SK15096A3

SK15096A3 - Therapeutic peptide derivatives and a method of their application

Info

Publication number: SK15096A3
Application number: SK150-96A
Authority: SK
Inventors: Hyuk Kim Sun; Xin Dong Zheng; John E Taylor; Sylviane Moreau; Susan R Keyes
Original assignee: Biomeasure Inc
Priority date: 1993-08-09
Filing date: 1994-08-08
Publication date: 1996-07-03
Also published as: JP2004339237A; FI960584A0; CZ292586B6; CN1055700C; ATE399177T1; JP3618750B2; DE69435105D1; AU7481994A; EP1288224A1; DE69434181T2; CA2168113C; SI9420051A; GEP20002146B; EP1288223B1; HUT73491A; HU224350B1; KR100325972B1; MD1591B2; LV11549A; HK1053314A1

Description

Terapeutické peptidové deriváty a spôsob ich použitia

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka terapeutických peptidových derivátov a spôsobu ich použitia.

Doterajší stav techniky

Robili sa pokusy na predĺženie aktivity biologicky aktívnych peptidov. Peptidy boli napríklad modifikované chemicky syntetickým pridaním cukrových skupín, aby sa predĺžila doba, počas ktorej sú peptidy aktívne ( Sandoz: spis WO 88/02756, Sandoz: spis WO 89/09786, SRN patent 3910667 Al, európska patentová prihláška číslo 0 374 089 A2 /1990/ a Breipohl: USA patent č. 4 861 755 /1989/ ). Na zvýšenie životnosti peptidu sa tiež používa pridanie katiónových zakotvení ( európska patentová prihláška 0 363 589 A2 /1990/) a lipidových skupín ( Whittaker: spis WO 91/09837, Jung: USA patent č. 4 837 303 /1990/).

Podstata vynálezu

Všeobecne tento vynález poskytuje deriváty biologicky aktívnych peptidov, ktoré obsahujú jeden alebo viac substituentov oddelene naviazaných na amínovú skupinu umiestnenú na N-konci alebo na bočnom reťazci peptidovej skupiny. V tejto modifikovanej forme majú tieto deriváty vyššiu a dlhšiu biologickú aktivitu v porovnaní so zodpovedajúcimi nemodifikovanými peptidmi.

Peptidové deriváty sú výhodné v tom, že nie sú drahé, sú vysoko biokompatibilné, chýbajú im škodlivé vedľajšie účinky a sú zlučiteľné s rôznymi formami terapeuticého podávania. Obzvlášť potom deriváty, ktoré majú ako peptidovú časť somatostatín, majú značne zlepšenú účinnosť a selektivitu v porovnaní s nemodifikovaným somatostatínom.

Z jedného aspektu sa tento vynález týka peptidového derivátu, ktorý obsahuje biologicky aktívnu peptidovú časť a aspoň jeden substituent pripojený na peptidovú skupinu, tento substituent je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca I, II a III, keď zlúčenina všeobecného vzorca I je

kde

Ro znamená atóm kyslíka, síry alebo skupinu NR5, v ktorej R₅ znamená atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka,

Ri a R₂ nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka, skupinu všeobecného vzorca (CH₂)_mOR6 alebo CH(OR7)CH₂OR«, v ktorých znamená atóm vodíka alebo acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka a R₇ a R₈ nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka, acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka alebo skupinu C(R9)(Rio), v ktorej R₉ a Rio nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo skupiny Ri aj R₂ znamenajú skupinu =CHCH₂ORn, v ktorej Rn nezávisle od toho, či ide o Ri alebo R₂, znamená atóm vodíka alebo acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka a m znamená číslo od 1 do 5 včítane, a jedna zo skupín R3 a znamená skupinu (CH₂)„Ri₂ alebo (CH₂)_nCH(OH)Ri₂, v ktorých R_]2 znamená skupinu CO, CH₂ alebo skupinu SO₂ a n znamená číslo medzi la 5 včítane, a zvyšujúca skupina R3 alebo R4 znamená atóm vodíka, hydroxyalkxlovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka, zlúčenina všeobecného vzorca II je r₁₃-o-ch₂

R,₄-°-CH₂-C- (CH,) ,-R₁₆-R₁₇- (CH₂)„-R r₁₅-o-ch₂ (Π) kde

R13, Rh a R13 nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka alebo acylovú skupinu s 2 až 24 atómami uhlíka,

Rie znamená skupinu NH alebo nie je prítomná,

Rn znamená skupinu CO, atóm kyslíka alebo nie je prítomná,

Ris znamená skupinu CO, CH2, SO2 alebo nie je prítomná, m znamená číslo od 1 do 5 včítane, n znamená číslo od 1 do 5 včítane a zlúčenina všeobecného vzorca III je (CH₂)_m

(CH₂)_n kde

R19 znamená atóm vodíka, skupinu NH2, aromatickú funkčnú skupinu, skupinu OH, hydroxyalkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, skupinu H(R27)(R2s), skupinu SO3H alebo nie je prítomná, pričom R₂7 a R28 nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka,

R20 znamená atóm kyslíka alebo nie je prítomná,

R21 znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo nie je prítomná,

R22 znamená atóm dusíka, skupinu CH, atóm kyslíka alebo atóm uhlíka,

-R23- znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo nie je prítomná,

R24 znamená atóm dusíka, skupinu CH alebo atóm uhlíka,

R25 znamená skupinu NH, atóm kyslíka alebo nie je prítomná,

R26 znamená skupinu SO2, CO, CH₂ alebo nie je prítomná, m znamená číslo medzi 0 a 5 včítane, n znamená číslo medzi 0 a 5 včítane, p znamená číslo medzi 0 a 5 včítane a q znamená číslo medzi 0 a 5 včítane.

V zlúčeninách všeobecných vzorcov I, II a III je peptidová časť pripojená ku každému substituentu väzbou CO-N, CH2-N alebo SO2-N medzi substituentom a atómom dusíka N-konca alebo bočného reťazca uvedenej peptidovej skupiny.

Vo výhodných uskutočneniach -R23- znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, R22 znamená atóm dusíka, atóm uhlíka alebo skupinu CH a R24 znamená atóm uhlíka. Alebo R22 znamená atóm kyslíka, R19, R20, R21 a -R23- nie sú prítomné a súčet m + n znamená číslo 3, 4 alebo 5.

V inom výhodnom uskutočnení podľa vynálezu substituent znamená zlúčeninu všeobecného vzorca I, kde R12 znamená výhodne skupinu CH2 alebo SO2. Substituentom môže byť tiež zlúčenina všeobecného vzorca II, kde v tomto prípade Rig výhodne znamená skupinu CH₂ alebo SO2, Rb, Rh a R15 znamenajú atóm vodíka a Rp nie je prítomná. V mimoriadne výhodných uskutočneniach substituent znamená skupinu (HOCH₂)3C-NH-(CH)₂-SO2 alebo skupinu (HOCH₂)3C-CH₂.

V ešte iných uskutočneniach podľa vynálezu substituent znamená zlúčeninu všeobecného vzorca III. V tomto prípade -R23- nie je prítomná a aspoň jedna zo skupín R22 a R24 znamená atóm dusíka. Tiež môže ako R22, tak aj R24 znamenať atóm dusíka.

V inom uskutočnení substituent znamená jednu zo skupín :

HO(CH₂)₂ - n N - (CH₂)COHO(CH₂)₂

(CH₂)₂SO₂-- .

Peptidová skupina je výhodne vybraná zo skupiny pozostávajúcej z somatostatínu, bombezínu, kalcitonínu, peptidu súvisiaceho s kalcitonínovým génom (CRGP), amylínu, paratyreoidného hormónu (PTH), peptidu uvoľňujúceho gastrín (GRP), hormónu stimulujúceho melanocyty (MSH), adrenokortikotrjopného hormónu (ACTH), peptidu súvisiaceho s prištítnym telieskom (PTHrP), hormónu uvoľňujúceho luteinizačný hormón (LHRH), faktoru uvoľňujúceho rastový hormón (GHRF), peptidu uvoľňujúceho rastový hormón (GHRP), cholecystokinínu (CCK), glukagónu, bradykinínu, peptidu podobného glukagónu (GLP), gastrínu, enkefalínu, neuromedínov, endotelínu, látky P, neuropeptidu Y (NPY), peptidu YY (PYY), vazoaktívneho intestinálneho peptidu (VIP), guanylínu, polypeptidu aktivujúceho hypofyzámu adenylcyklázu (PACAP), betabunkového tropínu, adrenomedulínu a z ich derivátov, fragmentov a analógov.

Peptidová skupina výhodne znamená somatostatín alebo jeho derivát, fragment alebo analóg. Najvýhodnejším somatostatinovým analógom je jedna z nasledujúcich zlúčenín : H-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂₎ H-D-Phe-c[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂ a ' H-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂. Peptidovým zvyškom je výhodne aj bombezín alebo jeho derivát, fragment alebo analóg.

V ešte iných výhodných uskutočneniach je peptidovým derivátom jedna zo zlúčenín:

HO(CH₂)₂-N

Co-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Ly3-Abu-Cys]-Thr-NH₂,

\_/

N- (CH₂) SO-j-D-Phe-c [Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys ] -Thr-NH₂.

Z iného aspektu tento vynález poskytuje dimémy peptidový derivát obsahujúci dve biologicky aktívne peptidové skupiny a aspoň jeden substituent napojený na každú peptidovú skupinu. Substituent je vybraný zo skupiny pozostávajúcej zo zlúčeniny všeobecného vzorca IV a V, kde zlúčenina všeobecného vzorca IV je generickým štruktúrnym ekvivalentom zlúčeniny všeobecného vzorca I a zlúčenina všeobecného vzorca V je generickým štruktúrnym ekvivalentom zlúčeniny všeobecného vzorca III. V dimére je každá peptidová skupina pripojená na substituenty väzbou CO-N, CH₂-N alebo SO₂-N medzi substituentom a atómom dusíka na N-konci alebo na bočnom reťazci jednej z peptidových skupín.

Ešte z iného aspektu tento vynález poskytuje spôsob liečenia ochorení, ako je rakovina, pacienta. Tento spôsob zahŕňa podávanie terapeutického množstva tu opísaných peptidových derivátov pacientovi. Vo výhodných uskutočneniach sa pri liečení ako peptidová časť používa somatostatín.

Pojem “biologicky aktívny“ tak, ako sa tu používa, znamená prirodzene sa vyskytujúci, rekombinantný a syntetický peptid, ktorý má fyziologickú alebo terapeutickú aktivitu. Všeobecne tento pojem zahŕňa všetky deriváty, fragmenty a analógy biologicky aktívnych peptidov, ktoré vykazujú kvalitatívne podobný alebo opačný účinok v porovnaní s účinkom nemodifikovaného peptidu.

Na obrázku 1 je graf dvoch rastových kriviek buniek AR42J za prítomnosti rôznych somatostatínových derivátov.

V d’aľšej časti tohto spisu budú opísané výhodné uskutočnenia. Najprv budú opísané peptidové deriváty.

Peptidové deriváty podľa vynálezu všeobecne obsahujú dve oddelené zložky: 1/ biologicky aktívny peptid a 2/ aspoň jeden substituent, ktorý má štruktúru zlúčeniny všeobecného vzorca I, II alebo III. Peptidové deriváty, vyrobené tu opísanými spôsobmi, zahŕňajú tri nasledujúce skupiny zlúčenín:

Deriváty odvodené od zlúčeniny všeobecného vzorca I

R3O O-.f^lnCHÍOHlR^-NH-P·

P,

R‘-MH-R₁₂CH(CH) (CK₂)_n-0

v ktorom Ro, Ri, R₂, R3, R4, R12 a n znamenajú vyššie uvedené a NH-P' znamená biologicky aktívnu peptidovú skupinu. V týchto uskutočneniach je skupina NH umiestnená na N-konci alebo na bočnom reťazci peptidu a P' znamená zvyšok peptidu.

Deriváty odvodené od zlúčeniny všeobecného vzorca II

R..-O-CH,

I

R₁₄-O-CH₂-C-(CH₂)_m-R₁₆-R_l7-(CH₂)_n-R_l8-NH-P' r₁₅-o-ch₂ v ktorom Ri₃₎ R14, Ru, Ru, R17, Ru, m, n a NH-P' znamenajú vyššie uvedené.

Deriváty odvodené od zlúčeniny všeobecného vzorca III

CCH₂)_m\

R₁₉ R₂₀ R₂₁ R₂₂ R₂3“^R24^- p^-R25^-(^CH2) q^-R26 (I) (III) (^CH2)n v ktorom Ri₉, R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, m, n, p a NH-P znamenaj ú vyššie uvedené.

Okrem vyššie uvedených štruktúr zlúčeniny vyrobené podľa vynálezu obsahujú peptidové deriváty obsahujúce dva alebo viac substituentov pripojených na jednu peptidovú skupinu. Tieto uskutočnenia podľa vynálezu sú deriváty biologicky aktívnych peptidov, ktoré majú viac ako jednu voľnú amínovú skupinu, napr. zvyšok lyzínu.

Tento vynález tiež poskytuje diméme peptidové deriváty obsahujúce dve peptidové skupiny naviazané na jediný substituent, napr. dva bradykinínové analógy naviazané na substituent zlúčeniny všeobecného vzorca V.

Peptidové deriváty podľa vynálezu sú deriváty biologicky aktívnych peptidov, ktoré sú vybrané zo skupiny pozostávajúcej zo somatostatínu, bombezínu, kalcitonínu, peptidu súvisiaceho s kalcitonínovým génom (CRGP), amylínu, paratyreoidného hormónu (PTH), peptidu uvoľňujúceho gastrin (GRP), hormónu stimulujúceho melanocyty (MSH), adrenokortikotropného hormónu (ACTH), peptidu súvisiaceho s prištítnym telieskom (PTHrP), hormónu uvoľňujúceho luteinizačný hormón (LHRH), faktoru uvoľňujúceho rastový hormón (GHRF), peptidu uvoľňujúceho rastový hormón (GHRP), cholecystokinínu (CCK), glukagónu, bradykinínu, peptidu podobného glukagónu (GLP), gastrínu, enkefalínu, neuromedínov, endotelínu, látky P, neuropeptidu Y (NPY), peptidu YY (PYY), vazoaktívneho intestinálneho peptidu (VIP), guanylínu, polypeptidu aktivujúceho hypofyzámu adenylcyklázu (PACAP), betabunkového tropínu, adrenomedulínu a z ich derivátov, fragmentov a analógov.

V mimoriadne výhodných uskutočneniach peptidová skupina znamená somatostatín alebo derivát, fragment alebo analóg somatostatínu. Medzi somatostatínové analógy, ktoré sa môžu používať podľa tohto vynálezu, patria, ale nie sú nimi obmedzené, nasledujúce zlúčeniny:

H-D-P-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-P-Nal-NH2,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-3-Nal-NH₂,

H-D^-Nal-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NPL,

H-D-P he-Cys-T y r-D-T rp-Ly s-Thr-Pen-T hr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH2,

H-D-Phe-Cys-T yr-D-T rp-Lys-Thr-Pen-Thr,

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr,

H-Gly-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr,

H-Phe-Pen-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr,

H-Phe-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr,

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol,

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

H-D-T rp-Cys-T yr-D-T rp-Lys-V al-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Trp-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-T rp-Lys-V al-Cys-T rp-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂₎

Ac-D-Phe-Lys*-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Asp-Thr-NH₂,

Ac-hArg(Et)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg(Et)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-LyS'Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg(Bu)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg(Et)₂-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-L-h Arg(Et)₂-Cys-Phe-D-T rp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg(CH₂CF₃)₂-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg(CH₂CF3)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(CH₂CF3)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH2,

Ac-D-hArg(CH2CF₃)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHEt,

Ac-L-hArg(CH₂CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(CH₂CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(Me)-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg(CH₂CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(Me)-Thr-Cys-Thr-NHEt,

Ac-hArg(CH₃, hexyl)-GIy-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-hArg(hexyl₂)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(Et)₂-Gly-Cys-Phe-D'Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHEt,

Ac-D-hArg(Et)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH₂, propionyl-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(iPr)-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-p-Nal-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Gly-hArg(Et)₂-NH₂,

Ac-D-Lys(iPr)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg(CH₂CF3)2-D-hArg(CH₂CF3)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(CH₂CF3)₂-D-hArg(CH₂CF₃)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe- -NH₂₎

Ac-D-hArg(Et)₂-D-hArg(Et)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-Cys-Lys-Asn-4-Cl-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-D-Cys-NH₂,

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Phe-NH₂₎

Bmp-T yr-D-T rp-Lys- V al-Cys-p-Cl-Phe-NH₂,

B mp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-P-Nal-NH₂,

H-D-p-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂₎

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-P-Nal-NH₂,

H-pentafluór-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-P-Nal-Cys-pentafluór-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

H-D-P-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-P-Nal-NH₂,

H-D-Phe-Cys-T yr-D-T rp-Lys-Val-Cys-P-Nal-NH₂₎

H-D-P-Nal-Cys-Tyr-D-T rp-Lys- Abu-Cys-Thr-NH₂,

H-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-P-Nal-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-T yr-D-T rp-Lys-Cys-Thr-NH₂₎ cyklo(Pro-Phe-D-Trp-N-Me-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-N-Me-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-N-Me-Phe), cyklo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-T yr-D-T rp-Lys-Thr-Ph e), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-L-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-Trp(F)-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-p-Cl-Phe), cyklo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-D-Lys-Trp-D-Phe), cyklo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Phe), cyklo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-Lys-D-Trp-D-Phe), cyklo(D-Abu-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Tyr), cyklo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe), cyklo(Pro-Tyr-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe), cyklo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba-Gaba), cyklo(Asn-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-NH(CH₂)4CO), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-P-Ala), cykJo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Glu)-OH, cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly), cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp(N02)-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-Trp(Br)-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe(I)-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Tyr(But)-Gaba), cyklo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Pro-Cys)-OH, cyklo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Pro-Cys)-OH, cyklo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Tpo-Cys)-OH, cykJo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-MeLeu-Cys)-OH, cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba), cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Phe-Gaba), cyklo(Phe-Phe-D-Trp(5F)-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys(Ac)-Thr-Phe-NH-(CH2)3CO), cyklo(Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba) a cyklo(Orn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba), kde Lys* znamená amidový mostík vytvorený medzi Lys* a Asp.

Peptidové zlúčeniny, zoznam ktorých je uvedený vyššie, sú opísané v nasledujúcich odkazoch, ktoré sú tu zahrnuté ako citácie: európska patentová prihláška P5 164 EU, Van Binst G. a spol.: Peptide Research 5, 8 (1992), Horvath A. a spol.: Abstrakt “Conformations of Somatostatin Analogs Having Anti-Tumor Activity“, 22. európske peptidové sympózium, 13. až 19. septembra 1992, Interlaken, Švajčiarsko, PCT prihláška WO 91/09056 (1991), európska patentová prihláška 0 363 589 A2 (1990) a 0 203 031 A2 (1986), USA patenty č. 4 904 642, 4 871 717, 4 853 371, č. 4 725 577, 4 684 620, 4 650 787, 4 603 120, 4 585 755, číslo 4 522 813, 4 486 415, 4 485 101, 4 435 385, 4 395 403, číslo 4 369 179, 4 360 516, 4 358 439, 4 328 214, 4 316 890, 4 310 518, 4 291 022, číslo 4 238 481, 4 235 886, 4 224 190, 4 211 693, číslo 4 190 648, 4 146 612 a 4 133 782.

Každý zvyšok aminokyseliny vyššie uvedených somatostatínových analógov má štruktúru všeobecného vzorca NH-C(R)H-CO-, v ktorom R znamená bočný reťazec. Čiarky medzi zvyškami aminokyselín predstavujú peptidové väzby, ktoré spájajú aminokyseliny. Ak je zvyšok aminokyseliny opticky aktívny, má L-konfiguráciu, pokiaľ nie je výslovne uvedená D-forma. Ak sú v peptide prítomné dva zvyšky Cys, vytvára sa medzi týmito zvyškami disulfidový mostík. Táto väzba však nie je uvádzaná v zozname zvyškov.

Ďaľšie výhodné somatostatínové analógy podľa vynálezu sú zlúčeniny všeobecného vzorca ΐ¹

A₁-A₂-A₃-D-Trp-Lys-A₆-A₇-A₈-R₃ *2 v ktorom Ai znamená D- alebo L-formu β-Nal, Trp, β-pyridyl-Ala, Phe, substituovaného Phe alebo je vynechaná a A₂ a A₇ nezávisle od seba znamenajú Cys, Asp alebo Lys. Tieto skupiny sú navzájom kovalentne zviazané disulfidovým mostíkom alebo amidovým mostíkom. Z d’aľších potom A₃ znamená β-Nal, Phe alebo o-, m- alebo substituovaný XPhe, kde X znamená atóm halogénu, skupinu OH, NH₂, NO₂ alebo alkylovú skupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, A« znamená Val, Thr, Ser, Ala, Phe, β-Nal, Abu, íle, Nie alebo

Nva a A« znamená Phe, Thr, Tyr, Trp, Ser, β-Nal, alkoholovú skupinu alebo je vynechaná, Ri a R₂ nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka, nižšiu acylovú alebo nižšiu alkylovú skupinu a R₃ znamená skupinu OH alebo NH₂ alebo je vynechaná. Ak buď A₂ alebo A7 znamená Cys, potom výhodne druhá skupina znamená tiež Cys, ak A« znamená α-aminoalkohol, potom R₃ je vynechaná a ak ani A₂ ani A7 neznamená Cys, potom A₂ znamená inú skupinu ako A₇.

Mimoriadne výhodné somatostatínové analógy podľa tohto uskutočnenia sú: Me-D-Phe-Cys-Tyr-T yr-D-T rp-Lys- V al-Cys-Thr-NH₂, H-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Nal-NH₂, H-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂, H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂₎H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Nal-NH₂,

H-D-P he-Cys-T yr-D-T rp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol.

Vo výhodných uskutočneniach majú lineárne somatostatínové analógy podľa vynálezu štruktúru všeobecného vzorca f¹

A¹-A²-A³-D-Trp-Lys-A⁶-A⁷-A⁸-R,

I *2 v ktorom

A¹ znamená D- alebo L- izomér Ala, Leu, íle, Val, Nie, Thr, Ser, β-Nal, βpyridyl-Ala, Trp, Phe, 2,4-dichlór-Phe, pentafluór-Phe, p-X-Phe alebo o-X-Phe, kde X znamená CH₃, atóm chlóru, brómu alebo fluóru, skupinu OH, OCH₃ alebo NO₂,

A² znamená Ala, Leu, íle, Val, Nie, Phe, β-Nal, pyridyl-Ala, Trp, 2,4-dichlórPhe, pentafluór-Phe, o-X-Phe alebo p-X-Phe, kde X znamená skupinu CH₃, atóm chlóru, brómu alebo fluóru, skupinu OH, OCH₃ alebo NO₂,

A³ znamená pyridyl-Ala, Trp, Phe, β-Nal, 2,4-dichlór-Phe, pentafluór-Phe, o-XPhe alebo p-X-Phe, kde X znamená skupinu CH₃, atóm chlóru, brómu alebo fluóru, skupinu OH, OCH₃ alebo NO₂,

A⁶ znamená Val, Ala, Leu, Ue, Nie, Thr, Abu alebo Ser,

A⁷ znamená Ala, Leu, íle, Val, Nie, Phe, β-Nal, pyridyl-Ala, Trp, 2,4-dichlórPhe, pentafluór-Phe, o-X-Phe alebo p-X-Phe, kde X znamená skupinu CH₃, atóm chlóru, brómu alebo fluóru, skupinu OH, OCH₃ alebo NO2,

A⁸ znamená D- alebo L- izomér Ala, Leu, íle, Val, Nie, Thr, Ser, Phe, β-Nal, pyridyl-Ala, Trp, 2,4-dichlór-Phe, pentafluór-Phe, p-X-Phe alebo o-X-Phe, kde X znamená skupinu CH₃, atóm chlóru, brómu alebo fluóru, skupinu OH, OCH₃ alebo NO₂alebo jeho alkohol a

Ri a R₂ nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka, nižšiu acylovú alebo nižšiu alkylovú skupinu a R₃ znamená skupinu OH alebo NH₂ alebo je vynechaná. Výhodne buď A¹ alebo A⁸ a buď A² alebo A⁷ musia znamenať aromatickú aminokyselinu a ak A⁸znamená alkohol, potom musí byť R₃ vynechaná. Ďalej A¹, A², A⁷ a A⁸ nemôžu súčasne všetky znamenať aromatické aminokyseliny. Medzi obzvlášť výhodné analógy z tohto aspektu patria:

H-D-Phe-p-chlór-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH₂,

H-D-Phe-p-NO₂-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂,

H-D-Nal-p-chlór-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂,

H-D-Phe-p-chlór-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂ a

H-D-Phe-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Ala-D-P-Na!-NH₂.

V ešte iných výhodných uskutočneniach peptidový zvyšok znamená bombezín alebo derivát, fragment alebo analóg bombezínu. Medzi bombezínové analógy, ktoré sa môžu používať podľa predloženého vynálezu, patria, ale nie sú nimi obmedzené : neuromedín C, neuromedín B, litorín a peptid uvoľňujúci gastrín (GRP), majúce nasledujúcu sekvenciu aminokyselín:

H-Ala-Pro-Val-Ser-Val-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Ala-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-AsnHis-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂.

Ďaľšie bombezínové analógy, ktoré sa môžu používať v predloženom vynáleze, zahŕňajú zlúčeniny opísané v nasledujúcich odkazoch, ktorých obsahy sú tu uvedené ako citácie: Coy a spol.: Peptides, Proceedings of the llth Amer. Peptide Symposium, Riviér a spol. (red.), ESCOM, str. 65 až 67 (1990), Wang a spol.: Journal Biol. Chemistry 265. 15695 (1990). Mahmoud a spol.: Cancer Research 51, 1798 (1991), Wang a spol.: Biochemistry 29, 616 (1990), Heimbrook a spol.: “Synthetic Peptides: Approaches to Biological Problems“, UCLA Symposium on Mol. and Celí. Biol. New Šerieš, diel 86, Tam a Kaiser (red.), Martinez a spol.: J. Med. Chem. 28, 1874 (1985), Gargosky a spol.: Biochem. J. 247. 427 (1987), Dubreuil a spol.: Drug Design Delivery 2, 49, Harwood Academic Publishers, Anglicko (1987), Heikkila a spol.: J. Biol. Chem. 262. 16456 (1987), Caranikas a spol.: J. Med. Chem. 25, 1313 (1982), Saeed a spol.: Peptides K), 597 (1989), Rosell a spol.: Trends in Pharmacological Sciences 3,211 (1982), Lundberg a spol.: Proc. Natl. Acad. Sci. 80, 1120 (1983), Engberg a spol.: Náture 293. 222 (1984), Mizrahi a spol.: Euro. J. Pharm. 82, 101 (1982), Leander a spol.: Náture 294. 467 (1981), Woll a spol.: Biochem. Bipohys. Res. Comm. 155. 359 (1988), Riviér a spol.: Biochem. 17, 1766 (1978), Cuttitta a spol.: Cancer Surveys 4, 707 (1985), Aumelas a spol.: Int. J. Peptide Res. 30, 596 (1987), Szepeshazi a spol.: Cancer Research 51, 5980 (1991), Jensen a spol.: Trends Pharmacol. Sci. 12, 13 (1991), USA patenty číslo 5 028 692, 4 943 561, 4 207 311, 5 068 222, 5 081 107 a číslo 5 084 555, európske patentové prihlášky č. 0 315 367 A2 (1989), 0 434 979 A1 (1991), 0 468 497 A2 (1992), 0 313 158 A2 (1989) a 0 339 193 A1 (1989), PCT prihlášky č. WO 90/01037 (1990) a 90/02545 (1992) a anglická prihláška GB 1 231 051 A (1990).

Peptidy podľa vynálezu sa môžu pripravovať vo forme farmaceutický prijateľných solí. Príkladmi výhodných solí su soli s terapeuticky prijateľnými organickými kyselinami, napr. s kyselinou octovou, mliečnou, maleínovou, citrónovou, jablčnou, askorbovou, jantárovou, benzoovou, salicylovou, metánsulfónovou, toluénsulfónovou alebo pamovou a tiež s polymérnymi kyselinami, ako je tanín alebo karboxymetylcelulóza, a soli s anorganickými kyselinami, ako sú halogénvodíkové kyseliny včítane kyseliny chlorovodíkovej, kyselina sírová a kyselina fosforečná.

V d’aľšej časti tohto spisu je opísaná syntéza zlúčenín všeobecného vzorca I, II a

III. V opise syntéz zlúčenín podľa predloženého vynálezu sa používajú nasledovné skratky:

Nal	znamená naftylalanín (1 alebo 2 ),
Abu	znamená α-aminomaslová kyselina,
D	znamená pravotočivá,
L	znamená ľavotočivá,
HOAc	znamená kyselina octová,
BOP	znamená benzotriazol-l-yloxytri(dimetylamino)fbsfónium- -hexafluórfosfát,
BOC	znamená terc. butyloxykarbonylová skupina,
DCC	znamená dicyklohexylkarbodiimid,
EDC	znamená l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid,
DEPC	znamená dietylkyanofosfonát,
DMF	znamená dimetylformamid,
CH₂C1₂	znamená dichlórmetán,
MeOH	znamená metanol,
EtOH	znamená etanol,
DIEA	znamená Ν,Ν-diizopropyletylamín,
HOBT	znamená 1-hydroxybenzotriazol,
HBTU	znamená O-benzotriazol-1 -yl,N,N,N'-tetrametyluronium- -hexafluórfosfát a
TFA	znamená trifluóroctová kyselina.

Východiskové materiály a medziprodukty pre zlúčeniny všeobecného vzorca I, II a III sú komerčne dostupné. Východiskové materiály sa môžu tiež ľahko pripravovať spôsobmi, ktoré sú dobre známe odborníkom a sú obsiahnuté v odbornej literatúre. Napríklad chémiu derivátov súvisiacich s kyselinou askorbovou možno nájsť v J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1220 (1974), Carbohyd. Res. 67. 127 (1978), Yakugaku Zasshi 86, 376 (1966), v USA patente č. 4 552 888, J. Med. Chem. 31, 793 (1988), 34, 2152 (1992) a 31, 1618 (1992), obsahy ktorých sú tu zahrnuté ako odkazy. Chémiu derivátov súvisiacich s tris možno nájsť v Árch. Biochem. Biophy. 96. 653 (1962) a Biochem. 5, 467 (1966), ktorých obsahy sú tu zahrnuté ako odkazy.

Všeobecne možno kondenzáciu zlúčenín všeobecného vzorca I, II a III na príslušné voľné skupiny chránených aminokyselín alebo peptidov vykonávať dobre známymi spôsobmi používanými pri syntéze peptidov (napr. DCC, DCC-HOBT, DICHOBT PPA, EDC-HOBT, DEPT, BOP, HBTU) s použitím bázy (napr. DIEA) v inertnom rozpúšťadle (napr. DMF, THF, dichlórmetáne, etylacetáte alebo v ich kombináciách). Odstránenie ochranných skupín sa tiež môže uskutočňovať dobre známymi spôsobmi (napr. odstránenie skupiny pridaním kyseliny alebo bázy, TFA, dioxánu s HC1, amoniaku, metoxidu sodného, piperidínu). Vo väčšine prípadov by sa reakčná teplota mala pohybovať v rozmedzí od -30 °C do izbovej teploty.

Prvý stupeň syntézy všeobecne zahŕňa reakciu medzi epoxidom a voľnou amínovou skupinou chránenej aminokyseliny alebo peptidu. Komplexácia a odstránenie ochranných skupín sa dosiahne dobre známymi spôsobmi, ako sú tie , ktoré opísal McManus a spol.: Synth. Communications 3, 177 (1973), ktorých obsahy sú tu zahrnuté ako odkazy. Nasledujúce syntézy, čistenie medziproduktov a produktov sa môžu robiť konvenčnými spôsobmi, ako je chromatografia alebo HPLC. Zlúčeniny sa identifikujú konvenčnými technikami, ako je NMR, aminokyselinová analýza a hmotnostná spektrometria.

Nasledujúce príklady ilustrujú výhodné spôsoby prípravy zlúčenín podľa vynálezu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Syntéza somatostatínových derivátov

Podľa tohto vynálezu bol syntetizovaný nasledujúci somatostatínový derivát, ktorý je označovaný aj ako BIM-23118:

HO O- (CH2) ₃CO-D-Nal-c (Cys-Tyr-D-Trp-Lvs-Val-Cys ] -Thr-NH^

Príklad 1, 1

3-O-(Benzyloxykarbonylmetyl)-2,5,6-triacetyl-askorbová kyselina

Anhydrid kyseliny octovej (6 ml) sa prikvapká do roztoku 3-0(benzyloxykarbonylmetyl) askorbovej kyseliny (2,2 g) v pyridíne (30 ml). Táto zmes sa mieša cez noc pri izbovej teplote. Pyridín sa pri zníženom tlaku odparí. Zostávajúci odparok sa roztrepe medzi etylacetát a IN HC1. Etylacetátová vrstva sa premyje IN HC1 a vodou. Po vysušení nad síranom horečnatým sa etylacetát pri zníženom tlaku odparí. Zvyšné stopy pyridínu a anhydridu kyseliny octovej sa odstránia niekoľkonásobným odparením s toluénom. Výsledná 3-O-(benzyloxykarbonylmetyl)-2,5,6-triacetylaskorbová kyselina vysušením vo vákuu poskytne viskózny gél, ktorý zostáva vo zvyšku (2,4 g). TLC (silikagél-chloroform-acetón v pomere 9:1); Rf= 0,52.

Príklad 1, 2

3-O-(Karboxymetyl)-2,5,6-triacetylaskorbová kyselina

Suspenzia paládia na uhlí (100 mg) vo vode (2 ml) sa pridá do roztoku 3-O(benzyloxykarbonylmetyl)-2,5,6-triacetyl-askorbovej kyseliny (2,4 g) v etanole (30 ml). Suspenzia sa trepe 6 hodín pod vodíkom (116 kPa). Katalyzátor sa odfiltruje vrstvou celitu. Odparením filtrátu pri zníženom tlaku sa získa 3-O-(karboxymetyl)-2,5,6triacetylaskorbová kyselina. TLC (silikagél-chloroform /metanol/ kyselina octová v pomere 9:1:0,1) : Rf = 0,2.

Príklad 1, 3

5.6- O-Izopropylidénaskorbová kyselina

Do rýchlo miešanej suspenzie kyseliny askorbovej (8,0 g) v acetóne (80 ml) sa pridá acetylchlorid (0,67 ml). Zmes sa mieša cez noc pri izbovej teplote. Zrazenina sa odfiltruje, premyje sa etylacetátom a vysuší sa pri zníženom tlaku. Získa sa tak 8,29 g

5.6- O-izopropylidénaskorbovej kyseliny vo forme bezfarebnej tuhej látky. TLC (silikagél /chloroform /metanol/ kyselina octová v pomere 3:1:0,1) : Rf = 0,54.

Príklad 1, 4

3-O-(Etoxykarbonylpropyl)-5,6-izopropylidénaskorbová kyselina

Roztok 5,6-O-izopropylidénaskorbovej kyseliny (2,0 g) v 10 ml DMF sa prikvapká do suspenzie NaH (0,44 g 50 % /hmôt./ disperzie NaH v minerálnom oleji, niekoľkokrát premytej hexánom) v 5 ml DMF. Keď sa skončí uvoľňovanie plynu, prikvapká sa roztok 1,43 ml etylesteru kyseliny 4-brómmaslovej v 5 ml DMF a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa pri zníženom tlaku odparí. Výsledný odparok sa chromatografuje na silikagéle (55 g), elúcia zmesou chloroformu s metanolom v pomere 19:1. Príslušné frakcie sa spoja a rozpúšťadlá sa pri zníženom tlaku odstránia. Získa sa tak viskózny odparok, ktorý obsahuje 3-O-(etoxykarbonylpropyl)5.6- izopropylidénaskorbovú kyselinu (1,1 g).

Príklad 1, 5

3-O-(Karboxypropyl)-5,6-izopropylidénaskorbová kyselina

4,6 ml 2N-NaOH sa pridá do roztoku 3-O-(etoxykarbonylpropyl)-5,6izopropylidénaskorbovej kyseliny ( 1,02 g ) v 15 ml etanolu. Po hodine sa väčšina etanolu pri zníženom tlaku odstráni, odparok sa zriedi s vodou (10 ml) a okyslí sa zriedenou HC1 (pH 3). Roztok sa potom nasýti NaCl a niekoľkokrát sa extrahuje etylacetátom. Spojené extrakty sa vysušia síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa pri zníženom tlaku odparí. Získa sa tak viskózny odparok, ktorý obsahuje 3-0(karboxypropyl)-5,6-izopropylidénaskorbovú kyselinu (0,84 g). TLC (silikagél:

chloroform/metanol/kyselina octová v pomere 5:1:0,1): Rf = 0,55.

Príklad 1, 6

D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂

Roztok diterc. butyldikarbonátu (0,36 g) v 10 ml DMF sa prikvapká do roztoku acetátu D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂ (2 g, ΒΓΜ-23014) v 45 ml DMF. Po 2 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni pri zníženom tlaku a pri izbovej teplote. Získa sa tak odparok, ktorý sa chromatografuje na silikagéle (150 g), elúcia zmesou chloroformu s metanolom v pomere 9:1. Príslušné frakcie sa spoja a rozpúšťadlo sa pri zníženom tlaku odstráni. Získa sa tak odparok, ktorý obsahuje D-Nal-c[Cys-Tyr-D-TrpLys-(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂ (1,45 g). TLC (silikagél, chloroform s metanolom v pomere 3:1) : Rf= 0,52.

ΗΩ O-íCHnl^CO-O-Nal-crCys-TYr-p-Trp-Ly^BOC) -Val-CysT-lhr-MM^

0,2 ml diizopropyletylamínu sa pridá do roztoku D-Nal-cyklo[Cys-Tyr-D-TrpLys-(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂ (300mg), 3-O-(karboxypropyl)-5,6izopropylidénaskorbovej kyseliny (56 mg) a HBTU (113 mg) v 5 ml DMF. Zmes sa potom mieša cez noc pri izbovej teplote a rozpúšťadlo sa pri zníženom tlaku odstráni. Odparok sa roztrepe medzi zmes etylacetátu s metanolom a nasýtený vodný roztok chloridu sodného. Etylacetátová vrstva sa premyje nasýteným vodným chloridom sodným, potom nasýteným vodným hydrogénuhličitanom sodným a vysuší sa síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa pri zníženom tlaku odstráni. Odparok sa preparatívne chromatografuje na TLC, elúcia zmesou chloroformu s metanolom v pomere 8:1.

Zodpovedajúca UF-pozitívna zóna sa izoluje a extrahuje sa zmesou chloroformu s metanolom. Rozpúšťadlá sa pri zníženom tlaku odstránia. Získa sa tak vyššie uvedený produkt (0,20 g). TLC (silikagél, chloroform/MeOH v pomere 5:1): Rf = 0,54.

Príklad 1, 8

Odstránenie skupiny BOC

Vyššie uvedený derivát kyseliny askorbovej, obsahujúci D-Nal-c[Cys-Tyr-D-TrpLys-(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂ (95 mg), sa nechá 45 minút reagovať s 25% (hmôt.) TFA v chloroforme pri izbovej teplote. Prchavé látky sa odstránia pri zníženom tlaku. Získa sa suchý odparok, ktorý sa vyčistí HPLC na kolóne Vydac Cig, elúcia acetonitril/0,1 % (hmôt.) vodná TFA. Konečný výťažok bol 90 mg. FAB-MS (m/e): 1341.

Príklad 1, 9

Iné uskutočnenia

Analogickým spôsobom sa syntetizujú aj nasledujúce somatostatínové deriváty:

CH

OH

HO

O-CH₂-CO-Ο-Mal-c(Cys-Tyr-D-Trp-tys-Val-Cys)-Thr-NH₂BIM-23135,

H¹

OH

OH ô-C'r^-CO-D- p M - c (Cy^£ - Tyr - P-Trp - Lys -Atu-Cys] -Thr

BIM-23181 a

OH

O-CH₂-C&-Q- Ph«-e[Cys -Tyr-D-7 rp-Lys-Thr -Cys) -Nal *h^H2

BIM-23183.

Príklad 2

Syntéza BIM-23107

Podľa tohto vynálezu bol syntetizovaný nasledujúci somatostatínový derivát, ktorý sa označuje aj ako BIM-23107: (AcO-CH2)3-C-NH-CO-(CH₂)2-CO-D-Nal-c-[CysTyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂.

Príklad 2, 1 (AcO-CH2)₃-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Nal-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys]-ThrNH₂

0,03 ml DIEA sa pridá do ľadom ochladeného roztoku diacetátu 2-N(sukcinyl)amino-2-(acetoxymetyl)-l,3-propándiolu (83 mg) a HBTU (92 mg) v 2 ml DMF. Po 30 minútach miešania pri 0 až 5 °C sa pridá roztok D-Nal-c-[Cys-Tyr-D-TrpLys(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH2 (100 mg) v 2 ml DMF, obsahujúci 0,03 ml DIEA. Zmes sa najprv mieša 1 hodinu pri 0 až 5 °C, potom cez noc pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku. Získa sa tak suchý odparok, ktorý sa roztrepe medzi etylacetát a vodný nasýtený NaCl, etylacetátová vrstva sa premyje vodným 5 % (hmôt.) roztokom hydrogénuhličitanu sodného a nakoniec vodným nasýteným NaCl. Výsledný roztok sa vysuší síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa pri zníženom tlaku odparí. Zostane odparok, ktorý obsahuje (AcO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Nal-c-[Cys-TyrD-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂ (0,14 g). TLC (silikagél, elúcia zmesou chloroformu s MeOH a AcOH v pomere 4:1:0,1): Rf = 0,82.

Príklad 2,2

Odstránenie skupiny BOC mg vyššie uvedenej zlúčeniny sa nechá 45 minút reagovať s 50 % (hmôt.) TFA v chloroforme pri izbovej teplote. Prchavé zlúčeniny sa pri zníženom tlaku odstránia. Získa sa tak odparok. Stopy TFA sa niekoľkokrát odparia spolu s etanolom. Odparok sa titruje éterom a potom sa vysuší. Získa sa tak 30 mg produktu. TLC (silikagél, elúcia chloroform s MeOH a AcOH v pomere 3:1:1): Rf = 0,24.

Príklad 2,3

Iné uskutočnenia

Podobným spôsobom sa syntetizujú aj nasledujúce somatostatínové deriváty: (HO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Nal-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂

BIM-23158 (HO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH₂

BIM-23167 (HO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Nal-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂

BIM-23173 (HO-CH₂)₃-C-NH-CH₂-CO-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂

BIM-23179 (HO-CH₂)₃-C-NH-CH₂-CO-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂

BIM-23182

Príklad 3

Syntéza BI-23201

Podľa tohto vynálezu sa syntetizuje nasledujúci somatostatínový derivát, ktorý sa označuje aj ako BIM-23201 :

(HO-CH₂)₃-C-CH₂-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-NaI-NH₂.

Príklad 3, 1 (HO-CH₂)₃-C-CH₂-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂

Po dávkach sa pridajú 2 g molekulového sita (0,3 nm) a NaCNBH3 (36 mg) počas 15 minút do roztoku D-Phe-c-[Cys-Tyr(OBt)-D-Trp-Lys(BOC)-Thr(OBt)-Cys]Nal-NH₂ (250 mg) a tris(acetoxymetyl)acetaldehydu (120 mg) získaného oxidáciou tricetyl-pentaerytritolu pyridíniumdichromátom alebo zmesou

DMSO/oxalylchlorid/trietylamín v metanole (10 ml) obsahujúcom 10 % (hmôt.) kyseliny octovej. Zmes sa potom mieša 30 minút pri izbovej teplote a zohrieva sa 4 hodiny. Po filtrácii sa zvyšok roztrepe medzi etylacetát a vodu. Etylacetátová vrstva sa premyje vodou, potom vodným hydrogénuhličitanom sodným a vysuší sa síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa pri zníženom tlaku odparí. Získa sa odparok (0,4 g), ktorý sa rozpustí v metanole (5 ml), nechá sa reagovať s roztokom NaOMe v MeOH (pH 10), mieša sa 1 hodinu a nakoniec sa neutralizuje s IN Hcl na pH5 až 6. Po odparení rozpúšťadla sä odparok rozpustí v 90 % (hmôt.) vodnej TFA a zmes sa mieša 30 minút.

t

Prchavé podiely sa pri zníženom tlaku odstránia. Stopy TFA a vody vo výslednom odparku sa odstránia spoločným odparovaním s etanolom (dvakrát). Odparok sa vysuší, titruje sa éterom a nakoniec sa vyčistí HPLC za podobných podmienok, ako je opísané vyššie. Získa sa 41 mg (HO-CH₂)₃-C-CH₂-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-NalNH₂vo forme bezfarebnej tuhej látky. Hmotnostné spektrum (m/e) : 1262,8.

Príklad 3, 2

Iné uskutočnenia

Podobným spôsobom sa syntetizuje nasledujúci somatostatínový derivát, ktorý sa označuje aj ako BIM-23195 :

(HO-CH₂)₃-C-CH₂-CO-D-Php-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂.

Príklad 4

Syntéza BIM-23197

Podľa tohto vynálezu sa syntetizuje nasledujúci somatostatínový derivát, ktorý sa označuje aj ako BIM-23197 :

(HO-CH₂)₂-N \í-(CH₂)₂-SO₂-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂.

Príklad 4, 1

2-Brómetánsulfonylchlorid

2-Brómetánsulfonát sodný (4,0 g) sa nechá reagovať s PC1₅ (11,8 g) počas chladenia v ľadovom kúpeli. Po získaní kvapalnej fázy sa roztok zohrieva 1,5 h v oleji na 90 až 120 °C, ochladí sa na izbovú teplotu, naleje sa do rozdrveného ľadu a potom sa mieša 15 minút. Zmes sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 20 ml) a spojené extrakty sa premyjú vodou (2x) a opäť vodou (2x). Vysušením nad bezvodým síranom horečnatým a destiláciou pri zníženom tlaku sa získa 2-brómetánsulfonylchlorid vo forme bezfarebnej kvapaliny (1,95 g, 42 až 44 °C/133 Pa).

Príklad 4, 2

Br-(CH₂)₂-SO₂-D-Phe-c[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr-(tBu)-NH(lcyklopropyl-l-metyl)-etyl

Roztok 2-brómetánsulfonylchloridu (30 mg) v DMF (1 ml) sa prikvapká do roztoku H-D-Phe-c[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr-(tBu)-(l-cyklopropyll-metyl)-etylu (150 mg) a DIEA (55 mg) v DMF (2 ml) pod dusíkom pri 0 °C. Reakčná zmes sa mieša 3 h pri 0 až 5 °C, rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku, odparok sa rozpustí v etylacetáte a premyje sa 5 % (hmôt.) kyselinou citrónovou (2x), 5 % (hmôt.) hydrogénuhličitanom sodným (2x) a soľným roztokom (2x). Roztok sa potom vysuší nad bezvodým síranom horečnatým, prefiltruje sa a pri zníženom tlaku sa zahustí dosucha. Produkt sa ďalej prečistí na krátkej kolóne silikagélu, elúcia etylacetátom. Frakcie, ktoré obsahujú produkt, sa spoja a rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku. Získa sa tak 105 mg Br-(CH₂)2-SO₂-D-Phe-c[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr-(tBu)-NH(lcyklopropyl-l-metyl)-etylu vo forme svetložltej tuhej látky. TLC (silikagél, chloroform/ MeOH/ AcOH v pomere 9:1:0,1): Rf = 0,36

Príklad 4, 3.

HO-(CH₂)₂-N N-(CH₂)₂-SO₂-D-Phe-c-[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-AbuCys]-Thr-(tBu)-NH( 1 -cyklopropyl-1 -metyl)-etyl

Roztok Br-(CH2)2-SO2-D-Phe-c[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr(tBu)-NH(l-cyklopropyl-l-metyl)-etylu (100 mg) a 2-hydroxyetylpiperazínu (55 mg) v 2 ml 1-propanolu sa varí pri spätnom chladení pod dusíkom 2,5 h. Roztok sa potom ochladí na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa pri zníženom tlaku odstráni. Odparok sa rozpustí v etylacetáte, ktorý obsahuje 5 % (hmôt.) metanolu a premyje sa roztokom chloridu sodného (3x). Nakoniec sa roztok vysuší nad síranom horečnatým, prefiltruje sa a pri zníženom tlaku sa odparí dosucha. Získa sa tak 110 mg vyššie uvedenej tuhej zlúčeniny. Táto zlúčenina sa bez ďalšieho čistenia použije pre nasledujúci stupeň.

Príklad 4, 4

HO-(CH₂)₂-N N-(CH₂)2-SO2-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂

110 mg chráneného somatostatínového derivátu získaného v predchádzajúcom stupni sa rozpustí v 10 ml 90 % (hmôt.) vodného roztoku TFA. Zmes sa mieša 1 h pri izbovej teplote pod dusíkom. Pri zníženom tlaku sa odstráni voda a TFA. Odparok sa titruje studeným éterom (3x10 ml). Získa sa nepatrne žltá tuhá látka. Tento materiál sa ďalej čistí preparatívnou HPLC na obrátených fázach, elúcia 1/ vodným roztokom octanu amónneho a 2/ vodným roztokom kyseliny octovej. Lyofilizácia spojených frakcií, obsahujúcich vyššie uvedený produkt, poskytla bielu tuhú látku (18 mg). Hmotnostné spektrum (ESI, m/e): 1252,7 (M* + 1).

Príklad 4, 5

Podobným spôsobom sa syntetizujú aj nasledujúce somatostatínové deriváty:

HO-(CH₂)₂-Ň N-(CH₂)₂-CO-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂

BIM-23190,

HO-(CH₂)₂-Ň N-(CH₂)₂-CO-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂

ΒΓΜ-23191,

HO-(CH₂)₂-C-NH-(CH₂)₂-SO₂-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂

BIM-23196, a

HO-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-N N-(CH₂)-CO-D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thrnh₂ ^x—^/

BIM-23202.

Príklad 5

Syntéza bombezínových derivátov

Podobným spôsobom, ako je opísané vyššie, sa syntetizuje nasledujúci bombezínový derivát, ktorý sa označuje aj ako BIM-26333:

GH

KO o_cH₂-c-Í2-CH-)-CO-D-Pbe-Gln-Tr?-Ala-Val-:Gly-His-Leu-Leu-NH2

Analogickým spôsobom, použitím syntetických modifikácií známych z oblasti techniky, sa syntetizujú d’aľšie peptidové deriváty podľa vynálezu.

V ďalšej časti sú uvedené výsledky testov testovaných peptidov.

Príklad 6

Väzbové testy

Na demonštrovanie väzbovej afinity somatostatínových (SRIF) analógov na somatostatínový receptor sa vyššie opísané vyčistené zlúčeniny testujú testom naviazania somatostatínu, zahŕňajúcim meranie in vitro inhibície naviazania [¹²⁵I-Tyrⁿ]SRIF-14 na krysie AR42J pankreasové membrány. Ako je uvedené v tabuľke 1, vyčistené somatostatínové analógy podľa tohto vynálezu vykazujú vysoké väzbové afinity na tieto receptory. V tabuľke je pre každý somatostatínový derivát uvedená molekulová hmotnosť, ktorá je stanovená hmotnostnou spektrometriou a vypočítaná z molekulárnej štruktúry.

Podobne bol testom naviazania bombezínu testovaný vyčistený, vyššie opísaný, bombezínový analóg. Test naviazania spočíval v meraniach in vitro inhibície naviazania [¹²⁵I-Tyr¹¹]bombezínu na krysie AR42J pankreasové membrány. V tomto teste bola stanovená väzbová afinita bombezínového analógu na GRP receptor okolo 21 nM.

Príklad 7

Test inhibície rastového hormónu (GH)

Skupine 5 krysích samcov Sprague Dawley ( každý o hmotnosti medzi 250 a 300 g ) bol injekčné s.c. podaný somatostatínový derivát alebo soľný roztok. Tridsať minút pred zvolenou dobou po podaní liečivého prípravku uvedenou v tabuľke II (2 h, 4 h, 6 h, 8h) boli krysy anestetizované Nembutalom (i.p., 50 mg/kg). 15 minút po anestézii bol odobraný podiel krvi kardiálnym vpichom cez heparín, aby zmeral základný GH. Ďalej bola podaná s.c. injekcia D-Ala²-GRF (10 pg/kg). Po 15 minútach bola odobraná krv, aby bol kvantitatívne stanovený stimulovaný GH, ktorý sa meria v plazme rádioimunoanalytickým testom dodaným NIADDKD. Zo získaných rozdielov medzi základnou a stimulovanou hodnotou GH sa vypočíta inhibícia GH.

Tabuľka II ukazuje účinok rôznych vyčistených somatostatínových analógov ako funkciu času. Účinnosť D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH2 (BIM-23060) na inhibovanie rastového hormónu krýs je porovnávaná s inými somatostatínovými derivátmi (BIM-23167, BIM-23179 a BIM-23181) podľa vynálezu. Všetky deriváty vykazujú prekvapujúce predĺžené trvanie pôsobenia, ktoré klesá v závislosti od času.

Na stanovenie ED50 (t.j. koncentrácie každej zlúčeniny potrebnej na inhibovanie 50 % uvoľneného rastového hormónu po príslušnom čase) príslušnej zlúčeniny boli uskutočnené d’aľšie pokusy so somatostatínovým analógom D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-TrpLys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ a s BIM-23190, BIM-23195 a BIM-23197. Pokusy boli robené v dávkovom rozmedzí medzi 25 pg/kg a 0,25 pg/kg. Tabuľka III ukazuje prekvapujúce zlepšenie somatostatínových derivátov oproti nemodifikovanému peptidu v rôznych časových intervaloch, z čoho vyplýva, že inhibícia uvoľňovania stimulovaného GH zlúčeninami podľa vynálezu závisí od času.

Príklad 8

Antiproliferačný test

Vyššie opísané vyčistené somatostatínové analógy boli testované aj na aktivitu proti rýchlo proliferujúcim bunkám. Tabuľka IV opisuje účinok týchto peptidov na rast AR42J nádorových buniek krysieho pankreasu. Na rozdiel od prírodného somatostatínu vykazujú deriváty podľa vynálezu podstatnú anti-proliferaČnú aktivitu. Na obrázku 1 je vidieť, že ako BIM-23041C (somatostatínový analóg), tak aj BIM-23118 (derivát zlúčeniny BIM-23014) inhibujú rast AR42J nádorových buniek krysieho pankreasu v závislosti od koncentrácie, pričom BIM-23118 je z týchto dvoch zlúčenín aktívnejší. Obe zlúčeniny inhibujú rast nádorových buniek vo väčšom rozsahu ako nemodifíkované somatostatínové analógy v ekvivalentných koncentráciách.

Príklad 9

Test príjmu tymidínu

V tomto teste sa zásobné kultúry švajčiarskych 3T3 buniek pestujú v Dulbeccovom modifikovanom Eaglesovom médiu (DMEM) doplnenom 10 % plodového teľacieho séra, vo vlhkej atmosfére s 10 % hmôt. CO2 a 90 % hmôt. vzduchu pri 37 °C. Bunky sa potom vysejú do klastrových misiek s 24 jamkami a použijú sa 4 dni po poslednej zmene média. Aby sa bunky zachovali vo fáze G1/G0 bunkového cyklu, DMEM médium bez séra sa použije 24 h pred testom príjmu tymidínu. Bunky sa potom dvakrát premyjú 1 ml podielmi DMEM (bez séra, 0,5 μΜ) a [metyl-³H]tymidínu (20 Ci/mmol, New England Nuclear). Bombezínové deriváty sa najprv testujú pri koncentrácii 0,001, 0,01, 0,1, 1, 10, 100 a 100 nM. Po 28 h pri 37 °C sa testuje inkorporácia [metyl-³H]tymidínu v podieloch nerozpustných v kyseline. Bunky sa najprv dvakrát premyjú ľadom ochladeným 0,9 % NaCl (1 ml podiely). Rádioaktivita rozpustná v kyseline sa potom odstráni 30 minútovou inkubáciou pri 40 °C s 5 % (hmôt.) trichlóroctovou kyselinou (TCA). Kultúry sa potom jedenkrát premyjú (1 ml) 95 % (hmôt.) etanolom a solubilizujú sa 30 minútovou inkubáciou s 10ml 0,1 N NaOH. Solubilizovaný materiál sa prenesie do baniek obsahujúcich 10 ml ScintA (Packard). Rádioaktivita sa stanoví kvapalinovou scintilačnou spektrometriou. Tento test ukazuje schopnosť bombezínových derivátov stimulovať príjem tymidínu do buniek. Vypočítaná EC50 bola 0,48 nm, čo ukazuje, že bombezínové deriváty podľa vynálezu sú účinné stimulátory príjmu tymidínu.

Peptidové deriváty podľa vynálezu sa môžu podávať cicavcom, predovšetkým človeku, jedným z tradičných spôsobov podávania (napr. orálne, parenterálne, transdermálne alebo transmukozálne), v prostriedkoch s trvalým uvoľňovaním použitím biodegradovateľného a biozlučiteľného polyméru alebo miestnym podávaním (napr. v prípade protirakovinových bombezínových alebo somatostatínových derivátov do pľúc) pomocou miciel, gélov alebo lipozómov. Dávkovaní je zvyčajne rovnaké ako bežne používané dávkovanie terapeutických peptidov pre ľudí.

Peptidové deriváty podľa vynálezu sú vhodné aj na zlepšené liečenie tých ochorení, ktoré sú citlivé na liečenie zodpovedajúcim nemodifikovaným peptidom. Práve vyššie opísané somatostatínové deriváty sú vhodné na liečenie rakoviny, akromegálie, pankreatitídy, proliferáci'e spôsobenej úrazom, diabetu, diabetickej retinopatie, restonózy po angioplastii, AIDSu, neurogénneho zápalu, arteritídy a gastrointestinálnych problémov včítane diarey.

Tabuľka I

In vitro väzbové afinity a molekulové hmotnosti somatostatínových peptidových derivátov

	MWtest	MWvyp	IC₅o (nM)
SRIF-14			0,17
SRIF-28			0,23
BĽM-23107	1340,4	1340,4	0,30
BIM-23118	1313,5	1313,52	0,30
BIM-23135	1426,2	1426,64	2,52
BIM-23158	1299,6	1299,54	0,33
BIM-23167	1347,6	1347,55	0,09
BIM-23173	1235,5	1235,46	0,11
BIM-23179	1305,9	1305,55	0,12
BIM-23181	1435,0	1434,62	0,25
BIM-23182	1193,8	1193,42	0,12
BIM-23183	1323,0	1322,49	0,22
BIM-23190	1202,8	1202,47	0,20
BIM-23191	1314, 9	1314,61	0,08
BIM-23195	1150,8	1150,39	0,08
BIM-23196	1243,7	1243,50	0,09
BIM-23197	1252,7	1252,55	0,29
BIM-23201	1262,8	1262,53	0,14
BIM-23202	1247,0	1246,53	0,18

Tabuľka II

Inhibícia uvoľňovania stimulovaného rastového hormónu u krýs somatostatínovými peptidovými derivátmi

Inhibícia v % ku kontrole pri dávke 25 pg/kg:
	2h	4h	6h	8 h
BIM-23060	86,39	64,96	47,62	38,15
BIM-23167	92,67	79,54	59,72	50,14
BIM-23179	92,79	63,85	67,78	68,26
BIM-23181	99,24	77,07	60,56	56,12

Tabuľka III

Inhibícia uvoľňovania stimulovaného rastového hormónu u krýs somatostatínovými peptidovými derivátmi podávanými s.c.

ED₅₀ (pg/kg)

	2h	4h	6h	8 h
BIM-23023	0,48	1,11	2,26	4,32
BIM-23190	0,68	0,57	0,76	1,04
BIM-23195	1,19	3,13	2,08	3,23
BIM-23197	1,01	0,59	1,14	1,59

Tabuľka IV

Antiproliferačná aktivita somatostatínových peptidových derivátov rast buniek (percentá ku kontrole)¹

SREF-14	91,3
SROF-28	98,0
BEM-23014C	74,1
BIM-23107	67,5
BIM-23109	72,1
BIM-23118	61,0
BIM-23135	62,9
BIM-23167	60,2
BIM-23173	67,9
BIM-23181	69,1
BIM-23182	68,7
BIM-23183	69,1
BIM-23195	69,2
BIM-23197	66,4

¹ Koncentrácia 100 nM, nádorové bunky AR42J krysieho pankreasu po 8 dňoch

Claims

1. Terapeutické peptidové deriváty, ktoré obsahujú biologicky aktívnu peptidovú časť a aspoň jeden substituent pripojený na peptidovú skupinu, pričom tento substituent je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca I, II a III, keď zlúčenina všeobecného vzorca I je kde

Ro znamená atóm kyslíka, síry alebo skupinu NR₅, v ktorej Rj znamená atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka,

Ri a R₂ nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka, skupinu všeobecného vzorca (CH₂)_mORí alebo CH(OR7)CH₂ORs, v ktorých R$ znamená atóm vodíka alebo acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka a R7 a Rg nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka, acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka alebo skupinu C(R9)(Rio), v ktorej R9 a Rio nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo skupiny Ri aj R₂ znamenajú skupinu =CHCH₂ORn, v ktorej Rn nezávisle od toho, či ide o Ri alebo R₂, znamená atóm vodíka alebo acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka a m znamená číslo od 1 do 5 včítane, a

jedna zo skupín R₃ a R» znamená skupinu (CH₂)_nR_I2 alebo (CH₂)_nCH(OH)Ri₂, v ktorých Rj₂ znamená skupinu CO, CH₂ alebo skupinu SO₂ a n znamená číslo medzi la 5 včítane, a zvyšujúca skupina R₃ alebo R4 znamená atóm vodíka, hydroxyalkxlovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka, zlúčenina všeobecného vzorca II je r₁₃-o-ch₂

R„-O-CH₂-C-(CH₂).-R,₆-R₁₇- (CH,) „-R,, r„-o-ch₂ OD,

R13, Rh a Ru nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka alebo acylovú skupinu s 2 až 24 atómami uhlíka,

Riô znamená skupinu NH alebo nie je prítomná,

Rn znamená skupinu CO, atóm kyslíka alebo nie je prítomná,

Ris znamená skupinu CO, CH₂, SO₂ alebo nie je prítomná, m znamená číslo od 1 do 5 včítane, n znamená číslo od 1 do 5 včítane a zlúčenina všeobecného vzorca III je (CH_?)

2'm ^19”^20 ^21^_^22~^23^_^24^- p^-^25~ (^CH₂) q“^26 \ / ( III), (^CH2> n kde

R₁₉ znamená atóm vodíka, skupinu NH₂, aromatickú funkčnú skupinu, skupinu OH, hydroxyalkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, skupinu H(R₂7)(R₂g), skupinu SO3H alebo nie je prítomná, pričom R₂7 a R₂₈ nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka,

R₂₀ znamená atóm kyslíka alebo nie je prítomná,

R₂₂ znamená atóm dusíka, skupinu CH, atóm kyslíka alebo atóm uhlíka,

-R₂₃- znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo nie je prítomná,

R₂4 znamená atóm dusíka, skupinu CH alebo atóm uhlíka,

R25 znamená skupinu NH, atóm kyslíka alebo nie je prítomná,

R26 znamená skupinu SO₂, CO, CH₂ alebo nie je prítomná, m znamená číslo medzi 0 a 5 včítane, n znamená číslo medzi 0 a 5 včítane, p znamená číslo medzi 0 a 5 včítane a q znamená číslo medzi 0 a 5 včítane, pričom peptidová časť je pripojená ku každému substituentu väzbou CO-N, CH₂N alebo SO₂-N medzi substituentom a atómom dusíka N-konca alebo bočného reťazca uvedenej peptidovej časti.

2. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 1, v ktorých substituent pripojený na peptidovú časť znamená zlúčeninu všeobecného vzorca I.

3. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 2, v ktorých R_J2 znamená skupinu CH₂ alebo SO₂.

4. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 1, v ktorých substituent pripojený na peptidovú časť znamená zlúčeninu všeobecného vzorca II.

5. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 4, v ktorých Rig znamená skupinu CH2 alebo SO2.

6. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 5, v ktorých Ru, R14 aj Ru znamená atóm vodíka a R17 nie je prítomná.

7. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 6, v ktorých substituent znamená skupinu (HOCH₂)₃C-NH-(CH)2-SO2 alebo (HOCH₂)₃C-CH₂.

8. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 1, v ktorých substituent pripojený na peptidovú časť znamená zlúčeninu všeobecného vzorca III.

9. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 8, v ktorých -R23- znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, R22 znamená atóm dusíka, atóm uhlíka alebo skupinu CH a R₂4 znamená atóm uhlíka.

10. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 8, v ktorých R₂₂ znamená atóm kyslíka, R19, R₂o, R21 a -R23- nie sú prítomné a súčet m + n znamená číslo 3, 4 alebo 5.

11. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 8, v ktorých -R23- nie je prítomná.

12. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 11, v ktorých aspoň jeden zo substituentov R22 a R24 znamená atóm dusíka.

13. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 12, v ktorých R₂2 aj R24 znamená atóm dusíka.

14. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 13, v ktorých substituent znamená jednu zo skupín:

/ \

HO(CH₂)₂ - n N - (CH₂)₂SO₂\_/ / \

HO(CH₂)₂ - n N - (CH₂)₂CO- .

\_/

15. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 1, v ktorých peptidová časť je výhodne vybraná zo skupiny pozostávajúcej z somatostatínu, bombezínu, kalcitonínu, peptidu súvisiaceho s kalcitonínovým génom (CRGP), amylínu, paratyreoidného hormónu (PTH), peptidu uvoľňujúceho gastrín (GRP), hormónu stimulujúceho melanocyty (MSH), adrenokortikotropného hormónu (ACTH), peptidu súvisiaceho s prištítnym telieskom (PTHrP), hormónu uvoľňujúceho luteinizačný hormón (LHRH), faktoru uvoľňujúceho rastový hormón (GHRF), peptidu uvoľňujúceho rastový hormón (GHRP), cholecystokinínu (CCK), glukagónu, bradykinínu, peptidu podobného glukagónu (GLP), gastrínu, enkefalínu, neuromedínov, endotelínu, látky P, neuropeptidu

Y (NPY), peptidu YY (PYY), vazoaktívneho intestinálneho peptidu (VIP), guanylínu, polypeptidu aktivujúceho hypofyzámu adenylcyklázu (PACAP), betabunkového tropínu, adrenomedulínu a z ich derivátov, fragmentov a analógov.

16. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 15, v ktorých peptidová časť znamená somatostatín alebo jeho derivát, fragment alebo analóg.

17. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 16, v ktorých somatostatínový analóg znamená jednu z nasledujúcich zlúčenín:

H-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂, H-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂ a H-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂.

18. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 15, v ktorých peptidový zvyšok znamená bombezín alebo jeho derivát, fragment alebo analóg.

19. Terapeutické peptidové deriváty podľa nároku 1, v ktorých peptidový zvyšok znamená jednu z nasledujúcich zlúčenín:

/ \

HO(CH₂)₂-N N-(CH₂)CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂, a

HO (CH₂) ₂-N N-(CHj) gSOg-D-Phe-c [Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys ] -Thr-NHj.

20. Terapeutické diméme peptidové deriváty, ktoré obsahujú dve biologicky aktívne peptidové časti a aspoň jeden substituent pripojený na tieto peptidové časti, pričom tento substituent je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca IV a V, keď zlúčenina všeobecného vzorca IV je kde

R_o znamená atóm kyslíka, síry alebo skupinu NR₅, v ktorej R5 znamená atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka,

Ri a R2 nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka, skupinu všeobecného vzorca (CH2)_m0Ré alebo CH(OR7)CH₂OR«, v ktorých R^ znamená atóm vodíka alebo acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka a R7 a Rg nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka, acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka alebo skupinu C(Rg)(Rio), v ktorej R9 a Rio nezávisle od seba znamenajú atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo skupiny Ri aj R2 znamenajú skupinu =CHCH₂ORn, v ktorej R11 nezávisle od toho, či ide o Ri alebo R2, znamená atóm vodíka alebo acylovú skupinu s 2 až 7 atómami uhlíka a m znamená číslo od 1 do 5 včítane, a

R₃ a R4 nezávisle od seba znamenajú skupinu (CH2)_nRi2 alebo (CH₂)_nCH(OH)Ri2, v ktorých R12 znamená skupinu CO, CH₂ alebo skupinu SO₂ a n znamená číslo medzi la 5 včítane, a zlúčenina všeobecného vzorca V je (CH₂)„ \ (V) ^R19^-R20“^R21^-R22^-R23“^R24~ (^CH2 )p^-R25“ (^^H2 )q^-R26 \ / (ch₂)„ kde

R19 znamená skupinu SO₂, CO alebo CH₂,

R20 znamená atóm kyslíka alebo nie je prítomná,

R₂i znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo nie je prítomná,

R₂₂ znamená atóm dusíka, skupinu CH, atóm kyslíka alebo atóm uhlíka,

-R₂3- znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo nie je prítomná,

R₂4 znamená atóm dusíka, skupinu CH alebo atóm uhlíka,

R₂j znamená skupinu NH, atóm kyslíka alebo nie je prítomná,

R₂6 znamená skupinu SO₂, CO, CH₂ alebo nie je prítomná, m znamená číslo medzi 0 a 5 včítane, n znamená číslo medzi 0 a 5 včítane, p znamená číslo medzi 0 a 5 včítane a q znamená číslo medzi 0 a 5 včítane a aspoň jedna z peptidových častí je pripojená ku každému substituentu väzbou CO-N, CH₂-N alebo SO₂-N medzi týmto substituentom a atómom dusíka N-konca alebo bočného reťazca uvedenej peptidovej časti.

21. Terapeutické diméme peptidové deriváty podľa nároku 20, v ktorých -R^znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, R₂₂ znamená atóm dusíka, atóm uhlíka alebo skupinu CH a R₂4 znamená atóm uhlíka.

22. Terapeutické diméme peptidové deriváty podľa nároku 20, v ktorých R₂₂znamená atóm kyslíka, Ri₉, R20, R21 a -R23- nie sú prítomné a súčet m + n znamená Číslo 3, 4 alebo 5.

23. Spôsob použitia terapeutických peptidových derivátov podľa nároku 1 na liečenie ochorení pacienta, vyznačujúci sa tým, že tento spôsob zahŕňa podanie terapeutického množstva peptidového derivátu podľa nároku 1 tomuto pacientovi.

24. Spôsob použitia terapeutických peptidových derivátov podľa nároku 23, vyznačujúci sa tým, že touto peptidovou časťou je somatostatín alebo jeho analóg.

25. Spôsob použitia terapeutických peptidových derivátov podľa nároku 23, v y značujúci sa tým, že ochorením je rakovina.