SK285307B6 - Substituovaný derivát triazolopyridazínu, spôsob jeho výroby, farmaceutický prostriedok s jeho obsahom a jeho použitie - Google Patents

Abstract

Substituovaný derivát triazolopyridazínu, ktorým je 7-(1,1-dimetyletyl-6-(2-etyl-2H-1,2,4-triazol-3-ylmetoxyl)-3-(2- fluórfenyl)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pyridazín, a jeho farmaceuticky prijateľné soli sú selektívnymi ligandmi GABAA receptorov, osobitnes vysokou afinitou k jeho alfa2 a/alebo alfa3 podjednotke, a sú podľa toho prospešné v liečbe a/alebo prevencii porúch centrálnej nervovej sústavy včítane úzkosti a kŕčov.

Description

Oblasť techniky

Súčasný vynález sa týka substituovaného derivátu triazolopyridazínu a jeho využitia v terapii. Osobitnejšie, tento vynález sa týka najmä substituovaného derivátu 1,2,4-triazolo[4,2-/>]pyridazj'nu, ktorý je ligandom GABA_a receptorov a je preto užitočný v liečbe vážnych duševných stavov.

Doterajší stav techniky

Receptory hlavného inhibičného neurotransmiteru, kyseliny gama-amino-maslovej (GABA), sa delia do dvoch hlavných tried: (1) GABA_Ä receptory, ktoré sú členmi superrodiny ligandmi riadených iónových kanárikov; a GABA_b receptory, ktoré môžu byť členmi G-proteinom viazanej superrodiny receptorov. Od klonovania prvých cDNA kódujúcich jednotlivé podjednotky GABA_a receptorov sa počet známych členov cicavčej rodiny zvýšil aspoň na šesť a podjednotiek, štyri β podjednotky, tri γ podjednotky, jednu δ podjednotku, jednu ε podjednotku a dve p pod-jednotky.

Hoci poznatky o rozmanitosti génovej rodiny GABA_a receptorov znamenajú obrovský krok vpred v našom chápaní tohto ligandmi riadeného iónového kanárika, pohľad do šírky rozmanitosti podtypov je stále ešte v počiatočných štádiách. Bolo zistené, že jedna a podjednotka, jedna β podjednotka a jedna γ podjednotka znamenajú minimálne požiadavky na vytvorenie plne funkčného GABA_a receptoru exprimovaného prechodnou transfekciou molekúl cDNA do buniek. Skôr sme uviedli, že existujú aj δ, ε a p podjednotky, ale v populáciách GABA_a receptorov sú prítomné iba v menšom rozsahu.

Štúdie veľkosti receptorov a ich vizualizácia elektrónovým mikroskopom ukázali, že podobne ako iné členy rodiny ligandmi riadených iónových kanárikov, aj natívny GABA_a receptor existuje v pentamémej forme. Výber aspoň jednej a, jednej β a jednej γ podjednotky zo zoznamu sedemnástich podjednotiek umožňuje prípadnú existenciu viac ako 10 000 kombinácií pentamémych podjednotiek. Okrem toho, tento výpočet neberie do úvahy dodatočné permutácie, ktoré by boli možné, ak by usporiadanie podjednotiek okolo iónového kanárika bolo bez obmedzení (t. j. pri receptoroch zloženého z piatich rôznych podjednotiek by mohlo existovať 120 možných variant).

Zostavy existujúcich podtypov receptorov zahŕňajú okrem iných α1β2γ2, α2β2/3γ2, α3βγ2/3, α2βγ1, α5β3γ2/3, α6βγ2, <χ6βδ a α4βδ. Zostavy podtypov obsahujúce αΐ podjednotku sú prítomné vo väčšine oblastí mozgu a predpokladá sa, že tvoria viac ako 40 % GABA_a receptorov u potkana. Predpokladá sa, že zostavy podtypov obsahujúce a2 a cc3 podjednotky tvoria u potkanov približne 25 % a 17 % GABA_a receptorov. Zostavy podtypov obsahujúce «5 podjednotku sú exprimované prevažne v hipokampu a v kôre a predpokladá sa, že u potkanov tvoria asi 4 % GABA_a receptorov.

Typickou vlastnosťou všetkých známych GABA_a receptorov je prítomnosť veľkého počtu modulačných miest, jedným z ktorých je väzbové miesto benzodiazepínu (BZ). Spomedzi modulačných miest GABA_a receptorov je väzbové miesto BZ najviac preskúmané, a je to miesto, cez ktoré pôsobia anxiolytické lieky, ako je napríklad diazepam a temazepam. Pred klonovaním génovej rodiny GABA_a receptorov bolo väzbové miesto benzodiazepínu na základe štúdii väzby rádioligandov historicky rozdelené na dva podtypy, BZ1 a BZ2. Bolo zistené, že podtyp BZ1 je farmakologicky ekvivalentný GABA_a receptoru obsahujúce mu cti podjednotku v kombinácii s jednou β a s jednou y2 podjednotkou. Tento podtyp GABA_a receptorov je najčastejší a predpokladá sa, že v mozgu tvorí takmer polovicu všetkých GABA_a receptorov.

Dva iné dôležité populácie sú podtypy α2βγ2 a α3β/2/3. Tieto spolu tvoria približne ďalších 35 % celkového repertoáru GABA_a receptorov. Zdá sa, že táto kombinácia je farmakologicky ekvivalentná podtypu BZ2 podľa predchádzajúcej definície väzby rádioligandov, hoci podtyp BZ2 môže zahŕňať aj určité zostavy obsahujúce podtyp a5. Fyziologická úloha týchto podtypov bola doteraz nejasná, pretože neboli známe nijaké dostatočne selektívne agonisty alebo antagonisty.

Teraz sa predpokladá, že činidlá pôsobiace ako BZ agonisty na podjednotke α1βγ2, α2βγ2 alebo α3βγ2 budú mať požadované anxiolytické vlastnosti. Zlúčeniny, ktoré sú modulátormi väzbového miesta benzodiazepínu GABA_a receptoru pôsobením ako BZ agonisty sa ďalej uvádzajú ako „agonisty GABA_a receptorov“. Alpidem a zolpidem, αΐ-selektívne agonisty GABA_a receptorov, sa klinicky predpisujú ako hypnotické prostriedky, čo naznačuje, že aspoň časť útlmu spájaného so známymi anxiolytickými liekmi, ktoré pôsobia na väzbovom mieste BZ1, je sprostredkovaná GABA_a receptormi obsahujúcimi podjednotku al. Podľa toho sa uvažuje, že receptory GABA_a agonistov, ktoré interagujú priaznivejšie s a2 a/alebo a3 podjednotkou ako s al podjednotkou, budú účinné v liečbe úzkosti s obmedzeným sklonom spôsobovať útlm. Tiež aj prostriedky, ktoré sú antagonistmi alebo inverznými agonistmi na podjednotke al, by sa mohli použiť na zvrátenie útlmu alebo hypnózy spôsobenej al agonistmi.

Zlúčeniny podľa súčasného vynálezu, ktoré sú selektívnymi ligandmi GABA_a receptorov, sa dajú preto použiť v liečbe a/alebo prevencii veľkého počtu porúch centrálnej nervovej sústavy. Takéto poruchy zahŕňajú poruchy úzkosti, ako je napríklad panická porucha s agorafóbiou alebo bez nej, agorafóbiu bez anamnézy panickej poruchy, zvieracie alebo iné fóbie včítane sociálnej fóbie, obsesívnokompulzívnu poruchu, stresové poruchy včítane posttraumatickej a akútnej stresovej poruchy a generalizovanú alebo látkami indukovanú poruchu úzkosti, neurózy, kŕče, migrénu, depresívne alebo bipoláme poruchy, napríklad depresívnu poruchu s jedinou príhodou alebo s opakovanými príhodami, dystymickú poruchu (trudnomyseľnosť), manické poruchy bipoláme I a bipoláme II, a cyklotymickú poruchu, psychotické poruchy včítane schizofrénie, neurodegeneráciu vznikajúcu z mozgovej ischémie, nedostatočné sústredenie sa, hyperaktívnu poruchu; a poruchy denného rytmu, napríklad u jedincov trpiacich následkami prekračovania časových pásiem, alebo u jedincov pracujúcich na smený.

Ďalšie poruchy, pre ktoré selektívne ligandy GABA_a receptorov môžu byť užitočné, zahŕňajú bolesť a pocit bolesti, zvracanie, včítane akútneho, oneskoreného a predčasného zvracania, osobitne zvracania vyvolaného chemoterapiou alebo žiarením, ako aj postoperatívneho napínania na zvracanie a zvracania, stravovacie poruchy včítane mentálnej anorexie a nadmernej žravosti, predmenštruačný syndróm; kŕče alebo kŕčovitosť svalov, napríklad u ochrnutých pacientov, a poruchy sluchu. Selektívne ligandy GABA_a receptorov môžu byť účinné aj ako premedikácia pred anestéziou alebo menšími zákrokmi, ako je napríklad endoskopia včítane žalúdočnej endoskopie.

Patent WO 98/04559 opisuje triedu substituovaných a 7,8-kruhových fúzovaných derivátov 1,2,4-triazolo[4,3-ô]pyridazínu, o ktorých sa tvrdí, že sú selektívne ligandy

GABA_a receptorov užitočné v liečbe a/alebo prevencii neurologických porúch včítane úzkosti a kŕčov.

Podstata vynálezu

Súčasný vynález poskytuje osobitný derivát triazolopyridazínu a jeho farmaceutický prijateľné soli, ktoré majú potrebné väzbové vlastnosti na rôznych podtypoch GABA_a receptorov. Zlúčeniny podľa súčasného vynálezu majú dobrú afinitu ako ligandy a2 a/alebo a3 podjednotky ľudského GABA_a receptoru. Zlúčeniny podľa tohto vynálezu interagujú priaznivejšie s a2 a/alebo a3 podjednotkou ako s al podjednotkou. Skutočne, zlúčeniny podľa súčasného vynálezu vykazujú funkčnú selektívnosť v zmysle selektívnej účinnosti proti a2 a/alebo oc3 podjednotke v porovnaní s al podjednotkou.

Zlúčeniny podľa súčasného vynálezu sú ligandy podtypov GABA_a receptoru a podľa meraní v teste opísanom nižšie majú hodnotu väzbovej afinity (K,) proti a2 a/alebo a3 podjednotke nižšiu ako 1 nM. Okrem toho zlúčeniny podľa tohto vynálezu majú funkčnú selektivitu v zmysle selektívnej účinnosti proti a2 a/alebo a3 podjednotke v porovnaní s al podjednotkou. Okrem toho zlúčeniny podľa tohto vynálezu majú zaujímavé farmakokinetické vlastnosti, a to v zmysle lepšej ústnej biologickej dostupnosti.

Podstatou vynálezu je 7-(1,1 -dimetyletyl)-6-(2-etyl-2/ŕ-l,2,4-triazol-3-ylmetyl-oxy)-3-(2-fluórfcnyl)-l,2,4-triazolo[4,3-A] pyridazí n vzorca (I)

(I) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ.

Zlúčeniny podľa súčasného vynálezu sú zahrnuté do genetického rozsahu patentu WO 98/04559. Tam však nie je nijaký špecifický opis zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľných solí podľa opisu.

Na použitie v medicíne soli zlúčeniny uvedeného vzorca (I) budú farmaceutický prijateľné soli. Iné soli však môžu byť užitočné pri príprave zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli. Vhodne farmaceutický prijateľné soli zlúčeniny vzorca (I) zahŕňajú kyslé adičné soli, ktoré sa môžu napríklad vytvoriť zmiešaním roztoku zlúčeniny vzorca (I) s roztokom farmaceutický prijateľnej soli, napríklad kyseliny chlorovodíkovej, sírovej, metánsulfónovej, fumarovej, maleínovej, jantárovej, octovej, benzoovej, šťaveľovej, citrónovej, vínnej, uhličitej alebo fosforečnej.

Súčasný vynález poskytuje aj spôsob na liečbu a/alebo prevenciu úzkosti, ktorý zahŕňa podávanie účinného množstva zlúčeniny vzorca (I) podľa opisu alebo jej farmaceutický prijateľnej soli pacientovi, ktorý takúto liečbu potrebuja

Ďalej súčasný vynález poskytuje spôsob na liečbu a/alebo prevenciu kŕčov (napríklad u pacienta trpiaceho na epilepsiu alebo podobnú poruchu), ktorý zahŕňa podávanie účinného množstva zlúčeniny vzorca (I) podľa opisu alebo jej farmaceutický prijateľnej soli pacientovi, ktorý takúto liečbu potrebuje.

Väzbová afinita (K.) zlúčenín podľa súčasného vynálezu k a3 podjednotke ľudského GABA_a receptoru sa výhodne meria testom opísaným neskôr. Väzbová afinita (K_;) a3 podjednotky zlúčenín podľa súčasného vynálezu je nižšia ako 1 nM.

Zlúčeniny podľa súčasného vynálezu selektívne potencujú odpoveď GABA EC₂₀ v permanentne transfekovaných rekombinantných bunkových líniách exprimujúcich a3 podjednotku ľudského GABA_a receptoru vo vzťahu k potencovaniu GABA EC₂₀ odpovede vyvolanej v permanentne transfekovaných bunkových líniách exprimujúcich al podjednotku ľudského GABA₁ receptoru.

Potencovanie GABA EC₂₀ odpovede v permanentne transfekovaných bunkových líniách exprimujúcich a3 a al podjednotky ľudského GABA_a receptoru možno výhodne merať spôsobmi, ktoré sú analogické s protokolom opísaným autormi Wafford a spol., Mol. Pharmacol., 1996, 50, 670 - 678. Spôsob sa dá vhodne uskutočniť s použitím kultúr permanentne transfekovaných eukaryotických buniek, typicky permanentne transfekovaných myších buniek Ltk fibroblastov.

Zlúčeniny podľa súčasného vynálezu majú anxiolytickú aktivitu podľa pozitívnej odpovede z testu s bludiskom a z testu na podmienené potlačenie pitia (porovnaj Dawson a spol., Psychopharmacology, 1995, 121, 109 - 117). Okrem toho zlúčeniny podľa vynálezu sú na základe adekvátnych výsledkov získaných z testu na senzitivitu odpovede (ťahanie za reťaz) v podstate neutlmujúce (porovnaj Bayley a spol., J. Psychopharmacol., 1996, 10, 206 - 213).

Zlúčeniny podľa súčasného vynálezu môžu mať protikŕčovú aktivitu. Dá sa to dokázať schopnosťou blokovať záchvaty indukované pentyléntetrazolom u potkanov a myší podľa protokolu, ktorý je analogický s protokolom, ktorý opísali Bristow a spol. v J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 279,492-501.

Pretože zlúčeniny podľa vynálezu ovplyvňujú správanie, jednoducho prenikajú do mozgu, inými slovami, tieto zlúčeniny sú schopné prekračovať takzvanú „krvnomozgovú bariéru“. Výhodne, zlúčeniny podľa vynálezu sú schopné vyvíjať svoju prospešnú terapeutickú aktivitu po podaní ústnou cestou.

Vynález tiež poskytuje farmaceutické prostriedky zahŕňajúce jednu alebo viaceré zlúčeniny podľa tohto vynálezu v spojení s farmaceutický prijateľným nosičom. Tieto zmesi sú výhodne v jednotkovej dávkovej forme, ako sú napríklad tabletky, pilulky, kapsuly, prášky, granuly, sterilné parenterálne roztoky alebo suspenzie, dávkované aerosólové alebo tekuté spreje, kvapky, ampulky, autoinjekčne zariadenia alebo čapíky, na ústne, parenterálne, vnútronosové, podjazykové alebo rektálne podávanie, alebo na podávanie inhalovaním alebo insufláciou. Na prípravu tuhých zmesí, ako sú napríklad tabletky, sa hlavná účinná zložka zmieša s farmaceutickým nosičom, napríklad s konvenčnými tabletovacími zložkami, ako je napríklad kukuričný škrob, laktóza, sacharóza, sorbitol, mastenec, kyselina stearová, stearan horečnatý, hydrofosforečnan vápenatý alebo gumy, a iné farmaceutické riedidlá, napríklad voda, čím vznikne tuhá preformulačná zmes obsahujúca homogénnu zmes zlúčeniny podľa súčasného vynálezu, alebo jej farmaceutický prijateľnej soli. Keď sa hovorí, že tieto preformulačné zmesi sú homogénne, myslí sa tým, že účinná zložka je rozptýlená rovnomerne po celej zmesi, takže zmes sa dá ľahko ďalej deliť do rovnako účinných jednotkových dávkových foriem, ako sú napríklad tabletky, pilulky a kapsuly. Táto tuhá preformulačná zmes sa potom ďalej delí na jednotkové

dávkové formy opísaného typu, ktoré obsahujú 0,1 až približne 500 mg účinnej látky podľa súčasného vynálezu. Typické jednotkové dávkové formy obsahujú 1 až 100 mg, napríklad 1, 2, 5, 10, 25, 50 alebo 100 mg účinnej látky. Tabletky alebo pilulky novej zmesi možno potiahnuť alebo inak upraviť, aby poskytli dávkovú formu umožňujúcu výhodu riadeného účinku. Napríklad tabletka alebo pilulka môže zahŕňať jednu vnútornú dávkovú zložku a jednu vonkajšiu dávkovú zložku, pričom vonkajšia dávková zložka je vo forme obalu okolo vnútornej zložky. Tieto dva komponenty možno od seba oddeliť enterickou vrstvou, ktorá slúži na zabránenie rozkladu v žalúdku a dovoľuje vnútornej zložke prejsť v nezmenenej podobe do dvanástnika, alebo pôsobiť formou riadeného uvoľňovania. Na takéto enterické vrstvy alebo obaly možno použiť rôzne materiály, včítane napríklad veľkého počtu polymémych kyselín a zmesí polymémych kyselín s takými materiálmi, ako je napríklad šelak, cetylalkohol a acetát celulózy.

Tekuté formy, v ktorých nové zmesi podľa súčasného vynálezu možno včleniť na podávanie ústnou alebo injekčnou cestou, zahŕňajú vodné roztoky, vhodne ochutené sirupy, vodné alebo olejové suspenzie, a ochutené emulzie s jedlými olejmi, ako je napríklad bavlníkový olej, sezamový olej, kokosový olej alebo podzemnicový olej, ako aj elixíry a podobné farmaceutické nosiče. Vhodné dispergačné alebo suspendovacie prostriedky na vodné suspenzie zahŕňajú syntetické a prírodné gumy, ako je napríklad tragakant, akácia, alginát, dextrán, sodná karboxymetylcelulóza, metylcelulóza, polyvinyl-pyrolidón alebo želatína.

Na liečbu úzkosti vhodná dávková hladina je približne 0,01 až 250 mg/kg denne, výhodne približne 0,05 až 100 mg/kg denne, a osobitne približne 0,05 až 5 mg/kg denne. Zlúčeniny možno podávať v režime 1- až 4-krát denne.

Zlúčeninu vzorca (I) opísanú možno pripraviť spôsobom, ktorý zahŕňa reakciu zlúčeniny vzorca (III) so zlúčeninou vzorca (IV)

kde L¹ je vhodná odstupujúca skupina.

Odstupujúca skupina Ľ je v typickom prípade atóm halogénu, osobitne chlóru.

Reakcia medzi zlúčeninami (III) a (IV) sa výhodne uskutoční miešaním reaktantov vo vhodnom rozpúšťadle v prítomnosti zásady. Rozpúšťadlo je typicky Λ',Λ'-dimctylformamid a zásada je silná zásada, napríklad hydrid sodný. Rozpúšťadlo jc výhodne dimetylsulfoxid a zásada je uhličitan cézny. Výhodnejšie, rozpúšťadlo je 1 -metyl-2-pyrolidinón a zásada je hydroxid sodný, keď sa reakcia výhodne uskutoční pri teplote okolo 0 °C.

Medziprodukty uvedeného vzorca možno pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca (V) v podstate s ekvimolámym množstvom derivátu hydrazínu vzorca (VI) (VI), kde L¹ bolo definované skôr a L² je vhodná odstupujúca skupina, po ktorej v prípade potreby nasleduje odseparovanie výslednej zmesi izomérov konvenčným spôsobom.

Odstupujúca skupina L² je v typickom prípade atóm halogénu, osobitne chlóru. V medziproduktoch vzorca (V) odstupujúce skupiny Ľ a L² môžu byť rovnaké alebo rôzne, ale vhodne sú rovnaké, výhodne obe sú chlór.

Reakcia medzi zlúčeninami (V) a (VI) sa konvenčné uskutoční ohrievaním reaktantov v prítomnosti zdroja protónov, ako je napríklad trietylaminhydrochlorid, v typickom prípade pri spätnom toku v inertnom rozpúšťadle ako je napríklad xylén alebo 1,4-dioxán.

Obdobne, medziprodukty vzorca (III) možno pripraviť reakciou derivátu hydrazínu vzorca (VII) s derivátom alde-

(VIH), kde Ľ bolo definované skôr, po reakcii nasleduje cyklizácia takto získaného medziproduktu Schiffovej zásady.

Reakcia medzi zlúčeninami (VII) a (VIII) sa výhodne uskutoční v kyslých podmienkach, napríklad v prítomnosti minerálnej kyseliny, ako je napríklad kyselina chlorovodíková. Cyklizáciu výsledného medziproduktu Schiffovej zásady možno potom výhodne uskutočniť pôsobením chloridu železitého vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad v alkoholovom rozpúšťadle, ako je napríklad etanol, pri zvýšenej teplote, v typickom prípade pri teplote v rozmedzí od 60 do 70 °C.

Medziprodukty vzorca (VII) možno pripraviť reakciou vhodnej zlúčeniny vzorca (V) podľa uvedenej definície s hydrazínhydrátom, v typickom prípade v izobutyl-alkohole pri zvýšenej teplote, napríklad pri teplote v rozmedzí okolo 90 °C, alebo v 1,4-dioxáne pri teplote spätného toku rozpúšťadla, po ktorej v prípade potreby nasleduje odseparovanie výslednej zmesi izomérov konvenčným spôsobom.

V alternatívnom uskutočnení možno medziprodukty uvedeného vzorca (III) pripraviť reakciou derivátu hydrazínu vzorca (VII) podľa uvedenej definície so zlúčeninou vzorca (IX)

F

kde Q je reaktívna karboxylátová časť, potom sa takto získaný derivát hydrazidu vzorca (X) cyklizujc

kde L³ je vhodná odstupujúca skupina.

Odstupujúca skupina L³ je vhodne atóm halogénu, typicky chlór alebo bróm.

Reakcia medzi zlúčeninami (XI) a (XII) sa výhodne uskutoční miešaním reaktantov vo vhodnom rozpúšťadle, typicky v A/.V-dimctylformamide, v prítomnosti silnej zásady, ako je napríklad hydrid sodný.

Medziprodukt uvedeného vzorca (XI) možno výhodne pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca (III) podľa uvedenej definície s hydroxidom alkalického kovu, napríklad s hydroxidom sodným. Reakcia sa výhodne uskutoční v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad 1,4-dioxán, ideálne pri teplote spätného toku rozpúšťadla.

V ďalšom spôsobe možno uvedenú zlúčeninu vzorca (ľ) pripraviť spôsobom, ktorý zahŕňa reakciu kyseliny trimetyloctovej so zlúčeninou vzorca (XIII) kde Ľ bolo definované skôr.

Vhodné hodnoty reaktívnej karboxylátovej časti Q zahŕňajú estery, napríklad C|.₄-alkylestery, kyslé anhydridy, napríklad zmiešané anhydridy s C|.₄-alkánovými kyselinami, kyslé halogény, napríklad kyslé chloridy, a acylimidazoly. Výhodne, Q je kyslá chloridová časť.

Reakcia medzi zlúčeninami (VII) a (IX) sa výhodne uskutoční v zásaditých podmienkach, napríklad v prítomnosti trietylaminu, vhodne v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad dietyléter, a typicky pri teplote v oblasti 0 °C. Cyklizácia výslednej zlúčeniny vzorca (X) sa môže potom výhodne uskutočniť pôsobením 1,2-dibróm-1,1,2,2-tetrachlóretánu a trifenylfosfínu v prítomnosti zásady, ako je napríklad trietylamín, výhodne v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad acetonitril, a typicky pri teplote v oblasti 0 °C.

Vo výhodnom spôsobe sa reakcia medzi zlúčeninami (Víl) a (IX) môže uskutočniť zmiešaním reaktantov v rozpúšťadle, ako je napríklad l-metyl-2-pyrilidinón, pri teplote v oblasti 0 °C, cyklizácia takto získanej zlúčeniny vzorca (X) sa potom môže uskutočniť in situ ohrievaním reakčnej zmesi pri teplote v oblasti 130 °C.

Reakciou medzi zlúčeninou (V) a hydrazínhydrátom alebo zlúčeninou (VI) možno vznikne, ako je to uvedené, zmes izomémych produktov podľa toho, či atóm dusíka hydrazínu vytesní odstupujúcu skupinu Ľ alebo L². Takže okrem požadovaného produktu vzorca (III) alebo (VII) sa možno do určitej miery získa aj alternatívny izomér. Z tohto dôvodu by mohlo byť potrebné oddeliť výslednú zmes izomérov konvenčnými spôsobmi, napríklad chromatograficky.

V inom spôsobe zlúčenina vzorca (I), podľa uvedeného opisu, sa môže pripraviť spôsobom, ktorý zahŕňa reakciu zlúčeniny vzorca (XI) (alebo jej tautoméru, 1,2,4-triazolo[4,3-ó]pyridazin-6-ónu) so zlúčeninou vzorca (XII)

v prítomnosti dusičnanu strieborného a peroxosíranu amónneho.

Reakcia sa výhodne uskutoční vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad vo vode alebo vo vodnom roztoku acetonitrilu, voliteľne v kyslých podmienkach, napríklad s použitím kyseliny trifluóroctovej alebo sírovej, typicky pri zvýšenej teplote.

Medziprodukt vzorca (XIII) zodpovedá zlúčenine vzorca (I) podľa uvedeného opisu, kde Zerc-butylový substituent v polohe 7 nie je prítomný, a medziprodukt (XIII) možno preto pripraviť spôsobmi, ktoré sú analogické s opísanými spôsobmi na prípravu zlúčeniny vzorca (I).

V ďalšom spôsobe možno opísanú zlúčeninu vzorca (I) pripraviť spôsobom, ktorý zahŕňa reakciu zlúčeniny vzorca (XIV) so zlúčeninou vzorca (XV)

(ΧΠ), kde M je -B(OH)₂ alebo -Sn(Alk)₃, v ktorom Alk je C|.₆-alkylová skupina, typicky n-butyl, a L⁴ je vhodná odstupujúca skupina, v prítomnosti katalyzátora prechodného kovu.

Odstupujúca skupina L⁴ je vhodne atóm halogénu, napríklad bróm.

Vhodný katalyzátor prechodného kovu na použitie v reakcii medzi zlúčeninami (XIV) a (XV) zahŕňa dichlórbis(trifenylfosfín) paládnatý alebo tetrakis(trifenylfosfín)paládium.

Reakcia medzi zlúčeninami (XIV) a (XV) sa výhodne uskutočňuje v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad N,N-dimetylformamid, typicky pri zvýšenej teplote.

Medziprodukty vzorca (XIV) možno pripraviť reakciou definovanej zlúčeniny vzorca (XIV) so zlúčeninou vzorca (XVI)

kde Ľ a L⁴ boli definované skôr, za podmienok, ktoré sú analogické s podmienkami opísanými na reakciu medzi zlúčeninami (III) a (IV).

Medziprodukt uvedeného vzorca (IV) možno pripraviť spôsobmi opísanými v patente EP-A-0421210, alebo spôsobmi, ktoré sú s nimi analogické. Vhodné spôsoby sú opísané v priložených príkladoch.

Medziprodukty uvedeného vzorca (V) možno pripraviť reakciou kyseliny trimetyloctovej so zlúčeninou vzorca (XVII)

L²

(XVII), kde L¹ a L² boli definované skôr, v prítomnosti dusičnanu strieborného a peroxosíranu amónneho, za podmienok, ktoré sú analogické s podmienkami opísanými na reakciu medzi kyselinou trimetyloctovou a zlúčeninou (XIII). Tam, kde v zlúčenine (XVII) L¹ aj L² je chlór, sa reakcia výhodne uskutoční v prítomnosti kyseliny trifluóroctovej.

Tam, kde počiatočné materiály nie sú komerčne dostupné, možno počiatočné materiály vzorca (VI), (VIII), (IX), (XII), (XV), (XVI) a (XVII) pripraviť spôsobmi, ktoré sú analogické s opísanými spôsobmi v príkladoch, alebo štandardnými spôsobmi známymi v problematike.

Počas ktorejkoľvek z uvedených postupov syntézy môže byť potrebné a/alebo žiaduce chrániť senzitívne alebo reaktívne skupiny na ktorejkoľvek danej molekule. Toto sa dá dosiahnuť konvenčnými ochrannými skupinami, napríklad tými, ktoré sú opísané v Protective Groups in Organic Chemistry, ed. J. F. W. McOmie, Plénum Press, 1973; a T. W. Greene a P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1991. Ochranné skupiny možno odstrániť vo výhodnom následnom kroku s použitím spôsobov známych v problematike.

Bolí syntetizované a charakterizované štyri bezvodé polymorfy, dva solváty a jeden dihydrát 7-(l ,1-dimetyletyl)-6-(2-etyl-27ŕ-l,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluór-fenyl)-l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazínu. Všetky polymorfy a solváty revertujú na termodynamicky najstabilnejšiu formu, polymorf A (jeho príprava a charakterizácia je uvedená v príklade 3), a to po miešaní vo forme suspenzie vo vode. Dihydrát polymorfu A je stabilný, ale len pri zvýšenej vlhkosti.

Nasledujúce príklady ilustrujú prípravu zlúčenín podľa súčasného vynálezu.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Na obrázku 1 je adsorpčná/desorpčná isoterma polymorfu A zlúčeniny I pri 25 °C.

Na obrázku 2 sú vedľa seba XRPD difraktogramy bezvodého polymorfu A zlúčeniny I a dihydrátu polymorfu A.

Na obrázku 3 sú vedľa seba XRPD difraktogramy bezvodých polymorfov A, B, C a D zlúčeniny I, metanolových a etanolových solvátov a dihydrátu polymorfu A.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Zlúčeniny v súlade s týmto vynálezom silne potláčajú väzbu [³H]-flumazenilu na väzbové miesto benzodiazepínu ľudských GABA_a receptorov obsahujúcich a2 alebo a3 podjednotku permanentne exprimovanú Ltk bunkami.

Reagencie

- Fosfátmi tlmený fyziologický roztok (PBS).

- Testovací tlmivý roztok: 10 mM KH₂PO₄, 100 mM KC1, pH 7,4 pri izbovej teplote.

- [³H]-Flumazenil (18 nM pre bunky α1β3γ2; 18 nM pre bunky α2β3γ2; 10 nM pre bunky α3β3γ2) v testovacom tlmivom roztoku.

- Flunitrazepam 100 μΜ v testovacom tlmivom roztoku.

- Bunky resuspendované v testovacom tlmivom roztoku (1 miska do 10 ml).

Izolácia buniek

Z buniek sa odstráni supematant a pridá sa približne 20 ml PBS. Bunky sa zoškrabú a umiestnia sa v 50 ml centrifugačnej skúmavke. Postup sa zopakuje s ďalšími 10 ml PBS, aby sa zabezpečilo odstránenie väčšiny buniek. Bunky sa 20 min. peletujú centrifugovaním pri 3000 otáčok/minútu v stolnej centrifúge a potom sa v prípade potreby zmrazia. Pelety sa resuspendujú v 10 ml tlmivého roztoku na každú misku (25 cm x 25 cm) buniek.

Test

Môže sa uskutočniť na hlbokých platničkách s 96 jamkami alebo v skúmavkách. Každá skúmavka obsahuje:

- 300 μΐ testovacieho tlmivého roztoku.

- 50 μΐ [³H]-flumazenilu (konečná koncentrácia pre αΐ β3γ2 je 1,8 nM; pre α2β3γ2 je 1,8 nM; pre c^2y2je 1,0 nM).

- 50 μΐ tlmivého roztoku alebo rozpúšťadla vo forme nosiča (napríklad 10 %-ný DMSO), ak zlúčeniny sa rozpúšťajú v 10 %-nom DMSO (celkom), testovaná zlúčenina alebo flunitrazepam (na stanovenie nešpecifickej väzby), konečná koncentrácia 10 μΜ.

-100 μΐ buniek.

Testy sa inkubujú 1 hodinu pri 40 °C, potom sa prefiltrujú s použitím bunkových zberačov (Tomtec alebo Brandcl) na filtre GF/B, potom sa premývajú s 3 x 3 ml ľadového testovacieho tlmivého roztoku. Filtre sa vysušia a merajú sa kvapalným scintilačným meraním. Očakávané hodnoty celkovej väzby sú 3000 až 4000 dpm pre celkové počty a menej ako 200 dpm pre nešpecifickú väzbu v prípade, žc sa použije kvapalné scintilačné meranie, alebo 1500 až 2000 dpm pre celkové počty a menej ako 200 dpm pre nešpecifickú väzbu, ak sa použije tuhý scintilačný prostriedok meltilex. Väzbové parametre sa stanovia neli neámou regresnou analýzou najmenších štvorcov, z ktorej sa pre každú testovanú zlúčeninu dá vypočítať inhibičná konštanta K;.

Zlúčenina v priložených príkladoch sa testovala uvedeným testom a zistilo sa, že jej K; hodnota na vytesnenie [³H]-flumazenilu zpodjednotky a2 a/alebo a3 ľudského GABA_a receptoru je menšia ako 1 nM.

Príklad 1

7-(1,1 -Dimetyletyl)-6-(2-etyl-2/7-l ,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fl uórfenyl)-1,2,4-triazolo[4,3-/>]pyridazín

3,6-Dichlór-4-( 1,1 -dimetyletyljpyridazín

Do miešanej suspenzie 3,6-dichlórpyridazinu (50,0 g, 0,34 mol) vo vode (1,25 1) sa opatrne pridala koncentrovaná kyselina sírová (53,6 ml, 1,0 mol). Táto zmes sa potom ohrievala na 70 °C (vnútorná teplota) a potom sa pridala kyselina trimetyloctová (47,5 ml, 0,41 mol). Potom sa približne počas 1 minúty pridával roztok dusičnanu strieborného (11,4 g, 0,07 mol) vo vode (20 ml). Reakčná zmes sa mliečne zakalila. Potom sa počas 20 až 30 minút pridával roztok peroxosíranu amónneho (230 g, 1,0 mol) vo vode (0,63 1). Vnútorná teplota sa zvýšila približne na 85 °C. Počas pridávania sa vytvoril produkt vo forme lepkavej zrazeniny. Po ukončení celého pridávania sa reakcia miešala ďalších 10 minút, potom sa nechala ochladiť na izbovú teplotu. Zmes sa potom vyliala na ľad a jej pH sa koncentrovaným vodným amoniakom upravilo na bázickú hodnotu, v prípade potreby aj s pridaním ďalšieho ľadu, aby sa teplota udržala pod 10 °C. Vodná fáza sa vyextrahovala dichlórmetánom (3 x 300 ml). Zlúčené extrakty sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a odparili sa, čím vzniklo 55,8 g surového produktu vo forme oleja. Produkt sa vyčistil silikagélovou chromatografiou s použitím 0 až 15 %-ného octanu etylnatého v hexáne ako elučného prostriedku, čím vzniklo 37,31 g (53 %) požadovanej zlúčeniny. Údaje požadovanej zlúčeniny: 'H NMR (360 MHz, d₆-DMSO) δ 1,50 (9H, s), 7,48 (1H, s); MS (ES⁺) m/e 205 [MH]⁺, 207 [MH]⁺.

6-Chlór-7-(l, 1 -dimetyletyl)-3-(2-fluórfenyl)-1,2,4-triazolo[4,3-6]pyridazín

Zmes 3,6-dichlór-4-(l,l-dimetyletyl)pyridazínu (20 g, 0,097 mol), 2-fluórbenzhydrazidu (22,6 g, 0,145 mol) a trietylamínhydrochloridu (20 g, 0,0145 mol) vdioxáne (1,2 1) sa 4 dni miešala a ohrievala do spätného toku v prúde dusíka. Po ochladení sa prchavé látky vo vákuu odstránili a zvyšok sa rozmiešal dichlórmetánom (200 ml), prefiltroval a skoncentroval sa vo vákuu. Zvyšok sa vyčistil chromatograficky na silikagéli eluovaním s 0 % až 25 %-ným octanom etylnatým/dichlórmetánom, čím sa získala požadovaná zlúčenina (12,95 g, 44 %) vo forme bielej tuhej látky. Údaje požadovanej zlúčeniny: ’H NMR (360 MHz, CDClj) δ 1,57 (9H, s), 7,26 až 7,35 (2H, m), 7,53 až 7,60 (1H, m), 7,89 až 7,93 (1H, m), 8,17 (lH,s), MS (ES⁺) m/e 305 [MH]⁺, 307 [MH]⁺.

(2-Ety 1-2//-1,2,4-triazol-3 -yljmetanol

Do roztoku 1,2,4-triazolu (10 g, 0,145 mol) vDMF (150 ml) sa pri izbovej teplote po častiach počas 15 min. pridával hydrid sodný (6,4 g zo 60 %-nej disperzie v oleji, 0,16 mol). Keď sa pridávanie ukončilo, reakčná zmes sa nechala vychladnúť na izbovú teplotu, potom sa ochladila v ľadovom kúpeli a po kvapkách sa počas 10 min. pridával jódetán (14 ml, 0,174 mol). Reakčná zmes sa nechala ohriať na izbovú teplotu a po miešaní 3 h sa rozpúšťadlá odstránili vo vysokom vákuu, čím vznikol zvyšok, ktorý sa rozdelil medzi vodu (300 ml) a octan etylnatý (3 x 300 ml).

Zlúčené organické vrstvy sa premyli nasýteným roztokom soli a vysušili sa (MgSO₄), prefiltrovali a skoncentrovali sa vo vákuu, čím vznikol olejovitý zvyšok, ktorý sa vyčistil destiláciou (120 °C @ ~ 2,6 kPa (20 mm Hg)), čim vznikol 1 -etyl-1,2,4-triazol kontaminovaný približne 15 % DMF (2,4 g). Surový produkt (2,4 g, 0,025 mol) sa rozpustil v suchom THF (35 ml), ochladil sa na -40 °C a pomaly, počas 20 min. sa pridávalo n-butyllítium (16,2 ml z 1,6 M roztoku v hexáne, 0,026 mol), pričom sa udržiavala konštantná teplota. Pridal sa potom DMF (2,03 ml, 0,026 mol) a po 15 min. sa reakčná zmes nechala pomaly počas 2 h ochladiť na izbovú teplotu. Do reakčnej zmesi sa pridal metanol (20 ml) a potom bórhydrid sodný (1 g, 0,026 mol) a roztok sa miešal 14 h. Rozpúšťadlá sa vo vákuu odstránili a zvyšok sa rozdelil medzi roztok soli (50 ml) a dichlórmetán (6 x 50 ml). Zlúčené organické vrstvy sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a skoncentrovali sa vo vákuu, čím vznikol zvyšok, ktorý sa vyčistil silikagélovou chromatografiou s použitím 0 až 5 %-ného metanolu v dichlórmetáne ako elučného činidla, čím sa získala požadovaná zlúčenina vo forme špinavobielej tuhej látky (0,5 g, 3 %). Údaje požadovanej zlúčeniny: ‘H NMR (250 MHz, CDC1₃) δ 1,48 (3H, t, J = 7,3 Hz), 4,25 (2H, q, J = 7,3 Hz), 4,75 (2H, s), 5,14 (1H, br s), 7,78 (1H, s).

d) 7-(l,l-Dimetyletyl)-6-(2-etyl-2/ŕ-l,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfenyl)-l,2,4-triazolo[4,3-h]pyridazín

Do roztoku (2-etyl-2//-l,2,4-triazol-3-yl)metanolu (0,094 g, 0,74 mmol) a 6-chlór-7-(l,l-dimetyletyl)-3-(2-fluórfenyl)-l,2,4-triazolo[4,3-í>]pyridazínu (0,15 g, 0,49 mmol) v DMF (10 ml) sa pridal hydrid sodný (0,024 g zo 60 %-nej disperzie v oleji, 1,1 molámeho ekvivalentu) a reakčná zmes sa miešala 30 minút pri izbovej teplote. Po uplynutí tohto času sa reakčná zmes zriedila vodou (80 ml), tuhá zrazenina sa oddelila filtráciou a premyla sa niekoľkokrát vodou v deliacom lieviku. Tuhá látka vykryštalizovala z octanu etylatého/hexánu, čím sa získala čistá požadovaná zlúčenina (0,085 g, 44 %). Údaje požadovanej zlúčeniny: ’H NMR (250 MHz, CDC1₃) δ 1,40 až 1,47 (12H, m), 4,14 (2H, t, J = 7,3 Hz), 5,26 (2H, s), 7,26 až 7,38 (2H, m), 7,53 až 7,58 (1H, m), 7,86 až 7,90 (1H, m), 7,93 (1H, s), 7,99 (1H, s); MS (ES⁺) m/c 396 [MH]⁺. Analýza: Zistené C, 61,02; H, 5,45; N, 24,75 %. C₂₀H₂₂FN₇O požaduje C, 60,75; H, 5,61; N, 24,79%.

Príklad 2 7-(l,l-Dimetyletyl)-6-(2-etyl-277-l,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfenyl)-l,2,4-triazolo[4,3-h]pyridazin: alternatívny spôsob syntézy

a) 3,6-Dichlór-4-(l ,1-dimetyletyljpyridazín

Zmes dichlórpyridazínu (100 g, 0,67 mol), kyseliny trimetyloctovej (96 g, 0,94 mol) a vody (800 ml) v 10-litrovej nádobe s vrchným miešadlom sa ohrievala na 55 °C, čím sa získal dvojfázový roztok. V jednej dávke sa pridal AgNO₃ (11,4 g, 0,134 mol) vo vode (125 ml) a roztok sa zakalil. V jednej dávke sa pridala kyselina trifluóroctová (10,3 ml, 0,134 mol). Vo vode (500 ml) sa rozpustil peroxosíran amónny (245 g, 1,07 mol) a počas 45 až 60 min. sa po kvapkách pridával do suspenzie, čím vznikla exotermná reakcia (v typickom prípade teplota stúpne na 75 až 80 °C a môže sa regulovať rýchlosťou pridávania peroxosíranu). Teplota sa ďalšiu hodinu udržiavala pri 75 °C a potom sa ochladila na izbovú teplotu. Reakčná zmes sa vyextrahovala izobutylalkoholom (1 1) a vodná vrstva sa odstránila. Organická vrstva sa premyla vodou (250 ml) a vodná časť sa odstránila. HPLC testom sa získalo 134 g (97 %). Roz tok izobutylalkoholu sa použil v ďalšom kroku v stave ako sa získal.

b) 6-Chlór-5-(l ,l-dimetyletyl)pyridazin-3-ylhydrazín

Hydrazínhydrát (95 ml, 1,95 mol) sa pridal do roztoku izobutylalkoholu z kroku a) v 3-litrovej nádobe a 20 hodín sa ohrieval na 90 °C. Reakčná zmes sa ochladila na izbovú teplotu a spodná vrstva sa odstránila. Reakčná zmes sa premyla vodou (450 ml) a vodná časť sa odstránila. Reakčná zmes sa predestilovala za zníženého tlaku, až kým produkt nezačal kryštalizovať, a pridal sa 1 -metyl-2-pyrolidinón (NMP) (550 ml). Destilácia pokračovala, aby sa odstránili posledné zvyšky izobutylalkoholu. Roztok sa v takomto stave použil v ďalšom kroku.

c) 6-Chlór-7-( 1,1 -dimetyletyl)-3-(2-fluórfenyl)-l ,2,4-triazolo[4,3-6]pyridazín

Do vychladeného roztoku (0 °C) NMP z kroku b) sa po kvapkách pridal 2-fluórbenzoyIchIorid (103 g, 0,65 mol), pričom vnútorná teplota sa udržiavala pri < 5 °C. Po pridaní sa reakčná zmes ohrievala 2 h na 130 °C. Reakčná zmes sa ochladila na izbovú teplotu, čo viedlo k vykryštalizovaniu produktu. Počas 30 min. sa po kvapkách pridávala voda (1,3 1). Kašovitá zmes sa ochladila na 10 °C a tuhá látka sa vyizolovala filtráciou, potom sa vysušila za zníženého tlaku, čím sa získal produkt (145 g, výťažok 71 % z 3,6-dichlórpyridazínu).

d) 1 -Etyl-l,2,4-triazol

1,2,4-Triazol (100,0 g, 1,45 mol) vbezvodom THF (950 ml) sa ochladil na 0 °C a v jednej dávke sa pridal 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undek-7-én (DBU) (220 g, 1,45 mol). Reakčná zmes sa miešala 30 minút až do úplného rozpustenia. Udržiaval sa chladiaci kúpeľ ľad/voda a počas 15 minút sa po kvapkách pridal jódetán (317 g, 2,03 mol), čím vnútorná teplota sa zvýšila na 30 °C. Reakcia sa miešala 16 h pri izbovej teplote, potom sa DBU hydrojodid odfiltroval. Filtračný roztok sa v takomto stave použil v ďalšom kroku.

e) (2-Ety 1-2//-1,2,4-triazol-3-yl)metanol

Miešaný roztok z predchádzajúceho kroku sa ochladil na -75 °C (vnútorná teplota) v kašovitom kúpeli s tuhým CO₂/acetónom. Počas 25 min. sa po kvapkách pridalo hexyllítium (458 ml z 33 %-ného roztoku v hexánoch), pričom sa vnútorná teplota udržiavala pod -55 °C. Reakčná zmes sa nechala stáť 30 min. (späť na -75 °C) a potom sa počas 10 min. po kvapkách pridal čistý DMF (108 ml, 1,39 mol), pričom sa vnútorná teplota udržiavala pod -60 °C. Reakčná zmes sa nechala stáť 90 min. pri -70 °C, potom sa chladiaci kúpeľ odstránil a reakčná zmes sa počas 30 min. nechala ohriať na 0 °C. Počas 10 min. sa pridával priemyselný metylovaný lieh (340 ml). Potom sa po častiach pridal bórhydrid sodný (26,3 g, 0,695 mol), pričom vnútorná teplota sa udržiavala pod 6 °C. Po pridaní sa reakčná zmes nechala ohriať na izbovú teplotu a pri tejto teplote sa miešala 1 hodinu. Reakcia sa zastavila opatrným pridaním 2M H₂SO₄ (200 ml) a potom sa miešala 20 hodín pri izbovej teplote. Reakčná zmes sa skoncentrovala na 675 ml a v jednej dávke sa pridal síran sodný (135 g). Reakčná zmes sa počas 15 min. ohriala na 35 °C. Roztok sa vyextrahoval teplým (45 °C) izobutylalkoholom (2 x 675 ml). Zlúčené organické frakcie sa skoncentrovali za zníženého tlaku na 450 ml, kedy sa produkt vykryštalizoval. Pridal sa heptán (1,125 1) a kašovitá zmes sa skoncentrovala za zníženého tlaku, aby sa odstránila väčšina izobutylalkoholu. Pridal sa heptán tak, aby objem konečnej kaše bol 680 ml. Po ochladení na 0 °C sa filtráciou získala požadovaná zlúčenina (137 g, 74 % z 1,2,4-triazolu).

f) 7-(1,1 -Dimetyletyl)-6-(2-etyl-2//-1,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfenyl)-l,2,4-triazolo[4,3-b]pyridazín

Spôsob A

Do 10-litrovej nádoby s vrchným miešadlom sa umiestnil 6-chlór-7-( 1,1 -dimetyletyl)-3-(2-fluórfenyl)-1,2,4-triazolo[4,3-Ŕ]pyridazín (255 g, 0,819 mol), (2-etyl-2H-l,2,4-triazol-3-yl)metanol (125 g, 0,983 mol) a uhličitan cézny (640 g, 1,966 mol). V jednej dávke sa pridal dimetylsulfoxid (2,5 1) a reakčná zmes sa miešala 20 hodín pri izbovej teplote. Produkt sa vykryštalizoval. Reakčná zmes sa udržiavala pri teplote < 25 °C, kým sa k miešanému roztoku počas 45 min. po kvapkách pridávala voda (5 1). Po ochladení na 10 °C sa produkt vyizoloval filtráciou a koláč sa premyl vodou (1,75 1). Vysušením pri 50 °C vo vákuu sa získala požadovaná zlúčenina (317 g, 98 %) vo forme bielej tuhej látky.

Spôsob B

Do 500-mililitrovej nádoby vybavenej vrchným miešadlom sa umiestnil 6-chlór-7-(l,l-dimetyletyl)-3-(2-fluórfenyl)-l,2,4-triazolo[4,3-b]pyridazín (10 g, 32,12 mmol) a (2-etyl-2//-l,2,4-triazol-3-yl)metanol (5,01 g, 38,55 mmol). V jednej dávke sa pridal NMP (100 ml) a reakčná zmes sa miešala až do úplného rozpustenia. Reakčná zmes sa ochladila na 0 °C a v jednej dávke sa pridal 48 %-ný (hmotnosť/hmotnosť) hydroxid sodný (4,02 g, 46 mmol). Po miešaní 1 h pri 0 °C sa produkt vykryštalizoval. Počas 15 min. sa po kvapkách pridávala voda a kašovitá zmes sa nechala stáť 30 min. Produkt sa vyizoloval filtráciou a koláč sa premyl vodou (100 ml). Vysušením pri 50 °C vo vákuu sa získala požadovaná zlúčenina (12,50 g, 98 %) vo forme bielej tuhej látky.

Príklad 3

Vznik a charakterizovanie polymorfov a solvátov 7-(l,l-dimetyletyl)-6-(2-etyl-2//-l,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfenyl)-l,2,4-triazolo[4,3-ŕ>]pyridazínu

7-(1,1 -Dimetyletyl)-6-(2-etyl-2/7-1,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfcnyl)-l,2,4-triazolo[4,3-ó]pyridazín (ďalej označovaný ako zlúčenina I) sa rekryštalizoval z výberu organických rozpúšťadiel a výsledné tuhé látky sa cez noc vysušili vo vákuu pri 60 °C, pokiaľ to nie je uvedené inak. Každá dávka sa potom charakterizovala optickým mikroskopom, diferenčnou skenovacou kalorimetriou (DSC), termogravimetrickou analýzou (TGA) a rôntgenovou práškovou difrakciou (XRPD). Charakterizovali sa štyri rôzne bezvodé polymorfy, jeden hydrát a dva solváty (tabuľka 1).

Tabuľka 1

Polymorfy zlúčeniny I

Polymorf	Kryštalizačné rozpúšťadlo	Tvar kryštálov	Teplota topenia °C
A	Metanol Octan etylnatý Acetonitril Acetón Kyselina octová/H20	Predĺžený pravouhlý alebo nepravidelný	približne 186
B	Izobutanol	Predĺžený pravouhlý alebo nepravidelný	približne 181
C	Dimetylformamid Tetrahydrofurán	Ihličkovitý	približne 170
D	Izopropanol Izobutanol	Ihličkoví tý	približne 170
Metanolový solvát	Metanol (sušenie na vzduchu)	Nepravidelný	približne 186
Etanolový solvát	Etanol	Nepravidelný	približne 186

Polymorf A

Polymorf A pozostáva z nepravidelných alebo predĺžených dvoj lomných kryštálov. Spôsobom DSC vykazuje jednu hlavnú endotermu približne pri teplote 186 °C v dôsledku topenia. V prípade niektorých pripravených vzoriek táto tavenina vykazuje niektoré deje, ktoré sa v nej odohrávajú, čo je charakterizované tvarom topného endotermu. Polymorf A je bczvodý a analýzou TGA nevykazuje straty. Má jedinečný XRPD difraktogram, ktorý je charakteristický dvoma vrcholmi pri 20 « 7,3°.

Polymorf B

Polymorf B pozostáva z nepravidelných alebo podlhovastých pravouhlých dvojlomných kryštálov. Polymorf B v DSC analýze vykazuje jednu hlavnú endotermu približne pri teplote 181 °C v dôsledku topenia. Je bezvodý a podľa TGA analýzy nevykazuje stratu hmotnosti. Má jedinečný XRPD difraktogram.

Polymorf C

Polymorf C pozostáva z ihličkovitých dvojlomných kryštálov. DSC termogramy polymorfu C vykazujú jednu endotermu približne pri teplote 170 °C, exotermu približne pri teplote 173 °C, malú endotermu približne pri 181 °C, a endotermu v dôsledku topenia približne pri teplote 186 °C. Termogravimetrická analýza nedokázala nijakú stratu hmotnosti.

Polymorf D

Polymorf D pozostáva z ihličkovitých dvojlomných kryštálov. XRPD difraktogram polymorfu D sa podobá na difraktogram polymorfu C. Pozorujú sa však výrazné odlišnosti, a to sú dodatočné vrcholy pri 20 = 9,861, 15,113, 18,015 a 22,224. Analýza DSC polymorfu D vykazuje veľmi širokú exotermu približne pri 108 °C, potom nasleduje endoterma a exoterma pri 170 °C a 173 °C, ako pri polymorfe C. Hlavné topenie sa pozoruje približne pri teplote 181 °C, a v rámci topnej endotermy sa pozoruje niekoľko dejov s menším topením pri teplote 186 °C. TGA analýza neukázala žiadne straty.

Metanolový solvát

DSC termogram metanolovcho solvátu ukazuje endotermu približne pri teplote 157 °C v dôsledku straty metanolu, a jednu endotermu pri teplote 186 °C v dôsledku topenia. TGA analýza ukazuje postupnú stratu až približne po teplotu 150 °C, pri tejto teplote dochádza ku strate skokom, čo súhlasí s endotermou pozorovanou DSC analýzou. Táto náhla strata v niektorých prípadoch pozostáva z viac ako jedného deja, počet medzi jednotlivými kryštalizovanými vzorkami je rôzny a zdá sa, že nezodpovedá stechiometrickému solvátu. Ale štúdie sorpcie metanolových výparov u polymorfu A svedčia o prítomnosti odlišného hemisolvátu. XRPD difraktogram solvátu je jedinečný.

Etanolový solvát

Etanolový solvát je charakterizovaný DSC termogramom, ktorý vykazuje endotermu približne pri teplote 111 “C v dôsledku straty metanolu, a endotermu približne pri teplote 186 °C v dôsledku topenia. TGA analýza ukazuje, že strata je v rôznych vzorkách variabilná, približne 4 a 6,5 %, a nezodpovedá stechiomctrickému solvátu. XRPD difraktogram je jedinečný.

Hydrát polymorfu A

Na obrázku 1 je adsorpčná/desorpčná isoterma polymorfu A zlúčeniny I pri 25 °C. Tieto sorpčné štúdie vlhkých výparov ukazujú tvorbu dihydrátu nad relatívnou vlhkosťou 80 % pri 25 °C. Pozoruje sa hysteréza, ktorá svedčí o tvorbe hydrátu, s výskytom desorpcie pri relatívnej vlhkosti približne pod 60 %.

Na obrázku 2 sú vedľa seba XRPD difraktogramy bezvodého polymorfu A zlúčeniny I a dihydrátu polymorfu A. XRPD difraktogram dihydrátu získaný z vlhkej vzorky polymorfu A ukazuje zreteľné rozdiely pozorované medzi oboma formami. Hlavné zmeny pozorované v difrakcii sú strata vrcholu pri 20 = 11,2°, a vzhľad dvoch hlavných vrcholov pri 20= 11,9° a 12,3°.

Prekonvertovanie polymorfov zlúčeniny I na polymorf A

Po skašovatení vo vode všetky opísané polymorfy a solváty počas 1 až 4 dní konvertujú na polymorf A, čo ukazuje, že pri izbovej teplote je to najstabilnejšia forma. Táto konverzia je pre nízku rozpustnosť zlúčeniny I vo vode pomalá v porovnaní k veľkému nadbytku skašovatenej tuhej zlúčeniny.

Údaje rOntgenovej práškovej difrakcie

Na obrázku 3 sú vedľa seba XRPD difraktogramy bezvodých polymorfov A, B, C a D zlúčeniny I, metanolových a etanolových solvátov a dihydrátu polymorfu A. Príslušné číselné údaje sú uvedené neskôr.

Polymorf A zlúčeniny I

Údaje rôntgenovej práškovej difrakcie

Uhol 2Θ	Hodnota d Ä	Intenzita počet	Intenzita %	Uhol 20	Hodnota d Ä	Intenzita počet	Intenzita %
7,243	12,19523	2214	88,5	22,885	3,88289	195	7,8
7,559	11,68660	613	24,5	23,621	3,76351	307	12,3
8,601	10,27227	50	2	23,67	3,75587	256	10,2
9,694	9,11647	211	8,4	23,767	3,74068	253	10,1
10,703	8,25928	270	10,8	24,12	3,68684	102	4,1
11,027	8,01719	213	8,5	24,518	3,62778	281	11,2
11,239	7,86640	1464	58,5	25,223	3,52803	162	6,5
12,943	6,83420	2501	100	25,275	3,52082	185	7,4
13,441	6,58218	41	1,6	25,478	3,49324	808	32,3
14,497	6,10492	740	29,6	26,088	3,41292	2178	87,1
15,178	5,83251	1211	48,4	26,686	3,33787	86	3,4
15,376	5,75802	187	7,5	27,093	3,28857	138	5,5
15,42	5,74169	144	5,8	27,74	3,21330	186	7,4
15,854	5,58536	391	15,6	28,056	3,17789	87	3,5
16,081	5,50706	236	9,4	28,607	3,11788	248	9,9
16,134	5,48931	250	10	28,703	3,10770	155	6,2
16,419	5,39437	135	5,4	29,135	3,06255	131	5,2
16,76	5,28552	36	1,4	29,267	3,04911	284	11,4
17,165	5,16167	304	12,1	29,353	3,04034	193	7,7
17,199	5,15149	235	9,4	29,787	2,99703	71	2,8
17,24	5,13933	329	13,2	30,357	2,94205	106	4,2
17,355	5,10550	281	H,2	30,954	2,88666	38	1,5
18,556	4,77774	213	8,5	31,436	2,84343	52	2,1
18,829	4,70917	85	3,4	32,618	2,74309	163	6,5
19,27	4,60224	372	14,9	32,773	2,73047	161	6,5
19,499	4,54892	233	9,3	33,254	2,69202	64	2,6
20,203	4,39192	118	4,7	33,897	2,64245	66,4	2,7
20,635	4,30098	238	9,5	34,14	2,62417	162	6,5
21,584	4,11385	250	10	36,522	2,45827	53	2,1
21,689	4,09416	704	28,2	38,532	2,33459	40	1,6
21,867	4,06119	1621	64,8	38,859	2,31564	78	3,1
22,28	3,98692	154	6,2	39,594	2,27434	47	1,9

Polymorf B zlúčeniny I

Údaje rôntgenovej práškovej difrakcie

Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita	Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita
20	Ä	počet	%	20	Ä	počet	%
7,379	11,97023	651	49,2	20,179	4,39705	119	9
10,096	8,75424	481	36,4	20,9	4,24699	54	4,1
10,821	8,16974	1323	100	21,718	4,08884	1300	98,3
12,482	7,08575	61	4,6	22,285	3,98602	446	33,7
12,739	6,94328	149	11,3	22,96	3,87033	87	6,6
13,036	6,78588	194	14,7	23,304	3,81394	111	8,4
13,475	6,56586	123	9,3	24,018	3,70224	73	5,5
13,828	6,39890	69	5,2	24,459	3,63648	75	5,7
14,815	5,97480	322	24,3	25,081	3,54765	141	10,7
15,078	5,87109	307	23,2	25,837	3,44555	47	3,6
15,584	5,68147	86	6,5	26,204	3,39810	193	14,6
16,082	5,50675	391	29,6	27,078	3,29031	176	13,3
16,979	5,21789	147	11,1	28,449	3,13490	91	6,9
17,02	5,20548	163	12,3	28,889	3,08812	51	3,9
17,287	5,12570	257	19,4	29,84	2,99177	166	12,6
17,616	5,03052	72	5,4	29,922	2,98380	121	9,1
18,125	4,89033	83,1	6,3	30,227	2,95440	58	4,4
18,161	4,88081	129	9,7	31,94	2,79975	70.5	5,3
18,192	4,87269	143	10,8	32,837	2,72528	117	8,8
19,022	4,66174	69	5,2	33,295	2,68885	40	3
19,542	4,53891	119	9	34,407	2,60440	52	3,9
19,68	4,50748	70,5	5,3	38,876	2,31472	27	2

Polymorf C zlúčeniny I

Údaje rôntgenovej práškovej difrakcie

Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita	Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita
2Θ	Ä	počet	%	20	Ä	počet	%
7,254	12,17653	25	0,6	24,647	3,60908	75	1,8
8,023	11,01169	798	19,3	24,961	3,56448	398	9,6
9,686	9,12421	4130	100	25,341	3,51181	182	4,4
10,489	8,42726	64	1,5	25,549	3,48378	617	14,9
10,813	8,17559	107	2,6	25,981	3,42671	832	20,1
11,277	7,83989	31	0,8	26,794	3,32466	328	7,9
12,193	7,25327	48	1,2	27,782	3,20863	166	4
12,961	6,82506	40	1	27,985	3,18576	158	3,8
14,357	6,16430	146	3,5	28,257	3,15573	241	5,8
14,497	6,10512	213	5,2	28,788	3,09868	257	6,2
15,225	5,81495	35	0,8	29,242	3,05164	322	7,8
16,007	5,53248	917	22,2	29,301	3,04560	322	7,8
16,545	5,35385	681	16,5	29,56	3,01950	111	2,7
16,951	5,22646	61	1,5	30,544	2,92444	158	3,8
17,672	5,01479	402	9,7	30,942	2,88768	70	1,7
18,337	4,83428	536	13	31,839	2,80834	156	3,8
18,578	4,77228	533	12,9	32,457	2,75628	157	3,8
19,396	4,57272	3486	84,4	32,745	2,73271	369	8,9
20,034	4,42851	57	1,4	34,246	2,61626	150	3,6
20,913	4,24430	193	4,7	34,979	2,56310	76	1,8
21,189	4,18959	1917	46,4	35,42	2,53225	74	1,8
21,523	4,12543	476	H,5	35,753	2,50941	92	2,2
21,876	4,05969	329	8	36,71	2,44615	91	2,2
22,654	3,92185	151	3,7	37,036	2,42537	145	3,5
23,207	3,82968	463	11,2	37,549	2,39339	137	3,3
23,238	3,82472	462	11,2	38,915	2,31247	74	1,8
24,316	3,65757	87	2,1	39,41	2,28456	166	4

Polymorf D zlúčeniny I

Údaje rôntgenovej práškovej difrakcie

Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita	Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita
20	Á	počet	%	20	Ä	počet	%
8,024	11,00971	501	33,4	22,224	3,99690	414	27,6
9,664	9,14458	1501	100	22,654	3,92192	112	7,5
9,861	8,96259	502	33,5	23,22	3,82757	322	21,5
10,498	8,42115	38	2,5	24,052	3,69702	89	5,9
10,8	8,18489	229	15,3	24,313	3,65791	295	19,7
11,462	7,71362	40	2,7	24,948	3,56619	272	18,1
12,105	7,30563	216	14,4	25,3	3,51744	120	8
12,951	6,83035	573	38,2	25,543	3,48455	304	20,3
13,312	6,64558	107	7,1	25,977	3,42728	362	24,1
13,817	6,40392	39	2,6	26,036	3,41965	416	27,7
14,478	6,11305	282	18,8	26,789	3,32518	539	35,9
14,823	5,97145	76	5,1	27,479	3,24329	173	H,5
15,113	5,85746	162	10,8	27,754	3,21176	198	13,2
16	5,53485	396	26,4	28,019	3,18199	170	11,3
16,533	5,35742	774	51,6	28,261	3,15525	314	20.9
16,952	5,22613	72	4,8	28,478	3,13170	144	9,6
17,661	5,01784	509	33,9	28,809	3,09646	205	13,7
18,015	4,92003	479	31,9	29,257	3,05012	176	11,7
18,316	4,83994	545	36,3	29,83	2,99276	178	11,9
18,46	4,80255	512	34,1	30,533	2,95545	157	10,5
18,543	4,78110	498	33,2	30,904	2,89114	96	6,4
19,239	4,60966	196	13,1	31,818	2,81015	131	8,7
19,41	4,56957	775	51,6	32,454	2,75655	119	7,9
20,005	4,43493	158	10,5	32,744	2,73282	182	12,1
20,525	4,32367	82	5,5	33,654	2,66094	94	6,3
20,798	4,26748	386	25,7	34,22	2,61823	95	6,3
20,882	4,25060	416	27,7	34,526	2,59568	80	5,3
21,188	4,18982	1344	89,5	34,934	2,56632	99	6,6
21,509	4,12810	1313	87,5	36,998	2,42775	122	8,1
21,853	4,06378	296	19,7	37,545	2,39366	97	6,5

Metanolový solvát zlúčeniny I

Údaje róntgenovej práškovej difrakcie

Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita	Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita
20	Ä	počet	%	20	Á	počet	%
7,357	12,00677	9531	90,4	21,153	4,19677	224	2,1
7,608	11,61023	260	2,5	22,081	4,02236	10545	100
9,616	9,19052	260	2,5	22,588	3,93327	526	5
9,755	9,05958	433	4,1	22,825	3,89290	1150	10,9
10,943	8,07881	1145	10,9	23,14	3,84065	362	3,4
11,274	7,84189	406	3,9	23,742	3,74460	291	2,8
12,36	7,15546	3517	33,4	24,295	3,66064	440	4,2
12,942	6,83511	472	4,5	24,818	3,58463	3357	31,8
12,981	6,81447	530	5	25,434	3,49921	933	8,8
14,42	6,13754	440	4,2	25,967	3,42863	2020	19,2
14,69	6,02552	3179	30,1	26	3,42428	2000	19
15,196	5,82583	371	3,5	26,761	3,32860	402	3,8
15,651	5,65758	767	7,3	27,151	3,28169	230	2,2
15,913	5,56476	954	9	28,642	3,11415	273	2,6
16,507	5,36597	379	3,6	28,951	3,08162	298	2,8
16,539	5,35556	426	4	29,56	3,01950	1793	17
16,871	5,25102	1070	10,1	30.365	2,94130	455	4,3
17,226	5,14355	237	2,2	31,319	2,85382	313	3
18,226	4,86354	372	3,5	32,074	2,78834	173	1,6
18,613	4,76331	112	1,1	32,739	2,73323	134	1,3
19,283	4,59933	291	2,8	33,77	2,65210	344	3,3
19,545	4,53827	195	1,8	35,185	2,54858	129	1,2
19,961	4,44452	1703	16,2	37,166	2,41715	145	1,4
20,675	4,29264	161	1,5	37,694	2,38454	218	2,1

Etanolový solvát zlúčeniny I

Údaje rOntgenovcj práškovej difrakcie

Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita	Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita
20	Á	počet	%	29	Ä	počet	%
7,357	12,00679	943	52,5	25,061	3,55045	462	25,7
9,541	9,26191	201	H,2	25,341	3,51184	1795	100
9,809	9,00980	208	11,6	25,712	3,46196	290	16,2
10,951	8,07238	1365	76,1	26,055	3,41713	463	25,8
13,031	7,35019	1500	83,6	26,235	3,39415	401	22,4
13,499	7,07637	115	6,4	26,599	3,34857	178	9,9
14,158	6,25067	245	13,7	27,054	3,29329	159	8,9
14,707	6,01841	236	13,2	28,355	3,14498	311	17,3
15,719	5,63302	428	23,8	28,491	3,13034	190	10,6
15,899	5,56980	657	36,6	28,667	3,11154	150	8,4
16,304	5,43218	869	48,4	29,029	3,07353	142	7,9
16,895	5,24359	1076	60	29,658	3,00975	207	11,5
18,227	4,86334	500	27,9	29,819	2,99388	604	33,7
19,109	4,64073	148	8,2	30,421	2,93596	132	7,4
19,49	4,55085	1045	58,2	30,609	2,91837	133	7,4
20,998	4,22731	211	11,8	31,383	2,84817	131	7,3
21,177	4,19195	168	9,3	32,048	2,79050	154	8,6
21,982	4,04035	1230	68,6	32,116	2,78480	146	8,1
22,124	4,01471	1146	63,9	33,78	2,65134	233	13
22,82	3,89385	904	50,4	35,079	2,55608	119	6,6
23,017	3,86082	475	26,5	35,267	2,54289	123	6,9
23,321	3,81127	295	16,5	36,866	2,43614	89	5
23,459	3,78909	282	15,7	37,84	2,37564	88	4,9
23,961	3,71094	701	39,1	39,182	2,29730	102	5,7
24,159	3,68094	1504	83,8	39,406	2,28477	104	5,8

Hydrát polymorfu A zlúčeniny I

Údaje rontgenovej práškovej difrakcie

Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita	Uhol	Hodnota d	Intenzita	Intenzita
2θ	Á	počet	%	2Θ	Ä	počet	%
7,261	12,16414	447	100	18,657	4,75222	48,4	10,8
9,1	9,70988	25,6	5,7	18,779	4,72155	35,7	8
9,626	9,18058	31	6,9	18,859	4,70171	43,7	9,8
10,796	8,18860	283	63,2	19,276	4,60089	82	18,3
11,858	7,45707	170	38	19,504	4,54766	46	10,3
13,218	7,23806	51,8	11,6	20,22	4,38821	28	6,3
12,261	7,21317	79,4	17,7	20,655	4,29677	133	29,7
12,302	7,18922	78	17,4	21,68	4,09588	163	36,4
12,97	6,82039	173	38,7	21,86	4,06263	223	49,8
14,462	6,11993	132	29,5	22,316	3,98062	88,8	19,8
14,518	6,09637	138	30,8	22,537	3,94207	254	56,7
15,19	5,82798	229	51,2	22,579	3,93478	281	62,7
15,402	5,74824	114	25,6	22,901	3,88013	78	17,4
15,866	5,58141	222	49,6	23,673	3,75541	84	18,8
15,906	5,56750	196	43,9	24,507	3,62946	46	10,3
16,08	5,50763	102	22,7	25,469	3,49445	203	45,4
16,127	5,49137	117	26,1	26,087	3,41311	128	28,6
16,178	5,47423	112	25,1	27,754	3,21175	56	12,5
16,221	5,46004	78	17,4	28,613	3,11725	65	14,5
16,357	5,41482	65,9	14,7	29,291	3,04663	57	12,7
16,418	5,39480	7103	15,9	29,935	2,98248	43	9,6
17,189	5,15467	146	32,6	32,747	2,73253	63	14,1
17,345	5,10866	105	23,5	34,176	2,62146	32	7,2
18,57	4,77428	71	15,9	38,848	2,31630	31	6,9

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (7)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. 7-(l, 1 -Dimetyl etyl )-6-(2-ctyl-2//-l ,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfenyl)-1,2,4-triazol[4,3-/>]pyridazín.
2. 2. Polymorf A 7-(l,l-dimetyletyl)-6-(2-etyl-27/-l,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfenyl)-I,2,4-triazol[4,3-Z>]pyridazínu, ktorý má XRPD difraktogram s dvoma vrcholmi pri 20 « 7,3°
3. 3. Spôsob prípravy 7-(l,l-dimetyletyl)-6-(2-ctyl-2H-1,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfenyl)-1,2,4-triazol[4,3-ô]pyridazínu podľa nároku 1 alebo 2, ktorý zahŕňa: (A) reakciu zlúčeniny vzorca (III) so zlúčeninou vzorca (IV) kde L³ znamená vhodnú odstupujúcu skupinu, alebo (C) reakciu kyseliny trimetyloctovej so zlúčeninou vzorca (ΧΙΠ) (IV), (ΧΠΙ) kde Ľ znamená vhodnú odstupujúcu skupinu, alebo (B) reakciu zlúčeniny vzorca (XI) (alebo jeho 1,2,4-triazolo[4,3-ú]pyridazin-6-ónového tautoméru) so zlúčeninou vzorca (XII) v prítomnosti dusičnanu strieborného a peroxosíranu amónneho, alebo (D) reakciu zlúčeniny vzorca (XIV) so zlúčeninou vzorca (XV)

   F (XV), kde M znamená -B(OH)₂ alebo -Sn(Alk)₃, kde Alk znamená C]_₆ alkylovú skupinu, a L⁴ znamená vhodnú odstupujúcu skupinu, v prítomnosti prechodného kovu ako katalyzátora.
4. 4. Spôsob podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým, že reakcia (A) sa uskutoční v l-mctyl-2pyrolidinóne v prítomnosti hydroxidu sodného pri teplote v oblasti okolo 0 °C.
5. 5. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje 7-(l,l-dimctyletyl)-6-(2-etyl-2//-1,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfenyl)-1,2,4-triazol-[4,3-i]pyridazín spolu s farmaceutický prijateľným nosičom.
6. 6. 7-(1,1 -Dimctyletyl)-6-(2-etyl-2//-1,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfenyl)- í ,2,4-triazol[4,3-Z>]pyridazín na použitie na liečenie a/alebo prevenciu úzkosti.
7. 7. Použitie 7-(l, 1 -dimetyletyl)-6-(2-etyl-2ŕ/-1,2,4-triazol-3-ylmetoxy)-3-(2-fluórfenyl)-1,2,4-triazol[4,3-h]pyridazínu na výrobu lieku na liečenie a/alebo prevenciu úzkosti.