RU2425052C1 - Способ получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона из андрост-4-ен-3,17-диона, способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (эксеместана) с использованием полученного 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона - Google Patents
Способ получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона из андрост-4-ен-3,17-диона, способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (эксеместана) с использованием полученного 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона Download PDFInfo
- Publication number
- RU2425052C1 RU2425052C1 RU2010107745/04A RU2010107745A RU2425052C1 RU 2425052 C1 RU2425052 C1 RU 2425052C1 RU 2010107745/04 A RU2010107745/04 A RU 2010107745/04A RU 2010107745 A RU2010107745 A RU 2010107745A RU 2425052 C1 RU2425052 C1 RU 2425052C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dione
- methyleneandrost
- medium
- ene
- methylene
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 119
- KQRGETZTRARSMA-DAELLWKTSA-N (8r,9s,10r,13s,14s)-10,13-dimethyl-6-methylidene-1,2,7,8,9,11,12,14,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthrene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC(=C)C2=C1 KQRGETZTRARSMA-DAELLWKTSA-N 0.000 title claims abstract description 62
- BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N Aromasine Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC(=C)C2=C1 BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N 0.000 title claims abstract description 50
- AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N androstenedione Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 37
- AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N androst-4-ene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N 0.000 title claims abstract description 35
- BTTWKVFKBPAFDK-UHFFFAOYSA-N (9beta,10alpha)-Androst-4-ene-3,17-dione Natural products OC1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)O)C4C3CCC2=C1 BTTWKVFKBPAFDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 24
- 229960000255 exemestane Drugs 0.000 title abstract description 22
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 claims abstract description 36
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 32
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 27
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 claims abstract description 19
- 230000009615 deamination Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 claims abstract description 14
- 241000203720 Pimelobacter simplex Species 0.000 claims abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims abstract description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 39
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 32
- -1 aliphatic alcohols Chemical class 0.000 claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N Menadione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1 MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- AFBPFSWMIHJQDM-UHFFFAOYSA-N N-methylaniline Chemical compound CNC1=CC=CC=C1 AFBPFSWMIHJQDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 238000005902 aminomethylation reaction Methods 0.000 claims description 13
- 229960005471 androstenedione Drugs 0.000 claims description 13
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 11
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000005837 enolization reaction Methods 0.000 claims description 10
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 9
- 235000012711 vitamin K3 Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000011652 vitamin K3 Substances 0.000 claims description 9
- 229940041603 vitamin k 3 Drugs 0.000 claims description 9
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 5
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 5
- 238000007171 acid catalysis Methods 0.000 claims description 4
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 4
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 3
- 150000008280 chlorinated hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 44
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 125000000467 secondary amino group Chemical class [H]N([*:1])[*:2] 0.000 abstract description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 32
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 28
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 21
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 15
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 9
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 8
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 7
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 6
- 238000006683 Mannich reaction Methods 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LUJVUUWNAPIQQI-UHFFFAOYSA-N (+)-androsta-1,4-diene-3,17-dione Natural products O=C1C=CC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 LUJVUUWNAPIQQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QZLYKIGBANMMBK-UGCZWRCOSA-N 5α-Androstane Chemical compound C([C@@H]1CC2)CCC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CCC[C@@]2(C)CC1 QZLYKIGBANMMBK-UGCZWRCOSA-N 0.000 description 5
- 241000430521 Alyssum Species 0.000 description 5
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 5
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LUJVUUWNAPIQQI-QAGGRKNESA-N androsta-1,4-diene-3,17-dione Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 LUJVUUWNAPIQQI-QAGGRKNESA-N 0.000 description 5
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 5
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 4
- XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N phosphoryl trichloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)=O XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]-2-methylpyrimidin-4-yl]amino]-n-(2-methyl-6-sulfanylphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide;hydrate Chemical compound O.C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1S WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RREANTFLPGEWEN-MBLPBCRHSA-N 7-[4-[[(3z)-3-[4-amino-5-[(3,4,5-trimethoxyphenyl)methyl]pyrimidin-2-yl]imino-5-fluoro-2-oxoindol-1-yl]methyl]piperazin-1-yl]-1-cyclopropyl-6-fluoro-4-oxoquinoline-3-carboxylic acid Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(\N=C/3C4=CC(F)=CC=C4N(CN4CCN(CC4)C=4C(=CC=5C(=O)C(C(O)=O)=CN(C=5C=4)C4CC4)F)C\3=O)=NC=2)N)=C1 RREANTFLPGEWEN-MBLPBCRHSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- FKLJPTJMIBLJAV-UHFFFAOYSA-N Compound IV Chemical compound O1N=C(C)C=C1CCCCCCCOC1=CC=C(C=2OCCN=2)C=C1 FKLJPTJMIBLJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091006149 Electron carriers Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 150000001441 androstanes Chemical class 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 150000003128 pregnanes Chemical class 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N tetrachloro-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(Cl)=C(Cl)C1=O UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FRASJONUBLZVQX-UHFFFAOYSA-N 1,4-naphthoquinone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C=CC(=O)C2=C1 FRASJONUBLZVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JWYVGKFDLWWQJX-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylazepan-2-one Chemical compound C=CN1CCCCCC1=O JWYVGKFDLWWQJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AVFZOVWCLRSYKC-UHFFFAOYSA-N 1-methylpyrrolidine Chemical compound CN1CCCC1 AVFZOVWCLRSYKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZNVUJQVZSTENZ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(C#N)=C(C#N)C1=O HZNVUJQVZSTENZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-pyrrolidine Natural products CN1CC=CC1 AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 2
- 239000003377 acid catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003886 aromatase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940046844 aromatase inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical class OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 2
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N caprylic alcohol Natural products CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 2
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 150000007975 iminium salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N n-Octanol Natural products CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- JWMFYGXQPXQEEM-WZBAXQLOSA-N pregnane Chemical compound C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](CC)[C@@]1(C)CC2 JWMFYGXQPXQEEM-WZBAXQLOSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JPJALAQPGMAKDF-UHFFFAOYSA-N selenium dioxide Chemical compound O=[Se]=O JPJALAQPGMAKDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 2
- PYOKUURKVVELLB-UHFFFAOYSA-N trimethyl orthoformate Chemical compound COC(OC)OC PYOKUURKVVELLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- WSIQEGIPGPEMTC-TXTPUJOMSA-N (8r,9s,10r,13s,14s)-3-methoxy-10,13-dimethyl-1,2,7,8,9,11,12,14,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-one Chemical compound C1C[C@@H]2[C@](CCC(OC)=C3)(C)C3=CC[C@H]2[C@@H]2CCC(=O)[C@]21C WSIQEGIPGPEMTC-TXTPUJOMSA-N 0.000 description 1
- NNPWVPDIRNJLIN-LNMJFAINSA-N (8s,10s,13s,14s)-10,13-dimethyl-7,8,12,14,15,16-hexahydro-6h-cyclopenta[a]phenanthrene-3,17-dione Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)C3=CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 NNPWVPDIRNJLIN-LNMJFAINSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- SPEUIVXLLWOEMJ-UHFFFAOYSA-N 1,1-dimethoxyethane Chemical compound COC(C)OC SPEUIVXLLWOEMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGJSXRVXTHVRSN-UHFFFAOYSA-N 1,3,5-trioxane Chemical compound C1OCOCO1 BGJSXRVXTHVRSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZYHXKLKJRGJGP-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoro-n,n-bis(trimethylsilyl)acetamide Chemical compound C[Si](C)(C)N([Si](C)(C)C)C(=O)C(F)(F)F RZYHXKLKJRGJGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZFFMLCVRJBZUDZ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylbutane Chemical group CC(C)C(C)C ZFFMLCVRJBZUDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001070 3-oxosteroid delta(1) dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 5-methylphenazinium methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 description 1
- 229920001450 Alpha-Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 description 1
- HJTUINCBGMVXOB-LNMJFAINSA-N Androsta-4,9(11)-diene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)C3=CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 HJTUINCBGMVXOB-LNMJFAINSA-N 0.000 description 1
- 102000014654 Aromatase Human genes 0.000 description 1
- 108010078554 Aromatase Proteins 0.000 description 1
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 description 1
- 241000186074 Arthrobacter globiformis Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000577959 Calonectria Species 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 206010011703 Cyanosis Diseases 0.000 description 1
- 241000723247 Cylindrocarpon Species 0.000 description 1
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N Ethenol Chemical compound OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 1
- 241000187580 Nocardioides Species 0.000 description 1
- 241000190509 Ophiobolus Species 0.000 description 1
- 229940123973 Oxygen scavenger Drugs 0.000 description 1
- 241000586779 Protaminobacter Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 238000005874 Vilsmeier-Haack formylation reaction Methods 0.000 description 1
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 1
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229910001516 alkali metal iodide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 description 1
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940087620 aromasin Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000031709 bromination Effects 0.000 description 1
- 238000005893 bromination reaction Methods 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- QQVDYSUDFZZPSU-UHFFFAOYSA-M chloromethylidene(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)=CCl QQVDYSUDFZZPSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000002288 cocrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012084 conversion product Substances 0.000 description 1
- 229960003290 cortisone acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000007256 debromination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007269 dehydrobromination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002084 enol ethers Chemical class 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 1
- UYMKPFRHYYNDTL-UHFFFAOYSA-N ethenamine Chemical class NC=C UYMKPFRHYYNDTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KLKFAASOGCDTDT-UHFFFAOYSA-N ethoxymethoxyethane Chemical compound CCOCOCC KLKFAASOGCDTDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- OSVMTWJCGUFAOD-KZQROQTASA-N formestane Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1O OSVMTWJCGUFAOD-KZQROQTASA-N 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- WIXFIQKTHUVFDI-UHFFFAOYSA-N menadione sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)(S(O)(=O)=O)CC(=O)C2=C1 WIXFIQKTHUVFDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- PNLUGRYDUHRLOF-UHFFFAOYSA-N n-ethenyl-n-methylacetamide Chemical compound C=CN(C)C(C)=O PNLUGRYDUHRLOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- FIYYMXYOBLWYQO-UHFFFAOYSA-N ortho-iodylbenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1I(=O)=O FIYYMXYOBLWYQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 239000012048 reactive intermediate Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000012258 stirred mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- GKASDNZWUGIAMG-UHFFFAOYSA-N triethyl orthoformate Chemical compound CCOC(OCC)OCC GKASDNZWUGIAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к улучшенным способам получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона и 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (МНН эксеместан) с использованием полученного 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона. Получают 6-метиленандрост-4-ен-3,17-дион способом, включающим предварительную енолизацию Δ4-3-кетофункции андрост-4-ен-3,17-диона с образованием 3-алкоксиандроста-3,5-диен-17-она, последующую трехкомпонентную конденсацию с вторичным амином и формальдегидом в среде полярного протонного растворителя, дезаминирование N,N-дизамещенной аминогруппы с образованием 6-метиленовой группы в среде апротонного растворителя. Реакцией 1,2-дегидрирования 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона с применением микробиологической трансформации в среде, содержащей до 40% смешивающегося с водой апротонного растворителя, с помощью клеток Nocardioides simplex BKM Ас-2033Д получают 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-дион. Способы обеспечивают высокие выходы и селективность при мягких условиях проведения процессов. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 1 табл.
Description
Настоящее изобретение относится к области органического синтеза и биотехнологии, конкретно касается получения стероидного соединения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона и может быть использовано в химической, микробиологической и фармацевтической отраслях промышленности.
6-Метиленандроста-1,4-диен-3,17-дион (6-метилен-АДД, МНН эксеместан) - высокоэффективный современный инактиватор ароматазы, известный под торговым названием «Аромазин» (Производитель «Pharmacia Italia», Италия), который широко применяется в терапии злокачественных новообразований молочной железы [US 4808616, 1989; D.Giudici, G.Ornati, G.Briatico, F.Buzzetti, P.Lombardi and E. di Salle Journal of Steroid Biochemistry, Volume 30, Issues 1-6, 1988, Pages 391-394]. Клинические испытания показали высокую эффективность и безопасность эксеместана при лечении женщин в постменопаузе (естественной или индуцированной), страдающих метастатическим раком молочной железы, прогрессирующим на фоне терапии антиэстрогенами, нестероидными ингибиторами ароматазы или прогестинами [М.Б.Стенина «Ингибиторы ароматазы в лечении диссеминированного рака молочной железы у больных в менопаузе». Материалы IV ежегодной российской онкологической конференции. Москва, 21-23 ноября 2000 г.].
Известны способы получения эксеместана 1,2-дегидрированием 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона (6-метилен-АД).
Известны способы 1,2-дегидрирования 6-метилен-АД с использованием химических дегидрирующих агентов. Так, известны способы получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона дегидрированием 6-метилен-АД с использованием 2,3-дихлор-5,6-дициан-1,4-бензохинона (DDQ) при кипячении реакционной массы в диоксане в течение 15 ч (выход 50,3%) [GB 2177700, 1987, пример 1] или в инертном растворителе в течение 8 ч в присутствии ароматической карбоновой кислоты (выход 50,7%) [CN 1453288, 2003].
Известны способы получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона дегидрированием 6-метилен-АД с использованием двуокиси селена (кипячение в среде трет-бутилового спирта в течение 30 ч, выход 40,2%) [GB 2177700, 1987, пример 2] или с использованием 2-йодоксибензойной кислоты [CN 1491957, 2004].
Также известен процесс получения эксеместана реакцией дегидрирования 6-метилен-АД в 1,2-положение в присутствии хинона, силилирующего агента и кислоты, имеющей рКа в водном растворе ≤1 [WO 2009/077454, 2009, пример 1]. При этом в качестве хинона используют 2,3,5,6-тетрахлор-1,4-бензохинон (хлоранил), в качестве силилирующего агента используют бис(триметилсилил)трифторацетамид, в качестве сильной кислоты - трифторметансульфоновую кислоту; технический продукт, Полученный с выходом 81,8% продукт перекристаллизовывают, однако выход очищенного продукта не указан. Так, известен способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона реакцией 6-метилен-АД с хлоранилом в удобном растворителе, в качестве которого применяют диметилсульфоксид (ДМСО) или N-метилпирролидин (NМП) [WO 2009093262, 2009]. При этом из 100 г 6-метилен-АД (пример 3) получают лишь 55 г эксеместана 97,3% содержания.
Известен способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона, в котором дегидрирование 6-метилен-АД осуществляется бромированием 6-метилен-АД бромом в органическом растворителе при температуре от 0 до 10°С с образованием трибром-соединения, дебромированием трибром-соединения реакцией с йодидом щелочного металла в органическом кетонном растворителе с образованием 2-бромпроизводного 6-метилен-АД и дегидробромированием 2-бромпроизводного 6-метилен-АД реакцией с основным агентом в полярном растворителе (при температуре 120°С в течение 2,5 ч, общий выход 40,13%) [US 4990635, 1991, примеры 2-4] (Рисунок 1).
Рисунок 1. Синтез эксеместана из 6-метилен-АД химическими методами
Общим недостатком химических методов 1,2-дегидрирования является использование дорогостоящих и токсичных реагентов, жесткие условия проведения реакций, а также в большинстве случаев необходимость применения колоночной хроматографии для очистки, и как следствие низкий выход эксеместана.
Известно введение 1,2-двойной связи в стероидную молекулу с использованием методов микробиологической трансформации.
Осуществление сложных полиферментных процессов в одну технологическую стадию в мягких условиях, относительно высокие выходы получаемых целевых продуктов, возможность ингибирования побочных реакций определяют перспективность использования микроорганизмов в качестве биокатализаторов реакции 1,2-дегидрирования, в частности, для получения эксеместана.
В качестве биокатализаторов процесса 1,2-дегидрирования используют культуры с 3-кетостероид-Δ1-дегидрогеназой (ЕС 1.3.99.4) родов: Arthrobacter, Alternaria, Alcaligenes, Calonectria, Ophiobolus, Corynebacterium, Bacillus, Nocardia, Streptomyces, Bacterium, Mycobacterium, Fusarium, Cylindrocarpon, Pseudomonas, Protaminobacter, Septomyxa, Didymella и др. [Charney W., Herzog H. Microbial transformation of Steroids. Academic Press. Inc. New York. 1967, pp.236-261]. Наиболее часто для проведения процесса 1,2-дегидрирования стероидных соединений ряда прегнана и андростана используются штаммы вида Arthrobacter simplex.
Биоконверсию проводят, используя культуральную жидкость, нативные клетки (60-85% влажности) [US 4749649, 1988], высушенные клетки, полученные при обработке ацетоном, высушенные в вакууме или на воздухе при нагревании [US 4704358, 1987], в условиях лиофилизации, а также используют бесклеточные экстракты, полученные при ультразвуковом разрушении или разрушенные при пропускании замороженных клеток через фильеры под давлением [EP 0350488, 1993]. Для того чтобы исключить дополнительные технологические этапы, предпочтительно использование нативных клеток.
Основной проблемой получения 1,2-дегидрированных производных ряда андростана, в частности эксеместана, микробиологическим способом, является малая эффективность процесса, обусловленная низкой растворимостью субстрата в водной среде, необходимостью в этих условиях использования малых концентраций для создания условий его доступности клеткам микроорганизмов и для достижения максимально полного превращения в продукт.
Для достижения в среде более высокой концентрации стероидных субстратов и повышения эффективности процесса 1,2-дегидрирования применяют органические растворители, несмешивающиеся с водой, в количестве, необходимом для растворения исходного субстрата.
Так, известен способ превращения 1,2-насыщенного стероида в 1,2-дегидростероид, который включает взаимодействие 1,2-насыщенного стероида с Arthrobacter simplex или Bacterium cyclooxydans в присутствии экзогенного носителя электронов, несмешивающегося с водой ароматического углеводородного растворителя, где концентрация кислорода поддерживается на уровне минимальной концентрации кислорода, необходимой для окисления, или где реакция осуществляется ниже температуры вспышки смеси при условии, что 1,2-насыщенный стероид имеет растворимость в несмешивающемся с водой ароматическом углеводородном растворителе, более чем 5 г/л [US 4684610, 1987]. Процесс проводят в двухфазной системе, используя несмешивающиеся с водой органические растворители: бензол, толуол, ксилол.
Также известен способ получения 1,2-дегидро-3-кетостероида, который заключается в том, что 1,2-насыщенный 3-кетостероид подвергают взаимодействию с Arthrobacter simplex или Bacterium cyclooxydans в присутствии экзогенного носителя электронов и несмешивающегося с водой растворителя, включая ароматические углеводороды [GB 2131811, 1984]. Согласно этому способу (примеры 1 и 2) процесс трансформации проводят клетками A. simplex в присутствии менадиона в среде K2HPO4 буферного раствора (pH 7.5), содержащей до 10% толуола, в течение 4 дней.
Недостатком данных способов является необходимость создания и строгого поддержания минимально допустимой концентрации растворенного кислорода в среде, чтобы избежать вспышки паров газовоздушной смеси и в то же время обеспечить оптимальные условия для процесса окисления субстрата. Осуществление данных способов требует специального технологического оборудования, что фактически исключает их практическую реализацию в условиях промышленного производства. Однако известными способами получают андроста-1,4-диен-3,17-дион (АДД) из андрост-4-ен-3,17-диона (АД), андроста-1,4,9(11)-триен-3,17-дион (Δ9(11)-АДД) из андроста-4,9(11)-диен-3,17-диона (Δ9(11)-АД), а также другие 1,2-дегидропроизводные ряда андростана, и в них не описано получение эксеместана (6-метилен-АДД) из 6-метилен-АД.
Известно, что экзогенные акцепторы электронов - феназинметосульфат (ФМС), менадион (2-метил-1,4-нафтохинон), 1,4-нафтохинон, менадион бисульфит - используют не только для стимулирования процесса 1,2-дегидрирования стероидных соединений, но также и для ингибирования побочных реакций восстановительного характера и деструктивной активности клеток микроорганизмов. Образование побочных продуктов, деструкция целевого продукта снижают выход основного продукта.
В процессах микробиологической трансформации стероидных соединений наряду с использованием органических растворителей несмешивающихся с водой, используют смешивающиеся с водой органические растворители, такие как диметилсульфоксид, диметилформамид, метанол, этанол, ацетон и т.п.
Описано применение диметилформамида (ДМФ) и диметилсульфоксида (ДМСО) в качестве смешивающихся с водой органических растворителей, используемых в процессах микробиологического 1,2-дегидрирования.
Например, известен способ получения 1,2-дегидро-Δ4-3-кетостероида, который заключается в том, что соответствующий 1,2-насыщенный Δ4-3-кетостероид подвергают взаимодействию с высушенными на воздухе или в тепле клетками Arthrobacter simplex, содержащими от 1 до 10% влаги, где клетки высушены в отсутствии органического растворителя [US 4524134, 1985]. Согласно способу (пример 2) суспензию микронизированного субстрата в ДМФ вносят в фосфатный буферный раствор (pH 7.5), содержащий суспензию высушенных клеток A. simplex АТСС 6946 (10 г/л) и менадион (86 мг/л). При этом концентрация ДМФ в среде составляет 2% v/v, а 1,2-дегидрирование проводят с нагрузкой субстрата 2.5 г/л в течение 24 ч при температуре 31оС. Однако указанным способом получают АДД из АД, Δ9(11)-АДД из Δ9(11)-АД, а также другие 1,2-дегидропроизводные ряда андростана и прегнана, и в нем не описано получение эксеместана (6-метилен-АДД) из 6-метилен-АД.
Относительно низкая концентрация субстрата характеризует данный способ получения 1,2-дегидропроизводных, как малоэффективный.
Также известен способ превращения 1,2-насыщенных 3-кетостероидов в 1,2-дегидро-3-кетостероиды, который заключается в том, что 1,2-насыщенные 3-кетостероиды подвергают взаимодействию с препаратом, имеющим стероид-1,2-дегидрогеназную активность Arthrobacter simplex или Bacterium cyclooxydans, в присутствии экзогенного носителя электронов и одного или более дополнительного поглотителя токсичного кислорода, выбранного из группы, содержащей каталазу, супероксиддисмутазу или платину [US 4749649, 1988]. Согласно этому способу стероидный субстрат может быть внесен в виде порошка, водной пасты, или в виде раствора (или суспензии) в смешивающемся с водой органическом растворителе, таком как ДМФ, ДМСО, этанол, метанол, ацетон, в количестве, не более чем 5% от конечного объема среды. Способ проиллюстрирован примером 1, в описании которого, однако, не уточняется, какой из указанных выше видов внесения субстрата использован (нагрузка субстрата 3,5 г/л). При этом в биоконверсионной среде даже в присутствии менадиона накопление продукта Δ1-дегидрирования проходит лишь на 50%.
Таким образом, применение смешивающихся с водой органических растворителей в низкой концентрации - до 5% v/v - не позволяет значительно увеличить растворимость субстрата в водной среде и его доступность к клеткам микроорганизма и не позволяет повысить эффективность процесса.
Рассматриваемый способ [US 4749649, 1988] предлагает также использование экзогенного фермента-каталазы. Добавление каталазы в количестве 10 мг/л (эквивалентное 16000 ед/л) способствует активному превращению субстрата и позволяет увеличить его нагрузку до 10 г/л (пример 1). За 22 часа степень превращения субстрата составляет - 83%, за 46 часов - 95%. Кроме этого, в присутствии каталазы и менадиона происходит полное подавление деструктивной активности.
Однако удорожание технологии, обусловленное необходимостью добавления в среду поглотителя (фермента каталазы, или супероксиддисмутазы, или платины), устраняющего ингибирующее влияние синглетного кислорода на активность дегидрогеназы, определяет основной недостаток данного способа. Кроме того, известным способом получают АДД из АД, Δ9(11)-АДД из Δ9(11)-АД, а также другие 1,2-дегидропроизводные ряда андростана, и в нем не описано получение эксеместана (6-метилен-АДД) из 6-метилен-АД.
Известно, что для повышения растворимости стероидных субстратов в водной среде также используют α, β или γ-циклодекстрины, а также производные β-циклодекстрина (βЦД) метил-βЦД и гидроксипропил-βЦД в концентрации 1-50 г/л [Szejtli J. The use of cyclodextrins in biotechnological operations. Ed.D.Duchene, Published in France by Editions de Sante. 1991, 625 p]. В частности, известен способ получения 1,2-дегидропроизводных дельта4-3-кетостероидов путем трансформации дельта4-3-кетостероидов с помощью микроорганизма Arthrobacter globiformis 193 в присутствии циклодекстрина, отличающийся тем, что в качестве циклодекстрина используют водорастворимые химически модифицированные производные β-циклодекстрина [RU 2156302, 2000]. Согласно этому способу применение метил-βЦД позволяет осуществлять 1,2-дегидрирование субстрата при нагрузке 20 г/л. При весовом соотношении метил-βЦД/субстрат 7/1 полное превращение субстрата завершается за 6 часов. Содержание 1,2-дегидрированного продукта в культуральной жидкости составляет 95%. Однако практическая значимость данного способа 1,2-дегидрирования в значительной степени ограничена использованием больших количеств дорогостоящего метил-βЦД. Кроме того, известным способом получают АДД из АД (пример 12) и в нем не описано получение эксеместана (6-метилен-АДД) из 6-метилен-АД.
Наряду с применением циклодекстринов, для повышения концентрации и доступности для микроорганизмов стероидных субстратов используют синтетические полимеры класса N-виниламидов - поливинилпирролидон (ПВП), поливинилкапролактам (ПВК) и поливиниловый спирт (ПВС) [Дружинина А.В., Андрюшина В.А., Аринбасарова А.Ю., Пашкин И.И., Савинова Т.С., Стыценко Т.С., Войшвилло Н.Е. Биотехнология, 2008, №1, с.46-50].
Известен способ получения дегидроаналогов стероидов, включающий микробиологическую трансформацию соответствующих Δ4-3-кетостероидов в присутствии полимерного материала с последующим выделением из реакционной среды целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве полимерного материала используют гомо- или сополимер N-винилкапролактама с мол.м. 104-106 или сополимеры N-винилкапролактама с виниловым спиртом, винилацетатом или винилметилацетамидом с содержанием оных до 46%, 45% и 15% соответственно [RU 2042687, 27.08.1995]. Однако известный способ заявлен в общем виде и изобретение не проиллюстрировано примерами, в нем не описано получение эксеместана из 6-метилен-АД.
Промежуточным соединением в синтезе эксеместана из андрост-4-ен-3,17-диона (АД) является 6-метилен-АД.
Известны способы получения 6-метилен-АД из АД.
В частности, известен способ получения 6-метилен-3-оксо-Δ4-стероидов, который включает обработку 3-енолэфира 6-гидроксиметилстероида кислым реагентом, способным регенерировать Δ4-3-кетостероиды из их 3-енолэфиров и одновременно восстанавливать 6-гидроксиметильную группу в 6-метиленовую [US 3112305, 1963]. Согласно этому способу 6-метилен-АД получают из 3-метилового енолэфира 6-гидроксиметил-АД дегидратацией 90% муравьиной кислотой, который может быть получен из АД следующей последовательностью реакций: получение 3-метилового енолэфира АД, его взаимодействие с реагентом Вильсмейера [US 3114750, 1963], гидрирование полученного 6-формильного производного [US 3095411, 1963] (выходы не указаны) (Рисунок 2).
Рисунок 2. Синтез 6-метилен-АД из АД с применением реакции Вильсмейера
Известен также способ получения 6-метилен-Δ4-3-кетостероида ряда андростана или прегнана, включающий реакцию соответствующего Δ4-3-кетостероида с производным формальдегида в инертном растворителе в присутствии сильного кислого конденсирующего агента [US 4322349, 1982; Annen, Klaus; Hofmeister, Helmut; Laurent, Henry; Wiechert, Rudolf: Synthesis, 1982, №1 34-40] (метод прямого γ-метиленирования). При этом в качестве производного формальдегида могут быть использованы триоксан или диалкилацеталь формальдегида (метиловый, этиловый или диизопропиловый), а в качестве конденсирующего агента - пентоксид фосфора или оксихлорид фосфора. Так, например, согласно этому способу взаимодействие АД с диэтилацеталем формальдегида проводят в присутствии фосфорилхлорида и ацетата натрия в инертном растворителе при кипячении в течение 5,5 ч, продукт очищают хроматографированием на силикагеле (Рисунок 3).
Рисунок 3. Синтез 6-метилен-АД из АД методом прямого γ-метиленирования [US 4322349, 1982]
Однако, несмотря на значительно более короткий путь к целевому продукту, этот метод не позволяет получать выход 6-метилен-АД из АД выше, чем 68%.
Известен способ получения 6-N,N-дизамещенных аминометилпроизводных стероидов [GB 1280569, 1972] и способ получения 6-метиленстероидов из 6-N,N-дизамещенных аминометилпроизводных стероидов [GB 1280570, 1972]. Способ получения 6-N,N-дизамещенных аминометилпроизводных стероидов [GB 1280569, 1972] заключается в том, что смешивают вторичный амин, формальдегид и стероидное соединение, содержащее в ядре 3-алкокси-3,5-диеновую группу, при этом реакцию проводят в среде тетрагидрофурана, а в качестве вторичного амина используют среди прочих и N-метиланилин. Способ получения 6-метиленстероидов [GB 1280570, 1972] заключается в том, что 6-(N-метил-N-фениламинометил)-производные стероиды, полученные способом, аналогичным [GB 1280569, 1972], смешивают с сильной кислотой. Согласно этому способу 6-(N-метил-N-фениламинометил)-стероидное производное растворяют в 6 N соляной кислоте, раствор выдерживают в течение 3 ч при комнатной температуре, осадок отфильтровывают. Однако известными способами получают 6-(N-метил-N-фениламинометил)-производные Δ4-3-кетосоединений рядов прегнана и 6-(N-метил-N-фениламинометил)-производное 17β-гидрокси-17α-метиландрост-4,9(11)-диен-3-она, а также их 6-метилен-аналоги, и в них не описано получение 6-(N-метил-N-фениламинометил)-производного из АД и 6-метилен-АД.
Наиболее близким по сущности к предложенному способу получения 6-метилен-АД из АД является способ получения эксеместана и его производных реакцией 3-енолэфира АД или его производных с 30-40% водным раствором формальдегида и 1-2 эквивалентом галоидводородной соли амина в органическом растворителе при температуре от 30 до 50°С с получением 6-метилен-АД или его производных, описанный А.Лонго и П.Ломбарди [US 4990635, 1991]. Способ проиллюстрирован примером (пример 1), заключающимся в том, что в синтезе 6-метилен-АД из АД последний обрабатывают триэтилортоформиатом в среде тетрагидрофурана, содержащей этанол (13,3%), в присутствии п-толуолсульфокислоты при температуре 40°С в течение 2 ч, затем добавляют N-метиланилин и 40% водный раствор формальдегида и после выдержки в течение 2 ч при 40°С реакционную массу обрабатывают концентрированной соляной кислотой при комнатной температуре. Продукт кристаллизуют разбавлением реакционной массы водой. Из 20 г исходного соединения получают 14,8 г 6-метилен-АД с молярным выходом 71%. (Рисунок 4).
Рисунок 4. Синтез 6-метилен-АД из АД с применением реакции Манниха [US 4990635, 1991].
Аналогичный способ получения 6-метилен-АД из АД использован в патентах [CN 1415624, 2003; CN 1491957, 2004], при этом продукт получен с выходом 68,6%.
Недостатками описанного в US 4990635 способа являются:
- большая продолжительность этапа енолизации (2 ч при 40°С);
- дробная подача катализатора п-толуолсульфокислоты в процессе енолизации;
- использование большого количества соляной кислоты на этапе дезаминирования;
- низкий выход 6-метилен-АД, несмотря на то, что процесс проводится без выделения интермедиатов.
Известно, что механизм реакции Манниха (при катализе кислотой) состоит в первоначальном образовании высокореакционной промежуточной частицы - иминиевого катиона, образующегося из аминного и карбонильного компонентов, который стабилизован кислотой. Высокая реакционная способность иминиевых солей накладывает некоторые ограничения на выбор растворителя для проведения реакции аминометилирования. Обычно в синтезе нестероидных оснований Манниха предпочитают использовать высокополярные растворители (для того чтобы соль находилась в растворе), неспособные к химическому взаимодействию с иминиевой солью: ацетонитрил, диметилсульфоксид, диметилформамид и т.д.
Кроме того, в выборе растворителя для проведения реакции Манниха следует учитывать также и особенности стероидного субстрата. Для обеспечения региоселективности аминометилирования по атому С6 и с целью исключения побочной реакции по атому С2, находящемуся в α-положении к 3-кетогруппе, проводят предварительную енолизацию Δ4-3-кетосистемы. От растворимости и стабильности последней в процессе аминометилирования зависит эффективность реакции. Поэтому выбор растворяющей среды имеет существенное значение.
В известных способах получения 6-метилензамещенных стероидов ряда прегнана и андростана через образование 6-(N-метил-N-фениламинометил)-интермедиата с применением реакции Манниха в качестве растворителя используют тетрагидрофуран [GB 1280569, 1972; US 4990635, 1991; CN 1415624, 2003; CN 1491957, 2004]. Так, в патенте [GB 1280569, 1972] отмечается, что спирты (метанол, этанол, пропанол, изопропанол, t-бутанол) хотя и могут быть использованы как растворители в процессе аминометилирования, однако полярные апротонные растворители, такие как тетрагидрофуран, диоксан, 1,2-диметоксиэтан более эффективны. Кроме того, применение алифатических спиртов как растворителей в реакции Манниха с соединениями нестероидной структуры считается нежелательным, так как спирты способны реагировать с формальдегидом и вторичным амином с образованием продукта О-аминометилирования.
R-OH+CH2O+HNR2"=ROCH2NR2"
Однако в патенте [GB 1280569, 1972] не описано получение 6-(N-метил-N-фениламинометил)-производного АД. Кроме того, информация об изучении влияния растворяющей среды на параметры процесса 6-аминометилирования стероидов в доступных литературных источниках отсутствует.
Известно также, что расщепление оснований Манниха (в том числе и стероидных) может протекать неоднозначно. Наряду с целевым продуктом дезаминирования экзометилен-соединением (А) может образовываться продукт реверсивного процесса дезаминометилирования (В), представляющий собой исходное соединение в синтезе (Рисунок 5).
Рисунок 5. Направления расщепления стероидных оснований Манниха.
Причем селективность процесса дезаминирования существенно зависит от условий его проведения. Несмотря на то, что оптимальным вариантом расщепления связи C-N фенилзамещенных аминометилстероидов (R1=Ph) с образованием 6-метиленпроизводных считается обработка концентрированной минеральной кислотой [Mannich bases, Maurilio Tramontini, Luigi Angiolini //CRC Press. Inc. 1994. P 78-80], природа растворяющей среды и температурный режим также имеют большое значение. Обеспечение региоселективности расщепления N,N-дизамещенных 6-аминометилен-производных АД имеет большое значение в решении вопроса об эффективности и промышленной применимости этого способа. Однако информация о влиянии последних двух факторов на селективность реакции дезаминирования 6-аминометилпроизводных стероидов в доступных литературных источниках практически отсутствует. В патенте [GB 1280570, 1972] нет информации о качестве полученных продуктов дезаминирования 6-(N-метил-N-фениламинометил)-стероидов. Кроме того, не описано расщепление 6-(N-метил-N-фениламинометил)-производного АД с образованием 6-метилен-АД.
Также в литературных источниках отсутствует информация об изучении целесообразности совмещения последовательных процессов енолизации, аминометилирования и дезаминирования и проведения их без выделения интермедиатов.
Наиболее близким по сущности к предложенному способу получения эксеместана из 6-метилен-АД является способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона, который заключается в контактировании 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона с Δ1-дегидрирующими энзимами A. Simplex в присутствии несмешивающегося с водой органического растворителя и экзогенного акцептора электронов [WO 0104342, 2001]. Согласно этому способу для проведения процесса 1,2-дегидрирования 6-метилен-АД используют целые клетки или бесклеточный экстракт Arthrobacter simplex ATCC 6946, при этом использование целых клеток предпочтительно. Процесс проводят в двухфазной системе с использованием несмешивающегося с водой органического растворителя, выбранного из группы толуол, ксилол, бензол, гептан, метилен хлорид, н-октанол, или смесей этих растворителей, в присутствии химического экзогенного акцептора электронов (4% менадиона по отношению к весу субстрата) и фермента каталазы. Несмотря на то, что авторами заявлено, что субстрат 6-метиленандрост-4-ен-3,17-дион присутствует в среде в концентрации от 10 до 125 г/л (пп.18 и 19 формулы), в примере А, иллюстрирующем способ, концентрация исходного субстрата составляет 55,6 г/л. Так, для проведения процесса 6-метиленандрост-4-ен-3,17-дион (50 г) и менадион (2,0 г) смешивают с толуолом (800 мл). Водную фазу (pH 8.7-8.9), приготовленную как смесь каталазы, дикалийфосфата, клеточного концентрата A. Simplex (50 мл) и воды (50 мл), добавляют к интенсивно перемешиваемой смеси в толуоле. Процесс проводят при 30оС, реакционную смесь продувают регулируемой смесью воздуха и азота - воздух (0.1% SCHF) и азот (0.3% SCHF). При необходимости в течение реакции добавляют клетки A. Simplex для завершения процесса. Причем количество добавляемого дополнительно клеточного концентрата не указано. После завершения процесса органическую фазу отделяют, водную фазу экстрагируют толуолом. После фильтрации и осветления толуольный раствор концентрируют, к остатку добавляют 2,5-кратное объемное количество октана, кристаллический продукт отфильтровывают.
Недостатками описанного в WO 0104342 процесса являются:
- использование фермента каталазы в количестве 0,03% от веса субстрата, что удорожает технологический процесс и ограничивает его индустриальное применение;
- использование больших объемов легко воспламеняющихся органических растворителей на этапе трансформации, что требует специального ферментационного оборудования и соблюдения особых правил противопожарной безопасности;
- использование токсичных органических соединений создает угрозу здоровью специалистов, занятых в производстве. Применяемые ароматические углеводороды (бензол, толуол, ксилол) являются сильнодействующими ядами, влияющими на функцию кроветворения организма. Так, например, толуол вызывает цианоз, гипоксию, поражение центральной нервной системы, а также толуольную токсикоманию, которая имеет и канцерогенное действие.
- необходимость решения экологических проблем;
- сложность проведения технологического процесса в условиях необходимого регулирования состава газовой смеси, подаваемой в реакционную среду;
- отсутствие информации о селективности процесса трансформации и эффективности процесса выделения кристаллического продукта, т.е. о степени превращения субстрата в продукт и выходе кристаллического продукта (указано лишь, что количество нетрансформированного исходного субстрата составляет 0,1%);
- отсутствие информации о качестве полученного эксеместана;
- отсутствие примера, подтверждающего применимость способа при нагрузке субстрата до 125 г/л.
Технической задачей одного из изобретений заявленной группы является, таким образом, повышение эффективности, технологичности и безопасности проведения микробиологического 1,2-дегидрирования и получение 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона из 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона способом, лишенным указанных недостатков.
Технической задачей в заявленной группе изобретений является увеличение выхода целевых продуктов путем снижения вероятности протекания побочных реакций на стадии образования 3-енолэфира АД, на стадии введения N,N-дизамещенного аминометильного заместителя в положение С6 молекулы андростендиона, практически полное исключение образования побочных продуктов на стадии дезаминирования и образования 6-метиленовой группы и стадии 1,2-дегидрирования и получение 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона и 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона способами, лишенными вышеуказанных недостатков.
Техническая задача решается способом получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона формулы (I)
из андростендиона формулы (II),
включающим предварительную енолизацию Δ4-3-кетосистемы с образованием 3-енолэфира андростендиона формулы (III),
трехкомпонентную конденсацию с формальдегидом и вторичным амином в условиях кислого катализа с образованием N,N-дизамещенного 6-аминометилпроизводного андростендиона формулы (IV),
дезаминирование в среде, содержащей сильную минеральную кислоту, отличающимся тем, что в качестве среды для проведения реакции аминометилирования используют полярные протонные растворители, а в качестве среды для проведения реакции дезаминирования используют апротонные растворители или смеси апротонных растворителей. Протонные растворители в качестве среды для проведения реакции 6-аминометилирования стероидного субстрата ряда андростана ранее в подобных процессах не применялись. Апротонные растворители заявленной группы растворителей или их смеси в качестве среды для проведения реакции дезаминирования N,N-дизамещенных 6-аминометилпроизводных стероидов ряда андростана ранее в подобных процессах не применялись.
Еще одним изобретением заявленной группы является способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона 1,2-дегидрированием с использованием в качестве исходного вещества 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона, полученного вышеописанным способом по изобретению, методом микробиологической трансформации с помощью клеток бактерий Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д и последующего выделения целевого продукта из культуральной жидкости, отличающийся тем, что трансформацию проводят в водной среде, содержащей до 40% об смешивающегося с водой органического растворителя. Применение больших концентраций смешивающегося с водой органического растворителя в среде для проведения процесса 1,2-дегидрирования стероидного субстрата не является очевидным, и ранее большие концентрации смешивающегося с водой органического растворителя в подобных процессах не применялись.
Техническая задача в части получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона с использованием в качестве исходного (промежуточного соединения) полученного 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона достигается получением 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона формулы (V)
из 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона формулы (I),
методом микробиологического 1,2-дегидрирования в среде, содержащей экзогенный акцептор электронов и смешивающийся с водой апротонный полярный растворитель, с использованием концентраций исходного субстрата от 5 до 100 г/л и выделением целевого продукта из культуральной жидкости.
Таким образом, сущность заявленной группы изобретений, в которую входят получение 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона и далее 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона с его использованием заключается в том, что андростендион сначала подвергают енолизации Δ4-3-кетосистемы, затем трехкомпонентной конденсации с формальдегидом и вторичным амином в условиях кислого катализа с образованием N,N-дизамещенного 6-аминометиленпроизводного андростендиона в среде полярного протонного растворителя, затем дезаминированию с образованием 6-метиленового производного АД в среде апротонного растворителя (или смеси апротонных растворителей) с последующим проведением микробиологической реакции 1,2-дегидрирования в водной среде, содержащей до 40% об полярного апротонного растворителя, смешивающегося с водой.
С целью повышения выхода и упрощения процесса енолэфир АД подвергают аминометилированию положения С6 реакцией Манниха в среде полярного протонного растворителя и далее региоселективному расщеплению основания Манниха до образования 6-метиленовой группы в среде апротонного растворителя (или смеси апротонных растворителей).
При этом трехкомпонентную конденсацию по типу реакции Манниха проводят с выделением продукта из реакционной среды, а реакцию дезаминирования осуществляют в оптимальных условиях.
Кроме того, в качестве полярного протонного растворителя используют алифатические спирты из группы метанол, этанол, пропанол, изопропанол и т.п.
Кроме того, в качестве апротонного органического растворителя используют диалкилкетоны (например, ацетон, метилэтилкетон), ароматические углеводороды (например, бензол, толуол), хлорированные углеводороды (например, дихлорметан, хлороформ, дихлорэтан), а также их смеси в эффективном соотношении.
Кроме того, в качестве вторичного амина используют N-метиланилин, а формальдегид используют в виде 37-40% водного раствора.
Кроме того, проведение последующего 1,2-дегидрирования с целью получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона осуществляют с использованием клеток бактерий Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д.
Кроме того, в качестве полярного апротонного органического растворителя при проведении 1,2-дегидрирования используют диметилформамид или диметилсульфоксид, предпочтительно диметилсульфоксид. При этом концентрация ДМФ в водной среде составляет не менее 8% об., а концентрация ДМСО в водной среде составляет 8-40%.
Кроме того, концентрация исходного субстрата при проведении 1,2-дегидрирования составляет от 5 до 100 г/л, предпочтительно 100 г/л.
Кроме того, в качестве экзогенного акцептора электронов используют метадион в эффективном количестве.
Преимущества заявляемого способа состоят в следующем:
- Отсутствие необходимости использования многократной кристаллизации основного продукта или хроматографирования с целью его очистки.
- Высокая эффективность процесса енолизации. Выход на стадии получения енолэфира АД составляет 94,4%.
- Высокая селективность и упрощение проведения реакции аминометилирования. Выход на стадии получения N,N-дизамещенного 6-аминометиленпроизводного АД количественный;
- Высокая селективность процесса дезаминирования. Выход на стадии составляет 85-88%;
- Общий выход 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона из андростендиона составляет 83%.
Способ по настоящему изобретению позволяет проводить процесс 1,2-дегидрирования:
- при высокой нагрузке субстрата до 100 г/л в мягких условиях;
- без использования легко воспламеняющихся органических растворителей;
- без дополнительных соединений стероидной природы, обеспечивающих стабилизацию 1,2-дегидрогеназной активности;
- способ экологически безопасен, так как в качестве смешивающегося с водой растворителя предлагается ДМСО - высококипящая жидкость с низким уровнем токсичности и температурой вспышки 89°С (в закрытом сосуде), применяемая в медицине в виде водных растворов в качестве местного лекарственного препарата противовоспалительного и обезболивающего действия (торговое название Димексид);
- способ исключает применение фермента каталазы и каких-либо других поглотителей синглетного кислорода;
- способ может быть реализован на стандартном технологическом оборудовании.
Получение 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона формулы (I) и 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона формулы (V) осуществляются по схеме, изображенной на рисунке 6.
Рисунок 6. Синтез эксеместана из АД через 6-метилен-АД заявляемым способом
Ниже приводится в качестве примера подробное описание сущности изобретения.
Андростендион формулы (II),
подвергают енолизации Δ4-3-кетосистемы (с выделением продукта енолизации (III), например действием каталитического количества сульфосалициловой кислоты. Полученный с выходом до 94,4% метиловый 3-енолэфир АД (III) подвергают взаимодействию с реактивом Манниха, образующимся in situ в условиях кислого катализа (п-ТСК) из формальдегида и вторичного амина (N-метиланилина), в среде протонного полярного органического растворителя с образованием N,N-дизамещенного 6-аминометиленпроизводного (IV), которое после выделения из реакционной массы подвергают региоселективному дезаминированию в условиях катализа сильной минеральной кислотой (серной или соляной) в среде апротонного растворителя (или смеси апротонных растворителей) с образованием 6-метиленового производного (I). Полученный с выходом до 88% 6-метиленандрост-4-ен-3,17-дион (I) далее превращают в 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-дион (V) введением 1,2-двойной связи методом микробиологического дегидрирования с участием клеток микроорганизмов, обладающих 3-кетостероид-Δ1-дегидрогеназной активностью (предпочтительно клеток бактерий Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д), при этом нагрузка исходного субстрата составляет от 5 до 100 г/л, а продолжительность ферментации - от 24 до 52 часов и процесс проводят в водной среде, содержащей экзогенный акцептор электронов и смешивающийся с водой апротонный полярный растворитель - ДМФ или ДМСО (предпочтительно ДМСО).
Использование смешивающихся с водой органических растворителей на стадии 1,2-дегидрирования обеспечивает перевод стероидного субстрата - 6-метилен-АД, либо большей его части в растворимую форму и проведение процесса при высоких (50-100 г/л) нагрузках субстрата в значительной степени снижает эффект сокристаллизации субстата и продукта и образования смешанных кристаллов. В литературе отсутствуют данные об использовании смешивающихся с водой органических растворителей, применяемых в высоких концентрациях (20-40% об/об).
Анализ продуктов микробиологической трансформации проводят методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) и ВЭЖХ.
Определение содержания продуктов методом ВЭЖХ проводят на хроматографе Agilent 1100/1200 (Agilent, Germany) с предколонкой Symmetry C18, 5 мкм, 3,9×20 мм и колонкой Symmetry C18, 5 мкм, 4,6×250 мм (Waters, Ireland); в системе с подвижной фазой (v/v): 60% ацетонитрил, 10% изопропанол, 0,01% уксусная кислота и вода до 100%, при скорости потока 1 мл/мин, температуре 50°С, и детекции по поглощению при 250 нм; типичные времена удержания: для 6-метилен-АД 4,9 мин и для 6-метилен-АДД (эксеместана) 3,2 мин.
Выделение 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (V) из культуральной жидкости может быть осуществлено экстракцией несмешивающимся с водой растворителем или экстракцией стероида из пасты биомассы любым подходящим растворителем после ее предварительного отделения от водной фазы. Для извлечения стероида может быть также применен, например, сорбционный способ извлечения, а также любой другой эффективный метод. Селективность образования 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (V) на стадии микробиологического 1,2-дегидрирования составляет 95-98%. Выход кристаллического 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (V) на стадии микробиологического 1,2-дегидрирования после выделения и очистки составляет 85-87%.
Общий выход 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (V) из андростендиона составляет от 70 до 72%.
Заявленная группа изобретений иллюстрируется следующими примерами, не ограничивающими ее.
Образование 3-енолэфира АД проводят с использованием минимально необходимого количества триалкилортофомиата в среде соответствующего абсолютного спирта в присутствии кислого катализатора. В качестве кислого катализатора могут быть использованы сильные органические кислоты, например п-толуолсульфокислота или сульфосалициловая кислота.
N,N-Дизамещенное 6-аминометиленпроизводного андростендиона формулы (IV) получают в среде водного алифатического спирта с содержанием воды от 5 до 10%.
В качестве вторичного амина используют N-метиланилин, а формальдегид применяют в виде 37% водного раствора.
В качестве протонного растворителя на стадии аминометилирования при осуществлении изобретения-способа получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона могут быть использованы, например, алифатические спирты (метанол, этанол, пропанол, изопропанол и др.).
В качестве апротонного растворителя при осуществлении изобретения-способа получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона на стадии дезаминирования могут быть использованы, например, диалкилкетоны (например, ацетон, метилэтилкетон), ароматические углеводороды (например, бензол, толуол), хлорированные углеводороды (например, дихлорметан, хлороформ, дихлорэтан), а также их смеси в эффективном соотношении.
В качестве кислого катализатора на стадии дезаминирования могут быть использованы минеральные кислоты (предпочтительно серная или соляная кислота).
Микробиологическое 1,2-дегидрирование при осуществлении изобретения-способа получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона может быть осуществлено покоящимися (отмытыми) клетками бактерий рода Nocardioides, конкретно Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д.
В качестве компонента среды при осуществлении изобретения-способа получения 6-метиленандроста-1,4-ен-3,17-диона могут быть использованы смешивающиеся с водой органические полярные апротонные растворители, например ДМФ или ДМСО, предпочтительно ДМСО.
Способ иллюстрируется примерами.
Примеры
Пример 1. Получение 3-метоксиандроста-3,5-диен-17-она (3-енолэфир АД, III).
Суспензию 100 г АД (I) в смеси 85,6 мл триметилортоформиата и 130 мл безводного метанола перемешивают в течение 15 минут, затем медленно добавляют 120 мл раствора 0,2 г безводной сульфосалициловой кислоты в метаноле. Реакционную массу выдерживают при 20-25°С в течение 1 часа 15 минут. По окончании выдержки реакционную массу охлаждают до 10-15°С, добавляют медленно 75 мл сухого ацетона и выдерживают в течение 1 часа при этой же температуре. Затем добавляют 0,8 мл триэтиламина до pH 7-8, реакционную массу охлаждают до 0-2°С и прибавляют 225 мл воды. По окончании выдержки осадок отфильтровывают, промывают на фильтре водой и 0,25% раствором триэтиламина в метаноле. Получают 99 г 3-енолэфира АД (III) с выходом 94,4%. Т.пл.=171-172°С (лит. 171-173°C [RU 2163606, 2001]). ЯМР 1Н, δ, м.д.: 0.90 c (3 Н, 18-СН3), 0.98 c (3 Н, 19-СН3), 1.02-2.52 м (17 Н), 3.56 с (3 Н, ОСН3), 5.13 д (J=1.2 Гц, 1 Н, Н4), 5.22-5.25 м (1 Н, Н6).
Пример 2. Получение 6ξ-(N-метил-N-фениламинометил)-андрост-4-ен-3,17-диона (Смесь 6α и 6β изомеров, IV).
К суспензии 30 г 3-енолэфира АД (III) в 150 мл метанола добавляют 12,9 мл N-метиланилина и 7,45 мл 37% водного раствора формальдегида, затем медленно добавляют раствор 0,75 г п-ТСК в 10 мл метанола. Суспензию выдерживают 15-30 мин при комнатной температуре, затем 1 ч при температуре 30-40°С до растворения суспензии. По окончании реакции раствор выливают в 10-кратное объемное количество воды, содержащей 0,1 г NaOH. Осадок отфильтровывают, промывают водой до pH~7. Получают 40,42 г соединения IV (смесь 6α и 6β изомеров).
Найдено: С 80.16%; Н 8.92%; N 3.71%, C27H35NO2. Вычислено: С 79.96%; Н 8.70%, N 3.45%
6α-изомер: ЯМР 1Н, δ, м.д.: 0.92 с (3Н, 18-СН3), 1.31 с (3Н, 19-СН3), 2.98 с (3H, 21-СН3-N), 3.25 м (1Н, СН2-N), 3.77 м (1Н, СН2-N), 5.84 с (1Н, Н4), 6.50-7.25 м (5Н, Ph); 13C, δ, м.д.: 199.02, 170.44, 148.58, 129.17, 126.53, 116.49, 112.14, 56.97, 55.33, 54.10, 52.88, 50.50, 47.24, 42.52, 39.99, 39.07, 38.15, 37.24, 35.51, 34.65, 33.85, 31.04, 30.34, 21.24, 20.13, 18.21, 13.55. 6β-изомер: ЯМР 1Н, δ, м.д.: 0,87 с (3H, 18-CH3), 1,21 с (3H, 19-CH3), 2.97 с (3H, CH3-N), 5,74 с (1H, H4).
Пример 3. Получение 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона (6-метилен-АД, I).
Вариант 1.
К суспензии 40 г смеси 6α и 6β изомеров соединения IV в 200 мл ацетона добавляют 28,5 мл 32% соляной кислоты. Массу выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч и выливают в 10-кратное объемное количество воды. Осадок отфильтровывают, промывают водой до pH~7. Получают 26,7 г 6-метилен-АД (I) с выходом 90,7%.
После перекристаллизации из водного этилового спирта получают 25,9 г соединения I с выходом 88%.
Т.пл.=160-163°С (лит. 159-162°C [CN 1415624, 2003]).
ЯМР 1Н, δ, м.д.: 0.86 с (3Н, 18-СН3), 1.07 с (3Н, 19-СН3), 5,00 д (J=44.3 Гц, 2Н, 6-С=СН2), 5.88 с (1Н, Н4).
Вариант 2.
К суспензии 13,5 г смеси 6α и 6β изомеров соединения IV в смеси 100 мл толуола и 50 мл метилэтилкетона добавляют 15 мл 60% водной серной кислоты. Массу выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч, отделяют кислый слой и экстрагируют его дважды по 20 мл толуола. Раствор продукта в толуоле промывают 60% раствором серной кислоты и водой, обрабатывают осветляющим углем. Растворитель упаривают досуха, остаток кристаллизуют из водного этанола. Получают 8,5 г 6-метилен-АД (I) с выходом 85,6%.
Пример 4. Получение 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (V)
В работе используют штамм Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д, который поддерживают на агаризованной среде следующего состава (г/л): глюкоза - 10, соевый пептон - 4, дрожжевой экстракт - 4, MgSO4 - 0.5, KH2PO4 - 2, K2HPO4 - 4, агар - 20, вода дистиллированная, pH 7.0-7.2. Выращивание проводят в течение 3-4 суток при 30оС.
Выращивание 1-го инокулята
Смыв культуры с поверхности агаризованной среды в 5 мл физиологического раствора вносят в 750 мл колбы Эрленмейера с 50 мл среды (г/л): глюкоза - 15, соевый пептон - 6, дрожжевой экстракт - 6, MgSO4 - 0.5, KH2PO4 - 2, K2HPO4 - 4, и культивируют при 28-30оС в течение 24-26 часов.
Выращивание трансформирующей культуры.
5 мл культуральной жидкости на 24-26 часов роста 1-го инокулята вносят в 100 мл среды того же состава и проводят выращивание в аналогичных условиях в течение 15 часов, затем вносят индуктор синтеза стероид-Δ1-дегидрогеназы - ацетат кортизона - в виде этанольного раствора (20 мг в 1 мл этанола). Индукцию синтеза Δ1-дегидрогеназы проводят в течение последующих 24-26 часов. Клетки микроорганизмов осаждают центрифугированием при 5000 g в течение 30 мин и используют для проведения процесса 1-дегидрирования или хранят при -18оС в течение месяца до использования.
Трансформация 6-метилен-АД
Вариант 1.
Трансформацию 6-метилен-АД (I) проводят в колбах объемом 250 мл, содержащих 25 мл 0.02 М Na-фосфатного буферного раствора, pH 8,0. Последовательно вносят 125 мг субстрата в виде порошка и добавляют 0.2 г биомассы (вес сухой биомассы).
Биоконверсию проводят в аэрируемых условиях при 30оС, на роторной качалке при 200 об/мин. Процесс останавливают на 72 часа культивирования при достижении содержания 6-метилен-АДД - 91-93 (±3%).
Анализ продуктов конверсии осуществляют методом ТСХ и ВЭЖХ.
Вариант 2.
Способ осуществляют по варианту 1, но реакционная среда представлена 0.02 М Na-фосфатным буферным раствором, pH 8.0 (23 мл) и ДМСО (2 мл) с менадионом.
Вариант 3.
Способ осуществляют по варианту 2, но реакционная среда представлена 0.02 М Na-фосфатным буферным раствором, pH 8.0 (23 мл) и ДМФ (2 мл).
Варианты 4-9.
Способы осуществляют по варианту 2, но при диапазоне концентраций субстрата от 10.0 до 100.0 г/л (Таблица).
Культуральную жидкость экстрагируют этилацетатом, экстракт промывают водой, сушат над безводным MgSO4, осветляют активированным углем и упаривают досуха в вакууме. Остаток растирают с петролейным эфиром, осадок отфильтровывают. Получают 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-дион с выходом 85-87%.
Т.пл.=183-185°С (лит. 188-191°C [US 4904650, 1990]). ЯМР 1Н, δ, м.д.: 0.93 с (3Н, 18-СН3), 1.16 с (3Н, 19-СН3), 5.00 д (J=24.7 Гц, 2Н, 6-С=СН2), 6.16 д (J=1,9 Гц, 1Н, Н4), 6.24 дд (J=1.9 Гц, J=10.1 Гц, 1Н, Н2), 7.07 д (J=10.2 Гц, 1Н, Н1).
Получение 6-метилен-АДД | |||||||
Вариант, № | Объем среды, мл | Биомасса, г/л (вес сухой биомассы) | Нагрузка субстрата, г/л | Способ внесения | Концентрация растворителя, % | Продолжительность процесса, часы | Содержание продукта в среде, % |
1 | 25 | 1.0 | 5 | порошок | - | 72 | 92±3 |
2 | 25 | 1.0 | 5 | ДМСО | 8.0 | 48 | 93±3 |
3 | 25 | 1.0 | 5 | ДМФ | 8.0 | 24 | 92±3 |
4 | 25 | 2.0 | 10 | ДМСО | 8.0 | 24 | 92±3 |
5 | 25 | 4.0 | 20 | ДМСО | 14.0 | 24 | 92±3 |
6 | 25 | 10.0 | 50 | ДМСО | 20 | 27 | 95±3 |
7 | 25 | 10.0 | 50 | ДМСО | 40 | 29 | 91±3 |
8 | 25 | 15.0 | 75 | ДМСО | 40 | 52 | 91±3 |
9 | 25 | 20.0 | 100 | ДМСО | 40 | 52 | 92±3 |
Claims (11)
1. Способ получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона формулы (I)
из андростендиона формулы (II)
включающий предварительную енолизацию Δ4-3-кетосистемы с образованием 3-енолэфира андростендиона формулы (III)
трехкомпонентную конденсацию с формальдегидом и вторичным амином в условиях кислого катализа с образованием N,N-дизамещенного 6-аминометилпроизводного андростендиона формулы (IV)
дезаминирование в среде, содержащей сильную минеральную кислоту, отличающийся тем, что в качестве среды для проведения реакции аминометилирования используют полярные протонные растворители, а в качестве среды для проведения реакции дезаминирования используют апротонные растворители или смеси апротонных растворителей.
из андростендиона формулы (II)
включающий предварительную енолизацию Δ4-3-кетосистемы с образованием 3-енолэфира андростендиона формулы (III)
трехкомпонентную конденсацию с формальдегидом и вторичным амином в условиях кислого катализа с образованием N,N-дизамещенного 6-аминометилпроизводного андростендиона формулы (IV)
дезаминирование в среде, содержащей сильную минеральную кислоту, отличающийся тем, что в качестве среды для проведения реакции аминометилирования используют полярные протонные растворители, а в качестве среды для проведения реакции дезаминирования используют апротонные растворители или смеси апротонных растворителей.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве полярного протонного растворителя используют алифатические спирты из группы метанол, этанол, пропанол, изопропанол и т.п.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве апротонного органического растворителя используют диалкилкетоны (например ацетон, метилэтилкетон), ароматические углеводороды (например бензол, толуол), хлорированные углеводороды (например дихлорметан, хлороформ, дихлорэтан), а также их смеси в эффективном соотношении.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве вторичного амина используют N-метиланилин, а формальдегид используют в виде 37-40%-ного водного раствора.
5. Способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона формулы (V)
из 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона формулы (I)
путем микробиологического 1,2-дегидрирования в водной среде, содержащей экзогенный акцептор электронов и смешивающийся с водой растворитель, с использованием клеток микроорганизма с 3-кетостероид-Δ1-дегидрогеназной активностью, отличающийся тем, что в качестве компонента среды используют апротонный полярный растворитель в концентрации до 40 об.%.
из 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона формулы (I)
путем микробиологического 1,2-дегидрирования в водной среде, содержащей экзогенный акцептор электронов и смешивающийся с водой растворитель, с использованием клеток микроорганизма с 3-кетостероид-Δ1-дегидрогеназной активностью, отличающийся тем, что в качестве компонента среды используют апротонный полярный растворитель в концентрации до 40 об.%.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что в качестве микроорганизма с 3-кетостероид-Δ1-дегидрогеназной активностью используют Nocardioides simplex BKM Ac-2033Д.
7. Способ по п.5, отличающийся тем, что в качестве полярного апротонного органического растворителя используют диметилформамид или диметилсульфоксид, предпочтительно диметилсульфоксид.
8. Способ по п.5, отличающийся тем, что в качестве экзогенного акцептора электронов используют менадион в эффективном количестве.
9. Способ по п.5, отличающийся тем, что концентрация исходного субстрата составляет от 5 до 100 г/л, предпочтительно 100 г/л.
10. Способ по п.7, отличающийся тем, что концентрация ДМФ в водной среде составляет не менее 8 об.%.
11. Способ по п.7, отличающийся тем, что концентрация ДМСО в водной среде составляет 8-40%.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010107745/04A RU2425052C1 (ru) | 2010-03-04 | 2010-03-04 | Способ получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона из андрост-4-ен-3,17-диона, способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (эксеместана) с использованием полученного 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010107745/04A RU2425052C1 (ru) | 2010-03-04 | 2010-03-04 | Способ получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона из андрост-4-ен-3,17-диона, способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (эксеместана) с использованием полученного 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2425052C1 true RU2425052C1 (ru) | 2011-07-27 |
Family
ID=44753496
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010107745/04A RU2425052C1 (ru) | 2010-03-04 | 2010-03-04 | Способ получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона из андрост-4-ен-3,17-диона, способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (эксеместана) с использованием полученного 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2425052C1 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105017370A (zh) * | 2015-07-03 | 2015-11-04 | 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 | 一种依西美坦中间体及其制备方法和应用 |
CN106243179A (zh) * | 2016-07-31 | 2016-12-21 | 合肥远志医药科技开发有限公司 | 一种依西美坦工业化生产方法 |
CN106831920A (zh) * | 2016-12-03 | 2017-06-13 | 丽江映华生物药业有限公司 | 合成6‑亚甲基‑17α‑羟基‑19‑去甲孕甾‑4‑烯‑3,20‑二酮的方法 |
CN112409432A (zh) * | 2020-11-16 | 2021-02-26 | 陕西理工大学 | 一种依西美坦的合成方法 |
-
2010
- 2010-03-04 RU RU2010107745/04A patent/RU2425052C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105017370A (zh) * | 2015-07-03 | 2015-11-04 | 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 | 一种依西美坦中间体及其制备方法和应用 |
CN106243179A (zh) * | 2016-07-31 | 2016-12-21 | 合肥远志医药科技开发有限公司 | 一种依西美坦工业化生产方法 |
CN106831920A (zh) * | 2016-12-03 | 2017-06-13 | 丽江映华生物药业有限公司 | 合成6‑亚甲基‑17α‑羟基‑19‑去甲孕甾‑4‑烯‑3,20‑二酮的方法 |
CN106831920B (zh) * | 2016-12-03 | 2019-03-05 | 丽江映华生物药业有限公司 | 一种合成6-亚甲基-17α-羟基-19-去甲孕甾-4-烯-3,20-二酮的方法 |
CN112409432A (zh) * | 2020-11-16 | 2021-02-26 | 陕西理工大学 | 一种依西美坦的合成方法 |
CN112409432B (zh) * | 2020-11-16 | 2023-07-07 | 陕西理工大学 | 一种依西美坦的合成方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Fukui et al. | Bioconversion of lipophilic compounds in non-aqueous solvent. Effect of gel hydrophobicity on diverse conversions of testosterone by gel-entrapped Nocardia rhodocrous cells | |
RU2425052C1 (ru) | Способ получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона из андрост-4-ен-3,17-диона, способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (эксеместана) с использованием полученного 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона | |
JP2021533823A (ja) | 遺伝子改変細菌とその用途 | |
CN112852767B (zh) | 羰基还原酶突变体及其在催化合成17β-羟基甾体化合物中的应用 | |
JPH0824596B2 (ja) | ステロイド転化プロセス | |
KR960013094B1 (ko) | 에이. 심플렉스(A. simplex)에 의한 스테로이드성 21-에스테르의 1,2-탈수소화 | |
Faramarzi et al. | Metabolism of androst-4-en-3, 17-dione by the filamentous fungus Neurospora crassa | |
CN103740799A (zh) | 一种生物转化植物甾醇制备甾体药物中间体的方法 | |
HU194318B (en) | Process for the delta 1-dehydrogenation of steroids in the presence of materials relieving from toxic kinds of oxygen | |
Zhang et al. | Transformation of prednisolone to a 20β-hydroxy prednisolone compound by Streptomyces roseochromogenes TS79 | |
Naumann et al. | Biotechnological production of 20-alpha-dihydrodydrogesterone at pilot scale | |
US4528271A (en) | Process for the intensification of microbiological conversions of steroids using cyclodextrin additives | |
Luthra et al. | Biotransformation of 4-androstene-3, 17-dione to androst-1, 4-diene-3, 17-dione by Nocardioides Simplex | |
Zeng et al. | High Enantioselective and Large-Scale Production of Ursodeoxycholic Acid by Combination of Pd-and Hydroxysteroid Dehydrogenase-Catalyzed Hydrogenation | |
Tan et al. | Biological conversion of 17α-hydroperoxyprogesterone to 11α, 17α-dihydroxyprogesterone | |
Yang et al. | Microbial hydroxylation of 16α, 17α-dimethyl-17β-(l-oxopropyl) androsta-l, 4-dien-3-one to rimexolone by Curvularia lunata AS 3.4381 | |
EP1504021B1 (en) | Process for dehydrogenation of azaandrostane compounds | |
RU2447154C1 (ru) | Микробиологический способ получения 1,2-дегидрированных производных δ4-3-кетостероидов ряда андростана в водно-органических средах | |
US20030044885A1 (en) | Process to prepare 11beta, 17alpha,21-trihydroxy-6alpha-methylpregna-1,4-diene-3,20-dione 21-acetate | |
RU2236464C2 (ru) | Способ получения метандростенолона | |
US4684610A (en) | Process for converting 1,2-saturated steroids to 1,2-dehydro steroids | |
CN111349677A (zh) | 甾体c1,2位脱氢药物中间体的一种生物催化制备方法 | |
PATIL et al. | SUBSTRATE CARRIERS FOR C-1 (2)-DEHYDROGENATION OF 6-METHYLENE ANDROSTENEDIONE TO EXEMESTANE BY GROWING AND IMMOBILIZED ARTHROBACTER SIMPLEX NCIM 2449 | |
PENDHARKAR et al. | MICROBIAL Δ¹-DEHYDROGENATION OF ANDROST-4-ENE-3, 17-DIONE (AD) BY DELFTIA ACIDOVORANCE MTCC 3364 IN PRESENCE OF ORGANIC SOLVENT AS SUBSTRATE CARRIERS. | |
Sukhodolskaya et al. | Combined chemical and microbiological synthesis of exemestane from sitosterol |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130305 |