RU2550933C1 - Method for predicting risk of hysteromyoma - Google Patents
Method for predicting risk of hysteromyoma Download PDFInfo
- Publication number
- RU2550933C1 RU2550933C1 RU2014116047/15A RU2014116047A RU2550933C1 RU 2550933 C1 RU2550933 C1 RU 2550933C1 RU 2014116047/15 A RU2014116047/15 A RU 2014116047/15A RU 2014116047 A RU2014116047 A RU 2014116047A RU 2550933 C1 RU2550933 C1 RU 2550933C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- isolated
- interleukin
- risk
- uterine fibroids
- hysteromyoma
- Prior art date
Links
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 title claims abstract description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 11
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims abstract description 5
- 229940100602 interleukin-5 Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 claims description 34
- 101001002634 Homo sapiens Interleukin-1 alpha Proteins 0.000 abstract description 7
- 102100020881 Interleukin-1 alpha Human genes 0.000 abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 201000007954 uterine fibroid Diseases 0.000 description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 2
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;boric acid Chemical compound OB(O)O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005641 Adenomyosis Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 208000037093 Menstruation Disturbances Diseases 0.000 description 1
- 238000000342 Monte Carlo simulation Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 208000000450 Pelvic Pain Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000034943 Primary Sjögren syndrome Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000008051 TBE buffer Substances 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 1
- 201000009274 endometriosis of uterus Diseases 0.000 description 1
- 210000001752 female genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000009247 menarche Effects 0.000 description 1
- 230000007778 menstrual function Effects 0.000 description 1
- 231100000544 menstrual irregularity Toxicity 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010579 uterine corpus leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицинской диагностики, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования риска формирования изолированной миомы матки.The invention relates to the field of medical diagnosis, namely to gynecology, and can be used to predict the risk of forming isolated uterine fibroids.
Проблема миомы матки у женщин всех возрастных периодов является одной из актуальных в современной гинекологии. Обусловлено это тем, что миома матки - наиболее распространенная доброкачественная опухоль женских половых органов не только в перименопаузальном периоде, когда она встречается более чем у 50% женщин, но и в репродуктивном возрасте. Чаще всего миома матки выявляется у женщин в возрасте 35 лет, на возраст 35-55 лет приходится до 90% общего числа заболеваний, и редко миома матки встречается у женщин моложе 20 и старше 70 лет. Миома матки является причиной нарушений менструального цикла, анемии, хронических тазовых болей. От 60 до 95% всех оперативных вмешательств у женщин репродуктивного периода с миомой матки приходится на радикальные операции, приводящие к потере репродуктивной и менструальной функции и к выраженным вегетососудистым и психоэмоциональным нарушениям. Раннее выявление миомы матки позволит более эффективно провести консервативное лечение и тем самым снизить риск оперативного вмешательства [Сидорова И.С. Миома матки (современные проблемы этиологии, патогенеза, диагностики и лечения). - М., 2003].The problem of uterine fibroids in women of all age periods is one of the urgent in modern gynecology. This is due to the fact that uterine fibroids are the most common benign tumor of the female genital organs, not only in the perimenopausal period, when it occurs in more than 50% of women, but also in the reproductive age. Most often, uterine fibroids are detected in women aged 35 years, up to 90% of the total number of diseases by the age of 35-55 years, and rarely, uterine fibroids occurs in women under the age of 20 and older than 70 years. Uterine fibroids are the cause of menstrual irregularities, anemia, and chronic pelvic pain. From 60 to 95% of all surgical interventions in women of the reproductive period with uterine myoma are radical operations, leading to a loss of reproductive and menstrual function and to pronounced vegetovascular and psychoemotional disorders. Early detection of uterine fibroids will allow for more effective conservative treatment and thereby reduce the risk of surgery [Sidorova I.S. Uterine fibroids (current problems of etiology, pathogenesis, diagnosis and treatment). - M., 2003].
Особая роль в механизмах опухолевого роста отводится процессам апоптоза. Рост опухоли складывается из динамического баланса между пролиферацией и гибелью клеток. Таким образом, рост может быть связан как с избыточной пролиферацией, так и с низким индексом гибели клеток. Сравнительно недавно были получены данные о том, что клетка способна получать сигналы как к делению, так и к смерти, запуская каскад сложных процессов, приводящий к фрагментации клетки с образованием окруженных мембраной так называемых апоптозных телец. Этот процесс называется апоптозом, т.е. запрограммированной гибелью клеток. Важное значение в механизмах апоптоза отводится интерлейкинам. В настоящее время идентифицировано более двух десятков интерлейкинов (интерлейкин-1, интерлейкин-2 и т.д.). Они регулируют межклеточные и межсистемные взаимодействия, определяют выживаемость клеток, стимуляцию или подавление их роста, дифференциацию, функциональную активность и апоптоз, а также обеспечивают согласованность действия иммунной, эндокринной и нервной системы на клеточном уровне в нормальных условиях и в ответ на патологические воздействия [Голубева О.В. Генетические факторы предрасположенности к аденомиозу / О.В. Голубева, Т.Э. Иващенко, В.С. Баранов, Э.К. Айламазян // Журнал акушерство и женские болезни. 2007. - Т. 1. - №2. - С. 25-38].A special role in the mechanisms of tumor growth is given to apoptosis processes. Tumor growth consists of a dynamic balance between proliferation and cell death. Thus, growth can be associated with both excessive proliferation and a low cell death index. More recently, evidence has been obtained that a cell is capable of receiving signals of both division and death, triggering a cascade of complex processes leading to fragmentation of the cell with the formation of so-called apoptotic bodies surrounded by a membrane. This process is called apoptosis, i.e. programmed cell death. The importance in the mechanisms of apoptosis is given to interleukins. Currently, more than two dozen interleukins have been identified (interleukin-1, interleukin-2, etc.). They regulate intercellular and intersystem interactions, determine cell survival, stimulation or suppression of their growth, differentiation, functional activity and apoptosis, and also ensure the coordination of the immune, endocrine and nervous system at the cellular level under normal conditions and in response to pathological effects [Golubeva O .AT. Genetic factors of predisposition to adenomyosis / O.V. Golubeva, T.E. Ivashchenko, V.S. Baranov, E.K. Haylamazyan // Journal of Obstetrics and Women's Diseases. 2007. - T. 1. - No. 2. - S. 25-38].
В патенте РФ №2355319, опубл. 20.08.2012 по заявке на №2007137713/14 от 11.10.2007 (Кулагина Н.В., Козлов В.В.) предложен способ прогнозирования течения миомы матки с развитием клинической симптоматики, включающий определение возраста менархе, наличия медицинских абортов до первых родов, наличия воспалительных осложнений медицинских абортов, наличия артериальной гипертензии во время предшествующих беременностей, наличия аномалий родовой деятельности, индекса массы тела, наличия гипертонической болезни и наличия хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта и расчет показателей прогноза клинического течения миомы матки. На основании его значения прогнозируют течение миомы матки с развитием клинической симптоматики. Способ не дает возможности спрогнозировать формирование изолированной миомы матки.In the patent of the Russian Federation No. 2355319, publ. 08/20/2012 by application for No. 2007137713/14 dated 10/11/2007 (Kulagina N.V., Kozlov V.V.) a method for predicting the course of uterine fibroids with the development of clinical symptoms, including determining the age of menarche, the presence of medical abortions before the first birth, is proposed the presence of inflammatory complications of medical abortion, the presence of arterial hypertension during previous pregnancies, the presence of abnormalities of labor, body mass index, the presence of hypertension and the presence of chronic diseases of the gastrointestinal tract and calculation will show Oil prediction of the clinical course of uterine fibroids. Based on its value, the course of uterine fibroids is predicted with the development of clinical symptoms. The method does not allow to predict the formation of isolated uterine fibroids.
За прототип выбран патент РФ №2340897, опубл. 10.12.2008 по заявке №2007126877/15 от 16.07.2007 «Способ прогнозирования быстрого роста лейомиомы матки» (Сотникова Н.Ю. (RU), Соснина А.Е. (RU), Бойко О.М. (RU)), где предложен способ прогнозирования быстрого роста лейомиомы матки, включающий забор и исследование периферической венозной крови, определение в периферической крови женщин с лейомиомой матки относительного количества IL-8+ моноцитов и в случае, если значения этого показателя равны или превышают 63%, прогноз быстрого роста лейомиомы в течение года.For the prototype selected patent of the Russian Federation No. 2340897, publ. 12/10/2008 according to the application No. 2007126877/15 dated 07.16.2007 “A method for predicting the rapid growth of uterine leiomyoma” (Sotnikova N.Yu. (RU), Sosnina A.E. (RU), Boyko OM (RU)), where a method is proposed for predicting the rapid growth of uterine leiomyoma, including sampling and examination of peripheral venous blood, determination of the relative number of IL-8 + monocytes in the peripheral blood of women with uterine leiomyoma, and if the values are equal to or exceed 63%, a prognosis for the rapid growth of leiomyoma during a year.
Недостаток прототипа заключается в том, что предложенный метод позволяет спрогнозировать рост лейомиомы матки, но не дает возможности спрогнозировать формирование изолированной миомы матки.The disadvantage of the prototype is that the proposed method allows to predict the growth of uterine leiomyoma, but does not make it possible to predict the formation of an isolated uterine fibroid.
Задачей настоящего изобретения является создание способа прогнозирования формирования изолированной формы миомы матки по данным сочетаниям генетических полиморфизмов: -889 ТТ IL-1 совместно с -703 С IL-5.The objective of the present invention is to provide a method for predicting the formation of an isolated form of uterine fibroids according to these combinations of genetic polymorphisms: -889 TT IL-1 together with -703 C IL-5.
Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска формирования изолированной миомы матки у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России.The technical result of using the invention is to obtain criteria for assessing the risk of forming isolated uterine fibroids in women of Russian nationality who are natives of the Central Black Earth Region of Russia.
В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования формирования изолированной миомы матки, включающий:In accordance with the task, a method was developed for predicting the formation of isolated uterine fibroids, including:
- забор и исследование периферической венозной крови;- sampling and examination of peripheral venous blood;
- выделение ДНК из периферической венозной крови;- DNA isolation from peripheral venous blood;
- типирование генетических полиморфизмов генов интерлейкинов (-889 С/Т IL-1 и -703 С/Т IL-5);- typing of genetic polymorphisms of interleukin genes (-889 C / T IL-1 and -703 C / T IL-5);
- анализ сочетаний полиморфизмов гена интерлейкина-1 (-889 ТТ IL-1) и интерлейкина-5 (-703 С IL-5);- analysis of combinations of polymorphisms of the interleukin-1 gene (-889 TT IL-1) and interleukin-5 (-703 C IL-5);
- прогнозирование высокого риска развития изолированной миомы матки у больных в случае выявления сочетания аллеля -889 ТТ IL-1 и аллеля -703 С IL-5.- predicting a high risk of developing isolated uterine fibroids in patients if a combination of the -889 TT IL-1 allele and the -703 C IL-5 allele is detected.
Новизна и изобретательский уровень заключается в том, что из уровня техники неизвестна возможность прогноза развития изолированной миомы матки по наличию сочетаний аллеля -889 ТТ гена интерлейкина-1 и аллеля -703 С интерлейкина-5 у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России.The novelty and inventive step consists in the fact that the possibility of predicting the development of isolated uterine fibroids by the presence of the –889 TT allele of the interleukin-1 gene and the –703 C interleukin-5 allele in women of Russian nationality who are natives of the Central Black Earth Region of Russia is not known from the prior art.
Изобретение характеризуют следующие графические изображения.The invention is characterized by the following graphic images.
Фиг. 1. Электрофоретическое разделение продуктов рестрикции гена -703 С/Т IL-5., где 1, 3-8, 12, 15 - гомозиготы -703 СС; 10, 11, 13, 14 - гетерозиготы -703 СТ; 2, 9 - гомозиготы -703 ТТ.FIG. 1. Electrophoretic separation of restriction products of the gene -703 C / T IL-5., Where 1, 3-8, 12, 15 - homozygotes -703 CC; 10, 11, 13, 14 - heterozygotes -703 CT; 2, 9 - homozygotes -703 TT.
Фиг. 2. Электрофоретическое разделение продуктов рестрикции гена -889 С/Т IL 1A., где 2, 3, 4 - гомозиготы -889 ТТ; 5, 6, 10 - гомозигота -889 СС, 1, 7-9, 11-14 - гетерозиготы -889 СТ.FIG. 2. Electrophoretic separation of the products of restriction of the gene -889 C / T IL 1A., Where 2, 3, 4 - homozygotes -889 TT; 5, 6, 10 - homozygote -889 SS, 1, 7-9, 11-14 - heterozygotes -889 ST.
Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.
ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови больных с пролиферативными заболеваниями матки (миома матки с эндометриозом, гиперпластическими процессами эндометрия) методом фенольно-хлороформной экстракции в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl (pH 7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°C, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (pH 8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы K (10 мг/мл) и инкубируют образец при 37°C в течение 16 часов.DNA is isolated from samples of peripheral venous blood of patients with proliferative diseases of the uterus (uterine fibroids with endometriosis, endometrial hyperplastic processes) by phenol-chloroform extraction in 2 stages. At the first stage, 25 ml of lysis buffer containing 320 mM sucrose, 1% Triton X-100, 5 mM MgCl 2 , 10 mM Tris-HCl (pH 7.6) is added to 4 ml of blood. The resulting mixture was stirred and centrifuged at 4 ° C, 4000 rpm for 20 minutes. After centrifugation, the supernatant is decanted, 4 ml of a solution containing 25 mM EDTA (pH 8.0) and 75 mM NaCl are added to the precipitate and resuspended. Then add 0.4 ml of 10% SDS, 35 μl of proteinase K (10 mg / ml) and incubate the sample at 37 ° C for 16 hours.
На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -200°C.At the second stage, DNA is sequentially extracted from the obtained lysate in equal volumes of phenol, phenol-chloroform (1: 1) and chloroform with centrifugation at 4000 rpm for 10 minutes. After each centrifugation, the aqueous phase is selected. DNA is precipitated from solution in two volumes of chilled 96% ethanol. The formed DNA is dissolved in bidistilled, deionized water and stored at -200 ° C.
Выделенную ДНК затем подвергают полимеразной цепной реакции с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров (таблица 1).The isolated DNA is then subjected to polymerase chain reaction using standard oligonucleotide primers (table 1).
Молекулярно-генетический анализ проводят методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК. ПЦР осуществляют на амплификаторе ТП4-ПЦР-01-«ТЕРЦИК». Анализ полиморфизма генов -889 С/Т IL-1A, -703 С/Т IL-5 осуществляют методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров по методике, указанной в источнике [Hulkkonen, J. Inflammotory cytokines and cytokine gene polymorphisms in chronic lymphocytic leukaemia, in primary Sjögren′s Syndrome and Haelthy Subjects: [acad. diss.] / J. Hulkkonen; University of Tampere, Medical School Tampere University Hospital. - Tampere, 2002. - 81 p.].Molecular genetic analysis is carried out by polymerase chain reaction of DNA synthesis. PCR is carried out on a TP4-PCR-01- “TERTSIK” amplifier. The analysis of gene polymorphism -889 C / T IL-1A, -703 C / T IL-5 is carried out by polymerase chain reaction of DNA synthesis using standard oligonucleotide primers according to the method specified in the source [Hulkkonen, J. Inflammotory cytokines and cytokine gene polymorphisms in chronic lymphocytic leukaemia, in primary Sjögren′s Syndrome and Haelthy Subjects: [acad. diss.] / J. Hulkkonen; University of Tampere, Medical School Tampere University Hospital. - Tampere, 2002. - 81 p.].
Реакцию проводят в 12,5 мкл общего объема смеси, содержащей 33,5 мМ трис-НСl (pH 8,8), 1,25 мМ MgCl2, 0,5 мкг геномной ДНК, по 5 пМ каждого праймера, по 100 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации выполняют 32 цикла амплификации по схеме: денатурация, отжиг праймеров и элонгация. Затем пробы выдерживают 5 мин при 72°C и охлаждают. Продукты амплификации анализируют в 2%-ном агарозном геле, окрашенном бромистым этидием, в течение 30 минут при 160 V. В качестве электрофорезного буфера используют 1×TAE (трис-ацетатный буфер). Затем пробы идентифицируют в проходящем УФ-свете.The reaction is carried out in 12.5 μl of the total volume of the mixture containing 33.5 mm Tris-Hcl (pH 8.8), 1.25 mm MgCl 2 , 0.5 μg of genomic DNA, 5 pM of each primer, 100 μM dATP , dGTP, dCTP, dTTP and 1 unit of active Taq polymerase. After denaturation, 32 amplification cycles are performed according to the scheme: denaturation, annealing of primers and elongation. Then the samples were incubated for 5 min at 72 ° C and cooled. The amplification products were analyzed on a 2% ethidium bromide stained gel for 30 minutes at 160 V. 1 × TAE (Tris-acetate buffer) was used as electrophoresis buffer. Samples are then identified in transmitted UV light.
Генотипирование ДНК-маркеров (локусы -889 С/Т IL-1А, -703 С/Т IL-5) производят методом анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) продуктов ПЦР-амплификации специфических участков генома с использованием соответствующих ферментов рестрикции производства фирмы «Сибэнзим» (Новосибирск).Genotyping of DNA markers (loci -889 C / T IL-1A, -703 C / T IL-5) is carried out by analysis of restriction fragment length polymorphism (RFLP) of PCR amplification products of specific genome sections using appropriate restriction enzymes manufactured by Sibenzim "(Novosibirsk).
После инкубации рестрикционной смеси в течение 16 часов при температуре 37°C проводят разделение фрагментов ДНК с помощью горизонтального электрофореза на электрофоретических ячейках производства фирмы «Хеликон» (Россия). В зависимости от размера разделяемых фрагментов ДНК используют агарозный гель 2-3% концентрации, приготовленный на основе ТВЕ-буфера, окрашенный раствором бромистого этидия (0,01%). Результаты визуализации фореграмм, осуществленных в темном боксе с трансиллюминатором фирмы UVP (Швеция), представлены на Фиг. 1 и Фиг. 2.After incubation of the restriction mixture for 16 hours at 37 ° C, DNA fragments are separated by horizontal electrophoresis on electrophoretic cells manufactured by Helikon (Russia). Depending on the size of the separated DNA fragments, an agarose gel of 2-3% concentration is used, prepared on the basis of a TBE buffer, stained with ethidium bromide solution (0.01%). The results of visualization of phoreograms carried out in a dark box with a transilluminator manufactured by UVP (Sweden) are presented in FIG. 1 and FIG. 2.
Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы «STATISTICA 6.0» [Боровиков, В. Statistica: искусство анализа данных на компьютере / В. Боровиков. - 2-е изд. - СПб.: Питер, 2003. - 688 с.: ил. - (Для профессионалов)].The formation of the database and statistical calculations were carried out using the program "STATISTICA 6.0" [Borovikov, V. Statistica: the art of data analysis on a computer / V. Borovikov. - 2nd ed. - SPb .: Peter, 2003 .-- 688 p.: Ill. - (For professionals)].
Изучение роли комбинаций генетических вариантов полиморфных маркеров генов интерлейкинов в формировании изолированной миомы матки проведено с помощью программного обеспечения APSampler [http:sources.redhat.com/cygwin/], использующего метод Монте-Карло марковских цепей и байесовсовскую непараметрическую статистику.The role of combinations of genetic variants of polymorphic markers of interleukin genes in the formation of isolated uterine fibroids was studied using the APSampler software [http: sources.redhat.com/cygwin/], using the Monte Carlo method of Markov chains and Bayesian nonparametric statistics.
Оценку уровня статистической значимости полученных результатов проводили с использованием поправки Бонферрони (pcor), т.е. поправки, минимизирующей вероятность получения ложноположительных результатов [Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета программ Statistica / О.Ю. Реброва // М.: МедиаСфера. - 2006 г. - 312 с.].The level of statistical significance of the obtained results was estimated using the Bonferroni correction (pcor), i.e. amendments minimizing the probability of obtaining false positive results [Rebrova O.Yu. Statistical analysis of medical data. Application of the software package Statistica / O.Yu. Rebrova // M .: MediaSfera. - 2006 - 312 p.].
Возможность использования предложенного способа для оценки повышенного риска развития изолированной миомы матки подтверждает анализ результатов наблюдений 713 больных с пролиферативными процессами репродуктивной системы, а также 500 человек популяционного контроля. Среди 713 обследуемых женщин изолированная миома матки выявлена у 117 пациенток. Пациенты включались в соответствующую группу больных только после установления диагноза заболевания, подтвержденного с помощью клинических, лабораторно-инструментальных методов обследования и подтвержденного результата гистологического исследования.The possibility of using the proposed method to assess the increased risk of developing isolated uterine fibroids is confirmed by an analysis of the observation results of 713 patients with proliferative processes of the reproductive system, as well as 500 people of population control. Among 713 examined women, isolated uterine fibroids were detected in 117 patients. Patients were included in the appropriate group of patients only after a diagnosis of the disease was confirmed, confirmed by clinical, laboratory and instrumental methods of examination and the confirmed result of histological examination.
В исследуемую группу включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья России и не имеющие родства между собой.The study group included individuals of Russian nationality, who are natives of the Central Black Earth Region of Russia and have no kinship with each other.
Установлено, что комбинация из двух генетических вариантов -889 TT IL-1А и -703 С IL-5 в группе пациенток с изолированной миомой матки встречается (14,47%) существенно чаще (в 6,8 раза), чем в контрольной группе (2,12%, p=0,0001, pcor=0,02). Эти данные свидетельствуют о значимом вкладе сочетаний полиморфных вариантов генов -889 С/Т IL-1A и -703 С/Т IL-5 в формирование изолированной формы миомы матки (OR=7,78, 95% CI 2,61-23,21).It was found that the combination of two genetic variants -889 TT IL-1A and -703 C IL-5 in the group of patients with isolated uterine fibroids occurs (14.47%) significantly more often (6.8 times) than in the control group ( 2.12%, p = 0.0001, pcor = 0.02). These data indicate a significant contribution of polymorphic variants of the -889 C / T IL-1A and -703 C / T IL-5 genes to the formation of an isolated form of uterine fibroids (OR = 7.78, 95% CI 2.61-23.21 )
Конкретный пример использования предложенного способаA specific example of the use of the proposed method
Пациентке X русской национальности, уроженке Центрального Черноземья России, были проведены забор и исследование периферической венозной крови, выделение ДНК из периферической венозной крови; типирование генетических полиморфизмов генов интерлейкинов -889 С/Т IL-1 и -703 С/Т IL-5 и - анализ сочетаний полиморфизмов -889 ТТ IL-1 и -703 С IL-5. Результаты представлены на фиг. 1 и фиг. 2.A patient of X Russian nationality, a native of the Central Black Earth Region of Russia, underwent a sampling and examination of peripheral venous blood, DNA extraction from peripheral venous blood; typing of genetic polymorphisms of interleukin genes -889 C / T IL-1 and -703 C / T IL-5; and - analysis of combinations of polymorphisms -889 TT IL-1 and -703 C IL-5. The results are presented in FIG. 1 and FIG. 2.
Выявлено, что в связи с наличием сочетания молекулярно-генетических маркеров аллеля -889 ТТ IL-1A и аллеля -703 С IL-5 женщину можно отнести в группу риска формирования изолированной миомы матки и подобрать индивидуальную тактику ведения для проведения консервативного лечения и снижения риска оперативного вмешательства.It was revealed that due to the presence of a combination of molecular genetic markers of the –889 TT IL-1A allele and the –703 C IL-5 allele, a woman can be assigned to the risk group for the formation of isolated uterine fibroids and to select individual management tactics for conservative treatment and to reduce the risk of surgical interventions.
Таким образом, предложенный способ решает поставленную задачу и обеспечивает достижение технического результата - получение критериев оценки риска формирования изолированной миомы матки по сочетанию молекулярно-генетических маркеров -889 ТТ IL-1A и -703 С IL-5 (OR=7,78).Thus, the proposed method solves the problem and ensures the achievement of a technical result — obtaining criteria for assessing the risk of forming isolated uterine fibroids by a combination of molecular genetic markers -889 TT IL-1A and -703 C IL-5 (OR = 7.78).
Применение данного способа позволит идентифицировать группу риска по развитию изолированной миомы матки у пациенток русской национальности, уроженок Центрального Черноземья России, и подобрать индивидуальную тактику ведения, предпринять лечебные мероприятия для проведения консервативного лечения и снизить риск оперативного вмешательства.The use of this method will identify the risk group for the development of isolated uterine fibroids in patients of Russian nationality, natives of the Central Black Earth Region of Russia, and select individual management tactics, take therapeutic measures for conservative treatment and reduce the risk of surgical intervention.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014116047/15A RU2550933C1 (en) | 2014-04-22 | 2014-04-22 | Method for predicting risk of hysteromyoma |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014116047/15A RU2550933C1 (en) | 2014-04-22 | 2014-04-22 | Method for predicting risk of hysteromyoma |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2550933C1 true RU2550933C1 (en) | 2015-05-20 |
Family
ID=53294198
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014116047/15A RU2550933C1 (en) | 2014-04-22 | 2014-04-22 | Method for predicting risk of hysteromyoma |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2550933C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2650990C1 (en) * | 2017-06-29 | 2018-04-18 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for prediction of risk of uterine fibroid |
| RU2766809C1 (en) * | 2021-06-21 | 2022-03-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for prediction of risk of recurrence of symptomatic uterine myoma after selective embolization of uterine arteries |
| RU2833110C1 (en) * | 2024-08-01 | 2025-01-14 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for prediction of risk of developing uterine fibroids in women with normal body weight |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2340897C1 (en) * | 2007-07-16 | 2008-12-10 | Федеральное государственное учреждение научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method of predicting of fast growth of leiomyoma of uterus |
| RU2355319C1 (en) * | 2007-10-11 | 2009-05-20 | Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Prediction method for hysteromyoma course with clinical sympromatology development |
-
2014
- 2014-04-22 RU RU2014116047/15A patent/RU2550933C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2340897C1 (en) * | 2007-07-16 | 2008-12-10 | Федеральное государственное учреждение научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method of predicting of fast growth of leiomyoma of uterus |
| RU2355319C1 (en) * | 2007-10-11 | 2009-05-20 | Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Prediction method for hysteromyoma course with clinical sympromatology development |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Алтухова Оксана Борисовна / Изучение молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с миомой матки / Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, Москва " 2010 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2650990C1 (en) * | 2017-06-29 | 2018-04-18 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for prediction of risk of uterine fibroid |
| RU2766809C1 (en) * | 2021-06-21 | 2022-03-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for prediction of risk of recurrence of symptomatic uterine myoma after selective embolization of uterine arteries |
| RU2833110C1 (en) * | 2024-08-01 | 2025-01-14 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for prediction of risk of developing uterine fibroids in women with normal body weight |
| RU2833106C1 (en) * | 2024-08-01 | 2025-01-14 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for prediction of risk of developing uterine myoma based on molecular genetic testing |
| RU2834526C1 (en) * | 2024-08-01 | 2025-02-11 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for prediction of risk of developing uterine fibroids in women with overweight or obesity |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gueuvoghlanian-Silva et al. | Treg and NK cells related cytokines are associated with deep rectosigmoid endometriosis and clinical symptoms related to the disease | |
| Özcan et al. | HOXA-10 gene expression in ectopic and eutopic endometrium tissues: Does it differ between fertile and infertile women with endometriosis? | |
| RU2578425C2 (en) | Method for prediction of risk of preeclampsia | |
| RU2550933C1 (en) | Method for predicting risk of hysteromyoma | |
| RU2558854C1 (en) | Method for prediction of risk of endometriosis | |
| RU2557954C1 (en) | Method of predicting development of risk of combined proliferative reproductive system diseases in women | |
| RU2557977C1 (en) | Method for prediction of risk of hyperplastic processes of endometrium | |
| RU2480763C1 (en) | Method for prediction of risk of developing benign mammry dysplasia in females with genital endometriosis | |
| RU2557944C1 (en) | Method of predicting level of arterial pressure in women in late pregnancy | |
| RU2642939C1 (en) | Method for prediction of risk of preeclampsia | |
| RU2453850C2 (en) | Method for prediction of character of uterine involvement in myomatous nodes | |
| RU2568891C1 (en) | Method for prediction of risk of preeclampsia by combination of cytokine genes | |
| RU2833106C1 (en) | Method for prediction of risk of developing uterine myoma based on molecular genetic testing | |
| RU2616246C1 (en) | Method of predicting risk of development of myomatous nodes of large sizes in patients with myoma | |
| RU2834809C1 (en) | Method for prediction of risk of severe preeclampsia | |
| RU2650990C1 (en) | Method for prediction of risk of uterine fibroid | |
| RU2833110C1 (en) | Method for prediction of risk of developing uterine fibroids in women with normal body weight | |
| RU2834526C1 (en) | Method for prediction of risk of developing uterine fibroids in women with overweight or obesity | |
| RU2830467C1 (en) | Method for prediction of risk of developing breast cancer in women with obesity based on data on polymorphism of genes jmjd1c, ppp1r21 and prmt6 | |
| RU2808924C1 (en) | Method of predicting risk of developing preeclampsia in pregnant women with fetal growth restriction | |
| RU2578441C1 (en) | Method for prediction of moderate severity of chronic true eczema | |
| RU2646455C1 (en) | Method for prediction of risk of preeclampsia development in women depending on hereditary burden | |
| RU2565405C1 (en) | METHOD FOR PREDICTION OF BLOOD PRESSURE IN DELIVERING FEMALES WITH USING 4a/4b eNOS GENETIC POLYMORPHISM | |
| RU2828525C1 (en) | Method for prediction of risk of developing breast cancer in women without obesity by results of genetic testing | |
| RU2650988C1 (en) | Method for predicting risk of endometrial hyperplastic processes based on genetic data |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160423 |