PT97624B

PT97624B - Processo para a preparacao de derivados de galactopiranosidos fosforilados com uma actividade potencial identica a da insulina

Info

Publication number: PT97624B
Application number: PT97624A
Authority: PT
Inventors: Manuel Martin Lomas; Jose Maria Mato De La Paz
Original assignee: Europharma Sa
Priority date: 1990-05-10
Filing date: 1991-05-09
Publication date: 1998-08-31
Also published as: PT97624A; EP0456948B1; ATE127125T1; DE69022033D1; IE910491A1; EP0456948A2; ES2019839A6; EP0456948A3; GR920300068T1; DE456948T1

Description

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883.

Espanha, apresentado em 10 de Maio de 1990, sob o nQ. P

9001306.

INPI. MOD. 113 RF 18732

Descrição referente à patente de invenção de EUROPHARMA, S.A., espanhola, industrial e comercial, com sede em Avda. de la Hispanidad, 21, 28042 Madrid, Espanha, (inventores: Manuel Martin Lomas e Jose Maria Mato De La Paz, resi^ dentes na Espanha), para PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE GALACTOPIRANOSIDOS FOSFORILADOS COM UMA ACTIVIDADE POTENCIAL

IDÊNTICA Ã DA INSULINA.

DESCRIÇÃO

A presente invenção refere-se à prepara ção de derivados de galactopiranosidos alquílicos di-, tri-, e tetra-fosforilados de fórmula geral 1.

Em gue o radical R’ representa um grupo alquilo (C-,-C_R) e pelo

3 4 5 xo menos dois dos radicais R , R , R e R representam o grupo

Ο ιι

- P - ο ο

De entre os compostos de fórmula 1 posi ί suem interesse os derivados que possuem uma actividade potencial idêntica ã da insulina.

A insulina é uma das hormonas polipeptí^ dicas mais amplamente estudadas cujos efeitos celulares principais são a estimulação do glicogénio, a síntese lipídica e proteica devido à modulação dos percursos metabólicos implicados nesses processos, e a estimulação do crescimento celular. Os efeitos psicológicos da insulina englobam a estimulação do trans porte da glicose, dos aminoácidos e dos iões através da membrana plasmática a regulação do nível de fosforilação das proteínas e das enzimas que controlam o metabolismo intermédio, tais como a glicogénio fosforilase, a lipase sensível ãs hormonas e ATP-citrateiase, e a regulação da expressão génica específica de várias enzimas (R.M. Denton, in Advances in Cydic Nucleotide Re search, 20 (1986) . 293).

Todos esses efeitos ocorrem depois de a insulina se ligar ao seu receptor, que é uma glicoproteína da superfície celular constituída por duas subunidades oc e por duas subunidades (3 . A insulina liga-se às subunidades oc que estão associadas entre si e às subunidades (2> através de ligações dissulfeto. Após a interacção com a insulina, os resíduos de tirosina das subunidades oc são rapidamente autofosforilados. Demonstrou-se recentemente a actividade desta tirosina quinase no receptor é necessária para a acção hormonal (O.M. Rosen, Science 237 (1987). 1452-1458).

A ligação da insulina ao seu receptor estimula a hidrólise de um glicosil-fosfatidil-inositol (GPI) que gera um fosfo-oligossacarido (POS) que imita e provavelmente veícua indirectamente o importante número de acções biológicas da hormona, [A.R. Saltiel, J.A. Fox, P. Sherline and P. Cua trecasas; Science 233 (1986). 967-972; J.M. Mato, Cellular Signaling 1_ (1989) . 143-146] , tais como os efeitos anti-lipolíticos • e lipogénico, o efeito mitogénico e o POS transportador de ami2

noãcidos também demonstra actividade numa variedade de enzimas tais como a piruvato desidrogenase, CAMP-fosfodiesterase, quina se proteica dependente de CAMP e quinase II da caseína [A. A. Saltiel, Endocrinology 120 (1987). 967-972; S. Alemany, J.M. Ma to, P. Strálfors, Nature 330 (1987). 77-79; M. Villalba, K.L. Kelly, e J.M. Mato 968 (1988) 69-76].

A estrutura química completa do POS ainda é desconhecida embora tenha sido já revelada a presença de monofosfato de inositol ligado a grupos glucosamina, galacto se e fosfato [J.M. Mato, K.L. Kelly, A. Ables, e L. Jarret, J. Biol .Chem. 262 (1987) 2131-2137; J.M. Mato, K.L. Kelly, A. Abler, L. Jarret, B.E. Corkey, J.A. Carhed, D. Zopf, Biochem. Bio phys. Res. Commun. 152 (1987) 1455-1462; M. Villalba, K.L. Kelly, J.M. Mato, Biochem. Biophys. Acta 968 (1988) 69-76]. Foi já demonstrado que a actividade biológica do POS depende da presença de grupos fosfato [J.M. Mato, K.L. Kelly, A. Abler e L. Jarrett, J. Biol. Chem. 262 (1987) 2131-2137].

A presente invenção descreve a síntese de derivados de D-galactose fosforilados e a investigação da existência de possível actividade semelhante â da insulina, que eventualmente exista nesses compostos, através da análise do seu efeito sobre o transporte de aminoácidos, sobre a síntese de glicogénio e sobre a actividade da quinase proteica.

A síntese de derivados de galactose fo_s forilados foi efectuada a partir de derivados de 0(. - e ^3-D-galactopiranosidos alquílicos especificamente protegidos.

A fosforilação de compostos poli-hidroxilados é uma questão problemática devido à disseminação espacial e ã facilidade de formação de fosfatos ciclicos a partir de dióis derivados de ricino. Contudo, o interesse recente da química do fosfato de inositol veio a proporcionar diversos métodos novos de fosforilação. Esses métodos englobam não só a ac tivação da função álcool com bases fortes e posterior aplicação de fosfato de tetrabenzilo como agente de fosforilação [Y. Wata nabe, H. Nakahira, M. Bunya, S. Ozaki, Tetrahedrom Lett. 28 (1987) 4179-4180; S.J. Debolms, J.P. Vacca, J.R. Huff, Ibid 28 (1987) 4503-4504; D.C. Billington, R. Baker, J. Chem. Soc. Chem. Commun. (1987) 1011-1013; J.P. Vacca, S.J. DEbolms, J.R. Huff,

J. Am. Chem. Soc. 109 (1987) 3478-3479], mas também a fosfitila ção principalmente com fosforamidite de A,A-dialquil-dibenzilo e posterior oxidação [J.L. Meek, F. Davidson, F.W. Hobbs Jr. J. Am. Chem. Soc. 110 (1988) 2317; C.E. Dreef, R.J. Tuinman, C.J.

J. Tlie, G.A. Van der Marel, J.H. Van Boom, Red. Trav. Chim. Pays-Bas 107 (1988) 395; K.L. Yu, B. Fraser-Reid Tetrahedron Lett. 29 (1988) 976; C.E. Dreef, G.A. Van der Marel, J.H. Van Boom, Red. Trav. Chim. Pays-Bas 106 (1987) 161; C.B. Reese, J.

G. Ward, Tetrahedron Lett. 28 (1987) 2309; A.M. Cooke, B.V.L. Potter, R. Gigg, Tetrahedrom Lett. 28 (1987) 2305; Y.C. Lin, C. S. Chen, Tetrahedron Lett. 30 (1989) 1617; G. Baudin, B.I. Glãn zer, K.S. Swaminathan, A. Vasella, Helv. Chim. Acta 71 (1988) 1367].

Na presente invenção recorreu-se a esta última abordagem para a preparação de uma série de derivados de 0C- e β -D-galactopiranosidos alquílicos di-, tri- e tetra-fo_s forilados. Os fosfitos resultantes da reacção dos <% - e ^3-D-ga lacto-piranosidos convenientemente protegidos, com fosforamidite de dibenzil-N,N-dialquilo têm sido oxidados convencionalmente com ácido m-cloro-perbenzóico (ver as referências anteriores) Todavia, verificou-se que a reacção se efectua mais conveniente mente em presença de periodato de sódio e utilizando quantidades catalíticas de tricloreto de ruténio num sistema bifásico [P.H.J. Carlsen, T. Katsuki, V.S. Martin, K.B. Sharpless, J.

Org. Chem. 46 (1981) 3936].

Investigou-se a actividade semelhante à da insulina possuída pelos sais di-, tri- ou tetra-fosfato de sódio com o( - e β -D-galacto-piranosidos alquílicos no que diz respeito ao transporte de aminoácidos ao efeito sobre a quinase A proteica, ao efeito sobre a quinase II da caseína e à síntese de glicogénio. Os resultados indicam que os compostos deste tipo possuem interesse potencial para o tratamento da diabetes, particularmente nos casos de intolerância à insulina.

Os exemplos que se seguem ilustram os processos de síntese e mostram as medições da actividade biológica com alguns dos produtos preparados. Contudo, faz-se observar que a presente invenção não fica limitada pelos reagentes e pelas condições indicadas nos exemplos.

Exemplos

Sal 2,3-difosfato de sódio com DÇ-D-galacto-piranosido metélico (1) .

Preparou-se uma solução de 4,6-benzilideno-DC-D-galactopiranosido metilico (0,115 g; 0,39 mmol) numa mistura de aoetonitrilo seco (3 ml) e de diclorometano seco (3 ml) e tratou-se com tetrazol anidro (0,25 g; 3,6 mmol) e com fosforamideto de dibenzil-N,N-di-isopropilo (0,64 g; 1,83 mmol),< sob agitação durante 1 hora. Após o arrefecimento para a tempe-I ratura de OQC adicionou-se gota a gota uma solução de ãcido metacloro-perbenzóico (0,6 g; 3,5 mmol) em dicloro-metano seco (3 ml). Depois manteve-se a mistura à temperatura ambiente durante

1,5 horas sob agitação, concentrou-se in vãcuo e lavou-se o resíduo com uma solução aquosa de tio-sulfato de sódio a 10% e com uma solução aquosa de carbonato de sódio a 10%, secou-se e purificou-se através de uma coluna de gel de sílica eluindo com uma mistura de acetato de etilo/hexano (1:2 —> 3:1 ^v/V) para proporcionar 0,270 g do fosfato correspondente, [oc]_D+84.9Q (c 1,0 clorofórmio).

Tratou-se a solução anterior de fosfato (0,270 g) em metanol com hidrogénio em presença de 10% de palãdio-em-carvão durante 4 horas. Filtrou-se a mistura e tratou-se com resina de Amberlite C6-120(Na⁺) para proporcionar o composto 1 (0,060 g); RMN-¹H (300 MH2, D2O) $ : 3.43 (5, 3H, OMe), 3.76 (d, 2H, J5 6=J5 , 6.1 H , H6+H'-6’), 3.94 (m, ÍH, H-5), 4.18 (m, ÍH, J3 4 2, J4 5 1 Η , H4), 4.34 (m, ΙΗ, H2 + H-3), 5.01 (d, ÍH, 2 2.9, H-l). ^l3C R.M.N. (D20, 70 MHz): 56.24 (OMe), 62.38 (C-6), 70.06 e 71.62 (C-4, C-5), 72.30 e 74.25 (C-2 e C-3) , 99.61 (C-l).

Sal 3,4-difosfato de sódio com oC-D-galacto-piranosido metilico (2)

Preparou-se uma solução de metil-3,4-0-isopropilideno-oC-g-galactopiranosido (1,8 g) em N,A-âimetil-formamida seca e tratou-se com hidreto de sódio sob agitação durante 1 hora. Gota a gota adicionou-se brometo de benzilo (3,7 ml) à temperatura de OQC. Manteve-se sob agitação durante 18 ho ras à temperatura ambiente. Após o arrefecimento para a tempera

tura de OSC adicionou-se primeiro metanol e depois água e a seguir extraiu-se a mistura com clorofórmio. Evaporou-se o extrac to de clorofórmio in vácuo para proporcionar um resíduo de 3,4-O-isopropiledeno-β-D-galacto-piranosido 2,6-di-0-benzílico im puro (2 g, 63%) o qual foi utilizado no passo seguinte sem puri ficação adicional.

Durante 2 horas aqueceu-se à temperatura de 100QC uma mistura do composto anterior (2 g) com uma solu· ção aquosa de ácido acético a 30% (30 ml). Após a remoção do solvente fez-se passar o resíduo através de um leito de gel de sílica para proporcionar 1,74 g (94%) de 2,6-di-O-benzil~^3-D-galacto-piranosido metílico.

Preparou-se uma solução do composto anterior (0,10 g; 0,26 mmol) numa mistura de dicloro-metano seco (2 ml) e de acetonitrilo seco (2 ml). Adicionou-se tetrazol seco (0,160 g; 2,4 mmol) e fosforamideto de dibenzil-N,N-di-isopropilo (0,414 g; 1,62 mmol) e agitou-se a mistura durante 1 ho ra à temperatura ambiente. Adicionou-se água, (3,5 ml), metaperiodato de sódio (0,330 g; 1,56 mmol) e tri-hidrato de triclore to de ruténio (2,7 mg; 0,010 mmol) e manteve-se sob agitação du rante 1 hora. Extraíu-se a mistura com diclorometano (15 ml) e lavou-se o extracto com água, secou-se e evaporou-se in vácuo para proporcionar um resíduo que foi purificado em coluna de gel de sílica. A eluição com acetato de etilo/hexano (2:1 ^v/V) proporcionou 0,2 g do fosfato correspondente [oC]_D + 18.5° (c 0.7 clorofórmio).

Preparou-se uma solução do composto anterior (0,270 g) em metanol (30 ml) e tratou-se com hidrogénio em presença de 10% de paládio-em-carvão durante 2 horas. Filtrou-se a mistura sobre celite, e evaporou-se in vácuo. Fez-se passar o resíduo através de uma coluna de Amberlite CG-120 (Na ) para proporcionar o composto 2.

Sal 2,4,6-trifosfato de sódio com oC-B-galacto-piranosido metílico (3) .

Preparou-se uma solução de oC-D-galacto • piranosido metílico (0,6 g; 3,1 mmol) em acetonitrilo (65 ml) e

manteve-se ao refluxo durante a noite com óxido de dibutil-esta nho (1 g; 4,02 mmol) e depois adicionou-se-lhe crivos moleculares de 3A (4 g), brometo de benzilo (18,7 g; 0,11 mmol) e brome to de tetra-butil-amõnio (0,49 g; 1,53 mmol) e manteve-se ao re fluxo durante 2 horas. Após o arrefecimento filtrou-se a mistura concentrou-se o filtrado in vácuo para proporcionar um resíduo que foi purificado em coluna de gel de sílica. A eluição i com acetato de etilo proporcionou 3-O-benzil-OC-g-galactopirano sido metílico puro (0,430 g).

Preparou-se uma solução do composto anterior (0,20 g; 0,70 mmol) numa mistura 1:1 de diclorometano se co/acetonitrilo (14 ml) e tratou-se conforme anteriormente descrito com tetrazol seco (0,65 g; 9,3 mmol) e com fosforamideto ι

de dibenzil-N,N-di-isopropilo (1,7 g; 4,86 mmol) durante duas ! horas à temperatura ambiente. Adicionou-se água (10 ml), metapeí riodato de sódio (1,35 g; 6,34 mmol) e tri-hidrato de cloreto j de ruténio (0,011 g; 0,042 mmol) e manteve-se a mistura à tempej ratura ambiente durante duas horas. O processamento conforme anj teriormente descrito para o composto 2 proporcionou o correspon dente trifosfato puro (0,47 g) [oC]_D+49.2° (c 1.0 clorofórmio).

Hidrogenou-se o composto anterior em presença de 10% de paládio-em-carvão durante duas horas. Depois filtrou-se a mistura sobre celite e evaporou-se o filtrado in vácuo para proporcionar um resíduo que foi tratado com amberlite CG-120 (Na ) pelo processo habitual para proporcionar o composto 3 (80 mg). RMN-¹H (300 MHz, D20):£ 5,03 (d, ÍH, Jq 2 3.1 Hz, H-l), 4.59 (m, ÍH, J2 3 9, J2 10 Hz), 4.00 (m, 4N, H-3, H-5, H-6'), 3.43 (s, 4H, OMe). RMN- ³C (70 MHz, D2O): 99.5 (c-1)

75.4 (C-4), 73.8 (C-2) 70.8 (dd, C-3 ou C-5) 69.7 (dd, C-5 ou C-3), 65.6 (d, C-6), 56.5 (OMe).

Sal 2,3,4,6-tetrafosfato de sódio com /3-D-galacto-piranosido propílico (4)

Preparou-se uma solução de (è -D-galacto

-piranosido de alquilo (0,05 g; 0,23 mmol) numa mistura 1:1 de diclorometano/acetonitrilo (4 ml) e tratou-se com tetrazol (0,28 g; 4 mmol) e com fosforamideto de dibenzil-N,N-di-isopropilo (0,72 g) . Decorridas duas horas adicionou-se gota a gota,

à temperatura de OQC, uma solução de ácido m-cloro-perbenzóico (0_z704 g; 4,08 mmol) em dicloro-metano (4 ml). Manteve-se a mis tura durante duas horas à temperatura ambiente. Após o processa mento convencional obteve-se 0,150 g do correspondente tetrafoss fato [oC]^+13S (£ 0.97 clorofórmio).

Hidrogenou-se o composto anterior e tra tou-se com Amberlite CG-120 (Na⁺) pelo processo habitual para proporcionar o composto 4. RMN-H (300 MHz, D₂O) 8 ί 4.65 (dd,

ÍH, J_{3 4} 3.0, J_{4 p} 10.2 Hz, H-4), 4.60 (d, ΙΗ, σ_{χ 2} 7.6 H-l), 4.27 (m, ÍH, J_{3 4} 3.0, J₃ 9 Hz, H-3), 4.17 (m, ÍH, J₂ 9,

J₂ p 9 Hz, H-2), 3.88 (m, 3H, H-5, H-6, e H-6'), 3.83 (m, ÍH), 3.66 (m, ÍH), 1.61 (m, 2H) 0.91 (t, 3H, Me), RMN-¹³C (70 MHz, D₂O) : 103.1 (d, 5.2, C-l), 75.8 (t, C-2), 74.0, 74.1, 77.0 (C-3, C-4 e C-5), 73.8 (O-CH₂), 65.1 (d, C-6, 23.6 (CH₂), 11.0 (Me) .

Sal 2,3,4-trifosfato de sódio com ^3-D-galacto-piranosido metílico (5) .

Preparou-se uma solução de 3,4,0-isopro pilideno-^3-D-galacto-piranosido metílico (0,45 g; 1,5 mmol) em tolueno (25 ml) e manteve-se ao refluxo com óxido de tributil-estanho (1,36 g, 1.1 equiv.) e com crivos moleculares de 3Ã (2,5 g) durante dezoito horas. Depois adicionou-se brometo de benzilo (2,5 ml) e N-metil-imidazol e manteve-se a mistura ao refluxo durante 24 horas. Após o processamento habitual, tratou -se o produto resultante com uma solução ácida aquosa a 40% e à temperatura de 9OQC durante 20 minutos para proporcionar um com posto puro. Preparou-se uma solução do composto anterior (0,098 g) numa mistura 1:1 de diclorometano/acetonitrilo (7 ml) e fez-se a fosfitilação com fosforamideto de dibenzil-N,N-di-isopropílico (0,850 g; 2,43 mmol) em presença de tetrazol (3,25 mg; 4,65 mmol), conforme anteriormente descrito. Efectuou-se o passo de oxidação utilizando metaperiodato de sódio (0,670 g; 6,3 mmol), tri-hidrato de cloreto de ruténio (5 mg; 0,042 mmol) e água (3,5 ml). Efectuou-se o passo de hidrogenolise pelo proce£ so habitual para proporcionar um resíduo que após tratamento com resina de Amberlite CG-120 (Na⁺) proporcionou o composto 5 puro (79 mg).

RMN-¹H (300 MHz, D2O):&4.59 (dd, ÍH, J3 4 ³, J4 p 10.3 Hz, H-4), 4.47 (d, ÍH, J_{1 2} 7.7 Hz, H-l), 4.25 (m, ÍH, J₃ 9.5 Hz, H-3), 4.13 (m, ÍH, J_o ~ 9.5, J₉ 9Hz, H-2), 3.76 (m, 3H, H-5, H-6 e H-6'), 3.54 (s, 3H, OMe). RMN- C = 104.2 (C-l, d, J_cl__p3,9 Hz), 76.7 (C-3), 75.6 (C-4), 75.3 (C-2), 73.5 (C-5), 61.6 (C-6), 58.6 (OMe).

Sal 3,4-difosfato de sódio com of-D-galacto-piranosido metílico: (6)

Preparou-se 2,6-di-O-benzil-PC-g-galacto-piranosido metílico (0,662 g; 1,77 mmol) a partir de 3,4-0-isopropilideno-of-g-galacto-piranosido metílico por benzilação convencional e por hidrólise ácida conforme anteriormente descrito para o composto 2 e tratou-se com N,N-di-isopropil-fosforcL mideto de dibenzilo (2,74 g; 7,9 mmol) e com tetrazol (1,01 g; 1,44 mmol) numa mistura 1:1 de diclorometano/acetonitrilo (10 ml) tal como nos casos anteriores. Efectuou-se a oxidação utildj zando metaperiodato de sódio (1,82 g; 8,5 mmol) e tri-hidrato de cloreto de ruténio (7 mg; 0,026 mmol) e depois fez-se a hidrogenolise com hidrogénio em presença de 10% de paládio-em-car vão utilizando metanol (20 ml) e o tampão constituído por ácido , 1 acetico/acetato de sodio IM, pH 4,5. Dados de RMN- H (300 MHz, D₂O):8 4.90 (d, ÍH, J_{1 2} 3.4 Hz, H-l), 4.70 (dd, 1H, H-4), 4.36 (m, ÍH, H-3), 4.02 (m, ÍH, H-2), 3.98 (m, ÍH, H-5), 3.77 (m, 2H, H-6, H-6'), 3.44 (s, 3H, OMe). Dados de RMN-¹³C (D₂°' ^{70 MHz})^:100.7 (C-l), 74.7 (C-3), 74.0 (C-4), 71.5 (d, J 3Hz, C-5 ou C-2), 68.6 (d, J 6.6 Hz, C-2 ou C-5), 62.2 (C-6), 56.7 (OMe).

Sal 2,3,4,6-tetrafosfato de sódio com of-D-galacto-piranósido metílico (7) .

Efectuou-se a fosfitilação de of-D-galacto-piranosido metílico (0,212 g; 1,1 mmol) pelo processo habitual utilizando fosforamideto de dibenzil-N,N-di-isopropilo (3,61 g; 10,4 mmol). Efectuou-se o passo de oxidação com ácido m-cloro-perbenzõico (2,9 g; 16,7 mmol) e realizou-se a hidroge- 1 nolise por um processo convencional. Dados de RMN- H (300 MHz, D₂O):& 5.05 (d, ₂ 3.3 Hz, H-l), 4.75 (m, ÍH, H-4), 4.46 (m,

ÍH, H-3), 4.40 (m, ÍH, H-2), 4.17 (m, ÍH, H-5), 4.04 (m, 2H, H9

-6 e H-6'), 3.44 (s, 3H, OMe). RMN-¹³C (70 MHz, D₂O): 99.9 (C-1) 75.0 (d, J 5.8 Hz, C-4), 73.5 (m, C-3), 72.5 (t, J 5.7, C-2), 70.7 (dd, J 4.0, J 8.2 Hz, C-5), 65.9 (d, J 4.6, C-6), 56. (OMe).

Actividade biológica dos compostos 1-7

No Quadro 1 representa-se a actividade biológica dos derivados de galactose fosforilados. Os efeitos sobre o transporte de aminoácidos, sobre a actividade da quinase A proteica (dependente de CAMP) e sobre a actividade da quinase II da caseína foram determinados em conformidade com... J.

M. Mato et al., Biochem.Biophys.Res.Commun. 152 (1987) 1455-1462; M. Villalba et al., Biochem.Biophys.Acta 968 (1988) 69-76; e S. Alemany et al., J.Biol.Chem. (1990) no prelo.

Os compostos 2 e 4 estimulam a síntese de glicogénio para as concentrações compreendidas entre 2-10 M.

Quadro I. Actividade biológica dos OC - e (3-D-galactopiranosidos alquílicos fosforilados.

Transporte Quinase A Quinase II

Composto de LDH proteica proteica

Aminoácidos

Controlo	100
1	(400	μΜ)	63 (400 μΜ)
2	(	)	78 (	)
3	(	)	91 (	)
4	(	)	220 (	)

5	(	)	81	nd
6	(	)	72	nd
7	(	)	93	nd
POS	( 20	μΜ)	225	( 20 μΜ)
INSULINA	(100	μΜ)	225	(100 μΜ)

11	100	100
13	(100	μΜ)	100	(400	μΜ)	87
14	(	)	100	(	)	95
18	(	)	97	(	)	79
17	(	)	80	(	)	39
	(200	μΜ)	60
	(400	μΜ)	24
	(	)	67	(	)	103
	(	)	77	(	)	113
	(	)	44	(	)	118
15	(20	μΜ)	20	( 20	μΜ)	40
13	-,			—,

Claims

REIVINDICAÇÕES

-ΚΙ

Processo para a preparação de derivados | de galacto-piranosidos di-, tri- e tetra-fosforilados de fórmula geral (I) , com uma actividade potencial idêntica ã da insul.i na, em que 1

R representa um grupo alquilo (C.-Cp) e pelo menos dois dos 2 3 4 5 io radicais R , R , R e R representam um grupo

II

- P - o“

I.

o caracterizado pelo facto de se fazer a fosfatilação de of- ou β -Q-galactopiranosidos alquílicos ou convenientemente de derivados mono- ou di- substituídos de of - ou ^3-g-galactopiranosidos alquílicos e depois se realizar a oxidação para proporcionar os fosfatos correspondentes os quais são desprotegidos no último passo do processo.

- 2â Processo de acordo com a reivindicação

1, caracterizado pelo facto de a reacção de fosfatilação se efec • tuar utilizando um fosforamideto de diaril-N,N-dialquilo e tre12 tazol seco e se realizar depois o passo de oxidação com ácido m-cloro-perbenzóico ou com metaperiodato de sódio em presença de uma quantidade catalítica de tricloreto de ruténio num siste ma bifásico.

- 3ã Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se efectuar a desprotecção dos derivados fosforilados resultantes através de uma hidrólise ácida e por hidrogenação catalítica.

A requerente reivindica a prioridade do pedido de patente espanhol apresentado em 10 de Maio de 1990, sob ο n°. P9001306.

Lisboa, 9 de Maio de 1991

RESUMO

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE

GALACTOPIRANOSIDOS FOSFORILADOS COM UMA AÇTIVIDADE POTENCIAL IDÊNTICA Ã DA INSULINA

A invenção refere-se a um processo parai a preparação de derivados de galacto-piranosidos di-, tri- e te tra-fosforilados de fórmula geral (I), com uma actividade poten ciai idêntica à da insulina, que compreende fazer-se a fosfatilação de o( - ou β -D-galactop_i ranosidos alquílicos ou convenientemente de derivados mono- ou di- substituídos de o( - ou Q-g-galactopiranosidos alquílicos e depois realizar-se a oxidação para proporcionar os fosfatos cor respondentes os quais são desprotegidos no ultimo passo do processo.