TW201791B - - Google Patents

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L017&1 A 6 B 6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（/ ) 發明背署 使用培餐基以培餐黴生物為已知技蕕。一廣泛分類的 培蓍基為已知，使用特別培養基通常可決定微生物是否 可生長在待殊的琛境。培養基通常被設計成提供所有的 營養物微生物在其中成長時可使用，及可以液態，通常 為肉湯，或固體，通常是謬》固饑的培餐基有待別用途 因為它們可被使用以分離微生物混合物》 在正常用途，培餐基是滅鋪的（殺掉撖生物污染）及 然後放入滅菌盤或容器内，其然後被儲存於無菌琛境以 確保没有微生物污染發生。滅阖是很重要，因其從培養 基移除所有的競爭微生物是根本以確保任何觀察到生長 只有從放入培養基表面的撤生物的生長。 使用滅菌的種類主要是選擇及其來源。當由熱滅菌（ 高熱壓蒸氣滅菌）使用於很多狀況，但不是所有的培養 基可直接如此處理。待別是，高溫通常會使很多蛋白質 及其它存於培養基的化合物變性，使微生物的成長無效 〇 使用於此技轻的其他滅菌技術為把培養基暴露於游離 輻射以殺死任何微生污染物為可能。造由第一以製備培 養基方法完成，調配入適當容器（例如盤子），及暴露 包裝好的培養基以游離照射適當的強度及時間以播得滅 0的培養基包。這包，被滅薗，可儲存於更長的時間而 不會變壊。 -3 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂 本紙張尺度遑用中國國家標準(CNS)甲4規格C210X297公龙) Λ 6 B 6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（> ) 當如此的滅黼法被使用於一些申請菜，包括醫用儀器 的滅豳，它並不廣泛使用於培餐基的滅适主要是因 為游離輻射加強了分解産物於培養内的形成，其可使微 生物的生長變壊，更進一步，在很多例子暴露於游_照 射導致固鼸瓊脂成份變質，認定是如此培餐基對其所申 讅太軟》為了疸倕理由，高熱蒸氣滅菌為逭種培餐基的 滅菌方法。 Eisenberg等在美國專利4,071,412敍逑生産培養基以 輻射滅薗的方法，以加入稱之"輻射保嫌剛的組成物， 以預防産品變質形成毒性物質。造些輻射保護劑的特別 例子為指示劑，維它命，及酵素，所有均可預防形成某 些毒性産物於韁射照射時《這些專利報導了一些待殊的 培養基在加入所述輻射保護劑下大大增加了安定性。 然而，使用如此的輻射保護劑並不適合於所有的培餐 基。例如，使用在環境取樣裝置如接味盤（例如，RODAC ® 盤）必需依然為固體及保持其功能。使用接觸盤以獲得 微生物污染的搛品在不同黏於一室、處理線，或其它環 境。在其使用，接觸盤的蓋子被移開，及培養基的表面 被壓以取樣。這盤然後被從表面移開，再Μ上，及培育 一段時間，在目光檢視出現豳落後，其為指出有橄生物 污染。菌落可被檢査，計算，鑑定，等。接觭盤也可被 使用取空氣的微生物污染，使用待別設計的裝置為了适 値申讅。 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本S) 裝_ .?τ- 線_ 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210X297公；¢) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Λ 6 _Π_6_ 五、發明説明（4 ) 不幸地，當道種盤子暴露於游離軀射，凝謬及表面的 整體變成太軟。凝謬強度的損失，使培餐基為接觸的應 用變成無效》 更進一步，如此盤子常包含中和消毒劑的物質通常發 現於取樣的表面。中和遒些消毒«ί是必需的，如同它們 存在可抑制撤生物生長。如此化合物通常輿酵素作用干 擾如使用在’41 2專利，以接觭盤使這些方法無效。 存在一真實的需要，因此，為了環境取樣培餐基其可 由游離輻射消毒，其將維持它們凝膠強度及不産生赛性 物質其將干*徹生物生長。 發明槪連 因此本發明的目標以呈視適合的培餐基以使用在琛境 取樣裝置其可由游離輻射消毒滅®。本發明更進一步的 目標是，呈視一種製備單一劑型滅菌培養基方法，以使 用在接觴盤。 上述及相期的目樣由本發明培餐基逹成。這些培養基 包括黃豆酪朊消化瓊脂（例如Trypticase®黃瓊脂由 Becton Dickinson Microbiology公司出産）包括添加 物其中和消毒劑（較佳地卵磷脂及聚山梨酸鹽80)。此 型瓊脂如Trypticase®黃瓊脂與卵磷脂及聚山梨酸》80 為Becton Dickinson所出産。已發現逭些培餐基由添加 酵母抽取物，瓊脂及調整PH至7 . 4的改良，結果培餐基 可由游離輻射滅鏟及仍然可保有生長及保持谋意的凝醪 -5- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

,3T 本紙張尺度近用中國Β家標準(CNS)甲4規格(210X297公婕) L〇mi 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Λ 6 Π 6_ 五、發明説明（4 ) 強度。更進一步的預期其他常使用於琛塊取樣裝置如 Lethee η瓚脂及標準方法瓊脂含卵磷脂及聚山梨酸鹽80 ，可被認為以相同方法改良是檷定的。 如此培餐基，當由游離輻射滅菌，發現有館存至少4 健月安定，支持撖生物生畏及新鮮培餐基，及在如此储 存由高熱壓滅豳的培餐基。 本發明的詳細說明 本發明的培餐基包括改良的黃豆酪朊消化瓊脂，其包 含中和消赛_的添加劑（較佳的卵磷脂及聚山梨酸鹽80 )β這個改良可由添加酵母抽取物，瓊脂，及諏整ΡΗ值 至7 . 4而達成。 加入的酵母抽取物為普通酵母抽取物，及加入之濃度 為每升3 - 1 0克，較佳為每升4 - 8克，及最佳為每升5克， 瓊脂（較佳為細®學等的瓊脂）為普通（但不是必需） 以相同之澳度加入，及較佳以每升5克加入。pH值最好 調至7.4,但發現pH值的範園7.2-7.6也有相同的結果。 使用0.1N HaOH或Na2 C03調整pH值為較佳。Na2 C03 的待別優點在於其可與乾培餐基混合在凝膠製備前，避 免分離中和步驟的霈要〇 這些改良培餐基可由高熱壓消毒滅籣，但其亦可由以 游離輻射照射消赛。較佳使用的游離輻射是伽瑪輻射， 但使用其他型的伽瑪輻射亦可例如X -光及適當強度的霄 子束，唯一的規格是適當強度輜射在合理的一段時間内 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本許') 訂 線- 本紙張尺度边用中國國家標準（CNS)甲4規格(210x297公址) 經濟部屮央標準局員工消費合作社印製 Λ 6 __B6_ 五、發明説明（r) 達成滅豳作用β較佳的伽瑪照射瀝為絶（Cs/Μ )及鈷 (Co60 ), 在正常使用，製備的培餐基被倒入琛塊取樣装置，較 佳的接《盤其是密閉及封成一包β逭包然後暴露於游離 輻射《在逋偁方法，一澝潔消毒包包括單一裝置，或多 種裝置，獲得及逭包可被儲存直到需要使用。當室溫餹 存是可能，較佳是裝置可儲存於2-8 °C,以增大其儲存 期。發現培餐基，因此被滅菌，可儲存在埴匍溫度大約 4掴月而不會變質。 遒偏裝置，包括滅0培餐基，可被使用於所需之申請 。本發明較佳的主釅為逭裝置是接臁盤。在正常使用， 盤蓋被移開，培餐基的表面置於或暴露於所取樣的環境 。在移開盤之後立即，蓋子被換掉，及這条統被培養以 測定是否有撤生物生長。發現這發明的盤沒有存在對大 多數榭生物有意義少的生長當與高歷熱滅菌培養基比較 時。更進一步，本發明的培養基將中和於被取樣表面的 消毒劑。因此，這發明的盤可被使用於所有的應用其接 觸盤將被正常使用的。&L 下列例子證實某些本發明較佳本臛，但不用來證實所 有的本發明實質β 例1 :添加果的卜h蛉 評估不同的添加劑及不同量之添加薄（於培餐基的效果 -7 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本P') 本紙張尺度逍用中國國家樣準（CNS)甲4規格（210X297公;¢) Λ 6 B6

五、發明説明（fe ) ，一条列的寶驗可使用 Becton Dickinson Trypticase® 含勝及聚山梨酸膳，及通氣化氫醻 ，或酵母抽取物及細皤學等级瓚脂的3外添加在每 一箱實驗，去水的TSA_LP的製備是根鐮標籤說明及由添 加添加薄改良。pH然後以0.1N HaOH被鼸至7.4β 培餐基置於滅艫盤，其被慝用，暴露於Cow射源的伽 瑪射線，及培餐與金黄色葡萄球69ATCC 2 5 9 2 3或釀膜葡 萄球豳ATCC 19615使用0.1毫升有活細胞預期可産生30-300 CFU(菌落形成單位）。毎—餹澜試培餐2盤及其結 果以平均CFU/盤表示及平均豳落直徑以毫米（*β )表示 ，在1 〇 - 2 4小時於3 5 °C培餐後。結果列於表I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本3)

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -8 一 本紙張尺度遑甩中國B家樣準(CNS)甲4規格(210X297公；《·) om· Λ 6 Β6 五、發明説明（7 m. 丄 添 屮於潘加麵奮期的钴果 结 果 轘射 劑量 *脂其它 金黄色葡菊球繾 釀膜葡萄球豳

CFU 大小

CFU 大小 an (M r a d) (g/L ) 無 m 0 無 192 2 . 1 95 0 過 氣 化 氫 酶 232 2 . 2 7 7 0 酵 母 抽 取 物 2 12 2 . 3 82 8 3 無 17 3 1 . 6 96 3 過 氣 化 氫 m 1 90 1.8 85 3 m 母 抽 取 物 170 1 . 8 6 9 無 17 9 1.0 30 過 氣 化 氫 酶 2 2 5 1 . 3 10 0 酵 母 抽 取 物 196 1 . 4 9 5 <0.3 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本S ) 訂 線-

JL 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 a啓始瓊脂濃度（沒有添加_)為15g/L b過氣化氫酶加至100 »g/L濃度 c酵母抽取物加至5 g/L濃度 如結果所示，在零及低（0.8 Mrad)輻射_量

C FU 並未由任何添加蘭有意義加強。然而，在3.2 Mrad劑董 本紙張尺度迤用中β B家標準(CNS)甲4規格(210X297公《) Λ 6 _D_6_ 五、發明説明（S ) ，酵母抽取物及遇氣化氫酶存在加強恢愎（CFU)是在與 只有瓚脂比較下。更進一步，在所有的三個条列，含酵 母抽取物的培餐基存在加強生長，為較大平均菌落由釀 牖葡萄球豳證實。 M2. 使用不囿献株 在造一条列的實驗，二盤純TSA-LP及TSA-LP由加入5 g/L添加瓊脂及酵母抽取物及調整pH至7.4以0.1N (JaOH (改良TSA-LP)的輿列於例1的微生物培餐。，其結果列 於表Π ^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫衣叚) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -10- 本紙張尺度遍用中國Η家標準(CNS)甲4規格(210X297公*) Λ 6 η 6 五、發明説明（9 )

表 II a?自 TSA-LP TSA-LP 無照射 照射a CFU Μ落大小 CFU ®落大小 CFU菌落大小 生物臞 (丨） (•B ) (») 枯草桿® (植物的） ATCC 6633 65 3 . 7 52 5 . 9 31 4 . 4 金黃色蕕萄 球菌 A_TCC 2 5 9 2 3 55 1 . 9 57 1.9 47 1 . 8 腸球菌 ATCC 29212 65 1 . 1 65 1 . 3 69 1 . 3 鼠傷寒桿_ ATCC 13311 103 2.5 98 2 · 8 105 2.6 藤黃微球豳 ATCC 9341 48 0.8 4 7 0.8 61 0 . 9 白色念珠菌 BDMS 001 7 2 . 3 5 1 . 9 6 1 . 9 釀膿葡萄球菌 ATCC 19615 69 0 . 7 7 1 1.2 66 1 . 0 綠膿桿薗 ATCC 10145 140 2 . 2 127 2.1 122 1.9 黑麴_ ATCC 16404 生長 生長 生長 註 (請先閲讀背面之注意事項再場寫本艮) 裝- ΐτ. 經濟部中央標準局員工消t合作社印製 3 由 Cs/37 射源 1 · 5 Mrad -11- 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲<1規格(210x297公¢) ιοιηι. Λ 6 _ B6_ 五、發明説明（I c) 如表所示，恢愎（CFU)及生長（大小）可比較於照射 與非照射培養基，除了枯草捍豳（植物的）其為下降。 因此，改良的TSA-LP可被使用以支持廣泛微生物生長。 第二糸列的實驗被完成是以比較撖生物在相同培養基 儲存4摘月於2-8 °C與新鮮製備的TSA-LP比較。其结果 列於表m。 (請先閱讀背面之注意事項4填寫本玎) 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 -12- 本紙張尺度逍用中國國家樣準(CKS>甲4規格(210x297公逄) οι 五、發明説明（"） 表 m Λ 6 Β6 經濟部屮央標準局貝工消費合作社印製

儲存培着# 新鮮TSA-LP TSA-LP 改良 mmm TSA-LP 照 射3 生物體 CFU 菌落大小 («Β ) CFU 鼸落大小 (iBIB ) CFU菌落大小 (η) CFU薗落大小 (ηη) $草捍菌 (¾物的） ATCC 6633 68 2.2 21 1.4 26 2.5 57 2.9 枯草捍ϋ (孢子的） ATCC 6633 280 1.9 283 2.3 263 3.3 243 3.1 金黃色《萄 球菌 ATCC 25923 64 1.8 67 1.6 72 1.8 65 1.6 緣膿桿菌 ATCC 10145 80 2.0 78 3.0 81 2.6 69 2.5 鼠傷寒捍_ ATCC 13311 80 2.9 80 2.4 76 2.5 88 2.5 釀膜涵萄球薗 AfCC 19615 70 0.8 77 0.6 86 1.0 80 1.2 白色念珠菌 BDMS 001 425 0.9 335 0.7 375 0.8 322 0.7 腸球_ ATCC 29212 43 1.5 44 1.3 43 1.7 63 1.3 藤黃微球豳 ATCC 9341 480 0.8 475 0.7 458 0.8 480 0.7 黑麴_ ATCC 16404 生長 生長 生長 生長 註a由Cs〃7射源的1.5Mrad b儲存4艟月2-8°C -13- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS>甲4規格（210x297公龙) Λ 6 B 6 五、發明説明（I >) 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 如 表 所 示， 餡 存 的 培 餐 基 有 較 大 恢 復 及 大 小 > 除 了 枯 草 桿 菌 的 檀物 細 胞 > 當 照 射 時 其 真 實 表 示 有 意 義 增 加 恢 愎 〇 例 3 中和故力 四 级 銨 化合 物 的 中 和 效 力 由 使 用 Ho f f 釅a η η 及 Phil 1 i PS 試 驗 測 定 (Ann N .Y • a c a c 1 Ac i . 53第5 9- 65頁 ) 0 簡 單 説 f 盤 以 金黃 色 m m 球 菌 AT C C 6 5 3 8 9 培 養 t 及 紙 盤 ( 12 毫 米 直 徑 )以 0 . 08 毫 升 苄 氛 溶 液 9 於 濃 度 8， 4 » 2， 1 » 0 . 5或0 .2 5 B g / B 1 置 於 表 面 〇 每 一 盤 包 括 3 値 不 同 m 度 的 小 圖 洞 及 每一 値 濃 度 測 試 於 3 個 盤 〇 在 2 4小 時 後 培 餐 在 2 5°C > 每 一値 抑 制 區 大 小 被 测 定 〇 使 用 直 線 迴 歸 ( 對 數 港 度 與 區 直徑 呈 直 線 關 係 ) > 需 要 濃 度 以 生 長 抑 制 區 大 小 被 計 算 出； 這 是 中 和 能 力 於 其 結 果 列 於 表 IV 〇 表 IV 中 和 效 能 培 養 基 照 射 a 新 鮮 儲存 (» g / · 1 ) TSA- L P 無 0 .2 5 5 0 .2 34 改 良 TS A- LP 無 0 .2 5 3 0 .2 6 2 改 良 TS A- L P 有 0 .2 6 4 0 • 28 1 a 由 C s /i7射源的1 .5 Mr ad b 儲 存 於2 - 8°C 4値月 -14- (請先閱讀背面之注意事項洱填寫本F') 本紙張尺度遑用中國國家楳準(CNS)甲4規格(210X297公釐) Λ 6 B6 五、發明説明（Μ) 如 表 所 示， 所 有 的 培餐 基 存 在 相 似 結 果· 指 出 照射 遇 培 養 基 存 有輿 無 照 射 培餐 基 的 微 生 物 生 長。 例 4 皤皤狳麻 凝 m 強 度由 St ο 1 of f方法澜度 (F is he r y 1 e a f 1 et 3 0 6 美 國 内 政部 ) 〇 結 果列 於 表 V 表 V 凝 膠 強 度 培 餐 基 照射s a 新 鮮 儲存b (ffl g / B 1 ) TS Α- LP 無 56 9 g/ cm 2 54 7 g / C 2 改 良 TS A- L P 無 80 8 g/ cm 2 84 9 g / c ffl 2 改 良 TS A- LP 有 6 1 8 g/ cm 2 59 3 g / c B 2 IL a 由 C s β射源的1 .5Hr ad b 儲 存 4個 月 2- 8°C 如 表 所 示， 改 良 的 TS A- L P有 較 占· 闻 凝 腰 強度 比 標 準（ 新 鮮 ) 培 養 基〇 在 照 射 後， 改 良 的 培 餐 基 其凝 謬 強 度與 標 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本3) 裝- 訂 線_ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 準的相比較。 很明顯的，很多的改良及本發明的變異在此可逹成而 沒有分開其精神與其範_。所述的待別實臞以實例表示 及本發明只有以所附的申誚専利範園限制》 -15- 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS}甲4規格(210X297公世)

Claims (1)

1. 修Λ補充 Α7 Β7 C7 D7 六、申請專利範圍 第81100350號「適合接觭盤取樣之浮離照射可滅菌培養介 質」專利案 （81年12月修正） 在接觸盤的撤生 加劑以中和消毒 效量瓊脂及酵母 可由游離輻射滅 凝_強度；其中 是卵磷脂及聚山 個存在濃度為3 圍第1項的撤生 物培餐基，其包括瓊脂及 劑，改良之處包括在含所 抽取物，富pH為7. 2〜 菌及雒持它的能力以雒持 瓊脂為黃豆酪朊消化瓊脂 梨酸鹽80 ;其中瓊脂及酵 〜10克/升。 物培餐基，其中瓊脂為 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 1. 一偏適於使用 一種或多種添 述培養基的有 7 . 6 ，培養基 撤生物生長與 :其中添加劑 母抽取物每一 2. 如申請專利範 Letheen 瓊脂 3. 如申諳專利範 準方法瓊脂。 4. 如申請專利範 菌學级瓊脂。 5. 如申諳專利範圍第1項的微生 母抽取物每一個存在濃度為5 圍第1項的撤生 C03調整。 圍第1項的微生物培餐基，其中pH是7 圍第1項的撇生物培養基，其中瓊脂為標 圍第1項的撤生物培養基，其中瓊脂為細 (請先閱讀背面之;ίί·事項再塡寫太頁) 裝 線 6. 如申請專利範 加 NaOH 或 Ha: 7. 如申諳專利範 物培養基，其中瓊脂及酵 克/升。 物培養基，其中pH是以添