RU2665850C1 - Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А - Google Patents
Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А Download PDFInfo
- Publication number
- RU2665850C1 RU2665850C1 RU2017145754A RU2017145754A RU2665850C1 RU 2665850 C1 RU2665850 C1 RU 2665850C1 RU 2017145754 A RU2017145754 A RU 2017145754A RU 2017145754 A RU2017145754 A RU 2017145754A RU 2665850 C1 RU2665850 C1 RU 2665850C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- foot
- mouth disease
- arriah
- virus
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 92
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 title claims abstract description 85
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 42
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 title abstract description 35
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 66
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 48
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 36
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 33
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 32
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 31
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 21
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 17
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 11
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 9
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 9
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 6
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000710202 Foot-and-mouth disease virus - type A Species 0.000 description 6
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 6
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 6
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- -1 Polyhexamethylene guanidine Polymers 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001250090 Capra ibex Species 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001481710 Cerambycidae Species 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 241001573881 Corolla Species 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 101150024766 VP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 210000004777 protein coat Anatomy 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 229960003127 rabies vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
- A61K39/135—Foot- and mouth-disease virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой вакцину инактивированную эмульсионную против ящура типа А. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный в суспензионной перевиваемой клеточной линии из почки новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21/2-17). Антигенный материал представляет собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура. Для изготовления эмульсионной вакцины применяют масляный адъювант Montanide ISA-206 или Montanide ISA-70 в эффективных соотношениях. Вакцина обладает высокой иммуногенностью и способна обеспечить эффективную защиту от гомологичного возбудителя инфекции, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Среднего и Ближнего Востока. 9 з.п. ф-лы, 1 ил., 9 табл., 7 пр.
Description
Широкое распространение вируса ящура, равно как и сложности, возникающие при диагностике заболевания и подборе вакцинных штаммов во время противоэпизоотических мероприятий, обусловлены высокой мутационной изменчивостью генома и, как следствие, антигенным разнообразием вируса ящура [1,2].
Профилактическая эффективность вакцин, определяемая по эпидемиологическим показателям, устанавливается в группах привитых животных при угрозе возникновения и распространения болезни. Вакцины должны обеспечивать создание массовой невосприимчивости и препятствовать распространению эпизоотических штаммов вируса ящура.
Так, для успешного проведения профилактической групповой иммунизации необходима информация о результатах сравнительного анализа нуклеотидных и аминокислотных последовательностей вакцинных штаммов и эпизоотических изолятов вируса ящура, циркулирующих в зоне профилактической вакцинации. При возникновении вспышек заболевания именно путем сравнительного анализа нуклеотидного и аминокислотного определения антигенного соответствия эпизоотического изолята производственному штамму можно наиболее оперативно подобрать необходимый штамм для производства вакцин, применяемых в угрожаемой зоне [3].
Возбудитель ящура обладает высокой антигенной вариабельностью штаммов в пределах одного серотипа, которая выявляется в различные временные промежутки и на разных территориях в зависимости от видового состава восприимчивого поголовья, иммунного статуса животных и множества других факторов. Мутационная изменчивость изолятов вируса ящура обусловлена заменами аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), локализованных на поверхности капсидных белков.
Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого изолята, могут варьировать от незначительных, улавливаемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма с большой вероятностью способствуют ослаблению специфического иммунитета, индуцированного негомологичным антигеном, и, кроме того, вызывают затруднения штаммоспецифической диагностики.
В 2015 году на территории Армении была отмечена вспышка ящура. Выделенный изолят значительно отличался от производственных штаммов вируса ящура. В связи с этим для обеспечения безопасности территории России и сопредельных государств от этого возбудителя возникла необходимость разработать вакцину на основе эпизоотического штамма вируса ящура серотипа А.
Известна вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма вируса ящура, полученного в чувствительной биологической системе (перевиваемая культура клеток свиной почки IB-RS-2 клон 3), и целевые добавки в виде поддерживающей среды и масляного адъюванта в эффективном соотношении [4].
Известна вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма А22 №550 вируса ящура, полученного в чувствительной биологической системе (новорожденные крольчата), и целевые добавки в виде поддерживающей среды и масляного адъюванта в эффективном соотношении [5].
Известна вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма А22 №550 вируса ящура, полученного в чувствительной биологической системе (перевиваемая культура клеток ВНК-21), и целевые добавки в виде поддерживающей среды и масляного адъюванта в эффективном соотношении [6].
Известна вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из иммуногенных 146S и 75S компонентов вируса ящура типа А штамма А №1707 «Армения-98», полученного в чувствительной биологической системе (перевиваемая культура клеток ВНК-21), и целевые добавки в виде поддерживающей среды и масляного адъюванта [7].
Известна вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2187/Кути/2013.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма А №2187/Кути/2013 [8], был выделен в сентябре 2013 года от больных свиней в селе Кути Приаргунского района Забайкальского края (экспертиза №2187). Производственный штамм получен из данного изолята путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм адаптирован к первично-трипсинизированным клеткам из свиной почки (СП), а также к перевиваемым клеточным линиям из почки новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21), почки свиньи (IB-RS-2) и почки сибирского горного козерога (ПСГК-30). Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно суспензионную перевиваемую клеточную линию ВНК-21/2-17, а в качестве поддерживающей среды - раствор Эрла без сыворотки крови с добавлением ферментативных гидролизатов мышц сухого (ФГМС), гидролизатов белков крови сухого (ГБКС) и антибиотиков (рНсреды 7,4-7,6).
Для очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей применяют полигексаметиленгуанидин (ПГМГ) [9]. С целью инактивации вируса используют аминоэтилэтиленамин (АЭЭИ), который добавляют в вируссодержащую суспензию до концентрации 0,025-0,05%. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию тиосульфата натрия [10]. В качестве адъюванта используют масляный адъювант Montanide ISA-70.
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из иммуногенного 146S компонента вируса ящура штамма А №2187/Кути/2013 и используется в качестве производственного штамма А №2187/Кути/2013 при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах СНГ.
Данная вакцина характеризуется следующим качественным и количественным составом, мкг в 1 см3 готового препарата:
| Антигенный материал не менее | 3,0 |
| Масляный адъювант | 600000,0-700000,0. |
Основной недостаток вакцины-прототипа состоит в ее недостаточной иммуногенной активности. Она не обеспечивают надежной защиты восприимчивых животных от эпизоотического вируса ящура типа А, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Среднего и Ближнего Востока.
В задачу создания настоящего изобретения входила разработка вакцины инактивированной эмульсионной против ящура, позволяющей обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа А.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала вакцин инактивированных эмульсионных против ящура типа А. Указанный технический результат, достигнут созданием вакцины инактивированной эмульсионной против ящура типа А, характеризующейся совокупностью признаков, которые приведены ниже.
Предлагаемая вакцина в 1 см3 препарата содержит следующие компоненты: активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015 [11], полученного предпочтительно в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21/2-17, в количестве не менее 3,0 мкг и адъюванты: масляный адъювант Montanide ISA-206 или Montanide ISA-70 в количестве 500000,0-575000,0 и 600000,0-700000,0 мкг, соответственно.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, был выделен в декабре 2015 года от больных свиней в Республике Армения (экспертиза №2269). Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 [11] вируса ящура типа А получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы использовали предпочтительно суспензионную перевиваемую клеточную линию ВНК-21/2-17, а в качестве поддерживающей среды - раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН 7,4-7,6.
Для инактивации вируса применяли АЭЭИ, который добавляли в вируссодержащую суспензию до концентрации 0,025-0,05% от общего объема. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализовали внесением в суспензию тиосульфата натрия [9]. Полученный антиген очищали от балластных примесей с помощью ПГМГ, который вносили в суспензию до концентрации 0,005-0,007% от общего объема [10].
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 представлял собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура. Качественное и количественное содержание вирусного сырья в полученном материале определяли методом турбидиметрии [12].
Для приготовления эмульсионной вакцины используют вирусный материал, содержащий не менее 0,5 мкг 146S иммуногенных компонентов вируса ящура.
Необходимую концентрацию иммуногенных компонентов в эмульсионной вакцине, составляющую не менее 3 мкг в 1 см3 готового препарата, получают путем концентрирования антигена проточной ультрафильтрацией.
Эмульсионную вакцину получают путем диспергирования на коллоидных мельницах концентрата ящурного антигена и масляного адъюванта в соотношении 4:6 и 1:1 по массе соответственно. Для усиления иммунного ответа используют масляный адъювант производства фирмы «Seppic» марок Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206.
Разработанная эмульсионная вакцина представляет собой молокоподобную жидкость, не растворимую в воде.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые спрашивается правовая охрана.
1. Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А.
2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015 в эффективном количестве.
3. Целевые добавки.
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1. Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А;
2. Активное вещество;
3. Целевые добавки.
По сравнению с вакциной-прототипом существенным отличительным признаком предлагаемой вакцины является то, что в качестве активного вещества готовый препарат содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А в эффективном количестве.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования.
1. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А, полученный предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура в эффективном количестве.
2. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А, полученный предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
3. Из целевых добавок вакцина содержит масляный адъювант.
4. Вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-206.
5. Вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-206 в количестве 500000,0-575000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
6. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура, полученного предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и масляный адъювант Montanide ISA-206 в количестве, мкг/см3 препарата:
7. Из целевых добавок вакцина содержит масляный адъювант.
8. Вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-70.
9. Вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-70 в количестве 600000,0-700000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
10. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура, полученного предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и масляный адъювант Montanide ISA-70 в количестве, мкг/см3 препарата:
Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против вируса ящура серотипа А, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Среднего и Ближнего Востока.
Достижение технического результата от использования изобретения достигается тем, что в состав предлагаемой вакцины введен в качестве активного вещества антигенный материал из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура серотипа А, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации и обеспечивающего получение противоящурной вакцины эмульсионной инактивированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против вируса ящура серотипа А, вызывающего вспышки заболевания в последние годы в странах Закавказья, Центральной Азии, Среднего и Ближнего Востока.
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А депонирован 01 февраля 2015 года в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») под регистрационным номером (ссылкой): штамм ВЯ А №2269/ВНИИЗЖ/2015 (производственный), (контрольный КРС), (контрольный свиной).
По сравнению с известными штаммами А №2269/ВНИИЗЖ/2015 обладает более высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации.
Экспериментально подтверждена возможность использования вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015 для контроля антигенной и иммуногенной активности, а также для изготовления биопрепаратов с целью диагностики и специфической профилактики ящура типа А.
Сущность изобретения пояснена на дендрограмме, отражающей филогенетические взаимоотношения штамма вируса ящура А №2269/ВНИИЗЖ/2015 с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура серологического типа А. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1.
Сущность изобретения пояснена в перечне последовательностей, в котором:
SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов гена VP1 штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А;
SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот белка VP1 штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А.
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические признаки
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу А и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.
Антигенные свойства
По своим антигенным свойствам штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура относится к серотипу А. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН).
При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа А №2269/ВНИИЗЖ/2015 индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в РСК в разведении 1:40.
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 вируса ящура типа А №2269/ВНИИЗЖ/2015 и выведена первичная структура белка VP1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм вируса ящура типа А №2269/ВНИИЗЖ/2015 значительно отличается от производственных штаммов типа А.
Степень нуклеотидных различий последовательностей штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 со штаммами вируса ящура серологического типа А составило: А22№550 - 16,12%, А22/Ирак/64 - 15,78%, А/Иран/96 - 15,78%, А/Армения/98 - 15,34%, А/Турция/06 - 18,47%, А/Иран/05 - 18,62%.
Филогенетический анализ показал, что штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 принадлежит к генетической линии G-VII топотипа Азия.
Антигенное родство штамма ВЯ А №2269/ВНИИЗЖ/2015 с имеющимися производственными штаммами ВЯ типа А исследовано серологическим методом в перекрестной реакции микронейтрализации (РМН). Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 антигенно отличается от производственных штаммов А22 №550, А/Ирак/64, А/Иран/97, А/Турция/06 (А/Иран/05), А №2187/Кути/13, А №2171/Кабардино-Балкарский/13.
Результаты исследований в РМН представлены в таблице 1. Антигенное соответствие (r1) составило для А22 №550 - 0,01, А/Ирак/64 - 0,01, А/Иран/97 - 0,05, А/Турция/06 - 0,02, А №2187/Кути/13 - 0,01, А №2171/Кабардино-Балкарский/13 - 0,06. При значении r1≥0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r1<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса [13, 14].
Биотехнологические характеристики
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 репродуцируется в первично-трипсинизированной монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), IB-RS-2, и в течение 17-24 часов инкубирования вируса в указанных культурах клеток накапливается от 6,75 до 7,25 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 24 часа. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 3 пассажей (срок наблюдения).
Гено- и хемотаксономическая характеристика Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А является РНК-сод ержащим вирусом с молекулярной массой 7×106Д.
Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеиновая оболочка отсутствует.
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.
Физические свойства
Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.
Устойчивость к внешним факторам
Штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при рН 7,2-7,6. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам.
Дополнительные признаки и свойства
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.
Антигенная активность - введение инактивированного антигена морским свинкам индуцирует образование вирусоспецифических антител.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 3 пассажей (срок наблюдения).
Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015 по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа А, обладает более высокой протективной и иммуногенной активностью.
Для снижения эпизоотической опасности ящура типа А и предотвращения возникновения новых очагов болезни важна своевременная вакцинопрофилактика, что требует разработки высокоиммуногенной вакцины.
Получена высокоиммуногенная инактивированная эмульсионная вакцина против ящура типа А из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена также примерами его осуществления и использования, которые не ограничивают объем правовой охраны изобретения.
Пример 1. Получение и исследование биологических свойств штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, был выделен в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из проб афтозного материала, полученных в декабре 2015 года от подозреваемых в заболевании ящуром свиней из села Аразап, Армавирский марз, Республика Армения (экспертиза №2269/2015). Пробы афтозного материала поступили в ФГБУ «ВНИИЗЖ» 25 декабря 2015 года.
При выделении вируса с целью получения его однородной популяции, обладающей оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов, предусмотренных методическими указаниями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура [15].
Биологические и вирусологические методы включали:
Выделение вируса проводили в культуре первично-трипсинизированных клеток СП, перевиваемых линиях клеток ПСГК-30, IB-RS-2 с последующей адаптацией в течение 3 пассажей. Применяемые клеточные линии выращивали с использованием требуемых питательных сред в стационарных условиях в культуральных флаконах с площадью поверхности 25 см2, отмывали от ростовой среды и заражали 10%-ной суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦД50 на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% гидролизата лактальбумина (ГЛА) и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали 10% хлороформа. После контакта с вирусом при температуре 37°С в течение 0,5 ч во флаконы вносили по 5 см3 поддерживающей среды и инкубировали при температуре 37°С до появления ЦПД вируса, характеризующегося округлением клеток, дегенерацией и отделением клеток от стекла, повышение оптической плотности суспензии. После развития ЦПД флаконы подвергали процессу замораживания-оттаивания, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000 об/мин (1200 g) в течение 0,25 ч. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК на наличие вирусного антигена, применяя коммерческие типоспецифические сыворотки, хранящихся в музее ФГБУ «ВНИИЗЖ». Возбудитель ящура считали адаптированным к культурам клеток, если в течение 20-24 часов клеточный монослой деструктировал под влиянием вируса на 90-100%.
Вирус, адаптированный к клеткам линий ПСГК-3030, IB-RS-2 и ВНК-21/2-17, использовали с целью получения антигена для РСК. Результаты адаптации вируса к указанным клеточным культурам представлены в таблице 2, данные которой свидетельствуют о высокой адаптационной способности штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А к использованным линиям клеток.
Пример 2. Сравнительный анализ биологических свойств штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 с производственными штамма вируса ящура типа А.
При изучении свойств штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 выявлены значительные преимущества в сравнении с используемыми производственными штаммами.
В таблицах 3 и 4 приведены результаты культивирования штаммов А №2269/ВНИИЗЖ/2015 и А №2187/Кути/2013 вируса ящура типа А, из которых следует:
1) штаммы А №2187/Кути/2013 и А №2269/ВНИИЗЖ/2015 имеют разное время репродукции, 10,30±0,35 и 15,35±0,58 часов, соответственно;
2) процент выхода иммуногенных компонентов при культивировании штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура выше, чем у штамма А №2187/Кути/2013.
Пример 3. Получение инактивированного антигена.
Инактивированную эмульсионную вакцину против ящура типа А производят из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура, выращенного в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21/2-17. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без внесения сыворотки крови с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН 7,4-7,6. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,005-0,200 ТЦД50/клетка.
Культивирование вируса проводят при температуре 36-37°С. Через 6-7 часов инкубирования определяют количество живых и мертвых клеток при окраске трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15-20%, то экспозицию продлевают еще 2-3 часа. При доле мертвых клеток, равной 90-95%, культивирование прекращают, и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S компонентов. Количество 146S компонентов для эмульсионной вакцины в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см3. Количество 146S компонентов для эмульсионной вакцины в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см3.
Пример 4. Исследование влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные (146S) компоненты вируса ящура штаммов А №2269/ВНИИЗЖ/2015 и А №2187/Кути/2013.
По окончании цикла репродукции вируса ящура, не прекращая процесс термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15-20%-ный раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой, корректируя рН 8,0-8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025-0,050%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12-24 часов при температуре 36-37°С и рН 7,2-7,6 с перемешиванием через 5-6 часов в течение 3-5 минут. Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия.
В теплую суспензию добавляют 10%-ный раствор ПГМГ до концентрации 0,005-0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.
В таблице 5 приведены результаты исследований по изучению влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные (146S) компоненты вируса ящура штаммов А №2269/ВНИИЗЖ/2015 и А №2187/Кути/2013. Из таблицы 5 следует, что иммуногенные компоненты штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура не уступают в устойчивости к инактивации и очистке в условиях производства штамму А №2187/Кути/2013. Особенно важным является тот факт, что в процессе инактивации и очистки вируса из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 концентрация 146S компонентов, полученных при репродукции вируса, не снижается.
Пример 5. Изготовление эмульсионной вакцины против вируса ящура из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015.
Антиген вируса ящура получают так, как описано в примерах 3 и 4. Инактивированный антиген вируса ящура контролируют на содержание вирусспецифического белка, 146S компонента вируса, авирулентность и стерильность.
Необходимое количество иммуногенных компонентов 146S достигают при помощи ультрафильтрации. Конечная концентрация 146S компонентов вируса ящура должна быть, не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
Масляный адъювант Montanide ISA-70 стерилизуют в реакторе нагревом. Масляный адъювант Montanide ISA-206 стерилизуют при помощи фильтрации.
Эмульсионную вакцину получают путем диспергирования при помощи проточного смесителя концентрата ящурного антигена и масляного адъюванта Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206 в соотношении 40:60 и 50:50 по весу, соответственно.
Вакцину расфасовывают в стеклянные или пластиковые флаконы и проводят контроль ее стерильности в соответствии с ГОСТ 28085-89.
Пример 6. Оценка авирулентности и безвредности эмульсионной противояшурной вакцины из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015.
Авирулентность и безвредность вакцины оценивают на 5 головах КРС, вводя вакцину сначала под слизистую языка в дозе 2,0 см3, а затем подкожно в дозе 10,0 см3. Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут в течение 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на иммуногенную активность на КРС или на морских свинках.
Для определения авирулентности вакцины на свиньях отобранную пробу вакцинного препарата вводили внутрикожно по 0,1 см3 в две точки венчика на каждой конечности. В исследовании использовали свиней массой 35-40 кг. В течение 10 суток наблюдения животные остались клинически здоровыми, и при патологоанатомическом исследовании не было обнаружено изменений, характерных для ящура. Это свидетельствовало об отсутствии вирулентных свойств разработанной вакцины.
Контроль безвредности продукта на свиньях проводили путем внутримышечного введения вакцины в область верхней трети шеи в дозе 6 см3. Срок наблюдения также составлял 10 суток. Следует отметить, что после инокуляции температура тела животного может повышаться до 41°С и удерживаться на этом уровне в течение 1-3 суток.
По результатам исследований вакцина была признана безвредной, все животные в период наблюдения оставались клинически здоровыми, при патологоанатомическом анализе некроза тканей на месте введения вакцины не обнаружено.
Эмульсионная вакцина представляет собой молокоподобную жидкость, не растворимую в воде.
Оптимальный компонентный состав полученной эмульсионной вакцины против ящура типа А указаны в таблицах 6 и 7.
Пример 7. Сравнительный анализ гуморального иммунитета у подсвинков привитых эмульсионной вакциной против ящура.
Проведены испытания антигенной и протективной активности эмульсионной вакцины против вируса ящура типа А на подсвинках, изготовленный так, как описано в примерах 3-5 и содержащей следующие компоненты, мкг/см3 в дозе:
| авирулентный и очищенный | |
| антигенный материал из штамма | |
| А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А | 3,2 |
| ISA-70 | 630000,0. |
Животных иммунизировали внутримышечно в дозе 2 см3.
Результаты испытаний приведены в таблице 8. По результатам, указанным в таблице видно, что на 28 сутки после иммунизации уровень гуморального иммунитета против гетерологичных штаммов составил от 1,75±0,14 log2 до 3,95±0,35 log2, что в 1,22-3,35 раз ниже, чем против штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015.
Пример 8. Проведены испытания антигенной и протективной активности эмульсионной вакцины против вируса ящура типа А на КРС, изготовленный так, как описано в примерах 3 и 5 и содержащей следующие компоненты, мкг/см3 в дозе:
| авирулентный и очищенный | |
| антигенный материал из штамма | |
| А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура типа А | 3,1 |
| ISA-206 | 560000,0. |
Авирулентность и безвредность полученной вакцины оценивали на 5 головах КРС. Препарат вводили каждому животному под слизистую языка в дозе 2,0 см3, а затем подкожно в дозе 10,0 см3. Наблюдение за клиническим состоянием животных вели в течение 10 суток. На протяжении всего срока наблюдения отклонений в клиническом состоянии животных не было выявлено, что подтверждает авирулентность и безвредность введенной вакцины.
По окончании контроля на авирулентность и безвредность вакцину проверили на иммуногенную активность по отношению к КРС. Испытание проводили с использованием 15 голов КРС. Результаты испытания вакцины представлены в таблице 9. Иммунизирующая доза (ИмД50) препарата была составляла 0,19 см3, т.е. в прививной дозе вакцины содержалось 10,5 ПД50.
По рекомендациям OIE (МЭБ), вакцина против ящура должна содержать, не менее 6 PD50 в прививном объеме для КРС [16]. Иными словами, изготовленная инактивированная эмульсионная вакцина из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура имеет высокую иммуногенную активность.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о том, что вакцина эмульсионная инактивированная против ящура типа А, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии; подтверждена возможность осуществления представленного; вакцина, изготовленная из штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015 в соответствии с предлагаемым изобретением обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа А, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Среднего и Ближнего Востока.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А»:
1. Domingo, Е. Evolution of FMD virus / E. Domingo, C. Escarmis, E. Baranovski // Virus Res. - 2003. - Vol. 91. - P. 47-63.
2. Узюмов, В.Л. Ультраструктура и физико-химические свойства вируса ящура / В.Л. Узюмов: Фрунзе: Кыргызстан, 1970. - 246 с.
3. Дудников А.И., Борисов В.В., Дудников С.А. Противоящурный иммунитет и практические достижения в области противоящурной защиты // Пробл. 
та вет. Медицини: зб. наук. прац. - 
, 2007. -Вип. 15(40). - Ч. 2, - т. 1. - С. 116-120.
4. Патент Франции №2088038; А61К 27/00, С12К 5/00; 07.01.1972 г.
5. Авт. свид. СССР №411131, С12К 5/00, 15.01.1974 г.
6. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины моновалентной эмульсионной против ящура типа А, типа О, типа С, типа Азия-1 (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21). Утверждена ГУВ Госкомиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам 24.01.1991 г.
7. Патент РФ №2143921, А61К 39/135, С07К 14/09, C12N 7/00, 7/04; 10.01.2000 г. (прототип).
8. Патент РФ №2553219, C12N 7/00, 10.06.2015 г.
9. Патент РФ №594771, А61К 39/12, 07.07.93 г.
10. Патент РФ №2054039, C12N 7/02, А61К 39/135, 10.02.1996 г.
11. Заявка на изобретение №2016127971/10 от 12.07.2016 г.
12. Авт. свид. СССР №784335, C12Q 1/02, 20.03.2000 г.
13. Selection of foot-and-mouth disease vaccine strains a review / D.J. Paton, J.F. Valacher, J. Bergman [et al.] // Rev. Sci. Tech. OIE. - 2005. - Vol. 24(3). - P. 981-983.
14. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 7th Ed.-, Paris, 2012-Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.
15. Методические указания по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура / Гусев А.А., Захаров В.М., Шажко Ж.А. [и др.]. Владимир, 2002,31 с.
16. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals -24th Ed. -, Paris, 2016-Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.
Примечание: * ВСБ - вирусспецифический белок
Примечание: * ВСБ - вирусспецифическии белок
Примечание: * ВСБ - вирусспецифическии белок
Примечание: А №2269 - штамм А № 2269/ВНИИЗЖ/2015 культурального вируса ящура,
А Турция - штамм А №2029/Турция/2006 культурального вируса ящура,
А КБР - штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 культурального вируса ящура,
А Кути - штамм А №2187/Кути/2013 культурального вируса ящура,
А22 Ирак - штамм А22 Ирак 24/64 культурального вируса ящура
Примечание: * «-» - отсутствие клинических признаков заболевания,
«+» - наличие клинических признаков ящура,
ИмД50 - иммунизирующая доза,
ПД50 - протективная (защитная) доза вакцины для 50% животных
Claims (16)
1. Вакцина инактивированная против ящура типа А, содержащая активное вещество и целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса ящура Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, типа А, депонированого в Коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») под регистрационным номером (авторским наименованием): штамм ВЯ А №2269/ВНИИЗЖ/2015 (производственный), (контрольный КРС), (контрольный свиной), в эффективном количестве.
2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А.
3. Вакцина по п. 2, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А.
4. Вакцина по п. 3, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А №2269/ВНИИЗЖ/2015 в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
5. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит масляный адъювант Montanide ISA-70.
6. Вакцина по п. 5, отличающаяся тем, что она содержит масляный адъювант Montanide ISA-70 предпочтительно в количестве 600000,0-700000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
7. Вакцина по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А, масляный адъювант Montanide ISA-70 в соотношении, мкг в 1 см3 готового препарата:
8. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит масляный адъювант Montanide ISA-206.
9. Вакцина по п. 8, отличающаяся тем, что она содержит масляный адъювант Montanide ISA-206 предпочтительно в количестве 500000,0-575000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.
10. Вакцина по любому из пп. 1-4 и 8-9, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма А №2269/ВНИИЗЖ/2015, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А, масляный адъювант Montanide ISA-206 в соотношении, мкг в 1 см3 готового препарата:
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017145754A RU2665850C1 (ru) | 2017-12-25 | 2017-12-25 | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017145754A RU2665850C1 (ru) | 2017-12-25 | 2017-12-25 | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2665850C1 true RU2665850C1 (ru) | 2018-09-04 |
Family
ID=63460212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017145754A RU2665850C1 (ru) | 2017-12-25 | 2017-12-25 | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2665850C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2772713C1 (ru) * | 2021-05-12 | 2022-05-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина для ранней защиты против ящура из штамма А 2205/G IV культуральная инактивированная эмульсионная |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2526570C2 (ru) * | 2012-08-09 | 2014-08-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная |
| RU2593718C1 (ru) * | 2015-03-16 | 2016-08-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов а, о, азия-1 |
-
2017
- 2017-12-25 RU RU2017145754A patent/RU2665850C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2526570C2 (ru) * | 2012-08-09 | 2014-08-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная |
| RU2593718C1 (ru) * | 2015-03-16 | 2016-08-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов а, о, азия-1 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2772713C1 (ru) * | 2021-05-12 | 2022-05-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина для ранней защиты против ящура из штамма А 2205/G IV культуральная инактивированная эмульсионная |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8277814B2 (en) | Avian Astrovirus | |
| RU2593718C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов а, о, азия-1 | |
| EP3688146A1 (en) | Porcine astroviruses and the uses thereof | |
| RU2451745C2 (ru) | ШТАММ А 2045/КИРГИЗИЯ/2007 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А | |
| RU2603003C1 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типов а, о, азия-1 | |
| WO2014167582A2 (en) | Vaccine composition for prophylaxis in ruminants | |
| RU2699671C1 (ru) | Вакцина для ранней защиты против ящура типа О инактивированная эмульсионная | |
| RU2665849C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О | |
| RU2663004C2 (ru) | Стабилизированные капсиды fmdv | |
| RU2682876C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О | |
| RU2563522C1 (ru) | ШТАММ О №2102/Забайкальский/2010 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА О ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА О | |
| RU2143921C1 (ru) | Вакцина против ящура типа а и способ ее изготовления | |
| RU2665850C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А | |
| RU2242513C1 (ru) | Штамм а (грузия) 1999/№1721 вируса ящура типа а для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2681815C1 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А | |
| RU2220744C1 (ru) | Вакцина против ящура типа азия-1 и способ ее изготовления | |
| RU2212895C2 (ru) | Вакцина против ящура типа о и способ ее изготовления | |
| RU2603255C9 (ru) | ШТАММ А №2155/Забайкальский/2013 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А | |
| RU2204599C1 (ru) | Штамм № 1734 "приморский-2000" вируса ящура типа о для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2140452C1 (ru) | Штамм n 1707 "армения-98" вируса ящура типа a для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2294760C2 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а | |
| RU2526570C2 (ru) | Вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная | |
| RU2348690C2 (ru) | Штамм "амурский" № 1987 вируса ящура типа азия-1 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа азия-1 | |
| RU2563345C1 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а | |
| RU2741639C1 (ru) | Вакцина для ранней защиты против ящура типа Азия-1 инактивированная эмульсионная |