RU1561227C

RU1561227C - Водный раствор для криоконсервирования тромбоцитов

Info

Publication number: RU1561227C
Authority: RU
Inventors: Е.П. Сведенцов; О.М. Селезнева; Д.С. Симкин; В.М. Новосадов
Original assignee: Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови
Priority date: 1988-02-01
Filing date: 1988-02-01
Publication date: 1994-11-15

Abstract

Изобретение относится к медицине, в частности к консервированию клеток крови. Цель изобретения - снижение гибели тромбоцитов и увеличение их количества в фуекционально полиоценном состоянии, уменьшение токсичности криозащитного раствора. Посталенная цель достигается тем, что раствор для криоконсервирования тромбоцитов содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, лимонную кислоту и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующем соотношении компонентов, мас.%: гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 5,0 - 15,0; лимонная кислота 0,9 - 1,3; динатриевая соль диаминтетрауксусной кислоты 0,1 - 0,1; вода для инъекций - остальное. Предложенный раствор обеспечивает повышение выхода целевого продукта до 93%, повышает выход жизнеспособных и функционально полноценных клеток до 70%, снижает в 3 раза токсичность криозащитного раствора. 3 табл.

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к консервированию клеток крови.

Цель изобретения - сохранение тромбоцитов в функционально полноценном состоянии после замораживания до -196^оС и уменьшение токсичности.

Данная цель достигается тем, что раствор для криоконсервирования тромбоцитов содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, лимонную кислоту и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующем соотношении компонентов, мас.%: Гексаметиленбистетра- оксиэтилмочевина 5,0-15,0 Лимонная кислота 0,9-1,3 Динатриевая соль эти- лендиаминтетрауксус- ной кислоты 0,1-0,1 Вода для инъекций Остальное
Оптимальная рецептура ограждающего раствора для замораживания тромбоцитов следующая, г: гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 10; лимонная кислота 1,1; ЭДТА Na₂ 0,1; вода до 100 мл.

П р и м е р 1. К 10 мл тромбоцитарной взвеси добавляют по стенке 10 мл раствора для криоконсервирования при постоянном перемешивании (соотношение 1: 1), эквилибрируют 20 мин с этим раствором при температуре +4^оС разливают по 10 мл в металлические контейнеры из нержавеющей стали объемом 12 мл, замораживают по двухэтапной программе на аппарате для программного замораживания УОП 000.000: на первом этапе охлаждают со скоростью 1^оС/мин до -7^оС, на втором 20^oC/мин до -140оС с последующим переносом контейнеров в жидкий азот. Содержание форменных элементов в 1 мкл тромбоцитовзвеси, подготовленной к замораживанию, составляло 900˙ 10³. Размораживание тромбоцитной взвеси через 17 дней после замораживания до -196^оС производят в 20-литровой водяной ванне при +39^оС в течение 20 с. Число тромбоцитов в 1 мкл равно 800˙ 10³. Их адгезивность составила 23,7%, агрегация с АДФ на 2 мин 7,14%, на 10 мин 7,14%.

Влияние криоконсервирования на морфологические особенности тромбоцитов изучают с помощью световой и электронной микроскопии, а их функцию исследованием адгезивности и агрегации.

При оценке ультраструктуры проведен анализ содержания альфа-гранул и митохондрий на срез тромбоцита и величины площади среза. Полученные данные сравнивают с аналогичными показателями интактных тромбоцитов,
Как видно из табл. 1, средняя площадь среза тромбоцитов, хранившихся в жидком азоте с использованием растворов 1, 2, 3, значимо не отличается от средней площади интактных тромбоцитов. Содержание альфа-гранул на срез оказалось значимо сниженным, однако при использовании раствора 2 это снижение менее выражено.

В табл. 2 представлены преимущества предложенного раствора (2), содержащего криопротектор - гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину в 5%-ной конечной концентрации по сравнению с прототипом (1, 2, 3), содержащим криофилактик - диметилацетамид.

Как видно из представленных данных, гибель тромбоцитов, криоконсервированных с предложенным раствором, меньше чем при замораживании с аналогом, а количество форменных элементов в функционально полноценном состоянии больше, так как предложенный раствор имеет в 3 раза меньшую токсичность. Он так же, как и прототип, не требует отмывания криопротектора после размораживания биообъекта.

Сохранность функциональных свойств тромбоцитов представлена в табл. 3.

Как видно из табл. 3, предлагаемый раствор обладает таким же криозащитным действием, что и прототип, но токсичность заявляемого раствора по сравнению с прототипом в 3 раза ниже.

Claims

ВОДНЫЙ РАСТВОР ДЛЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ ТРОМБОЦИТОВ, отличающийся тем, что, с целью сохранения тромбоцитов в функционально полноценном состоянии после замораживания до -196^oС, а также уменьшения токсичности раствора, он содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, лимонную кислоту и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 5,0 - 15,0
Лимонная кислота 0,9 - 1,3
Динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 0,1 - 0,1
Вода для инъекций Остальное