[go: up one dir, main page]

TW201343676A - 具拮抗性之人類ｌｉｇｈｔ專一性人類單株抗體 - Google Patents

具拮抗性之人類ｌｉｇｈｔ專一性人類單株抗體 Download PDF

Info

Publication number
TW201343676A
TW201343676A TW102125965A TW102125965A TW201343676A TW 201343676 A TW201343676 A TW 201343676A TW 102125965 A TW102125965 A TW 102125965A TW 102125965 A TW102125965 A TW 102125965A TW 201343676 A TW201343676 A TW 201343676A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
hlight
seq
pta
amino acid
Prior art date
Application number
TW102125965A
Other languages
English (en)
Inventor
Steven W Granger
Shinichiro Kato
Carl F Ware
Original Assignee
Kyowa Hakko Kirin Co Ltd
Jolla Inst Allergy Immunolog
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=39126775&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TW201343676(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Kyowa Hakko Kirin Co Ltd, Jolla Inst Allergy Immunolog filed Critical Kyowa Hakko Kirin Co Ltd
Publication of TW201343676A publication Critical patent/TW201343676A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)

Abstract

本發明提供免疫專一性結合至hLIGHT多肽抗體，諸如完全人類抗體。本發明亦提供編碼免疫專一性結合至hLIGHT多肽抗體(諸如完全人類抗體)的經分離核酸。本發明另外提供包含編碼免疫專一性結合至hLIGHT多肽抗體(諸如完全人類抗體)之核酸之載體及宿主細胞。本發明亦提供製造免疫專一性結合至hLIGHT多肽抗體(諸如完全人類抗體)之方法。本發明亦提供治療受檢者體內由hLIGHT介導之疾病之方法，包含向該受檢者投與免疫專一性結合至hLIGHT多肽抗體(諸如完全人類抗體)。在較佳實施例中，本發明所提供之抗hLIGHT抗體將改善、中和或抑制活體內hLIGHT生物活性(例如來自表現hLIGHT受體之細胞之hLIGHT介導的CCL20、IL-8或RANTES的產生或分泌)。本發明亦提供一種偵測檢體中hLIGHT之方法，以及一種改善、中和或抑制例如患有hLIGHT活性有害之病症之人類受檢者體內的hLIGHT活性之方法。

Description

具拮抗性之人類LIGHT專一性人類單株抗體
本發明提供抗體，該等抗體可免疫專一性結合至人類LIGHT(hLIGHT)(類淋巴毒素，具有誘發性表現，且可與HSV醣蛋白D競爭HVEM，即一種由T淋巴細胞表現之受體)多肽、hLIGHT多肽片段或其他hLIGHT抗原決定基。在一些實施例中，抗體係為免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之完全人類抗體，較佳為完全人類單株抗體。本發明亦提供編碼免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體之經分離核酸。本發明進一步提供包含編碼免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體之核酸的載體及宿主細胞，以及製造免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體的方法。本發明亦提供使用本發明所提供之抗hLIGHT抗體來抑制活體內hLIGHT生物活性及/或治療或處理患者體內hLIGHT介導之疾病的方法。
LIGHT(類淋巴毒素，具有可誘發表現，且可與HSV醣蛋白D競爭HVEM，即一種由T淋巴細胞表現之受體)是一種與慢性發炎性自體免疫疾病過程有關之潛在細胞激素靶(Mauri等人1998 Immunity 8 21-30)。作為配位體TNF總科(TNFSF)之一員，LIGHT亦為已知的 TNFSF14或CD258。LIGHT係以緊密受控的方式於激活後表現於T細胞表面上，其在4小時內出現，在12-24小時達到高峰值，而在48小時消失(Castellano等人2002 J Biol Chem 277 42841-51)。然而，LIGHT亦以可偵測含量基本性地存在於未成熟樹突狀細胞表面上(Tamada等人2000 J Immunol 164 4105-10)及消化道T細胞及天然殺傷(NK)細胞上(Cohavy等人2005 J Immunol 174 646-53)。LIGHT藉由結合三種TNF總科受體(包括淋巴毒素β受體(LTβR)(Crowe等人1994 Science 264 707-10；Browning等人1997 J Immunol 159 3288-98)、疱疹病毒進入介體(HVEM)(Montgomery等人1996 Cell 87(3)427-36)及誘餌受體3(DcR3)(Yu等人1999 J Biol Chem 274 13733-6))來介導其生物效應。
經以抑制性LTβR-Fc融合蛋白所處理之小鼠會降低CD4+CD45RBhigh T細胞轉移結腸炎模型之發炎性症狀，即CD4+T細胞介導之病理(Mackay等人1998 Gastroenterology 115 1464-75)。LIGHT之基本性轉殖基因T細胞專一性表現亦經證明會導致具有類似人類發炎性腸病(inflammatory bowel disease；IBD)之類自體免疫病理之嚴重腸炎(Wang等人2005 J Immunol 174 8173-82；Shaikh等人2001 J Immunol 167 6330-7；Wang等人2001 J Immunol 167 5099-105；Wang等人2004 J Clin Invest 113 826-35)。當來自LIGHT轉殖基因動物之腸系膜淋巴結細胞轉化為RAG-/-時，表現LIGHT之淋巴細胞可誘發類IBD症狀(例如人類克羅恩氏病(Crohn's disease)、裂開性潰瘍(fissuring ulcer)、回腸炎之細胞激素變化及結腸性IFN-γ及TNF之增加)(Wang等人2005 J Immunol 174 8173-82)。在人類疾病中，發現患有活性克羅恩氏病患者體內LIGHT表現增加(Cohavy等人2005 J Immunol 174 646-53；Wang等人2005 J Immunol 174 8173-82；Wang等人2004 J Clin Invest 113 826-35；Cohavy等人2004 J Immunol 173 251-8)。LIGHT亦經證明在IBD患者消化道T細胞中亦會升高(Cohavy等人2004 J Immunol 173 251-8)。遺傳證據亦證實LIGHT於IBD中之作用(Granger 等人2001 J Immunol 167 5122-8)；(Rioux等人2000 Am J Hum Genet 66 1863-70；Low等人2004 Inflamm Bowel Dis 10 173-81；Bonen及Cho 2003 Gastroenterology 124 521-36)。
此外，CCL20-CCR6信號傳導業經證明與IBD有關，且LIGHT會誘發CCL20自人類結腸上皮細胞株HT29.14s之分泌。在人類研究中，業經發現結腸上皮細胞為IBD患者中之CCL20的主要來源，且人類IBD患者體內CCL20表現會增加(Kwon等人2002 Gut 51 818-26)；(Kaser等人2004 J Clin Immunol 24 74-85)。
hLIGHT亦與移植物抗宿主疾病(GVHD)有關。舉例而言，LIGHT業經證明對於T細胞可提供有效協同刺激活性，可增強無關於B7-CD28路徑之Th1細胞激素增殖及產生(參見例如Tamada等人2000 J.Immunol.164 4105-4110)。以任一抗-HVEM單株抗體、HVEM-Ig或LTβR融合蛋白阻斷LIGHT-HVEM協同刺激作用會抑制同種異體T細胞反應(參見例如Tamada等人2000 J.Immunol.164 4105-4110；Harrop等人19998 J.Immunol.161 1786)。此外，活體內投與LTβR-Ig或鼠科抗-LIGHT抗體會抑制鼠科急性GVHD模型中之抗宿主細胞毒性T淋巴細胞(CTL)反應(Tamada等人2000 Nat.Med.6 283-289)。
儘管諸如上述彼等發現顯示LIGHT在發炎性病症(諸如IBD或GVHD)之作用，但截至目前，人類抗-人類LIGHT抗體既未產生，亦未顯示任何人類抗-hLIGHT抗體或單株抗hLIGHT抗體對hLIGHT生物活性具有拮抗性的。據此，對辨識適用於治療人類之發炎性病症之療法(諸如抗LIGHT療法)仍存在需要。本發明中引用或論及之參考不應視為承認其為本發明之先前技術。
本發明係提供免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段 或hLIGHT抗原決定基之抗體，諸如完全人類抗體。本發明亦提供編碼免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體(諸如完全人類抗體)之經分離核酸。另外本發明提供包含編碼免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體，諸如完全人類抗體之核酸的載體及宿主細胞。本發明亦提供製造免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體(諸如完全人類抗體)之方法。本發明亦提供治療由hLIGHT介導之疾病之方法，其包含投與免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體，諸如完全人類抗體。在較佳實施例中，本發明所提供之抗hLIGHT抗體係拮抗抗體，其可改善、中和或抑制活體內hLIGHT生物活性(例如從表現hLIGHT配位體，諸如hLIGHT受體(例如HVEM、LTβR及/或DcR3)之細胞經hLIGHT介導之CCL20、IL-8或RANTES的產生或分泌)。本發明抗體可為全長抗體或抗原結合抗體片段。本發明抗體亦適用於偵測hLIGHT，以及改善、中和或抑制例如患有hLIGHT活性有害之病症之人類受檢者體內的hLIGHT活性。
因此，本發明在一態樣中係提供免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現或可溶hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之經分離抗體。在一些實施例中，抗體免疫專一性可結合至(a)三聚(或原生)hLIGHT抗原決定基；(b)單體(或變性)hLIGHT抗原決定基，(c)三聚hLIGHT抗原決定基與單體hLIGHT抗原決定基，(d)三聚hLIGHT抗原決定基而非單體hLIGHT抗原決定基，或(e)單體hLIGHT抗原決定基而非三聚hLIGHT抗原決定基。在較佳實施例中，抗體免疫專一性係結合三聚hLIGHT抗原決定基而非人類單體hLIGHT抗原決定基。在較佳實施例中，該抗體為E1抗體、E13抗體、E63抗體、F19抗體或F23抗體。
產生各E1、E13、E63、F19及F23抗體之融合瘤係依據Budapest Treaty with the American Type Culture Collection(ATCC,10801 University Blvd.,Manassas,VA 20110-2209)之條款於2006年7月12日(分別為ATCC登記號PTA-7729(融合瘤124 E1)及PTA-7728(融合瘤124 F23))、2006年8月17日(ATCC登記號PTA-7818(融合瘤124 E63)及PTA-7819(融合瘤124 F19))及2006年8月23日(ATCC登記號PTA-7842(融合瘤124 E13))寄存，其均係以引用的方式併入本發明。由融合瘤124 E1、124 E13、124 E63、124 F19及124 F23各自產生之抗體在本發明中亦可分別稱作E1、E13、E63、F19、F23及/或分別以ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819及PTA-7728表示。
此等抗體、融合瘤、製造此等抗體之方法及使用此等抗體之方法均包括在本發明中。
在特定實施例中，本發明抗體為一種由E1抗體、E13抗體及/或E63抗體競爭性阻斷(例如以劑量依賴方式)與hLIGHT多肽(例如細胞表面表現的或可溶的hLIGHT)、hLIGHT片段或hLIGHT抗原決定基之結合的抗體。在其他實施例中，該抗體係由F19抗體及/或F23抗體競爭性阻斷(例如以劑量依賴方式)與hLIGHT多肽(例如細胞表面表現的或可溶的hLIGHT)、hLIGHT片段或hLIGHT抗原決定基之結合。在特定實施例中，該抗體與hLIGHT多肽(例如細胞表面表現的或可溶的hLIGHT)、hLIGHT片段或hLIGHT抗原決定基之結合係由E1抗體、E13抗體及/或E63抗體競爭性阻斷(例如以劑量依賴方式)，但不由F19抗體及/或F23抗體競爭性阻斷(例如以劑量依賴方式)。在其他實施例中，抗體與hLIGHT多肽(例如細胞表面表現或可溶hLIGHT)、hLIGHT片段或hLIGHT抗原決定基之結合係由F19抗體及/或F23抗體競爭性阻斷(例如以劑量依賴方式)，但不由E1抗體、E13抗體及/或E63抗體競爭性阻斷(例如以劑量依賴方式)。例示性競爭性阻斷測試提供於本發 明之實例中。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現的或可溶的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體或其抗原結合抗體片段。在某些實施例中，該抗體或抗原結合片段包含E1、E13、E63、F19或F23之VH鏈、VL鏈、VH域、VL域、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。
在某些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包含少於六個CDR。在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包含一個、兩個、三個、四個或五個選自由VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3所組成之CDR或由其組成。在特定實施例中，該抗體或其抗原結合片段包含一個、兩個、三個、四個或五個選自由下列各物組成之群之CDR或由其組成：E1、E13、E63、F19或F23之VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。
本發明亦提供包含本發明抗hLIGHT抗體(諸如E1、E13、E63、F19或F23)之醫藥組合物。
在特定實施例中，本發明抗體為完全人類抗體、單株抗體、重組抗體、拮抗抗體或其任何組合。在特定實施例中，該抗體為免疫專一性結合至hLIGHT之完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體或其抗原結合片段。在較佳實施例中，該抗體為拮抗抗體。
在某些實施例中，該抗體與HVEM、LTβR、DcR3或其融合蛋白(例如Fc：HVEM、Fc：LTβR或Fc：DcR3)競爭(例如以劑量依賴方式)結合hLIGHT多肽，諸如細胞表面表現的hLIGHT多肽或可溶的hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基。例示性競爭性阻斷測試提供於本發明之實例中。
本發明在第二態樣中提供編碼免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現的或可溶的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體之經分離核酸。在某些實施例中，該核酸編碼E1、E13、E63、F19或F23之VH鏈、VL鏈、VH域、VL域、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。
本發明在第三態樣中提供包含編碼免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體之核酸的載體及宿主細胞。
本發明在第四態樣中提供製造免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體之方法。在某些實施例中，該抗體可免疫專一性結合至hLIGHT多肽之單核苷酸多態性(SNP)突變體，諸如214E-32S、214K-32S、214E-32L及/或214K-32L。本發明亦提供產生免疫專一性結合至hLIGHT多肽或其SNP突變體之抗體之融合瘤。在較佳實施例中，該融合瘤為產生E1、E13、E63、F19或F23之融合瘤。
本發明在第五態樣中提供治療或緩解受檢者(例如人類受檢者)體內由hLIGHT介導疾病之一或多種症狀之方法，其包含向該受檢者投與有效量之免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現或可溶hLIGHT)之抗體，其中該抗體可抑制hLIGHT活性。在某些實施例中，hLIGHT介導之疾病為IBD，諸如克羅恩氏病或潰瘍性結腸炎。在其他實施例中，該hLIGHT介導之疾病為GVHD。
本發明在第六態樣中提供減低或抑制受檢者(例如人類受檢者)體內hLIGHT與HVEM、LTβR及/或DcR3結合之方法，其包含向該受檢者投與有效量之免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現的或可溶的hLIGHTT)之抗體。
本發明在第七態樣中提供減低或抑制受檢者(例如人類受檢者)體 內hLIGHT生物活性(諸如分泌CCL20、IL80及/或RANTES)之方法，其包含向該受檢者投與有效量之免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現的或可溶的hLIGHT)之抗體，其中該抗體可減低或抑制hLIGHT生物活性。
本發明在第八態樣中提供減低或抑制具有細胞表面表現hLIGHT之細胞內hLIGHT與HVEM、LTβR及/或DcR3之結合的方法，其包括使該細胞與有效量之免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現或可溶hLIGHT)，諸如hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體接觸。
本發明在第九態樣中提供減低或抑制具有細胞表面表現hLIGHT受體(諸如HVEM、LTβR及/或Dc3R)之細胞內之hLIGHT生物活性(諸如分泌CCL20、IL8及/或RANTES)的方法，其包括使該細胞與有效量之免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現或可溶hLIGHT或其SNP突變體)之抗體接觸，其中抗體可減低或抑制hLIGHT生物活性。
本發明在第十態樣中提供免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體進一步包含一可偵測標記。在某些實施例中，將包含可偵測標記之抗hLIGHT抗體用於偵測檢體中hLIGHT之方法，該方法包含使檢體與抗hLIGHT抗體接觸。在特定實施例中，該檢體包含一於細胞表面上表現hLIGHT之細胞。
本發明在第十一態樣中提供包含免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體之套組。
術語
除非另有所指，本發明所使用之所有技術及科學術語具有一般熟習此項技術者通常理解之相同含義。所有專利案、申請案、公開申 請案及其他公開案之全文係以引用的方式併入本發明中。在本發明之術語有多種定義之情況下，除非另有所指，否則以此部分中之定義優先。
術語"約"或"大約"意謂在所給定值或範圍之20%，較佳10%且更佳在5%(或1%或更少)之範圍內。
本發明所使用之"投與"或"投用"係指藉由將存在於體外之物質(例如本發明所提供之抗hLIGHT抗體)注射或其他身體傳遞(諸如藉由黏膜、皮內、靜脈內、肌內傳遞及/或本發明所述或此項技術中已知之任何其他身體傳遞方法)至患者體內。當要治療疾病或其症狀時，物質的投與典型地係在疾病或其症狀發作後進行。當要預防疾病或其症狀時，物質的投與典型地係在疾病或其症狀發作前進行。
在多肽之上下文中，本發明所使用之術語"類似物"係指具有與hLIGHT多肽，hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗體類似或相同之功能，但不一定包含hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗體類似或相同之胺基酸序列，或具有hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗體之類似或相同結構的多肽。具有類似胺基酸序列之多肽係指滿足以下條件中之至少一者之多肽：(a)具有與本發明所述之hLIGHT多肽(例如SEQ ID NO：52)、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗體之胺基酸序列至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%且較佳至少90%，更佳至少95%或最佳至少99%相同之胺基酸序列的多肽；(b)由在嚴格條件下可與編碼本發明所述之hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗體(或其VH或VL區)之核苷酸序列雜交之核苷酸序列編碼的多肽，該等多肽具有至少5個胺基酸殘基、至少10個胺基酸殘基、至少15個胺基酸殘基、至少20個胺基酸殘基、至少25個胺基酸殘基、至少40個胺基酸殘基、至少50個胺 基酸殘基、至少60個胺基酸殘基、至少70個胺基酸殘基、至少80個胺基酸殘基、至少90個胺基酸殘基、至少100個胺基酸殘基、至少125個胺基酸殘基或至少150個胺基酸殘基(參見例如Sambrook等人(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Maniatis等人(1982)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,NY)；及(c)由與編碼本發明所述之hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗體(或其VH或VL區)之核苷酸序列至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%且較佳至少90%，更佳至少95%或最佳至少99%相同之核苷酸序列編碼的多肽。具有與本發明所述之hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗體類似結構之多肽係指具有本發明所述之hLIGHT多肽、hLIGHT片段或hLIGHT抗體之類似第二、第三或第四結構之多肽。多肽結構可藉由為熟習此項技術者已知之方法確定，包括(但不限於)X射線結晶學、核磁共振及結晶電子顯微法。
為測定兩個胺基酸序列或兩個核酸序列之一致性百分比，將該等序列排比以求最佳比較目的(例如可於第一胺基酸序列或核酸序列中引入間隙從而與第二胺基酸或核酸序列最佳比對)。接著比較對應胺基酸位置或核苷酸位置處之胺基酸殘基或核苷酸。當第一序列中之位置由與第二序列中對應位置的相同之胺基酸殘基或核苷酸所佔據時，則彼位置處之分子相同。兩個序列之間之一致性百分比為序列所共有之相同位置數之函數(亦即一致性%=相同重疊位置數/位置總數×100%)。在一個實施例中，該兩個序列為相同長度。
亦可使用數學演算法來完成兩個序列(例如胺基酸序列或核酸序列)之間一致性百分比的測定。用於比較兩個序列之數學演算法之較 佳非限制性實例為如於Karlin and Altschul,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：5873 5877中經修正之Karlin and Altschul,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87：22642268之演算法。將該演算法併入Altschul等人，1990,J.Mol.Biol.215：403之NBLAST及XBLAST程式中。BLAST核苷酸搜尋可以設定為(例如)計分=100，字長=12之NBLAST核苷酸程式參數來進行以獲得與本發明核酸分子同源之核苷酸序列。BLAST蛋白搜尋可以設定為(例如)計分=50，字長=3之XBLAST程式參數來進行以獲得與本發明蛋白質分子同源之胺基酸序列。為獲得為比較目的之間隙比對，可利用如Altschul等人，1997,Nucleic Acids Res.25：3389 3402中所述之間隙BLAST。或者可使用PSI BLAST來執行偵測分子間遠緣關係(Id.)之重複搜尋。當利用BLAST、間隙BLAST及PSI Blast程式時，可使用各別程式(例如XBLAST及NBLAST)之預設參數(參見例如萬維網ncbi.nlm.nih.gov之美國國家生物技術資訊中心(NCBI))。用於比較序列之數學演算法之另一較佳、非限制性實例為Myers and Miller,1988,CABIOS 4：1117演算法。將該演算法併入為GCG序列比對軟體包之部分之ALIGN程式(版本2.0)中。當利用ALIGN程式來比較胺基酸序列時，可使用PAM120重量殘餘表、12間隙長度損失及4間隙長度損失。
可使用具有或不具有間隙之類似於彼等上述技術之技術來測定兩個序列之間的一致性百分比。在計算一致性百分比時，典型地僅計數精確性的配對。
本發明所使用之hLIGHT之"拮抗劑"或"抑制劑"係指一種分子，該分子能夠抑制或減低諸如表現hLIGHT之細胞或表現hLIGHT配位體(諸如hLIGHT受體)之細胞中hLIGHT之一或多種生物活性。舉例而言，在某些實施例中，當本發明抗體與具有細胞表面表現之hLIGHT受體(例如HVEM、LTβR及/或DcR3)之細胞接觸時，該抗體係為可抑 制或減低自該細胞分泌CCL20、IL-8及/或RANTES之拮抗抗體。在一些實施例中，hLIGHT拮抗劑(例如本發明拮抗性抗體)會有作用，其係(例如)藉由抑制或減低表現hLIGHT受體細胞之活化及/或細胞信號轉導路徑，據此相對於不存有拮抗劑下hLIGHT介導之生物活性下，而抑制細胞由hLIGHT介導之生物活性。在某些實施例中，本發明所提供之抗體為完全人類、拮抗性抗hLIGHT抗體，較佳為完全人類，單株、拮抗性抗hLIGHT抗體。
術語"抗體"及"免疫球蛋白"或"Ig"在本發明中可互換地使用。術語"免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體"、"免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體"、"抗hLIGHT抗體"及其類似術語亦於本發明中互換使用且係指專一性結合至hLIGHT多肽(諸如hLIGHT抗原或抗原決定基)之抗體或其片段。免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體或其片段可與相關抗原交叉反應。較佳地，免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體或其片段而不與其他抗原交叉反應。免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體或其片段可(例如)藉由免疫檢定、BIAcore或熟習此項技術者已知之其他技術加以鑑定。如使用實驗技術(諸如放射性免疫檢定(RIA)及酶聯結免疫吸附劑檢定(ELISA))測定，當以高於任何交叉反應抗原之親和力結合至hLIGHT抗原時，抗體或其片段專一性可結合至hLIGHT抗原。典型地，專一性或選擇性反應係為至少兩倍於背景信號或雜訊，且更典型地係高於10倍背景。參見例如Paul編輯，1989,Fundamental Immunology Second Edition,Raven Press,New York第332-336頁，關於抗體專一性之討論。
本發明抗體包括(但不限於)合成抗體、單株抗體、重組產生之抗體、多專一性抗體(包括雙專一性抗體)、人類抗體、人化抗體、嵌合抗體、內抗體、單鏈Fv(scFv)(例如包括單專一性、雙專一性等)、駱駝化抗體、Fab片段、F(ab')片段、二硫鍵連接之Fv(sdFv)、抗遺傳型 (抗Id)抗體及上述任何抗體之抗原決定基結合片段。詳言之，本發明抗體包含免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，亦即含有免疫專一性結合至hLIGHT抗原(例如抗hLIGHT抗體之一或多個互補判定區(CDR))之抗原結合位點之抗原結合域或分子。本發明抗體可為免疫球蛋白分子之任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、任何種類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或任何子類(例如IgG2a及IgG2b)。在較佳實施例中，hLIGHT抗體為完全人類，諸如完全人類單株hLIGHT抗體。在某些實施例中，本發明抗體為IgG抗體或其種類(例如人類IgG1或IgG4)或子類。
術語"抗原結合域"、"抗原結合區"、"抗原結合片段"及類似術語係指抗體的部分，其包含與抗原相互作用且賦予結合劑對抗原(例如互補判定區(CDR))之專一性及親和力之胺基酸殘基。抗原結合區可源自任何動物物種，諸如齧齒動物(例如兔、大鼠或倉鼠)及人類。較佳地，抗原結合區將具有人類來源。
本發明所使用之術語"組合物"意欲涵蓋含有視情況特定量之特定成分(例如本發明抗體)之產物以及直接或間接由視情況特定量之特定成分組合所產生的任何產物。
術語"恆定區"或"恆定域"係指不直接涉及抗體與抗原之結合但具有各種效應子功能(諸如與Fc受體之相互作用)之輕鏈及重鏈的羧基末端部分。該等術語係指具有相對於含有抗原結合位點之免疫球蛋白其他部分(可變域)具有更保守之胺基酸序列的免疫球蛋白分子部分。恆定域含有重鏈之CH1、CH2及CH3域及輕鏈之CHL域。
在多肽上下文中，本發明所使用之術語"衍生物"係指包含hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段，或免疫專一性結合至hLIGHT多肽之抗體的藉由引入胺基酸殘基取代、缺失或添加而改變之胺基酸序列的多肽。本發明所使用之術語"衍生物"亦係指例如藉由將任何類型之 分子共價連接至多肽而經化學修飾之hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或免疫專一性結合至hLIGHT多肽之抗體。舉例而言(但不限於)，可藉由(例如)醣基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、已知保護/阻斷基之衍生、蛋白裂解、與細胞配位體或其他蛋白連接等來化學修飾hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗體。衍生物係以所連接分子之類型或位置不同於天然產生或起始之肽或多肽的方式修飾。衍生物進一步包括天然存在於肽或多肽上之一或多種化學基團之缺失。hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗體之衍生物可藉由使用熟習此項技術者已知之技術(包括(但不限於)專一性化學裂解、乙醯化、調配、衣黴素代謝合成等)之化學修飾作用來化學修飾。此外，hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗體之衍生物可含有一或多種非經典胺基酸。多肽衍生物具有與本發明所述之hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗體類似或相同之功能。
本發明所使用之術語"有效量"係指足以降低及/或改善所給定疾病及/或其相關症狀之嚴重性及/或持續時間之療法(例如本發明所提供之抗體或醫藥組合物)量。此術語亦涵蓋降低或改善所給定疾病之進展或進程，降低或改善所給定疾病之復發、發展或發作及/或改良或增強另一種療法(例如除本發明所提供之抗hLIGHT抗體以外之治療劑療法)之預防或治療效應所必需之量。在一些實施例中，本發明抗體之有效量自約0.1mg/kg(毫克抗體/公斤受檢者體重)至約100mg/kg。在某些實施例中，其中所提供之抗體有效量為約0.1mg/kg、約0.5mg/kg、約1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、約10mg/kg、約15mg/kg、約20mg/kg、約25mg/kg、約30mg/kg、約35mg/kg、約40mg/kg、約45mg/kg、約50mg/kg、約60mg/kg、約70mg/kg、約80mg/kg、約90mg/kg或約100mg/kg(或其中之範圍)。在一些實施例中，本發明所使用之"有效量"亦指本發明抗體達成指定結果(例如抑制細胞 hLIGHT生物活性，諸如抑制自細胞分泌CCL20、IL-8或RANTES)之量。
本發明所使用之術語"抗原決定基"係指抗原(諸如hLIGHT多肽或hLIGHT多肽片段)表面上能夠結合至抗體之一或多個抗原結合區且於動物(較佳哺乳動物且最佳人類)體內具有抗原或免疫原活性，能夠誘發免疫反應之局部區域。具有免疫原活性之抗原決定基為誘發動物體內抗體反應之多肽部分。具有抗原活性之抗原決定基為一多肽部分，其以免疫專一性結合至抗體可以此項技術中眾所熟知之任何方法(例如藉由本發明所述之免疫檢定法)測定。抗原性抗原決定基不一定需要為免疫原性的。抗原決定基通常由諸如胺基酸或糖側鏈之化學活性表面分子群組成且具有特定三維結構特徵以及特定電荷特徵。貢獻抗原決定基之多肽區可為多肽之鄰近胺基酸或該抗原決定基可同時來自多肽之兩個或兩個以上之非鄰近區。該抗原決定基可能為或可能不為三維表面特徵抗原。在某些實施例中，hLIGHT抗原決定基為三維表面特徵hLIGHT多肽(例如為三聚形式之hLIGHT多肽)。在其他實施例中，hLIGHT抗原決定基為直鏈特徵hLIGHT多肽(例如為三聚形式或單體形式之hLIGHT多肽)。本發明所提供之抗體免疫專一性結合至單體(變性)形式hLIGHT之抗原決定基、三聚(原生)形式hLIGHT之抗原決定基或單體(變性)形式與三聚(原生)形式兩種形式hLIGHT之抗原決定基。在特定實施例中，本發明所提供之抗體可免疫專一性結合至三聚形式hLIGHT之抗原決定基，但不會免疫專一性結合至單體形式hLIGHT。
本發明所使用之術語"賦形劑"係指常用作藥物稀釋劑、媒劑、防腐劑、黏合劑或穩定劑之惰性物質且包括(但不限於)蛋白質(例如血清白蛋白等)、胺基酸(例如天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、精胺酸、甘胺酸、組胺酸等)、脂肪酸及磷脂(例如磺酸烷酯、辛酸酯等)、界面活性 劑(例如SDS、聚山梨醇酯、非離子界面活性劑等)、醣類(例如蔗糖、麥芽糖、海藻糖等)及多元醇(例如甘露糖醇、山梨糖醇等)。亦參見Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA，其全文係以引用的方式併入本發明。
在肽或多肽之上下文中，本發明所使用之術語"片段"係指包含小於全長胺基酸序列之肽或多肽。該片段可(例如)由自胺基酸序列截斷胺基端、截斷羧基端及/或內部缺失殘基而產生。片段可(例如)由替代RNA剪接或由活體內蛋白酶活性產生。在某些實施例中，hLIGHT片段包括包含hLIGHT多肽或免疫專一性結合至hLIGHT多肽之抗體之胺基酸序列的至少5個鄰近胺基酸殘基、至少10個鄰近胺基酸殘基、至少15個鄰近胺基酸殘基、至少20個鄰近胺基酸殘基、至少25個鄰近胺基酸殘基、至少40個鄰近胺基酸殘基、至少50個鄰近胺基酸殘基、至少60個鄰近胺基酸殘基、至少70個鄰近胺基酸殘基、至少80個鄰近胺基酸殘基、至少90個鄰近胺基酸殘基、到少100個鄰近胺基酸殘基、至少125個鄰近胺基酸殘基、至少150個鄰近胺基酸殘基、至少175個鄰近胺基酸殘基、至少200個鄰近胺基酸殘基或到少250個鄰近胺基酸殘基之胺基酸序列之多肽。在特定實施例中，hLIGHT多肽片段或免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體保有多肽或抗體之至少1個、至少2個或至少3個功能。
術語"完全人類抗體"或"人類抗體"在本發明中可互換使用，且係指包含人類可變區及最佳人類恆定區之抗體。在特定實施例中，該等術語係指包含人類來源可變區及恆定區之抗體。在某些實施例中，"完全人類"抗hLIGHT抗體亦可涵蓋結合hLIGHT多肽且由為人類生殖系免疫球蛋白核酸序列之天然產生之體細胞突變體的核酸序列所編碼之抗體。在特定實施例中，本發明所提供之抗hLIGHT抗體為完全人類抗體。如Kabat等人所述，術語"完全人類抗體"包括具有對應於人 類生殖系免疫球蛋白序列之可變及恆定區之抗體(參見Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH公開案第91-3242號)。產生完全人類抗體之例示性方法提供於(例如)本發明實例中，但可使用於此項技術中已知之任何方法。
片語"重組人類抗體"包括藉由重組方法製備、表現、產生或分離之人類抗體，諸如使用重組表現載體轉染至宿主細胞中而表現之抗體；自重組、組合人類抗體庫分離之抗體；自人類免疫球蛋白基因被基因轉殖及/或染色體轉殖之動物(例如小鼠或牛)分離之抗體(參見例如Taylor,L.D.等人(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295)或藉由包括將人類免疫球蛋白基因序列剪接成其他DNA序列之任何其他方法製備、表現、產生或分離之抗體。該等重組人類抗體可具有源自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變或恆定區(參見Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH公開案第91-3242號)。 然而，在某些實施例中，使該等重組人類抗體經受活體外突變(或當使用人類Ig序列基因轉殖動物時，使經受活體內體細胞突變)，且因此重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列雖然源自且與人類生殖系VH及VL序列相關，但可能並非天然存在於活體內人類抗體生殖系基因譜中之序列。
本發明所使用之術語"融合蛋白"係指包含抗體之胺基酸序列及異源多肽或蛋白質(亦即通常不為抗體部分(例如非抗hLIGHT抗原抗體)之多肽或蛋白質))之胺基酸序列之多肽。當與hLIGHT或抗hLIGHT抗體聯合使用時，術語"融合"係指將肽或多肽或其片段、突變體及/或衍生物與異源肽或多肽接合。較佳地，融合蛋白保有hLIGHT或抗hLIGHT抗體之生物活性。在某些實施例中，融合蛋白包含hLIGHT抗 體VH域、VL域、VH CDR(一、二或三個VH CDR)及/或VL CDR(一、二或三個VL CDR)，其中融合蛋白可免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基。
當參考抗體使用時，術語"重鏈"係指以重鏈恆定域之胺基酸序列為基礎之五個不同類型，即α、δ、ε、γ及μ。此等不同類型之重鏈為眾所熟知的，且分別會產生五種類型之抗體IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，包括四種IgG子類，即IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。較佳地，該重鏈為人類重鏈。
本發明所使用之術語"宿主"係指動物，較佳哺乳動物，且最佳人類。
本發明所使用之術語"宿主細胞"係指經核酸分子轉染之特定受檢細胞及該細胞之子代或潛在子代。由於可能發生於後代繁殖中之突變或環境影響或將核酸分子整合至宿主細胞基因體中，該細胞之子代可能不會與經核酸分子轉染之母細胞完全一致。
本發明所使用之術語"免疫調節劑"及其變體(包括(但不限於)該等免疫調節劑)係指可調節宿主免疫系統之藥劑。在某些實施例中，免疫調節劑為免疫抑制劑。在某些其他實施例中，免疫調節劑為免疫刺激劑。根據本發明，用於本發明組合療法之免疫調節劑不包括抗hLIGHT抗體或抗原結合片段。免疫調節劑包括(但不限於)小分子、肽、多肽、蛋白質、融合蛋白、抗體、無機分子、摸擬劑及有機分子。
本發明所使用之術語"組合"在投與其他療法之上下文中係指使用一種以上療法。使用術語"組合"並不限制向患有感染之受檢者投與療法之次序。第一療法可在投與第二療法之前(例如1分鐘、45分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12 週)，與投與第二療法同時，或於投與第二療法之後(例如1分鐘、45分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週)投與曾患、患有或易患hLIGHT介導之疾病之受檢者。可以任何次序與其他額外療法一起投與任何額外療法。在某些實施例中，可將本發明抗體與一或多種療法(例如目前投與以預防、治療、處理及/或改善hLIGHT介導之疾病之非本發明抗體之療法)組合投與。可與本發明抗體組合投與之療法之非限制性實例包括鎮痛劑、麻醉劑、抗生素或免疫調節劑或於美國藥典(U.S.Pharmacopoeia)及/或臨床醫生手冊(Physician's Desk Reference)中列出之任何其他藥劑。
本發明中所使用之術語"無機鹽"係指由以金屬或起金屬作用之基團置換酸式氫或酸之部分或全部而產生或通常於醫藥組合物及生物材料製劑中用作張力調節化合物之不含碳的任何化合物。最常用無機鹽為NaCl、KCl、NaH2PO4等。
"經分離"或"經純化"抗體大體上不含來自產生抗體之細胞或組織來源之細胞材料或其他污染蛋白，或大體上不含化學合成時之化學前驅物或其他化學物質。文字"大體上不含細胞材料"包括抗體製劑，其中將該抗體自分離或重組產生抗體之細胞之細胞成分分離。因此，大體上不含細胞材料之抗體包括具有小於約30%、20%、10%或5%(以乾重計)之異源蛋白(本發明中亦稱作"污染蛋白")之抗體製劑。當該抗體係重組產生時，其亦較佳大體上不含培養基，亦即培養基代表小於約20%、10%或5%之蛋白質製劑體積。當該抗體係藉由化學合成產生時，其較佳地大體上不含化學前驅物或其他化學物質，亦即將其自涉及蛋白質合成之化學前驅物或其他化學物質分離。因此，除所關注之抗體以外，該等抗體製劑具有小於約30%、20%、10%、5%(以乾重計)之化學前驅物或化合物。在較佳實施例中，本發明抗體為經分離 或純化的。
"經分離"核酸分子為分離自存有核酸分子之天然來源中之其他核酸分子的核酸分子。此外，"經分離"核酸分子(諸如cDNA分子)在藉由重組技術產生時可大體上不含其他細胞材料或培養基，或在化學合成時大體上不含化學前驅物或其他化學物質。在特定實施例中，編碼本發明抗體之核酸分子為經分離或純化的。
術語"人類LIGHT"、"hLIGHT"或"hLIGHT多肽"及其類似術語係指包含SEQ ID NO：52胺基酸序列之多肽("多肽"、"肽"及"蛋白質"在本發明中可互換使用)及相關多肽，包括其SNP突變體。相關多肽包括對偶基因突變體(例如SNP突變體)；剪接突變體；片段；衍生物；取代、缺失及插入突變體；融合多肽；及種間同系物，其較佳地保持hLIGHT活性及/或足以產生抗hLIGHT免疫反應。例示性非同義SNP突變體包括(但不限於)包含214E-32S(hLIGHT多肽(例如示於SEQ ID NO：52之hLIGHT多肽)位置214處之麩胺酸及位置32處之絲胺酸)、214K-32S、214E-32L及214E-32L之hLIGHT多肽。亦涵蓋足以產生抗hLIGHT免疫反應之可溶形式之hLIGHT(參見例如SEQ ID NO：53及SEQ ID NO：54)。熟習此項技術者將瞭解，可將本發明抗hLIGHT抗體與hLIGHT多肽、多肽片段、抗原及/或抗原決定基結合，因為抗原決定基為更大抗原之部分，該抗原為更大多肽片段之部分，而該多肽片段又為更大多肽之部分。hLIGHT可以三聚(原生)或單體(變性)形式存在。
術語"Kabat編號"及其類似術語於此項技術中係已知的，且係指比抗體之重鏈及輕鏈可變區或其抗原結合部分中之其他胺基酸殘基更具變化性(亦即高變)之胺基酸殘基編號系統(Kabat等人(1971)Ann.NY Acad.Sci.190：382-391及Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH公開案第91-3242號)。對於重鏈可變區而言，高變區通常在CDR1之胺基酸位置31至35，CDR2之胺基酸位置50至65及CDR3之胺基酸位置95至102之範圍內。對於輕鏈可變區而言，高變區通常在CDR1之胺基酸位置24至34，CDR2之胺基酸位置50至56及CDR3之胺基酸位置89至97之範圍內。
當參考抗體使用時，術語"輕鏈"係指基於恆定域之胺基酸序列之兩種不同類型，即κ或λ。輕鏈胺基酸序列於此項技術中為眾所熟知。在較佳實施例中，輕鏈為人類輕鏈。
本發明中所使用之術語"處理"係指受檢者從療法(例如預防或治療劑)所得有益效應，其不會導致感染治癒。在某些實施例中，向受檢者投與一或多種療法(例如預防或治療劑，諸如本發明抗體)來"處理"hLIGHT介導之疾病(例如IBD或GVHD)其一或多種症狀，從而預防疾病之進程或惡化。
術語"單株抗體"係指自同源或大體上同源之抗體群體獲得之抗體，且各單株抗體通常將辨識抗原上之單一抗原決定基。在較佳實施例中，本發明所使用之"單株抗體"為由單一融合瘤或其他細胞產生之抗體，其中(例如)藉由ELISA或於此項技術中或於本發明中所提供之實例中已知之其他抗原結合或競爭性結合檢定所測定，該抗體僅可免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基。術語"單株"不限於任何製造抗體之特定方法。舉例而言，本發明之單株抗體可藉由Kohler等人；Nature,256：495(1975)中所描述之融合瘤法製得；或可使用(例如)本發明中所述之技術自噬菌體庫分離。製備純系細胞株(clonal cell line)及製備藉此表現之單株抗體之其他方法在此項技術中為眾所熟知(參見例如Short Protocols in Molecular Biology,(2002)第5版中之第11章，Ausubel等人編，John Wiley and Sons,New York)。產生其他單株抗體之其他例示性方法係提供於本發明之實例中。
當與生物材料(諸如核酸分子、多肽、宿主細胞及其類似物)聯合使用時，術語"天然產生"或"原生"係指在自然中發現且未由人類處理之彼等材料。
本發明所使用之術語"醫藥學上可接受"意謂聯邦政府或州政府管理機構所許可或列入美國藥典、歐洲藥典或其他普遍認可之藥典以用於動物且更特定言之用於人類。
本發明所使用之"多株抗體"係指在對具有許多抗原決定基之蛋白質產生免疫原性反應時所產生之抗體群體且因此包括針對蛋白質內相同及不同抗原決定基之各種不同抗體。產生多株抗體之方法於此項技術中已知(參見例如Short Protocols in Molecular Biology,(2002)第5版中之第11章，Ausubel等人編，John Wiley and Sons,New York)。
本發明所使用之術語"聚核苷酸"、"核苷酸"、"核酸"、"核酸分子"及其他類似術語可互換使用，且包括DNA、RNA、mRNA及其類似物。
本發明所使用之術語"預防"係指由投與本發明所提供之療法或療法組合(例如諸如本發明抗體之預防或治療劑之組合)，進而產生完全或部分抑制hLIGHT介導之疾病及/或其相關症狀的發展、復發、發作或傳播。
本發明所使用之術語"預防劑"係指可完全或部分抑制受檢者體內hLIGHT介導之疾病及/或其相關症狀之發展、復發、發作或傳播之任何藥劑。在某些實施例中，術語"預防劑"係指本發明抗體。在某些其他實施例中，術語"預防劑"係指除本發明抗體以外之藥劑。較佳地，預防劑為已知適用於或已用於或目前正用於預防hLIGHT介導之疾病及/或其相關症狀或阻止hLIGHT介導之疾病及/或其相關症狀之發作、發展、進程及/或嚴重性的藥劑。在特定實施例中，預防劑為完全人類抗hLIGHT抗體，諸如完全人類抗hLIGHT單株抗體。
在本發明之某些實施例中，"預防學上有效血清力價"為完全或部分抑制受檢者(較佳人類)體內hLIGHT介導之疾病及/或其相關症狀之發展、復發、發作或傳播之該受檢者的血清力價。
術語"hLIGHT抗原"係指抗體免疫專一性結合至其之hLIGHT多肽部分。hLIGHT抗原亦係指抗體免疫專一性結合至其之hLIGHT多肽或其片段之類似物或衍生物。在一些實施例中，hLIGHT抗原為單體hLIGHT抗原或三聚hLIGHT抗原。貢獻抗原決定基之hLIGHT多肽區可為多肽之鄰近胺基酸或該抗原決定基可同時來自多肽之兩個或兩個以上之非鄰近區。該抗原決定基可能為或可能不為三維表面特徵抗原。hLIGHT抗原表面上能夠誘發免疫反應之局部區域為hLIGHT抗原決定基。抗原決定基可能為或可能不為三維表面特徵之抗原。
"hLIGHT介導之疾病"及"hLIGHT介導之病症"可互換地使用，且係指完全或部分由hLIGHT引起或產生之任何疾病。在某些實施例中，hLIGHT於細胞表面上會異常(例如高度)表現。在一些實施例中，hLIGHT會於特定細胞類型上異常上調。在其他實施例中，正常、異常或過度細胞信號轉導係藉由將hLIGHT結合至hLIGHT配位體而引起。在某些實施例中，hLIGHT配位體為(例如)在諸如結腸上皮細胞之細胞表面上表現之hLIGHT受體(例如HVEM、LTβR或DCR3)。在某些實施例中，hLIGHT介導之疾病為發炎性腸病(IBD)，諸如克羅恩氏病(CD)或潰瘍性結腸炎(UC)。在其他實施例中，hLIGHT介導之疾病為移植物抗宿主疾病(GVHD)。
"hLIGHT配位體"係指可結合hLIGHT或與hLIGHT相互作用之分子。在較佳實施例中，hLIGHT配位體為hLIGHT受體。
術語"hLIGHT受體"或"hLIGHT結合受體"在本發明中可互換地使用，且係指結合至hLIGHT之受體多肽。在特定實施例中，hLIGHT受體為HVEM、FcβR或DcR3。在一些實施例中，hLIGHT受體係於諸如 結腸上皮細胞之細胞表面上表現。
本發明所使用之術語"醣類"係指為多元醇衍生物之分子種類。醣類通常稱作碳水化合物，且可含有不同量之糖(醣)單元，例如單醣、雙醣及多醣。
本發明所使用之術語"血清力價"係指至少10個，較佳至少20個且最佳至少40個受檢者多達約100、1000或更多受檢者群體之平均血清力價。
本發明所使用之術語"副作用"涵蓋療法(例如預防或治療劑)之非吾人所樂見之效應及反效應。非吾人所樂見之效應不一定為不利的。療法(例如預防或治療劑)之反效應可為有害的或不適的或危險的。副作用之實例包括腹瀉、咳嗽、胃腸炎、喘鳴、噁心、嘔吐、厭食、腹部絞痛、發熱、疼痛、體重減輕、脫水、禿發、呼吸困難、失眠、頭腦昏沉、黏膜炎、神經及肌肉效應、疲勞、口乾及食慾喪失、投藥部位皮疹或腫脹、類流感症狀，諸如發熱、畏寒及疲勞、消化道問題及過敏反應。患者所經受之額外不合乎所需之效應有許多且於此項技術中已知。許多係於Physician's Desk Reference(第60版，2006)中描述。
術語"小分子"及其類似術語包括(但不限於)肽、肽模擬物、胺基酸、胺基酸類似物、聚核苷酸、聚核苷酸類似物、核苷酸、核苷酸類似物、具有小於每莫耳約10000公克分子量之有機或無機化合物(亦即包括雜有機(heterorganic)化合物及/或有機金屬(ganometallic)化合物)、具有小於每莫耳約5000公克之分子量之有機或無機化合物、具有小於每莫耳約1000公克分子量之有機或無機化合物、具有小於每莫耳約500公克分子量之有機或無機化合物及該等化合物之鹽、酯及其他醫藥學上可接受之形式。
在包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體之液體調配物的上 下文中，本發明所使用之術語"穩定性"及"穩定"係指調配物中抗體在所給定之製造、製備、運輸及儲存條件下對熱及化學去摺疊、凝聚、降解或斷裂之抗性。本發明"穩定"調配物在所給定製造、製備、運輸及儲存條件下保有等於或大於80%、85%、90%、95%、98%、99%或99.5%之生物活性。抗體穩定性可藉由熟習此項技術者已知之方法(包括(但不限於)還原毛細管凝膠電泳(rCGE)、十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)及HPSEC)以與對照抗體相比之凝聚、降解或斷裂程度來評定。包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體之調配物的總體穩定性可藉由各種免疫檢定(包括(例如)ELISA及放射性免疫檢定)，使用hLIGHT專一性抗原決定基來評定。
本發明所使用之術語"受檢者"與"患者"可互換使用。如本發明所使用，受檢者較佳為哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如牛、豬、馬、貓、犬、大鼠等)或靈長類動物(例如猴子及人類)，最佳為人類。在一實施例中，受檢者為具有hLIGHT介導之疾病之哺乳動物，較佳為人類。在另一實施例中，受檢者為處於感染hLIGHT介導之疾病之危險中的哺乳動物，較佳為人類。
本發明所使用之"大體上所有"係指至少約60%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或約100%。
本發明所使用之術語"大體上不含界面活性劑"係指免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體調配物，該調配物含有小於0.0005%，小於0.0003%或小於0.0001%之界面活性劑及/或小於0.0005%、小於0.0003%或小於0.0001%之界面活性劑。
本發明所使用之術語"大體上不含鹽"係指免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體調配物，該調配物含有小於0.0005%、小於0.0003%或小於0.0001%之無機鹽。
本發明所使用之術語"界面活性劑"係指具有兩性結構之有機物質；亦即其係由相反溶解度趨勢基團，通常為可溶於油之烴鏈與可溶於水之離子基團構成。可視表面活性部分之電荷而定將界面活性劑分為陰離子、陽離子及非離子界面活性劑。通常將界面活性劑用作各種醫藥組合物及生物材料製劑之濕潤劑、乳化劑、溶解劑及分散劑。
本發明所使用之術語"標記"係指連接至例如編碼hLIGHT或hLIGHT抗體或其抗原結合片段之多肽及/或聚核苷酸之任何類型的部分。舉例而言，編碼hLIGHT、hLIGHT抗體或其抗原結合片段之聚核苷酸可含有一或多個編碼(例如)可偵測部分或有助於親和性純化之部分之額外標記編碼核苷酸序列。轉譯時，標記及抗體可為融合蛋白形式。關於標記之術語"可偵測"或"偵測"係指能夠顯現或能夠確定及/或量測(例如藉由定量)標記存在之任何標記。可偵測標記之非限制性實例為螢光標記。
本發明所使用之術語"治療劑"係指可用於治療、處理或改善hLIGHT介導之疾病及/或其相關症狀之任何藥劑。在某些實施例中，術語"治療劑"係指本發明抗體。在某些其他實施例中，術語"治療劑"係指除本發明抗體以外之藥劑。較佳地，治療劑為已知適用於或已用於或目前正用於治療、處理或改善hLIGHT介導之疾病或其一或多種相關症狀之藥劑。在特定實施例中，治療劑為完全人類抗hLIGHT抗體，諸如完全人類抗hLIGHT單株抗體。
療法(例如使用預防劑或治療劑)組合比任何兩種或兩種以上單一療法之加成效應更有效。舉例而言，預防劑及/或治療劑組合之協同效應使得對患有hLIGHT介導之疾病的受檢者使用較低劑量之一或多種藥劑及/或較低頻率投與該等藥劑。能利用較低劑量預防療法或治療療法及/或較低頻率投與該等療法降低與向受檢者投與該等療法相關之毒性而不降低該等療法在預防、處理、治療或改善hLIGHT介導 之疾病中之功效。此外，協同效應可致使療法在預防或在處理、治療或改善hLIGHT介導之疾病中之功效得以改良。最後，療法(例如預防劑或治療劑)組合之協同效應可避免或降低與使用任何單一療法相關之不利或非吾人所樂見之副作用。
在本發明某些實施例中，"治療上有效之血清力價"為受檢者(較佳人類)體內降低該受檢者體內與hLIGHT介導之疾病相關之嚴重性、持續時間及/或症狀之血清力價。
本發明所使用之術語"療法"係指可用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病(例如IBD或GVHD)之任何方案、方法及/或藥劑。在某些實施例中，術語"療法"係指為熟習此項技術者(諸如醫務人員)已知適用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之生物療法、支持療法及/或其他療法。
本發明所使用之術語"治療"係指由投與一或多種療法(包括(但不限於)投與一或多種預防或治療劑，諸如本發明抗體)產生之hLIGHT介導之疾病(例如IBD或GVHD)的進程、嚴重性及/或持續時間的降低或改善。在特定實施例中，該等術語係指降低或抑制hLIGHT與HVEM之結合、降低或抑制hLIGHT與LTβR之結合、降低或抑制hLIGHT與DcR3之結合、降低或抑制自受檢者表現hLIGHT受體之細胞產生或分泌CCL20、降低或抑制自受檢者表現hLIGHT受體之細胞產生或分泌IL-8、降低或抑制自受檢者表現hLIGHT受體之細胞產生或分泌RANTES，及/或抑制或降低與hLIGHT介導之疾病(諸如IBD或GVHD)相關之一或多種症狀。在特定實施例中，預防劑為完全人類抗hLIGHT抗體，諸如完全人類抗hLIGHT單株抗體。
術語"可變區"或"可變域"係指輕鏈及重鏈之部分，通常重鏈中胺基端約120至130個胺基酸及輕鏈中約100至110個胺基酸，其序列在抗體之間普遍不同，且係用於各特定抗體與其特定抗原之結合及專一 性。序列可變性集中於稱作互補股判定區(CDR)之彼等區域，同時將可變域中更高度保守之區域稱作構架區(FR)。輕鏈及重鏈之CDR最初負責抗體與抗原之相互作用。本發明中所使用之胺基酸位置編號係根據如Kabat等人(1991)Sequences of proteins of immunological interest 中之EU指數。(U.S.Department of Health and Human Services,Washington,D.C.)第5版("Kabat等人")。在較佳實施例中，可變區為人類可變區。
當關於hLIGHT或hLIGHT抗體使用時，術語"突變體"係關於與原生或未經修飾序列相比包含一或多個(諸如約1至約25、約1至約20且較佳約1至約15，更佳約1至約10且最佳約1至約5個)胺基酸序列取代、缺失及/或添加之肽或多肽。舉例而言，hLIGHT突變體可改變原生hLIGHT胺基酸序列之一或多處(諸如約1至約25，約1至約20且較佳約1至約15，更佳約1至約10且最佳約1至約5處)而產生。又舉例而言，抗hLIGHT抗體之突變體可改變原生或先前未經修飾之抗hLIGHT抗體胺基酸序列之一或多處(諸如約1至約25，約1至約20且較佳約1至約15，更佳約1至約10且最佳約1至約5處)而產生。突變體可為天然產生的，諸如對偶基因突變體或剪接突變體或可為人工構築的。多肽突變體可從編碼該等突變體之對應核酸分子製備之。在較佳實施例中，hLIGHT突變體或hLIGHT抗體突變體分別保有hLIGHT或hLIGHT抗體功能活性。在特定實施例中，hLIGHT抗體突變體可免疫專一性結合hLIGHT及/或對hLIGHT活性具有拮抗性。在某些實施例中，突變體係由hLIGHT單一核苷酸多態性(SNP)突變體編碼。hLIGHT之例示性SNP突變體編碼胺基酸位置214處之麩胺酸(E)或離胺酸(K)。另一種例示性hLIGHT之SNP突變體編碼胺基酸位置32處之絲胺酸(S)或白胺酸(L)。
圖1A-1B描述藉由人類抗hLIGHT抗體之內源性表現之hLIGHT的細胞儀分析。(A)將人類T細胞株II23.D7以PMA及伊諾黴素(inonomycin)活化隔夜且為活化標記CD69與各種抗hLIGHT抗體組合染色。開啟且分析與對照人類抗流行性感冒IgG1(虛線)相比CD69陽性細胞之hLIGHT染色(粗線)或以抗hLIGHT抗體染色未經活化II23.D7細胞(灰線)。以山羊抗人類IgG-APC第二抗體偵測結合。(B)以人類抗hLIGHT抗體染色活化人類T細胞株II-23.D7係飽和的。活化II-23.D7細胞係以各種濃度之人類抗hLIGHT抗體標記且以抗人類IgG-APC偵測。幾何平均螢光強度資料曲線係連同非線性回歸一起展示。
圖2A-2B描述以人類抗hLIGHT抗體染色EL4-hLIGHT細胞株上之重組hLIGHT。在(A)及(B)中，使用分級量之抗hLIGHT抗體來染色EL4-hLIGHT細胞，以抗人類IgG-APC來偵測且以流式細胞儀分析。測定幾何平均螢光強度(MFI)且應用非線性回歸分析。在所有實驗中，使用人類抗流行性感冒蛋白M2作為負性對照。由此分析獲得之資料係於圖3中表示。
圖3描述人類抗hLIGHT單株抗體之特徵。
圖4描述以ELISA交叉阻斷之抗體。此分析藉由ELISA基於競爭結合hLIGHT來定義兩個群。於96孔培養盤之各孔中塗覆個別抗體。將可溶FLAG-hLIGHT以可溶抗hLIGHT抗體預培育且接著添加至經塗覆孔中。以抗FLAG IgG-HRP偵測FLAG-hLIGHT與經塗覆抗體之結合。使用各檢體之OD，以下式測定抑制百分比：抑制%=(max-檢體/max)×100。
圖5A-5B描述以人類抗hLIGHT單株抗體阻斷人類HVEM：Fc與細胞表面上原生hLIGHT之結合。在(A)及(B)中，以EL4-hLIGHT細胞培育分級量之抗體，添加亞飽和濃度之生物素標記人類HVEM：Fc且以SA-APC偵測。如(A)中所示，使用人類抗流行性感冒M2抗體作為對 照。
圖6A-6B描述以人類抗hLIGHT單株抗體阻斷人類LTβR：Fc與細胞表面上原生hLIGHT之結合。在(A)至(B)中，以EL4-hLIGHT細胞培育分級量之抗體，添加亞飽和濃度之聚His標記之人類LTβR：Fc且以抗His-APC偵測。如(A)中所示，使用人類抗流行性感冒M2抗體作為對照。
圖7描述自人類結腸上皮細胞之hLIGHT介導之CCL20分泌。將重組可溶hLIGHT添加至增加濃度之HT29.14s細胞之生長培養基中。生長培養基係於處理後第3日收集且CCL20含量係藉由ELISA測定。誤差條線表示兩個獨立的處理。
圖8A-8B描述自人類結腸上皮細胞之hLIGHT介導之IL-8及RANTES分泌。將重組可溶hLIGHT、TNF、LTα1β2及FLAG-BAP(作為負性對照)添加至HT29.14s細胞之生長培養基中。於處理後1、2及3日自不同孔中收集生長培養基。IL-8及RANTES之含量係以ELISA測定。將FLAG標記之細菌鹼性磷酸酶(FLAG-BAP)用作經標記不相關蛋白負性對照。
圖9A-9B展示人類抗hLIGHT抗體抑制自人類結腸上皮細胞之hLIGHT介導之CCL20分泌。(A)將重組可溶hLIGHT(1μg/ml)以抗hLIGHT抗體預培育且添加至HT29.14s細胞之生長培養基中。於第3日自各自處理之兩個孔收集生長培養基。CCL20含量係以ELISA測定。包括僅有培養基、僅有可溶hLIGHT、以抗流行性感冒M2抗體培育之可溶hLIGHT及僅有各抗hLIGHT抗體作為對照。(B)資料之非線性回歸分析係於條形圖A中表示。
圖10A-10B展示人類抗hLIGHT抗體抑制自人類結腸上皮細胞之細胞表面表現之hLIGHT介導的RANTES分泌。(A)將固定EL4-hLIGHT細胞以抗hLIGHT抗體預培育且添加至HT29.14s細胞之生長培養基 中。於第3日自各自處理之兩個孔收集生長培養基。RANTES含量係以ELISA測定。包括僅有培養基、僅有之EL4-hLIGHT細胞、僅有之可溶hLIGHT及僅有之各抗hLIGHT抗體作為對照。(B)資料曲線係於(A)中表示。
圖11描述競爭性阻斷結合至hLIGHT之實驗之結果。
圖12描述抗體阻斷HVEM：Fc結合至293 hLIGHT細胞之活性。測試E1、E13、F19人類抗hLIGHT單株抗體、R&D mAb及市售之山羊抗hLIGHT多株抗體(R&D Systems)及兔抗hLIGHT多株抗體(eBioscience)阻斷HVEM：Fc結合至表現hLIGHT之293細胞之能力。
圖13描述抗體阻斷LTβR：Fc結合至293 hLIGHT細胞之活性。測試E1及E13人類抗hLIGHT單株抗體、R&D mAb及市售之山羊抗hLIGHT多株抗體(R&D Systems)及兔抗hLIGHT多株抗體(eBioscience)阻斷LTβR：Fc結合至表現hLIGHT之293細胞之能力。
圖14描述抗體阻斷(A)LTβR：Fc及(B)HVEM：Fc結合至293 hLIGHT細胞之活性且為圖12及13中所示資料之圖示。
圖15A-15B描述各種抗hLIGHT抗體與原生或變性可溶hLIGHT之結合。將五微克可溶人類LIGHT於2×SDS檢體緩衝液中煮沸(變性)或不經處理(原生)且接著將兩者以6×增量連續稀釋。使用八爪微量吸管吸管將5μl各hLIGHT稀釋液同時點於水合0.2μm PVDF膜(Invitrogen,Carlsbad,CA)上。使墨點風乾，接著再水合，阻斷(1×TBST(Tris緩衝生理鹽水Tween-20)+2.5%脫脂奶+0.02%疊氮化鈉)。以5μg/ml各初級抗體探測各墨點。將墨點於1×TBST、隨後於5μg/ml生物素標記第二Abs(生物素-山羊α人類(Vector Labs,Burlingame,CA)、生物素-山羊α小鼠(Jackson labs,Bar Harbor,ME)、生物素-小鼠α山羊(Sigma-Aldrich corp.,St.Louis,MO))中洗滌3次。將墨點於1×TBST，隨後於超SA-HRP(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ)中洗滌3次。將化學 發光用於使用ECL偵測套組(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ)之偵測且藉由曝露於X-OMAT AR成像膜(Kodak,Rochester,New York)來呈現信號。(A)點漬墨法結果使用可購自R&D Systems("R&D小鼠mAb")及Abnova("Abnova小鼠mAb")之E1、E13、E63、F19、F23人類抗hLIGHT mAb或兩個鼠科抗hLIGHT單株抗體。將抗M2(不相關抗原)抗體用作負性對照。(B)點漬墨法結果使用市售之山羊抗hLIGHT多株抗體製劑(R&D Systems "R&D山羊pAb")或兩種市售之兔抗hLIGHT多株抗體製劑(eBioscience("eBioscience兔pAb")及Peprotech("Peprotech兔pAb"))。
圖16描述各種抗hLIGHT抗體與原生或變性可溶hLIGHT之結合且以表格形式總結圖15中呈現之資料。
圖17展現本發明之人類抗hLIGHT抗體抑制自人類結腸上皮細胞之LIGHT介導之CCL20分泌，而市售之小鼠抗hLIGHT抗體則無此作用。將重組可溶人類hLIGHT(1μg/ml)以抗LIGHT抗體預培育且添加至HT29.14s細胞之生長培養基中。於第3日自各自處理之兩個孔收集生長培養基。CCL20含量係以ELISA測定。包括僅有培養基、僅有可溶LIGHT、以抗流行性感冒M2抗體培育之可溶LIGHT、非阻斷抗LIGHT Ab B12及僅有各抗LIGHT抗體作為對照。E1及F19為各交叉阻斷抗原決定基群之代表。
圖18展現本發明之人類抗LIGHT抗體抑制自人類結腸上皮細胞之LIGHT介導之RANTES分泌，而市售之小鼠抗hLIGHT抗體則無此作用。將重組可溶人類hLIGHT(1μg/ml)以抗LIGHT抗體預培育且添加至HT29.14s細胞之生長培養基中。於第3日自各自處理之兩個孔收集生長培養基。RANTES含量係以ELISA測定。包括僅有培養基、僅有可溶LIGHT、以抗流行性感冒M2抗體培育之可溶LIGHT、非阻斷抗LIGHT Ab B12及僅有各抗LIGHT抗體作為對照。E1及F19為各交叉阻 斷抗原決定基群之代表。
圖19A至19B描述與其重組單一κ鏈抗體對應物相比，藉由人類(A)E1或(B)F19抗hLIGHT抗體之細胞表面表現hLIGHT結合之細胞儀分析。將表現293細胞之穩定hLIGHT以增加量之圖例所示抗LIGHT抗體培育。以山羊抗人類IgG-APC第二抗體偵測結合。將抗體自融合瘤培養物或以編碼與重鏈基因配對之不同κ鏈cDNA之哺乳動物表現載體瞬間轉染的293F細胞純化。幾何平均螢光強度資料曲線係連同非線性回歸一起展示。
圖20描述藉由ELISA之比較單一κ鏈抗體與其親本對應物之抗體交叉阻斷。此分析藉由ELISA基於競爭結合至hLIGHT來定義兩個群。於96孔培養盤之各孔中塗覆個別抗體。將可溶FLAG-hLIGHT以可溶抗hLIGHT抗體預培育且接著添加至經塗覆孔中。以抗FLAG IgG-HRP偵測FLAG-hLIGHT與經塗覆抗體之結合。使用各檢體之OD，以下式測定抑制百分比：抑制%=(max-檢體/max)×100。
圖21A至21B描述藉由人類抗hLIGHT單株抗體及其單一κ鏈重組對應物阻斷(A)人類HVEM：Fc或(B)人類LTβR：Fc與細胞表面上原生hLIGHT之結合。將分級量之抗體藉由以亞飽和濃度添加之EL4-hLIGHT細胞、生物素標記人類HVEM：Fc或聚His標記人類LTβR：Fc培育，且接著以SA-APC或抗His-APC偵測。將抗體自融合瘤培養物或以編碼與重鏈基因配對之不同κ鏈cDNA之哺乳動物表現載體瞬間轉染的293F細胞純化。
圖22描述與親本融合瘤產生之抗體相比藉由重組單一κ鏈人類抗LIGHT抗體抑制自人類結腸上皮細胞之hLIGHT介導之CCL20分泌。將重組可溶人類LIGHT(1μg/ml)以抗LIGHT抗體預培育且添加至HT29.14s細胞之生長培養基中。於第3日自各自處理之兩個孔收集生長培養基。CCL20含量係以ELISA測定。包括僅有培養基、僅有可溶 LIGHT(SHL)、以抗流行性感冒M2抗體培育之可溶LIGHT或不存在可溶LIGHT下之各抗體作為對照。稱作"E1k2"之抗體包含E1κ(B)及"F19k2"包含F19κ(B)。
圖23展示本發明人類抗LIGHT抗體抑制自人類結腸上皮細胞之LIGHT介導之CCL20分泌，而市售之小鼠抗hLIGHT抗體不抑制(Abnova)或僅抑制過高濃度(100μg/ml)(R&D)。將重組可溶人類LIGHT(1μg/ml)以抗LIGHT抗體預培育且添加至HT29.14s細胞之生長培養基中。於第3日自各自處理之兩個孔收集生長培養基。CCL20含量係以ELISA測定。包括僅有培養基、僅有可溶LIGHT(SHL)、以無關抗流行性感冒M2抗體培育之可溶LIGHT、抗人類血清白蛋白或不存在可溶LIGHT下之各抗體作為對照。E1及F19為各交叉阻斷抗原決定基群的代表。
圖24A至24B描述各種種族群體中(A)編碼胺基酸位置214處之麩胺酸(E)或離胺酸(K)或(B)編碼胺基酸位置32處之白胺酸(L)或絲胺酸(S)之特定非同義單一核苷酸多態性(SNP)hLIGHT突變體之對偶基因頻率。
圖25A至25D。圖25A至25C描述以人類抗hLIGHT抗體124F23及124E1κ(B)染色表現人類LIGHT之非同義SNP突變體之細胞株的劑量滴定。將分級量之抗hLIGHT抗體用以染色表現SNP突變體(A)214E-32S(B)214K-32S或(C)214E-32L之EL4-hLIGHT細胞，以抗人類IgG-APC偵測且以流式細胞儀分析。(D)描述如圖5中所進行之人類抗LIGHT抗體介導之阻斷人類HVEM：Fc(方形)或LTBR：Fc(三角)與細胞表面表現之214K-32S LIGHT SNP突變體結合的劑量滴定。測定(A)-(D)之幾何平均螢光強度(MFI)且應用非線性回歸分析。
圖26A-26B描述以人類抗hLIGHT抗體流式細胞儀分析表現非同義SNP突變體之細胞株。將(A)EL4-LIGHT SNP 214E細胞株及(B)EL4 SNP 214K細胞株以某一濃度(10μg/ml)之各抗hLIGHT抗體染色。以山羊抗人類IgG-APC第二抗體偵測結合。將同形對照人類IgG用作負性對照。
圖27描述人類抗hLIGHT抗體抑制自人類結腸上皮細胞之細胞表面表現之hLIGHT SNP突變體介導之RANTES分泌。將重組可溶hLIGHT(SHL)(1μg/ml)或5×105 EL4-hLIGHT 214K或214E SNP突變體細胞以抗hLIGHT抗體預培育且添加至HT29.14s細胞之生長培養基中。於第3日自各自處理之兩個孔收集生長培養基。RANTES含量係以ELISA測定。包括僅有培養基、僅有EL4-hLIGHT細胞、僅有可溶hLIGHT及僅有各抗hLIGHT抗體作為對照。
圖28描述急性異種GVHD模型之示意圖。於第2日向SCID小鼠注射IL2Rβ抗體(TM-β1)以耗盡NK細胞。第1日，使小鼠接收2.5Gy之次致死量輻射。於第0日，使小鼠藉由腹膜內注射接收1千萬人類PBMC，隨後即刻靜脈注射人類抗人類LIGHT或負性對照抗體。以3至4天之時間間隔稱重小鼠，且在第12日將小鼠處死且評定其大體病理。移除脾用於流式細胞儀分析，移除盲腸用於組織學且收集血清用於細胞激素及抗體分析。
圖29描述於鼠科急性異種GVHD疾病模型中觀測到之大體病理計分。表示出無單株抗體注射(圓形)、124F23抗hLIGHT單株抗體注射(三角形)及對照人類IgG1單株抗體(方形)之病理計分。各自賦予三種種類0、1、2或3分(分別為無、輕度、中度或重度)：腹瀉、腹膜炎/腹水及腸炎(最高總分為9)。
圖30描述於鼠科急性異種GVHD疾病模型中觀測到之組織病理計分。表示出無MAb注射(圓形)、124F23抗hLIGHT MAb注射(三角形)及對照hIgG1 MAb(方形)之病理計分。各自賦予四種種類0、1、2或3分(分別為無、輕度、中度或重度)：發炎嚴重性、發炎範圍、絨毛損 傷/萎縮及涉及百分比(最高總分為12)。
圖31A-31B描述GVHD研究中之小鼠盲腸之代表性蘇木精及伊紅(H&E)組織學染色切片。(A)經抗LIGHT MAb處理之小鼠盲腸切片及(B)經對照人類IgG處理之小鼠。黏膜下層內捲表示腹水，虛線箭頭表示出血區且實線箭頭表示淋巴細胞滲透區。
圖32描述異種GVHD研究中小鼠脾中總T細胞數。星號表示對於經抗LIGHT MAb處理之動物與對照組之間之比較而言，小於0.05之student t測試值。
本發明中提供可免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體。本發明亦提供編碼免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體之經分離核酸。本發明另外提供包含編碼免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體之核酸的載體及宿主細胞。本發明亦提供製造免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體之方法。本發明中亦提供治療或處理經hLIGHT介導之疾病之方法，包含投與免疫專一性結合至hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體。
抗體
本發明抗體包括(但不限於)合成抗體、單株抗體、重組產生之抗體、多專一性抗體(包括雙專一性抗體)、人類抗體、人化抗體、嵌合抗體、內抗體、單鏈Fv(scFv)(例如包括單專一性、雙專一性等)、駱駝化抗體、Fab片段、F(ab')片段、二硫鍵連接之Fv(sdFv)、抗遺傳型(抗Id)抗體及上述任何抗體之抗原決定基結合片段。
詳言之，本發明所提供之抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，亦即含有免疫專一性結合至hLIGHT抗原之 抗原結合位點之分子。本發明中所提供之免疫球蛋白分子可具有任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、種類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或免疫球蛋白分子子類。在特定實施例中，本發明所提供之抗體為IgG抗體，較佳為IgG1或IgG4。
抗體之突變體及衍生物包括保有專一性結合至抗原決定基之能力之抗體片段。較佳片段包括Fab片段(含有抗原結合域且包含藉由二硫鍵橋接之輕鏈及重鏈部分之抗體片段)；Fab'(含有單一抗結合域，包含Fab及另一縱穿鉸鏈區之重鏈部分之抗體片段)；F(ab')2(藉由重鏈鉸鏈區中之鏈間二硫鍵接合之兩個Fab'分子；Fab'分子可針對相同或不同抗原決定基)；雙專一性Fab(具有兩個抗原結合域，各自可針對不同抗原決定基之Fab分子)；包含可變區之單鏈Fab鏈，亦稱作sFv(藉由10-25個胺基酸鏈連接在一起之抗體的單一輕鏈及重鏈之可變、抗原結合判定區)；二硫鍵連接之Fv或dsFv(藉由二硫鍵連接在一起之抗體的單一輕鏈及重鏈之可變、抗原結合判定區)；駱駝化VH(抗體單一重鏈之可變、抗原結合判定區，其中該抗體中VH界面處之一些胺基酸為於天然產生之駱駝抗體之重鏈中所發現之彼等胺基酸)；雙專一性sFv(具有兩個抗原結合域，各自可針對不同抗原決定基之sFv或dsFv分子)；雙功能抗體(當第一sFv之VH域與第二sFv之VL域集合且第一sFv之VL域與第二sFv之VH域集合時所形成之二聚sFv；雙功能抗體之兩個抗原結合區可針對相同或不同抗原決定基)；及三功能抗體(以類似於雙功能抗體之方式形成之三聚sFv，但其中三個抗原結合域係於單一複合體中產生；該等三個抗原結合域可針對相同或不同抗原決定基)。抗體之衍生物亦包括抗體組合位點之一或多個CDR序列。當存在兩個或兩個以上CDR序列時，可在支架上將CDR序列連接在一起。在某些實施例中，本發明所使用之抗體包含單鏈Fv("scFv")。scFv為包含抗體VH域及VL域之抗體片段，其中此等域存在 於單一多肽鏈中。一般而言，scFv多肽於VH域與VL域之間另外包含多肽連接子，其使得scFv能夠形成抗原結合之所需結構。關於scFv之論述，參見Pluckthun之The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編Springer-Verlag,New York，第269-315頁(1994)。
本發明抗體可來自任何動物來源，包括鳥類及哺乳動物(例如人類、鼠科、驢、綿羊、兔、山羊、豚鼠、駱駝、馬或雞)。在某些實施例中，本發明抗體為人類或人化單株抗體。本發明所使用之"人類"抗體包括具有人類免疫球蛋白胺基酸序列之抗體，且包括自人類免疫球蛋白庫或自表現來自人類基因之抗體之小鼠所分離的抗體。
在較佳實施例中，本發明抗體為免疫專一性結合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之完全人類抗體，諸如完全人類抗體。當投與受檢者時，該等完全人類抗體優於完全小鼠(或其他完全或部分非人類物種抗體)、人化抗體或嵌合抗體，以使產生之非吾人所樂見或不需要之副作用(諸如針對非完全人類抗體(例如源自其他物種之抗hLIGHT抗體)之免疫反應)最小化。
本發明抗體可為單專一性的、雙專一性的、三專一性的或具有更高之多專一性。多專一性抗體可專一於hLIGHT多肽之不同抗原決定基，或可專一於hLIGHT多肽以及異源抗原決定基，諸如異源多肽或固體支撐材料。在較佳實施例中，本發明所提供之抗體對於所給定之hLIGHT多肽之抗原決定基為單專一性的，且不會免疫專一性結合至其他抗原決定基。
在較佳實施例中，包含抗體之組合物之抗體及使用本發明抗體之方法包括E1、E13、E63、F19或F23抗體(分別為ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728)。本發明中亦提供產生E1、E13、E63、F19或F23抗體(分別為ATCC登記號PTA- 7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728)及/或本發明所述之其他抗hLIGHT單株抗體之融合瘤。
在某些實施例中，本發明中提供一種免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之經分離抗體，其中該抗體與該hLIGHT抗原決定基之結合係藉由下列各抗體(例如以劑量依賴方式)競爭性阻斷：(a)E1抗體、E13抗體或E63抗體或(b)F19抗體或F23抗體；其限制性條件為與該hLIGHT抗原決定基之該結合不為下列各兩種抗體所阻斷：(a)E1抗體及F19抗體；(b)E1抗體及F23抗體；(c)E13抗體及F19抗體；(d)E13抗體及F23抗體；(e)E63抗體及F19抗體或(f)E63抗體及F23抗體。抗體可為或可不為完全人類抗體。在較佳實施例中，抗體為完全人類單株抗hLIGHT抗體且甚至更佳為完全人類、單株、拮抗抗hLIGHT抗體。於本發明實例中提供可使用之例示性競爭性阻斷測試。
在其他實施例中，本發明中提供一種免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之經分離抗體，較佳為完全人類抗體，其中該抗體與該hLIGHT抗原決定基之結合係藉由下列各抗體(例如以劑量依賴方式)競爭性阻斷：(a)E1抗體、E13抗體或E63抗體，或(b)F19抗體或F23抗體。抗體可為或可不為完全人類抗體。在較佳實施例中，抗體為完全人類單株抗hLIGHT抗體，且甚至更佳為完全人類、單株、拮抗抗hLIGHT抗體。於本發明實例中提供可使用之例示性競爭性阻斷測試。
在一些實施例中，本發明所提供之抗體可與HVEM、LTβR及/或DcR3(或其融合蛋白)競爭(例如以劑量依賴方式)結合至細胞表面表現之hLIGHT。在其他實施例中，本發明所提供之抗體與HVEM、LTβR及/或DcR3(或其融合蛋白)競爭(例如以劑量依賴方式)結合至可溶hLIGHT。於本發明實例中提供可使用之例示性競爭性結合檢定。在一實施例中，抗體部分或完全抑制HVEM、LTβR及/或DcR3與細胞表 面表現之hLIGHT(諸如hLIGHT)之結合。在另一實施例中，抗體部分或完全抑制HVEM、LTβR及/或DcR3與可溶hLIGHT之結合。在一些實施例中，本發明所提供之抗體部分或完全抑制自具有細胞表面表現之hLIGHT配位體(諸如hLIGHT受體(例如HVEM、LTβR及/或DcR3))之細胞分泌CCL20、IL-8及/或RANTES。在某些實施例中，表現hLIGHT受體之細胞為結腸上皮細胞。
本發明抗體包括實例部分及申請案其他部分之下列抗體之彼等抗體及抗原結合片段：E1抗體(ATCC登記號PTA-7729)、E13抗體(ATCC登記號PTA-7842)、或E63抗體(ATCC登記號PTA-7818)、F19抗體(ATCC登記號PTA-7819)或F23抗體(ATCC登記號PTA-7728)抗體。在特定實施例中，本發明抗體為E1、E13、E63、F19或F23抗體。在另一實施例中，本發明抗體包含E1、E13、E63、F19或F23之抗原結合片段(例如Fab片段)。
較佳地，本發明抗體為免疫專一性結合至hLIGHT之完全人類、單株抗體，諸如完全人類單株拮抗抗體。
在一些實施例中，將本發明所提供之抗體結合至為三維表面特徵之hLIGHT多肽(例如三聚形式hLIGHT多肽)之hLIGHT抗原決定基。貢獻抗原決定基之hLIGHT多肽區域可為多肽之鄰近胺基酸或抗原決定基可同時來自兩種或兩種以上多肽之非鄰近區。hLIGHT抗原決定基可以下列形式存在：(a)三聚形式hLIGHT("三聚hLIGHT抗原決定基")，(b)單體形式hLIGHT("單體hLIGHT抗原決定基")，(c)三聚與單體形式hLIGHT，(d)三聚形式而非單體形式hLIGHT或(e)單體形式而非三聚形式hLIGHT。
舉例而言，在一些實施例中，抗原決定基僅以三聚(原生)形式存在或用於藉由抗hLIGHT抗體結合，而不以單體(變性)形式存在或用於藉由抗hLIGHT抗體結合。在其他實施例中，hLIGHT抗原決定基為 直鏈特徵hLIGHT多肽(例如為三聚形式或單體形式之hLIGHT多肽)。本發明所提供之抗體可免疫專一性結合至(a)單體形式hLIGHT之抗原決定基；(b)三聚形式hLIGHT之抗原決定基；(c)單體而非三聚形式hLIGHT之抗原決定基，(d)三聚而非單體形式hLIGHT之抗原決定基或(e)單體形式與三聚形式之hLIGHT。在較佳實施例中，本發明所提供之抗體免疫專一性結合至三聚形式hLIGHT之抗原決定基，但不會免疫專一性結合至單體形式hLIGHT之抗原決定基。
在特定實施例中，本發明提供一或多種免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含具有E1、E13、E63、F19及/或F23抗體，或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728之融合瘤產生之抗體的VH鏈及/或VL鏈之胺基酸序列之VH鏈及/或VL鏈。
在另一實施例中，本發明提供一或多種免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含具有E1、E13、E63、F19及/或F23抗體，或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728之融合瘤產生之抗體的VH域及/或VL域之胺基酸序列之VH域及/或VL域。
在另一實施例中，本發明提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含具有E1、E13、E63、F19及/或F23抗體，或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728之融合瘤產生之抗體的一個、兩個、三個或三個以上CDR之胺基酸序列之一個、兩個、三個或三個以個CDR。
在一實施例中，本發明提供一或多種免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含具有E1、E13、E63、F19及/或F23，或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728之融合瘤產生之抗體的VH CDR及/或VL CDR之胺基 酸序列之VH CDR及/或VL CDR的組合。
本發明提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含分別具有免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體之VH鏈及/或VL鏈的胺基酸序列之VH鏈及/或VL鏈，其中藉由抗體結合至hLIGHT抗原決定基係以劑量依賴方式為下列各抗體競爭性阻斷：(a)E1、E13或E63抗體或(b)F19抗體或F23抗體；其限制性條件為與該hLIGHT抗原決定基之該結合不為下列各兩種抗體所阻斷：(a)E1及F19抗體；(b)E1及F23抗體；(c)E13及F19抗體；(d)E13及F23抗體；(e)E63及F19抗體或(f)E63抗體及F23抗體。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之完全人類抗體，該等抗體包含分別具有免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體之VH鏈及/或VL鏈的胺基酸序列之VH鏈及/或VL鏈，其中藉由抗體結合至hLIGHT抗原決定基係以劑量依賴方式為下列各抗體競爭性阻斷：(a)E1抗體、E13抗體或E63抗體或(b)F19抗體或F23抗體。較佳地，完全人類抗體為完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
本發明提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含分別具有免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體之VH域及/或VL域的胺基酸序列之VH域及/或VL域，其中藉由抗體結合至hLIGHT抗原決定基係以劑量依賴方式為下列各抗體競爭性阻斷：(a)E1、E13或E63抗體或(b)F19抗體或F23抗體；其限制性條件為與該hLIGHT抗原決定基之該結合不為下列各兩種抗體所阻斷：(a)E1及F19抗體；(b)E1及F23抗體；(c)E13及F19抗體；(d)E13及F23抗體；(e)E63及F19抗體或(f)E63抗體及F23抗體。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之完全人類抗體，該等抗體包含分別具有免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體之VH域及/或VL域的胺基酸序列之VH域及/或VL域，其中藉由 抗體結合至hLIGHT抗原決定基係以劑量依賴方式為下列各抗體競爭性阻斷：(a)E1抗體、E13抗體或E63抗體，或(b)F19抗體或F23抗體。較佳地，完全人類抗體為完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含分別具有免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體之一個、兩個或三個VH CDR的胺基酸序列之一個、兩個或三個VH CDR(亦即VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3)，其中藉由抗體結合至hLIGHT抗原決定基係以劑量依賴方式為下列各抗體競爭性阻斷：(a)E1、E13或E63抗體或(b)F19抗體或F23抗體；其限制性條件為與該hLIGHT抗原決定基之該結合不為下列各兩種抗體所阻斷：(a)E1及F19抗體；(b)E1及F23抗體；(c)E13及F19抗體；(d)E13及F23抗體；(e)E63及F19抗體或(f)E63抗體及F23抗體。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之完全人類抗體，該等抗體包含分別具有免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體之一個、兩個或三個VH CDR的胺基酸序列之一個、兩個或三個VH CDR(亦即VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3)，其中藉由抗體結合至hLIGHT抗原決定基係以劑量依賴方式為下列各抗體競爭性阻斷：(a)E1抗體、E13抗體或E63抗體或(b)F19抗體或F23抗體。較佳地，完全人類抗體為完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含分別具有免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體之一個、兩個或三個VL CDR的胺基酸序列之一個、兩個或三個VL CDR(亦即VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3)，其中藉由抗體結合至hLIGHT抗原決定基係以劑量依賴方式為下列各抗體競爭性阻斷：(a)E1、E13或E63抗體或(b)F19抗體或F23抗體；其限制性條件為與該hLIGHT抗原決定基之該結合不為下列各兩種抗體所阻斷：(a)E1及 F19抗體；(b)E1及F23抗體；(c)E13及F19抗體；(d)E13及F23抗體；(e)E63及F19抗體或(f)E63抗體及F23抗體。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之完全人類抗體，該等抗體包含分別具有免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體之一個、兩個或三個VL CDR的胺基酸序列之一個、兩個或三個VL CDR(亦即VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3)，其中藉由抗體結合至hLIGHT抗原決定基係以劑量依賴方式為下列各抗體競爭性阻斷：(a)E1抗體、E13抗體或E63抗體或(b)F19抗體或F23抗體。較佳地，完全人類抗體為完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含具有E1、E13、E63、F19及/或F23，或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728之融合瘤產生之抗體或其任何組合的任一種VH CDR(亦即VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3)之胺基酸序列之一或多種VH CDR(亦即VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3)。
在一實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5中任一者之VH域之胺基酸序列的VH域及/或具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91或10中任一者之VL域之胺基酸序列的VL域。
在某些實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含(a)具有示於SEQ ID NO：1之胺基酸序列之VH域及具有示於SEQ ID NOS：82、6或83中任一者之胺基酸序列之VL域；(b)具有示於SEQ ID NO：2之胺基酸序列之VH域及具有示於SEQ ID NO：7之胺基酸序列之VL域；(c)具有示於SEQ ID NO：3之胺基酸序列之VH域及具有示於SEQ ID NO：8之胺基酸序列之VL域；(d)具有示於SEQ ID NO：4之胺基酸序列之VH域及具有示於SEQ ID NO：90、9、91或92中任一者之胺基 酸序列之VL域；或(e)具有示於SEQ ID NO：5之胺基酸序列之VH域及具有示於SEQ ID NO：10之胺基酸序列之VL域。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在另一實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含一VH域(其具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之抗體之VH域的胺基酸序列)及/或一VL域(其具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之抗體之VL域的胺基酸序列)。
在某些實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含(a)具有ATCC登記號PTA-7729(E1)之抗體胺基酸序列之VH域及具有ATCC登記號PTA-7729(E1)之抗體胺基酸序列之VL域；(b)具有ATCC登記號PTA-7842(E13)之抗體胺基酸序列之VH域及具有含有ATCC登記號PTA-7842(E13)之抗體胺基酸序列之VL域；(c)具有ATCC登記號PTA-7818(E63)之抗體胺基酸序列之VH域及具有ATCC登記號PTA-7818(E63)之抗體胺基酸序列之VL域；(d)具有ATCC登記號PTA-7819(F19)之抗體胺基酸序列之VH域及具有ATCC登記號PTA-7819(F19)之抗體胺基酸序列之VL域；或(e)具有ATCC登記號PTA-7728(F23)之抗體胺基酸序列之VH域及具有ATCC登記號PTA-7728(F23)之抗體胺基酸序列之VL域。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在一些實施例中，本發明抗體包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之任一VH區中VH CDR1胺基酸序列的VH CDR1。在另一實施例中，本發明抗體包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之任一VH區中VH CDR2胺基酸序列的VH CDR2。在另一實施例中，本發明抗體包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之任一VH區中VH CDR3胺基酸序列的VH CDR3。在某些實施例中，本發明抗體包含獨立選自如示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH區中任一者之VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3之VH CDR1及/或VH CDR2及/或VH CDR3。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含具有E1、E13、E63、F19及/或F23或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體或其任何組合的VL CDR中任一者(亦即VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3)胺基酸序列之一或多種VL CDR(亦即VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3)。
在某些實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含(1)具有下列各物之VH域：(a)分別具有示於SEQ ID NO：11、12及/或13之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(b)分別具有示於SEQ ID NO：14、15及/或16之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(c)分別具有示於SEQ ID NO：17、18及/或19之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(d)分別具有示於SEQ ID NO：20、21及/或22之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；或(e)分別具有示於SEQ ID NO：23、24及/或24之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；及/或(2)具有下列各物之VL域：(a)具有示於SEQ ID NO：84、26或85中任一者之胺基酸序列之VL CDR1；具有示於SEQ ID NO：86、27或87中任一者之胺基酸序列之VL CDR2；及/或具有示於SEQ ID NO：88、28或89中任一者之胺基酸序列之VL CDR3；(b)分別具有示於SEQ ID NO：29、30及/或31之胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；(c)分別具有示於SEQ ID NO：32、33及/或34之胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；(d)具有示於SEQ ID NO：93、35、94或95中任一者之胺基 酸序列之VL CDR1；具有示於SEQ ID NO：96、36、97或98中任一者之胺基酸序列之VL CDR2；及/或具有示於SEQ ID NO：96、36、97或98中任一者之胺基酸序列之VL CDR3；或(e)分別具有示於SEQ ID NO：38、39及/或40之胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在一些實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含(1)具有下列各物之VH域：(a)具有ATCC登記號PTA-7729(E1)之抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(b)具有ATCC登記號PTA-7842(E13)之抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(c)具有ATCC登記號PTA-7818(E63)之抗體VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(d)具有ATCC登記號PTA-7819(F19)之抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；或(e)具有ATCC登記號PTA-7728(F23)之抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；及/或(2)具有下列各物之VL域：(a)具有ATCC登記號PTA-7729(E1)之抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；(b)具有ATCC登記號PTA-7842(E13)之抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；(c)具有ATCC登記號PTA-7818(E63)之抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；(d)具有ATCC登記號PTA-7819(F19)之抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；或(e)具有ATCC登記號PTA- 7728(F23)之抗體VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在某些實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含(1)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3分別具有示於SEQ ID NO：11、12及/或13之胺基酸序列；及(b)具有下列各物之VL域，具有示於SEQ ID NO：84、26或85中任一者之胺基酸序列之VL CDR1；具有示於SEQ ID NO：86、27或87中任一者之胺基酸序列之VL CDR2；及/或具有示於SEQ ID NO：88、28或89中任一者之胺基酸序列之VL CDR3；(2)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3分別具有示於SEQ ID NO：14、15及/或16之胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3分別具有示於SEQ ID NO：29、30及/或31之胺基酸序列；(3)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3分別具有示於SEQ ID NO：17、18及/或19之胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3分別具有示於SEQ ID NO：32、33及/或34之胺基酸序列；(4)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3分別具有示於SEQ ID NO：20、21及/或22之胺基酸序列；及(b)具有下列各物之VL域，具有示於SEQ ID NO：93、35、94或95中任一者之胺基酸序列之VL CDR1；具有示於SEQ ID NO：96、36、97或98中任一者之胺基酸序列之VL CDR2；及/或具有示於SEQ ID NO：96、36、97或98中任一者之胺基酸序列之VL CDR3；或(5)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3分別具有示於SEQ ID NO：23、24及/或24之胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3分別具有示於SEQ ID NO：38、39及/或40之胺基酸序列。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在一些實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含(1)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3具有ATCC登記號PTA-7729(E1)抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3具有ATCC登記號PTA-7729(E1)抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列；(2)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3具有ATCC登記號PTA-7842(E13)抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3具有ATCC登記號PTA-7842(E13)抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列；(3)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3具有ATCC登記號PTA-7818(E63)抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3具有ATCC登記號PTA-7818(E63)抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列；(4)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3具有ATCC登記號PTA-7819(F19)抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之 VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3具有ATCC登記號PTA-7819(F19)抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列；或(5)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3具有ATCC登記號PTA-7728(F23)抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3具有ATCC登記號PTA-7728(F23)抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在一些實施例中，本發明抗體包含具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR1胺基酸序列之VL CDR1。在另一實施例中，本發明抗體包含具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR2胺基酸序列之VL CDR2。在另一實施例中，本發明抗體包含具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR3胺基酸序列之VL CDR3。在某些實施例中，本發明抗體包含獨立選自如示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL區中任一者之VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3之VL CDR1及/或VL CDR2及/或VL CDR3。
在一些實施例中，本發明抗體包含(1)具有一或多種下列各物之VH域或鏈：(a)具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VH區中VH CDR1胺基酸序列之VH CDR1；(b)具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VH區中VH CDR2胺基酸序列之VH CDR2；或(c)具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VH區中VH CDR3胺基酸序列之VH CDR3；及/或(2)具有一或多種下列各物之VL域或鏈：(a)具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR1胺基酸序列之VL CDR1；(b)具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR2胺基酸序列之VL CDR2；及/或(c)具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR3胺基酸序列之VL CDR3。
本發明亦提供包含列於表1中之一或多種VH CDR及一或多種VL CDR之抗體。詳言之，本發明提供包含下列各序列之抗體：VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH1 CDR1、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、 15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；或列於表I中之VH CDR(SEQ ID NO：11-25)與VL CDR(SEQ ID NO：26-40)之其任何組合。ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之對應VH CDR及VL CDR亦可用於以上所列之任何組合。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，該等抗體包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原之本發明所述之VH域、 VH CDR、VL域及VL CDR之衍生物。本發明亦提供包含E1、E13、E63、F19及/或F23之衍生物之抗體，其中該等抗體免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基。可使用熟習此項技術者已知之標準技術於編碼本發明分子之核苷酸序列中引入突變，包括(例如)定點突變及導致胺基酸取代之PCR介導之突變。較佳地，衍生物相對於原分子包括小於25個胺基酸取代、小於20個胺基酸取代、小於15個胺基酸取代、小於10個胺基酸取代、小於5個胺基酸取代、小於4個胺基酸取代、小於3個胺基酸序列或小於2個胺基酸取代。在較佳實施例中，衍生物具有於一或多個所預測之非必需胺基酸殘基處進行之保守胺基酸取代。"保守胺基酸取代"為胺基酸殘基經側鏈具有類似電荷之胺基酸殘基置換的取代。側鏈具有類似電荷之胺基酸殘基家族已於此項技術中定義。此等家族包括具有下列各側鏈之胺基酸：鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β-分枝側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。或者，可諸如藉由飽和突變沿編碼序列之全部或部分隨機引入突變，且可篩檢所得突變體之生物活性以識別保有活性之突變體。突變發生後，可表現所編碼蛋白質且該蛋白質活性係可測定的。
在另一實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含與E1、E13、E63、F19及/F23或其抗原結合片段，諸如VH域、VL域、VH鏈或VL鏈之胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同之胺基酸序 列。在一實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含與示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同之胺基酸序列。在另一實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含與示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同之胺基酸序列。在另一實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體包含與示於SEQ ID NO：11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25之VH CDR胺基酸序列(VH CDR)及/或示於SEQ ID NO：84、26、85、86、27、87、88、28、89、2、30、31、32、33、34、93、35、94、95、96、36、97、98、99、37、100、101、38、39或40之VL CDR胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同之VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。
在特定實施例中，抗體為完全人類抗人類抗體，諸如完全人類單株抗體。完全人類抗體可藉由於此項技術中已知之任何方法產生。例示性方法包括以能夠在沒有產生內源性免疫球蛋白的情況下產生人類抗體基因譜之轉殖基因動物(例如小鼠)之hLIGHT抗原(能夠誘發免疫反應且視情況與載體共軛之任何hLIGHT多肽)加以免疫；參見例如Jakobovits等人，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.,90：2551；Jakobovits等人，(1993)Nature,362：255 258(1993)；Bruggermann等人(1993)Year in Immunol.,7：33。產生完全人類抗hLIGHT抗體之其他方法見於本發 明所提供之實例。
或者，完全人類抗體可經由活體外篩檢噬菌體呈現抗體庫而產生；參見例如Hoogenboom等人，J.Mol.Biol.,227：381(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.,222：581(1991)，其係以引用的方式併入本發明中。各種含有抗體之噬菌體呈現庫業經揭示，且其可由熟習此項技術者容易地製備。呈現庫可含有可相對適當靶篩檢之不同人類抗體序列，諸如人類Fab、Fv及scFv片段。
在較佳實施例中，根據本發明方法使用之抗體對hLIGHT多肽或其多肽片段或抗原決定基具有高親和力。在一實施例中，根據本發明方法使用之抗體對hLIGHT抗體具有比已知抗體(例如本發明其他處所論及之市售單株抗體)高之親和力。在特定實施例中，如以本發明所述或熟習此項技術者已知之技術(例如BIAcore檢定)所評定，根據本發明方法使用之抗體對hLIGHT抗原具有比已知抗hLIGHT抗體高2至10倍(或更高)之親和力。根據此等實施例，在一實施例中抗體親和力係以BIAcore檢定評定。
在特定實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體包含由在嚴格條件下(例如在約45℃下在6×氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中之雜交至過濾結合(hybridization to filter-bound)DNA隨後在約50-65℃下以0.2×SSC/0.1% SDS洗滌一或多次)，在高度嚴格條件下(例如在約45℃下在6×SSC中雜交至過濾結合核酸隨後在約68℃下以0.1×SSC/0.2% SDS洗滌一或多次)或在熟習此項技術者已知之其他嚴格雜交條件下(參見例如Ausubel,F.M.等人編，1989,Current Protocols in Molecular Biology，第I卷，Green Publishing Associates,Inc.and John Wiley & Sons,Inc.,New York第6.3.1-6.3.6頁及第2.10.3頁)雜交至下列各物之核苷酸序列所編碼之VH域胺基酸序列及/或VL域胺基酸序列：(1)編碼示於SEQ ID NO：41、42、43、44或45(VH)及/或SEQ ID NO：102、 46、103、47、48、104、49、105、106或50(VL)之VH及/或VL域中任一者之核苷酸序列的互補股；或(2)編碼由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH或VL域中任一者之核苷酸序列之互補股。
在另一實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體包含由在嚴格條件下(例如在約45℃下在6×SSC中雜交至過濾結合DNA隨後在約50-65℃下以0.2×SSC/0.1% SDS洗滌一或多次)，在高度嚴格條件下(例如在約45℃下在6×SSC中雜交至過濾結合核酸隨後在約68℃下以0.1×SSC/0.2% SDS洗滌一或多次)或在熟習此項技術者已知之其他嚴格雜交條件下(參見例如Ausubel,F.M.等人編，1989,Current Protocols in Molecular Biology，第I卷，Green Publishing Associates,Inc.and John Wiley & Sons,Inc.,New York第6.3.1-6.3.6頁及第2.10.3頁)雜交至下列各物之核苷酸序列所編碼之VH CDR胺基酸序列及/或VL CDR胺基酸序列：編碼示於SEQ ID NO：11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25(VH CDR)及/或SEQ ID NO：84、26、85、86、27、87、88、28、89、2、30、31、32、33、34、93、35、94、95、96、36、97、98、99、37、100、101、38、39或40(VL CDR)之VH CDR及/或VL CDR中任一者之核苷酸序列的互補股；或(b)編碼由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR及/或VL CDR中任一者之核酸序列之互補股。
本發明抗體包括經化學修飾(亦即藉由將任何類型之分子共價連接至抗體)之抗體。舉例而言(但不限於)抗體衍生物包括(例如)已藉由醣基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、已知保護/阻斷基之衍生、蛋白裂解、與細胞配位體或其他蛋白質連接等而經化學修飾 之抗體。眾多化學修飾中之任一者均可藉由已知技術，包括(但不限於)特定化學裂解、乙醯化、調配、衣黴素的代謝合成等來進行。此外，該抗體可含有一或多種非經典胺基酸。
本發明亦提供包含熟習此項技術者已知之構架區(例如人類或非人類片段)之免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體。構架區可(例如)為天然產生或一致構架區。最佳地，本發明抗體之構架區為人類構架區(參見例如Chothia等人，1998,J.Mol.Biol.278：457-479之人類構架區列表，其全文係以引用的方式併入本發明中)。亦參見Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest_(U.S.Department of Health and Human Services,Washington,D.C.)第5版。
在特定實施例中，本發明提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體，該等抗體包含E1、E13、E63、F19及/或F23(亦即SEQ ID NO：11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25(VH CDR)或SEQ ID NO：84、26、85、86、27、87、88、28、89、2、30、31、32、33、34、93、35、94、95、96、36、97、98、99、37、100、101、38、39或40(VL CDR))或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728之融合瘤產生之抗體的一或多個CDR之胺基酸序列，及於一個、兩個、三個或三個以上之以下殘基處具有一或多個胺基酸取代之人類構架區：(a)於鼠科抗體構架(亦即供體抗體構架)與人類抗體構架(亦即受體抗體構架)之間相區分之稀有構架殘基；(b)於供體抗體構架與受體抗體構架之間區分之Venier區殘基；(c)於供體抗體構架與受體抗體構架之間區分之VH/VL界面處之鏈間填充殘基；(d)於供體抗體構架與受體抗體構架序列，特別是對於定義典型種類之鼠科抗體CDR環為關鍵的構架區之間區分之典型殘基；(e)與CDR相鄰之殘基；(g)能夠與抗原相互作用之殘基；(h)能夠與CDR相互作用之殘基；及(i)VH域與VL域之間之接 觸殘基。在某些實施例中，包含於一個、兩個、三個或三個以上之上述識別出的殘基處具有一或多個胺基酸取代之人類構架區的免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體為拮抗性hLIGHT抗體。
本發明涵蓋免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體，該等抗體包含由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728之融合瘤產生之抗體或E1、E13、E63、F19及/或F23抗體之VH域及/或VL域或其抗原結合片段之胺基酸序列，於構架區中具有突變(例如一或多個胺基酸取代)。在某些實施例中，免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體包含E1、E13、E63、F19及/或F23之VH域及/或VL域或其抗原結合片段之胺基酸序列，其中於VH及/或VL域之構架區中具有一或多個胺基酸殘基取代。
本發明亦涵蓋免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體，該等抗體包含由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728之融合瘤產生之抗體或E1、E13、E63、F19及/或F23抗體之VH域及/或VL域之胺基酸序列，於高變區及構架區中具有突變(例如一或多個胺基酸殘基取代)。較佳地，高變區及構架區中之胺基酸取代改良抗體與hLIGHT抗原之結合。
在一些實施例中，本發明中所提供之抗體於受檢者(例如人類受檢者)體內可減低或抑制hLIGHT與HVEM、LTβR及/或DcR3之結合，及/或減低或抑制hLIGHT生物活性，諸如分泌CCL20、IL8及/或RANTES。在某些實施例中，本發明所提供之抗體(諸如人類單株抗hLIGHT抗體)在與可溶或細胞表面表現之hLIGHT接觸後於受檢者體內可減低或抑制可溶或細胞表面表現之hLIGHT與HVEM或LTβR之結合及/或減低或抑制CCL20及/或RANTES之分泌。在一些實施例中，hLIGHT為hLIGHT之SNP突變體，諸如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。本發明所提供之抗體阻斷hLIGHT與HVEM、LTβR 及/或DCR3結合之活性可使用於實例1-4中任一者中所述之檢定來偵測。本發明所提供之hLIGHT抗體對表現hLIGHT受體之細胞生物活性的抑制可使用於實例1-4中任一者中所述之檢定來偵測。
在其他實施例中，本發明所提供之抗體在具有細胞表面表現之hLIGHT受體(諸如HVEM、LTβR及/或Dc3R)之細胞中減低或抑制hLIGHT與HVEM、LTβR及/或DcR3之結合及/或減低或抑制hLIGHT生物活性，諸如分泌CCL20、IL8及/或RANTES。在某些實施例中，本發明所提供之抗體(諸如人類單株抗hLIGHT抗體)在與可溶或細胞表面表現之hLIGHT接觸後於具有細胞表面表現hhLIGHT受體的細胞中減低或抑制可溶或細胞表面表現之hLIGHT與HVEM或LTβR之結合及/或減低或抑制CCL20及/或RANTES之分泌。在一些實施例中，hLIGHT為hLIGHT之SNP突變體，諸如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。本發明所提供之抗體阻斷hLIGHT與HVEM、LTβR及/或DcR3結合之活性可使用於實例1-4中任一者中所述之檢定偵測。本發明所提供之hLIGHT抗體對表現hLIGHT受體之細胞生物活性的抑制可使用於實例1-4中任一者中所述之檢定來偵測。
本發明亦提供包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原及異源多肽之本發明所提供之抗體的融合蛋白。在一些實施例中，抗體與其融合之異源多肽適用於將抗體靶向具有細胞表面表現之hLIGHT的細胞。
本發明亦提供免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體組。在特定實施例中，本發明提供具有不同締合速率常數不同解離速率常數、對hLIGHT抗原之不同親和力及/或對hLIGHT抗原之不同專一性之抗體組。本發明提供約10，較佳約25、約50、約75、約100、約125、約150、約175、約200、約250、約300、約350、約400、約450、約500、約550、約600、約650、約700、約750、約800、約850、約900、約950或約1000個抗體或更多之組。可將抗體組用於(例如)96孔 或384孔培養盤，諸如用於諸如ELISA之檢定。
抗體共軛物及融合蛋白
在一些實施例中，將本發明抗體共軛或重組融合至診斷、可偵測或治療劑或任何其他分子。共軛或重組融合抗體可適用於(例如)作為臨床測試程序之部分(諸如確定特定療法功效)監控或預測hLIGHT介導之疾病之發作、發展、進程及/或嚴重性。
該診斷及偵測可(例如)藉由將抗體偶合至可偵測物質來完成，該等物質包括(但不限於)各種酶，諸如(但不限於)辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；輔基，諸如(但不限於)抗生蛋白鏈菌素/生物素及抗生物素蛋白/生物素；螢光材料，諸如(但不限於)繖酮、螢光素、螢光素異硫氰酸酯、若丹明、二氯三基胺螢光素、丹磺醯氯或藻紅素；發光材料，諸如(但不限於)魯米諾(luminol)；生物發光材料，諸如(但不限於)螢光素酶、螢光素及發光蛋白質；放射性材料，諸如(但不限於)碘(131I、125I、123I及121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(115In、113In、112In及111In)、鎝(99Tc)、鉈(201Ti)、鎵(68Ga、67Ga)、鈀(103Pd)、鉬(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn及117Sn；及使用各種正電子發射斷層攝影術之正電子發射金屬及非放射性順磁性金屬離子。
本發明進一步涵蓋使用經共軛或重組融合至治療部分(或一或多個治療部分)之本發明抗體。可將抗體共軛或重組融合至治療部分，諸如細胞毒素，例如細胞生長抑制劑或殺細胞劑；治療劑或放射性金屬離子，例如α發射體。細胞毒素或細胞毒性劑包括任何對細胞有害之藥劑。治療部分包括(但不限於)抗代謝物(例如甲胺喋呤、6-硫醇嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氮烯唑胺(decarbazine))；烷 化劑(例如二氯甲基二乙胺、硫哌苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、美法侖(melphalan)、卡氮芥(carmustine)(BCNU)及環己亞硝脲(lomustine)(CCNU)、環硫氛醯胺(cyclothosphamide)、硫酸布他卡因(busulfan)、二溴甘露糖醇、鏈脲黴素、絲裂黴素C及順二氯二胺鉑(II)(DDP)及順鉑；蒽環黴素(例如道諾黴素(daunorubicin)(從前稱為柔紅黴素(daunomycin))及阿黴素(doxorubicin))；抗生素(例如放線菌素d(從前稱為放線菌素)、博萊黴素(bleomycin)、光神黴素(mithramycin)及氨茴黴素(AMC))；Auristatin分子(例如auristatin PHE、苔蘚蟲素(bryostatin)1及solastatin 10；參見Woyke等人，Antimicrob.Agents Chemother.46：3802-8(2002)；Woyke等人，Antimicrob.Agents Chemother.45：3580-4(2001)；Mohammad等人，Anticancer Drugs 12：735-40(2001)；Wall等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.266：76-80(1999)；Mohammad等人，Int.J.Oncol.15：367-72(1999)，其中所有係以引用的方式併入本發明中；激素(例如糖皮質激素、孕激素、雄激素及雌激素)、DNA修復酶抑制劑(例如依託泊苷(etoposide)或拓朴替康(topotecan)、激酶抑制劑(例如化合物ST1571、甲磺酸伊馬替尼(Kantarjian等人，Clin Cancer Res.8(7)：2167-76(2002))；細胞毒性劑(例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)、細胞遲緩素B、短桿菌素D、溴化乙錠、吐根素(emetine)、絲裂黴素(mitomycin)、依託泊苷、特諾波賽(tenoposide)、長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、秋水仙鹼(colchicin)、阿黴素、道諾黴素、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌(mitoxantrone)、光神黴素、放線黴素D、1-脫氫睾固醇、糖皮質激素、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)及嘌呤黴素(puromycin)及其類似物或同系物及彼等於美國專利第6,245,759號、第6,399,633號、第6,383,790號、第6,335,156號、第6,271,242號、第6,242,196號、第 6,218,410號、第6,218,372號、第6,057,300號、第6,034,053號、第5,985,877號、第5,958,769號、第5,925,376號、第5,922,844號、第5,911,995號、第5,872,223號、第5,863,904號、第5,840,745號、第5,728,868號、第5,648,239號、第5,587,459號中所揭示之化合物)；法呢基轉移酶抑制劑(例如R115777、BMS-214662及彼等由(例如)下列美國專利揭示者：美國專利第6,458,935號、第6,451,812號、第6,440,974號、第6,436,960號、第6,432,959號、第6,420,387號、第6,414,145號、第6,410,541號、第6,410,539號、第6,403,581號、第6,399,615號、第6,387,905號、第6,372,747號、第6,369,034號、第6,362,188號、第6,342,765號、第6,342,487號、第6,300,501號、第6,268,363號、第6,265,422號、第6,248,756號、第6,239,140號、第6,232,338號、第6,228,865號、第6,228,856號、第6,225,322號、第6,218,406號、第6,211,193號、第6,187,786號、第6,169,096號、第6,159,984號、第6,143,766號、第6,133,303號、第6,127,366號、第6,124,465號、第6,124,295號、第6,103,723號、第6,093,737號、第6,090,948號、第6,080,870號、第6,077,853號、第6,071,935號、第6,066,738號、第6,063,930號、第6,054,466號、第6,051,582號、第6,051,574號及第6,040,305號)；拓撲異構酶抑制劑(例如喜樹鹼(camptothecin)；伊立替康(irinotecan)；SN-38；拓朴替康；9-胺基喜樹鹼；GG-211(GI 147211)；DX-8951f；IST-622；魯比特康(rubitecan)；吡唑啉幷吖啶(pyrazoloacridine)；XR-5000；聖托平(saintopin)；UCE6；UCE1022；TAN-1518A；TAN 1518B；KT6006；KT6528；ED-110；NB-506；ED-110；NB-506；及蝴蝶黴素(rebeccamycin)；布格來因(bulgarein)；DNA小溝結合物，諸如Hoescht染料33342及Hoechst染料33258；兩面針鹼(nitidine)；佛蓋羅倪(fagaronine)；表小檗鹼(epiberberine)；甲氧檗因(coralyne)；β-拉帕 醌(β-lapachone)；BC-4-1)；雙膦酸鹽(例如阿侖膦酸鹽、cimadronte、氯屈膦酸鹽、替魯膦酸鹽、依替膦酸鹽、伊班膦酸鹽、奈立膦酸鹽(neridronate)、olpandronate、利塞膦酸鹽、piridronate、帕米膦酸鹽、zolendronate)HMG-CoA還原酶抑制劑(例如洛伐他汀(lovastatin)、斯伐他汀(simvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、斯達汀(statin)、西立伐他汀(cerivastatin)、益脂可(lescol)、立普妥(lupitor)、羅素他汀(rosuvastatin)及阿托伐他汀)；反義寡核苷酸(例如彼等於美國專利第6,277,832號、第5,998,596號、第5,885,834號、第5,734,033號及第5,618,709號中描述者)；腺苷脫胺酶抑制劑(例如氟達拉賓磷酸鹽(Fludarabine phosphate)及2-氯去氧腺苷)；替伊莫單抗(ibritumomab)tiuxetan(Zevalin®)；托西莫單抗(tositumomab)(Bexxar®)及其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、籠形物及前藥)。
此外，可將本發明抗體共軛或重組融合至修飾給定生物反應之治療部分或藥物部分。不應認為治療部分或藥物部分限於經典化學治療劑。舉例而言，藥物部分可為具有所需生物活性之蛋白質、肽或多肽。該等蛋白可包括(例如)毒素，諸如相思子鹼、蓖麻毒素A、綠膿桿菌外毒素、霍亂毒素或白喉毒素；蛋白質，諸如腫瘤壞死因子、γ-干擾素、α-干擾素、神經生長因子、血小板衍生生長因子、組織纖維蛋白溶酶原活化因子、細胞凋亡劑(例如TNF-γ、TNF-γ、AIM I(參見國際公開案第WO 97/33899號)、AIM II(參見國際公開案第WO 97/34911號)、Fas配位體(Takahashi等人，1994,J.Immunol.,6：1567-1574)及VEGF(參見國際公開案第WO 99/23105號))、抗血管生成劑(例如血管抑制素、內皮抑制素或凝固路徑之成分(例如組織因子))；或生物反應修飾劑，諸如淋巴介質(例如干擾素γ、介白素-1("IL-1")、介白素-2("IL-2")、介白素-5("IL-5")、介白素-6("IL-6")、介白素-7("IL- 7")、介白素-9("IL-9")、介白素-10("IL-10")、介白素-12("IL-12")、介白素-15("IL-15")、介白素-23("IL-23")、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子("GM-CSF")及粒細胞群落刺激因子("G-CSF"))或生長因子(例如生長激素("GH"))或凝固劑(例如鈣、維生素K、組織因子，諸如(但不限於)哈格曼因子(Hageman factor)(因子XII)、高分子量激肽原(HMWK)、前激肽釋放酶(PK)、凝固蛋白因子II(凝血素)、因子V、XIIa、VIII、XIIIa、XI、XIa、IX、IXa、X、磷脂及纖維蛋白單體)。
本發明涵蓋重組融合或化學共軛(共價或非共價共軛)至異源蛋白或多肽(或其片段，較佳共軛至約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90或約100個胺基酸之多肽)以產生融合蛋白之本發明抗體。詳言之，本發明提供包含下列各物之融合蛋白：本發明抗體之抗原結合片段(例如Fab片段、Fd片段、Fv片段、F(ab)2片段、VH域、VH CDR、VL域或VL CDR)及異源蛋白、多肽或肽。在一實施例中，抗體與其融合之異源蛋白、多肽或肽適用於將抗體靶向特定細胞類型，諸如表現hLIGHT或hLIGHT受體之細胞。舉例而言，免疫專一性結合至由特定細胞類型(例如免疫細胞)所表現之細胞表面受體之抗體可融合或共軛至本發明之經修飾抗體。
本發明之共軛或融合蛋白包含本發明所述之本發明之任何抗體或異源多肽。在一實施例中，本發明之共軛或融合蛋白包含E1、E13、E63、F19或F23抗體或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體及異源多肽。在另一實施例中，本發明之共軛或融合蛋白包含E1、E13、E63、F19或F23或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體之抗原結合片段及異源多肽。在另一實施例中，本發明之共軛或融合蛋白包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH域或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH域中任一者之胺基酸序列之VH域；及/或具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL域或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL域中任一者之胺基酸序列之VL域，及異源多肽。在另一實施例中，本發明之共軛或融合蛋白包含具有示於SEQ ID NO：11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25之VH CDR或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR，或異源多肽。在另一實施例中，本發明之共軛或融合蛋白包含具有示於SEQ ID NO：84、26、85、86、27、87、88、28、89、2、30、31、32、33、34、93、35、94、95、96、36、97、98、99、37、100、101、38、39或40之VL CDR或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR，或異源多肽。在另一實施例中，本發明之共軛或融合蛋白包含分別是於SEQ ID NO：1、2、3、4或5及SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之至少一種VH域及至少一種VL域或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的至少一種VH域及至少一種VL域，及異源多肽。在另一實施例中，本發明之共軛或融合蛋白包含分別示於SEQ ID NO：11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25及SEQ ID NO：84、26、85、86、27、87、88、28、 89、2、30、31、32、33、34、93、35、94、95、96、36、97、98、99、37、100、101、38、39或40之至少一種VH CDR及至少一種VL CDR或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的至少一種VH CDR及至少一種VL CDR，及異源多肽。
此外，本發明抗體可共軛至治療部分，諸如放射性金屬離子，諸如適用於將放射金屬離子(包括(但不限於)131In、131LU、131Y、131Ho、131Sm)共軛至多肽之α-發射體，諸如213Bi或巨環螯合劑。在某些實施例中，巨環螯合劑為可經由連接子分子連接至抗體之1,4,7,10-四氮雜環十二烷-N,N',N",N'''-四乙酸(DOTA)。該等連接子分子通常於此項技術中已知且係描述於Denardo等人，1998,Clin Cancer Res.4(10)：2483-90；Peterson等人，1999,Bioconjug.Chem.10(4)：553-7；及Zimmerman等人，1999,Nucl.Med.Biol.26(8)：943-50中，其各自之全文係以引用的方式併入。
此外，可將本發明之抗體融合至諸如肽之標記序列以促進純化。在較佳實施例中，標記胺基酸序列為六聚組胺酸肽，尤其諸如於pQE載體(QIAGEN,Inc.)中提供之標記，其中許多為市售的。如Gentz等人，1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：821-824所述，例如六聚組胺酸提供便利的融合蛋白質純化。適用於純化之其他肽標記包括(但不限於)對應於源自流行性感冒血球凝集素蛋白之抗原決定基之血球凝集素("HA")標記(Wilson等人，1984,Cell 37：767)；及"FLAG"標記。
將治療部分(包括多肽)融合或共軛至抗體之方法為眾所熟知的，參見例如Arnon等人，"Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy"，在Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy,Reisfeld等人(編)，第243-56頁(Alan R.Liss,Inc.1985)； Hellstrom等人，"Antibodies For Drug Delivery"，在Controlled Drug Delivery(第2版)，Robinson等人(編)，第623-53頁(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe,"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy：A Review",Monoclonal Antibodies 84：Biological And Clinical Applications,Pinchera等人(編)，第475-506頁(1985)；"Analysis,Results,And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy"，在Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy,Baldwin等人(編)，第303-16頁(Academic Press 1985),Thorpe等人，1982,Immunol.Rev.62：119-58；美國專利第5,336,603號、第5,622,929號、第5,359,046號、第5,349,053號、第5,447,851號、第5,723,125號、第5,783,181號、第5,908,626號、第5,844,095號及第5,112,946號；EP 307,434；EP 367,166；EP 394,827；PCT公開案WO 91/06570、WO 96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631及WO 99/04813；Ashkenazi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88：10535-10539,1991；Traunecker等人，Nature,331：84-86,1988；Zheng等人，J.Immunol.,154：5590-5600,1995；Vil等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：11337-11341,1992，其全文係以引用的方式併入本發明。
融合蛋白可(例如)經由基因改組、基元改組、外顯子改組及/或密碼子改組(共同稱為"DNA改組")技術而產生。可採用DNA改組來改變本發明抗體之活性(例如具有較高親和力及較低解離速率之抗體)。一般而言，參見美國專利第5,605,793號、第5,811,238號、第5,830,721號、第5,834,252號及第5,837,458號；Patten等人，1997,Curr.Opinion Biotechnol.8：724-33；Harayama,1998,Trends Biotechnol.16(2)：76-82；Hansson等人，1999,J.Mol.Biol.287：265-76；及Lorenzo and Blasco,1998,Biotechniques 24(2)：308-313(此等專 利及公開案各自全文係以引用的方式併入本發明中)。抗體或經編碼抗體可在重組之前藉由以易造成誤差之PCR、隨機核苷酸插入或其他方法使其經受隨機突變而改變。可將編碼本發明抗體之聚核苷酸與一或多種異源分子之一或多種成分、基元、區域、部分、結構域、片段等重組。
如全文以引用的方式併入本發明中之美國專利第4,676,980號所述，亦可將本發明抗體共軛至第二抗體以形成抗體雜共軛物。
應選擇共軛或重組融合至免疫專一性結合至hLIGHT抗原之本發明抗體之治療部分或藥物以達成所需預防或治療效應。在某些實施例中，抗體為經修飾抗體。臨床醫師或其他醫務人員在確定將何種治療部分或藥物共軛或重組融合至本發明抗體時應考慮以下因素：疾病性質、疾病嚴重性及受檢者病況。
亦可將本發明抗體連接至固體支撐物，該等固體支撐物特別適用於靶抗原之免疫檢定或純化。該等固體支撐物包括(但不限於)玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、錦綸、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。
醫藥組合物
可藉由將具有所需純度之抗體與視情況之生理上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑混合(Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA)來製備含有一或多種本發明所提供之本發明抗體之凍乾調配物或水溶液形式的治療調配物以供儲存。所用劑量及濃度之可接受之載劑、賦形劑或穩定劑對於接受者而言為非毒性的，且包括緩衝液，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如氯化十八基二甲基苄基銨物；氯化六羥季銨；氯苄烷銨、苄索氯銨；苯酚、丁醇或苄醇；對氧苯甲酸烷酯，諸如對氧苯甲酸甲酯或對氧苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約 10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽反離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白錯合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
本發明所提供之本發明抗體亦可(例如)以脂質體調配。含有所關注分子之脂質體係藉由於此項技術中已知之方法來製備，諸如於Epstein等人(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：3688；Hwang等人(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4030；及美國專利第4,485,045號及第4,544,545號中所述之方法。具有增加之循環時間之脂質體係於美國專利第5,013,556號中揭示。
特別適用的免疫微脂囊可藉由逆相蒸發法以含有磷脂醯膽鹼、膽固醇及PEG衍生之磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)之脂質組合物產生。將脂質體經由具有指定孔尺寸之過濾器擠出以產生具有所需直徑之脂質體。可將本發明所提供之抗體Fab'片段經由二硫鍵互換反應共軛至如Martin等人(1982)J.Biol.Chem.257：286-288所述之脂質體。脂質體內視情況含有化學治療劑(諸如阿黴素)；參見Gabizon等人，(1989)J.National Cancer Inst.81(19)：1484。
諸如本發明所述彼等之調配物亦可含有一種以上之用於所治療之特定適應症必需的活性化合物。在某些實施例中，調配物包含本發明抗體及一或多種彼此不會不利影響之具有互補活性之活性化合物。該等分子合適地以用於所欲目的有效之量存在於組合中。舉例而言，可將本發明抗體與一或多種其他治療劑組合。可將該組合療法連續或同時或相繼投與患者。
(例如)分別於膠狀藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)或於巨乳液中藉由凝聚技術或藉由界面聚合作用亦可將本發明抗體誘陷於所製備之微囊中，例如羥甲基纖維素或明膠微囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊。該等技術係揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA中。
待用於活體內投與之調配物可為無菌的。其係藉由經由(例如)無菌濾過膜過濾而容易地完成。
亦可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之合適實例包括含有拮抗劑之固體疏水性聚合物的半透基質，該等基質為成形物品(例如薄膜)或微囊形式。持續釋放基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如聚(甲基丙烯酸2-羥乙酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(美國專利第3,773,919號)、L-麩胺酸與L-麩胺酸乙酯之共聚物、不可降解乙烯-乙酸乙烯酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物(諸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)構成之可注射微球體)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。儘管諸如乙烯-乙酸乙烯酯及乳酸-乙醇酸之聚合物使得能夠分子釋放歷時超過100天，但特定水凝膠釋放蛋白質歷時較短時間段。當經囊封抗體保持於體內歷時較長時間時，其可由於暴露於37℃下之濕氣而變性或凝聚，導致生物活性之損耗及可能之免疫原性改變。可視所涉及機理而定設計合理策略用於穩定化作用。舉例而言，若發現凝聚機理為經由硫-二硫鍵互換形成分子間S-S鍵，則可藉由修飾氫硫基殘基、由酸性溶液凍乾、控制水分含量、使用適當添加物及研發特定聚合物基質組合物來達成穩定化作用。
本發明所提供之醫藥組合物於醫藥學上可接受之載劑中含有治療有效量之一或多種本發明所提供之本發明抗體及視情況一或多種額外預防或治療劑。該等醫藥組合物適用於預防、治療、處理或改善 hLIGHT介導之疾病(諸如發炎性腸病)或其一或多種症狀。
適用於投與本發明所提供之化合物之醫藥載劑包括熟習此項技術者已知適用於特定投與模式的任何該等載劑。
此外，可將本發明抗體作為組合物中之唯一醫藥活性成分調配或可與其他活性成分(諸如一或多種其他預防或治療劑)組合。
該等組合物可含有一或多種本發明抗體。在一實施例中，可將抗體調配為合適之醫藥製劑，諸如用於口服投與之溶液、懸浮液、錠劑、可分散錠劑、藥丸、膠囊、散劑、持續釋放調配物或酏劑或用於非經腸投與之無菌溶液或懸浮液以及經皮貼布製劑及乾粉吸入劑。在一實施例中，使用於此項技術中眾所熟知之技術及程序將上述抗體調配為醫藥組合物(參見例如Ansel(1985)Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms，第4版，第126頁)。
在組合物中，可將有效濃度之一或多種抗體或其衍生物與合適醫藥載劑混合。組合物中化合物之濃度在投與後可有效地用於傳遞治療、預防或改善hLIGHT介導之疾病或其症狀之量。
在一實施例中，調配組合物用於單一劑量投與。為調配組合物，將重量分數之化合物以使得所治療病況得以緩解、預防或一或多種症狀得以改善之有效濃度溶解、懸浮、分散或混合於所選載劑中。
本發明抗體係以足以在不存在不合乎需要之副作用的情況下對所治療患者發揮治療有用效應之有效量包括於醫藥學上可接受之載劑中。治療有效濃度可藉由於活體外及活體內系統中使用常規方法測試化合物且接著由其推及用於人類之劑量而從經驗上確定。
醫藥組合物中之抗體濃度將視(例如)抗體之物理化學特徵、投藥時程及投藥量以及熟習此項技術者已知之其他因素而定。
在一實施例中，治療有效劑量會產生約0.1ng/ml至約50-100μg/ml之抗體血清濃度。在另一實施例中，醫藥組合物提供每天每公 斤體重約0.001mg至約2000mg抗體之劑量。可製備醫藥劑量單位形式以提供每劑量單位形式約0.01mg、0.1mg或1mg至約500mg、1000mg或2000mg，且在一實施例中為約10mg至約500mg之抗體及/或其他視情況之基本成分之組合。
抗體可一次性投與或可分為許多較小劑量以一定時間間隔投與。應瞭解，精確劑量及治療之持續時間隨所治療疾病而變化，且可使用已知測試方案或藉由自活體內或活體外測試資料外推而從經驗上確定。應注意的是濃度及劑量值亦可隨待緩解之病況之嚴重性而變化。應進一步瞭解的是，對於任何特定受檢者而言，可根據個體需要及投藥或監督組合物投與之人士之專業判斷隨時間調節特定投藥方案，且本發明中所列出之濃度範圍僅為例示性的，且不意欲限制所主張組合物之範疇或實踐。
在混合或添加抗體後，所得混合物可為溶液、懸浮液、乳液或其類似物。所得混合物之形式視許多因素而定，包括所欲投與模式及化合物於所選載劑或媒劑中之溶解度。有效濃度足以改善所治療疾病、病症或病況之症狀且可從經驗上加以確定。
提供以含有合適量之化合物或其醫藥學上可接受之衍生物的諸如以下之單位劑型向人類及動物投與之醫藥組合物，諸如錠劑、膠囊、藥丸、散劑、顆粒、無菌非經腸溶液或懸浮液及口服溶液或懸浮液及油水乳液。在一實施例中，該抗體係以單位劑型或多劑型調配或投與。本發明所使用之單位劑型係指如於此項技術中已知適用於人類及動物受檢者且個別包裝之物理離散單位。各單位劑量含有與所需醫藥載劑、媒劑或稀釋劑聯合足以產生所需治療效應之預定量之抗體。單位劑型之實例包括安瓶及注射器及個別包裝之錠劑或膠囊。單位劑型可以其部分或多份投與。多劑型為包裝於單一容器內之複數個相同單位劑型待以分離單位劑型投與。多劑型之實例包括錠劑或膠囊之小 瓶、瓶或品脫或加侖瓶。因此，多劑型為不以包裝分離之多個單位劑量。
在較佳實施例中，本發明之一或多種抗hLIGHT抗體為液體醫藥調配物。液體醫藥學上可投與之組合物可(例如)藉由於載劑(諸如水、生理食鹽水、含水右旋糖、甘油、乙二醇、乙醇及其類似物)中溶解、分散或混合如上所定義之活性化合物及視情況之醫藥佐劑，藉此形成溶液或懸浮液而製備。若需要，待投與之醫藥組合物亦可含有少量非毒性輔助物質，諸如濕潤劑、乳化劑、增溶劑、pH值緩衝劑及其類似物，例如乙酸鹽、檸檬酸鈉、環糊精衍生物、單月桂酸脫水山梨糖醇酯、三乙醇胺乙酸鈉、三乙醇胺油酸鹽及其他該等藥劑。
製備該等劑型之實際方法為熟習此項技術者已知或將為熟習此項技術者顯而易見；例如參見Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA。
可製備含有0.005%至100%範圍內之抗體，其餘為非毒性載劑之劑型或組合物。製備此等組合物之方法為熟習此項技術者已知。
口服醫藥劑型為固體、凝膠或液體。固體劑型為錠劑、膠囊、顆粒及塊體散劑。口服錠劑類型包括可為腸包衣、糖包衣或膜包衣之壓縮可咀嚼口含劑及錠劑。膠囊可為硬明膠或軟明膠膠囊，而顆粒及散劑可以與熟習此項技術者已知之其他成分組合之非發泡或發泡形式提供。
在某些實施例中，調配物為固體劑型。在某些實施例中，調配物為膠囊或錠劑。錠劑、藥丸、膠囊、片劑(troche)及其類似物可含有一或多種以下成分，或具有類似特性之化合物：黏合劑；潤滑劑；稀釋劑；助流劑；崩解劑；著色劑；甜味劑；調味劑；濕潤劑；催吐包衣；及膜包衣。黏合劑之實例包括微晶纖維素、黃耆膠、葡萄糖溶液、阿拉伯膠黏液、明膠溶液、糖蜜、聚乙烯吡咯啶、聚乙烯吡咯 酮、交聯聚乙烯吡咯酮、蔗糖及澱粉糊狀物。潤滑劑包括滑石、澱粉、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣、石鬆及硬脂酸。稀釋劑包括(例如)乳糖、蔗糖、澱粉、高嶺土、鹽、甘露糖醇及磷酸二鈣。助流劑包括(但不限於)膠狀二氧化矽。崩解劑包括交聯羧甲基纖維素鈉、羥基乙酸澱粉鈉、褐藻酸、玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、膨潤土、甲基纖維素、瓊脂及羧甲基纖維素。著色劑包括(例如)任何許可證明之可溶於水之FD及C染料，其混合物；及懸浮於水合氧化鋁上之不溶於水之FD及C染料。甜味劑包括蔗糖、乳糖、甘露糖醇及人造甜味劑，諸如糖精及許多噴霧乾燥香料。調味劑包括自諸如水果之植物萃取之天然香料及產生舒適感覺之化合物之合成摻合物，諸如(但不限於)胡椒薄荷及水楊酸甲酯。濕潤劑包括丙二醇單硬脂酸酯、單油酸脫水山梨糖醇酯、二乙二醇單月桂酸酯及聚氧化乙烯月桂醚。催吐包衣包括脂肪酸、脂肪、蠟、蟲膠、氨化蟲膠及酞酸乙酸纖維素。膜包衣包括羥乙基纖維素、羥甲基纖維素鈉、聚乙二醇4000及酞酸乙酸纖維素。
本發明抗體可於受保護使免於酸性胃環境之組合物中提供。舉例而言，可將組合物於在胃中維持其完整性且於腸中釋放活性化合物之腸包衣中調配。該組合物亦可與抗酸劑或其他此類成分組合調配。
當劑量單位形式為膠囊時，其除上述類型材料以外亦可含有液體載劑，諸如脂肪油。此外，劑量單位形式可含有改質劑量單位物理形式之各種其他材料，例如糖包衣及其他腸包衣藥劑。該等化合物亦可以酏劑、懸浮液、糖漿、糯米紙囊劑、噴灑物、口嚼錠或其類似物之成分形式投與。糖漿除活性化合物以外亦可含有蔗糖作為甜味劑及特定防腐劑、染料及著色劑及香料。
亦可將該抗體與不損害所需作用之其他活性材料，或與補充所需作用之材料(諸如抗酸劑、H2阻斷劑及利尿劑)混合。活性成分為如本發明所述之抗體或其醫藥學上可接受之衍生物。可包括較高濃度， 達至約98重量%之活性成分。
在所有實施例中，可如熟習此項技術者已知將錠劑及膠囊調配物包衣以改質或保持活性成分之溶解。因此(例如)可將其以習知腸可消化包衣(諸如水楊酸苯酯、蠟及酞酸乙酸纖維素)包衣。
在較佳實施例中，調配物為液體劑型。液體口服劑型包括水溶液、乳液、懸浮液、由非發泡顆粒復水之溶液及/或懸浮液及由發泡顆粒復水之發泡製劑。水溶液包括(例如)酏劑及糖漿。乳液為水包油或油包水型。
酏劑為澄清、甜味的水醇製劑。用於酏劑之醫藥學上可接受之載劑包括溶劑。糖漿為糖(例如蔗糖)之濃縮水溶液，且可含有防腐劑。乳液為小球滴形式之一種液體分散於另一種液體中之二相系統。用於乳液之醫藥學上可接受之載劑為不含水液體、乳化劑及防腐劑。懸浮液使用醫藥學上可接受之懸浮劑及防腐劑。用於待復水為液體口服劑型之非發泡顆粒中之醫藥學上可接受的物質包括稀釋劑、甜味劑及濕潤劑。用於待復水為液體口服劑型之發泡顆粒中之醫藥學上可接受的物質包括有機酸及二氧化碳來源。著色劑及調味劑係用於所有以上劑型中。
溶劑包括甘油、山梨糖醇、乙醇及糖漿。防腐劑之實例包括甘油、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯、苯甲酸、苯甲酸鈉及乙醇。用於乳液之不含水液體之實例包括礦物油及棉籽油。乳化劑之實例包括明膠、阿拉伯膠、黃耆膠、膨潤土及界面活性劑(諸如聚氧化乙烯單油酸脫水山梨糖醇酯)。懸浮劑包括羧甲基纖維素鈉、果膠、黃耆膠、維格姆膠(Veegum)及阿拉伯膠。甜味劑包括蔗糖、糖漿、甘油及人造甜味劑，諸如糖精。濕潤劑包括丙二醇單硬脂酸酯、單油酸脫水山梨糖醇酯、二乙二醇單月桂酸酯及聚氧化乙烯月桂醚。有機酸包括檸檬酸及酒石酸。二氧化碳來源包括碳酸氫鈉及碳酸鈉。著色劑 包括任何許可證明之可溶於水之FD及C染料，及其混合物。調味劑包括自諸如水果之植物萃取之天然香料及產生舒適味覺之化合物之合成摻合物。
對於固體劑型而言，在一實施例中將(例如)碳酸丙烯酯、植物油或甘油三酯中之溶液或懸浮液囊封於明膠膠囊中。該等溶液及其製備及囊封係於美國專利第4,328,245號；第4,409,239號；及第4,410,545號中揭示。對於液體劑型而言，(例如)可將(例如)聚乙二醇中之溶液以易於量測用於投與之足夠量醫藥學上可接受的液體載劑(例如水)稀釋。
或者，可藉由將活性化合物或鹽溶解或分散於植物油、二醇、甘油三酯、丙二醇酯(例如碳酸丙烯酯)及其他此類載劑中且將此等溶液或懸浮液囊封於硬或軟明膠膠囊外殼中來製備液體或半固體口服調配物。其他適用調配物包括彼等於美國專利第RE28,819號及第4,358,603號中所列出者。簡言之，該等調配物包括(但不限於)彼等含有下列各物之調配物：本發明所提供之化合物；二烷化單或聚烷二醇，包括(但不限於)1,2-二甲氧甲烷、二乙二醇二甲醚、三乙二醇二甲醚、四乙二醇二甲醚、聚乙二醇-350-二甲醚、聚乙二醇-550-二甲醚、聚乙二醇-750-二甲醚，其中350、550及750係指聚乙二醇之大致平均分子量；及一或多種抗氧化劑，諸如丁基化羥基甲苯(BHT)、丁基化羥基甲氧苯(BHA)、沒食子酸丙酯、維生素E、氫醌、羥基香豆素、乙醇胺、卵磷脂、腦磷脂、抗壞血酸、蘋果酸、山梨糖醇、磷酸、硫代二丙酸及其酯及二硫代胺基甲酸酯。
其他調配物包括(但不限於)包括醫藥學上可接受之縮醛之含水醇溶液。用於此等調配物中之醇類為具有一或多個羥基之任何醫藥學上可接受之可與水混溶之溶劑，包括(但不限於)丙二醇及乙醇。縮醛包括(但不限於)低碳烷基醛之二(低碳烷基)縮醛，諸如乙醛二乙縮醛。
在一實施例中，非經腸投與係以注射為特徵，皮下、肌內或靜脈內亦涵蓋於本發明中。可注射物可以液體溶液或懸浮液，適用於在注射前溶解或懸浮於液體中之固體形式或乳液之習知形式製備。可注射物、溶液及乳液亦含有一或多種賦形劑。合適賦形劑為(例如)水、生理食鹽水、右旋糖、甘油或乙醇。此外，若需要，待投與之醫藥組合物亦可含有微量非毒性輔助物質，諸如濕潤劑或乳化劑、pH值緩衝劑、穩定劑、溶解度增強劑及其他此類藥劑，諸如乙酸鈉、單月桂酸脫水山梨糖醇酯、三乙醇胺油酸酯及環糊精。
本發明中亦涵蓋緩慢釋放或持續釋放系統之植入，使得維持恆定劑量程度(參見例如美國專利第3,710,795號)。簡言之，本發明所提供之化合物係分散於固體內基質中，例如聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、增塑或未增塑聚氯乙烯、增塑錦綸、增塑聚對苯二甲酸乙二酯、天然橡膠、聚異戊二烯、聚異丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、聚矽氧橡膠、聚二甲基矽氧烷、聚矽氧碳酸酯共聚物；聚合性外膜(例如聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯共聚物、聚矽氧橡膠、聚二甲基矽氧烷、氯丁橡膠、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、乙酸乙烯酯與氯化乙烯基之共聚物、氯化亞乙烯基、乙烯及丙烯)所環繞之親水性聚合物，諸如丙烯酸酯及甲基丙烯酸酯之水凝膠、膠原蛋白、交聯聚乙烯醇及交聯部分水解聚乙酸乙烯酯；不溶於體液之離聚物聚對苯二甲酸乙二酯、丁基橡膠、表氯醇橡膠、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三聚物及乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物。抗體以釋放速率控制步驟擴散通過聚合性外膜。包含於該等非經腸組合物中之抗體量高度依賴於其特定特性以及化合物活性及受檢者需要。
非經腸投與之製劑包括預備注射之無菌溶液、預備在使用前即刻與溶劑組合之無菌乾燥可溶產品(諸如凍乾粉末)，包括皮下注射用 錠劑、預備注射之無菌懸浮液、預備於使用前即刻與媒劑組合之無菌乾燥不溶產品及無菌乳液。溶液可為含水或不含水的。
若靜脈內投藥，則合適載劑包括生理食鹽水或磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)及含有增稠劑及增溶劑(諸如葡萄糖、聚乙二醇及聚丙二醇及其混合物)之溶液。
用於非經腸製劑之醫藥學上可接受之載劑包括含水媒劑、不含水媒劑、抗菌劑、等張劑、緩衝劑、抗氧化劑、局部麻醉劑、懸浮及分散劑、乳化劑、錯隔劑或螯合劑及其他醫藥學上可接受之物質。
含水媒劑之實例包括氯化鈉注射液、林格注射液(Ringers Injection)、等張右旋糖注射液、無菌水注射液、右旋糖及乳酸化林格注射液。不含水非經腸媒劑包括植物來源之不揮發性油、棉籽油、玉米油、芝麻油及花生油。可將抑制細菌或抑制真菌濃度之抗菌劑添加至包裝於多劑量容器中之非經腸製劑中，該等抗菌劑包括酚或甲酚、汞劑、苄醇、氯丁醇、甲基及丙基對羥基苯甲酸酯、硫柳汞、氯苄烷銨及苄索氯銨。等張劑包括氯化鈉及右旋糖。緩衝劑包括磷酸鹽及檸檬酸鹽。抗氧化劑包括硫酸氫鈉。局部麻醉劑包括普魯卡因鹽酸鹽。懸浮及分散劑包括羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素及聚乙烯吡咯啶酮。乳化劑包括聚山梨醇酯80(TWEEN® 80)。金屬離子錯隔劑或螯合劑包括EDTA。醫藥載劑亦包括用於可與水混溶之媒劑之乙醇、聚乙二醇或丙二醇；及用於pH值調節之氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸或乳酸。
調節醫藥活性化合物之濃度以使得注射液提供之有效量產生所需藥理效應。如此項技術中已知，確切劑量視患者或動物之年齡、體重及病況而定。
可將單位劑量非經腸製劑包裝於安瓶、小瓶或具有針頭之注射器中。如於此項技術中已知及實踐，用於非經腸投與之所有製劑可為 無菌的。
舉例而言，含有活性化合物之無菌水溶液之靜脈或動脈內輸液係為有效投與模式。另一實施例為注射含有產生所需藥理效應必需之活性材料之無菌含水或油性溶液或懸浮液。
可注射物係經設計用於局部及全身投與。在一實施例中，調配治療有效劑量以使活性化合物與治療組織為至少約0.1%重量比達至約90%重量比或更高，在某些實施例中為1%重量比以上濃度。
抗體可以微粉化或其他合適形式懸浮。所得混合物之形式視許多因素而定，包括所欲投與模式及化合物於所選載劑或媒劑中之溶解度。有效濃度足以改善病況之症狀且可從經驗上確定。
在其他實施例中，醫藥調配物為凍乾粉末，其可經復水而以溶液、乳液及其他混合物形式投與。其亦可以固體或凝膠形式復水及調配。
凍乾粉末係藉由將本發明所提供之抗體或其醫藥學上可接受之衍生物溶解於合適溶劑中而製備。在一些實施例中，凍乾粉末為無菌的。該溶劑可含有改良穩定性之賦形劑或粉末或由粉末製備之復水溶液之其他藥理成分。可使用之賦形劑包括(但不限於)右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖漿、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他合適藥劑。該溶劑亦可含有在一實施例中為約中性pH值之緩衝劑，諸如檸檬酸鹽、磷酸鈉或磷酸鉀或熟習此項技術者已知之其他此類緩衝劑。隨後在熟習此項技術者已知之標準條件下進行溶液之無菌過濾，隨後進行凍乾提供所需調配物。在一實施例中，將所得溶液分配至小瓶中以供凍乾。各小瓶將含有單一劑量或多劑量之化合物。可將凍乾粉末儲存在合適條件下，諸如在約4℃至室溫下。
以注射用水使此凍乾粉末復水製成用於非經腸投與之調配物。為便復水，將凍乾粉末添加至無菌水或其他合適載劑中。精確量視所 選化合物而定。該量可在經驗上確定。
局部混合物係如所述製備之，以供局部及全身投與。所得混合物可為溶液、懸浮液、乳液或其類似物且可調配為乳膏、凝膠、軟膏、乳液、溶液、酏劑、洗劑、懸浮液、酊劑、糊劑、發泡劑、霧劑、沖洗劑、噴霧劑、栓劑、繃帶、表皮貼布或適用於局部投與之任何其他調配物。
可將本發明抗體調配為霧劑，以諸如藉由吸入供局部施用(參見例如美國專利第4,044,126號、第4,414,209號及第4,364,923號，其描述了用於傳遞適用於治療發炎疾病，尤其是哮喘之類固醇之霧劑)。用於向呼吸道投與之此等調配物可為單獨或與諸如乳糖之惰性載劑組合之用於噴霧器之霧劑或溶液形式或為用於吹入之微細粉末。在該情況下，調配物顆粒在一實施例中具有小於50微米，在一實施例中具有小於10微米之直徑。
化合物可經調配而以凝膠、乳膏及洗劑形式局部施用，諸如對皮膚或黏膜(諸如眼中)局部施用及對眼施用或腦池內或脊柱內施用。涵蓋局部投與用於經皮傳遞且亦用於向眼或黏膜投與或用於吸入療法。亦可投與單獨或與其他醫藥學上可接受之賦形劑組合之活性化合物的鼻內溶液。
可將此等溶液，特別是彼等意欲用於眼用用途之溶液與適當鹽調配為pH值為約5-7之0.01%-10%等張溶液。
本發明中亦涵蓋其他投與途徑，諸如經皮貼布(包括離子電滲裝置及電泳裝置)；及直腸投與。
經皮貼布(包括離子電滲裝置及電泳裝置)為熟習此項技術者眾所熟知。舉例而言，該等貼布係揭示於美國專利第6,267,983號、第6,261,595號、第6,256,533號、第6,167,301號、第6,024,975號、第6,010715號、第5,985,317號、第5,983,134號、第5,948,433號及第 5,860,957號。
舉例而言，直腸投與之醫藥劑型為用於獲得全身效應之直腸栓劑、膠囊及錠劑。本發明中所使用之直腸栓劑意謂插入直腸中在體溫下熔融或軟化釋放一或多種藥理或治療活性成分之固體。用於直腸栓劑之醫藥學上可接受之物質為基質或媒劑及用以提高熔點之藥劑。基質之實例包括可可脂(可可油)、甘油-明膠、卡波蠟(carbowax)(聚氧乙烯醇)及脂肪酸單、二及三甘油酯之適當混合物。可使用各種基質之組合。提高栓劑熔點之藥劑包括鯨蠟及蠟。直腸栓劑可藉由壓縮法或藉由模製來製備。直腸栓劑之重量在一實施例中為約2至3gm。
可使用相同醫藥學上可接受之物質，且藉由與用於口服投與之調配物相同方法來製造用於直腸投與之錠劑及膠囊。
亦可調配本發明中所提供之抗體及其他組合物以靶向待治療之受檢者的特定組織、受體或身體其他區域。許多該等標靶方法為熟習此項技術者眾所熟知。本發明中涵蓋所有該等標靶方法用於本發明組合物。關於標靶方法之非限制性實例，參見例如美國專利第6,316,652號、第6,274,552號、第6,271,359號、第6,253,872號、第6,139,865號、第6,131,570號、第6,120,751號、第6,071,495號、第6,060,082號、第6,048,736號、第6,039,975號、第6,004,534號、第5,985,307號、第5,972,366號、第5,900,252號、第5,840,674號、第5,759,542號及第5,709,874號。在一些實施例中，將本發明之抗hLIGHT抗體靶向(或投與)諸如患有或具有患IBD危險之患者之結腸。
在一實施例中，脂質懸浮液(包括靶向組織之脂質體，諸如靶向腫瘤之脂質體)亦可適用作醫藥學上可接受之載劑。其可根據熟習此項技術者已知之方法製備。舉例而言，脂質體調配物可如美國專利第4,522,811號中所述製備。簡言之，諸如多層微脂粒(MLV)之脂質體可藉由於燒瓶內乾燥卵磷脂醯膽鹼及大腦磷脂醯絲胺酸(7：3莫耳比)而形 成。添加本發明所提供之化合物於缺少二價陽離子之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)中之溶液且震盪燒瓶直至脂質膜分散。將所得微脂粒洗滌以移除未經囊封之化合物，藉由離心形成離心塊且接著再懸浮於PBS中。
投藥及給藥之方法
本發明進一步提供用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病(或其症狀)之包含本發明一或多種抗體的組合物。
在某些實施例中，本發明中提供用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病，諸如IBD(例如潰瘍性結腸炎或克羅恩氏病)或其症狀之包含本發明一或多種抗體之組合物。IBD症狀可在輕度至重度之範圍內且一般視所涉及之腸道部分而定。IBD之例示性症狀包括腹部絞痛及疼痛、帶血性腹瀉、嚴重腸蠕動迫切感(severe urgency to have a bowel movement)、發熱、食慾喪失、體重損耗、貧血、疲勞及/或下胺、足踝、髖骨、大腿及手臂疼痛。IBD之例示性腸併發症包括潰瘍大出血、腸穿孔或腸破裂、狹窄及阻塞、瘺管(異常通道)及肛周疾病、毒性巨結腸(例如急性非阻塞性結腸擴張)及/或惡性病(例如結腸或小腸癌)。例示性IBD腸外併發症包括關節炎、皮膚病症、眼炎、肝及腎病症及/或骨質流失。此等症狀之任何組合可使用本發明所提供之組合物及方法來預防、處理、治療及/或改善。
在某些實施例中，本發明中提供用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病，諸如GVHD或其症狀之包含本發明一或多種抗體之組合物。GVHD一般發生於同種異體移植或完全吻合無血緣骨髓移植(BMT)後。
在一些實施例中，GVHD為急性GVHD。急性GVHD之症狀可快速發生且可為輕度或重度。在某些情況下，急性GVHD在移植後約三個月內，諸如當移植後血球計數恢復時發生。在某些情況下，急性 GVHD影響皮膚、胃腸(GI)道及/或肝。舉例而言，在一些患者中，急性皮膚GVHD起始於例如患者手掌、腳底或肩部之皮疹。然而，皮疹可變得普遍且可癢且痛及/或可起泡且剝落。急性肝GVHD可影響肝之正常功能(諸如肝酶)且可隨後引起黃疸。若肝變大，則急性肝GVHD亦可引起患者腹部腫脹及疼痛。最後，急性消化道GVHD(或消化系統GVHD)症狀可包括腹瀉、黏液便或血便、腹部絞痛或腹部疼痛、消化不良、噁心及/或食慾喪失。急性GVHD之其他一般症狀可包括貧血、低熱及/或更易於感染。急性GVHD之此等症狀之任何組合可使用本發明所提供之組合物及方法來預防、處理、治療及/或改善。
在其他實施例中，GVHD為慢性GVHD。慢性GVHD可於移植後約三個月至約一年或更長時間內發生。慢性GVHD可為輕度或重度且一般包括類似於急性GVHD之彼等症狀之症狀。慢性GVHD可影響皮膚及消化系統，包括肝，但亦可涉及其他器官及免疫系統(例如使患者更易感染)及/或結締組織。慢性皮膚GVHD之症狀包括皮疹、皮膚乾燥、皮膚緊實、皮膚癢、皮膚顏色變暗、皮膚增厚及/或可影響頭髮(例如掉髮、變灰)或指甲(例如硬甲或指甲易碎)。慢性消化道GVHD可影響消化系統、口、食道、胃內層及/或腸內層且症狀可包括腹瀉、口乾或口痛、吞咽疼痛、胃吸收養分較低、鼓脹、胃絞痛。慢性肝GVHD可引起肝損害及疤痕(肝硬化症)。眼之慢性GVHD可影響腺體產生淚，引起眼乾、燒灼感及疼痛或難於耐受亮光。慢性肺GVHD可引起呼吸短促、喘鳴、持續性咳嗽及/或易於胸部感染。慢性GVHD影響連接肌肉與骨骼之腱(例如發炎)，使得難於伸直或彎曲手臂及腿。慢性GVHD之此等症狀之任何組合可使用本發明所提供之組合物及方法來預防、處理、治療及/或改善。
在特定實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含E1、E13、E63、F19及/或F23抗體。在一實施例 中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體。在另一特定實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含E1、E13、E63、F19及/或F23抗體之抗原結合片段。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的抗原結合片段。
在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH域或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH域中任一者之胺基酸序列之一或多種VH域。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：11、14、17、20或23之VH CDR1(亦即分別是於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR1)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR1中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR1。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：12、15、18、21或24之VH CDR2(亦即分別是於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR2)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR2中 任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR2。在較佳實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：13、16、19、22或25之VH CDR3(亦即分別示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR3)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR3中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR3。
在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL域或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL域中任一者之胺基酸序列之一或多種VL域。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：84、26、85、29、32、93、35、94、95或38之VL CDR1(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR1)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR1中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR1。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39之VL CDR2(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR2)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR2中任一者之胺基酸序列之一或多種 VL CDR2。在較佳實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40之VL CDR3(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR3)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR3中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR3。
在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH域或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH域中任一者之胺基酸序列之一或多種VH域；及/或具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL域或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL域中任一者之胺基酸序列之一或多種VL域。
在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：11、14、17、20或23之VH CDR1(亦即分別示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR1)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR1中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR1及具有示於SEQ ID NO：84、26、85、29、32、93、35、94、95或38之VL CDR1(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR1)或由具有ATCC 登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR1中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR1。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：11、14、17、20或23之VH CDR1(亦即分別示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR1)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR1中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR1及具有示於SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39之VL CDR2(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR2)中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR2。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：11、14、17、20或23之VH CDR1(亦即分別示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR1)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR1中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR1及具有示於SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40之VL CDR3(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR3)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR3中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR3。
在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：12、15、18、21或24之VH CDR2(亦即分別示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR2)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR2中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR2及具有示於SEQ ID NO：84、26、85、29、32、93、35、94、95或38之VL CDR1(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR1)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR1中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR1。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：12、15、18、21或24之VH CDR2(亦即分別示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR2)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR2中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR2及具有示於SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39之VL CDR2(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR2)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR2中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR2。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：12、15、18、21或24之VH CDR2(亦即分別示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR2)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產 生之抗體的VH CDR2中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR2及具有示於SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40之VL CDR3(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR3)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR3中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR3。
在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：13、16、19、22或25之VH CDR3(亦即分別示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR3)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR3中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR3及具有示於SEQ ID NO：84、26、85、29、32、93、35、94、95或38之VL CDR1(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR1)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR1中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR1。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：13、16、19、22或25之VH CDR3(亦即分別示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR3)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR3中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR3及具有示於SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39之VL CDR2(亦即分別 示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR2)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR2中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR2。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含一或多種抗體，該或該等抗體包含具有示於SEQ ID NO：13、16、19、22或25之VH CDR3(亦即分別示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之VH之VH CDR3)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VH CDR3中任一者之胺基酸序列之一或多種VH CDR3及具有示於SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40之VL CDR3(亦即分別示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10之VL之VL CDR3)或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的VL CDR3中任一者之胺基酸序列之一或多種VL CDR3。
在一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5中任一者之VH域之胺基酸序列的VH域及/或具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91或10中任一者之VL域之胺基酸序列的VL域。
在某些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含(a)具有示於SEQ ID NO：1之胺基酸序列之VH域及具有示於SEQ ID NO：82、6或83中任一者之胺基酸序列之VL域；(b)具有示於SEQ ID NO：2之胺基酸序列之VH域及具有示於SEQ ID NO：7之胺基酸序列之VL域；(c)具有示於SEQ ID NO：3之胺基酸序列之VH域 及具有示於SEQ ID NO：8之胺基酸序列之VL域；(d)具有示於SEQ ID NO：4之胺基酸序列之VH域及具有示於SEQ ID NO：90、9、91或92中任一者之胺基酸序列之VL域；或(e)具有示於SEQ ID NO：5之胺基酸序列之VH域及具有示於SEQ ID NO：10之胺基酸序列之VL域。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在一些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之抗體之VH域胺基酸序列的VH域及/或具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之抗體之VL域胺基酸序列的VL域。
在某些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含(a)具有ATCC登記號PTA-7729(E1)之抗體胺基酸序列之VH域及具有ATCC登記號PTA-7729(E1)之抗體胺基酸序列之VL域；(b)具有ATCC登記號PTA-7842(E13)之抗體胺基酸序列之VH域及具有ATCC登記號PTA-7842(E13)之抗體胺基酸序列之VL域；(c)具有ATCC登記號PTA-7818(E63)之抗體胺基酸序列之VH域及具有ATCC登記號PTA-7818(E63)之抗體胺基酸序列之VL域；(d)具有ATCC登記號PTA-7819(F19)之抗體胺基酸序列之VH域及具有ATCC登記號PTA-7819(F19)之抗體胺基酸序列之VL域；或(e)具有ATCC登記號PTA-7728(F23)之抗體胺基酸序列之VH域及具有ATCC登記號PTA-7728(F23)之抗體胺基酸序列之VL域。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在一些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之任一VH區中VH CDR1胺基酸序列的VH CDR1。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之任一VH區中VH CDR2胺基酸序列的VH CDR2。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之任一VH區中VH CDR3胺基酸序列的VH CDR3。在某些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含如示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5之任一VH區中所述獨立選自VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3之VH CDR1及/或VH CDR2及/或VH CDR3。
本發明亦提供用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物，該組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含具有E1、E13、E63、F19及/或F23或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體之任一VL CDR(亦即VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3)胺基酸序列之一或多種VL CDR(亦即VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3)，或其任何組合。
在某些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含(1)具有下列各物之VH域：(a)分別具有示於SEQ ID NO：11、12及/或13之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(b)分別具有示於SEQ ID NO：14、15及/或16之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(c)分別具有示於SEQ ID NO：17、18及/或19之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(d)分別具有示於SEQ ID NO：20、21及/或22之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；或(e)分別具有示於SEQ ID NO：23、24及/或24之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；及/或(2)具有下列各物之VL域：(a)具有示於SEQ ID NO：84、26或85中任一者之胺基酸序列之VL CDR1；具有示於SEQ ID NO：86、27或87中任一者之胺基酸序列之VL CDR2；及/或具有示於SEQ ID NO：88、28或89中任一者之胺基酸序列之VL CDR3；(b)分別具有示於SEQ ID NO：29、30及/或31之胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；(c)分別具有示於SEQ ID NO：32、33及/或34之胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；(d)具有示於SEQ ID NO：93、35、94或95中任一者之胺基酸序列之VL CDR1；具有示於SEQ ID NO：96、36、97或98中任一者之胺基酸序列之VL CDR2；及/或具有示於SEQ ID NO：96、36、97或98中任一者之胺基酸序列之VL CDR3；或(e)分別具有示於SEQ ID NO：38、39及/或40之胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在一些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含(1)具有下列各物之VH域：(a)具有ATCC登記號PTA-7729(E1)之抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(b)具有ATCC登記號PTA-7842(E13)之抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3胺基酸序列之 VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(c)具有ATCC登記號PTA-7818(E63)之抗體VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(d)具有ATCC登記號PTA-7819(F19)之抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；或(e)具有ATCC登記號PTA-7728(F23)之抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；及/或(2)具有下列各物之VL域：(a)具有ATCC登記號PTA-7729(E1)之抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；(b)具有ATCC登記號PTA-7842(E13)之抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；(c)具有ATCC登記號PTA-7818(E63)之抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；(d)具有ATCC登記號PTA-7819(F19)之抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3；或(e)具有ATCC登記號PTA-7728(F23)之抗體VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在某些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含(1)具有分別示於SEQ ID NO：11、12及/或13之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的VH域及(b)具有下列各物之VL域：示於SEQ ID NO：84、26或85中任一者之胺基酸序列之VL CDR1；具有示於SEQ ID NO：86、27或87中任一者之胺基酸序列之VL CDR2；及/或具有示於SEQ ID NO：88、28、89中任一者之胺基酸序列之VL CDR3；(2)(a)具有分別具有示於SEQ ID NO：14、15及/或16之胺 基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的VH域；及(b)分別具有示於SEQ ID NO：29、30及/或31之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3；(3)(a)具有分別具有示於SEQ ID NO：17、18及/或19之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的VH域；及(b)具有分別具有示於SEQ ID NO：32、33及/或34之胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的VL域；(4)(a)具有分別具有示於SEQ ID NO：20、21及/或22之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的VH域；及(b)具有下列各物之VL域：具有示於SEQ ID NO：93、35、94或95中任一者之胺基酸序列之VL CDR1；具有示於SEQ ID NO：96、36、97或98中任一者之胺基酸序列之VL CDR2；及/或具有示於SEQ ID NO：96、36、97或98中任一者之胺基酸序列之VL CDR3；或(5)(a)具有分別具有示於SEQ ID NO：23、24及/或24之胺基酸序列之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的VH域；及(b)具有分別具有示於SEQ ID NO：38、39及/或40之胺基酸序列之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的VL域。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在一些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含(1)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3具有ATCC登記號PTA-7729(E1)抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3具有ATCC登記號PTA-7729(E1)抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列；(2)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3具有ATCC登記號PTA-7842(E13)抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3具有ATCC登記號PTA-7842(E13)抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列；(3)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3具有ATCC登記號PTA-7818(E63)抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3具有ATCC登記號PTA-7818(E63)抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列；(4)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3具有ATCC登記號PTA-7819(F19)抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3具有ATCC登記號PTA-7819(F19)抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列；或(5)(a)具有VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3之VH域，該VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3具有ATCC登記號PTA-7728(F23)抗體之VH CDR1、VH CDR2及/或VH CDR3的胺基酸序列；及(b)具有VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之VL域，該VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3具有ATCC登記號PTA-7728(F23)抗體之VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
在一些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、 PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23中)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR1胺基酸序列之VL CDR1。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23中)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR2胺基酸序列之VL CDR2。在另一實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23中)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR3胺基酸序列之VL CDR3。在某些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含如示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中所述獨立選自VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3之VL CDR1及/或VL CDR2及/或VL CDR3。
在一些實施例中，用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含(1)具有一或多種下列各物之VH域或VH鏈：(a)具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、 E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VH區中VH CDR1胺基酸序列的VH CDR1；(b)具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VH區中VH CDR2胺基酸序列之VH CDR2；或(c)具有示於SEQ ID NO：1、2、3、4或5或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VH區中VH CDR3胺基酸序列之VH CDR3；及/或(2)具有一或多種下列各物之VL域或鏈：(a)具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR1胺基酸序列之VL CDR1；(b)具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR2胺基酸序列之VL CDR2；及/或(c)具有示於SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10或由具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(分別為E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤產生之抗體的任一VL區中VL CDR3胺基酸序列之VL CDR3。
本發明亦提供用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物，該組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含表I中列出之一或多種VH CDR及一或多種VL CDR。詳言之，本發明提供用於預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之組合物，該組合物包含免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之抗體，其中該抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、 20或23)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH1CDR1、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)及VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)及VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或 39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)及VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；或列於表I中之VH CDR(SEQ ID NO：11-25)與VL CDR(SEQ ID NO：26-40)之其任何組合。ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之對應VH CDR及VL CDR亦可用於以上所列之任何組合。較佳地，抗體為完全人類抗體，諸如完全人類單株抗體及/或hLIGHT拮抗抗體。
如本發明其他處更詳細討論，本發明之組合物可單獨或與其他化合物或組合物組合使用。此外，抗體可進一步重組融合至異源多肽之N端或C端或化學共軛(包括共價及非共價共軛)至多肽或其他組合物。舉例而言，本發明抗體可重組融合或共軛至適於用作偵測檢定之 標籤之分子及效應分子(諸如異源多肽、藥物、放射性核苷酸或毒素)。參見例如PCT公開案WO 92/08495；WO 91/14438；WO 89/12624；美國專利第5,314,995號；及EP396,387。
本發明在一些實施例中提供減低或抑制受檢者(例如人類受檢者)體內hLIGHT與HVEM、LTβR及/或DcR3結合之方法，其包含向該受檢者投與有效量之免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現或可溶hLIGHTT)之抗體。在一實施例中，hLIGHT為hLIGHT之SNP突變體，諸如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。在一些實施例中，亦減低或抑制受檢者體內之hLIGHT生物活性，諸如分泌CCL20、IL80及/或RANTES。
本發明在某些實施例中提供減低或抑制受檢者(例如人類受檢者)體內hLIGHT生物活性(諸如分泌CCL20、IL8及/或RANTES)之方法，其包含向該受檢者投與有效量之免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現或可溶hLIGHT)之抗體，其中由該抗體減低或抑制hLIGHT生物活性。在一些實施例中，hLIGHT為hLIGHT之SNP突變體，諸如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。
本發明在其他實施例中提供減低或抑制具有細胞表面表現hLIGHT之細胞內hLIGHT與HVEM、LTβR及/或DcR3之結合的方法，其包含使該細胞與有效量之免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現或可溶hLIGHT)，諸如hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗原決定基之抗體接觸。在某些實施例中，hLIGHT為hLIGHT之SNP突變體，諸如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。在一些實施例中，亦減低或抑制細胞中之hLIGHT生物活性，諸如分泌CCL20、IL8及/或RANTES。
本發明在某些實施例中提供減低或抑制具有細胞表面表現hLIGHT受體(諸如HVEM、LTβR及/或Dc3R)之細胞內之hLIGHT生物 活性(諸如分泌CCL20、IL8及/或RANTES)的方法，其包含使該細胞與有效量之免疫專一性結合至hLIGHT多肽(例如細胞表面表現或可溶hLIGHT)之抗體接觸，其中由抗體減低或抑制hLIGHT生物活性。在一些實施例中，hLIGHT為hLIGHT之SNP突變體，諸如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。
可在活體外及活體內診斷及治療方法中使用本發明抗體來(例如)純化、偵測或標靶hLIGHT抗原。舉例而言，經修飾抗體於免疫檢定中具有定性及定量量測生物檢體中hLIGHT含量之用途。參見例如Harlow等人，Antibodies：A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版1988)(其全文以引用的方式併入本發明中)。
本發明亦提供藉由向受檢者投與有效量之抗體或包含本發明抗體之醫藥組合物來預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之方法。在一態樣中，抗體為大體上純化的(亦即大體上不含限制其效應或產生不合乎需要的副作用之物質)。在較佳實施例中，抗體為完全人類單株抗體，諸如完全人類單株拮抗抗體。投與療法之受檢者較佳為哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如牛、豬、馬、貓、犬、大鼠等)或靈長類動物(例如諸如非洲綠猴之猴子及人類)。在較佳實施例中，受檢者為人類。在另一較佳實施例中，受檢者為人類嬰兒或早產人類嬰兒。在另一實施例中，受檢者為患有hLIGHT介導之疾病之人類。
已知各種傳遞系統且可將其用以投與預防或治療劑(例如本發明之抗體)，包括(但不限於)囊封於脂質體、微粒、微囊中、能夠表現抗體之重組細胞、受體介導之內飲作用(參見例如Wu及Wu,J.Biol.Chem.262：4429-4432(1987))；核酸作為逆轉錄病毒或其他載體之部分之構造等。投與預防或治療劑(例如本發明抗體)或醫藥組合物之方法包括(但不限於)非經腸投與(例如皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內及 皮下)、硬膜外投與及黏膜投與(例如鼻內或經口途徑)。在特定實施例中，預防或治療劑(例如本發明抗體)或醫藥組合物係鼻內、肌肉內、靜脈內或皮下投與。預防或治療劑或組合物可藉由任何便利途徑投與，例如藉由輸液或快速注射、經由上皮或黏膜與皮膚內層(例如口腔黏膜、鼻內黏膜、直腸及腸黏膜等)吸收，且可與其他生物活性劑一起投與。投與可為全身或局部的。此外，亦可採用肺部投與，例如藉由使用吸入器或噴霧器及與霧化劑調配。參見例如美國專利第6,019,968號、第5,985,320號、第5,985,309號、第5,934,272號、第5,874,064號、第5,855,913號、第5,290,540號及第4,880,078號；及PCT公開案WO 92/19244、WO 97/32572、WO 97/44013、WO 98/31346及WO 99/66903，其各自之全文係以引用的方式併入本發明中。
在特定實施例中，可能需要對需要治療之區域局部投與預防或治療劑或本發明之醫藥組合物。其可藉由(例如且不限於)局部輸液、藉由局部投與(例如藉由鼻內噴霧)、藉由注射或藉由植入物(該植入物為多孔、非多孔或凝膠狀材料，包括諸如矽橡膠膜之膜或纖維)來完成。較佳地，當投與本發明抗體時，必須小心使用不吸收抗體之材料。
在另一實施例中，預防或治療劑或本發明之組合物可以微脂粒，尤其是脂質體傳遞(參見Langer,1990,Science 249：1527-1533；Treat等人，Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer,Lopez-Berestein and Fidler(編)，Liss,New York，第353-365頁(1989)；Lopez-Berestein，同上，第317-327頁；一般參見同上)。
在另一實施例中，預防或治療劑或本發明組合物可以控制釋放或持續釋放系統傳遞。在一實施例中，可使用泵來達成控制釋放或持續釋放(參見Langer同上；Sefton,1987,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：20；Buchwald等人，1980,Surgery 88：507；Saudek等人，1989,N. Engl.J.Med.321：574)。在另一實施例中，可使用聚合材料來達成預防或治療劑(例如本發明抗體)或本發明組合物之控制或持續釋放(參見例如Medical Applications of Controlled Release,Langer and Wise(編)，CRC Pres.,Boca Raton,Florida(1974)；Controlled Drug Bioavailability,Drug Product Design and Performance,Smolen and Ball(編)，Wiley,New York(1984)；Ranger及Peppas,1983,J.,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23：61；亦參見Levy等人，1985,Science 228：190；During等人，1989,Ann.Neurol.25：351；Howard等人，1989,J.Neurosurg.7 1：105)；美國專利第5,679,377號；美國專利第5,916,597號；美國專利第5,912,015號；美國專利第5,989,463號；美國專利第5,128,326號；PCT公開案WO 99/15154；及PCT公開案WO 99/20253。用於持續釋放調配物之聚合物實例包括(但不限於)聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯基吡咯啶酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯醯胺、聚(乙二醇)、聚丙交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)及聚原酸酯。在較佳實施例中，用於持續釋放調配物之聚合物為惰性的、不含可滲出雜質、儲存穩定、無菌及生物可降解的。在另一實施例中，控制釋放或持續釋放系統可接近治療靶(亦即鼻孔或肺)置放，因此僅需要全身劑量之部分(參見例如Goodson,Medical Applications of Controlled Release，同上文，第2卷，第115-138頁(1984))。控制釋放系統係於Langer之論述(1990,Science 249：1527-1533)中論及。可使用熟習此項技術者已知之任何技術來產生包含一或多種本發明抗體之持續釋放調配物。參見例如美國專利第4,526,938號；PCT公開案WO 91/05548；PCT公開案WO 96/20698；Ning等人，1996,"Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy & Oncology 39：179-189；Song等人，1995,"Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions,"PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50：372-397；Cleek等人，1997,"Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application,"Pro.Int'l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24：853-854及Lam等人，1997,"Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery,"Proc.Int'l.Symp.Control Rel.Bioact.Mater.24：759-760，其各自之全文係以引用的方式併入本發明中。
在特定實施例中，當本發明組合物為編碼預防或治療劑(例如本發明抗體)之核酸時，可藉由將其構建為適當核酸表現載體之部分且(例如)藉由使用逆轉錄病毒載體(參見美國專利第4,980,286)，或藉由直接注射或藉由使用微粒轟擊(例如基因槍；Biolistic,Dupont)或以脂質或細胞表面受體或轉染劑塗覆或藉由將其與已知進入核中之類同源盒肽聯合投與(參見例如Joliot等人，1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：1864-1868)等方式投與該部分而使其變為胞內部分而活體內投與該核酸來促進其編碼之預防或治療劑之表現。或者，可將核酸引入胞內且併入宿主細胞DNA內以供藉由同源重組表現。
在特定實施例中，本發明組合物包含一種、兩種或兩種以上本發明抗體。在另一實施例中，本發明組合物包含一種、兩種或兩種以上本發明抗體及除本發明抗體以外之預防或治療劑。較佳地，已知該等藥劑適用於或已用於或目前正用於預防、處理、治療及/或改善hLIHGT介導之疾病。除預防或治療劑以外，本發明組合物亦可包含載劑。
本發明組合物包括適用於製造醫藥組合物(例如適用於向受檢者或患者投與之組合物)之塊體藥物組合物，其可用於製備單位劑型。 在較佳實施例中，本發明組合物為醫藥組合物。該等組合物包含預防或治療有效量之一或多種預防或治療劑(例如本發明抗體或其他預防或治療劑)及醫藥學上可接受之載劑。較佳地，醫藥組合物可經調配以使得適於向受檢者投與之途徑。
在特定實施例中，術語"載劑"係指與治療劑一起投與之稀釋劑、佐劑(例如Freund氏佐劑(完全及不完全))、賦形劑或媒劑。該等醫藥載劑可為無菌液體，諸如水及油，包括彼等石油、動物、植物或合成來源之油，諸如花生油、豆油、礦物油、芝麻油及其類似物。當醫藥組合物係靜脈投與時，水為較佳載劑。生理食鹽水溶液及含水右旋糖及甘油溶液亦可用作液體載劑，特別是用於可注射溶液。合適醫藥賦形劑包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、水稻、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇及其類似物。若需要，則組合物亦可含有微量濕潤劑或乳化劑或pH值緩衝劑。此等組合物可呈溶液、懸浮液、乳液、錠劑、藥丸、膠囊、散劑、持續釋放調配物及其類似物之形式。口服調配物可包括標準載劑，諸如醫藥級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。合適醫藥載劑之實例係於Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA中描述。該等組合物將含有預防或治療有效量之抗體，較佳為純化形式之抗體，以及合適量之載劑以向患者提供正確投與之形式。調配物應與投與模式相適宜。
在較佳實施例中，根據常規程序將組合物調配為適於向人類靜脈內投與之醫藥組合物。通常，靜脈內投與之組合物為無菌等張含水緩衝劑中之溶液。若需要，則組合物亦可包括增溶劑及諸如利多卡因(lignocamne)之局部麻醉劑以緩解注射部位之疼痛。然而，該等組合物可藉由除靜脈內以外之途徑投與。
一般而言，本發明組合物之成分係單獨或以單位劑型，例如以密封容器(諸如指示活性劑的量之安瓶或sachette)中之乾燥凍乾粉末或不含水濃縮物形式混合在一起提供。當組合物係藉由輸液投與時，可將其以含有無菌醫藥級水或生理食鹽水之輸液瓶分配。當組合物係藉由注射投與時，可提供注射用無菌水或生理食鹽水安瓶使得成分在投與前混合。
本發明亦提供本發明之抗體係包裝於密封容器中，諸如指示抗體量之安瓶或藥囊。在一實施例中，提供呈密封容器中乾燥無菌凍乾粉末或不含水濃縮物形式之抗體且可將其(例如)以水或生理食鹽水復水至適當濃度以投與受檢者。較佳地，以至少0.1mg、至少0.5mg、至少1mg、至少2mg或至少3mg，且更佳地至少5mg、至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少30mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少60mg、至少75mg、至少80mg、至少85mg、至少90mg、至少95mg或至少100mg之單位劑量提供呈密封容器中乾燥無菌凍乾粉末形式之抗體。可將凍乾抗體在2與8℃之間儲存在其原容器中，且可在復水後12小時內，較佳6小時內，5小時內、3小時內或1小時內投與該抗體。在另一實施例中，於指示抗體量及濃度之密封容器中提供液體形式之抗體。較佳地，以至少0.1mg/ml、至少0.5mg/ml或至少1mg/ml，且更佳至少5mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少30mg/ml、至少40mg/ml、至少50mg/ml、至少60mg/ml、至少70mg/ml、至少80mg/ml、至少90mg/ml或至少100mg/ml於密封容器中提供液體形式之抗體。
可將本發明之組合物調配為中性或鹽形式。醫藥學上可接受之鹽包括彼等與陰離子形成之鹽，諸如彼等衍生自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等之鹽；及彼等與陽離子形成之鹽，諸如彼等衍生自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙 胺、2-乙胺基乙醇、組胺酸、普魯卡因(procaine)等之鹽。
有效預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病之預防或治療劑(例如本發明抗體)或本發明之組合物量可藉由標準臨床技術來確定。
因此，可向人類投與產生約0.1μg/ml至約450μg/ml，且在一些實施例中至少0.1μg/ml、至少0.2μg/ml、至少0.4μg/ml、至少0.5μg/ml、至少0.6μg/ml、至少0.8μg/ml、至少1μg/ml、至少1.5μg/ml，且較佳至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少30μg/ml、至少35μg/ml、至少40μg/ml、至少50μg/ml、至少75μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少200μg/ml、至少250μg/ml、至少300μg/ml、至少350μg/ml、至少400μg/ml或至少450μg/ml血清力價之劑量的抗體或組合物來預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病。此外，可視情況採用活體外檢定來幫助識別最佳劑量範圍。待用於調配物之精確劑量亦將視投與途徑及hLIGHT介導之疾病之嚴重性而定且應根據行醫者之判斷及各患者之情況來決定。
有效劑量可自由活體外或動物模型測試系統產生之劑量反應曲線推斷。
對於本發明抗體而言，投與患者之劑量通常為每公斤患者體重0.1mg至100mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤患者體重約1mg至約75mg。較佳地，投與患者之劑量為每公斤患者體重1mg與20mg之間，更佳為每公斤患者體重1mg至5mg。一般而言，由於對外來多肽之免疫反應，故人類抗體於人體內具有比來自其他物種之抗體長之半衰期。因此，較低人類抗體劑量及較低頻率投藥通常係可能的。此外，本發明抗體之投與劑量及頻率可藉由以修飾作用(例如脂化作用)增強抗體吸收及組織穿透而降低。
在一實施例中，投與大約100mg/kg或更少、大約75mg/kg或更少、大約50mg/kg或更少、大約25mg/kg或更少、大約10mg/kg或更少、大約5mg/kg或更少、大約1mg/kg或更少、大約0.5mg/kg或更少或大約0.1mg/kg或更少之本發明抗體5次、4次、3次、2次或較佳1次來處理hLIGHT介導之疾病。在一些實施例中，投與本發明抗體約1-12次，其中該等劑量必要時可經醫師確定(例如)以每週、每兩週、每月、每兩月、每三月等投與。在一些實施例中，較低劑量(例如1-15mg/kg)可以較高頻率投與(例如3-6次)。在其他實施例中，較高劑量(例如25-100mg/kg)可以較低頻率投與(例如1-3次)。然而，將為熟習此項技術者顯而易見，其他給藥量及時程係容易測定的且在本發明範疇內。
在特定實施例中，以持續釋放調配物向受檢者(較佳人類)投與大約100mg/kg、大約75mg/kg或更少、大約50mg/kg或更少、大約25mg/kg或更少、大約10mg/kg或更少、大約5mg/kg或更少、大約1mg/kg或更少、大約0.5mg/kg或更少、大約0.1mg/kg或更少之本發明抗體來預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病。在另一特定實施例中，不以持續釋放調配物向受檢者(較佳人類)投與大約100mg/kg、大約75mg/kg或更少、大約50mg/kg或更少、大約25mg/kg或更少、大約10mg/kg或更少、大約5mg/kg或更少、大約1mg/kg或更少、大約0.5mg/kg或更少或大約0.1mg/kg或更少本發明抗體大藥丸以預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病且一定時間段後，以持續釋放向該受檢者(例如鼻內或肌肉內)投與大約100mg/kg、大約75mg/kg或更少、大約50mg/kg或更少、大約25mg/kg或更少、大約10mg/kg或更少、大約5mg/kg或更少、大約1mg/kg或更少、大約0.5mg/kg或更少或大約5mg/kg或更少之本發明抗體兩次、三次或四次(較佳一次)。根據此實施例，一定時間段可為1至5天、一週、兩週或 一個月。
在一些實施例中，在一年的時程中，以兩週(例如約14天)之時間間隔向患者投與兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次、十五次、十六次、十七次、十八次、十九次、二十次、二十一次、二十二次、二十三次、二十四次、二十五次或二十六次單一劑量之本發明抗體以預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病，其中該劑量係選自由下列劑量組成之群：約0.1mg/kg、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg、約15mg/kg、約20mg/kg、約25mg/kg、約30mg/kg、約35mg/kg、約40mg/kg、約45mg/kg、約50mg/kg、約55mg/kg、約60mg/kg、約65mg/kg、約70mg/kg、約75mg/kg、約80mg/kg、約85mg/kg、約90mg/kg、約95mg/kg、約100mg/kg，或其組合(亦即每月投與之各劑量可相同或可不相同)。
在另一實施例中，在一年的時程中，以約每月(例如約30天)之時間間隔向患者投與兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次單一劑量之本發明抗體以預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病，其中該劑量係選自由下列劑量組成之群：約0.1mg/kg、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg、約15mg/kg、約20mg/kg、約25mg/kg、約30mg/kg、約35mg/kg、約40mg/kg、約45mg/kg、約50mg/kg、約55mg/kg、約60mg/kg、約65mg/kg、約70mg/kg、約75mg/kg、約80mg/kg、約85mg/kg、約90mg/kg、約95mg/kg、約100mg/kg，或其組合(亦即每月投與之各劑量可相同或可不相同)。
在一實施例中，在一年的時程中，以約每兩月(例如約60天)之時間間隔向患者投與兩次、三次、四次、五次或六次單一劑量之本發明抗體以預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病，其中該劑量 係選自由下列劑量組成之群：約0.1mg/kg、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg、約15mg/kg、約20mg/kg、約25mg/kg、約30mg/kg、約35mg/kg、約40mg/kg、約45mg/kg、約50mg/kg、約55mg/kg、約60mg/kg、約65mg/kg、約70mg/kg、約75mg/kg、約80mg/kg、約85mg/kg、約90mg/kg、約95mg/kg、約100mg/kg，或其組合(亦即每兩月投與之各劑量可相同或可不相同)。
在一些實施例中，在一年的時程中，以約每三月(例如約120天)之時間間隔向患者投與兩次、三次或四次單一劑量之本發明抗體以預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導之疾病，其中該劑量係選自由下列劑量組成之群：約0.1mg/kg、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg、約15mg/kg、約20mg/kg、約25mg/kg、約30mg/kg、約35mg/kg、約40mg/kg、約45mg/kg、約50mg/kg、約55mg/kg、約60mg/kg、約65mg/kg、約70mg/kg、約75mg/kg、約80mg/kg、約85mg/kg、約90mg/kg、約95mg/kg、約100mg/kg，或其組合(亦即每三月之各劑量可相同或可不相同)。
在某些實施例中，向患者投與本發明抗體之投與途徑為鼻內、肌肉內、靜脈內或其組合，但本發明所述之其他途徑亦為可接受的。各劑量可以或可不以相同投與途徑投與。在一些實施例中，本發明抗體可經由多種投與途徑與其他劑量之相同或不同之本發明抗體同時或連續投與。
在某些實施例中，向受檢者預防性或治療性地投與本發明抗體。可將本發明抗體預防性或治療性地投與受檢者以預防、減輕或改善hLIHGT介導之疾病或其症狀。
基因療法
在特定實施例中，投與包含編碼本發明抗體或其功能衍生物之序列之核酸以藉由基因療法預防、處理、治療及/或改善hLIGHT介導 之疾病。基因療法係指藉由向受檢者投與表現或可表現核酸來進行之療法。在本發明之一實施例中，核酸產生其所編碼之抗體，且該抗體介導預防或治療效應。
根據本發明可使用可用於此項技術中之任何基因療法方法。例示性方法係於以下描述。
對於基因療法方法之一般論述，參見Goldspiel等人，1993,Clinical Pharmacy 12：488-505；Wu及Wu,1991,Biotherapy 3：87-95；Tolstoshev,1993,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32：573-596；Mulligan,1993,Science 260：926-932；及Morgan及Anderson,1993,Ann.Rev.Biochem.62：191-217；May,1993,TIBTECH 11(5)：155-215。可使用之通常於重組DNA技術中已知之方法係描述於Ausubel等人(編)，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,NY(1993)；及Kriegler,Gene Transfer and Expression,A Laboratory Manual,Stockton Press,NY(1990)中。
在較佳實施例中，本發明組合物包含編碼本發明抗體之核酸，該等核酸為於合適宿主中表現抗體或嵌合蛋白或其重鏈或輕鏈之表現載體之部分。特定言之，該等核酸具有可操作性地連接至抗體編碼區之啟動子，較佳為異源啟動子，該啟動子為誘發性的或組成性的且視情況為組織專一性的。在另一特定實施例中，使用抗體編碼序列及任何其他所需序列被促進於基因體所需位點處之同源重組之區域側接，從而提供編碼核酸之抗體染色體內表現的核酸分子(Koller及Smithies,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：8932-8935；Zijlstra等人，1989,Nature 342：435-438)。在一些實施例中，經表現抗體分子為單鏈抗體；或者，核酸序列包括編碼抗體重鏈及輕鏈或其片段之序列。
將核酸傳遞至受檢者體內可為直接的，在該情況下使受檢者直接暴露於核酸或攜有核酸之載劑；或為間接的，在該情況，首先將細 胞以核酸進行活體外轉型，接著移植至受檢者體內。將此等兩種途徑分別稱為活體內或離體基因療法。
在特定實施例中，核酸序列係於活體內直接投與，該等序列在活體內經表現產生經編碼產物。其可藉由於此項技術中已知之許多方法中之任一者完成，例如藉由將其構建為適當核酸表現載體之部分及投與該載體使得該等序列而變為胞內的(例如藉由使用偵測或衰減逆轉錄病毒或其他病毒載體而感染(參見美國專利第4,980,286號)，或藉由直接注射裸DNA，或藉由使用微粒轟擊(例如基因槍；Biolistic,Dupont)，或以脂質或細胞表面受體或轉染劑塗覆，囊封於脂質體、微粒或微囊中，或藉由將其聯合已知進入核中之肽投與，藉由將其聯合經受受體介導內飲作用之配位體投與(參見例如Wu及Wu,1987,J.Biol.Chem.262：4429-4432)(其可用以標靶專一表現受體之細胞類型)等。在另一實施例中，可形成核酸-配位體複合物，其中該配位體包含融合病毒肽以分裂內涵體，使得核酸避免溶菌體降解。在另一實施例中，可藉由標靶專一性受體而於活體內標靶核酸以供細胞專一性吸收及表現。(參見例如PCT公開案WO 92/06180；WO 92/22635；WO 92/20316；WO 93/14188、WO 93/20221)。或者，可藉由同源重組將核酸引入胞內或併入宿主細胞DNA中以供表現(Koller及Smithies,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：8932-8935；及Zijlstra等人，1989,Nature 342：435-438)。
在特定實施例中，使用含有編碼本發明抗體之核酸序列之病毒載體。舉例而言，可使用逆轉錄病毒載體(參見Miller等人，1993,Meth.Enzymol.217：581-599)。此等逆轉錄病毒載體含有將病毒基因體正確封裝且整合至宿主細胞DNA中所需之成分。可將待用於基因療法中之編碼抗體之核酸序列選殖入一或多個載體中，其便利於將基因傳遞至受檢者體內。關於逆轉錄病毒載體之更詳細描述可見於Boesen 等人，1994,Biotherapy 6：291-302，其描述了使用逆轉錄病毒載體將mdr 1基因傳遞至造血幹細胞中以使幹細胞對化學療法更具抗性。說明於基因療法中使用逆轉錄病毒載體之其他參考文獻為：Clowes等人，1994,J.Clin.Invest.93：644-651；Klein等人，1994,Blood 83：1467-1473；Salmons及Gunzberg,1993,Human Gene Therapy 4：129-141；及Grossman及Wilson,1993,Curr.Opin.in Genetics and Devel.3：110-114。
腺病毒為可用於基因療法之其他病毒載體。腺病毒為用於將基因傳遞至呼吸道上皮之尤其具有吸引力的媒劑。腺病毒天然感染呼吸道上皮，於其中引起輕度疾病。基於腺病毒之傳遞系統之其他標靶為肝、中樞神經系統、內皮細胞及肌肉。腺病毒具有能夠感染不分裂細胞之優點。Kozarsky及Wilson,1993,Current Opinion in Genetics and Development 3：499-503揭示以腺病毒為主之基因療法之論述。Bout等人，1994,Human Gene Therapy 5：3-10表明腺病毒載體將基因轉移至恆河猴呼吸道上皮之用途。於基因療法中使用腺病毒之其他實例可見於Rosenfeld等人，1991,Science 252：431-434；Rosenfeld等人，1992,Cell 68：143-155；Mastrangeli等人，1993,J.Clin.Invest.91：225-234；PCT公開案WO 94/12649；及Wang等人，1995,Gene Therapy 2：775-783。在較佳實施例中，使用腺病毒載體。
亦提出將腺相關病毒(AAV)用於基因療法(Walsh等人，1993,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204：289-300；及美國專利第5,436,146號)。
基因療法之另一途徑涉及藉由諸如電穿孔、脂質轉染、磷酸鈣介導之轉染或病毒感染之方法將基因轉移至組織培養物中之細胞中。通常，轉移方法包括將可選擇之標記轉移至細胞中。接著將該等細胞置於選擇下直至分離已吸收且表現轉移基因之彼等細胞。接著將彼等細胞傳遞至受檢者體內。
在此實施例中，在活體內投與所得重組細胞之前，將核酸引入細胞中。該引入可藉由於此項技術中已知之任何方法進行，包括(但不限於)轉染、電穿孔、顯微注射、以含有核酸序列之病毒或噬菌體載體感染、細胞融合、染色體介導基因轉移、微細胞介導基因轉移、原生質球狀體融合等。於此項技術中已知許多用於將外來基因引入細胞中之技術(參見例如Loeffler及Behr,1993,Meth.Enzymol.217：599-618；Cohen等人，1993,Meth.Enzymol.217：618-644；Clin.Pharma.Ther.29：69-92(1985))且其可根據本發明使用，其限制條件為不破壞接受細胞必需之發育及生理功能。該技術應將核酸穩定轉移至細胞中，使得核酸可藉由細胞表現且較佳地可藉由其細胞子代遺傳及表現。
可藉由於此項技術中已知之各種方法將所得重組細胞傳遞至受檢者。較佳地靜脈內投與重組血細胞(例如造血幹細胞或祖細胞)。預想使用之細胞量視所需效應、患者狀態等而定且可由熟習此項技術者確定。
為基因療法之目的起見其中可引入核酸之細胞涵蓋任何所需、可用細胞類型且包括(但不限於)上皮細胞、內皮細胞、角質細胞、纖維母細胞、肌肉細胞、肝細胞；血細胞，諸如T淋巴細胞、B淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、嗜中性細胞、嗜伊紅細胞、巨核細胞、粒細胞；各種幹細胞或祖細胞，特別是造血幹細胞或祖細胞，例如自骨髓、臍帶血、外周血、胎兒肝等中獲得之細胞。
在較佳實施例中，用於基因療法之細胞為受檢者自體性細胞。
在將重組細胞用於基因療法之實施例中，將編碼本發明抗體之核酸序列引入細胞中使得其可藉由細胞或其子代表現，且接著活體內投與該等重組細胞以獲得治療效應。在特定實施例中，使用幹細胞或祖細胞。可能根據本發明之此實施例使用可活體外分離或維持之任何 幹細胞及/或祖細胞(參見例如PCT公開案WO 94/08598；Stemple and Anderson,1992,Cell 7 1：973-985；Rheinwald,1980,Meth.Cell Bio.21A：229；及Pittelkow及Scott,1986,Mayo Clinic Proc.61：771)。
在特定實施例中，為基因療法之目的起見待引入之核酸包含可操作性連接至編碼區之誘發性啟動子，使得核酸表現可藉由控制適當轉錄誘發子之存在或不存在而受控制。
抗體之診斷用途
可將免疫專一性結合至hLIGHT抗原之本發明經標記抗體及其衍生物及類似物用於診斷目的以偵測、診斷或監控hLIGHT介導之疾病。本發明提供用於偵測hLIGHT介導之疾病之方法，其包含：(a)使用免疫專一性結合至hLIGHT抗原之一或多種本發明抗體檢定受檢者細胞或組織檢體中之hLIGHT抗原表現；及(b)比較hLIGHT抗原含量與對照含量，例如正常組織檢體(例如來自不患有hLIGHT介導之疾病之患者，或來自疾病發作前之相同患者)中之含量，藉此與hLIGHT抗原之對照含量相比檢定出hLIGHT抗原含量增加預示hLIGHT介導之疾病。
本發明提供用於診斷hLIGHT介導之疾病之診斷檢定，其包含：(a)使用免疫專一性結合至hLIGHT抗原之一或多種本發明抗體檢定個體細胞或組織檢體中之hLIGHT抗原含量；及(b)比較hLIGHT抗原含量與對照含量，例如正常組織檢體中之含量，藉此與hLIGHT抗原之對照含量相比檢定出hLIGHT抗原含量之增加預示hLIGHT介導的疾病。更確定之hLIGHT介導之疾病診斷可使得健康專家更早採用預防措施或積極治療，藉此預防hLIGHT介導之疾病之進展或進一步之進程。
本發明抗體可用以使用本發明所述或如熟習此項技術者已知之經典免疫組織法來檢定生物檢體中之hLIGHT抗原含量(例如參見Jalkanen等人，1985,J.Cell.Biol.101：976-985；及Jalkanen等人， 1987,J.Cell.Biol.105：3087-3096)。適用於偵測蛋白基因表現之其他以抗體為主之方法包括免疫檢定，諸如酶聯結免疫吸附檢定(ELISA)及放射性免疫檢定(RIA)。合適抗體檢定標記於此項技術中已知且包括酶標記，諸如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，諸如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(121In)及鎝(99Tc)；發光標記，諸如魯米諾；及螢光標記，諸如螢光素及若丹明；及生物素。
本發明之一態樣為偵測及診斷人類之hLIGHT介導之疾病。在一實施例中，診斷包含：a)向受檢者投與(例如非經腸、皮下或腹膜內)有效量之免疫專一性結合至hLIGHT抗原之經標記抗體；b)於投與後等候一定時間間隔，以許可經標記抗體較佳於受檢者體內表現hLIGHT抗原之部位集中(且許可未經結合之經標記分子清除至背景含量)；c)測定背景含量；且d)偵測受檢者體內之經標記抗體，從而偵測到背景含量以上之經標記抗體預示受檢者患有hLIGHT介導之疾病。背景含量可藉由各種方法測定，包括比較所偵測到之經標記分子的量與先前測定之特定系統之標準值。
將於此項技術中瞭解，受檢者體格及所使用之成像系統將確定產生診斷影像所需之成像部分量。對於人類受檢者而言，在放射性同位素部分之情況下，所注射之放射性之量通常將在約5至20毫居里99Tc範圍內。接著經標記抗體將較佳地在含有專一蛋白之細胞位置處累積。活體內腫瘤成像係描述於S.W.Burchiel等人，"Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments." Tumor Imaging：The Radiochemical Detection of Cancer第13章，S.W.Burchiel及B.A.Rhodes編，Masson Publishing Inc.(1982)。
視若干變數而定，包括所使用之標記類型及投與模式，投與後許可經標記抗體較佳於受檢者體內之部位集中且許可未經結合之經標記抗體清除至背景含量之時間間隔為6至48小時或6至24小時或6至12 小時。在另一實施例中，投與後之時間間隔為5至20天或5至10天。
在一實施例中，監控hLIGHT介導之疾病係藉由於初始診斷後一個月、初始診斷後六個月、初始診斷後一年等重複診斷hLIGHT介導之疾病之方法而進行。
可使用於此項技術中已知用於活體內掃描之方法偵測受檢者體內經標記分子之存在。此等方法視所使用之標記類型而定。熟習此項技術者將能夠確定用於偵測特定標記之適當方法。可用於本發明診斷方法之方法及裝置包括(但不限於)電腦斷層攝影術(CT)、全身掃描，諸如正電子放射斷層攝影術(PET)、核磁共振成像(MRI)及超音波掃描。
在特定實施例中，將分子以放射性同位素標記且於患者體內使用輻射響應外科器具偵測(Thurston等人，美國專利第5,441,050號)。在另一實施例中，將分子以螢光化合物標記且於患者體內使用螢光響應掃描器具偵測。在另一實施例中，將分子以正電子發射金屬標記且於患者體內使用正電子發射斷層攝影術偵測。在另一實施例中，將分子以順磁性標記而標記且於患者體內使用磁共振成像(MRI)偵測。
產生抗體之方法
免疫專一性結合至抗原之本發明抗體可藉由於此項技術中已知任何用於合成抗體之方法產生，特別是藉由化學合成或較佳藉由重組表現技術。除非另有所指，否則本發明之實踐採用分子生物、微生物、遺傳分析、重組DNA、有機化學、生物化學、PCR、寡核苷酸合成及修飾，核酸雜交及此項技術中相關領域之習知技術。此等技術係於本發明中所引用之參考文獻中描述且係於文獻中完全解釋。參見例如Maniatis等人(1982)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人(1989),Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons(1987及每年更新)；Current Protocols in Immunology,John Wiley & Sons(1987及每年更新)Gait(編)(1984)Oligonucleotide Synthesis：A Practical Approach,IRL Press；Eckstein(編)(1991)Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach,IRL Press；Birren等人(編)(1999)Genome Analysis：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press。
免疫專一性結合至抗原之多株抗體可藉由此項技術中眾所熟知之各種程序產生。舉例而言，可將人類抗原投與各種宿主動物(包括(但不限於)兔、小鼠、大鼠等)以誘發產生含有專一於人類抗原之多株抗體之血清。視宿主物種而定可使用各種佐劑以增加免疫反應，且包括(但不限於)Freund氏(完全及不完全)；無機凝膠，諸如氫氧化鋁；表面活性物質，諸如溶血卵磷酯、聚醚多元醇、聚陰離子、肽、油乳液、匙孔螺血氰蛋白、二硝基酚及可能適用之人類佐劑，諸如BCG(卡介苗(bacille Calmette-Guerin))及短棒狀桿菌(corynebacterium parvum)。該等佐劑於此項技術中亦為眾所熟知。
單株抗體可使用廣泛種類之於此項技術中已知之技術來製備，包括使用融合瘤、重組及噬菌體呈現技術或其組合。舉例而言，單株抗體可使用融合瘤技術產生，包括彼等於此項技術中已知及於下列文獻中教示之融合瘤技術：Harlow等人，Antibodies：A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版1988)；Hammerling等人，Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681(Elsevier,N.Y.,1981)(該等參考文獻之全文係以引用的方式併入本發明中)。本發明中所使用之術語"單株抗體"不限於經由融合瘤 技術產生之抗體。產生單株抗體之其他例示性方法係於本發明其他處論及，諸如使用KM mouseTM。產生單株抗體之額外例示性方法係於本發明之實例中提供。
使用融合瘤技術產生且篩檢專一性抗體之方法於此項技術中為常規的及眾所熟知的。簡言之，可將小鼠以hLIGHT抗原免疫且免疫反應一經偵測(例如於小鼠血清中偵測到專一於hLIGHT抗原之抗體)，則收集小鼠脾且分離脾細胞。接著藉由眾所熟知之技術將脾細胞融合至任何合適之骨髓瘤細胞，例如來自可自ATCC獲得之細胞株SP20之細胞。藉由有限稀釋選擇且選殖融合瘤。
此外，可使用RIMMS(重複免疫多部位)技術使動物免疫(Kilptrack等人，1997 Hybridoma 16：381-9，其全文係以引用的方式併入本發明中)。接著藉由於此項技術中已知之方法檢定分泌能夠結合本發明多肽之抗體之細胞的融合瘤純系。藉由以陽性融合瘤純系使小鼠免疫可產生一般含有高含量抗體之腹水。
因此，本發明提供藉由培養分泌經修飾本發明抗體之融合瘤細胞產生抗體之方法，其中較佳地融合瘤係藉由將自以hLIGHT抗原免疫之小鼠分離之脾細胞與骨髓瘤細胞融合且接著篩檢由分泌能夠結合至hLIGHT抗原之抗體之融合瘤純系融合產生的融合瘤而產生。
辨識專一性hLIGHT抗原之抗體片段可藉由熟習此項技術者已知之任何技術產生。舉例而言，本發明之Fab及F(ab')2片段可藉由使用諸如木瓜蛋白酶(以產生Fab片段)或胃蛋白酶(以產生F(ab')2片段)之酶蛋白質裂解免疫球蛋白分子產生。F(ab')2片段含有可變區、輕鏈恆定區及重鏈CH1域。此外，亦可使用於此項技術中已知之各種噬菌體呈現方法產生本發明抗體。
舉例而言，亦可使用各種噬菌體呈現方法產生抗體。在噬菌體呈現方法中，功能抗體域係呈現於攜有編碼其之聚核苷酸序列之噬菌 體顆粒表面上。詳言之，擴增來自動物cDNA庫(例如人類或鼠科之受影響組織之cDNA庫)之編碼VH及VL域之DNA序列。藉由PCR將編碼VH及VL域之DNA與scFv連接子重組在一起且選殖入噬粒載體中。將載體於大腸桿菌中電穿孔且以輔助噬菌體感染大腸桿菌。用於此等方法中之噬菌體通常為絲狀噬菌體，包括fd及M13且通常將VH及VL域重組融合至噬菌體基因III或基因VIII。可選擇或以抗原(例如使用經標記抗原或結合或俘獲於固體表面或珠粒之抗原)識別表現結合至特定抗原之抗原結合域之噬菌體。可用以製造本發明抗體之噬菌體呈現方法之實例包括彼等於下列文獻中揭示者：Brinkman等人，1995,J.Immunol.Methods 182：41-50；Ames等人，1995,J.Immunol.Methods 184：177-186；Kettleborough等人，1994,Eur.J.Immunol.24：952-958；Persic等人，1997,Gene 187：9-18；Burton等人，1994,Advances in Immunology 57：191-280；PCT申請案第PCT/GB91/O1 134號；國際公開案WO 90/02809、WO 91/10737、WO 92/01047、WO 92/18619、WO 93/1 1236、WO 95/15982、WO 95/20401及WO 97/13844；及美國專利第5,698,426號、第5,223,409號、第5,403,484號、第5,580,717號、第5,427,908號、第5,750,753號、第5,821,047號、第5,571,698號、第5,427,908號、第5,516,637號、第5,780,225號、第5,658,727號、第5,733,743號及第5,969,108號；其各自之全文係以引用的方式併入本發明中。
如於以上參考文獻中所述，噬菌體經選擇後，可將來自噬菌體之抗體編碼區分離且用以產生全抗體，包括人類抗體，或任何其他所需抗原結合片段且於任何所需宿主(包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母及細菌，例如以下所述)中表現。亦可使用於此項技術中已知之方法採用重組產生Fab、Fab'及F(ab')2片段之技術，諸如彼等揭示於下列文獻中之方法：PCT公開案WO 92/22324；Mullinax等 人，1992,BioTechniques 12(6)：864-869；Sawai等人，1995,AJRI 34：26-34；及Better等人，1988,Science 240：1041-1043(該等參考文獻之全文係以引用的方式併入本發明中)。
為產生全抗體，包括VH或VL核苷酸序列之PCR引子、限制位點及用以保護限制位點之側接序列可用以擴增scFv純系中之VH或VL序列。利用熟習此項技術者已知之選殖技術，可將經PCR擴增之VH域選殖入表現VH恆定區(例如人類γ4恆定區)之載體中，且可將經PCR擴增之VL域選殖至表現VL恆定區(例如人類κ或λ恆定區)之載體中。亦可將VH及VL域選殖入表現必需恆定區之一個載體中。接著使用熟習此項技術者已知之技術將重鏈轉化載體及輕鏈轉化載體共轉染至細胞株中以產生表現全長抗體(例如IgG)之穩定或瞬間細胞株。
對於一些用途(包括抗體於人類體內及活體外偵測檢定中之活體內用途)而言，較佳使用人類或嵌合抗體。人類受檢者之治療性治療特別需要完全人類抗體。可藉由於此項技術中已知之各種方法(包括上述噬菌體呈現方法)，使用源自人類免疫球蛋白序列之抗體庫製造人類抗體。亦參見美國專利第4,444,887號及第4,716,111號；及國際公開案WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735及WO 91/10741；其各自之全文係以引用的方式併入本發明中。
在較佳實施例中，產生人類抗體。可使用於此項技術中已知之任何方法(包括本發明提供之實例)來產生人類抗體及/或完全人類抗體。舉例而言，不能表現功能性內源性免疫球蛋白，但可表現人類免疫球蛋白基因之轉殖基因小鼠。舉例而言，可將人類重鏈及輕鏈免疫球蛋白基因複合物隨機或藉由同源重組引入小鼠胚胎幹細胞中。或者，除人類重鏈基因及輕鏈基因以外，亦可將人類可變區、恆定區及多樣區引入小鼠胚胎幹細胞中。可非功能性獨立再現小鼠重鏈及輕鏈 免疫球蛋白基因或在同源重組引入人類免疫球蛋白基因座的同時再現小鼠重鏈及輕鏈免疫球蛋白基因。詳言之，JH區之純合子缺失防止內源性抗體產生。可將經修飾胚胎幹細胞擴展且顯微注射至胚胞中以產生嵌合小鼠。接著育種嵌合小鼠以產生表現人類抗體之純合子後代。可以通常方式以所選抗原(例如本發明多肽之所有或部分)使轉殖基因小鼠免疫。可使用習知融合瘤技術自經免疫轉殖基因小鼠獲得對抗抗原之單株抗體。轉殖基因小鼠所懷有之人類免疫球蛋白轉殖基因於B細胞分化期間重排且隨後經受種類轉換及體細胞突變。因此，使用該技術，可能產生治療上適用之IgG、IgA、IgM及IgE抗體。關於產生人類抗體之此技術之概述，參見Lonberg及Huszar(1995,Int.Rev.Immunol.13：65-93)。關於產生人類抗體及人類單株抗體之此技術及產生該等抗體之方案的詳細論述，參見例如PCT公開案WO 98/24893、WO 96/34096及WO 96/33735；及美國專利第5,413,923號、第5,625,126號、第5,633,425號、第5,569,825號、第5,661,016號、第5,545,806號、第5,814,318號及第5,939,598號，其全文係以引用的方式併入本發明中。其他方法係於本發明之實例中詳述。此外，諸如Abgenix,Inc.(Freemont,CA)及Genpharm(San Jose,CA)之公司可從事使用上述類似技術提供對抗所選抗原之人類抗體。
嵌合抗體為抗體之不同部分係源自不同免疫球蛋白分子的分子。產生嵌合抗體之方法於此項技術中已知。參見例如Morrison,1985,Science 229：1202；Oi等人，1986,BioTechniques 4：214；Gillies等人，1989,J.Immunol.Methods 125：191-202；及美國專利第5,807,715號、第4,816,567號、第4,816,397號及第6,331,415號，其全文係以引用的方式併入本發明中。
人化抗體為能夠結合至預定抗原且包含具有大體上人類免疫球蛋白胺基酸序列之構架區及具有大體上非人類免疫球蛋白胺基酸序列 之CDR之抗體或其突變體或片段。人化抗體包含大體上所有之至少一個且通常為兩個可變域(Fab、Fab'、F(ab')2、Fabc、Fv)，其中所有或大體上所有CDR區對應於非人類免疫球蛋白(亦即供體抗體)之彼等CDR區且所有或大體上所有構架區為彼等人類免疫球蛋白一致序列構架區。較佳地，人化抗體亦包含至少一部分免疫球蛋白恆定區(Fc)，通常為人類免疫球蛋白之恆定區。通常，該抗體將含有輕鏈以及至少重鏈之可變域。抗體亦可包括重鏈之CH1區、鉸鏈區、CH2、CH3及CH4區。人化抗體可選自任何種類之免疫球蛋白(包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE)及任何同型(包括IgG1、IgG2、IgG3及IgG4)。通常，該恆定域為互補股固定恆定域，其中需要人化抗體展現細胞毒性活性；且該種類通常為IgG1。不需要該細胞毒性活性時，恆定域可為IgG2種類。可用於本發明之某些實施例之VL及VH恆定域的實例包括(但不限於)Johnson等人(1997)J.Infect.Dis.176,1215-1224中描述之C-κ及C-γ-1(nG1m)及彼等於美國專利第5,824,307號中描述者。人化抗體可包含來自一種以上種類或同型之序列，且選擇特定恆定域以使所需效應子功能最優化係在一般熟習此項技術者掌握之範圍內。人化抗體之構架區及CDR區不需要與親本序列精確對應，例如供體CDR或一致構架可藉由取代、插入至少一個殘基或使得至少一個殘基缺失而產生突變，使得彼位點之CDR或構架殘基不對應於一致抗體或輸入之抗體。然而該等突變並不廣泛。通常，至少75%之人化抗體殘基將對應於彼等親本FR及CDR序列者，更通常90%，且最佳大於95%。人化抗體可使用此項技術中已知之各種技術產生，包括(但不限於)CDR-接枝(歐洲專利第EP 239,400號；國際公開案WO 91/09967；及美國專利第5,225,539號、第5,530,101號及第5,585,089號)、鑲飾(veneering)或重塑(resurfacing)(歐洲專利EP 592,106及EP 519,596；Padlan,1991,Molecular Immunology 28(4/5)：489-498；Studnicka等人，1994,Protein Engineering 7(6)：805-814；及Roguska等人，1994,PNAS 91：969-973)、鏈改組(美國專利第5,565,332號)及於下列各文獻中揭示之技術：例如美國專利第6,407,213號；美國專利第5,766,886號；WO 9317105；Tan等人，J.Immunol.169：1119 25(2002)；Caldas等人，Protein Eng.13(5)：353-60(2000)；Morea等人，Methods 20(3)：267 79(2000)；Baca等人，J.Biol.Chem.272(16)：10678-84(1997)；Roguska等人，Protein Eng.9(10)：895904(1996),Couto等人，Cancer Res.55(23 Supp)：5973s-5977s(1995)；Couto等人，Cancer Res.55(8)：1717-22(1995),Sandhu JS,Gene 150(2)：409-10(1994)及Pedersen等人，J.Mol.Biol.235(3)：959-73(1994)。亦參見美國專利公開案US 2005/0042664 A1(2005年2月23日)，其全文係以引用的方式併入本發明中。通常構架區中之構架殘基將以來自CDR供體抗體之對應殘基取代以改變(較佳改良)抗原結合。此等構架取代係藉由於此項技術中眾所熟知之方法識別，例如藉由將CDR與構架殘基之相互作用模型化以識別對於抗原結合重要之構架殘基且序列比較以識別特定位置之不常見之構架殘基。(參見例如Queen等人，美國專利第5,585,089號；及Reichmann等人，1988,Nature 332：323，其全文係以引用的方式併入本發明中)。
單一域抗體(例如缺少輕鏈之抗體)可藉由此項技術中眾所熟知之方法產生。參見Riechmann等人，1999,J.Immunol.231：25-38；Nuttall等人，2000,Curr.Pharm.Biotechnol.1(3)：253-263；Muylderman,2001,J.Biotechnol.74(4)：277302；美國專利第6,005,079號；及國際公開案WO 94/04678、WO 94/25591及WO 01/44301，其各自之全文係以引用的方式併入本發明中。
此外，又可利用免疫專一性結合至hLIGHT抗原之抗體使用熟習此項技術者眾所熟知之技術產生"模擬"抗原之抗個體基因型抗體。(參見例如Greenspan & Bona,1989,FASEB J.7(5)：437-444；及 Nissinoff,1991,J.Immunol.147(8)：2429-2438)。
編碼抗體之聚核苷酸
本發明提供包含編碼免疫專一性結合至hLIGHT抗原決定基之本發明抗體之核苷酸序列的聚核苷酸。本發明亦涵蓋在高度嚴格、中等或較低嚴格雜交條件下(例如同上文所定義)雜交至編碼經修飾之本發明抗體之聚核苷酸的聚核苷酸。
藉由於此項技術中已知之任何方法可獲得聚核苷酸且確定聚核苷酸之核苷酸序列。由於E1、E13、E63、F19及F23之胺基酸序列已知(分別參見例如SEQ ID NO：41、42、43、44、45、102、46、103、47、48、104、49、105、106及50；及ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728，其係以引用的方式併入本發明中)，可使用於此項技術中眾所熟知之方法確定編碼此等抗體及經修飾形式之此等抗體之核苷酸序列，亦即將已知編碼特定胺基酸之核苷酸密碼子以產生編碼抗體之核酸之方式組裝。編碼抗體之該聚核苷酸可由化學合成之寡核苷酸組裝(例如Kutmeier等人於1994,BioTechniques 17：242中所述)，簡言之，其涉及合成含有編碼抗體、其片段或突變體之序列部分之重疊寡核苷酸，黏接且接合彼等寡核苷酸且接著藉由PCR擴增經接合之寡核苷酸。
或者，編碼本發明抗體之聚核苷酸可由來自合適來源(例如具有ATCC登記號PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19或F23)之融合瘤)之核酸產生。若含有編碼特定抗體之核酸之純系不可用，但已知抗體分子序列，則編碼免疫球蛋白之核酸可為藉由使用可雜交至序列之3'及5'端之合成引子之PCR擴增或藉由使用專一於特定基因序列之寡核苷酸探針選殖以識別(例如)編碼抗體之來自cDNA庫之cDNA純系而化學合成或可自合適來源(例如由表現抗體之任何組織或細胞(諸如經選擇以表現本發明抗體之 融合瘤細胞)產生之抗體cDNA庫或cDNA庫或自該等組織或細胞分離之核酸，較佳聚A+RNA)獲得。接著可使用於此項技術中眾所熟知之任何方法將由PCR產生之經擴增核酸選殖入可複製選殖載體中。
在某些實施例中，本發明核酸分子包含示於SEQ ID NOS：41、42、43、44、45(編碼VH)及/或SEQ ID NO：102、46、103、47、48、104、49、105、106或50(編碼VL)中任一者描述之核酸序列或其任何組合(例如編碼本發明抗體，諸如全長抗體、抗體重鏈及/或輕鏈或單鏈本發明抗體之核苷酸序列)或由其組成。
抗體之重組表現
免疫專一性結合至hLIGHT抗原之本發明抗體(例如全長抗體、抗體重鏈及/或輕鏈或單鏈之本發明抗體)之重組表現需要構築含有編碼抗體之聚核苷酸之表現載體。一旦獲得編碼本發明抗體分子、抗體重鏈或輕鏈或其片段(較佳，但不一定含有重鏈及/或輕鏈可變域)之聚核苷酸，則可使用於此項技術中眾所熟知之技術以重組DNA技術產生用於產生抗體分子之載體。因此，本發明中描述藉由表現含有抗體編碼核苷酸序列之聚核苷酸製備蛋白質之方法。可使用為熟習此項技術者眾所熟知之方法來構築含有抗體編碼序列及適當轉錄及轉譯控制信號之表現載體。此等方法包括(例如)活體外重組DNA技術、合成技術及活體內遺傳重組。因此，本發明提供包含編碼可操作性連接至啟動子之本發明抗體分子、抗體重鏈或輕鏈、抗體之重鏈或輕鏈可變區或其片段或重鏈或輕鏈CDR之核苷酸序列的可複製載體。該等載體可包括編碼抗體分子恆定區之核苷酸序列(參見例如國際公開案WO 86/05807及WO 89/01036；及美國專利第5,122,464號)且可將抗體可變域選殖入該載體中用於表現整個重鏈、整個輕鏈或整個重鏈及輕鏈。
藉由習知技術將表現載體轉移至宿主細胞中且接著藉由習知技術培養經轉染細胞以產生本發明抗體。因此，本發明包括含有編碼可 操作性連接至異源啟動子之本發明抗體或其片段、或其重鏈或輕鏈或其片段或單鏈本發明抗體之聚核苷酸的宿主細胞。如下詳述，在表現雙鏈抗體之較佳實施例中，編碼重鏈及輕鏈之載體可於宿主細胞中共表現，以表現整個免疫球蛋白分子。
可利用各種宿主表現載體系統以表現本發明之抗體分子(參見例如美國專利第5,807,715號)。該等宿主表現系統表示媒劑，藉由該等媒劑可產生且隨後純化所關注之編碼序列，且亦表示可於以適當核苷酸編碼序列轉型或轉染時就地表現本發明抗體分子之細胞。此等宿主包括(但不限於)以重組噬菌體DNA、質體DNA或黏質體DNA表現載體轉型之微生物，諸如細菌(例如大腸桿菌(E.coli)及枯草桿菌(B.subtilis))；以含有抗體編碼序列之重組酵母表現載體轉型之酵母(例如植酵母(Saccharomyces)、畢赤酵母(Pichia))；以含有抗體編碼序列之重組病毒表現載體(例如桿狀病毒)感染之昆蟲細胞系統；以含有抗體編碼序列之重組病毒表現載體(例如花椰菜嵌紋病毒，CaMV；煙草嵌紋病毒，TMV)感染或以含有抗體編碼序列之重組質體表現載體(例如Ti質體)轉型之植物細胞系統；或具有含有源自哺乳動物細胞基因體之啟動子(例如金屬硫蛋白啟動子)或源自哺乳動物病毒之啟動子(例如腺病毒晚期啟動子、牛痘病毒7.5K啟動子)之重組表現構築體的哺乳動物細胞系統(例如COS、CHO、BHK、293、NS0及3T3細胞)。較佳地，將特別是用於表現整個重組抗體分子之細菌細胞(諸如大腸埃希氏菌(Escherichia coli))且更佳地真核細胞用於表現重組抗體分子。舉例而言，與諸如來自人類細胞巨大病毒之主要中早期基因啟動子元件之載體聯合的哺乳動物細胞(諸如中國倉鼠卵巢細胞(CHO))為抗體之有效表現系統(Foecking等人，1986,Gene 45：101；及Cockett等人，1990,Bio/Technology 8：2)。在較佳實施例中，本發明抗體係於CHO細胞中產生。在特定實施例中，編碼免疫專一性結合至hLIGHT抗原之 本發明抗體之核苷酸序列的表現係藉由組成性啟動子、誘發性啟動子或組織專一性啟動子調控。
在細菌系統中，可視意欲用於所表現之抗體分子之用途而定有利地選擇許多表現載體。舉例而言，當待產生大量之該抗體來產生抗體分子之醫藥組合物時，引導易於純化之高含量融合蛋白產物的表現之載體可為合乎需要的。該等載體包括(但不限於)大腸桿菌表現載體pUR278(Ruther等人，1983,EMBO 12：1791)，其中抗體編碼序列可個別接合至與lac Z編碼區同框之載體中，使得產生融合蛋白；pIN載體(Inouye & Inouye,1985,Nucleic Acids Res.13：3101-3109；Van Heeke & Schuster,1989,J.Biol.Chem.24：5503-5509)；及其類似物。pGEX載體亦可用於以麩胱甘肽5轉移酶(GST)表現外來多肽為融合蛋白。一般而言，該等融合蛋白為可溶的且藉由吸附且結合至基質麩胱甘肽瓊脂糖珠粒，隨後在游離麩胱甘肽存在下溶離可易於自溶胞細胞純化。設計包括凝血酶或因子Xa蛋白酶裂解位點之pGEX載體使得可自GST部分釋放經選殖靶基因產物。
在昆蟲系統中，將苜蓿丫紋夜蛾核型多角體病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus)(AcNPV)用作表現外來基因之載體。使病毒於草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞中生長。可將抗體編碼序列個別選殖入病毒之非主要區域(例如多角體蛋白基因)中且置於AcNPV啟動子(例如多角體蛋白啟動子)控制下。
在哺乳動物宿主細胞中，可利用許多以病毒為主之表現系統。在將腺病毒用作表現載體之情況下，可將所關注之抗體編碼序列接合至腺病毒轉錄/轉譯控制複合物，例如晚期啟動子及三重前導序列。接著可將此嵌合基因藉由活體外或活體內重組插入腺病毒基因體中。插入病毒基因體之非主要區域(例如區域E1或E3)中將產生可以且能夠於所感染宿主中表現抗體分子之重組病毒(例如參見Logan & Shenk, 1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8 1：355-359)。所插入抗體編碼序列之有效轉譯亦可需要特定起始信號。此等信號包括ATG起始密碼子及相鄰序列。此外，起始密碼子必須與所需編碼序列之閱讀框架同相以確保轉譯整個插入物。此等外因性轉錄控制信號及起始密碼子可具有天然及合成之各種來源。表現效率可藉由包括適當轉錄增強子元件、轉錄終止子等而增強(參見例如Bittner等人，1987,Methods in Enzymol.153：51-544)。
此外，可選擇以所需特定方式調節所插入序列表現或修飾且加工基因產物之宿主細胞株。該等蛋白產物修飾(例如醣基化)及加工(例如裂解)對於蛋白質功能而言可為重要的。不同宿主細胞具有蛋白質及基因產物轉譯後加工及修飾之特徵化及特定機制。可選擇適當細胞株或宿主系統以確保正確修飾及加工所表現之外來蛋白。為此目的，可使用具有基因產物之最初轉錄、醣基化及磷酸化之正確加工之細胞機制的真核宿主細胞。該等哺乳動物宿主細胞包括(但不限於)CHO、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O及T47D、NS0(未內源性產生任何免疫球蛋白鏈之鼠科骨髓瘤細胞株)、CRL7O3O及HsS78Bst細胞。在較佳實施例中，於哺乳動物細胞(諸如CHO細胞)中產生本發明之單株抗hLIGHT抗體。
對於長期以高產率產生重組蛋白而言，穩定表現較佳。舉例而言，可工程設計穩定表現抗體分子之細胞株。可以藉由適當表現控制元件(例如啟動子、增強子、序列、轉錄終止子、多聚腺苷酸作用位點等)及可選擇標記所控制之DNA轉型宿主細胞，而非使用含有病毒複製來源之表現載體。引入外來DNA後，可使經工程設計之細胞於富集培養基中生長1-2天且接著轉移至選擇培養基中。重組質體中之可選擇標記賦予選擇抗性且使得細胞將質體穩定地整合至其染色體中且 生長以形成變異區，而該變異區又可經選殖且擴展至細胞株中。此方法可有利地用以工程設計表現抗體分子之細胞株。該等經工程設計之細胞株可特別適用於篩檢及評估與抗體分子直接或間接相互作用之組合物。
可使用許多選擇系統，包括(但不限於)分別可於tk-、hgprt-或aprt細胞中採用之單純性疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人，1977,Cell 11：223)、次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(Szybalska & Szybalski,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48：202)及腺嘌呤磷酸核糖基轉移酶(Lowy等人，1980,Cell 22：8-17)基因。同樣，可將抗代謝物抗性用作選擇下列基因之基礎：dhfr，其賦予甲胺喋呤抗性(Wigler等人，1980,Natl.Acad.Sci.USA 77：357；O'Hare等人，1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78：1527)；gpt，其賦予黴酚酸抗性(Mulligan & Berg,1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78：2072)；neo，其賦予胺基糖苷G-418抗性(Wu及Wu,1991,Biotherapy 3：87-95；Tolstoshev,1993,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32：573-596；Mulligan,1993,Science 260：926-932；及Morgan及Anderson,1993,Ann.Rev.Biochem.62：191-217；May,1993,TIB TECH 11(5)：155-2 15)；及hygro，其賦予潮黴素抗性(Santerre等人，1984,Gene 30：147)。通常於重組DNA技術中已知之方法可常規應用於選擇所需重組純系且該等方法係描述於(例如)Ausubel等人(編)，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,NY(1993)；Kriegler,Gene_Transfer and Expression,A Laboratory Manual,Stockton Press,NY(1990)；及Dracopoli等人(編)，Current Protocols in Human Genetics,John Wiley & Sons,NY(1994)之第12及13章；Colberre-Garapin等人，1981,J.Mol.Biol.150：1中，其全文係以引用的方式併入本發明中。
抗體分子之表現含量可藉由載體擴增來增加(關於其論述，參見 Bebbington及Hentschel,The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning，第3卷(Academic Press,New York,1987))。當表現抗體之載體系統中之標記為可擴增標記時，存在於宿主細胞培養物中之抑制劑含量增加將使標記基因複本數增加。由於擴增區與抗體基因相關，故抗體產生亦增加(Crouse等人，1983,Mol.Cell.Biol.3：257)。
可以本發明之兩種表現載體共轉染宿主細胞，該等兩種表現載體即編碼得自重鏈多肽之第一載體及編碼得自輕鏈多肽之第二載體。兩種載體可含有使重鏈及輕鏈多肽同等表現之相同可選擇標記。或者，可使用編碼且能夠表現重鏈及輕鏈多肽之單一載體。在該等情況下，應將輕鏈置於重鏈之前以避免不含毒素之重鏈過量(Proudfoot,1986,Nature 322：52；及Kohler,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：2197-2199)。重鏈及輕鏈之編碼序列可包含cDNA及基因體DNA。
一旦藉由重組表現產生本發明之抗體分子，則可將其藉由於此項技術中已知用於純化免疫球蛋白分子之任何方法，例如藉由層析(例如離子交換、親和力，特別是蛋白質A後之專一抗原親和力及尺寸管柱層析)、離心、差異溶解度或藉由蛋白質純化之任何其他標準技術純化。此外，可將本發明抗體融合至本發明所述或於此項技術中已知之異源多肽序列以促進純化。
套組
本發明亦提供包含以一或多種本發明醫藥組合物成分(諸如本發明所提供之一或多種抗體)填充之一或多個容器之醫藥包裝或套組。視情況可存在調節醫藥或生物產品之製造、使用或銷售之政府機構規定形式的注意事項與該(該等)容器相聯合，該注意事項反映製造、使用或銷售機構對於人類投與之許可。
本發明提供可用於以上方法之套組。在一實施例中，套組包含 一或多個容器中之本發明抗體，較佳經純化抗體。在特定實施例中，本發明套組含有大體上經分離之hLIGHT抗原作為對照。較佳地，本發明套組進一步包含不與hLIGHT抗原反應之對照抗體。在另一特定實施例中，本發明套組含有偵測經修飾抗體與hLIGHT抗原結合之構件(例如可將抗體共軛至可偵測底物，諸如螢光化合物、酶底物、放射性化合物或發光化合物；或可將辨識第一抗體之第二抗體共軛至可偵測底物)。在特定實施例中，套組可包括重組產生或化學合成之hLIGHT抗原。亦可將套組中所提供之hLIGHT抗原連接至固體支撐物。在更特定實施例中，上述套組之偵測構件包括連接hLIGHT抗原之固體支撐物。該套組亦可包括未經連接之報導子標記抗人類抗體。在此實施例中，可藉由結合該報導子標記抗體來偵測抗體與hLIGHT抗原之結合。
以下實例係以說明方式提供，且不為其限制。
實例 實例1-人類抗hLIGHT抗體之產生
在此實例中，描述使用以可溶重組hLIGHT免疫之轉染色體小鼠(KM miceTM)(WO 02/43478、WO 02/092812、Ishida及Lonberg,IBC's 11th Antibody Engineering Meeting.Abstract(2000)；及Kataoka,S.IBC's 13th Antibody Engineering Meeting.Abstract(2002))產生人類抗hLIGHT單株抗體。此處所述之抗體特別指經染色hLIGHT穩定轉染細胞株(EL4-hLIGHT及HEK 293-hLIGHT)而非親本細胞株。同樣，其於活化時結合至人類T細胞融合瘤(II-23.D7)(Ware等人1986 Lymphokine Res 5 313-24)表面上內源性表現之hLIGHT。此等資料共同表示抗體免疫專一性結合至hLIGHT。如下所述，藉由交叉阻斷實驗測定，經分離抗體辨識hLIGHT上兩個抗原決定基中之一個。此外，抗體能夠阻斷細胞表面表現之hLIGHT結合至可溶受體Fc融合形式之人類 HVEM及LTβR。可溶hLIGHT以劑量依賴方式誘發自人類結腸上皮細胞株HT29.14s(ATCC HTB-38)分泌細胞趨化因子CCL20及RANTES。以抗hLIGHT抗體培育可溶hLIGHT阻斷自HT29.14s細胞hLIGHT介導分泌CCL20及RANTES。此外，以此等抗hLIGHT抗體預培育細胞表面表現之hLIGHT(EL4-hLIGHT)阻斷自HT29細胞之膜結合hLIGHT誘發之趨化因子分泌。此等結果共同說明完全人類抗hLIGHT單株抗體之功能及結構特徵且提供其適用於治療hLIGHT介導之疾病之證明。
材料及方法
抗原製備：用於在完全人類抗hLIGHT抗體產生中免疫之抗原為經截短以僅包括胞外區(自胺基酸位置66處之甘胺酸起始至纈胺酸240)之可溶形式hLIGHT且於蛋白質(SEQ ID NO：54)胺基端含有FLAG抗原決定基標記。先前已報導此分子之產生(Rooney等人2000 J Biol Chem 275 14307-15)。
藉由逆轉錄酶PCR將編碼全長hLIGHT胺基酸序列(SEQ ID NO：52)之核酸(SEQ ID NO：51)自活化II23.D7 T細胞融合瘤細胞選殖(Mauri等人1998 Immunity 8 21-30)。II-23細胞株(D7次純系)為人類CD4+T細胞融合瘤(Ware等人1986 Lymphokine Res 5 313-24)。將hLIGHT PCR產物次選殖至哺乳動物表現載體pcDNA3.1(+)中以產生pcDNA3.1-hLIGHT。使用具有併入之限制位點之以下引子藉由PCR自pcDNA3-hLIGHT擴增胞外域(編碼Gly66至Val240)：
前置，5'-GTAGGAGAGATGGTCACCCGCCT-3'(SEQ ID NO：80)。
反置，5'-GGAACGCGAATTCCCACGTGTCAGACCCATGTCCAAT-3'(SEQ ID NO：81)。
將經擴增hLIGHT PCR產物以EcoRI消化且接合至pCDNA3.1-VCAM-FLAG之SnaB1及EcoRI位點，pCDNA3.1-VCAM-FLAG編碼VCAM1前導序列，隨後編碼FLAG抗原決定基以產生經分泌N端 FLAG標記蛋白(SEQ ID NO：52)。
為產生用於產生可溶hLIGHT之穩定細胞株，使用磷酸鈣法轉染HEK293細胞，且藉由ELISA以G418(Invitrogen,Corp.)選擇且篩檢用於產生hLIGHT之穩定純系。將可溶hLIGHT自生長於含有1.0%指定胎牛血清(Hyclone Laboratories,Logan,UT)之DMEM中之細胞培養物上清液純化。藉由親和力層析以偶合至瓊脂糖珠粒之抗FLAG(M2)抗體純化可溶hLIGHT。使用pH值為3.0之20mM甘胺酸、150mM NaCl將可溶hLIGHT自管柱溶離，且藉由收集於pH值為7.4之50mM Tris中即刻中和pH值。以280nm之吸光率測定蛋白質濃度。
起始密碼子(ATG)至終止(TGA)之hLIGHT核苷酸序列(SEQ ID NO：51)：
全長hLIGHT 240 aa之胺基酸序列(SEQ ID NO：52)：
可溶FLAG標記hLIGHT之核苷酸序列(所展示之VCAM前導序列，隨後為粗體表示之FLAG編碼序列)(SEQ ID NO：53)
可溶FLAG標記hLIGHT 183 aa之胺基酸序列(以粗體表示FLAG)(SEQ ID NO：54)：
以含有編碼全長hLIGHT之cDNA的逆轉錄病毒穩定轉導EL4(ATCC TIB-39)細胞以產生EL4-hLIGHT細胞株。
Fc融合蛋白製備：先前已描述含有人類IgG1之Fc區及人類LTβR及人類HVEM之配位體結合域之可溶受體融合蛋白之選殖、表現及純化(Rooney等人2000 Methods Enzymol 322 345-63)。簡言之，將HVEM及LTβR之胞外區使用具有併入限制性核酸內切酶位點之引子藉由聚合酶鏈分離且同框接合至含有人類Fc IgG1之桿狀病毒載體pVL1392(Pharmingen)中。以LTβR：Fc或HVEM：Fc重組桿狀病毒感染粉紋夜蛾(Trichoplusia ni)High-Five BTI-TN-5b1-4(Tn5)昆蟲細胞(Invitrogen Corp.)以產生蛋白質(參見抗體及蛋白質純化)。
小鼠：自Kirin Brewery Co.,Ltd.,Japan獲得具有編碼人類免疫球蛋白區之人類染色體片段之轉人類染色體KM miceTM(WO 02/43478、WO 02/092812、Ishida及Lonberg,IBC's 11th Antibody Engineering Meeting.Abstract(2000)；及Kataoka,S.IBC's 13th Antibody Engineering Meeting.Abstract(2002))且將其圈養於Gemini Science(La Jolla,CA)之動物設施中。產生人類抗體之技術之概述係描述於Lonberg及Huszar 1995 Int Rev Immunol 13 65-93。具有一或多個未表現內源性免疫球蛋白之人類免疫球蛋白基因(κ或λ)之轉殖基因動物係(例如)於美國專利第5,939,598號中描述。描述產生人類抗體及人類單株抗體之額外方法(參見例如WO 98/24893；WO 92/01047；WO 96/34096；WO 96/33735；美國專利第5,413,923號；第5,625,126號；第5,633,425號；第5,569,825號；第5,661,016號；第5,545,806號；第5,814,318號；第5,885,793號；第5,916,771號及第5,939,598號)。攜有人類免疫球蛋白基因之牛，即TC牛之發育係描述於Ishida及Lonberg中(參見Ishida 2000 11th Antibody Engineering Meeting、Kuroiwa等人2004 Nat Genet 36 775-80、Kuroiwa等人2002 Nat Biotechnol 20 889-94)。
免疫：將FLAG標記之可溶hLIGHT重組蛋白與等體積之完全Freund氏佐劑(CFA,Sigma)混合且製備乳液。將小鼠以10至50μg蛋白質皮下(s.c.)免疫且以於不完全Freund氏佐劑(IFA,Sigma)中乳化之10至20μg蛋白質皮下激發，以2-3週之時間間隔激發2至3次。於融合前3天給予最後靜脈內(i.v.)注射無佐劑之10μg FLAG標記之可溶hLIGHT。
融合瘤產生：選擇如使用hLIGHT轉導之EL4細胞比EL4親本細胞，以hLIGHT ELISA及FACS所測定於其血清中展現最高抗hLIGHT IgG專一抗體力價之小鼠用於產生單株抗體。收集脾且以與50%聚乙 二醇(Boehringer Mannheim,Indianapolis,IN)5：1之比率將單一細胞懸浮液融合至SP2/O-Ag14骨髓瘤細胞株(ATCC,Manassas,VA)。將融合物以最佳密度(此處為1×106/ml)塗於完全DMEM-10培養基(具有10%胎牛血清(FBS,Invitrogen,Corp.)、1%非必需胺基酸、2mM L-麩胺醯胺、100U/ml盤尼西林(penicillin)、100μg/ml鏈黴素硫酸鹽(所有均來自BioWhittaker,Walkersville,MD)、HAT補充物(Sigma)及10%融合瘤選殖因子(HCF,Biovaris,San Diego,CA)之杜貝科氏改質伊革氏培養基(Dulbecco's Modified Engle's Medium))中之96孔平底盤中且在37℃下之10% CO2恆溫箱中培養。藉由ELISA篩檢來自2種融合物之大約2800個孔之含有人類κ之hLIGHT專一抗體。使用hLIGHT-EL4細胞對EL4親本細胞，藉由流式細胞儀分析確認人類抗hLIGHT IgG抗體。亦藉由以EL4-hLIGHT細胞預培育粗融合瘤消光培養生長培養基且以半飽和HVEM：Fc或LTβR：Fc染色來測試陽性孔之受體阻斷活性。使陽性孔擴展且經受3-5輪限制稀釋選殖以獲得單株抗體。
抗體及蛋白質純化：為純化抗體，將融合瘤以每瓶350毫升至1公升於具有以超低IgG胎牛血清(Invitrogen,Corp.)補充之融合瘤-SFM培養基之2公升滾瓶或於1公升Integra系統(INTEGRA Bioscience,Inc.,Ijamsville,MD)中培養。
先前已報導人類及小鼠LTβR：Fc及HVEM：Fc重組蛋白之產生(Rooney等人2000 Meth.Enzymol.322：345-63)且係藉由感染1公升懸浮液Tn5細胞歷時4天而產生。使用重組蛋白A-瓊脂糖快速流動凝膠(Amersham Biosciences)自培養基純化人類單株抗體及Fc融合蛋白。首先使用Ultrasette切向流式系統(Pall Corp.,East Hills,NY)濃縮滾瓶中所產生之條件培養基。將條件培養基以0.22μm真空過濾單元(Millipore,Bedford,MA)過濾且負載於對於培養基中人類抗體量而言適當尺寸之蛋白A-瓊脂糖快速流動管柱(Amersham Biosciences)上。 將管柱以20管柱體積之PBS徹底洗滌且將抗體以pH值為3.6之0.1M Gly-HCl、0.15M NaCl溶離且以pH值為8.0之1M Tris-HCl中和。以SDS-PAGE分析溶離份且將陽性溶離份混合且以離心濃縮器(Vivaspin,50,000 MWCO：Sartorius,Gettingen,Germany)濃縮。
使用Sephadex G-25去鹽管柱(NAP,Amersham Biosciences)以緩衝液交換為pH值為7.4之PBS。最後，使用具有0.22μm之孔直徑之針筒過濾器將抗體過濾殺菌，且藉由Lowry法測定抗體濃度。使用鱟變形細胞溶菌液(LAL)檢定(Associates of Cape Cod,Falmouth,MA)來測定熱原質含量。此檢定之偵測極限為0.06EU/mg。若測試為陰性的，則認為檢體不含內毒素。
人類IgG定量ELISA：為測定存在於上清液及純化原料中之人類抗體量，使用以下方案。在37℃下將山羊抗人類Fcγ專一抗體(Jackson Immunoresearch Laboratories,West Grove,PA)以每孔0.5μg塗於碳酸鹽緩衝液中之96孔培養盤(Nunc,Denmark)歷時1小時。接著將培養盤以Super阻斷物(Pierce,Rockford,IL)阻斷30分鐘，隨後將檢體添加至培養盤中。使用總人類IgG(Sigma)或純化人類IgG1或IgG4(Kirin Brewery Co.,Ltd)產生標準曲線。將培養盤在37℃下培育1小時，以PBS/1% BSA/0.1% Tween 20(Sigma)洗滌且在37℃下以共軛至辣根過氧化物酶(HRP,Jackson Immunoresearch Laboratorie,West Grove,PA)之山羊抗人類Fcγ專一抗體偵測經結合抗體歷時1小時。經10分鐘添加TMB底物(Sigma)且以H2SO4(LabChem,Pittsburgh,PA)停止反應。在微定量盤式讀取器上以450nm量測OD。
哺乳動物細胞培養物：將人類II-23細胞株(D7次純系)、CD4+T融合瘤細胞株(Ware等人1986 Lymphokine Res 5 313-24)維持於含有10% FBS(HyClone Laboratories,Logan,UT)及100U/ml盤尼西林/100μg/ml鏈黴素(Life Technologies,Grand Island,NY)之RPMI 1640中。將人類 HT29.14s細胞株、EL4-hLIGHT細胞株及293-hLIGHT細胞株均維持於含有10% FBS(HyClone Laboratories,Logan,UT)之DMEM中。將所有哺乳動物細胞在37℃下於5% CO2加濕恆溫箱中培養。
抗hLIGHT抗體偵測ELISA：藉由ELISA測定抗體力價、專一性及藉由融合瘤之產生。簡言之，可在4℃下隔夜或在37℃下經1小時於碳酸鹽緩衝液(pH 9.4)中以5μg/ml將50μl經FLAG標記之可溶hLIGHT塗於96孔平底培養盤。以PBS/0.1% Tween 20洗滌兩次後，將培養盤在37℃下以PBS/1% BSA/0.1 Tween 20阻斷1小時。將血清、上清液或純化抗體於阻斷緩衝液中稀釋，添加至孔中且將培養盤在37℃下培育1小時。將培養盤以PBS/0.1% Tween 20洗滌4次且以1：2000之稀釋率添加過氧化物酶共軛之綿羊抗人類κ偵測抗體(The Binding Site,Birmingham,UK)。在37℃下培育1小時後，洗滌培養盤且添加TMB(Sigma)底物且將其在室溫下培育10至30分鐘。以H2SO4(LabChem)停止反應且以微定量盤式讀取器於450nm量測最佳密度。
流式細胞儀：使用hLIGHT穩定EL4轉導細胞株或6-15 hr PMA(40ng/ml)+伊諾黴素(500ng/ml)活化II23.D7 T細胞株藉由流式細胞儀分析測定抗體力價、專一性及相對結合親和力。將細胞以下列染色緩衝液洗滌一次：PBS+2% FBS+0.01% NaN3+10mM EDTA，接著再懸浮於50μl體積之血清、上清液或純化抗體中。將細胞以冰上之抗體培育20分鐘，於染色緩衝液中洗滌兩次，接著再懸浮於山羊抗人類IgG-APC標記之第二抗體(驢抗人類APC,Jackson Immunoresearch Laboratories,West Grove,PA)中。在冰上培育20分鐘後，將細胞洗滌一次且以1%三聚甲醛固定10分鐘或經受最後洗滌，接著使細胞再懸浮於染色緩衝液中且使用FACScan或FACS Calibur流式細胞儀(Becton Dickinson Biosciences,Palo Alto,CA)獲得檢體。使用 CELLQUEST(Becton Dickinson Biosciences)或FLOW JO(TreeStar,Inc.,San Carlos,CA)軟體分析資料。
抗hLIGHT抗體交叉阻斷檢定：使用ELISA方案確定抗體是否結合相同hLIGHT抗原決定基。在37℃下經1小時以2μg/ml於碳酸鹽緩衝液中以人類抗hLIGHT抗體塗覆NUNC 96孔平底ELISA培養盤。洗滌培養盤且接著以PBS/1% BSA/Tween20阻斷。接著在4℃下將人類抗hLIGHT抗體以重組人類FLAG標記可溶hLIGHT預培育30分鐘。將抗體-hLIGHT蛋白質組合添加至培養盤中且在4℃下培育1小時。3次洗滌之後，以過氧化物酶共軛之M2小鼠抗FLAG抗原決定基標記Ig(Sigma)偵測經結合hLIGHT。使用各檢體之OD，以下式測定抑制百分比：抑制%=(max-檢體/max)* 100。
人類細胞激素分析：使用多路傳輸技術且根據製造者說明(Bio-Rad Laboratories,Hercules,CA)量測經處理HT29.14s細胞生長培養基中8種人類細胞激素組。藉由ELISA(R&D systems,Minneapolis,MN)使用製造者說明來執行HT29.14s細胞培養基中CCL20之偵測。
活體外檢定抗體介導阻斷細胞表面表現LIGHT與可溶受體Fc融合蛋白之結合。在4℃下將1e5 EL4 hLIGHT細胞以分級濃度之各抗體培育30分鐘。接著向細胞中添加次飽和量之HVEM：Fc-生物素(3μg/ml)或LTβR：Fc-His(3μg/ml)(Alexis Biochemicals)且在4℃下培育30分鐘。接著將細胞以200μl FACS緩衝液(1×PBS 2% FBS+0.02%疊氮化合物)洗滌兩次。藉由分別以2.5μg/ml之SA-APC或抗His-HRP培育30分鐘來偵測HVEM：Fc-生物素或LTβR：Fc-His。接著以FACScaliber(Becton Dickinson)流式細胞儀分析細胞。自前方散射光對側散射光曲線輸出死亡細胞且使用FLOWJO(TreeStar,San Carlos,CA,USA)計算各直方圖之幾何平均數。
分離人類抗hLIGHT抗體基因。藉由離心收集分別產生 E63(IgG3)、F23(IgG4)、E1(IgG1)、E13(IgG1)及F19(IgG1)抗體之經培養融合瘤細胞(124E63、124F23、124E1、124E13及124F19)。使用RNEASY套組(QIAGEN Inc.,Valencia,CA)根據製造者說明自此等細胞純化總RNA。使用SMART RACE cDNA擴增套組(Clontech Co.,Ltd.,Palo Alto,CA)選殖編碼來自總融合瘤細胞RNA之免疫球蛋白基因可變區之cDNA。簡言之，藉由逆轉錄酶由2毫克RNA製備第一鏈cDNA。將此cDNA用作聚合酶鏈反應(PCR)之模板以擴增重鏈及輕鏈可變區(分別為VH及VL)及部分恆定區。用於在5' RACE反應中擴增重鏈及輕鏈基因之3'引子分別為HH-2(SEQ ID NO：64)(H鏈恆定區)及HK-2(SEQ ID NO：65)(輕鏈恆定區)。擴增序列亦含有前導序列。反應如下：2.5單位PFU ULTRA DNA聚合酶(Stratagene,La Jolla,CA)；0.2μM 3'引子(對於重鏈而言：IgG1p，對於輕鏈而言：hk5，表2)；5'端之1X Universal引子混合物A(包括於SMART RACE套組中之UMP引子混合物A)；200μM dNTP混合物；1mM MgCl2；Puff Ultra緩衝液(最終濃度為1x)；及cDNA模板。
熱循環程式為94℃×30秒，72℃×3分鐘之5次循環；94℃×30秒、70℃×30秒、72℃×3分鐘之5次循環；94℃×30秒、68℃×30秒、72℃×3分鐘之25次循環，隨後延長72℃×7分鐘。將擴增DNA片段藉由瓊脂糖凝膠電泳收集，且以QIAQUICK凝膠萃取套組(Qiagen Co.,Ltd.,Germany)純化。使用Zero Blunt TOPO PCR選殖套組(Invitrogen,Carlsbad,CA)將VH及LV之純化DNA片段整合至PCR 4 Blunt-TOPO載體中且將各構築質體轉型至大腸桿菌中且接著選殖。使用專一通用載體引子M13F(SEQ ID NO：58)及M13R(SEQ ID NO：59)分析構築質體中各插入物(HV及LV)之核苷酸序列。基於由VH及VL獲得之序列，設計寡核苷酸引子以擴增各別之VH及VL(參見表2)。
將編碼E63、F23、E1及F19 VH及VL之cDNA自PCR4 Blunt- TOPO載體PCR次選殖至IgG1表現載體中。由於E13為具有κ單鏈(參見以下)融合瘤之IgG1亞型，故不需要將E13 cDNA次選殖至IgG1載體中以供進一步分析。
首先，設計含有5'-SalI及3'-NheI限制酶辨識位點之寡核苷酸引子以藉由PCR擴增重鏈之可變區(VH)。舉例而言，在E63VH之情況下，使用pTopoE63VH mini-prep DNA作為模板，E63HF85(SEQ ID NO：60)及E63HR38(SEQ ID NO：61)作為引子(參見表2)以PFU ULTRA DNA聚合酶進行PCR。以NheI及SalI消化後，將PCR產物次選殖至以NheI及SalI(8.9千鹼基對DNA片段)預消化之IgG1表現載體(IDEC Pharmaceuticals,San Diego,CA,N5KG1-Val Lark(N5KG1經修飾載體(美國專利第6,001,358號))中。藉由限制消化分析VH之存在。
其次，設計含有5' BglII及3' BsiWI限制酶辨識位點之寡核苷酸引子以藉由PCR擴增輕鏈之可變區(VL)。舉例而言，次選殖上述E63VH後，藉由以BglII及BsiWI消化DNA載體將E63VL插入N5KG1-Val Lark-VH載體中。接著分離9.1kb DNA片段。類似於VH構築體，設計VL之一組PCR引子以使其含有5'BglI及3'BsiWI之辨識位點。使用此等引子E63LF84(SEQ ID NO：62)及E63LR43(SEQ ID NO：63)自pTopoE63VL mini-prep質體DNA擴增VL。將PCR產物以BglII及BsiWI消化且以瓊脂糖凝膠電泳及凝膠純化分離。將含有E63VL之此片段以T4 DNA連接酶接合至所製備之9.1kb載體上且用以使Top10細胞(Invitrogen)轉型。選擇陽性大腸桿菌轉化子。將此表現載體pG1K112E63純化且以限制分析確定E63VL及E63VH區之存在。
以與E63G1基本相同之方式產生載體以產生重組F23G1、E1G1及F19G1抗體。使用F23HF86(SEQ ID NO：66)及F23HR55(SEQ ID NO：67)執行F23VH之PCR擴增。F23VL擴增引子為F23LF36(SEQ ID NO：68)及F23LR43(SEQ ID NO：69)。使用E1HFSal1(SEQ ID NO：70)及 E1HRNheI(SEQ ID NO：71)執行E1VH之PCR擴增。使用與E1KR2BsiWI(SEQ ID NO：75)或E1KR3BsiWI(SEQ ID NO：76)配對之E1KF2+3BglII(SEQ ID NO：74)執行E1VL κ(A)、E1VL κ(B)及E1VL κ(C)之PCR擴增。使用F19HFSalI(SEQ ID NO：72)及F19HRNheI(SEQ ID NO：73)執行F19VH之PCR擴增。使用F19KR1+2BsiWI(SEQ ID NO：77)及F19KF1+2+3BglII(SEQ ID NO：79)進行F19L κ(A)及F19L κ(B)之PCR擴增。使用F19KR3BsiWI(SEQ ID NO：78)及F19KF1+2+3BglII(SEQ ID NO：79)進行F19L κ(C)之PCR擴增。亦藉由限制酶消化及定序確認所得載體，pKLG1/F23、pKLG1/E1及pKLG1/F19。由序列分析偵測到，由於讀框移位而使F19L κ(D)未經PCR擴增，其產生抗體之C端區段。
E63重鏈可變區(VH)之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：43)：
E63 κ輕鏈可變區(VL)之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：48)：
F23重鏈可變區之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：45)：
F23 κ輕鏈可變區之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：50)：
E1重鏈可變區之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：41)：
E1 κ輕鏈可變區#1之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：102)：
E1 κ輕鏈可變區#2之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：46)：
E1 κ輕鏈可變區#3之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：103)：
E13重鏈可變區之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：42)：
E13 κ輕鏈可變區之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：47)：
F19重鏈可變區之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：44)：
F19 κ輕鏈可變區#1之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：104)：
F19 κ輕鏈可變區#2之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：49)：
F19 κ鏈可變區#3之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：105)：
F19 κ鏈可變區#4之cDNA之核苷酸序列(自起始密碼子(ATG)至可變區末端)(SEQ ID NO：106)：
E63重鏈可變區之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：3)：
E63 κ輕鏈可變區之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：8)：
F23重鏈可變區之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：5)：
F23 κ輕鏈可變區之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：10)：
E1重鏈可變區之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：1)：
E1 κ輕鏈可變區#1(E1κ(A))之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：82)：
E1 κ輕鏈可變區#2(E1κ(B))之cDNA之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：6)：
E1 κ輕鏈可變區#3(E1κ(C))之cDNA之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：83)：
E13重鏈可變區之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：2)：
E13 κ輕鏈可變區之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：7)：
F19重鏈可變區之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：4)：
F19 κ輕鏈可變區#1(F19κ(A))之cDNA之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：90)：
F19 κ輕鏈可變區#2(F19κ(B))之cDNA之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：9)：
F19 κ輕鏈可變區#3(F19κ(C))之cDNA之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：91)：
F19 κ輕鏈可變區#4(F19κ(D))之cDNA之胺基酸序列(前導序列(粗體)及可變區)(SEQ ID NO：92)：
KM mouseTM係於例如Fishwild等人1996,Nat.Biotechnol.14：845-51；Lonberg等人2005 Nat.Biotechnol.9：1117-1125；Tomizuka等人2000 Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：722-7；Tomizuka 1997 Nat Genet.16：133-43中描述，其各自之全文係以引用的方式併入本發明中。由於KM mouseTM之性質(例如在產生κ轉殖基因菌株時將一條以上之κ鏈基因整合至鼠科基因體中)，故可能具有自純系融合瘤表現之一條以上κ輕鏈cDNA。為確定是否為此情況，定序最小十個cDNA純系。在分離一條以上之κ輕鏈抗體cDNA(例如E1及F19)之情況下，產生含有與各κ cDNA組合之多種重鏈cDNA對之若干構築體。使用293FECTIN(Invitrogen,San Diego,CA)將此等表現構築體轉染至293F細胞中。接著測試七十二小時培養物上清液之抗體活性以識別免疫專一性結合至hLIGHT之正確重鏈及輕鏈對(例如藉由西方墨點、ELISA或其他類似方法)。關於特徵化具有多條κ鏈之抗體(例如E1及F19)之例示性方法，請參考以下實例3。
自293F細胞產生重組人類抗hLIGHT抗體：將293F細胞之懸浮培養物維持於Freestyle 293表現培養基中，同時在37℃之8% CO2加濕恆溫箱中以約120rpm/min震盪。對於重組抗體之瞬間表現而言，使用293-fectin(Invitrogen,Carlsbad,CA)，根據製造者說明以30μg編碼重組IgG1形式之E63或F23抗hLIGHT抗體之各質體轉染3×107 293F細 胞。在正常生長條件下使轉染物於30ml FREESTYLE 293表現培養基中之懸浮液中生長5天。收集生長培養基且藉由以300g之速率離心隨後經由0.22μm過濾器過濾移除細胞。存在於此未經純化材料中之抗體濃度係藉由hIgG ELISA測定且用於活體外檢定以評定子類轉換抗體之功能性質。
結果
將KM miceTM以CFA/IFA中可溶重組FLAG標記之hLIGHT免疫。藉由ELISA及FACS分析hLIGHT-EL4細胞染色所量測，若干小鼠產生之抗hLIGHT專一抗體在人類IgG hLIGHT專一力價範圍內。將來自最高反應者之脾細胞與骨髓瘤細胞融合以產生產生人類抗hLIGHT之融合瘤。藉由個別融合瘤產生抗hLIGHT抗體係以藉由抗hLIGHT ELISA之最初篩檢來測定。在此篩檢中，將抗FLAG抗體塗覆於培養盤上以俘獲FLAG標記之重組hLIGHT以成功遮蔽FLAG抗原決定基且防止產生抗FLAG抗體融合瘤之分離。將來自ELISA陽性純系之培養基用於藉由流式細胞儀染色hLIGHT-EL4細胞株之第二篩檢中以確認識別免疫專一性結合至原生形式hLIGHT之抗體。
藉由將由融合瘤產生之抗體阻斷HVEM：Fc及LTβR：Fc與hLIGHT-EL4細胞結合之能力分等以測試陽性融合瘤之拮抗活性。使此阻斷活性標準化至由人類IgG ELISA測定之抗體濃度。藉由限制稀釋選殖前15個候選者以產生單株融合瘤，同時冷凍其餘候選者。產生此等15個抗體自消光培養物(<1mg)之小規模純化以供基於以下標準進一步表徵且分等：hLIGHT之相對結合親和力、阻斷人類HVEM：Fc及LTβR：Fc與hLIGHT-EL4細胞結合之能力、彼此交叉阻斷之能力及阻斷可溶及細胞表面表現hLIGHT介導之趨化因子自結腸上皮細胞株HT29.14s分泌之能力。基於此等研究，所選擇之前5個候選者(E1、E13、E63、F23及F19)之特性係呈現於圖3中。
E1、E13、E63、F23及F19抗hLIGHT單株抗體各自專一性結合至活化人類T細胞株(II23.D7)及穩定hLIGHT表現細胞株hLIGHT-EL4，但不結合至親本EL4或其餘II23.D7細胞(圖1A)。此等人類抗hLIGHT抗體之結合達到飽和(圖1B)。藉由滴定標記hLIGHT-EL4細胞所需之抗體量來測定各抗體之功能穩定狀態結合親和力(圖2A及2B)。進行非線性回歸分析以測定各候選者之功能結合親和力量值或EC50(圖3)。觀測功能親和力之範圍。認為在分等及選擇過程中，飽和時較低EC50以及較高含量染色(平均螢光強度(MFI))皆為理想的。
藉由ELISA測試抗體以確定其是否彼此競爭結合可溶hLIGHT(圖4)。於此分析中識別兩種hLIGHT抗原決定基。"E抗體"(E1、E13及E63)彼此交叉阻斷，且"F抗體"(F19及F23)彼此交叉阻斷。然而"E抗體"不能交叉阻斷"F抗體"且"F抗體"不能交叉阻斷"E抗體"。如所期望，在此檢定中所有抗體自身阻斷。
使用基於流式細胞儀之檢定得到之E1、E13、E63、F23及F19阻斷人類HVEM：Fc及LTβR：Fc融合蛋白與細胞表面表現hLIGHT結合的能力分別展示於圖5A及5B及圖6A及6B中。在此等實驗中，將分級量之各抗體添加至EL4-hLIGHT細胞株中，隨後添加次飽和量之受體融合蛋白。藉由His標記LTβR：Fc之抗His抗體或生物素標記HVEM：Fc之抗生蛋白鏈菌素PE偵測受體融合蛋白。如所展示，與對任一Fc受體結合不具有效應之完全人類抗流行性感冒M2抗體相比，各抗體阻斷任一受體融合蛋白結合hLIGHT。在各實驗中，所有抗體以劑量依賴方式阻斷受體結合使得能夠以非線性回歸分析測定IC50劑量(圖3)。當將可能之候選者分等時，考慮此等值。
為直接證明本發明拮抗性抗體阻斷hLIGHT介導之信號轉導，建立活體外量測hLIGHT介導之信號轉導之檢定。為此目的，以分級量之可溶hLIGHT處理表現LTβR及HVEM之結腸上皮細胞株HT29.14s且 在若干天之時程中分析生長培養基中分泌細胞激素之存在。使用標準ELISA及懸浮陣列多路傳輸分析，確定hLIGHT以劑量依賴方式誘發CCL20、IL-8及RANTES(圖7及圖8A及8B)。圖7表示於第3日收集之可溶hLIGHT之劑量滴定。可將重組TNF用作經由TNF受體之趨化因子誘發的正性對照，而將淋巴毒素(LTα1β2)用作經由LTβR之信號轉導之正性對照。將FLAG標記之細菌鹼性磷酸酶(FLAG-BAP)用作經標記不相關蛋白負性對照。如所期望，藉由以hLIGHT接觸細胞產生之趨化因子含量等於彼等以LTαβ誘發之趨化因子，而TNF更有效地誘發CCL20及IL-8，但誘發類似含量之RANTES。使用此細胞反應檢定量測hLIGHT信號轉導且評定本發明抗體活體外阻斷hLIGHT介導之信號轉導事件之能力。
在hLIGHT介導之HT29.14s CCL20誘發檢定中，以恆定量之重組可溶hLIGHT預培育分級量之抗hLIGHT抗體，接著添加至HT29.14s細胞中(圖9)。在處理後第3日或第4日檢定趨化因子含量，且與以單獨之可溶hLIGHT或以作為同型對照之不相關完全人類抗流行性感冒M2蛋白預培育之可溶hLIGHT誘發的含量相比較。在此等檢定中，本發明中所測試之本發明抗體以劑量依賴方式阻斷可溶hLIGHT介導之CCL20誘發。在一些情況下，非線性回歸分析能夠產生IC50值。
不希望受縛於任何特定機制或理論，咸信由結合至其於其他細胞上之同源受體之細胞表面hLIGHT起始的信號轉導對於經由HVEM相互作用發揮觀測到T細胞協同刺激活性或經由消化道、脾或淋巴結之基質或上皮來源細胞上表現之LTβR增加趨化因子產生而言可為關鍵的。與可溶因子相比，消化道中CCL20誘發似乎更多地由與上皮細胞接觸之細胞上之LTβR配位體表現來調控(Rumbo等人2004 Gastroenterology 127 213-23)。因此，研發細胞表面hLIGHT信號轉導檢定以評定該等抗體阻斷細胞表面hLIGHT之能力。在此檢定中，使 用福馬林(formalin)固定之hLIGHT-EL4細胞以與可溶hLIGHT檢定類似之方式藉由將其以HT29.14s細胞一起培育而誘發趨化因子。此等細胞以與可溶hLIGHT相同之含量誘發CCL20及RANTES。以固定hLIGHT-EL4細胞預培育分級量之抗hLIGHT抗體時，阻斷RANTES誘發至未添加hLIGHT表現細胞時所觀測到之含量(圖10)。在相同實驗中，同樣抑制CCL20。此等資料共同表示本發明抗體可活體外阻斷可溶及膜結合hLIGHT信號轉導。
實例2-市售之小鼠抗人類單株抗體之特徵
抗體交叉阻斷。交叉阻斷實驗係如實例1所述，使用可自R&D Systems("R&D小鼠mAb")及Abnova("Abnova小鼠mAb")購得之小鼠抗hLIGHT單株抗體以及如實例1中所識別之人類抗hLIGHT單株抗體進行以評定抗體結合至何種hLIGHT抗原決定基。將結果呈現於圖11中。
結果展示R&D小鼠mAb結合至與人類E1、E13及E63單株抗體("人類E抗體")相同之抗原決定基，以及與人類F19及F23單株抗體("人類F抗體")相同之抗原決定基。因此，與發現僅免疫專一性結合至兩個不同抗原決定基中之一個之實例1中所識別的人類抗hLIGHT E & F單株抗體相比，R&D小鼠mAb結合至兩個hLIGHT抗原決定基。亦即，實例1中所識別之人類E抗體及人類F抗體彼此不交叉阻斷。人類E抗體交叉阻斷其他人類E抗體且人類F抗體交叉阻斷其他人類F抗體；而人類E抗體及人類F抗體均能夠交叉阻斷R&D小鼠mAb。類似地，R&D小鼠mAb交叉阻斷人類E抗體以及人類F抗體。
結果亦展示Abnova小鼠mAb不結合藉由人類E抗體及人類F抗體結合之任一抗原決定基。亦即，Abnova小鼠mAb不被人類E1、E13、E63、F19或F23抗體中之任一者交叉阻斷，Abnova小鼠mAb亦不能交叉阻斷人類E1、E13、E63、F19或F23抗體中之任一者。
抗體對HVEM：Fc與293 hLIGHT細胞結合之阻斷活性。如實例1所述測試E1、E13及F19人類抗hLIGHT單株抗體、R&D小鼠mAb、市售之山羊抗hLIGHT多株抗體(R&D Systems)及兔抗hLIGHT多株抗體(eBioscience)阻斷將HVEM：Fc結合至表現hLIGHT之293細胞的能力。結果展示於圖12及圖14B中。如以FACS分析所測定，所有四個單株抗體均能夠以劑量依賴方式抑制結合。R&D山羊多株抗體能夠抑制HVEM：Fc結合，而eBioscience兔多株抗體不抑制其結合。
抗體對LTβR：Fc與293 hLIGHT細胞結合之阻斷活性。如實例1所述測試E1及E13人類抗hLIGHT單株抗體、R&D小鼠mAb、市售之山羊抗hLIGHT多株抗體(R&D Systems)及兔抗hLIGHT多株抗體(eBioscience)阻斷將LTβR：Fc結合至表現hLIGHT之293細胞的能力。結果展示於圖13及圖14B中。如以FACS分析所測定，所有四個單株抗體均能夠以劑量依賴方式抑制結合。R&D山羊多株抗體能夠抑制LTβR：Fc結合，而兔eBioscience多株抗體不抑制其結合。
與原生及變性hLIGHT之結合。將五微克可溶人類LIGHT於2×SDS檢體緩衝液中煮沸(變性)或不經處理(原生)且接著將兩者以6×增量連續稀釋。使用八爪微量吸管(8 multi-channel pipette)將5μl各hLIGHT稀釋液同時點於水合0.2μm PVDF膜(Invitrogen,Carlsbad,CA)上。使墨點風乾，接著再水合，阻斷(1×TBST(Tris緩衝生理鹽水Tween-20)+2.5%脫脂奶+0.02%疊氮化鈉)。以5μg/ml各初級抗體探測各墨點(參見以下)。將墨點於1×TBST、隨後於5μg/ml生物素標記第二Abs(生物素-山羊α人類(Vector Labs,Burlingame,CA)、生物素-山羊α小鼠(Jackson labs,Bar Harbor,ME)、生物素-小鼠α山羊(Sigma-Aldrich corp.,St.Louis,MO))洗滌3次。將墨點於1×TBST，隨後於超SA-HRP(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ)中洗滌3次。將化學發光用於使用ECL偵測套組(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ)之偵 測且藉由曝露於X-OMAT AR成像膜(Kodak,Rochester,New York)來顯現信號。
所測試之初級抗體為E1、E13、E63、F19、F23人類抗hLIGHT mAb(參見實例1)、可自R&D Systems("R&D小鼠mAb")及Abnova("Abnova小鼠mAb")購得之鼠科抗hLIGHT單株抗體、山羊抗hLIGHT多株抗體製劑(R&D Systems"R&D山羊pAb")及兩種兔抗hLIGHT多株抗體製劑(eBioscience("eBioscience兔pAb")及Peprotech("Peprotech兔pAb"))。
結果展示於圖15及圖16B中。於此檢定中測試之本發明之人類抗hLIGHT單株"E抗體"(E1、E13及E63)免疫專一性結合至原生及變性形式之可溶hLIGHT(圖15A及圖16)。抗體E63免疫專一性結合至比變性hLIGHT(偵測之最低限為139ng變性hLIGHT)低之濃度原生hLIGHT(偵測之最低限為3.9ng原生hLIGHT)。抗體E1亦免疫專一性結合至與變性hLIGHT(偵測之最低限為139ng變性hLIGHT)相比較低濃度之原生hLIGHT(偵測之最低限為23ng原生hLIGHT)。抗體E13以對於兩種形式之hLIGHT而言0.64ng之偵測最低限免疫專一性結合至原生及變性形式之hLIGHT。
與人類抗hLIGHT單株抗體"E抗體"相比，於此檢定中測試之本發明之人類抗hLIGHT單株"F抗體"(F19及F23)免疫專一性結合至原生形式之可溶hLIGHT(偵測之最低限為23ng原生hLIGHT)，但不結合至變性形式，即使為最高(>5000ng)濃度之變性hLIGHT(圖15A及圖16)。
於此檢定中測試之市售小鼠抗hLIGHT單株抗體(R&D小鼠mAb及Abnova小鼠mAb)各自免疫專一性結合至原生及變性形式之可溶hLIGHT。R&D小鼠mAb免疫專一性結合至與變性hLIGHT(偵測之最低限為139ng變性hLIGHT)相比較低濃度之原生hLIGHT(偵測之最低限為23ng原生hLIGHT)。Abnova小鼠mAb免疫專一性結合至大約相 等濃度之原生及變性形式可溶hLIGHT(偵測之最低限分別為0.64ng原生或變性hLIGHT)。
三種市售之抗hLIGHT多株抗體製劑(R&D山羊pAb、eBioscience兔pAb及Peprotech兔pAb)各自結合至原生及變性形式之可溶hLIGHT。R&D山羊pAb免疫專一性結合至與變性hLIGHT(偵測之最低限為0.13ng變性hLIGHT)相比略微較低濃度之原生hLIGHT(偵測之最低限為0.04ng原生hLIGHT)。eBioscience兔pAb亦免疫專一性結合至與變性hLIGHT(偵測之最低限為1.2ng變性hLIGHT)相比略微較低濃度之原生hLIGHT(偵測之最低限為0.4ng原生hLIGHT)。類似地，Peprotech兔pAb亦免疫專一性結合至與變性hLIGHT(偵測之最低限為0.13ng變性hLIGHT)相比略微較低濃度之原生hLIGHT(偵測之最低限為0.04ng原生hLIGHT)。
表現hLIGHT受體之細胞的生物活性之抑制。亦如實例1所述進行實驗以確定市售之小鼠抗hLIGHT單株抗體能否競爭性阻斷可溶hLIGHT與HT29.14s細胞上之細胞表面表現LTβR及HVEM之結合。結果呈現於圖17(CCL20)及圖18(RANTES)中，且展現R&D小鼠mAb及Abnova小鼠mAb均不能抑制由此等細胞LIGHT介導產生CCL20或RANTES趨化因子，而人類E13及人類F23 mAb能夠使趨化因子分泌降低至背景含量。
實例3-F19及E1人類抗hLIGHT抗體κ鏈之特徵
使用實例1中所論及之程序發現較佳κ鏈，即由E1及F19融合瘤產生之抗體重鏈對。基於此等實驗結果，展示E1κ(B)(SEQ NO：6)為由E1融合瘤產生之hLIGHT抗體之較佳κ輕鏈，且F19κ(B)(SEQ ID NO：9)為由F19融合瘤產生之hLIGHT抗體之較佳κ輕鏈。
重組單κ鏈抗體係藉由瞬間轉染含有與存在於親本融合瘤細胞中之各個別κ鏈基因配對之重鏈基因的哺乳動物表現載體而產生。接著 與由各別之親本融合瘤產生之純化抗體同時測試此材料。
抗體結合檢定係如實例1中所述執行。κ鏈，即包含E1κ(B)或F19κ(B)之重鏈對以與各別親本融合瘤產生之抗體相比相等之程度專一性染色hLIGHT穩定轉染之細胞株(HEK 293-hLIGHT)(圖19)。
如實例1中所述執行交叉阻斷ELISA實驗，且結果顯示此等重組抗體辨識hLIGHT上與其親本融合瘤Ab相同之抗原決定基(圖20)。
如實例1所述進一步測試單κ鏈重組抗體阻斷細胞表面表現hLIGHT與可溶受體Fc融合形式之人類HVEM及LTβR結合之能力(圖21)。阻斷程度不同於親本Ab。
最後，如實例1及2所述測試重組單κ鏈抗體抑制自HT29結腸上皮細胞hLIGHT介導分泌CCL20之能力(圖22及圖23)。在此等實驗中，類似於親本融合瘤，以抗hLIGHT抗體培育可溶hLIGHT阻斷自HT29.14s細胞hLIGHT介導分泌CCL20。
此外，單κ鏈重組物亦維持親本融合瘤產生之抗體在原生對變性LIGHT之點漬墨法評定中之專一性(資料未展示)。
此等結果共同表示E1κ(B)(SEQ ID NO：6)為用於與E1重鏈(SEQ ID NO：1)組合之較佳κ輕鏈，且F19κ(B)(SEQ ID NO：9)為用於與F19重鏈(SEQ ID NO：4)組合之較佳κ輕鏈。
實例4-抗體結合及抗體介導阻斷HVEM：FC及LTβR：FC與LIGHT之單核苷酸多態性(SNP)突變體之結合
存在至少兩種人類LIGHT非同義單核苷酸多態性(SNP)突變體(圖24)。一種SNP突變體編碼胺基酸位置214處之麩胺酸(E)或離胺酸(K)且另一種SNP突變體編碼胺基酸位置32處之絲胺酸(S)或白胺酸(L)。如圖24A-24B所示，各種種群中之各SNP突變體之對偶基因頻率不同。因此，結合給定SNP突變體之hLIGHT抗體在具有較高給定SNP突變體發生率之彼等種群中可更有效地治療或預防hLIGHT介導之疾病 或其症狀。
在此實例中，展示本發明所提供之hLIGHT抗體結合存在於hLIGHT胞外及細胞質域中之非同義hLIGHT SNP突變體。此等抗體與SNP突變體之結合亦與抗體有效阻斷HVEM：Fc及LTβR：Fc與hLIGHT SNP突變體結合，且亦有效阻斷表現hLIGHT受體之細胞生物活性的能力相關。
抗體結合。如實例1所述執行F23及E1κ(B)抗體之劑量滴定來確定此等抗體是否結合細胞表面表現之hLIGHT SNP突變體。將基本如實例1所述製備且穩定細胞表現各別hLIGHT SNP突變體之EL4細胞株用於此等實驗中。如分別於圖25A及25C中所示，F23及E1κ(B)抗體各自結合至214E-32S及214E-32L SNP突變體。然而，如圖25B所示，僅F23而非E1κ(B)抗體辨識214K-32S SNP突變體。
亦測試F23(IgG1)、F19、E63及E1κ(B)抗體以確定"F抗體"與"E抗體"辨識任一形式SNP突變體之能力是否存在差異。如圖26A及26B所示，F23及F19抗體結合214E及214K SNP形式之hLIGHT。然而，E63及E1κ(B)抗體僅結合主要形式之LIGHT 214E而非214K(圖26A及26B)。
抗體阻斷HVEM：Fc及LTβR：Fc與LIGHT SNP突變體214K-32S結合之活性。由於F23抗體結合主要形式(214E)及較次要形式(214K)之LIGHT突變體，故其次確定F23抗體是否能夠阻斷HVEM：Fc或LTβR：Fc之結合。如實例1執行受體融合蛋白之抗體介導阻斷。簡言之，將細胞株EL4-214K-32S以增加量之抗LIGHT抗體培育隨後添加HVEM：Fc或LTβR：Fc。此預培育對受體結合之效應係如實例1藉由偵測HVEM：Fc或LTβR：Fc來評定。如圖25D所示，F23抗體有效阻斷HVEM：Fc及LTβR：Fc與LIGHT 214K-32S突變體之結合。
抑制表現LIGHT受體之細胞之細胞表面LIGHT SNP突變體介導 的生物活性。進行此研究以確定結合至214K及214E hLIGHT SNP突變體之先前展示之人類抗hLIGHT單株抗體能否亦藉由細胞表面表現hLIGHT 214E或214K SNP突變體或其可溶hLIGHT SNP突變體有效地阻斷表現LTβR及HVEM之人類結腸上皮細胞HT29.14s中之RANTES分泌。在細胞表面表現LIGHT介導之HT29.14s RANTES誘發檢定中，以恆定數量之表現hLIGHT之SNP突變體(214K或214E)之細胞預培育分級量之抗hLIGHT抗體。在處理後第3日檢定趨化因子含量，且與以僅有可溶hLIGHT、僅有表現hLIGHT之細胞或以作為同型對照蛋白之不相關人類IgG預培育之細胞所誘發的含量相比較。
在此等檢定中，本發明中所提供之抗體(F19及F23)以劑量依賴方式阻斷可溶hLIGHT及細胞表面表現hLIGHT SNP突變體(214E或2143K)介導之RNATES之誘發。無論SNP突變體為何，可自R&D systems購得之市售小鼠抗hLIGHT單株抗體(R&D小鼠mAb，如實例1中)不能阻斷可溶或細胞表面表現hLIGHT介導之趨化因子分泌。細胞表面表現hLIGHT突變體及可溶重組hLIGHT正性對照誘發相等含量之RANTES，且具有細胞表面表現hLIGHT突變體或可溶重組hLIGHT之負性對照同型hIgG之預培育不顯著降低RANTES含量。
討論。在hLIGHT基因座中三十多個單核苷酸多態性(SNP)中，存在至少兩個頻率資料與其相關之非同義hLIGHT(圖24)。一個編碼hLIGHT胺基酸位置214處之麩胺酸(~0.9)或離胺酸(0.1)且位於hLIGHT胞外區中。另一個編碼胺基酸殘基32處之絲胺酸(0.99)或白胺酸(0.011)且位於hLIGHT之細胞質域中。hLIGHT基因座位於含有易患發炎性腸病之基因座之染色體區ch19p13.3(Rioux等人(2000)Am J Hum Genet.66：1863-70)，且因此暗示SNP可能與IBD疾病頻率相關。因此，關注確定本發明所提供之拮抗性抗hLIGHT抗體能否辨識hLIGHT之非同義SNP突變體。
在此實例中，吾人測試抗hLIGHT抗體與在EL4細胞株表面穩定表現之hLIGHT SNP突變體結合之能力。如圖25A及25B所示，F23結合SNP突變體214E及214F，而E1κ(B)僅結合主要形式之214E。F23同樣阻斷HVEM：Fc或LTBR：Fc與此等細胞之結合(圖25D)。如所期望，細胞質SNP未表現出影響任一抗體之結合(圖25C)。當測試"E抗體"及"F抗體"時，僅F抗體能夠結合至214K及214E SNP突變體(圖26A及26B)。市售R&D小鼠mAb抗體亦能夠結合兩種SNP突變體(資料未展示)。
抗hLIGHT抗體除活體外阻斷可溶形式之受體結合至LIGHT SNP突變體以外，細胞表面hLIGHT SNP介導之趨化因子誘發亦係受本發明之抗hLIGHT抗體抑制。在此檢定中，將表現214E或214K hLIGHT SNP突變體之EL4細胞株以福馬林固定且用以處理HT29結腸上皮細胞株。如圖27所示，單獨之此等細胞株誘發與1μg可溶LIGHT相比類似含量之RANTES。藉由以分級量之抗體預培育hLIGHT表現細胞株測試抗hLIGHT"F抗體"且將其與同型對照或市售R&D小鼠mAb比較。F23及F19κ(B)皆抑制由任一SNP突變體表現細胞株介導之RANTES分泌。然而，R&D小鼠mAb及人類同型負性對照不抑制任一LIGHT SNP突變體之RANTES分泌。儘管R&D小鼠mAb能夠結合兩種SNP突變體，事實亦為如此。此等結果不僅表明本發明之F23及F19κ(B)抗體阻斷LIGHT SNP突變體之任一信號轉導，且亦展現優於市售R&D小鼠mAb之優越性。
實例5-124F23於急性異種移植物抗宿主疾病模型中之活體內功效研究
在此實例中，於鼠科急性異種移植物抗宿主疾病模型(GVHD)中評估本發明所提供之抗hLIGHT抗體之活體內功效。在此模型中展示F23抗體減低所有大體病理(腹瀉、腹膜發炎及腹水及腸道發炎)及組織病理(發炎嚴重性、發炎範圍、絨毛損傷/萎縮及涉及百分比)以及降 低脾中T細胞數。
自全血純化人類PBMC：在Scripps Green Hospital(La Jolla,CA)中以正常血液供體程式自18與50歲之間之健康供體收集全血，且添加肝素防止凝結。不指定種族、種群或性別。將血液於PBS中稀釋且接著以FICOLL-PLAQUE Plus(Amersham Biosciences)墊於其下。藉由以1800RPM無制動離心自血清及血小板分離單核細胞。接著收集含有PBMC之介面且以PBS洗滌兩次。
急性移植物抗宿主疾病活體內模型：使用急性異種移植物抗宿主疾病模型以活體內測試F23(124F23G1)人類抗人類LIGHT抗體之治療潛力(Watanabe等人2006 1006.Clin Immunol.120 247-59)，基本如圖28中所概述。簡言之，於-2日，向5-10週齡之嚴重聯合免疫缺陷(SCID)雄性小鼠注射20μg大鼠抗小鼠IL2受體β(IL2Rβ)鏈抗體(TMβ1，Tanaka等人1993 J Exp Med.178 1103)以耗盡內源性鼠科天然殺傷細胞。次日(-1日)，使小鼠接收2.5Gy之使用銫來源之次致死量輻射以使得人類細胞遷移至腸道。次日(0日)藉由腹膜內注射使小鼠接收PBS中1千萬總人類外周血單核細胞，隨後即刻以100μl PBS中100μg之劑量靜脈內注射人類抗人類LIGHT(124F23G1)或負性對照hIgG1(抗二硝基酚(抗DNP)，Kirin Brewery Co.Ltd.)抗體。人類T細胞會擴展且誘發類移植物抗宿主疾病及其症狀，導致(例如)體重喪失、血尿、腹水、肝及腸道中發炎性細胞滲透且最終死亡。疾病最初係由人類T細胞介導，因為僅有T細胞轉移會誘發類似症狀。每3-4天量測體重且每週使小鼠接收抗IL2Rβ抗體。第12日，將小鼠處死且分析疾病大體病理及症狀，收集脾以供流式細胞儀分析且收集盲腸以供組織學分析，且收集血清以供人類細胞激素及抗體分析(Watanabe等人1006.Clin Immunol.120 247-59)。
人類抗人類LIGHT單株抗體之活體內功能分析。將於第12日觀 測到之大體病理如下計分：腹瀉(0或1)、腸及腹膜腔出血及腹膜炎(各自分等為0、1、2或3分別作為無、輕度、中度或重度)。使用所有疾病症狀總和測定總大體病理計分。如圖29所示，僅接收對照抗體或PBMC(無抗體注射)之小鼠均展現具有比接收124F23G1抗LIGHT抗體之小鼠高之病理計分的GVHD症狀。
對盲腸H&E切片進行組織病理分析且如下計分：發炎嚴重性、發炎範圍、絨毛損傷/萎縮及涉及百分比(各自分等為0、1、2或3分別作為無、輕度、中度或重度)。最終計分為各種類之總和，其中各小鼠之最高計分為12。如圖30所示，僅接收對照抗體或PBMC(無抗體注射)之小鼠具有類似組織病理，而以124F23G1注射之小鼠不具有疾病之組織學病徵。於抗LIGHT處理之動物體內觀測到之盲腸組織學實例係於圖31A中說明，該圖展示了均勻絨毛結構、黏膜下層及肌肉層以及缺少腹水或血液。對比而言，來自經對照抗體處理之動物之盲腸組織學具有顯著疾病標誌，包括黏膜下層腹水填充，以紅血球叢集所指示之腸道出血病征及顯著淋巴細胞滲透(圖31B)。
對脾之分析與大體病理及組織病理一致。在以對照抗體處理之小鼠脾中存在人類T細胞，但經124F23G1處理之動物體內之人類T細胞數顯著低於對照動物體內之T細胞數(圖32)。
在後續研究中，可使用T細胞耗盡(IgG1)及/或非耗盡(IgG4PE)形式之抗hLIGHT抗體來評定疾病改善之機制，諸如T細胞是否被抗體阻斷或替代地經受細胞凋亡。
討論：急性移植物抗宿主疾病(GVHD)為與同種異體造血幹細胞移植相關之主要併發症。一般將GVHD定義為供體T細胞廣泛侵襲宿主組織。移植後，全身免疫抑制為目前防止GVHD之方法，然而其可導致條件性病原微生物感染且復發白血病。因此，阻斷T細胞協同刺激信號為更有前景的免疫抑制劑替代物中之一種。最近報導顯示T細 胞之LIGHT-HVEM協同刺激於GVHD中起關鍵病原作用(Xu等人(2007)109：4097-4104)。因此，拮抗性抗LIGHT抗體可具有治療GVHD之功效。於急性異種GVHD模型中表現之活體內功效表明此潛力。
急性異種GVHD模型為將人類PBMC注射至NK細胞耗盡之次致死輻射SCID小鼠中之模型(圖28)。在此模型中，輻射引起腸道損害且T細胞介導疾病之腸道發炎。動物在PBMC注射後大約12天內展現嚴重疾病病徵。疾病標誌包括以出血、腹水及絨毛萎縮表現之腸道發炎。在起始研究中，以100微克抗LIGHT抗體(124F23G1)處理小鼠會降低所觀測到之腸道中之大體病理(圖29)。同樣，藉由以盲腸組織病理之更精確分析(其中抗LIGHT抗體處理未導致可偵測之疾病)確證此降低(圖30)。圖31A展示來自經抗LIGHT處理之動物之盲腸的代表性H&E染色切片。對比而言，經對照抗體處理之動物之盲腸展現腸道中嚴重發炎之標誌，包括指示出血之細胞紅色斑點、大體上內捲流體填充之黏膜下層及淋巴細胞滲透(圖31B)。在此模型中，經轉移人類T細胞最初負責疾病誘發且脾T細胞數傾向於與疾病嚴重性相關。抗LIGHT抗體處理顯著降低脾中之總人類T細胞數(圖32)。因此，此等資料共同顯示抗LIGHT抗體於此模型中展示活體內功效，相對於負性對照顯著降低疾病病徵。
實例6-人類LIGHT/抗人類LIGHT抗體(F23)相互作用之X射線結晶分析
使用F23G1抗體(或其Fab片段)評定較佳辨識原生三聚hLIGHT之性質。結構分析使得能夠在抗hLIGHT抗體與hLIGHT分子之間識別專一性接觸胺基酸殘基以進一步定義抗體所辨識之構型抗原決定基。藉由直立式蒸氣擴散標準方法執行LIGHT-抗LIGHT Fab複合物結晶(參見例如McRee 1993：Practical Protein Crystallography(Academic Press,San Diego,CA)第1-23頁；Rhodes 1993：Crystallography Made Crystal Clear(Academic Press,San Diego,CA)第8-10,29-38頁)。使 用SYNCHROTRON分析晶體，且使用CCP4軟體組(Science & Technology Facilities Council,Computational Science and Engineering Department)(其為涵蓋大部分巨分子結晶所需計算之不同程式集合)分析資料。熟習此項技術者將瞭解，本發明中所提供之其他hLIGHT抗體可類似地用以確定hLIGHT抗原決定基結合及胺基酸接觸殘基。
實例7-結腸炎疾病模型中124F23之活體內功效研究
結腸炎之人類T細胞轉移模型。類似於Morrissey等人(1993)J Exp Med.178 237所述之小鼠結腸炎CD4+/CD45Rbhi轉移模型，以人類原生T細胞(CD45RA+CD45RO-)注射RAG-/-小鼠。在此模型中，與HLA型人類供體匹配之HLA轉殖基因菌株(C57BL/6NTac-[KO]Abb-[Tg]DR-4)回交至RAG-/-(B6.129S6-Rag2tm1FwaN12)背景上以使得能夠於小鼠接受者APC與人類供體T細胞之間呈現抗原。此相互作用對於消化道微生物群之T細胞辨識而言為必需的，認為其負責T細胞活化且使T細胞棲身於消化道中。動物經受未見於RAG-/-小鼠體內之體重喪失及消耗病，以及發炎。
在某些組中，人類抗hLIGHT抗體(例如F23)係與人類供體T細胞投與同時藉由靜脈內注射以每隻動物100μg(或例如2μg-500μg範圍內)之劑量投與。在某些組中，抗hLIGHT抗體係在人類供體T細胞投與之前及/或之後以各種時間間隔投與。由於抗LIGHT抗體結合活化T細胞表面上所表現之LIGHT，故預防及/或治療疾病症狀。在後續研究中，可使用T細胞耗盡(IgG1)及/或非耗盡(IgG4PE)形式之抗hLIGHT抗體來評定疾病改善之機制。舉例而言，IgG4抗LIGHT抗體能夠阻斷T細胞協同刺激及存活。
實例8-人類LIGHT敲入小鼠體內之IBD人類疾病模型
如本發明其他處所論述，LIGHT先前已涉及IBD疾病病理中(參見例如Wang等人2005 J.Immunol.174：8173-82；Wang等人2004 J.Clin. Invest.113：826-35；Cohavy等人2005 J.Immunol.174：646-53)。在此實例中，產生hLIGHT敲入小鼠IBD模型，且向動物投與本發明之人類抗hLIGHT單株抗體以評定此等抗體於IBD治療中之活體內功效。由於先前已展示此等抗體阻斷hLIGHT受體結合，阻斷hLIGHT生物活性(參見例如實例1-4)且治療GVHD(實例5)，故期望本發明hLIGHT抗體亦有效地治療IBD。
LIGHT敲入產生。使用標準基因靶向方法藉由同源重組產生亦具有標靶插入之人類LIGHT基因的小鼠LIGHT基因破壞之小鼠。簡言之，藉由將基因標靶構築體電穿孔插入野生型ES細胞中而產生基因標靶小鼠ES細胞。ES細胞基因體與標靶載體中側接人類LIGHT基因之兩個同源區之間的同源重組致使以人類LIGHT基因置換小鼠LIGHT基因。接著將胚胞植入假孕母鼠中導致產生嵌合小鼠。育種產生同源LIGHT敲入動物。
IBD人類疾病模型。使用經引入hLIGHT基因動物以建立IBD模型。所建立之一個IBD模型包括於飲用水中投與葡聚糖硫酸鈉(DSS)(參見例如Mähler等人1998 Am J Physiol.274G544-51)。簡言之，藉由給予任意採食之酸化飲用水中3.5%(w/v)DDS(mol.wt.36,100-45,000；TbD Consultancy,Uppsala,Sweden)歷時5天誘發實驗性結腸炎。接著停止DDS投與，且使小鼠僅接收之酸化飲用水，歷時16天直至第21日之屍體剖析。儘管可使用其他劑量，但此劑量誘發中度至重度之結腸炎，同時使死亡率最小。接著收集大腸且將盲腸自結腸分離。接著執行標準組織固定及H&E染色以確定發炎及損害之嚴重性。評定小鼠之病理、組織病理、消耗症候群及/或死亡。
所建立之第二個IBD模型包括直腸投與三硝基苯磺酸(TNBS)(參見例如Neurath等人1995 J Exp Med.182 1281-90)。簡言之，為誘發結腸炎，將小鼠以甲氧基氟烷(metofane)暫時麻醉，且接著將3.5F導管 小心地插入結腸中，使得時間為肛門近端約4cm。為誘發結腸炎，將50%乙醇中0.5mg半抗原試劑TNBS(Sigma,St.Louis,MO)(以破壞腸障壁)經由安裝到1ml注射器上之導管插入結腸內腔中。在對照實驗中，使小鼠僅接收50%乙醇。兩組中之總注射體積為100μl，使得TNBS或乙醇到達整個結腸，包括盲腸及闌尾。接著使動物保持垂直位置歷時30秒且返回其籠中，或小鼠結腸炎CD4+/CD45Rbhi轉移模型(參見例如Morrissey等人1993 J Exp Med.178 237-44)。基本如上所述，接著可(諸如)以每隻動物2-500μg之劑量將抗LIGHT抗體用於治療及預防已確立之疾病。接著收集大腸且將盲腸自結腸分離。在其後之各時間點，移除腸且接著執行標準組織固定及H&E染色以確定發炎及損害嚴重性。評定小鼠之病理、組織病理、消耗症候群及/或死亡。
所建立之第三個IBD模型為小鼠結腸炎CD4+/CD45RBhi轉移模型(參見例如Morrissey等人1993 J Exp Med.178 237-44)。簡言之，將經純化CD4+淋巴結T細胞根據其CD45RB表現揀選且注射至hLIGHT敲入小鼠中。接著執行標準組織固定及H&E染色以確定發炎及損害之嚴重性。評定小鼠之病理、組織病理、消耗症候群及/或死亡。
基本如上所述，可將抗hLIGHT抗體(例如每隻動物2-500μg之劑量)用於諸如上述之彼等之任何IBD模型以評定治療及預防IBD之功效。由於先前已展示此等抗體阻斷hLIGHT受體結合，阻斷hLIGHT生物活性(參見例如實例1-4)且治療GVHD(實例5)，故期望本發明hLIGHT抗體亦有效地治療IBD。
上述本發明之實施例僅意欲為例示性的，且熟習此項技術者將瞭解或能夠確認使用不超出常規實驗之本發明所述之特定程序的許多等效程序。認為所有該等等效物在本發明範疇內且涵蓋於以下申請專利範圍中。此外，除非上下文中清楚指出，否則本說明書及申請專利 範圍內所使用之單數形式"一"及"該"包括複數形式。因此，舉例而言，提及"一抗體"包括兩種或兩種以上該等抗體之混合物及其類似物。此外，普通熟習此項技術者將瞭解為解釋及申請專利之目的，操作序列必須以某種特定次序列出，但本發明涵蓋除該特定次序以外之各種變化。
本發明所述之所有參考文獻之內容係以引用的方式併入本發明中。
其他實施例在以下申請專利範圍內。
【生物材料寄存】
國內寄存資訊【請依寄存機構、日期、號碼順序註記】
1.食品工業發展研究所；96年11月08日；BCRC 960320
2.食品工業發展研究所；96年11月08日；BCRC 960321
3.食品工業發展研究所；96年11月08日；BCRC 960322
4.食品工業發展研究所；96年11月08日；BCRC 960323
5.食品工業發展研究所；96年11月08日；BCRC 960324
國外寄存資訊【請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記】
1.美國；American Type Culture Collection(ATCC)；2006年07月12日；PTA-7728
2.美國；American Type Culture Collection(ATCC)；2006年07月12日；PTA-7729
3.美國；American Type Culture Collection(ATCC)；2006年08月23日；PTA-7842
4.美國；American Type Culture Collection(ATCC)；2006 年08月17日；PTA-7818
5.美國；American Type Culture Collection(ATCC)；2006年08月17日；PTA-7819
<110> 日商麒麟醫藥股份有限公司 美國拉荷亞過敏及免疫協會
<120> 具拮抗性人類LIGHT專一性人類單株抗體
<130> 7505-049-228
<140> 096131608
<141> 2007-08-24
<150> 60/840,774
<151> 2006-08-28
<150> 60/897,875
<151> 2007-01-25
<160> 106
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 136
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1重鏈可變區
<400> 1
<210> 2
<211> 138
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E13重鏈可變區
<400> 2
<210> 3
<211> 141
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E63重鏈可變區
<400> 3
<210> 4
<211> 141
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19重鏈可變區
<400> 4
<210> 5
<211> 143
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F23重鏈可變區
<400> 5
<210> 6
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1κ輕鏈可變區#2(E1κ(B))
<400> 6
<210> 7
<211> 130
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E13κ輕鏈可變區
<400> 7
<210> 8
<211> 126
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E63κ輕鏈可變區
<400> 8
<210> 9
<211> 129
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19κ輕鏈可變區#2
<400> 9
<210> 10
<211> 129
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F23κ輕鏈可變區
<400> 10
<210> 11
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1重鏈可變區之CDR1
<400> 11
<210> 12
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1重鏈可變區之CDR2
<400> 12
<210> 13
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1重鏈可變區之CDR3
<400> 13
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E13重鏈可變區之CDR1
<400> 14
<210> 15
<211> 19
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E13重鏈可變區之CDR2
<400> 15
<210> 16
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E13重鏈可變區之CDR3
<400> 16
<210> 17
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E63重鏈可變區之CDR1
<400> 17
<210> 18
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E63重鏈可變區之CDR2
<400> 18
<210> 19
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E63重鏈可變區之CDR3
<400> 19
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19重鏈可變區#2(F19κ(B))之CDR1
<400> 20
<210> 21
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19重鏈可變區#2(F19κ(B))之CDR2
<400> 21
<210> 22
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19重鏈可變區#2(F19κ(B))之CDR3
<400> 22
<210> 23
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F23重鏈可變區之CDR1
<400> 23
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F23重鏈可變區之CDR2
<400> 24
<210> 25
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F23重鏈可變區之CDR3
<400> 25
<210> 26
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1輕鏈可變區#2(E1κ(B))之CDR1
<400> 26
<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1輕鏈可變區#2(E1κ(B))之CDR2
<400> 27
<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1輕鏈可變區#2(E1κ(B))之CDR3
<400> 28
<210> 29
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E13輕鏈可變區之CDR1
<400> 29
<210> 30
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E13輕鏈可變區之CDR2
<400> 30
<210> 31
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E13輕鏈可變區之CDR3
<400> 31
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E63輕鏈可變區之CDR1
<400> 32
<210> 33
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E63輕鏈可變區之CDR2
<400> 33
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E63輕鏈可變區之CDR3
<400> 34
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#2(F19κ(B))之CDR1
<400> 35
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#2(F19κ(B))之CDR2
<400> 36
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#2(F19κ(B))之CDR3
<400> 37
<210> 38
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F23輕鏈可變區之CDR1
<400> 38
<210> 39
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F23輕鏈可變區之CDR2
<400> 39
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F23輕鏈可變區之CDR3
<400> 40
<210> 41
<211> 408
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> E1重鏈可變區之cDNA
<400> 41
<210> 42
<211> 414
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> E13重鏈可變區之cDNA
<400> 42
<210> 43
<211> 423
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> E63重鏈可變區之cDNA
<400> 43
<210> 44
<211> 423
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> F19重鏈可變區之cDNA
<400> 44
<210> 45
<211> 429
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> F23重鏈可變區之cDNA
<400> 45
<210> 46
<211> 384
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> E1κ輕鏈可變區#2(E1κ(B))之cDNA
<400> 46
<210> 47
<211> 390
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> E13κ輕鏈可變區之cDNA
<400> 47
<210> 48
<211> 378
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> E63κ輕鏈可變區之cDNA
<400> 48
<210> 49
<211> 387
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> F19κ輕鏈可變區#2(F19κ(B))之cDNA
<400> 49
<210> 50
<211> 387
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> F23κ輕鏈可變區之cDNA
<400> 50
<210> 51
<211> 723
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> hLIGHT之核苷酸序列
<400> 51
<210> 52
<211> 240
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 全長hLIGHT
<400> 52
<210> 53
<211> 630
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 可溶FLAG標記hLIGHT(240 aa)
<400> 53
<210> 54
<211> 183
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 可溶FLAG標記hLIGHT(183 aa)
<400> 54
<210> 55
<211> 22
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子RACEUPS5’
<400> 55
<210> 56
<211> 31
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子IgG1p
<400> 56
<210> 57
<211> 30
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子HK5
<400> 57
<210> 58
<211> 18
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子M13F
<400> 58
<210> 59
<211> 17
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子M13R
<400> 59
<210> 60
<211> 41
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子E63HF85
<400> 60
<210> 61
<211> 37
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子E63HR38
<400> 61
<210> 62
<211> 42
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子E63LF84
<400> 62
<210> 63
<211> 40
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子E63LR43
<400> 63
<210> 64
<211> 25
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子HH-2
<400> 64
<210> 65
<211> 26
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子HK-2
<400> 65
<210> 66
<211> 41
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子F23HF86
<400> 66
<210> 67
<211> 34
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子F23HR55
<400> 67
<210> 68
<211> 42
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子F23LF36
<400> 68
<210> 69
<211> 40
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子F23LR43
<400> 69
<210> 70
<211> 41
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子E1HFSalI
<400> 70
<210> 71
<211> 37
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子E1HRNheI
<400> 71
<210> 72
<211> 41
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子F19HFSalI
<400> 72
<210> 73
<211> 37
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子F19HRNheI
<400> 73
<210> 74
<211> 42
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子E1KF2+3BglII
<400> 74
<210> 75
<211> 40
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子E1KR2BsiWI
<400> 75
<210> 76
<211> 40
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子E1KR3BsiWI
<400> 76
<210> 77
<211> 40
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子F19KR1+2BsiWI
<400> 77
<210> 78
<211> 40
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子F19KR3BsiWI
<400> 78
<210> 79
<211> 42
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 引子F19KF1+2+3BglII
<400> 79
<210> 80
<211> 23
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 前置引子
<400> 80
<210> 81
<211> 37
<212> DNA
<213> 人造序列
<220>
<223> 反置引子
<400> 81
<210> 82
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1κ輕鏈可變區#1(E1κ(A))
<400> 82
<210> 83
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1κ輕鏈可變區#3(E1κ(C))之cDNA胺基酸序列
<400> 83
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1輕鏈可變區#1(E1κ(A))之CDR1
<400> 84
<210> 85
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1輕鏈可變區#3(E1κ(C))之CDR1
<400> 85
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1輕鏈可變區#1(E1κ(A))之CDR2
<400> 86
<210> 87
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1輕鏈可變區#3(E1κ(C))之CDR2
<400> 87
<210> 88
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1輕鏈可變區#1(E1κ(A))之CDR3
<400> 88
<210> 89
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> E1輕鏈可變區#3(E1κ(C))之CDR3
<400> 89
<210> 90
<211> 129
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19κ輕鏈可變區#1(F19κ(A))
<400> 90
<210> 91
<211> 129
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19κ輕鏈可變區#3(F19κ(C))
<400> 91
<210> 92
<211> 126
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19κ輕鏈可變區#4(F19κ(D))之cDNA之胺基酸序列
<400> 92
<210> 93
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#1(F19κ(A))之CDR1
<400> 93
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#3(F19κ(C))之CDR1
<400> 94
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#4(F19κ(D))之CDR1
<400> 95
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#1(F19κ(A))之CDR2
<400> 96
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#3(F19κ(C))之CDR2
<400> 97
<210> 98
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#4(F19κ(D))之CDR2
<400> 98
<210> 99
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#1(F19κ(A))之CDR3
<400> 99
<210> 100
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#3(F19κ(C))之CDR3
<400> 100
<210> 101
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> F19輕鏈可變區#4(F19κ(D))之CDR3
<400> 101
<210> 102
<211> 386
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> E1κ輕鏈可變區#1(E1κ(A))之cDNA
<400> 102
<210> 103
<211> 384
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> E1κ輕鏈可變區#3(E1κ(C))之cDNA
<400> 103
<210> 104
<211> 387
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> F19κ輕鏈可變區#1(F19κ(A))之cDNA
<400> 104
<210> 105
<211> 387
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> F19κ鏈可變區#3(F19κ(C))之cDNA
<400> 105
<210> 106
<211> 380
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> F19κ鏈可變區#4(F19κ(D))之cDNA
<400> 106

Claims (22)

  1. 一種經分離抗體或其hLIGHT結合片段，其係專一性結合至hLIGHT，其中該抗體結合至該hLIGHT抗原決定基可經F19抗體(食品工業發展研究所(FIRDI)寄存編號：BCRC 960323)競爭性阻斷且其中該抗體結合至該hLIGHT抗原決定基不經E1抗體(FIRDI寄存編號：BCRC 960320)阻斷。
  2. 如請求項1之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體為拮抗抗體。
  3. 如請求項1或2之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體與HVEM、LTβR或其融合蛋白競爭結合至細胞表面表現之hLIGHT或可溶hLIGHT。
  4. 如請求項1或2之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體包含：具有SEQ ID NO：5所示之胺基酸序列之VH域及具有SEQ ID NO：10所示之胺基酸序列之VL域。
  5. 如請求項1或2之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體包含：(a)一重鏈可變區，其包含具有SEQ ID NO：23所示之胺基酸序列之VH CDR1；具有SEQ ID NO：24所示之胺基酸序列之VH CDR2；及具有SEQ ID NO：25所示之胺基酸序列之VH CDR3；及(b)一輕鏈可變區，其包含具有SEQ ID NO：38所示之胺基酸序列之VL CDR1；具有SEQ ID NO：39所示之胺基酸序列之VL CDR2；及具有SEQ ID NO：40所示之胺基酸序列之VL CDR3。
  6. 如請求項1或2之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體包含：(a)一抗體之VH，該抗體係由具有FIRDI寄存編號：BCRC 960323(F19抗體)或BCRC 960324(F23抗體)之融合瘤產生；及(b)一抗體之VL，該抗體係由具有FIRDI寄存編號：BCRC 960323(F19抗體)或BCRC 960324(F23抗體)之融合瘤產生。
  7. 如請求項1或2之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體包含：(a)由具有FIRDI寄存編號：BCRC 960323(F19抗體)或BCRC 960324(F23抗體)之融合瘤產生之抗體的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3；及(b)由具有FIRDI寄存編號：BCRC 960323(F19抗體)或BCRC 960324(F23抗體)之融合瘤產生之抗體的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3。
  8. 如請求項1或2之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體係由具有FIRDI寄存編號：BCRC 960323(F19抗體)或BCRC 960324(F23抗體)之融合瘤產生。
  9. 如請求項1或2之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體為完全人類抗體、嵌合抗體或人化抗體。
  10. 如請求項1或2之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體為單株抗體。
  11. 如請求項1或2之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體為重組抗體。
  12. 如請求項1或2之抗體或其hLIGHT結合片段，其中該抗體為Fab片段、F(ab')2片段、單鏈Fv(scFv)、雙鏈抗體(diabody)、三鏈抗體(triabody)或微型抗體(minibody)。
  13. 一種組合物，其包含如請求項1至12中任一項之抗體或其hLIGHT結合片段。
  14. 一種經分離核酸分子，其編碼如請求項1至12中任一項之抗體或其hLIGHT結合片段。
  15. 一種載體，其包含如請求項14之核酸分子。
  16. 一種宿主細胞，其包含如請求項15之載體。
  17. 一種製備抗體或其hLIGHT結合片段之方法，其係包含：培養如請求項16之宿主細胞、使該抗體或其hLIGHT結合片段表現及回收該抗體或其hLIGHT結合片段。
  18. 一種融合瘤，其產生如請求項1至12中任一項之抗體。
  19. 如請求項18之融合瘤，其中該融合瘤具有FIRDI寄存編號：BCRC 960323(F19抗體)或BCRC 960324(F23抗體)。
  20. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至12中任一項之抗體或其hLIGHT結合片段及藥學上可接受之載劑。
  21. 一種套組，其包含如請求項1至12中任一項之抗體或其hLIGHT結合片段。
  22. 一種套組，其包含如請求項13之組合物。
TW102125965A 2006-08-28 2007-08-24 具拮抗性之人類ｌｉｇｈｔ專一性人類單株抗體 TW201343676A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US84077406P 2006-08-28 2006-08-28
US89787507P 2007-01-25 2007-01-25

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201343676A true TW201343676A (zh) 2013-11-01

Family

ID=39126775

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW102125965A TW201343676A (zh) 2006-08-28 2007-08-24 具拮抗性之人類ｌｉｇｈｔ專一性人類單株抗體
TW096131608A TWI405771B (zh) 2006-08-28 2007-08-24 具拮抗性之人類ｌｉｇｈｔ專一性人類單株抗體

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW096131608A TWI405771B (zh) 2006-08-28 2007-08-24 具拮抗性之人類ｌｉｇｈｔ專一性人類單株抗體

Country Status (29)

Country Link
US (4) US8058402B2 (zh)
EP (3) EP2064243A2 (zh)
JP (2) JP5209625B2 (zh)
KR (2) KR101374983B1 (zh)
AU (1) AU2007290570C1 (zh)
BR (1) BRPI0716088B8 (zh)
CA (1) CA2661782C (zh)
CO (1) CO6170363A2 (zh)
CR (1) CR10652A (zh)
CY (1) CY1114719T1 (zh)
DK (2) DK2484696T3 (zh)
EA (1) EA021255B1 (zh)
ES (2) ES2439994T3 (zh)
GT (1) GT200900043A (zh)
HR (1) HRP20131215T1 (zh)
IL (2) IL197158A (zh)
MA (1) MA31347B1 (zh)
MX (1) MX2009002151A (zh)
MY (1) MY162024A (zh)
NI (1) NI200900027A (zh)
NO (1) NO20091235L (zh)
NZ (2) NZ575163A (zh)
PL (1) PL2292663T3 (zh)
PT (1) PT2292663E (zh)
RS (1) RS53120B (zh)
SG (1) SG170032A1 (zh)
TN (1) TN2009000051A1 (zh)
TW (2) TW201343676A (zh)
WO (1) WO2008027338A2 (zh)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2449578T3 (es) 2002-09-06 2014-03-20 Amgen Inc. Anticuerpo monoclonal anti-IL-1R1 humano terapéutico
WO2010006071A1 (en) * 2008-07-08 2010-01-14 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Hvem/btla, hvem/cd160 and hvem/gd cis complexes and methods of use
CA2661782C (en) * 2006-08-28 2019-04-16 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Antagonistic human light-specific human monoclonal antibodies
WO2009039310A2 (en) * 2007-09-18 2009-03-26 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Light inhibitors for asthma, lung and airway inflammation, respiratory, interstitial, pulmonary and fibrotic disease treatment
KR20190064664A (ko) 2008-10-02 2019-06-10 압테보 리서치 앤드 디벨롭먼트 엘엘씨 Ｃｄ86 길항제 다중-표적 결합 단백질
JP2012521216A (ja) * 2009-03-24 2012-09-13 テバ バイオファーマスーティカルズ ユーエスエー，インコーポレーテッド Ｌｉｇｈｔに対するヒト化抗体およびその使用
EP2780360B1 (en) 2011-11-15 2023-03-08 Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute Compositions and methods for treating autoimmune and inflammatory disorders
CA2868401C (en) * 2012-03-26 2021-08-24 Sanofi Stable anti-cxcr5 igg4 antibody formulations
WO2013148350A2 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Sanofi Anti-light antibody therapy for inflammatory bowel disease
PT2830658T (pt) * 2012-03-26 2018-12-28 Sanofi Sa Formulações de agente de ligação igg4 estável
US9592289B2 (en) 2012-03-26 2017-03-14 Sanofi Stable IgG4 based binding agent formulations
JP6153019B2 (ja) 2013-01-31 2017-06-28 国立大学法人 東京大学 リゾホスファチジルセリン受容体機能調節活性を有する化合物
CN106170498A (zh) * 2014-01-14 2016-11-30 科马布有限公司 抗‑light抗体
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
TWI555513B (zh) * 2014-05-27 2016-11-01 奇美醫療財團法人奇美醫院 管體窄化監測裝置及其監測方法
JP6369721B2 (ja) 2014-07-04 2018-08-08 国立大学法人 東京大学 リゾホスファチジルセリン誘導体
MA41414A (fr) * 2015-01-28 2017-12-05 Centre Nat Rech Scient Protéines de liaison agonistes d' icos
HK1257443A1 (zh) 2015-08-21 2019-10-18 The Children's Hospital Of Philadelphia 治療具有dcr3或dcr3網絡基因中的遺傳變異的患者的自身免疫病症的方法
JP7261379B2 (ja) 2016-06-20 2023-04-20 カイマブ・リミテッド 抗ｐｄ－ｌ１抗体
WO2018083248A1 (en) 2016-11-03 2018-05-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
EP4252629A3 (en) 2016-12-07 2023-12-27 Biora Therapeutics, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
WO2018112240A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Progenity Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
GB201701194D0 (en) 2017-01-24 2017-03-08 Capella Bioscience Ltd Antigen binding molecules that bind light
US11312781B2 (en) 2018-01-24 2022-04-26 Capella Bioscience Ltd. Antigen binding molecules that bind LIGHT
WO2019246313A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
CN116726361A (zh) 2018-11-19 2023-09-12 比奥拉治疗股份有限公司 用生物治疗剂治疗疾病的方法和装置
EP4056232A4 (en) 2019-09-13 2023-09-13 Kyowa Kirin Co., Ltd. Dcr3 variant
CA3162181A1 (en) 2019-11-21 2021-05-27 Unity Biotechnology Antibodies directed to tie-2 and methods of use
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
WO2021202649A2 (en) * 2020-04-01 2021-10-07 Aevi Genomic Medicine, Llc Methods and treatment involving excess free light
JP2024527028A (ja) * 2021-07-26 2024-07-19 アヴァロ セラピューティクス， インコーポレイテッド 抗ｌｉｇｈｔ抗体を用いて潰瘍性大腸炎を治療する方法
EP4460523A2 (en) * 2022-01-05 2024-11-13 Avalo Therapeutics, Inc. Methods of treating asthma with anti-light antibodies
WO2024067344A1 (zh) 2022-09-27 2024-04-04 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别light的抗体及其应用

Family Cites Families (246)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US627366A (en) 1899-06-20 John treleaven
US452281A (en) 1891-05-12 Railway signaling device
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3710795A (en) 1970-09-29 1973-01-16 Alza Corp Drug-delivery device with stretched, rate-controlling membrane
GB1429184A (en) 1972-04-20 1976-03-24 Allen & Hanburys Ltd Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols
US4044126A (en) 1972-04-20 1977-08-23 Allen & Hanburys Limited Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof
USRE28819E (en) 1972-12-08 1976-05-18 Syntex (U.S.A.) Inc. Dialkylated glycol compositions and medicament preparations containing same
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4410545A (en) 1981-02-13 1983-10-18 Syntex (U.S.A.) Inc. Carbonate diester solutions of PGE-type compounds
US4328245A (en) 1981-02-13 1982-05-04 Syntex (U.S.A.) Inc. Carbonate diester solutions of PGE-type compounds
US4358603A (en) 1981-04-16 1982-11-09 Syntex (U.S.A.) Inc. Acetal stabilized prostaglandin compositions
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4409239A (en) 1982-01-21 1983-10-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Propylene glycol diester solutions of PGE-type compounds
ATE37983T1 (de) 1982-04-22 1988-11-15 Ici Plc Mittel mit verzoegerter freigabe.
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
DE3668186D1 (de) 1985-04-01 1990-02-15 Celltech Ltd Transformierte myeloma-zell-linie und dieselbe verwendendes verfahren zur expression eines gens, das ein eukaryontisches polypeptid kodiert.
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
EP0428534B1 (en) 1988-06-14 1995-03-29 Cetus Oncology Corporation Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
DE768377T1 (de) 1988-09-02 1998-01-02 Dyax Corp Herstellung und Auswahl von Rekombinantproteinen mit verschiedenen Bindestellen
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US5734033A (en) 1988-12-22 1998-03-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Antisense oligonucleotides inhibiting human bcl-2 gene expression
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
EP0394827A1 (en) 1989-04-26 1990-10-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides
ZA902949B (en) 1989-05-05 1992-02-26 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
US5436146A (en) 1989-09-07 1995-07-25 The Trustees Of Princeton University Helper-free stocks of recombinant adeno-associated virus vectors
AU6430190A (en) 1989-10-10 1991-05-16 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
EP0550436A1 (en) 1989-11-06 1993-07-14 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Protein microspheres and methods of using them
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
WO1991010737A1 (en) 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
ATE139258T1 (de) 1990-01-12 1996-06-15 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US5314995A (en) 1990-01-22 1994-05-24 Oncogen Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins
AU654811B2 (en) 1990-03-20 1994-11-24 Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The Chimeric antibodies with receptor binding ligands in place of their constant region
IT1246382B (it) 1990-04-17 1994-11-18 Eurand Int Metodo per la cessione mirata e controllata di farmaci nell'intestino e particolarmente nel colon
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
JPH07500961A (ja) 1990-10-01 1995-02-02 ユニバーシティ オブ コネチカット 細胞による選択的内在化を目的としたウイルス及び細胞の標的設定
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
CA2095836C (en) 1990-11-09 1999-04-06 Stephen D. Gillies Cytokine immunoconjugates
CA2405246A1 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with alterred binding properties
ES2096749T3 (es) 1990-12-14 1997-03-16 Cell Genesys Inc Cadenas quimericas para vias de transduccion de señal asociada a un receptor.
DE69233750D1 (de) 1991-04-10 2009-01-02 Scripps Research Inst Bibliotheken heterodimerer Rezeptoren mittels Phagemiden
CA2109528A1 (en) 1991-05-01 1992-11-02 Gregory A. Prince A method for treating infectious respiratory diseases
DE69231736T2 (de) 1991-05-14 2001-10-25 The Immune Response Corp., Carlsbad Gerichtete abgabe von genen, die immunogene proteine kodieren
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
JPH06510278A (ja) 1991-06-05 1994-11-17 ユニバーシティ オブ コネチカット 分泌タンパク質をコードする遺伝子の標的への配達
EP0590067A1 (en) 1991-06-14 1994-04-06 Xoma Corporation Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
US5844095A (en) 1991-06-27 1998-12-01 Bristol-Myers Squibb Company CTLA4 Ig fusion proteins
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5885793A (en) 1991-12-02 1999-03-23 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
JP4157160B2 (ja) 1991-12-13 2008-09-24 ゾーマ テクノロジー リミテッド 改変抗体可変領域の調製のための方法
US5824307A (en) 1991-12-23 1998-10-20 Medimmune, Inc. Human-murine chimeric antibodies against respiratory syncytial virus
WO1993014188A1 (en) 1992-01-17 1993-07-22 The Regents Of The University Of Michigan Targeted virus
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
US6271242B1 (en) 1992-02-10 2001-08-07 Bristol-Myers Squibb Co. Method for treating cancer using a tyrosine protein kinase inhibitor
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US6010715A (en) 1992-04-01 2000-01-04 Bertek, Inc. Transdermal patch incorporating a polymer film incorporated with an active agent
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
CA2133411A1 (en) 1992-04-03 1993-10-14 Alexander T. YOUNG Gene therapy using targeted viral vectors
US6024975A (en) 1992-04-08 2000-02-15 Americare International Diagnostics, Inc. Method of transdermally administering high molecular weight drugs with a polymer skin enhancer
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
ATE452207T1 (de) 1992-08-21 2010-01-15 Univ Bruxelles Immunoglobuline ohne leichte ketten
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
DE69330167T2 (de) 1992-10-09 2001-11-15 Advanced Tissue Sciences, Inc. Leberreservezellen
JPH08503855A (ja) 1992-12-03 1996-04-30 ジェンザイム・コーポレイション 嚢胞性線維症に対する遺伝子治療
US5441050A (en) 1992-12-18 1995-08-15 Neoprobe Corporation Radiation responsive surgical instrument
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US6274552B1 (en) 1993-03-18 2001-08-14 Cytimmune Sciences, Inc. Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5523092A (en) 1993-04-14 1996-06-04 Emory University Device for local drug delivery and methods for using the same
US5985307A (en) 1993-04-14 1999-11-16 Emory University Device and method for non-occlusive localized drug delivery
DK0698097T3 (da) 1993-04-29 2001-10-08 Unilever Nv Produktion af antistoffer eller (funktionaliserede) fragmenter deraf afledt af Camelidae-immunoglobuliner med tung kæde
WO1995002420A2 (en) 1993-07-15 1995-01-26 Cancer Research Campaign Technology Ltd. Prodrugs of protein tyrosine kinase inhibitors
US6004534A (en) 1993-07-23 1999-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery
WO1995015982A2 (en) 1993-12-08 1995-06-15 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
US5925376C1 (en) 1994-01-10 2001-03-20 Madalene C Y Heng Method for treating psoriasis using selected phosphorylase kinase inhibitor and additional compounds
US5618709A (en) 1994-01-14 1997-04-08 University Of Pennsylvania Antisense oligonucleotides specific for STK-1 and method for inhibiting expression of the STK-1 protein
ATE243745T1 (de) 1994-01-31 2003-07-15 Univ Boston Bibliotheken aus polyklonalen antikörpern
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US5837458A (en) 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US5834252A (en) 1995-04-18 1998-11-10 Glaxo Group Limited End-complementary polymerase reaction
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
AU3382595A (en) 1994-07-29 1996-03-04 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
GB9415379D0 (en) 1994-07-29 1994-09-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
US5759542A (en) 1994-08-05 1998-06-02 New England Deaconess Hospital Corporation Compositions and methods for the delivery of drugs by platelets for the treatment of cardiovascular and other diseases
US5911995A (en) 1994-08-19 1999-06-15 Regents Of The University Of Minnesota EGF-genistein conjugates for the treatment of cancer
US5587459A (en) 1994-08-19 1996-12-24 Regents Of The University Of Minnesota Immunoconjugates comprising tyrosine kinase inhibitors
US5660854A (en) 1994-11-28 1997-08-26 Haynes; Duncan H Drug releasing surgical implant or dressing material
JPH10511957A (ja) 1995-01-05 1998-11-17 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ ミシガン 表面改質ナノ微粒子並びにその製造及び使用方法
WO1996022024A1 (en) 1995-01-17 1996-07-25 Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
GB9501567D0 (en) 1995-01-26 1995-03-15 Pharmacia Spa Hydrosoluble 3-arylidene-2-oxindole derivatives as tyrosine kinase inhibitors
US5998596A (en) 1995-04-04 1999-12-07 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibition of protein kinase activity by aptameric action of oligonucleotides
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US5983134A (en) 1995-04-23 1999-11-09 Electromagnetic Bracing Systems Inc. Electrophoretic cuff apparatus drug delivery system
EP1978033A3 (en) 1995-04-27 2008-12-24 Amgen Fremont Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
EP0841068B1 (en) 1995-06-01 2006-07-12 Kishimoto, Tadamitsu Leukemic cell growth inhibitor containing antisense oligonucleotide derivative against wilms' tumor gene (wt1)
US6316652B1 (en) 1995-06-06 2001-11-13 Kosta Steliou Drug mitochondrial targeting agents
GB9515975D0 (en) 1995-08-04 1995-10-04 Zeneca Ltd Chemical compounds
US6167301A (en) 1995-08-29 2000-12-26 Flower; Ronald J. Iontophoretic drug delivery device having high-efficiency DC-to-DC energy conversion circuit
US5916597A (en) 1995-08-31 1999-06-29 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition and method using solid-phase particles for sustained in vivo release of a biologically active agent
US5863904A (en) 1995-09-26 1999-01-26 The University Of Michigan Methods for treating cancers and restenosis with P21
GB9601081D0 (en) 1995-10-06 1996-03-20 Cambridge Antibody Tech Specific binding members for human transforming growth factor beta;materials and methods
US6039975A (en) 1995-10-17 2000-03-21 Hoffman-La Roche Inc. Colon targeted delivery system
US6001358A (en) 1995-11-07 1999-12-14 Idec Pharmaceuticals Corporation Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof
US6127366A (en) 1995-11-22 2000-10-03 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
ATE215541T1 (de) 1995-12-08 2002-04-15 Janssen Pharmaceutica Nv (imidazol-5-yl)methyl-2-chinolinoderivate als farnesyl protein transferase inhibitoren
US5723125A (en) 1995-12-28 1998-03-03 Tanox Biosystems, Inc. Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide
US5958769A (en) 1996-01-18 1999-09-28 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for mediating cell cycle progression
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
JP2000504017A (ja) 1996-01-30 2000-04-04 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド ファルネシル―タンパク質転移酵素の阻害剤
EP0944387A1 (en) 1996-01-30 1999-09-29 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
JP2000506165A (ja) 1996-03-04 2000-05-23 ザ ペン ステイト リサーチ ファウンデーション 細胞インターナリゼーションを増強するための物質および方法
AU5711196A (en) 1996-03-14 1997-10-01 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule i
EP0904107B1 (en) 1996-03-18 2004-10-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
US6479254B2 (en) 1996-03-22 2002-11-12 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule II
JP2000508522A (ja) 1996-03-22 2000-07-11 ヒューマン・ジェノム・サイエンシズ・インコーポレイテッド アポトーシス誘導分子ｉｉ
US6495520B2 (en) 1996-03-22 2002-12-17 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis Inducing Molecule II and methods of use
US6635743B1 (en) 1996-03-22 2003-10-21 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule II and methods of use
US7964190B2 (en) 1996-03-22 2011-06-21 Human Genome Sciences, Inc. Methods and compositions for decreasing T-cell activity
US6080870A (en) 1996-04-03 2000-06-27 Merck & Co., Inc. Biaryl substituted imidazole compounds useful as farnesyl-protein transferase inhibitors
US5891889A (en) 1996-04-03 1999-04-06 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US6063930A (en) 1996-04-03 2000-05-16 Merck & Co., Inc. Substituted imidazole compounds useful as farnesyl-protein transferase inhibitors
US5883105A (en) 1996-04-03 1999-03-16 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
DE19617461A1 (de) 1996-05-02 1997-11-06 Bayer Ag Acylmercapto-triazolyl-Derivate
US6300501B1 (en) 1996-05-22 2001-10-09 Warner-Lambert Company Histidine-(N-benzyl glycinamide) inhibitors of protein farnesyl transferase
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
TW345603B (en) 1996-05-29 1998-11-21 Gmundner Fertigteile Gmbh A noise control device for tracks
US5648239A (en) 1996-06-21 1997-07-15 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human camp-dependent protein kinase inhibitor homolog
BR9709974A (pt) 1996-06-27 1999-08-10 Pfizer Derivados de 2-(2-oxo-etidileno)-imidazolidin-4-ona e seu uso como inibidores da transferase da proteina de farnesila
DE69730607T2 (de) 1996-07-19 2005-01-27 Takeda Chemical Industries, Ltd. Fas ligand ähnliches protein, seine herstellung und verwendung
KR100595740B1 (ko) 1996-08-12 2006-07-03 미쯔비시 웰 파마 가부시키가이샤 Ｒｈｏ 키나아제 억제제를 함유하는　약제
US5985317A (en) 1996-09-06 1999-11-16 Theratech, Inc. Pressure sensitive adhesive matrix patches for transdermal delivery of salts of pharmaceutical agents
US6040305A (en) 1996-09-13 2000-03-21 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US5945429A (en) 1996-09-13 1999-08-31 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6030982A (en) 1996-09-13 2000-02-29 Schering Corporationm Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US5885834A (en) 1996-09-30 1999-03-23 Epstein; Paul M. Antisense oligodeoxynucleotide against phosphodiesterase
CA2266629C (en) 1996-10-01 2002-04-16 Cima Labs Inc. Taste-masked microcapsule compositions and methods of manufacture
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
US6131570A (en) 1998-06-30 2000-10-17 Aradigm Corporation Temperature controlling device for aerosol drug delivery
AU5702298A (en) 1996-12-03 1998-06-29 Abgenix, Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and VK regions nd antibodies produced therefrom
US6013662A (en) 1996-12-30 2000-01-11 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Farnesyl transferase inhibitors, their preparation, the pharmaceutical compositions which contain them and their use in the preparation of medicaments
US6093737A (en) 1996-12-30 2000-07-25 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US5939439A (en) 1996-12-30 1999-08-17 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
CA2277801C (en) 1997-01-16 2002-10-15 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
EP0975603A1 (en) 1997-01-29 2000-02-02 Zeneca Limited Inhibitors of farnesyl protein transferase
US5860957A (en) 1997-02-07 1999-01-19 Sarcos, Inc. Multipathway electronically-controlled drug delivery system
ZA981080B (en) 1997-02-11 1998-08-12 Warner Lambert Co Bicyclic inhibitors of protein farnesyl transferase
TW591030B (en) 1997-03-10 2004-06-11 Janssen Pharmaceutica Nv Farnesyl transferase inhibiting 1,8-annelated quinolinone derivatives substituted with N- or C-linked imidazoles
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
DK0970126T3 (da) 1997-04-14 2001-08-13 Micromet Ag Hidtil ukendt fremgangsmåde til fremstillingen af anti-humant antigen-receptorer og anvendelser deraf
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US6211193B1 (en) 1997-06-17 2001-04-03 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6225322B1 (en) 1997-06-17 2001-05-01 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6228865B1 (en) 1997-06-17 2001-05-08 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6051582A (en) 1997-06-17 2000-04-18 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6239140B1 (en) 1997-06-17 2001-05-29 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6159984A (en) 1997-06-17 2000-12-12 Schering Corporation Farnesyl protein transferase inhibitors
US6998108B1 (en) 1997-07-07 2006-02-14 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Antibodies to p30 polypeptides and methods making and using same
US6140467A (en) 1997-07-07 2000-10-31 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Ligand for herpes simplex virus entry mediator and methods of use
US7118742B2 (en) 1997-07-07 2006-10-10 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Ligand for herpes simplex virus entry mediator and methods of use
US6346388B1 (en) 1997-08-13 2002-02-12 Smithkline Beecham Corporation Method of identifying agonist and antagonists for tumor necrosis related receptors TR1 and TR2
KR100612161B1 (ko) 1997-08-15 2006-08-14 세파론, 인코포레이티드 전립선암 치료를 위한 티로신 키나아제 억제제 및 화학적거세법의 조합
US5948433A (en) 1997-08-21 1999-09-07 Bertek, Inc. Transdermal patch
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
US6103723A (en) 1997-10-17 2000-08-15 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
WO1999020612A1 (en) 1997-10-22 1999-04-29 Astrazeneca Uk Limited Imidazole derivatives and their use as farnesyl protein transferase inhibitors
PT1025088E (pt) 1997-10-22 2002-01-30 Astrazeneca Ab Derivados de imidazole e sua utilizacao como inibidores de farnesil proteino transferase
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
AU730850B2 (en) 1997-10-28 2001-03-15 Bando Chemical Industries, Ltd. A transdermal patch and a method for manufacture of a substrate sheet therefor
ES2303358T3 (es) 1997-11-03 2008-08-01 Human Genome Sciences, Inc. Vegi, un inhibidor de la angiogenesis y el crecimiento tumoral.
US6124465A (en) 1997-11-25 2000-09-26 Rhone-Poulenc S.A. Farnesyl transferase inhibitors, their preparation, the pharmaceutical compositions which contain them and their use in the preparation of medicaments
DE69814167T2 (de) 1997-11-28 2004-02-26 Lg Chemical Ltd. Imidazolderivate mit farnesyltransferase hemmenden eigenschaften und verfahren zu ihrer herstellung
US6054466A (en) 1997-12-04 2000-04-25 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US6242196B1 (en) 1997-12-11 2001-06-05 Dana-Farber Cancer Institute Methods and pharmaceutical compositions for inhibiting tumor cell growth
US6335156B1 (en) 1997-12-18 2002-01-01 The Johns Hopkins University School Of Medicine 14-3-3σ arrests the cell cycle
BR9908545A (pt) 1998-02-02 2001-10-02 Lg Chemical Ltd Derivado de piperidina, processo para a preparação do mesmo, composto, processo para a preparação do mesmo, e, composição farmacêutica
JP2002504333A (ja) 1998-02-20 2002-02-12 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド アポトーシス誘導分子ｉｉおよび使用方法
CA2322944C (en) 1998-04-27 2003-05-20 Warner-Lambert Company Functionalized alkyl and alkenyl side chain derivatives of glycinamides as farnesyl transferase inhibitors
US6048736A (en) 1998-04-29 2000-04-11 Kosak; Kenneth M. Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs
JP2002518432A (ja) 1998-06-24 2002-06-25 アドバンスト インハレーション リサーチ，インコーポレイテッド 吸入器から放出される大多孔性粒子
HRP20000904A2 (en) 1998-07-06 2001-12-31 Janssen Pharmaceutica Nv Farnesyl protein transferase inhibitors for treating arthropathies
US6034053A (en) 1998-07-13 2000-03-07 Wayne Hughes Institute EGF-isoflavone conjugates for the prevention of restenosis
US6362188B1 (en) 1998-12-18 2002-03-26 Schering Corporation Farnesyl protein transferase inhibitors
US6372747B1 (en) 1998-12-18 2002-04-16 Schering Corporation Farnesyl protein transferase inhibitors
FR2787327B1 (fr) 1998-12-21 2003-01-17 Aventis Pharma Sa Compositions contenant des inhibiteurs de farnesyle transferase
US6432959B1 (en) 1998-12-23 2002-08-13 Schering Corporation Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US6383790B1 (en) 1999-01-11 2002-05-07 Princeton University High affinity protein kinase inhibitors
US6399633B1 (en) 1999-02-01 2002-06-04 Aventis Pharmaceuticals Inc. Use of 4-H-1-benzopryan-4-one derivatives as inhibitors of smooth muscle cell proliferation
US6245759B1 (en) 1999-03-11 2001-06-12 Merck & Co., Inc. Tyrosine kinase inhibitors
US6271359B1 (en) 1999-04-14 2001-08-07 Musc Foundation For Research Development Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes
US6143766A (en) 1999-04-16 2000-11-07 Warner-Lambert Company Benzopyranone and quinolone inhibitors of ras farnesyl transferase
CA2374273A1 (en) 1999-05-21 2000-11-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Liver function controlling agents
US6256533B1 (en) 1999-06-09 2001-07-03 The Procter & Gamble Company Apparatus and method for using an intracutaneous microneedle array
US6458935B1 (en) 1999-06-23 2002-10-01 Merck & Co., Inc. Radiolabeled farnesyl-protein transferase inhibitors
AU2161501A (en) 1999-11-29 2001-06-25 Unilever Plc Immobilized single domain antigen-binding molecules
US6403581B1 (en) 2000-01-19 2002-06-11 American Cyanamid Company Method of inhibition of farnesyl-protein transferase using substituted benz (cd) indol-2-imine and-amine derivatives
US6261595B1 (en) 2000-02-29 2001-07-17 Zars, Inc. Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device
WO2001079496A2 (en) 2000-03-13 2001-10-25 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Ligand for herpes simplex virus entry mediator and methods of use
PL366062A1 (en) 2000-09-08 2005-01-24 Micromet Ag Antibody and/or chemokine constructs and their use in immunological disorders
CN1487996B (zh) 2000-11-30 2010-06-16 米德列斯公司 用于生产人类抗体的转基因转染色体啮齿动物
US20040058367A1 (en) 2001-02-23 2004-03-25 Hideki Matsui Casoase 3 inhibitors
CN100448992C (zh) 2001-05-11 2009-01-07 麒麟医药株式会社 含人抗体λ轻链基因的人类人工染色体
DE60232077D1 (de) 2001-06-29 2009-06-04 Glykos Finland Oy Verwendung mindestens einer glycoinhibitor-substanz gegen infektionskrankheiten
AU2002363354A1 (en) 2001-07-27 2003-05-19 Human Genome Sciences, Inc. Heteromultimeric tnf ligand family members
AR035119A1 (es) * 2001-08-16 2004-04-14 Lilly Co Eli Anticuerpos humanos antagonistas anti-htnfsf13b
EP1336619A3 (en) 2002-02-19 2003-12-10 Millenium Pharmaceuticals, Inc. Combination of a HVEM-LIGHT inhibitor and an immunosuppressive agent in the treatment or prevention of immune disorders
AU2003224952A1 (en) 2002-04-15 2003-11-03 Thomas F. C. Allnutt Incorporation of anaerobic bacteria in feed formulation
WO2003089575A2 (en) * 2002-04-15 2003-10-30 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to tl5
AU2004280333A1 (en) 2003-08-22 2005-04-21 Medimmune, Llc Humanization of antibodies
WO2006063067A2 (en) 2004-12-09 2006-06-15 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Novel tnf receptor regulatory domain
CA2661782C (en) * 2006-08-28 2019-04-16 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Antagonistic human light-specific human monoclonal antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
ES2439994T3 (es) 2014-01-27
KR20130064814A (ko) 2013-06-18
MA31347B1 (fr) 2010-05-03
AU2007290570A1 (en) 2008-03-06
IL197158A0 (en) 2011-08-01
AU2007290570B2 (en) 2013-01-10
MY162024A (en) 2017-05-31
EP2484696A1 (en) 2012-08-08
CA2661782C (en) 2019-04-16
US20100021466A1 (en) 2010-01-28
CO6170363A2 (es) 2010-06-18
US8058402B2 (en) 2011-11-15
NI200900027A (es) 2011-10-25
CY1114719T1 (el) 2016-10-05
KR20090057285A (ko) 2009-06-04
KR101314362B1 (ko) 2013-10-10
TWI405771B (zh) 2013-08-21
IL197158A (en) 2014-09-30
BRPI0716088A8 (pt) 2020-03-31
BRPI0716088B1 (pt) 2020-12-08
EP2292663A2 (en) 2011-03-09
JP5209625B2 (ja) 2013-06-12
EA021255B1 (ru) 2015-05-29
KR101374983B1 (ko) 2014-03-17
MX2009002151A (es) 2009-07-03
WO2008027338A3 (en) 2008-07-24
TN2009000051A1 (en) 2010-08-19
IL216381A0 (en) 2011-12-29
BRPI0716088B8 (pt) 2021-05-25
ES2643687T3 (es) 2017-11-23
EP2484696B1 (en) 2017-08-16
AU2007290570A2 (en) 2010-09-09
GT200900043A (es) 2010-04-29
US8461307B2 (en) 2013-06-11
NZ575163A (en) 2011-12-22
EP2292663A3 (en) 2011-11-23
NO20091235L (no) 2009-04-29
PT2292663E (pt) 2013-11-04
HRP20131215T1 (hr) 2014-01-31
EP2292663B1 (en) 2013-10-02
HK1153209A1 (zh) 2012-03-23
JP2010502183A (ja) 2010-01-28
JP2013153749A (ja) 2013-08-15
RS53120B (en) 2014-06-30
JP5751680B2 (ja) 2015-07-22
TW200825104A (en) 2008-06-16
EP2064243A2 (en) 2009-06-03
US20120076798A1 (en) 2012-03-29
CA2661782A1 (en) 2008-03-06
US20130230536A1 (en) 2013-09-05
SG170032A1 (en) 2011-04-29
WO2008027338A2 (en) 2008-03-06
AU2007290570C1 (en) 2013-08-15
DK2484696T3 (en) 2017-10-02
PL2292663T3 (pl) 2014-03-31
US20150337046A1 (en) 2015-11-26
US9771419B2 (en) 2017-09-26
BRPI0716088A2 (pt) 2013-10-01
US8974787B2 (en) 2015-03-10
EA200970234A1 (ru) 2010-02-26
NZ596091A (en) 2012-07-27
CR10652A (es) 2009-05-13
DK2292663T3 (da) 2013-11-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI405771B (zh) 具拮抗性之人類ｌｉｇｈｔ專一性人類單株抗體
KR101225463B1 (ko) 인터류킨-4 수용체에 결합하는 항체
JP2008546805A (ja) 最適な凝集および断片化プロフィールを有する抗体製剤
TW200909447A (en) Antigen binding proteins that bind PAR-2
CN101663321B (zh) 拮抗型人light特异性人源性单克隆抗体
CN101273061A (zh) 具有优化的聚集和片段化特性的抗体制剂
AU2013203359B2 (en) Antagonistic human LIGHT-specific human monoclonal antibodies
HK1153209B (zh) 拮抗型人light特異性人源性單克隆抗體