SU1472505A1 - Способ иммобилизации ферментов - Google Patents
Способ иммобилизации ферментов Download PDFInfo
- Publication number
- SU1472505A1 SU1472505A1 SU874269855A SU4269855A SU1472505A1 SU 1472505 A1 SU1472505 A1 SU 1472505A1 SU 874269855 A SU874269855 A SU 874269855A SU 4269855 A SU4269855 A SU 4269855A SU 1472505 A1 SU1472505 A1 SU 1472505A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- titanium sponge
- activated
- enzyme
- washed
- activity
- Prior art date
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 28
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 title claims description 3
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000010936 titanium Substances 0.000 claims description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 22
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 8
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 7
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 6
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 6
- 108700016171 Aspartate ammonia-lyases Proteins 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 2
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 2
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 2
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- -1 chlorine ions Chemical class 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- KPZGRMZPZLOPBS-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloro-2,2-bis(chloromethyl)propane Chemical compound ClCC(CCl)(CCl)CCl KPZGRMZPZLOPBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000007373 indentation Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии и может найти применение в медицинской, химической и микробиологической пром. Целью изобретени вл етс повышение гидродинамической устойчивости прививаемых ферментов, упрощение и ускорение процесса. Согласно способу титановую губку, промытую водой и высушенную при 100°С, активируют путем обработки перекисью водорода с концентрацией 30-35% при соотношении титанова губка: перекись водорода 1:/3-5/ в течение 45 мин при 55-67°С, после чего на активированный таким образом носитель иммобилизуют фермент известным способом. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.
Description
1
Изобретение относитс к биотехнологии , а именно к технологии биохимического превращени органических веществ растительного или животного происхождени , и может найти применение в медицинской, химической и микробиологической промьшзленности.
Цель изобретени - повыщение гидродинамической устойчивости прививаемых ферментов, упрощение и ускорение процесса иммобилизации.
Способ осуществл етс следующим образом.
К промытой в дистиллированной воде и высзш1енной титановой губке приливают перекись водорода с концентрацией 30-35% при соотношении титанова губка .: перекись водорода равном 1:(3-5)
соответственно. Смесь термостатируют при 55-67°С при встр хивании в течение 45 мин, затем промьшают дистилли-- рованной водой до нейтральной реакции и сушат при 150 С в течение 1 ч. Активированную таким образом титановую губку охлаждают до 0-4 С, после чего иммобилизуют на ней фермент.
Титанова губка вл етс побочным продуктом при получении чистого гитана методом магнийтермического восстановлени четыреххлористого
титана.
Титанова губка имеет высокую механическую прочность, большую удельную поверхность, составл ющую 0,06-0,11 , и невысокую насыщенную массу в пределах 0,7-1,1 г/см .
Пример 1. Получение активированного носител ,
К 5 г промытой в дистиллированной воде и высушенной при 100 С титановой губки добавл ют 1.5 мл перекиси водорода с концентрацией 30-35%, Смесь термостатируют при 55 С при встр хивании в течение 45 мин, заванный препарат с активностью фермента 132 ед/г, что составл ет 66% от активности титанативного фермента .
Пример 5, Иммобилизаци су пензий клеток E.coli,
Б качестве ферментативно активн го материала используют суспензию
тем,промывают дистиллированной водой Q клеток E.coli с аспартазной актив20
25
30
до нейтральной реакции и сушат при течение 1 ч. Активированную , taKHM образом титановую губку охлаждают до и используют дл иммобилизации ферментов,15
Пример 2. Иммобилизаци пепсина .
К 2 г титановой губки, активированной по примеру 1, приливают 10 мл 0,5%-ного раствора пепсина в О,1 М ацетатном буфере при рН 4,0 Смесь, взбалтывают на механической качалке в течение 1 ч при 4 С и вьщерживают в течение 10 ч. Титановую губку С иммобилизованными ферментами промывают от несв занного фермента 490 мл дистиллированной воды. Получают иммобилизованный препарат с активностью 1800 ед/г, т,е, 62% активности на- тивного фермента.
Пример 3, Иммобилизаци пек- тиназы из Aspergillus niger,
К 2 г титановой губки, активиро- .ванной по примеру 1, приливают 5 мл 3%-ного раствора пектиназы в 0,1 М ацетатном буфере при рН 4,0, Смесь тщательно перемешивают и взбалтывают на механической качалке 2 ч. при 0°С и оставл ют на 10 ч. Губку промы-s: вают 100 мл дистиллированной-воды до нейтральной реакции. Получают иммобилизованный препарат с активностью фермента 83,2 ед/г, что составл ет 90% от активности нативного фермента. Пример 4, мобилизаци про- теазы из Aspergillus oryzae,
К 5 г титановой губки, активированной по примеру 1, приливают 10 мл 0,5%-ного раствора проторизина в- 0,1 М универсальном буферном растворе при рН 4 (0,1 М борной кислоты, 0,1 М фосфорной кислоты, 0,1 М уксусной кислоты в 1 М щелочи)о Смесь тщательно перемешивают и взбалтывают на механической качалке 2 ч при и оставл ют при этой температуре на 10 ч t Титановую губку промывают 100 мл дистиллированной воды до нейтральной среды. Получают иммобилизо35
40
45
50
2 С
55
ностью. Клетки E.coli отдел ют из культуральной среды и промывают ди тиллированной водой с последующим центрифугированием в течение 10 ми К 2 г титановой губки, активирован ной по примеру 1, приливают 10 мл- суспензии клеток E.coli, Смесь охлаждают до 6-8°С, приливают 9 мл 0,1 М фосфатного буфера при рН 8,0 Смесь тщательно перемешивают и взб тывают на механической качалке 2 ч при 4 С и ост-авл еют на 10 ч. Тита новую губку с иммобилизованной сус пензией клеток промьшают на фильтр от несв занных клеток 0,1 М водным раствором хлористого натри до исчезновени светопоглощени при 280 нм в промьюных водах и О,1 К ацетатном буфере при рН 4,5 до отсутстви ионов хлора. Получают пре парат с общей аспартазной активно стью 69520 ед, что составл ет 90% от исходной общей аспартазной акти ности внесенных свободных клеток.
Пример 6, Получение актив рованного носител фермента.
К 5 г промытой в дистиллированн воде, а затем высушенной при 100 С титановой губки добавл ют 25 мл ко центрированной гидроперекиси. Смес термостатируют при 67 С при.встр х вании в течение 45 мин, затем пром вают дистиллированной водой до ней ральной реакции и сушат при 150 С в течение 1 ч. Активированную таки образом титановую губку охлаждают . Подготговленную активированную титановую губку используют дл им билизации на ней ферментов.
Пример 7, Иммобилизаци сина, V .
- К 2 г титановой губки, активир ванной по примеру 6, приливают 10 0,5%-ного раствора пепсина в 0,1 ацетатном буфере при рН 4,0, Смес взбалтьшают на механической качал в течение 1 « при 4°С и выдержива в течение 10 ч. Титановую губку с
ванный препарат с активностью фермента 132 ед/г, что составл ет 66% от активности титанативного фермента .
Пример 5, Иммобилизаци суспензий клеток E.coli,
Б качестве ферментативно активного материала используют суспензию
клеток E.coli с аспартазной актив0
5
0
5
35
40
45
50
55
ностью. Клетки E.coli отдел ют из культуральной среды и промывают дистиллированной водой с последующим центрифугированием в течение 10 мин. К 2 г титановой губки, активированной по примеру 1, приливают 10 мл- суспензии клеток E.coli, Смесь охлаждают до 6-8°С, приливают 9 мл 0,1 М фосфатного буфера при рН 8,0, Смесь тщательно перемешивают и взбалтывают на механической качалке 2 ч при 4 С и ост-авл еют на 10 ч. Титановую губку с иммобилизованной суспензией клеток промьшают на фильтре от несв занных клеток 0,1 М водным раствором хлористого натри до ис . чезновени светопоглощени при 280 нм в промьюных водах и О,1 К ацетатном буфере при рН 4,5 до отсутстви ионов хлора. Получают препарат с общей аспартазной активностью 69520 ед, что составл ет 90% от исходной общей аспартазной активности внесенных свободных клеток.
Пример 6, Получение активированного носител фермента.
К 5 г промытой в дистиллированной воде, а затем высушенной при 100 С титановой губки добавл ют 25 мл концентрированной гидроперекиси. Смесь термостатируют при 67 С при.встр хивании в течение 45 мин, затем промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции и сушат при 150 С в течение 1 ч. Активированную таким образом титановую губку охлаждают до . Подготговленную активированную титановую губку используют дл иммобилизации на ней ферментов.
Пример 7, Иммобилизаци пепсина , V .
- К 2 г титановой губки, активированной по примеру 6, приливают 10мл 0,5%-ного раствора пепсина в 0,1 К ацетатном буфере при рН 4,0, Смесь взбалтьшают на механической качалке в течение 1 « при 4°С и выдерживают в течение 10 ч. Титановую губку с иммобилизованными ферментами промывают от несв занного фермента 490 мл дистиллированной воды. Получают иммобилизованный препарат с активностью 1870 ед/г, т.е. 64,4% активности на- тивного препарата.
Пример 8. Иммобилизаци про теазы из Aspergillus oryzae.
К 5 г титановой губки, активированной по примеру 6, приливают 10мл 0,5%-ного раствора проторизина в О,1 М универсальном буфере растворе при рН 4. Смесь тщательно перемешивают и взбалтывают на механической качалке 2 ч при 2 С и оставл ют при этой температуре на 10ч. Титановую губку промывают 100 мл дистиллированной воды до нейтральной среды„ Получают иммобилизованньш препарат с активностью фермента 140 ед/г, что составл ет 70% от активности нативного фермента.
Пример 9. Получение активированного носител фермента
К 5 г промытой в дистиллированной воде, а затем высушенной при титановой губки добавл ют 20 мл концентрированной гидроперекиси. Смесь термостатируют при 60 С при встр хивании в течение 45 мин,затем промывают дистиллированной водой до нейтт ральной реакции и сушат при 150 С в течение 1 ч. Активированную таким образам титановую губку охлалсдают до , 0°С. Подготовленную активированную титановую губку используют дл иммобилизации на ней ферментов.
Пример 10, Иммобилизаци пепсина.
К 2 г титановой губки, активированной по примеру 9, приливают 10мл 0,5%-ного раствора пепсина в 0,1 М ацетатном буфере при рН 4,О Смесь взбалтывают на механической качалке
в течение 1 ч при 4 С и выдерживают в течение 10 ч. Титановую губку с иммобилизованными ферментами про -1ыва ют от несв занного фермента 490 мл дистиллированной воды. Получают иммо билйзованный препарат с 1780 ед/г, т.е„ 61,5% тивного фермента.
активностью активности на
Примеры 11-18. Способ осут ществл ют аналогично, но при различном соотношении титановой губки и гидроперекиси при активации носител .
Результаты указаны в таблице.
Как видно из таблицы при выходе за режимы соотношени титанова губка:перекись водорода снижаетс активность иммобилизованного фермента .
Claims (2)
- Формула изобретени1,Способ иммобилизации ферментов , предусматривающий активацию носител на основе титана и последующее св зьюание ферментов с активированным- носителем, отличаю-щ и и с тем, что, с целью повышени гидродинамической устойчивости прививаемых ферментов, упрощени и ускорени процесса, в качестве носител используют титановую губку, а активацию ос тцествл ют путем обработки 30-35%-ной перекисью водорода при соотношении титанова губка : перекись водорода равном 1 : (3-5) соответственно и температ у- ре 55-67 с.
- 2.Способ по п.1, о т л и ч а. ю Щ и и с тем, что обработку перекисью водорода 45 45 мин.ведут в течение1Д725058Продолжение таблицы
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU874269855A SU1472505A1 (ru) | 1987-04-29 | 1987-04-29 | Способ иммобилизации ферментов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU874269855A SU1472505A1 (ru) | 1987-04-29 | 1987-04-29 | Способ иммобилизации ферментов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1472505A1 true SU1472505A1 (ru) | 1989-04-15 |
Family
ID=21313905
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU874269855A SU1472505A1 (ru) | 1987-04-29 | 1987-04-29 | Способ иммобилизации ферментов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1472505A1 (ru) |
-
1987
- 1987-04-29 SU SU874269855A patent/SU1472505A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| РГммобилизованные ферменты,/Под ред. Березина И.В., Антонова В.К., Мартинека К. Изд-во МГУ, 1976. Авторское свидетельство СССР № 536192, кл. А 61 К 37/48, 1975. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3802997A (en) | Method of stabilizing enzymes | |
| US4665028A (en) | Method for production of an immobilized enzyme preparation by means of a crosslinking agent | |
| Campbell et al. | Enzymatic recycling of coenzymes by a multi-enzyme system immobilized within semipermeable collodion microcapsules | |
| JPS59113889A (ja) | 固定化酵素もしくは固定化微生物菌体の製造方法 | |
| US3909358A (en) | Insolubilized enzymes | |
| SU1472505A1 (ru) | Способ иммобилизации ферментов | |
| US3736231A (en) | Preparation of insolubilized enzymes | |
| CA1215336A (en) | Immobilization of catalytically active microorganisms in agar gel fibers | |
| Kang et al. | Effect of water on hydrolysis of olive oil by immobilized lipase in reverse phase system | |
| JPS61111685A (ja) | 安定化された酵素及びその製造方法 | |
| JPS6331538A (ja) | 固定化用担体 | |
| JPS583675B2 (ja) | 水溶液中に含まれている生化学化合物を増成又は減成する方法 | |
| KR830002846B1 (ko) | 덱스트로오스를 함유하는 시럽 제조방법 | |
| JPH074244B2 (ja) | 微生物固定化担体及びその製造方法 | |
| JPS60145095A (ja) | 固定化微生物によるキシリト−ルの製造法 | |
| JP3025947B2 (ja) | 乾燥固定化リパーゼ担体の製造方法 | |
| RU2204600C2 (ru) | Способ получения иммобилизованной глюкоамилазы | |
| JPS62163698A (ja) | γ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−α−アミノ−ｎ−ブチリルグリシンの製造方法 | |
| RU2054481C1 (ru) | Способ получения иммобилизованных ферментов | |
| SU749847A1 (ru) | Способ получени носител дл иммобилизации биологически активных веществ | |
| JPH0320232B2 (ru) | ||
| JPS6167489A (ja) | 枯草菌の固定化細胞、固定化方法及び７‐β‐アシルアミドセフアロスポラン酸からの３‐アセトキシ基の脱離に対する生成物の使用 | |
| KR950010816B1 (ko) | 에스테르 교환 반응용 고정화 리파제 | |
| JPH02138975A (ja) | 固定化リパーゼの製造方法 | |
| RU686377C (ru) | Способ получени препарата иммобилизованной протеазы BACILLUS SUBTILIS |