SK5862003A3

SK5862003A3 - Salts of a isothiazole-4-carboxamide and their use as anti-hyperproliferation agents

Info

Publication number: SK5862003A3
Application number: SK586-2003A
Authority: SK
Inventors: Thomas G Gant; Glenn Robert Williams
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2000-11-28
Filing date: 2001-11-19
Publication date: 2004-05-04
Also published as: TNSN01167A1; CN1476439A; MA26960A1; PL362079A1; NO20032388D0; CY1106240T1; IL155371A0; CA2430065A1; ES2271086T3; UA74221C2; HRP20030408A2; ECSP034628A; HUP0302553A3; MY136686A; EP1337521A1; SI1337521T1; CN1231474C; BR0115621A; ZA200303341B; DE60123461T2

Description

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka soli amidu 3-(4-bróm-2, 6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(pyrrolidin-l-yl-butyl)-ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny vzorca I:

Vzorec I vo forme volnej fázy je popísaný v súbežnej US prihláške No.09/316!837, podanej 21.5.1999, ktorej odhalenie je tu začlenené odkazom ako celok. Skoršia prihláška je postúpená spoločne s predloženou prihláškou. Volná báza vzorca ,1 je užitočná pre liečenie hyperproliferatívnych chorôb, ako je rakovina.

Predložený vynález poskytuje hydrochlorid, hydrobromid, hemicitrát, acetát, p-tosylát, 1-tartrát, hemisukcinát, a mesylát vytvorený z amidu 3-(4-bróm-2, 62

-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-1-ylbutyl)ureido]izotiazo1-4-karboxylovéj kyseliny.

Predložený vynález sa ďalej týka spôsobu výroby hydrochloridu, hydrobromidu, hemicitrátu, acetátu, p-tosylátu, L-tartrátu, hemisukcinátu a mesylátu vytvoreného z amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3- (4-pyrrolidin-1-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny. Vynález sa tiež týka farmaceutických kompozícii obsahujúcich hydrochlorid, hydrobromid, hemicitrát, acetát, p-tosylát, L-tartrát, hemisukcinát a mesylát zlúčeniny vzorca I. Soli podľa predloženého vynálezu sú užitočné pre liečenie hyperproliferatívnych chorôb, ako je rakovina u cicavcov, najmä u človeka. Vynález sa taktiež týka spôsobov podávania solí vzorca I pri liečení hyperproliferatívnych chorôb.

Stručný popis obrázkov

Obr. 1. je róntgenové práškové difrakčné spektrum hydrochloridu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5 [3- (4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny, ktorý bol pripravený a izolovaný spôsobom podľa predloženého vynálezu ilustrovanom v Príklade 2.

Obr. 2. je róntgenové práškové difrakčné spektrum hydrobromidu amidu 3-(4-bróm-2, 6-difluórbenzyloxy)-5[3- (4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny, ktorý bol pripravený a izolovaný spôsobom podľa predloženého vynálezu ilustrovanom v Príklade 3.

Obr. 3. je rôntgenové práškové difrakčné spektrum hemicitrátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny, ktorý bol pripravený a izolovaný spôsobom podlá predloženého vynálezu ilustrovanom v Príklade 4.

Obr. 4. je rôntgenové práškové difrakčné spektrum acetátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny, ktorý bol pripravený a izolovaný spôsobom podlá predloženého vynálezu ilustrovanom v Príklade 5.

Obr. 5. je rôntgenové práškové difrakčné spektrum p-tosylátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny, ktorý bol pripravený a izolovaný spôsobom podlá predloženého vynálezu ilustrovanom v Príklade 6.

Obr. 6. je rôntgenové práškové difrakčné spektrum L-tartrátu amidu 3-(4-bróm-2, 6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny, ktorý bol pripravený a izolovaný spôsobom podía predloženého vynálezu ilustrovanom v Príklade 7.

Obr. 7. je rôntgenové práškové difrakčné spektrum hemisukcinátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny, identifikovaného ako forma A, ktorý bol pripravený a izolovaný spôsobom podía predloženého vynálezu ilustrovanom v Príklade 8.

Obr. 8. je rôntgenové práškové difrakčné spektrum hemisukcinátu amidu 3-(4-bróm-2, 6-difluórbenzyloxy)-5[3- (4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny, identifikovaného ako forma B, ktorý bol pripravený a izolovaný spôsobom podía predloženého vynálezu ilustrovanom v Príklade 9.

Obr. 9. je rôntgenové práškové difrakčné spektrum mesylátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny, ktorý bol pripravený a izolovaný spôsobom podía predloženého vynálezu ilustrovanom v Príklade 10.

V rôntgenovom práškovom difrakčnom spektre na Obr. 1-9 horizontálna os ukazuje uhol difrakcie 2-theta stupňov a vertikálna os znázorňuje intenzitu difrakcie v Cps.

Podstata vynálezu

Predložený vynález sa týka hydrochloridu, hydrobromidu, hemicitrátu, acetátu, p-tosylátu, L-tartrátu, hemisukcinátu a mesylátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy) -5[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]-izotiazol4-karboxylovej kyseliny nasledujúceho vzorca:

(D

Predložený vynález sa ďalej týka spôsobov výroby hydrochloridu, hydrobromidu, hemicitrátu, acetátu, p-tosylátu, L-tartrátu, hemisukcinátu a mesylátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)-ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny zahrnujúcich reakciu volnej bázy s jednou z vyššie uvedených solí v prítomnosti vhodného organického rozpúšťadla.

Hydrochlorid, hydrobromid, hemicitrát, acetát, p-tosylát, L-tartrát, hemisukcinát a mesylát amidu 3—(4— -bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny bol charakterizovaný pomocou róntgenovej práškovej difraktometrie.

Kryštály hydrochloridu, hydrobromidu, hemicitrátu, acetátu, p-tosylátu, L-tartrátu, hemisukcinátu (Formy A a B) a mesylátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[(46

-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny poskytujú práškové róntgenové difrakčné spektrá v podstate zhodné ako sú práškové rôntgenová difrakčné spektrá na Obr. 1-9, jednotlivo. Avšak, je známe, že práškové róntgenové difrakčné spektrá môžu byť získané s chybou merania, ktorá je závislá od podmienok merania. Najmä, je obecne známe, že intenzity v práškovom rôntgenovom difrakčnom spektre sa môžu meniť v závislosti od podmienok merania. Preto je zrejmé, že soli podía predloženého vynálezu nie sú obmedzené na kryštály, ktoré vykazujú práškové róntgenové difrakčné spektrum naprosto zhodné s práškovými róntgenovými difrakčnými spektrami na Obr.l -8, a že kryštály poskytujúce práškové róntgenové difrakčné spektrá v podstate zhodné, ako vyššie uvedené práškové róntgenové difrakčné spektrá patria do rozsahu predloženého vynálezu. Odborníci v odbore róntgenovéj práškovej difraktometrie môžu lahko posúdiť identitu róntgenových práškových difrakčných spektier.

Obecne, chyba merania uhla difrakcie pri bežnej róntgenovéj práškovej difraktometrii je asi 5 % alebo menej a táto chyba merania by sa mala brať v úvahu, rovnako ako u uhlov difrakcie. Ďalej, by malo byť zrejmé, že intenzity sa môžu meniť v závislosti od experimentu.

Hydrochlorid vytvorený zo zlúčeniny vzorca I je charakteristický tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri uhloch difrakcie asi

2-theta, [% relatívnej intenzity] : 8,623 [90,7], 12,121 [38.9], 17,298 [95,2], 23, 397 [440, 7], 23, 944 [51,7],

24,119 [62,7], 24, 873 [55,7], 25, 948 [100] a 28, 821 [39,6]. Hydrochlorid vyrobený podľa predloženého vynálezu poskytuje práškové róntgenové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je práškové róntgenové difrakčné spektrum na Obr. 1.

Charakteristické 2-theta (20) intenzity (RI) v percentách pre hydrochloridu zlúčeniny obecného v Tabulke 1 hodnoty relatívnej difrakčné spektrum vzorca I sú uvedené

2Θ	Rl(%)	2Θ	Rl(%)	2Θ	Rl(%)	20	Rl(%)	20	R) (%)
6,225	10,5	17,298	95,2	23,397	44,7	28,821	39, 6	33,407	10, 4
8, 623	90,7	17,868	17, 6	23,944	51,7	29,438	19, 0	33,778	15, 3
12,121	38, 9	18,712	17,1	24,119	62,7	30,543	15, 3	34,920	10, 5
12,522	16,8	18,880	14,2	24,873	55,7	31,144	8,7	35,273	9,4
12,873	6, 0	19,549	13, 8	25, 948	100, 0	31,757	8,7	36, 321	13, 6
14,206	4,7	20,552	8,5	27,216	12, 6	32,348	14, 6	38,409	15, 5
15,951	5,1	21,896	22,2	28,146	6, 0	32,640	11,4	39,500	9,9
16,736	12,4

Tabulka 1

Hydrobromid vytvorený zo zlúčeniny vzorca I je charakteristický tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri uhloch difrakcie asi

2-theta_z [% relatívnej intenzity]: 8,687 [100,0], 12,264 [35,9], 17,374 [42,3], 23,711 [24,0], 24,335 [20,7] a 25,769 [34,3]. Hydrobromid vyrobený podía predloženého vynálezu poskytuje práškové rôntgenové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je práškové rôntgenové difrakčné spektrum na Obr. 2.

Charakteristické 2-theta (2Θ) hodnoty relatívnej intenzity (RI) v percentách pre difrakčné spektrum hydrobromidu zlúčeniny obecného vzorca I sú uvedené v Tabulke 2

20	Rl (%	2Θ	Rl(%)	2Θ	Rl (%	2Θ	Ri (%	2Θ	Rl(%)
3, 156		17,37	42, 3	23,18	5, 6	28,52	6, 1	33,256	3,7
4,615	2,4	17,76	5, 6	23,71	24,0	28,91	9,4	33,897	7,9
6, 331		18,18	3, 2	24, 33	20,7	29, 41	7,7	34,628	2, 8
8, 687	100,	18,91	16, 6	25, 43	9,1	30,26	4,6	34,999	3,3
12,264		19,52	9,5	25, 76	34, 3	31, 56	3,9	35,432	6,1
12,890	2,2	20,28	2,5	26, 94	4, 1	32, 08	3,4	36, 006	4,3
13,445	1,4	20-	2,9	27, 34	7,0	32, 63	5, 3	37,361	3,4
14,140	3,4	21,87	13, 6	28,16	5,7	32,92	4,4	38,224	4,8
16,083	4,0

Tabuľka 2

Hemicitrát vytvorený zo zlúčeniny vzorca I je charakteristický tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri uhloch difrakcie asi 2-theta, [% relatívnej intenzity]: 4,306 [79,9], 16,317 [100,0], 20,988 [32,7], 21,476 [30,9], 22, 643 [48,7], 23, 384 [76,9], 24, 891 [76,0], 27,573 [47,9] a 27,840 [32,3]. Hemicitrát vyrobený podlá predloženého vynálezu poskytuje práškové róntgenové

difrakčné róntgenové	spektrum v podstate difrakčné spektrum na	zhodné ako	je	práškové
Obr.	3.
Charakteristické 2-theta	(2Θ)	hodnoty	relatívnej
intenzity	(RI) v percentách	pre	difrakčné	spektrum
hemicitrátu	zlúčeniny obecného	vzorca I	sú	uvedené

v Tabulke 3.

2Θ	Rl (%	2Θ	Rl(%)	2Θ	Rl (%)	2Θ	Rl (%)	2Θ	Rl(%)
3,201	14,3	13,76	12, 4	18, 69	15, 8	24,21	28,8	29, 63	17,4
4,306	79, 9	14, 08	7,0	19, 34	23, 4	24, 89	76, 0	31, 25	14,6
6, 429	7,0	14,71	9,5	20, 39	16, 4	25, 32	20, 4	31,84	14,2
8, 620	6, 0	15,29	16, 0	20, 98	32, 7	25, 94	28,0	32, 23	11,8

9, 589	5, 6	16,31	100,0	21,47	30, 9	26, 37	25,7	34,14	11, 0
10, 58	6, 8	17,30	14, 4	21, 99	27,3	27,57	47, 9	35, 87	16, 2
11,44	20, 9	17,57	16, 5	22, 64	48,7	27, 84	32, 3	37, 33	12, 3
12, 30	8,7	18,25	13,7	23, 38	76, 9	28, 60	19, 6

Tabuľka 3

Acetát vytvorený zo zlúčeniny vzorca I je charakteristický tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri uhloch difrakcie asi 2-theta, [% relatívnej intenzity]: : 6,096 [21,7], 12,183 [21,4], 17,451 [33,3], 18,288 [100,0], 22,441 [57,7], 23, 086 [19,9] a 24,439 [20,7], Acetát vyrobený podlá predloženého vynálezu poskytuje práškové rôntgenové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je práškové rôntgenové difrakčné spektrum na Obr. 4.

Charakteristické 2-theta (2Θ) hodnoty relatívnej intenzity (RI) v percentách pre difrakčné spektrum acetátu zlúčeniny obecného vzorca I sú uvedené v Tabulke 4

Rl(%)	2Θ	2©	Rl(%)	2Θ	Rl(%	2Θ	Rl(%)	2©	Rl(%)
21,7	6,096	16,79	4,5	21,346	8,9	27,93	5,8	32,27	4,1
2,8	8, 625	17,12	12, 8	22,441	57,7	28,82	10,0	33,12	5,1
2,9	11,84	17,45	33,3	23,086	19,9	29, 64	6,1	35,03	3,4
21, 4	12, 18	17,92	8,7	24,038	7,5	30, 63	3,3	36,44	3,2
4,2	14, 83	18,28	100, 0	24,439	20,7	31,11	3,2	37, 83	3, 0
9,2	15, 26	20, 08	3, 6	24,760	11, 3	31, 95	2,9	39,47	2, 5
5, 0	15, 82	20,45	11,3	25,861	5, 0

Tabulka 4 p-Tosylát vytvorený zo zlúčeniny vzorca I je charakteristický tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri uhloch difrakcie asi 2-theta, [% relatívnej intenzity]: 20,446 [100,0], 20,760 [74,0],

22,092 [81,7], 22, 371[70, 8], 23,190 [65,2], a 26, 239 [61,5]. p-Tosylat vyroheny podlá predloženého vynálezu poskytuje práškové rontgenové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je práškové rontgenové difrakčné spektrum na Obr. 5.

Charakteristické 2-theta (2Θ) hodnoty relatívnej intenzity (RI) v percentách pre difrakčné spektrum p-tosylátu zlúčeniny obecného vzorca I sú uvedené v Tabuľke 5

	Rl(%)	2Θ	Rl(%)	2Θ	RK%)	2Θ	Rl(%	2Θ	Rl(%)
7,515	28,0	14,337	18,3	18,97	40,4	24,11	30,5	29,67	19, 6
7, 822	22, 3	15,001	22,2	19, 73	36,7	25, 47	40,2	31,03	19, 3
11,15	15, 0	15,601	21,4	20, 44	100, 0	25, 93	50, 4	31,58	21,2
12,20	24,5	16,297	14,0	20, 76	74,0	26,23	61,5	35,35	19, 6
6, 817	50,3	13,373	53,9	18,17	21,3	23,19	65,2	28,16	34,5
12, 80	30, 0	16, 943	32, 0	22, 09	81,7	27, 35	48, 8	36, 80	16,4
13, 04	43, 6	17,362	23,5	22, 37	70,8	27, 83	39,0

Tabuika 5

L-tartrát vytvorený zo zlúčeniny vzorca I je charakteristický tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri uhloch difrakcie asi 2-theta, [% relatívnej intenzity]: 4,061 [82, 91, 20, 821 [85,6], 21,634 [100,0], 22, 179 [94,0], a 25, 858 [95,1].

1-tartrát vyrobený podlá predloženého vynálezu poskytuje práškové rôntgenové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je práškové rontgenové difrakčné spektrum na Obr. 6.

Charakteristické 2-theta (20) hodnoty relatívnej intenzity (RI) v percentách pre difrakčné spektrum 1-tartrátu zlúčeniny obecného vzorca I sú uvedené v Tabulke 6.

2Θ	Rl(%)	2Θ	Rl(%)	20	Rl(%)	2Θ	Rl(%	20	Rl(%
4, 061	82, 9	14, 63	27,2	20,01	53,0	24,78	53, 8	32,46	36,1
6, 678	11, 8	15,42	22,7	20,33	58,7	25, 08	60,9	33,44	33,7
8,057	29,4	16,14	31,2	20, 82	85,6	25,85	95,1	34,09	34, 6
9,383	8,7	16, 85	65,3	21,63	100, 0	26, 80	59, 6	34, 64	26, 8
10,647	8,3	17,33	56,2	22,17	94,0	28,38	34,3	35,63	33,7
11,711	60,2	18,40	97, 0	22, 73	73,8	29,06	34,1	36,07	28,5
12,075	27,4	18,63	98,2	23,47	77,1	29,84	30,5	36,77	24,5
12,868	33,8	18, 99	52,4	24,25	67,8	31,30	39,4	38, 08	22, 6
13,320	22,7	19,72	42, 9

Tabulka 6

Bolo zistené, že kryštály anhydridu hemisukcinátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny majú hygroskopické vlastnosti za podmienok vlhkosti 90 %. Boli identifikované dve kryštalické formy hemisukcinátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny. Bolo zistené, že kryštalická forma A hemisukcinátu zlúčeniny vzorca I má 0,6% hmotn. hygroskopičnosť pri 30 °C a 90% relatívnej vlhkosti. Kryštalická forma B hemisukcinátu zlúčeniny vzorca I má

1,5% hmotn. hygroskopicitu 30 °C a 90% relatívnej vlhkosti. Forma B hemisukcinátu sa konvertuje na formu A hemisukcinátu v refluxe etanolu za menej ako 24 hodín. Hemisukcinátové soli foriem A a B podía predloženého vynálezu poskytujú práškové rôntgenové difrakčné spektrá v podstate zhodné ako sú práškové rôntgenové difrakčné spektrá na Obr.7 a 8 v danom poradí.

Charakteristické 2-theta (2Θ) hodnoty relatívnej intenzity (RI) v percentách pre difrakčné spektrum hemicitrátu zlúčeniny obecného vzorca I sú uvedené v Tabulke 3.

Hemisukcinátová sol formy A zlúčeniny vzorca I je charakterizovaná tým, že kryštály vykazujú vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch 2-theta, [% relatívnej intenzity]: 4,634 [100,0], 16,735 [67,2],

22,179 [60,8] a 25,002 [70,3].

Hemisukcinátová sol formy B zlúčeniny vzorca I je charakterizovaná tým, že kryštály vykazujú vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch 2-theta, [% relatívnej intenzity]: 6,714 [31,0], 15,272 [100,0],

19,197 [59,3], 19, 457 [50,0], 24, 487 [99,0] a 24,802 [79,1] .

Charakteristické 2-theta (20) hodnoty relatívnej intenzity (%) pre difrakčné spektrum hemisukcinátovej soli formy A a B zlúčeniny obecného vzorca I je uvedené v nasledujúcich Tabuľkách 7 a 8 v tomto poradí.

20	Rl(%)	20	RI (%	20	RI (%	20	RI (%	20	Rl(%)
4, 634	100, 0	13, 68	13, 8	17, 76	20, 6	22, 86	38, 7	27, 60	23, 7
6,149	15, 5	14,44	13, 5	18, 67	18,4	23,25	39, 5	30, 10	14,3
9, 843	6,2	14, 89	21,9	,19,4	30, 2	24,07	44, 6	30, 79	13, 7
11,392	11,3	15,99	14,4	20,58	29,2	25,00	70,3	37,76	11, 4
11,937	19,2	16,73	67,2	22, 17	60, 8	26, 54	26, 8

Tabuľka 7

20	Rl(%)	20	RI (%	20	Rl(%)	20	RI (%	20	Rl(%)
6,714	31,0	15,27	100,	19,19	59,3	24,48	99,0	29, 73	14,1
8, 666	7,3	15,81	19,8	19,45	50,0	24,80	79,1	30, 79	17,5
11,09	8, 6	16, 55	17,5	20,59	17,2	25, 64	15,9	33, 48	9,4
11, 69	21, 9	16, 87	26, 4	21,16	28, 8	26, 64	20,1	34,59	11,4
12,00	15,9	17,36	12, 6	21, 64	21,7	27,09	15,1	37, 21	15,5
12, 63	7,3	17, 98	8, 6	22,98	15, 0	27, 84	21, 5	37, 90	8,9
13, 46	17,2	18,71	26,4	23,56	18, 6	28,55	19,7	39, 02	8,9
13,77	13,9

Tabulka 8

Mesylátová soľ zlúčeniny vzorca I je charakteristická tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri uhloch difrakcie asi 2-theta, [% relatívnej intenzity]: 4,417 [99,3], 17,288 [45,5], 20, 828 [39,6], 21, 677 [43,5], 22, 148 [68,3], 25,427 [100,0] a 27,006 [37,5]. Mesylátová soľ vyrobená podľa predloženého vynálezu poskytuje práškové rôntgenové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je práškové rôntgenové difrakčné spektrum na Obr.9.

Charakteristické 2-theta (20) hodnoty relatívnej intenzity (RI) v percentách pre difrakčné spektrum mesylátovej soli zlúčeniny obecného vzorca I sú uvedené v Tabulke 9.

2Θ	R1 (%)	2Θ	R1 (%	2Θ	R1 (%)	2Θ	R1 (%	2Θ	R1 (%
4,417	99, 3	15, 619	9,1	2i, 67	43, 5	27,00	37, 5	32,337	9,0
8,806	7,2	17,288	45,5	22,14	68,3	28,75	8,8	32,940	7,8
11,664	7,0	17,654	17,2	23,23	14,1	29,56	6,7	33,796	11,8
12,267	18,7	17,993	15,9	23, 96	28,8	30, 56	6,2	34,550	8,7
12,610	8, 3	18,728	9,8	24, 60	30,2	31,17	9,7	35,308	7,6
13,224	5,4	20,358	15, 0	25, 42	100, 0	31,72	13, 3	36, 883	9, 1
14,915	27, 1	20,828	39,6	26,22	16,1

Tabuľka 9

Róntgenový práškový difrakčný vzor je iba jeden z vela spôsobov charakterizácie usporiadania atómov, ktoré sú obsiahnuté v soliach amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny. Ďalšie metódy sú známe zo stavu techniky, ako napr. monochromatická rontgenová difrakcia, môže byť použitá pre identifikáciu vyššie uvedených solí zlúčeniny vzorca I.

Neočakávane bolo zistené, že soli, ktorými sú acetát, anydrochlorid, hydrobromid, hemisukcinát a mesylát zlúčeniny vzorca I majú vysokú kryštalinitu, t.j. sú v podstate bez amorfného materiálu. Takéto soli majú výhodu, pretože poskytujú reprodukovatelnejšie výsledky pri dávkovaní. Soli, ktorými sú hydrochlorid, hydrobromid a hemisukcinát zlúčeniny vzorca I sú v podstate hygroskopicky stabilné, čo znižuje potenciálne problémy spojené so zmenami hmotnosti aktívnej zložky počas výroby toboliek alebo tabliet. Hydrochlorid a hydrobromid zlúčeniny vzorca

I majú ďalšiu výhodu, pretože majú nízku tendenciu tvoriť u koncentrovaných vodných roztokov viskózne zmesi v situácii statickej polohy. Ďalej hydrobromidová soľ zlúčeniny vzorca

I dodáva mierne sedatívne účinky pri nízkom dávkovaní. Mesylátová sol zlúčeniny vzorca I má rýchlu kinetickú rozpustnosť vo vode, čo zjednodušuje dávkovanie s vodou a robí ju vhodnú pre injekčné dávkovacie formy. Ďalej, mesylátová sol zlúčeniny vzorca I so zvýšenými charakteristikami rozpustnosti uľahčuje rozpustenie pevných dávkových foriem vhodným spôsobom.

Soli p-Tosylát, L-tartrát a hemicitrát majú vyššiu kinetickou rozpustnosť, ako volná báza alebo hydrochlorid zlúčeniny vzorca I. Naviac, soli p-tosylát, L-tartrát a hemicitrát zlúčeniny vzorca I sú menej hygroskopické ako mesylátová sol zlúčeniny vzorca I. Preto, soli p-tosylát, L-tartrát a hemicitrát zlúčeniny vzorca I sú stabilnejšie na vzduchu a môžu byť používané ani čo by zvlhli.

Vynález sa ďalej týka farmaceutickej kompozície pre liečenie hyperproliferatívnych porúch u cicavcov, ktorá obsahuje terapeuticky účinné množstvo soli zlúčeniny vzorca I alebo jej hydrátu, farmaceutický prijatelný nosič. V jednom uskutočnení, uvedené farmaceutické kompozície sú pre liečenie nádorov, ako mozgu, plúc, dlaždicových buniek, močového mechúra, žalúdka, podžalúdkovej žľazy, prsníka, hlavy, krku, obličiek, prostaty, hrubého čreva, pažeráka, nádorov gynekologických (ako vaječníka) alebo nádoru štítnej žlazy. V ďalšom uskutočnení, uvedená farmaceutická kompozícia je pre liečenie nenádorových hyperproliferatívnych porúch ako je benígna hyperplázia kože (ako je psoriáza) alebo prostaty (napr., benígna prostatická hypertrofia (BPH)).

Vynález sa ďalej týka farmaceutickej kompozície pre liečenie chorôb podžalúdkovej žľazy alebo obličiek (vrátane proliferatívnej glomerulonefritídy a diabetom indukovanej choroby obličiek) u cicavcov, ktorá obsahuje terapeuticky účinné množstvo soli zlúčeniny vzorca I alebo jej hydrátu a farmaceutický účinný nosič.

Vynález sa taktiež týka farmaceutickej kompozície pre prevenciu implantácie blastocytov u cicavcov, ktorá zahrnuje terapeuticky účinné množstvo soli zlúčeniny vzorca I alebo jej hydrátu a farmaceutický prijateľný nosič.

Vynález sa taktiež týka farmaceutickej kompozície pre liečenie chorôb spojených s vaskulogenézou alebo angiogenézou cicavcov, ktorá obsahuje terapeuticky účinné množstvo soli zlúčeniny vzorca I alebo jej hydrátu, a farmaceutický prijateľný nosič. V jednom uskutočnení, uvedená farmaceutická kompozícia je pre liečenie chorôb vybraných zo skupiny, ktorú tvorí angiogenéza tumoru, chronické zápalové choroby, ako je reumatoidná artritída, ateroskleróza, kožné choroby ako je psoriáza, ekzém a skleroderma, diabetes, diabetická retinopatia, predčasná retinopatia, s vekom spojená makulárna degenerácia, hemangióm, glióm, melanóm, Kaposiho sarkóm a zhubný nádor vaječníkov, prsníka, pľúc, pankreasu, prostaty, hrubého čreva a epidermálneho nádoru.

Vynález sa tiež týka spôsobu liečenia hyperproliferatívnych porúch u cicavcov, ktorý zahrnuje podávanie terapeuticky účinného množstva soli zlúčeniny vzorca I alebo jej hydrátu cicavcom. V jednom uskutočnení sa uvedená metóda týka liečenia zhubných nádorov ako nádoru mozgu, plúc, dlaždicových buniek, močového mechúra, žalúdka, podžalúdkovej žľazy, prsníka, hlavy, krku, obličiek, prostaty, kolorektálnej oblasti, pažeráka, gynekologických (ako vaječníka) alebo nádoru štítnej žľazy. V ďalšom uskutočnení, sa uvedený spôsob týka liečenia nenádorových hyperproliferatívnych porúch ako je benígna hyperplázia kože (ako je psoriáza) alebo prostaty (napr., benígna prostatická hypertrofia (BPH)).

Vynález sa ďalej týka spôsobu liečenia hyperproliferatívnych porúch u cicavcov, ktorý zahrnuje podávanie terapeuticky účinného množstva soli zlúčeniny alebo jej solí cicavcom, v kombinácii s protinádorovým prípravkom vybraným z inhibítorov mitózy, alkylačných činidiel anti-metabolitov, interkalačných antibiotík, inhibítorov rastového faktora, inhibítorov bunkového cyklu, enzýmov, inhibítorov topoizomerázy, modifikátory biologickej odpovedi, anti-hormóny, a anti-androgény.

Predložený vynález sa ďalej týka spôsobu liečenia chorôb podžalúdkovej žľazy alebo obličiek u cicavcov, ktoré zahrnuje podávanie terapeuticky účinného množstva soli zlúčeniny vzorca I alebo jej hydrátu cicavcom. Vynález sa ďalej týka spôsobu prevencie implantácie blastocytov u cicavcov, ktoré zahrnuje podávanie terapeuticky účinného množstva soli zlúčeniny vzorca I alebo jej hydrátu cicavcom.

Predložený vynález sa ďalej týka spôsobu liečenia chorôb, spojených s vaskulogenézou alebo angiogenézou, u cicavcov, ktoré zahrnuje podávanie terapeuticky účinného množstva soli zlúčeniny vzorca I alebo jej hydrátu cicavcom. V jednom uskutočnení, uvedený spôsob je pre liečenie chorôb vybraných zo skupiny, ktorú tvorí angiogenéza tumoru, chronická zápalová choroba, ako je reumatoidná artritída, ateroskleróza, kožné choroby ako je psoriáza, ekzém a sklerodermia, diabetes, diabetická retinopatia, predčasná retinopatia, makulárna degenerácia, hemangióm, glióm, melanóm, Kaposiho sarkóm a zhubný nádor vaječníka, prsníka, pľúc, pankreasu, prostaty, hrubého čreva a epidermoidný karcinóm.

Ďalej zlúčeniny pódia predloženého vynálezu môžu byť použité ako kontraceptívum u cicavcov. V jednom výhodnom uskutočnení zlúčeniny podlá predloženého vynálezu môžu byť použité pre liečenie pre prevenciu gravidity samíc cicavcov.

Pacienti, ktorí môžu byť liečení sólami zlúčeniny vzorca I a hydrátmi týchto zlúčenín, v súlade so spôsobmi podlá predloženého vynálezu, napríklad, pacienti, u ktorých bola diagnostikovaná psoriáza, BPH, pľúcny nádor, kosti, rakovina, nádor podžalúdkovej žľazy, kožný nádor, nádor hlavy a krku, kožný alebo intraokulárny melanóm, maternicový nádor, nádor vaječníka, rektálny nádor alebo nádor análnej oblasti, nádor žalúdka, nádor bedrovníka, nádor prsníka, gynekologické tumory ( napr., maternicové sarkómy, karcinóm vajíčkovodu, karcinóm endometria, karcinóm maternicového krčka, karcinóm vagíny alebo ženského ohanbia), Hodgkinova choroba, nádor pažeráka, nádor tenkého čreva, nádor endokrinného systému (ako je nádor podžalúdkovej žľazy, prištítnej žľazy alebo nadobličkovej žľazy), sarkómy mäkkých tkanív, nádory močové trubice, nádor penisu a prostaty, chronická alebo akútna leukémia, pevné tumory u detí, lymfatické lymfómy, zhubné nádory mechúra, obličiek alebo močovodu (napr., karcinóm renálnych buniek, karcinóm obličkovej panvičky) alebo neoplazma centrálnej nervové sústavy (napr., primárny CNS lymfóm, tumory spinálnej osi, gliómy mozgového kmeňa alebo adenómy hypofýzy).

Predložený vynález sa taktiež týka farmaceutických kompozícií pre liečenie infekcie u cicavcov, vrátane človeka, ktoré je uľahčené farnezyl proteíntransferázou, ako je malária delta vírusová hepatitída, zahrnujúcich množstvo soli zlúčenín vzorca I, ako sú vyššie definované a ich proliečiva alebo solváty, ktoré je účinné pri liečení abnormálneho bunkového rastu a farmaceutický prijatelný nosič.

Abnormálny bunkový rast, ako je tu používaný bez ďalšej indikácie, znamená bunkový rast, ktorý je nezávislý od normálnych regulačných mechanizmov (napríklad, strata kontaktnej inhibície). Zahrnuje abnormálny rast: (1) tumorových buniek (tumory) exprimujúcich aktivovaný Ras onkogén; (2) tumorové bunky, v ktorých Ras proteín je aktivovaný ako výsledok onkogénnej mutácie v inom géne;

(3) benígne a malígne bunky ďalších proliferatívnych chorôb u ktorých sa vyskytuje aberantná aktivácia Ras; a (4) tumory, ktoré proliferujú účinkom vlastností farnezylproteíntransferázy.

Termín liečenie, ako je tu používaný, bez ďalšej indikácie, znamená vracanie, zmiernenie, potlačenie rozvoja, alebo prevenciu chorôb alebo stavov pre ktoré je tento termín používaný, alebo jeden alebo viacej symptómov takej poruchy alebo stavu. Termín liečenie, ako je tu používaný, bez ďalšej indikácie, znamená liečenie, ako je tu bezprostredne vyššie „liečenie definované.

Detailný popis vynálezu

Predložený vynález sa týka soli, ktorými sú hydrochlorid, hydrobromid, hemicitrát, acetát, p-tosylát, L-tartrát, hemisukcinát a mesylát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny.

Vynález sa ďalej týka spôsobu výroby soli, ktorými sú hydrochlorid, hydrobromid, hemicitrát, acetát, p-tosylát, L-tartrát, hemisukcinát, a mesylát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)-ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny. Soli, ktoré sú predmetom vynálezu sú užitočné pri liečení hyperproliferatívnych chorôb, ako je rakovina u cicavcov, najmä ludí a pre farmaceutické kompozície obsahujúce tieto zlúčeniny.

Soli zlúčeniny vzorca I boli charakterizované s použitím rôntgenovej práškovej difraktometrie. Hydrochlorid, hydrobromid, hemicitrát, acetát, p-tosylát, L-tartrát, hemisukcinát (forma A), hemisukcinát (forma B) a mesylát zlúčeniny vzorca I vykazujú rôntgenové práškové difrakčné vzory v podstate zhodné ako sú znázornené na Obr. 1-9.

Hydrochlorid amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-kaŕboxylovej kyseliny podía predloženého vynálezu je charakterizovaný tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch (2θ)ν rôntgenovom práškovom difrakčnom spektre asi 8,623, 12,121, 17,298, 23,397,

23,944, 24,119, 24,873, 25,948 a 28,821.

Hydrobromid amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny podlá predloženého vynálezu je charakterizovaný tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch (2θ)ν rôntgenovom práškovom difrakčnom spektre asi 8,687, 12,264, 17,374, 23,711,

24,335 a 25,769.

Hemicitrát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny podlá predloženého vynálezu je charakterizovaný tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch (2θ)ν rôntgenovom práškovom difrakčnom spektre asi 4.306, 16,317, 20,988, 21,476,

22,643, 23,384, 24,891, 27,573 a 27,840.

Acetát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)-ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny podlá predloženého vynálezu je charakterizovaný tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch (2θ)ν rôntgenovom práškovom difrakčnom spektre asi 06,096, 12,183, 17,451, 18,288,

22,441, 23,086 a 24.439.

p-Tosylát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny podía predloženého vynálezu je charakterizovaný tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch (2θ)ν rôntgenovom práškovom difrakčnom spektre asi 20,446, 20,760, 22,092, 22,371,

23,190 a 26,239.

L-Tartrát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny podľa predloženého vynálezu je charakterizovaný tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch (2θ)ν róntgenovom práškovom difrakčnom spektre asi 4,061, 20,821, 21,634, 22,179 a

25,858.

Hemisukcinát (forma A) amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)-ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny podľa predloženého vynálezu je charakterizovaný tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch (2θ)ν róntgenovom práškovom difrakčnom spektre asi 4,634, 16,735, 22,179 a 25,002. Forma A hemisukcinátu absorbuje

0, 6 % vody pri 90% relatívnej vlhkosti.

Hemisukcinát (forma B) amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy) -5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl) ureido]izotiazol4-karboxylovej kyseliny podľa predloženého vynálezu je charakterizovaný tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch (2θ)ν róntgenovom práškovom difrakčnom spektre asi 6,714, 15,272, 19,197,

19,457, 24,487 a 24,802. Forma B hemisukcinátu absorbuje

1,5 % vody pri 90% relatívnej vlhkosti.

Mesylát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny podlá predloženého vynálezu je charakterizovaný tým, že kryštál poskytuje vysokú intenzitu difrakčných píkov pri difrakčných uhloch (29)v róntgenovom práškovom difrakčnom spektre asi 4,417, 17,288, 20,828, 21,677,

22,148, 25,427 a 27.006.

Aktivita zlúčenín vzorca I in vitro pri inhibícii KDR/VEGF receptora môže byť stanovená nasledujúcim postupom.

Schopnosť zlúčenín podía predloženého vynálezu inhibovat aktivitu tyrozín kinázy je možno stanoviť s použitím rekombinantného enzýmu spôsobom pri ktorom sa meria schopnosti zlúčenín inhibovat fosforyláciu exogénneho substrátu, polyGluTyr (PGT,Sigma™, 4: 1). Kinázová doména ludského KDR/VEGF receptora (aminokyseliny 805-1350) sa exprimuje Sf9 ako glutatión S-transferáza (GST)-fúzny proteín s použitím baculovírusového expresného systému. Proteín sa potom získa prečistením z lyzátov týchto buniek s použitím glutatión-agarózových afinitných kolón. Enzýmový test sa uskutočňuje na doštičkách o 96 jamkách, ktoré sú potiahnuté PGT substrátom (0, 625 gg PGT na jamku). Testované zlúčeniny sú zriedené dimetylsulfoxidom (DMSO) a potom nanesené na PGT doštičky tak, aby konečná koncentrácia DMSO pri stanovení bola 1,6 % obj.. Rekombinantný enzým je zriedený vo fosforylačnom pufri (50 mM Hepes, pH 7,3, 125 mM NaCI, 24 mM MgClž) . Reakcia je iniciovaná pridaním ATP na konečnú koncentráciu 10 M. Po 30 minútach inkubácie pri izbovej teplote za trepania, reakcia sa odsaje, a doštičky sa premyjú pufrom (PBS-obsahujúci 0,1% Tween-20). Množstvo fosforylovaného PGT sa kvantifikuje inkubáciou s HRP (HRP je chrenová peroxydáza)konjugovanou s PY-54 protilátkou (Transduction Labs), detekcia sa uskutočňuje s TMB peroxidázou (TMB je 3, 3’, 5, 5’-tetrametylbenzidín) a reakcia sa kvantitatívne vyhodnotí na BioRad Microplát Reader, pri 450 nm. Inhibícia enzymatickej aktivity kinázy testovanou zlúčeninou sa detekuje ako zníženie absorbancie, a koncentrácia zlúčeniny potrebná pre 50% zníženie signálu sa označuje ako IC50 hodnota testovanej zlúčeniny.

Pre meranie schopnosti zlúčenín inhibovať aktivitu KDR tyrozínkinázy v celej dĺžke proteínu, ktorý existuje v bunkách, môžu byť použité prasačie aortálne endoteliálne (PAE) bunky transfektované ľudským KDR (Waltenberger et al., J.Biol. Chem. 269: 26988,1994). Bunky sa nanesú a nechajú sa prichytiť na doštičkách o 96 jamkách v rovnakom médiu (Ham’s F12) s 10 % obj. FBS (fetálne hovädzie sérum). Bunky sa potom premyjú, obnoví sa médium bez séra, ale obsahujúce (0,1 % obj. FBS), ktoré obsahuje 0,1 % obj. hovädzieho sérového albumínu (BSA) a bunky sa inkubujú po dobu 16-24 hodín. Bezprostredne pred pridaním testovanej zlúčeniny, boli bunky znovu vyživované médiom bez séra, (0,1 % obj. FBS) (bez BSA). Testované zlúčeniny rozpustené v DMSO sa neriedia v médiu (konečná koncentrácia DMSO 0, 5 % obj.). Po 2 hodinách inkubácie sa pridá k reakčnému médiu, VEGF165 (50 ng/ml konečná koncentrácia) na 8 minútovú inkubáciu. Bunky sa premyjú a zlyzujú sa v 50 μ lyžujúcom pufri obsahujúcom 20 mM Tris-HCL (pH 8) , 150 M NaCI, 1 % obj. v NP40,2 mMNaV0₄, 500 μΜ EDTA, 1 mM PMSF a 1 tableta/25 ml DTA zbavený kompletnej ©Protease Inhibítor Table, Roche. Bunkový lyzát sa potom zriedi na konečný objem 150 μΐ v PBS/1 mM NaVCh. Rozsah fosforylácie vyvolaný KDR sa stanoví s použitím ELISA testu. Kozacou anti-králičou protilátkou potiahnutá doštička (Pierce) sa blokuje pufrom Superblock (Pierce) pred pridaním protilátky anti-flk-1 C20 (0,5 μς na jamku, Santa Cruz). Nenaviazaná protilátka sa vymyje z doštičky pred pridaním 100 μΐ bunkového lyzátu. Po 2 hodinách inkubácie lyzátu s protilátkou flk-1, sa KDR spojený s fosfotyrozínom kvantifikuje konjugovanou s protilátkou PY-54 a TMB, vyššie. Schopnosť zlúčenín inhibovať vyvinutím s HRP ako je popísané autofosforyláciu stimulovanú VEGF o 50 %, vzhíadom na VEGF-stimulovanej u kontrolnej vzorky testované zlúčeniny.

sa označuje ako IC₅₀ hodnota pre

Schopnosť zlúčenín inhibovať mitózu ľudských endoteliálnych buniek sa hodnotí ich schopností inhibovať inkorporáciu ³H-tymidínu do HUVE buniek (endoteliálne bunky ludského pupočníka, Clonetics™) . Toto stanovenie je v literatúre dobre popísané (Waltenberger J. et al. J.Biol. Chem. 269: 26988,1994; Cao Y et al. J.Biol. Chem. 271:

3154,1996). Stručne, 10⁴ buniek sa nanesie na 24 jamkovej doštičky potiahnutej kolagénom a nechá sa prichytiť. Potom sa k bunkám pridá médium bez séra a po 24 hodinách sa ošetrí rôznymi koncentráciami zlúčeniny (roztok pripravený v DMSO, konečná koncentrácia DMSO pri stanovení je 0,2 % obj.) a 2-30 ng/mlVEGFi65. Počas posledných 3 hodín z 24 hodinového pôsobenia, sa bunky premyjú ³H tymidínom (NEN, 1 gCi na jamku) . Médium sa odstráni a bunky sa preperú extenzívne ľadovo chladným Hanksovým vyváženým soľným roztokom a potom 2 krát ľadovo chladnou kyselinou

trichlóroctovou	(10	% obj.)	'. Bunky	sa lyžujú	pridaním 0,2
ml 0,1 N NaOH	a	lyzát	sa prevedie	do	scintilačných
nádobiek. Jamky	sa	potom	premyj ú	0,2	ml	0,1 N HCI,

a roztoky na premývanie sa taktiež prevedú do fľaštičiek. Rozsah inkorporácie ³H tymidínu sa stanoví na scintilačnom detektore. Schopnosť zlúčenín inhibovať inkorporáciu o 50

%, vzhľadom na kontrolnú vzorku (VEGF spracovaný iba s DMSO
nosičom) sa zlúčeniny.	označuje	ako IC50 hodnoty pre	testované
Aktivita	zlúčenín	vzorca	I 1 in vivo,	môže byť
stanovená veľkosťou inhibície	rastu tumoru	testovanou

zlúčeninou vzhľadom na kontrolný pokus. Inhibičný účinok rastu tumoru rôznych zlúčenín sa stanoví metódami podľa Corbett T. H., a spol.Tumor Induction Relationships in Development of Transplantable Cancers of the Colon in Mice for Chemotherapy Assays, with a Note on Carcinogen Structure, Cancer Res., 35,2434-2439 (1975) a Corbett, T. H., et al.,A Mouse Colon-tumor Model for Experimente! Therapy, Cancer Chemother. Rep. (Part 2), 5, 169-186 (1975), s malými modifikáciami. Tumory sa indukujú v ľavom boku injekcií 1 X 10⁶ kultivovaných tumorových buniek v logaritmickej fáze (ludská MDA MB-468 pŕs alebo ľudských buniek nádoru hlavy alebo krku HN5 ) suspendovaných v 0,10 ml RPMI 1640. Po dostatočnej dobe, kedy sa tumory u testovaných zvierat stanú hmatateľné (2-3 mm v priemere), testovaná zvieratá (atymická myš) sú ošetrené aktívnou zlúčeninou (vo forme roztoku v DMSO typicky pri koncentrácii 50 až 100 mg/mL následne zriedeného 1: 9 solankou alebo alternatívne, 1: 9 zriedeného 0,1% PluronicT P105 v 0,9% solanke) intraperitoneálnym (ip) alebo orálnym (po) spôsobom podania dvakrát denne (t.j., každých 12 hodín) po 5 po sebe idúcich dní. Pre vyhodnotenie antitumorových účinkov, sa tumor meria v milimetroch pomocou Vernierovej mierky ako dva priečne rozmery a veľkosť tumoru (mg) sa vypočíta sw použitím vzorca : Hmotnosť tumoru = (dĺžka x[šírka ]²)/2, podľa metódy Geran R.I., et al. Protocols for Screening Chemical Agents a Natural Products Against Animal Tumors a Other Biological Systems, Third Edition, Cancer Chemother. Rep., 3,1-104(1972). Výsledky sa vyjadrujú ako % inhibície, podía vzorca : Inhibícia (%)= (TuWkontroi ^- TuWtest) /TuW_kontroi xl00%. Implantácia tumoru do slabín poskytuj e reprodukovateľné výsledky dávkovanie/odozva účinku pre rôzne chemoterapeutiká a spôsob merania (priemer tumoru) je spoľahlivý spôsob hodnotenia rýchlosti rastu tumorov.

Podávanie zlúčenín podľa predloženého vynálezu (ďalej aktívna zlúčenina alebo zlúčeniny) je možno uskutočňovať všetkými spôsobmi, ktoré umožňujú transport uvedených zlúčenín na miesto pôsobenia. Tieto spôsoby zahrnujú orálne spôsoby podania, intraduodenálne spôsoby, parenterálne injekcie (vrátane injekcie intravenóznej, subkutánnej, intramuskulárnej, intravaskulárnej alebo infúznej), topikálne a rektálne podávanie.

Množstvo podanej aktívnej zlúčeniny závisí od subjektu liečby, závažnosti choroby alebo stavu, rýchlosti podávania a posúdenia ošetrujúcim lekárom. Jednako len, účinná dávka býva v rozsahu asi 0,001 až asi 100 mg na kg telesnej hmotnosti na deň, výhodne asi 1 až asi 35 mg/kg/deň, v jednej alebo v rozdelenej dávke. Pre človeka o hmotnosti 70 kg, robí táto dávka asi 0,05 až asi 7 g/deň, výhodne asi 0,2 až asi 2,5 g/deň. V niektorých prípadoch môžu byť vhodnejšie dávky pod vyššie uvedeným rozmedzím dávok, zatiaľ čo v iných prípadoch je možné aplikovať dávky ešte vyššie, ani čo by vyvolali škodlivý účinok s tou výhradou, že uvedené vyššie dávky sa najskôr rozdelia do niekolkých menších dávok, ktoré sa podávajú v priebehu dňa.

Aktívna zlúčenina môže byť aplikovaná ako samostatná terapia alebo ju možno aplikovať v terapii s jedným alebo viacej protinádorovými prostriedkami, napríklad prostriedkami vybranými zo skupiny zahrnujúcej, inhibítory mitózy, napríklad vinblastín; alkylačné činidlá, napríklad cis-platina, karboplatina a cyklofosfamid; anti-metabolity, napríklad 5-fluorouracil, cytozin arabinozid a hydroxymočovina alebo napríklad jedno z výhodných antimetabolík uvedených v Európskej patentovej prihláške č. 239362 ako je kyselina N-(5-(3,4-dihydro-2-metyl-4oxochinazolin-6-ylmetyl)-N-metylamino]-2-tenoyl)-Lglutámová; inhibítory rastového faktora; inhibítory bunkového cyklu; antibiotika s interkalačným mechanizmom, napríklad adriamycín a bleomycín; enzýmy, napríklad interferón; a anti-hormóny, napríklad anti-estrogény ako je Nolvadex™ (tamoxifén) alebo napríklad anti-androgény ako Casodex (4'-kyano-3-(4-fluórfenylsulfonyl)-2-hydroxy-2metyl-3’-(trifluorometyl) propionanilid). Uvedenú kombinovanú liečbu je možné uskutočňovať súčasným, následným alebo samostatným podávaním jednotlivých terapeutických zložiek.

Farmaceutická kompozícia môže byť napríklad vo forme vhodné pre orálne podávanie ako sú tablety, tobolky, pilulky, prášok, prípravky s riadeným uvoľňovaním, roztok, suspenzie, pre parenterálne injekcie ako sterilný roztok, suspenzie alebo emulzie, pre topikálne podávanie, ako masti alebo krémy alebo pre rektálne podávanie ako čapíky. Farmaceutická kompozícia môže byť v jednotkovej dávkovej forme vhodnej pre jednotlivé podávanie presných dávok. Farmaceutická kompozícia obsahuje bežný farmaceutický nosič alebo excipient a zlúčeninu podľa vynálezu ako aktívnu zložku. Ďalej môže zahrnovať ďalší liečivý alebo farmaceutický prostriedok, nosiča, adjuvans, atď..

Príklady foriem pre parenterálne podávanie zahrnujú roztoky alebo suspenzie aktívnych zlúčenín v sterilných vodných roztokoch, napríklad vodný roztok propylénglykolu alebo dextrózy. Uvedené dávkovacie formy môžu obsahovať tlmiče, ak je toho treba.

Vhodné farmaceutické nosiče zahrnujú inertné riedidlá alebo plnivá, vodu a rôzne organické rozpúšťadlá. Farmaceutické kompozície môžu, ak je to žiaduce, obsahovať ďalšie zložky ako látky dodávajúce chuť, spojivá, excipienty a podobne. Pre orálne podávanie je možno použiť tablety, obsahujúce rôzne excipienty, ako je kyselina citrónová spoločne s prostriedkami proti rozpadávaniu, ako je škrob, kyselina algínová a niektoré komplexné silikáty a so spojivami ako je sacharóza, želatína a arabská glejovina. Ďalej, lubrikačné činidlá ako stearát horečnatý, laurylsíran sodný a mastenec sú často užitočné pre účely tabletizácie. Pevné kompozície podobného typu je možno použiť pre plnenie mäkkých a tvrdých želatínových toboliek. Medzi výhodné zložky patria laktóza alebo mliečny cukor, polyetylénglykoly o vysokej molekulovej hmotnosti. Pokial je potreba pripraviť vodné suspenzie alebo elixíry pre orálne podávanie, aktívna zlúčenina môže byť kombinovaná s rôznymi sladidlami alebo látkami dodávajúce chuť, farbiacimi prostriedkami alebo farbivami a ak je to žiaduce, emulgačné činidlá alebo suspendačné činidlá, spoločne s riedidlami ako voda, etanol, propylénglykol, glycerín alebo ich kombinácie.

Spôsoby prípravy rôznych farmaceutických kompozícií so špecifikovaným množstvom aktívnej zlúčeniny sú známe alebo lahko dostupné odborníkom v odbore. Napríklad, viď Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition (1975).

Príklady prípravy uvedené nižšie ďalej ilustrujú doložené príklady zlúčenín podlá predloženého vynálezu a spôsoby prípravy týchto zlúčenín. Nasledujúce príklady a prípravy však žiadnym spôsobom neovplyvňujú rozsah predloženého vynálezu.

Spektrá na Obr. 1-9 boli zaznamenané s použitím Siemens 6/26 práškového difraktometra vybaveného nasledujúcim spôsobom: štyridsaťpolohový automatický vzorkovač, goniometer s pevnými štrbinami, uzatvorená medená trubica (Cu) zdroj rôntgenového žiarenia (vlnová dĺžka 1: 1,54056, vlnová dĺžka 2: 1,54439), a Kevex pevný detektor stavu. Trubicový zdroj: 40-mA x 50-kV alebo ako je vhodné. Štrbiny: 1 x 1 x 0,6 mm (zdroj, usmerňovač a štrbiny detektora, v danom poradí). Veľkosť kroku: 0,04 stupňov vo 2T. Doba na jeden krok: 1 sekunda. Štart skenovania: 3 stupne vo 2T. Koniec skenovania: 40 stupňov vo 2T.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Voľná báza 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny.

Voľná báza 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny sa pripraví postupom popísaným v Príklade 30 US patente 09/316837, podanom 21.5.1999, ktorého odhalenia sú tu začlenená odkazom ako celok. Teplota topenia 208°C (DSC). Charakteristické rôntgenové práškové difrakčné piky (2-theta, [% relatívnej intenzity]): 9,314 [100,0], 11,356 [44,8], 15,897 [49,6], 22,059 [84,5], 22,520 [63,3], 22,726 [70,0], 23, 927 [67, 61, 24,307 [60,51, 25,310 [64,8] a

26,551 [86,6].

Príklad 2

Hydrochlorid amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny

Amid 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny (500 mg, 0,939 mmol) bol rozpustený v EtOH (20 ml) pri refluxe, roztok sa nechal ochladiť na teplotu prostredia a bol spracovaný s HCl (0,94 ml 1, 0 M roztoku v Et₂0) s krúžením bankou. Zmes sa potom nechala jemne trepať pri zohrievaní na 50 °C po dobu 3 hodín a pri teplote prostredia 3 dni. Pevný podiel bol odfiltrovaný, vysušený za vysokého vákua do získania bielej pevnej látky (468 mg, 0, 823 mmol, 82 %) . Teplota topenia 230 °C (DSC) .

Hygroskopickosť:1 % (hmotn.) pri 90% relatívnej vlhkosti a teplote prostredia (RH). Charakteristické róntgenové práškové difrakčné piky (2-theta, [% relatívnej intenzity]): 8,623 [90,7], 12,121 [38,9], 17,298 [95,2],

23,397 [44,71, 23,944 [51,7], 24,119 [62,7], 24, 873 [55,7], 25, 948 [100] a 28,821 [39,6].

Príklad 3

Hydrobromid amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny

Bromovodíková kyselina (1,0 mL 47-49% vodný 8,9M roztok) bola pridaná ku 4 mL MeOH a potom naplnená po 8,9 mL značku valca so stupnicou MeOH. Oddelene 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylová kyselina (500 mg, 0,939 mmol) bola rozpustená v CH₂C1₂ (10 ml) a MeOH (4 ml) a bola pridaná HBr (1,0 ml roztoku popísaného vyššie). Tento roztok bol potom umiestnený do difúznej komory obklopenej Et₂O. Po 16 hodinách, sa objavila pevná látka. Et₂O bol nahradený čerstvým Et₂O a difúzia pokračovala cez noc. Bola získaná biela pevná látka (529 mg, 0,863 mmol, 86 %) . Teplota topenia 201,0 °C (DSC). Hygroskopickosť: 0,1 % pri 87% relatívnej vlhkosti. Charakteristické róntgenové práškové difrakčné piky (2-theta, [% relatívnej intenzity]) : 8,687 [100,0], 12,264 [35,9], 17,374 [42,3], 23,711 [24,0],

24,335 [20,7] a 25,769 [34,3].

Príklad 4

Hemicitrát amidu 3- (4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny

3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4-karboxylová kyselina (532 mg, 1,00 mmol), kyselina citrónová (96 mg, 0,50 mmol), a MeOH (8 ml) boli spojené v 16 mL banke šeptom a zohrievaná, pri trepaní, na 75 °C po dobu 24 hodín. Zmes bola ochladená na teplotu prostredia a filtrovaná. Pevná látka bola prepraná MeOH a vysušená prúdením vzduchu cez pevnú látku. Bola získaná biela pevná látka (530 mg, 0,843 mmol, 84 %).

Teplota topenia 201,7 °C (DSC). Hygroskopickosť: 0,43 % pri 87% relatívnej vlhkosti. Charakteristické práškové difrakčné piky (2-theta, [% intenzity]): 4,306 [79,9], 16,317 [100,0], 20,988 [32,7],

21,476 [30,9], 22, 643 [48,7], 23,384 [76,9], 24, 891 [76,0], 27,573 [47,9] a 27,840 [32,3].

rôntgenové relatívnej

Príklad 5

Acetát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny

3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylová kyselina (532 mg, 1,00 mmol), octová kyselina (57 μΐ, 1,0 mmol) a MeOH (3 mL) boli spojené v 8 mL banke uzatvorenej šeptom a zohrievané pri trepaní, pri 75 °C po dobu 24 hodín. Zmes bola ochladená na teplotu prostredia a umiestnená do komory s Et2O. Po piatich hodinách boli získané velké kryštály dekantovaním kvapaliny a prepraním pevnej látky MeOH a potom Et₂O. Pevná látka bola vysušená krátkym prúdením vzduchu cez pevnú látku. Bola získaná biela pevná látka (330 mg, 0,557 mmol, 56 %). Teplota topenia 175 °C (DSC). Charakteristické rontgenové práškové difrakčné piky (2theta, [% relatívnej intenzity]): 6,096 [21,7], 12,183 [21,4], 17,451[33, 3], 18,288 [100,0], 22,441 [57,7],

23, 086 [19, 9] a 24, 439 [20,7].

Príklad 6 p-Tosylát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny

3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylová kyselina (532 mg, 1,00 mmol), monohydrát p-toluénsulfónovej kyseliny (179 mg, 1,00 mmol), MeOH (10 ml), a CH2CI2 (1 ml) boli spojené, filtrované pre odstránenie malého množstva velmi jemných častíc a preprané ďalším CH₂C1₂ (3 ml). Roztok bol pridaný k ďalšiemu CH2CI2 (4 ml) plus MeOH (1 mL) a umiestnený v difúznej komore s Et2O cez noc. Nevytvorili sa žiadne kryštály, preto bol Et2O nahradený pentánom cez noc. Pevná látka bola prepraná Et₂O a vysušená vzduchom prúdiacim cez pevnú látku. Bola získaná biela pevná látka (572 mg, 0,812 mmol, 81 %) . Teplota topenia 140 a 174 °C (DSC) .

Hygroskopickosť: -0,9 % pri 87% relatívnej vlhkosti.

Charakteristické rontgenové práškové difrakčné piky (2-theta, [% relatívnej intenzity]): 20,446 [100,0], 20,760 [74,0], 22,092 [81,7], 22,371 [70,8], 23,190 [65,2], 26,239 [61,5].

Príklad 7

L-tartrát amidu 3- (4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3- (4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny

3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylová kyselina (532 mg, 1.00 mmol), L-vinna kyselina (150 mg, 1,00 mmol) a MeOH (8 ml) boli spojené v 16 ml banke uzatvorenej šeptom a zohrievané pri miešaní, na 75 °C po dobu 24 hodín. Zmes bola ochladená na teplotu prostredia a filtrovaná. Pevná látka bola prepraná MeOH a vysušená prúdením vzduchu cez pevnú látku. Bola získaná biela pevná látka (617 mg, 0,904 mmol, 90 %) Teplota topenia 206 °C (DSC). Hygroskopickosť: 0,3 % pri 100% relatívnej vlhkosti. Charakteristické rôntgenové práškové difrakčné piky (2-theta,[% relatívnej intenzity]): 4,061 [82,9], 20,821 [85,6], 21,634 [100,0],

22,179[94, 0], 25,858 [95,1].

Príklad 8

Hemisukcinát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny (Forma A)

3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]-izotiazol-4-karboxylová kyselina (532 mg, 1,00 mmol), sukcínová kyselina (59 mg, 0,50 mmol) a MeOH (8 ml) boli spojené v 16 mL banke uzatvorenej šeptom a zohrievané, pri trepaní, na 75 °C po dobu 24 hodín. Zmes bola ochladená na teplotu prostredia a filtrovaná. Pevná látka bola prepraná MeOH a vysušená prúdením vzduchu cez pevnú látku bola získaná biela pevná látka (500 mg, 0,845mmol, 85 %) .Teplota topenia Formy A 216 °C (DSC) .

Hygroskopicita: 0,6 % pri 90% relatívnej vlhkosti.

Charakteristické rôntgenové práškové difrakčné piky (2-theta, [% relatívnej intenzity]): Forma A: 4,634 [100,0], 16,735 [67,2], 22,179 [60,8], a 25,002 [70,3].

Príklad 9

Hemi-sukcinát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny (Forma B)

3- (4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]-izotiazol-4-karboxylová kyselina (100 mg) bola rozpustená pri zohrievaní v 6 ml EtOH:MeOH (2:1)sukcínová kyselina (11.1 mg, 0,5 ekv.)rozpustená v EtOH bola pridaná k skoršiemu roztoku. Zmes bola ochladená na teplotu prostredia, miešaná 20 min. a filtrovaná. Pevná látka bola prepraná EtOH a vysušená prúdením vzduchu cez pevnú látku. Bola získaná biela pevná látka ((80 mg, 70%)). Hygroskopickosť: Forma B: 1,5 % pri 90% relatívnej vlhkosti. Charakteristické rôntgenové práškové difrakčné piky (2-theta, [% relatívnej intenzity]): 6,714 [31,0],

15,272 [100,0], 19,197 [59,3], 19, 457 [50,0], 24,487 [99,0] a 24, 802 [79,1] .

Príklad 10

Mesylát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5- [3- '4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny

3- (4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]izotiazol-4-karboxylová kyselina (10,9 g, 20,5 mmol) bola rozpustená V MeOH (150 m) a ochladená na 0 °C. V oddelenej banke, bol pridaný H₃CSO₃H (1,33 ml) k MeOH (15 ml) pri 0 °C. Roztok kyseliny bol pridaný po kvapkách počas 10 minút k roztoku východzieho amínu. Roztok bol zohriatý na teplotu prostredia, filtrovaný k odstránení minoritných pevných nečistôt, zriedený Et₂O (1 1) a miešaný po dobu 1 h. Zmes bola ďalej zriedená hexánom (500 ml) a ochladená na 0 °C s pokračujúcim miešaním. Potom sa nechal stať pri 0 °C cez noc , kryštály boli odfiltrované, preprané hexánom, a vysušené satím k zisku bielej pevnej látky (11,1 g, 17,7 mmol, 86 %) . Charakteristické rôntgenové práškové difrakčné piky (2theta, [% relatívnej intenzity]): 4,417 [99,3], 17,288 [45,5], 20,828 [39,6], 21,677 [43,5], 22,148 [68,3], 25,427 [100,0] a 27,006 [37,5] .

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Hydrobromid amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4karboxylovej kyseliny.
2. Sol podlá nároku 1, kde táto sol má róntgenové práškové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je róntgenové práškové difrakčné spektrum na Obr. 2.
3. Hemicitrát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4karboxylovej kyseliny.
4. Sol podľa nároku 3, kde táto soľ má róntgenové práškové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je róntgenové práškové difrakčné spektrum na Obr. 3.
5. Acetát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4karboxylovej kyseliny.
6. Sol podľa nároku 5, kde táto soľ má róntgenové práškové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je róntgenové práškové difrakčné spektrum na Obr. 4.
7. p-Tosylát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4karboxylovej kyseliny.
8. Sol podlá nároku 7, kde táto sol má róntgenové práškové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je róntgenové práškové difrakčné spektrum na Obr. 5.
9. L-Tartrát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]izotiazol-4karboxylovej kyseliny.
10. Sol podlá nároku 9, kde táto sol má róntgenové práškové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je róntgenové práškové difrakčné spektrum na Obr. 6.
11. Hemisukcinát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy) -5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]-izotiazol4-karboxylovej kyseliny, forma A.
12. Sol podlá nároku 11, kde táto sol má róntgenové práškové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je róntgenové práškové difrakčné spektrum na Obr. 7.
13. Hemisukcinát amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy) -5-[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl)ureido]-izotiazol4-karboxylovej kyseliny, forma B.
14. Soľ podľa nároku 13, kde táto sol má róntgenové práškové difrakčné spektrum v podstate zhodné ako je róntgenové práškové difrakčné spektrum na Obr. 8.
15. Použitie zlúčenín podlá nárokov 1, 3, 5, 7, 9, 11 alebo 13 pre výrobu liečiva pre liečenie hyperproliferatívnych porúch u cicavcov.
16. Použitie podlá nároku 15, kde liečivo sa používa pre liečenie nádorov vybraných z nádorov mozgu, dlaždicových buniek, mechúra, žalúdka, pankreasu, prsníka, hlavy, krku, pažeráka, prostaty, hrubého čreva, plúc, obličiek, vaječníkov, gynekologických nádorov a nádorov štítnej žlazy.
17. Farmaceutická kompozície, vyznačujúce sa tým, že zahrnuje množstvo zlúčeniny podía nárokov 1, 3, 5, 7, 9, 11 alebo 13 účinné pre liečenie hyperproliferatívnych porúch u cicavcov a farmaceutický účinný nosič.
18. Farmaceutická kompozícia podlá nároku 17, vyznačujúca sa tým, že hyperproliferatívnou poruchou je nádor vybraný z nádoru mozgu, plúc, dlaždicových buniek, mechúra, žalúdka, pankreasu, prsníka, hlavy, krku, obličiek, vaječníka, prostaty, hrubého čreva, pažeráka, gynekologických nádorov a nádorov štítnej žlazy.
19. Spôsob prípravy hydrobromidu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-yl-butyl) ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje reakciu bromovodíku s amidom 3-(4-bróm2, 6-difluórbenzyfoxy)-5-[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]-izotiazol-4-karboxylovej kyseliny.
20. Spôsob prípravy hemicitrátu amidu 3-(4-bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5[3-(4-pyrrolidin-l-ylbutyl) ureido]izotiazol-4-karboxylovej kyseliny vyznačujúci sa tým, že zahrnuje reakciu amidu kyseliny citrónovej 3—(4— -bróm-2,6-difluórbenzyloxy)-5-[3- (4-pyrrolidin-l-ylbutyl)ureido]-izotiazol-4-karboxylovej kyseliny.

-^>^'2003