RU2563522C1 - ШТАММ О №2102/Забайкальский/2010 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА О ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА О - Google Patents
ШТАММ О №2102/Забайкальский/2010 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА О ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА О Download PDFInfo
- Publication number
- RU2563522C1 RU2563522C1 RU2014132227/10A RU2014132227A RU2563522C1 RU 2563522 C1 RU2563522 C1 RU 2563522C1 RU 2014132227/10 A RU2014132227/10 A RU 2014132227/10A RU 2014132227 A RU2014132227 A RU 2014132227A RU 2563522 C1 RU2563522 C1 RU 2563522C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- strain
- fmd
- activity
- antigenic
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 79
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 44
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 title description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 19
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 claims description 46
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 claims description 22
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 12
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 8
- 241000700198 Cavia Species 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- 241001250090 Capra ibex Species 0.000 claims description 2
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 claims description 2
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 claims description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims 4
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 18
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 23
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 22
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 21
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 10
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 6
- 241000710194 Foot-and-mouth disease virus - type O Species 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 5
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000000254 composite pulse decoupling sequence Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 101150024766 VP1 gene Proteins 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001573881 Corolla Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 description 2
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- WMWXXXSCZVGQAR-UHFFFAOYSA-N dialuminum;oxygen(2-);hydrate Chemical compound O.[O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] WMWXXXSCZVGQAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- -1 freon Chemical compound 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 210000004777 protein coat Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером вирус ящура штамм О №2102/Забайкальский/2010. Представленный штамм репродуцируется в монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах ПСГК-30, ВНК-21 и IBRS-2, в течение 18-24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает значений 6,63-7,5 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 5 часов, сохраняя исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 10 пассажей. Представленный штамм может быть использован для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О. 5 з.п. ф-лы, 1 ил., 8 табл., 9 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности к новому штамму вируса ящура Aphtae epizooticae, и может быть использовано для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин, а также при разработке и изготовлении средств диагностики и специфической профилактики ящура типа О.
Ящур - это острое, контагиозное вирусное заболевание парнокопытных животных, проявляющееся лихорадкой, везикулярными (афтозными) поражениями слизистой оболочки ротовой полости, бесшерстных участков кожи головы, вымени, венчика, межкопытной щели и сопровождающееся нарушением движения. Для этого возбудителя характерна тенденция к широкому распространению и эпизоотическому течению. Болезнь сопровождается большими потерями молока, мяса и других видов животноводческой продукции, затрудняет коммерческие операции и хозяйственную деятельность. Многолетний опыт показывает, что при эндемичном ящуре снижаются доходы в молочном и мясном животноводстве на (%): 30-40 [1].
Вирус ящура относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus. Он имеет 7 антигенных типов, большое количество подтипов и множество штаммов [2].
Возбудитель ящура обладает значительной антигенной вариабельностью штаммов в пределах одного серотипа, которая выявляется в различные временные промежутки и на разных территориях и зависит от видового состава восприимчивого поголовья, его иммунного статуса и множества других различных факторов. Антигенная изменчивость вируса ящура обусловлена заменами аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), экспонированных на поверхности капсидных белков [2, 3].
Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого штамма, могут варьировать от незначительных, улавливаемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма с большой вероятностью вызывают ослабление специфического иммунитета, индуцированного негомологичным антигеном. Они вызывают также затруднения штаммоспецифической диагностики.
В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики.
Известны штаммы вируса ящура типа О, использовавшиеся в качестве производственных на территории России в течение последних 50 лет. К ним относятся следующие штаммы: O1 №1618 Чечено-Ингушский, выделенный в 1966 году; O1 №194, выделенный в 1957 году в Волгоградской области. Указанные штаммы использовали для получения диагностикумов и противоящурных вакцин, применявшихся в различных регионах страны, в настоящее время поддерживаются в коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ».
Известен штамм типа О №1736/Абхазия/2000, выделенный от КРС в Гальском районе Абхазии, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.
Известен штамм типа О №1964/Монголия/2004, выделенный от КРС в феврале 2004 г. в Восточно-гобийском аймаке Монголии, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов [4].
Известен штамм типа О №1734 «Приморский-2000», выделенный 13.04.2000 г. от свиней в ОПХ «Степное» с. Элитное Уссурийского района Приморского края [5, 6].
Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм типа О №1734 «Приморский-2000» принадлежит к Паназиатской генетической линии вируса ящура типа О. Паназиатский вирус вызвал пандемию ящура в 1999-2000 годах в большинстве стран Азии, в том числе во Вьетнаме, Японии, Корее, Монголии, а также Армении и Грузии. Опустошительная эпизоотия ящура в Великобритании в 2001 г. также была вызвана паназиатским вирусом. Исследуемый вирус имеет наиболее высокий уровень гомологии (98,74%) с изолятами О Вьетнам/99 и О Тайвань/99. Установлено, что изолят О №1734 «Приморский-2000» отличается от всех выделенных ранее изолятов, в том числе и от штаммов O1 №194 и O1 №1618, используемых для изготовления средств диагностики и специфической профилактики.
Производственный штамм №1734 «Приморский-2000» используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах-членах СНГ.
В 2010 г. в Японии, Южной Корее, Гонконге и континентальном Китае вспышки ящура типа О были вызваны вирусом топотипа Юго-Восточная Азия, относящимся к генетической линии Муа-98 [7].
Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм №1734 "Приморский-2000" вируса ящура типа О для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.
Недостатки известных штаммов, в том числе и штамма-прототипа, состоят в антигенных отличиях от изолятов вируса ящура типа О, выделенных в различные временные промежутки, а приготовленные на их основе вакцины обеспечивают эффективную защиту животных только против заражения гомологичным вирусом.
Вспышка ящура на территории РФ была отмечена в июле 2010 г. во дворах у жителей поселка Абагайтуй Забайкальского района в 12 км от границы с Китаем в буферной зоне, где КРС и МРС с профилактической целью вакцинировали против ящура типов О, А, Азия-1. Из 2256 голов КРС разного возраста, имевшихся у жителей, переболело 112 голов (5%), из 50 свиней - 4.
В связи с этим возникла необходимость получить новый производственный штамм из эпизоотического вируса ящура серотипа О для обеспечения безопасности территории России и сопредельных государств от этого возбудителя.
Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, заключается в расширении арсенала производственных штаммов вируса ящура серотипа О, обладающих высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и сохраняющих антигенную и иммуногенную активность после инактивации, пригодных для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин, изготовления чувствительных и высокоспецифичных диагностикумов и высокоиммуногенных вакцинных препаратов, гомологичных эпизоотическому вирусу, появившемуся на территории России.
Указанная задача решена получением штамма О №2102/Забайкальский/2010 (авторское наименование) вируса ящура для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма О №2102/Забайкальский/2010, был выделен в июле 2010 года от больной свиньи в поселке Абагайтуй Забайкальского района Забайкальского края (экспертиза №2102). Производственный штамм О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.
Штамм О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О депонирован 01 марта 2012 года в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») под регистрационным номером (ссылкой): вирус ящура штамм О №2102/Забайкальский/2010 (производственный).
По сравнению со штаммом-прототипом штамм 0№2102/Забайкальский/2010 обладает более высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации.
Экспериментально подтверждена возможность использования штамма O №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О.
Сущность изобретения пояснена на графическом изображении. Представлена дендрограмма, отражающая филогенетические взаимоотношения штамма O №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура серологического типа О. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1.
Сущность изобретения пояснена следующим перечнем последовательностей:
SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О;
SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот гена белка VP1 штамма О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О.
Штамм О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические признаки
Штамм О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О относится к семейству Picomaviridae, роду Aphtovirus, серотипу О и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.
Антигенные свойства
По своим антигенным свойствам штамм О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура относится к серотипу О. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). При иммунизации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА и РМН.
При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного штамма типа О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в РСК в разведении 1:30 и в ИФА в разведении 1:10000.
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 штамма О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура и выведена первичная структура белка VP1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О имеет близкое филогенетическое родство с изолятами, выделенными в Гонконге, Южной Корее, Японии и континентальном Китае в 2010 г. и значительно отличается от штаммов O1 Manisa, О №1734 «Приморский-2000» сублинии PanAsia, а также от вируса топотипа Средний Восток - Южная Азия (ME-SA) сублинии О PanAsia2. Гомология изолятов О №2102/Забайкальский/2010 и О/Гонконг/20/2010 составляет 97%.
Таким образом, филогенетический анализ показал, что штамм О №2102/Забайкальский/2010 принадлежит к топотипу Юго-Восточная Азия (SEA) генетической линии Муа-98 вируса ящура серологического типа О.
Антигенное родство штамма О №2102/Забайкальский/2010 с производственными штаммами вируса ящура O1 Manisa, О №1734/Приморский/2000 и О PanAsia2 изучено в ИФА и РМН.
Результаты исследований в РМН представлены в таблице 1. Антигенное соответствие (r1) составило для O1 Manisa - 0,31, О №1734 «Приморский-2000» - 0,36, О PanAsia2 - 0,3. При значении r1>0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r1<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса [8].
Результаты исследований в ИФА представлены в таблице 2. Антигенное соответствие (r1) составило для O1 №1618 - 0,22, О №1734/Приморский/2000 - 0,35, О PanAsia2 - 0,23. При значении r1 - 0,4-1,0 производственный штамм находится в близком антигенном родстве; при значении r1 - 0,2-0,39 - полевой изолят антигенно родственен производственному штамму, вакцина из производственного штамма может быть использована, если не будет найдено более родственного штамма и при условии, что животные будут иммунизированы более 1 раза; при значении r1<0,2 - полевой изолят отличается от производственного штамма, вакцина из которого не приемлема для защиты от заражения полевым вирусом.
Биотехнологические характеристики
Штамм О №2102/Забайкальский/2010 репродуцируется в монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки сирийского хомячка (ВНК-21) и почки свиньи (IB-RS-2). В течение 18-24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает значений от 6,0 до 7,5 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 10 пассажей (срок наблюдения).
Гено- и хемотаксономическая характеристики
Штамм О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×106Д.
Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VР3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VР66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.
Физические свойства
Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.
Устойчивость к внешним факторам
Штамм О №2102/Забайкальский/2010 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при рН 7,2-7,6. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам.
Дополнительные признаки и свойства
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей (срок наблюдения).
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.
Пример 1
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма О №2102/Забайкальский/2010, был выделен в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из проб афтозного материала, полученных в июле 2010 года от подозреваемой в заболевании ящуром свиньи из поселка Абагайтуй Забайкальского района Забайкальского края (экспертиза №2102/2010). Пробы афтозного материала поступили в ФГБУ «ВНИИЗЖ» 18 июля 2010 года.
При выделении вируса с целью получения его однородной популяции, обладающей оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов, предусмотренных методическими указаниями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура [9].
Биологические и вирусологические методы включали в себя выделение вируса и его адаптацию.
Выделение вируса на культуре первично трипсинизированных клеток СП, перевиваемых линиях клеток ПСГК-30, IB-RS-2, ВНК-21 и свиньях с последующей адаптацией (3 пассажа). Для постановки биопроб на первичных и перевиваемых культурах клеток их выращивали на соответствующих питательных средах, в стационарных условиях во флаконах с площадью поверхности 25 см2, отмывали от ростовой среды и заражали 10% суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦД50 на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% гидролизата лактальбумина (ГЛА) и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали 10% хлороформа. После 30-минутного контакта при 37°С во флаконы вносили по 5 см3 поддерживающей среды и инкубировали при 37°С до появления ЦПД вируса. При наличии ЦПД (округление клеток, повышение их оптической плотности, дегенерация и отделение клеток от стекла) флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000 g в течение 15 мин. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК и ИФА на наличие вирусного антигена, при этом использовали коммерческие типоспецифические сыворотки, хранящиеся в музее штаммов ФГБУ «ВНИИЗЖ» и «Набор для выявления антигена вируса ящура в ИФА», изготовленный ФГБУ «ВНИИЗЖ». Вирус считался адаптированным к культурам клеток, если в течение 18-24 часов проявлялось (%) 90-100 ЦПД в монослое.
Адаптация эпизоотического изолята О №2102/Забайкальский/2010 к различным клеточным линиям наступала на уровне 3 пассажей. Вирус, адаптированный к культуре клеток ПСГК-30, был использован для заражения суспензии клеток ВНК-21 с целью получения антигена для изготовления экспериментальной серии вакцины, а также для гипериммунизации морских свинок.
Вирус, адаптированный к культурам клеток IB-RS-2? использовали для получения антигена для РСК и ИФА.
Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 3.
Данные, приведенные в таблице 3, свидетельствуют о высокой адаптационной способности штамма О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О к использованным клеточным культурам.
Изолированный с помощью перечисленных методов вирусный препарат был исследован в реакциях: РСК и ИФА с целью идентификации его типовой принадлежности (таблицы 4 и 5). Проведена проверка штамма на стерильность, отсутствие контаминации бактериальной и грибной микрофлорой и микоплазмами, а также посторонними вирусами в ПЦР и ОТ-ПЦР.
Приведенные в таблицах 4 и 5 результаты свидетельствуют о том, что в афтозном материале экспертизы №2102/Забайкальский/2010 выявлен антиген вируса ящура типа О в разведении 1:2 в РСК и 1:16 в ИФА.
Контаминации бактериальной и грибной микрофлорой, микоплазмами и посторонними вирусами не обнаружено.
Пример 2
Для гипериммунизации морских свинок используют антиген из штамма O №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О, репродуцированный в монослойной культуре клеток ПСГК-30. Вируссодержащую суспензию концентрируют в 100 раз добавлением 8-10% полиэтиленгликоля (ПЭГ) м.м. 6000, очищают от балластных примесей добавлением 10% хлороформа. Очищенный вирус инактивируют аминоэтилэтиленимином (АЭЭИ) в концентрации 0,025-0,05% при значении рН 8,0-8,3.
Инактивированный концентрат антигена в смеси с равным объемом масляного адъюванта типа неполного адъюванта Фрейнда вводят морским свинкам в объеме 1,0 см3 внутримышечно. Через 21 и 7 дней иммунизацию повторяют и через 10 дней после последнего введения антигена животных обескровливают. Индивидуальные пробы сыворотки крови проверяют на типовую специфичность и активность в РСК в соответствии с методическими рекомендациями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура [9].
После этого готовят серию путем смешивания типоспецифичных индивидуальных проб сыворотки одинаковой активности. Штаммовую специфичность серийного препарата определяют в одно- и двусторонних реакциях с гомо- и гетерологичными антигенами.
После консервирования азидом натрия (1:5000) и выдерживания при температуре 4°С в течение 30 дней полученную сыворотку фасуют во флаконы по 0,5-1,0 см3 и высушивают методом сублимации под вакуумом.
Способом, описанным в примере 2, была приготовлена 1 серия гипериммунной сыворотки, характеристика которой представлена в таблице 6.
Данные, приведенные в таблице 6, свидетельствуют о том, что получена диагностическая сыворотка, по специфической активности отвечающая требованиям ГОСТа 25384-82.
Пример 3
Для получения антигена для серологических и иммунохимических реакций используют штамм О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура Aphtae epizooticae, адаптированный к культуре клеток перевиваемых линий ВПК-21, ПСГК-30 и IB-RS-2. Для адаптации используют вируссодержащий материал в виде 10% афтозной суспензии. Пассирование проводят в течение 3-5 последовательных пассажей. Полученный вирус используют для наработки вирусного сырья. Заражение клеточных культур и сбор вирусного материала проводят по общепринятой методике.
Полученную вируссодержащую суспензию концентрируют в 100 раз добавлением (%) 8-10 ПЭГ. Полученный концентрат инактивируют АЭЭИ, фасуют во флаконы и высушивают методом сублимации под вакуумом.
Антиген, полученный на культуре клеток ВНК-21, используется для получения иммуноспецифических компонентов для ИФА.
Указанным способом было приготовлено 3 серии диагностического антигена, характеристики которой приведены в таблице 7.
Результаты исследований, приведенные в таблице 7, свидетельствуют, что получены диагностические антигены, специфическая активность которых соответствует требованиям ГОСТа 25384-82.
Пример 4
Для изготовления вакцины инактивированной сорбированной типа О штамма О №2102/Забайкальский/2010 вирус ящура репродуцируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН 7,2-7,4. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,001-0,05 ТЦЦ50 на клетку. Культивирование вируса ведут при температуре (36°С)-(37°С). Через 8-10 часов культивирования проводят подсчет живых и мертвых клеток путем окраски трипановым синим. Если количество живых клеток составляет (%) 15-20, то культивирование продолжают еще 2-3 часа. При достижении количества мертвых клеток (%) 90-95 культивирование прекращают и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S и 75 S компонентов.
Количество 146S и 75S компонентов в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см3. Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15-20%-ный раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до рН 8,0-8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной (%) 0,025-0,05. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12-24 часов при (36°С)-(37°С) и рН 7,2-7,6 с перемешиванием через 5-6 часов в течение 3-5 минут. По окончании инактивации суспензию антигена охлаждают до (4°С)-(8°С). В охлажденную суспензию добавляют 10%-ный раствор ПГМГ до концентрации 0,005-0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией. Полученный антиген контролируют на авирулентность, содержание вирусспецифического белка, 146S и 75S компонентов вируса и стерильность. Необходимую концентрацию 146S и 75S компонентов в прививной дозе адсорбированной вакцины получают путем концентрирования антигена гелем гидрата окиси алюминия (ГОА).
Расчетный объем геля ГОА 3%-ной концентрации добавляют в охлажденную суспензию антигена при работающей мешалке. Перемешивание ведут в течение 30 минут. После седиментации геля ГОА сливают расчетный объем оставшейся суспензии. Конечная концентрация ГОА должна быть в пределах 1,62±0,488 мг/см3 Р<0,01 n=10, а концентрация 146S и 75S компонентов вируса ящура не менее 3,0 мкг/см3. Затем в суспензию добавляют дополнительно 10%-ный раствор сапонина до конечной концентрации не менее 0,075%.
Полученную вакцину расфасовывают в стеклянные флаконы и проводят контроль стерильности по ГОСТ 28085-89.
Авирулентность и безвредность вакцины проверяют на 5 головах КРС, вводя вакцину сначала под слизистую языка в дозе 2 см3, затем подкожно в дозе 10 см3. Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут в течение 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на иммуногенную активность на КРС или морских свинках.
Полученная вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым белым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.
Пример 5
Проведены испытания на КРС противоящурной вакцины инактивированной сорбированной из штамма О №2102/Забайкальский/2010, изготовленной так, как описано в примере 4.
КРС массой 200-250 кг иммунизировали подкожно, вводя по 2 см3 цельной вакцины. Вакцина в цельном виде уже на 7 день после прививки индуцировала достаточный уровень вируснейтрализующих антител (1,78±0,11 lg), а к 35 дню после вакцинации количество вируснейтрализующих антител (ВНА) увеличилось до 2,11±0,26 lg (таблица 8). После контрольного заражения заболели с генерализацией процесса 2 контрольных головы КРС и 1 вакцинированная голова КРС.
Пример 6
Для изготовления вакцины инактивированной эмульсионной против ящура типа О вирус штамма О №2102/Забайкальский/2010 репродуцируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21, инактивируют, очищают от балластных примесей, контролируют полученный антиген на авирулентность, содержание вирусспецифического белка, 146S и 75S компонентов вируса и стерильность так, как описано в примере 4.
Необходимую концентрацию 146S и 75S компонентов в прививной дозе эмульсионной вакцины получают путем концентрирования антигена проточной ультрафильтрацией. Для этого используют ультрафильтры БТУ 0,5-2. Полученный концентрат антигена хранят при 4-6°С до момента использования в вакцине.
Эмульсионную вакцину получают путем диспергирования на коллоидных мельницах концентрата антигена и масляного адъюванта в соотношении 3:7-1:1 соответственно. Из масляных адъювантов, которые применяются в ФГБУ «ВНИИЗЖ» (ГОА, сапонин), а также масляный адъювант марки Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206 производства фирмы «Seppic» (Франция, стандарт ИСО 9001).
В результате получают вакцину инактивированную эмульсионную против вируса ящура типа О, которая представляет собой молокоподобную жидкость, нерастворимую в воде. Вакцина имеет жидкую консистенцию, легко рассасывается в месте введения, не вызывает образования абсцессов, общей реакции в виде подъема температуры и обладает выраженной иммуногенностью для КРС в дозе 2 см3 через 35 дней после вакцинации. Вакцину вводят КРС подкожно. В прививном объеме должно содержаться не менее 4 мкг 146S и 75S компонентов.
Пример 7
Проведены испытания иммуногенной активности противоящурной вакцины инактивированной эмульсионной из штамма О №2102/Забайкальский/2010, изготовленной так, как описано в примере 6. Иммуногенная активность данной вакцины проверена на КРС массой 200-250 кг. Результаты исследований представлены в таблице 8. КРС, привитые цельной вакциной на основе адъюванта марки Montanide ISA-70, на 35 день после вакцинации имели титр ВНА, равный 2,63±0,16 lg, а на основе адъюванта марки Montanide ISA-206 - 2,57±0,16 lg. После контрольного заражения заболели с генерализацией процесса только 2 контрольных головы КРС.
Пример 8
Штамм О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О, предназначенный для контроля иммуногенной активности противоящурных вакцин на КРС, готовят следующим образом. Полученный вирус предварительно освежают на КРС, заражая 1-2 животных массой 250-300 кг, доставленных из благополучных по ящуру зон страны, где в течение последних 2-х лет не проводили вакцинацию животных против ящура. Количество пассажей вируса не должно превышать 20, начиная от исходного вируса. Суспензию вируса, содержащую 10000-10000000 ИД50/1 см3 с антибиотиками, вводят по 0,2-0,3 см3 в 20-40 каналов интрадермалингвально по всей поверхности языка. Зараженных животных не кормят до снятия вируса. Через 20-30 часов после заражения афты снимают по мере их созревания. Лимфу собирают шприцем. На основе собранного афтозного материала готовят 20%-ную суспензию вируса, которую очищают от балластных примесей с последующим добавлением в нее антибиотиков и равного объема глицерина. Полученную 10% суспензию вируса оценивают в РСК на типоспецифичность и методом ОТ-ПЦР с последующим проведением нуклеотидного секвенирования на соответствие исходному вирусу по первичной структуре гена VP1. Активность вируса в РСК должна быть не ниже 1:4.
Инфекционную активность вируса определяют на КРС и в первичной культуре клеток СП. Контрольный вирус должен иметь титр инфекционной активности не менее 104,0 ИД50/0,1 см3. Флаконы с суспензией вируса в присутствии глицерина хранят в холодильнике при температуре минус (70°С - 40°С).
Пример 9
Штамм О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О, предназначенный для контроля иммуногенной активности противоящурных вакцин на свиньях, готовят следующим образом. Полученный вирус предварительно освежают на свиньях, заражая 1-2 животных массой 30-50 кг, доставленных из благополучных по ящуру зон страны, где в течение 2 лет не проводили вакцинацию скота против ящура. Вируссодержащую суспензию вводят под слизистую оболочку языка или в кожу венчика конечностей. Созревшие афты снимают через 24-72 часа после заражения. Приготовление суспензии вируса и контроль его активности осуществляют так, как описано в примере 8. Титрование инфекционной активности вируса ящура проводят на свиньях и в культуре клеток СП. Контрольный вирус должен иметь титр инфекционной активности не менее 104,0 ИД50/0,1 см3.
Источники информации
1. Рёрер X. Ящур. Пер. с нем. Г.А. Сурковой. / Под ред. и с предисл. канд. вет. наук. П.В. Малярца. - М.: Колос, 1971, 432 с.
2. Ящур / А.Н. Бурдов, А.И. Дудников, П.В. Малярец [и др.] - М., Агропромиздат, 1990, 320 с.
3. Вирусные болезни животных / Сюрин В.П., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В. [и др.] - М., ВНИИТИБП, 1998, С.532-548.
4. Иммунобиологические свойства эпизоотического штамма вируса ящура типа О №1964/Монголия/2004 / Т.А. Фомина, В.К. Спирин, А.И. Егорова [и др.] // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2005. - Т. 3. - С. 94-104.
5. Иммунобиологические свойства эпизоотического штамма вируса ящура типа О №1734 «Приморский-2000» / В.К. Спирин, А.И. Егорова, С.Р. Кременчугская [и др.] // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2007. - Т. 5. - С. 52-57.
6. Пат. РФ №2204599, C12N 7/00, А61К 39/135, 20.05.2003 г.
7. Southeast Asian Foot-and-Mouth Disease Vimses in Eastern Asia / N.J. Knowles, J.J. He, Y. Shang [et al] // Emerg Infect Dis. - 2012. - V. 18(3): P. 499-501.
8. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals (mammals, birds and beers). - 7th Edition, Paris, 2008. - Vol. 1. - P. 203-207
9. Методические указания по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура / Гусев А.А., Захаров В.М., Шажко Ж.А. [и др.]. Владимир, 2002, 31 с.
Claims (6)
1. Штамм вируса ящура Aphtae epizooticae типа О, сем. Picornaviridae, род Aphtovirus, депонированный в коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером вирус ящура штамм О №2102/3абайкальский/2010 (производственный) для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О, характеризующийся тем, что он получен в течение последовательного пассирования в культурах клеток гомологичного и гетерологичного происхождения, обладает высокой биологической активностью в нативном виде и сохраняет высокую антигенную и иммуногенную активность после инактивации.
2. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он получен в течение 3 последовательных пассажей в первично трипсинизированной культуре клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30) с титром инфекционной активности не менее 6,63 lg ТЦД50/см3 и антигенной активностью в реакции связывания комплемента (РСК) 1:4.
3. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он получен в течение 3 последовательных пассажей в перевиваемой культуре клеток свиной почки (СП) с титром инфекционной активности не менее 7,0 lg ТЦД50/см3 и антигенной активностью в реакции связывания комплемента (РСК) 1:8.
4. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он получен в течение 3 последовательных пассажей в перевиваемой культуре клеток почки свиньи (IB-RS-2) с титром инфекционной активности не менее 6,75 lg ТЦД50/см3 и антигенной активностью в реакции связывания комплемента (РСК) 1:6.
5. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он получен в течение нескольких последовательных пассажей в перевиваемой культуре клеток почки сирийского хомячка (ВНК-21) с титром инфекционной активности не менее 7,5 lg ТЦД50/см3 и антигенной активностью в реакции связывания комплемента (РСК) 1:12.
6. Штамм по любому из пп.1-5, характеризующийся тем, что после инактивации он индуцирует в организме морских свинок образование вирусоспецифических антител, выявляемых в РСК в разведениях 1:30 и в ИФА в разведении 1:10000.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014132227/10A RU2563522C1 (ru) | 2014-08-06 | 2014-08-06 | ШТАММ О №2102/Забайкальский/2010 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА О ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА О |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014132227/10A RU2563522C1 (ru) | 2014-08-06 | 2014-08-06 | ШТАММ О №2102/Забайкальский/2010 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА О ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА О |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2563522C1 true RU2563522C1 (ru) | 2015-09-20 |
Family
ID=54147853
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014132227/10A RU2563522C1 (ru) | 2014-08-06 | 2014-08-06 | ШТАММ О №2102/Забайкальский/2010 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА О ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА О |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2563522C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2650768C1 (ru) * | 2016-10-14 | 2018-04-17 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Штамм О N 2212/Приморский/2014 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О |
| RU2658608C1 (ru) * | 2017-11-02 | 2018-06-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Штамм О N 2311/Забайкальский/2016 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2204599C1 (ru) * | 2001-11-01 | 2003-05-20 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Штамм № 1734 "приморский-2000" вируса ящура типа о для изготовления диагностических и вакцинных препаратов |
-
2014
- 2014-08-06 RU RU2014132227/10A patent/RU2563522C1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2204599C1 (ru) * | 2001-11-01 | 2003-05-20 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Штамм № 1734 "приморский-2000" вируса ящура типа о для изготовления диагностических и вакцинных препаратов |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ФОМИНА Т.А. и др., Иммунобиологические свойства эпизоотического штамма вируса ящура типа О N1964/Монголия/2004/, Труды Федерального центра охраны здоровья животных, Владимир, 2005, Т.3, с.52-57 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2650768C1 (ru) * | 2016-10-14 | 2018-04-17 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Штамм О N 2212/Приморский/2014 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О |
| RU2658608C1 (ru) * | 2017-11-02 | 2018-06-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Штамм О N 2311/Забайкальский/2016 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8277814B2 (en) | Avian Astrovirus | |
| RU2593718C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов а, о, азия-1 | |
| RU2451745C2 (ru) | ШТАММ А 2045/КИРГИЗИЯ/2007 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А | |
| RU2603003C1 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типов а, о, азия-1 | |
| RU2563522C1 (ru) | ШТАММ О №2102/Забайкальский/2010 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА О ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА О | |
| RU2665849C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О | |
| RU2699671C1 (ru) | Вакцина для ранней защиты против ящура типа О инактивированная эмульсионная | |
| RU2143921C1 (ru) | Вакцина против ящура типа а и способ ее изготовления | |
| RU2682876C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О | |
| RU2603255C9 (ru) | ШТАММ А №2155/Забайкальский/2013 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А | |
| RU2242513C1 (ru) | Штамм а (грузия) 1999/№1721 вируса ящура типа а для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2220744C1 (ru) | Вакцина против ящура типа азия-1 и способ ее изготовления | |
| RU2212895C2 (ru) | Вакцина против ящура типа о и способ ее изготовления | |
| RU2204599C1 (ru) | Штамм № 1734 "приморский-2000" вируса ящура типа о для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2348690C2 (ru) | Штамм "амурский" № 1987 вируса ящура типа азия-1 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа азия-1 | |
| RU2650768C1 (ru) | Штамм О N 2212/Приморский/2014 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О | |
| RU2294760C2 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а | |
| RU2140452C1 (ru) | Штамм n 1707 "армения-98" вируса ящура типа a для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2658608C1 (ru) | Штамм О N 2311/Забайкальский/2016 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О | |
| RU2526570C2 (ru) | Вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная | |
| RU2297452C2 (ru) | Штамм азия-1/таджикистан/2004(1960) вируса ящура типа азия-1 для изготовления диагностических и/или вакцинных препаратов | |
| RU2553219C1 (ru) | ШТАММ ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А | |
| RU2563345C1 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а | |
| RU2604200C9 (ru) | ШТАММ А №2166/Краснодарский/2013 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А | |
| RU2640261C1 (ru) | Штамм А N2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для контроля антигенной и иммуногенной активности и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А |