SK146096A3 - Adenosine derivatives, processes for their preparation, their use for the preparation of drugs, their use in therapy and pharmaceutical compositions containing them - Google Patents

Description

Adenozínové deriváty, spôsob ich prípravy, použitie týchto derivátov na prípravu liečiv, použitie týchto derivátov pri liečení a farmaceutická kompozícia obsahujúca tieto deriváty

Oblasť techniky

Vynález sa týka adenozínových derivátov a predovšetkým nového použitia agonizujúcich činidiel receptorov Al.

Doterajší stav techniky

V súčasnosti sú známe niektoré zlúčeniny spadajúce do všeobecného vzorca I ( pozri ďalej), ktoré vykazujú účinnosť ako antihypertezné činidlá a koronárne vazodilatátory (napríklad uverejnená britská patentová prihláška 2 226 027 A, európske patentové prihlášky EP-O-378518 a EP-0-269 574, patenty US 4, 843, 006 a 4,985,049).

Okrem toho je známe, že niektoré z týchto derivátov chránia vaskulárny endotel tým, že inhibujú ako agregáciu trombocytov tak i aktiváciu leukocytov. Tieto zlúčeniny taktiež znižujú hladinu lipidov v krvi. Okrem toho majú zlúčeniny všeobecného vzorca I ochranný účinok proti chorobám spôsobeným hypertenziou, akými sú kongestívne zlyhanie srdca, infarkt myokardu alebo náhla srdcová smrť alebo renálna insuficiencia ( pozri európske patentové prihlášky EP-0-387 518 a EP-0-269 574 ) .

Tieto zlúčeniny sú taktiež známe ako liečivá na liečenie neurodegeneratívnych porúch, periférnych neuropatií, akou je diabetická neuropatia, a porúch združených s periférnymi vaskulárnymi ochoreniami alebo/a porúch združených s neutronálnou degeneráciou, hyperglyceridémia/nízke hladiny HDL cholesterolu, lipidové dysfunkcie, zvýšené hladiny voľných mastných kyselín alebo diabetes typu I alebo typu II, vrátane inzulíno-nedependentnej cukrovky, arytmií, predovšetkým paroxymálnej supraventrikulátnej tachykardie a tachykardiálne atriálne fibrilácie a ako prostriedky chrániace proti infarktu myokardu .

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu je nové použitie zlúčenín všeobecného vzorca I

HN

v ktorom

R¹ znamená atóm vodíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy, alylovú skupinu, metalylovú skupinu, priamu alebo rozvetvenú alkinylovú skupinu obsahujúcu 3 až 7 uhlíkových atómov, cykloalkylovú skupinu obsahujúcu 3 až 8 uhlíkových atómov, hydroxycykloalkylovú skupinu obsahujúcu 4 až 8 uhlíkových atómov, fenylovú skupinu mono- alebo navzájom nezávisle di-substituovanú halogénom s atómovým číslom 9 až 35, alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 uhlíkové atómy, alkoxyskupinou obsahujúcou 1 až 4 uhlíkové atómy alebo trifluórmetylovou skupinou, alebo fenylalkylovou skupinou, v ktorej alkylový zvyšok obsahuje 1 až 4 uhlíkové atómy a fenylový kruh je nesubstituovaný alebo mono- alebo navzájom nezávisle di-substituovaný halogénom s atómovým číslom 9 až 35, aikyiovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 uhlíkové atómy, alkoxyskupinou obsahujúcou 1 až 4 uhlíkové atómy alebo trifluórmetylovou skupinou, alkylovú skupinu obsahujúcu aspoň jednu hydroxyskupinu alebo aspoň dve fenylové skupiny, bicykloalkylovú skupinu ako endoalebo exo-bicyklo-/2,2,1/heptylovú skupinu, naftylalkylovú skupinu, v ktorej alkylový zvyšok obsahuje 1 až 4 uhlíkové atómy, acenaftylenylalkylovú skupinu, v ktorej alkylový zvyšok obsahuje 1 až 4 uhlíkové atómy alebo skupinu všeobecného vzorca A alebo všeobecného vzorca B (A) (B) v ktorom znamená atóm vodíka, hydroxyskupinu alebo alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy, znamená atóm vodíka alebo hydroxyskupinu, znamená skupinu -CH -, -0-, -S- alebo priamu väzbu, znamená skupinu “(CH ) - alebo priamu väzbu, znamená celé číslo od 1 do 3, pričom prerušovaná čiara vo vzorci A znamená prípadnú väzbu,

R² znamená atóm vodíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až uhlíkové atómy, amínovú skupinu, cykloalkylovú skupinu obsahujúcu 3 až 5 uhlíkových atómov alebo atóm halogénu s atómovým číslom 9 až 35 a

R³ znamená alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy, pri ktorých sa zistilo, že sú mimoriadne zaujímavými analgetikami, napríklad na tíšenie bolesti, napríklad akútnej alebo chronickej bolesti.

Vo vyššie uvedených vzorcoch majú substituenty 2', 3',

4' a 5' tetrahydrofuránového kruhu konfiguráciu ako v adenozíne.

V jednej skupine zlúčenín všeobecného vzorca I, R¹ je iný ako hydroxycyklylová skupina. V inej skupine zlúčenín všeobecného vzorca I, R¹ znamená hydroxycyklylalkylovú skupinu obsahujúcu 4 až 8 uhlíkových atómov.

S výhodou je zlúčeninou všeobecného vzorca I 6-cyklohexyl-2’-O-metyladenozín, ktorý sa bude v ďalšom uvádzať ako zlúčenina M.

A¹-Adenozínová účinnost pri výhodných zlúčeninách všeobecného vzorca I sa môže typicky stanoviť nasledujúcim spôsobom.

Afinita k adenozínovým receptorom

Spôsobom, ktorý opísali H. Bruns a kol. v Molecular Pharmacology 29 (1986), str. 331-344, sa pripravia striatálne membrány ošípaných. Na označenie ako A¹ tak i A²-receptorov sa použije činidlo ³H-NECA, čo je neselektívne agonizujúce činidlo adenozínových receptorov. Hodnoty IC_so sa odvodia z vytesňovacích kriviek pri použití váženej nelineárnej metódy najmenších štvorcov upravenej pre Langmuirovu rovnicu, následne sa vypočítajú hodnoty pK_D.

Tabuľka

Afinita adenozín-receptorových ligandov pre receptory A^x a A²

	Ax (Κθ,ηΜ)	A2 (Κθ,ηΜ)	A1 :A2 selektivita	n
CPA	0,74 ± 0,08	930 ± 110	1260	6
CV 1808	2460 ± 7578	269 ± 70	0,1	5
CGS 21680	4360 ± 1080	18,6 ± 4	0,004	4
Zlúčenina M 1,5 H O ' 2	23 ± 2	24500 ± 5160	1090	5

CPA = cyklopentyladenozín

CV 1808 = 2-fenylaminoadenozín (Carbohydrates, zv. 81, 1974, ref. 91898 K)

CGS 21680 = 2-/p-(2-karboxyetyl)fenetylamino/-5¹-N-etylkarboxamido-adenozín (Faser, J., 1989, ref. 4770/3).

Z literatúry je známe, že produkt CPA je potentným a vysoko selektívnym vytesňujúcim činidlom väzby k receptoru A^x a produkt CV 1808 je relatívne slabým avšak selektívnym ligandom receptora A², pričom produkt CHS 21680 vykazuje vysokú potenciu a selektivitu pre receptor A².

Zlúčenina M vykazuje vo forme 1,5-hydrátu dobrú afinitu a vysokú selektivitu pre receptor A¹ v porovnaní s receptorom A².

Analgetická účinnosť zlúčenín všeobecného vzorca I bola preukázaná ich analgetickou účinnosťou pri štandardných testoch s pokusnými zvieratami, napríklad pri použití zápalových a neuropatických modelov, napríklad znížením peristentnej zápalovej mechanickej hyperanalgézie /testy a) a b)/ a perzistentnej neuropatickej terminálnej hyperanalgézie /test c)/, ktorá predstavuje chronickú neuropatickú bolesť.

Zápalová hyperanalgézia

Test a)

Hyperanalgézia indukovaná Freundovým činidlom

Krysám sa aplikuje vnútrokíbovo do jedného kolenného kĺbu kompletné Freundovo adjuvans (100 mikrolitrov). U krysy klesá končatiny a táto zaťažiTento jav je ukazovateľom táto hyperanalgézia javí znesiteľná zaťažiteľnosť ošetrenej teľnosť je potlačená počas až 5 dní. mechanickej hyperanalgézie, pričom odozvu na podávanie NSAID a opiátov. Zlúčeniny všeobecného vzorca I sa podávanú injekciou a s výhodou perorálne v dávkach od asi 3 do 60 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti zvieraťa. S účelom stanovenia reverzie hyperanalgézie sa meria schopnosť pokusného zvieraťa znášať zvýšené zaťaženie ošetrenej končatiny.

Zlúčenina M vykazuje pri tomto teste predovšetkým zaujímavú účinnosť pri perorálnom podaní dávok od asi 3 do asi 60 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti pokusného zvieraťa pri trvaní účinku počas asi jednej hodiny. Nejestvuje tu žiaden významný rozdiel v odozve medzi dávkami 3, 30 a 60 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti, čo vedie k záveru, že maximálny účinok sa dosahuje v rozmedzí 3 až 30 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti.

Test b)

Mechanická hyperanalgézia indukovaná terpentínom

Lokálna intraplantárna injekcia zmesi terpentínu a parafínu do labky krysy (ľavá zadná končatina) má za následok lokálnu zápalovú odozvu a zníženie prahu znesiteľnosti pri mechanickom stimule (tlak na labku, medzná záťaž 340 g). Zlúčeniny všeobecného vzorca I sú pri tomto účinné pri dávkach od asi 1 do 100 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti podaných perorálne alebo subkutánne tri dni po vyššie uvedenej intraplantárnej injekcii, pričom sa medza znesiteľnosti mechanickej záťaže meria 1 až 3 hodiny po aplikácii účinnej zlúčeniny.

Zlúčenina M vykazuje významnú účinnosť v rámci tohto testu pri dávkach 30 a 60 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti pri perorálnom podaní. Morfium má pri tomto teste hodnotu ED_so rovnú 1,2 mg/kg telesnej hmotnosti pri subkutánnom podaní.

Neuropatická hyperanalgézia

Test c)

Neuropatická termálna hyperanalgézia (podľa metodiky Z. Seltzera a kol., Pain, 1990, 43, 205 - 518)

Unilateriálna parciálna ligácia ischiatického nervu eliminuje vlákna počas inervácie labky krysy. U krysy nastane rozvoj hyperanalgézie k mechanickým a tepelným stimulom a alodýnia čiastočne denervovanej labky, bez toho aby pritom prišlo k autotómii. Pokusné zvieratá sa umiestnia do boxu z plexiskla na tenkú sklenenú dosku a na povrch chodidla labky sa aplikujú zvyšujúce sa tepelné stimuly. Pritom sa meria reakčný čas, ktorý uplynie medzi aplikáciou tepelného stimulu a odtiahnutím labky. Zlúčeniny všeobecného vzorca I sú pri tomto teste účinné pri dávkach od asi 1 do asi 100 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti (pri subkutánnom alebo s výhodou perorálnom podaní) podaných 12 až 15 dní po uvedenej ligácii nervu Zlúčenina M je predovšetkým účinná proti termálnej hyperplázii. Zlúčenina M vykazuje významnú účinnosť pri dávkach 30 až 60 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti, pričom maximálny účinok vykazuje pri dávke 30 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti. Jej ED_so predstavuje asi 60 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti pri perorálnom podaní. Morfium má pri tomto teste hodnotu ED_so rovnú pri subkutánnom podaní asi 3 mg/kg.

Klinické testy

Klinické testy sa môžu uskutočňovať nasledujúcim spôsobom. Pacientom trpiacom bolesťou, ktorá má formu postoperačnej alebo postherpetickej neuralgézie sa podajú zlúčeniny všeobecného vzorca I, predovšetkým zlúčeniny M, v dávke od 0,02 do 5 mg. Dá sa pozorovať utíšenie bolesti.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa preto užitočné ako analgetiká, napríklad proti akútnej alebo chronickej bolesti, napríklad proti chronickej neuropatickej bolesti.

Predmetom vynálezu je preto skutočnosť, že je poskytnutý spôsob liečenia bolesti, ktorého podstata spočíva v tom, že sa subjektu, ktorý takéto liečenie potrebuje, podá terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, ktorá bola definovaná vyššie.

Ďalším predmetom vynálezu je použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I, ktorá bola definovaná vyššie, ako analgetika pri príprave liečiva vhodného na liečenie bolesti.

Ďalším predmetom vynálezu je poskytnutie analgetickej kompozície, ktorej podstata spočíva v tom, že obsahuje vyššie definovanú zlúčeninu všeobecného vzorca I ako analgetikum v kombinácii s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom.

Farmakologické indikácie zlúčenín všeobecného vzorca I zahrňujú bolesť, napríklad akútnu bolesť spojenú s poškodením tkaniva a zápalom (napríklad postoperačná bolesť, bolesť spôsobená popáleninami, úrazy a pod.), chronickú zápalovú bolesť (napríklad pri artritíde) a chronickú neuropatickú bolesť (napríklad bolesť pri diabetickej neuropatii, herpetickej neu9 ralgii, roztrúsenej skleróze, kauzalgii, atď.).

Dávky zlúčeniny použité v rámci vyššie uvedených indikácii budú pochopiteľne závisieť od použitej zlúčeniny, od závažnosti liečeného stavu, od stavu liečeného subjektu a od jeho telesnej hmotnosti, od spôsobu podania a od relatívnej účinnosti použitej zlúčeniny. Vo všeobecnosti sa uspokojivé výsledky pri zvieratách dosiahnu pri podaní troch denných dávok od asi 1 do asi 100 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti, napríklad 3 až 60 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti, predovšetkým 10 až 60 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti. Pri väčších cicavcoch, napríklad ľudí sa podáva denná dávka od asi 0,1 do asi 10 mg, vhodne podaná v jednotlivých dávkach od asi 0,02 do asi 5 mg, pričom takéto jednotkové dávky sa podávajú viackrát ako raz denne, napríklad dvakrát, trikrát, štyrikrát, päťkrát alebo šesťkrát denne, avšak s výhodou jedenkrát alebo dvakrát denne.

Pri vyššie uvedenom teste a) má NSAID iburpofen hodnotu ED_so rovnú asi 4 mg/kg pri perorálnom podaní, pričom indomethacin má hodnotu ED_so rovnú 13 mg/kg pri perorálnom podaní. Zlúčenina M je asi tristokrát účinnejšia. Pri zlúčenine M sa výhodné dávkové rozmedzie pohybuje od asi 0,1 mg/deň do asi 10 mg/deň, napríklad medzi 3a 30 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti pre dospelého pacienta s telesnou hmotnosťou 70 kilogramov, a to v závislosti od závažnosti liečeného stavu a početnosti podaní.

Pre zlúčeninu M sa preukázalo, že pri nej pri jednorázových dávkach dosahujúcich až 5 mg pri perorálnom podaní nedochádza k žiadnym závažným nepriaznivým účinkom.

V prípade, že sa tu použije výraz ''farmaceutický prijateľný, potom sa tento výraz vzťahuje na materiály, ktoré sú vhodné na použitie v humánnej a veterinárnej medicíne.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť formulované pre účely podania ľubovoľným vhodným spôsobom, pričom voľba výhodného spôsobu podania závisí od poruchy, ktorá sa podaním lieči a s výhodou sa zlúčenina podľa vynálezu podáva v jednotkovej dávkovej forme alebo vo forme, ktorá sa môže ľudskému pacientovi podať v jedinej dávke. S výhodou je kompozícia vhodná na perorálne, rektálne, topické, parenterálne, intravenózne alebo intramuskulárne podanie.

Kompozície podľa vynálezu môžu mať formu tabliet, kapsúl, toboliek, liekoviek, práškov, granúl, pastiliek, čípkov, rekonštituovateľných práškov alebo kvapalných prípravkov, akými sú sterilné parenterálne roztoky alebo suspenzie. Uvažuje sa taktiež o topických formuláciách v prípade, v ktorom budú takéto prípravky vhodné.

Pre účely dosiahnutia reprodukovateľnosti podania je výhodné, keď má kompozícia podľa vynálezu formu jednotkovej dávky.

Jednotkovými dávkovými formami môžu byť v prípade perorálneho podania tablety a kapsule obsahujúce 0,02 až 5 mg zlúčeniny podľa vynálezu, pričom tieto tablety a kapsule môžu obsahovať konvenčné pomocné látky, akými sú spájadlá, ako napríklad sirup, akácia, želatína, sorbitol, tragant alebo polyvinylpyrolidón, plnidlá, ako napríklad laktóza, cukor, kukuričný škrob, fosforečnan vápenatý, sorbitol alebo glycín, tabletizačné mazadlá, ako napríklad stearát horečnatý, dezintegračné činidlá, ako napríklad škrob, zosieťovaný polyvinylpyrolidón, škrob-glykolát sodný alebo mikrokryštalická celulóza, alebo farmaceutická celulóza, alebo farmaceutický prijateľné zmáčadlá, ako napríklad laurylsulfát sodný.

Uvedené pevné perorálne kompozície sa môžu pripraviť konvenčnými postupmi zahrňujúcimi zmiešavanie, plnenie, tabletovanie a pod. Pre účely distribúcie účinnej látky v kompozíciách, v ktorých sa použilo veľké množstvo plnidiel, sa môžu použiť opakované zmiešavacie operácie.

Takéto operácie patria však medzi konvenčné operácie doterajšieho stavu techniky. Uvedené tablety sa môžu ovrstviť pri použití veľmi dobre známych metód v normálnej farmaceutickej praxi, pričom sa tablety pokryjú vrstvou, predovšetkým enterickým poťahom.

Perorálne kvapalné prípravky môžu mať napríklad formu emulzií, sirupov alebo elixírov alebo môžu mať formu suchého produktu určeného na rekonštitúciu s vodou alebo iným vhodným kvapalným vehikulom bezprostredne pred vlastným podaním. Takéto kvapalné prípravky môžu obsahovať konvenčné prísady, akými sú suspendačné činidlá, napríklad sorbitol, sirup, metylcelulóza, želatína, hydroxymetylcelulóza, karboxymetylcelulóza, gél stearátu hlinitého, hydrogenované jedlé tuky, ďalej emulgačné činidlá, ako napríklad lecitín, sorbitanmonooleát alebo akácia, nevodné vehikulá (ktoré môžu zahrňovať jedlé oleje), napríklad mandľový olej, frakcionovaný kokosový olej, estery olejov, ako estery glycerínu, propylénglykol alebo etylakohol, konverzačné činidlá, ako napríklad metylalebo propyl-p-hydroxybenzoát alebo kyselina askorbová, a prípadne konvenčné ochuťovacie činidlá alebo farbivá.

Ďalej sú uvedené príklady pevných perorálnych kompozícií, napríklad tablety alebo kapsule.

Tablety sú vylisované z kapsulového granulátu so zodpovedajúcim množstvom účinnej látky. Na zapuzdrenie zlúčeniny M sa použili žlté kapsule veľkosti 3, pričom v nasledujúcej tabuľke sú uvedené príslušné zloženia formulácií s obsahom účinnej látky 0,1 resp. 5 mg.

Zložka	Obsah v tablete/kapsule s obsahom účinnej látky
0,1 mg	5,0 mg
zlúčenina M	0,1	5,0
mikrokryštalická celulóza	76,92	74,96
hydrátovaná laktóza	87,63*	84,69*
polyvinylpyrolidón	7,4	7,4
krospovinón	7,4	7,4
stearát horečnatý	0,925	0,925
zadržaná vlhkosť	4,625	4,625
kapsule veľkosti 3	50	50
teoretická hmotnosť
náplne kapsule alebo
tablety	185	185
teoretická hmotnosť
kapsule	235	235

+) množstvo laktózy je nastavené na kompenzáciu množstva vlhkosti v účinnej látky.

Uvedené zlúčeniny sa môžu taktiež podať vo forme galenickej formy s regulovaným pomalým uvoľňovaním účinnej látky s účelom dosiahnutia prologovaného trvania trvania účinku účinnej látky. Na zabezpečenie takéhoto pomalého uvoľňovania účinnej látky sa môže použiť ľubovoľný konvenčný systém regulovaného uvoľňovania účinnej látky, akým sú napríklad ovrstvené pelety alebo osmotické typu push-pull.

Na parenterálne podanie sa kvapalné jednotkové dávkové formy pripravia pri použití účinnej zlúčeniny a sterilného vehikula, pričom v závislosti od použitej koncentrácie môže byť účinná zlúčenina v danom vehikule buď suspendovaná alebo rozpustená. Pri príprave roztokov sa môže zlúčenina rozpustiť v polyetylénglykole alebo v etanole, zriediť vodou pre injekciu a sterilizačne prefiltrovať pre naplnením do vhodnej liekovky alebo ampule, v ktorej sa potom vzduchotesne uzatvorí, resp. zataví. S výhodou sa môžu vo vehikulu rozpustiť prísady, akými sú lokálne anestetiká a konzervačné a pufrovacie činidlá. Parenterálna suspenzia sa pripraví v podstate rovnakým spôsobom s výnimkou spočívajúcou v tom, že sa účinná zlúčenina namiesto rozpustenia v tomto vehikule suspenduje, pričom sterilizácia sa môže uskutočniť sterilizačnou filtráciou. Účinná zlúčenina sa môže v tomto prípade sterilizovať vystavením účinku etylénoxidu a to ešte pred suspendovaním v sterilnom vehikule. S výhodou kompozícia obsahuje povrchovo aktívne a zmáčacie činidlo a to s účelom uľahčenia jednotnej distribúcie účinnej zlúčeniny.

Uvedené kompozície môžu obsahovať od asi 0,1 do asi 99 % hmotnosti, s výhodou od 10 do 60 % hmotnosti účinnej látky, a to v závislosti od spôsobu podania.

Zlúčenina M podľa vynálezu alebo jej hydrát alebo adičný produkt s ostatnými rozpúšťadlami alebo jej soli sa môžu tiež použiť vo forme topickej formulácie v kombinácii s konvenčnými topickými pomocnými látkami.

Topické formulácie môžu mať napríklad formu mastí, krémov alebo lotion, impregnovaných obväzov, gélov, gélových tyčiniek, sprejov a aerosolov, pričom tieto formulácie môžu obsahovať príslušné konvenčné prísady, akými sú konzervačné činidlá, rozpúšťadlá podporujúce penetráciu účinnej látky a utišujúce prostriedky pre masti a krémy. Tieto formulácie môžu obsahovať zlučiteľné konvenčné nosiče, akými sú krémové a masťové základy a etanol alebo oleylalkohol pre lotion.

Vhodné krémy, lotion, gély, masti, spreje alebo aerosólové formulácie, ktoré sa môžu použiť v prípade zlúčenín všeobecného vzorca I alebo ich hydrátov alebo adičných produktov s ostatnými rozpúšťadlami alebo ich solí, sú konvenčnými formuláciami, ktoré sú vo farmaceutickej praxi velmi dobre známe a ktoré sú napríklad opísané v štandardných farmaceutických alebo kozmetických publikáciách, akými sú napríklad Harry's Cosmeticology, publ. Leonard Hill Books, Remington's Pharmaceutical Sciences a Liekopisy Veľkej Británie a Spojených štátov amerických.

Ďalším predmetom vynálezu sú adenozínové deriváty všeobecného vzorca la

R

(la) v ktorom

R¹’ znamená cykloalkylovú skupinu obsahujúcu 4 až 8 uhlíkových atómov a substituovanou hydroxyskupinou,

R² má vyššie uvedený význam alebo s výhodou znamená atóm vodíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy alebo halogén s atómovým číslom 9 až 35 a

R³ má vyššie uvedený význam.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la môžu jestvovať vo forme enantiomérov alebo vo forme diastereomérnych zmesí.

Vo všeobecnom vzorci la halogénom s atómovým číslom 9 až je fluór, chlór alebo bróm, alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 uhlíkové atómy je metylová skupina, etylová skupina, n-propylová skupina, i-propylová skupina, n-butylová skupina, i-butylová skupina a terc.butylová skupina a predovšetkým metylová skupina, a cykloalkylovou skupinou obsahujúcou 4 až 8 uhlíkových atómov je cyklobutylová skupina, cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina, cykloheptylová skupina alebo cyklooktylová skupina a predovšetkým cyklohexylová skupina alebo cyklopentylová skupina.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la sa môžu pripraviť spôsobom, ktorého podstata spočíva v tom, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca Ila

(Ila) v ktorom

R² a R³ majú vyššie uvedené významy a

X znamená chlór alebo bróm, uvedú do reakcie so zlúčeninou všeobecného vzorca Hla

R¹¹-NH (Hla) v ktorom

R¹’ má vyššie uvedený význam.

Vyššie uvedený spôsob sa vhodne uskutočňuje zahrievaním zlúčeniny všeobecného vzorca Ila spoločne so zlúčeninou všeo16 bécného vzorca Hla v prítomnosti rozpúšťadla, akým je dioxán, pri teplote medzi asi 80 a 120 ’C, s výhodou pri teplote varu reakčnej zmesi.

V zlúčeninách všeobecného vzorca Ila, ktoré sa použijú ako východiskové látky pri uvedenom spôsobe, X predovšetkým znamená chlór. Zlúčeniny všeobecného vzorca Ila, rovnako ako spôsob ich prípravy sú opísané vo zverejnenej európskej patentovej prihláške 269 574.

Ďalší spôsob spočíva v tom, že sa prípravy zlúčenín všeobecného vzorca la zlúčeniny všeobecného vzorca IVa _1 / ^r·

EN

~\ V v ktorom R¹’, R² a R³ majú vyššie uvedené významy, uvedú do reakcie s trihydrátom tetrabutylamóniumfluridu.

Vyššie uvedená reakcia sa môže uskutočniť v organickom rozpúšťadle, akým je napríklad tetrahydrofurán, pri laboratórnej teplote a za miešania. Zlúčeniny všeobecného vzorca IVa sa môžu získať reakciou zlúčenín všeobecného vzorca Ila s 1,3-di-chlór-1,1,3,3-tetraizopropyldisiloxánom v alkalickom rozpúšťadle, akým je napríklad pyridín, a reakciou takto získaných zlúčenín všeobecného vzorca Va

v ktorom X, R² a R³ majú vyššie uvedené významy, so zlúčeninami všeobecného vzorca Hla.

V nasledujúcich príkladoch 1 až 8 sú teploty uvedené v stupňoch Celzia nekorigovanými teplotami.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

6-[ (trans)-4-hydroxycyklohexyl]-2'-O-metyladenozín g 6-[(trans)-4-hydroxycyklohexyl]-9-purinyl-2¹-O-metyl-3’,5'-0-(1,1,3,3-tetraizopropyldisilox-l,3-diyl)-D-ribózy sa mieša počas 15 minút pri laboratórnej teplote v 2 g trihydrátu tetrabutylamóniumfluoridu v 20 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa potom odparí do sucha a zvyšok sa eluuje na silikagéle pri použití elučnej sústavy tvorenej zmesou etylacetátu a metanolu v objemovom pomere 85 : 15. Prečistený produkt sa kryštalizuje zo zmesi metanolu a etylacetátu. Požadovaná zlúčenina kryštalizuje s jedným ekvivalentom metanolu.

Teplota topenia: 121 - 124 ’C, [α]^2θο = -50,2 ’ (c = 1 v dimetylformamide) .

Uvedená zlúčenina sa môže prekrystalizovať tiež z etanolu, pričom po odstavení na vlhkom vzduchu kryštalizuje s jedným ekvivalentom vody.

Teplota topenia: 114 - 117 ‘C, [α]^2θπ = -46,9 ’ (c = 1, dimetylformamid).

6-[ (trans)-4-hydroxycyklohexyl]-9-purinyl-2'-O-metyl-3¹,-5 ¹ -O- (1,1,3,3-tetraizopropyldisilox-l,3-diyl)-D-ribóza, použitá pri vyššie opísanom spôsobe ako východisková látka, sa môže pripraviť nasledujúcim spôsobom.

pričom sa ako a etylacetátu v g 6-chlór-9-purinyl-2'-O-metyl-3¹,5'-O-(1,1,3,3-tetraizopropyldisilox-l, 3-diyl) -D-ribózy sa mieša spolu s 1,32 g trans-4-hydroxycyklohexylamínu a 1,4 ml N-etyldiizopropylamínu v 80 ml dioxánu počas 6 hodín na olejovom kúpeli s teplotou 105 ’C. Reakčná zmes sa potom ochladí na laboratórnu teplotu, prefiltruje a filtrát sa zahustí do sucha. Pre účely prečistenia sa takto získaná zmes chrómatograŕuje na silikagéle, elučná sústava použije najskôr zmes hexánu objemovom pomere 7:3a potom zmes etylacetátu a metanolu v objemovom pomere 95 : 5. Takto prečistená olejovitá zlúčenina má hodnotu 0,3 (zmes etylacetátu a metanolu v objemovom pomere 95 : 5).

Príklad 2

6- [ (cis) -4-hydroxycyklohexyl ] -2 ' -O-metyladenozín

Zlúčenina uvedená v názve príkladu sa získa spôsobom, ktorý je analogický so spôsobom opísaným v príklade 1, s výnimkou spočívajúcou v tom, že sa namiesto trans-4-hydroxycyklohexylamínu použije cis-4-hydroxycyklohexylamín.

Takto získaná požadovaná zlúčenina sa kryštalizuje s polovicou ekvivalentu etylacetátu a má teplotu topenia rovné 110 až 111 ’C.

[a]^2oD = -48,6 ' (c = 1 v dimetylformamide) .

Príklad 3

6-[ (1S, trans) -2-hydroxycyklopentyl]-2 ' -O-metyladenozín

Požadovaná zlúčenina sa získa postupom, ktorý je analogický s postupom opísaným v príklade 1, s výnimkou spočívajúcou v tom, že sa namiesto trans-4-hydroxycyklohexylamínu použije 1S, trans-2-hydroxycyklopentylamín. Takto získaná požadovaná zlúčenina má formu peny.

R v zmesi etylacetátu a etanolu v objemovom pomere : 25 : 0,44 [α]^2θο = 25,5 ’ (c = 1 v dimetylformamide) .

Príklad 4

6-[ (ÍR, trans)-2-hydroxycyklopentyl]-2'-O-metyladenozín

Požadovaná zlúčenina sa získa spôsobom, ktorý je analogický so spôsobom opísaným v príklade 1, s tou výnimkou, že namiesto trans-4-hydroxycyklohexylamínu sa použije lR,trans-2-hydroxycyklopentylamín. Takto získaná zlúčenina má nasledujúce charakteristiky:

R_£: 0,44 (zmes etylacetátu a etanolu v objemovom pomere : 25).

[^α]^2θο = -80,2 ° (c = 1 v dimetylf ormamide) .

Príklad 5

6-[ (1S, trans) -2-hydroxycyklohexyl]-2¹ -O-metyladenozín

Požadovaná zlúčenina sa získa spôsobom, ktorý je analogický so spôsobom opísaným v príklade 1, s výnimkou spočívajúcou v tom, že sa namiesto trans-4-hydroxycyklohexylamínu použije 1S,trans-2-hydroxycyklohexylamín. Takto získaná zlúčenina má formu peny.

R_£: 0,42 (zmes etylacetátu a etanolu v objemovom pomere : 25).

[a]^2OD = -26,2 ' (c = 1 v dimetylformamide).

Príklad 6

6- [ (trans)-4-hydroxycyklohexyl]— 2 *-O-etyladenozín

Požadovaná zlúčenina sa pripraví spôsobom, ktorý je analogický so spôsobom opísaným v príklade 5. Získa sa vo forme 0,4-hydrátu.

Teplota topenia: 98 ’C (skvapalnenie), [α]²°_ο = -58 ’ (c = 1 v dimetylformamide).

Príklad 7

6-[ (1S,trans)-2-hydroxycyklohexyl]-2'-O-etyladenozín

Požadovaná zlúčenina sa pripraví spôsobom, ktorý je analogický so spôsobom opísaným v príklade 5.

Príklad 8

6- [ (ÍR,trans)-2-hydroxycyklohexyl]-2'-O-metyladenozín

Požadovaná zlúčenina sa získa spôsobom, ktorý je analogický so spôsobom opísaným v príklade 1, s výnimkou spočívajúcou v tom, že sa namiesto trans-4-hydroxycyklohexylamínu použije ÍR,trans-2-hydroxycyklohexylamín. Takto získaná požadovaná zlúčenina má formu peny.

R_£: 0,42 (zmes etylacetátu a etanolu v objemovom pomere : 25).

[a]^2OD = -69,25’ (c = 1 v dimetylformamide).

Zlúčeniny podľa vynálezu majú zaujímavé farmakologické vlastnosti. Môžu byť preto užitočné ako liečivá. Na tento účel sa môžu zlúčeniny podľa vynálezu použiť ako také alebo vo forme hydrátov alebo adičných produktov s organickými rozpúš21 ťadlami, akými sú napríklad metanol, etanol alebo etylacetát. Najzaujímavejšou zlúčeninou všeobecného vzorca la je zlúčenina z príklad 1, ktorá sa v ďalšom texte uvádza ako zlúčenina č.l.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la sú zaujímavé ako analgetiká, ako to už bolo uvedené vyššie. Pokiaľ ide o ich ďalšie účinky, možno uviesť, že zlúčeniny podľa vynálezu majú antihypertenzné účinky, ako je to zrejmé z výsledkov nasledujúcich výskumov.

Meranie väzby k adenozínovým receptorom A^x a A² v membránach z mozgovej kôry krysy alebo z kôry alebo striata mozgu ošípané j pri použití metódy podľa R. F. Brunsea, G. H. Lua a T. A.-Pugsleyea, ktorá je opísaná v Molec. Pharmacol. 29, 331 - 346 (1986).

Ďalšie testovanie účinnosti uvedených zlúčenín sa uskutočňuje v izolovaných premývaných obličkách krysy so zameraním na nasledujúce parametre:

sekrécia renínu, renálne hemodynamiky, inhibícia uvoľňovania noradrenalínu z nervových zakončení po elektrostimulácii renálnych nervov podľa metódy P. M. Vanhoutteho, D. Browninga, E. Coena, T. J. Verbeurena, L. Zonnekeyena a M. G. Collisa, opísané v Hypertension 4, 251 - 256 (1982), meranie krvného tlaku, srdcového rytmu, produkcie moča a aktivity renínu v plazme bdelých, NaCl-zbavených a nasýtených normotenzných alebo spontánne hypertenzných krýs s katétrom implantovaným do abdominálnej aorty a do dutej žily po intravenóznom podaní alebo po podaní vo forme infúzie alebo bolusu zlúčenín podľa vynálezu metódou J. F. M. Smotsa a J. M. Brodyho, opísanej v Am. J. Physiol. 247, R1003 - R1008 (1984).

Z výsledkov uvedených výskumov sa dá odvodiť, že v rámci antihypertenznej účinnosti zlúčenín všeobecného vzorca la dochádza ako k inhibícii sekrécie renínu, tak k priamej vazodilatácii. Na rozdiel od zníženia krvného tlaku zostávajú produkcia a exkrécia elektrolytu nezmenené. Z toho vyplýva, že zlúčeniny všeobecného vzorca la sa nemusia použiť iba ako antihypertenzné činidlá, ale tiež ako činidlá spôsobujúce koronárnu vazodilatáciu. Okrem tohto chránia tieto zlúčeniny vaskulárny endotel mechanizmom inhibície agregácie trombocytov a aktivácie leukocytov. Tieto zlúčeniny taktiež znižujú hladinu lipidov v krvi.

Vzhľadom na vyššie uvedené indikácie je výhodnou zlúčeninou všeobecného vzorca la zlúčenina z príkladu 1. Výhodnými indikáciami sú kardioprotektívna a analgetická indikácia.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la sú taktiež účinné pri liečení arytmií, čo jee stanovené ich agonizujúcou účinnosťou voči adenozínovému receptoru A¹, ktorá je selektívna v porovnaní s ich účinnosťou voči receptoru A², ako to bude stanovené napríklad v ďalej opísanom teste a), a napríklad ich schopnosťou prolongovat kondukciu cez atrioventrikulárny (A-V) nodus srdca, ako je to preukázané v ďalej zaradenom teste b). Uvedené zlúčeniny takto reštaurujú sínusový rytmus pri supraventrikulárnej tachykardii, predovšetkým pri paroxymálnej supraventrikulárnej tachykardii, znižujú srdcovú frekvenciu pri tachykardiálnej atriálnej fibrilácii a vracajú ventrikulárnu tachykardiu indukovanú beta-adrenergnou stimuláciou do normálneho rytmu.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la napodobňujú prekondicionačný efekt, čo je mechanizmus, pri ktorom krátkodobá ischémia robí srdce odolným voči infarktu, ku ktorému by mohlo prísť v prípade následnej ischémie. Tieto zlúčeniny sa dajú použiť na ochranu srdca počas nestabilizovanej angíny, proti infarktu myokardu pri podpornej adjuvantnej terapii alebo bez nej, alebo pri ischemickej lézii u pacientov, ktorí napríklad podstupujú chirurgické implantovanie koronárneho arteriálneho by23 passu, angioplastiu, transplantáciu srdca alebo iný nesrdcový chirurgický zákrok.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la sa dajú predovšetkým použiť pri podávaní subjektom náchylným k infarktom myokardu, napríklad ako dôsledok stanovenia diagnózy u pacientov, ktorí ešte infarkt myokardu neprekonali, alebo u pacientov, ktorí už infarkt myokardu v minulosti prekonali.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la ďalej znižujú hladinu inzulínu v plazme, bez toho aby ovplyvňovali glukózovú toleranciu .

Tieto zlúčeniny potencionalizujú účinok inzulínu pre účely zvýšenia absorpcie glukózy a znižujú lipolýzu v adipóznom tkanive, čo vedie ku zníženiu plazmových koncentrácií voľných mastných kyselín (pozri ďalej zaradený test d)). Zníženie plazmovej koncentrácie voľných mastných kyselín zasa vedie ku zníženiu hladiny triglyceridov, čo ďalej vedie ku zvýšeniu HDL cholesterolu.

Inzulín-šetriaci účinok alebo/a schopnosť znížiť hladinu mastných kyselín robí zlúčeniny všeobecného vzorca la spôsobilými na použitie pri liečení cukrovky typu I a cukrovky typu II, t.j. inzulíno-nedependentnej cukrovky.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la znižujú hladinu triglyceridov a voľných mastných kyselín v plazme (pozri ďalej zaradený test e) ) a zvyšujú hladinu HDL cholesterolu a sú týmto užitočné pri liečení lipidovej dysfunkcie a stavov združených so zvýšenými hladinami voľných mastných kyselín a triglyceridov a všade tam, kde sa požaduje zvýšenie HDL cholesterolu.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la vykazujú dobrú metabolickú stabilitu.

Ďalším predmetom vynálezu je preto použitie zlúčenín všeobecného vzorca la na liečenie bolesti alebo na prípravu liečiv vhodných na liečenie bolesti.

Ešte ďalším predmetom vynálezu je vyššie definovaná zlúčenina všeobecného vzorca la na použitie pri liečení bolesti.

Ďalším predmetom vynálezu je analgetická kompozícia, ktorej podstata spočíva v tom, že obsahuje vyššie definovanú zlúčeninu všeobecného vzorca la v kombinácii s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom. Prihlasovateľ má v úmysle použiť zlúčeniny všeobecného vzorca la i pre indikácie, ktoré boli uvedené vyššie pre zlúčeniny všeobecného vzorca I.

Nasledujúce farmakologické testy ilustrujú vyššie uvedenú účinnosť zlúčenín všeobecného vzorca la.

a) Afinita k adenozínovým receptorom

Metódou, ktorú opísali H. Brunsen a kol. v Molecular Pharmacology 29, (1986), str. 331 - 344 sa pripravia striatálne membrány ošípaných. Na označenie ako receptorov A¹ tak i receptorov A² sa použije neselektívne agonizujúce činidlo adenozínového receptora, ktorým je Ή-NECA. Hodnoty IC_SO sú odvodené z vytesňovacích kriviek pri použití nelineárnej metódy najmenších štvorcov v súlade s Langmuirovou rovnicou, následne sa vypočítajú hodnoty pK_D.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la vykazujú afinitu k receptorom A¹ napríklad v rozmedzí od 1 do 500 nM.

b) Arytmia

Aktivácia adenozínového receptora A¹ znižuje výskyt napríklad paroxymálnej supraventrikulárnej tachykardie, tachykardiálnej artiálnej fibrilácie a ďalších arytmií spomalením kondukcie cez atrio-ventrikulárny (A-V) nodus srdca detegované zvýšením intervalu P-R. Použitá testovacia metóda zahrňuje zaznamenávanie zmien EKG u dospelých opíc Rhesus pri vedomí. Zlúčeniny všeobecného vzorca la sa podávajú v dávkovom rozmedzí od asi 0,1 mg/kg do asi 1000 mg/kg pri perorálnom podaní alebo v dávkovom rozmedzí od 0,03 do 30 mg/kg pri intravenóznej aplikácii v rámci testu opísaného C. Clarkom a kol. v The Pharmaceutical Journal 244, 595 - 597 (1990). Tak napríklad zlúčenina č. 1 prolonguje pri tomto teste interval P-R povrchového elektrokardiogramu (EKG), čo indikuje spomalenie kondukcie cez A V nodus pri dávkach 0,1 a 0,6 mg/kg pri perorálnom podaní. Ako už bolo uvedená vyššie, vedie takýto účinok k ukončeniu AV nodálnej recidívnej tachykardie a k zníženiu frekvencie srdca pri tachykardiálnej atriálnej fibrilácii.

c) Ochrana proti infarktu prekondicionačným mechanizmom

Prekondicionácia (5 minútová ischémia nasledovaná 10 minútovým zotavením) robí srdce veľmi odolným proti infarktu z následnej ischémie (30 minút) a reperfúzie (3 hodiny). Testovacia metodika je opísaná v článku G. S. Liu a kol., 1991, Circulation (84), 1, 350 - 356 a J. D. Thorntona a kol., v 1992-Circulation (85), 659 - 665. Zlúčeniny všeobecného vzorca la sa podávajú intravenózne v dávke od asi 0,01 do 10 mg/kg králikom. Pri tomto teste sú králiky, ktorým sa podalo 100 Mg/kg zlúčeniny č. 1, chránené takmer rovnako ako pri endogénnej prekondicionácii proti infarktu indukovanému 30 minútovou koronárnou oklúziou.

d) Transport glukózy a lipolýza k adipocytoch krysy

i) Adipocyty sa izolujú z epididymálnych tukových vankúšikov normálne kŕmených krýs digesciou kolagenázou. Získané bunky (finálna koncentrácia 2 % obj./obj.) sa predinkubujú s adenozín-deaminázou (1 U/ml) a s tetovanými zlúčeninami, napríklad so zlúčeninou č. 1, a s ostatnými prísadami predpísanými na meranie transportu glukózy pri teplote 37 ’C.

Po 30 minútach sa potom pridá [3-³H]-glukóza (finálna koncentrácia 50 μΜ, 0,5 μθΐ/ιη1) a v inkubácii sa pokračuje počas ďalších 60 minút. Zabudovanie rádioaktivity z [3-³H]- -glukózy do bunečných lipidov (meranie transportu glukózy) sa vyhodnotí extrakciou bunečnej suspenzie (0,5 ml) 5 ml scintilačnej kvapaliny na báze toluénu a následnou kvapalinovou scintilografiou. Vo vode rozpustné metabolity a zvyšková [3-³H]-glukóza zostanú vo vodnej fáze a nedetegujú sa.

Lipolýza sa meria konvenčným spôsobom. Pri jednej metóde sa bunky inkubujú s 1 μΜ izoproterenolu a bez neho, potom sa v inkubácii pokračuje počas 60 minút. Supernatant sa od buniek oddelí po predchádzajúcom odstredení cez dinonylftalát a lipolýza sa vyhodnotí enzymatickým stanovením glycerolu uvoľneného do supernatantu.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la sú pri tomto teste účinné pri koncentrácii od 0,1 do 1000 nM.

Zlúčenina č. 1 potlačila lipolýzu v adipocytoch krysy pri koncentráciách od 0,1 do 100 nM.

V prítomnosti adenozín-deaminázy (1 U/ml) nemá zlúčenina č. 1 žiaden významný účinok na inkorporáciu rádioaktivity z [3-³H]-glukózy do bunečných lipidov pri absencii inzulínu a iba okrajový účinok v prítomnosti maximálne stimulujúcej inzulínovej koncentrácie (8 nM), avšak významne zvyšuje stimuláciu inkorporácie rádioaktivity koncentračné závislým spôsobom pri koncentráciách od 0,1 do 50 nM inzulínu. Tieto pozorovania indikujú, že uvedená zlúčenina zvyšuje citlivosť transportu glukózy na inzulín. V prítomnosti takmer maximálne účinnej koncentrácie zlúčeniny č. 1 sa hodnota EC_SO pre inzulínovú stimuláciu [3-³H]-glukózovej inkorporácie do lipidov zníži 2- až 3-krát. V prítomnosti adenozín-deaminázy a 1 μΜ izoproterenolu, 10 - 50 nM zlúčeniny č. 1 zvýši ako citlivosť, tak aj mieru odozvy na inzulín. Hodnota EC pre inzulín sa zníži až päťkrát a stimulácia pri maximálnej inzulínovej koncentrácii sa významne zvýši.

ii) Lipidy a glukóza pri normálnych krysách v režime 18 hodinového pôstu

Krysy vo veku 2 až 3 mesiace s telesnou hmotnosťou asi 250 gramov sa prechovávajú v priestore s regulovanou teplotou okolia 22 ’C s režimom cyklov 12 hodín svetla a 12 hodín tmy počas sedem dní.

Potrava a voda sú pre krysy dostupné ad libitum. Po 18 hodinovom pôste sa krysám (5 jedincov v skupine) podá testovaná zlúčenina v rámci pitia v 0,5 % CMC. Pokusné zvieratá prijmú 1,0 ml/100 g telesnej hmotnosti. Tri hodiny po podaní sa krysy anestetizujú pôsobením oxidu uhličitého a odoberie sa im kardiálnou punkciou krv. Izoluje sa krvné sérum, ktoré sa použije na stanovenie glukózy, voľných mastných kyselín a beta-hydroxybutyrátu. Obsah voľných mastných kyselín sa stanoví kalorimetrickým enzymatickým stanovením pri použití acyl-COAperoxidázy, glukóza sa stanoví metódou glukózo-oxidázy (YSI model 27, Yellow Spring, Ohio) a beta-hydroxybutyrát sa stanoví enzymatickým stanovením pri použití enzýmovej väzby beta-hydroxybutyrát-dehydrogenáza (Sigma Kit 310-A, St. Louis, Mo). Zlúčeniny všeobecného vzorca la sú účinné v dávke od asi 1 do asi 5000 /ng/kg.

Dávky nevyhnutné na zníženie hladiny voľných mastných kyselín (primárny dôsledok účinku na adipocyty) predstavuje pre zlúčeninu č. 1 5 až 100 gg/kg 2 hodiny po podaní dávky. To má za následok dávkovo-dependentné zníženie beta-hydroxybutyrátu a hladiny glukózy v krvi.

ii) Účinky na inzulíno-nedependentnú cukrovku (NIDD) pri krysách

V rámci tohto testu konzumujú krysy s telesnou hmotnosťou 200 až 220 g vysokotučnú diétu ad libitum. V stave nakŕmenia sa krysám injikuje do chvostovej žily 40 mg streptomycínu na kilogram telesnej hmotnosti. Po jednom týždni sa za diabetické považujú tie krysy, ktoré majú hladinu krvnej glukózy vyššiu ako 200 mg/dl a ktoré majú po pôste cez noc a podrobení sa tolerančnému testu s perorálnym podaním glukózy hladinu glukózy 40 až 80 mg/dl tri hodiny po tomto teste. O štyri dni neskôr sa tieto pokusné zvieratá použijú na účely testu v prípade, že majú hladinu krvnej glukózy vyššiu ako 180 mg/dl. Krvná glukóza sa stanovuje pri použití glukózového analyzátora YSI. Chromický skríningový test sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom.

V deň 1 sa krysám odoberie potrava o 9. hodine dopoludnia a po východiskovom odpočítaní krvnej glukózy v krvi odobranej zo špičky chvosta sa pokusným zvieratám perorálne podá buď vehikulum (kontrolná skupina zvierat) alebo testovaná zlúčenina (9 krýs na každú aplikáciu). O šesť hodín neskôr sa stanoví obsah glukózy v krvi a bezprostredne potom sa krysám opäť podá potrava.

Rovnakým krysám sa podáva buď vehikulum alebo účinná látka jedenkrát denne počas 11 nasledujúcich dní. Krvná glukóza sa stanoví v hodine 0 a po šesťhodinovom pôste po podaní dávky účinnej zlúčeniny 4., 8. a 11. deň. Dávka 100 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti zlúčeniny všeobecného vzorca la, napríklad zlúčeniny č. 1, má za následok významné zníženie hladiny glukózy v krvi.

e) Dislipidémia charakterizovaná zvýšenou hladinou triglyceridov v krvnom sére

Niektoré štúdie preukázali pozitívnu koreláciu medzi hladinou triglyceridu v sére (a pridruženým poklesom hladiny HDL cholesterolu) a rizikom koronárneho ochorenia srdca (Grundy v Cholesterol a Atherosclerosis: Diagnosis and Treatment, Lippicott, Phipadelphia (1990)). Zníženie zvýšenej hladiny triglyceridov ako nový prístup ku zníženiu rizika koronárneho ochorenia srdca, sa najskôr objavilo v správe Helsinky Heart Study, kde sa uvádza, že po liečení gemfibrozilom sa najväčšie obmedzenie vážnych koronárnych príhod dosiahlo u pacientov s hyperlipidémiou typu IIB, pri ktorých boli všeobecne zvýšené ako LDL-cholesterol, tak aj celkové sérové triglyceridy a znížené hladiny HDL cholesterolu. Zlúčeniny všeobecného vzorca la sú účinné pri opiciach Rhesus v dávkach od asi 0,03 do 30 (napríklad v dávkach od 0,1 do 30) mg/kg pri intravenóznom podaní a v dávkach 0,1 až 100 (napríklad v dávkach 0,1 až 10) mg/kg pri perorálnom podaní. Zlúčenina č. 1 poskytuje dávkovo závislý a dlhotrvajúci pokles hladiny voľných mastných kyselín v plazme a triglyceridov v plazme u opíc Rhesus pri dávkach od 0,03 do 6 mg/kg pri intravenóznom podaní a pri dávkach 0,1 až 1,2 mg/kg pri perorálnom podaní. Reprezentačné výsledky pre zlúčeninu č. 1 pri perorálnej dávke 0,6 mg/kg poskytujú zníženie obsahu voľných mastných kyselín o asi 60 % v porovnaní s kontrolnou skupinou zvierat po 300 minútach a zníženie obsahu triglyceridov o 40 %.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú taktiež účinné pri testoch stanovujúcich stredný arteriálny krvný tlak, bradykardiu a periférnu vazodilatáciu pri anestetizovaných krysách.

Tieto pokusy sa uskutočňujú na samčekoch krysy Wistar s telesnou hmotnosťou medzi 300 a 350 g pod anestéziou Pentothalom (120 mg/kg intraperitoneálne) podľa metódy Salzmanna a kol. (J. Cardiovasc. Pharmacol. 12, 451 - 460, 1988). Pokusným zvieratám sa zavedú katétre do pravej jugulárnej a pravej femorálnej žily, do ľavej komory (cez krčnú tepnu), do ľavej femorálnej artérie a aorty (cez pravú femorálnu artériu). Potom sa merajú alebo vypočítajú nasledujúce premenné veličiny: systolický a diastolický, ako aj stredný arteriálny krvný tlak (mm Kg, ľavá femorálna artéria,· Stathamov snímač krvného tlaku (tepy za minútu, z krivky krvného tlaku), miera zvýšenia tlaku v ľavej komore (dP/dt^^, mm Hg, Stathamov snímač tlaku P 23 Gb) výstup srdca (ml/min/100 telesnej hmotnosti, termodilučná metóda, pravá jugulárna žila a aorta), celková periférna rezistencia (dyn.s.cm^-s/100 g telesnej hmotnosti) a povrchový EKG. Arteriálny krvný tlak, tlak v ľavej komore, dP/dt_majt, frekvencia srdca a elektrokardiograf sa plynulé zaznamenávajú Schwarzenovým polygrafom. Uvedené parametre sa merajú 30, 20, 10 a 2 minúty pred podaním testovanej zlúčeniny do pravej femorálnej žily. Zlúčeniny všeobecného vzorca la sa injikujú v dávkach od asi 0,001 do asi 10 mg/kg telesnej hmotnosti. Zlúčenina č. 1 sa testuje v kumulatívnych dávkach 0,0003 a 0,03 mg/kg, pričom sa pre každú dávku použijú tri pokusné zvieratá. Zlúčenina č. 1 indukuje pokles krvného tlaku (ED_so = 49 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti pri intravenóznej aplikácii) a frekvencie srdca a zvýšenie systemickej vaskulárnej konduktancie.

Dávky zlúčeniny všeobecného vzorca ľa použité pri vyššie uvedených indikáciách sa budú meniť zvyčajným spôsobom v závislosti od závažnosti liečeného stavu, od telesnej hmotnosti liečeného subjektu a od relatívnej účinnosti danej hmotnosťou liečeného subjektu a od relatívnej účinnosti danej konkrétnej zlúčeniny. Všeobecným vodítkom pre voľbu vhodných jednotkových dávok môžu byt dávky 0,1 až 100 mg, ako 0,1 až 10, 0,5 až 200, 0,5 až 100 alebo 0,5 až 10, napríklad 0,1 0,5 1, 2, 3, 4 alebo 5 mg, pričom takéto jednotkové dávky sa môžu podávať viac ako jedenkrát denne, napríklad 2-, 3-, 4-, 5- alebo 6-krát denne, avšak s výhodou 1- alebo 2-krát denne tak, aby celková denná dávka pre 70 kg ťažkého cicavca, zahrňujúceho i človeka, sa pohybovala v rozmedzí od asi 0,1 do 1000 mg, napríklad pri perorálnom podaní, alebo v rozmedzí od 0,003 do 300 g pri intravenóznom podaní, t.j. v rozmedzí od asi 0,001 do 20 mg/kg/deň, ako napríklad 0,007 až 3, 0,007 až 1,4, 0,007 až 0,14 alebo 0,01 až 0,5 mg/kg/deň, predovšetkým 0,01, 0,02, 0,04, 0,05, 0,06, 0,08, 0,1 alebo 0,2 mg/kg/deň, a táto terapia môže trvať počas niekoľkých týždňov alebo niekoľkých mesiacov. Pre zlúčeninu č. 1 predstavuje výhodná dávka pre všetky indikácie podľa vynálezu 0,1 až 10 mg/deň pre 70 kg dospelého človeka. Pri výhodnú indikáciu inzulíno-nedependentnej cukrovky a pri hypertriglyceridémii predstavujú indikované dávky pre človeka 0,2 až 2 mg denne pri perorálnom podaní a pri liečení zlyhania srdca alebo iných srdcových poruchách 0,2 až 10 mg denne, predovšetkým 0,5 až 5 mg denne pri perorálnom podaní alebo 0,25 až 5 mg pri intravenóznom podaní v prípade arytmie, napríklad pri tachykardiálnej atriálnej fibrilácii.

Zlúčeniny podľa vynálezu všeobecného vzorca la sa môžu formulovať na podanie ľubovoľným spôsobom a to v závislosti od poruchy, ktorá sa lieči, a s výhodou v jednotkovej dávkovej forme alebo vo forme, ktorú si môže ľudský pacient podať sám v jedinej dávke. S výhodou sa uvádza kompozícia vhodná na perorálne, rektálne, parenterálne, intravenózne alebo intramuskulárne podanie, ako to už bolo opísané vyššie v súvislosti s použitím zlúčenín podľa vynálezu vo funkcii analgetík.

Jednotkovými dávkovými formami na perorálne podanie môžu byť tablety alebo kapsule obsahujúce 0,05 až 20 mg zlúčeniny všeobecného vzorca la.

Vhodne budú zlúčeniny podľa vynálezu alebo ich hydráty alebo adičné produkty s organickými rozpúšťadlami tvoriť od asi 0,5 do asi 20 % hmotnostných, s výhodou asi 1 až asi 10 % hmotnostných, napríklad 2 až 5 % hmotnostných, z celkovej hmotnosti formulácie.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la, v ktorom R¹' znamená hydroxycykloalkylovú skupinu obsahujúcu 4 až 8 uhlíkových atómov, sú detegované ako metabolity po podaní zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená cykloalkylovú skupinu obsahujúcu 4 až 8 uhlíkových atómov a R³ znamená alkylovú skupinu, teplokrvným živočíchom, napríklad krysám, psom a ľuďom.

Podanie zlúčeniny M vedie takto k produkcii hydroxycyklohexyl-2'-O-metyladenozínu.

Ďalším predmetom vynálezu je teda spôsob podania N^e-cyk-lohexyl-2¹-O-metyladenozínu teplokrvnému živočíchovi s cieľom produkcie N⁶-hyaroxycyklohexyl-2'-O-metyladenozínu.

Podľa ďalšieho predmetu vynálezu vynález poskytuje N^e-hydroxycykloalkyl-2'-O-alkyladenozín v čistej forme, napríklad s čistotou vyššou ako 95 %. Zlúčeniny, opísané ďalej v príkladoch, spĺňajú toto kritérium.

Ďalším predmetom vynálezu je N⁶-hydroxycykloalkyl-2'-O-alkyladenozín bez obsahu cyklohexyl-2’-O-metyladenozínu.

Podľa ďalšieho predmetu vynálezu poskytuje vynález spôsob prípravy 2¹-O-alkyladenozínov, ktorého podstata spočíva v tom, že sa adenozín uvedie do reakcie s príslušným alkylsulfátom v prítomnosti katalyzátora fázového prechodu.

S výhodou je 2'-O-alkyladenozínom ľubovoľná z vyššie uvedených zlúčenín.

Podľa ďalšieho predmetu vynálezu vynález poskytuje spôsob prípravy zlúčenín všeobecného vzorca I, ktoré boli definované vyššie, ktorého podstata spočíva v tom, že sa zlúčenina všeobecného vzorca VI

/

H O

(VI) uvedie do reakcie so zásaditým roztokom zlúčeniny všeobecného vzorca (R³) SO ' ' 2 4 v prítomnosti tetrabutylamóniumhydrogénsulfátu a nepolárneho rozpúšťadla, následne sa získaný produkt prečistí rekryštalizáciou .

V prípade, že sa to vyžaduje, môžu sa reaktívne skupiny dočasne chrániť ochrannými skupinami.

Alkylsulfátom je s výhodou dialkylsulfát, v ktorom každý alkylový zvyšok obsahuje 1 až 4 uhlíkové atómy.

Katalyzátorom fázového prechodu je s výhodou tetrabutylamóniumhydrogénsulf át .

Reakcia s as výhodou uskutočňuje v nepolárnom rozpúšťadle, aké bude napríklad opísané ďalej.

Je definovaná skupina zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom R^x znamená cykloalkylovú skupinu obsahujúcu 3 až 8 uhlíkových atómov, R³ znamená atóm vodíka alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy a R³ znamená alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy.

Až doteraz príprava zlúčenín všeobecného vzorca I typicky zahrňovala šesť reakčných stupňov, ktorými sú príprava 2', 35'-triacetylinozínu, chlorácia a hydrolýzy 6-chlór-9-5-D-ribofuranozyl-9H-purínu, ochrana 3'-0- a 5'-0-polohy tetraizopropyldisiloxánom (TIPDS-C1 ), 2'-O-alkylácia a prečistenie chromatografiou na silikagéle, deprotekcia 3'-0- a 5'-O-polohy a reakcia so zlúčeninou všeobecného vzorca a rekryštalizácia s cieľom získania zlúčeniny všeobecného vzorca I.

Prihlasovateľ teraz novo zistil, že zlúčeniny všeobecného vzorca I sa môžu pripraviť v dobrých výťažkoch a s dobrou čistotou, bez tohto aby bolo potrebné uskutočniť ochranu a deprotekciu 3'-0- a 5'-O-polohy pri použití vyššie uvedeného aisiloxánu alebo chromatografiou na silikagéle. Prihlasovateľ zistil, že východisková látka doterajšieho stavu techniky, ktorou je inozín-2',3',5'-triacetát sa môže vhodne nahradiť lipofilným inozín-2',3¹,5'-tripropionátom, ktorý umožňuje zdvojnásobiť presadenie a elimináciu nežiadúceho pyridínového rozpúšťadla.

V rámci vynálezu sa zlúčeniny všeobecného vzorca I pripravia za podmienok katalýzy fázového prechodu podľa nasledujúcej reakčnej schémy:

(R³)₂SO₄

---------->

Bu₄N‘HSO

Vil kde R¹, R² a R³ majú vyššie uvedené významy.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I sa môžu pripraviť reakciou zásaditého vodného roztoku zlúčeniny všeobecného vzorca VI s dialkylsulfátom, v ktorom každý alkylový zvyšok obsahuje 1 až 4 uhlíkové atómy, v prítomnosti tetrabutylamóniumhydrogénsulfátu a organického s vodou nemiešateľného rozpúšťadla. Zásadou použitou na prípravu uvedeného zásaditého vodného roztoku je s výhodou hydroxid alkalického kovu, akým je napríklad hydroxid sodný alebo hydroxid draselný. Rozpúšťadlom môže byť ľubovoľné s vodou nemiešateľné rozpúšťadlo, v ktorom je zlúčenina všeobecného vzorca I rozpustná, pričom týmto rozpúšťadlom je napríklad metylénchlorid alebo terc.amylalkohol. Je taktiež výhodné, ak sa reakcia uskutočňuje pri teplote z teplotného rozmedzia medzi -20 ‘C a 50 ’C, predovšetkým pri laboratórnej teplote. Reakčný čas nie je kritickým parametrom, i keď je výhodné, ak sa reakcia uskutočňuje počas asi 5 až 10 hodín, predovšetkým počas asi 7 až 8 hodín. Surová zlúčenina všeobecného vzorca I sa izoluje odparením a následným rozmiešaním zvyšku so zmesou vody a inertného rozpúšťadla, s výhodou toluénu, v objemovom pomere 1:1, pri laboratórnej teplote počas 5 až 7 hodín a filtráciou a vysušením. Čistá zlúčenina sa môže získať frakčnou kryštalizáciou, s výhodou

1) rekryštalizáciou z inertného rozpúšťadla, akým je toluén, rozpustením surovej zlúčeniny v tomto rozpúšťadle pri teplote 80 ’C, zahrievaním roztoku pri teplote asi 55 ’C počas približne 1 hodiny, ochladením na laboratórnu teplotu, zaočkovaním roztoku zárodočným kryštálom čistej zlúčeniny a odfiltrovaním vylúčených kryštálov,

2) opakovaním kryštalizačného postupu zo stupňa 1), pričom sa však roztok zahrieva pred ochladením pri teplote 65 ’C, a

3) rekryštalizáciou zo 100 % etylalkoholu rozpustením pri teplote varu pod spätným chladičom, zriedením vodou, zaočkovaním zárodočným kryštálom a následnou filtráciou a vysušením.

Značná časť zlúčenín všeobecného vzorca VI predstavuje známe zlúčeniny, ktoré sa môžu pripraviť spôsobmi opísanými v literatúre, napríklad vo vyššie uvedených patentoch US 4 843 066 a 4 585 409. Zlúčenina všeobecného vzorca VI sa môže tiež s výhodou pripraviť podľa nasledujúcej výhodnej reakčnej schémy

kde R¹ a R² majú vyššie uvedené významy.

IX

Zlúčeniny všeobecného vzorca VI sa môžu pripraviť acyláciou inozínu všeobecného vzorca VII anhydridom kyseliny propiónovej za vzniku 2'-0-, 3'-0-, 5'-O-chránenej zlúčeniny všeobecného vzorca VIII, ďalej halogenáciou zlúčeniny všeobecného vzorca VIII tionylchloridom za vzniku medziproduktu všeobecného vzorca IX a súčasnou amináciou a hydrolýzou zlúčeniny všeobecného vzorca IX. Acylácia inozínu sa s výhodou uskutočňuje v zmesi toluénu, tributylamínu a 4-dimetylaminopyridínu pri teplote od 100 do 110 'C počas 4 až 5 hodín. Zlúčenina všeobecného vzorca VIII sa izoluje vyzrážaním heptánom. Halogenácia zlúčeniny všeobecného vzorca VIII sa s výhodou uskutočňuje v zmesi toluénu a N, N-dimetylformamidu pri teplote od asi 60 do 70 °C počas 3 až 4 hodín, pričom roztok zlúčeniny všeobecného vzorca IX sa môže ďalej použiť na premytie vodou a soľankou. Aminácia a súčasná hydrolýza medziproduktu všeobecného vzorca IX sa s výhodou uskutočňuje pridaním amínu všeobecného vzorca R¹NH_z a zahrievaním reakčnej zmesi pri teplote 100 až 110 C počas 15 až 20 hodín. Zlúčenina všeobecného vzorca VI sa izoluje filtráciou pri laboratórnej teplote a prečistí sa rekryštalizáciou.

Spôsob podľa vynálezu bude ilustrovaný nasledujúcimi príkladmi.

Spôsobový príklad 1

N^e-Cyklohexyl-2'-O-metyladenozín

Stupeň A

Inozín-2',3',5’-tripropionát

Zmes 271,2 g inozínu, 966 ml tributylamínu, 3,30 g 4-dimetylaminopyridínu a 600 ml toluénu sa zahrieva pri teplote vo vnútri reakčnej zmesi 104 až 105 ’C počas 35 minút, následne sa k reakčnej zmesi pridá 453 ml anhydridu kyseliny propiónovej a to rýchlosťou, pri ktorej sa udržiava teplota vo vnútri reakčnej zmesi medzi 104 až 105 ’C . Po miešaní reakčnej zmesi pri uvedenej teplote počas ďalších 4 hodín sa zmes ochladí na teplotu 5 až 10 ’C na ľade a k takto ochladenej zmesi sa potom pridá 1000 ml heptánu. Získaná suspenzia sa mieša pri laboratórnej teplote (20 až 22 ’C) počas 30 minút, potom sa prefiltruje v Buchnerovom lieviku. Oddelený pevný podiel sa premyje celkom 450 ml heptánu v troch rovnakých podieloch s objemom 150 ml a vysuší sa pri teplote 45 až 50 ’C (3,3 kPa), pričom sa získa 425,9 g inozín-2',3',5’-tripropionátu vo forme bieleho pevného produktu.

Teplota topenia: 171 až 172 ’C, výťažok: 96,5 %.

Stupeň B

N^s-Cyklohexyladenozín

Zmes 270,6 g inozín-2¹,3¹,5’-tripropionátu, 240 ml N,N-dimetylformamidu a 600 ml toluénu sa zahrieva pri teplote 65 ’C počas 1 hodiny, následne sa pridá 67,84 ml tionylchloridu a to rýchlosťou, pri ktorej sa udržiava teplota vo vnútri reakčnej zmesi 62 až 65 ’C. Reakčná zmes sa mieša pri tejto teplote počas ďalších dvoch hodín a tridsiatich minút, potom sa ochladí na teplotu 10 ’C na ľade. Po pridaní 600 ml vody predchladenej na teplotu 10 až 15 ’C na ľade a to rýchlosťou, pri ktorej sa udržiava teplota nižšia ako 20 ’C, sa organická vrstva oddelí a premyje celkom 800 ml 10 % vodného roztoku chloridu sodného v štyroch rovnakých podieloch s objemom 200 ml. Organická vrstva obsahujúca surový 6-chlór-9-(2,3,5-tri-0-propionyl-B-ribofuranozyl)-9H-purín sa za miešania pridá do 620 ml cyklohexylamínu zahriateho na teplotu 105 ’C počas 2 hodín a rýchlosťou, pri ktorej sa udržiava teplota vo vnútri reakčnej zmesi 105 ’C. Po miešaní tejto zmesi pri uvedenej teplote počas ďalších 17 hodín sa reakčná zmes ochladí na laboratórnu teplotu (25 ’C) počas približne 2 hodín pri intenzívnom miešaní, následne sa prefiltruje, napríklad pri použití Buchnerovho lievika, za odsávania. Pevný podiel obsahujúci N^e-cyklohexyladenozín a cyklohexylamínhydrochlorid sa premyje celkom 460 ml toluénu v štyroch rovnakých podieloch s objemom 115 ml a prenesie sa vo vlhkom stave do päťlitrovej banky vybavenej mechanickým miešadlom. Po pridaní 2 litrov vodného nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 2,5 litra etylacetátu sa zmes mieša až do času, kedy sa celý pevný podiel rozpustí (približne 10 až 15 minút). Organická vrstva sa oddelí a vodná vrstva sa extrahuje 1,5 1 etylacetátu a to vo dvoch podieloch s objemom 1 litra resp. 500 ml.

Organické vrstvy sa spoja a odparujú sa až do času, kedy sa dosiahne odparenie asi 3 litre etylacetátu (pri teplote 40 ’C, 10 - 20 kPa). Ku zvyšku sa pridá 500 ml heptánu a získaná zmes sa mieša počas 30 minút. Pevný podiel sa oddelí pri použití Buchnerovho lievika a premyje sa celkom 300 ml heptánu v troch rovnakých podieloch s objemom 100 ml. Pevný podiel sa potom vysuší pri teplote 45 až 50 ’C (3 - 3,5 kPa) počas približne 3 hodín, pričom sa získa 148 g surového N^-cyklohexyladenozínu vo forme bieleho pevného produktu. Tento produkt sa prenesie do jednolitrovej banky s guľatým dnom vybavenej mechanickým miešadlom, následne sa do banky pridá 175 ml 95 % etanolu. Získaná suspenzia sa mieša počas 15 až 20 minút, potom sa 175 ml terc.butyletyléteru. Po päťminútovom miešaní sa suspenzia ochladí na ľade a mieša sa počas ďalších 15 minút. Táto suspenzia sa prefiltruje pri použití Buchnerovho lievika a oddelený pevný podiel sa premyje celkovo 50 ml terc.butylmetyléteru vo dvoch rovnakých podieloch s objemom 25 ml.

Odfiltrovaný pevný podiel sa vysuší pri teplote 45 až 50 ’C (3 - 3,5 kPa) počas 14 hodín, pričom sa získa 130 g N⁶-cyklohexyladenozínu vo forme bieleho pevného produktu.

Teplota topenia: 185 až 187 ’C, výťažok: 60,0 %.

Stupeň C

N⁶-Cyklohexyl-2’-O-metyladenozín

Suspenzia 94,33 g N^ä-cyklohexyladenozínu a 720 g 5 % vodného roztoku hydroxidu sodného sa mieša pri laboratórnej teplote (24 až 25 ’C) až do času, kedy sa dosiahne rozpustenie celého pevného podielu (približne 5 minút). Pomocou nálevky na pridanie reakčných zložiek sa pridá 850 ml dichlórmetánu a 5,5 g tetrabutylamóniumhydrogénsulfátu a potom ešte 61,3 g dimetylsulfátu počas 5 až 10 minút, pričom sa udržiava teplota vo vnútri reakčnej zmesi medzi 24 a 25 ’C. Nálevka sa potom premyje ďalšími 50 ml dichlórmetánu, ktorý sa potom pridá do reakčnej nádoby. Po miešaní dvojfázovej zmesi pri teplote 24 až 25 ’C (teplota vo vnútri zmesi) počas 7,5 hodiny sa organická vrstva oddelí a odparí pri teplote 40 ’C (27-29 kPa) až do času, kedy už nedestiluje žiadne rozpúšťadlo.

Zvyšok sa rozpustí v 200 ml toluénu a roztok sa potom znova odparuje pri teplote 45 až 50 ’C (4 kPa) až do času, kedy už nedestiluje žiadne rozpúšťadlo.

Zmes z vyššie uvedeného surového materiálu a 2470 ml toluénu sa mieša pri laboratórnej teplote počas 10 minút a potom sa k zmesi pridá 2470 ml vody počas 22 minút. Získaná suspenzia sa mieša pri laboratórnej teplote počas ďalších 6 hodín a pevný podiel sa izoluje filtráciou, napríklad pri použití Buchnerovho lievika, za odsávania. Po premytí pevného podielu 1140 ml toluénu a celkom 285 ml vody v troch rovnakých podieloch s objemom 95 ml sa pevný podiel vysuší pri teplote 48 až 50 ’C (3,3 kPa) cez noc (14 hodín), pričom sa získa 53,0 g bieleho pevného produktu. Suspenzia tohto pevného podielu v 397 ml toluénu sa zahrieva pri teplote 80 ’C za miešania za vzniku číreho roztoku, ktorý sa ochladí na teplotu 56 ’C počas 45 minút a zaočkuje sa zárodočnými kryštálmi (10 mg) čistého produktu. Zmes sa mieša pri teplote 55 až 56 °C počas jednej hodiny. Po ďalšom jednohodinovom miešaní pri uvedenej teplote sa pevný podiel izoluje filtráciou, napríklad pri použití Buchnerovho lievika, za odsávania. Pevný podiel sa premyje celkom 75 ml toluénu v troch rovnakých podieloch s objemom 25 ml, pričom sa získa 60 g bieleho pevného produktu. Suspenzia tohto pevného podielu v 159 ml toluénu sa znova zahreje na teplotu 80 ‘C a zaočkovanie zárodočnými kryštálmi sa uskutočňuje pri teplote 65 až 66 ’C.

Po ochladení na laboratórnu teplotu počas jednej hodiny a miešaní pri uvedenej teplote počas ďalšej jednej hodiny sa pevný podiel odfiltruje a premyje 42 ml toluénu v troch rovnakých podieloch s objemom 14 ml, následne sa vysuší pri teplote 48 až 50 ’C (3,3 kPa) cez noc (14 hodín, pričom sa získa 57,7 g bieleho pevného produktu. Pevný podiel a 122 ml 100 % etanolu sa zahrievajú pri teplote varu pod spätným chladičom za miešania za vzniku číreho roztoku, následne sa k tomuto roztoku pridá 288 ml vody predhriatej na teplotu 55 ’C počas 25 minút. Zmes sa ochladí na teplotu 55 ’C a zaočkuje sa 20 mg zárodočných kryštálov čistého produktu. Táto zmes sa ochladí na laboratórnu teplotu počas jednej hodiny a mieša sa pri tejto teplote cez noc (16 hodín). Pevný podiel sa izoluje za odsávania pri použití Buchnerovho lievika a premyje sa celkom 57 ml zmesi 100 % etanolu a vody (objemovo 1 : 2,36) v troch rovnakých podieloch s objemom 19 ml. Pevný podiel sa vysuší pri laboratórnej teplote (3,8 kPa), pričom sa získa 62,2 g produktu vo forme bielej pevnej látky vo forme 1,5 hydrátu.

Teplota topenia: 88 až 91 ’C, výťažok: 42,5 .

Spôsobový príklad 2

Opakuje sa vyššie uvedený postup s výnimkou spočívajúcou v tom, že sa použije ekvivalentné množstvo N^e-cyklopentyladenozínu, pričom sa získa N^e-cyklopentyl-2¹-O-metyladenozín.

Spôsobový príklad 3

Opakujú sa reakčné stupne príkladu 1 s výnimkou spočívajúcou v tom, že sa v reakčnom stupni C) dichlórmetán nahradí terc.amylakoholom a po prvotnej kryštalizácii zo zmesi etanolu a vody sa produkt rekryštalizuje z etanolu a vody. Získa sa 32,1 g (výťažok približne 30 %) N^e-cyklohexyl-2¹-O-metyladenozínu, ktorý má čistotu vyššiu ako 98 %.

Spôsob podía vynálezu je, pokiaľ ide o čas a náklady, hospodárnejší ako doteraz známe spôsoby. Spôsob podľa vynálezu poskytuje vhodnú metódu na selektívnu 2'-O-metyláciu N⁶-cyklohexyladenozínu za podmienok katalýzy fázového prechodu a metódu čistenia 2'-O-metylového derivátu. Pri spôsobe podľa vynálezu nie je potrebné použiť nákladné ochranné skupiny a chromatografiu.

Claims (20)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I i

   R'

   H N (D

   R

   HO v ktorom

   R^{v * * * * x} znamená atóm vodíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy, alylovú skupinu, metalylovú skupinu, priamu alebo rozvetvenú alkinylovú skupinu obsahujúcu 3 až 7 uhlíkových atómov, cykloalkylovú skupinu obsahujúcu 3 až 8 uhlíkových atómov, hydroxycykloalkylovú skupinu, v ktorej cykloalkylový zvyšok obsahuje 4 až 8 uhlíkových atómov, fenylovú skupinu mono- alebo navzájom nezávisle di-substituovanú halogénom s atómovým číslom 9 až 35, alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 uhlíkové atómy, alkoxyskupinou obsahujúcou 1 až 4 uhlíkové atómy alebo skupinou CF₃ alebo fenylalkylovou skupinou, v ktorej alkylový zvyšok obsahuje 1 až 4 uhlíkové atómy a fenylový kruh je nesubstituovaný alebo monoalebo navzájom nezávisle di-substituovaný halogénom s atómovým číslom 9 až 35, alkylovou skupinou obsahu44 júcou 1 až 4 uhlíkové atómy, alkoxyskupinou obsahujúcou 1 až 4 uhlíkové atómy alebo skupinou CF_a, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy a obsahujúcu aspoň jednu hydroxyskupinu alebo aspoň dve fenylové skupiny, bicykloalkylovú skupinu akou je endo- alebo exo-bicyklo-/2,2,1/heptylová skupina, naftylalkylovú skupinu, v ktorej alkylový zvyšok obsahuje 1 až 4 uhlíkové atómy, acenaftylenylalkylovú skupinu, v ktorej alkylový zvyšok obsahuje 1 až 4 uhlíkové atómy alebo skupinu všeobecného vzorca A alebo všeobecného vzorca B (A) (B) v ktorých znamená atóm vodíka, hydroxyskupinu alebo alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy, znamená atóm vodíka alebo hydroxyskupinu, znamená skupinu -CH -, -0-, -S- alebo priamu väzbu, znamená skupinu ^-(^CH2)_n ^- alebo priamu väzbu, znamená celé číslo od 1 do 3, a prerušovaná čiara vo vzorci A znamená prípadnú väzbu,

   R² znamená atóm vodíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až

   4 uhlíkové atómy, aminoskupinu, cykloalkylovú skupinu obsahujúcu 3 až 5 uhlíkových atómov alebo atóm halogénu s atómovým číslom 9 až 35 a

   R³ znamená alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy.
2. 2. Použitie podľa nároku 1,vyznačujúce sa tým, že zlúčenina všeobecného vzorca I je zvolená z množiny zahrňujúcej 6'-hydroxycykloalkyl-2'-O-metyladenozíny, v ktorých cykloalkylový zvyšok obsahuje 4 až 8 uhlíkových atómov.
3. 3. Použitie podľa nároku 1, vyznačujúce sa tým, že vo všeobecnom vzorci I R¹ má iný význam ako hydroxycykloalkylová skupina.
4. 4. Použitie podľa nároku 3,vyznačujúce sa tým, že zlúčeninou všeobecného vzorca I je 6'-hydroxycyklohexyl-2'-O-metyladenozín.
5. 5. Použitie podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov laž 4,vyznačujúce sa tým, že je určené pri akútnej bolesti.
6. 6. Použitie podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov laž 4,vyznačujúce sa tým, že je určené pri chronickej neuropatickej bolesti.
7. 7. Použitie zlúčeniny definovanej v niektorom z predchádzajúcich nárokov 1 až 4, pri liečení bolesti definovanej v niektorom z predchádzajúcich nárokov alebo spôsob liečenia bolesti definovanej v niektorom z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúce sa tým, že sa subjektu, ktorý potrebuje takéto liečenie, podá zlúčenina podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov 1 až4 alebo analgetická kompozícia obsahujúca zlúčeninu podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov 1 až 4 ako analgetikum v kombinácii s farmaceutickým nosičom alebo riedidlom.
8. 8. Zlúčenina všeobecného vzorca la ,1'

   KN

   N'

   N'

   N !Í >

   --N .O I (la)

   KO

   KO

   Oft v ktorom

   R¹¹ znamená cykloalkylovú skupinu obsahujúcu 4 až 8 uhlíkových atómov a substituovanou hydroxyskupinou,

   R² má význam uvedený v nároku 1 a

   R³ má význam uvedený v nároku 1.
9. 9. Zlúčenina podľa nároku 8 všeobecného vzorca la, v ktorom R² znamená atóm vodíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 uhlíkové atómy alebo atóm halogénu s atómovým číslom od 9 do

   35.
10. 10. Zlúčenina zvolená z množiny zahrňujúcej

    6-/ (trans)-4-hydroxycyklohexyl/-2’-O-metyladenozín,

    6-/ (cis)-4-hydroxycyklohexyl/-2'-O-metyladenozín,

    6-/( 1S,trans)-2-hydroxycyklopentyl/-2'-O-metyladenozín, 6-/( ÍR, trans )-2-hydroxycyklopentyl/-2'-O-metyladenozín, 6-/( 1S,trans)-2-hydroxycyklohexyl/-2'-O-metyladenozín, 6-/( ÍR,trans)-2-hydroxycyklohexyl/-2¹-O-metyladenozín, 6-/(trans)-4-hydroxycyklohexyl/-2'-O-etyladenozín a 6-/1S, (trans)-2-hydroxycyklohexyl/-2'-O-etyladenozín.
11. 11. Zlúčenina podľa nároku 8, 9 alebo 10 s čistotou 95 %.
12. 12. Zlúčenina podľa nároku 8, 9 alebo 10 bez obsahu

    N⁶-cykloalkyl-2'-O-metyladenozínu.
13. 13. Použitie zlúčenín všeobecného vzorca la podľa niektorého z nárokov 8 až 12 na prípravu liečiv vhodných na liečenie bolesti, na použitie proti vysokému krvnému tlaku, ako koronárny vazodilatátor, na inhibíciu agregácie trombocytov alebo aktivácie leukocytov, na zníženie hladiny lipidov v krvi, proti kongestívnemu zlyhaniu srdca, infarktu myokardu, náhlej kardiálnej smrti, renálnej insuficiencii, ďalej na liečenie hladiny HDL cholesterolu, lipihladiny voľných mastných kyselín alebo/a cukrovky typu I alebo typu II, arytmií alebo na ochranu proti infarktu myokardu.

    hypertriglyceridémii/nízkej dovej dysfunkcie, zvýšenej
14. 14. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje terapeuticky účinné množstvo zlúčenín všeobecného vzorca a podľa niektorého z nárokov 8 až 12 v kombinácii s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom.
15. 15. Zlúčenina podía niektorého z nárokov 8 až 12 na použitie pri liečení bolesti, vysokého krvného tlaku, koronár48 nej vazokonštrikcie, agregácie trombocytov, vysokej hladiny lipidov v krvi, kongestívneho zlyhania srdca, náhlej kardiálnej smrti, renálnej insuficiencie, hypertriglyceridémie/nízkej hladiny HDL cholesterolu, lipidovej dysfunkcie, zvýšenej hladiny voľných mastných kyselín, cukrovky typu I alebo typu II, arytmií a na ochranu proti infarktu myokardu, alebo spôsob použitia takejto zlúčeniny, ktorý zahrňuje podanie zlúčeniny všeobecného vzorca la subjektu, ktorý uvedené liečenie potrebuje .
16. 16. Spôsob prípravy 2'-O-alkyladenozínov, v y z n a čujú c i s a t ý m, že adenozín sa uvedie do reakcie s príslušným alkylsulfátom v prítomnosti katalyzátora fázového prechodu.
17. 17. Spôsob podľa nároku 16,vyznačujúci sa tým, že sa pripraví zlúčenina všeobecného vzorca I podľa nároku 1.
18. 18. Spôsob podľa nároku 16 alebo 17, vyznačujúci sa t ý m, že pripravenou zlúčeninou je N-cyklohexyl-2'-O-metyladenozín.
19. 19. Zlúčenina pripravená spôsobom podľa nároku 16, 17 alebo 18.
20. 20. Spôsob podania N⁶-cyklohexyl-2'-O-metyladenozínu teplokrvnému živočíchovi s účelom produkcie N⁶-hydroxycyklohexyl-2'-O-metyladenozinu.