SK12402001A3

SK12402001A3 - Peptidy HIV, antigény, zloženie vakcín, súprava na imunologickú skúšku a spôsob detekcie protilátok vyvolaných HIV

Info

Publication number: SK12402001A3
Application number: SK1240-2001A
Authority: SK
Inventors: Birger Srensen
Original assignee: Bionor Immuno As
Priority date: 1999-03-04
Filing date: 2000-03-02
Publication date: 2002-02-05
Also published as: CY1108299T1; JP2013032384A; HU229282B1; CZ20013195A3; SK287382B6; NZ525752A; CN101328208A; US20080107669A1; US20040259797A1; CZ300505B6; ZA200107072B; JP5313998B2; HK1044778B; DE60039036D1; AU771827B2; JP5814331B2; CN101328209A; US6706859B1; US7709004B2; NZ514619A

Description

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka nových peptidov založených na konzervatívnych oblastiach HIV gag p24, antigénov voľných alebo viazaných na nosiči zahrňujúcich aspoň jeden z uvedených peptidov, zloženia vakcín obsahujúcich aspoň jeden z antigénov, súpravy na imunologickú skúšku a spôsobu detekcie protilátok vyvolaných ľudským vírusom imunitnej nedostatočnosti (HIV) alebo HlV-špecifickými peptidmi s použitím takýchto antigénov.

Doterajší stav techniky

Potreba udržiavať globálnu epidémiu infekcie HIV pod kontrolou je naliehavá a vývoj vakcíny proti HIV je jednou z hlavných úloh výskumu AIDS. Vakcíny by vo všeobecnosti mali aktivovať bunky tvoriace antigén, prekonať genetické obmedzenie v odozvách T buniek a vytvárať T a B pamäťové bunky. Variabilita vírusovej populácie spôsobuje ďalší problém pri získavaní účinnej vakcíny HIV. Zásadný zlom v prebiehajúcich pokusoch o vyvinutie vakcíny proti AIDS zatiaľ nebol publikovaný. V súčasnosti sa vo všeobecnosti pripúšťa, že pre vývoj účinnej profylaktickej a terapeutickej vakcíny je rozhodujúce vyvolanie humorálnej a bunkami sprostredkovanej imunity špecifickej pre antigén. Všetky tri nástroje imunitného systému zahrňujúce neutralizačné protilátky: bunky CD8+CTL a T-pomocné-1 (TH1) môžu byť potrebné na ochrannú imunitu voči HIV. Je známe, že CTL môžu účinkovať na iné vírusové infekcie (Ada, Immunol. Celí Biol., 72:447-454, 1994) a že CTL môžu rozkladať infikované ciele v počiatkoch infekcie, skôr ako sa vírus rozmnoží a uvoľní rozkladom buniek, Ada a kol., pozri vyššie. Ťažisko leží na výbere antigénov ako aj na návrhu a vyhodnotení rozličných adjuvantov. Antigénmi použitými v rozličných štúdiách in vitro a in vivo boli látky od surových proteínov až po rozličné syntetické peptidy, hlavne z gplóO a do istej miery aj z p24. Veľký počet ·· ···· • · · • · · • · · • · · · ·· ·· štúdiísa uskutočnil na slučke V3 v gpl20. Pozorovalo sa vyvolanie odozvy B aj T buniek, v štúdii in vitro sa však zistilo, že peptid z konzervatívnej oblasti gp41 indikoval vzrast infekcie (Bell S.J. a kol., Clin. Exp. Immunol., 87 (1):37-45, január 1992).

Prirodzene sa vyskytujúce sekvencie HIV v kandidátskych vakcínach nie sú schopné stimulovať stabilnú imunitnú odozvu kvôli základnej schopnosti vírusov ukryť sa zmenou vzhľadu epitopov prítomných na bunkovom povrchu infikovaných buniek. Imunitný systém je oklamaný tak, aby veril, že príslušná sekvencia aminokyselín je náležitá, kým v skutočnosti dôležité aminokyseliny sú ukryté.

Nedávna štúdia titrov protilátok proti proteínu gag p24 ukázala, že pomalý progres vývoja AIDS je spojený s vysokými titrami, kým rýchly progres vývoja AIDS je spojený s nízkymi titrami. Ukázalo sa, že u osôb s nízkym titrom protilátok p24 sa AIDS vyvíja podstatne rýchlejšie ako u osôb s výsokým titrom protilátok p24 (Zwart GF. a kol., Virology, 201, str. 285-93, jún 1994), čo naznačuje, že p24 môže hrať kľúčovú úlohu pri vývoji AIDS.

Vo WO91/13360 sú opísané nové peptidy HIV p24 a tieto peptidy sa tu používajú v metóde na rozlíšenie medzi nesprávne a správne diagnostikovanou HlV-pozitívnou vzorkou.

Johnson R.P, a kol., The Journal of Immunology, zv. 147, s. 1512-1521, č. 5, 1. septembra 1991 opisujú analýzu pozoruhodnej špecificity gagšpecifických CTL odoziev u troch HIV-1 sérovopozitívnych jedincov, u ktorých sa zistilo, že tieto gag-špecifické CTL odozvy boli sprostredkované CD3+CD8+lymfocytmi, ktoré sú obmedzené na HLA triedy I.

EP-A-0 356 007 opisuje antigénové determinanty, konkrétne sa týka syntetických sekvencií polypeptidov, ktoré súvisia s proteínmi v HIV-1 a ktoré sa môžu použiť ako základ pre potenciálnu vakcínu proti AIDS:

Rosenberg E.S. a kol., Science, zv. 278, 21. novembra 1997, s. 14471450 píšu, že vírusovo špecifické CD4+ T-pomocné lymfocyty sú rozhodujúce na udržiavanie účinnej imunity pri mnohých chronických vírusových infek·· ···· · ·· ·· ·· · ···· ··· ··· · · · · · ···· ··· · · ·· ·· ··· ·· ·· · ciách, ale sú spravidla nedetegovateľné pri infekcii vŕusom ľudskej imunitnej nedostatočnosti typu 1 (HIV-1). HIV-1-špecifické proliferatívne odozvy na p24 boli nepriamo úmerné masívnosti vírusovej infekcie. Autori usúdili, že je pravdepodobné, že HIV-1-špecifické pomocné bunky sú dôležité pri imunoterapeutických intervenciách a vývoji vakcíny.

EP 0 230 222, EP 0 270 114, DE 37 11 016 a GB 2 188 639, všetky v mene F. Hoffmann-La Roche & Co. a.s. sa týkajú rekombinancnej expresie a čistenia génových proteínov HTLVIII Gag/Env alebo spojených proteínov. Proteíny pozostávajúce z natívnych sekvencii sa môžu prečistiť z hľadiska homogenity a použiť ako základ pre diagnostické skúšky na detekciu protilátok' proti vírusom spojeným s AIDS. Proteín gag/env môže byť zložkou preparátu na použitie ako vakcíny na ochranu pred AIDS pomocou profylaktickej imunizácie.

Z diagnostického a terapeutického hľadiska je pri použití p24 ako súčasti testu alebo liečby najväčším problémom veľký počet epitopov na p24, čo stimuluje produkciu veľkého počtu protilátok so slabou špecificitou, ktoré opakovanou revakcináciou na potenciálne zmutovaných sekvenciách môže vytvoriť autoprotilátky (Autoprotilátky k alfa/beta receptorom T buniek pri infekcii HIV; dysregulácia a mimikry. Lake D.FF. a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, (23): 10849-53, 8. nov. 1994). Ďalej sa publikovalo, že titer protilátok p24 nedosahuje rovnako vysoké hladiny ako pre obalové proteíny (gpl20 a gp41). Obvykle sa protilátky k p24 vyvíjajú vo veľmi včasnej fáze infekcie, avšak po tejto počiatočnej perióde infekcie sa titer dosť rýchlo stabilizuje. Neskôr sa titer p24 postupne znižuje, kým pre gpl60 dochádza k opačnému javu. Tieto pozorovania je tiež možné dať do súvislosti s nedávnymi publikáciami tvrdiacimi, že aktivita cytotoxických T buniek sa antagonizuje prirodzene sa vyskytujúcimi variantmi HIV-1 gagu (Klenerman P. a kol., Náture, 2:369 (6479), s. 355, 2.júna 1994). Toto môže byť jedným z dôvodov, prečo sa pozoruje rýchla stabilizácia titru p24 a prečo sa neskôr začína zvyšovať.

Na základe vyššie uvedených pôvodných údajov sme sa rozhodli vyšetriť možnosť skonštruovania nového syntetického peptidu, ktorý môže napodobňo·· ···· • · · ·· · · ···· • · · ······ • · ·· ······ · • · · · · · · ··· ·· ·· ··· ·· ·· ··· vať epitop p24 bez antagonizujúcej aktivity cytotoxických T buniek, aby sa tým dosiahli požiadavky na profylaktický a terapeuticky účinnú vakcínu.

Počiatočné práce boli založené na jednom epitope, ktorý zverejnili Korber a kol., Human Retroviruses and AIDS (Ľudské retrovírusy a AIDS) 1997, vyd. Theoretical Biology and Biophysics Group, Los Alamos National Laboratory (Skupina pre teoretickú biológiu a biofyziku, Národné laboratórium v Los Alamos), Los Alamos, NM. Sekvencia aminokyselín tohto epitópu (203-222) bola:

KAL G PGATLEEMMT A CQGVG

RRMRTK SIKD LSSS R R G V R V

S A A

S E QQ

Jednopísmenové rovnako ako trojpísmenové kódy definujúce aminokyseliny v sekvenciách uvedené v tomto opise sú v zhode s medzinárodnými normami a sú uvedené v učebniciach, napríklad Lehninger A.L., Principles of Biochemistry (Základy biochémie), Worth Publishers Inc., New Zork, 1982. Aminokyseliny uvedené pod prvou sekvenciou predstavujú prirodzené variácie sekvencie. Východisková štúdia sekvencie obsahujúcej tento modifikovaný epitop sa zamerala na sekvenciu:

ANPDCKQILKSLGPGATLEEXXTACQGVG - NH₂I________________________________I v ktorej X označuje kyselinu 2-aminohexánovú a cysteínové zvyšky sú v oxidovanom stave, t.j. tvoria vnútroreťazcové disulfidické mostíky. Výsledky (nepublikované) štúdií používajúcich tento peptid ako súčasť diagnostickej súpravy ukázali, že na vybranom súbore afrických sér bola špecificita 87 % (n=279). Citlivosť bola prekvapujúco 100 % na súbore HIV-1 pozitívnych sér zahŕňajúcich HIV-1 podtyp O séra, ktorý je dosť odlišný od iných podtypov.

·· ·· • · · · · • · · · • · · · ·· ·· • · · · • ·· ·· ·

Aby sa zlepšila špecificita, t.j. aby sa definovali aminokyseliny, ktoré prispievajú k čistej protilátkovej odozve bez krížových reakcií, podobná štúdia sa uskutočnila na podstatne kratšom a viac modifikovanom peptide:

LIWGATCQEHXTACQGVG- NH₂I__________I v ktorom X má význam uvedený vyššie a cysteínové zvyšky tvoria vnútroreťazcové disulfidické mostíky.

Výsledky z tejto štúdie ukazujú, že špecificita skúšky sa zvýšila na 96 % (n=293), ktorá je podobná špecificite získanej pri skúške bez použitia peptidu p24. So špecificitou 87 % v skúške, v ktorej bol zahrnutý prvý peptid, je pravdepodobné, že tento peptid by vyvolal imunitnú odozvu k viac ako jednému epitopu, pretože sa to zistilo podľa nešpecifických protilátok, keď sa použil ako kandidátska vakcína. Ak sa teda sekvencia založená na tomto peptide použije ako antigén v kandidátskej vakcíne, mal by veľmi pravdepodobne urýchliť špecifickú imunitnú odozvu na HIV-1.

Na ďalšie zvýšenie počtu epitopov T buniek a zníženie pravdepodobnosti na vývoj únikových mutantov boli ďalšie tri sekvencie peptidov založené na nasledujúcich troch sekvenciách zvyškov 264-284, 253-271, resp. 166-186, ktoré sa publikovali v Human Retroviruses and AIDS 1997 (Ľudské retrovírusy a AIDS 1997); A Compilation and Analysis of Nucleic Acid and Aminokyselina Sequences (Prehľad a analýza nukleových kyselín a sekvencií aminokyselín). Vyd. Theoretical Biology and Biophysics Group, Los Alamos National Laboratory (Skupina pre teoretickú biológiu a biofyziku, Národné laboratórium v Los Alamos), Los Alamos:

RWI I L GLN KI V RM Y SPT S I L D

K G V V M MK CVG E

D M V V Q I G

S A ·· ···· • · · ·· • · · · • · · · · • · · · · ·· ·· ··· • · »·

NNP P I PVGE I YKRW	I I L G L
S	QAV KDMLRKG	M V M
G	G S N KV D	V V
H	G T

a

PEV I RI T L N

PMFSALSEGATPQDLNT TTLTE AD ISYNIYM

Niektoré modifikované peptidy sa syntetizovali na to, aby sa určili špeci fické sekvencie, ktoré sú špecifické a súčasne citlivé voči HIV-1.

Podstata vynálezu

Peptidy podľa tohto vynálezu pochádzajú zo štyroch rozdielnych konzervatívnych oblastí jadrového proteínu HIV-1 p24 opísaného vyššie, ktoré majú vlastnosti uchovávajúce jedinečnosť (citlivosť a špecificitu) epitopu HIV-1. Nové peptidy podľa tohto vynálezu ďalej nemajú pozorovateľný cytotoxický antagonistický účinok na T lymfocyty (CTL) a musia mať aspoň jeden potenciálny CTL epitop.

Peptidy podľa tohto vynálezu, ktoré spĺňali nasledujúce kritériá, sú vybraté z nasledujúcich skupín:

Xaai Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaae Ala Xaag Xaa9 Gin Thr Pro Trp Xaa_J4 Xaais Xaa_t6 Xaan Xaajg Val Xaa₂o (Sek. č.: 1), v ktorom aminokyseliny reťazca môžu maťnasledujúci význam;

·· ···· · ·· ·· • · · ······ • · ι ·····

Ί ···· ··· · · ·· ·· ··· ·· ··

Xaa v polohe 1 derivátu peptidu je Lys alebo Arg,

Xaa v polohe 2 je Ala, Gly, Ser alebo Arg,

Xaa v polohe 3 je Leu alebo Met,

Xaa v polohe 4 je Gly alebo Arg,

Xaa v polohe 5 je Pro, Thr, Val, Ser, Gin alebo Ala,

Xaa v polohe 6 je Gly, Ala, Lys, Arg, Gin alebo Glu,

Xaa v polohe 8 je Thr alebo Ser,

Xaa v polohe 9 je Leu alebo íle ,

Xaa v polohe 14 je Thr, Ser alebo Val,

Xaa v polohe 15 je Ala alebo Ser,

Xaa v polohe 16 je Cys alebo Ser,

Xaa v polohe 17 je Gin alebo Leu,

Xaa v polohe 18 je Gly, Glu alebo Arg,

Xaa v polohe 20 je Gly alebo Arg, peptid obsahuje aspoň deväť po sebe idúcich aminokyselín sekvencie sek. č.:l,

Xaai Xaa₂ Xaa₃ Xaa4 Xaas Gly Leu Asn Pro Leu Val [Gly]„ Xaaj₂ Xaai₃ Tyr Xaais Pro Xaaj₇ Xaajg íle Leu Xaa₂i Xaa₂₂ (Sek.č.: 4) v ktorom aminokyseliny reťazca môžu maťnasledujúci význam;

Xaa v polohe 1 je Arg, Lys, Asp alebo nič,

Xaa v polohe 2 je Trp, Gly, Lys alebo Arg,

Xaa v polohe 3 je íle, Leu, Val alebo Met,

Xaa v polohe 4 je íle, Val alebo Leu,

Xaa v polohe 5 je Leu, Met, Val alebo Pro,

Xaa v polohe 12 je Arg, Lys,

Xaa in polohe 13 je Met alebo Leu,

Xaa v polohe 15 je Ser, Cys alebo Gin,

Xaa v polohe 17 je Thr, Val, íle, Ser alebo Ala,

Xaa v polohe 18 je Ser, Gly alebo Thr,

Xaa v polohe 21 je Asp, Glu, Cys alebo Gly,

Xaa v polohe 22 je Gly alebo nič, ·· ···· • · · ········ ··· ······ ·· ·· ······ · ···· · · · ··· ·· ·· ··· ·· ·· ··· kde sekvencia Sek.č.: 4 obsahuje aspoň šesť po sebe idúcich aminokyselín a n = 0,1,2 alebo 3,

Xaai Xaa₂ Xaa₃ Pro íle Pro Xaa7 Xaag Xaag Xaan Xaan Xaa_]2 [Gly]_n Xaai₃Xaau Xaan Xaan Xaan Xaaig Xaan Xaa₂o Xaa₂i Xaa₂₂ Xaa₂₃ Xaa₂4 (Sek. č.: 9) v ktorom Xaa v polohe 1 je Asn, Ser, Gly, His, Ala, Pro, Arg alebo nič,

Xaa v polohe 2 je Asn, Ala alebo Lys,

Xaa v polohe 3 je Pro, Gin, Gly, íle alebo Leu,

Xaa v polohe 7 je Val alebo Ala,

Xaa v polohe 8 je Gly alebo Lys,

Xaa v polohe 9 je Glu, Asp, Lys, Phe alebo Thr,

Xaa v polohe 10 je íle, Met, Val alebo Leu,

Xaa v polohe 11 je Tyr, Leu alebo nič,

Xaa v polohe 12 je Ser alebo nič,

Xaa v polohe 13 je Arg alebo nič,

Xaa v polohe 14 je Asp, Arg, Trp, Ala alebo nič,

Xaa v polohe 15 je íle alebo nič,

Xaa v polohe 16 je Tyr alebo nič,

Xaa v polohe 17 je Lys alebo Arg,

Xaa v polohe 18 je Arg, Lys alebo Asp,

Xaa v polohe 19 je Trp alebo Gly,

Xaa v polohe 20 je íle, Met, Val, Gin alebo Ala,

Xaa v polohe 21 je íle, Val alebo Ala,

Xaa v polohe 22 je Leu, Met alebo Val,

Xaa v polohe 23 je Gly alebo Cys,

Xaa v polohe 24 je Leu alebo nič, kde sekvencia Sek. č.: 9 obsahuje aspoň šesť po sebe idúcich aminokyselín a n = 1,2 alebo 3,

Xaai Xaa₂ íle íle Xaas Xaae Xaa7 Xaag Xaag Leu Xaan [Gly]„ [Arg]_m Xaai₂Xaau Xaau Xaau Xaau Xaan Xaaig Xaan Xaa₂o Xaa₂i Xaa₂₂ Xaa₂₃ Xaa₂4 Xaa₂₅ (Sek. č.: 15) v ktorom Xaa v polohe 1 je Pro, Lys, Arg alebo nič,

··	····	• ··		»·
• ·	•	·· · ·	•	• ·
• ·	•	• · ·	•	•
				•
• ·	• ·	• · ·	9	•
«·	··	··· ··		·· ·

Xaa v polohe 2 je Glu, Arg, Phe alebo Lys,

Xaa v polohe 5 je Pro alebo Thr,

Xaa v polohe 6 je Met, Thr alebo Nleu,

Xaa v polohe 7 je Phe alebo Leu,

Xaa v polohe 8 je Ser, Thr, Ala alebo Met,

Xaa v polohe 9 je Ala, Glu alebo Leu,

Xaa v polohe 11 je Ser alebo nič,

Xaa v polohe 12 je Ala, Arg alebo nič,

Xaa v polohe 13 je íle, Leu alebo nič,

Xaa v polohe 14 je Ser, Ala, Leu alebo nič,

Xaa v polohe 15 je Tyr, Glu alebo Asp,

Xaa v polohe 16 je Gly alebo Asp,

Xaa v polohe 17 je Ala alebo Leu,

Xaa v polohe 18 je Thr, íle, Val, Leu alebo Asn,

Xaa v polohe 19 je Pro, Thr alebo Ser,

Xaa v polohe 20 je Tyr, Phe, Nleu, His alebo Gin,

Xaa v polohe 21 je Asp, Asn, Leu alebo Ala,

Xaa v polohe 22 je Leu, íle, Val alebo Asn,

Xaa v polohe 23 je Asn, Tyr, Cys alebo Gly,

Xaa v polohe 24 je Thr, Met, íle, Ala, Val alebo nič,

Xaa v polohe 25 je Gly alebo nič, kde sekvencia Sek. č.: 15 obsahuje aspoň šesť po sebe idúcich aminokyselín, n = 1,2 alebo 3 a m=0,l,2 alebo 3, terminálnymi ukončeniami sekvencii môžu byť voľné karboxylové skupiny alebo aminoskupiny, amidy, acyly, acetyly alebo ich soli, dva alebo viac Cys zvyškov môže tvoriť časť vnútroreťazcových alebo medzi reťazcových disulfidických spojov, mostík -S-(CH2)_P-S- alebo -(CH2)_P-, v ktorom p = 1-8, prípadne s vloženým jedným alebo viacerými heteroatómami, ako je O, N alebo S, a/alebo sú uvedené sekvencie peptidov imobilizované na tuhom nosiči.

·· ···· ··

• · · • · · • · · · • · · · ·· ··

Nové sekvencie peptidov majú schopnosť slúžiť ako dobrý antigén, v ktorom antigén obsahuje aspoň jeden peptid vybratý zo skupiny sekvencií Sek. č.: 1, Sek. č.: 4, Sek. č.: 9 alebo Sek. č.: 15. Antigenicita sa môže upravovať zmenou pomeru koncentrácie rozličných peptidov alebo veľkosti peptidov napríklad dimerizáciou alebo polymerizáciou a/alebo imobilizáciou na tuhej fáze. Antigén obsahuje dve alebo viac sekvencií polypeptidov podľa tohto vynálezu, ktoré sú buď spojené mostíkom, napríklad disulfidickým mostíkom medzi Cys zvyškami reťazcov alebo mostíkmi ako je Ci-Cg alkylén, prípadne s vloženým jedným alebo viacerými heteroatómami, ako sú O, S alebo N, alebo sú výhodne nespojené. Reťazce môžu byť imobilizované na tuhej fáze v monomérnej, dimérnej alebo oligomérnej forme. Ku koncom sa môžu pridať ďalšie aminokyseliny, aby vzniklo «rameno» na uľahčenie imobilizácie.

Všetky aminokyseliny v peptidoch podľa tohto vynálezu môžu byť v Dforme alebo v L-forme, hoci prirodzene sa vyskytujúca L-forma je výhodnejšia.

C- a N-terminálne ukončenia sekvencií peptidov sa môžu odlišovať od prírodných sekvencií modifikáciou terminálnych NH₂ skupín a/alebo COOH skupín, môžu byť napríklad acylované, acetylované, amidované alebo modifikované tak, že poskytujú miesto naviazania pre nosič alebo inú molekulu.

Peptidy podľa tohto vynálezu pozostávajú zo 6 až 50 aminokyselín, výhodne 10 až 30 aminokyselín. Tieto predstavujú celú prírodnú paletu aminokyselín v identifikovaných polohách.

Polypeptidový antigén podľa tohto vynálezu je buď voľný alebo vo forme viazanej na nosiči. Nosič alebo tuhá fáza, na ktorú je peptid prípadne naviazaný, sa môže vybrať zo širokej palety známych nosičov. Mal by byť vybratý s ohľadom na zamýšľané použitie imobilizovaného polypeptidu ako diagnostického antigénu alebo ako imunizačná zložka vo vakcíne.

Príkladmi nosičov, ktoré sa môžu použiť napríklad na diagnostické účely, sú magnetické guličky alebo živica z kopolymérov, ako je styréndivinylbenzén, hydroxylovaný styrén-divinylbenzén, polystyrén, karboxylovaný polystyrén, guľôčky z uhlíkovej černe, neaktivované alebo polystyrénom alebo polyvinylchloridom aktivované sklo, epoxidom aktivované porózne magnetické • · ···· » 9 9 · ·· ·· ·· • · · • · • · · ·

·· · sklo, želatínové alebo polysacharidové častice alebo iné proteínové častice, červené krvinky, monoklonálne a polyklonálne protilátky alebo fab fragmenty týchto protilátok.

Podľa ďalšieho praktického uskutočnenia tohto vynálezu môžu byť antigény súčasťou vakcíny s možnosťou kombinácie s nosičmi, adjuvantmi alebo s inými imunostimulačnými prvkami, ako je vírus kiahní obsahujúci env gén. Príkladmi nosičov a/alebo adjuvantov na účely vakcíny sú iné proteiny, ako je ľudský alebo hovädzí sérový albumín a limpetový hemocyanín. Imunostimulačné materiály sa dajú rozdeliť do troch skupín: adjuvanty, nosiče pre antigény a vehikulá. Príkladmi adjuvantov sú hydroxid hlinitý, hlinité soli, saponín, muramyl di- a tripeptidy, monofosforyllipid A, B.pertussis a rozličné cytokíny zahŕňajúce Thl cytokín IL-12 a IL-1. Rad proteínových toxínov sa môže použiť na dopravu prenášačových proteínov cez bunkové membrány do cytosolu, ktoré sú užitočné pri vývoji CTL vakcín. K nosičom patria bakteriálne toxoidy, ako je inaktivovaný toxín tetánu a cholery, geneticky detoxifikované bakteriálne toxíny, ako je teplotné labilný enterotoxín z E.coli, mastné kyseliny, živé vektory, ako je polio chimeras, a hybridné proteiny, ktoré tvoria častice, napríklad častice kvasinkového retrotranspozónového hybridu TY a častice HbcAg. Vehikulá, ktoré sú často sa vyskytujúcimi zložkami v moderných vakcínach, obsahujú emulzie minerálnych olejov, Freundov úplný a neúpný adjuvant, rastlinné oleje, povrchovo aktívne látky na báze neiónových blokových kopolymérov, skvalén alebo skvalán, lipozómy a biologicky odbúrateľné mikroguľôčky. Dvoma novými adjuvantami, ktoré sú významné pri vývoji nových vakcín, sú mikroemulzia olej vo vode (MF59) a polymérne mikročastice. Môže sa použiť akákoľvek látka, ktorá môže zvýšiť imunogenicitu antigénu, a niektoré ďalšie alternatívy nosičov alebo adjuvantov sú uvedené v americkom alebo v európskom liekopise.

Vhodné prípravky obsahujúce antigén na imunostimulačné použitie môžu tiež obsahovať interferóny, ako je INF-γ, antivírusové chemokíny alebo hematopoetické rastové faktory, ako je rastový faktor granulocytov-makrofágov.

Iným priblížením, ktorého cieľom je zvýšiť stimuláciu a absorpciu, napríklad v črevách, je podanie peptidov podľa tohto vynálezu s malými peptid·· ···· ·· ·· • · · · • · · • · ·· ······ ···· ··· ·· ·· ·· ··· ·· ·· · mi, ako sú di-, tri- alebo tetrapeptidy. Tieto peptidy sa môžu podávať navyše alebo v kombinácii s peptidmi podľa tohto vynálezu. Výhodne sa tieto peptidy podávajú spolu s tripeptidom YGG, ktorý pozostáva z aminokyselín v D-forme alebo v L-forme, výhodne v D-forme.

Nedávne prístupy k neparenterálnemu podávaniu vakcíny, napríklad cez sliznicu, zahŕňajú: technológiu génovej fúzie na vytvorenie netoxických derivátov sliznicových adjuvantov, geneticky inaktivované antigény s deléciou v esenciálnom géne, koexpresiu antigénu a špecifického cytokínu, ktorý je dôležitý pri modulácii a riadení sliznicovej imunitnej odozvy, a samotný genetický materiál, ktorý by umožnil prijatie DNA alebo RNA a jeho endogénnu expresiu v hostiteľských bunkách.

Jedným prístupom k vývoju trvanlivých odoziev, keď sa vyžaduje bunkami sprostredkovaná imunita, je vakcinácia s plazmidom DNA kódujúcim jeden alebo viac špecifických antigénov.

Na ochranu proti infekcii HIV musia vakcíny vykazovať sliznicovú aj systémovú imunitnú odozvu a mali by sa podávať akýmkoľvek konvenčným spôsobom, napríklad parenterálne alebo neparenterálne, ako je subkutánne, intrakutánne, intravenózne, intramuskulárne, perorálne, mukoticky alebo intranazálne.

Vo výhodnom praktickom uskutočnení vakcína podľa tohto vynálezu obsahuje antigény obsahujúce peptidy Sek. č.: 1, 4, 9 a 15, výhodnejšie sa peptidy vyskytujú v pomere 1:1:1:1.

V ďalšom praktickom uskutočnení vakcína obsahuje antigény:

RAL GPAATLQTPWTASLGVG - NH₂ (Sek. č.: 3)

RWL LLGLNPLVGGGRLYSPTSILG - NH₂ (Sek. č.: 6) RAIPIPAGTLLSGGGRAIYKRTAILG- NH₂ (Sek. č.: 11) a

RFIIPNIFTALSGGRRALLYGATPYAIG- NH₂ (Sek. č.: 18).

Jedna zo sekvencií obsahuje B bunkový epitop a bude aktivovať humorálny imunitný systém, kým ďalšie sekvencie spolupracujú s CTL-epitopmi a zmeny v aminokyselinách zabudované v rámci CTL-epitopu sú navrhnuté tak, aby sa dosiahlo zlepšenie viazania. Vykonali sa aj ďalšie zmeny v aminokyselinách, aby sa uľahčila syntéza peptidu a/alebo sa zvýšila rozpustnosť peptidu.

Ďalším praktickým uskutočnením vynálezu je spôsob detekcie protilátok vyvolaných HIV-1 alebo HIV-1-špecifickými peptidmi alebo proteínmi vo vzorke telovej tekutiny pomocou uvedených antigénov. Tento vynález zahŕňa aj súpravu na imunologickú skúšku pri uvedenej detekcii a protilátky schopné selektívne reagovať s uvedenými antigénmi.

Opis prípravy peptidov

Peptidy podľa tohto vynálezu sa môžu pripraviť akoukoľvek známou metódou prípravy lineárnej sekvencie aminokyselín, ako sú rekombinantné DNA techniky. Sekvencia nukleových kyselín, ktorá kóduje peptid podľa tohto vynálezu alebo multimér uvedených peptidov sa zavedie do expresného vektoru. Vhodnými expresnými vektormi sú napríklad plazmidy, kozmidy, vírusy a YAC (kvasinkové umelé chromozómy), ktoré obsahujú potrebné kontrolné oblasti pre replikáciu a expresiu. Expresný vektor môže byť stimulovaný na expresiu v hostiteľskej bunke. Vhodnými hostiteľskými bunkami sú napríklad baktérie, bunky kvasiniek a bunky cicavcov. Takéto techniky sú dobre známe odborníkom v problematike a sú opísané napríklad Sambrookom a kol., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Molekulárne klonovanie: Laboratórna príručka), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 1989. Inými dobre známymi technikami sú degradácia alebo syntéza pripojením aminokyselinového zvyšku k ďalšiemu zvyšku v kvapalnej fáze alebo výhodne na tuhej fáze (živica), napríklad takzvanou Merrifieldovou syntézou. Pozri napríklad Barany a Merrifield v knihe Peptids, Analysis, Synthesis, Biology (Peptidy, analýza, syntéza, biológia), zv. 2, red. E. Gross a Meinhofer (Acad. Press, N.Y., 1980), Kneib-Coronier a Mullen, Int. J. Peptid Res., 30, s. 705-739 (1987) a Fields a Noble. Int. J. Peptid Protein Res. 35, s.161-214 (1990).

·· ···· ·· • · · · · • · · · • · · 9 · • · · · • · · · • · · • · · · • · · · ·· ·· ·

V prípade, že sa požaduje lineárny alebo cyklický peptid, na sekvencii aminokyselín sa vykoná krok chemickej oxidácie, aby sa pri syntetizovaní vhodných sekvencií lineárnych aminokyselín cyklizovali alebo spojili dva cysteínové zvyšky v rámci jednej alebo medzi dvoma sekvenciami peptidov, pozri Akaji a kol., Tetrahedron Letter, 33, 8, s. 1073-1076, 1992.

Všeobecný opis syntézy

Všetky deriváty peptidov pripravené v príkladoch uvedených nižšie sa syntetizovali na syntezátori peptidov Milligen 9050 s použitím štandardného programu. Použitá živica bola Tenta Gel P RAM s teoretickým plnením 0,20 meq/g (RAPP POLYMERE GmBH, Tiibingen). Konečný produkt syntézy sa vysušil cez noc vo vákuu. Peptid sa potom oddelil od živice pôsobením 90 % kyseliny trifluóroctovej v prítomnosti etánditiolu (5 %) a vody (5 %) ako lapačov nečistôt (1,5 hodiny pri teplote miestnosti). Potom sa živica odfiltrovala a premyla na filtri ďalšou dávkou kyseliny trifluóroctovej (100 %) (2 x 20 ml). Spojené filtráty sa odparili vo vákuu (vodný kúpeľ pri teplote miestnosti) a zvyšok sa zmiešal s etyléterom (200 ml) a vyzrážaný produkt sa odfiltroval. Tuhá látka sa ihneď rozpustila na filtri v ľadovej kyseline octovej (100 ML) a pridala sa k 1,5 1 20 % kyseliny octovej v metanole a pridával sa 0,1 M roztok jódu v metanole, až sa sústava získala svetlohnedú farbu. Potom sa pridal iónomenič Dowex 1 x 8 vo forme acetátu (15 g) (Bio-Rad, Richmond, CA, USA) a zmes sa prefiltrovala. Filtrát sa odparil a zvyšok sa lyofilizoval z kyseliny octovej. Produkt sa potom prečistil kvapalinovou chromatografiou s obrátenými fázami na stĺpci s Kromasilom® 100 - 5 C8 (EKA Nobel, Súrte, Švédsko) vo vhodnom systéme obsahujúcom acetonitril v 0,1 % vodnom roztoku kyseliny trifluóroctovej. Vzorky odobraté zo stĺpca sa analyzovali analytickou vysokoúčinnou kavaplinovou chromatografiou (HPLC) (Beckman System Gold, USA) na stĺpci Kromasilu® 100 - 5 C8 (EKA Nobel, Súrte, Švédsko). Frakcie obsahujúce čistú látku sa spojili, rozpúšťadlo sa odparilo a produkt sa lyofilizoval z kyseliny octovej. Na výslednom produkte sa urobila záverečná analýza HPLC a štruktúra peptidu sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

·· ···· • · • · · • · · • · · • · · · ·· ··

Všetky aminokyseliny použité v syntéze boli L-aminokysliny a aaminoskupina bola chránená fluórenylmetoxykarbonylovou skupinou. Bočné reťazce boli chránené nasledujúcim spôsobom:

Cys (Trt), Gln(Trt), Glu(OtBu), Thr(tBu).

Skratky v zátvorkách znamenajú:

Trt = trifenylmetyl, t-Bu = ferc-butyl

OtBu = íerc-butylester

Deriváty aminokyselín dodala firma Bachem AG, Švajčiarsko.

PRÍKLAD 1

Príprava K A L GPG ATL Q TP WT A C Q G V G - NH₂ (Sek. č.: 2).

Peptid sa syntetizoval vo forme amidu z odpovedajúcich východiskových materiálov podľa všeobecného opisu syntézy. Čistota sa stanovila analýzou HPLC a štruktúra sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

Čistota (HPLC): 87 %

PRÍKLAD 2

Príprava RALGPAATLQTPWTASLGVG (Sek. č.: 3).

Čistota (HPLC): viac ako 95 % ·· ····

Molekulová hmotnosť (voľná báza): 1966

Molekulový vzorec: C88H144O25N26

PRÍKLAD 3

Príprava WIIPGLNPLVGGGKLYSPTSILCG - NH₂ (Sek. č.: 5).

Čistota (HPLC): viac ako 95 %

Analýza hmotnostnou spektrometriou: Teoretická molekulová hmotnosť: 2454,9

Experimentálna molekulová hmotnosť: 2454,8 ES+

PRÍKLAD 4

Príprava RWLLLGLNPLVGGGRLYSPTSILG (Sek. č.: 6).

Čistota (HPLC): viac ako 95 %

Molekulová hmotnosť (voľná báza): 2552

Molekulový vzorec: Ci 19H195O29N33

PRÍKLAD 5

Príprava KILLGLNPLVGGGRLYSPTSILG (Sek. č.: 7) , R L L LGLNPLVGGGRLYSPTTILG (Sek. č.: 8) a N I P I P V G D I Y G GGDIYKRWQALCL (Sek. č.: 24).

Peptidy sa syntetizovali vo forme amidov z odpovedajúcich východiskových materiálov podľa všeobecného opisu syntézy. Čistota sa stanovila analýzou HPLC a štruktúra sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

PRÍKLAD 6

Príprava RNIPIPVGDIYGGGDIYKRWQALCL (Sek. č.: 10).

Čistota (HPLC): 85 %

Analýza hmotnostnou spektrometriou: Teoretická molekulová hmotnosť: 2817,3

Experimentálna molekulová hmotnosť: 2813,7 ES+

PRÍKLAD 7

Príprava RAIPIPAGTLLSGGGRAIYKRWAILG (Sek. č.: 11).

Čistota (HPLC): viac ako 95 % ·· ····

Molekulová hmotnosť (voľná báza): 2707

Molekulový vzorec: C125H208O29N38

PRÍKLAD 8

Príprava A L P I PA G F I Y G G G R I Y K R W Q A L G (Sek. č.: 12), K I P I P V G F I G G G W I Y KR W A I L G (Sek. č.: 13) a K I P I P V G T L L S G G G R I Y K R W A I L G (Sek. č.: 14).

PRÍKLAD 9

Príprava KFIIPNIF S ALGG Al S YDLNTNILNC I (Sek. č.: 16).

Čistota (HPLC): viac ako 80 %

Analýza hmotnostnou spektrometriou: Teoretická molekulová hmotnosť: 2783,3

Experimentálna molekulová hmotnosť: 2783,3 ES+

PRÍKLAD 10

Príprava KFIIPN1FSALSGGGAISYDLNTFLNCIG (Sek. č.: 17).

·· ···· • · · ·· · · • · · · · · • · · · · · · • · · · · · · ·· ·· ··· ··

Peptid sa syntetizoval vo forme amidu z odpovedajúcich východiskových materiálov podľa všeobecného opisu syntézy. N1 v sekvencií je norleucín. Čistota sa stanovila analýzou HPLC a štruktúra sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

Čistota (HPLC): viac ako 80 %

Analýza hmotnostnou spektrometriou: Teoretická molekulová hmotnosť: 2932,4

Experimentálna molekulová hmotnosť: 2931,8 ES+

PRÍKLAD 11

Príprava RFIIPN1FTALSGGRRALLYGATPYAIG (Sek. č.: 18).

Peptid sa syntetizoval vo forme amidu z odpovedajúcich východiskových materiálov podľa všeobecného opisu syntézy. NI v sekvencií je norleucín. Čistota sa stanovila analýzou HPLC a štruktúra sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

Čistota (HPLC): viac ako 95 %

Molekulová hmotnosť (voľná báza): 2894

Molekulový vzorec: C137H217O32N37

PRÍKLAD 12

Príprava Kíl P NI F S A L G G G R L L Y G A T P Y A I G (Sek. č.: 19), R I I PNI FT ALS G G GRL L Y G ATP Y A I G (Sek. č.: 20) a W I I P NI F SALGGAISYDLNTN1LNCI (Sek. č.: 25).

Peptidy sa syntetizovali vo forme amidov z odpovedajúcich východiskových materiálov podľa všeobecného opisu syntézy. Čistota sa stanovila analý-

•· ···· • · · • · · • · · · • · · ·· ·· ·· • ·· zou HPLC a štruktúra sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

PRÍKLAD 13

Dimerizácia prostredníctvom disufldického mostíku

Sekvencie peptidov z príkladov 1 a 3 sa spojili v oxidačnom kroku za vzniku dipeptidu, v ktorom cysteínové zvyšky vytvorili disulfidový mostík. Mostík sa vytvoril jedným z týchto spôsobov:

A) Oxidácia s I₂. Rovnaké množstvá peptidov sa rozpustili v zmesi kyseline octová/metanol (1:4) a pridal sa 0,1 M I₂ v metanole za vzniku zmesi diméru.

alebo

B) Oxidácia z [Cys(Spy)¹⁶]- Sek. č.:2; 2,3 mM peptidu sekvencie Sek. č.: 2 rozpusteného v 2 M AcOH (aq) a 2-propanolu (1:1) sa nechalo reagovať s 2,2ditiodipyridínu (3 ekv.) za vzniku [Cys(Spy)¹⁶]- Sek. č.: 2. Rovnaké množstvá [Cys(Spy)¹⁶]- Sek. č.: 2 a peptidu Sek. č.: 5 sa rozpustili v zmesi 10 mM NH-íOac (aq, pH=6,5) a metanolu (5:2), čím sa získal dimér Sek. č.: 21.

Čistota peptidu sa stanovila analýzou HPLC a štruktúra peptidu sa potvrdila analýzou aminokyselín. Obsah peptidu (voľná báza aminokyseliny) bola 80 %.

Čistota (HPLC): 92 %.

PRÍKLAD 14

Pripravila sa vakcína obsahujúca peptidy Sek. č.: 3, 6, 11 a 18. Lyofilizované peptidy sa rozpustili v sterilnej vode na výslednú koncentráciu 4 mg/ml. Výsledná koncentrácia soli bola 0,9 %. Pripravil sa tiež faktor stimulujúci granulocytovo-makrofágové kolónie (GM-CSF) podľa návodu na použitie

·· ·· ···· ·· • ·· výrobcu s výslednou koncentráciou 0,3 mg/ml. Tieto dva roztoky sa podali intrakutánne. Typická injekčná dávka je 100 μΐ.

PRÍKLAD 15

Roztok alebo suspenzia antigénu sa zmiešala s rovnakými množstvami Freundovho adjuvantu od Behringa, úplného alebo neúplného, a potom sa jemne emulguje natiahnutím do injekčnej striekačky alebo ráznym vytlačením z nej, alebo homogenizátorom. Emulzia by mala ostať stabilná aspoň 30 minút. Emulzie antigén-adjuvant je najlepšie podávať injekčné subkutánne ako depot.

PRÍKLAD 16

Údaje o toxicite

Peptid z príkladu 13 sa rozpustil v 0,9 % NaCI na koncentráciu skúšobného roztoku 4 mg/ml. Peptid sa podal injekčné myším samiciam NMFI v dávke 100 pg na kg telesnej hmotnosti. Nepozorovali sa žiadne toxikologické účinky a peptid sa nepovažuje za toxický.

Štúdie toxicity sa vykonali na myšiach a potkanoch so zmesou peptidov vakcíny v príklade 14. Na štúdiu sa vybrali myši, aby poskytli komparatívne údaje pre druhý bežne používaný druh hlodavcov. Skúšobná látka bola zmesou štyroch peptidov dodaných v jednej nádobke obsahujúcej lyofilizovaný materiál na rekonštitúciu s fyziologickým soľným roztokom, pričom dávkové hladiny sa vyjadrili vo forme celkovej dávky peptidu. Jednotlivé peptidy boli prítomné v pomere 1:1:1:1, čo poskytne dávkové hladiny každého peptidu 0,0075 mg/kg telesnej hmotnosti, 0,075 mg/kg telesnej hmotnosti a 0,75 mg/kg telesnej hmotnosti, ktoré sú až 500-krát vyššie ako predpokladaná dávka pre ľudí. Testovacia zmes sa podala raz, intravenóznou infúziou do chvostovej vény s rýchlosťou dávkovania 3 ml/minútu. Zvieratá sa zabili v 15. a 16. deň intraperitoneálnou injekciou pentobarbitónu sodného.

·· ···· • ·· ·· • · · · · · _ _ ····· • · ·· ······

·..··..· ··· ·

Výsledky týchto štúdií naznačujú, že dávkové hladiny podané myšiam a potkanom neukázali žiadne nepriaznivé reakcie a že hladina bez účinku presiahla 3 mg/kg.

PRÍKLAD 17

Imunologická skúška na detekciu protilátok vyvolaných HIV-1

Činidlá s magnetickými časticami sa pripravia podľa protokolu odporúčaného výrobcom. Dynal AS je výrobcom Dynabeads, ktoré sa použili. Magnetické častice pokryté ligandom sa nazývajú činidlo 1. Peptid podľa tohto vynálezu je kovalentne spojený s predaktivovaným povrchom magnetických častíc. Je tiež možné absorbovať peptid fyzikálne na povrchu magnetických častíc. Koncentrácia častíc v činidle 1 je v rozsahu od 1 mg/ml do 15 mg/ml. Veľkosť častíc sa menila v rozsahu 0,2 pm až 15 pm. Koncentrácia peptidov je v rozsahu od 0,01 mg/mg častíc do 1 mg/mg častíc.

Antihumánnou Ig alkalickou fosfatázou (AP) konjugované protilátkové činidlo sa pripravilo podľa odporúčaného protokolu Dáko AS. Tento protokol je štandardným postupom v tomto odbore. Toto činidlo sa nazýva činidlo 2.

Roztok substrátu fenolftaleínmonofosfátu sa pripraví podľa odporúčaného protokolu Fluka AG. Tento protokol je štandardným postupom v tomto odbore. Roztok substrátu sa nazýva činidlo 3.

Použitý premývací a inkubačný tlmivý roztok je štandardný tlmivý roztok 0,05 M tris-zásady s nasledujúcimi prídavnými zlúčeninami: Tween 20 (0,01% až 0,1%), glycerol (0,1% až 10%) a chlorid sodný (0,2% až 0,1%).

Postup skúšky zahŕňal inkubačný krok, v ktorom sa v každej jamke zmiešala 1 kvapka činidla 1 s 2 kvapkami premývacieho tlmivého roztoku. Po zmiešaní sa pridalo 30 μΐ vzorky a roztok sa inkuboval 5 minút. Magnetické častice sa môžu magnetom zachytiť a kvapalina sa môže odstrániť, po čom sa magnet oddiali. Potom sa jamky vypláchli dvakrát 4 kvapkami premývacieho roztoku, po čom nasledovala inkubácia činidlom 2. Pridala sa 1 kvapka činidla 2 s 2 • ·· ·· ·· · · · · · • · · · · • · · · · · • · · · · ··· ·· ·· · ·· ···· • · · • · · • · · · • · · · ·· ·· kvapkami premývacieho tlmivého roztoku a roztok sa inkuboval 5 minút. Magnetické častice sa môžu magnetom zachytiť a kvapalina sa môže odstrániť, po čom sa magnet oddiali. Potom sa premývací krok opakoval a nasledovala inkubácia s činidlom 3. Do každej jamky sa pridali 2 kvapky činidla 3 a roztok sa inkuboval 3 minúty. Výsledky sa odčítali oproti bielemu pozadiu. Pozitívne výsledky sú červené (3+ = sýto červené), kým negatívne výsledky sú jasne svetložlté/svetlohnedé roztoky, aké sa získali pri negatívnej kontrole.

Sada na imunologickú skúšku sa môže použiť pri detekcii protilátok vyvolaných buď vírusom HIV alebo HlV-špecifickými peptidmi alebo proteínmi, napríklad peptidmi podľa tohto vynálezu.

Zámerom vyššie uvedených príkladov je len ilustrácia vynálezu. Musí to byť pochopené tak, že osoba s praxou v problematike môže modifikovať tu opísané peptidy, antigény a vakcíny tak, že sa neodchýli od zmyslu a z rámca tohto vynálezu, ako je uvedené v nárokoch.

Polypetidy tohto vynálezu sa môžu použiť v kombinácii aspoň jedného peptidu vybratého z každej skupiny sekvencii, Sek. č.: 1, Sek. č.: 4, Sek. č.: 9 a Sek. č.: 15 za vzniku antigénov a aktívnej zložky profylaktickej alebo terapeutickej vakcíny určenej na ochranu proti vírusu ľudskej imunitnej nedostatočnosti typu 1 (HIV-1). Vakcína môže obsahovať zlúčeniny, ktoré majú priaznivé účinky pri ochrane alebo stimulácii imunitného systému hostiteľa (človeka alebo iného živočícha-stavovca), napríklad interleukíny, interferóny, rastové faktory granulocytov-makrofágov, hematopoetické rastové faktory a podobne. Vakcíny ďalej obsahujú adjuvant alebo vehikulum, výhodným adjuvantom alebo vehikulom je monofosforyllipid A (MPL ®), prípadne s alumom, Freundov adjuvant (úplný alebo neúplný) alebo hydroxid hlinitý. Optimálne množstvo adjuvantu/vehikula bude závisieť od vybratého typu (typov).

Preparát peptidu alebo vakcíny sa pred uskladnením môže lyofilizovať.

Vakcína sa môže skladovať výhodne pri nízkej teplote, v ampulách obsahujúcich jednu alebo viac jednotkových dávok, použiteľných bez úpravy. Typická jednotková dávka peptidu podľa tohto vynálezu je v rozmedzí koncentrácií: 1 pg - 1 mg na kg telesnej hmotnosti, výhodne 2pg - 0,15 mg na kg telesnej ·· ····

• · · · • · · • · · · • · · · ·· ·· · hmotnosti. Osoby s praxou v problematike ocenia, že vhodná dávka bude závisieť na telesnej hmotnosti pacienta, na type ochorenia, závažnosti stavu, spôsobu podávania a niektorých ďalších faktoroch. Vakcína sa môže podať až dvanásťkrát a injekčné, typicky sa podá asi trikrát. Pri príprave injekčného roztoku sa peptid rozpustí v sterilnom roztoku chloridu sodného na výslednú koncentráciu 1 mg/ml peptidu a 0,9 % choridu sodného. Typický objem injekcie je 100 μΐ až 200 μΐ (2x100 μΐ). Peptid sa výhodne podáva spolu s vhodným adjuvantom a/alebo s rastovým faktorom granulocytov-makrofágov, napríklad s prípravkom Leucomax® «Shering Plough». Vhodným spôsobom podania môže byť intrakutánne, subkutánne, intravenózne, perorálne, intramuskulárne, intranazálne, mukozálne alebo inou vhodnou cestou. Na zabezpečenie ochrany sa môžu vyžadovať urýchlené spôsoby podávania. Pre odborníkov v problematike bude zrejmé, že zloženie vakcíny podľa tohto vynálezu je prospešné nielen pri prevencii infekcie, ale aj pri liečbe infekcie.

·· ···· • · · · • · · • · · · • · · ·· ·· · ··

9 9 9 • u · · • · · · · • · · · ·· ·· ·>

···

Zoznam sekvencii (1) VŠEOBECNÉ INFORMÁCIE:

(i) PRIHLASOVATEĽ (pre všetky krajiny okrem USA):

(A) MENO: Bionor A/S (B) ULICA: Stramdalsjordet 4, P.O.Box 1868, Gulset (C) MESTO: Skien (E) KRAJINA: Nórsko (F) POŠTOVÝ KÓD (ZIP): N-3705 (G) TELEFÓN: +47 35 50 57 50 (H) TELEFAX: + 47 35 50 57 01 (i) PÔVODCA A PRIHLASOVATEĽ (len pre USA) :

(A) MENO: Birger Sorensen (B) ULICA : Meierlia 3 (C) MESTO: 3727 Skien (D) KRAJINA: Nórsko (ii) NÁZOV VYNÁLEZU: Peptidy HIV, antigény, zloženie vakcín, súprava na imunologickú skúšku a spôsob detekcie protilátok vyvolaných HIV (iii) POČET SEKVENCIÍ: 25 (iv) FORMA ČITATEĽNÁ PRE POČÍTAČ:

(A) TYP MÉDIA: Pružný disk (B) POČÍTAČ: IBM-kompatibilný (C) OPERAČNÝ SYSTÉM: Windows 95 (D) SOFTWARE: Word 7.0 (v) SÚČASNÉ ÚDAJE O PRIHLÁŠKE:

Priorita z NO 1999 1078 podanej 4. marca 2000

··	····	• ··	··
• ·	•	·· · ·	•	• ·
• ·	•	• · ·	•	•
• ·	• ·	• · ·	•	•
··	··	··· ··	··	•

ČÍSLO PODANIA:

(2) INFORMÁCIE PRE SEK č.:l:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP REŤAZCA: jednovláknová (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (v) TYP FRAGMENTU : vnútorný (ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 1 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 1 je Lys alebo Arg ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 2 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 2 je Ala, Gly, Ser alebo Arg ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 3 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 3 je Leu alebo Met ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 4 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 4 je Gly alebo Arg ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto ·· ···· • · · ·· · · · · · ··· ····· • · ·· ······ ···· ··· · · ·· ·· ··· ·· ·· · Λ* (B) MIESTO: 5 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 5 je Pro, Thr, Val, Ser, Gin alebo Ala ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 6 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 6 je Gly, Ala, Lys, Arg, Gin alebo Glu ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 8 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 8 je Thr alebo Ser ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 9 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 9 je Leu alebo íle ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 14 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 14 je Thr,Ser alebo Val ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 15 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 15 je Ala alebo Ser ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 16 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 16 je Cys alebo Ser, prípadne Cys tvorí súčasť disulfidickej väzby ·· ···· ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 17 (D) INE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 17 je Gin alebo Leu.

ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 18 (D) INE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 18 je Gly, Glu alebo Arg ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 20 (D) INE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 20 je Gly alebo Arg (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:1:

Xaaj Xaa2 Xaa₃ Xaa4 Xaas Xaa^ Ala Xaa₈ Xaa? Gin Thr Pro Trp Xaan Xaai₅ Xaais Xaa p Xaajg 15 10 15

Val Xaa2o (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:2:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie ·· ···· • · · · • · · • · · · • · · · ·· ·· · ·· ·· • · · · · • · · · • · · · · • · · · • ·· ·· · ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 16 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 16 prípadne tvorí súčasť disulfidickej väzby (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:2:

Lys Ala Leu Gly Pro Gly Ala Thr Leu Gin Thr Pro Trp Thr Ala Cys Gin Gly Val Gly 15 10 15 20 (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:3:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.-.3:

Arg Ala Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Gin Thr Pro Trp Thr Ala Ser Leu Gly Val Gly 15 10 15 20 (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:4:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 23-24 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý

JO (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 1 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 1 je Arg, Lys, Asp alebo nič (ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 2 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 2 je Trp, Gly, Lys alebo Arg (ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 3 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 3 je íle, Leu, Val alebo Met ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 4 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe je íle, Val alebo Leu ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 5 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 5 je Leu, Met, Val alebo Pro ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 12 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 12 je Arg alebo Lys ·· ·· ···· ·· · ·· ··

3‘Ί • · ·· · · • · · • · · · • · · ·« · ·· ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 13 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 13 je Met alebo Leu ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 15 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 15 je Ser, Cys alebo Gin, Cys prípadne tvorí súčasť disulfidickej väzby ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 17 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 17 je Thr, Val, íle, Ser alebo Ala ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 18 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 18 je Ser, Gly alebo Thr ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 21 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 21 je Asp, Glu, Cys alebo Gly, Cys prípadne tvorí súčasť disulfidickej väzby ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 22 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 22 je Gly alebo nič ·· ···· • ·

• · ·· ··· ·· ·· ·· • · • · ·· · ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 11..12 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= prípadne vložený Gly-mostík s 0, 1, 2, alebo 3 zvyškami (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:4:

Xaai Xaa₂ Xaa3 Xaa4 Xaas Gly Leu Asn Pro Leu Val [Gly]„Xaai₂Xaai3 Tyr Xaais Pro 1 5 10 15

XaanXaaiglle LeuXaa₂i Xaa₂₂ (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:5:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 24 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 23 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 23 môže tvoriť súčasť disulfidického mostíka (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:5:

·· ···· · ·· ·· • e · ···· ··· ··· ····· • · · · ··· ·· ·· ·· ··· ·· ·· ·

Trp íle íle Pro Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Lys Leu Tyr Ser Pro Thr Ser íle Leu 15 10 15 20

Cys Gly (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:6:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 24 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:6:

Arg Trp Leu Leu Leu Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Ser Pro Thr Ser 15 10 15 20

Ue Leu Gly (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:7:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 23 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:7:

··	···· • •	• ··	• · • •	• ·
• •	• •	·· · • ·	• •	• •
•	•	• ·	• ·	•	•	•
··		··	··· ··			• ·	··

Lys íle Leu Leu Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Ser Pro Thr Ser íle 15 10 15 20

Leu Gly (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.: 8 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 23 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:8

Arg Leu Leu Leu Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Ser Pro Thr Thr íle 15 10 15 20

Leu Gly (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.: 9 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 22-26 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie ix) VLASTNOSŤ:

·· ···· · ·· ·· ·· · ······ • « · ····· ·· ·· ······ ···· ··· · · ·· ·· ··· ·· ·· (A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 1 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka^ Xaa v polohe 1 je Asn, Ser, Gly His, Ala, Pro, Arg alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 2 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 2 je Asn, Ala alebo Lys ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 3 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 3 je Pro, Gin, Gly, íle alebo Leu ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 7 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 7 je Val alebo Ala ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 8 (D) INE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 8 je Gly, alebo Lys ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 9 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 9 je Glu, Asp, Lys, Phe alebo Thr ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 10 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 10 je íle, Met, Val alebo Leu • ·· ·· • · · · · · · • · · · · %

·· ···· • · · • · • · · ·· ·· ··· ·· ·· ·· · ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 11 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 11 je Tyr, Leu alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 12 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 12 je Ser alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 13 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 13 je Arg alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 14 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 14 je Asp, Arg, Trp, Ala alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 15 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 15 je íle alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 16 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 16 je Tyr alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 17 ·· ···· · ·» ·· • · ······ • · · ····· ·· ·· ······ · · · ··· ·· ·· ·· ··· ·· ·· (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 17 je Lys alebo Arg.

ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 18 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 18 je Arg, Lys älebo Asp ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 19 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 19 je Trp alebo Gly ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 20 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 20 je íle, Met, Val, Gin alebo Ala ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 21 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 21 je íle, Val alebo Ala ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 22 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 22 je Leu, Met alebo Val ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 23 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 23 je Gly alebo Cys ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto

Μ ·· ···· · ·· ·· ·· · ····· • · · · · · · · ···· · · · ·· ·· ·· ··· ·· ·· (B) MIESTO: 24 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 24 je Leu alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 12..13 (D) INE INFORMÁCIE: /poznámka= prípadne vložený Gly-mostík s 1,2 alebo 3 zvyškami (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:9

Xaai Xaa₂Xaa₃ Pro íle Pro Xaa7 Xaag Xaa9 XaaioXaau Xaai₂ [Gly]„ Xaan Xaa [₄ Xaan 15 10 15

Xaan Xaan Xaan Xaan Xaa₂o Xaa₂i Xaa₂₂ Xaay Xaa₂₄20 (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.: 10 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 25 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 24 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 24 prípadne tvorí súčasť disulfidickej väzby ·· ···· · ·· ·· · ·· · ········ • ; ·_ββ Σϊΐ.ϊϊ Σ • · · · ··· ··· ·· ·· ····· ·· ·· · y

(xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:10

Arg Asn íle Pro íle Pro Val Gly Asp íle Tyr Gly Gly Gly Asp íle Tyr Lys Arg Trp Gin Ala 15 10 15 20

Leu Cys Leu (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.: 11 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 26 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.: 11

Arg Ala íle Pro íle Pro Ala Gly Thr Leu Leu Ser Gly Gly Gly Arg Ala íle Tyr Lys Arg Trp 15 10 15 20

Ala íle Leu Gly 25 (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.: 12 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 23 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid í

·· ···· • · · • · · • · · ·· ··

·· • · • · • · ·· (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:12

Ala Leu Pro íle Pro Ala Gly Phe íle Tyr Gly Gly Gly Arg íle Tyr Lys Arg Trp Gin Ala Leu 15 10 15 20

Gly

2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:13 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 22 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:13 Lys íle Pro íle Pro Val Gly Phe íle Gly Gly Gly Trp íle Tyr Lys Arg Trp Ala íle Leu Gly 15 10 15 20 (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:14 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 24 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid ·· «··· · ·· ·· ·· 4 ·«·· · · · • · *·· , ♦ : · · j • · · · <*· *t tt tt ·· · ·· · (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:14

Lys íle Pro íle Pro Val Gly Thr Leu Leu Ser Gly Gly Gly Arg íle Tyr Lys Arg Trp Ala íle 15 10 15 20

Leu Gly (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:15 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 24-28 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 1 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 1 je Pro, Lys, Arg alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 2 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 2 je Glu, Arg, Phe alebo Lys ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 5 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 5 je Pro alebo Thr ·· ···· • · 4 • · · • · · · ·· · ·

:

··· ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 6 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= ” Xaa v polohe 6 Met, Thr alebo Nie ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 7 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 7 je Phe alebo Leu ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 8 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= ” Xaa v polohe 8 je Ser, Thr, Ala alebo Met ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 9 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 9 je Ala, Glu alebo Leu ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 11 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 11 je Ser alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 12 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 12 je Ala, Arg alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 13

··	····	• ··		··
•	•	•	•t ·	•	•	•	• *
•	•	•	i ·	•	•	•
·	• ·	• ·	•	• ·
·	··	·»· ··		··	·*

(D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 13 je íle, Leu alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 14 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 14 je Ser, Ala, Leu alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 15 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 15 je Tyr, Glu alebo Asp ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 16 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 16 je Gly alebo Asp ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 17 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 17 je Ala alebo Leu ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 18 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 18 je Thr, íle, Val, Leu alebo Asn ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 19 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka^ Xaa v polohe 19 je Pro, Thr alebo Ser ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto

··	····	•	··	• ·
•	• ·	··	• ·	• · ·
•	• ·	•	• ·	• ·
•
•
··	··	···	··	·· ·

(B) MIESTO: 20 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 20 je Tyr, Phe, Nie, His alebo Gin ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 21 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 21 je Asp, Asn, Leu alebo Ala ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 22 (D) INE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 22 je Leu, íle, Val alebo Asn ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 23 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 23 je Asn, Tyr, Cys alebo Gly ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 24 (D) INE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 24 je Thr, Met, íle, Ala, Val alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 25 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 25 je Gly alebo nič ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 23 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 23 prípadne tvorí súčasť disulfidickej väzby ·· ···· · ·· ·· • · · ······· • · · ····· ·· ·· ··· ·· ·· ··· ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 11...12 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= medzi Xaa 11 a 12 je prípadne vložený mostík Gly-Arg, v ktorom n = 1,2 and 3, a m nezávisle od n je 0,1,2 alebo 3.

(xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:15

Xaai Xaa₂ íle íle Xaas Xaae Xaa? Xaag Xaag Leu Xaau [Gly]_n [Arg]_m Xaa^ Xaa n Xaa h 1 5 10

Xaajs Xaai6 Xaa n Xaau Xaai9Xaa₂o Xaa₂j Xaa^Xaa^ Xaa₂₄ Xaa₂s

20 25 (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:16 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 24 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 24 prípadne tvorí súčasť disulfidickej väzby (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:16

• 9 ···· • · · • · ·	• ·· •	·· • · • ·	·· • · 9 9	9 9

99 99	···	··	• 9	9 9

Lys Phe íle íle Pro Nie Phe Ser Ala Leu Gly Gly Ala íle Ser Tyr Asp Leu Asn Thr Nie

10 15 20

Leu Asn Cys íle (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:17 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 28 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 26 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 26 prípadne tvorí súčasť disulfidickej väzby (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.-.17

Lys Phe íle íle Pro Nie Phe Ser Ala Leu Ser Gly Gly Gly Ala íle Ser Tyr Asp Leu Asn 15 10 15 20

Thr Phe Leu Asn Cys íle Gly 25 (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:18 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 27 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina

·· ···· • · · • · ·	• ·· •	·· • · • ·	·· • · · • ·

·· ··	···	··	·· ·

(C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:18

Arg Phe íle íle Pro Nie Phe Thr Ala Leu Ser Gly Gly Arg Arg Ala Leu Leu Tyr Gly Ala

10 15 20

Thr Pro Tyr Ala íle Gly 25 (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:19 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 24 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:19

Lys íle íle Pro Nie Phe Ser Ala Leu Gly Gly Gly Arg Leu Leu Tyr Gly Ala Thr Pro Tyr Ala 15 10 15 20 íle Gly (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:20 ·· ····

w>

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 25 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:20

Arg íle íle Pro Nie Phe Thr Ala Leu Ser Gly Gly Gly Arg Leu Leu Tyr Gly Ala Thr Pro Tyr 15 10 15 20

Ala íle Gly (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:21 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 44 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: dvojitý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: dimémy peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: disulfidická väzba medzi polohou 16 v IDENT. Č. SEKV.: 2 a polohou 23 v IDENT. Č. SEKV.: 5 (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:22 • · · · ··· ·· ·· ·· ·· ·· ·· · tyl (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 40 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: dvojitý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: dimémy peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: disulfidická väzba medzi polohou 16 v IDENT. Č. SEKV.: 2 a polohou 16 v IDENT. Č. SEKV.: 2 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka- (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:23 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 48 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: dvojitý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: dimémy peptid (iii) HYPOTETICKÝ: Nie ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: disulfidická väzba medzi polohou 23 v IDENT. Č. SEKV.: 5 a polohou 23 v IDENT. Č. SEKV.: 5 (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:24:

·· ···· • · · · »·· ·· ·· ·· ··· ·· ·· ·

51?

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 23 (D) INÉ INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 23 môže tvoriť súčasť disulfidického mostíka (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:24:

Asn íle Pro íle Pro Val Gly Asp íle Tyr Gly Gly Gly Asp íle Tyr Lys Arg Tyr Gin Ala 15 10 15 20

Leu Cys Leu (2) INFORMÁCIE PRE IDENT. Č. SEKV.:25 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 24 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) TYP SPLETENIA: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid

··		····	• ··	··
•	•	•	·· · ·	• · ·
•	•	•	• · ·	• ·
•	•	• ·	• · ·	• ·
··		··	··· ··	·· ·

(iii) HYPOTETICKÝ: Nie ix) VLASTNOSŤ:

(A) NÁZOV/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) MIESTO: 23 (D) INE INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 23 prípadne tvorí súčasť disulfidickej väzby (xi) OPIS SEKVENCIE: IDENT. Č. SEKV.:25 Trp íle íle Pro Nie Phe Ser Ala Leu Gly Gly Ala íle Ser Tyr Asp Leu Asn Thr Nie 15 10 15 20

Leu Asn Cys íle ·· ···· ·· ·· ·· • · •

• · ·· ·

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Peptid odvodený od proteínu HIV gag p24, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa modifikovanú sekvenciu aminokyselín obsahujúcu modifikácie v porovnaní s natívnou sekvenciou a vybratú zo skupín sekvencii aminokyselín:

Xaai Xaa₂ Xaa3 Xaa₄ Xaas Xaae Ala Xaag Xaa9 Gin Thr Pro Trp Xaai₄Xaau Xaai6 Xaap Xaaig Val Xaa₂o (Sek. č.: 1) kde aminkyseliny reťazca by mohli mať nasledujúce významy;

Xaa v polohe 1 derivátu peptidu je Lys alebo Arg,

Xaa v polohe 2 je Ala, Gly, Ser alebo Arg,

Xaa v polohe 3 je Leu alebo Met,

Xaa v polohe 4 je Gly alebo Arg,

Xaa v polohe 5 je Pro, Thr, Val, Ser, Gin alebo Ala,

Xaa v polohe 6 je Gly, Ala, Lys, Arg, Gin alebo Glu,

Xaa v polohe 8 je Thr alebo Ser,

Xaa v polohe 9 je Leu alebo íle ,

Xaa v polohe 14 je Thr, Ser alebo Val,

Xaa v polohe 15 je Ala alebo Ser,

Xaa v polohe 16 je Cys alebo Ser,

Xaa v polohe 17 je Gin alebo Leu Xaa v polohe 18 je Gly, Glu alebo Arg,

Xaa v polohe 20 je Gly alebo Arg, peptid obsahuje aspoň deväť po sebe idúcich aminokyselín sekvencie s sek. č.: 1,

Xaaj Xaa₂ Xaa3 Xaa₄ Xaas Gly Leu Asn Pro Leu Val [Gly]„ Xaaj₂ Xaa^ Tyr Xaajs Pro Xaan Xaajg íle Leu Xaa₂i Xaa₂₂ (Sek. č.: 4) v ktorom aminokyseliny reťazca majú nasledujúci význam;

Xaa v polohe 1 je Arg, Lys, Asp alebo nič, •e ···· • · · « ·· ··

Xaa v polohe 2 je Trp, Gly, Lys alebo Arg,

Xaa v polohe 3 je íle, Leu, Val alebo Met,

Xaa v polohe 4 je íle, Val alebo Leu,

Xaa v polohe 5 Leu, Met, Val alebo Pro,

Xaa v polohe 12 je Arg, Lys,

Xaa in postion 13 je Met alebo Leu,

Xaa v polohe 15 je Ser, Cys alebo Gin,

Xaa v polohe 17 je Thr, Val, íle, Ser alebo Ala,

Xaa v polohe 18 je Ser, Gly alebo Thr,

Xaa v polohe 21 je Asp, Glu, Cys alebo Gly,

Xaa v polohe 22 je Gly alebo nič, kde sekvencia sek. č.: 4 obsahuje aspoň šesť po sebe idúcich aminokyselín a n = 1,2 alebo 3,

Xaai Xaa2 Xaa3 Pro íle Pro Xaa? Xaag Xaa? Xaaio Xaan Xaan [Gly]„ Xaaj3 Xaai4 Xaais Xaaie Xaai7 Xaais Xaai9 Xaa₂o Xaa₂i Xaa₂2 Xaa₂3 Xaa₂4 (Sek. č.: 9) kde Xaa v polohe 1 je Asn, Ser, Gly, His, Ala, Pro, Arg alebo nič,

Xaa v polohe 2 je Asn, Ala alebo Lys,

Xaa v polohe 3 je Pro, Gin, Gly, íle alebo Leu,

Xaa v polohe 7 je Val alebo Ala,

Xaa v polohe 8 je Gly alebo Lys,

Xaa v polohe 9 je Glu, Asp, Lys, Phe alebo Thr,

Xaa v polohe 10 je íle, Met, Val alebo Leu,

Xaa v polohe 11 je Tyr, Leu alebo nič,

Xaa v polohe 12 je Ser alebo nič,

Xaa v polohe 13 je Arg alebo nič,

Xaa v polohe 14 je Asp, Arg, Trp, Ala alebo nič,

Xaa v polohe 15 je íle alebo nič,

Xaa v polohe 16 je Tyr alebo nič,

Xaa v polohe 17 je Lys alebo Arg,

Xaa v polohe 18 je Arg, Lys alebo Asp,

Xaa v polohe 19 je Trp alebo Gly, ·· ···· • · • · • · · • · ··

Xaa v polohe 20 je íle, Met, Val, Gin alebo Ala,

Xaa v polohe 21 je íle, Val alebo Ala,

Xaa v polohe 22 je Leu, Met alebo Val,

Xaa v polohe 23 je Gly alebo Cys,

Xaa v polohe 24 je Leu alebo nič, kde sekvencia s sek.č: 9 obsahuje aspoň šesť po sebe idúcich aminokyselín a n = 1,2 alebo 3, a

I · a » · · • · a » · · a · ··

Xaai Xaa₂ íle íle Xaa₅ Xaa6 Xaa₇ Xaag Xaa₉ Leu Xaan [Gly]„ [Argjm Xaai₂ Xaan Xaai4 Xaais Xaaie Xaaj₇ Xaaig Xaai₉ Xaa₂o Xaa₂i Xaa₂₂Xaa₂3 Xaa₂4 Xaa₂₅ (Sek.č.: 15) kde Xaa v polohe 1 je Pro, Lys, Arg alebo nič,

Xaa v polohe 2 je Glu, Arg, Phe alebo Lys,

Xaa v polohe 5 je Pro alebo Thr,

Xaa v polohe 6 je Met, Thr alebo Nleu,

Xaa v polohe 7 je Phe alebo Leu,

Xaa v polohe 8 je Ser, Thr, Ala alebo Met,

Xaa v polohe 9 je Ala, Glu alebo Leu,

Xaa v polohe 11 je Ser alebo nič,

Xaa v polohe 12 je Ala, Arg alebo nič,

Xaa v polohe 13 je íle, Leu alebo nič,

Xaa v polohe 14 je Ser, Ala, Leu alebo nič,

Xaa v polohe 15 je Tyr, Glu alebo Asp,

Xaa v polohe 16 je Gly alebo Asp,

Xaa v polohe 17 je Ala alebo Leu,

Xaa v polohe 18 je Thr, íle, Val, Leu alebo Asn,

Xaa v polohe 19 je Pro, Thr alebo Ser,

Xaa v polohe 20 je Tyr, Phe, Nleu, His alebo Gin, Xaa v polohe 21 je Asp, Asn, Leu alebo Ala,

Xaa v polohe 22 je Leu, íle, Val alebo Asn,

Xaa v polohe 23 je Asn, Tyr, Cys alebo Gly,

Xaa v polohe 24 je Thr, Met, íle, Ala, Val alebo nič,

Xaa v polohe 25 je Gly alebo nič, ·· ·· ·· ···· ·· · ··· • · · • · · • · · · • · · · ·« ·· ·· • · • · • · · • · ·· kde sekvencia s Sek. č.: 15 obsahuje aspoň šesť po sebe idúcich aminokyselín, n = 1,2 alebo 3 a nezávisle m= 0, 1, 2 alebo 3, terminálnymi ukončeniami sekvencií môžu byť voľné karboxylové skupiny alebo aminoskupiny, amidy, acyly, acetyly alebo ich soli, dva alebo viac Cys zvyškov môže tvoriť časť vnútroreťazcových alebo medzi reťazcových disulfidických spojov, mostík -S-(CH₂)p-S- alebo (CH₂)_p-, v ktorom p = 1-8, prípadne s vloženým jedným alebo viacerými heteroatómami, ako je O, N alebo S, a/alebo. sú uvedené sekvencie peptidov imobilizované na tuhom nosiči.
2. Peptid podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sekvencia aminokyselín Sek. č.: 1 je vybratá zo skupín Sek. č.: 2 a Sek. č.: 3.
3. Peptid podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sekvencia aminokyselín Sek. č.: 4 je vybratá zo skupín Sek. č.: 5, Sek. č.: 6, Sek. č.: 7 a Sek. č.:

8.
4. Peptid podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sekvencia aminokyselín Sek. č.: 9 je vybratá zo skupín Sek. č.: 10, Sek. Č.: 11, Sek. č.: 12, Sek. č.: 13 a Sek. č.: 14.
5. Peptid podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sekvencia aminokyselín Sek. č.: 15 je vybratá zo skupín Sek. č.: 16, Sek. č.: 17, Sek. č.: 18, Sek. č.: 19 a Sek. č.: 20.
6. Antigén, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa aspoň jeden peptid podľa nároku

1.

ζζ,

Ί. Antigén podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa aspoň jeden peptid vybratý z každej zo skupín Sek. č.: 1, Sek. č.: 4, Sek. č.: 9 a Sek. č.: 15.
8. Zloženie vakcíny, vyznačujúce sa tým, že zahŕňa antigén podľa nároku 6 s farmaceutický prijateľným riedidlom a prípadne adjuvantom, nosičom a/alebo vehikulom a prípadne s prídavnou imunostimulačnou látkou (látkami).
9. Zloženie vakcíny podľa nároku 8, vyznačujúce sa tým, že zahŕňa aspoň štyri peptidy vybraté z každej zo skupín Sek. č.: 1, Sek. č.: 4, Sek. č.: 9 a Sek. č.: 15.
10. Zloženie vakcíny podľa nároku 9, vyznačujúce sa tým, že zahŕňa peptidy Sek. č.: 3, Sek. č.: 6, Sek. č.: 11 a Sek. č.: 18.
11. Zloženie vakcíny podľa nárokov 8 až 10, vyznačujúce sa tým, že peptidy sú rozpustené v soľnom vodnom roztoku a prípadná imunostimulačná zlúčenina je rastový faktor granulocytov-makrofágov.
12. Zloženie vakcíny podľa nárokov 8 až 11, vyznačujúce sa tým, že zmes zahŕňa adjuvant vybratý zo skupiny monofosforyllipid A (MPL ), Freundov úplný alebo neúplný adjuvant alebo hydroxid hlinitý.
13. Spôsob detekcie protilátok vyvolaných HIV alebo HlV-špecifickými peptidmi alebo proteínmi vo vzorke telesnej tekutiny, vyznačujúci sa ·· ···· ::.. ::: · · . ·· ·· ··· · ·· ·

5?

tým, že sa na uvedenej vzorke vykoná imunologická skúška, v ktorej je(sú) antigén(y) vybratý(é) z peptidov podľa nároku 1, 2, 3, 4 a 5.
14. Súprava na imunologickú skúšku na detekciu protilátok vyvolaných HIV alebo HlV-špecifickými peptidmi alebo proteínmi vo vzorke telesnej tekutiny, vyznačujúca sa tým, že diagnostickým antigénom je peptid z niektorého z predchádzajúcich nárokov 1 až 5.
15. Protilátka, vyznačujúca sa tým, že je schopná selektívne reagovať s antigénom z nárokov 6 a 7.