RU2336899C1

RU2336899C1 - Method of myelopoiesis stimulation

Info

Publication number: RU2336899C1
Application number: RU2007108222/14A
Authority: RU
Inventors: Евгений Данилович Гольдберг (RU); Евгений Данилович Гольдберг; Александр Михайлович Дыгай (RU); Александр Михайлович Дыгай; Глеб Николаевич Зюзьков (RU); Глеб Николаевич Зюзьков; Вадим Вадимович Жданов (RU); Вадим Вадимович Жданов
Priority date: 2007-03-05
Filing date: 2007-03-05
Publication date: 2008-10-27

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention concerns medicine, namely to haematology, and is referred to the method of stimulation of myelopoiesis. For this purpose administer Hyaluronidasum in effective dose specially developed for it.

EFFECT: provision of wide spectrum of haemostimulating action on hemopoietic tissue, rendering thus the minimum medicinal load on an organism.

2 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, конкретно к гематологии, и касается способа стимуляции миелопоэза.The invention relates to medicine, specifically to hematology, and relates to a method for stimulating myelopoiesis.

Значительный рост частоты встречаемости заболеваний системы крови в клинической практике, а также высокая частота развития осложнений при проведении химио- и лучевой терапии со стороны системы крови, являются основанием для поиска новых медикаментозных патогенетически обоснованных способов гемостимуляции и создания новых эффективных лекарственных препаратов, которые с успехом могли бы применяться в лечении анемий и лейкопений различного генеза.A significant increase in the incidence of diseases of the blood system in clinical practice, as well as a high incidence of complications during chemotherapy and radiation therapy from the blood system, are the basis for the search for new drug-based pathogenetically substantiated methods of hemostimulation and the creation of new effective drugs that could successfully would be used in the treatment of anemia and leukopenia of various origins.

Известно значительное количество способов гемостимуляции. Наиболее широкое распространение в лечебной практике получили методы, основанные на применении препаратов - рекомбинантных форм естественных регуляторов гемопоэза (цитокинов): эритропоэтина, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, гранулоцитомакрофагального колониестимулирующего фактора [1, 2]. Данные средства обладают выраженными стимулирующими действиями в отношении отдельных ростков миелопоэза.A significant number of hemostimulation methods are known. The most widespread in medical practice are methods based on the use of drugs - recombinant forms of natural hematopoiesis regulators (cytokines): erythropoietin, granulocyte colony-stimulating factor, granulocytomacrophage colony-stimulating factor [1, 2]. These funds have pronounced stimulating effects against individual sprouts of myelopoiesis.

Недостатками имеющихся способов являются: высокая тропность препаратов к определенному ростку кроветворения. В связи с этим, при патологических состояниях, когда наблюдается депрессия сразу нескольких ростков гемопоэза (цитостатические, лучевые воздействия, наследственные заболевания) требуется комбинированное использование гемостимуляторов. При этом одновременное назначение нескольких препаратов с разнонаправленными (а все цитокины являются полифукциональными регуляторами [3]) механизмами действия, сопровождаемое высокой ксенобиотической нагрузкой на организм, может приводить к нарушению функционирования систем жизнеобеспечения и усилению неблагоприятных побочных действий препаратов [4]. При этом такие побочные эффекты, как гипертензивные состояния, нарушения системы гемостаза, дефицит железа в сыворотке крови, аллергические реакции и др. достаточно часто встречаются даже при монотерапии указанными средствами [5, 6]. В свете вышесказанного чрезвычайно важное значение приобретает проблема создания новых эффективных способов стимуляции гемопоэза, которые могли бы оказывать одновременное действие на разные ростки кроветворения и были бы максимально безопасны.The disadvantages of the available methods are: high tropism of drugs to a specific germ of hematopoiesis. In this regard, in pathological conditions, when there is a depression of several sprouts of hematopoiesis at once (cytostatic, radiation effects, hereditary diseases), combined use of hemostatic stimulators is required. Moreover, the simultaneous administration of several drugs with multidirectional (and all cytokines are multifunctional regulators [3]) mechanisms of action, accompanied by a high xenobiotic load on the body, can lead to impaired functioning of life support systems and increase adverse side effects of drugs [4]. Moreover, such side effects as hypertensive conditions, disorders of the hemostatic system, iron deficiency in blood serum, allergic reactions, etc. are quite common even with monotherapy with the indicated drugs [5, 6]. In light of the foregoing, the problem of creating new effective methods of stimulating hematopoiesis, which could have a simultaneous effect on different sprouts of hematopoiesis and would be as safe as possible, is extremely important.

Предлагаемый способ стимуляции миелопоэза адекватного прототипа по широте эффективного гемостимулирующего эффекта и терапевтической сущности среди существующих способов не имеет.The proposed method for stimulating myelopoiesis of an adequate prototype in terms of the breadth of an effective hemostatic effect and therapeutic essence among the existing methods does not.

Задачей, решаемой данным изобретением, является создание эффективного средства с широким спектром гемостимулирующего действия на кроветворную ткань при минимальной лекарственной нагрузке на организм.The problem solved by this invention is the creation of an effective tool with a wide range of hemostimulating effects on the hematopoietic tissue with minimal drug load on the body.

Поставленная задача достигается техническим решением, представляющим собой способ стимуляции миелопоэза, заключающийся во внутрибрюшинном введении лабораторным животным (мыши) препарата гиалуронидазы в дозе 1000 УЕ/кг 1 раз в сут, в течение 2 дней.The problem is achieved by a technical solution, which is a method of stimulating myelopoiesis, which consists in the intraperitoneal administration to a laboratory animal (mouse) of a preparation of hyaluronidase at a dose of 1000 UE / kg once a day for 2 days.

Новым в предлагаемом изобретении является использование препарата гиалуронидазы, вводимого внутрибрюшинно в дозе 1000 УЕ/кг 1 раз в сут, в течение 2 дней.New in the present invention is the use of a hyaluronidase preparation, administered intraperitoneally at a dose of 1000 U / kg 1 time per day, for 2 days.

Гиалуроновая кислота (ГК) является одним из основных компонентов межклеточного матрикса тканей организма. Согласно современным представлениям молекулы ГК с различной длиной полисахаридной цепи оказывают разное влияние на многие биологические процессы и функциональную активность клеточных элементов [7, 8]. Известно, что низко- и среднемолекулярные формы ГК стимулируют ангиогенез, пролиферацию, дифференцировку и миграцию клеток. В то время как молекулы ГК с высокой молекулярной массой, напротив, тормозят сосудообразование, ингибируют деление клеток и снижают их способность к миграции [7, 8]. При этом важная роль в метаболизме и поддержании баланса различных форм ГК in situ принадлежит гиалуронидазе - ферменту, под действием которого происходит гидролитическое расщепление полимеров [7]. Вместе с тем установлено, что состояние межклеточного матрикса кроветворной ткани, значительная часть которого представлена именно ГК (около 40% от всех гликозаминогликанов [9]), способно влиять на гемопоэз [10]. Тем не менее, роль гиалуронидазы в регуляции кроветворения до сих пор во многом остается не известна, также как не известна и принципиальная возможность управления гемопоэзом путем введения в организм гиалуронидазы извне.Hyaluronic acid (HA) is one of the main components of the intercellular matrix of body tissues. According to modern concepts, HA molecules with different lengths of the polysaccharide chain have different effects on many biological processes and the functional activity of cellular elements [7, 8]. It is known that low- and medium-molecular forms of HA stimulate angiogenesis, proliferation, differentiation, and cell migration. At the same time, high molecular weight HA molecules, on the contrary, inhibit vascular formation, inhibit cell division and reduce their ability to migrate [7, 8]. In this case, an important role in the metabolism and maintaining the balance of various forms of HA in situ belongs to hyaluronidase, an enzyme under the action of which hydrolytic cleavage of polymers occurs [7]. At the same time, it was found that the state of the intracellular matrix of the hematopoietic tissue, a significant part of which is represented by HA (about 40% of all glycosaminoglycans [9]), is capable of affecting hematopoiesis [10]. Nevertheless, the role of hyaluronidase in the regulation of hematopoiesis is still largely unknown, as well as the fundamental possibility of controlling hematopoiesis by introducing external hyaluronidase into the body.

Факт применения гиалуронидазы с достижением нового технического результата: создание эффективного способа стимуляции миелопоэза за счет изменения свойств межклеточного матрикса путем введения гиалуронидазы, для специалиста является не очевидным.The fact of using hyaluronidase with the achievement of a new technical result: the creation of an effective method of stimulating myelopoiesis by changing the properties of the intercellular matrix by introducing hyaluronidase, is not obvious to a specialist.

Заявляемые существенные признаки проявили в совокупности новые свойства, не вытекающие явным образом из уровня техники в данной области. Новые признаки позволяют расширить спектр эффективного стимулирующего влияния на миелопоэз при минимальной лекарственной нагрузке на организм. Предлагаемое изобретение может быть использовано в экспериментальной биологии и медицине с выходом в практическое здравоохранение. Идентичной совокупности признаков при исследовании уровня техники по патентной и научно-медицинской литературе не обнаружено.The claimed essential features in the aggregate showed new properties that are not explicitly derived from the prior art in this field. New signs allow us to expand the spectrum of an effective stimulating effect on myelopoiesis with a minimum drug load on the body. The present invention can be used in experimental biology and medicine with access to practical health care. An identical set of features was not found in the study of the state of the art in patent and medical literature.

Исходя из вышеизложенного, следует считать заявляемое техническое решение соответствующим критериям: «новизна», «изобретательский уровень», «промышленная применимость».Based on the foregoing, the claimed technical solution should be considered relevant criteria: "novelty", "inventive step", "industrial applicability".

Способ осуществляют следующим образом:The method is as follows:

Лабораторному интактному животному (мыши), либо животному после моделирования у него цитостатической миелосупрессии путем однократного введения максимально переносимой дозы (МПД) циклофосфана, 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводят гиалуронидазу в дозе 1000 УЕ/кг.After simulating cytostatic myelosuppression by laboratory administration of an intact animal (mouse) or an animal by administering a maximum tolerated dose (MTD) of cyclophosphamide once a day for 2 days, hyaluronidase is administered at a dose of 1000 UE / kg.

Заявляемая доза и режим введения гиалуронидазы подобраны опытным путем и являются оптимальными для получения заявленного технического результата. Повышение дозы и кратности введения отменяет получение заявленного технического результата. Снижение дозы и/или однократное введение препарата значительно снижают эффективность способа.The claimed dose and mode of administration of hyaluronidase are selected empirically and are optimal for obtaining the claimed technical result. Increasing the dose and frequency of administration cancels the receipt of the claimed technical result. Dose reduction and / or single administration of the drug significantly reduces the effectiveness of the method.

Предлагаемый способ был изучен в экспериментах на мышах линии CBA/CaLac в количестве 456 штук, массой 18-20 г. Мыши 1 категории (конвенциональные линейные мыши) получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).The proposed method was studied in experiments on CBA / CaLac mice in the amount of 456 pieces, weighing 18-20 g. Category 1 mice (conventional linear mice) were obtained from the nursery of the experimental biomedical modeling department of the Research Institute of Pharmacology of the Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences (certificate is available).

На 3, 5 и 8-е сут после начала введения препарата гиалуронидазы интакным животным, и на 4, 6, 8, 10 и 14-е сут при введении препарата гиалуронидазы животным на фоне моделирования цитостатической миелосупрессии (однократное внутрибрюшинное введение циклофосфана в МПД (250 мг/кг) в 0,2 мл) стандартными гематологическими методами определяли количество эритроцитов, ретикулоцитов, содержание различных форм лейкоцитов в периферической крови и показатели костномозгового кроветворения [11]. Кроме того, изучали число эритроидных (КОЕ-Э) и грануломоноцитарных (КОЕ-ГМ) клеток-предшественников в костном мозге [12]. Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента и непараметрического U-критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.On the 3rd, 5th and 8th day after the start of administration of the hyaluronidase preparation to intact animals, and on the 4th, 6th, 8th, 10th and 14th day after the administration of the hyaluronidase preparation to animals on the background of modeling of cytostatic myelosuppression (single intraperitoneal administration of cyclophosphamide in the MTD (250 mg / kg) in 0.2 ml) the standard hematological methods determined the number of red blood cells, reticulocytes, the content of various forms of white blood cells in the peripheral blood and indicators of bone marrow hematopoiesis [11]. In addition, the number of erythroid (CFU-E) and granulomonocytic (CFU-GM) progenitor cells in the bone marrow was studied [12]. The results were processed by the method of variation statistics using Student's t-test and non-parametric Wilcoxon-Mann-Whitney U-test.

Пример 1.Example 1

Гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ), растворенную в 0,3 мл физиологического раствора, вводили интактным животным внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 2-х дней в дозе 1000 УЕ/кг. Контрольным мышам в эквивалентном объеме внутрибрюшинно вводили физиологический раствор.Hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Microgen of the Ministry of Health of the Russian Federation), dissolved in 0.3 ml of physiological saline, was administered intraperitoneally to intact animals 1 time per day for 2 days at a dose of 1000 UE / kg. Saline was injected intraperitoneally into the control mice in an equivalent volume.

Введение интактным животным гиалуронидазы приводило к существенному возрастанию количества ретикулоцитов во все сроки исследования с максимальными значениями до 253,6% от контроля на 8-е сут и числа эритроцитов на 8-е сут в периферической крови. При этом имело место достоверное увеличение числа палочко- (3, 5-е сут) и сегментоядерных нейтрофилов (3, 5, 8-е сут). Указанные изменения явились отражением динамики костномозгового кроветворения. Так, гиалуронидаза приводила к значительной гиперплазии эритроидного ростка кроветворения. Имело место увеличение содержания эритрокариоцитов в гемопоэтической ткани, достигающее максимальной величины на 5-е и 8-е сут опыта. Число незрелых нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге было достоверно выше на 3, 5-е сут, а их зрелых форм на протяжении всего эксперимента. Кроме того, введение фермента сопровождалось увеличением содержания лимфоидных элементов в кроветворной ткани на 5, 8-е сут эксперимента (табл.1). При этом количество других морфологически распознаваемых форм миелокариоцитов оставалось в пределах фоновых значений.Administration of hyaluronidase to intact animals led to a significant increase in the number of reticulocytes at all stages of the study with maximum values up to 253.6% of the control on the 8th day and the number of red blood cells on the 8th day in the peripheral blood. In this case, there was a significant increase in the number of rod- (3, 5th day) and segmented neutrophils (3, 5, 8th day). These changes were a reflection of the dynamics of bone marrow hematopoiesis. So, hyaluronidase led to significant hyperplasia of the erythroid germ of hematopoiesis. There was an increase in the content of red blood cells in the hematopoietic tissue, reaching a maximum value on the 5th and 8th days of the experiment. The number of immature neutrophilic granulocytes in the bone marrow was significantly higher on the 3rd, 5th day, and their mature forms throughout the experiment. In addition, the introduction of the enzyme was accompanied by an increase in the content of lymphoid elements in the hematopoietic tissue on the 5th, 8th day of the experiment (Table 1). At the same time, the number of other morphologically recognized forms of myelokaryocytes remained within the background values.

Культуральные исследования механизмов формирования описанных реакций системы крови показали зависимость их развития от состояния пула коммитированных клеток-предшественников. Расщепление ГК приводило к возрастанию числа КОЕ-Э (3, 5, 8-е сут) и КОЕ-ГМ (3, 5, 8-е сут) в костном мозге (с максимумом КОЕ-Э до 276,8% на 3-е и КОЕ-ГМ до 313, 3% на 5-е сут соответственно) (табл.1).Cultural studies of the mechanisms of formation of the described reactions of the blood system showed the dependence of their development on the state of the pool of committed progenitor cells. Cleavage of HA led to an increase in the number of CFU-E (3, 5, 8th day) and CFU-GM (3, 5, 8th day) in the bone marrow (with a maximum of CFU-E to 276.8% by 3- e and CFU-GM up to 313, 3% on the 5th day, respectively) (Table 1).

В целом, изменение свойств межклеточного матрикса с помощью используемой дозы гиалуронидазы приводило к существенной гиперплазии эритроидного и гранулоцитарного ростков кроветворения (миелопоэз).In general, a change in the properties of the intercellular matrix using the used dose of hyaluronidase led to significant hyperplasia of the erythroid and granulocytic hematopoietic germs (myelopoiesis).

Пример 2.Example 2

Моделирование цитостатической миелосупрессии осуществляли путем однократного внутрибрюшинного введения циклофосфана в максимально переносимой дозе (250 мг/кг) в 0,3 мл физиологического раствора. Опытным животным на фоне моделирования миелосупрессии вводили внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 2-х дней гиалуронидазу в дозе 1000 УЕ/кг («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ), растворенную в 0,3 мл физиологического раствора.The modeling of cytostatic myelosuppression was carried out by a single intraperitoneal injection of cyclophosphamide in the maximum tolerated dose (250 mg / kg) in 0.3 ml of physiological saline. Against the background of modeling myelosuppression, experimental animals were injected intraperitoneally 1 time per day for 2 days with a dose of 1000 UE / kg of hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Microgen, Ministry of Health of the Russian Federation), dissolved in 0.3 ml of physiological saline.

Введение циклофосфана закономерно приводило к выраженной депрессии костномозгового кроветворения. Отмечалось падение содержания эритрокариоцитов (4, 6-е сут), незрелых (4, 6-е сут) и зрелых (4, 6, 8, 10-е сут) нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге. При этом указанная динамика сменялась в дальнейшем нормализацией показателя зрелых нейтрофильных гранулоцитов и увеличением количества эритрокариоцитов и незрелых нейтрофильных гранулоцитов на 10, 14-е сут относительно фоновых значений, свидетельствующих о высокой интенсивности регенераторных процессов в гемопоэтической ткани. Динамика содержания остальных морфологически распознаваемых клеточных элементов в костном мозге в целом носила аналогичный характер. Отражением состояния костномозгового кроветворения явилась картина периферической крови. Имело место резкое снижение содержания ретикулоцитов (4, 6, 8-е сут) и эритроцитов (8-е сут), сменяющееся возрастанием их числа на 10, 14-е сут и на 10-е сут соответственно. Схожая тенденция наблюдалась и со стороны динамики содержания нейтрофилов в периферической крови. В начальные сроки абсолютно не регистрировались их палочкоядерные формы. Данные элементы определялись лишь на 10, 14-е сут, причем их количество было все же ниже исходного уровня. При этом восстановление числа сегментоядерных нейтрофилов начиналось раньше, и их количество с 8-х сут превосходило аналогичные параметры у интактных животных. Изучение механизмов регенерации кроветворной ткани показало, что введение циклофосфана сопровождалось падением числа КОЕ-Э и КОЕ-ГМ до 6-х сут исследования. Однако в дальнейшем отмечалось значительное увеличение количества кроветворных прекурсоров с максимумом на 8-е сут до 265,5% и до 159,3% от фона для КОЕ-Э для КОЕ-ГМ соответственно (табл.2).The introduction of cyclophosphamide naturally led to severe depression of bone marrow hematopoiesis. There was a decrease in the content of erythrokaryocytes (4th, 6th day), immature (4th, 6th day) and mature (4th, 6th, 8th, 10th day) neutrophilic granulocytes in the bone marrow. At the same time, the indicated dynamics was subsequently replaced by normalization of the index of mature neutrophilic granulocytes and an increase in the number of red blood cells and immature neutrophilic granulocytes on the 10th, 14th day relative to the background values, indicating a high intensity of regenerative processes in hematopoietic tissue. The dynamics of the content of the remaining morphologically recognizable cellular elements in the bone marrow as a whole was of a similar nature. A reflection of the state of bone marrow hematopoiesis was a picture of peripheral blood. There was a sharp decrease in the content of reticulocytes (4th, 6th, 8th day) and red blood cells (8th day), followed by an increase in their numbers on the 10th, 14th day, and on the 10th day, respectively. A similar trend was observed in the dynamics of the content of neutrophils in peripheral blood. In the initial period, their stab forms were not recorded at all. These elements were determined only on the 10th, 14th day, and their number was still below the initial level. Moreover, the restoration of the number of segmented neutrophils began earlier, and their number from 8 days exceeded the similar parameters in intact animals. A study of the mechanisms of hematopoietic tissue regeneration showed that the introduction of cyclophosphamide was accompanied by a decrease in the number of CFU-E and CFU-GM before the 6th day of the study. However, in the future, a significant increase in the number of hematopoietic precursors was noted with a maximum on the 8th day to 265.5% and up to 159.3% of the background for CFU-E for CFU-GM, respectively (Table 2).

Двукратное введение гиалуронидазы сразу после моделирования цито-статической миелосупрессии значительно стимулировало процессы регенерации эритроидного и гранулоцитарного ростков кроветворения. Практически во все сроки опыта отмечалось существенное увеличение содержания кроветворных прекурсоров в гемопоэтической ткани относительно цитостатического контроля (КОЕ-Э с максимумом в 6,3 раза, а КОЕ-ГМ в 4,4 раза на 6-е сут). Состояние пула родоначальных клеток закономерно приводило к более быстрому и значительному возрастанию эритрокариоцитов (число данных элементов на 6-е сут было больше, чем в контроле в 2,01 раза), незрелых (было больше в 1,72 раза на 6-е сут) и зрелых (на 6-е и 8-е сут превосходило более чем в 2 раза) нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге. Аналогичные изменения имели место со стороны периферической крови. Количество исследуемых зрелых элементов крови значительно превосходило число соответствующих показателей в контрольной группе практически во все сроки наблюдения (табл.2).Twice administration of hyaluronidase immediately after modeling of cytostatic myelosuppression significantly stimulated the regeneration of erythroid and granulocytic hematopoietic sprouts. In almost all periods of the experiment, there was a significant increase in the content of hematopoietic precursors in the hematopoietic tissue relative to the cytostatic control (CFU-E with a maximum of 6.3 times, and CFU-GM by 4.4 times on the 6th day). The state of the pool of primordial cells naturally led to a more rapid and significant increase in erythrokaryocytes (the number of these elements on the 6th day was more than 2.01 times in the control), immature (was 1.72 times more on the 6th day) and mature (on the 6th and 8th days exceeded more than 2 times) neutrophilic granulocytes in the bone marrow. Similar changes have occurred in the peripheral blood. The number of mature blood elements studied significantly exceeded the number of corresponding indicators in the control group at almost all observation periods (Table 2).

Таким образом, гиалуронидаза оказывала выраженный стимулирующий эффект в отношении как эритроидного, так и гранулоцитарного ростка кроветворения, подавленного цитостатиком (т.е. отмечалась стимуляция миелопоэза). Данный препарат увеличивал количество кроветворных клеток-предшественников в гемопоэтической ткани и приводил к более быстрому восстановлению показателей костного мозга и периферической крови. Причем полученные результаты, согласно «Методическим указаниям по изучению гемостимулирующей активности фармакологических веществ» [13], позволяют охарактеризовать используемый препарат как эффективный. При этом механизмом гемопоэзстимулирующего действия гиалуронидазы, очевидно, является изменение свойств межклеточного матрикса гемопоэтической ткани.Thus, hyaluronidase exerted a pronounced stimulating effect on both erythroid and granulocyte hematopoiesis growth suppressed by cytostatic (i.e., stimulation of myelopoiesis was noted). This drug increased the number of hematopoietic progenitor cells in hematopoietic tissue and led to a faster recovery of bone marrow and peripheral blood. Moreover, the results obtained, according to the “Methodological guidelines for the study of hemostimulating activity of pharmacological substances” [13], allow us to characterize the drug used as effective. In this case, the mechanism of the hematopoietic stimulating action of hyaluronidase, obviously, is a change in the properties of the intercellular matrix of the hematopoietic tissue.

Предлагаемый способ позволяет эффективно стимулировать миелопоэз как в условиях оптимальной жизнедеятельности, так и при миелосупрессирующих воздействиях.The proposed method allows you to effectively stimulate myelopoiesis both in conditions of optimal life and myelosuppressive effects.

Цитируемая литература:References cited:

1. Glaspy J.A. Hematopoietic management in oncology practice. Part 1. // Myeloid growth factors Oncology (Huntingt). - 2003. - Vol.17. - №11. - P.1593-1603.1. Glaspy J.A. Hematopoietic management in oncology practice. Part 1. // Myeloid growth factors Oncology (Huntingt). - 2003. - Vol.17. - No. 11. - P.1593-1603.

2. Волкова М.А. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор граноцит и его клиническое применение // Тер. архив. - 1998. - №4. - С.80-84.2. Volkova M.A. Granulocyte colony-stimulating factor granocyte and its clinical use // Ter. archive. - 1998. - No. 4. - S.80-84.

3. Система цитокинов: Теоретические и клинические аспекты / Под ред. В.А.Козлова, С.В.Сенникова. - Новосибирск: Наука, 2004. - С.7.3. System of cytokines: Theoretical and clinical aspects / Ed. V.A. Kozlova, S.V. Sennikova. - Novosibirsk: Nauka, 2004. - P.7.

4. Зборовский А.Б., Тюренков И.Н. Осложнения фармакотерапии. - М.: Медицина, 2003. - 543 с.4. Zborovsky A.B., Tyurenkov I.N. Complications of pharmacotherapy. - M.: Medicine, 2003 .-- 543 p.

5. Vial Т., Descotes J. Clinical toxicity of cytokines used as haemopoietic growth factors // Drug Saf. - 1995. - Vol.13. - №6. - P.371-406.5. Vial T., Descotes J. Clinical toxicity of cytokines used as haemopoietic growth factors // Drug Saf. - 1995 .-- Vol.13. - No. 6. - P.371-406.

6. Ancliff P.J., Gale R.E., Liesner R. e.a. Long-term follow-up of granulocyte colony-stimulating factor receptor mutations in patients with severe congenital neutropenia: implications for leukaemogenesis and therapy // Br. J. Haematol. - 2003. - Vol.120. - №4. - P.685-690.6. Ancliff P.J., Gale R.E., Liesner R. e.a. Long-term follow-up of granulocyte colony-stimulating factor receptor mutations in patients with severe congenital neutropenia: implications for leukaemogenesis and therapy // Br. J. Haematol. - 2003. - Vol. 120. - No. 4. - P.685-690.

7. Stern R. Devising a pathway for hyaluronan catabolism: are we there yet? // Glycobiology. - 2003. - Vol.13. - №12. - P.105-115.7. Stern R. Devising a pathway for hyaluronan catabolism: are we there yet? // Glycobiology. - 2003. - Vol.13. - No. 12. - P.105-115.

8. Noble P.W. Hyaluronan and its catabolic products in tissue injury and repair // Matrix Biol. - 2002. - №21. - P.25-29.8. Noble P.W. Hyaluronan and its catabolic products in tissue injury and repair // Matrix Biol. - 2002. - No. 21. - P.25-29.

9. Avigdor A., Goichberg P., Shivtiel S. e.a. CD44 and hyaluronic acid cooperate with SDF-1 in the trafficking of human CD34⁺stem/progenitor cells to bone marrow // Blood. - 2004. - Vol.103. - №8. - P.2981-2989.9. Avigdor A., Goichberg P., Shivtiel S. ea CD44 and hyaluronic acid cooperate with SDF-1 in the trafficking of human CD34 ⁺ stem / progenitor cells to bone marrow // Blood. - 2004 .-- Vol. 103. - No. 8. - P.2981-2989.

10. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. Гипоксия и система крови. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 2006. - С.15-17, 47-48.10. Goldberg E.D., Dygay A.M., Zyuzkov G.N. Hypoxia and the blood system. - Tomsk: Publishing house Tom. University, 2006 .-- S.15-17, 47-48.

11. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. В.В.Меньшикова, М. - 1987. - 152 с.11. Laboratory research methods in the clinic: Handbook / Ed. V.V. Menshikova, M. - 1987. - 152 p.

12. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. - Томск: Изд-во ТГУ, 1992. - С.130-145.12. Goldberg E.D., Dygay A.M., Shakhov V.P. Methods of tissue culture in hematology. - Tomsk: Publishing house of TSU, 1992. - S.130-145.

13. Дыгай A.M., Жданов В.В., Гольдберг В.Е. и др. Методические указания по изучению гемостимулирующей активности фармакологических веществ // Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств. - 2002. - №1(9). - С.29-32.13. Digay A.M., Zhdanov VV, Goldberg V.E. and other guidelines for the study of hemostimulating activity of pharmacological substances // Vedomosti Scientific Center for Expertise and State Control of Medicines. - 2002. - No. 1 (9). - S. 29-32.

Таблица 1Table 1 Показатели эритроидного и грануломоноцитарного ростка кроветворения при введении интактным мышам линии СВА гиалуронидазу в дозе 1000 УЕ/кг, (Х±m)Indicators of an erythroid and granulomonocytic hematopoietic sprout with the introduction of intact mice of the CBA line of hyaluronidase at a dose of 1000 UE / kg, (X ± m) Сроки/суткиDates / day Ретикулоциты, %Reticulocytes,% Эритроциты, Т/лRed blood cells, T / L Палочко-ядерные нейтрофилы, Г/лNuclear neutrophils, g / l Сегменто-ядерные нейтрофилы, Г/лSegment nuclear neutrophils, g / l Незрелые нейтрофильные гранулоциты, ×10⁶/бедроImmature neutrophilic granulocytes, × 10 ⁶ / thigh Зрелые нейтрофильные гранулоциты, ×10⁶/бедроMature neutrophilic granulocytes, × 10 ⁶ / thigh Эритрокариоциты, ×10⁶/бедроErythrokaryocytes, × 10 ⁶ / thigh КОЕ-Э, на 10⁶ миелокариоцитовCFU-E, 10 ⁶ myelocaryocytes КОЕ-ГМ, на 10⁶ миелокариоцитовCFU-GM, for 10 ⁶ myelocaryocytes контрольthe control 9,12±1,29.12 ± 1.2 11,21±0,411.21 ± 0.4 0,3±0,020.3 ± 0.02 2,44±0,232.44 ± 0.23 1,12±0,41.12 ± 0.4 3,64±0,213.64 ± 0.21 1,71±0,291.71 ± 0.29 5,31±0,125.31 ± 0.12 5,11±0,215.11 ± 0.21 3-е3rd 13,0±0,57*13.0 ± 0.57 * 10,9±1,210.9 ± 1.2 0,46±0,01*0.46 ± 0.01 * 4,6±0,69*4.6 ± 0.69 * 2,56±0,03*2.56 ± 0.03 * 5,02±0,38*5.02 ± 0.38 * 2,01±0,372.01 ± 0.37 14,7±0,42*14.7 ± 0.42 * 12,68±0,8*12.68 ± 0.8 * 5-е5th 15,4±1,1*15.4 ± 1.1 * 12,6±0,812.6 ± 0.8 1,03±0,09*1.03 ± 0.09 * 5,01±0,9*5.01 ± 0.9 * 2,98±0,2*2.98 ± 0.2 * 5,4±0,67*5.4 ± 0.67 * 4,8±0,79*4.8 ± 0.79 * 12,4±2,0*12.4 ± 2.0 * 16,01±1,4 *16.01 ± 1.4 * 8-е8th 23,12±2,1*23.12 ± 2.1 * 13,4±0,2*13.4 ± 0.2 * 0,04±0,020.04 ± 0.02 8,5±0,79*8.5 ± 0.79 * 1,6±0,341.6 ± 0.34 6,37±1,2*6.37 ± 1.2 * 5,0±1,1*5.0 ± 1.1 * 8,09±0,56*8.09 ± 0.56 * 9,1±1,7*9.1 ± 1.7 * * - отмечена достоверность различия показателя от его контрольного значения при р≤0,05.* - the significance of the difference of the indicator from its control value at p≤0.05 is noted.

Таблица 2table 2 Показатели эритроидного и грануломоноцитарного ростка кроветворения при моделировании цитостатической миелосупрессии (1) и при введении гиалуронидазы в дозе 1000 УЕ/кг на фоне моделирования миелосупрессии (2), (Х±m)Indicators of erythroid and granulomonocytic hematopoiesis when modeling cytostatic myelosuppression (1) and with the introduction of hyaluronidase at a dose of 1000 UE / kg against the background of modeling myelosuppression (2), (X ± m) Сроки/суткиDates / day Ретикулоциты, %Reticulocytes,% Эритроциты, Т/лRed blood cells, T / L Палочко-ядерные нейтрофилы, Г/лNuclear neutrophils, g / l Сегменто-ядерные нейтрофилы, Г/лSegment nuclear neutrophils, g / l Незрелые нейтрофильные гранулоциты, ×10⁶/бедроImmature neutrophilic granulocytes, × 10 ⁶ / thigh Зрелые нейтрофильные гранулоциты, ×10⁶/бедроMature neutrophilic granulocytes, × 10 ⁶ / thigh Эритрокариоциты, ×10⁶/бедроErythrokaryocytes, × 10 ⁶ / thigh КОЕ-Э, на 10⁶ миелокариоцитовCFU-E, for 10 ⁶ myelocaryocytes КОЕ-ГМ, на 10⁶миелокариоцитовCFU-GM, for 10 ⁶ myelocaryocytes контрольthe control 9,12±1,29.12 ± 1.2 11,21±0,411.21 ± 0.4 0,3±0,020.3 ± 0.02 2,44±0,232.44 ± 0.23 1,12±0,21.12 ± 0.2 3,64±0,213.64 ± 0.21 1,71±0,121.71 ± 0.12 5,31±0,125.31 ± 0.12 5,11±0,215.11 ± 0.21 4-е4th 1one 1,2±0,04*1.2 ± 0.04 * 10,1±0,4210.1 ± 0.42 0±00 ± 0 0±00 ± 0 0,2±0,01*0.2 ± 0.01 * 0,4±0,02*0.4 ± 0.02 * 0,4±0,02*0.4 ± 0.02 * 1,24±0,26*1.24 ± 0.26 * 4,5±0,454,5 ± 0,45 22 1,86±0,03*#1.86 ± 0.03 * # 10,42±0,5110.42 ± 0.51 0±00 ± 0 0,98±0,04*#0.98 ± 0.04 * # 0,36±0,02*#0.36 ± 0.02 * # 0,7±0,03*0.7 ± 0.03 * 0,24±0,07*0.24 ± 0.07 * 2,99±0,12*#2.99 ± 0.12 * # 9,6±1,2*#9.6 ± 1.2 * # 6-е6th 1one 3,0±0,64*3.0 ± 0.64 * 12,03±1,212.03 ± 1.2 0±00 ± 0 3,71±0,563.71 ± 0.56 0,6±0,02*0.6 ± 0.02 * 0,68±0,14*0.68 ± 0.14 * 0,68±0,14*0.68 ± 0.14 * 2,34±0,75*2.34 ± 0.75 * 2,68±0,3*2.68 ± 0.3 * 22 6,54±1,01*#6.54 ± 1.01 * # 11,7±0,9911.7 ± 0.99 0,11±0,02*#0.11 ± 0.02 * # 4,86±0,67*4.86 ± 0.67 * 1,03±0,05#1,03 ± 0,05 # 1,32±0,17*#1.32 ± 0.17 * # 1,37±0,09#1.37 ± 0.09 # 14,89±1,4*#14.89 ± 1.4 * # 11,74±1,36*#11.74 ± 1.36 * # 8-е8th 1one 4,5±0,23*4.5 ± 0.23 * 7,06±0,87*7.06 ± 0.87 * 0±00 ± 0 5,04±0,55*5.04 ± 0.55 * 1,74±0,31.74 ± 0.3 1,2±0,6*1.2 ± 0.6 * 1,2±0,61.2 ± 0.6 14,1±2,3*14.1 ± 2.3 * 8,14±0,78*8.14 ± 0.78 * 22 7,19±1,2*#7.19 ± 1.2 * # 12,78±0,65*#12.78 ± 0.65 * # 0,18±0,04*#0.18 ± 0.04 * # 6,56±0,2*#6.56 ± 0.2 * # 2,56±0,31*#2.56 ± 0.31 * # 2,76±0,84#2.76 ± 0.84 # 2,3±0,04*#2.3 ± 0.04 * # 18,64±3,1*18.64 ± 3.1 * 10,12±2,4*10.12 ± 2.4 * 10-е10th 1one 12,64±0,38*12.64 ± 0.38 * 12,4±0,21*12.4 ± 0.21 * 0,01±0,01*0.01 ± 0.01 * 6,32±0,48*6.32 ± 0.48 * 2,4±0,02*2.4 ± 0.02 * 2,42±0,04*2.42 ± 0.04 * 3,42±0,04*3.42 ± 0.04 * 7,8±1,347.8 ± 1.34 6,3±1,46.3 ± 1.4 22 24,3±1,4*#24.3 ± 1.4 * # 13,5±0,34*#13.5 ± 0.34 * # 0,07±0,04*0.07 ± 0.04 * 8,66±0,35*#8.66 ± 0.35 * # 2,7±0,31*2.7 ± 0.31 * 3,56±0,14#3.56 ± 0.14 # 4,78±0,98 *#4.78 ± 0.98 * # 13,01±1,7*#13.01 ± 1.7 * # 4,36±1,084.36 ± 1.08 14-е14th 1one 29,7±3,4*29.7 ± 3.4 * 11,24±0,7911.24 ± 0.79 0,04±0,01*0.04 ± 0.01 * 4,78±0,36*4.78 ± 0.36 * 2,78±0,2*2.78 ± 0.2 * 5,41±0,995.41 ± 0.99 2,41±0,992.41 ± 0.99 4,03±1,564.03 ± 1.56 3,78±0,89*3.78 ± 0.89 * 22 32,4±2,4*32.4 ± 2.4 * 13,78±0,37*13.78 ± 0.37 * 0,32±0,08#0.32 ± 0.08 # 6,34±0,41*#6.34 ± 0.41 * # 3,54±0,03*#3.54 ± 0.03 * # 7,66±0,97*#7.66 ± 0.97 * # 4,37±0,64 *#4.37 ± 0.64 * # 5,7±2,35.7 ± 2.3 3,98±1,73.98 ± 1.7 * - отмечена достоверность различия показателя от его контрольного значения при p≤0,05.
# - отмечена достоверность различия показателя от его значения у животных после введения циклофосфана при p≤0,05.* - the significance of the difference of the indicator from its control value is noted at p≤0.05.
# - the significance of the difference of the indicator from its value in animals after the introduction of cyclophosphamide at p≤0.05 is noted.

Claims

A method of stimulating myelopoiesis by administering a drug, characterized in that hyaluronidase is used as a drug in an effective dose.