TARIFNAME KARACIGER RAHATISZLIKLARININ TEDAVISI IÇIN 1,3-DIFENILPROP-2-EN-i-ON TÜREVLERININ KULLANIMI Teknik Alan Bulus farmasötik bilesimlerin hazlEllanmasIa hepatokoruyucu etkilere sahip bilesiklerin kullanIiIarEiIe ve bunlarlEl karaciger sirozu, alkolle iliskili karaciger hastalllZlarü baglglKlLlZl araclIJIIkaraciger hastalilZlarlEtlan meydana gelen gruptan seçilen bir karaciger rahatslîllglll tedavi yönteminde kullanIiIarEilgilidir. Önceki Teknik Washington Manual of Medical Therapeutics (31'inci baskü 2004; Lippincott Williams & Wilkins)'e göre karaciger rahatslîlllîlarüözellikle viral hastaliKIar, ilaç- ve alkolle-iliskili karaciger hastal[Elarüimmün-aracllllîlüaraciger hastalllZJarÇlmetabolik karaciger hastalilZlarÇI alkolik olmayan yaglEkaraciger hastalglgibi çesitli hastallKlar ve hepatik yetersizlik (fulminan hepatik yetmezlik veya hepatoselüler karsinoma gibi) ve karaciger nakli ile ilgili komplikasyonlar gibi farklEHiastalmgruplarI kategorize edilebilir. Özellikle alkolik olmayan yaglllaraciger hastal[g]I:(NAFLD) az alkol tüketen veya hiç alkol tüketmeyen kisilerde alkolden kaynaklanan yaglEkaraciger hastal[g]II histolojik özelliklerine sahip olan yaygI bir hepatik bozukluktur (Yeh M ve digerleri, 2007; Marchesini G ve digerleri, 2003). NAFLD'nin nedeni hücreler içerisinde Iipdilerin anormal tutulmasIIIEI(yayg olarak steatoz olarak tanIilanmaktadlE), karaciger temel olarak Iipid metabolizmasIan sorumlu oldugundan bu olay bu organda daha sllZ] olmaktadIE NAFLD karaciger inflamasyonu, steatoz, nekroz ve karaciger hücrelerinin bozulmasIan dolayüfibroz ile karakterize edilen hepatik steatoz ve alkolik olmayan steatohepatit (NASH) dahil bir histolojik form spektrumuna sahiptir. NAFLD ile iliskili durumlar çesitlidir ve bunlara tip 2 diyabet, obezite, dislipidemi, metabolik sendrom, hepatotoksik ilaçlarla tedavi, toksinler, enfekte edici ajanlar veya diger ekzojenöz nedenler dahildir. Her ne kadar NAFLD tipik olarak habis, ilerlemeyen bir klinik yol izlese de, NASH potansiyel olarak ciddi bir durumdur; hastalar. %25'i kadargelismis fibroz, siroz gelistirebilir ve erken ve dogru bir degerlendirmeyi zorunlu kllân portal hipertansiyon, karaciger yetmezligi ve hepatoselüler karsinom komplikasyonlarllîyasayabilir (Yeh M ve digerleri, 2007). Hepatik görüntüleme sistemleri karaciger yap-!El ve steatoz varl[g]lEil:HegerIendirmede de kullanlSlIE Ancak, karaciger fibrozunu degerlendirmek için karaciger biyopsisi altI standart olarak kalmaktadlî] ancak bu analiz yöntemi müdahaleci oldugundan her bir inceleme için yapüâmaz. NAFLD ve NASH gibi karaciger hastalIElarII tannlanmasliîda karaciger biyokimyasII ve metabolizmaleiI müdahaleci olmayan degerlendirmesi lelllZJa kullanilB1aktadlEl(Gressner A ve digerleri, 2009; Vuppalanchi R and Chalasani N, 2009). Plazma kullanilârak serum glikoz ve insülin direnç parametrelerine ilave olarak, karaciger kaynakIEIdiger proteinlerin (heptaglobin, toplam bilirubin, alfa-2-mikroglobulin, Resistin, parçalanmlgi veya saglam sitokeratin-18 dahil) varllglII yanElslü AIanin aminotransferaz (ALAT), Aspartat aminotransferaz (ASAT), Alkalin Fosfataz (AP) ve/veya Gama Glutamil Transpeptidaz (GGT) gibi enzimlerin yüksek seviyeleri yaygI olarak ölçülmektedir. ALAT aktivitesinin seviyesi NASH hastalarIda sllZllKla yükseldiginden (Angulo P ve digerleri, 2002) bu kriter karaciger hasarII degerlendirilmesi için vekil marker olarak ele aIlErnaktadlEl AsIHa, NAFLD ve NASH'nin dogru olarak tanllânmasüçin güvenilir müdahaleci olmayan yöntemler mevcut degildir ve NAFLD veya NASH'nin alkolik karaciger hastal[g]Egibi diger durumlardan uygun sekilde aylill edilmesi için histolojik özellikler dahi her zaman yeterli degildir (Yeh M ve digerleri; 2007, Vuppalanchi R and Chalasani N, 2009). Karaciger fibrotik hastalüîlarllîil ve özellikle NAFLD ve NASH'nin etkin tedavisi için yollar hala yetersizdir. NASH hastalarEiçin bir tedavi olusturulmamlgtlEl ve çesitli terapötik seçenekler klinik denemelerde test edilmektedir (Vuppalanchi R and Chalasani N, 2009, Dowman J.K ve digerleri, 2009). Bu çallgi'nalar pek çok farkllîl kimyasal bilesik ailesinin (fibratlar, tiazolidinedion'lar, biguanid'ler, statin'ler, kanabinoid'ler) ve terapötik hedeflerin (nükleer reseptörler, anjiyotensin reseptörleri, kanabinoid reseptörleri, HMG-CoA redüktaz) kullanIilEJEl içermektedir. Son zamanlarda, thiazolidinedion'larü(Rosiglitazon ve Pioglitazon) içeren çallginalar, bu ilaçlar. karacigerin durumunu iyilestirebildigini göstermistir, ancak bu ilaçlarla tedavi hasta üzerinde fizyolojik etkilerle birlikte kilo aIIiII yanEIle yüksek konjestif kardiyak yetmezlik ve osteoporoz riskleri gibi istenmiyen etkilere de sahiptir (Dowman J.K ve Kanabinoidlerin verilmesini içeren klinik denemeler nöropsikiyatrik bozukluk süphelerini yükseltmistir (Vuppanchi R and Chalasani N, 2009). Mevcut durumda devam eden diger terapiler NASH ilaçlarIElantioksidanlar olarak degerlendirmeyi arastlünaktadlü ancak bu tedavilerin hiçbiri henüz ikna edici sonuçlar göstermemistir (Nelson A ve digerleri, 2009). Karaciger rahatslîlllZlarII ve özellikle karaciger fibrozu ve/veya steatozunun yönetilmesi için özgün terapötik seçeneklere olan ihtiyaç hala açllZlve acildir. difenilpropan türevlerini açlElamaktadlE savasmak için bir preparasyonun üretimi için bir madde olarak ksantohumolün kullanIilZl açllZIamaktadlB USS691373 endotelin I'in peptit olmayan antagonistlerini açUZlamaktadlEI ekspresyonunu önleyici özelliklerini açIEJamaktadlE Bulusun Klâla Açililamaslîl Klinik bir çallgma sasllîßekilde hastalari bir 1,3-difenilprop-2-en-1-0n türevi ile tedavisinin plazma içerisindeki karacigere spesifik biyokimyasal markerlerde istatistiksel olarak önemli bir azalma saglamaktadlEve bu durum bir Genel Formül (I) ile tanIilanmlSlolan bir bilesikler ailesinin hepatoprotektif özelliklerini göstermektedir. Mevcut açlElama karaciger rahatslZllKIarII ve özellikle aminotransferaz gibi biyokimyasal markerlerin plazma seviyesinde art& neden olanlar. tedavisi için bir yöntemde kullanIi için özgün Genel Formül (I)'in 1,3-difenilprop-Z-en-l-on türevlerini (bahsedilen türevler baska yerlerde "bilesikler" olarak da adlandlElIB1aktadlE) veya bunlarElçeren farmasötik bilesimleri sunmaktadE Genel Formül (I)'in 1,3-difenilprop-2-en-1-on türevleri ve bunu içeren farmasötik bilesikler hepatoprotektif özelliklere sahiptir ve karaciger fibrozu, yagllîkaraciger hastallgiEl/e alkolik olmayan steatohepatit gibi karaciger hücrelerinin patolojik bozulmasIÇl inflamasyonunu, dejenerasyonunu ve/veya proliferasyonunu içeren karaciger bozuklularII tedavisi için yöntemlerde kullanllâbilmektedir. Mevcut bulusun ilave amaçlarEllgili bilesiklerin spesifik genel formülleri dahil olmak üzere bulusun AyrlEtHJJZxçlElamasEbölümünün içerisinde sunulmaktadlEl Sekillerin Kßla AçEIillamasIZI Metin ve sekillerde kullanlßn klglaltmalar: - ALAT = alanin aminotransferaz - CCL5 = kemokin (C-C motif) Iigand 5 - Col1a1 = kolajen, tip I, alfa 1 - Ctrl = kontrol veya vasß - Feno = Fenofibrat - HDL = Yüksek Yogunluklu Lipoprotein - LDL : Düsük Yogunluklu Lipoprotein - NAFLD = Alkolik olmayan yaglEkaraciger hastaligilZl - NASH = Alkolik olmayan steatohepatit - PPAR = Peroksizom Proliferator Aktiveli Reseptör - Rosi : Rosiglitazon - RT-PCR= Ters Transkripsiyon Polimeraz Zincir Reaksiyonu - TGFß = Dönüstürücü Büyüme Faktörü beta - TNFd = Tümör Nekroz Faktörü alfa ekil 1: Genel Formül 1 in örnek bile iklerinin a ED Genel Formül (I)'in örnek bilesikleri Genel Formül (II) (Panel A), Genel Formül (IV) (Panel P) ve Genel formül (V) (Panel C)'nin daha spesifik olan tanIi-lar göre gruplanmaktadß Sekil 2: Genel Formül (I)'in bilesiklerinin anti-inflamatuvar özelliklerinin ob/ob farelerde in Viva degerlendirmesi Genel Formül (I)'in bilesikleri bir tip II diyabet murin modelinde test edilmistir, ob/ob fareleri. ve prototipik PPARaIfa- ve PPARgama-spesifik referans bilesikleri (slûslilla 100 mg/kg/gün'de Fenofibrat ve 10 mg/kg/gün'de Rosiglitazon) oral yoldan verilmistir. 26 günlük tedavinin ardIan hayvanlar kurban edilmis ve plazma örnekleri ile karacigerler toplanmlgtlEl Karaciger inflamasyon sürecinde belirtildigi bilinen genlerin hepatik ekspresyonu degerlendirilmis ve ALAT'I plazmatik seviyeleri ölçülmüstür (Paneller A-C). Istatistiksel analizler istatistiksel önemi belirten üç p degeri (* ortalamalar p<0.05; ** ortalamalar p<0.01; *** ortalamalar p<0.001) ile eslesmemis T-testi kullanlßrak gerçeklestirilmistir. Sekil 3: Genel Formül (I)'in bilesiklerinin anti-inflamatuvar ve anti-fibrotik özelliklerinin hApoE2 KI farelerinde in i/ii/o degerlendirilmesi Genel Formül (I)'in bilesikleri yüksek yag içerikli diyetli bir fare modelinde in Viva test edilmistir. Dislipidemik "insanlastlîlllEnSl' ApoE2 knock-in fareleri (hAp bir Western diyeti ile beslenmis ve 12 hafta boyunca tedavi edilmistir. 0.3 mg/kg/gün'de Fenofibrat (bir referans bilesigi olarak kullanilIhlgtlE) diyete dahil edilmistir. Protokolün sonunda, hayvanlar kurban edilmis, karacigerler toplanmlgl ve karaciger inflamasyonu ve fibroz süreçlerinde belirtildigi bilinen genlerin hepatik ekspresyonu kantitatif RT-PCR (Paneller A-D) ile degerlendirilmistir. Sekil 1'de belirtildigi gibi istatistiksel analizler gerçeklestirilmistir. Sekil 4. Genel Formül (I)'in bilesiklerinin anti-inflamatuvar ve anti-steatotik özelliklerinin hADoEZ KI ve hADoE2 KI / PPARalfa KO farelerinde i'n V/'i/o degerlendirilmesi Genel Formül (I)'in bilesikleri yüksek yag içerikli diyetli bir fare modelinde in V/VO test edilmistir. Dislipidemik "insanlastlElIE'ilSl' PPARalfa eksik hAp0E2 KI fareleri bir Western diyeti yoldan verilmistir. Protokolün sonunda, hayvanlar kurban edilmis, karacigerler toplanmlglve karaciger inflamasyonu ve fibroz süreçlerinde belirtildigi bilinen genlerin hepatik ekspresyonu kantitatif RT-PCR ile degerlendirilmistir. Paralel olarak karaciger trigliserid içerikleri degerlendirilmistir (Paneller A-D). Sekil 1'de belirtildigi gibi istatistiksel analizler gerçeklestirilmistir. Bulusun AyrItüDçlElamaslZl Mevcut bulus Genel formül (I)'in 1,3-difenilprop-2-en-1-on türevlerinin ve bunu içeren farmasötik bilesiklerinin karaciger bozukluklarIEl tedavi etmek için özgün terpaötik kullanIilarIElve verilme yöntemlerini saglamaktadlü Her iki fenil grubu üzerinde ikame edilen spesifik 1,3-difenilprop-2-en-1-on türevleri Örneklere göre karaciger rahatslîllKlarII tedavisi için faydalüolarak tanIilanabilir, çünkü bu tür bilesikler saslElîlEElsekilde insan öznelerdeki ve hayvan öznelerdeki karaciger hücrelerinin bozulmasüdejenerasyonu ve/veya proliferasyonunun yanEtß karaciger inflamasyonunun spesifik markerlerini düsürmekte ve bu nedenle hepatoprotektif bir etki saglayabilmektedir. Bu bulusa göre kullanllâcak ve verilecek ve bulusa göre bilesikler içerisinde bulunan bilesikler asag-ki Genel Formül (I)'e sahiptir: X1 bir halojeni, bir R1 veya G1-R1 grubunu temsil etmektedir; A bir CH=CH veya bir CH2-CH2 grubunu temsil etmektedir; X2 bir G2-R2 grubunu temsil etmektedir; G1 ve G2, aynüleya farkllîblsun, bir oksijen veya sülfür atomunu temsil etmektedir; R1 bir hidrojen atomunu, ikame edilmemis bir alkil grubunu, bir aril grubunu veya bir veya daha fazla halojen atomu ile ikame edilmis bir alkil grubunu, bir alkoksi veya bir alkitiyo grubunu, bir veya daha fazla halojen atomu ile ikame edilmis veya edilmemis sikloalkil gruplarlßikloalkiltiyo gruplarIEleya heterosiklik gruplarlElEllemsil etmektedir; R2 en az bir -COOR3 grubu taraflEUan ikame edilmis bir alkil grubunu temsil etmektedir, burada R3 bir hidrojen atomunu veya bir veya daha fazla halojen atomu ile ikame edilmis veya edilmemis bir alkil grubunu, sikloalkil gruplarlEllZlveya heterosiklik gruplarIEltemsil etmektedir; R4 ve R5, aynEl/eya farkllîblsun, bir ya da daha fazla halojen atomlarÇlsikloalkil gruplari: heterosiklik gruplarüle ikame edilmis veya edilmemis bir alkil grubunu temsil etmektedir. Belirli bir yapllândIÜnada, Genel Formül (I)'in bilesikleri X1 ve X2 pozisyonlarüda en az bir alkiloksi grubu veya bir alkiltiyo grubu ile ikame edilmektedir. Ilaveten, türevler karsl1]K| gelen 1,3-difenilprop-2-en-1-on türevlerinin indirgenmesi ile elde edilmis olan ikame edilmis 1,3- difenilpropanon'lar formunda olabilir. Belirli bir yapHândIElnada, X1 bir Gl-Rl grubudur ve daha çok tercih edilen haliile G1 bir sülfür atomudur ve R1 bir veya daha fazla halojen atomu, sikloalkil gruplarÇlheterosiklik gruplarEille ikame edilmis veya edilmemis düz veya kollara ayrllîhlgl bir alkil grubudur. Daha da çok tercih edilen haliile, X1 dogrusal veya kollara ayrllBiE olan, bir veya daha fazla halojen atomu ile ikame edilmis veya edilmemis bir ila yedi arasia karbon atomuna sahip olan bir alkil grubunu içeren bir alkiltiyo grubudur. Tercih edilen bir uygulamada, X1 bir metiltiyo grubudur. Belirli bir yapllândlünada, X2 bir G2-R2 grubudur, burada GZ bir oksijen atomudur ve R2 ise bir -COOR3 grubu ile ikame edilmis bir alkil grubudur, burada R3 bir hidrojen atomunu veya bir ila yedi aralekja karbon atomu içeren ve daha çok tercih edilen haliile bir ila dört arasIa karbon atomu içeren dogrusal veya kollara ayrllh'ilgl ikame edilmemis bir alkil grubunu temsil etmektedir. Tercih edilen bir yaplßndlûnada, hem R4 hem de R5 metil gruplarIEliemsil etmektedir. Ilave olarak R4 ve R5 aynül'eya farklüilabilirler, ve terihen ikame edilmemis, dogrusal çatalllîl alkil gruplarIlEllar, bir ila yedi karbon atomuna sahip alkil gruplarllEllar ve daha tercihen bir ila dört karbon atomuna sahiptirler. Mevcut bulus baglamia, "alkil" terimi dogrusal veya kollara ayrlibßl olan, tercihen bir ila yirmidört arasIa ve daha çok tercih edilen haliile bir ila yedi arasIa karbon atomu içeren, metil, etil, n-propil, isopropil, n-bütil, isobütil, tertiobütil, sekbütil, pentil, neopentil veya n- hekzil gibi doymus bir hidrokarbon radikalini ifade etmektedir. ifade etmektedir. alkil grubunu ifade etmektedir. haliile üç ila sekiz arasIa karbon atomu içeren, siklopropil, siklobütil, siklopentil, siklohekzil, sikloheptil ve siklooktil gibi bir sikl meydana getiren bir alkil grubunu tannlamaktadlü bir sikloalkil grubunu ifade etmektedir. içeren, fenil, a-naftil, b-naftil, bifenil veya antrasenil gibi bir aromatik grubu tanIiIamaktadlE etmektedir. fazla heteroatom içeren yukari belirtildigi gibi bir sikloalkili ifade etmektedir. Bunlar mofolinil, piperidinil, tetrahifropiranil, ditiyolanil gibi genel olarak dört ila 0ndört araleUa karbon atomu Içermektedir. heteroatom içeren, yukarüla belirtildigi gibi bir aril grubudur. Bunlar furanil, tiyofenil, piridinil, pirimidinil, kinoleinil, izokinoleinil gibi genel olarak dört ila 0ndört arasIa karbon atomu içermektedir. Halojen atomu ile bir bromîn, klorin, fluorin veya iyodin atomu anlasilBiaktadlEI Her iki fenil grubu üzerinde ikame edilmis olan 1,3-difenilprop-2-en-1-on türevleri ve 1,3- hepatoprotektif etkilerin Genel Formül (I)'de tanIilanan bilesikler ile iliskili oldugunu göstermemektedir. Genel Formül (I) tarafIan kapsanan bilesiklerin yaplîlleentezi ve bazüaktiviteleri bu tür bilesiklerin karaciger rahatsiZilZJarII tedavisi için kullanIIEnasIlIaçllZJamayan bir seri patent Genel Formül (I)'in mevcut bulus içerisinde kullanüâbilecek olan ve bulusa ait bilesim bilesik 15 olarak açllZIanan; 1-[4-klorofenil]-3-[3,5-dimetil-4-tertbütiloksikarbonildimetilmetiloksifenil]prop-2-en-1-0n, bilesik 16 olarak açilZIanan; 1-[4-metiltiyofenil]-3-[3,5-dimetil-4-tertbütiloksikarb0nildimetilmetiloksifenil]prop-2-en-1-on, bilesik 27 olarak açllZlanan; 1-[4-metiItiyofeniI]-3-[3,5-dimetil-4-izopr0piloksikarbonildimetiImetiloksifenil] prop-2-en-1- on, bilesik 28 olarak açlKlanan; 1-[4-metiltiyofenil]-3-[3,5-dimetil-4-karboksidimetilmetiIoksifenil]prop-Z-en-l-on, bilesik 29 olarak açlKIanan; on, bilesik 32 olarak açllîlanan; 1-[4-hekziloksifenil]-3-[3,5-dimetiI-4-karboksidimetiImetiloksifenil]prop-Z-en-l-on, bilesik 33 olarak açllZlanan; 1-[4-heptilfeniI]-3-[3,5-dimetil-4-tertbütiloksikarboniIdimetilmetiloksifenil]prop-2-en-1-on, bilesik 38 olarak açllZlanan; olarak açllZlanan; 1-[4-br0m0feniI]-3-[3,5-dimetiI-4-tertbütiIoksikarbonildimetilmetiloksifenil]prop-Z-en-l-on, bilesik 40 olarak açllZlanan; olarak açlElanan. bulusa aiy bilesim içerinde bulunabilen ve verilebilen ve kullanllâbilen bilesikler (buradan itibaren Genel Formül (II)'nin bilesikleri olarak adlandlElllâcaktlE) asaglölaki Genel Formül (I)'e sahiptir: X1 bir halojeni, bir R1 veya bir G1-R1 grubunu temsil etmektedir; A bir CH=CH grubunu temsil etmektedir; X2 bir G2-R2 grubunu temsil etmektedir; G1 ve G2, aynlîlveya farklElolsunlar, bir oksijen veya sülfür atomunu temsil etmektedirler; R1 bir ila yedi arasIa karbon atomunu içeren bir alkil veya sikloalkil grubunu, özellikle bir veya daha fazla halojen atomu taraflEtlan ikame edilmis veya edilmemis alkil veya sikloalkil grubunu temsil etmektedir; R2 bir -COOR3 grubu taraflEtlan ikame edilmis bir alkil grubunu temsil etmektedir, burada R3 bir ila dört arasüda karbon atomuna sahip olan bir alkil grubunu veya bir hidrojen atomunu temsil etmektedir, R4 ve R5 bir ila dört arasia karbon atomu içeren bir alkil grubunu temsil etmektedir. göre bilesiklerin ve özellikle asag-ki bilesiklerin sentezi için yapHârEl/e alternatif süreçleri açllZlamaktadlE 1-[4-trifl0r0metilfenil]-3-[3,5-dimetil-4-tertbütil0ksikarbonildimetilmetiloksi fenil]prop- 1-[4-triflor0metil0ksifeniI]-3-[3,5-dimetil-4-tertbütiloksikarbonildimetilmetiloksi Bulusa ait bilesimler içerisinde bulunabilen ve kullanllâcak ve verilecek ilave bilesik örnekleri 1-(4-(Pentiltiy0etiIoksi)fenil)-3-(4-tert-bütiloksikarbonildImetilmetiloksi-3,5- dimetilfenil)prop-2-en-1-on, bilesik 1 olarak açlElanan; 1-(4-(Pentiltiyoetiloksi)fenil)-3-(4-karb0ksidimetiImetiloksi-3,5-dimetilfeniI)prop-2-en- 1-on, bilesik 2 olarak açllîlanan; 1-(4-((R,S)-5-[1,2]ditiyolan-3-ilpentiIoksi)fenil)-3-(4-tert-bütiloksikarbonildimetil metiI0ksi-3,5-dimetilfenil)pr0p-2-en-1-on, bilesik 5 olarak açiKIanan; dimetilfenil)prop-2-en-1-on, bilesik 6 olarak açilZlanan; 1-(4-Siklohekziletiloksifenil)-3-(4-teit-bütiloksikarbonildimetilmetiI0ksi-3,5- dimetiIfenil)prop-2-en-1-on, bilesik 10 olarak aç[E|anan; 1-(4-SiklohekziletiloksifeniI)-3-(4-karb0ksidimetilmetiloksi-3,5-dimeti!fenil)prop-Z-en- 1-0n, bilesik 11 olarak açllZlanan; 1-(4-SiklohekziItiyoetiIoksifeniI)-3-(4-tert-bütiloksikarbonildimetilmetiloksi-3,5- dimetiIfenil)prop-2-en-1-on, bilesik 22 olarak aç[K|anan; 1-(4-Siklohekziltiyoetiloksifenil)-3-(4-karboksidimetilmetiloksi-3,5-dimetil fenil)prop- 2-en-1-on, bilesik 23 olarak açlKianan; 1-(4-Feniloksifenil)-3-(4-tert-bütiloksikarbonildimetiImetiloksi-3,5-dimetilfenil)prop-2- en-1-0n, bilesik 32 olarak açilZlanan; 1-(4-FeniloksifeniI)-3-(4-karboksidimetilmetiloksi-3,5-dimethytfenil)prop-2-en-1-on, bilesik 33 olarak açiElanan. içerinde bulunabilen ve verilebilen ve kullanllâbilen bilesikler (buradan itibaren Genel Formül (III)'ün bilesikleri olarak adlandlîllâcaktlî) asag-ki Genel Formül (I)'e sahiptir: X1 bir G1-R1 grubunu temsil etmektedir; A bir CH=CH grubunu temsil etmektedir; X2 bir G2-R2 grubunu temsil etmektedir; Gl ve G2, bir oksijen atomunu temsil etmektedir; R1 bir veya daha fazla alkiltiyo, sikloalkil, sikloalkiltiyo gruplarEi/eya heterosikloalkil gruplarüleya bir alkiltiyo grubu taraflEUan ikame edilmis veya edilmemis bir sikloalkil, bir ariI veya bir alkil grubunu temsil etmektedir; R2 en az bir -COOR3 grubu tarafIan ikame edilmis bir alkil grubunu temsil etmektedir, burada R3 bir ila dört arasIa karbon atomuna sahip olan bir alkil grubunu veya bir hidrojen atomunu temsil etmektedir, R4 ve R5 bir ila dört arasIa karbon atomu Içeren bir alkil grubunu temsil etmektedir. Bulusa göre kullanllân ve verilen ve bulusa ait bilesimler içerisinde bulunabilen ilave bilesik formuna indirgenmis olanlardan seçilebilir. Buna göre bulusa uygun olarak kullanllâbileb ve verilebilen ve bulusa ait bilesimler içerisinde seçilebilir: 2-[2,6-dimetiI-4-[3-[4-(metiltiy0)fenil]-3-okso-propil]fenoksi]-2-metilpropanoyik asit, bilesik 1 olarak açllZlanan; 2-[2,6-climetiI-4-[3-[4-(metoksi)fenil]-3-okso-propil]fenoksi]-2-metilpropanoyik asit, bilesik 6 olarak açlk'lanan; 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(metiItiyo)feniI]-3-okso-propil]fen0ksi]etanoyik asit, bilesik 7 olarak açllZlanan; 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(propiloksi)fenil]-3-okso-propil]fen0ksi]-2-metilpropanoyik asit, bilesik 8 olarak açlKlanan; izopropil ester, bilesik 13 olarak açlKlanan. içerinde bulunabilen ve verilebilen ve kullanllâbilen bilesikler (buradan itibaren Genel Formül (IV)'ün bilesikleri olarak adlandlîllâcaktlî) asaglki Genel Formül (I)'e sahiptir X1 bir R1 veya bir G1-R1 grubunu temsil etmektedir; A bir CH2-CH2 grubunu temsil etmektedir; X2 bir G2-R2 grubunu temsil etmektedir; Gl bir oksijen veya sülfür atomunu ve G2 bir oksijen atomunu temsil etmektedir; R1 bir ila yedi arasIa karbon atomunu içeren bir alkil veya sikloalkil grubunu temsil etmektedir; R2 bir -COOR3 grubu tarafükjan ikame edilmis bir alkil grubunu temsil etmektedir, burada R3 bir ila dört arasIa karbon atomuna sahip olan bir alkil grubunu veya bir hidrojen atomunu temsil etmektedir, R4 ve R5 bir ila dört arasIda karbon atomu içeren bir alkil grubunu temsil etmektedir. bilesiklerin indirgenmis, ikame edilmis 1,3-difenilpropanon türevlerine karslIlKl gelen bilesikleri açIEIamaktadlE asit, bilesik 1 olarak açllîlanan; asit, bilesik 2 olarak açilZlanan; olarak açllZIanan; bilesik 4 olarak açllZlanan; propanoyik asit, bilesik 11 olarak aç[lZlanan; asit, bilesik 12 olarak açlKlanan; asit, bilesik 13 olarak açllZlanan; 29 olarak açlElanan; asit, bilesik 34 olarak açlKIanan; tertiobütil ester, bilesik 35 olarak açllglanan; izopropil ester, bilesik 36 olarak aç[lZlanan; bilesik 37 olarak açllîlanan. içerinde bulunabilen ve verilebilen ve kullaniiâbilen bilesikler (buradan itibaren Genel Formül (V)'in bilesikleri olarak adlandlîilâcaktlî.) asaglâaki Genel Formül (I)'e sahiptir: X1 bir halojeni veya bir R1 veya bir Gl-Rl grubunu temsil etmektedir; A bir CH2-CH2 grubunu temsil etmektedir; X2 bir G2-R2 grubunu temsil etmektedir; G1 bir oksijen veya sülfür atomunu ve G2 bir oksijen atomunu temsil etmektedirler; R1 bir veya daha fazla halojen atomu tarafIdan ikame edilmis bir alkil veya sikloalkil grubunu temsil etmektedir; R2 bir veya daha fazla halojen atomu tarafIan ikame edilmis veya edilmemis olan ve en az bir -COOR3 grubu taraflEUan ikame edilmis olan bir alkil grubunu temsil etmektedir, burada R3 bir ila dört arasIda karbon atomuna sahip olan bir hidrojen atomunu temsil etmektedir, R4 ve R5 bir ila dört arasIa karbon atomu içeren bir alkil grubunu temsil etmektedir. En çok tercih edilen halde bulusa göre kullanilâbilen ve verilebilen ve bulusa göre bilesimler içerisinde bulunabilen bilesikler Genel Fromül (11), Genel Formül (IV) veya Genel Formül (V) içerisinde tan Iananlar ve özellikle asag. belirtilenlerdir: 1-[4-metiltiy0fenil]-3-[3,5-dimetiI-4-izopropiloksikarbonildimetilmetiloksifenil] prop-2-en- 1-[4-metiltiyofeniI]-3-[3,5-dimetiI-4-tertbütil0ksikarbonildimetilmetiloksifenil]prop-2-en-1- 1-[4-trifl0rometiIfenil]-3-[3,5-dimetil-4-tertbütiloksikarbonildimetilmetiloksi fenil]prop-Z-en- 1-[4-triflorometiIoksifeniI]-3-[3,5-dimetil-4-tertbütiloksikarbonildimetilmetiloksifenil]prop-2- 1-[4-triflorometiloksifeniI]-3-[3,5-dimetil-4-karboksidimetilmetiIoksifenil]prop-2-en-1-on 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(metiltiyo)feniI]-3-okso-propil]fen0ksi]-2-metilpropanoyik asit 2-[2,6-dimetiI-4-(3-[4-(metiltiyo)fenil]-3-okso-propil]fenoksi]-2-metiI-propanoyik asit 2-[2,6-dimetil-4-[3-[4-(triflorometiItiyo)feniI]-3-okso-propil]fenoksi]-2-metiIpropanoyik asit 2-(2,6-dimetil-4-(3-okso-3-(4-(trifl0rometiloksi)fenil)propil)fenoksi)-2-metilpropanoyik asit Mevcut bulus Genel Formül (I)'in bilesiklerinin ve bunu içeren ilgili farmasötik bilesimlerin spesifik kullannlarliîsunmaktadE Bilesik farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuz formunda olabilir veya olmayabilir ve karaciger hastallElarII tedavi edilmesi için terapötik olarak etkili bir miktarda kullanllBiaktadlB Karaciger sirozu, alkolle iliskili karaciger hastallklarÇlbaglQEHZl aracililîkaraciger hastaliElarIdandan olusan bir gruptan seçilen bir karaciger rahatslîl[glüll tedavisi için, özellikle bahsedilen bilesigi içeren farmasötik bir bilesim formunda, Genel Formül (II), Genel formül (III), Genel Formül (IV) veya Genel Formül (V)'e göre tanIilanmS olan herhangi bir bilesik (bu formüller Genel Formül (1) taraf-an kapsanmaktadlî) mevcut bulus içerisinde kullanüâbilir. Mevcut bulus ayrlîa karaciger rahatslîllkîarII tedavisi için ihtiyachlan bir sujeye Genel Formül (I)'in bir bilesiginin verilmesini içeren bir yöntem de sunmaktadlElve Genel Formül (I) içerisinde: X1 bir halojeni, bir R1 veya Gl-R1 grubunu temsil etmektedir; A bir CH=CH veya bir CH2-CH2 grubunu temsil etmektedir; X2 bir G2-R2 grubunu temsil etmektedir; G1 ve G2, aynüleya farkllîblsun, bir oksijen veya sülfür atomunu temsil etmektedir; R1 bir hidrojen atomunu, ikame edilmemis bir alkil grubunu, bir aril grubunu veya bir veya daha fazla halojen atomu ile ikame edilmis bir alkil grubunu, bir alkoksi veya bir alkitiyo grubunu, sikloalkil gruplarIÇl sikloalkiltiyo gruplarIIZlveya heterosiklik gruplarIEltemsil etmektedir; R2 en az bir -COOR3 grubu tarafIan ikame edilmis bir alkil grubunu temsil etmektedir, burada R3 bir hidrojen atomunu veya bir veya daha fazla halojen atomu ile ikame edilmis veya edilmemis bir alkil grubunu, sikloalkil gruplarIEl/eya heterosiklik gruplarIEtemsil etmektedir; R4 ve R5, aynlZl/eya farkllZblsun, bir ya da daha fazla halojen atomu, sikloalkil grubu, heterosiklik grubu ile ikame edilmis veya edilmemis bir alkil grubunu temsil etmektedir. Karaciger hastallEIarII tedavi edilmesi için yöntemlerin gerçeklestirilmesi için X1, X2, A, Gl, G2, R1, R2, R3, R4 ve R5'In Genel formül (II), Genel formül (III), Genel formül (IV) veya Genel formül (V)'e göre tanllandlglEbilesikleri içeren bilesimler da kullanüâbilir. karaciger hücrelerinin patolojik bozuklugunu, inflamasyonunu, dejenerasyonunu ve/veya proliferasyonunu içeren herhangi bir akut veya kronik karaciger hastalEgllEkapsamaktadlEI Özellikle karaciger rahatslîllgllîl karaciger fibrozu, karaciger sirozu veya normal plazma seviyeleri ile klýlaslandlglia hepatoselüler hasar, degisim veya nekroza ait bazlîlriarkerlerin plazma içerisindeki seviyesini yükselten diger herhangi bir karaciger hastallglIlEl Karaciger aktivitesi ve durumu ile iliskili bu biyokimyasal markerler literatürde açiklananlarlül içerisinden ve özellikle Alanin aminotransferaz (ALAT), Aspartat aminotransferaz (ASAT), Alkalin Fosfataz (AP), Gama Glutamil transpeptidaz (GGT), Sitokeratin-18 (CK-18) veya Resistin arasEUan seçilebilir. Mevcut bulusta karaciger rahatslîlfg'lÇl karaciger sirozu, alkolle iliskili karaciger rahatsiîllElarlÇlbagEüZllKl aracIIIIJ seçilen bir karaciger rahatslîl[glIlE Mevcut bulusun özel bir yönüne göre karaciger hastallgilZI bu markerlerin bir veya daha fazlasi. yükselmesinin karaciger içerisindeki daha çok veya az önemli olan steatoz ile iliskili oldugu yaglEkaraciger hastal[giI|B bu durum bir karaciger biyopsisi ile dogrulanabilir. YaglElkaraciger hastal[lZ]arII hepsini kapsamayan bir liste NAFLD, NASH ve hepatit veya metabolik sendrom (obezite, insülin direnci, hipertrigliseridemi ve benzerleri) gibi bozukluklar ile ile iskili yaglERaraciger hastallgilljçermektedir. hepatositler gibi karaciger hücrelerinin patolojik bozulmaslBlÇI inflamasyonunu, dejenerasyonunu ve/veya proliferasyonunu azaltarak, tersine çevirerek veya engelleyerek karaciger hasarlßzaltma, tersine çevirme veya engelleme kabiliyetini ifade etmektedir. terapisi, engellenmesi veya profilaksisi anlamlEb gelmektedir. Tedavi belirtilmis bir hastal[g]|:l bulunan bir hastaya ilerlemenin tedavi edilmesi, geciktirilmesi veya yavaslatlIBwasEt/e bu sayede hastanI durumunun iyilestirilmesi için bir bilesik veya farmasötik bir bilesimin verilmesini içermektedir. Tedavi ayrlîla bir karaciger rahatslîllgiügelistirme riski bulunan sagllElEöznelere de verilebilir. Bulusun kapsamEiçerisinde, "özne" terimi bir memeliyi ve daha spesifik olarak bir insanüfade etmektedir. Bulusa göre tedavi edilecek özneler önceki ilaç tedavileri, iliskili patolojiler, genotip, risk faktörlerine maruziyet, viral enfeksiyonun yanlis& immünolojik, biyokimyasal, enzimatik, kimyasal veya nükleik asit tespit yöntemleri aracHJglEile degerlendirilebilecek diger ilgili biyomarkerler gibi karaciger rahatsEHgDIe iliskili çesitli kriterlere baglEbIarak uygun sekilde seçilebilir. Belirli bir uygulamada özne atherojenîk dislipidemiden rahatsü olan bir obez hasta veya aslEllJdlolu bir hastadlE(özellikle aslElEkilqu prediyabetik veya diyabetik hasta). Dogal olarak, bu hastalar bir karaciger rahatslîllgllîlie özellikle NAFLD veya NASH gelistirme riski tasiaktadEl Bu bulusun sahipleri yukari tanilanan bilesiklerin bu tür hastalar. hepatik fonksiyonlarlîl'izerinde faydalElbir etkiye sahip oldugunu göstermistir. Genel Formül (I)'in bilesikleri bir veya daha fazla asimetrik merkez içerebilir. Enantiyomerik olarak saf (veya zenginlestirilmis) bir bilesik arzu edildiginde, ya nihai ürün veya kiral ara ürünlerin saflastlElIBiasEile ya da bu teknik alanda uzman kisilerce bilinen tipik yöntemlerin takip edilmesi ile asimetrik sentez yoluyla elde edilebilir (örnek olarak reaktifler veya kiral katalizörler kullanilârak). Bu bilesiklerden bazliârElfarkIElstabil tautomerik formlara sahip olabilir. bu bulus Genel Formül (I)'in bilesiklerinin geometrik izomerleri ve rasemik karlglmlarll yanEisBi ve saf veya karlglöil halinde stereoizomerlerin (diastereoizomerler, enantiyomerler) kullannllîçermektedir. Genel Formül (I)'in bilesikleri Genel Formül (I)'in bilesiklerinin organik veya inorganik bazlarEl veya asitlerinden elde edilen çok hafif toksik veya toksik olmayan tuzlar seklinde "farmasötik olarak kabul edilebilir" tuzlar olarak formüle edilebilirler. Bu tuzlar bilesigin nihai saflastlElna adHElesnasa veya tuzu önceden saflastlEIllüjlSl bilesik içerisine dahil ederek elde edilebilirler. Karaciger hastalllaarII tedavisi için Genel Formül (I)'in bir bilesigini içeren farmasötik bilesimler farmasötik baglamda kabul edilebilir sIlHlarda bir veya daha fazla eksipiyan veya vaslß içerebilir (örnek olarak farmasötik kullanIiIar ile uyumlu ve bu teknik alanda uzman kisilerce iyi bilinen salin solüsyonlar, fizyolojik solüsyonlar, izotonik solüsyonlar vs.). Bu bilesimler dagEElBr, çözündürücüler, stabilizörler, koruyucular vb. içerisinden seçilen bir veya daha fazla ajan veya vaslüh içerebilir. Bu formülasyonlar için kullanlglüilan ajanlar veya vaslßlar (slIEI ve/veya enjekte edilebilir ve/veya katili özellikle metilselüloz, hidroksimetilselüloz, karboksimetilselüloz, polizorbat 80, mannitol, jelatin, Iaktoz, bitkisel yaglar, akasya, Iipozomlar ve benzerleridir. Bu bilesimler uzun süreli ve/veya yavas saIIiEl garanti eden galenik formlar veya cihazlar araclllgllîile enjekte edilebilir süspansiyonlar, jeller, yaglar, haplar, fitiller, tozlar, jel kapsüller, kapsüller, aerosoller vb. formlarda formüle edilebilmektedir. Bu tür bir formülasyon için selüloz, karbonatlar veya nisastalar gibi ajanlar avantajllîilarak kullanlßbilir. Genel Formül (I)'e ait bilesikler yukari tanllandlgiüsekilde bir farmasötik bilesim kullanllârak bir bilesikteri etkili bir miktarda verilmelidir. Bulusun kapsamülçerisinde "etkili bir miktar" terimi arzu edilen terapötik sonucu üretmek için yeterli bir bilesik miktarIElfade etmektedir. Genel Formül (I)'e ait bilesikler bahsedilen bilesiklerin terapötik olarak etkili bir miktarda verilmesine olanak veren farklEl/ollarda ve farkIEformIarda verilebilir. Bu nedenle, örnek olarak, sistemik bir yolla, aglîdan, parenteral olarak, solunum ile veya örnek olarak intravenöz, kasiçi yol, subkütanöz yol, transdermal yol, intra-arteryel yol gibi enjeksiyon ile verilebilir. Karaciger fibrozu veya bir yagIElkaraciger hastalglülçeren bir gruptan seçilen bir karaciger rahatslîllglII tedavisi için Genel Formül (I)'in bir bilesigini içeren farmasötik bilesimler için tercih edilen verilme yolu oral yoldan verilmedir. Verilmeye nispeten ferkans ve/veya doz bu teknik alanda uzman bir kisi taraflEdan hastanI fonksiyonu, patoloji, verilme formu ve saireye göre adapte edilebilir. Tipik olarak, Genel Formül (I)'in bilesikleri karaciger rahatslZllKlarIlEl tedavisi için verilme bas. 0.01 mg ile 1 g araletla ve tercihen verilme baslEla 1 mg ila 100 mg araletla degisen dozlarda verilebilmektedir. Verilme islemi günlük olarak veya gerekmesi durumunda günde birkaç defa gerçeklestirilebilir. Bulusa ait bilesikler ve bilesimler metformin, insülin, thiazolidinedion'lar, glitazon'lar, statinler, kolesterol inhibitörleri ve/veya diger lipid düsürücü ilaçlar gibi metabolik ve/veya karaciger rahatslîlllgarII tedavisi için pazarda bulunan veya gelistirme asamalelda olan diger terapötik ajanlar ile kombine halde avantajllîilarak verilebilir. Diger bir yapllândlünada, mevcut tarifname karaciger rahatslîllElarlElI tedavisi için Genel Formül (I)'in bir bilesiginin ve özellikle bu bilesikleri içeren farmasötik bilesimler formunda verilmesini içeren yöntemler sunmaktadE Bu tür yöntemler Genel Formül (II), Genel Formül (III), Genel Formül (IV) veya Genel Formül (V)'e göre tanIilanmlg herhangi bir bilesigin verilmesini içerebilir. Mevcut bulusun bilesikleri ve bilesimlerinde, Genel Formüldeki (I) bilesiklerin hepatoprotektif etkileri nedeniyle, karaciger rahatsiîllElarII ve bilhassa NAFLD ve NASH de dahil olmak üzere karaciger yaglanmasElhastallEarII tedavi edilmesine yönelik avantajlübir tedavi aracEl saglanmaktadE Bilhassa, bu bilesikler X1, X2, A, G1, G2, R1, R2, R3, R4 ve R5'in Genel Formül (II), Genel Formül (III), Genel Formül (IV) veya Genel Formüle (V) göre tanIiIandlgiEl bilesikler araleUan seçilebilmektedir. Mevcut bulusun diger modellerinden biri karaciger sirozu, alkolle iliskili karaciger rahatlâllklarü baglglîlllzl araclIJDkaraciger hastallKlarIian meydana gelen gruptan seçilen bir karaciger rahatslîl[glII tedavi edilmesine iliskin bir yöntemde kullanllüiak üzere Genel Formülde (I) ve bilhassa, Genel Formülde (II), (III), (IV) ve (V)'de açlElanan bir bilesik ile ilgilidir. Tedavi edilecek belirli karaciger rahatslZHZJarD yukar- açlKlanan sekilde karaciger fibrozu veya bir karaciger yaglanmaslZhastallgllZlgibi hastal[lZlardlEl Baska bir modelde, söz konusu yöntemlerde kullanllâcak bilesikler bilhassa yukari açlKlanan bilesiklerdir. Genel olarak, Genel Formüle (I) iliskin bilesiklerin karacigere özgü özellikleri çallsmaya dahil edildiklerinde NAFLD ve/veya NASH gibi bir karaciger hastaligiübulunan spesifik hasta popülasyonlaria degerlendirilebilmektedir. Örnegin, bir çift kör, plasebo-kontrollü ve randomize çallslnada NAFLD (yalnlîta steatoz) ve/veya NASH (steatoz ve fibroz) tanlîlîl konan ve aminotransferaz düzeyleri yüksek olan süjelerde 3-12 ay boyunca oral bilesik uygulamalellEl (80 mg/gün veya daha yüksek dozda) etkinligi degerlendirilebilmektedir. Temel biyokimyasal parametreler (aminotransferazlar, GGT ve/veya Sitokeratin-18 düzeylerinin azalmasElve/veya Rezistin düzeylerinin azalmaslîgibi), görüntüleme teknigi ile ölçülen hepatik steatoz hacmi veya karaciger biyopsilerinin histolojik özellikleri (steatoz, karaciger enflamasyonu ve fibroz ölçümü) ile ilgili istatistiki öneme sahip herhangi bir gelisme çallgna esnasia bu hastalarda düzenli olarak degerlendirilebilmektedir (ayIlE veya daha slm olarak). toplam/LDL-/HDL-kolesterol, hemodinamik parametreler, Vücut Kitle Endeksi, insülin direnci, enflamatuvar veya oksidatif stres markörleri, plazma insülin ve glikoz, idrardaki renal fonksiyon markörleri, MR ile hepatik görüntüleme ve/veya karaciger biyopsilerindeki histomorfoloji gibi ek parametreler de, karaciger rahatslîlllZlarII tedavi edilmesine iliskin bilesiklerin etkinlik profilinin tamamlanmasEilçin, çallgina esnasIa ve/veya çallgmanl sonunda ölçülebilmektedir. Bulusun diger birden çok özelligi asaglki örneklerin okunmasEile anlasllâcaktlü örneklerin temsili veriler olarak görülmesi ve sIIHlaylElElarak degerlendirilmemesi gerekir. ÖRNEKLER Örnek 1: Genel Formüldeki I bile iklerin karaci"ere öz ü bi okim asal endekslere iliskin etkileri Malzemeler & Yöntemler seklinde formüle edilmistir. Bilesik (80 mg) 28 gün boyunca günde bir kez oral olarak uygulanmlgtlü Çalisma çift kör kosullarIa iki paralel grupta gerçeklestirilmistir: plasebo Günde bir uygulamalar. tolerabilitesi ve güvenliginin yanElle plazma Iipitleri ve glikoz homeostazII gelistirilmesindeki etkinlik ilgili biyokimyasal parametrelerin kullanDBiasEl suretiyle iki pilot çallglnada plasebo ile karsllâstlîrlnalEblarak degerlendirilmistir. 28 günlük tedavinin ardIan, plasebo ile karsüâstnlgla bilesik nedeniyle ortaya çllZbn degisim yüzdesinin hesaplanmaslîçin veriler kullanilBilStlB Sonuçlar & Neticeler: tolerabilitesi ve güvenliginin yanlZblü plazma trigliseritleri ve HDL-kolesterolü Üzerindeki etkinligin (temel hedefler) degerlendirilmesi için aterojenik dislipidemi ve abdominal obeziteden mustarip hastalarda bir ilk pilot, çift kör, plasebo kontrollü, randomize çallgna gerçeklestirilmistir. Plasebo grupla baglantIIJJIbIarak, bu bilesigin törapötik etkinligi plazma trigliseritlerindeki %21 düzeyinde istatistiki anlamIElbir azalma (p< düzeyindeki fibratlar ile yayIiIanan etkiler ile karsllâstlülâbilir düzeydedir. Bunun yanEUa, bilesik ile Homosisteyn (bilinen bir kardiyovasküler risk faktörü) ile ilgili kayda deger bir etki olmadlglEI ortaya çilZlarilüîlgtlEI Bilesik fibrinojen ve haptoglobin gibi karaciger akut faz enflamasyon markörlerinin azalmaslZha dahil olmak üzere birden çok sekonder degerlendirme kriterine iliskin önemli etkiler göstermistir (p<0,01). Karaciger fonksiyonunun biyokimyasal uygulamalarÇl beklenmedik sekilde, Gamma Glutamil transpeptidaz düzeyinde istatistiki aç-n anlamlElO/023'Iük bir azalmaya (p<0,001) ve Alanin aminotransferaz düzeyinde tolerabilitesi ve güvenliginin yanElle glikoz ve Iipit metabolizmaslîlüzerindeki etkinligin degerlendirilmesi için bozulmus açlllZl glikozu, bozulmus glikoz toleransElve abdominal obeziteden mustarip hastalarda ikinci bir pilot, çift kör, plasebo kontrollü, randomize çalgna gerçeklestirilmistir. Plasebo grupla baglantllilîblarak, bu bilesigin törapötik etkinligi açlllZlplazma glikozundaki (%- , p<0,05), açlilZl insülinemisindeki (%-25, p<0,01) ve insülin direnci endeksindeki (HOMA- HDL-C'yi (%+9, p<0,01) artlîilnlgtlîl Bilesik haptoglobin gibi karaciger akut faz enflamasyon markörlerinin azalmasEda dahil olmak üzere birden çok sekonder degerlendirme kriterine iliskin önemli etkiler göstermistir (p<0,01). Karaciger fonksiyonu ile ilgili biyokimyasal Gamma Glutamil transpeptidaz düzeyinde istatistiki açlEIIan anlamIEP/oIS'Iik bir azalmaya (p<0,01) yol açmlStIE Bu sonuçlar Genel Formüldeki (I) bir bilesigin bir oral formülasyonunun hastalar tarafIian iyi tolere edilmesinin yanilma, karaciger enzimleri, insülin hassasiyeti, lipit metabolizmasüle karaciger enflamasyon markörleri de dahil olmak üzere NAFLD ve NASH ile iliskili birden çok biyokimyasal parametresi üzerinde olumlu etkilerinin bulundugunu göstermistir. Bilhassa, spesifik karaciger rahatslîHgEbiyomarkörü olan ALAT ve GGT plazma düzeylerini önemli ölçüde azaltmaktadlEi Örnek 2: Genel Formüldeki (I) bilesiklerin karaciggre özgü özelliklerinin test edilmesine iliskin hayvan modelleri Malzemeler & Yöntemler Hayvan mode/I' ve feda Vi5/1' obez/ obez fare/er Erkek obez/obez fareler (8 haftallK) Charles River'dan (L'Arbresle, Fransa) satI aIIErnlSve 20 ± 3°C'Iik sabit bir slîlaklüîta 12-saat aydIlIZykaranIKl döngüsünde tutulmustur. 1 hafta ortama allgina süresinden sonra, fareler 8 hayvandan meydana gelen gruplara ayrllîhgve bu seçim yapiliflken, deneyden önce belirlenen vücut aglEll[gll:l/e 6 saatlik açlllZl glisemilerinin dagIIJEliIlEl aynüilmas- dikkate edilmistir. Hayvanlar 26 gün boyunca standart bir yiyecek numarallîbilesik (10 veya 20 mg/kg/gün seklinde de 29), Fenofibrat (100 mg/kg/gün) ve Rosiglitazon (10 mg/kg/gün) da dahil olmak üzere bilesikler günlük olarak gavaj ile uygulanmlgtlü Kontrol hayvanlarüialnlîta taslýlEJO/ol Karboksimetilselüloz + %0,1 Tween- 80) ile tedavi edilmistir. Hayvanlar. arzu ettikleri zaman yiyecek ve suya erisimi bulunmustur. Hayvan mode/I' ve fedai/1311' hApoL-'Z knock-in fareler/'ndek/ ça/[gna Disi hAp0E2 knock-in (KI) transjenik fareleri (Sullivan ve digerleri, 1998) (4 haftalik). Fareler ± 3°C'Iik sabit bir lelaklltha 12-saat aydIlEykaranlllZJ döngüsünde tutulmustur. 1 hafta ortama allgma süresinden sonra, fareler 7-10 hayvandan meydana gelen gruplara ayrllîhlgve bu seçim yaplJJElken, deneyden önce belirlenen vücut agmlkjllîl/e plazmatik lipit düzeylerinin daglEîiII aynüilmalela dikkate edilmistir. Hayvanlar sütten kesme ve 12 hafta boyunca bir Batljljiyeti (%20 doygun yag ve %0,2 kolesterol, Harlan Teklad TD88137) ile beslenmistir. Ilgili bilesikler (0,3 mg/kg/günlük de 29 ve 100 mg/kg/günlük Fenofibrat) BatEdiyetine eklenmis (SAFE, Augy, Fransa) ve 12 hafta boyunca farelere uygulanmlgtlü Kontrol hayvanlarEyalnlîta Batthliyetini almlStE Hayvanlar. arzu ettikleri zaman yiyecek ve suya erisimi bulunmustur. Hayvan mode/I' i/e IEdâI/ÃS/f hApoL-'Z K] ve hApoEZ K] PPARa/fa KO fare/erihdek/ ça/gna Disi hApoE2 knock-in (KI) ve hApoE2 KI / PPARalfa knock-out (KO) yaslarlZleslestirilen transjenik fareler (ilk deney için 8 ila 25 haftallEl ve ikinci deney için 10 ila 14 haftaIHZl). hApoE2 KI / PPARalpha KO fareleri homozigot hApoE2 KI fareleri (Sullivan P ve digerleri, çiftlestirilmesi sonucu elde edilmistir. Fareler 20 ± 3°C'Iik sabit bir lelaklllZIa 12-saat aydIlE'karanlllZJdöngüsünde tutulmustur. 1 hafta ortama allgina süresinden sonra, fareler 4- 6 hayvandan meydana gelen gruplara ayrliIhE ve bu seçim yaplllfken, deneyden önce belirlenen yaslarüvücut aglElllglEls/e plazmatik lipit düzeylerinin dag[[[lîrliII aynEblmas- dikkate edilmistir. Hayvanlar ilk çallgtnada iki hafta boyunca bir Batlîdliyeti (%20 doygun yag ve %0,2 kolesterol, Harlan Teklad TD88137) ile beslenmis ve günlük olarak de 29 (oral gavaj ile 30 mg/kg/gün seklinde) uygulanmlgl ve ikinci çalismada 6 hafta boyunca seklinde) uygulanmlstlü Kontrol hayvanlarüiralnlîta tasMElIQWol Karboksimetilselüloz + %0,1 Tween-80) ile tedavi edilmistir. Hayvanlar. arzu ettikleri zaman yiyecek ve suya erisimi bulunmustur. Hayvan mode/lerinden elde edi/en b/y0/0j/'k numune/erin haz/ManmasÜ Çallglnalar sonunda, hayvanlar tartllîhlglve anestezi altIia sakrifiye edilmistir. Retro-orbital sinüsten kan allElnlSl santrifüjleme (4.000 rpm, 4 C'de 15 dakika boyunca) ile plazma elde edilmis ve ardIan dondurulmus ve -20 C'de tutulmustur. Dokular ve karacigerler izole edilmis ve slîEhitrojende hemen dondurulmus ve sonraki analizler için -80 C'de tutulmus (gen ekspresyonu ve biyokimya) veya histoloji için %4 paraformaldehid'de sabitlenmistir. Plazma ana/izi RX DaytonaTM otomatik analizörü (Ran-dox) ve uygun dozaj kiti (Randox, cat# AL 3801) kullanllârak plazmadaki alanin aminotransferaz düzeyleri belirlenmistir. Gen ekspresyon ana/izi NucleoSpin® 96 RNA kiti (Macherey Nagel) imalatçII talimatlarlEla göre kullanllârak dondurulan karacigerlerden toplam RNA izole edilmistir. 30 ml'Iik bir toplam hacimde 37 C'de1 saat boyunca MMLV-RT enziminin (Invitrogen) 1 ml'sinin aksiyonuyla 1 mg'lik toplam RNA üzerinde ters transkripsiyon gerçeklestirilmistir. Tepkime kosullarEl 1X tampon (Invitrogen), , 200 ng pdN6 (Amersham), 30U RNaz inhibitörü (Promega) seklinde olusturulmustur. ArdlEUan, MyiQ Tek Renkli Gerçek ZamanIEIPCR Tespit Sistemi (Biorad) kullanilârak nicel PCR gerçeklestirilmistir. Klêh bir süre sonra, iQ SYBR Green Supermix kiti kullanilârak 5 ml'Iik seyreltilmis ters transkripsiyon karlglmlîüzerinde 96 bölümlü plakalarda PCR tepkimeleri gerçeklestirilmistir. Tepkime kosullarlîlsu sekilde olusturulmustur: 25 ml'Iik hacim tepkimesi, 3 mM MgCI2 ve hem ters hem de ileri primer çözeltilerinden ve 60 C'Iik leiakllKl Her hedef gene özgü amplifikasyon için tasarlanan primer çiftleri Tablo 1'de özetlenmektedir. Genler Ters primer (5'-3') Ileri primer (5'-3') TNF alfa AGGTACAACCCATCGGCT GG (SEK KIM CGTCGTAGCAAACCACCAAGTG (SEK KIM TGF beta TGGTI'GTAGAGGGCAAGGAC (SEK KIM TI'GC'ITCAGCTCCACAGAGA (SEK KIM CCL5 CACACTI'GGCGGTI'CCTI'CG (SEK KIM CCCTCACCATCATCCTCACTGC (SEK KIM Col1a1 GCCAGGAGAACCAGCAGAG (SEK KIM AGGCGAACAAGGTGACAGAG (SEK KIM SallEian florasanllEJ miktarlZltepkimenin basIa var olan ve PCR esnasia çogaltüân tamamlaylEJDNA miktarEliIe dogru orantlIJJîIJIEl Her transkripte yönelik standart egrinin kullanilBiasIleuretiyle, göreceli ekspresyon düzeyleri belirlenmistir. ArdEtlan, sonuçlar 3684 kontrolü (hepatik gen ekspresyonuna yönelik bir referans transkripti) ile elde edilen sinyallere göre normalize edilmistir. ArdIan, bulusa iliskin bilesigin olusturdugu göreceli sinyal ile kontrol grubuna iliskin degerlerin ortalamasElarasIaki oran olan endüksiyon faktörü her numuneye yönelik olarak hesaplanmlStlE Bu faktör büyüdükçe, bilesik hedef gen ekspresyonunu 0 ölçüde artünaktadlîl Nihai sonuç her deney grubundaki endüksiyon degerlerinin ortalamaslîjeklinde açlKlanmaktadlE Karaciger/h /7/'5t0/0j77( ana//Z/ Formalin ile sabitlenen karaciger dokusu islenmis ve 5 mm kalI[glIdaki parafin kesitleri Hematoksilin ve Eosin ile boyanmlStlîl Karaciger steatozu ve karaciger intralobüler enflamasyonunun nicel hale getirilmesi için, boyanan karaciger kesitlerinin histolojik analizi kör kosullar alt-a yapiliilgtlB Karaciger steatozu asaglki sekilde 0 ila 3 aras-a skorlanmlîstE 0 (çok hafif sekilde etkilenen), 1 (hafif sekilde etkilene), 2 (orta düzeyde etkilenen), 3 (üst düzeyde etkilenen). Karaciger intralobüler enflamasyonu da gözlem alanü ile sayllân enflamatuvar odak say_ dayalEblarak asaglöhki sekilde skorlanmlStIE 0 (<1 odak/alan), 1 (1 ila odak/alan), 2 (2 ila 4 odak/alan) 3 (4'ten fazla odak/alan). Hepat/'k //'p/'t ana/izi tamponunda bir doku homojenizatörü (Precellys®24, Bertin Technologies, Fransa) ile homojenize edilmistir. Homojenatlardaki lipit k-ilar kloroform-metanol (hacmen 2:1) ile özütlenmis ve ardlEUan, toplam kolesterol (Cholesterol RTUTM 61218 kiti kullanilârak, Biomerieux, Fransa) ve gerçek trigliseritler (TR0100 kiti, Sigma-Aldrich) ölçülmüstür. Sonuçlar & Neticeler Literatürde insan karaciger hastallKIarII etiyolojisi, hastalllZl ilerlemesi ve patolojisini yanslün çesitli hayvan modelleri aç[lZlanmaktadlEl Buna karslEl, bu modeller spesifik karaciger hastalilZlarEile iliskili histo-patolojik ve pato-fizyolojik özellikleri her zaman göstermemektedir. Son zamanlarda degerlendirildigi üzere (Fan J ve Qiaq L, 2009), bu husus genetik (transjenik farelerde), besinsel (ratlarda veya farelerde) veya karma modellerin olusturuldugu NAFLD veya NASH aç-an bilhassa açllZJ bir sekilde görülmektedir. NASH steatoz ve karaciger enflamasyonundan karaciger dejenerasyonu, fibroz ve siroza kadar patolojik karaciger degisikliklerine neden olmaktadlEl NASH'in patojenezi yeteri kadar anlaslJB1amlSIlB NASH metabolik sendromun bir bilesenidir ve bu nedenle, slkllKJa hiperlipidemi ile iliskilendirilmektedir. Genel Formüldeki (I) ve bilhassa Genel Formül (I) ve Genel Formüldeki (IV) örnek bilesiklerin etkilerinin açlElanmasEiçin, farklEtransjenik hayvan modelleri kullanllüîlgtlîi insüline dirençli, leptin yetmezligi bulunan obez/obez fareler ve dislipidemik hApoE2 knock-in fareleri (PPARaIfa geninin inaktivasyonuna iliskin baska bir genomik modifikasyon ile birlikte veya bu modifikasyon olmakslîlü, hApoE2 knock-in fareleri). Leptin yetmezligi bulunan obez/obez fareler obez, dislipidemik, insüline dirençlidir ve hepatik yaralanma ve steatoz gelistirmektedir. Hepatik steatoz görece asemptomatiktir, ancak bu rahatslîl[glül oldugu bireyler NASH gelistirme aç-an daha büyük bir risk taslaktadlEl Bu ilk protokol, de 29 ve referans bilesikler olan Fenofibrat ve Rosiglitazon'un NASH'I erken evrelerindeki (obez/obez farelerin steatosik karacigerinde enflamasyon) etkilerinin analiz edilmesi için tasarlanmlgtlü Obez/obez farelerde, Rosiglitazon ile gerçeklestirilen 26 günlük tedavi sonucu, obez/obez farelerde TNFalfa'nI hepatik ekspresyonu artarken, Fenofibrat ile tedavi edilen hayvanlarda bu sitokinin ekspresyonuna iliskin herhangi bir önemli degisiklik gözlenmemistir. Bunun aksine, de 29'un uygulanmasüsonucu, bu sitokinin bir doz-yanIEl biçiminde ekspresyonu inhibe edilmistir (Sekil 2A). AynIZtedavinin ardlEUan, TGFbeta'nI hepatik ekspresyon düzeyi bütün kontrol ve referans gruplarda (kontrol, Fenofibrat ve Rosiglitazon) esit sekilde gerçeklesmistir. Benzer sekilde, de 29'un uygulanmasßonucu, bu büyüme faktörünün bir doz-yanltîlbiçiminde ekspresyonu inhibe edilmistir ve bu etki de 29 mg/kg/gün seklinde uygulandlgllEtla istatistiki olarak daha anlamIEhale gelmistir (Sekil Farklübilesiklerle 26 günlük tedavinin ardlEldan, plazma ALAT bu obez/obez farelerde karaciger yaralanmasII degerlendirilmesine yönelik bir tasMEÜnarkör olarak ölçülmüstür. Plazma ALAT düzeyi kontrol grubu veya Fenofibrat ile tedavi edilen grupla klýlaslandlglia, Rosiglitazon ile tedavi edilen fare grubunda plazmatik ALAT düzeyleri aç-an önemli bir artâgörülmüstür (Sekil 2C). Bunun aksine, de 29'un 30 mg/kg/gün dozunda uygulanmasElsonucu, plazmatik ALAT düzeylerinin istatistiki açlElhn önemli bir azalma meydana gelmistir (Sekil 2C). de 29 ve referans bilesik olan Fenofibrat'I normalde NASH'in degerlendirilmesi aç-an uygun oldugu degerlendirilen fizyolojik parametrelere iliskin etkilerinin arastEllüiasEilçin baska bir in vivo model kullanilIhIStlEl "Hümanize" Ap0E2 knock-in farelerinde (hApoE2 KI seklinde belirtilmektedir), insan ApoE2 aleli mürin apoe geninin yerini almaktadlElve bu sekilde, söz konusu fareler endojen promoter sekanslarIlEfizyolojik düzeylerde kontrolü aItIda insan ApoE2'si (hApoE2) eksprese etmektedir. Buna karslEl, hApoEZ'nin LDL reseptörüne oldukça düsük bir baglama düzeyi bulunmaktadlEl ve bunun sonucunda, insan tip III hiperlipoproteinemi'ye benzeyen bir plazma Iipoprotein profili ortaya çüZinaktadlE(Sullivan ve digerleri, 1998). Insanlara benzer sekilde, hApoE2 KI fareleri fibratlar gibi lipiti düsüren ilaçlara yan[El vermektedir (PPARci'ya yönelik ligandlar). Bu Ilaç sI-I farelerde steatohepatit'i terse çevirdigi gösterilmistir (Shiri-Sverdlov R ve digerleri, 2006) ve bu nedenle, bu model Genel Formüldeki (I) bilesiklerin karacigere özgü anti-enflamatuvar ve anti-fibrotik etkilerinin degerlendirilmesini saglayabilmektedir. Bilhassa, artan TNFo düzeyleri NASH'e özgü karaciger enflamasyonu, nekroz ve fibroz ile ilgilidir (Larter ve digerleri, 2008). TGFß birçok hücre türünde bulunan ve yara iyilesmesi ile apoptozu düzenleyen bir peptiddir. Hepatik hücrelerde bulunan izoform olan TGFßl birçok hepatik fibroz modelinde bulunmaktadü ve düzeyler kronik aktif hepatit ve fibrotik alkolik karaciger hastallgilEUa artmaktadlEl(Nan ve digerleri, 2009). FarklEhApoEZ KI fareleri, bir Batlîtliyeti ile beslenirken, 12 hafta boyunca tedavi edilmistir. Bu modelde, de 29 karaciger enflamasyonu için önemli olan genin (TNFci, CCLS, TGFß; süslîla, Sekil 3A, 35, 3C) hepatik ekspresyonunu daha yüksek bir dozda uygulanan FenoFibrata benzer bir etkinlikle (daha yüksek olmasa bile) inhibe etmistir. Buna karslül, de 29 ile tedavi edilen fare grubunda karaciger fibrozunda bulunan spesifik kolajen zincirleri (Basaranoglu ve digerleri, 2010) ve bilhassa Col1a1'e yönelik genlerin ekspresyonuna yönelik istatistiki aç-n önemli bir inhibisyon görülmüstür (Sekil 3D). Kolajen genlerine iliskin böyle bir etki Fenofibrat ile tedavi edilen fare grubunda gözlenmemistir. Bu sonuçlar, de 29'da in vivo bir NASH modelinde anti-enflamatuvar ve anti-fibrotik özelliklerin ortaya çlEtlglIügiöstermektedir. Genel Formüle (I) iliskin örnek bilesikler yüksek yagllZlbir diyete maruz bßkllân fare modelinde in vivo olarak test edilmistir. hApoE2 KI ve hApoE2 KI/PPARaIfa KO (mPPARalfa geninden yoksun "hümanize" ApoE2 knock-in fareleri) 2 hafta boyunca bir Batlîtliyeti ile beslenmis ve 30 mg/kg/gün seklinde de 29 ile günlük olarak tedavi edilmektedir. Protokolün sonunda, histolojik analiz ved spesifik skorlar vasßslýla, kontrol fareleri ve tedavi edilen farelerde karaciger steatozu ve intralobüler enflamasyon degerlendirilmistir. Bu çallglna, cm 29 ile gerçeklestirilen tedavinin hApoE2 KI farelerinde ve hApoE2 KI/ PPARaIfa KO farelerinde diyetin daha hlZIDJIr sekilde nede oldugu hem karaciger steatozu hem de karaciger enflamasyonunun gelismesini inhibe ettigini ve PPARaIfa bulunmamasEI sebebiyle karaciger rahatsiZigill hlîlandlgillîjiöstermistir (Tablo 2 ve Tablo 3). Karaciger Steatozu hApoE2 KI hApoE2 KI / PPARalfa K0 (skor) TasMEEI de 29 (30 mg/kg/gün) Taslýlîl] de 29 (30 mg/kg/gün) 0 %17 %83 %0 %0 1 %50 %17 %33 %33 2 %33 %0 %33 %50 3 %0 %0 %33 %17 Karaciger Enflamasyonu hApoE2 KI hApoE2 KI / PPARaIfa KO (skor) Taslîla] de 29 (30 mg/kg/gün) Tasma] de 29 (30 mg/kg/gün) 1 %50 %0 %33 % 17 2 %0 %0 %33 % 17 3 %0 %0 % 17 %0 özgü anti-enflamatuvar ve anti-fibrotik özelliklerine etkileri 6 hafta boyunca bir Batmiyeti ile beslenen ve günlük olarak seçilen bilesikler ile tedavi edilen hApoE2 KI / PPARaIfa KO farelerinde degerlendirilmistir. Hem de 29 hem de de 1 hApoE2 KI/PPARaIfa KO farelerinde TNFci, TGFß ve kolajenin karaciger ekspresyonunu inhibe etmistir (sßslßa, Sekil 4A, 48 ve 4C) ve NASH'e iliskin bir in vivo modelinde bu bilesiklerin karacigere özgü (temel olarak, PPARaIfa'ya baglDîI anti- enflamatuvar ve anti-fibrotik özelliklerini teyit etmistir. Hepatik Iipitlere iliskin analiz hem de 29 hem de de 1'in hApoE2 KI / PPARaIfa KO farelerinin karacigerlerinde trigliserit birikmesini engelledigini ortaya çlEbrmlgtlEl(Sekil 4D). bilesigin (Genel Formül I ve IV'te bulunmaktadlî) karacigere özgü anti-enflamatuvar, anti- steatosik ve anti-fibrotik özelliklerini yansüjnlgtlü Genel Formüle (I) iliskin bilesiklerin test edilmesine yönelik ek modeller yüksek sükroz ve yag ihtiva eden, ancak karaciger metabolizmaslîbçlglülan önemli faktörler olan metiyonin ve kolin gibi iki bilesenden yoksun olan bir diyete dayalEblan metiyonin ve kolinden yoksun (MCD) model gibi NASH'in besinsel hayvan modelleridir. Bu diyetle beslenen fareler veya ratlarda hlîlElbir sekilde enflamasyon ortaya çllîmaktadlrîl ve enflamasyon sonuç olarak steatoz, nekrotik enflamasyon, fibroz ve oksidatif strese dönüsmektedir. Bu yaklasIi Rosiglitazon (Tahan V., ve digerleri 2007), pan-kaspaz nhibitörü VX-166 (Witek R ve digerleri, 2009), Zeaksantin (Chamberlain S ve digerleri, 2009), Telmisartan (Kudo H ve digerleri, 2009) veya Wy- gibi bilesiklerin uygulanmas- iliskin olarak karaciger steatozu, fibroz, oksidatif stres ve/veya enflamasyona yönelik muhtemel törapötik etkileri göstermek üzere kullanlEhlgIE Genel Formüldeki (I) bilesikler 4 ila 12 hafta boyunca metiyonin ve kolinden yoksun diyetle beslenen Sprague Dawley ratlarl:[8 haftalllZl) veya C57BI6 farelerinde olusturulan bir MCD modelinde test edilebilmektedir. ArdIan, negatif ve pozitif kontrol olarak seçilen bilesikler de dahil olmak üzere ilgili bilesiklerle yapllân tedavi sonraki 4 ila 12 hafta boyunca gavaj ile on veya daha fazla sayida hayvandan meydana gelen gruplara günlük olarak farkllîlozlarda uygulanmaktadlEI Hayvanlar. sakrifiye edilmesi veya edilmemesi suretiyle, tedaviden önce, tedavi esnasIa veya tedavi sonunda çesitli ölçüm türleri gerçeklestirilebilmektedir. Biyokimyasal dozajlar (aspartat aminotransferaz ve alanin aminotransferaz aktiviteleri, total bilirubin, alkalin fosfataz, LDL/HDL-kolesterol, serum hiyalüronat, hepatik trigliserit ve plazmatik trigliserit) ve histomorfometrik analiz (fibroz ve/veya steatozun bulundugu karaciger alanII belirlenmesi için) daha uygun ölçümlerdir. Enflamatuvar markör (Interlökin 1a, 1b, 2, 4, 6, 10, Interferon Gama veya TNFalfa gibi) dozaj Ele/veya ilgili gen (tip 1 kolajen veya karacigere özgü kemokin reseptörleri) ekpresyonu dozajüla degerlendirilebilmektedir. Alternatif olarak, kimyasal olarak baslayan hepatik fibroza dayalEhayvan modelleri Genel Formüldeki (1) bilesiklerin anti-fibrotik etkisinin arastlElIBiasElamacElle kullanllâbilmektedir. Örnegin, tiyoasetamid (TAA) veya karbon tetraklorür (CCL4) uygulamasElsonucu, reaktif oksijen türlerinde (ROS) bir artlS ortaya çlElnaktadlÜ Iipit peroksidasyonu, hepatik stellat hücre proliferasyonu ve kolajen hiperprodüksiyonu gelismektedir ve ratlarda kronik karaciger hasarEl/e fibroza neden olmaktadlEl Bu yaklasl, Kürkümin (Fu Y ve digerleri, 2008) ve Pioglitazon (Yuan G ve digerleri, 2004) gibi bilesiklerle karaciger fibrozu, oksidatif stres ve/veya enflamasyona iliskin olumlu bir etkinin gösterilmesi amacEile kullanlE1aktadlB Genel Formüldeki (I) bilesikler 4 ila 12 hafta boyunca bes günde bir olmak üzere artan dozlarda intraperitoneal olarak slîlîibarafinde (%50'si) seyreltilen CCL4 alan Sprague Dawley ratlarIa (8 haftallEJ) olusturulan bir CCL4 modelinde test edilebilmektedir. Modelin tesirinin artlEllIhasEl için, ilk CCL4 dozundan 10 gün önce baslanarak fenobarbital da uygulanabilmektedir. ArdIan, negatif veya pozitif kontrol olarak seçilen bilesikler de dahil olmak üzere ilgili bilesiklerle yapllân tedavi sonraki 4 ila 12 hafta boyunca gavaj ile on veya daha fazla say. rattan meydana gelen gruplara günlük olarak farklülozlarda (0,01 ve 100 mg/kg/gün arasiEUaki dozlarda) uygulanmaktadlB MCD modelinde oldugu gibi, hemodinamik endeksler ve enflamatuvar markörler ve/veya ilgili genlerin ekspresyon dozajEile ilgili olarak, biyokimyasal dozajlar ve histomorfometrik analize dayalEl olarak tedavi etkinliginin degerlendirilmesi için, ratlarI sakrifiye edilmesi veya edilmemesi suretiyle, tedaviden önce, tedavi esnaslüda veya tedavi sonunda çesitli türde ölçümler gerçeklestirilebilmektedir. YukariElla açllZlanan hayvan modelleri Genel Formüldeki (I) bilesiklerin karacigere özgü aktivitelerinin kendi aralarIa ve karacigere özgü (ve bilhassa, NAFLD/NASH'a özgü) törapötik özellikleri bulundugu halihazlîilla bilinen bilesikler ile klýaslanmaslßaglamaktadlü Bilhassa, bu Örnekte gösterilen veriler, referans bilesikler ile klýhslandlgilütla, Genel Formüldeki (I) bilesiklerin üstünlügünü ortaya koymaktadlB Örnek 3: Genel Formüldeki (I) bilesiklerin karacigere özgü özelliklerinin test edilmesine iliskin in vitro] ex vivo modeller Karaciger fibrozu, oksidatif stres ve/veya karaciger enflamasyonu üzerinde olumlu bir etkisi bulunabilen bilesiklerin taranmasEliçin bazElin vitro / ex vivo modeller olusturulmustur. AsIIa, karaciger fibrozundaki temel bir olay hepatik stellat hücrelerinin (HSC) aktivasyonudur. Hepatosit hasar-an sonra, bu hücre türü aktive olmaktadlîlve çogalmaya baslamaktadE(Sato M ve digerleri, 2003). Aktive HSC'Ier (örnegin, karacigerlerden izole edilen rat veya insan HSC veya rat HSC-T6 hücre hattDJ aktive edilebilmektedir ve aslEll] miktarlarda hücre dmnatris bilesigi ve matris degradasyon inhibitörleri olusturabilmektedir. Bu yaklasIi, kürkümin (Xu ve digerleri, 2003), tiyazolidinediyonlar (Miyahara T ve digerleri, gösterilmesi amacEile kullan llBiaktadlEl Yukari açllZlanan hayvan modelleri Genel Formüldeki (I) bilesiklerin karacigere özgü aktivitelerinin kendi aralarIa ve karacigere özgü (ve bilhassa, NAFLD/NASH'a özgü) törapötik özellikleri bulundugu bilinen bilesikler ile klýlaslanmaslßaglamaktadlü TR TR TR TR TR TR TR TR TR