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TW202214626A - 雌激素受體調節劑化合物及其用途 - Google Patents

雌激素受體調節劑化合物及其用途 Download PDF

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TW202214626A
TW202214626A TW110121533A TW110121533A TW202214626A TW 202214626 A TW202214626 A TW 202214626A TW 110121533 A TW110121533 A TW 110121533A TW 110121533 A TW110121533 A TW 110121533A TW 202214626 A TW202214626 A TW 202214626A
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compound
pharmaceutically acceptable
cycloalkyl
alkyl
formula
Prior art date
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TW110121533A
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English (en)
Inventor
張雁
楊聖偉
龐司林
丁海敏
李剛
唐鋒
吳清萍
郝元斌
樊靜
孫鈺菖
彭少平
唐任宏
任晉生
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大陸商江蘇先聲藥業有限公司
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Abstract

本申請提供了一種具有雌激素受體調節活性或功能的化合物或其藥學上可接受的鹽，所述化合物具有式(I)結構且具有本申請所述取代基和結構特徵。本申請還提供了包含式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物，以及所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在製備預防或治療雌激素受體相關性疾病的藥物中的用途。

Description

雌激素受體調節劑化合物及其用途
本發明涉及雌激素受體調節劑化合物或其藥學上可接受的鹽，含有該化合物的藥物組合物，以及其在預防或治療雌激素受體相關性疾病中的用途。
本申請要求2020年6月12日向中國國家知識產權局提交的，專利申請號為202010536528.6，發明名稱為“雌激素受體調節劑化合物及其用途”、2020年6月22日向中國國家知識產權局提交的，專利申請號為202010572513.5，發明名稱為“雌激素受體調節劑化合物及其用途”以及2021年5月25日向中國國家知識產權局提交的，專利申請號為202110573837.5，發明名稱為“雌激素受體調節劑化合物及其用途”的三件在先申請的優先權。所述三件申請的全文通過引用的方式結合於本申請中。
雌激素(E2)及雌激素α受體(ERα)是乳腺癌發生發展的重要驅動因子。在乳腺癌患者中有超過2/3的患者表達ER(Estrogen Receptor,ER)轉錄因子，並且在大多數ER陽性患者中，即使經過早期的內分泌治療後進展的腫瘤中，ER仍是一個關鍵的驅動因子，因此ER是乳腺癌治療的一個主要靶點(Pharmacology & Therapeutics 186(2018)1-24)。內分泌治療目的是降低ER活性，主要有三類，包括選擇性雌激素受體調節劑(selective estrogen receptor modulators,SERMs)，比如泰莫西芬(tamoxifen)，是ER的別構調節劑，同ER結合後抑制其轉錄活性；芳香化酶抑制劑(aromatase inhibitors,AIs)，通過抑制雄激素轉化為雌激素，減低體內雌激素水準；以及選擇性雌激素受體下調劑，比如氟維司群(fulvestrant)，不僅作為ER的拮抗劑抑制其活性，還具有誘導ER蛋白降解的作用。雖然內分泌治療是雌激素受體陽性乳腺癌患者的首選，但是約有30%的 治療後病人會發生復發，並且幾乎所有的轉移性乳腺癌患者都會產生耐藥而發生進展。內分泌治療產生耐藥的機制主要有兩類，一是集中在雌激素受體信號通路本身，包括編碼雌激素受體的基因ESR1的啟動突變，擴增，與其他基因的融合，雌激素受體共調節因子和下游控制細胞週期因子的失調等；另一類機制包括與雌激素受體信號通路有交叉反應的信號通路的啟動，比如生長因子受體通路等(Oncol Ther，2017,5：17-29)。
氟維司群是首個也是唯一經臨床批准用於泰莫西芬或芳香化酶抑制劑進展後治療ER陽性、轉移性乳腺癌的絕經後患者的選擇性雌激素受體下調劑(selective estrogen receptor downregulators,SERDs)類藥物。此外，阿斯利康(參見專利申請WO2018077630A1)及基因泰克公司(參見專利申請WO2019245974A1)也公開了一系列結構新穎的SERD類化合物及相應的醫藥用途。多項研究資料顯示經氟維司群治療的患者體內並未能完全實現ER的降解，不過也可能是氟維司群的劑量(最高只能達到500mg，主要是其藥效動力學特徵和肌內投藥途徑限制了其可投與患者的最高劑量)限制了其藥效。因此，具有更高生物利用度、對ER的拮抗活性更高、並能在更大程度上的ER降解、以及可以用於雌激素水準較高的絕經前患者、方便的口服投藥的SERD類藥物是臨床上迫切需要的。
為了解決上述至少一個技術問題，本發明提供了一種式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽：
Figure 110121533-A0202-12-0002-2
其中，
X1、X2、X3、X4獨立地選自CR7或N；
R7選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-6元雜環基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基氧基或3-6元雜環基氧基；
Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0003-3
、
Figure 110121533-A0202-12-0003-4
、
Figure 110121533-A0202-12-0003-5
或
Figure 110121533-A0202-12-0003-6
；
R1、R2、R9獨立地選自氫、OH、F、Cl、Br、I、C1-C6烷基或C2-C8烯基；
或者，R1、R2與其連接的碳原子共同形成C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被Ra取代；
R5選自C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被1個或多個選自如下的基團取代：氘、F、Cl、Br、I、CN、OH、OCH3和SO2CH3；
R6選自H、C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被1個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、CN、OH、OCH3和SO2CH3；
或者，R1或R2之一與R6及其各自連接的C和N共同形成3-6元雜環基；
R3選自H、CN、COOH、C(O)ORb、OC(O)Rb、CONH2、C(O)NRbRc、SO2Rb、SO2NRbRc、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6雜環基、C6-C10芳基或C5-C10雜芳基，所述C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C6雜環基、C6-C10芳基或C5-C10雜芳基任選被1個或多個Rd取代；
R4選自H、F、Cl、Br、I、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基或C3-C6雜環基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基或C3-C6雜環基任選被一個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、CN、OH、OCH3和SO2CH3；
環Q選自C6-C10芳基或5-10元雜芳基，所述C6-C10芳基或5-10元雜芳基任選被1個或多個R8取代；
R8選自F、Cl、Br、I、OH、CN、COOH、C(O)ORb、OC(O)Rb、CONH2、C(O)NRbRc、NRcC(O)Rb、SO2Rb、SO2NRb、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-6元雜環基、C6-C10芳基或5-10元雜芳基，所述C3-C6環烷基、3-6元雜環基、C6-C10芳基或5-10元雜芳基任選被1個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
Ra選自鹵素、OH、CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6環烷基或3-6元雜環基，所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6環烷基或3-6元雜環基任選被鹵素取代；
Rb獨立選自C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基、3-6元雜環基、C6-C10芳基或5-10元雜芳基；
Rc獨立選自H、C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基、3-6元雜環基、C6-C10芳基或5-10元雜芳基；
Rd獨立選自F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基或3-6元雜環基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基或3-6元雜環基任選被1個或多個選自F、Cl、Br、I或OH的基團取代；
n為0、1或2；
m為1、2、3或4；
p為1或2；
條件是：(1)當n為0或1時，R1不為H、F或甲基；(2)當m為1或2時，R9不為H。
在一些實施方案中，R5選自C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被1個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、CN、OH、OCH3和SO2CH3。
在一些實施方案中，所述式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(Ia)化合物或其藥學上可接受的鹽：
Figure 110121533-A0202-12-0005-7
在一些實施方案中，所述Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0005-8
。
在一些實施方案，所述Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0005-9
，其中R1、R2與其連接的碳原子共同形成C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被Ra取代。
在一些實施方案中，Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0005-10
，其中R1、R2與其連接的碳原子共同形成C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被Ra取代；所述n為1。
在一些實施方案中，所述Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0006-11
，其中R1、R2與其連接的碳原子共同形成環丙烷。
在一些實施方案中，所述Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0006-12
，其中R1或R2之一與R6以及各自連接的C和N一起形成3-6元雜環基。
在一些實施方案中，所述Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0006-13
，其中R1或R2之一與R6以及各自連接的C和N一起形成3-6元雜環基；所述n為1。
在一些實施方案中，Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0006-14
，其中R1或R2之一與R6以及各自連接的C和N一起形成哌啶環。
在一些實施方案中，所述Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0006-15
。
在一些實施方案中，所述R9選自氫、OH、F、Cl、Br、I或C1-C6烷基。
在一些實施方案中，所述R9選自氫或CH3。
在一些實施方案中，所述m選自1。
在一些實施方案中，所述m選自3。
在一些實施方案中，所述m選自4。
在一些實施方案中，所述Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0007-16
Figure 110121533-A0202-12-0007-17
在一些實施方案中，所述p為1。
在一些實施方案中，所述Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0007-18
。
在一些實施方案中，所述Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0007-19
Figure 110121533-A0202-12-0007-20
在一些實施方案中，所述Het選自
Figure 110121533-A0202-12-0007-21
。
在一些實施方案中，所述R3選自C1-C6烷基、CN、COOH、C(O)ORb、OC(O)Rb、CONH2、C(O)NRbRc或C6-C10芳基；所述C1-C6烷基或C6-C10芳基任選被一個或多個Rd取代，Rd獨立選自F、Cl、Br、I、OH、CN或者任選被1個或多個選自F、Cl、Br、I或OH基團取代的C1-C6烷基。
在一些實施方案中，所述R3選自C1-C6烷基或C6-C10芳基；所述C1-C6烷基或C6-C10芳基任選被一個或多個Rd取代，Rd獨立選自F、Cl、Br、OH或者任選被1個或多個選自F、Cl、Br或OH基團取代的C1-C6烷基。
在一些實施方案中，所述R3選自C1-C3烷基或苯基；所述C1-C3烷基或苯基任選被一個或多個Rd取代，Rd獨立選自F、OH或三氟甲基。
在一些實施方案中，所述R3選自4-三氟甲基苯基、-CH2CF3、
Figure 110121533-A0202-12-0008-22
在一些實施方案中，所述R4選自任選被F、Cl、Br或I取代的C1-C6烷基。
在一些實施方案中，所述R4為甲基。
在一些實施方案中，所述R5為任選被氘、F、Cl、Br或I取代的C1-C6烷基。
在一些實施方案中，所述R5為任選被F、Cl、Br或I取代的C1-C6烷基。
在一些實施方案中，所述R5為1,1-二氘代-3-氟丙基、3-氟丙基或2-氟乙基。
在一些實施方案中，所述R5為3-氟丙基或2-氟乙基。
在一些實施方案中，所述X1選自CR7或N，X2、X3、X4均為CR7。
在一些實施方案中，所述X1選自CH或N，X2、X3、X4均為CH。
在一些實施方案中，所述R7選自H、F、Cl、Br或I。
在一些實施方案中，所述R6選自H或C1-C6烷基。
在一些實施方案中，當Het與NR6相連的原子為手性碳時，其構型為(S)-構型。
在一些實施方案中，所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(II)化合物或其藥學上可接受的鹽：
Figure 110121533-A0202-12-0009-23
其中X1、X2、X3、X4、Het、R3、R4、R6如式(I)所定義；
Y選自NR10、O或S；
R10選自H、C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被1個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、CN、OH、OCH3和SO2CH3。
在一些實施方案中，所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(IIa)化合物或其藥學上可接受的鹽：
Figure 110121533-A0202-12-0009-24
其中X1、X2、X3、X4、Het、R3、R4、R6如式(I)所定義；
Y選自NR10、O或S；
R10選自H、C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6 元雜環烷基任選被1個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、CN、OH、OCH3和SO2CH3。
在一些實施方案中，所述Y選自NR10。
在一些實施方案中，R10選自H、C1-C6烷基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基。
在一些實施方案中，R10為H。
在一些實施方案中，所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(III)化合物或其藥學上可接受的鹽：
Figure 110121533-A0202-12-0010-25
其中X1、X2、X3、X4、Het、R3、R4、R6如式(I)所定義。
在一些實施方案中，所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(IIIa)化合物或其藥學上可接受的鹽：
Figure 110121533-A0202-12-0010-26
其中X1、X2、X3、X4、Het、R3、R4、R6如式(I)所定義。
在一些實施方案中，所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(IV)化合物或其藥學上可接受的鹽：
Figure 110121533-A0202-12-0011-27
其中X1、X2、X3、X4、Het、R3、R4、R6、R8如式(I)所定義。
在一些實施方案中，所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(IVa)化合物或其藥學上可接受的鹽：
Figure 110121533-A0202-12-0011-28
其中X1、X2、X3、X4、Het、R3、R4、R6、R8如式(I)所定義。
在一些實施方案中，式(IV)的化合物中所述R8選自C6-C10芳基或5-10元雜芳基，所述C6-C10芳基或5-10元雜芳基任選被1個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。
在一些實施方案中，式(IV)的化合物中所述R8選自苯基或5-6元雜芳基，所述苯基或5-6元雜芳基任選被1個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、OH、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基。
在一些實施方案中，式(IV)的化合物中所述R8選自吡唑，所述吡唑任選被1個或多個甲基取代。
在一些實施方案中，式(IV)化合物中所述R8選自1H-吡唑-4-基或1-甲基-1H-吡唑-4-基。
在一些實施方案中，式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽選自以下化合物或其藥學上可接受的鹽：
Figure 110121533-A0202-12-0012-29
Figure 110121533-A0202-12-0013-30
Figure 110121533-A0202-12-0014-31
在一個方面，本申請所述的化合物以外消旋混合物或以鏡像異構體富集的或鏡像異構體純的形式存在。在某些實施方案中，本申請所述的化合物以它們的單獨的立體異構體製備，其通過使所述化合物的外消旋混合物與光學活性拆分劑反應來形成一對非鏡像異構體化合物/鹽，將所述非鏡像異構體分離並回收具有光學純的鏡像異構體。在一些實施方案中，鏡像異構體的拆分使用本申請所述的化合物的共價非鏡像異構體衍生物來進行。在另一個實施方案中，通過基於溶解度差異的分離/拆分技術分離非鏡像異構體。在某些實施方案中，本申請所述的化合物通過酶法拆分製備為它們的單獨的立體異構體。在一些實施方案中，單獨的立體異構體的拆分使用脂酶或酯酶進行。在一些實施方案中，單獨的立體異構體的拆分通過脂酶或酯酶催化的不對稱脫醯作用來進行。在另一些實施方案中，通過層析法，或者通過形成非鏡像異構體的鹽並通過重結晶或層析法或其任意組合來分離，進行立體異構體的分離。在一些實施方案中，通過立體選擇性合成獲得立體異構體。
本發明還提供藥物組合物，其包含式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體和/或賦形劑。
在一些實施方案中，所述藥物組合物配製用於靜脈內注射、皮下注射、口服投藥或局部投藥。
在一些實施方案中，所述藥物組合物為片劑、丸劑、膠囊劑、液體、懸浮液、凝膠劑、分散劑、溶液、乳劑、軟膏劑或洗劑。
進一步地，本發明涉及式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或者其藥物組合物在製備預防或者治療雌激素受體相關性疾病的藥物中的用途。
進一步地，本發明涉及式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或其藥物組合物，用於預防或者治療雌激素受體相關疾病。
進一步地，本發明涉及式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或者其藥物組合物在預防或者治療雌激素受體相關性疾病中的用途。
進一步地，本發明涉及預防或者治療雌激素受體相關性疾病的式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或其藥物組合物。
本發明還涉及預防或者治療雌激素受體相關性疾病的方法，該方法包括向有此需要的對象施用預防或治療有效劑量的本發明所述的式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、或其藥物組合物。
在本發明的一些實施方案中，所述的雌激素受體相關性疾病包括但不限於癌症和自身免疫病等。
在本發明的一些實施方案中，所述的雌激素受體相關性疾病優選為腫瘤。
術語定義和說明
除非另有說明，本申請中所用的術語具有下列含義，本申請中記載的基團和術語定義，包括其作為實例的定義、示例性的定義、優選的定義、表格中記載的定義、實施例中具體化合物的定義等，可以彼此之間任意組合和結合。一個特定的術語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照本領域普通的含義去理解。當本文中出現商品名時，意在指代其對應的商品或其活性成分。
本文中“
Figure 110121533-A0202-12-0015-32
”表示連接位點。
本文中消旋體或者鏡像體純的化合物的圖示法來自Maehr,J.Chem.Ed.1985,62：114-120。除非另有說明，用楔形鍵和虛楔鍵(
Figure 110121533-A0202-12-0015-33
和
Figure 110121533-A0202-12-0015-34
)表示 一個立體中心的絕對構型，用黑實鍵和虛鍵(
Figure 110121533-A0202-12-0016-35
和
Figure 110121533-A0202-12-0016-36
)表示一個立體中心的相對構型(如脂環化合物的順反構型)。
術語“互變異構體”是指因分子中某一原子在兩個位置迅速移動而產生的官能團異構體。本發明化合物可表現出互變異構現象。互變異構的化合物可以存在兩種或多種可相互轉化的種類。互變異構體一般以平衡形式存在，嘗試分離單一互變異構體時通常產生一種混合物，其理化性質與化合物的混合物是一致的。平衡的位置取決於分子內的化學特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型佔優勢；而在酚中，烯醇型佔優勢。本發明包含化合物的所有互變異構形式。
術語“立體異構體”是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產生的異構體，包括順反異構體、鏡像異構體、非鏡像異構體和構象異構體。
本發明的化合物可以具有不對稱原子如碳原子、硫原子、氮原子、磷原子或不對稱雙鍵，因此本申請的化合物可以存在特定的幾何或立體異構體形式。特定的幾何或立體異構體形式可以是順式和反式異構體、E型和Z型幾何異構體、(-)-和(+)-鏡像體、(R)-和(S)-鏡像體、非鏡像異構體、(D)-異構體、(L)-異構體，以及其外消旋混合物或其它混合物，例如鏡像異構體或非鏡像體富集的混合物，以上所有這些異構體以及它們的混合物都屬於本申請化合物的定義範圍之內。烷基等取代基中可存在另外的不對稱碳原子、不對稱硫原子、不對稱氮原子或不對稱磷原子，所有取代基中涉及到的這些異構體以及它們的混合物，也均包括在本申請化合物的定義範圍之內。本申請的含有不對稱原子的化合物可以以光學活性純的形式或外消旋形式被分離出來，光學活性純的形式可以從外消旋混合物拆分，或通過使用手性原料或手性試劑合成。
術語“被取代”是指特定原子上的任意一個或多個氫原子被取代基取代，只要特定原子的價態是正常的並且取代後的化合物是穩定的。當取代基為氧代(即=O)時，意味著兩個氫原子被取代，氧代不會發生在芳香基上。
術語“任選”或“任選地”是指隨後描述的事件或情況可以發生或不發生，該描述包括發生所述事件或情況和不發生所述事件或情況。例如，乙基“任選”被鹵素取代，指乙基可以是未被取代的(CH2CH3)、單取代的(如CH2CH2F)、多取代的(如CHFCH2F、CH2CHF2等)或完全被取代的(CF2CF3)。本領域技術 人員可理解，對於包含一個或多個取代基的任何基團，不會引入任何在空間上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
本文中的Cm-n，是指該部分具有給定範圍中的整數個碳原子。例如“C1-6”是指該基團可具有1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子、4個碳原子、5個碳原子或6個碳原子。
當任何變數(例如R)在化合物的組成或結構中出現一次以上時，其在每一種情況下的定義都是獨立的。例如，如果一個基團被2個R所取代，則每個R都有獨立的選項。
當一個連接基團的數量為0時，比如-(CH2)0-，表示該連接基團為鍵。
術語“藥學上可接受的”，是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們在可靠的醫學判斷的範圍之內，適用於與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或併發症，與合理的利益/風險比相稱。
術語“藥學上可接受的鹽”是指藥學上可接受的無毒酸或鹼的鹽，包括無機酸和鹼、有機酸和鹼的鹽。作為藥學上可接受的鹽，例如，可以提及金屬鹽、銨鹽、與有機鹼形成的鹽、與無機酸形成的鹽、與有機酸形成的鹽、與鹼性或者酸性氨基酸形成的鹽等。
術語“溶劑化物”是指一個或多個溶劑分子與本申請化合物的締合物或絡合物。形成溶劑化物的溶劑的實例包括但不限於水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO(dimethyl sulfoxide,DMSO，二甲亞碸)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙酸(AcOH)和乙醇胺。
術語“藥物組合物”表示一種或多種文本所述化合物或其生理學/藥學上可接受的鹽或前體藥物與其它化學組分的混合物，其它組分例如生理學/藥學上可接受的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進化合物對生物體的投藥。藥物組合物的目的是有利於對有機體投與本申請的化合物。
術語“被取代”是指特定原子上的任意一個或多個氫原子被取代基取代，只要特定原子的價態是正常的並且取代後的化合物是穩定的。當取代基為氧代(即=O)時，意味著兩個氫原子被取代，氧代不會發生在芳香基上。
術語“任選”或“任選地”是指隨後描述的事件或情況可以發生或不發生，該描述包括發生所述事件或情況和不發生所述事件或情況。例如，乙基“任選”被鹵素取代，指乙基可以是未被取代的(CH2CH3)、單取代的(如CH2CH2F)、多取代的(如CHFCH2F、CH2CHF2等)或完全被取代的(CF2CF3)。本領域技術人員可理解，對於包含一個或多個取代基的任何基團，不會引入任何在空間上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
術語“鹵”或“鹵素”是指氟、氯、溴和碘。
術語“羥基”指-OH基團。
術語“氰基”指-CN基團。
術語“巰基”指-SH基團。
術語“氨基”指-NH2基團。
術語“硝基”指-NO2基團。
術語“烷基”是指通式為CnH2n+1的烴基。該烷基可以是直鏈或支鏈的。例如，術語“C1-C6烷基”應理解為表示具有1、2、3、4、5或6個碳原子的直鏈或支鏈飽和一價烴基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、異戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1，2-二甲基丙基、新戊基、1，1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基或1，2-二甲基丁基等。類似地，烷氧基的烷基部分(即烷基)具有上述相同定義。本文所述“C1-6烷基”可以包含“C1-3烷基”等範圍。
術語“烯基”是指由碳原子和氫原子組成的直鏈或支鏈的具有至少一個雙鍵的不飽和脂肪族烴基。烯基的非限制性實例包括但不限於乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、異丁烯基、1,3-丁二烯基等。術語“C2-C8烯基”應理解為表示直鏈或支鏈的一價烴基，其包含一個或多個雙鍵並且具有2、3、4、5、6、7、8個碳原子。
術語“炔基”是指由碳原子和氫原子組成的直鏈或支鏈的具有至少一個三鍵的不飽和脂肪族烴基。炔基的非限制性實例包括但不限於乙炔基(-C≡CH)、1-丙炔基(-C≡C-CH3)、2-丙炔基(-CH2-C≡CH)、1,3-丁二炔基(-C≡C- C≡CH)等。術語“C2-C4炔基”應理解為表示直鏈或支鏈的一價烴基，其包含一個或多個三鍵並且具有2、3、4個碳原子。
術語“烷氧基”是指-O-烷基。根據本發明，合適的烷氧基為C1-6烷氧基，如C1-5烷氧基，C1-4烷氧基，C1-3烷氧基，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、異丁氧基、第二丁氧基等。例如術語“C1-C6烷氧基”可理解為“C1-C6烷基氧基”或“C1-C6烷基-O-”，如“C1-C6烷氧基”可以包含“C1-C3烷氧基”。
術語“環烷基”指完全飽和的並且可以以呈單環、橋環或螺環存在的碳環。除非另有指示，該碳環通常為3至10元環。環烷基非限制性實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、降冰片基(雙環[2.2.1]庚基)、雙環[2.2.2]辛基、金剛烷基等。術語“C3-C6環烷基”應理解為表示飽和的一價單環或雙環烴環，其具有3~6個碳原子。如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環壬基或環癸基，或者是雙環烴基如十氫化萘環。
術語“環烷基氧基”可以理解為“環烷基-O-”。例如術語“C3-6環烷基氧基”可理解為“C3-6環烷基-O-”。
術語“雜環基”是指完全飽和的或部分不飽和的(整體上不是具有芳香性的雜芳族)一價單環、并環、橋環或螺環基團，其環原子中含有1-5個雜原子或雜原子團(即含有雜原子的原子團)，所述“雜原子或雜原子團”包括但不限於氮原子(N)、氧原子(O)、硫原子(S)、磷原子(P)、硼原子(B)，=O,=S,-O-N=,-C(=O)O-,-C(=O)-,-C(=S)-,-S(=O)2-,-S(=O)-，以及任選被取代的-NH-,-S(=O)(=NH)-,-C(=O)NH-,-C(=NH)-,-S(=O)2NH-,S(=O)NH-,-NHC(=O)NH-等。除非另有指示，該雜環通常為含有1至3個獨立地選自硫、氧和/或氮的雜原子(如1或2個雜原子)的3至7元環。雜環基的非限制性實例包括但不限於環氧乙烷基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、吡咯烷基、N-甲基吡咯烷基、二氫吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吡唑烷基、4H-吡喃基、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫噻吩基等。
術語“3-6元雜環基”或“3-6元雜環基氧基”中的“3-6元雜環基”意指飽和的或部分飽和的一價單環或雙環烴環，其包含1、2或3個選自N、O和S的雜原子。特別地，所述雜環基可以包括但不限於：3元環，如環氧乙烷環；4元環，如氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基；5元環，如四氫呋喃基、二氧雜環戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、4,5-二氫噁唑或2,5-二氫-1H- 吡咯基；或6元環，如四氫吡喃基、哌啶基、嗎啉基、二噻烷基、硫代嗎啉基、哌嗪基或三噻烷基；或部分飽和的6元環如四氫吡啶基、哌啶基、嗎啉基、二噻烷基、硫代嗎啉基、哌嗪基、三噻烷基、四氫吡啶基或4H-[1,3,4]噻二嗪基。根據本發明，所述雜環基整體上是無芳香性的。“3-6元雜環基”可以包含“5-6元雜環基”，“3-6元雜環基氧基”可以包含“5-6元雜環基氧基”。
術語“雜環烷基”是指完全飽和的並且可以以單環、并環、橋環或螺環存在的一價環狀基團。除非另有指示，該雜環通常為含有1、2或3個獨立地選自硫、氧和/或氮的雜原子(如1或2個雜原子)的3至7元環。3元雜環烷基的實例包括但不限於環氧乙烷基、環硫乙烷基、環氮乙烷基，4元雜環烷基的非限制性實例包括但不限於吖丁啶基、噁丁環基、噻丁環基，5元雜環烷基的實例包括但不限於四氫呋喃基、四氫噻吩基、吡咯烷基、異噁唑烷基、噁唑烷基、異噻唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、四氫吡唑基，6元雜環烷基的實例包括但不限於哌啶基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、嗎啉基、哌嗪基、1,4-噻噁烷基、1,4-二氧六環基、硫代嗎啉基、1,3-二噻烷基、1,4-二噻烷基，7元雜環烷基的實例包括但不限於氮雜環庚烷基、氧雜環庚烷基、硫雜環庚烷基。本發明前述形成的含B的5-6元雜環烷基的實例包括但不限於
Figure 110121533-A0202-12-0020-37
、
Figure 110121533-A0202-12-0020-38
。
術語“3-6元雜環烷基”或“3-6元雜環烷基氧基”中的“3-6元雜環烷基”是指環原子數為3、4、5或6的所述雜環烷基。“3-6元雜環烷基”可以包含“5-6元雜環烷基”，“3-6元雜環烷基氧基”可以包含“5-6元雜環烷基氧基”。
術語“芳基”是指具有共軛的π電子體系的全碳單環或稠合多環的芳香環基團。例如，芳基可以具有6-20個碳原子，6-14個碳原子或6-12個碳原子。芳基的非限制性實例包括但不限於苯基、萘基、蒽基和1,2,3,4-四氫化萘等。術語“C6-C10芳基”應理解為表示具有6~10個碳原子的一價芳香性或部分芳香性的單環或雙環烴環。特別是具有6個碳原子的環(“C6芳基”)，例如苯基；或者具有9個碳原子的環(“C9芳基”)，例如茚滿基或茚基，或者具有10個碳原子的 環(“C10芳基”)，例如四氫化萘基、二氫萘基或萘基。
術語“雜芳基”是指單環或稠合多環體系，其中含有至少一個選自N、O、S的環原子，其餘環原子為C，並且具有至少一個芳香環。示例性的雜芳基具有單個4至8元環，尤其是單個5至8元環，或包含6至14個，尤其是6至10個環原子的多個稠合環。雜芳基的非限制性實例包括但不限於吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、異喹啉基、四唑基、三唑基、三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、異吲哚基等。術語“5-10元雜芳基”應理解為包括這樣的一價單環或雙環芳族環系：其具有5~10個環原子且包含1-5個獨立選自N、O和S的雜原子。術語“5-10元雜芳基”應理解為包括這樣的一價單環或雙環芳族環系：其具有5、6、7、8、9或10個環原子，特別是5或6或9或10個環原子，且其包含1-5個或1-3個獨立選自N、O和S的雜原子並且，另外在每一種情況下可為苯并稠合的。特別地，雜芳基選自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、異噁唑基、異噻唑基、噁二唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、噻二唑基等以及它們的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、異吲哚基等；或吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它們的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、異喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它們的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、哢唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。術語“5-6元雜芳基”指具有5或6個環原子的芳族環系，且其包含1-3個或1-2個獨立選自N、O和S的雜原子，實例包括但不限於噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、異噁唑基、異噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基。“5-10元雜芳基”可以包含“5-6元雜芳基”。
術語“治療有效量”意指(i)治療或預防特定疾病、病況或障礙，(ii)減輕、改善或消除特定疾病、病況或障礙的一種或多種症狀，或(iii)預防或延遲本文中所述的特定疾病、病況或障礙的一種或多種症狀發作的本發明化合物的用量。構成“治療有效量”的本發明化合物的量取決於該化合物、疾病狀態及其嚴重性、投藥方式以及待被治療的哺乳動物的年齡而改變，但可例行性地由本領域技 術人員根據其自身的知識及本公開內容而確定。
術語“佐劑”是指可藥用惰性成分。術語“賦形劑”的種類實例非限制性地包括粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、穩定劑、填充劑和稀釋劑等。賦形劑能增強藥物製劑的操作特性，即通過增加流動性和/或粘著性使製劑更適於直接壓縮。適用於上述製劑的典型的“藥學上可接受的載體”的實例為：糖類，澱粉類，纖維素及其衍生物等在藥物製劑中常用到的佐劑。
詞語“包括(comprise)”、“含有(contain)”或“包含(include)”及其英文變體例如comprises、contains、includes、comprising、containing或including應理解為開放的、非排他性的意義，即“包括但不限於”。
本申請還包括與本文中記載的那些相同的，但一個或多個原子被原子量或質量數不同于自然中通常發現的原子量或質量數的原子置換的同位素標記的本申請化合物。可結合到本申請化合物的同位素的實例包括氫、碳、氫、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，諸如分別為2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、123I、125I和36Cl等。
某些同位素標記的本申請化合物(例如用3H及14C標記的那些)可用於化合物和/或受質組織分佈分析中。氚化(即3H)和碳-14(即14C)同位素對於由於它們易於製備和可檢測性是尤其優選的。正電子發射同位素，諸如15O、13N、11C和18F可用於正電子發射斷層掃描(Positron emission tomography,PET)研究以測定受質佔有率。通常可以通過與公開於下文的方案和/或實施例中的那些類似的下列程式，通過同位素標記試劑取代未經同位素標記的試劑來製備同位素標記的本申請化合物。
本申請的藥物組合物可通過將本申請的化合物與適宜的藥學上可接受的佐劑組合而製備，例如可配製成固態、半固態、液態或氣態製劑，如片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、膏劑、乳劑、懸浮劑、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠劑、微球及氣溶膠等。
投與本申請化合物或其藥學上可接受的鹽或其藥物組合物的典型途徑包括但不限於口服、直腸、局部、吸入、腸胃外、舌下、陰道內、鼻內、眼內、腹膜內、肌內、皮下、靜脈內投藥。
本申請的藥物組合物可以採用本領域眾所周知的方法製造，如常 規的混合法、溶解法、制粒法、乳化法、冷凍乾燥法等。
在一些實施方案中，藥物組合物是口服形式。對於口服投藥，可以通過將活性化合物與本領域熟知的藥學上可接受的佐劑混合，來配製該藥物組合物。這些佐劑能使本申請的化合物被配製成片劑、丸劑、錠劑、糖衣劑、膠囊劑、液體、凝膠劑、漿劑、懸浮劑等，用於對患者的口服投藥。
可以通過常規的混合、填充或壓片方法來製備固體口服組合物。例如，可通過下述方法獲得：將所述的活性化合物與固體佐劑混合，任選地碾磨所得的混合物，如果需要則加入其它合適的佐劑，然後將該混合物加工成顆粒，得到了片劑或糖衣劑的核心。適合的佐劑包括但不限於：粘合劑、稀釋劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、甜味劑或矯味劑等。
藥物組合物還可適用於腸胃外投藥，如合適的單位劑型的無菌溶液劑、混懸劑或凍幹產品。
本文所述的通式(I)化合物的所有施用方法中，每天投藥的劑量為0.01到200mg/kg體重，優選為0.05到50mg/kg體重，更優選0.1到30mg/kg體重，以單獨或分開劑量的形式。
術語“IC50”是半數最大抑制濃度，表示獲得體外生物學過程的50%抑制所需要的特定化合物的濃度。IC50值可對數換算成pIC50值(-log IC50)，其中較高的值以指數方式表示較大的效力。
本發明的化合物可以通過本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。
本發明具體實施方式的化學反應是在合適的溶劑中完成的，所述的溶劑須適合於本發明的化學變化及其所需的試劑和物料。為了獲得本發明的化合物，有時需要本領域技術人員在已有實施方式的基礎上對合成步驟或者反應流程進行修改或選擇。為清楚起見，進一步用實施例來闡述本申請，但是實施例並非限制本申請的範圍。本申請所使用的所有試劑是市售的，無需進一步純化即可使用。
以下實施例詳細說明發明的技術方案，但本發明的保護範圍包括但不限於此。本文已經詳細地描述了本發明，其中也公開了其具體實施方式，對本領域的技術人員而言，在不脫離本發明精神和範圍的情況下針對本發明具體實施方式進行各種改變和改進將是顯而易見的。本申請所使用的所有試劑是市售的，無需進一步純化即可使用。
化合物的結構是通過核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)和/或質譜(mass spectrometry,MS)來確定的。NMR位移的單位為10-6(ppm)。NMR測定的溶劑為氘代二甲基亞碸、氘代氯仿、氘代甲醇等，內標為四甲基矽烷(TMS)。“IC50”指半數抑制濃度，指達到最大抑制效果一半時的濃度。
實施例1：3-(((1R，3R)-1-(2,6-二氟-4-(((S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基)苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇
Figure 110121533-A0202-12-0024-39
步驟1：(S)-(5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-基)氨基甲酸第三丁酯的合成
Figure 110121533-A0202-12-0024-40
將(S)-(5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基甲酸第三丁酯(2.12g，10.0mmol)加入到40mL乙腈(MeCN)中，加入碳酸鉀(2.76g,20.0mmol)，3-氟-1-碘代丙烷(2.26g,12.0mmol)，加熱至80℃攪拌6小時後反應完畢。將反應液過濾，濾餅用乙腈洗滌，合併濾液後柱層析得標題化合物。
步驟2：(S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0024-41
將(S)-(5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-基)氨基甲酸第三丁酯(1.00g，3.68mmol)加入到10mL二氯甲烷中，加入4mol/L的氯化氫二氧六環溶液5mL，室溫攪拌2小時後反應完畢。將反應液濃縮後加入飽和碳酸鈉水溶液調節pH至pH7-8，二氯甲烷萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後得標題化合物。
步驟3：3-(((1R，3R)-1-(2,6-二氟-4-(((S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基)苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇的合成
Figure 110121533-A0202-12-0025-42
按照WO2016097072A1實施例340製備3-((1R，3R)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇。將3-((1R，3R)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇(470mg，1.00mmol)，甲烷磺酸(2-二環己基膦)-3,6-二甲氧基-2,4,6-三異丙基-1,1-聯苯)(2-氨基-1,1-聯苯-2-基)鈀(II)(Brettphos Pd G3)(90.0mg，0.10mmol)，第三丁醇鈉(t-BuONa)(192mg，2.00mmol)，(S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺(172mg，1.00mmol)加入到5mL甲苯中，氬氣保護下加熱至80℃攪拌4小時後反應完畢，將反應液加入到50mL水中，乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，柱層析得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.61(s,1H),7.46-7.45(m,1H),7.28-7.26(m,1H),7.09-7.00(m,2H),6.23-6.31(m,2H),5.36-5.33(m,1H),5.12(s,1H),4.65-4.62(m,1H),4.52-4.50(m,1H),3.80-3.69(m,2H),3.53-3.48(m,2H),3.40-3.37(m,1H),3.22-3.11(m,3H),2.92-2.87(m,1H),2.72-2.63(m,3H),2.50-2.42(m,3H),1.91-1.85(m,2H),1.16-1.14(m,3H),0.85-0.75(m,1H),0.72-0.68(m,2H),0.59-0.52(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：563.3。
實施例2：(S)-N-(3,5-二氟-4-((1R，3R)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺
Figure 110121533-A0202-12-0026-43
按照WO2016097072A1實施例304製備(1R，3R)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚。然後參照上述實施例1步驟3，不同的是將實施例1步驟3中的3-((1R，3R)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇替換為(1R，3R)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚，同法制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.58(s,1H),7.39-7.38(m,1H),7.21-7.19(m,1H),7.02-6.92(m,3H),6.23-6.20(m,2H),5.09(s,1H),4.56-4.53(m,1H),4.44-4.41(m,1H),3.75-3.70(m,1H),3.47-3.41(m,2H),3.35-3.32(m,1H),3.05-3.01(m,1H),2.97-2.91(m,1H),2.84-2.78(m,1H),2.62-2.55(m,2H),2.48-2.38(m,3H),1.85-1.74(m,2H),1.12-1.10(m,3H),0.74-0.70(m,1H),0.64-0.61(m,2H),0.48-0.43(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：551.3。
實施例3：2,2-二氟-3-((1S，3R)-1-(5-(((S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)丙-1-醇
Figure 110121533-A0202-12-0026-44
Figure 110121533-A0202-12-0027-45
按照WO2016097072A1實施例340製備(R)-3-(((1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)氨基)-2,2-二氟丙烷-1-醇。將(R)-3-(((1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)氨基)-2,2-二氟丙烷-1-醇(2.68g,10.0mmol)和5-溴-2-吡啶甲酸(1.84g,10.0mmol)加入到20mL甲苯(Tol)中，加入1mL醋酸(AcOH)，加熱至90℃攪拌12小時後反應完畢，將反應液濃縮後用100mL水稀釋，飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8-9，乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後柱層析純化得到3-((1R,3R)-1-(5-溴-吡啶-2-基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇。然後參照上述實施例1步驟3，不同的是將實施例1中的3-((1R，3R)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇替換為3-((1R,3R)-1-(5-溴-吡啶-2-基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇，同法制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.60(s,1H),7.91-7.90(m,1H),7.40-7.35(m,1H),7.25-7.20(m,2H),7.00-6.96(m,4H),5.10(s,1H),4.56-4.53(m,1H),4.44-4.41(m,1H),3.79-3.69(m,2H),3.53-3.45(m,2H),3.40-3.32(m,1H),3.22-3.17(m,3H),2.92-2.80(m,1H),2.70-2.63(m,3H),2.50-2.46(m,3H),1.94-1.85(m,2H),1.16-1.10(m,3H),0.82-0.75(m,1H),0.75-0.68(m,2H),0.60-0.52(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：528.3。
實施例4：(S)-5-(3-氟丙基)-N-(6-((1S，3R)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)吡啶-3-基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺
Figure 110121533-A0202-12-0027-46
Figure 110121533-A0202-12-0028-47
製備方法與實施例3類似，不同的是將實施例3的起始物料(R)-3-(((1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)氨基)-2,2-二氟丙烷-1-醇替換為(R)-1-(1H-吲哚-3-基)-N-(2,2,2-三氟乙基)丙-2-胺，同法制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.58(s,1H),7.90-7.88(m,1H),7.42-7.40(m,1H),7.27-7.25(m,1H),7.05-6.96(m,4H),4.89(s,1H),4.56-4.53(m,1H),4.44-4.41(m,1H),3.75-3.70(m,1H),3.47-3.41(m,1H),3.35-3.32(m,1H),3.04-3.00(m,1H),2.96-2.89(m,1H),2.84-2.78(m,1H),2.62-2.55(m,2H),2.48-2.38(m,3H),1.85-1.74(m,2H),1.14-1.13(m,3H),0.75-0.73(m,1H),0.64-0.61(m,2H),0.48-0.43(m,1H).
13C NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 147.24,143.56,136.57,133.91,132.84,126.62,126.51(q,J=278.2Hz),122.64,120.60,118.67,118.15,117.57,111.09,107.61,82.29(d,J=161.4Hz),64.30,62.33,61.42,55.99,51.69(d,J=5.7Hz),48.66,48.24(q,J=29.9Hz),28.95(d,J=19.3Hz),26.16,25.32,17.64,13.28,7.94.
LC/MS(m/z,MH+)：516.3。
實施例5：3-((6S，8R)-6-(2,6-二氟-4-(((S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-基)氨基)苯基)-8-甲基-3,6,8,9-四氫-7H-吡唑并[4,3-f]異喹啉-7-基)-2,2二氟丙烷-1-醇
Figure 110121533-A0202-12-0028-48
步驟1：(7S)-N-(4-((6S，8R)-7-(3-((第三丁基二苯基甲矽烷基)氧基)-2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H- 吡唑并[4,3-f]異喹啉-6-基)-3,5-二氟苯基)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0029-118
按照WO2018077630A1實施例5製備方法製備(6S，8R)-6-(4-溴-2,6-二氟苯基)-7-(3-((第三丁基二苯基甲矽烷基)氧基)-2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉。然後，將(6S，8R)-6-(4-溴-2,6-二氟苯基)-7-(3-((第三丁基二苯基甲矽烷基)氧基)-2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉(793mg，1.00mmol)，Brettphos Pd G3(90.0mg，0.10mmol)，第三丁醇鈉(192mg，2.00mmol)，(S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺(172mg，1.00mmol)加入到5mL甲苯中，氬氣保護下加熱至80℃攪拌6小時後反應完畢，將反應液加入到50mL水中，乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，柱層析得標題化合物。
步驟2：3-((6S，8R)-6-(2,6-二氟-4-(((S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-基)氨基)苯基)-8-甲基-3,6,8,9-四氫-7H-吡唑并[4,3-f]異喹啉-7-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇的合成
Figure 110121533-A0202-12-0029-50
將(7S)-N-(4-((6S，8R)-7-(3-((第三丁基二苯基甲矽烷基)氧基)-2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉-6-基)-3,5-二氟苯基)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺(400mg，0.50mmol)加入到10mL甲醇(MeOH)中，加入4mol/L的氯化氫二氧 六環溶液5mL，室溫攪拌1小時後反應完畢。將反應液濃縮後加入飽和碳酸鈉水溶液調節pH至7-8，乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後柱層析得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.97(s,1H),8.05(s,1H),7.22-7.20(m,1H),6.71-6.69(m,1H),6.20-6.14(m,3H),5.28-5.25(m,1H),5.07(s,1H),4.56-4.53(m,1H),4.44-4.41(m,1H),3.72-3.64(m,2H),3.54-3.50(m,1H),3.18-3.00(m,3H),2.90-2.85(m,1H),2.67-2.60(m,2H),2.48-2.37(m,6H),1.85-1.74(m,2H),1.03-1.02(m,3H),0.75-0.70(m,1H),0.64-0.60(m,2H),0.47-0.42(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：564.3。
實施例6：2,2-二氟-3-(((6S，8R)-6-(5-(((S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚基-7-基)氨基]吡啶]-2-基)-8-甲基-3,6,8,9-四氫-7H-吡唑并[4,3-f]異喹啉-7-基)丙-1-醇
Figure 110121533-A0202-12-0030-51
按照WO2018077630A1實施例16製備方法製備起始物料(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(3-((第三丁基二苯基甲矽烷基)氧基)-2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉。然後參考實施例5的製備方法，不同的是將實施例5步驟1中的(6S，8R)-6-(4-溴-2,6-二氟苯基)-7-(3-((第三丁基二苯基甲矽烷基)氧基)-2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉替換為(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-7-(3-((第三丁基二苯基甲矽烷基)氧基)-2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉， 同法制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.06(s,1H),8.04(s,1H),7.84-7.83(m,1H),7.24-7.22(m,1H),6.89-6.79(m,3H),5.70-5.68(m,1H),4.92(s,1H),4.55-4.52(m,1H),4.43-4.40(m,1H),3.72-3.64(m,2H),3.54-3.50(m,1H),3.18-3.00(m,3H),2.90-2.85(m,1H),2.67-2.60(m,2H),2.48-2.37(m,6H),1.85-1.74(m,2H),1.03-1.02(m,3H),0.75-0.70(m,1H),0.64-0.60(m,2H),0.47-0.42(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：529.3。
實施例7：(S)-5-(3-氟丙基)-N-(6-((6S，8R)-8-甲基-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉-6-基)吡啶-3-基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺
Figure 110121533-A0202-12-0031-52
按照WO2018077630A1實施例17的製備方法製備起始物料(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉。參考上述實施例5的製備方法，不同的是將實施例5步驟1中的(6S，8R)-6-(4-溴-2,6-二氟苯基)-7-(3-((第三丁基二苯基甲矽烷基)氧基)-2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉替換為(6S，8R)-6-(5-溴吡啶-2-基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉，同法制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.99(s,1H),8.06(s,1H),7.83(s,1H),7.23-7.21(m,1H),6.98-6.88(m,2H),6.81-6.79(m,1H),5.71-5.69(m,1H),4.92 (s,1H),4.55-4.52(m,1H),4.43-4.40(m,1H),3.75-3.70(m,1H),3.52-3.45(m,2H),3.09-3.05(m,2H),3.00-2.94(m,1H),2.87-2.81(m,1H),2.65-2.60(m,1H),2.48-2.45(m,3H),2.39-2.35(m,1H),1.85-1.72(m,2H),1.09-1.08(m,3H),0.77-0.72(m,1H),0.64-0.59(m,2H),0.45-0.40(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：517.3。
實施例8：(S)-N-(3,5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉-6-基)苯基)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-胺
Figure 110121533-A0202-12-0032-53
按照WO2019223715A1實施例27第一步、第二步製備方法製備(6S,8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉。然後，參考實施例5的製備方法，不同的是將實施例5步驟1中的(6S，8R)-6-(4-溴-2,6-二氟苯基)-7-(3-((第三丁基二苯基甲矽烷基)氧基)-2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉替換為(6S，8R)-6-(4-溴-2,6-二氟苯基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉，同法制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.05(s,1H),8.11(s,1H),7.29-7.27(m,1H),6.80-6.78(m,1H),6.26-6.21(m,3H),5.20(s,1H),4.62-4.59(m,1H),4.50-4.47(m,1H),3.76-3.73(m,1H),3.54-3.51(m,1H),3.27-3.20(m,2H),3.08-3.06(m,1H),2.97-2.93(m,2H),2.68-2.66(m,1H),2.54-2.42(m,4H),1.89-1.79(m,2H),1.14-1.13(m,3H),0.78-0.75(m,1H),0.70-0.66(m,2H),0.53-0.50(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：552.2。
實施例9：(S)-N-(4-((6S，8R)-7-(2,2-二氟丙基)-8-甲基-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉-6-基)-3,5-二氟苯基)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺
Figure 110121533-A0202-12-0033-54
步驟1：(R)-3-(2-(((2,2-二氟丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0033-55
將(R)-N-(1-(3-溴-2-甲基苯基)丙-2-基)-2,2-二氟丙-1-胺(14.3g)，二苯甲酮亞胺(10.0g)，三(二亞苄基丙酮)二鈀(Pd2(dba)3)(0.42g)，1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(BINAP)(0.57g)，第三丁醇鈉(6.60g)加入到60mL甲苯中，氬氣保護下加熱至80℃攪拌5小時後反應完畢。將反應液旋幹，加入100mL二氯甲烷和稀鹽酸溶液(2N，100mL)，劇烈攪拌2小時後反應完畢，分層，二氯甲烷層棄去，水層用5N氫氧化鈉水溶液調節pH至10-11，乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，有機層濃縮後得粗品油狀物12.0g。
步驟2：(1S，3R)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-2-(2,2-二氟丙基)-3,5-二甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0034-56
將(R)-3-(2-(((2,2-二氟丙基)氨基)丙基)-2-甲基苯胺(12.0g)，4-溴-2,6-二氟苯甲醛(13.0g)加入到50mL醋酸中，加入5mL水，60℃攪拌，TLC檢測反應，反應完畢後將反應液旋幹，加入100ml水，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至8~9，乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後柱層析石油醚：乙酸乙酯=10：1(V：V)得油狀物13.9g。
步驟3：(6S，8R)-6-(4-溴-2,6-二氟苯基)-7-(2,2-二氟丙基)-8-甲基-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4，3-f]異喹啉的合成
Figure 110121533-A0202-12-0034-57
將(1S，3R)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-2-(2,2-二氟丙基)-3,5-二甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-胺(3.56g)加入到40mL丙酸中，冷卻至-20℃，滴加2N亞硝酸鈉的水溶液(560mg)，攪拌1小時後反應完畢，向反應液中加入50mL乙酸乙酯，隨後緩慢滴加飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8~9，乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後得油狀物4.00g。
步驟4：(6S，8R)-6-(4-溴-2,6-二氟苯基)-7-(2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉的合成
Figure 110121533-A0202-12-0034-58
將(6S，8R)-6-(4-溴-2,6-二氟苯基)-7-(2,2-二氟丙基)-8-甲基-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4，3-f]異喹啉(4.00g)加入到100mL二氯甲烷中，加 入4-甲基苯磺酸吡啶(PPTS)(100mg)，加入6mL 3,4-二氫-2H-吡喃(DHP)，加熱至50℃攪拌10小時後反應完畢，將反應液濃縮後柱層析石油醚：乙酸乙酯=10：1(V：V)得油狀物1.90g。
步驟5：(S)-N-(4-((6S，8R)-7-(2,2-二氟丙基)-8-甲基-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉-6-基)-3,5-二氟苯基)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0035-59
參考實施例5的製備方法，不同的是將實施例5步驟1中的(6S，8R)-6-(4-溴-2,6-二氟苯基)-7-(3-((第三丁基二苯基甲矽烷基)氧基)-2,2-二氟丙基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉替換為(6S,8R)-6-(4-溴-2，6-二氟苯基)-8-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-7-(2,2-二氟丙基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉，同法制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.97(s,1H),8.05(s,1H),7.23-7.21(m,1H),6.72-6.70(m,1H),6.22-6.19(m,3H),5.07(s,1H),4.57-4.52(m,1H),4.42-4.39(m,1H),3.75-3.70(m,1H),3.52-3.45(m,2H),3.09-3.05(m,2H),3.00-2.94(m,1H),2.87-2.81(m,1H),2.65-2.60(m,1H),2.48-2.45(m,3H),2.39-2.35(m,1H),1.85-1.72(m,2H),1.46-1.36(m,3H),1.03-1.01(m,3H),0.70-0.58(m,3H),0.45-0.42(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：548.3。
實施例10：(S)-N-(3,5-二氟-4-((1S，3R)-3-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-2-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)苯基)-5-(3-氟丙基)- 5-氮雜螺環[2.4]庚烷-7-胺
Figure 110121533-A0202-12-0036-60
步驟1：5-溴-2-(二乙氧基甲基)-1,3-二氟苯的合成
Figure 110121533-A0202-12-0036-121
將4-溴-2,6-二氟苯甲醛(1.69g，7.66mmol)加入到17mL乙醇中，加入三乙氧基甲烷(1.13g，7.66mmol)，濃硫酸1滴，加熱至60℃攪拌2小時後反應完畢。將反應液旋幹得標題化合物。
步驟2：(S)-2,6-二氟-4-((5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-7-基)氨基)苯甲醛的合成
Figure 110121533-A0202-12-0036-62
將5-溴-2-(二乙氧基甲基)-1,3-二氟苯(2.26g，7.66mmol)，5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺(1.1g，6.4mmol)，Brettphos Pd G3(580.0mg，0.06mmol)，第三丁醇鈉(1.47g，15.31mmol)，加入到30mL甲苯中，氬氣保護下加熱至80℃攪拌15小時後反應完畢，將反應液加入到50mL水中，乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，有機層濃縮後加入20mL四氫呋喃，加入2mol/L稀鹽酸溶液，室溫攪拌2小時後反應完畢。加入50mL水，乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後柱層析得標題化合物。
步驟3：(1S，3R)-1-(2,6-二氟-4-((S)-(5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基)苯基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,3,4-四氫異喹 啉-6-醇的合成
Figure 110121533-A0202-12-0037-63
將2,6-二氟-4-((5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-7-基)氨基)苯甲醛(0.95g，3.05mmol)，(R)-3-(2-(((2,2,2-三氟乙基)氨基)丙基)苯酚(0.71g，3.05mmol)加入到20mL甲苯/醋酸=10/1體系中，加熱至80℃攪拌15小時後反應完畢，將反應液濃縮後柱層析(石油醚/乙酸乙酯梯度洗脫)得標題化合物。
步驟4：(1S，3R)-1-(2,6-二氟-4-((S)-(5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基)苯基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基三氟甲磺酸酯的合成
Figure 110121533-A0202-12-0037-64
將(1S，3R)-1-(2,6-二氟-4-((5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基)苯基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-醇(1.10g，2.09mmol)，雙(三氟甲磺醯基)苯胺(PhNTf2)(1.49g，4.17mmol)，三乙胺(TEA)(0.63g，6.26mmol)加入到10mL二氯甲烷(DCM)中，室溫攪拌12小時後反應完畢。將100mL水加入到反應液中，乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，有機層濃縮後柱層析得標題化合物。
步驟5：(S)-N-(3,5-二氟-4-((1S，3R)-3-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-2-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)苯基)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺環[2.4]庚烷-7-胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0038-65
將(1S，3R)-1-(2,6-二氟-4-((5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基)苯基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基三氟甲磺酸(200mg，0.30mmol)，1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(Pd(dppf)Cl2)(22.0mg，0.03mmol)，碳酸銫(198mg，0.61mmol)，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-甲酸第三丁酯(89mg，.30mmol)加入到5mL 1,4-二氧六環/水=10/1體系中，氬氣保護下加熱至90℃攪拌14小時後反應完畢，將反應液濃縮後加入10mL二氯甲烷，隨後加入2mL三氟乙酸，室溫攪拌2小時後反應完畢，將反應液濃縮後柱層析得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.20(s,1H),7.99(s,2H),7.33-7.26(m,2H),6.71-6.69(m,1H),6.22-6.16(m,3H),5.04(s,1H),4.56-4.53(m,1H),4.44-4.41(m,1H),3.73-3.68(m,2H),3.18-3.02(m,3H),2.83-2.92(m,2H),2.68-2.56(m,2H),2.47-2.36(m,3H),1.84-1.74(m,2H),1.03-1.02(m,3H),0.72-0.69(m,1H),0.64-0.60(m,2H),0.47-0.45(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：578.2。
實施例11：3-((1R，3R)-1-(2,6-二氟-4-((4aR，7aR)-6-(3-氟丙基)八氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-基)苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇
Figure 110121533-A0202-12-0038-66
製備方法與實施例1步驟3類似，不同的是將實施例1步驟3中的(S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺替換為(4aR，7aR)-6-(3-氟丙基) 八氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶，同法制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.56(s,1H),7.40-7.38(m,1H),7.20-7.18(m,1H),7.02-6.92(m,2H),6.49-6.46(m,2H),5.30-5.26(m,1H),5.11(s,1H),4.53-4.50(m,1H),4.41-4.31(m,2H),3.74-3.62(m,1H),3.49-3.41(m,3H),3.18-3.05(m,1H),2.85-2.80(m,2H),2.77-2.60(m,4H),2.58-2.56(m,2H),2.48-2.40(m,2H),2.24-2.20(m,1H),1.80-1.68(m,4H),1.55-1.49(m,2H),1.09-1.07(m,3H).
LC/MS(m/z,MH+)：577.3。
實施例12：(S)-5-(3-氟丙基)-N-(6-((1S，3R)-3-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-2-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)吡啶-3-基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺
Figure 110121533-A0202-12-0039-67
製備方法與實施例10類似，不同的是將實施例10步驟2中的起 始物料5-溴-2-(二乙氧基甲基)-1,3-二氟苯替換為5-溴-2-(二乙氧基甲基)-吡啶，依次進行步驟2-步驟5同法反應，制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.73(s,1H),7.85(s,2H),7.67-7.59(m,2H),7.39-7.26(m,2H),6.71-6.69(m,1H),6.22-6.16(m,2H),4.94(s,1H),4.55-4.41(m,2H),3.73-3.68(m,2H),3.18-3.02(m,3H),2.83-2.92(m,2H),2.68-2.56(m,2H),2.47-2.36(m,3H),1.86-1.72(m,3H),1.05-0.96(m,1H),0.75-0.57(m,2H),0.38-0.49(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：543.2。
實施例13：(S)-N-(3,5-二氟-4-((1S，3R)-3-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)苯基)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺
Figure 110121533-A0202-12-0040-68
步驟1：(R)-N-(1-(3-(苯氧基苯基)丙-2-基)-4-(三氟甲基)苯胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0040-69
將(R)-1-(3-苯氧基苯基)丙烷-2-胺(2.27g)，對溴三氟甲苯(2.25g)，三(二亞苄基丙酮)二鈀(900mg)，2-二環己基膦-2',4',6'-三異丙基聯苯(Xphos)(920mg)，碳酸銫(6.50g)加入到50mL 1,4-二氧六環中，氮氣保護下加熱至100℃，6小時反應完畢。反應液柱層析(石油醚/乙酸乙酯梯度洗脫)制得標題化合物。
步驟2：(R)-N-(1-(3-(苯氧基苯基)丙-2-基)-4-(三氟甲基)苯胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0041-70
將(R)-N-(1-(3-(苯氧基苯基)丙-2-基)-4-(三氟甲基)苯胺(1.00g)加入到20mL甲醇中，加入鈀碳(100mg)，通入氫氣後室溫攪拌，4小時後反應完畢，抽濾，濾液濃縮後制得標題化合物。
步驟3：(S)-N-(3,5-二氟-4-((1S，3R)-3-甲基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-1-基)苯基)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0041-71
製備方法與實施例10類似，不同的是將實施例10步驟3中的(R)-3-(2-(((2,2,2-三氟乙基)氨基)丙基)苯酚替換為(R)-3-(2-(((4-(三氟甲基)苯基)氨基)丙基)苯酚，然後依次進行步驟2-步驟5同法反應，制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.10(s,1H),7.83(s,1H),7.48-7.36(m,4H),7.17-7.15(m,1H),7.01-6.99(m,2H),6.53(s,1H),6.19-6.15(m,2H),5.92(s,1H),4.52-4.51(m,1H),4.40-4.37(m,1H),3.85(s,1H),3.54-3.47(m,4H),2.79-2.50(m,3H),2.34-2.33(m,2H),1.91-1.79(m,2H),0.92-0.91(m,2H),0.65-0.64(m,1H),0.590.57(m,2H),0.43-0.42(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：654.3。
實施例14：3-((1R，3R)-1-(2,6-二氟-4-(((S)-1-(3-氟丙基)哌啶-3-基)氨基)苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2- 二氟丙烷-1-醇
Figure 110121533-A0202-12-0042-72
製備方法與實施例1步驟3類似，不同的是將實施例1步驟3中的(S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺替換為(S)-1-(3-氟丙基)哌啶-3-胺，制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.66(s,1H),7.43-7.37(m,2H),7.03-6.90(m,2H),6.25-6.17(m,3H),5.79-5.75(m,1H),5.35(s,1H),4.55-4.52(m,1H),4.43-4.39(m,1H),3.60-3.57(m,2H),3.31-3.30(m,3H),2.98-2.78(m,4H),2.72-2.60(m,2H),2.39-2.32(m,2H),2.05-1.95(m,1H),1.84-1.64(m,6H),0.89-0.77(m,3H).
LC/MS(m/z,MH+)：551.2
實施例15：3-((1R，3R)-1-(2,6-二氟-4-(((S)-1-(3-氟丙基)氮雜環庚-3-基)氨基)苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇
Figure 110121533-A0202-12-0042-73
製備方法與實施例1類似，不同的是將實施例1步驟1中的(S)-(5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基甲酸第三丁酯替換為(S)-氮雜環庚-3-基氨基甲酸第三丁酯，同法進行實施例1的步驟1-步驟3反應制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.53(s,1H),7.38-7.36(m,1H),7.20-7.18(m,1H),7.00-6.91(m,2H),6.19-6.06(m,3H),5.27-5.24(m,1H),5.04(s,1H),4.55-4.53(m,1H),4.43-4.42(m,1H),3.44-3.38(m,3H),2.83-2.80(m,2H),2.72-2.50(m,6H),1.99-1.96(m,2H),1.80-1.60(m,7H),1.55-1.50(m,3H),1.07-1.06(m,3H).
LC/MS(m/z,MH+)：565.2。
實施例16：N-(3,5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)-3-甲基氮雜環丁烷-3-胺
Figure 110121533-A0202-12-0043-74
步驟1：1-(3-氟丙基)-3-甲基氮雜環丁烷-3-胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0043-75
參照實施例1步驟1和步驟2的方法，不同的是將實施例1步驟1中的(S)-(5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基甲酸第三丁酯替換為3-(Boc-氨基)-3-甲基氮雜環丁烷，同法製備1-(3-氟丙基)-3-氨基-3-甲基吖啶。
步驟2：N-(3,5-二氟-4-((6S，8R)-8-甲基-7-(2,2,2-三氟乙基)-6,7,8,9-四氫-3H-吡唑并[4,3-f]異喹啉-6-基)苯基)-1-(3-氟丙基)-3-甲基氮雜環丁烷-3-胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0043-76
參照實施例8的製備方法製備，不同的是將實施例8中的(S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺替換為1-(3-氟丙基)-3-氨基-3-甲基吖啶，同法進行實施例8的最後2步反應制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.00(s,1H),8.06(s,1H),7.24-7.22(m,1H),6.77-6.75(m,1H),6.63(s,1H),5.94-5.90(m,2H),5.17(s,1H),4.52-4.49(m,1H),4.40-4.37(m,1H),3.51-3.44(m,2H),3.32-3.30(m,3H),3.19-3.14(m,1H),2.98-2.88(m,4H),2.48-2.46(m,1H),1.69-1.60(m,2H),1.46(s,3H),1.10-1.08(m,3H).
LC/MS(m/z,MH+)：526.2。
實施例17：3-(((1R，3R)-1-(2,6-二氟-4-((((1R，4R，5S)-2-(3-氟丙基)-2-氮雜雙環[2.1.1]己-5-基)氨基)苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙烷-1-醇
Figure 110121533-A0202-12-0044-77
製備方法與實施例1類似，不同的是將實施例1步驟1中的(7S)-5-(苯甲基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基氨基甲酸第三丁酯替換為((1R，4R，5S)-2-氮雜雙環[2.1.1]己基-5-基)氨基甲酸苄酯，制得中間體((1R，4R，5S)-2-(3-氟丙基)-2-氮雜雙環[2.1.1]己基-5-基)氨基甲酸苄酯。將((1R，4R，5S)-2-(3-氟丙基)-2-氮雜雙環[2.1.1]己基-5-基)氨基甲酸苄酯(290mg，1.00mmol)加入到10mL甲醇中，加入10mg Pd/C，通入氫氣後室溫攪拌5小時後反應完畢， 將反應液抽濾濃縮後得中間體(1R，4R，5S)-2-(3-氟丙基)-2-氮雜雙環[2.1.1]己-5-胺。然後參照實施例1步驟3，不同的是將實施例1步驟3中的(S)-5-(3-氟丙基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺替換為(1R，4R，5S)-2-(3-氟丙基)-2-氮雜雙環[2.1.1]己-5-胺，同法制得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.39(s,1H),7.37-7.32(m,2H),6.98-6.88(m,2H),6.35(s,1H),6.21-6.18(m,1H),5.95(s,1H),5.67-5.65(m,1H),4.66-4.63(m,1H),4.54-4.51(m,1H),4.34-4.36(m,1H),4.27-4.20(m,1H),3.41-3.40(m,1H),3.31-3.24(m,2H),2.93-2.91(m,1H),2.81-2.67(m,4H),2.59-2.55(m,3H),2.19-2.16(m,1H),1.88-1.77(m,2H),1.29-1.20(m,2H),1.07-1.06(m,3H).
LC/MS(m/z,MH+)：549.2。
實施例18：(S)-5-(3-氟丙基-1,1-d2)-N-(6-((1S，3R)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3，4,9-四氫-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)吡啶-3-基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺
Figure 110121533-A0202-12-0045-78
步驟1：(S)-(5-(3-氟丙醯基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基甲酸第三丁酯的合成
Figure 110121533-A0202-12-0045-79
將(S)-(5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基甲酸第三丁酯(1.06g) 加入到10mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.60g)，3-氟丙酸(1.00g)，N,N-二異丙基乙胺(2.50g)，室溫攪拌4小時後反應完畢，將反應液加入到100mL水中，乙酸乙酯萃取，合併有機層，濃縮後柱層析(二氯甲烷/甲醇梯度洗脫)得標題化合物。
步驟2：(S)-1-(7-氨基-5-氮雜螺[2.4]庚基-5-基)-3-氟丙烷-1-酮的合成
Figure 110121533-A0202-12-0046-80
將(S)-(5-(3-氟丙醯基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-7-基)氨基甲酸第三丁酯(1.00g)加入到4mol/L的氯化氫1,4-二氧六環溶液10mL中，室溫攪拌1小時後反應完畢，將反應液濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液後乙酸乙酯萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，有機層濃縮後直接投入下一步中。
步驟3：(S)-5-(3-氟丙基-1,1-d2)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0046-81
將(S)-1-(7-氨基-5-氮雜螺[2.4]庚基-5-基)-3-氟丙烷-1-酮(400mg)加入到20mL無水四氫呋喃中，加入氘代氫化鋁鋰(AlD4Li)(100mg)，氮氣保護下加熱至70℃，4小時後反應完畢，將反應液濃縮，直接用於下一步中。
步驟4：(S)-5-(3-氟丙基-1,1-d2)-N-(6-((1S，3R)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3，4,9-四氫-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)吡啶-3-基)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺的合成
Figure 110121533-A0202-12-0046-82
將(1S，3R)-1-(5-溴吡啶-2-基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1H-吡啶基[3，4-b]吲哚(200mg)，甲烷磺酸(2-二環己基膦)-3,6-二甲氧基-2,4,6-三異丙基-1,1-聯苯)(2-氨基-1,1-聯苯-2-基)鈀(II)(Brettphos Pd G3) (45.0mg)，第三丁醇鈉(192mg)，(S)-5-(3-氟丙基-1,1-d2)-5-氮雜螺[2.4]庚-7-胺(100mg)加入到5mL甲苯中，氬氣保護下加熱至80℃攪拌4小時後反應完畢，反應液柱層析(二氯甲烷/甲醇梯度洗脫)得標題化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.58(s,1H),7.90-7.88(m,1H),7.42-7.40(m,1H),7.27-7.25(m,1H),7.05-6.96(m,4H),5.75(d,J=8.8Hz,1H),4.89(s,1H),4.56-4.53(m,1H),4.44-4.41(m,1H),3.77-3.70(m,1H),3.59-3.41(m,1H),3.35-3.25(m,1H),3.04-2.89(m,2H),2.75-2.36(m,5H),1.85-1.71(m,2H),1.14-1.12(m,3H),0.75-0.73(m,1H),0.64-0.61(m,2H),0.48-0.43(m,1H).
LC/MS(m/z,MH+)：518.3。
生物學活性及相關性質測試例
測試實施例1：本發明化合物對MCF7細胞內雌激素受體降解效果檢測
試驗原理：測定本發明化合物對MCF7細胞內內源表達的雌激素受體的降解活性，根據IC50及最大降解效率評價待測化合物的活性。
試驗方法：
MCF7細胞(購於ATCC,HTB-22)用含10%胎牛血清的DMEM(購於Gibco，11995-065)完全培養基進行培養。實驗第一天，使用完全培養基將MCF7細胞以3000個/孔的密度種于384孔板，37℃，5%CO2細胞培養箱培養。待測化合物溶解於DMSO，儲存濃度為10mM，用Echo 550(購於Labcyte Inc.)稀釋並加入細胞培養板內，各化合物處理的起始濃度為100nM，3倍梯度稀釋，9個濃度點，設置含0.5%DMSO的空白對照，各濃度點設雙複孔對照。37℃，5%CO2細胞培養箱培養24小時。各細胞培養孔內加入多聚甲醛至細胞培養液內，終濃度約3.7%固定細胞，作用30分鐘後，棄上清，加入50μL PBS(Phosphate buffered saline,PBS，磷酸鹽緩衝生理鹽水)每孔洗滌一次；加入PBS含0.5% v/v Tween-20處理細胞30分鐘，PBS洗滌一次；加入封閉液(自製，PBS內含5% BSA，0.05% Tween-20)室溫孵育1小時；去封閉液加入一抗混合液(抗-ER單抗，Estrogen Receptor α(D8H8)Rabbit mAb，購於CST,# 8644S,1：1000稀釋；抗-GAPDH單抗，GAPDH(D4C6R)Mouse mAb，購於CST,#97166S，1：2000稀釋)室溫孵育3小時；用PBST(自製， PBS內含0.05% Tween-20)洗滌3次；加入檢測二抗(800CW-羊抗兔IgG，購於LI-COR，P/N：926-32211,1：1000稀釋；680RD-羊抗鼠IgG，購於LI-COR，#925-68070，1：1000稀釋)，室溫，避光孵育45分鐘：PBST洗滌3次，使用Odyssey CLx讀取各孔螢光信號。資料處理用XLfit，根據化合物的濃度和螢光信號值計算各化合物的降解活性DC50。
試驗結果：
在本實驗條件下，測試化合物對基於細胞水準的ER水準具有良好的降解活性。測試化合物相應的ER水準活性測試結果具體見表1。
Figure 110121533-A0202-12-0048-84
測試實施例2：本發明化合物對T47D細胞增殖的抑制效果檢測
試驗原理：測定本發明化合物對T47D細胞體外增殖的抑制影響，根據IC50及最大抑制效率評價化合物的活性。
試驗方法：
T47D(T-47D)細胞(購於ATCC,HTB-133)用含10%胎牛血清的RPMI-1640(購於Gibco，A10491-01)完全培養基進行培養。實驗第一天，使用完全培養基將T47D細胞以500個/孔的密度種于384孔板，37℃，5%CO2細胞培養箱過夜培養。第二天，加入待測化合物進行藥物處理，採用Echo550 (購於Labcyte Inc.)將儲存濃度為10mM的化合物溶液進行稀釋及轉移至各細胞培養孔內，各化合物在細胞內的處理起始濃度為100nM，3倍梯度稀釋，10個濃度點，設置含0.3%DMSO的空白對照，各濃度點設雙複孔對照。37℃，5%CO2細胞培養箱培養7天，第八天，取出細胞培養板。加入CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay(購於Promega,G7573)，室溫放置10分鐘後，使用多標記酶標儀EnVision(購於PerkinElmer)讀取發光信號值，用XLfit根據化合物的濃度和發光信號值計算各化合物的抑制活性IC50。
試驗結果：
在本實驗條件下，測試化合物對T47D乳腺癌細胞表現出了良好的抑制活性。測試化合物對T47D細胞增殖的抑制活性結果具體見表2。
Figure 110121533-A0202-12-0049-85
測試實施例3：本發明化合物對MCF7細胞增殖的抑制效果檢測
試驗原理：測定本發明化合物對MCF7細胞體外增殖的抑制影響，根據IC50及最大抑制效率以評價化合物的活性。
試驗方法：
MCF7細胞(ATCC,HTB-22)用含10%胎牛血清的DMEM(Gibco，11995-065)完全培養基進行培養。實驗第一天，使用完全培養基將MCF7細胞以500個/孔的密度種于384孔板，37℃，5%CO2細胞培養箱過夜培養。第二天， 加入待測化合物進行藥物處理，採用Echo550(Labcyte Inc.)將儲存濃度為10mM的化合物溶液進行稀釋及轉移至各細胞培養孔內，各化合物在細胞內的處理起始濃度為100nM，3倍梯度稀釋，9個濃度點，設置含0.3%DMSO的空白對照，各濃度點設雙複孔對照。37℃，5%CO2細胞培養箱培養7天，第八天，取出細胞培養板。加入CellTiter-Glo ® Luminescent Cell Viability Assay(Promega,G7573)，室溫放置10分鐘後，使用多標記酶標儀EnVision(PerkinElmer)讀取發光信號值，用XLfit根據化合物的濃度和發光信號值計算各化合物的抑制活性IC50及最大抑制率Imax，結果如表3所示。
Figure 110121533-A0202-12-0050-86
測試實施例4：本發明化合物的藥代動力學性質檢測
試驗原理：以小鼠為受試動物，應用LC/MS/MS法測定小鼠灌胃和靜脈投與本發明化合物後，不同時刻血漿中的藥物濃度。研究本發明化合物在小鼠體內的藥代動力學行為，評價其藥動學特徵。
試驗方法：
4.1 試驗動物
健康成年BALB/c小鼠18只，雌性，平均分為6組，每組3只，灌胃，小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物生產許可證號：SCXK(浙)2019-0001。
4.2 藥物配製
稱取一定量藥物，溶於DMSO 5%+PG 20%+無水乙醇5%+solutol 10%+水60%，配製成10mg/ml，用於灌胃。
4.3 投藥
BALB/c小鼠禁食過夜後灌胃投藥，投藥劑量均為10mg/kg，投藥體積均為1mL/kg。
4.4 操作
小鼠灌胃投藥後，於投藥後5min，15min，30min，1h，2h，4h，24h由眼眶采血40μL，5μL EDTA-K2抗凝，12000rpm，4℃，5分鐘離心分離血漿，於-20℃保存。
測定不同濃度的藥物灌胃投藥後小鼠血漿中待測化合物含量：取樣品室溫融解，渦旋1min；定量轉移15μL至2ml 96孔板中，加入150μL內標沉澱劑，振盪(1200rpm * 3min)；離心(4000rpm * 15min)，轉移上清100μL至1ml 96孔板中；氮氣吹幹，加入100μL複溶液(乙腈水1：9)，振盪搖勻(900rpm * 3min),20μL進樣分析。LC/MS/MS條件：流動相A：0.1%甲酸水溶液，流動相B：0.1%甲酸乙腈，層析柱：ACE C18 5μm(3.0mm * 50mm)，柱溫：35℃，流速0.5ml/min。
試驗結果：
在本實驗條件下，測試化合物表現出較好的藥代動力學性質，結果具體見表4。
Figure 110121533-A0202-12-0051-87
測試實施例5：本發明化合物小鼠口服投藥後的腦血比測試
1.實驗目的：
測定本發明化合物小鼠口服投藥後，藥物入腦情況及腦血比數值，評價化合物透腦情況。
2.實驗方法：
2.1 試驗藥品
GDC-9545(CN107108611A表1化合物340，按專利方法製備)、 實施例4化合物、實施例8化合物。
2.2 試驗動物
健康成年BALB/c小鼠18只，雌性，平均分為6組，每組3只，具體分組情況如下表，小鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物生產許可證號：SCXK(浙)2019-0001。
Figure 110121533-A0202-12-0052-88
2.3 藥物配製
稱取一定量受試化合物，溶于四甘醇40%(7.5% Captisol)+水60%，配製成1mg/mL，用於灌胃。
2.4 投藥
BALB/c小鼠禁食過夜後灌胃投藥，投藥劑量均為10mg/kg，投藥體積均為10mL/kg。
2.5 樣品收集及檢測
小鼠灌胃投藥後，於投藥後2h、4h安樂死動物，取腦組織、全血。全血使用EDTA-K2抗凝，12000rpm，4℃，5分鐘離心分離血漿，於-20℃保存。腦組織樣品收集後，加入PBS勻漿，經乙腈蛋白沉澱，使用液相質譜聯用法測定腦組織中待測化合物濃度。線性範圍1~1000ng/mL。
2.6 實驗結果
各受試化合物的腦血比參數如表5所示。
Figure 110121533-A0202-12-0052-89
從以上結果可以看出，本發明化合物能穿透小鼠血腦屏障，進入腦 組織。
測試實施例6：本發明化合物的血漿蛋白結合率測定
一、試驗材料及儀器
1. CD-1小鼠血漿(BioIVT)
2. 96孔平衡透析板(HTDialysis LLC,Gales Ferry,CT，HTD96B)，平衡透析膜(MWCO 12-14K,#1101)
3.陽性對照化合物華法林
4. ABI QTrap 5500液質聯用儀
二、試驗步驟
1.濃度為100mM磷酸鈉鹽和150mM NaCl的緩衝液的配製：用超純水配製濃度為14.2 g/L Na2HPO4和8.77 g/L NaCl的鹼性溶液，用超純水配製濃度為12.0 g/L NaH2PO4和8.77 g/L NaCl的酸性溶液。用酸性溶液滴定鹼性溶液至pH值為7.4配製成濃度為100mM磷酸鈉鹽和150mM NaCl的緩衝液。
2.透析膜的準備：將透析膜浸泡在超純水中60分鐘以便將膜分離成兩片，然後用20%乙醇浸泡20分鐘，最後用透析所用緩衝液浸泡20分鐘。
3.血漿的準備：將冷凍的血漿迅速在室溫下解凍，然後將血漿在4℃、3,220g下離心10分鐘去除凝塊，並將上清收集到新的離心管中。測定和記錄血漿的pH值，使用pH值為7-8的血漿。
4.含化合物的血漿樣品的配製：用DMSO稀釋10mM的本發明化合物或陽性對照化合物的儲備液得到200μM的工作液。597μl小鼠血漿中加入3μl 200μM的化合物工作液得到終濃度為1μM的血漿樣品。
5.平衡透析步驟：按照操作說明將透析裝置組裝起來。在透析膜的一側加入120μL含1μM化合物的血漿樣品，另一側加入等體積的透析液(磷酸鹽緩衝液)。試驗設雙樣本。封上透析板，放入孵育裝置，在37℃、5% CO2及約100rpm轉速下孵育6小時。孵育結束後，去除封膜，從每個孔的緩衝液和血漿側吸取50μl到新板的不同孔中。在磷酸鹽緩衝液樣品中加入50μl空白血漿，在血漿樣品中加入等體積的空白磷酸鹽緩衝液，然後加入300μl含內標的乙腈沉澱蛋白。渦旋5分鐘，在4℃、3,220g下離心30分鐘。取100μl上清液至進樣板，加入100μL超純水混勻，用於LC-MS/MS分析。
測定化合物在緩衝液側和血漿側的峰面積。計算化合物的血漿蛋白結合率公式如下：
%游離率=(化合物峰面積與內標峰面積比值緩衝液側/化合物峰面積與內標峰面積比值血漿側)*100%
%結合率=1-%游離率
所有的資料均通過Microsoft Excel軟體進行計算。計算得到的本發明化合物的血漿蛋白結合率值見表6。
Figure 110121533-A0202-12-0054-90
測試實施例7、本發明化合物的膜滲透性及轉運特性測定
本發明化合物的膜滲透性及轉運特性採用如下試驗方法測定。
一、試驗材料及儀器
1. Caco-2細胞(ATCC)
2. HEPES(Solarbio 804D049)、青黴素/鏈黴素(Solarbio 20200109)和Trypsin/EDTA(Solarbio)、PBS(Solarbio 20200620)
3.胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)(Sigma WXBD0055V)、螢光黃(Sigma MKCJ3738)、NaHCO3(Sigma SLBZ4647)
4. Hank’s平衡鹽溶液(Gibco 2085528)和非必需氨基酸(NEAA)(Gibco 2211548)、Trypsin/EDTA(Gibco 2120732)
5.高糖DMEM(Corning 20319014)
6. HTS Transwell-96 Well Permeable(Corning,3391)
7.電阻檢測儀(Millipore，Millicell® ERS-2)
8. Cellometer® Vision(Nexcelom Bioscience)
9. Infinite 200 PRO酶標儀(Tecan，Infinite M200PRO)
10.陽性對照化合物Metoprolol(Sinopharm 100084-201403)、Erythromycin(MCE 84550)和Cimetidine(Sinopharm 100158-201406)
11. ABI QTrap 5500液質聯用儀
二、試驗步驟
1. Caco-2細胞培養
1)轉運緩衝液(含25mM HEPES的HBSS，pH 7.4)的配製：精確稱量5.958g HEPES和0.35g NaHCO3，加900mL純水讓其溶解，然後加100mL 10×HBSS攪拌均勻，調pH至7.4，過濾。
2)Caco-2細胞培養基的配製：高糖DMEM(含有L-穀氨醯胺)培養基中加入FBS、青黴素、鏈黴素、卡那黴素和NEAA配製成含10% FBS、0.1mg/mL鏈黴素、100單位青黴素、0.6μg/mL卡那黴素和1×NEAA的細胞培養基。
3)在37℃、5% CO2的培養箱中用T-75培養瓶培養細胞，細胞生長達到80-90%密度時棄去培養基。用5mL PBS沖洗細胞，加入1.5mL Trypsin/EDTA，然後在37℃培養箱中孵育5-10分鐘直至細胞呈流沙狀脫落，最後用含FBS的培養基中和Trypsin/EDTA。
4)細胞混懸液在120 x g下離心10分鐘，棄去上清液。
5)加細胞培養基重懸細胞，調至密度為6.86×105cells/mL的細胞懸浮液。
2. Caco-2細胞接種
1)Transwell小室每孔加入50μL培養基，下層加入25mL培養基，置於37℃，5% CO2培養箱中預熱1小時。
2)預熱的Transwell小室每孔加入50μL細胞懸浮液，最終接種密度為2.4×105cells/cm2。
3)培養14-18天，隔一天換一次培養基，在最初種板以後的48小時之內更換培養基。實驗前一天培養基必須更換。
3.評估單層細胞膜完整性
1)細胞培養14天后融合並且分化，準備進行轉運實驗。
2)用電阻儀測量單層膜電阻，記錄每孔電阻。
3)測量完畢後，將Transwell培養板重新孵育
4)計算TEER值：TEER值=TEER(Ω)測量值×膜面積(cm2)
單層細胞膜的電阻<230Ω．cm2，指示單層細胞膜緻密性差，不能用 於試驗。
4.轉運實驗
1)用DMSO稀釋10mM的本發明化合物或陽性對照化合物的儲備液得到2mM的儲備液，然後用轉運緩衝液稀釋2mM的儲備液得到10μM的本發明化合物或陽性對照化合物的工作液。
2)從培養箱中取出Caco-2細胞板，然後用預熱的轉運緩衝液清洗Transwell培養板兩次，再置於37℃培養箱孵育30分鐘。
3)為測定化合物從頂端到基底端(A→B)的轉運速率，加108μL化合物的工作液到Transwell小室(頂端)，同時立即從頂端取出8μL樣品至72μL轉運緩衝液中，加入240μL含內標的終止液終止轉運以作為初始頂端樣品。 同時，接收端(基底端)加入300μL轉運緩衝液。試驗設雙樣本。
4)為測定化合物從基底端到頂端(B→A)的轉運速率，加308μL化合物的工作液到接收端(基底端)，同時立即從基底端取出8μL樣品至72μL轉運緩衝液中，加入240μL含內標的終止液終止轉運以作為初始基底端樣品。同時，Transwell小室(頂端)加入300μL轉運緩衝液。試驗設雙樣本。
5)將細胞培養板置於37℃ CO2培養箱中孵育2小時。
6)轉運實驗結束後，從投藥端(即A→B方向的頂端和B→A方向的基底端)取8μL樣品至72μL轉運緩衝液中，然後加入240μL含內標的終止液終止轉運。從接收端(即A→B方向的基底端和B→A方向的頂端)取80μL樣品至240μL含內標的終止液中，1000rpm下渦旋10分鐘，3,220g下離心30分鐘。取100μl上清液至進樣板，加入100μL超純水混勻，用於LC-MS/MS分析。
7)轉運實驗結束後測量螢光值，用水配製10mM螢光黃儲備液，然後用轉運緩衝溶液稀釋至100μM。往Transwell小室(頂端)中加入100μL螢光黃溶液，基底端加入300μL轉運緩衝溶液，置於37℃的CO2培養箱中孵育30分鐘。從基底端取80μL溶液至96孔板中，在激發波長為485nm及發射波長為530nm下用酶標儀測量細胞螢光值(檢測膜完整性)。
用以下公式計算Caco-2細胞單層膜的螢光值：
LY Leakage={I acceptor×0.3/(I acceptor×0.3+I donor×0.1)}×100%
I acceptor指接收側(0.3mL)的螢光密度，I donor指投藥側(0.1mL)的螢光密度。LY>1.0
表示單層細胞膜緻密性差，相應的結果將從評估中排除。
測定化合物在投藥側和接收側的峰面積。計算化合物的表觀滲透係數(P app，單位：cm/s)和外排比(Efflux ratio,ER)：
P app={V A×[drug] acceptor /(Area×incubation time×[drug] initial donor }
V A為接收端溶液的體積(A→B是0.3mL，B→A是0.1mL)；Area為Transwell-96孔板膜面積(0.143cm2)；incubation time為孵育時間(單位：s)；[drug] acceptor 為接收側藥物濃度，[drug] initial donor 為初始投藥側藥物濃度。
Figure 110121533-A0202-12-0057-91
P app(B-A)為由基底端到頂端的表觀滲透係數；P app(A-B)為由頂端到基底端的表觀滲透係數。
計算得到的本發明化合物的表觀滲透係數和外排比值見表7。
Figure 110121533-A0202-12-0057-92
測試實施例8、本發明化合物對CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4酶活性的抑制作用
本發明化合物對CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4酶活性的抑制採用如下試驗方法測定。
一、試驗材料及儀器
1.人肝微粒體(Corning 452117)
2. Na2HPO4(Sigma SLBZ6180)
3. KH2PO4(Sigma SLBT6559)
4. NADPH(Solarbio 705Y021)
5. NADPH(Solarbio 705Y021)
6.陽性受質雙氯芬酸(Sigma SLBV3438)、右美沙芬(TRC 3-EDO- 175-1)和咪達唑侖(Cerilliant FE01161704)
7.陽性抑制劑磺胺苯吡唑(D.Ehrenstorfer GmbH 109012)、奎尼丁(TCI WEODL-RE)和酮康唑(Sigma 100M1091V)
8. AB Sciex Triple Quad 5500液質聯用儀
二、試驗步驟
1. 100mM磷酸緩衝液(PBS)的配製：稱取7.098g Na2HPO4，加入500mL純水超聲溶解，作為溶液A。稱取3.400g KH2PO4，加入250mL純水超聲溶解，作為溶液B。將A溶液放置在攪拌器上緩慢加入B溶液直到pH值達到7.4配製成100mM的PBS緩衝液。
2.用100mM的PBS緩衝液配製10mM的NADPH溶液。用DMSO稀釋10mM的本發明化合物儲備液得到200×濃度的化合物工作液(6000、2000、600、200、60、20、0μM)。用DMSO稀釋陽性抑制劑儲備液得到200×濃度的陽性抑制劑工作液(磺胺苯吡唑，1000、300、100、30、10、3、0μM；奎尼丁/酮康唑，100、30、10、3、1、0.3、0μM)。用水、乙腈或乙腈/甲醇配製200×濃度的受質工作液(120μM雙氯芬酸、400μM右美沙芬和200μM咪達唑侖)。
3.取2μl 20mg/ml的肝微粒體溶液、1μl受質工作液、1μl化合物工作液和176μl PBS緩衝液，混合均勻，置於37℃水浴中預孵育15分鐘。陽性對照組加入1μl雙氯芬酸、右美沙芬或咪達唑侖工作液代替化合物工作液。同時將10mM的NADPH溶液一起在37℃水浴中預孵育15分鐘。15分鐘後，取20μl NADPH加入到各個孔中，啟動反應，37℃下孵育5分鐘(CYP2C9)、20分鐘(CYP2D6)或5分鐘(CYP3A4)。所有孵育樣品設雙樣本。孵育相應時間後向所有樣本中加入400μl含內標的冰甲醇終止反應。渦旋混勻，3220g、4℃離心40分鐘。離心結束後轉移100μL上清液到進樣板，加入100μL超純水混勻，用於LC-MS/MS分析。
數值經Excel XLfit 5.3.1.3計算得到本發明化合物對CYP2C9、CYP2D6和CYP3A4的IC50值見表8。
Figure 110121533-A0202-12-0058-93
Figure 110121533-A0202-12-0059-94
測試實施例9：化合物對MCF-7異種移植瘤的生長抑制實驗
實驗試劑：
人乳腺癌MCF-7細胞：ECACC-86012803
17β-雌二醇片：Innovative Research of America,Cat No.：SE-121,60-day release,0.18mg/pellet
EMEM培養液：ATCC,Cat No.：30-2003
胎牛血清：Hyclone；Cat No.：SV30087.03
Antibiotic-Antimycotic：Gibco,Cat No.：15240-062
0.25%胰酶-EDTA：Gibco,Cat No.：25200-072
DPBS：Corning,Cat No.：21-031-CVR
基質膠：Corning,Cat No.：354234
實驗方法：
動物資訊：Balb/c裸小鼠，雌性，6-8周，體重約18-22克，動物購自上海靈暢生物科技有限公司，將小鼠飼養在SPF級的環境中，每個籠位單獨送排風，所有動物都可以自由獲取標準認證的商業實驗室飲食和自由飲水。
細胞培養：人乳腺癌MCF-7細胞株體外培養，培養條件為EMEM(細胞培養液)中加入10%胎牛血清，1% Antibiotic-Antimycotic，37℃、5%CO2孵箱。一周兩次用0.25%胰酶-EDTA消化液進行常規消化處理傳代。當細胞飽和度為80%-90%，數量達到要求時，收取細胞，計數。
細胞接種：將0.2ml/(含1×107)MCF-7細胞懸液(DPBS加基質膠，體積比為1：1)皮下接種於每只小鼠的右後背，並於細胞接種前兩天皮下接種17β-雌二醇片。在接種細胞後第6天，依據腫瘤體積隨機分組投藥，分組當天為Day 0。
投藥：化合物的投藥劑量為3mg/kg或10mg/kg，口服投藥(PO)，每天一次投藥(QD)x3周，PO，QDx3周。每組6只小鼠。
腫瘤測量和實驗指標：
每週兩次用遊標卡尺測量腫瘤直徑。腫瘤體積的計算公式為：V=0.5a x b2，a和b分別表示腫瘤的長徑和短徑。每週兩次測量小鼠體重。
化合物的抑瘤療效用腫瘤生長抑制率TGI(%)來評價。
TGI(%)=[(1-(某處理組投藥結束時平均瘤體積-該處理組開始投藥時平均瘤體積)/(溶劑對照組治療結束時平均瘤體積-溶劑對照組開始治療時平均瘤體積)]x100%。
實驗結果如表9所示。
Figure 110121533-A0202-12-0060-95
測試實施例10：化合物對T47D異種移植瘤的生長抑制實驗
實驗試劑：
人乳腺癌T47D細胞：ATCC,HTB-133
17β-雌二醇片：Innovative Research of America,Cat No.：SE-121,60-day release,0.36mg/pellet
RPMI1640培養液：Gibco,Cat No.：22400-089
胎牛血清：Gbico；Cat No.：10099-141C
青鏈黴素(Pen Strep)：Gibco,Cat No.：15240-122
0.25%胰酶-EDTA：Gibco,Cat No.：25200-072
D-PBS(無鈣鎂離子磷酸鹽緩衝液)：Hyclone,Cat.No.：SH30256.01
基質膠：Corning,Cat No.：356237
牛胰島素：上海翊聖，Cat No.：40107ES60
實驗方法：
動物資訊：NPG小鼠，雌性，6-8周，體重約18-22克，動物購自北京維通達生物技術有限公司，將小鼠飼養在SPF級的環境中，每個籠位單獨送排風，所有動物都可以自由獲取標準認證的商業實驗室飲食和自由飲水。
細胞培養：人乳腺癌T47D細胞株體外培養，培養條件為RPMI1640 (細胞培養液)中加入10%胎牛血清，8μg/ml牛胰島素，1% pen-strep，37℃、5%CO2孵箱。一週一次用0.25%胰酶-EDTA消化液進行常規消化處理傳代。當細胞匯合度為80%-90%，數量達到要求時，收取細胞，計數。
細胞接種：將0.1ml/(含1×107)T47D細胞的懸液(DPBS加基質膠，體積比為1：1)皮下接種於每只小鼠的右側腰背部，並於細胞接種前兩天皮下接種17β-雌二醇片。在接種細胞後第29天，依據腫瘤體積隨機分組投藥，分組當天為Day 0。
投藥：陽性藥Fulvestrant(芙仕得®，氟維司群注射液，阿斯利康)的投藥劑量為250mg/kg，皮下注射投藥(SC)，每週一次投藥(QW)x4周，化合物的投藥劑量為3mg/kg或10mg/kg，口服投藥(PO)，每天一次投藥(QD)x4周，PO，QDx4周。每組6只小鼠。
腫瘤測量和實驗指標：
每週兩次用遊標卡尺測量腫瘤直徑。腫瘤體積的計算公式為：V=0.5a x b2，a和b分別表示腫瘤的長徑和短徑。每週兩次測量小鼠體重。
化合物的抑瘤療效用腫瘤生長抑制率TGI(%)來評價。
TGI(%)=[(1-(某處理組投藥結束時平均瘤體積-該處理組開始投藥時平均瘤體積)/(溶劑對照組治療結束時平均瘤體積-溶劑對照組開始治療時平均瘤體積)]x100%。
實驗結果如表10所示。
Figure 110121533-A0202-12-0061-96
測試實施例11：Langendorff離體心臟灌流實驗
實驗試劑：
Glucose(葡萄糖)，General-reagent，目錄號：G2410A
EDTA,Sinopharm，目錄號：10009617
Heparin sodium salt(肝素鈉)，Sinopharm，目錄號：63007131
Sodium pentobarbital(戊巴比妥鈉)，Solarbio，目錄號：P8410
受試化合物：實施例4化合物、實施例8化合物、GDC-9545(CN107108611A表1化合物340，按專利方法製備)、AZD-9833(CN109843888A實例17化合物，按專利方法製備)。
離體心臟的製備：
成年Hartley豚鼠，體重250~300g，戊巴比妥鈉(40mg/kg，i.p.)腹腔麻醉5~10分鐘，麻醉前進行肝素化處理(500U/kg，i.p.)。迅速打開胸腔，將含有部分上腔靜脈和較長主動脈弓的心臟立即從豚鼠胸腔分離，並將其浸入預冷的臺式液中(臺式液配製(mM)：131 NaCl、4.0 KCl、1.8 CaCl2、1.2 MgSO4、11.1葡萄糖、24.9 NaHCO3、1.2 KH2PO4(pH 7.4))，迅速將豚鼠離體心臟主動脈套入langendorff灌流裝置的灌流針並固定，用36.5±1℃ 95% O2-5% CO2飽和的臺式液(pH 7.35±0.05)進行逆向灌流，流速控制在15~20ml/min，保持恒流灌流。記錄電極的兩個位點分別放置在心室外膜的兩側，產生雙極反式心電圖。
電信號記錄：
ECG(Electrocardiography,ECG，雙極心室外膜心電圖)通過心外膜上的一對表面電極記錄，一個電極放置在右心室靠近房室環處，另一個電極放置在左心室表面，調節其位置以能夠獲得一個較大清晰的T波，無關電極放置在主動脈根部。穩定30分鐘後，整個實驗過程各記錄電極的位置都不再調節。
所有的信號通過放大器放大並數位化處理後記錄，採樣速率為1kHz保存在硬碟裡以離線分析。所有的資料都由PowerLab離體心臟系統即時記錄。
實驗方案：
在穩定30分鐘後(穩定30分鐘後的結果作為溶劑陰性對照組結果)，所有符合實驗條件的心臟用含化合物的灌流液進行灌流。同樣的實驗步驟重複三遍，使每一個心臟都經下列遞增濃度(1.1、3.3、10μM)的灌流液灌流。灌流結束後用正常臺式液清洗20分鐘。在竇性心率下採集資料，用於評價受試化合物的作用。
參數分析：
ECG結果顯示了心臟的整體電活動性，下列參數均來自實驗記錄的ECG分析：RR間期、PR間期、QRS波群、QT間期和QTc(Bazett QTc=QT/RR)。
實驗結果如表11所示。
Figure 110121533-A0202-12-0063-97
以上，對本發明的實施方式進行了說明。但是，本發明不限定於上述實施方式。凡在本發明的精神和原則之內，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。

Claims (13)

  1. 式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽：
    Figure 110121533-A0202-13-0001-98
    其中：
    X1、X2、X3、X4獨立地選自CR7或N；
    R7選自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-6元雜環基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基氧基或3-6元雜環基氧基；
    Het選自
    Figure 110121533-A0202-13-0001-99
    、
    Figure 110121533-A0202-13-0001-101
    、
    Figure 110121533-A0202-13-0001-102
    或
    Figure 110121533-A0202-13-0001-103
    ；
    R1、R2、R9獨立地選自氫、OH、F、Cl、Br、I、C1-C6烷基或C2-C8烯基；
    或者，R1、R2與其連接的碳原子共同形成C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被Ra取代；
    R5選自C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被1個或多個選自如下的基團取代：氘、F、Cl、Br、I、CN、OH、OCH3和SO2CH3；
    R6選自H、C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被1個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、CN、OH、OCH3和SO2CH3；
    或者，R1或R2之一與R6及其各自連接的C和N共同形成3-6元雜環基；
    R3選自H、CN、COOH、C(O)ORb、OC(O)Rb、CONH2、C(O)NRbRc、SO2Rb、SO2NRbRc、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6雜環基、C6-C10芳基或C5-C10雜芳基，所述C1-C6烷基、C3-C6環烷基、C3-C6雜環基、C6-C10芳基或C5-C10雜芳基任選被1個或多個Rd取代；
    R4選自H、F、Cl、Br、I、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基或C3-C6雜環基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基或C3-C6雜環基任選被一個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、CN、OH、OCH3和SO2CH3；
    環Q選自C6-C10芳基或5-10元雜芳基，所述C6-C10芳基或5-10元雜芳基任選被1個或多個R8取代；
    R8選自F、Cl、Br、I、OH、CN、COOH、C(O)ORb、OC(O)Rb、CONH2、C(O)NRbRc、NRcC(O)Rb、SO2Rb、SO2NRb、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-6元雜環基、C6-C10芳基或5-10元雜芳基，所述C3-C6環烷基、3-6元雜環基、C6-C10芳基或5-10元雜芳基任選被1個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；
    Ra選自鹵素、OH、CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6環烷基或3-6元雜環基，所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6環烷基或3-6元雜環基任選被鹵素取代；
    Rb獨立選自C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基、3-6元雜環基、C6-C10芳基或5-10元雜芳基；
    Rc獨立選自H、C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基、3-6元雜環基、C6-C10芳基或5-10元雜芳基；
    Rd獨立選自F、Cl、Br、I、OH、CN、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基或3-6元雜環基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基或3-6元雜環基任選被1個或多個選自F、Cl、Br、I或OH的基團取代；
    n為0、1或2；
    m為1、2、3或4；
    p為1或2；
    條件是：(1)當n為0或1時，R1不為H、F或甲基；(2)當m為1或2時，R9不為H。
  2. 如請求項1所述的式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(Ia)化合物或其藥學上可接受的鹽：
    Figure 110121533-A0202-13-0003-104
  3. 如請求項1或2所述的式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述Het選自
    Figure 110121533-A0202-13-0003-105
    ，所述R1、R2、R5、n如請求項1所定義。
  4. 如請求項3所述的式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述Het選自
    Figure 110121533-A0202-13-0003-106
    ，其中R1、R2與其連接的碳原子共同形成C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被Ra取代，所述Ra、R5和n如請求項1所定義。
  5. 如請求項1-4任一項所述的式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述Het選自
    Figure 110121533-A0202-13-0003-107
    ，其中R1或R2與R6以及各自連接的C和N一起形成3-6元雜環基。
  6. 如請求項1或2所述的式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述Het選自
    Figure 110121533-A0202-13-0004-108
    或
    Figure 110121533-A0202-13-0004-109
    ，所述R5和p如請求項1所定義。
  7. 如請求項6所述的式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述Het選自
    Figure 110121533-A0202-13-0004-110
    ，進一步優選自
    Figure 110121533-A0202-13-0004-111
    ，其中所述R5如請求項1所定義。
  8. 如請求項1所述的式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(II)化合物或其藥學上可接受的鹽：
    Figure 110121533-A0202-13-0004-112
    其中：
    Y選自NR10、O或S；
    R10選自H、C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基，所述C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C4炔基、C3-C6環烷基或3-6元雜環烷基任選被1個或多個選自如下的基團取代：F、Cl、Br、I、CN、OH、OCH3和SO2CH3；
    X1、X2、X3、X4、Het、R3、R4和R6如請求項1所定義；
  9. 如請求項1所述的式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(III)化合物或其藥學上 可接受的鹽：
    Figure 110121533-A0202-13-0005-113
    其中X1、X2、X3、X4、Het、R3、R4和R6如請求項1所定義。
  10. 如請求項1所述的式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽選自式(IV)化合物或其藥學上可接受的鹽：
    Figure 110121533-A0202-13-0005-120
    其中X1、X2、X3、X4、Het、R3、R4、R6和R8如請求項1所定義。
  11. 如請求項1所述的式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述化合物選自如下結構之一：
    Figure 110121533-A0202-13-0005-115
    Figure 110121533-A0202-13-0006-116
    Figure 110121533-A0202-13-0007-117
  12. 一種藥物組合物，所述組合物包含請求項1至11任一項的化合物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體或賦形劑。
  13. 一種預防或治療雌激素受體相關性疾病的方法，所述方法包括向有此需要的對象施用預防或治療有效劑量的請求項1至11任一項的化合物或其藥學上可接受的鹽或者請求項12所述的藥物組合物，其中所述雌激素受體 相關性疾病優選為腫瘤。
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