RU96122866A - Способ получения доксорубицина - Google Patents

Claims (1)

1. Выделенная молекула ДНК, кодирующая лаунорубицин-14-гидроксилазу.

2. Молекула ДНК по п. 1, включающая полностью или частично SphI фрагмент размером 3,4 Kb, приведенный на фиг. 1.

3. Молекула ДНК по п. 1, включающая полностью или частично NdeI-BamHI фрагмент, приведенный на фиг. 2.

4. Молекула ДНК по п. 1, кодирующая даунорубицин-14-гидроксилазу, которая имеет последовательность SEQ ID NO:2 (приведена в описании).

5. Молекула ДНК по п. 1, кодирующая даунорубицин-14-гидроксилазу, которая имеет последовательность, идентичную, по крайней мере, на 60% последовательности SEQ ID NO:2.

6. Молекула ДНК по п. 1, состоящая по существу из последовательности SEQ ID NO:1 (приведена в описании)
7. Вектор, кодирующий даунорубицин-14-гидроксилазу.

8. Вектор по п. 7, включающий полностью или частично SphI фрагмент размером 3,4 Kb, приведенный на фиг. 1.

9. Вектор по п. 7, включающий полностью или частично NdeI-BamHI фрагмент, приведенный на фиг. 2.

10. Вектор по п. 7, кодирующий даунорубицин-14-гидроксилазу, которая имеет последовательность SEQ ID NO:2.

11. Вектор по п. 7, кодирующий даунорубицин-14-гидроксилазу, которая имеет последовательность, идентичную, по крайней мере, на 60% последовательности SEQ ID NO:2.

12. Вектор по п. 7, включающий последовательность, которая состоит по существу из последовательности SEQ ID NO:1.

13. Вектор по п. 7, который представляет собой плазмиду.

14. Плазмида по п. 13, которая представляет собой pIS23, pIS62 или pIS70.

15. Хозяйская клетка, трансформированная или трансфицированная вектором по п. 7.

16. Хозяйская клетка по п. 15, представляющая собой бактериальную клетку, продуцирующую даунорубицин.

17. Хозяйская клетка по п. 16, которая представляет собой клетку Streptomyces.

18. Способ получения доксорубицина, который включает:
(I) культивирование хозяйской клетки по п. 15 в присутствии даунорубицина в условиях, способствующих превращению даунорубицина в доксорубицин, и (II) выделение дексорубицина из культуры.

19. Способ получения доксорубицина, который включает:
(I) культивирование хозяйской клетки по п. 16, в условиях, способствующих превращению даунорубицина в доксорубицин, и
(II) выделение доксорубицина из культуры.

20. Даунорубицин-14-гидроксилаза, имеющая аминокислотную последовательность, идентичную, по крайней мере, на 60% последовательности SEQ ID NO:2.

21. Даунорубицин-14-гидроксилаза по п. 20, имеющая аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2.

22. Клеточный экстракт, содержащий даунорубицин-14-гидроксилазу, отличающийся тем, что упомянутая даунорубицин-14-гидроксилаза включает аминокислотную последовательность, которая по крайней мере на 60% идентична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:2.

23. Молекула ДНК по п. 2, отличающаяся тем, что упомянутая молекула ДНК имеет длину, по крайней мере 1,2 Kb.

24. Молекула ДНК по п. 23, отличающаяся тем, что упомянутая молекула ДНК имеет длину между 1,2 - 2,4 Kb.

25. Даунорубицин-14-гидроксилаза по п. 20, отличающаяся тем, что упомянутая аминокислотная последовательность имеет те же показатели гидрофобности/гидрофильности и размер, что и последовательность SEQ ID NO:2.

26. Молекула ДНК, кодирующая даунорубицин-14-гидроксилазу, причем упомянутая молекула ДНК включает SphI фрагмент размером 3,4 Kb, приведенный на фиг. 1, или фрагмент, соответствующий SphI фрагменту размером 3,4 Kb, приведенному на фиг. 1, в пределах вырожденности генетического кода.

27. Способ получения выделенной ДНК по п. 1, который включает:
(a) создание библиотеки геномной ДНК из S.peucetius 29050 или полученного из него штамма;
(б) отбор из бибилиотеки клона, обладающего способностью превращать даунорубицин в доксорубицин; и
(в) выделение молекулы ДНК настоящего изобретения из отобранного клона.