SU1711066A1 - Устройство дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ - Google Patents
Устройство дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ Download PDFInfo
- Publication number
- SU1711066A1 SU1711066A1 SU894739138A SU4739138A SU1711066A1 SU 1711066 A1 SU1711066 A1 SU 1711066A1 SU 894739138 A SU894739138 A SU 894739138A SU 4739138 A SU4739138 A SU 4739138A SU 1711066 A1 SU1711066 A1 SU 1711066A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- gel
- column
- sleeve
- substances
- biological substances
- Prior art date
Links
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 abstract description 28
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 abstract description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 5
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 229920002313 fluoropolymer Polymers 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 229920000298 Cellophane Polymers 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N tris phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(N)(CO)CO JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к области медицины , молекул рной биологии и биотехнологии , в частности к устройствам дл осуществлени анализа биологических веществ (нуклеиновых кислот белков и др.) методом препаративного электрофореза в полужидких гел х, может быть использова- но дл фракционного разделени различных видов биологических соединений при проведении разнообразных биохимических исследований указанных веществ и вл етс усовершенствованием известного устройства , описанного в авт. св. Ns 434985. Целью изобретени вл етс повышение разрешающей способности устройства и улучшение качества получаемых препаратов . Поставленна цель достигаетс тем, что известное устройство снабжено кольцевой втулкой наружным диаметром на 4 мм меньше рабочей поверхности гел , которую закрепл ют специальным держателем и ввод т на 0,3г0.4 мм глубины в гель в момент его полимеризации. 2 ил.
Description
Изобретение относитс к медицине, молекул рной биологии и биотехнологии, в частности к устройствам дл осуществлени анализа высокомолекул рных биологических веществ (нуклеиновых кислот, белков и др.) методом препаративного электрофореза в полужидких гел х, может быть использовано дл фракционного разделени различных видов биологических соединений при проведении разнообразных биохимических исследований указанных веществ и вл етс усовершенствованием известного устройства, описанного в авт. св. Мг434985.
Известна конструкци устройства дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ, включающа колонку дл размещени гел с нанесенным на его исследуемым веществом , сообщающиес с колонкой верхнею и нижнюю электродные камеры с расположенными в них электродами, капсульную полость, образованную поддерживающим гель фильтром, проницаемым дл молекул исследуемого вещества, и мембраной, проницаемой дл ионов буферного раствора, .расположенной в нижней части колонки, и трубок дл подвода и отвода буферного раствора , сообщающихс с капсульной полостью .
Недостатком устройства дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ вл етс нежелательный факт частичной миграции исследуемой пробы высокомолекул рных веществ по зазору вдоль стенок верхней части колонки и гелем, что возможно, поскольку гели не прилипают к органическому (или другому) стеклу, что приводит к потери до 8-10% исследуемого образца высокомолекул рных биологических соединений. Проникновение по зазору при старте электрофореза особенО
сх о
но нежелательно при фракционировании уникальных фрагментов нуклеиновых кислот (онкогенов), количество которых в исследуемых пробах минимально.
Цель изобретени - повышение разрешающей способности устройства и улучшение качества выдел емых препаратов за счет устранени утечки (миграции) пробы высокомолекул рных соединений по зазору MS ду стенкой верхней части колонки и гелем при нанесении ее на старт (верхнюю часть) гел перед началом процесса препаративного электрофореза,
С этой целью устройство снабжено кольцевой втулкой наружным диаметром нижней части (1 /2) ее высоты на 4 мм меньше рабочей поверхности гел , котора вводитс на 0,3-0.4 мм глубины в гель в момент его полимеризации. В результате этого между стенкой верхней части колонки и кольцевой втулкой (ее наружной стенки) образуетс кольцевой зазор в 2 мм, заполненный гелем при его полимеризации. Таким образом, кольцевой формы сформировавшийс гель устран ет контакт образца исследуемой пробы со стенками верхней части колонки и тем самым предотвращает миграцию высокомолекул рных соединений по зазору вдоль стенки верхней части колонки.
На фиг. 1 представлена принципиальна схема предлагаемого устройства; на фиг. 2 - схема креплени кольцевой втулки в верхней части колонки после полимеризации гел ,
Устройство включает верхнюю 1 (содержащую гель 19 и втулку 20) и нижнюю 2 части колонки, соединенные резьбовой соединительной втулкой 3. На нижнем торце верхней части 1 колонки закрепл етс поддерживающий фильтр 4, выполненный из батиста. Дл креплени фильтра 4 с помощью нити (резинового кольца) на наружной образующей верхней части 1 колонки выполнена кольцева канавка. При соединении верхней части 1 колонки с соединительной втулкой 3 фильтр 4 зажимаетс между торцами верхней части 1 колонки и упорным буртом втулки 3.
Между торцем нижней части 2 колонки и упорным буртом втулки 3 зажимаетс мембрана 5, выполненна из целлофана или другого материала, проницаемого дл ионов буферного раствора. Нижн часть 2 колонки имеет в своем теле канал 6, один конец которого соединен отверстием 7 с подмембранным пространством нижней части 2 колонки, а в другом его конце смонтирована гибка трубка 8. выполненна из
фторопласта. Отверстие 7 расположено в
непосредственной близости от мембраны 5.
Фильтр 4 и мембрана 5 образуют во
втулке 3 устройства капсульную полость 9.
В стенках втулки 3 вмонтированы гибкие трубки 10 и 11, выполненные из фторопласта , сообщающиес с капсульной полостью 9.
Верхн часть 1 колонки, содержаща
0 гель 19 и кольцевую втулку 20, герметично монтируетс в соединительном патрубке днища верхней электродной камеры 12, в которой закреплен минусовой электрод 13, Нижн часть колонки закрепл етс в ниж5 ней электродной камере 14 таким образом, чтобы торец нижней части 2 колонки располагалс от дна камеры 14 на рассто нии, равном 1/4-1/3 высота (глубины) камеры 14. В камере 14 закреплен плюсовой элек0 трод 15. Электроды 13 и 15 выполнены из пластины, позици ми 16-18 обозначена тефлоновые трубки.
Работа предлагаемого устройства осуществл етс следующим образом.
5 Известными способами приготавливаетс полиакриламидный гель, концентраци которого выбираетс в зависимости от исследуемого вещества.
Под фильтр 4, между верхней частью 1
0 колонки и опорным буртом втулки 3 разме- щают тонкую резиновую пленку, после чего
верхнюю часть 1 колонки заполн ют гелем
на высоту 20-30 мм и сразу же известным
способом ввод т в нее кольцевую втулку 20
5 на глубину 3-4 мм от поверхности гел . После полимеризации гел верхн часть 1 колонки , содержаща гель с кольцевой втулкой 20, разъедин етс с втулкой 3, резинова пленка удал етс , после чего верх0 нюю часть 1 колонки с гелем 19 и кольцевой втулкой 2о вновь монтируетс во втулке 3. Образовавшийс столбик гел при этом удерживаетс фильтром 4.
Верхн 12, нижн 13 электродные ка5 меры и капсульна полость 9 заполн ютс буферным раствором (например, трисфос- фатный буфер рН 7,8) и известными способами осуществл етс предэлектрофорез дл удалени из гел веществ, поглощаю0 щих свет в ультрафиолетовой области. Послезавершени процесса предэлектрофореза верхн 12 и нижн 14 электродные камеры заполн ютс свежим упорным буферным раствором. На поверх5 ность столбика гел внутрь кольцевой втулки 20, наход щуюс под слоем буферного раствора, известными способами наноситс исследуемое вещество.
Одна из гибких трубок 10, 11 подсоедин етс к известному устройству, например
к колбе Мариотта, способному создать посто нный гидравлический напор буферного раствора в капсульной полости 9, при посто нном расходе через полость 9 в заданных пределах. Втора из гибких трубок 10, 11 соедин етс с известным автоматическим коллектором и регистратором фракции ве щества, например типа Увикорд Л КБ;
В верхней 12 и нижней 14 электродных камерах создаетс известными способами циркул ци буферного раствора с целью сохранени его состава, при этом, с целью предотвращени образовани воздушных включений и обеспечени посто нства буферного раствора по рН ионной силе, в под- мембранной полости нижней части 2 колонки отвод буферного раствора из нйж- ней электродной камеры 14 осуществл етс через канал 6 и трубку 8.
На электроды 13 и 15 подаетс посто н- ное напр жение, обеспечивающее требуемую плотность тока электрофореза, При электрофоретическом движении молекул исследуемого вещества столбик полиакри- ламидного гел играет роль молекул рного сита, а св зи с чем разные молекулы вещества проникают в капсульную камеру по истечении разных промежутков времени от начала процесса.
Проход щий через капсульную камеру 9 буферный раствор, промыва камеру 9, выносит фракции молекул вещества в автоматический коллектор, в пробирках которого собирают отдельные фракции этих
молекул, деление на которые дл конкретного вида исследуемого вещества зависит от времени сбора буферного раствора в каждую пробирку, от времени прошедшего с начала процесса, а также от концентрации полиакриламидного или агарозного гел ,, размещенного в колонке устройства.
Предлагаемое устройство дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ при разделении таких веществ как ДНК, РНК, позвол ет устранить утечку (диффузию) пробы высокомолекул рных соединений по зазору между стенками верхней части колонки и гелем и тем самым повысить надёжность работы устройства на 8-10% и получить свыше 20 отдельных фракций ДНК, например онкогены в чистом виде.
Claims (1)
- Формула и зобретениУстройство дл преларато&ного разделени высокомолекул рных биологических веществ по авт. се. №434985, от ли чающеес тем, что, с целью повышени разрешающей способности и улучшени качества выдел емых препаратов, устройство дополнительно снабжено полой кольцевой втулкой ступенчатой формы, при. этом диаметр верхней части втулки превышает диаметр нижней части и равен внутреннему диаметру колонки, а диаметр нижней части втулки меньше диаметра верхней части не менее чем на 4 мм.2 , Э фиг.119Фиг. 2
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894739138A SU1711066A1 (ru) | 1989-09-19 | 1989-09-19 | Устройство дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894739138A SU1711066A1 (ru) | 1989-09-19 | 1989-09-19 | Устройство дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU434985 Addition |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1711066A1 true SU1711066A1 (ru) | 1992-02-07 |
Family
ID=21470600
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU894739138A SU1711066A1 (ru) | 1989-09-19 | 1989-09-19 | Устройство дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1711066A1 (ru) |
-
1989
- 1989-09-19 SU SU894739138A patent/SU1711066A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Автооское свидетельство СССР Мг 434985, кл. G 01 N 27/26, 1,974. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4284491A (en) | Apparatus for electrophoresis | |
| Gassmann et al. | Electrokinetic separation of chiral compounds | |
| JP3467995B2 (ja) | キャピラリー電気泳動装置 | |
| US4964961A (en) | Elution method and device | |
| US5560811A (en) | Capillary electrophoresis apparatus and method | |
| US5468359A (en) | Method of determining presence of an analyte by isoelectric focusing | |
| CA2176317C (en) | Fast sampling device and sampling method for capillary electrophoresis | |
| JPH04264253A (ja) | 膜上での毛細電気泳動留分の収集のための装置 | |
| IE62803B1 (en) | An isoelectric focusing process and a means for carrying out said process | |
| AU779947B2 (en) | Automated 2-dimensional analysis of biological and other samples | |
| US4181594A (en) | Matrix recovery electrophoresis apparatus | |
| CN1119275A (zh) | 电泳多试样组分采集器 | |
| US4552640A (en) | Electrophoretic apparatus for the quantitative elution of proteins or polypeptides from a gel | |
| US4726889A (en) | Process and apparatus for conducting electrophoresis and transfer | |
| US6139709A (en) | Apparatus for producing electrophoresis gels | |
| EP0687358B1 (en) | Method and device for isoelectric focusing without carrier ampholytes | |
| US4729823A (en) | Apparatus and methods for electrophoresis | |
| SU434985A1 (ru) | Устройство для препаративного разделения высокомолекулярных биологических веществ | |
| US6319379B1 (en) | Modified electrokinetic sample injection method in chromatography and electrophoresis analysis | |
| SU1711066A1 (ru) | Устройство дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ | |
| US3395093A (en) | Centrifugal chromatography and electrophoresis device | |
| EP0236153B1 (en) | Method and apparatus for conducting electrophoresis and subsequent transfer | |
| US4849078A (en) | Process for conducting electrophoresis and transfer | |
| US6190521B1 (en) | Method and apparatus for feeding a sample into a capillary electrophoresis apparatus | |
| SU1029064A1 (ru) | Устройство дл электрофореза микроколичеств белков |