SU1652341A1 - Штамм бактерий РSеUDомоNаS SтUтZеRI - продуцент рестриктазы PSU I - Google Patents
Штамм бактерий РSеUDомоNаS SтUтZеRI - продуцент рестриктазы PSU I Download PDFInfo
- Publication number
- SU1652341A1 SU1652341A1 SU894706937A SU4706937A SU1652341A1 SU 1652341 A1 SU1652341 A1 SU 1652341A1 SU 894706937 A SU894706937 A SU 894706937A SU 4706937 A SU4706937 A SU 4706937A SU 1652341 A1 SU1652341 A1 SU 1652341A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- psu
- pseudomonas stutzeri
- restrictase
- restriction enzyme
- Prior art date
Links
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 title claims abstract description 15
- 241000589614 Pseudomonas stutzeri Species 0.000 title claims abstract description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 abstract description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 6
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 abstract description 3
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 abstract description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBUYCZFBVCCYFD-JJYYJPOSSA-N 2-dehydro-D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)C(O)=O VBUYCZFBVCCYFD-JJYYJPOSSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 229940110377 dl- arginine Drugs 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- BTNMPGBKDVTSJY-UHFFFAOYSA-N keto-phenylpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)CC1=CC=CC=C1 BTNMPGBKDVTSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIHDCSAXVMAMJH-GFBKWZILSA-N levan Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@](CO)(CO[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@](O)(CO)O2)O)O1 AIHDCSAXVMAMJH-GFBKWZILSA-N 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии и может быть использовано в генной инженерии и молекул рной биологии. Цель изобретени - получение штамма Pseudomonas stutzerl В-4727 (t31), обладающего более высоким уровнем синтеза ре- стриктазы, узнающей палиндромную S CGAfCGS1 последовательность :1 и вл ю3 GCTAGCS щейс гомогенно чистой. Штамм культивируют на среде 3 с рыбным гидролизатом. В результате использовани штамма Pseudomonas stutzeri ВКПМ В-4727 выход биомассы составл ет 6,0-7,5 г/л культу- ральной жидкости, а выход рестриктазы Psu 16000-9000 ед/г биомассы или 36000-67500 ед/л культурэльной жидкости. 1 табл. ё
Description
Изобретение относитс к биотехнологии и представл ет собой штамм, который может быть использован дл получени рестриктазы Psu J,
Цель изобретени - получение штамма Pseudomonas stutzeri (131) ВКПМ В-4727, обладающего более высоким уровнем синтеза рестриктазы, узнающей палиндромную
б ССАтЪзЗ1 последовательность -,г и вл ю3 GqjAGC5
щейс гомогенно чистой.
Штамм Pseudomonas stutzeri (131) ВКПМ В-4727 выделен из почвы с последующим отбором вариантов, имеющих высокую продуктивность рестриктазы Psu 3. Штамм имеет следующие характеристики.
Морфологические признаки.
Клетки одиночные, палочковидные, пр мые или изогнутые, но не спиральные, размеры 0,5-1 х 1,5-4 мкм, движутс с помощью пол рных жгутиков. Грамотрица- тельные.
Физиолого-химические признаки.
Метаболизм дыхательный (ассимилируют глюкозу на среде Хью-Лейфсона по окислительному типу), обладает уреазной и аргининдегидролазной активностью.
Пигментов не содержит, растет при 4- 30°С, не растет при 42°С (оптимальна температура роста 25°С).
Леван из сахарозы не образуетс , не разжижает желатину и не гидролизует поли- / -оксибутират, гидролизует крахмал.
В качестве единственного источника углерода может использовать глюкозу, L-ва- лин, ацетат, цитрат и не использует трегалозу, 2-кетоглюконат, мезо-инозит, /9
Os
ел
го
00
-аланин, DL-аргинин. При ассимил ции глюкозы образуетс кислота.
Сероводород не образуетс , реакци Фогес-Проскауэра отрицательна , тест с метиловым красным отрицательный.
Фенилпируват не образуетс (реакци на наличие фенилаланиндезаминазы отрицательна ).
Факультативные аэробы. Оксидазо- и каталазоположительные.
Культуральные признаки.
Рост на кос ках густой, сплошной. Штрих широкий, четко видный. При попадании на твердую среду влаги растет в виде сплошной пленки по всей поверхности. При выращиваний культуры в чашках Петри на твердой среде через 24 ч образуютс полу- прозрачные точечные колонии размером 0.1-0.2 мм. Через 38 ч образуютс белые, круглые, полупрозрачные, совершенно гладкие, влажные, однородные, выпуклые, блест щие с гладким краем колонии. Размер таких колоний в диаметре 2-2,5 мм. По всей консистенции они вл ютс масл нистыми (подобие сливочного масла}.
Колонии не пигментированы.
Штамм Pseudomonas stutzeri 131 имеет сильный запах при росте на твердой или жидкой среде.
При росте в бульоне образуетс обильный осадок.
Хорошо растет на жидкой питательной среде, содержащей 50 г/л рыбного гидроли- зата и до 1,0 л воды, рН 7.2-7,4. На такой питательной среде штамм растет при температуре 25-27°С, аэрации 2 объема воздуха на 1 объем питательной среды в течение 5-6 ч. При выращивании штамма на питательной среде данного состава происходит помутнение среды, что свидетельствует о сильном росте культуры. Рост глубинный и пленки на поверхности не образуетс . Осадок , состо щий из клеток Pseudomonas stutzeri 131, т гучий, при воздействии на него лизоцимом быстро происходит лизис клеток. Количество осадка обильное, цвет осадка светло-серый.
Штамм фагоустойчив. Не лизируетс в присутствии фагов Ch 4A, А , MS 2, Q ft,
Штамм чувствителен к ампициллину в концентрации 25 мкг/м . Штамм дает выход биомассы 6,0-7,5 г/л культуральной жидкости, имеет выход рестриктазы Psu I 6000-9000 ед/г биомассы или 36000-67500 ед/л культуральной жидкости, биосинтези- рует одну сайт-специфическую эндонуклеа- зу Psul, вл ющуюс гомогенно чистой.
Выращивают культуру на питательной среде известного состава при рН 7,2, температуре 25°С, аэрации 2 объема к 1 объему
питательной среды до поздней логарифмической фазы роста. Выход биомассы 6,0-7,5 л/г культуральной жидкости; выход рестриктазы Psu I 3000-4500 ед/r биомассы
или 18000-33750 ед/л культуральной жидкости .
Сравнение уровней продуктивности штаммов - продуцентов рестриктаз - изо- шизомеров рестриктазы Psu 1 представлены в таблице.
Пример. Штамм бактерий Pseudomonas stutzeri 131 выделен из почвы. Дл получени изолированных колоний берут 10 г почвы (из расчета абсолютно сухой)
и взбалтывают с 90 мл воды в течение 5 мин. В дальнейшем используют метод предельных разведений, заключающийс в последовательном переносе 1 мл суспензии в пробирку с 10 мл стерильной воды, хорошо
перемешивают и из данной пробирки 1 мл суспензии перенос т во вторую пробирку и т.д. Всего делают 8-9 разведений, из каждого разведени производ т посев 0,1 мл суспензии в чашки Петри с твердой
питательной средой, содержащей 3.5% сухого питательного агара и воду).
Все выросшие в чашках Петри колонии изучают микроскопически на наличие биохимических признаков, в том числе на наличие активности рестриктазы Psu I. Полученные колонии Pseudomonas stutzeri в активностью фермента Psu I селекционируют с целью получени наиболее активных вариантов.
Проверку продуктивности штамма бактерий Pseudomonas stutzeri (131) ВКПМ В- 4727 ведут в сравнении со штаммом Proteus vulgaris ATCC 133115 ВКПМ В-1804. который синтезируют аналогично рестриктазу и
экспериментально проверен в лабораторных услови х на НПО Биолар.
Готов т среду дл выращивани штамма следующего состава: 50 г/л рыбного гид- ролизата и 1,0 л воды.
Оживление штамма Rseudomonas stutzert 131 осуществл ют на сухом питательном агаре (35 г/л сухого питательного агара и 1,0 л воды) в чашках Петри. Инкубируют в термокамере при 26°С в течение 18ч.
С поверхности агара в чашках Петри культуру перенос т бактериологической петлей в качалочные колбы с питательной средой данного состава, рН 7,2.
Выращивают посевной материал при 26°С в течение 18 ч на качалке.
Ферментацию культуры провод т на питательной среде данного состава при рН 7,2, температуре 2б°С, перемешивании 200
об/мин, подаче воздуха - 2 объема воздуха на 1 объем питательной среды.
Выращивают до поздней логарифмической фазы роста. Выход биомассы 6,0-7,5 г/л культуралькой жидкости, выход ре- стриктазы Psu J 6000-9000 ед/г биомассы или 36000-67500 ед/л культуральной жидкости .
Таким образом, при использовании штамма Pseudomonas stutzerl (131) ВКПМ В-4727 по сравнению с известным способом выход рестриктазы Psul возрастает с 1000 до 6000-9000 ед/г биомассы.
Claims (1)
- Формула изобретени Штамм бактерий Pseudomonas stutzeri ВКПМ В-4727 - продуцент рестриктазы Psul,
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894706937A SU1652341A1 (ru) | 1989-06-19 | 1989-06-19 | Штамм бактерий РSеUDомоNаS SтUтZеRI - продуцент рестриктазы PSU I |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894706937A SU1652341A1 (ru) | 1989-06-19 | 1989-06-19 | Штамм бактерий РSеUDомоNаS SтUтZеRI - продуцент рестриктазы PSU I |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1652341A1 true SU1652341A1 (ru) | 1991-05-30 |
Family
ID=21454980
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU894706937A SU1652341A1 (ru) | 1989-06-19 | 1989-06-19 | Штамм бактерий РSеUDомоNаS SтUтZеRI - продуцент рестриктазы PSU I |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1652341A1 (ru) |
-
1989
- 1989-06-19 SU SU894706937A patent/SU1652341A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Clngeras N.R., Greenough I., Schlldkraut I., Roberts RJ. Two new restriction endonucleases from Proteus vulgaris. - I.Nucleis Acids Res., 1981. v.9, 18, p. 4525-4536. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lillo et al. | Effects of culture conditions on poly (β-hydroxybutyric acid) production by Haloferax mediterranei | |
| KR101577820B1 (ko) | 종속영양 미세조류의 신규 배양 방법 | |
| KR19990013007A (ko) | 형질전환된 대장균 ｓｓ373(ｋｃｔｃ 8818ｐ)과 이를 이용한숙신산의 생산방법 | |
| JPH0923785A (ja) | 繊毛虫類の大量培養法 | |
| JPS60244295A (ja) | （十）‐トランス‐シクロプロパンカルボン酸の製造方法 | |
| Prasertsan et al. | Isolation, identification and growth conditions of photosynthetic bacteria found in seafood processing wastewater | |
| CA1238593A (en) | Microorganisms of the genus pseudomonas and process for the degradation of compounds containing methyl groups in aqueous solutions | |
| SU1652341A1 (ru) | Штамм бактерий РSеUDомоNаS SтUтZеRI - продуцент рестриктазы PSU I | |
| SU521849A3 (ru) | Способ получени цефалоспорина с | |
| Hayaishi | [14] Special techniques for bacterial enzymes. Enrichment culture and adaptive enzymes | |
| SU671738A3 (ru) | Способ получени биомассы микроорганизмов | |
| JPS6125358B2 (ru) | ||
| US3663373A (en) | Process for the preparation of iodinin | |
| SU1731809A1 (ru) | Способ получени кормовой биомассы фототрофных бактерий | |
| RU2053294C1 (ru) | Способ культивирования бифидобактерий | |
| RU2740710C1 (ru) | Штамм бактерии Paenibacillus polymyxa - продуцент левана | |
| RU2747583C1 (ru) | Способ получения (2r, 3s)-изолимонной кислоты из подсолнечного масла с помощью дрожжей yarrowia lipolytica | |
| SU1472493A1 (ru) | Штамм бактерий PRoVIDeNcIa SтUаRтII - продуцент рестриктазы Р S @ I | |
| RU1804479C (ru) | Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью | |
| SU763462A1 (ru) | Штамм 62-продуцент тирозинфеноллиазы | |
| SU1705338A1 (ru) | Штамм дрожжей CaNDIDa ReQUINII - продуцент алкогольдегидрогеназы | |
| Ringø et al. | Effects of extracts of Alnus glutinosa seeds on growth of Frankia strain ArI3 under static and fermentor culture conditions | |
| RU2078813C1 (ru) | Консорциум штаммов бактерий pseudomonas species, pseudomonas pseudoalkaligenes, corynebacterium species, разлагающий продукты переработки нефти | |
| SU1724686A1 (ru) | Штамм бактерий РSеUDомоNаS SтUтZеRI, используемый дл очистки промышленных сточных вод от малеиновой кислоты | |
| SU644833A1 (ru) | Штамм 85-продуцент -аспарагиновой кислоты |