SU1482887A1 - Method of assessing toxic effect of chemicals contained in aqueous medium - Google Patents
Method of assessing toxic effect of chemicals contained in aqueous medium Download PDFInfo
- Publication number
- SU1482887A1 SU1482887A1 SU874260249A SU4260249A SU1482887A1 SU 1482887 A1 SU1482887 A1 SU 1482887A1 SU 874260249 A SU874260249 A SU 874260249A SU 4260249 A SU4260249 A SU 4260249A SU 1482887 A1 SU1482887 A1 SU 1482887A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- population
- microalgae
- cells
- energy consumption
- movement
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к водной токсикологии, в частности к способу оценки токсичности с использованием в качестве тест-объектов подвижных микроводорослей. Цель изобретени - повышение точности оценки и сокращение длительности анализа. Оценку физиологического состо ни организмов осуществл ют по скорости движени и подвижности клеток в попул ции с вычислением показател энергозатрат попул ции на движение клеток. Движение микроводорослей измер ют в реальном масштабе времени методом коррел ционно-доплеровской спектроскопии, дл чего суспензию облучают когерентным светом с длиной волны 632,8 нм в красном диапазоне и регистрируют флуктуации рассе нного движущимис клетками света. Инкубацию тест-объекта с токсикантом провод т при температуре 25-32°С в течении 30-100 мин, а о токсическом эффекте суд т дл концентраций химических веществ, при которых наблюдаетс втора фаза чувствительности, про вл юща с в увеличении энергозатрат попул ции на движение клеток. 2 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 табл.The invention relates to aquatic toxicology, in particular to a method for assessing toxicity using mobile microalgae as test objects. The purpose of the invention is to improve the accuracy of the assessment and reduce the duration of the analysis. The assessment of the physiological state of the organisms is carried out by the speed of movement and mobility of the cells in the population with the calculation of the energy consumption of the population for cell movement. The movement of microalgae is measured in real time by the method of correlation Doppler spectroscopy, for which the suspension is irradiated with coherent light with a wavelength of 632.8 nm in the red range and the fluctuations of light scattered by the moving cells are recorded. Incubation of the test object with a toxicant is carried out at a temperature of 25-32 ° C for 30-100 minutes, and the toxic effect is judged for the concentrations of chemicals at which the second sensitivity phase is observed, which manifests itself in an increase in the energy consumption of the population cell movement. 2 hp f-ly, 4 ill., 3 tables.
Description
Изобретение относитс к водной токсикологии, в частности к способу оценки токсичности с использованием в качестве тест-объектов подвижных микроводорослей, и может быть использовано в системе мониторинга и контрол качества воды, в том числе при сбросе сточных вод промышленных предпри тий ,поверхностного стока при ме-, лиорации и в других област х, где требуетс контроль качества водной среды.The invention relates to water toxicology, in particular, to a method for assessing toxicity using mobile microalgae as test objects, and can be used in a system for monitoring and controlling water quality, including when discharging industrial wastewater, , and other areas that require quality control of the aquatic environment.
Цель изобретени - повышение точ- ности оценки и сокращение длительности анализа.The purpose of the invention is to improve the accuracy of the assessment and reduce the duration of the analysis.
Поставленна цель достигаетс тем что определение токсического действи химических веществ провод т после инкубации тест-объекта с химическим веществом в течение 30 - 100 мин. А далее суспензию клеток облучают когерентным светом в красном диапазоне с длиной волны, например, 632,8 нм с измерением флуктуации рассе нногоThe goal is achieved by determining the toxic effect of chemicals after incubating the test object with the chemical for 30-100 minutes. And then the cell suspension is irradiated with coherent light in the red range with a wavelength, for example, 632.8 nm with measurement of the scattered fluctuations
Ј 00 ГСЈ 00 GS
00 0000 00
ыs
JU8JU8
движущимис клетками света, по которым определ ют коррел ционную функцию амплитуды рассе нного излучени и оценивают скорость и число подвижных клеток, а относительную величину энергозатрат на движение клеток в попул ции вычисл ют по формулеmoving cells of light, which determine the correlation function of the amplitude of scattered radiation and estimate the speed and number of moving cells, and the relative amount of energy consumption for the movement of cells in a population is calculated by the formula
W-Л-З W-lz
где ve и v K - средн скорость по ан- .самблю клеток микроводорослей в зоне наблюдени соответственно в опыте и контроле, мкм/с;where ve and v K are the average velocity over the ana- lamblum of microalgae cells in the observation zone, respectively, in experiment and control, µm / s;
отношение числа подвижных клеток в попул ции к числу неподвижных соответственно в опыте и контроле,the ratio of the number of motile cells in the population to the number of immobile, respectively, in experience and control,
при этом о токсическом эффекте суд т по концентрации химических веществ, при которых наблюдаетс втора фазаat the same time, the toxic effect is judged by the concentration of chemicals at which the second phase is observed
2с и Чк2c and Chk
00
организма, а это на практике осуществить очень сложно.organism, and it is very difficult to implement in practice.
То, что после инкубации облучают организмы в попул ции микроводорослей когер ентным светом с длиной волны в красном диапазоне, например 632,8 нм, обеспечивает повышение точности оценки скорости движени клеток микроводорослей методом доплеровской спектроскопии . Зондирование пучком света позвол ет проводить исследование в камере, размеры которой по габаритам в принципе не ограничены, с одним лишь условием - толщина камеры должна быть не более 0,8-1 мм. Это обеспечивает возможность анализа скорости движени клеток достаточно длительное врем ( до 1 ч) без учета фактора ограничени объема суспензии, который в других случа х, в частности при анализе под микроскопом, необходимо об зательно учитывать. Это снижает веро тность получени артеThe fact that, after incubation, the organisms in a population of microalgae are irradiated with coherent light with a wavelength in the red range, for example 632.8 nm, improves the accuracy of the estimation of the speed of movement of microalgae cells using Doppler spectroscopy. Sounding by a beam of light allows the study to be carried out in a chamber, the dimensions of which in size are not limited in principle, with only one condition — the thickness of the chamber should be no more than 0.8-1 mm. This makes it possible to analyze the speed of cell movement for a sufficiently long time (up to 1 hour) without taking into account the factor limiting the volume of the suspension, which in other cases, in particular when analyzed under a microscope, must be taken into account. This reduces the likelihood of getting arte
чувствительности, котора про вл етс 25 фактов, что также повышает точностьsensitivity, which manifests itself in 25 facts, which also increases the accuracy
в увеличении энергозатрат попул ции на движение микроводорослей.in increasing the energy consumption of the population for the movement of microalgae.
То, что инкубацию биологического тест-объекта с химическим веществом провод т в течение 30-100 мин, обеспечивает реализацию краткосрочного контрол химического загр знени водной среды, т.е. оперативность анали1- за. За это врем организмы тест-объекта измен ют только энергетические характеристики своего состо ни , а параметры, отражающие информационные потоки (в генетическом аппарате и др.)-, не успевают отреагировать. Требовани на длительность повреждающего воздействи в этом аспекте можно представить в видеThe fact that the incubation of a biological test object with a chemical substance is carried out for 30–100 min ensures the implementation of short-term monitoring of chemical contamination of the aqueous medium, i.e. Efficiency of analysis. During this time, the test object organisms change only the energy characteristics of their state, and the parameters reflecting the information flows (in the genetic apparatus, etc.) do not have time to react. The requirements for the duration of the damaging effect in this aspect can be represented as
где ton - длительность опыта;where ton is the duration of the experiment;
f0p - характерное врем рйзвити полного цикла жизнеде тельности тест-объекта (дл микроводорослей это врем составл ет 12-24 ч).f0p is the characteristic time for a complete life cycle of a test object to be recovered (for microalgae, this time is 12-24 hours).
Данное ограничение обеспечивает повышение точности и воспроизводимости анализа, так как позвол ет исключить вли ние медленных циклов жизнеде тельности организма в реакции на химическое воздействие. При длительност х сравниваемых или больших характерных времен необходимо учитывать все параметры жизнеде тельностиThis limitation provides an increase in the accuracy and reproducibility of the analysis, since it allows one to exclude the effect of the slow life cycles of the organism in response to chemical exposure. With durations of comparable or large characteristic times, it is necessary to take into account all the parameters of vital activity.
00
5five
00
5five
00
5five
измерени подвижности клеток в попул ции . Толщина камеры менее 0,8 мм ограничиваетс эффектами пристеночного плавани клеток, которые вли ют на скорость и подвижность клеток, а толщина больше 1-мм ограничиваетс тем, что дл измерени флуктуации рассе нного света использован принцип оптического гетерод нировани с помощью блика света от передней стенки камеры. Выбор длины волны света в красном диапазоне обусловлен тем, что дл водорослей рода, Uunaliella Teod в этом диапазоне не Наблюдаютс активационные эффекты ни в фотосинтетическом аппарате клеток водорослей, ни в пигментной системе, ответственной за влени фототаксиса. Это практически исключает эффеты синергизма, а значит, обеспечивает высокую точность оценки состо ни .водорослей по параметрам их движени .measuring cell motility in a population. The chamber thickness less than 0.8 mm is limited by the effects of the wall floating cells, which affect the speed and mobility of the cells, and the thickness greater than 1 mm is limited by the fact that the optical heterodiptic principle is used to measure the fluctuations of scattered light. cameras. The choice of the wavelength of light in the red range is due to the fact that for algae of the genus Uunaliella Teod in this range no activation effects are observed either in the photosynthetic apparatus of algae cells or in the pigment system responsible for phototaxis. This virtually eliminates the effects of synergism, and therefore, provides a high accuracy of the assessment of the state of algae by the parameters of their movement.
То, что измер ют флуктуации-рассе нного движущимис клетками света, обеспечивает измерение скорости движени микроограннзмов методом доплеровской спектроскопии при низких требовани х к стабильности параметров как источника излучени , так и измерительного тракта. Дл этого достаточно , чтобы характерные времена изменени параметров системы были не соизмеримы с характерными временамиThe fact that the fluctuations of light scattered by moving cells are measured provides measurement of the speed of movement of microgranulars by Doppler spectroscopy with low requirements for the stability of the parameters of both the radiation source and the measuring path. For this, it is sufficient that the characteristic times of change of the parameters of the system are not commensurate with the characteristic times
доплеровского сдвига на микроорганизмах (временами спадани коррел ционной функции), которые имеют пор док величины в пределах 1-10 мс. Таким образом, прием измерени коррел ционной функции методом доплеровской спектроскопии в целом повышает точность оценки состо ни биологического тест-объекта.Doppler shift on microorganisms (from time to time the correlation function decays), which are of the order of magnitude in the range of 1–10 ms. Thus, the method of measuring the correlation function by the Doppler spectroscopy method as a whole improves the accuracy of estimating the state of a biological test object.
То, что из коррел ционной фукнкции получают скорость и число подвижных клеток, обеспечивает объективный анализ состо ни попул ции. Коррел ционна функци имеет быстро и медленно 1В спадающие слагаемые.The fact that the speed and the number of moving cells are obtained from the correlation function provides an objective analysis of the state of the population. The correlation function has fast and slow 1B falling terms.
Параметры быстро спадающего слагаемого св заны с величиной средней по ансамблю скорости движени микророт . Энергозатраты при этом измен лись закономерно с про влением всех фаз стресса и адаптации. Таким образом , использование показател энергозатрат при оценке токсического действи химических веществ на попул цию движущихс кл еток - принципиально новый признак, который ранее в таком виде нигде не рассматривалс The parameters of the rapidly decreasing term are related to the magnitude of the average speed of movement of the microrot. Energy consumption at the same time changed naturally with the manifestation of all phases of stress and adaptation. Thus, the use of energy consumption indicators in assessing the toxic effect of chemicals on a population of moving cells is a fundamentally new feature that has never been considered in this form before.
То, что относительную величину энергозатрат на движение клеток в попул ции вычисл ют по формулеThe fact that the relative amount of energy consumption per cell movement in a population is calculated by the formula
V.V.
обеспечивает воспроизводимость результатов оценки, так как при этом в относительном показателе энергозатрат учитываютс возможные изменени . организмов, а относительный вес мед- 20 Физиологического состо ни исходной ленно спадающего слагаемого определи- культуры микроводорослей, имеющие provides reproducibility of the evaluation results, since in this case the possible changes are taken into account in the relative energy consumption indicator. organisms, and the relative weight of the mediocre-descending term is determined by the culture of microalgae, which have
ет относительное количество неподвижных клеток. Эти параметры извлекаютс по методу наименьших квадратов.The relative number of immobile cells. These parameters are extracted using the least squares method.
Таким образом, анализ состо ни попул ции методом коррел ционно-доп- леровской спектроскопии в услови х автоматизации съема и обработки информации о скорости и подвижности клеток исключает субъективизм оценки. Причем величину погрешности Можно уменьшить путем увеличени объема выборки (количества экспериментов). Реальное врем съема и обсчета информации составл ет 1,5-2,0 мин.Thus, the analysis of the state of a population by the method of correlation Doppler spectroscopy under the conditions of automation of the removal and processing of information about the speed and mobility of cells eliminates the subjectivity of assessment. Moreover, the magnitude of the error can be reduced by increasing the sample size (the number of experiments). The actual time for retrieving and calculating information is 1.5-2.0 minutes.
То, что при анализе состо ни попул ции в краткосрочных опытах используетс показатель в виде v2.|, обеспечивает оценку энергозатрат наThe fact that when analyzing the state of a population in a short-term experiment, the indicator is used in the form of v2. |, Provides an estimate of the energy consumption for
движение клеток в попул ции, так как о наблюдаетс перва фаза стимул цииcell movement in the population, as the first phase of stimulation is observed
с максимальной параметрической чуви кинетическа энерги движени клеток и энерги , расходуема на в зкое трение, пропорциональна v2, а Ј - пр мо пропорциональна количеству действительностью , фаза индиферентнос- ти с минимальной чувствительностью к действию внешнего фактора, послеwith the maximum parametric chuvy, the kinetic energy of cell movement and the energy consumed by the viscous friction is proportional to v2, and Ј is directly proportional to the amount of reality, the phase of indifference with minimal sensitivity to the action of the external factor, after
гающихс клеток. Величина энергоэа- 4д которой снова повышаетс (вторично)cells. The value of energy-4d which again increases (again)
трат отражает свойство попул ции обмениватьс энергией с внешней средой и в этом про вл етс фундаментальность оценки состо ни биосистемы по данному параметру. Исследовани показал что именно показатель энергозатрат наиболее информативен по сравнению как с характеристикой скорости, так и с подвижностью клеток. В частности , установлено, что в некоторых случа х изменени скорости при воздействи х повреждающих факторов не наблюдалось, а подвижность имела существенную вариабильность и наобо50The expenditure reflects the property of the population to exchange energy with the external environment, and this is the basis for assessing the state of the biosystem by this parameter. Research has shown that it is precisely the indicator of energy consumption that is the most informative in comparison with both the characteristic of speed and the mobility of cells. In particular, it was found that in some cases, changes in speed under the effects of damaging factors were not observed, and the mobility had significant variability and vice versa.
параметрическа чувствительность. При этом энергозатраты относительно увеличиваютс . Однако если на первой фазе сн то воздействие, то биосистема возвращаетс в свое нормальное состо ние, а при наличии второй фазы сн тие воздействи не сопровождаетс переходом биосистемы в норму. Обыч- но наблюдали либо значительный гистерезис переходного процесса, либо последующую деградацию попул ции (по крайней мере при тех временах наблюдени , которые исследовались в опытах). Следует отметить, что данрот . Энергозатраты при этом измен лись закономерно с про влением всех фаз стресса и адаптации. Таким образом , использование показател энергозатрат при оценке токсического действи химических веществ на попул цию движущихс кл еток - принципиально новый признак, который ранее в таком виде нигде не рассматривалс .parametric sensitivity. In this case, the energy consumption is relatively increased. However, if in the first phase the effect is removed, then the biosystem returns to its normal state, and in the presence of the second phase the removal of the effect is not accompanied by the transition of the biosystem to normal. Usually, either a significant hysteresis of the transient process was observed, or a subsequent degradation of the population (at least during the observation times studied in the experiments). It should be noted that dunroth. Energy consumption at the same time changed naturally with the manifestation of all phases of stress and adaptation. Thus, the use of energy consumption in assessing the toxic effect of chemicals on a population of moving cells is a fundamentally new feature that has never been considered in this form before.
То, что относительную величину энергозатрат на движение клеток в попул ции вычисл ют по формулеThe fact that the relative amount of energy consumption per cell movement in a population is calculated by the formula
V.V.
характерные изменени при развитии попул ции в процессе их культивировани , при этом также повышаетс точность измерени .characteristic changes in the development of a population during their cultivation, while also improving the measurement accuracy.
То, что о токсическом эффекте действи химических веществ суд т по концентраци м, при которых наблюдаетс втора фаза чувствительности, про вл юща с в увеличении энергозатрат попул ции на движение микроводорослей , обеспечивает точность оценки повреждающего воздействи . Это св зано с тем, что характер реакции попул ции движущихс организмов при действии повреждающего фактора (исследовались температурные и химические воздействи ) измен етс в зависимости от интенсивности воздействи , при этомThe fact that the toxic effect of chemicals is judged by the concentrations at which the second sensitivity phase is observed, which is manifested in an increase in the energy consumption of the population for the movement of microalgae, ensures the accuracy of the assessment of the damaging effect. This is due to the fact that the nature of the reaction of a population of moving organisms under the action of a damaging factor (temperature and chemical effects were studied) varies depending on the intensity of the effect, while
ствительностью, фаза индиферентнос- ти с минимальной чувствительностью к действию внешнего фактора, послеindifference phase with minimal sensitivity to the action of an external factor, after
00
параметрическа чувствительность. При этом энергозатраты относительно увеличиваютс . Однако если на первой фазе сн то воздействие, то биосистема возвращаетс в свое нормальное состо ние, а при наличии второй фазы сн тие воздействи не сопровождаетс переходом биосистемы в норму. Обыч- но наблюдали либо значительный гистерезис переходного процесса, либо последующую деградацию попул ции (по крайней мере при тех временах наблюдени , которые исследовались в опытах). Следует отметить, что данный феномен реакции биосистемы наблюдаетс и на других объектах.parametric sensitivity. In this case, the energy consumption is relatively increased. However, if in the first phase the effect is removed, then the biosystem returns to its normal state, and in the presence of the second phase the removal of the effect is not accompanied by the transition of the biosystem to normal. Usually, either a significant hysteresis of the transient process was observed, or a subsequent degradation of the population (at least during the observation times studied in the experiments). It should be noted that this phenomenon of the reaction of the biosystem is also observed in other objects.
Новым вл етс то, что, с целью воспроизводимости опытов, измерение флуктуации рассе нного света провод т после предварительной засветки обду- чающим светом в течение 1 - 2 мин.What is new is that, for the purpose of reproducibility of experiments, the measurement of the scattered light fluctuations is carried out after a preliminary illumination with a blasting light for 1–2 minutes.
Это св зано с тем, что в первый момент после облучени клеток микроводорослей за врем 1 - 2 мин клетки адаптируютс к режиму освещени . Установлено , что это повышает точность измерени скорости и подвижности клеток , так как ошибка уменьшаетс , до уровн 2-5%.This is due to the fact that at the first moment after irradiation of microalgae cells, during 1–2 min, the cells adapt to the light conditions. This has been found to improve the accuracy of measuring the speed and mobility of cells, as the error decreases, to a level of 2-5%.
Новым также вл етс то, что инкубацию биологического тест-объекта осуществл ют при температуре в диапазоне 25 - 32° С с поддержанием стабильности термостатировани не хуж-е Ј0,5°С, что обеспечивает повышение точности оценки, так как в этом диапазоне изменение параметра энергозатрат от температуры имеет однонаправленный характер . Установлено, что в диапазоне 18-25°С энергозатраты уменьшаютс , а при 25-32°С - увеличиваютс . Известно , что диапазон 18 - 25°С соответствует дл водорослей Dunaliella Teod области гомеостаза, а диапазон 25 - 32°С - толерантные границы физиологической активации под действием температуры дл этого вида микроводорослей .New is also the fact that the incubation of a biological test object is carried out at a temperature in the range of 25–32 ° C with maintaining the stability of the temperature control not уж 0.5 ° C, which provides an increase in the accuracy of the estimate, since in this range the change in the parameter energy consumption of temperature is unidirectional. It has been found that in the range of 18-25 ° C, energy consumption is reduced, and at 25-32 ° C, it increases. It is known that the range of 18–25 ° C corresponds to the homeostasis regions of the Dunaliella Teod algae, and the range of 25–32 ° C corresponds to the tolerable limits of physiological activation under the influence of temperature for this type of microalgae.
На фиг. 1 представлена блок-схема устройства дл Измерени энергозатрат попул ции на движение микроводорослей в реальном масштабе времени методом коррел ционно-доплеровской спектроскопии; на фиг. 2 - температурные зависимости скорости движени (А), числа подвижных клеток (Б) и энергозатрат попул ции на движение (В) микроводорослей D.Salina, D.Viridis; на фиг. 3 - кинетика изменени энергозатрат попул ции н движение клеток D.Salina, D.Viridis при концентраци х токсиканта Си 10 мг/л; на фиг.4 - дозовые зависимости реакции биологического тест-объекта на действие токсиканта в краткосрочных опытах.FIG. Figure 1 shows a block diagram of a device for measuring the energy consumption of a population for the movement of microalgae in real time by the correlation Doppler spectroscopy method; in fig. 2 - temperature dependences of the speed of movement (A), the number of motile cells (B) and the energy consumption of a population per movement (C) of microalgae D. Salina, D. Viridis; in fig. 3 - kinetics of changes in the energy consumption of a population and the movement of D. Salina, D. Viridis cells at a concentration of 10 mg / L of the Toxicant; 4 shows the dose dependences of the response of a biological test object to the action of a toxicant in short-term experiments.
Предлагаемый способ оценки токсического действи химических веществ, содержащихс в водной среде реализуетс устройством (фиг. 1). содержащим: источник 1 когерентного излучени в диапазоне красного света, в качестве которого использовали лазерThe proposed method for evaluating the toxic effects of chemicals contained in the aquatic environment is implemented by the device (Fig. 1). containing: a source of coherent radiation in the range of red light, which was used as a laser
00
5five
00
5five
00
5five
00
5five
с источником 2 питани ; на выходе лазера 1 установлены диафрагма 3 и линза 4; излучение падает перпендикул рно плоскости кюветы на измерительную камеру 5, снабженную термо- статирующей рубашкой, котора соединена с термостатом 6; рассе нный свет регистрируетс фотоприемником 7, в качестве которого использовали фотоэлектронный умножитель, установленный под углом 16° и снабженный диафрагмой 8 и блоком 9 высоковольтного питани , выход фотоприемника 7 соединен с входом усилител 10, выход которого соединен с входом коррел тора 11; цифровый выход коррел тора 11 соединен с входом микроЭВМ 12, из микроЭВМ 12 поступают сигналы управлени работой коррел тора 11, при этом интервалы между съемами информации задаютс таймером 13; выход микроэвм 12 соединен с цифропечатающим устройством 14.with power source 2; the output of the laser 1 is installed aperture 3 and lens 4; the radiation falls perpendicular to the plane of the cuvette on the measuring chamber 5, equipped with a thermostatic jacket, which is connected to the thermostat 6; the scattered light is recorded by a photodetector 7, which was used as a photomultiplier at an angle of 16 ° and equipped with a diaphragm 8 and a high-voltage power supply unit 9, the output of the photoreceiver 7 is connected to the input of the amplifier 10, the output of which is connected to the input of the correlator 11; the digital output of the correlator 11 is connected to the input of the microcomputer 12, the microcomputer 12 receives the control signals for the operation of the correlator 11, and the intervals between retrieval of information are set by the timer 13; the output of the microcomputer 12 is connected to the digital printing device 14.
После предварительного культивировани микроводорослей D.Salina Teod или D.Viridis Teod на питательной среде составом, г/л: NaCl 116; MgS04 х7НгО 50; KNO, 2,5; KtHP04 0,2; NaHC03 0,5; водопроводна дехлорированна вода 1 л, рН 6-7, при освещенности 6000 - 8000 лк, температуре 20 - 25°С в течение 10 - 15 дк, пробу водорослей помещают в сосуд дл инкубации, куда ввод т химическое вещество заданной концентрации. Если исследуема вода с токсикантом имеет неизвестный состав, что характерно дл исследовани на токсичность сточных вод, то готов т р д проб воды с различной кратностью разбавлени (например , 1:1; 1:2; 1:5; 1:10; 1:20; 1:50; 1:100; 1:200; 1:500; 1:1000; 1:10000).After preliminary cultivation of D. Salina Teod microalgae or D. Viridis Teod in a nutrient medium with the composition, g / l: NaCl 116; MgS04 x7NO 50; KNO, 2.5; KtHP04 0.2; NaHC03 0.5; tap water dechlorinated water of 1 l, pH 6-7, with illumination of 6000-8000 lx, temperature 20-25 ° C for 10-15 dk, a sample of algae is placed in an incubation vessel where a chemical substance of a given concentration is introduced. If the investigated water with a toxicant has an unknown composition, which is typical for a study on the toxicity of wastewater, then a series of water samples with different dilution rates (for example, 1: 1; 1: 2; 1: 5; 1:10; 1: 20; 1:50; 1: 100; 1: 200; 1: 500; 1: 1000; 1: 10,000).
Инкубацию суспензии осуществл ют при освещенности 6000 - 8000 лк, температуру устанавливают в пределах 25 - 32е С, предпочтительно 26 С, со стабильностьюt0,5 С. Длительность инкубации выбирают в пределах 30- 100 мин в зависимости от требований оперативности, например при регулировании технологического режима очистных сооружений предпочтительна длительность 30 мин.The incubation of the suspension is carried out with an illumination of 6000-8000 lx, the temperature is set between 25 and 32 ° C, preferably 26 ° C, with a stability of 0.5 ° C. The duration of incubation is chosen between 30-100 minutes depending on the requirements of efficiency, for example, when regulating the technological mode treatment facilities preferred duration is 30 minutes.
После инкубации суспензию водорослей помещают в измерительную камеру 5, которую термостатируют до выбранной температуры, котора выше температуры культивации, например 28 0,5°С, с помощью термостата 6. Пучок когерентного света с длиной волны , например 632,8 им от лазера, формируют с помощью диафрагмы 3 и фокусируют в центр измерительной камеры 5 с помощью линзы 4.After incubation, the suspension of algae is placed in a measuring chamber 5, which is thermostatted to a selected temperature that is higher than the cultivation temperature, for example 28 0.5 ° C, using a thermostat 6. A beam of coherent light with a wavelength, for example 632.8 them from the laser, is formed using the diaphragm 3 and focus in the center of the measuring chamber 5 using a lens 4.
После предварительной засветки облучающим светом в течение 1-2 мик рассе нный движущимис клетками микроводорослей свет и блик от передней стенки камеры 5 регистрируют фотоприемником 7, на выходе которого получают за счет гетеродинировани модулированный электрический сигнал, поступающий на вход низкочастотного усилител 10, где происходит усиление флуктуационного сигнапа до уровн 2-ЗВ. Из сигнала с помощью коррел тора 11 стро т коррел ционную функцию рассе нного света в реальном масштабе времени при времени задержки 100 мкс и величине выборки (статистики ) 21 -2 . Коррел ционна функци в виде цифрового сигнала поступает в оперативную пам ть микроЭВМ 12. Из коррел ционной функции по методу наименьших квадратов извлекают величины скорости и числа подвижных клеток в попул ции микроводорослей, информаци о которых выводитс , например , на циФропечатающее устройство 14After preradiation with irradiation light for 1-2 microns, the light and the glare from the front wall of chamber 5 diffused by the microalgae moving cells are recorded by the photoreceiver 7, the output of which is a modulated electric signal received by heterodyning, which is fed to the input of the low-frequency amplifier 10, where the fluctuation amplification occurs Signa to level 2-SZ. From the signal, using the correlator 11, a correlation function of the scattered light is constructed in real time at a delay time of 100 µs and a sample size (statistics) of 21 -2. The correlation function in the form of a digital signal enters the RAM of microcomputer 12. From the correlation function, using the least squares method, extract the speed values and the number of moving cells in the microalgae population, information about which is output, for example, to a digital printer 14
Врем между съемами информации определ етс с помощью таймера 13. Врем прохождени сигнала, его обработки и набора статистики 2 составл ет 80 с, при меньшей статистике это врем уменьшаетс .The time between data pickups is determined using timer 13. The signal transit time, its processing and statistics collection 2 is 80 seconds, with less statistics, this time is reduced.
Величину энергозатрат на движение клеток в попул ции микроводорослей вычисл ют по формулеThe amount of energy consumption for cell movement in a population of microalgae is calculated by the formula
w-ЙФw jf
где v и v цwhere v and v
средн скорость по ан самблю клеток микроводорослей в зоне наблюдени соответственно в опыте и контроле; 0 и Ј k - отношение числа подвижных клеток в попул ции к числу неподвижных соответственно в опыте и контроле.average speed along the Sambl of microalgae cells in the observation zone, respectively, in experiment and control; 0 and Ј k is the ratio of the number of motile cells in the population to the number of immobile, respectively, in experiment and control.
О токсическом эффекте суд т дл концентраций химических веществ, при которых наблюдаетс втора фаза чувствительности, про вл юща с в увеличении энергозатрат попул ции наThe toxic effect is judged for the concentrations of chemical substances at which the second sensitivity phase is observed, which manifests itself in an increase in the energy consumption of the population
00
1515
2020
2525
00
. .
движение клеток микроводорослей. Аналогично определ ют кратность разбавлени сточных вод, при которой начинаетс необратимый сдвиг в функциональной активности микроводорослей, что происходит при достижении второй фазы увеличени энергозатрат попул ции на движение организмов.movement of microalgae cells. Similarly, the multiplicity of dilution of wastewater is determined, at which an irreversible shift in the functional activity of microalgae begins, which occurs when the second phase of increasing the energy consumption of a population by the movement of organisms is reached.
Пример 1 (обоснование выбора предварительной засветки облучающим светом).Example 1 (justification of the choice of pre-exposure of the irradiating light).
Суспензию микроводорослей облучают лазерным светом в красном диапазоне , при этом величина скорости движени клеток практически не измен етс , а подвижность после незначительного увеличени уже к третьей минуте стабилизируетс .The suspension of microalgae is irradiated with laser light in the red range, while the magnitude of the speed of cell movement remains almost unchanged, and the mobility after a slight increase already stabilizes by the third minute.
В табл. 1 представлены результаты . измерений скорости, подвижности и энергозатрат микроводорослей D.Salina в первые 4 мин после облучени красным лазерным светом (достоверность подгонок по методу наименьших квадратов не хуже 99,9%).In tab. 1 presents the results. measurements of the speed, mobility, and energy consumption of D.Salina microalgae in the first 4 min after irradiation with red laser light (the least squares fit is not worse than 99.9%).
Из табл. 1 видно, что дл получени стабильных результатов при оценке химического воздействи необходи- 30 ма предварительна засветка облучающим светом длительностью 1-2 мин. При этом стабильность энергозатрат после двух минут измен етс не более 7%, а в первые минуты засветки она измен етс до 40%. Нормировку дл энергозатрат проводили по средней величине текущих значений, соответствующих временам 2,5; 3,0, 3,5 и 4,0 мин. где данный показатель стабилизировалс .From tab. As can be seen from Fig. 1, in order to obtain stable results in evaluating the chemical effect, the required 30-pre-illumination with irradiation light lasting for 1-2 min. At the same time, the stability of energy consumption after two minutes does not change more than 7%, and in the first minutes of exposure it changes to 40%. Normalization for energy consumption was performed on the average of the current values corresponding to the times of 2.5; 3.0, 3.5 and 4.0 min. where this indicator has stabilized.
П р и м е р 2 (обоснование выбора температурного режима инкубации суспензии и проведени измерений энергозатрат попул ции на движение).Example 2 (substantiation of the choice of the temperature regime for incubating the suspension and measuring the energy consumption of a population per movement).
Исследовали температурные зависимости измер емых показателей дл двух ,видов микроводорослей - D.Salina (Teod) , D.Viridis (Teod). Дл этого пробу водорослей помещали в измерительную камеру, которую термостати5The temperature dependences of the measured indices for two microalgae species, D. Salina (Teod), D. Viridis (Teod), were investigated. For this, a sample of algae was placed in a measuring chamber, which thermostat5
00
5five
ровали при заданной температуре в пределах 18 - 60°С. При этом водоросли выдерживали дл каждой температуры в течение 2 мин. Контроль скорости , подвижности клеток и энергозатраты попул ции проводили в 3-кратной повторности при статистике 2 , Ошиб- ка по трем опытам измен лась в зависимости от температуры.were kept at a given temperature in the range of 18–60 ° С. The algae were kept for each temperature for 2 minutes. Control of the speed, mobility of the cells and energy consumption of the population was carried out in 3-fold repetition with statistics 2. The error in three experiments varied with temperature.
Б табл. 2 представлены величины погрешности дл скорости и подвижности клеток, а на фиг. 2 показаны температурные зависимости; 2.Л - дл скорости движени , 2. Б - подвижности клеток и 2.В - величины энергозатрат попул ции на движение клеток микроводорослей (крива 1,3 и 5 - D.Salina; крива 2,4 и 6 - D.Viridis).B tab. 2 shows the magnitude of the error for the speed and mobility of the cells, and FIG. 2 shows the temperature dependences; 2. L - for the speed of movement, 2. B - cell motility and 2. B - energy consumption values of the population for the movement of microalgae cells (curve 1.3 and 5 - D. Salina; curve 2.4 and 6 - D. Viridis) .
Из табл. 2 следует, что погрешность в опытах по температурным исследовани м в области выбранных режимов термостатировани (заштрихованна область на фиг. 2) не превышает 4% дл скорости движени и 8% дл подвижности.From tab. 2 it follows that the error in the experiments on temperature studies in the region of the selected thermostating regimes (the shaded area in Fig. 2) does not exceed 4% for the movement speed and 8% for mobility.
Как видно из температурных зависимостей , в диапазоне 25 - 32°С наблюреакции микроводорослей D.Salina Te на Си 14 в концентрации 10 мгл/л, а график 2 - микроводорослей U.Viri dis Teod на тот же токсикант. Досто верность подгонок по методу наимень ших квадратов не хуже 99,9%. Как ви но из фиг. 3, в интервале 30-100 ми водоросли измен ют свои параметрыAs can be seen from the temperature dependences, in the range of 25–32 ° C, the observations of D.Salina Te microalgae are at Cu 14 at a concentration of 10 mg / l, and graph 2 is of the microalgae U. Viri dis Teod for the same toxicant. The validity of the least squares fit is no worse than 99.9%. As seen from FIG. 3, in the range of 30-100 mi, algae change their parameters
JQ достаточно, чтобы сделать вывод о токсическом действии. Следует отметить , что именно параметр энергозатрат наиболее информативен, так как кинетика его изменени имеет хаJQ is enough to infer toxic effects. It should be noted that the energy consumption parameter is the most informative, since the kinetics of its change has
15 рактерные фазы перестройки попул ци под действием токсиканта с этапами стимул ции, ингибировани и повреждени клеток. Длительность инкубиро15 toxic phases of population rearrangement under the action of a toxicant with stages of stimulation, inhibition and cell damage. Incubiro Duration
вани более 100 мин ограничиваетс даетс синбадность изменени скорости 20 требованием экспрессности контрол , движени , подвижности клеток и величины энергозатрат попул ции на движение клеток микроводорослей. При этом дл показател энергозатрат характер изменени разных видов водорослей полностью совпадает.For more than 100 minutes, the synbadism of the change in speed 20 is limited by the requirement of express control, movement, cell mobility and energy consumption of a population for movement of microalgae cells. At the same time, for the indicator of energy consumption, the character of changes in different types of algae completely coincides.
Если инкубацию проводить при температурах меньше 25 С, то в этом случае возможны эффекты инверсии в реакции движени микроводорослей, что повышает ошибку измерени , так КакIf the incubation is carried out at temperatures below 25 ° C, then in this case the effects of inversion in the reaction of movement of microalgae are possible, which increases the measurement error, since
2525
а менее 30 мин - величиной ошибки в динамике и требованием завершени фазы перестройки стимул ции.and less than 30 minutes - by the magnitude of the error in the dynamics and the requirement for the completion of the stimulation restructuring phase.
В табл. 3 представлены значени дисперсии измер емых величин в дина мике в токсикологическом опыте.In tab. Figure 3 shows the dispersion values of measured values in dynamics in a toxicological experiment.
II р и м е р 4 (обоснование крите ри токсического эффекта в краткосрочных опытах с использованием по- 30 движных клеток микроводорослей).II p and me 4 (substantiation of the toxic effect in short-term experiments with the use of motile cells of microalgae).
Инкубацию микроводорослей D.Sali na Teod проводили при 26°С в течени 30 мин при освещенности 8000 лк в присутствии, например, ионов меди Си и тритона Х-100. Результаты предста лены на фиг. 4 (график 1 - дл меди график 2 - дл тритона Х-100). Из д зовой зависимости видно, что параметр энергозатрат при малых концент раци х имеет фазу стимул ции, при средних - некоторое ингибирование, при больших по вл етс втора фаза стимул ции и при очень больших наблюдаетс деградаци жизнеде тельности клеток. Установлено, что при достижении первой фазы стимул ции после сн ти воздействи параметры энергозатрат восстанавливаютс до нормы (контрол ), а при достижении второй фазы такого восстановлени нIncubation of D.Sali na Teod microalgae was carried out at 26 ° C for 30 min with an illumination of 8000 lx in the presence of, for example, copper ions Cu and Triton X-100. The results are presented in FIG. 4 (graph 1 - for copper; graph 2 - for triton X-100). From the dependency relationship, it can be seen that the energy consumption parameter at low concentrations has a stimulation phase, with moderate concentrations - some inhibition, with large concentrations, the second stimulation phase appears and at very large cells there is a degradation of cell viability. It is established that when the first phase of stimulation is achieved, after removal of the effect, the energy consumption parameters are restored to the norm (control), and when the second phase of this recovery is reached,
эти влени завис т от физиологического состо ни исходной культуры. Очевидно, что учет их - задача сложthese phenomena depend on the physiological state of the original culture. Obviously, accounting for them is a difficult task.
на . При температурах выше 32 С необ ходимо учитывать повреждающее воздействие температуры, которое на фоне химического воздействи может либо усиливатьс , либо уменьшатьс , что также влечет за собой увеличение динамической ошибки.on . At temperatures above 32 ° C, it is necessary to take into account the damaging effects of temperature, which against the background of chemical exposure can either increase or decrease, which also entails an increase in the dynamic error.
Таким образом, при температурном диапазоне 25 - 32°С ошибки измерени имеют минимальные значени .Thus, at a temperature range of 25 to 32 ° C, measurement errors have minimal values.
Пример 3,(установление длительности проведени опыта при оценке токсического действи химических веществ на микроводоросли D.Salina Teod или D.Viridis Teod).Example 3, (determination of the duration of the experiment in assessing the toxic effect of chemicals on the microalgae D. Salina Teod or D. Viridis Teod).
Пробы микроводорослей инкубировали при 26 С в присутствии токсикантов , после чего измер ли скорость движени и подвижность клеток попул ции с последующим вычислением энергозатрат попул ции ка движение клеток микроводорослей. На фиг. 3 представлены в качестве примера результаты экспериментов действи токсикак та, где график 1 отображает кинетикуMicroalgae samples were incubated at 26 ° C in the presence of toxicants, after which the speed and mobility of the cells of the population were measured, followed by the calculation of the energy consumption of the population, the movement of microalgae cells. FIG. 3 presents as an example the results of experiments toxication, where graph 1 shows the kinetics
реакции микроводорослей D.Salina Teod на Си 14 в концентрации 10 мгл/л, а график 2 - микроводорослей U.Viridis Teod на тот же токсикант. Достоверность подгонок по методу наименьших квадратов не хуже 99,9%. Как видно из фиг. 3, в интервале 30-100 мин водоросли измен ют свои параметрыreactions of D.Salina Teod microalgae on Cu 14 at a concentration of 10 mg / l, and graph 2 — U.Viridis Teod microalgae on the same toxicant. The least squares fit accuracy is not worse than 99.9%. As can be seen from FIG. 3, in the range of 30-100 minutes, algae change their parameters
Q достаточно, чтобы сделать вывод о токсическом действии. Следует отметить , что именно параметр энергозатрат наиболее информативен, так как кинетика его изменени имеет характерные фазы перестройки попул ции под действием токсиканта с этапами стимул ции, ингибировани и повреждени клеток. Длительность инкубировани более 100 мин ограничиваетс 0 требованием экспрессности контрол , Q is enough to infer toxic effects. It should be noted that it is precisely the energy consumption parameter that is most informative, since the kinetics of its change has characteristic phases of population restructuring under the influence of a toxicant with stages of stimulation, inhibition and cell damage. The incubation time of more than 100 minutes is limited to the requirement of express control,
5five
00
5five
,- ,,
а менее 30 мин - величиной ошибки в динамике и требованием завершени фазы перестройки стимул ции.and less than 30 minutes - by the magnitude of the error in the dynamics and the requirement for the completion of the stimulation restructuring phase.
В табл. 3 представлены значени дисперсии измер емых величин в динамике в токсикологическом опыте.In tab. Figure 3 shows the dispersion values of measured values over time in a toxicological experiment.
II р и м е р 4 (обоснование критери токсического эффекта в краткосрочных опытах с использованием по- 0 движных клеток микроводорослей).II p and me 4 (substantiation of the toxic effect criteria in short-term experiments with the use of motile cells of microalgae).
Инкубацию микроводорослей D.Salina Teod проводили при 26°С в течение 30 мин при освещенности 8000 лк в присутствии, например, ионов меди Си и тритона Х-100. Результаты представлены на фиг. 4 (график 1 - дл меди, график 2 - дл тритона Х-100). Из до- зовой зависимости видно, что параметр энергозатрат при малых концентраци х имеет фазу стимул ции, при средних - некоторое ингибирование, при больших по вл етс втора фаза стимул ции и при очень больших наблюдаетс деградаци жизнеде тельности клеток. Установлено, что при достижении первой фазы стимул ции после сн ти воздействи параметры энергозатрат восстанавливаютс до нормы (контрол ), а при достижении второй фазы такого восстановлени неIncubation of D.Salina Teod microalgae was carried out at 26 ° C for 30 min with an illumination of 8000 lx in the presence of, for example, copper ions Cu and Triton X-100. The results are presented in FIG. 4 (graph 1 - for copper, graph 2 - for triton X-100). From the dose dependence, it can be seen that the energy consumption parameter at low concentrations has a stimulation phase, with moderate concentrations, some inhibition, with large concentrations, the second stimulation phase appears and with very large cell degradation is observed. It was established that when the first phase of stimulation is reached, after removal of the effect, the energy consumption parameters are restored to the norm (control), and when the second phase of this recovery is reached,
наблюдали даже через 24 ч. Поэтому о токсическом эффекте химического воздействи необходимо судить только дл концентраций, при которых наблюдаетс втора фаза стимул ции. Это свойство реакции биологического тест- объекта характерно и дл других исследованных химических веществ. Использование данного критери оцен0they were observed even after 24 hours. Therefore, the toxic effect of the chemical effect should be judged only for the concentrations at which the second stimulation phase is observed. This property of the reaction of a biological test object is also characteristic of other studied chemicals. Use of this criterion
SS
1313
ки токсического действи позвол ет количественного контролировать химическое загр знение в краткосрочных опытах.The toxic effect allows the quantitative control of chemical contamination in short-term experiments.
Предлагаемый способ оценки токсического действи химических веществ, содержащихс в водной среде, может быть реализован на любой другой установке , котора позвол ет получать ин-JQ организмов в попул ции по скорости формацию о скорости движени и подвижности клеток в попул ции в реальном масштабе времени методом корре- л ционно-доплеровской спектроскопии.The proposed method for assessing the toxic effect of chemicals contained in the aquatic environment can be implemented on any other installation that allows the formation of in-JQ organisms in a population by velocity on the speed and mobility of cells in the population in real time by the method of correlating - L-Doppler spectroscopy.
дсижени клеток, отлнчающи с тем, что, с целью повышени то кости оценки и сокращени длительно ти анализа измер ют энергозатратыcell dividing, so that, in order to increase the evaluation bone and reduce the duration of the analysis, the energy consumption is measured
Использование способа наиболее эф- 15 попул ции на движение микроводорослейUsing the most effective method of 15 populations on the movement of microalgae
фективно в задачах оперативного контрол качества водной среды методом биотестировани в св зи с особой важностью решени проблемы охраны окружающей среды, в частности водных экосистем, кроме того, при организации скрининга вновь синтезируемых химических веществ, например в медицине , ветеринарии, сельском хоз йстве , пищевой и химической промышлен- ност х. Особое значение использовани данного способа имеет при оценке состо ни водных систем в экстремальных ситуаци х антропогенного воздействи .efficiently in the tasks of operational quality control of the aquatic environment by biotesting in connection with the particular importance of solving the problem of environmental protection, in particular aquatic ecosystems, in addition, when organizing screening of newly synthesized chemicals, for example, in medicine, veterinary medicine, agriculture, food and chemical industry x. Of particular importance is the use of this method in assessing the state of water systems in extreme situations of anthropogenic impact.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU874260249A SU1482887A1 (en) | 1987-06-10 | 1987-06-10 | Method of assessing toxic effect of chemicals contained in aqueous medium |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU874260249A SU1482887A1 (en) | 1987-06-10 | 1987-06-10 | Method of assessing toxic effect of chemicals contained in aqueous medium |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1482887A1 true SU1482887A1 (en) | 1989-05-30 |
Family
ID=21310161
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU874260249A SU1482887A1 (en) | 1987-06-10 | 1987-06-10 | Method of assessing toxic effect of chemicals contained in aqueous medium |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1482887A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112485399A (en) * | 2020-12-18 | 2021-03-12 | 江南大学 | Sewage toxin concentration estimation method |
-
1987
- 1987-06-10 SU SU874260249A patent/SU1482887A1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Авторское свидетельство СССР № 1184541, кл. А 61 К 31/52, 1985. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112485399A (en) * | 2020-12-18 | 2021-03-12 | 江南大学 | Sewage toxin concentration estimation method |
| CN112485399B (en) * | 2020-12-18 | 2021-09-07 | 江南大学 | Method for Estimating Toxin Concentration in Wastewater |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5798222A (en) | Apparatus for monitoring substances in organisms | |
| Schulz et al. | Real-time monitoring of lactate extrusion and glucose consumption of cultured cells using a lab-on-valve system | |
| Berden-Zrimec et al. | Delayed fluorescence in algal growth inhibition tests | |
| US4503149A (en) | Method of microbial assay | |
| US4969741A (en) | Measurement of solid particle concentration in presence of a second particle type | |
| SU1482887A1 (en) | Method of assessing toxic effect of chemicals contained in aqueous medium | |
| EP0112888B1 (en) | Method for the performance of a mutagenicity test | |
| US20100304421A1 (en) | Optical monitoring method | |
| Voznesenskiy et al. | Biosensors based on micro-algae for ecological monitoring of the aquatic environment | |
| Arsenault et al. | Toxic Effects of Copper on Selenastrum capricornutum Measured by a Plow Cytometry-Based Method | |
| RU2604302C2 (en) | Method for assessing functional status of plants in vitro without violating sterility | |
| CN114705647A (en) | Methods for the detection of acute toxicity in water | |
| RU2222003C2 (en) | Method of biological testing of natural water, sewage and aqueous solutions | |
| SU1688161A1 (en) | A method of determining the toxic effect of chemical substances contained in aqueous medium on plankton hydrobiont culture | |
| Clarkson et al. | An assessment of the cage-culture turbidostat as an alternative algal bioassay | |
| RU2050128C1 (en) | Fresh water reservoir environmental condition assessment method | |
| SU1010557A1 (en) | Method and device for liquid toxicity determination | |
| Sinkkonen et al. | Chlorinated acetic and propionic acids in pine needles from industrial areas | |
| RU2123692C1 (en) | Method of estimating quality of water | |
| UA129987U (en) | METHOD OF APPLICATION OF BIOTECHNICAL MONITORING SYSTEM FOR ACCOUNTING OF BIOS INDICATORS WITH BIOSENSOR AND OPTICAL REGISTRATION SUBSYSTEM | |
| RU2069851C1 (en) | Process of detection of content of phytotoxic substances | |
| RU2135994C1 (en) | Method for biologically testing water and soil for pollution | |
| RU2624797C1 (en) | Method of detecting rodanide using polymethacrylate matrix | |
| Yamamoto et al. | Decrease of DNA per cell during development of the lens in chickens | |
| RU2092838C1 (en) | Biosensor for quantitatively determining synthetic surfactants in water |