RU2823497C2

RU2823497C2 - Фармацевтическая композиция одевиксибата

Info

Publication number: RU2823497C2
Application number: RU2021100978A
Authority: RU
Inventors: Ева БИРЁД; Пер-Йёран ЙИЛЛБЕРГ; Анна-Мариа ТИВЕРТ; Рикар БРИЛАНД; Анн-Шарлотт ДАЛКВИСТ; Йессика ЭЛЬВЕРССОН; Нильс Ове ГУСТАФССОН; Роберт ЛУНДКВИСТ; Ингвар ИМЕН; Мартин БОЛИН
Original assignee: Альбирео Аб
Priority date: 2018-06-20
Filing date: 2019-06-20
Publication date: 2024-07-23

Abstract

Группа изобретений относится к биотехнологии. Представлены: фармацевтическая композиция одевиксибата для лечения или профилактики билиарно-зависимого заболевания печени, где указанная композиция включает множество частиц, где каждая частица имеет размер от около 0,5 до около 1,25 мм, также раскрыты способы получения фармацевтической композиции. Изобретение может быть использовано в лечении заболеваний печени, таких как билиарно-зависимые заболевания печени, и в частности холестатических заболеваний печени, таких как билиарная атрезия, прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), синдром Алажиля (ALGS) и холестатический зуд у детей. 3 н. и 21 з.п. ф-лы, 6 ил., 19 табл., 10 пр.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННЫЕ ЗАЯВКИ

По настоящей заявке испрашивается приоритет Шведской заявки No. 1850761-6, поданной 20 июня 2018, и Шведской заявки No. 1850762-4, поданной 20 июня 2018, описание которых включено в виде ссылки полностью.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к фармацевтической композиции, например, педиатрической композиции, одевиксибата, которая включает множество мелких частиц. Композиция может быть использована в лечении заболеваний печени, таких как билиарно-зависимые заболевания печени, такие как билиарная атрезия, прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), синдром Аладжиля (ALGS) и холестатический зуд у детей. Изобретение также относится к способу получения фармацевтической композиции.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Соединение 1,1-диоксо-3,3-дибутил-5-фенил-7-метилтио-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-карбоксипропил)карбамоил]-4-гидроксибензил}карбамоилметокси)-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин (одевиксибат; также известный как A4250) описано в WO 03/022286. Структура одевиксибата показана ниже.

В качестве ингибитора механизма транспорта желчных кислот в подвздошной кишке (IBAT) одевиксибат ингибирует естественную реабсорбцию желчных кислот из подвздошной кишки в циркуляцию воротной вены. Желчные кислоты, которые не реабсорбируются из подвздошной кишки, вместо этого экскретируются с калом. Общее удаление желчных кислот из кишечно-печеночной циркуляции приводит к снижению уровня желчных кислот в сыворотке и печени. Одевиксибат, или его фармацевтически приемлемая соль, следовательно, является применимым в лечении заболеваний печени, которые ассоциированы с повышенным уровнем желчных кислот, и особенно в лечении редких холестатических заболеваний печени у детей.

Одевиксибат проявляет высокую эффективность и может вводиться в низких дозах, таких как варьирующиеся от около 40 до около 120 мкг/кг. Это соответствует таким дозам как от 200 до 800 мкг в лечении детей, которые весят от около 5 до 20 кг (например, младенцев и маленьких детей). Желательно, чтобы композицию одевиксибата было можно вводить маленьким пациентам в лекарственной форме, имеющей маленький размер. Кроме того, желательно, чтобы такая композиция была приятна на вкус, не ощущалась как зернистая и хорошо переносилась младенцами и маленькими детьми.

Мелкие частицы можно давать младенцам с рождения, если их вводят с жидкостью. Для детей в возрасте приблизительно 6 месяцев и старше (например, после отлучения от груди), частицы можно вводить в твердой форме или непосредственно в полость рта или смешанными с полутвердой пищей. Размер частиц, форма, текстура, твердость, вкус и объем дозы (т.е. количество частиц) являются важными для приемлемости частиц для младенцев и детей (Kozarewicz, Int. J. Pharm. 2014, vol. 469, pp 245-248). Проводились различные литературные обзоры по приемлемости различных пероральных лекарственных форм у детей и пожилых взрослых пациентов (см. например, Liu, et al., Drugs 2014, vol. 74, pp. 1871-1889; Drumond et al., Int. J. Pharm. 2017, vol. 521, pp. 294-305; Mistry et al., J. Pharm. Pharmacol. 2017, vol. 69, pp. 361-376; Walsh et al., Int. J. Pharm. 2017, vol. 536, pp. 547-562), но исследуемый размер и/или объем дозы (количество) частиц в этих обзорах не всегда указывали.

На ощущение зернистости может влиять множество факторов, включая размер частиц, количество и носитель (см. Mishra et al., Yakugaku Zasshi 2009, vol. 129, pp. 1537-1544; Lopez et al., Eur. J. Pharm. Sci. 2016, vol. 92, pp. 156-162) а также твердость и форма частиц (Tyle, Acta Psychologica 1993, vol. 84, pp. 111-118), частицы неправильной формы ощущаются более крупными, чем круглые (сферические) частицы того же размера (Engelen et al., J. Text. Studies 2005, vol. 36, pp. 373-386). Исследования ощущения зернистости показали, что степень зернистости может увеличиваться при увеличении размера и дозы частиц, тогда как степень зернистости может снижаться при увеличении вязкости носителя (Lopez et al., Eur. J. Pharm. Sci. 2016, vol. 92, pp. 156-162).

Капсулы могут быть приемлемыми для детей в возрасте приблизительно 6 лет. Проглатывание капсул может зависеть от размеров лекарственной формы (т.е. размера) и способностей ребенка. Размер, форма, вкус и послевкусие являются важными свойствами капсул, которые могут влиять на приемлемость для пациента (Kozarewicz, Int. J. Pharm. 2014, vol. 469, pp 245-248). В некоторых вариантах осуществления изобретения размер капсул сохраняют таким мелким, как возможно, и количество капсул, требуемое на дозу, выдерживают минимальным, например, не более чем 1-3 капсулы.

В свете вышеописанного существует необходимость в композиции одевиксибата, которую можно легко вводить в небольших дозах, адаптированных по массе пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция должна подходить для лечения очень маленьких пациентов, ее должно быть легко глотать и она не должна ощущаться зернистой.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На фиг. 1 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма высушенного кристалла модификации 1.

На фиг. 2 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма гипергидратированного образца кристалла модификации 1.

На фиг. 3 показана сушка кристаллической модификации 1 с рентгеновской порошковой дифрактограммой гипергидратированного образца кристаллической модификации 1 на дне и высушенного образца на крышке (2Ɵ диапазон 5-13°).

На фиг. 4 показана сушка кристаллической модификации 1 с рентгеновской порошковой дифрактограммой гипергидратированного образца кристаллической модификации 1 на дне и высушенного образца на крышке (2Ɵ диапазон 18-25°).

На фиг. 5 показана рентгеновская порошковая дифрактограмма кристаллической модификации 2A, полученной из смеси этанола и воды (70:30%об/об).

На фиг. 6 показаны след DSC образца одевиксибата с около 50% кристаллической фракции (после предварительного нагревания и охлаждения).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем описании обеспечивают композицию из частиц, содержащих низкие дозы одевиксибата. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция является педиатрической композицией. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция позволяет дозирование, зависимое от массы, и может быть насыпана на еду. Композиция может быть создана, как имеющая хороший вкус с оптимальным балансом между размером частиц и объемом дозы.

В первом аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции одевиксибата, включающей множество частиц, где каждая частица содержит одевиксибат, или его фармацевтически приемлемую соль в количестве от около 0,1% масс/масс до около 5,0% масс/масс на основании общей массы частиц.

Из-за низких доз, в которых вводят одевиксибат, и дополнительно из-за формы применения в виде частиц, каждая частица композиции содержит только очень небольшое количество активного ингредиента. Например, количество одевиксибата или его фармацевтически приемлемой соли в каждой частице может составлять от около 0,2% масс/масс до около 3,5% масс/масс, предпочтительно от около 0,3% масс/масс до около 3,0% масс/масс, более предпочтительно от около 0,4% масс/масс до около 2,5% масс/масс, и наиболее предпочтительно от около 0,5% масс/масс до около 2,0% масс/масс на основании общей массы частиц. В одном предпочтительном варианте осуществления изобретения каждая частица содержит одевиксибат или его фармацевтически приемлемую соль в количестве около 0,5% масс/масс на основании общей массы частиц. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения каждая частица содержит одевиксибат или его фармацевтически приемлемую соль в количестве около 1,0% масс/масс в расчете на общую массу частицы. В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения каждая частица содержит одевиксибат или его фармацецевтически приемлемую соль в количестве около 1,5% масс/масс в расчете на общую массу частицы.

Как используется в настоящем описании, термин “частицы” относится к мелким частицам размером в диапазоне от около 0,1 до около 1,5 мм. Такие частицы являются предпочтительно по существу сферическими, хотя удлиненные или продолговатые частицы также могут быть использованы. Частицами могут быть, например, пеллеты, шарики, микрочастицы, микросферы, гранулы или минитаблетки, и они могут необязательно быть покрыты одним или более слоями оболочки, окружающими каждую такую пеллету, шарик, микрочастицу, гранулу или минитаблетку.

В некоторых вариантах осуществления изобретения частицы композиции являются достаточно маленькими, так что они могут быть насыпаны на пищу и легко проглочены. В некоторых вариантах осуществления изобретения частицы могут быть проглочены, не вызывая ощущения зернистости. В некоторых вариантах осуществления изобретения частицы не вынуждают пациента жевать частицы. Следовательно, частицы имеют размер предпочтительно от около 0,1 до около 1,5 мм, более предпочтительно от около 0,1 до около 1,0 мм, и более предпочтительно от около 0,1 до 0,8 мм, например, около 0,2 мм, около 0,3 мм, около 0,4 мм, около 0,5 мм, около 0,6 мм, или около 0,7 мм. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения частицы имеют размер от около 0,4 до около 0,8 мм, например, около 0,5 мм, или, например, около 0,6 мм, или, например, около 0,7 мм. В определенном варианте осуществления изобретения частицы имеют размер около 0,7 мм.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к композиции одевиксибата, где каждая частица включает ядро и слой оболочки, окружающий ядро. Ядром каждой частицы может быть пеллета, гранула, минитаблетка, шарик, микрочастица или микросфера.

В некоторых вариантах осуществления изобретения ядро каждой частицы включает активный фармацевтический ингредиент (одевиксибат), тогда как слой оболочки каждой частицы не содержит активного фармацевтического ингредиента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ядро каждой частицы включает от около 0,1% до около 5% масс/масс активного фармацевтического ингредиента в расчете на общую массу частицы, например, от около 0,1% до около 2% масс/масс, например, от около 0,1% до около 1% масс/масс, или например от около 0,1% до около 0,5% масс/масс активного фармацевтического ингредиента, в расчете на общую массу частицы.

В некоторых вариантах осуществления изобретения оболочка каждой частицы включает активный фармацевтический ингредиент (одевиксибат), тогда как ядро каждой частицы не включает активный фармацевтический ингредиент. В некоторых вариантах осуществления изобретения оболочка каждой частицы включает от около 0,1% до около 5% масс/масс активного фармацевтического ингредиента в расчете на общую массу частицы, например, от около 0,1% до около 2% масс/масс, например от около 0,1% до около 1% масс/масс, или например от около 0,1% до около 0,5% масс/масс активного фармацевтического ингредиента, в расчете на общую массу частицы.

Ядра могут быть перорально диспергированы и включать растворимые ингредиенты, такие как сахар (например, сахароза) или растворимый полимер (например, гидроксипропилметилцеллюлоза) или могут быть перорально недиспергируемыми и включать нерастворимые ингредиенты, такие как нерастворимый полимер (например, микрокристаллическая целлюлоза). В предпочтительном варианте осуществления изобретения ядра включают микрокристаллическую целлюлозу. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения ядрами являются сферы из микрокристаллической целлюлозы.

Оболочка может дополнительно включать пленкообразующий полимер, такой как полимер на основе целлюлозы, полимер на основе полисахарида, полимер на основе N-винилпирролидона, акрилат, акриламид или их сополимеры. Примеры подходящих пленкообразующих полимеров включают поливиниловый спирт (PVA), поливинил ацетатфталат (PVAP), полиэтиленгликоль (PEG), поливинилпирролидон (PVP), сополимеры метакриловой кислоты, крахмал, гидроксипропилкрахмал, хитозан, шеллак, метилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, (HPC), гидроксипропилцеллюлозу с низкой степенью замещения, гидроксипропилметилцеллюлозу (HPMC; или гипромеллоза), ацетатсукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы (HPMCAS), фталат гидроксипропилметилцеллюлозы (HPMCP), ацетат фталат целлюлозы (CAP), ацетат тримеллитат целлюлозы (CAT), а также их комбинации, например, смесь метилцеллюлозы и гидроксипропилметилцеллюлозы (метолоза). В предпочтительном варианте осуществления изобретения оболочка включает пленкообразующий полимер, выбираемый из группы, состоящей из гидроксипропилметилцеллюлозы, поливинилового спирта (PVA), полиэтиленгликоля (PEG), крахмала, гидроксипропилкрахмала и гидроксипропилцеллюлозы (HPC). В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения оболочка включает гидроксипропилметилцеллюлозу в качестве пленкообразующего полимера.

Оболочка может необязательно включать один или более дополнительных ингредиентов, таких как пластификатор (например, полиэтиленгликоль, триацетин или триэтилцитрат), антислеживающий агент (например, тальк или стеарат магния) или краситель (например, диоксид титана, оксиды железа, рибофлавин или куркума).

В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция включает одевиксибат в кристаллической форме. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция включает кристаллический гидрат одевиксибата. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция включает кристаллическую модификацию 1 одевиксибата. Такая стабильная кристаллическая модификация может быть получена из суспензии одевиксибата в смеси воды и органического растворителя, такого как этанол. В таких условиях исходно образуется смешанный сольват, содержащий около двух молей воды и от около одного до около трех, например от около двух до около трех молей этанола на моль одевиксибата (например, дигидрат-диэтанолат или дигидрат-триэтанолат). Такой смешанный растворитель называют в настоящем описании кристаллической модификацией 2. Когда кристаллическую модификацию 2 сушат, например, в вакууме (например, менее чем 5 мБар) или в токе азота, она теряет молекулы растворителя и становится кристаллической модификацией 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения трансформация кристаллической модификации 2 в кристаллическую модификацию 1 происходит через кристаллический промежуточный продукт. Считают, что такой кристаллический промежуточный продукт является дегидратированной формой, которая быстро поглощает воду из воздуха. Не желая быть связанными с теорией, считают, что молекулы растворителя могут быть удалены без растворения и рекристаллизации кристаллов.

Кристаллическая модификация 1 одевиксибата может быть получена не только из смеси воды и этанола, как описано выше, но также из суспензии одевиксибата в смеси воды и органического растворителя, выбираемого из группы, состоящей из метанола, 2-пропанола, ацетона, ацетонитрила, 1,4-диоксана, DMF и DMSO. После сушки различных смешанных сольватов, полученных в таких условиях (кристаллическая модификация 2), получают тот же кристаллический гидрат одевиксибата, а именно кристаллическую модификацию 1.

Кристаллическая модификация 1 содержит объем пор, которые способны содержать до около 2 моль воды, ассоциированных с кристаллом, на моль одевиксибата, в зависимости от относительной влажности. Следовательно, такая форма является формально канальным гидратом. При относительной влажности около 30%, однако, кристаллическая модификация 1 содержит по существу стехиометрическое количество около 1,5 моль воды на моль органического соединения и, следовательно, является сексвигидратом. По существу стехиометрическое количество воды расценивается преимущественным, так как содержание воды в кристаллах остается по существу постоянным, даже если влажность изменяется в нормальном диапазоне относительной влажности от около 30% до около 70% ОВ. Действительно, при нормальной влажности, например, от около 30 до около 70% ОВ, кристаллическая модификация 1 проявляет относительно низкую гигроскопичность.

В одном варианте осуществления изобретения композиция включает кристаллическую модификацию 1 одевиксибата, имеющую рентгеновскую порошковую дифрактограмму (XRPD), полученную с помощью CuKα1-излучения, с по меньшей мере специфическими пиками в положениях °2Ɵ 5,6±0,2, 6,7±0,2 и/или 12,1±0,2.

В специфическом варианте осуществления изобретения композиция включает кристаллическую модификацию 1, имеющую дифрактограмму XRPD, полученную с помощью CuKα1-излучения, со специфическими пиками в положениях °2Ɵ 5,6±0,2, 6,7±0,2 и 12,1±0,2 и один или более характерных пиков: 4,1±0,2, 4,6±0,2, 9,3±0,2, 9,4±0,2 и 10,7±0,2.

В более специфическом варианте осуществления изобретения композиция включает кристаллическую модификацию 1, имеющую дифрактограмму XRPD, полученную с помощью CuKα1-излучения, со специфическими пиками в положениях °2Ɵ 4,6±0,2, 5,6±0,2, 6,7±0,2, 9,3±0,2, 9,4±0,2 и 12,1±0,2.

В более специфическом варианте осуществления изобретения композиция включает кристаллическую модификацию 1 имеющую дифрактограмму XRPD, полученную с помощью CuKα1-излучения, с характерными пиками в °2Ɵ положениях 4,1±0,2, 4,6±0,2, 5,6±0,2, 6,7±0,2, 9,3±0,2, 9,4±0,2, 10,7±0,2 и 12,1±0,2, и одним или более из 8,1±0,2, 8,6±0,2, 13,4±0,2, 13,8±0,2, 13,9±0,2, 16,6±0,2, 17,3±0,2, 17,7±0,2, 18,3±0,2, 18,9±0,2, 19,4±0,2, 19,7±0,2, 20,5±0,2, 20,8±0,2, 21,6±0,2, 23,2±0,2, 24,3±0,2, 29,8±0,2 и 30,6±0,2.

В еще более специфическом варианте осуществления изобретения композиция включает кристаллическую модификацию 1, имеющую дифрактограмму XRPD, полученную с помощью CuKα1-излучения, с характерными пиками в положениях °2Ɵ 4,1±0,2, 4,6±0,2, 5,6±0,2, 6,7±0,2, 8,1±0,2, 8,6±0,2, 9,3±0,2, 9,4±0,2, 10,7±0,2, 12,1±0,2, 13,4±0,2, 13,8±0,2, 13,9±0,2, 16,6±0,2, 17,3±0,2, 17,7±0,2, 18,3±0,2, 18,9±0,2, 19,4±0,2, 19,7±0,2, 20,5±0,2, 20,8±0,2, 21,6±0,2, 23,2±0,2, 24,3±0,2, 29,8±0,2 и 30,6±0,2.

В другом варианте осуществления изобретения композиция включает кристаллическую модификацию 1, имеющую дифрактограмму XRPD, полученную с помощью CuKα1-излучения, по существу, как показано на фиг. 1.

Тогда как кристаллическая модификация 1 представляет собой сексвигидрат, содержащий около 3,5% (масс/масс) воды при около 30% относительной влажности (на основании общей массы кристалла), наблюдали, что кристалл может поглотить дополнительно 1,5% (масс/масс) воды, когда влажность увеличивается до 95% ОВ. Сорбция и десорбция такой дополнительной воды является полностью обратимой. Дополнительная вода может быть абсорбирована на поверхности или может дополнительно заполнять каналы в структуре. В некоторых вариантах осуществления изобретения термин “гипергидратированный” относится к кристаллической модификации 1, содержащей от около 1,5 до около 4 моль воды на моль одевиксибата, например от около 1,5 до около 3,5, или например от около 1,5 до 3, или например от около 1,5 до около 2,5, или например от около 1,5 до около 2 моль воды на моль одевиксибата. В некоторых вариантах осуществления изобретения термин “гипергидратированный” относится к кристаллическкой модификации 1, содержащей от около 2 до около 4 моль воды на моль одевиксибата, например от около 2 до около 3,5, или например от около 2 до около 3, или например от около 2 до 2,5 моль воды на моль одевиксибата.

Наблюдали, что дифрактограмма XRPD гипергидратированной кристаллической модификации 1 немного изменяется, когда высыхает, например, при 50°C в вакууме. Небольшой сдвиг пиков наиболее четко виден в 2Ɵ диапазонах 5-13° и 18-25°, как показано на фиг. 3 и 4, соответственно. При воздействии на высушенную модификацию повышенной относительной влажности, например, 95% ОВ, снова получают дифрактограмму XRPD гипергидратированнной модификации. Сдвиги пиков являются результатом изменения объема отдельных ячеек, которое возникает при входе и выходе молекул воды в кристаллическую структуру.

Следовательно, в другом варианте осуществления изобретения композиция включает гидратированную кристаллическую модификацию 1, имеющую рентгеновскую порошковую дифрактограмму (XRPD), полученную с помощью CuKα1-излучения с по меньшей мере специфическими пиками в положениях °2Ɵ 5,7±0,2, 6,7±0,2 и/или 12,0±0,2.

В специфическом варианте осуществления изобретения композиция включает гипергидратированную кристаллическую модификацию 1, имеющую дифрактограмму XRPD, полученную с помощью CuKα1-излучения, со специфическими пиками в положениях °2Ɵ 5,7±0,2, 6,7±0,2 и 12,0±0,2 и одним или более характерными пиками: 4,0±0,2, 9,4±0,2, 9,6±0,2 и 10,8±0,2.

В более специфическом варианте осуществления изобретения композиция включает гипергидратированную кристаллическую модификацию 1, имеющую дифрактограмму XRPD, полученную с помощью CuKα1-излучения, с характерными пиками в положении °2Ɵ 4,0±0,2, 5,7±0,2, 6,7±0,2, 9,4±0,2, 9,6±0,2, 10,8±0,2 и 12,1±0,2.

В более специфическом варианте осуществления изобретения композиция включает гипергидратированную кристаллическую модификацию 1, имеющую дифрактограмму XRPD, полученную с помощью CuKα1-излучения, с характерными пиками в положении °2Ɵ 4,0±0,2, 5,7±0,2, 6,7±0,2, 9,4±0,2, 9,6±0,2, 10,8±0,2 и 12,1±0,2, и один или более из 4,7±0,2, 8,0±0,2, 8,6±0,2, 13,3±0,2, 14,1±0,2, 15,3±0,2, 16,5±0,2, 17,3±0,2, 19,3±0,2, 19,7±0,2, 19,9±0,2, 20,1±0,2, 20,8±0,2, 21,7±0,2, 23,6±0,2, 26,2±0,2, 26,5±0,2, 28,3±0,2 и 30,9±0,2.

В еще более специфическом варианте осуществления изобретения композиция включает гипергидратированную кристаллическую модификацию 1, имеющую дифрактограмму XRPD, полученную с помощью CuKα1-излучения, с характерными пиками в положении °2Ɵ 4,0±0,2, 4,7±0,2, 5,7±0,2, 6,7±0,2, 8,0±0,2, 8,6±0,2, 9,4±0,2, 9,6±0,2, 10,8±0,2, 12,1±0,2, 13,3±0,2, 14,1±0,2, 15,3±0,2, 16,5±0,2, 17,3±0,2, 19,3±0,2, 19,7±0,2, 19,9±0,2, 20,1±0,2, 20,8±0,2, 21,7±0,2, 23,6±0,2, 26,2±0,2, 26,5±0,2, 28,3±0,2 и 30,9±0,2.

В другом варианте осуществления изобретения композиция включает гипергидратированную кристаллическую модификацию 1 одевиксибата, имеющую дифрактограмму, полученную с помощью CuKα1-излучения, по существу как показано на фиг. 2.

Желательно избегать применения органических растворителей в получении композиции. В некоторых вариантах осуществления изобретения воду используют в качестве растворителя для получения композиции. Одевиксибат очень плохо растворяется в воде и растворимость при pH 7 и при 37°C определяли, как около 30 мкг/мл. Из-за его низкой растворимости в воде, водные суспензии одевиксибата могут содержать более крупные агломераты одевиксибата, что может приводить к неравномерному распределению активного фармацевтического ингредиента в ядрах, т.е. ядра могут содержать различные количества одевиксибата, что в свою очередь влияет на однородность дозы. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления изобретения водная суспензия одевиксибата является гомогенной. В некоторых вариантах осуществления изобретения гомогенную суспензию одевиксибата распыляют на ядра.

Одевиксибат проявляет высокую эффективность и его необходимо вводить в низких дозах, особенно в лечении детей, которые весят около 5-20 кг. С целью достижения высокой однородности дозы для композиции частиц, описанной в настоящем описании, важно, чтобы каждая частица композиции по существу содержала то же количество одевиксибата, т.е. отклонение содержания одевиксибата частиц композиции должно быть таким низким, как возможно.

Как используется в настоящем описании термин “гомогенный” относится к суспензии, которая не содержит агломераты одевиксибата, крупнее, чем около 200 мкм, и предпочтительно нет агломератов крупнее, чем около 100 мкм, более предпочтительно нет агломератов крупнее, чем около 50 мкм. Размер агломератов одевиксибата в суспензии оболочки может быть определен оптической микроскопией с использованием способа на основе Европейской Фармакопеи 9.0, монография 2.9.37, и как описано в экспериментальном разделе. Альтернативно, размер агломератов одевиксибата в суспензии оболочки может быть определен методиками светового рассеяния, такими как, рассеяние лазерного луча под низким углом (LALLS). В некоторых вариантах осуществления изобретения значение d₉₀ для распределения размера частиц суспензии оболочки меньше чем 15 мкм, например, меньше чем 14 мкм, например, меньше чем 13 мкм, например, меньше чем 12 мкм, например, меньше чем 11 мкм, или например, меньше чем 10 мкм.

В некоторых вариантах осуществления изобретения гомогенная суспензия одевиксибата может быть получена посредством диспергирования соединения в воде посредством мокрого размола. Мокрый размол представляет собой способ, при котором твердое вещество диспергируется в жидкости посредством сдвигания, разрушения или трения. Примеры приборов мокрого размола включают коллоидные мельницы, конические мельницы, шаровые мельницы, дисковые мельницы и диспергирующие приборы с высоким сдвигом. Специфическим примером прибора для мокрого размола для применения в настоящем изобретении является коллоидная мельница.

В некоторых вариантах осуществления изобретения кристалличность одевиксибата увеличивается во время мокрого размола.

Предпочтительно, одевиксибат сначала увлажняют в небольшом количестве воды с использованием гомогенизатора, и после этого диспергируют в воде с использованием коллоидной мельницы. Распыление гомогенизированной дисперсии на ядра позволяет равномерное распределение активного фармацевтического ингредиента.

Желательно, чтобы композиция не содержала других ингредиентов, которые необязательны для рецептирования, таких как поверхностно-активные вещества. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, следовательно, суспензия оболочки не содержит поверхностно-активных веществ. Сходным образом в некоторых вариантах осуществления изобретения слой оболочки композиции не содержит поверхностно-активных веществ.

В одном варианте осуществления изобретения частицы содержатся в саше. В другом варианте осуществления изобретения частицы содержатся в капсуле. Такие капсулы могут быть сделаны из желатина, из полимера на основе целлюлозы, такого как гидроксипропилметилцеллюлоза (гипромеллоза), или из полимера на основе полисахарида, такого как пуллулан. Капсулы могут проглатываться интактными или могут быть созданы для открытия, так что, например, содержимое (т.е. частицы) могут быть высыпаны на пищевой носитель для введения. В последнем случае количество частиц в одной капсуле должно предпочтительно помещаться в одну столовую ложку пищи. В некоторых вариантах осуществления изобретения капсула содержит от около 20 до около 100 мг частиц, например, около 30, около 40, около 50, около 60, около 70, около 80 или около 90 мг.

Для более маленьких детей, таких как младенцы, маленькие дети и дети до около 6 лет частицы предпочтительно высыпают на пищу, которая может быть легко проглочена, и которая не требует жевания, такую как йогурт, яблочное пюре, фруктовое пюре или овсяная каша. Для более старших детей, например, детей старше чем около 6 лет, подростков и молодых взрослых, капсулы, содержащие частицы, могут быть проглочены интактными, т.е. без открытия. Для новорожденных пациентов в возрасте до около 6 месяцев, которые еще не отняты от груди или неспособны принимать полутвердую пищу, композицию можно вводить посредством диспергирования частиц в подходящем жидком носителе, таком как грудное молоко, молочная смесь или вода. Когда частицы диспергированы в жидком носителе, их можно вводить пациенту в течение 30 минут после диспергирования, без потери активного ингредиента или признаков разложения. В некоторых вариантах осуществления изобретения объем жидкого носителя, используемый для введения частиц одевиксибата, включая промывку, может быть меньше чем около 20 мл, например, меньше чем около 15 мл, например, меньше чем около 10 мл, или такой небольшой, как около 5 мл. В некоторых вариантах осуществления изобретения диспергированные частицы вводят непосредственно в полость рта с использованием перорального шприца.

Композиция, описанная в настоящем описании, может быть использована в лечении или профилактике заболеваний печени, таких как билиарно-зависимые заболевания печени. В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевания печени включают повышенный уровень желчных кислот в сыворотке и/или в печени. Композиция, описанная в настоящем описании, может в частности быть использована в лечении или профилактике холестатических заболеваний печени, включая редкие педиатрические холестатические заболевания печени, такие как билиарная атрезия; пост-Касаи билиарная атрезия; билиарная атрезия после трансплантации печени; прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), включая PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 и неспецифический PFIC, PFIC после диверсии печени и PFIC после трансплантации печени; синдром Алажиля (ALGS); и первичный билиарный цирроз (PBC); а также холестатический зуд у детей. В одном аспекте, следовательно, изобретение относится к композиции, описанной в настоящем описании, для применения в лечении или профилактике холестатического заболевания печени. В другом аспекте изобретение относится к способу лечения или профилактики холестатического заболевания печени у пациента, такого как человек, включающему введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении или профилактике, терапевтического эффективного количества композиции, описанной в настоящем описании.

Билиарная атрезия является редким заболеванием печени у детей, которое включает частичную или полную блокаду (или даже отсутствие) крупных желчных протоков. Такая блокада или отсутствие вызывает холестаз, который приводит к накоплению желчных кислот, которые повреждают печень. В некоторых вариантах осуществления изобретения накопление желчных кислот возникает во внепеченочных желчных протоках. В некоторых вариантах осуществления изобретения накопление желчных кислот возникает во внутрипеченочных желчных протоках. Существующим стандартом лечения является процедура Касаи, которая представляет собой операцию, при которой удаляют блокированные желчные протоки и непосредственно присоединяют часть тонкого кишечника к печени. В настоящее время не существует одобренной лекарственной терапии указанного заболевания.

В настоящем описании обеспечивают способы лечения билиарной атрезии у пациента, нуждающегося в этом, способы включают введение терапевтически эффективного количества композиции, описанной в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления изобретения пациент подвергается процедуре Касаи до введения композиции, описанной в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления изобретения пациенту вводят композицию, описанную в настоящем описании, перед проведением процедуры Касаи. В некоторых вариантах осуществления изобретения лечение билиарной атрезии снижает уровень желчных кислот в сыворотке пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения уровень желчных кислот сыворотки определяют посредством, например, ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано в Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12(6): e0179200, который включен в виде ссылки в настоящее описание полностью. В некоторых вариантах осуществления изобретения уровень желчных кислот сыворотки может быть снижен на, например, 10%-40%, 20%-50%, 30%-60%, 40%-70%, 50%-80%, или на более чем 90% уровня желчных кислот до введения композиции, описанной в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления изобретения лечение билиарной атрезии включает лечение зуда.

PFIC представляет собой редкое генетическое расстройство, которое поражает приблизительно одного из каждых 50000-100000 новорожденных детей во всем мире и вызывает прогрессирующее жизнеугрожающее заболевание печени.

Одним проявлением PFIC является зуд, который часто приводит к серьезному нарушению качества жизни. В некоторых случаях PFIC приводит к циррозу и печеночной недостаточности. Существующее лечение включает частичную наружную билиарную диверсию (PEBD) и трансплантацию печени, однако, такие варианты могут нести существенный риск постоперационных осложнений, а также психологические и социальные проблемы.

Было идентифицировано три альтернативных генетических дефекта, которые коррелируют с тремя отдельными подтипами PFIC, известными как типы 1, 2 и 3.

- PFIC, тип 1, который иногда называют как “болезнь Билера,” вызван нарушенной секрецией желчи из-за мутаций в гене ATP8B1, который кодирует белок, который помогает поддерживать соответствующий баланс жиров, известных как фосфолипиды, в клеточных мембранах в желчных протоках. Дисбаланс указанных фосфолипидов ассоциирован с холестазом и повышением желчных кислот в печени. У пациентов, страдающих от PFIC тип 1, часто развивается холестаз в первые месяцы жизни и в отсутствие хирургического лечения прогрессирует в цирроз и терминальные стадии заболевания печени до конца первого десятилетия жизни.

- PFIC, тип 2, который иногда называют как “синдром Билера,” вызван нарушенной секрецией желчи из-за мутаций в гене ABCB11, который кодирует белок, известный как насос, выносящий желчные кислоты, который переносить желчные кислоты из печени. Пациенты с PFIC тип 2 часто имеют печеночную недостаточность в течение первых нескольких лет жизни и имеют высокий риск развития рака печени, известного как печеночно-клеточная карцинома.

- PFIC, тип 3, который обычно проявляется в первые годы детства прогрессирующим холестазом, вызван мутациями в гене ABCB4, который кодирует транспортер, который переносит фосфолипиды через клеточные мембраны.

Кроме того, мутации в гене TJP2, гене NR1H4 или гене Myo5b были предложены, как причина PFIC. Кроме того, некоторые пациенты с PFIC не имеют мутации в каком-либо из генов ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 или Myo5b. В таких случаях, причина состояния неизвестна.

Примерные мутации гена ATP8B1 или получаемого белка перечислены в таблицах 1 и 2, с нумерацией на основе человеческого белка ATP8B1 дикого типа (например, SEQ ID NO: 1) или гена (например, SEQ ID NO: 2). Примерные мутации гена ABCB11 или полученного белка перечислены в таблицах 4 и 5, с нумерацией на основе человеческого белка ABCB11 дикого типа (например, SEQ ID NO: 3) или гена (например, SEQ ID NO: 4).

Как может быть понятно специалисту в области техники положение аминокислоты в контрольной последовательности белка, которое соответствует специфическому положению аминокислоты в SEQ ID NO: 1 или 3, может быть определено посредством выравнивания последовательности контрольного белка с SEQ ID NO: 1 или 3 (например, с использованием программного обеспечения, такого как ClustalW2). Изменения этих остатков (называемые в настоящем описании как “мутации”) могут включать одиночные или множественные замены аминокислот, вставки в или по бокам последовательностей, и делеции в или по бокам последовательностей. Как понимает специалист в области техники, положение нуклеотида в контрольной генетической последовательности, которое соответствует специфическому положению нуклеотида в SEQ ID NO: 2 или 4, может быть определено посредством выравнивания последовательности гена с SEQ ID NO: 2 или 4 (например, с использованием программного обеспечения, такого как ClustalW2). Изменения таких остатков (называемые как “мутации”) могут включать одиночные или множественные замены нуклеотидов, вставки в или по бокам последовательностей, и делеции в или по бокам последовательностей. См. также Kooistra, et al., “KLIFS: A structural kinase-ligand interaction database,” Nucleic Acids Res. 2016, vol. 44, no. D1, pp. D365-D371, которое включено в виде ссылки полностью в настоящее описание.

Таблица 1. Примерные мутации ATP8B1

Положение аминокислоты 3 (например, T3K)²⁷

Положение аминокислоты 23 (например, P23L)⁵

Положение аминокислоты 45 (например, N45T)^5,8,9

Положение аминокислоты 46 (например, R46X)^A,25

Положение аминокислоты 62 (например, C62R)²⁸

Положение аминокислоты 63 (например, T63T)⁴¹

Положение аминокислоты 70 (например, D70N)^1,6

Положение аминокислоты 71 (например, R71H)⁴³

Положение аминокислоты 78 (например, H78Q)¹⁹

Положение аминокислоты 82 (например, T82T)⁴¹

Положение аминокислоты 92 (например, Y92Y)⁴¹

Положение аминокислоты 93 (например, A93A)⁶

Положение аминокислоты 96 (например, A96G)²⁷

Положение аминокислоты 114 (например, E114Q)⁸

Положение аминокислоты 127 (например, L127P6, L127V36)

Положение аминокислоты 177 (например, T177T)⁶

Положение аминокислоты 179 (например, E179X)²⁹

Δ Положение аминокислот 185-282⁴⁴

Положение аминокислоты 197 (например, G197Lfs*10)²²

Положение аминокислоты 201 (например, R201S²⁷, R201H³⁵)

Положение аминокислоты 203 (например, K203E^5,8, K203R⁹, K203fs²⁵)

Положение аминокислоты 205 (например, N205fs⁶, N205Kfs*2³⁵)

Положение аминокислоты 209 (например, P209T)⁴

Положение аминокислоты 217 (например, S217N)⁴³

Положение аминокислоты 232 (например, D232D)³⁰

Положение аминокислоты 233 (например, G233R)³⁸

Положение аминокислоты 243 (например, L243fs*28)³³

Положение аминокислоты 265 (например, C265R)²⁵

Положение аминокислоты 271 (например, R271X¹³, R271R³⁰)

Положение аминокислоты 288 (например, L288S)⁶

Положение аминокислоты 294 (например, L294S)⁴³

Положение аминокислоты 296 (например, R296C)¹¹

Положение аминокислоты 305 (например, F305I)²⁸

Положение аминокислоты 306 (например, C306R)²³

Положение аминокислоты 307 (например, H307L)³⁵

Положение аминокислоты 308 (например, G308V¹, G308D⁶, G308S³⁵)

Положение аминокислоты 314 (например, G314S)¹³

Положение аминокислоты 320 (например, M320Vfs*13)¹¹

Положение аминокислоты 337 (например, M337R)¹⁸

Положение аминокислоты 338 (например, N338K)¹⁸

Положение аминокислоты 340 (например, M340V)¹⁸

Положение аминокислоты 344 (например, I344F)^6,20

Положение аминокислоты 349 (например, I349T)⁴¹

Положение аминокислоты 358 (например, G358R)²⁸

Положение аминокислоты 367 (например, G367G)⁴¹

Положение аминокислоты 368 (например, N368D)⁴¹

Положение аминокислоты 393 (например, I393V)²⁷

Положение аминокислоты 403 (например, S403Y)⁶

Положение аминокислоты 407 (например, S407N)⁴⁰

Положение аминокислоты 412 (например, R412P)⁶

Положение аминокислоты 415 (например, Q415R)²⁷

Положение аминокислоты 422 (например, D422H)³⁵

Положение аминокислоты 429 (например, E429A)⁶

Положение аминокислоты 446 (например, G446R)^4,11

Положение аминокислоты 453 (например, S453Y)⁶

Положение аминокислоты 454 (например, D454G)⁶

Положение аминокислоты 455 (например, K455N)⁴³

Положение аминокислоты 456 (например, T456M^3,6, T456K³⁵)

Положение аминокислоты 457 (например, G457G⁶, G457fs*⁶³³)

Положение аминокислоты 469 (например, C469G)⁴¹

Положение аминокислоты 478 (например, H478H)⁴¹

Положение аминокислоты 500 (например, Y500H)⁶

Положение аминокислоты 525 (например, R525X)⁴

ΔПоложение аминокислот 529⁶

Положение аминокислоты 535 (например, H535L⁶, H535N⁴¹)

Положение аминокислоты 553 (например, P553P)⁴³

Положение аминокислоты 554 (например, D554N^1,6, D554A³⁵)

ΔПоложение аминокислоты 556-628⁴⁴

ΔПоложение аминокислоты 559-563³⁵

Положение аминокислоты 570 (например, L570L)⁴¹

Положение аминокислоты 577 (например, I577V)¹⁹

Положение аминокислоты 581 (например, E581K)³⁵

Положение аминокислоты 554 и 581 (например, D554A+E581K)³⁵

Положение аминокислоты 585 (например, E585X)²¹

Положение аминокислоты 600 (например, R600W^2,4, R600Q⁶)

Положение аминокислоты 602 (например, R602X)^3,6

Положение аминокислоты 628 (например, R628W)⁶

Положение аминокислоты 631 (например, R631Q)²⁸

ΔПоложения аминокислот 645-699⁴

Положение аминокислоты 661 (например, I661T)^1,4,6

Положение аминокислоты 665 (например, E665X)^4,6

Положение аминокислоты 672 (например, K672fs⁶, K672Vfs*1³⁵)

Положение аминокислоты 674 (например, M674T)¹⁹

Δ Положение аминокислот 78 и 674 (например, M674T)¹⁹

Положение аминокислоты 684 (например, D684D)⁴¹

Положение аминокислоты 688 (например, D688G)⁶

Положение аминокислоты 694 (например, I694T⁶, I694N¹⁷)

Положение аминокислоты 695 (например, E695K)²⁷

Положение аминокислоты 709 (например, K709fs⁶, K709Qfs*41¹³)

Положение аминокислоты 717 (например, T717N)⁴

Положение аминокислоты 733 (например, G733R)⁶

Положение аминокислоты 757 (например, Y757X)⁴

Положение аминокислоты 792 (например, P792fs)⁶

ΔПоложение аминокислот 795-797⁶

Положение аминокислоты 809 (например, I809L)²⁷

Положение аминокислоты 814 (например, K814N)²⁸

Положение аминокислоты 833 (например, R833Q²⁷, R833W⁴¹)

Положение аминокислоты 835 (например, K835Rfs*36)³⁵

Положение аминокислоты 845 (например, K845fs)²⁵

Положение аминокислоты 849 (например, R849Q)²⁴

Положение аминокислоты 853 (например, F853S, F853fs)⁶

Положение аминокислоты 867 (например, R867C¹, R867fs⁶, R867H²³)

Положение аминокислоты 885 (например, K885T)⁴¹

Положение аминокислоты 888 (например, T888T)⁴¹

Положение аминокислоты 892 (например, G892R)⁶

Положение аминокислоты 912 (например, G912R)³⁵

Положение аминокислоты 921 (например, S921S)⁴¹

Положение аминокислоты 924 (например, Y924C)²⁸

Положение аминокислоты 930 (например, R930X⁶, R930Q²⁸)

Положение аминокислоты 941 (например, R941X)³⁵

Положение аминокислоты 946 (например, R946T)⁴¹

Положение аминокислоты 952 (например, R952Q^5,9,15, R952X⁶)

Положение аминокислоты 958 (например, N958fs)⁶

Положение аминокислоты 960 (например, A960A)⁴¹

Δ Положение аминокислот 971⁴³

Положение аминокислоты 976 (например, A976E⁴¹, A976A⁴³)

Положение аминокислоты 981 (например, E981K)²⁰

Положение аминокислоты 994 (например, S994R)⁴

Положение аминокислоты 1011 (например, L1011fs*18)³³

Положение аминокислоты 1012 (например, S1012I)¹⁰

Положение аминокислоты 1014 (например, R1014X)^6,11

Положение аминокислоты 1015 (например, F1015L)²⁷

Положение аминокислоты 1023 (например, Q1023fs)⁶

Положение аминокислоты 1040 (например, G1040R)^1,6

Положение аминокислоты 1044 (например, S0144L)³⁴

Положение аминокислоты 1047 (например, L1047fs)⁶

Положение аминокислоты 1050 (например, I1050K)³¹

Положение аминокислоты 1052 (например, L1052R)²⁸

Положение аминокислоты 1095 (например, W1095X)¹¹

Положение аминокислоты 1098 (например, V1098X)³⁵

Положение аминокислоты 1131 (например, Q1131X)⁴⁴

Положение аминокислоты 1142 (например, A1142Tfs*35)⁴³

Положение аминокислоты 1144 (например, Y1144Y)⁴³

Положение аминокислоты 1150 (например, I1150T)⁴¹

Положение аминокислоты 1152 (например, A1152T)³⁰

Положение аминокислоты 1159 (например, P1159P)^25,43

Положение аминокислоты 1164 (например, R1164X)⁶

Положение аминокислоты 1193 (например, R1193fs*39)³³

Положение аминокислоты 1197 (например, V1197L)⁴¹

Положение аминокислоты 1208 (например, A1208fs)⁶

Положение аминокислоты 1209 (например, Y1209Lfs*28)⁴

Положение аминокислоты 1211 (например, F1211L)²⁷

Положение аминокислоты 1219 (например, D1219H⁵, D1219G²⁷)

Положение аминокислоты 1223 (например, S1223S)⁴¹

Положение аминокислоты 1233 (например, P1233P)⁴¹

Положение аминокислоты 1241 (например, G1241fs)⁶

Положение аминокислоты 1248 (например, T1248T)⁴³

Сплайсинговая мутация IVS3+1_+3delGTG⁶

Сплайсинговая мутация IVS3-2A>G⁶

IVS6+5T>G^17,25

Сплайсинговая мутация IVS8+1G>T⁶

IVS9-G>A²⁶

IVS12+1G>A²⁵

Сплайсинговая мутация IVS17-1G>A⁶

Сплайсинговая мутация IVS18+2T>C⁶

Сплайсинговая мутация IVS20-4CT>AA

Сплайсинговая мутация IVS21+5G>A⁶

Сплайсинговая мутация IVS23-3C>A⁶

Сплайсинговая мутация IVS26+2T>A⁶

g.24774-42062del⁴

c.-4C>G⁴¹

c.145C>T¹²

c.181-72G>A⁹

c.182-5T>A⁴¹

c.182-72G>A⁴¹

c.246A>G⁹

c.239G>A³⁹

c.279+1_279+3delGTG⁴⁶

c.280-2A>G⁴⁶

c.625_62715delinsACAGTAAT⁴⁶

c.554+122C>T⁹

c.555-3T>C²⁷

c.625+5 G>T⁴

Положение аминокислоты 209 (например, P209T) и c.625+5 G>T⁴

c.628-30G>A⁴¹

c.628-31C>T⁴¹

c.698+1G>T⁴⁶

c.698+20C>T⁴¹

c.782-1G>A⁴⁶

c.782-34G>A⁴¹

Δ795-797¹⁴

c.782 -1G>A⁴

c.852A>C²⁷

c.941-1G>A⁴⁶

c.1014C>T⁹

c.1029+35G>A⁹

c.1221-8C.G⁴¹

1226delA¹⁶

c.1429+1G>A⁴⁶

c.1429+2T>G¹³

c.1429+49G>A⁴¹

c.1430-42A>G⁴¹

c.1493T>C¹²

c.1587_1589delCTT⁴⁶

c.1630+2T>G²⁷

c.1631-10T>A⁴¹

c.1637-37T>C⁴¹

1660 G>A¹⁴

1798 C>T¹⁴

1799 G>A¹⁴

c.1819-39_41delAA⁹

c.1819+1G>A³¹

c.1820-27G>A⁴¹

c.1918+8C>T²⁷

c.1933-1G>AK⁴⁶

c.2097+2T>C³²

c.2097+60T>G⁴¹

c.2097+89T>C⁴¹

c.2097+97T>G⁴¹

c.2210-114T>C⁹

2210delA¹⁶

c.2210-45_50dupATAAAA⁹

c.2285+29C.T⁴¹

c.2285+32A>G⁴¹

c.2286-4_2286-3delinsAA⁴⁶

c.2418+5G>A⁴⁶

c.2707+3G>C²⁷

c.2707+9T>G⁴¹

c.2707+43A>G⁴¹

c.2709-59T>C⁴¹

c.2931+9A>G⁴¹

c.2931+59T>A⁴¹

c.2932-3C>A⁴⁶

c.2932+59T>A⁹

c.2937A>C²⁷

c.3016-9C>A³¹

c.3033-3034del¹⁹

3122delTCCTA/ insACATCGATGTTGATGTTAGG⁴⁵

3318 G>A¹⁴

c.3400+2T>A⁴⁶

c.3401-175C>T⁹

c.3401-167C>T⁹

c.3401-108C>T⁹

c.3531+8G>T^9,15

c.3532-15C>T⁹

Δ Phe ex 15⁴

Ex1_Ex13del⁶

Ex2_Ex6del³³

Ex12_Ex14del²⁷

Пропущенный экзон 24⁴⁵

del5’UTR-ex18¹¹

c.*11C>T⁴¹

c.*1101+366G > A⁷

g.92918del565³¹

GC предшествующий экзон 16 (например, приводя к делеции 4 bp)⁴²

Сдвиг рамки считывания с 5’ конца экзона 16⁴²

5’ 1,4 kb делеция⁴⁶

Таблица 2. Выбранные мутации ATP8B1, ассоциированные с PFIC-1

Положение аминокислоты 23 (например, P23L)⁵

Положение аминокислоты 78 (например, H78Q)¹⁹

Положение аминокислоты 93 (например, A93A)⁶

Положение аминокислоты 96 (например, A96G)²⁷

Положение аминокислоты 127 (например, L127P)⁶

Положение аминокислоты 205 (например, N205fs)⁶

Положение аминокислоты 209 (например, P209T)⁴

Положение аминокислоты 233 (например, G233R)³⁸

Положение аминокислоты 288 (например, L288S)⁶

Положение аминокислоты 296 (например, R296C)¹¹

Положение аминокислоты 308 (например, G308V^1,6)

Положение аминокислоты 403 (например, S403Y)⁶

Положение аминокислоты 407 (например, S407N)⁴⁰

Положение аминокислоты 412 (например, R412P)⁶

Положение аминокислоты 415 (например, Q415R)²⁷

Положение аминокислоты 429 (например, E429A)⁶

Положение аминокислоты 446 (например, G446R)⁴

Положение аминокислоты 456 (например, T456M)^3,6

Положение аминокислоты 457 (например, G457G⁶, G457fs*6³³)

Положение аминокислоты 500 (например, Y500H)⁶

Положение аминокислоты 525 (например, R525X)⁴

ΔПоложение аминокислот 529⁶

Положение аминокислоты 535 (например, H535L)⁶

Положение аминокислоты 554 (например, D554N)^1,6

Положение аминокислоты 577 (например, I577V)¹⁹

Положение аминокислоты 585 (например, E585X)²¹

Положение аминокислоты 600 (например, R600W)⁴

Положение аминокислоты 602 (например, R602X)^3,6

Положение аминокислоты 661 (например, I661T)^4,6

Положение аминокислоты 665 (например, E665X)^4,6

ΔПоложение аминокислот 645-699⁴

Положение аминокислоты 672 (например, K672fs)⁶

Положение аминокислоты 674 (например, M674T)¹⁹

Положение аминокислоты 78 и 674 (например, H78Q/M674T)¹⁹

Положение аминокислоты 688 (например, D688G)⁶

Положение аминокислоты 694 (например, I694N)¹⁷

Положение аминокислоты 695 (например, E695K)²⁷

Положение аминокислоты 709 (например, K709fs)⁶

Положение аминокислоты 717 (например, T717N)⁴

Положение аминокислоты 733 (например, G733R)⁶

Положение аминокислоты 749 (например, L749P)²¹

Положение аминокислоты 757 (например, Y757X)⁴

Положение аминокислоты 792 (например, P792fs)⁶

Положение аминокислоты 809 (например, I809L)²⁷

Положение аминокислоты 867 (например, R867fs)⁶

Положение аминокислоты 892 (например, G892R)⁶

Положение аминокислоты 930 (например, R930X⁶, R952Q¹⁵)

Положение аминокислоты 952 (например, R952X)⁶

Положение аминокислоты 958 (например, N958fs)⁶

Положение аминокислоты 981 (например, E981K)²⁰

Положение аминокислоты 994 (например, S994R)⁴

Положение аминокислоты 1023 (например, Q1023fs)⁶

Положение аминокислоты 1040 (например, G1040R)^1,6

Положение аминокислоты 1047 (например, L1047fs)⁶

Положение аминокислоты 1095 (например, W1095X)¹¹

Положение аминокислоты 1208 (например, A1208fs)⁶

Сплайсинговая мутация IVS3+1_+3delGTG⁶

Сплайсинговая мутация IVS3-2A>G⁶

IVS6+5T>G¹⁷

Сплайсинговая мутация IVS8+1G>T⁶

IVS9-G>A²⁶

Сплайсинговая мутация IVS17-1G>A⁶

Сплайсинговая мутация IVS18+2T>C⁶

Сплайсинговая мутация IVS21+5G>A⁶

g.24774-42062del⁴

c.145C>T¹²

c.239G>A³⁹

c.625+5 G>T⁴

c.782 -1G>A⁴

c.1493T>C¹²

c.1630+2T>G²⁷

1660 G>A¹⁴

c.2707+3G>C²⁷

c.2097+2T>C³²

c.3033-3034del¹⁹

3318 G>A¹⁴

c.3158+8G>T¹⁵

Δ Phe ex 15⁴

Ex1_Ex13del⁶

Ex2_Ex6del³³

Ex12_Ex14del²⁷

del5’UTR-ex18¹¹

c.*1101+366G > A⁷

^A Мутация ‘X’ обозначает ранний стоп кодон

Ссылки для таблиц 1 и 2

¹ Folmer et al., Hepatology. 2009, vol. 50(5), p. 1597-1605.

² Hsu et al., Hepatol Res. 2009, vol. 39(6), p. 625-631.

³ Alvarez et al., Hum Mol Genet. 2004, vol. 13(20), p. 2451-2460.

⁴ Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p. 1645-1655.

⁵ Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p. 945-958.

⁶ Klomp et al., Hepatology 2004, vol. 40(1), p. 27-38.

⁷ Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500.

⁸ Dixon et al., Scientific Reports 2017, vol. 7, 11823.

⁹ Painter et al., Eur J Hum Genet. 2005, vol. 13(4), p. 435-439.

¹⁰ Deng et al., World J Gastroenterol. 2012, vol. 18(44), p. 6504-6509.

¹¹ Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): e0145021.

¹² Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S180. Abstract Number: OP284.

¹³ Togawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology и Nutrition 2018, vol. 67, Supp. Supplement 1, pp. S363. Abstract Number: 615.

¹⁴ Miloh et al., Gastroenterology 2006, vol. 130, No. 4, Suppl. 2, pp. A759-A760. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/107th Annual Meeting of the American-Gastroenterological-Association. Los Angeles, CA, USA. May 19.

¹⁵ Druge et al., Zeitschrift fur Gastroenterologie 2015, vol. 53, No. 12. Abstract Number: A3-27. Meeting Info: 32. Jahrestagung der Deutschen Arbeitsgemeinschaft zum Studium der Leber. Dusseldorf, Germany. 22 Jan 2016-23 Jan 2016

¹⁶ Mizuochi et al., Clin Chim Acta. 2012, vol. 413(15-16), p. 1301-1304.

¹⁷ Liu et al., Hepatology International 2009, vol. 3, No. 1, p. 184-185. Abstract Number: PE405. Meeting Info: 19th Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver. Hong Kong, China. 13 Feb 2009-16 Feb 2009

¹⁸ McKay et al., Version 2. F1000Res. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/f1000research.2-32.v2

¹⁹ Hasegawa et al., Orphanet J Rare Dis. 2014, vol. 9:89.

²⁰ Stone et al., J Biol Chem. 2012, vol. 287(49), p. 41139-51.

²¹ Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print]

²² Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p. 107.

²³ Uegaki et al., Intern Med. 2008, vol. 47(7), p. 599-602.

²⁴ Goldschmidt et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(4), p. 306-311.

²⁵ Liu et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 50(2), p. 179-183.

²⁶ Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p. 453-458.

²⁷ Bounford. University of Birmingham. Dissertation Abstracts International, (2016) Vol. 75, No. 1C. Order No.: AAI10588329. ProQuest Dissertations & Theses.

²⁸ Stolz et al., Aliment Pharmacol Ther. 2019, vol. 49(9), p. 1195-1204.

²⁹ Ivashkin et al., Hepatology International 2016, vol. 10, No. 1, Supp. SUPPL. 1, pp. S461. Abstract Number: LBO-38. Meeting Info: 25th Annual Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver, APASL 2016. Tokyo, Japan. 20 Feb 2016-24 Feb 2016

³⁰ Blackmore et al., J Clin Exp Hepatol. 2013, vol. 3(2), p. 159-161.

³¹ Matte et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 488-493.

³² Squires et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2017, vol. 64(3), p. 425-430.

³³ Hayshi et al., EBioMedicine. 2018, vol. 27, p. 187-199.

³⁴ Nagasaka et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 45(1), p. 96-105.

³⁵ Wang et al., PLoS One. 2016; vol. 11(4): e0153114.

³⁶ Narchi et al., Saudi J Gastroenterol. 2017, vol. 23(5), p. 303-305.

³⁷ Alashkar et al., Blood 2015, vol. 126, No. 23. Meeting Info.: 57th Annual Meeting of the American-Society-of-Hematology. Orlando, FL, USA. December 05 -08, 2015. Amer Soc Hematol.

³⁸ Ferreira et al., Pediatric Transplantation 2013, vol. 17, Supp. SUPPL. 1, pp. 99. Abstract Number: 239. Meeting Info: IPTA 7th Congress on Pediatric Transplantation. Warsaw, Poland. 13 Jul 2013-16 Jul 2013.

³⁹ Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p. 342-357.

⁴⁰ Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology и Nutrition 2015, vol. 60(3), p. 368-374.

⁴¹ van der Woerd et al., PLoS One. 2013, vol. 8(11): e80553.

⁴² Copeland et al., J Gastroenterol Hepatol. 2013, vol. 28(3), p. 560-564.

⁴³ Druge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p. 1253-1264.

⁴⁴ Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p. 119-124.

⁴⁵ Jirsa et al., Hepatol Res. 2004, vol. 30(1), p. 1-3.

⁴⁶ van der Woerd et al., Hepatology 2015, vol. 61(4), p. 1382-1391.

В некоторых вариантах осуществления изобретения мутацию ATP8B1 выбирают из L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X, и G1040R.

Таблица 3. Примерные мутации ABCB11

Положение аминокислоты 1 (например, M1V)⁹

Положение аминокислоты 4 (например, S4X)^A,64

Положение аминокислоты 8 (например, R8X)⁸⁸

Положение аминокислоты 19 (например, G19R)⁵⁶

Положение аминокислоты 24 (например, K24X)³⁵

Положение аминокислоты 25 (например, S25X)^5,14

Положение аминокислоты 26 (например, Y26Ifs*7)³⁸

Положение аминокислоты 36 (например, D36D)²⁷

Положение аминокислоты 38 (например, K38Rfs*24)⁷³

Положение аминокислоты 43 (например, V43I)⁵⁷

Положение аминокислоты 49 (например, Q49X)⁷³

Положение аминокислоты 50 (например, L50S, L50W)⁵⁷

Положение аминокислоты 52 (например, R52W²⁶, R52R²⁸)

Положение аминокислоты 56 (например, S56L)⁵⁸

Положение аминокислоты 58 (например, D58N)⁶²

Положение аминокислоты 62 (например, M62K)⁹

Положение аминокислоты 66 (например, S66N)¹⁷

Положение аминокислоты 68 (например, C68Y)⁴¹

Положение аминокислоты 50 (например, L50S)^5,7

Положение аминокислоты 71 (например, L71H)⁷³

Положение аминокислоты 74 (например, I74R)⁷¹

Положение аминокислоты 77 (например, P77A)⁷³

Положение аминокислоты 87 (например, T87R)⁶⁷

Положение аминокислоты 90 (например, F90F)^7,27

Положение аминокислоты 93 (например, Y93S¹³, Y93X⁸⁸)

Положение аминокислоты 96 (например, E96X)⁸⁸

Положение аминокислоты 97 (например, L97X)³⁹

Положение аминокислоты 101 (например, Q101Dfs*8)⁹

Положение аминокислоты 107 (например, C107R)³⁶

Положение аминокислоты 112 (например, I112T)⁹

Положение аминокислоты 114 (например, W114R)^2,9

Положение аминокислоты 123 (например, M123T)⁶⁷

Положение аминокислоты 127 (например, T127Hfs*6)⁵

Положение аминокислоты 129 (например, C129Y)²⁵

Положение аминокислоты 130 (например, G130G)⁷⁷

Положение аминокислоты 134 (например, I134I)²⁸

Положение аминокислоты 135 (например, E135K^7,13, E135L¹⁷)

Положение аминокислоты 137 (например, E137K)⁷

Положение аминокислоты 157 (например, Y157C)⁵

Положение аминокислоты 161 (например, C161X)³⁹

Положение аминокислоты 164 (например, V164Gfs*7³⁰, V164I⁸⁵)

Положение аминокислоты 167 (например, A167S⁴, A167V⁷, A167T^9,17)

Положение аминокислоты 181 (например, R181I)³⁵

Положение аминокислоты 182 (например, I182K)⁹

Положение аминокислоты 183 (например, M183V⁸, M183T⁹)

Положение аминокислоты 185 (например, M185I)⁷³

Положение аминокислоты 186 (например, E186G)^2,7,22

Положение аминокислоты 188 (например, G188W)⁷³

Положение аминокислоты 194 (например, S194P)⁷

Положение аминокислоты 198 (например, L198P)⁷

Положение аминокислоты 199 (например, N199Ifs*15X)⁸⁸

Положение аминокислоты 206 (например, I206V)²⁸

Положение аминокислоты 212 (например, A212T)⁷³

Положение аминокислоты 217 (например, M217R)⁸⁸

Положение аминокислоты 225 (например, T225P)⁵⁷

Положение аминокислоты 226 (например, S226L)⁹

Положение аминокислоты 232 (например, L232Cfs*9)⁹

Положение аминокислоты 233 (например, L233S)⁸⁶

Положение аминокислоты 238 (например, G238V)^2,7

Положение аминокислоты 242 (например, T242I)^5,7

Положение аминокислоты 245 (например, I245Tfs*26)⁵⁷

Положение аминокислоты 256 (например, A256G)⁹

Положение аминокислоты 260 (например, G260D)⁷

Положение аминокислоты 269 (например, Y269Y)²⁷

Положение аминокислоты 277 (например, A277E)⁷⁷

Положение аминокислоты 283 (например, E283D)⁷³

Положение аминокислоты 212 и 283 (например, A212T+E283D)⁷³

Положение аминокислоты 284 (например, V284L^7,39, V284A⁷, V284D²³)

Положение аминокислоты 297 (например, E297G^1,2,5,7, E297K⁷)

Положение аминокислоты 299 (например, R299K)²⁸

Положение аминокислоты 303 (например, R303K⁸, R303M⁶³ R303fsX321⁸³)

Положение аминокислоты 304 (например, Y304X)²⁶

Положение аминокислоты 312 (например, Q312H)⁷

Положение аминокислоты 313 (например, R313S)^5,7

Положение аминокислоты 314 (например, W314X)⁵⁷

Положение аминокислоты 318 (например, K318Rfs*26)²⁹

Положение аминокислоты 319 (например, G319G)⁷

Положение аминокислоты 327 (например, G327E)^5,7

Положение аминокислоты 330 (например, W330X)²⁴

Положение аминокислоты 336 (например, C336S)^2,7

Положение аминокислоты 337 (например, Y337H)^21,27

Положение аминокислоты 342 (например, W342G)⁵⁰

Положение аминокислоты 354 (например, R354X)⁹

Положение аминокислоты 361 (например, Q361X⁵⁷, Q361R⁷⁴)

Положение аминокислоты 366 (например, V366V²⁸, V366D⁵⁷)

Положение аминокислоты 368 (например, V368Rfs*27)⁵

Положение аминокислоты 374 (например, G374S)³

Положение аминокислоты 380 (например, L380Wfs*18)⁵

Положение аминокислоты 382 (например, A382G)⁸⁸

ΔПоложение аминокислот 382-388⁵

ΔПоложение аминокислот 383-389⁵⁷

Положение аминокислоты 387 (например, R387H)⁹

Положение аминокислоты 390 (например, A390P)^5,7

Положение аминокислоты 395 (например, E395E)²⁸

Положение аминокислоты 404 (например, D404G)⁹

Положение аминокислоты 410 (например, G410D)^5,7

Положение аминокислоты 413 (например, L413W)^5,7

Положение аминокислоты 415 (например, R415X)⁴²

Положение аминокислоты 416 (например, I416I)²⁷

Положение аминокислоты 420 (например, I420T)⁹

Положение аминокислоты 423 (например, H423R)¹³

Положение аминокислоты 432 (например, R432T)^1,2,7

Положение аминокислоты 436 (например, K436N)⁴⁰

Положение аминокислоты 440 (например, D440E)⁸⁸

Положение аминокислоты 444 (например, V444A)²

Положение аминокислоты 454 (например, V454X)⁴⁹

Положение аминокислоты 455 (например, G455E)⁹

Положение аминокислоты 457 (например, S457Vfs*23)⁸⁸

Положение аминокислоты 461 (например, K461E)^2,7

Положение аминокислоты 462 (например, S462R)⁸⁸

Положение аминокислоты 463 (например, T463I)^5,7

Положение аминокислоты 466 (например, Q466K)^5,7

Положение аминокислоты 470 (например, R470Q^5,7, R470X⁹)

Положение аминокислоты 471 (например, Y472X)⁵

Положение аминокислоты 472 (например, Y472C^5,27, Y472X¹⁴)

Положение аминокислоты 473 (например, D473Q³⁵, D473V⁸⁸)

Положение аминокислоты 475 (например, C475X)²⁹

Положение аминокислоты 481 (например, V481E)^5,7

Положение аминокислоты 482 (например, D482G)^2,5,7

Положение аминокислоты 484 (например, H484Rfs*5)⁹

Положение аминокислоты 487 (например, R487H², R487P⁵)

Положение аминокислоты 490 (например, N490D)^5,7

Положение аминокислоты 493 (например, W493X)⁸

Положение аминокислоты 496 (например, D496V)⁸⁸

Положение аминокислоты 498 (например, I498T)^2,7

Положение аминокислоты 499 (например, G499E)⁷³

Положение аминокислоты 501 (например, V501G)⁶⁸

Положение аминокислоты 504 (например, E504K)⁷⁹

Положение аминокислоты 510 (например, T510T)⁷

Положение аминокислоты 512 (например, I512T)^5,7

Положение аминокислоты 515 (например, N515T^5,7, N515D⁶⁴)

Положение аминокислоты 516 (например, I516M)¹⁷

Положение аминокислоты 517 (например, R517H)^5,7

Положение аминокислоты 520 (например, R520X)⁵

Положение аминокислоты 523 (например, A523G)¹³

Положение аминокислоты 528 (например, I528Sfs*21⁵, I528X⁹, I528T⁷³)

Положение аминокислоты 535 (например, A535A⁷, A535X⁸⁹)

Положение аминокислоты 540 (например, F540L)⁴⁶

Положение аминокислоты 541 (например, I541L^5,7, I541T^5,17)

Положение аминокислоты 546 (например, Q546K³⁹, Q546H⁷³)

Положение аминокислоты 548 (например, F548Y)^5,7

Положение аминокислоты 549 (например, D549V)⁹

Положение аминокислоты 554 (например, E554K)²¹

Положение аминокислоты 556 (например, G556R)⁶⁷

Положение аминокислоты 558 (например, Q558H)²³

Положение аминокислоты 559 (например, M559T)⁵⁷

Положение аминокислоты 562 (например, G562D^5,7, G562S⁷³)

Положение аминокислоты 570 (например, A570T^2,5,7, A570V²⁶)

Положение аминокислоты 575 (например, R575X^2,5, R575Q²¹)

Положение аминокислоты 580 (например, L580P)⁵⁷

Положение аминокислоты 586 (например, T586I)⁷

Положение аминокислоты 587 (например, S587X)⁷³

Положение аминокислоты 588 (например, A588V^5,7, A588P⁷³)

Положение аминокислоты 591 (например, N591S)^2,7

Положение аминокислоты 593 (например, S593R)^2,7

Положение аминокислоты 597 (например, V597V⁹, V597L¹³)

Положение аминокислоты 603 (например, K603K)⁵⁵

Положение аминокислоты 609 (например, H609Hfs*46)²⁶

Положение аминокислоты 610 (например, I610Gfs*45⁹, I610T⁵⁷)⁹

Положение аминокислоты 615 (например, H615R)²⁶

Положение аминокислоты 616 (например, R616G²⁸, R616H⁷³)

Положение аминокислоты 619 (например, T619A)²⁸

Положение аминокислоты 623 (например, A623A)²⁸

Положение аминокислоты 625 (например, T625Nfs*5)²⁶

Положение аминокислоты 627 (например, I627T)⁷

Положение аминокислоты 628 (например, G628Wfs*3)⁷⁰

Положение аминокислоты 636 (например, E636G)²

Положение аминокислоты 648 (например, G648Vfs*6⁵, G648V⁵⁰)

Положение аминокислоты 655 (например, T655I)⁷

Положение аминокислоты 669 (например, I669V)²⁶

Положение аминокислоты 676 (например, D676Y)¹¹

Положение аминокислоты 677 (например, M677V)^7,13

Положение аминокислоты 679 (например, A679V)⁵⁸

Положение аминокислоты 685 (например, G685W)⁶⁰

Положение аминокислоты 696 (например, R696W²⁷, R696Q⁵⁸)

Положение аминокислоты 698 (например, R698H^7,9, R698K⁶¹, R698C⁸⁸)

Положение аминокислоты 699 (например, S699P)⁹

Положение аминокислоты 701 (например, S701P)⁵⁸

Положение аминокислоты 702 (например, Q702X)⁸⁹

Положение аминокислоты 709 (например, E709K)⁷

Положение аминокислоты 710 (например, P710P)⁷

Положение аминокислоты 712 (например, L712L)²⁸

Положение аминокислоты 721 (например, Y721C)⁸⁸

Положение аминокислоты 729 (например, D724N)³⁹

Положение аминокислоты 731 (например, P731S)²³

Положение аминокислоты 740 (например, P740Qfs*6)⁷³

Положение аминокислоты 758 (например, G758R)⁵

Положение аминокислоты 766 (например, G766R)^5,24

Положение аминокислоты 772 (например, Y772X)⁵

Положение аминокислоты 804 (например, A804A)⁷

Положение аминокислоты 806 (например, G806D⁴⁴, G806G⁵⁵)

Положение аминокислоты 809 (например, S809F)⁸¹

Положение аминокислоты 817 (например, G817G)⁸⁸

Положение аминокислоты 818 (например, Y818F)⁷

Положение аминокислоты 824 (например, G824E)⁴²

Положение аминокислоты 825 (например, G825G)⁷³

Положение аминокислоты 830 (например, R830Gfs*28)⁷³

Положение аминокислоты 832 (например, R832C^7,26, R832H⁴¹)

Положение аминокислоты 842 (например, D842G)²

Положение аминокислоты 848 (например, D848N)⁷³

Положение аминокислоты 855 (например, G855R)¹¹

Положение аминокислоты 859 (например, T859R)^5,7

Положение аминокислоты 865 (например, A865V)²⁷

Положение аминокислоты 866 (например, S866A)⁵⁷

Положение аминокислоты 868 (например, V868D)⁷³

Положение аминокислоты 869 (например, Q869P)⁷³

Положение аминокислоты 875 (например, Q875X)⁷³

Положение аминокислоты 877 (например, G877R)⁵⁶

Положение аминокислоты 879 (например, I879R)⁸⁸

Положение аминокислоты 893 (например, A893V)⁵⁷

Положение аминокислоты 901 (например, S901R¹⁷, S901I⁷³)

Положение аминокислоты 903 (например, V903G)⁵⁷

ΔПоложение аминокислот 919¹²

Положение аминокислоты 923 (например, T923P)^2,7

Положение аминокислоты 926 (например, A926P)^2,7

Положение аминокислоты 928 (например, R928X¹⁵, R928Q⁴⁰)

Положение аминокислоты 930 (например, K930X⁵, K930Efs*79^5,10, K930Efs*49²⁶)

Положение аминокислоты 931 (например, Q931P)²⁷

Положение аминокислоты 945 (например, S945N)⁵⁷

Положение аминокислоты 948 (например, R948C)^5,7,26

Положение аминокислоты 958 (например, R958Q)²⁸

Положение аминокислоты 969 (например, K969K)⁸⁸

ΔПоложение аминокислот 969-972⁵

Положение аминокислоты 973 (например, T973I)⁵⁷

Положение аминокислоты 976 (например, Q976R⁵⁸, Q976X⁸⁸)

Положение аминокислоты 979 (например, N979D)^5,7

Положение аминокислоты 981 (например, Y981Y)²⁸

Положение аминокислоты 982 (например, G982R)^2,5,7

Положение аминокислоты 444 и 982 (например, V444A+G982R)³⁸

Положение аминокислоты 995 (например, A995A)²⁸

Положение аминокислоты 1001 (например, R1001R)⁹

Положение аминокислоты 1003 (например, G1003R)²⁴

Положение аминокислоты 1004 (например, G1004D)^2,7

Положение аминокислоты 1027 (например, S1027R)²⁶

Положение аминокислоты 1028 (например, A1028A^7,10,88, A1028E⁸⁸)

Положение аминокислоты 1029 (например, T1029K)⁵

Положение аминокислоты 1032 (например, G1032R)¹²

Положение аминокислоты 1041 (например, Y1041X)⁹

Положение аминокислоты 1044 (например, A1044P)⁸⁸

Положение аминокислоты 1050 (например, R1050C)^2,7,57

Положение аминокислоты 1053 (например, Q1053X)⁵⁷

Положение аминокислоты 1055 (например, L1055P)³⁶

Положение аминокислоты 1057 (например, R1057X², R1057Q⁵⁸)

Положение аминокислоты 1058 (например, Q1058Hfs*38⁹, Q1058fs*38¹⁷, Q1058X⁷³)

Положение аминокислоты 1061 (например, I1061Vfs*34)⁹

Положение аминокислоты 1083 (например, C1083Y)⁴⁷

Положение аминокислоты 1086 (например, T1086T)²⁸

Положение аминокислоты 1090 (например, R1090X)^2,5

Положение аминокислоты 1099 (например, L1099Lfs*38)²⁶

Положение аминокислоты 1100 (например, S1100Qfs*38)¹³

Положение аминокислоты 1110 (например, A1110E)^5,7

Положение аминокислоты 1112 (например, V1112F)⁷⁰

Положение аминокислоты 1116 (например, G1116R⁷, G1116F^9,17, G1116E³⁶)

Положение аминокислоты 1120 (например, S1120N)⁸⁸

Положение аминокислоты 1128 (например, R1128H^2,7, R1128C^5,7,13)

Положение аминокислоты 1131 (например, D1131V)²⁷

Положение аминокислоты 1144 (например, S1144R)⁷

Положение аминокислоты 1147 (например, V1147X)⁵

Положение аминокислоты 1153 (например, R1153C^2,5,7, R1153H⁵)

Положение аминокислоты 1154 (например, S1154P)^5,7

Положение аминокислоты 1162 (например, E1162X)³⁹

ΔПоложение аминокислот 1165⁸⁸

Положение аминокислоты 1164 (например, V1164Gfs*7)

Положение аминокислоты 1173 (например, N1173D)⁵⁷

Положение аминокислоты 1175 (например, K1175T)⁵⁸

Положение аминокислоты 1186 (например, E1186K)⁷

Положение аминокислоты 1192 (например, A1192Efs*50)⁹

Положение аминокислоты 1196 (например, Q1196X)⁸⁸

Положение аминокислоты 1197 (например, L1197G)⁷

Положение аминокислоты 1198 (например, H1198R)²⁷

Положение аминокислоты 1204 (например, L1204P)⁸⁸

Положение аминокислоты 1208 (например, Y1208C)⁷³

Положение аминокислоты 1210 (например, T1210P^5,7, T1210F⁵⁷)

Положение аминокислоты 1211 (например, N1211D)⁷

Положение аминокислоты 1212 (например, V1212F)³⁶

Положение аминокислоты 1215 (например, Q1215X)⁵

Положение аминокислоты 1221 (например, R1221K)⁵³

Положение аминокислоты 1223 (например, E1223D)⁷

Положение аминокислоты 1226 (например, R1226P)⁷³

Положение аминокислоты 1228 (например, A1228V)⁷

Положение аминокислоты 1231 (например, R1231W^5,7, R1231Q^5,7)

Положение аминокислоты 1232 (например, A1232D)¹⁷

Положение аминокислоты 1235 (например, R1235X)^5,12

Положение аминокислоты 1242 (например, L1242I)^5,7

Положение аминокислоты 1243 (например, D1243G)⁶⁷

Положение аминокислоты 1249 (например, L1249X)⁷³

Положение аминокислоты 1256 (например, T1256fs*1296)⁸³

Положение аминокислоты 1268 (например, R1268Q)^2,7

Положение аминокислоты 1276 (например, R1276H)³⁰

Положение аминокислоты 1283 (например, A1283A²⁸, A1283V⁸⁸)

Положение аминокислоты 1292 (например, G1292V)⁷³

Положение аминокислоты 1298 (например, G1298R)⁵

Положение аминокислоты 1302 (например, E1302X)⁵

Положение аминокислоты 1311 (например, Y1311X)⁵⁷

Положение аминокислоты 1316 (например, T1316Lfs*64)¹⁵

Положение аминокислоты 1321 (например, S1321N)⁵⁷

Интрон 4 ((+3)A>C)¹

IVS4-74A>T⁸⁹

Сплайсинговая мутация 3’ интрон 5 c.3901G>A⁵

Сплайсинговая мутация 5; интрон 7 c.6111G>A⁵

Сплайсинговая мутация IVS7+1G>A¹⁴

IVS8+1G>C⁷⁶

Сплайсинговая мутация 5’ интрон 9 c.9081delG⁵

Сплайсинговая мутация 5’ интрон 9 c.9081G>T⁵

Сплайсинговая мутация 5’ интрон 9 c.9081G>A⁵

Сплайсинговая мутация IVS9+1G>T¹⁴

Сплайсинговая мутация 3’ интрон 13 c.143513_1435-8del⁵

Сплайсинговая мутация IVS13del-13^-8¹⁴

Сплайсинговая мутация 3’ интрон 16 c.20128T>G⁵

Сплайсинговая мутация IVS16-8T>G¹⁴

Сплайсинговая мутация 5’ интрон 18 c.21781G>T⁵

Сплайсинговая мутация 5’ интрон 18 c.21781G>A⁵

Сплайсинговая мутация 5’ интрон 18 c.21781G>C⁵

Сплайсинговая мутация 3’ интрон 18 c.21792A>G⁵

Сплайсинговая мутация IVS18+1G>A¹⁴

Сплайсинговая мутация 5’ интрон 19 c.2343+1G>T⁵

Сплайсинговая мутация 5’ интрон 19 c.2343+2T>C⁵

Сплайсинговая мутация IVS19+2T>C¹⁴

Сплайсинговая мутация IVS19+1G>A²²

Сплайсинговая мутация 3’ интрон 21 c.26112A>T⁵

IVS22+3A>G⁸⁹

IVS 23-8 G-A³⁶

IVS24+5G>A⁵¹

Сплайсинговая мутация 5’ интрон 24 c.32131delG⁵

IVS35-6C>G⁸⁹

Предполагаемая сплайсинговая мутация 1198-1G>C¹⁷

Предполагаемая сплайсинговая мутация 1810-3C>G¹⁷

Предполагаемая сплайсинговая мутация 2178+1G>A¹⁷

Предполагаемая сплайсинговая мутация 2344-1G>T¹⁷

Предполагаемая сплайсинговая мутация c.2611-2A>T³⁹

Предполагаемая сплайсинговая мутация 3213+1_3213+2delinsA¹⁷

c.-24C>A^44,78

c.76 13 G>T⁹

c.77-19T>A⁵²

c.90_93delGAAA¹⁸

c.124G>A⁶⁹

c.150 +3 A>C¹⁰

174C>T⁵⁴

c.245T>C⁸⁷

c.249_250insT¹⁸

270T>C⁵⁴

402C>T⁵⁴

585G>C⁵⁴

c.611+1G>A⁷⁰

c.611+4A>G³⁶

c.612-15_-6del10bp⁵⁵

c.625A>C³¹

c.627+5G>T³¹

c.625A>C/ c.627+5G>T³¹

696G>T⁵⁴

c. 784+1G>C⁴⁹

807T>C⁵⁴

c.886C>T³¹

c.890A>G⁵⁹

c.908+1G>A⁵⁷

c.908+5G>A⁵⁵

c.908delG⁵⁹

c.909-15A>G⁶⁶

957A>G⁵⁴

c.1084-2A>G⁵⁷

1145 1bp deletion⁹⁰

1281C>T^54,57

c.1309-165C > T¹⁹

c.1434+174G > A¹⁹

c.1434+70C > T¹⁹

c.1530C>A⁵⁷

c.1587-1589delCTT³¹

c.1621A>C^33,59

c.1638+32T>C⁶⁶

c.1638+80C>T⁶⁶

1671C>T⁵⁴

1791G>T⁵⁴

1939delA¹⁴

c.2075+3A>G⁵³

c.2081T>A³¹

c.2093G>A⁶⁵

2098delA¹⁶

c.2138-8T>G⁶⁷

2142A>G⁵⁴

c.2178+1G>T^36,39

c.2179-17C>A⁶⁶

c.2344-157T>G⁶⁶

c.2344-17T>C⁶⁶

c.2417G>A⁷⁸

c.2541delG⁸⁷

c.2620C>T^32,33

c.2815-8A>G⁵⁵

c.3003A>G³⁷

c.3084A>G^48,54

c.3213 +4 A>G^9,37

c.3213 +5 G>A⁹

c.3268C>T⁷⁵

3285A>G⁵⁴

c.3382C>T⁷⁵

3435A>G⁵⁴

c.3491delT⁷²

c.3589C>T⁵⁷

c.3765(+1 +5)del⁵⁴²

c.3766-34A>G⁶⁶

c.3767-3768insC⁶

c.3770delA⁶⁷

c.3826C>T⁷²

c.3846C>T⁵⁷

c.3929delG⁶⁷

c.*236A>G⁶⁶

1145delC⁸

Ex13_Ex17del⁸²

Таблица 4. Выбранные мутации ABCB11, ассоциированные с PFIC-2

Положение аминокислоты 1 (например, M1V)⁹

Положение аминокислоты 4 (например, S4X)⁶⁴

Положение аминокислоты 19 (например, G19R)⁵⁶

Положение аминокислоты 25 (например, S25X)¹⁴

Положение аминокислоты 50 (например, L50S)^7,57

Положение аминокислоты 52 (например, R52W)²⁶

Положение аминокислоты 58 (например, D58N)⁶²

Положение аминокислоты 62 (например, M62K)⁹

Положение аминокислоты 66 (например, S66N)¹⁷

Положение аминокислоты 68 (например, C68Y)⁴¹

Положение аминокислоты 93 (например, Y93S)¹³

Положение аминокислоты 107 (например, C107R)³⁶

Положение аминокислоты 112 (например, I112T)⁹

Положение аминокислоты 114 (например, W114R)^2,9

Положение аминокислоты 129 (например, C129Y)²⁵

Положение аминокислоты 135 (например, E135K¹³, E135L¹⁷)

Положение аминокислоты 167 (например, A167V⁷, A167T^9,17)

Положение аминокислоты 182 (например, I182K)⁹

Положение аминокислоты 225 (например, T225P)⁵⁷

Положение аминокислоты 226 (например, S226L)⁹

Положение аминокислоты 233 (например, L233S)⁸⁶

Положение аминокислоты 238 (например, G238V)^2,7

Положение аминокислоты 242 (например, T242I)⁷

Положение аминокислоты 256 (например, A256G)⁹

Положение аминокислоты 260 (например, G260D)⁵⁷

Положение аминокислоты 284 (например, V284L)⁷

Положение аминокислоты 297 (например, E297G)^2,7

Положение аминокислоты 303 (например, R303K⁸, R303M⁶³, R303fsX321⁸³)

Положение аминокислоты 304 (например, Y304X)²⁶

Положение аминокислоты 312 (например, Q312H)⁷

Положение аминокислоты 313 (например, R313S)⁷

Положение аминокислоты 314 (например, W314X)⁵⁷

Положение аминокислоты 327 (например, G327E)⁷

Положение аминокислоты 330 (например, V330X)²⁴

Положение аминокислоты 336 (например, C336S)^2,7

Положение аминокислоты 337 (например, Y337H)²¹

Положение аминокислоты 342 (например, W342G)⁵⁰

Положение аминокислоты 354 (например, R354X)⁹

Положение аминокислоты 361 (например, Q361X)⁵⁷

Положение аминокислоты 366 (например, V366D)⁵⁷

Положение аминокислоты 386 (например, G386X)³⁴

ΔПоложение аминокислоты 383-389⁵⁷

Положение аминокислоты 387 (например, R387H)⁹

Положение аминокислоты 390 (например, A390P)⁷

Положение аминокислоты 410 (например, G410D)⁷

Положение аминокислоты 413 (например, L413W)⁷

Положение аминокислоты 415 (например, R415X)⁴²

Положение аминокислоты 420 (например, I420T)⁹

Положение аминокислоты 454 (например, V454X)⁴⁹

Положение аминокислоты 455 (например, G455E)⁹

Положение аминокислоты 461 (например, K461E)^2,7

Положение аминокислоты 463 (например, T463I)⁷

Положение аминокислоты 466 (например, Q466K)⁷

Положение аминокислоты 470 (например, R470Q⁷, R470X⁹)

Положение аминокислоты 472 (например, Y472X¹⁴, Y472C²⁷)

Положение аминокислоты 475 (например, C475X)²⁹

Положение аминокислоты 481 (например, V481E)⁷

Положение аминокислоты 482 (например, D482G)^2,7

Положение аминокислоты 487 (например, R487H², R487P⁸⁴)

Положение аминокислоты 490 (например, N490D)⁷

Положение аминокислоты 493 (например, W493X)⁸

Положение аминокислоты 498 (например, I498T)⁷

Положение аминокислоты 501 (например, V501G)⁶⁸

Положение аминокислоты 512 (например, I512T)⁷

Положение аминокислоты 515 (например, N515T⁷, N515D⁶⁴)

Положение аминокислоты 516 (например, I516M)¹⁷

Положение аминокислоты 517 (например, R517H)⁷

Положение аминокислоты 520 (например, R520X)⁵⁷

Положение аминокислоты 523 (например, A523G)¹³

Положение аминокислоты 528 (например, I528X)⁹

Положение аминокислоты 540 (например, F540L)⁴⁶

Положение аминокислоты 541 (например, I541L⁷, I541T¹⁷)

Положение аминокислоты 548 (например, F548Y)⁷

Положение аминокислоты 549 (например, D549V)⁹

Положение аминокислоты 554 (например, E554K)²¹

Положение аминокислоты 559 (например, M559T)⁵⁷

Положение аминокислоты 562 (например, G562D)⁷

Положение аминокислоты 570 (например, A570T⁷, A570V²⁶)

Положение аминокислоты 575 (например, R575X², R575Q²¹)

Положение аминокислоты 588 (например, A588V)⁷

Положение аминокислоты 591 (например, N591S)^9,17

Положение аминокислоты 593 (например, S593R)^2,7

Положение аминокислоты 591 и 597 (например, N591S+V597V)⁹

Положение аминокислоты 603 (например, K603K)⁵⁵

Положение аминокислоты 610 (например, I610Gfs*45)⁹

Положение аминокислоты 615 (например, H615R)²⁶

Положение аминокислоты 627 (например, I627T)⁷

Положение аминокислоты 636 (например, E636G)²

Положение аминокислоты 669 (например, I669V)²⁶

Положение аминокислоты 698 (например, R609H)⁹

Положение аминокислоты 112 и 698 (например, I112T+R698H)⁹

Положение аминокислоты 699 (например, S699P)⁹

Положение аминокислоты 766 (например, G766R)²⁴

Положение аминокислоты 806 (например, G806G)⁵⁵

Положение аминокислоты 824 (например, G824E)⁴²

Положение аминокислоты 842 (например, D842G)²

Положение аминокислоты 859 (например, T859R)⁷

Положение аминокислоты 865 (например, A865V)⁴⁵

Положение аминокислоты 877 (например, G877R)⁵⁶

Положение аминокислоты 893 (например, A893V)⁵⁷

Положение аминокислоты 901 (например, S901R)¹⁷

Положение аминокислоты 903 (например, V903G)⁵⁷

ΔПоложение аминокислоты 919¹²

Положение аминокислоты 928 (например, R928X)^15,21

Положение аминокислоты 930 (например, K930Efs*79¹⁰, K930Efs*49²⁶)

Положение аминокислоты 948 (например, R948C)^7,26

Положение аминокислоты 979 (например, N979D)⁷

Положение аминокислоты 982 (например, G982R)^2,7

Положение аминокислоты 1001 (например, R1001R)⁹

Положение аминокислоты 1004 (например, G1004D)^2,7

Положение аминокислоты 1028 (например, A1028A)¹⁰

Положение аминокислоты 1032 (например, G1032R)¹²

Положение аминокислоты 1041 (например, Y1041X)⁹

Положение аминокислоты 1050 (например, R1050C)⁵⁷

Положение аминокислоты 1057 (например, R1057X)²

Положение аминокислоты 1058 (например, Q1058Hfs*38⁹, Q1058fs*38¹⁷)

Положение аминокислоты 1090 (например, R1090X)²

Положение аминокислоты 1110 (например, A1110E)⁷

Положение аминокислоты 1128 (например, R1128C)^7,13

Положение аминокислоты 1144 (например, S1144R)⁷

Положение аминокислоты 1153 (например, R1153C^2,7, R1153H^7,26)

Положение аминокислоты 1154 (например, S1154P)⁷

Положение аминокислоты 1210 (например, T1210P⁷, T1210F⁵⁷)

Положение аминокислоты 1211 (например, N1211D)⁷

Положение аминокислоты 1231 (например, R1231W⁷, R1223Q⁷)

Положение аминокислоты 1235 (например, R1235X)¹²

Положение аминокислоты 1242 (например, L1242I)⁷

Положение аминокислоты 1268 (например, R1268Q)^2,7

Положение аминокислоты 1302 (например, E1302X)⁵⁷

Интрон 4 ((+3)A>C)¹

Сплайсинговая мутация IVS7+1G>A¹⁴

IVS8+1G>C⁷⁶

Сплайсинговая мутация IVS9+1G>T¹⁴

Сплайсинговая мутация IVS13del-13^-8¹⁴

Сплайсинговая мутация IVS16-8T>G¹⁴

Сплайсинговая мутация IVS18+1G>A¹⁴

Сплайсинговая мутация IVS19+2T>C¹⁴

IVS 23-8 G-A³⁶

IVS24+5G>A⁵¹

c.-24C>A⁷⁸

c.76 13 G>T⁹

c.77-19T>A⁵²

c.90_93delGAAA¹⁸

c.124G>A⁶⁹

c.150 +3 A>C¹⁰

c.249_250insT¹⁸

c.611+1G>A⁸⁴

c.611+4A>G³⁶

c.612-15_-6del10bp⁵⁵

c.625A>C³¹

c.627+5G>T³¹

c.625A>C/ c.627+5G>T³¹

c.886C>T³¹

c.890A>G⁵⁹

c.908+1G>A⁵⁷

c.908+5G>A⁵⁵

c.908delG⁵⁹

1273 1bp делеция⁹¹

c.1084-2A>G⁵⁷

c.1445A>G⁵⁹

c.1587-1589delCTT³¹

c.1621A>C⁵⁹

1939delA¹⁴

c.2081T>A³¹

2098delA¹⁶

c.2343+1 G>T⁸⁰

c.2178+1G>T³⁶

c.2417G>A⁷⁸

c.2620C>T³²

c.2815-8A>G⁵⁵

c.3003A>G³⁷

c.3213 +4 A>G^9,37

c.3213 +5 G>A⁹

c.3268C>T⁷⁵

c.3382C>T⁷⁵

c.3765(+1 +5)del5⁴²

c.3767-3768insC⁶

1145delC⁸

Ex13_Ex17del⁸²

^A Мутация ‘X’ обозначает ранний стоп кодон

Ссылки для таблиц 3 и 4

¹ Noe et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(3), p. 536-543.

² Lam et al., Am J Physiol Cell Physiol. 2007, vol. 293(5), p. C1709-16.

³ Stindt et al., Liver Int. 2013, vol. 33(10), p. 1527-1735.

⁴ Gao et al., Shandong Yiyao 2012, vol. 52(10), p. 14-16.

⁵ Strautnieks et al., Gastroenterology. 2008, vol. 134(4), p. 1203-1214.

⁶ Kagawa et al., Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2008, vol. 294(1), p. G58-67.

⁷ Byrne et al., Hepatology. 2009, vol. 49(2), p. 553-567.

⁸ Chen et al., J Pediatr. 2008, vol. 153(6), p. 825-832.

⁹ Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p. 1645-1655.

¹⁰ Drоge et al., Sci Rep. 2016, vol. 6: 24827.

¹¹ Lang et al., Pharmacogenet Genomics. 2007, vol. 17(1), p. 47-60.

¹² Ellinger et al., World J Gastroenterol. 2017, vol. 23(29), p. :5295-5303.

¹³ Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p. 945-958.

¹⁴ Knisely et al., Hepatology. 2006, vol. 44(2), p. 478-86.

¹⁵ Ellis et al., Hepatology. 2018, vol. 67(4), p. 1531-1545.

¹⁶ Lam et al., J Hepatol. 2006, vol. 44(1), p. 240-242.

¹⁷ Varma et al., Hepatology 2015, vol. 62(1), p. 198-206.

¹⁸ Treepongkaruna et al., World J Gastroenterol. 2009, vol. 15(34), p. 4339-4342.

¹⁹ Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500.

²⁰ Hayashi et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(2), p. 192-200.

²¹ Guorui et al., Linchuang Erke Zazhi 2013, vol. 31(10), 905-909.

²² van Mil et al., Gastroenterology. 2004, vol. 127(2), p. 379-384.

²³ Anzivino et al., Dig Liver Dis. 2013, vol. 45(3), p. 226-232.

²⁴ Park et al., World J Gastroenterol. 2016, vol. 22(20), p. 4901-4907.

²⁵ Imagawa et al., J Hum Genet. 2018, vol. 63(5), p. 569-577.

²⁶ Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): e0145021.

²⁷ Hu et al., Mol Med Rep. 2014, vol. 10(3), p. 1264-1274.

²⁸ Lang et al,. Drug Metab Dispos. 2006, vol. 34(9), p. 1582-1599.

²⁹ Masahata et al., Transplant Proc. 2016, vol. 48(9), p. 3156-3162.

³⁰ Holz et al., Hepatol Commun. 2018, vol. 2(2), p. 152-154.

³¹ Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S180. Abstract Number: OP284.

³² Francalanci et al., Laboratory Investigation 2011, vol. 91, Supp. SUPPL. 1, pp. 360A. Abstract Number: 1526.

³³ Francalanci et al., Digestive и Liver Disease 2010, vol. 42, Supp. SUPPL. 1, pp. S16. Abstract Number: T.N.5.

³⁴ Shah et al., J Pediatr Genet. 2017, vol. 6(2), p. 126-127.

³⁵ Gao et al., Hepatitis Monthly 2017, vol. 17(10), e55087/1-e55087/6.

³⁶ Evason et al., Am J Surg Pathol. 2011, vol. 35(5), p. 687-696.

³⁷ Davit-Spraul et al., Mol Genet Metab. 2014, vol. 113(3), p. 225-229.

³⁸ Maggiore et al., J Hepatol. 2010, vol. 53(5), p. 981-6.

³⁹ McKay et al., Version 2. F1000Res. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/f1000research.2-32.v2

⁴⁰ Liu et al., Pediatr Int. 2013, vol. 55(2), p. 138-144.

⁴¹ Waisbourd-Zinman et al., Ann Hepatol. 2017, vol. 16(3), p. 465-468.

⁴² Griffin, et al., Canadian Journal of Gastroenterology и Hepatology 2016, vol. 2016. Abstract Number: A200. Meeting Info: 2016 Canadian Digestive Diseases Week, CDDW 2016. Montreal, QC, United States. 26 Feb 2016-29 Feb 2016

⁴³ Qiu et al., Hepatology 2017, vol. 65(5), p. 1655-1669.

⁴⁴ Imagawa et al., Sci Rep. 2017, 7:41806.

⁴⁵ Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print]

⁴⁶ Takahashi et al., Eur J Gastroenterol Hepatol. 2007, vol. 19(11), p. 942-6.

⁴⁷ Shimizu et al., Am J Transplant. 2011, vol. 11(2), p. 394-398.

⁴⁸ Krawczyk et al., Ann Hepatol. 2012, vol. 11(5), p. 710-744.

⁴⁹ Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p. 107.

⁵⁰ Sattler et al., Journal of Hepatology 2017, vol. 66, No. 1, Suppl. S, pp. S177. Meeting Info.: International Liver Congress/52nd Annual Meeting of the European-Association-for-the-Study-of-the-Liver. Amsterdam, NETHERLANDS. April 19 -23, 2017. European Assoc Study Liver.

⁵¹ Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p. 453-458.

⁵² Sciveres. Digestive и Liver Disease 2010, vol. 42, Supp. SUPPL. 5, pp. S329. Abstract Number: CO18. Meeting Info: 17th National Congress SIGENP. Pescara, Italy. 07 Oct 2010-09 Oct 2010

⁵³ Sohn et al., Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2019, vol. 22(2), p. 201-206.

⁵⁴ Ho et al., Pharmacogenet Genomics. 2010, vol. 20(1), p. 45-57.

⁵⁵ Wang et al., Hepatol Res. 2018, vol. 48(7), p. 574-584.

⁵⁶ Shaprio et al., J Hum Genet. 2010, vol. 55(5), p. 308-313.

⁵⁷ Bounford. University of Birmingham. Dissertation Abstracts International, (2016) Vol. 75, No. 1C. Order No.: AAI10588329. ProQuest Dissertations & Theses.

⁵⁸ Stolz et al., Aliment Pharmacol Ther. 2019, vol. 49(9), p. 1195-1204.

⁵⁹ Jankowska et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2014, vol. 58(1), p. 92-95.

⁶⁰ Kim. Journal of Pediatric Gastroenterology и Nutrition 2016, vol. 62, Supp. SUPPL. 1, pp. 620. Abstract Number: H-P-045. Meeting Info: 49th Annual Meeting of the European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology и Nutrition, ESPGHAN 2016. Athens, Greece. 25 May 2016-28 May 2016.

⁶¹ Pauli-Magnus et al., Hepatology 2003, vol. 38, No. 4 Suppl. 1, pp. 518A. print. Meeting Info.: 54th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases. Boston, MA, USA. October 24-28, 2003. American Association for the Study of Liver Diseases.

⁶² Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S362. Abstract Number: PP0347. Meeting Info: 26th Annual Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver, APASL 2017. Shanghai, China. 15 Feb 2017-19 Feb 2017.

⁶³ Rumbo et al., Transplantation 2018, vol. 102, No. 7, Supp. Supplement 1, pp. S848. Abstract Number: P.752. Meeting Info: 27th International Congress of The Transplantation Society, TTS 2018. Madrid, Spain. 30 Jun 2018-05 Jul 2018.

⁶⁴ Lee et al., Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2017, vol. 20(2), p. 114-123.

⁶⁵ Sherrif et al., Liver international: official journal of the International Association for the Study of the Liver 2013, vol. 33, No. 8, pp. 1266-1270.

⁶⁶ Blackmore et al., J Clin Exp Hepatol. 2013, vol. 3(2), p. 159-161.

⁶⁷ Matte et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 488-493.

⁶⁸ Lin et al., Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi. 2018, vol. 20(9), p. 758-764.

⁶⁹ Harmanci et al., Experimental и Clinical Transplantation 2015, vol. 13, Supp. SUPPL. 2, pp. 76. Abstract Number: P62. Meeting Info: 1st Congress of the Turkic World Transplantation Society. Astana, Kazakhstan. 20 May 2015-22 May 2015.

⁷⁰ Herbst et al., Mol Cell Probes. 2015, vol. 29(5), p. 291-298.

⁷¹ Moghadamrad et al., Hepatology. 2013, vol. 57(6), p. 2539-2541.

⁷² Holz et al., Zeitschrift fur Gastroenterologie 2016, vol. 54, No. 8. Abstract Number: KV275. Meeting Info: Viszeralmedizin 2016, 71. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft fur Gastroenterologie, Verdauungs- und Stoffwechselkrankheiten mit Sektion Endoskopie - 10. Herbsttagung der Deutschen Gesellschaft fur Allgemein- und Viszeralchirurgie. Hamburg, Germany. 21 Sep 2016-24 Sep 2016.

⁷³ Wang et al., PLoS One. 2016; vol. 11(4): e0153114.

⁷⁴ Hao et al., International Journal of Clinical и Experimental Pathology 2017, vol. 10(3), p. 3480-3487.

⁷⁵ Arnell et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 494-499.

⁷⁶ Sharma et al., Indian Journal of Gastroenterology 2017, vol. 36, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. A99. Abstract Number: M-20. Meeting Info: 58th Annual Conference of the Indian Society of Gastroenterology, ISGCON 2017. Bhubaneswar, India. 14 Dec 2017-17 Dec 2017.

⁷⁷ Beausеjour et al., Can J Gastroenterol. 2011, vol. 25(6), p. 311-314.

⁷⁸ Imagawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology и Nutrition 2016, vol. 63, Supp. Supplement 2, pp. S51. Abstract Number: 166. Meeting Info: World Congress of Pediatric Gastroenterology, Hepatology и Nutrition 2016. Montreal, QC, Canada. 05 Oct 2016-08 Oct 2016.

⁷⁹ Peng et al., Zhonghua er ke za zhi (Chinese journal of pediatrics) 2018, vol. 56, No. 6, pp. 440-444.

⁸⁰ Tibesar et al., Case Rep Pediatr. 2014, vol. 2014: 185923.

⁸¹ Ng et al., Journal of Pediatric Gastroenterology и Nutrition 2018, vol. 66, Supp. Supplement 2, pp. 860. Abstract Number: H-P-127. Meeting Info: 51st Annual Meeting European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology и Nutrition, ESPGHAN 2018. Geneva, Switzerland. 09 May 2018-12 May 2018.

⁸² Wong et al., Clin Chem. 2008, vol. 54(7), p. 1141-1148.

⁸³ Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p. 342-357.

⁸⁴ Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology и Nutrition. 60, vol. 3, p. 368-374.

⁸⁵ Scheimann et al., Gastroenterology 2007, vol. 132, No. 4, Suppl. 2, pp. A452. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/108th Annual Meeting of the American-Gastroenterological-Association. Washington, DC, USA. May 19 -24, 2007. Amer Gastroenterol Assoc; Amer Assoc Study Liver Dis; Amer Soc Gastrointestinal Endoscopy; Soc Surg Alimentary Tract.

⁸⁶ Jaquotot-Haerranz et al., Rev Esp Enferm Dig. 2013, vol. 105(1), p. 52-54.

⁸⁷ Khosla et al., American Journal of Gastroenterology 2015, vol. 110, No. Suppl. 1, pp. S397. Meeting Info.: 80th Annual Scientific Meeting of the American-College-of-Gastroenterology. Honolulu, HI, USA. October 16 -21, 2015.

⁸⁸ Drоge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p. 1253-1264.

⁸⁹ Liu et al., Liver International 2010, vol. 30(6), p. 809-815.

⁹⁰ Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p. 119-124.

⁹¹ U.S. Patent No. 9,295,677

В некоторых вариантах осуществления изобретения мутацию в ABCB11 выбирают из A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C, и R1268Q.

Обеспечивают способы лечения PFIC (например, PFIC-1 и PFIC-2) у пациента, которые включают проведение анализа образца, полученного от пациента, для определения, имеет ли пациент мутацию, ассоциированную с PFIC (например, мутацию ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 или Myo5b), и введение (например, специфическое или селективное введение) терапевтически эффективного количества соединения по формуле (I), или его фармацевтически приемлемой соли, пациенту, имеющему мутацию, ассоциированную с PFIC. В некоторых вариантах осуществления изобретения мутацией является мутация ATP8B1 или ABCB11. Например, мутация, как представлено в любой из таблиц 1-4. В некоторых вариантах осуществления изобретения мутацию в ATP8B1 выбирают из L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X, и G1040R. В некоторых вариантах осуществления изобретения мутацию в ABCB11 выбирают из A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C, и R1268Q.

Также обеспечивают способы лечения PFIC (например, PFIC-1 и PFIC-2) у пациента, нуждающегося в этом, способ включает: (a) определение у пациента мутации, ассоциированной с PFIC (например, мутации ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 или Myo5b); и (b) введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции, описанной в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления изобретения способы лечения PFIC могут включать введение терапевтически эффективного количества соединения по формуле (I), или его фармацевтически приемлемой соли пациенту, имеющему мутацию, ассоциированную с PFIC (например, мутацию ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 или Myo5b). В некоторых вариантах осуществления изобретения мутацией является мутация ATP8B1 или ABCB11. Например, мутация, как показано в любой из таблиц 1-4. В некоторых вариантах осуществления изобретения, мутацию в ATP8B1 выбирают из L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X, и G1040R. В некоторых вариантах осуществления изобретения мутацию в ABCB11 выбирают из A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C, и R1268Q.

В некоторых вариантах осуществления изобретения пациента определяют, как имеющего мутацию, ассоциированную с PFIC, у пациента или в образце биопсии от пациента, посредством применения любых тестов, имеющихся в области техники, включая секвенирование следующего поколения (NGS). В некоторых вариантах осуществления изобретения пациента определяют, как имеющего мутацию, ассоциированную с PFIC, с использованием одобренных руководящими органами, например, одобренных FDA тестов или анализов для идентификации мутации, ассоциированной с PFIC, у пациента или образца биопсии от пациента, или посредством проведения любого из неограничивающих примеров анализов, описанных в настоящем описании. Дополнительные способы диагностики PFIC описаны в Gunaydin, M. et al., Hepat Med. 2018, vol. 10, p. 95-104, включенном в виде ссылки полностью в настоящее описание.

В некоторых вариантах осуществления изобретения лечение PFIC (например, PFIC-1 или PFIC-2) снижает уровень желчных кислот сыворотки пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения уровень желчных кислот сыворотки определяют посредством, например, ферментативного анализа ELISA или анализов для определения общего количества желчных кислот, как описано в Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12(6): e0179200, который включен в виде ссылки в настоящее описание полностью. В некоторых вариантах осуществления изобретения уровень желчных кислот сыворотки может снижаться на, например, 10%-40%, 20%-50%, 30%-60%, 40%-70%, 50%-80%, или более чем на 90% от уровня желчных кислот сыворотки до введения композиции, описанной в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления изобретения, лечение PFIC включает лечение зуда.

В другом аспекте изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, как описано в настоящем описании, включающему стадию получения гомогенной водной суспензии одевиксибата. В предпочтительном варианте осуществления изобретения суспензию для нанесения оболочки получают посредством диспергирования одевиксибата в воде посредством мокрого помола.

В более специфическом варианте осуществления изобретения способ включает стадии:

увлажнения одевиксибата в воде с использованием гомогенизатора; и

диспергирования увлажненного одевиксибата в воде посредством мокрого помола, таким образом, получая гомогенную водную суспензию одевиксибата.

В некоторых вариантах осуществления изобретения одевиксибат просеивают до увлажнения стадии a).

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ дополнительно включает стадию добавления к суспензии пленкообразующего полимера. Пленкообразующий полимер может облегчать однородную дисперсию одевиксибата в суспензии. Пленкообразующий полимер может быть добавлен или до или после стадии мокрого помола. В некоторых вариантах осуществления изобретения мокрый помол является более эффективным в отсутствие пленкообразующего полимера. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, следовательно, пленкообразующий полимер добавляют к гомогенной водной суспензии одевиксибата, полученной на стадии (b).

Гомогенность суспензии для нанесения оболочки может быть проверена или до или после добавления пленкообразующего полимера. Когда размер агломератов одевиксибата может быть определен оптической микроскопией так, как описано в экспериментальном разделе, суспензия для нанесения оболочки не должна содержать агломератов крупнее, чем 200 мкм. Суспензия предпочтительно не содержит агломератов крупнее, чем 100 мкм, и более предпочтительно не содержит агломератов крупнее, чем 50 мкм. Когда размер агломератов определяют методиками рассеяния света, такими как LALLS, значение d₉₀ для распределения размера частиц суспензии для нанесения оболочки предпочтительно меньше чем 15 мкм, например, менее чем 14 мкм, например, менее чем 13 мкм, например, менее чем 12 мкм, например, менее чем 11 мкм, или например, менее чем 10 мкм.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения суспензия для нанесения оболочки не содержит поверхностно-активных веществ.

В другом аспекте изобретение относится к композиции, полученной любым из способов, описанных в настоящем описании.

Определения

Как используется в настоящем описании термины "лечение," "лечить," и "лечение" относятся к обратному развитию, облегчению, отсрочке развития или ингибированию прогрессирования заболевания или расстройства, или одного или более его симптомов, как описано в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления изобретения лечение может быть назначено после появления одного или более симптомов. В других вариантах осуществления изобретения лечение может быть назначено в отсутствие симптомов. Например, лечение может быть назначено предрасположенному индивиду до начала симптомов (например, в свете анамнеза симптомов и/или в свете генетических или других предрасполагающих факторов). Лечение также может быть продолжено после разрешения симптомов, например, для предотвращения или отсрочки их повторного развития.

Как используется в настоящем описании термин “фармацевтически приемлемый” относится к таким соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые подходят для человеческого фармацевтического применения и которые являются обычно безопасными, нетоксичными и не являются биологически или иным образом нежелательными.

Как используется в настоящем описании термин "около" относится к значению или параметру, которые включают (и описывают) варианты осуществления изобретения, которые относятся к такому значению или параметру, как таковому. Например, описание, относящееся к "около 20" включает описание "20." Числовые диапазоны являются включающими числа, ограничивающие диапазон. В общем говоря, термин "около" относится к указанному значению переменной и ко всем значениям переменной, которые находятся в пределах экспериментальной ошибки указанного значения (например, в рамках 95% доверительного интервала для среднего) или в рамках 10 процентов указанного значения, что больше.

Термин “кристаллическая модификация” относится к кристаллической твердой фазе органического соединения. Кристаллическая модификация может быть или сольватированной или несольватированной.

Термин “сольват” относится к кристаллической твердой фазе органического соединения, которое имеет растворитель (т.е. молекулы растворителя), включенный в его кристаллическую структуру. “Гидрат” представляет собой сольват, где растворителем является вода.

Термин “сексвигидрат” относится к гидрату, содержащему около 1,5 моль воды, ассоциированные с кристаллом на моль органического соединения (т.е., 1,5 гидрат). Как используется в настоящем описании, сексвигидрат включает от около 1,2 до около 1,8, более предпочтительно от около 1,3 до около 1,7, более предпочтительно от около 1,4 до около 1,6 и еще более предпочтительно от около 1,45 до около 1,55 моль воды, ассоциированной с каждым молем одевиксибата в кристалле. Количество воды, рассчитанное в настоящем описании, исключает воду, адсорбированную на поверхности кристалла.

Термин “смешанный сольват” относится к кристаллической солидной фазе органического соединения, которая имеет две или более молекул различных растворителей, включенных в кристаллическую структуру. Одной из по меньшей мере двух молекул растворителя может быть вода.

Термин “взвесь” относится к насыщенному раствору, к которому добавляют избыток твердого вещества, таким образом, формируя смесь твердого вещества и насыщенного раствора.

Как используется в настоящем описании термин “объем пустот” относится к каналам, слоям или другим более или менее изолированным пустотам в кристаллической структуре.

Кристалличность кристаллического образца одевиксибата может быть измерена, например, методами дифракции рентгеновских лучей на порошке (XRPD) или методами дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), такими как метод, описанный в экспериментальном разделе. Когда в настоящем описании делают ссылку на кристаллическое соединение, предпочтительно кристалличность, измеренная методами DSC, больше чем около 70%, например, более чем около 80%, в особенности более чем около 90%, точнее более чем около 95%. В некоторых вариантах осуществления изобретения степень кристалличности, измеренная методами DSC, составляет более чем около 98%. В некоторых вариантах осуществления изобретения, степень кристалличности, измеренная методами DSC, составляет более чем около 99%. % кристалличности относится к проценту по массе общей массы образца, который является кристаллом.

Далее изобретение будет описано следующими примерами, которые не ограничивают изобретение в каком-либо отношении. Все цитированные документы и ссылки, упомянутые в настоящем описании, включены в виде ссылки полностью.

Список сокращений

DMF диметилформамид

DMSO диметилсульфоксид

EtOH этанол

MeOH метанол

ОВ - относительная влажность

2-PrOH 2-пропанол

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ

Анализ дифракции рентгеновских лучей на порошке (XRPD)

Анализы проводили при 22°C на дифрактометре PANalytical XPert Pro, снабженном длинной тонкой фокусирующей рентгеновские лучи трубкой из Cu и PIXcel детектором. Автоматическую дивергенцию и противорассеивающие фильтры использовали вместе с Soller фильтрами 0,02 рад и Ni-фильтром. Высушенные образцы растирали на нарезанных держателях Silicon Zero Background (ZBH) и анализировали между 2-40° в 2-тета с временем анализа 17 минут. Все образцы взвеси капали на субстраты закаленного пористого фильтра оксида алюминия и анализировали дважды при высыхании, сначала со сканированием одну минуту 16-секунд (2-30° в 2-тета) и затем со сканированием 7-минут (2-30° в 2-тета). Окончательное 17-минутное сканирование проводили, когда образец высыхал в течение нескольких часов.

Образцы формовали во время анализа с целью увеличения случайности образца. Использовали следующие экспериментальные условия:

Напряжение и ток рентгеновской трубки: 40 кВт, 50 мА

Длина волны альфа1 (CuKα1): 1,5406 Å

Длина волны альфа 2 (CuKα2): 1,5444 Å

Средняя длина волны альфа 1 и альфа2 (CuKα): 1,5418 Å

Известно в области техники, что может быть получена рентгеновская порошковая дифрактограмма, имеющая одну или более ошибок измерения в зависимости от условий измерения (таких как оборудование, подготовка порошка или используемый прибор). В частности, общеизвестно, что интенсивность дифрактограммы XRPD может колебаться в зависимости от условий измерения и подготовки образца. Например, специалист в области техники XRPD понимает, что относительная интенсивность пиков может варьироваться в соответствии с ориентацией образца в тесте и от типа и установок используемого прибора. Специалист также понимает, что на положение рефлексов может влиять точная высота, на которой образец установлен в дифрактометр, и нулевая калибровка дифрактометра. Плоскость поверхности образца также может оказывать небольшой эффект. Так как специалист в области техники понимает, что дифрактограммы, представленные в настоящем описании, не расцениваются как абсолютные, и любая кристаллическая форма, которая обеспечивает рентгеновскую порошковую дифрактограмму, по существу идентичную таковой, описанной в настоящем описании, попадает в рамки настоящего описания (для дополнительной информации см. R. Jenkins и R.L. Snyder, “Introduction to X-ray powder diffractometry”, John Wiley & Sons, 1996).

Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC)

Эксперименты проводили с использованием дифференциального сканирующего калориметра TA Instruments Q2000. Используемым DCS тигелем был TZero алюминиевый поддон с отверстием (диаметр ≥0,2 мм) в крышке. Сухой азот, пропускаемый с постоянной скоростью тока 50 мл/мин, поддерживали в ячейке DSC на всем протяжении измерения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

Получение композиции (небольшой масштаб)

Сферы из микрокристаллической целлюлозы покрывали одной из двух суспензий для нанесения оболочки одевиксибата, как указано в таблице 5 ниже, для получения частиц, содержащих или 0,5% масс/масс или 1,5% масс/масс одевиксибата.

Таблица 5

Ингредиент	Количество (г/партию)	Количество (г/партию)
Ядро: Ядра микрокристаллическо целлюлозы 700 (Vivapur® MCC sphere 700)	1500	1500
Оболочка: Одевиксибат Гипромеллоза 3 мПа.с (Methocel® E3 premium)	7,5 30,0	22,5 90,0
Очищенная вода^а	337,5	1012,5
Всего (покрытые оболочкой частицы)	1537,5	1612,5

^a Очищенную воду удаляют во время процесса нанесения оболочки и сушки.

Использовали кристаллический одевиксибат. Типичные значения для распределения размеров частиц кристаллического материала составили d₁₀=0,9 мкм, d₅₀=4 мкм и d₉₀=20 мкм, где d₁₀, d₅₀ и d₉₀ определяли, как диаметры, где 10%, 50% и 90%, соответственно, популяции частиц лежит между этими значениями.

Суспензия для нанесения оболочки

Суспензию для нанесения оболочки, содержащую лекарственное вещество одевиксибат, получали в три стадии:

а) Суспензия Одевиксибата: лекарственное средство одевиксибат просеивали через сито 0,5 мм, с последующим увлажнением в небольшом количестве воды с использованием гомогенизатора (Ultra Turrax T25; 15 минут при приблизительно 6600-7000 об/мин). Полученное увлажненное лекарственное вещество одевиксибат затем диспергировали в воде с помощью коллоидной мельницы (IKA Magic Lab MKO или MK модули, 14600 об/мин в течение 20 минут, размер петли 1,5 вращения) до того, как размер агломератов будет соответствовать контрольным лимитам приемлемости.

b) Дисперсия гипромеллозы: гипромеллозу (3 мПа.с) диспергировали в горячей воде при перемешивании и полученную дисперсию охлаждали до комнатной температуры.

c) Суспензия Одевиксибата для нанесения оболочки: дисперсию гипромеллозы добавляли к суспензии одевиксибата в коллоидной мельнице и суспензию перемешивали в течение 4 минут при 10000 об/мин. Окончательное смешивание продолжали при низкой скорости с использованием магнитной мешалки. Суспензию одевиксибата для нанесения оболочки фильтровали через 0,5 мм сито до использования в процессе нанесения оболочки.

Дисперсию одевиксибата в суспензии для нанесения оболочки отслеживали оптической микроскопией с использованием метода на основании European Pharmacopoeia 9.0, monograph 2.9.37, который корректировали для применимости с суспензией одевиксибата для нанесения оболочки. Использовали Микроскоп Leica DMLB, снабженный цифровой камерой Leica DMC 2900, и объективом с 10x увеличением.

Образцы получали посредством помещения небольшой капли суспензии для нанесения оболочки (с использованием пипетки Пастера) на пустое предметное стекло на поверхности щелевой счетной камеры с тестовыми полями 4×4. Покровное стекло (около 18×18 мм, того же размера, что и координатная сетка, помещали на каплю и немного надавливали в центре для получения тонкого ровного образца. Диаметр образца был сравнимым с размером покровного стекла.

Объектив устанавливали с увеличением x10 и измерительную линейку устанавливали на 100 мкм. Сканировали пять реплик. Размер любого агломерата проверяли посредством сравнения их с линейкой в четырех заранее определенных тестовых полях для каждого репликата. Общее количество агломератов рассчитывали из 5 репликатов×4 тестируемых полей, т.е. всего 20 тестируемых полей. Суспензию для нанесения оболочки принимали, если 20 тестовых полей не содержали более чем 5 агломератов ≥50 мкм, и не было агломератов ≥200 мкм.

Процесс нанесения оболочки

Сферы микрокристаллической целлюлозы (MCC) покрывали оболочкой с использованием суспензии одевиксибата для нанесения оболочки в устройстве для нанесения оболочки в псевдоожиженном слое с вставкой Вурстера. Количество суспензии для нанесения оболочки на сферы MCC определяли взвешиванием. Покрытые оболочкой частицы просеивали через сито 0,5 мм и 1,25 мм, соответственно с целью удаления мелких частиц, а также пар. Затем частицы переносили в контейнер для насыпных грузов и обрабатывали, как промежуточный продукт лекарственного средства.

Заполнение капсул

Рассчитанное количество частиц, требуемое для каждой стандартной лекарственной формы, заполняли в твердые капсулы из гидроксипропилметилцеллюлозы (HPMC) (размер 0 или размер 3) с использованием автоматического наполнителя капсул для получения четырех различных дозировок: 200, 400, 600 и 1200 мкг.

Дозировки 200 и 600 мкг представляют собой белые капсулы размера 0, содержащие 40 мг частиц, имеющих концентрацию одевиксибата 0,5% масс/масс и 1,5% масс/масс, соответственно. Такие дозировки используются для пациентов с диапазоном массы тела от 5,0 кг до <19,5 кг в низко- (40 мкг/кг) и высоко- (120 мкг/кг) дозируемых группах клинических исследований 3 фазы. Капсулы 0 размера сделаны так, чтобы их можно было открыть, так, чтобы содержимое можно было высыпать на пищевой носитель для введения. Они не предназначены для проглатывания интактными.

Дозировки 400 мкг и 1200 мкг представляют собой белые капсулы 3 размера, содержащие 80 мг частиц, имеющих концентрацию одевиксибата 0,5% масс/масс и 1,5% масс/масс, соответственно. Такие дозировки используются для пациентов с диапазоном массы тела от 19,5 кг до >55,5 кг в низко- (40 мкг/кг) и высоко- (120 мкг/кг) дозируемых группах клинических исследований 3 фазы. Капсулы 3 размера предназначены для проглатывания интактными.

Масса заполнения, количества одевиксибата и других ингредиентов и размер капсул для капсул с различными дозировками показаны в таблице 6 ниже.

Таблица 6

Компонент	Дозировка
	200 мкг	400 мкг	600 мкг	1200 мкг
Концентрация одевиксибата частиц	0,5% масс/масс		1,5% масс/масс
Масса заполнения (мг) (теоретическая)	40	80	40		80
Частицы Сферы микрокристаллической целлюлозы 700 (Vivapur® MCC sphere 700)	39	78	37		74
Одевиксибат	0,200	0,400	0,600		1,200
Гипромеллоза 3 мПа.с (Methocel® E3 Premium)	0,8	1,6	2,4		4,8
Капсула Капсулы из гипромеллозы, белые (Vcaps® Plus)	Размер 0	Размер 3	Размер 0		Размер 3

Пример 2

Получение композиции (более крупные масштабы)

Сферы микрокристаллической целлюлозы покрывали оболочкой из двух различных суспензий одевиксибата для нанесения оболочки, как показано в таблице 7 ниже, для получения частиц, содержащих или 0,5% масс/масс или 1,5% масс/масс одевиксибата.

Таблица 7

Ингредиент	Количество (кг/партию)	Количество (кг/партию)
Ядро: Сферы микрокристаллической целлюлозы 700 (Vivapur® MCC sphere 700)	14,625	13,875
Оболочка: Одевиксибат Гипромеллоза 3 мПа.с (Methocel® E3 Premium)	0,075 0,300	0,225 0,900
Очищенная вода^а	3,375	10,125
Всего (покрытые оболочкой частицы)	15,000	15,000

Использовали кристаллический одевиксибат. Типичные значения для распределения размера частиц кристаллического материала составили d₁₀=0,9 мкм, d₅₀=4 мкм и d₉₀=20 мкм, где d₁₀, d₅₀ и d₉₀ определяют, как диаметры, где 10%, 50% и 90%, соответственно, популяции частиц находятся ниже этих значений.

Суспензия для нанесения оболочки

а) Суспензия одевиксибата: лекарственное вещество одевиксибат увлажняли в небольшом количестве воды с использованием гомогенизатора (Ultra Turrax T25; 15 минут при приблизительно 6600-7000 об/мин). Полученное увлажненное лекарственное вещество одевиксибат затем диспергировали в воде посредством коллоидной мельницы (IKA Magic Lab MKO или MK модули, 14600 об/мин в течение 20 минут, размер петли 1,5 вращения) до того, как уровень агломератов соответствовал контрольным пределам приемлемости в процессе, т.е. d₉₀ <12 мкм (что определяли рассеянием лазерного излучения под низким углом (LALLS)).

c) суспензия одевиксибата для нанесения оболочки: дисперсию гипромеллозы добавляли к суспензии одевиксибата и суспензию перемешивали. Окончательное перемешивание продолжали при низкой скорости с использованием мешалки. Суспензию одевиксибата для нанесения оболочки фильтровали через 0,5 мм сито перед применением в процессе нанесения оболочки.

Процесс нанесения оболочки

Полученную суспензию одевиксибата использовали для покрытия оболочкой сфер микрокристаллической целлюлозы (MCC) в соответствии со способом нанесения оболочки, описанным в примере 1.

Заполнение капсул

Капсулы получали в соответствии с примером 1. Масса заполнения, количество одевиксибата и других ингредиентов и размер капсул для различных дозировок капсул были, как представлено в таблице 5 выше.

Пример 3

Получение кристаллической модификации 1

Абсолютный спирт (100,42 кг) и сырой одевиксибат (18,16 кг) загружали в 250-л GLR с перемешиванием в атмосфере азота. Очищенную воду (12,71 кг) добавляли и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при 25±5°C в течение 15 минут. Перемешивание продолжали при 25±5°C в течение 3-60 минут до образования прозрачного раствора. Раствор фильтровали через 5,0 µ SS картридж фильтра, с последующим 0,2 µ PP картридж фильтром и затем переносили на чистый реактор. Очищенную воду (63,56 кг) добавляли медленно в течение периода 2-3 часа при 25±5°C, и раствор затравливали кристаллической модификацией 1 одевиксибата. Раствор перемешивали при 25±5°C в течение 12 часов. В течение этого времени раствор становился мутным. Осажденное твердое вещество фильтровали через центрифугу, и материал вращательно сушили в течение 30 минут. После этого материал сушили в вакууме в фильтре Nutsche в течение 12 часов. Затем материал сушили в полочной вакуум сушилке при 25±5°C в вакууме (550 мм рт ст) в течение 10 часов и затем при 30±5 °C в вакууме (550 мм рт ст) в течение 16 часов. Материал выделяли в виде не совсем белого кристаллического твердого вещества. Выделенный кристаллический материал измельчали и хранили в LDPE пакетах.

Гипергидратированный образец анализировали XRPD и дифрактограмма показана на фиг. 2. Другой образец сушили при 50°C в вакууме и после этого анализировали XRPD. Дифрактограмма высушенного образца показана на фиг. 1.

Дифрактограммы для сушки образца показаны на фиг. 3 и 4 для 2Ɵ диапазонов 5-13° и 18-25°, соответственно (гипергидратированный образец внизу и сухой образец наверху).

Пример 4

Получение кристаллической модификации 2 из этанола и воды

105,9 мг одевиксибата взвешивали в 1 мл сосуде Chromacol. Магнитную мешалку и 1,0 мл смеси этанол:вода 70:30%об/об добавляли и сосуд закрывали профилированной крышкой. Полученную взвесь затем оставляли перемешиваться при 25°C в течение 1 недели.

Влажный образец анализировали XRPD и дифрактограмма показана на фиг. 5. После сушки образца, он трансформировался в кристаллическую модификацию 1.

Пример 5

Определение кристаллической фракции дифференциальной сканирующей калориметрией

Данный способ количественно оценивает кристаллическую фракцию лекарственного вещества одевиксибата в частично кристаллических образцах. Количественная оценка основана на допущении, что частично кристаллические образцы представляют собой бинарные смеси кристаллического гидрата и аморфной фазы одевиксибата. Кристаллическую фракцию оценивают количественно на основании энтальпии плавления безводной формы. Такая безводная форма представляет собой дегидратированный гидрат, который спонтанно и воспроизводимо образуется посредством сушки гидрата при повышенной температуре.

5-6 мг образца кристаллического или частично кристаллического образца одевиксибата точно взвешивали в горн DSC, который затем закрывали перфорированной крышкой с использованием подходящего пресса. Общую массу горна DSC (поднос+крышка+образец) отмечали и общую массу горна снова определяли после DSC теста. Потеря массы во время DSC теста не должна быть более чем 5%.

Тест DSC состоит из трех циклов:

Цикл 1: увеличение температуры с 20°C до 120°C при скорости сканирования 5°C/мин;

Цикл 2: снижение температуры с 120°C до 80° со скоростью сканирования 10°C/мин; и

Цикл 3: увеличение температуры с 80°C до 200°C при скорости сканирования 10°C/мин.

Первый цикл сканирования сушит образец и посредством этого преобразует гидратированную форму в дегидратированный гидрат (безводную форму). Во втором цикле сканирования образец охлаждается для получения стабильной основы для последующего нагревания для интеграции сигнала. Энтальпию плавления определяют в третьем цикле сканирования, когда образец нагревают посредством плавления безводной формы.

Эндотермическое событие из-за плавления появляется в диапазоне температур 140-165°C. Пик должен быть интегрирован в сигмовидную касательную исходную с использованием функции интеграции Sig Tangent программного обеспечения TA Universal Analysis. Интеграция должна начинаться при температуре от 130°C до 140°C, и заканчиваться при температуре от 165°C до 175°C, в зависимости от точного исходного. Стеклование аморфной части может развиваться в диапазоне температур 120-130°C, в зависимости от точной аморфной фракции (см. фиг. 6 для примера). Если неравномерное исходное не позволяет интеграцию, ее необходимо оценивать, когда сушка образца была неполной.

Оценку энтальпии плавления осуществляют с использованием сухой массы образца, которую получают посредством вычитания общей массы горна DSC (поднос+крышка+образец) после теста DSC из общей массы горна до теста. Процент потери массы во время DSC сканирования, который представляет собой разницу между исходной массой и сухой массой, поделенной на исходную массу, должен быть не более чем 5%; иначе кристаллическое содержимое образца не может быть рассчитано.

Кристаллическая фракция, выражаемая в процентах по массе, должна рассчитываться из энтальпии плавления (ΔH_{образца}) на основании следующей формулы. Значение необходимо давать по целому числу.

Пример 6

Гомогенность, отслеживаемая посредством LALLS

Гомогенность суспензий одевиксибата для нанесения оболочки исследовали с использованием рассеяния лазерного излучения под низким углом (LALLS). Три суспензии одевиксибата для нанесения оболочки, предназначенные для частиц, содержащих 0,5% масс/масс одевиксибата, получали посредством диспергирования лекарственного вещества одевиксибата (16 г) в воде (200 г) с помощью гомогенизатора Ultra Turrax в течение 7 минут. Когда лекарственное вещество диспергировалось, гомогенизатор запускали в течение дополнительных 8 минут. Затем гомогенизатор промывали водой (216 г), которую добавляли к суспензии.

Суспензии одевиксибата затем диспергировали с использованием мельницы для мокрого измельчения (IKA Magic Lab и MK модуль), с использованием установок, представленных в таблице 8. Methocel E3 диспергировали в горячей воде (85-90°C) при перемешивании воздушной мешалкой и затем охлаждали при комнатной температуре. Концентрацию доводили до 17,4% масс/масс посредством добавления воды.

368 г геля Methocel загружали в суспензию одевиксибата и перемешивали с использованием мельницы для мокрого помола в течение еще 4 минут при 10000 об/мин. Температуру суспензии проверяли во время процесса. Гомогенность суспензии одевиксибата отслеживали посредством LALLS через 0, 5, 10, 15 и 20 минут времени рециркуляции. Данные представлены в таблице 9.

Таблица 8

N суспензии	1	2	3
Дисперсия (Ultra Turrax) Время (мин) Скорость (об/мин)
Дисперсия (Ultra Turrax) Время (мин) Скорость (об/мин)	15 6800-8000	15 7600-8000	15 6600-8000
Дисперсия (мельница для мокрого помола) Петля (вращения) Время (мин) Скорость (об/мин)
	1,5 20 14600	1,5 20 14600	1,0 20 14600
Охлаждение (МК модуль) Установленная температура (°С)	НП	25	10
Температура (°С) суспензии для нанесения оболочки после 20 минут мокрого помола	72	50	55

Таблица 9

No суспензии	Время рециркуляции (мин)	LALLS (мкм)			Комментарии
No суспензии	Время рециркуляции (мин)	d ₁₀	d ₅₀	d ₉₀
1	0	1,5	5,5	17,9
	5	1,1	3,9	10,5
	10	1,2	3,9	9,3
	15	2,4	5,2	11,3
	20	1,8	4,1	8,8	Образец брали после добавления Methocel
	20	1,6	3,9	8,7	Образец брали после 5 дней хранения при комнатной температуре при магнитном перемешивании
2	0	1,5	6,5	29,1
	5	1,2	4,3	11,4
	10	1,1	3,8	9,3
	15	1,1	3,6	8,5
	20	1,0	3,5	8,2	Образец брали, когда завершался мокрый помол
	20	1,1	3,7	8,6	Образец брали после добавления Methocel
3	0	нп	нп	нп
	5	0,9	3,4	8,8
	10	0,9	3,2	7,7
	15	1,1	3,7	8,5
	20	1,1	3,8	8,9	Образец брали, когда завершался мокрый помол
	20	1,0	3,4	8,0	Образец брали после добавления Methocel

Пример 7

Однородность содержимого

Пеллеты двух различных дозировок, 0,5% масс/масс и 1,5% масс/масс, получали, как описано в примере 1. Количество одевиксибата в капсуле определяли для 30 капсул с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ). Подвижная фаза: 40:60 ацетонитрил:ацетатный буфер pH 5,5; скорость тока 1,5 мл/мин; колонка: Zorbax SB-CN (50×4,6 мм, 3,5 мкм). Оцениваемое количество одевиксибата и гомогенность содержимого представлены в таблице 10.

Таблица 10

Концентрация одевиксибата в частицах	0,5% масс/масс	1,5% масс/масс	0,5% масс/масс
Анализ (мг/г)	4,98	14,2	4,88
Гомогенность содержимого: RSD% (n=30)	1,6	0,8	1,4

Пример 8

Тестирование стабильности при низком pH

Совместимость между частицами, покрытыми одевиксибатом, и йогуртом, яблочным пюре или фруктовым пюре оценивали посредством насыпания около 40 мг покрытых оболочкой частиц, содержащих 0,5% масс/масс одевиксибата (соответствующих одной капсуле 200 мкг) на 1 столовую ложку пищи и определения восстановления в течение периода 120 минут. Восстановление одевиксибата определяли с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ). Подвижная фаза: 40:60 ацетонитрил:ацетатный буфер pH 5,5; скорость тока 1,5 мл/мин; колонка: Zorbax SB-CN (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

Восстановление для всех образцов пищи варьировалось от 95% до 101% без изменений с течением времени. Визуальная оценка заключила, что частицы были интактными в течение до 6 часов для всех образцов; не наблюдали цветовых различий и растворенных частиц. Результаты подтверждают, что пациенты, которые насыпают частицы на пищу, получат назначенную дозу. Резюме по тестируемой пище представлено в таблице 11, и результаты тестирования восстановления представлены в таблице 12 (яблочное пюре), таблице 13 (йогурт смузи), и таблице 14 (фруктовое пюре).

Таблица 11

Пища	Торговая марка	рН	Ингредиенты
Яблочное пюре	Eldorado	3,7	Яблоко 92%, сахар 7%, антиоксидант (аскорбиновая кислота), консерванты (Е202)
Йогурт смузи	Semper	3,9	Банан 42%, клубника 30%, йогурт (термообработанный) 20%, вода, кукурузный крахмал, концентрат сока черноплодной рябины, концентрат лимонного сока, антиоксидант (аскорбиновая кислота)
Фруктовое пюре	Semper	3,9	Вода, апельсиновый сок (из концентрата) 23%, яблоко 20%, банан 15%, рисовый крахмал, витамин С, железо

Таблица 12

Время (мин)	Масса добавленных частиц (мг)	Номинальное количество одевиксибата (мкг)	Анализ одевиксибата (мкг)	Восстановление (%)	Среднее (%)
0	39,58	201,07	199,35	99,1	99
0	42,35	215,14	212,28	98,7	99
15	40,37	205,08	187,29	91,3	96
15	40,37	205,08	205,37	100,1	96
30	41,21	209,35	206,45	98,6	98
30	39,97	203,05	197,70	97,4	98
60	40,50	205,74	198,14	96,3	97
60	40,20	204,22	199,99	97,9	97
120	39,61	201,22	199,22	99,0	98
120	40,12	203,81	199,65	98,0	98

Таблица 13

Время (мин)	Масса добавленных частиц (мг)	Номинальное количество одевиксибата (мкг)	Анализ одевиксибата (мкг)	Восстановление (%)	Среднее (%)
0	42,07	213,72	213,60	99,9	99
0	42,38	215,29	209,17	97,2	99
15	41,24	209,50	206,01	98,3	97
15	40,42	205,33	195,58	95,2	97
30	40,70	206,76	199,48	96.5	96
30	41,96	213,16	203,30	95,4	96
60	40,39	205,18	197,33	96,2	96
60	39,38	200,05	192,06	96,0	96
120	40,99	208,23	199,05	95,6	96
120	39,42	200,25	192,38	96,1	96

Таблица 14

Время (мин)	Масса добавленных частиц (мг)	Номинальное количество одевиксибата (мкг)	Анализ одевиксибата (мкг)	Восстановление (%)	Среднее (%)
0	43,57	221,34	188,05	85,0	95
0	37,79	191,97	200,25	104,3	95
15	39,74	201,88	194,86	96,5	101
15	39,34	199,85	209,63	104,9	101
30	41,72	211,94	203,61	96,1	101
30	41,77	212,19	226,27	106,6	101
60	42,25	214,63	208,02	96,9	96
60	43,39	220,42	210,74	95,6	96
120	39,05	198,37	196,18	98,9	97
120	40,33	204,88	196,19	95,8	97

Основным путем деградации, ожидаемым для частиц одевиксибата, при смешивании с установленными пищевыми носителями для введения, является кислый гидролиз дипептидного компонента. Для оценки химической стабильности частиц одевиксибата 1 мл фосфатного буфера pH 3,0 добавляли к около 200 мг частиц, содержащих 0,5% масс/масс одевиксибата (т.е. содержимое пяти 200 мкг капсул) и оставляли при комнатной температуре в течение 2 часов. Деградации не наблюдали.

Пример 9

Исследование длительной стабильности

Капсулы одевиксибата размера 0 и размера 3, полученные в соответствии с примером 1, хранили в HDPE бутыли с HDPE крышкой и держали при 25°C и 60% относительной влажности в качестве условий длительного хранения и при 40°C и 75% относительной влажности в качестве ускоренных условий. Количества одевиксибата, связанных веществ и воды определяли после 1, 3, 6, 9 и 12 месяцев для образцов, хранимых при 25°C/60% ОВ, и после 1, 3, и 6 месяцев для образцов, хранимых при 40°C/75% ОВ. Результаты для капсул дозировки 200 мкг (размер 0) представлены в таблице 15; для капсул дозировки 600 мкг (размер 0) в таблице 16; для капсул дозировки 400 мкг (размер 3) в таблице 17; и для капсул дозировки 1200 мкг (размер 3) в таблице 18.

Тест	Критерии приемлемости	Условия хранения	Период хранения (месяцы)
Тест	Критерии приемлемости	Условия хранения	0	1	3	6	9	12
Описание	Белая продолговатая твердая капсулы, содержащая пеллеты от белого до не совсем белого цвета	25°С/60% ОВ	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует
Описание		40°С/75% ОВ	Соответствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует
Анализ	180-220 мкг/капсулу	25°С/60% ОВ	207	205	206	204	209	207
Анализ	180-220 мкг/капсулу	40°С/75% ОВ	207	206	206	205
Связанные вещества, всего	≤4,0%	25°С/60% ОВ	0,53	0,51	0,48	0,47	0,55	0,57
Связанные вещества, всего	≤4,0%	40°С/75% ОВ	0,53	0,44	0,63	0,90
растворение	Q=75% через 45 мин	25°С/60% ОВ	104	101	102	102	106	106
растворение	Q=75% через 45 мин	40°С/75% ОВ	104	99	102	101
Содержание воды	Сообщаемый (%)	25°С/60% ОВ	3,3	НТ	НТ	3,5	НТ	4,3
Содержание воды	Сообщаемый (%)	40°С/75% ОВ	3,3	НТ	НТ	4,5

Таблица 15. Данные стабильности для капсул дозировки 200 мкг

Таблица 16. Данные стабильности для капсул с дозировкой 600 мкг.

Тест	Критерии приемлемости	Условия хранения	Период хранения (месяцы)
Тест	Критерии приемлемости	Условия хранения	0	1	3	6	9	12
Описание	Белая продолговатая твердая капсула, содержащая пеллеты от белого до не совсем белого цвета	25°С/60% ОВ	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует
Описание		40°С/75% ОВ	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует
Анализ	540-660 мкг/капсулу	25°С/60% ОВ	576	600	596	597	603	599
Анализ	540-660 мкг/капсулу	40°С/75% ОВ	576	599	612	601
Связанные вещества, всего	≤4,0%	25°С/60% ОВ	0,53	0,52	0,47	0,44	0,43	0,41
Связанные вещества, всего	≤4,0%	40°С/75% ОВ	0,53	0,45	0,48	0,73
растворение	Q=75% через 45 мин	25°С/60% ОВ	99	99	100	97	102	106
растворение	Q=75% через 45 мин	40°С/75% ОВ	99	100	99	96
Содержание воды	Сообщаемый (%)	25°С/60% ОВ	3,4	НТ	НТ	3,3	НТ	4,4
Содержание воды	Сообщаемый (%)	40°С/75% ОВ	3,4	НТ	НТ	4,4

Таблица 17. Данные стабильности для капсул с дозировкой 400 мкг.

Тест	Критерии приемлемости	Условия хранения	Период хранения (месяцы)
Тест	Критерии приемлемости	Условия хранения	0	1	3	6	9	12
Описание	Белая продолговатая твердая капсула, содержащая пеллеты от белого до не совсем белого цвета	25°С/60% ОВ	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует
Описание		40°С/75% ОВ	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует
Анализ	360-440 мкг/капсулу	25°С/60% ОВ	397	395	397	400	396	399
Анализ	360-440 мкг/капсулу	40°С/75% ОВ	397	394	392	398
Связанные вещества, всего	≤4,0%	25°С/60% ОВ	0,63	0,51	0,47	0,57	0,57	0,59
Связанные вещества, всего	≤4,0%	40°С/75% ОВ	0,63	0,42	0,55	0,83
растворение	Q=75% через 45 мин	25°С/60% ОВ	100	99	99	99	102	99
растворение	Q=75% через 45 мин	40°С/75% ОВ	100	100	101	99
Содержание воды	Сообщаемый (%)	25°С/60% ОВ	3,7	НТ	НТ	3,1	НТ	4,2
Содержание воды	Сообщаемый (%)	40°С/75% ОВ	3,7	НТ	НТ	4,3

Таблица 18. Данные стабильности для капсул с дозировкой 1200 мкг.

Тест	Критерии приемлемости	Условия хранения	Период хранения (месяцы)
Тест	Критерии приемлемости	Условия хранения	0	1	3	6	9	12
Описание	Белая продолговатая твердая капсула, содержащая пеллеты от белого до не совсем белого цвета	25°С/60% ОВ	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует
Описание		40°С/75% ОВ	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует	Соот-ветствует
Анализ	1080-1320 мкг/капсулу	25°С/60% ОВ	1191	1194	1174	1169	1196	1175
Анализ	1080-1320 мкг/капсулу	40°С/75% ОВ	1191	1200	1192	1191
Связанные вещества, всего	≤4,0%	25°С/60% ОВ	0,53	0,51	0,48	0,46	0,44	0,51
Связанные вещества, всего	≤4,0%	40°С/75% ОВ	0,53	0,55	0,51	0,63
Растворение	Q=75% через 45 мин	25°С/60% ОВ	99	97	99	99	98	98
Растворение	Q=75% через 45 мин	40°С/75% ОВ	99	101	100	98
Содержание воды	Сообщаемый (%)	25°С/60% ОВ	3,5	НТ	НТ	3,0	НТ	4,1
Содержание воды	Сообщаемый (%)	40°С/75% ОВ	3,5	НТ	НТ	4,3

Пример 10

Однородность смеси пеллет

Частицы двух различных дозировок, 0,5% масс/масс и 1,5% масс/масс, получали, как описано в примере 2. Просеянные пеллеты собирали в 55 л барабан, выстланный PE пакетом. Пеллеты забирали из 10 различных мест барабана с помощью пипетки для отбора образцов с наконечником 0,25 мл. Средний образец из каждого положения составил 80 мг, соответствуя содержимому двух капсул размера 0 по 200 мкг или 600 мкг или одной капсуле размера 3 по 400 мкг или 1200 мкг. Содержание одевиксибата определяли посредством ОФ-ВЭЖХ: подвижная фаза A: 80:20 буфер ацетат аммония pH 5,7/ацетонитрил; подвижная фаза B: 20:80 буфер ацетат аммония pH 5,7/ацетонитрил; скорость тока 0,40 мл/мин; колонка: Waters Acquity BEH C8°100×2,1 мм, 1,7 мм; градиент: 0 мин: 60% A: 40% B, 12 мин: 20% A: 80% B, 13,5 мин: 20% A: 80% B, 13,6 мин: 60% A: 40% B, 15 мин: 60% A: 40% B. Оцениваемое количество одевиксибата и однородность содержимого представлены в таблице 19.

Таблица 19

Образец	Анализ одевиксибата (% отмеченного в инструкции)
Образец	0,5% масс/масс	1,5% масс/масс
1	101,7	99,5
2	97,6	101,7
3	98,8	101,1
4	100,8	101,5
5	100,4	97,7
6	99,7	98,5
7	100,4	102,7
8	99,5	103,5
9	98,4	102,5
10	99,5	100,6
Среднее	99,7	100,9
мин	97,6	97,7
Макс	101,7	103,5
RSD(%)	1,2	1,9

Claims

1. Фармацевтическая композиция одевиксибата для лечения или профилактики билиарно-зависимого заболевания печени, где указанная композиция включает множество частиц, где каждая частица имеет размер от около 0,5 до около 1,25 мм и содержит

а) ядро и

б) слой оболочки, окружающий ядро, где слой оболочки содержит одевиксибат или его фармацевтически приемлемую соль и пленкообразующий полимер, выбранный из полимера на основе целлюлозы, где значение d₉₀ для распределения размера частиц агломератов одевиксибата в слое оболочки составляет менее 15 мкм; где каждая частица содержит одевиксибат или его фармацевтически приемлемую соль в количестве от около 0,5 до около 1,5% мас./мас. в расчете на общую массу частицы, где каждая частица композиции содержит по существу одинаковое количество одевиксибата, где фармацевтическая композиция содержит эффективное количество одевиксибата и где термин “около” относится к указанному значению переменной и ко всем значениям переменной, которые находятся в рамках 10 процентов от указанного значения.

2. Композиция по п. 1, где каждая частица содержит одевиксибат или его фармацевтически приемлемую соль в количестве около 0,5% мас./мас. в расчете на общую массу частицы.

3. Композиция по п. 1, где каждая частица содержит одевиксибат или его фармацевтически приемлемую соль в количестве около 1,5% мас./мас. в расчете на общую массу частицы.

4. Композиция по любому из пп. 1-3, где ядро не содержит одевиксибат.

5. Композиция по п. 4, где ядро включает микрокристаллическую целлюлозу.

6. Композиция по любому из пп. 1-5, где слой оболочки включает пленкообразующий полимер, выбранный из гипромеллозы.

7. Композиция по любому из пп. 1-6, где слой оболочки распыляют на ядра в виде гомогенной суспензии одевиксибата в воде.

8. Композиция по п. 7, где гомогенную суспензию получают посредством диспергирования одевиксибата в воде посредством мокрого помола.

9. Композиция по п. 7 или 8, где гомогенная суспензия не содержит агломератов одевиксибата крупнее, чем 200 мкм.

10. Композиция по любому из пп. 1-9, где слой оболочки не содержит поверхностно-активное вещество.

11. Композиция по любому из пп. 1-10, где частицы имеют размер от около 0,5 до около 1,0 мм.

12. Композиция по любому из пп. 1-11, где одевиксибат присутствует в виде кристаллической модификации 1 одевиксибата, имеющей рентгеновскую порошковую дифрактограмму (XRPD), полученную с помощью излучения CuKα1, со специфическими пиками в положениях °2θ 5,6±0,2, 6,7±0,2 и 12,1±0,2.

13. Композиция по любому из пп. 1-12, где частицы содержатся в саше или капсуле.

14. Композиция по любому из пп. 1-13, где значение d₉₀ для распределения размера частиц агломератов одевиксибата в слое оболочки составляет менее 12 мкм.

15. Композиция по любому из пп. 1-14, которая является педиатрической композицией.

16. Композиция по любому из пп. 1-15 для применения в лечении или профилактике болезней печени.

17. Композиция по п. 16, где заболеванием печени является билиарно-зависимое заболевание печени.

18. Композиция по п. 16, где заболеванием печени является прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), синдром Алажиля (ALGS), билиарная атрезия или детский холестатический зуд.

19. Способ получения фармацевтической композиции по любому из пп. 1-15, включающий стадии получения гомогенной водной суспензии одевиксибата и пленкообразующего полимера, выбранного из полимера на основе целлюлозы, где значение d₉₀ для распределения размера частиц агломератов одевиксибата в суспензии составляет менее 15 мкм и покрытия ядер указанной гомогенной водной суспензией одевиксибата.

20. Способ по п. 19, где суспензию для нанесения оболочки получают посредством диспергирования одевиксибата в воде посредством мокрого помола.

21. Способ по п. 19 или 20, где суспензия для нанесения оболочки не содержит агломератов одевиксибата крупнее, чем 200 мкм.

22. Способ по любому из пп. 19-21, где суспензия для нанесения оболочки не содержит поверхностно-активного вещества.

23. Способ получения композиции по любому из пп. 1-15, включающий стадии:

а) увлажнения одевиксибата в воде с использованием гомогенизатора;

б) диспергирования увлажненного одевиксибата в воде посредством мокрого помола, таким образом получая гомогенную водную суспензию одевиксибата;

в) добавления пленкообразующего полимера, выбранного из полимера на основе целлюлозы, к гомогенной водной суспензии одевиксибата и

г) покрытия ядер гомогенной водной суспензией одевиксибата, полученной на стадии (в).

24. Способ по любому из пп. 19-23, где одевиксибат присутствует в виде кристаллической модификации 1 одевиксибата, имеющей порошковую рентгеновскую дифрактограмму (XRPD), полученную с помощью излучения CuKα1, со специфическими пиками в положениях °2θ 5,6±0,2, 6,7±0,2 и 12,1±0,2.