TW201402603A

TW201402603A - 展現ｇｉｐ受體活性之胰高血糖素類似物

Info

Publication number: TW201402603A
Application number: TW102121585A
Authority: TW
Inventors: Richard D Dimarchi; David L Smiley; Konrad Bleicher; Eric Kitas
Original assignee: Univ Indiana Res & Tech Corp; Hoffmann La Roche
Priority date: 2012-06-21
Filing date: 2013-06-18
Publication date: 2014-01-16
Also published as: PL2864350T3; PH12014502857A1; BR112014031671A2; EP2864350B1; AU2013277372A1; IL236386B; US9868772B2; HUE039267T2; TR201808818T4; JP6300239B2; HRP20180936T1; MY185217A; EA029025B1; KR20150039748A; EA201590065A1; CN104583233A; AU2013277372B2; DK2864350T3; JP2015528795A; EP2864350A1

Abstract

本文提供展現針對GIP受體之有效活性的胰高血糖素類似物，且因而預期用於治療糖尿病及肥胖症。在例示性實施例中，本發明之胰高血糖素類似物展現之針對GIP受體之EC50在奈莫耳濃度或皮莫耳濃度範圍內。

Description

展現GIP受體活性之胰高血糖素類似物

相關申請案之交叉引用

本申請案主張2012年6月21日申請之美國臨時專利申請案第61/662,874號及2013年3月15日申請之美國臨時專利申請案第61/787,973號之優先權；各申請案之內容係以全文引用的方式併入本申請案中。

以引用的方式併入以電子版提交之材料

以全文引用的方式併入與本申請案同時提交的電腦可讀的核苷酸/胺基酸序列表且標識如下：命名為「224560SeqListing.txt」的107千位元組ACII(Text)檔案，創建於2013年3月14日。

根據來自美國糖尿病協會(American Diabetes Association)的國家糖尿病資料單張(National Diabetes Fact Sheet)的最新資料，在美國有23,600,000名兒童及成人罹患糖尿病。在年齡為20歲或20歲以上的人群中，每年新診斷出1,600,000例糖尿病。根據Journal of the American Medical Association中最近公開的研究，美國三分之二以上的成人為體重超重的或肥胖的(Flegal等人，JAMA 303(3)：235-241(2010))且此群體中三分之一以上為肥胖的。

腸促胰島素激素(胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)及葡萄糖依賴性促胰島素肽(GIP))為天然產生之肽激素。GLP-1與GIP皆以葡萄糖依賴性方式刺激胰島素合成及分泌且不產生低血糖(參見例如Nauck等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.76：912-917(1993)；及Irwin等人，Regul.Pept.153：70-76(2009))。

GLP-1已證實可有效作為糖尿病輔助療法且伴隨著體重減輕。然而，關於GIP靶向療法仍然不清楚的是，經由拮抗此激素之作用(例如經由GIP受體拮抗作用)或經由模擬或增強GIP之作用是否將達成糖尿病及肥胖症之成功治療。

本文提供作為預期用於治療有需要之個體(例如患有糖尿病及肥胖症)之GIP促效劑肽的肽。

原生胰高血糖素不活化GIP受體，且通常具有原生GLP-1針對GLP-1受體的活性的約1%。在一些實施例中，該等肽為包含基於原生人類胰高血糖素之胺基酸序列(SEQ ID NO：1)之結構但與SEQ ID NO：1相比在一或多個位置不同的胰高血糖素類似物，其中該等差異或修飾增強該類似物針對GIP受體之促效劑活性。該等胰高血糖素類似物針對GIP受體之促效劑活性將大於原生胰高血糖素且在一些態樣中大於原生GIP。在一些或任何實施例中，GIP促效劑具有至少0.1%之GIP效能百分比。在本發明之一些或任何態樣中，胰高血糖素類似物另外展現針對胰高血糖素受體及GLP-1受體中之一者或兩者的促效劑活性。因此，本文提供GIP促效劑、GIP-GLP-1共促效劑、GIP-胰高血糖素共促效劑及GIP-GLP-1-胰高血糖素三重促效劑。

在例示性實施例中，本發明之GIP促效劑肽針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。在一些或任何實施例中，GIP促效劑肽之GIP效能百分比與胰高血糖素效能百分比及/或GLP-1效能百分比相差20倍或10倍以內(更高或更低)。

本發明提供胰高血糖素(SEQ ID NO：1)之類似物，其包含：

(A)位置1之包含Tyr、His、硫代Ala或Phe之側鏈的胺基酸，其中位置1之胺基酸之α碳係連接至選自由以下組成之群的結構：

(i)H₂N-(CH₂)-

(ii)H₂N-

(iii)H(乙醯基)N-(CH₂)_0-1-；及

(iv)H-或CH₃-

(B)位置9、10、12、16、20或37-43中之任何位置的包含醯化或烷基化胺基酸之胺基酸，視情況其中非原生醯基或烷基係經由間隔基鍵聯至該胺基酸；

(C)位置16-21中之一或多個位置的α螺旋穩定化胺基酸，及

(D)相對於SEQ ID NO：1之至多10個(例如，至多1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個或9個)額外胺基酸修飾，其中位置1之胺基酸為L-立體異構體或D-立體異構體，其中，視情況，位置1之胺基酸不同於L-His及L-Tyr，其中，當胰高血糖素類似物缺乏親水性部分時，胰高血糖素類似物展現針對人類GIP受體之EC50為小於或約0.5nM，且其中胰高血糖素類似物針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。

在本申請案中，所有由數字對特定胺基酸位置之提及(例如，位置28)係指原生胰高血糖素(SEQ ID NO：1)中之該位置或其任何類似物中之相應胺基酸位置的胺基酸。舉例而言，本文提及「位置28」將意謂SEQ ID NO：1之第一胺基酸已缺失之胰高血糖素類似物的相應位置27。類似地，本文提及「位置28」將意謂在SEQ ID NO：1之N端已添加一個胺基酸之胰高血糖素類似物的相應位置29。

在一些實施例中，GIP促效劑肽包含SEQ ID NO：11-18、21-23、25-31、33-36、38、39、100-139、141-155、157-173、175-194及196-200中之任一者的胺基酸序列。在一些實施例中，GIP促效劑肽包含基於包含SEQ ID NO：11-18、21-23、25-31、33-36、38、39、100-139、141-155、157-173、175-194及196-200中之任一者之母序列但在一或多個位置與該母序列不同之結構，如本文進一步描述。在一些實施例中，GIP促效劑肽包含SEQ ID NO：156、174及195中之任一者的胺基酸序列。在一些實施例中，GIP促效劑肽包含基於包含SEQ ID NO：156、174及195中之任一者之母序列但在一或多個位置與該母序列不同之結構，如本文進一步描述。在一些實施例中，GIP促效劑肽包含SEQ ID NO：201或202之胺基酸序列。在一些實施例中，GIP促效劑肽包含基於包含SEQ ID NO：201及202中之任一者之母序列但在一或多個位置與該母序列不同之結構，如本文進一步描述。在基於母序列之前述肽的例示性態樣中，胺基酸修飾發生在除位置1以外的位置。

本發明因此提供一種包含以下、基本上由以下組成或由以下組成之肽：序列SEQ ID NO：11。亦提供一種包含以下、基本上由以下組成或由以下組成之肽：序列SEQ ID NO：12。本發明進一步提供一種包含以下、基本上由以下組成或由以下組成之肽：序列SEQ ID NO：13。此外提供一種包含以下、基本上由以下組成或由以下組成之肽：序列SEQ ID NO：15。亦提供一種包含以下、基本上由以下組成或由以下組成之肽：序列SEQ ID NO：16。本發明另外提供一種包含以下、基本上由以下組成或由以下組成之肽：序列SEQ ID NO：22。本發明此外提供一種肽，其包含：a.相對於SEQ ID NO：11具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：11；b.相對於SEQ ID NO：12具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：12；c.相對於SEQ ID NO：13具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：13；d.相對於SEQ ID NO：15具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：15；e.相對於SEQ ID NO：16具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：16；f.相對於SEQ ID NO：22具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：22，其中該肽展現針對人類GIP受體及人類GLP-1受體之促效劑活性且該肽針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。在包含具有至多3個(例如，1個、2個、3個)胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：11-13、15、16及22中之任一者之肽的例示性態樣中，胺基酸修飾發生在除位置1以外的位置。

本發明提供一種肽，其包含：

(a)序列

X₁X₂X₃GTFTSDX₁₀SKYLX₁₅X₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FVQWLX₂₇X₂₈X₂₉X₃₀PSSGX₃₅PPPS

(SEQ ID NO：35)

其中：X₁係選自由以下組成之群：乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala、乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala、乙醯基β-2-D-His、乙醯基β-2-D-Tyr、乙醯基β-2-D-硫代Ala、去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基D-His、去胺基D-Tyr、去胺基D-硫代Ala、去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基β-2-L-硫代Ala、去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、D-His、D-Tyr、D-硫代Ala、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β 2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala及L-硫代Ala；X₂為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser及Val，X₃為Gln、包含結構I、II或III之側鏈的胺基酸、疏水性胺基酸、酸性胺基酸或鹼性胺基酸，或為選自由以下組成之群的胺基酸：Glu、Ala、Leu、Ile、Nle、Val、NorVal、高絲胺酸、Met、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸碸、乙醯基-Orn、乙醯基-二胺基丁酸及乙醯基-Lys；其中結構I、II及III為：

其中R¹為C_0-3烷基或C_0-3雜烷基；R²為NHR⁴或C_1-3烷基；R³為C_1-3烷基；R⁴為H或C_1-3烷基；X為NH、O或S；且Y為NHR⁴、SR³或OR³。

X₁₀為Tyr或共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸；X₁₅為酸性胺基酸，視情況為Glu或Asp；X₁₆為任何胺基酸，視情況為除Gly、Pro及Ser以外之任何胺基酸；例如，Glu、Ala、α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)、His、Lys；X₁₇為Arg、His、Gln；X₁₈為Arg或Ala；X₁₉為Ala或α,α雙取代胺基酸；X₂₀係選自由以下組成之群：α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)或Gln或His、Lys或Ala；X₂₁為酸性胺基酸，視情況為Asp或Glu； X₂₇為Leu、Ala、Nle或Met；X₂₈為Ala或酸性胺基酸(視情況為Asp或Glu)；X₂₉為脂族，例如，Ala或Gly或AIB或Val；X₃₀為小型脂族胺基酸，例如，Ala或Gly；X₃₅為Ala或鹼性胺基酸(視情況為Arg或Lys)；其中，當X₂₈為酸性胺基酸時，X₃₅為鹼性胺基酸；其中，視情況，當X₂₈為Asp時，則X₂₉不為Gly；其中，當X₁₀為Tyr時，該肽在位置40包含共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸，且其中，視情況，該肽在位置41包含Gly；其中該肽之C端胺基酸經醯胺化；或(b)相對於SEQ ID NO：35具有至多3個胺基酸修飾的序列SEQ ID NO：35，其中該肽展現針對人類GIP受體及人類GLP-1受體及/或人類胰高血糖素受體之促效劑活性，視情況，其中該胰高血糖素類似物針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。

本發明提供一種肽，其包含：

(a)序列：

(SEQ ID NO：140)

其中：X₁係選自由以下組成之群：乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基L-Phe、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala、乙醯基D-Phe、乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala、乙醯基β-2-L-Phe、乙醯基β-2-D-His、乙醯基β-2-D Tyr、乙醯基β-2-D-硫代Ala、乙醯基β-2-D-Phe、去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基L-Phe、去胺基D-His、去胺基D-Tyr、去胺基D-硫代Ala、去胺基D-Phe、去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基β-2-L-硫代Ala、去胺基β-2-L-Phe、去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、去胺基β-2-D-Phe、D-His、D-Tyr、D-硫代Ala、D-Phe、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β2-D-Phe、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala、β-2-L-Phe及L-硫代Ala；X₂為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser及Val；X₃為Gln、包含結構I、II或III之側鏈的胺基酸、疏水性胺基酸、酸性胺基酸或鹼性胺基酸，或為選自由以下組成之群的胺基酸：Glu、Ala、Leu、Ile、Nle、Val、NorVal、高絲胺酸、Met、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸碸、乙醯基-Orn、乙醯基-二胺基丁酸及乙醯基-Lys；其中結構I、II及III為：

其中R¹為C_0-3烷基或C_0-3雜烷基；R²為NHR⁴或C_1-3烷基；R³為C_1-3烷基；R⁴為H或C_1-3烷基；X為NH、O或S；且Y為NHR⁴、SR³或OR³；X₁₀為Tyr或共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸；X₁₅為酸性胺基酸，視情況為Glu或Asp；X₁₆為任何胺基酸，視情況為除Gly、Pro及Ser以外之任何胺基酸；例如，Glu、Ala、α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)、His、Lys；X₁₇為Arg、His、Gln；X₁₈為Arg或Ala；X₁₉為Ala或α,α雙取代胺基酸；X₂₀係選自由以下組成之群：α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)或Gln或His、Lys或Ala；X₂₁為酸性胺基酸，視情況為Asp或Glu；X₂₇為Leu、Ala、Nle或Met；X₂₈為Ala或酸性胺基酸(視情況為Asp或Glu)；X₂₉為脂族，例如，Ala或Gly或AIB或Val或Leu；X₃₀為小型脂族胺基酸，例如，Ala或Gly；X₃₅為Ala或鹼性胺基酸(視情況為Arg或Lys)；其中，當X₂₈為酸性胺基酸時，X35為鹼性胺基酸；其中，視情況，當X₂₈為Asp時，則X₂₉不為Gly；其中，當X10為Tyr時，該肽在位置40包含共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸，且其中，視情況，該肽在位置41包含Gly；其中該肽之C端胺基酸經醯胺化；或(b)相對於SEQ ID NO：140具有至多3個胺基酸修飾的序列SEQ ID NO：140，其中該肽展現針對人類GIP受體及人類GLP-1受體及/或人類胰高血糖素受體之促效劑活性，視情況，其中該胰高血糖素類似物針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。

在包含具有至多3個(例如，1個、2個、3個)胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：35或SEQ ID NO：140之肽的例示性態樣中，胺基酸修飾發生在除位置1以外的位置。

本文亦提供包含兩個或兩個以上的本發明GIP促效劑肽之二聚體及多聚體。本文另外提供包含本發明GIP促效劑肽之結合物及結合物部分。在一些態樣中，結合物為包含本發明GIP促效劑肽融合至異源肽之融合多肽。本發明亦提供包含本發明之GIP促效劑肽、二聚體、多聚體或結合物(或其組合)之套組。

本發明進一步提供包含本發明之GIP促效劑肽、二聚體、多聚體或結合物中之任一者(或其組合)及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑的醫藥組合物。該等醫藥組合物較佳為無菌的且適於非經腸投與。該等醫藥組合物預期用於治療或預防糖尿病或肥胖症、或與糖尿病或肥胖症相關之醫學病狀之方法中。因此，在例示性實施例中，本發明提供一種減少體重增加或誘發體重減輕之方法、一種治療或預防糖尿病或肥胖症之方法、及一種誘發腸道之暫時麻痹之方法。在以下說明書中提供肽類似物及包含其之醫藥組合物的其他應用。

圖1表示如在研究第7天所量測之總體重變化(%)的圖。

圖2表示經皮下注射媒劑對照物或如所示肽之DIO小鼠之總食物攝入(如在第7天所量測)的圖。

圖3表示經皮下注射媒劑對照物或如所示肽之DIO小鼠之脂肪質量(如在第0天及第7天所量測)的圖。

圖4表示經皮下注射媒劑對照物或如所示肽之DIO小鼠之血糖含量變化(mg/dL；第7天之含量-第0天之含量)的圖。

圖5A-D表示胰高血糖素之例示性類似物之胺基酸序列。

圖6表示已皮下注射10nmol/kg所示SEQ ID NO之肽、媒劑對照物或利拉魯肽(liraglutide)之dbdb小鼠之餐後葡萄糖概況的圖。

本發明提供展現針對GIP受體之促效劑活性的GIP促效劑肽(例如，原生人類胰高血糖素(SEQ ID NO：1)之類似物(亦稱為「胰高血糖素類似物」)、SEQ ID NO：11-18、21-23、25-31、33-36、38、39、100-200中之任一者的類似物)。如本文所用之術語「肽」涵蓋具有2個或2個以上胺基酸且通常小於100個或小於50個胺基酸之序列。該等胺基酸可為天然產生或編碼或非天然產生或非編碼胺基酸。非天然產生之胺基酸係指不天然存在於活體內但可併入本文所述之肽結構中的胺基酸。如本文所用之「非編碼」係指不為以下20種胺基酸Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr中之任一者之L-異構體的胺基酸。術語「GIP促效劑肽」係指結合至GIP受體且活化GIP受體之下游信號傳導的化合物。GIP促效劑肽可具有本文所述之針對GIP受體之活性水準(例如，絕對活性水準或相對活性水準)、對於GIP受體之選擇性或GIP效能百分比中之任一者。參見例如標題為GIP受體活性之章節。然而，此術語不應理解為限制化合物僅具有針對GIP受體之活性。實際上，本發明之GIP促效劑肽可展現針對其他受體之額外活性，如本文進一步所論述。舉例而言，GIP促效劑肽可展現針對GLP-1受體及/或胰高血糖素受體之促效劑活性。

本發明所揭示之肽的活性 GIP受體活性

在一些或任何實施例中，本發明之肽展現針對GIP受體活化之EC50在奈莫耳濃度範圍內。在例示性實施例中，肽針對GIP受體之EC50小於1000nM、小於900nM、小於800nM、小於700nM、小於600nM、小於500nM、小於400nM、小於300nM、小於200nM。在一些實施例中，肽針對GIP受體之EC50為約100nM或100nM以下，例如，約75nM或75nM以下、約50nM或50nM以下、約25nM或25nM以下、約10nM或10nM以下、約5nM或5nM以下、或約1nM或1nM以下。在一些或任何實施例中，本發明之肽展現針對GIP受體活化之 EC50在皮莫耳濃度範圍內。在例示性實施例中，GIP促效劑肽針對GIP受體之EC50小於1000pM、小於900pM、小於800pM、小於700pM、小於600pM、小於500pM、小於400pM、小於300pM、小於200pM。在一些實施例中，肽針對GIP受體之EC50為約100pM或100pM以下，例如，約75pM或75pM以下、約50pM或50pM以下、約25pM或25pM以下、約10pM或10pM以下、約5pM或5pM以下、或約1pM或1pM以下。如本文所用之術語「約」意謂比所述值或值範圍大或小10%，但不欲將任何值或值範圍指定為僅此較寬定義。前面有術語「約」之各值或值範圍亦意欲涵蓋所述絕對值或值範圍之實施例。

此項技術中已知適於測定肽針對受體(例如GIP受體)活化之EC50的方法。一種例示性活體外分析法在本文描述於實例3中，其中如由螢光素酶活性表示之cAMP誘導作用係於過度表現GIP受體之HEK293細胞中量測。

在一些或任何實施例中，與原生人類胰高血糖素相比，本發明之肽展現針對GIP受體之活性增強。原生胰高血糖素(SEQ ID NO：1)不活化GIP受體；原生胰高血糖素展現原生GIP針對GIP受體之活性的基本上0%(例如，小於0.001%、小於0.0001%)。肽相較於原生胰高血糖素針對GIP受體之相對活性係以(本發明肽之EC50/原生胰高血糖素之EC50)×100%之反比來計算。

肽相較於原生GIP針對GIP受體之相對活性係以(本發明肽之EC50/原生GIP之EC50)×100%之反比(本文亦稱為「GIP效能百分比」之值)來計算。

在本發明之一些或任何實施例中，本發明之肽展現至少或約0.1%之GIP效能百分比。在例示性實施例中，該等肽展現原生GIP針對GIP受體之活性的至少或約0.5%、至少或約1%、至少或約5%、至少或約10%、至少或約20%、至少或約30%、至少或約40%、至少或約50%、至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%、至少或約90%、或至少或約100%。

在本發明之一些實施例中，本發明之肽展現針對GIP受體之活性大於原生GIP。在例示性實施例中，GIP促效劑肽展現至少或約125%、至少或約150%、至少或約175%、至少或約200%、至少或約300%、至少或約400%、至少或約500%、至少或約600%、至少或約700%、至少或約800%、至少或約900%、或至少或約1000%之GIP效能百分比。在一些實施例中，本文所述之GIP促效劑肽展現不大於1000%或不大於10,000%之GIP效能百分比。

在一些態樣中，本發明之肽展現GIP效能百分比在約0.001%至約10,000%、或約0.01%至約10,000%、或約0.1%至約10,000%、或約1%至約10,000%、或約0.001%至約5000%、或約0.01%至約5000%、或約0.1%至約5000%、或約0.1%至約1000%之範圍內。

共促效劑

在一些或任何實施例中，本發明之肽只要活化GIP受體及不同於GIP受體之第二受體即為共促效劑肽。

GIP/GLP-1共促效劑

舉例而言，在一些態樣中本發明之肽展現針對GIP受體與GLP-1受體之活性(「GLP-1/GIP受體共促效劑」)。在一些態樣中，該等肽展現針對GLP-1及GIP受體之活性，但胰高血糖素活性已例如因位置3之胺基酸修飾而顯著降低或破壞。舉例而言，在此位置經酸性、鹼性或疏水性胺基酸(麩胺酸、鳥胺酸、正白胺酸)取代可降低胰高血糖素活性。在一些或任何實施例中，GIP促效劑肽為展現原生胰高血糖素針對胰高血糖素受體之活性之約10%或10%以下(例如，約5%或5%以下、或約1%或1%以下、或約0.1%或0.1%以下)的肽。

在一些或任何實施例中，本發明之肽針對GIP受體之EC50與其針對GLP-1受體之EC50相差在約50倍或50倍以下、約40倍或40倍以下、約30倍或30倍以下、約20倍或20倍以下、或約10倍或10倍以下、或約5倍或5倍以下以內(更高或更低)。舉例而言，針對GIP受體之EC50可比針對GLP-1受體之EC50高10倍或低10倍。在一些或任何實施例中，本發明之肽的GIP效能百分比與其GLP-1效能百分比相差小於或約50倍、40倍、30倍、20倍、10倍或5倍(更高或更低)。

因此，本發明之肽針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。如本文所用之術語分子針對第一受體相較於第二受體之「選擇性」係指以下比率：分子針對第二受體之EC50除以分子針對第一受體之EC50。舉例而言，針對第一受體之EC50為1nM且針對第二受體之EC50為100nM之分子針對第一受體相較於第二受體之選擇性為100倍。在例示性實施例中，本發明之肽針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍(例如，小於或約90倍、小於或約80倍、小於或約70倍、小於或約60倍、小於或約50倍、小於或約40倍、小於或約30倍、小於或約20倍、小於或約10倍、小於或約5倍)。

在一些或任何實施例中，與原生人類胰高血糖素相比，本發明之肽展現針對GLP-1受體之活性增強。原生胰高血糖素針對GLP-1受體之活性為原生GLP-1針對GLP-1受體之活性的約1%。肽相較於原生胰高血糖素針對GLP-1受體之相對活性係以(本發明肽之EC50/原生胰高血糖素之EC50)×100%之反比來計算。

肽相較於原生GLP-1針對GLP-1受體之相對活性係以(本發明肽之EC50/原生GLP-1之EC50)×100%之反比(本文亦稱為「GLP-1效能百分比」之值)來計算。

在本發明之一些或任何實施例中，本發明之肽展現至少或約0.1%之GLP-1效能百分比。在例示性實施例中，該等肽展現至少或約0.5%、至少或約1%、至少或約5%、至少或約10%、至少或約20%、至少或約30%、至少或約40%、至少或約50%、至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%、至少或約90%、或至少或約100%之GLP-1效能百分比。

在本發明之一些實施例中，本發明之肽展現針對GLP-1受體之活性大於原生GLP-1。在例示性實施例中，本發明之肽展現至少或約125%、至少或約150%、至少或約175%、至少或約200%、至少或約300%、至少或約400%、至少或約500%、至少或約600%、至少或約700%、至少或約800%、至少或約900%、或至少或約1000%之GLP-1效能百分比。在一些實施例中，本發明之肽展現不大於1000%或不大於10,000%之GLP-1效能百分比。

GIP/胰高血糖素共促效劑

作為另一實例，在一些態樣中本發明之肽展現針對GIP受體與胰高血糖素受體之活性(「胰高血糖素/GIP受體共促效劑」)。在一些實施例中，GLP-1活性已例如因位置7之胺基酸修飾(例如，經Ile取代、胺基酸C端位置27或28之一或多個胺基酸缺失(得到27或28胺基酸肽)或其組合)而顯著降低或破壞。在一些實施例中，本發明之肽為展現原生GLP-1針對GLP-1受體之活性之約10%或10%以下(例如，約5%或5%以下、或約1%或1%以下、或約0.1%或0.1%以下)的肽。

在一些或任何實施例中，本發明之肽針對GIP受體之EC50與其針對胰高血糖素受體之EC50相差在約50倍或50倍以下、約40倍或40倍以下、約30倍或30倍以下、約20倍或20倍以下、或約10倍或10倍以下、或約5倍或5倍以下以內(更高或更低)。在一些或任何實施例中，本發明之肽之GIP效能百分比與其胰高血糖素效能百分比相差小於或約50倍、40倍、30倍、20倍、10倍或5倍(更高或更低)。

在一些實施例中，與原生人類胰高血糖素相比，本發明之肽展現針對胰高血糖素受體之活性增強。肽相較於原生胰高血糖素針對胰高血糖素受體之相對活性係以(本發明肽之EC50/原生胰高血糖素之EC50)×100%之反比(本文亦稱為「胰高血糖素效能百分比」之值)來計算。

在本發明之一些實施例中，本發明之肽展現至少或約0.1%之胰高血糖素效能百分比。在例示性實施例中，該等肽展現至少或約0.5%、至少或約1%、至少或約5%、至少或約10%、至少或約20%、至少或約30%、至少或約40%、至少或約50%、至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%、至少或約90%、或至少或約100%之胰高血糖素效能百分比。

在本發明之一些實施例中，本發明之肽展現針對胰高血糖素受體之活性大於原生胰高血糖素。在例示性實施例中，本發明之肽展現至少或約125%、至少或約150%、至少或約175%、至少或約200%、至少或約300%、至少或約400%、至少或約500%、至少或約600%、至少或約700%、至少或約800%、至少或約900%、或至少或約1000%之胰高血糖素效能百分比。在一些實施例中，本發明之肽展現不大於1000%或不大於10,000%之胰高血糖素效能百分比。

三重促效劑

在一些實施例中，本發明之肽展現針對除GIP受體以外之兩種或兩種以上受體之活性。因此，本發明在一些態樣中提供GIP三重促效劑肽。在一些態樣中，本發明之肽展現針對胰高血糖素、GIP及GLP-1受體中之每一者之活性(「胰高血糖素/GIP/GLP-1三重促效劑」)。

在一些實施例中，本發明之肽針對GIP受體之EC50與本發明之肽針對(a)GLP-1受體、(b)胰高血糖素受體或兩者之EC50相差在50倍或50倍以下、20倍或20倍以下、或10倍或10倍以下以內(更高或更低)。在一些實施例中，本發明之肽針對GIP受體之EC50與其針對GLP-1受體之EC50相差約40倍、約30倍、約20倍以內(更高或更低)，且視情況與其針對胰高血糖素受體之EC50相差約50倍以內。在一些實施例中，本發明之肽之GIP效能百分比與(a)其GLP-1效能百分比、(b)其胰高血糖素效能百分比或兩者相差小於或約50倍、20倍或10倍(更高或更低)。在一些實施例中，本發明之肽之GIP效能百分比與其GLP-1效能百分比相差在約40倍、約30倍、約20倍以內(更高或更低)，且視情況與其胰高血糖素效能百分比相差在約50倍以內。在一些實施例中，本發明之肽針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性不具有至少100倍。在例示性實施例中，本發明之肽針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍(例如，小於或約90倍、小於或約80倍、小於或約70倍、小於或約60倍、小於或約50倍、小於或約40倍、小於或約30倍、小於或約20倍、小於或約10倍、小於或約5倍)。

不存在GLP-1促效作用及胰高血糖素促效作用情況下之GIP促效作用

在一些實施例中，本發明之肽展現僅針對GIP受體且不針對任何其他受體(例如，GLP-1受體、胰高血糖素受體)之活性。在例示性實施例中，本發明之肽展現針對GIP受體之活性，且胰高血糖素及GLP-1活性已例如因位置3及位置7之胺基酸修飾而顯著降低或破壞。在一些實施例中，本發明之肽為展現約10%或10%以下(例如，約5%或5%以下、或約1%或1%以下、或約0.1%或0.1%以下)之GLP-1效能百分比的肽。在一些實施例中，本發明之肽為展現約10%或10%以下(例如，約5%或5%以下、或約1%或1%以下、或約0.1%或0.1%以下)之胰高血糖素效能百分比的肽。

結合物之活性

在一些或任何實施例中，如本文進一步描述，當本發明之肽結合至異源部分(例如，親水性部分(例如聚乙二醇))時，本發明之肽與呈游離或未結合形式之本發明之肽相比展現降低之活性(例如，更低效能百分比或更高EC50)。因此，預期當上述絕對活性水準(例如GIP 效能百分比、GLP-1效能百分比或胰高血糖素效能百分比，但非相對比率)中之任一者應用於呈結合形式(例如聚乙二醇化)之肽時，該等絕對活性水準降低約10倍、20倍、30倍、40倍、50倍或100倍，且該等活性水準降低倍數預期在本發明之範疇內。相反，本發明之肽在未結合時所展現之GIP效能百分比為本發明之肽在結合至異源部分(例如，親水性部分(例如聚乙二醇))時之效能的約10倍、約20倍、約30倍、約40倍、約50倍、約100倍或100倍以上。

本發明所揭示之肽的結構 胰高血糖素類似物

在一些實施例中，本發明之肽在結構上類似於原生人類胰高血糖素(SEQ ID NO：1)，例如，為原生人類胰高血糖素之類似物(本文中亦稱為「胰高血糖素類似物」或「胰高血糖素之肽類似物」)。如本文所用之術語「胰高血糖素類似物」及「胰高血糖素之肽類似物」及其類似術語係指在結構上類似於原生人類胰高血糖素之肽且此等術語未必暗示該等肽活化胰高血糖素受體。

在一些或任何實施例中，本發明之肽為原生人類胰高血糖素(SEQ ID NO：1)之類似物，其包含基於胺基酸序列SEQ ID NO：1但不同於SEQ ID NO：1的胺基酸序列，因為該胰高血糖素類似物之胺基酸序列包含一或多個(例如，1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個，及在一些情況下16個或16個以上(例如，17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個等))指定或視情況可選之胺基酸修飾。在一些或任何實施例中，相對於原生人類胰高血糖素序列(SEQ ID NO：1)，本發明之肽包含總共1個、至多2個、至多3個、至多4個、至多5個、至多6個、至多7個、至多8個、至多9個或至多10個額外胺基酸修飾(例如，除指定胺基酸修飾以外)。在一些或任何實施例中，該等修飾為本文所述修飾中之任一者，例如，醯化、烷基化、聚乙二醇化、C端截短、在位置1、2、3、7、10、12、15、16、17、18、19、20、21、23、24、27、28及29中之一或多個位置進行胺基酸取代。

如本文所用之「胺基酸修飾」係指(i)SEQ ID NO：1之胺基酸經不同胺基酸(天然產生或編碼或非編碼或非天然產生之胺基酸)取代；(ii)向SEQ ID NO：1添加胺基酸(天然產生或編碼或非編碼或非天然產生之胺基酸)；或(iii)SEQ ID NO：1之一或多個胺基酸缺失。

在一些或任何實施例中，胺基酸取代為保守胺基酸取代，例如，位置2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27、28或29中之一或多個位置的保守胺基酸取代。如本文所用之術語「保守胺基酸取代」在本文定義為一個胺基酸經另一具有類似性質(例如，尺寸、電荷、疏水性、親水性及/或芳香性)之胺基酸取代，且包括以下五組中之一組內的交換：I.小型脂族、非極性或微極性殘基：Ala、Ser、Thr、Pro、Gly；II.極性、帶負電荷殘基及其醯胺及酯：Asp、Asn、Glu、Gln、氧化半胱胺酸及高氧化半胱胺酸；III.極性、帶正電荷殘基：His、Arg、Lys；鳥胺酸(Orn)IV.大型、脂族、非極性殘基：Met、Leu、Ile、Val、Cys、正白胺酸(Nle)、高半胱胺酸V.大型、芳族殘基：Phe、Tyr、Trp、乙醯基苯丙胺酸

在替代實施例中，胺基酸取代不為保守胺基酸取代，例如，為非保守胺基酸取代。

如本文所用之術語「帶電荷胺基酸」係指包含在水溶液中在生理pH值下帶負電荷(亦即，去質子化)或帶正電荷(亦即，質子化)之側鏈的胺基酸。舉例而言，帶負電荷胺基酸包括天冬胺酸、麩胺酸、氧化半胱胺酸、高氧化半胱胺酸及高麩胺酸，而帶正電荷胺基酸包括精胺酸、離胺酸及組胺酸。帶電荷胺基酸包括20種編碼胺基酸中之帶電荷胺基酸，以及非典型或非天然產生或非編碼胺基酸。如本文所用之術語「酸性胺基酸」係指包含包括例如側鏈羧酸或磺酸基之第二酸性部分(除胺基酸之α羧酸以外)之胺基酸。

在一些實施例中，本發明之肽包含與原生人類胰高血糖素之胺基酸序列(SEQ ID NO：1)具有至少25%序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之肽包含與SEQ ID NO：1具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%或大於90%序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，具有上文提及之%序列一致性的本發明所揭示之肽之胺基酸序列為本發明所揭示之肽的全長胺基酸序列。在一些實施例中，具有上文提及之%序列一致性的本發明之肽之胺基酸序列僅為本發明所揭示之肽之胺基酸序列的一部分。在一些實施例中，本發明所揭示之肽包含與SEQ ID NO：1之至少5個連續胺基酸(例如，至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個胺基酸)之參考胺基酸序列具有約A%或更大序列一致性的胺基酸序列，其中該參考胺基酸序列始於SEQ ID NO：1位置C之胺基酸且終於SEQ ID NO：1位置D之胺基酸，其中A為25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99；C為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28且D為5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29。預期前述參數之任何及所有可能之組合，包括(但不限於)例如其中A為90%且C 與D為1與27、或6與27、或8與27、或10與27、或12與27、或16與27。

本文所述之原生人類胰高血糖素(SEQ ID NO：1)之類似物可包含具有任何數目之胺基酸之肽主鏈，亦即可為任何肽長度。在一些實施例中，本文所述之肽與SEQ ID NO：1具有相同長度，亦即長度為29個胺基酸。在一些實施例中，本發明所揭示之肽的長度長於29個胺基酸，例如，本發明所揭示之肽包含1-21個胺基酸之C端延長物，如本文進一步描述。因此，在一些實施例中，本發明之肽之長度為30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個胺基酸。在一些實施例中，本發明所揭示之肽之長度為至多50個胺基酸。在一些實施例中，本發明所揭示之肽之長度由於與另一肽融合而長於29個胺基酸(例如，長度大於50個胺基酸(例如，至少或約60個、至少或約70個、至少或約80個、至少或約90個、至少或約100個、至少或約150個、至少或約200個、至少或約250個、至少或約300個、至少或約350個、至少或約400個、至少或約450個、至少或約500個胺基酸))。在其他實施例中，本發明所揭示之肽之長度少於29個胺基酸，例如，28、27、26、25、24、23個胺基酸。

根據上述，在一些態樣中，本發明之肽為原生人類胰高血糖素(SEQ ID NO：1)之類似物，其包含基於SEQ ID NO：1之胺基酸序列，該序列包含一或多個胺基酸修飾，其影響GIP活性、胰高血糖素活性及/或GLP-1活性；增強穩定性，例如藉由減少肽之降解(例如，藉由改良DPP-IV蛋白酶抗性)；增強溶解性；增加半衰期；延遲作用起始時間；延長針對GIP、胰高血糖素或GLP-1受體之作用的持續時間；或任何前述作用之組合。下文進一步描述除其他修飾以外的該等胺基酸修飾，且任何此等修飾可個別或組合應用。

包含非原生醯基之胺基酸

根據一些或任何實施例，作為胰高血糖素(SEQ ID NO：1)之類似物的GIP促效劑肽包含包括非原生醯基之胺基酸(本文中稱為「醯化胺基酸」，而不考慮其如何製備，例如，藉由將先前醯化之胺基酸併入肽中，或在合成後對肽進行醯化)。在一些或任何態樣中，醯化胺基酸位於胰高血糖素類似物之位置9、10、12、13、14、16、17、20、37、38、39、40、41、42或43中之任何位置。在例示性態樣中，醯化胺基酸位於胰高血糖素類似物之位置9、10、12、16、20或40中之任何位置或胰高血糖素類似物之位置10、13、14、16、17或40中之任何位置。在例示性態樣中，醯化胺基酸位於位置10、14及40中之任何一或多個位置。在例示性態樣中，醯化胺基酸位於肽類似物之位置10、12或16中之任何位置。

在一些實施例中，醯化胺基酸致使GIP促效劑肽具有一或多種以下性質：(i)循環中之半衰期延長；(ii)作用起始時間延遲；(iii)作用持續時間延長；(iv)蛋白酶(諸如DPP-IV)抗性改良；及(v)針對GIP受體、GLP-1受體及胰高血糖素受體中之任何一或多者之效能增加。

直接醯化

在一些實施例中，醯基係直接鍵聯至GIP促效劑肽之胺基酸。根據一個實施例，GIP促效劑肽包含經由酯、硫酯或醯胺鍵聯連接至肽的醯基。

在特定態樣中，藉由對GIP促效劑肽之胺基酸側鏈之胺、羥基或硫醇進行直接醯化而使GIP促效劑肽包含醯基。在一些實施例中，醯化處於GIP促效劑肽之位置9、10、12、13、14、16、17、20或40(例如，位置10、14及40中之任一位置)。就此而言，GIP促效劑肽包含胺基酸序列SEQ ID NO：1或其包含一或多個本文所述之胺基酸修飾的經修飾胺基酸序列，其中GIP促效劑肽之位置9、10、12、13、14、16、17、20及40(例如，位置10、14及40中之任一位置)之胺基酸中的至少一者為包含側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸。

在一些實施例中，包含側鏈胺之胺基酸為式I胺基酸：

在一些實施例中，式I胺基酸為其中n為4(Lys)或n為3(Orn)之胺基酸。在一些實施例中，包含側鏈胺之胺基酸為包含側鏈胺之芳族胺基酸。在例示性態樣中，包含側鏈胺之芳族胺基酸為4-胺基-苯丙胺酸(4-胺基Phe)、對胺基苯基甘胺酸、對胺基高苯丙胺酸或3-胺基酪胺酸。在例示性態樣中，包含側鏈胺之芳族胺基酸為4-胺基-Phe。

在其他實施例中，包含側鏈羥基之胺基酸為式II胺基酸：

在一些例示性實施例中，式II胺基酸為其中n為1(Ser)之胺基酸。在例示性態樣中，式II胺基酸為其中n為2(高絲胺酸)之胺基酸。在類似例示性實施例中，包含側鏈羥基之胺基酸為Thr或高蘇胺酸。在類似例示性實施例中，包含側鏈羥基之胺基酸為包含側鏈羥基之芳族胺基酸。在例示性態樣中，包含側鏈羥基之芳族胺基酸為酪胺酸、高酪胺酸、甲基-酪胺酸或3-胺基酪胺酸。

在其他實施例中，包含側鏈硫醇之胺基酸為式III胺基酸：

在一些例示性實施例中，式III胺基酸為其中n為1(Cys)之胺基酸。

在其他實施例中，包含側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸為包含式I、式II或式III之相同結構之雙取代胺基酸，其中例外為鍵結至式I、式II或式III之胺基酸之α碳的氫經第二側鏈置換。

醯化間隔基

在替代實施例中，醯基係經由間隔基鍵聯至GIP促效劑肽之胺基酸，其中該間隔基位於GIP促效劑肽之該胺基酸與該醯基之間。在一些實施例中，GIP促效劑肽包含介於肽與醯基之間的間隔基。在一些實施例中，GIP促效劑肽係共價結合至間隔基，該間隔基共價結合至醯基。

在一些實施例中，間隔基為包含側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸，或包含包括側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸之二肽或三肽。間隔基所連接之胺基酸可為包含允許鍵聯至間隔基之部分的任何胺基酸(例如，單或雙α-取代胺基酸)。舉例而言，包含側鏈NH₂、-OH或-COOH之胺基酸(例如，Lys、Orn、Ser、Asp或Glu)為適合的。在此方面，在一些態樣中GIP促效劑肽包含胺基酸序列SEQ ID NO：1或其包含一或多個本文所述之胺基酸修飾的經修飾胺基酸序列，其中位置9、10、12、13、14、16、17、20及37-43(例如，位置10、14或40)之胺基酸中之至少一者為包含側鏈胺、羥基或羧酸酯基之胺基酸。

在一些實施例中，間隔基為包含側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸，或包含包括側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸之二肽或三肽。

當經由間隔基之胺基連接醯基時，醯基在一些態樣中係經由間隔基胺基酸之α胺或經由側鏈胺連接。在經由α胺連接醯基之情況下，間隔基之胺基酸可為任何胺基酸。舉例而言，間隔基之胺基酸可為疏水性胺基酸，例如Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Met、Phe、Tyr、6-胺基己酸、5-胺基戊酸、7-胺基庚酸及8-胺基辛酸。或者，在一些態樣中，間隔基之胺基酸為酸性殘基，例如Asp、Glu、高麩胺酸、高氧化半胱胺酸、氧化半胱胺酸、γ-麩胺酸。

在經由胺基酸間隔基之側鏈胺連接醯基之情況下，間隔基為包含側鏈胺之胺基酸，例如，式I胺基酸(例如，Lys或Orn)。在此情況下，間隔基之胺基酸之α胺與側鏈胺可能皆連接至醯基，因此GIP促效劑肽經二醯化。本發明之實施例包括該等二醯化分子。在一些實施例中，醯基係連接至4-胺基-Phe、對胺基苯基甘胺酸、對胺基高苯丙胺酸或3-胺基酪胺酸。

當經由間隔基之羥基連接醯基時，胺基酸或者二肽或三肽之一個胺基酸可為式II胺基酸。在一特定例示性實施例中，胺基酸為Ser。在類似例示性實施例中，醯基係連接至Thr或高蘇胺酸。在類似例示性實施例中，醯基係經由包含側鏈羥基之芳族胺基酸(例如，酪胺酸、高酪胺酸、甲基-酪胺酸或3-胺基酪胺酸)之羥基連接。

當醯基係經由間隔基之硫醇基連接時，胺基酸或者二肽或三肽之一個胺基酸可為式III胺基酸。在一特定例示性實施例中，胺基酸為Cys。

在一些實施例中，間隔基為親水性雙官能間隔基。在例示性實施例中，親水性雙官能間隔基包含兩個或兩個以上反應性基團，例如，胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。在例示性實施例中，親水性雙官能間隔基包含羥基及羧酸酯基。在其他實施例中，親水性雙官能間隔基包含胺基及羧酸酯基。在其他實施例中，親水性雙官能間隔基包含硫醇基及羧酸酯基。在一特定實施例中，間隔基包含胺基聚(烷氧基)羧酸酯基。就此而言，間隔基可包含例如NH₂(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_mCOOH，其中m為1至6之任何整數且n為2至12之任何整數，諸如，8-胺基-3,6-二氧雜辛酸，其係購自Peptides International,Inc.(Louisville,KY)。

在例示性實施例中，間隔基包含小的聚乙二醇部分(PEG)，其包含結構[-O-CH₂-CH₂-]_n，其中n為介於2與16之間的整數(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16)。該等小的PEG在本文中稱為「微型PEG」。在例示性態樣中，微型PEG為包含一或多個官能基之官能化微型PEG。適合之官能基包括(但不限於)胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。在例示性態樣中，微型PEG為包含結構{[-O-CH₂-CH₂-]_n-COO-}之微型PEG酸，其中n係如上文所定義。在例示性態樣中，微型PEG為包含結構{-N-CH₂-CH₂-[-O-CH₂-CH₂-]_n}之醯胺基微型PEG，其中n係如上文所定義。在例示性態樣中，微型PEG為包含結構{-N-CH₂-CH₂-[-O-CH₂-CH₂-]_n-COO-}之醯胺基微型PEG酸，其中n係如上文所定義。適用於醯化具有微型PEG之胺基酸的試劑可購自供應商，諸如Peptides International(Louisville,KY)。此外，本文中描述適用於醯化具有微型PEG之胺基酸的技術(參見實例1)。

在一些實施例中，間隔基為疏水性雙官能間隔基。疏水性雙官能間隔基在此項技術中已知。參見例如Bioconjugate Techniques,G.T.Hermanson(Academic Press,San Diego,CA,1996)，其係以全文引用之方式併入。在例示性實施例中，疏水性雙官能間隔基包含兩個或兩個以上反應性基團，例如，胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。在例示性實施例中，疏水性雙官能間隔基包含羥基及羧酸酯基。在其他實施例中，疏水性雙官能間隔基包含胺基及羧酸酯基。在其他實施例中，疏水性雙官能間隔基包含硫醇基及羧酸酯基。包含羧酸酯基及羥基或硫醇基之適合疏水性雙官能間隔基在此項技術中已知且包括例如8-羥基辛酸及8-巰基辛酸。

在一些實施例中，雙官能間隔基不為在羧酸酯基之間包含1-7個碳原子之未分支亞甲基之二羧酸。在一些實施例中，雙官能間隔基為在羧酸酯基之間包含1-7個碳原子之未分支亞甲基之二羧酸。

在特定實施例中，間隔基(例如，胺基酸、二肽、三肽、親水性雙官能間隔基或疏水性雙官能間隔基)長度為3至10個原子(例如，6至10個原子(例如，6、7、8、9或10個原子))。在更特定實施例中，間隔基長度為約3至10個原子(例如，6至10個原子)且醯基為C12至C18脂肪醯基，例如C14脂肪醯基、C16脂肪醯基，因此間隔基與醯基之總長度為14至28個原子，例如，約14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28個原子。在一些實施例中，間隔基與醯基之長度為17至28個(例如，19至26個、19至21個)原子。

根據一些或任何前述實施例，雙官能間隔基可為包含長度為3至10個原子之胺基酸主鏈之合成或天然產生之胺基酸(包括(但不限於)本文所述之任何彼等胺基酸)(例如，6-胺基己酸、5-胺基戊酸、7-胺基庚酸及8-胺基辛酸)。或者，間隔基可為具有長度為3至10個原子(例如，6至10個原子)之肽主鏈的二肽或三肽間隔基。二肽或三肽間隔基之各胺基酸可與二肽或三肽之其他胺基酸相同或不同且可獨立地選自由以下組成之群：天然產生或編碼及/或非編碼或非天然產生之胺基酸，包括例如天然產生之胺基酸(Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr)之任何D或L異構體，或選自由以下組成之群之非天然產生或非編碼胺基酸之任何D或L異構體：β-丙胺酸(β-Ala)、N-α-甲基-丙胺酸 (Me-Ala)、胺基丁酸(Abu)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、胺基己酸(ε-Ahx)、胺基異丁酸(Aib)、胺基甲基吡咯甲酸、胺基哌啶甲酸、胺基絲胺酸(Ams)、胺基四氫哌喃-4-甲酸、精胺酸N-甲氧基-N-甲基醯胺、β-天冬胺酸(β-Asp)、氮雜環丁烷甲酸、3-(2-苯并噻唑基)丙胺酸、α-第三丁基甘胺酸、2-胺基-5-脲基-正戊酸(瓜胺酸、Cit)、β-環己基丙胺酸(Cha)、乙醯胺基甲基-半胱胺酸、二胺基丁酸(Dab)、二胺基丙酸(Dpr)、二羥基苯丙胺酸(DOPA)、二甲基噻唑啶(DMTA)、γ-麩胺酸(γ-Glu)、高絲胺酸(Hse)、羥基脯胺酸(Hyp)、異白胺酸N-甲氧基-N-甲基醯胺、甲基-異白胺酸(MeIle)、異哌啶甲酸(Isn)、甲基-白胺酸(MeLeu)、甲基-離胺酸、二甲基-離胺酸、三甲基-離胺酸、甲醯基脯胺酸、甲硫胺酸-亞碸(Met(O))、甲硫胺酸-碸(Met(O₂))、正白胺酸(Nle)、甲基-正白胺酸(Me-Nle)、正纈胺酸(Nva)、鳥胺酸(Orn)、對胺基苯甲酸(PABA)、青黴胺(Pen)、甲基苯丙胺酸(MePhe)、4-氯苯丙胺酸(Phe(4-Cl))、4-氟苯丙胺酸(Phe(4-F))、4-硝基苯丙胺酸(Phe(4-NO₂))、4-氰基苯丙胺酸((Phe(4-CN))、苯基甘胺酸(Phg)、哌啶基丙胺酸、哌啶基甘胺酸、3,4-去氫脯胺酸、吡咯啶基丙胺酸、肌胺酸(Sar)、硒代半胱胺酸(Sec)、O-苄基-磷酸絲胺酸、4-胺基-3-羥基-6-甲基庚酸(Sta)、4-胺基-5-環己基-3-羥基戊酸(ACHPA)、4-胺基-3-羥基-5-苯基戊酸(AHPPA)、1,2,3,4，-四氫-異喹啉-3-甲酸(Tic)、四氫哌喃甘胺酸、噻吩基丙胺酸(Thi或硫代Ala)、O-苄基-磷酸酪胺酸、O-磷酸酪胺酸、甲氧基酪胺酸、乙氧基酪胺酸、O-(雙-二甲基胺基-膦酸基)-酪胺酸、硫酸酪胺酸四丁基胺、甲基-纈胺酸(MeVal)及烷基化3-巰基丙酸。在例示性態樣中，間隔基為Cys殘基或Lys殘基。

在一些實施例中，間隔基包含總體負電荷，例如，包含一個或兩個帶負電荷胺基酸。在一些實施例中，二肽不為通用結構A-B之任何二肽，其中A係選自由Gly、Gln、Ala、Arg、Asp、Asn、Ile、 Leu、Val、Phe及Pro組成之群，其中B係選自由Lys、His、Trp組成之群。在一些實施例中，二肽間隔基之胺基酸係選自由Ala、β-Ala、Leu、Pro、γ-胺基丁酸、Glu及γ-Glu組成之群。

在一些例示性實施例中，藉由間隔基之胺、羥基或硫醇之醯化使GIP促效劑肽包含醯基，該間隔基係在GIP促效劑肽之位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43(例如，在位置10、14及40中之任何一或多個位置)或在C端胺基酸處連接至胺基酸之側鏈。

在更特定實施例中，醯基係在肽類似物之位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43中之任何位置(例如，在位置10、14及40中之任何一或多個位置)連接至胺基酸且間隔基與醯基之長度為14至28個原子。在一些態樣中，位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43中之任何位置(例如，在位置10、14及40中之任何一或多個位置)之胺基酸為式I胺基酸，例如，Lys或式I所述之雙取代胺基酸。在更特定實施例中，肽類似物缺乏分子內橋鍵，例如，共價分子內橋鍵。胰高血糖素類似物例如可為包含一或多個用於穩定類似物之α螺旋之α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)的胰高血糖素類似物。

醯基

醯化胺基酸之醯基可具有任何尺寸(例如，任何長度碳鏈)，且可為直鏈或分支鏈。在一些特定實施例中，醯基為C4至C30脂肪酸。舉例而言，醯基可為C4脂肪酸、C6脂肪酸、C8脂肪酸、C10脂肪酸、C12脂肪酸、C14脂肪酸、C16脂肪酸、C18脂肪酸、C20脂肪酸、C22脂肪酸、C24脂肪酸、C26脂肪酸、C28脂肪酸或C30脂肪酸中之任一者。在一些實施例中，醯基為C8至C20脂肪酸，例如，C12至C18脂肪酸、C14脂肪酸或C16脂肪酸。在例示性實施例中，醯基為C16至C30脂肪酸，例如，C20至C28脂肪酸、C16至C22脂肪酸。

在一替代實施例中，醯基為膽汁酸(bile acid)。膽汁酸可為任何適合之膽汁酸，包括(但不限於)膽酸(cholic acid)、鵝去氧膽酸、去氧膽酸、石膽酸、牛膽酸、甘膽酸及膽固醇酸。

在例示性實施例中，醯基為丁二酸或丁二酸衍生物。如本文所用之「丁二酸衍生物」意謂包含經取代之丁二酸或經取代之環狀丁二酸(亦即丁二酸酐)或經取代之擴展環丁二酸酐(亦即包含-C(O)-O-C(O)-部分及3至5個額外碳之6-8員環)的化合物，其中該經取代之丁二酸、該經取代之環狀丁二酸(亦即丁二酸酐)或該經取代之擴展環丁二酸酐係經一或多個烷基鏈或一或多個官能化碳鏈取代。

在例示性態樣中，丁二酸衍生物包含式V之結構：

其中R及R'各自獨立地為H、直鏈或分支鏈C4-C30碳鏈或直鏈或分支鏈C4-C30官能化碳鏈。在例示性實施例中，R及/或R'為包含C4至C30烷基鏈之碳鏈。舉例而言，烷基可為C4烷基、C6烷基、C8烷基、C10烷基、C12烷基、C14烷基、C16烷基、C18烷基、C20烷基、C22烷基、C24烷基、C26烷基、C28烷基或C30烷基中之任一者。在一些實施例中，烷基為C8至C20烷基，例如，C12至C18烷基、C14烷基或C16烷基。在例示性實施例中，烷基為C16至C30烷基，例如，C20至C28烷基、C16至C22烷基。在例示性態樣中，官能化碳鏈包含官能基，包括(但不限於)羧基、巰基、胺、羰遊基、硫氧基或醯胺基。

在例示性態樣中，丁二酸衍生物包含包括式VI結構之丁二酸酐： [式VI]

在例示性態樣中，丁二酸衍生物為丁二酸酐衍生物，其包括式VII之丁二酸酐衍生物：

其中n為1-4，且其中R及R'各自獨立地為H、直鏈或分支鏈C4-C30碳鏈或直鏈或分支鏈C4-C30官能化碳鏈。在例示性實施例中，R及/或R'為包含C4至C30烷基鏈之碳鏈。舉例而言，烷基可為C4烷基、C6烷基、C8烷基、C10烷基、C12烷基、C14烷基、C16烷基、C18烷基、C20烷基、C22烷基、C24烷基、C26烷基、C28烷基或C30烷基中之任一者。在一些實施例中，烷基為C8至C20烷基，例如，C12至C18烷基、C14烷基或C16烷基。在例示性實施例中，烷基為C16至C30烷基，例如，C20至C28烷基、C16至C22烷基。在例示性態樣中，官能化碳鏈包含官能基，包括(但不限於)羧基、巰基、胺、羰遊基、硫氧基或醯胺基。

當式V-VI之R及R'中僅一者為H時，醯化胺基酸係稱為「Cx丁二醯基」。如本文所用之術語「Cx丁二醯基」(其中x為整數)係指一種結構，其中R為具有y個碳之烷基鏈且y=x-1，且y不包括丁二醯基部分之碳。舉例而言，其中R為C15烷基且R'為H之式VI結構係稱為C16丁二醯基。舉例而言，圖3A描繪C16丁二醯基Lys，其中Lys已在ε胺處經丁二醯化。當式V-VI之R與R'皆不為H時，則醯化胺基酸係稱為「Cx,Cx'丁二醯基」。如本文所用之術語「Cx,Cx'丁二醯基」(其中x及x'為整數)係指一種結構，其中R為具有y個碳之烷基鏈且R'為具有y'個碳之烷基鏈，且y'=x'-1。舉例而言，其中R為C15烷基且R'為C13烷基之式VI結構亦稱為C16,C14丁二醯基。當丁二酸衍生物為經取代之擴展環丁二酸酐且式VII之R與R'皆不為H時，則醯化胺基酸係稱為「Cx,Cx'-n-丁二醯基」。如本文所用之術語「Cx,Cx'-n-丁二醯基」(其中x、x'及n為整數)係指一種結構，其中R為具有y個碳之烷基鏈，R'為具有y'個碳之烷基鏈，且丁二酸酐環擴展n個碳。舉例而言，其中R及R'為C15烷基且n=2之式VII結構係稱為C16,C16-2-丁二醯基。

在例示性實施例中，醯基為順丁烯二酸或順丁烯二酸衍生物。如本文所用之「順丁烯二酸衍生物」意謂包含經取代之順丁烯二酸或經取代之環狀順丁烯二酸(亦即順丁烯二酸酐)或經取代之擴展環順丁烯二酸酐(亦即包含-C(O)-O-C(O)-部分及3至5個額外碳之6-8員環)的化合物，其中該經取代之順丁烯二酸、該經取代之環狀順丁烯二酸(亦即順丁烯二酸酐)或該經取代之擴展環順丁烯二酸酐係經一或多個烷基鏈或一或多個官能化碳鏈取代。

在例示性態樣中，順丁烯二酸衍生物包含式VIII之結構： [式VIII]

在例示性態樣中，順丁烯二酸衍生物包含順丁烯二酸酐，其包含式IX之結構：

在例示性態樣中，順丁烯二酸衍生物為順丁烯二酸酐衍生物，其包括式X之順丁烯二酸酐衍生物：

其中n為1-4，在兩個非羰基碳之間存在至少一個C=C雙鍵，且其中R及R'各自獨立地為H、直鏈或分支鏈C4-C30碳鏈或直鏈或分支鏈C4-C30官能化碳鏈。在例示性實施例中，R及/或R'為包含C4至C30烷基鏈之碳鏈。舉例而言，烷基可為C4烷基、C6烷基、C8烷基、C10烷基、C12烷基、C14烷基、C16烷基、C18烷基、C20烷基、C22烷基、C24烷基、C26烷基、C28烷基或C30烷基中之任一者。在一些實施例中，烷基為C8至C20烷基，例如，C12至C18烷基、C14烷基或C16烷基。在例示性實施例中，烷基為C16至C30烷基，例如，C20至C28烷基、C16至C22烷基。在例示性態樣中，官能化碳鏈包含官能基，包括(但不限於)羧基、巰基、胺、羰遊基、硫氧基或醯胺基。

當式VIII-IX之R及R'中僅一者為H時，醯化胺基酸係稱為「Cx順丁烯二醯基」。如本文所用之術語「Cx順丁烯二醯基」(其中x為整數)係指一種結構，其中R為具有y個碳之烷基鏈且y=x-1，且y不包括順丁烯二醯基部分之碳。舉例而言，其中R為C15烷基且R'為H之式IX結構係稱為C16順丁烯二醯基。當式VIII-IX之R與R'皆不為H時，則醯化胺基酸係稱為「Cx,Cx'順丁烯二醯基」。如本文所用之術語「Cx,Cx'順丁烯二醯基」(其中x及x'為整數)係指一種結構，其中R為具有y個碳之烷基鏈且R'為具有y'個碳之烷基鏈且y'=x'-1。舉例而言，其中R為C15烷基且R'為C13烷基之式IX結構係稱為C16,C14順丁烯二醯基。當順丁烯二酸衍生物為經取代之擴展環順丁烯二酸酐且式X之R與R'皆不為H時，則醯化胺基酸係稱為「Cx,Cx'-n-順丁烯二醯基」。如本文所用之術語「Cx,Cx'-n-順丁烯二醯基」(其中x、x'及n為整數)係指一種結構，其中R為具有y個碳之烷基鏈，R'為具有y'個碳之烷基鏈，且順丁烯二酸酐環擴展n個碳。舉例而言，其中R及R'為C15烷基且n=2之式X結構係稱為C16,C16-2-順丁烯二醯基。

連接醯基之方法

經由肽之胺、羥基及硫醇將醯基連接至肽之適合方法在此項技術中已知。參見例如實例1及實例2(關於經由胺進行醯化之方法)；Miller,Biochem Biophys Res Commun 218：377-382(1996)；Shimohigashi及Stammer,Int J Pept Protein Res 19：54-62(1982)；及Previero等人，Biochim Biophys Acta 263：7-13(1972)(關於經由羥基進行醯化之方法)；及San及Silvius,J Pept Res 66：169-180(2005)(關於經由硫醇進行醯化之方法)；Bioconjugate Chem.「Chemical Modifications of Proteins：History and Applications」第1、2-12頁(1990)；Hashimoto等人，Pharmacuetical Res.「Synthesis of Palmitoyl Derivatives of Insulin and their Biological Activity」第6卷，第2期，第171-176頁(1989)。

在一些實施例中，藉由GIP促效劑肽對長鏈烷烴之醯化而使GIP促效劑肽包含醯化胺基酸。在特定態樣中，長鏈烷烴包含胺、羥基或硫醇基(例如，十八烷基胺、十四醇及十六烷硫醇)，其與GIP促效劑肽之羧基或其活化形式反應。GIP促效劑肽之羧基或其活化形式可為GIP促效劑肽之胺基酸(例如，麩胺酸、天冬胺酸)之側鏈的一部分或可為肽主鏈之一部分。

在例示性實施例中，藉由連接至GIP促效劑肽之間隔基對長鏈烷烴之醯化而使GIP促效劑肽包含醯基。在特定態樣中，長鏈烷烴包含胺、羥基或硫醇基，其與間隔基之羧基或其活化形式反應。包含羧基或其活化形式之適合間隔基描述於本文中且包括例如雙官能間隔基，例如，胺基酸、二肽、三肽、親水性雙官能間隔基及疏水性雙官能間隔基。

如本文所用之術語「羧基之活化形式」係指具有通式R(C=O)X之羧基，其中X為離去基且R為胰高血糖素類似物或間隔基。舉例而言，羧基之活化形式可包括(但不限於)醯基氯化物、酐及酯。在一些實施例中，活化羧基為具有N-羥基丁二醯亞胺酯(NHS)離去基之酯。

關於長鏈烷烴由胰高血糖素類似物或間隔基醯化之此等態樣，長鏈烷烴可具有任何尺寸且可包含任何長度之碳鏈。長鏈烷烴可為直鏈或分支鏈。在例示性態樣中，長鏈烷烴為C4至C30烷烴。舉例而言，長鏈烷烴可為C4烷烴、C6烷烴、C8烷烴、C10烷烴、C12烷烴、C14烷烴、C16烷烴、C18烷烴、C20烷烴、C22烷烴、C24烷烴、C26烷烴、C28烷烴或C30烷烴中之任一者。在一些實施例中，長鏈烷烴包含C8至C20烷烴，例如，C12至C18烷烴、C14烷烴、C16烷烴或C18烷烴。在例示性實施例中，長鏈烷烴為C16至C30烷烴，例如，C20至C28烷烴、C16至C22烷烴。

此外，在一些實施例中，GIP促效劑肽之胺、羥基或硫醇基係經膽固醇酸醯化。在一特定實施例中，GIP促效劑肽經由烷基化去胺基Cys間隔基(亦即，烷基化3-巰基丙酸間隔基)鍵聯至膽固醇酸。

當醯基為丁二酸、丁二酸衍生物、順丁烯二酸或順丁烯二酸衍生物時，肽係藉由GIP促效劑肽或間隔基之胺、羥基或硫醇基與式V、式VI、式VII、式VIII、式IX或式X之丁二酸、丁二酸衍生物、順丁烯二酸或順丁烯二酸衍生物反應而經丁二醯化/順丁烯二醯化。丁二醯化方法描述於本文中。

額外醯基

在一些或任何實施例中，肽在除位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43(例如，在位置10、14及40中之任何一或多個位置)以外之位置包含醯化胺基酸。醯化胺基酸之位置可為GIP促效劑肽內之任何位置，包括位置1-29中之任何位置、C端至第29個胺基酸之位置(例如，位置30、31、32、33、34、35、36、44、45、46、47等、C端延長物內之位置或C端之胺基酸)，視情況連同位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43中之任何位置(例如，位置10、14及40中之任何一或多個位置)的第二醯化胺基酸，其限制條件為肽類似物之GIP促效劑活性得以保留(若未增強的話)。非限制性實例包括位置5、7、11、13、14、17、18、19、21、24、27、28或29。

與前述一致，在例示性態樣中，當存在兩個醯基時，胰高血糖素類似物包含兩個(或兩個以上)醯化胺基酸，且可視為雙重醯化肽或二醯化肽。在例示性態樣中，所有醯化胺基酸皆位於位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43中之兩個位置(例如，位置10、14及40中之任何一或多個位置)。在例示性態樣中，醯化發生在位置10、14及40中之兩個位置。在例示性態樣中，肽包含位置10之第一醯化胺基酸及位置40之第二醯化胺基酸。

在其他例示性實施例中，胰高血糖素類似物包含連接至肽主鏈之單一胺基酸的兩個(或兩個以上)醯基。當存在兩個醯基時，肽可視為雙重醯化肽或二醯化肽。兩個(或兩個以上)醯基可為以分枝或線性形式排列之相同醯基或不同醯基。舉例而言，為達成分枝形式，胰高血糖素類似物可包含連接至間隔基之一個醯化胺基酸(其為肽主鏈之一部分)，該間隔基包含至少三個官能基，其中至少兩個各自共價連接至醯基且其中一個連接至肽主鏈之醯化胺基酸。在例示性態樣中，可經由例如包含兩個胺基(側鏈胺及α胺)以供直接連接至脂肪醯基或經由間隔基間接連接至脂肪醯基之Lys殘基來達成分枝形式。在例示性態樣中，另一間隔基可位於肽主鏈之胺基酸與包含至少三個官能基之間隔基之間。舉例而言，肽主鏈之胺基酸可連接(例如，經由其側鏈)至第一間隔基，該第一間隔基又連接至第二間隔基，其中該第二間隔基包含至少三個官能基，其中至少兩個各自共價連接至烷基且其中一個連接至第一間隔基。

在烷基呈線性形式排列之例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含直接連接至第一醯基之一個醯化胺基酸(其為肽主鏈之一部分)，該第一醯基又連接至間隔基，該間隔基又連接至第二醯基。

雙重醯化化合物之例示性結構描繪於圖5A中。

親水性部分及醯基

包含醯化胺基酸之GIP促效劑肽視情況進一步包含親水性部分。在一些或任何實施例中，親水性部分包含聚乙二醇(PEG)鏈。親水性部分之併入係經由任何適合方法來實現，諸如本文所述方法中之任一者。就此而言，GIP促效劑肽可包含SEQ ID NO：1，其包括本文所述修飾中之任一者，其中在位置9、10、12、13、14、16、17、20及37-43中之任何位置(例如，位置10、14及40中之一或多個位置)之胺基酸的至少一者為醯化胺基酸且位置16、17、21、24或29、C端延長物內之位置之胺基酸或C端胺基酸中之至少一者為Cys、Lys、Orn、高Cys或Ac-Phe，其中側鏈共價鍵聯至親水性部分(例如PEG)。在一些實施例中，GIP促效劑肽之位置9、10、12、13、14、16、17、20及37-43中之任何位置(例如，位置10、14及40中之一或多個位置)之胺基酸連接(視情況經由間隔基)至醯基且該胺基酸進一步連接至親水性部分或進一步連接至Cys、Lys、Orn、高Cys或Ac-Phe，該Cys、Lys、Orn、高Cys或Ac-Phe連接至親水性部分。

或者，醯化胰高血糖素類似物可包含間隔基，其中該間隔基經醯化且修飾以包含親水性部分。適合間隔基之非限制性實例包括包含一或多個選自由Cys、Lys、Orn、高Cys及Ac-Phe組成之群之胺基酸的間隔基。

在一些態樣中，GIP促效劑肽在一些實施例中係在相同胺基酸位置(其中鍵聯親水性部分)或在不同胺基酸位置經醯化。非限制性實例包括在胰高血糖素類似物之位置9、10、12、13、14、16、17、20或40(例如，在位置10、14及40中之一或多個位置)之醯化及在C端部分中之一或多個位置(例如，位置24、28或29、C端延長物內(例如，37-43)或C端(例如，經由添加C端Cys))之聚乙二醇化。

在一些特定實施例中，包含醯化胺基酸之GIP促效劑肽缺乏分子內橋鍵，例如，共價分子內橋鍵(例如，內醯胺橋鍵)。

包含非原生烷基之胺基酸

根據一些或任何實施例，作為胰高血糖素(SEQ ID NO：1)之類似物之GIP促效劑肽包含包括非原生烷基之胺基酸(本文中稱為「烷基化胺基酸」，而不考慮其如何製備，例如，藉由將先前烷基化之胺基酸併入肽中，或在合成後對肽進行烷基化)。在一些或任何態樣中，烷基化胺基酸位於位置9、10、12、13、14、16、17、20、37、38、39、40、41、42或43中之任何位置(例如，位置10、14及40中之一或多個位置)。在例示性態樣中，烷基化胺基酸位於位置9、10、12、16、20或40中之任何位置或位置10、13、14、16、17或40中之任何位置。在例示性態樣中，烷基化胺基酸位於位置10、12、16或40中之任何位置或位置10、12或16中之任何位置。在例示性態樣中，烷基化胺基酸位於位置10、14及40中之任何一或多個位置。

在一些實施例中，烷基化胺基酸致使GIP促效劑肽具有一或多種以下性質：(i)循環中之半衰期延長；(ii)作用起始時間延遲；(iii)作用持續時間延長；(iv)蛋白酶(諸如DPP-IV)抗性改良；及(v)針對GIP受體、GLP-1受體及胰高血糖素受體中之任何一或多者之效能增加。

直接烷基化

在一些實施例中，烷基係直接鍵聯至GIP促效劑肽之胺基酸。根據一個實施例，GIP促效劑肽包含經由醚、硫醚或胺鍵聯連接至肽的烷基。

在特定態樣中，藉由GIP促效劑肽之胺基酸側鏈之胺、羥基或硫醇的直接烷基化而使GIP促效劑肽包含烷基。在一些或任何實施例中，藉由使胺、羥基或硫醇與活化烷基反應而將烷基鍵聯至GIP促效劑肽之胺基酸。在一些態樣中，烷基經例如鹵素、磺酸酯、吡啶基硫醇、銨鹽或苯氧基之離去基活化。

在一些或任何實施例中，烷基化胺基酸位於位置9、10、12、13、14、16、17、20或40中之一個位置(例如，位置10、14及40中之任一位置)或位置10、12或16中之一個位置。就此而言，GIP促效劑肽包含胺基酸序列SEQ ID NO：1或其包含一或多個本文所述胺基酸修飾的經修飾胺基酸序列，其中位置9、10、12、13、14、16、17、20及40(例如，位置10、14及40中之任一位置)之胺基酸中的至少一者為包含側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸。

在一些實施例中，包含側鏈胺之胺基酸為式I胺基酸。在一些實施例中，式I胺基酸為其中n為4(Lys)或n為3(Orn)之胺基酸。在一些實施例中，包含側鏈胺之胺基酸為包含側鏈胺之芳族胺基酸。在例示性態樣中，包含側鏈胺之芳族胺基酸為4-胺基-苯丙胺酸(4-胺基Phe)、對胺基苯基甘胺酸、對胺基高苯丙胺酸或3-胺基酪胺酸。在例示性態樣中，包含側鏈胺之芳族胺基酸為4-胺基-Phe。

在其他實施例中，包含側鏈羥基之胺基酸為式II胺基酸。在一些例示性實施例中，式II胺基酸為其中n為1(Ser)之胺基酸。在例示性態樣中，式II胺基酸為其中n為2(高絲胺酸)之胺基酸。在類似例示性實施例中，包含側鏈羥基之胺基酸為Thr或高蘇胺酸。在類似例示性實施例中，包含側鏈羥基之胺基酸為包含側鏈羥基之芳族胺基酸。在例示性態樣中，包含側鏈羥基之芳族胺基酸為酪胺酸、高酪胺酸、甲基-酪胺酸或3-胺基酪胺酸。

在其他實施例中，包含側鏈硫醇之胺基酸為式III胺基酸。在一些例示性實施例中，式III胺基酸為其中n為1(Cys)之胺基酸。在一些或任何例示性實施例中，式III胺基酸係共價連接至烷基，例如，非官能化或官能化碳鏈。在例示性態樣中，胺基酸係經S-棕櫚基-烷基化(亦即S-棕櫚酸酯-烷基化)，其中Cys殘基之硫原子共價結合至棕櫚酸酯之β碳。在其他實施例中，式III胺基酸係經由Cys殘基之硫原子共價結合至Cn乙酸酯之β碳，其中n為4至30之整數。進行S-棕櫚基烷基化之不同方式之實例展示於圖6及圖7中。

烷基化間隔基

在替代實施例中，非原生烷基係經由間隔基鍵聯至GIP促效劑肽之胺基酸，其中該間隔基位於GIP促效劑肽之該胺基酸與該非原生烷基之間。在一些實施例中，GIP促效劑肽係共價結合至間隔基，該間隔基共價結合至非原生烷基。

在例示性實施例中，藉由間隔基之胺、羥基或硫醇之烷基化而使胰高血糖素類似物經修飾以包含非原生烷基，該間隔基係在位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43中之一個位置(例如，位置10、14及40中之任一位置)連接至胺基酸之側鏈。在例示性實施例中，藉由使間隔基之胺、羥基或硫醇與具有離去基(例如，鹵素、磺酸酯基、吡啶基硫醇、銨鹽、苯氧基)之烷基反應而將烷基連接至間隔基。

連接間隔基之胺基酸可為包含允許鍵聯至間隔基之部分的任何胺基酸。舉例而言，包含側鏈NH₂、-OH或-COOH(例如，Lys、 Orn、Ser、Asp或Glu)之胺基酸為適合的。在此方面，烷基化胰高血糖素類似物可包含SEQ ID NO：1之經修飾胺基酸序列，其包含一或多個本文所述之胺基酸修飾，其中位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43(例如，位置10、14及40中之任何一或多個位置)之胺基酸中的至少一者經修飾為任何包含側鏈胺、羥基或羧酸酯基之胺基酸。

在一些實施例中，間隔基為包含側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸，或包含包括側鏈胺、羥基或硫醇之胺基酸之二肽或三肽。間隔基所連接之胺基酸可為包含允許鍵聯至間隔基之部分的任何胺基酸(例如，單或雙α-取代胺基酸)。舉例而言，包含側鏈NH₂、-OH或-COOH之胺基酸(例如，Lys、Orn、Ser、Asp或Glu)為適合的。在此方面，在一些態樣中GIP促效劑肽包含胺基酸序列SEQ ID NO：1或其包含一或多個本文所述之胺基酸修飾的經修飾胺基酸序列，其中位置9、10、12、13、14、16、17、20及37-43(例如，位置10、14及40中之任一位置)之胺基酸中之至少一者為包含側鏈胺、羥基或羧酸酯基之胺基酸。

當經由間隔基之胺基連接烷基時，烷基在一些態樣中係經由間隔基胺基酸之α胺或經由側鏈胺連接。在經由α胺連接烷基之情況下，間隔基之胺基酸可為任何胺基酸。舉例而言，間隔基之胺基酸可為疏水性胺基酸，例如Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Met、Phe、Tyr、6-胺基己酸、5-胺基戊酸、7-胺基庚酸及8-胺基辛酸。或者，在一些態樣中，間隔基之胺基酸為酸性殘基，例如Asp、Glu、高麩胺酸、高氧化半胱胺酸、氧化半胱胺酸、γ-麩胺酸。

在經由胺基酸間隔基之側鏈胺連接烷基之情況下，間隔基為包含側鏈胺之胺基酸，例如，式I胺基酸(例如，Lys或Orn)。在此情況下，間隔基之胺基酸之α胺與側鏈胺可能皆連接至烷基，因此GIP促效劑肽經二烷基化。本發明之實施例包括該等二烷基化分子。在一些實施例中，烷基係連接至4-胺基-Phe、對胺基苯基甘胺酸、對胺基高苯丙胺酸或3-胺基酪胺酸。

當經由間隔基之羥基連接烷基時，胺基酸或者二肽或三肽之一個胺基酸可為式II胺基酸。在一特定例示性實施例中，胺基酸為Ser。在類似例示性實施例中，烷基係連接至Thr或高蘇胺酸。在類似例示性實施例中，烷基係經由包含側鏈羥基之芳族胺基酸(例如，酪胺酸、高酪胺酸、甲基-酪胺酸或3-胺基酪胺酸)之羥基連接。

當烷基係經由間隔基之硫醇基連接時，胺基酸或者二肽或三肽之一個胺基酸可為式III胺基酸。在一特定例示性實施例中，胺基酸為Cys。當經由間隔基之硫醇基連接烷基時，胺基酸或者二肽或三肽之一個胺基酸可為式III胺基酸。在一特定例示性實施例中，胺基酸為Cys。在例示性實施例中，間隔基為Cys殘基，其共價連接至烷基，例如，非官能化或官能化碳鏈。在例示性態樣中，Cys殘基係經S-棕櫚基烷基化(亦即S-棕櫚酸酯烷基化)，視情況，其中Cys殘基係連接至作為肽主鏈之一部分的Lys殘基。在替代實施例中，間隔基為包含Cys殘基之二肽，該Cys殘基共價連接至烷基。在例示性態樣中，Cys係經S-棕櫚基烷基化，且Cys連接至間隔基之另一胺基酸，該另一胺基酸又連接至例如作為肽主鏈之一部分的Lys殘基。

在其他例示性實施例中，間隔基為雙官能間隔基，其包含(i)包含與包含胺、羥基或硫醇之烷基反應之離去基的第一末端；及(ii)包含與胰高血糖素類似物之胺基酸之側鏈反應之官能基的第二末端。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物之胺基酸為式I胺基酸(例如Lys)或式II胺基酸(例如Ser)且該胺基酸係經羧酸或羧酸衍生物官能化。在替代例示性態樣中，胰高血糖素類似物之胺基酸為式III胺基酸且該胺基酸係經鹵乙醯胺、順丁烯二醯亞胺基或二硫化物官能化。在一些實施例中，胰高血糖素類似物之胺基酸為包含側鏈羧酸酯基之胺基酸，例如，經胺、羥基或硫醇官能化之Glu、Asp。

在一些或任何實施例中，間隔基為親水性雙官能間隔基。在例示性實施例中，親水性雙官能間隔基包含兩個或兩個以上反應性基團，例如，胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。在例示性實施例中，親水性雙官能間隔基包含羥基及羧酸酯基。在其他實施例中，親水性雙官能間隔基包含胺基及羧酸酯基。在其他實施例中，親水性雙官能間隔基包含硫醇基及羧酸酯基。在一特定實施例中，間隔基包含胺基聚(烷氧基)羧酸酯基。就此而言，間隔基可包含例如NH₂(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_mCOOH，其中m為1至6之任何整數且n為2至12之任何整數，例如，8-胺基-3,6-二氧雜辛酸，其係購自Peptides International,Inc.(Louisville,KY)。

在例示性實施例中，間隔基包含小的聚乙二醇部分(PEG)，其包含結構[-O-CH₂-CH₂-]_n，其中n為介於2與16之間的整數(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16)。該等小的PEG在本文中稱為「微型PEG」。在例示性態樣中，微型PEG為包含一或多個官能基之官能化微型PEG。適合之官能基包括(但不限於)胺、羥基、硫醇及羧基或其任何組合。在例示性態樣中，微型PEG為包含結構{[-O-CH₂-CH₂-]_n-COO-}之微型PEG酸，其中n係如上文所定義。在例示性態樣中，微型PEG為包含結構{-N-CH₂-CH₂-[-O-CH₂-CH₂-]_n}之醯胺基微型PEG，其中n係如上文所定義。在例示性態樣中，微型PEG為包含結構{-N-CH₂-CH₂-[-O-CH₂-CH₂-]_n-COO-}之醯胺基微型PEG酸，其中n係如上文所定義。適用於烷基化具有微型PEG之胺基酸的試劑可購自供應商，諸如Peptides International(Louisville,KY)。

在特定實施例中，間隔基(例如，胺基酸、二肽、三肽、親水性雙官能間隔基或疏水性雙官能間隔基)長度為3至10個原子(例如，6至10個原子(例如，6、7、8、9或10個原子))。在更特定實施例中，間隔基長度為約3至10個原子(例如，6至10個原子)且非原生烷基為C12至C18烷基，例如C14烷基、C16烷基，因此間隔基與烷基之總長度為14至28個原子，例如，約14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28個原子。在一些實施例中，間隔基與烷基之長度為17至28個(例如，19至26個、19至21個)原子。

根據一些或任何前述實施例，雙官能間隔基可為包含長度為3至10個原子之胺基酸主鏈之合成或天然產生之胺基酸(包括(但不限於)本文所述之任何彼等胺基酸)(例如，6-胺基己酸、5-胺基戊酸、7-胺基庚酸及8-胺基辛酸)。或者，間隔基可為具有長度為3至10個原子(例如，6至10個原子)之肽主鏈的二肽或三肽間隔基。二肽或三肽間隔基之各胺基酸可與二肽或三肽之其他胺基酸相同或不同且可獨立地選自由以下組成之群：天然產生或編碼及/或非編碼或非天然產生之胺基酸，包括例如天然產生之胺基酸(Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr)之任何D或L異構體，或選自由以下組成之群之非天然產生或非編碼胺基酸之任何D或L異構體：β-丙胺酸(β-Ala)、N-α-甲基-丙胺酸(Me-Ala)、胺基丁酸(Abu)、γ-胺基丁酸(γ-Abu)、胺基己酸(ε-Ahx)、胺基異丁酸(Aib)、胺基甲基吡咯甲酸、胺基哌啶甲酸、胺基絲胺酸(Ams)、胺基四氫哌喃-4-甲酸、精胺酸N-甲氧基-N-甲基醯胺、β-天冬胺酸(β-Asp)、氮雜環丁烷甲酸、3-(2-苯并噻唑基)丙胺酸、α-第三丁基甘胺酸、2-胺基-5-脲基-正戊酸(瓜胺酸、Cit)、β-環己基丙胺酸(Cha)、乙醯胺基甲基-半胱胺酸、二胺基丁酸(Dab)、二胺基丙酸(Dpr)、二羥基苯丙胺酸(DOPA)、二甲基噻唑啶(DMTA)、γ-麩胺酸(γ-Glu)、高絲胺酸(Hse)、羥基脯胺酸(Hyp)、異白胺酸N-甲氧基-N-甲基醯胺、甲基-異白胺酸(MeIle)、異哌啶甲酸(Isn)、甲基-白胺酸(MeLeu)、甲基-離胺酸、二甲基-離胺酸、三甲基-離胺酸、甲醯基脯胺酸、甲硫胺酸-亞碸(Met(O))、甲硫胺酸-碸(Met(O₂))、正白胺酸(Nle)、甲基-正白胺酸(Me-Nle)、正纈胺酸(Nva)、鳥胺酸(Orn)、對胺基苯甲酸(PABA)、青黴胺(Pen)、甲基苯丙胺酸(MePhe)、4-氯苯丙胺酸(Phe(4-Cl))、4-氟苯丙胺酸(Phe(4-F))、4-硝基苯丙胺酸(Phe(4-NO₂))、4-氰基苯丙胺酸((Phe(4-CN))、苯基甘胺酸(Phg)、哌啶基丙胺酸、哌啶基甘胺酸、3,4-去氫脯胺酸、吡咯啶基丙胺酸、肌胺酸(Sar)、硒代半胱胺酸(Sec)、O-苄基-磷酸絲胺酸、4-胺基-3-羥基-6-甲基庚酸(Sta)、4-胺基-5-環己基-3-羥基戊酸(ACHPA)、4-胺基-3-羥基-5-苯基戊酸(AHPPA)、1,2,3,4，-四氫-異喹啉-3-甲酸(Tic)、四氫哌喃甘胺酸、噻吩基丙胺酸(Thi或硫代Ala)、O-苄基-磷酸酪胺酸、O-磷酸酪胺酸、甲氧基酪胺酸、乙氧基酪胺酸、O-(雙-二甲基胺基-膦酸基)-酪胺酸、硫酸酪胺酸四丁基胺、甲基-纈胺酸(MeVal)及烷基化3-巰基丙酸。在例示性態樣中，間隔基為Cys殘基。

在一些實施例中，間隔基包含總體負電荷，例如，包含一個或兩個帶負電荷胺基酸。在一些實施例中，二肽不為通用結構A-B之任何二肽，其中A係選自由Gly、Gln、Ala、Arg、Asp、Asn、Ile、Leu、Val、Phe及Pro組成之群，其中B係選自由Lys、His、Trp組成之群。在一些實施例中，二肽間隔基之胺基酸係選自由Ala、β-Ala、Leu、Pro、γ-胺基丁酸、Glu及γ-Glu組成之群。

在一些例示性實施例中，藉由間隔基之胺、羥基或硫醇之烷基化使GIP促效劑肽包含烷基，該間隔基係在GIP促效劑肽之位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43(例如，在位置10、14及40中之任何一或多個位置)或在C端胺基酸處連接至胺基酸之側鏈。

在更特定實施例中，烷基係在肽類似物之位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43中之任何位置(例如，在位置10、14及40中之任何一或多個位置)連接至胺基酸且間隔基與烷基之長度為14至28個原子。在一些態樣中，位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43中之任何位置(例如，在位置10、14及40中之任何一或多個位置)之胺基酸為式I胺基酸，例如，Lys或式I所述之雙取代胺基酸。在更特定實施例中，肽類似物缺乏分子內橋鍵，例如，共價分子內橋鍵。胰高血糖素類似物例如可為包含一或多個用於穩定類似物之α螺旋之α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)的胰高血糖素類似物。

烷基

烷基化胺基酸之非原生烷基可具有任何尺寸(例如，任何長度碳鏈)，且可為直鏈或分支鏈。在一些特定實施例中，烷基為C4至C30烷基。舉例而言，烷基可為C4烷基、C6烷基、C8烷基、C10烷基、 C12烷基、C14烷基、C16烷基、C18烷基、C20烷基、C22烷基、C24烷基、C26烷基、C28烷基或C30烷基中之任一者。在一些實施例中，烷基為C8至C20烷基，例如，C12至C18烷基、C14烷基或C16烷基。在例示性實施例中，烷基為C16至C30烷基，例如，C20至C28烷基、C16至C22烷基。

在例示性實施例中，烷基化胺基酸之非原生烷基為具有任何長度之官能化直鏈或分支鏈碳鏈。在一些特定實施例中，碳鏈為C4至C30烷基。舉例而言，烷基可為C4烷基、C6烷基、C8烷基、C10烷基、C12烷基、C14烷基、C16烷基、C18烷基、C20烷基、C22烷基、C24烷基、C26烷基、C28烷基或C30烷基中之任一者。在一些實施例中，烷基為C8至C20烷基，例如，C12至C18烷基、C14烷基或C16烷基。在例示性實施例中，烷基為C16至C30烷基，例如，C20至C28烷基、C16至C22烷基。在例示性態樣中，官能化碳鏈包含官能基，包括(但不限於)羧基、巰基、胺、羰遊基、硫氧基或醯胺基。

在例示性實施例中，非原生烷基為具有結構-Cx-COOH之羧基官能化碳鏈，其中x為整數，視情況為介於4-30之整數(例如，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30)，其中羧基碳為α碳且Cx之碳各自指定為β、γ、δ、ε等，其中β碳係連接至α碳。舉例而言，其中，當x為4時，非原生烷基將指定如下：C_ε-C_δ-C_γ-C_β-C_αOOH。在例示性實施例中，羧基官能化碳鏈係經由除羧基碳以外之碳(亦即，Cx之一個碳)連接。在例示性態樣中，羧基官能化碳鏈係經由羧基官能化碳鏈之β、γ、δ或ε碳連接至烷基化胺基酸之側鏈。在替代實施例中，羧基官能化碳鏈係經由羧基官能化碳鏈之β、γ、δ或ε碳連接至間隔基之側鏈，該間隔基連接至烷基化胺基酸。在例示性態樣中，羧基官能化碳鏈係經由羧基官能化碳鏈之β碳連接至烷基化胺基酸之側鏈。在替代實施例中，羧基官能化碳鏈係經由羧基官能化碳鏈之β碳連接至間隔基之側鏈，該間隔基連接至烷基化胺基酸。

連接烷基之方法

連接烷基至胺基酸之方法為此項技術中已知。舉例而言，經離去基活化之烷基可與包含親核側鏈(例如，包含胺、羥基或硫醇之側鏈)之胺基酸反應。離去基在例示性態樣中為鹵素、磺酸酯、吡啶基硫醇、銨鹽或苯氧基。

在例示性實施例中，待連接至烷基之胺基酸為Cys殘基且硫原子經烷基化，例如，「S-烷基化」。在例示性實施例中，Cys之硫與包含結構-Cx-COOH之羧基官能化碳鏈之烷基的離去基反應，其中x為整數，視情況為介於4-30之整數(例如，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30)，其中羧基碳為α碳且Cx之碳各自指定為β、γ、δ、ε等，其中β碳係連接至α碳。舉例而言，其中，當x為4時，非原生烷基將指定如下：C_ε-C_δ-C_γ-C_β-C_αOOH。在例示性實施例中，羧基官能化碳鏈係經由除羧基碳以外之碳(亦即，Cx之一個碳)連接。在例示性態樣中，羧基官能化碳鏈係經由羧基官能化碳鏈之β、γ、δ或ε碳連接至烷基化胺基酸之側鏈。在替代實施例中，羧基官能化碳鏈係經由羧基官能化碳鏈之β、γ、δ或ε碳連接至間隔基之側鏈，該間隔基連接至烷基化胺基酸。在例示性態樣中，羧基官能化碳鏈係經由羧基官能化碳鏈之β碳連接至烷基化胺基酸之側鏈。在替代實施例中，羧基官能化碳鏈係經由羧基官能化碳鏈之β碳連接至間隔基之側鏈，該間隔基連接至烷基化胺基酸。

在例示性態樣中，離去基為鹵素(諸如碘、溴、氯或氟)、磺酸酯(諸如甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯或氟磺酸酯)、吡啶基硫醇、銨鹽、重氮鹽、硝酸鹽、磷酸鹽或苯氧基。

在特定態樣中，烷基包含碘離去基及包含總共16個碳之羧基官能化碳鏈(包括羧酸酯基之碳)。經該碘-羧酸烷基化可稱為「S-棕櫚基烷基化」，其與「S-棕櫚酸酯烷基化」同義。S-棕櫚基烷基化之其他示例提供於本文實例1及實例20中。

額外烷基

肽在一些態樣中在除位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43(例如，位置10、14及40中之任何一或多個位置)以外之位置處包含烷基化胺基酸。烷基化胺基酸之位置可為GIP促效劑肽內之任何位置，包括位置1-29中之任何位置、C端至第29個胺基酸之位置(例如，位置30、31、32、33、34、35、36、44、45、46、47等、C端延長物內之位置或C端之胺基酸)，視情況連同位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43中之任何位置(例如，位置10、14及40中之任何一或多個位置)的第二烷基化胺基酸，其限制條件為肽類似物之GIP促效劑活性得以保留(若未增強的話)。非限制性實例包括位置5、7、11、13、14、17、18、19、21、24、27、28或29。

與前述一致，在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含兩個(或兩個以上)烷基化胺基酸。在例示性態樣中，所有烷基化胺基酸皆位於位置9、10、12、13、14、16、17、20或37-43中之兩個位置(例如，位置10、14及40中之任何一或多個位置)。在例示性態樣中，肽包含位置10之第一烷基化胺基酸及位置40之第二烷基化胺基酸。

在其他例示性實施例中，胰高血糖素類似物包含連接至肽主鏈之一個胺基酸的額外烷基。兩個(或兩個以上)烷基可為以分枝或線性形式排列之相同烷基或不同烷基。舉例而言，為達成分枝形式，胰高血糖素類似物可包含連接至間隔基之一個烷基化胺基酸(其為肽主鏈之一部分)，該間隔基包含至少三個官能基，其中至少兩個各自共價連接至烷基且其中一個連接至肽主鏈之烷基化胺基酸。在例示性態樣中，可經由例如包含兩個胺基(側鏈胺及α胺)以供直接連接至脂肪烷基或經由間隔基間接連接至脂肪烷基之Lys殘基來達成分枝形式。在例示性態樣中，另一間隔基可位於肽主鏈之胺基酸與包含至少三個官能基之間隔基之間。舉例而言，肽主鏈之胺基酸可連接(例如，經由其側鏈)至第一間隔基，該第一間隔基又連接至第二間隔基，其中該第二間隔基包含至少三個官能基，其中至少兩個各自共價連接至烷基且其中一個連接至第一間隔基。

在烷基呈線性形式排列之例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含直接連接至第一烷基之一個烷基化胺基酸(其為肽主鏈之一部分)，該第一烷基又連接至間隔基，該間隔基又連接至第二烷基。

雙重烷基化化合物之例示性結構可衍生自圖5A中所描繪之雙重醯化化合物。

親水性部分及烷基

包含烷基化胺基酸之GIP促效劑肽視情況進一步包含親水性部分。在一些特定實施例中，親水性部分包含聚乙二醇(PEG)鏈。在一些態樣中，親水性部分之併入係經由任何適合方法來實現，諸如本文所述方法中之任一者。就此而言，GIP促效劑肽可包含SEQ ID NO：1，其包括本文所述修飾中之任一者，其中在GIP促效劑肽之位置9、10、12、13、14、16、17、20及37-43中之任何位置(例如，位置10、14及40中之一或多個位置)之胺基酸的至少一者包含烷基且位置16、17、21、24或29、C端延長物內之位置之胺基酸或C端胺基酸中之至少一者為Cys、Lys、Orn、高Cys或Ac-Phe，其中側鏈共價鍵聯至親水性部分(例如PEG)。在一些實施例中，GIP促效劑肽之位置9、10、12、13、14、16、17、20及37-43中之任何位置(例如，位置10、14及40中之一或多個位置)之胺基酸連接(視情況經由間隔基)至烷基且該胺基酸進一步連接至親水性部分或進一步連接至Cys、Lys、Orn、高Cys 或Ac-Phe，該Cys、Lys、Orn、高Cys或Ac-Phe連接至親水性部分。

或者，烷基化胰高血糖素類似物可包含間隔基，其中該間隔基經烷基化且修飾以包含親水性部分。適合間隔基之非限制性實例包括包含一或多個選自由Cys、Lys、Orn、高Cys及Ac-Phe組成之群之胺基酸的間隔基。

在一些態樣中，GIP促效劑肽在一些實施例中係在相同胺基酸位置(其中鍵聯親水性部分)或在不同胺基酸位置經烷基化。非限制性實例包括在胰高血糖素類似物之位置9、10、12、13、14、16、17、20或40(例如，在位置10、14及40中之一或多個位置)之烷基化及在C端部分中之一或多個位置(例如，位置24、28或29、C端延長物內(例如，37-43)或C端(例如，經由添加C端Cys))之聚乙二醇化。

額外烷基實施例

在特定實施例中，包含烷基化胺基酸之GIP促效劑肽缺乏分子內橋鍵，例如，共價分子內橋鍵(例如，內醯胺橋鍵)。

α螺旋之穩定化及α螺旋穩定化胺基酸

不受任何特定理論限制，作為胰高血糖素類似物之GIP促效劑肽包含螺旋狀結構，例如，α螺旋。在一些或任何實施例中，GIP促效劑肽包含穩定α螺旋狀結構之胺基酸。因此，在一些態樣中，GIP促效劑肽包含一或多個α螺旋穩定化胺基酸。如本文所用之術語「α螺旋促進胺基酸」可與術語「α螺旋穩定化胺基酸」互換使用且係指使GIP促效劑肽之α螺旋之穩定性增加且作為GIP促效劑肽之一部分的胺基酸。α螺旋促進胺基酸在此項技術中已知。參見例如Lyu等人，Proc Natl Acad Sci U.S.A.88：5317-5320(1991)；Branden及Tooze,Introduction to Protein Structure,Garland Publishing,New York,NY,1991；Fasman,Prediction of Protein Structure and the Principles of Protein Conformation,Fasman編，Plenum,NY,1989。適於本文目的之α螺旋促進胺基酸包括(但不限於)：丙胺酸、正纈胺酸、正白胺酸、α胺基丁酸、α-胺基異丁酸(AIB)、白胺酸、異白胺酸、纈胺酸及其類似物。在一些實施例中，α螺旋促進胺基酸為作為天然產生蛋白質中存在之α螺旋之一部分的任何胺基酸，例如，Leu、Phe、Ala、Met、Gly、Ile、Ser、Asn、Glu、Asp、Lys、Arg。

在例示性實施例中，α螺旋促進胺基酸與甘胺酸或丙胺酸相比向α螺旋提供更大穩定性。在例示性實施例中，α螺旋促進胺基酸為α,α雙取代胺基酸，例如AIB。

α螺旋：α螺旋促進胺基酸之位置

在本發明之一些或任何實施例中，GIP促效劑肽包含與原生胰高血糖素(SEQ ID NO：1)類似之胺基酸序列且GIP促效劑肽在肽類似物之位置16-21中之一或多個位置(例如，位置16、17、18、19、20、21之一或多個位置)包含至少一個α螺旋促進胺基酸。在一些或任何實施例中，肽類似物在位置16、17、20及21中之一個、兩個、三個或所有位置包含α螺旋促進胺基酸。

α螺旋：α,α雙取代胺基酸

在一些或任何實施例中，α螺旋促進胺基酸為α,α雙取代胺基酸。在特定實施例中，α,α雙取代胺基酸包含R¹及R²，其各自鍵結至α碳，其中R¹及R²各自獨立地選自由視情況經羥基、醯胺、硫醇、鹵基取代之C1-C4烷基組成之群，或R¹及R²與其所連接之α碳一起形成環(例如，C3-C8環)。在例示性實施例中，R¹及R²各自選自由甲基、乙基、丙基及正丁基組成之群，或R¹及R²一起形成環辛烷或環庚烷(例如，1-胺基環辛烷-1-甲酸)。在例示性實施例中，R¹與R²相同。在其他實施例中，R¹與R²不同。在例示性態樣中，R¹及R²各為C1-C4烷基。在一些態樣中，R¹及R²各為C1或C2烷基。在例示性實施例中，R¹及R²各為甲基，因此α,α雙取代胺基酸為α-胺基異丁酸(AIB)。在其他例示性實施例中，α,α雙取代胺基酸為ACPC。

在一些態樣中，本文所述之GIP促效劑肽包含一或多個α,α雙取代胺基酸且GIP促效劑肽特定地缺乏共價分子內橋鍵(例如，內醯胺)，因為α,α雙取代胺基酸能夠在不存在共價橋鍵之情況下穩定α螺旋。在一些態樣中，GIP促效劑肽在C端(位置12-29周圍)包含一或多個α,α雙取代胺基酸。在一些或任何實施例中，GIP促效劑肽之位置16、17、18、19、20、21、24或29中之一個、兩個、三個、四個或四個以上位置或位置16、17、18、19、20或21中之一個、兩個、三個、四個、五個或所有位置經α,α-雙取代胺基酸(例如，胺基異丁酸(AIB)、經選自甲基、乙基、丙基及正丁基之相同或不同基團或經環辛烷或環庚烷(例如，1-胺基環辛烷-1-甲酸)雙取代之胺基酸)取代。舉例而言，在不存在分子內橋鍵(例如，非共價分子內橋鍵(例如，鹽橋鍵)或共價分子內橋鍵(例如，內醯胺))之情況下，位置20經AIB取代增強GIP活性。在一些或任何實施例中，位置16、20、21或24中之一個、兩個、三個或三個以上位置經AIB取代。在例示性實施例中，原生人類胰高血糖素(SEQ ID NO：1)之對應於位置2、16及20之一個、兩個或所有胺基酸經諸如AIB之α,α雙取代胺基酸取代。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含位置2與16或位置2與20之AIB。在其他例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含位置2之D-Ser及位置16或位置20之AIB。

α螺旋：分子內橋鍵

在一些例示性實施例中，α螺旋促進胺基酸為經由分子內橋鍵鍵聯至GIP促效劑肽之另一胺基酸之胺基酸。在該等實施例中，經由分子內橋鍵鍵聯之此兩種胺基酸各自視為α螺旋促進胺基酸。在例示性實施例中，GIP促效劑肽包含一或兩個分子內橋鍵。在例示性實施例中，GIP促效劑肽包含一個分子內橋鍵以及至少一個其他α螺旋促進胺基酸(例如，α,α-雙取代胺基酸)。

在一些實施例中，分子內橋鍵為經由非共價鍵(包括例如凡得瓦爾(van der Waals)相互作用、氫鍵、離子鍵、疏水相互作用、偶極-偶極相互作用及其類似作用)連接GIP促效劑肽之兩個部分的橋鍵。就此而言，胰高血糖素類似物包含非共價分子內橋鍵。在一些實施例中，非共價分子內橋鍵為鹽橋鍵。

在一些實施例中，分子內橋鍵為經由共價鍵連接GIP促效劑肽之兩個部分的橋鍵。就此而言，GIP促效劑肽包含共價分子內橋鍵。

在一些實施例中，在間隔3個胺基酸之兩個胺基酸(例如，位置i及i+4之胺基酸，其中i為介於12與25之間的任何整數(例如，12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24及25))之間形成分子內橋鍵(例如，非共價分子內橋鍵、共價分子內橋鍵)。更特定言之，胺基酸對12與16、16與20、20與24或24與28(i=12、16、20或24之胺基酸對)之側鏈彼此鍵聯且因此穩定α螺旋。或者，i可為17。在一些特定實施例中，GIP促效劑肽在胺基酸17與21之間包含分子內橋鍵。在一些特定實施例中，GIP促效劑肽在位置16與20或12與16之胺基酸之間包含分子內橋鍵，且在位置17與21之胺基酸之間包含第二分子內橋鍵。本文涵蓋包含一或多個分子內橋鍵之GIP促效劑肽。在位置i及i+4之胺基酸係藉由分子內橋鍵接合之特定實施例中，連接子之尺寸為約8個原子，或約7-9個原子。

在其他實施例中，在間隔2個胺基酸之兩個胺基酸(例如，位置j及j+3之胺基酸，其中j為介於12與26之間的任何整數(例如，12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25及26))之間形成分子內橋鍵。在一些特定實施例中，j為17。在位置j及j+3之胺基酸係藉由分子內橋鍵接合之特定實施例中，連接子之尺寸為約6個原子，或約5至7個原子。

在其他實施例中，在間隔6個胺基酸之兩個胺基酸(例如，位置k 及k+7之胺基酸，其中k為介於12與22之間的任何整數(例如，12、13、14、15、16、17、18、19、20、21及22))之間形成分子內橋鍵。在一些特定實施例中，k為12、13或17。在一例示性實施例中，k為17。

α螺旋：分子內橋鍵中所涉及之胺基酸

能夠鍵結(共價地或非共價地)形成六原子鍵聯橋鍵之胺基酸配對之實例包括Orn與Asp、Glu與式I胺基酸(其中n為2)，及高麩胺酸與式I胺基酸(其中n為1)，其中式I為：

能夠鍵結形成七原子鍵聯橋鍵之胺基酸配對之實例包括Orn-Glu(內醯胺環)；Lys-Asp(內醯胺)；或高ser-高glu(內酯)。可形成八原子連接子之胺基酸配對之實例包括Lys-Glu(內醯胺)；高lys-Asp(內醯胺)；Orn-高glu(內醯胺)；4-胺基Phe-Asp(內醯胺)；或Tyr-Asp(內酯)。可形成九原子連接子之胺基酸配對之實例包括高lys-Glu(內醯胺)；Lys-高glu(內醯胺)；4-胺基Phe-Glu(內醯胺)；或Tyr-Glu(內酯)。此等胺基酸上之任何側鏈可另外經其他化學基團取代，只要不破壞α-螺旋之三維結構即可。一般技術者可預期將產生類似尺寸之穩定化結構及所需作用之替代配對或替代胺基酸類似物，包括化學修飾衍生物。舉例而言，高半胱胺酸-高半胱胺酸二硫橋鍵長度為6個原子且可進一步經修飾以提供所需作用。

即使無共價鍵聯，上述胺基酸配對(或一般技術者可預期之類似配對)亦可經由非共價鍵(例如，經由形成鹽橋鍵或氫鍵相互作用)對α- 螺旋提供額外穩定性。因此，可在以下配對之間形成鹽橋鍵：Orn與Glu；Lys與Asp；高絲胺酸與高麩胺酸；Lys與Glu；Asp與Arg；高Lys與Asp；Orn與高麩胺酸；4-胺基Phe與Asp；Tyr與Asp；高Lys與Glu；Lys與高Glu；4-胺基Phe與Glu；或Tyr與Glu。在一些實施例中，類似物在任何以下胺基酸對之間包含鹽橋鍵：Orn與Glu；Lys與Asp；Lys與Glu；Asp與Arg；高Lys與Asp；Orn與高麩胺酸；高Lys與Glu；及Lys與高Glu。可在其他對帶相反電荷側鏈之間形成鹽橋鍵。參見例如Kallenbach等人，Role of the Peptide Bond in Protein Structure and Folding,in The Amide Linkage：Structural Significance in Chemistry,Biochemistry,and Materials Science,John Wiley & Sons,Inc.(2000)。

在一些實施例中，非共價分子內橋鍵為疏水性橋鍵。根據一個實施例，經由在位置j及j+3或i及i+4處併入疏水性胺基酸使類似物之α螺旋穩定化。舉例而言，i可為Tyr且i+4可為Val或Leu；i可為Phe且i+4可為Met；或i可為Phe且i+4可為Ile。應瞭解，對於本文之目的，上述胺基酸配對可顛倒，因此位置i之所示胺基酸或者可位於i+4，而i+4胺基酸可位於i位置。亦應瞭解，對於j及j+3可形成適合之胺基酸配對。

α螺旋：共價分子內橋鍵

在一些實施例中，共價分子內橋鍵為內醯胺環或內醯胺橋鍵。內醯胺環之尺寸可視胺基酸側鏈之長度而改變，且在一個實施例中，藉由將鳥胺酸之側鏈鍵聯至天冬胺酸側鏈而形成內醯胺。內醯胺橋鍵及其製備方法在此項技術中已知。參見例如Houston,Jr.等人，J Peptide Sci 1：274-282(2004)，及本文之實例1。在一些實施例中，類似物包含SEQ ID NO：1之經修飾序列及介於i與i+4(其中i係如上文所定義)之間的內醯胺橋鍵。在一些實施例中，GIP促效劑肽包含兩個內醯胺橋鍵：一個介於位置16與20之胺基酸之間且另一個介於位置17與 21之胺基酸之間。在一些實施例中，GIP促效劑肽包含一個內醯胺橋鍵及一個鹽橋鍵。本文在標題為「實例」之章節中描述其他例示性實施例。其他例示性實施例包括以下配對與視情況內醯胺橋鍵：位置12之Glu與位置16之Lys；位置12之原生Lys與位置16之Glu；位置16之Glu與位置20之Lys；位置16之Lys與位置20之Glu；位置20之Glu與位置24之Lys；位置20之Lys與位置24之Glu；位置24之Glu與位置28之Lys；位置24之Lys與位置28之Glu。

在一些實施例中，共價分子內橋鍵為內酯。製備內酯橋鍵之適合方法在此項技術中已知。參見例如Sheehan等人，J Am Chem Soc 95：875-879(1973)。

在一些態樣中，使用全烴交聯系統利用烯烴複分解來交聯類似物之α螺旋之一個或兩個轉角。在此情況下GIP促效劑肽包含帶有不同長度之烯烴側鏈且在j與j+3或i與i+4位置經組態為R或S立體化學之α-甲基化胺基酸。在一些實施例中，烯烴側鏈包含(CH₂)n，其中n為介於1至6之間的任何整數。在一些實施例中，對於8個原子之交聯長度，n為3。在一些實施例中，對於6個原子之交聯長度，n為2。此項技術中描述形成該等分子內橋鍵之適合方法。參見例如Schafmeister等人，J.Am.Chem.Soc.122：5891-5892(2000)；及Walensky等人，Science 305：1466-1470(2004)。在替代實施例中，類似物包含位於相鄰螺旋狀轉角上之O-烯丙基Ser殘基，該等殘基經由釕催化之閉環複分解橋接在一起。該等交聯程序描述於例如Blackwell等人，Angew,Chem.,Int.Ed.37：3281-3284(1998)中。

在特定態樣中，使用非天然硫代-二丙胺酸胺基酸(羊毛硫胺酸(lanthionine)，其已廣泛用作胱胺酸之肽模擬物)用於交聯α螺旋之一個轉角。基於羊毛硫胺酸之環化之適合方法在此項技術中已知。參見例如Matteucci等人，Tetrahedron Letters 45：1399-1401(2004)；Mayer 等人，J.Peptide Res.51：432-436(1998)；Polinsky等人，J.Med.Chem.35：4185-4194(1992)；Osapay等人，J.Med.Chem.40：2241-2251(1997)；Fukase等人，Bull.Chem.Soc.Jpn.65：2227-2240(1992)；Harpp等人，J.Org.Chem.36：73-80(1971)；Goodman及Shao,Pure Appl.Chem.68：1303-1308(1996)；及Osapay及Goodman,J.Chem.Soc.Chem.Commun.1599-1600(1993)。

在一些實施例中，使用位置i及i+7之兩個Glu殘基之間的α,ω-二胺基烷烴繫栓(例如，1,4-二胺基丙烷及1,5-二胺基戊烷)來穩定類似物之α螺旋。視二胺基烷烴繫栓之長度而定，該等繫栓導致形成長度為9個原子或9個原子以上之橋鍵。此項技術中描述用該等繫栓交聯之肽之適合製備方法。參見例如Phelan等人，J.Am.Chem.Soc.119：455-460(1997)。

在其他實施例中，使用二硫橋鍵來交聯類似物之α螺旋之一或兩個轉角。或者，使用經修飾二硫橋鍵(其中一或兩個硫原子經亞甲基置換，導致等排大環化)來穩定類似物之α螺旋。用二硫橋鍵或基於硫之環化來修飾肽之適合方法描述於例如Jackson等人，J.Am.Chem.Soc.113：9391-9392(1991)及Rudinger及Jost,Experientia 20：570-571(1964)中。

在其他實施例中，經由金屬原子由位於j與j+3或i與i+4之兩個His殘基或His與Cys對結合來穩定類似物之α螺旋。該金屬原子可為例如Ru(III)、Cu(II)、Zn(II)或Cd(II)。該等基於金屬結合之α螺旋穩定化方法在此項技術中已知。參見例如Andrews及Tabor,Tetrahedron 55：11711-11743(1999)；Ghadiri等人，J.Am.Chem.Soc.112：1630-1632(1990)；及Ghadiri等人，J.Am.Chem.Soc.119：9063-9064(1997)。

GIP促效劑肽之α螺旋或者可經由其他方式之肽環化來穩定，該等方式評述於Davies,J.Peptide.Sci.9：471-501(2003)中。可經由形成醯胺橋鍵、硫醚橋鍵、硫酯橋鍵、脲橋鍵、胺基甲酸酯橋鍵、磺醯胺橋鍵及其類似物來穩定α螺旋。舉例而言，可在C端與Cys殘基之側鏈之間形成硫酯橋鍵。或者，可經由具有硫醇之胺基酸(Cys)之側鏈及具有羧酸之胺基酸(例如，Asp、Glu)之側鏈形成硫酯。在另一方法中，諸如二羧酸(例如，辛二酸(suberic acid/octanedioic acid)等)之交聯劑可在胺基酸側鏈之兩個官能基(諸如游離胺基、羥基、硫醇基及其組合)之間引入鍵聯。

額外描述

下文提供本發明之胰高血糖素類似物之額外描述。如本文所論述，下文描述中之胺基酸位置係關於SEQ ID NO：1之胺基酸編號提及。此外，儘管下文描述係關於原生人類胰高血糖素(SEQ ID NO：1)論述，例如，SEQ ID NO：1之修飾，但此等描述未必暗示：(i)該等修飾皆存在於所有本發明所揭示之肽中；及(ii)本發明所揭示之肽之唯一製備方法係以原生人類胰高血糖素起始且修飾該序列。實際上，提供該等描述以描述本發明胰高血糖素類似物之一些實施例，且本發明之肽可在不利用原生人類胰高血糖素作為起始物質之情況下重新製備，如標題為「製備肽之方法」之章節中進一步描述。

位置1及2

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置1包含胺基酸修飾，例如，胰高血糖素類似物在位置1包含不為His之胺基酸。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物在位置1包含大型芳族胺基酸。在例示性實施例中，大型芳族胺基酸為Tyr、Phe、Trp、胺基-Phe(例如，4-胺基-Phe)、氯-Phe、磺基-Phe、4-吡啶基-Ala、甲基-Tyr或3-胺基Tyr。

在其他例示性實施例中，胰高血糖素類似物在位置1包含包括咪唑側鏈之胺基酸。在例示性態樣中，位置1之胺基酸包含式A之結構：其中R1及R2各自獨立地選自由H、(C1-6)烷基、O(C1-6)烷基、(C1-6)烷基-OH、F及(C1-C6)烷基組成之群，其中至少一個H係經F置換。

在例示性態樣中，位置1之胺基酸為胰高血糖素(SEQ ID NO：1)L-組胺酸(His)之原生殘基，或為His之衍生物(His衍生物)，例如，α原子經修飾之His衍生物。在例示性態樣中，His衍生物為D-組胺酸、去胺基組胺酸、羥基-組胺酸、乙醯基-組胺酸、高組胺酸、N-甲基組胺酸、α-甲基組胺酸、咪唑乙酸或α,α-二甲基咪唑乙酸(DMIA)。

在例示性態樣中，位置1之胺基酸包含式A之類似物結構，其中一個或兩個環氮連接至C1-C3烷基。

在其他態樣中，位置1之胺基酸為如本文所述之DPP-IV保護性胺基酸。如本文所用之術語「DPP-IV保護性胺基酸」係指達成本發明所揭示之肽針對二肽基肽酶IV(DPP IV)裂解之實質抗性的胺基酸。在一些態樣中，DPP-IV保護性胺基酸為His衍生物。

在例示性態樣中，位置1之胺基酸為包含Tyr、His、硫代Ala或Phe之側鏈的胺基酸，其中位置1之胺基酸之α碳係連接至選自由以下組成之群的結構：

(i)H₂N-(CH₂)-

(ii)H₂N-

(iii)H(乙醯基)N-(CH₂)_0-1-；及

(iv)H-或CH₃-。

如本文所用之術語「硫代Ala」意謂2-噻吩基丙胺酸或2-噻吩丙胺酸。硫代Ala具有以下結構：

在例示性態樣中，位置1之胺基酸包含以下結構：

其中R為Tyr、His、硫代Ala或Phe之側鏈，其中X為以下中之一者：

(i)H₂N-(CH₂)-

(ii)H₂N-

(iii)H(乙醯基)N-(CH₂)_0-1-；及

(iv)H-或CH₃-。

當胺基酸包含連接至α碳(替代α NH₂)之H₂N-(CH₂)-之結構時，胺基酸可視為胺基酸之「β-2」形式，例如，β-2-L-Tyr、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala。

當胺基酸包含連接至α碳(替代α NH₂)之H(乙醯基)N-之結構時，胺基酸可視為胺基酸之「乙醯基」或「乙醯化」形式，例如，乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala。當胺基酸包含H(乙醯基)N-(CH₂)-時，胺基酸可視為胺基酸之「乙醯基-β-2-」形式，例如，乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala、乙醯基β-2-D-His、乙醯基β-2-D-Tyr、乙醯基β-2-D-硫代Ala。

當胺基酸包含連接至α碳(替代α NH₂)之結構H-時，胺基酸可視為胺基酸之「去胺基」形式，例如，去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基D-His、去胺基D-Tyr、去胺基D-硫代Ala。

當胺基酸包含連接至α碳(替代α NH₂)之CH₃-之結構時，胺基酸可視為胺基酸之「去胺基-β-2」形式，例如，去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基β-2-L-硫代Ala、去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala。

當胺基酸包含連接至α碳之H₂N-時，胺基酸可視為包含未經修飾之α胺基之胺基酸且可為胺基酸之L-立體異構體或D-立體異構體，例如，D-His、D-Tyr、D-硫代Ala。

在例示性態樣中，位置1之胺基酸不同於L-His、L-Tyr及L-Phe。

在例示性實施例中，位置1之胺基酸係選自由以下組成之群：乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基L-Phe、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala、乙醯基D-Phe、乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala、乙醯基β-2-L-Phe、乙醯基β-2-D-His、乙醯基β-2-D-Tyr、乙醯基β-2-D-硫代Ala、乙醯基β-2-D-Phe、去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基L-Phe、去胺基D-His、去胺基D-Tyr、去胺基D-硫代Ala、去胺基D-Phe、去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基β-2-L-硫代Ala、去胺基β-2-L-Phe、去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、去胺基β-2-D-Phe、D-His、D-Tyr、D-硫代Ala、D-Phe、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β-2-D-Phe、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala、β-2-L-Phe及L-硫代Ala。

在例示性實施例中，位置1之胺基酸係選自乙醯基D-Tyr、乙醯基D-His、去胺基Tyr、D-Tyr、D-His及乙醯基-D-Phe。

在一些實施例中，本發明所揭示之肽包含位置2之DPP-IV保護性胺基酸。在一些態樣中，DPP-IV保護性胺基酸為D-絲胺酸、D-丙胺酸、纈胺酸、甘胺酸、N-甲基絲胺酸、N-甲基丙胺酸或α,胺基異丁酸(AIB)中之一者。在一些態樣中，DPP-IV保護性胺基酸為α,α-雙取代胺基酸。在一些態樣中，α,α-雙取代胺基酸包含R1及R2，其各自鍵結至α碳，其中R1及R2各自獨立地選自由視情況經羥基、醯胺、硫醇、鹵基取代之C1-C4烷基組成之群，或R1及R2與其所連接之α碳一起形成環。在一些態樣中，α,α-雙取代胺基酸為AIB或1-胺基環丙烷-1-甲酸酯(ACPC)。

如本文所用之術語「C₁-C_n烷基」(其中n可為1至6)表示具有一個至指定數目碳原子之分支鏈或直鏈烷基。典型C₁-C₆烷基包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基及其類似基團。

在例示性實施例中，DPP-IV保護性胺基酸為Ser之D-異構體(D-Ser)或其保守胺基酸取代。舉例而言，DPP-IV保護性胺基酸可包含-(C1-C4烷基)OH之側鏈結構。視情況，當側鏈結構包含-(C3烷基)OH或-(C4烷基)OH時，碳鏈可為直鏈或分支鏈。

在例示性實施例中，位置2之DPP-IV保護性胺基酸係選自由Ala、Gly、Pro、肌胺酸及Val組成之群。在例示性態樣中，位置2之DPP-IV保護性胺基酸為Ala或Gly。

在例示性態樣中，當DPP-IV保護性胺基酸為D-Ser且位置1之胺基酸為His時，GIP促效劑肽未結合至異源部分，例如，親水性部分(例如PEG)。在本發明之其他態樣中，DPP-IV保護性胺基酸不為D-絲胺酸。

在例示性態樣中，當位置2之胺基酸為Ala時，位置1之胺基酸為胺基酸之D-立體異構體。

在例示性實施例中，胰高血糖素類似物在位置1及位置2包含選自由以下組成之群的一對胺基酸：

在例示性態樣中，位置1之胺基酸包含以下結構：

其中R為His或硫代Ala之側鏈或R包含以下結構：其中R'視情況存在，且當存在時，為C_1-4伸烷基，其中X為以下中之一者：

(i)H₂N-(CH₂)-

(ii)H₂N-

(iii)H(乙醯基)N-(CH₂)_0-1-；及

(iv)H-或CH₃-。

在例示性態樣中，R'不存在且X為H。在該等態樣中，胺基酸可視為4-羥基苯基乙酸。

位置3

在一些實施例中，與在位置3具有原生胰高血糖素殘基(Gln)之匹配對照肽相比，胰高血糖素類似物在位置3包含賦予胰高血糖素類似物以針對胰高血糖素受體之降低活性的胺基酸。在一些態樣中，在位置3具有此類型胺基酸之胰高血糖素類似物具有原生胰高血糖素針對胰高血糖素受體之活性的約10%或10%以下，例如，約1-10%、或約0.1-10%、或大於約0.1%但小於約10%。在一些實施例中，胰高血糖素類似物展現原生胰高血糖素活性之約0.5%、約1%或約7%。在例示性態樣中，位置3之胺基酸為酸性、鹼性或疏水性胺基酸殘基，例如，麩胺酸、鳥胺酸、正白胺酸。在一些態樣中，位置3之胺基酸為Ile或Leu。

在一些實施例中，胰高血糖素類似物在位置3包含SEQ ID NO：1之原生胺基酸，例如麩醯胺酸，或包含麩醯胺酸類似物。不受特定理論限制，該等包含麩醯胺酸類似物之胰高血糖素類似物不展現針對胰高血糖素受體之活性的實質損失，且在一些情況下，包含麩醯胺酸類似物之胰高血糖素類似物增強胰高血糖素受體活性。在一些實施例中，麩醯胺酸類似物在位置3包含包括結構I、II或III之側鏈之胺基酸：

其中R¹為C_0-3烷基或C_0-3雜烷基；R²為NHR⁴或C_1-3烷基；R³為C_1-3烷基；R⁴為H或C_1-3烷基；X為NH、O或S；且Y為NHR⁴、SR³或OR³。在一些實施例中，X為NH或Y為NHR⁴。在一些實施例中，R¹為C_0-2烷基或C₁雜烷基。在一些實施例中，R²為NHR⁴或C₁烷基。在一些實施例中，R⁴為H或C¹烷基。在例示性實施例中，提供包含結構I之側鏈之胺基酸，其中R¹為CH₂-S，X為NH，且R²為CH₃(乙醯胺基甲基-半胱胺酸，C(Acm))；R¹為CH₂，X為NH，且R²為CH₃(乙醯基二胺基丁酸，Dab(Ac))；R¹為C₀烷基，X為NH，R²為NHR⁴，且R⁴為H(胺甲醯基二胺基丙酸，Dap(脲))；R¹為CH₂-CH₂，X為NH，且R²為CH₃(乙醯基鳥胺酸，Orn(Ac))；或R¹為(CH₂)₃，X為NH，且R²為CH₃(乙醯基離胺酸(Ac Lys))。在例示性實施例中，提供包含結構II之側鏈的胺基酸，其中R¹為CH₂，Y為NHR⁴，且R⁴為CH₃(甲基麩醯胺酸，Q(Me))；在例示性實施例中，提供包含結構III之側鏈的胺基酸，其中R¹為CH₂且R⁴為H(甲硫胺酸-亞碸，M(O))；在特定實施例中，位置3之胺基酸係經Dab(Ae)取代。

在一些實施例中，胰高血糖素類似物在位置3包含：(i)脂族胺基酸，例如，Ala、Val、正白胺酸(Nle)或正纈胺酸(NorVal)；(ii)具有結構S1之側鏈之胺基酸：-(CH₂)n-X

[結構S1]

其中n為1至4之整數；且其中X為SCH₃、S(O)CH₃；或SOO；或(iii)具有結構S2之側鏈之胺基酸：-(CH₂)n-OH

[結構S2]

其中n為1至4之整數。

在例示性態樣中，具有結構S1之側鏈之胺基酸為Met、甲硫胺酸亞碸或甲硫胺酸碸。在例示性態樣中，具有結構S2之側鏈之胺基酸為高絲胺酸。不受特定理論限制，該等胰高血糖素類似物維持一些胰高血糖素活性。

位置7

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置7包含胺基酸修飾，例如，胰高血糖素類似物在位置7包含除Thr以外之胺基酸。在一些態樣中，位置7之胺基酸為大型脂族胺基酸，例如，Ile、Leu、Ala及其類似物。不受特定理論限制，在位置7包含該胺基酸之胰高血糖素類似物咸信展現針對GLP-1受體之活性急劇降低。

位置9

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置9包含胺基酸修飾，例如，胰高血糖素類似物在位置9包含除Asp以外之胺基酸。在一些實施例中，胰高血糖素類似物包含除Asp以外之帶負電荷胺基酸，例如，Glu、高麩胺酸、氧化半胱胺酸、高氧化半胱胺酸。在一些態樣中，位置9之胺基酸為如本文所論述之醯化胺基酸或烷基化胺基酸。

位置10

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置10包含胺基酸修飾，例如，胰高血糖素類似物在位置10包含除Tyr以外之胺基酸。在一些態樣中，位置10之胺基酸為Trp。不受特定理論限制，在位置10包含該胺基酸之胰高血糖素類似物咸信展現針對GIP受體、GLP-1受體及/或胰高血糖素受體之活性與在位置10具有Tyr之相應肽相比未降低。

在一些實施例中，胰高血糖素類似物包含如本文所論述之醯化胺基酸或烷基化胺基酸。

位置11

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置11包含胺基酸修飾，例如，胰高血糖素類似物在位置11包含除Ser以外之胺基酸。在一些態樣中，位置11之胺基酸為小型脂族胺基酸，例如，Gly或Ala。不受特定理論限制，在位置10包含該胺基酸之胰高血糖素類似物咸信展現針對胰高血糖素受體之活性降低。

位置12

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置12包含胺基酸修飾，例如，胰高血糖素類似物在位置12包含除Lys以外之胺基酸。在一些態樣中，位置12之胺基酸為大型脂族非極性胺基酸，視情況為異白胺酸。在一些態樣中，位置12之胺基酸為Arg。不受特定理論限制，包含大型脂族非極性胺基酸(例如Ile)之胰高血糖素類似物展現針對GIP受體之活性增強。在一些實施例中，胰高血糖素類似物包含如本文所論述之醯化胺基酸或烷基化胺基酸。

位置15

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置15包含胺基酸修飾，例如，胰高血糖素類似物在位置15包含除Asp以外之胺基酸。在一些態樣中，位置15之胺基酸缺失或為麩胺酸、高麩胺酸、氧化半胱胺酸或高氧化半胱胺酸。不受特定理論限制，該等胰高血糖素類似物展現改良之穩定性，例如，藉由降低類似物隨時間之降解或裂解，尤其在酸性或鹼性緩衝液中，例如pH值在5.5至8範圍內的緩衝液。在一些實施例中，包含此修飾之胰高血糖素類似物在25℃下24小時後保持原始類似物之至少75%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%。

位置16

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置16包含胺基酸修飾，例如，胰高血糖素類似物在位置16包含除Ser以外之胺基酸。在一些態樣中，位置16之胺基酸為麩胺酸或具有另一帶負電荷胺基酸(具有長度為4個原子之側鏈)、或者具有麩醯胺酸、高麩胺酸或高氧化半胱胺酸、或具有含至少一個雜原子(例如N、O、S、P)之側鏈之帶電荷胺基酸中之任一者並且側鏈長度為約4個(或3-5個)原子。在一些實施例中，胰高血糖素類似物在位置16包含選自由麩胺酸、麩醯胺酸、高麩胺酸、高氧化半胱胺酸、蘇胺酸或甘胺酸組成之群之胺基酸或為選自由麩胺酸、麩醯胺酸、高麩胺酸及高氧化半胱胺酸組成之群之胺基酸。

不受特定理論限制，該等胰高血糖素類似物展現增強之穩定性，例如，藉由降低肽隨時間之降解，尤其在酸性或鹼性緩衝液中，例如pH值在5.5至8範圍內的緩衝液。該等胰高血糖素類似物不易經受Asp15-Ser16肽鍵之裂解。

在一些實施例中，位置16之胺基酸為帶負電荷胺基酸，視情況組合位置20之α螺旋促進胺基酸(例如，α,α雙取代胺基酸或AIB)。該等胰高血糖素類似物展現GIP活性。

在替代實施例中，胰高血糖素類似物在位置16包含Thr或如上文所述之α螺旋促進胺基酸。在一些實施例中，α螺旋促進胺基酸為AIB或Glu。

在一些態樣中，位置16之胺基酸為帶正電荷胺基酸，例如，式IV：其中n為1至16、或1至10、或1至7、或1至6、或2至6、或2或3或4或5，R₁及R₂各自獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₁₈烷基、(C₁-C₁₈烷基)OH、(C₁-C₁₈烷基)NH₂、(C₁-C₁₈烷基)SH、(C₀-C₄烷基)(C₃-C₆)環烷基、(C₀-C₄烷基)(C₂-C₅雜環基)、(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇及(C₁-C₄烷基)(C₃-C₉雜芳基)，其中R₇為H或OH。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物之位置16之胺基酸為Lys。

在一些實施例中，胰高血糖素類似物在位置16包含如本文所論述之醯化胺基酸或烷基化胺基酸。

在額外實施例中，位置16之胺基酸為包含結合至異源部分之側鏈的胺基酸，如本文在標題為「結合物」之章節下所描述。

在一些實施例中，胰高血糖素類似物包含位置16之脂族胺基酸。舉例而言，胰高血糖素類似物在胰高血糖素類似物之位置16可具有Gly、Ala、Val、Leu或Ile。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含小型脂族殘基，例如，Gly、Ala。

在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含包括咪唑側鏈之胺基酸。在例示性態樣中，位置16之胺基酸包含式A之結構：其中R1及R2各自獨立地選自由以下組成之群：H、(C1-6)烷基、O(C1-6)烷基、(C1-6)烷基-OH、F及(C1-C6)烷基，其中至少一個H經F置換。在例示性態樣中，位置16之胺基酸包含式A之類似物結構，其中一個或兩個環氮連接至C1-C3烷基。

在例示性態樣中，位置16之胺基酸為L-組胺酸(His)。在其他態樣中，位置16之胺基酸為His之衍生物(His衍生物)，其中一些描述於本文中。參見例如「 位置1 」下之教示。

位置17及18

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置17及18中之任一個位置或兩個位置包含胺基酸修飾，以使得位置17及18之二元Arg-Arg位點得以消除。在一些實施例中，胰高血糖素類似物在位置17及18中之一個或兩個位置包含除Arg以外之胺基酸。不受任何特定理論限制，咸信二元位點之消除改良胰高血糖素類似物之活體內功效。在一些態樣中，位置17之胺基酸不為鹼性胺基酸。在一些態樣中，位置17之胺基酸為脂族胺基酸。在一些實施例中，位置17之胺基酸係經如本文所述之另一胺基酸(例如，包含親水性部分之胺基酸、α螺旋促進胺基酸)取代。在一些實施例中，α螺旋促進胺基酸與j+3或i+4之胺基酸形成非共價分子內橋鍵。在一些態樣中，位置17之胺基酸為Gln。

在其他態樣中，本發明之胰高血糖素類似物在位置17包含包括咪唑側鏈之胺基酸。在例示性態樣中，位置17之胺基酸包含式A之結構：其中R1及R2各自獨立地選自由以下組成之群：H、(C1-6)烷基、O(C1-6)烷基、(C1-6)烷基-OH、F及(C1-C6)烷基，其中至少一個H經F置換。在例示性態樣中，位置17之胺基酸包含式A之類似物結構，其中一個或兩個環氮連接至C1-C3烷基。

在例示性態樣中，位置17之胺基酸為L-組胺酸(His)。在其他態樣中，位置17之胺基酸為His之衍生物(His衍生物)，其中一些描述於本文中。參見例如「 位置1 」下之教示。

在一些態樣中，位置18之胺基酸不為鹼性胺基酸。在一些態樣中，位置18之胺基酸為脂族胺基酸。在一些實施例中，位置18之胺基酸為小型脂族胺基酸，例如Ala。

在一些特定態樣中，位置18之胺基酸為小型脂族胺基酸，例如Ala，且位置17之胺基酸為Arg。在其他態樣中，位置18之胺基酸為小型脂族胺基酸，例如Ala，且位置17之胺基酸為Gln。

在一些態樣中，位置17之胺基酸為包含結合至異源部分之側鏈的胺基酸，如本文在標題為「結合物」之章節下所述。

位置19

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置19包含胺基酸修飾，例如，胰高血糖素類似物在位置19包含除Ala以外之胺基酸。在一些態樣中，位置19之胺基酸為α螺旋促進胺基酸(例如，α,α雙取代胺基酸或AIB)。不受任何特定理論限制，與其中位置19之胺基酸為原生胺基酸殘基Ala的匹配對照肽相比，包含α,α雙取代胺基酸(例如AIB)之胰高血糖素類似物展現降低之胰高血糖素促效劑活性。

位置20

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置20包含胺基酸修飾，例如，位置20之胺基酸為除Gln以外之胺基酸。在一些態樣中，位置20之胺基酸為α螺旋促進胺基酸，例如如上文所述。在一些態樣中，位置20之胺基酸為α,α雙取代胺基酸，例如，AIB、ACPC。在一些實施例中，α螺旋促進胺基酸與j-3或i-4之胺基酸形成非共價分子內橋鍵。

在一些特定實施例中，胺基酸為具有帶電荷或能夠氫鍵鍵結之側鏈的親水性胺基酸，且長度為至少約5個(或約4-6個)原子，例如，離胺酸、瓜胺酸、精胺酸或鳥胺酸。在其他態樣中，位置20之胺基酸為Ser、Thr、Ala或AIB。

在一些態樣中，位置20之胺基酸為如本文所論述之醯化胺基酸或烷基化胺基酸。

在一些態樣中，位置20之胺基酸為包含結合至異源部分之側鏈的胺基酸，如本文在標題為「結合物」之章節下所述。

在一些態樣中，胰高血糖素類似物之位置20之胺基酸包含咪唑側鏈。在例示性態樣中，位置20之胺基酸包含式A之結構：其中R1及R2各自獨立地選自由以下組成之群：H、(C1-6)烷基、O(C1-6)烷基、(C1-6)烷基-OH、F及(C1-C6)烷基，其中至少一個H經F置換。在例示性態樣中，位置20之胺基酸包含式A之類似物結構，其中一個或兩個環氮連接至C1-C3烷基。

在例示性態樣中，位置20之胺基酸為L-組胺酸(His)。在其他態樣中，位置20之胺基酸為His之衍生物(His衍生物)，其中一些描述於本文中。參見例如「 位置1 」下之教示。

在一些態樣中，位置20之胺基酸為帶正電荷胺基酸，例如，式IV：其中n為1至16、或1至10、或1至7、或1至6、或2至6、或2或3或4或5，R₁及R₂各自獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₁₈烷基、(C₁-C₁₈烷基)OH、(C₁-C₁₈烷基)NH₂、(C₁-C₁₈烷基)SH、(C₀-C₄烷基)(C₃-C₆)環烷基、(C₀-C₄烷基)(C₂-C₅雜環基)、(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇及(C₁-C₄烷基)(C₃-C₉雜芳基)，其中R₇為H或OH。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物之位置20之胺基酸為Lys。

不受特定理論限制，該等胰高血糖素類似物展現針對GLP-1受體及/或GIP受體之活性增強或展現經由Gln之去醯胺化而發生之降解減少及/或展現增加之穩定性。

位置21

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置21包含胺基酸修飾，例如，位置21之胺基酸為除Asp以外之胺基酸。在例示性態樣中，位置21之胺基酸為Ser、Thr、Ala或AIB。在其他態樣中，位置21之胺基酸為Lys、Arg、Orn或瓜胺酸。在一些態樣中，位置21之胺基酸為Glu、高麩胺酸或高氧化半胱胺酸。在一些態樣中，位置21之胺基酸為包含結合至異源部分之側鏈的胺基酸，如本文在標題為「結合物」之章節下所述。

在一些實施例中，位置21之胺基酸為α螺旋促進胺基酸。在一些實施例中，α螺旋促進胺基酸與j-3或i-4之胺基酸形成非共價分子內橋鍵。

不受特定理論限制，該等胰高血糖素類似物展現經由Asp脫水形成環狀丁二醯亞胺中間物接著異構化為異天冬胺酸而降解所發生的降解減少及/或展現增加之穩定性。

位置23

在一些態樣中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置23包含胺基酸修飾。在一些態樣中，位置23之胺基酸為除Val以外之胺基酸，包括(但不限於)Ile。

位置24

在一些態樣中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置24包含胺基酸修飾。在一些態樣中，位置24之胺基酸為除Gln以外之胺基酸，例如，Ala、Asn、Cys。在一些態樣中，位置24之胺基酸為包含結合至異源部分之側鏈的胺基酸，如本文在標題為「結合物」之章節下所述。

位置27

在一些態樣中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置 27包含胺基酸修飾。在一些態樣中，位置27之胺基酸為除Met以外之胺基酸。在一些實施例中，胰高血糖素類似物在位置27包含防止肽氧化降解之胺基酸。在一些態樣中，位置27之胺基酸為甲硫胺酸亞碸、白胺酸、異白胺酸或正白胺酸。在一些特定實施例中，位置27之胺基酸為白胺酸或正白胺酸。

在其他態樣中，位置27之胺基酸為脂族胺基酸(例如，Gly、Ala、Val、Leu、Ile)或式IV胺基酸，如本文所述，例如Lys。在例示性實施例中，位置27之胺基酸為Val或Lys。不受任何特定理論限制，該胺基酸修飾降低胰高血糖素活性。

位置28及29

在一些態樣中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置28包含胺基酸修飾。在一些態樣中，位置28之胺基酸為除Asn以外之胺基酸。在一些態樣中，位置28之胺基酸為Ala、Ser、Thr或AIB。在一些態樣中，位置28之胺基酸為帶電荷胺基酸，例如，帶負電荷胺基酸，如本文進一步所述。參見標題為「 帶電荷C端 」之章節。在一些態樣中，位置28之胺基酸為Asp。在例示性較佳態樣中，位置28之胺基酸為Glu。

在例示性態樣中，位置28之胺基酸為如本文所述之式IV胺基酸。在例示性實施例中，胺基酸為Lys。不受任何特定理論限制，該胺基酸修飾降低胰高血糖素活性。

在一些態樣中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物在位置29包含胺基酸修飾。在一些態樣中，位置29之胺基酸為除Thr以外之胺基酸。在一些態樣中，位置29之胺基酸為脂族殘基，例如，Gly、Ala、Val、Leu、Ile。在一些態樣中，位置29之胺基酸為小型脂族胺基酸。在一些態樣中，位置29之胺基酸為Ala或Gly或Leu。在一些態樣中，位置29之胺基酸為α,α-雙取代胺基酸，諸如任何本文所述之此等α,α-雙取代胺基酸。在例示性態樣中，位置29之胺基酸為AIB。

在一些態樣中，位置29之胺基酸為包含結合至異源部分之側鏈的胺基酸，如本文在標題為「結合物」之章節下所述。

不受任何特定理論限制，當位置28為Asp且位置29為Gly時，胰高血糖素類似物經受一定程度之化學不穩定性。因此，在例示性態樣中，胰高血糖素類似物不具有位置28之Asp及位置29之Gly，且可展現增強之化學穩定性。舉例而言，在一些態樣中，胰高血糖素類似物包含位置28之Asp及位置29之除Gly以外之胺基酸。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含位置28之Asp及位置29之Gly、Ala、Val、Leu、Ile或AIB中之一者。在替代態樣中，胰高血糖素類似物包含位置29之Gly及位置28之除Asp以外之胺基酸。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含位置28之Ala、Ser、Thr、Lys、AIB或Glu及位置29之Gly。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含位置28之Glu及位置29之Gly。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含位置28之Asp或Glu及位置29之Ala。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含位置28之Asp及位置29之Leu。

帶電荷C端

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物包含一或多個將帶電荷胺基酸引入類似物之C端部分中的胺基酸取代及/或添加。在一些實施例中，該等修飾增強穩定性及溶解性。如本文所用之術語「帶電荷胺基酸」或「帶電荷殘基」係指包含在水溶液中在生理pH值下帶負電荷(亦即，去質子化)或帶正電(亦即，質子化)之側鏈的胺基酸。在一些態樣中，引入帶電荷胺基酸修飾之此等胺基酸取代及/或添加係在SEQ ID NO：1之C端位置至位置27。在一些實施例中，一個、兩個或三個(且在一些情況下，三個以上)帶電荷胺基酸經引入C端部分內(例如，C端位置至位置27)。根據一些實施例，位置28及/ 或29之原生胺基酸係經帶電荷胺基酸取代，及/或在另一實施例中，一至三個帶電荷胺基酸亦添加至類似物之C端。在例示性實施例中，一個、兩個或所有帶電荷胺基酸為帶負電荷。在一些實施例中，帶負電荷胺基酸為天冬胺酸、麩胺酸、氧化半胱胺酸、高氧化半胱胺酸或高麩胺酸。在一些態樣中，此等等修飾增加溶解性或穩定性。在一些實施例中，位置30不為帶電荷胺基酸。不受特定理論限制，帶電荷胺基酸(例如，帶負電荷胺基酸，例如Glu)降低GIP活性。

C端截短

根據一些實施例，本文所揭示之胰高血糖素類似物係藉由用一或兩個胺基酸殘基截短C端而經修飾。該等經修飾之胰高血糖素肽保持類似的針對胰高血糖素受體及GLP-1受體之活性及效能。就此而言，胰高血糖素肽可包含原生胰高血糖素類似物(SEQ ID NO：1)之胺基酸1-27或1-28，視情況具有任何本文所述之額外修飾。

電荷中性C端

在一些實施例中，相對於SEQ ID NO：1，胰高血糖素類似物包含電荷中性基團，諸如醯胺或酯，在C端以替代α羧酸酯基。不受任何特定理論限制，在例示性態樣中，該等修飾增加胰高血糖素類似物針對GLP-1受體之活性。因此，在一些實施例中，胰高血糖素類似物為醯胺化肽，以使得C端殘基包含醯胺以替代胺基酸之α羧酸酯基。如本文所用，一般提及肽或類似物意欲涵蓋具有經修飾胺基末端、羧基末端或胺基與羧基末端兩者之肽。舉例而言，包含醯胺基以替代末端羧酸之胺基酸鏈意欲由表示標準胺基酸之胺基酸序列所涵蓋。

C端延長物

在本發明之一些實施例中，胰高血糖素類似物包含與位置29之胺基酸融合之具有1-21個胺基酸之C端延長物。C端延長物可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、 19、20或21個胺基酸。在一些態樣中，C端延長物為下文在章節「結合物」中所述之任何異源肽。舉例而言，胰高血糖素類似物在位置30包含脂族殘基，例如，Gly、Ala、Val、Leu、Ile。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物在位置30包含小型脂族殘基，例如，Gly、Ala。

此外，例如，在一些態樣中，延長物包含形成Trp籠結構之胺基酸序列，例如，延長物包含胺基酸序列GPSSGAPPPS(SEQ ID NO：5)或其保守取代序列。在替代態樣中，具有1至21個胺基酸之延長物包含至少一個帶電荷胺基酸。在例示性態樣中，延長物包含胺基酸序列：X1-X2，其中X1為帶電荷胺基酸且X2為小型脂族胺基酸。在一些態樣中，X1為帶正電荷胺基酸，例如，Arg。在一些態樣中，延長物包含Arg-Gly。

在一些實施例中，延長物包含胺基酸序列SEQ ID NO：5(GPSSGAPPPS)、SEQ ID NO：6(GGPSSGAPPPS)、SEQ ID NO：7(KRNRNNIA)或SEQ ID NO：8(KRNR)。在特定態樣中，胺基酸序列係經由胰高血糖素類似物之C端胺基酸(例如，位置29之胺基酸)連接。在一些實施例中，SEQ ID NO：5-8中之任一者之胺基酸序列係經由肽鍵結合至胰高血糖素類似物之胺基酸29。在一些特定實施例中，胰高血糖素類似物之位置29之胺基酸為Gly且該Gly融合至SEQ ID NO：5-8中之任一者之一個胺基酸序列。

在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含形成此項技術中已知為Trp籠之結構的延長物(參見例如Paschek等人，Proc Natl Acad Sci USA 105(46)：17754-17759(2008))。在一些態樣中，延長物包含胺基酸序列GPSSGAPPPS(SEQ ID NO：5)或GGPSSGAPPPS(SEQ ID NO：6)或GPSSGRPPPS(SEQ ID NO：183)或具有1、2或3個保守胺基酸取代之前述序列之一的序列。在例示性態樣中，當延長物包含胺基酸序列SEQ ID NO：183時，位置28之胺基酸為帶負電荷胺基酸，例如， Asp或Glu。

其他修飾

在本申請案中通篇可見關於本發明胰高血糖素類似物之其他修飾(相對於SEQ ID NO：1)的描述。上述清單並非詳盡的，而僅具例示性。

在一些實施例中，本文所述之胰高血糖素類似物經糖基化、醯胺化、羧酸化、磷酸化、酯化、N-醯化、經由例如二硫橋鍵環化、或轉化成鹽(例如，酸加成鹽、鹼加成鹽)，及/或視情況經二聚合、多聚合、或聚合、或結合。

排除在外之肽

本發明之胰高血糖素類似物在結構上不同於以下文獻中所述之展現GIP受體促效劑活性的胰高血糖素類似物：國際專利申請案第PCT US2009/47447號(申請於2009年6月16日)；美國申請案第61/073,274號(申請於2008年6月17日)；美國申請案第61/078,171號(申請於2008年7月3日)；美國申請案第61/090,448號(申請於2008年8月20日)；美國申請案第61/151,349號(申請於2009年2月10日)；美國申請案第61/187,578號(申請於2009年6月16日)；國際專利申請案第PCT/US2010-038825號(申請於2010年6月16日)；美國臨時專利申請案第61/426,285號(申請於2010年12月22日)；美國臨時專利申請案第61/514,609號(申請於2011年8月3日)；及國際專利申請案第PCT/US2011/066164號(申請於2011年12月20日)；該等文獻之內容係以全文引用的方式併入本文中。因此，在任何或所有實施例中，本發明之胰高血糖素類似物不為以下文獻中所述之任何胰高血糖素類似物或肽：國際專利申請案第PCT/US2009/47447號(申請於2009年6月16日，且公開為WO 2010/011439)；美國申請案第61/073,274號(申請於2008年6月17日)；美國申請案第61/078,171號(申請於2008年7月3 日)；美國申請案第61/090,448號(申請於2008年8月20日)；美國申請案第61/151,349號(申請於2009年2月10日)；美國申請案第61/187,578號(申請於2009年6月16日)；國際專利申請案第PCT/US2010/038825號(申請於2010年6月16日，且公開為WO 2010/148089)；美國申請案第61/298,812號(申請於2010年1月27日)；國際專利申請案第PCT/US2011/022608號(申請於2011年1月26日，且公開為WO 2011/094337)；美國臨時專利申請案第61/426,285號(申請於2010年12月22日)；美國臨時專利申請案第61/514,609號(申請於2011年8月3日)；或國際專利申請案第PCT/US2011/066164號(申請於2011年12月20日)。在例示性實施例中，本發明之肽、胰高血糖素肽或胰高血糖素類似物不為(亦即排除)以下肽中之任何一種或所有：WO 2010/011439之SEQ ID NO：1-262；WO 2010/148089之SEQ ID NO：1-680；或PCT/US2011/022608之SEQ ID NO：1-1318；或國際專利申請案第PCT/US2011/066164號(申請於2011年12月20日)之SEQ ID NO：10-262。

在例示性實施例中，本發明之肽、胰高血糖素肽或胰高血糖素類似物不為(亦即排除)國際專利申請公開案第WO 2010/011439號之以下肽中之任何一種或所有：SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、 123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261及/或262。

在例示性實施例中，本發明之肽、胰高血糖素肽或胰高血糖素類似物不為(亦即排除)國際專利申請公開案第WO 2010/148089號之以下肽中之任何一種或所有：SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、 159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、 471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、524、525、526、527、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679及/或680。在例示性實施例中，本發明之肽、胰高血糖素肽或胰高血糖素類似物不為(亦即排除)國際專利申請公開案第WO 2010/148089號之以下肽中之任何一種或所有：SEQ ID NO：657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669，其在本文中分別呈現為SEQ ID NO：219-229。

在例示性實施例中，本發明之肽、胰高血糖素肽或胰高血糖素類似物不為(亦即排除)國際申請公開案第WO/2011/094337號之以下肽中之任何一種或所有：SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、 25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、 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664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、717、718、719、720、721、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743、744、745、746、747、748、749、750、751、752、753、754、755、756、757、758、759、760、761、762、763、764、765、766、767、768、769、770、771、772、773、774、775、776、777、778、779、780、781、782、783、784、785、786、787、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813、814、815、816、817、818、819、820、821、822、823、824、825、826、827、828、829、830、831、832、833、834、835、836、837、838、839、840、841、842、843、844、845、846、847、848、849、850、851、852、853、854、855、856、857、858、859、860、861、862、863、864、865、866、867、868、869、870、871、872、873、874、875、876、877、878、879、880、881、882、883、884、885、886、887、888、889、890、891、892、893、894、895、896、897、898、899、900、901、902、903、904、905、906、907、908、909、910、911、912、913、914、915、916、917、918、919、920、921、922、923、924、925、926、927、928、929、930、931、932、933、934、935、936、937、938、939、940、941、942、943、944、945、946、947、948、949、950、951、952、953、954、955、956、957、958、959、960、961、962、963、964、965、966、967、968、969、970、971、972、973、974、975、 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1240、1241、1242、1243、1244、1245、1246、1247、1248、1249、1250、1251、1252、1253、1254、1255、1256、1257、1258、1259、1260、1261、1262、1263、1264、1265、1266、1267、1268、1269、1270、1271、1272、1273、1274、1275、1276、1277、1278、1279、1280、1281、1282、1283、1284、1285、1286、1287、1288、1289、1290、1291、1292、1293、1294、1295、1296、1297、1298、1299、1300、1301、1302、1303、1304、1305、1306、1307、1308、1309、1310、1311、1312、1313、1314、1315、1316、1317及/或1318。

例示性實施例

在例示性實施例中，本發明之肽為胰高血糖素(SEQ ID NO：1)之類似物，其包含：A.位置1之包含Tyr、His、硫代Ala或Phe之側鏈的胺基酸，其中位置1之胺基酸之α碳係連接至選自由以下組成之群的結構：(i)H₂N-(CH₂)-；(ii)H₂N-；(iii)H(乙醯基)N-(CH₂)_0-1-；及(iv)H-或CH₃-；B.位置9、10、12、20或37-43中之任何位置的醯化胺基酸或烷基化胺基酸，視情況其中醯基或烷基係經由間隔基鍵聯至該胺基酸；C.位置16-21中之一或多個位置的α螺旋穩定化胺基酸，及D.相對於SEQ ID NO：1之至多10個額外胺基酸修飾；位置1之胺基酸為L-立體異構體或D-立體異構體，其中，視情況，位置1之胺基酸不同於L-His、L-Phe及L-Tyr，其中，當胰高血糖素類似物缺乏親水性部分時，胰高血糖素類似物展現針對人類GIP受體之EC50為小於或約0.5nM(例如，小於或約0.01nM、小於或約0.05 nM、或小於或約0.03nM)，且其中胰高血糖素類似物針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。

在例示性實施例中，本發明之肽為胰高血糖素(SEQ ID NO：1)之類似物，其包含：A.位置1之包含以下結構之胺基酸：

其中R為His或硫代Ala之側鏈或R為：

其中R'視情況存在，且當存在時，為C_1-4伸烷基，其中X為以下中之一者：

(i)H₂N-(CH₂)-

(ii)H₂N-

(iii)H(乙醯基)N-(CH₂)_0-1-；及

(iv)H-或CH₃-。

B.位置9、10、12、20或37-43中之任何位置的醯化胺基酸或烷基化胺基酸，視情況其中醯基或烷基係經由間隔基鍵聯至胺基酸；

C.位置16-21中之一或多個位置的α螺旋穩定化胺基酸，

及

D.相對於SEQ ID NO：1之至多10個額外胺基酸修飾；其中位置1之胺基酸為L-立體異構體或D-立體異構體，其中，視情況，位置1之胺基酸不同於L-His、L-Phe及L-Tyr，其中，當胰高血糖素類似物缺乏親水性部分時，胰高血糖素類似物展現針對人類GIP受體之EC50為小於或約0.5nM(例如，小於或約0.01nM、小於或約0.05nM、或小於或約0.03nM)，且其中胰高血糖素類似物針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。在例示性態樣中，R'為C_1-2伸烷基。在例示性態樣中，R'不存在且X為H。在該等態樣中，胺基酸可視為4-羥基苯基乙酸。

本文所述之胰高血糖素類似物可包含本文所述之任何活性概況。參見例如標題為「 本發明所揭示之肽之活性 」之章節。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物展現至少或約1%、至少或約10%、至少或約50%、至少或約90%、至少或約100%、至少或約300%、或至少或約500%之GIP效能百分比。在一些態樣中，胰高血糖素類似物亦展現至少或約1%、至少或約10%、至少或約50%、至少或約90%、至少或約100%、至少或約300%、或至少或約500%之GLP-1效能百分比。在替代或額外態樣中，胰高血糖素類似物展現至少或約1%、至少或約10%、至少或約50%、至少或約90%、或至少或約100%之胰高血糖素效能百分比。因此，儘管胰高血糖素類似物可視為GIP促效劑肽，但在一些態樣中，胰高血糖素類似物另外可視為GIP-GLP-1共促效劑、GIP-胰高血糖素共促效劑或GIP-GLP-1-胰高血糖素三重促效劑。舉例而言，肽可展現針對人類GIP受體、人類GLP-1受體及視情況人類胰高血糖素受體中之每一者的促效劑活性，其中該肽展現針對GIP受體之EC50為其針對GLP-1受體之EC50的100倍以內(例如，50倍、40倍、30倍、20倍、15倍、10倍或10倍以下)且視情況為其針對胰高血糖素受體之EC50的100倍以內(例如，50倍、40倍、30倍、20倍、15倍、10倍或10倍以下)。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物針對人類GLP-1 受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。

在一些態樣中，位置1之胺基酸係選自由以下組成之群：乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基L-Phe、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala、乙醯基D-Phe、乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala、乙醯基β-2-L-Phe、乙醯基β-2-D-His、乙醯基β-2-D-Tyr、乙醯基β-2-D-硫代Ala、乙醯基β-2-D-Phe、去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基L-Phe、去胺基D-His、去胺基D-Tyr、去胺基D-硫代Ala、去胺基D-Phe、去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基β-2-L-硫代Ala、去胺基β-2-L-Phe、去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、去胺基β-2-D-Phe、D-His、D-Tyr、D-硫代Ala、D-Phe、β-2-D-His、β-2-D-Tyr、β-2-D-硫代Ala、β-2-D-Phe、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala、β-2-L-Phe及L-硫代Ala。在例示性態樣中，位置1之胺基酸係選自乙醯基D-Tyr、乙醯基D-His、去胺基Tyr、D-Tyr、D-His及乙醯基-D-Phe。

在例示性態樣中，胰高血糖素類似物在位置2包含選自由以下組成之群的胺基酸：Ala、Gly、Pro、肌胺酸及Val。在一些態樣中，位置2之胺基酸為Ser。在其他態樣中，位置2之胺基酸為Ala或Gly。

在例示性態樣中，當位置2之胺基酸為Ala時，胰高血糖素類似物在位置1包含胺基酸之D-立體異構體。

在例示性態樣中，胰高血糖素類似物在位置1及位置2包含選自由以下組成之群的一對胺基酸：

在例示性態樣中，當胰高血糖素類似物在位置2包含Gly時，類似物在位置1不包含D-His、去胺基His。在一些態樣中，胰高血糖素類似物不包含位置1之去胺基His及位置2之Ala。在一些態樣中，胰高血糖素不包含位置1之乙醯基His及位置2之肌胺酸。

在例示性態樣中，胰高血糖素類似物在位置16-21之一或多個位置包含α螺旋穩定化胺基酸。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物在位置16包含α螺旋穩定化胺基酸，視情況，帶負電荷胺基酸(例如Glu)或α,α雙取代胺基酸。在例示性態樣中，α,α-雙取代胺基酸包含R1及R2，其各自鍵結至α碳，其中R1及R2各自獨立地選自由視情況經羥基、醯胺、硫醇、鹵基取代之C1-C4烷基組成之群，或R1及R2與其所連接之α碳一起形成環。在例示性態樣中，α,α-雙取代胺基酸為AIB。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含位置17之Arg及位置18之小型脂族胺基酸，視情況為Ala。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物與SEQ ID NO：1相比在位置20未經修飾且位置20之胺基酸為Gln。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含位置16之Glu、位置17之Arg、位置18之Ala、位置19之Ala及位置20之Gln。

在前述之例示性態樣中，胰高血糖素類似物在位置9、10、12、16、20中之任一位置包含醯化或烷基化胺基酸。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物在位置9、10、12、13、14、16、17及20中的任何一或多個位置包含共價連接至C12至C18醯基或烷基的胺基酸。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物在位置10包含醯化或烷基化胺基酸。在一些態樣中，胰高血糖素類似物包含C端至位置29之胺基酸之1至21個胺基酸的延長物且在位置37-43中之任何位置(例如，37、38、39、40、41、42、43)包含醯化或烷基化胺基酸。在一些態樣中，包含非原生醯基或烷基之胺基酸處於位置40。

在前述之例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含C端至位置29之胺基酸之1至21個胺基酸的延長物，且在一些態樣中，延長物形成此項技術中稱為Trp籠之結構。在一些態樣中，延長物包含胺基酸序列GPSSGAPPPS(SEQ ID NO：5)或GGPSSGAPPPS(SEQ ID NO：6)或GPSSGRPPPS(SEQ ID NO：68)或具有1、2或3個保守胺基酸取代之前述序列之一的序列。在例示性態樣中，當胰高血糖素類似物包含具有1至21個胺基酸之延長物時，胰高血糖素類似物包含位置29之Gly、Ala或Leu。

在例示性態樣中，醯化胺基酸或烷基化胺基酸包含式I之結構(視情況Lys)、式II之結構(視情況Cys)或式III之結構(視情況Ser)。視情況，在一些態樣中，醯化胺基酸或烷基化胺基酸包含式I之結構，例如Lys。

在一些態樣中，醯化胺基酸或烷基化胺基酸係經由間隔基鍵聯至醯基或烷基。在一些態樣中，間隔基長度為3至10個原子。在一些態樣中，間隔基為胺基酸或二肽，且在一些態樣中，間隔基包含一個或兩個酸性胺基酸殘基，例如Glu。在一些態樣中，醯基或烷基係經由間隔基鍵聯至胺基酸，其中間隔基與醯基之總長度為約14至約28個原子。在一些態樣中，間隔基包含一個或兩個γ-Glu。

關於醯化胺基酸，醯基在一些態樣中為C12至C18(例如，C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18)脂肪醯基。在一些態樣中，醯基為C14或C16脂肪醯基。

在前述實施例之例示性態樣中，胰高血糖素類似物在位置15、位置21或位置28、或在位置15與21、在位置15與28、或在位置21與28、或在位置15、21及28包含Glu。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物僅在位置15、21及28中之位置28包含Glu。

在本發明之一些態樣中，胰高血糖素類似物在C端至位置27胺基酸之間包含至少一個帶電荷胺基酸。舉例而言，在一些態樣中，胰高血糖素類似物在位置28包含帶電荷胺基酸(例如，帶負電荷胺基酸)。帶負電荷胺基酸在一些態樣中為Asp或Glu。帶負電荷胺基酸在一些態樣中Glu。在替代態樣中，位置28之胺基酸為帶正電荷胺基酸，例如，帶正電荷胺基酸為式I胺基酸，例如Lys。

在替代或額外態樣中，胰高血糖素類似物在位置27、在位置29、或在兩個位置27與29處包含胺基酸修飾。舉例而言，位置27之胺基酸在一些態樣中為Leu、Nle、Val或Lys及/或位置29之胺基酸在一些態樣中為Gly或Thr。

在一些態樣中，位置28之胺基酸為Asp且視情況，位置29之胺基酸為除Gly以外之胺基酸，例如，Val、Ala、Leu或AIB。

在例示性態樣中，位置28之胺基酸為Glu且位置29之胺基酸為 Gly、Ala或Leu。

相對於SEQ ID NO：1，本文所述之胰高血糖素類似物可包含額外胺基酸修飾，例如，至多10個(例如，0個、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個)額外胺基酸修飾，如本文進一步論述。在例示性態樣中，胰高血糖素類似物包含以下一或多者：i.位置7之Ile；ii.位置12之Ile或Arg；iii.位置18之脂族胺基酸，視情況為Ala；iv.位置21之酸性胺基酸，視情況為Glu；v.位置24之Asn、Ala或AIB；vi.位置27之脂族胺基酸，視情況為Ala或Leu或Nle；vii.位置28之酸性胺基酸，視情況為Glu，或脂族胺基酸，視情況為Ala；viii.位置29之脂族胺基酸，視情況為Ala；ix. C端醯胺化。

根據前述，胰高血糖素類似物在例示性態樣中包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：SEQ ID NO：11-34中任一者之胺基酸序列。

本發明提供一種肽，其包含SEQ ID NO：35之序列，X₁X₂X₃GTFTSDX₁₀SKYLX₁₅X₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FVQWLX₂₇X₂₈X₂₉X₃₀PSSGX₃₅PPPS

(SEQ ID NO：35)

其中：X₁係選自由以下組成之群：乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala、乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala、乙醯基β-2-D- His、乙醯基β-2-D-Tyr、乙醯基β-2-D-硫代Ala、去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基D-His、去胺基D-Tyr、去胺基D-硫代Ala、去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基β-2-L-硫代Ala、去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、D-His、D-Tyr、D-硫代Ala、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala及L-硫代Ala；X₂為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser及Val；X₃為Gln或包含結構I、II或III之側鏈之胺基酸；其中結構I、II及III為：

其中R¹為C_0-3烷基或C_0-3雜烷基；R²為NHR⁴或C_1-3烷基；R³為C_1-3烷基；R⁴為H或C_1-3烷基；X為NH、O或S；且Y為NHR⁴、SR³或OR³；X₁₀為Tyr或共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸；X₁₅為酸性胺基酸，視情況為Glu或Asp；X₁₆為任何胺基酸，視情況為除Gly、Pro及Ser以外之任何胺基酸；例如，Glu、Ala、α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)、His、Lys；X₁₇為Arg、His、Gln；X₁₉為Ala或α,α雙取代胺基酸；X₁₈為Arg或Ala；X₂₀係選自由以下組成之群：α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)或Gln或 His、Lys或Ala；X₂₁為酸性胺基酸，視情況為Asp或Glu；X₂₇為Leu、Ala、Nle或Met；X₂₈為Ala或酸性胺基酸(視情況為Asp或Glu)；X₂₉為脂族，例如，Ala或Gly或AIB或Val；X₃₀為小型脂族胺基酸，例如，Ala或Gly；X₃₅為Ala或鹼性胺基酸(視情況為Arg或Lys)；其中，當X₂₈為酸性胺基酸時，X35為鹼性胺基酸；其中，視情況，當X₂₈為Asp時，則X₂₉不為Gly；其中，當X10為Tyr時，該肽在位置40包含共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸，且其中，視情況，該肽在位置41包含Gly，且其中該肽之C端胺基酸經醯胺化；其中，當胰高血糖素類似物缺乏親水性部分時，胰高血糖素類似物展現針對人類GIP受體之EC50為小於或約0.5nM，且其中胰高血糖素類似物針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。

在一些態樣中，位置1之胺基酸係選自由以下組成之群：乙醯基D-Tyr、乙醯基D-His、去胺基Tyr、D-Tyr、D-His及乙醯基D-Phe。

在例示性態樣中，肽在位置2包含選自由以下組成之群的胺基酸：Ala、Gly、Pro、肌胺酸及Val。在例示性態樣中，位置2之胺基酸係選自由Ala及Gly組成之群。

在例示性態樣中，當位置2之胺基酸為Ala時，肽在位置1包含胺基酸之D-立體異構體。

在例示性態樣中，肽在位置1及位置2包含選自由以下組成之群的一對胺基酸：

在例示性態樣中，當肽在位置2包含Gly時，肽在位置1不包含D-His、去胺基His。在一些態樣中，肽不包含位置1之去胺基His及位置2之Ala。在一些態樣中，肽不包含位置1之乙醯基His及位置2之肌胺酸。

在SEQ ID NO：35之肽之例示性態樣中，X₁₀為Tyr，該肽在位置40包含共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸，且該肽視情況在位置41包含Gly。在SEQ ID NO：35之肽之替代例示性態樣中，X₁₀為共價連接至C12-C18醯基或烷基之胺基酸。

在SEQ ID NO：35之肽之例示性態樣中，X₂₀為Gln。在例示性態樣中，位置16之胺基酸為帶負電荷胺基酸，視情況為Glu。在例示性態樣中，X₁₈為Ala。在例示性態樣中，X₂₈為Glu。此外，在例示性態樣中，X₂₇為Leu或Nle，X₂₉為Gly，肽在C端包含醯胺化Gly，或其組合。

本發明另外提供一種肽，其包含相對於SEQ ID NO：35具有至多3個胺基酸修飾(例如，0、1、2或3個胺基酸修飾)之序列SEQ ID NO：35，其中該肽展現針對人類GIP受體及人類GLP-1受體及/或人類胰高血糖素受體之促效劑活性。胺基酸修飾可為任何本文所述之胺基酸修飾。在包含具有至多3個(例如，1個、2個、3個)胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：35之肽的例示性態樣中，胺基酸修飾發生在除位置1以外之位置。

本發明提供一種肽，其包含序列SEQ ID NO：35，X₁X₂X₃GTFTSDX₁₀SKYLX₁₅X₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FVQWLX₂₇X₂₈X₂₉X₃₀PSSGX₃₅PPPS

(SEQ ID NO：140)

其中：X₁係選自由以下組成之群：乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基L-Phe、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala、乙醯基D-Phe、乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala、乙醯基β-2-L-Phe、乙醯基β-2-D-His、乙醯基β-2-D-Tyr、乙醯基β-2-D-硫代Ala、乙醯基β-2-D-Phe、去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基L-Phe、去胺基D-His、去胺基D-Tyr、去胺基D-硫代Ala、去胺基D-Phe、去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基β-2-L-硫代Ala、去胺基β-2-L-Phe、去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、去胺基β-2-D-Phe、D-His、D-Tyr、D-硫代Ala、D-Phe、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代 Ala、β-2-D-Phe、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala、β-2-L-Phe及L-硫代Ala；X₂為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser及Val；X₃為Gln或包含結構I、II或III之側鏈之胺基酸；其中結構I、II及III為：

其中R¹為C_0-3烷基或C_0-3雜烷基；R²為NHR⁴或C_1-3烷基；R³為C_1-3烷基；R⁴為H或C_1-3烷基；X為NH、O或S；且Y為NHR⁴、SR³或OR³；X₁₀為Tyr或共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸；X₁₅為酸性胺基酸，視情況為Glu或Asp；X₁₆為任何胺基酸，視情況為除Gly、Pro及Ser以外之任何胺基酸；例如，Glu、Ala、α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)、His、Lys；X₁₇為Arg、His、Gln；X₁₉為Ala或α,α雙取代胺基酸；X₁₈為Arg或Ala；X₂₀係選自由以下組成之群：α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)或Gln或His、Lys或Ala；X₂₁為酸性胺基酸，視情況為Asp或Glu；X₂₇為Leu、Ala、Nle或Met；X₂₈為Ala或酸性胺基酸(視情況為Asp或Glu)； X₂₉為脂族，例如，Ala或Gly或AIB或Val；X₃₀為小型脂族胺基酸，例如，Ala或Gly；X₃₅為Ala或鹼性胺基酸(視情況為Arg或Lys)；其中，當X₂₈為酸性胺基酸，X35為鹼性胺基酸；其中，視情況，當X₂₈為Asp時，則X₂₉不為Gly；其中，當X10為Tyr時，該肽在位置40包含共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸，且其中，視情況，該肽在位置41包含Gly，且其中該肽之C端胺基酸經醯胺化；其中，當胰高血糖素類似物缺乏親水性部分時，胰高血糖素類似物展現針對人類GIP受體之EC50為小於或約0.5nM，且其中胰高血糖素類似物針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。

在一些態樣中，位置1之胺基酸係選自由以下組成之群：乙醯基D-Tyr、乙醯基D-His、去胺基Tyr、D-Tyr、D-His及乙醯基-D-Phe。

在在SEQ ID NO：140之肽之例示性態樣中，X₁₀為Tyr，該肽在位置40包含共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸，且該肽視情況在位置41包含Gly。在SEQ ID NO：140之肽之替代例示性態樣中，X₁₀為共價連接至C12-C18醯基或烷基之胺基酸。

在SEQ ID NO：140之肽之例示性態樣中，X₂₀為Gln。在例示性態樣中，位置16之胺基酸為帶負電荷胺基酸，視情況為Glu。在例示性態樣中，X₁₈為Ala。在例示性態樣中，X₂₈為Glu。此外，在例示性態樣中，X₂₇為Leu或Nle，X₂₉為Gly，肽在C端包含醯胺化Gly，或其組合。

本發明另外提供一種肽，其包含相對於SEQ ID NO：140具有至多3個胺基酸修飾(例如，0、1、2或3個胺基酸修飾)之序列SEQ ID NO：140，其中該肽展現針對人類GIP受體及人類GLP-1受體及/或人類胰高血糖素受體之促效劑活性。胺基酸修飾可為任何本文所述之胺基酸修飾。在包含具有至多3個(例如，1個、2個、3個)胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：140之肽的例示性態樣中，胺基酸修飾發生在除位置1以外之位置。

本發明進一步提供一種包含序列SEQ ID NO：11之肽。在例示性態樣中，該肽基本上由SEQ ID NO：11組成或由SEQ ID NO：11組成。

本發明亦提供一種包含序列SEQ ID NO：12之肽。在例示性態樣中，該肽基本上由SEQ ID NO：12組成或由SEQ ID NO：12組成。

本發明亦提供一種包含序列SEQ ID NO：13之肽。在例示性態樣中，該肽基本上由SEQ ID NO：13組成或由SEQ ID NO：13組成。

本發明亦提供一種包含序列SEQ ID NO：15之肽。在例示性態樣中，該肽基本上由SEQ ID NO：15組成或由SEQ ID NO：15組成。

本發明亦提供一種包含序列SEQ ID NO：16之肽。在例示性態樣中，該肽基本上由SEQ ID NO：16組成或由SEQ ID NO：16組成。

本發明亦提供一種包含序列SEQ ID NO：22之肽。在例示性態樣中，該肽基本上由SEQ ID NO：22組成或由SEQ ID NO：22組成。

本文亦提供一種肽，其包含：(A)相對於SEQ ID NO：11具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：11；(B)相對於SEQ ID NO：12具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：12；(C)相對於SEQ ID NO：13具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：13；或 (D)相對於SEQ ID NO：15具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：15；(E)相對於SEQ ID NO：16具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：16；(F)相對於SEQ ID NO：22具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：22；其中該肽展現針對人類GIP受體及人類GLP-1受體之促效劑活性。在包含具有至多3個(例如，1個、2個、3個)胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：11-13、15、16及22中之任一者之肽的例示性態樣中，胺基酸修飾發生在除位置1以外的位置。

在一些實施例中，胰高血糖素類似物包含基於SEQ ID NO：11-18、21-23、25-31、33-36、38、39、100-200中之任一者之母序列但在一或多個位置不同於該母序列之結構。

在一些或任何實施例中，本發明之肽為包含SEQ ID NO：11-18、21-23、25-31、33-36、38、39、100-200中之任一者之母序列的類似物，其包含基於該母序列之胺基酸序列但不同於該母序列的胺基酸序列，因為該類似物之胺基酸序列包含一或多個(例如，1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個，及在一些情況下16個或16個以上(例如，17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個等))指定或視情況可選之胺基酸修飾。在一些或任何實施例中，相對於包含SEQ ID NO：11-18、21-23、25-31、33-36、38、39、100-200中之任一者之母序列，本發明之肽包含總共1個、至多2個、至多3個、至多4個、至多5個、至多6個、至多7個、至多8個、至多9個或至多10個額外胺基酸修飾。在一些或任何實施例中，該等修飾為本文關於胰高血糖素類似物所述之任何修飾，例如，醯化、烷基化、聚乙二醇化、C端截短、在位置 1、2、3、7、10、12、15、16、17、18、19、20、21、23、24、27、28及29中之一或多個位置進行胺基酸取代。在例示性態樣中，胺基酸修飾發生在除位置1以外之位置。

在一些或任何實施例中，修飾為胺基酸取代或置換，例如，保守胺基酸取代。在一些態樣中，保守取代為位置2、5、7、10、11、12、13、14、16、17、18、19、20、21、24、27、28或29中之一或多個位置的胺基酸置換。在替代實施例中，胺基酸取代不為保守胺基酸取代，例如，為非保守胺基酸取代。在例示性態樣中，胺基酸修飾發生在除位置1以外之位置。

在一些實施例中，本發明之肽包含與母序列之胺基酸序列具有至少25%序列一致性之胺基酸序列，該母序列包含SEQ ID NO：11-18、21-23、25-31、33-36、38、39、100-200中之任一者。在一些實施例中，本發明之肽包含與母序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%或大於90%序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，具有上文提及之%序列一致性的本發明所揭示之肽之胺基酸序列為本發明所揭示之肽的全長胺基酸序列。在一些實施例中，具有上文提及之%序列一致性的本發明之肽之胺基酸序列僅為本發明所揭示之肽之胺基酸序列的一部分。在一些實施例中，本發明所揭示之肽包含與母序列之至少5個連續胺基酸(例如，至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個胺基酸)之參考胺基酸序列具有約A%或更大序列一致性的胺基酸序列，其中該參考胺基酸序列始於SEQ ID NO：1位置C之胺基酸且終於SEQ ID NO：1位置D之胺基酸，其中A為25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99；C為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28；且D 為5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29。預期前述參數之任何及所有可能之組合，包括(但不限於)例如其中A為90%且C與D為1與27、或6與27、或8與27、或10與27、或12與27、或16與27。

本文所述之包含SEQ ID NO：11-18、21-23、25-31、33-36、38、39、100-200中之任一者之母序列的類似物可包含具有任何數目之胺基酸之肽主鏈，亦即可為任何肽長度。在一些實施例中，本文所述之肽與SEQ ID NO：1具有相同長度，亦即長度為29個胺基酸。在一些實施例中，本發明所揭示之肽的長度長於29個胺基酸，例如，本發明所揭示之肽包含1-21個胺基酸之C端延長物，如本文進一步描述。因此，在一些實施例中，本發明之肽之長度為30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個胺基酸。在一些實施例中，本發明所揭示之肽之長度為至多50個胺基酸。在一些實施例中，本發明所揭示之肽之長度由於與另一肽融合而長於29個胺基酸(例如，長度大於50個胺基酸(例如，至少或約60個、至少或約70個、至少或約80個、至少或約90個、至少或約100個、至少或約150個、至少或約200個、至少或約250個、至少或約300個、至少或約350個、至少或約400個、至少或約450個、至少或約500個胺基酸))。在其他實施例中，本發明所揭示之肽之長度少於29個胺基酸，例如，28、27、26、25、24、23個胺基酸。

根據上述，在一些態樣中，本發明之肽為包含SEQ ID NO：11-18、21-23、25-31、33-36、38、39、100-200中之任一者之母序列的類似物，該類似物之序列包含一或多個胺基酸修飾，其影響GIP活性、胰高血糖素活性及/或GLP-1活性；增強穩定性，例如藉由減少肽之降解(例如，藉由改良DPP-IV蛋白酶抗性)；增強溶解性；增加半衰期；延遲作用起始時間；延長針對GIP、胰高血糖素或GLP-1受體之作用的持續時間；或任何前述作用之組合。本文關於胰高血糖素類似物進一步描述除其他修飾以外的該等胺基酸修飾，且任何此等修飾可個別或組合應用。

製備肽之方法

可藉由此項技術中已知之方法獲得本發明之胰高血糖素類似物。重新合成肽之適合方法描述於例如Chan等人，Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis,Oxford University Press,Oxford,United Kingdom,2005；Peptide and Protein Drug Analysis,Reid,R.編，Marcel Dekker,Inc.,2000；Epitope Mapping,Westwood等人編，Oxford University Press,Oxford,United Kingdom,2000；及美國專利第5,449,752號中。製備本發明肽之其他例示性方法闡述於實例1及實例2中。

在一些實施例中，本文所述之肽可由諸如Synpep(Dublin,CA)、Peptide Technologies Corp.(Gaithersburg,MD)及Multiple Peptide Systems(San Diego,CA)之公司商業合成。在此方面，該等肽可為合成、重組、分離及/或純化肽。

此外，在本發明之類似物不包含任何非編碼或非天然胺基酸之情況下，可使用標準重組方法使用編碼類似物之胺基酸序列之核酸重組製備胰高血糖素類似物。參見例如Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual.第3版，Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,NY 2001；及Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons,NY,1994。

在一些實施例中，本發明之胰高血糖素類似物為分離的胰高血糖素類似物。如本文所用之術語「分離」意謂已自其天然環境移除。在例示性實施例中，類似物係經由重組方法製備且類似物係自宿主細胞分離。

在一些實施例中，本發明之胰高血糖素類似物為純化胰高血糖素類似物。如本文所用之術語「純化」係指分子或化合物以實質上不含污染物(其在一些態樣中通常與分子或化合物在原生或天然環境中締合)之形式分離且意謂已因與原始組合物之其他組分分離而導致純度增加。經純化之肽或化合物包括例如實質上不含核酸分子、脂質及碳水化合物、或其他起始物質或在肽之化學合成期間使用或形成之中間物的肽。公認「純度」為相對術語，且不必理解為絕對純度或絕對富集或絕對選擇。在一些態樣中，純度為至少或約50%、至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%、或至少或約90%(例如，至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、至少或約96%、至少或約97%、至少或約98%、至少或約99%或約100%)。

結合物

本發明進一步提供包含一或多個本文所述之胰高血糖素類似物結合至異源部分之結合物。如本文所用之術語「異源部分」與術語「結合物部分」同義，且係指與本文所述之胰高血糖素類似物不同之任何分子(化學或生物化學、天然產生或非編碼)。可鍵聯至本文所述之任何類似物之例示性結合物部分包括(但不限於)異源肽或多肽(包括例如血漿蛋白)、靶向劑、免疫球蛋白或其部分(例如，可變區、CDR或Fc區)、診斷標記(諸如放射性同位素、螢光團或酶標記)、聚合物(包括水溶性聚合物)，或其他治療或診斷劑。在一些實施例中，提供包含本發明之類似物及血漿蛋白之結合物，其中該血漿蛋白係選自由白蛋白、轉鐵蛋白、血纖維蛋白原及球蛋白組成之群。在一些實施例中，結合物之血漿蛋白部分為白蛋白或轉鐵蛋白。在一些實施例中，結合物包含一或多個本文所述之胰高血糖素類似物及以下一或多者：肽(其不同於本文所述之胰高血糖素及/或GLP-1受體活性胰高血糖素類似物)、多肽、核酸分子、抗體或其片段、聚合物、量子點、小分子、毒素、診斷劑、碳水化合物、胺基酸。

在一些實施例中，異源部分為不同於本文所述之胰高血糖素類似物之肽且結合物為融合肽或嵌合肽。在一些實施例中，異源部分為1-21個胺基酸之肽延長物。在特定實施例中，延長物係連接至胰高血糖素類似物之C端，例如，連接至位置29之胺基酸。

在一些特定態樣中，延長物為單一胺基酸或二肽。在特定實施例中，延長物包含選自由以下組成之群之胺基酸：帶電荷胺基酸(例如，帶負電荷胺基酸(例如Glu)、帶正電荷胺基酸)、包含親水性部分之胺基酸。在一些態樣中，延長物為Gly、Glu、Cys、Gly-Gly、Gly-Glu。

在一些實施例中，延長物包含SEQ ID NO：5(GPSSGAPPPS)、SEQ ID NO：6(GGPSSGAPPPS)、SEQ ID NO：7(KRNRNNIA)或SEQ ID NO：8(KRNR)之胺基酸序列。在特定態樣中，胺基酸序列係經由胰高血糖素類似物之C端胺基酸(例如，位置29之胺基酸)連接。在一些實施例中，SEQ ID NO：5-8之胺基酸序列係經由肽鍵結合至胰高血糖素類似物之胺基酸29。在一些特定實施例中，胰高血糖素類似物之位置29之胺基酸為Gly且該Gly係融合至SEQ ID NO：5-8中之任一者之胺基酸序列之一。

在一些實施例中，異源部分為聚合物。在一些實施例中，聚合物係選自由以下組成之群：聚醯胺；聚碳酸酯；聚伸烷基及其衍生物，包括聚伸烷二醇、聚烷醚、聚對苯二甲酸伸烷酯；丙烯酸酯及甲基丙烯酸酯之聚合物，包括聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸異丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸異癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸異丙酯)、聚(丙烯酸異丁酯) 及聚(丙烯酸十八烷酯)；聚乙烯基聚合物，包括聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚鹵乙烯、聚(乙酸乙烯酯)及聚乙烯吡咯啶酮；聚乙交酯；聚矽氧烷；聚胺基甲酸酯及其共聚物；纖維素，包括烷基纖維素、羥基烷基纖維素、纖維素醚、纖維素酯、硝基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥基-丙基甲基纖維素、羥基丁基甲基纖維素、乙酸纖維素、丙酸纖維素、乙酸丁酸纖維素、乙酸鄰苯二甲酸纖維素、羧乙基纖維素、三乙酸纖維素及硫酸纖維素鈉鹽；聚丙烯；聚乙烯，包括聚(乙二醇)、聚(氧化乙烯)及聚(對苯二甲酸伸乙酯)；及聚苯乙烯。

在一些態樣中，聚合物為生物可降解聚合物，包括合成生物可降解聚合物(例如，乳酸與乙醇酸之聚合物、聚酸酐、聚(原)酸酯、聚胺基甲酸酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)及聚(丙交酯-共-己內酯))，及天然生物可降解聚合物(例如，海藻酸鹽及其他多醣(包括聚葡萄糖及纖維素)、膠原蛋白、其化學衍生物(取代、添加例如烷基、伸烷基之化學基團、羥基化、氧化及熟習此項技術者通常進行之其他修飾)、白蛋白及其他親水性蛋白質(例如，玉米蛋白(zein)及其他醇溶穀蛋白(prolamine)及疏水性蛋白質))，以及其任何共聚物或混合物。一般而言，此等材料在活體內藉由酶促水解或暴露於水、藉由表面或本體侵蝕而降解。

在一些態樣中，聚合物為生物黏附聚合物，諸如生物可侵蝕性水凝膠(由H.S.Sawhney,C.P.Pathak及J.A.Hubbell於Macromolecules,1993,26,581-587中描述，該文獻之教示內容併入本文中)、聚玻尿酸、酪蛋白、明膠、明膠蛋白(glutin)、聚酸酐、聚丙烯酸、海藻酸鹽、聚葡萄胺糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸異丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸異癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸異丙酯)、聚(丙烯酸異丁酯)及聚(丙烯酸十八烷酯)。

在一些實施例中，聚合物為水溶性聚合物或親水性聚合物。本文在「親水性部分」下進一步描述親水性聚合物。適合水溶性聚合物在此項技術中已知且包括例如聚乙烯吡咯啶酮、羥丙基纖維素(HPC；Klucel)、羥丙基甲基纖維素(HPMC；Methocel)、硝基纖維素、羥丙基乙基纖維素、羥丙基丁基纖維素、羥丙基戊基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素(Ethocel)、羥乙基纖維素、各種烷基纖維素及羥烷基纖維素、各種纖維素醚、乙酸纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、乙酸乙烯酯/丁烯酸共聚物、聚甲基丙烯酸羥基烷酯、甲基丙烯酸羥基甲酯、甲基丙烯酸共聚物、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、順丁烯二酸酐/甲基乙烯醚共聚物、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉及聚丙烯酸鈣、聚丙烯酸、酸性羧基聚合物、羧基聚亞甲基、羧基乙烯基聚合物、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、聚甲基乙烯醚-共-順丁烯二酸酐、羧甲基醯胺、甲基丙烯酸鉀二乙烯基苯共聚物、聚氧基乙二醇、聚氧化乙烯，及其衍生物、其鹽及其組合。

在特定實施例中，聚合物為聚伸烷二醇，包括例如聚乙二醇(PEG)。

在一些實施例中，異源部分為碳水化合物。在一些實施例中，碳水化合物為單醣(例如，葡萄糖、半乳糖、果糖)、雙醣(例如，蔗糖、乳糖、麥芽糖)、寡醣(例如，棉子糖、水蘇糖)或多醣(澱粉、澱粉酶、支鏈澱粉、纖維素、甲殼素、癒創聚葡糖(callose)、昆布糖(laminarin)、木聚糖、甘露聚糖、褐藻糖膠(fucoidan)或半乳甘露聚糖)。

在一些實施例中，異源部分為脂質。在一些實施例中，脂質為脂肪酸、類廿烷酸(eicosanoid)、前列腺素、白三烯、血栓素、N-醯基乙醇胺、甘油脂質(例如，單取代甘油、雙取代甘油、三取代甘油)、甘油磷脂(例如，磷脂醯膽鹼、磷脂醯肌醇、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲胺酸)、鞘脂(例如，神經鞘胺醇、神經醯胺)、固醇脂質(例如，類固醇、膽固醇)、異戊烯醇脂質(prenol lipid)、醣脂質、或聚酮化合物(polyketide)、油、蠟、膽固醇、固醇、脂溶性維生素、單酸甘油酯、二酸甘油酯、三酸甘油酯、磷脂。

在一些實施例中，異源部分係經由非共價或共價鍵結連接至本發明之類似物。在例示性態樣中，異源部分係經由連接子連接至本發明之類似物。可藉由共價化學鍵、物理力(諸如靜電相互作用、氫鍵相互作用、離子相互作用、凡得瓦爾相互作用、或疏水性或親水性相互作用)來實現鍵聯。可使用多種非共價偶合系統，包括生物素-抗生物素蛋白、配位體/受體、酶/受質、核酸/核酸結合蛋白、脂質/脂質結合蛋白、細胞黏著分子搭配物；或彼此具有親和力之任何結合搭配物或其片段。

在一些實施例中，藉由使類似物之目標胺基酸殘基與能夠與此等目標胺基酸之所選側鏈或N端或C端殘基反應之有機衍生劑反應而經由直接共價鍵將胰高血糖素類似物鍵聯至結合物部分。類似物或結合物部分上之反應性基團包括例如醛、胺基、酯、硫醇、α-鹵乙醯基、順丁烯二醯亞胺基或肼基。衍生劑包括例如順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基磺基丁二醯亞胺酯(經由半胱胺酸殘基結合)、N-羥基丁二醯亞胺(經由離胺酸殘基)、戊二醛、丁二酸酐或此項技術中已知之其他試劑。或者，結合物部分可經由諸如多醣或多肽載體之中間載體間接鍵聯至類似物。多醣載體之實例包括胺基聚葡萄糖。適合多肽載體之實例包括聚離胺酸、聚麩胺酸、聚天冬胺酸、其共聚物，及此等胺基酸與其他胺基酸(例如絲胺酸)之混合聚合物，以使所得經負載載體具有所需溶解性質。

最通常使半胱胺醯基殘基與α-鹵基乙酸酯(及相應胺)(諸如氯乙酸、氯乙醯胺)反應以得到羧甲基或羧醯胺基甲基衍生物。半胱胺醯基殘基亦藉由與溴三氟丙酮、α-溴-β-(5-咪唑基)丙酸、氯乙醯磷酸、N-烷基順丁烯二醯亞胺、3-硝基-2-吡啶基二硫化物、甲基2-吡啶基二硫化物、對氯汞基苯甲酸酯、2-氯汞基-4-硝基苯酚或氯-7-硝基苯并-2-氧雜-1,3-二唑反應而衍生化。

組胺醯基殘基係藉由在pH 5.5-7.0下與焦碳酸二乙酯反應而衍生化，因為此試劑對組胺醯基側鏈具相對特異性。對溴苯甲醯甲基溴亦為適用的；反應較佳在pH 6.0之0.1M二甲胂酸鈉中進行。

離胺醯基及胺基末端殘基係與丁二酸酐或其他羧酸酐反應。用此等試劑進行衍生化具有逆轉離胺醯基殘基之電荷的作用。用於衍生化含α-胺基之殘基之其他適合試劑包括醯亞胺酯(諸如吡啶甲醯亞胺酸甲酯)、磷酸吡哆醛、吡哆醛、氯硼氫化物、三硝基苯磺酸、O-甲基異脲、2,4-戊二酮，及與乙醛酸酯之轉胺酶催化反應。

精胺醯基殘基係藉由與一種或若干種習知試劑(其中有苯基乙二醛、2,3-丁二酮、1,2-環己二酮及茚滿三酮)反應而進行修飾。由於胍官能基具有高pKa，因此精胺酸殘基之衍生化需要反應在鹼性條件下進行。此外，此等試劑可與離胺酸之基團以及精胺酸ε-胺基反應。

可對酪胺醯基殘基進行特定修飾，其中尤其關注藉由與芳族重氮化合物或四硝基甲烷反應而將光譜標記引入酪胺醯基殘基中。最通常分別使用N-乙醯基咪唑及四硝基甲烷來形成O-乙醯基酪胺醯基物質及3-硝基衍生物。

羧基側基(天冬胺醯基或麩胺醯基)藉由與碳化二亞胺(R-N=C=N-R')反應而選擇性地修飾，其中R及R'為不同烷基，諸如1-環己基-3-(2-嗎啉基-4-乙基)碳化二亞胺或1-乙基-3-(4-氮鎓-4,4-二甲基戊基)碳化二亞胺。此外，天冬胺醯基及麩胺醯基殘基藉由與銨離子反應而轉化成天冬醯胺醯基及麩醯胺醯基殘基。

其他修飾包括：脯胺酸及離胺酸之羥基化；絲胺醯基或蘇胺醯基殘基之羥基之磷酸化；離胺酸、精胺酸及組胺酸側鏈之α-胺基的甲基化(T.E.Creighton,Proteins：Structure and Molecular Properties,W.H.Freeman & Co.,San Francisco，第79-86頁(1983))；天冬醯胺或麩醯胺酸之去醯胺化；N端胺之乙醯化；及/或C端羧酸基之醯胺化或酯化。

另一類型之共價修飾涉及使醣苷化學或酶促偶合至類似物。糖可連接至：(a)精胺酸及組胺酸；(b)游離羧基；(c)游離巰基，諸如半胱胺酸之游離巰基；(d)游離羥基，諸如絲胺酸、蘇胺酸或羥基脯胺酸之游離羥基；(e)芳族殘基，諸如酪胺酸或色胺酸之芳族殘基；或(f)麩醯胺酸之醯胺基。此等方法描述於1987年9月11日公開之WO87/05330；及Aplin及Wriston,CRC Crit.Rev.Biochem.，第259-306頁(1981)中。

在一些實施例中，胰高血糖素類似物係經由胰高血糖素類似物之胺基酸側鏈與異源部分之間的共價鍵聯結合至異源部分。在一些實施例中，胰高血糖素類似物係經由位置16、17、21、24或29之胺基酸之側鏈、C端延長物內之位置、或C端胺基酸、或此等位置之組合結合至異源部分。在一些態樣中，共價鍵聯至異源部分之胺基酸(例如，包含異源部分之胺基酸)為Cys、Lys、Orn、高Cys或Ac-Phe，且胺基酸之側鏈係共價鍵聯至異源部分。

在一些實施例中，結合物包含將胰高血糖素類似物接合至異源部分之連接子。在一些態樣中，連接子包含長度為1至約60個原子、或1至30個原子或30個原子以上、2至5個原子、2至10個原子、5至10個原子、或10至20個原子之鏈。在一些實施例中，鏈原子均為碳原子。在一些實施例中，連接子之主鏈中之鏈原子係選自由C、O、N及 S組成之群。可根據預期溶解性(親水性)選擇鏈原子及連接子以提供更可溶之結合物。在一些實施例中，連接子提供由於酶或其他催化劑或目標組織或器官或細胞中存在之水解條件而進行裂解之官能基。在一些實施例中，連接子之長度足夠長以降低位阻之勢能。若連接子為共價鍵或肽鍵且結合物為多肽，則整個結合物可為融合蛋白。該等肽基連接子可為任何長度。例示性連接子長度為約1至50個胺基酸，長度為5至50、3至5、5至10、5至15或10至30個胺基酸。或者可藉由一般技術者已知之重組基因工程法製備該等融合蛋白。

結合物：Fc融合

如上文所述，在一些實施例中，類似物係結合(例如融合)至免疫球蛋白或其部分(例如，可變區、CDR或Fc區)。已知類型之免疫球蛋白(Ig)包括IgG、IgA、IgE、IgD或IgM。Fc區為Ig重鏈之C端區，其負責與進行諸如再循環(其導致半衰期延長)之活動之Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。

舉例而言，根據一些定義，人類IgG重鏈Fc區自Cys226伸展至重鏈之C端。人類IgG1之「鉸鏈區」一般自Glu216延伸至Pro230(藉由比對半胱胺酸鍵結中所涉及之半胱胺酸可將其他IgG同型物之鉸鏈區與IgG1序列進行比對)。IgG之Fc區包括兩個恆定域CH2及CH3。人類IgG Fc區之CH2域通常自胺基酸231延伸至胺基酸341。人類IgG Fc區之CH3域通常自胺基酸342延伸至胺基酸447。提及免疫球蛋白或免疫球蛋白片段或區域之胺基酸編號均係基於Kabat等人，1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Public Health,Bethesda,Md。在一相關實施例中，Fc區可包含一或多個來自免疫球蛋白重鏈之原生或經修飾恆定區(除CH1以外)，例如，IgG及IgA之CH2及CH3區，或IgE之CH3及CH4區。

適合之結合物部分包括包含FcRn結合位點之免疫球蛋白序列之部分。FcRn(救助受體)負責使免疫球蛋白再循環且使其回至血液循環中。已基於X射線結晶學(Burmeister等人，1994,Nature 372：379)描述與FcRn受體結合之IgG之Fc部分的區域。Fc與FcRn之主要接觸面接近CH2域與CH3域之接面。Fc-FcRn接觸點均在單一Ig重鏈內。主要接觸位點包括CH2域之胺基酸殘基248、250-257、272、285、288、290-291、308-311及314，及CH3域之胺基酸殘基385-387、428及433-436。

一些結合物部分可能或可能不包括FcγR結合位點。FcγR負責ADCC及CDC。與FcγR直接接觸之Fc區內位置之實例為胺基酸234-239(下端鉸鏈區)、胺基酸265-269(B/C環)、胺基酸297-299(C'/E環)及胺基酸327-332(F/G)環(Sondermann等人，Nature 406：267-273,2000)。IgE之下端鉸鏈區亦已涉及FcRI結合(Henry等人，Biochemistry 36,15568-15578,1997)。涉及IgA受體結合之殘基描述於Lewis等人(J Immunol.175：6694-701,2005)中。涉及IgE受體結合之胺基酸殘基描述於Sayers等人(J Biol Chem.279(34)：35320-5,2004)中。

可對免疫球蛋白之Fc區進行胺基酸修飾。該等可變Fc區包含在Fc區之CH3域(殘基342-447)中之至少一個胺基酸修飾及/或在Fc區之CH2域(殘基231-341)中之至少一個胺基酸修飾。咸信賦予FcRn以增加之親和力的突變包括T256A、T307A、E380A及N434A(Shields等人，2001,J.Biol.Chem.276：6591)。其他突變可減少Fc區與FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB及/或FcγRIIIA之結合而不顯著降低對FcRn之親和力。舉例而言，Fc區之位置297之Asn經Ala或另一胺基酸取代可移除高保守性N-糖基化位點且可導致免疫原性降低同時伴隨著Fc區之半衰期延長，以及與FcγR之結合減少(Routledge等人，1995,Transplantation 60：847；Friend等人，1999,Transplantation 68：1632；Shields等人，1995,J.Biol.Chem.276：6591)。已對IgG1之位置233-236之胺基酸進行修飾，其減少與FcγR之結合(Ward及Ghetie,1995,Therapeutic Immunology2：77及Armour等人，1999,Eur.J.Immunol.29：2613)。一些例示性胺基酸取代描述於美國專利7,355,008及7,381,408中，該等專利各自以全文引用之方式併入本文中。

結合物：親水性部分

本文所述之胰高血糖素類似物可進一步經修飾以改良其在水溶液中在生理pH值下之溶解性及穩定性，同時保持相對於原生胰高血糖素之高生物活性。可在用於使蛋白質與活化聚合物分子反應之任何適合條件下將諸如PEG基團之親水性部分連接至類似物。可使用此項技術中已知之任何方式，包括經由醯化、還原性烷基化、麥可加成(Michael addition)、硫醇烷基化或其他化學選擇性結合/連接方法經PEG部分上之反應性基團(例如，醛、胺基、酯、硫醇、α-鹵乙醯基、順丁烯二醯亞胺基或肼基)至目標化合物上之反應性基團(例如，醛、胺基、酯、硫醇、α-鹵乙醯基、順丁烯二醯亞胺基或肼基)。可用於將水溶性聚合物鍵聯至一或多種蛋白質之活化基團包括(不限於)碸、順丁烯二醯亞胺、巰基、硫醇、三氟甲磺酸酯基、三氟乙磺酸酯基、氮丙啶、環氧乙烷、5-吡啶基及α-鹵化醯基(例如，α-碘乙酸、α-溴乙酸、α-氯乙酸)。若藉由還原性烷基化連接至類似物，則所選聚合物應具有單一反應性醛以便控制聚合度。參見例如Kinstler等人，Adv.Drug.DeliveryRev.54：477-485(2002)；Roberts等人，Adv.Drug Delivery Rev.54：459-476(2002)；及Zalipsky等人，Adv.Drug Delivery Rev.16：157-182(1995)。

在特定態樣中，具有硫醇之類似物之胺基酸殘基係經諸如PEG之親水性部分修飾。在一些實施例中，硫醇係在麥可加成反應中經順丁烯二醯亞胺活化之PEG修飾以產生包含下文所示之硫醚鍵之聚乙二醇化類似物：

在一些實施例中，硫醇係在親核取代反應中經鹵乙醯基活化之PEG修飾以產生包含硫醚鍵之聚乙二醇化類似物。

適合之親水性部分包括聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧乙基化多元醇(例如POG)、聚氧乙基化山梨糖醇、聚氧乙基化葡萄糖、聚氧乙基化甘油(POG)、聚環氧烷、聚乙二醇丙醛、乙二醇/丙二醇之共聚物、單甲氧基-聚乙二醇、單-(C1-C10)烷氧基-聚乙二醇或單-(C1-C10)芳氧基-聚乙二醇、羧甲基纖維素、聚縮醛、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚(β-胺基酸)(均聚物或無規共聚物)、聚(N-乙烯吡咯啶酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物(PPG)及其他聚氧化烯、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、結腸酸(colonic acid)或其他多醣聚合物、Ficoll或聚葡萄糖及其混合物。聚葡萄糖為主要由α1-6鍵鍵聯之葡萄糖次單元之多醣聚合物。聚葡萄糖可以多種分子量範圍獲得，例如，約1kD至約100kD，或約5、10、15或20kD至約20、30、40、50、60、70、80或90kD。涵蓋線性或分枝聚合物。所得結合物製劑基本上可為單分散或多分散，且每個類似物可具有約0.5、0.7、1、1.2、1.5或2個聚合物部分。

在一些或任何實施例中，胰高血糖素類似物係經由胰高血糖素類似物之胺基酸側鏈與親水性部分之間的共價鍵聯結合至該親水性部分。在一些或任何實施例中，胰高血糖素類似物係經由位置16、17、21、24或29之胺基酸側鏈、C端延長物內之位置、或C端胺基酸、或此等位置之組合結合至親水性部分。在一些態樣中，共價鍵聯至親水性部分(例如，包含親水性部分之胺基酸)之胺基酸為Cys、Lys、 Orn、高Cys或Ac-Phe，且胺基酸之側鏈係共價鍵聯至親水性部分(例如，PEG)。

結合物：rPEG

在一些或任何實施例中，本發明之結合物包含與輔助類似物融合之具有GIP受體促效劑活性之胰高血糖素類似物，其能夠形成與化學PEG類似之延長構形(例如，重組PEG(rPEG)分子)，諸如國際專利申請公開案第WO2009/023270號及美國專利申請公開案第US20080286808號中所述。在一些態樣中，rPEG分子為包含甘胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、丙胺酸或脯胺酸中之一或多者之多肽。在一些態樣中，rPEG為均聚物，例如，聚甘胺酸、聚絲胺酸、聚麩胺酸、聚天冬胺酸、聚丙胺酸或聚脯胺酸。在其他實施例中，rPEG包含兩種類型之重複胺基酸，例如，聚(Gly-Ser)、聚(Gly-Glu)、聚(Gly-Ala)、聚(Gly-Asp)、聚(Gly-Pro)、聚(Ser-Glu)等。在一些態樣中，rPEG包含三種不同類型之胺基酸，例如，聚(Gly-Ser-Glu)。在特定態樣中，rPEG增加胰高血糖素及/或GLP-1促效劑類似物之半衰期。在一些態樣中，rPEG包含淨正電荷或淨負電荷。在一些態樣中，rPEG缺乏二級結構。在一些實施例中，rPEG之長度大於或等於10個胺基酸且在一些實施例中長度為約40至約50個胺基酸。在一些態樣中，輔助肽係經由肽鍵或蛋白酶裂解位點與本發明類似物之N端或C端融合，或插入本發明類似物之環中。在一些態樣中，rPEG包含親和力標籤或鍵聯至大於5kDa之PEG。在一些實施例中，rPEG賦予本發明類似物以增加之流體動力學半徑、血清半衰期、蛋白酶抗性或溶解性且在一些態樣中賦予類似物以降低之免疫原性。

結合物：多聚體

本發明進一步提供本文所揭示類似物之多聚體或二聚體，包括均-或雜-多聚體或均-或雜-二聚體。兩種或兩種以上類似物可使用熟習此項技術者已知之標準鍵聯劑及程序鍵聯在一起。舉例而言，可經由使用雙官能硫醇交聯劑及雙官能胺交聯劑在兩個肽之間形成二聚體，尤其對於已經半胱胺酸、離胺酸、鳥胺酸、高半胱胺酸或乙醯基苯丙胺酸殘基取代之類似物。二聚體可為均二聚體或者可為雜二聚體。在例示性實施例中，連接兩個(或兩個以上)類似物之連接子為PEG，例如，5kDa PEG、20kDa PEG。在一些實施例中，連接子為二硫鍵。舉例而言，二聚體之各單體可包含Cys殘基(例如，末端或內部位置之Cys)且各Cys殘基之硫原子參與形成二硫鍵。在例示性態樣中，二聚體之各單體係經由硫醚鍵鍵聯。在例示性態樣中，一個單體之Lys殘基之ε胺鍵結至Cys殘基，該Cys殘基又經由化學部分連接至另一單體之Lys殘基之ε胺。本文進一步描述製備該等硫醚鍵結之二聚體的方法。在一些態樣中，單體係經由末端胺基酸(例如，N端或C端)，經由內部胺基酸，或經由至少一個單體之末端胺基酸及至少另一單體之內部胺基酸連接。在特定態樣中，單體並非經由N端胺基酸連接。在一些態樣中，多聚體之單體係以各單體之C端胺基酸連接在一起之「尾-尾」定向連接在一起。

前藥

本發明進一步提供本文所述之肽及類似物之前藥。如本文所用之術語「前藥」經定義為在展現其完全藥理學作用之前經歷化學修飾的任何化合物。

在例示性實施例中，前藥為基於醯胺之肽前藥，與公開於2010年6月24日之國際專利申請公開案第WO/2010/071807號中所述者類似。該等前藥意欲延遲作用開始時間且延長藥物之半衰期。延遲作用開始時間為有利的，原因在於其允許前藥在其活化前全身分佈。因此，投與前藥可消除在投藥時由峰值活性造成之併發症且增加母藥物之治療指數。

在例示性態樣中，前藥包含結構：A-B-Q；其中Q為本文所述之肽或類似物；A為胺基酸或羥基酸；B為經由A-B與Q之胺之間的醯胺鍵鍵聯至Q之N-烷基化胺基酸；其中A、B或與A-B鍵聯之Q之胺基酸為非編碼胺基酸，此外其中在生理條件下在PBS中A-B與Q化學裂解之半衰期(t1/2)為至少約1小時至約1週。如本文所用之術語「羥基酸」係指已經修飾以用羥基置換α碳胺基之胺基酸。

在一些實施例中，二肽前藥要素具有式I之通用結構：

其中R₁、R₂、R₄及R₈係獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₁-C₁₈烷基)OH、(C₁-C₁₈烷基)SH、(C₂-C₃烷基)SCH₃、(C₁-C₄烷基)CONH₂、(C₁-C₄烷基)COOH、(C₁-C₄烷基)NH₂、(C₁-C₄烷基)NHC(NH₂ ⁺)NH₂、(C₀-C₄烷基)(C₃-C₆環烷基)、(C₀-C₄烷基)(C₂-C₅雜環基)、(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇、(C₁-C₄烷基)(C₃-C₉雜芳基)及C₁-C₁₂烷基(A)(W₁)C₁-C₁₂烷基，其中W₁為選自由N、S及O組成之群的雜原子，或R₁及R₂與其所連接之原子一起形成C₃-C₁₂環烷基或芳基；或R₄及R₈與其所連接之原子一起形成C₃-C₆環烷基；R₃係選自由以下組成之群：C₁-C₁₈烷基、(C₁-C₁₈烷基)OH、(C₁-C₁₈烷基)NH₂、(C₁-C₁₈烷基)SH、(C₀-C₄烷基)(C₃-C₆)環烷基、(C₀-C₄烷基)(C₂-C₅雜環基)、(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇及(C₁-C₄烷基)(C₃-C₉雜芳基)，或R₄及R₃與其所連接之原子一起形成4、5或6員雜環；R₅為NHR₆或OH；R₆為H、C₁-C₈烷基或R₆及R₂與其所連接之原子一起形成4、5或6 員雜環；且R₇係選自由H及OH組成之群。

在其他實施例中，二肽前藥要素具有式I之通用結構：

其中R₁、R₂、R₄及R₈係獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₁-C₁₈烷基)OH、(C₁-C₁₈烷基)SH、(C₂-C₃烷基)SCH₃、(C₁-C₄烷基)CONH₂、(C₁-C₄烷基)COOH、(C₁-C₄烷基)NH₂、(C₁-C₄烷基)NHC(NH₂ ⁺)NH₂、(C₀-C₄烷基)(C₃-C₆環烷基)、(C₀-C₄烷基)(C₂-C₅雜環基)、(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇、(C₁-C₄烷基)(C₃-C₉雜芳基)及C₁-C₁₂烷基(W₁)C₁-C₁₂烷基，其中W₁為選自由N、S及O組成之群的雜原子，或R₁及R₂與其所連接之原子一起形成C₃-C₁₂環烷基；或R₄及R₈與其所連接之原子一起形成C₃-C₆環烷基；R₃係選自由以下組成之群：C₁-C₁₈烷基、(C₁-C₁₈烷基)OH、(C₁-C₁₈烷基)NH₂、(C₁-C₁₈烷基)SH、(C₀-C₄烷基)(C₃-C₆)環烷基、(C₀-C₄烷基)(C₂-C₅雜環基)、(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇及(C₁-C₄烷基)(C₃-C₉雜芳基)，或R₄及R₃與其所連接之原子一起形成4、5或6員雜環；R₅為NHR₆或OH；R₆為H、C₁-C₈烷基或R₆及R₁與其所連接之原子一起形成4、5或6員雜環；且R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基。

在一些實施例中，R₈為H及R₅為NHR₆。

在一些實施例中，二肽前藥要素具有式I之結構，其中R₁及R₈獨立地為H或C₁-C₈烷基；R₂及R₄係獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₈烷基、C₂-C₈烯基、(C₁-C₄烷基)OH、(C₁-C₄烷基)SH、(C₂-C₃烷基)SCH₃、(C₁-C₄烷基)CONH₂、(C₁-C₄烷基)COOH、(C₁-C₄烷基)NH₂、(C₁-C₄烷基)NHC(NH₂+)NH₂、(C₀-C₄烷基)(C₃-C₆環烷基)、(C₀-C₄烷基)(C₂-C₅雜環基)、(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇及CH₂(C₃-C₉雜芳基)，或R₁及R₂與其所連接之原子一起形成C₃-C₁₂環烷基或芳基；R₅為NHR₆；且R₆為H或C₁-C₈烷基。

在其他實施例中，二肽前藥要素具有式I之結構，其中R₁及R₈獨立地為H或C₁-C₈烷基；R₂及R₄係獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₈烷基、C₂-C₈烯基、(C₁-C₄烷基)OH、(C₁-C₄烷基)SH、(C₂-C₃烷基)SCH₃、(C₁-C₄烷基)CONH₂、(C₁-C₄烷基)COOH、(C₁-C₄烷基)NH₂、(C₁-C₄烷基)NHC(NH₂+)NH₂、(C₀-C₄烷基)(C₃-C₆環烷基)、(C₀-C₄烷基)(C₂-C₅雜環基)、(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇及CH₂(C₃-C₉雜芳基)，或R₁及R₂與其所連接之原子一起形成C₃-C₁₂環烷基；R₃為C₁-C₁₈烷基；R₅為NHR₆；R₆為H或C₁-C₈烷基；且R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基。

根據本發明形成之前藥之半衰期係由二肽前藥要素之取代基、其位置及其所連接之胺基酸決定。舉例而言，前藥可包含本文所述之肽或類似物，其中該二肽前藥要素係經由本文所述之肽或類似物之N端胺基酸的α胺基鍵聯。在此實施例中，具有例如約1小時之t_1/2之前藥包含具有以下結構之二肽前藥要素：

其中R₁及R₂獨立地為C₁-C₁₈烷基或芳基；或R₁及R₂係經由-(CH₂)_p鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₁₈烷基；R₄及R₈各自為氫；且R₅為胺。

在其他實施例中，具有例如約1小時之t_1/2之前藥包含具有以下結構之二肽前藥要素：

其中R₁及R₂獨立地為C₁-C₁₈烷基或(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇；或R₁及R₂係經由-(CH₂)_p鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₁₈烷基；R₄及R₈各自為氫；R₅為NH₂；且R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基。

此外，具有鍵聯至本文所述肽或類似物之N端α胺基酸之二肽前藥要素且具有例如約6小時至約24小時之t_1/2的前藥包含具有以下結構之二肽前藥要素：

其中R₁及R₂係獨立地選自由氫、C₁-C₁₈烷基及芳基組成之群，或R₁及R₂係經由(CH₂)_p鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₁₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-12雜環；R₄及R₈係獨立地選自由氫、C₁-C₈烷基及芳基組成之群；且R₅為胺；限制條件為R₁與R₂皆不為氫且限制條件為R₄或R₈中之一者為氫。

在一些實施例中，具有鍵聯至本文所述肽或類似物之N端α胺基酸之二肽前藥要素且具有例如約12小時至約72小時或在一些實施例中約12小時至約48小時之t_1/2的前藥包含具有以下結構之二肽前藥要素：

其中R₁及R₂係獨立地選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、(C₁-C₁₈烷基)OH、(C₁-C₄烷基)NH₂及(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇，或R₁及R₂係經由(CH₂)_p鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₁₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-12雜環；R₄及R₈係獨立地選自由氫、C₁-C₈烷基及(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇組成之群；R₅為NH₂；且 R₇係選自由以下組成之群：H、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基；限制條件為R₁與R₂皆不為氫且限制條件為R₄或R₈中之至少一者為氫。

在一些實施例中，具有鍵聯至本文所述肽或類似物之N端胺基酸之二肽前藥要素且具有例如約12小時至約72小時或在一些實施例中約12小時至約48小時之t_1/2的前藥包含具有以下結構之二肽前藥要素：

其中R₁及R₂係獨立地選自由氫、C₁-C₈烷基及(C₁-C₄烷基)NH₂組成之群，或R₁及R₂係經由(CH₂)_p鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-6雜環；R₄係選自由氫及C₁-C₈烷基組成之群；且R₅為NH₂；限制條件為R₁與R₂皆不為氫。

在其他實施例中，具有鍵聯至本文所述肽或類似物之N端胺基酸之二肽前藥要素且具有例如約12小時至約72小時或在一些實施例中約12小時至約48小時之t_1/2的前藥包含具有以下結構之二肽前藥要素：

其中R₁及R₂係獨立地選自由氫、C₁-C₈烷基及(C₁-C₄烷基)NH₂組成之群；R₃為C₁-C₆烷基； R₄為氫；且R₅為NH₂；限制條件為R₁與R₂皆不為氫。

其中R₁及R₂係獨立地選自由氫及C₁-C₈烷基、(C₁-C₄烷基)NH₂組成之群，或R₁及R₂係經由(CH₂)_p鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₈烷基；R₄為(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇；R₅為NH₂；且R₇係選自由氫、C₁-C₈烷基及(C₀-C₄烷基)OH組成之群；限制條件為R₁與R₂皆不為氫。

另外提供具有鍵聯至本文所述肽及類似物之N端α胺基酸之二肽前藥要素且具有例如約72小時至約168小時之t_1/2的前藥，其中該二肽前藥要素具有結構：

其中R₁係選自由氫、C₁-C₈烷基及芳基組成之群；R₃為C₁-C₁₈烷基；R₄及R₈各自為氫；且R₅為胺或N上經取代之胺或羥基；限制條件為，若R₁為烷基或芳基，則R₁及R₅與其所連接之原子一起形成4-11雜環。

在一些實施例中，二肽前藥要素具有結構：

其中R₁係選自由氫、C₁-C₈烷基及(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇組成之群；R₃為C₁-C₁₈烷基；R₄及R₈各自為氫；R₅為NHR₆或OH；R₆為H、C₁-C₈烷基，或R₆及R₁與其所連接之原子一起形成4、5或6員雜環；且R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基；限制條件為，若R₁為烷基或(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇，則R₁及R₅與其所連接之原子一起形成4-11雜環。

在一些實施例中，二肽前藥要素係鍵聯至本文所述肽或類似物之內部胺基酸之側鏈胺。在此實施例中，具有例如約1小時之t_1/2之前藥具有結構：

其中R₁及R₂獨立地為C₁-C₈烷基或芳基；或R₁及R₂係經由(CH₂)_p鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₁₈烷基；R₄及R₈各自為氫；且R₅為胺。

在一些實施例中，具有例如約1小時之t_1/2之前藥具有結構：

其中R₁及R₂獨立地為C₁-C₈烷基或(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇；或R₁及R₂係經由-(CH₂)_p-鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₁₈烷基；R₄及R₈各自為氫；R₅為NH₂；且R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基。

此外，具有例如約6小時至約24小時之t_1/2且具有鍵聯至內部胺基酸側鏈之二肽前藥要素的前藥包含具有以下結構之二肽前藥要素：

其中R₁及R₂係獨立地選自由氫、C₁-C₈烷基及芳基組成之群，或R₁及R₂係經由-(CH₂)_p-鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₁₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-12雜環；R₄及R₈獨立地為C₁-C₁₈烷基或芳基；且R₅為胺或N上經取代之胺；限制條件為R₁與R₂皆不為氫且限制條件為R₄或R₈中之一者為氫。

在一些實施例中，具有例如約12小時至約72小時或在一些實施例中約12小時至約48小時之t_1/2且具有鍵聯至內部胺基酸側鏈之二肽前藥要素的前藥包含具有以下結構之二肽前藥要素：

其中R₁及R₂係獨立地選自由氫、C₁-C₈烷基及(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇組成之群，或R₁及R₂係經由-(CH₂)_p-鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₁₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-12雜環；R₄及R₈獨立地為氫、C₁-C₁₈烷基或(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇；R₅為NHR₆；R₆為H或C₁-C₈烷基，或R₆及R₂與其所連接之原子一起形成4、5或6員雜環；且R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基；限制條件為R₁與R₂皆不為氫且限制條件為R₄或R₈中之至少一者為氫。

另外提供具有例如約72小時至約168小時之t_1/2且具有鍵聯至本文所述肽或類似物之內部胺基酸側鏈之二肽前藥要素的前藥，其中該二肽前藥要素具有結構：

其中R₁及R₂係獨立地選自由氫、C₁-C₁₈烷基及芳基組成之群； R₃為C₁-C₁₈烷基；R₄及R₈各自為氫；且R₅為胺或N上經取代之胺或羥基；限制條件為，若R₁及R₂皆獨立地為烷基或芳基，則R₁或R₂係經由(CH2)_p鍵聯至R₅，其中p為2-9。

在一些實施例中，提供具有例如約72小時至約168小時之t_1/2且具有鍵聯至本文所述肽或類似物之內部胺基酸側鏈之二肽前藥要素的前藥，其中該二肽前藥要素具有結構：

其中R₁係選自由氫、C₁-C₁₈烷基及(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇組成之群；R₃為C₁-C₁₈烷基；R₄及R₈各自為氫；R₅為NHR₆或OH；R₆為H或C₁-C₈烷基，或R₆及R₁與其所連接之原子一起形成4、5或6員雜環；且R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基；限制條件為，若R₁及R₂皆獨立地為烷基或(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇，則R₁或R₂係經由(CH₂)_p鍵聯至R₅，其中p為2-9。

在一些實施例中，二肽前藥要素係鍵聯至本文所述肽或類似物之內部胺基酸之側鏈胺，其中該內部胺基酸包含式II之結構：

其中n為1至4之整數。在一些實施例中n為3或4且在一些實施例中內部胺基酸為離胺酸。在一些實施例中，二肽前藥要素係鍵聯至本文所述肽或類似物之位置12、16、17、18、20、28或29之胺基酸側鏈上的一級胺。在一些實施例中，位置12、16、17、18、20、28或29之胺基酸包含式II之結構：

其中n為選自1至4之整數且二肽前藥要素係經由醯胺鍵鍵聯至胺基酸側鏈。在一些實施例中n為4且胺基酸位於位置20。

在另一實施例中，二肽前藥要素係經由芳族胺基酸之芳基上存在的胺鍵聯至其肽或類似物。在一些實施例中，芳族胺基酸為本文所述肽或類似物之內部胺基酸，然而芳族胺基酸亦可為N端胺基酸。在一些實施例中，芳族胺基酸係選自由以下組成之群：胺基-Phe、胺基-萘基丙胺酸、胺基色胺酸、胺基-苯基-甘胺酸、胺基-高Phe及胺基酪胺酸。在一些實施例中，與二肽前藥要素形成醯胺鍵之一級胺在芳基上之對位中。在一些實施例中，芳族胺包含式III之結構：

其中m為1至3之整數。

對於二肽前藥要素經由芳族胺基酸上之芳基上存在之胺鍵聯至本文所述肽或類似物的彼等實施例，具有例如約1小時之t_1/2之前藥具有以下二肽結構：

其中R₁及R₂獨立地為C₁-C₁₈烷基或芳基；R₃為C₁-C₁₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-12雜環；R₄及R₈係獨立地選自由氫、C₁-C₁₈烷基及芳基組成之群；且R₅為胺或羥基。

在一些實施例中，二肽前藥要素係經由芳族胺基酸上之芳基上存在之胺鍵聯至本文所述肽或類似物，具有例如約1小時之t_1/2之前藥具有以下二肽結構：

其中R₁及R₂獨立地為C₁-C₁₈烷基或(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇；R₃為C₁-C₁₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-12雜環；R₄及R₈係獨立地選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基及(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇；R₅為NH₂或OH；且 R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基。

此外，提供具有經由芳族胺基酸鍵聯之二肽前藥要素且具有例如約6小時至約24小時之t_1/2的前藥，其中該二肽包含以下結構：

其中R₁係選自由氫、C₁-C₁₈烷基及芳基組成之群，或R₁及R₂係經由-(CH₂)_p-鍵聯，其中p為2-9；R₃為C₁-C₁₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-6雜環；R₄及R₈係獨立地選自由氫、C₁-C₁₈烷基及芳基組成之群；且R₅為胺或N上經取代之胺。

在一些實施例中，提供具有經由芳族胺基酸鍵聯之二肽前藥要素且具有例如約6小時至約24小時之t_1/2的前藥，其中該二肽包含以下結構：

其中R₁係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、(C₁-C₁₈烷基)OH、(C₁-C₄烷基)NH₂及(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇；R₃為C₁-C₁₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-6雜環；R₄及R₈係獨立地選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基及(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇； R₅為NHR₆；R₆為H、C₁-C₈烷基，或R₆及R₁與其所連接之原子一起形成4、5或6員雜環；且R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基。

另外，提供具有經由芳族胺基酸鍵聯之二肽前藥要素且具有例如約72小時至約168小時之t_1/2的前藥，其中該二肽包含以下結構：

其中R₁及R₂係獨立地選自由氫、C₁-C₈烷基及芳基組成之群；R₃為C₁-C₁₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-6雜環；R₄及R₈各自為氫；且R₅係選自由胺、N上經取代之胺及羥基組成之群。

在一些實施例中，提供具有經由芳族胺基酸鍵聯之二肽前藥要素且具有例如約72小時至約168小時之t_1/2的前藥，其中該二肽包含以下結構：

其中R₁及R₂係獨立地選自由以下組成之群：氫、C₁-C₈烷基、(C₁-C₄烷基)COOH及(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇，或R₁及R₅與其所連接之原子一起形成4-11雜環；R₃為C₁-C₁₈烷基或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成4-6雜環；R₄為氫或與R₃一起形成4-6雜環； R₈為氫；R₅為NHR₆或OH；R₆為H或C₁-C₈烷基，或R₆及R₁與其所連接之原子一起形成4、5或6員雜環；且R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基。

在一些實施例中，二肽前藥要素係經由作為芳族胺基酸之芳基取代基存在的一級胺鍵聯至芳族胺基酸，其中該芳族胺基酸位於本文所述肽或類似物之位置10、13、22或25(基於原生胰高血糖素之編號，參見例如，SEQ ID NO：1)。在一些實施例中，二肽前藥要素鍵聯之芳族胺基酸位於本文所述肽或類似物之位置22。

根據一些實施例，二肽前藥要素係鍵聯於本文所述肽或類似物(包括例如胰高血糖素相關肽或骨鈣化素，以及前述物之類似物、衍生物及結合物)之N端胺，其中該二肽前藥要素包含結構：

其中R₁係選自由H及C₁-C₈烷基組成之群；R₂及R₄係獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₈烷基、C₂-C₈烯基、(C₁-C₄烷基)OH、(C₁-C₄烷基)SH、(C₂-C₃烷基)SCH₃、(C₁-C₄烷基)CONH₂、(C₁-C₄烷基)COOH、(C₁-C₄烷基)NH₂、(C₁-C₄烷基)NHC(NH₂ ⁺)NH₂、(C₀-C₄烷基)(C₃-C₆環烷基)、(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇、CH₂(C₅-C₉雜芳基)，或R₁及R₂與其所連接之原子一起形成C₃-C₆環烷基；R₃係選自由C₁-C₈烷基、(C₃-C₆)環烷基組成之群，或R₄及R₃與其所連接之原子一起形成5或6員雜環；R₅為NHR₆或OH；R₆為H，或R₆及R₂與其所連接之原子一起形成5或6員雜環；且R₇係選自由H及OH組成之群。在一些實施例中，R₁為H或C₁-C₈烷基，R₂係選自由H、C₁-C₆烷基、CH₂OH、(C₁-C₄烷基)NH₂、(C₃-C₆環烷基)及CH₂(C₆芳基)R₇組成之群，或R₆及R₂與其所連接之原子一起形成5員雜環，R₃為C₁-C₆烷基，且R₄係選自由H、C₁-C₄烷基、(C₃-C₆)環烷基、(C₁-C₄烷基)OH、(C₁-C₄烷基)SH及(C₀-C₄烷基)(C₆芳基)R₇組成之群，或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成5員雜環。在另一實施例中，R₃為CH₃，R₅為NHR₆，且在另一替代實施例中，R₃及R₄與其所連接之原子一起形成5員雜環且R₅為NHR₆。

根據另一實施例，二肽前藥要素係鍵聯於本文所述肽或類似物之N端胺，其中該二肽前藥要素包含結構：

其中R₁係選自由H及C₁-C₈烷基組成之群；R₂及R₄係獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₈烷基、C₂-C₈烯基、(C₁-C₄烷基)OH、(C₁-C₄烷基)SH、(C₂-C₃烷基)SCH₃、(C₁-C₄烷基)CONH₂、(C₁-C₄烷基)COOH、(C₁-C₄烷基)NH₂、(C₁-C₄烷基)NHC(NH₂ ⁺)NH₂、(C₀-C₄烷基)(C₃-C₆環烷基)、(C₀-C₄烷基)(C₆-C₁₀芳基)R₇、CH₂(C₅-C₉雜芳基)，或R₁及R₂與其所連接之原子一起形成C₃-C₆環烷基；R₃係選自由C₁-C₈烷基、(C₃-C₆)環烷基組成之群，或R₄及R₃與其所連接之原子一起形成5或6員雜環；R₅為NHR₆或OH； R₆為H，或R₆及R₂與其所連接之原子一起形成5或6員雜環；且R₇係選自由以下組成之群：氫、C₁-C₁₈烷基、C₂-C₁₈烯基、(C₀-C₄烷基)CONH₂、(C₀-C₄烷基)COOH、(C₀-C₄烷基)NH₂、(C₀-C₄烷基)OH及鹵基。在一些實施例中，R₁為H或C₁-C₈烷基，R₂係選自由H、C₁-C₆烷基、CH₂OH、(C₁-C₄烷基)NH₂、(C₃-C₆環烷基)及CH₂(C₆芳基)R₇組成之群，或R₆及R₂與其所連接之原子一起形成5員雜環，R₃為C₁-C₆烷基，且R₄係選自由H、C₁-C₄烷基、(C₃-C₆)環烷基、(C₁-C₄烷基)OH、(C₁-C₄烷基)SH及(C₀-C₄烷基)(C₆芳基)R₇組成之群，或R₃及R₄與其所連接之原子一起形成5員雜環。在另一實施例中，R₃為CH₃，R₅為NHR₆，且在另一替代實施例中，R₃及R₄與其所連接之原子一起形成5員雜環且R₅為NHR₆。

醫藥組合物、用途及套組 鹽

在一些實施例中，胰高血糖素類似物呈鹽形式，例如，醫藥學上可接受之鹽。如本文所用之術語「醫藥學上可接受之鹽」係指保持母化合物之生物活性且並非在生物學上或其他方面不合需要之化合物的鹽。該等鹽可藉由在類似物之最終分離及純化期間就地製備，或藉由使游離鹼官能基與適合之酸反應而獨立製備。許多本文所揭示之化合物由於存在胺基及/或羧基或與其類似之基團而能夠形成酸式鹽及/或鹼式鹽。

醫藥學上可接受之酸加成鹽可由無機酸及有機酸製備。代表性酸加成鹽包括(但不限於)乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽(羥乙基磺酸鹽)、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷磺酸鹽、菸鹼酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過氧硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、磷酸鹽、麩胺酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。衍生自無機酸之鹽包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽及其類似物。衍生自有機酸之鹽包括乙酸鹽、丙酸鹽、乙醇酸鹽、丙酮酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、丙二酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、反丁烯二酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、肉桂酸鹽、杏仁酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、水楊酸鹽及其類似物。可用於形成醫藥學上可接受之酸加成鹽之酸的實例包括例如無機酸，例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸及磷酸；及有機酸，例如，草酸、順丁烯二酸、丁二酸及檸檬酸。

亦可在水楊酸源之最終分離及純化期間就地製備，或藉由使含羧酸部分與適合之鹼(諸如醫藥學上可接受之金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)或與氨或有機一級、二級或三級胺反應來製備鹼加成鹽。醫藥學上可接受之鹽包括(但不限於)基於鹼金屬或鹼土金屬之陽離子，諸如鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及鋁鹽，及其類似鹽；及無毒四級氨及胺陽離子，尤其包括銨、四甲基銨、四乙基銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、三乙基銨、二乙基銨及乙基銨。適於形成鹼加成鹽之其他代表性有機胺包括例如乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪及其類似胺。衍生自有機鹼之鹽包括(但不限於)一級、二級及三級胺之鹽。

此外，鹼性含氮基團可經本發明之類似物四級銨化，如低碳烷基鹵化物，諸如甲基、乙基、丙基及丁基氯化物、溴化物及碘化物；長鏈鹵化物，諸如癸基、月桂基、十四烷基及十八烷醯基氯化物、溴化物及碘化物；芳基烷基鹵化物，如苄基及苯乙基溴化物及其他。藉此獲得水溶性或油溶性或分散性產物。

調配物

根據一些實施例，提供一種醫藥組合物，其中該組合物包含本發明之胰高血糖素類似物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑。如本文所用之術語「醫藥學上可接受之載劑」包括任何標準醫藥載劑，諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液(諸如油/水或水/油乳液)，及各種類型之濕潤劑。該術語亦涵蓋經美國聯邦政府管理機構(regulatory agency of the US Federal government)批准或美國藥典(US Pharmacopeia)中列出供動物(包括人類)使用之任何試劑。

醫藥組合物可包含任何醫藥學上可接受之成分，包括例如酸化劑、添加劑、吸附劑、氣霧劑推進劑(aerosol propellant)、空氣置換劑、烷基化劑、防結塊劑、抗凝劑、抗微生物防腐劑、抗氧化劑、抗菌劑(antiseptic)、基質、黏合劑、緩衝劑、螯合劑、塗佈劑、著色劑、乾燥劑、清潔劑、稀釋劑、消毒劑(disinfectant)、崩解劑、分散劑、溶解增強劑、染料、緩和劑、乳化劑、乳液穩定劑、填充劑、成膜劑、香味增強劑、調味劑、流動增強劑、膠凝劑、成粒劑、保濕劑、潤滑劑、黏膜黏著劑、軟膏基質、軟膏、油性媒劑、有機基質、片劑基質、顏料、增塑劑、拋光劑、防腐劑、錯隔劑、皮膚滲透劑、增溶劑、溶劑、穩定劑、栓劑基質、表面活性劑、界面活性劑、懸浮劑、甜味劑、治療劑、增稠劑、張力劑、毒性劑、增黏劑、吸水劑、水可混溶性共溶劑、水軟化劑或濕潤劑。

在一些實施例中，醫藥組合物包含以下組分之任一者或組合：阿拉伯膠、乙醯磺胺酸鉀、檸檬酸乙醯基三丁酯、檸檬酸乙醯基三乙酯、瓊脂、白蛋白、酒精、脫水酒精、變性酒精、稀釋酒精、油桐酸(aleuritic acid)、海藻酸、脂族聚酯、氧化鋁、氫氧化鋁、硬脂酸鋁、支鏈澱粉、α-直鏈澱粉、抗壞血酸、棕櫚酸抗壞血酸酯、阿斯巴甜糖(aspartame)、抑菌注射用水、膨潤土、膨潤土岩漿、氯化苯甲烴銨、苄索氯銨、苯甲酸、苄醇、苯甲酸苄酯、溴硝丙二醇(bronopol)、丁基化羥基甲氧苯、丁基化羥基甲苯、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸丁酯鈉、海藻酸鈣、抗壞血酸鈣、碳酸鈣、環己胺基磺酸鈣、無水磷酸氫鈣、脫水磷酸氫鈣、磷酸三鈣、丙酸鈣、矽酸鈣、山梨酸鈣、硬脂酸鈣、硫酸鈣、半水合硫酸鈣、芥花油、卡波姆(carbomer)、二氧化碳、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、β-胡蘿蔔素、角叉菜膠、蓖麻油、氫化蓖麻油、陽離子型乳化蠟、乙酸纖維素、乙酸鄰苯二甲酸纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、粉末狀纖維素、矽酸化微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、十六醇硬脂醇、溴棕三甲銨(cetrimide)、十六醇、洗必泰(chlorhexidine)、氯丁醇、氯甲酚、膽固醇、乙酸洗必泰、葡糖酸洗必泰、鹽酸洗必泰、氯二氟乙烷(HCFC)、氯二氟甲烷、氯氟碳化物(CFC)、氯苯氧基乙醇、氯二甲苯酚、玉米糖漿固體、無水檸檬酸、單水合檸檬酸、可可脂、著色劑、玉米油、棉籽油、甲酚、間甲酚、鄰甲酚、對甲酚、交聯羧甲纖維素鈉、交聯聚維酮、環己胺基磺酸、環糊精、葡萄糖結合劑、糊精、右旋糖、無水右旋糖、二唑啶基脲、鄰苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、二乙醇胺、鄰苯二甲酸二乙酯、二氟乙烷(HFC)、二甲基-β-環糊精、環糊精型化合物(諸如Captisol®)、二甲醚、鄰苯二甲酸二甲酯、乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸二鈉、磷酸氫二鈉、多庫酯鈣(docusate calcium)、多庫酯鉀、多庫酯鈉、沒食子酸十二烷酯、溴化十二烷基三甲銨、乙二胺四乙酸鈣二鈉、依地酸(edtic acid)、葡甲胺(eglumine)、乙醇、乙基纖維素、沒食子酸乙酯、月桂酸乙酯、乙基麥芽酚、油酸乙酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸乙酯鉀、對羥基苯甲酸乙酯鈉、乙基香草精、果糖、液體果糖、經研磨果糖、無熱原質果糖、粉末狀果糖、反丁烯二酸、明膠、葡萄糖、液體葡萄糖、飽和植物脂肪酸之甘油酯混合物、甘油、山崳酸甘油酯、單油酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、自乳化單硬脂酸甘油酯、棕櫚基硬脂酸甘油酯、甘胺酸、二醇、四氫呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)、瓜爾膠(guar gum)、七氟丙烷(HFC)、溴化六癸基三甲銨、高果糖糖漿、人類血清白蛋白、烴(HC)、稀鹽酸、II型氫化植物油、羥乙基纖維素、2-羥乙基-β-環糊精、羥丙基纖維素、低取代羥丙基纖維素、2-羥丙基-β-環糊精、羥丙基甲基纖維素、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、咪唑啶基脲、靛卡紅(indigo carmine)、離子交換劑、鐵氧化物、異丙醇、十四烷酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、等滲鹽水、高嶺土、乳酸、乳糖醇、乳糖、羊毛脂、羊毛脂醇、無水羊毛脂、卵磷脂、矽酸鎂鋁、碳酸鎂、正碳酸鎂、無水碳酸鎂、碳酸鎂氫氧化物、氫氧化鎂、月桂基硫酸鎂、氧化鎂、矽酸鎂、硬脂酸鎂、三矽酸鎂、無水三矽酸鎂、蘋果酸、麥芽、麥芽糖醇、麥芽糖醇溶液、麥芽糊精、麥芽酚、麥芽糖、甘露糖醇、中鏈三酸甘油酯、葡甲胺、薄荷醇、甲基纖維素、甲基丙烯酸甲酯、油酸甲酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸甲酯鉀、對羥基苯甲酸甲酯鈉、微晶纖維素及羧甲基纖維素鈉、礦物油、輕質礦物油、礦物油及羊毛脂醇、油、橄欖油、單乙醇胺、蒙脫石、沒食子酸辛酯、油酸、棕櫚酸、石蠟、花生油、石蠟油及羊毛脂醇、藥釉(pharmaceutical glaze)、酚、液化酚、苯氧基乙醇、苯氧基丙醇、苯乙醇、乙酸苯汞、硼酸苯汞、硝酸苯汞、泊拉可林(polacrilin)、泊拉可林鉀、泊洛沙姆(poloxamer)、聚右旋糖、聚乙二醇、聚氧化乙烯、聚丙烯酸酯、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚甲基丙烯酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、海藻酸鉀、苯甲酸鉀、碳酸氫鉀、亞硫酸氫鉀、氯化鉀、檸檬酸鉀、無水檸檬酸鉀、磷酸氫鉀、偏亞硫酸氫鉀、磷酸二氫鉀、丙酸鉀、山梨酸鉀、聚維酮、丙醇、丙酸、碳酸伸丙酯、丙二醇、海藻酸丙二醇酯、沒食子酸丙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丙酯鉀、對羥基苯甲酸丙酯鈉、硫酸魚精蛋白、菜籽油、林格氏溶液(Ringer's solution)、糖精、糖精銨、糖精鈣、糖精鈉、紅花油、皂石、血清蛋白、芝麻油、膠態二氧化矽(colloidal silica/colloidal silicon dioxide)、海藻酸鈉、抗壞血酸鈉、苯甲酸鈉、碳酸氫鈉、亞硫酸氫鈉、氯化鈉、無水檸檬酸鈉、脫水檸檬酸鈉、氯化鈉、環己胺基磺酸鈉、乙二胺四乙酸鈉、十二烷基硫酸鈉、月桂基硫酸鈉、偏亞硫酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸三鈉、無水丙酸鈉、丙酸鈉、山梨酸鈉、乙醇酸澱粉鈉、硬脂醯反丁烯二酸鈉、亞硫酸鈉、山梨酸、脫水山梨糖醇酯(脫水山梨糖醇脂肪酸酯)、山梨糖醇、70%山梨糖醇溶液、大豆油、鯨蠟、澱粉、玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、預膠凝化澱粉、可滅菌玉米澱粉、硬脂酸、純化硬脂酸、硬脂醇、蔗糖、糖、可壓性糖、糖粉(confectioner's sugar)、糖球、轉化糖、Sugartab、日落黃(Sunset Yellow)FCF、合成石蠟、滑石、酒石酸、酒石黃(tartrazine)、四氟乙烷(HFC)、可可豆油、硫柳汞(thimerosal)、二氧化鈦、α生育酚、乙酸生育酚、α丁二酸生育酚酯、β-生育酚、δ-生育酚、γ-生育酚、黃蓍、三乙酸甘油酯、檸檬酸三丁酯、三乙醇胺、檸檬酸三乙酯、三甲基-β-環糊精、溴化三甲基四癸基銨、tris緩衝液、乙二胺四乙酸三鈉、香草精、I型氫化植物油、水、軟水、硬水、無二氧化碳之水、無熱原質水、注射用水、無菌吸入用水、無菌注射用水、無菌灌洗用水、蠟、陰離子型乳化蠟、巴西棕櫚蠟(carnauba wax)、陽離子型乳化蠟、十六烷基酯蠟、微晶蠟、非離子型乳化蠟、栓劑蠟、白蠟、黃蠟、白石蠟油、羊毛脂、三仙膠、木糖醇、玉米蛋白、丙酸鋅、鋅鹽、硬脂酸鋅，或Handbook of Pharmaceutical Excipients，第3版，A.H.Kibbe(Pharmaceutical Press,London,UK,2000)(其係以全文引用之方式併入)中之任何賦形劑。Remington's Pharmaceutical Sciences，第 16版，E.W.Martin(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1980)(其係以全文引用之方式併入)揭示調配醫藥學上可接受之組合物中所用之各種組分及其已知製備技術。涵蓋任何習知試劑在醫藥組合物中之使用，但如不可與醫藥組合物相容之任何習知試劑則屬於例外。補充活性成分亦可併入組合物中。

在一些實施例中，一或多種前述組分可以任何濃度存在於醫藥組合物中，諸如至少A，其中A為0.0001% w/v、0.001% w/v、0.01% w/v、0.1% w/v、1% w/v、2% w/v、5% w/v、10% w/v、20% w/v、30% w/v、40% w/v、50% w/v、60% w/v、70% w/v、80% w/v或90% w/v。在一些實施例中，一或多種前述組分可以任何濃度存在於醫藥組合物中，諸如至多B，其中B為90% w/v、80% w/v、70% w/v、60% w/v、50% w/v、40% w/v、30% w/v、20% w/v、10% w/v、5% w/v、2% w/v、1% w/v、0.1% w/v、0.001% w/v或0.0001%。在其他實施例中，一或多種前述組分可以任何濃度範圍存在於醫藥組合物中，諸如約A至約B。在一些實施例中，A為0.0001%且B為90%。

在一些實施例中，醫藥學上可接受之成分係選自由以下組成之群：糖(例如，葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麥芽糖、聚葡萄糖、甘油、聚葡萄糖、蜜二糖(mellibiose)、松三糖(melezitose)、棉子糖、甘露三糖、水蘇糖(stachyose)、麥芽糖、乳酮糖(lactulose)、麥芽酮糖(maltulose)或異麥芽酮糖，或此等糖之組合)、糖醇(例如，乙二醇、甘油、赤藻糖醇、蘇糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、艾杜糖醇、異麥芽糖、麥芽糖醇、乳糖醇或葡萄糖醇，或此等糖醇之組合)、鹽(例如，氯化鈉)、乳化劑或界面活性劑(例如，聚山梨醇酯，諸如聚氧乙烯20脫水山梨糖醇單油酸酯，或環氧乙烷與環氧丙烷之其他嵌段共聚物)、凍乾保護劑，以及其混合物。舉例而言，諸如糖或糖醇之賦形劑例如以約20mg/mL 至約40mg/mL、或25mg/mL至45mg/mL、諸如35mg/mL之濃度存在。

醫藥組合物可經調配以達到生理上相容之pH值。在一些實施例中，視調配物及投藥途徑而定，醫藥組合物之pH值可為至少5、至少5.5、至少6、至少6.5、至少7、至少7.5、至少8、至少8.5、至少9、至少9.5、至少10或至少10.5直至且包括pH 11，例如介於4與7之間，或介於4.5與5.5之間。在例示性實施例中，醫藥組合物可包含緩衝劑以達到生理上相容之pH值。緩衝劑可包括能夠在所需pH值下緩衝之任何化合物，諸如，磷酸鹽緩衝液(例如PBS)、三乙醇胺、Tris、二羥乙基甘胺酸(bicine)、TAPS、三羥甲基甘胺酸(tricine)、HEPES、TES、MOPS、PIPES、二甲基胂酸鹽(cacodylate)、MES、乙酸鹽、檸檬酸鹽、丁二酸鹽、組胺酸或其他醫藥學上可接受之緩衝劑。在例示性實施例中，緩衝液之濃度為至少0.5mM、至少1mM、至少5mM、至少10mM、至少20mM、至少30mM、至少40mM、至少50mM、至少60mM、至少70mM、至少80mM、至少90mM、至少100mM、至少120mM、至少150mM或至少200mM。在一些實施例中，緩衝液之濃度為不大於300mM(例如，至多200mM、至多100mM、至多90mM、至多80mM、至多70mM、至多60mM、至多50mM、至多40mM、至多30mM、至多20mM、至多10mM、至多5mM、至多1mM)。舉例而言，緩衝液濃度可為約2mM至約100mM，或約10mM至約50mM。

投藥途徑

以下關於投藥途徑之討論僅經提供以說明例示性實施例且不應理解為以任何方式限制範疇。

適於經口投與之調配物可包括：(a)液體溶液，諸如有效量之本發明類似物溶解於諸如水、生理鹽水或橙汁之稀釋劑中；(b)膠囊、藥囊、錠劑、口含錠及糖衣錠，各含有預定量之固體或顆粒形式之活性成分；(c)散劑；(d)於適當液體中之懸浮液；及(e)適合之乳液。液體調配物可包括諸如水及醇(例如，乙醇、苄醇及聚乙二醇)之稀釋劑，其中添加有或未添加醫藥學上可接受之界面活性劑。膠囊形式可為含有例如界面活性劑、潤滑劑及惰性填充劑(諸如乳糖、蔗糖、磷酸鈣及玉米澱粉)之普通硬殼或軟殼明膠類型。錠劑形式可包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇、玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、海藻酸、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、瓜爾膠、膠態二氧化矽、交聯羧甲纖維素鈉、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酸、及其他賦形劑、著色劑、稀釋劑、緩衝劑、崩解劑、濕潤劑(moistening agent)、防腐劑、調味劑及其他藥理學上相容之賦形劑中之一或多者。除含有如此項技術中已知之該等賦形劑之外，口含錠形式可包含於通常蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍之調味劑中之本發明類似物，以及包含於諸如明膠與甘油、或蔗糖與阿拉伯膠之惰性基質中之本發明類似物的片劑、乳液、凝膠及其類似物。

單獨或組合其他適合組分之本發明類似物可經由肺部投與傳遞且可製成待經由吸入投與之氣霧劑調配物。此等氣霧劑調配物可置於諸如二氯二氟甲烷、丙烷、氮及其類似物之可接受之加壓推進劑中。其亦可經調配成非加壓製劑之醫藥劑，諸如於噴霧器或霧化器中。該等噴霧調配物亦可用於噴霧黏膜。在一些實施例中，類似物經調配成粉末摻合物或微粒或奈米粒子。此項技術中已知適合之肺部調配物。參見例如Qian等人，Int J Pharm 366：218-220(2009)；Adjei及Garren,Pharmaceutical Research,7(6)：565-569(1990)；Kawashima等人，J Controlled Release 62(1-2)：279-287(1999)；Liu等人，Pharm Res 10(2)：228-232(1993)；國際專利申請公開案第WO 2007/133747號及第WO 2007/141411號。

適於非經腸投與之調配物包括水性及非水性等張無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使調配物與預期接受者之血液等張之溶解物；及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩定劑及防腐劑。術語「非經腸」意謂不經由消化道而藉由諸如皮下、肌肉內、脊椎內或靜脈內之一些其他途徑。本發明之類似物可於醫藥載劑中與生理學上可接受之稀釋劑一起投與，該醫藥載劑諸如無菌液體或液體混合物，包括水、生理鹽水、右旋糖水溶液及相關糖溶液、醇(諸如乙醇或十六醇)、二醇(諸如丙二醇或聚乙二醇)、二甲亞碸、甘油、縮酮(諸如2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊烷-4-甲醇)、醚、聚(乙二醇)400、油、脂肪酸、脂肪酸酯或甘油酯、或乙醯化脂肪酸甘油酯，其中添加有或未添加醫藥學上可接受之界面活性劑(諸如皂或清潔劑)、懸浮劑(諸如果膠)、卡波姆、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素、或乳化劑及其他醫藥佐劑。

可用於非經腸調配物中之油包括石油、動物油、植物油或合成油。油之特定實例包括花生油、大豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄欖油、石蠟油及礦物油。適用於非經腸調配物中之脂肪酸包括油酸、硬脂酸及異硬脂酸。油酸乙酯及十四烷酸異丙酯為適合之脂肪酸酯之實例。

適用於非經腸調配物中之皂包括脂肪鹼金屬、銨及四乙醇胺鹽，且適合之清潔劑包括：(a)陽離子型清潔劑，諸如，鹵化二甲基二烷基銨及鹵化烷基吡錠；(b)陰離子型清潔劑，諸如，烷基、芳基及烯烴磺酸鹽、烷基、烯烴、醚及單甘油酯硫酸鹽及磺基丁二酸鹽；(c)非離子型清潔劑，諸如，脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇醯胺，及聚氧乙烯/聚丙烯共聚物；(d)兩性清潔劑，諸如，烷基-β-胺基丙酸鹽，及2-烷基-咪唑啉四級銨鹽；及(e)其混合物。

非經腸調配物通常將含有約0.5重量%至約25重量%之溶液形式之本發明類似物。可使用防腐劑及緩衝劑。為了最小化或消除注射部位之刺激，該等組合物可含有一或多種非離子型界面活性劑，其具有約12至約17之親水-親脂平衡值(HLB)。該等調配物中界面活性劑之量通常將在約5重量%至約15重量%之範圍內。適合之界面活性劑包括聚乙二醇脫水山梨糖醇脂肪酸酯(諸如脫水山梨糖醇單油酸酯)及環氧乙烷與藉由環氧丙烷與丙二醇縮合形成之疏水性基質的高分子量加合物。非經腸調配物可呈現於單位劑量或多劑量密封容器(諸如安瓿及小瓶)中，且可儲存於冷凍乾燥(凍乾)條件下，僅需要在即將使用之前添加例如注射用水之無菌液體賦形劑。可自先前所述種類之無菌散劑、顆粒及錠劑製備臨時注射溶液及懸浮液。

可注射調配物係根據本發明。一般技術者熟知用於可注射組合物之有效醫藥載劑之要求(參見例如Pharmaceutics and Pharmacy Practice,J.B.Lippincott Company,Philadelphia,PA,Banker及Chalmers編，第238-250頁(1982)；及ASHP Handbook on Injectable Drugs,Toissel，第4版，第622-630頁(1986))。

另外，本發明之類似物可藉由與諸如乳化基質或水溶性基質之多種基質混合而製成用於經直腸投與之栓劑。適於經陰道投與之調配物可以子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、發泡體或噴霧配方形式呈現，除了含有活性成分以外，亦含有如此項技術中已知適當之該等載劑。

熟習此項技術者應瞭解，除了上述醫藥組合物以外，本發明之類似物亦可經調配成包涵複合物，諸如環糊精包涵複合物，或脂質體。

劑量

咸信本發明之類似物可用於治療GIP受體促效作用、GIP/GLP-1受體共促效作用、GIP/胰高血糖素受體共促效作用、或GIP/GLP-1/胰高血糖素受體三重促效作用發揮作用之疾病或醫學病狀之方法中。就本發明之目的而言，所投與本發明類似物之量或劑量應足以在合理時間範圍內在個體或動物中實現例如治療或預防反應。舉例而言，本發明類似物之劑量應自投藥時起在約1分鐘至4分鐘、1小時至4小時或1週至4週或4週以上(例如，5週至20週或20週以上)之時段內足以刺激cAMP自如本文所述之細胞中分泌或足以降低哺乳動物之血糖含量、脂肪含量、食物攝入量或體重。在例示性實施例中，時段可能甚至更長。應依據特定本發明類似物之功效及動物(例如人類)之狀況，以及待治療動物(例如人類)之體重來確定劑量。

此項技術中已知用於確定投與劑量之許多分析法。就本文之目的而言，可使用一分析法來確定待投與至哺乳動物之起始劑量，該分析法包含在向哺乳動物(該哺乳動物所屬之一組哺乳動物各自經給與不同劑量之類似物)投與既定劑量之本發明類似物時比較血糖含量降低之程度。可藉由此項技術中已知之方法(包括例如本文實例10所述之方法)分析投與特定劑量時血糖含量降低之程度。

亦將藉由投與特定本發明類似物可能伴隨產生之任何不良副作用的存在、性質及程度來確定本發明類似物之劑量。通常，主治醫師將考慮到諸如年齡、體重、一般健康、飲食、性別、待投與之本發明類似物、投藥途徑及待治療病狀之嚴重程度之多種因素，決定用於治療各個別患者之本發明類似物之劑量。作為實例且並不意欲限制本發明，本發明類似物之劑量可為每天每公斤待治療個體之體重約0.0001g至約1g、每天每公斤體重約0.0001g至約0.001g、或每天每公斤體重約0.01mg至約1g。在例示性實施例中，劑量可為約1mg至約40mg、或約4mg至約30mg、或約4至約20mg、或約10至約20mg、或約12mg至約30mg之總每週劑量。

在一些實施例中，醫藥組合物包含適於投與至患者之純度水準之任何本文揭示之類似物。在一些實施例中，類似物具有至少約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%之純度水準，及醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑或賦形劑。在一些態樣中，醫藥組合物包含濃度為至少A之本發明類似物，其中A為約0.001mg/ml、約0.01mg/ml、約0.1mg/ml、約0.5mg/ml、約1mg/ml、約2mg/ml、約3mg/ml、約4mg/ml、約5mg/ml、約6mg/ml、約7mg/ml、約8mg/ml、約9mg/ml、約10mg/ml、約11mg/ml、約12mg/ml、約13mg/ml、約14mg/ml、約15mg/ml、約16mg/ml、約17mg/ml、約18mg/ml、約19mg/ml、約20mg/ml、約21mg/ml、約22mg/ml、約23mg/ml、約24mg/ml、約25mg/ml或25mg/ml以上。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為至多B之類似物，其中B為約30mg/ml、約25mg/ml、約24mg/ml、約23mg/ml、約22mg/ml、約21mg/ml、約20mg/ml、約19mg/ml、約18mg/ml、約17mg/ml、約16mg/ml、約15mg/ml、約14mg/ml、約13mg/ml、約12mg/ml、約11mg/ml、約10mg/ml、約9mg/ml、約8mg/ml、約7mg/ml、約6mg/ml、約5mg/ml、約4mg/ml、約3mg/ml、約2mg/ml、約1mg/ml或約0.1mg/ml。在一些實施例中，組合物可含有濃度範圍為A至Bmg/ml(例如，約0.001mg/ml至約30.0mg/ml)之類似物。

目標形式

一般技術者將容易地瞭解，本發明之類似物可以任何數目之方式經修飾，以使得本發明類似物之治療或預防功效經由修飾增加。舉例而言，本發明類似物可直接或間接地經由連接子結合至靶向部分。此項技術中已知將例如本文所述之胰高血糖素類似物之化合物結合至靶向部分之實務。參見例如Wadhwa等人，J Drug Targeting,3,111-127(1995)及美國專利第5,087,616號。如本文所用之術語「靶向部分」係指特異性識別且結合至細胞表面受體以使得靶向部分將本發明類似物之傳遞指向表面上存在受體(胰高血糖素受體、GLP-1受體)表現之細胞群體的任何分子或試劑。靶向部分包括(但不限於)結合至細胞表面受體(例如，上皮生長因子受體(EGFR)、T細胞受體(TCR)、B細胞受體(BCR)、CD28、血小板衍生生長因子受體(PDGF)、菸鹼乙醯基膽鹼受體(nAChR)等)之抗體或其片段、肽、激素、生長因子、細胞因子，及任何其他天然或非天然配位體。如本文所用之「連接子」為將兩個獨立實體彼此結合在一起之鍵、分子或分子群。連接子可向兩個實體提供最佳間隔或可進一步供應允許兩個實體彼此分離之不穩定鍵聯。不穩定鍵聯包括光可裂解基團、酸不穩定部分、鹼不穩定部分及酶可裂解基團。在一些實施例中，術語「連接子」係指橋接本發明類似物與靶向部分之任何試劑或分子。一般技術者認識到本發明類似物上之位點(其對於本發明類似物之功能並非必需的)為連接連接子及/或靶向部分之理想位點，其限制條件為連接子及/或靶向部分在連接至本發明類似物時不會干擾本發明類似物之功能，亦即，刺激cAMP自細胞中分泌以治療糖尿病或肥胖症之能力。

控制釋放調配物

或者，本文所述之胰高血糖素類似物可經改質成儲槽形式，以使得本發明類似物經釋放入所投與身體內之方式係關於在體內之時間及位置受控制(參見例如美國專利第4,450,150號)。本發明類似物之儲槽形式可為例如包含本發明類似物及多孔或無孔材料(諸如聚合物)之可植入組合物，其中本發明類似物係由該材料囊封或在整個材料內擴散及/或無孔材料之降解。隨後將儲槽植入身體內所需位置且本發明類似物係以預定速率自植入物中釋放。

在例示性態樣中，醫藥組合物係經改質以具有任何類型之活體內釋放概況。在一些態樣中，醫藥組合物為立即釋放、控制釋放、持續釋放、延長釋放、延遲釋放或兩相釋放調配物。此項技術中已知調配肽以進行控制釋放之方法。參見例如Qian等人，J Pharm 374：46-52(2009)及國際專利申請公開案第WO 2008/130158號；第WO2004/033036號；第WO2000/032218號；及第WO 1999/040942號。

本發明之組合物可進一步包含例如微胞或脂質體，或一些其他囊封形式，或可以延長釋放形式投與以提供長時期之儲存及/或傳遞作用。可根據任何方案投與所揭示之醫藥調配物，包括例如每日(每日1次、每日2次、每日3次、每日4次、每日5次、每日6次)、每週三次、每週兩次、每兩日、每三日、每四日、每五日、每六日、每週、每兩週、每三週、每月或每兩月。

組合

本文所述之胰高血糖素類似物可單獨或組合其他治療劑投與，其旨在治療或預防本文所述之任何疾病或醫學病狀。舉例而言，本文所述之胰高血糖素類似物可與抗糖尿病或抗肥胖症藥劑(同時或依序)共同投與。此項技術中已知或正在研究之抗糖尿病藥劑包括胰島素、瘦素(leptin)、肽YY(PYY)、胰肽(PP)、纖維母細胞生長因子21(FGF21)、Y2Y4受體促效劑；磺醯脲，諸如甲苯磺丁脲(tolbutamide)(山地酶(Orinase))、乙醯苯磺醯環己脲(acetohexamide)(戴美樂(Dymelor))、妥拉磺脲(tolazamide)(甲磺氮卓脲(Tolinase))、氯磺丙脲(chlorpropamide)(特泌胰(Diabinese))、格列吡嗪(glipizide)(瑞易寧(Glucotrol))、格列本脲(glyburide)(達安療(Diabeta)、優降糖(Micronase)、格列納斯(Glynase))、格列美脲(glimepiride)(亞莫利(Amaryl))，或格列齊特(gliclazide)(達美康(Diamicron))；美格列奈(meglitinide)，諸如諾和隆(repaglinide)(普瑞丁(Prandin))或那格列奈(nateglinide)(唐力(Starlix))；雙胍，諸如二甲雙胍(metformin)(格華止(Glucophage))或苯乙雙胍(phenformin)；噻唑啶二酮，諸如羅格列酮(rosiglitazone)(梵帝雅(Avandia))、吡格列酮(pioglitazone)(愛妥糖(Actos))，或曲格列酮(troglitazone)(瑞如林(Rezulin))，或其他PPARγ抑制劑；抑制碳水化合物消化之α葡糖苷酶抑制劑，諸如米格列醇(miglitol)(格利塞(Glyset))、醣祿(acarbose)(普利科斯(Precose)/格魯科貝(Glucobay))；艾塞那肽(exenatide)(百泌達(Byetta))或普蘭林肽(pramlintide)；二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制劑，諸如維格列汀(vildagliptin)或西他列汀(sitagliptin)；SGLT(鈉依賴性葡萄糖轉運體1)抑制劑；葡萄糖激酶活化劑(GKA)；胰高血糖素受體拮抗劑(GRA)；或FBP酶(果糖1,6-二磷酸酶)抑制劑。

此項技術中已知或正在研究之抗肥胖症藥劑包括食慾抑制劑，包括苯乙胺型刺激劑、苯丁胺(phentermine)(視情況與苯氟拉明(fenfluramine)或右芬氟拉明(dexfenfluramine)一起)、安非拉酮(diethylpropion)(Tenuate®)、苯甲曲嗪(phendimetrazine)(Prelu-2®、Bontril®)、苄非他明(benzphetamine)(Didrex®)、諾美婷(sibutramine)(Meridia®、Reductil®)；利莫那班(rimonabant)(Acomplia®)、其他類大麻酚受體拮抗劑；調酸素(oxyntomodulin)；氟西汀鹽酸鹽(fluoxetine hydrochloride)(百憂解(Prozac))；曲那沙(Qnexa)(托吡酯(topiramate)及芬特明(phentermine))、艾柯薩列(Excalia)(丁胺苯丙酮(bupropion)及唑尼沙胺(zonisamide))或孔曲維(Contrave)(丁胺苯丙酮及納曲酮(naltrexone))；或脂肪酶抑制劑，類似於XENICAL(羅氏鮮(Orlistat))或新利司他(Cetilistat)(亦稱ATL-962)，或GT 389-255。

在一些實施例中，本文所述之肽係與用於治療非酒精性脂肪肝疾病或NASH之藥劑一起共同投與。用於治療非酒精性脂肪肝疾病之藥劑包括熊去氧膽酸(a.k.a.、阿克替高(Actigall)、烏爾索(URSO)及熊二醇(Ursodiol))、二甲雙胍(格華止)、羅格列酮(梵帝雅)、氯貝丁酯 (Clofibrate)、吉非羅齊(Gemfibrozil)、多黏菌素B(Polymixin B)及甜菜鹼(Betaine)。

在一些實施例中，本文所述之肽係與用於治療神經退化性疾病(例如，帕金森氏病(Parkinson's Disease))之藥劑一起共同投與。抗帕金森氏病藥劑此外在此項技術中已知且包括(但不限於)左旋多巴(levodopa)、卡比多巴(carbidopa)、抗膽鹼劑(anticholinergics)、溴麥角環肽(bromocriptine)、普拉克索(pramipexole)及羅匹尼洛(ropinirole)、金剛胺(amantadine)及雷沙吉蘭(rasagiline)。

鑒於前述，本發明進一步提供另外包含此等其他治療劑之一的醫藥組合物及套組。該額外治療劑可與本發明類似物同時或依序投與。在一些態樣中，類似物係在額外治療劑之前投與，而在其他態樣中，類似物係在額外治療劑之後投與。

用途

基於本文第一次提供之資訊，涵蓋本發明之組合物(例如，相關醫藥組合物)可用於治療疾病或醫學病狀，其中例如缺乏針對GIP受體、GLP-1受體或針對兩種受體之活性為該疾病或醫學病狀之發作及/或進展之因素。因此，本發明提供一種治療或預防患者之疾病或醫學病狀之方法，其中該疾病或醫學病狀為缺乏GIP受體活化及/或GLP-1受體活化與疾病或醫學病狀之發作及/或進展相關的疾病或醫學病狀。該方法包含向該患者提供可有效治療或預防該疾病或醫學病狀之量的根據任何本文所述者的組合物或結合物。

在一些實施例中，疾病或醫學病狀為代謝症候群。代謝症候群(亦稱為代謝症候群X、胰島素抗性症候群或雷文氏症候群(Reaven's syndrome))為一種影響5千萬以上美國人之病症。代謝症候群之特徵通常在於群集出現至少三種或三種以上之以下風險因子：(1)腹部肥胖(腹部中及周圍過多脂肪組織)；(2)致動脈粥樣硬化血脂異常(包括高三酸甘油酯、低HDL膽固醇及高LDL膽固醇之血脂異常，其增強斑塊在動脈壁中之積聚)；(3)高血壓；(4)胰島素抗性或葡萄糖不耐受；(5)易栓塞狀態(例如，血液中之高血纖維蛋白原或血纖維蛋白溶酶原活化劑抑制劑-1)；及(6)促發炎狀態(例如，血液中C-反應性蛋白升高)。其他風險因子可包括老齡化、激素不平衡及遺傳傾向性。

代謝症候群與冠狀動脈心臟病及與血管斑塊積聚相關之其他病症(諸如中風及周邊血管疾病(稱為動脈粥樣硬化心血管疾病(ASCVD)))之風險增加有關。患有代謝症候群之患者可自早期階段之胰島素抗性狀態進展至發育完全的II型糖尿病，ASCVD之風險進一步增加。不欲受任何特定理論限制，胰島素抗性、代謝症候群與血管疾病之間的關係可涉及一或多個並行致病機制，包括胰島素刺激之血管擴張受損、由於氧化應激增強而致之胰島素抗性相關之NO可用性降低，及脂肪細胞衍生之激素(諸如脂聯素(adiponectin))異常(Lteif及Mather,Can.J.Cardiol.20(增刊B)：66B-76B(2004))。

根據2001年美國國家膽固醇教育計劃成人治療指引(2001 National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel)(ATP III)，同一個體中出現任何三種以下特性將滿足代謝症候群之準則：(a)腹部肥胖(男性腰圍大於102cm且女性腰圍大於88cm)；(b)血清三酸甘油酯(150mg/dl或150mg/dl以上)；(c)HDL膽固醇(男性為40mg/dl或40mg/dl以下且女性為50mg/dl或50mg/dl以下)；(d)血壓(130/85或130/85以上)；及(e)空腹血糖(110mg/dl或110mg/dl以上)。根據世界衛生組織(World Health Organization，WHO)，具有至少兩個以下準則之具有高胰島素含量(單獨之高空腹血糖或高餐後葡萄糖)之個體滿足代謝症候群之準則：(a)腹部肥胖(腰臀比大於0.9，身體質量指數為至少30kg/m²，或腰部量測結果大於37吋)；(b)展示三酸甘油酯含量為至少150mg/dl或HDL膽固醇低於35mg/dl之膽固醇指引；(c) 血壓為140/90或140/90以上，或正在治療高血壓。(Mathur,Ruchi,「Metabolic Syndrome」,Shiel,Jr.,William C.編，MedicineNet.com,2009年5月11日)。

就本文之目的而言，若個體滿足2001年美國國家膽固醇教育計劃成人治療指引或WHO所提出之準則之任一或兩個準則，則該個體視為罹患代謝症候群。

不受任何特定理論限制，本文所述之組合物及結合物可用於治療代謝症候群。因此，本發明提供一種預防或治療個體之代謝症候群或減少個體之一個、兩個、三個或三個以上代謝症候群風險因子的方法，其包含向該個體提供可有效預防或治療代謝症候群或其風險因子之量的本文所述之組合物。

在一些實施例中，該方法治療高血糖醫學病狀。在例示性態樣中，該高血糖醫學病狀為糖尿病、I型糖尿病、II型糖尿病或妊娠性糖尿病(胰島素依賴性或非胰島素依賴性)。在一些態樣中，該方法藉由減少糖尿病之一或多個併發症(包括腎病變、視網膜病變及血管疾病)來治療高血糖醫學病狀。

在一些態樣中，疾病或醫學病狀為肥胖症。在一些態樣中，肥胖症為藥物誘發性肥胖症。在一些態樣中，該方法藉由預防或降低患者之體重增加或增加患者之體重損失來治療肥胖症。在一些態樣中，該方法藉由降低食慾、減少食物攝入、降低患者之脂肪含量或降低食物穿過胃腸系統之移動速率來治療肥胖症。

因為肥胖症與其他疾病之發作或進展有關，所以治療肥胖症之方法進一步適用於減少與肥胖症有關之併發症(包括血管疾病(冠狀動脈疾病、中風、周邊血管疾病、缺血再灌注等)、高血壓、II型糖尿病發作、高脂質血症及肌肉骨骼疾病)之方法中。本發明因此提供治療或預防與此等肥胖症有關之併發症之方法。

在一些實施例中，疾病或醫學病狀為非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)。NAFLD係指多種肝臟疾病，其中包括單純脂肪肝(脂肪變性)、非酒精性脂肝炎(NASH)及肝硬化(肝臟的不可逆之晚期瘢痕形成)。所有階段之NAFLD共同具有脂肪(脂肪浸潤)在肝臟細胞(肝細胞)中積聚。單純脂肪肝為特定類型之脂肪(三酸甘油酯)在肝臟細胞中異常積聚而無發炎或瘢痕形成。在NASH中，脂肪積聚與肝臟之發炎(肝炎)及瘢痕形成(纖維化)之不同程度有關。發炎性細胞可破壞肝臟細胞(肝細胞壞死)。在術語「脂肝炎」及「脂肪壞死」中，脂肪係指脂肪浸潤，肝炎係指肝臟發炎，且壞死係指肝臟細胞破壞。NASH最終可導致肝臟瘢痕形成(纖維化)及隨後不可逆之晚期瘢痕形成(肝硬化)。由NASH造成之肝硬化為NAFLD範圍中之最終且最嚴重之階段。(Mendler,Michel,「Fatty Liver：Nonalcoholic Fatty Liver Disease(NAFLD)and Nonalcoholic Steatohepatitis(NASH)」,Schoenfield,Leslie J.編，MedicineNet.com,2005年8月29日)。

酒精性肝臟疾病或酒精誘發性肝臟疾病涵蓋與酒精過多消耗相關或由酒精過多消耗造成之三種病理學不同之肝臟疾病：脂肪肝(脂肪變性)、慢性或急性肝炎，及肝硬化。酒精性肝炎可包括：輕度肝炎，其中異常實驗室測試為疾病之唯一指示；及重度肝臟功能障礙，其具有諸如黃疸(由膽紅素滯留造成之皮膚發黃)、肝性腦病(由肝臟衰竭造成之神經學功能障礙)、腹水(腹部中液體積聚)、食管靜脈曲張出血(食管中靜脈曲張)、異常凝血及昏迷之併發症。在組織學上，酒精性肝炎具有肝細胞飛速變性、嗜中性白血球發炎及有時麥洛利氏小體(Mallory body)(細胞中間物絲蛋白之異常聚集)之特徵性外觀。肝硬化在解剖學上之特徵在於肝臟中廣泛存在之節結以及纖維化。(Worman,Howard J.,「Alcoholic Liver Disease」,Columbia University Medical Center網站)。

不受任何特定理論限制，本文所述之組合物及結合物可用於治療酒精性肝臟疾病、NAFLD或其任何階段，包括例如脂肪變性、脂肝炎、肝炎、肝臟發炎、NASH、肝硬化，或其併發症。因此，本發明提供一種預防或治療個體之酒精性肝臟疾病、NAFLD或其任何階段之方法，其包含向個體提供可有效預防或治療酒精性肝臟疾病、NAFLD或其任何階段之量的本文所述之組合物。該等治療方法包括降低以下一者、兩者、三者或三者以上：肝臟脂肪含量、肝硬化之發病率或進展、肝細胞癌之發病率、發炎之徵兆(例如，肝酶(例如，天冬胺酸胺基轉移酶AST及/或丙胺酸胺基轉移酶ALT，或LDH)含量異常、血清鐵蛋白升高、血清膽紅素升高)，及/或纖維化之徵兆(例如，TGF-β含量升高)。在例示性實施例中，該等組合物係用於治療已進展至超過單純脂肪肝(脂肪變性)且展現發炎或肝炎之徵兆的患者。該等方法可導致例如AST及/或ALT含量降低。

GLP-1及腸促胰島素類似物-4已展示具有一些神經保護作用。本發明亦提供本文所述之組合物在治療神經退化性疾病中之用途，包括(但不限於)：阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、帕金森氏病、多發性硬化、肌萎縮性側索硬化、其他髓鞘脫失相關病症、老年性癡呆、皮質下癡呆、動脈硬化性癡呆、AIDS相關性癡呆或其他癡呆、中樞神經系統癌症、創傷性腦損傷、脊髓損傷、中風或大腦局部缺血、腦血管炎、癲癇症、亨廷頓氏病(Huntington's disease)、妥瑞症候群(Tourette's syndrome)、格-巴二氏症候群(Guillain Barre syndrome)、威爾遜病(Wilson disease)、皮克氏病(Pick's disease)、神經發炎性病症、病毒、真菌或細菌源腦炎、腦脊髓炎或腦膜炎，或其他中樞神經系統感染、朊病毒疾病、小腦共濟失調、小腦變性、脊髓小腦變性症候群、弗里德賴希共濟失調(Friedreichs ataxia)、共濟失調毛細管擴張、脊髓性肌萎縮、進行性核上麻痺、肌張力障礙、肌肉痙攣狀態、顫動、色素性視網膜炎、黑質退化症、粒線體腦肌病、神經性類蠟脂褐質病、肝性腦病、腎性腦病、代謝性腦病、毒素誘發性腦病，及輻射誘發性腦損傷。

在一些實施例中，組合物係結合營養素之非經腸投與用於醫院環境中之非糖尿病患者，例如，用於接收非經腸營養或完全非經腸營養之患者。非限制性實例包括手術患者、昏迷患者、患有消化道疾病或具有非功能性胃腸道(例如由於手術移除、堵塞或受損吸收能力、克隆氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、胃腸道阻塞、胃腸道瘺、急性胰臟炎、腸缺血、重大胃腸手術、某些先天性胃腸道異常、長期腹瀉或由手術造成之短腸症候群)之患者、休克患者，且經歷癒合過程之患者通常接受碳水化合物以及脂質、電解質、礦物質、維生素及胺基酸之各種組合的非經腸投與。包含如本文所述之GIP促效劑肽及胰高血糖素拮抗劑肽之組合物及非經腸營養組合物可同時、在不同時刻、彼此先後地投與，其限制條件為該組合物在非經腸營養組合物進行消化時發揮所需生物作用。舉例而言，非經腸營養可每天1次、2次或3次投與，而該組合物係每隔一天一次、每週三次、每週兩次、每週一次、每2週一次、每3週一次或每月一次投與。

如本文所用之術語「治療」包括預防特定病症或病狀，或減輕與特定病症或病狀相關之症狀，及/或預防或消除該等症狀。舉例而言，如本文所用之術語「治療糖尿病」一般係指朝正常含量方向改變血糖含量且可包括視既定情形而定增加或降低血糖含量。

如本文所用之胰高血糖素肽之「有效量」或「治療有效量」係指提供所需作用之無毒但足夠量之肽。舉例而言，一種所需作用將為預防或治療低血糖症，如例如藉由血糖含量增加所量測。本發明胰高血糖素肽之替代所需作用將包括治療高血糖症，例如如藉由血糖含量更接近正常含量之改變所量測；或誘導體重減輕/預防體重增加，例如如藉由體重減輕所量測；或預防或減少體重增加；或使體脂肪分佈正常化。不同個體之間「有效」量將有所改變，取決於個體之年齡及一般狀況、投藥模式及其類似因素。因此，並非總有可能指定確切「有效量」。然而，在任何個別情況下適當之「有效」量可由一般技術者使用常規實驗方法來確定。

個體

對於上述治療方法，患者為任何宿主。在一些實施例中，宿主為哺乳動物。如本文所用之術語「哺乳動物」係指哺乳綱之任何脊椎動物，包括(但不限於)單孔類動物、有袋動物及有胎盤動物中之任一者。在一些實施例中，哺乳動物為嚙齒目(order Rodentia)哺乳動物(諸如小鼠及倉鼠)及兔形目(order Carnivora)哺乳動物(諸如兔)之一。在例示性實施例中，哺乳動物係來自食肉目(order Carnivora)，包括貓科動物(貓)及犬科動物(犬)。在例示性實施例中，哺乳動物係來自偶蹄目(order Artiodactyla)，包括牛科動物(牛)及豬科動物(豬)；或屬於奇蹄目(order Perssodactyla)，包括馬科動物(馬)。在一些情況下，哺乳動物屬於靈長目(order Primate)、新世界猴類(Ceboids)或狐猴類(Simoids)(猴)或屬於類人猿亞目(order Anthropoids)(人類及猿)。在特定實施例中，哺乳動物為人類。

套組

可根據一個實施例提供本發明之胰高血糖素類似物作為套組之一部分。因此，在一些實施例中，提供用於向有需要之患者投與胰高血糖素類似物之套組，其中該套組包含如本文所述之胰高血糖素類似物。

在一個實施例中，套組具備用於向個體投與胰高血糖素類似物之裝置。該裝置在一些態樣中為針筒針、筆形裝置、噴射注射器或其他無針注射器。套組可或者或另外包括一或多種容器，例如，小瓶、管、瓶、單腔或多腔預填充針筒、濾筒、輸注泵(外部或可植入)、噴射注射器、預填充筆形裝置及其類似物，視情況含有呈凍乾形式或水溶液形式之胰高血糖素類似物。在一些實施例中，套組包含使用說明。根據一個實施例，套組之裝置為氣霧劑分配裝置，其中組合物係預包裝在氣霧劑裝置內。在另一實施例中，套組包含針筒及針，且在一個實施例中無菌胰高血糖素組合物係預包裝在針筒內。

在一些實施例中，套組包含使用說明。在一些態樣中，該等說明包括根據本文所述方法中之任一者的使用說明。該等說明可另外包括關於維持健康飲食及/或體育鍛煉程式之說明。該等說明可呈紙質小冊子形式或電子形式，例如，包含說明之電腦可讀儲存裝置。

提供以下實例僅為說明本發明且其不以任何方式限制本發明之範疇。

實例實例1

以下提供合成本發明之肽類似物之例示性方法。

胰高血糖素之肽片段之合成

材料：除非另外說明，否則實例中所有本文所述之肽均經醯胺化。

MBHA樹脂(在肽合成期間使用4-甲基二苯甲基胺聚苯乙烯樹脂。MBHA樹脂，100-180目，1% DVB交聯聚苯乙烯；負載量為0.7-1.0mmol/g)、經Boc保護之胺基酸及經Fmoc保護之胺基酸係購自Midwest Biotech。利用Applied Biosystem 430A肽合成器使用經Boc保護之胺基酸進行固相肽合成。使用Applied Biosystems 433型肽合成器進行經Fmoc保護之胺基酸合成。

肽合成(Boc胺基酸/HF裂解)：

利用Applied Biosystem 430A型肽合成器進行此等類似物之合成。藉由向含有2mmol經Boc保護之胺基酸之濾筒中依序添加胺基酸來建構合成肽。特定言之，使用Boc DEPBT活化之單偶合來進行合成。在偶合步驟結束時，用TFA處理肽基樹脂以移除N端Boc保護基。將其用二甲基甲醯胺(DMF)反覆洗滌且對於所需數目之偶合步驟重複此重複性循環。組裝之後，藉由20%哌啶處理移除側鏈保護Fmoc且使用DIC進行醯化。在整個合成結束時藉由使用二氯甲烷(DCM)來乾燥肽基樹脂，且利用無水HF使肽自樹脂裂解。

對於內醯胺化，針對Glu及Lys選擇正交保護基(例如，Glu(Fm)、Lys(Fmoc))。在移除保護基之後且在HF裂解之前，如先前所述進行環化(參見例如國際專利申請公開案第WO2008/101017號)。

肽基樹脂之HF處理

用無水氟化氫(HF)處理肽基樹脂，且此舉通常得到約350mg(約50%產率)之粗製經脫除保護基之肽。特定言之，將肽基樹脂(30mg至200mg)置於HF反應容器中以進行裂解。將500μL對甲酚添加至容器中作為離子清除劑。將該容器連接至HF系統且浸入甲醇/乾冰混合物中。用真空泵排空容器且將10ml HF蒸餾至反應容器中。在0℃下將肽基樹脂與HF之此反應混合物攪拌一小時，其後建立真空且快速排空HF(10-15分鐘)。小心地移除容器且填充約35ml乙醚以使肽沈澱且萃取對甲酚及由HF處理所產生之小分子有機保護基。利用鐵氟龍(teflon)過濾器過濾此混合物且重複兩次以移除所有過量甲酚。棄去此濾液。將沈澱之肽溶解於約20ml 10%乙酸(水溶液)中。收集含有所需肽之此濾液且凍乾。

在以下條件[4.6×30mm Xterra C8，1.50mL/min，220nm，A緩衝液0.1%三氟乙酸(TFA)/10%丙烯腈(ACN)，B緩衝液0.1% TFA/100% ACN，梯度5-95% B(經15分鐘)]下進行粗製溶解肽之分析型HPLC分析。用水將萃取物稀釋兩倍且裝載於2.2×25cm Vydac C4製備型逆相管柱上且利用Waters HPLC系統使用乙腈梯度進行溶離(A緩衝液為0.1% TFA/10% ACN，B緩衝液為0.1% TFA/10% ACN且梯度為0-100% B(經120分鐘)，流速為15.00ml/min)。經純化肽之HPLC分析顯示純度大於95%且使用電噴霧離子化質譜分析來確認肽之身分。

肽醯化

如下製備醯化肽。使用CS Bio 4886肽合成器或Applied Biosystems 430A肽合成器於固體支撐樹脂上合成肽。如Schnolzer等人，Int.J.Peptide Protein Res.40：180-193(1992)所述使用現場中和化學。對於醯化肽，待醯化之目標胺基酸殘基(例如，位置10，相對於SEQ ID NO：3之胺基酸位置編號)係經N ε-FMOC離胺酸殘基取代。用含20%哌啶之DMF處理完全N端BOC保護之肽30分鐘以移除FMOC/甲醯基。藉由使10倍莫耳過量之經FMOC保護之間隔基胺基酸(例如FMOC-Glu-OtBu)或醯基鏈(例如CH₃(CH₂)₁₄-COOH)與PyBOP或DEPBT偶合試劑於DMF/N,N-二異丙基乙胺(DIEA)中偶合來達成與游離ε-胺基Lys殘基之偶合。隨後移除間隔基胺基酸之FMOC基團，接著重複與醯基鏈之偶合。用100% TFA最終處理導致移除任何側鏈保護基及N端BOC基團。將肽樹脂用5% DIEA/DMF中和，乾燥，隨後在0℃下使用95：5 HF/對甲酚自支撐物裂解一小時。在乙醚萃取後，使用5%乙酸(HOAc)溶液將粗製肽溶劑化。隨後藉由ESI-MS證實溶液樣品含有恰當分子量之肽。藉由RP-HPLC使用10%乙腈(CH₃CN)/0.1% TFA至含0.1% TFA之100% CH₃CN之線性梯度純化恰當之肽。使用Vydac C18 22mm×250mm蛋白質管柱進行純化。利用20：80之緩衝液比率，醯化肽類似物一般完全溶離。將各部分彙集在一起且利用分析型RP-HPLC檢查純度。將純溶離份凍乾，得到白色固體肽。

以下為例示性醯化Lys殘基，其中醯基係經由γ-Glu-γ-Glu二肽間隔基連接。

其中n為1至29。

若肽包含內醯胺橋鍵及待醯化之目標殘基，則在向肽主鏈添加彼胺基酸時如上所述進行醯化。

如下製備雙重醯化或二醯化。使用CS Bio 4886肽合成器或Applied Biosystems 430A肽合成器於固體支撐樹脂上合成肽。如Schnolzer等人，Int.J.Peptide Protein Res.40：180-193(1992)所述使用現場中和化學。對於兩個位點雙重醯化肽，待醯化之目標胺基酸殘基(例如，位置10及40，相對於SEQ ID NO：3之胺基酸位置編號)係經N ε-FMOC離胺酸殘基取代。用含20%哌啶之DMF處理完全N端BOC保護之肽30分鐘以移除FMOC/甲醯基。藉由使10倍莫耳過量之經FMOC保護之間隔基胺基酸(例如FMOC-Glu-OtBu)或醯基鏈(例如CH₃(CH₂)₁₄-COOH)與PyBOP或DEPBT偶合試劑於DMF/DIEA中偶合來達成與游離 ε-胺基Lys殘基之偶合。隨後移除間隔基胺基酸之FMOC基團，接著重複與醯基鏈之偶合。用100% TFA最終處理導致移除任何側鏈保護基及N端BOC基團。將肽樹脂用5% DIEA/DMF中和，乾燥，隨後在0℃下使用95：5 HF/對甲酚自支撐物裂解一小時。在乙醚萃取後，使用5% HOAc溶液將粗製肽溶劑化。隨後藉由ESI-MS證實溶液樣品含有恰當分子量之肽。藉由RP-HPLC使用10% CH₃CN/0.1% TFA至含0.1% TFA之100% CH₃CN之線性梯度純化恰當之肽。使用Vydac C18 22mm×250mm蛋白質管柱進行純化。利用20：80之緩衝液比率，醯化肽類似物一般完全溶離。將各部分彙集在一起且利用分析型RP-HPLC檢查純度。將純溶離份凍乾，得到白色固體肽。

如下製備單位點分枝雙重醯化。使用CS Bio 4886肽合成器或Applied Biosystems 430A肽合成器於固體支撐樹脂上合成肽。如Schnolzer等人，Int.J.Peptide Protein Res.40：180-193(1992)所述使用現場中和化學。對於醯化肽，待醯化之目標胺基酸殘基(例如，位置10，相對於SEQ ID NO：3之胺基酸位置編號)係經N ε-FMOC離胺酸殘基取代。用含20%哌啶之DMF處理完全N端BOC保護之肽30分鐘以移除FMOC/甲醯基。藉由使10倍莫耳過量之經ε-胺基及α-胺基FMOC保護之間隔基胺基酸(例如FMOC-Lys(FMOC)-OH)與PyBOP或DEPBT偶合試劑於DMF/DIEA中偶合來達成與Lys殘基至C端之偶合。隨後移除間隔基胺基酸之FMOC基團，接著使ε-胺基及α-胺基各自與醯基鏈偶合。用100% TFA最終處理導致移除任何側鏈保護基及N端BOC基團。將肽樹脂用5% DIEA/DMF中和，乾燥，隨後在0℃下使用95：5 HF/對甲酚自支撐物裂解一小時。在乙醚萃取後，使用5% HOAc溶液將粗製肽溶劑化。隨後藉由ESI-MS證實溶液樣品含有恰當分子量之肽。藉由RP-HPLC使用10% CH₃CN/0.1% TFA至含0.1% TFA之100% CH₃CN之線性梯度純化恰當之肽。使用Vydac C18 22mm×250mm蛋白質管柱進行純化。利用20：80之緩衝液比率，醯化肽類似物一般完全溶離。將各部分彙集在一起且利用分析型RP-HPLC檢查純度。將純溶離份凍乾，得到白色固體肽。

如下製備單一位點線性雙重醯化。使用CS Bio 4886肽合成器或Applied Biosystems 430A肽合成器於固體支撐樹脂上合成肽。如Schnolzer等人，Int.J.Peptide Protein Res.40：180-193(1992)所述使用現場中和化學。對於醯化肽，待醯化之目標胺基酸殘基(例如，位置10，相對於SEQ ID NO：3之胺基酸位置編號)係經N ε-FMOC離胺酸殘基取代。用含20%哌啶之DMF處理完全N端BOC保護之肽30分鐘以移除FMOC/甲醯基。藉由使10倍莫耳過量之經FMOC保護之間隔基胺基酸(例如FMOC-Glu-OtBu)或醯基鏈(例如CH₃(CH₂)₁₄-COOH)與PyBOP或DEPBT偶合試劑於DMF/DIEA中偶合來達成與游離ε-胺基Lys殘基之偶合。隨後移除間隔基胺基酸之FMOC基團，接著與在脂肪酸尾末端經諸如FmocNH-(CH₂)₁₁-COOH之保護性胺基酸官能化之醯基鏈偶合。用含20%哌啶之DMF處理所得單醯化胺基酸以移除FMOC保護基，接著與醯基鏈偶合。用100% TFA最終處理導致移除任何側鏈保護基及N端BOC基團。將肽樹脂用5% DIEA/DMF中和，乾燥，隨後在0℃下使用95：5 HF/對甲酚自支撐物裂解一小時。在乙醚萃取後，使用5% HOAc溶液將粗製肽溶劑化。隨後藉由ESI-MS證實溶液樣品含有恰當分子量之肽。藉由RP-HPLC使用10% CH₃CN/0.1% TFA至含0.1% TFA之100% CH₃CN之線性梯度純化恰當之肽。使用Vydac C18 22mm×250mm蛋白質管柱進行純化。利用20：80之緩衝液比率，醯化肽類似物一般完全溶離。將各部分彙集在一起且利用分析型RP-HPLC檢查純度。將純溶離份凍乾，得到白色固體肽。

在兩個位點或單一位點雙重醯化之情況下，待偶合至肽之兩個醯基鏈可相同或不同。在兩個不同醯基鏈之情況下，待醯化之目標胺基酸係經兩個不同保護基取代。舉例而言，N ε-FMOC離胺酸殘基及N ε-ivDde離胺酸殘基(兩個位點雙重醯化)或FMOC Lys(ivDde)-OH(單一位點雙重醯化，852082 Novabiochem)。用含20%哌啶之DMF處理完全N端BOC保護之肽30分鐘以移除FMOC/甲醯基。使游離ε-胺基Lys殘基與醯基或間隔基胺基酸偶合，接著偶合至醯基。用2%肼/DMF處理所得單醯化肽以移除(ivDde)保護基。使游離胺基Lys殘基與醯基或間隔基胺基酸偶合，接著偶合至醯基。如上所述分離雙重醯化肽。

雙重醯化肽(胰高血糖素Aib2 E16 A18 L27 D28 Cex K40(C16γE-K-γEC12)G41-醯胺，具有胺基酸序列SEQ ID NO：211)之實例合成展示於圖5B中且進一步描述於下文：將0.28公克(0.2毫莫耳)mbha樹脂(Midwest Biotech)置於反應容器中且使用DEPBT/DIEA活化之Boc胺基酸之單一偶合利用CSBio336合成器組裝以下序列。

Boc-HaibQGTFTSDYSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPSK(Fmoc)G-mbha樹脂

將Boc保護之肽樹脂轉移至手動反應容器且在室溫下用20%哌啶/DMF處理10分鐘。過濾樹脂，用DMF洗滌3次，且添加Fmoc Lys(ivDde)-OH之活化溶液(EMD-Novabiochem)(先前藉由將2毫莫耳Fmoc Lys(ivDde)溶解於4.0ml 0.5M DEPBT/DMF中且添加0.35ml(2毫莫耳)DIEA來製備)。

肽樹脂在室溫下混合16小時，隨後過濾，用DMF洗滌且用20%哌啶/DMF處理10分鐘。過濾樹脂，用DMF洗滌若干次，且添加Fmoc Glu-OBzl之活化溶液(先前藉由將2毫莫耳Fmoc Glu-OBzl溶解於4.0ml 0.5M DEPBT/DMF中且添加0.35ml DIEA來製備)。反應物在室溫下混合1小時，隨後過濾且用DMF洗滌樹脂。再次用20%哌啶/DMF處理後，用DMF洗滌樹脂若干次，且添加棕櫚酸之活化溶液以完成位置40之側鏈Lys之α-胺的醯化(先前藉由將2毫莫耳棕櫚酸溶解於4.0ml 0.5M DEPBT/DMF中且添加0.35ml DIEA來製備)。將反應物混合1小時。

將肽樹脂過濾，用DMF洗滌且在室溫下用2%肼/DMF處理15分鐘，隨後過濾且用DMF洗滌若干次。添加Fmoc Glu-OBzl之活化溶液(與上文相同)且反應物在室溫下混合1小時。將樹脂分成三部分以對ε-離胺酸胺進行最終醯化。在此情況下，向一部分中添加十二烷酸之活化溶液。該十二烷酸之活化溶液係先前藉由將1毫莫耳十二烷酸(Aldrich)溶解於2.0ml 0.5M DEPBT/DMF中且添加0.175ml DIEA來製備。將反應物混合1小時，過濾，依次用DMF及二氯甲烷洗滌。在用50% TFA/DCM處理時移除N端Boc基團，且在用5% DIEA/DCM中和後，使用對甲酚作為清除劑在冰浴中進行HF裂解持續1小時。在HF蒸發後，將殘餘物懸浮於乙醚中且過濾肽/樹脂混合物並用乙醚洗滌。將肽萃取於乙酸水溶液中且利用HPLC(4.6×50mm Zorbax SB-C8，1ml/min，45℃，214nm(0.5A)A=0.1% TFA，B=0.1% TFA/90% ACN)分析。將剩餘裂解萃取物裝載於21.2×250mm Amberchrom XT20管柱上且在Pharmacia FPLC上操作0.1% TFA/乙腈梯度以進行純化。

將溶離份83-86合併，冷凍且凍乾，得到22.3mg的SEQ ID NO：211之肽，其純度為90%+。理論分子量=5202.9，ESI觀測質量=5202.0。

經由丁二醯化進行之肽醯化

如下製備丁二醯化肽。使用CS Bio 4886肽合成器或Applied Biosystems 430A肽合成器於固體支撐樹脂上合成肽。如Schnolzer等人，Int.J.Peptide Protein Res.40：180-193(1992)所述使用現場中和化學。對於丁二醯化肽，待醯化之目標胺基酸殘基(例如，位置10，相對於SEQ ID NO：3之胺基酸位置編號)係經N ε-FMOC離胺酸殘基取代。用含20%哌啶之DMF處理完全N端BOC保護之肽10分鐘以移除FMOC/甲醯基。過濾樹脂，用DMF/DCM洗滌且再次懸浮於DCM中。藉由使10倍莫耳過量之正十六烷基丁二酸酐(TCl)與4-二甲基胺基吡啶一起偶合來達成與游離ε-胺基Lys殘基之偶合。將樹脂混合隔夜，過濾，用DCM洗滌且用50% TFA/DCM處理以移除任何側鏈保護基及N端BOC。將肽樹脂用5% DIEA/DMF中和，乾燥，隨後在0℃下使用95：5 HF/對甲酚自支撐物裂解一小時。在乙醚萃取後，使用5% HOAc溶液將粗製肽溶劑化。隨後藉由HPLC分析檢驗溶液樣品。將剩餘乙酸溶液裝載於10×250mm Amberchrom XT20管柱上以進行純化。操作含水TFA/ACN梯度，同時收集溶離份且監測214nm下之UV。凍乾純溶離份，得到固體肽。

丁二醯化肽(胰高血糖素Aib2 E16 A18 L27 D28 Cex K40(C16丁二醯基)G41-醯胺，具有胺基酸序列SEQ ID NO：156)之實例合成展示於圖3C中且進一步描述於下文：將0.28公克(0.2毫莫耳)mbha樹脂(Midwest Biotech)置於反應容器中且使用DEPBT/DIEA活化之單一偶合利用CSBio336合成器組裝以下序列。

Boc-HaibQGTFTSDYSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPSK(Fmoc)G-mbha樹脂

將大約三分之一的Boc保護之肽樹脂轉移至手動反應容器且在室溫下用20%哌啶/DMF處理10分鐘。過濾樹脂，用DMF洗滌3次，用二氯甲烷洗滌兩次且再次懸浮於10ml DCM中。添加324mg(1毫莫耳)正十六烷基丁二酸酐(TCI)以及2-3mg的4-二甲基胺基吡啶(Aldrich)。

將樹脂在室溫下混合隔夜，隨後過濾，用DCM洗滌兩次，且用50% TFA/DCM處理1-2分鐘。過濾樹脂，用DCM洗滌若干次，藉由用5% DIEA/DCM洗滌中和且轉移至HF反應容器。使用5ml液態氟化氫及0.5ml對甲酚清除劑進行HF裂解。在冰浴中攪拌1小時後，在真空中移除HF且將殘餘物懸浮於乙醚中。使用燒結玻璃漏斗過濾懸浮液，用乙醚洗滌固體，且將肽萃取於15ml 50%乙酸水溶液中。利用HPLC(4.6×50mm Zorbax SB-C8，1ml/min，45℃，214nm，A=0.1% TFA，B=0.1% TFA/90% ACN，梯度=30% B至90% B(經10分鐘))分析後，將裂解萃取物裝載於21.2×250mm Amberchrom XT20管柱上以進行純化。操作含水TFA/乙腈梯度，同時收集溶離份且監測UV吸光度。溶離份55-56經鑑別為單一組分且冷凍並凍乾。回收到32.5mg，其純度為90%+(DLS-027-68B)。理論分子量=4720.3，ESI觀測質量=4717.0。

肽烷基化(例如S-烷基化)

烷基化(例如S-烷基化)肽(胰高血糖素Aib2 E16 A18 L27 D29 Cex Cys40(S-2棕櫚基)醯胺，具有胺基酸序列SEQ ID NO：164)之實例合成展示於圖6中且進一步描述於下文：將0.28公克0.2毫莫耳mbha樹脂(Midwest Biotech)置於CSBio反應容器中且使用Boc胺基酸及DEPBT/DIEA活化之單一偶合利用CSBio336合成器組裝以下序列。

HaibQGTFTSDYSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPSC-醯胺

將肽樹脂轉移至HF反應容器且使用10ml液態氟化氫及1ml對甲酚清除劑在冰浴中進行HF裂解持續1小時。蒸發HF之後，將殘餘物懸浮於乙醚中且將肽及樹脂過濾至燒結玻璃漏斗中。用乙醚洗滌且快速風乾之後，將肽萃取至50%乙酸水溶液中。經由HPLC(4.6×50mm Zorbax SB-C8，1ml/min，45℃，214nm，A=0.1% TFA，B=0.1% TFA/90% ACN，30%至90% B(經10分鐘))分析後，裂解萃取物以水稀釋3-4倍且裝載於22.2×250mm Amberchrom XT20管柱上以使用含水TFA/ACN梯度進行純化。初始彙集物經同一管柱再次純化，得到79mg(純度95%)。理論分子量=4313.7，ESI觀測質量=4312.0。

將16mg(3.7微莫耳)上述游離硫醇肽懸浮於1ml甲醇中且在攪拌下在氮氣流下添加含1.5μl四甲基胍之1ml甲醇(MeOH)，接著添加含3mg(7.8微莫耳)2-碘十六烷酸(2-碘棕櫚酸)之0.5mg四氫呋喃(THF)。 2-碘十六烷酸係先前藉由用含碘化鉀之丙酮(DLS-027-52)處理2-溴十六烷酸來製備。烷基化反應物在浴槽中升溫10分鐘，在此期間大部分溶劑蒸發。將殘餘物溶解於乙酸水溶液中，藉由HPLC分析且發現比起始肽之疏水性更大。將剩餘乙酸溶液裝載於10×250mm Amberchrom XT20管柱上以進行純化。操作含水TFA/ACN梯度，同時收集溶離份且監測214nm下之UV。將溶離份64-68合併，冷凍且凍乾，得到6.1mg物質(SEQ ID NO：164之肽)，其純度為90%+。理論分子量=4568.1，MALDI觀測質量=4568.79。

當肽在C端包含Lys殘基以替代Cys殘基時，肽可首先經製備具有主鏈Lys。待N-烷基化之目標胺基酸殘基係經N ε-FMOC離胺酸殘基取代。用含20%哌啶之DMF處理完全N端BOC保護之肽30分鐘可自Lys殘基移除FMOC/甲醯基。使Cys殘基與游離ε-胺基Lys殘基偶合。隨後藉由與如上所述之2-碘棕櫚酸反應將Cys殘基烷基化。

用「微型PEG」間隔基進行之肽醯化

經由微型PEG間隔基合成醯化肽(肽具有胺基酸序列SEQ ID NO：89)之實例描述於下文：將0.28公克(0.2毫莫耳)4-甲基二苯甲基胺(mbha)樹脂(Midwest Biotech,Inc.,Fishers,IN)置於反應容器中且使用Boc胺基酸及3-(二乙氧基磷醯氧基)-3H-苯并[d][1,2,3]三嗪-4-酮/N,N-二異丙基乙胺(DEPBT/DIEA)活化之單一偶合利用CSBio336合成器組裝以下序列。

Boc-HaibQGTFTSDYSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPSK(Fmoc)G-mbha

將大約三分之一的Boc保護之肽樹脂轉移至手動反應容器且在室溫下用20%哌啶/二甲基甲醯胺處理10分鐘。過濾樹脂，用二甲基甲醯胺(DMF)洗滌若干次且添加Fmoc醯胺基PEG4之活化溶液(先前藉由將487.5mg 1.0毫莫耳N-Fmoc醯胺基dPEG4酸(Peptides International,Louisville,KY)溶解於2.0ml 0.5M DEPBT/DMF中且添加0.175ml 1毫莫耳二異丙基乙胺來製備)。反應物在室溫下混合約1小時。

將肽樹脂過濾，用DMF洗滌，且再次用20%哌啶/DMF處理10分鐘。過濾樹脂，用DMF洗滌若干次，且添加Fmoc Glu-OBzl之活化溶液(先前藉由將470mg 1毫莫耳的Fmoc Glu-γ-OBzl(Aapptec,Louisville,KY)溶解於2.0ml 0.5M DEPBT/DMF中且添加0.175ml 1毫莫耳DIEA中來製備)。反應物在室溫下混合1小時。

再次過濾肽樹脂，用DMF洗滌，且在室溫下用20%哌啶/DMF處理10分鐘。過濾樹脂，用DMF洗滌若干次，且添加棕櫚酸之活化溶液(先前藉由將256mg 1毫莫耳棕櫚酸(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)溶解於2.0ml 0.5M DEPBT/DMF中且添加0.175ml DIEA來製備)。反應物在室溫下混合1小時。

最後，過濾肽樹脂，依次用DMF及二氯甲烷洗滌且用50% TFA/DCM處理以移除N端Boc基團。1-2分鐘後，過濾樹脂，用DCM洗滌若干次，接著用5% DIEA/DCM溶液洗滌。將風乾之肽樹脂轉移至HF反應容器且使用5ml液態氟化氫及0.5ml對甲酚清除劑進行HF裂解。在冰浴中混合1小時之後，在真空中移除HF且將殘餘物懸浮於乙醚中。於燒結玻璃漏斗中過濾肽/樹脂混合物，用乙醚洗滌，且快速風乾。將肽萃取至10ml 50%乙酸水溶液中，藉由HPLC(4.6×50mm Zorbax SB-C8，1ml/min，214nm，A=0.1% TFA，B=0.1% TFA/90% ACN，梯度=30% B至90% B(經10分鐘))分析。剩餘粗萃取物以水稀釋3倍且裝載於22.2×250mm Amberchrom XT20管柱上以使用含水TFA/ACN梯度進行純化。初始純化彙集物經同一管柱再次純化，得到19mg產物，其純度為90%+。理論質量=5010.6，ESI觀測質量為5008.0。

使用不同的N-Fmoc醯胺基dPEG酸重複相同程序。在一種情況下使用N-Fmoc醯胺基dPEG8酸(Peptides International,Louisville,KY)且在另一情況下使用N-Fmoc醯胺基dPEG2酸(Peptides International,Louisville,KY)。醯化肽之結構展示於圖12A-12C中。

肽二聚合-二硫化物二聚合

二硫化物二聚體肽之實例合成描述於下文：將0.28公克(0.2毫莫耳)mbha樹脂(Midwest Biotech)置於CSBio反應容器中且使用Boc胺基酸及DEPBT/DIEA活化之單一偶合利用CSBio336合成器組裝以下序列。

Boc-HaibQGTFTSDYSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPSK(Fmoc)G-醯胺

將Boc保護之肽樹脂轉移至手動反應容器且在室溫下用20%哌啶/DMF處理10分鐘。過濾樹脂，用DMF充分洗滌，隨後用Fmoc Cys(Trt)活化溶液(先前藉由將1.17公克2毫莫耳Fmoc Cys(Trt)-OH(Aapptec)溶解於4.0ml 0.5M DEPBT/DMF中且添加0.35ml 2毫莫耳二異丙基乙胺來製備)醯化。反應物在室溫下混合2小時，隨後過濾，用DMF洗滌且使用相同程序依次添加Fmoc Glu-OBzl及棕櫚酸。

最後，過濾樹脂，用DMF洗滌，用二氯甲烷洗滌，且用50% TFA/DCM處理1-2分鐘。用5% DIEA/DCM中和之後，將肽樹脂轉移至HF反應容器且使用10ml液態氟化氫及1ml對甲酚清除劑在冰浴中進行HF裂解持續1小時。蒸發HF之後，將殘餘物懸浮於乙醚中且將肽及樹脂過濾至燒結玻璃漏斗中。用乙醚洗滌且快速風乾之後，將肽萃取至50%乙酸水溶液中。經由HPLC(4.6×50mm Zorbax SB-C8，1ml/min，45℃，214nm，A=0.1% TFA，B=0.1% TFA/90% ACN，30%至90% B(經10分鐘))分析後，裂解萃取物以水稀釋3-4倍且裝載於21.2×250mm Amberchrom XT20管柱上以使用含水TFA/乙腈梯度進行純化。將純化溶離份64-67合併，冷凍且凍乾，得到58.7mg物質，HPLC純度為90%+。

DLS-027-97A理論分子量=4866.48，ESI觀測質量=4864.0。

HaibQGTFTSDYSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPSK(Cys(SH)γE-C16)G-醯胺

將18.6mg(3.8微莫耳)上述肽溶解於2.0ml 3M胍/0.05M tris(pH 8.5)中且添加1ml二甲亞碸。在室溫下在暴露於空氣下攪拌反應物。6小時後，與起始肽相比之分析型HPLC顯示存在疏水性更大之峰。

反應混合物以20ml 0.1% TFA稀釋且裝載於10×250mm Amberchrom XT20管柱上。使用0.1% TFA/乙腈梯度進行純化，同時監測220nm下之UV吸光度。將溶離份68-72合併並凍乾，得到5.5mg經純化之二聚體。

HPLC純度為90%+。理論分子量=9743.99，MALDI觀測質量=9745.1。DLS-027-98B。所得二聚體之結構展示於圖9A中。

肽二聚合-硫醚二聚合

硫醚二聚體之實例合成描述於下文：將0.28公克(0.2毫莫耳)mbha樹脂(Midwest Biotech)置於反應容器中且使用DEPBT/DIEA活化之單一偶合利用CSBio336合成器組裝以下序列。

Boc-HaibQGTFTSDYSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPSK(Fmoc)G-mbha

將三分之一的Boc保護之肽樹脂轉移至手動反應容器且在室溫下用20%哌啶/DMF處理10分鐘。用DMF洗滌若干次之後，添加Boc Dap(Fmoc)活化溶液(先前藉由將426mg 1毫莫耳Boc Dap(Fmoc)-OH(Chem-Impex)溶解於2.0ml 0.5M DEPBT/DMF中且添加0.175ml 1毫莫耳DIEA來製備)。反應物在室溫下混合2小時，過濾，用DMF洗滌且如上文用20%哌啶/DMF再次處理。用DMF洗滌之後，用溴乙酸活化溶液(先前藉由將139mg 1毫莫耳溴乙酸(Aldrich)溶解於2.0ml 0.5M DEPBT/DMF中且添加0.175ml DIEA來製備)醯化樹脂。反應物在室溫下混合1-2小時，隨後過濾且依次用DMF及DCM洗滌樹脂。在室溫下用50% TFA/DCM處理肽樹脂2分鐘，隨後過濾，用DCM洗滌且用5% DIEA/DCM中和。將完成之肽樹脂轉移至HF反應容器且使用5ml液態氟化氫/0.5ml對甲酚進行HF裂解。在冰浴中攪拌1小時後，蒸發HF且將殘餘物懸浮於乙醚中。將樹脂/肽混合物過濾至燒結玻璃漏斗中且用乙醚洗滌。將肽萃取至50%乙酸水溶液中且經由HPLC分析粗產物：4.6×50mm Zorbax SB-C8，1ml/min，45℃，214nm，A=0.1% TFA，B=0.1% TFA/90% ACN，梯度=30% B至90% B(經10分鐘)。將裂解萃取物裝載於21.2×250mm Amberchrom XT20管柱上且使用含水TFA/乙腈梯度進行純化，同時監測220nm下之UV吸光度。將溶離份48-53合併，冷凍且凍乾，得到18mg含K40(Dap-Br乙醯基)的SEQ ID NO：89之肽，純度=90%+。理論分子量=4602.8，ESI觀測質量=4616.0。

HaibQGTFTSDYSKYLDERAAQDFVQWLLDGGPSSGAPPPSK(Dap-Br乙醯基)G-醯胺

將15mg(3.2微莫耳)的上述K40(Dap-Br乙醯基)肽及15mg SEQ ID NO：89之肽K40(Cys γE-C16)溶解於3.0ml 7M脲/0.05M tris(pH 8.6)中且在室溫下混合，同時監測反應進程之HPLC。30分鐘後，大部分起始物質之峰高降低，同時新峰為主要組分。反應混合物以25ml 0.1% TFA稀釋且裝載於10×250mm Amberchrom XT20管柱上以進行純化。操作含水TFA/乙腈梯度，同時監測220nm下之UV吸光度。將溶離份57-61合併，冷凍且凍乾，得到7.1mg硫醚二聚體。HPLC純度=90%+，理論分子量=9401.4，MALDI觀測質量=9402.8。二聚體之結構展示於圖9B中。

肽聚乙二醇化

對於肽聚乙二醇化，使用將肽與PEG兩者溶解成澄清溶液所需之最少量之溶劑(對於使用2-3mg肽之反應，一般小於2mL)，使40kDa甲氧基聚(乙二醇)碘乙醯胺(NOF)與莫耳當量之肽在7M脲、50mM Tris-HCl緩衝液中反應。在室溫下強力攪拌持續4-6小時且藉由分析型RP-HPLC分析反應。隨著滯留時間減少，聚乙二醇化產物顯得與起始物質顯著不同。利用Vydac C4管柱在與初始肽純化所用條件類似之條件下進行純化。在緩衝液比率為50：50附近發生溶離。發現純聚乙二醇化肽之溶離份且將其凍乾。產率高於50%，對於每個反應有所不同。

使用質譜法進行分析

使用具有標準ESI離子源之Sciex API-III電噴霧四極質譜儀獲得質譜。所用離子化條件如下：ESI為正離子模式；離子噴霧電壓，3.9kV；孔電位，60V。所用噴霧及氣簾氣體為氮氣，流動速率為.9L/min。在每步0.5Th及2msec停留時間下自600-1800湯普生 (Thompsons)記錄質譜。將樣品(約1mg/mL)溶解於含1%乙酸之50%乙腈水溶液中且藉由外部注射泵以5μL/min之速率引入。

當藉由ESI MS於PBS溶液中分析肽時，根據製造商(Millipore Corporation,Billerica,MA，參見全球資訊網(world wide web)上Millipore網站之millipore.com/catalogue.nsf/docs/C5737)所提供之說明，首先使用含0.6μL C4樹脂之ZipTip固相萃取尖端將肽脫鹽。

高效液相層析(HPLC)分析：

使用高效液相層析(HPLC)及MALDI分析，利用此等粗製肽進行初步分析以得到其在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)緩衝液(pH 7.2)中之相對轉化率的近似值。將粗製肽樣品溶解於PBS緩衝液中至1mg/ml之濃度。將1ml所得溶液儲存在1.5ml HPLC小瓶中，隨後將該小瓶密封且在37℃下培育。以各種時間間隔取出100μl等分試樣，冷卻至室溫且藉由HPLC進行分析。

使用Beckman System Gold層析系統使用UV偵測器在214nm下進行HPLC分析。利用150mm×4.6mm C18 Vydac管柱進行HPLC分析。流動速率為1ml/min。溶劑A為含0.1% TFA之蒸餾水，且溶劑B為含0.1% TFA之90% CH₃CN。使用線性梯度(15分鐘內40%至70% B)。收集資料且使用Peak Simple Chromatography軟體進行分析。

使用初始水解速率來量測各別前藥之解離速率常數。分別根據其峰面積估算前藥及藥物之濃度。藉由繪製在各種時間間隔下前藥濃度之對數來測定前藥之第一級解離速率常數。此曲線之斜率給出速率常數『k』。隨後藉由使用式t1/2=.693/k來計算各種前藥之降解半衰期。

實例2

以下提供合成本發明之肽類似物的例示性方法。

使用Fmoc策略合成胰高血糖素物質之肽片段：

除非另外指出，否則所有肽皆經醯胺化且利用Tentagel S RAM-Rink樹脂(90μm；負載量0.26mmol/g)合成。經Fmoc保護之胺基酸及樹脂係購自Novabiochem。固相肽合成係利用CS Bio CS136XT肽合成器進行。

肽合成(Fmoc策略)：藉由向混合容器中依序添加胺基酸溶液(0.33mol/l，於含有0.05mol/l HOBt之NMP中)來構築合成肽。特定言之，合成係使用COMU/DIPEA活化(4當量胺基酸、4當量COMU、8當量DIPEA)利用單一偶合來進行。在偶合步驟(在室溫下標準時間30分鐘)結束時，用哌啶溶液(40%於DMF中，1×10分鐘+2×5分鐘)處理肽基樹脂以移除N端Fmoc保護基。用二甲基甲醯胺(DMF)反覆洗滌樹脂且對於所需數目之偶合步驟重複此合成循環。藉由在室溫下用過量的含18當量乙酸酐/DIPEA之DMF處理肽基樹脂30分鐘來產生N封端肽。

醯化肽

為連接醯化基團(例如C16)，使用如上所述之標準條件在肽序列之所需位置引入Dde-Lys(Fmoc)-OH。在定量偶合後，藉由DBU/DMF(2%處理3×3分鐘連續流動，用DMF反覆洗滌，此程序重複5次)移除Fmoc基團。使用如上所述之偶合條件實現醯化基團之偶合。在醯化基團之定量偶合後，用含20%單水合肼(64%)之2% DMF(5×3分鐘，連續流動，用DMF反覆洗滌)移除N端Dde保護基。如上所述進行剩餘偶合步驟。

肽裂解及脫保護

在整個合成結束時，用二氯甲烷(DCM)洗滌肽基樹脂，且在室溫下使用試劑K(TFA/硫代苯甲醚/水/酚/TIS-82.5/5/5/5/2.5)使肽自樹脂裂解持續2小時，通常得到約250mg(約50%產率)之粗製經脫除保護基之肽。

特定言之，將肽基樹脂(30-200mg)置於燒結濾筒中，隨後添加試劑K(約20ml，對於1.2g樹脂)且在室溫下攪拌樹脂2小時。在濾去液體後，用5ml試劑K沖洗樹脂且用3ml DCM沖洗兩次。用冷乙醚使產物沈澱。將懸浮液離心，濾去液體，且粗製肽再次溶解於水/ACN中且冷凍乾燥，獲得約250mg(約50%產率)粗製肽。

在以下條件下進行粗製肽之分析型HPLC分析：HPLC管柱4.6×150mm Poroshell 120 SB-C18；溶離劑系統：緩衝液A：0.1%三氟乙酸(TFA)/10%丙烯腈/90%水；緩衝液B：0.1% TFA/10%水/90% ACN；梯度：5-100% B，經30分鐘。

使用16×150mm Dr.Maisch Reprosil Gold 120 C18，5μm，製備型逆相管柱經由製備型HPLC純化粗製肽且使用與分析型系統上相同之移動相利用5-100% B(經190分鐘)之梯度及1.80ml/min之流速來溶離。在所得溶離份之LC/MS分析後，將純樣品合併且冷凍乾燥，得到白色粉末。

實例3

此實例描述測試本發明肽之生物活性的例示性方法，該方法涉及分析cAMP合成。

在基於螢火蟲螢光素酶之報導體分析法中量測胰高血糖素類似物誘導cAMP之能力。藉由在補充有0.25%牛生長血清(Bovine Growth Serum)(HyClone,Logan,UT)之DMEM(Invitrogen,Carlsbad,CA)中培養16小時將用受體(胰高血糖素受體、GLP-1受體或GIP受體)與鍵聯至cAMP反應元件之螢光素酶基因共轉染之HEK293細胞進行血清去除且隨後在37℃、5% CO₂下於塗有聚-D-離胺酸之96孔「Biocoat」培養盤(BD Biosciences,San Jose,CA)中與胰高血糖素、GLP-1、GIP或新穎胰高血糖素類似物之連續稀釋液一起培育5小時。在培育結束時，將 100微升LucLite發光受質試劑(Perkin Elmer,Wellesley,MA)添加至各孔中。短暫地震盪培養盤，在黑暗中培育10分鐘，且利用MicroBeta-1450液體閃爍計數器(Perkin-Elmer,Wellesley,MA)量測光輸出。藉由使用Origin軟體(OriginLab,Northampton,MA)來計算有效50%濃度。

實例4

此實例描述分析本發明肽之穩定性的例示性方法。

將各胰高血糖素類似物溶解於水或PBS中且進行初始HPLC分析。調節pH值(4、5、6、7)之後，在37℃下經指定時段培育樣品且藉由HPLC再次分析以測定肽之完整性。測定相關特定肽之濃度且計算相對於初始分析之剩餘完整性百分比。

實例5

此實例描述分析肽之溶解性之例示性方法。

於0.01N HCl中製備胰高血糖素(或類似物)之溶液(1mg/ml或3mg/ml)。用0.01N HCl將100μl儲備溶液稀釋至1ml且測定UV吸光度(276nm)。使用200-250μl 0.1M Na₂HPO₄(pH 9.2)將剩餘儲備溶液之pH值調節至pH 7。使溶液在4℃下靜置隔夜，隨後離心。隨後用0.01N HCl將100μl上清液稀釋至1ml，且測定UV吸光度(一式兩份)。

初始吸光度讀數係關於體積增加進行補償且使用以下計算來確定溶解百分比：

實例6

此實例描述分析肽與受體之結合的例示性方法。

利用閃爍近接分析技術在競爭結合分析法中量測肽與胰高血糖素受體之親和力。將以閃爍近接分析緩衝液(0.05M Tris-HCl(pH 7.5)、0.15M NaCl、0.1% w/v牛血清白蛋白)製備的肽的連續3倍稀釋液與0.05nM(3-[¹²⁵I]-碘酪胺醯基)Tyr10胰高血糖素(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ)、每孔1-6微克由過度表現人類胰高血糖素受體之細胞製備的質膜片段及1毫克/孔經聚乙二亞胺處理之麥胚芽凝集素A型閃爍近接分析珠粒(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ)一起混合於白色/透明底96孔培養盤(Corning Inc.,Acton,MA)中。利用旋轉震盪器在800rpm下震盪5分鐘時，培養盤在室溫下培育12小時且隨後利用MicroBeta1450液體閃爍計數器(Perkin-Elmer,Wellesley,MA)讀取。在具有濃度達到測試樣品中最高濃度之4倍的「冷」原生配位體的孔中量測非特異性結合(NSB)放射性，且在不具有競爭劑之孔中偵測總結合放射性。特異性結合百分比計算如下：特異性結合百分比=((結合-NSB)/(總結合-NSB))×100。藉由使用Origin軟體(OriginLab,Northampton,MA)測定IC₅₀值。

實例7

基本上如實例1或實例2中所述來合成SEQ ID NO：37之肽之類似物且基本上如實例3中所述在活體外測試其針對GLP-1受體、胰高血糖素受體及GIP受體中之每一者的促效劑活性。

針對GLP-1受體(GLP-1R)、胰高血糖素受體(GR)及GIP受體(GIPR)之EC50提供於表1中。

實例8

藉由向DIO小鼠注射10nmol/kg肽或媒劑對照物來評估表1之所選肽的活體內作用。亦即，每週三次(週一、週三及週五)向小鼠投與SEQ ID NO：10、12、15、16、22或37之肽或媒劑對照物，持續2週。向小鼠給與致糖尿病飲食且各組小鼠中每組含有8隻動物。平均體重為約50g且小鼠為約6月齡雄性。

在向小鼠投與肽或媒劑對照物當天量測體重及食物攝入。在第0天、第7天及第14天分析身體組成。每週一次在第0天、第7天及第14天量測空腹血糖含量。來自此研究之資料展示於圖1-4中。

如圖1中所示，所有肽在7天後皆造成體重之至少10%降低。經注射一種肽之小鼠之總食物攝入為經注射媒劑對照物之小鼠之總食物攝入的50%至60%(參見圖2)。對於經給與肽之各組小鼠，與經注射媒劑對照物之小鼠相比，脂肪質量降低(圖3)。如圖4中所示，與媒劑對照物小鼠相比，經注射肽之小鼠顯示血糖含量降低。

實例9

基本上如實例1或實例2中所述來合成SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：12之肽之類似物。基本上如實例3中所述，在活體外測試該等類似物針對胰高血糖素受體、GLP-1受體及GIP受體中之每一者的促效劑活性。

針對胰高血糖素受體(GR)、GLP-1受體(GLP-1R)及GIP受體(GIPR)之EC50提供於表2及表3中。

4HPA=4-羥基苯基乙酸；Des-NH2-Tyr=去胺基L-Tyr；Ac=乙醯基；

實例10

藉由向約11週齡雄性糖尿病db/db小鼠投與媒劑對照物、或10nmol/kg肽或30nmol/kg利拉魯肽之單次皮下注射評估表1-3之所選肽的活體內作用。小鼠可隨意取用飲食及水。在施以處理之前兩小時，根據其餐後葡萄糖含量(平均約23mM葡萄糖)及體重(平均約45g)將小鼠分組(n=6/組)。

在用媒劑或肽或利拉魯肽處理後24小時量測小鼠之餐後葡萄糖概況。如圖6中所示，多種肽的投與造成血糖含量顯著降低，而媒劑及利拉魯肽不會改變血糖含量。SEQ ID NO：12、17、18、23、29、142及143之肽造成之降低大於基線餐後葡萄糖含量之50%。

本文所引用之所有參考文獻(包括公開案、專利申請案及專利)係以引用的方式併入本文中，該引用的程度就如同各參考文獻係個別地及特定地以引用的方式併入且全文闡述於本文一般。

除非本文另外指出或明顯與內容相矛盾，否則在描述本發明之內容中(尤其在以下申請專利範圍之內容中)使用術語「一」及「該」及類似指示物應理解為涵蓋單數與複數。除非另外說明，否則術語「包含」、「具有」、「包括」及「含有」應理解為開放式術語(亦即，意謂「包括(但不限於)」)。

除非本文另外指出，否則本文對值範圍之引述僅意欲用作個別地提及屬於該範圍內之各個別值及各端點的簡寫方法，且各個別值及端點係併入本說明書中，如同其在本文中個別地引用一般。

除非本文另外指出或另外明顯與內容相矛盾，否則本文所述之所有方法可以任何適合順序進行。除非另外主張，否則使用任何及所有實例或本文提供之例示性語言(例如，「諸如」)僅意欲更好地闡明本發明且並不對本發明之範疇施加限制。本說明書中之任何語言均不應理解為指示實施本發明所必需之任何未主張要素。

本文描述本發明之較佳實施例，包括本發明人已知用於實施本發明之最佳模式。在閱讀前述描述之後，彼等較佳實施例之變化形式對於一般技術者可變得顯而易知。本發明人預期熟習相關技藝之人士適當地使用該等變化形式，且本發明人預期本發明以不同於本文明確描述之方式進行實施。因此，本發明包括適用法律所允許之隨附申請專利範圍中所引述之標的物的所有修改及等效物。此外，除非本文另外指出或另外明顯與內容相矛盾，否則本發明涵蓋上述要素以其所有可能之變化形式的任何組合。

<110> 迪瑪奇等人

<120> 展現GIP受體活性之胰高血糖素類似物

<130> 31812/47072A

<150> 61/662,874

<151> 2012-06-12

<150> 61/787,973

<151> 2013-03-15

<160> 202

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 29

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 野生型胰高血糖素

<400> 1

<210> 2

<211> 42

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 原生人類GIP

<220>

<221> CHAIN

<222> (1)..(42)

<400> 2

<210> 3

<21> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(30)

<223> GLP-1(7-36)醯胺化

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (30)..(30)

<223> C端醯胺化

<400> 3

<210> 4

<211> 31

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(31)

<223> GLP-1(7-37)

<400> 4

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 5

<210> 6

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 6

<210> 7

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 7

<210> 8

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 8

<210> 9

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 9

<210> 10

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為AIB

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 10

<210> 11

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 11

<210> 12

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

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<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 12

<210> 13

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-His

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<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

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<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 13

<210> 14

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

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<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-Tyr

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<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

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<221> MISC_FEATURE

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<223> C端醯胺化

<400> 14

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> D-Tyr

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<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 15

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> D-His

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<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

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<221> MISC_FEATURE

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<223> C端醯胺化

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-硫代Ala

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<221> MISC_FEATURE

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<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

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<223> C端醯胺化

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<222> (1)..(1)

<223> Xaa為D-硫代Ala

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<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

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<223> Xaa為乙醯基硫代Ala

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<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

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<223> C端醯胺化

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> MISC_FEATURE

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<223> Xaa為去胺基His

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<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

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<223> C端醯胺化

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<223> D-His

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<221> MISC_FEATURE

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<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

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<221> MISC_FEATURE

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<223> C端醯胺化

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> MISC_FEATURE

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<223> Xaa為β2-His

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<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

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<221> MISC_FEATURE

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<223> C端醯胺化

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<210> 26

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可為任何天然產生之胺基酸

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<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為β-Ala

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<221> MISC_FEATURE

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<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

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<223> C端醯胺化

<400> 26

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> MISC_FEATURE

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<223> D-His

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<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 27

<210> 28

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為肌胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> 39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 28

<210> 29

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 29

<210> 30

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基鳥胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 30

<210> 31

<211> 39

<211> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 31

<210> 32

<400> 32

000

<210> 33

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 33

<210> 34

<21> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 34

<210> 35

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala、乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala、乙醯基β-2-D-His、乙醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：乙醯基β-2-D-硫代Ala、去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基D-His、去胺基D-Tyr、去胺基D-硫代Ala、去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、D-His、D-Tyr、D-硫代Ala、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa為Gln、包含結構I、II或III之側鏈之胺基酸、疏水性胺基酸、酸性胺基酸或鹼性胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa為選自由以下組成之群的胺基酸：Glu、Ala、Leu、Ile、Nle、Val、NorVal、高絲胺酸、Met、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸碸、乙醯基-Orn、乙醯基-二胺基丁酸及乙醯基-Lys

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa為Tyr或共價結合至C12-C18醯基或烷基之胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa為酸性胺基酸，視情況為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> Xaa為任何胺基酸，視情況為除Gly、Pro及Ser以外之任何胺基酸；例如，Glu、Ala、α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)、His、Lys

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)..(17)

<223> Xaa為Arg、His或Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)..(18)

<223> Xaa為Arg或Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (19)..(19)

<223> Xaa為Ala或α,α雙取代胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (20)..(20)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)或Gln或His、Lys或Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa為酸性胺基酸，視情況為Asp或Glu

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Leu、Ala、Nle或Met

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa為Ala或酸性胺基酸(視情況為Asp或Glu)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> Xaa為脂族，例如Ala或Gly或AIB或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (30)..(30)

<223> Xaa為小型脂族胺基酸，例如Ala或Gly

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (35)..(35)

<223> Xaa為Ala或鹼性胺基酸(視情況為Arg或Lys)

<400> 35

<210> 36

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa為疏水性胺基酸、酸性胺基酸或鹼性胺基酸，視情況為Glu、Nle、Orn

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa為Tyr或共價結合至C12-C18醯基或烷基之胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa為酸性胺基酸，視情況為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)..(17)

<223> Xaa為Arg、His或Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)..(18)

<223> Xaa為Arg或Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (19)..(19)

<223> Xaa為Ala或α,α雙取代胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (20)..(20)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa為酸性胺基酸，視情況為Asp或Glu

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Leu、Ala、Nle或Met

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa為Ala或酸性胺基酸(視情況為Asp或Glu)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> Xaa為脂族，例如Ala或Gly或AIB或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (30)..(30)

<223> Xaa為小型脂族胺基酸，例如Ala或Gly

<220>

<221> MISC_FEATURE

<22> (35)..(35)

<223> Xaa為Ala或鹼性胺基酸(視情況為Arg或Lys)

<400> 36

<210> 37

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為AIB

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<233> C端醯胺化

<400> 37

<210> 38

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa為Gln或包含如本文所述之結構I、II或III之側鏈結構的胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 38

<210> 39

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、D-His-D-Tyr、D-硫代Ala、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 39

<210> 40

<400> 40

000

<210> 41

<400> 41

000

<210> 42

<400> 42

000

<210> 43

<400> 43

000

<210> 44

<400> 44

000

<210> 45

<400> 45

000

<210> 46

<400> 46

000

<210> 47

<400> 47

000

<210> 48

<400> 48

000

<210> 49

<400> 49

000

<210> 50

<400> 50

000

<210> 51

<400> 51

000

<210> 52

<400> 52

000

<210> 53

<400> 53

000

<210> 54

<400> 54

000

<210> 55

<400> 55

000

<210> 56

<400> 56

000

<210> 57

<400> 57

000

<210> 58

<400> 58

000

<210> 59

<400> 59

000

<210> 60

<400> 60

000

<210> 61

<400> 61

000

<210> 62

<400> 62

000

<210> 63

<400> 63

000

<210> 64

<400> 64

000

<210> 65

<400> 65

000

<210> 66

<400> 66

000

<210> 67

<400> 67

000

<210> 68

<400> 68

000

<210> 69

<400> 69

000

<210> 70

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000

<210> 71

<400> 71

000

<210> 72

<400> 72

000

<210> 73

<400> 73

000

<210> 74

<400> 74

000

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<400> 75

000

<210> 76

<400> 76

000

<210> 77

<400> 77

000

<210> 78

<400> 78

000

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<400> 79

000

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<400> 80

000

<210> 81

<400> 81

000

<210> 82

<400> 82

000

<210> 83

<400> 83

000

<210> 84

<400> 84

000

<210> 85

<400> 85

000

<210> 86

<400> 86

000

<210> 87

<400> 87

000

<210> 88

<400> 88

000

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<400> 89

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<400> 90

000

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<400> 92

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<400> 94

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000

<210> 97

<400> 97

000

<210> 98

<400> 98

000

<210> 99

<400> 99

000

<210> 100

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 100

<210> 101

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 101

<210> 102

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 102

<210> 103

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 103

<210> 104

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 104

<210> 105

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<22> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 105

<210> 106

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 106

<210> 107

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為D-硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 107

<210> 108

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 108

<210> 109

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 109

<210> 110

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 110

<210> 111

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為β2-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 111

<210> 112

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可為任何天然產生之胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為β-Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 112

<210> 113

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 113

<210> 114

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為肌胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 114

<210> 115

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 115

<210> 116

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基鳥胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 116

<210> 117

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 117

<210> 118

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 118

<210> 119

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 119

<210> 120

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 120

<210> 121

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 121

<210> 122

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 122

<210> 123

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 123

<210> 124

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 124

<210> 125

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 125

<210> 126

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基D-硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 126

<210> 127

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為D-硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 127

<210> 128

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 128

<210> 129

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 129

<210> 130

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 130

<210> 131

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為β2-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 131

<210> 132

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可為任何天然產生之胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為β-Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 132

<210> 133

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 133

<210> 134

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為肌胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 134

<210> 135

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 135

<210> 136

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基鳥胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 136

<210> 137

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 137

<210> 138

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 138

<210> 139

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 139

<210> 140

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基L-Phe、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala、乙醯基D-Phe、乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：乙醯基β-2-D-His、乙醯基β-2-D-Tyr、乙醯基β-2-D-硫代Ala、乙醯基β-2-D-Phe、去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基L-Phe、去胺基D-His、去胺基D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：去胺基D-Phe、去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基β-2-L-硫代Ala、去胺基β-2-L-Phe、去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、去胺基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：D-Tyr、D-硫代Ala、D-Phe、β2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β-2-D-Phe、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala、β-2-L-Phe、L-硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：乙醯基β-2-L-Phe、去胺基D-硫代Ala、去胺基β-2-D-Phe及D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa為Gln、包含結構I、II或III之側鏈之胺基酸、疏水性胺基酸、酸性胺基酸或鹼性胺基酸，或為選自由以下組成之群的胺基酸：Glu、Ala、Leu、Ile、Nle、Val、NorVal、高絲胺酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa為Met、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸碸、乙醯基-Orn、乙醯基-二胺基丁酸或乙醯基-Lys

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa為Tyr或共價結合至C12至C18醯基或烷基之胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa為酸性胺基酸，視情況為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)..(17)

<223> Xaa為Arg、His或Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)..(18)

<223> Xaa為Arg或Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (19)..(19)

<223> Xaa為Ala或α,α雙取代胺基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (20)..(20)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa為酸性胺基酸，視情況為Asp或Glu

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Leu、Ala、Nle或Met

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa為Ala或酸性胺基酸(視情況為Asp或Glu)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> Xaa為脂族，例如，Ala或Leu或Gly或AIB或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (30)..(30)

<223> Xaa為小型脂族胺基酸，例如Ala或Gly

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (35)..(35)

<223> Xaa為Ala或鹼性胺基酸(視情況為Arg或Lys)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 140

<210> 141

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 141

<210> 142

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 142

<210> 143

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 143

<210> 144

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 144

<210> 145

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 145

<210> 146

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 146

<210> 147

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 147

<210> 148

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 148

<210> 149

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 經由γ-Glu-γ-Glu二肽間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 149

<210> 150

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Phe

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 150

<210> 151

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 151

<210> 152

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 經由γ-Glu-γ-Glu二肽間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 152

<210> 153

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 153

<210> 154

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 154

<210> 155

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 155

<210> 156

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為4-羥基苯基乙酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 156

<210> 157

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 157

<210> 158

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> D-Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 158

<210> 159

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 經由γ-Glu-γ-Glu二肽間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 159

<210> 160

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 經由γ-Glu-γ-Glu二肽間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 160

<210> 161

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 161

<210> 162

<21> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 162

<210> 163

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 163

<210> 164

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 164

<210> 165

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 165

<210> 166

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 166

<210> 167

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 167

<210> 168

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 168

<210> 169

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Phe

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 169

<210> 170

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 170

<210> 171

<21> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 171

<210> 172

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 172

<210> 173

<21> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 173

<210> 174

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為4-羥基苯基乙酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 174

<210> 175

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> D-Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由酸性胺基酸間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 175

<210> 176

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 經由兩個酸性胺基酸之二肽間隔基共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 176

<210> 177

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 177

<210> 178

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 178

<210> 179

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 經由兩個酸性胺基酸之二肽間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 179

<210> 180

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 180

<210> 181

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 181

<210> 182

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 182

<210> 183

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 183

<210> 184

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 184

<210> 185

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 185

<210> 186

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 186

<210> 187

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 187

<210> 188

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 188

<210> 189

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Phe

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 189

<210> 190

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 190

<210> 191

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 191

<210> 192

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 192

<210> 193

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-His

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 193

<210> 194

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 194

<210> 195

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為4-羥基苯基乙酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 195

<210> 196

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 196

<210> 197

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> D-Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 197

<210> 198

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為乙醯基-D-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 198

<210> 199

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 醯化或烷基化，視情況經由間隔基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 199

<210> 200

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa為去胺基L-Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)..(40)

<223> 共價結合至C12-C18脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (41)..(41)

<223> C端醯胺化

<400> 200

<210> 201

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：乙醯基β-2-D-Tyr及去胺基β-2-L-硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 201

<210> 202

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係選自由以下組成之群：去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、D-His、D-Tvr、D-硫代Ala、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 經由γ-Glu間隔基共價結合至C16脂肪醯基

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa為Glu或Asp

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (39)..(39)

<223> C端醯胺化

<400> 202

Claims

一種原生胰高血糖素之類似物，其視情況包含胺基酸序列SEQ ID NO：140，其包含：A.位置1之包含Tyr、His、硫代Ala或Phe之側鏈的胺基酸，其中該位置1之胺基酸之α碳係連接至選自由以下組成之群的結構：(i)H₂N-(CH₂)-；(ii)H₂N-；(iii)H(乙醯基)N-(CH₂)_0-1-；及(iv)H-或CH₃-；B.位置9、10、12、20或37-43中之任何位置的醯化胺基酸或烷基化胺基酸，視情況其中醯基或烷基係經由間隔基鍵聯至該胺基酸；C.位置16-21中之一或多個位置的α螺旋穩定化胺基酸；及D.相對於原生胰高血糖素之至多10個額外胺基酸修飾；其中該位置1之胺基酸為L-立體異構體或D-立體異構體，其中，視情況，該位置1之胺基酸不為L-His、L-Tyr及L-Phe，其中，當該胰高血糖素類似物缺乏親水性部分時，該胰高血糖素類似物展現針對人類GIP受體之EC50為小於或約0.5nM，且其中該胰高血糖素類似物針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。
如請求項1之胰高血糖素類似物，其中該位置1之胺基酸包含連接至該α碳之(iii)之結構。
如請求項1或2之胰高血糖素類似物，其中該位置1之胺基酸係選自由以下組成之群：乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基L-Phe、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala、乙醯基D-Phe、乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala、乙醯基β-2-L-Phe、乙醯基β-2-D-His、乙醯基β-2-D-Tyr、乙醯基β-2-D-硫代Ala、乙醯基β-2-D-Phe、去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基L-Phe、去胺基D-His、去胺基D-Tyr、去胺基D-硫代Ala、去胺基D-Phe、去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基β-2-L-硫代Ala、去胺基β-2-L-Phe、去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、去胺基β-2-D-Phe、D-His、D-Tyr、D-硫代Ala、D-Phe、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β-2-D-Phe、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala、β-2-L-Phe及L-硫代Ala。
如請求項1至3中任一項之胰高血糖素類似物，其中該位置1之胺基酸係選自乙醯基D-Tyr、乙醯基D-His、去胺基Tyr、D-Tyr、D-His及乙醯基D-Phe。
如請求項1至4中任一項之胰高血糖素類似物，其在位置2包含選自由以下組成之群的胺基酸：Ala、Gly、Pro、肌胺酸及Val。
如請求項1至5中任一項之胰高血糖素類似物，其在位置2包含選自由以下組成之群的胺基酸：Ala或Gly。
如請求項6之胰高血糖素類似物，其中，當該位置2之胺基酸為Ala時，該位置1之胺基酸為胺基酸之D-立體異構體。
如請求項1至7中任一項之胰高血糖素類似物，其在位置1及位置2包含選自由以下組成之群的一對胺基酸：
如請求項8之胰高血糖素類似物，其在位置1及位置2包含選自由以下組成之群的一對胺基酸：
如請求項1至9中任一項之胰高血糖素類似物，其在位置16包含α螺旋穩定化胺基酸，視情況，其中該α螺旋穩定化胺基酸為帶負電荷胺基酸或α,α雙取代胺基酸。
如請求項10之胰高血糖素類似物，其中該帶負電荷胺基酸為Glu。
如請求項1至11中任一項之胰高血糖素類似物，其包含位置17之Arg及位置18之小型脂族胺基酸，視情況為Ala。
如請求項1至12中任一項之胰高血糖素類似物，其包含C端至位置29之胺基酸之1至21個胺基酸的延長物。
如請求項13之胰高血糖素類似物，其中該位置29之胺基酸為 Gly、Ala或Leu。
如請求項13或14之胰高血糖素類似物，其中該延長物包含胺基酸序列GPSSGAPPPS(SEQ ID NO：5)或其保守取代序列。
如請求項1至15中任一項之胰高血糖素類似物，其中(i)該醯化胺基酸或該烷基化胺基酸位於位置10或(ii)該胰高血糖素類似物包含C端至該位置29之胺基酸之1至21個胺基酸的延長物且該醯化胺基酸或該烷基化胺基酸位於位置37-43中之任何位置，視情況為位置40。
如請求項1至16中任一項之胰高血糖素類似物，其中該醯基或該烷基係連接至包含式I之結構(視情況為Lys)、式II之結構(視情況為Cys)或式III之結構(視情況為Ser)之胺基酸，其中式I、II及III各為： [式III]。
如請求項1至17中任一項之胰高血糖素類似物，其中該醯基或該烷基係經由間隔基鍵聯至該胰高血糖素類似物之胺基酸。
如請求項18之胰高血糖素類似物，其中該間隔基為胺基酸或二肽。
如請求項19之胰高血糖素類似物，其中該間隔基包含一個或兩個酸性胺基酸殘基。
如請求項1至20中任一項之胰高血糖素類似物，其中該醯化胺基酸或該烷基化胺基酸係連接至C12至C18脂肪醯基。
如請求項21之胰高血糖素類似物，其中該醯基為C14或C16脂肪醯基。
如請求項1至22中任一項之胰高血糖素類似物，其中位置27之胺基酸為Leu、Nle、Val或Lys。
如請求項1至23中任一項之胰高血糖素類似物，其包含位置28之Glu或Asp。
如請求項24之胰高血糖素類似物，其包含位置28之Asp或Glu及位置29之Gly、位置28之Asp或Glu及位置29之Ala、或位置28之Asp及位置29之Leu。
如請求項24之胰高血糖素類似物，其包含位置28之Glu及位置29之Gly、位置28之Asp或Glu及位置29之Ala、或位置28之Asp及位置29之Leu。
如請求項1至26中任一項之胰高血糖素類似物，其包含以下一或多者：i.位置7之Ile；ii.位置12之Ile或Arg；vi.位置18之脂族胺基酸，視情況為Ala； vii.位置21之酸性胺基酸，視情況為Glu；viii.位置24之Asn、Ala或AIB；ix.位置27之脂族胺基酸，視情況為Ala或Leu或Nle；x.位置28之酸性胺基酸，視情況為Glu，或脂族胺基酸，視情況為Ala；xi.位置29之脂族胺基酸，視情況為Ala；xii.該C端之醯胺化。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物，其在位置3包含Gln、包含結構I、II或III之側鏈的胺基酸、疏水性胺基酸、酸性胺基酸或鹼性胺基酸，或為選自由以下組成之群的胺基酸：Glu、Ala、Leu、Ile、Nle、Val、NorVal、高絲胺酸、Met、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸碸、乙醯基-Orn、乙醯基-二胺基丁酸及乙醯基-Lys；其中結構I、II及III為：其中R¹為C_0-3烷基或C_0-3雜烷基；R²為NHR⁴或C_1-3烷基；R³為C_1-3烷基；R⁴為H或C_1-3烷基；X為NH、O或S；且Y為NHR⁴、SR³或OR³。
如請求項1至28中任一項之胰高血糖素類似物，其包含SEQ ID NO：11-18、21-23、25-31、33、34、100-139、141-155及157-173、175-194及196-200中之任一者的胺基酸序列。
一種肽，其包含：(a)序列X₁X₂X₃GTFTSDX₁₀SKYLX₁₅X₁₆X₁₇X₁₈X₁₉X₂₀X₂₁FVQWLX₂₇X₂₈X₂₉X₃₀PSSGX₃₅PPPS(SEQ ID NO：140)其中：X₁係選自由以下組成之群：乙醯基L-His、乙醯基L-Tyr、乙醯基L-硫代Ala、乙醯基L-Phe、乙醯基D-His、乙醯基D-Tyr、乙醯基D-硫代Ala、乙醯基D-Phe、乙醯基β-2-L-His、乙醯基β-2-L-Tyr、乙醯基β-2-L-硫代Ala、乙醯基β-2-L-Phe、乙醯基β-2-D-His、乙醯基β-2-D-Tyr、乙醯基β-2-D-硫代Ala、乙醯基β-2-D-Phe、去胺基L-His、去胺基L-Tyr、去胺基L-硫代Ala、去胺基L-Phe、去胺基D-His、去胺基D-Tyr、去胺基D-硫代Ala、去胺基D-Phe、去胺基β-2-L-His、去胺基β-2-L-Tyr、去胺基β-2-L-硫代Ala、去胺基β-2-L-Phe、去胺基β-2-D-His、去胺基β-2-D-Tyr、去胺基β-2-D-硫代Ala、去胺基β-2-D-Phe、D-His、D-Tyr、D-硫代Ala、D-Phe、β-2-D-His、β-2-D-Ala、β-2-D-硫代Ala、β-2-D-Phe、β-2-L-His、β-2-L-Tyr、β-2-L-硫代Ala、β-2-L-Phe及L-硫代Ala；X₂為Ala、Gly、Pro、肌胺酸、Ser及Val；X₃為Gln、包含結構I、II或III之側鏈之胺基酸、疏水性胺基酸、酸性胺基酸或鹼性胺基酸，或為選自由以下組成之群的胺基酸：Glu、Ala、Leu、Ile、Nle、Val、NorVal、高絲胺酸、Met、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸碸、乙醯基-Orn、乙醯基-二胺基丁酸及乙醯基-Lys；其中結構I、II及III為：其中R¹為C_0-3烷基或C_0-3雜烷基；R²為NHR⁴或C_1-3烷基；R³為C_1-3烷基；R⁴為H或C_1-3烷基；X為NH、O或S；且Y為NHR⁴、SR³或OR³；X₁₀為Tyr或共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸；X₁₅為酸性胺基酸，視情況為Glu或Asp；X₁₆為任何胺基酸，視情況為除Gly、Pro及Ser以外之任何胺基酸；例如，Glu、Ala、α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)、His、Lys；X₁₇為Arg、His、Gln；X₁₈為Arg或Ala；X₁₉為Ala或α,α雙取代胺基酸；X₂₀係選自由以下組成之群：α,α-雙取代胺基酸(例如AIB)或Gln或His、Lys或Ala；X₂₁為酸性胺基酸，視情況為Asp或Glu；X₂₇為Leu、Ala、Nle或Met；X₂₈為Ala或酸性胺基酸(視情況為Asp或Glu)；X₂₉為脂族，例如，Ala或Leu或Gly或AIB或Val；X₃₀為小型脂族胺基酸，例如，Ala或Gly；X₃₅為Ala或鹼性胺基酸(視情況為Arg或Lys)；其中，當X₂₈為酸性胺基酸時，X35為鹼性胺基酸；其中，視情況，當X₂₈為Asp時，則X₂₉不為Gly；其中，當X10為Tyr時，該肽在位置40包含共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸，且其中，視情況，該肽在位置41包含Gly，其中該肽之C端胺基酸經醯胺化；或(b)相對於SEQ ID NO：140具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：140，其中該肽展現針對人類GIP受體及人類GLP-1受體及/或人類胰高血糖素受體之促效劑活性，視情況，其中該胰高血糖素類似物針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。
如請求項30之肽，其中該位置1之胺基酸係選自乙醯基D-Tyr、乙醯基D-His、去胺基Tyr、D-Tyr、D-His及乙醯基D-Phe。
如請求項30或31中任一項之肽，其在位置2包含選自由以下組成之群的胺基酸：Ala、Gly、Pro、肌胺酸及Val。
如請求項32之肽，其在位置2包含選自由以下組成之群的胺基酸：Ala或Gly。
如請求項33之胰高血糖素類似物，其中，當該位置2之胺基酸為Ala時，該位置1之胺基酸為胺基酸之D-立體異構體。
如請求項30至34中任一項之肽，其在位置1及位置2包含選自由以下組成之群的一對胺基酸：
如請求項35之肽，其在位置1及位置2包含選自由以下組成之群的一對胺基酸：
如請求項30至36中任一項之肽，其中X₁₀為Tyr，該肽在位置40包含共價連接至C12至C18醯基或烷基之胺基酸，且該肽視情況在位置41包含Gly。
如請求項30至36中任一項之肽，其中X₁₀為共價連接至C12-C18醯基或烷基之胺基酸。
如請求項30至38中任一項之肽，其中X₂₀為Gln。
如請求項39之肽，其中位置16之胺基酸為帶電負荷胺基酸，視情況為Glu。
如請求項40之肽，其中X₁₈為Ala。
如請求項30至41中任一項之肽，其中X₂₈為Glu。
如請求項30至42中任一項之肽，X₂₇為Leu或Nle，X₂₉為Gly，該肽在C端包含醯胺化Gly，或其組合。
如請求項30至43中任一項之肽，其中該至多3個胺基酸修飾為保守取代。
一種肽，其包含序列SEQ ID NO：11。
一種肽，其包含序列SEQ ID NO：12。
一種肽，其包含序列SEQ ID NO：13。
一種肽，其包含序列SEQ ID NO：15。
一種肽，其包含序列SEQ ID NO：16。
一種肽，其包含序列SEQ ID NO：22。
一種肽，其由序列SEQ ID NO：11組成。
一種肽，其由序列SEQ ID NO：12組成。
一種肽，其由序列SEQ ID NO：13組成。
一種肽，其由序列SEQ ID NO：15組成。
一種肽，其由序列SEQ ID NO：16組成。
一種肽，其由序列SEQ ID NO：22組成。
一種肽，其包含：a.相對於SEQ ID NO：11具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：11；b.相對於SEQ ID NO：12具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：12；c.相對於SEQ ID NO：13具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：13；d.相對於SEQ ID NO：15具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：15；e.相對於SEQ ID NO：16具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：16；或 f.相對於SEQ ID NO：22具有至多3個胺基酸修飾之序列SEQ ID NO：22，其中該肽展現針對人類GIP受體及人類GLP-1受體之促效劑活性且該肽針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素類似物針對人類GLP-1受體相較於GIP受體之選擇性小於100倍。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素類似物針對GIP受體之EC50與其針對GLP-1受體之EC50相差在約50倍以內。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素類似物針對GIP受體之EC50與其針對GLP-1受體之EC50相差在約40倍以內。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素類似物針對GIP受體之EC50與其針對GLP-1受體之EC50相差在約30倍以內。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素類似物針對GIP受體之EC50與其針對GLP-1受體之EC50相差在約20倍以內。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素類似物針對GIP受體之EC50與其針對GLP-1受體之EC50相差在約10倍以內。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素類似物針對GIP受體之EC50與其針對GLP-1受體之EC50相差在約5倍以內。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素類似物展現至少1%之GIP效能百分比。
如請求項65之胰高血糖素類似物或肽，其中該GIP效能百分比為至少10%。
如請求項66之胰高血糖素類似物或肽，其中該GIP效能百分比為大於15%或大於20%。
如請求項67之胰高血糖素類似物或肽，其中該GIP效能百分比為至少50%。
如請求項68之胰高血糖素類似物或肽，其中該GIP效能百分比為大於或約100%。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素類似物展現至少1%之GLP-1效能百分比。
如請求項70之胰高血糖素類似物或肽，其中該GLP-1效能百分比為至少10%。
如請求項71之胰高血糖素類似物或肽，其中該GLP-1效能百分比為至少50%。
如請求項72之胰高血糖素類似物或肽，其中該GLP-1效能百分比為大於或約100%。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該GIP效能百分比與該GLP-1效能百分比相比高或低10倍以內。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素效能百分比為至少1%。
如請求項75之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素效能百分比為至少10%。
如請求項76之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素效能百分比為至少50%。
如請求項77之胰高血糖素類似物或肽，其中該胰高血糖素效能百分比為大於或約100%。
如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽，其中該GIP效能百分比與該胰高血糖素效能百分比相比高或低10倍以內。
一種二聚體或多聚體，其包含兩個或兩個以上如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽。
一種結合物，其包含如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽及結合物部分。
如請求項81之結合物，其中該胰高血糖素類似物係與異源肽類似物融合。
一種醫藥組合物，其包含如前述請求項中任一項之胰高血糖素類似物或肽、如請求項80之二聚體或多聚體、如請求項81或82之結合物或其組合，及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
一種在有需要之個體中降低體重增加或誘發體重減輕之方法，其包含以有效降低體重增加或誘發體重減輕之量向有需要之患者投與如請求項83之醫藥組合物。
如請求項84之方法，其中該量可有效治療有需要之個體之肥胖症。
一種治療糖尿病之方法，其包含以有效降低血糖含量之量向有需要之患者投與如請求項83之醫藥組合物。
一種肽，視情況為胰高血糖素類似物，如本文所述。