RU2003678C1 - Штамм бактерий BACILLUS SUBTILIS - продуцент инозина - Google Patents

Description

снижение расхода глюкозы на единицу продукции;

снижение потребности в интенсивной аэрации.

Это достигаетс  получением нового штамма Bacillus subtills As 115-7, депонированного во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-6134.

Штамм As 115-7 получен генетико-се- лекционным путем после обработки штамма В.subtills ВНИИгенетика 72 нитрозогуанидином и введени  в его геном р да последовательных мутаций - реверсии по признаку ауксотрофности по урацилу и резистентности к повышающимс  концентраци м арсензта (до 3 мМ).

Полученный штамм As 115-7 приобрел вследствие мутации резистентности р д полезных свойств, улучшающих его технологические характеристики по сравнению с исходным штаммом ВНИИгенетика 72. За вл емый штамм As 115-7 отличаетс  улучшенным ростом на плотных агаризованых средах, повышенными стабильностью и продуктивностью. Максимальный уровень накоплени  инозина в оптимальных услови х культивировани  составл ет у штамма As 115-7 40-45 г/л, тогда как у штамма-прототипа ВНИИгенетика 48 - 30-40 г/л. Наиболее ценным свойством, отличающим штамм As 115-7 от штамма-прототипа,  вл етс  его способность, к активному накоплению инозина при недостаточном снабжении среды кислородом.

Культура л ьно-морфо логические признаки .

Грамположительна  палочка размером 3,5-5,0 х 0,7-0,8. Способность к спорообразованию резко снижена. Штамм Аз 115-7 отличаетс  от штамма ВНИИгенетика 48 по морфологии колоний. На агаризовэнной среде Хоттингера после 1-2 сут культивировани  при 34-37°С штамм As 115-7 образует более крупные желтовато-серые колонии диаметром 7-8 мм с умеренно извилистым краем. В отличие от блест щих и слизистых колоний штамма-прототипа колонии штамма As 115-7 плотные матовые с шероховатой крупинчатой поверхностью, строго локализованным уплотнением к центру типа пуговички и широким уплотнением к периферии в виде валика. На кос ках Хоттингера штрих белесый, матовый, более густой и плотный по сравнению со штаммом-прототипом . На м сопептонном агаре штамм As 115-7 образует колонии диаметром 6-7 мм с уплотнением в центре и к периферии, Штрих густой и плотный. На белково-витаминном агаре (БВА) колонии

более крупные и плотные, чем на агаризо- ванной среде Хоттингера и на м сопептонном агаре. На кос ках БВА штрих очень густой и плотный.

5При инкубации в течение 24 ч при 37°С

на жидких полноценных средах без встр хивани  наблюдаетс  помутнение среды. На поверхности образуетс  пленка.

При росте на синтетических жидких и 0 агаризованных средах нуждаетс  в добавке аденина. гистидина и тирозина. Культуру поддерживают на кос ках с агаризованной средой Хоттингера с добавкой аденина в концентрации 10 мг на 1 л среды. 5 Физиолого-биохимические признаки.

Аэроб.

Желатину разжижает.

Крахмал гидролизует слабо.

Молоко пептонизирует.

0На ломтиках картофел  рост умеренный .

Клетчатку не разрушает и не усваивает.

Усваивает глюкозу, галактозу, лактозу, фруктозу, мальтозу, манмозу, рзмнозу, сахз- 5 розу, глицерин, маннит. Не усваивает ара- бинозу и ксилозу.

Антагонистических свойств не обнаруживает . Непатогенен. Устойчив ч зрсензту з

0 концентрации 3 мМ. Штамм As 115 7 обладает наиболее высокой активностью накоплени  инозина среди известных из патентной литературы штаммов. Кроме го- го, он более эффективно использует глюкозу

5 на образование целевого продукта.

Как следует из данных, приведенных в табл. 1, при культивировании штамма As 115-7 в лабораторных услови х в колбах из качалке он образует до 35-45 г/л инозина, в

0 то врем  как штамм-прототип накапливает 30-40 г/л. При этом степень конверсии глюкозы в целевой продукту за вл емого штамма выше, чем у штамма-прототипа.

Дл  более полной оценки преимуществ

5 предлагаемого штамма в табл.2 приводитс  характеристика его активности в сравнении с активностью штамма-прототипа в услови х недостаточной аэрации.

Как видно из табл.2, за вл емый шг мм

0 As 115-7 в огличие от штчммз-прототппо при значительном ухудшении условий ции (до 1,0 г 02/л/ч)сохран в высокую ьи- осинтетическую активность. Кроме тою, штамм As 115-7 обладает способностью бо5 лее эффективно использовать глюкозу ча синтез инозина даже в недостаточном снабжении среды кислородом, чгс повышает экономичность процесса и позвол ет снизить энергозатраты в процессе культивирг вани  штамма.

Пример. Культуру Bacillus subtllls As 115-7 со скошенного агара Хоттингера перенос т в жидкую посевную среду следующего состава, мас.%:

Глюкоза техническа  2,0 Пептон1,0

Дрожжевой экстракт 1,0 NaCI0.25

ВодаДо 100

Посевной материал выращивают в колбах емкостью 250 мл, содержащих 20 мл среды, на качалке, делающей 240-260 об/ мин, при 34°С в течение 24 ч. Посевной материал в количестве 4 об.% перенос т в ферментационную среду следующего состава , мас.%:

Глюкоза техническа 14 ,0 Белково-витаминный концентрат 2,5 NH-iNOa3,0

MgSCto0,5

Мел3,0

ВодаДо 100

рН среды подвод т до 7,3 раствором КОН перед стерилизацией. Среду стерилизуют при 0,8 атм в течение 30 мин.

Процесс ферментации осуществл ют в

колбах емкостью 250 мл, содержащих 10 мл

среды, на качалке, делающей 240-260

об/мин, что соответствует скорости растворени  кислорода 4,0 г 02/л/ч, при 34°С.

После 144 ч ферментации в культураль- ной жидкости накапливаетс  44,4 г/л инозина .

Таким образом, за вл емый штамм Bacillus subtllls As 115-7 обладает следующими преимуществами по сравнению со штаммом-прототипом:

превосходит штамм-прототип по максимальному уровню накоплени  инозина; Отличаетс  бблее высокой эффективностью использовани  глюкозы на единицу продукции, что повышает экономичность процесса;

обладает улучшенным ростом и повы- шенной жизнеспособностью клеток;

сохран ет высокую биосинтетическую активность при недостаточном снабжении среды кислородом, что позвол ет снизить энергозатраты в процессе ферментации.

(56) Патент США № 4749650, кл. С 19/40, 1988.

12 Р

Сравнение основных показателей, характеризующих за вл емый штамм и штамм-прототип.

Таблица 1 ,

Накопление инозина за вл емым штаммом и штаммом-прототипом в зависимости от условий аэрации

Claims (1)

1. Формула изобретени  Штамм бактерий Bacillus subtlils ВКПМ

   Таблица2

   В-6134 - продуцент инозина.