-氟苯甲醛(6.00g，29.5mmol)溶解於無水THF(60mL)中且在氬氣氛圍下，將溶液冷卻至-78℃。逐滴添加溴化甲鎂(於二乙醚中之3.0M溶液，13.4mL，40.3mmol)且將混合物在-78℃下攪拌30min。隨後用10%鹽酸(50mL)淬滅反應且將產物萃取至乙醚(2×50mL)中。將萃取物乾燥(MgSO4)且濃縮，且殘餘物藉由使用10%-30% EtOAc/己烷作為溶離劑之矽膠Combiflash®純化，以得到呈無色油狀物之
所需醇衍生物(6.20g，96%產率)：1H NMR(CDCl3)δ：7.35(ddd,J=7.9,3.1,2.0Hz,1H),7.16-6.99(m,2H),5.35(q,J=6.7Hz,1H),1.61(dd,J=6.8,1.1Hz,3H)。
步驟2：將氯化銦(III)(412mg，1.83mmol)懸浮於DCM(40mL)中且添加氯二異丙基矽烷(8.42mL，49.3mmol)。添加來自步驟1之於DCM(8mL)中之醇(4.00g，18.3mmol)且將混合物在RT下攪拌3h，以得到澄清溶液。將反應混合物用水(50mL)淬滅，用二乙醚(3×20mL)萃取，用鹽水洗滌且乾燥(MgSO4)。濃縮且藉由使用己烷作為溶離劑之急速層析純化，以提供起始醇之矽烷化醚。
將該物質溶解於DCE(41mL)中且添加氯二異丙基矽烷(0.78mL，4.6mmol)及氯化銦(III)(103mg，4.6mmol)。將混合物在80℃下攪拌3h。在冷卻至環境溫度之後，反應混合物用己烷(100mL)稀釋，用水(100mL)洗滌且水相用己烷(2×50mL)反萃取。將合併的有機相乾燥(Na2SO4)且濃縮，以得到無色油狀物，其藉由使用己烷作為溶離劑之矽膠急速層析純化以得到呈無色油狀物之2-溴-6-氟-乙苯(3.71g，100%)：1H-NMR(CDCl3)δ：7.32(d,J=7.8Hz,1H),7.11-6.91(m,2H),2.82(dq,J=7.5,2.2Hz,2H),1.20-1.15(m,3H)。
步驟3：將來自步驟2之芳基溴(3.71g，18.3mmol)溶解於甲苯(60mL)中且添加N,N-二異丙基乙胺(6.40mL，36.5mmol)。隨後溶液藉由3個抽真空及用氮氣回填之循環脫氣。添加參(二亞苄丙酮)-二鈀(0)(836mg，0.9mmol)、4,4-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃(1.08g，1.83mmol)及2-乙基己基-3-巰丙酸酯(4.59mL,19.2mmol)且將混合物再脫氣兩次，隨後在氮氣氛圍下回流隔夜。隨後將反應混合物冷卻至RT，用水(50mL)淬滅，且用EtOAc(2×50mL)萃取。將合併的有機相用10% HCl水溶液(75mL)洗滌且乾燥(Na2SO4)。在減壓下濃縮且藉由使用0-15% EtOAc/己烷作為溶離劑之急速層析純化殘餘物，以得到呈經一些未反應之起始硫醇污染之橙色油狀物的所需硫化物中間物(4.00g)。此物質按原樣用於下一步驟中。
步驟4：將來自步驟3之粗硫化物衍生物(4.00g，假定為11.7mmol)溶解於THF(41mL)中且逐滴添加三級丁醇鉀(1.0M於THF中，14.1mL，14.1mmol)。將所得溶液在RT下攪拌1h。隨後，反應藉由添加飽和NH4Cl水溶液(40mL)淬滅且用EtOAc(2×30mL)萃取。將合併的有機相濃縮且將深橙色殘餘物穿過使用己烷之小矽膠墊來洗滌，以得到硫醇與二硫化物之混合物(1.50g)，其按原樣用於下一步驟中(注意：惡臭)。
步驟5：將來自步驟4之硫酚與二硫化物之粗混合物(1.50g，假定為9.6mmol)及KCl(723mg，9.6
mmol)懸浮於水(40mL)中且按份添加oxone®(14.8g，24mmol)。在RT下攪拌1h之後，用EtOAc(2×20mL)萃取反應混合物，並且將萃取物乾燥(Na2SO4)且在減壓下濃縮，以得到粗磺醯氯，其按原樣用於製備相應的片段A-5及苯胺A-8(參見表1)。
3-氯-2-乙苯磺醯氯：
按照與3-氟-2-乙苯磺醯氯相同的程序，但自2-溴-6-氯苯甲醛開始來製備磺醯氯：
步驟1(呈白色固體，98%產率)：1H NMR(CDCl3)δ：7.49(dd,J=8.0,1.2Hz,1H),7.33(dd,J=8.0,1.2Hz,1H),7.05(t,J=8.0Hz,1H),5.58(q,J=6.9Hz,1H),1.64(d,J=6.9Hz,3H)。
步驟2(呈無色油狀物，100%產率)：1H-NMR(CDCl3)δ：7.43(dd,J=8.0,1.2Hz,1H),7.29(dd,J=8.0,1.2Hz,1H),6.96(t,J=8.0Hz,1H),2.97(q,J=7.5Hz,2H),1.17(t,J=7.5Hz,3H)。
步驟3(呈橙色油狀物，81%產率)：1H-NMR(CDCl3)δ：7.24-7.18(m,2H),7.08(t,J=7.9Hz,1H),4.07-3.96(m,2H),3.17(t,J=7.4Hz,2H),2.96(q,J=7.5Hz,2H),2.64(t,J=7.4Hz,2H),1.56(dd,J=11.9,5.8Hz,2H),1.40
-1.21(m,9H),1.16(t,J=7.5Hz,3H),0.89(t,J=7.4Hz,6H)。
步驟4(呈無色液體，99%產率)：1H-NMR(CDCl3)δ：7.15(d,J=7.9Hz,2H),6.97-6.92(m,1H),3.41(s,1H),2.87(q,J=7.5Hz,2H),1.18(t,J=7.5Hz,3H)。
步驟5(未經進一步純化即使用之粗物質)：1H-NMR(CDCl3)δ：8.03(dd,J=8.2,1.3Hz,1H),7.73(dd,J=8.0.1.3Hz,1H),7.37(t,J=8.1Hz,1H),3.30(q,J=7.4Hz,2H),1.33(t,J=7.4Hz,3H)。
2-甲基-3-(三氟甲基)苯磺醯氯：
按照與3-氟-2-乙苯磺醯氯相同的程序，但自可商購之2-甲基-3-(三氟甲基)溴苯開始來製備磺醯氯：
步驟3(呈橙色油狀物，100%產率)：1H-NMR(CDCl3)δ：7.49(d,J=7.9Hz,2H),7.26-7.19(m,1H),4.06-4.00(m,2H),3.18(dd,J=9.1,5.6Hz,2H),2.65(dd,J=9.2,5.6Hz,2H),2.50(d,J=1.3Hz,3H),1.33-1.23(m,11H),0.88(td,J=7.4,2.3Hz,6H)。
步驟4(呈無色油狀物，定量產率)：1H-NMR(CDCl3)δ：7.43(dd,J=7.9,2.2Hz,2H),7.12(t,J=7.8Hz,1H),3.42(s,1H),2.43(s,3H)。
步驟5(呈白色固體，定量產率)：1H-NMR(CDCl3)δ：8.31(d,J=8.1Hz,1H),8.00(t,J=7.7Hz,1H),7.55(dd,J=15.6,7.6Hz,1H),2.93(s,3H)。
由芳基溴製備磺醯氯之一般程序：
步驟1：將芳基溴1(1.00mmol)溶解於甲苯(1.70mL)中。將混合物用氮氣鼓泡通過溶液來脫氣5min。添加參(二亞苄丙酮)-二鈀(0)(0.02mmol)、4,4-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃(0.04mmol)及N,N-二異丙基乙胺(2.0mmol)且隨後將混合物再次脫氣5min。隨後添加苄硫醇(1mmol)且在回流下加熱所得混合物隔夜(油浴T=115℃)。在完成之後，將反應冷卻至室溫，用EtOAc(20mL)稀釋且用H2O(20mL)淬滅。用EtOAc(2×20mL)萃取水層。將合併的有機層用鹽水(50.0mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾且在減壓下濃縮。粗物質藉由急速層析(0-10% EtOAc/己烷，35mL/min，產物以100%己烷溶離)進-步純化。收集感興趣的級分且在減壓下濃縮以得到標題化合物2。
步驟2：將化合物2(1.00mmol)溶解於乙酸(1.90mL)中且添加H2O(0.65mL)以得到非均質溶液。逐份添加N-氯琥珀醯亞胺(4.00mmol)。攪拌反應且藉由LCMS監測(樣品用N-甲基哌嗪淬滅)。在反應完成之後，將混合物在減壓下濃縮。將所得混合物緩慢傾入產生氣體釋放之飽和NaHCO3水溶液中。將混合物用EtOAc(2×75mL)萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾且在減壓下濃縮。粗化合物藉由正相層析(0-40% EtOAc/己烷，60mL/min，產物以100%己烷分離)進一步純化。收集感興趣的級分且在減壓下濃縮以得到標題化合物3。
2-氯-3-甲苯磺醯氯：
磺醯氯係按照自可商購之1-溴-2-氯-3-甲苯開始之一般程序製備：
(2-氯-3-甲苯基)苄硫醚：黃色固體，51%產率，95%純度(在220nm下)。(ES-)M-H=247.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.39-7.35(m,2H),7.33-7.28(m,2H),7.28-7.23(m,1H+CDCl3),7.11-7.03(m,3H),4.15(s,2H),2.38(s,3H)。
2-氯-3-甲苯磺醯氯：淡黃色油狀物，70%產率，60%純度(在254nm下)。LCMS：將LCMS樣品用N-甲
基哌嗪淬滅(所得磺醯胺MW=288.8)(ES+)M+H=289.2。用作粗物質。
3-氟-2-(三氟甲基)苯磺醯氯：
磺醯氯係按照自可商購之1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯開始之一般程序製備：
(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)苄硫醚：黃色油狀物，66%產率，98%純度(在254nm下)。(ES-)M-H=285.2。
3-氟-2-(三氟甲基)苯磺醯氯：淡黃色油狀物，93%產率，98%純度(在254nm下)。LCMS：將LCMS樣品用N-甲基哌嗪淬滅(所得磺醯胺MW=326.1)(ES+)M+H=327.1
3-氯-2-(三氟甲基)苯磺醯氯：
磺醯氯係按照自可商購之1-溴-3-氯-2-(三氟甲基)苯開始之一般程序製備：
(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)苄硫醚：白色固體，59%產率，90%純度(在220nm下)。(ES-)M-H=301.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.46-7.14(m,8H+CDCl3),4.16(s,2H)。
3-氯-2-(三氟甲基)苯磺醯氯
無色油狀物，66%產率。LCMS：將LCMS樣品用N-甲基哌嗪淬滅(所得磺醯胺MW=343.5)(ES+)M+H=343.2。用作粗物質。
3,4-二氟-2-甲苯磺醯氯：
磺醯氯係按照自可商購之1-溴-3-氯-2-(三氟甲基)苯開始之一般程序製備：
(3,4-二氯-2-甲苯基)苄硫醚：橙色油狀物，96%產率，96%純度(在254nm下)。(ES-)M-H=249.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.32-7.17(m,7H),4.16(s,2H),2.18(d,J=2.7Hz,3H)。
3,4-二氟-2-甲苯磺醯氯：淡黃色油狀物，49%產率。LCMS：將LCMS樣品用N-甲基哌嗪淬滅(所得磺醯胺MW=290.3)(ES+)M+H=291.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.56(ddd,J=8.4,5.5,1.8Hz,1H),7.15(dd,J=18.4,8.4Hz,1H),2.46(d,J=2.8Hz,3H)。
2,4-二甲基-3-氟苯磺醯氯：
磺醯氯係按照自可商購之1-溴-2,4-二甲基-3-氟苯開始之一般程序製備：
(3-氟-2,4-二甲苯基)苄硫醚：橙色油狀物，95%之粗物質產率，80%純度(在254nm下)。用作粗物質。
3-氟-2,4-二甲基苯-1-磺醯氯：橙色油狀物，89%之粗物質產率，74%純度(在254nm下)。LCMS：將LCMS樣品用N-甲基哌嗪淬滅(所得磺醯胺MW=286.4)(ES+)M+H=287.1。用作粗物質。
2-甲吡啶-3-磺醯氯：
磺醯氯係按照自可商購之3-溴-2-甲吡啶開始之一般程序製備：
3-(苄硫基)-2-甲吡啶：橙色液體，88%產率，94%純度(在220nm下)，(ES+)M+H=215.8，(ES-)M-H=214.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.30(dd,J=4.9,1.5Hz,1H),7.57-7.45(m,1H),7.31-7.27(m,5H),7.07(dd,J=7.6,5.1Hz,1H),4.09(s,2H),2.58(s,3H)。
2-甲吡啶-3-磺醯氯：淡黃色油狀物，100%產率，95%純度(在254nm下)，將LCMS樣品用H2O稀釋(所得磺酸MW=173.1)(ES-)M-H=171.9；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.80(dd,J=4.8,1.6Hz,1H),8.33(dd,J=8.1,1.7Hz,1H),7.43-7.36(m,1H),3.02(s,3H)。
6-甲氧基-4-甲吡啶-3-磺醯氯：
3-((6-甲氧基-4-甲吡啶-3-基)硫基)丙酸2-乙基己酯(2)之製備：將5-溴-2-甲氧基-4-甲吡啶(6.00g，29.7mmol)溶解於甲苯(100mL)中且添加N,N-二異丙基乙胺(10.4mL，59.4mmol)。將混合物用氮氣鼓泡通過溶液來脫氣5min。添加參(二亞苄丙酮)二鈀(0)(1.36g，1.49mmol)、4,4-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃(1.75g，2.97mmol)及2-乙基己基-3-巰丙酸酯(7.47mL，31.2mmol)。將混合物再次脫氣5min。在回流下加熱混合物隔夜(油浴T=117℃)。將反應冷卻至室溫，用EtOAc(100mL)稀釋且用H2O(100mL)淬滅。分離有機層與水層，且用EtOAc(2×50.0mL)萃取水層。將合併的有機層用HCl(10%於H2O中，50.0mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾且在減壓下濃縮。將粗物質藉由急速層析(330g矽膠柱，EtOAc-己烷，0-20%)純化以得到呈橙色油狀物之標題化合物(10.0g，99%產率)。(ES+)M+H=340.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.19(s,1H),6.64(s,1H),3.99(dd,J=5.9,2.4Hz,2H),3.93(s,3H),2.96(t,J=7.3Hz,2H),2.55(t,J=7.3Hz,2H),2.42(d,
J=0.5Hz,3H),1.56(dt,J=12.1,6.0Hz,1H),1.39-1.22(m,8H),0.88(m,6H)。
6-甲氧基-4-甲吡啶-3-硫醇(3)之製備：向2(10.0g，29.5mmol)於THF(105mL)中之-78℃溶液中逐滴添加三級丁醇鉀(1.00M於THF中，35.3mL，35.3mmol)且形成沉澱。在-78℃下攪拌所得懸浮液30分鐘。將反應藉由添加NH4Cl(50.0mL)來淬滅且混合物用CH2Cl2(2×50.0mL)萃取。將合併的有機層乾燥(Na2SO4)，過濾且在減壓下濃縮以得到深橙色液體。粗物質藉由急速層析(100%己烷)純化以得到標題化合物與其二硫化物之混合物(4.56g)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。硫醇3：(ES+)M+H=156.9及二硫化物：Rt=1.92min，(ES+)M+H=309.0。
6-甲氧基-4-甲吡啶-3-磺醯氯(4)之製備：向硫醇3(4.56g,29.4mmol)於H2O(123mL)中之混合物中添加氯化鉀(2.21g，29.3mmol)，接著逐份添加OXONE(45.2g，73.5mmol)。在反應完成之後(1h)，混合物用EtOAc(2×20.0mL)萃取且將合併的有機層乾燥(Na2SO4)並且在減壓下濃縮。所獲得之粗產物未經進一步純化即使用。
3-甲吡啶-4-磺醯氯：
步驟1：將4-溴吡啶(1.00mmol)溶解於甲苯(1.70mL)中且添加N,N-二異丙基乙胺(2.00mmol)。將混合物用氮氣鼓泡通過溶液來脫氣5min。添加參(二亞苄丙酮)-二鈀(0)(0.02mmol)、4,4-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃(0.04mmol)及苯基甲硫醇/苄硫醇(1.00mmol)。將混合物再次脫氣5min。在回流下加熱混合物18h(油浴T=115℃)。將反應冷卻至室溫，用EtOAc(10.0mL)稀釋且用H2O(10.0mL)淬滅。分離水層與有機層且用EtOAc(2×10.0mL)萃取水層，並且合併的有機相用鹽水HCl(10%於H2O中，10.0mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾且在減壓下濃縮。粗物質藉由急速層析(EtOAc-己烷，10%至35%)純化，以得到硫化物2：(90%產率)。(ES+)M+H=216.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.28(d,J=4.6,1H),8.24(s,1H),7.43-7.27(m,5H),7.20(t,J=5.4Hz,1H),4.25(s,2H),2.28(s,3H)。
步驟2：將化合物2(1.00mmol)溶解於CH2Cl2(11.5mL)中且冷卻至-10℃。添加HCl(1.00M於H2O中，5.70mL)且在-10℃下攪拌5min。歷時10min添加次氯酸鈉(於H2O中之10%溶液，3.00mmol)，保持溫度低於0℃。在0℃下攪拌混合物10min。分離有機層與水層。乾燥(Na2SO4)有機層。粗磺醯氯不經進一步純化或蒸發即用於下一步驟中：將LCMS樣品用N-甲基哌嗪淬滅(所得磺醯胺MW=255.3)；(ES+)M+H+=256.2。
2,3-二甲吡啶-4-磺醯氯：
自2,3-二甲基-4-溴吡啶開始，使用與3-甲吡啶-4-磺醯氯相同的程序：
步驟1：4-(苄硫基)-2,3-二甲吡啶(2)：(92%產率)。(ES+)M+H=230.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.17(d,J=5.5Hz,1H),7.42-7.28(m,5H),6.99(d,J=5.5Hz,1H),4.18(s,2H),2.53(s,3H),2.24(s,3H)。
步驟2：2,3-二甲吡啶-4-磺醯氯(3)：將LCMS樣品用N-甲基哌嗪淬滅(所得磺醯胺MW=269.3)；(ES+)M+H+=270.2。
基團B49之磺醯氯：
步驟1：向可商購之胺吡啶(1.00g，4.27mmol)及N-苄基胺甲醯氯(0.9421g，5.5546mmol)於EtOAc(20mL)中之溶液中添加20mL飽和NaHCO3水溶液。將溶液在RT下攪拌16h。一旦完成，則將EtOAc添加至反
應混合物中且分離有機層，用鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，隨後過濾且濃縮。將殘餘物吸附於SiO2上，隨後在SiO2上藉由EtOAc/己烷純化以得到所需的受保護之胺吡啶(1000mg，2.72mmol，64%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.35(s,1H),8.09(d,J=8.61Hz,1H),7.47(d,J=9.00Hz,1H),7.23-7.44(m,4H),5.16(s,2H),2.53(s,3H)MS m/z 369.2(MH+)。
步驟2：將來自步驟1之碘吡啶(0.61g，1.66mmol)、參(二亞苄丙酮)-二鈀(0)氯仿加成物(86mg，0.0828mmol)、9,9-二甲基-9h-二苯并哌喃-4,5-二基-雙(二苯膦)(96mg，0.166mmol)、dipea(0.576mL，3.31mmol)及苄硫醇(0.233mL，1.99mmol)於甲苯(15mL)中之脫氣溶液在N2下在115℃下攪拌3h。一旦完成，則將SiO2添加至反應混合物中且在真空下濃縮。將殘餘物在具有EtOAc/己烷之SiO2管柱上純化以提供預期硫化物(560mg，93%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.71(d,J=8.61Hz,1H),7.54(d,J=8.61Hz,1H),7.46(br.s.,1H),7.31-7.43(m,5H),7.19-7.26(m,2H),7.12-7.19(m,2H),5.22(s,2H),3.96(s,2H),2.41(s,3H)。MS m/z 365.2(MH+)。
步驟3：向來自步驟2之硫化物(300mg，0.823mmol)於含90% AcOH的水(16mL)中之溶液中添加N-
氯琥珀醯亞胺(330mg，2.47mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。將反應混合物蒸發至乾燥，隨後在EtOAc中稀釋且用水洗滌，接著用鹽水洗滌。將有機層經MgSO4乾燥、過濾且在真空下濃縮，以得到所需磺醯氯B49(282mg，99%)，其按原樣使用：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.28(d,J=9.00Hz,1H),8.02(d,J=9.00Hz,1H),7.72(br.s.,H),7.34-7.60(m,5H),5.27(s,2H),2.86(s,3H)。MS m/z 341.2(MH+)。
2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧呃-4-磺醯氯：
歷時20min，將亞硫醯氯(5.96mL)逐滴添加至水(30mL)中且在RT下攪拌混合物48h，以生成含有二氧化硫之溶液。在一單獨的容器中，將2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧呃-4-胺(1.00g，5.78mmol)逐滴添加至冰冷卻之HCl(7mL)中，以生成白色沉澱。歷時5min，將亞硝酸鈉(523mg，7.5mmol)於水(2mL)中之溶液逐滴添加至苯胺鹽酸鹽中，以生成橙色反應混合物。隨後，在5℃下將橙色懸浮液逐漸添加至來自上文之二氧化硫溶液中，其中先前已向該二氧化硫溶液中添加10mg氯化亞銅。將混合物在冰浴中再攪拌2h(觀測到氣體逸出且橙色液體沉積於燒瓶底部)。在如藉由LCMS分析決
定完成之後，將反應混合物用DCM(2×20mL)萃取、乾燥(Na2SO4)、過濾及濃縮，以得到呈橙色油狀物之所需磺醯氯(100%粗物質產率)，其未經進一步純化即使用：1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.65(dd,J=8.4,1.1Hz,1H),7.44(dd,J=8.1,1.1Hz,1H),7.32(t,J=8.2Hz,1H)。
4-氯-3-氟-2-甲苯磺醯氯：
N-(3-氟-2-甲苯基)三甲基乙醯胺(2)之製備：在0℃下，歷時10min，向3-氟-2-甲苯胺(10.9mL，93.0mmol)之THF(240mL)溶液中添加三乙胺(14.9mL，106mmol)，接著添加三甲基乙醯氯(13.1mL，105mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌2h。在減壓下蒸發揮發成分且將殘餘物分配於H2O(250mL)與EtOAc(150mL)之間。分離有機層與水層。將水層用EtOAc(4×60mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(60mL)洗滌、乾燥(Na2SO4)且在減壓下濃縮，以得到呈固體之標題化合物(18.5g，95%產率)。(ES+)M+H=210.2。
N-(4-氯-3-氟-2-甲苯基)三甲基乙醯胺(3)之製備：在室溫下，歷時10min，向化合物2(4.20g，20.1
mmol)之DMF(50.0mL)溶液中添加N-氯琥珀醯亞胺(2.76g，20.1mmol)(分3份)。在80℃下，加熱混合物90min。添加額外N-氯琥珀醯亞胺(541mg，4.01mmol)且在80℃下將其攪拌45min。將混合物冷卻至室溫且用EtOAc(30mL)及水(60mL)稀釋。分離有機層與水層。將水層用EtOAc(3×20mL)萃取。將合併的有機層用H2O(3×30mL)、鹽水(20.0mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)且在減壓下濃縮，以得到粗化合物(5.20g)。將粗物質溶解於環己烷(30mL)中且在45℃-50℃下加熱直至所有固體均溶解。將溶液冷卻至室溫。過濾出所沉澱之白色固體且用環己烷(3×5mL)洗滌，以得到呈固體之標題化合物(1.95g，40%產率)。(ES+)M+H=244.1。
4-氯-3-氟-2-甲苯胺(4)之製備：在室溫下，歷時5min，向化合物3(1.60g，6.57mmol)之二噁烷(18mL)溶液中添加HCl(6.00M於水中，23mL，138mmol)。在100℃下加熱混合物20h。將混合物冷卻至室溫。逐份添加固體K2CO3(放熱)直至獲得pH=8-9。將混合物用EtOAc(4×20mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(20mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)且在減壓下濃縮，以得到1.6g粗物質，將其在真空下乾燥24h，以得到呈油狀物之標題化合物(850mg，81%產率)。其不經進一步純化即用於下一反應中。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.99(t,J=8.3Hz,1H),6.40(d,J=8.6Hz,1H),2.22-2.06(m,3H)。
4-氯-3-氟-2-甲苯-1-磺醯氯(5)之製備：在冰冷卻下，歷時20min，將亞硫醯氯(29.1mL，395mmol)逐滴添加至H2O(92.1mL)中。將含有二氧化硫之此溶液在0℃下攪拌2h且在室溫下攪拌18h。各別地，在0℃下，將HCl(濃)(23mL)逐份添加至化合物4(3.00g,18.8mmol)中，以得到米色沉澱。將其在0℃下攪拌5min。歷時大致10min，逐滴添加亞硝酸鈉(1.70g，24.4mmol)於H2O(2mL)中之溶液。在5℃下，歷時40min，將上文所提及之含有氯化銅(I)之二氧化硫溶液(38.4mg，376μmol)逐漸添加至反應混合物中。在冰冷卻下，將混合物進一步攪拌2h且隨後在室溫下攪拌4天。將混合物用CH2Cl2(20mL)稀釋。分離水層與有機層。用CH2Cl2(3×20mL)萃取水層。將合併的有機層乾燥(Na2SO4)，過濾且濃縮以得到呈油狀物之粗化合物5(1.95g，30%產率，70%純度)。粗物質未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS：將LCMS樣品用N-甲基哌嗪淬滅(所得磺醯胺MW=306.784)；(ES+)M+H=307.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.81(d,J=8.4Hz,1H),7.46(t,J=7.5Hz,1H),2.69(s,3H)。
3-甲基-2-苯硫基磺醯氯：
如美國專利3,991,081中所描述，藉由3-甲基噻吩之氯磺醯化來製備。1H NMR(CDCl3)δ：7.67(d,J=5.1Hz,1H),7.03(d,J=5.1Hz,1H),2.63(s,3H)。
3-氯-2-苯硫基磺醯氯：
將3-氯噻吩(1.00g)溶解於CHCl3(10mL)中且將溶液冷卻至-30℃。歷時5min，逐滴添加氯磺酸(2.4mL)(無明顯的氣體逸出)。隨後，攪拌該橙褐色溶液30min，再經歷30min使溫度上升至-10℃，隨後上升至RT。隨後，在RT下攪拌反應混合物2h(未發現氣體逸出，且TLC顯示產物形成(在8：2己烷/EA中Rf=0.4))。將反應混合物傾至冰(50mL)上，添加DCM(25mL)且分離乳狀產物有機相，用冷水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮成黃色油狀物(0.55g)，將其在真空下乾燥且不經進一步純化即使用。1H NMR(CDCl3)δ：7.76(d,J=5.7Hz,1H),7.16(d,J=5.7Hz,1H)。
4-氯-3-甲噻吩-2-磺醯氯：
3-氯-4-甲噻吩之製備：在100mL燒瓶中，在室溫下，將氯化銅(I)(5.76g,56.5mmol)添加至含3-溴-4-甲噻吩(3.16mL，28.2mmol)之DMF(20.1mL)
中。將其在油浴中在160℃下加熱24h。將粗物質傾於H2O(50mL)上。在室溫下攪拌所得混合物10min。過濾所形成的褐綠色固體，用水(3×10.0mL)及Et2O(4×10.0mL)洗滌。將濾液用Et2O(3×25.0mL)萃取。將合併的有機層用H2O(2×20.0mL)、鹽水(20.0mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)且在減壓下濃縮，以得到橙色油狀物(0.890g，59%粗物質產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.09(d,J=3.5Hz,1H),6.99-6.95(m,1H),2.22-2.21(m,3H)。
4-氯-3-甲噻吩-2-磺醯氯之製備：將3-氯-4-甲噻吩(1.00g，7.54mmol)溶解於CHCl3(4.43mL)中，且在室溫下，歷時5min，添加氯磺酸(1.19mL，17.3mmol)於CHCl3(1.48mL)中之溶液。攪拌混合物10min。向反應混合物中添加五氯化磷(4.13g，18.9mmol)，接著添加CHCl3(7.50mL)。將其在50℃下加熱1h。將反應混合物緩慢添加至NaHCO3水溶液+冰(30mL)中。將其攪拌10min。用CH2Cl2(4×10mL)萃取。將合併的有機層乾燥(Na2SO4)，在減壓下濃縮以得到呈油狀物之標題化合物(1.30g，30%產率，40%純度)。其不經進一步純化即用於下一反應中。LCMS：將LCMS樣品用N-甲基哌嗪淬滅；(ES+)M+H=295.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.57(s,1H),2.57(s,3H)。
3,4-二氯噻吩-2-磺醯氯：
3,4-二氯噻吩之製備：在100mL燒瓶中，在室溫下，將氯化銅(I)(13.9g，137mmol)添加至含3,4-二溴噻吩(5.03mL，45.5mmol)之DMF(32mL)中。將其在油浴中在160℃下加熱24h。將粗物質傾於H2O(100mL)上且用Et2O(60mL)稀釋。在室溫下攪拌混合物10min。過濾所形成的褐綠色固體，用H2O(3×20mL)洗滌，隨後用Et2O(4×20mL)洗滌。將濾液用Et2O(4×30mL)萃取。將合併的有機層用H2O(2×30mL)、鹽水(30mL)洗滌，乾燥(MgSO4)且在減壓下濃縮，以得到呈紅色油狀物之標題化合物2(5.50g，79%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.21(s,2H)。
3,4-二氯噻吩-2-磺醯氯之製備：歷時5min，向化合物2(1.61g，10.5mmol)之CHCl3(5.98mL)溶液中添加氯磺酸(757μL，11.0mmol)於CHCl3(1.99mL)中之溶液。在室溫下攪拌混合物20min。將五氯化磷(5.77g，26.3mmol)分4份添加至混合物中。將混合物在50℃下加熱18h。在減壓下移除揮發成分，且將殘餘物溶解於CH2Cl2(25mL)中，用飽和NaHCO3水溶液(3×15mL)、H2O(3×10mL)及鹽水(10mL)洗滌。將有機層乾燥(Na2SO4)且在減壓下濃縮，以得到標題化合物3(2.32g，88%產率)。LCMS：將LCMS
樣品用N-甲基哌嗪淬滅(所得磺醯胺MW=315.240)；(ES+)M+H=315.1。
(3R)-3-甲氧基1-吡咯啶磺醯氯：
將(R)-3-甲氧基吡咯啶鹽酸鹽(0.30g，2.1mmol)懸浮於4mL甲苯及2mL DCM之混合物中。添加三乙胺(0.64mL，4.6mmol)且對混合物進行音波處理4-5min，以得到細白色懸浮液。在單獨的燒瓶中，將4mL甲苯在乙腈/乾冰浴中冷卻至-40℃。添加硫醯氯(0.71mL，8.7mmol)且將溶液攪拌5min。隨後，歷時10min，將吡咯啶懸浮液逐滴添加至冷(-40℃)硫醯氯溶液中。使所得懸浮液在相同的溫度下攪拌1小時且隨後使其升溫至室溫。濾出固體且用甲苯沖洗。濃縮濾液以得到呈淡褐色油狀物之所需產無(0.40g)，其未經進一步純化即使用。1H NMR(CDCl3)δ：4.07(tt,J=4.6,2.1Hz,1H),3.48-3.69(m,4H),3.36(s,3H),2.12-2.23(m,1H),1.98-2.12(m,1H)。
一般合成方法A：由胺甲酸三級丁酯A-2製備二氟苯胺鹽酸鹽中間物A-5(Ar=4-甲氧苯基)。
步驟1-苯胺中間物A-3之製備：將硝基芳烴A-2(5.00g，18mmol，按照J.Med.Chem.2003,46,1905中所描述之程序製備)及20% Pd(OH)2/C(130mg)懸浮於MeOH(50mL)中且當藉由TLC分析(在2：1己烷/EtOAc中Rf=0.45)顯示還原完成時，將混合物在含氫氣之氣球下攪拌18h。將懸浮液藉由Celite®墊過濾以移除催化劑，使用MeOH洗滌且在減壓下蒸發溶劑。一旦暴露於空氣，原本無色的溶液即快速變成極深的藍綠色。獲得呈深紫綠色泡沫狀物之粗中間物苯胺A-3，其未經進一步純化即立即用於下一步驟中：1H NMR(DMSO-d6)δ：8.58(s,1H),6.77(td,J=9.4,2.0Hz,1H),6.60(td,J=9.4,5.5Hz,1H),4.97(s,2H),1.43(s,9H)。
步驟2-磺醯胺A-4(Ar=4-甲氧苯基)之製備：將來自步驟1之粗苯胺A-3(假定為18mmol)溶解於THF(30mL)中且添加過量的4-甲氧苯基磺醯氯(7.53g，36mmol)，接著添加吡啶(6mL)。將混合物在50℃下攪拌18h。在減壓下移除THF且將殘餘物分配於EtOAc與水
之間。將萃取物用飽和NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，且經MgSO4乾燥。將乾燥劑漿液通過75mL矽膠墊，使用EtOAc洗滌，以移除乾燥劑及基線物質。移除溶劑得到褐色油狀物，將其藉由二氧化矽(約250mL)急速層析純化，使用20%-50% EtOAc/己烷作為溶離劑。在真空下乾燥之後，獲得呈褐色泡沫狀物之產物A-4(8.16g)，其經未反應之磺醯氯以藉由1H NMR之2：1的比污染。該物質按原樣直接用於下一步驟中：1H NMR(CDCl3)δ：7.68(d,J=9.0Hz,2H),7.41(td,J=8.8,5.5Hz,1H),6.85-6.98(m,3H),6.57(br.s,1H),5.85(br.s,1H),3.85(s,3H),1.46(s,9H)。MS m/z 413.0(M-H)，m/z 313.0(M-H-Boc)。
步驟3-苯胺鹽酸鹽A-5(Ar=4-甲氧苯基)之製備：在RT下將來自步驟3之粗胺甲酸酯A-4(8.16g)在含4N HCl之二噁烷(25mL)中攪拌1.5h，在此期間米色固體逐漸沉澱。1.5h之後，添加另一10mL之含4N HCl之二噁烷且繼續攪拌另外1h。隨後，將反應混合物用50mL二乙醚稀釋且藉由過濾收集該米色沉澱，用乙醚洗滌且在真空下乾燥。自硝基芳烴A-2以68%總產率獲得呈純形式之苯胺鹽A-5(4.38g)：1H NMR(DMSO-d6)δ：9.73(s,1H),7.62(d,J=8.6Hz,2H),7.06(d,J=9.0Hz,2H),6.69-6.88(m,1H),6.30(td,J=8.6,5.5Hz,1H),3.81(s,3H)。MS m/z 313.0(M-H)。
一般合成方法A：由乙醯苯胺A-8製備二氟苯胺鹽酸鹽中間物A-5(Ar=2,3-二氯苯基)。
乙醯苯胺A-8之製備：乙醯苯胺A-7可按照Bioorg.Med.Chem.2016,24,2215中所描述之文獻程序藉由用乙酸酐乙醯化2,6-二氟苯胺A-6來製備。如WO 2012/101238A1中所描述，藉由依序硝化，接著將硝基還原為苯胺來將中間物A-7轉化為乙醯苯胺A-8。
步驟1-磺醯胺A-9(Ar=2,3-二氯苯基)之製備：將苯胺A-8(8.50g，45.5mmol)溶解於THF(145mL)中且將吡啶(4當量，14.7mL)添加至褐色溶液中，接著添加2,3-二氯苯磺醯氯(1.2當量，13.45g)。將所得反應混合物在45℃下攪拌3.5小時，之後藉由LCMS監測判斷轉化完成。使反應混合物冷卻至室溫，隨後分配於EtOAc及2-Me-THF(1：1)與水之間。添加1N HCl溶液，直至獲得微弱酸性pH值。顯著量之灰白色固體存在於雙相混合物中且濾出(第一批)。分離濾液層，且水層用EtOAc再萃取兩次。合併的有機萃取物用水洗滌一次，隨後用鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮至約20mL。
對所得懸浮液進行音波處理，且藉由過濾收集固體並且用EtOH洗滌(第2批)。將兩批合併且在減壓下乾燥。獲得呈米色固體之A-9(15.3g，85%產率)，其未經進一步純化即使用：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.61(s,1H),9.67(s,1H),7.95(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.85(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.51(t,J=8.0Hz,1H),7.05-7.18(m,2H),2.00(s,3H)。MS m/z 395.0(MH+)。
步驟2-苯胺鹽酸鹽A-5(Ar=2,3-二氯苯基)之製備：在500mL圓底燒瓶中，將乙醯苯胺A-9(7.00g，17.7mmol)懸浮於乙醇(65mL)中且添加濃HCl與水(65mL)之1：1混合物。燒瓶配備有塞頭回流冷凝器且在攪拌下在80℃下加熱。24小時之後，如藉由LCMS監測判斷轉化率為~70%。將額外EtOH(65mL)及6N HCl(65mL)添加至懸浮液中且在80℃下攪拌假定7小時以上，之後LCMS指示完全轉化為所需苯胺。將反應混合物用50mL水稀釋，同時仍然溫熱，且藉由棉塞過濾以移除少量不溶性物質。隨後在減壓下將其濃縮至乾燥。殘餘物藉由在減壓下蒸發甲苯3次來進行共沸乾燥，隨後在真空下乾燥，得到7.2g呈黃色固體形式之所需產物A-5，作為其HCl鹽：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.30(s,1H),7.93(dd,J=8.2,1.2Hz,1H),7.83(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.49(t,J=8.0Hz,1H),6.68-6.96(m,
1H),6.31(td,J=8.6,5.5Hz,1H)。MS m/z 350.9(M-H)。
以下A-5中間物係使用相關磺醯氯且經由如表1中所描述之胺甲酸酯A-2或乙醯苯胺A-8進行的類似順序製備：
一般合成方法A-由中間物A-5製備抑制劑W-I：
步驟1-吡啶并嘧啶酮A-11之製備：採用J.Med.Chem.2014,57,3484中所描述之程序，將可商購之3-胺基-6-氯甲吡啶醯胺A-10(9.00g，52.5mmol)懸浮於250mL圓底燒瓶中之116mL原甲酸三乙酯中且向褐色懸浮液中添加4-甲苯磺酸水合物(0.027g，0.14mmol)。在設置為140℃之油浴中，將混合物在未塞蓋之燒瓶對空氣敞開之情況下攪拌。52小時之後，LCMS顯示起始物質完全消耗。使米色懸浮液冷卻至室溫，隨後在減壓下濃縮成約15-20mL之漿液。隨後將其用20mL之1：1 EtOAc/Et2O混合物稀釋且音波處理。隨後藉由過濾收集固體，用10-15mL之EtOAc/Et2O混合物洗滌且在真空下乾燥以得到A-11(6.73g，70%產率)：1H NMR(DMSO-d6)δ：12.74(br.s.,1H),
8.20(s,1H),8.15(d,J=8.6Hz,1H),7.88(d,J=8.6Hz,1H)。MS m/z 182.0(MH+)。
步驟2-二氯吡啶并嘧啶A-12之製備：按照J.Med.Chem.2014,57,3484中所描述之程序，將嘧啶酮A-11(8.61g，47mmol)懸浮於亞硫醯氯(60mL)中且向混合物中添加2滴DMF。燒瓶配備有回流冷凝器且在油浴中在80℃下加熱6小時，此時黏稠糊狀漿液變成深褐色溶液持續約30分鐘。LCMS分析揭示起始物質基本上完全消耗。在冷卻至室溫之後，將混合物濃縮，隨後在減壓下乾燥。以米色固體形式獲得之A-12(9.51g)未經進一步純化按原樣使用：1H NMR(CDCl3)δ：9.14(s,1H),8.35(d,J=9.0Hz,1H),7.87(d,J=9.0Hz,1H)。
步驟3-氯吡啶中間物A-13(Ar=4-甲氧苯基)之製備：按照WO 2012/101238A1中所描述之類似程序，將粗二氯吡啶并嘧啶A-12(0.44g，2.2mmol，1.2當量)及苯胺鹽酸鹽A-5(Ar=4-甲氧苯基：0.65g，1.8mmol)溶解於乙酸(5mL)中且將混合物在50℃下攪拌1h(LCMS顯示完全轉化)。將反應混合物用3倍體積之水稀釋且將所得米色懸浮液劇烈攪拌30min，隨後藉由過濾收集產物，用水洗滌且在真空下乾燥。獲得呈米色固體之氯吡啶A-13(Ar=4-甲氧苯基)(0.88g)1H NMR(DMSO-d6)δ：10.10(br.s,2H),8.50(s,1H),8.28(d,J=9.0Hz,1H),7.99(d,J=9.0Hz,1H),
7.67(d,J=8.9Hz,2H),7.13-7.30(m,2H),7.09(d,J=9.0Hz,2H),3.81(s,3H)。MS m/z 478.0(MH+)。
以下A-13氯吡啶中間物係以類似方式製備且描述於表2中：
步驟4-實例1(W-I：Ar=4-甲氧苯基，Het=1-苯并咪唑基)之製備：將氯吡啶A-13(Ar=4-甲氧苯基；25mg，0.05mmol)、苯并咪唑(11mg，0.09mmol，1.8當量)，Cu粉(0.3mg)、外消旋-BINOL(0.5mg)及碳酸銫(2.3當量，39mg，0.12mmol)稱取於4mL小瓶中且添加DMSO(0.7mL)。將小瓶蓋上且將混合物在125℃下攪拌2h(產生深橙褐色溶液)。LCMS顯示完全轉化為所需產物。將反應混合物用AcOH(200μL)酸化且注入使用30%-100% MeOH 0.05%TFA梯度之製備型逆相HPLC上。在凍乾之後獲得呈米色粉末之抑制劑1-TFA鹽(17mg)。
以類似方式製備之抑制劑之其他實例描述於表3及4(方法A)中。
使用合成方法B合成抑制劑W-I(實例8)：
步驟1：將胺甲酸酯A-2(1.50g)溶解於8.2mL含4M HCl溶液之二噁烷中。在室溫下5分鐘之後，淡褐色溶液變成淡黃色懸浮液。使其攪拌16h(LCMS顯示完全轉化為所需產物)。在減壓下將反應混合物濃縮至乾燥，並且將固體殘餘物與甲苯共蒸發2次且在真空下乾燥。所得淡綠色固體(1.11g，97%產率)未經進一步純化按原樣使用：1H NMR(DMSO-d6)δ：7.31(ddd,J=9.2,8.0,5.5Hz,1H),7.10-7.18(m,1H)。
步驟2：將來自步驟1之苯胺鹽酸鹽B-1(600mg，2.85mmol)及二氯吡啶并嘧啶A-12(1.1當量，627mg，3.13mmol)懸浮於AcOH(8mL)中且在50℃下攪拌1.5h，此時藉由LCMS發現反應完成。使該深褐色溶液冷卻至室溫，隨後緩慢傾入30mL冰/水中。一旦冰融
化，即音波處理該懸浮液，並且藉由過濾收集固體且用水洗滌。在真空下乾燥之後，獲得呈米色固體之氯吡啶B-2(878mg，91%產率)，其未經進一步純化按原樣使用：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.39(s,1H),8.61(s,1H),8.33(d,J=9.0Hz,1H),8.29(td,J=9.2,5.9Hz,1H),8.04(d,J=9.0Hz,1H),7.56(td,J=9.0,1.0Hz,1H)。MS m/z 338.0(MH+)。
步驟3：將硝基芳烴B-2(875mg，2.6mmol)及二水合二氯化錫(II)(5當量，2.92g，13mmol)懸浮於20mL乙醇中。將混合物加熱至60℃，得到深橙色溶液且在該溫度下攪拌2h，此時藉由LCMS分析反應且發現反應完成。使混合物冷卻至室溫，隨後在減壓下濃縮以移除大部分乙醇。將濃縮物倒入EtOAc(150mL)中且添加1N NaOH溶液直至獲得兩個幾乎澄清的相。分離各層且用50mL EtOAc再萃取水層3次。將合併的有機層用水洗滌，隨後用鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾，濃縮且在真空下乾燥。獲得呈淡黃褐色固體之苯胺B-3(792mg，99%產率)，其未經進一步純化按原樣使用：1H NMR(DMSO-d6)δ：9.99(s,1H),8.53(s,1H),8.27(d,J=8.6Hz,1H),7.98(d,J=8.6Hz,1H),6.89(td,J=9.2,1.6Hz,1H),6.74(td,J=9.4,5.5Hz,1H),5.07(s,2H)。MS m/z 308.0(MH+)。
步驟4-苯胺B-4(Het=1-苯并咪唑基)之製備：將氯吡啶并嘧啶B-3(495mg，1.6mmol)裝入50mL
燒瓶中且溶解於6mL DMSO中。隨後添加苯并咪唑(1.15當量，220mg，1.85mmol)、碳酸銫(2.3當量，1.21g，3.7mmol)、銅粉(0.01當量，1mg)及BINOL(0.01當量，4.5mg)。將所得深色混合物在100℃下攪拌2h。此時的LCMS分析揭示~40%轉化率。將溫度升高至120℃且使混合物再攪拌2小時，此時僅存在痕量的起始苯胺。使混合物冷卻至室溫，隨後用1N HCl中和(pH 7)。隨後將其分配於水(75mL)與DCM(100mL)之間。在攪拌之後，將約5g celite®添加至褐色乳液中，將該乳液藉由celite®墊過濾，用DCM洗滌。將濾液(兩個澄清層)轉移至分液漏斗中且分離各層。將水相用DCM再萃取兩次，並且將合併的有機層用水洗滌兩次且用鹽水洗滌一次。隨後將有機部分經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由使用100% DCM至40% i-PrOH/DCM梯度之24g管柱急速層析(combiflash)純化。將適當的級分(在1：9 i-PrOH/DCM中Rf=0.25)合併且濃縮，以得到124mg呈深黃色固體之B-4(Het=1-苯并咪唑基)，其為所需產物與未反應之苯并咪唑的1：1莫耳混合物。粗物質未經進一步純化即用於磺醯化步驟(步驟5)：1H NMR(DMSO-d6)δ：9.79(s,1H),9.39(s,1H),8.56(s,1H),8.52(d,J=9.4Hz,1H),8.47(d,J=9.0Hz,1H),8.39(d,J=7.8Hz,1H),7.83(d,J=7.4Hz,1H),7.37-7.49(m,2H),6.95(td,
J=9.2,1.6Hz,1H),6.78(td,J=9.4,5.5Hz,1H),5.13(s,2H)。MS m/z 390.1(MH+)。
步驟5(實例8)：將2-氯苯磺醯氯(2當量，26mg，0.12mmol)稱取於4mL小瓶中且溶解於0.5mLTHF中。隨後添加粗苯胺B-4(24mg，0.06mmol)，接著添加吡啶(6當量，30μL，0.37mmol)。將所得混合物在50℃下攪拌18h，此時藉由LCMS發現反應完成(混合物中亦存在副產物，其對應於將磺醯氯添加至污染起始物質之殘餘苯并咪唑上)(MS m/z 293.0：MH+)。使反應混合物冷卻至室溫，隨後藉由添加0.2mL乙酸來淬滅且用甲醇稀釋至2mL。產物藉由製備型HPLC(MeOH/H2O/0.1%甲酸條件，50%→100%甲醇梯度)分離。合併含有主峰之級分且部分濃縮以移除甲醇。藉由添加幾毫升乙腈溶解所得懸浮液，隨後將溶液冷凍且凍乾。獲得9.8mg呈米色固體之所需產物(實例8)。
以類似方式製備之抑制劑之其他實例描述於表3及4(方法B)中。
使用合成方法C及有機硼試劑經由鈴木-宮浦交聯偶合來合成抑制劑W-II(實例71及510)：
向2mL微波小瓶中裝入30mg(1當量)氯吡啶并嘧啶A-13、2當量6-甲氧基吡啶基-3-硼酸(19mg)及4當量無水碳酸鉀(34mg)。隨後添加DME(1.5mL)及水(0.5mL)，且將氮氣鼓泡通過混合物2分鐘。添加肆(三苯基膦)鈀(0)(0.05當量，3.5mg)，將氮氣再鼓泡通過混合物2分鐘且密封小瓶。隨後將反應混合物在90℃下在微波中照射1h。此時的LCMS分析揭示反應完成。將反應混合物用0.6mL乙酸處理且在減壓下濃縮至約0.5mL。隨後用甲醇及DMSO將其稀釋至2mL，過濾且藉由製備型HPLC(MeOH/H2O/0.1%甲酸條件，50%→100%甲醇梯度)純化。將適當級分合併且部分濃縮以移除甲醇。藉由添加幾毫升乙腈溶解所得懸浮液，隨後將溶液冷凍且凍乾。獲得呈米色固體之實例71之抑制劑(15mg)。
使用適當氯吡啶片段A-13(表2)及可商購之硼酸或硼酸酯以類似方式製備的抑制劑之其他實例列於方法C下之表4中。實例510之類似物係使用可商購之硼酸酯、作為鹼之碳酸銫、作為催化劑之反式-二氯雙(三苯基膦)-鈀(II)及作為溶劑之二噁烷以類似方式製備。
使用合成方法C及有機錫試劑經由施蒂勒交聯偶合來合成抑制劑W-II(實例561)：
步驟1：在N2下，在-78℃下，向可商購之溴化物(100mg，0.497mmol)於THF(5mL)中之溶液中添加2.5M nBuLi於己烷(0.24mL，0.597mmol)中之溶液且在此溫度下攪拌30min。此後，添加三正丁基氯化錫(0.13mL，0.497mmol)且將所得溶液攪拌30min。完成之後，添加EtOAc且將有機層用鹽水洗滌，隨後經MgSO4乾燥，過濾且在真空下濃縮以提供有機錫中間物(154mg，75%)。MS m/z 413.2(MH+)。
步驟2：將裝有於PhMe-DMF1：1(0.5mL)中之來自步驟1之有機錫試劑(40mg，0.0968mmol)、2,3-二氯-N-[3-[(6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)胺基]-2,4-二氟-苯基]苯磺醯胺(50mg，0.0968mmol)、碘化銅(I)(1.2mg，0.0290mmol)、(R)-(+)-2,2"-雙(二苯基膦)-1,1"-聯萘(12mg，0.0194mmol)及1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵-二氯化鈀(ii)二氯甲烷錯合物(7.1mg，0.00968mmol)的小瓶脫氣且用N2吹掃3次。在N2氛圍下在90℃下攪拌混合物16小時。一旦完成，即將反應混合物用EtOAc稀釋，隨後用10% KF水溶液洗滌3次，接著用鹽水洗滌。將有機層經MgSO4乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物在具有ACN/0.1%.HCOOH水溶液之逆相HPLC上純化以在凍乾後得到實例561(2.7mg，5%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.73(br.s.,1H),9.44(s,1H),8.76(d,J=9.00Hz,1H),8.39-8.62(m,2H),8.23(d,J=8.22Hz,1H),
7.91(dd,J=1.17,7.83Hz,2H),7.51(t,J=8.02Hz,2H),7.27(br.s.,1H),7.17(br.s.,1H),6.83(d,J=8.22Hz,1H),4.41(s,1H),3.98-4.15(m,2H),3.51-3.60(m,2H),1.54-1.79(m,4H),1.17-1.38(m,3H)。MS m/z 712.3(MH+)。
使用適當的氯吡啶片段A-13(表2)及可商購之有機錫化合物或轉化為上述步驟1中相應有機錫物質的溴化物以類似方式製備的抑制劑之其他實例列於方法C下之表4中(實例562-565、590及591)。
用於合成式W-III之抑制劑的一般方法(方法D，X=CH)-實例109之合成：
步驟1-羧酸D-1之製備：將氯吡啶并嘧啶A-13(Ar=2-氯苯基)(150mg，0.3mmol，1當量)裝入4mL小瓶，接著裝入吲哚-3-甲酸甲酯(71mg，0.4mmol，1.3當量)、銅(0)(0.6mg，0.03當量)、BINOL(2.7mg，0.03當量)、碳酸銫(150mg，0.47mmol，1.5
當量)及DMSO(1.5mL)。將所得混合物在100℃下攪拌1.75h，得到深褐色溶液(LCMS顯示完全轉化)。使反應冷卻至室溫，隨後將6當量(0.5mL)之4N氫氧化鈉添加至混合物中。將其在50℃下攪拌1h(LCMS顯示完全轉化為羧酸)。將混合物用水(2mL)稀釋且藉由celite®塞過濾以移除不溶性顆粒。隨後用1N HCl將其酸化至約pH 1且用10mL水稀釋，得到凝膠狀懸浮液(不可過濾的)。將混合物用EtOAc萃取3次並且將合併的有機層用水洗滌兩次且用鹽水洗滌一次，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮以得到220mg呈黃色固體之粗羧酸：1H NMR(DMSO-d6)δ：12.56(br.s.,1H),10.53(s,1H),9.99(s,1H),8.97(s,1H),8.50(s,1H),8.47(d,J=9.0Hz,1H),8.43(d,J=9.4Hz,1H),8.23-8.29(m,1H),8.16-8.22(m,1H),7.91(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.62-7.71(m,2H),7.48-7.55(m,1H),7.35-7.44(m,2H),7.24-7.33(m,1H),7.21-7.24(m,1H),7.16-7.21(m,1H)。MS m/z 607.0(MH+)。
步驟2-抑制劑W-III之製備(實例109)：向來自步驟1之於NMP(1mL)中之粗羧酸(30mg，1當量)中添加DIEA(40μL，6當量)及HATU(30mg，2當量)。將溶液攪拌2-3min，得到深黃色溶液。添加嗎啉(7mg，2當量)且將反應混合物在室溫下攪拌3h，此時藉由LCMS發現反應完成。將反應藉由添加0.2mL乙酸淬滅，隨後用
甲醇稀釋至2mL且藉由製備型HPLC(MeOH/H2O/0.1%甲酸條件，50%→100%甲醇梯度)純化。將適當級分合併且部分濃縮以移除甲醇。藉由添加幾毫升乙腈溶解所得懸浮液，隨後將溶液冷凍且凍乾。獲得呈灰白色固體之醯胺實例109(14.5mg)。
以類似方式製備的抑制劑之其他實例列於方法D下之表4中。
用於合成式W-III之抑制劑的一般方法(方法D，X=N)-實例127之合成：
步驟1-羧酸D-2之製備：將氯吡啶并嘧啶A-13(Ar=3-氯-2-甲苯基)(300mg，0.6mmol，1當量)裝入4mL小瓶中，接著裝入3-吲唑甲酸甲酯(140mg，0.79mmol，1.3當量)、銅(0)(1mg，0.03當量)、BINOL(5mg，0.03當量)、碳酸銫(295mg，0.91mmol，1.5當量)及DMSO(2mL)。將小瓶塞住且將混合物在100℃下攪拌1.5h，得到深褐色溶液。LCMS分析揭示反應基本上完成。使反應冷卻至室溫，隨後添加6當量
(0.9mL)之4N氫氧化鈉溶液。將混合物在50℃下攪拌1.5h(LCMS顯示甲酯完全皂化)。將混合物用水(3mL)稀釋且藉由celite®塞過濾，同時仍然溫熱，以移除不溶性顆粒。隨後用1N HCl將其酸化至約pH 1且用10mL水稀釋，在音波處理之後得到細懸浮液。藉由過濾收集固體且在真空下乾燥。獲得呈米色固體之粗羧酸D-2(Ar=3-甲基-2-氯苯基)(398mg)：1H NMR(DMSO-d6)δ：13.70(br.s,1H),10.58(s,1H),9.48(s,1H),9.03(d,J=8.6Hz,1H),8.65(d,J=9.0Hz,1H),8.54(br.s.,1H),8.48(d,J=9.0Hz,1H),8.26(d,J=7.8Hz,1H),7.79(d,J=7.8Hz,1H),7.75(d,J=7.8Hz,1H),7.68(t,J=7.6Hz,1H),7.54(t,J=7.6Hz,1H),7.40(t,J=8.0Hz,1H),7.28-7.36(m,1H),7.25(t,J=9.0Hz,1H),2.66(s,3H)。MS m/z 622.0(MH+)。
步驟2-抑制劑W-III之製備(實例127)：將來自步驟1之粗羧酸(30mg，1當量)溶解於NMP(1mL)中且添加DIEA(50μL，6當量)及HATU(37mg，2當量)。將溶液在室溫下攪拌2-3min，得到深黃色溶液。隨後添加N-Boc-哌嗪(18mg，2當量)且將反應混合物在室溫下攪拌2h，此時藉由LCMS發現反應完成。反應藉由添加1mL飽和氯化銨溶液來淬滅，隨後用水稀釋至4mL。隨後將所得懸浮液進行音波處理，且藉由過濾收集固體。隨後用水洗滌該等固體且在真空下乾燥。隨後將固體倒入
DCM(1mL)及MeOH(0.5mL)中且用1mL之於二噁烷中之4N HCl溶液處理。在室溫下攪拌2小時後，LCMS分析顯示Boc保護基完全裂解。將混合物濃縮至乾燥，將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(MeOH/H2O/0.1%甲酸條件，30%→100%甲醇梯度)純化。將適當級分合併且部分濃縮以移除甲醇。藉由添加幾毫升乙腈溶解所得懸浮液，隨後將溶液冷凍且凍乾。獲得呈淡黃色固體之實例127之醯胺(14mg)。
以類似方式製備的抑制劑之其他實例列於方法D下之表4中。
用於合成式W-IV之抑制劑的一般方法(方法E)-實例227之合成：
步驟1-中間物E-2之製備：將3-溴-1,2-苯二胺(2.00g，10.7mmol)連同15mL甲酸一起裝入50mL燒瓶中。使混合物在120℃油浴中回流且攪拌4h。在減壓下將混合物濃縮成深色油狀殘餘物，用水稀釋且在冰浴中冷卻。混合物之中和係以1N NaOH開始且以飽和NaHCO3溶液結束。藉由在布氏漏斗中過濾來收集深褐色固體且用水洗滌。隨後將固體在真空下乾燥，得到1.91g呈深褐色固體之所需溴苯并咪唑E-2，其按原樣使用：1H NMR(DMSO-d6)δ：12.81(br.s.,1H),8.30(s,1H),7.58(d,J=8.2Hz,1H),7.41(d,J=7.8Hz,1H),7.14(t,J=8.0Hz,1H)。MS m/z 197.0(MH+)。
步驟2-中間物E-3之製備：採用WO 2004/076411A2中所描述之程序，將溴苯并咪唑E-2(350mg，1.776mmol)溶解於8mL無水THF中。在室溫下添加於礦物油中之60%氫化鈉分散液(78mg，1.95mmol)。10分鐘之後，將反應冷卻至-78℃且逐滴添加於戊烷中之1.4莫耳三級丁基鋰(2.66ml，3.73mmol)。反應混合物變得極濃稠且難以攪拌。30分鐘之後，混合物藉由添加DMF(0.55ml，7.1mmol)來淬滅。使其升溫至室溫，隨後分配於EtOAc與水及NaHCO3飽和溶液的1：1混合物之間。分離各層且水層進一步用EtOAc萃取3次將合併的有機層用鹽水洗滌一次，隨後經Na2SO4乾燥。隨後將有機層過濾且濃縮成殘餘物。將所得深褐色膠狀固
體用2mL己烷研磨兩次以自NaH中移除礦物油。隨後將固體倒入6mL EtOAc中且音波處理。藉由過濾收集固體且在抽吸下乾燥，以得到呈深褐色固體之E-3(117mg)：1H NMR(DMSO-d6)δ：13.01(br.s.,1H),10.17(s,1H),8.31(s,1H),8.04(d,J=7.8Hz,1H),7.88(d,J=7.4Hz,1H),7.43(t,J=7.8Hz,1H)。自母液中回收第二批產物(148mg，~80%均勻性)。
步驟3-中間物E-4之製備：將氯吡啶并嘧啶A-13(Ar=2-氯苯基：75mg，1當量)連同來自步驟2之粗苯并咪唑E-3(26mg，1.15當量)、銅(0)(0.3mg，0.03當量)、BINOL(1.3mg，0.03當量)、碳酸銫(76mg，1.5當量)及DMSO(1mL)一起裝入4mL小瓶中。將所得混合物在100℃下攪拌1h，此時LCMS顯示完全反應。使混合物冷卻至室溫，隨後藉由添加0.1mL乙酸來淬滅。將混合物用水稀釋至10mL，隨後音波處理。藉由過濾收集沉澱且用水洗滌。隨後將褐色固體在真空下乾燥。獲得呈褐色固體之粗中間物E-4(98mg)且按原樣用於步驟4中：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.85(br.s.,1H),10.53(br.s.,1H),9.84(s,1H),9.54(br.s.,1H),8.76(d,J=7.4Hz,1H),8.45-8.63(m,2H),7.92(d,J=7.4Hz,1H),7.88(d,J=7.4Hz,1H),7.55-7.73(m,3H),7.51(t,J=7.2Hz,1H),7.12-7.34(m,2H)。MS m/z 592.1(MH+)。
步驟4-抑制劑W-IV之製備(實例227)：將3-氟吖呾鹽酸鹽(17mg，0.15mmol)連同1mL甲醇及4N氫氧化鈉溶液(0.038ml，0.15mmol)一起裝入4mL小瓶中。隨後添加來自步驟3之粗醛E-4(30mg，0.051mmol)且將混合物在50℃下加熱10分鐘。最後添加氰基硼氫化鈉(9.55mg，0.15mmol)。將反應混合物在50℃下再攪拌2h，此時藉由LCMS顯示轉化完成。藉由添加於0.5mL DMSO中之乙酸溶液(0.2mL)將反應淬滅，過濾溶液且藉由製備型HPLC(30%→100% MeOH/H2O梯度，0.1%甲酸)分離產物。將適當級分合併且濃縮以移除甲醇，隨後冷凍且凍乾。分離出呈灰白色固體之實例227之化合物(12.7mg)。
用於合成式W-V之抑制劑的一般方法(方法F)-實例243之合成：
步驟1：將溴苯并咪唑E-2(70mg，0.355mmol)、碳酸鉀(196mg，1.42mmol)及3-吡啶基硼酸(57mg，0.46mmol)裝入4mL小瓶中且添加二噁烷(2mL)及水(0.7mL)。將氬氣鼓泡通過混合物1分鐘且隨後添加肆(三苯基膦)鈀(0)(16.4mg，0.014mmol)。再次將氬氣鼓泡通過溶液3min，將小瓶密封且在100℃下
加熱2小時(如藉由LCMS分析判斷轉化為所需產物已完成)。使反應混合物冷卻至RT，用EtOAc稀釋且用鹽水洗滌。在MgSO4上乾燥之後，在減壓下濃縮萃取物且殘餘物藉由使用Et3N預處理之二氧化矽及DCM-20% iPrOH/DCM梯度的急速層析純化，以提供所需苯并咪唑中間物(58mg，84%產率)：1H NMR(DMSO-d6)δ：12.71(寬頻帶s,1H),9.24(s.1H),8.57(dd,J=5.1,1.6Hz,1H),8.43(broad d,J=5.5Hz,1H),8.31(s,1H),7.61(d,J=7.8Hz,1H),7.52(ddd,J=7.8,4.7,0.8Hz,1H),7.47(d,J=7.4Hz,1H),7.34(t,J=7.8Hz,1H)。MS m/z 196.1(MH+)。
步驟2(實例243)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之粗苯并咪唑與氯吡啶A-13(Ar=2-氯苯基)偶合。
使用步驟1中的適當可商購之硼酸及氯吡啶中間物A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基或2,3-二氯苯基)以類似方式製備其他化合物(例如實例251、272、273及342)。
用於合成式W-VI之抑制劑的一般方法(方法G)-實例437之合成：
步驟1：向具有攪拌棒之小瓶中添加於無水THF(1.5mL)中之1-(對甲苯磺醯基)吲哚-3-磺醯氯(117mg，0.316mmol)(Chemical and Pharmaceutical Bulletin 2009,57,591)。將溶液冷卻至0℃且逐滴添加DIEA(0.11mL，0.633mmol)。隨後逐滴添加N-(2-甲氧基乙基)乙胺(0.039mL，0.316mmol)且將反應混合物緩慢升溫至室溫。將反應在室溫下攪拌1h。完成之後，逐滴添加10% KOH水溶液(與溶劑體積相同)。在60℃下將反應加熱隔夜。完成之後，用EtOAc稀釋反應混合物且添加NH4Cl水溶液。分離各層。將有機層用鹽水洗滌，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮至乾燥以得到呈淺橙色油狀物之預期磺醯胺衍生物(86mg，96%)。MS m/z 283.2(MH+)。
步驟2(實例437)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之吲哚磺醯胺與氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合。
在步驟1中使用適當的胺以類似方式製備的抑制劑之其他實例列於方法G下之表4中。
用於合成式W-VII之抑制劑的一般方法(方法H)-實例466之合成：
步驟1：向1H-吲哚-3-基-硫氰酸酯(Phosphorus,Sulfur and Silicon and the Related Elements 2014,189,1378)(100mg，0.574mmol)於iPrOH(5mL)中之溶液中添加九水合硫化鈉(414mg，1.72mmol)，溶解於0.5mL水中，隨後將所得混合物在50℃下攪拌2h。此後，添加4-氯四氫吡喃(0.19mL，1.72mmol)且在50℃下攪拌隔夜。用EtOAc(30mL)稀釋反應混合物且進行分離。將有機層用水(15mL)洗滌，接著用鹽水(15mL)洗滌，經MgSO4乾燥且隨後在真空下濃縮以得到粗硫化物，其未經進一步純化直接用於下一步驟中。
步驟2：將來自步驟1之硫化物溶解於DCM中且添加3-氯過氧苄酸(297mg，1.72mmol)並且在室溫下攪拌2h。完成之後，反應藉由添加10ml之飽和NaHCO3水溶液與10% Na2SO3水溶液之1：1溶液淬滅。將所得懸浮液在室溫下攪拌15min。添加EtOAc且分離有機層。有機層用水(15mL)洗滌，隨後用飽和鹽水溶液(15mL)洗滌。將有機層進行分離、乾燥(MgSO4)且過濾，接著濃
縮至乾燥以提供預期碸(154mg，98%)，將其溶解於DMSO中且未經進一步純化直接用於下一步驟中。MS m/z 266.2(MH+)。
步驟3(實例466)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之吲哚與氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合。
在步驟1中使用適當的烷化劑以類似方式製備的抑制劑之其他實例列於方法H下之表4中。
用於合成式W-VIII之抑制劑的一般方法(方法I)-實例524及665之合成：
實例524(鐵金屬作為步驟2之還原劑)：
步驟1：將4-甲哌啶-4-醇(0.24g，1.84mmol)及碳酸鉀(0.49g，3.52mmol)添加至3-氟-2-硝基-苯胺(0.25g，1.60mmol)於MeCN(2.6mL)中之溶液中。將所得混合物在85℃下攪拌10h。在減壓下移除MeCN且添加EtOAc。將懸浮液離心且傾入燒瓶中。將溶液濃縮且粗1-(3-胺基-2-硝基-苯基)-4-甲基-哌啶-4-醇
(0.40g，94%產率)未經進一步純化即用於下一步驟中。MS m/z 252.2(MH+)。
步驟2(使用鐵作為還原劑)：將鐵(0.37g，6.70mmol)及氯化銨(0.36g,6.70mmol)添加至1-(3-胺基-2-硝基-苯基)-4-甲基-哌啶-4-醇(0.34g，1.34mmol)於iPrOH(6.5mL)及甲酸(1.9mL，49.6mmol)中之混合物中。將所得混合物加熱至90℃且攪拌10h。將反應混合物冷卻至室溫，且藉由Celite®過濾。濃縮溶液且將粗物質藉由管柱層析(矽膠，0%-15% MeOH/DCM)純化以得到呈微紅色泡沫狀固體之1-(1H-苯并咪唑-4-基)-4-甲基-哌啶-4-醇(0.17g，55%產率)。MS m/z 232.2(MH+)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.21(br.s,1H),8.02(s,1H),6.85-7.20(m,2H),6.33-6.67(m,1H),4.24(s,1H),3.15-3.26(m,2H),2.48(td,J=1.66,3.72Hz,2H),1.41-1.74(m,4H),1.16(s,3H)。
步驟3(實例524)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之苯并咪唑與氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合。
實例665(鋅金屬作為步驟2之還原劑)：
步驟1：將碳酸鉀(1.01g，7.33mmol)及4-異丙基哌啶-4-醇(262mg，1.83mmol)(WO2014/139144,2014,A1)添加至3-氟-2-硝基-苯胺(0.25g，1.60mmol)於ACN(3mL)中之鮮紅色溶液中。將所得混合物在80℃下攪拌16h。添加EtOAc且將懸浮液離心。分離上清液且在真空下濃縮以得到所需硝基苯胺(400mg，78%產率)。MS m/z 280.2(MH+)。
步驟2(使用鋅作為還原劑)：向來自步驟1之硝基苯胺(280mg，1.25mmol)於異丙醇(8mL)中之溶液中添加鋅(820mg，12.5mmol)及氯化銨(671mg，12.5mmol)。將懸浮液在60℃下攪拌10min，隨後添加甲酸(1.9mL，50.2mmol)。將所得混合物在60℃下加熱且攪拌2h。完成之後，添加EtOAc且將懸浮液離心。分離上清液且在真空下濃縮。將殘餘物在具有MeOH/DCM之矽膠上純化以得到預期苯并咪唑衍生物(284mg，76%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.16(br.s.,1H),7.22-7.45(m,2H),7.05(br.s.,1H),
3.76-4.35(m,2H),3.01-3.30(m,2H),1.83(dt,J=3.94,12.66Hz,2H),1.46-1.71(m,3H),0.92(d,J=6.88Hz,6H)。MS m/z 360.2(MH+)。MS m/z 360.2(MH+)。
步驟3(實例665，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之苯并咪唑與氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合。
在步驟1中使用適當的胺且在步驟2中使用Fe或Zn作為還原劑以類似方式製備的抑制劑之其他實例列於方法I下之表4中。
用於合成式W-IX之抑制劑的一般方法(方法J)-實例600之合成：
步驟1：將哌啶-4-甲腈鹽酸鹽(0.103g，0.705mmol)及碳酸鉀(177mg，1.28mmol)添加至3-氟-2-硝基-苯胺(100mg，0.641mmol)於ACN(5mL)中之鮮紅色溶液中。將所得混合物在90℃下攪拌16h。將反應混合物用EtOAc(5mL)稀釋且離心。分離含有所需硝
基苯胺之上清液且按原樣用於下一步驟。MS m/z 247.2(MH+)。
步驟2：向來自步驟1之硝基苯胺溶液中添加氯化銨(685mg，12.8mmol)及鋅(419mg，6.41mmol)。將所得懸浮液在40℃下攪拌1h。用EtOAc(30mL)稀釋反應混合物，隨後離心。分離上清液且在真空下濃縮。將所得1,2-苯二胺(101mg，73%)按原樣用於下一步驟中。MS m/z 217.2(MH+)。
步驟3：將來自步驟2之產物溶解於AcOH(3mL)中，隨後添加亞硝酸鈉(32mg，0.647mmol)且在室溫下攪拌1h。將反應混合物用EtOAc(60mL)稀釋，用水(2×20mL)洗滌，接著用飽和NaHCO3水溶液(2×20mL)洗滌，隨後用鹽水(20mL)洗滌。將分離的有機層經MgSO4乾燥，過濾且在真空下濃縮以得到所需苯并三唑(75mg，0.330mmol，51%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.30(t,J=7.88Hz,1H),7.20(d,J=8.00Hz,1H),6.63(d,J=7.50Hz,1H),3.85(br.s.,2H),3.45(t,J=9.38Hz,2H),3.15(td,J=4.24,8.41Hz,1H),2.00-2.22(m,2H),1.85-2.00(m,2H)。MS m/z 228.2(MH+)。
步驟4：將來自步驟3之苯并三唑(17mg，0.076mmol)、2,3-二氯-N-[3-[(6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)胺基]-2,4-二氟-苯基]苯磺醯胺(30mg，0.058mmol)、五水合硫酸銅(II)(1.9mg，0.0077mmol)、
反式-2-苯基-1-環丙烷甲酸(1.3mg，0.0077mmol)及碳酸鉀(21mg，0.155mmol)於DMSO(1.5mL)中之溶液在100℃下攪拌3h。一旦完成，即將混合物冷卻至室溫，用DMSO稀釋且藉由HPLC(MeOH+0.1%甲酸/水+0.1%甲酸)純化以得到實例600(11mg，25%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.45(br.s.,1H),8.76(d,J=9.01Hz,1H),8.45-8.63(m,2H),8.31(d,J=8.00Hz,1H),7.73-8.02(m,2H),7.41-7.70(m,2H),7.25(br.s.,1H),7.13(br.s.,1H),6.87(d,J=8.00Hz,1H),4.01(d,J=12.38Hz,2H),3.60(t,J=10.38Hz,2H),3.20(br.s.,2H),2.11(br.s.,2H),1.96(d,J=10.01Hz,2H)。MS m/z 707.2(MH+)。
在步驟1中使用適當的胺以類似方式製備的抑制劑之其他實例列於方法J下之表4中。
用於合成式W-X之抑制劑的一般方法(方法K)-實例112之合成：
步驟1：3-吲哚磺醯氯係如Org.Lett.2011,13,3588中所描述來製備。將吲哚(3g，25.6mmol)及三氧化硫-吡啶(4.08g，25.6mmol)於吡啶(15mL)中之溶液在攪拌下加熱至回流(115℃)持續2h。2h之後，將反應冷卻至室溫且用水(20mL)稀釋。將水層用二乙醚(20mL)洗滌兩次。將水層蒸發至乾燥以得到呈白色固體之粗1H-吲哚-3-磺酸吡啶鎓(5.30g，75%產率)。粗物質按原樣用於下一步驟。
步驟2：將來自前一步驟之步驟1的粗1H-吲哚-3-磺酸吡啶鎓(4.60g，16.7mmol)溶解於環丁碸：乙腈之1：1混合物(50mL)中。將白色懸浮液冷卻至0℃，且在攪拌下逐滴添加POCl3(3.42mL，36.7mmol)，得到淺褐色溶液。將反應加熱至70℃持續1h。1h之後，將橙色溶液冷卻至0℃。將冷橙色溶液逐滴添加至250mL冰水中。在添加期間，形成白色沉澱。過濾固體，用水洗滌且在真空下乾燥以得到呈灰色固體之1H-吲哚-3-磺醯氯(740mg，21%產率)。
步驟3(一般程序)：將來自步驟2之1H-吲哚-3-磺醯氯(100mg，0.463mmol)於無水THF(3mL)中之溶液冷卻至0℃且逐滴添加胺(2當量)。隨後添加DIPEA(0.24mL，1.39mmol)且將反應混合物升溫至室溫。反應之進展藉由LCMS監測。當反應完成時，用飽和NH4Cl將其淬滅至pH=7。水層用EtOAc萃取(3次)。
將合併的有機層用水、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮以得到所需磺醯胺。
步驟3(R1=R2=Me，實例112)：將磺醯氯(200mg，0.9mmol)裝入25mL燒瓶中，向該燒瓶中添加THF(4mL)，接著添加二甲胺鹽酸鹽(2當量，150mg，1.9mmol)及DIEA(4當量，0.65mL，3.7mmol)。溶液很快變成淡黃色，且黃色膠狀油狀物沉積於底部。在RT下攪拌20分鐘之後(LCMS顯示磺醯氯完全消耗)。將混合物分配於EtOAc與飽和NH4Cl溶液之間。水層用EtOAc萃取且將合併的有機層用飽和NH4Cl溶液再洗滌一次，隨後用鹽水洗滌。隨後，將其經MgSO4乾燥，過濾且濃縮至乾燥，以得到65mg米色結晶固體，其未經進一步純化按原樣使用：1H NMR(DMSO-d6)δ：12.17(br.s.,1H),7.96(d,J=3.1Hz,1H),7.81(d,J=7.8Hz,1H),7.49-7.57(m,1H),7.22-7.28(m,1H),7.16-7.22(m,1H),2.58(s,6H)。MS m/z 225.1(MH+)。
步驟4(實例112，表4)：使用一般方法A，由來自步驟3之吲哚磺醯胺及氯吡啶A-13(Ar=2-氯苯基)製備。
在步驟1中使用適當的胺以類似方式製備的抑制劑之其他實例列於方法K下之表4中。
實例69之製備：
步驟1：按照一般合成方法A，在銅粉、BINOL及碳酸銫存在下，在100℃下的DMSO中將氯吡啶A-13(Ar=4-甲氧基-2-甲苯基)與3-氰基吲哚偶合，以在酸性水溶液處理且萃取至EtOAc中之後提供粗預期3-氰基吲哚衍生物。該物質直接用於步驟2中，但氰基衍生物之等分試樣藉由逆相HPLC純化以用於表徵：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.17(br.s.,1H),9.93(s,1H),9.29(s,1H),8.52(s,1H),8.45-8.51(m,2H),8.36(d,J=8.2Hz,1H),7.76-7.87(m,1H),7.68(d,J=9.0Hz,1H),7.39-7.59(m,2H),7.15-7.32(m,2H),6.95(d,J=2.7Hz,1H),6.87(dd,J=8.8,2.5Hz,1H),3.79(s,3H),2.58(s,3H)。MS m/z 598.1(MH+)。
步驟2：將來自步驟1之粗腈(35mg，1.0當量)及乙醇(0.5mL)裝入4mL小瓶中，接著裝入102μL之4N NaOH(7當量)，得到深黃色溶液。在室溫下向該溶液中添加約30μL(4當量)之30%過氧化氫水溶液(觀測到一些氣泡)。在室溫下攪拌10分鐘之後，LCMS顯示起始物質完全消耗且形成醯胺產物所需質量的新峰。反應藉由添加一些硫代硫酸鈉晶體及0.5mL乙酸來淬滅。隨後用甲醇將其稀釋至2mL，過濾且藉由製備型HPLC(MeOH/H2O/
0.1%甲酸條件，50%→100%甲醇梯度)純化。將適當級分合併且部分濃縮以移除甲醇。藉由添加幾毫升乙腈溶解所得懸浮液，隨後將溶液冷凍且凍乾。獲得7.4mg呈黃色固體之實例69之抑制劑。
使用A-13(Ar=2-氯苯基)以類似方式製備實例104。
實例70、83及85之製備：
實例70：7-硝基苯并咪唑係由3-硝基伸苯基-1,2-二胺如J.Chem.Phys.2011,115,11403中所描述來製備且使用一般方法A與A-13(Ar=4-甲氧基-2-甲苯基)偶合。
步驟1(實例83)：將7-硝基苯并咪唑(參見實例70，250mg)及20% Pd(OH)2/C(珀爾曼催化劑，10mg，0.01當量)懸浮於MeOH(3mL)中且H2氣球氛圍下攪拌4h(隨著還原進行，SM緩慢進入溶液)。在如LCMS
顯示完全轉化之後，將懸浮液藉由膜過濾，使用MeOH洗滌且在減壓下移除揮發成分。該物質不經進一步純化即使用：1H NMR(DMSO-d6)δ：7.99(s,1H),6.87(t,J=7.8Hz,1H),6.73(d,J=7.8Hz,1H),6.35(d,J=7.8Hz,1H)。
步驟2(實例83)：使用來自步驟1之胺基苯并咪唑、氯吡啶A-13(Ar=2-氯苯基)及一般方法A，在使用30→100% MeOH-0.1%甲酸，接著10→100% MeCN-0.1% AcOH作為梯度之兩次連續逆相HPLC純化之後，分離實例83之抑制劑：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.53(br.s.,1H),9.87(s,1H),9.17(s,1H),8.49(s,1H),8.44(s,2H),7.92(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.61-7.72(m,2H),7.47-7.56(m,1H),7.41(d,J=7.8Hz,1H),7.28(td,J=9.0,5.5Hz,1H),7.22(t,J=9.0Hz,1H),7.11(t,J=8.0Hz,1H),6.57(d,J=7.4Hz,1H),5.51(br.s.,2H)。MS m/z 579.1。
使用來自步驟1之胺基苯并咪唑(片段A31)及相應A-13氯吡啶以類似方式製備的其他實例列於方法A下之表4中。
步驟3(實例85)：將來自步驟2之胺基苯并咪唑(23mg)溶解於乙酸(1mL)中且添加乙酸酐(13mg，3當量)。在RT下攪拌3h(LCMS顯示完全轉化為所需質
量)。將物質用DMSO稀釋至1.8mL且藉由使用30→100% MeOH-0.1%甲酸梯度之製備型HPLC純化。
實例75之製備：
步驟1：將7-苯并咪唑甲酸(500mg，3.1mmol)懸浮於DCM(5mL)中且添加一滴DMF，接著添加草醯氯(0.5mL，5.9mmol)。將米色漿液在RT下攪拌1h。隨後在減壓下移除揮發成分，將殘餘物再懸浮於THF中且再次移除揮發成分。隨後將殘餘物懸浮於THF(5mL)且添加濃氨水(1mL)，且將混合物在RT下攪拌30min(米色懸浮液逐漸變成磚色懸浮液)。LCMS指示起始酸與所需醯胺之1：1混合物。藉由過濾移除固體且在減壓下將濾液蒸發至乾燥。將殘餘物直接用於下一步驟中。
步驟2(實例75)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之粗苯并咪唑與氯吡啶A-13(Ar=4-甲氧基-2-甲苯基)偶合。
實例80及81之製備：
使用對於實例69所描述之程序，將實例77化合物之腈基水解成相應醯胺。以類似方式由實例78製備實例81。
實例94及95之製備：
步驟1：向5mL小瓶中之起始氯吡啶并嘧啶A-13(Ar=2-氯苯基，50mg，0.1mmol)於乙腈(2mL)中之懸浮液中添加1.1當量之1-乙氧基乙烯基-三丁基錫(42mg，0.11mmol)。將氮氣鼓泡通過混合物5-7分鐘，隨後添加肆(三苯基膦)二氯化鈀(0.1當量，7mg)。再將氮氣鼓泡通過懸浮液4-5分鐘，隨後將小瓶密封且將混合物在80℃下加熱，得到淡黃色溶液。將其在該溫度下攪拌18h(LCMS指示轉化完成)。使混合物冷卻至室溫，藉由celite®塞過濾以移除不溶性黑色顆粒，使用EtOAc沖洗。在減壓下將濾液濃縮至乾燥且所得淡黃色泡沫狀物(108mg)未經進一步純化按原樣使用：MS m/z 518.0(MH+)。
步驟2：將來自步驟1之粗烯醇醚(53mg，0.10mmol)溶解於THF(1mL)中，且在室溫下添加水(0.1mL)，接著添加1.1當量之N-溴琥珀醯亞胺(20mg，0.11mmol)。將所得混合物攪拌1h(LCMS顯示完全轉化)。將混合物用3-4mL甲苯稀釋且濃縮成油狀殘餘物。隨後將
其倒入4-5mL DCM中且經Na2SO4乾燥、過濾且濃縮。殘餘物藉由急速層析經由3g矽膠筒，使用10% EtOAc/己烷至60% EtOAc/己烷梯度進行純化。合併適當級分且濃縮以得到呈淡黃色固體之所需產物，將其按原樣用於下一步驟中(1H NMR及LCMS顯示一些經琥珀醯亞胺污染)：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.38(s,1H),8.58(s,1H),8.35-8.42(m,2H),7.91(dd,J=7.8,1.2Hz,1H),7.59-7.73(m,4H),7.47-7.59(m,2H),7.20-7.35(m,2H),5.43(s,1H)。MS m/z 568(MH+)。
步驟3：向來自步驟2之粗溴甲基酮(25mg，0.04mmol)於乙醇(1mL)中之懸浮液中添加硫脲(5mg，0.07mmol，1.5當量)。將所得混合物升溫至80℃且在該溫度下攪拌2h(LCMS顯示完全轉化)。將混合物用DMSO稀釋至2mL，過濾且藉由製備型HPLC(MeOH/H2O/0.1%甲酸條件，50%→100%甲醇梯度)純化。將適當級分合併且部分濃縮以移除甲醇。藉由添加幾毫升乙腈溶解所得懸浮液，隨後將溶液冷凍且凍乾。獲得5.5mg呈黃色固體之所需產物(實例94)。
將步驟3中之硫脲替換為1,2,4-噁二唑之3-羧基硫醯胺，以類似方式製備實例95。
實例96及115之製備：
步驟1：4-硝基-3-吲哚甲酸甲酯係由3-吲哚甲酸甲酯之硝化，如WO 2008/113760及Bioorg.Med.Chem.Lett.2011,21,1782中所描述來製備。在一般方法A之標準條件下，使吲哚衍生物與氯吡啶A-13(Ar=2-氯苯基)反應。
步驟2：將來自步驟1之粗甲酯(33mg，0.05mmol)懸浮於MeOH(1mL)中，且添加4N NaOH(75μL，6當量)及LiOH(2mg，0.05mmol)。將混合物在RT下攪拌18h且隨後在50℃下攪拌2h以完成轉化(LCMS)。隨後反應混合物用1N HCl酸化且藉由過濾收集所沉澱產物，用水洗滌且在真空下乾燥以得到所需羧酸(30mg)：MS m/z 650.0(M-H)。
步驟3：將來自步驟2之粗硝基吲哚甲酸(30mg，0.046mmol)溶解於NMP(0.8mL)中。向黃色溶液中
添加8當量之DIEA(64μL)，接著添加2當量之HATU(35mg)。將混合物攪拌2-3min，隨後添加二甲胺鹽酸鹽(7.4mg，2當量)。將所得深黃色溶液在室溫下攪拌3h，此時藉由LCMS發現反應完成。反應藉由添加1N HCl溶液來淬滅，直至獲得酸性pH。將混合物用8mL水稀釋，經音波處理且藉由藉由小燒結玻璃漏斗過濾來收集所得固體。隨後將所得固體在減壓下乾燥隔夜且將產物(27mg)按原樣用於隨後的硝基還原：MS m/z 679(MH+)。
步驟4：向來自步驟3之粗酸(27mg，0.040mmol)於乙醇(1mL)及EtOAc(0.5mL)中之懸浮液中添加4當量之SnCl2-2H2O(36mg)。將所得混合物升溫至60℃且攪拌2h(藉由LCMS顯示完成)。濃縮混合物以移除EtOH，隨後用EtOAc(4mL)及水(0.5mL)稀釋。將約1mL之1N NaOH溶液添加至濃稠乳液/懸浮液中，但並沒有使混合物澄清。將混合物濃縮至幾乎乾燥，隨後將約0.5g十水合硫酸鈉連同一些新製EtOAc一起添加至燒瓶中。對懸浮液進行音波處理、傾析且過濾EtOAc萃取物。用EtOAc再重複一次，隨後用DCM重複一次，接著用兩者之1：1混合物再重複一次。隨後將合併的萃取物經Na2SO4乾燥，在過濾一次且濃縮。將殘餘物倒入DMSO(1.5mL)中且藉由製備型HPLC(MeOH/H2O/0.1%甲酸條件，50%→100%甲醇梯度)純化。將適當級分合併且部分濃縮以移除甲醇。藉由添加幾毫升乙腈溶解所得懸
浮液，隨後將溶液冷凍且凍乾(6.6mg呈黃色固體之實例96)。
藉由將步驟4中之二甲胺鹽酸鹽替換為嗎啉，以類似方式製備實例115。
實例100之製備：
步驟1：使用WO 2010/069833中所描述之程序，由3-硝基-1,2-苯二胺製備呈橙粉色固體之7-硝基苯并三唑：1H NMR(DMSO-d6)δ：8.58(d,J=8.2Hz,1H),8.46(d,J=7.8Hz,1H),7.63(t,J=8.0Hz,1H)。
步驟2：使用氫氣球氛圍，將來自步驟1之硝基苯并三唑經炭載20% Pd(OH)2氫解，以提供呈橙色固體之所需胺基苯并三唑，其不經純化即使用：1H NMR(DMSO-d6)δ：7.11(t,J=7.8Hz,1H),6.81(d,J=8.2Hz,1H),6.38(d,J=7.8Hz,1H),5.86(br.s.,2H)。
步驟3：使用來自步驟2之胺基苯并三唑、氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)及一般方法A，實例100之抑
制劑以異構物混合物形式形成，該等混合物在通常條件下藉由逆相HPLC分離。實例100以最豐富異構物形式存在。
以類似方式且使用相應A-13氯吡啶製備之其他實例包括實例91-93及206。
實例103之製備：
按照對於實例69所描述之程序，使用相應的3-氰基吲唑代替3-氰基吲哚及A-13(Ar=2-氯苯基)來製備該化合物。
實例116之製備：
步驟1：按照WO1992/021663A1中所描述之程序製備3-苄氧基-1,2-苯二胺。將二胺(1.00g，4.67mmol)懸浮於甲酸(10mL)中且將混合物在100℃下攪拌4h(LCMS指示完全轉化)。將反應混合物冷卻至RT且在減壓下移除大部分甲酸。將殘餘物緩慢添加至過量的飽和NaHCO3水溶液中(注意：起泡)。遊離鹼最初以深米色膠形式出現，但在攪拌後變成淺米色沉澱。藉由過濾收集產物，用水洗滌且在真空下乾燥(0.96g，藉由1H NMR顯示為互變異構物之1：1混合物)：1H NMR(DMSO-d6)
δ：12.72(br.s.,0.5H),12.44(br.s.,0.5H),8.10(s,1H),7.56(d,J=7.0Hz,1H),7.50(d,J=7.4Hz,1H),7.29-7.45(m,3H),7.25(d,J=7.8Hz,0.5H),7.02-7.18(m,1.5H),6.87(d,J=7.8Hz,0.5H),6.75(d,J=7.0Hz,0.5H),5.36(s,1H),5.28(s,1H)。MS m/z 225.1(MH+)。
步驟2：使用方法A之一般程序將來自步驟1之苯并咪唑與氯吡啶A-13(Ar=3-氯-2-甲基)偶合。在95℃下1h之後，將反應混合物傾入水中，用AcOH及少量1N HCl酸化且用EtOAc萃取。將萃取物用水及鹽水洗滌、乾燥(MgSO4)且在減壓下濃縮。將殘餘物及炭(5mg)載催化20% Pd(OH)2懸浮於THF(3mL)+AcOH(1mL)中且在H2氣球下攪拌18h(LCMS顯示產物、一些剩餘的起始物質及雜質)。過濾反應混合物以移除催化劑，濃縮且將殘餘物溶解於1.8mL DMSO中，並且藉由使用50-100% MeOH-0.1% HCOOH梯度之製備型HPLC純化。獲得實例116(90%均勻性)。
實例117之製備：
步驟1：按照WO1992/021663A1中所描述之程序製備3-苄氧基-1,2-苯二胺。將二胺(1.00g，4.67mmol)溶解於AcOH(8mL)中且按份添加亞硝酸鈉(0.335g，4.9mmol)。發生輕微放熱反應，伴有少量氣體逸出。將混合物在RT下攪拌15min且隨後在60℃下攪拌3.5h(LCMS顯示完成轉化)。將反應混合物冷卻至RT，用等體積水稀釋且在RT下攪拌1h，隨後收集米色沉澱。將產物用水洗滌且在真空下乾燥(1.01g)：1H NMR(CDCl3)δ：7.43-7.57(m,3H),7.28-7.43(m,4H),6.84(d,J=7.8Hz,1H),5.36(s,2H)。MS m/z 226.1(MH+)。
步驟2：按照與對於實例116所描述相同的程序，使用方法A之一般程序將來自步驟1之苯并三唑(30mg)與氯吡啶A-13(Ar=3-氯-2-甲基)偶合且將產物氫解以移除苄醚保護基得到實例117(15mg)。
實例120-122之製備：
使用對於實例127所描述之一般方法D，用步驟1中之5-甲基-吡唑-3-甲酸甲酯替代吲唑-3-甲酸甲酯。
實例136-138之製備：
使用對於實例127所描述之一般方法D，用步驟1中之2-甲基-吲唑-4-甲酸乙酯替代吲唑-3-甲酸甲酯。
實例145及146之製備：
使用對於實例127所描述之一般方法D，用步驟1中之吡唑-3-甲酸甲酯替代吲唑-3-甲酸甲酯。
實例147及148之製備：
使用對於實例127所描述之一般方法D，用步驟1中之3-甲基-吡唑-4-甲酸乙酯替代吲唑-3-甲酸甲酯。將異構物之85：15混合物用於步驟2中。分離出實例147及148作為主要組分。
實例149及150之製備：
將胺基苯并咪唑(實例83，30mg)溶解於吡啶(0.5mL)中且添加嗎啉胺甲醯氯(31mg，4當量)。將混合物在60℃下攪拌2h(藉由LCMS顯示完全轉化為所需質量)。將減壓下濃縮紫紅色溶液，將殘餘物溶解於3：1 DMSO-AcOH(1.8mL)中且該物質藉由使用50%→100% MeOH-0.1% HCOOH梯度之製備型HPLC純化。
實例150係以類似方式但使用N-N-二甲基胺甲醯氯代替嗎啉胺甲醯氯來製備。將反應加熱至75℃持續18h以完成反應。
實例151及152之製備：
使用對於實例127所描述之一般方法D，用步驟1中之1,2,4-三唑-3-甲酸甲酯替代吲唑-3-甲酸甲酯。
實例153-155之製備：
使用對於實例127所描述之一般方法D，用步驟1中之4-甲基-吡唑-3-甲酸乙酯替代吲唑-3-甲酸甲酯。
實例207之製備：
步驟1：在-78℃下，向按照WO 2013/041457中所描述之程序製備的1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑(1.80g，9.1mmol)於無水THF(16mL)中之溶液中緩慢添加正丁基鋰(6.24ml，9.98mmol，1.6M於己烷中)。一旦添加完成，即在-78℃下將淡黃色溶液攪拌5分鐘，隨後緩慢添加四溴化碳(3.31g，9.98mmol)於8mL THF中之溶液。溶液變成深黃色，隨後在添加結束時變成極深的黃色。使其在相同溫度下攪拌15分鐘，隨後用飽和氯化銨溶液淬滅。在升溫至室溫之後，添加EtOAc且將深褐色至黑色雙相混合物用celite®處理且過濾以促進相分離。分離各層且水層用EtOAc再萃取兩次。將合併的有機層用鹽水洗滌一次，隨後經MgSO4乾燥且過濾。濃縮之後，殘餘物藉由急速管柱層析(combiflash，40g管柱，0%→40% EtOAc/己烷；藉由TLC，產物為略微UV可見的，使用KMnO4染色來檢
查級分)純化。得到1.944g呈淡黃褐色油狀物之所需產物：1H NMR(CDCl3)δ：7.11(d,J=1.2Hz,1H),7.06(d,J=1.2Hz,1H),5.28(s,2H),3.54(t,J=7.8Hz,2H),0.92(t,J=8.2Hz,2H),0.00(s,9H)。
步驟2：將N-甲苯磺醯基-3-吲哚硼酸酯(132mg，0.33mmol)、來自步驟1之SEM保護之溴咪唑(111mg，0.4mmol)、碳酸鉀(184mg，1.33mmol)、DMF(3mL)及水(1mL)裝入微波小瓶中。將氮氣鼓泡通過懸浮液3-4min。添加肆(三苯基膦)鈀(0)(19mg，0.017mmol)且在音波處理下，將氮氣再鼓泡通過混合物3-4min。隨後將小瓶蓋上蓋子且在80℃下在微波中照射1h。此時，LCMS分析揭示硼酸酯已消耗。使反應混合物冷卻至室溫，隨後用水稀釋且用2：1 EtOAc/己烷混合物萃取3次。將合併的有機層用水洗滌兩次且用鹽水洗滌一次。隨後將其經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急速層析(isco combiflash，12g矽膠管柱，0%→35% EtOAc/己烷梯度)純化。合併且濃縮適當級分之後，獲得33mg所需產物(亦獲得8mg均偶合之雙吲哚副產物)：1H NMR(CDCl3)δ：8.20(d,J=7.8Hz,1H),8.09(s,1H),8.03(d,J=8.2Hz,1H),7.79(d,J=8.6Hz,2H),7.38(t,J=7.4Hz,1H),7.32(t,J=7.8Hz,1H),7.20-7.26(m,3H),7.14(s,1H),5.32(s,2H),3.64(t,J=8.2Hz,2H),2.35(s,3H),1.01(t,
J=8.6Hz,2H),0.04(s,9H)。MS m/z 468.0(MH+)。
步驟3：將來自步驟2之產物(32mg)溶解於甲醇(3mL)中且添加粉碎的氫氧化鉀(115mg，30當量)。將所得溶液回流4h(LCMS顯示起始物質完全消耗)。藉由添加飽和氯化銨來淬滅反應，隨後添加水及EtOAc。分離各層且水層用EtOAc再萃取一次。合併的有機萃取物用水洗滌一次，隨後用鹽水洗滌一次，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。在減壓下乾燥之後，獲得呈米色固體之所需吲哚衍生物(23mg)，其按原樣用於下一步驟中：MS m/z 324.0(MH+)。
步驟4：按照一般方法A，在銅催化下，藉由在100℃下加熱1.5h使氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基，38mg，0.07mmol)與來自步驟3之吲哚(23mg，0.07mmol)偶合，以提供直接用於下一步驟之預期粗產物(65mg)：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.72(s,1H),9.81(s,1H),8.89(br.s.,1H),8.49-8.62(m,2H),8.37-8.49(m,2H),7.98-8.07(m,1H),7.95(d,J=7.8Hz,1H),7.90(d,J=7.8Hz,1H),7.79-7.88(m,1H),7.54(t,J=8.2Hz,1H),7.50(t,J=8.2Hz,1H),7.44(t,J=7.0Hz,1H),7.27-7.34(m,1H),7.23(t,J=8.8Hz,1H),5.68(s,2H),3.55(t,J=8.0Hz,2H),0.83(t,J=8.6Hz,2H),-0.15(s,9H)。MS m/z 793.1(MH+)。
步驟5：將來自步驟4之粗SEM保護之物質懸浮於2mL乙醇中，隨後添加1mL之6N HCl。將所得懸浮液升溫至80℃，在該溫度下，將其攪拌4.5h。隨後將反應濃縮成殘餘物，將其再溶解於1.5mL DMSO中，過濾且將濾液藉由製備型HPLC(MeOH/H2O/0.1%甲酸條件，30%→100%甲醇梯度)純化。含有所需產物之級分均由共溶離雜質污染。合併級分，濃縮且凍乾。將粉末再溶解於DMSO/MeOH中且藉由製備型HPLC(MeOH/H2O/0.05% TFA條件，30%→100%甲醇梯度)進行第二次純化。將適當級分濃縮、冷凍且凍乾，得到16.3mg呈TFA鹽(黃色粉末)之所需產物207。
實例208之製備：
步驟1：將1H-吲唑-3-甲酸甲酯(350mg，1.98mmol)連同5mL EtOH(無水)及水合肼(0.244ml，4.97mmol)一起裝入壓力管中。將管密封且在油浴中在100℃下加熱。4h之後，藉由LCMS指示反應完成。在攪拌下，將無色溶液在冰水浴中冷卻，得到顯著量之結晶物
質。藉由過濾收集白色固體且用少量Et2O洗滌。乾燥之後，獲得255mg醯肼：1H NMR(DMSO-d6)δ：12.98(br.s.,1H),9.55(br.s.,1H),8.14(d,J=8.2Hz,1H),7.60(d,J=8.6Hz,1H),7.40(t,J=7.6Hz,1H),7.23(t,J=7.4Hz,1H),4.46(br.s.,2H)。MS m/z 175.1(M-H)。
步驟2：向來自步驟1之1H-吲唑-3-卡肼(250mg，1.42mmol)於3mL DMF中之溶液中添加三乙胺(0.59ml，4.26mmol)。在冰水浴中將無色溶液冷卻至0℃，隨後以一份添加二(1H-咪唑-1-基)甲酮(345mg，2.13mmol)。溶液立即變成黃色。將其移出冰浴且在室溫下攪拌隔夜。彼時，等分試樣的LCMS分析揭示反應完成。將其用水稀釋，隨後用1N HCl酸化且攪拌10分鐘以破壞任何剩餘CDI。隨後藉由過濾收集白色固體，在減壓下乾燥且按原樣用於下一步驟中(300mg)：MS m/z 203.0(MH+)。步驟3：按照一般方法A，在銅催化下，藉由在100℃下加熱1.5小時使氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基，35mg，0.068mmol)與來自步驟3之吲哚(25mg，0.075mmol)偶合，以在逆相HPLC純化(MeCN/H2O，0.1%乙酸，60%→100% MeCN梯度)之後提供呈米色粉末之抑制劑208(25mg)。
實例209之製備：
步驟1：將來自實例208合成的步驟2之粗產物(80mg，0.4mmol)裝入4mL小瓶中，接著裝入二甲胺鹽酸鹽(64.5mg，0.79mmol)、DMF(2mL)及DIEA(0.21ml，1.18mmol)。將黃色溶液攪拌2分鐘，隨後以一份添加BOP試劑(193mg，0.44mmol)。使反應在室溫下攪拌60h。隨後將其用水及飽和氯化銨溶液稀釋。將所得懸浮液音波處理且藉由過濾收集固體，用水洗滌且在減壓下乾燥以得到45mg呈灰白色固體之所需產物：1H NMR(DMSO-d6)δ：13.75(br.s.,1H),8.12(d,J=8.2Hz,1H),7.66(d,J=8.2Hz,1H),7.48(t,J=7.6Hz,1H),7.31(t,J=7.6Hz,1H),3.12(s,6H)。MS m/z 230.1(MH+)。
步驟2：按照一般方法A，在銅催化下，藉由在100℃下加熱1.5小時使氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基，35mg，0.068mmol)與來自步驟3之吲哚(17mg，0.075mmol)偶合。隨後使混合物冷卻至室溫，隨後藉由添加0.2mL乙酸來淬滅。隨後添加甲醇(2mL)且對懸浮液進行音波處理。收集固體且用少量甲醇洗滌，隨後在減壓下乾燥。獲得呈米色粉末之實例209(32mg)。
藉由用二甲胺鹽酸鹽代替步驟1中之甲胺鹽酸鹽，以類似方式來製備實例210。藉由用4-甲氧基苄胺代替步驟1中之二甲胺鹽酸鹽來製備實例211。在與氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合之後，藉由在DCM中在60℃-70℃下加熱6h來移除PMB保護基。
實例212之製備：
步驟1：按照WO 2011/138265中所描述之程序，藉由吲唑之碘化來製備3-碘吲唑。
步驟2/3：按照WO 2016/058544中所描述之程序，將3-碘吲唑作為N-Boc衍生物進行保護且錫烷化為3-三甲基錫烷衍生物。
步驟4：將來自步驟3之錫烷衍生物(270mg，0.71mmol)裝入4mL小瓶中，接著裝入實例207之步驟1中所製備之2-溴-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1H-咪唑(197mg，0.71mmol)、肆(三苯基膦)鈀(0)(41mg，0.035mmol)及2mL甲苯。將小瓶用氬氣脫氣2分鐘，隨後密封且在110℃下加熱20h。將黑色反應混合物傾入水中，用EtOAc萃取，用鹽水洗滌且乾燥(MgSO4)。濃
縮得到N-Boc(42mg)及NH-吲唑(54mg)產物之混合物，該等產物可藉由急速層析分離。N-Boc產物：1H NMR(CDCl3)δ：8.64(d,J=7.8Hz,1H),8.17(d,J=8.6Hz,1H),7.58(t,J=7.8Hz,1H),7.42(t,J=7.4Hz,1H),7.31(d,J=9.0Hz,2H),6.07(s,2H),3.63(t,J=8.6Hz,2H),1.75(s,9H),0.93(t,J=7.8Hz,2H),-0.09(s,9H)。MS m/z 415.2(MH+)。將N-Boc物質懸浮於DCM中且添加TFA(150μL)。在攪拌2小時之後，藉由LCMS判斷轉化為脫保護之吲唑已完成。添加甲苯(2mL)且在減壓下移除揮發成分以得到所需吲唑，其未經進一步純化即用於下一步驟中：MS m/z 315.2(MH+)。
步驟5：使用一般方法A，將起始氯-吡啶并嘧啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基，58mg，1當量)與來自步驟4之吲唑(41mg，1.15當量)偶合。在100℃下攪拌3h之後，藉由LCMS顯示反應完成。使混合物冷卻至室溫，隨後藉由添加0.15mL乙酸來淬滅。隨後添加水(5mL)且對懸浮液進行音波處理。在燒結玻璃過濾器上收集固體，且用水及己烷(54mg)洗滌。將粗物質溶解於TFA(0.5mL)中且在室溫下攪拌3小時，此時LCMS顯示SEM基團完全脫保護。將混合物濃縮成殘餘物，隨後倒入1mL DMSO及0.5mL MeOH中。過濾且濾液藉由製備型HPLC(MeOH/H2O，0.05% TFA,60%→100% MeOH梯度)純化。將適當級分合併且濃縮以移除甲醇。添
加一些乙腈，並且將溶液冷凍且凍乾。獲得呈黃色固體之實例212(21.5mg)。
使用相應A-13(Ar=2-氯苯基)，以類似方式製備實例213。
實例223之製備：
步驟1：將色胺作為Boc-胺甲酸酯進行保護且氧化為如J.Am.Chem.Soc.2004,126,12888中所描述之受保護之胺甲基酮。
步驟2：使用一般方法A，將來自步驟1之吲哚衍生物與A-13(Ar=2-氯苯基)偶合。藉由在2：1 DCM-TFA中攪拌30分鐘來將粗產物脫保護。在逆相HPLC純化(30%→100% MeOH-0.05% TFA)之後將實例223(黃色固體)分離為TFA鹽。
實例224之製備：
在室溫下，向粗胺甲基酮223-TFA鹽(50mg，0.068mmol)於甲醇(0.6mL)中之懸浮液中添加1N氫氧化鈉溶液(0.082ml，0.082mmol)。懸浮液變成深色溶液。隨後添加37wt%之甲酸溶液(55mg，0.681mmol)且將混合物在40℃下攪拌5分鐘。添加氰基硼氫化鈉(13mg，0.20mmol)且將溶液在50℃下攪拌2h(LCMS顯示起始物質完全消耗且形成所需產物)。反應藉由添加0.2mL乙酸來淬滅且用DMSO稀釋至2mL。將混合物藉由注射器過濾器過濾且藉由製備型HPLC(30%→100% MeOH-0.1%甲酸)純化。將適當級分合併且濃縮以移除甲醇，隨後冷凍且凍乾。獲得呈淡黃色固體之實例224(3.3mg)。
實例237之製備：
步驟1：按照與方法E中所描述用於製備E-3(步驟2)之類似程序，但對於羰基化步驟用N,N-二甲基乙醯胺替代DMF，將如一般方法E(步驟1)下所描述製備的溴苯并咪唑E-2轉化為乙醯衍生物。獲得呈褐色固體之產物(131mg)，其直接用於下一步驟中。
步驟2：使用一般方法A，將來自步驟1之苯并咪唑衍生物(50mg)在100℃下與A-13(Ar=2-氯苯基，130mg)偶合3小時。獲得呈褐色固體之預期粗中間物(168mg)，其直接用於下一步驟中：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.53(br.s.,1H),9.84(s,1H),9.45(br.s.,1H),8.66(d,J=8.2Hz,1H),8.47-8.59(m,3H),7.92(dd,J=7.8,1.2Hz,1H),7.86(d,J=7.0Hz,1H),7.61-7.71(m,2H),7.55(t,J=7.8Hz,1H),7.47-7.53(m,1H),7.28(td,J=8.7,5.7Hz,1H),7.22(t,J=9.2Hz,1H),3.01(s,3H)。MS m/z 605.8(MH+)。
步驟3：將嗎啉(17mg，0.20mmol)連同1mL甲醇一起裝入1打蘭小瓶中。隨後裝入來自步驟2之粗乙醯基苯并咪唑(40mg，0.066mmol)且將混合物在50℃下加熱10分鐘。添加氰基硼氫化鈉(12.5mg，0.2mmol)且將反應混合物在50℃下攪拌20h(LCMS顯示~50%轉化率)。添加另一份嗎啉(17mg，0.2mmol)及氰基硼氫化鈉(12.5mg，0.2mmol)且將混合物在70℃下再攪拌7h。在~70%轉化率(LCMS)之後，反應藉由添加含乙酸溶液(0.2mL)之0.5mL DMSO淬滅。將溶液過濾且藉由製備型HPLC(30%→100% MeOH-0.1%甲酸)純化。將適當級分合併且濃縮以移除甲醇，隨後冷凍且凍乾。獲得呈淡黃色固體之實例237(10mg)。
以類似方式，用二甲胺鹽酸鹽替代嗎啉且添加等量4N NaOH以中和鹽酸鹽來獲得實例238。
實例239及652(表5)之製備：
步驟1：將2-氯-6-氟苯胺(10g)裝入250mL燒瓶中且溶解於40mL冰醋酸中。在室溫下添加乙酸酐(7.47mL)且將所得混合物在90℃下攪拌1h，此時LCMS分析揭示反應完成。在減壓下移除揮發成分，將殘餘物溶解於DCM中且用飽和NaHCO3溶液緩慢中和。分離各層且水層用DCM萃取3次。將合併的有機層用水洗滌一次，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。在真空乾燥之後，獲得呈白色至淡粉色晶體之所需產物(12.79g)：1H NMR(CDCl3)δ：7.16-7.26(m,2H),7.03-7.13(m,1H),6.93(br.s.,1H),2.23(br.s.,3H)。MS m/z 188.1(MH+)。
步驟2：將來自步驟1之乙醯苯胺(12.75g)倒入25mL濃硫酸中且在冰浴中冷卻至0℃。緩慢添加硝酸(90%，3.31mL)。5-10分鐘之後，混合物變成固體塊。
使其升溫至室溫，產生濃稠的紫紅色淤漿。在總計4h之後，藉由LCMS監測反應，顯示一些剩餘的起始物質。添加另一5mL硫酸以改良流動性，接著添加0.3mL 90%硝酸。將混合物在室溫下再攪拌18小時。隨後將混合物冷卻至0℃且傾至碎冰(約150mL)上。一旦冰融化，即音波處理該懸浮液，並且藉由過濾收集黃色固體，用水洗滌且乾燥(15.1g粗產物)。將粗固體倒入50mL乙腈中且回流，得到澄清的深紅色溶液。停止加熱且歷時1小時，使混合物冷卻至室溫，隨後在室溫下攪拌2h。彼時，混合物變成固體塊，用抹刀將其打碎且音波處理。隨後藉由過濾收集固體且用少量冷乙腈洗滌。如NMR所示，以單一區域異構物形式獲得所需的灰白色硝基化合物(6.63g)(母液產生第二批2.16g，其含有7%之6-氯-2-氟-3-硝基乙醯苯胺)：1H NMR(CDCl3)δ：7.90(dd,J=9.2,4.9Hz,1H),7.24(dd,J=9.2,8.4Hz,1H),6.98(br.s.,1H),2.28(s,3H)。MS m/z 233.0(MH+)。
步驟3：向來自步驟2之硝基乙醯苯胺(500mg，2.15mmol)於15mL乙醇中之溶液中添加於1.35mL水中之NH4Cl溶液(60mg，1.12mmol)。將混合物升溫至70℃，隨後分三份添加鐵粉(600mg，10.75mmol)，間隔10分鐘。將所得深紅色至紫紅色混合物在70℃下攪拌20h。此時，反應混合物之經過濾等分試樣之LCMS揭示反應完成。將混合物藉由celite®墊過濾。將深褐色濾液濃縮至乾燥，隨後倒入已添加MgSO4之EtOAc中。攪拌
懸浮液，隨後過濾得到澄清的淡黃色溶液。將溶液濃縮至乾燥以得到呈淡黃色固體之所需產物(440mg)，其未經進一步純化按原樣使用：1H NMR(CDCl3)δ：6.92(t,J=9.0Hz,1H),6.76(br.s.,1H),6.68(dd,J=8.6,4.7Hz,1H),3.98(br.s.,2H),2.24(br.s.,3H)。MS m/z 203.1(MH+)。
步驟4：使用4-甲氧基苯磺醯氯，以對於一般方法A中之A-9所描述的通常方式將來自步驟3之苯胺磺醯化：1H NMR(DMSO-d6)δ：9.89(s,1H),9.67(s,1H),7.57-7.74(m,2H),7.23(t,J=9.2Hz,1H),7.13(dd,J=8.8,5.3Hz,1H),7.02-7.10(m,2H),3.82(s,3H),2.00(s,3H)。MS m/z 373.0(MH+)。
步驟5：將來自步驟4之乙醯苯胺(200mg，0.54mmol)倒入1.5mL乙醇中，隨後緩慢添加濃HCl與水(2mL)之1：1混合物。隨後將黃色漿液升溫至80℃且攪拌1小時。彼時，添加1mL乙醇以改良溶解性。將混合物在相同溫度下再攪拌5h(彼時，混合物變成澄清的黃色溶液)。此時，LCMS分析顯示<3%剩餘起始物質。將混合物濃縮以移除大部分乙醇，隨後在冰上冷卻。將其用4N NaOH鹼化至pH 5-6。對所得懸浮液進行音波處理，並且藉由過濾收集固體且用水洗滌。在減壓下乾燥之後，獲得156mg呈米色固體之所需產物：1H NMR(DMSO-d6)δ：9.53(s,1H),7.53-7.72(m,2H),7.00-7.14(m,2H),
6.95(dd,J=10.8,8.8Hz,1H),6.36(dd,J=8.6,5.1Hz,1H),5.39(s,2H),3.81(s,3H)。MS m/z 329.0(M-H)。
步驟6：如對於一般方法A中之A-13之製備所描述的，在50℃下將來自步驟5之苯胺(75mg，0.23mmol)與AcOH中之二氯吡啶并嘧啶A-12(125mg，0.63mmol)偶合。獲得呈米色固體之預期產物(125mg)：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.18(s,1H),9.95(s,1H),8.50(s,1H),8.27(d,J=8.6Hz,1H),7.99(d,J=9.0Hz,1H),7.65-7.69(m,2H),7.33(t,J=9.0Hz,1H),7.26(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),7.04-7.12(m,2H),3.81(s,3H)。MS m/z 496.0(MH+)。
步驟7(實例239，表5)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將苯并咪唑與來自步驟6之氯吡啶偶合。
使用步驟4中之2,3-二氯苯基磺醯氯及步驟7之片段A31，以類似方式製備實例652(表5)。
實例240、646及647(表5)之製備：
步驟1：將2-氟-3-硝基苯甲酸(1.50g，8.1mmol)溶解於DCM(7mL)中且添加2滴DMF，接著逐份添加草醯氯(1.23mL)。將混合物在RT下攪拌ON，之後在減壓下移除揮發成分且在真空下乾燥酸氯殘餘物1/2h。將白色固體溶解於DCM(5mL)中且添加DMF(3mL)，接著添加NaN3(0.58g，1.1當量)。在RT下攪拌35min。隨後添加三級BuOH(0.86mL)且將混合物浸入油浴中預熱至65℃。將混合物回流4h(N2逸出)。冷卻回至RT，在減壓下移除DCM，傾入水(100mL)中且將產物萃取至EtOAc中用NaHCO3、水及鹽水洗滌萃取物且乾燥(MgSO4)。在減壓下濃縮得到淺黃色結晶固體，將其在真空下乾燥：1H NMR(CDCl3)δ：8.46(t,J=7.2Hz,1H),7.59-7.73(m,1H),7.24(td,J=8.6,1.0Hz,1H),6.87(br.s.,1H),1.55(s,9H)。MS m/z 155.1(M-H-Boc)。
步驟2：將來自步驟1之硝基芳烴(0.74g)及於二噁烷(5mL)中之4N HCl在RT下攪拌18h(在前30min內逐漸形成沉澱)。LCMS顯示完全轉化。用二乙醚(30mL)稀釋，收集沉澱，用乙醚洗滌且在空氣中乾燥白色固體(0.45g)：1H NMR(DMSO-d6)δ：7.14-7.20(m,1H),7.04-7.14(m,2H)。
步驟3：將來自步驟2之苯胺鹽酸鹽(143mg，0.74mmol)及二氯吡啶并嘧啶A-12(178mg，0.89mmol)懸浮於AcOH(3mL)中，且將混合物在55℃下攪拌直至藉由LCMS顯示苯胺完全消耗(視需要添加額外份A-13以完成轉化)。過濾反應混合物以移除不溶性羥基嘧啶污染物(使用AcOH洗滌)且將橙色濾液用水稀釋以將產物沉澱為淺橙色固體。藉由過濾收集物質，用水洗滌且乾燥(198mg)：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.35(s,1H),8.65(s,1H),8.32(d,J=8.6Hz,1H),8.14(t,J=6.8Hz,1H),8.06(t,J=7.8Hz,1H),8.02(d,J=8.6Hz,1H),7.51(t,J=8.2Hz,1H)。MS m/z 320.0(MH+)。
步驟4：將來自步驟3之硝基芳烴(198mg,0.62mmol)及氯化錫(II)脫水物(630mg，2.8mmol)懸浮於EtOH(7mL)中且將混合物在65℃下攪拌2h(LCMS顯示完成)。將反應混合物傾入1N NaOH中且用EtOAc萃取。將萃取物用水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮以得到呈橙色固體之苯胺(176mg)：1H NMR(DMSO-d6)δ：
9.74(s,1H),8.60(s,1H),8.27(d,J=8.6Hz,1H),7.98(d,J=9.0Hz,1H),6.99-7.12(m,1H),6.90(t,J=8.0Hz,1H),6.66(td,J=8.2,1.6Hz,1H),5.22(s,2H)。MS m/z 290.1(MH+)。
步驟5：將來自步驟4之苯胺(176mg，0.6mmol)溶解於THF(4mL)中且添加吡啶(0.2mL，2.4mmol)，接著添加3-氯-2-甲苯磺醯氯(150mg，0.67mmol)。將混合物在RT下攪拌18h(LCMS顯示苯胺剩餘)。添加另一25mg磺醯氯且在55℃下再繼續攪拌7h(LCMS顯示完成)。將米色漿液冷卻至RT，用AcOH(0.25mL)進行酸化，用1：1 EtOAc-乙醚稀釋且藉由過濾收集固體，用乙醚洗滌且乾燥(210mg)：1H NMR(DMSO-d6)δ：10.61(br.s.,1H),8.86(d,J=4.7Hz,1H),8.58(s,1H),8.29(d,J=9.0Hz,1H),8.21(d,J=6.3Hz,1H),8.00(d,J=8.6Hz,1H),7.93(t,J=6.5Hz,1H),7.81(d,J=7.8Hz,1H),7.74(d,J=7.8Hz,1H),7.52(br.s.,1H),7.38(t,J=8.2Hz,1H),7.17(d,J=5.1Hz,2H),6.98(d,J=6.7Hz,1H),2.66(s,3H)。MS m/z 480.0(MH+)。
步驟6(實例240，表5)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將苯并咪唑與來自步驟5之氯吡啶偶合。
使用步驟5中之2,3-二氯苯基磺醯氯，以類似方式製備實例646(表5)。
使用步驟4中之2,3-二氯苯基磺醯氯及步驟6之片段A31，以類似方式製備實例647(表5)。
實例241(表5)之製備：
步驟1：將3-吲唑甲酸(250mg，1.5mmol)懸浮於DCM(3mL)中且添加草醯氯(0.26mL，3mmol)，接著添加2滴DMF。將混合物在RT下攪拌18h(獲得乳狀懸浮液)。在減壓下移除揮發成分。將殘餘物懸浮於THF(3mL)中且添加嗎啉(0.3mL，3.4mmol)。發生發熱反應，形成白色沉澱。1h之後，反應混合物用1N HCl稀釋且用EtOAc萃取。將萃取物用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮以得到白色泡沫，其未經進一步純化即用於步驟2中：1H NMR(CDCl3)δ：8.40(d,J=8.2Hz,1H),8.10(d,J=8.2Hz,1H),7.65-7.71(m,1H),7.52(t,J=7.4Hz,1H),3.67-3.97(m,8H)。MS m/z 230.1(M-H)。
步驟2(實例241)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之吲唑與來自實例240之步驟5的氯吡啶偶合。
實例242(表4)之製備：
將實例99之胺基苯并咪唑(50mg，0.082mmol)溶解於THF(1mL)中且添加丙醛(14.2mg，0.245mmol，3當量)。在RT下攪拌2分鐘之後，添加氰基硼氫化鈉(10.2mg，0.163mmol)且將混合物在RT下攪拌隔夜以提供起始物質與產物之混合物。添加第二份丙醛及硼氫化鈉並不提供進一步轉化，因此反應混合物用於MeOH(1mL)中之10%甲酸淬滅，過濾且藉由使用60%→100% MeOH-0.1%甲酸梯度之製備型HPLC分離產物。將粗產物用使用30%→100% MeOH-0.1% TFA梯度之製備型HPLC第二次純化以提供實例242之產物。
實例316(表3)之製備：
4-氯-3-甲噻吩-2-磺醯氯(2及3)之製備：將3-氯-4-甲噻吩1(1.00g，7.54mmol)溶解於CHCl3(4.43mL)中，且在室溫下，歷時5min，添加氯磺酸(1.19mL，17.3mmol)於CHCl3(1.48mL)中之溶液。攪拌混合物10min。向反應混合物中添加五氯化磷(4.13g，18.9mmol)，接著添加CHCl3(7.50mL)。將其在50℃下加熱1h。將反應混合物緩慢添加至NaHCO3水溶液+冰(30.0mL)中。將其攪拌10min。用CH2Cl2(4×10mL)萃取。經合併的有機層乾燥(Na2SO4)、過濾且在減壓下濃縮，以得到呈油狀物之主要異構物化合物2及化合物3之混合物(1.30g)。其不經進一步純化即用於下一反應中。LCMS：將LCMS樣品用N-甲基哌嗪淬滅；(ES+)M+H=295.1
N-(3-(4-氯-3-甲噻吩-2-磺醯胺基)-2,6-二氟苯基)乙醯胺(5及6)之製備：向化合物2及3之混合物(1.30g,2.37mmol)的CH2Cl2溶液中添加苯胺4(400mg，2.15mmol)，接著添加三乙胺(904μL，6.45mmol)。將其在室溫下攪拌18h。將反應混合物緩慢添加至冰水(20mL)中且在室溫下攪拌10min。過濾出所沉澱的固體，用MTBE(3×5mL)洗滌且在真空下乾燥以得到呈固體之化合物5及6之混合物(900mg)。LCMS：(ES+)M+H=381.1。
N-(3-胺基-2,4-二氟苯基)-4-氯-3-甲噻吩-2-磺醯胺(7)之製備：將化合物5及6之混合物(900mg，2.36mmol)溶解於EtOH(5.49mL)且在室溫下添加HCl(6.00N於H2O中，0.6mL)。將其在油浴中在80℃下加熱18h。隨後在減壓下移除揮發成分。將殘餘物溶解於EtOAc(30mL)及H2O(10mL)中。添加飽和NaHCO3水溶液直至獲得pH=8。分離水層與有機層。將水層用EtOAc(3×10mL)洗滌。將合併的有機層經乾燥(Na2SO4)，過濾且在減壓下濃縮。藉由急速層析(50g矽膠管柱，EtOAc/己烷，在10 CV內0-70%)純化得到標題化合物(35mg)，將其再純化(12g矽膠管柱，EtOAc/己烷，20%-60%)以得到呈油狀物之標題化合物7(17mg，1.76%，84%純度)。(ES-)M+H=337.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.20(m,1H),7.03(br
s,1H),6.87(td,J=8.8,5.4Hz,1H),6.73(td,J=9.8,2.0Hz,1H),2.21(s,3H)。
3-氯-N-(3-((6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)胺基)-2,4-二氟苯基)-4-甲噻吩-2-磺醯胺(9)之製備：將化合物7(15.3mg，45.2μmol)添加至於乙酸(200μL)中之化合物8(9.04mg，45.2μmol)中。將混合物在50℃下加熱2h。將混合物冷卻至室溫。在減壓下移除揮發成分以得到呈淡黃色油狀物之標題化合物9(22mg，粗物質)。其不經進一步純化即用於下一反應中。(ES+)M+H=502.1及(ES-)M-H=500.2。
N-(3-((6-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)胺基)-2,4-二氟苯基)-3-氯-4-甲噻吩-2-磺醯胺10(實例316，表3)之製備：將苯并咪唑(4.32mg，35.8μmol)、化合物9(15.0mg，29.9μmol)及碳酸銫(11.8mg，35.8μmol)在氮氣下混合於DMSO(200μL)中。將反應在80℃下攪拌21h。將混合物冷卻至室溫且殘餘物藉由逆相層析(12g，乙腈/含0.1% AmF之水，在15 CV內20%-70%)純化以得到標題化合物10(實例316，表3)(5.30mg，30%產率，93%純度)。(ES+)M+H=584.3及(ES-)M-H=582.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.64(s,1H),9.76(s,1H),9.29(s,1H),8.44-8.43(m,1H),8.43-8.36(m,2H),8.28(d,J=8.1Hz,1H),7.73(d,J=7.7Hz,1H),7.60(br m,1H),7.38
-7.27(m,2H),7.16(dd,J=14.3,8.3Hz,1H),7.02(br m,1H),2.07-1.99(m,3H)。
實例320(表3)之製備：
3-氯-4-(氯磺醯基)噻吩-2-甲酸甲酯(2)之製備：在0℃下，向2,3-二甲噻吩1(499μL，4.46mmol)之Et2O溶液(8.00mL)中添加丁基鋰(2.50M於己烷中，1.96mL，4.90mmol)。將其在0℃下攪拌1h。將混合物冷卻至-78℃。逐滴添加氯甲酸乙酯(476μL，4.90mmol)。將其在-78℃下攪拌1h。用1.00M NH4Cl(10mL)及Et2O(20.0mL)稀釋反應混合物。將混合物升溫
至室溫且攪拌30min。分離水層與有機層。將水層用Et2O(3×15.0mL)萃取。將合併的有機層乾燥(MgSO4)，過濾且在減壓下濃縮。藉由急速層析(25g矽膠管柱，EtOAc/己烷，在15 CV內0-30%)純化得到呈深綠色油狀物之標題化合物2(554mg，49%產率，73%純度)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.49(s,1H),4.30(q,J=7.1Hz,2H),2.36(s,3H),2.13(s,3H),1.35(t,J=7.1Hz,3H)。
3-(氯磺醯基)-4,5-二甲噻吩-2-甲酸乙酯(3)之製備：向4,5-二甲噻吩-2-己酸乙酯2(1.00g，5.43mmol)之THF(2.99mL)中添加硫粉(1.67g，6.52mmol)。將其冷卻至-78℃。將新製的二異丙基醯胺鋰溶液(1.00M於THF中，6.79mL，6.79mmol)逐滴添加至混合物中。將混合物在-78℃下攪拌30min，且隨後歷時4h，緩慢升溫至室溫。將混合物冷卻至0℃。將CH2Cl2(5.00mL)添加至混合物中，接著添加HCl(1.00M於H2O中，5.50mL)。將其在0℃下攪拌10min且逐滴添加次氯酸鈉(於H2O中之10%溶液，11.8mL，16.3mmol)。將其在0℃下攪拌20min且隨後在室溫下攪拌2h。添加額外HCl(1.00M於H2O中，5.50mL)，接著添加次氯酸鈉(於H2O中之10%溶液，5.91mL，8.15mmol)。將其在室溫下攪拌20h。用NH4Cl(1.00M於H2O中，20.0mL)及Et2O(30.0mL)稀釋反應混合物。將其在室溫下攪拌30min。分離水層與有機層。將水層用
Et2O(3×25.0mL)萃取。將合併的有機層乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮以得到粗標題化合物(1.58g，40%產率，40%純度)。將LCMS樣品用N-甲基哌嗪淬滅(所得磺醯胺MW=346.4)；(ES+)M+H=347.3。
3-(N-(3-乙醯胺基-2,4-二氟苯基)胺磺醯基)-4,5-二甲噻吩-2-甲酸乙酯(5)之製備：將粗磺醯氯3(1.58g，40%純度，2.15mmol)溶解於THF(11.3mL)中。在室溫下，向該溶液中添加苯胺4(400mg，2.15mmol)，接著添加吡啶(209μL，2.58mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌18h。用EtOAc(30.0mL)及水(15.0mL)稀釋混合物。分離水層與有機層。將水層用EtOAc(3×15.0mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(15.0mL)洗滌、乾燥(Na2SO4)、過濾且在減壓下濃縮，以得到呈油狀物之粗化合物。藉由急速層析(40g矽膠管柱，EtOAc/己烷，在15 CV內0-60%)純化得到呈油狀物之標題化合物(370mg，40%)。(ES+)M+H=433.3及(ES-)M-H=431.3。
N-(3-(4-氯噻吩-3-磺醯胺基)-2,6-二氟苯基)乙醯胺(6)之製備：將化合物5(350mg，809μmol)倒入THF(4.17mL)及MeOH(1.04mL)中。將NaOH(5.00M於H2O中，600μL)添加至混合物中。將混合物攪拌10min，隨後使用HCl(10%於H2O中，10.0mL)酸化。移除揮發成分。將殘餘物與甲苯(3×10.0mL)共沸且在真空下乾燥歷時週末，以得到330mg粗羧酸。在微波
小瓶(5mL大小)中裝入粗羧酸(330mg)、乙酸銅(II)(75.6mg，408μmol)及1,10-啡啉(149mg，816μmol)且將混合物懸浮於NMP(2.79mL)/喹啉(697μL)中。將小瓶用氮氣沖洗，隨後在180℃下使用高吸光度經受微波照射10min。將粗物質用EtOAc(10.0mL)稀釋，用H2O(15.0ml)、HCl(10%於H2O中，2×10.0mL)及鹽水(15.0mL)洗滌。將有機層乾燥(Na2SO4)、過濾且在減壓下濃縮以得到粗標題化合物6(310mg)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。(ES+)M+H=361.2及(ES-)M-H=359.2。
N-(3-胺基-2,4-二氟苯基)-4,5-二甲噻吩-3-磺醯胺(7)之製備：將化合物6(290mg，805μmol)懸浮於EtOH(3.34mL)中且添加HCl(6.00N於H2O中，1.00mL)。將反應混合物在80℃下攪拌隔夜。將溶液冷卻至室溫且在減壓下蒸發揮發成分。將殘餘物與MeOH(3×10.0mL)共沸。將殘餘物藉由逆相層析(25g管柱，CH3CN/含有0.1% AmF之水，5%-50%)純化，以得到標題化合物(139mg，54%產率)，其未經進一步純化即用於下一反應中。(ES+)M+H=319.1及(ES-)M-H=317.2。
N-(3-((6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)胺基)-2,4-二氟苯基)-4,5-二甲噻吩-3-磺醯胺(9)之製備：將苯胺7(130mg，408μmol)添加至於乙酸(1.05mL)中之化合物8(98.0mg，490μmol)中。將該混合
物在50℃下加熱4h。將混合物冷卻至室溫且傾於冰水混合物(50.0mL)中。將混合物攪拌20min。將所形成的固體過濾，用H2O(8×10.0mL)洗滌且在真空下乾燥隔夜以得到米色固體(182mg，85%純度)。將其用CH3CN/MTBE(1：25，5×5.00mL)研磨且乾燥隔夜，以得到成固體之標題化合物9(165mg，80%產率，94%純度)。(ES+)M+H=482.3及(ES-)M-H=480.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.19(s,1H),10.13(s,1H),8.55-8.51(m,1H),8.32-8.24(m,1H),8.05-7.96(m,1H),7.90-7.86(m,1H),7.31-7.23(m,1H),7.20-7.12(m,1H),2.30(s,3H),2.21(s,3H)。
實例320(表3)之製備：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將苯并咪唑與上文所描述之氯吡啶9偶合。
實例329(表4)之製備：
步驟1：向配備有磁力攪拌棒之經氮氣吹掃(×3)的10mL微波小瓶中添加於DMF(4mL)中之4-溴-1H-苯并[d]咪唑(99mg，0.502mmol)、二氰鋅(70.8mg，0.603mmol)、肆(三苯基膦)鈀(116mg，0.100
mmol)。將反應加熱至90℃且攪拌16h。將反應冷卻至室溫且隨後用EtOAc萃取。將有機層用NaHCO3、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且隨後裝載於矽藻土上。將粗物質藉由使用MeOH/DCM之SiO2純化以得到呈淺粉色固體之1H-苯并[d]咪唑-4-甲腈(31mg，43.1%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：13.04(br.s.,1H),8.45(s,1H),7.90(d,J=7.83Hz,1H),7.68(d,J=7.83Hz,1H),7.20-7.44(m,1H)。MS m/z 142.2(MH+)。
步驟2(實例329，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之苯并咪唑片段與氯吡啶A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基)偶合。
實例334、335、336及346(表4)之製備：
步驟1：將氯吡啶片段A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基)(40mg，0.083mmol)、1H-吡唑-3-甲酸甲酯(13.67mg，0.108mmol)、[1,1'-聯萘]-2,2'-二醇
(5.97mg，0.021mmol)、銅(1.32mg，0.021mmol)及碳酸銫(40.7mg，0.125mmol)裝入4mL小瓶中，接著裝入DMSO(700μL)。將橙色/褐色溶液在100℃下攪拌16h。一旦完成，即使反應冷卻至室溫且將4N氫氧化鈉(125μL，0.50mmol)水溶液添加至反應混合物中，隨後將該混合物在50℃下再攪拌一小時。使反應混合物冷卻至室溫且轉移至1.5mL之1N HCl水溶液中，且觀測到形成沉澱。將所形成的沉澱過濾，用水洗滌且在高真空下乾燥以獲得呈黃色固體之所需產物1-(4-((2,6-二氟-3-(3-氟-2-甲苯基磺醯胺基)苯基)胺基)-吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-基)-1H-吡唑-3-甲酸(43.3mg，0.078mmol，94%產率)。MS m/z 556.2(MH+)。
步驟2：藉由將來自步驟1之酸(30mg，0.054mmol)及HATU(41.1mg，0.108mmol)溶解於NMP(1mL)中，接著溶解DIEA(56.4μL，0.324mmol)來製備活化酯。將溶液在室溫下攪拌2-3分鐘且隨後添加N-甲基-1-(吡啶-4-基)甲胺(13.4μL，0.108mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16h。一旦完成，即將反應藉由添加0.5mL甲酸來淬滅，用DMSO稀釋且藉由HPLC(ACN/H2O/0.1%甲酸)純化，以得到呈米色固體之表4中之實例334之產物(5.7mg，8.64μmol，16%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.52(br.s.,1H),10.13(s,0.5H),10.09(s,0.5H),9.39(br.s.,0.5H),9.33(br.s.,0.5H),8.58(br.s.,2H),
8.38-8.53(m,2H),8.32(d,J=9.00Hz,0.5H),8.02(d,J=9.00Hz,0.5H),7.61(dd,J=4.30,7.43Hz,1H),7.47(d,J=8.22Hz,1H),7.14-7.43(m,5H),7.08(d,J=2.74Hz,0.5H),7.01(d,J=2.74Hz,0.5H),5.11(s,1),4.77(s,1H),3.39(s,1.5H),3.03(s,1.5H),2.51(s,3H)。MS m/z 660.2(MH+)。
使用適當可商購之吡唑酯以類似方式製備實例335、336及346(表4)。
實例339及340(表4)之製備：
步驟1：將1-boc-3-哌啶酮(5.00g，25.1mmol)於DMF-DMA(20.8mL)中之攪拌溶液在100℃
下加熱1h。完成之後，將反應混合物冷卻至室溫且在減壓下蒸發揮發成分，以獲得黃色膠狀物質。將其與EtOH(5.00mL×3)共蒸發成區域異構產物之混合物。將物質作為粗物質用於下一步驟中：(ES+)M+H=225.1。
步驟2：將來自步驟1之化合物與水合肼溶液(3.19mL，50.2mmol)之混合物在EtOH(33.5mL)中混合。將混合物在80℃下加熱1h。當LCMS顯示起始物質完全消耗時，將其冷卻至室溫。在減壓下蒸發揮發成分且將殘餘物藉由具有20%-60%乙酸乙酯/己烷之矽膠層析純化。所需產物產率為60%。獲得呈膠狀固體之異構吡唑衍生物之混合物(4.04g，72%產率)：(ES+)M+H=224.1。
步驟3：將來自步驟2之產物(335mg，1.50mmol)、A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基，480mg，1.00mmol)、銅金屬(6.36mg，100umol)、1,1'-二-2-萘酚(58.5mg，200μmol)及碳酸銫(757mg，2.30mmol)之混合物在DMSO(4.00mL)中混合。將反應加熱至125℃持續3h。在冷卻至室溫之後，將反應用水(30.0mL)及乙酸乙酯(30.0mL)稀釋且藉由矽藻土稀釋。將濾液用乙酸乙酯(30.0mL×2)萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，乾燥且濃縮。殘餘物藉由具有50%-70%乙酸乙酯/己烷之矽膠層析(80g)來純化。所需產物呈區域異構物之黃色固體混合物形式以70%乙酸乙酯/己烷產出(567mg，85%產率)：(ES+)M+H=667.2。
步驟4：將來自步驟4之區域異構胺甲酸酯混合物(567mg，850μmol)溶解於二噁烷(4.25mL)中。在室溫下向溶液中添加HCl(4.0M於二噁烷中，2.13mL，8.50mmol)。將反應物在室溫下攪拌2天。過濾反應且用二噁烷洗滌。獲得呈黃色固體之區域異構鹽酸鹽之混合物(542mg，定量產率)：(ES+)M-HCl+H=567.2。
來自步驟4之區域異構吡唑之分離：將來自步驟3之區域異構物胺甲酸酯之混合物(1.0g，1.5mmol)溶解於二噁烷(7.5mL)中。在室溫下向溶液中添加HCl(4M於二噁烷中，3.75mL，15mmol)。將反應物在室溫下攪拌2天。過濾反應且用二噁烷洗滌。獲得呈黃色固體之區域異構鹽酸鹽之混合物(850mg，定量產率)。將固體藉由具有於10mM甲酸銨中之0-20%-40% ACN之逆相管柱純化，第一異構物(異構物a)以於10mM甲酸銨中之15% ACN產出，且第二異構物(異構物b)以於10mM甲酸銨中之40% ACN產出。濃縮兩種化合物且用於0.5mL二噁烷中之4M HCl處理殘餘物，對所得懸浮液進行音波處理且隨後過濾，得到呈白色固體之異構物a(130mg，15%產率)及異構物b(230mg，27%產率)之鹽酸鹽：(ES+)M-HCl+H=567.2。
步驟5(實例339及340，表4)：將來自步驟4之異構物的混合物(85.0mg，150μmol)溶解於MeOH(1.50mL)中。向溶液中添加羥乙醛二聚體(56.9mg，450μmol)。5min之後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉(163
mg，750μmol)。將反應在室溫下攪拌隔夜。將反應用水(10.0mL)淬滅並用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。將有機層合併且用鹽水洗滌，乾燥且濃縮。將殘餘物在具有於10mM甲酸銨中之0-40%-60% ACN的逆相管柱純化。實例339之化合物以於10mM甲酸銨中之20% ACN產出，且實例340之化合物以於10mM甲酸銨中之40% ACN產出。凍乾之後，獲得呈白色固體之實例339(10mg，11%產率)。獲得呈白色固體之實例340(10mg，11%產率)。
實例343(表4)之製備：
步驟1：將可商購之咪唑起始物質(其亦可按照Tet.Lett.2002,43(1),61中所描述之程序製備)如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化與氯吡啶A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基)偶合。
步驟2(實例343，表4)：向配備有磁力攪拌棒之20mL閃爍小瓶中添加來自步驟1之產物(91mg，0.157mmol)及2,4,6-三氧化2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三膦(997mg，1.57mmol)。歷時48h，將反應加熱至65℃。一旦完成，即將反應冷卻至室溫。將水添加至反應中，導致產物沉澱。將產物過濾，用水洗滌，收集且隨後在真空下乾燥隔夜以得到呈米色固體之
(E)-N-(3-((6-(4-(2-氰基乙烯基)-1H-咪唑-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)胺基)-2,4-二氟苯基)-3-氟-2-甲苯磺醯胺(63mg，69%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.53(s,1H),10.16(s,1H),9.13(s,1H),8.74(s,1H),8.50(s,1H),8.38-8.48(m,2H),7.61(d,J=7.83Hz,1H),7.57(d,J=16.04Hz,1H),7.49(t,J=8.41Hz,1H),7.40(dt,J=5.48,8.02Hz,1H),7.28-7.36(m,1H),7.22-7.28(m,1H),6.24(d,J=16.04Hz,1H),2.51(s,3H)。MS m/z 563.2(MH+)。
實例345及361(表4)之製備：
步驟1：在N2氛圍下，向配備有磁力攪拌棒之5mL小瓶中添加於無水THF(2mL)中之4-苯并咪唑甲酸甲酯(100mg，0.568mmol)。將反應冷卻至0℃。歷時5min，緩慢添加1M鋁氫化鋰於THF中之溶液(0.44mL，0.437mmol)。使反應升溫至室溫且攪拌4小時。另一份於THF(0.250mL)中之1M鋁氫化鋰推動反應完成。使反應再攪拌1小時。用MeOH淬滅反應。將反應負載
於矽藻土上且隨後在使用MeOH/DCM之SiO2上純化，以得到呈黃色固體之所需苄醇衍生物(58mg，0.391mmol，90%產率)。MS m/z 149.2(MH+)。
步驟2(實例345)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之苄醇與氯吡啶A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基)偶合。
步驟3：向20mL閃爍小瓶中，添加於DMF(3.1259mL)中之N-[2,4-二氟-3-[[6-[4-(羥甲基)苯并咪唑-1-基]吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基]胺基]苯基]-3-氟-2-甲基-苯磺醯胺(1.00當量，138mg，0.233mmol)及DIEA(2.00當量，81μL，0.467mmol)。接下來，將技術穩定之2-(三甲矽)乙氧基甲基氯(1.10當量，46μL，0.257mmol)添加至懸浮液中。將反應加熱至40℃且攪拌24h。將反應用飽和NH4Cl淬滅且隨後用鹽水及EtOAc(×3)萃取。收集有機物，藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。粗物質液體藉由使用MeOH/DCM之正相急速管柱層析純化。收集所需級分且在減壓下濃縮以得到呈黃色固體之所需受保護之磺醯胺(153mg，91%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.88(br.s.,1 H),9.30(s,1 H),8.49(br.s.,3 H),8.25(d,J=8.2Hz,1 H),7.66(d,J=7.8Hz,1 H),7.54(t,J=8.2Hz,1 H),7.39-7.48(m,2 H),7.29-7.39(m,2 H),5.26(br.s.,1 H),5.07(s,2 H),5.00(s,2 H),3.60-3.68(m,2 H),2.39(d,J=2.3
Hz,3 H),0.82-0.90(m,2 H),-0.03(s,9 H)。MS m/z 722.2(MH+)。
步驟4(實例361)：向20mL小瓶中添加於DMF(2mL)中之來自步驟3之產物(1.00當量，150mg，0.208mmol)及N,N-二異丙基乙胺(2.00當量，72μL，0.416mmol)。接下來，添加甲磺醯氯(1.50當量，24μL，0.312mmol)。將反應在室溫下攪拌隔夜。將反應用飽和NaHCO3淬滅且隨後用EtOAc(×3)萃取。收集有機物，藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質溶解於MeCN(2mL)且隨後添加氰化鉀(2.00當量，27mg，0.416mmol)。使反應在室溫下攪拌36h。將反應用10% LiCl淬滅且隨後用EtOAc(×3)萃取。收集有機物，藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質溶解於1mL DCM及1mL TFA中，且在室溫下攪拌48h。在減壓下移除DCM。將粗物質溶解於DMSO中且隨後藉由使用水：MeCN+0.1%甲酸之製備型HPLC純化，以在凍乾後得到呈淺黃色固體之實例361之類似物(36mg，0.0593mmol，29%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.51(br.s.,1 H),9.82(s,1 H),9.38(s,1 H),8.46-8.55(m,3 H),8.36(d,J=7.8Hz,1 H),7.63(d,J=7.8Hz,1 H),7.41-7.50(m,3 H),7.35-7.41(m,1 H),7.29(td,J=9.0,6.3Hz,1 H),7.19(t,J=9.4Hz,1 H),4.38(s,2 H),2.50(br.s.,3 H)。MS m/z 601.2(MH+)。
實例347(表4)之製備：
向20ml閃爍小瓶中添加於MeOH(2ml)中之實例343之化合物(50mg，0.089mmol)及5% Pd/C(10mg，5.2μmol)。在1atm H2下，使反應在室溫下攪拌16h。將反應藉由矽藻土墊過濾且隨後在減壓下濃縮。粗物質藉由使用水：MeOH+1%甲酸之HPLC純化，以得到表4中之實例347之化合物(17mg，34%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.51(br.s.,1H),10.00(s,1H),8.96(s,1H),8.43-8.49(m,1H),8.32-8.43(m,2H),8.30(s,1H),7.62(d,J=7.83Hz,1H),7.41-7.49(m,1H),7.33-7.41(m,1H),7.23-7.33(m,1H),7.18(br.s.,1H),2.87(s,4H),2.50(s,3H)。MS m/z 565.4(MH+)。
實例348及349(表4)之製備：
如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將可商購之3H-咪唑并[4,5-c]
吡啶-4-胺(CAS號6811-77-4)與氯吡啶A-13偶合，不同之處在於使用1.2當量之Cu金屬。
實例353(表4)之製備：
藉由如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將含有氯吡啶片段之片段B49(表2)與4-胺基苯并咪唑偶合，以常見方式獲得起始Cbz-保護之胺基吡啶衍生物。向此中間物(12mg，0.0168mmol)於MeOH(1mL)中之溶液中添加5%氫氧化鈀/碳(23mg，0.0084mmol)且在1atm H2下攪拌1h。一旦完成，即過濾懸浮液且在真空下濃縮。將殘餘物用DMSO稀釋且藉由具有於0.1%甲酸水溶液中之MeCN的HPLC純化以得到353(表4)(2.0mg，20%)。1H NMR(400MHz，乙酸d4)δ：9.15(s,1H),8.56-8.84(m,2H),8.42(d,J=9.00Hz,1H),8.08(s,1H),7.98(d,J=9.39Hz,1H),7.54(s,1H),7.29(s,1H),7.18(s,1H),6.85(d,J=7.83Hz,1H),6.75(d,J=9.39Hz,1H),2.65(s,3H)。MS m/z 575.2(MH+)。
實例356及664之製備：
將來自實例339/340之步驟4的區域異構吡唑之混合物(100.0mg,177μmol)溶解於MeOH(1.77mL)中。向溶液中添加甲醛(65.7μL，883μmol)，接著添加AcOH(1滴)。5min之後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉(192mg，883μmol)。將反應在室溫下攪拌隔夜。濃縮反應以移除MeOH且隨後將其用水及乙酸乙酯稀釋。分離水層與有機層且將水層用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。將合併的有機層乾燥且在減壓下濃縮。將殘餘物在具有於10mM甲酸銨中之0-30%-60% ACN的逆相管柱(30g)純化。實例664之化合物以於10mM甲酸銨中之30% ACN產出，且實例356之化合物以於10mM甲酸銨中之50% ACN產出。凍乾之後，均獲得呈白色固體之664(20mg，20%產率)及356(13mg，13%產率)。
實例357及393(表4)之製備：
將來自實例339/340之步驟4的區域異構吡唑之混合物(50.0mg,88.2μmol)溶解於CH2Cl2(1.00mL)中。向溶液中添加乙酸酐(4.63μL，48.5μmol)，接著添加N,N-二異丙基乙胺(11.6μL，66.2μmol)。將反應在室溫下攪拌隔夜。將Ac2O(10.0μL)添加至反應中且再攪拌一天。在減壓下移除揮發成分且將殘餘物直接在逆相管柱(30g)上使用於10mM碳酸氫銨中之0-30%-60% ACN純化。實例393之化合物以於10mM碳酸氫銨中之30% ACN產出，且實例357之化合物以於10mM碳酸氫銨中之40% ACN產出。凍乾之後，均獲得呈白色固體之393(10mg，19%產率)及357(20mg，37%產率)。
實例362及383(表4)之製備：
步驟1：將來自實例339/340之步驟4的異構物b(30.0mg，53.0μmol)及N-boc-2-胺基乙醛(26.6mg，159μmol)溶解於MeOH(530μL)中。5min之後，將三乙醯氧基硼氫化鈉(57.6mg，265μmol)添加至溶液中。將反應在室溫下攪拌隔夜。將反應直接在逆相管柱上，使用於10mM甲酸銨中之0-40%-70% ACN純化。所需胺甲酸酯類似物以於10mM甲酸銨中之55% ACN產出且將適當級分凍乾成黃色固體(7.5mg，20%產率)：(ES+)M+H=710.0。
步驟2(實例362，表4)：向於二噁烷(500μL)中之來自步驟1之胺甲酸酯(30.0mg，53μmol)中添加鹽酸(4.00M於二噁烷中，26.4μL，106μmol)。將反應在室溫下攪拌隔夜。在減壓下移除揮發成分且將殘餘物直接在逆相管柱上，使用於10mM甲酸銨中之0-20%-40% ACN純化。凍乾之後，實例362之化合物以於10mM甲酸銨中之30% ACN產出為黃色固體(5.10mg，79%產率)。
步驟3(實例383，表4)：向化合物362(21.5mg，35.3μmol)之CH2Cl2(0.5mL)及AcOH(0.05mL)溶液中添加乙酸酐(3.7μL，38.8μmol)，接著添加N,N-二異丙基乙胺(9.3μL，52.9μmol)。將反應在室溫下攪拌隔夜。在減壓下移除揮發成分且將殘餘物直接在逆相管柱上，使用於10mM甲酸銨中之0-40%-60% ACN純化。凍乾之後，實例383之化合物以於10mM甲酸銨中之60% ACN產出且以黃色固體(10.8mg，47%產率)獲得。
實例369(表4)之製備：
向實例368之硝基芳烴(26mg，0.043mmol)於MeOH/DCM 1：1(1mL)中之溶液中添加5%氫氧化鈀/碳(23mg，0.0084mmol)且在1atm H2下攪拌16h。一旦完成，即過濾懸浮液且在真空下濃縮。將殘餘物用DMSO稀釋且藉由具有於0.1%甲酸水溶液中之MeCN的HPLC純化以得到實例369之化合物(2.0mg，20%)。1H NMR(400MHz，乙酸-d4)δ：9.18(br.s.,1H),8.57-8.84(m,2H),8.42(d,J=9.00Hz,1H),8.08(s,1H),7.51-7.69(m,2H),7.29(td,J=3.96,8.12Hz,1H),6.98-7.18(m,1H),6.84(d,J=
7.83Hz,1H),6.57(s,1H),6.52(d,J=8.61Hz,1H),2.53(s,3H)MS m/z 574.2(MH+)。
實例375、350及351(表4)之製備：
步驟1：將3-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基丙醛(0.38mL，1.80mmol)添加至1H-苯并咪唑-4-胺(80mg，0.601mmol)於MeOH(7.5mL)中之溶液中。將反應加熱至50℃持續20min，且隨後冷卻至室溫。添加氰基硼氫化鈉(0.151g，2.40mmol)且將反應在50℃下攪拌16h。在減壓下移除溶劑且隨後添加DCM(3mL)，接著添加TFA(3mL)。使反應在室溫下攪拌30min。在減壓下移除溶劑且將粗物質溶解於MeOH中。添加IRA-67樹脂且將溶液藉由棉塞過濾，並且隨後在減壓下濃縮以得到3-(1H-苯并咪唑-4-基胺基)丙-1-醇(60mg，53%產率)。MS m/z 192.2(MH+)。
步驟2：將3-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基丙醛(98μL，0.471mmol)添加至3-(1H-苯并咪唑-4-基胺
基)丙-1-醇(60mg，0.314mmol)於MeOH(3.1mL)中之溶液中。將反應加熱至50℃持續15min，且冷卻至室溫。添加氰基硼氫化鈉(59mg，0.941mmol)且隨後將反應加熱至50℃，並且攪拌10h。LCMS分析顯示仍存在顯著量之起始物質。在減壓下移除溶劑且隨後添加DCM(3mL)，接著添加TFA(3mL)。使反應在室溫下攪拌30min且濃縮。將粗物質用MeOH稀釋且添加IRA-67樹脂。將混合物藉由棉塞過濾。添加氰基硼氫化鈉(3.00當量，59mg，0.941mmol)。將反應加熱至50℃且攪拌整個週末。一旦完成，即添加TFA(1mL)及IRA-67。將所得混合物過濾且將溶液濃縮。將粗物質在真空下放置2天，以得到3-[1H-苯并咪唑-4-基(3-羥丙基)胺基]丙-1-醇(32mg，41%產率)。MS m/z 250.2(MH+)。
步驟3(實例375，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之苯并咪唑片段與氯吡啶A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基)偶合。
使用步驟1之2-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基乙醛，以類似方式製備實例350(表4)。隨後使用上述步驟3之程序將步驟1中所獲得之單烷化4-胺基苯并咪唑轉化為實例350之化合物。
使用步驟1及2之3-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基乙醛，以與實例375相同的方式製備實例351(表4)。
實例376及384(表4)之製備：
步驟1：將LiHMDS(1M於THF中，0.76mL，0.759mmol)之溶液添加至1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-胺(WO 202105591中所描述的)(50mg，0.190mmol)於DMF(1.9mL)中之溶液中。將所得混合物在rt下攪拌20min且添加1-溴-2-甲氧乙烷(6.00當量，107μL，1.14mmol)。將反應在RT下攪拌45min。接下來，添加額外6當量之1-溴-2-甲氧乙烷(107μL)且將所得混合物攪拌2天。一旦完成，添加NH4Cl(在水中飽和)溶液且用EtOAc萃取水性混合物。將有機物合併，藉由MgSO4乾燥，過濾且濃縮。粗物質藉由管柱層析(矽膠，0-80% EtOAc/己烷)純化以得到呈淺黃色油狀物之N,N-雙(2-甲氧基乙基)-1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-胺(40mg，56%產率)。MS m/z 380.4(MH+)。
步驟2：於TFA(1mL)及DCM(1mL)之混合物中之N,N-雙(2-甲氧基乙基)-1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-胺(40mg，0.105mmol)。使反應在室溫下攪拌1h且加熱至40℃持續1.5h。將反應冷卻至室溫。在減壓下濃縮反應且隨後再溶解於MeOH中。添加IRA-67樹脂且將混合物藉由棉塞過濾。在減壓下濃縮溶液以得到呈黃褐色油狀物之N,N-雙(2-甲氧基乙基)-1H-苯并咪唑-4-胺(26mg，100%產率)。MS m/z 250.2(MH+)。
步驟3(實例376，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之苯并咪唑片段與氯吡啶A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基)偶合。
使用步驟1中之1-溴-3-甲氧丙烷，以類似方式製備實例384之化合物(表4)：MS m/z 278.4(MH+)。
實例382(表4)之製備：
步驟1：將如WO2021/97057第2021頁所描述製備之1-(對甲苯磺醯基)吡咯(5g，22.6mmol)於無水CH3CN(100mL)中之溶液在冰浴中冷卻且用氯磺酸(9.0mL，136mmol)逐滴處理。使反應混合物升溫至室溫且攪拌72h。一旦完成，即將混合物傾至冰/水上且出現沉澱。過濾固體以提供1-(對甲苯磺醯基)吡咯-3-磺醯氯(2.53g，35%產率)。MS m/z(MH+)。
步驟2：向配備有攪拌棒之小瓶中添加來自步驟1之於無水THF(2mL)中之1-(對甲苯磺醯基)吡咯-3-磺醯氯(86mg，0.27mmol)。向該溶液中添加DIEA(0.094mL，0.541mmol)及N,N,N"-三甲基乙二胺(0.042mL，0.325mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌1h。完成之後，逐滴添加10% KOH水溶液(2mL)。在60℃下將反應加熱隔夜。完成之後，用EtOAc稀釋反應混合物且添加NH4Cl水溶液。分離各層。將有機層用鹽水洗滌，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮至乾燥，以得到呈淺橙色油狀物之N-[2-(二甲胺基)乙基]-N-甲基-1H-吡咯-3-磺醯胺(48mg，77%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：ppm 2.35-2.48(m,6 H)2.61-2.85(m,6 H)3.01-3.24(m,2 H)6.46(br.s.,1 H)6.85(br.s.,1 H)。MS m/z 232.2(MH+)。
步驟3(實例382，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之吡咯片段與氯吡啶A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基)偶合。
實例391(表4)之製備：
將來自實例339/340之步驟4的異構物b(28.3mg，49.9μmol)添加至3-羥基丙醛(22.2mg，300μmol)中，隨後添加DCE(1.0mL)，接著添加一滴AcOH及三乙醯氧基硼氫化鈉(65.1mg，300μmol)。將反應在室溫下攪拌隔夜。將反應在製備型HPLC上純化且獲得呈白色固體之實例391之化合物(6.3mg，20%產率)。
實例392(表4)之製備：
步驟1：將來自實例339/340之步驟4的異構物b(30.0mg，53.0μmol)、N,N-二異丙基乙胺(23.2μL，132μmol)及Boc-Gly-OH(11.4mg，63.5μmol)溶解於DMF(600μL)中。向溶液中添加HATU(30.8mg，79.4μmol)。將反應在室溫下攪拌隔夜。將水(5.00mL)添加至反應中且過濾所沉澱的產物以產生呈米色固體
之所需胺甲酸酯(38.0mg，99%產率)：(ES+)M+H=724.3。
步驟2(實例392，表4)：向來自步驟1之產物(38.0mg，52.5μmol)的二噁烷(1.00mL)溶液中添加HCl(4M於二噁烷中，131μL，525μmol)。將反應在室溫下攪拌整個週末。在減壓下移除揮發成分且將殘餘物藉由具有於10mM甲酸銨中之0-20%-40% ACN之逆相管柱純化。凍乾之後，實例392之化合物以於10mM甲酸銨中之25% ACN產出且以白色固體(27.6mg，84%產率)獲得。
實例414(表4)之製備：
以與實例392之化合物類似的方式製備實例414之化合物，不同之處在於使用來自實例339/340之步驟4的異構物b。
實例415(表4)之製備：
步驟1：將來自實例339/340之步驟4的異構物b(15.0mg，26.5μmol)及N-boc-2-胺基乙醛(13.3
mg，79.4μmol)溶解於DCE(375μL)中。5min之後，將三乙醯氧基硼氫化鈉(17.3mg，79.4μmol)添加至溶液中。將反應在室溫下攪拌隔夜。將反應用水(5.00mL)淬滅且藉由DCM(5mL×3)萃取。將合併的有機層在減壓下濃縮且將所得粗殘餘物7a(18.8mg，100%產率)直接用於下一步驟中：(ES+)M+H=710.3。
步驟2：將來自步驟1之粗產物(18.8mg，26.5μmol)溶解於二噁烷(250μL)中，隨後添加HCl(4M於二噁烷中，66.3μL，265μmol)。將反應在室溫下攪拌隔夜。在減壓下移除揮發成分且將殘餘物藉由具有於10mM甲酸銨中之0-20%-40% ACN之逆相管柱純化。凍乾之後，實例415之化合物以於10mM甲酸銨中之25% ACN產出且以白色固體(甲酸鹽形式)(8.20mg，51%產率)獲得。
實例420(表4)之製備：
步驟1：向100mL圓底燒瓶中添加於無水DMF(10mL)中之4-溴-1H-苯并咪唑(1.00g，5.08mmol)、2-(三甲矽)乙氧基甲基氯(1.1mL，6.09mmol)及60% NaH(244mg，6.09mmol)使反應在室溫下攪拌1h。一旦完成，即將反應用飽和NH4Cl淬滅且隨後用EtOAc(×3)萃取。收集有機物，用鹽水洗滌，分離，隨後藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質裝載於矽藻土上且隨後在具有EtOAc/己烷之SiO2上純化，以得到呈褐色油狀物之2-[(4-溴苯并咪唑-1-基)甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(1.18g，71%產率)。MS m/z 327.2(MH+)。
步驟2：在N2氛圍下，向火焰乾燥之5mL微波小瓶中添加於DMF(0.30mL)中之2-[(4-溴苯并咪唑-1-基)甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(500mg，1.53mmol)及雙(頻哪醇)二硼(776mg，3.06mmol)。接下來，將1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵-二氯化鈀(ii)二氯甲烷錯合物(279mg，0.382mmol)及乙酸鉀(450mg，4.58mmol)添加至溶液中。將反應用氬氣球噴射幾分鐘，密封且隨後加熱至100℃並且攪拌16h。將反應冷卻至室溫。將粗反應物作為粗混合物用於下一步驟。
步驟3：向粗反應物中添加4-胺基-3-溴吡啶(34mg，0.20mmol)、肆(三苯膦)鈀(0)(35mg，0.0305mmol)及碳酸鉀(97mg，0.914mmol)。將反應用氬氣球噴射約5-10min，密封且隨後加熱至100℃持續24h。
一旦完成，即將反應冷卻至室溫。反應用鹽水稀釋且用EtOAc(×3)萃取。收集有機物，藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質裝載於矽藻土上且隨後在具有MeOH/DCM之SiO2上純化，以得到呈褐色薄膜狀物之3-[1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-基]吡啶-4-胺(72mg，69%產率)。MS m/z 341.2(MH+)。
步驟4：向20mL閃爍小瓶中添加於DCM(2mL)及TFA(2mL)中之3-[1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-基]吡啶-4-胺(72mg，0.210mmol)。使反應在室溫下攪拌16h。一旦完成，即在減壓下移除溶劑且隨後在真空下乾燥，以得到呈褐色油狀物之3-(1H-苯并咪唑-4-基)吡啶-4-胺TFA鹽(68mg，100%產率)。MS m/z 211.2(MH+)。
步驟5(實例420，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟4之苯并咪唑片段與氯吡啶A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基)偶合。
實例424(表4)之製備：
步驟1：向20mL閃爍小瓶中添加於DMF(5mL)中之4-溴-1H-苯并咪唑(500mg，2.54mmol)、60% NaH(122mg，3.05mmol)及4-甲氧苄氯(413μL，3.05mmol)。使反應在室溫下攪拌2h。將反應用飽和NH4Cl淬滅且隨後用EtOAc(×3)萃取。收集有機物，藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質裝載於矽藻土上且隨後在具有EtOAc/己烷之SiO2上純化，以得到呈褐色油狀物之4-溴-1-[(4-甲氧苯基)甲基]苯并咪唑(735mg，91%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.50(s,1 H),7.57(dd,J=8.2,0.8Hz,1 H),7.29(ddd,J=8.6,3.1,2.0Hz,2 H),7.14(t,J=7.8Hz,2 H),6.86-6.89(m,2 H),5.43(s,2 H),3.70(s,3 H)。次要異構物：8.46(s,1 H),7.70(dd,J=8.0,1.0Hz,1 H),7.42(d,J=7.8Hz,2 H),7.04(d,J=9.0Hz,2 H),6.90(m,J=3.5Hz,
2 H),5.72(s,2 H),3.70(s,3 H)。MS m/z 317.2(MH+)。
步驟2：在N2氛圍下，向火焰乾燥之5mL微波小瓶中添加於DMF(0.3000mL)中之來自步驟1之受保護的苯并咪唑(200mg，0.631mmol)及雙(頻哪醇)二硼(320mg，1.26mmol)。接下來，向溶液中添加1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵-二氯化鈀(ii)二氯甲烷錯合物(231mg，0.315mmol)且隨後添加乙酸鉀(186mg，1.89mmol)。將反應用氬氣球噴射幾分鐘，密封且隨後加熱至100℃並且攪拌24h。將反應冷卻至室溫。反應萃取，用鹽水稀釋且用EtOAc(×3)萃取。收集有機物，藉由MgSO4乾燥，藉由矽藻土塞過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質裝載於矽藻土上且隨後在具有EtOac/己烷之SiO2上純化。收集所需級分且在減壓下濃縮以得到呈褐色油狀物之1-[(4-甲氧苯基)甲基]-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊-2-基)苯并咪唑(82mg，36%產率)。MS m/z 365.4(MH+)。
步驟3：在N2氛圍下，向火焰乾燥之5mL微波小瓶中添加1-[(4-甲氧苯基)甲基]-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊-2-基)苯并咪唑(56mg，0.154mmol)及2-胺基-3-溴吡啶(35mg，0.200mmol)。接下來，向溶液中添加碳酸鈉(49mg，0.461mmol)且隨後添加肆(三苯膦)鈀(0)(18mg，0.0154mmol)。將反應用氬氣球噴射約5-10min，密封且隨後加熱至80℃
並且攪拌16h。將反應冷卻至室溫。反應用鹽水稀釋且用EtOAc(×3)萃取。收集有機物，藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質裝載於矽藻土上且隨後在具有MeOH/DCM之SiO2上純化。收集所需級分且在減壓下濃縮以得到呈白色固體之3-[1-[(4-甲氧苯基)甲基]苯并咪唑-4-基]吡啶-2-胺(15mg，0.0445mmol，29%產率)。MS m/z 331.2(MH+)。
步驟4：向20mL閃爍小瓶中添加於TFA(2mL)中之3-[1-[(4-甲氧苯基)甲基]苯并咪唑-4-基]吡啶-2-胺(15mg，0.0445mmol)。將反應加熱至80℃且攪拌96h。在減壓下移除溶劑且隨後將產物與甲苯(×3)共蒸發以得到3-(1H-苯并咪唑-4-基)吡啶-2-胺TFA鹽(14mg，100%)。MS m/z 211.2(MH+)。
步驟5(實例424，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟4之苯并咪唑片段與氯吡啶A-13(Ar=3-氟-2-甲苯基)偶合。
實例425及460(表4)之製備：
步驟1：將化合物A-13(800mg，1.67mmol)及肼(於THF中之1.00M溶液，3.33mL，3.33mmol)在THF(6.67mL)中混合。將反應在80℃下攪拌隔夜。將反應冷卻至室溫且添加己烷(50mL)。將所形成的固體過濾且用己烷(5mL×2)洗滌。在空氣循環下乾燥，產生819mg米色固體。將粗固體產物藉由0-10% MeOH/CH2Cl2進一步純化。所需產物以10% MeOH/DCM產出，產生呈米色固體之預期肼衍生物(550mg，69%產率)：(ES+)M+H=476.1。
步驟2：將來自步驟1之產物(350mg，736μmol)及在實例339/340之步驟1中所獲得之粗乙烯類似物醯胺(206mg，810μmol)在EtOH(3.68mL)中混合，將反應在室溫下攪拌隔夜。濃縮反應以移除EtOH，且添加AcOH(5.25mL)。將反應在80℃下攪拌1h。在減壓下移除揮發成分且將殘餘物藉由具有於10mM甲酸銨中之0-50%-100% ACN之逆相管柱純化。凍乾之後，所需
吡唑衍生物(85mg，17%產率)以於10mM甲酸銨中之90% ACN呈白色固體形式產出：(ES+)M+H=667.2。
步驟3：向來自步驟2之產物(85.0mg，127μmol)的二噁烷(637μL)溶液中添加HCl(4M於二噁烷中，319μL，1.27mmol)。在室溫下攪拌反應隔夜。添加HCl(4M於二噁烷中，0.5mL，1.98mmol)且隨後將其加熱至50℃再持續一天。將反應過濾且用二噁烷(2.0mL)洗滌。獲得呈米色固體之所需鹽酸鹽(70.0mg，97%產率)：(ES+)M+H=567.3。
步驟4(實例425，表4)：將來自步驟3之鹽酸鹽(20.0mg，35.3μmol)及羥乙醛二聚體(17.9mg，141μmol)溶解於DCE(500μL)中。5min之後，將三乙醯氧基硼氫化鈉(38.4mg，177μmol)添加至溶液中。將反應在室溫下攪拌2h。在減壓下移除揮發成分且將固體殘餘物藉由具有於10mM碳酸氫銨中之0-20%-50% ACN之逆相管柱純化。在凍乾之後，獲得呈黃色固體之標題化合物425(8.00mg，37%產率)。
步驟4(實例460，表4)：將來自步驟3之鹽酸鹽(15.0mg，26.5μmol)及甲醛水溶液(9.86μL，132μmol)溶解於DCE(265μL)中。向溶液中添加三乙醯氧基硼氫化鈉(28.8mg，132μmol)，接著添加AcOH(1滴)。將反應在室溫下攪拌隔夜。在減壓下移除揮發成分。向固體殘餘物中添加MeOH(1.00mL)及水(10mL)。過濾混合物以獲得固體A，將其置於一邊。將所得濾液用乙
酸乙酯(5mL×5)萃取。合併有機層且濃縮以產生固體B。將固體A及B合併且添加MeOH(2mL)。將漿液加熱至80℃，直至固體溶解。隨後將其冷卻至室溫，且過濾以獲得呈黃色固體之實例460之化合物(11.3mg，74%產率)。
實例443及444(表4)：
使用5-氟吲哚作為起始物質及適當胺，按照一般方法G製備此等兩種類似物。如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將吲哚磺醯胺與氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合。
實例447、456、457及461(表4)之製備：
步驟1：如一般方法H下所描述的，由1H-吲哚-3-基-硫氰酸酯(Phosphorus,Sulfur and Silicon and the Related Elements 2014,189,1378)製備3-吲哚碸酯。在-78℃下，向該物質(100mg，0.309mmol)於DCM(3mL)中之溶液中分兩份添加二異丁基氫化鋁
(2.5mL，3.72mmol)之1M溶液。將反應混合物升溫至室溫且攪拌2h。將反應混合物用二乙醚(30mL)稀釋且冷卻至0℃。將反應藉由緩慢添加0.15mL水，接著添加0.15mL之15%氫氧化鈉水溶液及0.37mL水來淬滅。將溶液升溫至室溫且攪拌15min。將無水硫酸鎂添加至攪拌溶液中。15min之後，過濾懸浮液以移除鹽。蒸發至乾燥得到呈固體之相應醇(68mg，87%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.91(br.S.,1H),7.87-8.08(m,1H),7.81(d,J=3.13Hz,1H),7.43-7.61(m,1H),7.32-7.43(m,2H),3.81(d,J=6.65Hz,2H),1.39(s,6H)。MS m/z 254.2(MH+)。
步驟2(實例447，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之吲哚碸與氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合。
步驟3：將來自步驟1之醇(350mg，1.38mmol)於DCM(4mL)中之攪拌溶液經1,1,1-參(乙醯氧基)-1,1-二氫-1,2-苯并二氧呃-3-(1h)-酮(1289mg，3.04mmol)處理。在RT下2h之後，添加飽和Na2SO3水溶液(1.0mL)及飽和NaHCO3水溶液(1.0mL)，且隨後攪拌該雙相混合物30min。將混合物用DCM(3mL)稀釋，分離各層且隨後將水層用CH2Cl2(2×4mL)萃取。將合併的有機萃取物經MgSO4乾燥，過濾，且濃縮以得到所需醛中間物(350mg，96%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：9.86(s,1H),8.88(br.s.,1H),7.87
-7.98(m,1H),7.73(d,J=3.13Hz,1H),7.44-7.52(m,1H),7.29-7.40(m,2H),1.55(s,6H)。MS m/z 250.2(MH-)。
步驟4：將來自步驟3之醛(30mg，0.119mmol)及嗎啉(0.021mL，0.239mmol)與一滴乙酸在ACN(1mL)中混合且在70℃下攪拌16h。隨後添加DCE，接著添加三乙醯氧基硼氫化鈉(127mg，0.597mmol)且將所得懸浮液在室溫下攪拌16h。將反應藉由飽和NaHCO3水溶液(5mL)淬滅且攪拌15min。將溶液用EtOAc(3×10mL)萃取。將有機相用鹽水(10mL)洗滌，分離，經MgSO4乾燥，過濾且在真空下濃縮以得到所需胺基碸(29mg，75%)。MS m/z 286.2(MH-)。
步驟5(實例457，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟4之吲哚碸與氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合以提供實例457之化合物。
使用步驟4中之適當胺，以此方式製備表4中之其他類似物(456及461)。
實例465(表4)之製備：
步驟1：向1H-吲哚-3-基-硫氰酸酯(Phosphorus,Sulfur and Silicon and the Related Elements 2014,189,1378)(500mg，2.87mmol)於iPrOH(15mL)中之溶液中添加九水合硫化鈉(2068mg，8.61mmol)，溶解於1mL水中，隨後將所得混合物在50℃下攪拌2h。此後，添加1-哌啶甲酸，4-溴-1,1-二甲基乙基酯(1.1mL，5.74mmol)且在50℃下攪拌隔夜。用EtOAc(30mL)稀釋反應混合物且進行分離。將有機層用水(15mL)洗滌，接著用鹽水(15mL)洗滌，經MgSO4乾燥且隨後在真空下濃縮以得到粗硫化物，其未經進一步純化直接用於下一步驟中。
步驟2：將來自步驟1之硫化物溶解於DCM中且添加3-氯過氧苄酸(1486mg，8.61mmol)並且在室溫下攪拌2h。完成之後，反應藉由添加10mL之飽和NaHCO3水溶液與10% Na2SO3水溶液之1：1溶液淬滅。將所得懸浮液在室溫下攪拌15min。添加EtOAc且分離有機層。有機層用水(15mL)洗滌，隨後用飽和鹽水溶液(15mL)洗滌。將有機層分離，乾燥(MgSO4)且過濾，隨後濃縮至乾燥。將殘餘物在具有EtOAc/己烷之矽膠上純化以提供所需碸(985mg，94%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.29(br.s.,1H),8.00(d,J=3.13Hz,1H),7.77(d,J=7.43Hz,1H),7.54(d,J=7.83Hz,1H),7.14-7.30(m,2H),3.80-4.08(m,3H),2.72(br.s.,2H),1.99(s,1H),1.91(d,
J=10.96Hz,2H),1.24-1.35(m,9H)。MS m/z 365.2(MH+)。
步驟3：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之吲哚碸與氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合。
步驟4(實例465，表4)：將來自步驟3之N-Boc-保護的哌啶酮(170mg，0.201mmol)在TFA(1.0mL，13.1mmol)中攪拌30分鐘，隨後在真空下濃縮。將殘餘物與ACN共蒸發以提供實例465(170mg，93%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.84(s,1H),9.05(s,1H),8.54(s,1H),8.43-8.52(m,2H),8.34(d,J=8.61Hz,1H),8.16(s,1H),7.88-7.99(m,2H),7.65(dd,J=1.17,7.83Hz,1H),7.43-7.59(m,2H),7.36(t,J=8.02Hz,1H),6.96-7.13(m,1H),6.72-6.89(m,1H),3.47-3.60(m,1H),3.24(br.s.,2H),2.78(t,J=11.93Hz,2H),2.14(d,J=12.13Hz,2H),1.72(d,J=9.39Hz,2H)。MS m/z 744.3(MH+)。
實例467(表4)之製備：
步驟1：將鋁氫化鋰(26mg，0.686mmol)添加至4-(1H-吲哚-3-基磺醯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(實
例465，步驟2：50mg，0.137mmol)於25mL Et2O中之冷的(0℃)攪拌溶液中。在室溫下攪拌16h之後，將反應混合物用Et2O稀釋且在0℃下冷卻。將反應藉由緩慢添加0.150mL水，接著添加0.150mL之15%氫氧化鈉水溶液及0.370mL水來淬滅。將溶液升溫至室溫且攪拌15min。將無水硫酸鎂添加至攪拌溶液中。15min之後，過濾懸浮液以移除鹽。蒸發至乾燥得到呈固體之N-甲哌啶碸(68mg，87%)。MS m/z 279.2(MH+)。
步驟2：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之吲哚碸與氯吡啶A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合以在具有於0.1% HCOOH中之ACN的逆相HPLC之後提供實例467之產物。
實例468-470及474-479(表4)之製備：
將實例465(25mg，0.0291mmol)、3-氧環丁酮(0.0055mL，0.0873mmol)及DIEA(1當量，0.0051mL，0.0291mmol)懸浮於DCE(1mL)中且在60℃下攪拌30min。隨後添加三乙醯氧基硼氫化鈉(19mg，0.0873mmol)且將懸浮液在60℃下攪拌16h。一旦完成，即在真空下移除溶劑且將殘餘物在具有於0.1%
HCOOH水溶液中之ACN的逆相HPLC上純化以得到實例474(12mg，49%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.97(s,1H),8.92(s,1H),8.36-8.64(m,4H),8.28(d,J=8.61Hz,1H),7.83-8.03(m,3H),7.44-7.50(m,3H),7.42(s,1H),4.38-4.51(m,2H),4.31(t,J=6.06Hz,3H),2.72(br.s.,2H),2.31(s,1H),1.99(br.s.,2H),1.75(m,2H),1.63(m,2H)。MS m/z 800.3(MH+)。
使用適當醛或酮以類似方式製備其他實例且可見於表4(例如實例468-470及475-479)中。
實例472(表4)之製備：
步驟1：在室溫下，向3-碘吲哚(600mg，2.47mmol)於無水二噁烷(10mL)中之攪拌溶液中添加甲基膦醯基甲烷(212mg，2.72mmol)、(9,9-二甲基-9h-二苯并哌喃-4,5-二基)雙(二苯膦)(143mg，0.247mmol)及碳酸銫(1207mg，3.70mmol)。將反應混合物脫氣且用氬氣回填三次。將參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(113mg，0.123mmol)添加至反應混合物中且將反應小瓶密封。將反應混合物加熱至90℃且攪拌16h。將反應混合物冷卻至室溫且在減壓下濃縮。將粗物質藉由具有
EtOac/己烷之急速管柱層析SiO2純化以得到所需3-吲哚膦氧化物(220mg，46%，50%均勻性)。MS m/z 194.2(MH+)。
步驟2(實例472，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之吲哚與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例483(表4)之製備：
步驟1：將O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(0.173g，0.454mmol)添加至3-甲氧基丙酸(0.047g，0.454mmol)、可商購之1H-吲哚-3-胺(0.030g，0.227mmol)及N,N-二異丙基乙胺(2.4mL，1.36mmol)於DMF(1.1mL)中之混合物中。將所得混合物在rt下攪拌1.5h。添加水且用EtOAc萃取水性混合物。將有機層合併，藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質裝載於Celite®上且隨後藉由管柱層析(矽膠，30%-100% EtOAc/己烷)純化以得到呈褐色油狀物之N-(1H-吲哚-3-基)-3-甲氧基-丙醯胺(0.049g，99%產率)。MS m/z 219.2(MH+)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.74(br.s.,1 H),9.81(s,1 H),7.76(d,J=8.2Hz,1 H),7.71(d,J=2.3Hz,1 H),7.32(d,J=7.8Hz,
1 H),7.08(td,J=7.4,1.2Hz,1 H),6.99(td,J=7.5,1.0Hz,1 H),3.64(t,J=6.3Hz,2 H),3.25(s,3 H),2.62(t,J=6.3Hz,2 H)。
步驟2(實例483，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之吲哚與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例484(表4)之製備：
步驟1：根據一般方法H，使用可商購之3-溴丙醛二噁烷縮醛作為烷化劑來製備碸縮醛，接著如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化於片段A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合。
隨後在1M H2SO4水溶液(5當量)存在下，藉由在120℃下在微波照射下加熱10min，將於THF(4mL)中之縮醛(305mg，0.393mmol)水解成相應醛。隨後反應用1M Na2CO3淬滅且用EtOAc(10mL)萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且蒸發以得到呈黃色泡沫狀物之2,3-二氯-N-(2,4-二氟-3-((6-(3-((3-側氧基丙基)磺醯基)-1H-吲哚-1-基)吡
啶并并[3,2-d]嘧啶-4-基)胺基)苯基)苯磺醯胺(188mg，67%產率)：m/z=719.2(M+H)。
步驟2(實例484，表4)：向來自步驟1之醛(50mg，0.0697mmol)於DCE(1mL)中之溶液中添加二甲胺HCl(17mg，0.209mmol)及DIPEA(0.055mL,，0.313mmol)。將反應在rt下攪拌15min。隨後在rt下逐份添加三乙醯氧基硼氫化鈉(44mg，0.209mmol)。將反應在rt下攪拌且接著進行LCMS。當反應完成時，將反應蒸發至乾燥且將殘餘物溶解於1mL DMSO中。將產物藉由PREP-HPLC，使用20-80% MeCN/水+0.01%甲酸純化。收集純級分，蒸發且凍乾以得到呈白色固體之實例484之化合物(8mg，15%)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.94(s,1H),9.01(s,1H),8.52(s,1H),8.44-8.50(m,2H),8.32(d,J=8.6Hz,1H),7.89-7.98(m,2H),7.81(d,J=8.6Hz,1H),7.41-7.54(m,3H),7.14-7.25(m,1H),6.97-7.08(m,1H),3.40-3.46(m,3H),2.54-2.60(m,1H),2.27(s,6H),1.83-1.92(m,2H)；m/z=748.4。
實例486(表4)之製備：
按照對於實例357所描述的程序且使用A-13(Ar=2,3-二氯苯基)，獲得實例486之類似物。下文為各步驟提供了相關中間物之表徵：
步驟1：
(ES+)M+H=703.4，(ES-)M-H=701.4
步驟2：
在室溫下，將HCl(4M於二噁烷中，6.0mL，24.2mmol)之溶液添加至化合物2a(1.70g，2.42mmol)於二噁烷(5mL)中之溶液中。在室溫下攪拌反應3天。添加HCl(4M於二噁烷中，3.0mL，12.0mmol)之溶液且將混合物在室溫下再攪拌24h。將反應混合物過濾且將所過濾的固體用MTBE洗滌以得到黃色固體(1.58g，102%產率，在254nm下62%純度)。遊離鹼質譜：(ES+)M+H=603.3，(ES-)M-H=601.3。
步驟3(實例486，表4)：
將來自步驟2之鹽酸鹽(50.0mg，82.9μmol)及N,N-二異丙基乙胺(22μL，124μmol)溶解於CH2Cl2(1.88mL)及AcOH(470μL)中。在室溫下向此溶液中添加乙酸酐(8.7μL，91.1μmol)。將反應在
室溫下攪拌隔夜。將反應濃縮且藉由逆相管柱(乙腈/於H2O中之10mM AmF，0-25%-55%)純化。將含有所需產物之級分凍乾以得到呈米色粉末之實例486之化合物(12.4mg，23%產率)。
實例488(表4)之製備：
步驟1：在室溫下，將來自實例465之製備的步驟2的N-Boc-哌啶碸(100mg，0.274mmol)在TFA中攪拌30分鐘。完成之後，在真空下濃縮反應混合物。將殘餘物與ACN共蒸發以得到所需TFA鹽(100mg，96%)。MS m/z 265.2(MH+)。
步驟2：將來自步驟1之TFA鹽(30mg，0.0793mmol)、DIEA(10.0當量，0.14mL，0.793mmol)及三氟甲磺酸2,2-二氟乙酯(10.0當量，170mg，0.793mmol)在DMSO(0.8mL)中混合在一起且在80℃下攪拌4天。完成之後，將反應混合物在EtOAc中稀釋，隨後用NH4Cl水溶液洗滌，接著用鹽水洗滌。將有機層經MgSO4乾燥，過濾且在真空下濃縮以得到所需吲哚衍生物
(20mg，0.061mmol,，76%產率)，將其在DMSO中稀釋且按原樣使用。MS m/z 329.2(MH+)。
步驟3(實例488，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之吲哚與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例494(表4)之製備：
在實例495(表4)之類似物的製備型HPLC純化期間將此化合物分離為副產物。
實例495(表4)之製備：
以與其他吲哚碸衍生物(一般方法H)類似的方式製備實例495之化合物，不同之處在於在步驟1中使用2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯作為烷化劑用於原位生成色吲哚硫化物之烷化。在如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化與氯吡啶中間物A-13偶合之後，將實例494及495之兩種化合物在製備型HPLC純化步驟期間分離。
實例499(表4)之製備：
步驟1：在0℃下，將於己烷中之1.6M nBuLi(2.8mL，4.18mmol)逐滴添加至(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(477mg，1.39mmol)於THF(14mL)中之溶液中。10min之後，逐滴添加如實例457之製備的步驟3中所描述獲得的醛碸(350mg，1.39mmol)於THF(5mL)中之溶液，且在0℃下10min之後，將混合物傾至0℃下之飽和NH4Cl水溶液上。將有機相用鹽水洗滌且隨後乾燥(MgSO4)，以在濃縮後得到粗物質，將該粗物質在具有己烷/AcOEt之SiO2上純化以得到烯醇醚中間物(389mg，99%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.81(br.s.,1H),7.98-8.15(m,1H),7.64-7.89(m,1H),37-7.64(m,1H),7.27-7.34(m,2H),5.84。(d,J=7.04Hz,1H),4.36(d,J=7.04Hz,1H),3.22(s,3H),1.61(s,6H)。MS m/z 278.2(MH-)。
步驟2：將6N HCl(2.0mL，12.0mmol)之水溶液逐滴添加至來自步驟1之烯醇醚(389mg，1.39mmol)於THF(2mL)中之溶液中且在室溫下攪拌16h。將反應混合物用EtOAc稀釋，隨後用飽和NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，且隨後乾燥(MgSO4)以在濃縮後得到相應醛(95mg，0.358mmol，25.7%產率)，其立即用於步驟3中。MS m/z 264.2(MH-)。
步驟3：在冰浴下，向於DCM(20mL)中之來自步驟2之醛(68mg，0.271mmol)中緩慢地逐滴添加二乙胺基三氟化硫(0.18mL，1.35mmol)，並且將反
應緩慢升溫至室溫且攪拌5h。完成之後，將飽和碳酸氫鈉水溶液緩慢地逐滴添加至反應混合物中。將水層用EtOAc萃取。將分離的有機層用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮。將粗產物藉由管柱層析在具有EtOAc/己烷之SiO2上純化以得到所需吲哚碸(22mg，0.0766mmol，21.4%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：9.01(br.s.,1H),7.98(d,J=7.83Hz,1H),7.79(d,J=3.13Hz,1H),7.43-7.68(m,1H),7.32-7.39(m,2H),5.76-6.58(m,1H),2.38(dt,J=4.89,17.12Hz,2H),1.48(s,6H)。MS m/z 286.2(MH-)。
步驟4(實例499，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟3之吲哚與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例500及528(表4)之製備：
步驟1：向20mL小瓶中添加於3.5mL DCM中之吲哚(100mg，0.85mmol)。將反應冷卻至0℃。接下來，逐滴添加於甲苯中之25wt%(1.8M)之二乙基氯化銨(0.71mL，1.28mmol)。將反應在0℃下攪拌30min。逐滴添加於3mL DCM中之四氫呋喃-3-羰基氯化
物(172mg，1.28mmol)。將反應升溫至室溫且攪拌3h。完成之後，將反應用1M NaOH淬滅。將反應用水、鹽水及DCM(×3)萃取。收集有機物，經MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質裝載於矽藻土上且在具有EtOAc/己烷之SiO2上純化以得到呈白色固體之所需3-吲哚酮(12mg，0.055mmol，6.4%產率)。MS m/z 216.3(MH+)。
步驟2(實例500，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之吲哚與氯吡啶中間物A-13偶合。
使用步驟1中之噻吩-2-羰基氯化物，以類似方式獲得實例528(表4)。
實例502(表4)之製備：
步驟1：將如Phosphorus,Sulfur and Silicon and the Related Elements 2014,189,1378中所描述的，以類似方式製備的4-硝基-3-甲基碸吲哚(230mg，0.957mmol)溶解於MeOH(10mL)中。向溶液中添加10%氫氧化鈀/碳(75mg，0.0957mmol)且將懸浮液在1atm H2下攪拌1h。用矽藻土濾出鈀且在真空下移除溶劑以得到所需4-胺基吲哚衍生物(110mg，
55%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.93(br.s.,1H),7.81(d,J=3.13Hz,1H),6.88-7.08(m,1H),6.76(d,J=7.43Hz,1H),6.42(d,J=7.04Hz,1H),5.57(s,2H),3.25(s,3H)。MS m/z 211.2(MH+)。
步驟2(實例502，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之吲哚與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例506及573(表4)之製備：
實例506：在室溫下，將碳酸銫(1.50mmol)添加至3-硝基吲哚(1.50mmol)及A-13(Ar=2,3-二氯苯基)(1mmol)於DMSO(8.50mL)中之混合物中。在100℃下將其加熱4天，直至反應完成。將反應混合物冷卻至室溫。將粗反應混合物藉由逆相層析(乙腈/含0.1% AmF之水)純化以得到實例506之所需化合物。
實例573：使用1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪，以實例506所描述之相同的程序在80℃下加熱24h及100℃下加熱4天之後提供所需化合物。
實例511及532(表4)之製備：
步驟1：將燒瓶裝載於二噁烷(1.5mL)中之3-碘吲哚-1-甲酸三級丁酯(50mg，0.146mmol)、2-吡咯啶酮(37mg，0.437mmol)、碳酸銫(0.142g，0.437mmol)、CuI(14mg，0.073mmol)及N,N"-二甲基乙二胺(16μL，0.146mmol)。將所得混合物在80℃下加熱且攪拌10h。將反應混合物藉由Celite®過濾且粗物質藉由管柱層析(矽膠，0-100% EtOAc/己烷)純化以得到呈白色薄膜狀物之3-(2-側氧基吡咯啶-1-基)吲哚-1-甲酸三級丁酯(23mg，53%產率)。MS m/z 301.2(MH+)。
步驟2：將三氟乙酸(1mL)添加至3-(2-側氧基吡咯啶-1-基)吲哚-1-甲酸三級丁酯(23mg，0.077mmol)於DCM(1.0mL)中之溶液中。將粗物質溶解於MeOH及MeCN中，且隨後添加IRA-67樹脂。將溶液藉由棉塞過濾且收集。在減壓下移除溶劑以得到1-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2-酮(7.3mg，47%產率)。MS m/z 201.2(MH+)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.06(br.s.,1 H),7.58(d,J=7.8Hz,1 H),7.46(d,
J=2.7Hz,1 H),7.36(d,J=7.4Hz,1 H),7.09(t,J=7.6Hz,1 H),6.98(t,J=7.8Hz,1 H),3.89(t,J=7.0Hz,2 H),2.44(t,J=8.2Hz,2 H),2.13(quin,J=7.5Hz,2 H)。
步驟3(實例511，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之吲哚與氯吡啶中間物A-13偶合。
使用步驟1中之3-(2-側氧基-1-哌啶基)吲哚-1-甲酸三級丁酯，以與實例511相同的方式製備實例532(表4)之6員環類似物(23mg，21%產率)。MS m/z 315.2(MH+)。在用TFA處理(步驟2)之後，脫保護的吲哚得到1-(1H-吲哚-3-基)哌啶-2-酮；2,2,2-三氟乙酸(25mg，100%產率)。MS m/z 215.0(MH+)，其以常見方式(步驟3)轉化為實例532之類似物。
實例512及691(表4)之製備：
步驟1：將R-(+)-3-吡咯啶醇(0.049mL，0.612mmol)添加至4-氯-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(47
mg，0.306mmol)於異丙醇(2.0mL)中之溶液中。將所得混合物加熱至125℃且攪拌10h。一旦完成，即濃縮反應混合物且將粗物質藉由管柱層析(矽膠，0%-20% MeOH/DCM)純化以得到呈灰白色固體之(3R)-1-(1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基)吡咯啶-3-醇(50mg，80%產率)。MS m/z 205.2(MH+)。
步驟2(實例512，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之苯并咪唑與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例691(表4)：以類似方式製備實例691之化合物，其中在步驟1中用4-乙基-4-羥基哌啶替代R-(+)-3-吡咯啶醇。
實例513(表4)之製備：
步驟1：在一微波小瓶中，將4-氯-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(60mg，0.391mmol)溶解於EtOH(1.3mL)中且添加乙氧鈉溶液(21%於EtOH中，0.29mL，0.781mmol)。將所得混合物在125℃下在微波中攪拌2h。添加水且用EtOAc萃取水性混合物。將有機層合併，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。將粗物質藉由管柱層析(矽膠，0%-15% MeOH/DCM)純化以得到呈灰
白色固體之4-乙氧基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(49mg，0.30mmol，76%產率)。MS m/z 164.2(MH+)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.21(s,1H),7.81(d,J=5.75Hz,1H),7.17(d,J=5.50Hz,1H),4.48(q,J=7.05Hz,2H),1.32-1.48(m,3H)
步驟2(實例513，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之氮雜苯并咪唑與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例514(表4)之製備：
步驟1：將燒瓶裝載於二噁烷(2.0mL)中之3-碘吲哚-1-甲酸三級丁酯(0.10g，0.291mmol)、噻嗪烷1,1-二氧化物(0.118g，0.87mmol)、碳酸銫(0.285g，0.874mmol)、CuI(28mg，0.146mmol)及N,N"-二甲基乙二胺(31μL，0.291mmol)。將所得混合物在80℃下加熱且攪拌10h。將反應混合物藉由Celite®過濾且粗物質藉由管柱層析(矽膠，0-100% EtOAc/己烷)純化以得到呈無色油狀物之3-(1,1-二側氧基噻嗪烷-2-基)
吲哚-1-甲酸三級丁酯(30mg，29%產率)。MS m/z 351.1(MH+)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.09-8.18(m,1 H),7.63-7.71(m,2 H),7.32-7.38(m,1 H),7.25-7.31(m,1 H),3.76-3.81(m,2 H),3.24-3.32(m,2 H),2.34-2.44(m,2 H),1.94(m,J=5.7,5.7Hz,2 H),1.68(s,9 H)。
步驟2：將三氟乙酸(66μL，0.856mmol)添加至3-(1,1-二側氧基噻嗪烷-2-基)吲哚-1-甲酸三級丁酯(30mg，0.086mmol)於DCM(2.0mL)中之溶液中。將所得混合物在rt下攪拌2h。一旦完成，即在減壓下移除揮發成分且在真空下乾燥殘餘物以得到2-(1H-吲哚-3-基)噻嗪烷1,1-二氧化物；2,2,2-三氟乙酸(30mg，96%產率)。MS m/z 251.0(MH+)。
步驟3(實例514，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟2之吲哚與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例520(表4)之製備：
步驟1：向100mL圓底燒瓶中添加於DMF(15mL)中之2,6-二氟硝基苯(1.3mL，12.6mmol)及氰乙酸乙酯(1.6mL，15.1mmol)。接下來，在室溫下緩慢添加氫化鈉(754mg，18.9mmol)。使反應在室溫下攪拌15min。用1M HCl淬滅反應直至深紅色溶液變成黃色，且隨後在EtOAc中稀釋。分離有機層，隨後用NH4Cl水溶液洗滌，接著用鹽水洗滌。將有機層藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質溶解於DMSO(9mL)及水(1mL)中且轉移至20mL微波小瓶中。將反應加熱至120℃且攪拌16h。使反應混合物冷卻至室溫且在EtOAc中稀釋，隨後用。NH4Cl水溶液洗滌，接著用鹽水洗滌。將有機層藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮。將粗物質藉由使用己烷：EtOAc之正相急速管柱層析純化以得到呈橙色固體之所需苄基腈(2.12g，93%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.80(td,J=7.8,5.5Hz,1 H),7.65(t,J=9.6Hz,1 H),7.54(d,J=7.4Hz,1 H),4.28(s,2 H)。MS m/z 725.4(MH+)。MS m/z 181.2(MH+)。
步驟2：向20mL小瓶中添加於8mL DMF中之來自步驟1之2-(3-氟-2-硝基-苯基)乙腈(200mg，1.11mmol)及氫化鈉(111mg，2.78mmol)。隨後將碘甲烷(346μL，5.55mmol)緩慢添加至反應中。一旦添加，即將反應在室溫下攪拌1h。將反應用NH4Cl水溶液淬滅且隨後用EtOAc稀釋。分離有機層，隨後用鹽水洗滌，經
MgSO4乾燥，過濾且在真空下濃縮以提供2-(3-氟-2-硝基-苯基)-2-甲基-丙腈(214mg，1.03mmol，92%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.78(td,J=8.4,5.9Hz,1 H),7.68(t,J=8.8Hz,1 H),7.63(d,J=8.2Hz,1 H),1.82(s,6 H)。MS m/z 209.2(MH+)。
步驟3：向10mL微波小瓶中添加來自步驟2之氟硝基衍生物(63mg，0.301mmol)，接著添加1.5mL 28%-30%氫氧化銨。將反應在微波中在130℃下照射1小時。反應混合物用水稀釋，隨後用EtOAc(×3)萃取。將有機層用鹽水洗滌，藉由MgSO4乾燥，過濾且隨後在減壓下濃縮以得到呈橙色固體之所需硝基苯胺(62.6mg，100%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.27(t,J=8.0Hz,1 H),6.93(d,J=8.2Hz,1 H),6.80(d,J=7.8Hz,1 H),6.00(s,2 H),1.76(s,6 H)。MS m/z 206.2(MH+)。
步驟4：使用鐵及甲酸按照實例524之方法I之步驟2中所描述的程序，將中間物1,2-苯二胺還原且閉環成苯并咪唑環。
步驟5(實例520，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將步驟4之苯并咪唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例521(表4)之製備：
步驟1：將3-氯-2-硝基苯胺(2.00g，11.6mmol)裝入25mL燒瓶中且溶解於10mL無水DMF中，得到亮橙色溶液。隨後將甲硫醇鈉(1.06g，15.1mmol)以漿液形式添加至5mL DMF中且3mL DMF用於在室溫下沖洗，得到深紅色溶液。在室溫下將所得混合物攪拌2小時。將混合物傾入含有3mL乙酸之80mL水中且用EtOAc萃取3次。將合併的有機層用水洗滌兩次，隨後用鹽水洗滌一次，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由使用DCM作為溶離劑之矽膠急速層析純化。將適當級分合併，濃縮且在減壓下乾燥。得到3-甲基氫硫基-2-硝基-苯胺(2.06g，97%產率)。MS m/z 185.2(MH+)。1H NMR(DMSO-d6)δ：7.25(t,J=8.2Hz,1H),7.09(br.s,2H),6.75(dd,J=8.4,1.0Hz,1H),6.52(dd,J=7.8,0.8Hz,1H),2.38(s,3H)。
步驟2：將3-甲基氫硫基-2-硝基-苯胺(1.00g，5.43mmol)、鐵金屬(3.03g，54.3mmol)、氯化銨(2.90g，54mmol)及13mL異丙醇加入100mL燒瓶中，接著加入甲酸(12mL，326mmol)。燒瓶配備有回
流冷凝器，隨後浸入預熱至80℃之油浴中。將黃色混合物在該溫度下劇烈攪拌4小時，隨後冷卻至室溫。將反應混合物藉由Celite®短墊過濾，使用異丙醇沖洗。將濾液濃縮至乾燥，隨後將其作為於飽和NaHCO3溶液中之懸浮液，直至不再呈酸性。混合物隨後用EtOAc萃取3次。將合併的有機層用鹽水洗滌一次，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由使用50%至100% EtOAc/DCM梯度，接著1% IPA/EtOAc之矽膠急速層析純化。將適當級分合併，濃縮且在減壓下乾燥。得到呈淡橙紅色固體之4-甲基氫硫基-1H-苯并咪唑(0.83g，93%產率)。MS m/z 165.0(MH+)。1H NMR(DMSO-d6)δ：12.52(br.s.,1H),8.18(s,1H),7.31(br.s.,1H),7.17(t,J=7.8Hz,1H),6.99(br.s.,1H),2.54(s,3H)。
步驟3：將4-甲基氫硫基-1H-苯并咪唑(300mg，1.83mmol)懸浮於4mL MeCN中，向該MeCN中添加二乙胺(0.038mL，0.37mmol)。在室溫下，向該混合物中逐滴添加Oxone®(1.68g，2.74mmol)於7mL水中之溶液。注意到顏色變化。在相同溫度下攪拌所得懸浮液15分鐘。添加0.5mL飽和硫代硫酸鈉溶液。將混合物用水稀釋且藉由緩慢添加固體NaHCO3將pH調節至接近中性。隨後混合物用EtOAc萃取3次且合併的有機層用鹽水洗滌一次，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。將固體殘餘物藉由使用70%至100% EtOAc/DCM梯度，隨後應用100% EtOAc至5% IPA/EtOAc梯度之矽膠急速層
析純化。將適當級分合併，濃縮且在減壓下乾燥以得到4-甲基氫硫基-1H-甲基氫硫基(264mg，74%產率)。MS m/z 197.0(MH+)。1H NMR(DMSO-d6)δ：13.03(br.s.,1H),8.46(br.s.,1H),7.95(d,J=7.0Hz,1H),7.72(dd,J=7.4,0.8Hz,1H),7.43(t,J=7.8Hz,1H),3.44(br.s.,3H)。
步驟4(實例521，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將步驟3之苯并咪唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例522(表4)之製備：
步驟1：在一微波小瓶中，將氫化鈉(60%於礦物油中，49mg，1.23mmol)添加至2-甲氧基乙醇(1.1mL，13.3mmol)中。將所得混合物攪拌30min且添加4-氯-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(63mg，0.410mmol)。將所得混合物在微波中在180℃下加熱且攪拌2h。添加水，且將水性混合物用EtOAc萃取。將有機層合併，用鹽水洗滌，藉由Na2SO4乾燥，過濾且濃縮以得到4-(2-甲氧基乙氧基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(59mg，0.305mmol，74%產率)。MS m/z 194.0(MH+)。
步驟2(實例522，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之氮雜苯并咪唑與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例523、538及598(表4)之製備：
步驟1(R=OMe)：將碳酸鉀(0.35g，2.56mmol)及2-甲氧基乙醇(0.40mL，5.12mmol)添加至3-氟-2-硝基-苯胺(0.10g，0.641mmol)於DMF(3.2mL)中之溶液中。將所得混合物在80℃下攪拌10h。添加水，且將水性混合物用EtOAc萃取。將有機層合併，用鹽水洗滌，藉由Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗物質藉由管柱層析(矽膠，0-100% EtOAc/己烷)純化以得到3-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基-苯胺(52mg，38%產率)。MS m/z 213.1(MH+)。
步驟2：使用鐵及甲酸按照實例524之方法I之步驟2中所描述的程序，將中間物1,2-苯二胺還原且閉環成苯并咪唑環。
步驟3(實例538，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將步驟2之苯并咪唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
使用步驟1中之乙二醇(R=H)，以類似方式製備實例523之類似物。使用步驟1中之2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇，以類似方式製備實例598(R=CH2CH2OMe)之類似物。
實例525(表4)之製備：
步驟1：將乙氧鈉(21%於EtOH中，1.63mL，4.36mmol)之溶液添加至3-氟-2-硝基-苯胺(0.23g，1.45mmol)於EtOH(8mL)中之溶液中。將所得混合物在80℃下攪拌10h。濃縮反應混合物且添加水。用EtOAc萃取水性混合物。將有機層合併，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗物質藉由管柱層析(矽膠，0-100% EtOAc)純化以得到3-乙氧基-2-硝基-苯胺(0.25g，94%產率)。MS m/z 183.0(MH+)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.10(t,J=8.4Hz,1 H),6.42(dd,J=8.4,1.0Hz,1 H),6.28(dd,J=8.2,
1.2Hz,1 H),5.94(br.s,2 H),4.03(q,J=6.9Hz,2 H),1.25(t,J=7.0Hz,3 H)。
步驟2：將鐵(0.37g，6.70mmol)及氯化銨(0.36g,6.70mmol)添加至3-乙氧基-2-硝基-苯胺(0.24g，1.34mmol)於iPrOH(4.0mL)及甲酸(1.9mL，49.6mmol)中之混合物中。將所得混合物在90℃下加熱且攪拌10h。將反應混合物冷卻至rt，且藉由Celite®過濾。濃縮溶液且將粗物質藉由管柱層析(矽膠，0%-10% MeOH/DCM)純化以得到呈灰白色固體之4-乙氧基-1H-苯并咪唑(133mg，61%產率)。MS m/z 163.0(MH+)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.98-8.10(m,1 H),7.97-8.21(m,2 H),7.01-7.11(m,1 H),6.70(d,J=7.4Hz,1 H),4.23(q,J=7.0Hz,2 H),1.27-1.50(m,3 H)。
步驟3(實例525，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之苯并咪唑與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例531(表4)之製備：
將來自實例339/340之步驟4的異構物b(24.1mg，40.0μmol)溶解於DMF(300μL)中，且添加碳
酸鉀(12.4mg，88.0μmol)，接著添加2-溴乙醯胺(6.08mg，43.2μmol)且將所得混合物在室溫下劇烈攪拌18小時。將殘餘物藉由具有於10mM甲酸銨中之0-30%-60% ACN的逆相管柱純化。實例531之化合物(9.0mg，36%產率)以於10mM甲酸銨中之46% ACN產出且在凍乾後以白色固體形式獲得。
實例536及550(表4)之製備：
步驟1：在一微波小瓶中，將雜芳基溴(1.00mmol)懸浮於二噁烷(5mL)中。在室溫下添加雙(頻哪醇)二硼(1.10mmol)、乙酸鉀(1.50mmol)及丁基二-1-金剛烷基膦；CataCXium(0.150mmol)。將所得混合物用氮氣脫氣5min，隨後添加參(二亞苄基丙酮)-二鈀(0)(0.030mmol)。將其在微波(正常吸光度)中在150℃下加熱30min或在油浴中在90℃下加熱20h。使混合物冷卻至室溫，提供矽藻土過濾且用EtOAc(3×20mL)洗滌。在減壓下濃縮濾液且將粗硼酸不經進一步純化即用於下一反應中。
步驟2：在室溫下將碳酸鉀(3.0mmol)、來自步驟1之硼酸(4.0mmol)及A-13(Ar=2,3-二氯苯基)(1.00mmol)懸浮於THF(10mL)及H2O(2.5mL)
中。將所得混合物用氮氣脫氣5min，隨後添加Pd(PPh3)4(0.050mmol)。將混合物在油浴中在80℃下加熱20h且隨後冷卻至室溫，藉由矽藻土過濾，使用THF(3×25mL)沖洗。在減壓下濃縮濾液以在藉由逆相層析(乙腈/含有0.1% AmF之水)之後得到實例536及550(表4)之化合物。
實例537及551(表4)之製備：
步驟1(n=4)：將50%-60%水合肼溶液(114μL，3.60mmol)添加至6,7-二氫吡唑并[1,5-a]吡啶-4(5H)-酮(100mg，720μmol)於二乙二醇(1.00mL)中之攪拌溶液中。將所得溶液在100℃下攪拌1h以得到腙中間物(MW=150.18)。隨後將反應自熱源中移除且將氫氧化鉀(166mg，2.52mmol)小心地添加至混合物中。將所得混合物在100℃下攪拌2h，隨後在120℃下再攪拌3h。冷卻之後，將反應混合物用水稀釋，用鹽酸水溶液(1N)酸化至pH=5且用Et2O(3×30mL)萃取。將合併的有
機層用水(2×20mL)洗滌且隨後經MgSO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮以得到呈粗淺黃色油狀物之預期吡唑并吡啶(22.0mg，25%)，其不經純化即用於下一步驟中：(ES+)M+H=123.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.45(d,J=1.8Hz,1H),6.00-5.98(m,1H),4.18(t,J=6.1Hz,2H),2.81(t,J=6.4Hz,2H),2.09-1.98(m,2H),1.91-1.80(m,2H)，剩餘乙二醇。
步驟2(n=4)：在室溫下向來自步驟1之產物(800mg，6.55mmol)於DMF(8mL)中之攪拌溶液中按份添加N-溴琥珀醯亞胺(1.20g，6.61mmol)，並且攪拌所得溶液且藉由LCMS監測。在3h之後觀測到完全轉化。將反應混合物在減壓下濃縮且殘餘物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮以得到所需溴基衍生物(1.11g，84%產率)，其不經純化即用於下一步驟中：(ES+)M+H=203.1。
步驟3(n=3或4)：在-78℃下向可商購之溴化物(n=3)或來自步驟2之產物(n=4)(1.00mmol)於THF(4.00mL)中之攪拌溶液中添加正丁基鋰(2.5M於己烷中，2.00mmol)，且將混合物在-78℃下攪拌50min。隨後在-78℃下添加2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊烷(2.00mmol)且將所得懸浮液緩慢升溫至室溫且攪拌2h。在反應完成之後，將溶劑在減壓下移除。將混合物用EtOAc(10mL)稀釋，藉由矽藻土過濾，
用EtOAc(10mL)洗滌且將濾液蒸發以得到硼酸酯，其不經進一步純化即用於下一步驟中：
步驟3(n=3)：51%產率，(ES+)M+H=235.5。步驟3(n=4)：定量產率，(ES+)M+H=248.9
步驟4(n=3或4)：在室溫下，將來自步驟3之硼酸酯(1.00mmol)、碳酸鉀(3.00mmol)及A-13(Ar=2,3-二氯苯基)(1.20mmol)在二噁烷(10mL)及水(3.2mL)中混合。將所得溶液用氮氣脫氣10min，隨後添加Pd(PPh3)4(50.0μmol)。將反應在90℃下加熱且攪拌隔夜。完成之後，使混合物冷卻至室溫且在減壓下移除溶劑。隨後將粗化合物藉由逆相層析(10%-50% MeCN/H2O之梯度溶離，0.1%之10mM甲酸銨緩衝液，產物以約45% MeCN產出)純化。收集感興趣的級分且凍乾以得到所需化合物。
實例549及595(表4)之製備：
步驟1(R=Me)：向冷卻至0℃之4-溴-2-甲基-1H-咪唑(200mg，1.22mmol)於THF(3.93mL)
中之攪拌溶液中添加於礦物油中之60%氫化鈉分散液(51.1mg，1.28mmol)。添加之後，將混合物在氮氣氛圍下在0℃下攪拌30min。隨後，逐滴添加(2-氯甲氧基乙基)三甲基矽烷(251μL，1.28mmol)之溶液。將所得溶液升溫至室溫且在氮氣下攪拌隔夜。將反應藉由添加水(10mL)來淬滅。分離有機層，且用EtOAc(3×10mL)萃取水層。用鹽水(40mL)洗滌合併的有機物，經Na2SO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。隨後粗物質藉由正相層析(40g管柱，0-60% EtOAc/己烷，40mL/min)純化以得到呈異構物之混合物的受保護的溴咪唑(248mg，70%產率)：(ES+)M+H=293.1。
1H NMR異構物1(400MHz,DMSO-d6)δ 7.33(s,1H),5.23(s,2H),3.51-3.43(m,2H),2.29(s,3H),0.87-0.79(m,2H),-0.04(s,9H)。
1H NMR異構物2(400MHz,DMSO-d6)δ 6.87(s,1H),5.26(s,2H),3.56-3.46(m,2H),2.37(s,3H),0.89-0.81(m,2H),-0.03(s,9H)。
步驟2(R=Me)：在-78℃下向來自步驟1之溴化物之混合物(130mg，446μmol)於THF(1.79mL)中之攪拌溶液中添加正丁基鋰(2.50M於己烷中，393μL，982μmol)，且將混合物在-78℃下攪拌50min。隨後在-78℃下添加2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊烷(204μL，982μmol)且將所得黃色懸浮液緩慢升溫至室溫並且攪拌3h。隨後在減壓下移除溶
劑。將混合物用EtOAc(5mL)稀釋，藉由矽藻土過濾且蒸發濾液以得到呈黃色油狀物之粗硼酸酯(186mg)。其未經進一步純化直接用於下一個步驟中。
步驟3(R=Me)：在室溫下，將來自步驟2之硼酸酯(58.0mg，171μmol)、碳酸鉀(60.4mg，429μmol)及化合物A-13(Ar=2,3-二氯苯基)(73.8mg，143μmol)在二噁烷(1.42mL)及水(459μL)中混合。將所得溶液用氮氣脫氣10min，隨後添加Pd(PPh3)4(8.34mg，7.14μmol)。將反應在90℃下加熱且攪拌隔夜。完成之後，使混合物冷卻至室溫且在減壓下移除溶劑。將粗化合物在CH2Cl2/己烷混合物中稀釋且進行音波處理，產生黃色沉澱，過濾該黃色沉澱以得到黃色固體。將該黃色固體直接用於下一步驟中：(ES+)M+H=392.3
步驟4(R=Me)：向來自步驟3之粗化合物(90.0mg，130μmol)於THF(1.30mL)中之攪拌溶液中緩慢添加濃鹽酸溶液(39.5μL，1.30mmol)且將混合物在室溫下攪拌48h。在旋轉蒸發器上濃縮之後，添加CH2Cl2且用Na2CO3水溶液中和水層，直至不再釋放氣體。將所得溶液用CH2Cl2(4×10mL)萃取，隨後將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮以得到黃色油狀物。將粗物質藉由逆相層析(12g管柱，5%-25% MeCN/H2O之梯度溶離，0.1%之10mM甲酸銨緩衝液，12mL/min，產物以20% MeCN產出)進一步純化。收集
感興趣的級分且凍乾以得到實例595之化合物(0.43mg，0.59%產率)。
實例549(表4)：按照與上文對於實例595之化合物所描述的相同的反應順序，且使用步驟1中之適當的2-苯基-4-溴咪唑，得到呈淡黃色固體之實例549之化合物。
實例552(表4)之製備：
步驟1：將如實例520之步驟1中所描述獲得之苯乙腈衍生物(200mg，1.11mmol)及DMSO(4mL)裝入25mL燒瓶中。隨後在室溫下添加三氟甲磺酸二苯基(乙烯基)鋶(479mg，1.32mmol)，接著添加1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯(0.37ml，2.48mmol)。將混合物在該溫度下攪拌16小時。一旦完成，即添加NH4Cl水溶液且用EtOAc萃取水層。有機層用水洗滌且用鹽水洗滌一次。將有機層經MgSO4乾燥，過濾且在真空下濃縮。所得殘餘物藉由使用EtOAc/己烷之矽膠管柱急速層析純化以產生所需環丙烷衍生物(138mg,，60%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.47-7.59(m,1H),
7.29-7.41(m,2H),1.69-1.85(m,2H),1.29-1.39(m,2H)。MS m/z 207.2(MH+)。
步驟2：如實例520之步驟3中所描述進行來自步驟1之產物的胺化以得到呈橙色固體之所需硝基苯胺(62.6mg，100%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.27(t,J=8.0Hz,1 H),6.93(d,J=8.2Hz,1 H),6.80(d,J=7.8Hz,1 H),6.00(s,2 H),1.76(s,6 H)。MS m/z 206.2(MH+)。
步驟3：使用鐵及甲酸按照實例524之方法I之步驟2中所描述的程序，將中間物1,2-苯二胺還原且閉環成苯并咪唑環。
步驟4(實例552，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將步驟3之苯并咪唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例553(表4)之製備：
如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將4-甲咪唑於氯吡啶中間物A-13(Ar=2,3-二氯苯基)偶合，以得到區域異構物之混合物，藉由製備型HPLC自該混合物分離主要極性異構物及弱極性異構物(實例553)。
實例556(表4)之製備：
步驟1：將碳酸銫(8.35g，25.6mmol)裝入50mL燒瓶中且懸浮於6mL DMSO中。隨後在室溫下添加丙二酸二甲酯(2.7mL，30.7mmol)在攪拌濃稠漿液10分鐘之後，添加3-氟-2-硝基-苯胺(800mg，5.12mmol)，得到亮橙色至紅色混合物，將其在70℃下攪拌1小時。使混合物冷卻至室溫，隨後用EtOAc稀釋且用飽和氯化銨溶液洗滌。用EtOAc萃取水層3次，且將合併的有機層用鹽水洗滌，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由使用5%至50%乙酸乙酯/己烷梯度之矽膠急速層析純化。得到2-(3-胺基-2-硝苯基)丙二酸二甲酯(1.225g，89%產率)：MS m/z 269.1(MH+)。1H NMR(DMSO-d6)δ：7.29(dd,J=8.2,7.4Hz,1H),7.00(dd,J=8.6,1.2Hz,1H),6.85(s,2H),6.47(dd,J=7.4,1.2Hz,1H),5.09(s,1H),3.67(s,6H)。
步驟2：將2-(3-胺基-2-硝苯基)丙二酸二甲酯(1.37g，5.11mmol)及氯化鋰(260mg，6.13mmol)裝入40mL小瓶中且溶解於6mL DMSO及0.6mL水中。將鮮紅色混合物在150℃下加熱2.5小時，之後顏色變得稍深。使混合物冷卻至室溫，隨後用水及EtOAc稀釋。將雙
相混合物藉由Celite®短墊過濾以移除產生乳液之不溶物且分離各層。水層用EtOAc再萃取3次。隨後將合併的有機層用水洗滌兩次且用鹽水洗滌一次，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。將鮮紅色殘餘物藉由使用15%至50% EtOAc/己烷梯度之矽膠急速層析純化。將適當級分合併，濃縮且在減壓下乾燥。得到呈亮橙色固體之2-(3-胺基-2-硝基-苯基)乙酸甲酯(749mg，70%產率)：1H NMR(DMSO-d6)δ：7.24(dd,J=8.4,7.2Hz,1H),6.93(dd,J=8.4,1.4Hz,1H),6.79(s,2H),6.54(d,J=7.0Hz,1H),3.85(s,2H),3.59(s,3H)。
步驟3：將2-(3-胺基-2-硝基-苯基)乙酸甲酯(545mg，2.59mmol)裝入含磁力攪拌棒之100mL燒瓶中。隨後添加炭載5%鈀(109mg，0.051mmol)且將混合物懸浮於14mL甲醇中。添加原甲酸三乙酯(0.91mL，5.45mmol)，接著添加2滴乙酸。將反應燒瓶置放於減壓下，隨後引入氫氣。將該操作重複兩次以上，隨後在室溫下，在氫氣球氛圍下劇烈攪拌混合物24小時。將0.2mL Et3N添加至混合物中以中和AcOH，隨後將其藉由矽藻土短墊過濾，用甲醇沖洗。將濾液濃縮至乾燥，隨後將殘餘物藉由使用1：1 EtOAc/DCM至100% EtOAc與10% IPA/EtOAc之矽膠急速層析純化。將適當級分合併，濃縮，隨後在減壓下乾燥以得到2-(1H-苯并咪唑-4-基)乙酸甲酯(299mg，61%產率)。MS m/z 191.2(MH+)。1H NMR顯示互變異構物之0.6：0.4混合物：1H
NMR(DMSO-d6)δ：12.50(br.s.,0.4H),12.44(br.s.,0.6H),8.21(s,0.4H),8.17(s,0.6H),7.55(d,J=7.4Hz,0.4H),7.43(d,J=7.8Hz,0.6H),7.15(t,J=7.4Hz,0.6H),7.12(t,J=7.8Hz,0.4H),7.03-7.09(m,1H),4.00(s,1.2H),3.97(s,0.8H),3.62(s,1.2H),3.60(s,1.8H)。
步驟4：將2-(1H-苯并咪唑-4-基)乙酸甲酯(40mg，0.21mmol)於2mL無水THF中之溶液在冰/水浴中冷卻且攪拌5分鐘。隨後逐滴添加鋁氫化鋰(0.25mL，0.25mmol)之1M THF溶液。注意到一些氣體逸出且澄清的黃色溶液變成乳白色懸浮液。使混合物升溫至室溫且攪拌隔夜。將3-4滴飽和氯化銨溶液添加至混合物中。攪拌5分鐘之後，添加100mg十水硫酸鈉。再攪拌10分鐘之後，將混合物用2-3mL EtOAc稀釋且藉由Celite®塞過濾，移除不溶性物質。將濾液濃縮成殘餘物，將該殘餘物通過矽膠塞，使用30% IPA/EtOAc溶液作為溶離劑。將濾液濃縮至乾燥且將所得淺棕色油狀物在減壓下乾燥時結晶，以得到呈淺棕色固體之2-(1H-苯并咪唑-4-基)乙醇(34.5mg，100%產率)，其不經進一步純化即使用。MS m/z 163.0(MH+)。
步驟5(實例556，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將步驟4之苯并咪唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例534、594及684(表4)之製備：
步驟1：在室溫下將NaN3(190mg，2.90mmol)及氯吡啶A-13(1.00g，1.94mmol)在DMF(5.0mL)中混合。將其在油浴中在100℃下加熱18h。將反應冷卻至室溫且用H2O(100mL)稀釋。將所形成的固體過濾且用H2O洗滌。在空氣循環下乾燥固體，以得到呈褐色固體之標題化合物(970mg，96%產率)：(ES+)M+H=523.2，(ES-)M-H=521.2
步驟2(實例534，表4)：向於DMSO(5.0mL)中之來自步驟1的疊氮衍生物(1.0mmol)及苯乙炔(2.0mmol)中同時(逐滴)添加無水硫酸銅(II)(319mg，2.0mmol)於水(1.5mL)中之溶液及(+)-L-抗壞血酸鈉(2.0mmol)於水(1.5mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物隔夜直至反應完成。將混合物用MeOH(20mL)稀釋。混合物藉由矽藻土過濾且用MeOH洗滌。在減壓下
將濾液濃縮以移除揮發成分且殘餘物藉由製備型HPLC純化以得到呈白色固體之實例534之化合物(15%產率)。
步驟2(實例594，表4)：使用丙-2-炔-1-醇，按照與實例534相同的程序。獲得呈米色固體之實例594之化合物(17%產率)。
步驟2(實例684，表4)：按照與實例534相同的程序，但使用填充有丙-1-炔氣體之氣球，將該氣體鼓泡通過混合10min且隨後在丙-1-炔氣球在室溫下攪拌隔夜。藉由逆相層析(乙腈/含有0.1% AmF之水，40%-70%)純化得到呈白色固體之實例684之化合物(15%產率)。
實例610(表4)之製備：
步驟1：將如實例552之步驟1及2中所描述獲得的硝基苯胺起始物質轉化為如實例600之一般方法J下的步驟3中所描述之所需苯并三唑。
步驟2(實例610，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將來自步驟1之苯并三唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例612(表4)之製備：
步驟1：在室溫下將如實例556中所描述製備之2-(1H-苯并咪唑-4-基)乙酸甲酯(303mg，1.59mmol)(來自步驟3)溶解於10mL DMF中，隨後添加碳酸鉀(661mg，4.78mmol)，接著歷時10分鐘逐滴添加SEM-Cl(0.42mL，2.39mmol)。將混合物在相同溫度下攪拌16小時。將混合物傾人飽和氯化銨溶液中，隨後用EtOAc萃取3次。將合併的有機層用水洗滌，隨後用鹽水洗滌，接著經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。鎖的殘餘物藉由使用20%乙酸乙酯/己烷至100% EtOAc梯度之矽膠急速層析純化。將適當級分合併，濃縮且在減壓下乾燥。得到呈淡黃色油狀物之2-[1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-基]乙酸甲酯(260mg，51%產率)。
步驟2：將2-[1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-基]乙酸甲酯及2-(1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)乙酸甲酯(265mg,0.83
mmol)之混合物裝入25mL燒瓶中。在室溫下添加三氟甲磺酸二苯基(乙烯基)鋶(479mg，1.32mmol)於DMSO(4mL)中之溶液，接著添加1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯(0.37mL，2.48mmol)。將混合物在該溫度下攪拌17小時。隨後將反應混合物用含有少量NH4Cl及EtOAc之水稀釋。分離各層且水層用EtOAc再萃取兩次。將合併的有機層用水洗滌兩次且用鹽水洗滌一次。隨後將有機層經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。將所得殘餘物藉由使用20%至100% EtOAc/己烷梯度，接著5% IPA/EtOAc之矽膠急速層析純化。將適當級分合併，濃縮且在減壓下乾燥。得到呈淡黃色油狀物之異構物1-(1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)環丙烷-1-甲酸甲酯及1-(1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)環丙烷-1-甲酸甲酯作為不可分離的混合物(250mg，87%產率)。MS m/z 347.2(MH+)。
步驟3：將來自步驟2之甲酯(275mg，0.79mmol)於4mL無水THF中之溶液在冰/水浴中冷卻且攪拌5分鐘。隨後逐滴添加鋁氫化鋰(0.95mL，0.95mmol)之1M THF溶液。注意到一些氣體逸出。使混合物升溫至室溫，且攪拌23小時。將十水硫酸鈉(0.7g)添加至混合物中，將該混合物再攪拌一小時。隨後混合物用EtOAc稀釋且藉由Celite®墊過濾，用EtOAc沖洗。隨後將濾液濃縮至乾燥且殘餘物藉由使用100% EtOAc至30% IPA/EtOAc梯度之矽膠急速層析純化。
溶離的第一產物為[1-[1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-基]環丙基]甲醇(132mg，52%產率)。MS m/z 319.2(MH+)。1H NMR(DMSO-d6)δ：8.33(s,1H),7.48(d,J=8.2Hz,1H),7.18(t,J=7.8Hz,1H),7.10(d,J=7.4Hz,1H),5.61(s,2H),4.98(t,J=5.7Hz,1H),3.70(d,J=5.5Hz,2H),3.50(t,J=8.0Hz,2H),0.91(d,J=2.7Hz,4H),0.83(t,J=8.0Hz,2H),-0.08(s,9H)。
溶離的第二產物為[1-(1H-苯并咪唑-4-基)環丙基]甲醇(47mg，31%產率)。MS m/z 186.9(M-H-)。
步驟4(實例612，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將步驟3之苯并咪唑衍生物(第二產物)與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例613及631(表4)之製備：
步驟1：將2,5-二溴噻唑(200mg，0.823mmol)、嗎啉(0.22mL，2.46mmol)及三乙胺(0.35mL，2.47mmol)於無水THF(4mL)中之混合物在密封管中在微波輻射下在170℃下加熱1h。當反應完成時，將其蒸發至乾燥且殘餘物在使用0-50% EtOAc/己烷之二氧化矽管柱上純化。收集純級分且蒸發以得到呈白色固體之4-(5-溴噻唑-2-基)嗎啉(148mg，72%產率)：m/z=249.0(m+H)。
步驟2：將4-(5-溴噻唑-2-基)嗎啉(148mg，0.594mmol)於無水THF(3mL)中之溶液冷卻至-78℃且逐滴添加含nBuLi之己烷2.5M(0.28mL，0.712mmol)。將淺黃色溶液在-78℃下攪拌30min且逐滴添加iPrOBPin(0.18mL，0.891mmol)。使反應升溫至
rt且在該溫度下攪拌2h。將反應蒸發至乾燥且殘餘物按原樣用於下一反應。
步驟3：向具有攪拌棒之微波小瓶中添加於脫氧二噁烷：水(5：1，1mL)中之2,3-二氯-N-(3-((6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)胺基)-2,4-二氟苯基)苯磺醯胺A-13(61mg，0.118mmol)、來自步驟2之粗4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊-2-基)噻唑-2-基)嗎啉(35mg，0.118mmol)、Pd(dppf)Cl2(19mg，0.0236mmol)及K2CO3(82mg，0.590mmol)。將深紅色反應混合物再脫氧10min。將反應密封且浸漬於100℃之預熱油浴中。將反應在該溫度下攪拌16h。使反應冷卻至rt且藉由矽藻土墊過濾。將濾餅用EtOAc洗滌。在減壓下蒸發溶劑且將殘餘物溶解於1mL DMSO中且在使用20-70% MeCN/水+0.01%甲酸之製備型HPLC上純化。收集純級分，蒸發且凍乾以得到呈淺黃色固體之表4之實例631之類似物(24mg，28%產率)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.71(br.s.,1H),9.57(s,1H),8.36(br.s.,1H),8.30(d,J=8.9Hz,1H),8.23(s,1H),8.07-8.15(m,1H),7.90(d,J=8.0Hz,1H),7.93(d,J=8.1Hz,1H),7.52(dd,J=8.0Hz,1H),7.23-7.30(m,1H),7.14-7.22(m,1H),3.75(t,J=4.4Hz,4H),3.53(t,J=4.2Hz,4H)；m/z=652.2。
使用步驟1中之N-甲哌嗪替代嗎啉，以類似方式製備實例613(表4)
實例614(表4)之製備：
按照方法J中所描述之方案將來自實例538之製備中的步驟1之硝基苯胺中間物(R=OMeCH2CH2)轉化為苯并三唑片段A455。隨後如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將苯并三唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例619及623-625及627(表4)之製備：
步驟1：將如方法J中所描述製備之N-Boc保護的哌嗪(300mg，0.383mmol)溶解於TFA(5.0mL，65.3mmol)中且在RT下攪拌30min。在反應完成之後，將TFA與ACN共蒸發以得到實例619(298mg，97%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.35(br.s.,1H),8.76(d,J=9.13Hz,1H),8.56(s,1H),8.51(d,J=9.13Hz,1H),8.41(d,J=8.00Hz,1H),7.94(dd,J=1.50,7.75Hz,1H),7.68(d,J=7.88Hz,1H),7.57(t,J=8.07Hz,1H),7.38
(t,J=7.88Hz,1H),7.03-7.15(m,1H),6.90(d,J=7.88Hz,1H),6.85(t,J=9.26Hz,1H),3.87(m.,4H)。MS m/z 683.2(MH+)。
步驟2：向來自步驟1之上述三氟乙酸鹽(60mg，0.0658mmol)於DCE-ACN 1：1(2mL)中之懸浮液中添加三乙胺(0.046mL，0.329mmol)，接著添加丙酮(11mg，0.197mmol)及三乙醯氧基硼氫化鈉(21mg，0.0987mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16h。在真空下濃縮反應混合物且將殘餘物用DMSO稀釋且藉由HPLC(MeOH+0.1%甲酸/水+0.1%甲酸)純化以得到實例623(12mg，24%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.43(s,1H),8.77(d,J=9.13Hz,1H),8.47-8.57(m,2H),8.32(d,J=8.25Hz,1H),7.92(d,J=8.13Hz,1H),7.85(d,J=7.13Hz,1H),7.54(t,J=8.07Hz,1H),7.48(t,J=8.00Hz,1H),7.24(d,J=5.25Hz,1H),7.10(br.s.,1H),6.84(d,J=8.13Hz,1H),3.78(br.s.,4H),2.87(d,J=15.38Hz,5H),1.10(d,J=6.50Hz,6H)。MS m/z 725.4(MH+)。
使用還原胺化步驟2重視適當的醛，按照類似程序製備實例624、625及627。
實例628(表4)之製備：
步驟1：按照方法I製備起始4-硫嗎啉苯并咪唑片段。將oxone®(1.42g，2.32mmol)於水(10mL)中之溶液添加至4-(1H-苯并咪唑-4-基)硫嗎啉(0.127g，0.579mmol)於甲醇(20mL)中之溶液中。將所得混合物在rt下攪拌17h。在真空下濃縮混合物且將粗物質藉由管柱層析(矽膠，0-25% MeOH/DCM)純化以得到呈固體之1,1-二氧化4-(1H-苯并咪唑-4-基)-1,4-噻嗪烷(0.126g，87%產率)。MS m/z 252.2(MH+)。
步驟2：(實例628，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將步驟2之苯并咪唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例629(表4)之製備：
步驟1：將3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸三級丁酯(0.70g，3.30mmol)及碳酸鉀(1.14g，8.24mmol)裝入25mL燒瓶中且懸浮於10mL MeCN中。隨後在室溫下逐滴添加2-溴乙基苄醚(0.57mL，3.63mmol)。使所得混合物在室溫下攪拌22小時，隨後在40℃下攪拌4小時。將反應混合物用EtOAc稀釋。藉由過濾移除固體且將濾液濃縮至乾燥。將所得殘餘物藉由使用0%至40% EtOAc/己烷梯度之矽膠急速層析純化。濃縮適當級分，隨後在減壓下乾燥以得到呈無色油狀物之3-(2-苄基環氧乙烷基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸三級丁酯(678mg，59%產率)。MS m/z 347.4(MH+)。1H NMR(DMSO-d6)δ：7.24-7.39(m,5H),4.47(s,2H),3.99(br.s.,2H),3.51(t,J=5.7Hz,2H),2.64(d,J=10.2Hz,2H),2.50(t,J=5.7Hz,2H),2.19(d,J=10.6Hz,2H),1.60-1.82(m,4H),1.39(s,9H)。
步驟2：將3-(2-苄基環氧乙烷基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸三級丁酯(673mg，1.94mmol)裝入100mL燒瓶中且溶解於5mL二噁烷中。隨後逐滴添加含4N HCl之二噁烷溶液(1.94mL，7.76mmol)。在攪拌1小時之後，添加另一份HCl溶液(2.91mL，11.64mmol)且將混合物升溫至40℃。在該溫度下再攪拌2小時之後，在燒瓶度底部分離出膠狀物。將混合物冷卻至室溫，用甲醇稀釋且濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於甲醇中且再次
濃縮至乾燥，隨後在減壓下乾燥。得到呈白色膠狀固體之3-(2-苄基環氧乙烷基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷；二鹽酸鹽(620mg，100%產率)，其按原樣使用。MS m/z 247.3(MH+)。1H NMR(DMSO-d6)δ：11.36(br.s.,1H),10.10(br.s.,1H),9.64(br.s.,1H),7.33-7.40(m,4H),7.27-7.33(m,1H),4.51(s,2H),4.18(br.s.,2H),3.88(br.s.,2H),3.58-3.75(m,2H),3.21(br.s.,2H),2.34(br.s.,2H),2.02(br.s.,2H)(2H隱藏在水峰之下)。
步驟3：向於100mL燒瓶中之3-(2-苄基環氧乙烷基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷；二鹽酸鹽(615mg，1.93mmol)於15mL甲醇中之溶液中添加10%鈀/炭(205mg，0.193mmol)。將燒瓶置放於減壓下，隨後用氫氣填充。將此操作再重複3次，隨後將混合物在氫氣球氛圍下劇烈攪拌整個週末。將燒瓶用氮氣沖洗，且反應混合物藉由Celite®短墊過濾。將濾液濃縮且在減壓下乾燥。得到2-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)乙醇；二鹽酸鹽(406mg，92%產率)。MS m/z 157.2(MH+)。1H NMR(DMSO-d6)δ：11.14(br.s.,1H),10.07(br.s.,1H),9.68(br.s.,1H),5.08(br.s.,1H),4.16(br.s.,2H),3.81(br.s.,2H),3.03(br.s.,2H),2.33(br.s.,2H),2.03(br.s.,2H)(4H隱藏在水峰之下)。
步驟4：如對於實例524之一般方法I之步驟1中描述的來製備2-(8-(3-胺基-2-硝苯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)乙-1-醇：MS m/z 293.2(MH+)。1H NMR(DMSO-d6)δ：7.00(t,J=8.2Hz,1H),6.32(dd,J=8.1,0.8Hz,1H),6.18(dd,J=8.3,0.8Hz,1H),5.83(s,2H),4.30(t,J=5.4Hz,1H),3.67(br.s.,2H),3.45(q,J=6.1Hz,2H),2.61(dd,J=10.7,2.6Hz,2H),2.35(t,J=6.3Hz,2H),2.25(d,J=10.3Hz,2H),1.75-1.85(m,2H),1.65-1.75(m,2H)。
步驟5：將2-[8-(3-胺基-2-硝基-苯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基]乙醇(228mg，0.78mmol)懸浮於IPA(5mL)及甲酸(1.8mL，46.8mmol)中。向鮮紅色混合物中添加氯化銨(417mg，7.80mmol)及鐵金屬(436mg，7.80mmol)。燒瓶配備有回流冷凝器且浸入預熱至80℃之油浴中2小時。將油浴之溫度降至60℃且使反應進行隔夜。使混合物冷卻至室溫且隨後藉由矽藻土墊過濾，用IPA沖洗。將濾液濃縮至乾燥，且將殘餘物倒入5mL水中。添加1N NaOH，直至獲得鹼性pH值。隨後用EtOAc徹底萃取混合物。將合併的有機層用鹽水洗滌一次，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱之急速層析純化，以99% EtOAc/1% Et3N混合物開始至50% IPA/49% EtOAc/1% Et3N混合物作為梯度。將適當級分合併，濃縮，隨後在減壓下乾燥。
得到呈紅色泡沫狀物之2-[8-(1H-苯并咪唑-4-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基]乙醇(161mg，76%產率)。MS m/z 273.2(MH+)。1H NMR(DMSO-d6)δ：12.22(br.s.,1H),7.98(s,1H),6.98(t,J=7.9Hz,1H),6.82(d,J=7.9Hz,1H),6.45(d,J=7.8Hz,1H),5.00(br.s.,2H),4.25(br.s.,1H),3.44(dt,J=5.7,4.1Hz,2H),2.55(dd,J=10.6,2.3Hz,2H),2.39(d,J=10.3Hz,2H),2.25(t,J=6.3Hz,2H),1.87-1.96(m,2H),1.79-1.87(m,2H)。
步驟6(實例629，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將步驟5之苯并咪唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例634(表4)之製備：
根據方法I，使用單保護之N-Boc-哌嗪製備苯并咪唑片段。隨後如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將苯并咪唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。隨後使用TFA在標準條件下移除N-Boc保護基，且藉由製備型HPLC分離實例634之產物。
實例648及649(表5)之製備：
步驟1：如專利WO2020/261156中所述進行2,4,5-三氟苯胺之甲氧羰基化。
步驟2：在rt下向3-基-2,5,6-三氟苯甲酸甲酯(2.72g，13.26mmol)於DCE/吡啶(1：1，16mL)中之溶液中逐份添加2,3-二氯苯磺醯氯(3.91g，15.91mmol)。將反應加熱至70℃持續16h。藉由LCMS監測反應。當反應完成時，用1M HCl淬滅。水層用EtOAc(15mL)萃取三次。將合併的有機層用鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且蒸發至乾燥。殘餘物藉由使用0-30% EtOAc/己烷之矽膠管柱層析純化。收集純級分且蒸發以得到呈淺褐色固體之3-((2,3-二氯苯基)磺醯胺基)-2,5,6-三氟苯甲酸甲酯(5.14g，91%產率)：m/z=412.0。
步驟3：在rt下向來自步驟2之3-((2,3-二氯苯基)磺醯胺基)-2,5,6-三氟苯甲酸甲酯(5.14g，12.41mmol)於30mL THF：MeOH(5：1)中之溶液中添加2M KOH(37mL，74.5mmol)。將反應在rt下攪拌隔夜。當反應完成時，將其蒸發至乾燥且向殘餘物中添加水(30mL)及二乙醚(30mL)。將水層用乙醚(20mL)洗滌兩次。將水層用1M HCl酸化至pH=2。將水層用EtOAc(30mL)萃取三次。將合併的有機層用鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且蒸發以得到呈淺橙色油狀物之3-((2,3-二氯苯基)磺醯胺基)-2,5,6-三氟苯甲酸(4.50g，91%產率)。將化合物按原樣用於下一步驟中：m/z=398.0。
步驟4：在rt下向來自步驟3之3-((2,3-二氯苯基)磺醯胺基)-2,5,6-三氟苯甲酸(4.50g，11.24mmol)於乙腈(30mL)中之溶液中添加三乙胺(1.71mL，12.37mmol)及二苯基疊氮化磷醯(2.91mL，13.50mmol)。將反應物加熱至80℃隔夜。將反應冷卻至rt且添加水(30mL)。將水層用EtOAc(30mL)萃取三次。將合併的有機層用鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且蒸發呈深黃色殘餘物。粗物質藉由使用0-50% EtOAc/己烷之矽膠管柱層析純化。收集純級分且蒸發以得到呈褐色固體之2,3-二氯-N-(2,4,5-三氟-3-異氰酸基苯基)苯磺醯胺(2.29g，51%產率)：m/z=391.0。
步驟5：向來自步驟4之2,3-二氯-N-(2,4,5-三氟-3-異氰酸基苯基)苯磺醯胺(1.35g，3.39mmol)於
THF(17mL)中之溶液中添加4M LiOH水溶液(17mL)。擰緊壓力容器且在油浴中加熱至100℃持續1h。當反應完成時，用飽和NH4Cl淬滅。添加EtOAc且分離各層。將水層用EtOAc(20mL)再萃取兩次。將合併的有機層用鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且蒸發以得到呈褐色固體之N-(3-胺基-2,4,5-三氟苯基)-2,3-二氯苯磺醯胺(1.09g，86%產率)。化合物不經進一步純化即繼續至下一步驟：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.59(br.s.,1H),7.94(dd,J=8.2,1.6Hz,1H),7.89(dd,J=8.2,1.6Hz,1H),7.51(dd,J=8.0Hz,1H),6.34-6.43(m,1H),5.72(s,2H)。m/z=369.0。
步驟6：在rt下向來自步驟5之N-(3-胺基-2,4,5-三氟苯基)-2,3-二氯苯磺醯胺(300mg，0.808mmol)於冰AcOH(1mL)中之溶液中添加4,6-二氯吡啶并[3,2-d]嘧啶(162mg，0.808mmol)。將反應加熱至50℃且藉由LCMS監測。當反應完成時，將其蒸發至乾燥以得到呈淺黃色泡沫狀物之2,3-二氯-N-(3-((6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)胺基)-2,4,5-三氟苯基)苯磺醯胺(451mg，98%產率)。將化合物按原樣用於下一反應中。
m/z=536.0
步驟7(實例648及649，表5)：按照如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的一般程序，使用銅
/BINOL催化將來自步驟6之氯吡啶與苯并咪唑偶合的帶實例648(表5)之化合物。用苯并三唑替代苯并咪唑得到實例649(表5)之化合物。
實例655(表4)之製備：
步驟1(來自專利CN 105503725之程序)：將硼氫化鈉(0.10g，2.67mmol)添加至4-o側氧基-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸三級丁酯(0.34g，1.33mmol)於THF(6.7mL)中之溶液中。將所得混合物加熱至75℃且攪拌10h。TLC顯示起始物質之消耗。添加水，且將水性混合物用EtOAc萃取。將有機層合併，用鹽水洗滌，藉由Na2SO4乾燥，過濾且濃縮以得到4-羥基-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸三級丁酯(0.27g，79%產率)。粗物質不經任何純化即用於下一步驟中。
步驟2：將三氟乙酸(0.81mL，10.6mmol)添加至4-羥基-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸三級丁酯(0.27g，1.06mmol)於DCM(6.7mL)中之溶液中。將所得混合物在RT下攪拌10h。將反應混合物濃縮(與甲苯共沸)且在真空下乾燥以得到呈無色油狀物之片段A481(0.28g，99%產率)。MS m/z 156.2(MH+)。
按照一般方法I，將片段A481轉化為實例655(表4)之化合物。
實例662(表4)之製備：
步驟1：將實例420之步驟1中所製備之2-[(4-溴苯并咪唑-1-基)甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(101mg，0.31mmol)稱取於4mL小瓶中，隨後添加1-boc-4-哌啶酮(71mg，0.36mmol)，接著添加對甲苯磺醯肼(68mg，0.355mmol)、參(二亞苄丙酮)二鈀(0)-氯仿加成物(6.4mg，0.006mmol)、2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯(12mg，0.025mmol)及三級丁氧鋰(62mg，0.77mmol)。最後添加二噁烷(2mL)且將氬氣鼓泡通過混合物3-4分鐘。將小瓶蓋上蓋子且在110℃下加熱。在30分鐘內，最初的淺棕色溶液變成乳狀淺綠色懸浮液。使反應混合物在該溫度下攪拌24小時，隨後在室溫下將另一份1-boc-哌啶酮(35mg，0.18mmol)及對甲苯磺醯肼(34mg，0.18mmol)添加至混合物中且將反應在110℃下攪拌隔夜。將混合物冷卻至室溫，隨後分配於EtOAc與飽和氯化銨溶液之間。水層用EtOAc再萃取兩
次，且將合併的有機層用鹽水洗滌，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。將所得殘餘物藉由使用10%至50% EtOAc/己烷梯度之矽膠急速層析純化。將適當級分濃縮且在減壓下乾燥得到呈淡黃色薄膜狀物之4-[1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(89mg，0.21mmol，67%產率)。MS m/z 430.4(MH+)。
步驟2：4-[1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(89mg，0.21mmol)連同5%鈀/炭(22mg，0.01mmol)一起裝入25mL燒瓶中。燒瓶用氮氣沖洗，隨後添加甲醇(4mL)。將燒瓶置放於減壓下，用氫氣填充。將此操作再重複兩次，隨後將混合物在室溫下的氫氣球氛圍下再說會問下劇烈攪拌6小時且在40℃下劇烈攪拌16小時。添加另一份5%鈀/炭(22mg，0.01mmol)且使反應在氫氣下在40℃下再攪拌24小時。將燒瓶用氮氣沖洗，且混合物藉由Celite®短墊過濾，用甲醇沖洗。隨後將濾液濃縮至乾燥，接著在減壓下乾燥。得到4-[1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(90mg，100%產率)，其按原樣使用。MS m/z 432.4(MH+)。
步驟3：在室溫下，在一20mL小瓶中，將4-[1-(2-三甲矽基乙氧基甲基)苯并咪唑-4-基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(89mg，0.21mmol)溶解於2mL THF中，且向溶液中添加四正丁基氟化銨(1.0mL，1.03
mmol)之1M THF溶液。將小瓶蓋上蓋子且將混合物在65℃下加熱17小時。使混合物冷卻至室溫，隨後用EtOAc稀釋且用NaHCO3之經稀釋溶液洗滌一次。將水層萃取兩次，隨後將合併的有機層用鹽水洗滌一次且經MgSO4乾燥。將過濾且濃縮之後所獲得之殘餘物藉由使用100% EtOAc至14% IPA/EtOAc梯度之矽膠急速層析純化。將適當級分合併，濃縮且在減壓下乾燥。得到4-(1H-苯并咪唑-4-基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(29mg，0.0972mmol，47%產率)。MS m/z 302.2(MH+)。
步驟4：將4-(1H-苯并咪唑-4-基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(27mg，0.09mmol)連同2,3-二氯-N-[3-[(6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)胺基]-2,4-二氟-苯基]苯磺醯胺(40mg，0.08mmol)、銅(0.25mg，0.004mmol)、碳酸銫(63mg，0.194mmol)及(R)-(+)-1,1'-二-2-萘酚(1.1mg，0.004mmol)一起裝入4ml小瓶中。隨後添加DMSO(0.6mL)。將小瓶蓋上蓋子且將混合物在攪拌下在100℃下加熱2小時。隨後使反應混合物冷卻至室溫且緩慢轉移至含3mL水及0.15mL AcOH之燒瓶中(氣體逸出)。將所得懸浮液藉由音波處理均質化，隨後藉由在布氏漏斗中之濾紙上過濾來收集固體。隨後用少量水洗滌固體，且在減壓下乾燥。得到4-[1-[4-[3-[(2,3-二氯苯基)磺醯基胺基]-2,6-二氟-苯胺基]吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-基]苯并咪唑-4-基]哌啶
-1-甲酸三級丁酯(61mg，100%產率)。MS m/z 781.2(MH+)。
步驟5：將4-[1-[4-[3-[(2,3-二氯苯基)磺醯基胺基]-2,6-二氟-苯胺基]吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-基]苯并咪唑-4-基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(61mg，0.08mmol)溶解於1mL DCM中。隨後在室溫下緩慢添加TFA(0.50mL，6.53mmol)。攪拌所得混合物4小時。將混合物用2mL甲苯稀釋，隨後在減壓下濃縮成殘餘物。將殘餘物倒入2mL MeCN中且用幾滴濃NH4OH鹼化，得到褐色懸浮液。將該懸浮液再濃縮一次且將殘餘物倒入2mL DMSO中，向其中添加0.1mL甲酸。將所得溶液藉由注射過濾器過濾且藉由製備型HPLC(3次注射，30%至100% MeOH/水梯度，0.1%甲酸)純化。將適當級分合併且濃縮以移除MeOH。將產物自MeCN/水凍乾。得到2,3-二氯-N-[2,4-二氟-3-[[6-[4-(4-哌啶基)苯并咪唑-1-基]吡啶并并[3,2-d]嘧啶-4-基]胺基]苯基]苯磺醯胺(17mg，28%產率)。
實例671(表4)之製備：
步驟1：在-78℃下將乙酸乙酯(2.4mL，24.1mmol)於THF(30mL)中之溶液逐滴添加至LDA(13mL，26.1mmol)於THF中之2.0M溶液中。將混合物在該溫度下攪拌30min。在-78℃下逐滴添加1-苄基-4-哌啶酮(3.80g，20.1mmol)於THF(25mL)中之溶液，隨後將混合物升溫至-40℃且攪拌3h。將混合物在-30℃之冷凍器儲存14小時。隨後在-30℃下藉由飽和NH4Cl水溶液(30mL)淬滅，接著升溫至室溫且用EtOAc(3×200mL)萃取。將合併的有機萃取物乾燥(Na2SO4)，濃縮且殘餘物藉由使用MeOH及DCM(0-30%)之矽膠層析純化，以獲得呈黃色油狀物之2-(1-苄基-4-羥基-4-哌啶基)乙酸乙酯(3.99g，72%產率)。MS m/z 278.2(MH+)。
步驟2：將2-(1-苄基-4-羥基-4-哌啶基)乙酸乙酯(3.00g，10.8mmol)溶解於THF(45mL)中。在室溫下分四份添加鋁氫化鋰(411mg，10.8mmol)，其後將混合物攪拌1h。將反應用水(10mL)淬滅，隨後添加10% NaOH水溶液(15mL)且攪拌30min。隨後藉由Celite®墊過濾濃稠的懸浮液且將濾液用EtOAc(3×50mL)萃取。將合併的有機萃取物經Na2SO4乾燥，過濾，濃縮且在減壓下乾燥以得到呈黃色油狀物之1-苄基-4-(2-羥乙基)哌啶-4-醇(2.45g，96%產率)。MS m/z 236.2(MH+)。
步驟3：將20%氫氧化鈀/碳(0.0385當量，200mg，0.285mmol)稱取於50mL RBF中。用氮氣沖洗燒瓶。將1-苄基-4-(2-羥乙基)哌啶-4-醇(1.74g，7.39mmol)於甲醇(20mL)中之溶液插管至燒瓶。將反應混合物在室溫下在氫氣球氛圍下攪拌20小時。將混合物提高Celite®墊過濾，該墊用甲醇(3×20mL)沖洗。將合併的濾液在減壓下濃縮以得到呈褐色油狀物之4-(2-羥乙基)哌啶-4-醇(1.27g，95%產率)。MS m/z 146.0(MH+)。
步驟4：將4-(2-羥乙基)哌啶-4-醇(384mg，2.11mmol)添加至3-氟-2-硝基-苯胺(300mg，1.92mmol)及K2CO3(2.00當量，533mg，3.85mmol)於乙腈(5mL)中之懸浮液中。將所得混合物在80℃下攪拌20h。將反應混合物冷卻至rt，用EtOAc(15mL)稀釋且藉由Celite®墊過濾，用EtOAc沖洗。將濾液藉由使
用60%至100% EtOAc/己烷梯度之矽膠急速層析純化。將適當級分合併，濃縮且在減壓下乾燥。得到呈紅色膠狀物之1-(3-胺基-2-硝基-苯基)-4-(2-羥乙基)哌啶-4-醇(120mg，22%產率)。MS m/z 282.2(MH+)。
步驟5：將1-(3-胺基-2-硝基-苯基)-4-(2-羥乙基)哌啶-4-醇(120mg，0.427mmol)連同鐵粉(238mg，4.27mmol)及氯化銨(228mg，4.27mmol)一起裝入50mL燒瓶中。隨後添加IPA(5mL)及甲酸(0.97mL，25.6mmol)。燒瓶配備有回流冷凝器且浸入預熱至90℃之油浴中。攪拌2小時之後，將油浴之溫度降至65℃且使反應進行隔夜。使混合物冷卻至室溫且隨後藉由Celite®墊過濾，用IPA沖洗。將濾液濃縮至乾燥，且將殘餘物倒入5mL水中。添加1N NaOH，直至獲得鹼性pH值。隨後用溫熱的EtOAc徹底萃取混合物。將合併的有機層用鹽水洗滌一次，隨後經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。隨後在減壓下乾燥殘餘物。得到呈褐色膠狀物之1-(1H-苯并咪唑-4-基)-4-(2-羥乙基)哌啶-4-醇(91mg，81%產率)。MS m/z 262.2(MH+)。
步驟6(實例671，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將步驟5之苯并咪唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例679(表4)之製備：
步驟1：使用方法J，將來自實例538之步驟1的產物轉化為苯并三唑片段A503。
步驟2(實例679，表4)：如對於一般方法A中之實例1(步驟4)所描述的，使用銅/BINOL催化將步驟1之苯并三唑衍生物與氯吡啶中間物A-13偶合。
實例681(表4)之製備：
步驟1：將實例662之化合物(17mg，0.022mmol)懸浮於2mL DCE及0.5mL MeCN中。添加三乙胺(0.016mL，0.11mmol)，接著添加(三級丁基二甲基矽氧基)乙醛(8mg，0.04mmol)及三乙醯氧基硼氫化鈉(9.5mg，0.04mmol)。使反應混合物在室溫下攪拌整個週末。隨後將該反應混合物濃縮成殘餘物，其按原樣用於後續步驟。MS m/z 839.4(MH+)。
步驟7(實例681，表4)：將來自步驟1之產物(18mg，0.021mmol)懸浮於THF(2mL)中。在室溫下添加四-N-丁基氟化銨(0.11mL，0.107mmol)之1M THF溶液且將混合物攪拌2天。添加另一份TBAF溶液(0.021mL，0.021mmol)且將混合物攪拌整個週末。隨後用水及EtOAc稀釋黃色溶液。添加硫酸鈣之乳狀溶液(200mg於4mL水中)。分離各層且水層用EtOAc萃取兩次。合併的有機萃取物用水洗滌一次，隨後用鹽水洗滌一次，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物溶解於3mL DMSO中，藉由注射過濾器過濾且藉由使用15%至45% MeCN/水梯度(0.1%甲酸)之逆相層析純化。將適當級分合併且自MeCN/水凍乾以得到呈白色固體之實例681之化合物(6.8mg，0.0083mmol，38%產率)。
生物活性
(a)BRAF、CRAF及ARAF之激酶活性分析
化合物製備：將1打蘭小瓶中之各物質的固體樣品以20mM之儲備液濃度懸浮於DMSO(Fisher Scientific)中。將儲備液保持在-20℃且避光。若化合物在20mM下之溶解性出現問題，則將DMSO儲備液之初始濃度改為10mM或5mM。
活體外酶反應用於評價化合物對BRAF、CRAF及ARAF之內在活性。對於BRAF及CRAF，在10μM之具有或不具有測試化合物之超純ATP(目錄號V9102；
Promega；第V915A部分)存在下，將0.375nM經純化之GST標記激酶(分別來自Millipore Sigma的目錄號B4062-10UG及目錄號R1656-10UG)與75nM激酶死亡MEK1受質(目錄號40075；BPS Bioscience)一起在含有50mM HEPES pH 7.5、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.01% Brij-35及2mM DTT之緩衝液中孵育。以MEK1受質及ATP作為空白對照進行單獨的反應。除激酶濃度提高至3.75nM以外，ARAF激酶反應嚴格相同(目錄號1768-0000-1；Reaction Biology)。
對於化合物處理，將5μL/孔之測試物質溶液置放於384孔代理培養盤(Perkin Elmer)中且與2×濃縮激酶反應混合。選擇稀釋系列，使得九種濃度覆蓋100nM至0.01nM之範圍。若有必要(若化合物展現低內在效力)，則將100nM之初始濃度更改為1μM或0.5μM，且相應地進行進一步稀釋。分析中之DMSO之最終濃度設定為0.05%。
BRAF及CRAF激酶反應在30℃下進行總共2小時，且隨後藉由在ADP-Glo試劑(目錄號V9102；Promega；第V912C部分)中之1/2稀釋而停止。隨後將反應在室溫下孵育1h，接著添加一體積之激酶偵測試劑(目錄號V9102；Promega；第V917A部分)。隨後將培養盤在室溫下平衡30分鐘，接著在Synergy Neo2盤式讀取器(Biotek)上偵測發光。各化合物稀釋對BRAF及CRAF激酶活性之影響表示為%抑制且如下計算。首先，自
各數據點中減去內部100%抑制對照(僅包含激酶死亡MEK1受質的激酶反應中之發光平均值)。建立DMSO(媒劑)對照平均值(設定為0%抑制)且用於計算%抑制：
%抑制=100*(1-((發光信號compound)/(發光信號DMSO)))
ARAF激酶反應在30℃下進行總共2小時，且隨後藉由添加最終濃度為40mM之EDTA而停止。隨後使用AlphaLISA® SureFire® Ultra TM p-MEK 1/2(Ser218/222)(PerkinElmer)套組偵測反應。反應係根據製造商之說明在384孔代理培養盤(Perkin Elmer)中以5μL激酶反應進行，接著在室溫下，在加濕腔室中對AlphaLISA®反應進行隔夜孵育。在偵測反應完成之後，在配備有AlphaLISA®過濾器之Synergy Neo2盤式讀取器(Biotek)上記錄信號。各化合物稀釋對由ARAF反應產生之pMEK信號的影響以%抑制表示且如下計算。內部100%抑制對照(僅包含激酶死亡MEK1受質的激酶反應中之發光平均值)包括於各培養盤中以量測pMEK背景且自各數據點中減去。亦建立了DMSO(媒劑)對照平均值(設定為0%抑制)且用於計算%抑制：
%抑制=100*(1-((pMEK信號compound)/(pMEK信號DMSO)))
IC50值係藉由使用GraphPadPrism(V7.0)或Dotmatics Screening Ultra平台繪製激酶抑制值且使用對數(促效劑)與反應-可變斜率(四個參數)函數來擬合
劑量-活性曲線而獲得。包括於ARAF激酶分析中之標準為貝伐拉菲尼(Belvarafenib)(MedChem Express目錄號HY-109080；CAS號1446113-23-0)、LXH254(MedChem Express目錄號HY-112089；CAS號1800398-38-2)及BGB283(目錄號HY-18957；CAS號1446090-79-4)。
因此，本文所報告之所有物質均為BRAF、CRAF及ARAF ATP競爭性激酶抑制劑，如活體外酶活性之直接抑制所證實。化合物之BRAF及CRAF抑制效力列於表3-5中，而代表性類似物之ARAF激酶抑制效力列於表A中。如實施例中所定義之較佳實例展示BRAF IC50值<10nM且甚至更佳的實例具有BRAF IC50值<1nM。如實施例中所定義之較佳實例展示CRAF IC50值<50nM且甚至更佳的實例具有CRAF IC50值<10nM。
對於ARAF生化激酶分析，*指示IC50>10nM，**指示1-10nM IC50範圍且***指示IC50<1nM。
(b)一般細胞培養方法
所有癌細胞株(A375、A101D、A2058、RKO、HT29 SK-MEL 30、IPC298、HepG2、HCT-116、Lovo、SW620、SW480、NCI-H358、NCI-H2122、Calu-6、NCIH2087、NCIH1755、NCIH1666及Mewo)均自ATCC獲得且在5% CO2及37℃下，在補充有5%熱失活胎牛血清(FBS，Wisent)之RPMI-1640培養基(Gibco)中培養。將細胞保持於T175燒瓶(Greiner)中。該等細胞藉由移除培養基、在10mL之室溫磷酸鹽緩衝鹽水(Phosphate Buffered Saline；PBS；Wisent)中洗滌一次且在37℃下與2mL之0.05%胰蛋白(Thermo-Fisher)一起孵育來進行傳代。隨後藉由添加完全生長培養基來使胰蛋白失活且隨後以適當的稀釋度將細胞重新鋪種於T175培養皿中。所有細胞株均對黴漿菌污染
進行常規測試。組織類型及各細胞株之突變狀態可見於表B中。
(c)藉由AlphaLISA® SureFire® Ultra TM p-ERK 1/2(Thr202/Tyr204)量測經培養人類癌細胞株中之磷酸化ERK抑制
AlphaLISA® SureFire® UltraTM p-ERK 1/2(Thr202/Tyr204)分析係在以表C中所指示之密度鋪種於96孔平底透明培養皿(Costar)中之100μL的完全RPMI-1640生長培養基中的細胞上進行。將細胞在37℃
下，在5% CO2下保持隔夜，隨後用化合物之稀釋系列處理一小時。以細胞數/cm2為單位之細胞密度對應於細胞數除以96孔盤之一個孔的面積(0.143cm2)。
在稀釋系列中，將在完全RPMI-1640生長培養基中製備的100μL/孔之測試物質稀釋液添加至細胞中。選擇稀釋系列，使得十個濃度覆蓋或10μM至0.33nM之範圍。若必要，則將10μM之初始濃度增加至100μM或降低至1μM(如在A375及H1666細胞之情況下，該等細胞通常對化合物更敏感)且相應地進行進一步稀釋。分析中之DMSO之最終濃度設定為0.5%。
在處理之後，移除培養基且將細胞在50μL之1×AlphaScreen Ultra裂解緩衝液(Perkin Elmer)中裂
解。AlphaLISA® SureFire® Ultra TM p-ERK 1/2(Thr202/Tyr204)(PerkinElmer)反應係根據製造商之說明在384孔代理培養盤(Perkin Elmer)中使用5μL細胞裂解物進行，接著在室溫下，在加濕腔室中將反應孵育隔夜。反應完成後，使用內置AlphaLISA®設置在En Vision盤式讀取器(Perkin Elmer)上記錄信號。
各化合物稀釋度對pERK信號之影響以%抑制表示且如下計算。內部100%抑制對照(1μM曲美替尼，目錄號HY-10999；MedChem Express；CAS號871700-17-3)包括於各培養盤中且用作pERK背景之量度。首先，自各數據點減去曲美替尼所獲得的值。建立DMSO(媒劑)對照平均值(設定為0%抑制)且用於計算%抑制：
%抑制=100*(1-((pERK信號compound)/(pERK信號DMSO)))
各化合物抑制pERK信號之能力表示為IC50值，該值藉由使用GraphPadPrism(V7.0)或Dotmatics Screening Ultra平台繪製稀釋系列之各數據點的抑制值且使用對數(促效劑)與反應-可變斜率(四個參數)函數來擬合所獲得的曲線而獲得。
當存在時，反常pERK誘導係自化合物之pERK IC50曲線中觀測到的負%抑制值推斷出。為了將化合物分類為pERK反常誘導劑，將劑量-活性曲線之最小數據點(%YMIN)的%抑制設置為低於-20%，其視為在所預期分
析變化範圍內(例如，具有%YMIN=-30%或-50%或-150%之化合物視為產生路徑之反常誘導。顯示具有YMIN=-10%之IC50曲線的化合物視為不產生路徑之反常活化)。因此，當滿足以下準則時，則化合物在給定細胞株中抑制該路徑而無反常誘導：
1.最高測試劑量(30μM、10μM或1μM)下之%抑制超過50%。
2.IC50曲線之%YMIN大於-20%；其中YMIN對應於該化合物之IC50曲線中具有最低值之數據點。
熟悉此項技術者所熟知的，在此類實驗中預期抑制值之一些變化。±20%之YMIN值視為在實驗誤差內且為不顯著的。因此，僅具有超過分析變化(約>20%)之負值的化合物視為誘導傳訊級聯之反常活化且不包括於本揭示案之範疇內。第1圖提供了誘導反常路徑活化的化合物(PLX4720，可自Selleck Chemicals商購；CAS號918505-84-7)及如本文所描述之展現非預期及特別的無誘導概況之代表性化合物的IC50曲線的可視化。
第1圖示出了如本文所描述之在RAS突變HCT116細胞(實例99、113、128、139、140)中並不誘導pERK信號傳遞之反常誘導(YMIN>-20%)的化合物及在相同細胞株中導致強烈誘導(YMIN~-600%)該路徑之化合物(PLX4720)的代表性IC50抑制劑量反應曲線。
值得注意地，根據上文所描述之準則，本發明化合物並不誘導路徑之反常活化。對於無誘導化合物(實例
99)及誘導劑PLX4720，可使用如下文所描述且第2圖中所描繪的免疫墨點分析來說明此高度期望的特性的進一步說明。
對於免疫墨點分析，將500,000個HCT-116細胞鋪種於在24孔平底透明培養皿(Costar)中之1mL完整RPMI-1640生長培養基中。將細胞在37℃下，在5% CO2下保持隔夜，隨後用化合物之稀釋系列處理一小時。隨後將細胞在PBS中洗滌一次且在250μL補充有亮肽素(Leupeptin)、抑肽酶(Aprotinin)、PMSF、磷酸酶抑制劑混合物(Sigma)及Na3VO4之Igepal裂解緩衝液(50mM Tris-HCl pH 7.5、150mM NaCl、1% Igepal-CA630、1mM EDTA、10%甘油)中，在4℃下在輕輕搖動下裂解15分鐘。隨後藉由在4℃下以20,000g離心10分鐘來澄清細胞提取物。隨後將澄清的裂解物轉移至新試管中之冰上且隨後在上樣緩衝液(100mM Tris-HCl pH 6.8、4% SDS、0.2%溴酚藍、20%甘油、200mM β-巰基乙醇)中煮沸5分鐘，接著藉由SDS-PAGE分離且轉移至硝化纖維素膜(PALL)。將膜在含有2% BSA(Sigma)之Tris緩衝之鹽水0.2% Tween-20(TBST；10mM Tris-HCl pH 8.0、0.2% Tween-20、150mM NaCl)中阻斷1小時且隨後與在TBST中製備之以下初級抗體的稀釋液在4℃下一起孵育隔夜：抗pERK(1：2000稀釋度；Sigma-Aldrich；目錄號M9692)、抗總ERK(1：1000稀釋度；Cell
Signaling Technology；目錄號4695)、抗pMEK(1：1000稀釋度；Cell Signaling Technology；目錄號9121)及抗總MEK(1：1000稀釋度；Cell Signaling Technology；目錄號9122)。二級抗小鼠HRP及抗兔HRP(Jackson Immunoresearch Labs；目錄號分別為115-035-146及111-035-144)分別以1：5000及1：10000稀釋度製備於TBST中。免疫墨點係藉由在ECL試劑中孵育一分鐘之後，暴露於X光膠片來揭示。
第2圖示出了RAS突變HCT-116細胞之免疫墨點分析，該等細胞經並不誘導pERK或pMEK信號傳遞之反常誘導之代表性化合物(實例99；上圖)處理，且相比之下，經誘導同一細胞株中之路徑的化合物(PLX4720；下圖)處理。亦藉由免疫墨點探測總MEK及總ERK信號，以確保不同條件下均等負載蛋白質樣品。以微莫耳為單位之化合物濃度指示免疫墨點圖上方。用於處理之濃度範圍與實例99及PLX4720相同。
如表3-5中所示，實例化合物1至691在結腸G13D Ras突變之HCT-116細胞株中展示pERK抑制活性。另外，一些實例亦展示了在攜帶KRAS之G12D對偶基因的SW480結腸細胞株中顯示pERK信號傳遞之反常無誘導抑制(表3-5)。此外，亦測試了來自表3-5之一些實例對包含BRAFV600E驅動突變的A375細胞中pERK之抑制，且發現其亦具有活性(表D-1及D-2)。所有化合物實例1-691在HCT116細胞株中均顯示pERK IC50值<30
μM。較佳化合物之IC50值為1-10μM、更佳化合物之IC50值為0.5-1μM、而甚至更佳化合物之IC50值為<0.5μM。
亦在額外腫瘤細胞上測試了如本文所定義之代表性化合物之pERK抑制活性且在攜帶各種NRAS、KRAS及NF1對偶基因且代表大量組織類型(亦即SK-MEL 30、IPC298、HepG2、HCT-116、Lovo、SW620、SW480、NCI-H358、NCI-H2122、Calu-6及Mewo；參見表D-1及D-2且基因型參考表B)的癌細胞株展示良好至極好的pERK抑制活性。化合物之pERK抑制活性在攜帶BRAF對偶基因(A375、A101D、A2058、RKO、HT29、NCIH2087、NCIH1755及NCIH1666)之癌細胞株中更強(表D-1及D-2)。
表D(D-1及D-2).一組RAS突變癌細胞株(基因型參見表B)及BRAFV600E突變A375中所選化合物之無誘導pERK IC50值及抗增殖EC50值。
D-1.
對於pERK分析結果，+指示pERK IC50>0.3μM，++指示0.03-0.3μM pERK IC50範圍，+++指示pERK IC50<0.03μM。對於增殖分析結果，*指示增殖EC50>3μM，**指示0.3-3μM增殖EC50範圍，***指示增殖EC50<0.03μM。N/A：未獲得。Belv.：貝伐拉菲尼。
D-2.
對於pERK分析結果，+指示pERK IC50>0.3μM，++指示0.03-0.3μM pERK IC50範圍，+++指示pERK IC50<0.03μM。對於增殖分析結果，*指示增殖EC50>3μM，**指示0.3-3μM增殖EC50範圍，***指示增殖EC50<0.03μM。N/A：未獲得。Belv.：貝伐拉菲尼。
對於RAS突變癌細胞株，pERK IC50曲線之%Ymin值均高於-20%且視為顯示最小誘導或無誘導且因此化合物在此組癌細胞株中並不引起可偵測之路徑反常活化。相比之下，分子貝伐拉菲尼(自MedChem Express獲得，目錄號HY-109080；CAS號1446113-23-0)之比較結果在相同細胞株中展示輕度至強度的路徑誘導(在
所測試13個RAS突變細胞株中的10個中，YMIN<-30%)。
(d)使用CellTiter-Glo®試劑量測經培養人類癌細胞株(CCL)之增殖抑制
CellTiter-Glo®生存力分析係在以表E中所指示之密度(對於各CCL，用於進行CellTiter-Glo®細胞生存力分析的96孔盤之每孔鋪種之細胞數)鋪種於96孔平底白色不透明培養盤(Greiner或Croning)中之100μL的完全RPMI-1640生長培養基中的細胞上進行。以細胞數/cm2為單位之細胞密度對應於細胞數除以96孔盤之一個孔的面積(0.32cm2)。將細胞在37℃下，在5% CO2下保持隔夜，隨後用化合物之稀釋系列處理3天。
在稀釋系列中，將在完全RPMI-1640生長培養基中製備的100μL/孔之測試物質稀釋液添加至最初鋪種於100μL生長培養基中之細胞中。選擇稀釋系列，使得十個濃度覆蓋或10μM至0.33nM之範圍。若必要(如在A375細胞之情況下，該等細胞對化合物更敏感)，則將10μM之初始濃度降低至1μM且相應地進行進一步稀釋。分析中之DMSO之最終濃度設定為0.5%。
在孵育3天之後，藉由抽吸移除生長培養基且向各孔中添加60μL之經稀釋CellTiter-Glo®試劑(10μL CellTiter-Glo®試劑+50μL PBS)。藉由在盤式振盪器上孵育5min，接著在室溫下孵育10min，使細胞在CellTiter-Glo®試劑中裂解且平衡。隨後在Synergy Neo2盤式讀取器(Biotek)上獲取發光信號。
各化合物稀釋度對癌細胞株增殖之影響以%抑制表示且如下計算。內部100%抑制對照(1μM曲美替尼；目錄號HY-10999；MedChem Express；CAS號871700-17-3)包括於各培養盤中且用作CellTiter-Glo®信號背景之量度。自各數據點減去曲美替尼所獲得的值。建立DMSO(媒劑)對照平均值(設定為0%抑制)且用於計算%抑制：
%抑制=100*(1-((CellTiter-Glo®信號compound)/(CellTiter-Glo®信號DMSO)))
各化合物抑制增殖之能力表示為EC50值，該值藉由使用GraphPadPrism(V7.0)或Dotmatics
Screening Ultra平台繪製稀釋系列之各數據點的影響值且使用對數(促效劑)與反應-可變斜率(四個參數)函數來擬合所獲得的曲線而獲得。
如表D-1及D-2中所示，活性物質在代表多種組織類型(亦即SK-MEL 30、IPC298、HepG2、HCT-116、Lovo、SW620、SW480、NCI-H358、NCI-H2122、Calu-6及Mewo；表D-1及D-2且基因型參考表B)之各種NRAS突變、KRAS突變及NF1突變癌細胞株中展示抗增殖活性。抗增殖活性通常在攜帶BRAF驅動突變(A375、A101D、A2058、RKO、HT29、NCIH2087、NCIH1755及NCIH1666)之細胞株中甚至更強(表D-1及D-2)。值得注意的是，在KRAS突變及BRAF突變細胞株中，pERK降低之IC50值與物質之抗增殖活性的EC50值之間具有相當好的相關性(表D-1及D-2)。本發明化合物因此對若干種腫瘤類型有效且可用於此等腫瘤及其他適應症中。此證實本文所描述之化合物對治療不同類型腫瘤之有用性。
(e)異體移植腫瘤之建立
6-8週齡，重約18-22g之NU(NCr)-Foxnlnu雌性小鼠係自Charles River Laboratories購買。所有程序均符合加拿大動物照護協會(Canadian Council on Animal Care)及蒙特利爾大學(University of Montreal)之規則。動物喂飼標準嚙齒動物飲食且隨意提供水。將A375、HCT-116、A101D、A2058、RKO、
HT29 SK-MEL 30、Calu-6、HepG2、Lovo、NCI-H2122、NCIH1666及NCIH1755腫瘤細胞在5% CO2下，在37℃下在RPMI-1640 10% FBS中培養。一旦胰蛋白酶，即將細胞在PBS中洗滌一次，且在最終離心後再懸浮、計數且按體積進行調整以達至最終濃度為10×106個細胞/mL(A375及HCT116)或30×106個細胞/mL(A101D、A2058、RKO、HT29 SK-MEL 30、Calu-6、HepG2、Lovo、NCI-H2122、NCIH1666及NCIH1755)。隨後將細胞懸浮液與基質膠以50：50之比混合，使得細胞計數達至5×106個細胞/mL(A375及HCT116)或15×106個細胞/mL(A101D、A2058、RKO、HT29 SK-MEL 30、Calu-6、HepG2、Lovo、NCI-H2122、NCIH1666及NCIH1755)。
將於0.2mL之50：50 PBS：基質膠混合物中之1×106個(HCT-116或A375)或3×106個(A101D、A2058、RKO、HT29 SK-MEL 30、Calu-6、HepG2、Lovo、NCI-H2122、NCIH1666及NCIH1755)腫瘤細胞右側皮下接種NU(NCr)-Foxnlnu小鼠，以進行腫瘤發育。用電子測微計每週三次進行腫瘤量測。另外，在此等時間點記錄體重。使用以下公式計算腫瘤體積，長度為腫瘤之最長直徑且寬度為相應的垂直直徑：((長度×寬度×厚度)/2)。
(f)實例99對ERK級聯影響之藥效學評價
對於PK-PD實驗，在平均腫瘤大小達至大致200mm3時進行處理，其中各時間點至少2只小鼠隨機分配以平衡各組之平均腫瘤大小。在一個實驗中，將由1% NMP、0.3% Tween-80、pH 9.1組成的調配物中製備的實例99鈉鹽之懸浮液以指示濃度經口投與小鼠。將實例99：Na+粉末直接再懸浮於完全空白調配物中。給藥體積為10mL/kg，產生所指示劑量。在指定時間點提取腫瘤且藉由AlphaScreenTM進行生化分析(參見下文)。
如下獲得組織提取物。將腫瘤片段在與腫瘤大小成比例之適當體積中裂解。Igepal裂解緩衝液由(50mM Tris-HCl pH 7.5、150mM NaCl、1% Igepal-CA630、1mM EDTA、10% Glycerol)組成，且補充有亮肽素、抑肽酶、PMSF、2×磷酸酶抑制劑混合物(Sigma)及2×Na3VO4。用Ultra-Turrax均質機以15秒之單脈衝來機械地破壞腫瘤組織且隨後使其在冰上裂解15分鐘。
藉由在4℃下以20,000g離心10分鐘來澄清組織提取物。隨後將澄清的裂解物轉移至新試管中之冰上。隨後使用Bradford試劑對腫瘤提取物進行蛋白質定量且將樣品在完全Igepal裂解緩衝液中稀釋至1μg/μL。隨後將樣品在AlphascreenTM兼容的AlphaLisa SureFire Ultra裂解緩衝液(Perkin Elmer)中以1.25×進一步稀釋1/5，以獲得0.2μg/μL之濃度。出於標準化目的，分別使用AlphaLISA® SureFire® Ultra TM p-ERK 1/2
(Thr202/Tyr204)及AlphaLISA® SureFire® Ultra TM t-ERK 1/2套組(PerkinElmer)並行地分析腫瘤提取物之pERK及總ERK信號。AlphaLISA反應係根據製造商之說明在384孔代理培養盤(Perkin Elmer)中以5μL經稀釋的腫瘤裂解物進行，接著在室溫下，在加濕腔室中對反應進行隔夜孵育。反應完成後，使用內置AlphaLISA®設置在EnVision盤式讀取器(Perkin Elmer)上記錄信號。
各化合物對腫瘤pERK信號之影響以「pERK%抑制」表示且如下計算。內部空白對照包括於各培養盤中且用作pERK背景之量度；該空白對照由單獨的緩衝液與AlphaLISA珠粒組成。首先，自各pERK或tERK數據點減去空白對照所獲得的值。接下來，將各腫瘤的減去空白對照之pERK AlphaLISA計數除以減去空白對照之總ERK AlphaLISA計數，得到pERK/tERK比率。將經媒劑處理之腫瘤的平均值設定為0%抑制且用於計算%抑制：
%抑制=100*(1-((pERK/tERK比率compound)/(pERK/tERK比率vehicle)))
A375、A101D、A2058、RKO、HT29 SK-MEL 30、Calu-6、HepG2、Lovo、NCI-H2122、NCIH1666及NCIH1755異體移植腫瘤之PD實驗結果呈現於第3圖中。
(g)腫瘤生長抑制(Tumor growth inhibition；TGI)實驗
對於腫瘤生長抑制(TGI)實驗，在平均腫瘤大小達至大致200mm3時進行處理，其中各時間點至少7只小鼠隨機分配以平衡各處理組之平均腫瘤大小。將由1% NMP、0.3% Tween-80、pH 9.1組成的調配物中的實例99鈉鹽之懸浮液經口(QD或BID)投與小鼠。將實例99：Na+粉末直接再懸浮於完全空白調配物中。給藥體積為10mL/kg，產生所指示劑量(劑量以mg/kg或mpk為單位)。用電子測微計每週三次量測腫瘤。另外，在此等時間點記錄體重。如上所述計算腫瘤體積。A375及HCT-116異體移植腫瘤之TGI實驗結果呈現於第4圖中(分別為第A圖及第B圖)。值得注意的是，在整個投與時段記錄體重，表明與經媒劑處理之動物(未示出)相比，用實例99重複處理並不導致體重變化。
(h)結果
下表3至5中總結了例示性化合物結構、合成方法及生物學結果。此等表格中之每一者後面均有各自的總結化合物之化學特徵的表格。
對於pERK分析，+指示10-30μM IC50範圍，++指示1-10μM IC50範圍，+++指示0.5-1μM IC50範圍且++++指示IC50<0.5μM。% Ymin值指示各IC50曲線之最低值。展現Ymin值高於-20%之IC50曲線的化合物視為顯示最小誘導或無誘導且不引起可偵測之路徑的反常活
化。對於BRAF生化激酶分析，*指示IC50>10nM，**指示1-10nM IC50範圍且***指示IC50<1nM。對於CRAF生化激酶分析，§指示IC50>50nM，§§指示10-50nM IC50範圍且§§§指示IC50<10nM。
表3中之化合物之特徵
對於pERK分析，+指示10-30μM IC50範圍，++指示1-10μM IC50範圍，+++指示0.5-1μM IC50範圍且++++指示IC50<0.5μM。% Ymin值指示各IC50曲線之最低值。展現Ymin值高於-20%之IC50曲線的化合物視為顯示最小誘導或無誘導且不引起可偵測之路徑的反常活化。對於BRAF生化激酶分析，*指示IC50>10nM，**
指示1-10nM IC50範圍且***指示IC50<1nM。對於CRAF生化激酶分析，§指示IC50>50nM，§§指示10-50nM IC50範圍且§§§指示IC50<10nM。
表4中之化合物之特徵
對於pERK分析，+指示10-30μM IC50範圍，++指示1-10μM IC50範圍，+++指示0.5-1μM IC50範圍且++++指示IC50<0.5μM。% Ymin值指示各IC50曲線之最低值。展現Ymin值高於-20%之IC50曲線的化合物視為顯示最小誘導或無誘導且不引起可偵測之路徑的反常活化。對於BRAF生化激酶分析，*指示IC50>10nM，**指示1-10nM IC50範圍且***指示IC50<1nM。對於CRAF生化激酶分析，§指示IC50>50nM，§§指示10-50nM IC50範圍且§§§指示IC50<10nM。
表5中之化合物之特徵
在不脫離本發明之範疇的情況下，可對上文所描述之實施例中之任一者進行多種修改。本文檔中所提及之任何參考文獻、專利或科學文獻文檔均出於所有目的以全文引用之方式併入本文中。
Claims (101)
- 一種式I之化合物：
其中：R1選自經取代或未經取代之OR3、SR3、NH2、NHR3、N(R3)2、C3-8環烷基、C4-8雜環烷基、C6-10芳基及C5-10雜芳基，例如選自經取代或未經取代之C6-10芳基及C5-10雜芳基；R2選自經取代之C6芳基或C5-10雜芳基、經取代或未經取代之C4-8雜環烷基及N(R3)2；R3在每次出現時獨立地選自經取代或未經取代之C1-8烷基、C3-8環烷基、C4-8雜環烷基、C6-10芳基及C5-10雜芳基；X1為鹵基或一拉電子基團；X2選自H、鹵基及一拉電子基團；X3及X4各自選自H、鹵基、一拉電子基團、C1-3烷基、C3-4環烷基及OC1-3烷基；或其一醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 - 如請求項1所述之化合物，其中R2為一經 取代之C6芳基或C5-10雜芳基。
- 如請求項2所述之化合物，其中R2為經至少一個選自以下之基團取代的一C6芳基：F、Cl、Br、CN、NO2及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基。
- 如請求項2所述之化合物，其中R2為具有下式之一基團：
其中：R4選自H、F、Cl、Br、CN及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基；R5選自H、F、Cl、CN及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基；R6選自H、F、Cl、Br、NO2、NH2及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基；R7選自H、F、Cl及一經取代或未經取代之C1-3烷基；R8選自H、F及一經取代或未經取代之C1-3烷基；或R4及R5或R5及R6與其相鄰的碳原子一起形成一經取代或未經取代之碳環或雜環，前提條件係該雜環不為一苯并噁唑啉酮；並且(---)表示一鍵；其中當R4為H或F時，則R5、R6、R7或R8中之至少一者不為H或F；以及其中當R5為CN，則R4、R6、R7或R8中之至少一者不為H。 - 如請求項4所述之化合物，其中R4選自H、F、Cl、Br、Me、Et、CN、CHF2及CF3。
- 如請求項4或5所述之化合物，其中R5選自H、F、Me、CF3、CN及Cl。
- 如請求項4至6中任一項所述之化合物，其中R6選自H、F、Cl、Br及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基。
- 如請求項4至7中任一項所述之化合物，其中R6選自H、F、Cl、Me、Et及OMe。
- 如請求項4至8中任一項所述之化合物，其中R7選自H、Me、F及Cl。
- 如請求項4至9中任一項所述之化合物，其中R8選自H、Me及F。
- 如請求項4所述之化合物，其中：R4選自Cl及一經取代或未經取代之C1-3烷基；R5選自H、F、Cl及一經取代或未經取代之C1-3烷基；R6選自H、F、Cl、一經取代或未經取代之C1-3烷基及一經取代或未經取代之OC1-3烷基；並且R7及R8各自為H。
- 如請求項11所述之化合物，其中R4選自Cl及CH3。
- 如請求項11或12所述之化合物，其中R5選自F、Cl及CH3。
- 如請求項11至13中任一項所述之化合物，其中R6為H或F。
- 如請求項11至13中任一項所述之化合物，其中R6為Cl或一經取代或未經取代之C1-3烷基或經取代或未經取代之OC1-3烷基。
- 如請求項15所述之化合物，其中R6為CH3或OCH3。
- 如請求項2所述之化合物，其中R2為具有下式之一基團：
其中：X5選自NH、NC1-3烷基、NC3-4環烷基、O及S；R9、R10、R11各自獨立地選自H、F、Cl、CN及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基、 C(O)OC1-3烷基或OC1-3烷基，前提條件係R9及R11中之一者為H且另一者不為H；並且(---)表示一鍵。 - 如請求項2所述之化合物，其中R2為具有 下式之一基團：
其中：X5選自NH、NC1-3烷基、NC3-4環烷基、O及S；R9選自F、Cl、CN及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基、C(O)OC1-3烷基或OC1-3烷基；R10及R12各自獨立地選自H、F、Cl、CN及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基、C(O)OC1-3烷基或OC1-3烷基；並且(---)表示一鍵。 - 如請求項17或18所述之化合物，其中R9及R10各自獨立地選自F、Cl、CN及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基、C(O)OC1-3烷基或OC1-3烷基。
- 如請求項19所述之化合物，其中R9及R10各自獨立地選自Cl及一經取代或未經取代之C1-3烷基。
- 如請求項19所述之化合物，其中R9及R10均為Cl。
- 如請求項17至21中任一項所述之化合物，其中X5為O或S，較佳為S。
- 如請求項2所述之化合物，其中R2為具有下式之一基團：
其中：X9、X10、X11、X12及X13獨立地選自N及C，其中X9、X10、X11、X12及X13中之至少一者且至多兩者為N；以及R19、R20、R21、R22及R23選自H、F、Cl、Br、CN、NO2、NH2及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或OC1-3烷基，或當其所附接之X9、X10、X11、X12或X13為N時不存在；其中X9及X13中之至少一者不為N；並且其中當X9及X13中之一者為N時，則另一者不為N或CH。 - 如請求項1所述之化合物，其中R2為具有下式之一基團：
其中：R13在每次出現時獨立地選自F、Cl及一經取代或未經取代之C1-3烷基、C3-4環烷基或C1-3烷氧基；n為選自0至8之一整數；或n介於2與8之間，且兩個R13與其相鄰的碳原子一起形成一C3-4環烷基；並且(---)表示一鍵。 - 如請求項24所述之化合物，其中R13為甲氧基且n為1。
- 如請求項1所述之化合物，其中R2為N(R3)2。
- 如請求項26所述之化合物，其中R3選自經取代或未經取代之C1-8烷基或C3-8環烷基。
- 如請求項1所述之化合物，其中R2為選自以下之一基團：
其中(---)表示一鍵。 - 如請求項28所述之化合物，其中R2為選自以下之一基團：
其中(---)表示一鍵。 - 如請求項29所述之化合物，其中R2為選自以下之一基團：
其中(---)表示一鍵。 - 如請求項1至30中任一項所述之化合物，其中R1為一經取代或未經取代之C5-6雜芳基。
- 如請求項1至30中任一項所述之化合物，其中R1為一經取代或未經取代之C9雜芳基。
- 如請求項1至30中任一項所述之化合物，其中R1為選自以下之一經取代或未經取代的基團：噻吩基、咪唑基、吡唑基、三唑基、噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吡咯并吡啶基(例如吡咯并[3,2-b]吡啶基或吡咯并 [3,2-c]吡啶基)、吡唑并吡啶基(例如吡唑并[1,5-a]吡啶基)、嘌呤基、咪唑并吡嗪基(例如咪唑并[4,5-b]吡嗪基)及喹啉基(quinolyl/quinolinyl)。
- 如請求項1至30中任一項所述之化合物，其中R1為選自以下之一經取代或未經取代的基團：
其中(---)表示一鍵。 - 如請求項34所述之化合物，其中R1為選自以下之一經取代或未經取代的基團：
其中(---)表示一鍵。 - 如請求項1至35中任一項所述之化合物，其中R1經至少一個選自以下之取代基取代：OH、鹵基、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、OC1-6烷基、C5-10雜芳基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C(O)R15、C(O)N(R14)2、SO2R15、SO2N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、N(R16)C(O)N(R14)2、N(R16)SO2N(R14)2、N(R14)2、P(O)(R15)2、CH2C(O)R15、CH2C(O)N(R14)2、CH2SO2R15、CH2SO2N(R14)2、CH2N(R16)C(O)R15、CH2N (R16)SO2R15、CH2N(R16)C(O)N(R14)2、CH2N(R16)SO2N(R14)2及CH2N(R14)2；其中：R14在每次出現時獨立地選自H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C6芳基及C5-10雜芳基，或兩個R14與其相鄰的氮原子一起形成一C4-10雜環烷基；R15在每次出現時獨立地選自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10環烷基、C6芳基及C5-10雜芳基；並且R16在每次出現時獨立地選自H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10環烷基、C6芳基及C5-10雜芳基；其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基視情況經進一步取代。
- 如請求項1至30中任一項所述之化合物，其中R1為具有下式之一基團：
其中：R17選自H、OH、鹵基、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、OC1-6烷基、C5-10雜芳基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C(O)R15、 C(O)N(R14)2、SO2R15、SO2N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、N(R16)C(O)N(R14)2、N(R16)SO2N(R14)2、N(R14)2、P(O)(R15)2、CH2C(O)R15、CH2C(O)N(R14)2、CH2SO2R15、CH2SO2N(R14)2、CH2N(R16)C(O)R15、CH2N(R16)SO2R15、CH2N(R16)C(O)N(R14)2、CH2N(R16)SO2N(R14)2及CH2N(R14)2；X6為N或CH；並且X7為N且R18不存在；或X7為C且R18選自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、OC1-6烷基、C5-10雜芳基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C(O)R15、C(O)N(R14)2、SO2R15、SO2N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、N(R16)C(O)N(R14)2、N(R16)SO2N(R14)2、N(R14)2、P(O)(R15)2、CH2C(O)R15、CH2C(O)N(R14)2、CH2SO2R15、CH2SO2N(R14)2、CH2N(R16)C(O)R15、CH2N(R16)SO2R15、CH2N(R16)C(O)N(R14)2、CH2N(R16)SO2N(R14)2及CH2N(R14)2；其中R14、R15及R16如請求項32中所定義；其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基或雜芳基視情況經進一步取代；以及其中(---)表示一鍵。 - 如請求項37所述之化合物，其中X6為N。
- 如請求項37所述之化合物，其中X6為CH。
- 如請求項37至39中任一項所述之化合物，其中X7為N，R17選自H、OH、CN、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、OC1-6烷基、C5-10雜芳基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C(O)R15、C(O)N(R14)2、SO2R15、SO2N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、N(R16)C(O)N(R14)2、N(R16)SO2N(R14)2、N(R14)2、P(O)(R15)2、CH2C(O)R15、CH2C(O)N(R14)2、CH2SO2R15、CH2SO2N(R14)2、CH2N(R16)C(O)R15、CH2N(R16)SO2R15、CH2N(R16)C(O)N(R14)2、CH2N(R16)SO2N(R14)2及CH2N(R14)2，且R18不存在，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基或雜芳基視情況經進一步取代。
- 如請求項40所述之化合物，其中R17選自C1-6烷基、C5-10雜芳基、C4-10雜環烷基、N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、C(O)N(R14)2及SO2N(R14)2，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基或雜芳基視情況經進一步取代。
- 如請求項40所述之化合物，其中R17選自R17為H、NH2及一視情況經取代之C5-10雜芳基或C4-10雜環烷基，較佳為一視情況經取代之C5-10雜芳 基或C4-10雜環烷基。
- 如請求項37至39中任一項所述之化合物，其中R17為一視情況經取代之C4-10雜環烷基，其中該雜環烷基為一單環或雙環且包括1至3個雜原子，較佳地，其中X7為N。
- 如請求項43所述之化合物，其中該雜環烷基經至少一個選自F、OH、側氧基、CN、C1-4烷基及OC1-4烷基之取代基取代，其中該C1-4烷基視情況經進一步取代(例如經F、OH、OC1-3烷基等取代)。
- 如請求項42或44中任一項所述之化合物，其中該雜環烷基選自哌啶基團、哌嗪基團、硫代嗎啉基團及嗎啉基團，或為含有哌啶、哌嗪、硫代嗎啉或嗎啉環之一雙環結構(橋聯或螺環接)。
- 如請求項37至39中任一項所述之化合物，其中X7為C。
- 如請求項46所述之化合物，其中X7為C且R18選自C1-6烷基、C5-10雜芳基、C3-10環烷基、C4-10雜環烷基、C(O)R15、C(O)N(R14)2、SO2R15、SO2N(R14)2、N(R16)C(O)R15、N(R16)SO2R15、N(R16)C(O)N(R14)2、N(R16)SO2N(R14)2、N(R14)2、P(O)(R15)2、CH2C(O)R15、CH2C(O)N(R14)2、CH2SO2R15、CH2SO2N(R14)2、CH2N(R16)C(O)R15、CH2N(R16)SO2R15、CH2N(R16)C(O)N(R14)2、CH2N(R16)SO2N(R14)2及CH2N(R14)2，其中 該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基視情況經進一步取代。
- 如請求項47所述之化合物，其中R18選自C(O)N(R14)2、SO2R15及SO2N(R14)2。
- 如請求項46至48中任一項所述之化合物，其中R17選自H、OH、C1-6烷基、N(R14)2及一視情況經取代之C5-10雜芳基。
- 如請求項49所述之化合物，其中R17選自H、NH2及一視情況經取代之C5-10雜芳基，較佳為H或NH2。
- 如請求項38至50中任一項所述之化合物，其中R14在每次出現時獨立地選自H、視情況經取代之C1-6烷基、視情況經取代之C3-10環烷基、視情況經取代之C4-10雜環烷基及視情況經取代之C5-6雜芳基，或兩個R14與其相鄰的氮原子一起形成一視情況經取代之C4-10雜環烷基。
- 如請求項51所述之化合物，其中兩個R14與其相鄰的氮原子一起形成一視情況經取代之C4-10雜環烷基，其中該雜環烷基為一單環或雙環且包括1至3個雜原子。
- 如請求項52所述之化合物，其中該雜環烷基經至少一個選自F、OH、側氧基、CN、C1-4烷基及OC1-4烷基之取代基取代，其中該C1-4烷基視情況經進一步取代(例如經F、OH、OC1-3烷基等取代)。
- 如請求項51至53中任一項所述之化合物，其中該雜環烷基選自哌啶基團、哌嗪基團、硫代嗎啉基團及嗎啉基團，或為含有哌啶、哌嗪、硫代嗎啉或嗎啉環之一雙環結構(橋聯或螺環接)。
- 如請求項1至30中任一項所述之化合物，其中R1為具有下式之一基團：
其中：X14選自C及N；X15、X16、X17及X18獨立地選自O、N、S及CR17，其中R17如先前所定義；其中X14、X15、X16、X17及X18中之至少一者且至多三者為O、N或S且兩個雙鍵存在於該環中以保持芳香性。 - 如請求項1至30中任一項所述之化合物，其中R1選自：
其中R14如本文中先前所定義且(---)表示一鍵。 - 如請求項56所述之化合物，其中R1選自：
其中R14如本文所定義且(---)表示一鍵。 - 如請求項1至30中任一項所述之化合物，其中R1選自基團A1至A514。
- 如請求項1至58中任一項所述之化合物，其中X1為Cl且X2為F。
- 如請求項1至58中任一項所述之化合物，其中X1為F且X2為H。
- 如請求項1至58中任一項所述之化合物，其中X1及X2兩者均為F。
- 如請求項1至61中任一項所述之化合物，其中X3及X4各自為H。
- 如請求項1至61中任一項所述之化合物，其中X3為F且X4為H。
- 如請求項61所述之化合物，其中該化合物具有式II：
其中R1、R4、R5及R6各自獨立地如本文所定義，較佳地，R4選自Cl、Br及Me，R5選自H、F、Cl及甲基，且R6選自H、F、Cl、Me及OMe；或其一醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 - 如請求項64所述之化合物，其中該化合物若為具有式IV之一化合物：
其中X6、X7、R4、R5、R6、R17及R18各自獨立地如先前所定義。 - 如請求項64所述之化合物，其中該化合物若為具有式V之一化合物：
其中R4、R5、R6、X14、X15、X16、X17及X18各自獨立地如先前所定義。 - 如請求項61所述之化合物，其中該化合物具有式III：
其中R1、R9、R10、R12及X5各自獨立地如先前所定義。 - 如請求項67所述之化合物，其中該化合物具有式VI：
其中R9、R10、R12、R17、R18、X5、X6及X7各自獨立地如先前所定義。 - 如請求項67所述之化合物，其中該化合物具有式VII：
其中R9、R10、R12、X5、X14、X15、X16、X17及X18各自獨立地如先前所定義。 - 如請求項1所述之化合物，其中該化合物選自如本文所定義之實例1至691，或其一鹽及/或溶劑合物。
- 如請求項70所述之化合物，其中該化合物選自如本文所定義之實例3、6、8、19、20-22、30、31、43、46、48、68、76、83、84、91-93、99-102、111、113-115、123、124-128、131、139-141、168、171、176、177、180、188-190、198、202-206、240、244、247、248、250-253、261、262、264-275、277-280、282、284-286、290、292、294-299、304、305、307-310、312-315、317-319、321-323、325、328、331、333-337、342、346、347、350、351、354、355、356、359、361、364-367、370、372、377、378、381、385-389、395-398、400、401、403、408-412、416-419、421-423、426-429、431-433、435-439、441-445、447-453、454、456、 458、461、462、464、466-469、484、486、488、490、497、502、509、511、514、517、520、524、529、530、533、538-543、546、548、552-554、556、557、560、561、562、568、569、571、572、574、575、578、580-583、585、586、588-590、592、596-600、602、604、605、608-612、614-617、619-621、623、625-630、632、636、638、640、641、643-652、654-660、665及667-691，或其一鹽及/或溶劑合物。
- 如請求項70所述之化合物，其中該化合物選自如本文所定義之實例3、6、20-22、43、46、48、68、76、84、91-93、99-102、123、125、168、171、177、188、202、205、206、251、266、272、296-299、304、305、307-310、312、318、321、331、342、354、355、359、364、366、377、378、381、385-387、389、395、397、400、401、403、411、412、416-419、421-423、426-429、431-433、435-438、441、443-445、451-454、456、458、462、466-469、486、497、502、509、517、520、524、527、529、530、538-540、546、552、554、556、558、560、562、571、572、578、580-583、585、586、588、589、592、597、599、600、604、605、608-610、615、617、619-621、623、625-628、630、632-638、640、641、643、645-649、665、 671-680、682、683、685及688-690，或其一鹽及/或溶劑合物。
- 如請求項70所述之化合物，其中該化合物選自如本文所定義之實例20、84、99-102、123、205、251、266、296-299、308、312、318、321、342、355、385、387、412、421、432 462、509、517、520、524、529、530、538、539、546、554、556、560、562、568、571、572、578、580-583、586、588、592、597、600、605、608、609、615、617,621、628、630、632、633、636、637、641、643、648、649、665、672-675、679、682及688，或其一鹽及/或溶劑合物。
- 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至73中任一項所定義之一化合物，以及一醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
- 一種如請求項1至73中任一項所定義之一化合物用於治療一疾病或病症的用途，該疾病或病症選自：一增殖性疾病或病症、RAS-ERK傳訊級聯失調所致的一發育異常(RAS病)，或一發炎性疾病或一免疫系統失調。
- 如請求項75所述之用途，其中該疾病或病症選自一贅瘤及一發育異常。
- 如請求項75或76所述之用途，其中該疾病或病症與一RAF基因突變(例如ARAF、BRAF或 CRAF)相關。
- 如請求項75至77中任一項所述之用途，其中該疾病或病症與一RAS基因突變(例如KRAS)相關。
- 如請求項75至78中任一項所述之用途，其中該疾病或病症與一受體酪胺酸激酶突變或擴增(例如EGFR、HER2)或該受體下游RAS之一調節因子的一突變(例如SOS1功能獲得、NF1功能喪失)相關。
- 如請求項75至79中任一項所述之用途，其中該疾病或病症為一贅瘤。
- 如請求項80所述之用途，其中該贅瘤選自黑色素瘤、甲狀腺癌(例如乳突甲狀腺癌)、結腸直腸癌、卵巢癌、乳癌、子宮內膜癌、肝癌、肉瘤、胃癌、胰臟癌、巴瑞特氏腺癌、神經膠質瘤(例如室管膜瘤)、肺癌(例如非小細胞肺癌)、頭頸癌、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、非何杰金氏淋巴癌及毛細胞白血病。
- 如請求項80所述之用途，其中該贅瘤選自結腸癌或結腸直腸癌、肺癌、胰臟癌、甲狀腺癌、乳癌及黑色素瘤。
- 如請求項75至82中任一項所述之用途，其中該治療包括抑制該RAS-ERK信號傳遞路徑而基本上不誘導一反常路徑。
- 一種用於治療一疾病或病症的方法，該疾病或病症選自一增殖性疾病或病症、RAS-ERK傳訊級聯 失調所致的一發育異常(RAS病)，或一發炎性疾病或一免疫系統失調，該方法包括以下步驟：向一有需要之受試者投與如請求項1至73中任一項所定義之一化合物。
- 如請求項84所述之方法，其中該疾病或病症選自一贅瘤及一發育異常。
- 如請求項84或85所述之方法，其中該疾病或病症與一RAF基因突變(例如ARAF、BRAF或CRAF)相關。
- 如請求項84至86中任一項所述之方法，其中該疾病或病症與一RAS基因突變(例如KRAS)相關。
- 如請求項84至87中任一項所述之方法，其中該疾病或病症與一受體酪胺酸激酶突變或擴增(例如EGFR、HER2)或該受體下游RAS之一調節因子的一突變(例如SOS1功能獲得、NF1功能喪失)相關。
- 如請求項84至88中任一項所述之方法，其中該疾病或病症為一贅瘤。
- 如請求項89所述之方法，其中該贅瘤選自黑色素瘤、甲狀腺癌(例如乳突甲狀腺癌)、結腸直腸癌、卵巢癌、乳癌、子宮內膜癌、肝癌、肉瘤、胃癌、胰臟癌、巴瑞特氏腺癌、神經膠質瘤(例如室管膜瘤)、肺癌(例如非小細胞肺癌)、頭頸癌、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、非何杰金氏淋巴癌及毛細胞白血病。
- 如請求項89所述之方法，其中該贅瘤選自結腸癌或結腸直腸癌、肺癌、胰臟癌、甲狀腺癌、乳癌及黑色素瘤。
- 如請求項84至91中任一項所述之方法，其中該方法包括以下步驟：抑制該RAS-ERK信號傳遞路徑而基本上不誘導一反常路徑。
- 一種用於抑制細胞異常增殖的方法，其包括以下步驟：使該等細胞與如請求項1至73中任一項所定義之一化合物接觸。
- 如請求項93所述之方法，其中該等細胞包含一突變的RAF蛋白激酶(例如一突變的ARAF、BRAF或CRAF)。
- 如請求項93或94所述之方法，其中該等細胞包含一突變的RAS基因(例如突變的KRAS)。
- 如請求項93至95中任一項所述之方法，其中該異常增殖與一受體酪胺酸激酶突變或擴增(例如EGFR、HER2)或該受體下游RAS之一調節因子的一突變(例如SOS1功能獲得、NF1功能喪失)相關。
- 如請求項93至96中任一項所述之方法，其中該等細胞選自黑色素瘤細胞、甲狀腺癌細胞(例如乳突甲狀腺癌細胞)、結腸直腸癌細胞、卵巢癌細胞、乳癌細胞、子宮內膜癌細胞、肝癌細胞、肉瘤細胞、胃癌細胞、胰臟癌細胞、巴瑞特氏腺癌細胞、神經膠質瘤細胞(例如室管膜瘤細胞)、肺癌細胞(例如非小細胞肺癌細胞)、頭 頸癌細胞、急性淋巴母細胞白血病細胞、急性骨髓性白血病細胞、非何杰金氏淋巴癌細胞及毛細胞白血病細胞。
- 如請求項93至97中任一項所述之方法，其中該等細胞選自結腸癌或結腸直腸癌細胞、肺癌細胞、胰臟癌細胞、甲狀腺癌細胞、乳癌細胞及黑色素瘤細胞。
- 如請求項93至98中任一項所述之方法，其中該方法包括以下步驟：抑制該RAS-ERK信號傳遞路徑而基本上不誘導一反常路徑。
- 如請求項93至99中任一項所述之方法，其中該接觸係活體內進行。
- 如請求項93至99中任一項所述之方法，其中該接觸係離體進行。
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