RO112995B1

RO112995B1 - Produs medicamentos pentru terapia colonului

Info

Publication number: RO112995B1
Application number: RO97-01479A
Authority: RO
Inventors: Rodica Teodorescu
Original assignee: Rodica Teodorescu
Priority date: 1997-08-05
Filing date: 1997-08-05
Publication date: 1998-03-30
Also published as: AU8754098A; WO1999007393A1

Description

Prezenta invenție se referă la un produs medicamentos pentru terapia colonului, cu efecte deosebite în tratamentul postoperator al cancerului de colon.

□dată cu introducerea antibioticelor și chimioterapicelor, s-au obținut rezultate foarte bune în ceea ce privește agentul patogen al diferitelor maladii. Urmările, însă, în cazurile de administrare prelungită sau repetată utilizare a antibioticelor au fost din cele mai neplăcute.

Este cunoscut faptul că, în timpul folosirii antibioticelor pe cale orală, în tulburările digestive, cu germeni precizați și neprecizați, apar fenomene de rezistență a acestora. Ca urmare, efectul antibioticului scade, flora intestinală normală este distrusă, iar flora de putrefacție și germenii patogeni se dezvoltă în continuare.

Cercetările pentru găsirea de remedii naturale au luat o mare amploare pe plan mondial. Instituții de prestigiu ca “Centrul Experimental al Laptelui” și “Institutul Provincial pentru Protecția Infantilă” din Milano au publicat studii privind variația florei lactice si bifide intestinale. Acestea au demonstrat ca lactobacilii din iaurt supraviețuiesc trecerii prin tractul digestiv, împiedicând dezvoltarea florei de putrefacție, ajutând înmulțirea florei lactice și bifide, autohtone.

Problema utilizării anumitor specii de lactobacili în distrugerea florei de putrefacție s-a pus, deci, cu foarte mulți ani în urmă. Elementul activ în această acțiune este acidul lactic și alte substanțe specifice cu acțiune antibiotică de tipul nisinului. Nisinul se caracterizează printr-o acțiune de inhibare puternică a speciilor ce aparțin microflorei de putrefacție [Aerobacter sp., Escherichia sp., Proteus sp., Stafilococcus sp.], fie prin blocarea respirației și metabolismului acestora, fie prin stoparea diviziunii celulare.

Ga urmare; lactobacilii au fost folosiți în terapia afecțiunilor intestinale, ca preparate conținând culturi mono2 microbiene, asociate sau nu cu alte substanțe medicamentoase.

Cercetările efectuate in Centrul “Biosan” au avut rezultate în obținerea de produse biologice bazate pe diferite combinații de lactobacili specifici tractului digestiv.

Experimentarea clinica și apoi utilizarea clinică a produselor Centrului “Biosan” a demonstrat că eubioticele au la bază tulpini de mare vitalitate si putere enzimatică, constituie un mijloc terapeutic de valoare indiscutabila, care reprezintă o terapie de substituție microbiologică intestinală de mare eficienta De aici necesitatea unor reguli precise pentru producerea si controlul acestor preparate.

Eubioticele sunt culturi pure (Ui bacterii lactice, în special tulpini selecționate de Lactobacillus acidop'T/lus. care trăiesc în mod obișnuit, in tulm digestiv, și Lactobacillus casei care se află în salivă

In cercetările efectuate de Centrul “Biosan” au fost preparate, si apoi fabricate, trei generații de eubiotice. produse medicamentoase în care au fost asociate tulpini selecționate de Lactobacillus ac/dophylus, Lactobacillus casca și Lactobacillus plantarum.

Sunt cunoscute compoziții farmaceutice care conțin diferite tulpini ale Lactobacillus și care sunt utilizate iu medicina umana pentru tratarea diferitelor maladii.

Cercetările privind obținerea unor eubiotice de înaltă eficacitate au urmărit obținerea unor produse noi. având putere mărită de acidifiere. care sa asigure distrugerea florei de putrefacție si realizarea unor condiții optime pentru dezvoltarea florei saprofite normale. S-a urmărit, de asemenea, obținerea, prin selecție. a unor tulpini de Lactobacillus care să elibereze în mediu cantităti sporite de substanțe de tip antibiotic cuie ar fi lactobacilina, lactocitina. precum s ergoni, care au efecte benefice asupra celulei vii, stimulând funcția divcrscm sisteme endogene si sporind capacitatea vitală.

RO 112995 Bl

Produsul medicamentos conform invenției este constituit din 0,093650 părți amestec de 4 tulpini : Lactobacillus acidophylus - LAR, Lactobacillus casei LC, Lactobacillus plantarum - LPI și Streptococcus lactis - SLR înregistrate sub numerele 31, 27, 10 și 36 și Colecția Centrului Biosan (0,5 : 0,5 :

2,5 : 0,5], 40 părți vitamina B_v 10 părți vitamina B₂, 100 părți vitamina B₆, 200 părți pantotenat de calciu și 6000 părți L-lizină clorhidrat, părțile fiind exprimate în greutate.

Tulpina de Lactobacillus acidophylus - LAR nr.31 este o tulpină nefilantă, cu o putere acidifiantă de 148°T și fermentează cu randament maxim rafinoza și trehaloza.

Tulpina Lactobacillus casei - LC nr. 27, are o putere acidifiantă de 185° T și fermentează ramnoza.

Tulpina Lactobacillus plantarum LPI nr.10 coagulează laptele fără eliminare de zer, formează un depozit bogat pe mediu sintetic, are o putere acidifiantă de 150° T, fermentează xiloza.

Tulpina Streptococcus lactis - SLR nr. 36 fermentează aesculina.

Avantajele produsului medicamentos, conform invenției, sunt următoarele:

- acidifiază mediul cu efect prelungit;

- inhibă efectul hialuronidazei, oprind difuzarea bacteriilor patogene, influențând permeabilitatea mucoasei intestinale;

reduce activitatea gluconronidazei, azoreductazei si nitrureductazei, substanțe care au acțiune omogenă asupra celulei;

- stimulează mitoza celulară neoncogenă, cu rol în regenerarea mucoasei intestinale.

Se dă în continuare un exemplu de realizare a invenției.

Pentru obținerea a 100 g produs medicamentos, în conformitate cu prezenta invenție, se asociază următoarele componente: 93,650 g pulbere liofilizată, obținută din amestecul celor 4 tulpini bacteriene (raport de asociere 0,5 : 0,5 : 2,5 : 0,5], se amesteca la rece cu 40 mg vitamina B_v 10 mg vitamina B₂, 100 mg vitamina B... 200 mg pantotenat de calciu si 6000 mg L-lizma clorhidrat.

Adăugarea si amestecul ingredientelor se efectuează în condiții de protecție împotriva higroscopicitătii, iar ambalarea se face în recipienti ele culoare închisă cu pulberi sicative. în sistemul de închidere care trebuie sa fie etanș.

Modul de obținere a tulpinilor.

a) Lactobacillus acidophylus

Tulpina pură de Lactobacillus acidophylus a fost obținută prin dispersii si izolări repetate, care s-au efectuat in modul următor: proba din care vrem sa izolăm tulpina de lactobacili a fost introdusă in mediu MRS lichid ai stermostatat la 37°C timji rin 24 -î'-î

h.

Modul de lucru

In 10 eprubete sterile s-a introdus apa peptonată 1%o: în prima eprubeta 10 ml, iar în celelalte câte 9 ml. Se ia cu o ansă din mediul însămânțat anterior, introducându-se în prima eprubeta Cu o pipetă de 1 ml s-a omogenizat foarte bine si s-au făcut dilutn succesive dtim: tehnica cunoscuta. Pentru a onnne colonii izolate s-a mers până la dilutia 6-7. din care s-a pus câte 1 ml în cate o placă Petri, peste care s-au turnat 15... 20 ml mediu MRS agarizat la 45%. S-a omogenizat foarte bine pentru a se obține colonii dispersate uniform. După ce mediul s-a solidificat, placa Petri a fost introdusă în termostat la 37 C. cu capacul în jos. timp de 48 h. Cu o ansa fără buclă, au fost izolate coloniile care ne interesau, ținând cont ca aspectul coloniilor este specific speciei de loc*; bacillus acidophylus. Tulpinile izolate au fost introduse în eprubete cu mediu MRS lichid, care are următoarea compoziție 10 %o, triptona. 10°% extract de carne. 10%o extract de drojdie - pH = 6 6.5.

20%c glucoza. î% Tween SC 2' fosfat dipotasic, 5.h> acetat cie sodit.. 2%o citrat de amoniu. 0.2'’ sulmt, c '

RO 112995 Bl magneziu,

0,05 %o sulfat de mangan. Se sterilizează 20 mm. la o atmosferă.

b) Lactobacillus casei

Tulpina pură de Lactobacillus casei a fost obținută prin dispersii și izolări repetate, care s-au efectuat în modul următor: proba din care vrem să izolăm tulpina de lactobacili a fost introdusă în MRS lichid și s-a termostatat la 37°C timp de 24 ... 48 h.

Modul de lucru

In 10 eprubete sterile s-a introdus apă peptonată 1 %₀, în prima eprubetă 10 ml, iar în celelalte câte 9 ml.

Se ia cu o ansă din mediul însămânțat anterior, introducându-se în prima eprubetă. Cu o pipetă de 1 ml s-a omogenizat foarte bine si s-au făcut diluții succesive după tehnica cunoscută. Pentru a obține tulpini izolate s-a mers până la diluția 6 - 7, din care s-a pus câte 1 ml în câte o placă Petri, peste care s-au turnat 15 ... 20 ml mediu MRS organizat la 45°C. S-a omogenizat foarte bine pentru a se obține colonii dispersate uniform. După ce mediul s-a solidificat, placa Petri a fost introdusă în termostat la 37°C, cu capacul în jos, timp de 48 h.

Cu o ansă fără buclă au fost izolate coloniile care ne interesau, ținând cont că aspectul coloniilor este specific speciei de Lactobacillus casei.

Tulpinile izolate au fost introduse în eprubete cu mediu MRS lichid (mediu de Man, Rogoza, Sharpe) cu compoziția cunoscută.

c) Lactobacillus plantarum

Tulpina pură de Lactobacillus plantarum a fost obținută prin dispersii și izolări repetate, care s-au efectuat în modul următor: proba din care vrem să izolăm tulpina de lactobacili a fost introdusă în MRS lichid și s-a termostatat la 37°C timp de 24 ... 48 h.

Modul de lucru

In 10 eprubete sterile s-a introdus apă peptonată 1 %□; în prima eprubetă ml, iar în celelalte câte 9 ml. Se ia cu o ansă din mediul însămânțat anterior, introducându-se în prima eprubetă. Cu o pieptă de 1 ml s-a omogenizat foarte bine și s-au făcut diluții succesive după tehnica cunoscută. Pentru a obține colonii izolate s-a mers până la dilutic 6 ...7, din care s-a pus câte 1 ml in cate o placă Petri, peste care s-au turnat 1 5 ... 20 ml mediu MRS agarizat. la 45 C S-a omogenizat foarte bine pentru a se obține colonii dispersate uniform După ce mediul s-a solidificat, placa Petri a fost introdusă în termostat. cu capacul în jos, timp de 48 h. Cu o ansa fără buclă au fost izolate coloniile care ne interesau, ținând cont că aspectul coloniilor este specific speciei de Lootobacillus plantarum.

Tulpinile izolate au fost introrlus*în eprubete cu mediu MRS lichid, cu compoziția cunoscută.

d) Streptococcus lactis

Tulpina pură de Streptococccc lactis a fost obținută prin dispersii ai izolări repetate, care s-au efectuat modul următor. Proba din cărei vrern s. * izolăm tulpina de streptococi lactici a fost introdusă în lapte hidrolizat cu extract de drojdie (LHD) si s-a termostatat la 24°C timp de 24 ... 48 h.

Modul de lucru:

In 10 eprubete sterile s-a introdus apă peptonată 1%o; în prima eprubetă 10 ml, iar celelalte câte 9 ml. Se ia cu o ansă din mediul însămânțat anterior, introducându-se în prima eprubetă Cu c pipetă de 1 ml s-a omogenizat foarte bine si s-au făcut diluții succesive după tehnica cunoscută. Pentru a obține colonii izolate s-a mers până la diluție 6 .

7, din care s-a pus câte 1 ml în câte o placă Petri, peste care s-au turnat 1 5 ml mediu LHD agarizat. la 45 C S-a omogenizat foarte bine pentru a s>' obține colonii dispersate uniform Duiai ce mediul s-a solidificat, placa Petri . fost introdusă în termostat la 24 C. cu capacul în jos, timp de 48 h. Cu o ansa fără buclă au fost izolate coloniile care ne interesau, ținând cont că aspectul coloniilor este specific speciei de Streptococcus lactis.

Tulpinile izolate au fost introduse în eprubete cu mediu LHD lichid, car*'·

RO 112995 Bl are următoarea compoziție: 100 ml lapte hidrolizat concentrat pH = 6,5 ...

6,8, 100 ml apă distilată,5 gr autolizat de drojdie, 1 gr. acetat de sodiu. Se sterilizează 15 min. la 1 20°C. 5

Se prezintă în continuare caracteristicile tulpinilor izolate si identificate, în comparație cu tulpinile comune ale speciilor respective.

Caracteristicile tulpinei de Lactobacillus acidophylus folosită în produs, conform invenției, comparativ cu cele ale tulpinilor comune de Lactobacillus acidophylus

Nr. crt.	Caracteristici	Tulpina comună de Lactobacillus acidophylus	Tulpina LAR Nr 31
1.	Caracteristici morfologice	bastonașe cu capete rotunjite, gram-pozitivi, organizați în formațiuni filamentoase de dimensiuni variabile care dau aspect filamentos sau mucilaginos	bacili lungi, gram pozitivi colorați intermitent 1111011::1 formează lanî.i ηί a·: ;i .· ·
2.	Caractere culturale - creșterea pe lapte turnesolat	coagulează laptele	coagulează laptele
	- creșterea pe MRS lichid	tulbură mediul	tulbură mediul cu forma: :’ de sediment.
	- creșterea pe MRS solid	colonii vâscoase, lungi, încurcate cu proiecții piriforme, pufose sau în profunzime unde coloniile sunt mici, neregulate cu prelungiri fine	colonii mici, aibicioa.m a vâscoase, cu marq:rnr neregulate
3.	Temperatura de dezvoltare	Minim Optim Maxim 20°C 37°C 45°C	Minim Optim Maxim 20 0 37°C 47 C
4.	Rezistență la substanțe inhibitoare 2% NaCl 4% 6% 8%	se dezvoltă se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă	se dezvolta se dezvolta dezvoltare foarte slaba nu dezvoltă
	2% taurocolat 3% de sodiu 4%	se dezvoltă se dezvoltă nu se dezvoltă	se dezvolta se dezvoltă se dezvoltă slab

RO 112995 Bl

10

Tabel [continuare!

	0,3 % fenol 0,4 % 0,6 % 0,8 %	se dezvoltă se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă	se dezvolta se dezvolta nu se dezvolta nu se dezvolta
5. i 1	Rezistență la temperaturi înalte 30' - 60°C 60’ - 60°C 90' - 60°C 15' - 65°C 60' - 65°C 90' - 65°C	se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă dezvoltare slabă nu se dezvoltă nu se dezvoltă	se dezvolta nu se dezvolta nu se dezvolta se dezvolta nu se dezvolta nu se dezvoltă i I
6.	Puterea de acidifiere Aciditate finală Aciditate limită	140°T 1,2 % acid lactic	1 48^CT 1,8% acid lactic
7.	Reducerea mtraților	nu reduce nitrații	nu reduce nitratii
8.	Producerea amoniacului din arginină	nu produce amoniac din arginină	nu produce amoniac m· argmina
9-	Producerea C0₂ din glucoză	nu produce C0₂ din glucoză	nu produce CO din mc-
10.	Gelatinoliza	nu lichefiază gelatina	nu lichefiază gelatina
11.	Producerea de cataloză	sunt catalazo negativi	sunt catalazo negam·'
12.	Producerea de indol	nu produc îndoi	nu produc incioi
. 13.	Reacția cu roșu de metil	- reacție pozitivă	- reacție pozitiva
14.	Reacția Voges Praskauer	reacție pozitivă	reacție pozitiva
15.	Creștere pe mediu cu citrați	reacție negativă	reacție negativa
16.	Fermentarea hidraților de carbon	fermentează fructoza, manoza, galactoza,. zaharoza, maltoza, glucoza, lactoza	fermentează glucoza, zaharoza. lactoza.frimm'm’ maltoza. manoza. galacm.m. rafinoza si trehaloza

RO 112995 Bl

12

Caracteristicile tulpinei de Lactobacillus casei folosită în produs, conform invenției comparativ cu cele ale tulpinilor comune de Lactobacillus casei

Nr. crt	Caracteristici	Tulpina comună de Lactobacillus casei	Tulpina LC Nr. 27 \|
1.	Caracteristici morfologice și tinctoriale	bacili lungi sau scurți, imobili, gram-pozitivi, ce formează lanțuri scurte sau lungi	bacili lungi, gram pozitivi, imobili, ce formează lanțuri lungi și foarte lungi, puternic colorați
2.	Caractere culturale - lapte degresat steril cu extract de drojdie, glucoza și turnesol	acidifiază și coagulează laptele, reduce turnesolul	acidifiaza si coagulează laptele, reduce turnccm
	- lapte în amestec cu MRS lichid	coagulare cu eliminare de zer	coagulează fara eliminare de zer
	- MRS lichid	tulbură mediul la 24 h și formează depozit după 48 h	tulbura mediul ia 24 a formează depozit doct, a 48 h
	- MRS solid	colonii albe-cenusii netede, vâscoase, rotunde cu marginile regulate	colonii aibe-ceni isir τ rotunde cu marriiniC regulate
3.	Temperatura de dezvoltare	Minim Optim Maxim 15°C 35°C 40°C	Minim Optim Maxim 15°C 35'C 45 C
4.	Rezistență la substanțe inhibitoare 2% NaCI 4% 6% 8%	se dezvoltă se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă	se dezvolta se dezvolta se dezvolta slab nu se dezvolta
	2% taurocolat 3% de sodiu 4%	se dezvoltă se dezvoltă nu se dezvoltă	se dezvolta se dezvolta dezvoltare foarte slaba
	□,3 fenol 0,4 0,6 □ ,8	se dezvoltă se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă	se dezvolta se dezvolta se dezvolta nu se dezvolta

RO 112995 Bl

14

Tabel (continuarel

5.	Rezistența la temperaturi înalte 30' - 60°C 60' - 60°C 90' - 60°C 1 5' - 65°C 30' - 65°C 90 - 65°C	se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă nu sedezvoltă	se dezvolta nu se dezvolta nu se dezvolta nu se dezvolta nu se dezvolta nu se dezvoltă Ș
6.	Puterea de acidifiere Aciditate finală Aciditate limită	170°T 1,3% acid lactic	1 85°T 1,5% acid lactic I
7.	Reducerea nitraților	nu reduce nitrații	nu reduce mtratii ,
8.	Producerea amoniacului din arginină	nu produce amoniac din arginină	nu produce amoniac a n arginina
9.	Producerea C0₂ din glucoza	nu produce C0₂ din glucoza	nu produce CO din Cr _:
10.	Gelatinoliza	nu lichefiază gelatina	nu lichefiază gelatina
11.	Producerea de catalază	sunt cataiazo negativi	nu cataiazo negatm
12.	Producerea de indol	nu produc îndoi	nu produc îndoi
13.	Reacția cu roșu de metil	- reacție pozitivă	- reacție pozitiva
14.	Reacția Voges Praskauer	reacție pozitivă	reacție pozitiva
15.	Creștere pe mediu cu citrați	negativă	negativa
16.	Fermentarea hidraților de carbon	fermentează glucoza, fructoza, manoza, galactoza, maltoza, lactoza, manitolul și salicina. Fermentează slab zaharoza.	fermentează glucoza. ' fructoza. manoza. l galactoza. maltoza. lactoza manitolul. salicina si ί zaharoza. Fermentează vi i mare ușurința lactcza si ramnoza.

Caracteristicile tulpmei de Lactobacillus plantarum folosită în produs, conform invenției, comparativ cu cele ale tulpinilor comune de Lactobacillus plantarum

Nr.c rt.	Caracteristici	Tulpina comună de Lactobacillus plantarum	Tulpina LP 3 Nr 10
1.	Caracteristici morfologice	bacili scurti, gram pozitivi, cu capete rotunjite, izolați sau în lanțuri scurte	bacili scurti. gram- oⁿ''m capete rotunjim, as-':’ lanțuri scurte, in 'm'·': ' neprielnice au r.endin’.· ·: alungire.

RO 112995 Bl

16

Tabel [continuare]

2.	Caractere culturale - lapte cu extract de drojdie, glucoză și turnesol	acidifiază și coagulează	acidifiază si coagulează
	- lapte în amestec cu MRS lichid	coagulare cu eliminare de zer	coagulează fara eliminare de zer
	- MRS lichid	la 24 h de tulbureală, apoi formează depozit	la 24 h de tulbureala, ape formează un depozit docar
	- MRS solid	colonii mici, albe, netede, cu marginea neregulată	colonii de 2 - 3 mmm dimensiune, netede cu marginea neregulata
3.	Temperatura de dezvoltare	Minim Optim Maxim 10°C 30°C 40°C	Minim Optim Maxim 10’C 30 C --0 0
4.	Rezistența la substanțe inhibitoare 2% NaCI 4% 6% 8%	se dezvoltă se dezvoltă se dezvoltă nu se dezvoltă	se dezvolta se dezvolta se dezvolta dezvoltare slaba
	2% taurocolat 3% de sodiu 4%	se dezvoltă dezvoltare slabă nu se dezvoltă	se dezvolta se dezvolta nu se dezvolta
	□,3 fenol 0,4 □,6 0,8	se dezvoltă se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă	se dezvolta se dezvolta nu se dezvolta nu se dezvolta
5.	Rezistență la temperatură 15' - 60°C 30' - 60°C 60' - 60°C 15' - 65°C 30’ - 65°C 60' - 65°C	se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă se dezvoltă nu se dezvoltă nu se dezvoltă	se dezvolta nu se dezvolta nu se dezvolta se dezvolta dezvoltare foarte slaba nu se dezvolta
6-	Puterea de acidifiere Aciditate finală Aciditate limită	1 70°T 1,2% acid lactic	190°T 1,6% acid lactic
7.	Reducerea nitraților	nu reduce nitrații	nu reduce nitratii
8.	Producerea amoniacului din arginină	nu produce amoniac din arginină	nu produce amoniac, cm arginină
9.	Producerea 00 din glucoză	nu produce C0_o din glucoză	nu produce 00 dm Mmm

RO 112995 Bl

18

Tabel [continuare]

10.	Gelatinoliza	nu lichefiază gelatina	nu lichefiază gelatina
11.	Producerea de catalază	sunt catalazo negativi	sunt catalazo negativi
12.	Producerea de indol	nu produc îndoi	nu produc îndoi
13.	Reacția cu roșu de metil	- reacție pozitivă	- reacție pozitiva
14.	Reacția Voges Praskauer	- reacție negativă	- reacție negativa
15.	Creștere pe mediu cu citrați	negativă	negativă
16.	Fermentarea hidraților de carbon	fermentează fructoza, manoza, galactoza, arabinoza, zaharoza, maltoza, rafinoza, salicina si mai puțin sorbitolul, manitolul. glicerolul	fermentează fructoza. manzoza, galactoza, arabinoza. zaharoza. maltoza. rafinoza. salicina a mai puțin sorbitolul. manitolul. clextnna Cm' · si xiloza

Caracteristicile tulpinei de Streptococcus lactis folosită in produs, conform invenției, comparativ cu cele ale tulpinilor comune de Streptococcus lactis

Nr. crt.	Caracteristici	Tulpina comună de Streptococcus lactis	Tulpina SLR nr.36
1.	Caracteristici morfologice	germeni gram pozitivi sub formă de diplococi și lanțuri scurte	germeni gram-pozm formează lanțuri scm· si medii
2.	Caractere culturale - lapte smântânit cu 2 %o extract de drojdie	coagulează laptele cu eliminare de zer	coagulează laptele la însămânțare minima, fără eliminare de zer
I	- lapte turnesolat	produce aciditate si coagulează laptele, reduce turnesolul cu excepția unui inel de la suprafața culturii	reduce turnesolul înainte de coagulare, produce aciditate si coagulează laptele
	- bulion dextrozat și lactozat	produce tulbureala mediului, apoi sediment slab dezvoltat	produce tulbureala mediului, apoi sediment bogat
	- lapte hidrolizat cu drojdie agarizat (LHD)	colonii foarte mici, ușor gălbui, rotunde sau lenticulare cu marginea netedă	colonii foarte mici, ușor gălbui, rotunde, cu marginea neteda

RO 112995 Bl

Tabel [continuare ’

3.	Temperatura de dezvoltare	Minim Optim Maxim 10°C 24°C 40°C	Minim Optim Maxim 10°C 24°C 42 C i I
! 4. i I	Rezistența la substanțe inhibitoare 2% NaCI 4% 6%	se dezvoltă se dezvoltă dezvoltare slabă	I se dezvoltă se dezvoltă se dezvolta slab l
	bila de bou 10% 40%	se dezvoltă se dezvoltă	se dezvoltă i se dezvoltă
I	albastru de 0,1% metilen 0,2% 0,3%	se dezvoltă se dezvoltă dezvoltare slabă	se dezvolta se dezvolta se dezvolta
5.	Rezistență la temperaturi înalte 30' - 60°C 60' - 60°C 90' - 60°C 15' - 65°C 30' - 65°C	dezvoltare slabă nu se dezvoltă nu se dezvoltă dezvoltare foarte slabă nu se dezvoltă	Se dezvolta dezvoltare slaba nu se dezvolta se dezvolta nu se dezvolta
6.	Puterea de acidifiere - pH final în bulion dextrozat - aciditate finală în lapte steril - aciditate limită	3,85 - 4,0 145°T 1,13 % acid lactic	4,0-4.5 : f 1 50T 1,1 8% acid lactic
7.	Curba de aciditate	6h 7h 76°T 83°T	6h 7h 78T 89 T
8.	Producerea catalazei	catalazo negativă	catalazo negativa
9.	Gelatinoliza	nu lichefiază gelatină	nu lichefiază gelatina
10.	Hidroliza hipuratului de sodiu	nu hidrolizează	nu hidrolizeaza
11.	Producerea amoniacului din arginină	produce amoniac din arginină	produce amoniac din arginină
12.	Prezența compușilor aromatizați	nu produce aromă	nu produce aroma

RO 112995 Bl

22

Tabel [continuarej

13.	Producerea de C0₂	nu produce C0₂	nu produce CO
14.	Fermentarea hidraților de carbon	fermentează glucoza, levuloza, galactoza, manoza, lactoza, trehaloza, maltoza, dextrina și salicina.	Fermentează glucoza, levuloza. manoza. galactoza. maltoza. lactoza. trehaloza dextrina, salicina si aesculina

Adaptarea tulpinilor de lactobaciii și streptococi, conform invenției, la diverse concentrații de antibiotice și chimioterapice.

Tulpinile care intră în componenta medicamentului, conform invenției, au fost adaptate la următoarele antibiotice

- penicilină	- cloramfenicol	- furazolidon
- streptomicina	- ampicilina	- vibramicin
- tetraciclină	- kanamicina	- neomicina
- eritomicina	- oxacilina	- nitrofurantoin
-colimicina	- neoxazo!	- propiomicin
- negamicina	- sulfametin	- bacitracina
- rifampicina	- biseptol
- ftalilsulfatiazol	- salazopirin

S-au făcut pasaje alternative pe mediu MRS lichid, cu și fără antibiotice, în cantități progresive.

Se dă un exemplu de adaptare pentru un antibiotic - penicilina.

Se prepară o soluție de penicilin cu 1OO Ul/cc care se adaugă la medii, de bază steril, în cantitățile următoare

pasaj I	□ ,5 Ul/cc	VIII	4 Ul/cc
II	1 Ul/cc	IX	4,5 Ul/cc
III	1,5 Ul/cc	X	5 Ul/cc
IV	2	XI	5,5 Ul/cc
V	2,5 Ul/cc	XII	6 Ul/cc
VI	3UI/cc	XIII	6.5 Ul/cc
VII	3,5 Ul/cc	XIV	7 Ul/cc

antibiotice [7 Ul/cc]

Se procedează la fel iientru tom antibioticele

Pentru menținerea rezistentei la antibiotice, se fac pasaje în continuare pe mediul de bază cu doza maximă de

RO 112995 Bl

Antibiorezistența se controlează prin antibiograma pe mediu de bază solidă cu microcomprimate uzuale. Mediul se însămânțează prin încorporare, se lasă să se solidifice, apoi se pun microcomprimatele la 37°C, 48 ... 72 h.

Dacă în jurul microcomprimatelor nu apar zone clare, tulpinile sunt rezistente.

Tulpinile izolate, identificate și antibiorezistente au fost înregistrate în colecția Centrului “Biosan” la numerele:

a) Lactobacillus acidophylus

- tulpina LAR nr. 31

b) Lactobacillus casei

- tulpina LC nr. 27

c) Lactobacillus plantarum

- tulpina LPI nr. 1 □

d) Streptococcus lactis

- tulpina SLR nr.36

Tulpinile izolate se întrețin pe medii sintetice, cum ar fi MRS și LHD a căror compoziție este în sine cunoscută.

Periodic, tulpinile sunt supuse la cele mai importante teste cunoscute pentru identificare, în vederea stabilirii rezistenței în timp a caracteristicilor, precum și a vitezei lor de îmbătrânire.

Pentru revitalizare, tulpinile se trec periodic pe mediile solide cunoscute.

Pentru a pregăti tulpinile pentru faza de producție, acestea se multiplică, apoi se trec pe lapte degresat steril, în raportul lor de asociere din produsul conform invenției.

Laptele degresat steril este și mediul protector utilizat pentru ultima fază a procedeului, și anume liofilizarea, Se va obține o cultură pură, polimicrobiană.

Intre tulpinile de lactobacili nu s-au observat fenomene de antagonism, numărul de germeni viabili din cultura polimicrobiană fiind cel optim pentru produsul conform invenției.

Cultura polimicrobiană, obținută conform invenției, se coagulează la

45°C; - 5D°C, după care începe liofilizarea propriu-zisă în vid de 3 torn, timp de 30 h, având ca mediu de protecție lapte degresat steril, conform cerințelor standardizate pentru laptele alimentar Pulberea liofilizată polimicrobiana prezintă următoarlee caracteristici:

- aspect - pulbere liofilizata, lipsita de impurități mecanice, higroscopica.

- culoare - alb gălbuie,

- miros - specific,

- gust - acrișor caracteristic acid,

- solubilitate - insolubilă în apa. dar se dispersează ușor, formând o dis persie omogenă,

- pH-ul suspensiei 1% în apa 3.8 .

- conținut în clor %/g/g mam 1

- conținut în calciu % g/g mm. u.E

- conținut în azot % g/g min -LE

- reziduu prin calcinare ma:< 1 .3

- metale grele absent.

- număr de germeni viabili mm. 4 x 10⁷ germem/0.50 gr.

Indicațiile terapeutice ale pm dusului, conform invenției:

- rectita rădică severa:

- rectoragii si eliminări de mmm~

- reglarea tranzitului intestina: s: r. durerilor cu tenesme rectale si a constipațiilor cu fenomene dureroase:

- rectocolite ulcerohemoragice:

- boala lui Crohn localizată la colon;

- hipomotilitate;

- constipatie severă:

- diverticuloza colomca:

- stenoze benigne si maliqne:

- pancreatite acute, necrotm: operate;

- litiaze biliare cu angiocolita septică;

- peritomte de diferite etiologn:

- enterocolite cu disbacterii:

- malabsorbtii;

- refacerea florei microbiene saprofite normale.

Administrarea medicament i m

RO 112995 Bl conform invenției:

Produsul se administrează per os înainte cu 30 min. de cele trei mese principale, timp de 7 ... 20 zile, depinzând de gravitatea afecțiunii. Produsul se 5 poate administra singur sau asociat cu antibiotice, chimioterapice sau pansamente intestinale. Doza este de 50 ... 100 mg produs conform invenției.

Acțiunea produsului medicamentos apare la dispariția colicilor, normalizarea consistenței și aspectului scaunelor, precum si o mai buna toleranta la unele alimente, care, înainte de tratament nu erau suportate.

S-a urmărit efectul eubioticului in ₍afecțiuni de tip inflamator si degenerativ:

Afecțiunea	Nr.	Sex	Vârsta
	cazuri	B	F	40-50	50-60	peste 70
eterocolite cu disbacterii	150	79	71	80	50	--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1
insuficiență digestivă enzimatică	50	30	20		48	d
boala lui Crohn	120	72	48	48	52	20
enterocolite ulcerohemoragice	200	120	80	28	42	1 30

Diagnosticarea afecțiunilor s-a	făcut în urma
- examen clinic	30%
- examen biochimic	70%
- examen bacteriologic	80%
- examen imunologic	100%
- examen radiologie	70%
- examen irigoscopic	100%

Modul de administrare

Afecțiunea	Nr. Cazuri	Doza	Ritm	Timp
enterocolite cu disbacterii	150	1 50 mg/zi	50 mg/8h	30 zile
insuficiență digestivă enzimatică	50	100 mg/zi	50 mg/12h	60 zile
boala lui Crohn	120	200 mg/zi	50 mg/6li	oU 11pî
enterocolite ulcero-hemoragice	200	200 mg/zi	50 mg/6h	6C zile

RO 112995 Bl

Toleranța la medicament

Afecțiunea	Nr. cazuri	F. Bună	Bună	Satisfacar
eterocolite cu disbacterii	150	80%	20%
insuficiență digestivă enzimatică	50	100%
boala lui Crohn	120	75%	25%	-
enterocolite ulcerohemoragice	200	55%	35%	10%

Scheme terapeutice

Afecțiunea	Nr. cazuri	Monoterapie	Cloranfenicol	Salazapi- rina	Neomi- cma	Metrooi- i ! r j ^;. i i
eterocolite cu disbacterii	150	100	25		25
insuficiență digestivă enzimatică	50				25	Ή ΓΖ
boala lui Crohn	120	95	25	-	-
enterocolite ulcerohemoragice	200	100		50	25	TR E \|

Evoluția foarte bună în urma tratamentului aplicat pe tip de afecțiuni în raport cu parametrii inițiali:

Afecțiunea	Nr. cazuri	Chimie	Biochimie	Imunologie	Radiologie	Fibroecmm
eterocolite cu disbacterii	150	100%	100%	100%	ion·-
insuficiență digestivă enzimatică	50	100%	80%	50%	100 -
boala lui Crohn	120	75%	75%	80%	75%	50
enterocolite ulcerohemoragice	200	50%	38%	40%	35%	35^:

In cursul experimentelor clinice s- 45 au constatat următoarele efecte benefice ale produsului, conform invenției.

- epitalizarea leziunilor ulcerative în 72% din cazuri;

rezolvarea rapidă a unor 50 dizbacterioze postoperatorii sau a unor colopatii după tratament prelungit cu antibiotice;

- îmbunătățire evidentă a apetitului manifestat la 100% din cazuri, cu ameliorare a stării generale a pacientilor si o creștem greutății poderale.

- suprimarea zonelor de supratnfecție prin închiderea abceselor criptice;

- ameliorarea tranzitului in toate cazurile;

- schimbarea profilului florei bacteriene:

RO 112995 Bl

- de asemenea, s-a observat o toleranță foarte bună la medicament.

Claims

Revendicări

1. Produs medicamentos pentru terapia colonului, ce conține Lactobacillus, caracterizat prin aceea că este constituit din 0,093650 părți amestec de 4 tulpini: Lactobacillus acidophylus - io LAR, Lactobacillus casei - LC, Lactobacillus plantarum - LPI și Streptococcus lactis - SLR, înregistrate sub numerele 31, 27, 10 și 36 în colecția Centrului “Biosan” (0,5; 0,5; 2,5; 0,5], 40 părți 15 vitamina B_v 10 părți vitamina B₂, 100 părți vitamina Βθ, 200 părți pantotenat de calciu și 6000 părți L-lizina clorhidrat, părțile fiind exprimate în greutate.
2. Produs medicamentos, con- 20 form revendicării 1, caracterizat prin aceea că tulpina Lactobacillus acido phylus-LAR este o tulpină nefilantă, cu o putere acidifiantă de 148°T și fermentează cu randament maxim rafinoza și trehaloza.
3. Produs medicamentos, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că tulpina Lactobacillus casei - LC nr. 27 are o putere acidifiantă de 185°T și fermentează ramnoza.
4. Produs medicamentos, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că tulpina Lactbacillus plantarum LPI nr.1O coagulează laptele fără eliminare de zer, formează un depozit bogat pe mediu sintetic, are o putere acidifiantă de 150°T, fermentează xiloza.
5. Produs medicamentos, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că tulpina Streptococcus lactis SLR nr. 36 fermentează aesculina.