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TW201431875A - 轉變生長因子β（ＴＧＦβ）衍生之多肽類及彼等之用途 - Google Patents

轉變生長因子β（ＴＧＦβ）衍生之多肽類及彼等之用途 Download PDF

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TW201431875A
TW201431875A TW102140494A TW102140494A TW201431875A TW 201431875 A TW201431875 A TW 201431875A TW 102140494 A TW102140494 A TW 102140494A TW 102140494 A TW102140494 A TW 102140494A TW 201431875 A TW201431875 A TW 201431875A
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Monzon Kalet Leon
Portilla Tania Carmenate
Merino Amaury Pupo
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Abstract

本發明關於生技之領域，更特別地關於TGFβ分子之突變多肽，該突變多肽之一級序列與人TGFβ之序列具有高度同源性。這些突變蛋白失去與ALK5交互反應之能力，但維持與為受體複合物之部分的其他受體(TβRII及TβRIII)交互反應之能力。取決於該受體複合物徵集ALK5與否，該突變多肽具有拮抗TGFβ配體之所有天然變異體之傳訊的特性，且具有顯著之免疫調節效應。本發明關於包含作為活性成分之所揭示之多肽或融合蛋白之醫藥組成物及彼等之用途，鑑於彼等對諸如癌症、伴隨纖維化之疾病及慢性感染性疾病之疾病中的免疫系統具有調節效應。

Description

轉變生長因子β(TGFβ)衍生之多肽類及彼等之用途
本發明關於生技及及醫藥之領域。特別是轉變生長因子β(TGFβ)分子之突變變異體之用途(該等變異體為彼等之天然對應體傳訊之拮抗劑)以及該等變異體之治療應用。
轉變生長因子β(TGFβ)細胞介素是因為彼等刺激細胞集落形成之能力被發現(Roberts AB,et al,Proc Natl Acad Sci USA 78：5339-43,1981)；由於這個過程是細胞轉變之典型標記，因此該分子被稱為轉變生長因子β。目前TGFβ配體(TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3)被視為多功能生長因子之原型。幾乎體內所有類型之細胞皆產生TGFβ配體並表現彼等之受體複合物。這些分子是上皮、內皮及造血細胞增生之強力抑制劑(Ravitz,MJ et al,Adv Cancer Res 71：165-207,1997)，而且是細胞外基質產生及沉積(Massague,J.The Annu Rev Cell Biol 6：597-641,1990)與組織修復級聯(Roberts AB.,and others,275-308 Plenum, 1996)最有效的調節劑之一。彼等亦調節胚胎發育期間之各種機轉，諸如細胞分化、移動及血管生成。(Taya,Y.at al,Development 126：3869-79,1999；Lidral,A.et al Am J Hum Genet 63：557-68,1998)
在免疫系統中，TGFβ傳訊是非常重要的調節節點。彼之最重要的功能之一是維持淋巴細胞恆定及免疫耐受性，經由抑制少淋巴細胞環境中自我抗體所誘導之初始T細胞(naïve T cells)增生。(Bevan,M.et al,Nat Immunol.27,13(7)：667-73,2012)。此分子也抑制或改變自然殺手細胞(Laouar,Y.et al Nature Immunol 6：600-607,2005)、樹突細胞(Luo,X.et al,Proc.Natl Acad.Sci USA 104：2821-2826,2007；Bekeredjian Ding,I.et al,Immunology 128：439-450,2009)、巨噬細胞(Sica,A.et al,Semin.Cancer Biol 18,349-355,2008,Torroella.M et al,Cancer Res 69：4800-09,2009)、嗜中性球(Fridlender,ZG et al,Cancer cell 16：183-194,2009)及效應和記憶T細胞(Gorelik,L.& Flavell,RA Nature Med,7：1118-1122,2001；Flavell,RA Immunity 31：131-44,2009)之活化、成熟及分化。TGFβ在天然及誘導之調節T細胞(CD4 +Foxp3+)及TCD4+IL17+(TH17)效應T細胞(Kryczek,I.et al,J.Immunol.178：6730-33,2007；Moo-Young,TA et al.J.Immunother 32：12-21,2009；Fantini,MC et al J.Immunol.172：5149-53,2004；Flavell,R.A.Cell 134：392-404,2008)的誘導、分化及維持上扮演重要角色。
成熟TGFβ配體係112個胺基酸殘基之同型二聚體。彼等係衍生自由位於N端之潛伏相關原肽(LAP)及朝向C末端之活性結構域所形成之前體分子。二個結構域在細胞內藉由蛋白水解分離，配體係以不活化之前體分泌，該前體由與該活性結構域可逆性結合之前結構域形成，因此調節對細胞受體之接近(Geoffrey D.Young and Joanne E.Murphy-Ullrich.JBC Vol 279,No.36：38032-39,2004)。已經假設與潛伏相關之原肽對於成熟結構域之分泌也很重要(Gray A.and A Mason Science 247：1328-30,1990)。
所有三種異構體(TGFβ1、TGFβ2、TGF b3)皆與細胞膜中之受體TβRI、TβRII及TβRIII交互作用。TGF b3又名β聚糖(Betaglycan)並非表現於所有細胞種類，雖然不是TGFβ1及TGFβ3配體媒介之傳訊所必需，但當TβRII飽和時其組成該等配體之貯庫。(Wang XF et al,Cell 67：797-805,1991；Lebrin F.et al Cardiovasc.Res 65：599-608,2005)。TβRIII與TβRI及呈現配體給彼等之TβRII受體形成複合物。該等受體主要與TβRII結合，該TβRII/TGFβ複合體與高親和性TβRI受體一起徵集及活化，導致形成傳訊異三聚複合體。TGFβ1及TGFβ3可以高親和性(5-30pm)與TβRII結合，然而TGF-β2僅能在TβRIII存在時才能以高親和性與TβRII結合(De Crescenzo et al,J Biol Chem 279：26013-18,2004；De Crescenzo et al,J.Mol.Biol 328：1173-1183,2003；Groppe et al,Molecular Cell 29,157-168,2008)。
目前尚無報告指出TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3家族之配體有能力和其他第II型受體結合，其他第II型受體為TβRII所屬之相同蛋白家族的一部分(Huang F and YG Chen Cell Biosc Mar 15,2：9,2012)。然而彼等可與數種第I型受體結合。ALK5被描述為彼之配體亞家族之參考TβRI受體。在ALK5被徵集至該TβRII/TGF-β複合物後，SMAD2/3蛋白之磷酸化係經誘導(Huang F and YG Chen Cell Biosc；Mar 15；2：9,2012)。ALK1因應該TGF/TβRII複合物於內皮細胞中形成而被活化，且藉由SMAD1及SMAD5傳訊(Goumans MJ et al,Mol Cell 12(4)：817-28,2003)。在某些上皮細胞中，SMAD1/5傳訊係由受體ALK2、ALK3及ALK6誘導(Daly AC et al,Mol Cell Biol,28：6889-6902,2008)。ALK2亦與活體內心血管發展的過程有關(Olivey HE et al,Dev Dyn 235(1)：50-9,2006)。我們應強調TβRII與ALK5對於TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3家族之配體皆有專一性，然而ALK1/2/6/3較為混雜，也可被活化素(Activins)及骨型態發生蛋白(Bone Morphogenetic Proteins)結合(Sebald W.et al,Biol Chem,385(8)：697-710,2004)。
ALK5媒介之傳訊係與若干疾病中之多種致病機轉有關。例如在癌症中，彼之角色相當複雜，與抑制免疫反應及促進腫瘤進展有關。免疫反應之抑制主要發生在腫瘤發生的早期階段。然而其促進腫瘤進展之作用發生於腫瘤發生之末期，經由誘導轉移侵入性表型及抑制抗腫瘤免疫反 應(Miyazono K.Nat Rev.Cancer 10：415-24,2010；Miyazono K.Cancer Sci 101(2)：306-12,2010；Hawinkels LJ.et al,Growth Factors 29(4)：140-52,2011)。另一種TGFβ在其中也扮演有害角色之疾病是由病原體如HIV、HBV、HCV、CMV、分枝桿菌(mycobacteria)及庫氏錐蟲(Trypanosoma cruzi)寄生蟲引起之慢性感染。TGFβ對於保護性免疫反應展現負面影響，允許這些細胞內病原體之生長及存活(Reed GS.Microbes and Infection 1：1313-1325,1999)。在許多疾病中，TGFβ之過度生產導致病理性之纖維化組織過多，進而影響該受損器官之正常功能。病理性纖維化組織過多的若干實例為肺纖維化、類肉瘤病、心肌纖維化、心肌病、肝硬化、全身性硬化症、腎小球硬化症及原發性膽道性肝硬化等(Kopp JB et al,Microbes and Infection,1：1349-1365,1999)。
多種策略已被設計來抑制TGFβ傳訊。大多數抑制劑目前尚在臨床前模型中評估，但某些抑制劑已經開始進行多種癌症及纖維化之臨床試驗(Flavell RA.Nat Rev Immunol.10(8)：554-67,2010；Connolly EC et al,Int J Biol Sci 8(7)：964-78,2012；Hawinkels LJ.et al,Growth Factors 29(4)：140-52,2011)。最新的抑制策略包括下列：
1-中和配體：利用彼之受體之胞外域之可溶性形式(US 2002/0004037及US 2007/0244042)、抗TGFβ抗體(US 2002/076858、US 2005/0276802)或阻斷細胞介素基因轉導之寡核苷酸(US 2004/0006036、 US2007/0155685)。
2-阻斷傳訊：使用與TβRI/ALK5之激酶結構域結合之小分子(US 2006/0057145、US 2005/0136043、US 2006/0234911)。
3-受體II阻斷：利用辨識彼之胞外域之抗體(US 2010/0119516、US 2009/7579186)。
到目前為止，利用配體TGFβ之突變蛋白作為傳訊拮抗劑之抑制策略尚未被報告。
本發明關於TGFβ家族(TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3)之突變變異體可能抑制彼等之天然對應物之功能的科學發現。本發明人首次在活體外實驗發現TGFβ之突變變異體可大幅抑制由天然變異體誘導之傳訊，因此中和彼之生物效應。此發現提供在諸如癌症、纖維化或慢性感染的疾病中調節TGFβ傳訊之新穎策略之基礎，在該等疾病中這些配體具有有害作用。
本發明係關於一級序列與人TGFβ具有高度同源性之多肽，除了若干位置之天然胺基酸係經突變以消除或大幅減少彼等經由ALK5第1型受體傳訊之能力。該等TGFβ之突變變異體維持以高親和性與TβRII及TβRIII受體結合之能力，但無法傳訊因為彼等不與ALK5第I型受體交互作用，藉由與天然變異體競爭與高親和性TβRII及TβRIII受體之結合而負向調節天然變異體之傳訊。本發明 也包括該等突變變異體之治療應用，不論單獨使用或與疫苗或其他用於治療其中TGFβ之作用會影響病程之疾病諸如癌症、纖維化或慢性感染的治療方式組合使用。
本發明之新穎性在於提供一種新穎治療方法以調節疾病中之TGFβ傳訊，因此調節多種腫瘤之侵入性及轉移能力以及各種免疫系統及結締組織細胞之活性，其中TGFβ之功能減少不論是天然或由疫苗誘導之保護性免疫反應或誘導過度組織修復及纖維化。上述抑制策略沒有一種使用TGFβ配體之突變蛋白作為傳訊拮抗劑。本發明之TGFβ突變物實質上是自體蛋白，因此免疫原性很低，最小化引起拮抗彼等之抗體反應的風險。彼等對於TGFβ受體系統之高專一性減少非預期之毒性(常見於以小體積抑制劑為基礎之策略)。這些TGFβ之突變變異體維持至少與天然TGFβ1及TGFβ3相同之與TβRII受體之結合親和性(6-10pM)。此親和性難以利用其他受體或配體抑制策略、利用單株抗體或其他藥物達成。令人意外的是，本發明之作者發現這些TGFβ突變變異體維持彼等與TβRII及TβRIII受體交互作用之能力，此構成超越TβRII抗受體抗體之優點，因為突變蛋白阻斷天然配體與細胞表面所有可能的結合位點。
本發明之詳細說明
本發明關於拮抗由ALK5受體所媒介之天然TGFβ配體之活性之多肽。該等多肽與天然TGFβ配體之胺基酸序 列具有超過90%之同源性。本發明之多肽在彼等之一級胺基酸序列中選自Y6、W30、W32、I51、L51、Q67及L101之殘基中之一者具有至少一種突變。
在本發明之特定實施態樣中，該原始胺基酸殘基係由選自下列胺基酸殘基之一者突變：位置6：A；位置30：N、R、K、D、Q、L、S、P、V、I、G、C、T、A、E；位置32：A；位置51：Q、W、Y、A；位置67：H、F、Y、W；及位置101：A、E。
本發明的另一目的在於，在該多肽中添加與TGFβRII及/或TGFβRIII受體交互作用介面處之突變以增加該多肽對受體之親和性。
另外，本發明關於用於治療癌症、伴隨纖維化之疾病及慢性感染性疾病之醫藥組成物，其包含本發明所述之一或多種多肽及醫藥上適合用於投予之載劑。該等多肽可能與載體蛋白共價連接，該載體蛋白可能為白蛋白或人免疫球蛋白之Fc區。在本發明之另一實施態樣中，該多肽可能經聚乙二醇化。
最後，本發明關於所述之多肽於製造醫藥組成物之用途，該醫藥組成物可用於治療癌症、伴隨纖維化之疾病及 慢性感染性疾病，亦可取代天然TGFβ以增進對疫苗之細胞性及/或體液反應，特別是當該欲增進反應之疫苗係用於治療癌症之治療性疫苗。
獲得TGFβ突變多肽
本發明關於具有112胺基酸長度之多肽。該等多肽與不同之天然TGFβ分子維持高度序列一致性，超過90%一致性。在彼等之序列之一區中，該多肽相較於天然TGFβ包括1至6個突變。取代原始殘基之殘基的選擇係與該原始胺基酸具有非常不同的物理化學特性，包括從非極性殘基變成極性殘基、從帶電變成不帶電、從大變成小及從酸性變成鹼性。
這些多肽(亦稱為TGFβ突變蛋白)係根據天然TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3與彼等之受體TβRII及ALK5複合時之三維結構設計(並輸入PDB資料庫)。突變僅被導入對應顯著暴露於溶劑之胺基酸的TGFβ位置，該等TGFβ位置形成ALK5受體結合區域之部分但非TβRII受體之該部分。利用公共領域之生物資訊程式，預期這些殘基在與ALK5之交互作用中非常重要。下表顯示預期在與ALK5之交互作用中非常重要之結合介面之殘基，及會影響結合之可能突變。利用這些結果建立所有可能的理論性突變蛋白之資料庫，具有活體外最高拮抗效力之突變蛋白係經選擇。
本發明之多肽可利用多種方法獲得，包括蛋白之化學合成。彼等亦可藉由基因工程技術獲得，諸如在細菌如大腸桿菌(E.coli)或在哺乳動物細胞如CHO及HEK293細胞中，利用該技術領域所知之任何轉染程序以包含體表現。特定位置之突變亦可能透過聚合酶連鎖反應進行定點突變形成技術獲得。
根據生物活性選擇TGFβ突變多肽
本發明之多肽係選自活體外及活體內實驗，彼等同時具有下列特性：
- 這些TGFβ之突變變異體(在本發明中又稱為突變蛋白)維持彼等與TβRII受體結合之能力。此結合能力可利用商用ELISA試驗直接檢測TβRII受體鏈或間接檢測受體陽性細胞族群評估。其辨識TβRII受體之能力應與天然TGFβ之該能力相同。
- 這些突變蛋白阻斷TGFβ配體(TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3)與TβRII受體之結合。此可直接藉由競爭型ELISA測量，利用各種(市售)TGFβ配體包覆ELISA板，並檢測突變蛋白抑制TβRII與該等配體結合之能力。
- 這些TGFβ之突變變異體喪失或實質上減少彼等經由TβRI受體傳訊之能力。此特性可直接藉由西方免疫轉漬試驗評估，該試驗定量經突變蛋白或天然TGFβ處理後，4T1鼠系與MDA-MB231人系腫瘤細胞之細胞溶解物中磷酸化Smad2及Smad3的量。這些突變蛋白所誘導Smad2及Smad3之磷酸化應至少比天然TGFβ少100倍。誘導磷酸化之特性亦可於活體外之由IL-2誘導CTLL-2細胞系之增生的抑制試驗評估。這些突變體應具有至少低於天然TGFβ 100倍之抑制活性。
- 該等TGFβ之突變變異體能抑制由各種TGFβ配體(TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3)誘導之傳訊。此特性可直接藉由西方免疫轉漬試驗評估，該試驗定量經突變蛋白或天然TGFβ處理後，4T1鼠系與MDA-MB231人系腫瘤細胞之細胞溶解物中磷酸化Smad2及Smad3的量。在50ng/mL至10μg/mL之濃度範圍，該等突變蛋白應展現抑制至少100倍由市售配體誘導傳訊之能力。
- 該等TGFβ突變變異體具有活體外之抗腫瘤效應。彼等可抑制經處理或不含天然配體之數種腫瘤細胞系之移動。這些細胞系之實例為4T1鼠系及MDA-MB231人 系。在細胞移動試驗中，這些突變蛋白應能統計顯著性地抑制腫瘤細胞之移動。
- 該等TGFβ之突變變異體喪失或實質上減少彼等誘導初始T CD4+細胞在IL-2或IL-6及IL-23存在時，分別分化成Treg foxp3+或TH17表型之能力。此特性可直接於活體外之Treg及Th17細胞誘導試驗中評估。這些突變體應具有至少低於天然TGFβ 100倍之誘導能力。
- 該等TGFβ突變變異體具有抑制由彼等之天然類似物所誘導之初始T CD4+細胞分化成Treg foxp3+或TH17表型之能力。此特性可直接於活體外之Treg及Th17細胞誘導試驗中評估。在50ng/mL至10μg/mL之濃度範圍，該等突變蛋白應展現抑制至少100倍由市售配體誘導傳訊之能力。
- 該等TGFβ之突變變異體具有活體內之抗腫瘤效應。彼等可抑制移植腫瘤模型中數種腫瘤細胞系之活體內腫瘤生長及轉移能力。此特性可利用4T1乳房細胞系於BALB/c小鼠及MDA-MB231人腫瘤細胞系於裸鼠之原發性原位腫瘤模型評估。相較於以PBS處理之對照組，該等突變蛋白應造成腫瘤體積及肺轉移數量之統計顯著減少。
- 該等TGFβ突變變異體於移植腫瘤模型中具有增加活體內天然或由疫苗誘導之抗腫瘤免疫反應之能力。
此特性可利用4T1乳房細胞系及皮下CT26結腸腫瘤細胞系於BALB/c小鼠之原位原發性腫瘤模型評估。這些 突變蛋白應增加自然殺手細胞及T CD8+淋巴細胞之溶細胞活性及細胞介素分泌。彼等亦應增加樹突細胞及TH1型T CD4+細胞之活性且顯著減少調節性T細胞及骨髓抑制細胞之數量及彼等之腫瘤前活性。
本發明包含TGFβ突變蛋白之額外修飾，該額外修飾產生缺乏LAP之成熟結構域但不影響彼之分泌。此意味該突變蛋白可以彼等可與TβRII交互作用之活化形式獲得，導致簡化生產過程。
在另一實施態樣中，本發明關於增加TGFβ突變蛋白之半衰期之額外修飾。該等修飾包括聚乙二醇化、融合任何上述之免疫調節性多肽與載體蛋白(該載體蛋白可為白蛋白或人免疫球蛋白之Fc區)等等。
在更特定之實施態樣中，本發明關於與人IgG1之Fc片段融合之TGFβ之突變變異體(特定突變參照表2)，導致經選擇以展現如上述之特性之突變蛋白。經選擇以供耦合之Fc區在Cγ2結構域上具有一組突變(ala234、ala235)，該突變防止其與Fc γ受體交互作用，除了新生兒Fc受體，因此靜默彼之誘導免疫效應機轉之能力(Labrijn AF et al,Curr Opin Immunol.Aug,20(4)：479-85,2008.Epub 2008 Jul 9)。
該等突變蛋白具有多種顯著減少彼等經由ALK5傳訊之能力之胺基酸取代。然而，彼等維持與TβRII及TβRIII結合，及抑制天然TGFβ之活性之能力。
在另一實施態樣中，本發明亦包含對TGFβ突變蛋白之額外修飾，這些額外修飾是為了增加彼等對TβRII及TβRIII之親和性但不影響或甚至改善彼等之抑制特性，或是為了改善彼等於活體內之藥效動力學如增加半衰期。該等額外之突變可能藉由生物資訊工具理性設計或利用不同性質之組合式分子庫(噬菌體展示庫、酵母菌或細菌中之基因表現庫)獲得。
．TGFβ突變多肽之治療應用
本發明亦包括包含作為活性成分之TGFβ突變蛋白及彼等之類似物或本發明所揭示之融合蛋白之醫藥組成物，以及彼等用於調節各種腫瘤之侵入性及轉移能力及疾病中各種免疫系統及結締組織細胞之活性的可能治療應用，在該等疾病中TGFβ之功能降低天然或疫苗誘導之保護性免疫反應，或誘導過度組織修復及纖維化。
就彼等之治療用途，可對帶有疾病之個體獨立投予本發明之多肽，或與促進或增進彼之治療作用之其他多肽或其他物質組合投予。投予途徑可為非經腸投予藥物之技術領域中所述之任何投予途徑。該等多肽可較佳地經靜脈 內、肌肉內、皮下或腫瘤內投予。
本發明所述之多肽或融合蛋白亦可作為用於治療癌症、伴隨纖維化之疾病及慢性感染性疾病之醫藥組成物之一部分投予。較佳地，本發明包含組成物，包括包含醫藥上可接受之載體之醫藥組成物。
該組成物包括醫藥上可接受之載體。該醫藥上可接受之載體包括但不限於：食鹽水、無菌水、磷酸緩衝鹽水及類似物。其他適合用於對病患投予之緩衝劑、分散劑及惰性非毒性物質可被包括於本發明之組成物中。該組成物可為供投予之適當溶液且為無菌及不含非所欲之顆粒。
在另一實施態樣中，本發明亦關於治療方法，該方法包含對罹患癌症、伴隨纖維化之疾病或慢性感染性疾病之個體投予治療有效量之本發明所述之多肽、融合蛋白或組成物。在特定實施態樣中，該個體係人。
本發明所述之多肽或融合蛋白亦可與傳統腫瘤療法(化學治療及放射療法)組合投予以增進彼等之效應。
為了獲得所欲之治療效應，本發明之多肽應以足夠高之劑量投予，以保證彼等於淋巴結或周邊部位之濃度對於受到關注之疾病為適當，也就是突變蛋白對天然TGFβ顯示抑制效應之濃度範圍。該劑量因此必須視所欲研究之疾病類型及投予途徑調整。例如，在腫瘤治療之例中，應調整劑量以使該腫瘤及/或局部區域淋巴結內之突變物濃度達到夠高以展現抑制效應。欲探索之劑量範圍可能介於每周或每兩周1.25至20mg/kg/劑量。
投予次數也應隨該討論中之突變蛋白之生物分布調整。通常，前述之有效濃度應維持2至30個連續天之期間。若該突變蛋白與載體蛋白偶合，投予頻率應隨之調整。
當本發明之化合物或組成物係與另一抗癌劑組合使用時，本發明提供例如同時、交錯或輪流之治療選擇。因此，本發明之化合物可於分開之醫藥組成物同時投予，也就是本發明之化合物可在另一抗癌劑投予之前或之後例如相隔數秒、數分鐘、數小時、數天或數周投予。
治療作用係定義為疾病之徵狀完全或部分緩解。在癌症中，治療作用係定義為腫瘤體積減少或復發時間拉長等。
此新穎之治療策略相較於其他調節TGFβ傳訊之提案具有許多好處。例如：
．TGFβ突變物基本上為自體蛋白(除了少數突變)，因此具有低免疫原性。此特性最小化引起拮抗彼等之抗體反應之風險。
．彼等對於TGFβ受體系統之高專一性減少非預期之毒性，非預期之毒性常見於以小體積抑制劑為基礎之策略。
．這些TGFβ之突變變異體維持至少與天然TGFβ1及TGFβ3相同之與TβRII受體之結合親和性(6-10pM)。使用單株抗體或其他藥物之受體或配體抑制策略難以達到 此親和性。
．這些TGFβ之突變變異體的大小比單株抗體及與Fc偶合之受體更小。此特徵確保比其他抑制TGFβ傳訊及上述之藥物更能穿透至腫瘤。
．該等TGFβ之突變變異體抑制任何配體經由TβRII/TβRI(ALK5)受體系統之傳訊，此為優於泛配體抗體(pan-ligand antibodies)之理論優點，因為泛配體抗體僅拮抗已知之TGFβ異構體，若其他異構體存在這些抗體可能不會抑制它們。
．TGFβ突變變異體維持與TβRIII受體交互作用之能力。此構成優於抗TβRII受體抗體之優點，因為該等突變蛋白阻斷天然TGFβ配體與細胞表面所有可能的結合位點。
．與Fc片段結合增加突變蛋白之半衰期，此提供小體積藥物之優點，因為投予的劑量及頻率將可減少。
．與不和Fc γ受體交互作用(新生兒Fc受體除外)之人IgG1之Fc片段結合，避免引發宿主之非腫瘤細胞上之免疫效應機轉，減少相較於抗受體II抗體之非預期毒性的可能，該抗受體II抗體仍保留與Fc γ受體交互作用之完整能力的。
本發明另外藉由以下實施例及圖式說明。然而，這些實施例不應被視為對本發明之範圍的限制。
100‧‧‧LED燈泡
102‧‧‧LED
120‧‧‧包封體積
122‧‧‧外殼
124‧‧‧基座
126‧‧‧插孔
150‧‧‧支持結構
300‧‧‧液體填充LED燈泡
302‧‧‧隔膜元件
304‧‧‧體積、導熱液體
306‧‧‧LED、非液體界面
308‧‧‧外殼、接合
310‧‧‧支持物
312‧‧‧燈泡基座
502‧‧‧不連續處
600‧‧‧基座
602‧‧‧通路
圖1：突變蛋白G_M1及TGFβ1之西方墨點分析。野生型Fc融合蛋白。該等蛋白之SDS-PAGE係於非還原及還原條件下進行，利用抗人TGFβ1抗體染色。第一行裝有低分子量之蛋白標準物，第二行裝有突變蛋白GM_1_Fc，第三行為TGFβ1野生型_Fc，第四行為不相關之抗體hR3。
圖2：ELISA試驗評估G_M1_Fc突變蛋白對TβRII受體之辨識。不相關抗體hR3被用來作為陰性對照。 G_M1突變蛋白維持與TβRII受體之結合能力，該能力類似天然TGFβ1。
圖3：評估由突變物或天然TGFβ所誘導之對IL2依賴性CTLL-2細胞系增生之抑制。其顯示突變蛋白G_M1抑制CTLL-2細胞系增生之能力遠低於人天然TGFβ1。資料以三個獨立實驗之平均抑制百分比表示。
圖4：評估G_M1突變蛋白中和由天然TGF β1造成之IL2依賴性CTLL-2細胞增生之抑制之能力。該圖顯示在三個獨立實驗中細胞增生之平均百分比。
圖5：G_M1突變蛋白抑制鼠4T1腫瘤細胞系之活體外移動。傷口癒合之照片係於圖中所示之不同的時間點拍攝，顯示當細胞經突變蛋白處理，每個時間點的傷口癒合速率顯著較低。
圖6：G_M1突變蛋白抑制由天然TGFβ誘導之初始CD4+CD25- GITR- T細胞分化/轉變成Foxp3+CD4+調節T 細胞。當初始T細胞與500ng/ml之該突變蛋白一起培養時，在T細胞培養中回收之調節T細胞之百分比減少至幾乎零。此濃度僅高於主要用於誘導該轉換之重組人TGFβ1之濃度的30倍。
實施例1：TGFβ突變蛋白之設計
TGFβ突變物係利用生物資訊技術在電腦上設計。一開始，使用TGFβ1及TGFβ3與該TGFβ受體之三元複合物的報告結構。該天然異構體之結合能量及所有可能的突變變異體係利用公眾生物資訊程式決定。G_M1突變蛋白係於CHO-K1細胞中利用基因建構體表現，該建構體以慢病毒載體PLW為基礎，包括人IgG1之C端絞鏈區及Cγ2及Cγ3結構域和組胺酸尾。G_M1係利用蛋白A之親和性層析純化。如圖1所示獲得高純度(>95%)之G_M1。
實施例2：利用ELISA評估突變蛋白G_M1與TβRII之結合
ELISA試驗係利用TβRII(1ug/ml)包覆並由與鹼性磷酸酶偶合之抗人Fc抗體顯示進行。不相關抗體hR3被用來作為陰性對照。圖2顯示G_M1突變蛋白維持與TβRII受體之結合能力，該能力類似天然TGFβ1。
實施例3：突變蛋白G_M1經由受體TβRI(ALK5)傳訊之 能力降低，因此模擬天然TGFβ之生物活性
我們比較由突變物或天然TGFβ所誘導之對IL2依賴性CTLL-2細胞系增生之抑制。5000個CTLL-2細胞/孔槽係經rIL-2(50U/ml)刺激，並且在所示濃度之TGFβ1野生型或突變蛋白G_M1存在下培養48h。稍後添加阿爾瑪藍試劑至該培養，於540及630nm測量其還原。
G_M1突變蛋白無法抑制CTLL-2細胞系之增生，即使其濃度高於作為該實驗之陽性對照之市售TGFβ1的200倍(圖3)。其顯示突變蛋白G_M1抑制CTLL-2細胞系增生之能力遠低於市售TGFβ1。
實施例4：突變蛋白G_M1為活體外TGFβ傳訊之拮抗劑
5000個CTLL-2細胞/孔槽係經rIL-2(50U/ml)刺激，並且在2pM之TGFβ1野生型及所示濃度之G_M1或同型對照hR3 MAb或作為陽性對照之抗TGFβ1抗體存在下培養。在48小時之後，添加阿爾瑪藍試劑至該培養，在540及630nm測量其還原。
G_M1突變蛋白(但非同型對照MAb hR3)中和由天然TGFβ1誘導之抑制IL2依賴性CTLL-2細胞系增生(圖4)。由該突變蛋白造成之中和效應類似於被用來作為本實驗之陽性對照之抗TGFβ1抗體獲得之結果。
實施例5：突變蛋白G_M1具有活體外抗腫瘤效應
突變蛋白G_M1抑制鼠腫瘤細胞系4T1移動之能力係 於活體外傷口癒合試驗中評估(CC Liang et al,Nat Protoc.Two(2)：329-33,2007)。利用無菌微量吸管尖端將長滿細胞之細胞單層劃開製造傷口。添加G_M1突變蛋白或TGFβ1野生型(作為陰性對照)至該孔槽。圖5顯示當細胞經突變蛋白處理時，傷口癒合之速率顯著較低(每個時間點利用Kruskal-Wallis檢定及Dunn事後檢定p<0.05)。
實施例6：突變蛋白G_M1抑制由天然TGF β1及IL2誘導之初始CD4+ T細胞分化成Foxp3+ CD4+調節T細胞
源自四隻C57/BL6小鼠脾臟的CD4+CD25-GITR-天真(naive)細胞族群藉由細胞分選純化。5×104個細胞在5ng/ml IL-2及5ng/ml天然人TGFβ1存在下，以3μg/mL結合於板上之抗CD3及3μg/mL之可溶性抗CD28刺激。在此培養條件下，三天後回收之調節T細胞的百分比為55.6%。突變蛋白於該培養中之效應係於250及500ng/mL之濃度評估。測量在該突變蛋白存在或不存在下所回收之Foxp3+調節T細胞之百分比。圖6顯示在G_M1突變蛋白存在下，自該T細胞培養回收之調節T細胞百分比降至幾乎零。
<110> 分子免疫學中心(CENTRO INMUNOLOGIA MOLECULAR)
<120> 轉變生長因子β(TGF β)衍生之多肽類及彼等之用途
<140> TW 102140494
<141> 2013-11-07
<150> CU 2012-0158
<151> 2012-11-09
<160> 73
<170> PatentIn版本3.5
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Claims (14)

  1. 一種拮抗由ALK5受體所媒介之天然TGFβ配體之活性之多肽，其特徵為與天然TGFβ配體之序列具有超過90%之同源性。
  2. 如申請專利範圍第1項之多肽，其中，在選自W30、W32、L101、I51、L51、Q67及Y6之胺基酸殘基中之一者包含至少一種突變。
  3. 如申請專利範圍第2項之多肽，其中該原始殘基係由選自下列胺基酸殘基之一者突變：位置30：N、R、K、D、Q、L、S、P、V、I、G、C、T、A、E；位置32：A；位置101：A、E；位置51：Q、W、Y、A；位置67：H、F、Y、W；位置6：A。
  4. 如申請專利範圍第3項之多肽，其中添加在與TGFβRII及/或TGFβRIII受體交互作用介面處之突變以增加彼之親和性。
  5. 如申請專利範圍第3項之多肽，其包含產生缺乏LAP之成熟結構域但不影響彼之分泌之突變。
  6. 如申請專利範圍第3項之多肽，其與包含Cγ2結構域之突變ala234及ala235的人IgG1之片段偶合。
  7. 一種用於治療癌症、伴隨纖維化之疾病及慢性感 染性疾病之醫藥組成物，其包含：50ng/mL至10μg/mL之至少一種如申請專利範圍第3項之多肽，及醫藥上適合之載體。
  8. 如申請專利範圍第7項之醫藥組成物，其包含：治療有效量之如申請專利範圍第3項之多肽之混合物，及醫藥上適合之載體。
  9. 如申請專利範圍第7項之醫藥組成物，其中該多肽係與載體蛋白共價連接。
  10. 如申請專利範圍第9項之醫藥組成物，其中該載體蛋白之特徵為其係人免疫球蛋白之Fc區。
  11. 如申請專利範圍第9項之醫藥組成物，其中該多肽係經聚乙二醇化。
  12. 如申請專利範圍第1至6項中任一項之多肽，其係用於製造可供治療癌症、伴隨纖維化之疾病及慢性感染性疾病之藥物。
  13. 如申請專利範圍第1至6項中任一項之多肽，其係用於製造可供增進對疫苗之細胞性及/或體液反應之藥物。
  14. 如申請專利範圍第13項之多肽，其中該欲增進反應之疫苗係癌症之治療性疫苗。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES3011833T3 (en) * 2016-11-18 2025-04-08 Univ Pittsburgh Commonwealth Sys Higher Education Engineered tgf-beta monomers and their use for inhibiting tgf-beta signaling
PL238850B1 (pl) * 2017-10-19 2021-10-11 Calther Polska Spolka Z Ograniczona Odpowiedzialnoscia Aktywna forma transformującego czynnika wzrostu beta 1 (TGFβ1) do zastosowania w leczeniu pacjentów z glejakami wielopostaciowymi, w przypadku których to glejaków ponad 5% komórek nowotworowych jest EGFRvIII-pozytywna

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1087998A1 (en) * 1998-06-16 2001-04-04 Biogen, Inc. Variant type ii tgf-beta receptor fusion proteins and methods
JP2003524381A (ja) * 1998-09-22 2003-08-19 ユニヴァーシティ オブ メリーランド，ボルチモア システインノット成長因子ミュータント
US6677432B1 (en) * 1998-10-07 2004-01-13 Stryker Corporation Mutations of the C-terminal portion of TGF-β superfamily proteins
ES2146552B1 (es) * 1998-11-24 2001-04-16 Inst Cientifico Tecnol Navarra Peptidos inhibidores de tgf/31
EP1773367A4 (en) * 2004-06-30 2009-08-19 Molecular Logix Inc RECEPTOR ANTAGONISTS FOR EPIDERMAL GROWTH FACTOR AND USE METHOD
US7795389B2 (en) * 2004-09-28 2010-09-14 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Antagonizing TGF-beta activity with various ectodomains TGF-beta receptors used in combination or as fusion proteins
CA2593697A1 (en) * 2005-01-11 2006-07-20 Molecular Logix, Inc. Pan-her antagonists and methods of use
GB0724051D0 (en) * 2007-12-08 2008-01-16 Medical Res Council Mutant proteins and methods for producing them
JP2013524807A (ja) * 2010-04-22 2013-06-20 イッサム リサーチ ディベロプメント カンパニー オブ ザ ヘブリュー ユニバーシティ オブ エルサレム リミテッド 高親和性レプチン及びレプチンアンタゴニスト

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