PT848009E - Processo para a preparacao de epirubicina ou seus sais de adicao de acido a partir de daunorubicina - Google Patents

Description

SkZ CCô

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DESCRIÇÃO "PROCESSO PARA A PREPARAÇAO DE EPIRUBICINA OU SEUS SAIS DE ADIÇÃO DE ÁCIDO A PARTIR DE DAUNORUBICINA"

Esta invenção relaciona-se com um método novo para a preparação química de epirubicina ou dos seus sais de adição de ácido, em particular do sal de HCl, a partir de daunorubicina. A doxorubicina e a epirubicina foram preparadas a partir de daunorubicina e 4'-epidaunorubicina respectivamente por funcionalização da posição C-14 (S. Penco, Chim. In. (Milão), (1993), 369-373; Patente U.S. 3,803,124 (1974); F. Arcamone et al., Câncer Chemother. Rep., 6 (1975), 123-129). Esta funcionalização inclui bromação seguida por hidrólise ou directamente ou através de um carboxilato (formato ou acetato).

Foi afirmado que são obtidos melhores resultados quando a bromação ocorre através do acetal em C-13 (J. Bálint et al., Patente Europeia 0 183 691 (1986); Y. Kimura et al., Buli. Chem. Soc. Japan, 59 (1986) 423-431).

Contudo estas preparações têm algumas desvantagens. A bromação da cetona ou do acetal ocorre em condições ácidas de 1 <. Γ forma que não pode ser evitada a decomposição parcial das moléculas em açúcar e antraciclinona. A conversão directa do bromo em C-14 no hidroxilo em C-13 com 0H“ conduz à formação de produtos secundários devido à instabilidade da doxorubicina em condições básicas (J. Bálint et ai., Patente Europeia 0 183 691, 1986). Esta pode ser diminuída por transformação primeiro do bromo em formato seguida por hidrólise em condições básicas fracas.

Além disso as transformações oxidativas e redutivas na posição 4' da parte de açúcar da daunomicina podem conduzir a reacções secundárias com a aglicona, e.g. redução do carbonilo em C-13 (Patente Europeia 0 253 654, 1987). A WO 96/29335 descreve a preparação de epirubicina a partir de daunomicina através de a) reacção de daunorubicina N-protegida com ácido tríflico; b) protecção do hidroxilo em posição 9; c) tratamento do produto de b) com um sal de uma amina secundária ou terciária com um ácido carboxílico; d) desprotecção do 9-hidroxilo; e) hidrólise do éster; f) remoção do grupo protector da amina.

Esta invenção proporciona um processo para a preparação de epirubicina ou dos seus sais de adição de ácido, em particular do sal de HC1, a partir de daunomicina em que são evitadas estas desvantagens. O presente processo compreende: a) metanolização de daunomicina (daunorubicina) ou de um seu sal de adição de ácido (1) a daunomicinona 2. e éter metílico de daunosamina ou um seu sal de adição de ácido (3) 2

Ο 0 OH Ο Ο ΟΗ

OMe Ο OH OH 2

+ H3C

HO 3 OMe OMe Ο OH Ο

OH 1 e isolamento de 2 e 3; b) conversão de 2 em 14-acetoxidaunomicinona 4 por bromação e acetoxilação:

O OH O

OMe 0 OH OH 4 c) protecção do grupo amina de 3 com um grupo trifluoroacetilo ou com um grupo aliloxi carbonilo para dar o composto 5a ou 5b. respectivamente, em que X = trifluoroacetilo (TFA) (5a,) ou aliloxicarbonilo (Aloc) (5b)

HO OMe 5a; X = TFA 5b: X = Aloc 3

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u d) oxidação do composto 5a ou 5b para dar o composto 6a ou 6b. respectivamente

OMe 6a: X = TFA 6b: X = Aloc e) redução do composto 6_a ou 6b. ao composto 7a. ou 7b. respectivamente

OMe 7a: X = TFA 7b: X = Aloc f) conversão do composto 2a ou 7b para produzir os compostos protegidos 9a-d ou 9e-h. respectivamente

9a X=TFA, 9b X=TFA, 9c X=TFA, 9d X=TFA, 9e X=Aloc 9f X=Aloc 9g X=Aloc 9h X=Aloc Y=OTFA, Z=OTFA Y=OTFA, Z=halogeneto Y=0C(0)PhN02/ Z=0C(0)PhN02 Y=0C(0)PhN02, z=halogeneto Y=OTFA, Z=OTFA Y=OTFA, Z=halogeneto Y=OC(0)PhN02, Z=OC(0)PhN02 Y=OC(O)PhN02, Z=halogeneto g) reacção do composto 4. com o composto 9a-d ou 9e-h para obter o composto 10a ou 10b 4

( 0 OH O

10a: X = TFA 10b: X = Aloc e em seguida ha) reacção do composto 10a em condições básicas suaves para dar o composto 11a

11a ia) protecção do composto 11a para obter o composto 12

5 Γ u em que R=Ci-C4 alquilo ja) remoção do grupo trifluoroacetilo do composto 1_2 em condições básicas fortes, seguida por remoção do grupo protector acetal em condições ácidas, neutralização a epirubicina e opcionalmente acidificação para preparar um sal de adição de ácido, em particular o sal de HCl, de epirubicina; ou: hb) submeter o composto 10b a hidrólise do grupo Ci4-acetoxi em condições básicas suaves para dar o composto 11b

i*3) remover o grupo protector aliloxi carbonilo cataiiticamente com um catalisador de Pd para obter epirubicina, e opcionalmente converter a epirubicina obtida num seu sal de adição de ácido, em particular o sal de HCl. O presente processo é ilustrado em mais pormenor nos seguintes esquemas e suas descrições. 6

Esquema 1

1

3

H3C

0'

OMe pcc

H3C

d. NHX OMe bh3.thf

NHX HO 0 5a: X = TFA 6a 5b: X = Aloc 6b X = TFA X = AlOC 7

L-Cj ^

7a:X = TFA 7b:X = AlOC = TFA 9a: X=TFA, = Aloc 9b: X=TFA, 9c: X=TFA, 9d: X=TFA, 9e: X=Aloc, 9f: X=Aloc, 9g: X=Aloc, 9h: X=Aloc, Y=OTFA, Z=OTFA Y=OTFA, Z=halogeneto Y=0C(0)PhN02, Z=0C(0)PhN02 Y=0C(0)PhN02, Z=halogeneto Y=OTFA, Z=OTFA Y=OTFA, Z=halogeneto Y=0C(0)PhN02, Z=0C(0)PhN02 Y=OC(O)PhN02, Z=halogeneto

4 9a: X=TFA, Y=OTFA, Z=0TFA 9b: X=TFA, Y=OTFA, Z=halogeneto 9c: X=TFA, Y=0C(0)PhN02, Z=OC(0)PhN02 9d: X=TFA, Y=OC(0)PhN02, Z=halogeneto 9e: X=Aloc, Y=OTFA, Z=OTFA £1* X=Aloc, Y=OTFA, Z=halogeneto 9g: X=Aloc, Y=0C(0)PhN02, Z=0C(0)PhN02 9h: X=Aloc, Y=0C(0)PhN02, Z=halogeneto

10a: X = TFA 10b: X = Aloc

Nesta sequência reaccional a daunomicina (1_) é primeiramente metanolizada a daunomicinona (2) e éter metilico de daunosamina (3) com rendimento muito elevado. Ambos (2) e (3.) podem ser facilmente isolados sem passos cromatográficos. A daunamicinona (2) é convertida em 14-acetoxi daunomicinona (4) por bromação e acetoxilação com rendimento praticamente quantitativo. O éter metilico de daunomicinona (3) é convertido numa 4'-epi daunosamina N-protegida através da sequência 3.-9. Primeiro é protegido o grupo amina de 3. A escolha deste grupo protector é importante uma vez que tem de ser removido após o acoplamento do açúcar com a aglicona sem produzir reacções secundárias na parte de aglicona. Foram seleccionados dois grupos protectores. 0 grupo trifluoroacetilo que é removido em condições básicas e o grupo aliloxicarbonilo que pode ser 8

removido em condições neutras. Os açúcares protegidos 5a.b foram oxidados com rendimentos elevados aos ceto açúcares 6a.b com clorocromato de piridinio. Para a redução selectiva dos epiaçúcares 7a.b verificou-se que borano/THF deu melhores rendimentos e uma selectividade melhor do que o borohidreto de sódio utilizado nos procedimentos do estado da técnica (S. Penco, Chim. In. (Milão), (1993), 369-373).

Após transformação de 7a.b nos açúcares protegidos 9a-h por métodos correntes, 9a-h foram acoplados com a 14-acetoxidaunomicinona pelo método de Y. Kimura et al., utilizando trifluorometanossulfonato de trimetilsililo como catalisador (Y. Kimura et al., Chem. Letters, (1984), 501-504) ou pelo método de J. M. Broadhurst et al., utilizando trifluorometanossulfonato de prata (J. M. Broadhurst et al., J. Chem. Soc. Perkin I, (1982), 2249-2255). A conversão adicional de 10a.b em epirubicina depende do grupo protector da amina. Para o composto 10a foi seguida a sequência reaccional descrita no esquema 2.

OMe 0 OH 0 OMe 0 OH O

10a

11a 9 V ^^

0 tratamento do composto 10a em condições básicas suaves, e.g. com hidrogenocarbonato de sódio dá 11a com bom rendimento. A remoção do grupo trifluoroacetilo requer contudo condições básicas mais fortes que provocam a destruição parcial da parte de aglicona (G. Turci, V. Cario, Patente Europeia 0,253,654, 1987). Em consequência a posição lábil a base é primeiro protegida como acetonido, e.g. com 2,2-dimetoxipropano (genericamente 2,2-di(Ci-C4 alcoxi)propano) para dar o composto 12 de acordo com um método análogo ao descrito para a aglicona (F. Arcamone et ai., Pedido de Patente Alemã 7502934, 1974). Agora é possível a remoção do grupo trifluoroacetato em condições básicas mais fortes (NaOH). Após hidrólise do acetonido e acidificação com ácido clorídrico, é isolado o sal de ácido clorídrico da epirubicina (13)·

Para o composto 10b foi desenvolvida uma via mais curta para a epirubicina (13) tal como descrita no esquema 3. 10

Esquema 3

Após hidrólise do grupo C14-acetoxi em condições básicas, e.g. com hidrogeno carbonato de sódio o grupo aliloxicarbonilo é removido em condições básicas fracas com um catalisador de Pd, e.g. tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0).

Exemplos

Exemplo 1 1_ em 4 -epi a unidade 3-amino

Conversão de Daunorubicina-HCl Dox o r u b i c i n a - HC 1 1 3 utilizando trifluoroacetilo para a protecção do grupo 11

Γ

Metanólise

A uma solução de 8 g (14 mmol) de daunorubicina-HCl 1 em 500 mL de MeOH seco, adicionou-se 5,9 mL (79 mmol, 5,6 eq.) de cloreto de acetilo. Após refluxo durante 1 h os solventes foram evaporados sob vácuo. A adição de CHCI3 ao resíduo provocou a precipitação de daunosamina 3. Depois de o amino açúcar ter sido separado por filtração, o filtrado foi evaporado sob vácuo. Adicionou-se éter diisopropílico ao sólido remanescente e a mistura foi sonicada durante 15 min para dar daunomiciona 2. No total, obteve-se 2,55 g (91%) de daunosamina 3 e 5,5 g (99%) de daunomicinona 2, p.f. 209-233°C (dec.); ^-H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 2,17 (dd, 1H, J=4,8 Hz, H8), 2,35 (d, 1H, J=14,6 Hz, H8), 2,43 (s, 3H, H14), 3,09 (AB, 2H, Jab=18,6 Hz, Ηχο), 3,75 (s largo, ÍH, 7 -OH) , 4,09 (S, 3H, OCH3) , 4,57 (s, 1H, 9-OH), 5,32 (S largo, 1H, H7), 7,40 (d, ÍH, J=8,4 Hz, H3), 7,79 (t, 1H, J=8,2 Hz, H2), 8,03 (d, ÍH, J=7,6 Hz, Ηχ), 13,26 (s, ÍH, ArOH), 13,96 (s, ÍH, ArOH).

Modificação da aalicona

Sob atmosfera de árgon, adicionou-se uma solução de 1,24 mL (2,5 eq.) de Br2 em 72,8 mL de CHCI3 a uma solução de 3,90 g (9,8 mmol) de daunomicinona 2 em 390 mL de CHCI3. Após agitação da mistura reaccional de um dia para o outro à temperatura ambiente, precipitou o brometo puro 4_ e foi separado por filtração; rendimento de 4,1 g (88%). O brometo 4 foi dissolvido em 1,17 L de acetona, adicionou-se 16,7 g de KOAc à mistura que foi então aquecida a refluxo durante 5 min. Em seguida os solventes foram evaporados sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em CHCI3 e lavado com água e solução saturada de cloreto de sódio. Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04, filtrados e concentrados sob vácuo. Adicionou-se éter diisopropílico e a mistura foi sonicada e filtrada para dar acetato de doxorubicinona 4, 3,8 g (97%), p.f. 226-229°C (dec.); ÍH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,10 (dd, ÍH, J=4,5 Hz, H8), 2,21 (S, 12 L-Cj Γ 3H, Ac), 2,50 (d, 1H, J=14,8 Hz, Hs), 3,06 (AB, 2H, Jab=18,8 Hz, H10)/ 3,46 (s, 1H, 7-OH), 4,09 (s, 3H, OCH3), 4,74 (s, 1H, 9-OH), 5,24 (AB, 2H, Jab=18,3 Hz, H14), 5,34 (s, 1H, H7), 7,39 (d, 1H, J=8,4 Hz, H3), 7,79 (t, 1H, J=8,0 Hz, H2), 8,00 (d, 1H, J=7,7 Hz, Hl), 13,14 (s, 1H, ArOH), 13,88 (s, 1H, ArOH).

Modificação do amíno açúcar A uma solução de 2,55 g (12,9 mmol) de 3 em 64 mL de éter dietilico seco sob atmosfera de árgon adicionou-se 5 mL (4,8 eq.) de piridina. A mistura reaccional foi arrefecida a -20°C e adicionou-se 3,63 mL de anidrido do ácido trifluoroacético. Após agitação de um dia para o outro à temperatura ambiente, a mistura foi filtrada e o filtrado foi lavado com éter dietilico. O filtrado foi lavado subsequentemente com solução de ácido cítrico 10%, NaHC03 saturado e solução saturada de cloreto de sódio. Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e evaporados sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna "flash" (5% de MeOH em CHCI3) para dar 2,69 g (81%) do composto 5a, p.f. 137-152°C; *Η RMN (100 MHz, acetona-d6): ô 1,22 (d, 3H, J=6,5 Hz, 5-CH3), 1,72 (dd, 1H, J=7,8 Hz, H2ax)/ 2,80-3,20 (s largo, 1H, 4-OH), 3,33 (s, 3H, OCH3), 3,68 (d largo, 1H, H4), 3,94 (q, 1H, J=5,4 Hz, H3), 4,19-4,52 (m, 1H, H5), 4,75 (d, 1H, J=5,7 Hz, Hl), 7,94-8,27 (s largo, 1H, NH). A uma solução de 2,5 g (9,7 mmol) de 5a, em 100 mL de CK2CI2, adicionou-se 2,45 g (11,4 mmol) de clorocromato de piridinio (PCC). Após 2 e depois de 4 h de refluxo adicionou-se 1,08 g (5,0 mmol) de PCC. Novamente depois de aquecimento da mistura reaccional a refluxo durante 8 h adicionou-se 1,5 g (7,0 mmol) de PCC e a mistura foi agitada de um dia para o outro. A mistura foi vertida em 436 mL de éter dietilico, filtrada sobre hyflo e evaporada sob vácuo, o residuo foi purificado por cromatografia em coluna "flash" (2% de acetona em CH2CI2) para dar 2,10 g (85%) do composto 6a, p.f. 74-98°C; ^-H RMN (100 MHz, 13 CDCI3): δ 1,34-1,51 (m, 3Η, 5-CH3), 1,61-2,08 (m, 1Η, H2ax)r 2,81-3,07 (m, 1H, H2eq), 3,47 e 3,49 (sd, 3H, OCH3), 4,25 (q, 1H, J=6,8 Hz, H5), 4,57-4,86 (m, 1H, Ηχ), 4,95-5,06 (m, 1H, H3), 6,94-7,24 (s largo, 1H, NH).

Adicionou-se 10 mL de BH3.THF 1 M gota a gota a uma solução de 2,6 g (10 mmol) de cetona 6a dissolvida numa mistura de 200 mL de THF seco e 125 mL de MeOH seco sob atmosfera de árgon a 0°C. Após agitação durante 10 min, adicionou-se 1 mL de H2O e os solventes foram evaporados sob vácuo. O óleo remanescente foi purificado por cromatografia em coluna "flash" (3% de MeOH em CH2CI2) para dar 2,08 g (80%) do derivado de 4'-epi daunosamina 7a como um sólido branco, p.f. 165-167°C; ^-H RMN (100 MHz, acetona-d6): δ 1,24 (d, 3H, J=6,3 Hz, 5-CH3), 1,65-2,00 (md, 1H, H2ax)/ 2,69 (s largo, 1H, 4-OH), 3,31 (s, 3H, OCH3), 3,11-3,38 (m, 1H, H4), 3,53-3,81 (m, 1H, H3), 4,00-4,36 (m, 1H, H5), 4,70 (d, 1H, J=5,4 Hz, Ηχ), 8,11-8,43 (s largo, 1H, NH) .

Uma solução de 2,08 g (8,1 mmol) do epi açúcar 7a em 20% de AcOH foi aquecida a refluxo durante 3 h a 90°C. A solução foi liofilizada e purificada por cromatografia em coluna "flash" (10% de MeOH em CH2CI2) para dar 1,38 g (70%) do hemi acetal 8a, p.f. 180-185°C; ^-H RMN (100 MHz, acetona-d6): δ 1,17 (d, 3H, J=6,4 Hz, 5-CH3), 1,55-1,84 (m, 1H, H2ax), 3,06-3,40 (m, 1H, H4), 3,78-4,10 (m, 1H, H3), 4,17-4,44 (m, 1H, H5), 5,14-5,32 (d, 1H, Ηχ·), 8,15-8,42 (s largo, 1H, NH).

Acoplamento do derivado 4 '-eoi daunosamina 9a com o derivado de doxorubicinona 4

Adicionou-se 3,3 mL (23,5 mmol) de anidrido trifluoroacético a uma suspensão com agitação de 272 mg (1,12 mmol) de 8a em 10 mL de éter dietilico seco sob atmosfera de árgon a 0°C. Após a suspensão se ter tornado limpida, continuou-se a agitação durante 1 h à temperatura ambiente, depois do que 14 Γ L-Cj t o solvente foi cuidadosamente removido sob vácuo. A este resíduo adicionou-se 50 rrtL de CH2CI2 seco e 10 g de crivos moleculares 4 Â e 0,27 mL (1,39 mmol) de trifluorometanossulfonato de trimetilsililo sob atmosfera de árgon a 0°C. A mistura reaccional foi agitada a 0°C durante lhe adicionou-se uma solução de 0,50 g (1,11 mmol) de derivado de doxorubicinona 4 em 100 mL de CH2CI2 seco. Após agitação durante 2 h à temperatura ambiente, a suspensão vermelha foi vertida numa solução com agitação vigorosa de NaHC03 saturado e a camada aquosa foi extraída com CH2CI2· Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio e secos sobre Na2SC>4, filtrados e os solventes foram evaporados sob vácuo. O sólido vermelho remanescente foi agitado de um dia para o outro numa mistura de 20 mL de CH2CI2 e 175 mL de MeOH sob atmosfera de árgon e os solventes foram evaporados sob vácuo. O sólido vermelho remanescente foi purificado por cromatografia em coluna "flash" (4% de MeOH em CH2CI2) para dar 345 mg (47%) de derivado de 4'-epi doxorubicina 10a. (também se obteve 122 mg (24%) de aglicona 4. que não reagiu); p.f. 114-126°C? RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,39 (d, 3H, J=6,2 Hz, 5'-CH3), 1,84 (td, 1H, J=12,8 Hz, H2'ax)f 2,14 (dd, 1H, J=4,2 Hz, H2'eq), 2,21 (s, 3H, COCH3), 2,21-2,25 (m, 1H, Hs), 2,50 (d, 1H, J=15 Hz, H8), 2,98 (d, 1H, J=19 Hz, H10)/ 3,25-3,30 (m, 2H, H10 e H4'), 3,90-4,00 (m, 2H, H3' e H5'), 4,07 (s, 3H, OCH3), 4,53 (s, 1H, 9-OH), 5,23 (AB, 2H, Jab=18 Hz, H14), 5,26 (s, 1H, H7), 6,46 (d, 1H, J=7,3 Hz, NH), 7,38 (d, 1H, J=8,5 Hz, H3), 7,73 (t, 1H, J=8,2 Hz, H2), 8,01 (d, 1H, J=7,7 Hz, Hl), 13,19 (s, 1H, ArOH), 13,96 (S, 1H, ArOH).

Adicionou-se 225 mL de NaHC03 saturado a uma solução de 784 mg (1,15 mmol) de 10a numa mistura de 150 mL de acetona e 75 mL de metanol sob atmosfera de árgon. Após agitação durante 3 h à temperatura ambiente, a suspensão púrpura foi vertida em 600 mL de H2O e foi extraída 3 vezes com CHCI3. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio, secos sobre Na2S04, filtrados e levados à 15

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secura sob vácuo para dar 526 mg (72%) do composto 11a. p.f. 147-162°C (dec.).

Adicionou-se 5,1 mL (42 mmol) de 2,2-dimetoxipropano e 1 mg de ácido p-tolueno sulfónico a uma solução de 107 mg (0,17 mmol) de 11a numa mistura de 1 mL de dioxano e 20 mL de CHCI3, sob atmosfera de árgon. Após agitação durante 24 h à temperatura ambiente, adicionou-se 10 mg de NaHCC>3 e a solução foi agitada durante 5 min. A mistura reaccional vermelha foi lavada com água até pH neutro. A camada orgânica foi lavada com com solução saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04, filtrada e evaporada sob vácuo. 0 sólido vermelho remanescente foi purificado por cromatografia em coluna "flash" (5% de MeOH em CH2CI2) para dar 86 mg (72%) do composto 12a (mistura de diastereómeros), p.f. 146-164°C. RMN (400 MHz, CDCI3): ô 1,26-1,64 (m, 11H, H14 e 2xl5-CH3 e 5'-CH3), 2,15-2,38 (m, 2H, H8), 3,02 (t, 1H, J=18,8 Hz, H2'ax), 3,19-3,30 (m, 1H, H2-eq)/ 3,42 e 3,44 (2s, 1H, 13-OCH3), 3,98-4,12 (m, 2H, H3' e H5')/ 4,08 (s, 3H, 4-OCH3), 5,11-5,18 (m, 1H, H7), 5,40 e 5,47 (2d, 1H, J=3,4 Hz, Hl'), 6,21 (d largo, 1H, J=7,4 Hz, NH), 7,38 (d, 1H, J=5,1 Hz, Hl), 7,77 (t, 1H, J=8,0 Hz, H2), 8,03 (d, 1H, J=7,6 Hz, H3), 13,34 e 13,36 (2s, 1H, 6-OH), 13,96 e 14,02 (2s, 1H, 11-OH).

Uma solução de 325 mg (0,46 mmol) de 12. numa mistura de 50 mL de NaOH 0,1 M e 10 mL de acetona foi agitada durante 30 min à temperatura ambiente sob atmosfera de árgon. O pH da mistura reaccional foi ajustado para 8,4 com uma solução de HC1 0,1 M e extraida com CHCI3 até que a camada orgânica ficasse incolor. Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04, filtrados e o solvente foi evaporado sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em 20 mL de HC1 0,1 Me agitado durante 39 h à temperatura ambiente, a solução foi então lavada com CHCI3 (para extrair a aglicona). O pH da camada aquosa combinada foi ajustado para 8,5 com NaOH 0,1 Me extraída com CHCI3 até o extracto orgânico estar incolor. Os extractos orgânicos 16

V

U t combinados foram secos sobre Na2SC>4, filtrados e a solução foi concentrada. Adiçionou-se éter dietilico e 0,76 mL de HC1 0,6 M em MeOH, precipitou 4"-epi doxorubicina-HCl 13. e foi filtrada para dar 118 mg (45%), p.f. 176-185°C (dec.); !h RMN (400 MHz, DMSO-d6)í ô 1,20 (d, 3H, J=6,2 Hz, 5'-CH3), 1,70 (t largo, 1H, H2'axK 2,02 (d largo, 1H, J=ll,5 Hz, H2'eq)/ 2,16 (s largo, 2H, Hg), 3,04 (s largo, 2H, HlO), 3,40 (t, 1H, J=5,0 Hz, H3'), 3,49 (d largo, 1H, J=4,2 Hz, H4'), 3,91 (t, 1H, J=7,9 Hz, H5'). 3,98 (s, 3H, OCH3), 4,56 (s largo, 2H, H14), 4,96 (t, 1H, J=4,6 Hz, H7), 5,26 (d, 1H, J=3,2 Hz, Ηχ'), 5,45 (s, 1H, 9-OH), 5,65 (s largo, 1H, 4'-OH), 7,66 (t, 1H, J=4,8 Hz, H2), 7,92 (s, 2H, J=4,8 Hz, Hi e H3).

Exemplo 2

Conversão de Daunorubicina-HCl 1. em 4'-epi Doxorubicina-HÇ1 13 utilizando a unidade alil oxi carbonilo para a protecção do grupo 3'-amino

Metanólise A daunorubicina-HCl 1 sofre ruptura tal como descrito no exemplo 1.

Modificação da aalicona A daunorubicinona é transformada tal como descrito no exemplo 1.

Modificação do amino açúcar

Sob atmosfera de árgon adicionou-se 1,47 g (7,3 mmol) de Npsuccinimidil carbonato de alilo e 2,9 mL (16,6 mmol) de N,N-diisopropiletilamina a uma solução de 1,31 g (6,7 mmol) de 3 em 100 mL de acetonitrilo seco. Após agitação durante 30 min à temperatura ambiente o solvente foi evaporado sob vácuo. O óleo 17 Γ L-Cj t remanescente foi purificado por cromatografia em coluna (Si-60, CH2Cl2/MeOH/NEt3 = 98/2/1, v/v/v) para dar 1,61 g (>99%) de composto 5b como um sólido branco, p.f. 57-63°C; RMN (300 MHz, CDC13): δ 1,23 (d, 3H, J=6,6 Hz, 5-CH3), 1,72 (td, 1H, J=13,0 Hz, H2ax)f 1/86 (dd, 1H, J=13,2 Hz, H2eq)/ 2,10 (s largo, 1H, 4-OH), 3,33 (S, 3H, OCH3), 3,54-3,67 (m, 1H, H5), 3,94-4,10 (m, 2H, H3 e H4), 4,55 (d, 2H, J=5,3 Hz, CH2 de Aloc), 4,74 (d, 1H, J=3,5 Hz, Hl), 4,79 (d, 1H, J=6,0 Hz, NH), 5,19-5,34 (m, 2H, =ÇH2 de Aloc), 5,80-6,00 (m, 1H, CH= de Aloc). A uma solução de 1,0 g (4,1 mmol) de 5b em 50 mL de CH2CI2 seco adicionou-se 2,0 g (9,2 mmol) de clorocromato de piridinio (PCC). Após 2 de refluxo adicionou-se 1,0 g (4,7 mmol) de PCC. Após refluxo de 3 1/2 ha solução foi concentrada sob vácuo e vertida em éter dietilico. Após filtração da mistura reaccional o filtrado foi evaporado sob vácuo. O sólido remanescente foi purificado por cromatografia em coluna (Si-60, CH2CI2/acetona/ NEt3 = 98/2/1, v/v/v) para dar 0,87 g (88%) de composto 6b (mistura de diastereómeros (A=ax-OCH3; B=eq-OCH3, 1:1)). p.f. 44-72°C; !h RMN (300 MHz, CDCI3): δ 1,31 (d, 1 1/2H, J=6,5 Hz, 5tCH3, (A)), 1,31 (d, 1 1/2H, J=7,0 Hz, 5-CH3 (B)), 1,55-1,70 (m, 1/2H, H2ax (A)), 1,77 (td, 1/2H, J=12,7 Hz, H2ax (B)), 2,81 (dd, 1/2H, J=6,7 Hz, H2eq (A)), 2,95-3,21 (m, 1/2H, H2eq (B)), 3,40 (s, 1 1/2H, OCH3 (A)), 3,47 (s, 1 1/2H, OCH3 (B)), 4,33-4/42 (m, 1H, H5), 4,58 (d, 2H, J=4,3 Hz, CH2 de Aloc), 4,75-4,85 (m, 1/2H, H3 (B)), 4,86 (d, 1H, J=2,9 Hz, Ηχ), 5,03 (t, 1/2H, H3 (A)), 5,21-5,34 (m, 2H, =CH2 de Aloc), 5,49 (s largo, 1H, NH), 5^86-5,98 (m, 1H, CH= de Aloc).

Sob atmosfera de árgon adicionou-se uma solução de 0,11 mL de BH3.THF 1 M gota a gota a uma solução de 26 mg (0,11 mmol) de 6b numa mistura de 5 mL de THF seco e 2,5 iriL de MeOH seco a 0°C. Após agitação durante 15 min adicionou-se 0,05 mL de H2O e os solventes foram evaporados sob vácuo. O sólido remanescente foi purificado por cromatografia em coluna (Si-60, EtOAc/n-hexano/NEt3 = 7/3/0,01, v/v/v) para dar 18 mg (69%) de composto 18 \

-t 7b. p.f. 56-87°C; !h RMN (300 MHz, CDCI3): δ 1,30 (d, 3H, 3=6,5 Hz, 5-CH3), 1,63 (td, 1H, J=12,7 Hz, H2ax), 1,80-2,18 (m, 2H, H2eq e 4-OH), 3,07 (t, 1H, J=9,4 Hz, H5), 3,34 (s, 3H, OCH3), 3,58-3,70 (m, 1H, H4), 3,85-3,97 (m, 1H, H3), 4,58 (d, 2H, J=5,5 Hz, CH2 de Aloc), 4,73 (d, 1H, J=4,8 Hz, Hl), 4,72-4,80 (m, 1H, NH), 5,21-5,34 (m, 2H, =CH2 de Aloc), 5,85-5,96 (m, 1H, CH= de Aloc).

Uma solução de 346 mg (1,4 mmol) de 7b em 20% de HOAc foi aquecida a refluxo durante 2 h a ±90°C. A solução foi lioíilizada para dar 318 mg (97%) do composto 8b, p.f. 147-154°C; *Η RMN (100 MHz, acetona-d6): δ 1,17 (d, 3H, J=6,0 Hz, 5-CH3), 1,41-1,79 (m, 1H, H2ax), 2,73-3,11 (m, 1H, H3), 3,72-4,14 (m, 2H, H5 e H4), 4,49 (d, 2H, J=5,0 Hz, CH2 de Aloc), 5,05-5,20 (m, 2H, =CH2 de Aloc), 5,35 (d, 1H, Ηχ), 5,74-6,12 (m, 1H, CH= de Aloc), 6,24 (s largo, 1H, NH).

Acoplamento do derivado 4 '-epi daunosamina 9b com o derivado de doxorubicinona 4

Sob atmosfera de árgon adicionou-se 0,96 mL (6,8 mmol) de anidrido trifluoroacético a uma suspensão com agitação de 77 mg (0,33 mmol) de 8b em 5 mL de éter seco a 0°C. Após a suspensão se ter tornado limpida, continuou-se a agitação durante 45 min à témperatura ambiente. Em seguida o solvente foi cuidadosamente removido sob vácuo. Ao residuo adicionou-se 10 mL de éter dietilico seco e fez-se borbulhar HC1 através da solução a 0°c durante 30 min. 0 solvente foi cuidadosamente removido sob vácuo. Sob atmosfera de árgon, adicionou-se a uma solução do óleo remanescente 93 mg (0,36 mmol) de trifluorometanossulfonato de prata dissolvidos em 2 mL de éter dietilico seco e 50 mg (0,11 mmol) de 4 em 25 mL de CH2CI2 seco. Após agitação durante 2 h adicionou-se outros 93 mg (0,36 mmol) de trifluorometanossulfonato de prata. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura reaccional vermelha foi vertida numa solução saturada de NaHC03 com agitação 19 Γ L—l vigorosa e a camada aquosa foi extraída com CH2CI2. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e o solvente foi evaporado sob vácuo. 0 sólido vermelho remanescente foi purificado por cromatografia em coluna "flash" (EtOAc/Hex = 2/1, v/v e 2% de MeOH em CH2CI2) para dar 16 mg (23%) de composto 1 Ob. (também se obteve 24 mg (50%) de aglicona 4. que não reagiu). Composto 10b: p.f. 115-122°C; RMN (400 MHz, CDCI3): ô 1,38 (d, 3H, J=6,2 Hz, 5'-CH3), 1,69 (td, 1H, J=12,8 Hz, H2'ax), 2,07-2,15 (m, 2H, H2’eq e Hg), 2,21 (s, 3H, COCH3), 2,52 (d, 1H, J=14,9 Hz, Hg), 3,14 (t largo, 1H, J=8,8 Hz, H4·), 3,18 (ÁB, 2H, Jab=19,0 Hz, H10), 3,53 (s largo, 1H, 4'-OH), 3,65-3,77 (m, 1H, H5"), 3,48-3,90(m, 1H, H3'), 4,09 (s, 3H, OCH3), 4,53 (d, 2H, J=5,6 Hz, CH2 de AlOC), 4,65 (s, 1H, 9-OH), 4,68 (d, 1H, J=7,2 Hz, NH), 5,18-5,30 (m, 3H, H7 e =CH2 de Aloc), 5,24 (AB, 2H, Jab=18,2 Hz, H14), 5,50 (d, 1H, J=3,5 Hz, Ηχ'), 5,84-5,90 (m, 1H, CH= de Aloc), 7,40 (d, 1H, J=8,4 Hz, H3), 7,79 (t, 1H, J=8,0 Hz, H2), 8,05 (d, 1H, J=7,7 Hz, Ηχ), X3,25 (S, 1H, ArOH), 14,00 (s, 1H, ArOH).

Sob atmosfera de árgon adicionou-se 15 mL de NaHC03 saturado a uma solução de 50 mg (0,08 mmol) de 10b numa mistura de 10 mL de acetona e 5 mL de metanol. Após agitação durante 4 h à temperatura ambiente a suspensão púrpura foi vertida em 25 mL de H2O e foi extraída com CHCI3. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio, secos sobre Na2S04, filtrados e os solventes foram ccmcentrados sob vácuo. Adicionou-se n-hexano e o composto 11b puro precipitou para dar 40 mg (85%) do composto 11b. p.f. 117-131°C. *Η RMN (300 MHz, CDCI3): ô 1,36 (d, 3H, J=6,l Hz, 5'-CH3), 2,04-2,12 (m, 2H, H2' eq e Hg), 2,40 (d largo, 1H, J=14,7 Hz, He), 2,99-3,32 (m, 3H, Ηχο e H4'), 3,62-3,75 (m, 1H, H5-), 3,75-3,84 (m, 1H, H3'), 4,08 (s, 3H, OCH3), 4,53 (d, 2H, J=5,6 Hz, CH2 de AlOC), 4,71-4,79 (m, 3H, H14 e 9-OH), 5,17-5,30 (m, 3H, =CH2 de Aloc e H7), 5,50 (d, 1H, Ηχ-), 5,80-5,95 (m, 1H, CH= dê Aloc), 7,39 (d, 1H, J=8,0 Hz, H3), 7,78 (t, 1H, J=8,3 Hz, 1 20 V, ι Η2), 8,04 (d, 1Η, J=7,6 Hz, Ηχ), 13,24 (s, 1H, ArOH), 13,99 (s, 1H, ArOH).

Sob atmosfera de árgon adicionou-se 5 eq. de morfolina e uma pitada de tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) a uma solução de 100 mg (0,16 mmol) de 11b em 50 mL de CH2CI2 seco. Após agitação durante 2 h à temperatura ambiente o solvente foi concentrado sob vácuo. À solução remanescente adicionou-se HC1 0,6 M em éter dietilico e éter dietilico seco e o composto 13. puro precipitou para dar 83 mg (90%) de composto 13., p.f. 176-185°C (dec.); ΧΗ RMN (400 MHz, DMSO): δ 1,20 (d, 3H, J=6,2 Hz, 5'-CH3), 1,70 (t largo, 1H, H2'ax), 2,02 (d largo, 1H, J=ll,5 Hz, H2'eq)f 2,16 (s largo, 2H, He), 3,04 (s largo, 2H, Hio), 3/40 (t, 1H, J=5,0 Hz, H3'), 3,49 (d largo, 1H, J=4,2 Hz, H4'), 3/91 (t, 1H, J=7,9 Hz, H5-), 3,98 (s, 3H, OCH3), 4,56 (s largo, 2H, H14), 4,96 (t, 1H, J=4,6 Hz, H7), 5,26 (d, 1H, J=3,2 Hz, Hl'), 5,45 (s, 1H, 9-OH), 5,65 (s largo, 1H, 4'-OH), 7,66 (t, 1H, J=4,8 Hz, H2), 7,92 (s, 2H, J=4,8 Hz, Hl e H3).

Acoplamento do derivado de 4 '-eoi daunosamina 9a com o derivado de doxorubicinona 4 A uma solução de 4,9 g (21,4 mmol) de 8b em 125 mL de piridina adicionou-se 10,5 g (52 mmol) de cloreto de p-nitrobenzoilo sob atmosfera de árgon a 0°C. Após agitação da mistura reaccional durante 6 h à temperatura ambiente adicionou-se 13 mL de H2O e agitou-se durante mais 1/2 h. A mistura reaccional foi vertida em 375 mL de H2O e a camada aquosa foi extraída com CH2CI2 · Os extractos orgânicos combinados foram lavados com H2SO4 3 N, H2O e solução saturada de cloreto de sódio, secos sobre MgS04, filtrados e os solventes foram evaporados sob vácuo. Após cristalização (acetona/CH2Cl2 = 1/10, v/v e n-hexano) obteve-se 10,1 g (93%) de composto 9q.

Fez-se borbulhar HC1 através de uma solução de 58 mg (0,12 mmol) de 9jg em 15 iriL de éter dietilico seco durante 3 min a 0°C. 21

Após separação do precipitado por filtração, o filtrado foi evaporado sob vácuo.

Sob atmosfera de árgon o resíduo dissolvido em 15 mL de CH2CI2 seco foi adicionado a 50 mg (0,11 mmol) de 4 em 25 mL de CH2CI2 seco. Adicionou-se uma solução de 34 mg (0,13 mmol) de trifluorometanossulfonato de prata em 2 mL de éter dietílico seco e após agitação durante 2 h adicionou-se outros 34 mg (0,36 mmol) de trifluorometanossulfonato de prata. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura reaccional vermelha foi vertida numa solução saturada de NaHC03 com agitação vigorosa e a camada aquosa foi extraída com CH2CI2. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de sódio, secos sobre Na2S04, filtrados e os solvente foram evaporados sob vácuo. O sólido vermelho remanescente foi purificado por cromatografia em coluna "flash" (2% de MeOH em CH2CI2) para dar 44 mg (60%) de composto IQb. p.f. 115-122°C. Para os dados de RMN ver atrás (página 20 linhas 8-19) A desprotecção do composto 10b a 4'-epi Doxorubicina-HCl 13 é tal como descrita no exemplo 2.

Lisboa, 21 de Agosto de 2000 0 AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL- \-' iv~\ 22

Claims (1)

1. Γ

   REIVINDICAÇÕES 1. Processo para a preparação de epirubicina e dos seus sais de adição de ácido a partir de daunomicina (daunorubicina), compreendendo a) metanolização de daunomicina (daunorubicina) ou de um seu sal de adição de ácido (1.) a daunomicinona 2. e éter metilico de daunosamina ou um seu sal de adição de ácido (3)

   e isolamento de 2 e 3; b) conversão de 2. em 14-acetoxidaunomicinona 4. por bromação e acetoxilação: O OH 0

   OMe O OH OH

   O 4 c) protecção do grupo amina de 3_ com um grupo trifluoroacetilo ou com um grupo aliloxi carbonilo para 1 dar ο composto 5a ou 5b, respectivamente, em que X = trifluoroacetilo (TFA) (5a) ou aliloxicarbonilo (Aloc) (5b)

   OMe 5a: X = TFA 5b: X = AlOC d) oxidação do composto 5a ou 5b para dar o composto 6a ou 6b. respectivamente

   OMe 6a: X = TFA 6b: X = Aloc e) redução do composto 6a ou 6b ao composto la. ou 7b. respectivamente

   OMe 7a: X = TFA 7b: X = Aloc f) conversão do composto 7_a ou 1b. para produzir os compostos protegidos 9a-d ou 9e-h, respectivamente 2 V

   9a 9b 9c 9d 9e 9f ia 9h X=TFA, Y=OTFA, Z=OTFA X=TFA, Y=OTFA, Z=halogeneto X=TFA, Y=OC(0)PhN02, Z=0C(0)PhN02 X=TFA, Y=0C(0)PhN02, Z=halogeneto X=AlOC, Y=OTFA, Z=OTFA X=Aloc, Y=OTFA, Z=halogeneto X=Aloc, Y=0C(0)PhN02, Z=0C(0)PhN02 x=Aloc, Y=OC(0)PhN02, Z=halogeneto g) reacção do composto 4. com o composto 9a-d ou 9e-h para obter o composto 10a ou 10b

   10a; X = TFA 10b: X = Aloc e em seguida ha) reacção do composto 10a em condições básicas suaves para dar o composto 11a 3

   0 OH Ο

   OH OMe O OH Ο

   NHTFA 11a ia) protecção do composto 11a para obter o composto 12 0 0H OH ?R

   OMe O OH O

   12 em que R=Ci-C4 alquilo ja) remoção do grupo trifluoroacetilo do composto 12. em condições básicas fortes, seguida por remoção do grupo protector acetal em condições ácidas, neutralização a epirubicina e opcionalmente acidificação para preparar um sal de adição de ácido, em particular o sal de HC1, de epirubicina; ou: hb) submeter o composto 10b a hidrólise do grupo C14-acetoxi em condições básicas para dar o composto 11b i 4 OMe O OH Ο

   i*>) remover o grupo protector aliloxi carbonilo cataliticamente com um catalisador de Pd para obter epirubicina, e opcionalmente converter a epirubicina obtida num seu sal de adição de ácido, em particular o sal de HC1. Processo de acordo com a reivindicação 1, compreendendo a utilização de BH3.THF como um agente redutor no passo e). Lisboa, 21 de Agosto de 2000 O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUS TRIAL V 5