RU2760335C1 - Acinetobacter johnsonii a1 bacterial strain to increase grain yield - Google Patents
Acinetobacter johnsonii a1 bacterial strain to increase grain yield Download PDFInfo
- Publication number
- RU2760335C1 RU2760335C1 RU2021110658A RU2021110658A RU2760335C1 RU 2760335 C1 RU2760335 C1 RU 2760335C1 RU 2021110658 A RU2021110658 A RU 2021110658A RU 2021110658 A RU2021110658 A RU 2021110658A RU 2760335 C1 RU2760335 C1 RU 2760335C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- acinetobacter johnsonii
- bacterial strain
- seeds
- vkpm
- strain
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и сельскому хозяйству и касается получения штаммов бактерий, обладающих азотфиксирующей фитопротекторной и ростостимулирующей активностью. Штамм перспективен для получения бактериальных препаратов для улучшения питания растений, оздоровления биоценоза и повышения урожая зерновых культур.The invention relates to biotechnology, microbiology and agriculture and relates to the production of bacterial strains with nitrogen-fixing phytoprotective and growth-stimulating activity. The strain is promising for obtaining bacterial preparations to improve plant nutrition, improve biocenosis and increase the yield of grain crops.
Известно использование штамма бактерий Azotobacter chroococcum 3064 ВКПМ В-3721, проявляющего азотфиксирующую активность в составе препарата, для повышения урожайности, приживаемости растений при одновременном повышении качества стандартного посадочного материала, выхода его, а также повышения зимостойкости культур, в особенности плодовых (п. РФ № 2127509, МПК A01G 7/00, опубл. 23.03.1999). It is known to use the bacterial strain Azotobacter chroococcum 3064 VKPM B-3721, which exhibits nitrogen-fixing activity in the composition of the preparation, to increase the yield, plant survival while improving the quality of the standard planting material, its yield, as well as increasing the winter hardiness of crops, especially fruit crops (p. RF No. 2127509, IPC A01G 7/00, publ. 03.23.1999).
Однако данный штамм предлагается к использованию только в составе биопрепаратов. However, this strain is proposed for use only in the composition of biological products.
Pseudomonas aureofaciens ИБ 51 и Pseudomonas putida ИБ 17 (п. РФ № 2203945, МПК C12N 1/20, опубл. 2003; п. РФ № 2213774, МПК C12N 1/20, опубл. 2003), обладающие способностью оказывать антагонистическое действие на возбудителей заболеваний пшеницы твердой головней и корневыми гнилями. Pseudomonas aureofaciens IB 51 and Pseudomonas putida IB 17 (p. RF No. 2203945, IPC C12N 1/20, publ. 2003; p. RF No. 2213774, IPC C12N 1/20, publ. 2003), which have the ability to antagonize pathogens diseases of wheat with durum smut and root rot.
Недостатком штаммов является их сравнительно невысокая антагонистическая активность и неспособность к фиксации атмосферного азота и синтезу ростостимулирующих веществ, т.е. отсутствие комплексности воздействия на фитопатогены и растения. The disadvantage of the strains is their relatively low antagonistic activity and inability to fix atmospheric nitrogen and synthesize growth-stimulating substances, i.e. lack of complexity of impact on phytopathogens and plants.
Известны штаммы микроорганизмов, непосредственно стимулирующие рост и способствующие повышению продуктивности растений, такие как Pseudomonas putida ВКПМ В-4308 (п. РФ № 2051586, МПК A01N 63/00, C12N 1/20, опубл. 10.01.1996), Pseudomonas lemoignei ВКМ В-6615 (п. РФ № 2121271, МПК A01N 63/00, C12N 1/20, опубл. 10.11.1998), Streptomyces chrysomallus Р-21 (п. РФ № 2226214, МПК C12N 1/20, A01N 63/00, опубл. 27.03.2004), Bacillus subtilis 8А (п. РФ № 2495119, МПК C12N 1/20, C12R 1/125, A01N 63/00, опубл. 10.10.2013), Serratia ficaria ВКПМ В-11403 (п. РФ № 2545398, МПК A01N 63/02, C12N 1/20, C12R 1/425, опубл. 27.03.2015), Bacillus pumilus А1.5 (п. РФ №2551968, опубл. 10.06.2015), Bacillus atrophaeus ВКПМ В-11474 (п. РФ № 2570624, МПК C12N 1/20, A01N 63/02, C12R 1/07, опубл. 10.12.2015), Bacillus cereus 875 TS (п. РФ № 2624032, МПК C12N 1/20, A01N 63/02, C12R 1/085, опубл. 30.06.2017). Known strains of microorganisms that directly stimulate growth and enhance plant productivity, such as Pseudomonas putida VKPM B-4308 (p. RF No. 2051586, IPC A01N 63/00, C12N 1/20, publ. 10.01.1996), Pseudomonas lemoignei VKM B -6615 (p. RF No. 2121271, IPC A01N 63/00, C12N 1/20, publ. 10.11.1998), Streptomyces chrysomallus P-21 (p. RF No. 2226214, IPC C12N 1/20, A01N 63/00, publ. 27.03.2004), Bacillus subtilis 8A (p. RF No. 2495119, IPC C12N 1/20, C12R 1/125, A01N 63/00, publ. 10.10.2013), Serratia ficaria VKPM V-11403 (p. RF No. 2545398, IPC A01N 63/02, C12N 1/20, C12R 1/425, publ. 03/27/2015), Bacillus pumilus A1.5 (p. RF No. 2551968, publ. 06/10/2015), Bacillus atrophaeus VKPM V- 11474 (p. RF No. 2570624, IPC C12N 1/20, A01N 63/02, C12R 1/07, publ. 10.12.2015), Bacillus cereus 875 TS (p. RF No. 2624032, IPC C12N 1/20, A01N 63 / 02, C12R 1/085, publ. 06/30/2017).
Однако ни для одного из перечисленных штаммов не указаны возможные механизмы прямой стимуляции роста растений, что не позволяет делать уверенные прогнозы относительно эффективности их применения в различных условиях и на различных культурах.However, for none of the listed strains the possible mechanisms of direct stimulation of plant growth are indicated, which does not allow one to make confident predictions about the effectiveness of their application under various conditions and on various crops.
Штамм бактерий Pseudomonas sp. ИБ-4 (п. РФ № 2529958, МПК А01N 63/00, C12N 1/20, опубл. 10.10.2014) обладает высокой продуктивностью, нитрогеназной и ростостимулирующей активностями. Штамм бактерий Pseudomonas sp. депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов под регистрационным номером ВКМ В-2830D и может быть использован при получении биопрепарата для снижения заболеваемости растений, вызываемой фитопатогенными грибами, и повышения урожайности растений. Изобретение позволяет повысить урожай пшеницы.The bacterial strain Pseudomonas sp. IB-4 (p. RF No. 2529958, IPC А01N 63/00, C12N 1/20, publ. 10.10.2014) has high productivity, nitrogenase and growth-stimulating activities. The bacterial strain Pseudomonas sp. deposited in the All-Russian collection of microorganisms under the registration number VKM B-2830D and can be used to obtain a biological product to reduce the incidence of plants caused by phytopathogenic fungi and increase plant productivity. The invention improves the yield of wheat.
Недостатком данного штамма является его низкая азотфиксирующая способность. The disadvantage of this strain is its low nitrogen-fixing ability.
Таким образом, все известные штаммы, используемые в качестве фиксаторов азота воздуха или обладающие фитопротекторной и/или ростостимулирующей активностью, имеют ряд недостатков вследствие недостаточно высокой эффективности и трудоемкости способа получения биомассы, низким уровнем азотфиксирующей способности и стимуляции роста растений. Кроме того, большинство известных штаммов, для достижения указанных свойств, используются только в составе консорциумов, и не обладают самостоятельной фитпротекторной и ростостимулирующей активностью. Thus, all known strains used as air nitrogen fixers or with phytoprotective and / or growth-stimulating activity have a number of disadvantages due to insufficiently high efficiency and laboriousness of the biomass production method, low level of nitrogen fixing ability and plant growth stimulation. In addition, most of the known strains, to achieve these properties, are used only as part of consortia, and do not have an independent phytoprotective and growth-stimulating activity.
Технической проблемой, поставленной перед изобретением, является расширение ассортимента штаммов, обладающих азотфиксирующей, фитопротекторной и ростостимулирующей активностью. The technical problem posed to the invention is the expansion of the range of strains with nitrogen-fixing, phytoprotective and growth-stimulating activity.
Поставленная техническая проблема решается выявлением нового природного штамма Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867, который обладает значительной азотфиксирующей способностью, а также фитопротекторной и ростостимулирующей активностью. The technical problem posed is solved by identifying a new natural strain of Acinetobacter johnsonii A1 VKPM B-13867, which has a significant nitrogen-fixing ability, as well as phytoprotective and growth-stimulating activity.
Штамм Acinetobacter johnsonii A1 выделен в естественных условиях из почвы (Приморский край, Россия) путем прямого высева на агаризованную среду Эшби при 22-25°С и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-13867. The strain Acinetobacter johnsonii A1 was isolated in vivo from soil (Primorsky Krai, Russia) by direct plating on Ashby agar medium at 22-25 ° C and deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms under the number VKPM B-13867.
Штамм Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867 обладает азотфиксирующей способностью. Активность фиксации азота определяли ацетиленовым методом с помощью газового хроматографа и выражали в наномолях образовавшегося этилена за 1 час инкубации (нМ С2Н4/ч).The Acinetobacter johnsonii A1 strain VKPM B-13867 has nitrogen-fixing ability. The activity of nitrogen fixation was determined by the acetylene method using a gas chromatograph and expressed in nanomoles of the formed ethylene for 1 hour of incubation (nM C 2 H 4 / h).
Штамм идентифицировали помощью анализа 16S РН. Была проанализирована последовательность длинной 598 пар оснований. Для амплификации участка 16S рРНК образцов использовали пару праймеров BAK11w 5’-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3' и BAK2 5’-GGACTACHAGGGTATCTAAT-3’, которые оптимизированы для идентификации широкого спектра бактериальной ДНК (Zucol et al., 2006). Реакцию амплификации проводили с помощью термоциклера iCycler (Bio-Rad Laboratories, USA), программированном на следующие условия реакции: предварительная денатурация 96°С — 1 мин, 30 циклов, включавших 96°С — 10 сек, 55°С — 20 сек, 72°С — 30 сек и финальная элонгация 55°С — 20 сек, 72°С — 3 мин. Объем реакционной смеси составлял 25 мкл, содержащей по 0,3 мM праймеров BAK11w и BAK2, 0,2 мM каждого нуклеотида, 2,5 мкл 10X Encyclo буфера, 0,5 мкл 50X Encyclo полимеразы и 50 нг образца ДНК. Результат амплификации анализировали в 1 %-ном агарозном геле с добавлением бромида этидия. Полученный специфичный продукт размером 780 п.н. вырезали из геля, очищали и использовали в реакции секвенирования с помощью BigDye Terminator v3.1 согласно рекомендациям фирмы-производителя (Thermo Fisher Scientific, USA). The strain was identified by 16S PH analysis. The sequence analyzed was 598 bp long. To amplify the 16S rRNA region of the samples, we used a pair of primers BAK11w 5'-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3 'and BAK2 5'-GGACTACHAGGGTATCTAAT-3', which are optimized for identifying a wide range of bacterial DNA (Zucol et al., 2006). The amplification reaction was carried out using an iCycler thermal cycler (Bio-Rad Laboratories, USA), programmed for the following reaction conditions: preliminary denaturation at 96 ° С for 1 min, 30 cycles including 96 ° С for 10 sec, 55 ° С for 20 sec, 72 ° С - 30 sec and final elongation at 55 ° С - 20 sec, 72 ° С - 3 min. The volume of the reaction mixture was 25 μl containing 0.3 mM of primers BAK11w and BAK2, 0.2 mM of each nucleotide, 2.5 μl of 10X Encyclo buffer, 0.5 μl of 50X Encyclo polymerase and 50 ng of DNA sample. The amplification result was analyzed in a 1% agarose gel with the addition of ethidium bromide. The resulting specific product with a size of 780 bp. was excised from the gel, purified and used in the sequencing reaction using the BigDye Terminator v3.1 according to the manufacturer's recommendations (Thermo Fisher Scientific, USA).
Культурально-морфологические и биохимические особенности штамма: Cultural, morphological and biochemical characteristics of the strain:
На агаризованной среде Эшби штамм образует округлые, гладкие, выпуклые, блестящие непрозрачные колонии белого цвета с ровными краями, центр не выражен. В мазке обнаруживаются палочки размером 0,5-1,0×1,0-3,0 мкм, грамотрицательные. В активной фазе роста клетки в виде палочек шириной 1,1-1,4 мкм, длиной 1,6-2,4 мкм. Стационарной фазе роста клетки укорачиваются, становясь почти сферическими. По грамму окрашиваются отрицательно, подвижны. Каталазаположительные. Оксидазоотрицатиельные. Строгие Аэробы. Утилизируют соли аммония и нитраты, используют глюкозу, Л-арабинозу, ксилозу, рибозу.On Ashby agar medium, the strain forms round, smooth, convex, shiny opaque white colonies with smooth edges, the center is not pronounced. In the smear, sticks measuring 0.5-1.0 × 1.0-3.0 μm, gram-negative, are found. In the active phase of growth, the cells are in the form of rods, 1.1-1.4 microns wide, 1.6-2.4 microns long. In the stationary phase of growth, the cells are shortened, becoming almost spherical. By gram, they are colored negatively, mobile. Catalas are positive. Oxidase-negative. Strict Aerobes. Utilize ammonium salts and nitrates, use glucose, L-arabinose, xylose, ribose.
Для длительного хранения культуру бактерий высевали уколом на столбик полужидкого питательного агара (состав г/л: мясной экстракт – 3,0; пептон – 3,0; агар – 4,0) и через 3 дня заливали стерильным вазелиновым маслом слоем в 0,5-1 см. Полученные таким образом музейные культуры были помещены в холодильник при 4°С.For long-term storage, the culture of bacteria was sown with an injection on a column of semi-liquid nutrient agar (composition g / l: meat extract - 3.0; peptone - 3.0; agar - 4.0) and after 3 days they were poured with sterile vaseline oil with a layer of 0.5 -1 cm. The museum cultures thus obtained were placed in a refrigerator at 4 ° C.
Размножение штамма проводили на скошенном столбике ГРМ-агара (состав гр/л: панкреатический гидролизат рыбной муки- 12,0; пептон ферментативный – 12,0; натрия хлорид – 6,0; агар микробиологический – 10,0) при 25-30°С.Reproduction of the strain was carried out on a beveled column of GRM agar (composition g / l: pancreatic hydrolyzate of fish meal - 12.0; enzymatic peptone - 12.0; sodium chloride - 6.0; microbiological agar - 10.0) at 25-30 ° WITH.
Ферментацию штамма проводили путем посева в ГРМ-бульон (состав гр/л: панкреатический гидролизат рыбной муки- 8,0; пептон ферментативный – 8,0; натрия хлорид – 6,0) при 22-25°С в течение 6 дней при постоянном перемешивании до достижения численности бактерий не менее 1×107 м.кл./мл.Fermentation of the strain was carried out by inoculation in the GRM broth (composition g / l: pancreatic hydrolyzate of fish meal - 8.0; enzymatic peptone - 8.0; sodium chloride - 6.0) at 22-25 ° C for 6 days at constant stirring until the number of bacteria reaches at least 1 × 107 μl / ml.
Пример 1. Фиксация молекулярного азота культурой бактерий Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867. Example 1. Fixation of molecular nitrogen by a culture of bacteria Acinetobacter johnsonii A1 VKPM B-13867.
Активность фиксации азота определяли ацетиленовым методом с помощью газового хроматографа. Культуру бактерий Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867 выращивали в ГРМ-бульоне (состав г/л: панкреатический гидролизат рыбной муки - 8,0; пептон ферментативный – 8,0; натрия хлорид – 6,0) при 22-25°С в течение 6 дней при постоянном перемешивании до достижения численности бактерий не менее 1×107 мкл/мл. Затем во флакон с культурой вносили 2% глюкозы, перемешивали, закрывали флакон ватно-марлевой пробкой и помещали в термостат на 24 часа при 28°С. После чего флаконы с культурой закрывали резиновыми пробками и внутрь каждого флакона вводили 1 мл ацетилена и вновь помещали в термостат при 28°С. Через 1 сутки инкубации из флакона отбирали газовую пробу и вводили ее в газовый хроматограф медицинским шприцем. Колонка газового хроматографа обеспечивает разделение газов метана, пропана, этилена, ацетилена. Азотфиксирующую активность выражали в наномолях образовавшегося этилена за 1 час инкубации (наномоль С2Н4/ч). Активность азотфиксации вычисляли по формуле: АФ = (0,0067 × S × V) / t, где 0,0067 — калибровочная коэффициента на этилен, S — площадь пика этилена (мВ·сек), V — объем воздуха в пенициллиновом флакончике, T — время инкубации с ацетиленом (ч). The nitrogen fixation activity was determined by the acetylene method using a gas chromatograph. The culture of bacteria Acinetobacter johnsonii A1 VKPM B-13867 was grown in a GRM broth (composition g / l: pancreatic hydrolyzate of fish meal - 8.0; enzymatic peptone - 8.0; sodium chloride - 6.0) at 22-25 ° С in for 6 days with constant stirring until the number of bacteria reaches at least 1 × 107 μl / ml. Then 2% glucose was added to the culture bottle, mixed, the bottle was closed with a cotton-gauze stopper and placed in a thermostat for 24 hours at 28 ° C. After that, the culture flasks were closed with rubber stoppers, and 1 ml of acetylene was introduced into each flask and again placed in a thermostat at 28 ° C. After 1 day of incubation, a gas sample was taken from the vial and introduced into the gas chromatograph with a medical syringe. The gas chromatograph column provides separation of methane, propane, ethylene, acetylene gases. Nitrogen-fixing activity was expressed in nanomoles of formed ethylene for 1 hour of incubation (nanomolar C 2 H 4 / h). The nitrogen fixation activity was calculated by the formula: AF = (0.0067 × S × V) / t, where 0.0067 is the calibration factor for ethylene, S is the ethylene peak area (mV s), V is the air volume in the penicillin bottle, T - incubation time with acetylene (h).
В результате установлена азотфиксирующая способность культуры бактерий Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867 на уровне 5,4 нМ С2Н4/чAs a result, the nitrogen-fixing ability of the culture of bacteria Acinetobacter johnsonii A1 VKPM B-13867 was established at the level of 5.4 nM C 2 H 4 / h
Ростостимулирующее и фитопротекторное действие изучали посредством выявления потенциального эффекта исследуемых бактерий при воздействии на прорастание семян злаковых растений. The growth-stimulating and phytoprotective effect was studied by identifying the potential effect of the studied bacteria on the germination of seeds of cereal plants.
Пример 2. Оценка воздействия штамма Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867 на энергию прорастания семян злаковых культур Example 2. Evaluation of the effect of the strain Acinetobacter johnsonii A1 VKPM B-13867 on the germination energy of seeds of cereal crops
Готовили рабочий раствор: штамм Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867 подращивали на жидкой питательной среде при 23-25°С в течении 5-7 суток до достижения концентрации 1*109 КОЕ/мл. Семена растений, в количестве 100 штук каждого сорта, замачивали в рабочем растворе, время экспозиции составляло 30 минут. Затем все семена раскладывали по 10 штук на поверхность фильтровальной бумаги, смоченной стерильной водой, в стерильных чашках Петри для прорастания. Семена проращивали при 23°С. На 3-и сутки определяли энергию прорастания. В результате воздействия препарата наблюдали увеличение энергии прорастания семян пшеницы в среднем на 20%, семян ячменя — в среднем на 22% по сравнению с необработанным контролем.A working solution was prepared: the Acinetobacter johnsonii A1 strain VKPM B-13867 was grown on a liquid nutrient medium at 23-25 ° C for 5-7 days until a concentration of 1 * 10 9 CFU / ml was reached. Plant seeds, in the amount of 100 pieces of each variety, were soaked in the working solution, the exposure time was 30 minutes. Then all the seeds were laid out in 10 pieces on the surface of filter paper moistened with sterile water in sterile Petri dishes for germination. The seeds were germinated at 23 ° C. On the 3rd day, the germination energy was determined. As a result of the action of the drug, an increase in the germination energy of wheat seeds by an average of 20%, and of barley seeds by an average of 22% was observed in comparison with the untreated control.
Пример 3. Оценка воздействия штамма Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867 на лабораторную всхожесть семян злаковых культур.Example 3. Evaluation of the effect of the strain Acinetobacter johnsonii A1 VKPM B-13867 on the laboratory germination of cereal seeds.
Готовили рабочий раствор: штамм Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867 подращивали на жидкой питательной среде при 23-25°С в течении 5-7 суток до достижения концентрации 1*109 КОЕ/мл. Семена растений, в количестве 100 штук каждого сорта, замачивали в рабочем растворе, время экспозиции составляло 30 минут. Затем все семена раскладывали по 10 штук на поверхность фильтровальной бумаги, смоченной стерильной водой, в стерильных чашках Петри для прорастания. Семена проращивали при 23°С. На 7-е сутки оценивали лабораторную всхожесть семян. В результате воздействия препарата наблюдали увеличение лабораторной всхожести семян ярового ячменя на 18%, яровой пшеницы – на 20%.A working solution was prepared: the Acinetobacter johnsonii A1 strain VKPM B-13867 was grown on a liquid nutrient medium at 23-25 ° C for 5-7 days until a concentration of 1 * 10 9 CFU / ml was reached. Plant seeds, in the amount of 100 pieces of each variety, were soaked in the working solution, the exposure time was 30 minutes. Then all the seeds were laid out in 10 pieces on the surface of filter paper moistened with sterile water in sterile Petri dishes for germination. The seeds were germinated at 23 ° C. On the 7th day, the laboratory seed germination was assessed. As a result of the action of the drug, an increase in laboratory germination of seeds of spring barley by 18%, of spring wheat by 20% was observed.
Пример 4. Оценка воздействия штамма Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867 на длину побега и длину корней проростков семян злаковых культур.Example 4. Evaluation of the effect of the strain Acinetobacter johnsonii A1 VKPM B-13867 on the length of the shoot and the length of the roots of seedlings of cereal crops.
Готовили рабочий раствор: штамм Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867 подращивали на жидкой питательной среде при 23-25°С в течении 5-7 суток до достижения концентрации 1*109 КОЕ/мл. Семена растений, в количестве 100 штук каждого сорта, замачивали в рабочем растворе, время экспозиции составляло 30 минут. Затем все семена раскладывали по 10 штук на поверхность фильтровальной бумаги, смоченной стерильной водой, в стерильных чашках Петри для прорастания. Семена проращивали при 23°С. На 7-е оценивали длину побега и длину корней проростков. В результате воздействия препарата наблюдали увеличение длины надземной части ярового ячменя на 24 %, яровой пшеницы – на 8%; увеличение длины корня ярового ячменя на 34%, яровой пшеницы – на 70%.A working solution was prepared: the Acinetobacter johnsonii A1 strain VKPM B-13867 was grown on a liquid nutrient medium at 23-25 ° C for 5-7 days until a concentration of 1 * 10 9 CFU / ml was reached. Plant seeds, in the amount of 100 pieces of each variety, were soaked in the working solution, the exposure time was 30 minutes. Then all the seeds were laid out in 10 pieces on the surface of filter paper moistened with sterile water in sterile Petri dishes for germination. The seeds were germinated at 23 ° C. On the 7th, the length of the shoot and the length of the roots of the seedlings were assessed. As a result of the action of the drug, an increase in the length of the aboveground part of spring barley by 24%, of spring wheat by 8% was observed; an increase in the length of the root of spring barley by 34%, spring wheat - by 70%.
Пример 5. Протравка семян ячменя и пшеницы перед посевом штаммом бактерий Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867.Example 5. Etching of seeds of barley and wheat before sowing with the bacterial strain Acinetobacter johnsonii A1 VKPM B-13867.
Семена опрыскивали из пульверизатора культурой бактерий Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867 в концентрации 1х104 КОЕ/мл из расчета 100 мл на 1 кг семян. Обработанные таким образом семена ячменя и пшеницы раскладывали, соблюдая стерильность, на чашки Петри с плотной средой Чапека. На одну чашку выкладывали 10 семян. Всего в эксперимент брали 100 семян ячменя и 100 семян пшеницы. Контроль – необработанные семена. В результате эксперимента наблюдали 100% фунгицидную и бактерицидную активность бактерий Acinetobacter johnsonii A1 ВКПМ В-13867.The seeds were sprayed from a spray bottle with a culture of bacteria Acinetobacter johnsonii A1 VKPM B-13867 at a concentration of 1x10 4 CFU / ml at the rate of 100 ml per 1 kg of seeds. The seeds of barley and wheat treated in this way were laid out, observing sterility, on Petri dishes with a dense Czapek medium. 10 seeds were spread on one cup. In total, 100 barley seeds and 100 wheat seeds were taken into the experiment. Control - untreated seeds. As a result of the experiment, 100% fungicidal and bactericidal activity of bacteria Acinetobacter johnsonii A1 VKPM B-13867 was observed.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021110658A RU2760335C1 (en) | 2021-04-16 | 2021-04-16 | Acinetobacter johnsonii a1 bacterial strain to increase grain yield |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021110658A RU2760335C1 (en) | 2021-04-16 | 2021-04-16 | Acinetobacter johnsonii a1 bacterial strain to increase grain yield |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2760335C1 true RU2760335C1 (en) | 2021-11-24 |
Family
ID=78719314
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2021110658A RU2760335C1 (en) | 2021-04-16 | 2021-04-16 | Acinetobacter johnsonii a1 bacterial strain to increase grain yield |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2760335C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115011522A (en) * | 2022-06-17 | 2022-09-06 | 贵州大学 | EN-J1 Nitrogen Removal Bacteria and Its Application in Nitrogenous Sewage Treatment |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5232850A (en) * | 1991-07-19 | 1993-08-03 | The Penn State Research Foundation | Predatory Pseudomonas strain as a control of bacterial and fungal plant pathogens |
| RU2130264C1 (en) * | 1997-12-15 | 1999-05-20 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Плодородие" | Preparation for plant growth stimulation and protection from sicknesses |
| RU2235771C2 (en) * | 2002-05-13 | 2004-09-10 | Государственное унитарное предприятие "Государственный научный центр прикладной микробиологии" | Strain of bacterium pseudomonas fluorescens p469 for preparing preparation against plant diseases caused by phytopathogenic fungi and microorganisms |
| RU2529958C1 (en) * | 2013-08-20 | 2014-10-10 | Закрытое акционерное общество научно-производственное предприятие "Биомедхим" (ЗАО НПП "Биомедхим") | Strain of nitrogen-fixing bacteria pseudomonas sp for obtaining biological product against diseases of wheat caused by phytopathogenic fungi, and increase in productivity |
-
2021
- 2021-04-16 RU RU2021110658A patent/RU2760335C1/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5232850A (en) * | 1991-07-19 | 1993-08-03 | The Penn State Research Foundation | Predatory Pseudomonas strain as a control of bacterial and fungal plant pathogens |
| RU2130264C1 (en) * | 1997-12-15 | 1999-05-20 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Плодородие" | Preparation for plant growth stimulation and protection from sicknesses |
| RU2235771C2 (en) * | 2002-05-13 | 2004-09-10 | Государственное унитарное предприятие "Государственный научный центр прикладной микробиологии" | Strain of bacterium pseudomonas fluorescens p469 for preparing preparation against plant diseases caused by phytopathogenic fungi and microorganisms |
| RU2529958C1 (en) * | 2013-08-20 | 2014-10-10 | Закрытое акционерное общество научно-производственное предприятие "Биомедхим" (ЗАО НПП "Биомедхим") | Strain of nitrogen-fixing bacteria pseudomonas sp for obtaining biological product against diseases of wheat caused by phytopathogenic fungi, and increase in productivity |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115011522A (en) * | 2022-06-17 | 2022-09-06 | 贵州大学 | EN-J1 Nitrogen Removal Bacteria and Its Application in Nitrogenous Sewage Treatment |
| CN115011522B (en) * | 2022-06-17 | 2023-05-12 | 贵州大学 | EN-J1 denitrifying bacteria and application thereof in nitrogen-containing sewage treatment |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111040976B (en) | A strain of Bacillus amyloliquefaciens and its application | |
| CN115820461B (en) | High-yield indoleacetic acid strain JB0319 and application thereof | |
| RU2760335C1 (en) | Acinetobacter johnsonii a1 bacterial strain to increase grain yield | |
| RU2415924C1 (en) | Sinorhizobium fredii RNCM NO B-2458D NODULE BACTERIAL STRAIN FOR MANUFACTURING OF BACTERIAL SOYA FERTILISER | |
| CN117903964B (en) | Salt-tolerant bacillus 147 and application thereof | |
| RU2408722C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Bacillus mucilaginosus Bac 1208, HAVING HIGHER PHOSPHORUS AND POTASSIUM MOBILISING PROPERTIES, AND FERTILISER ON ITS BASIS | |
| RU2757123C1 (en) | Bacterial strain pantoea agglomerans f19 to increase the productivity of grain crops | |
| CN107674850A (en) | Certain kind of berries reality pseudomonas Sned811, metabolite and the application of a kind of killing root-knot nematode | |
| RU2694565C1 (en) | Agent for stimulating growth and increasing resistance to diseases of pea plants | |
| RU2099947C1 (en) | Biopreparation phytosporin for plant protection from illnesses | |
| JPH06135811A (en) | Controlling agent against plant disease and injury | |
| RU2751487C1 (en) | Method for producing liquid nutrition medium and method for obtaining liguid microbiological agent based on strains mixture of spore-forming bacteria-antagonists of phytopathogenic fungi of g. fusarium | |
| RU2551968C2 (en) | Bacillus pumilus A 1.5 BACTERIA STRAIN AS AGENT FOR INCREASING PLANT PRODUCTIVITY AND PLANT PROTECTION FROM DISEASES CAUSED BY PHYTOPATHOGENIC MICROORGANISMS | |
| RU2757506C1 (en) | Pseudarthrobacter equi s2 bacterial strain for increasing the productivity of grain crops | |
| RU2675503C1 (en) | Method of obtaining biological preparation for stimulation of growth and protection of plants against diseases | |
| RU2820245C1 (en) | Strain of microbacterium sp. et2, stimulating growth of cereal crops | |
| RU2797699C1 (en) | Bacillus pumilus rcam05517 bacterial strain for plant protection against phytopathogenic fungi phytophthora infestans, alternaria sp., aspergillus sp., penicillium sp. and stimulation of plant growth | |
| JP4768308B2 (en) | Plant disease control microorganism and plant disease control method | |
| RU2760337C1 (en) | Preparation for increasing the yield of spring wheat | |
| RU2760336C1 (en) | Preparation for increasing the yield of spring barley | |
| RU2823059C1 (en) | Bacillus pumilus bis88 strain as universal agent for improving nutrition, accelerating growth and increasing productivity of agricultural grain, vegetable and industrial crops, as well as their protection against diseases and stress factors of chloride salinization | |
| Azeez et al. | The species composition of epiphytic microorganisms and their influence on roots excretory activity of wheat and pea seedlings | |
| RU2752903C1 (en) | Mixture of bacterial strains with cellulolytic and fungicidal activity | |
| RU2795906C1 (en) | Consortium of psychrotolerant bacterial strains for biological protection and stimulation of growth of agricultural plants | |
| RU2732627C1 (en) | Agent for increasing cold resistance and productivity of plants |