PT96930B

PT96930B - Metodo para a utilizacao de guanidinas tri- e tetra-substituidas como antagonistas de amino-acidos excitadores

Info

Publication number: PT96930B
Application number: PT96930A
Authority: PT
Inventors: Eckard Weber; John F W Keana
Original assignee: Univ Oregon
Priority date: 1990-03-02
Filing date: 1991-03-04
Publication date: 1998-06-30
Also published as: ZA911553B; DK0517852T3; EP0517852A4; KR100353486B1; JP2002020361A; CA2076664A1; JP3298875B2; WO1991012797A1; ATE220320T1; ES2181668T3; PT96930A; EP0517852B1; US6251948B1; SG73414A1; AU7579691A; DE69133065T2; CA2076664C; JPH05507062A; IE910719A1; EP0517852A1

Description

MÉTODO PARA A UTILÍZAçSO DE GUANIDINAS TRI- E TETRA-SUBSTITUÍDAS COMO ANTAGONISTAS DE AMIN0-ACID03 EXCITADQRES

MEMÓRIA DESCRITIVA

Resumo

) presente invento diz respeito «□ método para a utilização de guanidinas tri- e tetra-substituidas como antagonistas de amino-ácidos excitadores, guanidinas essas que exibem uma elevada afinidade de ligação aos receptores de fencicliria <PCP> e mais preferivelmente uma baixa afinidade aos receptores sigma do cérebro. Estes derivados de guanidina actuam como inibidores não competitivos de respostas induzidas por glutamato do receptor de NMDA por acção como bloqueadDres para o canal de iSes do complexo receptor—canal de ioes. Estes compostos exercem actividade de neu roprotecção e são úteis no tratamento terapêutico de perda neuronal em hipoxia, hipog1icémia, isquémia da espinal medula ou cerebral, e no trauma da espinal medula ou cerebral bem como no tratamento da epilepsia, doença de Alzheimsr, esclerose lateral amiotrófica, doença de Parkinson, doença de Huntington, síndroma de Down, doença de Korsakoff e outras perturbações neuro-degenerativas, quando aplicadas numa gama de dosagem de 0,OO5 a 1Θ0Ο mg por quilograma de peso corporal.

Este pedido de patente é uma continuação em parte do Pedido de Patente dos E.U.A. No. de Série 07/467,036, apresentado em 2 de Março de 1990.

Campo do Invento presente invento diz respeita a guanidinas tri- e tetra-substituídas, e a composições farmacêuticas que as compreendem, que possuem capacidade de neuroprotecção. Este invento diz também respeito a métodos que envolvem a utilização destes compostos como antagonistas de amino-écidos excitadores, por exemplo para o tratamento de doenças do sistema nervoso nas quais a patofisiologia da doença envolve a excitação excessiva das células nervosas por agonistas do receptor de g lu.tamato/N_meti 1-d-aspartato <NMDA). Esta excitação excessiva pode conduzir à disfunção do sistema nervoso no caso de epilepsia e à degeneração das células nervosas nos casos de hipoxia, hipoglicémia, isquemia da espinal medula ou cerebral, no trauma da espinal medula ou cerebral e no tratamento de doenças neurodegenerativas tais como doença de Parkinson, doença de Huntington, Esclerose Lateral Amiotrófica (ALS), doença de Alzheimer, Sindroma de Down e doença de Korsakoff.

Antecedentes do Invento

Tem sido revelada na bibliografia de patentes uma larga variedade de guanidinas substituídas. Por exemplo,

- V

As patentes dos E.U.A. Nos. 1 411 731 e 1 422 506 revelam a difenilguanidina como um acelerador de massagem (rubber);

A patente dos E.U.A. No. 1 597 233 revela a N-o-tolil-N'-feni1-guanidina como um acelerador de massagem;

A patente dos E.U.A. Να. ί 672 431 revela a N,N'-di-a—metoxifeni1-guanidina como sendo útil para fins terapêuticos, especialmente na forma de sais solúveis em água;

A patente dos E.U.A. No. 1 73Θ 33B revela a N-p-dimetil-amino-fenil-N'-feni1-guanidina como um acelerador de massagem ;

A patente dos E.U.A. Nd. 1 795 738 revela um processo para a produção de guanidinas N,N'-dialquil-di-substituídas, incluindo a N-di-etil-N'-fenil-guanidina, a N-di-etil-N'-isoamilquanidina, a N-di-meti1-N'-isoamilquanidina e a N—di-meti1—N'~ -eti1guanidina;

A patente dos E.U.A. No. 1 850 682 revela um processo para a preparação de aceleradores de massagem de guanidinas di-substituídas, transportando um substituinte adicional no átomo de azoto imínico;

A patente dos E.U.A. No. 2 145 214 revela a utilização de guanidinas di-substituídas, por exempla diarilguanidinas, especialmente dixi1ilguanidina, como parasiticidas;

A patente dos E.U.A. No. 2 254 009 revela a sym-2~octil-gu.anidina e as patentes dos E.U.A. Nos. 2 274 476 e 2 289 542 revelam a sym-diciclo-hexilguanidina como insecticidas e repelentes de larvas de traça;

A patente dos E.U.A. No. 2 633 474 revela a l,3-bis-(o-eti1feni1>guanidina e a 1,3-bis-(p-eti1feni1>guanidina aceleradores de massagem;

como

A patente doe E.U.A. No. 3 117 794 revela a guanidinas N,N',N''-tri-substituídas e seus sais como compostos bacteriostáticos;

A patente dos E.U.A. No. 3 14€i 231 revela as N-metil- e N-etil-N'-octilguanidinas e seus sais como agentes anti-hipertensi vos ;

A patente dos E.U.A. No. 3 248 246 revela (Exemplo 5) uma guanidina 1,3-di-substituída cujos substituintes são grupos ’’ hidrocarboneto hidrofóbicos, um dos quais é naftilmetilo e o outro é n-butilo;

A patente dos E.U.A. Mo. 3 252 816 revela várias cinami1-guanidinas insubstituídas ou N—substituídas e, genericamente, os compostos correspondentes Ν'- e N*'-alqui1-substituídos e seus sais como agentes anti-hipertensivos;

A patente dos E.U.A. Nd. 3 270 054 revela derivados Ν-2-adamant-1-i1- e Ν-2-homoadamant-l-il-oxi-etil-tioetil- e aminotioeti1-guanidina transportando no máximo dois grupos alquilo inferior no átomo de azoto N' e/ou N'' como agentes simpaticolíticos e anti-virais;

w

A patente dos E.U.A. No. 3 301 755 revela alquil-guanidinas N-etilenicamente insubsti tuídas e os correspondentes compostos Ν'- e/ou N''-alquilo inferior como agentes hipoglicémicos e anti-hipertensivos;

A patente dos E.U.A. No. 3 409 669 revela N-ciclo-hexilamino-(propil 3,3-dialquil-substituido>guanidinas e os correspondentes compostos Ν'-alquil e/ou N''-alquil-substituídos como agentes hipoglicémicos;

X

A patente dos E.U.A. No. 3 547 951 revela guanidinas 1 ,3-dioxolan-4-iΓ-alqui 1-substituídas que têm actividade anti-hipertensiva e revela alquila inferior, incluindo n-butilo, como um substituinte possível no outro grupo amino;

A patente dos E.U.A. No. 3 639 477 revela compostos propoxiIquanidina como tendo propiedades anorécticas;

As patentes dos E.U.A. Nos. 3 681 689; 3 769 427; 3 803 324; 3 908 013; 3 976 787; e 4 014 934 revelam derivados de guanidina aromático-substituída, em que o anel fenilo pode conter substituintes hidroxi e/ou halogénio para utilização em terapia vasocontrictora;

A patente dos E..U.A. No. 3 804 898 revela N-benzilciclobutenil e N-benzilciclobuteni1-alqui1-guanidinas e os correspondentes compostos N-alquil-substituídos como agentes hipotensivos.

A patente dos E.U.A. No. 3 968 243 revela guanidinas N-aralquil-ubstituídas e os correspondentes compostos N'-alquil-N’'-alquilo e Ν’,N'-araiquilo como sendo úteis no tratamento no tratamento de arritmias cardíacas.

A patente dos E.U.A. No. 3 795 533 revela o-halo-benzi1ideno—amino—guanidinas e sua utilização como anti-deprssivos para combater a depressão psíquica.

A patente dos E.U.A. No. 4 007 181 revela guanidinas N,N'-di-substituídas no átomo de azoto imínico por um adamantilo, como possuindo actividades anti-arrítmicas e diuréticas;

e

A patente dos E.U.A. No. 4 051 256 revela N-fenilN-piridil-N*-cicloalquil-guanidinas como agentes antivirais;

As patentes dos E.U.A. Nos. 4 Θ52 455 e 4 130 663 revelam estiri 1amidinas, como agentes analgésicos ou para a •a prevenção da agregação das plaquetas sanguíneas;

A patente dos E.U.A. No. 4 109 014 revela quanidinas ·> N-hidroxi-substituídas e as corresepondentes guanidinas N-metil-di-substituídas como agentes vasoconstrictores.

A patente dos E.U.A. No. 4 169 154 revela a utilização v de guanidinas no tratamento da depressão;

A patente dos E.U.A. No. 4 393 007 revela guanidinas N-substituídas e insubstituídas, N-meti1 substituído-N'-insubstituídas, mono-substituídas e di-substituídas-N’'-insubstitúidas e substituídas, como agentes de bloqueanento gangliónico;

A pat.ente dos E.U.A. No. 4 393 007 revela Ν,Ν,Ν',Ν''-tetra-alquil-guanidinas como sendo bases estereoquimicamente impedidas úteis em síntese química;

A patente dos E.U.A. No. 4 709 094 revela guanidinas 1,3-di-substituídas, por exemplo 1,3-dibutilguanidina e 1,3-diy

-o-tolil-guanidina, como ligandos dos receptores sigma do cérebro.

s

	Para exemplos	de	outras	guanidinas substituídas.	ver
por exemplo, as Patentes dos E.U.	A. Nos. 1 422 506; 1 642	180
1 756	312; 3 159 676; 3	228	975; 3	248 426; 3 283 003; 3 320	229
3 479	437; 3 547 951; 3	639	477; 3	784 643; 3 949 089; 3 975	533
4 060	640 e 4 161 541.

Geluk, H.W., et al.. J. Med. Chem., 12 712 (1969) descreve a síntese de uma variedade de guanidinas adamantil-di-substituídas como agentes antivirais possíveis, incluindo hidrocloreto de N,N'-di-(adamantan-1-i1)guanidina, hidrocloreto de N-(adamantan-í-i1)-N'-ciclo-hexi1-guanidina e hidrocloreto de M-(adamantan-1-i1)-N'-benzi 1-guanidina.

amino-ácido L-glutamato é largamente conhecido por actuar como substância transmissora química em sinapses excitadoras no sistema nervoso central. As reacções neuronais ao glutamato são complexas e parecem ser provocadas por pelo menos três tipos de receptores diferentes, isto é, subtipos KA, QA e NMDA, sendo cada um nomeado rei tivamen te aos seus ligandos relativamente específicos, isto é, ácido kaínico, ácido quisaquálico e ácido N-meti1-D-aspártico, respectivamente. Um amino-ácido que active um ou mais destes tipos de receptores ê referido como sendo um amino-ácido excitador (EEA)„ su.btipo NMDA de receptores de amino-ácidos excitadores é activado durante a transmissão sináptica excitadDra normal no cérebro. A activação de receptores de NMDA sob condições normais é responsável pelos fenómenos de potenciação a longo prazo, um fenómeno do tipo memória, em sinapses excitadoras. A excitação excessiva de neurónios ocorre em ataques epilépticos e tem sido mostrado que a sobre-activação de receptores NMDA contribui para a patofisiologia da epilepsia.

Os receptores NMDA estão também fortemente envolvidos na morte das células nervosas que ocorre a seguir à isquemia cerebral ou da espinal medula. Após a ocorrência de perturbações cerebrais isquémicas tais como ataque apopléctico ou ataque cardíaco, ocorre uma libertação excessiva de glutamato endógeno, que resulta na sobreestimulação de receptores NMDA. Associado com os receptores NMDA está um canal de i.3es. □ local de reconhecimento, isto é, o receptor NMDA, é externo ao canal de iões. Quando o glutamato interactua com o receptor NMDA, provoca a abertura do canal de iões, pelo que permite um fluxo de catiões O+ 4atrvés da membrana celular, por exemplo, Ca e Na para dentro da célula e K⁺ para fora da célula. Pensa-se que este fluxo de o+ ioes, especialmente o influxo de iões Ca , provocado pela interacção do glutamato com o receptor NMDA, desempenha um papel importante na morte das células nervosas. Ver, por exemplo, Rothman, S.M. e Dlney, J.W., Trends in Neurosci, 10(7), 299-302 (19S7).

Os agentes que bloqueiam as reacções â activação de receptores NMDA têm, por conseguinte, utilizações terapêuticas no tratamento de perturbações neurológicas, tais como a epilepsia e também na prevenção da morte das células nervosas que resulta de hipoxia ou hipoglicemia ou que se segue à isquentia cerebral que ocorre durante ataques apoplécticos, traumas e ataques cardíacos. Uma série de perturbações do sistema nervoso estãD associadas com neurodegeneração que pode ser provocada pela sobre-activação de receptores NMDA. Antagonistas de reacções provocadas por receptores NMDA têm, por conseguinte, capacidade para o tratamento de tais perturbações tais como a doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington, Esclerose Lateral Amiotrófica, Sindroma de Down e doença de Korsakoff.

A investigação sobre o complexo receptor NMDA-canal de iões conduziu à determinação de um locar receptor sentro do canal de iões conhecido como receptor PCP. Ver vincent, J.P., Kartalovski, Β. , Geneste, P., Kamenka, J.M. e Lazdunski, Μ., Proc Natl. Acad. Sei. USA 76. 4679-4682 (1979); Zukin, S.R. e Zukin, R.S., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 76. 5372-5376 (1979); Sonders, M.S., Keana, J.F.W. e Weber, E. , Trends in Neurosci. 11(1), 37-40 (1988); e Anis, N.A., Berry, S.C., E-:urton, N.R» ε Lodge, D., Br J Pharmacol 7?, 565-575 (1983). Um composta que se ligue ao receptor PCP pode actuar como um bloqueador de canal de iões, interrompendo, deste modo, o fluxo de iões através celular. Deste modo, os agentes que interactuam com o receptor PCP, actuam como antagonistas não competitivos reduzindo a acção agonista do glutamato no receptor NMDA.

Os ligandos do receptor PCP incluem PCP, istD é, fenilcic1idina, análogos tais como Í-Cl-(2-tieni1)-ciclo-hexi13-piperidina (TCP), opiatos (sigma) de benzomorfano, e <+)-5-meti1-1©,1l~di~hidro-5H-dibenzoEa,d 3ciclo-hepteno-5,10-imina(isto é, a droga MK-B01, ver Patente dos E.U.A. Nd. 4 399 141). Ver, também, Wong, E.H.P., Kemp, J.A., Priestly, T., Knight, A.R., Woodruff, S.N. , Iversen, L.L; Proc. Natl. Acad. Sei. USA 33, 7104-71Θ8 (1986), e Thompson, W.J. et al, J. Med. Chem. 35; 789-808 (1990).

Nós identificámos compostos que exibem uma alta afinidade para se ligarem ao receptor PCP e são estruturalmente diferentes dos ligandos de receptores PCP'.

Sumário do Invento

Constitui um objecto deste invento fornecer guanidinas tri- ε tetra-substituídas que exibem uma elevada afinidade para receptores PCP do complexo receptor NMDA—canal.

Constitui outro objecto deste invento fornecer guanidinas tri- e tetra-substituídas que exibem uma elevada afinidade para receptores PCP da complexa receptor NMDA-canale e baixa afinidade para receptores sigma do cérebro.

Constitui outro objecto do invento fornecer guanidinas tri- s tetra-substituídas para auxiliarem na investigação de receptores PCP.

Constitui também um objecto do invento fornecer guanidinas tri- e tetra-substituídas úteis para o tratamento de condiçSes neurológicas tais como a epilepsia e das perturbações do sistema nervoso associadas com a neurodegeneração.

Constitui também um objecto do invento fornecer um método para o tratamento e/ou prevenção de doenças do sistema nervoso associadas com a excitação excessiva das células nervosas por agonistas do receptor NMDA.

Constitui ainda um outro objecto do invento o tratamento ou a prevenção de disfunções do sistema nervoso, por exemplo, epilepsia, associadas com a excitação excessiva das células nervosas por agonistas do receptor NMDA, por meio da administração de quantidades eficazes de compostos guanidina trie tetra-substituída qu.e exibem uma elevada afinidade para o receptor PCP.

Constitui ainda um outro objecto do invento o tratamento ou a prevenção de estadas neuradegenerativos e/ou morte das células nesvosas, que resultam de hipoxia, isquemia cerebral ou da espinal medula, trauma cerebral ou da espinal medula, e análogos, por meio da administração de quantidades eficazes de j compostos guanidina tri- e tetra-substituída que exibem uma elevada afinidade para o receptor PCF’.

Constitui ainda um outra objecto do invento o tratamento ou a prevenção de estados neurodegenerativos acssociados com doenças neurodegenerativas, tais coma doença de Parkinson, doença de Huntington, Esclerose lateral Alzheimer, Síndroma de Down e doença de administração de quantidades eficazes tetra-substituídas que exibem uma el receptor F’CP.

amiotrofíca, doença Korsakoff, por meio de guanidinas trievada afinidade para de da e

o

Constitui ainda um outro objecto do invento o tratamento ou a prevenção a doença de Korsakoff, um estado induzido pelo alcoolismo crónico, por meio da administração de quantidades eficazes de guanidinas tri- e tetra-substituídas que exibem uma elevada afinidade para o receptor PCF'.

Após o posterior estudo da Memória Descritiva e das Reivindicações anexas, outros objectos e vantagens deste invento tornar-se-ão evidentes para os especialistas nesta técnica.

Breve Descrição do Desenho

Vários outros objectos, características e vantagens adicionais do presente invento, serão mais completamente apreciados à medida que o mesmo se torna melhor compreendido quando considerado juntamente com a Figura acompanhante, em que:

A Figura 1 representa uma comparação gráfica dos dados resultantes do ensaio de neurotoxicidade in vitro com os dados resultantes do ensaio de ligalão a radialigandos para alguns dos compostos que são dados nos exemplos e que são o objecto de algumas das reivindicação.

Descricgo do Modelos de Realizaçao Preferidos

Estes objectos foram conseguidas pela determinação de certas guanidinas tri- e tetra-substituídas que exibem uma afinidade de ligação elevada relativamente ao local do receptor PCF'.

As guanidinas Ν,Ν,Ν’-tri-substituídas deste invento são as que apresentam a Fórmula (I):

NH ti

R-N-C-N-H I

em que R, R' e R'' são independentemente um grupo C,-C_o alquila, 1 o um grupo C^-Cg alquenilo, um grupo C^-Cg alquinilo, um grupo cicloalquilo, um grupo cicloalquilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo cicloa1queni1o, um grupo cicloalquenilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo arilo carbocíclico, um grupo arilo carbocílico substituído por um ou mais substituintes, um grupo alcarilo, um grupo alcarilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo aralquilo, um grupo aralquilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo heterocíclico, um grupo heterocíclico substituído por um ou mais substituintes, um grupo heteroarilo ou um grupo heteroarilo substituído por um ou mais substituintes;

ou um seu sal fisiologicamente aceitável;

em que o referido substituinte é cloro, fluoro, bromo ou iodo, Cj-Cg alquilo, C^-Cg alcoxi, ciano, C-.-C₁₅ dialquilaminoalquilo, carboxi, carboxamido, C*-Cg alquiltio, alilo, aralquilo, alcarilo, cicloalquilo, aroilo, aralcoxi, C^-Cg acilo, arilo, heteroarilo, arilo condensado com um anel de benzeno, heteroarilo condensado com um anel de benzeno, C^-C^ heterocicloalquilo, C^-C^ heterocicloalquilo condensado com um anel de benzeno, Cj-C-g alquilsulfonilo, ariltio, arnino, Cj-Cg alquilamino,

A

C^-Cje- dialqui lamino, hidroxi, hidroxialqui lo, carbamoi. lo, C^-C& N-alquilcarbamoilo, C^-C^ N, N-dia 1 qui Icarbamoi 1 o, nitro, azido ou C-.-C^ dialqui lsul famoi lo;

e em que o referido composto exibe uma elevada actividade de ligação relativamerite ao receptor F'CF'.

Preferivelmente, com referência à Fórmula (I), as guanidinas N,N,N'-tri-substituídas preferidas são aquelas em que R e R'' são independentemente um grupo cic1oa1qui1 o, um grupo cicloalquilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo cic1oalqueni1 o, um grupo cic1oa1queni1 o substituído por um ou mais substituintes, um grupo arilo carbocíc1ico, um grupo arilo carbocílico substituída por um ou mais substituintes, um grupo alcarilo, um grupo alcarilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo aralquilo, um grupo aralquilo substituído por u.m ou mais substituintes, um grupo heterocíc1ico, um grupa heterocíc1ico substituído por um ou mais substituintes, um grupo heteroarilo ou um grupo heteroarilo substituída por um ou mais substituintes; e R' é independentemente um grupo C-C alquilo, um grupo C^-C^ alquenilo, um grupo C^-C^ alquinilo, um grupo alcarilo, ou um grupo alcarilo substituído.

As guanidinas Ν,Ν,Ν'-tri-substi tuídas especialmente preferidas incluem a N,N'-di-(1-nafti1)-N-metilguanidina, N,N'~ -di-(1-nafti1)-N-etilguanidina, N,N'-di-(m-eti1feni1)-N-metiIguanidina, N-(o-isopropí1feni1)-N'-meti1-N'-<1-naf ti 1)guanidina, N-(m-eti1feni1)-N-meti1-N'-(1-nafti 1Iguanidina, N-eti1-N,N-di-<m-eti1fenil)guanidina, N-etil-N-ím-eti1fenil)-N'-(4-indanil) guanidina, N-eti1-N-(m-eti1fenil)-N'-(4-indenil)guanidina, N-eti1-N-(m—eti1fenil)-N'-(o-iodofeni1)guanidina, N-eti1-N-(m-eti1fenil )-N'-(o~isopropí1fenil)guanidina, N-eti1-N-(m-eti1feni1)-N'-(1-naftil)guanidina,

N-etil-N-(m-etilfenil)-N'-(m-meti1fenil)guanidina, N-etil-N-(4-indan i1)-N'-(m-etilfenil)guanidina, N-etil-N-(4-indeni1)-Ν’ -(m-etilfeni1)quanidina, M-etil-N-(g-iodofenil>-N'-<m-eti1feni1)guanidina, N-et.il-N-(g-isopropi1feni1)-N’-(m-eti1fenil)guanid ina,

N-eti1-N-(1-nafti 1)--N'-(m-eti1feni1)guanidina, N-eti1-N-(m-meti1feni1)-N'-(m-eti1feni1)guanidina, N-isopropi1-N,N'-di-(m-etilfenil) guanidina, N-isopropi1-N-(m-etiIfenil) -N ’-(4-indanil)guanidina, N-isopropi1-N-(m-eti1feni1)-N'-(4-indeni1)guanidina, N-isopropi1-N-< m-eti1fenil)-N'-(o-iodofeni1)guanidina, N-isopropi1-N-(m~eti1fen il)--N'-(g-isopropíIfenil)guanidina, N-isopropi1-N-( m-eti1fenil)-N'-(1-nafti1)guanidina, N-isopropi1-N-(m-etiIfenil)-N'-(m-metiIfenil)guanidina, N-isopropi1-N-(4-indanil)-N'- (m-eti 1feni1)quanidina, N-isopropi1-N-(4-indeni1)-N'-(m-etiIfenil)guanidina, N-isopropi1-N-(g-iodofeni1)-N'-(m-etilfenil)guanidina, N-isopropi1-N-(g-isopropi1feni1)-N'-(m-etiIfenil)guanidina, N-isopropi1-N-<1-naftil)-N'-(m-etilfenil)guanidina, N-isopropil-N-(m-meti1feni1)-N‘-(m-etiIfenil)guanidina, N-meti1-N-(m-eti1feni 1)-N'-(4-indanil)guanidina, N-meti1-N-(m-etilfeni1)-N'-(4-indeni 1 ) guanidina, N-meti1-N-(m-eti1feni1)-N'-(g-iodofeni1)guanidina, N-meti1-N-(m-etilfenil)-N'-(g-isopropi1fenil)guanidina, N-meti1— -N-(m-etilfeni1)-N'-< m-metiIfenil)guanidina, N-meti1-N-(4-indanil) -N'-(m—eti1fenil)guanidina, N-meti1-N-(4-indeni1)—N'-(m-etilfenil)guanidina, N-meti1-N-(o-iodofeni1)-N'-(m-etiIfenil)guanidina, N-meti1-N-(g-isopropi1feni1>-N'-(m-eti1feni1)guanidina, w», N-metil-N-(1-naftil)-N‘-(m-eti1feni1)guanidina, N-meti1-N-(m-meti1feni1)-N'-(m-etiIfenil)guanidina, N-(8-cumarini1)-N'-(3-etil— feni1)-N'-metilguanidina, N-(1-naf ti 1)-N'-(8-cumarini1)-N-etilguan idina, N-(8-cumarinil)-N'-(3-etilfenil)—N—etilguanidina,

N-(1-nafti 1)-N'-(8-cumarinil)-N-eti1guanidina, N-(l-naftil)-N'-(3-metiIfenil)-N-metilguanidina, N-(1-naftil)-N'-(3-nitrofeni1)-N'-meti 1guanidina, N-(1-nafti 1)-N'—<3-azidofeni1)-N'-metil — guanidina, N—(7—fluoro-1-naf ti 1)—N'-(3-eti1feni1)-N'—metilguani— dina, N-(4-fluoro-1-nafti 1)-N‘-(3—eti1feni1)-N'-metilguanidina,

N-( Γ-nafti 1)-N'-(4-fluoro-3-eti1feni1)-N'-metilguanidina, N~(2-fluoro-l-nafti 1 ) -N' - (3-eti 1 fenil ) -N' -meti 1 guanidina , N- 5-f luoro-1-nafti 1)-N'-(3-eti1fenil)-W' -metilguanidina, N-(9-fluoro-l-naf til ) -N' - (3-eti 1 fenil )-N' -meti lguanidina, N- ( 1-naf ti 1 '> -N '-(2-fluoro-3-eti1feni1)-N'-metilguanidina, N-(1-naftil)-W'-(6-f1uoro-3-etilfenil)-N'-metilguanidina, N-(1-nafti 1)-N*- (2,4-difluoro-3-eti1fenil)-N'-metilguanidina, N-(1-nafti 1)-N'-(2,6-difluoro-3-eti 1 f eni 1 ) -N' -meti 1 guan id ina , IM- ( 1-naf ti 1 )-N' - (2,4,6-trif luoro-3-eti 1 feni 1 ) -N ' -meti lguanidina , N- ( 2,4-dif luoro-1 -na. f ti 1 ) -N' - (3-eti1feni1)-N'-metilguanidina, N-(2,4-di fluoro—1-nafti 1)-N'-(3-eti 1feni1)—N'-meti 1guanidina, N-(2,4,5-triflucro-1-naftil)-N'-(3-eti1f en i1)—N'-metilguanidina, N-(2,4,8-tri fluoro-1-nafti 1)-M'-(3-eti1feni1)-N'-meti 1guanidina, W-<4-fluoro-1-naftil) -IM' ~ (2,6-di f 1 uoro-3-eti1 fenil ) -N' -meti lgu.an idina , N- (4-f luoro-l-nafti 1)-N'-< 2,4-difluoro-3-eti1feni1)-N'-metilguanidina, N-(7-fluoro-l-naf ti 1)-N'-(4-fluoro-3-eti1fenil)-IM'-metilguanidina, IM- (4-fluoro-l-nafti 1)-IM'-(4-fluoro-3-eti1fenil)-IM'-metilguanidina,

N-(4-fluoro-l-nafti 1) -N'-(6-fluoro-3-eti1feni1)-IM'-metilguanidina, IM-(8-cumarini1)-N'-(3-eti1feni1)-N'-etilguanidina, IM~(1-nafti 1)-IM'-(8-cumarini1)-N-etilguanidina, N-(8-cumarini1)-N'-(3-ni trofeni1)-IM'-metilguanidina, N-(8-cumarini1)-N'-(3-meti1fe— nil)-N'-metilguanidina, N-(8-cumarini1)~N’-(4—fluoro-3-eti1fεπί 1 )-N'-metilguanidina, IM,IM'-di(8-cumarini1)-N-metilguanidina,

N,N'-di(8-cumarini1)-N-etilguanidina, N-(2-fluoronafti 1)-N'-(3-meti1feni1)-N'-metilguanidina, N-(4-fluoronafti 1> —N' — <3-meti1fenil) -N'-metilguanidina, N-<5-fluoronafti 1)-N'-(3-meti1fenil)-N'-metilguanidina, N-(7-fluoronaf ti 1)-N‘< 3-meti1fenil)-N'-metilguanidina , N— (2,4-difluoronaf til)-N'-(3—meti 1feni1)-N'—metilguanidina, N-(2,4,5-triifluoronaftil)-IM'-(3-meti1feni1)-N'-metilguanidina, N-(2,4,8-tri i fluoronafti 1)-N'-(3-meti1feni1)-N'-metilguanidina, N-(1-naftil)-N‘-(2-fluoro-3-meti1feni1)-N'-metilguanidina, N-(1-naf ti 1)—N'-(4-fluoro-3-meti1fenil)~N'-metilguanidina,

N-(1-nafti 1)-N'-(5-fluoro-3—meti Ifeni1)-ΙΜ'-metilguanidina,

Ν-<1-nafti 1)~N'-(3-nitrofeni1)-N'-etilguanidina, N-(1-naftil)~N'~ -(4-fluoro-3-eti1feni1)-N*-metilguanidina, N-(1-nafti 1)-N'-(3-trifluorometi1fenil)-N'-metilguanidina, N-(1-nafti 1) -N'- (3-trifluorometi1íen i1)-N'-etilguanidina, e N-(8-cumarini1-N'-(3-trifluorometi1feni1)-N'-etilguan idina.

□ invento diz também respeito a guanidinas Ν,Ν,Ν',Ν'-tetra-substituídas com a Fórmula (II):

) s

NH

R-N-C-N-R''‘ II

À- A·· em que R, R', R' e R' sáo independentemente um grupo C^-Cg alquila, um grupa C^-Cg alquenilo, um grupo C_o-Cg alquinilo, um grupo cicloalquilo, um grupo cicloalquilo substituída par um au mais substituintes, um grupo cicloalquenilo, um grupo cicloalquenilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo arilo carbocíc1ico, um grupo arilo carbocílico substituído por um ou mais substituintes, um grupo alcarilo, um grupo alcarilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo aralquilo, um grupo ·> aralquilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo heterocíclico, um grupo heterocíclico substituído por um ou mais substituintes, um grupo heteroarilo ou um grupo heteroarilo substituído por um ou mais substituintes;

ou um seu sal fisiologicamente aceitável;

em que o referido substituinte é cloro, fluoro, bromo ou iodo, Cj—Cg alqui 1O, C_rCg alcoxi, ciano, C-^-Cj^ dialquilaminoalquilo, carboxi, carboxamido, ^C1 ^C8 alquiltio, alilo, aralquilo, alcarilo, C^-C^ cicloalquilo, aroilo, aralcoxi, ^C2^-C8 acilo, arilo, heteroarilo, arilo condensado com um anel de benzeno, heteroarilo :ondensado com um anel de benzeno, C-,-C_fe heterocicloalquilo,

C-,-C_ò heterocicloalquilo condensada c om um anel de benzeno, amina, C^-Cg alquilamina, C,

C^-Cg alquilsulfonilo, ariltio, ~C .dialquilamino, hidroxi, hidroxialquilo, carbamoilo, C.-C, i -j Io

-alqui1carbamoilo, N,N-dialqui1carbamoi1o, nitra, azido

2~^L,15

C^-C_jc- dial qui 1 sul famoi la

Nau e em que a referido composto exibe uma elevada actividade de ligação relativamente ao receptor F’CF'.

Com referência à Fórmula (I), as guanidinas Ν,Ν,Ν',Ν'-tetra-substituídas preferidas são aquelas em que R e R'' são independentemente um grupo cicloalquilo, um grupo cicloalquilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo cicloalquenilo, um grupo cic1oalqueni1o substituído por um ou mais substituintes, um grupo arilo carbocíclico, um grupo arilo carbocílico substituído por um ou mais substituintes, um grupo alcarilo, um grupo alcarilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo aralquilo, um grupo aralquilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo heterocíclico, um grupo heterocíclico substituído por um ou mais substituintes, um grupo heteroarilo ou um grupo heteroarilo substituído por um ou mais substituintes; e R' e R' são independentemente um grupo C,-C alquilo, um grupo Cg-C^ alquenilo, um grupo C_o-Cg alquinilo, um grupo alcarilo, um grupo alcarilo substituído, um grupo cicloalcarilo, ou um grupo cicloalcarilo substituído.

As guanidinas especialmente preferidas tendo a Fórmula (II) são aquelas em que R e R' são independentemente grupos arilo carbocíclicos, grupos cicloalquilo substituídos, grupas cicloalquenilo, grupos cicloalquenilo substituído por um ou mais substituintes, grupo arilo carbocíc1icos, grupo arilo carbocílicos substituídos, grupos alcarilo, grupos aralquilo substituídos,

Λ «Λ

Ο grupos heterocíc1icos, grupos heterocíc1icoa substituídos, grupos heteroarilo, ou grupos heteroarilo substituídos; e R' e R'' são grupos C^-Cg alquilo. As guanidinas N<N,N',N'-tetra-substituídas específicas preferidas incluem a N,N'-dieti1-N,N'-di-(m-eti1feni 1 )guanidina, ΙΜ,ΙΜ' -d ieti 1-N, N' -di-( 1-naftil )guanidina, N,N' -di eti 1-N~(m-eti1feni1)-N'-(4-indani 1 )guanid ina, N,N'-dieti1—N—(m— -eti 1 f en i. 1 ) -N' - ( 4-indeni1 ) guan id ina, N , N' -dieti l-N-( m-eti lfenil)-N'-(o-iodofeni1)guanidina, N,N'—d ieti 1-N-(m-eti lfenil ) -N' - (o- iso propi lfenil ) guanidina, N, IM' -dieti 1 -IM- (m-eti lfenil ) -IM ' - ( 1-naf ti 1)guanidina,, IM, IM' -dieti 1-N- (1-naftil) -N' -(m-eti lfenil )guanidina, N, JM' -dieti 1 -N-(m-meti 1 fenil) -IM' - (m-eti lfenil )guanidina, IM, IM' -di-isopropi1-N,N'-di-(m-eti 1 fenil )guanidina , N ,N' -di-isopropi1-N-(m-eti1feni1)-N'-(4-indani1)guanidina, N,N'-di-isopropi1-N-(m-eti1fenil)-N'-(4-indeni1)guanidina, N,N'-di-isopropi1-N-(m-eti 1 f eni 1 ) -N' - (o-iodo fenil ) guanidina, IM ,N' -di-isopropi 1-N- < m-eti 1 feni 1 )-N' - (o-isopropi 1 fenil )guanidina, N,N' -di-isopropi 1-IM-(m-eti1fenil)-N'-(1-naf ti 1)guanidina, N,N'-di-isopropi1-N-(m— -eti1feni1)-N'-(m-meti1fenil)guanidina, N,N'-dimeti1-N,N'-di - (m~eti 1feni1)guanidina, N,N'-dimeti1-N-(m-etilfenil)-N'-(4-indani 1 ) guan idina, N,N'-dimeti1-N-(m-etilfenil)-N'-(4-inden i1)guanidina, N,N'-dimeti1-N-(m-etilfenil)-N'-(o-iodofeni1)guanidina, IM, N' -dimeti 1-N- (m-eti 1 f eni 1) -N' -( o-isopropi lfenil) guanidina,

N, IM' -dimeti 1-N- (m-eti lfenil ) -N' -( 1-naftil ) guanidina, N, N' -dimeti 1-N- (m-eti1fenil)-N'-(m-meti1feni1)guanidina, N-eti1-N'-isopropi 1-N,N'-di-(m-eti1feni1)guanidina, N-eti1-N-(m-eti1fenil)-N'-(4-indani1)-N'-isopropilguanidina, N-eti1-N-(m-eti1fenil)-N'-(4-indeni1)-N'-isopropi1guanidina, N-eti1-N-(m-eti1feni1)-N'-(o-iodofeni1)-N'-isopropi1guanidina, N-eti1-N-(m-eti1fenil)-N'-(o-isopropilfenil)-N'-isopropilguanidina, N-etil-N-(m-eti1fenil)-N‘-(1-naf ti 1)-N'-isopropilguanidina, N-eti1-N-(m-etilfenil)-N’-(m-meti 1fenil)-N'-isopropilguanidina, N-eti1-N-(4-indani1)-N'-(m-eti1fenil)-N’-isopropilguanidina, N-eti1-N-(4-indenil)~N'-(m-etilfeni1)-N'-isopropilguanidina, ii

,)

N-eti1-Ν-ί q-iodofenil)-Μ'-(m-etiIfenil)-Ν'-isopropi1guanidina, N-eti1-Ν-(o-isopropi1fenil)—Ν'-(m-eti1fen i1)-N'-isopropilguan idina, N-eti1-N- ( l-naftil)-N'-( m-et.il fenil )-N'-isopropi1 guanidina, N-eti 1 -N- (m-me ti 1 fen i 1)-N' - (m—eti 1 fen i 1 ) —N' -isopropi 1quanid ina ,

N,N'-di-isopropi1-N,N'-di-<m—etiIfenil)guanidina, N,N'-di-isopropi 1 -N-(m-eti 1fenil)-N'-(4-indani1)guanidina, Ν, N'-di-isopropi1-N-(m-eti 1feni1)-N'-( 4-indenil)guanidina, N,N'-di-isopropi1-N-(m— -eti1feni1)-N'-(o-iodofeni1)guanidina, N,N'-di-isopropi1-N-(m-eti1feni1)-N'-(o-isopropiIfenil)guanidina, N, N'-di-isopropi1-N-(m-eti 1fenil)-N'-(1-nafti 1)guanidina, Ν, N'-di-isopropi1-N-(m-eti1feni1)-N'-(m-metiIfenil)guanidina, N,N'-di-isopropi1-N-(4-indani1)-N*-(m-etiIfenil)guanidina, Ν, N'-di-isopropi1-N-(4-indenil ) -N ' - ( m—etiIfenil)guanidina, N,N'-di-isopropi1-N-(q-iodofeni1)-N'-(m-eti 1feni1)guanidina, N,N'-di-isopropi1-N-(o-isopropi1f eni 1 ) -N' - (. m-e ti Ifenil ) guanidina, Ν, N' -di-isopropi l-N-( 1-naftil ) -N'-(m-etiIfenil)guanidina, N,N'-di-isopropi1-N-(m-metiIfenil) -N'-(m-etilfenil)guanidina, N-meti1-N,N‘-di-(m-eti 1fenil)-M'-isopropi 1guanidina, N-meti1-N-(m-etiIfenil)-N'-(4-indanil)-N'-isopropi lguan idi na , N-meti1-N-(m-etiIfenil)-N'-(4-indenil)-N'-isopropi 1guanidina, N-meti1-N-(m-etiIfenil)—N'-(q-iodofeni1)-N'-isopropi lguan i d ina , N-meti1-N-(m-eti 1fenil)-N'-(o-isopropi1fenil) — -N'-isopropi1guanidina, N-meti1-N-(m-eti 1feni1)-N'-(1-naftil)-N' -isopropi1guanidina, N-meti1-N-(m-eti 1feni1)-N'-(m-meti 1fenil)-N'-isopropi1guanidina, N-meti1-N-(4-indanil)-N'-(m-eti 1fenil)-N'-isopropi1guanidina, N-meti1-N-(4-indenil)-N'-(m-eti 1fen i 1) -Ν'-isopropilguanidina, N-meti1-N—(q—iodofeni1)-N’-(m-eti 1fenil)-N‘-isopropi1guanidina, N-meti1-N-(o-isopropiIfenil)-N'-(m-eti1feni1)-N*-isopropi1guanidina, N-meti1-N-(1-nafti 1>~N'-(m-eti1fenil) -N'-isopropilguanidina, N-meti1-N-(m—metilfeni1)-N'-< m—eti1feni1)-N'-isopropilguanidina, N-eti1—N,N'-di-(m-eti1fenil)-N'—meti 1 guanidina , N—eti1-N-(m—eti1feni1)—N'-(4-indani1)—N'—meti 1guanidina , N-eti1-N-(m-etiIfenil)-N'-(4-indenil)~N'-metilguan idina, N-eti1-N-(m-eti1fenil)-N'-(o-idofeni1)-N'—meti 1guanidina,

N-eti1-Ν-( m-eti 1 feni 1 ) —Ν ' — <q-isopropí 1 feni 1 ) -Ν' -meti 1 guanidina, N-eti1-N-(m-eti1feni1)-N'- (1-nafti 1)-N'-meti 1guanidina, N-eti1-N-(m-eti1fenil)-N'-(m-meti1fenil)-N'-meti 1guanidina, N-eti1-N-(4-indani1)-N'-(m-eti1fenil)-N'-meti 1guanidina, N-etil-N-(4-indeni1)-N'-(m-eti1feni1)-N'-meti 1guanidina, N-eti1-N-(o-iodofeni1)-N'-(m-eti1feni1)-N'-meti 1guanidina, N-eti1-N-(q-isopropí1feni1)-N'-(m-eti1fenil>-N'-metilguanidina, N-etil-N-<1-naftil)-N'-(m-etilfenil)-N*-meti 1guanidina, N-eti1-N-(m-meti1fenil)-N’-(m-etilfeni1)-N'-meti 1guanidina, Ν,N’-di(1-nafti 1)-N,N'-dimeti1guanidina, N-(8-cumarini1)-N'-(3-eti1feni1)-N,N‘-dimeti1guanidina,

N,N'-di(8-cumarini11)-N,N'-dimetilguanidina, N,N'-di(8-cumarini11)-N-meti1-N'-eti1guanidina, N-(1—naftil)-N'-(3-nitrofenil>—

-Ν,N'-dimeti1guanidina, N~(1-nafti 1)-N'-(3-azidofeni1)-N,N'-dimeti lguan idina, N—(8-cumarin i1)-N'-(3-ni trofeni1)-Ν,N'—dimetilgua— nidina, N-(8-cumarini1)-N'-(3-azidofeni1)-N,N'-dimetilguan idina,

N-(7-fluoro-1-nafti 1)-N'-(3-eti1feni1)-N,N'—dimetilguanidina,

N-(4-fluoro-1-nafti 1)-N'-(3-eti1fenil)-N,N'-dimetilguanidina,

N-(1-naf ti 1)-N'-(4-fluoro-3-eti1fenil)-Ν, N'-dimetilguanidina,

N-<1-naf ti 1)-N'-(3-meti1feni1)-N,N'-dimetilguanidina, N-(8-cumarini 1 )~N'-(3-meti1fenil>-N,N'-dimetilguanidina, N-(1-nafti 1>-N'-

-(3-nitrofenil)-N,N'-dietilguanidina, N-(1-naftil)-N'-(3-azidofenil)-N,N'-dietilguanidina, N—(8-cumarini1)-N'-(3-nitrofenil) — -Ν,N'-dietilguanidina, N-(8-cumarini1)-N’-(3-azidofeni1)-Ν,N'-dietilguanidina, N-(7-fluoro-1—nafti 1)-N'-(3-eti1fenil)-N,N'—dietilguanidina, N-(4-fluoro-1-nafti 1)-N'-(3-eti1feni1)-N,N‘-dietilguanidina , N-(1-nafti 1)-N'-(4—fluoro-3-eti1fenil)—N,N'—dietilguanidina, N-(1—nafti 1)-N* -(3-meti1fenil)-N,N* —dietilguanidina, e N~(8-cumarinil)-N'-(3-meti1fenil)-N,N’-dietilguanidina.

Os grupos alquilo típicos s3o, por exempla, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, amila, hexilo, heptilo e octilo.

Os grupos cicloalquilo típicos têm de 3 a 12 átomos de carbono, por exemplo, cic1opropi1o, ciclopenti lo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, 1,4-met.i leno-cic lo-hex i lo, adamantilo, norbornilo, isobornilo, mentilo, ciclopentilmetilo, ciclo-hexi1 meti lo, 1- ou

2-ciclo-hexiletila e 1-, 2- ou 3-ciclo-hexi1propilo.

Os grupos cicloalquenilo típicos têm de 5 a 12 átomos de carbono e incluem grupos ciclopentenilo, ciclo-hexenilo, ciclo-heptenilo, e ciclo-octenilo

Os grupos arilo carbocíc1icos típicos incluem grupos fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, bifenilo, fenantrilo, e antracilo.

Os grupos alcarilo ou aralquilo típicos, par exemplo, com atê 18 átomos de carbono, podem conter de 1 a 3 anéis aromáticos separados ou condensados, por exempla, fenilo, benzilo, Cj-C-. alquilfenilo, nitrofenilo, azidofenilo, neftilo, 1— e 2-feniIetilo, 1-, 2-, ou 3-fenil-propilo; o-, m-, ou p-tc<lilo, m,m'-dimeti1-fenilo, o-, m-, ou p-eti1fenilo, m,m'-dieti1-fenilo, m-metil-m' -etil-fenilo, p-propi1fenilo e o-isopropi1fenilo.

Os anéis aromáticos heterocíc1icos típicos incluem cumarinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidilo, furilo, pirrolilo, tienilo, tiazolilo, oxazolilo, ímidazolilo, indolilo, benzofuranilo e benzatiazolilo.

Os grupos alquenilo típicos incluem grupos alilo, 2-butenilo, 2-pentenilo e 2-hexenilo.

Os grupos alquinilo típicos incluem grupos 2-butinilo, 2-pentinilo e 2-hexinilo.

Os grupos aroilo típicos incluem carbonilo substituídos pelos grupos arilo anteriormente referidos.

Os grupos aralcoxi típicos incluem grupos C^-Cg alcoxi substituídos pelos grupos arilo art teriormen te referidos.

Os grupos heterocicloalquila típicos incluem grupos tetra-hidrofuranilo, tetra-hidrcpiranilo, piperidinilo, morfolino e pirrolidinilo.

As guanidinas di-substituídas são o objecto da Patente dos E.U.A. No. 4 709 Θ94, incorporada nesta Memória Descritiva como referência, das quais as preferidas são aí descritas pela Fórmula (III):

NH (I

R—NH—C—NH—R ¹ III em que R e R¹ são cada um independentemente alquilo, cicloalquilo, arilo carbocíc1ico, alcarilo ou aralquilo. Como uma classe, estes compostos são descritos nesta patente como apresentando uma actividade de ligação altamente selectiva relativamente ao receptor sigma do cérebro. A própria DTG apresenta também uma forte selectividade relativamente ao receptor sigma (Weber, E., Sonders, M., Quarum, M., McLean, S-, Pou, S., & Keana, J.F.W., Proc, Natl. Acad. Sei. USA 83. 87S6-8788 (1986)). No pedida de patente co-pendente No. de Série 07/237 367, é revelado que membros específicos adicionais desta classe de guanidinas di-substituídas apresentam uma alta actividade de ligação relativamente ao receptor PCF'. Foi agora determinado que certas guanidinas tri- e tetra-substituídas apresentam também uma alta afinidade relativamente ao receptor PCP. Surpreendentemente, certas guanidinas tri- e tetra-substituídas apresentam também uma ligção excepcinalmente baixa relativamente ao receptor sigma. Por conseguinte, estes compostos de guanidina tri- e tetra-substituída podem ser utilizados em métodos de tratamento sem afectar as respostas fisiológicas mediadas por sigma.

«χ

As guanidinas tri- e tetra-substituídas podem ser facilmente preparadas por meio da reacção de uma amina com uma alquil- ou ari1-cianamida pré-formada (ver Safer, S.R., et al. .

> J. Qrq. Chem. 13;924 (1948)) ou com a alquil- ou ari 1-cianamida

N-substituída. Este é o método escolhido para a produção de

N,N’-diaril-N'-C,-C_ alquil inferior-guanidinas, nas quais os 1 o substituíntes não são idênticos. Relativamente a uma síntese 7 recente de guanidinas assimétricas, ver G.J. Durant et al., J.

Med. Chem. 28:1414 (1985), e C.A. Maryanoff et aj_. , 3. Qrq. Chem. 51:1882 (1986), incorporado nesta Memória Descritiva como referência .

A via mais directa para a preparação de guanidinas N,N,N'-tri-substituídas quer siméticas quer assimétricas, consiste na reacção de uma N,N-dialqui 1 ari 1-amina com 1,2 equivalentes de brometo de cianogénío (Cressman, H.W.J., Qrq. Syn. Coli. 3:608-609 (1955)), e no aquecimento subsequente da cianamida di-substituída resultante em clorobenzeno com um equivalente de um hidrocloreto de amina (Kavanaugh, M.P. et a 1.. Proc Natl. Acad. Sei. (USA) 85:2844-2348 (1988)) do mesmo parceiro original (relativamente a um composto simétrico) ou de outro parceiro (relativamente a um composto assimétrico). As guanidinas

Λ tetra-substituídas simétricas podem ser preparadas por meio de aquecimento da N-monoalquilarilamina com 0,5 equivalentes de brometo de cianogénio em etanol ou sem solvente (Weber, E. et al. . Proc. Natl. Acad. Sei. (USA) 83:8784-8788 (1986)), enquanto que uma guanidina assimétrica é produzida por meio de reacção de uma Ν,Ν-dialquilaril-amina com 1,2 equivalentes de brometo de cianogénio (Cressman, H.W.J., Org. Syn. Coli. 3:603-609 (1955)) e aquecimento subsequente da cianamida resultante em clorobenzeno com um equivalente de um hidrocloreto da N-monoalquilarilamina do outro parceiro (Kavanaugh, ΙΊ.Ρ. et al . , Proc. Natl. Acad. Sei. (USA) 85:2844-2848 (1988)).

Num aspecto referente a composiçoes, este invento diz respeito a uma composição farmacêutica em forma de dosagem unitária e adaptada para administração sistémica a um indivíduo, por exemplo, um ser humano, compreendendo por dosagem unitária uma quantidade eficaz de uma guanidina tri- ou tetra-substituída, em que a guanidina tri- ou tetra-substituída tem uma elevada afinidade relativamente ao receptor PCP.

Num outro aspecto referente a composições, este invento diz respeito a uma guanidina N,N,N'-tri-substituída de neuroprotecção, a qual exibe uma elevada actividade de ligação relativamente ao receptor PCP em células nervosas de mamíferos, e aos seus sais fisiologicamente aceitáveis.

Num aspecto ainda referente a composiçoes, este invento diz respeito a uma guanidina Ν,Ν,Ν',N'-tetra-substituída de neuroprotecção, a qual exibe uma elevada actividade de ligação relativamente ao receptor PCP em células nervosas de mamíferos, e aos seus sais fisiologicamente aceitáveis.

Num aspecto referente a métodos, este invento diz respeito a um método para o tratamento ou prevenção de certas perturbações neurológicas, incluindo as consequências de apoplexia e danos cerebrais traumáticos, epilepsia ou doenças degenerativas, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma guanidina tri- ou tetra-substituída tendo uma elevada afinidade relativamente ao receptor PCP a um indivíduo com necessidade de tal tratamento. Estas quanidinas tri- e tetra-substituídas possuem utilidade como bloqueadores não competitivos de efeitos mediados por receptores de NMDA.

Num aspecto ainda referente a métodos, este invento dis respeito a um método para melhorar o efeito neurotóxico induzido por glutamato que interactua com o receptor de NMDA de uma célula nervosa, compreendendo a administração a um indivíduo, por exemplo, um ser humano apresentando sintomas de, ou susceptível a, tais tais efeitos neurotóxicos, de uma guanidina tri- ou tetra-substituída tendo uma elevada afinidade relativamente ao receptor PCP da célula nervosa numa quntidade eficas para melhorar o efeito neurotóxico. 0 termo elevada afinidade significa que o composto apresenta uma CI^ de 1 μΜ ou menos num ensaio de ligação ao receptor PCP, mais preferivelmente, no máximo O,5 μΜ, num ensaio típico de ligação ao receptor PCP, como descrito mais adiante.

Num outro aspecto referente a métodos, este invento dis respeito a um método para inibir a neurotoxicidade relacionada com receptor de NMDA-canal de iSes, compreendendo a administração a um mamífero de uma guanidina tri- ou tetra-substituída possuindo uma elevada afinidade relativamente ao receptor PCP de uma célula nervosa, numa quantidade eficas para inibir a neurotoxicidade.

Num outro aspecto referente a métodos, este invento diz ) respeito a um método para o tratamento da doença de Korsakoff, uma situação de alcoolismo crónico, compreendendo a administração a um mamífero de uma guanidina tri- ou tetra—substituída possuindo uma elevada afinidade relativamente ao receptor PCP de uma célula nervosa, numa quantidade eficas para tratar a doença. □ pré-tratamento de animais com o antagonista ΜΚ-ΒΘ1 de NMDA, atenua de maneira acentuada a amplitude da. perda celular, hemorragias e alteraçSes dos amino-ácidos num modelo de ratazana da doença, de Korsakoff. Ver, Langlais, P.J. et al . . Soe.. Neurosci. ftbstr 14;774 (1938). Por conseguinte, as guanidinas tri- e tetra-substituídas do presente invento têm utilidade para a atenuação da perda celular, hemorragias e alteraçSes dos amino-ácidos associadas com a doença de Korsakoff.

Estas guanidinas tri- e tetra-substituídas e outros bloqueadores não competitivos de respostas mediadas pelo receptor de MMDA, podem ser determinadas por meio de um método envolvendo: (a) determinação da afinidade de ligação realativamente ao receptor PCP por meio de deslocamento competitivo de MK.-801 triciado; (b) estudos de citotoxicidade in vitro para medir a capacidade do composto para evitar a morte de células nervosas causada pela exposição ao glutamato; (c> determinação da capacidade de neuroprotecção in vitro utilizando modelos animais.

A avaliação da actividade de ligação de compostos orgânicos relativamente ao receptor PCP ê relizada utilizando ensaios de ligação a radioligandos. Os compostas são testados para determinar a asua capacidade para deslocar ΜΚ-Θ01 triciado, o qual é utilizado para marcar os receptores PCP. Avaliando os dados de ligação por deslocamento competitivo, os compostos preferidos são aqueles que apresentam uma elevada afinidade (isto é, baixo valor de CI^_ft) relativamente aos receptores PCP.

Nos estudos de actividade de ligação a PCP, um valor de d^{e no} máximol μΜ, de preferência de no máximo 0,5 μΜ, indica uma elevada afinidade de ligação.

Nos estudos de ligação a sigma, um valor de CI^^ de pelo menos 1 μΜ indica uma baixa afinidade de ligação. 0 ensaio de ligação ao receptor sigma, de preferÇncia contra ''H-DTG, pode ser realizado como revelado por Weber et al . , Proc. Natl. ftcad. Sei. (USA? 83.:8784-9788 (1886), que é incorporado nesta Memória Descritiva como referência.

«·» )

Nos estudos de neurotoxicidade, neurónios o linhas celulares de mamíferos em cultura que expressam receptores de EEA são expostos in vitro ao glutamato e ao composta sob investigação. A quantidade de uma enzima, lactato-desidrogenase (LDH), libertada a partir das células dentro do meio é uma medida da morte das células. Este ensaio da morte das células in vitro está descrito com maior pormenor mais adiante.

Nos estudos de neurotoxicidade in vivo, pode ser empregado o modelo experimental de McDonald, J.W. et al.. (Em: Sigma and Phencyc1idine-1ike Conipounds as Molecular Probes in

Bioloqy. Ed. Domino, E.F., e Kamenka, J.-M., pp. 697-707 (1888). NPP Books, Ann Arbor, Michigan). Neste modelo, uma injecção, de NMDA dentro de um hemisfério cerebral de uma cria, de ratazana provoca danos no cérebro que se assemelham à lesão produzida por hipoxia-isquemia. A capacidade dos compostos de teste em limitar a lesão induzida por NMDA é uma medida das suas propriedades neuroprotectoras; e, visto que os compostos são administrados intraperitonealmente, o modelo também fornece informação acerca da capacidade dos compostos para atravessarem a barreira sangue-cérebro.

Como anteriormente discutido, as guanidinas tri- e tetra-substituídas do presente invento apresentam elevada afinidade relativamente ao receptor PCP e baixa afinidade relativamente ao receptor sigma. Deste modo, em adição ao tratamento de neurodegeneração e situações relacionadas anteriormente descrito, as guanidinas do presente invento podem ser também utilizadas como um instrumento farmacológica num modelo animal relativamente ao rastreio de ligandos potenciais do receptor F'CF'.

Os compostos deste invento podem ser administradas intranasalmente, oralmente ou por meio de injecção, por exemplo injecção intramuscular, intraperitoneal, subcutânea ou intravenosa , ou por meios transdérmicos, intraoculares ou entéricos. A dose óptima pode ser determinada por meios convencionais. Devido &) à maior parte, senão todas, as guanidinas tri- e tetra-substituídas empregadas neste inventa serem substancialmente insolúveis em ' água, elas são ordinariamente administradas na forma protonada, por exemplo, sob a forma de um sal farmaceuticamente aceitável de um ácido orgânico ou inorgânico, por exemplo hidrocloreto, sulfato, hemi-sulfato, fosfato, nitrato, acetato, oxalato, citrato, maleato, etc.

Os compostos deste invento podem ser empregados em mistura com excipientes convencionais, isto é, substâncias de suporte orgânicas ou inorgânicas, farmaceuticamente aceitáveis, adequadas para aplicação parentérica, entérica ou iritranasal, as quais não reagem prejudicialmente com os compostos activos. Os suportes farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem, mas não limitados a, água, soluções salinas, álcool, óleos vegetais, polietileno-g1icois, gelatina, lactose, amilose, estearato de magnésio, talco, ácido silícico, parafina viscosa, óleo de perfume, monog1icerídeos ou dig1icerídeos de ácidos gordos, ésteres de ácido gordo de petroetral, hidroximetilcelulose, polivini1pirrolidona, etc. As preparações farmacêuticas podem ser esterilizadas e, se desejado, misturadas com agentes auxiliares, por exemplo lubrificantes, conservantes, estabilizadores, agentes de molhantes, emulsionantes, sais para influenciarem a pressão osmótica, tampoões, corantes, substâncias aromatizantes e/ou os aromáticas e outros mais, que não reajem prejudicialmente com compostos activos.

Para aplicação parentérica, são partícularmente adequadas soluçoes, de preferencia soluçoes aquosas ou oleosas bem como ' suspensões, emulsões, ou implantes, incluindo su.posi tór ios. As ampolas são dosagens unitárias convenientes.

Para aplicação entérica, são particularmente adequados os comprimidas, drageias ou cápsulas tendo um ligante de suporte de talco e/ou hidrato de carbono ou outros mais, sendo o suporte preferivelmente lactose e/ou amido de milho e/ou amido de batata. Pode ser utilizado um um xarope, elixir ou outros mais, em que é empregado um veículo edulcorado. Podem ser formuladas composições de libertação prolongada incluindo aquelas em que o ingrediente activo está protegido com revestimentos diferencialmente degradáveis, poe exemplo, por meio de microencapsulação, revestimentos múltiplos, etc.

é preferida a administração intravenosa ou parentérica, por exemplo, administração subcutânea, intraperitoneal ou intramuscular. Os compostos deste invento são particularmente valiosos no tratamento de sujeitos mamíferos, por exemplo seres humanos, em que a patofisiologia da doença envolve a excitação excesiva λν das células nervosas por agonistas do receptor de NMDA. Tipicamente, estes sujeitos incluem os que sofrem de doenças neurodegenerativas tais como doença de Parkinson, doença de Huntington, Esclerose Lateral Amiotrófica (ALS), doença de Alzheimer, Síndroma de Down e doença de Korsakoff. Também adequados para tratamento são aqueles sujeitos que sofrem, ou tem probilidade de vir a sofrer, de disfunções do sistema nervoso resultantes de, por exemplo, epilepsia ou degeneração das células nervosas que resulte de hipoxia, hipog1icemia, isquemia cerebral ou da espinal medula ou trauma na espinal medula. Candidatos típicos para o tratamento incluem os pacientes que sofreram ataque cadíaco, apoplexia, danos cerebrais ou na espinal medula, pacientes que foram submetidos a cirurgia importanteurgia onde a isquemia cerebral é uma complicação potencial e pacientes [diversas! sofrendo de enjoo de descompressão devido a embolias gasosas na corrente sanguínea.

S&2 Deve de ser tomado em consideração que as quantidades realmente preferidas dos compostos activos utilizados poderão variarde acordo comi o compostos especifico que está a ser utilizado, as composições específicas formuladas, o modo de aplicação e o local específico de administração. As taxas de administração óptimas para um dado protocola de administração podem ser facilmente descobertas pelos especialistas nesta técnica, utilizando testes convencionais de determinação de dosagens conduzidos tendo em atenção as linhas de orientação anteriormente referidas.

Do mesmo modo que as guanidinas da Patente dos E.U.A. No. 1 411 713, as guanidias do presente invento podem ser também utilizadas como aceleradores de massagem.

Sem elaboração adicional, acredita-se que um especialista nesta técnica pode, utilizando a descrição precedente, utilizar o presente invento na sua máxima extensão. Ds modelos de realização específicos preferidos são, por conseguinte, para ser entendidos como meramente ilustrativos, e não limitativos da ) parte restante da descoberta seja por que via for.

□ texto completo de todos os pedidos de patente, patentes e publicações, referidos anteriormente e mais adiante, são aqui incorporados como referência.

EXEMPLOS

Nos exemplos que se sequem, os pontos de fusão foram determinados em tubos capilares abertos nom dispositivo de

Thomas-Hoover (compostos que fundem a < 230*0 ou num Melt-Temp •·χ (compostos que fundem a > 230*0 e não são corrigidos. Os espectros de RMN de todos os compostos foram registados num General Electric QE-300, e os deslocamentos químicos são referidos em ppm / relativamente ao sinal residual do solvente deuterado (CHCl-.,

7,26 ppm; HCD^OD, 3,30 ppm; TMS, 0,00 ppm). Os espectros de IV - A - ' foram registados num Nicolet 5DXB FT-IR, ou num Perkin-Elmer modelo 1420 em CHC1_, ou puros. Os espectros de IV e RMN de todos os compostos são consistentes com as estruturas que lhes foram atribuídas. As análises elementares foram levadas a cabo por Desert Analytics (Tucson, AZ), ou Galbraith Laboratories (Knoxville, TM). A N,N-dimeti1-1-nafti 1amina, o brometo de etilo, a N-fenil-l-naftilamina, a 3-etilanilina, a N-eti1-N-l-nafti lamina, o BrCN, o CH..I , o cloreto de ó-bromo-hexanoi1 o, e o butil-lítio (2,5 M) foram obtidos a partir da Aldrich Chemical Company, e utilizados tal como recebidos. A o-toluidina foi obtida a partir da Aldrich e destilada antes de utilização por meio de destilação de ampola para ampola sob pressão reduzida. □ reagente de pulverização verde de bromocresol foi adquirido a partir da Sigma Co.

mm)

A dimeti1formamida e a trietilamina foram agitadas em CaSO^, destiladas sob pressão reduzida, e armazenadas sobre crivos moleculares. □ clorobenzeno foi destilado antes da utilização a partir de CaCH^. 0 éter e o tetra-hidrofurano foram submetidos a i refluxo sobre sódio e benzofenona, e destilados antes da utilização sob N₇. Todos os outros solventes eram do grau reagente.

Exemplo 1

Preparação do hidrocloreto de N-metil-N,N'-di-(1-naftil)quanidina (Composto IV) a . N-Meti 1 -N-( 1-naf ti 1 )cianamida

Num balão de fundo redondo de duas tubuladuras, equi-X P ado com um agitador magnético e com condensador de refluxo, foi colocada N,N-dimeti1-1-nafti 1amina (4,35 g, 25,4 mmol), e BrCN t· (2,9? g, 28,2 mmol) numa única porção. Esta suspensão foi colocada num banho de óleo (pré-aquecido, 90°C) e deixada a agitar e ao refluxo sob azoto durante 21 horas. Durante este tempo libertou-se um gás, que foi detectado por um borbulhador colocado sobre o condensador de refluxo. A reacção foi seguida por TLC, utilizando cloreto de metileno coma solvente e observada sob UV. Depois de 21 horas, a mistura foi arrefecida, foram adicionados 100 ml de éter e o sal quaternária insolúvel (669 mg) foi separado por filtração. 0 filtrado éter foi extraído com uma solução aquoasa de HC1 5M (4 x, 30 ml) e lavado com água (5 x, 20 ml). 0 éter foi seco sobre K_oC0_. granular anidro, filtrado, em seguida concentrado até à secura, depois destilado por destilção de ampola para ampola a pressão reduzida de modo a proporcionar o óleo amarelo da N-meti 1-N-( 1-naf ti 1 ) c ianamida. (2,22 g, 487., p.e. 18O‘^:’C/1,5 mm Hg (Cressman, Homer, W.J., Org. Syn th. vol. colectivo 3, &08), 170-171°C/1 mm Hg).

Γν (CDCl^.) 3065, 2943, 2256, 2218, 1394 cm .

RMN (CDC1-.) S 7,92 (d, IH) , 7,69 (d, IH) , 7,56 (d, 1H> , 7,33 (m, 4H), 3,21 (s, 3H>.

Num balão de fundo redondo de três tubuladuras, equipado com um agitador magnética e com condensador de refluxo, foi colocada uma suspensão de hidrobrometo de í-nafti lamina (181 mg, 0,834 mmoi) em clorobenzeno seco (5 ml) e deixada a agitar e sob azoto durante 15 minutos. Foi adiconada, gota a gota, uma solução de N-metil-N-(1-naftil)cianamida <141 mg, 0,774 mmoi), em diclorobenzeno seco à suspensão de hidrobrometo de naftilamina durante

2,5 minutos. A reacção foi em seguida colocada num banho de óleo pré-aquecido (150°C) e submetido a refluxo durante 5 dias. A reacção foi seguida por meio de TLC (EtOH-CHCl-,) . 0 clorobenzeno foi removido por meio de evaporação sob pressão reduzida e aquecimento. 0 óleo resultante foi em seguida removido em EtOH <5 ml), adicionaram-se 40 ml de água e em seguida a mistura foi tornada básica por meio da adição de NaOH (12 ml). A solução foi em seguida extraída com CHCl-, (4 x 8 ml) e seca sobre K_oC0_,, e filtrada. 0 solvente foi em seguida removido de modo a obter-se um óleo castanho (322 mg). Este óleo foi foi dissolvido em 1 ml de CHCl-, e colocado sobre uma placa de TLC prep. e eluído com EtOH/CHCl^ (1:1) uma vez. A banda a R^ 0,2 foi removida a partir de gel de sílica com EtOH e concentrada até à secura (87,2 mg). Isto foi em seguida dissolvido em EtOH (2 ml), colocado num banho de gelo, e foi-lhe adicionado HC1 5 N (1 ml). 0 sal solúvel resultante foi concentrado até à secura de modo a produzir um óleo púrpura. Este óleo púrpura fDi dissolvido em EtOH (1 ml) e colocado numa câmara de difusão de éterdurante 5 dias de modo a obterem-se cristais castanho-amarelados densos. Estes foram recolhidos e retomados em EtOH (1 ml) e descorados com carvão vegetal activado (20 mg) e separados por meio de filtração através de um leitro de adjuvante de filtração Celite (0,5 cm) de modo a obter-se um filtrado transparente o qul foi imediatamente colocado numa câmara de difusão de éter. Depois de um dia os montes resultantes de cristais brancos foram recolhidos e secos de modo a obter-se o N-meti1-Ν,M'-di-(1-nafti 1)guanidinaHC1 (26,3 mg, 0,074 mmol, 107.), p.f. 249-250*C.

IV (KBr) 3075, 2925, 1656, 1619, 1594, 1306, 1394 cm

H RMN (CB_OB) 8,1-7,5 (m, 14), 3,69 (s, 3) ¹-‘C RMN (CD^OD) CN,, 158,6; Ar, 138,1, 136,8,

131.5, 130,7, 130,3, 129,7, 129,3, 128,4, 128,3,

127.5, 127,6, 126,8, 122,9, 122,4; CRU, 40,81.

136,2, 132,0,

123,0, 127,5,

Análise Calculada para C^H^N-.HCl: C, 73,02; H, 5,57; N, 11,61.

C, 73,15; H, 5,49; N, 11,74.

Encontrado:

Exemplo 2

Preparação da N,N^J-di-(m-etilfenil)-N—metilquanidina (Composto V)

a. N-(m-Eti1feni1)-N-metileianamida

Uma solução de m-eti1feniIcianamida (1,46 mg, 10 mmol) e hidreto de sódio (480 mg, 20 mmol, pré-aquecido três vezes com hexano) em THF anidro (10 ml) foi aquecida a 80-85°C durante

2,5 horas. Depois de ter sido deixado arrefecer até à temperatura ambiente, foi adicionado iodeto de metilo (3,5 g, 25 mmol) e a agitação continuou à temperatura ambiente durante 2 horas. Foi adicionado metanol (10 ml) seguido por água (2Θ ml) e a mistura reaccional foi extraída com diclorometano (3 x 25 ml), A concentração da camada orgânica seguida pela cromatografia flash sobre SiC^ produziu a N-(m-eti1feni1)-N-metiIcianamida (960 mg, 607) sob a forma de um líquido incolor:

IV (filme) 2220, 340Θ cm

b.

Uma mistura de N-(m-eti1feni1)-N-metilcianamida (640 mg, 4 mmol) e hidrocloreto de m-etilani1ina (630 mg, 4 mmol) foi colocada num banho de óleo pré-aquecido a 160°C durante

2,5 horas e em seguida deixada arrefecer até á temperatura ambiente. 0 sólido resultante foi tomado em diclorometano e lavado com solução de NaOH a 107.. A camada orgânica foi concentrada e o resíduo foi submetido a cromatografia flash” sobre SiO^ de modo a obter-se N,N'-di-(m~eti 1feni1)-N-meti1guanidina (630 mg, 567) sob a forma de um líquido incolor:

IV (CHC1-.) 1630, 3400, 3500 cm *.

¹H RMN (CDCip S 1,21-1,29 (m, 6H), 2,58-2,72 (m, 4H), 3,40 (s,

3H), 6,79-7,33 (m, 8H).

Análise Calculada para C,_OH-^N^: C, 76,83; H, 3,24; N, 14,83. Encontrado: C, 76,50; H, 8,06; N, 14,97.

«tf*

Exemplo 5

Preparação do hidrocloreto de N—metil—N—<1—naftil)—N'—(o—isopro— pilfenillquanidina (Composto VI) ) a. Hidrocloreto de isopropílaniIina

A o-isopropilanilina (11,2 g, 79,1 mmol) foi dissolvida em éter (60 ml) e o êter saturado com gás HCI foi adicionado gota a gota de modo a produzir um precipitado branco. O precipitado

foi recolhido e seco (13,0 q). □ precipitada (2,23 g, 13,6 mmol ) foi dissolvido em etanol (6 ml>, foi adicionado carvão vegetal activado (SOO mg), e a mistura foi filtrada através de um adjuvante de filtração de celite» D filtrado transparente resultante foi colocado num tubo centrífuqo e foi adicionado éter (28 ml) Λ lentamente de modo a obterem-se agulhas brancas (1,06 g, 6,16 mmol), p.f. 183-184^ο0.

,) ^-RMN (CD-.DD) 1,30 (d, 6), 3,10 (sept, 1), 7,32 (m, 2), 7,43-754 (m, 2) .

A-ή

b. N-Meti1-N-(l-naftil)-N'-(o-isopropiIfeni1)quanidina

Num balão de fundo redondo de 5 ml foram colocados N-meti1-N-naftilamina (227 mg, 1,25 mmol) e hídrocloreto de o-isopropi1ani1ina (236 mg, 1,37 mmol) e uma barra de agitação.

Esta mistura 2,5 horas. 0 amarelada foi óleo vítreo aquecida e passada com N^, durante castanho-amarelado foi arrefecido, dissolvido em metanol (2 ml) e uma pequena fracção foi removida e analisada a mancha sobre uma placa de TLC a qual foi eluída com CHCl_,:EtOH (2:1). A TLC mostrou uma mancha com 0,0-0,1 que deu origem a uma mancha, azul quando pulverizada com reagente de pulverização de verde de bromocresol (obtido e utilizado tal como recebido da Aldrich Chemical Co.), e manchas pálidas dos materiais de partida com R^'s 0,6-0,7. A solução castanho-amarelada restante foi adicionada a água (20 ml), em seguida foi adicionado NaOH 0,1 N (10 ml) a esta solução numa única porção de modo a originar a base livre. A solução leitosa foi em seguida extraída com CH^Cl^, (4 x, 10 ml), seca sobre K„CCU, filtrada, e concenxl x_ 4^ . .*» * trada até à secura de modo a obter-se um óleo castanho (375 mg). Este óleo castanho foi absorvida sabre gel de síulica (100 mg) e colocado no topo de uma coluna de gel de sílica de 18 g pré-eluída com CH^Cl»,. A coluna foi eluída com CH^Cl^ <50 ml),

CH₂Cl_o:Et0H (25:1, 50 ml), CH^Cl^zEtOH (10:1, 50 ml), e em seguida CH_nCl,-,:EtQH (1:1, 50 ml). Foram tomadas TLC's (eluindo com CHCl,:EtOH, 1:1) de cada fracção e as fracções com R^ semelhante de 0,1 foram combinadas e concentradas até à secura de modo a originarem um óleo púrpura (338 mg). Este foi em seguida dissolvido em éter (10 ml) e o precipitado púrpura insolúvel foi rejeitada. A solução solúvel foi colocada num tubo centrífugo e foi adicionado, gota a gota, éter saturado com gás HC1 de modo a obter se um sólido púrpura pegajoso sob a forma do sal hidrocloreto (30ó mg). 0 sólido pegajoso foi concentrado até á secura, em seguida dissolvido em EtOH (1 ml) e colocado numa câmara de difusão de vapor de éter durante 2 dias até se produzirem prismas cor de rosa. Os prismas foram recolhidos e secos, dissolvidos novamente em EtOH (1 ml), em seguida filtrados através de adjuvante de filtração de Celite depois da adição de carvão vegetal activado (40 mg). 0 filtrado foi em seguida colocado num balão erlenmeyer e colocado numa câmara de difusão de vapor de éter de modo a obterem-se, depois de um dia, prismas cor de rosa (205 mg, 467.), p.f. 231-232'^:'C.

^H-RMN (ambiente, CD-.OD) 1,03-1,24 (d largo, ó), 3,61 (s, 3), 7,21-7,47 (m largo, 4), 7,65-8.08 (m, 7).

^-'C-RMN (CD..DD) , CN^. 157,8; Ar, 146,7, 138,2, 130,1, 129,5, 123,8, 128,6, 127,7, 127,0, 126,9, 126,3, 126,0, 124,9, 120,9; CH, 39,1; (CH,)₂CH, 62,7, 27,9, 22,3.

IV(KBr), 3Θ62, 2969, 2869, 2750, 2363, 1975, 1662, 1619, 1550, 1444, 1406, 1206, 1088 cm^-1.

Espectrometria de massa m/e Calculado para C^,H^,N,

Z 1 Ζ. O ·_*»

Encontrado

317,1892,

317,1890.

.- 38 Exemplo 4 **

Preparação do hidrocloreto de N-(1-nafti 1)-N'-(m-etilfeni1)-N*-metilquanidina (Composto VII)

Uma mistura de m-eti1feni1-N-meti1cianamida (520 mg, 3,25 mrnol) e hidrocloreto de 1-aminonaftaleno (508 mg, 3,25 mrnol) foi colocada num banho de óleo prè-aquecido a 160°C durante 3 horas e em seguida deixada arrefecer atê à temperatura ambiente.. 0 sólido resultante foi tomado em diclorometano e lavado com solução de NaOH a 107. A camada orgânica foi concentrada e o resíduo resultante foi dissolvido em EtOH abs. (2 ml) e tratado com HC1 dil. Foi concentrado e o sólido foi duas vezes recrista1izado a partir de EtOH-Et^O de modo a obter-se hidrocloreto de N- (1 -naf ti 1 )~N'-(m—eti 1 feni 1 )-N' -meti lguanidina (403 mg, 377.) sob a forma de agulhas esbranquiçadas, p.f. 223-25°C.

IV (CHCl^): 1630, 3400 cm^-1.

(CD^OD) * 1,275 (t, 3H, J = 7,9Hz), 2,742 (q, 2H, J =

7,9Hz), 3,555 (s, 3H), 7,30-8,01 (m, 11H).

Análise Calculada para C₇₀H₇jN^C1: C, 70,67; H, 5,93; N, 12,36. Encontrado: C, 71,0Θ; H, 6,55; N, 12,10.

Exemplo 5

Preparação de_N-(1-naftil)-N*-(m-etilfenil)-N'-etilguanidina (Composto VIII) am-E ti 1feniIcianamida.

Uma solução de brometo de cianogénio (3,31 g, 31,26 mmol) em Et^,0 (25 ml) foi adicionada lentamente a uma solução agitada de m-eti 1 ani 1 ina (6,06 g, 50 mmol) em Εΐ^,Ο (5Θ ml) e a agitação continuou à temperatura ambiente durante 6 horas. Um precipitado branco de hidrobrometo de m-etilanilina (4,46 g) foi separado por meio de filtração, e o filtrado foi lavado com H^O (2 x 20 ml). A evaporação da camada éter forneceu o composto em epígrafe (3,85 g, 96,5X) sob a forma de um liquido espesso.

IV (filme): 2225 cm’¹.

b. N-(m-Eti 1feni1)-N-eti1c ianamida:

Uma suspensão de m-eti1feniIcianamida (2,26 g, 15,45 mmol) e hidreto de sódio (820 g, 34,2 mmol, pré—lavado três vezes com hexano) em THF anidro <20 ml) foi aquecida a 80-85°C durante 2,5 horas. Depois de ter sido deixada arrefecer até à temperatura ambiente, foi adicionada brometo de etilo (4,66 g, 42,76 mmol) e a agitação continuou à temperatura ambiente durante 6 horas. Foi adicionado metanol (20 ml) seguido de água (40 ml) e em seguida extraído com diclorometano (3 x 25 ml). A concentração da camada orgânica seguida por cromatografia flash rápida deu origem ao composto em epígrafe líquido amarelo claro:

2, 06 mg ,

387.) sob a forma de um

IV (filme): 2220 cm „

c. N-(1-Naf ti 1)-N'-(m-etiIfeni1)-N'-etilguan idina

Uma mistura de N-(m-eti1feni1)-N-etiIcianamida (500 mg, 2,86 mmol) e hidrocloreto de 1-aminonaftaleno (520 mg, 2,86 mmol) foi colocada num banho de óleo prê-aquecido a 160-'C durante 2 horas e em seguida deixada arrefecer até à temperatura ambiente» 0 sólido resultante foi tomado em diclorometano e lavado com solução de NaOH a 107. A camada orgânica foi concentrada e o resíduo resultante foi submetido a cromatografia flash de modo a obter-se IM- (1 -naf ti 1) -N'-( m-eti 1 fen i 1 ) -N ' -eti 1 guanidina (610 mg, 677) sob a forma de um líquido castanho-claro.

IV (CHC1-.): 1625, 3400, 3500 cm *H-RMN (CDCl^) «1,28 (t, 3H, J = 7,6Hz), 1,36 (t, 3H, J = 7,0Hz), 2,70 (q, 2H, J = 7,6Hz), 4,08 (q, 2H, J = 7,0Hz>, 7,52-7,05 (m, 7H), 7,82 (dd, ÍH, J = ó,66 e 3,21Hz), 8,2 (t, ÍH, J = 5,96Hz).

Exemplo 6

Preparação do hidrocloreto de N,Ν' —di—<1—naftil)—N—etil—guanidina (Composto IX)

Uma mistura de brometo de cianogénio (3,32 g, 31,3 mmol) e N,N- dieti1 — 1-nafti lamina (5 g, 25 mmol) foi aquecida

Preparação de N-eti1-N-(1-naf ti Iicianamida a 100*C durante 4 horas sob azoto. Foi em seguida deixada arrefecer até à temperatura ambiente, foi adicionado éter, e o hidrobrometo de N,N-dieti 1 -1.-nafti 1 aiiina ^fsi sccaradc- ;cr -neio de filtração. A camada de éter foi lavada com solução aquosa ^:.· 15% de HC1 <2 29 r; I ' ₅ iqua '2 ; FC' ml’, e seca sobre NgSC, . Foi trado, concentrado e o resíduo foi submetida a cromatografia flash” sobra gel de sílica de modo a obter-se a N-etiul-N-(l--naft.il )-cianamida (2,34 g, 48%> sob a forma de um líquido amarelo espesso.

Preparação do hidrocloreto de N,N'-di-(1-nafti 1)-N-etiI-quan i d i. n a

Uma mistura de hidrocloretc· de 1-naftilamina (520 mg, 2,9 mmol) e N-eti 1 -N-( 1 -nafti 1 )cianamida (57€> mg, 2,9 mmol) foi aquecida sob azoto a 180°C durante 3 horas. Foi deixada arrefecer atê à temperatura ambiente até se obter um sólido castanho—claro transparente. Foi dissolvido em diclorometano (35 ml) e lavado com solução aquosa de NaOH a 107. (10 ml) e em seguida seco sobre NaSO^. Foi filtrado, concentrado e o resíduo foi submetido a cromatografia flash sobre gel de sílica de modo a obter-se um líquida espessa incolor. Este fai tratado com metanol 0,5 M-solução de HC1 à temperatura ambiente durante 4 horas e em seguida concentrado de modo a obter-se um sólido branco brilhante (230 mg, 22,5%).

IV (CHCl^l: 1650, 3400 cm^-1.

J

RMN (CDCl-,.): δ 1,21 (t, 3H, ΰ = 7,5Hz), 3,68 (q, 2H, J = 7,5Hz),

7,32-7,87 (m, 14H).

Exemplo 7

Preparação do hidrocloreta de N-metil—N'-fenil—Ν,Ν'-di-(1-naftillguanidina (Composto X)

a. Hidrocloreto de N-fenilnaftilamina

Num balão de fundo redondo de 15 ml foi colocada N-feni1-1-nafti lamina (1,41 g, 6,44 mmol) a qual foi destilada sob pressão reduzida de modo a produzir um óleo púrpura claro com ’«0 montes cristalinos brancos sobressaindo. Esta suspensão foi ·, dissolvida em éter (50 ml) e arrefecida num banho de gelo. A solução arrefecida foi adicionado éter (25 ml) saturado com gás

HC1 de modo a produzir um sólido púrpura claro o qual foi recolhido e seco. O sólido púrpura foi em seguida dissolvido em MeOH (20 ml) com aquecimento e deixado a assentar sem perturbação de modo a formar folhinhas cor de rosa claras do sal de HC1 (963 mg, 3,77 mmol, 60'/.), p.f. 164-167^,:,C.

b. Hidrocloreto de N-meti1-N'-feni1-N,N'-di-(1-nafti1)quanidina

Num balão de fundo redondo de 5 ml foram colocados N-meti1-N-(1-nafti 1)cianamida (447 mg, 2,45 mmol; Cressman,

Orq. Synth., Coli,, Vol.III, 608 (1955)), hidrocloreto de

N-fenilnaftilamina (668 mg, 2,61 mmol) e uma barra de agitação. D balão foi evacuado através de aspirador e cheio com N^,. 0 recipiente de reacção foi em seguida colocado num banho de óleo pré-aquecido a ÍSC^C e deixada a agitar sob N₇ durante 3 h. Depois de 5 min resultou um fundido castanho-amarelado que escureceu atê uma cor castanha depois de 15 minutos. 0 fundido castanho foi arrefecido até à temperatura ambiente e dissolvido em MeOH (5 ml). A solução castanha foi em seguida vertida num funil separador contendo NaOH 0,1 N (30 ml) de modo a obter—se um óleo castanho-amarelado leitosa o qual foi extraída com CH^Cl^,. As fracçSes foram combinadas e concentradas até á secura de modo a produzir-se um óleo castanho (990 mg). 0 óleo castanho foi dissolvido em éter (20 ml> e o precipitado resultante foi separado por filtração e rejeitada. A solução em éter castanha foi extraída com solução de HC1 1 N (5 x 10 ml) e foram combinados todos os extractos. A solução castanho amarelada fDi em seguida tornada básica por meio da adição de peletes de NaOH até pH 12 e extraída com CH^Cl^, (4 x 10 ml) até se produzir um óleo púrpura (439 mg) após concentração até à secura. 0 óleo púrpura foi depositado sobre qel de sílica (500 mg) e colocado no topo de uma coluna de gel de sílica (20 g„ 3 cm de diâmetro). A coluna foi eluída com 50 ml de quantidades crescentes de CH^Cl^, em hexano seguido por quantidades crescentes de EtOH em CH^Cl^. Foram tomadas TLC's de cada fracção e aquelas que produziram uma mancha de absorção por UV de R, 0,0-0,1 quando eluídas com CH^Cl^iEtOH l -ú.

(9:1) e uma cor azul quando pulverizadas com reagente de pulverização de verde de bromocresol foram combinadas e concentradas até à secura de modo a produzirem um óleo acinzentado (150 mg). Este óleo foi dissolvido em éter (15 ml) e filtrado. 0 filtrada de éter foi arrefecido num banho de gelo e fDi adicionado, gota a gota, éter saturada com gás HC1, de modo a obter—se um óleo verde claro (49,5 mg) após secagem. 0 óleo foi dissolvido em EtOH (0,5 ml) e colocado numa câmara de vapor de éter durante 2 dias de modo a obter—se o hidrocloreto de N-metil-N'-feni 1-N,N' -di-(1-naftil)guanidina sob a forma de estrelinhas cristalinas (30,3 mg, 0,070 mmoi, 37.), p.f. 270-272^0.

A ^-RMN (CD^OD) 3,60 (s, 3), 6,80-7,64 (m largo, 19).

IV (KBr) 3520, 3438, 3045, 2934, 1674,

1393, 1275, 1117, 1076 e 1018 cm¹.

1598, 1568, 1486,

1416, de massa m/e:

Espectrametris

Calculado para C^^H^^N

z.U z.j ·

Encontrado

401,1892, 401,1880.

Exemplo 8

Preparação do hidrocloreto de N-metil-N'-fenil-N,Ν'-di-(1-naftil ) guanidina (Composto XI) a Hidrocloreto de N-etil-l-naf tilamiria

Num tubo centrífugo de 50 ml foi colocada N-eti1-1-naftilamina (1,57 mg, 9,16 mmol) dissolvida em éter (20 ml). A esta solução foi adicionado éter, saturado com gás HC1, de modo a obter-se um precipitado cor de laranja claro. 0 precipitado foi recolhido e seco. C precipitado foi em seguida dissolvido em MeOH (50 ml), descorado com carvão vegetal activado (150 mg) e filtrado através de um leito de adjuvante de filtração de Celite de modo a obter-se uma solução castanho-amarelada clara. D excesso de MeOH foi evaporada eixando um óleo o qual formou agulhas brancas após repousar. Foi adicionado éter à mistura (12 ml) e a suspensão foi deixada repousar durante 20 horas. As agulhas cor de rosa claro resultantes foram recolhidas e secas (1,43 g, 7,12 mmol, 787), p.f. 218-220°C.

^-RMN (CD_»OD) 1,44 (t, 3), 3,36 (q, 2), 7,59-8,08 (m, 7).

b. Hidrocloreto de N-meti1-N*-eti1-N,N'-di-(1-nafti 1)quanidina

Num balão de fundo redonda de 5 ml foram colocados N-meti1-N-(1-nafti 1)cianamida (594 mg, 3,25 mmol), hidrocloreto de N-etil-l-naftilamina (678 mg, 3,25 mmol, 1,01 eq) e uma barra ή

de agitação. 0 balão foi evacuado através de aspirador e em seguida cheio com N^. 0 recipiente de reacção foi em seguida colocado num banho de óleo pré-aquecido a 150°C durante 10 min, em seguida a temperatura foi gradualmente aumentada até 175‘''C de modo a formar um fundido amarelo. Este foi deixado a agitar sob N_r, durante 3,5 h. Depois do tempo indicado, a mistura reaccional tinha-se tornado de cor castanha. Esta solução castanha foi colocada num funil separador contendo NaOH 0,1 N (30 ml) e extraída com CH^Cl^, (4 x 10 ml). As fracções foram combinadas e concentradas até à secura de modo a produzir-se um óleo castanho-amarelado (1,19 g). Q óleo castanho-amarelado foi depositado sobre gel de sílica (500 mg) e colocado no topo de uma coluna de gel de sílica (20 g, 3 cm de diâmetro) e foi eluído com quantidades crescentes de CH^Cl^, em hexano seguido por CH^Cl^,, CH^Cl^íEtDH (50:1) e CH^C 1^,: EtOH (4:1). Foram tomadas TLC's de cada fracção e aquelas que produziram uma mancha de absorção por UV de Rj 0,0-0,15 quando eluídas com CH^Cl^zEtOH (8:1) e uma cor azul quando pulverizadas com reagente de pulverização de verde de bromocresol, foram combinadas e concentradas até à secura de modo a produzirem um óleo castanho-amarelado (499 mg). O óleo castanho-amarelado foi dissolvida em éter (10 ml) e filtrado. Ao filtrada de éter foi adicionado, gota a gota, éter saturado com gás HC1, de modo a obter—se um óleo castanho-amarelado. Este óleo foi dissolvido em EtOH (1 ml) e colocado numa câmara de difusão de vapor de éter durante dois dias de modo a obter—se uma espuma castanho-amarelada depois de seco (439 mg). Uma porção da espuma castanho-amarelada (121 mg) foi novamente convertida na base

livre por	meio da	adição	de
(4 x 8 ml)	. A base	1 ivre,	um
solvida em	éter	(20 ml)	em

aguida extraída com solução de HC1 1 N (4 x 8 ml). 0 extracto aquoso amarelo combinado foi em seguida tornado básico por meio da adição de peletes de NaOH até pH 12 e extraído com CH_OC1_O (4 x 8 ml) de modo a obter-se um óleo vítreo castanha-amarelado (1Θ8 mg). 0 óleo castanho amarelado foi dissolvido em éter (4 ml) e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionado, gota a gota, éter (25 ml) saturado com gás HC1 de modo a obter-se uma espuma castanho-amarelada (95,2 mg) depois de evaporação do solvente. A espuma castanho-amarelada foi dissolvida em EtOH (2 ml) e colocada numa câmara de difusão de vapor de éter durante 4 dias de modo a obter—se um óleo castanha-amarelado, o qual deu origem a uma espuma castanho-amrelada (68,0 mg) depois de secagem. A TLC revelou uma única mancha a R^ 0,02-0,10 quando eluída com CH^Cl:EtOH (8:1). A espuma castanho-amarelada foi em seguida dissolvida em CHC1.,. (0,5 ml) e foi adicionado hexano (2 ml). Depois de 1 dia a -20°C formou-se um óleo castanho-amarelado. A este foi adicionado hexano (15 ml) de modo a produzir-se uma mistura turva branca e depois de repousar a -20°C durante 3 dias formaram-se uns pocos de montes de estrelinhas cristalinas brancas. Estes cristais foram recolhidos e secos (8,10 mg, 0,021 mmol), p.f. 135-137*C.

^H-RMN (CD..OD) 1,1B (t largo, 3), 3,45 (s, 3), 3,89 (q largo, 2), 6,67-7,67 (m largo, 14).

^loC-RMN (CDC1₃, base livre) CN-, 163,7; Ar, 143,0, 141,0, 134,4,

40,4; CH₇CH₃,

Espectrometria de massa (sal de HC1) m/e Calculado para C

Encontrado

1556,

Exempla 9

PreparacSo da hidrocloreto de N-metil-N'-(m-etilfenil)-N-<1-naftil)quanidina (Composto XII)

a. . Hidrocloreto de 3-etilani1ina

Num tubo centrífugo de 50 ml foi colocada 3-eti1ani1ina <1,34 mg, 11,1 mmol) dissolvida em éter (20 ml). A esta solução foi zidicionado éter (25 ml), saturado com gás HC1, de modo a obter-se um precipitado branco o qual foi recolhido e seco. 0 pó branco foi dissolvido em EtOH (2 ml), e cristalizado por meio da adição, gota a gota, de éter (15 ml) de modo a obterem-se folhinhas brancas (1,21 g, 7,64 mmol, 697) , p.f. 159-160*C.

b. Hidrocloreto de N-meti1-N'-(m-eti1feni1)-N-(1-nafti 1)quanidina

Num balão de fundo redondo de 5 ml foram colocados N-metil-N~<l~naftil)ciariamida (491 mg, 2,70 mmol; Cressman,

Qrq Synth., Coli.. VdI.III, 608 (1955)), hidrocloreto de

3-etilani1ina (383 mg, 2,43 mmol, 0,9 eq, p.f 159-160°C) e uma barra de agitação. O balão foi evacuado através de aspirador e cheio com N_o. 0 recipiente de reacção foi imediatamente colocado num banho de óleo pré-aquecido a ÍSO^C e deixado a agitar sob N^, durante 4 h. Depois de 2 min a reacção tornou-se num fundido amarelo claro. Depois de 4 h, fundido amarelo foi deixado chegar j até á temperatura ambiente e, em seguida, foi dissolvido em MeOH (2 ml). Esta solução amarela foi em seguida adicionada a um funil separador contendo NaOH 0,1 N (40 ml) a qual foi extraída com CH2CI,, (4 x, 8 ml). As fracções foram combinadas e concentradas até à secura de modo a produzir-se um óleo castanho-amarelado escuro (824 mg). 0 óleo castanho amarelado escura foi dissolvido em éter e filtrado» 0 filtrado foi em seguida colocado num funil separador e extraído coin solução de HC1 1 N (4 , 8 ml). A camada aquosa foi peletes de em seguida tornada NaOH até pH 12, em básica por meio da adição de seguida extraída com CH._,C1^. 0 extracto foi concentrado até à secura de modo a produzir um óleo castanho amarelado (725 mg). 0 óleo castanho-amarei adc· foi depositada sobre gel de sílica (600 mg) e colocado no topo de uma coluna de gel de sílica (32 g, 3 cm de diâmetro). A coluna foi eluída com 50 ml de quantidades crescentes de CH^Cl,-, em hexano seguido por CH_oCl_r,, CH_,C 1 : E tOH (50:1) e EtOH. Foram tomadas TLC's de cada fracção e aquelas que produziram uma mancha de absorção por UV de R 0-0,15 quando eluídas com CH^Cl:EtOH (8:1) e uma cor azul quando pulverizadas com reagente de pulverização de verde de bromocresol foram combinadas e concentradas até à secura de modo a produzirem um óleo castanho-amarelado (543 mg). Este óleo castanho-amarelada foi dissolvida em éter e filtrado. 0 filtrado foi arrefecido num banho de gelo e foi adicionado éter saturado com gás HC1, de modo a obter-se uma espuma castanho-amarelada clara do sal de HCL após secagem (470 mq ) . Esta espuma castanha-amarelada óleo foi dissolvida em EtOH (1 ml) e colocada numa câmara de difusão de vapor de éter durante 2 dias de modo a obter se um óleo castanho-amarelado. Depois de secagem, o óleo castanho amarelado formou uma espuma castanho-amarelada clara que se tornou num pó castanho-amarelado claro (337 mg, 1,11 mmol, 417.), _P.f. 56-66*0.

H-RMN (CD..OD) 1,23 (t largo, 3), 2,65 (q largo, 2), 3,61 (s, 3), /,05-7,35 (m largo, 4), 7,61-7,7); 2) .

(m, 4), 7,93 (d, 1), 8,03 (d, ^loC (CDCl^, base livre) CN^., 152,2; Ar, 145,3, 139,8, 134,6, 130,5, 129,8, 128,9, 128,4, 128,3, 127,1, 126,5, 126,0, 125,8, 123,2, 122,5, 122,2, 120,8; CH,, 38,8; CH_OCH^, 26,8, 15,3.

IV (KBr) 3056, 2969, 2931,

1506, 1456, 1406, 1263, 1169,

2375 / τ j}

1044 cm 1

1644, 1594,

1550,

Exemplo 10

Preparação do hidrocloreto de N,N'-di-(1-naftil)-N—fenilquanidina (Composto XIII) hidrocloreto de N-feni1-1-nafti 1amina (820 mg,

3,2 mmol) foi finamente moído com 1-naftilcianamida (540 mg, *A

3,2 mmol) e o pó púrpura resultante foi aquecido sob uma atmosfera de N_? a 175°C, durante 2 h. 0 óleo castanho pegajoso resultante (911 mg, 677) foi tratado com uma mistura de (25 ml) e NaOH 1 N (25 ml) e chocalhada num funil separador. A camada aquosa foi extraída com CH^Cl^, e as fracçoes orgânicas combinadas foram extraídas com HC1 1 N. 0 extracto aquoso foi basificado com NaOH e a mistura branca turva resultante foi extraída com CH^Cl^,. 0 extracto foi seco sobre K^CO,, filtrada, e evaporada, dando origem a um óleo castanho amarelado (824 ml). A TLC (CH^Cl^) mostrou duas manchas, R^. 0,0 e 0,7, e a mancha inferior deu origem a uma cor característica da guanidina com verde de bromocresol. 0 óleo foi cromatografado sobre gel de sílica (12,7 g). A eluição com CH_OC1^ deu origem à amina de partida. A eluição jL. Z.

continuada com EtDAc deu origem à base livre sob a forma de um óleo castanho-amarelado (533 mg). Uma amostra de 30 mg do óleo foi dissolvida em éter e tratada com éter saturado com HC1. A evaporação deu origem a um precipitado amarelo (33 mg, 997) o j qual foi tomado em EtOH e colocada numa câmara de difusão de éter de modo a obterem-se agulhas cinzentas do sal hidrocloreto (31 mg, 987), p.f. 194-198*8.

Exemplo Í1

Preparação do hidrocloreto de N,N*-di-metil-Ν,Ν'-di-(1-naftil)guanidina (Composto XVIII)

Num balão de fundo redondo de 5 ml foram colocados 546 mg (2,99 mrnol) de N-meti1-1-nafti 1cianamida (Cressman, Homer, W.J., Org. Synth., vol, colectivo 3, 608), 576 mg (2,89 mrnol) de hidrocloreto de N-meti1-1-nafti 1amina (von Braun, Heider, e duller, Ber., 51 , 281 (1918)) e uma barra de agitação. □ balão foi evacuado através de aspirador e em seguida cheio com N^. Este foi imediatamente colocado num banho de óleo pré-aquecido a 150*0 a deixado a agitar sob N^, durante 4 h„ 0 vidro castanha resultante foi dissolvido em MeOH (2 ml) e adicionado a NaOH 0,1 N (30 ml), o qual foi extraído com CH^Cl^, de modo a produzir um óleo vermelho depois de secagem (1,08 g). 0 óleo foi tratado com éter (20 ml) e o precipitado resultante foi recolhida e rejeitado. 0 filtrado de éter foi extraído com solução de HC1 1 N e as camadas combinadas foram tornadas básicas por meio da adição de peletes de NaOH (500 mg) até pH 12 e extraídas com CH^Cl^, de modo a obter-se um óleo vermelho depois de secagem (1,05 g). 0 óleo foi depositado sobre gel de sílica e colocado no topo de uma coluna de gel de sílica (20 g, 3 cm de diâmetro) e foi eluída com hexano, proporções crescentes de hexanozCH^ClCH^Cl^,, proporções crescentes de CH^Cl^iEtOH e EtOH. Foram tomadas TLC's de cada fracção e aquelas com um 0,0-0,02 quando eluídas com CH-jCl^:EtDH (8:1) e uma cor azul quando pulverizadas com reagente de pulverização de verde de bromocresol, foram combinadas e concentradas até á secura de modo a produzirem um óleo castanho-amarelado (505 mg). 0 óleo foi tratado com êter (20 ml) e o precipitado resultante foi separado por meio de filtração e rejeitado. 0 filtrado de éter foi arrefecido num banho de gelo e foi adicionado, gota a gota, éter (10 ml) saturado com gás HC1, de modo a obter-se uma espuma castanho-amarelada depois de recolha e secagem. Esta espuma castanho-amarelada foi dissolvida em EtOH (1 ml) e colocada numa cantara de difusão de vapor de éter durante dois dias de modo a obterem-se cristais em estrelinas brancas. Estas foram recolhidas e secas in vacuo e recristalizadas a partir de EtQHséter (1:4) de modo a obter-se o sal de guanidina em epígrafe sob a forma de ripas alongadas (232 mg, 0,619 mmol, 217). P.f. 258-260^,:,C quando a amostra é aquecida desde a temperatura ambiente até um fundido verde. Quando a amostra é colocada a 210°C funde imediatamente até um fundido incolor que lentamente se torna verde à medida que temperatura aumenta. Quando a amostra é colocada a 130°C e a temperatura é lentamente aumentada até 137'^:'C, funde até um fundido incolor. Quando esta mesma amostra ê arrefecida atê 120°C, ela ressolidifica e funde novamente num fundido verde a 253-260*C.

H-RMN (CD-.OD) 3,48 (s, 3), 6,90-7,65 (m, 14).

C-RMN (CD^OD) CN_V 162,7; Ar, 139,5, 135,9, 129,7, 139,5,

129,1, 127,4, 126,4, 126,2, 122,0; CH., 42,63.

IV (KBr) 3194, 2969, 1681, 1656, 1544, 1506, 1413, 1394, 1294,

1231, 1119, 1098, 1044, 1019, 881, 806 cm^-1.

Espectrometria de massa m/e Calculado para C^H^NEncon trado

9,1735,

9,1726.

Exemplo 12

Preparação do hidrocloreto de N-(cumarin-B-il)-N'-(5-etilfenil)-N'-metilquanidina (Composto XIX)

Num balão de fundo redondo de 5 ml foram colocados

N-(3-eti1feni1)-N-metilcianamida (626 mg, 3,91 mmol).

hidroclobarra de uma reto de 8-aminocumarina (818 mg, 4,15 mmol) agitação. 0 balão foi evacuado através de aspirador e em seguida cheio com N^,. O recipiente de reacção foi imediatamente colocado num banho de óleo pré-aquecido a 150*C e deixado a agitar sob N_?durante 24 h. Depois de 24 h, o fundida castanho foi dissolvido em metanol (5 ml) e diluído com água destilada quente (25 ml). Esta solução amarela foi em seguida adicionada a um funil separador contendo NaOH 0,1 N (15 ml) a qual foi extraída com CHC1,. As fracções de CHC1-. foram combinadas e concentradas até á secura de modo produzir um óleo castanho-amarelado escura (900 mg). A TLC deste óleo mostrou uma mistura dos compostos de partida e do produto. Os compostas de partida foram eluídos por meio de cromatografia de coluna sobre gel de sílica com benzeno. 0 produto foi eluído com benzeno/etanol 4:1 (TLC R^.=0,27,

CHC,:EtOH, 1:1) e a remoção do solvente produziu um óleo castanho-amarelado , 0,5ó g (447.). Este óleo castanho-amarelado foi dissolvida em metanol (10 ml), em seguida foi adicionado, gota a gota, metanol (5 ml) saturado com gás HC1, de modo a obter-se uma espuma castanho-amarelada do sal de HC1 depois de secagem (600 mg). Esta espuma castanho-amarelada clara foi dissolvida em etanol (1 ml) e colocada numa câmara de difusão de vapor de éter durante 2 dias de modo a produzir o sal de guanidina em epígrafe sob a forma de prismas amarelo pálida (500 mg; 407), p.f. 250-252°C.

IV (KBr) 3349, 3297 (-NH), 1718 (carbonilo) e 1ÓÓ0 (C=NH)

ΕΖ^- “Τ’ ^•2» ^!Η-ΡΜΝ (CD^OD) ξ 1,23 (t, 3Η, J = 7,5), 3,54 (s, 3Η), 6,51 (d, 1Η, J = 9,6), 7,2 co), 8,02 (d, 1H, J = 9,6).

,68 (q, 2H, J = 7,5),

7,66 (m, 7H, H aromáti¹C-RMN (CD-.DD) CO, 160,9; CN^, 157,6; Ar, 149,9, 148,1,

142.2, 131,5, 131,1, 129,3, 129,2, 126,9, 125,7, 124,7,

121.3, 117,3; NCH-», 40,8; Ar-CH^, 29,2; CH_, 15,3.

145,3, 123,9, «4/ Espectrometria de massa m/e

Calculada para C, ,_.H, _πΜ_0_ ·<> 19 19 a 2

Encontrado

21.1477,

21.1477.

Exemplo 15

Preparação do hidrocloreto de N-(cumarin-B-il)-N'-etil-N'-naftilquanidina (Composto XX)

Num balão de fundo redondo de 5 ml foram colocados N-etil-N-1-naftilcianamida (766 mg, 3,91 mmol), hidrocloreto de 8-aminocumarina (818 mg, 4,15 mmol; C-lyton, Chem. Soe. 97; 1350 (1910)) e uma barra de agitação. Q balão foi evacuado através de aspirador e em seguida cheio com N^. Este foi imediatamente colocado num banho de óleo pré-aquecido a 160-'C o qual foi deixado a agitar sob M^, durante 9 h. □ fundido castanho esverdeado resultante foi dissolvido em metanol (5 ml) e diluído com água destilada quente (20 ml). Esta solução foi basifiçada com NaOH 0,1 N (10 ml) e extraída com CHCl^. (4 x 15 ml) de modo a produzir uma mistura dos reagentes e do produto. Os reagentes foram eluídos por meio de cromatografia de coluna com benzeno. 0 produto foi eluído com benzeno/etanol 8:1 (TLC R^=0,44, CHCjsEtOH, 1:1), 0,64 g (46*/.). Este óleo amarela pálido foi dissolvido em metanol (5 ml), em seguida foi adicionado, gota a gota, metanol (5 ml) saturada com gás HC1, de modo a obter-se uma espuma castanho-amarelada clara do sal de HC1 depois de secagem. Esta espuma castanho-amarelada clara foi dissolvida em etanol (1 ml) e colocada numa câmara de difusão de vapor de éter durante 5 dias de modo a produzir prismas brancos, 0,23 g (29%), p.f. 193-194*C.

J

IV (KBr) 3343, 3303 (-NH), 1712 (carbonilo), 1653 (-C=NH).

^-RMN (CD-.DD) S 1,12 (t, 3H, 3 = 7,2), 3,55 (η, 2H, 3 = 7,2), 6,47 (d. 1H, 3 - 9,3), 7,30-3,12 (m, 11H, H aromático e um olefínico).

^1:'C-RMN (CD^OB) CO, 132,5, 131,7, 131,5 127,3, 126,2, 124,1

161,4; CN_T, 157,6; Ar, 145,7, 136,6, 131,16, 130,12, 130,0, 129,5, 129,4, 123,2, 121,9, 117,3; CH^, 59,4; CH_,

136,1,

129,4,

18,5.

Espectrometria de massa m/e Calculado para C^^H_1(?N^O₇Encontrado

357,1477,

357,1453.

Exemplo 14

Preparação de N-(5-Etilfenil)-N,N*-dimeti1-N‘-(l-naftil)quanidina (Composto XXI)

Num balão de fundo redondo de 5 ml foram colocados N-(3-eti1feni1)-N-metilcianamida (340 mg, 2,18 mmol), hidrocloreto de N-meti1-1-naftilamina (440 mg, 2,23 mmol) e uma barra de agitação. □ balão foi evacuado através de aspirador e em seguida cheio com N^,. Este foi imediatamente colocado num banho de óleo pré-aquecido a 160°C o qual foi deixado a agitar sob N^> durante 14 h. 0 vidro castanho resultante foi dissolvido em metanol (5 ml) e diluído com água destilada quente (20 ml). Esta solução

Α foi basifiçada com NaOH 0,1 N (25 ml) e extraída com CHCl^.

(5 x 20 ml) de modo a produzir um óleo castanho após secagem (540 mg). A TLC deste óleo castanho mostrou uma mistura dos reagentes e do produto» Os reagentes foram eluídos por meio de cromatografia de coluna com benzeno. 0 produtD foi eluído com benzeno/EtOH 2:1 (TLC R=0,09, CHC_»:EtOH, 1:1), de modo a produT zir um óleo amarela pálida, 380 mg (567.).

IV (puro) 3323 (-NH), 1690-1570 (largo, -C=NH).

^-RMN (CDC1-.) ô 1,02 (t, 3H, J = 7,5) , 2,35 (q, 2H, J = 7,5), 2,96 (s, 3H), 3,27 (s, 3H), 5,70 (largo s, 1H>, 6,45-7,73 (m, 11H, H aromático).

C-RMN (CDC1₃> CN₃, 163,4; Ar, 145,9, 144,4, 142,5, 129,7, 128,2, 127,8, 125,9, 125,5, 125,3, 125,1, 123,6, 123,0, 122,5, 12Θ,8; NCH^, 40,1; ΝΌΗ^, 39,4; CH^, 28, 15,0.

134,0, 123,1, ; CH₃,

Espectrometria de massa m/e:

Calculado para C^jH^N,,. 317,1892,

Encontrada 317,1881.

Exemplo 15

Preparação de N-(3-etilfenil )-N-metil-N* —etil-N'-(1-naftil )quanidina (Composto XXII)

Num balão de fundo redondo de 5 ml foram colocados N-<3—etilfenil)-N-metilcianamida (626 mg, 3,91 mmol), hidrocloreto de N-eti1-N-(1-nafti 1)amina (859 mg, 4,15 mmol) e uma barra de agitação. 0 balão foi evacuado através de aspirador e em seguida cheio com N»,. Este foi imediatamente colocado num banho

CHCl, (5 x 20 ml) de (920 mg). A TLC deste de óleo pré-aquecido a 160‘^:,C o qual foi deixado a agitar sob M, durante 14 h. 0 vidro castanho resultante foi dissolvido em metanol (6 ml) e diluído com água destilada quente (20 ml). Esta solução foi basificada com NaOH 0,1 N (25 ml) e extraída com modc· a produzir um óleo verde acastanhado óleo mostrou uma mistura dos reagentes e do produto. Os reagentes foram eluídos por meio de cromatografia de coluna com benzeno. 0 produto foi eluído com benzeno/EtOH 2:1 (TLC R^.=0,0ó4, CHC,:EtOH, 1:1), de modo a produzir um óleo viscoso esverdeada pálido, 460 mg (35,57).

IV (puro) 3484,3394 (-NH), 1635 (-C=NH).

^-RMN (CDC1_.) S 1,00 (t, 3H, J = 7,5), 1,14 (t, 3H, J = 6,6),

2,32 (q, 2H, ΰ = 7,5), 2,91 (s, 3H), 3,72 (q, 2H, J = 6,6), 5,62 (s, ÍH), 6,34-7,73 (m, 11H, H-aromático).

¹ 'C-RMN (CDC1_> CN_, 162,2; Ar, 145,9, 144,0, 140,3, 133,7,

-J« . ji ' ' * * ' * * ’

130,3, 127,9, 127,5, 125,5, 125,1, 125,0, 124,5, 124,4, 122,7, 122,6, 122,4, 120,4; NCH,, 46,2; NCH,, 39,1; CH,, 27,9; CH^, 14,8; CH,, 12,5.

Calculado para C^,H,^N,

Espectrometría de massa, m/e: Calculado f Encontrado

331,2048, 331,2046»

Exemplo 16

Preparação de N-(1—naftil)-N*—(m-tolil)-N'-metilquanidina«HCl (Composto XXIII)

N-ciano-N-metil-5-toluidina

Uma solução de brometo de cianogénio (1,59 g, 15 mmoi) em éter dietílico (10 ml) foi adicinada, gota a gota , a Lima solução agitada de N-meti1-3-toluidina (2,91 g, 24 mmoi) em éter dietílico (90 ml) a 0^,:,C.. Depois da adição, a mistura reaccional foi agitada á temperatura ambiente durante 14 h. Foi formada uma solução com precipitadas brancos e os precipitados foram removidos por meio de filtração. A solução de eterato foi posteriormente lavada com HC1 aquoso (1 M, 20 ml, três vezes) bem como solução salina (10 ml), seca sobre MgSO^, filtrada e concentrada.

um produto foi obtido sob a rendimento de 70‘Z.

forma de um líquido amarelo com

IV (CH_OC1_O): 2240 cm

b. N-(1-nafti 1)-N'-(m-toli1)-N'-meti 1guanidina-HCl

Uma mistura de N-ciano-N-metil-3-toluidina (O,47 g, 3,22 mmoi) e 1-naftilamina-HCl (0,54 g, 3 mmoi) num balão de fundo redondo de 5 ml foi aquecida num banho de óleo pré-aquecido a 170-190°C durante 3 h sob N^,. A solução castanha escura foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente, e tornou-se num sólida pedregosa. 0 produto bruto foi submetido a cromatografia flash sobre gel de sílica de modo a obter-se N-(1-naftil)-N'-(m-toli1)-N'-metilguanidina·HC1 (rendimento de 40‘Z) sob a forma de um pó branco.

cm

6,347-7,972 (m,

11H) .

C H_9fiN^OCl-1/256 H_o0.

Exemplo 17

Preparação do hidrocloreto de N-meti1-N—(3-nitrofeni1)—N'-(1—na— fti 1)guanidina (Composto XXIV).

Uma mistura de 1-naftilcianamida (7©8 mg, 4,2 mmol) e hidrocloreto de N-metil-3-nitroanilina (1,4 g, 7,3 mmol; Rristera, F., et al., Anal. Chem. 32;495-508 (196©); Katritzky, A.R., et a1., Organic Frep. Proced, Int. Briefs 21, No. 3 (1989)) foi finamente pulverizada. 0 sólido amarelo esverdeado resultante foi colocado num balão em forma de pêra equipado com uma barra de _________, agitação magnética e aquecido sob N^, num banho de óleo a 16©°C durante 3 h. Formou-se uma película amarela perto do topo do balão. A mistura foi arrefecida até 25°C e foi adicionado etanol (1© ml), seguido por NaOH 1 N, seca (K^CO-,.) e concentrada até à secura produzindo 1,3 g de um óleo castanho viscoso. 0 óleo foi ) tomado em CH₀C1₀ e evaporado sobre gel de sílica (1,5 g). Este •S ·£ foi colocado no topo de 13,9 g de gel de sílica para cromatografia flash e eluído com quantidades crescentes de etanol em CH^Cl^,. As fracçoes que mostravam uma cor azul caractérística com verde de bromocresol foram combinadas e evaporadas atê à secura produzindo 668 mg de um sólido amarelo. 0 sólido foi triturado cara éter e em seguida com água. A mistura, incluindo o sólido pegajoso insolúvel, foi transferida para um funil separador e a mistura foi basificada com NaOH. A camada éter castanha escura foi removida e em seguida foi adicionado HC1 1 N, o que fez com que se depositasse um óleo castanha nas paredes do funil. A mistura foi novamente tornada básica com NaOH 1 N e a camada aquosa foi rejeitada. A camada de éter transparente âmbar foi separada de um sólido castanho arborescente. 0 sólido foi dissol vido em acetona, filtrado, e o filtrado foi concentrada até â secura, tomado em clorofórmio e uma vez mais concentrado até à secura, originando uma espuma amarela. Esta foi triturada com

.. éter seco e o éter foi tratado com éter saturado com HC1 , proporcionando um sólido branca (333 mg, 227.1, p.f. 147-ló2°C. 0 sólido foi tomado em acetonitrilo quente e tratado com carvão vegetal activado <25 mg), A mistura foi filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado até 2 nl e deixado a repousar a 4-‘C de um dia para o outro. Os montes de cristais acastanhados foram recolhidos e recristalizados duas vezes a partir de acetonitrilo proporcionando 79 mg (57.) do composta em epígrafe sob a forma de montes cristalinos acastanhados, p.f. 134-135,5°C.

EM de alta resolução:

Calculado para C_1OH..N.0_ lo l Ò *r tf0,1273 (base livre). 0,1256.

Exemplo 18

Preparação do hidrocloreto de N—(7-fluoro-l-naftil)-N'-(metilfenil)-N‘-metilquanidina (Composto XXV) a · m-Eti I feni Icianairdda

Uma solução de brometo de cianoqénio (3,31 g,

31,26 inmol ) em Et^.0 (25 ml) foi adicionada lentamente a uma solução agitada de m-etilanilina (6,06 g, 50 mmol) em Et^Q (50 ml) e a agitação foi continuada à temperatura ambiente durante 6 horas. Um precipitado branco de hidrobrometo de m-etilanilina (4,46 g) foi separado por filtração, e o filtrada foi 2 ;< 20 ml ) . A evaporação da camada de éter lavado com H„0 proporcionou o composto em epígrafe (3,85 g, 96,57.), sob a forma de um líquido espessa.

IV (filme): 2225 cm

b.

N-m-Eti1feni1-N-metilcianamida

Uma solução de m-etil f enilcianamida (1,46 g, 10 mmol) e hidreto de sódio (480 g, 20 mmol, pré—lavado três vezes com hexano) em THF anidro (10 ml) foi aquecida a 80—85°C durante

2,5 horas. Depois de ter sido deixada arrefecer até à temperatura ambiente, foi adicionado iodeto de metilo (3,5 g, 25 mmol) e a agitação foi continuada à temperatura ambiente durante 2 horas. Foi. adicionado metanol (10 ml) seguido por água (20 ml) e em seguida foi extraído com diclorometano (3 :< 25 ml). A concentração da camada orgânica seguida por eromatografia flash rápida proporcionou o composto em epígrafe (960 mg, 607) sob a forma de um líquido incolor:

IV (filme): 2220, 3400 cm ¹

Uma mistura N-(m-eti 1 feni 1 )-N-met.i lcianamida (195 mg, 1,21 mmol) e hidrocloreto de 7-fluoro-1-aminonaftaleno (200 mg, 1,01 mmol) foi aquecida num banho de 61eo pré-aquecido a 160'-C durante 2,5 horas e em seguida deixada arrefecer até à temperatura ambiente. 0 sólido resultante foi tomado em diclorometano e lavado com solução de NaOH a 57. A camada orgânica, foi concentrada e o residuo resultante foi tratado à temperatura ambiente com metanol 0,5 M-solução de HCI (10 ml). Foi concentrado e o vidro púrpura resultante foi purificado por meio de cromatografia flash sobre gel de sílica de modo a obter-se o hidrocloreto de N-(7-f1uoro-1-nafti 1)-M'-(m-eti1feni1)-N'-metilguanidina (192 mg, 537) sob a forma de cristais esbranquiçados, p.f. 187-90°C.

IV (CHC1,): 1630, 3400 cm¹.

H RMN (CD-.C1-,): S 1,259 (t, 3H, J = 7,9Hz),

7,9Hz), 3,564 (s, 3H>, 6,76-7,94 (m, 10H) .

2,431 (q, 2H, J =

Análise Calculada para C^H^N^FCl : C, 67,12; H, 5,92; N, 11,74. Encontrado: C: 67,28; H, 6,00; N, 11,87.

)

Exemplo 19

Preparação do hidrocloreto de N-metil-N-<5-azidofenil)-N'—(1—naf— ti 1)quanidina (Composto XXVI)

Uma mistura de 800 mg de hidrocloreto de N-meti1-N-(3-ni trof en i 1 ) -N'-(1-naf ti 1 ) guan id ina, 223 g de Pd a 307/C, e 15 ml de etanol foi chocalhada sob uma atmosfera de a 3,24 x 10 Pa (47 psi) durante 28 h. Em seguida foram adicionados 5 ml de HC1 1 N e a mistura foi filtrada através de Celite. 0 filtrado foi evaporado até à secura proporcionando o di-hidrocloreto sob a forma de uma espuma castanha clara (970 mg) que foi adequada para a reacção seguinte. Uma solução agitada de di-hidrocloreto de N-meti1-N-(3-aminofeni1)-N'-<1-nafti 1)guanidina (86 mg), água (8 ml) e HC1 concentrado (3 ml) foi envolvida numa folha e arrefecida a 0°C e em seguida tratada com NaNO_n (200 mg). A solução foi agitada a -10°C durante 1,5 h e em seguida foi adicionado NaN.. (100 mg). A solução foi deixada aquecer até 25^,:>C e em seguida foi agitada durante 22 h. Ela foi arrefecida até 0^,:>C e em seguida tratada com NaOH a 107. (13 ml) dando origem a uma suspensão branca. Esta foi extraída com CH^Cl^, e os extractos foram secos (Na^SO^) e concentrados até â secura dando origem a um óleo castanho claro (73 mg, 367). 0 óelo foi dissolvido em éter seco (10 ml) e tratado com éter saturado com HC1 (10 ml). A mistura foi concentrada até à secura e o resíduo foi recristalizado a partir de acetato de etilo-hexario dando origem ao composto em epígrafe sob a forma de um pó higroscópico branco (68 mg), p.f. 72-74*C.

EM de alta resolução; Calculado para

316,1422

316,1436.

(base 1ivre).

Exemplo 20

Ensaios de Ligação de Radioliqandos a PCP

Os ensaios de ligação a receptores PCP foram levados a cabo utilizando membranas cerebrais de ratazanas como fonte de receptores. 0 radioligando utilizado para marcar os receptores PCP foi o ΛίΜΚ-δΟΙ (97 Ci/mmol).

A síntese do C'~‘H3MK-801 e o ensaio de ligação ao receptor PCP estão descritos em Keana, J.F.W., Scherz, M.W. , Quarum, Μ., Sonders, M.S., e Weber, E., Life Sei. 43, 965-973 (1988). resumidamente, nos protocolos, as membranas cerebrais de ratazanas foram preparadas e utilizadas como descrita para membranas tratadas com detergente (ver Murphy, D.E., Schneider, J., Boehm, C., Lehmann, J., e Williams, M., J. Pharmacol. Exp. Ther. 240, 778-784 (1987)), e armazenadas numa concentração de proteína de 10 mg/ml a -70*6. Não foi observada nenhum efeito do armazenamento (1 mês) das membranas a -70°C sobre o número de receptores ou a afinidade para C'^_’H3-8O1.

Para os ensaios com membranas de ratazanas, as membranas descongeladas foram incubadas a 1 g/ml com Triton X-100 a Θ,ΟΙΖ durante 15 minutos a 32°C, em seguida lavadas três vezes por meio de centrifugação a fim de reduzir as concentrações de amina-ácidos endógenos, e finalmente ressuspensas no tampão para ensaio. A esta suspensão foram adicionados cada um de glicina e ) 1—glutamato até uma concentração final de 1 μΜ, de modo a estimular maximamente a ligação a C³H3-801. Os ensaios contém 400 μΐ de membranas, 50 μΐ de radiligando, e 50 μΐ de tampâp ou de droga não marcada.

horas è temperatura por meio de filtração fibra de vidro Whatman

Para a ligação a t ^-'H3MÍ<-801 , InM de radioliqando foi incubado com 200 pg/ml de membranas cerebrais de ratazana durante ambiente. Todos os ensaios foram parados rápida sob vácuo através de filtros de GF/B pré-embebidos em polietilenoimina a

0,057. utilizando um colector de células Brandel com 48 cavidades (Brandel, Gaithersburg, MD). Ds filtros foram lavados três vezes com 5 ml de Tris 5 mM/HCl frio, pH=7,4. Cada filtro foi suspenso em IO ml de Cytoscint (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA) e a radioactividade foi medida por meio de espectromet.r ia de cintilação líquida com uma eficácia de contagem de 507.. A liqação não específica foi definida como aquela que permaneceu na presença de 10 pM de MK-S01 ou 100 μΜ de PCP.

A ligação do t'H3CPP (ácido 3-((±)-2-carboxi-piperazin-4-i1)-propi1-1-fosfónico) ao receptor de glutamato do tipo N-meti1-D-aspartato (Murphy, D.E. et a 1. 3. Pharm. Exp. Ther. 240:778-784 (1987)), a ligação do C’-*H3kainato de alta afinidade ao receptor de glutamato do tipo kainato (Honore, T. et al, Neurosci. Lett. 65:47-52 (1986)), e a ligação do C³H3AMPA (ácido Dl_-a-amino-3-h.idroxi-5-meti 1 iso xazole-4-propiõnico) ao receptor de glutamato do tipo quisaqualato (Murphy, D.E., Snowhill, E.W., e Williams, M„, Neurechem. Res, 12, 775-782 (1987)) foram ensaiadas utilizando membranas cerebrais de ratazana preparadas como anteriormente descrito.

Os dados de saturação foram avaliados e foram determinados os valores de CI^-θ como descrito por J.B. Schonbrunn (3. Biol. Chem. 263, 2808-2816 (1988)).

Fischer e A.

Os compostos IV a XIII foram testados relativamente à ligação ao receptor PCP em membranas cerebrais de ratazanas em ensaios de ligação a radio1igandos utilizando ligandos selectivos marcados com C'H3 . 0 (+ / C H3MK-B01 foi utilizado para marcar os receptores PCP. Coma pode ser vista na Tabela 1, os compostos IV a VII tinham afinidades submicromolares relativamente a receptores PCP, conforme avaliada pela sua capacidade para deslocarem o ligando selectivo do receptor PCP da ligação a membranas cerebrais de ratazana (Os números entre parênteses na Tabela I indicam o número de experiências!. São também mostrados na Tabela 1 os dados de ligação relativamente A guanidina N,N'-di-substituída correspondente que não tenha um grupo N-metilo (N,N'-di-(1-nafti 1)guanidina, Composta XIV; N,N'-di-(m—eti1feni1)guanidina, Composto XV; N-(1-naftil)-N'-(m-etilfenillguanidina, Composto XVI; N~(1-nafti 1)-N'-(o-isoprapi1feni1)guanidina, Composto XVII.

Em contraste, nenhum dos compostos testados mostrou afinidade de ligação significativa reiativamente aos locais de ligação de glutamato do tipo N-meti1-D-aspartato, kainato ou quisqualato, ensaiadas utilizando C’H3CPP, C^:'H3kainato e CΉ3ΑΜΡΑ, respectivamente, como radioligandos específicos.

::*ΟΟΟΟΟΟ*ΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟ*:

! ¹ )

Η TABELA I

	:MU **J\|	O************************************************:
	j J	ζ	Afinidade para	Afinidade para
		i	Receptor PCP	Receptor Sigma
A,	I	:	CI,-^ em Membrana	CI,-. em	Membranas Ce—
	'7	í	Cerebral de Ratazana	reSrais	de Poçquinhos
	; ,	:Compos to ‘ 4	vs.	CH3MK-801	da índia vs. 'LHi-DTG	Tipo¹:
	i		Média	±DMP	(η )	Média	±DMP	(η )
Ά/	j	:OOOO:	: O O * O 5	:*OOO	(***·;	c*OOO:	;*OOO	£00*3	:OOO:
		: IV	1 15,5	11,4	(4)	4 800,8	130,0	(4)	Tri- :
	) :	f IX	146,3	36,7	(3)	6 550	—	( 1 )	Tri- ,
	:	V i ''	549,7	67,5	(3)	10 500	—	( 1 )	Tetra-:
	: :	i XI	55	—	( 1 )	10 093	—	( 1 )	TetraH
		j XIII	452	—	( 1 )	10 563	—	( 1 )	Tri-
		: XIV	____267^2.	______53_χ4.	._<52_.	___165_a2.	_____28 j. 4	(4)	Di_S—:
	) •	: v	240,5	34,0	(3)	90,1	6,0	(4)	Tri- ;
	I	ί XV	168j.3	38_A3.	(6)	9x3.	2j.0_	(5)	Di-
	' j	VI	859,2	62,5	<5>	7 250,8	641 ,2	(4)	Tri- :
	)	: XVII	102	X_X_	(4)	. 91_A2j	?χ2.	(4)	Di- i
		Kn	35,4	11,1	(5)	2 535,0	669,8	(4)	Tri-
		! VIII	30,5	15,7	(5)	2 55Θ	—	( 1 )	Tri-
	) :	L*u_ι	490	—	( 1 )	1 109	—	( 1 )	Tri-
	) •	: XVI	38^6	7_X3.	(6)	53.8	5,2	(4)	dí- :
		: XVIII	68,7	14,4	(3)	10 724	1 389,0	(3)	Tetra-:
-à^\		: XIX	SO , 0	3,9	(4)	2 787	291,2	(3)	Tri- _;
	:	XX	123,0	18,0	(2)	18 477	2 276,0	(4)	Tri- :
	I ' í	: XXI	86,8	20,3	(2)	1 211	56,0	(4)	Tetra-:
	i	í XXII	96,9	5,1	(2)	2 291	160,6	(4)	Tetra-:
		i XXIII	85,2	6,9	(3)	1 862	175,0	(3)	Tri- ;
		; xxiv	86,5	9,1	(2)	6 264	699,2	(4)	Tri- :
	i	: XXV	40,1	5,6	(5)	547	73,6	(4)	Tri- ;
	: : ι		:O*$?t ll	ΐΟΪΟΟ:			:OOO*	[&ϋ

ί Tetra é tetra-substituída, Tri- é tri-substituída, e J di- é di-substituída j :300000000000*000000000000000000::

Exemplo 21

Ensaio de Ligação a Receptores Sigma

Métodos 'h Ds ensaios de ligação a receptores sigma utilizando homogenizados de membranas cerebrais de porguinhos da índia e o radioligando I^HIDTG foram conduzidos como descrito por Weber et al , F'. A. N . S . <USA) 33.:8734-3788 (1986). Resumidamente, cérebros completos congelados de porquinhos da índia (Biotrol, Indianapolis, IN) foram homogenizados em 10 volumes (p/v) de sacarose 320 mM arrefecida por gelo utilizando um politrão de Brinkman. 0 homogenizado foi centrifugado a 1 000 x g durante 20 minutos a 4^,=,C. D sobrenadante foi centrifugado a 20 000 x g durante 20 minutos a 4^OC. A pelete resultante foi ressuspensa em 10 volumes iniciais de tampão Tris 50 mM/HCl a pH 7,4 e centrifugada a 20 000 x g durante 20 minutos a 4°C. A pelete resultante foi ressuspensa em 5 volumes iniciais de Tris 50 mM/HCl arrefecido por gelo (pH 7,4), e o volume final foi ajustado de modo a obter se uma concentração de proteína de 3 mg/ml. Foram armazenadas partes aliquotas de 20 ml a -70^OC até serem utilizadas, com

- perda não detectável de ligação.

Relativamente aos ensaios de ligação a C'H3DTG, as suspensões de membranas congeladas foram descongeladas e diluídas 1:3 em Tris 50 mM/HCl (pH 7,4). A tudos de ensaio de poliestireno ) de 12 x 75 mm foram adicionados 0,8 ml de suspensão diluída de membrana, 0,1 ml de C^HIDTG (Dupont/NEN) de modo a obter-se uma concentração final de 1,4 nM, e 0,1 ml de drogas não marcadas ou de tampão. A concentração de proteína no volume de incubação final de 1 ml foi de 8ΘΘ pg/ml, correspondente a 32 mg de tecido cerebral (peso húmido original) e a uma concentração de tecido dentro da gania linear para a ligação específica. A ligação não específica foi definida como aquela que permaneceu na presença de 10 μΜ de haloperidol. As incubações foram terminadas depois de 90 minutos à temperatura ambiente por meio de adição de 4 ml de Tris 50 mM/HCl arrefecido por gelo ( pH 7,4) e filtração rápida sob vácuo através de filtros de fibra de vidro Whatman GF/B, utilizando um colector de células Brandel com 48 cavidades (Brandel). Os filtros foram lavados duas vezes com 4 ml de Tris & 5 mM/HCl (pH 7,4). Cada, filtro foi suspenso em 10 ml de Cytoscint (ICI) e a radioactividade foi medida por espectrometria de cintilação líquida com uma eficácia de contagem de aproximadamente 507. Os calores da CI,-. foram determinados por meio de análise de regressão não linear. Os resultados são mostrados na Tabela 1 anteriormente apresentada.

Como pode ser visto na Tabela 1, em comparação com as guanidinas di-substituidas correspondentes, certas guanidinas tri-substituídas do invento apresentam inesperadamente elevada afinidade de ligação pa.ra o receptor PCP mas baixa afinidade de ligação para d receptor sigma. Deste modo, estas guanidinas tri-substituídas podem ser utilizadas como ligandos de PCP selectivos.

Exemplo 22

Ensaio de Neurotoxicidade In Vitro

a. Cultura celular

Culturas de hipocampos de ratazanas dissociadas foram preparadas utilizando uma modificação do método de Huettner e Baughman (Huettner, J.E. e Baughman, R.W., J. Neurosci. 6,

3044-3060 (1986))- Crias de ratazanas, de recem-nascidas a 1 dia de idade, pesando de 6a 8 g, forma anestesiadas com hidrato de cloral e córtices com hipocampos ligados foram removidos e colocados em meio de dissociação isento de Cl suplementado com ácido cinurénico 1 mM e MgSO^ 1Θ mM. 0 tecido foi limpo de meninges, lavado e incubado durante 20 min a 37^C'C em meio de dissociação contendo IC unidades/ml de Papaína (Worthington). Depois do tratamento com enzimas, o tecido foi incubado durante três períodos de 5 minutos a 37*C com 10 mg/ml de inibidor de tripsina (tipo Sigma 11-0).

As células foram dissociadas por meio de trituraçaõ num meio de crescimento e foram adicionados 50 μΐ de uma suspensão celular a cada cavidade de placas de microtitulação de 96 cavidades (Falcon) contendo 50 μΐ de meio de crescimento por cavidade. Antes da utilização as placas de 96 cavidades foram revestidas com plo-D-1isina (0,5 mg/ml) e laminina (2pg/ml) (Collabo— rative Research). As células foram calcadas nas placas numa 4 densidade de 5 x 10 por cavidade de modo a obter—se um volume final de 100 μΐ por cavidade. O meio de crescimento era constituído por meios essenciais mínimos de Eagle (MEM, sais de Earle), suplementado com soro fetal bovino a 57 (CCL), soro de vitela suplementado definido a 57. (Hyclone), glucose 50 mM, 50 unidades/ml de penici1ina/estreptomicina e MITO+ agente de enchimento de sara (Collaborative Research). As células foram mantidas a

37°C numa atmosfera humidificada de C0_n a 4,57. As células foram z.

mantidas num meio que era semelhante ao meio de crescimento mas sem o soro de bovino fetal. Permutas de meio volume dos meios foram realizadas duas vezes por semana até 15 ou 16 dias in vitro quando os ensaios de citotoxicidade foram levados a cabo.

b.

Ensaio de Neurotoxicidade Induzida por Glutamato/Lactato-Desidroqenase

As culturas foram avaliadas microscopicamente e apenas foram utilizadas aquelas placas com densidades neuronais unifor— mes nas experiências de neurotoxicidade por glutamato. As experiências de glutamato foram levadas a cabo à temperatura ambiente com todas as soluções aquecidas até 37°C. As culturas foram lavadas três vezes numa solução salina de controlo (CSS) tamponada com HEF’ES semelhante à relatada por Choi et al em J. Neurosei. 7:257-268 (1987), mas com o Tris-HCl substituído por HEF’ES 10 mM e tamponado para pH 4. As permutas rápidas de meios foram conseguidas neste sistema através da uri 1ização de um de 96 cavidades que remove meio de todas as cavidades simu1taneamente, e deixa iguais volumes de fluida em cada cavidade conseguindo deste modo concentrações uniformes de droga e eliminando o risco de exposição das células ao ar. As drogas são testadas contra glutamato 50Θ μΜ utilizando múltiplas diluições a 1/2 (habitualmente 7) da substância do teste de modo a obter-se uma curva de resposta à dose e 3 controlos os quais incluem glutamato 500 μΜ sozinho, droga de teste sozinha (concentração mais elevada) e CSS sozinha, é utilizada uma placa de 96 cavidades por droga de modo a obter-se uma dimensão de amostra de S e as experiências foram repetidas várias vezes. Depois de lavagens do CSS, onde todos os vestígios de meios contendo soro são removidos, as células são expostas durante 5 minutos às 7 concentrações da droga de teste em CSS e a seguir à droga, as mesmas concentrações de droga mais glutamato 500 μΜ. As três lavagens de CSS são repetidas e são adicionadas partes aliquotas de MEM ennriquecido com glucose a todas as cavidades e as placas são mantidas de um dia para o outro a 37'^:'C em incubador de C0_.

A morte de neurónios induzida por glutamato é medida por meio da determinação dos níveis de 1actato-desidrogenase (LDH, uma enzima citosólica) libertada no meio por morte e de neurónios mortos nas 24-48 horas que se sequem ao insulto com glutamato como descrito por Koh e Choii (J- Neurosci. Met.hods 20:83-90 (1987)). Foi também estabelecido que células não neuronais , tais como astrócitos, não libertam níveis significativas de LDH durante estas experiências. As amostras dos meios foram recolhidas a partir de todas as cavidades e ensaiadas relativamente à LDH de acordo com o protocolo sugerido por Molecular Devices Applications Bulletin, 012-A utilizando o Molecular Devices Kinetic Microplate Reader. Os resultados são normalizados para os valores de LDH obtidos nos controlas de glutamato sozin ho.

A medida da potência de cada composto testado é feita através da estimação, a partir da curva de resposta á dose, da concentração do composto que inibe 507. da libertação de LDH induzida por glutamato. Esta estimação é chamada a dose DE,-,..

Todas as guanidinas testadas foram capazes de inibir a neurotoxicidade induzida por glutamato in vitro. A Figura 1 mostra a relação entre os valores de DE_rA e os valores de CI_. relativamnete aos compostos IV—VII (assinalados pelos números correspondentes 4-7). As potências neuroprotectoras das quatro guanidinas Ν,Ν,Ν'-tri-substituídas estão intimamente correlacionadas com as suas afinidades relativamente ao receptor F‘CF'.

Exemplo 2-5

Ensaio de Neurotoxicidade In Vivo

Foi empregado o modela experimental de McDonald, J.W., et al., supra, com a única alteração no protocolo de uma ínjecção intraperitoneal do composto de teste 15 minutos a seguir, em vez do precedente, à ínjecção cerebral de NMDA. Apenas o Composto VII foi testado neste ensaio e mostrou, em dosagens variando entre 0,1 a 100 pmol/kg de peso corporal, proteger contra as lesSes causadas por ínjecção de NMDA.

Estas observações sobre as propriedades neuroprotectoras in vitro e in vivo das guanidinas substituídas são consistentes com as suas afinidades relativamente ao local de ligação a F'CP no cérebro.

As guanidinas tri- e tetra-substituídas do presente invento nao estão quimicamente relacionads com quaisquer bloqueadores de canal NMDA que actuam através de receptores PCP com a excepção dos compostos previamente revelados na Patente das E.U.A. No. 4 709 094 e no Pedido de Patente dos E.U.A. No. de Série 07/237 367.

Como anteriormente discutido, previamente, apenas os compostos pertencentes à série PCP/cetamina, opiatos de benzomorfano, benz-f-isoquinolinas e MK-801, mostraram interactuar com recetores PCP (ver Zukin, R.S. e Zukin, S.R., Trends in Neurose i ., no prelo (1988); Sonders, M.S., Keana, J.F.W. e Weber, E-, Trends in Neurosei. 11(1), 37-40 (1988); Wong, E.H.F., Kemp., J.A., Priestly, T., Knight. A.R., Woodruff, B.N. e Iversen , L.L., Proc. Natl. Acad. USA 83. 7104-7108 (1986)).

Os exemplas precedentes podem ser repetidas com sucesso semelhante substituindo pelos reagentes e/ou as condiçSes de operação, genericamente ou especificamente descritos deste invento, os que foram utilizados nos exemplos precedentes.

A partir da descrição anterior, um especialista nesta técnica pode facilmente averiguar as caracteristicas essenciais deste invento, e sem se afastar do seu espírito e âmbito, pode fazer várias alterações e modicações do invento de modo a adaptá-lo às várias utilizações e condições.

Claims

75 75 D C^~Cg alquiltio, alilo, aralquilo, alcarilo, C-T-CA cicloalquilo, aroilo, aralcoxi, C^-Cg acilo, arilo, heteroarilo, arilo condensado com um anel de benzeno, heteroarilo condensado com um anel de benzeno, heterocicloalquilo, C^-C^ heterocic loalquilo condensado com um anel de benzeno, C^-Cg alqui1su1fonilo, aril-tio, amino, C^-Cg alquilamino, C^-C^g dialquilamino, hidroxi, hidroxialquilo, carbamoilo, C.-C, N-alquilcarbamoilo, C^-Clc. N,N- lo xi 1 «j - dialquilcarbamoilo, nitro, azido ou C0-C1c· dialquilsulfamoilo; e em que a referida guanidina exibe uma elevada actividade de ligação relativamente ao receptor de PCP em células nervosas de mamíferos. 2®. - Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida guanidina Ν,Ν,Ν'-tri—substituída ser N, N ' -di - ( 1 -naf ti 1 ) -N-meti 1 guanidina , N,N' -di- ( m-et.il f eni 1)-N-me-ti 1 guartidina, N- (o-isopropilfeni 1)~N' -meti 1-N' -( 1-naf ti 1 .'guanidina , N- (m-etil f eni 1) -N-meti1-N' - (1-naf ti 1 > guanidina , N-(l-naftil)--N'-(m-etilfenil>-N'-etilguanidina, N,N'-di-(1-naftil)-N-etilgua-riidina, N-meti 1-N' - (m-etilf eni 1 >-N— (1 -naf til)guanidina, N,N'-di--(1-naftil)-N-fenilguanidina, N-(8-cumarini1>-N'-(3-etilfenil)-N--metilguanidina, N-(8-cumarini1>-N'-(3—etilfeni1)HM-etilguanidina, N-(1-naftil)-N'-(3-metilfenil)-N*-metilguanidina, N—<1-naf-ti1)-N'-(3-nitrofenil>-N'-metilguanidina, N-(l-naftil)-N'-(3-azi-dofenil)-N'-metilguanidina, N-(7-fluoro-1-nafti 1)-N'-(3-eti1fε πί 1 )-Ν'-meti 1guanidina, N-(4-fluoro-l-nafti 1)-N'-(3-eti1feni1)-N'--metilguanidina; ou um seu sal fisiologicamente aceitável. 3â. - Método para o tratamento de uma doença do sistema nervoso, na qual a patofisiologia da perturbação envolve a excitação excessiva das células nervosas por agonistas de receptores de NMDA, em que a referida doença é a doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington, Esclerose Lateral Amiotrófica, Síndroma de Down, doença de Korsafcoff, ou

-7 76 epilepsia, caracterizado por compreender a administração a um mamífero que exibe sintomas de tais perturbações ou que é suscep-tível a tais perturbações, de 0,005 a 1000 mg por quilograma de peso corporal de uma quanidina Ν,Ν,Ν',N'-tetra-suòstituida de neuroprotecção com a fórmula: -η*> NH <1 R-N-C-N-R'''

8 em que R, R', R' e R' são independentemente um grupo C^-Cg alquila, um grupo C2-C8 a lquenilo, um grupo C^,-CR alquinilo, um grupo cic1oalqui1 o, um grupo cicloalquilo substituído por um au mais substituintes, um grupo cicloalquenilo, um grupo cicloalque-ni.lo substituído por um ou mais subst.ituintes, um grupo arilo carbocíc1ico, um grupo arilo carbocílico substituído por um ou mais substituintes, um grupa alcarilo, um grupo alcarilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo aralquilo, um grupo aralqui lo substituído por um ou mais substituintes, um grupo heterocíc1ico, um grupo heterocíclico substituído por um ou mais substituintes, um grupo heteroarilo ou um grupo heteroarilo substituído por um ou mais substituintes; ou um seu sal fisiolo— gicamente aceitável; em que o referido substituinte é cloro, fluoro, bromo ou iodo, C^-Cg alquilo, C^-Cg alcoxi, ciano, C-^-C^ dialquí laminoalquilo, carboxi, carboxamido, C,-Cg alquil — tio, alilo, aralquilo, alcarilo, C-^-C^ cicloalquilo, aroilo, aralcoxi, Cri-Cg acilo, arilo, heteroarilo, arilo condensado com um anel de benzeno, heteroarilo condensado com um anel de benze— no, C-y-C^ heterocicloalquilo, C-^-C^ heterocicloalquilo condensado com um anel de benzeno, Cj-Cg alquilsulfonilo, ariltio, amino, Cj-Cg alquilamino, Co_ci5 dialquilamino, hidroxi, hidroxialquilo, carbanioilo, C^-C^ N-alquilcarbamoilo, N,N-dialquilcarba-moilo, nitro, azido ou dialquilsulfamoilo; e em que a 77 referida quanidina exibe uma elevada actividade de ligação ao receptor de PCF'. 4a. - Método de acordo com a reivindicação 3, em que a referida quanidina N,N,N',N'-tetra-substituída é N-metil-N'--fen i1-N,N'-di-(1-nafti 1)guanidina, N-meti1-N'-eti1-N,N'-di-(1-na-ftil)guanidina, N, N'-di-<1-naftil)-N,N'-dimetiIguanídina, N-(1- -naftil> ~N'-(3-etilfenil)-N,N'-dimetilguanidina, ou N-(1-naftil)--N‘ -(3-etil feni 1 )-N-eti.l-N' -meti.Iguanídina. 5§. ~ Método para inibir a neurotoxicida.de relacionada com receptor de NMDA-canal de iões num mamífero que exibe tal neutoxicidade ou que é susceptível a ela, em que a referida neurotoxicidade é causada por libertação excessiva de glutamato endógeno que se segue à ocorrência de hipoxia, hipoglicemia, isquemia do cérebro ou da medula espinal, ou trauma do cérebro ou da medula espinal, caracterisado por compreender a administração ao mamífero, de 0,0Θ5 a 10ΘΘ mg por quilograma de peso corporal de uma guanidina. Ν,Ν,Ν'-tri—substituída de neuroprotecção com a fórmula: NH II R—N—C--N—H

em que R, R' e R'' são independentemente um grupo C^-Cg alquilo, um grupo C2~^B alcíuenilo, um grupo C-,-Cg alquinilo, um grupo cicloalquilo, um grupo cicloalquilo substituída por um ou mais substituintes, um grupo cicloalquenilo, um grupo cicloalquenilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo arilo carbocí-cIícd, um grupo arilo carbocílico substituída por um ou mais substituintes, um grupo alcarilo, um grupo alcarilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo aralquilo, um grupo 78 aralquilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo heterocíclico, um grupo heterocíc1ico substituído por um ou mais substituintes, um grupo heteroarilo ou um grupo heteroarilo substituído por um ou mais substi tuin tes; ou. um seu sal fisiolo— gicamente aceitável; em que o referido substituinte é cloro, flucro, bromo ou iodo, C^-Cg alquilo, C^-C-g alcoxi, ciano, <V-Ci5 dialquilaminoalquilo, carboxi, carboxamido, -Cg alquil- tio, alilo, aralquilo, alcarilo, C-^-C^ cicloalquilo, aroilo, aralcoxi, C^-Cg acilo, arilo, heteroarilo, arilo condensado com um anel de benzeno, heteroarilo condensado com um anel de benze-no, C^-C^ heterocicloalqui lo, C_,-Cfe heterocicloalquilo condensado com um anel de benzeno, C^-Cg alquiIsulfanilo, ariltia, amino, -Cg alqui. lamino, C^-C^c- dialqui lamino , hidroxi, hidroxialqui lo, carbamoilo, C^-C^ M-alquilcarbamoilo, C^-Cj^. N,N-dialqui lcarba-moilo, nitro, azido ou C^-C^c· dialquilsul famoilo; e em que a referida guanidina exibe uma elevada actividade de ligação reiativamente ao receptor de PCP em células nervosas de mamíferos . í>â. - Método de acordo com a reivindicação 5, em que a referida guanidina N,N,N‘-tri-substituída é N,N'-di-(1-naf-ti 1 )-N-meti lgu.anidina , N,N' -di - (m-eti 1 feni 1 )-M~meti 1 guanidina, N- ( g-isopropi. 1 f eni 1 ) ~N ' -meti 1 -N ' - ( 1-naf ti 1) guanidina, N- (m-eti 1-feni1)-N-meti1~N'-(1-nafti 1)guanidina, N-(1-nafti 1)—N'-(m-eti1fe-n i 1 ) ~N'-eti1guanidina, Μ,N‘—di-<1-naf ti1)-N-eti 1guanidina, N-meti1-N'-(m-eti1feni1)-N-(1-nafti 1)guanidina, N,N'-di-(l-naf-ti1)-N-feni1guanidina, N-(8-cumarini1)—N'-( 3-eti1feni1)-N-meti1-guanidina, N-<8-cumarini1)~N'-(3-etilfenil)-N-etilguanidina, N-( 1-naf ti. 1 )-N' - < 3-meti 1 f eni 1 )-N' -meti 1 guanidina, N-< 1-naftil) — -N'-(3-nitrofenil)-N'-metilguanidina, N-<1-naftil)-N'-(3-azidofe- ni1)-N'-meti 1guanidina, N-< 7-fluoro-1-naf ti 1)~N'-(3-eti1feni1)--N'-metilguanidina, N-(4-fluoro-1 -naftil)-N'-(3-etilfenil)-N'-me-t.ilguanidina; ou um seu sal fisiologicamente aceitável. 7§. - Método para inibir a neurotoxicidade relacionada com receptcr de NMBA-canal de iSes num mamífero que exibe tal neutoxicidade ou que é susceptível a ela, em que a referida neu.rotoxicidade é causada por libertação excessiva de glutamato endógeno que se segue á ocorrência de hipoxia, hipoglicemia, isquemia do cérebro ou da medula espinal, ou trauma do cérebro ou da medula espinal, caracterizado por compreender a administraç3o ao mamífero, de Θ,0β5 a 100& mg por quilograma de peso corporal de uma guanidina Ν,Ν,Ν',N'-tetra-substituída de neuroprotecçSo com a fórmula: NH II R-N-C-N-R'''

em que R, R', R'' e R''' s3d independentemente um grupo Cj-Cg alquila, um grupo C^-C0 alquenilo, um grupo C^-CD alquinilo, um .£ d i. o grupa cicloalquilo, um grupo cicloalquilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo cicloalquenilo, um grupo cicloalque-nilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo arilo carbocíc1ico, um grupo arilo carbocilico substituído por um ou mais substituintes, um grupo alcarilo, um grupo alcarilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo aralquilo, um grupo aralquilo substituído por um ou mais substituintes, um grupo heterocíc1ico, um grupo heterociclico substituído por um ou mais substituintes, um grupo heteroarilo ou um grupo heteroarilo substituído por um ou mais substituintes; ou um seu sal fisiolo-gicamente aceitável; em que o referida substituinte é cloro, fluoro, bromo ou iodo, Cj-Cg alquilo, Cj-Cg alcoxi, ciano, Ctj-Cjjj dialquilaminoalquilo, carboxi, carboxamido, Cj-Cg alquil-tio, alilo, aralquilo, alcarilo, C-j—cicloalquilo, aroilo, aralcoxi, C2~Cg acilo, arilo, heteroarilo, arilo condensado com um anel de benzeno, heteroarilo condensado com um anel de 80 benzeno, C-^-C, heterocicloalquilo, C-.--C, heterocic loalquilo condensado com um anel de benzeno, C^-Cg alquilsulfonilo, aril-tio, amino, C^-Cg alquilamino, C^-C^ dialquilamino, hidroxi, hidroxialquilo, carbamoilo, C,-C, N-alquilcarbainoilo, C„--Cicr N,N- lo * ^ 1 * -dialquilcarbamoilo, nitro, azido ou C7-C15 dialquilsulfamai lo; e em que a referida guanidina exibe uma elevada actividade de ligação ao receptor de PCP em células nervosas de mamíferos. ^ 8§. - Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por a referida guanidina Ν,Ν,Ν',N'-tetra-substitu-ida ser N-metil-N'-feni1-N,N'-di~<1-naftil>guanidina, N-metil-N'--eti1-N,N'-di-(1-naftil)guanidina, N,N’-di-<1-naftil)-N,N'-dime-ti 1 guanidina, N-(1 -naf ti 1 >~N' - (3-eti 1 feni 1) —N,N' — dimetilguariidi — na, ou N-(1-nafti 1)-N'-(3-eti1feni1)-N—eti1-N'-metilguanidina; ou um seu sal fisiologicamente aceitável. Lisboa, 4 de Março de 1991 O ADJUNTO

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