RU1806199C - Штамм СоRYNевастеRIUм аммоNIаGеNеS - продуцент инозин-5 @ -монофосфата - Google Patents

Abstract

Использование: биотехнологи , микробиологическа  промышленность и касаетс  микробиологического синтеза инозин-5-монофосфата . Сущность изобретени : штамм Corynebacterium (Brevlbacterlum) ammonlagenes ВКПМ В-5534 получен гене- тико-селекционным путем без применени  мутагенной обработки с использованием ступенчатого отбора мутантов, резистентных к повышающимс  концентраци м арсената из родительского штамма Br. ammonlagenes 79-5 (ВКПМ В-3279). В отличие от родительского штамма В-3279, накапливающего смесь четырех продуктов пурмнового и пиримиди- нового происхождени  - уридин-5-моно- фосфата, урацила, инозин-5-монофосфата и гипоксантина. штамм В-5534  вл етс  продуцентом исключительно инозин-5-монофос- фата. Штамм В-5534 обладает наиболее высокой активностью накоплени  инозин-5- монофосфата (до 35,0 г/л) среди эффективных из патентной литературы штаммов. Кроме того, он более эффективно использует глюкозу на образование целевого продукта . 1 табл.

Description

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности и касаетс  микробиологического синтеза инозин-5 - монофосфата (5,-ИМФ).

51-ИМФ находит широкое применение в пищевой промышленности как высокоактивна  вкусова  приправа.

Целью изобретени   вл етс  увеличение уровн  накоплени  5,-ИМФ и повышение эффективности использовани  глюкозы.

Это достигаетс  получением нового штамма Corynebacterium (Вrev bacterium) ammoblagenes AS72-26. депонированного

во Всесоюзной; коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В- 5534.

Штамм В-5534 получен генетико-селек- ЦиОнным путем без применени  мутагенной обработки с использованием ступенчатого отбора мутантов, резистентных к повышающимс  концентраци м арсената. Исходным материалом дл  селекции послужил пигмен- тообразующйй штамм Br.ammonlagenes 79-5 (ВКПМ В-3279), накапливающий смесь четырех продуктов пуринового и пиримиди- нового происхождени  - уридин-5 -моно- фосфата (УМФ), урацила 5 -ИМФ и

ю

ы

гипоксантина. Штамм В-5534 отличаетс  от родительского штамма В-3279 устойчивостью к арсенату, улучшенным ростом на жидких и твердых средах, утратой способности к образованию пигмента при росте на агаризованной среде Хоттингера. В отличие от родительского штамма, он накапливает исключительно 5,-ИМФ,

Культурно-морфологические признаки,

Грамположйтельна  палочка длиной до 1,5 мкм, шириной 0,6-0,8 мкм, без жгутиков, неподвижна , не образует спор. На агаризованной среде Хотингера после 1-2 суток культивировани  при 30-34° образует колонии круглой формы диаметром 2,0-3,0 мм с ровным краем бледно-желтого цвета. Поверхность колоний гладка , с матовым блеском и слабой концентрической исчер- ченностью. При посеве петлей на твердую среду Хоттингера после инкубации в течение 24 ч при 30-34° наблюдаетс  умеренный рост, поверхность штриха гладка , блест ща , бледно-желтого цвета. В отличие от родительского штамма, за вл емый штамм В-5534 утратил способность к выделению в среду красно-бурого пигмента при инкубации на полноценной агаризованной среде Хоттингера.

Аэроб. При посеве уколом в полноценный агар растет только на его поверхности. При инкубации на жидких полноценных средах при 30-34° без встр хивани  рост отсутствует, пленки на поверхности не образуетс . При встр хивании,через 24 ч наблюдаетс  значительное помутнение.

Дл  роста на жидкой и агаризованной средах требуетс  добавка аденина, биотина , витаминов Вт иВз.

Культуру поддерживают на кос ках с агаризованной средой Хоттингера с добавкой аденина в концентрации 10 мг на 1 л среды.

Физиолого-биохимические признаки.

Штамм В-5534  вл етс  ауксотрофом по аденину. Желатину не разжижает, на крахмальном агаре и обезжиренном молоке роста нет. На ломтиках картофел  рост умеренный, клетчатку не разрушает и не усваивает. Нитраты не восстанавливает. Усваивает глюкозу, фруктозу, рибозу, цитрат, пуриновые и пиримидиновые рибонуклео- зиды, плохо усваивает сахарозу, сорбит, маннит, не. потребл ет лактозу, галактозу, фумарат, сукцинат, ксилозу, арабинозу, глицерин , рамнозу, маннозу.

Антагонистических свойств не обнаруживает . Не патогенен.

Устойчив к арсенату в концентрации 2 мМ. В результате резистентности к арсенату штамм В-5534 полностью потер л способность к накоплению пигмента и образованию

пиримидиновых производных (УМФ и ура- цила).

Как следует из данных, приведенных в таблице, при культивировании штамма В- 5534 он образует до 32,2-35,0 г/л 5Ч/1МФ, в то врем  как штамм-прототип накапливает 26,8 г/л 5 -ИМФ. При этом скорость накоплени  5,-ИМФ и степень конверсии глюкозы у за вл емого штамма значительно превы- шает соответствующие показатели штамма- прототипа.

П р и м е р 1. Культуру Corynebacterium (Brevlbacterlum) ammonlagenes В-5534 со скошенного агара Хоттингера перенос т в 5 жидкую посевную среду следующего состава , мас.%:

глюкоза техническа  2,0 пептон1,0 дрожжевой экстракт 1,0 0 NaCI 0,25

водадо 100 Посевной материал выращивают в колбах емкостью 750 мл, содержащих 75 мл среды , на качалке, делающей 240-250 об/мин 5 при 34° в течение 24 ч. Посевной материал в количестве 10 об.% перенос т в ферментационную среду следующего состава, %: глюкоза техническа  15,0 кукурузный экстракт 6,0 0 КН2Р04 3,0 MgS04 7Н20 1,0 мочевина 0,84 вода до 100 Среду стерилизуют при 0,8 атм в тече- 5 ние 30 мин, мочевину стерилизуют отдельно в-оиде 40%-ного раствора при 0,5 атм 30 мин. После стерилизации рН среды подвод т ,3 раствором КОН JN и добавл ют раствор мочевины.

0 Процесс ферментации осуществл ют в колбах емкостью 750 мл, содержащих 30 мл среды, на качалке, делающей 350 об/мин, что соответствует скорости растворени  кислорода 3,8 г 02/л ч при 34°. После 144 ч 5 ферментации в культуральной жидкости накапливаетс  32,2 г/л 5 -ИМФ. Степень конверсии глюкозы 21,5% (в прототипе 17,8%). П р и м е р 2. Штамм, услови  выращивани  посевного материала и услови  фер- 0 ментации те же, что в примере 1. Отличи  заключаютс  в составе ферментационной среды, мас.%:

глюкоза техническа  14,0 кукурузный экстракт 8,0 5 КН2Р043,0 MgSO r7H20 1,0 мочевина 0,84 вода до 100 После 144 ч ферментации в культуральной жидкости накапливаетс  35,0 г/л 5 -ИМФ.

Степень конверсии глюкозы 25,0% (в прототипе 17,8%)

Таким образом, за вл емый штамм Corynebacterlum (В re vl bacterium) ammonlagenes ВКПМ В-5534 обладает следующими преимуществами по сравнению со штаммом-прототипом:

превосходит штамм-прототип по количеству накапливаемого целевого продукта 5Ч/1МФ на 20-30%;

обладает большей скоростью накоплени  5 -ИМФ;

отличаетс  более высокой эффективностью использовани  глюкозы на единицу продукции.

Claims (1)

1. Формула изобретени  Штамм Corynebacterlum ammonlagenes ВКПМ В-5534 - продуцент инозин-5 -моно- фосфата.

   Сравнение основных показателей, характеризующих за вл емый штамм

   и штамм-прототип