SU736860A3 - Способ очистки гепарина - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к хигликофармацевтической промышленности, а именно к очистке гепарина.

Известен способ очистки гепарина путем осс1ждени  комплекса гепарин- белок 5. кислотой, протеолиг тйческого разрушени  белка, многократного переосаждени  целевого прб .цукта и пропускани  через ионообменные смолы. Активность гепарина 100 ед/мг.

Целью изобретени   вл етс  повышение активности целевого продукта.

Это достигаетс  тем, что гепарин раствор ют в. буферном растворе с рН от 5 до 9,5, адсорбируют на гель сефарозы, коньюгированный ic анти . ромбином или с интер-сС-трипсином и элюируют буфером.

Пример 1. Очистка гепарина на св занном с матрицей гепарине.

Гелевый адсорбент приготавливают следующим образом.

3 г BhCN раствор ют в 30 мл дис , тиллированной . 50 мп осажденной агарозы добавл ют к раствору BfCK. Смесь при перемешивании охлаждают в,вод ной бане. При добавлб НИИ 4М NaOH поднимают рН до 11,2 и выдерживают посто нным в течение

2

10 мин. Затем гель прогФзвают холЬдной дистиллированной водой и

0,2 М NaHCOj..

200 мг антитромбина, очищенного ПО Миллеру-Андурссону и растворенного S 50 МП 0,2 М МаНСОз, при рН 9jO добавл ют в.гель. Гель-протеиновую суспензию осторожно перемешивает при комнатной температу зе и ёченИб

to ночи и затем осторожно промывают с .буфером йри высокой концентрации ионов при попеременно высоких и значени х рН. : Гелевый адсорбент, содержаищй

1Б св занный с матрицей антитромбин, помещают в колонку и уравновешивают с 0,05 М. триса, 0,15 М МаСЙ, рН буфера 7,4. 300 мг гепарина/индивидуальна  активность 130 ед/мг) раствор ют в 20 мл 0,05 М триса, 0,15 М Насе, рН буфера 7,4 и прокачивают через колонку, jllociie. этого гель прогФлвают буфером, а адсорбированный гепарин затем десорбируют

25 М триса, 1,0 М масе, рН буфера 7,4. Из элюированного гепарина удал ют соль путем фильтрации гел  в дистиллированной воде в колонке, заполненной сефадексом G-25, после чего гепарин высу111ивают вымораживанйем . Изучение распределени  молекул рных весов показыв ает, что он имеет значительно более ограниченное распределение молекул рного веса , по сравнению с первоначсшьным гепарином.

Пример 2. Антитромбиновую матрицу готов т по способу,указанному в примере 1.

Очистка гепарина; 500 мг гепарина/активность 130 ед/мг) раствор ют в 300 мл 0,05 М триса, 0,15 М NaCC, рН буфера 7,4. 300 мл осажденного св занного с матрицей антитромбина уравнивают в буфере и высушивают отсасыванием. Адсорбент,.добавл ют в раствор гепарину, который затем перемешивают при комнатной температуре в течение односо часа, ,Гель высушивают отсасыванием настекл нном фильтре и промывают 10 200 мл 0,05 М триса, 0,15 М Nad , рН буфера 7,4, Адсорбированный гепарин затем десорбируют из гел  путем применени  3 200 мл 0,05 М триса. 1,0 М Nace, рН буфера 7,4, Элюированный гепарин концентрируют высуцщвают вымораживанием.., Оставшуюс  соль удгш ют фильтрацией гел  на Сефадекс G-25 в дистиллированной воЙё и затем гепарин высушивают вымораживанием . Активность очищенного гепарина 250 ед/мг.

Пример 3. Очистка гепарина на гелевом адсорбенте, содержащем св занный с матрицей ингибитор интер-о (-трипсин,

Приготовление гелевого адсорбента ,.

В холе очистки фактора коагул ции (х(В - фактор) получают интер-ci-трипсин ингибитор протеин-св зываю щего гепарина. Его мол. в. 150000, 250 мг этого протеина раствор ют в 200 МП 0,2 М NaHCOj, рН буфера 9,0 и затем добавл ют к 50 мл осажденной сефарозы И4В, активированной с Вг-СМ аналогично примеру 1.

Гель-протеиновую суспензию осторожно перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем гель проьывают так же, как в примере 1,

Очистка гепарина.

Гелевый,адсорбент, содержащий св занный с матрицей протеин, помещают в колонку, 300 мг гепарина раствор ют в 20 мл 0,05 М триса, 0,15 М Nace, рН буфера 7,4 и прокачивают через колонку.

Гель про1иывают буфером и адсорбированный гепарин затем десорбируют О,.05 М триса, 1,00 М NaCE , рН буфе-° ра 7,4. Соль удал ют из гепарина путем фильтрации гел  на Сефадекс G-25 в дистиллированной воде и затем гель высушивают вымораживанием. Активность очищенного гепарина 230 ед/мг,

Предлагаекый способ позвол ет повысить активность целевого продукта.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ очистки гепарина путем адсорбции, отличающийс  тем, что, с целью повышени  активности целевого продукта, гепарин раствор ют в буферном растворе с рН от 5 до 9,5, адсорбируют на гел сефарозы, конъюгированный с антитромбином или с интер-1.- трипсином и Элюируют буфером.