SK282377B6 - Použitie dimerizovanej formy lyzozýmu a farmaceutický prostriedok s jeho obsahom - Google Patents
Použitie dimerizovanej formy lyzozýmu a farmaceutický prostriedok s jeho obsahom Download PDFInfo
- Publication number
- SK282377B6 SK282377B6 SK40-95A SK4095A SK282377B6 SK 282377 B6 SK282377 B6 SK 282377B6 SK 4095 A SK4095 A SK 4095A SK 282377 B6 SK282377 B6 SK 282377B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- lysozyme
- lysozyme dimer
- tnf
- dimer
- antibiotic
- Prior art date
Links
- 239000000539 dimer Substances 0.000 title claims abstract description 103
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 title claims abstract description 102
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 title claims abstract description 102
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 title claims abstract description 102
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 title claims abstract description 102
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 title claims abstract description 102
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 title claims abstract description 102
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title abstract description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 31
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 19
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 claims abstract description 11
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000037125 natural defense Effects 0.000 claims abstract description 9
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims abstract description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 72
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims description 51
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 29
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 26
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 19
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 13
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 claims description 13
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 9
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 claims description 7
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 6
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 4
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 4
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 claims description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 3
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 3
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 claims description 2
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 claims description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 claims description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 claims description 2
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 claims 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 30
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 26
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 25
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 21
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 21
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 21
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 20
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 20
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 13
- 244000309466 calf Species 0.000 description 13
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 10
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 10
- 108010005627 KLP602 Proteins 0.000 description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 8
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 8
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 8
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 8
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 8
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 8
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 7
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 7
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 6
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 6
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 6
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 5
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 5
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 5
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 5
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000003532 endogenous pyrogen Substances 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 4
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 3
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 3
- 201000004813 Bronchopneumonia Diseases 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 3
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 3
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 3
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 3
- BMQYVXCPAOLZOK-UHFFFAOYSA-N Trihydroxypropylpterisin Natural products OCC(O)C(O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 3
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 3
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 3
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 3
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 2
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 description 2
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- 206010024774 Localised infection Diseases 0.000 description 2
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101000794214 Staphylococcus aureus Toxic shock syndrome toxin-1 Proteins 0.000 description 2
- 241000194054 Streptococcus uberis Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical class CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 2
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 2
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- RDLPVSKMFDYCOR-UEKVPHQBSA-N cephradine Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CCC=CC1 RDLPVSKMFDYCOR-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 208000021760 high fever Diseases 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- BMQYVXCPAOLZOK-XINAWCOVSA-N neopterin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-XINAWCOVSA-N 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 2
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 229940115922 streptococcus uberis Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 2
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101001023095 Anemonia sulcata Delta-actitoxin-Avd1a Proteins 0.000 description 1
- 206010003011 Appendicitis Diseases 0.000 description 1
- 101000641989 Araneus ventricosus Kunitz-type U1-aranetoxin-Av1a Proteins 0.000 description 1
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 208000031504 Asymptomatic Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 101001028691 Carybdea rastonii Toxin CrTX-A Proteins 0.000 description 1
- 101000685083 Centruroides infamatus Beta-toxin Cii1 Proteins 0.000 description 1
- 101000685085 Centruroides noxius Toxin Cn1 Proteins 0.000 description 1
- 101001028688 Chironex fleckeri Toxin CfTX-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 101000644407 Cyriopagopus schmidti U6-theraphotoxin-Hs1a Proteins 0.000 description 1
- 206010012455 Dermatitis exfoliative Diseases 0.000 description 1
- 206010014824 Endotoxic shock Diseases 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 206010016936 Folliculitis Diseases 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 208000031957 HIV carrier Diseases 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 208000003623 Hypoalbuminemia Diseases 0.000 description 1
- 208000013038 Hypocalcemia Diseases 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010024971 Lower respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- BYPFEZZEUUWMEJ-UHFFFAOYSA-N Pentoxifylline Chemical compound O=C1N(CCCCC(=O)C)C(=O)N(C)C2=C1N(C)C=N2 BYPFEZZEUUWMEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 101000679608 Phaeosphaeria nodorum (strain SN15 / ATCC MYA-4574 / FGSC 10173) Cysteine rich necrotrophic effector Tox1 Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 208000035109 Pneumococcal Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000018569 Respiratory Tract disease Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 1
- 241000589970 Spirochaetales Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 206010061372 Streptococcal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010044250 Toxic shock syndrome staphylococcal Diseases 0.000 description 1
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 201000009840 acute diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000035618 desquamation Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 150000002066 eicosanoids Chemical class 0.000 description 1
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 208000001780 epistaxis Diseases 0.000 description 1
- 230000010429 evolutionary process Effects 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000000705 hypocalcaemia Effects 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000007233 immunological mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012750 in vivo screening Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 108010052620 leukocyte endogenous mediator Proteins 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 238000002794 lymphocyte assay Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 230000000897 modulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000027531 mycobacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 201000002765 pyometritis Diseases 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 208000020029 respiratory tract infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002435 rhinoplasty Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 231100000046 skin rash Toxicity 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 208000017756 staphylococcal toxic-shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000003390 teratogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Je opísané použitie dimerizovanej formy lyzozýmu ako účinnej zložky na výrobu lieku na profylaxiu alebo liečenie stavu vyžadujúceho moduláciu a posilnenie prirodzeného obranného mechanizmu zvierat a ľudí, ktorý zahŕňa najmenej jeden z nasledujúcich účinkov: inhibícia uvoľňovania faktorov nekrotizujúcich nádory TNF, pokles hladiny faktorov nekrotizujúcich nádory, posilnenie fagocytózy, zvýšenie uvoľňovania interferónu, zvýšenie hodnôt IL-6. Ďalej je opísaný farmaceutický prostriedok vo forme apyrogénneho sterilného prípravku, obsahujúci dimér lyzozýmu a najmenej minimálnu inhibičnú koncentráciu MIC antibiotika.ŕ
Description
Oblasť techniky
Predkladaný vynález sa týka nových medicínskych použití diméru lyzozýmu a prípravkov, ktoré takýto dimér obsahujú. Nové použitia súvisia s liečbou určitých dysfúnkcií prirodzených obranných mechanizmov.
Doterajší stav techniky
Enzýmy vo svojich monomémych formách sú už dávno známe ako terapeuticky aktívne pri liečbe rôznych ochorení.
Lyzozým objavil Fleming v r. 1922, ale do r. 1950 neboli odhalené jeho enzymatické funkcie. Odvtedy sa táto zlúčenina stala predmetom intenzívneho výskumu a zaznamenali sa rôzne terapeutické účinky. Medzi inými sú to antivírusové, antibakteriálne, protizápalové a antihistamínové vlastnosti. Ale, terapeutické použitie lyzozýmu bolo dosť limitované kvôli negatívnym vedľajším účinkom monomémej formy.
Toto limitovanie praktického použitia lyzozýmu a iných terapeuticky aktívnych enzýmov bolo prekonané koncom 80-tych rokov, keď boli objavené a izolované ich dimenzované formy, pretože tieto zachovávajúc si všetky pozitívne vlastnosti monomémych foriem, nemajú žiadne negatívne vedľajšie účinky, ak sú používané v terapeutických dávkach. Prípravky s antivírusovým a antibakteriálnym účinkom obsahujúce ako aktívnu súčasť dimér lyzozýmu alebo iné dimenzované enzýmy boli opísané v WO 89/11294, kde je uvedené, že lyzozýmový dimér v testoch in vitro inhĺboval proliferáciu množstva bakteriálnych kmeňov kultivovaných vo vzorkách od pacientov v koncentráciách 5 až 20 mg/ml kultúry. Bolo tam tiež uvedené, že dimér bol účinný pri liečbe infekcií zapríčinených psím parvovírusom (CPV), keď bol podávaný perorálne 2 x denne v dávke 1 až 2 mg/kg telesnej hmotnosti.
Pretože výskumná práca na vynáleze pokračovala, zistili sa ďalšie významné vlastnosti dimérov lyzozýmu a vyvinuli sa nové možnosti terapeutického použitia.
V klinických testoch uskutočňovaných kvôli potvrdeniu antibakteriálnej a antivírusovej účinnosti diméru lyzozýmu sa s prekvapením zistilo, že dimér je nečakane účinný pri liečbe akútnych foriem ochorení zažívacieho a respiračného traktu. Preto sa nové výskumy vykonávali so zameraním na určenie účinku diméru lyzozýmu v tých Štádiách rôznych ochorení, kde zlyhávajú prirodzené obranné mechanizmy.
Je známe, že bakteriálne toxíny tvoria jednu skupinu v mnohých faktoroch virulencie, pomocou ktorých baktérie zapríčiňujú ochorenia. Niektoré nedávne pokroky v poznatkoch o bakteriálnych toxínoch sa týkajú ich interakcie s imunitným systémom hostiteľa.
Táto interakcia sa najprv prejaví v imunomodulácii a potom v uvoľňovaní cytokínov a iných mediátorov, ktoré sú zodpovedné za množstvo fyziologických porúch zapríčinených toxínmi. Druhý z účinkov bol sledovaný zvlášť so zameraním na pôsobenie endotoxínu, ktorý zohráva dôležitú úlohu v patogenéze gramnegatívnej sepsy (pozri Bayston, D. F., Cohen, J.: Bakteriálne endotoxíny a súčasné koncepcie v diagnostike a preliečovaní endotoxémie;
J. Med. Microbiol., 1990, 31: 73 až 83). Hoci úloha exotoxínov pri infekciách zapríčinených zlatým stafylokokom pyogénnym streptokokom je známa dávno, bolo to poznanie syndrómu stafylokokového toxického šoku, čo viedlo k zvýšenému záujmu o exotoxíny produkované týmito organizmami.
Toxický šok je vážne ochorenie charakterizované vysokou horúčkou, hypotenziou, kapilárnym priesakom, difúznou erytrodermou, mukóznym eiytémom, nefropatiou, hypokalcémiou, hypoalbuminémiou a deskvamáciou červenej kožnej vyrážky. Mnoho prípadov syndrómu toxického šoku súvisí s používaním vaginálnych tampónov počas menštruácie, ale syndróm sa čoraz častejšie opisuje bez súvisu s menštruáciou u oboch pohlaví, s častým výskytom po chirurgických zákrokoch, keď sa obväzový materiál necháva v mieste zákroku, napríklad nazálne náplne po rhinoplastike alebo vážnej epistaxii. Ukázalo sa, že stafylokokové kmene izolované z vagíny pacientiek so syndrómom toxického šoku (TSS) produkujú toxín 1 syndrómu toxického šoku (TSST-1), ale prameňom mikroorganizmu produkujúceho TSST-1 môže byť aj inaparentná infekcia. Počiatočná bakterémia môže byť inaparentná, ale po týždňoch alebo mesiacoch môže viesť k rozvinutiu lokalizovaných infekcií. Sprievodným znakom týchto infekcií môže byť zaznamenanie syndrómu sepsy alebo septického šoku. Zriedkavejšia, ale závažnejšia bakterémia sa môže vyskytnúť v neprítomnosti vstupných alebo súvisiacich lokalizovaných infekcií a v týchto prípadoch môže prevažovať šok, endokarditída, diseminovaná intravaskuláma koagulopatia a multiorgánové zlyhanie (pozri Stevens, D. L. et al.; Gram-positive shock; Current Opinions in Infectious Diseases 1992, 5: 355 až 363).
V niektorých sledovaniach sú zahrnuté aj ďalšie grampozitívne baktérie. Napríklad infekcia spôsobená pyogénnym streptokokom súvisí so šokom a predstavuje 30 % úmrtnosť. Streptococcus pneumoniae je pôvodcom zápalu pľúc, známy s vysokým stupňom rezistencie na penicilín a tendenciou rozvinutia šokového syndrómu. Navyše, pacienti s AIDS majú výskyt pneumokokových infekcií vyšší ako celá populácia.
Infekcie gramnegatívnymi baktériami môžu tiež vyústiť do sepsy alebo septického šoku. Gramnegatívne bacily a vibriá sú prameňom väčšiny dôležitých enterotoxínov. Enterotoxín je lipopolysacharidová (LPS) zložka vonkajšej membrány bunkových stien gramnegatívnych baktérií. Enterotoxíny primáme negatívne ovplyvnia črevný trakt a obvykle spôsobujú hnačku. Najčastejšími infekciami spôsobenými gramnegatívnymi baktériami u zvierat i ľudí sú infekcie vyvolané Escherichiou coli. Značná dehydratácia, ktorá sprevádza takéto infekcie, môže spôsobiť smrť postihnutého jedinca. Podľa Svetovej zdravotníckej organizácie, akútna hnačka spôsobuje ročne smrť asi 3,2 miliónom detí v rozvojových krajinách. Približne 30 % všetkých prípadov sepsy je spôsobených gramnegatívnymi baktériami.
Sepsa zapríčinená grampozitívnymi a gramnegatívnymi baktériami je vždy vážny problém, spoločný všetkým krajinám. V USA sa ročne vyskytne približne 400 000 prípadov a úmrtnosť je približne 50 %.
V posledných rokoch sa sepsa a septický šok stali predmetom množstva publikácií. Zistilo sa, že v patofyziológii septického šoku, endotoxémie a inej bakteriálnej intoxikácie zohrávajú hlavnú úlohu mediátory. Tieto zahrnujú faktorom nekrotizujúcim nádory (TNF), interleukín-1 (IL-1), interferón (IFN), faktor aktivity platničiek a eikosanoidy (deriváty kyseliny arachidónovcj); zo všetkých je najdôležitejší TNF, ktorý ovplyvňuje tak imunitné, ako aj fagocytáme systémy (pozri Berkowitz, F. E.: Bacterial toxín in pathogenesis of infection; Current Opinions in Infectious Diseases, 1991, 4: 332 až 337). U tých, ktorí neprežili, sa zistili vyššie koncentrácie TNF a interleukínu-L Množstvo autorov informovalo o zvýšených hladinách TNF-α v plazme a v krvi pacientov so septickým šokom. Tiež sa ukázalo, že toxický účinok TNF-α asi až natoľko nezávisí od koncentrácií TNF ako od jeho perzistencie v tele.
Mnoho autorov sledovalo možnosť modulácie cytokínovej lavíny pri sepse a septickom šoku. Publikované úspešné návrhy zahrnujú použitie monoklonálnych anti-TNF protilátok a neutralizáciu lipopolysacharidu antilipopolysacharidom. Protilátky však nezvyšujú bakteriálnu klírens. Čiastočne pozitívne účinky boli tiež zistené, ak sa použili agensy ako dexametazón a pentoxyfylín, ktoré blokujú produkciu TNF pomocou makrofágov.
Je tiež známe, že iné cytokíny sa tiež podieľajú na septickom šoku. V takomto prípade majú liečby, ktoré modulujú cytokinovú lavínu pri septickom šoku, schopnosť interferencie s ovládnutím infekcie, keďže obrana hostiteľa je závislá od tých istých zápalových cytokínov. Nachádzanie spôsobov prevencie septického šoku je nadmieru dôležité, pre ich účinnú pomoc veľkému počtu pacientov. Pre tieto dôvody sa javí ako základ regulácia hladín TNF.
Podobne kritická je úloha TNF v iných obranných mechanizmoch, ako je horúčka, ktorá je fyziologickou odpoveďou na infekciu aje typická v podstate pre všetky vyššie živočíchy a pre človeka. Päť pyrogénnych cytokínov (interleukín-1, TNF, interferón, interleukín-2 a interleukín-6) je v súčasnosti považovaných za základné endogénne mediátory febrilitnej odpovede, inhibujúc preoptické neuróny citlivé na teplo, ktoré za normálnych podmienok uľahčujú výdaj tepla a potláčanie produkcie tepla v ľudskom organizme. Horúčka a jej mediátory majú schopnosť poškodiť invazívny organizmus i hostiteľa. Za posledné roky sa zhromaždili významné údaje, ktoré naznačujú, že interleukín-1, TNF a interleukín-6 sprostredkúvajú patofyziologické abnormality infekcii. Keďže sa endogénne pyrogény podieľajú na patologickom procese rôznych infekcií, tak mediátory, ako aj febrilitná odpoveď sú potenciálne škodlivé pre hostiteľa. Najpresvedčivejší dôkaz v tejto súvislosti pochádza zo štúdií gramnegatívnej sepsy. Existuje tiež dôkaz, že endogénne pyrogény sprostredkujú systémové a lokálne manifestácie sepsy zapríčinenej grampozitívnymi baktériami, AIDS, spirochétovými infekciami, meningitídou, syndrómom respiračnej úzkosti dospelých, hnisavou artritídou a mykobakteriózou. Hoci sú spomenuté údaje v rozpore s faktom, že samotná febrilitná odpoveď zvyšuje rezistenciu proti infekcii u experimentálnych zvierat, ochrana druhov, viac ako prežitie jednotlivca je základom evolučného procesu. Prípadne škodlivé systémové účinky pyrogénnych cytokínov na následky odolávajúcich infekcií (napríklad gramnegatívna sepsa) sú adaptované ako pozitívne lokálne účinky horúčky pri menej fulminantných infekciách. Preto urýchlením smrti beznádejne infikovaných jedincov, príroda usmrcuje jednotlivcov, ktorí sú nebezpeční pre druh. Takým spôsobom môže byť druh ako celok chránený pred epidemickými chorobami (pozri Makowiak, P. A.: Mechanism of Fever; Current Opinious in Infectious Diseases, 1992,5: 348 až 354).
Fundamentálne poňatie patogénov horúčky je také, že exogénne pyrogény, bez ohľadu na ich pôvod alebo štruktúru, zapríčiňujú horúčku navodením buniek hostiteľa na produkciu endogénnych pyrogénov. Podľa toho terapeutické metódy založené na použití protilátok antiendogénneho pyrogénu a antagonistov receptora endogénneho pyrogénu môžu byť účinné.
Jednou z možností je blokáda biosyntézy TNF. Sledovania na zvieratách ukazujú, že TNF by mohol byť produkovaný pred IL-1 a inými cytokínmi v reťazci odpovede na infekciu. Podľa mnohých vedcov inhibícia biosyntézy TNF tiež znamená zastavenie biosyntézy IL-1. Ale inhibícia bio syntézy TNF tiež znamená zastavenie škodlivých účinkov niektorých fulminantných a beznádejných infekcií.
TNF je tiež známy ako jeden z mediátorov zápalových procesov. Zápal je v mnohých prípadoch prvým štádiom ochorenia, v prirodzenom priebehu ktorého sa rozvinie septický šok. V situácii, kde je porušená kontinuita tkanív, ako napríklad v ranách citlivých na infekciu, vojnových zraneniach, najmä v ranách v brušnej dutine (peritonitída), pri chorobách tráviaceho traktu, ako sú akútne infekcie sprevádzajúce apendicitídu, pri akútnych bakteriálnych a vírusových infekciách, ako sú pochrípkový zápal pľúc, neoplastické ochorenia, najmä vo fáze rozpadu tumorov a podobne, je zápal prvým symptómom zvýšenia produkcie TNF. Regulovanie hladiny TNF by preto bolo želateľnou liečbou týchto infekcií.
Čoraz viac sa sleduje úloha TNF pri AIDS. AIDS je charakterizovaný hlbokou imunodeficienciou. Hlavným znakom AIDS je znížené množstvo CD4+ lymfocytov. Počet buniek infikovaných HIV, etiologickým agensom AIDS -je relatívne nízky (< 1 v 100 až 1000) i v mononukleárnych bunkách periférnej krvi (PBMC) pacientov s AIDS. Zatiaľ čo prednostne sú infikované CD4+ lymfocyty, tieto bunky nie sú výhradnými cieľmi HIV infekcie. Posledné výsledky ukázali, že spektrum cieľových buniek HIV môže byť dosť široké. Jasné rozdiely sa zistili v dôsledkoch HIV infekcie v monocytoch/makrofágoch verzus T-lymfocyty. Zatiaľ čo T-lymfocyty majú tendenciu byť porušené, monocyty/makrofágy pripúšťajú perzistentnú infekciu. HIV preto môže byť uchovávaný ako zásoba monocytmi/makrofágmi ako aj inými bunkami. Odpoveď proti HIV typu monocyt/makrofág by mohla byť zodpovedná za stanovenie latencie u hostiteľa; táto odpoveď môže tiež zapríčiňovať patogénne dôsledky pochádzajúce z rozpustných faktorov produkovaných infikovanými bunkami (pozri Toshifumi Matsuyama et al.: Cytokines and HIV infection: Is AIDS a Tumor Necrosis Factor disease?; AIDS 1991, 5: 1405 až 1417). Mnoho vedcov uviedlo, že humánne T-bunkové línie infikované HTLV-1 sú vysoko citlivé na HIV infekciu, dokazujúc závažný cytopatogénny účinok v súvislosti so zvýšenou replikáciou HIV. Na dodatok, bunky infikované HIV sú citlivé na poškodenie supematantom týchto buniek. Zo stanovenia vírusového titra po opracovaní týmto supematantom sa zistilo, že faktor produkovaný T-bunkami (MT-2) zvýšil replikáciu HIV. Faktor bol identifikovaný ako TNF-β a toto zistenie je v súlade so správami, že T-bunky (MT-2) produkujú TNF-β. Ten istý účinok sa pozoroval, keď bol použitý TNF-α. TNF-α a TNF-β selektívne usmrcovali bunky infikované HIV a zvyšovali replikáciu HIV. Tiež bolo uvedené, že HIV infikované T-bunkové línie a čerstvo izolovaný PBMC od HIV infikovaných jedincov reagovali na TNF zvýšenými hladinami. Toto naznačuje, že taká istá HIV expresia sa podobne vyskytuje aj in vivo. V skutočnosti zvyšujúca sa aktivita TNF by mohla byť neutralizovaná anti-TNF protilátkami. Zvýšenie HIV replikácie po opracovaní TNF-α a TNF-β je až 10-násobné (pozri Yakamam, A. et al.: Tumor necrosis faktory (α, β) induced by HIV-1 in peripheral blood monocellular cells potentate virus replication; AIDS 1990, 421 až 427).
Tiež sa potvrdilo, že rôzne cytokíny môžu ovplyvniť produkciu HIV. Použitím purifikovaných mononukleárnych fagocytov z normálnej periférnej krvi bola pozorovaná tak indukcia 11-6, ako aj indukcia TNF-α o niekoľko hodín po expozícii HIV. Táto indukcia cytokínu bola tiež pozorovaná pri použití teplom inaktivovaného HIV. Na základe toho mnoho výskumov a Toshifumi Matsuyama et al. (op. cit.) sú presvedčení, že AIDS predstavuje cytokínové alebo TNF ochorenie. V cytokínovej sieti AIDS, TNF-α a TNF-β sa zdajú ako kľúčové molekuly zvyšujúce replikáciu HIV, ako aj indukujúce ich vlastnú expresiu iných cytokínov. Ukázalo sa, že TNF-α stimuluje uvoľňovanie iných cytokínov v rôznych typoch buniek, a preto má byť kľúčovým cytokínom v škále cytokínov v prvom obrannom mechanizme.
Bolo zaznamenané, že mnoho symptómov súvisiacich s AIDS možno vysvetliť uvoľňovaním cytokínov rozličných biologických funkcií. Zvýšená produkcia IL-1 a TNF-a, dvoch dobre známych pyrogénov by mohla vysvetliť horúčku pozorovanú u pacientov s AIDS. TNF-α môže byť zahrnutý do AIDS súvisiacej kachexie. TNF-α, ako aj TNF-β účinkujú ako imunomodulátoty a efektorové molekuly v cytotoxicite sprostredkovanej monocytmi. Ďalej je TNF zodpovedný za aktiváciu imunitnej odpovede a môže priamo usmrcovať bunky infikované HIV, teda zvyšovať replikáciu HIV. Navrhol sa tiež imunologický mechanizmus na vysvetlenie deplécie CD4-T buniek pri AIDS (Matsuyama et al.:, op. cit.). Bolo tiež uvedené, že s AIDS súvisiaci Kaposiho sarkóm je tiež indukovaný pomocou TNF-α: TNF-a môže byť produkovaný z keratinocytov pomocou fyziologických stimulov, ako sú ultrafialové žiarenie, ktoré sa môže zúčastňovať na indukcii IL-6 v koži a na vývoji Kaposiho sarkómu pri AIDS. V testoch in vitro môže TNF-α poškodiť myelín a oligodendrocyty; tiež niektoré bunkové línie odvodené od gliómu sa ukázali ako citlivé proti antiproliferatívnemu účinku TNF-α. Toto môže viesť k predpokladu, že dysfunkcia centrálneho nervového systému u pacientov s AIDS je výsledkom pôsobenia TNF-α. Niekoľko odkazov ukázalo, že sérové hladiny TNF-α a IL-1 sú výrazne zvýšené s rozvojom AIDS a ARC (komplex súvisiaci s AIDS), zatiaľ čo v testoch séra asymptomatických nosičov HIV dosahujú rozmedzie ako pri zdravých kontrolách. Podľa Matsuyamu et al. (op. cit.), AIDS je rovnako TNF ochorením ako ochorením HIV. To ukazuje, že získavanie kontroly nad TNF indukciou môže viesť k úspešnej terapii u pacientov s AIDS.
Podstata vynálezu
Nasledovné základné zistenia umožnili riešiť uvedené problémy a nájsť nové terapeutické použitie diméru lyzozýmu za opísaných patologických podmienok.
1. Dimér lyzozýmu inhibuje syntézu TNF,
2. Dimér lyzozýmu stimuluje syntézu IFN-a,
3. Dimér lyzozýmu zvyšuje fagocytámu aktivitu.
Predmetom predkladaného vynálezu je teda použitie dimenzovanej formy lyzozýmu ako účinnej zložky na výrobu lieku na profylaxiu alebo liečenie stavu, ktorý vyžaduje moduláciu a posilnenie prirodzeného obranného mechanizmu u zvierat a ľudí. Kde uvedená modulácia a posilnenie prirodzeného obranného mechanizmu zahrnuje najmenej jeden a nasledujúcich krokov: inhibíciu uvoľňovania faktorov nekrotizujúcich nádory - TNF, pokles hladiny faktorov nekrotizujúcich nádory, posilnenie fagocytózy, zvýšenie uvoľňovania interferónu, zvýšenie hodnôt interleukínu-6.
Ďalej bolo predmetom predkladaného vynálezu pripraviť farmaceutické prípravky terapeuticky vhodné na liečbu ochorení súvisiacich s nadbytočné vysokými hladinami TNF (faktory nekrotizujúce nádory), ako je opísané.
Ďalším predmetom vynálezu bolo pripraviť farmaceutické prípravky vhodné v profylaxii ochorení súvisiacich s nadbytočné vysokými hladinami TNF, ako je opísané.
Okrem toho bola ďalším predmetom vynálezu príprava farmaceutických prípravkov a hygienických produktov potrebných pri terapii a prevencii ochorení súvisiacich s nadmerne vysokými hladinami TNF.
Podľa vynálezu jeho uvedené zámery môžu byť dosiahnuté nasledovnými novými použitiami dimerizovanej formy lyzozýmu a nových farmaceutických prípravkov obsahujúcich dimér lyzozýmu ako aktívnu zložku:
- použitie diméru lyzozýmu na výrobu liečiva inhibujúceho biosyntézu faktorov nekrotizujúcich nádory u zvierat a ľudí;
- použitie diméru lyzozýmu na výrobu farmaceutického prípravku na liečbu ochorení súvisiacich s nadmerne vysokými hladinami faktorov nekrotizujúcich nádory;
- použitie diméru lyzozýmu na výrobu farmaceutického prípravku na profylaxiu ochorení súvisiacich s nadmerne vysokými hladinami faktorov nekrotizujúcich nádory;
- použitie diméru lyzozýmu na výrobu liečiva na reguláciu HlV-indukovaného uvoľňovania faktorov nekrotizujúcich nádory u asymptomatických nosičov a u pacientov s AIDS-súvisiacim komplexom;
- použitie diméru lyzozýmu na výrobu farmaceutických prípravkov na liečbu AIDS;
- použitie diméru lyzozýmu na výrobu farmaceutického prípravku na prevenciu a/alebo liečbu sepsy alebo septického šoku;
- použitie diméru lyzozýmu na výrobu farmaceutického prípravku na prevenciu a/alebo liečbu kachexie;
- použitie diméru lyzozýmu na výrobu farmaceutického prípravku na prevenciu a/alebo liečbu horúčky;
- injekcie s obsahom diméru lyzozýmu v množstve 0,01 až 10 mg/ml, výhodne 0,1 až 1,0 mg/ml apyrogénneho sterilného prípravku obsahujúceho fyziologicky prijateľné rozpúšťadlo a farmaceutický schválenú konzervačnú látku;
- injekcie, ako je uvedené, na i. v. podávanie v jednej alebo v opakovanej dávke 0,02 mg/kg telesnej hmotnosti;
- tampóny a antiseptické obväzy impregnované a masti alebo gély s obsahom účinných dávok diméru lyzozýmu na prevenciu sepsy a septického šoku a na liečbu infikovaných rán;
- vaginálne tampóny impregnované účinnou dávkou diméru lyzozýmu na použitie počas menštruácie.
Ako dimenzovaná forma sa výhodne používa purifikovaný dimér lyzozýmu. V niektorých aplikáciách je možné použiť prípravky, ktoré okrem diméru lyzozýmu obsahujú tiež malé frakcie triméru a vyššie oligoméry enzýmu.
Injekcie môžu byť podľa predkladaného vynálezu podávané aj intramuskuláme alebo hypodermálne. V niektorých aplikáciách môže byť tiež vhodné podávať ten istý tekutý prípravok (súčasne alebo nezávisle) intrauterinne a do vemena - alebo lokálne - prípadne spolu s inými povrchovými prípravkami.
Výhodné apyrogénne sterilné prípravky obsahujúce aspoň jedno fyziologicky prijateľné rozpúšťadlo a/alebo aspoň jednu farmaceutický schválenú konzervačnú prísadu pozostávajú z apyrogénnej sterilizovanej vody alebo vodného roztoku PBS ako rozpúšťadla a z tiomerzalu ako schválenej konzervačnej látky pre bielkovinové farmaceutické prípravky.
Dimerizovaná forma lyzozýmu sa dá získať pomocou kontrolovanej polymerizácie monoméru enzýmu s následnou opatrnou purifikáciou, predovšetkým odstránením monomémej formy s uvedenými toxickými účinkami a trimérov a frakcií vyšších oligomérov zo zmesi po reakcii. Akýkoľvek známy spôsob polymerizácie môže byť vhodný na získanie dimémej formy enzýmu. Jeden spôsob výroby obsahujúci purifikačné kroky bol opísaný vo WO 91/10731.
Predchádzajúce pre-klinické testy diméru lyzozýmu nevykázali žiadne mutagénne alebo teratogénne účinky a žiadne alebo veľmi slabé tolerančné účinky. Toxicita jednotlivej dávky pri perorálnej/dermálnej aplikácii LD50 bola nemerateľná (> 2000 mg/kg), pri i. v. aplikácii LD50 bola > 1000 mg/kg.
Nové aplikácie diméru lyzozýmu uvádzané v súčasnosti majú dokázateľne pevné základy v in vitro testoch a v účinných klinických aplikáciách in vivo. Boli tiež prevedené niektoré komparatívne štúdie.
Uznáva sa, že inhibičný vplyv na uvoľňovanie TNF je taký účinný vďaka širšiemu spektru aktivity diméru lyzozýmu, najmä jeho schopnosti indukovať uvoľňovanie IFN a jeho podporujúcemu účinku na fagocytózu. Práve tieto dve spomenuté vlastnosti sú dôležitými faktormi v prirodzených obranných mechanizmoch. Podľa toho, terapeutické a profylaktické účinky identifikovaných nových použití diméru lyzozýmu sú podporované prirodzenými obrannými mechanizmami súčasne zosilňované nimi samými.
Predkladaný vynález bude ďalej objasnený v príkladoch, kde budú grafické znázornenia zvlášť zaujímavých výsledkov spolu s opisom.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 znázorňuje in vitro supresiu uvoľňovania TNF v lymfocytámej kultúre suboptimálne stimulovanej ConA v prítomnosti diméru lyzozýmu v rôznych riedeniach.
Obr. 2 vyjadruje hladinu TNF v krvi teliat 9 (experimentálne zistenie).
Obr. 3 vyjadruje hladinu IFN v krvi teliat (experimentálne zistenie), v komparatívnom teste na terapeutickú účinnosť liečiv podľa vynálezu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Na stanovenie imunoaktivity diméru lyzozýmu, bol použitý test na ľudských lymfocytoch z periférnej krvi s FACS analýzou.
Mitogénna stimulácia v humánnych periférnych lymfocytoch je dobre zavedená metóda na testovanie reaktivity väčšiny dôležitých buniek imunitného systému. Na testovanie vplyvu terapeutických látok na aktiváciu a proliferáciu lymfocytov od zdravých darcov krvi, sa pridáva mitogén v suboptimálnej dávke a lymfocytáma odpoveď je nakoniec meraná kvantitatívne s imunorelevantnými parametrami. Výsledky sa porovnajú s kontrolnou hodnotou nameranou bez mcdikácie.
Na stimuláciu lymfocytov sa použil ConA v koncentrácii 20 pg/ml média. Počiatočná koncentrácia buniek bola 106 buniek/ml. Krátkodobé kultivácie boli vykonávané v CO2 inkubátore počas 1 (IL-2 receptory na lymfocytoch a HLA-Dr) alebo 2 dní (všetky ostatné testy). Merali sa nasledovné parametre ako kritériá celulámej aktivácie:
- neopterín (marker imunitnej aktivácie),
- β-2-mikroglobulín (tiež marker aktivácie),
- interleukín-2 (T helper lymfocyt odvodený z autokrínnej a parakrínnej látky),
- interleukín-6 (hormón bunkovej diferenciácie),
- faktor nekrotizujúci nádory - TNF (vazoaktívny, multiúčinný interleukín),
- interferón-a (diferenciačný faktor, hlavne pre B-lymfocyfy)>
- tymidínkináza (enzým nadregulovaný v proliferačných bunkách),
- lymfocytámy receptor interleukínu-2 (akceptorová molekula pre autokrínny a parakrínny IL-2),
- lymfocyt Ki-67 (antigén exprimovaný v aktivovaných a proliferujúcich bunkách),
- lymfocyt HLA-Dr (histokompatibilitný antigén triedy II nadregulovaný počas imunitnej reakcie).
Nasledovné sledovania týkajúce sa bunkových produktov boli vykonané v supematante kultúry:
Neopterin, produkovaný T-lymfocytmi počas imunitnej odpovede a v stimulovaných kultúrach, v súčasných experimentoch nebol významne zvýšený dimérom lyzozýmu nad kontrolnú hladinu v bunkách stimulovaných ConA bez testovaného diméru. So zvyšujúcou sa koncentráciou testovaného diméru boli hladiny neopterínu mierne vyššie.
Podobne, hladiny β-2-mikroglobulínu vo všetkých koncentráciách dimérov lyzozýmu sa pohybovali okolo kontrolných hodnôt.
IL-2-receptoiy, uvoľnené z povrchu lymfocytov počas kultivácie a poskytujúce informáciu o celkovej Il-2-receptorovej premene, boli na porovnateľnej hladine s IL-2 receptormi na povrchu lymfocytov (uvedené ďalej) a ukázali jasnú supresiu pri najvyšších koncentráciách testovaného diméru.
lnterleukín-6 mal jasnú tendenciu k vysokým hodnotám v závislosti od dávky pri vyšších koncentráciách. Táto molekula je veľmi dôležitá pri hematopoiéze, bunkovej diferenciácii a imunitnej reakcii. V teste bolo treba extrapolovať prvé tri hodnoty, pretože najvyšší štandard bol iba 2000 pg/ml.
Výsledky súvisiace so zostávajúcimi molekulami znázorňuje tab. 1 dole. Na rozdiel od interleukínu-6, TNF-a bol neočakávane prítomný v supematantoch kultúr vo veľmi znížených koncentráciách, okrem dvoch posledných krokov riedenia, ktoré z hľadiska supresie koncentrácie TNF boli neefektívne.
Tabuľka 1
Vplyv diméru lyzozýmu na humánne lymfocyty periférnej krvi
| í. | Príklad | HLA-CWCD3 | IL»2Rac | KP67/ČD8 | K1-67/CD4 |
| Kontrcte | 3,3 | ló | 6,0 | 2,7 | |
| 1 | 1 mfl/ml | 2,2 | 2,6 | 4,8 | 5,3 |
| 2 | 0,3 mg/ml | 1.9 | 6,3 | 4,1 | 3.0 |
| 3 | 0.1 mgAnl | 3.0 | e.1 | 6,5 | w |
| 4 | 33 pg/ml | á,ú | 5,9 | 6.3 | lo |
| 5 | 10 pg/ml | 3.4 | 6,0 | 7.7 | 3.7 |
| 6 | 3,3 pg/ml | 2.4 | 5,0 | 7,5 | 3.7 |
| 7 | 1 pg/ml | 15 | 4,9 | 7J0 | 4.1 |
| 8 | 0.3 pg/ml | 3.3 | 5,8 | 7fi | 3,9 |
| 9 | 0,1 pgftnl | 2.8 | 4,0 | 7,é | la |
| 10 | 33 pg/ml | 3.1 | 4.6 | 8,0 | 4,1 |
Vplyv diméru lyzozýmu na humánne lymfocyty periférnej krvi
| Č. | Príklad | TNF | Tym.-kináza | IFN-a |
| Kontrola | 205,11 | SSfi | 4,97 | |
| 1 | 1 mg/ml | 5OŽ | 923 | 8,BI |
| 2 | 0,3 mg/ml | 17,18 | 10914 | 9,44 |
| 3 | 0.1 mg/ml | 13,75 | 7254 | 17,96 |
| 4 | 33pfl/ml | 36,11 | 9525 | 3.67 |
| 6 | 10 pg/ml | 22,22 | 5492 | 7,54 |
| 6 | 3,3 figftnl | S3T | 5198 | 6,26 |
| 7 | 1 pg/ml | 18Λ7 | 584Č | 33,91 |
| 6 | 0,3 Mfl/ml | iW | 0839 | 10,07 |
| 9 | 0,1 pg/ml | 94,16 | 3672 | 4,97 |
| 10 | 33 pg/ml | 172,46 | 7312 | 10,07 |
Tymidínkináza je meraná v cytoplazme lymfocytu po zmrazení a rozmrazení bunkovej pelety. Tymidínkináza je nadregulovaná v deliacich sa bunkách, čo z nej robí dobrý marker bunkovej proliferácie. Údaje v tabuľke vykazujú zníženie najvyššími testovanými koncentráciami diméru lyzozýmu; v iných krokoch riedenia nevidno žiadnu jasnú tendenciu. Naopak, interferón-α za tých istých podmienok vykazuje hodnoty vyššie ako kontrolná hodnota ConA samotného pri vyšších koncentráciách. Viditeľné zvýšenie sa vyskytuje od druhej hodnoty po tretie riedenie.
Markery lymfocytov
HLA-Dr/CD3 je marker histokompatitbility, exprimovaný na aktivovaných T-lymfocytoch počas imunitnej reakcie. Získané výsledky poukazujú na určité percento aktivovaných T-buniek v kontrolnej kultivácii; s rôznymi koncentráciami diméru lyzozýmu v kultiváciách sa hodnoty pohybujú v okolí kontrolnej hodnoty.
IL-2 receptory na lymfocytoch: interleukín-2 je cytokín produkovaný pomocnými T-lymfocytmi po aktivácii cez IL-L IL-2 je autokrinny a parakrínny. Pomocné T-lymfocyty nielenže produkujú IL-2, ale sú tiež stimulované touto molekulou k proliferácii. Receptory pre IL-2 na povrchu pomocných T-lymfocytov sú pri aktivácii nadregulované. Tab. 1 vyjadruje, že pri najvyššej koncentrácii diméru lyzozýmu je značná supresia IL-2 receptorov na lymfocytoch, kým zostávajúce hodnoty sa nelíšia viac ako v medziach biologickej šírky. Tabuľka 1 tiež obsahuje údaje vzťahujúce sa na KI-67/CD8 a KÍ-67/CD4. Ki-67 jc proliferačná molekula objavujúca sa v bunkách v mitóze. Ki-67 je dôležitým parametrom na stanovenie stimulovaných buniek a v diagnostike tumorov. V publikovaných výsledkoch vidno miernu inhibíciu proliferácie buniek u Ki-67+ supresorových (CD8) buniek s dvoma najvyššími dávkami diméru lyzozýmu. Pri pomocných (CD4) lymfocytoch s najvyššou dávkou sa javí podstatné zvýšenie v percente pozitívnych buniek. S nižšími dávkami je percento buniek exprimujúcich KÍ-67/CD4 mierne vyššie, ako je kontrolná hodnota. Významná supresia TNF je znázornená na obr. 1.
Imunologické parametre spomenuté skôr a vybrané podľa ich potenciálnej dôležitosti v imunitnej odpovedi boli analyzované metódou založenou na meraní vplyvu testovanej látky na suboptimálne ConA stimulované humánne periférne lymfocyty dobre stanovené, citlivé a dovoľujúce hodnotiť mnoho rôznych parametrov. V niektorých koncentráciách diméru lyzozýmu sú značné rozdiely výsledkov testov v porovnaní s hodnotami lymfocytov stimulovaných ConA samotným, kým pokiaľ ide o príklad TNF a TNF-a, sledované účinky sú jasne v rozmedzí všetkých testovaných riedení.
Príklad 2
Laboratórne testy sa vykonávali s cieľom stanoviť účinok diméru lyzozýmu na fagocytámu aktivitu mlieka a krvných buniek in vitro. Už skôr bolo zistené, že v štandardnom in vitro teste dimér lyzozýmu neinhibuje proliferáciu mikroorganizmov izolovaných z infikovaných prsných žliaz kráv. Keďže klinické použitie do vemena a súčasné intravenózne podanie diméru lyzozýmu účinne eliminuje infekciu prsných žliaz u kráv, bolo jasné, že hlavným antibakteriálnym mechanizmom v prsných žľazách kráv je fagocytóza. Podľa toho boli krv a mlieko od zdravých i infikovaných kráv použité v in vitro testoch zameraných na stanovenie účinku diméru lyzozýmu na fagocytózu. Na porovnanie sa experimenty vykonávali s tými istými koncentráciami testovanej látky a s tým istým časom inkubácie s použitím buniek izolovaných od zdravých a infikovaných kráv, alebo dokonca z infikovaného a zdravého rezu z prsnej žľazy tej istej kravy, aby sa vylúčili individuálne rozdiely v odpovedi.
Vo vykonaných testoch bola ku krvi alebo k mlieku zdravých a infikovaných kráv pridaná purifikovaná forma diméru, zmes diméru a malé frakcie trimérov a vyšších oligomérov v koncentráciách 25 až 0,25 pg/ml a zmes bola inkubovaná pri 37 °C 0,5 až 24 hod. Percento fagocytujúcich buniek (Index fagocytózy podľa metódy Wisniewski a ďalší) a percento NBT-pozitívnych granulocytov bolo stanovené (podľa Parka) pre každú vzorku.
Dimér lyzozýmu zvyšuje fagocytámu aktivitu leukocytov v testoch in vitro. Účinky závisia od dávky a od času inkubácie. Na aktiváciu mliečnych leukocytov sú potrebné vyššie koncentrácie v porovnaní s krvnými leukocytmi. Nadmerne vysoké koncentrácie diméru mierne znižujú fagocytámu aktivitu in vitro. Vybrané výsledky, najmä vyjadrujúce, že dovtedy, kým postpolymerizačná reakčná zmes neobsahuje žiadnu cytotoxickú monomému formu diméru, sa získajú porovnateľné výsledky pre vysoko purifikovaný a menej purifikovaný dimerizovaný lyzozým - ukazujú tab. 2 a 3, v ktorých je termín „dimér+ lyzozýmu“ použitý na označenie prípravku, ktorý obsahuje malú frakciu trimérov a vyšších oligomérov lyzozýmu, ako už bolo spomenuté v špecifikácii.
Tabuľka 2
Účinok diméru lyzozýmu na fagocytámu aktivitu mliečnych leukocytov od zdravých kráv (koncentrácia diméru 20 pg/ml, čas inkubácie 3 hodiny)
| irxjkôfor | Mliečne leukocyty od zdravých kráv | ||
| oripravok | označenia vzoriek | ||
| 6.477 | č. 463 | ||
| %fagoc/tôzy | kontrola | 77.8 | 80,0 |
| dimér Ijweýmu* | 100 | 100 | |
| dimér lyzozýmu | 92,6 | 100 | |
| index fagocytúŕy | kontrola | 2,7 | 4,1 |
| dimér lyzozýmu* | 4,4 | 6,4 | |
| dimér lyzozýmu | 4,8 | 3,4 | |
| % redukcie NTB | kontrola | 3,4 | 2.5 |
| dimér lyzozýmu* | 5.7 | 3,8 | |
| dimér lyzozýmu | 3Λ | 6.8 |
SK 282377 Β6
Tabuľka 3
Účinok diméru lyzozýmu na fagocytámu aktivitu mliečnych leukocytov od infikovaných kráv (koncentrácia diméru 20 pg/ml, čas inkubácie 30 minút)
| indikátor | Inlkované leukocyty kravského mfieka (6. 400) | ||
| prípravok | infikované* sekcia | zdravé sekcia | |
| %fagocytózy | kontrole | 98 | 56 |
| dimér lyzozýmu* | 96 | 90 | |
| dimér lyzozýmu | 100 | 1ÔÔ | |
| index feeocytŕrfy | kontrota | 10,9 | 2,7 |
| dimér lyzozýmu* | 6,7 | 14,9 | |
| dimér lyzozýmu | Ϊ53 | 8,8 | |
| % redukcie NTB | kontrola | 4.2 | ♦í |
| dimér lyzozýmu* | W | 8/4 | |
| dknér lyzozýmu | é,5 | 7.0 |
* zápal; nefečarr'
Je jasné, že stupeň purifikácie diméru lyzozýmu nemá žiadny významný účinok na sledovanú fagocytámu aktivitu mliečnych leukocytov. Neskôr sa možno ukáže, že efektorovými bunkami môžu byť granulocyty.
V ďalších príkladoch sa uvádzajú výsledky in-vivo sledovaní. V klinických testoch bol použitý prípravok s obsahom 2 mg diméru lyzozýmu v 10 ml roztoku PBS. Tento prípravok je označený ako KLP-602.
Príklad 3
Pri intravenóznom podávaní KLP-602 sa ukázalo, že stimuluje fagocytámu aktivitu krvných granulocytov u zdravých a choiých teliat a u zdravých žriebät, ako aj u dojníc po podaní do vemena. Účinok sa prejavuje vyšším počtom neutrofilov a zvýšenou schopnosťou absorbovať stafylokoka a redukovať NBT. Tento fenomén sa vyskytuje primáme počas prvých 12-24 hod. po injekčnej aplikácii preparátu. Účinok KLP-602 na fagocytámu aktivitu vo vemene závisel od dávky a formy liečiva a od odpovede jednotlivého zvieraťa.
Dimér lyzozýmu bol použitý v terapii infekčných ochorení teliat, prasiat, koňov a psov. V rôznych dávkach a v rôznych časových intervaloch bol prípravok podaný intravenózne, intramuskuláme, subkutánne, do vemena a intrauterinálne liečivo bolo podané 346 kravám, 274 teľatám, 110 prasniciam a prascom, 294 prasiatkam, 709 cicajúcim prasiatkam, 35 žriebätám a 107 psom. Alternatívna liečba bola použitá ako kontrola. Z dôvodov druhu testovacích zvierat, žiadne neostalo bez medikamentóznej liečby z etických dôvodov. Akokoľvek, bolo možné vyvodiť závery v porovnaní s klinickým obrazom liečených ochorení známych z veterinárnej literatúry.
Príklad 4
V testoch vykonávaných na teľatách bola stanovená hladina INF a TNF v krvi pre skupinu zdravých a infikovaných zvierat, infikované boli neliečené počas prvých 12 hod. infekcie, potom boli liečené antibiotikami a dimérom lyzozýmu vo vysoko purifikovanej forme. Získané výsledky graficky znázorňujú obrázky 2 a 3, uvádzajúce hladiny TNF a IFN. Oba obrázky predstavujú skutočné výsledky získané zo vzoriek krvi 4 individuálne označených teliat. Na obidvoch obrázkoch L čiara predstavuje výsledky v krvi zdravého teľaťa, 2. čiara výsledky infikovaného, ale neliečeného teľaťa (hodnota IFN v 12. hod., ktorá sa rovná 45 U/ml nie je vyjadrená, ale diagram naznačuje hodnotu smerom 2. čiary); zviera bolo potom v 12. hod. podrobené liečbe, čiara 3 predstavuje výsledky u teľaťa liečeného antibiotikami a čiara 4 výsledky u teľaťa liečeného KLP-602.
V skupine liečenej dimérom lyzozýmu jedna alebo dve injekcie KLP-602 vyliečili vyše 90 % teliat trpiacich na gastroenteritídu a vyše 85 % prípadov akútnej bronchopneumónie. Promptné vymiznutie takých príznakov, ako sú horúčka a hnačka bolo veľmi charakteristické. Liečba týmto liečivom nevyžadovala poskytovanie suplementačných tekutín zvieratám. Čas a miera vyliečenia boli v porovnaní s kontrolnou skupinou liečenou antibiotikami výrazne lepšie.
Príklad 5
KLP-602 bol najúčinnejší pri liečbe ochorení postihujúcich prasatá. 100 % alebo takmer 100 % zvierat sa vyliečilo z nasledovných ochorení: popôrodná agalakcia (MMA syndróm), dyzentéria, pyometritída, chrípka a kolibacilóza. Podávanie liečiva v prípade edémového ochorenia a bronchopneumónie sa prejavilo mierne menej výraznými, ale významne lepšími výsledkami v porovnaní s výsledkami alternatívnej liečby. Bolo možné pozorovať týchle ustúpenie hnačky (obvykle počas prvých 24 hod.) a horúčky, ako aj obnovenie sa sekrécie mlieka, zvlášť dôležité v prípadoch popôrodných zápalov vemena a maternice. Účinnosť terapie KLP-602 v porovnaní s alternatívnymi postupmi ukazuje tab. 4 dole.
Príklad 6
Pri liečbe KLP-602 sa 100 % žriebät s enteritídou a 83,3 % žriebät s bronchopneumóniou vyliečilo rýchlejšie ako kontrolná skupina liečená známymi prípravkami.
Príklad 7
KLP-602 bol testovaný pri liečbe niektorých ochorení u psov, ako sú folikulitída (100 % účinnosť), infekcie horných a dolných dýchacích ciest a infekcie gastrointestinálneho traktu manifestujúce hnačkou. Prevažujúca v tejto skupine bola parvoviróza, ktorá je známa ako prakticky neliečiteľná choroba. Akokoľvek, v prípadoch parvovirózy sa zistila asi 75 %-ná miera vyzdravenia.
V testoch vykonávaných u zvierat s prirodzene sa vyskytujúcimi ochoreniami, ako je uvedené, sa dospelo k niekoľkým dôležitým zisteniam:
L Liečba sa ukázala ako účinná a veľmi jednoduchá pri ochoreniach s multifaktoriálnou etiológiou a patogenézou (takéto ochorenia v zvieracích populáciách prevažujú a dajú sa ťažko zvládnuť, najmä na pestovateľských farmách, kde epidemické šírenie chorôb je veľmi jednoduché). Takéto zistenia dokazujú modulačný účinok diméru lyzozýmu na prirodzené obranné mechanizmy.
Tabuľka IV
SK 282377 Β6
2. Terapia bola dokázateľné účinná pri ochoreniach, ktoré majú vo svojom prirodzenom priebehu za následok endotoxický šok, alebo také poruchy, ako je napríklad dlhotrvajúca vysoká horúčka, ktorá ovplyvňuje stav zvieraťa dlhý čas po vyliečení a teda je mimoriadne škodlivá pre zvieratá, ako sú kone (žriebätá) - chované na preteky a iné športy, ako aj tie, ktoré sú chované hlavne pre potravinársky priemysel, kde sú výrobné náklady kritickým problémom. Rýchle uzdravenie umožní výrazné zníženie výdavkov na liečbu takýchto ochorení.
3. Výsledky získané in vivo potvrdzujú znížené hladiny TNF pri rôznych prirodzene sa vyskytujúcich infekciách liečených dimérmi lyzozýmu a teda podporujú vynález, ako je to požadované.
Príklad 8
Účinok diméru lyzozýmu na aktivitu antibiotík proti rôznym rozdielnym mikroorganizmom bol sledovaný z dôvodu výberu baktérií na ďalšie testy, na určenie dávok antibiotík, ktoré sú na vybrané mikroorganizmy najúčinnejšie a na zistenie rozmedzia koncentrácií diméru lyzozýmu, v ktorom sa zaznamenajú očakávané účinky. V experimentoch boli použité dve šarže Iyofilizovaného purifíkovaného diméru lyzozýmu, jedna vyrobená v r. 1991 a druhá vyrobená v r. 1992. V experimentoch boli použité antibiotiká dostupné na poľskom trhu, dodávané poľským výrobcom liečiv Polfa, ako penicilín, neomycín, erytromycín, cefalosporin (SEFRIL).
Antibiotiká, ktoré by mali byť testované, boli suspendované v pufrovanom roztoku NaCl (PBS-Biomed) alebo v hovädzom sére. Potom sa k suspenzii pridal dimér lyzozýmu tak, aby koncentrácia diméru v testovaných vzorkách bola vždy 5 pg/ml. Koncentrácie testovaných antibiotík boli v každom teste rozdielne kvôli rozličnej citlivosti použitých mikroorganizmov.
Účinok antibiotika samotného alebo v jeho kombinácii s dimérom lyzozýmu bol testovaný in vitro v PBS alebo v suspenzii hovädzieho séra na Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus a Streptococcus uberis izolovaných od chorých zvierat. V experimentoch boli tiež použité laboratórne kmene Sarcina lutea 9341 ATCC a Staphylococcus aureus 209 P.
Z dôvodov predbežného charakteru bolo každé antibiotikum testované proti 1, 2, alebo 3 druhom baktérii nasledovne:
1. Príprava platní
0,05 ml z 18-hodinovej bujónovej kultúry s bakteriálnym kmeňom, ktorý mal byť testovaný, sa pridalo k 14 ml vzorky obohateného agaru (Biomed). Zmes bola pomiešaná a vyliata na platňu s priemerom 10 mm. Po ochladení a stuhnutí agaru sa naň umiestnili sterilné valčeky a tie boli naplnené roztokmi antibiotika, ktoré malo byť testované.
2. Príprava roztokov antibiotika mg vzorky antibiotika, ktoré malo byť testované, bolo najprv rozpustených v PBS; potom bol požadovaný objem tohto roztoku pridaný k predtým určenému objemu PBS alebo hovädzieho séra tak, aby sa získala koncentrácia antibiotika, ktorá je čo najbližšie k MIC (minimálnej inhibičnej koncentrácii); vždy boli pripravené 3 rozdielne koncentrácie.
3. Príprava roztoku diméru lyzozýmu mg Iyofilizovaného diméru lyzozýmu bolo najprv rozpustených v 10 ml PBS. Ďalšie riedenia boli pripravené alebo s PBS alebo s hovädzím sérom a boli pridané k roztokom antibiotík, pripravených predtým, ako je uvedené. Testovali sa nasledovné kombinácie:
- antibiotikum/PBS
- antibiotikum/PBS + dimér lyzozýmu
- antibiotikum/sérum
- antibiotikum/sérum + dimér lyzozýmu
Koncentrácia antibiotika bola v každom valčeku rovnaká; koncentrácia diméru lyzozýmu bola 5 pg/ml. Po naplnení valčekov roztokmi sa platne nechali stáť pri laboratórnej teplote 2 hodiny; potom boli kultúry inkubované pri 37 °C.
4. Odčítanie výsledkov a hodnotenie aktivity
Platne sa vybrali z termostatu, po 18 hodinách inkubácie sa meral priemer inhibičnej zóny bakteriálneho rastu (žiadne kolónie) okolo valčekov.
Nezistil sa žiadny rozdiel vo veľkosti inhibičných zón bakteriálneho rastu okolo valčekov naplnených suspenziami antibiotika v PBS bez pridania a s pridaním diméru lyzozýmu v koncentrácii 5 pg/ml. Ale, veľkosť inhibičnej zóny sa zmenšila okolo valčekov naplnených suspenziou antibiotika v hovädzom sére, zvýšila sa však okolo tých valčekov, ktoré boli naplnené antibiotikom + suspenziami diméru lyzozýmu v hovädzom sére. Zóny boli väčšie v porovnaní so zónami okolo valčekov naplnených suspenziami PBS a tiež väčšie ako pri valčekoch naplnených len sérovými suspenziami antibiotík, bez diméru lyzozýmu.
Tento fenomén sa zistil v testoch s penicilínom použitým proti Sarcina lutea. Ampicilín vykazoval synergizmus v kombinácii s dimérom lyzozýmu pri inhibícii rastu Escherichia coli, Salmonella enteritidis a Staphylococcus epidermidis in vitro. Zaznamenalo sa zvýšenie aktivity erytromycínu v prítomnosti diméru lyzozýmu proti Staphylococcus aureus 209 P a Streptococcus uberis, ako aj SEFRILU - proti Staphylococcus aureus 209 P. Escherichia coli a Salmonella enteritidis boli proti tomuto antibiotiku rezistentné.
Zvýšenie antibakteriálnej aktivity testovaných antibiotík bolo zistené, iba ak bolo ako rozpúšťadlo použité hovädzie sérum. Ako pravidlo, zvýšenie bolo v priemere 50 %, ale v niektorých príkladoch sa prítomnosť diméru lyzozýmu prejavila 100 % zvýšením aktivity antibiotík.
Závery
Dimér lyzozýmu (bez akéhokoľvek konzervačného činidla) v koncentráciách 5 pg/ml vykazuje v podmienkach in vitro synergizmus s niektorými antibiotikami použitými v MIC (minimálnych inhibičných koncentráciách) v prítomnosti hovädzieho séra, pri inhibícii bakteriálneho rastu. Doteraz získané výsledky jasne poukazujú na potrebu ďalších sledovaní.
Príklad 9
Synergizmus s AZT pri liečbe pacientov s AIDS
Ito a kol. nedávno publikovali, že TNF-α môže antagonizovať anti-HIV aktivitu AZT (Ito, M. et al.: Tumor necrosis factor antagonizes inhibítory cffect of azidothymidine on human immunodeficiency vírus (HIV) replication in vitro; Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990,166,1095 -
- 1101). Pacienti s AIDS v pokročilom štádiu trpia množstvom pridružených infekcií. Niektoré infekčné agensy môžu navodiť zvýšenie TNF-α, IL-6 a iných cytokínov, ktoré môžu byť alebo imunosupresívne alebo môžu podporovať replikáciu HIV.
Podľa toho liečba AZT samotným nie je dostatočne efektívna. S cieľom zvýšiť anti-HIV aktivitu AZT sa navrhuje kombinovať liečbu AZT s podávaním diméru lyzozýmu na inhibíciu syntézy TNF - faktora, ktorý antagonizuje anti-HIV aktivitu AZT.
Claims (11)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použitie dimenzovanej formy lyzozýmu ako účinnej zložky na výrobu lieku na profylaxiu alebo liečenie choroby alebo stavu, ktorý vyžaduje alebo ktorému prospieva aspoň jeden z nasledujúcich účinkov: inhibícia uvoľňovania faktora nekrotizujúceho nádory, znižovanie hladiny faktora nekrotizujúceho nádory, zvyšovanie fagocytózy, zvyšovanie uvoľňovania interferónu a zvyšovanie hodnôt interleukínu-6 u zvierat a ľudí.
- 2. Použitie podľa nároku 1 na posilnenie prirodzeného obranného mechanizmu u zvierat a ľudí.
- 3. Použitie podľa nároku 1 alebo 2, kde stav zahŕňa hladinu faktora nekrotizujúceho nádory, ktorá je vyššia ako 13,75 pg/ml.
- 4. Použitie podľa hociktorého z nárokov 1 až 3, kde liek obsahuje dimér lyzozýmu v dávke 0,3 gg až 1 mg na 106 leukocytov.
- 5. Použitie podľa hociktorého z nárokov 1 až 4, kde uvedený stav je vybraný zo skupiny zahrnujúcej sepsu, septický šok a kachexiu.
- 6. Použitie podľa hociktorého z nárokov 1 až 5, kde liek obsahuje dimér lyzozýmu v kombinácii s antibiotikom.
- 7. Použitie podľa hociktorého z nárokov 1 až 6, kde liek je vo forme injekčného roztoku obsahujúceho dimér lyzozýmu v množstve 0,01 až 10 mg/ml, výhodne 0,1 až 1,0 mg/ml, ako apyrogénny sterilný prípravok s obsahom najmenej jedného fyziologicky prijateľného rozpúšťadla a/alebo najmenej jedného farmaceutický overeného konzervačného činidla.
- 8. Použitie podľa nároku 7, kde injekčný roztok obsahuje dimér lyzozýmu v koncentrácii 0,02 mg/kg telesnej hmotnosti.
- 9. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, kde liek je vo forme gélu alebo masti zahrnujúcich účinné množstvo diméru lyzozýmu alebo vo forme antiseptického obväzu alebo tampónu impregnovaného účinnou dávkou diméru lyzozýmu.
- 10. Farmaceutický prípravok vo forme apyrogénneho sterilného prípravku zahrnujúci najmenej jedno farmaceutický prijateľné rozpúšťadlo a/alebo najmenej jedno farmaceutický overené konzervačné činidlo, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje dimému formu lyzozýmu v množstve 0,01 až 10 mg/ml, výhodne 0,1 až 1,0 mg/ml, a najmenej minimálnu inhibičnú koncentráciu MIC antibiotika.
- 11. Prípravok podľa nároku 10, vyznačujúci sa t ý m , že antibiotikum je vybrané zo skupiny zahrnujúcej penicilín, ampicilín, neomycín, erytromycín, cefalosporín.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL92295273A PL173978B1 (pl) | 1992-07-13 | 1992-07-13 | Sposób oddziaływania na wydzielanie cytokin w hodowli limfocytów krwi obwodowej |
| PCT/EP1993/001841 WO1994001127A1 (en) | 1992-07-13 | 1993-07-13 | Lysozyme dimer and compositions containing the same |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK4095A3 SK4095A3 (en) | 1995-09-13 |
| SK282377B6 true SK282377B6 (sk) | 2002-01-07 |
Family
ID=20058087
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK40-95A SK282377B6 (sk) | 1992-07-13 | 1993-07-13 | Použitie dimerizovanej formy lyzozýmu a farmaceutický prostriedok s jeho obsahom |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6132715A (sk) |
| EP (1) | EP0651654B1 (sk) |
| JP (1) | JPH07508744A (sk) |
| KR (1) | KR100289841B1 (sk) |
| CN (1) | CN1057937C (sk) |
| AT (1) | ATE252392T1 (sk) |
| AU (1) | AU677786B2 (sk) |
| BG (1) | BG63331B1 (sk) |
| BR (1) | BR9306722A (sk) |
| CA (1) | CA2140140A1 (sk) |
| CZ (1) | CZ286725B6 (sk) |
| DE (2) | DE651654T1 (sk) |
| DK (1) | DK0651654T3 (sk) |
| ES (1) | ES2074037T3 (sk) |
| FI (1) | FI950144A0 (sk) |
| GE (1) | GEP20012466B (sk) |
| GR (1) | GR950300039T1 (sk) |
| HU (1) | HU218151B (sk) |
| MX (1) | MX9304197A (sk) |
| NZ (2) | NZ254135A (sk) |
| OA (1) | OA10125A (sk) |
| PL (1) | PL173978B1 (sk) |
| PT (1) | PT651654E (sk) |
| RO (1) | RO112580B1 (sk) |
| RU (1) | RU2145875C1 (sk) |
| SG (1) | SG52727A1 (sk) |
| SK (1) | SK282377B6 (sk) |
| TW (1) | TW259710B (sk) |
| UA (1) | UA49789C2 (sk) |
| WO (1) | WO1994001127A1 (sk) |
| ZA (1) | ZA935046B (sk) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6183742B1 (en) | 1992-07-13 | 2001-02-06 | Nika Health Products, Limited | Applications of lysozyme dimer |
| DZ1964A1 (fr) * | 1995-01-13 | 2002-10-15 | Nika Health Products Ltd | Nouvelle applications d'un dimère de lysozyme. |
| EP0793472A4 (en) * | 1995-05-30 | 2000-12-27 | Lectin Biopharma Inc | METHOD FOR USING LECTINES FOR AGGLUTINATION AND FOR COLLECTING MENSTRUATION FLUIDS |
| US6123937A (en) * | 1997-03-14 | 2000-09-26 | Nika Health Products, Limited | Applications of lysozyme dimer |
| ITMI981148A1 (it) | 1998-05-22 | 1999-11-22 | Therapicon Srl | Utilizzo di lisozima c modificato per preparare composizioni medicinali per il trattamento di alcune gravi malattie |
| EP1174147A1 (en) * | 2000-06-27 | 2002-01-23 | Nika Health Products Limited | Reversal of antibiotic resistance with lysozyme dimer |
| US20050244402A1 (en) * | 2004-04-30 | 2005-11-03 | Villanueva Julie M | Absorption of pain-causing agents |
| RU2472467C2 (ru) * | 2011-04-13 | 2013-01-20 | Государственное научное учреждение Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт (ГНУ КНИВИ) | Способ профилактики и лечения гастроэнтеритов, обусловленных бактериозами, у телят |
| RU2546911C2 (ru) * | 2013-04-11 | 2015-04-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Донской государственный аграрный университет" | Способ хранения свинины в охлажденном состоянии |
| CN105106626A (zh) * | 2015-09-30 | 2015-12-02 | 成都倍加特生物科技有限公司 | 一种治疗月经期感染的汤剂药物及其制备方法 |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR4020M (sk) * | 1965-01-29 | 1966-03-21 | ||
| FR2215201A1 (en) * | 1973-01-24 | 1974-08-23 | Theranol Lab | Broad-spectrum antibiotic compsns. - contg. antibiotic resistant lactic bacilli and enzyme diffusing-agent |
| JPS5533408A (en) * | 1978-08-30 | 1980-03-08 | Eisai Co Ltd | Immunity-increasing agent |
| JPS5533409A (en) * | 1978-08-30 | 1980-03-08 | Eisai Co Ltd | Carcinostatic agent |
| JPS5543040A (en) * | 1978-09-25 | 1980-03-26 | Eisai Co Ltd | Immunity raising agent |
| US4221794A (en) * | 1979-06-21 | 1980-09-09 | Newport Pharmaceuticals International, Inc. | Method of imparting immunomodulating and antiviral activity |
| US4457919A (en) * | 1980-03-14 | 1984-07-03 | Newport Pharmaceutical International, Inc. | Method of imparting immunomodulating, antiviral or antitumor activity |
| US4510144A (en) * | 1981-08-26 | 1985-04-09 | Newport Pharmaceuticals International | Methods of imparting immunomodulating activity with dihydrothiazolo purine derivatives |
| US4739046A (en) * | 1985-08-19 | 1988-04-19 | Luzio Nicholas R Di | Soluble phosphorylated glucan |
| US4744984A (en) * | 1985-10-08 | 1988-05-17 | Vetrepharm Research, Inc. | Antiviral immunotherapeutic agent and preparation thereof |
| DE3782958D1 (de) * | 1986-02-19 | 1993-01-21 | Imreg Inc | Verfahren und mittel zum pruefen eines immunsystems. |
| US5200182A (en) * | 1988-05-26 | 1993-04-06 | Nika Health Products, Ltd. | Antiviral or antibacterial composition and method of use |
| DE3817955A1 (de) * | 1988-05-27 | 1989-11-30 | Hoechst Ag | Tnf-inhibitor enthaltendes arzneimittel |
| JP2568447B2 (ja) * | 1988-05-31 | 1997-01-08 | ナップ・システムズ・（ユーエスエイ）・インコーポレーテッド | 印刷原板を処理するための装置及び方法 |
| WO1991000092A1 (en) * | 1989-06-13 | 1991-01-10 | Smithkline Beecham Corporation | Inhibition of interleukin-1 and tumor necrosis factor production by monocytes and/or macrophages |
| SG49871A1 (en) * | 1990-01-08 | 1998-06-15 | Nika Health Products Ltd | Method of preparing lysozyme dimers |
| US5314816A (en) * | 1990-01-08 | 1994-05-24 | Nika Health Products Ltd. | Method of preparing lysozyme dimers |
| CA2088352A1 (en) * | 1990-08-03 | 1992-02-04 | Klaus M. Esser | Tnf inhibitors |
-
1992
- 1992-07-13 PL PL92295273A patent/PL173978B1/pl not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-07-13 BR BR9306722A patent/BR9306722A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-07-13 SK SK40-95A patent/SK282377B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 CN CN93116771A patent/CN1057937C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-07-13 AT AT93915903T patent/ATE252392T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 WO PCT/EP1993/001841 patent/WO1994001127A1/en active IP Right Grant
- 1993-07-13 DK DK93915903T patent/DK0651654T3/da active
- 1993-07-13 ES ES93915903T patent/ES2074037T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 EP EP93915903A patent/EP0651654B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 UA UA95018021A patent/UA49789C2/uk unknown
- 1993-07-13 DE DE0651654T patent/DE651654T1/de active Pending
- 1993-07-13 CZ CZ199585A patent/CZ286725B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 AU AU45686/93A patent/AU677786B2/en not_active Ceased
- 1993-07-13 HU HU9500098A patent/HU218151B/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 GE GEAP19932466A patent/GEP20012466B/en unknown
- 1993-07-13 JP JP6502985A patent/JPH07508744A/ja active Pending
- 1993-07-13 NZ NZ254135A patent/NZ254135A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 PT PT93915903T patent/PT651654E/pt unknown
- 1993-07-13 ZA ZA935046A patent/ZA935046B/xx unknown
- 1993-07-13 RU RU95105517A patent/RU2145875C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 RO RO95-00041A patent/RO112580B1/ro unknown
- 1993-07-13 SG SG1996008336A patent/SG52727A1/en unknown
- 1993-07-13 DE DE69333258T patent/DE69333258T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 MX MX9304197A patent/MX9304197A/es not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 KR KR1019940704649A patent/KR100289841B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 CA CA002140140A patent/CA2140140A1/en not_active Abandoned
- 1993-08-03 TW TW082106180A patent/TW259710B/zh active
-
1994
- 1994-12-22 BG BG99287A patent/BG63331B1/bg unknown
-
1995
- 1995-01-12 FI FI950144A patent/FI950144A0/fi unknown
- 1995-01-13 OA OA60604A patent/OA10125A/en unknown
- 1995-06-07 US US08/476,561 patent/US6132715A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-31 GR GR950300039T patent/GR950300039T1/el unknown
-
1996
- 1996-09-13 NZ NZ299377A patent/NZ299377A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK173078B1 (da) | Anvendelse af en lysozym-dimer og/eller en ribonuclease-dimer til fremstilling af et lægemiddel til behandling af virus- el | |
| EP0651654B1 (en) | Use of lysozyme dimer for the manufacture of a medicament for modulating natural defensive mechanisms | |
| AP871A (en) | New applicants of lysozyme dimer. | |
| RU2327453C2 (ru) | Состав для терапии и профилактики инфекционных заболеваний животных | |
| EP0548558A2 (en) | Compositions containing surfactants as potentiating agents for the treatment of mammalian diseases | |
| PL176407B1 (pl) | Kompozycja farmaceutyczna zawierająca dimer lizozymu | |
| KR930004599B1 (ko) | 항바이러스성 또는 항균성 조성물 | |
| KR19990034654A (ko) | 프로폴리스의 추출방법과 면역증강제로서의 용도 | |
| WO2023118327A1 (en) | Live bacteria as excipients for proteins | |
| KR19990034653A (ko) | 프로폴리스가 함유된 가축사료 및 이를 사용하여 생산된 축산물 | |
| MXPA97005246A (en) | New applications of dimero de lisoz |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Assignment and transfer of rights |
Owner name: NIKA HEALTH PRODUCTS SPOLKA Z.O.O., KATY WROCL, PL Free format text: FORMER OWNER: NIKA HEALTH PRODUCTS LIMITED, VADUZ, LI Effective date: 20100310 |
|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20110713 |