TW201339175A - 新黏合劑－藥物接合體（ａｄｃ）及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明係關於針對目標FGFR2之新穎的N,N-二烷基奧瑞他汀(dialkylauristatin)之黏合劑-藥物接合體(ADC)、這些ADC之活性代謝物、製備這些ADC之方法、這些ADC用於治療及/或預防疾病之用途，以及這些ADC用於製造醫藥品供治療及/或預防疾病，更特別是，過度增生性及/或血管新生性疾病，例如癌症之用途。此等治療可以單一治療或另外與其他醫藥品或其他治療方法組合來施行。

Description

新黏合劑-藥物接合體(ADC)及其用途

本發明係關於針對目標腫瘤生長因子受體2(FGFR2)之新穎的N,N-二烷基奧瑞他汀(dialkylauristatin)之黏合劑-藥物接合體(ADC)、這些ADC之活性代謝物、製備這些ADC之方法、這些ADC用於治療及/或預防疾病之用途，以及這些ADC用於製造醫藥品供治療及/或預防疾病，更特別是過度增生性及/或血管新生性疾病，例如癌症之用途。此等治療可以單一治療或另外與其他醫藥品或其他治療方法組合來施行。

癌症疾病為不受控制的細胞在各種組織中生長之結果。在許多情況下這些新細胞穿過現存的組織(侵入性生長)，或其轉移至遠端器官。癌症疾病發生於廣泛的各種器官中，且疾病通常係以組織特異性的方式推進。因此「癌症疾病」名稱為一通稱，係描述一大群不同器官、組織和細胞類型之該定義疾病。

早期的腫瘤能以手術和放射線治療方法來移除。轉移的腫瘤一般僅可藉由化療劑給予減緩性治療。該情況下之目的係欲達到改善生活品質和延長剩餘生命期之最適組合。

目前以非經腸給藥之大部分的化療劑對腫瘤組織或腫瘤細胞通 常不是靶向性，但取而代之的，因為其全身性給藥係非特定性分佈在身體中，因此包括了不希望暴露於該藥物之部位，例如健康的細胞、組織和器官。此可導致不欲的副作用及甚至嚴重的泛毒性效應，其然後常常限制該藥物的治療上有效劑量範圍或必須完全停止醫療。

這些化療劑在腫瘤細胞或緊鄰組織之改良和選擇性可利用性，及一方面有關增進效用，和另一方面將有毒副作用降至最低，因此已為多年來開發新化療劑的焦點。至今已做了許多嘗試來開發將藥物導入目標細胞之有效方法。例如，就相鄰細胞而言，最適化地連接藥物和細胞內目標及最小化細胞間的藥物分佈，仍然持續為困難的問題。

單株抗體，例如係適合用於腫瘤組織和腫瘤細胞之靶向定址。以此等藥物如曲妥珠單抗(trastuzumab)(Herceptin^®)、利妥昔單抗(rituximab)(Rituxan^®)、西妥昔單抗(cetuximab)(Erbitux)和貝伐單抗(bevacizumab)(Avastin^®)之活性為基礎，其因已核准用於個別、特定的腫瘤疾病治療，此等抗體對臨床癌症疾病治療之重要性在近幾年來已大大提升[參見，例如G.P.Adams和L.M.Weiner,Nat.Biotechnol.23,1147-1157(2005)]。因此，在所謂的免疫接合體之利益上亦顯著增加，例如前述的ADC，其中係將一針對腫瘤相關抗原之內化抗體經由一連接單位(連接子)與細胞毒性劑共價接合。在ADC導入腫瘤細胞後及隨後將接合物裂解，將細胞毒性劑本身或由細胞毒性所形成的另外具細胞毒性活性之代謝物，於細胞內釋放，在該處能直接或選擇性發生其效用。相較於習用的癌症化療法，在此方法中，能大大地盡量限制對正常細胞的傷害[參見，例如J.M.Lambert,Curr.Opin.Pharmacol.5,543-549(2005)；A.M.Wu和P.D.Senter,Nat.Biotechnol.23,1137-1146(2005)；P.D.Senter,Curr. Opin.Chem.Biol.13,235-244(2009)；L.Ducry和B.Stump,Bioconjugate Chem.21,5-13(2010)]。

亦可用來自小分子藥物球之結合物取代抗體，作為選擇性與特定位置(標鈀)結合之結合物，例如受體，例如[參見，例如E.Ruoslahti等人，Science 279,377-380(1998)；D.Karkan等人，PLoS ONE 3(6),e2469(June 25,2008)]。又已知細胞毒性藥物和定址配體之接合體其在配體和藥物間具有一定義的裂解點供釋放藥物。此類之「預定的斷裂點」，例如可存在於胜肽鏈內，其可選擇性於特定位置被作用位置上的特定酵素裂解[參見，例如R.A.Firestone和L.A.Telan，美國專利申請案US 2002/0147138]。

單株抗體之活性係於各種類型的癌症中驗證。因此，HERCEPTIN®和Erbitux®分別可成功地用於治療HER2-陽性的乳癌和EGFR-陽性的大腸直腸癌。

細胞毒性化合物與抗體結合擴展另外改善癌症治療之可能性，因為這些接合體使腫瘤專一性的帶毒體堆積及同時降低全身性毒性。有關活性和耐受性，以布妥昔單抗維多汀(brentuximab vedotin)於何杰金氏淋巴瘤之臨床研究，及以曲妥珠單抗於乳癌之臨床研究，已產生支持新抗體和抗其他腫瘤抗原之新ADC開發之高度有希望的結果。

以抗體為基礎之治療經證明對於治療各種惡性腫瘤(包括實體腫瘤)非常有效。因此，例如Herceptin^®已成功地開始用於治療乳癌，而Rituxan^®對於與B細胞有關的惡性腫瘤形式很有效。就開發成功的抗體治療之焦點為分離可能表現在腫瘤細胞上之抗細胞表面蛋白的抗體。

纖維母細胞生長因子受體為酪胺酸受體激酶(RTK)，其中已知有四種在哺乳動物中(FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4)。就配體而言， 已辨識出22種人類纖維母細胞生長因子(FGF)(Eswarakumar和Schlessinger,Cytokine & Growth Factor Reviews 2005,16：139-149；Shimada等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2001,98：6500-6505)。FGFR係由三種稱為D1-D3之胞外類-免疫球蛋白(Ig)區，和配體結合所必須的2和3區，以及個別的跨膜區和胞質區，其含有蛋白質酪胺酸激酶之催化中心所組成(示意圖係如圖1中所示)。

FGFR2之結構示意圖。將α(SEQ ID NO：1)和β(SEQ ID NO：2)剪接變體相互比較。示意圖顯示三個類-Ig-區(D1、D2和D3)、跨膜區(TM)和胞外激酶區。將肝素結合位置(HBS)、酸性盒(AB)和替代的IIIb/IIIc區同樣的標定。胺基酸端係以N標示，而羧酸端係以C標示。

胞外組份另外包括酸性盒(AB)和肝素結合位置(HBS)(參見圖1)。RTK之FGFR家族的重要特性為具有不同、選擇性的剪接變體存在。全長的FGFR經辨識為FGFRα(SEQ ID NO：1)，而缺少D1之異構形，經辨識為FGFRβ(SEQ ID NO：2)(圖1)。在3區選擇性剪接產生二種不同的變體，稱為FGFR2 IIIb，其係由外顯子7和8所編碼，以及FGFR2 IIIc，其係由外顯子7和9所編碼(圖1)。後者剪接影響配體結合，產生專一性模式。FGFR2 IIIc主要係藉由間質細胞來表現，而FGFR2 IIIb基本上係由上皮細胞所表現。FGF7亦稱為角質細胞生長因子(KGF)，並僅與FGFR2 IIIb結合，其因此亦稱為KGFR。當FGF與其受體結合時，有後續的FGFR之二聚化和磷酸化，及經由FRS-GRB2對接蛋白複合物至RAS-MAPK訊號傳導聯集(cascade)和PI3K-AKT訊號傳導聯集之下游訊號傳。前者訊號傳導聯集係涉及細胞生長和細胞分化，而後者係涉及係胞存活和決定細胞命運(Katoh和Katoh,Int.J.Oncol.2006,29：163-168)。

就胚胎發育期間正確的器官形成，所有四種受體(FGFR1至 FGFR4)及其剪接變體經由不同的FGF之精心策劃的訊號傳導為必須的(Ornitz等人，Genome Biol 2001,2：3005)。就FGFR2之情況，缺乏所有的FGFR2變體會導致胎盤和肢芽形成上的缺陷，而因此造成在E10.5階段死亡。在小鼠中特定的FGFR2 IIIb剔除同樣導致了與肺、垂體前葉、胸腺、牙齒和四肢發育不全有關的死亡(於P0)，而破壞FGFR2 IIIc變體則可存活，伴隨延遲骨化、成比例的侏儒症和顱底封閉過早之發生(Eswarakumar和Schlessinger,2005)。活化FGFR2在胚跡中之突變造成胚胎發育期間嚴重的畸形，例如人類之艾伯氏症候群(Apert’s syndrome)案例中和斐弗症候群(Pfeiffer’s syndrome)案例中的冠狀縫過早癒合和顱縫早閉(Robin等人Gene Reviews，NCBI Bookshelf Washington，由Pagon等人所編輯，1993)。在成人中，FGFR2訊號傳導係涉及創傷癒合、上皮修復及皮膚和黏膜之細胞保護(Braun等人，Phil.Trans.R.Soc.Lond.B 2004,359：753-757)，和肝臟損傷之再生事件(Steiling等人，Oncogene 2003,22：4380-4388；Böhm,dissertation,Eidgenössische Technische Hochschule Zürich,2009)。因此討論心梗塞後FGFR2訊號傳導於EPDC(心外膜源性细胞)遷移至心臟之角色，因為在胚胎發育期間，FGF10-FGFR2訊號傳導對於EPDC遷移至緻密心肌為必要的，其對心臟發育為一必要的過程(Vega-Hernández等人，Development 2011：3331-3340；Winter and De Groot,Cell Mol.Life Sci.2007,64：692-703)。所有這些FGFR2所扮演的角色為天然再生的，且顯然僅在非生理狀況下極為重要，因為破壞組織的恆定。經由FGFR2之身體的訊號傳導增加係涉及各種病理狀況，例如痤瘡(Katoh,J.of Invest.Dermatol.2009,129：1861-1867)、乾癬(Finch等人，Am.J.Pathol.1997,151：1619-1628；Xu等人，J.Invest.Dermatol.2011：131：1521-1529)和癌症(參見下文)。

許多研究已公開，其顯示FGFR2表現與癌症病患之不良結果有強烈的相關性：

FGFR2及/或KGF之過度表現係伴隨胃癌之膨脹性生長和病患較短的存活(Matsunobu等人，Int.J.Cancer 2006,28：307-314；Toyokawa等人，Oncol.Reports 2009,21：875-880)。在所有檢驗的胃癌樣本中偵測到31-36.5%之FGFR2過度表現(Matsunobu等人，Int.J.Cancer 2006,28：307-314；Toyokawa等人，Oncol.Reports 2009,21：875-880)。另外，腺癌(所有的胃癌之70%)係細分為二種不同的病理類型，亦即腸道型胃癌和瀰漫型胃癌。有趣地，首先，低侵襲型係與活化的ErbB2訊號路徑有關，而就後者之情況，高侵襲型在FGFR2/PI3K訊號路徑發生偏差(Yamashita等人，Surg.Today 2011,41：24-38)。FGFR2過度表現發生於53%所有瀰漫型的胃癌樣本中(Yamashita等人，Surg.Today 2011,41：24-38)。將所有的數據合在一起，HER2表現和FGFR2表現似乎發生在二種不同的病患族群。某種程度上可能是，FGFR2之表現為基因增幅之結果，因為在大約7-10%所有的原發性胃癌中發現FGFR2之增幅(Kunii等人，Cancer Res.2008,68：23-40-2348)。再者，FGFR2表現不僅在轉移瘤中發現，事實上甚至在轉移瘤中比原發腫瘤中更多(Yamashita等人，Surg.Today 2011,41：24-38)。

就乳癌的情況，在57%的腫瘤樣本中發現FGFR2 IIIb表現，但在所有健康的組織中幾乎沒有(Tamaru等人2004,84：1460-1471)。KGF(FGF7)發生在45%的隨機樣本中，一般而言係與FGFR2 IIIb一起。相較於其中無FGF7和FGFR2 IIIb表現之原發性乳癌，FGF7和其單一受體FGFR2 IIIb之共同表現係與原發腫瘤中凋亡細胞數顯著降低有關(Tamaru等人.2004,84：1460-1471)。如同胃癌的情況，對於乳癌同樣發現基因增幅，且亦發生在4%的三重陰性乳癌(TNBC) 中(Turner等人，Oncogene 2010,29：2013-2023)。在乳癌中，已辨識出許多個別的核苷酸改變(單一核甘酸多型性，SNP)，其係與乳癌風險增加有關(Hunter等人，Nature Genetics 2007,6：870-874)。若SNP係位在內含子2(Intron 2)內，則其會造成FGFR2之轉錄上調(Katoh,Expert Reviews 2010,10：1375-1379)。有趣地，FGFR1在雌激素受體(ER)陽性的乳癌之情況係優先上調，而FGFR2係在ER-陰性的乳癌之情況上調(Katoh,Expert Reviews 2010,10：1375-1379)。

就胰臟癌的情況，FGFR2 IIIb及/或FGF7之過度表現係重度與靜脈浸潤(venous invasion)相關(Cho等人，Am.J.Pathol.170：1964-1974)，FGFR2和FGF7之共同表現已在腫瘤細胞中發現，但甚至更常發生在與腫瘤細胞相鄰的基質細胞中(Ishiwata等人，Am.J.Pathol.1998,153：213-222)。

就上皮性卵巢癌之情況，與正常的組織相比，80%的案例顯示FGRF2上調，及70%在腹水中有FGF7(Steele等人，Oncogene 20：5878-5887)。

在所有檢驗的浸潤性子宮頸癌中發現FGFR2蛋白，其中在腫瘤浸潤的前沿有強烈的表現(Kawase等人，Int.J.Oncol.2010,36：331-340)。

就肺腺癌之情況，FGF7和FGFR2之共同表現係發生在51.6%的案例中，且係與較低的分化程度、較高的增生率、淋巴結轉移和較短的5-年存活率有關(Yamayoshi等人，J.Pathol.2004,204：110-118)。

就子宮內膜癌之情況，活化的FGFR2突變係發生在約16%的案例(Pollock等人，Oncogene 2007,26：7158-7162)。

就食道癌(OC)的情況，FGF7和FGFR2之共同表現係發生在26%的案例中，且係與趨向較短的存活時間有關(Yoshino等人，Int.J. Oncol.2007,31：721-728)。

就肝細胞癌之情況，在分化較差的腫瘤中，FGFR2之表現強度上調4.7倍。此表現係與門靜脈浸潤之發生和較低的無疾存活時間有關(Harimoto等人，Oncology 2010,78：361-368)。

許多的出版品，其中活體外和活體內實驗數據顯示改變FGFR2訊號轉導和腫瘤生長間之因果關聯。

降低或抑制胃癌(Takeda等人，Clin.Cancer Res.2007；13：3051-3057；Kunii等人，Cancer Res.2008；68：2340-2348)、乳癌(Turner et al.,Oncogene 2010,29：2013-2023)、卵巢癌(Cole等人，Cancer Biol.Ther.2010,10：495-504)和頭與頸之鱗狀細胞癌(Marshall等人，Clin.Cancer Res.2011,17：5016-5025)細胞中的FGFR2會造成腫瘤細胞之增生降低和凋亡增加。同樣在腫瘤異種移植中，於過度表現FGFR2的腫瘤細胞中減低FGFR2和抑制FGFR2觀察到造成胃癌細胞株(Takeda等人，Clin.Cancer Res.2007；13：3051-3057)及卵巢癌細胞株(Cole等人，Cancer Biol.Ther.2010,10：495-504)生長抑制。再者，專門活化FGFR2之FGF7，在活體外和活體內增加了胃癌細胞株(Shin等人，J.Cancer Res.Clin.Oncol.2002,128：596-602)、乳癌細胞株(Zhang等人，Anticancer Res.1998,18：2541-2546)和卵巢癌細胞株(Cole等人，Cancer Biol.Ther.2010,10：495-504)之增生。另外，在含有活化性突變的FGFR2之子宮內膜癌細胞株中減低FGFR2，同樣造成細胞週期停止並引發細胞死亡(Byron等人，Cancer Res.2008,68：6902-6907)。

FGFR2訊號傳導促進胃癌細胞株(Shin等人，J.Cancer Res.Clin.Oncol.2002,128：596-602)、乳癌細胞株(Zhang等人，Anticancer Res.1998,18：2541-2546)和胰臟癌細胞株於活體外(Nomura等人，Br.J.Cancer 2008,99：305-313；Niu等人，J.Biol.Chem.2007, 282：6601-6011)的遷移和浸潤。

就食道癌之情況，在腫瘤相關的纖維母細胞中FGFR2為最高度上調的基因。分離的腫瘤相關纖維母細胞釋放一促進增生食道癌細胞之可溶性因子(Zhang等人，hum.Cancer Biol.2009,15：4017-4022)，藉此驗證了由基質細胞表現的FGFR2亦能促進腫瘤惡化。

對於抗-FGFR2抗體僅有一些報告。Fortin等人(J.Neurosci.2005,25：7470-7479)描述了阻斷性抗-FGFR2抗體。Wei等人(Hybridoma 2006,25：115-124)已發表了對FGFR2 IIIb具有獨特專一性之抗體，其抑制KGF-引發的細胞增生。WO2007/144893描述了與FGFR2和FGFR3結合之抑制抗體。在WO2010/054265和Zhao等人(Clin.Cancer Res.2010,16：5750-5758)中，描述了抑制FGF結合之抗體，包括，例如GAL-FR21和GAL-FR22。Bai等人(Cancer Res.2010,70：7630-7639)描述了對FGFR2 IIIb具有專一性之抗體。R&D Systems公司係販售在製造商的分析中具有中和活性效用之kx7抗-FGFR2抗體。WO2005/066211描述了針對各種細胞表面FGFR，包括FGFR2之抗體。WO2009/100105描述了可與效應分子共價連結之異構型-專一性抗-FGFR2抗體。WO2007/134210描述了使用抗-FGFR2抗體或免疫接合體治療大腸直腸癌之方法。WO2007/144893描述對其他FGFR具有結合親和力之FGFR2抗體，其係阻斷配體-依賴以及構成性配體-依賴FGFR2受體活化。

奧瑞他汀E(Auristatin E)(AE)和單甲基奧瑞他汀E(MMAE)為多拉司他汀(dolastatin)之合成的類似物，一種特異性的直鏈偽胜肽，其起初係由海洋來源分離出，且在某些情況下對於腫瘤細胞具有非常強力的細胞毒性活性[其論述請參見，例如G.R.Pettit,Prog.Chem.Org.Nat.Prod.70,1-79(1997)；G.R.Pettit等人，Anti-Cancer Drug Design 10,529-544(1995)；G.R.Pettit等人，Anti-Cancer Drug Design 13,243-277(1998)]。

然而MMAE具有相當高的全身毒性之缺點。對於改善腫瘤選擇性，MMAE更特別是與酵素性可裂解纈胺酸-瓜胺酸連接子共同用於ADC設置，供更多的標靶腫瘤治療[WO 2005/081711-A2；S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.17,114-124(2006)]。在蛋白質裂解後，MMAE較佳地係於細胞內從對應的ADC釋出。

單甲基奧瑞他汀F(MMAF)為具有C-端苯丙胺酸單元之奧瑞他汀衍生物，相較於MMAE，其僅具中度的抗增生活性。此項事實非常可能係由於游離的羧酸基團，其極性和電荷對於此化合物進入細胞之能力有不利的影響。就此，MMAF之甲酯(MMAF-OMe)已描述為具有進入細胞能力之中性-電荷前藥衍生物，相較於MMAF，其對於各種增加許多數量級之癌細胞株具有活體外細胞毒性[S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.17,114-124(2006)]。可假設此效用係因MMAF本身所致，在前藥攝入細胞後，其藉由胞內酯水解快速地釋出。

然而，以簡單酯衍生物為主的藥物化合物，由於與所希望的作用位置無關的非專一性酯水解，例如藉由存在於血漿中的酯酶，一般易有化學不穩定的風險；此非專一性的水解可能大大地限制此等化合物於治療上的有效性。

單甲基奧瑞他汀F(MMAF)及其各種酯衍生物和醯胺衍生物已揭示於WO 2005/081711-A2中。其他具有C-端經醯胺取代的苯丙胺酸單元之奧瑞他汀類似物係描述於WO 01/18032-A2中。WO 02/088172-A2和WO 2007/008603-A1申請了MMAF類似物，其係關於苯丙胺酸之側鏈修飾，而WO 2007/008848-A2係申請其中苯丙胺酸之羧基基團經修飾之化合物。經由C-端連接之奧瑞他汀接合體最近已描述於WO 2009/117531-A1中[亦參見S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.19,1960-1963(2008)]。

本發明所提出的問題為提供新的黏合劑-藥物接合體(ADC)，經由新的N,N-二烷基奧瑞他汀與創新、適合的連接子和黏合劑組合，其展現非常引人注目的活性性質，例如就其特定的腫瘤效應及/或降低胞內形成代謝物作為轉運蛋白相關基質之潛在性，且其因此適合用於治療及/或預防過度增生及/或血管新生疾病，例如癌症疾病。

本發明係提供通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體 其中n為從1至50之數字，AK為與FGFR2結合之黏合劑，§-G-L¹-B-§§基團為連接子，其中§係標示與AK基團之連接位置，及§§係標示與氮原子之連接位置，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立地由甲基、羥基和苄基組成之群中選出的取代基取代，且其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫或甲基，R²為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²與其相鍵結的碳原子共同形成一下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基 其中#⁴係標示與氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄基氧基，R³為氫或甲基，R⁴為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴與其相鍵結的碳原子共同形成一下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結的氮原子共同形成一4-至7-員雜環， R¹⁰為苯甲醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團中經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R²⁶為氫或羥基，T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

本發明化合物為式(I)化合物以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物，與下式相同之化合物並涵蓋式(I)及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物，以及與下文操作實例相同之化合物並涵蓋式(I)及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物，與下文相同並涵蓋式(I)之化合物尚未為其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

依照其結構，本發明化合物可以不同的立體異構物形式存在，亦即組態異構物或其他，若適合，為構象異構物(鏡像異構物及/或非對映異構物，包括該等阻轉異構物之情況)。本發明因此係涵蓋鏡像異構物和非對映異構物及其各別的混合物。立體異構上同質的組成份可從此等鏡像異構物及/或非對映異構物之混合物中以已知的 方法加以分離；就此目的，最好係使用層析法，更特言之，係於非對掌或對掌相上的HPLC層析。

當本發明化合物可發生互變異構物形式時，本發明係涵蓋所有的互變異構型。

本發明亦涵蓋本發明化合物之所有適合的同位素變體。請了解，本發明化合物之同位素變體在本處係指一化合物，其中至少一個本發明化合物中的原子與另一個相同原子數但原子量與自然界正常或主要發生的原子量不同的原子交換。可併入本發明化合物之同位素之實例為該等氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘之同位素，例如²H(氘)、³H(氚)、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³²P、³³P、³³S、³⁴S、³⁵S、³⁶S、¹⁸F、³⁶Cl、⁸²Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁹I和¹³¹I。本發明化合物特別的同位素變體，例如，更特言之，該等其中併入一或多個放射性同位素者，可能有利於，例如作用機制或藥物在身體內的分佈之研究；由於製備和偵測較容易，以³H或¹⁴C同位素標定之化合物特別適合這些目的。再者，併入同位素，例如氘，例如由於化合物較佳的代謝穩定性，例如延長在身體內的半衰期或降低所需的有效劑量，可造成某些治療上的利益；本發明化合物之此等修飾作用因此，若適當，亦構成本發明之較佳實施例。本發明化合物之同位素變體可以熟習本項技術者已知的方法來製備，例如依照稍後於下文中所述之方法及操作實例中的生產製程，使用個別試劑及/或起始化合物之對應的同位素修飾作用。

本發明內文中較佳的鹽類為本發明化合物之生理上可接受鹽類。亦涵蓋雖然本身不適合醫藥應用，然而可用於，例如分離、純化本發明化合物之鹽類。

本發明化合物之生理上可接受鹽類涵蓋無機酸、羧酸和磺酸之酸加成鹽，實例有鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、 苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、延胡索酸、馬來酸及苯甲酸之鹽類。

本發明化合物之生理上可接受鹽類亦涵蓋習用鹼之鹽類，例如及較佳地鹼金屬鹽類(例如鈉和鉀鹽)、鹼土金屬鹽類(例如鈣和鎂鹽)或衍生自氨或有機胺具有1至16個C原子之銨鹽，例如及較佳地乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二異丙基胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環己胺、二甲基胺基乙醇、普卡因、二苄基胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎福啉、精胺酸、離胺酸及1,2-乙二胺。

本發明內文中之溶劑化物為該等經由與溶劑分子配位，形成固態或液態複合物之本發明化合物形式。水合物為一種特定的溶劑化物形式，其中係與水進行配位。在本發明內文中較佳的溶劑化物為水合物。

再者，本發明亦涵蓋本發明化合物之前藥。本處術語「前藥」係指本身為生物上活化或非活化，但於其停留在體內期間轉變為本發明化合物(例如，藉由代謝或水解)之化合物。

在本發明內文中，除非另有說明，否則取代基係具有下列意義：

在本發明內文中，(C₁-C₄)-烷基為具有1至4個碳原子之直鏈或支鏈烷基。可提及作為實例及較佳地為下列：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、1-甲基丙基和第三丁基。

在本發明內文中，烷二基為具有所指之特定碳原子數之直鏈α,ω-二價烷基。可提及作為實例及較佳地為下列：亞甲基、乙-1,2-二基(1,2-伸乙基)、丙-1,3-二基(1,3-伸丙基)、丁-1,4-二基(1,4-伸丁基)、戊-1,5-二基(1,5-伸戊基)、己-1,6-二基(1,6-伸己基)、庚-1,7-二基(1,7-伸庚基)、辛-1,8-二基(1,8-伸辛基)、壬-1,9-二基(1,9-伸壬基)、癸-1,10-二基(1,10-伸癸基)。

在本發明內文中(C₃-C₇)-環烷基和3-至7-員碳環分別為具有3至 7個碳原子之單環、飽和環烷基基團。可提及作為實例及較佳地為下列：環丙基、環丁基、環戊基、環己基和環庚基。

在R¹⁹定義中之α-胺基酸的側基不僅涵蓋天然生成的α-胺基酸側基，亦包括這些α-胺基酸的類似物和異構物之側基。本處α-胺基酸可為L和D組態或另外可以L型和D型之混合物存在。可給予的側基之實例係如下：甲基(丙胺酸)、丙-2-基(纈胺酸)、丙-1-基(正纈胺酸)、2-甲基丙-1-基(白胺酸)、1-甲基丙-1-基(異白胺酸)、丁-1-基(正白胺酸)、第三丁基(2-第三丁基甘胺酸)、苯基(2-苯基甘胺酸)、苄基(苯丙胺酸)、對羥基苄基(酪胺酸)、吲哚-3-基甲基(色胺酸)、咪唑-4-基甲基(組胺酸)、羥甲基(絲胺酸)、2-羥乙基(高絲胺酸)、1-羥乙基(蘇胺酸)、巰基甲基(半胱胺酸)、甲基硫基甲基(S-甲基半胱胺酸)、2-巰基乙基(高半胱胺酸)、2-甲基硫基乙基(甲硫胺酸)、胺甲醯基甲基(天門冬醯胺酸)、2-胺甲醯基乙基(麩醯胺酸)、羧甲基(天門冬胺酸)、2-羧乙基(麩胺酸)、4-胺基丁-1-基(離胺酸)、4-胺基-3-羥基丁-1-基(羥基離胺酸)、3-胺基丙-1-基(鳥胺酸)、2-胺基乙基(2,4-二胺基丁酸)、胺基甲基(2,3-二胺基丙酸)、3-胍基丙-1-基(精胺酸)、3-脲基丙-1-基(瓜胺酸)。在R¹⁹定義中，較佳的α-胺基酸側基為甲基(丙胺酸)、丙-2-基(纈胺酸)、2-甲基丙-1-基(白胺酸)、苄基(苯丙胺酸)、咪唑-4-基甲基(組胺酸)、羥甲基(絲胺酸)、1-羥乙基(蘇胺酸)、4-胺基丁-1-基(離胺酸)、3-胺基丙-1-基(鳥胺酸)、2-胺基乙基(2,4-二胺基丁酸)、胺甲基(2,3-二胺基丙酸)、3-胍基丙-1-基(精胺酸)。各案例中L組態為較佳。

在本發明內文中4-至7-員雜環為具有總計4至7個環原子之單環、飽和雜環，其係含有一或二個來自N、O、S、SO及/或SO₂系列的雜原子並經由一環碳原子或視需要環氮原子相連接。較佳的係給予具有一或二個來自N、O及/或S系列的環雜原子之5-至7-員雜 環，更佳地具有一或二個來自N及/或O系列的環雜原子之5-至6-員雜環。可提及作為實例為下列：氮呾基、氧呾基、吡咯啶基、吡唑啶基、四氫呋喃基、噻 基、哌啶基、哌基、四氫哌喃基、四氫噻哌喃基、嗎福啉基、噻嗎福啉基、六氫氮呯基和六氫-1,4-二氮呯基。較佳地係給予吡咯啶基、四氫呋喃基、哌啶基、哌基、四氫哌喃基和嗎福啉基。

可分別以A、B、B¹、D、G、L¹、L²、L⁴、L⁶、R¹、R²、R³、R⁴和R⁵表示之基團的化學式中，在各案中#⁶、^＊、^＊＊、#³、#¹、#²、##¹、##²、##³、##⁴、^＊＊＊、^＊＊＊＊、#⁴、#⁵、#⁶、#⁷、#⁸或#⁹符號所在的直線端點並非碳原子或CH₂基團，而是與所分派的原子相鍵結之部分，於此位置與A、B、B¹、D、G、L¹、L²、L⁴、L⁶、R¹、R²、R³、R⁴或R⁵相鍵結。

在本發明內文中，所有出現多次的基團具有其各自獨立的定義。若本發明化合物上的基團係經取代，除非另有說明，否則該等基團可經一或多次取代。經一或二個相同或不同的取代基取代為較佳。特佳的係經一個取代基取代。

在本發明內文中，所用的術語除非另有說明，否則具有下列定義：

術語「連接子」在最廣泛的概念下係理解為包括一共價鍵或一系列共價連接黏合劑和藥物之原子的化學單元。術語「連接子」請了解在本發明概念下較佳地為共價連接接合劑和藥物之一系列原子。再者，連接子可例如以二價化學單元表示，例如烷二基、亞芳基、亞雜芳基、亞雜環基、二羰酸酯、二羰酸醯胺。

術語「黏合劑」在最廣泛的概念下係理解為與存在特定目標細胞族群中之標靶分子相結合，以黏合劑-藥物接合體提出之分子。術語「黏合劑」應以其最廣泛的解釋來理解，並涵蓋，例如卵磷酯、 能與特定糖鏈結和的蛋白或磷脂質結合蛋白。此等黏合劑包括，例如高分子量蛋白(結合蛋白)、多肽或胜肽(結合胜肽)、非胜肽(例如適體(aptamer)論述文獻(US5,270,163)Keefe AD.，等人之回顧文獻，Nat.Rev.Drug Discov.2010；9：537-550)，或維生素)及所有其他細胞結合分子或物質。結合蛋白為，例如抗體和抗體片段或抗體模擬物，例如親和體(affibody)、adnectin、抗運載蛋白(anticalin)、DARPin、高親和多聚體(avimer)、奈米抗體(nanobodies)(論述文獻Gebauer M.等人，Curr.Opinion in Chem.Biol.2009；13：245-255；Nuttall S.D.et al.,Curr.Opinion in Pharmacology 2008；8：608-617)。結合胜肽有，例如配體-受體對之配體，例如配體-受體對VEGF/KDR之VEGF，例如配體-受體對運鐵蛋白/運鐵蛋白受體之運鐵蛋白，或細胞激素/細胞激素受體，例如配體-受體對TNFα/TNFα受體之TNFα。

術語「抗原決定區」係涵蓋任何能專一性與免疫球蛋白或T-細胞受體結合之蛋白决定簇。此等決定簇通常係由分子之化學活化表面排列所組成，例如胺基酸、碳水化合物或其組合，例如其通常具有一特異的三元結構以及明確的電荷性質。與相同抗原決定區結合之二種抗體，若在競爭性結合分析模式中係顯現第一抗體與第二抗體競爭。此種結合分析已為熟習技術者所知。

「標靶分子」在最廣泛的概念下係理解為存在目標細胞族群中並可為蛋白(例如生長因子之受體)之分子或非胜肽分子(例如糖或磷脂質)。較佳地其為一受體或抗原。

術語「胞外」標靶分子係描述與細胞相連及位於細胞外之標靶分子或位於細胞外之標靶分子部分，亦即黏合劑可與完整細胞於胞外的標靶分子結合。胞外標靶分子可固定在細胞膜中或可為細胞膜之部分。熟習技術者已了解辨識胞外標靶分子之方法。對於蛋白， 此可經由測定跨膜區和此蛋白在膜中之定向來進行。此資料一般係記錄在蛋白資料庫中(例如SwissProt)。

術語「癌標靶分子」係描述一標靶分子，相較於相同組織類型之非癌細胞，其係多重存在一或多種癌細胞類型上。相較於相同組織類型之非癌細胞，癌症標靶分子較佳地係選擇性存在一或多種癌細胞類型上，其中「選擇性」，相較於相同組織類型之非癌細胞，係描述至少二倍堆積在癌細胞上(選擇型癌標靶分子)。使用癌標靶分子得以用本發明接合體進行選擇性癌細胞治療。

黏合劑可經由一鍵與連接子連接。黏合劑之連接可藉由黏合劑之雜原子來進行。可用於連接之本發明黏合劑之雜原子有硫(在一實施例中係經由黏合劑的巰基基團)、氧(依照本發明係藉由黏合劑的羧基或羥基基團)和氮(在一實施例中係經由黏合劑的一級或二級胺基團或醯胺基團)。這些雜原子可存在天然的黏合劑中或可藉由化學或分子生物之方法來導入。依照本發明，黏合劑與帶毒體之連接對於黏合劑與標靶分子之結合活性僅有極少的影響。在一較佳的實施例中，此連接對於黏合劑與標靶分子之結合活性並無影響。

依照本發明，術語「抗體」係以最廣泛的概念理解並涵蓋免疫球蛋白分子，實例有完整或經修飾單株抗體、多株抗體或多專一性抗體(例如雙專一性抗體)。免疫球蛋白分子較佳地係包括具有四條多肽鏈，二條重鏈(H鏈)和二條輕鏈(L鏈)之分子，其典型地係以雙硫橋連接。各重鏈包括一重鏈可變區(縮寫VH)和一重鏈恆定區。重鏈恆定區可涵蓋，例如CH1、CH2和CH3三個區。各輕鏈包括一可變區(縮寫VL)和一恆定區。輕鏈之恆定區包括一個區(縮寫CL)。VH和VL區可進一步細分成具有超變異性之區域，亦稱為互補決定區(縮寫CDR)及具有低序列變異性之區域(「架構區」，縮寫為FR)。各VH和VL區典型地係由三個CDR和至高四個FR所組成。例如， 以下列胺基端至羧基端之順序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。抗體可由任何適合用作抗體之物種來製得，例如兔、羊駝、駱駝、小鼠或大鼠。在一實施例中該抗體為人類或鼠科來源。抗體，例如可為人類、人源化或嵌合的。

術語「單株」抗體係指從一群實質上同源的抗體得來之抗體，亦即該群族的個別抗體為相同，但是少數可能發生天然的突變。單株抗體以高專一性辨識單一抗原結合位。術語「單株抗體」並非指特殊的製造方法。

術語「全(intact)」抗體係指不僅包括一抗原結合區亦包括輕鏈和重鏈恆定區之抗體。恆定區可為天然生成的區域或其中多數胺基酸位置經改變之其變體。

術語「經修飾全」抗體係指經由其胺基端或羧基端，藉由共價鍵(例如胜肽連接鏈)與另外非源自抗體的多肽或蛋白融合之全抗體。再者，抗體可藉由於定義位置導入反應性半胱胺酸加以修飾，以便於促使與帶毒體結合(參見Junutula等人Nat Biotechnol.2008 Aug；26(8)：925-32)。

術語「人類」抗體為可得自人類之抗體或為合成的人類抗體。「合成的」人類抗體為其部分或整體可從合成的序列經電腦模擬，依照人類抗體序列分析所得來之抗體。人類抗體可，例如由人類來源之抗體序列庫分離出的核酸所編碼。一此等抗體之實例可參見Söderlind等人，Nature Biotech.2000,18：853-856。

術語「人源化」或「嵌合」抗體係描述由非人類和人類序列組份所組成的抗體。在這些抗體中，部分的人類免疫球蛋白序列(受體)被非人類免疫球蛋白之序列組份(供體)所取代。在許多案例中，供體為鼠科免疫球蛋白。就人源化抗體，受體CDR之胺基酸係被供體之胺基酸取代。在某些案例中，架構之胺基酸亦被對應的供體胺基 酸取代。在某些案例中，人源化抗體含有並非存在受體或供體之胺基酸且其係於抗體最適化期間插入。就嵌合抗體之情況，供體免疫球蛋白之可變區係與人類抗體之恆定區融合。

術語互補決定區(CDR)如本處所用係指該等抗體可變區中與抗原結合所必須的胺基酸。每個可變區典型地具有三個CDR區，為CDR1、CDR2和CDR3。各CDR區可包括根據Kabat定義之胺基酸及/或根據Chotia所定義之超變異環之胺基酸。Kabat之定義係涵蓋，例如輕鏈可變區之大約24-34(CDR1)、50-56(CDR2)和89-97(CDR3)胺基酸位置及重鏈可變區之31-35(CDR1)、50-65(CDR2)和95-102(CDR3)胺基酸位置(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immulological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))。Chotia之定義係涵蓋，例如輕鏈可變區之大約26-32(CDR1)、50-56(CDR2)和91-96(CDR3)胺基酸位置及重鏈可變區之26-32(CDR1)、53-55(CDR2)和96-101(CDR3)胺基酸位置(Chothia和Lesk；J Mol Biol 196：901-917(1987))。在某些案例中，CDR可包括來自Kabat和Chotia所定義的一CDR區之胺基酸。

依照重鏈恆定區之胺基酸序列，抗體可分成不同的種類。有五種主要的全抗體：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中許多可再分成另外的亞種(同型物)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。對應不同種類之重鏈恆定區係辨識為[alpha/α]、[delta/δ]、[epsilon/ε]、[gamma/γ]和[mu/μ]。抗體之三元結構和亞單位結構已為所知。

術語抗體/免疫球蛋白之「功能性片段」或「抗原結合抗體片段」係定義為抗體/免疫球蛋白之片段(例如IgG之可變區)，其進一步涵蓋抗體/免疫球蛋白之抗原結合區。抗體之「抗原結合區」典型地係 涵蓋一或多個抗體之超變異區列如CDR、CDR2及/或CDR3區。然而，抗體之「架構」或「骨架」區亦可參與有關抗體與抗原之結合。架構區形成CDR之骨架。抗原結合區較佳地係涵蓋至少4至103個輕鏈可變區之胺基酸和5至109個重鏈可變區之胺基酸，更佳地，3至107個輕鏈可變區之胺基酸和4至111個重鏈可變區之胺基酸，特佳地係給予完整的輕鏈和重鏈可變區，亦即VL之1-109和VH之1至113胺基酸(編號係根據WO97/08320)。

本發明之「功能性片段」或「抗原結合抗體片段」係涵蓋(非絕對)Fab、Fab’、F(ab’)₂和Fv片段、雙抗體、單區抗體(DAb)、直鏈抗體、抗體的個別鏈(單鏈Fv，縮寫為ScFv)；和多專一性抗體，例如雙-和三-專一性抗體，例如由來自抗體片段C.A.K Borrebaeck,editor(1995)Antibody Engineering(Breakthroughs in Molecular Biology),Oxford University Press；R.Kontermann & S.Duebel,editors(2001)Antibody Engineering(Springer Laboratory Manual),Springer Verlag)所形成。「多專一性」或「多功能性」抗體以外的抗體為該等具有相同結合位之抗體。多專一性抗體可對不同的抗原之抗原決定區具專一性，或可對一個以上的抗原之抗原決定區具專一性(參見，例如WO 93/17715；WO 92/08802；WO 91/00360；WO 92/05793；Tutt，等人，1991,J.Immunol.147：60 69；美國專利第4,474,893；第4,7 14,68 1號；第4,925,648號；第5,573,920號；第5,601,8 19號；或Kostelny等人，1992,J.Immunol.148：1547 1553)。F(ab’)₂或Fab分子可經建構使發生在Ch1和CL區間的分子內雙硫鍵相互作用之數目降低或另外完全防止。

「功能性片段」或「抗原結合抗體片段」可與非源自抗體之另外的多肽或蛋白經由其胺基端或羧基端，藉由共價鍵(例如胜肽連接鏈)融合。再者，抗體和抗原結合片段可藉由於定義位置導入反應性 半胱胺酸加以修飾，以便於促使與帶毒體結合(參見Junutula等人Nat Biotechnol.2008 Aug；26(8)：925-32)。

多株抗體可以本項技術之一般技術者已知的方法來製備。單株抗體可以本項技術之一般技術者已知的方法來製備(Köhler及Milstein,Nature,256,495-497,1975)。人類和人源化單株抗體可以本項技術之一般技術者已知的方法來製備(Olsson等人，Meth Enzymol.92,3-16或Cabilly等人US 4,816,567或Boss等人US 4,816,397)。

本領域具一般技術者已知各種用於製備人類抗體和其片段之方法，例如藉由基因轉殖小鼠(N Lonberg和D Huszar,Int Rev Immunol.1995；13(1)：65-93)或噬菌體表現技術(Clackson等人，Nature.1991 Aug 15；352(6336)：624-8)。本發明之抗體可得自藉由匯集大量健康自願者之大量抗體的胺基酸序列所組成之重組的抗體庫。抗體亦可藉由已知的重組DNA技術來製造。抗體之核酸序列可以慣用的定序來取得或可得自公共的資料庫。

「分離的」抗體或黏合劑係經純化以移除其他的細胞組成份。可能干擾診斷或治療使用之沾染的細胞組成份有，例如酵素、荷爾蒙或其他細胞之胜肽和非胜肽性組成份。較佳的抗體或黏合劑，相對於抗體或黏合劑為已純化至95%以上程度者(例如以Lowry法，UV-Vis光譜或以SDS毛細管電泳測定)。再者，抗體係經純化至可能測定至少15個胺基端或內部胺基酸序列之胺基酸程度，或經純化至均質性，該均質性係以SDS-PAGE於還原或非還原條件所測(偵測可藉由馬考斯藍染色(Coomassie Blau staining)或較佳地以銀著色)。然而，抗體一般係以一或多個純化步驟來製備。

術語「專一性結合」係指與預定的抗原/標靶分子結合之抗體或黏合劑。抗體或黏合劑之專一性結合典型地係描述為具有至少10^-7 M親和力之抗體或黏合劑，其中該抗體或黏合劑對於預定的抗 原/標靶分子具有至少比對非專一性抗原/標靶分子(例如牛血清白蛋白或酪蛋白)高二倍的親和力，其中非專一性抗原/標靶分子並非預定的抗原/標靶分子或密切相關之抗原/標靶分子。

專一性抗癌細胞抗原之抗體較佳地可由本項技術之一般技術者藉由其熟悉的方法(例如重組表現)或可由市面取得的(例如來自德國默克公司(Merck KGaA))方法來製備。用於癌症治療之已知的市售抗體之實例有Erbitux®(西妥昔單抗，Merck KGaA)、Avastin®(貝伐單抗，Roche)和Herceptin®(曲妥珠單抗，Genentech)。曲妥珠單抗為IgG1κ型之重組的人源化單株抗體，其在細胞分析中(Kd=5 nM)係以高親和力與人類表皮生長因子之胞外區結合。該抗體係於CHO細胞中以重組來產生。

本發明較佳的主體為通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中n為從1至50之數字，AK為AK₁或AK₂其中AK₁為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之硫原子與G基團鍵結，AK₂為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之氮原子與G基團鍵結，當AK=AK₁時，G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑之硫原子的連接位置，#²係標示與L¹基團之連接位置，或當AK=AK₂時，為羰基，L¹為一鍵、直鏈(C₁-C₁₀)-烷二基、下式之基團 其中m為2至6之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，L^1A為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基，B¹為下式之基團 其中 ##⁵係標示與L^1A基團之連接位置，##⁶係標示與L^1B基團之連接位置，L⁵為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁶為一鍵或下式之基團 其中##⁷係標示與羰基基團之連接位置，##⁸係標示與L^1B之連接位置，R³³為氫、(C₁-C₄)-烷羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基、R³⁴為氫或甲基，R²⁹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²⁹和R³⁰與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R³¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R³¹和R³²與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，L^1B為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基，及其中(C₁-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立由甲基、羥基和苄基組成之群中選出之取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括 位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，P為O或NH,L³為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁴為一鍵或下式之基團 其中^＊＊＊係標示與羰基基團之連接位置，^＊＊＊＊係標示與L²之連接位置，R²⁵為氫或甲基，R²⁸為氫、(C₁-C₄)-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，Q¹為4-至7-員雜環， Q²為3-至7-員雜環或4-至7-員雜環，R¹⁴為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁵為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁴和R¹⁵與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R¹⁶為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁶和R¹⁷與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R¹⁸ 為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁹為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R²⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁹和R²⁰與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環，R²¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R²²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²¹和R²²與其相鍵結之原子共同形成3-至7-員碳環，R²³為(C₁-C₄)-烷基，R²⁴為氫或(C₁-C₄)-烷基，R²⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³⁶為氫、(C₁-C₄)-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，R³⁷為氫或甲基，或R³⁶和R³⁷與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或 為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立由甲基、羥基和苄基組成之群中選出之取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫或甲基，R²為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置、R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫或甲基，R⁴為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴ 係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T1基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹ 係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苯甲醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代， R²⁶為氫或羥基，T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

發明較佳的主體為通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中n為1至20之數字，AK為AK₁或AK₂其中AK₁為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵結，AK₂為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵結，當AK=AK₁時，G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑的半胱胺酸殘基之連接位置，#²係標示與L¹基團之連接位置，或當AK=AK₂時為羰基，L¹為一鍵、直鏈(C₂-C₆)-烷二基、下式之基團 其中m為2至6之數字， ##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，L^1A為直鏈(C₂-C₆)-烷二基、B¹為下式之基團 其中##⁵係標示與L^1A基團之連接位置，##⁶係標示與L^1B基團之連接位置，L⁵為一鍵，L⁶為一鍵或下式之基團 其中##⁷係標示與羰基基團之連接位置，##⁸係標示與L^1B之連接位置，R³³為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R³⁴為氫或甲基，R²⁹為氫，R³⁰為氫，R³¹為氫或甲基， R³²為氫或甲基，L^1B為直鏈(C₂-C₆)-烷二基，及其中(C₂-C₆)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙-1,2-二基，L⁴為一鍵或下式之基團 其中^＊＊＊係標示與羰基基團之連接位置，^＊＊＊＊係標示與L²之連接位置，R²⁵為氫或甲基， R²⁸為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，Q¹為4-至7-員雜環，R¹⁴為氫，R¹⁵為氫，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，或R¹⁶和R¹⁷與其相鍵結之原子共同形成哌基環，R¹⁸為氫，R¹⁹為氫、甲基、丙-2-基、2-甲基丙-1-基或1-甲基丙-1-基，R²⁰為氫或甲基，或R¹⁹和R²⁰係與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環，R²¹為氫或甲基，R²²為氫或甲基，或R²¹和R²²係與其相鍵結之原子共同形成環丙基環，R²³為甲基，R²⁴為氫或甲基，R²⁷為氫，R³⁶為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R³⁷為氫或甲基，或R³⁶和R³⁷與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶環，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字， ##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫，R⁴為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R²⁶為氫或羥基，T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

本發明較佳的主體為通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中n為1至10之數字，AK為AK₁或AK₂其中AK₁為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵結，AK₂為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵結，當AK=AK₁時，G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑之半胱胺酸殘基的連接位置， #²係標示與L¹基團之連接位置，或當AK=AK₂時，為羰基，L¹為一鍵、直鏈(C₂-C₆)-烷二基、下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，其中(C₂-C₆)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙-1,2-二基，L⁴為一鍵或下式之基團 其中 ^＊＊＊係標示與羰基基團之連接位置，^＊＊＊＊係標示與L²之連接位置，R²⁵為甲基，R²⁸為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，Q¹為哌啶-1,4-二基，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，或R¹⁶和R¹⁷係與其相鍵結之原子共同形成哌基環，R²¹為氫或甲基，R²²為氫或甲基，或R²¹和R²²係與其相鍵結之原子共同形成環丙基環，R²³為甲基，R²⁴為氫，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中 #³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置、R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫，R⁴為苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T1基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHCH₂苯基之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

本發明較佳的主體為通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中n為1至10之數字，AK為AK₂，其中AK₂為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵結， G為羰基，L¹為一鍵，B為一鍵，L²為直鏈(C₃-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置、D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中 #⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R³為氫，R⁴為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷或-C(=O)-NR⁸R⁹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫，R⁹為氫或苄基，R³⁵為甲基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

本發明較佳的主體為通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中 n為1至10之數字，AK為AK₁，其中AK₁為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵結，G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#²係標示與L¹基團之連接位置，L¹為一鍵、直鏈(C₃-C₅)-烷二基或下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，其中(C₃-C₅)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙-1,2-二基， L⁴為一鍵或下式之基團 其中^＊＊＊係標示與羰基基團之連接位置，^＊＊＊＊係標示與L²之連接位置，R²⁵為甲基，R²⁸為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，或R¹⁶和R¹⁷係與其相鍵結之原子共同形成哌基環，L²為直鏈(C₃-C₅)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫， R²為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R³為氫，R⁴為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中 #⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷或-C(=O)-NR⁸R⁹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫，R⁹為氫或苄基，R³⁵為甲基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

另外較佳地本發明係提供如上述之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑係包括以SEQ ID NO：14(Vl)和SEQ ID NO：13(Vh)所複製的M048-D01-hIgG1-b抗體之可變輕鏈和重鏈之胺基酸序列，以SEQ ID NO：9(輕鏈)和SEQ ID NO：10(重鏈)所複製的M048-D01-hIgG1-b抗體之輕鏈和重鏈的胺基酸序列。

外本發明亦提供式(XXXa)之化合物 其中Cys為經由側鏈之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵結之半胱胺酸殘基，L¹為一鍵、直鏈(C₁-C₁₀)-烷二基、下式之基團 其中m為2至6之數字，##¹係標示與G基團之連接位置， ##²係標示與B基團之連接位置，L^1A為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基、B¹為下式之基團 其中##⁵係標示與L^1A基團之連接位置，##⁶係標示與L^1B基團之連接位置，L⁵為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁶為一鍵，R²⁹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²⁹和R³⁰係與其相鍵結之原子共同形成一5-或6-員雜環，R³¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R³¹和R³²與其相鍵結之原子共同形成一5-或6-員雜環，L^1B為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基、及其中(C₁-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立由甲基、羥基和苄基組成之群中選出之取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，P為O或NH，L³為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁴為一鍵，Q¹為4-至7-員雜環，Q²為3-至7-員雜環或4-至7-員雜環，R¹⁴為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁵為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁴和R¹⁵與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R¹⁶為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁶和R¹⁷係與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R¹⁸為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁹為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R²⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁹和R²⁰與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環，R²¹為氫或(C₁-C₄)-烷基， R²²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²¹和R²²係與其相鍵結之原子共同形成3-至7-員雜環，R²³為(C₁-C₄)-烷基，R²⁴為氫或(C₁-C₄)-烷基，R²⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立由甲基、羥基和苄基組成之群中選出之取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫或甲基，R²為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H- 咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫或甲基，R⁴為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹ 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苯甲醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R²⁶為氫或羥基， T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中又另外較佳的為式(XXXa)之化合物，其中Cys為經由側鏈之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵結之半胱胺酸殘基，L¹為一鍵、直鏈(C₂-C₆)-烷二基、下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，L^1A為直鏈(C₂-C₆)-烷二基、B¹為下式之基團 其中##⁵係標示與L^1A基團之連接位置，##⁶係標示與L^1B基團之連接位置，L⁵為一鍵，L⁶為一鍵，R²⁹為氫，R³⁰為氫，R³¹為氫或甲基，R³²為氫或甲基，L^1B為直鏈(C₂-C₆)-烷二基、及其中(C₂-C₆)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代， B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙-1,2-二基，L⁴為一鍵，R¹⁴為氫，R¹⁵為氫，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，或R¹⁶和R¹⁷係與其相鍵結之原子共同形成哌基環，R²³為甲基，R²⁴為氫或甲基，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置、D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫， R⁴為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成一4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHCH₂苯基之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代， R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中又另外特佳的為式(XXXa)之化合物，其中Cys為經由側鏈之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵結之半胱胺酸殘基，L¹為一鍵或直鏈(C₂-C₆)-烷二基，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，L³為一鍵，L⁴為一鍵，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置、D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置、#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R³為氫，R⁴為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷或-C(=O)-NR⁸R⁹之基團，其中R⁷為氫，R⁸為氫，R⁹為氫，R³⁵為甲基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

本發明另外係提供式(XXXI)化合物 其中L¹為一鍵、直鏈(C₁-C₁₀)-烷二基、下式之基團 其中m為2至6之數字，##¹係標示與G基團之連接位置， ##²係標示與B基團之連接位置，L^1A為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基、B¹為下式之基團 其中##⁵係標示與L^1A基團之連接位置，##⁶係標示與L^1B基團之連接位置，L⁵為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁶為一鍵，R²⁹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²⁹和R³⁰係與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R³¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R³¹和R³²係與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，L^1B為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基、及其中(C₁-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立由甲基、羥基和苄基組成之群中選出之取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，P為O或NH，Q¹為4-至7-員雜環，Q²為3-至7-員雜環或4-至7-員雜環，R¹⁸ 為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁹為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R²⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁹和R²⁰係與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環，R²¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R²²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²¹和R²²與其相鍵結之原子共同形成3-至7-員雜環，R²⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字， ##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立由甲基、羥基和苄基組成之群中選出之取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環、D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫或甲基，R²為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置， #⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫或甲基，R⁴為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基， R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R²⁶為氫或羥基，T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(XXXI)之化合物，其中L¹為一鍵、直鏈(C₂-C₆)-烷二基或下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置， 其中(C₂-C₆)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，R¹⁸為氫，R¹⁹為甲基、丙-2-基、2-甲基丙-1-基或1-甲基丙-1-基，R²⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁹和R²⁰係與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環，R²¹為氫或甲基，R²²為氫或甲基，或R²¹和R²²係與其相鍵結之原子共同形成環丙基環，R²⁷為氫或甲基，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置， 其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成苯基環，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置、R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫，R⁴為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環， R¹⁰為苄醯基，R¹¹苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHCH₂苯基之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦特佳的為式(XXXI)之化合物，其中L¹為一鍵，B為一鍵，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置， R¹為氫，R²為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫，R⁴為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷或-C(=O)-NR⁸R⁹之基團，其中R⁷為氫，R⁸為氫，R⁹為氫，R³⁵為甲基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(Ia)之化合物，其中AK為AK₁其中AK₁為一抗體或抗原-結合抗體片段，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵結， 其中#¹係標示與黏合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#²係標示與L¹基團之連接位置，及n、L¹、B、L²、D和R³⁵具有上述所示之定義， 以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(Ia)之化合物，其中AK為AK₂其中AK₂為一抗體或抗原-結合抗體片段，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵結，G為羰基，及n、L¹、B、L²、D和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的係給予式(Ia)之化合物，其中AK為AK₁其中AK₁為黏合劑，其係與FGFR2結合且係經由黏合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵結，G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#²係標示與L¹基團之連接位置，及n、L¹、B、L²、D和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的係給予式(Ia)之化合物，其中AK為AK₂其中 AK₂為黏合劑，其係與FGFR2結合且其係經由黏合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵結，G為羰基，及n、L¹、B、L²、D和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的係給予通式(Ia)之化合物，其中AK為AK₂其中AK₂為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵結，G為羰基，L¹為一鍵，B為一鍵，L²為直鏈(C₃-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，n、D和R³⁵⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的係給予通式(Ia)之化合物，其中AK為AK₁其中AK₁為黏合劑，其係與FGFR2結合且其係經由黏合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團連接，G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#²係標示與L¹基團之連接位置，L¹為一鍵、直鏈(C₃-C₅)-烷二基或下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，其中(C₃-C₅)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙-1,2-二基，L⁴為一鍵或下式之基團 其中^＊＊＊係標示與羰基基團之連接位置， ^＊＊＊＊係標示與L²之連接位置，R²⁵為甲基，R²⁸為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，或R¹⁶和R¹⁷係與其相鍵結之原子共同形成哌基環，L²為直鏈(C₃-C₅)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，及n、D和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的係給予式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)之化合物，其中L¹為一鍵，B為一鍵，L²為直鏈(C₃-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，及 n、AK、Cys、G、D和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(Ia)之化合物，其中L¹為直鏈(C₁-C₁₀)-烷二基或下式之基團 其中m為2至6之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，其中(C₁-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立由甲基、羥基和苄基組成之群中選出之取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁴為下式之基團 其中^＊＊＊係標示與羰基基團之連接位置，^＊＊＊＊係標示與L²之連接位置，R²⁵為氫或甲基，R²⁸為氫、(C₁-C₄)-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，Q¹為4-至7-員雜環，R¹⁶為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁶和R¹⁷係與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R²³為(C₁-C₄)-烷基，R²⁴為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³⁶為氫、(C₁-C₄)-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，R³⁷為氫或甲基，或R³⁶和R³⁷係與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶環，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立由甲基、羥基和苄基組成之群中選出之取代基取代，及n、AK、G、D和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(Ia)之化合物，其中 L¹為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙-1,2-二基，L⁴為下式之基團 其中^＊＊＊係標示與羰基基團之連接位置，^＊＊＊＊係標示與L²之連接位置，R²⁵為氫或甲基，R²⁸為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，或R¹⁶和R¹⁷係與其相鍵結之原子共同形成哌基環， R³⁶為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R³⁷為氫或甲基，或R³⁶和R³⁷係與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶環，L² 為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，及n、AK、G、D和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(Ia)和(XXXa)之化合物，其中G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#²係標示與L¹基團之連接位置，L¹為直鏈(C₃-C₅)-烷二基或下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置， ##²係標示與B基團之連接位置，其中(C₃-C₅)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中^＊係標示與L¹之連接位置，^＊＊係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙-1,2-二基，L⁴為一鍵，L²為直鏈(C₃-C₅)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，及n、AK₁、Cys、D、R¹⁶和R¹⁷具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)之化合物，其中D為下式之基團 其中 #³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫或甲基，R²為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫或甲基，R⁴為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基， 或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成一4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置， R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R²⁶為氫，T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，及n、AK、Cys、G、L¹、B、L²、D和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)之化合物，其中D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫或甲基，R²為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中 #⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，及n、AK、Cys、G、L¹、B、L²和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)之化合物，其中D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，及n、AK、Cys、G、L¹、B、L²和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)之化合物，其中R³⁵為羥基，及n、AK、Cys、G、L¹、B、L²、D和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

在本發明內文中亦較佳的為式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)之化合物，其中R³⁵為甲基，及n、AK、Cys、G、L¹、B、L²、D和R³⁵具有上述所示之定義，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

本發明較佳的主體為通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中D可具有下列結構，且^＊係代表與氮原子之連接位置： 以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

本發明較佳的主體為通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中D具有本發明中間物之一所揭示的結構；且連接子單元§-G-L¹-B-L²-§§以及所有其他變數係依照本發明所定義；以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。AK較佳的為抗-FGFR2抗體或其抗原結合片段。

本發明較佳的主體為通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中連接子-藥物單元具有本發明中間物或實例之一所揭示的結構；以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。AK較佳的為抗-FGFR2抗體或其抗原結合片段。

本發明較佳的主體為通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中連接子-藥物單元具有本發明實例之一所揭示的結構；以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。AK較佳的為抗-FGFR2抗體或其抗原結合片段。

本發明特佳的主體為通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體 其中n為1至50之數字，AK為與FGFR2結合之黏合劑，§-G-L¹-B-§§基團為連接子，其中§係標示與AK基團之連接位置，及§§係標示與氮原子之連接位置，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立由甲基、羥基和苄基組成之群中選出之取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環， D為下式之基團，其中^＊為與氮原子之連接位置， 以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

本發明特佳的主體為下式之化合物 其中AK為與FGFR2結合之黏合劑，而n為1至10之數字，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。若黏合劑係經由離銨酸殘基之NH側基與連接子-帶毒體單元鍵結，則為較佳。

本發明特佳的主體為下式之化合物 其中AK為與FGFR2結合之抗體或抗體片段，而n為1至10之數字，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。若抗體或抗體片段係經由抗體或抗體片段之離銨酸殘基的NH側基與連接子-帶毒體單元鍵結，則為較佳。

本發明特佳的主體為下式之化合物 其中AK2A為M048-D01-hIgG1而n為1至10之數字，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

本發明特佳的主體為下式之化合物 其中AK2B為M048-D01-hIgG1-b而n為1至10之數字，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。

於各別的基團組合或較佳的組合中個別所指之基團定義亦可任意以其他組合來取代，與所指之各別基團組合無關。

特佳的為二或多種上述較佳範圍之組合。

本發明進一步係提供製備式(Ia)之本發明化合物的方法，其特徵在於將溶於PBS緩衝液之黏合劑溶液[A]與適合的還原劑，例如二硫蘇糖醇或叁(2-羧乙基)膦鹽酸鹽混合，及隨後與式(IIa)化合物反應， 其中D、L¹、B、L²和R³⁵各具有上述所示之定義， 得到式(I-A)之化合物 其中n、AK₁、D、L¹、B、L²和R³⁵各具有上述所示之定義，或[B]與式(IIIa)之化合物反應 其中D、L¹、B、L²和R³⁵各具有上述所示之定義，得到式(Ia-B)之化合物 其中n、AK₂、D、L¹、B、L²和R³⁵各具有上述所示之定義。

半胱胺酸偶合：

抗體之部分還原以及隨後將(部分)還原的抗體與式(IIa)化合物接合係依照熟習技術者已知之方法來進行，例如，參見，如Ducry等人，Bioconj.Chem.2010,21,5和文中之參考文獻，Klussman等人，Bioconj.Chem.2004, 15(4),765-773。此抗體緩和的還原較佳地係藉由加入2-6當量的TCEP至抗體中，該TCEP係存在適合緩衝液中，較佳地磷酸緩衝液，並於介於15和40℃的溫度，較佳地室溫下攪拌30-180分鐘來進行。接著，將溶於DMSO、乙腈或DMF之式(IIa)化合物溶液加至溶於PBS緩衝液之(部分)還原抗體溶液中，及隨後於0℃至+40℃的溫度下，更特言之+10℃至+30℃，反應30分鐘至6小時的期間，更特言之1至2小時，進行接合。

離胺酸偶合：

首先以習用的胜肽化學法製備式(IIIa)化合物或相當的活化羧基組份。然後將其置於惰性溶劑例如DMSO或DMF中處理，並加入抗體，抗體較佳地係存在於中性pH之磷酸緩衝液中。將溶液於介於15至40℃之溫度，較佳地於RT下，攪拌1-16小時。

上述製備方法係藉由實例使用下列流程(流程1和2)來說明： [a)：1.AK(抗體)，TCEP，PBS緩衝液，RT；2.加入溶於DMSO之馬來醯亞胺衍生物，RT]。

流程2 [a)：AK(抗體)，PBS緩衝液，RT與連接子-藥物組份之活化的羧基衍生物混合]。

式(II)化合物，其中L¹和B為一鍵，可藉由將式(IV)化合物 其中D具有如上所示之定義，於惰性溶劑中以式(V)化合物進行還原性胺化作用 其中L^2A具有如上L²之定義，但在烷基鏈長度上少一個碳原子，PG¹為胺基-保護基團，例如(9H-茀-9-基甲氧基)羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，得到式(VI)化合物 其中D、L²和PG¹具有如上所示之定義，藉由熟習技術者已知的方法從該化合物移除PG¹保護基團，並將去保護的化合物於惰性溶劑中，於適合的鹼之存在下與2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯反應，得到式(II-A)之化合物 其中D和L²各自具有如上所示之定義。

式(II)化合物，其中B為式(B¹)之基團 其中^＊、^＊＊、R¹⁴和R¹⁵各自具有如上所示之定義，可藉由熟習技術者已知的方法從式(VI)化合物移除PG¹保護基團，並將去保護的化合物於惰性溶劑中，於適合的鹼之存在下與式(VII)化合物反應來製備 其中L¹各自具有上指之定義， 得到式(II-B)之化合物 其中D、L¹和L²各自具有如上所示之定義。

式(II)化合物，其中B為式(B²)之基團 其中^＊、^＊＊、L³、R¹⁶和R¹⁷各自具有如上所示之定義，可藉由將式(IV)化合物於惰性溶劑中以式(VIII)化合物進行還原性胺化作用， 其中L^2A具有如上L²之定義，但在烷基鏈長度上少一個碳原子，得到式(IX)化合物 其中D和L²具有如上所示之定義，並將此化合物於惰性溶劑中，於適合的偶合劑和鹼之存在下與式(X)化合物反應， 其中L¹和L³各自具有如上所示之定義，得到式(II-C)化合物 其中D、L¹、L²和L³各自具有如上所示之定義。

式(II)化合物，其中B為式(B³)之基團 其中^＊、^＊＊、L³、R¹⁶和R¹⁷各自具有如上所示之定義及L^4A為下式之基團 其中^＊＊＊係標示與羰基基團之連接位置，^＊＊＊＊係標示與L²之連接位置，R²⁵為氫或甲基，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適合的鹼和適合的偶合劑之存在下與式(XI-A)或(XI-B)化合物反應來製備， 其中R²⁵和PG¹各自具有如上所示之定義，及PG²為適合的羧基-保護基團，更特言之，苄基，得到式(XII-A)或(XII-B)化合物 或 其中D、PG¹、PG²和L²具有如上所示之定義，隨後以熟習技術者已知的方法從該化合物移除PG²保護基團，並將去保護的化合物於惰性溶劑中，於適合的偶合劑和適合的鹼之存在下與式(X)化合物反應，及最後以熟習技術者已知的方法從該化合物移除PG1保護基團，得到式(II-D-A)或(II-D-B)之化合物 或 其中D、L¹、L²和L³具有如上所示之定義。

式(II)化合物，其中B為(B⁴)之基團 ^＊＊各自具有如上所示之定義，及Q^1A為N-連接的4-至7-員雜環，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適合的鹼和適合的偶合劑之存在下與式(XXI)化合物反應來製備， 其中PG¹和Q^1A各自具有如上所示之定義，得到式(XXII)化合物 其中PG¹、Q^1A、D和L²具有如上所示之定義，藉由熟習技術者已知的方法從該化合物移除PG¹保護基團及隨後將去保護的化合物於惰性溶劑中，於適合的偶合劑和適合的鹼之存在下與式(XXIII)化合物反應， 其中L¹具有如上所示之定義，得到式(II-D)之化合物 其中Q^1A、D、L¹和L²具有如上所示之定義。

式(III)化合物，其中L¹和B為一鍵，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適合的偶合劑和適合的鹼之存在下與N-羥基琥珀醯亞胺反應來製備，得到式(III-A)之化合物 其中D和L²各自具有如上所示之定義。

式(III)化合物，其中L¹為一鍵且B為式(B^5A)之基團 其中^＊、^＊＊和P各自具有如上所示之定義，及 Q^2A為3-至7-員碳環，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適合的偶合劑和適合的鹼之存在下與式(XIII)化合物反應來製備， 其中P、Q^2A和PG²各自具有如上所示之定義，得到式(XIV)之化合物 其中D、P、Q^2A、L²和PG²各自具有如上所示之定義，藉由熟習技術者已知的方法從該化合物移除PG²保護基團，及隨後將去保護的化合物於惰性溶劑中，於適合的鹼之存在下與N-羥基琥珀醯亞胺，得到式(III-B)之化合物 其中D、P、Q^2A和L²各自具有如上所示之定義。

式(III)化合物，其中L¹為一鍵且B為式(B⁶)之基團 其中^＊、^＊＊、R¹⁸、R¹⁹和R²⁰各自具有如上所示之定義，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適合的偶合劑和適合的鹼之存在下與式(XV)化合物反應來製備， 其中R¹⁸、R¹⁹、R²⁰和PG²各自具有如上所示之定義，得到式(XVI)之化合物 其中D、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、L²和PG²各自具有如上所示之定義，藉由熟習技術者已知的方法從該化合物移除PG²保護基團，及隨後將去保護的化合物於惰性溶劑中，於適合的偶合劑和適合的鹼之存在下與N-羥基琥珀醯亞胺反應，得到式(III-C)化合物 其中D、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰和L²各自具有如上所示之定義。

式(III)化合物，其中L¹為一鍵且B為式(B⁷)之基團 其中^＊、^＊＊、R²¹和R²²各自具有如上所示之定義，可藉由熟習技術者已知的方法從式(VI)化合物移除PG¹保護基團並將所產生的去保護化合物於惰性溶劑中，於適合的鹼之存在下與式(XVII)化合物反應來製備， 其中R²¹和R²²各自具有如上所示之定義，得到式(III-D)之化合物 其中D、R²¹、R²²和L²各自具有如上所示之定義。

式(III)化合物，其中B為式(B⁸)之基團 其中^＊、^＊＊、R²³和R²⁴各自具有如上所示之定義，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適合的偶合劑和適合的鹼之存在下與式(XVIII)反應來製備其中^＊、^＊＊、R²³和R²⁴各自具有如上所示之定義， 其中R²³、R²⁴和PG¹各自具有如上所示之定義，得到式(XIX)之化合物 其中D、R²³、R²⁴、L²和PG¹各自具有如上所示之定義，藉由熟習技術者已知的方法從該化合物移除PG¹保護基團，及隨後將去保護的化合物於惰性溶劑中，於適合的偶合劑和適合的鹼之存在下與式(XX)化合物反應 其中L^1A為直鏈(C₁-C₁₀)-烷二基或下式之基團 其中m為2至6之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，其中(C₁-C₁₀)-烷二基可經1至4個甲基取代基取代，及其中烷二基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，同時包括任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，得到式(III-E)之化合物 其中D、R²³、R²⁴、L^1A和L²各自具有如上所示之定義。

式(III)化合物，其中B為式(B^5B)之基團 其中^＊和^＊＊各自具有如上所示之定義，及Q^2B為N-連接的4-至7-員雜環，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適合的鹼和適合的偶合劑之存在下與式(XXIV)化合物反應來製備， 其中PG¹和Q^2B各自具有如上所示之定義，得到式(XXV)之化合物 其中PG¹、Q^2B、D和L²具有如上所示之定義，藉由熟習技術者已知的方法從該化合物移除PG¹保護基團，及隨後將去保護的化合物於惰性溶劑中，於適合的鹼之存在下以式(XX)化合物轉變為式(III-F)化合物 其中Q^2B、D、L^1A和L²具有如上所示之定義。

(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VIII)→(IX)反應係在習用於還原性胺化作用及於反應條件下為惰性的溶劑中，視需要在酸及/或脫水劑作為催化劑之存在下來進行。等溶劑包括，例如醇類如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇或第三丁醇，醚類如四氫呋喃、1,4-二烷、1,2-二甲氧基乙烷或二(2-甲氧基乙基)醚，或其他溶劑例如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、N,N-二甲基甲醯胺或另外水。亦可使用這些溶劑之混合物。較佳地係使用1,4-二烷/水混合物作為溶劑，添加乙酸或稀鹽酸作為催化劑。

適用於此反應之還原劑，特言之，硼氫化物複合物，例如硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉、三乙醯氧基硼氫化鈉、四正丁基硼氫化銨或硼烷-吡啶複合物。較佳的係使用氰基硼氫化鈉或硼烷-吡啶複合物。

(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VIII)→(IX)反應一般係在0℃至+120℃之溫度範圍內，較佳地於+50℃至+100℃下進行。反應可於大氣壓、升高或降低的壓力(例如0.5至5巴)下進行；通常係於大氣壓下操作。

上述偶合反應(IX)+(X)→(II-C)、(XII-A)或(XII-B)+(X)→(II-D-A)或(II-D-B)、(IX)+(XIII)→(XIV)、(IX)+(XV)→(XVI)和(XXII)+(XXIII)→(II-D)(分別由胺組份和羧酸組份形成醯胺)係以標準的胜肽化學法來進行[參見，例如M.Bodanszky,Principles of Peptide Synthesis,Springer-Verlag,Berlin,1993；M.Bodanszky and A.Bodanszky,The Practice of Peptide Synthesis,Springer-Verlag,Berlin,1984；H.-D.Jakubke及H.Jeschkeit,aminosäuren,Peptide,Proteine,Verlag Chemie,Weinheim,1982]。

用於這些偶和反應之惰性溶劑的實例有醚類，例如乙醚、異丙醚、第三丁基甲基醚、四氫呋喃、1,4-二烷、1,2-二甲氧基乙烷或二(2-甲氧基乙基)醚，烴類例如苯、甲苯、二甲苯、戊烷、己烷、庚烷、環己烷或石油餾份，鹵化烴類例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1,2-二氯乙烷、三氯乙烷或氯苯，或偶極性-非質子溶劑例如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲基亞碸(DMSO)、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N,N-二甲基乙醯胺 (DMA)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯啶酮(NMP)。亦可使用這些溶劑之混合物。較佳地係使用N,N-二甲基甲醯胺。

用於這些偶合反應之適合的活化/縮合劑包括碳二亞胺例如N,N'-二乙基-、N,N'-二丙基-、N,N'-二異丙基-、N,N'-二環己基碳二亞胺(DCC)或N-(3-二甲基胺基異丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、光氣(phosgene)衍生物例如N,N'-羰基二咪唑(CDI)或氯甲酸異丁酯、1,2-唑鎓化合物例如2-乙基-5-苯基-1,2-唑鎓3-硫酸鹽或2-第三丁基-5-甲基異唑鎓過氯酸鹽、醯基胺基化合物例如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氯喹啉，磷化合物例如正丙基磷酸酐、氰基磷酸二乙酯、雙(2-側氧-3-唑啶基)磷醯氯、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基胺基)六氟磷酸鏻或苯并三唑-1-基氧基三(吡咯啶并)六氟磷酸鏻(PyBOP)或化合物例如O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基四氟硼酸(TBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HBTU)、2-(2-側氧-1-(2H)-吡啶基)-1,1,3,3-四甲基四氟硼酸(TPTU)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)或O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基四氟硼酸(TCTU)，視需要與另外的佐劑例如1-羥基苯并三唑(HOBt)或N-羥基琥珀醯亞胺(HOSu)組合，以及鹼金屬碳酸鹽，例如碳酸鈉或鉀，或四級胺鹼例如三乙胺、N-甲基嗎福啉、N-甲基哌啶、N,N-二異丙基乙基胺、吡啶或4-N,N-二甲基胺基吡啶作為鹼。

在本發明內文中，用於此等偶合反應之活化/縮合劑較佳地係使用N-(3-二甲基胺基異丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)與1-羥基苯并三唑(HOBt)和N,N-二異丙基乙基胺之組合，或O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)同樣與N,N-二異丙基乙基胺組合。

偶合反應(IX)+(X)→(II-C)、(XII-A)或(XII-B)+(X)→(II-D-A)或(II-D-B)、(IX)+(XIII)→(XIV)、(IX)+(XV)→(XVI)和(XXII)+(XXIII)→(II-D)一般係於-20℃至+60℃的溫度範圍內進行，較佳地0℃至+40℃。此等反應可於大氣壓、升高或降低的壓力下進行(例如0.5至5巴)；其通常係於大氣壓下操作。

酯化作用(IX)+(XVIII)→(XII)和(IX)+(XI-A)或(XI-B)→(XII-A)或(XII-B)、(IX)+(XXIV)→(XXV)以及(IX)+(XXI)→(XXII)同樣地係於上述醯胺 偶合反應中進行。這些反應較佳地係於二氯甲烷中，使用N-(3-二甲基胺基異丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和4-二甲基胺基吡啶，於+50℃至100℃的溫度，在大氣壓下進行。

視需要存在於化合物中之功能性基團-例如，特別是胺基、羥基和羧基基團-若有用或需要時，於上述處理步驟期間可以暫時性保護形式存在。在這些情況下，此等保護基團可依照胜肽化學中已知的習用方法來導入和移除[參見，例如T.W.Greene and P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,Wiley,New York,1999；M.Bodanszky and A.Bodanszky,The Practice of Peptide Synthesis,Springer-Verlag,Berlin,1984]。當有二或多個保護基團存在時，其可視需要同時以一鍋反應再次釋放，或另外以分開的反應步驟再次釋出。

較佳的係使用第三丁氧基羰基(Boc)、苄氧基羰基(Z)或(9H-茀-9-基甲氧基)羰基(Fmoc)作為PG¹胺基-保護基團；就羥基或羧基功能基，較佳的係使用第三丁基或苄基作為PG²保護基團。移除第三丁基或第三丁氧基羰基基團典型地係以強酸，例如鹽酸、氫溴酸或三氟乙酸，於惰性溶劑例如乙醚、1,4-二烷、二氯甲烷或乙酸中處理來進行；此反應視需要亦可於無添加惰性溶劑下進行。在以苄基或苄氧基羰基作為保護基團的情況下，此基團較佳的係以氫解作用，於適合的鈀催化劑例如活性碳上鈀之存在下移除。(9H-茀-9-基甲氧基)羰基基團一般係使用二級胺鹼例如二乙胺或哌啶來移除。

(VI)→(II-A)反應係於在該反應條件下為惰性之溶劑中進行，例如醚類如四氫呋喃、1,4-二烷、1,2-二甲氧基乙烷或二(2-甲氧基乙基)醚，醇類如甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇或第三丁醇，或偶極性-非質子溶劑例如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲基亞碸(DMSO)、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N,N-二甲基乙醯胺(DMA)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯啶酮(NMP)或水。亦可使用這些溶劑之混合物。較佳地係使用1,4-二烷和水之混合物。

用於(VI)→(II-A)反應之適合的鹼有，例如鹼金屬碳酸鹽例如碳酸鉀、碳酸鈉或碳酸鋰，鹼金屬碳酸氫鹽例如碳酸氫鈉或碳酸氫鉀，或鹼金屬烷醇類例如甲醇鈉、乙醇鈉或第三丁醇鉀。較佳地係使用碳酸氫鈉。

(VI)→(II-A)反應係於0℃至+50℃的溫度範圍內進行，較佳地+10℃至+30℃。此等反應可於大氣壓、升高或降低的壓力下進行(例如0.5至5巴)；其通常係於大氣壓下操作。

(VI)+(VII)→(II-B)反應係於在該反應條件下為惰性之溶劑中進行，例如醚類如四氫呋喃、1,4-二烷、1,2-二甲氧基乙烷或二(2-甲氧基乙基)醚，醇類如甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇或第三丁醇，或偶極性-非質子溶劑例如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲基亞碸(DMSO)、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N,N-二甲基乙醯胺(DMA)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯啶酮(NMP)或水。亦可使用這些溶劑之混合物。較佳地係使用DMF。

用於(VI)+(VII)→(II-B)之適合的鹼有，例如三級胺鹼例如三乙胺、N-甲基嗎福啉、N-甲基哌啶、N,N-二異丙基乙基胺、吡啶或4-N,N-二甲基胺基吡啶。較佳地係使用N,N-二異丙基乙基胺。

(VI)+(VII)→(II-B)反應係於0℃至+50℃的溫度範圍內進行，較佳地+10℃至+30℃。此反應可於大氣壓、升高或降低的壓力下進行(例如0.5至5巴)；其通常係於大氣壓下操作。

(IX)→(III-A)、(XIV)→(III-B)和(XVI)→(III-C)，以及(VI)+(XVII)→(III-D)、(XIX)+(XX)→(III-E)和(XXV)+(XX)→(III-F)反應係於在該反應條件下為惰性之溶劑中進行。適合的溶劑之實例有醚類，例如乙醚、異丙醚、第三丁基甲基醚、四氫呋喃醚、1,4-二烷醚、1,2-二甲氧基乙烷或二(2-甲氧基乙基)醚，烴類例如苯、甲苯、二甲苯、戊烷、己烷、庚烷、環己烷或石油餾份，鹵化烴類例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1,2-二氯乙烷、三氯乙烷或氯苯，或偶極性-非質子溶劑例如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲基亞碸(DMSO)、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N,N-二甲基乙醯胺(DMA)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯啶酮(NMP)。亦可使用這些溶劑之混合物。較佳地係使用N,N-二甲基甲醯胺。

用於這些反應之適合的鹼有，例如三級胺例如三乙胺、N-甲基嗎福啉、N-甲基哌啶、N,N-二異丙基乙基胺、吡啶或4-N,N-二甲基胺基吡啶。較佳 地係使用N,N-二異丙基乙基胺，視需要添加4-N,N-二甲基胺基吡啶。

(IX)→(III-A)、(XIV)→(III-B)和(XVI)→(III-C)，以及(VI)+(XVII)→(III-D)和(XIX)+(XX)→(III-E)反應係於0℃至+50℃的溫度範圍內進行，較佳地+10℃至+30℃。此等反應可於大氣壓、升高或降低的壓力下進行(例如0.5至5巴)；其通常係於大氣壓下操作。

式(II)和(III)化合物分別為式(IIa)、(IIIa)化合物之亞分量，其中R³⁵為甲基。式(IIa)和(IIIa)化合物之製備係類似如上述式(II)和(III)化合物之製備來進行。

上述方法係藉由實例以下列合成流程(流程3至13、18)來說明： [a)：1.水/二烷、1N HCl、100℃；2.H₂、Pd/C、甲醇、RT；b)：NaHCO₃、H₂O、二烷、RT]。

[a)：二異丙基乙基胺、DMF、RT]。

[a)：水/二烷、1N HCl、100℃；b)：HATU、二異丙胺、DMF、RT]。

[a)：1.EDCI、DMAP、二氯甲烷、RT；2.H₂、甲醇、RT；b)：1.EDCI、HOBt、二異丙胺、DMF、RT；2.二氯甲烷、RT]。

[a)：1.EDCI、DMAP、二氯甲烷、RT；2.H₂、甲醇、RT；b)：HATU、二異丙胺、DMF、RT]。

[a)：EDCI、二氯甲烷、RT]。

[a)：HATU、二異丙基乙基胺、DMF、RT；2.H₂、甲醇、RT；b)：EDCI、DMAP、二氯甲烷、RT]。

[a)：HATU、二異丙基乙基胺、DMF、RT；2.二氯甲烷、RT；b)：EDCI、DMAP、二氯甲烷、RT]。

[a)：二異丙基乙基胺、DMF、RT]。

[a)：1.EDCI、DMAP、二氯甲烷、RT；2.二氯甲烷、RT；b)：二異丙基胺、DMAP、二氯甲烷、RT]。

[a)：DMAP、二異丙基胺、二氯甲烷、RT]。

[a)：1.水/二烷、1N HCl、100℃；2.H₂、Pd/C、甲醇、RT；b)：HATU、二異丙基乙基胺、RT]。

式(IV)化合物可由市售的胺基酸構件(building block)或該等文獻中已知(參見，例如Pettit等人，Synthesis 1996,719；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991,32,931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993,49,1913；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991, 32,2395；Vidal等人，Tetrahedron 2004,60,9715；Poncet等人，Tetrahedron 1994,50,5345.Pettit等人，J.Org.Chem.1994,59,1796)以類似文獻中已知的方法，依照胜肽化學之習用方法和本發明實驗部分所述來製備。下列之合成流程(流程14至16)係藉由實例說明製備。

[a)：羥基胺鹽酸鹽、KOH、MeOH、0℃→RT；b)：BrCH₂(CH₂)₂CH₂Br、K₂CO₃、丙酮、回流]。

[a)：1.二異丙基乙基胺、BEP、二氯甲烷、-10℃→RT；2.MeOH]。

[a)：1.二異丙基乙基胺、BEP、DMF、RT；2.二氯甲烷；b)：1.HATU、二異丙基乙基胺、DMF、RT；2.二氯甲烷、RT；c)：1.HATU、二異丙基乙基胺、DMF、RT；2.哌啶、DMF、RT]。

式(XI)、(XIII)、(XV)、(XVII)和(XXI)之化合物，包括(若適當)其對掌或非對映異構物形式，係從市面上購得或如文獻中描述，或其可藉由熟習技術者顯見的路徑，以類似文獻中所公開的方法來製備。在實驗章節、製備起始化合物和中間物有關的章節中亦給予許多製備起始物之廣泛的教導以及文獻資料。

式(V)、(VII)、(VIII)、(X)、(XVIII)、(XX)和(XXIII)，包括(若適當)其對掌或非對映異構物形式，係從文獻中得知，或可藉由熟習技術者顯見的路徑，以類似文獻中所公開的方法來製備。在實驗章節、製備起始化合物 和中間物有關的章節中亦給予許多製備起始物之廣泛的教導以及文獻資料。

另外，製備程序之個別的步驟可以不同的順序或以其他保護基團組合來進行。此項係藉由實例以下列合成流程來說明(流程17、19、20和21)。

[a)：硼烷-吡啶複合物、乙酸、MeOH；b)：1.HOBt、EDCI、二異丙基乙基胺、DMF、RT；2.TFA、二氯甲烷、RT；c)：HATU、二異丙基乙基胺、DMF、RT；d)：1.Pd/C、MeOH、RT；2.NaHCO₃、二烷、水]。

[a)：1.HATU、二異丙基乙基胺、DMF、RT；2.TFA、二氯甲烷、RT；3.((H₃C)₃C(C=O))₂O、DMF、二異丙基乙基胺；b)：二異丙基乙基胺、BEP、DMF、RT；c)：1.H₂、Pd/C(10%)、甲醇、RT；2.HATU、二異丙基乙基胺、DMF、RT；3.TFA、二氯甲烷、RT]。

[a)：硼烷-吡啶複合物、乙酸、MeOH；b)：1.HOBt、EDCI、二異丙基乙基胺、DMF、RT；2.FA、二氯甲烷、RT；c)：1.H₂、Pd/C、MeOH、RT；2.NaHCO₃、二烷、水；d)：HATU、二異丙基乙基胺、DMF、RT]。

[a)：1.HOBt、EDCI、二異丙基乙基胺、DMF、RT；b)H₂、Pd/C、MeOH、RT；c)硼烷-吡啶複合物、乙酸、MeOH；d)TFA、二氯甲烷、RT；e)：HATU、二異丙基乙基胺、DMF、RT；f)：HATU、二異丙基乙基胺、DMF、RT；g)H₂、Pd/C、MeOH、RT].

本發明之黏合劑的FGFR2癌標鈀分子已為熟習技術者所知。全長的FGFR2係辨識為FGFR2α(SEQ ID NO：1)，而缺乏D1區之異構體係辨識為FGFR2β(SEQ ID NO：2)(參見圖1)。另外，於3區剪接產生二種不同的變體，亦即由外顯子7和8所編碼的FGFR2 IIIb，和由外顯子7和9所編碼的FGFR2 IIIc(參見圖1)。

在本發明一實施例中，黏合劑-較佳地係專一性與FGFR2結合。在本發明另一主體中，黏合劑-較佳地係專一性與標靶分子FGFR2之胞外區結合(參見圖1)。

在本發明另一實施例中，黏合劑-較佳地係專一性與與一或多種形式之人類FGFR2多肽結合。在本發明另一主體中，黏合劑-較佳地係專一性-與FGFR2之所有異構體和剪接變體結合。在下文中，不同形式之「FGFR2」概念係包括(但不限於)不同的異構體、不同的剪接變體、不同的糖型或經歷不同轉譯和後轉譯修飾之FGFR2多肽。

在本發明另一實施例中，黏合劑-較佳地係專一性-與癌標靶分子FGFR2之N-端區結合。在本發明另一主體中，黏合劑-較佳地係專一性與FGFR2(SEQ ID NO：23)之胞外N-端抗原決定區(¹RPSFSLVEDTTLEPE¹⁵)結合。

在本發明另一實施例中，黏合劑-較佳地係專一性-與不同物種之FGFR2結合。此效應為本發明之接合體可更容易於這些物種就藥理上進行研究。較佳的物種為囓齒類，特言之，小鼠或大鼠，但亦可為狗、豬和非人類靈長類。

在一較佳的實施例中，黏合劑在與目標細胞上的FGFR2結合後，由於結合而被目標細胞內化。此效應為該黏合劑-藥物接合體(其可為免疫接合體或ADC)被目標細胞所吸收。

在一實施例中，黏合劑為一結合蛋白。在一較佳的實施例中，該黏合劑為一抗體、抗原結合抗體片段、多專一性抗體或模擬抗體。

較佳的模擬抗體為親和體(affibody)、adnectin、抗運載蛋白(anticalin)、DARPin、高親和多聚體(avimer)或奈米抗體(nanobodies)。較佳的多專一性抗體為雙專一性和三專一性抗體。

在一較佳的實施例中，黏合劑為一抗體或抗原結合抗體片段，更佳地分離的抗體或分離的抗原結合抗體片段。

較佳的抗原結合抗體片段為Fab、Fab’、F(ab’)₂和Fv片段、雙抗體、DAb、直鏈抗體和scFv。特佳地為Fab、雙抗體和scFv。

在一特佳的實施例中，該黏合劑為一抗體。特佳地為單株抗體或其抗原結合抗體片段。另外特佳的為人類、人源化或嵌合抗體或其抗原結合抗體片段。

在一較佳的實施例中，抗體或抗原結合片段係包括M048-D01-hIgG1抗體之可變輕鏈和重鏈之CDR序列的胺基酸序列。

在一另較佳的實施例中，抗體或抗原結合片段係包括M048-D01-hIgG1抗體之可變輕鏈和重鏈之CDR序列的胺基酸序列，其係以SEQ ID NO：15(H-CDR1)、SEQ ID NO：16(H-CDR2)、SEQ ID NO：17(H-CDR3)、SEQ ID NO：18(L-CDR1)、SEQ ID NO：19(L-CDR2)和SEQ ID NO：20(L-CDR3)表示。

在另一較佳的實施例中，抗體或抗原結合片段係包括M048-D01-hIgG1或M048-D01-hIgG1-b抗體之可變輕鏈和重鏈的胺基酸序列。

在另一較佳的實施例中，抗體或抗原結合片段係包括以SEQ ID NO：12(Vl)和SEQ ID NO：11(Vh)表示之M048-D01-hIgG1抗體的可變輕鏈和重鏈之胺基酸序列，或以SEQ ID NO：14(Vl)和SEQ ID NO：13(Vh)表示之M048-D01-hIgG1-b抗體的可變輕鏈和重鏈之胺基酸序列。

在另一特佳的實施例中，抗體或抗原結合片段係包括以SEQ ID NO：14(Vl)和SEQ ID NO：13(Vh)表示之M048-D01-hIgG1-b抗體的可變輕鏈和重鏈之胺基酸序列。

在另一特佳的實施例中，抗體或抗原結合片段係包括以SEQ ID NO：9(輕鏈)和SEQ ID NO：10(重鏈)表示之M048-D01-hIgG1-b抗體的可變輕鏈和重鏈之胺基酸序列。

在另一特佳的實施例中，該抗體係包括以SEQ ID NO：7(輕鏈)和SEQ ID NO：8(重鏈)表示之M048-D01-hIgG1抗體的輕鏈和重鏈之胺基酸序列。

其他FGFR2抗體之實例有描述於本發明中之GAL-FR21-mIgG1(SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4)以及GAL-FR22-mIgG2a(SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6)抗體。後二者所提之抗體係依照WO2010/054265，如文中所述，從GAL-FR21抗體(SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：4來自WO2010/054265)以及GAL-FR22抗體(SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8來自WO2010/054265)之輕(Vl)和重(Vh)鏈的可變區所建構，其中GAL-FR21的可變區已重建成mIgG1模式，而GAL-FR22之可變區則重建成mIgG2a模式。

與癌標靶分子結合之抗體或抗原結合抗體片段可由本項技術之一般技術者使用已知的方法，例如化學合成或重組表現來製備。用於癌標靶分子之黏合劑可從市面取得或可由本項技術之一般技術者，使用已知的方法，例如化學合成或重組表現來製備。另外製備抗體或抗原結合抗體片段之方法係描述於WO 2007/070538(參見第22頁“Antibodies”)。熟習本項技術者已知如何匯集例如噬菌體表現庫(例如Morphosys HuCAL Gold)之方法及用於尋找抗體或抗原結合抗體片段(參見WO2007070538，第24頁ff和第70頁之實例1，第72頁之實例2)。使用B細胞之DNA庫製備抗體之其他的方法係描述於，例如26頁(WO2007070538)。人源化抗體之方法係描述於WO2007070538之第30-32頁和詳細描述於Queen，等人，Pros.Natl.Acad.Sci.USA 86：10029-10033,1989或於WO90/0786中。再者，用於一般蛋白和特定抗體的重組表現方法已為熟習本項技術者所知(參見，例如Berger和Kimrnel(Guide to Molecular Cloning Techniques,Methods in Enzymology,Vol.152,Academic Press,Inc.)；Sambrook等人，(Molecular Cloning：A Laboratory Manual,(Second Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press；Cold Spring Harbor,N.Y.；1989)Vol.1-3)；Current Protocols in Molecular Biolony,(F.M.Ausabel等人[Eds.],Current Protocols,Green Publishing Associates,Inc./John Wiley & Sons,Inc.)；Harlow等人，(MonocIonal Antibodies：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press(19881,Paul[Ed.])；Fundamental Immunology,(Lippincott Williams & Wilkins(1998))；及Harlow等人，(Using Antibodies：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1998))。熟習技術者知道用於表現蛋白/抗體所須之對應的載體、啟動子和訊息胜肽。一般性的方法亦描述於WO2007070538的第41-45頁。製 備IgG1抗體之方法係描述於，例如WO2007070538之第74頁ff的實例6中。可在抗體與其抗原結合後，測量抗體內化之方法已為熟習技術者所了解並描述於例如WO2007070538之第80頁。熟習技術者能使用已用於製備碳酸酐酶IX(Mn)抗體之WO2007070538中所述的方法，來製備具有不同標靶分子專一性之抗體。

FGFR2黏合劑之其他實例為描述於WO2007144893中之單鏈Fv抗體片段PRO-007(以高親和力與FGFR2結合)和PRO-001(以高親和力與FGFR3結合而以低親和力與FGFR2結合)。

本發明化合物具有珍貴的藥理特性並可用於預防和治療人類及動物之疾病。

如基於本發明實驗部分(C章節)所提出的分析所示，式(Ia)之本發明黏合劑-藥物接合體(ADC)對於腫瘤細胞具有高度和專一性細胞毒殺活性。對式(Ia)之本發明黏合物-藥物(ADC)接合體此高度和專一性細胞毒殺活性部分，係經由適當的新N,N-二烷基奧瑞他汀衍生物和黏合劑與連接子的組合來達成，其不僅具有酵素性、水解性或還原性可裂解預定斷裂點供釋放帶毒體，亦可為無此預定斷裂點。更特言之，經由使用不具酵素性、水解性或還原性可裂解預定斷裂點供釋放帶毒體之穩定的連接子，且其在將ADC吸入腫瘤細胞後和抗體之完全的細胞內、酵素性裂解後，仍保留完整或部分完整，該活性係非常專一地侷限於腫瘤細胞。ACD和穩定的連接子間之相容性係預先假定，其中胞內所形成的代謝物可形成足夠效力，能到達其標靶並能於該處以足夠的效力對標靶產生抗增生活性，而無需事先再次以轉運蛋白從腫瘤細胞運載。此ADC與穩定的連接子化學和與相關的標靶之相容性提供更大的治療窗口(參見，例如L.Ducry,Bionconjugate Chem.2010,21-5；A.G.Polson,Cancer Res.2009,69,2358)。

更特言之，本發明式(Ia)之黏合劑-藥物接合體對於表現FGFR2之腫瘤細胞具有高度和專一性細胞毒殺活性。同時，對於非表現FGFR2之腫瘤細胞的活性明顯地較弱。

基於此特徵性質，一般而言，因此本發明化合物在特定程度上係適合用於治療人類和哺乳動物之過度增生性疾病。此化合物在一方面能抑制、 阻斷、降低或減低細胞增生及細胞分裂，而在另一方面能增加細胞凋亡。

可使用本發明化合物治療之過度增生疾病包括，特別是癌症和腫瘤疾病之群。在本發明內文中，這些應理解為，特別是，係指下列疾病(但不限於此)：乳腺癌和乳腺腫瘤(乳管和小葉形式，以及原位、三重陰性、HER2-陰性)、呼吸道腫瘤(小細胞和非小細胞癌、支氣管癌)、腦腫瘤(例如腦幹和下視丘之腫瘤、星細胞瘤、髓母細胞瘤、室管膜瘤和神經上皮細胞瘤及松果體腫瘤)、消化器官之腫瘤(食道、食道胃交界(=EGJ)癌、胃(瀰漫型和腸道型)、膽、小腸、大腸、直腸)、肝腫瘤(包括肝細胞癌、膽管細胞癌和混合肝細胞及膽管細胞癌)、頭頸區之腫瘤(喉頭、下咽、鼻咽、口咽、嘴唇和口腔)、皮膚腫瘤(鱗狀上皮癌、卡波西氏肉瘤、惡性黑素瘤、梅克爾細胞皮膚癌和非黑色素皮膚癌)、軟組織之腫瘤(包括軟組織癌、骨肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、淋巴肉瘤和橫紋肌肉瘤)、眼睛之腫瘤(包括眼內黑色素瘤和視網膜母細胞瘤)、內分泌和外分泌腺之腫瘤(例如甲狀腺和副甲狀腺、胰臟和唾腺)、泌尿道之腫瘤(膀胱、陰莖、腎、腎盂和輸尿管之腫瘤)和生殖器官之腫瘤(女性的子宮內膜癌、子宮頸癌、卵巢癌、陰道癌、外陰癌和子宮癌，及男性前列腺癌和睪丸癌)。這些亦包括實體形式之增生性血液疾病和循環血液細胞，例如淋巴瘤、白血病和骨髓增生性疾病，例如急性骨髓性、急性淋巴母細胞性、慢性淋巴細胞性、慢性骨髓性和髮細胞白血病，以及AIDS-相關的淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、皮膚T-細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和中樞神經系統之淋巴瘤。

抗-FGFR2黏合劑-藥物接合體之較佳的過度增生性疾病

較佳地可應用本發明化合物治療之過度增生性疾病為FGFR2-過度表現之腫瘤，例如胃癌(腸道型和瀰漫型)、指環細胞癌，特別是瀰漫型、食道癌、食道胃交界(EGJ)癌、乳癌、大腸癌、大腸直腸癌、直腸癌、前列腺癌、腎癌、頭頸區之癌症、胰臟癌、肝癌、子宮頸癌、卵巢癌、子宮內膜癌，更特言之子宮內膜樣型、乳突漿液型或透明細胞亞型之子宮內膜癌、肺癌，更特言之非小細胞肺癌(NSCLC)、腺癌、鱗狀細胞癌和胰臟癌。

這些人類中完整記述之疾病亦可以類似病因發生於其他哺乳動物且可 用本發明之化合物來治療之。

在本發明內文中，術語「治療(treatment或treat)」為習用地且係指為了打擊、減小、弱化或疏緩疾病或健康缺陷，以及改善此疾病不利影響之生活狀況，例如癌症之情況，而加以照護、管理和支持病患。

本發明因此進一步係提供本發明化合物於治療及/或預防疾病，特別是上述疾病之用途。

本發明另外係提供本發明化合物於製備醫藥品供治療及/或預防疾病，特別是上述疾病之用途。

本發明另外係提供本發明化合物於治療及/或預防疾病，特別是上述疾病之方法中之用途。

本發明另外係提供使用一有效量之至少一種本發明化合物，供治療及/或預防疾病，特別是上述疾病之方法。

本發明化合物可以其本身來使用，或若需要與一或多種其他的藥理活性物質組合，只要此組合不會導致不欲的及不可接受的副作用。本發明因此另外係提供包括至少一種本發明化合物和一或多種另外的藥物之醫藥品，特別是供治療及/或預防上述疾病。

例如，本發明化合物可與已知的抗過度增生、細胞生長抑制或細胞毒性物質組合，用於治療癌症。可提及的適合用於組合之藥物例如下列：阿地白介素(aldesleukin)、阿侖磷酸(alendronic acid)、阿法干擾素(alfaferone)、阿利維甲酸(litretinoin)、安樂普利諾(allopurinol)、安樂匹(aloprim)、安洛西(aloxi)、六甲蜜胺(altretamine)、胺基格魯米特(aminoglutethimide)、胺磷汀(amifostine)、胺柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、安澤美(anzmet)、安然愛斯普(aranesp)、阿加來必(arglabin)、三氧化砷(arsenic trioxide)、諾曼癌素(aromasin)、5-氮胞啶(5-azacytidine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、BCG或tice-BCG、烏苯美司(bestatin)、倍他米松乙酸鹽(betamethasone acetate)、倍他米松磷酸鈉(betamethasone sodium phosphate)、貝沙羅汀(bexarotene)、博來黴素硫酸鹽(bleomycin sulphate)、溴尿苷(broxuridine)、硼替佐米(bortezomib)、白消安(busulfan)、降鈣素(calcitonin)、卡帕什(campath)、卡培他濱(capecitabine)、 卡鉑(carboplatin)、可蘇多(casodex)、西非松(cefesone)、西莫白介素(celmoleukin)、柔紅黴素(cerubidin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、順鉑(cisplatin)、克拉屈濱(cladribin)、唑來膦酸(clodronic acid)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、達卡巴嗪(dacarbazine)、放線菌素(dactinomycin)、柔紅黴素脂質體(daunoxome)、立克樂(decadron)、立克樂磷酸鹽(decadron phosphate)、戊酸雌二醇(delestrogen)、地尼白介素融合二毒素(denileukin diftitox)、甲潑尼龍(depomedrol)、地洛瑞林(deslorelin)、右雷佐生(dexrazoxane)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、泰復肯(diflucan)、多西它賽(docetaxel)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、多柔比星(doxorubicin)、屈大麻酚(dronabinol)、DW-166HC、艾裡咖(eligard)、埃立特(elitek)、艾倫斯(ellence)、阿瑞吡坦(emend)、表柔比星(epirubicin)、阿法依泊汀(epoetin-alfa)、益比奧(epogen)、依鉑(eptaplatin)、左旋咪唑(ergamisol)、estrace、雌二醇(estradiol)、雌莫司汀磷酸鈉(estramustine sodium phosphate)、炔雌醇(ethinylestradiol)、胺磷汀(ethyol)、依替膦酸(etidronic acid)、凡畢複(etopophos)、依託泊苷(etoposide)、法倔唑(fadrozole)、法司通(farstone)、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺(finasteride)、來格司亭(fligrastim)、氟尿苷(floxuridine)、氟康唑(fluconazole)、氟達拉濱(fludarabin)、5-氟去氧尿苷單磷酸鹽(5-fluorodeoxyuridine monophosphate)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)、富美特龍(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、福美坦(formestane)、福斯替濱(fosteabine)、福莫司汀(fotemustine)、氟維司群(fulvestrant)、gammagard、吉西他濱(gemcitabine)、吉妥單抗(gemtuzumab)、gleevec、格立得(gliadel)、戈舍瑞林(goserelin)、格拉司瓊鹽酸鹽(granisetron hydrochloride)、組胺瑞林(histrelin)、氫考酮(hycamtin)、氫化可的松(hydrocortone)、赤-羥基壬基腺嘌呤、羥基尿素、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、伊達比星(idarubicin)、異環磷醯胺(ifosfamide)、干擾素-α、干擾素-α-2、干擾素-α-2α、干擾素-α-2β、干擾素-α-n1、干擾素-α-n3、幹擾素-β、干擾素-γ-1α、介白素-2、intron A、艾瑞莎(iressa)、愛萊諾迪肯(irinotecan)、康你適(kytril)、香菇多醣硫酸鹽(lentinan sulphate)、曲來唑(letrozole)、亞葉酸(leucovorin)、亮丙瑞林(leuprolide)、亮丙瑞林乙酸鹽(leuprolide acetate)、 左旋咪唑(levamisole)、左亞葉酸鈣鹽(levofolic acid calcium salt)、左甲狀腺素(levothroid)、levoxyl、洛莫司汀(lomustine)、氯尼達明(lonidamine)、marinol、氮芥(mechlorethamine)、甲鈷胺(mecobalamin)、美加米星乙酸鹽(medroxyprogesterone acetate)、甲地孕酮乙酸鹽(megestrol acetate)、美法侖(melphalan)、menest、6-巰基嘌呤、美司鈉(mesna)、甲胺喋呤(methotrexate)、metvix、米替福新(miltefosine)、四環素(minocycline)、絲裂黴素C(mitomycin C)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、modrenal、myocet、奈達鉑(nedaplatin)、neulasta、neumega、優保津(neupogen)、尼魯米特(nilutamide)、諾瓦得士(nolvadex)、NSC-631570、OCT-43、奧曲肽(octreotide)、奧丹亞龍鹽酸鹽(ondansetron hydrochloride)、orapred、益樂鉑(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、pediapred、培門冬酶(pegaspargase)、珮格西施(pegasys)、噴司他汀(pentostatin)、必醫你舒(picibanil)、毛果芸香鹼鹽酸鹽(pilocarpine hydrochloride)、吡柔比星(pirarubicin)、普卡黴素(plicamycin)、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、潑尼莫司汀(prednimustine)、潑尼松龍(prednisolone)、潑尼松(prednisone)、倍美力(premarin)、丙卡巴肼(procarbazine)、procrit、雷替曲塞(raltitrexed)、立比扶(rebif)、錸-186依替膦酸鹽、利妥昔單抗、roferon-A、羅莫肽(romurtide)、舒樂津(salagen)、善得定(sandostatin)、沙格司亭(sargramostim)、司莫司汀(semustine)、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、舒汝美卓佑(solu-medrol)、鏈佐星(streptozocin)、氯化鍶-89、(synthroid)、他莫昔芬(tamoxifen)、坦洛新(tamsulosin)、他索納明(tasonermin)、睾內酯(tastolactone)、剋癌易(taxoter)、替西白介素(teceleukin)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、睪酮丙酸鹽(testosterone propionate)、testred、硫鳥嘌呤(thioguanine)、塞替派(thiotepa)、促甲狀腺素(thyrotropin)、替魯膦酸(tiludronic acid)、托泊替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifen)、托西莫單抗(tositumomab)、曲司珠單抗(tastuzumab)、曲奧舒凡(teosulfan)、維甲酸(tretinoin)、氨甲蝶呤(trexall)、三甲基三聚氰胺、三甲曲沙(trimetrexate)、曲普瑞林乙酸鹽(triptorelin acetate)、曲普瑞林羥萘酸鹽(triptorelin pamoate)、UFT、尿苷(uridine)、戊柔比星(valrubicin)、維司力農(vesnarinone)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼 (vincristine)、長春地辛(vindesine)、長春瑞濱(vinorelbine)、維魯利辛(virulizin)、卓弗蘭(zinecard)、淨司他丁斯酯(zinostatin-stimalamer)、卓弗蘭(zofran)；ABI-007、阿考比芬(acolbifen)、actimmune、(affinitak)、胺蝶呤(aminopterin)、阿佐昔芬(arzoxifen)、阿索立尼(asoprisnil)、阿他美坦(atamestane)、阿曲森坦(atrasentan)、安維汀(avastin)、BAY 43-9006、索拉非尼(sorafenib)、CCI-779、CDC-501、塞來昔布(celebrex)、西妥昔單抗(cetuximab)、克雷斯托(crisnatol)、環丙氯地孕酮乙酸鹽(cyproterone acetate)、地西他濱(decitabine)、DN-101、多柔比星-MTC、dSLIM、度他雄胺(dutasteride)、艾特卡林(edotecarin)、依氟鳥氨酸(eflornithine)、依沙替康(exatecan)、維甲醯酚胺(fenretinide)、組織胺二鹽酸鹽、組胺瑞林水凝膠植入物(histrelin hydrogel implant)、鈥-166 DOTMP、伊班膦酸(ibandronic acid)、干擾素-γ、intron-PEG、易莎平(ixabepilone)、鑰孔蟲戚血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanine)、L-651582、蘭瑞肽(lanreotide)、拉索昔芬(lasofoxifen)、libra、洛那法尼(lonafarnib)、米普昔芬(miproxifen)、米諾膦酸(minodronate)、MS-209、微質體MTP-PE、MX-6、諾拉曲特(nafarelin)、奈莫柔比(nemorubicin)、諾司達(neovastat)、諾拉曲特(nolatrexed)、奧利默森(oblimersen)、onko-TCS、osidem、太平洋紫杉醇聚麩胺酸鹽(paclitaxel polyglutamate)、帕米德諾內二鈉(pamidronate disodium)、PN-401、QS-21、誇西泮(quazepam)、R-1549、雷洛昔芬(raloxifen)、豹蛙酶(ranpirnas)、13-順式-retic acid、沙鉑(satraplatin)、西奧骨化醇(seocalcitol)、T-138067、特羅凱(tarceva)、二十二碳六烯酸紫杉醇(taxoprexin)、胸腺肽(thymosin)-α-1、噻唑羧胺核苷(tiazofurin)、替吡法尼(tipifarnib)、替拉紮明(tirapazamine)、TLK-286、托瑞米芬(toremifen)、反MID-107R、伐司撲達(valspodar)、伐普肽(vapreotide)、瓦他拉尼(vatalanib)、維替泊芬(verteporfin)、長春氟寧(vinflunin)、Z-100、唑來磷酸(zoledronic acid)及這些之組合。

在一較佳的實施例中，本發明化合物可與抗過度增生劑組合，其可，例如-(此列表並非為絕對性的)，如下所示：胺基格魯米特、L-天門冬醯胺酶、硫唑嘌呤(azathioprine)、5-氮胞啶(5-azacytidine)、博來黴素(bleomycin)、白消安(busulfan)、卡鉑(carboplatin)、 卡莫司汀(carmustine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、順鉑(cisplatin)、左旋門冬醯胺酶(colaspase)、環磷醯胺、阿糖胞苷(cytarabine)、達卡巴嗪(dacarbazine)、放線菌素(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、2',2'-二氟去氧胞苷、多西它賽(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)(阿黴素(adriamycin))、表柔比星(epirubicin)、伊波希隆(epothilone)和其衍生物、赤-羥基壬基腺嘌呤、炔雌醇(ethinylestradiol)、依託泊苷(etoposide)、氟達拉濱磷酸鹽(fludarabin phosphate)、5-氟去氧尿苷、5-氟去氧尿苷單磷酸鹽、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、富美特龍(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、六甲基三聚氰胺、羥基尿素、羥孕酮己酸酯、伊達比星(idarubicin)、異環磷醯胺(ifosfamide)、干擾素、愛萊諾迪肯(irinotecan)、亞葉酸(leucovorin)、洛莫司汀(lomustine)、氮芥(mechlorethamine)、美加米星乙酸鹽(medroxyprogesterone acetate)、甲地孕酮乙酸鹽(megestrol acetate)、美法侖(melphalan)、6-巰基嘌呤、、美司鈉(mesna)、甲胺喋呤(methotrexate)、絲裂黴素C、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、噴司他汀(pentostatin)、N-磷醯乙醯L-天門冬胺酸鹽(PALA)、普卡黴素(plicamycin)、潑尼松龍(prednisolone)、潑尼松(prednisone)、丙卡巴肼(procarbazine)、雷洛昔芬(raloxifen)、司莫司汀(semustine)、鏈佐星(streptozocin)、他莫昔芬(tamoxifen)、替尼泊苷(teniposide)、睪酮丙酸鹽(testosterone propionate)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、塞替派(thiotepa)、托泊替康(topotecan)、三甲基三聚氰胺、尿苷(uridine)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、長春地辛(vindesine)和長春瑞濱(vinorelbine)。

本發明化合物亦可以非常具前景的方式與生物治療劑例如抗體(例如安維汀(avastin)、美羅華(rituxan)、爾必得舒(erbitux)、賀賽汀(herceptin))組合。本發明化合物亦可以針對血管新生作用之治療劑，例如與安維汀(avastin)、阿西替尼(axitinib)、西地尼布(recentin)、瑞戈非尼(regorafenib)、索拉菲尼(sorafenib)或舒尼替尼(sunitinib)組合達到正向效用。與蛋白酶體和mTOR之抑制劑以及與抗荷爾蒙和類固醇代謝酵素抑制劑組合，因為其較有利的副作用性質，同樣地特別適合。

一般而言，可以本發明化合物與其他具有細胞抑制或細胞毒性作用之藥劑的組合實行下列目標：‧相較於以個別的藥物治療，對減緩腫瘤生長、降低其大小或甚至完全消除具改良活性；‧比單一治療使用較低劑量化療劑之可能性；‧相較於個別給藥，具極少副作用之更耐受治療的可能性；‧可能治療更廣泛的腫瘤疾病；‧達到較高的治療反應率；‧相較於目前標準治療，病患存活時間更長。

本發明化合物再者亦可與放射性治療及/或外科手術組合使用。

本發明另外亦提供包括至少一種本發明化合物與習用上一或多種惰性、無毒、醫藥上適合的賦形劑之醫藥品，及其用於上述目地之用途。

本發明化合物可全身性及/或局部作用。其可以適合此目的之方式來給藥，例如非經腸，可能藉由吸入或為植入物或支架。

本發明化合物可以適合這些給藥路徑之給藥形式來投予。

非經腸給藥可以繞道吸收步驟(例如靜脈內、動脈內、心內、脊椎內或腰內)或包括吸收(例如肌肉內、皮下、皮內、經皮或腹膜內)來進行。適合非經腸投予之給藥形式包括溶液、懸浮液、乳液或凍乾物形式之注射和輸液調配物。非經腸給藥為較佳，特別是靜脈給藥。

一般而言，在非經腸給藥之情況下，給予從約0.001至1 mg/kg體重，較佳地從0.01至0.5 mg/kg體重之量來達到效果，已證明有利的。

然而其可能須偏離上述之量，且特言之係依體重、給藥路徑、個體對活性化合物之取向、調配物的性質和給藥的時間點或間隔而定。因此，在某些情況下以低於上述最小量即足夠，而在其他的情況下則必須超過所述之上限量。在給予相當大量的情況下，適當的係將這些量分成數個個別的劑量分散於一天中。

圖1：FGFR2之結構示意圖。將α(SEQ ID NO：1)和β(SEQ ID NO：2)剪接變體相互比較。圖1顯示三個類-Ig-區(D1、D2和D3)、跨膜區(TM)和胞外激酶區。將肝素結合位置(HBS)、酸性盒(AB)和替代的IIIb/IIIc區同樣的標定。胺基酸端係以N標示，而羧酸端係以C標示。胞外組份另外包括酸性盒(AB)和肝素結合位置(HBS)。RTK之FGFR家族的重要特性為具有不同、選擇性的剪接變體存在。全長的FGFR經辨識為FGFRα(SEQ ID NO：1)，而缺少D1之異構形，經辨識為FGFRβ(SEQ ID NO：2)。在3區選擇性剪接產生二種不同的變體，稱為FGFR2 IIIb，其係由外顯子7和8所編碼，以及FGFR2IIIc，其係由外顯子7和9所編碼。

下列實例係說明本發明。本發明不限於此等實例。

除非另有說明，否則下列試驗和實例中的百分比計算為重量百分比；分量為重量份。在各案例中，液體/液體溶液之溶劑比例、稀釋比例和濃度數據係指體積。

A.實例

縮寫和首字母縮寫：

HPLC和LC-MS法：

方法1(LC-MS)：

儀器：Waters Acquity SQD UPLC System；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50 mm x 1 mm；溶離劑A：1 l水+0.25 ml 99%濃甲酸，溶離劑B：1 l乙腈+0.25 ml 99%濃甲酸；梯度：0.0 min 90% A→1.2 min 5% A→2.0 min 5% A；流速：0.40 ml/min；烘箱：50℃；UV偵測：210-400 nm.

方法2(LC-MS)：

儀器：Micromass QuattroPremier with Waters UPLC Acquity；管柱：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ 50 mm x 1 mm；溶離劑A：1 l水+0.5 ml 50%濃甲酸，溶離劑B：1 l乙腈+0.5 ml 50%濃甲酸；梯度：0.0 min 90% A→0.1 min 90% A→1.5 min 10% A→2.2 min 10% A；流速：0.33 ml/min；烘箱：50℃；UV偵測：210 nm.

方法3(LC-MS)：

儀器：Micromass Quattro Micro MS with HPLC Agilent Series 1100；管柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm；溶離劑A：1 l水+0.5 ml 50%濃甲酸，溶離劑B：1 l乙腈+0.5 ml 50%濃甲酸；梯度：0.0 min 100% A→3.0 min 10% A→4.0 min 10% A→4.01 min 100% A(流速2.5 ml/min)→5.00 min 100% A；烘箱：50℃；流速：2 ml/min；UV偵測：210 nm.

方法4(LC-MS)：

MS儀器：Micromass ZQ；HPLC儀器：HP 1100 Series；UV DAD；管柱：Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm；溶離劑A：1 l水+0.5 ml 50%濃甲酸，溶離劑B：1 l乙腈+0.5 ml 50%濃甲酸；梯度：0.0 min 90% A→2.5 min 30% A→3.0 min 5% A→4.5 min 5% A；流速：0.0 min 1 ml/min→2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min；烘箱：50℃；UV偵測：210 nm.

方法5(HPLC)：

儀器：HP 1090 Series II；管柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e,50 mm x 4.6 mm；preliminary管柱：Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e,5 mm x 4.6 mm；injection volume：5 μl；溶離劑A：70% HClO₄ in水(4 ml/litre)，溶離劑B：乙腈；梯度：0.00 min 20% B→0.50 min 20% B→3.00 min 90% B→3.50 min 90% B→3.51 min 20% B→4.00 min 20% B；流速：5 ml/min；管柱溫度：40℃.

方法6(HPLC)：

儀器：Waters 2695配有DAD 996；管柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e,50 mm x 4.6 mm；訂購編號：1.51450.0001，預備管柱：Merck Chromolith Guard Cartridge套組RP-18e,5 mm x 4.6 mm；訂購編號：1.51470.0001，溶離劑A：70% HClO₄之水溶液(4 ml/公升)，溶離劑B：乙腈；梯度：0.00 min 5% B→0.50 min 5% B→3.00 min 95% B→4.00 min 95% B；流速：5 ml/min.

方法7(LC-MS)：

MS儀器：Waters ZQ；HPLC儀器：Agilent 1100系列；UV DAD；管柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm；溶離劑A：1 l水+0.5 ml 50% 濃甲酸，溶離劑B：1 l乙腈+0.5 ml 50%濃甲酸；梯度：0.0 min 100% A→3.0 min 10% A→4.0 min 10% A→4.1 min 100% A(流速2.5 ml/min)；烘箱：55℃；流速：2 ml/min；UV偵測：210 nm.

方法8(LC-MS)：

MS儀器：Waters ZQ；HPLC儀器：Agilent 1100系列；UV DAD；管柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm；溶離劑A：1 l水+0.5 ml 50%濃甲酸，溶離劑B：1 l乙腈+0.5 ml 50%濃甲酸；梯度：0.0 min 100% A→2.0 min 60% A→2.3 min 40% A→3.0 min 20% A→4.0 min 10% A→4.2 min 100% A(流速2.5 ml/min)；烘箱：55℃；流速：2 ml/min；UV偵測：210 nm.

方法9(LC-MS)：

儀器：Waters Acquity SQD UPLC System；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50 mm x 1 mm；溶離劑A：1 l水+0.25 ml 99%濃甲酸，溶離劑B：1 l乙腈+0.25 ml 99%濃甲酸；梯度：0.0 min 95% A→6.0 min 5% A→7.5 min 5% A；烘箱：50℃；流速：0.35 ml/min；UV偵測：210-400 nm.

方法10(HPLC)：

儀器：Agilent 1200系列；管柱：Agilent Eclipse XDB-C18 5μ 4.6 mm x 150 mm；預備管柱：Phenomenex KrudKatcher拋棄式預柱；注射體積：5 μl；溶離劑A：1 l水+0.01%三氟乙酸；溶離劑B：1 l乙腈+0.01%三氟乙酸；梯度：0.00 min 10% B→1.00 min 10% B→1.50 min 90% B→5.5 min 10% B；流速：2 ml/min；管柱溫度：30℃.

對於所有其製備並未明確地描述於下文之反應物或試劑，其係由市售一般可取得的來源所獲得。對於其他其製備同樣地並未描述於下文中，且並非市售或由非一般性可取得的來源所獲得之反應物或試劑，係給予描述其製備之公開的文獻作為參考。

方法11(LC-MS)：

儀器：Waters ACQUITY SQD UPLC系統；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 30 x 2 mm；溶離劑A：1 l水+0.25 ml 99%濃甲酸，溶離劑B：1 l乙腈+0.25 ml 99%濃甲酸；梯度：0.0 min 90% A→1.2 min 5% A→2.0 min 5% A；烘箱：50℃；流速：0.60 ml/min；UV偵測：208-400 nm.

方法12(HPLC)：

儀器：Agilent 1200系列帶有管柱烘箱和DAD；管柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e,50 mm x 4.6 mm；訂購編號：1.51450.0001；預備管柱：Merck Chromolith Guard Cartridge套組RP-18e,5 mm x 4.6 mm；訂購編號：1.51470.0001；溶離劑A：70% HClO₄之水中溶液(4 ml/公升)，溶離劑B：乙腈；梯度：0.00 min 5% B→0.50 min 5% B→3.00 min 95% B→4.00 min 95% B；流速：5 ml/min；管柱溫度：30℃.

起始化合物和中間物：

起始化合物1

(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(Boc-dolaproine)

標題化合物可根據文獻方法以各種方式來製備；參見，例如Pettit等人，Synthesis 1996,719；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991,32,931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993,49,1913；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991,32,2395；Vidal等人，Tetrahedron 2004,60,9715；Poncet等人，Tetrahedron 1994,50,5345。其可製備成游離酸或帶有二環己胺之1：1鹽。

起始化合物2a

(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基胺基)庚酸第三丁酯鹽酸鹽(dolaisoleucine-OtBu x HCl)

標題化合物可根據文獻方法以各種方式來製備；參見，例如Pettit等人，J.Org.Chem.1994,59,1796；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991,32,2395；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991,32,931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993,49,1913。

起始化合物2b

(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基胺基)庚酸第三丁酯(dolaisoleucine-O^tBu)

標題化合物係類似起始化合物2a所製備，但是氫化反應係於無添加1N鹽酸下進行。

起始化合物3

Nα-(第三丁氧基羰基)-N-羥基-L-苯基丙胺醯胺

標題化合物係以文獻方法所製備(A.Ritter等人，J.Org.Chem.1994,59,4602)。

產率：750 mg(75%之理論值)

LC-MS(方法3)：R_t=1.67 min；MS(ESI+)：m/z=281(M+H)⁺.

起始化合物4

1,2-唑啶鹽酸鹽

標題化合物係以文獻方法所製備(參見，例如H.King,J.Chem.Soc.1942,432)；其亦可從市面上購得。

起始化合物5

1,2-烷鹽酸鹽

標題化合物可以文獻方法來製備(參見，例如H.King,J.Chem.Soc.1942,432)。

起始化合物6

2-氧雜-3-氮雙環[2.2.2]辛-5-烯

標題化合物可藉由文獻方法製備成Boc-保護形式(參見，例如C.Johnson等人，Tetrahedron Lett.1998,39,2059)；去保護係以習用的方式藉由以三氟乙酸處理及隨後中和來進行。

產率：149 mg(89%之理論值)

起始化合物7

(1S,2R)-1-(羥基胺甲醯基)-2-苯基環丙基胺甲酸第三丁酯

標題化合物係由市售的(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙烷羧酸以文獻方法(A.Ritter等人，J.Org.Chem.1994,59,4602)處理所製備(C.Cativiela等人，Chirality 1999,11,583)。

產率：339 mg(59%之理論值)

LC-MS(方法1)：R_t=0.82 min；MS(ESI+)：m/z=293(M+H)⁺.

中間物1

(3R,4S,5S)-4-[{N-[(苄氧基)羰基]-L-纈胺醯基}(甲基)胺基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸第三丁酯

將10.65 g(41.058 mmol)的(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基胺基)庚酸第三丁酯(起始化合物2b)置於250 ml的二氯甲烷中處理並將溶液冷卻至-10℃。然後，攪拌下加入10.317 g(41.058 mmol)的N-[(苄氧基)羰基]-L-纈胺酸、16.866 g(61.586 mmol)的2-溴-1-乙基四氟硼酸吡錠(BEP)和28.6 ml的N,N-二異丙基乙基胺，並隨後將混合物於RT攪拌20 h。然後將反應混合物以二氯甲烷稀釋並以飽和的氯化鈉溶液震盪二次，以硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮。將殘餘物以快速層析於矽膠上以4：1石油醚/乙酸乙酯作為溶離劑純化。將對應的溶離份濃縮並將殘餘物於高真空下乾燥至隔夜。得到10.22 g(51%之理論值)之標題化合物為淡黃色油狀物。

HPLC(方法5)：R_t=2.3 min； LC-MS(方法2)：R_t=1.59 min；MS(ESI+)：m/z=493(M+H)⁺.

中間物2

(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-纈胺醯基)胺基]庚酸第三丁酯

將500 mg(1 mmol)的(3R,4S,5S)-4-[{N-[(苄氧基)羰基]-L-纈胺醯基}(甲基)胺基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸第三丁酯(中間物1)溶於50 ml的甲醇中，及添加100 mg的10%活性碳上鈀後，於標準的氫氣壓、RT下氫化1 h。然後將催化劑濾出並於減壓下移除溶劑。得到370 mg(quant.)的標題化合物為實質上無色油狀物。

HPLC(方法5)：R_t=1.59 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.74 min；MS(ESI+)：m/z=359(M+H)⁺.

中間物3

N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-第三丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將4.64 g(13.13 mmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺酸溶於20 ml的DMF並連續與4.28 g(11.94 mmol)的(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-纈胺醯基)胺基]庚酸第三丁酯(中間物2)、2.75 g(14.33 mmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和2.2 g(14.33 mmol)的1- 羥基-1H-苯并三唑水合物混合。將混合物於RT攪拌至隔夜。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液和乙酸乙酯之混合物中。將有機層移出，連續以飽和的碳酸氫鈉溶液和飽和的氯化鈉溶液清洗，以硫酸鎂乾燥，過濾和濃縮。將殘餘物直接用於下個步驟，無進一步純化。

產率：9.1 g(定量，60%純度)

HPLC(方法5)：R_t=2.7 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.99 min；MS(ESI+)：m/z=694(M+H)⁺.

中間物4

N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將9.1 g的粗產物N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-第三丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物3)置於56.6 ml的二氯甲烷中處理，加入56.6 ml的三氟乙酸，並將混合物於RT攪拌2 h。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮及將剩餘的殘餘物以快速層析，使用二氯甲烷、3：1二氯甲烷/乙酸乙酯和15：5：0.5二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇作為溶離劑純化。將對應的溶離份純化和濃縮後，得到5.8 g(86%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=2.2 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.3 min；MS(ESI+)：m/z=638(M+H)⁺.

中間物5

(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基胺甲酸第三丁酯

將500 mg(1.9 mmol)的N-(第三丁氧基羰基)-L-苯丙胺酸溶於10 ml的DMF及連續與466 mg(3.8 mmol)的1,2-烷鹽酸鹽(起始化合物5)、433 mg(2.3 mmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、382 mg(2.8 mmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物和731 mg(5.7 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌至隔夜。然後將反應混合物倒入半飽和的氯化銨水溶液和乙酸乙酯之混合物中。將有機層移出，連續以飽和的碳酸氫鈉溶液和飽和的氯化鈉溶液清洗，以硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮。得到620 mg(98%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.62 min；MS(ESI+)：m/z=235(M-C₄H₈-CO₂+H)⁺.

中間物6

(2S)-2-胺基-1-(1,2-烷-2-基)-3-苯基丙-1-酮三氟乙酸鹽

將620 mg(1.85 mmol)的(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基胺甲酸第三丁酯(中間物5)置於5 ml的二氯甲烷中處理，加入10 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌30 min。將反應混合物於減壓下濃縮並將剩餘的殘餘物從水/乙腈中冷凍乾燥。於此方式，得到779 mg(91%之理論值)的標題 化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=0.45 min；LC-MS(方法3)：R_t=1.09 min；MS(ESI+)：m/z=235(M+H)⁺.

中間物7

(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟乙酸鹽

將360 mg(1.25 mmol)的(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)置於10 ml的DMF中處理，並連續以579.2 mg(1.25 mmol)的(2S)-2-胺基-1-(1,2-烷-2-基)-3-苯基丙-1-酮三氟乙酸鹽(中間物6)、714.5 mg(1.88 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和655 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌16 h。然後將反應混合物濃縮，並將殘餘物置於乙酸乙酯中處理及先以5%檸檬酸水溶震盪萃取，然後以5%的碳酸氫鈉溶液和隨後以飽和的氯化鈉溶液萃取。將有機層濃縮並將殘餘物以快速層析於矽膠上以16：4二氯甲烷/甲醇作為溶離劑純化。將對應的溶離份組合並於減壓下移除溶劑。將殘餘物真空乾燥後，得到503.5 mg(74%之理論值)Boc-保護的中間物(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-羧基第三丁酯。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.12 min；MS(ESI+)：m/z=504(M+H)⁺.

將503 mg(1 mmol)的此中間物置於20 ml的二氯甲烷中處理，加入10 ml的三氟乙酸，並將混合物於RT攪拌30 min。隨後，將反應混合物於 減壓下濃縮並以二氯甲烷稀釋。將剩餘的殘餘物以正丙烷從乙酸乙酯沉澱，並將溶劑傾析出。將得到的殘餘物溶於水並以乙酸乙酯震盪萃取，及隨後將水層凍乾。以此法得到462 mg(89%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法12)：R_t=1.53 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.57 min；MS(ESI+)：m/z=404(M+H)⁺.

中間物8

N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將51 mg(0.08 mmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)溶於10 ml的DMF，並加入0.5 ml的哌啶。於RT攪拌10 min後，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘餘物與乙醚攪拌。將不可溶的組成份濾出並重複以乙醚清洗。然後將過濾器殘餘物置於5 ml的二烷/水中處理，並將溶液以1N氫氧化鈉溶液調整至pH 11。於超音波處理下，將總計349 mg(1.6 mmol)的二碳酸二-第三丁酯分成數次加入，在此期間將溶液的pH保持在11。反應結束後，蒸發二烷並以檸檬酸將水溶液調整至pH 2-3。將混合物各以50 ml的乙酸乙酯萃取二次。將有機層組合，以硫酸鎂乾燥，並於減壓下濃縮。將殘餘物置於乙醚中處理，並以丙烷沉澱標題化合物。以傾析移除溶劑。將殘餘物以戊烷再消化數次及最後於高真空下乾燥。由此得到40 mg(97%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法6)：R_t=2.2 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.32 min；MS(ESI+)：m/z=516(M+H)⁺.

中間物9

(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-羧酸第三丁酯

標題化合物係類似中間物5、6和7之合成，於三階段藉由將市售的(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙烷羧酸與1,2-烷鹽酸鹽(起始化合物5)偶合，隨後以三氟乙酸去保護並與起始化合物1偶合所製備。將最終產物以製備式HPLC純化。

HPLC(方法5)：R_t=2.12 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.25 min；MS(ESI+)：m/z=516(M+H)⁺.

中間物10

N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將315 mg(0.494 mmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中 間物4)溶於12 ml的DMF並與104 mg(0.543 mmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和83 mg(0.543 mmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物混合，及將混合物於RT攪拌90 min。隨後，加入112 μl的N,N-二異丙基乙基胺和先前從起始化合物1藉由三氟乙酸移除保護基團所製備的149 mg(0.494 mmol)的(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙酸三氟乙酸鹽。將混合物於RT攪拌2 h及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化二次。得到140 mg(35%之理論值)的標題化合物為無色泡沫形式。

HPLC(方法5)：R_t=2.40 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.38 min；MS(ESI+)：m/z=807(M+H)⁺.

中間物11

N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-蘇胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，藉由於乙酸乙酯中處理及以5%硫酸溶液震盪萃取，將N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-蘇胺酸從其237 mg(0.887 mmol)的二環己基胺鹽中釋放出。將有機層以硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物置於16 ml的DMF中處理並連續與365 mg(1 mmol)的(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-纈胺醯基)胺基]庚酸第三丁酯(中間物2)、185 mg(0.967 mmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和148 mg(0.967 mmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物混合。將混合物於RT攪拌2 h。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液和乙酸乙酯之混合物。將有機層移出，連續以飽和的碳酸氫鈉溶液和飽和的氯化鈉溶液清洗，以硫酸鎂乾燥，過濾及濃縮。將殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到283 mg(53%之理論值)的第三丁酯中間物N-[(苄 氧基)羰基]-N-甲基-L-蘇胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-第三丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

HPLC(方法5)：R_t=2.17 min.

將283 mg(0.466 mmol)的此中間物置於5 ml的二氯甲烷中處理，加入5 ml的無水三氟乙酸並將混合物於RT攪拌2 h。隨後，將反應混合物於高真空下濃縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。有此得到156 mg(61%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.50 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.09 min；MS(ESI+)：m/z=552(M+H)⁺.

中間物12

N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-苯基苯丙胺酸苄基酯三氟乙酸鹽

於第1步驟，藉由將600 mg(1.28 mmol)對應的二環己基銨鹽溶於100 ml的乙酸乙酯及先以50 ml的0.5%硫酸而然後以飽和的氯化鈉溶液萃取震盪，將起始化合物1從此鹽中釋放出。然後將有機層以硫酸鎂乾燥，過濾，濃縮及以類似中間物7之合成與苯丙胺酸苄基酯立即反應，然後去保護。

產率：650 mg(94%於2階段中)

HPLC(方法6)：R_t=1.76 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.68 min；MS(ESI+)：m/z=425(M+H)⁺.

中間物13

(βS)-N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-β-甲基-L-苯基苯丙胺酸苄基酯三氟乙酸鹽

首先，藉由於乙酸乙酯中處理及以5%硫酸氫鉀水溶液震盪萃取，將(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸從其351 mg(0.75 mmol)的二環己基胺鹽(起始化合物1)中釋放出。將有機層以硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物置於10 ml的DMF中處理，並連續與373 mg(0.75 mmol)的(βS)-β-甲基-L-苯丙胺酸苄基酯三氟乙酸鹽[由市售的(βS)-N-(第三丁氧基羰基)-β-甲基-L-苯基丙胺酸以EDC/DMAP-媒介的酯化作用與苄基醇，隨後以三氟乙酸分離Boc保護基團所製備]、428 mg(1.125 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和392 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌20 h。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液和乙酸乙酯之混合物中。將有機層移出，連續以飽和的碳酸氫鈉溶液和飽和的氯化鈉溶液清洗，及隨後濃縮。將殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到230 mg(57%之理論值)Boc-保護的中間物(βS)-N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙醯基}-β-甲基-L-苯丙胺酸苄基酯。

HPLC(方法6)：R_t=2.3 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.36 min；MS(ESI+)：m/z=539(M+H)⁺.

將230 mg(0.42 mmol)的此中間物置於5 ml的二氯甲烷中處理，加入5 ml的三氟乙酸，並將混合物於RT攪拌30 min。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物進一步於減壓下乾燥及然後以乙腈/水冷凍乾燥。以此法得到230 mg(定量)的標題化合物。

HPLC(方法6)：R_t=1.6 min.

中間物14

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2- 甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將143 mg(0.223 mmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)置於15 ml的DMF中處理，並連續與141 mg(0.22 mmol)的(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟乙酸鹽(中間物7)、102 mg(0.27 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲四甲基六氟磷酸(HATU)和128 μl(0.74 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌3 h。然後將混合物倒入半飽和氯化銨水溶液和乙酸乙酯之混合物中。將有機層移出，連續以飽和的碳酸氫鈉溶液和飽和的氯化鈉溶液清洗，以硫酸鎂乾燥，過濾及濃縮。由此得到275 mg(quant.)Fmoc-保護的中間物N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

HPLC(方法5)：R_t=2.73 min；LC-MS(方法4)：R_t=3.19 min；MS(ESI+)：m/z=1023(M+H)⁺.

將46 mg(0.045 mmol)的此中間物溶於4 ml的DMF。加入1 ml的哌啶後，將反應混合物於RT攪拌1 h。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮及將殘餘物以製備式HPLC純化(溶離劑：乙腈+0.01% TFA/水+0.01% TFA)。得到22 mg(54%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.68 min；

LC-MS(方法2)：R_t=1.03 min；MS(ESI+)：m/z=801(M+H)⁺

¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)：δ=8.8(m,2H),8.7(m,1H),8.42和8.15(2d,1H),7.3-7.1(m,5H),5.12和4.95(2m,1H),4.70和4.62(2m,1H),4.62和4.50(2t,1H),4.1-3.9(m,3H),3.85(m,1H),3.75-3.6(m,2H),3.23,3.18,3.17,3.14,3.02和2.96(6s,9H),3.1-2.9和2.75(2m,2H),2.46(m,3H),2.4-2.1(m,2H),2.05(br.m,2H),1.85-1.55(br.m,6H),1.5-1.2(br.m,3H),1.1-0.8(m,18H),0.75(t,3H)[進一步的訊號隱藏於H₂O波峰下].

中間物15

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將126 mg(0.198 mmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)置於10 ml的DMF中處理並連續與105 mg(0.198 mmol)的(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟乙酸鹽(中間物17)、41.6 mg(0.217 mmol)的1-(3-di甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、33 mg(0.217 mmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物和79 μl(0.454 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌至隔夜。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液和乙酸乙酯之混合物中。將有機層移出，連續以飽和的碳酸氫鈉溶液和飽和的氯化鈉溶液清洗，以硫酸鎂乾燥，過濾及濃縮。由此得到220 mg(定 量)Fmoc-保護的中間物N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

HPLC(方法5)：R_t=2.77 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.5 min；MS(ESI+)：m/z=1037(M+H)⁺.

將220 mg(0.212 mmol)的此中間物溶於5 ml的DMF。加入1 ml的哌啶後，將反應混合物於RT攪拌1 h。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。(溶離劑：乙腈+0.01% TFA/水+0.01% TFA)。 得到91 mg(46%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.71 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.9 min；MS(ESI+)：m/z=815(M+H)⁺

¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)：δ=8.87和8.80(2d,2H),8.75(m,1H),8.40和7.98(2d,1H),7.3-7.1(m,5H),5.45和5.2(2t,1H),4.78和4.62(2 m,1H),4.73和4.58(2t,1H),4.2-4.0(m,3H),3.7-3.6(m,1H),3.35,3.20,3.18,3.14,3.12和3.00(6s,9H),3.1和2.95(2m,2H),2.46(m,3H),2.4-2.0(m,4H),1.9-1.6(m,4H),1.6-1.2(m,5H),1.1-0.75(m,21H),0.80(t,3H)[進一步的訊號隱藏於H2O波峰下].

中間物16

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將617 mg(1.2 mmol)的(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-羧酸第三丁酯(中間物24)置於44 ml的二氯甲烷中處理，加入4.4 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌30 min。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮並將剩餘的殘餘物從二烷/水冷凍乾燥。得到702 mg(quant.)去保護的化合物(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟乙酸鹽為粗產物，將其用於下個階段無進一步純化。

將470 mg(0.74 mmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)置於57 ml的DMF中處理並連續與390 mg(約0.74 mmol)的上述(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟乙酸鹽、336 mg(0.88 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和423 μl(2.4 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌2 h。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液和乙酸乙酯之混合物。將有機層移出，連續以飽和的碳酸氫鈉溶液和飽和的氯化鈉溶液清洗，以硫酸鎂乾燥，過濾及濃縮。將殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到453 mg(59%之理論值)Fmoc-保護的中間物N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

HPLC(方法5)：R_t=2.58 min；LC-MS(方法1)：R_t=3.10 min；MS(ESI+)：m/z=1035(M+H)⁺.

將453 mg(0.438 mmol)的此中間物溶於24 ml的DMF。加入2.4 ml的哌啶後，將反應混合物於RT攪拌30 min。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化(溶離劑：乙腈/0.1% TFA之水溶液)。得到260 mg(64%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.64 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=813(M+H)⁺

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)：δ=8.8(m,2H),8.65(m,2H),7.3-7.1(m,5H),4.8-4.05(m,2H),4.0和3.82(2m,2H),3.8-3.5(m,8H),3.32,3.29,3.20,3.19,3.12和3.00(6s,9H),2.65(t,1H),2.5-2.45(m,3H),2.4-1.3(m,15H),1.15-0.85(m,18H),0.8和0.75(2d,3H)[進一步的訊號隱藏於H2O波峰下].

中間物17

N-苄基-N-甲基-L-苯基丙胺醯胺三氟乙酸鹽

將1000 mg(3.77 mmol)的N-(第三丁氧基羰基)-L-苯丙胺酸溶於10 ml的DMF並與457 mg(3.77 mmol)的N-甲基苄基胺、2150 mg(5.65 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和657 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。將反應混合物於RT攪拌30 min及然後於減壓下濃縮。將殘餘物置於二氯甲烷中處理並以水震盪萃取三次。將有機層以硫酸鎂乾燥及濃縮。將殘餘物以快速層析於矽膠上以3：1石油醚/乙酸乙酯作為溶離劑純化。將產物溶離份濃縮並將殘餘物於高真空下乾燥。由此得到1110 mg(75%之理論值)Boc-保護的中間物N-苄基-N ^α-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-苯丙胺醯胺。

HPLC(方法6)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.14 min；MS(ESI+)：m/z=369(M+H)⁺.

將1108 mg(3,007 mrmol)的此中間物置於30 ml的二氯甲烷中處理，加入10 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌30 min。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮，將剩餘的殘餘物與二氯甲烷攪拌並蒸發溶劑。將殘餘物與戊烷再攪拌二次，每次再將溶劑傾析出，最後將標題化合物於高真空下乾燥。由此得到1075 mg(93%之理論值)的標題化合物為一樹脂。

HPLC(方法6)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.6 min；MS(ESI+)：m/z=269(M+H)⁺.

中間物18

N-苄基-N ^α-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-N-甲基-L-苯丙胺醯胺三氟乙酸鹽

首先，藉由於乙酸乙酯中處理及以5%硫酸水溶液震盪萃取，將(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)從其141 mg(0.491 mmol)的二環己基胺鹽中釋放出。將有機層以硫酸鎂乾燥，過濾及濃縮。將殘餘物置於10 ml的DMF中處理並加入187.6 mg(0.49 mmol)的N-苄基-N-甲基-L-苯基丙胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物9)、190.3 mg(1.47 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和256 μl的N,N-二異丙基乙基胺。將混合物於RT攪拌1 h。然後將反應混合物濃縮，將殘餘物置於乙酸乙酯中處理並隨後連續以半飽和氯化銨溶液、飽和碳酸氫鈉溶液和水震盪萃取。將有機層以硫酸鎂乾燥及濃縮。將殘餘物以快速層析於矽膠上以30：1乙腈/水作為溶離劑純化。將產物溶離份濃縮並將殘餘物於高真空下乾燥。由此得到168 mg(64%之理論 值)Boc-保護的中間物(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)胺基]-1-側氧-3-苯基丙-2-基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-羧酸第三丁酯。

HPLC(方法6)：R_t=2.2 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.22 min；MS(ESI+)：m/z=538(M+H)⁺.

將168 mg(0.312 mmol)的此中間物置於15 ml的二氯甲烷中處理，加入3 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌30 min。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物與二氯甲烷攪拌，然後與乙醚攪拌，每次再將溶劑蒸餾出。於高真空下乾燥後，得到170 mg(99%之理論值)的標題化合物為一樹脂。

HPLC(方法6)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.73 min；MS(ESI+)：m/z=438(M+H)⁺.

中間物19

N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-苯丙胺酸甲酯三氟乙酸鹽

標題化合物係類似中間物18之合成，由二環己基胺鹽中釋放出之(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)和L-苯丙胺酸甲酯鹽酸鹽開始所製備。

HPLC(方法5)：R_t=0.6 min；LC-MS(方法3)：R_t=1.17 min；MS(ESI+)：m/z=349(M+H)⁺.

中間物20

N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺酸苄基酯三氟乙酸鹽

標題化合物係類似中間物18之合成，由二環己基胺鹽中釋放出之(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)和L-色胺酸苄基酯開始所製備。

HPLC(方法6)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.8 min；MS(ESI+)：m/z=464(M+H)⁺.

中間物21

(1S,2R)-1-({(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}胺基)-2-苯基環丙烷羧酸苄基酯三氟乙酸鹽

標題化合物係類似中間物18之合成，由二環己基胺鹽中釋放出之(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)和(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸苄基酯開始所製備。(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸苄基酯係預先以標準方法，藉由將市售的(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙羧酸以苄基醇酯化及隨後以三氟乙酸分離Boc所製備。

HPLC(方法5)：R_t=1.5 min；LC-MS(方法2)：R_t=0.93 min；MS(ESI+)：m/z=437(M+H)⁺.

中間物22

6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N'-甲基己醯肼三氟乙酸鹽

將100 mg(473 μmol)的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸溶於71 μl的DMF及然後與139 mg(947 μmol)的1-甲基肼羧酸第三丁酯、182 mg(947 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和145 mg(947 μmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物混合。將混合物於RT攪拌至隔夜及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從二烷/水冷凍乾燥後，得到129 mg(80%之理論值)保護的中間物為無色泡沫。

隨後，將129 mg(380 μmol)以2 ml三氟乙酸溶於8 ml的二氯甲烷之溶液去保護。將混合物於RT攪拌1 h後，將反應混合物於減壓下濃縮。將殘餘物以乙腈/水冷凍乾燥，留下125 mg(83%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

LC-MS(方法1)：R_t=0.38 min；MS(ESI+)：m/z=240(M+H)⁺

中間物23

N-(2-胺基乙基)-4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丁醯胺三氟乙酸鹽

首先，將35 mg(164 μmol)的2-(甲基胺基)乙基胺甲酸第三丁酯鹽酸鹽三氟乙酸鹽、30 mg(164 μmol)的4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸、75 mg(197 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和57 μl的N,N-二異丙基乙基胺與5 ml的DMF混合並於RT攪拌至隔夜。 隨後，於減壓下移除溶劑並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮並從二烷/水冷凍乾燥，得到35 mg(63%之理論值)保護的中間物。

HPLC(方法12)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.71 min；MS(ESI+)：m/z=340(M+H)⁺.

隨後，將保護的中間物之總量以1 ml三氟乙酸溶於5 ml二氯甲烷之溶液去保護，得到28 mg(77%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法3)：R_t=0.75 min；MS(ESI+)：m/z=240(M+H)⁺.

中間物24

4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-[2-(甲基胺基)乙基]丁醯胺三氟乙酸鹽

首先，將35 mg(164 μmol)的(2-胺基乙基)甲基胺甲酸第三丁酯鹽酸鹽三氟乙酸鹽、30 mg(164 μmol)的4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸、75 mg(197 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和57 μl的N,N-二異丙基乙基胺於5 ml的DMF中混合，並於RT攪拌30 min。隨後，於減壓下移除溶劑並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮並從二烷/水冷凍乾燥，得到51 mg(91%之理論值)保護的中間物。

HPLC(方法12)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.77 min；MS(ESI+)：m/z=340(M+H)⁺.

隨後，將保護的中間物之總量以1 ml三氟乙酸溶於5 ml二氯甲烷之溶液去保護，得到45 mg(69%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.19 min；MS(ESI+)：m/z=240(M+H)⁺.

中間物25

(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙酸苄基酯三氟乙酸鹽

首先，藉由於乙酸乙酯中處理及以100 ml的5%硫酸水溶液震盪萃取，將(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸從其1.82 g(388 mmol)的二環己基胺鹽中釋放出。將有機層以硫酸鎂乾燥，過濾及濃縮。將殘餘物置於10 ml的二烷和10 ml的水中處理，加入1517 mg(4.66 mmol)的碳酸銫，並將混合物以超音波浴處理5 min，及於減壓下濃縮和以DMF再蒸餾一次。然後將殘餘物置於15 ml的二氯甲烷中處理，並加入1990 mg(11.64 mmol)的苄基溴。將混合物以超音波浴處理15 min，及然後於減壓下濃縮。將殘餘物置於乙酸乙酯和水間分溶，並將有機層移出，及以飽和的氯化鈉溶液震盪萃取然後濃縮。然後將殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到1170 mg(80%之理論值)Boc-保護的中間物。

隨後，將這些1170 mg立即以5 ml三氟乙酸溶於15 ml二氯甲烷之溶液去保護。於RT攪拌15 min後，將反應混合物於減壓下濃縮。將殘餘物從二烷冷凍乾燥。於高真空下乾燥後，剩餘1333 mg(84%之理論值)的標題化合物為黃色油狀物。

HPLC(方法6)：R_t=1.5 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.59 min；MS(ESI+)：m/z=278(M+H)⁺.

中間物26

N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將1200 mg(2.33 mmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物5)與910.8 mg(2.33 mmol)的(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙酸苄基酯三氟乙酸鹽(中間物14)、1327 mg(3.49 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和2027 μl的N,N-二異丙基乙基胺於50 ml的DMF中混合，並將混合物於RT攪拌5 min。之後，於減壓下移除溶劑。將剩餘的殘餘物置於乙酸乙酯中處理並連續以5%檸檬酸水溶液和飽和的碳酸氫鈉溶液震盪萃取。將有機層移出及濃縮。將殘餘物以製備式HPLC純化。將產物溶離份組合並濃縮，及將殘餘物於高真空下乾燥。由此得到1000 mg(55%之理論值)的苄基酯中間物N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-(苄氧基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為一樹脂。

LC-MS(方法1)：R_t=1.56 min；MS(ESI+)：m/z=775(M+H)⁺.

將所得到的此中間物總量置於25 ml的甲醇和二氯甲烷(20：1)混合物中處理，及以氫化作用於標準的氫氣壓下以10%活性碳上鈀作為催化劑移除苄基酯基團。於RT攪拌30 min後，將催化劑濾出並將濾液於減壓下濃縮。 由此得到803 mg(91%之理論值)的標題化合物為白色固體。

HPLC(方法6)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.24 min；MS(ESI+)：m/z=685(M+H)⁺.

中間物27

(1S,2R)-1-胺基-2-苯基-N-丙基環丙烷甲醯胺三氟乙酸鹽

標題化合物係藉由將市售的(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙烷羧酸以正丙基胺在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc所製備(產率：85%之理論值於二階段)。

HPLC(方法6)：R_t=1.2 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.52 min；MS(ESI+)：m/z=219(M+H)⁺.

中間物28

(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸乙酯三氟乙酸鹽

標題化合物係以標準方法，藉由將市售的(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙烷羧酸以乙醇酯化，及隨後以三氟乙酸分離Boc所製備。

LC-MS(方法1)：R_t=0.50 min；MS(ESI+)：m/z=206(M+H)⁺.

中間物29

4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁酸

於1.39 g(8.95 mmol)N-甲氧基羰基馬來酸之44 ml的飽和碳酸氫鈉溶液中，於0℃加入1.5 g(8.95 mmol)的4-胺基-2,2-二甲基丁酸，並將混合物攪拌40 min。隨後，移除冷卻浴並將反應混合物另再攪拌1 h。在以冰冷卻下，然後將反應混合物藉由加入硫酸調整至pH 3，並以乙酸乙酯萃取。將組合的有機層以硫酸鎂乾燥及濃縮。得到1.17 g(79%純度，49%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.64 min；m/z=212(M+H)⁺.

中間物30

2-[4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯胺]肼羧酸第三丁酯

於50 mg(237 μmol)的4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁酸之2 ml的THF溶液中，於0℃先加入26 μl(237 μmol)的4-甲基嗎福啉及然後加入31 μl(237 μmol)的氯甲酸異丁酯。移除冷卻浴及於RT另再攪拌15 min後，加入31.3 mg(237 μmol)的第三丁氧基羰基肼。將反應混合物攪拌至隔夜及然後濃縮。將殘餘物以製備式HPLC純化。得到50.8 mg(66%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.71 min；m/z=324(M-H)^-.

中間物31

4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯肼三氟乙酸鹽

將50 mg(154 mmol)的2-[4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯基]肼羧酸第三丁酯溶於2 ml的二氯甲烷並加入0.4 ml的三氟乙酸。將反應混合物於RT攪拌30 min及然後濃縮。得到55.2 mg(93%純度， 99%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.36 min；m/z=226(M+H)⁺.

中間物32

N-(第三丁氧基羰基)-L-苯丙胺酸金剛烷-1-基甲基酯

於500 mg(1.89 mmol)的N-Boc-L-苯丙胺酸之25 ml的二氯甲烷溶液中，於RT加入1192 mg(6.2 mmol)的EDC、578 μl(4.1 mmol)的三乙胺、345 mg(2.8 mmol)的DMAP和345 mg(2.1 mmol)的1-金剛烷基甲醇。將反應混合物攪拌至隔夜，然後以50 ml的二氯甲烷稀釋，並連續以10%檸檬酸水溶液、水和飽和的氯化鈉溶液清洗。將有機層以硫酸鎂乾燥，然後濃縮，並將殘餘物以製備式HPLC純化。得到769 mg(90%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法2)：R_t=1.84 min；m/z=414(M+H)⁺.

中間物33

L-苯苯丙胺酸金剛烷-1-基甲基酯鹽酸鹽

將769 mg(1.86 mmol)的N-(第三丁氧基羰基)-L-苯丙胺酸金剛烷-1-基甲基酯(中間物13)溶於25 ml的4 N鹽酸之二烷溶液中並於RT攪拌1 h。隨後，將反應混合物濃縮並將殘餘物於減壓下乾燥。得到619 mg(95%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.82 min；m/z=314(M+H)⁺.

中間物34

N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金剛烷-1-基甲氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

於20 mg(29 μmol)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之1 ml的DMF溶液中，於RT加入15.3 μl(88 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺、6.7 mg(44 μmol)的HOBt和6.7 mg(35 μmol)的EDC，並將混合物攪拌30 min。隨後，加入10.1 mg(32 μmol)的L-苯丙胺酸金剛烷-1-基酯鹽酸鹽。攪拌至隔夜後，將反應混合物經由製備式HPLC直接分離其組份。得到27.5 mg(93%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.70 min；m/z=980(M+H)⁺.

中間物35

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金剛烷-1-基甲氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將27.5 mg(28 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金剛烷-1-基甲氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於1.8 ml的二氯甲烷並加入和361 μl的TFA。將反應混合物攪拌30 min及然後濃縮。將殘餘物置於水中處理並冷凍乾燥。得到22.7 mg(81%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.14 min；m/z=880(M+H)⁺.

中間物36

(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基胺甲酸第三丁酯

於氬氣壓下，將500 mg(1.99 mmol)的N-Boc-L-苯丙胺醇溶於5 ml的DMF並冷卻至0℃。隨後，加入159 mg(3.98 mmol)60%的氫化鈉之石蠟油懸浮液。攪拌反應混合物直到氣體蒸發結束及然後加入260 μl(2.19 mmol)的苄基溴。移除冷卻浴並將反應混合物於RT攪拌2 h。之後，將反應混合物濃縮，將殘餘物置於冰水中處理並以二氯甲烷萃取混合物。將有機層以飽和的氯化鈉溶液清洗，以硫酸鎂乾燥及濃縮。將殘餘物以製備式HPLC純化。得到226 mg(33%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.28 min；m/z=342(M+H)⁺.

中間物37

(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-胺鹽酸鹽

將220 mg(644 μmol)的(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基胺甲酸第三丁酯溶於11 ml的4 N鹽酸之二烷溶液，並於RT攪拌1 h。然後將反應混合物濃縮及將殘餘物於減壓下乾燥。得到138 mg(77%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.65 min；m/z=242(M+H)⁺.

中間物38

N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

於20 mg(29 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之1 ml的DMF溶液中，於RT加入15.3 μl(88 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺、6.7 mg(44 μmol)的HOBt和 6.7 mg(35 μmol)的EDC，並將混合物攪拌30 min。隨後，加入7.8 mg(32 μmol)的(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-胺鹽酸鹽。攪拌至隔夜後，將反應混合物經由製備式HPLC直接分離其組份。得到26 mg(98%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：Rt=1.51 min；m/z=909(M+H)+.

中間物39

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將26 mg(29 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於1.8 ml的二氯甲烷並加入370 μl的TFA。將反應混合物於RT攪拌30 min及然後濃縮。將殘餘物置於水中處理並冷凍乾燥。得到26.4 mg(定量)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.97 min；m/z=809(M+H)⁺.

中間物40

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將50 mg(70 μmol)的中間物26和11 mg(70 μmol)的(1S,2R)-2-胺基-1-苯基丙-1-醇之10 ml的DMF溶液與42 mg(0.11 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和25 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合，並將反應混合物於RT攪拌5 min。接著濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份組合，濃縮及於高真空乾燥後，得到49 mg(81%)保護的中間物。隨後，藉由已知條件以三氟乙酸於二氯甲烷中去保護。濃縮接著將標題化合物以製備式HPLC純化，並得到26 mg(52%)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.65 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.77 min；MS(ESI+)：m/z=718(M+H)⁺.

中間物41

3-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸三氟乙酸鹽

將150 mg(541 μmol)的3-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸第三丁酯溶於3 ml的二氯甲烷，加入1.5 ml的三氟乙酸並將反應混合物於RT攪拌1 h，然後濃縮。

得到181 mg(100%之理論值)的標題化合物。

MS(EI)：m/z 222(M+H)⁺

中間物42

3-(2-{2-[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸

將186 mg(555 μmol)的3-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸三氟乙酸鹽溶於2.6 ml的飽和碳酸氫鈉溶液並於0℃與86 mg(555 μmol)的N-甲氧基羰基馬來醯亞胺混合。將反應混合物於0℃攪拌40 min及於RT攪拌1 h，然後再次冷卻至0℃，以硫酸調整至pH 3並以3x 25 ml的乙酸乙酯萃取。將組合的有機層以硫酸鎂乾燥並濃縮。

得到126 mg(75%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.53 min；m/z=302(M+H)⁺.

中間物43

15-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-4-側氧-7,10,13-三氧-2,3-二氮十五烷-1-酸第三丁酯

將125 mg(417 μmol)的3-(2-{2-[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸於0℃溶於2.1 ml的THF並與46 μl(417 mmol)的4-甲基嗎福啉和54.5 μl(417 μmol)的氯甲酸異丁酯混合物。移除冰浴並 將反應混合物於RT攪拌30 min。隨後，於0℃加入55 mg(417 μmol)的第三丁氧基羰基肼。將反應混合物升溫至RT至隔夜，濃縮並以製備式HPLC純化。

得到60 mg(33%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.66 min；m/z=416(M+H)⁺.

中間物44

3-(2-{2-[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙醯肼三氟乙酸鹽

60 mg(145 μmol)的15-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-4-側氧-7,10,13-三氧-2,3-二氮十五烷-1-酸第三丁酯溶於1 ml的二氯甲烷並加入0.2 ml的三氟乙酸。將反應混合物於RT攪拌30 min及然後濃縮。

得到62 mg(100%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.35 min；m/z=316(M+H)⁺.

中間物45

(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸苄基酯三氟乙酸鹽

標題化合物係以標準方法，藉由將市售的(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙烷羧酸以苄基醇酯化及隨後以三氟乙酸分離Boc所製備。

LC-MS(方法1)：R_t=0.72 min；MS(ESI+)：m/z=268(M+H)⁺.

中間物46

N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將383 mg(0.743 mmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物8)與485 mg(0.743 mmol)的N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-苯丙胺酸苄基酯三氟乙酸鹽(中間物12)、424 mg(1.114 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和388 μl的N,N-二異丙基乙基胺於15 ml的DMF中混合，並將混合物於RT攪拌10 min。隨後，於減壓下移除溶劑。將剩餘的殘餘物置於乙酸乙酯中處理並連續以5%檸檬酸水溶液和飽和的碳酸氫鈉溶液震盪萃取。將有機層移出並濃縮，及將殘餘物以製備式HPLC純化。將產物溶離份組合和濃縮，及將殘餘物於高真空乾燥。得到335 mg(48%之理論值)的苄基酯中間物為泡沫。

LC-MS(方法1)：R_t=1.49 min；MS(ESI+)：m/z=922(M+H)⁺.

將100 mg(0.11 mmol)的此中間物置於15 ml的甲醇中處理及以氫化作用於標準的氫氣壓下以10%活性碳上鈀作為催化劑移除苄基酯基團。於RT攪拌1 h後，將催化劑濾出並將濾液於減壓下濃縮。從二烷冷凍乾燥後，得到85 mg(94%之理論值)的標題化合物為一固體。

HPLC(方法12)：R_t=2.4 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.24 min；MS(ESI+)：m/z=832(M+H)⁺.

中間物47

N-苄基-L-色胺醯胺三氟乙酸鹽

將202 mg(0.5 mmol)的2,5-二側氧吡咯啶-1-基N-(第三丁氧基羰基)-L-色胺酸酯和45 mg(0.42 mmol)的苄基胺溶於10 ml的DMF並加入110 μl(630 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺。將反應混合物於RT攪拌3 h。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘餘物以快速層析於矽膠上(溶離劑：20：0.5：0.05二氯甲烷/甲醇/17%氨水)純化。將對應的溶離份組合及濃縮。將產生的殘餘物以乙醚處理及然後於高真空乾燥。隨後，將此殘餘物置於10 ml的二氯甲烷中處理並加入3 ml的無水三氟乙酸。於RT攪拌45分鐘後，將混合物濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。於高真空乾燥後，得到117 mg(57%之理論值於二階段中)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.66 min；MS(ESI+)：m/z=294(M+H)⁺.

中間物48

(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷甲醯胺三氟乙酸鹽

將50 mg(180 μmol)的市售的(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙羧酸溶於5 ml的DMF，加入94 μl(541 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺、31 mg(270 μmol)的N-羥基琥珀醯亞胺和41.5 mg(216 μmol)的EDC，及然後將混合物於RT攪拌至隔夜。然後將反應混合物濃縮，將殘餘物置於二烷中處理，加入71 mg(901 μmol)的碳酸氫銨及然後將反應混合物置於RT下3天。將反應混合物以1：1的乙酸乙酯和水之混合物稀釋。將有機層移出，以硫酸鎂乾燥並濃縮。隨後將產生的殘餘物置於3 ml的二氯甲烷中處理，並加入3 ml的無水三氟乙酸。於RT攪拌1 h接著濃縮。將殘餘物與戊烷攪拌，以抽氣過濾並從二烷冷凍乾燥。由此法得到32 mg(62%之理論值於二階段中)的標題化合物。

HPLC(方法6)：R_t=0.38 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.20 min；MS(ESI+)：m/z=177(M+H)⁺.

中間物49

N ^α-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺醯胺三氟乙酸鹽

標題化合物係以類似中間物13之合成，由起始化合物1和L-色胺醯胺鹽酸鹽所製備。

HPLC(方法5)：R_t=1.4 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.92 min；MS(ESI+)：m/z=473(M+H)⁺.

中間物50

2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基胺甲酸4-硝基苯基酯

將813 mg(3.1 mmol)的三苯基膦溶於25 ml的THF並於氬氣下冷卻至-70℃。逐滴加入627 mg(3.1 mmol)的疊氮二羧酸二異丙酯後，將混合物攪拌5 min。隨後，逐滴加入溶於5 ml的THF之500 mg(3.1 mmol)的2-胺基乙基胺甲酸第三丁酯，並將反應混合物於-70℃另再攪拌5 min。然後加入溶於1 ml的THF之136.6 mg(1.55 mmol)的2,2-二甲基-1-丙醇和301 mg(3.1 mmol)的馬來醯亞胺，將反應混合物於-70℃另再攪拌10 min及然後讓混合物升至RT。於RT另再攪拌16 h後，於減壓下移除溶劑並將殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到463 mg(62%)保護的中間物

於標準條件下移除Boc保護基後，得到652 mg的1-(2-胺基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮為三氟乙酸鹽。

將112.9 mg(543 μmol)的氯甲酸硝基苯基酯溶於30 ml的THF及，加入100 mg(271.6 μmol)的1-(2-胺基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮三氟乙酸鹽後，將混合物於RT攪拌30 min。將混合物過濾並將濾液濃縮至乾，及然後以乙醚形成漿狀。抽氣過濾和乾燥後，得到60 mg(95%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：Rt=0.65 min；LC-MS(方法1)：Rt=0.74 min；MS(ESI+)：m/z=306(M+H)+.

中間物51

(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙胺三氟乙酸鹽

起初將200 mg(0.75 mmol)的N-(第三丁氧基羰基)-L-苯基丙胺酸於0℃倒入5.5 ml的二氯甲烷中，並加入128 mg(0.79 mmol)的1,1'-羰基二咪唑。30 min後，加入103 mg(0.75 mmol)的苄醯肼。於0℃另再45 min後，最後加入500 mg(1.5 mmol)的四溴化碳和395 mg(1.5 mmol)的三苯基膦。將反應混合物先於0℃攪拌2 h及然後於RT攪拌至隔夜。隨後將混合物於旋轉蒸發器上濃縮並將殘餘物於高真空下乾燥。將由此得到的粗產物以製備式HPLC純化。得到217 mg(78%之理論值)Boc-保護的中間物(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基胺甲酸第三丁酯。

LC-MS(方法12)：R_t=1.15 min；MS(ESI+)：m/z=366(M+H)⁺

將217 mg(0.59 mmol)的此中間物置於3 ml的二氯甲烷中處理，加入0.6 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌30 min。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物為反應混合物進一步於減壓下乾燥及然後從二烷冷凍乾燥。於此法，得到214 mg(90%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法11)：R_t=0.62 min；MS(ESI+)：m/z=266(M+H)⁺

中間物52

(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙胺三氟乙酸鹽

起初將200 mg(0.75 mmol)的N-(第三丁氧基羰基)-D-苯丙胺酸於0℃倒入5.5 ml的二氯甲烷中，並加入128.3 mg(0.79 mmol)的1,1'-羰基二咪唑。30 min後，加入103 mg(0.75 mmol)的苄醯肼。於0℃另再45 min後，最後加入500 mg(1.5 mmol)的四溴化碳和395 mg(1.5 mmol)的三苯基膦。將反應混合物先於0℃攪拌2 h及然後於RT攪拌至隔夜。隨後將混合物於旋轉蒸發器上濃縮並將殘餘物於高真空下乾燥。將由此得到的粗產物以製備式HPLC純化。得到219 mg(80%之理論值)Boc-保護的中間物(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基胺甲酸第三丁酯。

LC-MS(方法2)：R_t=1.36 min；MS(ESI+)：m/z=366(M+H)⁺

將219 mg(0.6 mmol)的此中間物置於3 ml的二氯甲烷中處理，加入0.6 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌30 min。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物為反應混合物進一步於減壓下乾燥及然後從二烷冷凍乾燥。以此法，得到196 mg(86%之理論值)的標題化合物為一固體。

HPLC(方法10)：R_t=2.41 min

中間物53

(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-胺

起初將200 mg(1.13 mmol)的(4S)-4-苄基-1,3-唑啶-2-酮倒入3 ml的第三丁醇中並加入280 mg(2.26 mmol)的苄基硫醇。隨後將混合物加熱回流2天。之後，將反應混合物於旋轉蒸發器上濃縮並將生成的(2S)-1-(苄基硫基)-3-苯基丙-2-胺中間物直接進一步轉化，無後續處理。

HPLC(方法10)：R_t=2.63 min LC-MS(方法1)：R_t=0.67 min；MS(ESI+)：m/z=258(M+H)⁺

將上方所得到的粗中間物溶於2 ml的30%過氧化氫溶液和5 ml的甲酸中並將混合物於RT攪拌12 h。然後將反應混合物加到飽和的硫酸鈉溶液並以乙酸乙酯萃取三次。將有機層以硫酸鎂乾燥並於減壓下濃縮。將得到的 粗產物以製備式HPLC純化。由此得到343 mg(61%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法10)：R_t=2.40 min；LC-MS(方法12)：R_t=0.65 min；MS(ESI+)：m/z=290(M+H)⁺

中間物54

(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-胺

將552.7 mg(9.85 mmol)的氫氧化鉀溶於甲醇，吸附至1.1 g的中性氧化鋁上及然後於高真空下乾燥。於6.2 ml的正丁醇中所製備的240 mg(0.82 mmol)(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-胺和1.56 g氧化鋁上的氫氧化鉀之溶液中，於5-10℃逐滴加入307 μl(3.3 mmol)的二溴二氟甲烷。將反應混合物於RT攪拌2 h，然後通過矽藻土並將殘餘物以二氯甲烷充分清洗。將濾液濃縮並將所產生的殘餘物於減壓下乾燥。將由此得到的粗產物以製備式HPLC純化。得到98 mg(35%之理論值)的標題化合物帶有4：1之E/Z非對映異構物比例。

HPLC(方法10)：R_t=2.46 min；LC-MS(方法12)：R_t=0.75 min；MS(ESI+)：m/z=224(M+H)⁺

將上文所得到的E/Z非對映異構物溶於2 ml的乙醇和0.2 ml的N,N-二異丙基乙基胺，並以HPLC於對掌相分離[管柱：Daicel Chiralpak AD-H,5 μm 250 mm x 20 mm，溶離劑：己烷/(乙醇+0.2%二乙胺)50：50 v/v；UV偵測：220 nm；溫度：30℃]。將適當的溶離份於旋轉蒸發器上濃縮並將殘餘物於減壓下乾燥。得到45 mg的標題化合物。

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)δ[ppm]=2.62-2.83(m,2 H)3.52-3.71(m,1 H)6.18-6.30(m,1 H)6.34-6.46(m,1 H)6.98-7.57(m,10 H)[進一步的訊 號隱藏於溶劑波峰下].

中間物55

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將20 mg(29 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於1 ml的DMF，加入13.3 mg(35 μmol)的HATU和15.3 μl(88 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺，並將混合物於RT攪拌30 min。隨後，加入12.2 mg(32 μmol)的(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙胺三氟乙酸鹽。將反應混合物於RT攪拌至隔夜及然後以製備式HPLC分離。由此得到22 mg(81%之理論值)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

LC-MS(方法12)：R_t=1.45 min；MS(ESI+)：m/z=933(M+H)⁺

隨後以三氟乙酸將BOC保護基分離，然後得到22.4 mg(98%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法11)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=833(M+H)⁺

中間物56

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2- 甲基-3-側氧-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺係以類似中間物55之合成，藉由20 mg(29 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺與12.2 mg(32 μmol)的(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙胺三氟乙酸鹽之反應所製備。

產率：17 mg(64%之理論值)

HPLC(方法10)：R_t=3.74 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.45 min；MS(ESI+)：m/z=933(M+H)⁺

隨後以三氟乙酸將BOC保護基分離，然後得到17.1 mg(99%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法10)：R_t=2.55 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=833(M+H)⁺

中間物57

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺係以類似中間物55之合成，藉由20 mg(29 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺與9.3 mg(20 μmol)的(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-胺之反應所製備。

產率：19.2 mg(68%之理論值)

HPLC(方法10)：R_t=3.5 min；LC-MS(方法12)：R_t=1.41 min；MS(ESI+)：m/z=957(M+H)⁺

隨後以三氟乙酸將BOC保護基分離，然後得到19.3 mg(99%之理論值)的標題化合物

HPLC(方法10)：R_t=2.52 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=857(M+H)⁺

中間物58

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺係以類似中間物55之合成，藉由20 mg(29 μmil)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺與7.1 mg(32 μmol)的(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-胺之反應所製備。

產率：15.1 mg(58%之理論值)

HPLC(方法10)：R_t=4.2 min；LC-MS(方法12)：R_t=1.51 min；MS(ESI+)：m/z=891(M+H)⁺

隨後以三氟乙酸將BOC保護基分離，然後得到15.7 mg(99%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法10)：R_t=2.62 min；LC-MS(方法12)：R_t=0.97 min；MS(ESI+)：m/z=791(M+H)⁺

中間物61

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將50 mg(0.054 mmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物16)溶於8 ml的二烷/水中並加入70 ml(0.108 mmol)15%的4-側氧丁酸之水溶液。隨後將反應混合物於100℃攪拌1 h。冷卻至RT後，加入3.7 mg(0.059 mmol)的氰基硼氫化鈉並將混合物加入約300 μl的0.1 N鹽酸調整至pH 3。然後將反應混合物於100℃另再攪拌2 h。冷卻後，另加入70 ml(0.108 mmol)15% 4-側氧丁酸溶液並將反應混合物再次於100℃攪拌1 h。然後另再加入3.7 mg(0.059 mmol)的氰基硼氫化鈉，及隨後使用約300 μl的0.1 N鹽酸將pH調整回3。然後將反應混合物於100℃另再攪拌2 h。在轉化仍未完全之情況下，重複此步驟第三次。最後將反應混合物濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。於此法得到32 mg(65%之理論值)的標題化合物為無色泡沫之形式。

HPLC(方法5)：R_t=1.64 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.76 min；MS(ESI+)：m/z=899(M+H)⁺

¹H NMR(500 MHz,DMSO-d₆)：δ=8.95和8.8(2m,1H),8.88和8.65(2s,1H),7.4-7.1(m,5H),5.0,4.78,4.65和4.55(4m,2H),4.1-3.7(m,5H),3.32,3.29,3.20,3.12,3.1和3.0(6s,9H),2.75(m,2H),2.63(t,1H),2.4-2.2(m,4H),2.1-1.2(m,12H),1.2-0.8(m,16H),0.75(m,3H)[進一步的訊號隱藏於H₂O和DMSO波峰下]。

中間物62

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

標題化合物係以類似中間物61之合成，藉由50 mg的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物14)與4-側氧丁酸之反應所製備。

產率：34 mg(70%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.64 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.77 min；MS(ESI+)：m/z=887(M+H)⁺.

中間物63

N-(4-羧基苄基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

標題化合物係以類似中間物61之合成，藉由15 mg的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物16)與4-甲醯苯甲酸之反應所製備。

產率：7.5 mg(48%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.75 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.97 min；MS(ESI+)：m/z=947(M+H)⁺.

中間物64

N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(0.011 mmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2- 苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物16)溶於2 ml的二烷/水中，並加入2.8 mg(0.022 mmol)的6-側氧己酸。隨後將反應混合物於100℃攪拌1 h。冷卻至RT後，加入0.75 mg(0.012 mmol)的氰基硼氫化鈉並將混合物加入0.1 N鹽酸調整至pH 3。然後將反應混合物於100℃另再攪拌1小時。冷卻後，另加入2.8 mg(0.022 mmol)的6-側氧己酸並將反應混合物再次於100℃攪拌1 h。另再加入0.75 mg(0.012 mmol)的氰基硼氫化鈉，及隨後使用0.1 N鹽酸將pH調整回至3。然後將反應混合物於100℃另再攪拌1 h。然後重複此步驟第三次。最後將反應混合物濃縮並將粗產物以製備式HPLC純化。由此得到6.4 mg(64%之理論值)的標題化合物為無色泡沫之形式。

HPLC(方法5)：R_t=1.68 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.86 min；MS(ESI+)：m/z=927(M+H)⁺.

中間物65

N-(2-胺基乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺雙三氟乙酸鹽

標題化合物係以68 mg的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物14)與2-側氧乙基胺甲酸第三丁酯之反應所 製備，及隨後以三氟乙酸將BOC保護基分離。

產率：49 mg(62%之理論值於二階段中)

HPLC(方法5)：R_t=1.58 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.05 min；MS(ESI+)：m/z=844(M+H)⁺

¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)：δ=8.25(m,1H),8.45和8.15(2d,1H),7.65-7.55(m,3H),7.23-7.1(m,5H),5.12和4.95(2m,1H),4.72和4.62(2m,1H),4.6和4.52(2t,1H),4.2-3.8(m,4H),3.7(d,1H),3.23,3.20,3.19,3.18,3.03和2.98(6s,9H),3.0-2.7(m,6H),2.4-1.2(m,15H),1.05,1.0,0.88和0.82(4d,6H),0.92(m,6H),0.73(m,6H)[進一步的訊號隱藏於H2O波峰下]。

中間物66

N-(3-胺基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

標題化合物係以類似中間物65之合成，藉由25 mg(0.027 mmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物16)與3-側氧丙基胺甲酸苄基酯之反應所製備，及隨後以氫解作用將Z保護基分離(以10%活性碳上鈀作為催化劑，以乙醇作為溶劑)。

產率：11 mg(41%之理論值於二階段中)

HPLC(方法5)：R_t=1.53 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.72 min；MS(ESI+)：m/z=870(M+H)⁺.

中間物67

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金剛烷-1-基甲氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將26 mg(26 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金剛烷-1-基甲氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽和33.9 μl的15%琥珀半醛酸水溶液(53 μmol)溶於957 μl的1：1-二烷/水混合物並加熱至100℃歷時1 h。短暫的冷卻後，加入1.81 mg(29 μmol)的氰基硼氫化鈉。將反應混合物加入0.1 N鹽酸調整至pH 3並將混合物另再加熱至100℃歷時2 h。再次加入相同量的琥珀半醛酸溶液、氰基硼氫化鈉和鹽酸，將混合物再次加熱至100℃歷時2 h。然後將反應混合物以製備式HPLC直接分離其組份。由此得到18.5 mg(73%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.17 min；m/z=967(M+H)⁺.

中間物68

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚 -4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將24 mg(26 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽和33.7 μl的15%琥珀半醛酸水溶液(52 μmol)溶於953 μl的1：1-二烷/水混合物並加熱至100℃歷時1 h。短暫的冷卻後，加入1.81 mg(29 μmol)的氰基硼氫化鈉。將反應混合物加入0.1 N鹽酸調整至pH 3並將混合物另再加熱至100℃歷時2 h。再次加入相同量的琥珀半醛酸溶液、氰基硼氫化鈉和鹽酸，將混合物再次加熱至100℃歷時2 h。然後將反應混合物以製備式HPLC直接分離其組份。由此得到15.2 mg(65%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.01 min；m/z=895(M+H)⁺

中間物69

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將53 mg(84 μmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基 -N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)和45 mg(84 μmol)的N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-苯丙胺酸苄基酯三氟乙酸鹽(中間物12)置於2 ml的DMF中處理，加入19 μl的N,N-二異丙基乙基胺、14 mg(92 μmol)的HOBt和17.6 mg(92 μmol)的EDC及然後將混合物於RT攪拌至隔夜。隨後，將反應混合物濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到59 mg(68%之理論值)Fmoc-保護的中間物N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

LC-MS(方法1)：R_t=1.55 min；m/z=1044(M+H)⁺.

將57 mg(0.055 mmol)的此中間物以1.2 ml的哌啶溶於5 ml的DMF之溶液處理用以分離Fmoc保護基。濃縮及以製備式HPLC純化後，得到39 mg(76%之理論值)的游離胺中間物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.01 min；m/z=822(M+H)⁺.

將37 mg(0.045 mmol)的此中間物溶於5 ml的二烷/水，及類似中間物66中化合物的製備，與15%的4-側氧丁酸水溶液，於氰基硼氫化鈉的存在下反應。得到16 mg(39%之理論值)的標題化合物為無色泡沫之形式。

HPLC(方法6)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.01 min；MS(ESI+)：m/z=908(M+H)⁺.

中間物70

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側 氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物14中所述的合成，由中間物4和26開始，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

將30 mg(0.032 mmol)的此化合物溶於6 ml的二烷/水中，並加入41 μl(0.063 mmol)15%的4-側氧丁酸水溶液。將反應混合物隨後於100℃攪拌1 h。冷卻至RT後，加入2.2 mg(0.035 mmol)的氰基硼氫化鈉並將混合物加入約300 μl的0.1 N鹽酸調整至pH 3。然後將反應混合物於100℃另再攪拌2 h。冷卻後，另再加入41 μl(0.063 mmol)的15% 4-側氧丁酸溶液，並將反應混合物於100℃再攪拌1 h。然後另再加入2.2 mg(0.035 mmol)的氰基硼氫化鈉及隨後使用約300 μl的0.1 N鹽酸將pH調整回3。將反應混合物於100℃另再攪拌2 h。在轉化仍未完全之情況下，重複此步驟第三次。最後將反應混合物濃縮並將粗產物以製備式HPLC純化。由此得到24 mg(82%之理論值)的標題化合物為無色泡沫之形式。

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法9)：R_t=5.15 min；MS(ESI+)：m/z=922(M+H)⁺.

中間物71

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物14中所述的合成，從中間物4和39開始，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。然後使用7 mg(0.009 mmol)的此化合物，以類似中間物61中之製備，藉由與4-側氧丁酸於氰基硼氫化鈉的存在下反應，得到2 mg(22%之理論值)的標題化合物為無色泡沫之形式。

HPLC(方法6)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.06 min；MS(ESI+)：m/z=832(M+H)⁺.

中間物72

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將212 mg(411 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物8)和237 mg(411 μmol)的苄基-N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺酸酯三氟乙酸鹽(中間物20)置於30 ml的DMF中處 理，並加入188 mg(493 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和215 μl N,N-二異丙基乙基胺。將反應混合物於RT攪拌20 h，然後於減壓下濃縮，並將殘餘物以製備式HPLC純化。將產物溶離份組合並濃縮，及將殘餘物於高真空下乾燥。由此得到315 mg(80%之理論值)Boc-保護的中間物N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為無色泡沫。

LC-MS(方法1)：R_t=1.45 min；m/z=961(M+H)⁺.

將50 mg(52 μmol)的此中間物以1 ml的三氟乙酸溶於9 ml的二氯甲烷之溶液中處理，用以分離Boc保護基。濃縮及以製備式HPLC純化後，得到29 mg(57%之理論值)的游離胺中間物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。

LC-MS(方法1)：R_t=0.99 min；m/z=861(M+H)⁺.

將29 mg(0.03 mmol)的此中間物溶於6 ml的二烷/水並加入39 μl(0.059 mmol)的15% 4-側氧丁酸水溶液。將反應混合物隨後於100℃攪拌1 h。冷卻至RT後，加入2 mg(0.033 mmol)的氰基硼氫化鈉並將混合物加入約300 μl的0.1 N鹽酸調整至pH 3。然後將反應混合物於100℃另再攪拌2 h。冷卻後，另再加入39 μl(0.059 mmol)的15% 4-側氧丁酸溶液，並將反應混合物於100℃再攪拌1 h。然後另再加入2 mg(0.033 mmol)的氰基硼氫化鈉及隨後使用約300 μl的0.1 N鹽酸將pH調整回3。然後將混合物於100℃另再攪拌2 h。之後，將反應混合物倒入1：1半飽和氯化銨水溶液及乙酸乙酯之混合物中。將有機層移出，以飽和的氯化鈉溶液清洗，以硫酸鎂乾燥及濃縮。將殘餘物從水/乙腈冷凍乾燥。由此得到27 mg(94%之理論值)的標題化合物為無色泡沫之形式。

HPLC(方法5)：R_t=2.2 min；LC-MS(方法9)：R_t=5.04 min；MS(ESI+)：m/z=947(M+H)⁺.

中間物73

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)胺基]-1-側氧-3-苯基丙-2-基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物14中所述的合成，由中間物4和38開始，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)胺基]-1-側氧-3-苯基丙-2-基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。然後使用25 mg(0.026 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由與4-側氧丁酸於氰基硼氫化鈉的存在下反應，得到13 mg(54%之理論值)的標題化合物為無色泡沫之形式。

HPLC(方法12)：R_t=2.2 min；LC-MS(方法9)：R_t=5.01 min；MS(ESI+)：m/z=921(M+H)⁺.

中間物74

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基環丙烷}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將50 mg(73 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和28 mg(73 μmol)的(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸苄基酯三氟乙酸鹽(中間物45)置於5 ml的DMF中處理，並加入42 mg(110 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和38 μl的N,N-二異丙基乙基胺。將反應混合物於RT攪拌5 h，然後於減壓下濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。將產物溶離份組合並濃縮。從二烷/水冷凍乾燥後，得到35 mg(51%之理論值)Boc-保護的中間物N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基環丙基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為無色泡沫。

LC-MS(方法1)：R_t=1.52 min；m/z=934(M+H)⁺.

將35 mg的此中間物以1 ml的三氟乙酸溶於5 ml的二氯甲烷之溶液分離Boc保護基。濃縮及從二烷/水冷凍乾燥後，得到34 mg(97%之理論值)的游離胺中間物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基環丙基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。

LC-MS(方法1)：R_t=0.91 min；m/z=834(M+H)⁺.

然後使用11 mg(0.011 mmol)的此中間物，以類似中間物66之製備，藉由與4-側氧丁酸於氰基硼氫化鈉的存在下反應，得到2.5 mg(24%之理論值)的標題化合物為無色泡沫之形式。

HPLC(方法12)：R_t=2.2 min；LC-MS(方法9)：R_t=5.1 min；MS(ESI+)：m/z=920(M+H)⁺.

中間物75

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S,2R)-2-苯基-1-(丙基胺甲醯基)環丙烷]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物74中所述的合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和(1S,2R)-1-胺基-2-苯基-N-丙基環丙甲醯胺三氟乙酸鹽(中間物27)於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸的存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S,2R)-2-苯基-1-(丙基胺甲醯基)環丙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用14 mg(0.016 mmol)的此化合物，以類似中間物61中之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到11.3 mg(83%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法6)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.27 min；MS(ESI+)：m/z=871(M+H)⁺.

中間物76

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，藉由中間物46(N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)與中間物48((1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸乙酯三氟乙酸鹽)在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後分離Boc，製備起始化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽。然後使用70 mg(0.079 mmol)的此起始物，類似中間物61，藉由與4-側氧丁酸反應，得到46 mg(68%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法6)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.28 min；MS(ESI+)：m/z=858(M+H)⁺

中間物77

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚 -4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物75中所述的合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和L-苯基丙胺醯胺鹽酸鹽於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用47 mg(0.049 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到39 mg(96%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法6)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.44 min；MS(ESI+)：m/z=817(M+H)⁺

¹H NMR(500 MHz,DMSO-d₆)：δ=8.95和8.8(2m,1H),8.25和8.0(2d,1H),7.45,7.35和7.0(3s,broad,2H),7.3-7.1(m,5H),4.8-4.4(2m,3H),3.95(m,1H),3.82(m,1H),3.72(d,1H),3.22,3.18,3.15,3.05和3.00(5s,9H),2.85-2.7(m,4H),2.45-1.6(m,12H),1.5-1.2(m,3H),1.1-0.7(m,21H)[進一步的訊號隱藏於溶劑波峰下].

中間物78

N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基 -L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物66於2階段，由20 mg(16 μmol)來自中間物14之化合物和6-側氧己基胺甲酸苄基酯開始，並以甲醇作為溶劑進行氫化所製備。

產率：7.6 mg(55%之理論值於2階段中)

HPLC(方法6)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.7 min；MS(ESI+)：m/z=901(M+H)⁺.

中間物79

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將36 mg(43 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物46)和4.6 mg(43 μmol)的苄基胺置於5 ml的DMF中處理，加入7.5 μl(88 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺、10 mg(65 μmol)的HOBt和10 mg(52 μmol)的EDC，及然後將混合物於RT攪拌至隔夜。隨後，將反 應混合物濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。得到29 mg(73%之理論值)Boc-保護的中間物N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

LC-MS(方法1)：R_t=1.43 min；m/z=921(M+H)⁺.

將29 mg的此中間物以1 ml的三氟乙酸溶於6 ml的二氯甲烷之溶液處理用以分離Boc保護基。濃縮及從二烷/水冷凍乾燥後，得到30 mg(定量)的游離胺中間物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。

LC-MS(方法1)：R_t=0.95 min；m/z=821(M+H)⁺.

然後使用17 mg(0.018 mmol)的此中間物，以類似中間物61之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到13 mg(80%之理論值)的標題化合物為無色泡沫之形式。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.97 min；MS(ESI+)：m/z=907(M+H)⁺.

中間物80

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物74中所述的合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和N-苄基-L-色胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物47)在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。使用10 mg(0.01 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由與4-側氧丁酸於氰基硼氫化鈉的存在下反應，得到2.5 mg(26%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.13 min；MS(ESI+)：m/z=946(M+H)⁺.

中間物81

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-胺甲醯基-2-苯基環丙烷]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物74中所述的合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙甲醯胺三氟乙酸鹽(中間物48)於O-(7-氮雜苯 并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-胺甲醯基-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用14 mg(0.0163 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到8 mg(57%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.64 min；MS(ESI+)：m/z=829(M+H)⁺.

中間物82

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物69中所述的合成，藉由N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)和N ^α-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物49)在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，並隨後以哌啶分離Fmoc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基 -1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用78 mg(0.088 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到68 mg(90%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.49 min；MS(ESI+)：m/z=856(M+H)⁺.

中間物83

N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物82中之化合物，由20 mg(26 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽開始，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應所製備。

產率：5 mg(25%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.72 min；MS(ESI+)：m/z=884(M+H)⁺.

中間物84

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(嗎福啉-4-基)-1-側氧-3-苯基 丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物79中所述的合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物46)和嗎福啉，於EDC和HOBT之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(嗎福啉-4-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用30 mg(0.033 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到22 mg(76%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.58 min；MS(ESI+)：m/z=887(M+H)⁺.

中間物85

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(苄基胺基)-3-羥基-1-側氧丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物79中所述的合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物46)和N-苄基-L-蘇胺醯胺三氟乙酸鹽，於HATU之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(苄基胺基)-3-羥基-1-側氧丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用21 mg(0.024 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到20 mg(97%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.54 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.49 min；MS(ESI+)：m/z=861(M+H)⁺.

中間物86

4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1- 第三 -丁氧基-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基](甲基)胺基}-3-甲基丁-2-基]胺基}-3-甲基-1-側氧丁-2-基](甲基)胺基}丁酸

首先，以類似中間物74中所述的合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和第三丁基-L-苯丙胺酸酯鹽酸鹽，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，得到第三丁基酯(與三氟乙酸於二氯甲烷中攪拌40分鐘)，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用22 mg(0.02 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到16 mg(94%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法9)：R_t=5.05 min；MS(ESI+)：m/z=874(M+H)⁺.

中間物87

4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基](甲基)胺基}-3-甲基丁-2-基]胺基}-3-甲基-1-側氧丁-2-基](甲基)胺基}丁酸

此化合物，係以類似中間物86中所述之合成，由230 mg(336 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和第三丁基-L-色胺酸酯鹽酸鹽開始於3階段所製備。

HPLC(方法5)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法9)：R_t=5.05 min；MS(ESI+)：m/z=913(M+H)⁺.

中間物88

N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物69中所述的合成，藉由N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)和N ^α-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物49)於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以哌啶分離Fmoc保 護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用30 mg(0.03 mmol)的此化合物，以類似中間物61化合物的製備，藉由與6-側氧己基胺甲酸苄基酯(其係事先將6-羥己基胺甲酸苄基酯氧化所得來)於氰基硼氫化鈉的存在下反應，得到17 mg(45%之理論值)的Z-保護化合物。隨後，在甲醇中於10%鈀/活性碳上氫解，得到標題化合物。

產率：14 mg(95%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.5 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.73 min；MS(ESI+)：m/z=869(M+H)⁺.

中間物89

N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物86中所述的合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和第三丁基-L-色胺酸酯鹽酸鹽，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，得到第三丁基酯(與1：10三氟乙酸/二氯甲烷攪拌30 min)，製備胺化合物N-甲基 -L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用71 mg(0.075 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由與6-側氧己基胺甲酸苄基酯(其係事先將6-羥基己基胺甲酸苄基酯氧化所得來)於氰基硼氫化鈉的存在下反應，得到35 mg(44%之理論值)的Z-保護化合物。隨後，在甲醇中於10%鈀/活性碳上氫解，得到標題化合物。

產率：30 mg(98%之理論值)

HPLC(方法5)：Rt=1.9 min；LC-MS(方法1)：Rt=0.77 min；MS(ESI+)：m/z=926(M+H)+.

中間物90

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物74中所述的合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和2-(1H-吲哚-3-基)乙胺，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1- 側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用100 mg(0.119 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到50 mg(49%之理論值)的標題化合物。將標題化合物於本處以快速層析於矽膠上以二氯甲烷/甲醇/17%氨水作為溶離劑純化，在此期間，混合比例從最初的15/2/02換成15/4/0.5。

HPLC(方法6)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=813(M+H)⁺.

中間物91

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-{(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-[(2-苯乙基)胺基]丙基}吡咯啶-1-基]-5-甲基-1-側氧庚-4-基}-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物74中所述的合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和苯乙基胺，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-{(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-[(2-苯乙基)胺基]丙基}吡咯啶-1-基]-5-甲基-1-側氧庚-4-基}-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。然後使用57 mg(0.071 mmol)的此化合物，以類似中間物61之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到44 mg(80%之理論值)的標題化合物。標題化合物亦可以快速層析於矽膠上以二氯甲烷/甲醇/17%氨水作為溶離劑(15/2/02->15/4/0.5)純化。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.64 min；MS(ESI+)：m/z=774(M+H)⁺.

中間物92

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

使用100 mg(0.139 mmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物40)，以類似中間物61之製備，藉由於氰基硼氫化鈉的存在下與4-側氧丁酸反應，得到94 mg(84%之理論值)的標題化合物。將標題化合物以製備式HPLC純化。

HPLC(方法5)：R_t=1.5 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.46 min；MS(ESI+)：m/z=804(M+H)⁺.

中間物93

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將22.4 mg(24 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽溶於1.4 ml的二烷/水，及以類似中間物61之製備，與15%的4-側氧丁酸水溶液於氰基硼氫化鈉的存在下反應。從二烷冷凍乾燥後，得到8.2 mg(38%之理論值)的標題化合物為白色固體之形式。

HPLC(方法10)：R_t=2.54 min LC-MS(方法12)：R_t=0.94 min；MS(ESI+)：m/z=919(M+H)⁺

中間物94

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將17.1 mg(18 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基 -1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽溶於1.1 ml的二烷/水，及類似中間物61之製備，與15%的4-側氧丁酸水溶液於氰基硼氫化鈉的存在下反應。從二烷冷凍乾燥後，得到14.8 mg(89%之理論值)的標題化合物為白色固體之形式。

HPLC(方法10)：R_t=2.54 min；LC-MS(方法12)：R_t=0.92 min；MS(ESI+)：m/z=919(M+H)⁺

中間物95

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將19.3 mg(20 μmol)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽溶於1.2 ml的二烷/水，及類似中間物61之製備，與15%的4-側氧丁酸水溶液於氰基硼氫化鈉的存在下反應。從二烷冷凍乾燥後，得到8.6 mg(45%之理論值)的標題化合物為白色固體之形式。

LC-MS(方法11)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=943(M+H)⁺

中間物96

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將15.5 mg(10 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽溶於1.0 ml的二烷/水中，及類似中間物61之製備，與15%的4-側氧丁酸水溶液於氰基硼氫化鈉的存在下反應。從二烷冷凍乾燥後，得到10.3 mg(68%之理論值)的標題化合物為白色固體之形式。

HPLC(方法10)：R_t=2.59 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.94 min；MS(ESI+)：m/z=877(M+H)⁺

中間物97

N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

標題化合物係以類似中間物66之合成，藉由200 mg(0.108 mmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物16)與6-側氧己基胺甲酸苄基酯之反應，及隨後將Z保護基氫解分離(以5%活性碳上鈀作為催化劑，以甲醇作為溶劑)所製備。

產率：69 mg(65%之理論值於二階段中)

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.76 min；MS(ESI+)：m/z=912(M+H)⁺.

中間物98

N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物，係以類似中間物80中所述之合成所製備。以製備式HPLC進行純化。

產率：40 mg(29%之理論值於3階段中)

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.92 min；MS(ESI+)：m/z=974(M+H)⁺.

中間物99

(2S)-2-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)丙-1-酮三氟乙酸鹽

將324 mg(0.81 mmol)的2,5-二側氧吡咯啶-1-基N-(第三丁氧基羰基)-L-色胺酸酯溶於20 ml的DMF，並加入200 mg(1.62 mmol)的1,2-烷鹽酸鹽(起始化合物5)和850 μl的N,N-二異丙基乙基胺。將反應混合物於50℃攪拌至隔夜及然後於減壓下濃縮。將殘餘物置於二氯甲烷中處理並以水萃取。將有機層以硫酸鎂乾燥並濃縮。將殘餘物以快速層析於矽膠上以4：1二氯甲烷/乙酸乙酯作為溶離劑純化。將產物溶離份濃縮並將殘餘物於高真空下乾燥。由此得到147.5 mg(48%之理論值)Boc-保護的中間物。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.03 min；MS(ESI+)：m/z=374(M+H)⁺.

使用166 mg(444.5 μmol)的此中間物，於標準條件下以3 ml三氟乙酸溶於20 ml二氯甲烷之溶液將Boc保護基分離，以HPLC純化後，得到155 mg(86%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.43 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.56 min；MS(ESI+)：m/z=274(M+H)⁺.

中間物100

N-(6-{[(苄氧基)羰基]胺基}己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將177 mg(260 μmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和100 mg(260 μmol)的(2S)-2-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)丙-1-酮三氟乙酸鹽(中間物99)置於15 ml的DMF中處理，並加入118 mg(310 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和140 μl的N,N-二異丙基乙基胺。將反應混合物於RT攪拌30 min，然後於減壓下濃縮，並將殘餘物以製備式HPLC純化。將產物溶離份組合並濃縮。從二烷冷凍乾燥後，得到170 mg(68%之理論值)Boc-保護的中間物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.36 min；m/z=940(M+H)⁺.

將170 mg的此中間物以3 ml三氟乙酸溶於30 ml二氯甲烷之溶液處理用以分離Boc保護基。然後反應混合物於減壓下濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化，得到155 mg(86%之理論值)去保護的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺中間物。

HPLC(方法12)：R_t=1.85 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=840(M+H)⁺.

然後使用50 mg(0.052 mmol)的此中間物，以類似中間物97之製備，與3-側氧己基胺甲酸苄基酯於氰基硼氫化鈉的存在下反應，及隨後將Z保護基氫解分離(以5%活性碳上鈀作為催化劑，以甲醇作為溶劑)，製備標題化合物。

產率：21 mg(37%之理論值)

HPLC(方法12)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.02 min；MS(ESI+)：m/z=1073(M+H)⁺.

中間物101

N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將26.7 mg(24.87 μmol)的中間物100溶於10 ml的甲醇並於鈀/活性碳(5%)上，於標準的氫氣壓下氫化30 min。將催化劑濾出並於減壓下蒸發溶劑。將殘餘物於高真空下乾燥後，得到22.5 mg(96%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.76 min；MS(ESI+)：m/z=939(M+H)⁺.

中間物102

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基 -2-甲基-3-{[(2S)-1-(嗎福啉-4-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物，係以類似中間物157中所述的合成，從N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(嗎福啉-4-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼所製備。

產率：8 mg(71%之理論值)

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=1094(M+H)⁺.

中間物103

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(苄基胺基)-3-羥基-1-側氧丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物，係以類似中間物157中所述的合成，從N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(苄基胺 基)-3-羥基-1-側氧丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼所製備。

產率：3 mg(22%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.78 min；MS(ESI+)：m/z=1069(M+H)⁺.

中間物104

N-{4-[(反式-4-{[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]羰基}環己基)胺基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，反式-4-胺基環己羧酸苄基酯三氟乙酸鹽係從反式-4-胺基環己羧酸藉由導入Boc保護基，然後導入苄基酯保護基及隨後以習用的胜肽化學法分離Boc保護基所製備。

然後將15 mg(18 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於5 ml的二甲基甲醯胺及隨後與13 mg(35 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、9 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與15 mg(44 μmol)的反式-4-胺基環己羧酸苄基酯三氟乙酸鹽混合。將混合物於RT攪拌至1 h及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份組合並於減壓下蒸發溶劑。將殘餘物於高真空下乾燥後，得到14.7 mg(78%之理論值)保護的中間物為 無色泡沫。

HPLC(方法6)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.95 min；MS(ESI+)：m/z=1072(M+H)⁺.

由此保護的中間物先將苄基酯以氫解法移除並得到一定產率之游離羧基組份。將14 mg(14 μmol；1 equiv.)的去保護化合物置於5 ml的DMF中處理並與3.3 mg(29 μmol；2.1 equiv.)的N-羥基琥珀醯亞胺在4.1 mg(21 μmol；1.5 equiv.)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、7.5 μl(44 μmol；3.1 equiv.)的N,N-二異丙基乙基胺和0.9 mg(7 μmol；0.5 equiv.)的4-二甲基胺基吡啶之存在下混合，及將混合物於RT攪拌至隔夜。然後另加入10當量的N-羥基琥珀醯亞胺、5當量的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、5當量的N,N-二異丙基乙基胺和0.5當量的4-二甲基胺基吡啶，並將反應混合物以超音波浴處理5 h。隨後，蒸發溶劑，將殘餘物以製備式HPLC純化並將對應的溶離份組合並濃縮，將殘餘物從二烷冷凍乾燥後，得到9.7 mg(62%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法6)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.77 min；MS(ESI+)：m/z=1078(M+H)⁺.

中間物105

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

製備此化合物，係以類似中間物157中所述的合成，從4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲 氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基](甲基)胺基}-3-甲基丁-2-基]胺基}-3-甲基-1-側氧丁-2-基](甲基)胺基}丁酸和市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼開始所製備。得到42%產率之酯中間物。在第二步驟，將6 mg(6 μmol)的此中間物以三氟乙酸裂解第三丁基酯。以HPLC純化後，得到3.4 mg(48%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.66 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.04 min；MS(ESI+)：m/z=1025(M+H)⁺.

中間物106

N-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將14 mg(16 μmol)的N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物88)置於750 μl的二烷中處理並與1.5 ml的飽和的碳酸氫鈉溶液及然後與3.2 mg(21 μmol)的2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯混合。將反應混合物於RT攪拌1 h及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後，得到5.5 mg(36%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.84 min；MS(ESI+)：m/z=949(M+H)⁺.

中間物107

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將38 mg(47 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於37 ml的DMF，及然後與71 mg(187 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和33 μl的N,N-二異丙基乙基胺及與37 mg(140 μmol)市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。將混合物於RT攪拌1 h。接著於高真空下濃縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到12.2 mg(26%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=1020(M+H)⁺.

中間物108

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-{(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-[(2-苯乙基)胺基]丙基}吡咯啶-1-基]-5-甲基-1-側氧庚-4-基}-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物，係類似中間物107中所製備。

產率：2.5 mg(30%之理論值)

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.9 min；MS(ESI+)：m/z=981(M+H)⁺.

中間物109

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物107，從中間物92所製備。

產率：35 mg(65%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.76 min；MS(ESI+)：m/z=1011(M+H)⁺.

中間物110

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物147，從中間物83中之化合物所製備。

產率：2.4 mg(24%之理論值)

HPLC(方法6)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=981(M+H)⁺.

中間物111

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-1-甲基肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物，係類似中間物140，從中間物82和中間物22所製備。

產率：6.5 mg(51%之理論值)

HPLC(方法6)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=4.71 min；MS(ESI+)：m/z=1077(M+H)⁺.

中間物112

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-胺甲 醯基-2-苯基環丙烷]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物157，從中間物81中之化合物所製備。

產率：5.7 mg(57%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=1036(M+H)⁺.

中間物113

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將95 mg(104 μmol)的4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基](甲基)胺基}-3-甲基丁-2-基]胺基}-3-甲基-1-側氧丁-2-基](甲基)胺基}丁酸溶於DMF，及然後與79.5 mg(209 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、73 μl的N,N-二異丙基乙基胺及與68 mg(261 μmol)市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。將混合物於RT攪拌2 h。接著於高真空下濃 縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到104 mg(89%之理論值)標題化合物之第三丁酯為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.93 min；MS(ESI+)：m/z=1121(M+H)⁺.

將中間物置於33.4 ml的二氯甲烷中處理，加入17 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌1 h。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。

由此得到61 mg(62%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=1064(M+H)⁺.

中間物114

N-[6-({[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將5 mg(5 μmol)的N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺置於885 μl的DMF中處理，並與5.3 mg(8 μmol)的2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基胺甲酸4-硝基苯基酯和2.8 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。將反應混合物於RT攪拌2 h及然後濃縮至乾。將殘餘物以製備式HPLC純化。

產率：0.58 mg(11%之理論值)為無色泡沫

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.83 min；MS(ESI+)：m/z=1035(M+H)⁺.

中間物115

N-{4-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係以類似中間物147中之化合物，從8 mg(9 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺開始所製備。濃縮後，將活化酯以製備式HPLC純化，於減壓下移除溶劑後，立即與抗體反應。

產率：3 mg(27%之理論值)(水解-敏感性)

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=996(M+H)⁺.

中間物116

N-{4-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯 啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物，係以類似中間物147中之化合物，從5 mg(6 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺開始所製備。濃縮後，將活化酯以製備式HPLC純化，於減壓下移除溶劑後，立即與抗體反應。

產率：3.2 mg(43%之理論值)(水解-敏感性)

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.92 min；MS(ESI+)：m/z=984(M+H)⁺.

中間物117

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物，係類似中間物157，從中間物86中之化合物所製備。

產率：7 mg(42%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min； LC-MS(方法1)：R_t=0.94 min；MS(ESI+)：m/z=1081(M+H)⁺.

中間物118

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2R)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

目標化合物，係類似中間物157，從7 mg(7.8 μmol)的中間物68之化合物所製備。產率：6.3 mg(53%之理論值)

LC-MS(方法1)：R_t=1.00 min；MS(ESI+)：m/z=1102(M+H)⁺.

中間物119

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將7.4 mg(8.1 mmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和6.3 mg(24.2 mmol)的 6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼鹽酸鹽偶合並類似中間物157進行處理。得到1.6 mg(13%之理論值)的標題化合物為一固體。

LC-MS(方法11)：R_t=0.89 min；MS(ESI+)：m/z=1126(M+H)⁺

中間物120

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將12.8 mg(13.9 mmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和10.9 mg(41.8 mmol)的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼鹽酸鹽偶合並類似中間物157進行處理。得到10.8 mg(59%之理論值)的標題化合物為一固體。

LC-MS(方法11)：R_t=0.90 min；MS(ESI+)：m/z=1126(M+H)⁺

中間物121

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將7.4 mg(7.9 mmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和6.2 mg(23.5 mmol)的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼鹽酸鹽偶合並類似中間物157進行處理。得到6.9 mg(74%之理論值)的標題化合物為一固體。

LC-MS(方法11)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=1150(M+H)⁺

中間物122

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3 E )-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將8 mg(9.1 mmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和7.2 mg(27.4 mmol)的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼鹽酸鹽偶合並類似中間物157進行處理。得到8.2 mg(82%之理論值)的標題化合物為白色固體。

LC-MS(方法11)：R_t=0.95 min；MS(ESI+)：m/z=1083(M+H)⁺

中間物123

N-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將30 mg(30 μmol)的中間物89置於2 ml的1,4-二烷中處理並與4 ml的飽和的碳酸氫鈉溶液混合，及然後與7.5 mg(50 μmol)的2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯混合。將反應混合物於RT攪拌1 h及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後，得到24 mg(74%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=2.2 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.01 min；MS(ESI+)：m/z=1006(M+H)⁺.

中間物124

N-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將22 mg(20 μmol)的中間物123與4 ml的三氟乙酸於8 ml的二氯甲烷中在RT下反應1 h。之後將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後，得到11 mg(54%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=950(M+H)⁺.

中間物125

N-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將22.5 mg(20 μmol)的中間物101置於2 ml的1：1二烷/水中處理，及然後與5.6 mg(40 μmol)的2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯和與0.25 ml的飽和的碳酸氫鈉溶液混合。將反應混合物於RT攪拌30 min。然後另加入0.25 ml的飽和碳酸氫鈉溶液並將反應混合物於RT再攪拌15 min及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後，得到12.8 mg(50%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.95 min；MS(ESI+)：m/z=1019(M+H)⁺.

中間物126

N-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將64 mg(70 μmol)的N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物97)置於3 ml的1：1二烷/水中處理，然後以4 ml的飽和的碳酸氫鈉溶液調整至pH 9，及隨後與16.3 mg(110 μmol)的2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯混合。將反應混合物於RT攪拌1 h及然後於減壓下濃縮。然後另加入8 mg(55 μmol)的2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯，並將反應混合物再次調整至pH 9及於RT再攪拌1小時。接著濃縮和以製備式HPLC將剩餘的殘餘物純化。首先得到31 mg尚未環化的中間物。將27 mg的此中間物再次置於2 ml的1：1二烷/水中處理，及然後與250 μl的飽和的碳酸氫鈉溶液混合。於RT攪拌2 h後，將反應混合物濃縮及將殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後，得到20 mg(29%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.96 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.97 min；MS(ESI+)：m/z=992(M+H)⁺.

中間物127

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將17 mg(18 μmol)的N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物98)溶於2.8 ml的二氯甲烷並與20 mg(174 mmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮混合，及然後與10 mg(52 μmol)的1-(3二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和0.21 mg(0.17 μmol)的DMAP混合。於RT攪拌4 h後，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後，得到8.2 mg(43%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.98 min；MS(ESI+)：m/z=1071(M+H)⁺.

中間物128

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將5 mg(5.6 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於845 μl的DMF及然後與3.2 mg(17 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、2.6 mg(17 μmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物、1.96 μl的N,N-二異丙基乙基胺及與5.9 mg(22.5 μmol)的市售6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。將混合物於RT攪拌至隔夜及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到2.2 mg(36%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.88 min；MS(ESI+)：m/z=1094(M+H)⁺.

中間物129

N-(6-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-6-側氧己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將4 mg(4.3 μmol)的N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基 -N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於646 μl的DMF及然後與2.5 mg(13 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、2.0 mg(13 μmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物、2.25 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與4.5 mg(17 μmol)的市售6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。將混合物於RT攪拌3 h及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到1.9 mg(39%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.9 min；MS(ESI+)：m/z=1134(M+H)⁺.

中間物130

N-(4-{[(2R)-1-({5-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-5-側氧戊醯基}胺基)丙-2-基]氧基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10.5 mg(11.7 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於3.7 ml的二氯甲烷，及然後與6.7 mg(35 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、0.7 mg(5.8 μmol)的4-二甲基胺基吡啶和與8.2 mg(47 μmol)的市售(2R)-2-羥丙基胺甲酸第三丁酯混合。將混合物於RT攪拌至隔夜，及然後於 高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到7.5 mg(61%之理論值)Boc-保護的中間物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.03 min；MS(ESI+)：m/z=1056(M+H)⁺.

隨後，將Boc保護基以三氟乙酸分離。然後將4.9 mg(0.005 mmol)去保護的粗產物於無純化下置於1.8 ml的二氯甲烷中處理並與3.7 mg(0.011 mmol)的1,1'-[(1,5-二側氧戊-1,5-二基)雙(氧基)]二吡咯啶-2,5-二酮、2.4 μl(0.014 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺和0.6 mg(5 μmol)的4-二甲基胺基吡啶。將混合物於RT攪拌2 h，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到0.77 mg(15%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.93 min；MS(ESI+)：m/z=1167(M+H)⁺.

中間物131

N-{4-[(1-{5-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-5-側氧戊醯基}哌啶-4-基)氧基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(11 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於2 ml的二氯甲烷 及然後與4.3 mg(22 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、0.88 mg(6 μmol)的4-二甲基胺基吡啶和與5.2 mg(22 μmol)的市售4-羥基哌啶-1-羧酸苄基酯混合。將混合物於RT攪拌至隔夜，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到5 mg(40%之理論值)Z-保護的中間物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.04 min；MS(ESI+)：m/z=1116(M+H)⁺.

隨後，將Z保護基以氫解法於乙醇中於鈀/活性碳上分離。然後將4.6 mg(0.005 mmol)去保護的粗產物，無進一步純化下，置於1.8 ml的二氯甲烷中處理並與3.8 mg(0.012 mmol)的1,1'-[(1,5-二側氧戊-1,5-二基)雙(氧基)]二吡咯啶-2,5-二酮、0.8 μl(0.005 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺和0.6 mg(5 μmol)的4-二甲基胺基吡啶混合。將混合物於RT攪拌至隔夜，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到0.96 mg(16%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.94 min；MS(ESI+)：m/z=1193(M+H)⁺.

中間物132

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將15 mg(16.7 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基 -3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於2500 μl的DMF及然後與9.6 mg(50 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、7.6 mg(50 μmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物、5.8 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與17.4 mg(67 μmol)市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。將混合物於RT攪拌至隔夜，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到11.2 mg(52%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.09 min；MS(ESI+)：m/z=1106(M+H)⁺.

中間物133

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將5.8 mg(6.3 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於943 μl的DMF及然後與3.6 mg(19 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、2.9 mg(19 μmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物、2.2 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與6.6 mg(25 μmol)市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。將混合物於RT 攪拌至隔夜，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到4.5 mg(64%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.03 min；MS(ESI+)：m/z=1129(M+H)⁺.

中間物134

N-[3-({[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)丙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基胺甲酸4-硝基苯基酯係於標準條件下，由市售的1-(2-胺基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮三氟乙酸鹽和氯碳酸4-硝基苯基酯開始來製備。

將5 mg(6 μmol)的N-(3-胺基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於1000 μl的DMF及然後與2 μl的N,N-二異丙基乙基胺並與2.2 mg(9 μmol)的2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基胺甲酸4-硝基苯基酯混合。將混合物於RT攪拌1 h，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到1.6 mg(23%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.09 min；MS(ESI+)：m/z=1036(M+H)⁺.

中間物135

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(11 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於4000 μl的DMF及然後與6.3 mg(33 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、4.5 mg(33 μmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物、5.7 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與11.5 mg(44 μmol)市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。將混合物於RT攪拌至隔夜，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到2.6 mg(14%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法6)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.01 min；MS(ESI+)：m/z=1115(M+H)⁺.

中間物136

N-(4-{4-[4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯胺]哌-1-基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，1-[4-側氧-4-(哌-1-基)丁基]-1H-吡咯-2,5-二酮三氟乙酸鹽係於標準條件下，由哌-1-羧酸第三丁酯和4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸開始於二階段所製備。

將5 mg(5.6 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於1000 μl的DMF及然後與2.1 mg(11 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1.7 mg(11 μmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物、2 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與3.5 mg(5.6 μmol)的1-[4-側氧-4-(哌-1-基)丁基]-1H-吡咯-2,5-二酮三氟乙酸鹽混合。將混合物於RT攪拌至隔夜。然後加入2.1 mg(5.6 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸並將反應混合物於RT另攪拌3 h。隨後，於減壓下移除溶劑並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮，並從水冷凍乾燥，得到0.6 mg(10%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法6)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.9 min；MS(ESI+)：m/z=1132(M+H)⁺.

中間物137

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-1-甲基肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N'-甲基己醯肼三氟乙酸鹽係於標準條件下，由市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸和1-甲基肼羧酸第三丁酯開始於2階段所製備。

將6.9 mg(8 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於2540 μl的DMF及然後與3.6 mg(9 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、3 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與4.1 mg(12 μmol)的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N'-甲基己醯肼三氟乙酸鹽混合。將混合物於RT攪拌至隔夜。隨後，於減壓下蒸發溶劑並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到3.9 mg(45%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.93 min；MS(ESI+)：m/z=1108(M+H)⁺.

中間物138

N-{4-[(2-{[4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯胺](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

從2-(甲基胺基)乙基胺甲酸第三丁基甲基酯和4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸開始，於二階段，先製備4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基-N-[2-(甲基胺基)乙基]丁醯胺三氟乙酸鹽。

將6.6 mg(7.3 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於2000 μl的DMF及然後與5.6 mg(14.7 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、2.6 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與4.1 mg(9 μmol)的4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基-N-[2-(甲基胺基)乙基]丁醯胺三氟乙酸鹽混合。於RT攪拌3 h後，再次加入相同量的HATU和N,N-二異丙基乙基胺，及然後將反應混合物於RT攪拌至隔夜。隨後，於減壓下蒸發溶劑並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到4 mg(44%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法6)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.91 min；MS(ESI+)：m/z=1134(M+H)⁺.

中間物139

(2R,3S)-3-胺基-4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7,10-二異丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧乙基)-5,11-二甲基-6,9-二側氧-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯

將13 mg(14.7 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於10 ml的二氯甲烷及然後與8.4 mg(44 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、5.4 mg(44 μmol)的4-二甲基胺基吡啶和與9 mg(29.3 μmol)市售的N-(第三丁氧基羰基)-L-蘇胺酸苄基酯混合。將混合物於RT攪拌5 h。隨後，將反應混合物以水震盪萃取二次並將有機層以硫酸鎂乾燥及於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從二烷/水冷凍乾燥後，得到14 mg(81%之理論值)保護的中間物為無色泡沫。

HPLC(方法12)：R_t=2.3 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.13 min；MS(ESI+)：m/z=1178(M+H)⁺.

隨後，將Z保護基以氫解法於甲醇中於10%鈀/活性碳上分離。然後將9.5 mg(0.0087 mmol)去保護的粗產物，無進一步純化下，置於5 ml的DMF中處理並與5 mg(26.2 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、4 mg(26.2 μmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物、54.6 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與9.1 mg(34.9 μmol)市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。將混合物於RT攪拌1 h，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從二烷冷凍乾燥後，得到9.5 mg(84%之理論值)Boc-保護的中間物。

HPLC(方法12)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.97 min；MS(ESI+)：m/z=1295(M+H)⁺.

隨後，將9.5 mg(7.3 μmol)以0.5 ml的三氟乙酸於2 ml的二氯甲烷中將Boc-保護的中間物去保護，從二烷冷凍乾燥後，得到9 mg(82%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法12)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.84 min；MS(ESI+)：m/z=1195(M+H)⁺.

中間物140

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-1-甲基肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將4.1 mg(12 μmol)的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N'-甲基己醯肼三氟乙酸鹽(中間物22)與6.9 mg(8 μmol)來自中間物61之化合物共同溶解於2.5 ml的DMF中，及然後與3.5 mg(9 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和3 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌至隔夜，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從二烷冷凍乾燥後，得到2.6 mg(30%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.90和0.91 min；MS(ESI+)：m/z=1120(M+H)⁺.

中間物141

N-[4-({1-[4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯胺]哌啶-4-基}氧基)-4-側氧丁基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將44 mg(49 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於2 ml的二氯甲烷及然後與18.8 mg(98 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、3.8 mg(24 μmol)的4-二甲基胺基吡啶和與23 mg(98 μmol)市售的4-羥基哌啶-1-羧酸苄基酯混合。將混合物於RT攪拌至隔夜，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到22 mg(40%之理論值)Z-保護的中間物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.04 min；MS(ESI+)：m/z=1116(M+H)⁺.

隨後，將Z保護基以氫解法於乙醇中於鈀/活性碳上分離。

然後將19 mg(19 μmol)去保護的粗產物，無進一步純化下，置於4 ml的DMF中處理並與7 mg(39 μmol)的4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸、11 mg(29 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和5 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌1 h，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從二烷冷凍乾燥後，得到7.5 mg(34%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.94 min；MS(ESI+)：m/z=1147(M+H)⁺.

中間物142

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧 基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將9 mg(9.5 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物72)溶於1000 μl的DMF及然後與10 mg(38 μmol)市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼、7.2 mg(19 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-t四甲基六氟磷酸和8 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合，並將反應混合物於RT攪拌1 h。隨後，於減壓下蒸發溶劑並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮並冷凍乾燥，得到6.4 mg(58%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.99 min；MS(ESI+)：m/z=1154(M+H)⁺.

中間物143

N-(4-{2-[4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯胺]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將6 mg(6.7 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物61)與3 mg(8.7 μmol)的4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯肼三氟乙酸鹽，類似中間物142反應，得到2 mg(27%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法3)：R_t=1.92 min；MS(ESI+)：m/z=1106(M+H)⁺.

中間物144

N-(4-{2-[4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯胺]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

於5 mg(5.6 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之1 ml的DMF溶液中加入7.65 mg(22.5 μmol)的4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基 丁醯肼三氟乙酸鹽、3.2 mg(16.9 μmol)的EDC、1.96 μl(11.3 μmol)的二異丙基乙基胺和2.6 mg(16.9 μmol)的HOBT。將反應混合物於RT攪拌3 h。隨後，另加入0.95 mg(2.8 μmol)的4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯肼三氟乙酸鹽。攪拌至隔夜後，將反應混合物濃縮及以製備式HPLC純化。得到3.5 mg(85%純度，48%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法3)：R_t=1.86 min；m/z=1094(M+H)⁺.

中間物145

N-[3-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將12 mg(14 μmol)的N-(3-胺基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物66)置於750 μl的二烷中處理並與1.5 ml的飽和的碳酸氫鈉溶液及然後與3.2 mg(21 μmol)的2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯混合。將反應混合物於RT攪拌1 h，及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後，得到4.2 mg(32%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.94 min；MS(ESI+)：m/z=950(M+H)⁺.

中間物146

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)胺基]-1-側氧-3-苯基丙-2-基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將9 mg(9.8 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)胺基]-1-側氧-3-苯基丙-2-基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物73)，類似中間物133與10 mg(39 μmol)的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼反應，得到1.8 mg(15%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.2 min；LC-MS(方法9)：R_t=5.11 min；MS(ESI+)：m/z=1128(M+H)⁺.

中間物147

N-{4-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將16 mg(17 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物70)溶於2 ml的二氯甲烷並與2.6 mg(23 mmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮及然後與4 mg(21 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽混合。於RT攪拌2 h後，再次加入相同量的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮和1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。然後於RT攪拌至隔夜，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後，得到10 mg(56%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=2.0 min；

中間物148

N-{4-[(2-{[4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯胺](甲基)胺基}乙基)胺基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將6 mg(7 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物61)與2.8 mg(8 μmol)的N-(2-胺基乙基)-4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丁醯胺三氟乙酸鹽、10.1 mg(27 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和5 μl的N,N-二異丙基乙基胺於2 ml的DMF中混合，並於RT攪拌至隔夜。然後另再加入5 mg(23.5 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和3 μl的N,N-二異丙基乙基胺。於RT再攪拌5 h後，於減壓下移除溶劑並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮並從二烷冷凍乾燥，得到1.3 mg(15%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.21 min；MS(ESI+)：m/z=1120(M+H)⁺.

中間物149

N-{4-[(2-{[4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯胺]胺基}乙基)(甲基)胺基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將6 mg(7 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物61)與3.1 mg(9 μmol)的4-(2,5-二側氧-2,5-二 氫-1H-吡咯-1-基)-N-[2-(甲基胺基)乙基]丁醯胺三氟乙酸鹽、10.1 mg(27 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸和5 μl的N,N-二異丙基乙基胺於2 ml的DMF中混合，並將混合物於RT攪拌4 h。然後於減壓下移除溶劑並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮並從二烷冷凍乾燥後，得到1 mg(13.4%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.89 min；MS(ESI+)：m/z=1121(M+H)⁺.

中間物150

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S,2R)-2-苯基-1-(丙基胺甲醯基)環丙烷]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將7.9 mg(9 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S,2R)-2-苯基-1-(丙基胺甲醯基)環丙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於3 ml的DMF及然後與10.4 mg(54 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、8.3 mg(54 μmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物、9 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與9.5 mg(36 μmol)市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。將混合物於RT攪拌至隔夜，及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到4.3 mg(22%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法6)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.93 min；MS(ESI+)：m/z=1078(M+H)⁺.

中間物151

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-胺甲醯基-2-苯基環丙烷]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

製備此化合物係類似中間物150，由中間物81之化合物來進行。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=1036(M+H)⁺.

中間物152

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(12 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於3 ml的DMF及然後與8.9 mg(23 μmol)的 O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、10 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與12 mg(47 μmol)市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。將混合物於RT攪拌1 h。接著於高真空下濃縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到5.8 mg(37%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法6)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.99 min；MS(ESI+)：m/z=1066(M+H)⁺.

中間物153

N-[1-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-12,15-二側氧-3,6,9-三氧-13,14-二氮十八烷-18-基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

於5 mg(5.6 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之1 ml的DMF溶液中加入9.7 mg(22.5 μmol)的3-(2-{2-[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷肼三氟乙酸鹽、3.2 mg(16.9 μmol)的EDC、1.96 μl(11.3 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺和2.6 mg(16.9 μmol)的HOBT。將反應混合物於RT攪拌3 h。隨後，另再加入1.2 mg(2.8 μmol)的3-(2-{2-[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷肼三氟乙酸鹽。將反應混合物於RT攪拌 至隔夜及然後以製備式HPLC純化。

LC-MS(方法1)：R_t=0.90 min；m/z=1185(M+H)⁺.

中間物154

(2R,3S)-3-胺基-4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7,10-二異丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧乙基)-5,11-二甲基-6,9-二側氧-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯

將15 mg(17 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S)-1-(1,2-烷-2-基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於10 ml的二氯甲烷及然後與12.8 mg(67 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、10 mg(83 μmol)的4-二甲基胺基吡啶和與10.3 mg(33 μmol)市售的N-(第三丁氧基羰基)-L-蘇胺酸苄基酯混合。將混合物加熱回流4 h。然後再次加入相同量的偶合劑和4-二甲基胺基吡啶，並將反應混合物加熱回流至隔夜。隨後，將反應混合物以二氯甲烷稀釋並以水震盪萃取一次，將有機層移出並於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到7.7 mg(37%之理論值)保護的中間物為無色泡沫。

HPLC(方法12)：R_t=2.5 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.13 min；MS(ESI+)：m/z=1190(M+H)⁺.

隨後，以氫化作用，於標準的氫氣壓下，於甲醇中於10%鈀/活性碳上移除苄基酯保護基，如中間物151中所述，將由此得到的酸與6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼混合。在最後步驟，以三氟乙酸分離Boc 保護基。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到0.22 mg(2.5%之理論值於3階段)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.81 min；MS(ESI+)：m/z=1207(M+H)⁺.

中間物155

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係以類似中間物152中所述之合成，由N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和市售6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼所製備。

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.82 min；MS(ESI+)：m/z=1024(M+H)⁺.

中間物156

N-(3-{[(1-{[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]羰基}環丙烷)羰基]胺基}丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係以類似中間物131最後階段中所述之合成，由N-(3-胺基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和1,1'-[環丙烷-1,1-二基雙(羰基氧基)]二吡咯啶-2,5-二酮(事先從對應的羧酸製得)所製備。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.92 min；MS(ESI+)：m/z=1080(M+H)⁺.

中間物157

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將15 mg(18 μmol)的(N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於3.8 ml的DMF及然後與27 mg(70 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、12 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與14 mg(53 μmol)市售的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H- 吡咯-1-基)己醯肼混合。將反應混合物於RT攪拌1 h。接著於高真空下濃縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到6.2 mg(33%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=1063(M+H)⁺.

¹H-NMR(500 MHz,DMSO-d_6,特徵訊號)：δ=10.8(d,1H),9.8-9.7(m,2H),9.6和9.4(2m,1H),8.9,8.88,8.78和8.75(4d,1H),8.08和7.85(2d,1H),7.6-6.9(m,9H),4.7-4.4(m,3H),3.4(t,2H),3.23,3.2,3.18,3.0，和2.99(5s,9H),2.8(m,3H),2.1(t,2H),1.06和1.01(2d,3H),0.95-0.8(m,15H),0.8-0.75(dd,3H).

中間物158

N-[4-({(2R)-1-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-4-甲基-1-側氧戊-2-基}胺基)-4-側氧丁基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將13 mg(14.7 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於4 ml的二甲基甲醯胺及然後與9.4 mg(25 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、6 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與7 mg(31 μmol)的市售D-白胺酸第三丁酯鹽酸鹽混合。將混合物於RT攪拌5 h及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從二烷/水冷凍乾燥後，得到6.5 mg(49%之理論值) 保護的中間物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=2.2 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.21 min；MS(ESI+)：m/z=1076(M+H)⁺.

先使用三氟乙酸於二氯甲烷中從保護的中間物分離Boc保護基，得到6.2 mg(99%之理論值)去保護的化合物。將5.2 mg(5 μmol)的此中間物置於1.5 ml的二氯甲烷中處理並與0.8 mg(7 μmol)的N-羥基琥珀醯亞胺於1.2 mg(6 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和0.16 mg(1 μmol)的4-二甲基胺基吡啶之存在下反應。於RT攪拌2 h後，將反應混合物濃縮並以製備式HPLC純化。得到1.3 mg的標題化合物，將其中某些水解成反應物。

中間物159

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係以類似中間物157中所述之合成，由N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和市售6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼所製備。

產率：6 mg(53%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.94 min；MS(ESI+)：m/z=1114(M+H)⁺.

中間物160

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係以類似中間物157中所述之合成，由20 mg(21 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和市售6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼所製備。

產率：13 mg(52%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.92 min；MS(ESI+)：m/z=1153(M+H)⁺.

中間物161

N-(6-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-6-側氧己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係以類似中間物157中所述之合成，由N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和市售6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼所製備。

產率：0.8 mg(16%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.78 min；MS(ESI+)：m/z=1092(M+H)⁺.

中間物162

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將18 mg(20 μmol)的N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物64)溶於3.2 ml 的二氯甲烷及然後與22 mg(190 mmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮混合，及然後與11 mg(60 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和0.24 mg(0.17 μmol)的DMAP混合。於RT攪拌2 h後，另加入22 mg(190 mmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮、11 mg(60 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和0.24 mg(0.17 μmol)的DMAP並將反應混合物於RT另攪拌1小時。接著於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後，得到8.2 mg(41%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.9 min；MS(ESI+)：m/z=1024(M+H)⁺.

中間物163

[(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷](1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基)甲酮三氟乙酸鹽

首先，從265 mg(0.82 mmol)的(1S,2R)-1-(羥基胺甲醯基)-2-苯基環丙基胺甲酸第三丁酯(起始化合物7)開始，藉由與1,2-雙(溴甲基)苯，以類似文獻方法(參見H.King,J.Chem.Soc.1942,432)反應，製備Boc-保護的(1S,2R)-1-(1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基羰基)-2-苯基環丙基胺甲酸第三丁酯中間物。

產率：108 mg(34%之理論值)

LC-MS(方法2)：R_t=1.3 min；MS(ESI+)：m/z=395(M+H)⁺.

將108 mg(0.27 mmol)的此中間物置於3.7 ml的二氯甲烷中處理，加入 1.8 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌15 min。接著於減壓下濃縮及將剩餘的殘餘物從二烷冷凍乾燥。得到定量產率112 mg的標題化合物為無色泡沫。

LC-MS(方法1)：R_t=0.7 min；MS(ESI+)：m/z=295(M+H)⁺.

中間物164

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將166 mg(0.196 mmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物10)置於40 ml的DMF中處理及連續與80 mg(0.196 mmol)的[(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙基](1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基)甲酮三氟乙酸鹽(中間物163)、112 mg(0.294 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和682 μl(3.9 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物隨後於RT攪拌至隔夜。然後將反應混合物於減壓下濃縮，將殘餘物置於乙酸乙酯中處理並以飽和的氯化鈉水溶液清洗溶液。將有機層以硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮。最後將殘餘物以製備式HPLC純化。以此法，得到19 mg(9%之理論值)Fmoc-保護的中間物N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯 基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

HPLC(方法5)：R_t=1.68 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.51 min；MS(ESI+)：m/z=1083(M+H)⁺.

將19 mg(0.015 mmol)的此中間物溶於4 ml的DMF。加入817 μl的哌啶後，將反應混合物於RT攪拌5 min。接著於減壓下濃縮，並將殘餘物先以乙醚處理及然後以製備式HPLC純化(溶離劑：乙腈+0.1% TFA/0.1% aq.TFA)。將對應的溶離份組合，於減壓下移除溶劑及然後將殘餘物從二烷/水冷凍乾燥。得到12 mg(92%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法6)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.94 min；MS(ESI+)：m/z=861(M+H)⁺.

中間物165

N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

使用20 mg(0.021 mmol)的中間物164，以類似中間物97之製備，與6-側氧己基胺甲酸苄基酯，於氰基硼氫化鈉之存在下，隨後以氫解分離Z保護基(以5%活性碳上鈀作為催化劑，以甲醇作為溶劑)，製備標題化合物。

產率：4.5 mg(23%之理論值於2階段中)

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.9 min；MS(ESI+)：m/z=960(M+H)⁺.

中間物166

N-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將4.4 mg(4.5 μmol)的中間物165置於1 ml的1：1二烷/水中處理及然後與1 mg(6.8 μmol)的2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯和與50 μl的飽和碳酸氫鈉水溶液混合。將反應混合物於RT攪拌30 min。然後另加入50 μl的飽和碳酸氫鈉水溶液並將反應混合物於RT另攪拌15 min，及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後，得到1 mg(21%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法12)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.08 min；MS(ESI+)：m/z=1040(M+H)⁺.

中間物167

3-{2-[2-(2-側氧乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸苄基酯

標題化合物係由6 g(21.55 mmol)市售的3-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸於標準條件下，先以苄基氯和碳酸銫酯化，及隨後以三氧化硫-吡啶複合物氧化所製備。

產率：611 mg(10%之理論值於2階段)

LC-MS(方法2)：R_t=1.69 min；MS(ESI+)：m/z=311(M+H)⁺.

中間物168

N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物69中所述的合成，藉由N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)和N ^α-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物49)，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以哌啶分離Fmoc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。

將25 mg(0.028 mmol)的此化合物和17.5 mg(0.06 mmol)的中間物167 於2 ml的甲醇混合，及與12.6 mg(0.14 mmol)的硼烷-吡啶複合物和2.5 ml的乙酸混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜。然後再次加入相同量的硼烷-吡啶複合物和乙酸並將反應混合物於RT另攪拌24 h。接著於減壓下濃縮，並將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮及從1：1二烷/水冷凍乾燥後，得到26.5 mg(88%之理論值)Z-保護的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.04 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.97 min；MS(ESI+)：m/z=1064(M+H)⁺.

將25 mg(0.024 mmol)的此中間物置於10 ml的甲醇中處理並於10%活性碳上鈀在標準氫氣壓下，於RT氫化45 min。然後將催化劑濾出並於減壓下移除溶劑。從二烷冷凍乾燥後，得到19.7 mg(85%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.83 min；MS(ESI+)：m/z=974(M+H)⁺.

中間物169

N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(10 μmol)的中間物168溶於3 ml的DMF並與3.5 mg(30 mmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮混合，及然後與2.4 mg(10 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和5 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。於RT攪拌20 h後，加入8 mg(0.02 mmol)的HATU並將反應混合物再次於RT攪拌至隔夜，及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。 從二烷冷凍乾燥後，得到8.6 mg(64%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：Rt=1.9 min；LC-MS(方法11)：Rt=0.81 min；MS(ESI+)：m/z=1071(M+H)+.

中間物170

N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物101於2階段，從26 mg(0.028 mmol)的中間物15開始所製備。

產率：16.7 mg(63%之理論值於2階段)

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.81 min；MS(ESI+)：m/z=914(M+H)⁺.

中間物171

N-(6-{[4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯胺]胺基}己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將6.7 mg(7.3 μmol)由中間物170所形成的化合物和3 mg(14.7 μmol)市售的4-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸置於2 ml的DMF中處理並與5.6 mg(14.7 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和2 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌30 min。將反應混合物濃縮及將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份組合，於減壓下移除溶劑及然後將殘餘物從二烷冷凍乾燥。由此得到4.5 mg(56%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.12 min；MS(ESI+)：m/z=1079(M+H)⁺.

中間物172

2-{2-[2-(2-側氧乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基胺甲酸苄基酯

標題化合物係由市售的2-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙醇於標準條件下，首先導入Z保護基及然後以三氧化硫-吡啶複合物氧化所製備。

HPLC(方法12)：R_t=1.4 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.65 min；MS(ESI+)：m/z=326(M+H)⁺.

中間物173

{2-[2-(2-側氧乙氧基)乙氧基]乙基胺甲酸苄基酯

標題化合物係類似中間物172，從市售2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙醇於標準條件下，首先導入Z保護基及然後以三氧化硫-吡啶複合物氧化所製備。

HPLC(方法12)：R_t=1.3 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.68 min；MS(ESI+)：m/z=282(M+H)⁺.

中間物174

N-(2-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將47 mg(0.05 mmol)的中間物16以類似中間物167之製備，與2-{2-[2-(2-側氧乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基胺甲酸苄基酯，在硼烷-吡啶複合物之存在下進行還原性胺化。隨後，以氫解法以5%活性碳上鈀作為催化劑及以甲醇作為溶劑移除Z保護基，製備38 mg(66%之理論值於2階段)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.8 min；MS(ESI+)：m/z=988(M+H)⁺.

中間物175

N-[2-(2-{2-[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備係類似中間物166，由34 mg(0.03 mmol)的中間物174開始來進行。

產率：8.3 mg(23%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.97 min；MS(ESI+)：m/z=1068(M+H)⁺.

中間物176

N-(2-{2-[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備係類似中間物174和175，由中間物16與中間物173之還原性胺化作用開始，隨後去保護及形成馬來醯亞胺來進行。

HPLC(方法12)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.8 min；MS(ESI+)：m/z=981(M+H)⁺.

中間物177

N-[2-(2-{2-[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備係類似中間物174和175，由中間物16與中間物172之還原性胺化作用開始，隨後去保護及形成馬來醯亞胺來進行。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=1025(M+H)⁺.

中間物178

N-{4-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備係類似中間物162，由6 mg的中間物82開始來進行。

LC-MS(方法1)：R_t=0.82 min；MS(ESI+)：m/z=953(M+H)⁺.

中間物179

4-[(1E,3S)-3-胺基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟乙酸鹽

將13.6 mg(0.06 mmol)的乙酸鈀(II)、469 mg(1.46 mmol)的4-碘苯磺酸鉀、300 mg(1.21 mmol)的(S)-第三丁基1-苯基丁-3-烯-2-基胺甲酸酯、16.5 mg(0.12 mmol)的苯基尿素和167.6 mg(1.21 mmol)的碳酸鉀於7.5 ml的DMF中之混合物以微波加熱至160℃歷時15 min。隨後將粗產物直接以製備式HPLC純化。得到312 mg的31%Boc-保護化合物和69%游離胺之混合物。

隨後將混合物置於30 ml的二氯甲烷中處理，與1 ml的三氟乙酸混和並於RT攪拌20 h。於減壓下濃縮後，將殘餘物與乙醚攪拌，並將形成的沉澱抽氣過濾出並以乙醚清洗。由此得到200 mg(62%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法11)：R_t=0.44 min；MS(ESI+)：m/z=304(M+H)⁺.

中間物180

4-[(3R)-3-胺基-4-苯基丁基]苯磺酸

將100 mg(0.25 mmol)的4-[(1E,3S)-3-胺基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟乙酸鹽懸浮於10 ml的乙酸和數滴的DMF及水中，與70 mg(0.07 mmol)的碳上鈀(10%)混合，及於2.2巴(bar)的氫氣壓氫化24 h。將溶液過濾並以 製備式HPLC純化濾液。

得到29 mg(76%純度，21%之理論值)的產物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.46 min；MS(ESI+)：m/z=306(M+H)⁺.

中間物181

N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

於90 mg(0.13 mmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之4 ml的DMF溶液中加入60 mg(0.16 mmol)的HATU和69 μl的(0.39 mmol)Hünig鹼。將反應混合物於RT攪拌30 nim及然後與60 mg(0.15 mmol)60.3 mg(0.13 mmol)的4-[(1E,3S)-3-胺基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟乙酸鹽混合。攪拌至隔夜後，將反應混合物以製備式HPLC純化。由此得到127 mg的標題化合物和已去保護胺之44：56混合物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.21 min；MS(ESI+)：m/z=971(M+H)⁺；R_t=0.84 min；去保護地化合物：MS(ESI+)：m/z=871(M+H)⁺

中間物182

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將90 mg的中間物180溶於4.6 ml的二氯甲烷並加入0.92 ml的三氟乙酸。將反應混合物於RT攪拌30 min及然後濃縮。將得到的粗產物以製備式HPLC純化。

得到91 mg(98%之理論值)的目標化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=871(M+H)⁺

中間物183

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將16.7 μl(0.03 mmol)的15%琥珀醛水溶液先倒入943 μl的甲醇中並與17 mg(0.02 mmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物181)及1.1 μl(0.02 mmol)的乙酸混合。將反應混合物於RT攪拌5 min，及然後加入2.9 μl(0.02 mmol)的硼烷-吡啶複合物。1 h後，另加入各2當量的琥珀醛、乙酸和硼烷-吡啶複合物，並將混合物於RT攪拌20 h。然後將反應混合物以製備式HPLC純化。

由此得到20 mg(83%純度，80%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=957(M+H)⁺

中間物184

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將8 mg(7.5 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺、2.8 mg(8.2 μmol)的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼三氟乙酸鹽、3.4 mg(9 μmol)的HATU和3.9 μl的Hünig鹼於0.77 ml的DMF中於RT攪拌20 h。隨後，將反應混合物以製備式HPLC純化。

得到3 mg(31%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.90 min；MS(ESI+)：m/z=1164(M+H)⁺

中間物185

N-{4-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

於8 mg(7.5 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之2 ml的DMF溶液中加入8.6 mg(74.8 μmol)的N-羥基琥珀醯亞胺、8.5 mg(22.4 μmol)的EDCI和0.1 mg(0.75 μmol)的DMAP。將反應混合物於RT攪拌20 h。隨後，加入1.3 μl(7.5 μmol)的Hünig鹼並將混合物於RT攪拌1 h。然後將反應混合物以製備式HPLC純化。得到2.6 mg(72%純度，21%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.89 min；MS(ESI+)：m/z=1054(M+H)⁺

中間物186

N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

於43 mg(0.06 mmol)的N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之1.9 ml的DMF溶液中加入29 mg(0.07 mmol)的HATU和33 μl(0.19 mmol)的Hünig鹼。將反應混合物於RT攪拌30 min及然後與29 mg(0.07 mmol)的4-[(3R)-3-胺基-4-苯基丁基]苯磺酸三氟乙酸鹽混合。攪拌至隔夜後，將反應混合物以製備式HPLC純化。由此得到58 mg的標題化合物和已去保護胺之45：55混合物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.09 min；MS(ESI+)：m/z=973(M+H)⁺；R_t=0.87 min；去保護的化合物：MS(ESI+)：m/z=873(M+H)⁺

中間物187

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將58 mg的中間物186溶於4.1 ml的二氯甲烷，加入0.41 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌30 min。於減壓下濃縮後，將粗產物以製備式HPLC純化。

得到50 mg(90%純度，85%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=873(M+H)⁺

中間物188

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將171 μl(0.26 mmol)的15%琥珀醛水溶液先倒入2.5 ml的甲醇中並與50 mg(0.05 mmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽和11.6 μl(0.2 mmol)的乙酸混合。將反應混合物於RT攪拌5 min及然後加入30 μl(0.24 mmol)的硼烷-吡啶複合物。攪拌24小時後，另加入一當量的硼烷-吡啶複合物並將混合物另再攪拌2 h。然後將反應混合物以製備式HPLC純化。

得到40 mg(90%純度，66%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.91 min；MS(ESI+)：m/z=959(M+H)⁺

中間物189

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(9.3 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺、3.5 mg(10.3 μmol)的6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼三氟乙酸鹽、4.3 mg(11.2 μmol)的HATU和4.9 μl(28 μmol)的Hünig鹼於1 ml的DMF中於RT攪拌20 h。隨後，將反應混合物以製備式HPLC純化。

得到4.2 mg(92%純度，33%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.91 min；MS(ESI+)：m/z=1166(M+H)⁺

中間物190

N-{4-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

於10 mg(9.3 μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之2.5 ml的DMF溶液中加入10.7 mg(93 μmol)的N-羥基琥珀醯亞胺、10.6 mg(28 μmol)的EDCI和0.12 mg(0.9 μmol)的DMAP。將反應混合物於RT攪拌20及然後以製備式HPLC純化。

得到3.8 mg(72%純度，25%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.90 min；MS(ESI+)：m/z=1055(M+H)⁺

中間物191

(2R,3R)-N-[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟乙酸鹽

標題化合物類似中間物7之合成於2階段，由起始化合物1和(2S)-2-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)丙-1-同三氟乙酸鹽(中間物99)所製備。

產率於2階段：62 mg(67%之理論值)

HPLC(方法6)：R_t=1.65 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.7 min；MS(ESI+)：m/z=443(M+H)⁺.

中間物192

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將1015 mg(1.59 mmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)置於50 ml的DMF中處理，與654 mg(2.39 mmol)的2-溴-1-乙基四氟硼酸吡錠(BEP)和2.8 ml的N,N-二異丙基乙基胺混合，並於RT攪拌。然後加入1083 mg(1.75 mmol)的(2R,3R)-N-[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟乙酸鹽(中間物191)及然後將混合物於RT以超音波浴處理30 min。然後將反應混合物於減壓下濃縮並將殘餘物置於300 ml的乙酸乙酯中處理。將有機層連續以5%檸檬酸水溶液和5%碳酸氫鈉水溶液震盪清洗，以硫酸鎂乾燥，過濾及濃縮。將由此得到的粗產物(1684 mg)，無進一步純化下，置於20 ml的乙腈中處理，加入2 ml的哌啶及然後將反應混合物於RT攪拌10 min。然後將混合物於減壓下濃縮並將殘餘物與乙醚混合。以蒸發再次將溶劑濃縮並將殘餘物以快速層析於矽膠上純化(溶離劑：15：1：0.1->15：2：0.2二氯甲烷/甲醇/17%氨水溶液)。將對應的溶離份組合，於減壓下移除溶劑並將殘餘物從乙腈/水冷凍乾燥後。由此得到895 mg(67%於2階段)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.84 min；MS(ESI+)：m/z=840(M+H)⁺.

¹H NMR(500 MHz,DMSO-d₆)：δ=10.8(d,1H),8.3和8.05(2d,1H),8.0(d,1H),7.5(m,1H),7.3(m,1H),7.15和7.08(2s,1H)7.05-6.9(m,2H),5.12和4.95(2m,1H),4.65(m,1H),4.55(m,1H),4.1-3.8(m,4H),3.75(d,1H),3.23,3.18,3.17,3.12,2.95和2.88(6s,9H),3.1-3.0和2.85(2m,2H),2.65(d,1H),2.4-2.2(m,3H),2.15(m,3H),1.95(br.m,2H),1.85-0.8(br.m,11H),1.08和1.04(2d,3H),0.9-0.75(m,15H),0.75-0.65(dd,3H)[進一步的訊號隱藏於H2O波峰下].

中間物193

N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷 -2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將50 mg(0.052 mmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物192)和204 μl 15%的4-側氧丁酸水溶液置於2 ml的甲醇中混合，並與23.4 mg(0.252 mmol)的硼烷-吡啶複合物和6 μl的乙酸混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜。接著於減壓下濃縮，並將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮後，得到38 mg(78%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法9)：R_t=4.7 min；MS(ESI+)：m/z=926(M+H)⁺.

中間物194

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物157中所述之合成，從10 mg(11 μmol)的N-(3- 羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和市售6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯肼所製備。

產率：4.4 mg(35%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.90 min；MS(ESI+)：m/z=1133(M+H)⁺.

中間物195

N-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物166，從9 mg(0.010 mmol)的中間物170開始所製備。

產率：1.1 mg(10%之理論值)

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.99 min；MS(ESI+)：m/z=994(M+H)⁺.

中間物196

(2S)-2-胺基-1-(2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-3-苯基丙-1-酮三氟乙酸鹽

將41 mg(0.37 mmol)的2,5-二側氧吡咯啶-1-基N-(第三丁氧基羰基)-L-苯丙胺酸酯置於10 ml的DMF中處理並與149 mg(0.41 mmol)的2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯(起始化合物6)和72 μl(0.41 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌1 h。於減壓下移除溶劑並將殘餘物置於乙酸乙酯中處理，以5%檸檬酸水溶液及然後以5%碳酸氫鈉水溶液震盪萃取。將有機層濃縮並將殘餘物以快速層析於矽膠上以10：1甲苯/乙醇作為溶離劑純化。將對應的溶離份組和並於減壓下移除溶劑。將殘餘物於高真空下乾燥後，得到69 mg(47%之理論值)Boc-保護的中間物(2S)-1-(2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基胺甲酸第三丁酯為非對映異構物混合物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.1 min；MS(ESI+)：m/z=359(M+H)⁺.

將64 mg(0.18 mmol)的此中間物置於10 ml的二氯甲烷中處理，加入1 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌30 min。接著於減壓下濃縮並將剩餘的殘餘物從水/二烷冷凍乾燥。由此法得到66 mg(定量)的標題化合物為泡沫。

HPLC(方法6)：R_t=1.45 min；LC-MS(方法3)：R_t=1.12 min；MS(ESI+)：m/z=259(M+H)⁺.

中間物197

(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟乙酸鹽

首先，藉由於乙酸乙酯中處理及以5%硫酸氫鉀水溶液震盪萃取，將(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)從其83 mg(0.18 mmol)的二環己基胺鹽中釋放出。將有機層以硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物置於10 ml的DMF中處理，並連續與66 mg(0.18 mmol)的(2S)-2-胺基-1-(2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-3-苯基丙-1-酮三氟乙酸鹽(中間物196)、101 mg(0.266 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和93 μl(0.53 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌30 min。然後將反應混合物濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到52 mg(56%之理論值)Boc-保護的中間物(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-羧酸第三丁酯。

HPLC(方法6)：R_t=2.13 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.13 min；MS(ESI+)：m/z=528(M+H)⁺.

將52 mg(0.1 mmol)的此中間物置於10 ml的二氯甲烷中處理，加入1 ml的三氟乙酸並將混合物於RT攪拌20 min。接著於減壓下濃縮並將剩餘的殘餘物與20 ml的乙醚攪拌。10 min後，將混合物過濾並將濾液於高真空下乾燥。於此法得到39 mg(72%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法6)：R_t=1.62 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.68 min；MS(ESI+)：m/z=428(M+H)⁺.

中間物198

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺 基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將44.5 mg(0.071 mmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)置於10 ml的DMF中處理並連續與38.6 mg(0.071 mmol)的(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟乙酸鹽(中間物197)、32.5 mg(0.086 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和41 μl(0.235 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌1 h。然後將反應混合物於減壓下濃縮並將殘餘物置於乙酸乙酯中處理。將有機層連續以5%檸檬酸水溶液和5%碳酸氫鈉水溶液清洗，以硫酸鎂乾燥，過濾及濃縮。由此得到73 mg(98%之理論值)Fmoc-保護的中間物N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

HPLC(方法6)：R_t=2.78 min；LC-MS(方法3)：R_t=2.96 min；MS(ESI+)：m/z=1047(M+H)⁺.

將73 mg(0.071 mmol)的此中間物溶於5 ml的DMF。加入0.5 ml的哌啶後，將反應混合物於RT攪拌10 min，接著於減壓下濃縮，並將殘餘物重複以乙醚處理。將乙醚傾析出後，將殘餘物以製備式HPLC純化(溶離劑：乙腈/0.1% aq.TFA)。得到16 mg(26%之理論值)的標題化合物為泡沫。

HPLC(方法6)：R_t=1.94 min；LC-MS(方法3)：R_t=1.71 min；MS(ESI+)：m/z=825(M+H)⁺

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)：δ=8.9-8.6(m,3H),8.4,8.3,8.1和8.0(4d,1H),7.3-7.1(m,5H),6.7-6.5(m,2H),5.2-4.8(m,3H),4.75-4.55(m,3H),4.05-3.95(m,1H),3.7-3.4(m,4H),3.22,3.17,3.15,3.05,3.02和2.95(6s,9H),3.0和2.7(2 br.m,2H),2.46(m,3H),2.4-1.2(br.m,13H),1.1-0.85(m,18H),0.75(m,3H)[進一步的訊號隱藏於H2O波峰下].

中間物199

N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

標題化合物係類似中間物193和194，從23 mg(24 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧-3-吖雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物198)開始所製備。

HPLC(方法12)：Rt=1.9 min；LC-MS(方法2)：Rt=2.1 min；MS(ESI+)：m/z=1118(M+H)+.

中間物200

N-[2-(2-{2-[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙 基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備係類似中間物174和175，以中間物192與中間物172之烷化作用開始，隨後去保護及形成馬來醯亞胺來進行。

HPLC(方法12)：Rt=1.9 min；LC-MS(方法1)：Rt=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=1025(M+H)+.

中間物201

N-{6-[(溴乙醯基)胺基]己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將22 mg(0.023 mmol)的N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物101)溶於9.5 ml的THF並於0℃與4.2 μl的三乙胺混合。逐滴加入溴乙醯氯之THF溶液並將反應混合物於0℃攪拌30 min。將反應混合物濃縮並將殘餘物以製備式 HPLC純化。由此得到6.9 mg(26%之理論值)的標題化合物為泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.9 min；MS(ESI+)：m/z=1059和1061(M+H)⁺.

中間物202

N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備首先係類似中間物168，由中間物192與中間物167之還原烷化作用開始，及隨後氫解性裂解N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之苄基酯來進行。

將13 mg(10 μmol)的此中間物溶於5 ml的DMF並與2.1 mg(20 mmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮、6.5 μl的N,N-二異丙基乙基胺和7.1 mg(0.02 mmol)的HATU混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從乙腈/水冷凍乾燥後，得到9.2 mg(62%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法2)：R_t=2.1 min；MS(ESI+)：m/z=1141(M+H)⁺.

中間物203

6-肼基-6-側氧己基胺甲酸第三丁酯

此化合物係以標準的胜肽化學法，藉由6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己酸與苄基肼羧酸酯在EDCI和HOBT之存在下偶合，及隨後氫解性裂解苄氧基羰基保護基所製備。

LC-MS(方法11)：R_t=0.59 min；MS(ESI+)：m/z=246(M+H)⁺.

中間物204

N-{4-[2-(6-胺基己醯基)肼基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將146 mg(50 μmol)的(N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶於5 ml的DMF及然後與30.6 mg(80 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、19 μl的N,N-二異丙基乙基胺和與22.4 mg(60 μmol)的6-肼基-6-側氧己基胺甲酸第三丁酯混合。將反應混合物於RT攪拌1.5 h。接著於高真空下濃縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到43 mg(68%之理論值)保護的中間物，然後將其置於10 ml的二氯甲烷中處理並以1 ml的三氟乙酸去保護。將反應混合物濃縮並將殘餘物與二氯甲烷攪拌，再次於減壓下移除溶劑。由此得到45 mg(68%之理論值於2階段)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.66 min；MS(ESI+)：m/z=983(M+H)⁺.

中間物205

N-(4-{2-[6-({[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物114，從中間物50和204開始所製備。

產率：4 mg(78%之理論值)

HPLC(方法12)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.73 min；MS(ESI+)：m/z=1149(M+H)⁺.

中間物206

N-(6-{[3-({3-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧丙基}二硫基)丙醯基]胺基}己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將8 mg(10 μmol)的中間物101溶於2 ml的DMF並與8.6 mg(20 μmol) 的1,1'-{二對胺苯磺醯基雙[(1-側氧丙-3,1-二基)氧基]}二吡咯啶-2,5-二酮和3.7 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。將反應混合物於RT攪拌2 h及然後於減壓下蒸發溶劑並將殘餘物以製備式HPLC純化。得到7.2 mg(68%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.94 min；MS(ESI+)：m/z=615[½(M+2H⁺]

中間物207

(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸三氟乙酸鹽

將210 mg(0.76 mmol)市售的(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙羧酸以三氟乙酸去保護，得到定量產率之標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.23 min；MS(ESI+)：m/z=178(M+H)⁺.

中間物208

6-側氧己基胺甲酸9H-茀-9-基甲基酯

標題化合物係由1 g(2.95 mmol)市售的9H-茀-9-基甲基6-羥基己基胺甲酸酯於標準條件下，以三氧化硫-吡啶複合物氧化所製備。得到840 mg(85%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.1 min；MS(ESI+)：m/z=338(M+H)⁺.

中間物209

N-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羧基-2-苯基環丙烷]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以類似中間物75中所述之合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸三氟乙酸鹽(中間物207)於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羧基-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。

然後於22 mg(0.026 mmol)的此化合物之10 ml的甲醇溶液中加入17 mg(0.05 mmol)的9H-茀-9-基甲基6-側氧己基胺甲酸酯(中間物208)和2.3 mg的乙酸以及11.4 mg(0.12 mmol)的硼烷-吡啶複合物。將反應混合物於RT攪拌至隔夜。然後再次加入相同量之硼烷-吡啶複合物和乙酸以及8 mg的茀-9-基甲基6-側氧己基胺甲酸酯，並將反應混合物於RT另再攪拌24 h小時。接著於減壓下濃縮，並將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃 縮後，立即將此產物用於下個階段。

將33 mg仍帶有雜質之中間物置於5 ml的DMF中處理，並加入1 ml的哌啶。於RT攪拌15 min後，將反應混合物濃縮並將生成的殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到11 mg(55%之理論值於2階段)的胺基羧酸中間物。

HPLC(方法12)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.7 min；MS(ESI+)：m/z=843(M+H)⁺.

將6 mg(7.12 μmol)的此中間物置於1 ml的二烷中處理及然後與6.6 mg(42.7 μmol)的2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯和與5 μl的飽和碳酸氫鈉水溶液混合。將反應混合物於RT攪拌1 h。然後加入另3份各50 μl的飽和碳酸氫鈉水溶液並將反應混合物於RT另再攪拌30 min。然後將反應混合物以三氟乙酸酸化至pH 2，及隨後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。以乙腈/水冷凍乾燥後，得到4 mg(60%之理論值)的標題化合物為泡沫。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.88 min；MS(ESI+)：m/z=923(M+H)⁺.

中間物210

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，以文獻方法製備6-側氧己酸(J.Org.Chem.58,1993,2196-2200)。 將80 mg(0.08 mmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物192)和65.4 mg(0.5 mmol)的6-側氧己酸於9 ml的甲醇中混合，並與10 μl的乙酸和37.4 mg(0.4 mmol)的硼烷-吡啶複合物混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜。接著於減壓下濃縮並將殘餘物置於1：1乙腈/水中處理，及以三氟乙酸調整至pH 2。將反應混合物再次濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮後，得到70 mg(86%之理論值)的N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=955(M+H)⁺.

¹H NMR(500 MHz,DMSO-d_6,特徵訊號)：δ=12.0(br.M,1H),10.8(s,1H),9.4(m,1H),8.9和8.8(2d,1H),8.3和8.02(2d,1H),7.5(m,1H),7.3(m,1H),7.15和7.1(2s,1H)7.05-6.9(m,2H),5.12和4.95(2m,1H),4.7-4.5(m,2H),4.1-3.8(m,4H),3.75(d,1H),3.25,3.2,3.18,3.13,2.98和2.88(6s,9H),2.8(m,3H),1.08和1.04(2d,3H),0.95-0.8(m,15H),0.8-0.65(dd,3H).

將22 mg(23 μmol)的此中間物溶於1.8 ml的二氯甲烷並與13.2 mg(70 μmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、26.5 mg(230 μmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮和0.28 mg(2 μmol)的二甲基胺基吡啶混合，並和將反應混合物於RT攪拌2 h。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從乙腈/水冷凍乾燥後，得到21.3 mg(88%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.94 min；MS(ESI+)：m/z=1052(M+H)⁺.

中間物211

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

類似中間物210，將15 mg(20 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物15)以6-側氧己酸進行還原性烷化。

產率：9.2 mg(61%之理論值)

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=929(M+H)⁺.

將9 mg(10 μmol)的此中間物溶於3 ml的DMF並與5.6 mg(48 μmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮、5 μl的N,N-二異丙基乙基胺和5.5 mg(0.015 mmol)的HATU混合，及將反應混合物於超音波浴中處理6 h。在此期間，每小時加入5.5 mg的HATU。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮，及將殘餘物置於乙腈/水中處理並以三氟乙酸調整至pH2。再次於減壓下濃縮後，將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從乙腈/水冷凍乾燥後，得到5.8 mg(57%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.95 min；MS(ESI+)：m/z=1027(M+H)⁺.

中間物212

N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備首先係類似中間物168，由中間物15與中間物167之還原烷化作用開始，及隨後氫解性裂解N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之苄基酯來進行。

將8.4 mg(8 μmol)的此中間物溶於3 ml的DMF並與9.5 mg(80 μmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮、10 μl的N,N-二異丙基乙基胺和9.4 mg(25 μmol)的HATU混合，並將反應混合物於RT攪拌至隔夜及然後於減壓下濃縮。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘餘物置於乙腈/水中處理並以三氟乙酸調整至pH 2。再次於減壓下濃縮後，將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從乙腈/水冷凍乾燥後，得到4 mg(32%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.96 min；MS(ESI+)：m/z=1117(M+H)⁺.

中間物213

N-{6-[(反式-4-{[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]羰基}環己基)胺基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲 哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物104，從N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(其合成係描述於中間物210中)開始所製備。得到9.3 mg的標題化合物(37%之理論值於3階段)。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.9 min；MS(ESI+)：m/z=1177(M+H)⁺.

中間物214

N-{4-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物210，藉由將中間物92轉變為活性酯所製備。

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.82 min；MS(ESI+)：m/z=901(M+H)⁺.

中間物215

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，類似中間物183，使用中間物40，以硼烷-吡啶複合物來製備N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。然後從該化合物，類似中間物210，產生活性酯。得到34 mg(36%之理論值於2階段)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=930(M+H)⁺.

中間物216

N-(4-{[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]羰基}苄基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，類似中間物183之製備，將中間物192與4-甲醯基苯甲酸與硼烷-吡啶複合物反應，得到N-(4-羧基苄基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。然後使用此化合物，類似中間物210，產生11 mg(68%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.13 min；MS(ESI+)：m/z=1072(M+H)⁺.

中間物217

N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將53 mg(84 μmol)的N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物4)和45 mg(84 μmol)的N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-苯丙胺酸苄基酯三氟乙酸鹽(中間物12)置於2 ml的DMF中處理，並加入19 μl的N,N-二異丙基乙基胺、14 mg(92 μmol)的HOBt和17.6 mg(92 μmol)的EDC，及然後將混合物於RT攪拌至隔夜。隨後，將反應混合物濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到59 mg(68%之理論值)Fmoc-保護的中間物N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。

LC-MS(方法1)：R_t=1.55 min；m/z=1044(M+H)⁺.

將57 mg(0.055 mmol)的此中間物以1.2 ml哌啶於5 ml的DMF中處理，用以分離Fmoc保護基。濃縮及以製備式HPLC純化後，得到39 mg(76%之理論值)的游離胺中間物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟乙酸鹽。

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.01 min；m/z=822(M+H)⁺.

將60 mg(0.06 mmol)的此中間物，類似中間物210，與6-側氧己酸於硼烷-吡啶複合物之存在下反應。得到45 mg(75%之理論值)的標題化合物為泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.97 min；MS(ESI+)：m/z=9936(M+H)⁺.

中間物218

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係藉由將42 mg(0.05 mmol)的中間物217轉變為活性酯所製備。

產率：26 mg(54%)

HPLC(方法5)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.01 min；MS(ESI+)：m/z=1034(M+H)⁺.

中間物219

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將20 mg(0.02 mol)來自中間物218之化合物置於2.4 ml的甲醇中處理並於5%活性碳上鈀於標準氫氣壓下，在RT氫化30 min。然後將催化劑濾出並於減壓下移除溶劑。將殘餘物從1：1乙腈/水冷凍乾燥。由此得到14 mg(92%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=944(M+H)⁺.

中間物220

N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將500 mg的此中間物溶於20 ml的DMF並與466 mg(3.8 mmol)的中間物191、382 mg(1.01 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和440 μl(2.5 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌1 h及然後濃縮。將殘餘物置於二氯甲烷中處理並先以5%檸檬酸水溶液震盪萃取2次及然後以飽和的碳酸氫鈉水溶液震盪萃取。將有機層濃縮並將殘餘物以快速層析於矽膠上以95：5二氯甲烷/甲醇作為溶離劑純化。將對應的溶離份組合並於減壓下移除溶劑。將殘餘物於高真空下乾燥後，得到562 mg(65%之理論值於二階段)Z-保護的中間物。

將562 mg(0.57 mmol)的此中間物置於50 ml的甲醇中處理並以155 mg的10%活性碳上鈀於標準的氫氣壓下於RT氫化20 min。然後將催化劑濾出並於減壓下移除溶劑。將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份組合，於減壓下蒸發溶劑並將殘餘物從二烷冷凍乾燥。由此得到361 mg(87%之理論值)的標題化合物為泡沫。

HPLC(方法5)：雙波峰於Rt=1.75和1.86 min；LC-MS(方法1)：雙波峰於Rt=0.84 min和0.91 min具相同質量；MS(ESI+)：m/z=944(M+H)⁺.

中間物221

N-{(2S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-苯基丙基}-N-甲基-L-纈胺酸

將100 mg(0.76 mmol)的市售N-甲基-L-纈胺酸和285 mg(1.14 mmol)的市售(2S)-1-側氧-3-苯基丙-2-基胺甲酸第三丁酯於22 ml的甲醇中混合，並與340 mg(3.66 mmol)的硼烷-吡啶複合物和70 μl的乙酸混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜。接著於減壓下濃縮並將殘餘物以快速層析於矽膠上以二氯甲烷/甲醇/17%氨水溶液作為溶離劑純化。將對應的溶離份濃縮並從1：1二烷/水冷凍乾燥後，得到259 mg(93%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法11)：R_t=0.76 min；MS(ESI+)：m/z=365(M+H)⁺.

中間物222

N-[(2S)-2-胺基-3-苯基丙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將40 mg(0.11 mmol)的N-{(2S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-苯基丙基}-N-甲基-L-纈胺酸(中間物221)溶於5 ml的DMF並與80 mg(0.11 mmol)的N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3- 甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物220)、50 mg(0.13 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和57 μl(2.5 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌1 h及然後濃縮。將殘餘物置於乙酸乙酯和中處理，並先以5%檸檬酸水溶液清洗及然後以水清洗。將有機層濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份組合及於減壓下移除溶劑。從二烷冷凍乾燥後，得到60 mg(50%之理論值)保護的中間物。

HPLC(方法12)：R_t=2.2 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.17 min；MS(ESI+)：m/z=1073(M+H)⁺.

將60 mg(0.05 mmol)的此中間物置於10 ml的二氯甲烷中處理，加入2 ml的三氟乙酸並將反應混合物於RT攪拌1.5 h。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份組合，於減壓下移除溶劑並將殘餘物從二烷/水冷凍乾燥。於此得到25 mg(42%之理論值)的標題化合物為泡沫。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.95 min；MS(ESI+)：m/z=974(M+H)⁺.

中間物223

N-[(2S)-2-({[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)-3-苯基丙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備係類似中間物134，從5 mg(4.6 μmol)的中間物222開始來進行。得到3.4 mg(65%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.99 min；MS(ESI+)：m/z=1140(M+H)⁺.

中間物224

N-[(2S)-2-({[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)丙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備係類似中間物223之合成來進行。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.92 min；MS(ESI+)：m/z=1064(M+H)⁺.

中間物225

N-(2-胺基乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將100 mg(0.76 mmol)的市售N-甲基-L-纈胺酸和182 mg(1.14 mmol)的市售2-側氧乙基胺甲酸第三丁酯於20 ml的甲醇中混合，並與340 mg(3.66 mmol)的硼烷-吡啶複合物和65 μl的乙酸混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜。接著於減壓下濃縮並將殘餘物以快速層析於矽膠上以二氯甲烷/甲醇/17%氨水溶液(15/4/0.5)作為溶離劑純化。將對應的溶離份濃縮及從1：1二烷/水冷凍乾燥後，得到190 mg、39%純度(35%之理論值)的中間物，將其再轉化，無進一步純化。

將50 mg(0.07 mmol)的此中間物溶於10 ml的DMF並與52 mg(0.07 mmol)的N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物220)、32 mg(0.09 mmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和37 μl(0.2 mmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將混合物於RT攪拌至隔夜及然後濃縮。將殘餘物置於乙酸乙酯中處理並以5%檸檬酸水溶液震盪萃取及然後以水震盪萃取。將有機層濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份組合及於減壓下移除溶劑。從二烷冷凍乾燥後，得到53 mg(76%之理論值)保護的中間物。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.02 min；MS(ESI+)：m/z=984(M+H)⁺.

將53 mg(0.05 mmol)的此中間物置於10 ml的二氯甲烷中處理，加入2 ml的三氟乙酸並將反應混合物於RT攪拌30 min。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份組合，於減壓下移除溶劑並將殘餘物從二烷/水冷凍乾燥。由此得到21 mg(40%之理論值)的標題化合物，純度65%。

HPLC(方法12)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=884(M+H)⁺.

中間物226

N-[2-({[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)乙基]-N- 甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備係類似中間物134之合成，由中間物225開始來進行。得到11.6 mg(59%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.90 min；MS(ESI+)：m/z=1050(M+H)⁺.

中間物227

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物218，藉由轉化為活性酯所製備。

產率：18 mg(51%之理論值)

HPLC(方法5)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.98 min；MS(ESI+)：m/z=1073(M+H)⁺.

中間物228

(2R,3S)-3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7,10-二異丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧乙基)-5,11-二甲基-6,9-二側氧-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯

標題化合物係以中間物154合成中所得到的中間物。

HPLC(方法12)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.97 min；MS(ESI+)：m/z=1308(M+H)⁺.

中間物229

(2R,3S)-3-乙醯胺基-4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7,10-二異丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧乙基)-5,11-二甲基-6,9-二側氧-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯

標題化合物係從7.5 mg(2.5 μmol)的中間物154，藉由以2.3 μl的乙酸酐於1 ml的DMF中，在0.4 μl的N,N-二異丙基乙基胺之存在下乙醯化所 製備。

產率：1.4 mg(40%之理論值)

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=1250(M+H)⁺.

中間物230

(2R,3S)-3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧乙基)-7,10-二異丙基-5,11-二甲基-6,9-二側氧-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯

此化合物係類似中間物229，從中間物193開始所製備。得到16 mg(30%之理論值於3階段)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.0 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.02 min；MS(ESI+)：m/z=1335(M+H)⁺.

中間物231

(2R,3S)-3-乙醯胺基-4-{2-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧乙基)-7,10-二異丙基-5,11-二甲基-6,9-二側氧-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯

此化合物係由8 mg(6 μmol)的中間物230，先以三氟乙酸去保護，及隨後以乙酸酐於DMF中，在N,N-二異丙基乙基胺之存在下乙醯化所製備。得到2 mg(37%之理論值於2階段)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.88 min；MS(ESI+)：m/z=1277(M+H)⁺.

中間物232

N-[(4-硝基苯氧基)羰基]-β-丙胺酸苄基酯

將200 mg(0.57 mmol)的市售β-丙胺酸4-甲基苯磺酸-苄基酯和229 mg(1.14 mmol)的氯碳酸4-硝基苯基酯置於15 ml的四氫呋喃中處理，及然後將反應混合物加熱回流30 min。隨後，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮並將殘餘物於高真空下乾燥後，得到86 mg(44%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.07 min；MS(ESI+)：m/z=345(M+H)⁺.

中間物233

N-{2-[({3-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧丙基}胺甲醯基)胺基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將13 mg(10 μmol)的中間物225和6.7 mg(20 μmol)的中間物232溶於3 ml的DMF及然後加入7 μl的N,N-二異丙基乙基胺。將混合物於RT攪拌至隔夜及然後於高真空下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮及將殘餘物於高真空下乾燥後，得到5.4 mg(38%之理論值)保護的中間物。

HPLC(方法5)：R_t=2.1 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.6in；MS(ESI+)：m/z=1089(M+H)⁺.

將5.4 mg(5 μmol)的此中間物溶於5 ml的甲醇及加入2 mg的10%活性碳上鈀後，於標準的氫氣壓下於RT氫化20 min。然後將催化劑濾出並於減壓下移除溶劑。將殘餘物於高真空下乾燥後，得到5 mg(定量)的酸中間物。

HPLC(方法12)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.84 min；MS(ESI+)：m/z=999(M+H)⁺.

將5 mg(10 μmol)的此中間物溶於1 ml的DMF並與5.8 mg(50 mmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮及然後與2.6 μl的N,N-二異丙基乙基胺和3.8 mg(10 μmol)的HATU混合。於RT攪拌20 h後，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。從1：1二烷/水冷凍乾燥後，得到1.1 mg(20%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.87 min；MS(ESI+)：m/z=1096(M+H)⁺.

中間物234

N-(6-{[(苄氧基)羰基]胺基}己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N- 甲基-L-纈胺醯胺

將25 mg(30 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物55)和45 mg(180 μmol)的6-側氧己基胺甲酸苄基酯置於3 ml的甲醇中處理並以乙酸酸化。隨後於室溫加入15 μl(144 μmol；9.4M)的硼烷-吡啶複合物。隨後將混合物於RT攪拌24 h，並於8 h後再次加入乙酸和15 μl(144 μmol；9.4M)的硼烷-吡啶複合物。隨後將反應混合物以TFA調整至pH 2並以製備式HPLC純化。將產物溶離份組合並濃縮，及將殘餘物於高真空下乾燥。由此得到15 mg(46%之理論值)的標題化合物為泡沫。

LC-MS(方法1)：R_t=1.03 min；m/z=1066(M+H)⁺.

中間物235

N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將15 mg(14 μmol)的N-(6-{[(苄氧基)羰基]胺基}己基)-N-甲基-L-纈胺醯 基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物234)置於3 ml的甲醇中處理並加入1.8 mg的碳上鈀(5%)。將反應混合物隨後於標準的氫氣壓下於RT氫化2 h。然後將催化劑濾出並於減壓下移除溶劑。將殘餘物從1：1乙腈/水冷凍乾燥。得到11 mg(86%之理論值)的標題化合物為泡沫。

LC-MS(方法1)：R_t=0.81 min；m/z=932(M+H)⁺.

中間物236

N-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將11 mg(12 μmol)的N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物235)置於500 μl的1：1二烷/水中處理並與253 μl的1M碳酸氫鈉水溶液及然後與2.8 mg(18 μmol)的2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯混合。將反應混合物於RT攪拌30 min及然後以三氟乙酸酸化。將反應混合物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥後得到0.8 mg(7%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.01 min；m/z=1012(M+H)⁺.

中間物237

N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將25 mg(30 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物55)和23 mg(180 μmol)的6-側氧己酸置於3 ml的甲醇中處理並以乙酸酸化。隨後於室溫加入15 μl(144 μmol；9.4M)的硼烷-吡啶複合物。將反應混合物隨後於RT攪拌20 h，及於8 h後再次加入乙酸和15 μl(144 μmol；9.4M)的硼烷-吡啶複合物。將反應混合物隨後以三氟乙酸調整至pH 2並以製備式HPLC純化。將產物溶離份組合及濃縮，並將殘餘物冷凍乾燥。由此得到21 mg(74%之理論值)的標題化合物為泡沫。

LC-MS(方法1)：R_t=0.91 min；m/z=947(M+H)⁺.

中間物238

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將21 mg(22 μmol)的中間物237溶於1 ml的DMF並與38 mg(333 μmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮及然後與2.4 mg(10 μmol)的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和19 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。於RT攪拌2 h後，將反應混合物以製備式HPLC純化。從二烷冷凍乾燥後，得到22 mg(96%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.95 min；m/z=1044(M+H)⁺.

中間物239

N-甲基-L-蘇胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

首先，藉由於乙酸乙酯中處理及以5%硫酸水溶液震盪萃取，將N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-蘇胺酸從其237 mg(0.887 mmol)的二環己基胺鹽中釋放出。將有機層以硫酸鎂乾燥，過濾及濃縮。將14.7 mg(0.055 mmol)的N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-蘇胺酸置於3 ml的DMF中處理並連續與40 mg(0.055 mmol)的中間物220、12.7 mg(0.066 mmol)的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基 碳二亞胺鹽酸鹽和10 mg(0.066 mmol)的1-羥基-1H-苯并三唑水合物混合。將混合物隨後於RT攪拌2 h。然後於減壓下移除溶劑並將殘餘物以製備式HPLC純化。由此得到29 mg(54%之理論值)的Z-保護中間物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.15 min；MS(ESI+)：m/z=976(M+H)⁺.

將29 mg(0.003 mmol)的此中間物溶於5 ml的甲醇並於5 mg的5%鈀/活性碳上於RT和標準的氫氣壓下氫化1 h。隨後將催化劑濾出並蒸發溶劑。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。得到17 mg(54%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.77 min；MS(ESI+)：m/z=842(M+H)⁺.

中間物240

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-蘇胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係類似中間物210，從15.6 mg(0.016 mmol)的中間物239所製備。得到10.8 mg(67%之理論值於2階段)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=1053(M+H)⁺.

中間物241

N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基] 吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

首先，類似中間物5，製備三氟乙酸-(2S)-2-胺基-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)丙-1-酮(1：1)。然後使用此試劑，以類似中間物75中所述之合成，藉由與N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)，在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，製備標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=817(M+H)⁺.

中間物242

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將50 mg(0.05 mmol)的中間物241，類似中間物210，與6-側氧己酸於硼 烷-吡啶複合物之存在下反應。隨後，將22.5 mg(0.02 mmol)所生成的酸轉變為活化酯。得到13.5 mg(36%之理論值於2階段)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=1028(M+H)⁺.

另外，亦可藉由中間物250之一小時催化性氫化作用，於室溫在甲醇中於10%活性碳上鈀，在標準的氫氣壓下，得到此標題化合物。

中間物243

N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備係類似中間物78，藉由中間物241與6-側氧己基胺甲酸苄基酯和硼烷-吡啶複合物之還原性烷化作用，及隨後以甲醇作為溶劑氫化來進行。

產率：17.5 mg(34%之理論值於2階段)

HPLC(方法12)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.63 min；MS(ESI+)：m/z=916(M+H)⁺.

中間物244

N-[6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此製備係類似中間物166，從中間物243開始來進行。

產率：1.3 mg(12%之理論值)

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.89 min；MS(ESI+)：m/z=996(M+H)⁺.

中間物245

2,5-二側氧吡咯啶-1-基O-[(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧乙基)-7,10-二異丙基-5,11-二甲基-6,9,15-三側氧-2--氧-5,8,11-三氮十五烷-15-基]-N-(第三丁氧基羰基)-L-蘇胺醯基-β-丙胺酸酯

首先，將中間物193，如中間物154所述，與N-(第三丁氧基羰基)-L-蘇胺酸苄基酯反應，及然後以氫解作用移除苄基酯。然後將由此得到的30 mg(0.027 mmol)N-[4-({(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-1-羧基丙-2-基}氧基)-4-側氧丁基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺與4-甲基苯磺酸-苄基β-丙胺酸酯於HATU之存在下偶合，並再次以氫解作用移除苄基酯(產率：24 mg(71%之理論值於2階段))。最後，將10 mg(0.008 mmol)所生成的酸轉變為活化酯。以HPLC純化後，得到2.7 mg(23%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.01 min；MS(ESI+)：m/z=1295(M+H)⁺

中間物246a

(2S)-2-胺基-1-(4-羥基-1,2-唑啶-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙-1-酮三氟乙酸(1：1)非對映異構物1

將1.6 g(3.982 mmol)的2,5-二側氧吡咯啶-1-基N-(第三丁氧基羰基)-L-色胺酸酯溶於15 ml的DMF並與500 mg(3.982 mmol)的1,2-唑啶-4-醇和100 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜。然後另再加入100 μl的N,N-二異丙基乙基胺，並將混合物先以超音波浴處理5 h，然後於RT攪拌至隔夜，及隨後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物置於乙酸乙酯中處理並先以5%檸檬酸水溶液萃取二次，然後以飽和的碳酸氫鈉水溶液，最後以水萃取。將有機層濃縮並將殘餘物以快速層析於矽膠上以95： 5二氯甲烷/甲醇作為溶離劑分離成非對映異構物。將二種非對映異構物之對應的溶離份組合並於減壓下移除溶劑。將殘餘物於高真空下乾燥後，得到272 mg(18%之理論值)的非對映異構物1(R_f=0.18(95：5二氯甲烷/甲醇)和236 mg(16%之理論值)的非對映異構物2(R_f=0.13(95：5二氯甲烷/甲醇)，以及333 mg(22%之理論值)Boc-保護的中間物之混合溶離份。

於標準條件下，使用5 ml的三氟乙酸於20 ml的二氯甲烷中，從272 mg(725 μmol)此中間物的非對映異構物1分離Boc保護基，從二烷/水冷凍乾燥後，得到290 mg(定量)的標題化合物，75%純度並用於下個階段，無進一步純化。

HPLC(方法12)：R_t=1.1 min；LC-MS(方法13)：R_t=1.80 min；MS(ESI+)：m/z=276(M+H)⁺

中間物246b

(2S)-2-胺基-1-(4-羥基-1,2-唑啶-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙-1-酮三氟乙酸(1：1)非對映異構物2

於標準條件下使用5 ml的三氟乙酸於20 ml的二氯甲烷中從236 mg(630 μmol)之246a中所述的中間物之非對映異構物2分離Boc保護基，濃縮、與乙醚攪拌和將殘餘物於高真空下乾燥後，得到214 mg(76%)的標題化合物。

LC-MS(方法13)：R_t=1.84 min；MS(ESI+)：m/z=276(M+H)⁺

中間物247a

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(4-羥基-1,2-唑啶-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

如中間物74所述先進行中間物26和246a之偶合，隨後分離Boc保護基，以合成此化合物。隨後，以6-側氧己酸於硼烷-吡啶複合物之存在下烷化，及隨後如中間物210所述，將酸轉變為活性酯。以製備式HPLC純化標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=1053(M+H)⁺

中間物247b

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(4-羥基-1,2-唑啶-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

如中間物74所述先進行中間物26和246b之偶合，隨後分離Boc保護基，合成此化合物。隨後，以6-側氧己酸於硼烷-吡啶複合物之存在下烷化，及隨後如中間物210所述，將酸轉變為活性酯。以製備式HPLC純化標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.86 min；MS(ESI+)：m/z=1053(M+H)⁺

中間物248

N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(4-羥基苯基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，類似中間物86中所述之合成，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)和L-酪胺酸第三丁酯，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸分離Boc保護基，得到第三丁酯(以三氟 乙酸於二氯甲烷中攪拌40 min)，製備胺化合物N-[(2R,3R)-3-甲氧基-3-{(2S)-1-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基{(2S)-3-甲基-2-[(N-甲基-L-纈胺醯基)胺基]丁基}胺基)庚醯基]吡咯啶-2-基}-2-甲基丙醯基]-L-酪胺酸第三丁酯為三氟乙酸鹽。然後使用38 mg(0.04 mmol)的此化合物，類似中間物210之製備，藉由與6-側氧己酸於硼烷-吡啶複合物之存在下反應，得到31 mg(99%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.88 min；MS(ESI+)：m/z=918(M+H)⁺.

中間物249

三氟乙酸-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-[4-(苄氧基)苯基]-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(1：1)

首先，類似中間物5和6，由O-苄基-N-(第三丁氧基羰基)-L-酪胺酸開始，製備三氟乙酸-(2S)-2-胺基-3-[4-(苄氧基)苯基]-1-(1,2-烷-2-基)丙-1-酮(1：1)。然後從此構件，以類似中間物75中所述之合成，與N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間物26)在O-(7-氮苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，及隨後以三氟乙酸消除Boc保護基，得到標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.15 min； LC-MS(方法1)：R_t=0.99 min；MS(ESI+)：m/z=908(M+H)⁺.

中間物250

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-[4-(苄氧基)苯基]-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將100 mg(0.088 mmol)的中間物249，類似中間物210，與6-側氧己酸於硼烷-吡啶複合物之存在下反應。然後將30 mg(0.029 mmol)所生成的酸轉變為活性酯。由此得到15 mg(40%之理論值於2階段)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=2.26 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.05 min；MS(ESI+)：m/z=1119(M+H)⁺.

中間物251

N-[4-(2-{5-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-5-側氧戊醯基}-2-甲基肼基)-4-側氧丁基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

首先，將30 mg(0.032 mmol)的中間物193轉變為活化的N-羥基琥珀醯亞胺酯。將10.3 mg(0.009 mmol)的此活性酯溶於2 ml的DMF，與2.7 mg(0.018 mmol)的1-甲基肼羧酸第三丁酯和8 μL N,N-二異丙基乙基胺混合，並於RT攪拌16 h。重覆此操作，及然後將此批濃縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮並於高真空下乾燥，得到5.4 mg(43%)的中間物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.99 min；MS(ESI+)：m/z=1054(M+H)⁺.

使用三氟乙酸於二氯甲烷中從3.5 mg(0.002 mmol)的此中間物移除Boc保護基。濃縮和於高真空乾燥後，將殘餘物置於4 ml的二氯甲烷中處理並與1,1'-[(1,5-二側氧戊烷-1,5-二基)雙(氧基)]二吡咯啶-2,5-二酮和2 μ的N,N-二異丙基乙基胺混合。於RT攪拌1 h後，將此批濃縮並將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮並於高真空下乾燥，得到1.4 mg(44%)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.88 min；MS(ESI+)：m/z=1166(M+H)⁺.

中間物252

N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將100 mg(0.088 mmol)的中間物249和109 mg(0.350 mmol)的中間物167於10 ml的甲醇中混合並與39 mg(0.42 mmol)的硼烷-吡啶複合物和15 μl的乙酸混合。將此批於於RT攪拌至隔夜。然後再次加入相同量的硼烷-吡 啶複合物和乙酸，並將此批於RT另再攪拌24 h。然後將其於減壓下濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮並從二烷/水1：1冷凍乾燥，得到98 mg(93%之理論值)的雙-苄基中間物。將此中間物置於18.5 ml的甲醇中處理並以5%的活性碳上鈀於標準氫氣壓和室溫下進行催化性氫化1 h。過濾、濃縮和將殘餘物從二烷冷凍乾燥後，得到73 mg(87%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.85 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.84 min；MS(ESI+)：m/z=1021(M+H)⁺.

中間物253

N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將22 mg(22 μmol)的中間物252溶於8.5 ml的DMF並與25 mg(215 μmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮和隨後與12.3 mg(32 μmol)的O-(7-氮苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和37 μl of N,N-二異丙基乙基胺混合。於RT攪拌1 h後，將此反應混合物以製備式HPLC純化。從二烷冷凍乾燥，得到16 mg(62%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.57 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.8 min；MS(ESI+)：m/z=1118(M+H)⁺.

中間物254

N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基 -N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(0.012 mmol)的中間物55和11 mg(0.036 mmol)的中間物167於1 ml的甲醇中混合並與5.4 mg(0.058 mmol)的硼烷-吡啶複合物和1 μl的乙酸混合。將此批於RT攪拌至隔夜。然後再次加入相同量的硼烷-吡啶複合物和乙酸，並將此批於RT另再攪拌24 h。然後將其於減壓下濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。將對應的溶離份濃縮並從二烷/水1：1冷凍乾燥，得到8 mg(58%之理論值)的雙-苄基中間物。將此中間物置於2 ml的甲醇中處理並以5%的活性碳上鈀於標準氫氣壓和室溫下進行催化性氫化1 h。過濾、濃縮和將殘餘物從二烷冷凍乾燥後，得到7 mg(95%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.99 min；MS(ESI+)：m/z=1036(M+H)⁺.

中間物255

N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將7.3 mg(7 μmol)的中間物254溶於0.3 ml of DMF並與12 mg(106 μmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮和隨後與13.5 mg(35 μmol)的O-(7-氮苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和6 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。於RT攪拌1 h後，將此反應混合物以製備式HPLC純化。從二烷冷凍乾燥，得到7.7 mg(79%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.97 min；MS(ESI+)：m/z=1134(M+H)⁺.

中間物256

N-(2-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將20 mg(0.02 mmol)的中間物55以類似中間物254之製備，與(2-{2-[2-(2-側氧乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)胺甲酸苄基酯(中間物172)在硼烷-吡啶複合物之存在下進行還原性胺化作用。隨後使用5%的碳上鈀作為催化劑並以甲醇作為溶劑以氫化移除Z保護基，製備21 mg(85%之理論值於2階段)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=0.85 min；MS(ESI+)：m/z=1008(M+H)⁺.

中間物257

N-[2-(2-{2-[2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將21 mg(20.8 μmol)的中間物256置於1 ml的二烷/水1：1中處理並與4.9 mg(31.2 μmol)的2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯和42 μl的1M碳酸氫鈉水溶液混合。將反應混合物於RT攪拌30 min。然後另再加入374 μl的1M碳酸氫鈉水溶液，並將反應混合物於RT另再攪拌30 min及然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘餘物以製備式HPLC純化。冷凍乾燥，得到4.5 mg(20%之理論值)的標題化合物為無色泡沫。

LC-MS(方法1)：R_t=1.04 min；MS(ESI+)：m/z=1088(M+H)⁺.

中間物258

N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-[4-(苄氧基)苯基]-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係由中間物249開始，藉由使用3-{2-[2-(2-側氧乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸第三丁酯進行還原性烷化，接著裂解第三丁基酯和轉變成N-羥基琥珀醯亞胺酯所製備。

HPLC(方法5)：R_t=1.96 min；LC-MS(方法1)：R_t=1.11 min；MS(ESI+)：m/z=1208(M+H)⁺.

中間物259

N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將9.6 mg(8.4 μmol)的N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽(中間物58)和6.5 mg(51 μmol)的6-側氧己基胺甲酸苄基酯置於769 μl的甲醇中處理並以乙酸酸化。隨後於室溫加入4 μl(40 μmol)的硼烷-吡啶複合物。隨後將混合物於RT攪拌20 h。然後將反應混合物以三氟乙酸調整至pH 2並以製備式HPLC純化。將產物溶離份組合並濃縮，及將殘餘物冷凍乾燥。由此得到8 mg(93%之理論值)的標題化合物為泡沫。

LC-MS(方法1)：R_t=1.06 min；m/z=1019(M+H)⁺.

中間物260

N-{6-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將7.5 mg(7.4 μmol)的中間物259溶於332 μl的DMF並與12.7 mg(110 μmol)的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮和隨後與14 mg(37 μmol)的O-(7-氮苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及6 μl的N,N-二異丙基乙基胺混合。於RT攪拌2 h後，將此反應混合物以製備式HPLC純化。從二烷冷凍乾燥，得到4 mg(55%之理論值)的標題化合物。

LC-MS(方法1)：R_t=1.19 min；m/z=1002(M+H)⁺.

中間物261

N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙烷]胺基}-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

此化合物係由中間物16開始，藉由使用3-{2-[2-(2-側氧乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸苄基酯進行還原性烷化，接著以氫化裂解苄基酯及轉變成N-羥基琥珀醯亞胺酯所製備。

HPLC(方法5)：R_t=1.83 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.93 min；MS(ESI+)：m/z=1114(M+H)⁺.

B：製備抗體-藥物接合體(ADC)

B-1.產生抗-FGFR2抗體

本發明之人類抗-FGFR2抗體M048-D01-hIgG1和M048-D01-hIgG1-b係以噬菌體展現技術，使用來自Bioinvent International AB之天然的Fab抗體庫n-CoDeR(Lund,Sweden；描述於Söderling等人，Nat.Biotech.2000,18：853-856)來分離。篩選成功的為親代Fab片段M048-D01。此Fab片段的之重鏈Vh可變區係為SEQ ID NO：21；輕鏈Vl可變區為SEQ ID NO：22。在鑑別M048-D01 Fab片段後，其係以人類IgG形式M048-D01-hIgG1-b名稱表示(重鏈為SEQ ID NO：10，而輕鏈為SEQ ID NO：9)。就高效的選殖，另外，亦表現M048-D01-hIgG1-b[EVQ]重鏈的N-端之前三個胺基酸，為QVE。此變異得到抗體M048-D01-hIgG1(重鏈為SEQ ID NO：8，而輕鏈為SEQ ID NO：7)。M048-D01-hIgG1之Vh和Vl的可變區為SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12；M048-D01-hIgG1-b之Vh和Vl的可變區為SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14。二種抗體具有相同的CDR序列，為SEQ ID NOs：15(H-CDR1)、16(H-CDR2)、17(H-CDR3)、18(L-CDR1)、19(L-CDR2)和20(L-CDR3)。

GAL-FR21-mIgG1和GAL-FR22-mIgG2a抗體係描述於WO2010/054265中為mIgG1(GAL-FR21)和mIgG2b(GAL-FR22)。 GAL-FR21於文中係經由Vh(SEQ ID NO：4於WO2010/054265中)和經由Vl(SEQ ID NO：1於WO2010/054265中)所定義，而GAL-22係經由Vh(SEQ ID NO：8於WO2010/054265中)和經由Vl(SEQ ID NO：7於WO2010/054265中)所定義。對於本申請案中所描述的研究，GAL-FR21之Vl和Vh係經重建成鼠類IgG1模式，產生GAL-FR21-mIgG1抗體(本申請案之SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4)。GAL-FR22之Vl和Vh係經重建成鼠類IgG2a模式，產生GAL-FR22-mIgG2a抗體(本申請案之SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6)。

B-2.抗-FGFR2抗體之表現

M048-D01-hIgG1、M048-D01-hIgG1-b、GAL-FR21-mIgG1和 GAL-FR22-mIgG2a抗體係以哺乳動物細胞培養短暫性產生。

表現結構係如下述所產生：

將來自噬菌體展示大腸桿菌(E.coli)選殖株的Vh和Vl序列，使用PCR引子增幅，以便於將源自噬菌體展示的M048-D01 Fab之Vh和Vl轉變成IgG模式，以及將來自大腸桿菌的表現系統變成哺乳動物細胞。將周邊限制酵素裂解位點導入Vh和Vl之5’和3’端。這些限制酵素裂解位點係用來將Vh和Vl選殖到含IgG骨架的表現載體中。

將大腸桿菌細胞於試管中以100 μl的水於95℃培養10分鐘及然後置於冰上5分鐘。在短暫的渦轉後，以離心使溶液澄清。將上清液分離出用於DNA增幅。分別就Vh和Vl進行PCR反應。此項係使用帶有Vl之BamHI和NotI裂解位點和MfeI，及Vh之MfeI和BlpI裂解位點的專一引子對來進行。PCR反應係使用AccuPrime Pfx聚合酶(Invitrogen,# 12344-024)根據製造商說明來進行。於1%洋菜凝膠上分析PCR產物。根據製造商說明，以對應的限制核酸內切酶於37℃將表現載體和PCR產物消化2小時，以得到相容的末端(參見表1)。於70℃培養15分鐘終止消化作用。將產生的片段紮入表現載體中，並以標準方法以此結構轉化大腸桿菌或哺乳動物細胞。

以哺乳動物基因表現之Geneart基因合成和基因最適化技術(life technologies,Grand Island,NY,USA)，合成特定抗體(GAL-FR21-mIgG1、GAL-FR22-mIgG2a和M048-D01-hIgG1-b)之Vh和Vl區或完整輕鏈之DNA序列。在基因合成期間，編碼哺乳動物訊號胜肽之序列的V區係與上游Kozaki序列融合。周邊限制裂解位點係插在合成的DNA結構之5’和3’端。這些限制裂解位點係用來選殖Vh和Vl，或將輕鏈選殖到含IgG之編碼恆定區的表現載體中。

將表現載體和Geneart結構根據製造商說明以個別的限制核酸內切酶於37℃消化2小時，得到相容末端(參見表1)。於70℃培養15分鐘終止消化作用。紮入所產生的片段，並以該綁紮物轉化大腸桿菌細胞。將從這些轉化物得到的質體，根據標準方法，用於轉化哺乳動物細胞。

表1：用於將Vh和Vl或輕鏈選殖到IgG表現載體之限制裂解位點

此等抗體係短暫性表現在哺乳動物細胞培養中，如等人所述(Tom等人，方法表現之第12章：Expression Systems,Michael R.Dyson和Yves Durocher編輯，Scion Publishing Ltd,2007)：對於抗-FGFR2抗體，例如M048-D01-hIgG1、GAL-FR21-mIgG1和GAL-FR22-mIgG2a之表現，係將HEK293 6E細胞以適合的CMV啟動子表現質體短暫性轉染。細胞培養規模可達到1.5公升的震盪燒瓶或1公升的「織袋」。表現係於37℃以添加胰蛋白腖TN1(Organotechnie)與1%「FCS超低IgG」(Invitrogen)和0.5 mM丙戊酸之F17培養基(Invitrogen)進行5-6天。

另外，抗-FGFR2抗體，例如M048-D01-hIgG1-b，係表現在穩定轉染的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞株中。其係使用單一-載體系統來進行。發酵係於生物反應器中以不同規模的分批供料法(fed-batch process)來進行。

屬於來自噬菌體展現之M048-D01-抗體的親代Fab片段M048-D01(Vh：SEQ ID NO：21,Vl：SEQ ID NO：22)，係如下表現：將20-50 ml的LB培養基(混合0.1 mg/ml安比西林(ampicillin)和0.1%葡萄糖)以含有初始pBif載體(其缺乏基因III序列，但已將M048-D01 Fab序列選殖入其中)之對應大腸桿菌的初步培養接種。添加0.5 mM IPTG(最終濃度)開始製造sFab。培養係於30℃以250 rpm至隔夜來進行。

B-3. FGFR-2抗體之純化

抗體，例如M048-D01-hIgG1、M048-D01-hIgG1-b、GAL-FR21-mIgG1和GAL-FR22-mIgG2a係得自細胞培養上清液。將細胞上清液以離心分離細 胞使其澄清。隨後將細胞上清液以親和性層析於MabSelect Sure(GE Healthcare)層析管柱上純化。就此目的，係將管柱以DPBS pH 7.4(Sigma/Aldrich)平衡，施予細胞上清液並以約10個管柱體積之DPBS pH 7.4+500 mM NaCl清洗管柱。以50 mM乙酸鈉pH 3.5+500 mM NaCl溶離抗體，及隨後以凝膠過濾層析於Superdex 200管柱(GE Heathlcare)上以DPBS pH 7.4進一步純化。

將表現在大腸桿菌之親代M048-D01 Fab片段如下純化：以離心收取大腸桿菌細胞並藉由於解離緩衝液(20%蔗糖(w/v),30 mM TRIS,1 mM EDTA,pH 8.0,1 mg/ml lysozyme(Sigma L-6876)和2.5 U/ml Benzonase(Sigma E1014))中以4℃培養1小時來解離。之後加入等量的PBS，將澄清的上清液施予Dynabeads進行his-標籤分離(Invitrogen,101-03D)並將混合物於4℃旋轉2小時。之後，將此基質以緩衝液1(50 mM磷酸鈉緩衝液，pH 7.4,300 mM NaCl,5 mM咪唑，0.01% Tween 20)清洗3次。隨後，以緩衝液2清洗一次(PBS混合0.005%的Tween 20)。最後，以緩衝液E(10 mM磷酸鈉緩衝液，pH 7.4,300 mM NaCl,300 mM咪唑)溶離Fab並使用PBS緩衝液於Vivaspin 500濃縮器中濃縮(截斷10 000，來自GE,28-9322-25)。

B-4.建構M048-D01-系列抗體之交叉反應性

本申請書之人類M048-D01-hIgG1和M048-D01-hIgG1-b抗體的交叉反應性係使用親代Fab片段M048-D01(包括Vh：SEQ ID NO：21和Vl：SEQ ID NO：22)來測定.

將M048-D01 Fab片段以ELISA就與各種列於表2之FGF受體結合進行試驗。

所有的變體係採Fc融合蛋白之無載體製備物形式。根據製造商說明，使用2-倍莫耳濃度過量的生物素-LC-NHS(Pierce；型號21347)生物素化，並使用Zeba脫鹽管柱(Pierce；型號89889)脫鹽。

就ELISA而言，係將以鏈黴親和素(streptavidin)(Pierce,15500)預處理的96-孔盤於4℃載入1 μg/ml生物素化蛋白至隔夜。已載入生物素化TRAIL-Fc之孔槽用作為參照。翌日，將測定盤以3×的PBST(1×PBS混合0.05% Tween 20(Sigma,P7949))清洗，以阻斷緩衝液(PBST混合3% BSA(Sigma A4503))處理，並再次以PBST清洗三次。加入100 μl純化的Fab(1 μg/ml)並於室溫培養1小時。以PBST清洗三次後，加入HRP-偶合抗-hIgG(Fab-專一性)(稀釋1：2500,Sigma,A0293)，並於室溫培養1小時。加入50 μl的TMB(Invitrogen,2023)活化顏色反應並於5-15分鐘後加入50 μl的H₂SO₄(Merck,1120801000)終止反應。以盤式判讀儀(Tecan)於450 nm監測顏色反應。含TRAIL-Fc之孔槽的訊號強度係用作背景值，而訊號-與-背景比例係計算總述於表3中。

訊號-與-背景：0：<2；+：2-3；++：3-5；+++：>5

從表2明顯的，M048-D01-系列的抗體M048-D01-hIgG1和M048-D01-hIgG1-b與人類和鼠類FGFR2結合，而與相關形式是否為α或β異構型，或為IIIb和IIIc剪接型無關。同樣從表中顯示，本發明之M048-D01-系列的抗體不與FGFR1、FGFR3和FGFR4結合。

B-5.藉由CLIPS技術之抗原決定區圖譜辨識

以Pepscan專有的「化學性連接胜肽於支架(CLIPS)」技術(Timmerman等人，J.Mol.Recognit.2007,20：283-99)為基準進行密集式抗原決定區圖譜辨識操作，以便於試驗M048-D01-系列抗體之結合特性。總計，設計出8653種不同的CLIPS胜肽，長度從15個胺基酸至30個胺基酸，其涵蓋人類FGFR2上之線性、構象和非連續抗原決定區。於胜肽陣列(peptide array)上合成胜肽。人類抗體M048-D01-hIgG1係以ELISA-為主的程序於胜肽陣列上檢驗。分析得到最高ELISA值之胜肽，用以分離共同、類似的胺基酸序列。

合成一結構胜肽庫，以便於重建標靶分子之非連續性抗原決定區。CLIPS技術能將胜肽建構成個別環、雙環、三環、類片狀環、類螺旋環及這些結構元件的組合：就此目的，係將CLIPS模板與胜肽陣列的半胱胺酸殘基結合。例如將0.5 mM之T2 CLIPS模板1,3-雙(溴甲基)苯溶液溶於碳酸氫銨(20 mM,pH 7.9)/乙腈(1：1(v/v))。將此溶液加到胜肽陣列中。CLIPS模板與存在胜肽陣列中胜肽的2個半胱胺酸之側鏈結合(3 μl孔槽之455孔 盤)。在被溶液完全覆蓋下，於溶液中小心地旋轉胜肽陣列30至60分鐘。結束後，以過量的水充分清洗陣列並置於破壞緩衝液(1% SDS,0.1%β-巰基乙醇溶於PBS(pH 7.2))中以超音波浴於70℃處理30分鐘。隨後另於水中重覆超音波浴處理45分鐘。以類似的方式製備帶有T3 CLIPS之胜肽。

抗體與各胜肽之結合係於PEPSCAN-為主的ELISA中檢驗(Sloostra等人，Molecular Diversity 1996,1：87-96)。將胜肽陣列以5%至100%的結合緩衝液預培養(1 h,20℃)。結和緩衝液係由1% Tween 80、4%馬血清和5%卵白蛋白(w/v)之PBS中溶液所組成。清洗步驟後，將胜肽陣列以初級抗體(1 to 5 μg/ml)於1% Tween 80之PBS溶液於4℃培養至隔夜。另一清洗步驟後，將胜肽陣列以1/1000的抗體過氧化酶接合體(抗-人類-IgG)溶於100%結合緩衝液之稀釋液於25℃培養一小時。另再一清洗步驟後，加入過氧化酶基質2,2’-聯氮-二-3-乙基苯并噻唑啉磷酸鹽(ABTS)和2 μl/ml 3%濃度的H₂O₂。一小時後，測量所產生的顏色並使用CCD攝影機和影像處理系統定量。

於此法中所得到的粗數據為範圍0-3000 mAU之光學數值(毫吸收單位)。

結果為所有的M048-D01-系列抗體係結合在由FGFR2(¹RPSFSLVEDTTLEPE¹⁵)之15 N-端殘基所組成的抗原決定區上。1257 CLIPS和直鏈胜肽之分析得到一致的N-端胜肽之高ELISA值。

N-端殘基(¹RPSFSLVEDTTLEPE¹⁵)係存在人類FGFR2所有的剪接變體中，與產生IIIb和IIIc異構型之D3區選擇性剪接無關。若以剪接從全長的FGFR2(FGFR2α,SEQ ID NO：1)移除D1區，產生較短的β-型FGFR2(SEQ ID NO：2)，抗原決定區亦存在。在此情況下，抗原決定區即剛好位在D2區之前。

有利的事實為N-端序列係被保存在人類、小鼠、大鼠和獼猴中。此項使M048-D01抗體之廣泛的物種間交叉反應性成為可能。二種本發明之實例抗體M048-D01-hIgG1和M048-D01-hIgG1-b之結合抗原決定區，係如圖1線框中所標示。

B-6.與半胱胺酸側鏈偶合之通用製程

用於偶合反應之抗體係如下：M048-D01-hIgG1 M048-D01-hIgG1-b

將3當量三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)溶於PBS緩衝液之溶液，加到濃度範圍介於1 mg/ml和10mg/ml之對應抗體於PBS緩衝液之溶液中，並將混合物於RT攪拌1小時。隨後，依照所欲的載量，加入介於2至10當量供偶合用的馬來醯亞胺前驅化合物或鹵化物前驅化合物(來自中間物102、103、105-109、111-114、117-126、128、129、132-146、148-155、157、159-161、166、171、175-177、184、189、194-195、199-201、205、209、223-224、226、228-231、236、244和257)之DMSO溶液。本處DMSO的量不應超過總體積的10%。將此批於RT攪拌60-120分鐘，及然後施予經PBS平衡之PD 10管柱(Sephadex^® G-25,GE Healthcare)，並以PBS緩衝液溶離。視需要，另外以超離心進行濃縮程序。

一般而言，除非另有指出，否則係使用5 mg的對應抗體之PBS緩衝液進行還原和隨後的偶合。經由PD10管柱純化後，由此得到，溶於3.5 ml PBS緩衝液之各例對應的ADC溶液。然後測定這些溶液所顯示的特定蛋白濃度。另外，依照下文所述之方法測定抗體的載量(藥物/mAb比率)。

此方法係用於製備實例1、3、5-6、8、10-12、14、15、27和32中所代表的免疫接合體。

於所示的結構式中，AK_1A和AK_1B之定義係如下AK_1A=抗-FGFR2抗體M048-D01-hIgG1(部分減低)-S§¹ AK_1B=抗-FGFR2抗體M048-D01-hIgG1-b(減低)-S§¹其中§¹係指與琥珀醯亞胺基連接，及S係代表部分減低抗體之半胱胺酸殘基的硫原子。

B-7.與離胺酸側鏈偶合之通用製程：

下列為用於偶合反應之抗體：M048-D01-hIgG1 M048-D01-hIgG1-b GAL-FR21-mIgG1 GAL-FR22-mIgG2a

依照所欲的載量，將介於2和5當量的偶合前驅化合物(中間物104、110、115、116、127、130、131、147、156、158、162、169、178、185、190、202、206、210-216、218、219、227、233、238、240、242、245、247a、247b、250、251、253、255、258和260-261)之DMSO溶液，加到濃度範圍介於1 mg/ml和10 mg/ml之對應抗體於PBS緩衝液之溶液中。於RT攪拌30分鐘後，再次加入相同量的前驅化合物之DMSO溶液。本處DMSO的量不應超過總體積的10%。於RT另再攪拌30分鐘後，將此批施予經PBS平衡之PD 10管柱(Sephadex^® G-25,GE Healthcare)，並以PBS緩衝液溶離。視需要，另外以超離心進行濃縮程序。若需要，就更有效移除低分子量組成物而言，係以PBS緩衝液再稀釋後，重複以超過濾濃縮。

一般而言，除非另有指出，否則係使用5 mg的對應抗體之PBS緩衝液進行偶合。經由PD10管柱純化後，由此得到溶於3.5 ml PBS緩衝液之各例對應的ADC溶液。然後測定這些溶液所顯示的特定蛋白濃度並依照下文所述之方法測定抗體的載量(藥物/mAb比率)。

此方法係用於製備實例2、4、7、9、13、16-17、25、26、28-31和33-35中所代表的免疫接合體。

於所示的結構式中，AK_2A、AK_2B、AK_2D和AK_2E之定義係如下AK_2A=抗-FGFR2抗體M048-D01-hIgG1-NH§² AK_2B=抗-FGFR2抗體M048-D01-hIgG1-b-NH§² AK_2D=抗-FGFR2抗體GAL-FR21-mIgG1-NH§² AK_2E=抗-FGFR2抗體GAL-FR22-mIgG2a-NH§²其中 §²係指與羰基基團連接，及NH係代表抗體之離胺酸殘基的側鏈胺基基團。

B-8.製備半胱胺酸加合物之通用製程：

將10 μmol的上述馬來醯亞胺前驅化合物置於3 ml的DMF中處理並與2.1 mg(20 μmol)的L-半胱胺酸混合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮及隨後以製備式HPLC純化。

於所示的結構式中，Cys之定義係如下 其中§³係指與連接子-帶毒體單元連接。

B-9.製備離胺酸加合物之通用製程：

將10 μmol的上述活性酯前驅化合物置於5 ml的DMF中處理並在30 μmol的N,N-二異丙基乙基胺之存在下，與α-胺基-保護的L-離胺酸混合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓係濃縮及隨後以製備式HPLC純化。然後以已知的方法移除保護基。

本發明接合體之進一步純化和定性

反應發生後，於特定案例中係將反應混合物，例如以超過濾濃縮，及然後脫鹽和以層析純化，例如使用Sephadex® G-25。例如以磷酸-緩衝食鹽水(PBS)來進行溶離。隨後將該溶液進行無菌過濾並冷凍。另一種選擇係將接合體冷凍乾燥。

B-10.測定帶毒體載量

於PBS緩衝液中，操作實例中所述的接合體之結果溶液的帶毒體載量，係如下測量：

離胺酸連接的ADC之帶毒體載量係藉由質譜測定個別接合體種類之分子量來測量。在此案例中，開始係以PNGaseF將抗體接合體去糖基化，並將樣本酸化，接著HPLC分離，以質譜使用ESI-MicroTofQ(Bruker Daltonik)分析。所有的光譜係經由TIC(總離子層析圖)的訊號加入，且各種接合體之分子量係以MaxEnt解摺積(MaxEnt Deconvolution)為基準來計算。將不同種類的訊號整合後，然後計算DAR(藥物/抗體比率)。

就蛋白鑑定，除了分子量測定外，係在去糖基化及/或變性後進行胰蛋白酶消化，且此消化係在變性、還原和衍生化後依據所偵測的胰蛋白酶胜肽，確認蛋白的特性。

半胱胺酸-連接的接合體之帶毒體載量係經由還原和變性的ADC之逆相層析來測定。將ADC溶液(1 mg/mL,50 μL)與鹽酸鹽(GuHCl)(28.6 mg)及與DL-二硫蘇糖醇(DTT)(500 mM,3 μL)溶液混合。將混合物於55℃培養1小時並以HPLC分析。

HPLC分析係於Agilent 1260 HPLC系統上以220 nm偵測來進行。所用的管柱為Polymer Laboratories PLRP-S聚合逆相管柱(型號PL1912-3802)(2.1×150 mm,8 μm粒徑，1000 Å)以1 mL/min之流速，使用下列梯度：0 min,25% B；3 min，25% B；28 min，50% B。溶離劑A係由0.05%三氟乙酸(TFA)之水溶液組成，溶離劑B為0.05%三氟乙酸於乙腈中之溶液組成。

將偵測到的波峰與接合物抗體之輕鏈(L0)和重鏈(H0)相比較，以滯留時間來分配。於接合體樣本中單獨偵測到的波峰指派為輕鏈-含一帶毒體(L1)，和重鏈-含一、二和三個帶毒體(H1、H2、H3)。

抗體含帶毒體之平均載量係從波峰面積如下以積分來測定：輕鏈載量經計算為屬於輕鏈之波峰的帶毒體數加權積分結果之總和，除以屬於輕鏈波峰之奇異加權積分結果的總和。重鏈載量經計算為屬於重鏈之波峰的帶毒體數加權積分結果之總和，除以屬於重鏈波峰之奇異加權積分結果的總和。其平均藥物載量結果為輕鏈載量和重鏈載量之二倍總和。在特定個別的案例中，由於特定波峰之共析(co-elution)，可能無法精確地測出帶毒體載量。

B-11.試驗ADC之抗原結合

黏合劑與標鈀分子之結合能力係於結合發生後進行試驗。熟習技術者知道各種用於進行此試驗之方法，例如接合體之親和力可以ELISA技術或表面電漿共振分析(BIAcore^TM測量)來檢驗。接合體濃度可由熟習技術者使用一般的方法，例如對於抗體接合體，係藉由蛋白質測定來測量(亦參見Doronina等人；Nature Biotechnol.2003；21：778-784和Polson等人，Blood 2007；1102：616-623)。

操作實例-免疫接合體

實例1

處係使用30 mg的M048-D01-hIgG1之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮、以PBS再稀釋並再次濃縮。

蛋白濃度：15.5 mg/ml

藥物/mAb比率：3.7

實例2

本處係使用32 mg的M048-D01-hIgG1之PBS溶液進行偶合，及在 Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮、以PBS再稀釋並再次濃縮。

蛋白濃度：11.7 mg/ml

藥物/mAb比率：3.9

實例3

本處係使用30 mg的M048-D01-hIgG1之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮、以PBS再稀釋並再次濃縮。

蛋白濃度：12.5 mg/ml

藥物/mAb比率：3.7

實例4

本處係使用2 mg的M048-D01-hIgG1之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮及以PBS再稀釋。

蛋白濃度：1.92 mg/ml

藥物/mAb比率：3.7

實例5

本處係使用3 mg的M048-D01-hIgG1之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：2.54 mg/ml

藥物/mAb比率：3.1

實例6

本處係使用4 mg的M048-D01-hIgG1之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.53 mg/ml

藥物/mAb比率：2.7

實例7

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在 Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.28 mg/ml

藥物/mAb比率：6.1

實例8

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.26 mg/ml

藥物/mAb比率：3.5

實例9

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.28 mg/ml

藥物/mAb比率：6.1

實例10

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.36 mg/ml

藥物/mAb比率：4.4

實例11

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.27 mg/ml

藥物/mAb比率：4.8

實例12

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.48 mg/ml

藥物/mAb比率：4.0

實例13

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.21 mg/ml

藥物/mAb比率：1.5

實例14

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.27 mg/ml

藥物/mAb比率：2.7

實例15

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.37 mg/ml

藥物/mAb比率：3.9

實例16

本處係使用4 mg的GAL-FR21-mIgG1之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並以PBS再稀釋。

蛋白濃度：1.63 mg/ml

藥物/mAb比率：8.7

實例17

本處係使用4 mg的GAL-FR22-mIgG2a之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並以PBS再稀釋。

蛋白濃度：1.60 mg/ml

藥物/mAb比率：8.1

實例18

N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將15.5 mg(15 μmol)的中間物210置於5 ml的DMF中處理並與4.4 mg(18 μmol)的N²-(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸以及7.7 μL(44 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜及然後於減壓下濃縮。隨後將殘餘物以製備式HPLC純化。得到14 mg(81%之理論值)保護的中間物的標題化合物，隨後將其置於1 ml的二氯甲烷中處理並以1 ml的三氟乙酸去保護。將此批件濃縮，及將殘餘物從乙腈/水(1：1)冷凍乾燥後， 得到15 mg(97%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.8 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.79 min；MS(ESI+)：m/z=1083(M+H)⁺.

實例19

N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將40 mg(40 μmol)的中間物227置於5 ml的DMF中處理並與11.5 mg(40 μmol)的N²-[(苄氧基)羰基]-L-離胺酸以及13 μL(80 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜，然後於減壓下濃縮並隨後以製備式HPLC純化。得到32.5 mg(70%之理論值)保護的中間物的標題化合物。

將此32.5 mg的中間物溶於10 ml的甲醇，及加入2 mg的10%活性碳上鈀後，於標準的氫氣壓下於RT氫化30分鐘。以過濾移除催化劑並於減壓下移除溶劑。將殘餘物從二烷/水1：1冷凍乾燥，得到26 mg(99%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.76 min；MS(ESI+)：m/z=1014(M+H)⁺.

實例20

N-[(18S)-18-胺基-18-羧基-12-側氧-3,6,9-三氧-13-氮十八-1-基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基] 吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將3.5 mg(3 μmol)的中間物202置於2 ml的DMF中處理並與0.8 mg(3 μmol)的N²-(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸以及1.6 μL(10 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜及然後於減壓下濃縮。將殘餘物置於乙腈/水(1：1)中處理，以三氟乙酸使pH達到2，及然後以製備式HPLC純化。得到1 mg(25%之理論值)標題化合物之保護的中間物，隨後將其置於500 μl的二氯甲烷中處理並以500 μl的三氟乙酸去保護。將此批件濃縮，及將殘餘物從乙腈/水(1：1)冷凍乾燥後，得到1 mg(89%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.9 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.82 min；MS(ESI+)：m/z=1173(M+H)⁺.

實例21

N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧基乙基]硫基}-2,5-二側氧吡咯啶-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(10 μmol)的中間物157置於5.2 ml的DMF中處理並與2.28 mg(20 μmol)的L-半胱胺酸混合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然 後於減壓下濃縮及隨後以製備式HPLC純化。得到5.8 mg(48%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.45 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.74 min；MS(ESI+)：m/z=1184(M+H)⁺.

實例22

N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧基乙基]硫基}-2,5-二側氧吡咯啶-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(10 μmol)的中間物113置於5.2 ml的DMF中處理並與2.28 mg(20 μmol)的L-半胱胺酸混合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮及隨後以製備式HPLC純化。由此得到6 mg(54%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.5 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.77 min；MS(ESI+)：m/z=1185(M+H)⁺.

實例23

N-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧基乙基]硫基}-2,5-二側氧吡咯啶-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(10 μmol)的中間物124置於4 ml的DMF中處理並與2.5 mg(20 μmol)的L-半胱胺酸混合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮及隨後以製備式HPLC純化。由此得到7.2 mg(64%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.6 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.8 min；MS(ESI+)：m/z=1071(M+H)⁺.

實例24

N-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧基乙基]硫基}-2,5-二側氧吡咯啶-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺

將10 mg(10 μmol)的中間物125置於4 ml的DMF中處理並與2.4 mg(20 μmol)的L-半胱胺酸混合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮及隨後以製備式HPLC純化。由此得到7.7 mg(69%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法5)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法2)：R_t=1.91 min；MS(ESI+)：m/z=1140(M+H)⁺.

實例25

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.27 mg/ml

藥物/mAb比率：1.0

實例26

本處係使用35 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮，以PBS再稀釋並再次濃縮。

蛋白濃度：11.60 mg/ml

藥物/mAb比率：3.7

實例27

本處係使用35 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮，以PBS再稀釋並再次濃縮。

蛋白濃度：11.7 mg/ml

藥物/mAb比率：4.2

實例28

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並以PBS再稀釋。

蛋白濃度：1.31 mg/ml

藥物/mAb比率：3.7

實例29

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將反應混合物以超離心濃縮並以PBS再稀釋。

蛋白濃度：1.53 mg/ml

藥物/mAb比率：1.3

實例30

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將此批件以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.61 mg/ml

藥物/mAb比率：3.9

實例31

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將反應混合物以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.32 mg/ml

藥物/mAb比率：1.7

實例32

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將反應混合物以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.12 mg/ml

藥物/mAb比率：0.2

實例33

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將反應混合物以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.29 mg/ml

藥物/mAb比率：5.5

實例34

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將反應混合物以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.04 mg/ml

藥物/mAb比率：0.5

實例35

本處係使用5 mg的M048-D01-hIgG1-b之PBS溶液進行偶合，及在Sephadex純化後將反應混合物以超離心濃縮並再稀釋。

蛋白濃度：1.66 mg/ml

藥物/mAb-比率：3.4

實例36

N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧 基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

將8 mg(8 μmol)的中間物242置於3 ml的DMF中處理並與2.9 mg(12 μmol)的N²-(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸及2.7 μL(16 μmol)的N,N-二異丙基乙基胺混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜，然後與相同量的N²-(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸和N,N-二異丙基乙基胺混合，並於RT另再攪拌4小時。隨後將此批於減壓下濃縮。然後將殘餘物以製備式HPLC純化。從乙腈/水冷凍乾燥，得到6.5 mg(72%之理論值)標題化合物之保護的中間物，隨後將其置於5 ml的二氯甲烷中處理並以0.75 ml的三氟乙酸去保護。將此批濃縮，及將殘餘物從二烷/水冷凍乾燥，得到5 mg(76%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.7 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.69 min；MS(ESI+)：m/z=1059(M+H)⁺.

實例37

N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(4-羥基苯基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟乙酸鹽

先將38 mg(41 μmol)的中間物248轉變成N-羥基琥珀醯亞胺酯。將得到的72 mg粗產物置於5 ml的DMF中處理並與24 mg(100 μmol)的N²-(第 三丁氧基羰基)-L-離胺酸和23 μL的N,N-二異丙基乙基胺混合。將反應混合物於RT攪拌至隔夜，及然後再次與16 mg的N²-(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸和12 μL的N,N-二異丙基乙基胺混合，並隨後以超音波浴另處理2小時。然後將此批於減壓下濃縮並將殘餘物以製備式HPLC純化。從乙腈/水冷凍乾燥，得到20 mg(50%之理論值)保護的標題化合物之中間物。

隨後將15 mg(12 μmol)的此中間物置於3 ml的二氯甲烷中處理並與1 ml的三氟乙酸混合。於RT攪拌40分鐘後，另再加入1.5 ml的三氟乙酸並將此批以超音波浴處理1小時。之後，將此批濃縮，及將殘餘物從二烷/水冷凍乾燥，得到13 mg(90%之理論值)的標題化合物。

HPLC(方法12)：R_t=1.5 min；LC-MS(方法1)：R_t=0.68 min；MS(ESI+)：m/z=990(M+H)⁺.

C：生物活性之評估：

本發明化合物之生物效應係以下述分析來驗證：

C-1.辨識細胞表面上帶有不同FGFR2量之腫瘤細胞

測定細胞表面上抗體之可取得的FGFR2量，係於流式細胞儀中分析不同腫瘤細胞株上結合FGFR2抗體之細胞。使用下列細胞株進行實驗。就FGFR2之變異和拷貝數之資料係來自桑格中心基因體計畫(Sanger Center Genome Project)：

- SNU-16人類胃癌細胞，FGFR2基因增幅(拷貝數14；ATCC-CRL-5974,RPMI 1640(Biochrom FG1215)+10% FCS

- KatoIII人類人類胃癌細胞，FGFR2基因增幅(拷貝數14 ATCC-TCP-1008；Iscove’s(Biochrom FG0465)+20% FCS

- SUM52-PE人類乳癌細胞，FGFR2基因增幅(拷貝數14；Asterand批號：28062A1-6004；Ham’s F12(Biochrom FG0815)+5% FCS+10 mM Hepes緩衝液+1 μg/ml氫羥腎上腺皮質素+5 μg/ml胰島素

- MFM-223人類乳癌細胞，FGFR2基因增幅(拷貝數14；ECACC-98050130,MEM Earle(Biochrom F0315)+10% FCS+2mM麩胺酸

- NCI-H716人類大腸直腸癌細胞，FGFR2基因增幅(拷貝數：8； ATCC-CCL-251；RPMI 1640(Biochrom FG1215)+10% FCS)

- MDA-MB-231人類乳癌細胞，(無FGFR2基因增幅，拷貝數3；ATCC-HTB-26,DMEM/HAM's F12(Biochrom FG4815)+10% FCS

就實驗而言，將黏附的細胞以PBS(無鈣(Ca²⁺)和鎂(Mg²⁺)離子)沖洗二次並使用無酵素PBS-基底的細胞解離緩衝液(Invitrogen)分離。將大約每孔1×10⁵個細胞懸浮於FACS緩衝液(PBS無Ca²⁺和Mg²⁺，含3% FCS(Biochrom))，接著離心(250 g,5 min,4℃)，並將上清液傾析出。將細胞懸浮於溶於FACS緩衝液之抗體稀釋液(5 μg/ml溶於80 μl)，並於冰上培養1小時。接著，以100 μl冷的FACS緩衝液沖洗一次並加入80 μl之1：150稀釋的二級抗體(GAL-FR21-mIgG1和GAL-FR22-mIgG2a之PE-結合山羊抗-小鼠IgG，Jackson Immuno Research #115-115-164；和M048-D01-hIgG1之PE-結合山羊抗-人類IgG，Dianova #109-115-098)。

於冰上培養1小時後，再次以冷的FACS緩衝液清洗細胞，再懸浮於100 μl的FACS緩衝液中，並以FACS陣列流式細胞儀(BD Biosciences)分析。結果係計算為以FGFR2抗體偵測的細胞族群之幾何平均值，減掉僅以二級抗體培養細胞族群所測量到的背景螢光。以下列系統分析數值：FGFR2抗體幾何平均值減掉僅二級抗體之幾何平均值> 10 +，> 100 ++，> 1000 +++，> 10000 ++++，-：無訊號。接近範圍極限之數值係以()標示。

FGFR2抗體與腫瘤細胞之結合係如表4所示： ¹⁾nb：未測定

FGFR2抗體偵測到MFM-223和SNU-16癌細胞之細胞表面上的FGFR2。

C-2.測定針對FGFR2之ADC的細胞毒性效應

如下，測定FGFR2 ADC對各種帶有不同FGFR2表現量之細胞株的細胞毒性效應：

根據標準方法，使用如C-1所示的生長培養基來培養細胞。就執行上，係以胰蛋白酶(0.05%)和EDTA(0.02%)之PBS溶液(Biochrom AG #L2143)分離細胞，團化，再懸浮於培養基中，計數並植入白底的96孔盤(Costar #3610)(75 μl/孔，依照每孔之細胞數：SNU-16：3000；MFM-223：7000；MDA-MB-231：4000；SUM52-PE：3000；NCI-H716：3000；KatoIII：3000)並於培養器中以37℃和5%二氧化碳培養。24小時後，於細胞施予溶於25 μl培養基之抗體-藥物接合體(四-倍濃度)，得到細胞上3×10^-7 M至3×10^-11 M之最終的抗體-藥物接合體濃度(三重複)。然後將細胞置於培養器中以37℃和5%二氧化碳培養。在一平行的測定盤中，在藥物處理開始時(0天)使用Cell Titer Glow Luminescent細胞存活率分析(Promega #G7573和#G7571)測定細胞的活力。就此，係於每批細胞中加入100 μl的基質，及然後將測定盤以鋁箔覆蓋，以盤式震盪器於180 rpm震盪2分鐘，於實驗台上放置8分鐘，及然後使用光度計(Victor X2,Perkin Elmer)測量。此基質係偵測活細胞中ATP的含量，產生一冷光訊號，其量係直接與細胞存活率成正比。以抗體-藥物接合體培養72小時後，如上述使用Cell Titer Glow Luminescent細胞存活率分析同樣測量這些細胞的存活力。從測量的數據，與0天的數據相比較，使用以4-參數適應為基礎之實驗室軟體MTS(由Schering AG和Bayer Business Services 1999-2009所開發)來計算生長抑制之IC₅₀。

下表5係列出此分析中代表性操作實例之IC₅₀值¹⁾： ¹⁾所提出的活性數據係關於本試驗章節中所述的操作實例，具有所指的藥物 /mAb比率。對不同的藥物/mAb比率，此數值可能偏離。

操作實例1，以次奈莫耳濃度範圍之IC50，抑制了在細胞表面表現FGFR2之SNU-16和MFM-223癌細胞株的增生。操作實例1，以300 nM.之IC50，抑制了在細胞表面無FGFR2表現之MDA-MB-231癌細胞株的增生。從數據中明顯的，所有試驗的抗體-藥物接合體(操作實例1-31、33-35)選擇性抑制了表現FGFR2之癌細胞株的增生(SNU-16、MFM-223、SUM52-PE、KatoIII或NCI-H716)。

C-3.測定對微管蛋白聚合之效應

癌細胞為變性細胞，其由於細胞分裂增加，常導致腫瘤形成。微管形成紡錘體之紡錘絲並且為細胞週期之必要組成。微管規則性的建構和破壞使子代細胞中染色體得以精確的分裂，及構成持續的動態流程。中斷此動態流程導致不正確的細胞分裂及最後細胞死亡。然而，癌細胞之細胞分裂增加亦使其對紡錘絲毒素(構成化療之固定組成份)特別敏感。紡錘絲毒素，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)或伊波希隆(epothilone)導致微管之聚合率劇烈增加，而長春鹼或其他單甲基奧瑞他汀E(MMAE)則導致微管的聚合率劇烈降低。在這二種情況下，此必要的細胞週期動態性被嚴重地打斷。

使用Cytoskeleton公司(Denver,Colorado,USA；訂購編號：BK011)之「螢光微管聚合化分析套組」評估微管蛋白聚合化。以此分析，將GTP加到未聚合的微管蛋白使聚合化自發性發生。此分析係以螢光團4',6-二甲脒基-2-苯基吲哚(DAPI)與微管蛋白之結合為基礎。游離和結合的DAPI可基於不同的發射光譜來區分。因為相較於未聚合的微管蛋白，DAPI對於聚合的微管蛋白具有相當高的親和力，所以微管蛋白聚合可經由結合的DAPI螢光團之增加的螢光來追蹤。

對於施行此分析，係將本發明化合物之DMSO溶液從起初的濃度10 mM以水稀釋至1 μM。除了緩衝液對照組外，亦另外進行具增加聚合效應之太平洋紫杉醇(paclitaxel)，及具抑制聚合化效應之長春鹼(vinblastin)作為分析對照組。測量係使用帶有一半基底區之96-孔盤來進行。微管蛋白聚合之動力學係以螢光計(Fluorimeter)於37℃監測1小時。激發光波長為 355 nm，而發射光係於460 nm監測。在前10分鐘內線性增加之區域，計算每分鐘螢光的變化(△F/min)，其代表微管之聚合率。試驗物質之效力係以其個別的聚合下降率為基準來定量。下表6係給與代表性操作實例對微管蛋白聚合作用之影響的數據。

MMAF帶毒體及操作實例係以其濃度之函數抑制微管蛋白聚合。於100 μM MMAF時，微管蛋白聚合完全被抑制。本發明內文中所評估的化合物使微管蛋白聚合率下降。操作實例18-21於1 μM時，將微管蛋白聚合化作用抑制至1 μM MMAF測量值的45-88%。

C-4.測定細胞通透性之活體外試驗

物質的細胞通透性可藉由於活體外試驗以通量分析使用Caco-2細胞來評估[M.D.Troutman和D.R.Thakker,Pharm.Res.20(8),1210-1224(2003)]。就此目的，將細胞置於24-孔過濾盤上培養15-16天。就滲透作用之測定，係將個別的操作實例之HEPES緩衝液以頂端(A)或基部(B)施用於細胞，並培養2小時。0小時及2小時後，將樣本從順槽和反槽取出。將樣本以HPLC(Agilent 1200,Böblingen,Germany)使用逆相管柱分離。HPLC系統係經由渦輪增壓離子噴霧界面與三段四極質譜儀API 4000(Applied Biosystems Applera,Darmstadt,Germany)結合。通透性係以P_app值為基準來評估，該值係使用Schwab等人所發表的公式來計算[D.Schwab等人，J.Med.Chem.46,1716-1725(2003)]。

對於胞內釋放帶毒體非常重要的為從B到A之通透性[P_app(B-A)]：此通透性越低，則操作實例在胞內釋放後停留在細胞的時間越長，而因此可與生化標靶(在本案例為：微管蛋白)作用的時間亦越長。

下表7係說明本分析之代表性操作實例的通透性數據：

操作實例具有低的B至A之通透性[P_app(B-A)，而因此在CaCo-2細胞中具有較長的停留時間。比較起來，單甲基奧瑞他汀E(MMAE)和單甲基奧瑞他汀F(MMAF)在此試驗中具有73 nm/s之P_app(B-A)值，而因此在Caco-2細胞中具有明顯較短的停留時間。

C-5.測定P-糖蛋白(P-gp)之基質性質的活體外試驗

許多腫瘤細胞對藥物係表現轉運蛋白，且此項通常伴隨對細胞抑制劑產生抗藥性。非此等轉運蛋白之基質，例如P-糖蛋白(P-gp)或BCRP，因此可能具有改良的活性性質。

P-gp(ABCB1)物質之基質性質係藉由通量分析使用表現P-gp之LLC-PK1細胞(L-MDR1細胞)來測定[A.H.Schinkel等人，J.Clin.Invest.96,1698-1705(1995)]。就此目的，係將LLC-PK1細胞或L-MDR1細胞於96-孔過濾盤上培養3-4天。就滲透性之測量，係將個別的試驗物質單獨或在抑制劑(例如伊維菌素(Ivermectin)或維拉帕米(Verapamil))之存在下於HEPES緩衝液中以頂端(A)或基部(B)施用於細胞並培養2小時。0小時及2小時後，將樣本從順槽和反槽取出。將樣本以HPLC使用逆相管柱分離。HPLC系統 係經由渦輪增壓離子噴霧界面與三段四極質譜儀API 3000(Applied Biosystems Applera,Darmstadt,Germany)結合。通透性係以P_app值為基準加以評估，該值係使用Schwab等人所發表的公式來計算[D.Schwab等人，J.Med.Chem.46,1716-1725(2003)]。

對於胞內釋放帶毒體非常重要的為從B到A之通透性[P_app(B-A)]：通透性越低，則操作實例在胞內釋放後停留在細胞的時間越長，而因此可與生化標靶(在本案例為：微管蛋白)作用的時間亦越長。

下表8係列出本分析(其係於L-MDR1細胞中進行)之代表性操作實例的通透性數據：

操作實例具有低的B至A之通透性[P_app(B-A)，而因此在L-MDR1細胞中具有較長的停留時間。

C-6. SNU-16腫瘤細胞之藥物動力學

在靜脈給予各種ADC後，測量ADC以及潛在的代謝物之血漿濃度和腫瘤濃度並計算藥物動力學，例如廓清率(CL)、曲線下面積(AUC)和半衰期(t_1/2)。

可能產生的代謝物之定量分析

測量血漿和腫瘤中之化合物係在以甲醇沉澱蛋白後，藉由高壓液相層析(HPLC)結合串聯式質譜儀(MS)來進行。

就100 μL血漿之處理，係將其與400 μL的甲醇和10 μL的內標(ISTD,50 ng/mL之甲醇溶液)混合，並震盪10秒。以16 000 g離心5分鐘後，將250 μL的上清液轉置於自動取樣機的微量瓶中，將其加入250 μL的乙酸銨緩衝液(AAC,10 mM,pH 6.8)，並再次震盪。

就腫瘤之處理，係將其與4倍量的甲醇混合。於組織研磨機Tissuelyser II(Quiagen)中，將樣本以每分鐘30次衝擊粉碎6分鐘，及然後以16 000 g離心5分鐘。將50 μL的上清液轉置於自動取樣機的微量瓶中並加入50 μL的乙酸銨緩衝液(10 mM,pH 6.8)和5 μL的ISTD。再次震盪後，腫瘤樣本即可供測量。

二種基質樣本之測量係最後在HPLC-結合大氣壓離子化/串聯式質譜儀，藉由渦輪增壓噴霧介面於SCIEX之API4000儀器上進行。

HPLC/LC-MSMS(TISP)分析係於帶有Gemini管柱(5 μm C18 110 A,50×3 mm,Phenomenex)之HP1100幫浦(Agilent)來操作。

C-7.活體內試驗

本發明接合體之活性係於活體內，以例如異種移植模型來試驗。熟習技術者已知先前技術中用於試驗本發明化合物活性之方法(參見，例如WO 2005/081711；Polson等人，Cancer Res.2009 Mar 15；69(6)：2358-64)。就此目的，例如於囓齒類(例如小鼠)植入表現黏合劑標靶分子之腫瘤細胞株。隨後於這些帶有腫瘤的動物投予本發明接合體或對照組抗體或等張鹽溶液。給藥可單一或更頻繁進行。以游標尺每周二次測量腫瘤生長。在腫瘤生長數周後，將接合體治療的動物與對照組作比較。接合物治療的動物顯示明顯較小的腫瘤。

C-7a.小鼠中實驗腫瘤之ADC試驗

將表現FGFR2之人類腫瘤細胞皮下注射至免疫抑制小鼠，例如裸小鼠或SCID小鼠的側腹。從細胞培養中分離1百萬-1千萬個細胞，離心及以100 μl的培養基、50%培養基/50%基質膠或100%基質膠(Matrigel)再懸浮。將細胞懸浮液注射至小鼠的皮膚下。

於數天內，使腫瘤生長。在腫瘤建立後，腫瘤大小為20-25 mm²之後才開始治療。

接合體之治療係經由靜脈路徑進入小鼠尾靜脈來進行。將接合體溶於PBS並以5-10 ml/kg之量給藥。

治療流程係以抗體的藥物動力學來管控。治療係每四天或每七天進行三次，作為標準。然而，治療亦可進一步持續進行，或於以後的某時間點接著第二輪的三天治療。

每個治療組使用8隻動物作為基準。若於腫瘤生長或預期的治療後有特別大的波動，則此數量可較高。如同接受活性物質之組別，一組作為對照組之組別，係依照相同的流程僅以緩衝劑治療。

在實驗期間，定期地使用二維(長/寬)游標尺測量腫瘤面積。腫瘤的面積係以長x寬之公式來計算。

實驗終了時，移出腫瘤並稱重。治療組(T)與對照組(C)之腫瘤平均重量的比率係以T/C表示。若對照組和治療組於不同的時間完成，則使用所有治療組和對照組之最近期共同測量的腫瘤面積來計算T/C值。

C-7b.小鼠之SNU-16異種移植模型中FGFR2-ADC之試驗

將2百萬的SNU-16胃癌細胞以皮下接種至雌性NODscid小鼠的側腹。

在腫瘤平均大小為20-30 mm²時，開始進行接合體之靜脈治療。當對照組達到最大可允許大小時，結束這些組試驗。當腫瘤開始再次\生長時，結束以FGFR2接合體治療的實驗組。於第31天測定接合體之活性，在最後的時間點媒劑對照組仍在實驗中。所有試驗的FGFR2接合體皆以劑量依賴的方式抑制腫瘤生長。在5 mg/kg之劑量時，實例1達到0.08之T/C，實例3為0.06之T/C而實例26為0.10之T/C。對於所有試驗的動物，於此時間點腫瘤比治療開始時更小(腫瘤之部分縮小)。於2.5 mg/kg之劑量時，實例26達到0.14之T/C。於此劑量時，實例26造成40%動物之部分縮小。於1 mg/kg之劑量時，實例1達到0.15之T/C而實例3為0.36。於此劑量時，實例1造成所有經治療的動物部分縮小，而實例3並未得到部份縮小。相較於對照組，所有的試驗接合體皆達到顯著的抗-腫瘤效應，至高1 mg/kg 之劑量。對應的對照抗體-接合體在此模型中於相同的劑量並未顯示活性。

C7c小鼠之MFM-223異種移植模型中FGFR2-ADC之試驗

將1仟萬MFM-223乳癌細胞以皮下接種至雌性NMRI nu/nu小鼠之側腹。這些小鼠之前已補充雌二醇藥丸。

在腫瘤平均大小為30-35 mm²時，開始進行接合體之靜脈治療。在第40天當對照組達到最大可允許大小時，結束所有這些治療組並確認腫瘤重量。實例26，在10 mg/kg之劑量時達到0.09之T/C，在在5 mg/kg之劑量時為0.13之T/C，而1 mg/kg之劑量為0.26之T/C。相較於對照組，所有的三種劑量之治療皆達到顯著的抗-腫瘤效應。對應的對照抗體-接合體在此模型中僅於10 mg/kg劑量時顯示出顯著的非專一性效應。

C7d小鼠之NCI-H716異種移植模型中FGFR2-ADC之試驗

將150萬NCI-H716腸癌細胞以皮下接種至雌性NMRI nu/nu小鼠之側腹。

在腫瘤平均大小為25-30 mm2時，開始接合體之靜脈治療。在第36天當對照組達到最大可允許大小時，結束所有這些治療組並確認腫瘤重量。實例26之治療，在5 mg/kg之劑量時造成腫瘤重量顯著降低，達到0.24之T/C。在此劑量時，對應的對照接合體在此模型中皆無活性。

D.醫藥組成物之操作實例

本發明化合物可如下轉變為醫藥製備物：

i.v.溶液：

將本發明化合物以低於飽和溶解度之濃度溶於生理上可耐受的溶劑中(例如等張的食鹽水溶液、D-PBS或帶有甘油和氯化鈉溶於檸檬酸緩衝液中添加山梨醇酯80之調配物)。將溶液進行無菌過濾並分散於無菌和無病原之注射容器中。

i.v.溶液：

本發明化合物可轉變為所述的給藥形式。其可以已知的方法，藉由「混 合」或「溶解」於惰性、無毒的醫藥上適合的賦形劑(例如緩衝劑物質、安定劑、增溶劑、防腐劑)中來進行。例如可存有下列物質：胺基酸(甘胺酸、組胺酸、甲硫胺酸、精胺酸、離胺酸、白胺酸、異白胺酸、蘇胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及其他)、糖及相關化合物(葡萄糖、蔗糖、甘露醇、海藻糖、蔗糖、甘露糖、乳糖、山梨醇)、甘油、鈉鹽、鉀、銨鹽和鈣鹽(例如氯化鈉、氯化鉀或磷酸氫二鈉及許多其他)、乙酸鹽/乙酸緩衝系統、磷酸緩衝系統、檸檬酸和檸檬酸緩衝系統、胺丁三醇(trometamol)(TRIS和TRIS鹽)、聚山梨醇酯(例如Polysorbate 80和Polysorbate 20)、泊洛沙姆(Poloxamer)(例如泊洛沙姆188和泊洛沙姆171)、聚乙二醇(Macrogol)(PEG，例如3350)、Triton X-100、EDTA鹽、麩胱甘肽、白蛋白(例如人類)、尿素、苄基醇、酚、氯甲酚、間甲酚、苯札氯銨(benzalkonium chloride)及許多其他。

用於後續轉變為i.v.、s.c.或i.m.溶液之凍乾物：

另外，本發明化合物可轉變為穩定的凍乾物(可在上述賦形劑之幫助下)，及在給藥前，以適合的溶劑(例如注射等級的水、等張食鹽水溶液)重建並給藥。

<110> 拜耳智慧財產有限公司 拜耳製藥股份有限公司 西雅圖遺傳學公司

<120> 新黏合劑-藥物接合體(ADC)及其用途

<130> BHC 11 1 026-Ausland

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<213> 智人

<400> 17

<210> 18

<211> 13

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<213> 智人

<400> 18

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<400> 23

Claims (41)

1. 一種通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體， 其中n為1至50之數字，AK為與FGFR2結合之黏合劑，§-G-L¹-B-§§基團為連接子，其中§係標示與AK基團之連接位置，及§§係標示與氮原子之連接位置，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立地由甲基、羥基和苄基組成之群中選出的取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫或甲基，R²為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要羥取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置， R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫或甲基，R⁴為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R²⁶為氫或羥基，T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
2. 如申請專利範圍第1項之通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中n為1至50之數字，AK為AK₁或AK₂其中AK₁為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之硫原子與G基團相鍵結，AK₂為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之氮原子與G基團相鍵結，當AK=AK₁時，G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑之硫原子的連接位置，#²係標示與L¹基團之連接位置，或當AK=AK₂時，為羰基，L¹為一鍵、直鏈(C₁-C₁₀)-烷二基、下式之基團 其中m為2至6之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，L^1A為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基，B¹為下式之基團 其中 ##⁵係標示與L^1A基團之連接位置，##⁶係標示與L^1B基團之連接位置，L⁵為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁶為一鍵或下式之基團 其中##⁷係標示與羰基基團之連接位置，##⁸係標示與L^1B之連接位置，R³³為氫、(C₁-C₄)-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，R³⁴為氫或甲基，R²⁹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²⁹和R³⁰與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R³¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R³¹和R³²與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，L^1B為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基、及其中(C₁-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立地由甲基、羥基和苄基組成之群中選出的取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團 其中*係標示與L¹之連接位置，**係標示與L²之連接位置，P為O或NH，L³為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁴為一鍵或下式之基團 其中***係標示與羰基基團之連接位置，****係標示與L²之連接位置，R²⁵為氫或甲基，R²⁸為氫、(C₁-C₄)-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，Q¹為4-至7-員雜環，Q²為3-至7-員雜環或4-至7-員雜環，R¹⁴為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁵為氫或(C₁-C₄)-烷基， 或R¹⁴和R¹⁵與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環、R¹⁶為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁶和R¹⁷與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R¹⁸為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁹為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R²⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁹和R²⁰與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環，R²¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R²²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²¹和R²²與其相鍵結之原子共同形成3-至7-員雜環，R²³為(C₁-C₄)-烷基，R²⁴為氫或(C₁-C₄)-烷基，R²⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³⁶為氫、(C₁-C₄)-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，R³⁷為氫或甲基，或R³⁶和R³⁷與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶環，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置， 其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立地由甲基、羥基和苄基組成之群中選出的取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫或甲基，R²為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫或甲基，R⁴為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基， 或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R²⁶為氫或羥基，T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
3. 如申請專利範圍第1或2項之通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中n為1至20之數字，AK為AK₁或AK₂其中AK₁為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵結，AK₂為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵結，當AK=AK₁時，G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#²係標示與L¹基團之連接位置，或當AK=AK₂時，為羰基，L¹為一鍵、直鏈(C₂-C₆)-烷二基、下式之基團 其中m為2至6之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，L^1A為直鏈(C₂-C₆)-烷二基、B¹為下式之基團 其中##⁵係標示與L^1A基團之連接位置，##⁶係標示與L^1B基團之連接位置，L⁵為一鍵，L⁶為一鍵或下式之基團 其中##⁷係標示與羰基基團之連接位置，##⁸係標示與L^1B之連接位置，R³³為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R³⁴為氫或甲基，R²⁹為氫，R³⁰為氫，R³¹為氫或甲基，R³²為氫或甲基，L^1B為直鏈(C₂-C₆)-烷二基、及其中(C₂-C₆)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中 *係標示與L¹之連接位置，**係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙-1,2-二基，L⁴為一鍵或下式之基團 其中***係標示與羰基基團之連接位置，****係標示與L²之連接位置，R²⁵為氫或甲基，R²⁸為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，Q¹為4-至7-員雜環，R¹⁴為氫，R¹⁵為氫，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，或R¹⁶和R¹⁷與其相鍵結之原子共同形成哌基環，R¹⁸為氫，R¹⁹為氫、甲基、丙-2-基、2-甲基丙-1-基或1-甲基丙-1-基，R²⁰為氫或甲基，或R¹⁹和R²⁰與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環，R²¹為氫或甲基，R²²為氫或甲基，或R²¹和R²²與其相鍵結之原子共同形成環丙基環， R²³為甲基，R²⁴為氫或甲基，R²⁷為氫，R³⁶為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R³⁷為氫或甲基，或R³⁶和R³⁷與其相鍵結之原子共同形成一吡咯啶環，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫，R⁴為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置， T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R²⁶為氫或羥基，T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中n為1至10之數字，AK為AK₁或AK₂ 其中AK₁為為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵結，AK₂為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵結，當AK=AK₁時，G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#²係標示與L¹基團之連接位置，或當AK=AK₂時，為羰基，L¹為一鍵、直鏈(C₂-C₆)-烷二基、下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，其中(C₂-C₆)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中*係標示與L¹之連接位置，**係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙-1,2-二基，L⁴為一鍵或下式之基團 其中***係標示與羰基基團之連接位置，****係標示與L²之連接位置，R²⁵為甲基，R²⁸為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，Q¹為哌啶-1,4-二基，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，或R¹⁶和R¹⁷與其相鍵結之原子共同形成哌基環，R²¹為氫或甲基，R²²為氫或甲基，或 R²¹和R²²與其相鍵結之原子共同形成環丙基環，R²³為甲基，R²⁴為氫，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置、D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中 #⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫，R⁴為苄基、1-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基， R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與苯基-CHCH₂之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
5. 如申請專利範圍第1至4項中任一項之通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中n為1至10之數字，AK為AK₂其中AK₂為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵結，G為羰基，L¹為一鍵，B為一鍵，L²為直鏈(C₃-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置、D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R³為氫，R⁴為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或 R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷或-C(=O)-NR⁸R⁹之基團其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫，R⁹為氫或苄基，R³⁵為甲基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
6. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體，其中n為1至10之數字，AK為AK₁其中AK₁為黏合劑，其係與FGFR2結合並經由黏合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵結，G為下式之基團 其中#¹係標示與黏合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#²係標示與L1基團之連接位置，L¹為一鍵、直鏈(C₃-C₅)-烷二基或下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，其中(C₃-C₅)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中*係標示與L¹之連接位置，**係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙-1,2-二基，L⁴為一鍵或下式之基團 其中***係標示與羰基基團之連接位置，****係標示與L²之連接位置，R²⁵為甲基，R²⁸為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R¹⁶為氫或甲基， R¹⁷為氫或甲基，或R¹⁶和R¹⁷與其相鍵結之原子共同形成哌基環，L²為直鏈(C₃-C₅)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置、D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中 #⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R³為氫，R⁴為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷或-C(=O)-NR⁸R⁹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫，R⁹為氫或苄基，R³⁵為甲基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
7. 一種通式(Ia)之黏合劑-藥物接合體， 其中n為1至50之數字，AK為與FGFR2結合之黏合劑，§-G-L¹-B-§§基團為一黏合劑，其中§係標示與AK基團之連接位置，及§§係標示與氮原子之連接位置，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立地由甲基、羥基和苄基組成之群中選出的取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，D為下式之基團，其中*與氮原子之連接位置， 以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
8. 一種下式之化合物 其中AK為與FGFR2結合之黏合劑，而n為1至10之數字，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
9. 一種下式之化合物 其中AK為與FGFR2結合之抗體或抗體片段，而n為1至10之數字，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
10. 一種下式之化合物 其中AK2A為M048-D01-hIgG1而n為1至10之數字，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
11. 一種下式之化合物 其中AK2B為M048-D01-hIgG1-b而n為1至10之數字，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
12. 一種式(XXXa)之化合物 其中Cys為半胱胺酸殘基，其係經由側鏈之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵結，L¹為一鍵、直鏈(C₁-C₁₀)-烷二基、下式之基團 其中m為2至6之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，L^1A為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基、B¹為下式之基團 其中##⁵係標示與L^1A基團之連接位置，##⁶係標示與L^1B基團之連接位置，L⁵為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁶為一鍵，R²⁹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²⁹和R³⁰與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環、R³¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R³¹和R³²與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，L^1B為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基、及其中(C₁-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立地由甲基、羥基和苄基組成之群中選出的取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環， B為一鍵或下式之基團 其中*係標示與L¹之連接位置，**係標示與L²之連接位置，P為O或NH，L³為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁴為一鍵，Q¹為4-至7-員雜環，Q²為3-至7-員雜環或4-至7-員雜環，R¹⁴為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁵為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁴和R¹⁵與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R¹⁶為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁶和R¹⁷與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R¹⁸為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁹為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R²⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁹和R²⁰與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環， R²¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R²²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²¹和R²²與其相鍵結之原子共同形成3-至7-員雜環，R²³為(C₁-C₄)-烷基，R²⁴為氫或(C₁-C₄)-烷基，R²⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立地由甲基、羥基和苄基組成之群中選出的取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫或甲基，R²為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、 4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫或甲基，R⁴為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T1基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R²⁶為氫或羥基， T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
13. 如申請專利範圍第12項之式(XXXa)化合物，其中Cys為半胱胺酸殘基，其係經由側鏈之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵結，L¹為一鍵、直鏈(C₂-C₆)-烷二基、下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，L^1A為直鏈(C₂-C₆)-烷二基、B¹為下式之基團 其中##⁵係標示與L^1A基團之連接位置，##⁶係標示與L^1B基團之連接位置，L⁵為一鍵，L⁶為一鍵，R²⁹為氫，R³⁰為氫，R³¹為氫或甲基，R³²為氫或甲基，L^1B為直鏈(C₂-C₆)-烷二基，及 其中(C₂-C₆)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中*係標示與L¹之連接位置，**係標示與L²之連接位置，L³為一鍵或乙烷-1,2-二基，L⁴為一鍵，R¹⁴為氫，R¹⁵為氫，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，或R¹⁶和R¹⁷係與其相鍵結之原子共同形成哌基環，R²³為甲基，R²⁴為氫或甲基，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置， D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基， R³為氫、R⁴為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可於苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHCH₂苯基之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代， R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
14. 如申請專利範圍第12或13項之式(XXXa)化合物，其中Cys為半胱胺酸殘基，其係經由側鏈之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵結，L¹為一鍵或直鏈(C₂-C₆)-烷二基，B為一鍵或下式之基團 其中*係標示與L¹之連接位置，**係標示與L²之連接位置，L³為一鍵，L⁴為一鍵，R¹⁶為氫或甲基，R¹⁷為氫或甲基，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置、D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置、#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R³為氫，R⁴為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基， 或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷或-C(=O)-NR⁸R⁹之基團，其中R⁷為氫，R⁸為氫，R⁹為氫，R³⁵為甲基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
15. 一種式(XXXI)之化合物 其中L¹為一鍵、直鏈(C₁-C₁₀)-烷二基、下式之基團 其中m為2至6之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，L^1A為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基、B¹為下式之基團 其中##⁵係標示與L^1A基團之連接位置，##⁶係標示與L^1B基團之連接位置，L⁵為一鍵或(C₂-C₄)-烷二基，L⁶為一鍵，R²⁹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R²⁹和R³⁰與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，R³¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R³²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R³¹和R³²與其相鍵結之原子共同形成5-或6-員雜環，L^1B為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基、及其中(C₁-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立地由甲基、羥基和苄基組成之群中選出的取代基取代， 及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團 其中*係標示與L¹之連接位置，**係標示與L²之連接位置，P為O或NH，Q¹為4-至7-員雜環，Q²為3-至7-員雜環或4-至7-員雜環，R¹⁸為氫或(C₁-C₄)-烷基，R¹⁹為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R²⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基，或R¹⁹和R²⁰與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環，R²¹為氫或(C₁-C₄)-烷基，R²²為氫或(C₁-C₄)-烷基，或 R²¹和R²²與其相鍵結之原子共同形成3-至7-員碳環，R²⁷為氫或(C₁-C₄)-烷基，L²為直鏈(C₂-C₁₀)-烷二基或為下式之基團 其中p為2至6之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1至4個各自獨立地由甲基、羥基和苄基組成之群中選出的取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,2-、1,3-或1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成(C₃-C₆)-環烷基環或苯基環，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫或甲基，R²為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基， 或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置、R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫或甲基，R⁴為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯乙基、二苄基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 #⁹係標示與-CHC(R²⁶)-T²之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代， R²⁶為氫或羥基，T²為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R³⁵為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
16. 如申請專利範圍第15項之式(XXXI)化合物，其中L¹為一鍵、直鏈(C₂-C₆)-烷二基或下式之基團 其中m為2或3之數字，##¹係標示與G基團之連接位置，##²係標示與B基團之連接位置，其中(C₂-C₆)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團 其中*係標示與L¹之連接位置，**係標示與L²之連接位置，R¹⁸為氫，R¹⁹為甲基、丙-2-基、2-甲基丙-1-基或1-甲基丙-1-基，R²⁰為氫或(C₁-C₄)-烷基， 或R¹⁹和R²⁰與其相鍵結之原子共同形成吡咯啶基環，R²¹為氫或甲基，R²²為氫或甲基，或R²¹和R²²與其相鍵結之原子共同形成環丙基環，R²⁷為氫或甲基，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，其中(C₂-C₁₀)-烷二基可經1或2個甲基取代基取代，及其中烷二基鏈中相互為1,4-關係的二個碳原子同時包括位於其間的任何碳原子，可經橋聯形成苯基環，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫， R²為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫，R⁴為1-羥乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環 丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置，T¹為式-C(=O)-OR⁷、-C(=O)-NR⁸R⁹、-C(=O)-NH-NH-R¹⁰或-CH₂-O-R¹¹之基團，其中R⁷為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R⁸為氫或甲基，R⁹為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R⁸和R⁹係與其相鍵結之氮原子共同形成4-至7-員雜環，R¹⁰為苄醯基，R¹¹為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R⁵為氫、甲基或下式之基團 其中#⁹係標示與-CHCH₂苯基之連接位置，R¹²為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)₂OH之基團取代，R¹³為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R³⁵為甲基或羥基， 以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
17. 如申請專利範圍第15或16項之式(XXXI)化合物，其中L¹為一鍵，B為一鍵，L²為直鏈(C₂-C₆)-烷二基或為下式之基團 其中p為2或3之數字，##³係標示與B基團之連接位置，##⁴係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中#³係標示與氮原子之連接位置，R¹為氫，R²為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R¹和R²係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁴係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁵係標示與羰基基團之連接位置，其中存有N-O基團之A環為下式之單-或雙環狀、視需要經取代之雜環 其中#⁶係標示與羰基基團之連接位置，R⁶為氫、羥基或苄氧基，R³為氫，R⁴為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R³和R⁴係與其相鍵結之碳原子共同形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#⁷係標示與相鄰氮原子之連接位置，#⁸係標示與T¹基團之連接位置， T¹為式-C(=O)-OR⁷或-C(=O)-NR⁸R⁹之基團，其中R⁷為氫，R⁸為氫，R⁹為氫，R³⁵為甲基，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
18. 一種製備如申請專利範圍第1至11項中任一項之通式(Ia)本發明化合物的方法，其特徵在於將溶於緩衝液之黏合劑溶液[A]與適合的還原劑，例如二硫蘇糖醇或叁(2-羧乙基)膦鹽酸鹽混合，及隨後與式(II)化合物反應， 其中D、L¹、B、L²和R³⁵各具有如申請專利範圍第1至11項中任一項所示之定義，得到式(I-A)之化合物 其中n、AK₁、D、L¹、B、L²和R³⁵各具有如申請專利範圍第1至11項中所示之定義， 或[B]與式(III)之化合物反應 其中D、L¹、B、L²和R³⁵各具有如申請專利範圍第1至11項中所示之定義，得到式(I-B)之化合物 其中n、AK₂、D、L¹、B、L²和R³⁵各具有如申請專利範圍第1至11項中所示之定義。
19. 一種以如申請專利範圍第18項之方法所製備的化合物，其中AK₁和AK₂為一抗體，其係包括6個M048-D01-hIgG1或M048-D01-hIgG1-b抗體之CDR序列，M048-D01-hIgG1或M048-D01-hIgG1-b抗體之可變輕鏈和可變重鏈，或M048-D01-hIgG1或M048-D01-hIgG1-b抗體之氫鏈和重鏈，以及其鹽類、溶劑化物和鹽類之溶劑化物。
20. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑係專一性與FGFR2結合。
21. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏 合劑係與FGFR2之胞外區結合。
22. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中FGFR2為FGFR2α及/或FGFR2β。
23. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑係與FGFR2之胞外N-端抗原決定區(¹RPSFSLVEDTTLEPE¹⁵)結合。
24. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑係與人類FGFR2以及鼠類FGFR2結合。
25. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑，在與標靶分子之FGFR2結合後，被結合的標靶細胞內化。
26. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑為一結合蛋白。
27. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑為一抗體或其抗原結合抗體片段。
28. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑為一單株抗體或其抗原結合抗體片段。
29. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑為人類、人源化或嵌合抗體或其抗原結合抗體片段。
30. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑為一IgG抗體或其抗原結合抗體片段。
31. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑為一IgG1抗體或其抗原結合抗體片段。
32. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑係與GAL-FR21、GAL-FR22或M048-D01-hIgG1抗體相競爭和癌標靶分子FGFR2之結合。
33. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏 合劑係包括以SEQ ID NO：15(H-CDR1)、SEQ ID NO：16(H-CDR2)、SEQ ID NO：17(H-CDR3)、SEQ ID NO：18(L-CDR1)、SEQ ID NO：19(L-CDR2)和SEQ ID NO：20(L-CDR3)代表的M048-D01-hIgG1抗體之可變輕鏈和重鏈之CDR序列的胺基酸序列，以SEQ ID NO：12(Vl)和SEQ ID NO：11(Vh)代表的M048-D01-hIgG1抗體之可變輕鏈和重鏈之胺基酸序列，以SEQ ID NO：14(Vl)和SEQ ID NO：13(Vh)代表的M048-D01-hIgG1-b抗體之可變輕鏈和重鏈的胺基酸序列，以SEQ ID NO：9(輕鏈)和SEQ ID NO：10(重鏈)代表的M048-D01-hIgG1-b抗體之輕鏈和重鏈的胺基酸序列，以SEQ ID NO：7(輕鏈)和SEQ ID NO：8(重鏈)代表的M048-D01-hIgG1抗體之輕鏈和重鏈的胺基酸序列，或GAL-FR21或GAL-FR22抗體之可變輕鏈和重鏈的胺基酸序列。
34. 如前述申請專利範圍中任一項之黏合劑-藥物接合體，其中該黏合劑係包括以SEQ ID NO：14(Vl)和SEQ ID NO：13(Vh)代表的M048-D01-hIgG1-b抗體之可變輕鏈和重鏈的胺基酸序列，以SEQ ID NO：9(輕鏈)和SEQ ID NO：10(重鏈)代表的M048-D01-hIgG1-b抗體之輕鏈和重鏈的胺基酸序列，。
35. 如申請專利範圍第1至34項中任一項之黏合劑-藥物接合體或化合物，係用於治療及/或預防疾病。
36. 如申請專利範圍第1至34項中任一項之黏合劑-藥物接合體或化合物，係用於供治療及/或預防過度增生及/或血管新生疾病之方法。
37. 如申請專利範圍第1至34項中任一項之黏合劑-藥物接合體，係用於製造供治療及/或預防過度增生及/或血管新生疾病的醫藥 品。
38. 一種醫藥品，其係包括如申請專利範圍第1至34項中任一項之黏合劑-藥物接合體或化合物，與一惰性、無毒之醫藥上可接受賦形劑組合。
39. 一種醫藥品，其係包括如申請專利範圍第1至34項中任一項之黏合劑-藥物接合體或化合物，與一或多種抗增生、細胞抑制或細胞毒性物質組合。
40. 如申請專利範圍第38或39項之醫藥品，係用於治療及/或預防過度增生及/或血管新生疾病。
41. 一種使用一有效量之至少一種如申請專利範圍第1至34項中任一項之黏合劑-藥物接合體或化合物或如申請專利範圍第39或40項所定義之醫藥品的方法，用於治療及/或預防人類和動物之過度增生及/或血管新生疾病。