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TW201717956A - 羥基嘌呤類化合物的醫藥用途 - Google Patents

羥基嘌呤類化合物的醫藥用途 Download PDF

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TW201717956A
TW201717956A TW105135042A TW105135042A TW201717956A TW 201717956 A TW201717956 A TW 201717956A TW 105135042 A TW105135042 A TW 105135042A TW 105135042 A TW105135042 A TW 105135042A TW 201717956 A TW201717956 A TW 201717956A
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南京明德新藥研發股份有限公司
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Abstract

本發明公開了一系列羥基嘌呤類化合物在製備治療或預防肝病藥物中的應用，具體公開了式(Ⅰ)所示化合物、其互變異構體或其藥學上可接受的鹽在製備治療肝病藥物中的應用。□

Description

羥基嘌呤類化合物的醫藥用途
本發明涉及一系列羥基嘌呤類化合物在製備治療肝病藥物中的應用，具體涉及式(I)所示化合物、其互變異構體或其藥學上可接受的鹽在製備治療肝病藥物中的應用。
磷酸二酯酶(PDE)催化水解環化核苷酸cGMP和cAMP，通過控制這兩個重要的二級信號因子的分子內濃度調控各種生理反應。環化核苷酸cGMP和cAMP分子內的調控異常是導致許多疾病的原因，現在已經有多個藥物通過抑制PDE活性來改善和治療疾病，如PDE5抑制劑用於肺動脈高壓，PDE4抑制劑用於銀屑病引起的關節炎。目前已知的磷酸二酯酶基因共有十一個大類，每一類又可以表達若干亞型，總共有超過100 種PDE亞型。不同的亞型具有不同的結構，不同的組織分布，對環化核苷酸cGMP和cAMP的活性也有很大的不同，調控的生理功能也是千差萬別。
PDE2磷酸二酯酶可以催化水解環化核苷酸cGMP和cAMP，同時cAMP活性受cGMP調控，對於細胞內的cGMP 和cAMP功能平衡起關鍵作用。PDE2在人體組織中廣泛表達，分布主要是心臟、中樞神經系統、肝臟、腎上腺、內皮細胞、和血小板等。PDE2參與調節各項生理活性，如中樞的學習、記憶和認知等過程，維持心臟、平滑肌和內皮細胞的基本節律、內皮細胞的通透性、調節炎症反應。PDE2基因敲初小鼠直接導致胚胎死亡。通過抑制PDE2活性可能用於各種中樞，心血管疾病，和控制炎症反應。
多種天然和合成的嘌呤類化合物的非選擇性PDE抑制活性很早就被發現，如咖啡因，茶鹼，己酮可可鹼等。己酮可可鹼（PDE2活性）臨床上批准用於周邊血管諸塞造成的下肢跛行，主要作用是降低血液黏度，提高紅細胞變形，抑制血小板凝聚等。新型的高選擇性PDE2抑制劑也有報導用於控制內皮細胞的分裂和血管再生，和改善中樞認知障礙。但總體新型的選擇性PDE2抑制劑的開發和應用還非常有限，發現和應用新型PDE2抑制劑具有廣闊的前景。
腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF‑α）是一種具有多種生物學活性的細胞因子，對多種疾病特別是免疫和炎症相關的疾病的發生、發展及治療具有重要影響。TNF‑α主要由單核細胞和巨噬細胞系産生，參與機體的免疫調節和細胞因子網絡協調。正常情况下，TNF‑α對免疫防禦和免疫監督起著重要作用，但在某些情况下却有不良作用。研究顯示，TNF‑α過量表達可誘導促炎細胞因子如白介素1（interleukon‑1，IL‑1）、IL‑6等的表達、增加內皮細胞通透性、上調黏附分子表達、激活中性白細胞和嗜酸細胞，並且誘導骨滑膜細胞和軟骨細胞分泌急性期物質和組織降解酶等促進炎症的發生。這些病理反應在許多免疫介導的炎症性疾病（Immune‑mediated inflammatory diseases，IMID）的發生發展中起著非常重要的作用，如風濕性關節炎（rheumatoid arthritis，RA）、牛皮癬關節炎(psoriatic arthritis，PsA)、僵直性脊椎炎(ankylosing spondylitis，AS)、炎症性腸炎(inflammatory bowel disease，IBD)、幼年型慢性關節炎（juvenile chronic arthritis，JCA）以及血管炎(vasculitis)等。研究表明，TNF‑α是以上多種IMID的理想靶標，同時對於一些由於長期慢性炎症損傷造成的疾病，如脂肪肝炎、慢性阻塞性肺炎等，使用TNF‑α抑制藥物（TNF‑α inhibitors）來中和過量的TNF‑α，也是有效的防治和治療途徑。TNF‑α單抗藥物在臨床上已經證明抑制TNF‑α是非常有效的治療上述炎症相關疾病的手段。PDE2從機理上可以調控TNF‑α的表達，因此可以通過調節PDE2活性了控制TNF‑α的水平，從而可以實現控制炎症反應。
本發明提供式(I)所示化合物、其互變異構體或其藥學上可接受的鹽在製備治療或預防肝病藥物中的應用，(I) 其中，可將結構單元替換爲，具體替換爲；L11 選自空、C(R)( R’)；R 、R’分別獨立地選自H、鹵素、OH、NH2 、CN、任選被取代的1～6元烷基或雜烷基；任選地，R 、R’可以環化成3-6元環烷基、雜環烷基；A爲空，或選自任選被取代的環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基；L12 選自任選被取代的1～6元烷基或雜烷基；R1 選自任選被取代的1～6元烷基、3-6元環烷基或雜烷基；“雜”代表N、O、S、C(=O)、S(=O)、S(=O)2 ，每個基團上雜原子的數目選自1、2、3或4。
本發明的一些方案中，上述肝病選自非酒精性脂肪肝和肝纖維化。
本發明的一些方案中，上述R、R’、A、L12 、R1 中取代基分別獨立地選自鹵素、OH、NH2 、CN、任選被取代的1～6元烷基、3-6元環烷基或雜烷基，每個基團取代基的數目分別獨立地選自1、2或3。
本發明的一些方案中，上述R、R’、A、L12 、R1 中取代基分別獨立地選自鹵素、CF3 、CN、OH、Me、Et、正丙基、異丙基、環丙基、、。
本發明的一些方案中，上述R、R’分別獨立地選自H、Me、CF3 、Et。
本發明的一些方案中，上述L11 選自、、、、、、。
本發明的一些方案中，上述A選自任選被取代的：3～12元環烷基或雜環烷基、5～12元芳基或雜芳基。
本發明的一些方案中，上述A選自任選被取代的：環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環氧戊基、苯基、吡啶基、吡嗪基、惡唑基、異惡唑基、噻唑基、雙環[1.1.1]戊烷，或選自由上述基團中任意兩個組成的二聯環基、螺環基或並環基。
本發明的一些方案中，上述A選自任選被取代的：、、、、、、、、、、、、、、。
本發明的一些方案中，上述A選自、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、。
本發明的一些方案中，上述L12 選自亞甲基、、、、、。
本發明的一些方案中，上述R1 選自Me、CHF2 、CF3 、Et、CH2 CF3 、異丙基、、環丙基、、、、。
本發明選自下式化合物在製備治療或預防肝病藥物中的應用： ； ； 。
進一步，本發明選自下式化合物在製備治療或預防肝病藥物中應用： 。
相關定義。
除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情况下不應該被認爲是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。當本文中出現商品名時，意在指代其對應的商品或其活性成分。
這裡所採用的術語“藥學上可接受的”，是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們在可靠的醫學判斷的範圍之內，適用於與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或並發症，與合理的利益/風險比相稱。
術語“藥學上可接受的鹽”是指本發明化合物的鹽，由本發明發現的具有特定取代基的化合物與相對無毒的酸或鹼製備。當本發明的化合物中含有相對酸性的功能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足够量的鹼與這類化合物的中性形式接觸的方式獲得鹼加成鹽。藥學上可接受的鹼加成鹽包括鈉、鉀、鈣、銨、有機氨或鎂鹽或類似的鹽。當本發明的化合物中含有相對鹼性的官能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足够量的酸與這類化合物的中性形式接觸的方式獲得酸加成鹽。藥學上可接受的酸加成鹽的實例包括無機酸鹽，所述無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氫根，磷酸、磷酸一氫根、磷酸二氫根、硫酸、硫酸氫根、氫碘酸、亞磷酸等；以及有機酸鹽，所述有機酸包括如乙酸、丙酸、異丁酸、馬來酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸和甲磺酸等類似的酸；還包括氨基酸（如精氨酸等）的鹽，以及如葡糖醛酸等有機酸的鹽（參見Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science 66: 1-19 (1977))。本發明的某些特定的化合物含有鹼性和酸性的官能團，從而可以被轉換成任一鹼或酸加成鹽。
優選地，以常規方式使鹽與鹼或酸接觸，再分離母體化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母體形式與其各種鹽的形式的不同之處在於某些物理性質，例如在極性溶劑中的溶解度不同。
本文所用的“藥學上可接受的鹽”屬本發明化合物的衍生物，其中，通過與酸成鹽或與鹼成鹽的方式修飾所述母體化合物。藥學上可接受的鹽的實例包括但不限於：鹼基比如胺的無機酸或有機酸鹽、酸根比如羧酸的鹼金屬或有機鹽等等。藥學上可接受的鹽包括常規的無毒性的鹽或母體化合物的四級銨鹽，例如無毒的無機酸或有機酸所形成的鹽。常規的無毒性的鹽包括但不限於那些衍生自無機酸和有機酸的鹽，所述的無機酸或有機酸選自2-乙醯氧基苯甲酸、2-羥基乙磺酸、乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氫根、碳酸、檸檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富馬酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、氫碘酸鹽、羥基、羥萘、羥乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水楊酸、硬脂酸、亞乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、對氨基苯磺酸、硫酸、單寧、酒石酸和對甲苯磺酸。
本發明的藥學上可接受的鹽可由含有酸根或鹼基的母體化合物通過常規化學方法合成。一般情况下，這樣的鹽的製備方法是：在水或有機溶劑或兩者的混合物中，經由游離酸或鹼形式的這些化合物與化學計量的適當的鹼或酸反應來製備。一般地，優選醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈等非水介質。
除了鹽的形式，本發明所提供的化合物還存在前藥形式。本文所​​描述的化合物的前藥容易地在生理條件下發生化學變化從而轉化成本發明的化合物。此外，前體藥物可以在體內環境中通過化學或生化方法被轉換到本發明的化合物。
本發明的某些化合物可以以非溶劑化形式或者溶劑化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶劑化形式與非溶劑化的形式相當，都包含在本發明的範圍之內。
本發明的某些化合物可以具有不對稱碳原子（光學中心）或雙鍵。外消旋體、非對映異構體、幾何異構體和單個的異構體都包括在本發明的範圍之內。
除非另有說明，用楔形鍵和虛綫鍵（）表示一個立體中心的絕對構型，用表示一個立體中心的相對構型。當本文所述化合物含有烯屬雙鍵或其它幾何不對稱中心，除非另有規定，它們包括E 、 Z 幾何異構體。同樣地，所有的互變異構形式均包括在本發明的範圍之內。
本發明的化合物可以存在特定的幾何或立體異構體形式。本發明設想所有的這類化合物，包括順式和反式異構體、(-)- 和 (+)-對映體、(R )- 和 (S )-對映體、非對映異構體、(D )-異構體、(L )-異構體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對映異構體或非對映體富集的混合物，所有這些混合物都屬於本發明的範圍之內。烷基等取代基中可存在另外的不對稱碳原子。所有這些異構體以及它們的混合物，均包括在本發明的範圍之內。
可以通過的手性合成或手性試劑或者其他常規技術製備光學活性的(R )-和(S )-異構體以及D 和L 異構體。如果想得到本發明某化合物的一種對映體，可以通過不對稱合成或者具有手性助劑的衍生作用來製備，其中將所得非對映體混合物分離，並且輔助基團裂開以提供純的所需對映異構體。或者，當分子中含有鹼性官能團（如氨基）或酸性官能團（如羧基）時，與適當的光學活性的酸或鹼形成非對映異構體的鹽，然後通過本領域所公知的常用方法進行非對映異構體拆分，然後回收得到純的對映體。此外，對映異構體和非對映異構體的分離通常是通過使用色譜法完成的，所述色譜法採用手性固定相，並任選地與化學衍生法相結合（例如由胺生成氨基甲酸鹽）。
本發明的化合物可以在一個或多個構成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素標記化合物，比如氚（3 H），碘-125（125 I）或C-14（14 C）。本發明的化合物的所有同位素組成的變換，無論放射性與否，都包括在本發明的範圍之內。
術語“藥學上可接受的載體”是指能够遞送本發明有效量活性物質、不干擾活性物質的生物活性並且對宿主或者患者無毒副作用的任何製劑或載體介質代表性的載體包括水、油、蔬菜和礦物質、膏基、洗劑基質、軟膏基質等。這些基質包括懸浮劑、增黏劑、透皮促進劑等。它們的製劑爲化妝品領域或局部藥物領域的技術人員所周知。關於載體的其他信息，可以參考Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005)，該文獻的內容通過引用的方式併入本文。
術語“賦形劑”通常是指配製有效的藥物組合物所需要載體、稀釋劑和/或介質。
針對藥物或藥理學活性劑而言，術語“有效量”或“治療有效量”是指無毒的但能達到預期效果的藥物或藥劑的足够用量。對於本發明中的口服劑型，組合物中一種活性物質的“有效量”是指與該組合物中另一種活性物質聯用時爲了達到預期效果所需要的用量。有效量的確定因人而異，取决於受體的年齡和一般情况，也取决於具體的活性物質，個案中合適的有效量可以由本領域技術人員根據常規試驗確定。
術語“活性成分”、“治療劑”，“活性物質”或“活性劑”是指一種化學實體，它可以有效地治療目標紊亂、疾病或病症。
“任選”或“任選地”指的是隨後描述的事件或狀况可能但不是必需出現的，並且該描述包括其中所述事件或狀况發生的情况以及所述事件或狀况不發生的情况。
術語“被取代的”是指特定原子上的任意一個或多個氫原子被取代基取代，包括重氫和氫的變體，只要特定原子的價態是正常的並且取代後的化合物是穩定的。當取代基爲酮基（即=O）時，意味著兩個氫原子被取代。酮取代不會發生在芳香基上。術語“任選被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有規定，取代基的種類和數目在化學上可以實現的基礎上可以是任意的。
當任何變量（例如R）在化合物的組成或結構中出現一次以上時，其在每一種情况下的定義都是獨立的。因此，例如，如果一個基團被0-2個R所取代，則所述基團可以任選地至多被兩個R所取代，並且每種情况下的R都有獨立的選項。此外，取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會産生穩定的化合物的情况下才是被允許的。
當一個連接基團的數量爲0時，比如-(CRR)0 -，表示該連接基團爲單鍵。
當其中一個變量選自單鍵時，表示其連接的兩個基團直接相連，比如A-L-Z中L代表單鍵時表示該結構實際上是A-Z。
當一個取代基爲空缺時，表示該取代基是不存在的，比如A-X中X爲空缺時表示該結構實際上是A。
當一個取代基的鍵可以交叉連接到一個環上的兩個原子時，這種取代基可以與這個環上的任意原子相鍵合。當所列舉的取代基中沒有指明其通過哪一個原子連接到化學結構通式中包括但未具體提及的化合物時，這種取代基可以通過其任何原子相鍵合。取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會産生穩定的化合物的情况下才是被允許的。例如，結構單元或表示其可在環己基或者環己二烯上的任意一個位置發生取代。
除非另有規定，術語“鹵代素”或“鹵素”本身或作爲另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，術語“鹵代烷基”意在包括單鹵代烷基和多鹵代烷基。例如，術語“鹵代（C1 -C4 ）烷基”意在包括但不僅限於三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。
鹵代烷基的實例包括但不僅限於：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。“烷氧基”代表通過氧橋連接的具有特定數目碳原子的上述烷基。C1-6 烷氧基包括C1 、C2 、C3 、C4 、C5 和C6 的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限於：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、二級丁氧基、三級丁氧基、正戊氧基和S -戊氧基。“環烷基”包括飽和環基，如環丙基、環丁基或環戊基。3-7環烷基包括C3 、C4 、C5 、C6 和C7 環烷基。“鏈烯基”包括直鏈或支鏈構型的烴鏈，其中該鏈上任何的穩定位點上存在一個或多個碳-碳雙鍵，例如乙烯基和丙烯基。
術語“鹵”或“鹵素”是指氟、氯、溴和碘。
除非另有規定，術語“雜”表示雜原子或雜原子團(即含有雜原子的原子團)，包括碳（C）和氫（H）以外的原子以及含有這些雜原子的原子團，例如包括氧（O）、氮（N）、硫（S）、矽（Si）、鍺（Ge）、鋁（Al）、硼（B）、-O-、-S-、=O、=S、-C(=O)O-、-C(=O) -、-C(=S)-、-S(=O) 、-S(=O)2 -，以及任選被取代的-C(=O)N(H)-、-N(H)-、-C(=NH)-、-S(=O)2 N(H)-或-S(=O) N(H)-。
除非另有規定，“環”表示被取代或未被取代的環烷基、雜環烷基、環烯基、雜環烯基、環炔基、雜環炔基、芳基或雜芳基。所謂的環包括單環、聯環、螺環、並環或橋環。環上原子的數目通常被定義爲環的元數，例如，“5～7元環”是指環繞排列5～7個原子。除非另有規定，該環任選地包含1～3個雜原子。因此，“5～7元環”包括例如苯基吡啶和呱啶基；另一方面，術語“5～7元雜環烷基環”包括吡啶基和呱啶基，但不包括苯基。術語“環”還包括含有至少一個環的環系，其中的每一個“環”均獨立地符合上述定義。
除非另有規定，術語“雜環”或“雜環基”意指穩定的含雜原子或雜原子團的單環、雙環或三環，它們可以是飽和的、部分不飽和的或不飽和的（芳族的），它們包含碳原子和1、2、3或4個獨立地選自N、O和S的環雜原子，其中上述任意雜環可以稠合到一個苯環上形成雙環。氮和硫雜原子可任選被氧化（即NO和S (O) p，p是1或2）。氮原子可以是被取代的或未取代的（即N或NR，其中R是H或本文已經定義過的其他取代基）。該雜環可以附著到任何雜原子或碳原子的側基上從而形成穩定的結構。如果産生的化合物是穩定的，本文所述的雜環可以發生碳位或氮位上的取代。雜環中的氮原子任選地被四級銨化。一個優選方案是，當雜環中S及O原子的總數超過1時，這些雜原子彼此不相鄰。另一個優選方案是，雜環中S及O原子的總數不超過1。如本文所用，術語“芳族雜環基團”或“雜芳基”意指穩定的5、6、7元單環或雙環或7、8、9或10元雙環雜環基的芳香環，它包含碳原子和1、2、3或4個獨立地選自N、O和S的環雜原子。氮原子可以是被取代的或未取代的（即N或NR，其中R是H或本文已經定義過的其他取代基）。氮和硫雜原子可任選被氧化（即NO和S (O) p,p是1或2）。值得注意的是，芳香雜環上S和O原子的總數不超過1。橋環也包含在雜環的定義中。當一個或多個原子（即C、O、N或S）連接兩個不相鄰的碳原子或氮原子時形成橋環。優選的橋環包括但不限於：一個碳原子、兩個碳原子、一個氮原子、兩個氮原子和一個碳-氮基。值得注意的是，一個橋總是將單環轉換成三環。橋環中，環上的取代基也可以出現在橋上。
雜環化合物的實例包括但不限於：吖啶基、吖辛因基、苯並咪唑基、苯並呋喃基、苯並巰基呋喃基、苯並巰基苯基、苯並惡唑基、苯並惡唑啉基、苯並噻唑基、苯並三唑基、苯並四唑基、苯並異惡唑基、苯並異噻唑基、苯並咪唑啉基、哢唑基、4aH -哢唑基、哢啉基、苯並二氫吡喃基、色烯、噌啉基十氫喹啉基、2H , 6H -1, 5,2-二噻嗪基、二氫呋喃並[2,3-b ]四氫呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H -吲唑基、吲哚烯基、二氫吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H -吲哚基、isatino基、異苯並呋喃基、異吲哚基、異二氫吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異惡唑基、亞甲二氧基苯基、嗎啉基、萘啶基，八氫異喹啉基、惡二唑基、1,2,3-惡二唑基、1,2,4-惡二唑基、1,2,5-惡二唑基、1,3,4-惡二唑基、惡唑烷基、惡唑基、羥吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯並黃嘌呤基、酚惡嗪基、酞嗪基、呱嗪基、呱啶基、呱啶酮基、4-呱啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶並惡唑、吡啶並咪唑、吡啶並噻唑、吡啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H -吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H -喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基，6H -1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、異噻唑基噻吩基、噻吩基、噻吩並惡唑基、噻吩並噻唑基、噻吩並咪唑基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫噸基。還包括稠環和螺環化合物。
除非另有規定，術語“烴基”或者其下位概念（比如烷基、烯基、炔基、芳基等等）本身或者作爲另一取代基的一部分表示直鏈的、支鏈的或環狀的烴原子團或其組合，可以是完全飽和的（如烷基）、單元或多元不飽和的（如烯基、炔基、芳基），可以是單取代或多取代的，可以是一價（如甲基）、二價（如亞甲基）或者多價（如次甲基），可以包括二價或多價原子團，具有指定數量的碳原子（如C1 -C12 表示1至12個碳，C1-12 選自C1 、C2 、C3 、C4 、C5 、C6 、C7 、C8 、C9 、C10 、C11 和C12 ；C3-12 選自C3 、C4 、C5 、C6 、C7 、C8 、C9 、C10 、C11 和C12 。）。 “烴基”包括但不限於脂肪烴基和芳香烴基，所述脂肪烴基包括鏈狀和環狀，具體包括但不限於烷基、烯基、炔基，所述芳香烴基包括但不限於6-12元的芳香烴基，例如苯、萘等。在一些實施例中，術語“烴基”表示直鏈的或支鏈的原子團或它們的組合，可以是完全飽和的、單元或多元不飽和的，可以包括二價和多價原子團。飽和烴原子團的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、三級丁基、異丁基、二級丁基、異丁基、環己基、（環己基）甲基、環丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子團的同系物或異構體。不飽和烴基具有一個或多個雙鍵或三鍵，其實例包括但不限於乙烯基、2 -丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-異戊烯基、2-（丁二烯基）、2，4-戊二烯基、3-（1，4 -戊二烯基）、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高級的同系物和異構體。
除非另有規定，術語“雜烴基”或者其下位概念（比如雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜芳基等等）本身或者與另一術語聯合表示穩定的直鏈的、支鏈的或環狀的烴原子團或其組合，有一定數目的碳原子和至少一個雜原子組成。在一些實施例中，術語“雜烴基”本身或者與另一術語聯合表示穩定的直鏈的、支鏈的烴原子團或其組合物，有一定數目的碳原子和至少一個雜原子組成。在一個典型實施例中，雜原子選自B、O、N和S，其中氮和硫原子任選地被氧化，氮雜原子任選地被四級銨化。雜原子B、O、N和S可以位於雜烴基的任何內部位置（包括該烴基附著於分子其餘部分的位置）。實例包括但不限於-CH2 -CH2 -O-CH3 、-CH2 -CH2 -NH-CH3 、-CH2 -CH2 -N(CH3 )-CH3 、-CH2 -S-CH2 -CH3 、-CH2 -CH2 、-S(O)-CH3 、-CH2 -CH2 -S(O)2 -CH3 、-CH=CH-O-CH3 、 -CH2 -CH=N-OCH3 和–CH=CH-N(CH3 )-CH3 。至多兩個雜原子可以是連續的，例如-CH2 -NH-OCH3 。
術語“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”（或硫代烷氧基）屬慣用表達，是指分別通過一個氧原子、氨基或硫原子連接到分子的其餘部分的那些烷基基團。
除非另有規定，術語“烷基”用於表示直鏈或支鏈的飽和烴基,可以是單取代（如-CH2 F）或多取代的（如-CF3 ），可以是一價（如甲基）、二價（如亞甲基）或者多價（如次甲基）。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和異丙基)，丁基(如，n-丁基，異丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n- 戊基，異戊基，新戊基)等。
除非另有規定，術語“鹵代素”或“鹵素”本身或作爲另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，術語“鹵代烷基”意在包括單鹵代烷基和多鹵代烷基。例如，術語“鹵代（C1 -C4 ）烷基”意在包括但不僅限於三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。除非另有規定，鹵代烷基的實例包括但不僅限於：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。
“烷氧基”代表通過氧橋連接的具有特定數目碳原子的上述烷基，除非另有規定，C1-6 烷氧基包括C1 、C2 、C3 、C4 、C5 和C6 的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限於：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、二級丁氧基、三級丁氧基、正戊氧基和S -戊氧基。
除非另有規定，術語“環烴基”、“雜環烴基”或者其下位概念（比如芳基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、環烯基、雜環烯基、環炔基、雜環炔基等等）本身或與其他術語聯合分別表示環化的“烴基”、“雜烴基”。此外，就雜烴基或雜環烴基（比如雜烷基、雜環烷基）而言，雜原子可以占據該雜環附著於分子其餘部分的位置。環烷基的實例包括但不限於環戊基、環己基、1-環己烯基、3-環己烯基、環庚基等。雜環基的非限制性實例包括1-（1,2,5,6-四氫吡啶基）、1-呱啶基、2-呱啶基，3-呱啶基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃-2-基、四氫呋喃吲哚-3-基、四氫噻吩-2-基、四氫噻吩-3 -基，1-呱嗪基和2-呱嗪基。
除非另有規定，術語“芳基”表示多不飽和的芳族烴取代基，可以是單取代、二取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價，它可以是單環或多環（優選1至3個環），它們稠合在一起或共價連接。術語“雜芳基”是指含有一至四個雜原子的芳基（或環）。在一個示範性實例中，雜原子選自B、N、O和S，其中氮和硫原子任選地被氧化，氮原子任選地被四級銨化。雜芳基可通過雜原子連接到分子的其餘部分。芳基或雜芳基的非限制性實施例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-聯苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-惡唑基、4-惡唑基、2-苯基-4- 惡唑基、5-惡唑基、3 -異惡唑基、4-異惡唑基、5-異惡唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯並噻唑基、嘌呤基、2-苯並咪唑基、5-吲哚基、1-異喹啉基、5-異喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一個芳基和雜芳基環系的取代基選自下文所述的可接受的取代基。
爲簡便起見，芳基在與其他術語聯合使用時（例如芳氧基、芳硫基、芳烷基）包括如上定義的芳基和雜芳基環。因此，術語“芳烷基”意在包括芳基附著於烷基的那些原子團（例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等），包括其中碳原子（如亞甲基）已經被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-（1-萘氧基）丙基等。
術語“離去基團”是指可以被另一種官能團或原子通過取代反應（例如親和取代反應）所取代的官能團或原子。例如，代表性的離去基團包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對溴苯磺酸酯、對甲苯磺酸酯等；醯氧基，如乙醯氧基、三氟乙醯氧基等等。
術語“保護基”包括但不限於“氨基保護基”、“羥基保護基”或“巰基保護基”。術語“氨基保護基”是指適合用於阻止氨基氮位上副反應的保護基團。代表性的氨基保護基包括但不限於：甲醯基；醯基，例如鏈烷醯基（如乙醯基、三氯乙醯基或三氟乙醯基）；烷氧基羰基，如三級丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基（Bn）、三苯甲基(Tr)、1,1-二-（4'-甲氧基苯基）甲基；甲矽烷基，如三甲基甲矽烷基（TMS）和三級丁基二甲基甲矽烷基（TBS）等等。術語“羥基保護基”是指適合用於阻止羥基副反應的保護基。代表性羥基保護基包括但不限於：烷基，如甲基、乙基和三級丁基；醯基，例如鏈烷醯基（如乙醯基）；芳基甲基，如苄基（Bn），對甲氧基苄基（PMB）、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基（二苯甲基，DPM）；甲矽烷基，如三甲基甲矽烷基（TMS）和三級丁基二甲基甲矽烷基（TBS）等等。
本發明的化合物可以通過本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。
本發明所使用的所有溶劑是市售的，無需進一步純化即可使用。本發明採用下述縮略詞：化合物1爲實施例51 異構體2；Pen.爲己酮可可鹼；INT-747爲6-乙基鵝去氧膽酸；aq代表水；HATU代表O-(7-氮雜苯並三唑-1- 基）-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸鹽；EDC代表N-（3-二甲基氨基丙基）-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；m-CPBA代表3-氯過氧苯甲酸；eq代表當量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二異丙酯；DMF 代表N，N-二甲基甲醯胺；DMSO代表二甲亞碸；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一種胺保護基團；BOC代表三級丁基羰基是一種胺保護基團；HOAc代表乙酸； NaCNBH3 代表氰基硼氫化鈉；r.t.代表室溫；O/ N代表過夜；THF代表四氫呋喃；Boc2 O代表二-三級丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二異丙基乙基胺；SOCl2 代表氯化亞碸；CS2 代表二硫化碳；TsOH代表對甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-（苯磺醯基）苯磺醯胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2,5-二酮；n -Bu4 NF代表氟化四丁基銨；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔點；LDA代表二異丙基胺基鋰；TMSCF3 代表三氟甲基三甲基矽烷；Ti(Oi-Pr)4 代表鈦酸四異丙酯；MSCl代表甲烷磺醯氯；DMAP代表N,N-二甲基-4-氨基吡啶；TEA代表三乙胺；BnBr代表苄溴；DIEA代表二異丙基乙胺；BH3 DMS代表硼烷二甲硫醚；DMP代表戴斯馬丁過碘烷；TBAF代表四丁基氟化胺；HOBT代表1-羥基苯並三唑；AIBN代表偶氮二異丁腈；NBS代表N-溴代丁二醯亞胺；RT緩衝液代表逆轉錄緩衝液；dNTP代表脫氧核糖核苷三磷酸；PBS代表磷酸鹽緩衝液。
化合物經手工或者ChemDraw®軟件命名，市售化合物采用供應商目錄名稱。
下面通過實施例對本發明進行詳細描述，但並不意味著對本發明任何不利限制。
實施例1。
3，7-二甲基-1-（6，6，6-三氟-5-羥基-5-甲基己基）-1H -嘌呤-2，6（3H，7H）-二酮。
第一步。
3，7-二甲基-1-（6，6，6-三氟-5-甲基-5-（三甲基矽氧基）己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3，7-二甲基-1-（5-氧代己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（200 mg，0.719 mmol），氟化銫（10.9 mg，0.0719 mmol）溶於四氫呋喃（2 mL）中，0℃下滴加三氟甲基三甲基矽烷（153 mg，1.08 mmol）。反應液在20℃下攪拌2小時，加入飽和食鹽水（50 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（100 mL x 3）。有機相用飽和食鹽水洗滌（100 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮。真空乾燥得到3，7-二甲基-1-（6，6，6-三氟-5-甲基-5-（三甲基矽氧基）己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（200 mg，白色固體），産率：66%。MS-ESI計算值[M + H]+ 421，實測值421。
第二步。
3，7-二甲基-1-（6，6，6-三氟-5-羥基-5-甲基己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3，7-二甲基-1-（6，6，6-三氟-5-甲基-5-（三甲基矽氧基）己基）-1H -嘌呤-2，6（3H，7H）-二酮（200 mg，0.476 mmol）溶於四氫呋喃（2 mL），0℃下滴加1 M鹽酸（0.5 mL）後於20℃攪拌1小時。混合物冷却到0℃，加入碳酸氫鈉溶液（30 mL）淬滅反應。混合物用乙酸乙酯（100 mL x 3）萃取。有機相用飽和食鹽水（100 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮。用製備高效液相色譜分離純化得到3，7-二甲基-1-（6，6，6-三氟-5-羥基-5-甲基己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（50.0 mg，白色固體），産率：30%。1 H NMR:（400MHz，Methonal-d4 ）δ7.85（s，1H），4.02-3.98（m，2H），3.96（s，3H），3.52（s，3H），1.69-1.64（m，4H），1.52-1.48（m，2H），1.28（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 349，實測值349。
實施例2。
1-（5-羥基-5-甲基庚基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
乙基5-（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）戊酸乙酯。
將3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（5.00 g，28.0 mmol），溴戊酸乙酯（7.51 g，33.4 mmol），碳酸鉀（7.73 g，56.0 mmol）和碘化鉀（500 mg，2.80 mmol）溶解於N ，N -二甲基甲醯胺（62 mL）中。反應液加熱到110℃，攪拌兩小時。把反應倒入水中，用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮得乙基5-（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）戊酸乙酯（5.00 g，黃色固體），産率：50%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.51（s，1H），4.14-4.09（m，2H），4.04-4.01（m，2H），3.97（s，3H），3.57（s，3H），2.37-2.33（m，2H），1.72-1.69（m，4H），1.25（t，J = 7.2 Hz，3H）。
第二步。
1-（5-乙基-5-羥基庚基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將乙基5-（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）戊酸乙酯（0.500 g，1.62 mmol）溶解於無水四氫呋喃（5 mL）中，氮氣保護，-78℃條件下慢慢滴入乙基溴化鎂（3 M乙醚溶液，3.42 mL，9.72 mmol）。反應液在-78℃攪拌0.5小時，慢慢升至然後0℃，反應0.5小時。將反應液倒入水中，用乙酸乙酯萃取（30 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得1-（5-乙基-5-羥基庚基-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（0.300 g，無色油狀物），産率：57%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.50（s，1H），4.05-4.01（m，2H），3.99（s，3H），3.57（s，3H），1.70-1.37（m，10H），0.86（t，J = 7.6 Hz，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 323，實測值323。
實施例3。
1-（4-（1-羥基環丙基）丁基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
氮氣保護下，-35℃將乙基溴化鎂（3 M乙醚溶劑，1.1 mL，3.24 mmol）加入到乙基5-（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）戊酸乙酯（500 mg，1.62 mmol）和鈦酸四異丙酯（461 mg，1.62 mmol）的四氫呋喃（10 mL）溶液中。反應液緩慢加熱至25℃，攪拌2小時。加入水（10 mL）淬滅反應，過濾除去不溶物，濾液用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮用高效液相色譜法分離純化得到1-（4-（1-羥基環丙基）丁基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（90.0 mg，白色固體），産率：19%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.86（s，1H），4.03-3.90（m，5H），3.51（s，3H），1.72-1.53（m，6H），0.68-0.59（m，2H），0.46-0.38（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 293，實測值293。
實施例4。
3，7-二甲基-1-（（1-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）環丙基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
乙基1-乙醯基環丙烷。
將乙基-3-氧代丁酸（10.0 g，76.8 mmol）和1，2-二溴乙烷（21.7 g，115 mmol）溶於二甲基亞碸（300 mL）中，在氮氣保護下，再分批加入碳酸鉀（42.5 g，307 mmol）。將反應液置於25℃攪拌24小時。加入水（500 mL），反應液用乙酸乙酯（300 mL x 3）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（10：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到乙基1-乙醯基環丙烷（6.00 g，白色油狀物），産率：50%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ4.25-4.20（m，2H），2.44（s，3H），1.47-1.42（m，4H），1.32-1.28（m，3H）。
第二步。
1-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）環丙烷羧酸。
將乙基1-乙醯基環丙烷（2.00 g，12.8 mmol），氟化銫（195 mg，1.28 mmol）溶於四氫呋喃（30 mL）中，然後0℃加入三氟甲基三甲基矽烷（3.64 g，25.6 mmol）。反應液在20℃氮氣保護下反應6小時。然後加入4 N稀鹽酸（7 mL）。混合物在室溫氮氣保護下反應6小時。加入碳酸氫鈉飽和溶液（30 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（100 mL x 3），有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（10：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到1-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）環丙烷羧酸（1.70 g，白色油狀物），産率：59%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ4.14-4.10（m，2H），1.64（s，3H），1.29-1.24（m，3H），1.23-1.22（m，2H），0.92-0.90（m，2H）。
第三步。
1，1，1-三氟-2-（1-（羥甲基）環丙基）丙-2-醇。
將1-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）環丙烷羧酸（400 mg，1.77 mmol）溶於無水四氫呋喃（10 mL）中，0℃下加入四氫鋁鋰（81.0 mg，2.12 mmol）。反應液升溫至25℃，攪拌1小時。加水（10 mL）淬滅，用乙酸乙酯（50 mL x 3）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（1：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.2），得到1，1，1-三氟-2-（1-（羥甲基）環丙基）丙-2-醇（200 mg，黃色油狀物），産率：61%。1 H NMR：（400 MHz，DMSO-d6 ）δ5.64（s，1H），4.63-4.60（m，1H），3.64-3.60（m，1H），3.23-3.17（m，1H），1.36（s，3H），0.83-0.91（m，1H），0.56-0.55（m，1H），0.39-0.35（m，2H）。
第四步。
（1-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）環丙基）甲基甲磺酸酯
將1，1，1-三氟-2-（1-（羥甲基）環丙基）丙-2-醇（100 mg，0.543 mmol）溶解在二氯甲烷（5 mL）中，在0℃下加入三乙胺（110 mg，1.08 mmol）和甲烷磺醯氯（62.2 mg，0.543 mmol）。反應液在0℃下反應2小時。加入碳酸氫鈉飽和水溶液（10 mL）淬滅，用二氯甲烷（10 mL x 3）萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液（10 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到（1-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）環丙基）甲基甲磺酸酯（80.0 mg，黃色油狀物），産率：56%。
第五步。
3，7-二甲基-1-（（1-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）環丙基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
（1-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）環丙基）甲基甲磺酸酯（80.0 mg，0.305 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（54.9 mg，0.305 mmol），碘化鉀（5.10 mg，0.0305 mmol）和碳酸鉀（126 mg，0.915 mmol）溶於無水N ，N -二甲基甲醯胺（5 mL）中。反應液加熱至120℃，反應2小時。反應液冷却至20℃，過濾，用製備高效液相色譜純化，得到3，7-二甲基-1-（（1-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）環丙基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（40.0 mg，白色固體），産率：38%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.88（s，1H），4.45（d，J = 6.8 Hz，1H），4.24（d，J = 6.8 Hz，1H），3.97（s，3H），3.53（s，3H），1.53（s，3H），0.92-0.88（m，1H），0.64-0.63（m，1H），0.41-0.38（m，1H），0.15-0.12（m，1H）。 MS-ESI計算值[M + H]+ 347，實測值347。
實施例5。
1-（（3-羥基-3-（三氟甲基）環丁基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
3-氧代環丁烷羧酸甲酯。
將3-氧代環丁烷羧酸（25.0 g，0.220 mmol），甲醇（14 mL）及N ，N -二甲基-4-氨基吡啶（3.00 g，353 mmol）溶於二氯甲烷（500 mL）中，25℃攪拌，慢慢滴加1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（64.0 g，340 mmol），攪拌過夜。反應液依次用鹽酸水溶液（1.5 N，72 mL），水（150 mL x 2）和飽和食鹽水（75 mL x 2）洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到産品3-氧代環丁烷羧酸甲酯（25 g，黃色液體），産率：89%。
第二步。
5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-羧酸甲酯。
將甲基-3-氧代環丁烷羧酸（25.0 g，195 mmol），乙二醇（35.0 g，564 mmol）和對甲苯磺酸（3.50 g，20.0 mmol）溶於甲苯（250 mL）中，加分水器後加熱回流過夜。反應液冷却至25℃，依次用水（300 mL x 2）、飽和碳酸氫鈉（500 mL x 2）洗滌。有機相用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到産物甲基5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-羧酸甲酯（22.5 g，黃色液體），産率：90%。
第三步。
5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-甲醇。
在氮氣保護，0℃時下將四氫鋁鋰（5.20 g，136 mmol）緩慢溶於四氫呋喃（240 mL）中，然後滴加溶於四氫呋喃（60 mL）中的5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-羧酸甲酯（19.5 g，113 mmol）。反應緩慢升至25℃，攪拌3.5小時。反應液冷却至0℃，依次緩慢加入水（5.20 g，289 mmol），15% 氫氧化鈉（5.20 g，19.5 mmol）及水（15.6 g，867 mmol）。過濾，濾餅用四氫呋喃（10 mL x 3）洗滌，濾液減壓濃縮用矽膠柱色譜法純化（1：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到産物5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-甲醇（10.0 g，黃色液體），産率：62%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ3.90-3.87（m，4H），3.67（d，J = 6.4 Hz，2H），2.45-2.40（m，2H），2.38-2.26（m，1H），2.13-2.08（m，2H）。
第四步。
5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-基甲基甲磺酸酯。
將5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-甲醇（500 mg，53.1 mmol）及三乙胺（896 mg，6.90 mmol）溶於二氯甲烷（23 mL），在0℃緩慢加入甲烷磺醯氯（1.40 g，12.6 mmol）。反應液升至在25℃，攪拌過夜。加入水（50 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（50 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到産物5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-基甲基甲磺酸酯（2.30 g，黃色液體）。
MS-ESI計算值[M + H]+ 223，實測值223。
第五步。
（1-（5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-基甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮
將5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-基甲基甲磺酸酯（1.00 g，4.50 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（810 mg，4.50 mmol），碳酸鉀（1.20 g，13.5 mmol）和碘化鉀（75.0 mg，0.45 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（20 mL）中。反應加熱至130℃，攪拌3.5小時。反應液過濾，濾液減壓濃縮，得到1-（5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-基甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.50 g，棕色液體），産率：93%。MS-ESI計算值[M + H]+ 307，實測值307。
第六步。
3，7-二甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1-（5，8-二氧雜螺[3，4]辛烷-2-基甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.50 g，5.00 mmol）溶於丙酮（18 mL）中，加入鹽酸水溶液（4 N，3 mL）。反應加熱至30℃，攪拌過夜。加入水稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液（20 mL）調節pH至中性，用乙酸乙酯萃取（150 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的産品用矽膠柱色譜法純化（1：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.2）得到産物3，7-二甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（180 mg，白色固體），産率：14%。
1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.49（s，1 H），4.25（d，J = 7.6 Hz，2 H），3.95（s，3 H），3.55（s，3 H），3.13-2.96（m，4 H），2.95-2.84（m，1 H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 263，實測值263。
第七步。
1-（（3-羥基-3-（三氟甲基）環戊基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3，7-二甲基-1-（（3-氧代環戊基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（100 mg，0.382 mmol）和氟化銫（11.5 mg，0.0763 mmol）溶於無水四氫呋喃（3 mL）中，氮氣保護下加入三氟甲基三甲基矽烷（95.0 mg，0.640 mmol）。反應液緩慢加熱至30℃下，攪拌12小時。然後向反應中加入鹽酸水溶液（1 N，5 mL）繼續攪拌0.5小時。向反應液中加入水（50 mL）稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液（10 mL）調pH值至7，減壓濃縮，用製備高效液相色譜純化，得到1-（（3-羥基-3-（三氟甲基）環戊基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（80.0 mg，白色固體），産率：64％。1H NMR：（400 MHz，Mehonal-d4 ）δ8.54（s，1H），4.13-4.07（m，5H），3.56（s，3H），2.58-2.48（m，3H），2.14-2.10（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 333，實測值333。
實施例6。
1-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）-3-羥基環丁腈。
第一步。
（（（1，3-二溴丙-2-基）氧基）甲基）苯。
將2-（溴甲基）環氧乙烷（8.40 g，61.3 mmol）室溫下加入到溶有氯化亞銅（6.87 g，51.1 mmol）的苄溴（8.74 g，51.1 mmol）中。反應150℃攪拌11小時。反應液冷却至室溫，緩慢加入水（100 mL）並用乙酸乙酯（100 mL x 3）萃取。合併有機相，並用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的産品用矽膠柱色譜法純化（石油醚，Rf = 0.6）得到産物（（（1，3-二溴丙-2-基）氧基）甲基）苯（8.60 g，黃色油狀），産率：44%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.39-7.31（m，5H），4.67（s，2H），3.82-3.78（m，1H），3.58（d，J = 5.2 Hz，4H）。
第二步。
乙基3-（苄氧基）-1-氰基環丁烷羧酸乙酯。
將氰乙酸乙酯（2.76 g，24.3 mmol）室溫下緩慢加入到溶有（（（1，3-二溴丙-2-基）氧基）甲基）苯（7.00 g，18.2 mmol）及碳酸鉀（10.0 g，72.7 mmol）的N ，N -二甲基甲醯胺（35 mL）中。反應90℃攪拌4小時。冷却至室溫，過濾，固體用乙酸乙酯（20 mL）洗滌。得到的有機相用飽和氯化銨水溶液（20 mL x 3）洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的産品用矽膠柱色譜法純化（30：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到産物乙基3-（苄氧基）-1-氰基環丁烷羧酸乙酯（3.80 g，無色油狀），産率：81%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.40-7.28（m，5H），4.48-4.44（m，2H），4.37-4.31（m，1H），4.30-4.24（m，2H），2.97-2.80（m，2H），2.73-2.65（m，2H），1.37-1.30（m，3H）。
第三步。
3-（苄氧基）-1-（羥甲基）環丁腈。
將硼氫化鈉（1.39 g，36.6 mmol）溶於四氫呋喃和水（20 mL：2 mL）中，並在0℃下，20分鐘內緩慢滴加乙基3-（苄氧基）-1-氰基環丁烷羧酸乙酯（3.80 g，14.6 mmol）的四氫呋喃（22 mL）溶液。反應室溫攪拌2小時。加入乙酸乙酯（50 mL）稀釋，有機相分別用水（30mL）及飽和食鹽水（30mL）洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到粗産品3-（苄氧基）-1-（羥甲基）環丁腈（3.70 g，無色油狀）。1 H NMR：（400 MHz，DMSO-d 6 ）δ7.38-7.25（m，5H），5.57-5.52（m，1H），4.39-4.36（m，2H），4.13-4.04（m，1H），3.57-3.51（m，2H），2.58-2.51（m，1H），2.49-2.45（m，1H），2.31-2.09（m，2H）。
第四步。
（3-（苄氧基）-1-氰基環丁基）甲基甲磺酸酯。
將3-（苄氧基）-1-（羥甲基）環丁腈（3.70 g，15.3 mmol），三乙胺（3.10 g，30.6 mmol）溶於二氯甲烷（35 mL）中，在0℃下緩慢加入甲烷磺醯氯（3.29 g，28.7 mmol）。反應液室溫攪拌4小時，加入飽和氯化銨（30 mL），用乙酸乙酯（50 mL x 2）萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到粗産物（3-（苄氧基）-1-氰基環丁基）甲基甲磺酸酯（4.56 g，深棕色油狀）。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.36-7.26（m，5H），4.47-4.45（m，2H），4.44-4.38（m，2H），3.21-3.18（m，1H），3.17-3.14（m，3H），2.81-2.60（m，2H），2.53-2.26（m，2H）。
第五步。
3-（苄氧基）-1-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H- 嘌呤-1-基）甲基）環丁腈。
將（3-（苄氧基）-1-氰基環丁基）甲基甲磺酸酯（4.50 g，15.2 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（2.75 g，15.2 mmol）及碘化鉀（1.26 g，7.62 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（100 mL）中，加入碳酸鉀（6.32 g，45.7 mmol），反應120℃加熱回流4小時。反應液冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，加入水（50 mL），並用乙酸乙酯（50 mL x 3）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到粗産物3-（苄氧基）-1-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）環丁腈（4.60 g，黃色固體）。MS-ESI計算值[M + H]+ 380，實測值380。
第六步。
1-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）-3-羥基環丁腈。
將3-（苄氧基）-1-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）環丁腈（100 mg，0.263 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中，並加入氯化鐵（128 mg，0.790 mmol）。反應室溫攪拌12小時。加入水（10 mL）並用二氯甲烷（40 mL x 3）萃取。合併有機相，並用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的産品用製備高效液相色譜純化得到産物1-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）-3-羥基環丁腈（12.0 mg，黃色固體），産率：16%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.56（s，1H），4.66-4.49（m，1H），4.45-4.37（m，2H），4.01（s，3H），3.62（s，3H），2.96-2.85（m，2H），2.60-2.49（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 290，實測值290。
實施例7。
第一步。
甲基3-（羥基甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯。
將3-（甲氧羰基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸（100 mg，0.587 mmol）和三乙胺（71.0 mg，0.705 mmol）溶於四氫呋喃（20 mL）中，-10℃條件下緩慢滴加氯甲酸甲酯（56.0 mg，0.587 mmol）。反應液於0℃條件下攪拌半小時，然後加入硼氫化鈉（33.0 mg，0.881 mmol），繼續反應2小時。反應液中加入水（10 mL），乙酸乙酯（10 mL x 3）萃取，合併有機相並用飽和氯化鈉（10 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到甲基3-（羥基甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯（80.0 mg，無色油狀物），産率：87%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ3.65（s，3H），3.60（s，2H），2.00（s，6H）。
第二步。
甲基3-（（（甲基磺醯基）氧基）甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯。
將甲基3-（羥基甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯（40.0 mg，0.256 mmol）和三乙胺（39.0 mg，0.384 mmol）溶於二氯甲烷（15 mL）中，0℃條件下緩慢滴加甲烷磺醯氯（35.0 mg，0.307 mmol）。反應液於0℃條件下攪拌2小時，反應液中加入二氯甲烷（10 mL）稀釋，有機相用水（10 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到甲基3-（（（甲基磺醯基）氧基）甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯（50.0 mg，黃色油狀物），産率：83%。
第三步。
甲基3-（（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯。
將甲基3-（（（甲基磺醯基）氧基）甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯（100 mg，0.426 mmol）和3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（77.0 mg，0.427 mmol）溶於N ， N -二甲基甲醯胺（20 mL）中，室溫條件下加入碳酸鉀（88.0 mg，0.640 mmol）和碘化鉀（8.00 mg，0.0430 mmol）。反應液於100℃條件下攪拌2小時，反應液冷却至室溫濃縮，加入乙酸乙酯（20 mL）稀釋，有機相用水（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（1：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.2）得到甲基3-（（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯（100 mg，黃色固體），産率：73%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.50（s，1H），4.12（s，2H），3.95（s，3H），3.60（s，3H），3.53（s，3H），1.95（s，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 319，實測值319。
第四步。
3-（（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸。
將甲基3-（（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯（100 mg，0.314 mmol）溶於四氫呋喃（15 mL）和水（5 mL）中，室溫條件下加入氫氧化鋰（26.0 mg，0.628 mmol）。室溫攪拌2小時後，反應液加入2N稀鹽酸（10 mL）調PH值至4，乙酸乙酯（15 mL x 3）萃取，合併有機相用飽和氯化鈉溶液（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮3-（（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸（90.0 mg，白色固體），産率：94%。
MS-ESI計算值[M + H]+ 305，實測值305。
第五步。
3-（（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）-N -甲氧基-N -甲基雙環[1.1.1]戊烷-1-醯胺。
將3-（（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）雙環[1.1.1]戊烷-1-甲酸（30.0 mg，0.0986 mmol）和N ，O -二甲基羥胺（10.0 mg，0.0986 mmol）溶於二氯甲烷（20 mL）中，室溫條件下加入2-（7-偶氮苯並三氮唑）-N ，N ，N ’，N ’-四甲基脲六氟磷酸酯（75.0 mg，0.197 mmol）和二異丙基乙胺（19.0 mg，0.148 mmol）。室溫攪拌12小時後，反應液加入水（20 mL），二氯甲烷（20 mL x 2）萃取，合併有機相用飽和氯化銨溶液（20 mL x 2）洗滌。無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（1：2 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.2）得到3-（（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）-N -甲氧基-N -甲基雙環[1.1.1]戊烷-1-醯胺（30.0 mg，白色固體），産率：88%。
MS-ESI計算值[M + H]+ 348，實測值348。
第六步。
1-（（3-乙醯基雙環[1.1.1]戊烷-1-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將3-（（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）-N -甲氧基-N -甲基雙環[1.1.1]戊烷-1-醯胺（20.0 mg，0.0575 mmol）溶於四氫呋喃（20 mL）中，反應液於-78℃條件下加入甲基溴化鎂（3 M乙醚溶液，0.040 mL，0.120 mmol），繼續攪拌30分鐘後升至室溫反應4小時。反應液於0℃條件下加入飽和氯化銨溶液（10 mL），乙酸乙酯（15 mL x 3）萃取，合併有機相用飽和氯化鈉溶液（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用矽膠柱層析法分離純化（1：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.5）得到1-（（3-乙醯基雙環[1.1.1]戊烷-1-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（15.0 mg，無色油狀物），産率：86%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.55（s，1H），4.17（s，2H），3.99（s，3H），3.59（s，3H），2.07（s，3H），1.97（s，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 303，實測值303。
第七步。
3，7-二甲基-1-（（3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）雙環[1.1.1]戊烷-1-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（（3-乙醯基雙環[1.1.1]戊烷-1-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（20.0 mg，0.0660 mmol）和三氟甲基三甲基氯矽烷（19.0 mg，0.132 mmol）溶於四氫呋喃（15 mL）中，反應液於室溫條件下加入氟化銫（10.0 mg，00660 mmol），室溫繼續反應12小時。反應液中加入2N 稀鹽酸（10 mL），攪拌30分鐘，乙酸乙酯（20 mL x 2）萃取，合併有機相用飽和碳酸氫鈉溶液（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用高效液相色譜純化得3，7-二甲基-1-（（3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）雙環[1.1.1]戊烷-1-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（5.00 mg，無色油狀物），産率：20%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.59（s，1H），4.20（s，2H），4.02（s，3H），3.59（s，3H），1.97（s，6H），1.79（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 373，實測值373。
實施例8。 第一步
3，7-二甲基-1-[[3-[2，2，2-三氟-1-羥基-1-（三氟甲基）乙基]環丁基]甲基]嘌呤-2，6-二酮。
將3，7-二甲基-1-[[3-（2，2，2-三氟-1，1-二羥基-乙基）環丁基]甲基]嘌呤-2，6-二酮（60.0 mg，0.165 mmol），氟化銫（25.2 mg，0.165 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三氟甲基三甲基氯矽烷（70.6 mg，0.496 mmol），攪拌12小時。加入水（20 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到産物1（8.00 mg，黃色固體）（異構體1，第一個峰），産率：12%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.01（s，1H），4.22-4.17（m，2H），4.01（s，3H），3.54（s，3H），3.55-3.19（m，1H），2.63-2.56（m，1H），2.50-2.42（m，2H），1.82-1.78（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 415，實測值415。
以及産物2（異構體2，第二個峰），産率：6%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.20（s，1H），4.04-4.00（m，5H），3.55（s，3H）2.70-2.65（m，1H），2.55-2.53（m，1H），2.17-2.12（m，2H），2.02-1.98（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 415，實測值415。
實施例9。
第一步。
3-亞甲基環丁烷羧酸。
將3-亞甲基環丁腈（10.0 g，107 mmol）和氫氧化鉀（18.1 g，322 mmol）溶於乙醇（100 mL）和水（50 mL）中，100℃下反應2小時後。加入1 N鹽酸（120 mL）。二氯甲烷萃取（30 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到3-亞甲基環丁烷羧酸（11.0 g，黃色油狀），産率：91%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ4.83-4.76（m，2H），3.15-2.96（m，1H），2.95-2.92（m，4H）。
第二步。
甲基-3-亞甲基環丁烷羧酸。
將3-亞甲基環丁烷羧酸（11.0 g，98.1 mmol）和碳酸鉀（27.1 g，196 mmol）溶於丙酮（100 mL）中，25℃下加入硫酸二甲酯（14.8 g，117 mmol），70℃反應12小時後。加入水（20 mL）淬滅反應，二氯甲烷萃取（30 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到甲基-3-亞甲基環丁烷羧酸（12.0 g，黃色油狀），産率：97%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ4.83-4.79（m，2H），3.96（s，2H），3.68（s，3H），3.17-3.15（m，1H），2.95-2.92（m，2H）。
第三步。
甲基3-（羥甲基）環丁烷羧酸乙酯。
將甲基-3-亞甲基環丁烷羧酸（2.00 g，15.8 mmol）溶於四氫呋喃（30 mL）中，-10℃下滴加硼烷二甲硫醚（3.61 g，47.5 mmol），然後-10℃反應3小時,加入3 N氫氧化鈉水溶液（10 mL）和雙氧水（5 mL），繼續反應1小時，反應液加入飽和硫代硫酸鈉水溶液（30 mL）淬滅反應，二氯甲烷萃取（10 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到甲基3-（羥甲基）環丁烷羧酸乙酯（2.00 g，黃色油狀），産率：87%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ3.70（s，3H），3.58（d，J = 6.8 Hz，1H），3.49（d，J = 6.8 Hz，1H），3.10-3.05（m，1H），2.32-2.26（m，3H），2.03-1.98（m，2H）。
第四步。
3-（甲基磺醯氧基甲基）環丁烷羧酸乙酯。
將3-（羥甲基）環丁烷羧酸乙酯（1.00 g，6.94 mmol）和三乙胺（2.11 g，20.8 mmol）溶於二氯甲烷（20 mL）中，0℃下加入甲烷磺醯氯（1.59 g，13.9 mmol）。反應液緩慢升至室溫，攪拌2小時。加入碳酸氫鈉水溶液（50 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到3-（甲基磺醯氧基甲基）環丁烷羧酸乙酯（1.40 g，黃色油狀），産率：91%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ4.28（d，J = 6.8 Hz，1H），4.19（d，J = 6.8 Hz，1H），3.70（s，3H），3.20-3.08（m，4H），2.40-2.34（m，3H），2.13-2.09（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 223，實測值223。
第五步。
3-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環丁烷羧酸乙酯
將3-（甲基磺醯氧基甲基）環丁烷羧酸乙酯（1.40 g，6.30 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（1.13 g，6.30 mmol），碘化鉀（209 mg，1.26 mmol）和碳酸鉀（2.61 g，18.90 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（100 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，加入水（100 mL），用二氯甲烷萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到3-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環丁烷羧酸乙酯（1.50 g，黃色固體），産率：78%。
1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.51（s，1H），4.18-4.10（m，2H），3.99（s，3H），3.67（s，3H），3.55（s，3H），3.26-2.65（m，2H），2.29-2.13（m，4H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 307，實測值307。
第六步。
3-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環丁烷羧酸
將3-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環丁烷羧酸乙酯（1.00 g，3.26 mmol），氫氧化鉀（548 mg，9.78 mmol）溶於甲醇（10 mL）和水（5 mL）中。反應液升溫至90℃，攪拌3小時。冷却至室溫，加入1 N鹽酸（20 mL）中和過濾，用二氯甲烷萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到3-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環丁烷羧酸（800.00 mg，黃色固體），産率：84%。MS-ESI計算值[M + H]+ 293，實測值293。
第七步。
3-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]-N -甲氧基-N -甲基環丁烷甲醯胺。
將3-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環丁烷羧酸（300 mg，1.03 mmol），N ，O -二甲基羥胺鹽酸鹽（200 mg，2.05 mmol），1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（394 mg，2.06 mmol），1-羥基苯並三唑（27.8 mg，0.206 mmol）和三乙胺（312 mg，3.09 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中。25℃攪拌12小時。反應液減壓濃縮，用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.3）得到3-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]-N -甲氧基-N -甲基環丁烷甲醯胺（200 mg，黃色固體），産率：58%。MS-ESI計算值[M + H]+ 336，實測值336。
第八步。
1-[（3-乙醯基環丁基）甲基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮
將3-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]-N -甲氧基-N -甲基環丁烷甲醯胺（300 mg，0.894 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中。0℃下滴加甲基溴化鎂（3 M乙醚溶液，1.49mL，4.47 mmol）攪拌3小時。反應液加入飽和氯化銨溶液（20 mL）淬滅反應，用二氯甲烷萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.5）得到1-[（3-乙醯基環丁基）甲基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮（200 mg，黃色固體），産率：77%。
MS-ESI計算值[M + H]+ 291，實測值291。
第九步。
將1-[（3-乙醯基環丁基）甲基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮（250 mg，0.861 mmol），氟化銫（130 mg，0.861 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基-三氟甲基-矽烷（244 mg，1.72 mmol），攪拌12小時。加入水（20 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到産物1（65.0 mg，黃色固體）（異構體1，第一個峰），産率：20%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.21（s，1H），4.23（d，J = 7.6 Hz，2H），4.03（s，3H），3.55（s，3H），3.26-3.19（m，2H），2.63-2.56（m，2H），2.55-2.42（m，2H），1.82-1.78（m，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 361，實測值361。
産物2（異構體2，第二個峰），産率：22%。1H NMR：（400 MHz，Methonal-d4）δ8.05（s，1H），4.01-3.99（m，5H），4.03（s，3H），3.54（s，3H），2.71-2.66（m，1H），2.55-2.54（m，1H），2.17-2.12（m，2H），2.02-1.98（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 361，實測值361。
實施例10。
第一步。
1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-羧酸甲酯。
將3-氧代-環戊羧酸甲酯（16.0 g，110 mmol），對甲苯磺酸（14.0 g，220 mmol）和乙二醇（969 mg，5.60 mmol）溶於無水甲苯（160 mL）中，加分水器後加熱回流4小時。加入水（200 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取，合併有機相。合併有機相，依次用水（200 mL x 2），飽和氯化鈉溶液（200 mL x 2）洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾。濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（5：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）所得物1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-羧酸甲酯（6.20 g，黃色油狀），産率：29%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ3.93-3.89（m，4H），3.69（s，3H），2.91-2.89（m，1H），2.11-1.82（m，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 187，實測值187。
第二步。
（1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-基）-甲醇。
將1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-羧酸甲酯（1.00 g，10.7 mmol）溶於無水四氫呋喃（30 mL）中，氮氣保護，-10℃緩慢加入四氫鋁鋰（531 mg，13.9 mmol）。反應液緩慢升至25℃，攪拌3小時。向反應液中依次加入水（0.5 mL），15%氫氧化鈉溶液（0.5 mL），水（1.5mL）。過濾除去不溶物，濾液減壓濃縮得到（1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-基）-甲醇（1.5 mg，黃色油狀），産率：88%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ3.94-3.89（m，4H），3.58-3.57（m，2H），2.31-1.48（m，7H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 159，實測值159。
第三步。
甲磺酸1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-基甲酯。
將（1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-基）-甲醇（500 mg，53.1 mmol）和三乙胺（800 mg，7.92 mmol）溶於無水二氯甲烷（5 mL）中，氮氣保護，0℃緩慢加入甲烷磺醯氯（433 mg，3.80 mmol）。反應液升至在25℃，攪拌2小時。加入水（40 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取。合併有機相，依次用水（20 mL x 2），飽和氯化鈉溶液（50 mL x 2）洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到甲磺酸1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-基甲酯（800 mg，黃色油狀）。MS-ESI計算值[M + H]+ 237，實測值237。
第四步。
（1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-基甲基）-3，7-二甲基1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將甲磺酸1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-基甲酯（300 mg，1.27 mmol）溶於無水N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中，氮氣保護，25℃加入碳酸鉀（350 mg，2.54 mmol），碘化鉀（21.0 mg，0.130 mmol），2，6-羥基-3，7-二甲基嘌呤（275 mg，1.52 mmol）。反應液加熱至在130℃，攪拌3小時。反應液降至25℃，加入水（40 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯（30 mL x 2）萃取。合併有機相，用飽和氯化鈉溶液（100 mL x 2）洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到（1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-基甲基）-3，7-二甲基1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（200 mg，白色固體），産率：45%。MS-ESI計算值[M + H]+ 321，實測值321。
第五步。
3，7-二甲基-1-（3-氧代-環戊基甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將（1，4-二氧雜螺[4.4]壬烷-7-基甲基）-3，7-二甲基1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（200 mg，0.620 mmol）溶於無水四氫呋喃（5 mL）中，氮氣保護，25℃加入濃鹽酸（3 mL）。反應液在25℃條件下攪拌1小時。加入水（60 mL）稀釋，反應液用乙酸乙酯（20 mL x 3）萃取。合併有機相，用飽和氯化鈉溶液（100 mL x 2）洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（1：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3），得到3，7-二甲基-1-（3-氧代-環戊基甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（100 mg，黃色油狀），産率：57%。MS-ESI計算值[M + H]+ 277，實測值277。
第六步。
1，3反式-1-（（3-羥基-3-（三氟甲基）環戊基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
1，3順式-1-（（3-羥基-3-（三氟甲基）環戊基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3，7-二甲基-1-（（3-氧代環戊基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（100 mg，0.362 mmol）和氟化銫（11.0 mg，0.0725 mmol）溶於無水四氫呋喃（3 mL）中，氮氣保護下加入三氟甲基三甲基矽烷（95.0 mg，0.640 mmol）。反應液緩慢加熱至30℃，攪拌12小時。向反應液中加入鹽酸水溶液（1 N，5 mL），繼續在30℃攪拌0.5小時。向反應液中加入水（50 mL）稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液（10 mL）調pH值至7，用乙酸乙酯（30 mL x 2）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用製備高效液相色譜純化，得到兩個異構産物。
産物1（異構體1，第一個峰）（40.0 mg，白色固體），産率：32％。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.68（s，1H），4.13-4.08（m，2H），4.05（s，3H），3.61（s，3H），2.80-2.78（m，1H），2.40-2.24（m，1H），2.04-2.03（m，1H），2.01-1.87（m，2H），1.84-1.76（m，1H），1.62-1.60（m，1H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 347，實測值347。
産物2（異構體2，第二個峰）（20.0 mg，白色固體），産率：16％。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.62（s，1H），4.22-4.18（m，1H），4.05-4.04（m，1H），4.00（s，3H），3.63（s，3H），2.65-2.63（m，1H），2.09-2.01（m，4H），1.70-1.68（m，1H），1.67-1.65（m，1H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 347，實測值347。
實施例11。
1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
乙基1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-羧酸乙酯。
將乙基4-氧代環己烷羧酸（30.0 g，176 mmol），乙二醇（22.0 g，353 mmol）和對甲苯磺酸（304 mg，1.70 mmol）溶於甲苯（315 mL）中，加分水器後加熱回流反應過夜。反應液冷却至25℃，依次用水（300 mL x 2）、飽和碳酸氫鈉（500 mL x 2）洗滌，有機相用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法分離純化（1：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到産物乙基1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-羧酸乙酯（37.2 g，黃色液體），産率：99%。MS-ESI計算值[M + H]+ 215，實測值215。
第二步。
1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲醇。
在氮氣保護，0℃時下將四氫鋁鋰（2.30 g，61.0 mmol）緩慢加入四氫呋喃（60 mL）中，滴加乙基1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-羧酸乙酯（10.0 g，42.0 mmol）的四氫呋喃（40 mL）溶液。反應緩慢升至25℃，攪拌3.5小時。反應液冷却至0℃，依次緩慢加入水（2.3 g，127 mmol），15% 氫氧化鈉（2.3 g，8.60 mmol）及水（6.9 g，383 mmol）。過濾，濾餅用四氫呋喃（50 mL x 3）洗滌，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到産品1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲醇（6.22 g，黃色液體），産率：89%。MS-ESI計算值[M + H]+ 173，實測值173。
第三步。
1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基甲磺酸酯。
將1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲醇（2.00 g，12.0 mmol）及二異丙基乙基胺（3.10 g，24.0 mmol）溶於二氯甲烷（40 mL）中，在0℃下緩慢加入甲烷磺醯氯（3.90 g，30.0 mmol）。反應液升至25℃，攪拌過夜。加入飽和氯化銨水溶液（100 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（200 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮用矽膠柱色譜法分離純化（3：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4），得到産物1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基甲磺酸酯（1.80 g，黃色液體），産率：60%。MS-ESI計算值[M + H]+ 251，實測值251。
第四步。
1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基甲磺酸酯（1.50 g，6.00 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.00 g，6.00 mmol）及碳酸鉀（2.50 g，18.0 mmol），碘化鉀（100 mg，0.600 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（20 mL）中，反應液加熱至130℃，攪拌3小時。反應液冷却至25℃，加入飽和食鹽水淬滅（100 mL）反應，用乙酸乙酯萃取（500 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法分離純化（1：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到産物1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.75 g，白色固體），産率：63%。MS-ESI計算值[M + H]+ 335，實測值335。
第五步。
3，7-二甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.50 g，4.50 mmol）溶於丙酮（15 mL）中，加入鹽酸水溶液（2N，2.5 mL）。反應25℃攪拌過夜，加入水（50 mL）淬滅，用乙酸乙酯萃取（50 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮用矽膠柱色譜法純化（1：3 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到産物3，7-二甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.02 g，白色固體），産率：78%。MS-ESI計算值[M + H]+ 291，實測值291。
第六步。
1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3，7-二甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（100 mg，0.330 mmol）及氟化銫（60.0 mg，0.350 mmol）溶於四氫呋喃（5 mL）中，在氮氣保護下緩慢加入三氟甲基三甲基矽烷（75.0 mg，0.500 mmol）。反應液在30℃下攪拌3小時。冷却至25℃，加入鹽酸水溶液（4 N，3 mL），在25℃攪拌半小時，調節PH值至7，加水稀釋，用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用製備高效液相色譜純化得産物1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（24.0 mg，白色固體），産率：39%。
1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.86（s，1H），4.04（d，J = 7.2 Hz，1H），3.97（s，3H），3.89（d，J = 7.6 Hz，1H），3.53（s，3H），2.06-1.97（m，2H），1.88-1.77（m，3H），1.62-1.43（m，4H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 361，實測值361。
實施例12。
第一步。
4-羥基-4-（三氟甲基）環己烷甲酸乙酯。
將4-氧代環己烷甲酸乙酯（10.0 g，58.7 mmol）溶於四氫呋喃（100 mL）中，室溫條件下加入三氟甲基三甲基矽烷（12.5 g，88.1 mmol）和氟化銫（8.92 g，58.7 mmol）。反應液在室溫攪拌12小時，加入四丁基氟化銨（9.27 g，29.4mmol），室溫攪拌30分鐘後加入乙酸乙酯（80 mL）稀釋，有機相用飽和碳酸氫鈉（50 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（10：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.5）得到4-羥基-4-（三氟甲基）環己烷甲酸乙酯（12.0 g，無色油狀物），産率：85%。1 H NMR:（400 MHz，Methanol-d4 ）δ4.20-4.12（m，2H），2.03-1.86（m，9H），1.29-1.25（m，3H）。
MS-ESI計算值[M + H]+ 241，實測值241。
第二步。
4-（羥基甲基）-1-（三氟甲基）環己醇。
將4-羥基-4-（三氟甲基）環己烷甲酸乙酯（12.00 g，49.9 mmol）溶於四氫呋喃（20 mL）中，0℃下，加入四氫鋰鋁（3.79 g，100 mmol），反應2小時。加入水（30 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（50 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用用矽膠柱色譜法分離純化（1：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.2）得到（4-（羥基甲基）-1-（三氟甲基）環己醇（9.00 g，無色油狀物），産率：91%。1 H NMR:（400 MHz，Methanol-d4 ）δ3.58-3.40（m，2H），1.90-1.40（m，9H）。
第三步。
（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯。
將（4-（羥基甲基）-1-（三氟甲基）環己醇（11.0 g，55.5 mmol）和三乙胺（1.18 g，11.6 mmol）溶於二氯甲烷（80 mL）中，0℃條件下加入甲磺醯氯（14.4 g，125 mmol）。反應液於室溫攪拌2小時後，加入二氯甲烷（60 mL）稀釋，用飽和碳酸氫鈉（50 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（4：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.5）得到（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯（13.00 g，無色油狀物），産率：85%。1 H NMR:（400 MHz，Methanol-d4 ）δ4.25-4.01（m，2H），3.10-3.07（m，3H），2.03-1.24（m，9H）。
第四步。
1-（（（1S ，4S ）-4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯（10.0 g，36.2 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（100 mL）中，反應液於室溫條件下加入3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（6.52 g，36.2 mmol），碳酸鉀（7.50 g，54.3 mmol）和碘化鉀（184 mg，1.11 mmol）。反應液加熱至100℃，反應5小時，反應液濃縮，加入乙酸乙酯（100 mL）稀釋，有機相用飽和碳酸氫鈉（50 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，通過製備型SFC來分離，分離條件：色譜柱：Chiralpak AD-3 150 x 4.6mm I.D.，3um 流動相：乙醇（0.05% 二乙胺）in CO2 from 5% to 40% at 2.5mL/min 波長: 220nm得到産物1（2.5 g，白色固體）（異構體1，第1個峰），産率：19%。1 H NMR：（400 MHz，Methanol-d4 ）δ7.88（s，1H），4.02（d，J = 7.6 Hz，2H），3.98（s，3H），3.53（s，3H），2.16-2.02（m，1H），1.99-1.98（m，2H），1.87-1.80（m，2H），1.60-1.49（m，2H），1.48-1.46（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 361，實測值361。
産物2（2.40 g，白色固體）（異構體2，第二個峰），産率：19%。1 H NMR:（400 MHz，CDCl3 ）δ7.88（s，1H），3.99（s，3H），3.90（d，J = 7.6 Hz，2H），3.54（s，3H），1.84-1.81（m，3H），1.58-1.46（m，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 361，實測值361。
實施例13。
1-（（4-羥基-4-甲基環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3，7-二甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（50.0 mg，0.170 mmol）溶於四氫呋喃（2 mL）中。氮氣保護，在-78℃緩慢加入甲基格氏試劑（3 M乙醚溶劑，0.4 mL，1.20 mmol）。反應液在-78℃攪拌0.5小時，緩慢升至0℃繼續攪拌0.5小時。加入氯化銨飽和溶液淬滅，調節pH值至7。用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾。濾液減壓濃縮用製備高效液相色譜純化得産物1-（（4-羥基-4-甲基環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（8.0 mg，白色固體），産率：16%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.86（s，1H），3.97（s，3H），3.88（d，J = 7.6 Hz，2H），3.52（s，3H），1.85-1.78（m，1H），1.73-1.57（m，3H），1.46-1.33（m，2H），1.32-1.15（m，6H）。MS-ESI計算值[M + H-H2 O]+ 289，實測值289。
實施例14。
1-（（4-乙基-4-羥基環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H-嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3，7-二甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（50.0 mg，0.170 mmol）溶於四氫呋喃（2 mL）中。氮氣保護，在-78℃緩慢加入乙基格氏試劑（3M在乙醚溶劑，0.4 mL，1.20 mmol）。反應液在-78℃攪拌0.5小時，緩慢升至0℃繼續攪拌0.5小時。加入氯化銨飽和溶液淬滅，調節pH值至7。用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾。濾液減壓濃縮用製備高效液相色譜純化得産物 1-（（4-乙基-4-羥基環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H-嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（42.0 mg，白色固體），産率：77%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.86（s，1H），3.97（s，3H），3.88（d，J = 7.6 Hz，2H），3.54-3.50（m，3H），1.93-1.80（m，1H），1.76-1.72（m，2H），1.66-1.51（m，3H），1.38-1.28（m，3H），1.27-1.13（m，2H），0.89（t，J = 7.2 Hz，3H）。MS-ESI計算值[M + H-H2 O]+ 303，實測值303。
實施例15。
第一步。
乙基2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-亞基）乙酸甲酯。
將膦醯基乙酸三乙酯（12.2 g，54.4 mmol）溶於四氫呋喃（100 mL），0℃下分批加入氫化鈉（1.92 g，48.0 mmol），氮氣保護下攪拌反應30分鐘。0℃下將溶於四氫呋喃（15 mL）的1，4-環己二酮單乙二醇縮酮（5.00 g，32.0 mmol）溶液滴加到反應液中，反應液於25℃下攪拌反應3小時。加入水（25 mL）淬滅反應，用二氯甲烷（20 mL x 3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗滌（20 mL），無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，剩餘物剩餘物用矽膠柱色譜法純化（5：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3），得乙基2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-亞基）乙酸甲酯（6.30 g，無色油狀物），産率：93%。1 H NMR：（400MHz，CDCl3 ）δ5.67（s，1H），4.15（q，J = 7.2 Hz，2H），3.98（s，4H），3.00（t，J = 6.4 Hz，2H），2.38（t，J = 6.4 Hz，2H），1.84-1.68（m，4H），1.28（t，J = 7.2 Hz，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 227，實測值227。
第二步。
乙基2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙酸乙酯。
將甲基2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-亞基）乙酸甲酯（3.80 g，17.9 mmol）溶於甲醇（50 mL），加入幹鈀碳（鈀10%，水1%，400 mg），室溫下，反應液於氫氣（50 psi）下反應18小時。反應液過濾，濾液減壓濃縮得到甲基2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙酸乙酯（3.50 g，無色油狀物），産率：91%。
1 H NMR：（400MHz，CDCl3 ）δ4.12（q，J = 7.2 Hz，2H），3.93（s，4H），2.22（d，J = 7.2 Hz，2H），1.90-1.64（m，5H），1.63-1.48（m，2H），1.40-1.16（m，5H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 229，實測值229。
第三步。
2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙醇。
將乙基2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙酸乙酯（1.00 g，4.38 mmol）溶於四氫呋喃（20 mL），0℃下分批加入四氫鋰鋁（216 mg，5.69 mmol），氮氣保護下攪拌反應18小時。反應液冷却至0℃，依次緩慢加入水（0.2 mL），15% 氫氧化鈉水溶液（0.2 mL）及水（0.6 mL）。過濾，濾液減壓濃縮得到産物2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙醇（780 mg，黃色油狀物），産率：96%。
1 H NMR：（400MHz，CDCl3 ）δ3.94（s，4H），3.69（t，J = 6.4 Hz，2H），1.79-1.65（m，4H），1.59-1.38（m，5H），1.34-1.17（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 187，實測值187。
第四步。
2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙基甲磺酸酯
將2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙醇（400 mg，2.15 mmol）及三乙胺（435 mg，4.30 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中，在0℃下緩慢加入甲烷磺醯氯（369 mg，3.23 mmol）。反應液於0℃下，攪拌4小時。加水（10 mL）淬滅反應，用二氯甲烷萃取（30 mL x 2）。合併有機相，用飽和碳酸氫鈉水溶液（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙基甲磺酸酯（500 mg粗品，黃色油狀物）。
1 H NMR：（400MHz，CDCl3 ）δ4.28（t，J = 6.4 Hz，2H），3.94（s，4H），3.01（s，3H），1.76-1.63（m，6H），1.60-1.43（m，3H），1.37-1.21（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 265，實測值265。
第五步。
1-（2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（204 mg，1.13 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（15 mL），加入2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙基甲磺酸酯（300 mg，1.13 mmol），碳酸鉀（312 mg，2.26 mmol）和碘化鉀（225 mg，1.36 mmol）。反應液加熱到120℃，攪拌3小時。減壓濃縮，剩餘物用矽膠柱色譜法純化（1：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.2），得1-[2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮（190 mg，白色固體），産率：48%。
1 H NMR：（400MHz，CDCl3 ）δ7.50（s，1H），4.09-4.03（m，2H），4.02（s，3H），3.99（s，4H），3.57（s，1H），1.90-1.70（m，5H），1.68-1.47（m，6H），1.45-1.31（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 349，實測值349。
第六步。
3，7-二甲基-1-（2-（4-氧代環己基）乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-[2-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基）乙基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮（190 mg，545 umol）溶於四氫呋喃（3 mL），加入濃鹽酸（1 mL）。反應液室溫下攪拌18小時。反應液減壓濃縮，水相用飽和碳酸氫鈉中和到pH至7，用乙酸乙酯（20 mL x 2）萃取，合併有機相，用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，剩餘物用矽膠柱色譜法純化（乙酸乙酯，Rf = 0.3），得3，7-二甲基-1-（2-（4-氧代環己基）乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（150 mg，無色油狀物），産率：90%。
MS-ESI計算值[M + H]+ 305，實測值305。
第七步。
3，7-二甲基-1-（2-（4-（三氟甲基）-4-（（三甲基甲矽烷基）氧基）環己基）乙基）-1-嘌呤-2，6-（3H，7H）-二酮。
將3，7-二甲基-1-[2-（4-氧環己基）乙基]嘌呤-2，6-二酮（145 mg，0.476 mmol）及氟化銫（7.2 mg，0.0476 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，在氮氣保護下緩慢加入三氟甲基三甲基矽烷（ 203 mg，1.43 mmol）。反應液在25℃下攪拌18小時。加入水（20 mL）稀釋反應液，用乙酸乙酯（15 mL x 2）萃取，合併有機相，飽和食鹽水洗滌（10 mL），用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得3，7-二甲基-1-（2-（4-（三氟甲基）-4-（（三甲基甲矽烷基）氧基）環己基）乙基）-1-嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（170 mg，無色液體），産率：80%。
MS-ESI計算值[M + H]+ 447，實測值447。
第八步。
將3，7-二甲基-1-[2-[4-（三氟甲基）-4-三甲基矽氧基-環己基]乙基]嘌呤-2，6-二酮（160 mg，0.358 mmol）溶於四氫呋喃（3 mL），加入濃鹽酸（12 M，0.107 mL）。反應液於25℃攪拌18小時。加水稀釋，飽和碳酸氫鈉溶液（10 mL）調節pH至7，用乙酸乙酯萃取（10 mL x 2）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用製備高效液相色譜純化得産物1（40.0 mg，白色固體）（異構體1，第一個峰），産率：27%。1 H NMR：（400MHz，CDCl3 ）δ8.01（s，1H），4.09-3.94（m，5H），3.53（s，3H），1.97-1.79（m，4H），1.76-1.62（m，3H），1.61-1.45（m，4H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 375，實測值375。和産物2（15.0 mg，白色固體）（異構體2，第二個峰），産率：10%。1 H NMR：（400MHz，CDCl3 ）δ8.01（s，1H），4.09-3.95（m，5H），3.53（s，3H），1.87-1.68（m，4H），1.64-1.48（m，4H），1.46-1.25（m，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 375，實測值375。
實施例16。
1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H-嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
乙基-8-甲基-1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸三級丁酯
將乙基1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸乙酯（5.00 g，23.3 mmol）溶於無水四氫呋喃（100 mL）中，在氮氣保護，-78℃時緩慢滴加二異丙基氨基鋰溶液（2 M四氫呋喃溶液，14.0 mL，28.0 mmol），反應液在-78℃攪拌1小時。緩慢加入碘甲烷（6.62 g，46.7 mmol），繼續攪拌1小時。加入水（100 mL）淬滅反應。反應液用乙酸乙酯（100 mL x 3）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（10：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到乙基-8-甲基-1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸三級丁酯（5.00 g，黃色油狀物），産率：94%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ4.16-4.10（m，2H），3.93-3.86（m，4H），2.13-2.06（m，2H），1.61-1.48（m，6H），1.25-1.22（m，3H），1.15（s，3H）。
第二步。
乙基-1-甲基-4-氧代環己烷羧酸。
將乙基-8-甲基-1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸三級丁酯（5.00 g，21.9 mmol）溶於四氫呋喃（50 mL），0℃下滴加1 N 鹽酸水溶液（20 mL）後於20℃攪拌1小時。混合物冷却到0℃，加入碳酸氫鈉溶液（50 mL）淬滅反應。混合物用乙酸乙酯（100 mL x 3）萃取。有機相用飽和食鹽水（100 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮。用矽膠柱色譜法純化（10：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到乙基-1-甲基-4-氧代環己烷羧酸（3.00 g，無色油狀物），産率：74%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ4.26-4.11（m，2H），2.46-2.29（m，5H），1.74-1.55（m，3H），1.33-1.26（m，6H）。
第三步。
乙基4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己烷羧酸。
將乙基-1-甲基-4-氧代環己烷羧酸（3.00 g，16.3 mmol），氟化銫（247 mg，1.63 mmol）溶於四氫呋喃（50 mL）中，然後0℃加入三甲基矽三氟甲基（4.63 g，35.3 mmol）。反應液在20℃氮氣保護下反應6小時。然後加入4 N 鹽酸水溶液（4 mL）。混合物在室溫氮氣保護下反應6小時。加入碳酸氫鈉飽和溶液（30 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（100 mL x 3），有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（10：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到乙基4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己烷羧酸（3.00 g，無色油狀物），産率：73%。1 H NMR:（400 MHz，Methanol-d4 ）δ4.20-4.12（m，2H），2.03-1.31（m，8H），1.29-1.23（m，6H）。
第四步。
4-（羥甲基）-4-甲基-1-（三氟甲基）環己醇。
將乙基4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己烷羧酸（3.00 g，11.8 mmol）溶於無水四氫呋喃（50 mL）中，0℃下加入四氫鋁鋰（896 mg，23.6 mmol）。反應液升溫至25℃，攪拌1小時。加水（20 mL）淬滅，用乙酸乙酯（50 mL x 3）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（3：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.2），得到4-（羥甲基）-4-甲基-1-（三氟甲基）環己醇（2.00 g，無色油狀物），産率：80%。1 H NMR:（400 MHz，Methanol-d4 ）δ3.25（s，2H），1.76-1.64（m，6H），1.29-1.26（m，2H）,0.93-0.91（m，3H）。
第五步。
（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯。 將4-（羥甲基）-4-甲基-1-（三氟甲基）環己醇（2.00 g，9.42 mmol）溶解在二氯甲烷（30 mL）中，在0℃下加入三乙胺（953 mg，9.42 mmol）和甲烷磺醯氯（1.08 g，9.42 mmol）。反應液在0℃下反應2小時。加入碳酸氫鈉飽和水溶液（10 mL）淬滅，用二氯甲烷（50 mL x 3）萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液（50 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯（2.00 g，黃色油狀物），産率：73%。
第六步。
1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯（100 mg，0.344 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（62.1 mg，0.344 mmol），碘化鉀（5.70 mg，0.0344 mmol）和碳酸鉀（47.6 mg，0.344 mmol）溶於無水N ，N -二甲基甲醯胺（5 mL）中。反應液微波加熱至150℃，反應4小時。反應液冷却至20℃，過濾，用製備高效液相色譜純化，得到1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（3.0 mg，白色固體），産率：2%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.88（s，1H），3.98（s，3H），3.96（s，2H），3.54（s，3H），1.81-1.64（m，6H），1.63-1.34（m，2H），1.00（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 375，實測值375。
實施例17。
1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
乙基8-（甲氧基甲基）-1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸乙酯。
將乙基1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸乙酯（5.00 g，23.3 mmol）溶於無水四氫呋喃（100 mL）中，在氮氣保護，-78℃時緩慢滴加二異丙基氨基鋰溶液（2 M正己烷溶液，14.0 mL，28.0 mmol），反應液在-78℃攪拌1小時。緩慢加入甲氧基溴甲烷（5.83 g，46.7 mmol），繼續攪拌1小時。加入水（100 mL）淬滅反應。反應液用乙酸乙酯（100 mL x 3）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（10：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到乙基8-（甲氧基甲基）-1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸乙酯（5.00 g，黃色油狀物），産率：83%。1 H NMR:（400 MHz，Methanol-d4 ）δ4.18（q，J = 6.8 Hz，2H），3.94（s，4H），3.55（s，2H）,3.33（s，3H），2.14-2.12（m，2H），1.65-1.57（m，6H）,1.26（t，J = 6.8 Hz，3H）。
第二步。
乙基-1-（甲氧基甲基）-4-氧代環己烷羧酸乙酯。
將乙基8-（甲氧基甲基）-1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸乙酯（5.00 g，19.4 mmol）溶於四氫呋喃（50 mL），0℃下滴加 1 N 稀鹽酸（10 mL）後於20℃攪拌 1小時。混合物冷却到0℃，加入碳酸氫鈉溶液（50 mL）淬滅反應。混合物用乙酸乙酯（100 mL x 3）萃取。有機相用飽和食鹽水（100 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮。用矽膠柱色譜法純化（10：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到乙基-1-（甲氧基甲基）-4-氧代環己烷羧酸乙酯（3.00 g，白色油狀物），産率：73%。1 H NMR:（400 MHz，Methanol-d4 ）δ4.25（q，J = 6.8 Hz，2H），3.52（s，2H），3.34（s，3H），2.52-2.30（m，6H），1.82-1.78（m，2H）,1.30（t，J = 6.8 Hz，3H）。
第三步。
4-羥基-1-（甲氧基甲基）-4-（三氟甲基）環己烷羧酸乙酯。
將乙基-1-（甲氧基甲基）-4-氧代環己烷羧酸乙酯（3.00 g，14.0 mmol），氟化銫（243 mg，1.40 mmol）溶於四氫呋喃（50 mL）中，然後0℃加入三甲基矽三氟甲基（3.98 g，28.0 mmol）。反應液在20℃氮氣保護下反應6小時。然後加入4 N 稀鹽酸（7 mL）。混合物在室溫氮氣保護下反應6小時。加入碳酸氫鈉飽和溶液（30 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（100 mL x 3），有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（10：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到4-羥基-1-（甲氧基甲基）-4-（三氟甲基）環己烷羧酸乙酯（1.7 g，無色油狀物），産率：43%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）4.18-4.09（m，2H），3.61（s，2H），3.33（s，3H），1.84-1.71（m，8H），1.28-1.25（m，3H）。
第四步。
4-（羥基甲基）-4-（甲氧基甲基）-1-（三氟甲基）環己醇。 將4-羥基-1-（甲氧基甲基）-4-（三氟甲基）環己烷羧酸乙酯（1.50 g，5.28 mmol）溶於無水四氫呋喃（50 mL）中，0℃下加入四氫鋁鋰（220 mg，5.81 mmol）。反應液升溫至25℃，攪拌1小時。加水（20 mL）淬滅，用乙酸乙酯（50 mL x 3）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（1：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.2），得到4-（羥基甲基）-4-（甲氧基甲基）-1-（三氟甲基）環己醇（1.20 g，無色油狀物），産率：84％。1 H NMR:（400 MHz，Methanol-d4 ）δ3.33-3.32（m，7H），1.67-1.63（m，4H），1.52-1.48（m，4H）。
第五步。
（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯。
將4-（羥基甲基）-4-（甲氧基甲基）-1-（三氟甲基）環己醇（1.20 g，4.95 mmol）溶解在二氯甲烷（20 mL）中，在0℃下加入三乙胺（851 mg，9.91 mmol）和甲烷磺醯氯（851 mg，7.43 mmol）。反應液在0℃下反應2小時。加入碳酸氫鈉飽和水溶液（10 mL）淬滅，用二氯甲烷（50 mL x 3）萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液（50 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯（1.30 g，黃色油狀物），産率：92％。
第六步。
1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯（300 mg，1.05 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（189 mg，1.05 mmol），碘化鉀（17.4 mg，0.105 mmol）和碳酸鉀（435 mg，3.15 mmol）溶於無水N ，N -二甲基甲醯胺（5 mL）中。反應液微波加熱至150℃，反應2小時。反應液冷却至20℃，過濾，用製備高效液相色譜純化，得到 1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（12.0 mg，白色固體），産率：3%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.87（s，1H），4.06（s，2H），3.83（s，3H），3.98（s，3H），3.53（s，2H），3.42（s，3H），1.69-1.58（m，8H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 405，實測值405。
實施例18。
1-（（4-（3-羥基戊3-基）-環己基）甲基）-3，7-二甲基1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
4-羥甲基環己烷羧酸甲酯。
將1，4-環己烷甲酸甲酯（1.20 g，6.45 mmol）溶於無水四氫呋喃（20mL）中，氮氣保護，0℃下時緩慢滴加硼烷二甲硫醚（10 M，1.0 mL，10.3 mmol），反應液在0℃攪拌0.5小時，緩慢升至25℃，繼續攪拌1小時。加入水（40 mL）淬滅反應，反應液用乙酸乙酯萃取。合併有機相，依次用水，飽和氯化鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到4-羥甲基環己烷羧酸甲酯（1.00 g，白色固體），産率：91%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ3.67（s，3H），3.48-3.46（m，2H），2.26-2.25（m，1H），2.05-2.01（m，2H），1.89-1.85（m，2H），1.47-1.43（m，2H），1.31（s，1H），1.01-0.98（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 173，實測值173。
第二步。
4-甲磺醯氧基甲基-環己烷羧酸甲酯。
將4-羥甲基環己烷羧酸甲酯（900 mg，5.20 mmol）和三乙胺（1.58 g，15.6 mmol）溶於無水二氯甲烷（5 mL）中，氮氣保護，0℃下加入甲烷磺醯氯（720 mg，6.30 mmol）。反應液升至25℃，攪拌2小時。加入水（60 mL）淬滅反應，反應液用乙酸乙酯萃取。合併有機相，依次用水，飽和氯化鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用製備TLC板純化（3：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.5），得産物4-甲磺醯氧基甲基-環己烷羧酸甲酯（1.00 g，白色固體），産率：91%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ3.67（s，3H），3.48-3.46（m，2H），3.01（s，3H），2.26-2.25（m，1H），2.05-2.01（m，2H），1.89-1.85（m，2H），1.47-1.43（m，2H），1.31（s，1H），1.01-0.98（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 251，實測值251。
第三步。
4-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）-環己烷羧酸甲酯。
將4-甲磺醯氧基甲基-環己烷羧酸甲酯（580 mg，2.32 mmol）溶於5mL無水N ，N -二甲基甲醯胺中，在氮氣保護下25℃加入碳酸鉀（640 mg，4.64 mmol），碘化鉀（38.0 mg，0.230 mmol），2，6-羥基-3，7-二甲基嘌呤（501 mg，2.80 mmol）。反應液在130℃下攪拌3小時。40 mL水加入反應液用乙酸乙酯萃取，合併有機相，依次用水、飽和氯化鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用高效製備板純化得到産物甲基4-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）-環己烷羧酸甲酯（400 mg，白色固體），産率：52%。MS-ESI計算值[M + H]+ 335，實測值335。
第四步。
1-（（4-（3-羥基戊3-基）-環己基）甲基）-3，7-二甲基1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將甲基4-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）-環己烷羧酸（100 mg，0.30 mmol）溶於5mL無水四氫呋喃中，在氮氣保護下-65℃時緩慢滴加乙基溴化鎂溶液（3 M乙醚溶液，1 mL，3.00 mmol），反應液在-65℃下攪拌2小時。反應液加入水（40 mL），用乙酸乙酯萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液（50 mL）洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用製備高效液相色譜純化得到産物1-（（4-（3-羥基戊3-基）-環己基）甲基）-3，7-二甲基1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（20.0 mg，白色固體），産率：19%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.52（s，1H），4.00（s，3H），3.90-3.88（m，2H），3.59（s，3H），1.80-1.74（m，6H），1.50-1.45（m，4H），1.11-1.10（m，4H），0.86-0.82（m，6H）。MS ESI計算值[M + H]+ 363，實測值363。
實施例19。
3，7-二甲基-1-[[反式-4-（2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基-乙基）環己基]甲基]嘌呤-2，6-二酮。
第一步。
反式-4-羥甲基環己烷羧酸甲酯。
將反式環己烷-1，4-二羧酸單甲酯（5.00 g，26.8 mmol）溶於四氫呋喃（100 mL）中，0℃下加入硼烷二甲硫醚（3.06 g，40.3 mmol），室溫反應2小時。加入飽和甲醇（50 mL）淬滅反應。濃縮後加水（50 mL）用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到反式-4-羥甲基環己烷羧酸甲酯（4.00 g，黃色油狀），産率：87%。1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ3.67（s，3H），3.43-3.38（m，2H），2.31-2.54（m，1H），2.03-1.98（m，2H），1.90-1.82（m，2H），1.45-1.38（m，3H），1.03-0.99（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 173，實測值173。
第二步。
反式-4-甲磺醯氧基甲基-環己烷羧酸甲酯。
將反式-4-羥甲基環己烷羧酸甲酯（4.00 g，23.2 mmol）和三乙胺（7.05 g，69.6 mmol）溶於二氯甲烷（50 mL）中，0℃下加入甲烷磺醯氯（7.98 g，69.6 mmol）。反應液緩慢升至室溫，攪拌2小時。加入碳酸氫鈉水溶液（50 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到反式-4-甲磺醯氧基甲基-環己烷羧酸甲酯（5.80 g，黃色油狀），産率：99%。1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ4.10-4.03（m，2H），3.65（s，3H），3.07（s，3H），2.42-2.31（m，1H），2.10-2.03（m，2H），1.90-1.82（m，2H），1.75-1.66（m，1H），1.48-1.42（m，2H），1.21-1.10（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 251，實測值251。
第三步。
反式-甲基4-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環己烷羧酸。
將反式-4-甲磺醯氧基甲基-環己烷羧酸甲酯（1.00 g，4.00 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（719 mg，4.00 mmol），碘化鉀（66.0 mg，0.397 mmol）和碳酸鉀（1.10 g，7.96 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮。用矽膠柱色譜法分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.1），得到反式-甲基4-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環己烷羧酸（800 mg，黃色固體），産率：60%。1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.88（s，1H），3.98（s，3H），3.90-3.82（m，2H），3.72（s，3H），3.51（s，3H），2.33-2.25（m，1H），2.03-1.98（m，2H），1.80-1.74（m，3H），1.42-1.36（m，2H），1.21-1.10（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 335，實測值335。
第四步。
1-（反式-4-乙醯基環己基甲基）-3，7-二甲基-3，7-二氫-嘌呤-2，6-二酮
將反式-甲基4-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環己烷羧酸（300 mg，0.897 mmol）和O ，N -二甲基羥胺鹽酸鹽（114 mg，1.17 mmol）溶於四氫呋喃（25 mL）中，0℃下加入甲基溴化鎂（3 M乙醚溶液，1.50 mL，4.50 mmol）。反應液緩慢升至室溫，攪拌12小時。加入飽和氯化銨（10 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備TLC板純化（乙酸乙酯，Rf = 0.4），得到1-（反式-4-乙醯基環己基甲基）-3，7-二甲基-3，7-二氫-嘌呤-2，6-二酮（80.0 mg，黃色油狀），産率：29%。1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.88（s，1H），3.98（s，3H），3.92-3.84（m，2H），3.55（s，3H），2.42-2.33（m，1H），2.15（s，3H），1.98-1.88（m，2H），1.85-1.75（m，3H），1.32-1.10（m，4H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 319，實測值319。
第五步。
3，7-二甲基-1-[[反式-4-（2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基-乙基）環己基]甲基]嘌呤-2，6-二酮。
將1-（反式-4-乙醯基環己基甲基）-3，7-二甲基-3，7-二氫-嘌呤-2，6-二酮（80.0 mg，0.251 mmol），氟化銫（11.5 mg，0.753 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基-三氟甲基-矽烷（71.6 mg，0.502 mmol），攪拌12小時。加入1 N鹽酸（10 mL）室溫下攪拌1小時，加入飽和碳酸氫鈉（50 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。加入用製備型高效液相色譜純化，得到3，7-二甲基-1-[[反式-4-（2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基-乙基）環己基]甲基]嘌呤-2，6-二酮（35.0 mg，黃色固體），産率：70%。1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.88（s，1H），3.98（s，3H），3.88（d，J = 6.8 Hz，2H），3.53（s，3H），1.96–1.67（m，6H），1.22（s，3H），1.15-1.06（m，4H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 389，實測值389。
實施例20。
3，7-二甲基-1-[反式-4-（2，2，2-三氟-1-羥基-1-三氟甲基-乙基）-環己基甲基]-3，7-二氫-嘌呤-2，6-二酮。
第一步。
3，7-二甲基-1-[反式-4-（2，2，2-三氟-1-羥基-1-三氟甲基-乙基）-環己基甲基]-3，7-二氫-嘌呤-2，6-二酮。
將反式-甲基4-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環己烷羧酸（200 mg，0.598 mmol），氟化銫（45.4 mg，0.299 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基-三氟甲基-矽烷（340 mg，2.39 mmol），攪拌12小時。加入1 N鹽酸（10 mL）室溫下攪拌1小時，加入飽和碳酸氫鈉（50 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。加入用製備型高效液相色譜純化，得到3，7-二甲基-1-[反式-4-（2，2，2-三氟-1-羥基-1-三氟甲基-乙基）-環己基甲基]-3，7-二氫-嘌呤-2，6-二酮（35.0 mg，黃色固體），産率：41%。
1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.88（s，1H），3.98（s，3H），3.88（d，J = 6.8 Hz，2H），3.53（s，3H），2.08-1.79（m，6H），1.30-1.24（m，2H），1.11-1.08（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 443，實測值443。
實施例21。
1-[[反式-4-（1-羥基環丙基）環己基]甲基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮。
第一步。
1-[[反式-4-（1-羥基環丙基）環己基]甲基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮。
將反式-甲基4-[（3，7-二甲基-2，6-二氧代-嘌呤-1-基）甲基]環己烷羧酸（200 mg，0.598 mmol），四異丙基氧化鈦（340 mg，1.20 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入乙基溴化鎂（3 M乙醚溶液，0.39 mL，1.17 mmol），攪拌12小時。加入飽和氯化銨（50 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。剩餘物用製備型高效液相色譜純化，得到1-[[反式-4-（1-羥基環丙基）環己基]甲基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮（70.0 mg，黃色固體），産率：35%。
1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.87（s，1H），3.98（s，3H），3.88（d，J = 6.8 Hz，2H），3.53（s，3H），1.79-1.71（m，5H），1.29-1.07（m，5H），0.60-0.57（m，2H），0.42-0.39（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 333，實測值333。
實施例22。
1-（2-（3-乙基-3-羥基環己基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
2-（3-乙基-3-羥基環己基）乙基甲磺酸酯。
將1-乙基-3-（2-羥基乙基）環己醇（450 mg，2.61 mmol）及二異丙基乙基胺（500 mg，3.92 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中，在0℃下緩慢加入甲烷磺醯氯（600 mg，5.40 mmol）。反應液在0℃攪拌0.5小時。加入水淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮用矽膠柱色譜法純化（10：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到産物2-（3-乙基-3-羥基環己基）乙基甲磺酸酯（450 mg，黃色油狀物），産率：69%。MS-ESI計算值[M + H]+ 251，實測值251。
第二步。
1-（2-（3-乙基-3-羥基環己基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將2-（3-乙基-3-羥基環己基）乙基甲磺酸酯（200 mg，0.790 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（144 mg，0.790 mmol）及碳酸鉀（220 mg，1.60 mmol），碘化鉀（13.1 mg，0.0790mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（3 mL）中。反應液加熱至130℃，攪拌3小時。反應液冷却至25℃，加入飽和食鹽水，用乙酸乙酯萃取（40 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用製備高效液相色譜分離純化得到産物1-（2-（3-乙基-3-羥基環己基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（70.0 mg，白色固體），産率：26%。1 H NMR： （400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.86（s，1H），4.09-3.94（m，5H），3.52（s，3H），1.88-1.84（m，1H），1.80-1.40（m，10H），1.26-1.16（m，1H），1.02-0.95（m，1H），0.91（t，J = 7.2 Hz，3H）。MS-ESI計算值[M + H-18]+ 317，實測值317。
實施例23。
第一步。
3-三氟甲基-3-三甲基矽烷氧基-環己烷甲酸乙酯。
將乙基-3-氧代環己烷羧酸（1.00 g，5.88 mmol），氟化銫（446 mg，2.94 mmol）溶於四氫呋喃（30 mL）中，室溫下加入三甲基-三氟甲基-矽烷（1.67 g，11.7 mmol），攪拌12小時。加入水（20 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水（60 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到3-三氟甲基-3-三甲基矽烷氧基-環己烷甲酸乙酯（1.40 g，黃色油狀），産率：76%。MS-ESI計算值[M + H]+ 313，實測值313。
第二步。
（3-三氟甲基-3-三甲基矽烷氧基環己基）甲醇。
將3-三氟甲基-3-三甲基矽烷氧基-環己烷甲酸乙酯（1.00 g，3.20 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，0℃下，加入四氫鋰鋁（243 mg，6.40 mmol），反應1小時。加入水（10 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到（3-三氟甲基-3-三甲基矽烷氧基環己基）甲醇（800 mg，無色油狀），産率：92%。MS-ESI計算值[M + H]+ 271，實測值271。
第三步。
[3-（三氟甲基）-3-三甲基矽氧基環己基]甲基甲磺酸酯。
將3-三氟甲基-3-三甲基矽烷氧基環己基）甲醇（850 mg，3.14 mmol）和三乙胺（953 mg，9.42 mmol）溶於二氯甲烷（15 mL）中，0℃下加入甲烷磺醯氯（719 mg，6.28 mmol）。反應液緩慢升至室溫，攪拌2小時。加入碳酸氫鈉水溶液（10 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到[3-（三氟甲基）-3-三甲基矽氧基環己基]甲基甲磺酸酯（900 mg，黃色油狀），産率：82%。1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d4 ）δ4.36-4.32（m，1H），4.17–4.13（m，1H），3.08（s，3H），2.12-1.60（m，9H），0.16（s，9H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 349，實測值349。
第四步。
3，7-二甲基-1-[[3-（三氟甲基）-3-三甲基矽氧基-環己基]甲基]嘌呤-2，6-二酮。
將[3-（三氟甲基）-3-三甲基矽氧基環己基]甲基甲磺酸酯（200 mg，0.573 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（103 mg，0.574 mmol），碘化鉀（28.6 mg，0.172 mmol）和碳酸鉀（374 mg，1.15 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（30 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮用製備型高效液相色譜純化，得到3，7-二甲基-1-[[3-（三氟甲基）-3-三甲基矽氧基-環己基]甲基]嘌呤-2，6-二酮（150 mg，黃色固體），産率：60%。
MS-ESI計算值[M + H]+ 433，實測值433。
第五步。
將3，7-二甲基-1-[[3-（三氟甲基）-3-三甲基矽氧基-環己基]甲基]嘌呤-2，6-二酮（200 mg，0.462 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，加入1 N鹽酸（10 mL）室溫下攪拌1小時，加入飽和碳酸氫鈉（50 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到産物1（10.0 mg，黃色固體）（異構體1，第一個峰），産率：6%。1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.87（s，1H），3.97（s，3H），3.89-3.83（m，2H），3.52（s，3H），2.23-2.22（m，1H），1.76-1.07（m，8H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 361，實測值361。
産物2（85.0 mg黃色固體）（異構體2，第二個峰），産率：51%。1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.87（s，1H），4.31-4.26（m，1H），3.99-3.95（m，4H），3.55（s，3H），2.26-1.88（m，3H），1.79-1.47（m，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 361，實測值361。
實施例24。
1-（（5-羥基-5-（三氟甲基）四氫-2H -吡喃-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
（3，4-二氫-2H -吡喃-2-基）甲醇。
將3，4-二氫-2H -吡喃-2-甲醛（3.00 g，26.7 mmol）溶於甲醇（20 mL）中，0℃下加入硼氫化鈉（2.02 g，53.5 mmol），反應2小時。加入飽和氯化銨（30 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（20 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到（3，4-二氫-2H -吡喃-2-基）甲醇（1.50 g，黃色油狀），産率：49%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ6.40（d，J = 6.0 Hz，1H），4.71-4.68（m，1H），3.86-3.83（m，1H），3.82-3.61（m，2H），2.13-2.12（m，1H），2.10-2.08（m，1H），2.02-2.01（m，1H），1.68-1.63（m，1H）。
第二步。
（3，4-二氫-2H -吡喃-2-基）甲基甲磺酸酯。
將（3，4-二氫-2H -吡喃-2-基）甲醇（1.50 g，13.1 mmol）和三乙胺（2.66 g，26.3 mmol）溶於二氯甲烷（20 mL）中，0℃下加入甲烷磺醯氯（3.01 g，26.3 mmol）。反應液緩慢升至室溫，攪拌2小時。加入碳酸氫鈉水溶液（10 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到（3，4-二氫-2H -吡喃-2-基）甲基甲磺酸酯（1.70 g，黃色油狀），産率：67%。MS-ESI計算值[M + H]+ 193，實測值193。
第三步。
1-（（3，4-二氫-2H -吡喃-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將（3，4-二氫-2H -吡喃-2-基）甲基甲磺酸酯（1.70 g，8.84 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（1.59 g，8.84 mmol），碘化鉀（146 mg，0.884 mmol）和碳酸鉀（2.44 g，17.7 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（50 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮用矽膠柱色譜法純化（乙酸乙酯，Rf = 0.4），得到1-（（3，4-二氫-2H -吡喃-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（1.30 g，黃色固體），産率：53%。MS-ESI計算值[M + H]+ 277，實測值277。
第四步。
1-（（5-羥基四氫-2H -吡喃-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（3，4-二氫-2H -吡喃-2-基甲基）-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮（600 mg，2.17 mmol）溶於四氫呋喃（30 mL）中，0℃下加入硼烷二甲硫醚（825 mg，10.7 mmol）。反應液緩慢升至室溫，攪拌12小時。加入3 N氫氧化鈉水溶液（30 mL）和雙氧水（10 mL），繼續反應1小時。加入甲醇（10 mL）淬滅反應，硫代硫酸鈉溶液（30 mL）洗滌，用二氯甲烷萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備TLC板分離純化（20：1二氯甲烷/甲醇，Rf = 0.3）得到1-（（5-羥基四氫-2H -吡喃-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（130 mg，黃色油狀），産率：20%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.88（s，1H），4.25-4.23（m，1H），4.20（s，3H），3.98-3.67（m，5H），3.54（s，3H），2.10-1.77（m，2H），1.49-1.31（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 295，實測值295。
第五步。
3，7-二甲基-1-（（5-氧代四氫-2H -吡喃-2-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（（5-羥基四氫-2H -吡喃-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（130 mg，0.441 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中，加入戴斯馬丁過碘烷（138 mg，1.33 mmol），25℃反應3小時。加入飽和硫代硫酸鈉溶液（20 mL）淬滅反應，二氯甲烷（10 mL x 3）萃取，合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備TLC板分離純化（20：1二氯甲烷/甲醇，Rf = 0.4），得到3，7-二甲基-1-（（5-氧代四氫-2H-吡喃-2-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（60.0 mg，黃色固體），産率：47%。MS-ESI計算值[M + H]+ 293，實測值293。
第六步。
1-（（5-羥基-5-（三氟甲基）四氫-2H -吡喃-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將3，7-二甲基-1-（（5-氧代四氫-2H -吡喃-2-基）甲基）-1H-嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（60.0 mg，0.205 mmol），氟化銫（6.24 mg，0.0411 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基三氟甲基矽烷（87.5 mg，0.615 mmol），攪拌5小時。加入1 N 鹽酸（10 mL）室溫下攪拌1小時，加入飽和碳酸氫鈉（50 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到1-（（5-羥基-5-（三氟甲基）四氫-2H -吡喃-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（15.0 mg，黃色固體），産率：30%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.28（s，1H），4.39-4.10（m，2H），4.05（s，3H），3.93-3.89（m，2H），3.55（s，3H），3.32-3.27（m，1H），1.89-1.65（m，4H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 363，實測值363。
實施例25。
1-（4-（3-羥基戊烷-3-基）苄基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
4-（（3，7-二甲基-2，6-氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）苯甲酸甲酯。
氮氣保護，在25℃和下將3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（180 mg，1.00 mmol），4-（溴甲基）苯甲酸甲酯（251 mg，1.10 mmol），碘化鉀（55.0 mg，0.33 mmol）和碳酸鉀（179 mg，1.30 mmol）溶解於無水N ，N -二甲基甲醯胺（4 mL）中，並加熱到110℃，攪拌3小時。冷却至25℃後，加水稀釋，用乙酸乙酯萃取（30 mL x 2）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮用色譜矽膠柱純化（1：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到4-（（3，7-二甲基-2，6-氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）苯甲酸甲酯（300 mg，白色固體），産率：91%。MS-ESI計算值[M + H]+ 329，實測值329。
第二步。
1-（4-（3-羥基戊烷-3-基）苄基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將4-（（3，7-二甲基-2，6-氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）苯甲酸甲酯（200 mg，0.610 mmol）溶解於無水四氫呋喃（3 mL）中。氮氣保護，-78℃下滴加乙基溴化鎂（3 M乙醚溶液，1.2 mL，3.60 mmol）。反應液此溫度下攪拌0.5小時，自然升至25℃繼續反應1小時。加入飽和氯化銨水溶液淬滅（5 mL），用乙酸乙酯萃取（30 mL x 2）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮用製備TLC板純化（1：3石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到1-（4-（3-羥基戊烷-3-基）苄基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（190 mg，白色固體），産率：87%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.85（s，1H），7.32（d，J = 8.0 Hz，2H），7.28（d，J = 8.0 Hz，2H），5.25（s，2H），3.96（s，3H），3.52（s，3H），1.82-1.72（m，4H），0.69（t，J = 7.2 Hz，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 357，實測值357。
實施例26。
3，7-二甲基-1-（3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）苄基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
3-乙醯基苯甲酸乙酯。
將3-乙醯基苯甲酸（500 mg，3.05 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（20 mL）中，室溫條件下加入碘乙烷（475 mg，3.05 mmol）和碳酸鉀（632 mg，4.57 mmol），室溫攪拌2小時後，反應液濃縮，加入乙酸乙酯（30 mL）稀釋，有機相用水（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（5：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.5）得到3-乙醯基苯甲酸乙酯（530 mg，白色固體），産率：90%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ8.60（s，1H），8.24（d，J = 7.6 Hz，1H），8.15（d，J = 7.6 Hz，1H），7.56（t，J = 7.6 Hz，1H），4.41（q，J = 7.2 Hz，2H），2.66（s，3H），1.42（t，J = 7.2 Hz，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 193，實測值193。
第二步。
乙基3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）苯甲酸乙酯。
將3-乙醯基苯甲酸乙酯（500 mg，2.60 mmol）溶於四氫呋喃（20 mL）中，室溫條件下加入三氟甲基三甲基矽烷（370 mg，2.60 mmol）和氟化銫（79.0 mg，0.520 mmol）。室溫攪拌12小時，反應液加入乙酸乙酯（30 mL）稀釋，有機相用水（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（2：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.5）得到乙基3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）苯甲酸乙酯（600 mg，黃色固體），産率：88%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ8.26（s，1H），8.05（d，J = 7.6 Hz，1H），7.80（d，J = 7.6 Hz，1H），7.48（t，J = 7.6 Hz，1H），4.39（q，J = 7.2 Hz，2H），1.82（s，3H），1.40（t，J = 7.2 Hz，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 263，實測值263。
第三步。
1，1，1-三氟-2-（3-羥基甲基）苯基）丙-2-醇。
將乙基3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）苯甲酸乙酯（500 mg，1.91 mmol）溶於四氫呋喃（20 mL）中，反應液於0℃條件下加入氫化鋰鋁（108 mg，2.87 mmol），室溫攪拌 2小時，反應液中分別加入水（0.1 mL），15%氫氧化鈉（0.1 mL）和水（0.3 mL），攪拌20分鐘。反應液中加入乙酸乙酯（30 mL）稀釋，有機相用水（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到1，1，1-三氟-2-（3-羥基甲基）苯基）丙-2-醇（400 mg，黃色固體），産率：95%。
1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.62（s，1H），8.05（d，J = 7.6 Hz，1H），7.41-7.37（m，2H），4.73（s，2H），1.80（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 221，實測值221。
第四步。
3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）苄基甲磺酸酯。
將1,1,1-三氟-2-（3-羥基甲基）苯基）丙-2-醇（400 mg，1.82 mmol）和三乙胺（275 mg，2.72 mmol）溶於二氯甲烷（20 mL）中，反應液於0℃條件下加入甲烷磺醯氯（250 mg，2.18 mmol），攪拌2小時，加入二氯甲烷（30 mL）稀釋，有機相用水（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）苄基甲磺酸酯（500 mg，黃色油狀物），産率：92%。
MS-ESI計算值[M + H]+ 299，實測值299。
第五步。
3，7-二甲基-1-（3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）苄基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）苄基甲磺酸酯（100 mg，0.335 mmol）和3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（60.0 mg，0.335 mmol）溶於N ， N -二甲基甲醯胺（20 mL）中，室溫條件下加入碳酸鉀（70.0 mg，0.502 mmol）和碘化鉀（6.00 mg，0.0335 mmol），加熱100℃攪拌2小時後，反應液冷却濃縮，加入乙酸乙酯（30 mL）稀釋，有機相用水（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用高效液相色譜純化得到3，7-二甲基-1-（3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）苄基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（30.0 mg，白色固體），産率：23%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.90（s，1H），7.70（s，1H），7.49（d，J = 7.6 Hz，1H），7.38-7.32（m，2H），5.21（s，2H），4.00（s，3H），3.55（s，3H），1.71（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 383，實測值383。
實施例27。
3，7-二甲基-1-（4-（1，1，1-三氟-2-羥基丙基-2-基）苯基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
4-（1，1，1-三氟-2-羥基丙基-2-基）苯甲酸甲酯。
氮氣保護，0℃將4-乙醯基苯甲酸甲酯（10.0 g，56.1 mmol）和三甲基（三氟甲基）矽烷（16.0 g，112 mmol）溶於無水四氫呋喃（150 mL）中，並慢慢滴加四丁基氟化銨（22.0 g，84.2 mmol）。反應緩慢升至室溫，攪拌過夜。加入水（50 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（50 mL x 3）。合併有機相，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液，飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到産物4-（1，1，1-三氟-2-羥基丙基-2-基）苯甲酸甲酯（7.00 g，黃色液體），産率：50%。1 H NMR:（400 MHz，CDCl3 ）δ8.04（d，J = 8.0 Hz，2H），7.68（d，J = 8.0 Hz，2H），3.92（s，3H），3.27（s，1H），1.80（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 249，實測值249。
第二步。
1，1，1-三氟-2-（4-（羥基甲基）苯基）丙基-2-醇。
在氮氣保護，0℃將氫化鋁鋰（1.61 g，42.3 mmol）緩慢加入甲基4-（1，1，1-三氟-2-羥基丙基-2-基）苯甲酸甲酯（7.00 g，28.2 mmol）的四氫呋喃（150 mL）溶液中。反應液在0℃攪拌3小時。0℃下，依次緩慢加入水（1.60 mL），15% 氫氧化鈉溶液（1.60 mL）及水（4.80 mL）。過濾，濾液減壓濃縮得到産物1，1，1-三氟-2-（4-（羥基甲基）苯基）丙基-2-醇（2.40 g，黃色液體），産率：93%。1 H NMR:（400 MHz，CDCl3 ）δ7.55（d，J = 8.0 Hz，2H），7.34（d，J = 8.0 Hz，2H），4.66（s，2H），3.37（s，1H），2.39（s，1H），1.75（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 221，實測值221。
第三步。
4-（1，1，1-三氟-2-羥基丙基-2-基）苯基甲磺酸酯。
將1，1，1-三氟-2-（4-（羥基甲基）苯基）丙基-2-醇（5.80 g，26.3 mmol）及二異丙基乙基胺（10.2 g，79.0 mmol）溶於二氯甲烷（80 mL）中，在0℃下緩慢加入甲烷磺醯氯（4.53 g，39.5 mmol）。反應液於0℃下，攪拌0.5小時。加入飽和氯化銨水溶液（50 mL）淬滅反應，用二氯甲烷萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用飽和碳酸氫鈉水溶液（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法純化（5：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到産物4-（1，1，1-三氟-2-羥基丙基-2-基）苯基甲磺酸酯（3.45 g，黃色油狀物），産率：44%。1 H NMR:（400 MHz，CDCl3 ）δ7.66（d，J = 8.0 Hz，2H），7.46（d，J = 8.0 Hz，2H），5.26（s，2H），2.96（s，3H），2.84（s，1H），1.80（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 299，實測值299。
第四步。
3，7-二甲基-1-（4-（1，1，1-三氟-2-羥基丙基-2-基）苯基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將4-（1，1，1-三氟-2-羥基丙基-2-基）苯基甲磺酸酯（1.95 g，10.8 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（652 mg，3.62 mmol）及碳酸鉀（2.99 g，21.6 mmol）和碘化鉀（180 mg，1.08 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（30 mL）。反應液加熱至130℃，攪拌3小時。反應液冷却至室溫，加入飽和食鹽水（20 mL），用乙酸乙酯萃取（100 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法分離純化（1：2石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到産物3，7-二甲基-1-（4-（1，1，1-三氟-2-羥基丙基-2-基）苯基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.27 g，白色固體），産率：31%。1 H NMR:（400 MHz，CDCl3 ）δ7.57-7.55（m，5H），5.20（s，2H），3.99（s，3H），3.58（s，3H），2.60（s，1H），1.74（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 383，實測值383。
實施例28。
第一步。
6-溴烟酸甲酯。
將6-溴烟酸（1.00 g，4.95 mmol）溶於N ，N 二甲基甲醯胺（30 mL）中，加入碘甲烷（0.703 g，4.95 mmol）和碳酸鉀（1.03 g，7.43 mmol）。反應液於20℃攪拌12小時。反應液加入水（100 mL）稀釋，用乙酸乙酯萃取（30 mL x 3），有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（2：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.5）得到6-溴烟酸甲酯（1.00 g，白色固體），産率：94%。MS-ESI計算值[M + H]+ 216和218，實測值216和218。
第二步。
（6-溴吡啶-3-基）甲醇。
將6-溴烟酸甲酯（1.00 g，4.63 mmol）溶於四氫呋喃（20 mL）中，0℃下，加入四氫鋰鋁（351 mg，9.26 mmol），反應1小時。加入水（10 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用用矽膠柱色譜法分離純化（1：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到（6-溴吡啶-3-基）甲醇（600 mg，黃色油狀物），産率：69%。MS-ESI計算值[M + H]+ 188和190，實測值188和190。
第三步。
（6-溴吡啶-3-基）甲基甲磺酸酯。
將（6-溴吡啶-3-基）甲醇（1.00 g，5.32 mmol）和三乙胺（1.18 g，11.6 mmol）溶於二氯甲烷（20 mL）中，0℃條件下加入甲磺醯氯（1.38 g，12.0 mmol）。反應液於室溫攪拌2小時後，加入二氯甲烷（20 mL）稀釋，用飽和碳酸氫鈉（30 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（4：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.5）得到（6-溴吡啶-3-基）甲基甲磺酸酯（1.20 g，無色油狀物），産率：85%。MS-ESI計算值[M + H]+ 266和268，實測值266和268。
第四步。
1-（（6-溴吡啶-3-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將（6-溴吡啶-3-基）甲基甲磺酸酯（500 mg，1.88 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（20 mL）中，反應液於室溫條件下加入3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（338 mg，1.88 mmol），碳酸鉀（389 mg，2.82 mmol）和碘化鉀（184 mg，1.11 mmol）。反應液加熱至100℃，反應2小時，加入乙酸乙酯（20 mL）稀釋，有機相用飽和碳酸氫鈉（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（1：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到1-（（6-溴吡啶-3-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（300 mg，黃色固體），産率：46%。MS-ESI計算值[M + H]+ 350和352，實測值350和352。
第五步。
1-（（6-乙醯基吡啶-3-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1-（（6-溴吡啶-3-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（2.00 g，5.71 mmol）溶於1，4-二氧六環（50 mL）中，反應液於室溫條件下加入三丁基（1-乙氧基乙烯基）錫烷（8.25 g，22.8 mmol）和四三苯基膦鈀（329 mg，0.285 mmol）。反應液加熱至120℃攪拌2小時，反應液冷却至室溫，加入乙酸乙酯（70 mL）稀釋，用飽和碳酸氫鈉（20 mL）洗滌（30 mL x 2），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（3：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到1-（（6-乙醯基吡啶-3-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.00 g，黃色固體），産率：56%。1 H NMR:（400 MHz，CDCl3 ）δ8.83（s，1H），8.00-7.98（m，1H），7.95-7.93（m，1H），7.54（s，1H），5.27（s，2H），4.01（s，3H），3.59（s，3H），2.71（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 314，實測值314。
第六步。
3，7-二甲基-1-（（6-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）吡啶-3-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1-（（6-乙醯基吡啶-3-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（150 mg，0.478 mmol）溶於四氫呋喃（30 mL）中，室溫條件下加入三氟甲基三甲基矽烷（102 mg，0.718 mmol）和氟化銫（73.0 mg，0.478 mmol）。反應液在室溫攪拌12小時，加入四丁基氟化銨（50.0 mg，0.207 mmol），室溫攪拌30分鐘後加入乙酸乙酯（20 mL）稀釋，有機相用飽和碳酸氫鈉（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮用高效液相色譜純化得3，7-二甲基-1-（（6-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）吡啶-3-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（50 mg，白色固體），産率：27%。1 H NMR:（400 MHz，CDCl3 ）δ8.76（s，1H），7.99（d，J = 8.0 Hz，1H），7.53（s，1H），7.44（d，J = 8.0 Hz，1H），5.23（s，2H），3.99（s，3H），3.58（s，3H），1.68（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 384，實測值384。
實施例29。
3，7-二甲基-1-[[5-（2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基-乙基）-2-吡啶基]甲基]嘌呤-2，6-二酮。
第一步。
1-[6-（溴甲基）-3-吡啶基]乙酮。
將1-（6-甲基-3-吡啶基）乙酮（500 mg，3.70 mmol），N -溴代丁二醯亞胺（658 mg，3.70 mmol），偶氮二異丁腈（182 mg，1.11 mmol）溶於四氯化碳（20 mL）中，90℃反應12小時。加入飽和硫代硫酸鈉溶液（30 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（10 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1-[6-（溴甲基）-3-吡啶基]乙酮（125 mg，黃色油狀），産率：16%。MS-ESI計算值[M + H]+ 214，216，實測值214，216。
第二步。
1-[（5-乙醯基-2-吡啶基）甲基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮。
將1-[6-（溴甲基）-3-吡啶基]乙酮（100 mg，0.467 mmol），3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮（84.2 mg，0.467 mmol），碘化鉀（7.70 mg，0.0467 mmol）和碳酸鉀（194 mg，1.40 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.3）得到1-[（5-乙醯基-2-吡啶基）甲基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮（50.0 mg，黃色固體），産率：34%。MS-ESI計算值[M + H]+ 314，實測值314。
第三步。
3，7-二甲基-1-[[5-（2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基-乙基）-2-吡啶基]甲基]嘌呤-2，6-二酮。
將1-[（5-乙醯基-2-吡啶基）甲基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮（50.0 mg，0.159 mmol），氟化銫（24.2 mg，0.159 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基-三氟甲基-矽烷（113 mg，0.798 mmol），攪拌12小時。加入水（20 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到3，7-二甲基-1-[[5-（2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基-乙基）-2-吡啶基]甲基]嘌呤-2，6-二酮（10.0 mg，黃色固體），産率：16%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.96（s，1H），8.75（d，J = 8.0 Hz，1H），8.06（d，J = 8.0 Hz，1H），7.97（s，1H），5.55（s，2H），4.00（s，3H），3.57（s，3H），1.86（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 384，實測值384。
實施例30。
3，7-二甲基-1-（（5（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）吡嗪-2-基）甲基）-嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
N -甲氧基-N ，5-二甲基吡嗪-2-甲醯胺
將5-甲基吡嗪-2-羧酸（2.00 g，14.5 mmol），1-羥基苯並三唑（391 mg，2.90 mmol），1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（1.69 g，17.4 mmol）溶於無水二氯甲烷（10 mL）和三氯甲烷（30 mL）中，在氮氣保護，0℃時緩慢加入三乙胺（1.76 g，17.4 mmol），反應液在25℃攪拌12小時。加入水（50 mL）淬滅反應。反應液用乙酸乙酯（50 mL x 3）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，剩餘物用矽膠柱色譜法純化（20：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.1）得到N -甲氧基-N ，5-二甲基吡嗪-2-甲醯胺（2.00 g，黃色油狀物），産率：76%。1 H NMR:（400 MHz，CDCl3 ）δ8.80（s，1H），8.45（s，1H），3.73（s，3H），3.40（s，3H），2.61（s，3H）。
第二步。
1-（5-甲基吡嗪-2-基）乙酮。
將N -甲氧基-N ，5-二甲基吡嗪-2-甲醯胺（1.50 g，8.28 mmol）溶於四氫呋喃（30 mL），0℃下滴加甲基溴化鎂（3 M乙醚溶液，13.3 mL，39.9 mmol），後於25℃攪拌1小時。混合物冷却到0℃，加入水（10 mL）淬滅反應。混合物用乙酸乙酯（30 mL x 3）萃取，無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮。剩餘物用矽膠柱色譜法純化（20:1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.2）得到1-（5-甲基吡嗪-2-基）乙（700 mg，黃色油狀物），産率：62%。MS-ESI計算值[M + H]+ 137，實測值 137。
第三步。
1-（5（溴甲基）吡嗪-2-基）乙酮。
將1-（5-甲基吡嗪-2-基）乙（700 mg，5.14 mmol）溶於四氯化碳（20 mL）中，然後加入偶氮二異丁腈（169 mg，1.03 mmol）和N-溴代丁二醯亞胺（1.14 g，6.43 mmol）。反應液在100℃氮氣保護下反應5小時。反應液直接濾液並減壓濃縮，剩餘物用矽膠柱色譜法純化（20：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.5）得到1-（5（溴甲基）吡嗪-2-基）乙（300 mg，黃色油狀物），産率：27%。MS-ESI 計算值[M + H]+ 215 和217，實測值 215和217。
第四步。
1-（（5-乙醯基吡嗪-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮
將1-（5（溴甲基）吡嗪-2-基）乙（300 mg，1.40 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（251 mg，1.40 mmol），碘化鉀（23.2 mg，0.140 mmol）和碳酸鉀（578 mg，4.19 mmol）溶於無水N ，N -二甲基甲醯胺（20 mL）中。反應液加熱至120℃，反應3小時。反應液冷却至20℃，過濾，濾液減壓濃縮，剩餘物用矽膠柱色譜法純化（乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到1-（（5-乙醯基吡嗪-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（300 mg，黃色固體），産率：68％。MS ESI計算值[M + H]+ 315，實測值 315。
第五步。
3，7-二甲基-1-（（5（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）吡嗪-2-基）甲基）-嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1-（（5-乙醯基吡嗪-2-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（300 mg，0.954 mmol），氟化銫（14.5 mg，0.0954 mmol）溶於無水四氫呋喃（10 mL）中，然後加入三甲基矽三氟甲基（407 mg，2.86 mmol）。反應液在25℃氮氣保護下反應2小時。然後加入鹽酸（4 N，4 mL）。混合物在室溫氮氣保護下反應1小時。加入碳酸氫鈉飽和溶液（10 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（10 x 3 mL），有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，剩餘物用矽膠柱色譜法純化（1: 1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到3，7-二甲基-1-（（5（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）吡嗪-2-基）甲基）-嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（100 mg，白色固體），産率：40%。1 H NMR:（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.85（s，1H），8.65（s，1H），7.92（s，1H），5.40（s，2H），3.99（s，3H），3.56（s，3H），1.78（s，3H）。MS ESI計算值[M + H]+ 385，實測值 385。
實施例31。
1-（（3-（1，1，1，3，3，3-六氟-2-羥基丙烷-2-基）異惡唑-5-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
甲基5-（溴甲基）異惡唑-3-羧酸乙酯。
將甲基5-甲基異惡唑-3-羧酸乙酯（5.00 g，35.4 mmol），N -溴代丁二醯亞胺（6.31 g，35.4 mmol），過氧化苯甲醯（858 mg，3.54 mmol）溶於四氯化碳（20 mL）中，80℃反應12小時。加入飽和硫代硫酸鈉溶液（30 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（20 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法分離純化（3：1石油醚/乙酸乙酯，Rf值 = 0.5）得到甲基5-（溴甲基）異惡唑-3-羧酸乙酯（2.00 g，黃色油狀），産率：26%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ6.88（s，1H），4.73（s，2H），3.97（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 220，222，實測值220，222。
第二步。
甲基5-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）異惡唑-3-羧酸乙酯。
將5-（溴甲基）異惡唑-3-羧酸乙酯（2.00 g，9.09 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（1.64 g，9.09 mmol），碘化鉀（151 mg，0.909 mmol）和碳酸鉀（2.51 g，18.2 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（50 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮用矽膠柱色譜法分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.4）得到甲基5-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）異惡唑-3-羧酸乙酯（1.70 g，黃色固體），産率：59%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.06（s，1H），6.82（s，1H），5.22（s，2H），3.87（s，3H），3.83（s，3H），3.45（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 320，實測值320。
第三步。
1-（（3-（1，1，1，3，3，3-六氟-2-羥基丙烷-2-基）異惡唑-5-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮
將甲基5-（（3，7-二甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）甲基）異惡唑-3-羧酸乙酯（200 mg，0.626 mmol），氟化銫（95.0 mg，0.626 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基三氟甲基矽烷（445 mg，3.13 mmol），攪拌12小時。加入1 N 鹽酸（10 mL）室溫下攪拌1小時，加入飽和碳酸氫鈉（50 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到1-（（3-（1，1，1，3，3，3-六氟-2-羥基丙烷-2-基）異惡唑-5-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（10.0 mg，黃色固體），産率：4%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.95（s，1H），6.52（s，1H），5.37（s，2H），4.00（s，3H），3.57（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 428，實測值428。
實施例32。
3，7-二甲基-1-（（3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）異惡唑-5-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（5-甲基異惡唑-3-基）乙酮。
將甲基5-甲基異惡唑-3-羧酸乙酯（5.00 g，35.4 mmol）和三乙胺（21.5 g，213 mmol）溶於四氫呋喃（80 mL）中，0℃下加入甲基溴化鎂（3 M乙醚溶液，35 mL，105 mmol），反應3小時。加入飽和氯化銨（30 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（30 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法分離純化（3：1石油醚/乙酸乙酯，Rf值 = 0.7）得到1-（5-甲基異惡唑-3-基）乙酮（1.00 g，黃色油狀），産率：23%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ6.39（s，1H），2.58（s，3H），2.49（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 126，實測值126。
第二步。
1-（5-（溴甲基）異惡唑-3-基）乙酮。
將1-（5-甲基異惡唑-3-基）乙酮（100 mg，0.799 mmol），N -溴代丁二醯亞胺（142 mg，0.799 mmol），過氧化苯甲醯（19.3 mg，0.0800 mmol）溶於四氯化碳（10 mL）中，90℃反應12小時。加入飽和硫代硫酸鈉溶液（30 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（10 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到1-（5-（溴甲基）異惡唑-3-基）乙酮（150 mg，黃色油狀），産率：93%。MS-ESI計算值[M + H]+ 204和206，實測值204和206。
第三步。
1-（（3-乙醯基異惡唑-5-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（5-（溴甲基）異惡唑-3-基）乙酮（150 mg，0.735 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（132 mg，0.735 mmol），碘化鉀（61.0 mg，0.367 mmol）和碳酸鉀（305 mg，2.21 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.3），得到1-（（3-乙醯基異惡唑-5-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（50.0 mg，黃色固體），産率：22%。MS-ESI計算值[M + H]+ 304，實測值304。
第四步。
3，7-二甲基-1-（（3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）異惡唑-5-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮
將1-[（3-乙醯基異惡唑-5-基）甲基]-3，7-二甲基嘌呤-2，6-二酮（50.0mg，0.164 mmol），氟化銫（25.0 mg，0.164 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基三氟甲基矽烷（70.3 mg，0.494 mmol），攪拌12小時。加入1 N 鹽酸（10 mL）室溫下攪拌1小時，加入飽和碳酸氫鈉（50 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到3，7-二甲基-1-（（3-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）異惡唑-5-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（22.0 mg，黃色固體），産率：36%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.98（s，1H），6.48（s，1H），5.33（s，2H），4.01（s，3H），3.57（s，3H），1.71（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 374，實測值374。
實施例33。
3，7-二甲基-1-（（2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（4-（溴甲基）噻唑-2-基）乙酮。
將1-（4-甲基噻唑-2-基）乙酮（200 mg，1.42 mmol），N -溴代丁二醯亞胺（252 mg，1.42 mmol），偶氮二異丁腈（46.6 mg，0.284 mmol）溶於四氯化碳（20 mL）中，80℃反應12小時。加入飽和硫代硫酸鈉溶液（30 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（10 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1-（4-（溴甲基）噻唑-2-基）乙酮（200 mg，黃色油狀），産率：64%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.97（s，1H），4.73（s，2H），2.66（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 220，222，實測值220，222。
第二步。
1-（（2-乙醯基噻唑-4-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（4-（溴甲基）噻唑-2-基）乙酮（100 mg，0.454 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（81.9 mg，0.454 mmol），碘化鉀（7.50 mg，0.0454 mmol）和碳酸鉀（125 mg，0.908 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.3）得到1-（（2-乙醯基噻唑-4-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（80.0 mg，黃色固體），産率：55%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.92（s，1H），7.73（s，1H），5.38（s，2H），4.00（s，3H），3.57（s，3H），2.64（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 320，實測值320。
第三步。
3，7-二甲基-1-（（2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（（2-乙醯基噻唑-4-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（200 mg，0.626 mmol），氟化銫（95.0 mg，0.626 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基-三氟甲基-矽烷（267 mg，1.88 mmol），攪拌12小時。加入水（20 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到3，7-二甲基-1-（（2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（100 mg，黃色固體），産率：41%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.10（s，1H），7.33（s，1H），5.32（s，2H），4.03（s，3H），3.57（s，3H），1.80（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 390，實測值390。
實施例34。
3，7-二甲基-1-（（5-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（4-（溴甲基）-5-甲基噻唑-2-基）乙酮。
將1-（4，5-二甲基吡啶-2-基）乙酮（200 mg，1.29 mmol），N -溴代丁二醯亞胺（229 mg，1.29 mmol），偶氮二異丁腈（21.1 mg，0.129 mmol）溶於四氯化碳（10 mL）中，80℃反應12小時。加入飽和硫代硫酸鈉溶液（30 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（10 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1-（4-（溴甲基）-5-甲基噻唑-2-基）乙酮（200 mg，黃色油狀），産率：66%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ4.88（s，2H），2.65（s，3H），2.47（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 234，236，實測值234，236。
第二步。
1-（（2-乙醯基-5-甲基噻唑-4-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（4-（溴甲基）-5-甲基噻唑-2-基）乙酮（200 mg，0.854 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（154 mg，0.854 mmol），碘化鉀（14.0 mg，0.0854 mmol）和碳酸鉀（354 mg，2.56 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.3）得到1-（（2-乙醯基-5-甲基噻唑-4-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（200 mg，黃色固體），産率：70%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.90（s，1H），5.35（s，2H），4.00（s，3H），3.55（s，3H），2.66（s，3H），2.61（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 334，實測值334。
第三步。
3，7-二甲基-1-（（5-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（（2-乙醯基-5-甲基噻唑-4-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（80.0 mg，0.240 mmol），氟化銫（18.2 mg，0.120 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基-三氟甲基-矽烷（102 mg，0.720 mmol），攪拌12小時。加入水（20 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到3，7-二甲基-1-（（5-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（35.0 mg，黃色固體），産率：36%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.27（s，1H），5.36（s，2H），4.06（s，3H），3.57（s，3H），2.73（s，3H），1.90（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 404，實測值404。
實施例35。
3，7-二甲基-1-（（2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-5-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（5-甲基噻唑-2-基）乙基環己酮。
將5-甲基噻唑（2.00 g，20.2 mmol）溶於四氫呋喃（50 mL）中，-78℃時，在氮氣保護下緩慢滴加正丁基鋰（2.5 M 四氫呋喃溶液，9.68 mL，24.2 mmol）。反應液-78℃下攪拌0.5小時，並緩慢滴加溶於四氫呋喃中（1 mL）的N -甲氧基-N -甲基乙醯胺（2.50 g，24.2 mmol）。反應液升溫至0℃下攪拌1.5小時。在0℃下向反應液中緩慢加入水（10 mL），並用乙酸乙酯（30 mL x 3）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓蒸餾，所得到産品用高效製備板純化（1：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.7）得到産物1-（5-甲基噻唑-2-基）乙基環己酮（1.45 g，黃色固體），産率：51%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.73（s，1H），2.61（s，3H），2.57（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 142，實測值142。
第二步。
1-（5-（溴甲基）噻唑-2-基）乙基環己酮。
將1-（5-甲基噻唑-2-基）乙基環己酮（200 mg，1.42 mmol）及偶氮異丁晴（2.33 mg，0.0142 mmol）溶於氯仿（5 mL）中，室溫下加入溴代丁二醯亞胺（252 mg，1.42 mmol）。反應液加熱至78℃並攪拌16小時。反應液冷却至室溫，緩慢加入水（30 mL）並用氯仿（30 mL x 3）萃取。合併有機相，並用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到粗産品1-（5-（溴甲基）噻唑-2-基）乙基環己酮（290 mg，黃色油狀）。MS-ESI計算值[M + H]+ 220和222，實測值220和222。
第三步。
1-（（2-乙醯基噻唑-5-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（5-（溴甲基）噻唑-2-基）乙基環己酮（290 mg，1.05 mmol），3，7-二甲基-1H-嘌呤-2，6-（3H，7H ）-二酮（284 mg，1.58 mmol）及碘化鉀（17.5 mg，0.105 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（5 mL）中，加入碳酸鉀（437 mg，3.16 mmol），130℃反應2.5小時。反應液冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，得到的産品用高效製備板純化（乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到産物1-（（2-乙醯基噻唑-5-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（292 mg，黃色固體），産率：87%。MS-ESI計算值[M + H]+ 320，實測值320。
第四步。
3，7-二甲基-1-（（2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-5-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（（2-乙醯基噻唑-5-基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（280 mg，0.438 mmol）及氟化銫（6.66 mg，0.0438 mmol）溶於四氫呋喃（6 mL）中，在氮氣保護下緩慢加入三氟甲基三甲基矽烷（75.0 mg，0.500 mmol）。反應25℃下攪拌1.5小時。加入4 N 鹽酸水溶液（0.2 mL）並室溫攪拌半小時後，用飽和碳酸氫鈉溶液（10 mL）調節pH值至7，加入水（20mL）並用乙酸乙酯（50 mL x 3），有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗産品用製備高效液相色譜純化得産物3，7-二甲基-1-（（2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-5-基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（32.0 mg，白色固體），産率：19%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.89（s，1H），7.82（s，1H），5.35（s，2H），4.00（s，3H），3.56（s，3H），1.76（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 390，實測值390。
實施例36。
3，7-二甲基-1-（2-（4-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-5-基）乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（5-（2-羥乙基）-4-甲基噻唑-2-基）乙酮。
將2-（4-甲基噻唑-5-基）乙醇（500 mg，3.49 mmol）溶於四氫呋喃（100 mL）中，-78℃下加入正丁基鋰（3 M正己烷溶液，2.33 mL，6.98 mmol），反應半小時後加入N -甲氧基-N -甲基-乙醯胺（432 mg，4.19 mmol），繼續攪拌3小時。加入飽和氯化銨（50 mL）淬滅反應。乙酸乙酯萃取（10 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法分離純化（5：1石油醚/乙酸乙酯，Rf值 = 0.1），得到1-（5-（2-羥乙基）-4-甲基噻唑-2-基）乙酮（200 mg，黃色油狀），産率：31%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ3.78（t，J = 6.4 Hz，2H），3.18（t，J = 6.4 Hz，2H），2.67（s，3H），2.47（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 186，實測值186。
第二步。
2-（2-乙醯基-4-甲基-噻唑-5-基）乙基甲磺酸酯。
將1-（5-（2-羥乙基）-4-甲基噻唑-2-基）乙酮（120 mg，0.647 mmol）和三乙胺（196 mg，1.94 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中，0℃下加入甲烷磺醯氯（148 mg，1.30 mmol）。反應液緩慢升至室溫，攪拌2小時。加入碳酸氫鈉水溶液（50 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用製備TLC板分離純化（1：1石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.5），得到2-（2-乙醯基-4-甲基-噻唑-5-基）乙基甲磺酸酯（150 mg，黃色油狀），産率：88%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3）δ4.41（t，J = 6.4 Hz，2H），3.27（t，J = 6.4 Hz，2H），3.01（s，3H），2.67（s，3H），2.46（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 264，實測值264。
第三步。
1-（2-（2-乙醯基-4-甲基噻唑-5-基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將2-（2-乙醯基-4-甲基-噻唑-5-基）乙基甲磺酸酯（150 mg，0.569 mmol），3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（102 mg，0.569 mmol），碘化鉀（18.9 mg，0.114 mmol）和碳酸鉀（236 mg，1.71 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮。用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.5），得到1-（2-（2-乙醯基-4-甲基噻唑-5-基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（30.0 mg，黃色固體），産率：15%。MS-ESI計算值[M + H]+ 348，實測值348。
第四步                               。
3，7-二甲基-1-（2-（4-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-5-基）乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（2-（2-乙醯基-4-甲基噻唑-5-基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（40.0 mg，0.115 mmol），氟化銫（17.5 mg，0.115 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基三氟甲基矽烷（49.0 mg，0.345 mmol），攪拌12小時。加入水（20 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到3，7-二甲基-1-（2-（4-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-5-基）乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（15.0 mg，黃色固體），産率：31%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.37（s，1H），4.25（t，J = 6.4 Hz，2H），4.01（s，3H），3.54（s，3H），3.26（t，J = 6.4 Hz，2H），2.50（s，3H），1.90（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 418，實測值418。
實施例37。
1-（3-羥基-2-（羥甲基）-2-甲基丙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將3，7-二甲基-1-[（3-甲基氧雜環丁烷-3-基）甲基]嘌呤-2，6-二酮（20.0 mg，0.0757 mmol）溶於0.16%鹽酸（0.5 mL），反應液於室溫下攪拌反應6小時，用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至7，用高效液相色譜法純化，得1-（3-羥基-2-（羥甲基）-2-甲基丙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（12.0 mg，白色固體），産率：56%。1 H NMR：（400MHz，CDCl3 ）δ7.58（s，1H），4.25-3.94（m，7H），3.62（s，3H），3.35-3.26（m，2H），3.25-3.14（m，2H），1.01（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 283，實測值283。
實施例38。
1-（2-（2-羥基-2-甲基環丙基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
2-（2-（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-基）乙氧基）乙酸酯。
室溫條件下，向氫化鈉（21.0 mg，0.890 mmol）的N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）溶液中加入1-（2-羥基乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（100 mg，0.446 mmol），反應液在25℃攪拌1小時。再加入2-溴乙酸乙酯（149 mg，0.890 mmol）。反應液繼續攪拌16小時。過濾除去不溶物，濾液減壓濃縮，用製備高效液相色譜法分離純化得到2-（2-（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-基）乙氧基）乙酸酯（60.0 mg，白色固體），産率：43%。
MS-ESI計算值[M + H]+ 311，實測值311。
第二步。
1-（2-（2-羥基-2-甲基環丙基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
在-78℃向2-（2-（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-基）乙氧基）乙酸酯（100 mg，0.322 mmol）的四氫呋喃（5 mL）溶液緩慢滴加甲基溴化鎂溶液（3 M四氫呋喃溶液，0.43 mL，1.29 mmol）。反應液在-78℃攪拌2小時。加入飽和氯化銨水溶液（20 mL）淬滅反應。混合物用乙酸乙酯（20 mL x 3）萃取。合併有機相，減壓濃縮，用製備高效液相色譜法分離純化，得到 1-（2-（2-羥基-2-甲基環丙基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（40.0 mg，無色油狀物）。産率：42%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.88（s，1H），4.23（t，J = 5.8 Hz，2H），3.98（s，3H），3.72（t，J = 5.8 Hz，2H），3.53（s，3H），3.32（s，2H），1.13（s，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 296，實測值296。
實施例39。
1-（2-（（1-羥基環丁基）甲氧基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（羥基甲基）環丁醇。
在25℃條件下，向四氫鋁鋰（1.52 g，40.0 mmol）的四氫呋喃（30 mL）溶液中滴加 1-羥基環丁酸（1.16 g，10.0 mmol）的四氫呋喃（10 mL）溶液。反應液加熱至回流，反應1小時。反應液降至25℃，加水（20 mL）淬滅，用乙酸乙酯（50 mL x 3）萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到 1-（羥基甲基）環丁醇（0.800 g，無色油狀物），産率：80%。
第二步。
2-（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）乙基甲烷磺酸酯。
在0℃向1-（2-羥基乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（448 mg，2.00 mmol）的二氯甲烷（25 mL）溶液中加入三乙胺（600 mg，6.00 mmol）和甲烷磺醯氯（342 mg，3.00 mmol）。反應液在0℃攪拌0.5小時。加入飽和碳酸氫鈉溶液（30 mL）淬滅反應，用二氯甲烷（20 mL x 3）萃取。有機相用飽和食鹽水（20 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到2-（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）乙基甲烷磺酸酯（650 mg，黃色油狀物），産率：100%。
第三步。
1-（2-（（1-羥基環丁基）甲氧基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
向混合物1-（羥基甲基）環丁醇（102 mg，1.00 mmol）和 2-（3，7-二甲基-2，6-二氧-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）乙基甲烷磺酸酯（450 mg，1.50 mmol）的N ，N -二甲基甲醯胺（5 mL）溶液中加入碳酸鉀（414 mg，3.00 mmol）和碘化鉀（16.0 mg，0.100 mmol）。反應液加熱至60℃攪拌過夜。然後慢慢降至室溫，加水（20 mL）淬滅。混合物用乙酸乙酯（20 mL x 3）萃取，有機相用飽和食鹽水（20 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥。過濾，濾液減壓濃縮，用製備高效液相色譜法分離純化得到1-（2-（（1-羥基環丁基）甲氧基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（50.0 mg，白色固體），産率：16%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ　7.88（s，1H），4.57-4.59（m，2H），4.21-4.24（m，2H），3.98（s，3H），3.80（s，2H），3.54（s，3H），2.07-1.95（m，4H），1.52-1.54（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 309，實測值309。
實施例40。
（S ）-1-（2-（（2-羥基丙基）氨基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（3-氯丙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮
將3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H，7H）-二酮（1.00 g，5.56 mmol）溶於甲醇（20 mL），加入30%的甲醇鈉（9.64 g，49.9 mmol），反應液回流1小時。再加入1-溴-2-氯乙烷（47.2 g，299 mmol），反應液繼續攪拌16小時。加入水（30 mL）淬滅反應，用二氯甲烷（20 mL x 3）萃取，有機相用飽和食鹽水（20 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，並用柱層析法分離純化（1：2石油醚/乙酸乙酯）得到1-（3-氯丙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（230 mg，白色固體），産率：17%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.50（s，1H），4.36（t，J = 6.4 Hz，2H），3.97（s，3H），3.75（t，J = 6.4 Hz，2H），3.56（s，3H）.
第二步。
（S ）-1-（2-（（2-羥基丙基）氨基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
在25℃下，向混合物1-（3-氯丙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（62.4 mg，0.826 mmol）和（S ）-1-氨基丙烷-2-醇（50.0 mg，0.207 mmol）的乙腈（2 mL）溶液中加入碳酸鉀（138 mg，1.03 mmol）和碘化鉀（86.3 mg，0.517 mmol）。反應液在90℃攪拌4小時。加入水（10 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。有機相用飽和食鹽水（20 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮。用製備高效液相色譜分離純化得到（S ）-1-（2-（（2-羥基丙基）氨基）乙基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（10.0 mg，白色固體），産率：17%。1 H NMR：（400MHz，Methonal-d4 ）δ　7.86（s，1H），4.16（t，J = 6.4 Hz，2H），3.97（s，3H），3.84（m，1H），3.56（s，3H），2.93（m，2H），2.64（m，2H），1.14（d，J = 6.4 Hz，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 282，實測值282。
實施例41。
第一步。
1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-7-（二氟甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-9-（二氟甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將7-（二氟甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮和9-（二氟甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮的混合物（200 mg，0.930 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（20 mL）中，反應液於室溫條件下加入1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基甲磺酸酯（245 mg，1.10 mmol），碘化鉀（183 mg，1.10 mmol）和碳酸鉀（303 mg，2.20 mmol）。反應液加熱到100℃攪拌2小時。反應液中加入乙酸乙酯（30 mL）稀釋，有機相用水（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-7-（二氟甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮和1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-9-（二氟甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮的混合物（234 mg，黃色油狀物），産率：68%。
MS-ESI計算值[M + H]+ 371，實測值371。
第二步。
7-（二氟甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
9-（二氟甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-7-（二氟甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮，1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-9-（二氟甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮的混合物（230 mg，0.750 mmol）溶於四氫呋喃（15 mL）中，室溫條件下加入10%鹽酸（5 mL），反應液加熱至50℃攪拌1小時。冷却至室溫，加入乙酸乙酯（20 mL）稀釋，有機相用飽和碳酸氫鈉（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱層析法分離純化（2：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到7-（二氟甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮，9-（二氟甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮的混合物（200 mg，白色固體），産率：81%。
MS-ESI計算值[M + H]+ 327，實測值327。
第三步。
7-（二氟甲基）-1-（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
9-（二氟甲基）-1-（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將7-（二氟甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮，9-（二氟甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮的混合物（168 mg，0.515 mmol）溶於四氫呋喃（30 mL）中，室溫條件下加入三氟甲基三甲基矽烷（109 mg，0.773 mmol）和氟化銫（15.7 mg，0.103 mmol）。反應液在室溫攪拌12小時，加入四丁基氟化銨（50.0 mg，0.207 mmol），室溫攪拌30分鐘後加入乙酸乙酯（20 mL）稀釋，有機相用飽和碳酸氫鈉（20 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮用高效液相色譜純化得7-（二氟甲基）-1-（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（54 mg，白色固體），産率：23%，1 H NMR:（400 MHz，Methanol-d 4 ）δ8.46（s，1H），7.89-7.74（m，1H），4.06（d，J = 7.2 Hz，2H），3.59（s，3H），2.19-2.17（m，1H），2.05-1.99（m，2H），1.88-1.81（m，2H），1.61-1.58（m，2H），1.51-1.47（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 397，實測值397。
9-（二氟甲基）-1-（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（12 mg，白色固體），産率：10%。1 H NMR:（400 MHz，Methanol-d4 ）δ8.49（s，1H），7.93-7.89（m，1H），4.07（d，J = 7.2 Hz，2H），3.59（s，3H），2.20-2.19（m，1H），2.05-1.99（m，2H），1.88-1.85（m，2H），1.61-1.58（m，2H），1.51-1.48（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 397，實測值397。
實施例42。
7-乙基-1-（5-乙基-5-羥基庚基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
7-乙基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（500 mg，3.00 mmol），碳酸鉀（414 mg，3.00 mmol）和碘化鉀（4.0 mg，0.300 mmol）溶解於N ，N -二甲基甲醯胺（15 mL）中。反應液加熱到80℃反應半小時。加入碘乙烷（470 mg，4.50 mmol）。繼續反應5小時。把反應液倒入氫氧化鈉水溶液（50 mL）中淬滅反應，用乙酸乙酯（20 mL x 3）萃取。水相用1 N稀鹽酸（10 mL）調節酸鹼度至pH值至7，過濾，濾餅乾燥後得到7-乙基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（500 mg，淡黃色固體），産率：86%。1 H NMR：（400 MHz，DMSO-d 6 ）：δ8.05（s，1H），4.25–4.19（m，2H），3.34（s，3H），1.37（t，J = 7.2 Hz，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 195，實測值195.
第二步。
乙基5-（7-乙基-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）戊酸乙酯。
將7-乙基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（0.300 g，1.55 mmol），溴戊酸乙酯（480 mg，2.32 mmol），碳酸鉀（430 mg，3.10 mmol）和碘化鉀（26.0 mg，0.155 mmol）溶解於N ，N -二甲基甲醯胺（4 mL）中。反應液加熱到110℃反應2小時。把反應液倒入水中（20 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到乙基5-（7-乙基-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）戊酸乙酯（320 mg，黃色固體），産率：62 %。MS-ESI計算值[M + H]+ 323，實測值323。
第三步。
7-乙基-1-（5-乙基-5-羥基庚基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將乙基5-（7-乙基-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）戊酸乙酯（0.100 g，0.310 mmol）溶解於無水四氫呋喃（10 mL）中，於-78℃條件下慢慢滴加乙基溴化鎂（3 M四氫呋喃溶液，0.62 mL，1.86 mmol）。反應液在-78℃反應0.5小時，緩慢升至0℃反應0.5小時。反應完全後，反應液倒入水（20 mL）中，用乙酸乙酯萃取（30 mL x 3）。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用矽膠色譜柱純化得到7-乙基-1-（5-乙基-5-羥基庚基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（30.0 mg，無色油狀物），産率：30%。
1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）：δ7.56（s，1H），4.37–4.32（m，2H），4.05（t，J = 7.2 Hz，2H），3.60（s，3H），1.68–1.37（m，13H），0.86（t，J = 7.2 Hz，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 337，實測值337。
實施例43。
7-乙基-3-甲基-1-（6，6，6-三氟-5-羥基-5-甲基己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
7-乙基-3-甲基-1-（5-氧代己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮
將7-乙基-3-甲基-1H-嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（0.100 g，0.515 mmol），6-氯-2-戊酮（90.0 mg，0.670 mmol），碳酸鉀（140 mg，1.03 mmol）和碘化鉀（8.5 mg，0.0155 mmol）溶解於DMF（2 mL）中，加熱到110o C反應兩小時。把反應倒入水中，用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，乾燥，過濾，濃縮並用三級丁基甲醚洗滌，乾燥固體得目標化合物7-乙基-3-甲基-1-（5-氧代己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（100 mg，白色固體），産率：70%。MS-ESI計算值[M + H]+ 293，實測值293。
第二步。
7-乙基-3-甲基-1-（6，6，6-三氟-5-羥基-5-甲基己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將7-乙基-3-甲基-1-（5-氧代己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（100 mg，0.340 mmol）溶解於1毫升的四氫呋喃中，依次加入三氟甲基三甲基矽烷（53.0 mg，0.370 mmol）和氟化銫（10.0 mg，0.0340 mmol），於30o C反應3小時。把反應液倒入的稀鹽酸（10%，10 mL）中，攪拌半小時。用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，乾燥，濃縮，殘渣用製備色譜柱純化的目標化合物7-乙基-3-甲基-1-（6，6，6-三氟-5-羥基-5-甲基己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（20.0 mg，白色固體），産率：79%。1 H NMR：（400MHz，CDCl3 ）：δ7.95（s，1H），4.39–4.33（m，2H），4.04–4.00（m，2H），3.53（s，3H），1.71–1.64（m，4H），1.50–1.46（m，5H），1.28（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 363，實測值363。
實施例44。
1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-3-甲基-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮
將1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基甲磺酸酯（200 mg，0.800 mmol），3-甲基-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（200 g，0.800 mmol）及碳酸鉀（334 mg，2.42 mmol），碘化鉀（14.0 mg，0.0800 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（3 mL）中，反應液加熱至130℃，攪拌3.5小時。反應液直接過濾，濾液減壓濃縮，得到粗産品1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。MS-ESI計算值[M + H]+ 403，實測值403。
第二步。
3-甲基-1-（（4-氧代環己基）甲基）-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（2.50 g，6.00 mmol）溶於丙酮（18 mL）中，加入鹽酸水溶液（4 N，2.5 mL）。反應在30℃攪拌過夜，加入水（50 mL），用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮用矽膠柱色譜法純化（1：3 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到産物3-甲基-1-（（4-氧代環己基）甲基）-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（220 mg，白色固體），産率：11%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.68（s，1H），5.08-4.99（m，2H），4.00（d，J = 7.0 Hz，2H），3.61（s，3H），2.46-2.24（m，5H），2.04-1.96（m，2H），1.63-1.56（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 359，實測值359。
第三步。
1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3-甲基-1-（（4-氧代環己基）甲基）-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（128 mg，0.360 mmol）及氟化銫（6.0 mg，0.0360 mmol）溶於四氫呋喃（3 mL）中，在氮氣保護下緩慢加入三氟甲基三甲基矽烷（77.0 mg，0.540 mmol）。反應液在30℃下攪拌3小時。冷却至室溫，加入4 N鹽酸水溶液（2.5 mL），在25℃攪拌半小時，調節pH值至7，加水稀釋，用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用製備高效液相色譜純化得産物1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（14.0 mg，白色固體），産率：10%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ8.09（s，1H），5.27-5.20（m，2H），4.08-3.91（m，2H），3.58（s，3H），2.07-1.98（m，2H），1.89-1.80（m，2H），1.62-1.46（m，5H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 429，實測值429。
實施例45。
1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（500 mg，1.17 mmol），通過製備SFC來分離得到兩個異構體。分離條件：色譜柱：AD 250mm x 30mm，10um流動相：A: 超臨界二氧化碳，B: 乙醇（0.05%氨水），A:B =550:45流速：80 mL/min波長：220nm。
産物1（異構體1，第一個峰）（300 mg，白色固體），産率：90%。1 H NMR:（400 MHz，DMSO-d 6 ）δ8.23（s，1H），5.64（s，1H），5.31-5.24（m，2H），3.89（d，J = 3.6 Hz，2H），3.43（s，3H），2.06-2.05（m，1H），1.87-1.81（m，2H），1.73-1.61（m，2H），1.49-1.45（m，2H），1.33-1.31（m，2H）.MS ESI calc’d.[M + H]+ 429，found 429。
産物2（異構體2，第二個峰）（150 mg，白色固體），産率90％。1 H NMR:（400 MHz，DMSO-d 6 ）δ8.22（s，1H），5.63（s，1H），5.29-5.23（m，2H），3.74（d，J = 3.6 Hz，2H），3.42（s，3H），1.68-1.66（m，3H），1.45-1.31（m，6H）. MS ESI calc’d.[M + H]+ 429，found 429。
實施例46。
第一步。
1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-3-甲基-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基甲磺酸酯（603 mg，2.41 mmol），3-甲基-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（500 mg，2.01 mmol）及碘化鉀（33.3 mg，0.201 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（8 mL）中，加入碳酸鉀（555 mg，4.02 mmol），反應130℃加熱回流4小時。反應液冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，得到的粗産品1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-3-甲基-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（980 mg，黃色油狀）。MS-ESI計算值[M + H]+ 403，實測值403。
第二步。
3-甲基-1-（（4-氧代環己基）甲基）-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-3-甲基-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（980 mg，1.51 mmol）溶於丙酮（8 mL）中，加入4 N 鹽酸水溶液（2 mL）。反應室溫攪拌過夜，加入水（20 mL），用乙酸乙酯（30 mL x 3）萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的産品用矽膠柱色譜法純化（1：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到産物3-甲基-1-（（4-氧代環己基）甲基）-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（78.0 mg，黃色固體），産率：15%。MS-ESI計算值[M + H]+ 359，實測值359。
將3-甲基-1-（（4-氧代環己基）甲基）-7-（2，2，2-三氟乙基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（66.0 mg，0.184 mmol）溶於四氫呋喃（2 mL），-78℃時在氮氣保護下緩慢加入甲基格氏試劑（3 M乙醚溶液，0.184 mL，0.552 mmol），-78℃攪拌半小時，接著0℃反應2小時。加入水（10 mL），用乙酸乙酯（30 mL x 3）萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到粗産品用製備高效液相色譜純化得産物1（8.00 mg，白色固體），産率：12%，1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ8.08（s，1H），5.27-5.19（m，2H），3.92（d，J = 7.2 Hz，2H），3.58（s，3H），1.71-1.62（m，4H），1.46-1.38（m，2 H），1.32-1.18（m，6H）。MS-ESI計算值[M + H - H2 O]+ 357，實測值357。
産物2（12.0 mg，白色固體）（異構體2，第二個峰），産率：17%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4）δ8.08（s，1H），5.27-5.21（m，2H），3.91（d，J = 7.2 Hz，2H），3.57（s，3H），1.69-1.66（m，2H），1.49-1.44（m，3H），1.37-1.28（m，4H），1.17（s，3H）。MS-ESI計算值[M + H - H2 O]+ 357，實測值357。
實施例47。
7-環丙基-3-甲基-1-（6，6，6-三氟-5-羥基-5-甲基己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
6-氨基-5-溴-1-甲基嘧啶-2，4（1H ，3H ）-二酮。
混合物6-氨基-1-甲基嘧啶-2，4（1H ，3H ）-二酮（5.46 g，40.0 mmol）和溴代丁二醯亞胺（7.56 g，42.0 mmol）的乙腈（100 mL）溶液在氮氣保護加熱回流1.5小時。反應液冷却到室溫，過濾，除去溶劑，所得固體用水（20 mL）洗滌，乾燥得到6-氨基-5-溴-1-甲基嘧啶-2，4（1H ，3H ）-二酮（8.6 g，白色固體），産率：98%。1 H NMR：（400 MHz，DMSO-d6 ）δ10.90（s，1H），7.04（s，2H），3.28（s，3H）。
第二步。
6-氨基-5-（環丙基胺）-1-甲基嘧啶-2，4（1H ，3H ）-二酮。
6-氨基-5-溴-1-甲基嘧啶-2，4（1H ，3H ）-二酮（2.19 g，10.0 mmol）溶解於環丙胺（20 mL）和水（5 mL）的混合溶劑中。反應液加熱回流5小時。反應液過濾除去溶劑，得到粗産品6-氨基-5-（環丙基胺）-1-甲基嘧啶-2，4（1H ，3H ）-二酮直接用於下一步反應。
第三步。
7-環丙基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
在氮氣保護下將6-氨基-5-（環丙基胺）-1-甲基嘧啶-2，4（1H ，3H ）-二酮（1.96 g，10.0 mmol），原甲酸三甲酯（2.12 g，20.0 mmol）和對甲基苯磺酸（86.0 mg，0.500 mmol）溶解於的無水N ，N -二甲基甲醯胺（20 mL）中。反應液加熱到100℃反應過夜。反應液過濾，除去溶劑，得到粗産品7-環丙基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮直接用於下一步反應。
第四步。
7-環丙基-3-甲基-1-（5-氧代己烷）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
在氮氣保護下將7-環丙基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（100 mg，0.480 mmol），6-氯己烷-2-酮（97.0 mg，0.730 mmol）和碳酸鉀（132 mg，0.960 mmol）N ，N -二甲基甲醯胺（5 mL）中。反應液加熱到120℃反應3小時。待反應冷却至室溫後用水（20 mL）和乙酸乙酯（10 mL）稀釋，乙酸乙酯萃取（30 mL x 2），有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗産品7-環丙基-3-甲基-1-（5-氧代己烷）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮直接用於下一步反應。MS-ESI計算值[M + H]+ 305，實測值305。
第五步。
7-環丙基-3-甲基-1-（6，6，6-三氟-5-羥基-5-甲基己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
氮氣保護下，將7-環丙基-3-甲基-1-（5-氧代己烷）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（200 mg，0.660 mmol）溶解於無水四氫呋喃（3 mL）中，然後依次加入三氟甲基三甲基矽烷（0.2 mL，0.990 mmol）和氟化銫（20.0 mg，0.130 mmol）。所得反應液在30℃下反應2小時。然後反應液用水（30 mL）稀釋，乙酸乙酯萃取（30 mL x 2），有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用製備TLC板純化（1：2石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到7-環丙基-3-甲基-1-（6，6，6-三氟-5-羥基-5-甲基己基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（150 mg，白色固體），産率：61%。1 H NMR：（400 MHz，CDCl3 ）δ7.55（s，1H），4.13-4.02（m，2H），3.63-3.61（m，1H），3.55（s，3H），2.96（s，1H），1.90-1.68（m，2H），1.67-1.64（m，2H），1.47-1.45（m，2H），1.28（s，3H），1.18-1.16（m，2H），1.06-1.04（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 375，實測值375。
實施例48。
7-（環丙基甲基）-1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-7-異丙基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基甲磺酸酯（250 mg，1.00 mmol），7-異丙基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（208 mg，1.00 mmol），碘化鉀（15.8 mg，0.100 mmol）和碳酸鉀（276 mg，2.00 mmol）溶於無水N ，N -二甲基甲醯胺（8 mL）中。反應液加熱至120℃，攪拌3小時。反應冷却至20℃，將混合物過濾，濾液減壓濃縮得到粗品1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-7-異丙基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（300 mg，白色油狀物），産率：83％。MS-ESI計算值[M + H]+ 362，實測值362。
第二步。
7-異丙基-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮
將1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-7-異丙基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（300 mg，0.828 mmol）溶於丙酮（10 mL）中，加入鹽酸（0.5 mL）。反應液在室溫攪拌30分鐘。向反應液中加入水，用飽和碳酸氫鈉水溶液（10 mL）調至pH值至7，用乙酸乙酯（10 mL x 3）萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉（20 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法分離純化（乙酸乙酯，Rf = 0.3），得到7-異丙基-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（180 mg，白色油狀物），産率：68％。MS-ESI計算值[M + H]+ 319，實測值319。
第三步。
7-異丙基-3-甲基-1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將7-異丙基-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（122 mg，0.382 mmol）和氟化銫（11.5 mg，0.0763 mmol）溶於無水四氫呋喃（3 mL）中，在氮氣保護下加入三氟甲基三甲基矽烷（95.0 mg，0.640 mmol）。反應液加熱至30℃，攪拌12小時。然後加入鹽酸水溶液（1 N，5 mL），再攪拌30分鐘。向反應液中加入水，用飽和碳酸氫鈉水溶液（10 mL）調至pH值至7，用乙酸乙酯（10 mL x 3）萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉（20 mL x 3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用製備高效液相色譜分離純化，得到7-異丙基-3-甲基-1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（80.0 mg，白色固體），産率：53％。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.10（s，1H），5.06-5.00（m，1H），4.08-3.91（m，2H），3.55（s，3H），2.17-2.00（m，2H），1.88-1.84（m，2H），1.61-1.40（m，6H），1.59-1.57（m，5H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 389，實測值389。
實施例49。
7-（環丙基甲基）-1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤2，6（3H ，7H ）-二酮。
將（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（220 mg，1.00 mmol），1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基甲磺酸酯（250 mg，1.00 mmol），碘化鉀（15.8 mg，0.100 mmol）和碳酸鉀（276 mg，2.00 mmol）溶於無水N ，N -二甲基甲醯胺（8 mL）中，反應液加熱至120℃，攪拌3小時。反應冷却至20℃，將混合物過濾並減壓濃縮得到粗品1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（300 mg，白色油狀物），産率：80％。MS-ESI計算值[M + H]+ 375，實測值375。
第二步。
7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1-（1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（300 mg，0.802 mmol）溶於丙酮（10 mL）中，加入鹽酸（0.5 mL），將混合物置於室溫攪拌30分鐘。向反應液中加入水（30 mL），用飽和碳酸氫鈉水溶液（10 mL）調至PH值至7，用乙酸乙酯（10 mL x 3）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法分離純化（乙酸乙酯，Rf = 0.3），得到7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（180 mg，白色油狀物），産率：75％。MS-ESI計算值[M + H]+ 331，實測值331。
第三步。
7-（環丙基甲基）-1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（126 mg，0.382 mmol）和氟化銫（11.5 mg，0.0763 mmol）溶於無水四氫呋喃（3 mL）中，在氮氣保護下加入三氟甲基三甲基矽烷（95.0 mg，0.640 mmol）。將混合物置於30℃下攪拌12小時。然後加入1 N鹽酸水溶液（5 mL），再繼續攪拌30分鐘。向反應液中加入水（30 mL），用飽和碳酸氫鈉水溶液（10 mL）調至pH值至7，用乙酸乙酯（10 mL x 3）萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉（30 mL x 2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用製備高效液相色譜分離純化，得到7-（環丙基甲基）-1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（80.0 mg，白色固體），産率：53％。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ 8.16-8.15（m，1H），4.24-4.22（m，2H），4.08-3.91（m，2H），3.57（s，3H），2.18-2.07（m，2H），1.85-1.82（m，2H），1.61-1.47（m，6H），0.64-0.60（m，2H），0.50-0.48（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 401，實測值401。
實施例50。
7-（環丙基甲基）-1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（900 mg，2.25 mmol），通過製備SFC來分離得到兩個異構體。分離條件：色譜柱：AD 250mm x 30mm，5um流動相：A：超臨界二氧化碳，B：甲醇（0.05%氨水），A：B = 55：45 流速：40 mL/min波長：220 nm 。産物1（異構體1，第一個峰）（600 mg，白色固體），産率：100％。1 H NMR：（400 MHz，DMSO-d 6 ）δ8.11（s，1H），5.62（s，1H），4.08（d，J = 7.6 Hz，2H），3.88（d，J = 7.6 Hz，2H），3.43（s，3H），2.05-2.04（m，1H），1.85-1.82（m，2H），1.48-1.45（m，2H），1.33-1.32（m，2H），1.30-1.28（m，3H），0.48-0.46（m，2H），0.41-0.39（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 401，實測值401。
産物2（異構體2，第二個峰）（300 mg，白色固體），産率100％。1 H NMR：（400 MHz，DMSO-d 6 ）δ8.11（s，1H），5.62（s，1H），4.09（d，J = 7.6 Hz，2H），3.74（d，J = 7.6 Hz，2H），3.42（s，3H），1.69–1.45（m，3H），1.45–1.29（m，7H），0.48-0.46（m，2H），0.41-0.39（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 401，實測值401。
實施例51。
第一步。
1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基甲磺酸酯（682 mg，2.72 mmol），7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（500 mg，2.27 mmol）及碘化鉀（37.7 mg，0.227 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中，加入碳酸鉀（627 mg，4.54 mmol），反應130℃加熱回流4小時。反應液冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，得到的粗産品1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（1.10 g，黃色油狀）。MS-ESI計算值[M + H]+ 375，實測值375。
第二步。
7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（1.20 g，2.09 mmol）溶於丙酮（12 mL）中，加入4N 鹽酸水溶液（3 mL）。反應室溫攪拌過夜，加入水（20 mL），用乙酸乙酯（30 mL x 3）萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的産品用矽膠柱色譜法純化（1：1 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到産物7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（52.0 mg，黃色固體），産率：8%。MS-ESI計算值[M + H]+ 331，實測值331。
第三步。
將7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（100 mg，0.303 mmol）溶於四氫呋喃（5 mL），-78℃時在氮氣保護下緩慢加入甲基格氏試劑（3 M乙醚溶液，0.600 mL，1.81 mmol），-78℃攪拌半小時，接著0℃反應2小時。加入水（10 mL），用乙酸乙酯（30 mL x 3）萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到粗産品用製備高效液相色譜純化得産物1（26.0 mg，白色固體）（異構體1，第一個峰），産率：25%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.99（s，1H），4.19（d，J = 7.6 Hz，2H），3.90（d，J = 7.6 Hz，2H），3.54（s，3H），1.90-1.79（m，1H），1.70-1.61（m，4H），1.45-1.36（m，3H），1.27-1.16（m，5H），0.65-0.55（m，2H），0.49-0.42（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H - H2 O]+ 329，實測值329。
産物2（42.0 mg，白色固體）（異構體2，第二個峰），産率：40%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.99（s，1H），4.19（d，J = 7.6 Hz，2H），3.89（d，J = 7.6 Hz，2H），3.54（s，3H），1.81-1.70（m，1H），1.69-1.62（m，2H），1.51-1.41（m，4H），1.39-1.25（m，3H），1.15（s，3H），0.63-0.56（m，2H），0.48-0.42（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H - H2 O]+ 329，實測值329。
實施例52。
1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
（4-羥基-1-（甲氧基甲基）-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯（100 mg，0.349 mmol，7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（76.9 mg，0.349 mmol），碘化鉀（5.8 mg，0.0349 mmol）和碳酸鉀（149 mg，1.05 mmol）溶於無水N ，N -二甲基甲醯胺（5 mL）中。反應液微波加熱至150℃，反應2小時。反應液冷却至20℃，過濾，用製備高效液相色譜純化，得到 1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3，7-二甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（10.0 mg，白色固體），産率：6%。1 H NMR：（400 MHz，DMSO-d6 ）δ8.13（s，1H），4.12（s，2H），3.94（s，1H），3.43-3.38（m，4H），3.31（s，3H），3.19（s，3H），1.56-1.45（m，8H），1.43-1.31（m，1H），0.51-0.49（m，2H），0.44-0.42（m，2H）。
MS-ESI計算值[M + H]+ 445，實測值445。。
實施例53。
7-（環丙基甲基）-1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
7-（環丙基甲基）-1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮。
（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基甲磺酸酯（100 mg，0.344 mmol），7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（75.9 mg，0.344 mmol），碘化鉀（5.70 mg，0.0344 mmol）和碳酸鉀（47.6 mg，0.344 mmol）溶於無水N ，N -二甲基甲醯胺（5 mL）中。反應液加熱至150℃，微波反應4小時。反應液冷却至20℃，過濾，濃縮,然後用製備高效液相色譜純化，得到 7-（環丙基甲基）-1-（（4-羥基-1-甲基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（10.0 mg，白色固體），産率：7％。1 H NMR：（400 MHz，DMSO-d6 ）δ8.13（s，1H），4.13-4.09（m，2H），3.83（s，1H），3.43（s，3H），3.34（s，2H），1.67-1.53（m，6H），1.23-1.20（m，3H），0.88（s，3H），0.50-0.42（m，4H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 415，實測值415。
實施例54。
7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（5-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H-嘌呤2，6-（3H，7H）-二酮。
第一步。
1-（4-（溴甲基）-5-甲基噻唑-2-基）乙酮。
將1-（4，5-二甲基吡啶-2-基）乙酮（200 mg，1.29 mmol），N -溴代丁二醯亞胺（229 mg，1.29 mmol），偶氮二異丁腈（21.2 mg，0.129 mmol）溶於四氯化碳（20 mL）中，80℃反應12小時。加入飽和硫代硫酸鈉溶液（30 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（10 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1-（4-（溴甲基）-5-甲基噻唑-2-基）乙酮（200 mg，黃色油狀），産率：46%。MS-ESI計算值[M + H]+ 234，236，實測值234，236。
第二步。
1-（（2-乙醯基-5-甲基噻唑-4-基）甲基）-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H，7H）-二酮。
將1-（4-（溴甲基）-5-甲基噻唑-2-基）乙酮（200 mg，0.598 mmol），7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-二酮（132 mg，0.598 mmol），碘化鉀（19.8 mg，0.119 mmol）和碳酸鉀（248 mg，1.79 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮用製備TLC板分離純化（1：1石油醚/乙酸乙酯，Rf值 = 0.4）得到1-（（2-乙醯基-5-甲基噻唑-4-基）甲基）-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（100 mg，黃色固體），産率：45%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.02（s，1H），5.35（s，2H），4.21（d，J = 7.6 Hz，2H），3.56（s，3H），2.66（s，3H），2.60（s，3H），1.46-1.41（m，1H），0.65-0.61（m，2H），0.60-0.48（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 374，實測值374。
第三步。
7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（5-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-（（2-乙醯基-5-甲基噻唑-4-基）甲基）-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-（3H ，7H ）-二酮（100 mg，0.267 mmol），氟化銫（40.6 mg，0.267 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基-三氟甲基-矽烷（114 mg，0.803 mmol），攪拌12小時。加入水（20 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（5-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤2，6-（3H ，7H ）-二酮（50.0 mg，黃色固體），産率：42%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.11（s，1H），5.33（s，2H），4.23（d，J = 7.6 Hz，2H），3.57（s，3H），2.64（s，3H），1.81（s，3H），1.45-1.41（m，1H），0.65-0.61（m，2H），0.60-0.49（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 444，實測值444。
實施例55。
7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（6-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）吡啶-3-基）甲基）-1H -嘌呤2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-[5-（溴甲基）-2-吡啶基]乙酮。
將1-（5-甲基-2-吡啶基）乙酮（500 mg，3.70 mmol），N -溴代丁二醯亞胺（658 mg，3.70 mmol），偶氮二異丁腈（182 mg，1.11 mmol）溶於四氯化碳（20 mL）中，90℃反應12小時。加入飽和硫代硫酸鈉溶液（30 mL）淬滅反應。用二氯甲烷萃取（10 mL x 3），無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1-[5-（溴甲基）-2-吡啶基]乙酮（125 mg，黃色油狀），産率：16%。MS-ESI計算值[M + H]+ 214和216，實測值214和216。
第二步。
1-[（6-乙醯基-3-吡啶基）甲基]-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-二酮。
將1-[5-（溴甲基）-2-吡啶基]乙酮（100 mg，0.467 mmol），7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-二酮（103 mg，0.467 mmol），碘化鉀（15.5 mg，0.0934 mmol）和碳酸鉀（193 mg，1.40 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.4）得到1-[（6-乙醯基-3-吡啶基）甲基]-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-二酮（50.0 mg，黃色固體），産率：30%。MS-ESI計算值[M + H]+ 354，實測值354。
第三步。
7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（6-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）吡啶-3-基）甲基）-1H -嘌呤2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-[（6-乙醯基-3-吡啶基）甲基]-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-二酮（100 mg，0.283 mmol），氟化銫（43.0 mg，0.283 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基-三氟甲基-矽烷（60.4 mg，0.424 mmol），攪拌12小時。加入水（20 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（6-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）吡啶-3-基）甲基）-1H -嘌呤2，6-（3H ，7H ）-二酮（40.0 mg，黃色固體），産率：32%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ9.00（s，1H），8.80-8.72（m，1H），8.46（s，1H），8.35-8.29（m，1H），5.43（s，2H），4.28（d，J = 7.6 Hz，2H），3.58（s，3H），1.95（s，3H），1.50-1.46（m，1H），0.68-0.64（m，2H），0.53-0.51（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 424，實測值424。
實施例56。
7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（5-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤2，6-（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-[（5-乙醯基-2-吡啶基）甲基]-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-二酮。
將1-[6-（溴甲基）-3-吡啶基]乙酮（100 mg，0.467 mmol），7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-二酮（103 mg，0.467 mmol），碘化鉀（15.5 mg，0.0934 mmol）和碳酸鉀（193 mg，1.40 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液升溫至120℃，攪拌3小時。冷却至室溫，過濾，濾液減壓濃縮用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf值 = 0.5）得到1-[（5-乙醯基-2-吡啶基）甲基]-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-二酮（50.0 mg，黃色固體），産率：30%。MS-ESI計算值[M + H]+ 354，實測值354。
第二步。
7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（5-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤2，6-（3H ，7H ）-二酮。
將1-[（5-乙醯基-2-吡啶基）甲基]-7-（環丙基甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6-二酮（100 mg，0.283 mmol），氟化銫（43.0 mg，0.283 mmol）溶於四氫呋喃（10 mL）中，室溫下加入三甲基-三氟甲基-矽烷（60.4 mg，0.424 mmol），攪拌12小時。加入水（20 mL）淬滅反應。用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用製備型高效液相色譜純化，得到7-（環丙基甲基）-3-甲基-1-（（5-甲基-2-（1，1，1-三氟-2-羥基丙烷-2-基）噻唑-4-基）甲基）-1H -嘌呤2，6-（3H ，7H ）-二酮（10.0 mg，黃色固體），産率：8%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ8.92（s，1H），8.75（d，J = 7.6 Hz，1H），8.09（d，J = 7.6 Hz，1H），7.97（s，1H），5.54（s，2H），4.21（d，J = 7.6 Hz，2H），3.58（s，3H），1.85（s，3H），1.45-1.42（m，1H），0.64-0.59（m，2H），0.50-0.46（m，2H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 424，實測值424。
實施例57。
1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-7-異丁基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-7-異丁基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基甲磺酸酯（1.07 g，4.81 mmol），7-異丁基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.00 g，4.01 mmol）及碳酸鉀（647 mg，4.81 mmol）溶於N ，N -二甲基甲醯胺（14 mL）中，加入碘化鉀（66.5 mg，0.401 mmol），反應130℃加熱回流3小時。反應液直接過濾，濾液減壓濃縮，得到粗産品1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-7-異丁基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（粗産品2.56 g，棕色油狀）。MS-ESI計算值[M + H]+ 377，實測值377。
第二步。
7-異丁基-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將1-（1，4-二氧雜螺[4，5]癸烷-8-基甲基）-7-異丁基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（2.50 g，6.00 mmol）溶於丙酮（12 mL）中，加入4 N鹽酸水溶液（2 mL）。反應30℃攪拌過夜，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（8 mL）調節pH至7。向反應液中加入水（100 mL），用乙酸乙酯（150 mL x 3）萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的産品用矽膠柱色譜法純化（1：2 石油醚/乙酸乙酯，Rf = 0.3）得到産物7-異丁基-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（150 mg，白色固體），産率：13%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.94（s，1H），4.14（d，J = 7.6 Hz，2H），3.99（d，J = 7.6 Hz，2H），3.55（s，3H），2.29-2.38（m，5H）,2.20-2.13（m，1H），2.03-1.98（m，2H）,1.53-1.47（m，2H），0.92（d，J = 6.4 Hz，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 333，實測值333。
第三步。
1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-7-異丁基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將7-異丁基-3-甲基-1-（（4-氧環己基）甲基）-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（150 mg，0.450 mmol）及氟化銫（8.0 mg，0.0450 mmol）溶於四氫呋喃（3 mL）中，在氮氣保護下緩慢加入三氟甲基三甲基矽烷（950 mg，0.640 mmol）。反應30℃下攪拌16小時，加入4 N鹽酸水溶液（3 mL）並25℃攪拌半小時後，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（15 mL）調節pH至7，加入水（50 mL）並用乙酸乙酯（50 mL x 3），有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗産品用製備高效液相色譜純化得産物1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-7-異丁基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（86.0 mg，白色固體），産率：48%。1 H NMR：（400 MHz，Methanol-d 4 ）δ7.93（s，1H），4.15-4.04（m，2H），3.89（d，J = 7.6 Hz，1H），3.54（s，3H），2.20-1.98（m，3H），1.86-1.79（m，2H），1.61-1.42（m，5H），0.92（d，J = 6.4 Hz，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 403，實測值403。
實施例58。
1-（（4-羥基-4-（三氟甲基）環己基）甲基）-7-異丁基-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（900 mg，2.24 mmol），通過製備SFC來分離得到兩個異構體。異構體1分離條件：色譜柱：AD 250mm x 30mm，5 um 流動相：A：超臨界二氧化碳，B：乙醇（0.05%氨水），A：B = 80：20 流速：50 mL/min 波長：220 nm。異構體2分離條件：色譜柱：WEEK-1 300mm x 25 mm，5 um 流動相：A：超臨界二氧化碳，B：乙醇（0.05% 氨水），A：B = 60：40，流速：60 mL/min，波長：220nm。
産物1（異構體1，第一個峰）（216 mg，白色固體），産率：36％。1 H NMR：（400 MHz，DMSO-d 6 ）δ8.09（s，1H），5.65（s，1H），4.07（d，J = 7.2 Hz，2H），3.90（d，J = 7.2 Hz，2H），3.43（s，3H），2.14-2.00（m，2H），1.92-1.80（m，2H），1.77-1.66（m，2H），1.52-1.44（m，2H），1.37-1.30（m，2H），0.84（d，J = 6.4 Hz，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 403，實測值403。
産物2（異構體2，第二個峰）（101 mg，白色固體），産率37％。1 H NMR：（400 MHz，DMSO-d 6 ）δ8.07（s，1H），5.64（s，1H），4.05（d，J = 7.6 Hz，2H），3.75（d，J = 7.6 Hz，2H），3.42（s，3H），2.16-2.03（m，1H），1.71-1.66（m，3H），1.48-1.30（m，6H），0.83（d，J = 6.4 Hz，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 403，實測值403。
實施例59。
7-（2，3-二羥基丙基）-1-（5-乙基-5-羥基庚基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
7-（（2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（200 mg，1.20 mmol），碳酸鈉（128 mg，1.20 mmol），4-（氯甲基）-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環（217 mg，1.44 mmol）和碘化鉀（20.0 mg，0.120 mmol）溶解於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液加熱到110℃，反應36小時。加水（30 mL）淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3），有機相用飽和食鹽水洗滌（5 mL），無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf = 0.5）得到7-（（2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（169 mg，黃色固體），産率：50%。MS-ESI計算值[M + H]+ 281，實測值281。
第二步。
乙基5-（7-（（2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）甲基）-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤烷-1-基）戊酸乙酯。
將7-（（2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）甲基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（169 mg，0.604 mmol），溴戊酸乙酯（178 mg，0.906 mmol），碳酸鉀（167 mg，1.21 mmol）和碘化鉀（20.0 mg，0.0600 mmol）溶解於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液加熱到130℃，反應3小時，過濾，濃縮，用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf = 0.4）得到乙基5-（7-（（2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）甲基）-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤烷-1-基）戊酸乙酯（124 mg，黃色固體），産率：50%。MS-ESI計算值[M + H]+ 409，實測值409。
第三步。
7-（（2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）甲基）-1-（5-乙基-5-羥基庚基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）二酮。
將乙基5-（7-（（2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）甲基）-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤烷-1-基）戊酸乙酯（30.0 mg，0.0750 mmol）溶解於無水四氫呋喃（1 mL）中，於-65℃條件下慢慢滴入乙基溴化鎂（3 M四氫呋喃溶液，0.15 mL，0.450 mmol）。反應在-65℃反應0.5小時，然後在0℃反應0.5小時。反應液倒入水（5 mL）中淬滅，用乙酸乙酯萃取（5 mL x 3），用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用製備TLC板分離純化（乙酸乙酯，Rf = 0.5）得到7-（（2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）甲基）-1-（5-乙基-5-羥基庚基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）二酮（20.0 mg，黃色油狀物），産率：63%。MS-ESI計算值[M + H]+ 423，實測值423。
第四步。
7-（2，3-二羥基丙基）-1-（5-乙基-5-羥基庚基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將7-（（2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-基）甲基）-1-（5-乙基-5-羥基庚基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）二酮（20.0 mg，0.0470 mmol）溶解於無水四氫呋喃（1 mL）和稀鹽酸（0.3 mL）中，在25℃條件下反應36小時。反應完全後，減壓濃縮，用製備TLC板分離純化（8：1乙酸乙酯/甲醇，Rf = 0.3）純化得到7-（2，3-二羥基丙基）-1-（5-乙基-5-羥基庚基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（5.0 mg，白色固體），産率：28%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d 4 ）δ7.90（s，1H），4.57-4.53（m，1H），4.26-4.22（m，1H），4.03-3.96（m，3H），3.58-3.55（m，2H），3.54（s，3H），1.66-1.61（m，2H），1.48-1.44（m，6H），1.34-1.29（m，2H），0.85（t，J = 8.0 Hz，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 383，實測值383。
實施例60。
1-（5-乙基-5-羥基庚基）-7-（2-羥基乙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
7-（2-羥基乙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.00 g，6.00 mmol），碳酸鉀（830 mg，6.00 mmol）溶解於N ，N -二甲基甲醯胺（10 mL）中。反應液加熱到80℃反應0.5小時，加入2-溴乙醇（900 mg，7.20 mmol）。反應液加熱至130℃反應過夜。反應液濃縮得到粗品7-（2-羥基乙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮直接用於下一步。
第二步。
乙基5-（7-（2-羥基乙基）-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）戊酸乙酯。
7-（2-羥基乙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（1.05 g，5.00 mmol），5-溴戊酸乙酯（1.25 g，6.00 mmol）和碳酸鉀（1.66 g，12.0 mmol）溶解於N ，N -二甲基甲醯胺（3 mL）中。反應液加熱到130℃反應 3小時。把反應液倒入水（20 mL）中淬滅反應，用乙酸乙酯萃取（20 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用製備TLC板分離純化得到乙基5-（7-（2-羥基乙基）-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）戊酸乙酯（700 mg，黃色油狀物），産率：35%。MS-ESI計算值[M + H]+ 339，實測值339。
第三步。
1-（5-乙基-5-羥基庚基）-7-（2-羥基乙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將乙基5-（7-（2-羥基乙基）-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤-1-基）戊酸乙酯（700 mg，2.07 mmol）溶解於無水四氫呋喃（7 mL）中，於-78℃條件下慢慢滴加乙基溴化鎂（3 M四氫呋喃溶液，7 mL，2.10 mmol）。反應液在-78℃反應1小時。反應液倒入水（20 mL）中淬滅，用乙酸乙酯萃取（30 mL x 3）。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用高效液相色譜法分離純化得到1-（5-乙基-5-羥基庚基）-7-（2-羥基乙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（110 mg，白色固體），産率：15%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）：δ7.90（s，1H），4.41（t，J = 5.0 Hz，2H），4.00（t，J = 7.6 Hz，2H），3.87（t，J = 5.0 Hz，2H），3.54（s，3H），1.68-1.59（m，2H），1.50-1.42（m，5H），1.39-1.29（m，3H），0.95-0.77（m，6H）。MS-ESI計算值[M + H – H2 O]+ 335，實測值335。
實施例61。
1-（5-乙基-5-羥基庚醇）-7-（2-羥基-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
第一步。
1-溴-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙-2-醇。
將2-（甲基氨基）乙醇（135 mg，1.80 mmol）溶解於N ，N -二甲基甲醯胺（5 mL）中，加入2-（溴甲基）環氧乙烷（206 mg，1.51 mmol）室溫下反應1.5小時。反應完全後，該反應液直接用於下一步反應。
第二步。
7-（2-羥基-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
向1-溴-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙-2-醇的溶液中加入3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（100 mg，0.602 mmol），碳酸鈉（64.0 mg，0.602 mmol）和碘化鉀（10.0 mg，0.0600 mmol）。反應液加熱到80℃，反應10小時。反應完全後，過濾，減壓濃縮，得到粗品7-（2-羥基-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮直接用於下一步。MS-ESI計算值[M + H]+ 298，實測值298。
第三步。
乙基5-（7-（2-羥基-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙基）-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤烷-1-基）戊酸乙酯。
將7-（2-羥基-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（170 mg，0.572 mmol），溴戊酸乙酯（169 mg，0.858 mmol），碳酸鉀（158 mg，1.14 mmol）和碘化鉀（10.0 mg，0.0570 mmol）溶解於N ，N -二甲基甲醯胺（5 mL）中。反應液加熱到130℃，反應3小時。把反應液倒入水（5 mL）中淬滅，用乙酸乙酯萃取（10 mL x 3）。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，用製備TLC板分離純化（8：1二氯甲烷/甲醇，Rf = 0.4）得乙基5-（7-（2-羥基-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙基）-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤烷-1-基）戊酸乙酯（118 mg，黃色油狀物），産率：49%。MS-ESI計算值[M + H]+ 426，實測值426。
第四步。
1-（5-乙基-5-羥基庚醇）-7-（2-羥基-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮。
將乙基5-（7-（2-羥基-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙基）-3-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H -嘌呤烷-1-基）戊酸乙酯（100 mg，0.235 mmol）溶解於無水四氫呋喃（4 mL）中，在-65℃條件下慢慢滴入乙基溴化鎂（3 M四氫呋喃溶液，0.47 mL，1.41 mmol）。反應在-65℃反應0.5時，然後在0℃反應0.5小時。反應完全後，反應液倒入水（5 mL）中淬滅，用乙酸乙酯萃取（5 mL x 3），用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用製備TLC板分離純化（6：1 乙酸乙酯/甲醇，Rf = 0.3）純化得1-（5-乙基-5-羥基庚醇）-7-（2-羥基-3-（（2-羥基乙基）（甲基）氨基）丙基）-3-甲基-1H -嘌呤-2，6（3H ，7H ）-二酮（3.0 mg，白色固體），産率：3%。1 H NMR：（400 MHz，Methonal-d4 ）δ7.92（s，1H），4.91-4.59（m，2H），4.52-4.39（m，3H），4.30-4.25（m，2H），4.03-3.99（m，2H），3.88-3.84（m，2H），3.55（s，3H），2.90（s，3H），1.68-1.59（m，4H），1.48-1.45（m，6H），0.88-0.84（m，6H）。MS-ESI計算值[M + H]+ 440，實測值440。
實驗例1：體外評價PDE2磷酸二酯酶抑制活性。
實驗目的：通過熒光偏振分析法檢測AMP/GMP抗體上取代的AlexaFluor 633熒光染料來檢測反應體系中産生的AMP/GMP濃度,計算待測化合物的PDE2磷酸二酯酶抑制IC50 值。
實驗材料。
測定緩沖溶液：10 mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩衝液，pH 7.5，5 mM 氯化鎂，0.01%聚氧乙烯月桂醚，1 mM 二硫蘇糖醇和1% DMSO。 酶：使用N端GST標簽用杆狀病毒在昆蟲Sf9細胞中表達重組全長人PDE2A蛋白。底物：1 μM cGMP。
檢測方法。
Transcreener® AMP2 /GMP2 抗體, AMP2/GMP2 AlexaFluor 633熒光染料。
實驗操作。
將新鮮製備的緩衝溶液配置酶溶液，然後加入到反應孔穴中，通過Echo550非接觸式納升級聲波移液系統加入待測化合物的DMSO溶液，然後室溫下預溫育10分鐘，加入底物 (1mM cGMP)引發反應，室溫反應一小時。然後加入檢測系統（Transcreener® AMP2 /GMP2 抗體, AMP2/GMP2 AlexaFluor 633熒光染料），室溫下反應90分鐘，然後使用Ex/Em 620/688檢測熒光偏振。
熒光偏振强度通過AMP/GMP標準曲綫換算成nM濃度，然後計算相對DMSO空白的相對酶活性抑制，利用Prism軟件包 (GraphPad Software, San Diego California, USA)計算IC50值和曲綫。
實驗結果：見表1。 表1 PDE2磷酸二酯酶抑制活性測試結果 注：10　mＭ≦ “+”　＜　50　mＭ；1 mM　≦ “＋＋”　＜　10　mＭ；“＋＋＋”　＜　1 mM; -- N/A
結論：本發明化合物具有顯著甚至意料不到的PDE2A蛋白酶抑制活性。
實驗例2：體外評價化合物對LPS誘導大鼠血液中TNF-a的影響。
實驗目的：在體外檢測化合物對LPS誘導大鼠血液中TNF-a的影響，評估化合物對大鼠血液中LPS誘導TNF-a的抑制作用。
實驗材料： Sprague Dawley 大鼠 (雄性，210~260g，8~10周齡，上海斯萊克)； Rat TNF-alpha Quantikine ELISA Kit (R&D, #SRTA00)。
實驗操作：配製濃度爲1mM的待測化合物溶液，分別在48孔細胞培養板中加入40μL (化合物終濃度爲100uM)。大鼠用異氟烷麻醉後，於心臟採血（肝素抗凝）。將血液加入已經加好待測化合物的48孔板中，每孔320μL。將48孔板放置於細胞培養箱中，孵育30分鐘後取出，加入40μL LPS溶液(100ug/mL)，混勻後放置於培養箱中繼續孵育。5小時後取出48孔板，血樣轉移至1.5mL離心管中，置於離心機中離心（4,500 rpm, 4°C, 5 分鐘），分離上層得血漿，分裝後速凍，保存在-80度冰箱。第二天按照試劑盒說明書操作用R&D ELISA試劑盒進行血漿樣品中TNF-a水平檢測。
實驗結果：見表2。 表2TNF-a抑制活性測試結果 注：60% ≦ “+” ＜ 80%；80% ≦ “＋＋” ＜ 100%；　-- N/A
結論：本發明化合物具有顯著甚至意料不到的TNF-a抑制活性。
實驗例3：化合物藥代動力學評價。
實驗目的：測試化合物在SD大鼠體內藥代動力學。
實驗材料： Sprague Dawley 大鼠 (雄性, 200-300g, 7~9周齡，上海斯萊克)。
實驗操作：以標準方案測試化合物靜脉注射及口服給藥後的嚙齒類動物藥代特徵，實驗中候選化合物配成澄清溶液，給予大鼠單次靜脉注射及口服給藥。靜注及口服溶媒爲一定比例的羥丙基β環糊精水溶液或生理鹽水溶液。收集24小時內的全血樣品，3000g離心15分鐘，分離上清得血漿樣品，加入4倍體積含內標的乙腈溶液沉澱蛋白，離心取上清液加入等倍體積的水再離心取上清進樣，以LC-MS/MS 分析方法定量分析血藥濃度，並計算藥代參數，如達峰濃度，達峰時間，清除率，半衰期，藥時曲綫下面積，生物利用度等。
實驗結果：見表3。 表3 藥代動力學測試結果
結論：本發明化合物可以顯著提高大鼠藥代動力學單項或部分指標。
實驗例4：MCD小鼠模型體內藥理學研究。
主要任務：評估化合物1對非酒精性脂肪性肝炎模型MCD小鼠肝臟組織學， TG水平，TNF-a、mRNA水平和炎症因子 (IL-1b水平；血漿ALT/AST水平，炎症因子 (TNF-a，IL-1b) 水平的影響。
擬解决的問題：測試化合物1對MCD小鼠肝臟組織學，TG水平，TNF-amRNA水平和炎症因子 (IL-1b) 水平；血漿ALT/AST水平，炎症因子(TNF-a，IL-1b)水平的影響，評估化合物對非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠的肝功能保護，降低肝臟炎症的作用。
實驗模型：小鼠蛋氨酸和膽鹼缺失飲食誘導的非酒精性脂肪性肝炎模型 (Methionine-choline-deficient diet treated mice，MCD mice)
實驗動物： C57BL/6J小鼠 (雄性，4周齡購入，上海斯萊克)
實驗試劑： 1.  MCD飼料 (Research Diets, # A02082002B) 2.  MCD對照飼料(Research Diets, # A02082003B) 3.  RNeasy® Mini RNA提取試劑盒 (Qiagen, #74104) 4.  High Capacity cDNA 逆轉錄試劑盒 (ABI, # 4368814) 5.  TaqMan® Gene Expression Assay TNF-a (ABI, Assay ID: Mm00443258_m1) 6.  TaqMan® Endogenous Control 18S (ABI, Assay ID: Mm03928990_g1) 7.  TaqMan® Fast Universal PCR Mater Mix (ABI, # 4366072) 8.  One cOmplete, EDTA-free protease inhibitor tablet (Roche, # 11873580001) 9.  BCA蛋白定量試劑盒 (Pierce, # 23227) 10.  MSD炎症因子檢測試劑盒 (Meso Scale Discovery, #K15A0H-2) 11.  Triglyceride Quantification Kit (BioVision, #K622-100) 12.  Hematoxylin (Baso, # BA4097) 13.  Eosin (Baso, # BA4099)
實驗方法。
1. 實驗流程。
2. 體內實驗方法。
購買4周齡C57BL/6J小鼠，適應環境4周後開始特殊飼料飼養。特殊飼料飼養1周後開始口服給藥的預適應。預適應方法：按照5mL/kg口服溶媒對照 0.5% （w/v）羥丙基甲基纖維素。預適應一周後隨機分組，進行口服給藥，分組與給藥信息如下： MCD對照飲食 + 溶媒對照 (p.o. tid, 2wk)             n=8 MCD飲食 + 溶媒對照 (p.o. tid, 2wk)                 n=8 MCD飲食 + 己酮可可鹼 (p.o. 200mg/kg, tid, 2wk)      n=8 MCD飲食 + INT-747 (p.o. 30mg/kg, q.d. 2wk)           n=8 MCD飲食 + 化合物1 (p.o. 30mg/kg, bid, 2wk)    n=8
給藥兩周後CO2 處死小鼠，心臟取血500μL~600μL (K2 -EDTA抗凝)，將血樣置於離心機中離心 (4,500 rpm, 4°C, 5 分鐘)，分離上層得血漿，分裝後速凍，保存在-80°C冰箱。並解剖取肝組織用於組織學分析與生物標志物檢測。
凍存的血漿樣品於第二天進行ALT與AST檢測。
3. 組織學分析方法。
3.1 HE染色方法。
3.1.1 組織處理。
使用Leica ASP200S全自動脫水機，相關的脫水步驟如下： a)            10% 中性緩衝福爾馬林 5分鐘-6小時 b)           70% 乙醇 45分鐘 c)            80% 乙醇 45分鐘 d)           95% 乙醇 45分鐘 e)            95% 乙醇 45分鐘 f)             100% 乙醇 60分鐘 g)            100% 乙醇 60分鐘 h)           100% 乙醇 60分鐘 i)              二甲苯 60分鐘 j)              二甲苯 60分鐘 k)           石蠟 60分鐘 l)              石蠟 60分鐘 m)         石蠟 60分鐘
3.1.2 組織包埋。 a)       包埋前的準備。 Leica 組織包埋系統的組成及功能： Leica 組織包埋系統由兩部分組成：包埋台 (Leica EG1150 H) 和冷凍台 (Leica EG1150 C)。包埋台包括左側金屬模具存放缸，右側組織包埋盒存放缸及位於儀器上部的石蠟缸。包埋台前部有一個小的冷台，可以迅速冷却單個包埋模具。冷凍台主要由冷台構成，迅速冷却包埋模具內的石蠟。包埋盒冷却後，蠟塊保存在室溫條件下。 b)       打開冷台。 c)        將脫水機中的包埋盒取出，放入包埋機蠟缸中。 d)       包埋。 將熱鑷子將包埋機蠟缸中的組織包埋盒取出，放在包埋機的熱臺上。將與組織相應的包埋盒放置在模具上面。用熱鑷子將組織放入包埋模具，再向包埋模具中加入少許溶解的石蠟，將包埋模具放在冷臺上，直至石蠟徹底變成固體狀態。最後將固體的蠟塊從包埋模具中取出。
3.1.3 組織切片的準備。 a)       使用Leica RM2235石蠟切片機前確認其狀態。 裝蠟塊前，應確保切片輪把手粗語鎖定狀態，開啓刀架保護套，清潔刀架上的蠟屑。 小心插入未使用過的一次性切片刀，確認刀片放入到家中的適當位置，根據生産商的使用說明書鎖緊刀架。確認刀片的傾角，一般應設置爲3-6度。 b)       將組織蠟塊固定於切片機夾槽內的理想位置。 根據生産商的使用說明書，使用粗修輪把手進行粗修，使蠟塊緩慢的向前推進，直至暴露所需的組織平面。 c)        開始切片，首先開始設置切片厚度，開始切片，向前旋轉切片轉輪，直至平整的蠟片形成。鎖定切片輪轉把手，用鑷子或毛筆等將組織片移入攤片機 (Leica HI1210)並平整的裱於載玻片上。 d)       完成粗修或切片後，鎖定輪轉把手，小心取出蠟塊。
3.1.4 HE染色。
使用Leica ST5010、LeicaTS5010和LeicaCV5030組成的全自動染色工作站進行HE染色。
在染色機主菜單中按＜Stain＞鍵。通過按鍵區的上下箭頭選擇程序15進行常規HE染色。打開裝載倉，放入切片架，關上裝載倉。按＜Load＞鍵後啓動染色程序。程序如下： a)       烤箱 55℃ 2 分鐘 b)       二甲苯Ⅰ 10 分鐘 c)        二甲苯Ⅱ 10 分鐘 d)       二甲苯Ⅲ 10 分鐘 e)        無水乙醇Ⅰ 2 分鐘 f)         無水乙醇Ⅱ 1.5 分鐘 g)       95% 乙醇Ⅰ 1 分鐘 h)       80% 乙醇Ⅰ  0.5 分鐘 i)         水洗 3 分鐘 j)         蘇木素染液 3 分鐘 k)       水洗 2 分鐘 l)         1% 鹽酸-乙醇 5 秒鐘 m)    水洗 2 分鐘 n)       水洗 20 分鐘 o)       80% 乙醇Ⅱ 1 分鐘 p)      伊紅 5 秒鐘 q)       95% 乙醇Ⅱ 30 秒鐘 r)        無水乙醇Ⅲ 2 分鐘 s)        無水乙醇Ⅳ 2 分鐘 t)         無水乙醇Ⅴ 2 分鐘 u)       無水乙醇Ⅵ 2 分鐘 v)       二甲苯Ⅳ 3 分鐘 w)     二甲苯Ⅴ 3 分鐘
3.2 組織學非酒精性脂肪肝病活動度評分（NAS）相關評分標準：非酒精性脂肪肝病 (NAFLD) 的組織學診斷和臨床療效評估參照美國國立衛生研究院NASH臨床研究網病理工作組指南，常規進行NAFLD活動度評分 (NAFLD activity score, NAS)。
NAS評分 (0～8分)： a)       肝細胞脂肪變：0分 (＜5%)；1分 (5%～33%)；2分 (33%～66%)；3分 (＞66%)。 b)       小葉內炎症 (20倍鏡計數壞死灶) ：0分，無；1分 (＜2個) ；2分 (2～4個) ；3分(＞4個) 。 c)        肝細胞氣球樣變：0分，無；1分，少見；2分，多見。
4．肝臟TG檢測方法。
4.1 樣本準備：每份肝臟組織加入5% NP40裂解液，使得濃度爲100mg/mL。在組織勻漿器上裂解組織。在80-100度水浴中加熱樣本5min，然後降至室溫。重複加熱一次。最高轉速離心2min，取上清。將上清稀釋60倍，檢測板中每孔加入30μL。
4.2 標準品準備：將1mM甘油三酯稀釋至0.2mM，在標準孔列分別加入0,10,20,30,40,50μL的0.2mM甘油三酯標準品，加檢測液補足到50μL。
4.3 每孔加入2μL脂肪酶，混勻室溫孵育20min。
4.4 按比例配置酶反應液：46μL甘油三酯檢測液+2μL甘油三酯探針+2μL甘油三酯酶反應液。向所有檢測孔中加入50μL酶反應液，混勻，避光室溫孵育30-60min。
4.5 檢測：用酶標儀測定570nm的吸光度值。
5. 肝組織TNF-amRNA檢測方法。
根據操作手册，用RNeasy® Mini RNA提取試劑盒 (Qiagen #74104) 提取RNA，當天完成逆轉錄，逆轉錄體系配比 (ABI # 4368814) 如下： 10×逆轉錄緩衝液              2μL 25×脫氧核糖核苷三磷酸混合液 (100mM)             0.8μL 10×逆轉錄隨機引物                 2μL MultiScribe 逆轉錄酶               1μL 模板RNA                                    1μg 無RNA酶 H2 O                         加至20μL
逆轉錄程序：
cDNA保存於-20°C冰箱。
按照TaqMan® Fast Universal試劑盒(ABI, # 4366072)說明書，進行Q-PCR檢測，體系配比如下： TaqMan® Gene Expression Master Mix (2✕)          5μL TaqMan® Gene Expression Assay (20✕)            0.5μL cDNA template                                 0.8μL H2 O                                          3.7μL
Q-PCR程序：
6. 炎症因子檢測方法。
6.1 肝組織勻漿與樣品製備。
6.1.1 開機預冷離心機。
6.1.2 將一片One cOmplete, EDTA-free protease inhibitor tablet溶於50 mL磷酸鹽緩衝液中，PBS置於濕冰中均漿1：10 (w/v)。
6.1.3離心1000g, 10min, 4℃，上清轉移220μL至超速離心管中，每份上清準備兩管超速離心。
6.1.4樣品置於已經預冷的超速離心機Optima™ L-80 XP (Beckman)中，超速離心100,000 g，4℃，50 min。
6.1.5乾冰上預冷V底96孔板，將同一樣品對應的兩管上清並入1.5mL EP管中，輕彈混勻後取120μL分裝至V底96孔板中，乾冰速凍，共製備三塊樣品板（一塊板用於BCA蛋白定量，一塊板用於MSD檢測，剩餘一塊備用）。
6.2 BCA法測定組織勻漿液中蛋白濃度。
6.2.1 BCA工作液製備：按照試劑A：試劑B=50:1混合試劑A與B。
6.2.2製備BSA(牛血清白蛋)標準溶液A~I。
6.2.3 用PBS稀釋勻漿液，20μL勻漿液+80μL PBS。
6.2.4 在96孔板中按順序加入10μL BSA標準液A~I及已稀釋的待測樣品。
6.2.5 每孔加入200 μLBCA工作液於標準液和待測樣品中，振板器上混勻。
6.2.6 在37℃孵育箱中孵育30分鐘。
6.2.7 取出板後放冷至室溫。
6.2.8 在酶標儀上用562 nm波長測吸光度。
6.3 MSD檢測樣品中炎症因子含量。
6.3.1 冰箱中取出MSD板，放置於室溫。
6.3.2 按照1：3梯度稀釋標準品溶液。
6.3.3 每孔加入50μL標準品與樣品溶液，固定於振板上，300-1000rpm室溫孵育2hr。
6.3.4 每孔加入300μLWash buffer洗板三次，每孔加入1×檢測抗體溶液25μL，固定於振板上，300-1000rpm室溫孵育2hr。
6.3.5 每孔加入300μL Wash buffer洗板三次，每孔加入1×讀板液150μL，放入Sector Imager 6000 Model 1200中讀取信號值。
實驗結果：。
1. 組織學結果。
1.1 HE染色圖片。
HE染色結果顯示，MCD飼養四周，小鼠肝臟脂肪變顯著增加，肝小葉炎症明顯增加；己酮可可鹼 (200mpk,po.,t.i.d.) 與INT-747 (30mpk, po., q.d.)給藥兩周，MCD小鼠肝臟病變並無顯著改善，而化合物1(30mpk, po., b.i.d.) 給藥兩周MCD小鼠肝小葉炎症明顯改善，實驗結果見圖1。
1.2 NAS評分。 MCD小鼠肝臟組織學NAS和小葉炎症顯著升高，本次實驗測試的三種化合物對NAS無顯著性影響，但化合物1能够顯著性降低MCD小鼠肝臟小葉炎症，實驗結果見圖2。
2．肝臟TG檢測結果。 MCD小鼠肝臟TG水平顯著升高，本次實驗測試的三種化合物對MCD小鼠肝臟TG水平均無顯著性影響，實驗結果見圖3。
3. 肝臟TNF-amRNA水平檢測結果。 化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 給藥兩周MCD小鼠肝臟TNF-amRNA水平有下降趨勢，但經統計學比較沒有顯著性差異，實驗結果見圖4。
4．肝臟炎症因子檢測結果。
MCD飼養4周，小鼠肝臟IL-1b蛋白水平明顯升高，己酮可可鹼 (200mpk,po.,t.i.d.) 與INT-747 (30mpk, po., q.d.) 給藥兩周對MCD小鼠肝臟IL-1b　蛋白水平沒有顯著性影響；化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 給藥兩周MCD小鼠肝臟IL-1b　蛋白水平顯著下降，實驗結果見圖5。
5．血漿炎症因子檢測結果。
MCD小鼠血漿TNF-a與IL-1b蛋白水平顯著升高，己酮可可鹼 (200mpk,po.,t.i.d.) 與INT-747 (30mpk, po., q.d.) 給藥兩周對MCD小鼠血漿TNF-a與IL-1b蛋白水平無顯著性影響，化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 給藥兩周MCD小鼠血漿TNF-a與IL-1b蛋白水平顯著下降，實驗結果見圖6。
6. 血漿ALT與AST檢測結果。
MCD小鼠血漿ALT與AST水平顯著升高，本次實驗測試的三種化合物均不能降低MCD小鼠血漿ALT與AST水平，實驗結果見圖7。
總結。
1. MCD小鼠是廣泛使用的非酒精性脂肪性肝炎動物模型，模型小鼠肝臟脂肪變性明顯，TG水平顯著升高；組織學HE染色圖片顯示出明顯的小葉炎症，肝臟TNF-amRNA顯著升高，肝臟炎症因子IL-1b，血漿TNF-a和IL-1b的蛋白水平均顯著高於正常；血漿ALT與AST水平較正常小鼠顯著升高。
2. 化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 兩周給藥後，MCD小鼠肝臟小葉炎症顯著改善，肝臟炎症因子IL-1b，血漿TNF-a和IL-1b蛋白水平均顯著下降。
3. 化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 兩周給藥，對MCD小鼠肝臟TG水平，肝臟TNF-amRNA，血漿ALT與AST水平無顯著性影響。
實驗例5nSTZ+HFD小鼠模型體內藥理學研究。
主要任務。
評估化合物1對非酒精性脂肪性肝炎模型nSTZ+HFD小鼠肝臟組織學，TNF-amRNA，TGF-b1 mRNA和collagen 1a1 mRNA水平，血清ALT，AST，TG和TC水平的影響。
擬解决的問題。
測試化合物1對nSTZ+HFD小鼠肝臟組織學，TNF-amRNA，TGF-b1 mRNA和Collagen 1a1 mRNA水平，血清ALT，AST，TG和TC水平的影響，評估化合物對非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠的肝功能保護，降低肝臟炎症和纖維化的作用。
實驗模型：新生小鼠STZ注射合併高脂飲食誘導的非酒精性脂肪性肝炎模型(nSTZ+HFD mice)。
實驗動物： C57BL/6J小鼠 (雌性孕鼠，孕14-15天購入，上海靈暢生物科技有限公司)。
實驗試劑： 1.       鏈脲黴素 (Streptozocin，STZ) (Sigma, #S0130-1G) 2.       高脂飼料 (Research Diets, # D12492i) 3.       RNeasy® Mini RNA提取試劑盒 (Qiagen, #74104) 4.       High Capacity cDNA 逆轉錄試劑盒 (ABI, # 4368814) 5.       TaqMan® Gene Expression Assay TNF-a (ABI, Assay ID: Mm00443258_m1) 6.       TaqMan® Gene Expression Assay TGF-b1 (ABI, Assay ID: Mm00441724_m1) 7.       TaqMan® Gene Expression Assay Collagen 1a1 (ABI, Assay ID: Mm00801666_g1) 8.       TaqMan® Endogenous Control 18S (ABI, Assay ID: Mm03928990_g1) 9.       TaqMan® Fast Universal PCR Mater Mix (ABI, # 4366072) 10.  Hematoxylin (Baso, # BA4097) 11.  Eosin (Baso, # BA4099) 12.  Sirius red (Bogoo, # PT036)
實驗方法。
1. 實驗流程。
2. 體內實驗方法。
購買14~15天孕齡C57BL/6J小鼠，新生鼠出生2~3天進行STZ注射 (200ug, s.c.)。普通飼料飼養至4周齡開始給予高脂飲食。高脂飼養1周後動物隨機分組，開始口服給藥。
分組與給藥信息如下： 對照組 (STZ溶媒對照+正常飲食)                               n=12 模型組 (STZ +高脂飲食) + 溶媒對照 (0.5% HPMC, p.o. t.i.d.)          n=20 模型組 (STZ +高脂飲食) + 己酮可可鹼 (100mg/kg, p.o, t.i.d.)         n=20 模型組 (STZ +高脂飲食) + 化合物1 (30mg/kg, p.o, b.i.d.)       n=19 連續給藥5周後過夜禁食。CO2 處死小鼠，心臟取血後室溫放置2小時，將血樣置於離心機中離心 (2000g, 4°C, 15分鐘)，分離上層得血清，分裝後速凍，保存在-80°C冰箱。並解剖取肝組織用於組織學分析與生物標志物檢測。
凍存的血清樣品於第二天進行ALT，AST，TG和TC檢測。
3．組織學分析方法。
3.1 HE染色方法。
3.1.1 組織處理。
使用Leica ASP200S全自動脫水機，相關的脫水步驟如下： a)                10% 中性緩衝福爾馬林 5分鐘~6小時 b)                70% 乙醇 45分鐘 c)                 80% 乙醇 45分鐘 d)                95% 乙醇 45分鐘 e)                 95% 乙醇 45分鐘 f)                  100% 乙醇 60分鐘 g)                100% 乙醇 60分鐘 h)                100% 乙醇 60分鐘 i)                  二甲苯 60分鐘 j)                  二甲苯 60分鐘 k)                石蠟 60分鐘 l)                  石蠟 60分鐘 m)             石蠟 60分鐘
3.1.2 組織包埋。 a)  包埋前的準備。 Leica 組織包埋系統的組成及功能： Leica 組織包埋系統由兩部分組成：包埋台 (Leica EG1150 H) 和冷凍台 (Leica EG1150 C)。包埋台包括左側金屬模具存放缸，右側組織包埋盒存放缸及位於儀器上部的石蠟缸。包埋台前部有一個小的冷台，可以迅速冷却單個包埋模具。冷凍台主要由冷台構成，迅速冷却包埋模具內的石蠟。包埋盒冷却後，蠟塊保存在室溫條件下。 b)  打開冷台。 c)  將脫水機中的包埋盒取出，放入包埋機蠟缸中 d)  包埋。 將熱鑷子將包埋機蠟缸中的組織包埋盒取出，放在包埋機的熱臺上。將與組織相應的包埋盒放置在模具上面。用熱鑷子將組織放入包埋模具，再向包埋模具中加入少許溶解的石蠟，將包埋模具放在冷臺上，直至石蠟徹底變成固體狀態。最後將固體的蠟塊從包埋模具中取出。
3.1.3 組織切片的準備。 a)  使用Leica RM2235石蠟切片機前確認其狀態。 裝蠟塊前，應確保切片輪把手粗語鎖定狀態，開啓刀架保護套，清潔刀架上的蠟屑。 小心插入未使用過的一次性切片刀，確認刀片放入到家中的適當位置，根據生産商的使用說明書鎖緊刀架。確認刀片的傾角，一般應設置爲3-6度。 b)  將組織蠟塊固定於切片機夾槽內的理想位置。 根據生産商的使用說明書，使用粗修輪把手進行粗修，使蠟塊緩慢的向前推進，直至暴露所需的組織平面。 c)  開始切片，首先開始設置切片厚度，開始切片，向前旋轉切片轉輪，直至平整的蠟片形成。鎖定切片輪轉把手，用鑷子或毛筆等將組織片移入攤片機 (Leica HI1210)並平整的裱於載玻片上。 d)  完成粗修或切片後，鎖定輪轉把手，小心取出蠟塊。
3.1.4 HE染色。
使用Leica ST5010、LeicaTS5010和LeicaCV5030組成的全自動染色工作站進行HE染色。
在染色機主菜單中按＜Stain＞鍵。通過按鍵區的上下箭頭選擇程序15進行常規HE染色。打開裝載倉，放入切片架，關上裝載倉。按＜Load＞鍵後啓動染色程序。程序如下： a)       烤箱 55℃ 2 分鐘 b)       二甲苯Ⅰ 10 分鐘 c)        二甲苯Ⅱ 10 分鐘 d)       二甲苯Ⅲ 10 分鐘 e)        無水乙醇Ⅰ 2 分鐘 f)         無水乙醇Ⅱ 1.5 分鐘 g)       95% 乙醇Ⅰ 1 分鐘 h)       80% 乙醇Ⅰ  0.5 分鐘 i)         水洗 3 分鐘 j)         蘇木素染液 3 分鐘 k)       水洗 2 分鐘 l)         1% 鹽酸-乙醇 5 秒鐘 m)    水洗 2 分鐘 n)       水洗 20 分鐘 o)       80% 乙醇Ⅱ 1 分鐘 p)      伊紅 5 秒鐘 q)       95% 乙醇Ⅱ 30 秒鐘 r)        無水乙醇Ⅲ 2 分鐘 s)        無水乙醇Ⅳ 2 分鐘 t)         無水乙醇Ⅴ 2 分鐘 u)       無水乙醇Ⅵ 2 分鐘 v)       二甲苯Ⅳ 3 分鐘 w)     二甲苯Ⅴ 3 分鐘 x)       二甲苯Ⅴ 3 分鐘 y)       EXIT 二甲苯 3 分鐘 z)        Leica CV5030全自動封片機封蓋切片
3.2 天狼星紅染色方法。
將3.1.3製備好的組織白片通過手工製作天狼星紅染色切片，步驟如下： a)       二甲苯Ⅰ 15 分鐘 b)       二甲苯Ⅱ 15 分鐘 c)        無水乙醇Ⅰ 3 分鐘 d)       無水乙醇Ⅱ 3 分鐘 e)        95%乙醇Ⅰ 3 分鐘 f)         95%乙醇Ⅱ 3 分鐘 g)       80%乙醇 3 分鐘 h)       70%乙醇 3 分鐘 i)         蒸餾水Ⅰ 3 分鐘 j)         蒸餾水Ⅱ 3 分鐘 k)       蒸餾水Ⅲ 3 分鐘 l)         天狼星紅染液 1 小時 m)    蒸餾水 5 分鐘 n)       95% 乙醇Ⅲ 30 秒鐘 o)       無水乙醇Ⅲ 2 分鐘 p)      無水乙醇Ⅳ 2 分鐘 q)       無水乙醇Ⅴ 2 分鐘 r)        無水乙醇Ⅵ 2 分鐘 s)        二甲苯Ⅳ 15 分鐘 t)         二甲苯Ⅴ 15 分鐘 u)       中性樹膠封片
3.3 組織學非酒精性脂肪肝病活動度評分（NAS）相關評分標準。
非酒精性脂肪肝病 (NAFLD) 的組織學診斷和臨床療效評估參照美國國立衛生研究院NASH臨床研究網病理工作組指南，常規進行NAFLD活動度評分 (NAFLD activity score, NAS)。
NAS評分 (0～8分)： a)       肝細胞脂肪變：0分 (＜5%)；1分 (5%～33%)；2分 (33%～66%)；3分 (＞66%)。 b)       小葉內炎症 (20倍鏡計數壞死灶) ：0分，無；1分 (＜2個) ；2分 (2～4個) ；3分(＞4個) 。 c)        肝細胞氣球樣變：0分，無；1分，少見；2分，多見。
3.4纖維化評分標準。
肝纖維化分期（0～4）： a)       0分：無纖維化； b)       1分：1A，肝腺泡3區輕度竇周纖維化；1B，肝腺泡3區中度竇周纖維化；1C，僅有門脉周圍纖維化； c)        2分：肝腺泡3區竇周纖維化合併門脉周圍纖維化； d)       3分：橋接纖維化；以及 e)        4分：高度可疑或確診肝硬化。
4. 肝組織生物標志物mRNA檢測方法。
根據操作手册，用RNeasy® Mini RNA提取試劑盒 (Qiagen #74104) 提取RNA，當天完成逆轉錄，逆轉錄體系配比 (ABI # 4368814) 如下： 10×RT 緩衝液            2μL 25×dNTP 混合液 (100mM)                  0.8μL 10×RT 隨機引物               2μL MultiScribe 逆轉錄酶                          1μL 模板RNA                                    1μg 無RNA酶 H2 O                         加至20μL
逆轉錄程序：
cDNA保存於-20°C冰箱。
按照TaqMan® Fast Universal試劑盒(ABI, # 4366072)說明書，進行Q-PCR檢測，體系配比如下： TaqMan® Gene Expression Master Mix (2✕)          5μL TaqMan® Gene Expression Assay (20✕)            0.5μL cDNA template                         0.8μL H2 O                                          3.7μL
Q-PCR程序：
實驗結果。
1. 組織學結果。
1.1 HE染色圖片。
HE染色結果顯示，nSTZ+HFD小鼠肝臟脂肪變性顯著增加，肝細胞出現氣球樣變，肝小葉炎症明顯增加，己酮可可鹼 (100mpk, po., t.i.d.) 與化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 5周治療並不能顯著改善nSTZ+HFD小鼠肝臟組織脂肪樣變、氣球樣變性和炎症聚集的病理性改變。實驗結果見圖8。
1.2 NAS評分。
nSTZ+HFD小鼠肝臟組織學NAS顯著升高，肝臟脂肪化顯著升高，少量肝細胞氣球樣變，肝小葉炎症顯著增加。己酮可可鹼 (100mpk, po., t.i.d.) 與化合物1(30mpk, po., b.i.d.) 5周治療並不能顯著影響nSTZ+HFD小鼠的肝臟NAS。實驗結果見圖9。
1.3 天狼星紅染色圖片。
天狼星紅染色結果顯示，nSTZ+HFD小鼠肝臟組織發生較明顯竇周、3區合併門脉周圍纖維化改變，另見個別樣本發生疑似橋接纖維化。己酮可可鹼 (100mpk, po., t.i.d.) 與化合物1(30mpk, po., b.i.d.) 5周治療組均不同程度的減輕STZ+HFD小鼠上述肝組織區域內發生纖維化的程度，其中化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 5周治療組較明顯改善肝臟組織發生竇周合併門脉周圍纖維化的形態學改變。實驗結果見圖10。
1.4 纖維化評分。
nSTZ+HFD小鼠肝臟纖維化評分顯著上升，己酮可可鹼 (100mpk, po., t.i.d.) 5周治療有降低nSTZ+HFD小鼠肝臟纖維化趨勢，但經統計學分析，沒有顯著性，而化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 5周治療能够明顯降低nSTZ+HFD小鼠肝臟纖維化評分。實驗結果見圖11。
2．肝臟生物標記物mRNA檢測結果。 nSTZ+HFD小鼠肝臟TNF-a與TGF-b1 mRNA顯著上升，己酮可可鹼 (100mpk, po., t.i.d.) 5周治療對nSTZ+HFD小鼠肝臟TNF-a與TGF-b1 mRNA水平沒有明顯性影響，化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 給藥5周nSTZ+HFD小鼠肝臟TNF-a與TGF-b1mRNA水平顯著降低。nSTZ+HFD小鼠肝臟Collagen 1a1 mRNA有上升趨勢，化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 給藥5周nSTZ+HFD小鼠肝臟Collagen mRNA有下降趨勢，但統計學分析沒有顯著性，需進一步研究分析。實驗結果見圖12。
3. 血清生化指標檢測結果。
nSTZ+HFD小鼠血清ALT與TC水平顯著升高，己酮可可鹼 (100mpk, po., t.i.d.) 與化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 5周治療並不能顯著影響nSTZ+HFD小鼠血清ALT與TC水平。實驗結果見圖13。
總結。 1.       新生鼠注射低劑量鏈脲黴素 (streptozotocin, STZ) 並進行高脂飲食飼養1周後形成糖尿病合併脂肪肝。持續的高脂飲食導致肝脂肪沉積，肝小葉炎症的增加，並伴隨泡沫樣巨噬細胞浸潤。nSTZ+HFD小鼠模型模擬人類糖尿病-非酒精性脂肪性肝炎-肝細胞性肝癌的病理進程，是廣泛使用的非酒精性脂肪性肝炎動物模型。nSTZ+HFD模型小鼠肝臟組織學HE染色圖片顯示出明顯的脂肪變性，氣球樣變與小葉炎症，天狼星紅染色顯示出明顯的纖維化，肝臟炎症生物標志物TNF-amRNA顯著升高，纖維化生物標志物TGF-b1 mRNA顯著升高，血清ALT與TG水平較正常小鼠顯著升高。 2.       化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 5周給藥後，nSTZ+HFD小鼠肝臟纖維化顯著改善，肝臟TNF-a與TGF-b1 mRNA水平顯著降低。 3.       化合物1 (30mpk, po., b.i.d.) 5周給藥，對nSTZ+HFD小鼠肝臟NAS，血清ALT，AST，TG與TC水平無顯著性影響。
實驗例6：抗大鼠膽汁淤積型肝纖維化的藥效研究。
主要任務：評估化合物1對大鼠膽汁淤積型肝纖維化模型肝臟組織學，以及血清ALT，AST，TG和TC水平的影響。
擬解决的問題：測試化合物1對大鼠膽汁淤積型肝纖維化模型肝臟組織學，血清ALT，AST，TG和TC水平的影響，評估化合物對大鼠膽汁淤積型肝纖維化模型肝功能保護，降低肝臟炎症和纖維化的作用。
實驗模型：（ANIT）誘導的膽汁淤積型肝纖維化大鼠模型。
實驗動物：SD大鼠 (雄性，上海斯萊克實驗動物有限責任公司)
實驗試劑： ANIT (1-NAPHTHYL ISOTHIOCYANATE，Aldrich-N4525)；HPMC （Hydroxypropyl methyl cellulose，Sigma-H7509。
實驗方法。
1. 實驗流程。
2. 體內實驗方法。
訂購了90隻大鼠，動物到的當天，按照組與組之間差異最小的原則進行分組，每組12隻，每籠4隻。動物到達設施後，適應期爲5天。適應期內，給動物提供正常的飲食和飲水，每天監測動物的健康狀况。如發現任何異常或者感染情况，該大鼠則需要被剔除出試驗組。
第0天，先給藥。2小時後，將除第一組外的其他所有籠盒內的正常飼料換成ANIT添加料，添加量爲大鼠正常三天的攝入量（這個量是根據之前的實驗結果得出）。ANIT添加料每三天更新一次。第一組的大鼠在整個實驗過程中食用正常飼料。
所有大鼠在第8天上午被撤去食物，直到實驗終點，禁食時間5小時以上。安樂死方法：戊巴比妥鈉麻醉後心臟採血處死。（收集盡可能多的血液）。 1)       收集血液2mL；收集血清750µL，分裝於3個離心管中。（血清收集方式：10000rpm，4℃離心10分鐘，收集血清，置於乾冰上轉移至-80℃保存）； 2)       收集動物肝臟，用PBS沖洗； 3)       用滅菌的紙巾拭乾，稱重並記錄； 4)       拍照整個離體肝臟； 5)       從肝左葉最大直徑處，切取一條，寬約3mm，浸入10倍於組織體積的10%福爾馬林溶液（純水配置,需提前調PH值爲中性）中； 6)       剩餘的肝左葉，取 100mg的兩塊，剪成小塊分裝於兩個凍存管，用於肝臟TG/TC的檢測； 7)       肝臟中葉，一分爲二，各取一部分放入兩個凍存管中。
3．組織學分析方法。
3.1 組織處理。
進行肝臟組織脫水，石蠟塊製作，石蠟切片，HE染色石蠟片厚3µm，天狼星紅染色石蠟片厚4µm。遵循KCI病理標準染色SOP分別進行HE染色和天狼猩紅染色；HE染色的片子由兩位病理學專家進行打分（評判標準見病理分報告），最終取二者的平均值分析各組的肝臟損傷程度；纖維化染色切片經Digital Pathscope 4S掃描儀全片掃描後，進行整片分析。
3.2大鼠膽汁淤積模型炎症病理評分標準
實驗結果。
1. 組織學結果。
1.1 HE染色圖片及結果。
根據HE染色結果（圖14），按照炎症病理評分標準對肝臟炎症水平進行打分（圖15），對結果進行t檢驗。健康對照組顯著性低於模型組，但陽性對照INT-747給藥組的分值則顯著性升高。己酮可可鹼-100mg/kg和化合物1均未觀察到對肝臟炎症的改善作用。
1.2天狼星紅染色圖片及纖維化評分。
肝組織切片通過天狼星紅染色（圖16），經過Digital pathscope 4S全片掃描，對全景切片進行分析，計算膠原纖維在切片中的百分比，以此來判斷各組動物經過化合物處理後的纖維化程度變化（圖17）。結果顯示模型組的分值顯著性高於健康對照組，顯示肝纖維化造模成功。與模型組相比，化合物1在本研究的最高劑量組10mg/kg時，對肝臟的纖維化程度有抑制作用（p=0.03），抑制率爲17%，與INT-747對肝纖維化的改善程度相似（p=0.008）。而己酮可可鹼在100mg/kg劑量對肝纖維化沒有改善作用。
2. 血清生化指標檢測結果（表4）。
相對於正常組，模型組的ALT、AST、ALP 、TBA、TB、DB和IB均顯著性增高，說明造模成功。與模型組相比，INT-747組一定程度上可以降低血清中ALT和AST的水平，分別降低18% 和25%（均值比較），但是在本次試驗中並沒有統計學上的差異；己酮可可鹼和化合物1均沒有顯著降低AST和ALT的作用。所有給藥組都沒有降低血清中ALP的水平。
總膽汁酸（TBA）水平，模型組與正常組相比顯著性增高，升高約9倍。與模型組相比，INT-747，20mg/kg處理組的TBA水平顯著性降低，降低約75%。化合物1處理組有一定的降低總膽汁酸的作用，降低分別爲37%、26%、33%，但是不具有統計學上的意義。
TB、DB、IB的檢測結果顯示，與正常對照組相比，模型組的數值顯著性升高，分別升高53倍、62倍、36倍；而將藥物處理組與模型組相比，陽性對照組INT-747具有顯著性的降低TB、DB、IB的作用，分別降低53%、54%、49%；化合物1在高劑量作用下，TB、DB、IB的水平有所下降，且可以看出相應的劑量依賴性，但與模型組相比不具有統計學意義實驗結果。
總結： 1) 在ANIT誘導的膽汁淤積型肝纖維化大鼠模型中，模型組動物血清中的ALT/AST/ALP在血清中的數值顯著性高於健康對照組；TBA/TB/DB/IB在血清中的檢測結果也顯著性升高；炎症評分結果中，與健康對照組相比，模型組的纖維化程度明顯升高；病理纖維化結果中，與健康對照組相比，模型組的纖維化程度明顯升高。 2) 化合物1 (10mpk, po., b.i.d.)處理組在病理纖維化程度上表現了明顯的抗纖維化作用。 3) 化合物1各處理組，對血清ALT，AST，TG與TC水平無顯著性影響。
實驗例7：四氯化碳誘導的小鼠肝纖維化模型藥效研究。
主要任務：評估化合物1對四氯化碳誘導的小鼠肝纖維化模型肝臟組織學，以及血清ALT，AST，TG和TC水平的影響。
擬解决的問題：測試化合物1對四氯化碳誘導的小鼠肝纖維化模型肝臟組織學，血清ALT，AST，TG和TC水平的影響，評估化合物對四氯化碳誘導的小鼠肝纖維化模型肝功能保護，降低肝臟損傷和纖維化的作用。
實驗模型：四氯化碳誘導的小鼠肝纖維化模型。
實驗動物： C57BL/6小鼠 (雄性，上海靈暢生物科技有限責任公司)
實驗試劑： 1. CCl4 （江蘇强盛功能化學股份有限公司） 2. 橄欖油（阿拉丁工業公司,0108686-500ml） 3. HPMC （Hydroxypropyl methyl cellulose， Sigma-H7509）
實驗方法。
1. 實驗流程。
2. 體內實驗方法。
訂購了108隻小鼠，其中3隻備用。動物到的當天，按照組與組之間差異最小的原則進行分組，每組15隻。動物到達設施後，適應期爲5天。適應期內，每天監測動物的健康狀况。如發現任何異常或者感染情况，該小鼠則需要被剔除出試驗組。25% CCl4 溶液用純橄欖油配製，現配現用。除第一組的動物外，注射時間爲第0天、第4天、第8天、第12天，腹腔注射其他所有組的小鼠，根據體重給藥，2mL/kg。第一組的小鼠，腹腔注射純橄欖油。
所有小鼠在第14天上午被撤去食物，直到實驗終點，禁食時間5小時以上。安樂死方法：麻醉後眼眶後靜脈叢採血後，脫頸確認死亡。（收集盡可能多的血液）。 1）     收集盡可能多的血液；操作收集血清250ul，分裝於相應離心管中。（血清收集方式：10000rpm，4度離心10分鐘，收集血清，置於乾冰上轉移至-80度保存。） 2）     收集動物肝臟，用PBS沖洗 3）     用滅菌的紙巾拭乾，稱重並記錄； 4）     拍照； 5）     從肝左葉最大直徑處，切取一條，寬約3mm，浸入10倍體積的10%福爾馬林溶液（純水配置，需提前調PH值爲中性）中，垂直放置固定； 6）     剩餘的肝左葉，剪成小塊分裝於兩個凍存管，用於檢測肝臟TG/TC； 7）     肝臟中葉，一分爲二，放入兩個凍存管中，作爲蛋白分析和mRNA檢測的樣品。
需要注意：第6）和7）的樣品收集後需迅速浸入液氮中，且需要保證凍存管在扔入液氮後完全浸入液氮中。
3．組織學分析方法。
3.1 組織處理。
進行肝臟組織脫水，石蠟塊製作，石蠟切片，HE染色石蠟片厚3µm，天狼星紅染色石蠟片厚4µm。遵循KCI病理標準染色SOP分別進行HE染色和天狼猩紅染色。HE染色的片子由兩位病理學專家進行打分，最終取二者的平均值分析各組的肝臟損傷程度；纖維化染色切片。經Digital Pathscope 4S掃描儀全片掃描後，進行整片分析。
3.2   四氯化碳誘導肝損傷動物模型病理評分標準。
實驗結果。
1. 組織學結果。
1.1 HE染色圖片及結果。
肝臟病理切片經過HE染色後（圖18），按照病理評分標準對炎症水平、氣球樣變、水樣變性和壞死四項指標分別打分。結果顯示，與健康對照組相比，模型組四個指標的分值均極顯著性升高，證明造模成功（圖19，圖20，圖21，圖22）。
與模型組相比，化合物1三個劑量組水樣變性和壞死的分值均較模型組降低（均有統計學意義），且作用表現出了一定的劑量依賴性。且化合物1-10mg/kg組對水樣變性和壞死的改善作用與己酮可可鹼-100mg/kg組相當。相比模型組，化合物1-10mg/kg水樣變性和壞死評分分別降低0.93分和0.86分，己酮可可鹼-100mg/kg組水樣變性和壞死評分分別下降0.90和0.67分。
四個指標的評分進行加和的結果顯示，各個測試化合物對加和分值均有顯著改善。化合物1三個測試劑量中對肝臟損傷的均有顯著改善,有一定的劑量相關性，作用與己酮可可鹼-100mg/kg相當（圖23）。 1.2天狼星紅染色圖片及纖維化評分。
天狼星紅染色結果（圖24）讀取纖維化面積（圖25），模型組的分值顯著性高於健康對照組，顯示肝纖維化造模成功。與模型組相比，化合物1的高中低三個劑量組、己酮可可鹼和INT-747均可顯著降低肝臟組織的纖維化。
2. 血清生化指標檢測結果（表5）。
相對於正常組，模型組的ALT、AST、TG、TC都顯著性增高，說明造模成功。
與模型組相比，化合物1具有一定的降低ALT和AST的作用，且具有劑量依賴性，化合物1在1，3和10mg/kg的劑量分別使ALT降低24%，52%和56%，使AST分別降低23%，42%，52%。但只有化合物1-10mg/kg劑量，AST的改變具有統計學意義（p=0.02）。INT-747可顯著降低血清中ALT和AST的水平，分別降低75%和64%，另外INT-747也可使TG和TC有所下降，分別降低11%和12%。而將其他藥物處理組與模型組相比，但己酮可可鹼對ALT和AST、TG、TC均無改善作用。
總結： 1）三個劑量的化合物1一定程度上都可以降低血清中的ALT/AST，且表現了一定的劑量依賴性，尤其最高級量10mg/kg可以顯著性減低AST； 2）從HE染色結果看，化合物1可以顯著性改善肝臟的損傷，包括炎症水平、水樣變性程度、壞死程度，劑量10mg/kg處理組對這些指標的改善作用在三個劑量中最强； 3）化合物1在三個測試劑量下，可以顯著性降低肝臟纖維化程度。
圖1：MCD小鼠肝臟HE染色圖片； 圖2：MCD小鼠肝臟組織學評分，數據表示爲均值±標準誤，n=8，####p＜0.0001, ###p＜0.001vs. MCD對照飲食+溶媒對照組，***p＜0.001vs. MCD飲食+溶媒對照組，單因素重複方差分析及Tukey’s組間兩兩比較； 圖3：化合物1對MCD小鼠肝臟TG水平的影響，數據表示爲均值±標準誤，n=7~8。####p＜0.0001vs. MCD對照飲食+溶媒對照組。單因素重複方差分析及Tukey’s組間兩兩比較，溢出值 (＞均值+2✕標準差，或＜均值-2✕標準差) 已去除； 圖4：化合物1對MCD小鼠肝臟TNF-αmRNA水平的影響。數據表示爲均值±標準誤，n=7~8。#p＜0.05vs. MCD對照飲食+溶媒對照組。單因素重複方差分析及Tukey’s組間兩兩比較，溢出值 (＞均值+2✕標準差，或＜均值-2✕標準差) 已去除； 圖5：化合物1抑制MCD小鼠肝臟IL-1b水平，數據表示爲均值±標準誤，n=7~8。###p＜0.001vs. MCD對照飲食+溶媒對照組， *p＜0.001vs. MCD飲食+溶媒對照組。單因素重複方差分析及Tukey’s組間兩兩比較，溢出值 (＞均值+2✕標準差，或＜均值-2✕標準差) 已去除； 圖6：化合物1抑制MCD小鼠血漿TNF-a和IL-1b水平，數據表示爲均值±標準誤，n=7~8。####p＜0.0001vs. MCD對照飲食+溶媒對照組。*p＜0.05, **p＜0.01vs. MCD飲食+溶媒對照組，單因素重複方差分析及Uncorrected Fisher’s LSD組間兩兩比較，溢出值 (＞均值+2✕標準差，或＜均值-2✕標準差) 已去除； 圖7：化合物1對MCD小鼠血漿ALT與AST水平的影響，數據表示爲均值±標準誤，n=7~8。####p＜0.0001vs. MCD對照飲食+溶媒對照組。單因素重複方差分析及Tukey’s組間兩兩比較，溢出值 (＞均值+2✕標準差，或＜均值-2✕標準差) 已去除； 圖8：nSTZ+HFD小鼠肝臟HE染色圖片： A.對照組 (STZ溶劑對照+正常飲食) B. 模型組 (STZ +高脂飲食) +溶媒對照 (t.i.d.)； C. 模型組 (STZ +高脂飲食) + 己酮可可鹼 (100mg/kg, p.o, t.i.d.)；以及 D. 模型組 (STZ +高脂飲食) + 化合物1 (30mg/kg, p.o, b.i.d.)； 圖9：nSTZ+HFD小鼠肝臟組織學NAS評分。數據表示爲均值±標準誤，n=12~17。 ####p＜0.0001, ##p＜0.01vs. 對照組。單因素重複方差分析及Uncorrected Fish’s LSD組間兩兩比較； 圖10：STZ+HFD小鼠肝臟天狼星紅染色圖片； 圖11：nSTZ+HFD小鼠肝臟纖維化評分。數據表示爲均值±標準誤，n=3，##p＜0.01vs. 對照組，*p＜0.05vs. 模型組+溶媒對照。單因素重複方差分析及Uncorrected Fish’s LSD組間兩兩比較； 圖12：化合物1對nSTZ+HFD小鼠肝臟生物標志物mRNA水平的影響。數據表示爲均值±標準誤，n=4~20。#p ＜0.05,##p ＜0.01vs. 對照組，*p ＜0.05vs. 模型組+溶媒對照。單因素重複方差分析及Uncorrected Fish’s LSD組間兩兩比較，溢出值 (＞均值+2✕標準差，或＜均值-2✕標準差) 已去除； 圖13：化合物1對nSTZ+HFD小鼠血清生化指標的影響。數據表示爲均值±標準誤，n=15~17。###p＜0.001，####p＜0.0001vs. 對照組。單因素重複方差分析及Uncorrected Fish’s LSD組間兩兩比較，溢出值 (＞均值+2✕標準差，或＜均值-2✕標準差) 已去除； 圖14：膽汁淤積型肝纖維化模型大鼠肝臟HE染色圖片，100倍放大。 A：組-1，健康對照; B:組-2，模型對照；C：組-3 INT-747-20mg/kg，QD； D：組-4，己酮可可鹼-100mg/kg，TID； E: 組-5，化合物1-1 mg/kg，BID；F：組-6，化合物1-3 mg/kg，BID；G：組-7，化合物1-10 mg/kg，BID。 圖15：膽汁淤積型肝纖維化模型大鼠肝臟病理炎症評分。數據以均值±SEM標示，n=12。***p＜0.001vs 模型組； 圖16：膽汁淤積型肝纖維化模型大鼠肝臟天狼星紅染色圖片，50倍放大。 A：組-1，健康對照；B:組-2，模型對照；C：組-3 INT-747-20mg/kg，QD；D：組-4，己酮可可鹼-100mg/kg，TID；E: 組-5，化合物1-1 mg/kg，BID；F：組-6，化合物1-3 mg/kg，BID；G：組-7，化合物1-10 mg/kg，BID。 圖17：膽汁淤積型肝纖維化模型大鼠肝臟纖維化面積。數據以均值±SEM標示，n=12，與Vechile control組作比較，*p＜0.05，***p＜0.001； 圖18：CCl4 誘導的小鼠肝纖維化模型小鼠肝臟HE染色圖片，100倍放大。 A：組-1，健康對照；B：組-2，模型對照；C：組-3 INT-747-20mg/kg，QD； D：組-4，己酮可可鹼-100mg/kg，TID；E：組-5，化合物1-1 mg/kg，BID；F：組-6，化合物1-3 mg/kg，BID；G：組-7，化合物1-10 mg/kg，BID； 圖19：CCl4 誘導的小鼠肝纖維化模型小鼠肝臟病理炎症評分。數據以均值±SEM標示，n=15。與模型組作比較，***p＜0.001, **p＜0.01, *p＜0.05； 圖20：CCl4 誘導的小鼠肝纖維化模型小鼠肝臟氣球樣變分值。數據以均值±SEM標示，n=15，與模型組作比較，***p＜0.001, **p＜0.01, *p＜0.05； 圖21：CCl4 誘導的小鼠肝纖維化模型小鼠肝臟水樣變性分值。數據以均值±SEM標示，n=15，與模型組作比較，***p＜0.001, **p＜0.01, *p＜0.05； 圖22：CCl4 誘導的小鼠肝纖維化模型小鼠肝臟壞死分值。數據以均值±SEM標示，n=15，與模型組作比較，***p＜0.001, **p＜0.01, *p＜0.05； 圖23：CCl4 誘導的小鼠肝纖維化模型小鼠肝臟損傷綜合分值。數據以均值±SEM標示，n=15，與模型組作比較，***p＜0.001, **p＜0.01, *p＜0.05； 圖24：CCl4 誘導的小鼠肝纖維化模型小鼠肝臟天狼星紅染色圖片，50倍放大： A：組-1，健康對照; B:組-2，模型對照; C: 組-3 INT-747-20mg/kg,QD； D: 組-4，己酮可可鹼-100mg/kg，TID;  E: 組-5，化合物1-1 mg/kg，BID; F: 組-6，化合物1-3 mg/kg，BID; G: 組-7，化合物1-10 mg/kg，BID；以及 圖25：CCl4 誘導的小鼠肝纖維化模型小鼠肝臟纖維化面積。數據以均值±SEM標示，n=15，與模型組作比較，*p＜0.05，***p＜0.001。

Claims (8)

  1. 式(Ⅰ)所示化合物、其互變異構體或其藥學上可接受的鹽在製備治療或預防肝病藥物中的應用，(Ⅰ) 其中， 可將結構單元替換爲，具體替換爲； L11 選自空、C(R)(R’)； R 、R’分別獨立地選自H、鹵素、OH、NH2 、CN、任選被取代的1～6元烷基或雜烷基； 任選地，R 、R’可以環化成3-6元環烷基、雜環烷基； A爲空，或選自任選被取代的環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基； L12 選自任選被取代的1～6元烷基或雜烷基； R1 選自任選被取代的1～6元烷基、3-6元環烷基或雜烷基；以及 “雜”代表N、O、S、C(=O)、S(=O)、S(=O)2 ，每個基團上雜原子的數目選自1、2、3或4， 其中 具體地，所述疾病選自非酒精性脂肪性肝炎和肝纖維化。
  2. 如請求項1所述的應用，其中R、R’、A、L12 、R1 中取代基分別獨立地選自鹵素、OH、NH2 、CN、任選被取代的1～6元烷基、3-6元環烷基或雜烷基，每個基團取代基的數目分別獨立地選自1、2或3；具體地，R、R’、A、L12 、R1 中取代基分別獨立地選自鹵素、CF3 、CN、OH、Me、Et、正丙基、異丙基、環丙基、、。
  3. 如請求項1或2所述的應用，其中R、R’分別獨立地選自H、Me、CF3 、Et；以及 具體地，L11 選自、、、、、、。
  4. 如請求項1或2所述的應用，其中A選自任選被取代的：3～12元環烷基或雜環烷基、5～12元芳基或雜芳基； 具體地，A選自任選被取代的：環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環氧戊基、苯基、吡啶基、吡嗪基、惡唑基、異惡唑基、噻唑基、雙環[1.1.1]戊烷，或選自由上述基團中任意兩個組成的二聯環基、螺環基或幷環基； 具體地，A選自任選被取代的：、、、、、、、、、、、、、、；以及 具體地，A選自、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、。
  5. 如請求項1或2所述的應用，其中L12 選自亞甲基、、、、、、。
  6. 如請求項1或2所述的應用，其中R1 選自Me、CHF2 、CF3 、Et、CH2 CF3 、異丙基、、環丙基、、、、。
  7. 下式化合物在製備治療或預防肝病藥物中的應用： ； ；以及 。
  8. 下式化合物在製備治療或預防肝病藥物中的應用： 。
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