PT2532366T

PT2532366T - Composição farmacêutica para o tratamento e/ou prevenção de cancro

Info

Publication number: PT2532366T
Application number: PT117398818T
Authority: PT
Inventors: Kobayashi Shinichi; Saito Takanori; Okano Fumiyoshi
Original assignee: Toray Industries
Priority date: 2010-02-04
Filing date: 2011-02-04
Publication date: 2016-12-20
Also published as: BR112012018951B8; RU2597971C2; AU2011211698A1; BR112012018951A8; JPWO2011096533A1; CA2788716C; KR101801667B1; US20130045210A1; EP2532366A4; HUE030742T2; BR112012018951C8; JP5742713B2; CN102821789A; CN102821789B; KR20130033347A; WO2011096533A1; ES2606173T3; PL2532366T3; DK2532366T3; BR112012018951B1

Description

DESCRIÇÃO

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA O TRATAMENTO E/QU PREVENÇÃO DE

CANCRO

Campo da Técnica A presente invenção refere-se a uma nova utilização farmacêutica de um anticorpo contra CAPRIN-1 ou um fragmento do mesmo, como um agente, para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro. Técnica Anterior 0 cancro é a principal causa de morte. A terapêutica conduzida atualmente compreende principalmente a terapêutica de combinação com terapêutica de radiação e quimioterapia. Apesar do desenvolvimento de novos procedimentos cirúrgicos e da descoberta de novos agentes anti-cancro nos últimos anos, os resultados do tratamento do cancro nâo tem melhorado muito recentemente, exceto para alguns tipos de cancro. Os avanços recentes em biologia molecular ou imunologia do cancro levam a identificação de anticorpos que reagem especificamente com o cancro, antigénios de cancro a serem reconhecidos por células T citotôxicas, genes que codificam antigénios de cancro, e semelhantes. As demandas por terapêuticas de cancro específicos dirigidas a antigénios de cancro estão aumentando (Literatura não patente 1).

Na terapêutica do cancro, é desejável que péptidos, polipéptidos, ou proteínas reconhecidos como antigénios estejam praticamente ausentes em células normais, mas que estejam presentes especificamente em células de cancro, com a finalidade de aliviar os efeitos secundários. Em 1991, Boon et al, (Ludwig Institute for Cancer Research, Bélgica) isolou um antigénio de melanoma humano MAGE 1 reconhecido por células T CD8 positivas pelo método de clonagem de expressão ADNc utilizando linhas celulares de cancro autólogas e as células T reativas a cancro (literatura não patente 2) . Posteriormente, g método SEREX (identificação SGrológica de antigénios através de clonagem de expressão recombinante) que compreende identificar antigénios de tumor reconhecidos pelos anticorpos que são produzidos in vivo em resposta a cancro autólogo de um paciente de cancro através de técnicas de clonagem de expressão gênica foi relatado (literatura não patente 3 e literatura de patente 1) . Com a utilização deste método, alguns antigénios de cancro, que quase nunca são expressos em células normais, mas são expressos específicamente em células de cancro, foram isolados (literaturas não patente 4-9). Além disso, ensaios clínicos foram conduzidos com terapêuticas de células dirigidas a alguns antigénios de cancro utilizando imunõcitos especificamente reativos com antigénios de cancro, ou imunoterapêuticas específicas de cancro utilizando vacinas ou semelhantes contendo antigénios de cancro.

Entretanto, nos últimos anos, vários medicamentos de anticorpo que se direcionam a proteínas antigénicas em células de cancro para o tratamento do cancro têm aparecido em todo o mundo. Os medicamentos de anticorpos exibem alguns efeitos farmacológicos como agentes terapêuticos específicos de cancro e assim atraem a atenção. No entanto, a maioria das proteínas de antigénio a serem direcionadas também são expressas em células normais, de modo que não apenas as células de cancro, mas também células normais que expressam o antigénio também são danificadas como resultado da administração de anticorpos. Os efeitos secundários resultantes são uma causa de preocupação. Portanto, espera-se que a identificação de antigénios de cancro que sejam expressos especif icamente na superfície de uma célula de cancro e a utilização de anticorpos direcionados a antigénios de cancro como agentes farmacêuticos torne o tratamento com medicamentos de anticorpos com menores efeitos secundários. A proteína 1 citoplasmática e associada com a proliferação (CAPRIN-1) é expressa quando células normais na fase dormente são ativadas ou passam por divisão celular, e é uma proteína intracelular conhecida por formar grânulos de estresse intracelular com ARN dentro das células, de modo que está envolvida na regulação traducional e transporte de ARNtn. Entretanto, existem muitos outros nomes que representam CAPRIN-1, tais como a proteína 1 de membrana ancorada a GPI ou proteína 1 marcadora de superfície componente de membrana (M11S1), como se tais proteínas tinham sido conhecidas por ser proteínas de membrana celular. Estes nomes se originaram de um relatório que a sequência génica de CAPRIN-1 é uma proteína da membrana tendo uma região de ligação a GPI e expressa em células de cancro colorretal (literatura não patente 10) . No entanto, a sequência génica de CAPRIN-1 proporcionada neste relatório foi posteriormente revelada que estava errada. 0 seguinte tem sido recentemente relatado; isto é, a deleção de um único nucleótido na sequência génica de CAPRIN-1 registada no GenBank, ou semelhante, causa um deslocamento do quadro de leitura, de modo que S0 amínoãcidos sâo perdidos da terminação C, resultando na geração de um artefato (74 amínoãcidos) que corresponde com a porção de ligação de GPI no relatório anterior, e adicionalmente, outro erro também está presente 5' da sequência génica, de modo que 53 amínoãcidos foram perdidos da terminação N (literatura não patente 11) . Também foi relatado recentemente que a proteína codificada pela sequência génica de CAPRIN-1 registada no GenBank, ou semelhante, não é uma proteína da membrana celular (literatura não patente 11) .

Além disso, com base no relatório da literatura não patente 10 de que CAPRIN-1 é uma proteína da membrana celular, as literaturas de patente 2 e 3 descrevem que CAPRIN-1 (como uma prGteína da membrana celular) sob o nome de M11S1 pode ser usada como alvo de um medicamento de anticorpo na terapêutica do cancro, embora os exemplos de trabalho não descrevam o tratamento utilizando um anticorpo contra a proteína. No entanto, como relatado na literatura não patente 11, acreditava-se comumente do momento do depósito da literatura de patente 2 até agora que CAPRIN não é expressa na superfície de uma célula. Os conteúdos das literaturas de patente 2 e 3 baseados apenas na informação incorreta de que CAPRIN-1 é uma proteína da membrana celular não deve ser claramente entendido como conhecimento geral comum para peritos na especialidade. Literatura da Técnica Anterior Literatura de Patente

Literatura de patente 1: Patente U.S. N° 5698396 Literatura de patente 2: US2008/0075722 Literatura de patente 3: WQ2005/100998 Literatura Mão Patente

Literatura Mão Patente 1: Tsuyoshi Akiyoshi, "Gan To Kagaku-Ryoho (Cancer and Chemotherapy},” 19 97, Vol. 24, p551-519 (Cancer and Chemotherapy Publishers, Inc., Japão) Literatura Não Patente 2 Bruggen P. et al., Science, 254: 1643-1647 (1991)

Literatura Máo Patente 3: Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A, 92: 11810-11813 (1995)

Literatura Não Patente 4 : Int. J. Cancer, 72: 965-971 (1997) Literatura Não Patente 5: Cancer Res,, 58: 1034-1041 (1998) Literatura Não Patente 6: Int. J. Cancer, 29: 652-658 (1998) Literatura Não Patente 7: Int. J. Oncol., 14: 703-708 (1999) Literatura Não Patente 8: Cancer Res., 56: 4766-4772 (1996) Literatura Não Patente 9: Hum. Mol. Genet 6: 33-39, 1997 Literatura Não Patente 10: J. Biol. Chem., 270: 20717-20723, 1995

Literatura Não Patente 11: J. Immunol., 172: 2389-2400, 2004

Além disso, 0 documento WO 02/078524 identifica por meio de ligação de HLA-A2 um fragmento de péptido de M11S1 que consiste na sequência de aminoãcidos SLLDEFYKL (aminoácidos 184-192 de CAPRIN-1 humana).

Kolobova et al., (2009) Exp. Cell. Res., 315(3): 542-555 utiliza um anticorpo policlonal anti-CAPRIN-1 de coelho para identificar uma interação com a proteína de estrutura AKAP35QA, Sumário da Invenção

Problema a ser Resolvido pela Invenção

Os objetivos da presente invenção são identificar proteínas antigénicas de cancro expressas especificamente sobre a superfície de uma célula de cancro e proporcionar a utilização de ura anticorpo dirigido contra a proteína de antigénio de cancro para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro.

Meios para Resolução do Problema

Como resultado de estudos intensivos, os presentes inventores obtiveram agora um ADNc que codifica uma proteína que se liga a um anticorpo existente nos soros de cães com cancro de mama pelo método SEREX utilizando tanto bibliotecas de ADNc preparadas a partir de tecidos de testículos caninos e soros de cães com cancro de mama. Os presentes inventores ainda prepararam agora proteínas CAPRIN-1 tendo as sequências de aminoãcidos de número par das SEQ ID NOS: 2 a 3 0 e anticorpos contra tais proteínas CAPRIN-1 com base no gene de cão obtido e os correspondentes genes homólogos de seres humanos, gado, cavalo, ratinho, e galinha. Consequentemente, os presentes inventores encontraram agora que CAPRIN-1 é especificamente expressa em cancro de mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro pulmonar, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro colorretal, cancro gástrico, cancro renal, cancro ovârico, cancro da próstata, e fibrossarcoma, e que uma porção da proteína CAPRIN-1 é especif icamente expressa na superfície de cada célula de cancro. Assim os presentes inventores descobriram agora que um anticorpo ou anticorpos contra a porção de CAPRIN-1 expressa na superfície de cada célula de cancro é/são citotóxico (s) para as células de cancro que expressam CAPRIN-1. Com base nestas verificações, a presente invenção conforme descrita abaixo foi concluída. A presente invenção proporciona um anticorpo ou fragmento do mesmo, uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo ou fragmento do mesmo, uma composição farmacêutica, e agentes para utilização num método para o tratamento e para a prevenção de cancro, todos como são definidos nas reivindicações .

Numa forma de realização, a presente invenção proporciona urna composição farmacêutica que pode ser para utilização num método para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, que compreende um anticorpo ou um fragmento do mesmo como um ingrediente ativo que se liga a um polipéptido parcial de CAPRIN-1, em que CAPRIN-1 ê representada por qualquer das sequências de número par das SEQ ID NOS: 2 a 30, e em que o polipéptido parcial compreende a sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 37.

Numa forma de realização, o cancro acima é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro pulmonar, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro colorretal, cancro gástrico, cancro renal, cancro ovãrico, cancro da próstata, ou fibrossarcoma.

Noutra forma de realização, o anticorpo é um anticorpo monoclonal ou um anticorpo policlonal.

Noutra forma de realização, o anticorpo é um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, anticorpo quimérico, anticorpo de cadeia simples, ou anticorpo bi-específico. Efeitos da invenção 0 anticorpo contra CAPRIN-1 utilizado na presente invenção é citotóxico para células de cancro. Como tal, o anticorpo contra CAPRIN-1 é útil para o tratamento ou a prevenção do cancro.

Breve Descrição dos Desenhos A Fig. 1 mostra os padrões de expressão dos genes que codificam as proteínas de CAPRIN-1 nos tecidos normais e linhas celulares tumorais. 0 Número de referência 1 indica os padrões de expressão dos genes que codificam as proteínas CAPRIN-1, e o Numero de referência 2 indica os padrões de expressão dos genes GAPDH. A Fig. 2 mostra a citotoxicidade para a linha celular de cancro da mama MDA-MB-157 que expressa CAPRIN-1 por anticorpos policlonais anti-CAPRIN-1 que são reativos com as superfícies das células de cancro, A referência n° 3 indica 3i 0¾. t —L. "V idade exibida quando o anticorpo policlonal anti-CAPRIN-1 n° 1 foi adicionado, A referência n° 4 indica a atividade exibida quando um anticorpo de controlo de um coelho não imunizado com um antigénio foi adicionado, A referência n° 5 indica a atividade exibida quando PBS foi adicionado em vez dos anticorpos.

Modo para levar a cabo a invenção A atividade antitumoral de um anticorpo contra um polipéptido representado por qualquer das sequências de número par das SEQ ID NOS: 2 a 30 utilizado na presente invenção pode ser avaliada pelo exame da supressão in vivo de crescimento tumoral em animais com cancro, ou, examinando se o antícGrpo exibe ou não a citotoxicidade via imunócitos ou complementos para células tumorais que expressam o polipéptido in vitro, conforme descrito posteriormente.

No contexto, as sequências de nucleótidos dos polinucleótidos que codificam proteínas que compreendem as sequências de aminoácidos de número para (isto é, SEQ ID NOS: 2, 4, 6 28, 30) das SEQ ID NOS: 2 a 30 são representados pelas sequências de número ímpar (isto é, SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 27, 29) das SEQ ID NOS: 1 a 29.

As sequências de aminoácidos que são representadas pelas SEQ ID NOS: 6, 8, 10, 12, e 14 na Lista de Sequências revelada no presente documentG são as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 isoladas como polipêptidos, que se liga a anticorpos especificamente existentes no soro de um cão com cancro, através do método SEREX usando uma biblioteca de ADNc de tecido de testículos caninos e o soro de um cão com cancro de mama. As sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 2 e 4 são as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 isoladas como homólogos humanos. A sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 16 ê a sequência de aminoâcídGS de CAPRIN-1 isolada como um homologo de bovinos. A sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 18 é a sequência de aminoácidos de CAPRIN-1 isolada como um homólogo de cavalo. As sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOS: 20 a 28 são as sequências de aminoãcidos de CAPRIN-1 isoladas como homólogos de ratinho. A sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 30 é a sequência de aminoãcidos de CAPRIN-1 isolada como um homologo de galinha (veja-se o Exemplo 1 descrito posteriormente). CAPRIN-1 é conhecida por ser expressa quando células normais na fase de repouo são ativadas ou originar a divisão celular. É conhecido que CAPRIN-1 não foi expressa em superfícies celulares. Contudo, como resultado do exame pelos presentes inventores, foi revelado agora que uma porção da proteína de CAPRIN-1 é expressa nas superfícies de várias células de cancro. Assim foi agora revelado que um anticorpo que reconhece um polipéptido parcial da proteína de CAPRIN-1, que consiste na sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 37 ou uma sequência de aminoãcidos tendo 80 % ou mais, preferentemente 85 % ou mais, mais preferentemente 90 % ou mais, ainda preferentemente 95 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 37, exibe atividade anti-tumoral. Exemplos dos anticorpos da presente invenção incluem todos os anticorpos que se ligam ma um fragmento da proteína CAPRIN-1 acima e exibem atividade anti-tumoral. 0 anticorpo anti-CAPRIN-1 descrito acima utilizado na presente invenção pGde ser qualquer tipo de anticorpo desde que exiba atividade anti-tumoral. Exemplos de tais anticorpos incluem anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos recombinantes, tais como anticorpos sintéticos, anticorpos multiespecíficos, anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, e anticorpos de cadeia simples (scFvs) , anticorpos humanos, e fragmentos dos mesmos, tais como fragmentos Fab, F(ab')2, e Fv. Estes anticorpos e fragmentos dos mesmos podem ser preparados por meio de métodos conhecidos dos peritos na especialidade. Na presente invenção, os anticorpos tendo reatividade imunológica com proteínas de CAPRIN-1 ou polipêptidos parciais das mesmas (ou seja, se ligam a proteínas de CAPRIN-1 via reação antigénio-anticorpo) e preferentemente anticorpos capazes de se ligarem específicamente a proteínas de CAPRIN-1 são desejado. Preferentemente, são anticorpos monoclonais. Os anticorpos policlonais podem também ser utilizados desde que possam ser produzidos anticorpos homogéneos. Igualmente, quando um indivíduo é um ser humano, os anticorpos humanos ou humanizados são desejado com a finalidade de evitar ou suprimir a rejeição. 0 termo "específicamente se liga a proteína de CAPRIN-1!! conforme é utilizado no presente documento significa que o anticorpo se liga específicamente a uma proteína de CAPRIN-1, mas não se liga substancialmente a proteínas que nâG sejam a proteína de CAPRIN-1, A atividade anti-tumoral de um anticorpo que pode ser utilizado na presente invenção pode ser avaliada conforme descrito abaixo pelo exame in vivo da supressão do crescimento tumoral em animais com cancro, ou, pelo exame se exibe ou não in vitro uma atividade de citotoxicidade, que é mediada por imunócitos ou complementos, a células tumorais que expressam o polipéptido.

Além disso, exemplos do indivíduo para o tratamento e/ou a prevenção de cancro na presente invenção incluem mamíferos, tais como seres humanos, animais de estimação, animais domésticos, e animais para competição. Um indivíduo preferível é um ser humano. A preparação de antigénios e anticorpos e composições farmacêuticas relacionados com a presente invenção são descritas abaixo. <Preparação de antigénios para a preparação de anticorpos>

As proteínas ou fragmentos das mesmas a serem utilizadas como antigénios de sensibilização para a obtenção de anticorpos anti-CAPRIN-1 utilizados na presente invenção pGdem ser derivadas de quaisquer espécies de animais sem limitação particular, tais como seres humanos, cães, gado, cavalos, ratinhos, ratos, e galinhas. No entanto, as proteínas ou fragmentos das mesmas são selecionadas de um modo preferido tendo em consideração a compatibilidade com as células parentais utilizadas para a fusão celular. No geral, são preferidas proteínas derivadas de mamíferos e, em particular, é preferida proteína derivada de ser humano. Por exemplo, quando a CAPRIN-1 é CAPRIN-1 humana, a proteína de CAPRIN-1 humana, um péptido parcial da mesma, ou células que expressam CAPRIN-1 humana podem ser utilizados.

As sequências nucleotídicas e as sequências de aminoâcidos de CAPRIN-1 humana e homólogos das mesmas podem ser obtidas por acesso ao GenBank (NCBI, E.U.A.) e utilizando um algoritmo tal como BLAST ou FASTA (Karlin e Altschul, Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A., 90: 5873-5877, 1S93; Altschul et al, , Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997).

Na presente invenção, com base na sequência nucleotídíca ÍSEQ ID NO: 1 ou 3) ou a sequência de aminoâcidos (SEQ ID NO: 2 ou 4) de CAPRIN-1 humana, o ácido nucleico alvo ou a proteína alvo compreende uma sequência tendo de 70 a 100 %, preferentemente de 80% a 100 %, mais preferentemente de 90% a 100 %, ainda mais preferentemente de 95% a 100 % (por exemplo, de 97% a 100%, de 98% a 100%, de 99% a 100%, ou de 99,5 % a 100 %) de identidade de sequência com a sequência nucleotídíca ou a sequência de aminoâcidos da ORF ou a porção madura de CAPRIN-1 humana. CGnforme é usado no presente documento, o termo "% de identidade de sequência" refere-se a uma percentagem (%) de aminoâcidos idênticos (ou nucleõtidos) com relação ao número total de aminoâcidos (ou nucleõtidos), quando duas sequências sâG alinhadas para conseguira maior semelhança com ou sem a introdução de lacunas. 0 comprimento de um fragmento da proteína de CAPRIN-1 varia desde o comprimento do aminoãcido de um epítopo (determinante antigénico), que é a unidade mínima reconhecída pelo anticorpo, até um comprimento menos do que o comprimento completo da proteína. 0 termo "epítopo" refere-se a um fragmento de polipéptido que tem antigenicidade ou imunogenicidade em mamíferos, preferentemente em seres humanos, a unidade mínima do epítopo consiste em cerca de 7 a 12 aminoãcidos, por exemplo, de 8 a 11 aminoãcidos. Portanto, o anticorpo da presente invenção ê caracterizado pelo reconhecimento de um fragmento contendo pelo menos um epítopo que consiste em cerca de 7 a 12 aminoácidos contínuos (por exemplo, de 8 a 11 aminoácidos contínuos) na sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 37 ou uma sequência de aminoãcidos tendo 80 % ou mais, preferentemente 85 % ou mais, mais preferentemente 90 % ou mais, ainda preferentemente 95 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 37, Como tal, o anticorpo é caracterizado pela ligação (preferentemente, ligação especificamente) a tal sequência parcial (fragmento),

Os polipéptidos que compreendem a proteína CAPRIN-1 humana mencionada acima ou péptidos parciais da proteína, podem ser sintetizados por um método de síntese química, tal como o método Fmoc (método de fluorenilmetiloxicarbonilo) ou o método de tBoc (método de t-butiloxicarbonilo) (editado por The Japanese Biochemical Society, Seikagaku Jikken Koza (Biochemical Experimental Lecture Series) 1, Protein Chemistry IV, Chemical Modification and Peptide Synthesis, TOKYO KAGAKIJ DOZIN (Japão), 1981). Alternativamente, os polipéptidos mencionados acima podem também ser sintetizados pGr meio de métodos convencionais utilizando vários sintetizadores de péptido disponível comercialmente. Além disso, com a utilização de técnicas de engenharia genética conhecidas (por exemplo, Sambrook et ai. , Molecular Cloning, 2a Edição, Current Protocols in Molecular Biology (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Ausu.be 1 et al., Short Protocols in Molecular Biology, 3a edição, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley & Sons), urn polinucleótido que codifica o polipéptido acima é preparado e então incorporado num vetor de expressão, que é subsequentemente introduzido numa célula hospedeira com a finalidade de produzir um polipétido de interesse na célula hospedeira e então recuperá-lo.

Os polinucleõtidos que codificam os polipéptidos acima podem ser facilmente preparados através de técnicas de manipulação genética conhecidas ou técnicas convencionais utilizando um sintetizador de ácidos nucleicos comercialmente disponível. Por exemplo, ADN que compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1 pode ser preparado por meio de PCR utilizando um ADN cromossómico humano pu biblioteca de ADNc, como um molde, e um par de iniciadores concebidos para ser capazes de amplificar a sequência nucleotídica representada pela SEQ ID NO: 1. As condições de PCR podem ser apropriadamente determinadas. Por exemplo, as condições de PCR compreendem conduzir 30 ciclos do ciclo de reação de: desnaturação a 94 °C durante 30 segundos; hibridização a 55 °C durante 30 segundos a 1 minuto; e extensão a 72 °C durante 2 min, utilizando uma ADN polimerase termoestãvel (por exemplo, Taq polimerase ou Pfu polimerase ) e tampão de PCR contendo Mg^+, seguido pela reação a 72 °C durante 7 minutos. No entanto, as condições de PCR não sâG limitadas ao exemplo acima. As técnicas, condições, de PCR e semelhantes são descritas em Ausubel et al. , Short Protocols in Molecular Biology, 3a edição, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley & Sons (partícularmente Capítulo 15).

Igualmente, com base nas informações da sequência nucleotídica e nas informações da sequência de aminoáeidos representadas pelas SEQ ID NOS: 1 a 30 na Listagem de Sequências descrita no presente documento, sondas ou iniciadores apropriados são preparados, e então uma biblioteca de ADNc ou semelhante é rastreada utilizando-os, de modo que o ADN pode ser isolado. Uma biblioteca de ADNc é preferentemente construída a partir de células, órgãos e tecidos, que expressam proteínas tendo sequências de numeros pares das SEQ ID NOS: 2 a 30. Exemplos de tais células ou tecidos incluem células ou tecidos derivados dos testículos, e cancro ou tumores, tais como leucemia, cancro da mama, linfoma, tumor cerebral, cancro pulmonar, cancro colorretal, e semelhantes . Procedimentos tais como a preparação de sondas ou iniciadores, construção de uma biblioteca de ADNc, rastreio de uma biblioteca de ADNc, e clonagem de genes alvo são conhecidos pelos peritos na especialidade e podem ser levados a cabo pelos métodos descritos em Sambrook et al., Molecular Cloning, 2a Edição, Current Protocols in Molecular Biology (1989), Ausbel et al. , (acima), e semelhantes. 0 ADN que codifica uma proteína de CAPRIN-1 humana ou um péptido parcial da mesma pode ser obtido a partir do ADN assim obtido.

As células hospedeiras podem ser quaisquer células, desde que possam expressar o polipéptido mencionado acima. Exemplos de células procarióticas incluem, mas não são limitadas a, Escherichia coli e semelhantes. Exemplos de células eucarióticas incluem, mas não são limitadas a, células de mamíferos, tais como células de rim de macaco (COSI) e células de ovário de hamster chinês (CHO), linha de células renais fetais humanas (HEK293), linha de células de pele de ratinho fetal (ΝΊΗ3Τ3), células de leveduras tais como brotamento de leveduras e leveduras f issiparidade, células de bicho-da-seda, e oõcito de Xenopus.

Quando células procarióticas são utilizadas como as células hospedeiras, um vetor de expressão utilizado no presente documento contém uma origem replicável dentro de células procariotas, um promotor, um sítio de ligação a ribossoma, um sítio de clonagem múltipla, um terminador, um gene de resistência a fârmacos, um gene complementar auxotrófico, e semelhantes. Exemplos de vetor de expressão de Escherichia coli incluem um vetor com base em pUC, pBluescript II, um sistema de expressão pET, e um sistema de expressão pGEX. ADN que codifica o polipéptido acima é incorporado em tal vetor de expressão, as células hospedeiras procarióticas são transformadas com o vetor, as células transformadas obtidas deste modo são cultivadas, e assim o polipéptido codificado pelo ADN pode ser expresso em células hospedeiras procarióticas. Neste momento, o polipéptido também pode ser expresso como uma proteína de fusão com outra proteína.

Quando células eucariótícas sâo utilizadas como as células hospedeiras, um vetor de expressão utilizado no presente documento é um vetor de expressão para células eucariótícas, que contém um promotor, uma região de splicing, um local de adição de poli(A), e semelhantes. Exemplos de tal vetor de expressão incluem pKAl, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV, pRS, pcDNA3, e pYES2. De uma maneira semelhante ao mencionado acima, ADN que codifica o polipéptido acima é incorporado em tal vetor de expressão, as células hospedeiras eucariótícas são transformadas com o vetor, as células transformadas obtidas deste modo são cultivadas, e assim o polipéptido codificado pelo ADN pode ser expresso em células hospedeiras eucariótícas. Quando pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-Nl, pEGFP-Cl, ou semelhante é utilizado como um vetor de expressão, o polipéptido acima pode ser expresso como uma proteína de fusão ao qual uma etiqueta de entre várias etiquetas tal como uma etiqueta Hís (por exemplo, (Hi5) 6-(His) 10) , uma etiqueta FLAG, uma etiqueta myc, uma etiqueta HA, e GFP foi adicionada.

Para a introdução de um vetor de expressão nas células hospedeiras, pode ser empregue um método conhecido, tais como eletroporação, um método de fosfato de cálcio, um método de lipossomas, um método de DEAE dextrano, microinjeção, infeção viral, lípofeçáo e ligação a um péptído permeável a membrana celular. 0 polipéptido de interesse pode ser isolado e purificado a partir de células hospedeiras por uma combinação de procedimentos de separação conhecidos. Exemplos de tais procedimentos incluem, mas não sâo limitados a, tratamento com a utilização de um agente de desnaturação tal como ureia ou um tensioativo, ultrassonicação, digestão enzimática, salificação ou fracionamento e precipitação de solvente, diãlise, centrifugação ultrafiltração, filtração em gel, SDS-PAGE, focagem isoelétrica, cromatografia de permuta iónica, cromatograf ia hidrofóbica, cromatograf ia de afinidade e cromatografia de fase reversa. <Estrutura dos anticorpos>

Um anticorpo é uma glicoproteína heteromultimérica que geralmente contém pelos menos duas cadeias pesadas e duas cadeias leves. Anticorpos diferentes de IgM, um anticorpo é uma glicoproteína heterotetramérica de cerca de 150 kl)a composta por duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. Tipicamente, cada cadeia leve está conetada a uma cadeia pesada através de uma ligação covalente dissulfureto, contudo, o número de ligações dissulfureto entre cadeias pesadas de vários isotipos de imunoglobulinas 'varia. Cada cadeia pesada ou cada cadeia leve também tem uma ligação dissulfureto intracadeia. Cada cadeia pesada tem um domínio variável (região VH) numa extremidade seguida de várias regiões constantes. Cada cadeia leve tem um domínio variável (região VL) numa extremidade seguida de várias regiões constantes. A região constante de uma cadeia leve está alinhada com a primeira região constante de uma cadeia pesada e um domínio variável de cadeia leve está alinhado com um domínio variável de cadeia pesada. Urna região específica de um domínio variável de um anticorpo exibe variabilidade específica que é referida como região determinante de complementaridade (CDR) , de forma a que dá especificidade de ligação ao anticorpo. Uma porção de uma região variável, que está relativamente conservada, refere-se como uma regíâG estrutural (FR) . Os domíniGS variáveis das cadeias pesadas e cadeias leves completas contêm separadamente quatro FRs ligadas através de três CDRs. As três CDRs numa cadeia pesada referem-se como CRDH1 CDRH2 , e CDRH3 nesta ordem a partir da terminação N. De forma semelhante, no caso de uma cadeia leve, as CDRLs referem-se como CDRL1, CDRL2, e CDRL3. CDRH3 é mais importante para a especificidade de ligação de um anticorpo a um antigénío. Igualmente, as CDRs de cada cadeia mantém-se juntas num estado de adjacência entre si devido às regiões FR, contribuindo à formação do local de ligação a antigénios do anticorpo juntamente com as CDRs da outra cadeia. Uma regíâG constante nâo contribui diretamente à ligação de um anticorpo a um antigénío mas exibe várias funções efetoras, tais como o envolvimento na citotoxicidade mediada por células dependentes de anticorpos (ADCC), fagocitose através da união a um recetor Fey, a taxa de semivida/depuração através de um recetor Fc: de neonato (FcRn) , e citotoxicidade dependente de complemento (CDC) através de um constituinte Clq da cascata do complemento. <Preparação do anticorpo> 0 termo "anticorpo anti-CAPRIN-1" conforme é utilizado no presente documento refere-se a um anticorpo tendo reatividade imunológica com uma proteína de CAPRIN-1 de comprimento completo ou um fragmento da mesma.

Conforme é utilizado no presente documento, o termo "reatividade imunológica" refere-se à propriedade de ligação in vivo de um anticorpo a um antigénío da CAPRIN-1. Através de uma tal ligação in vivo, exibe-se a função de deterioração de um tumor (por exemplo, morte, supressão, ou degeneração). Especificamente, um anticorpo utilizado na presente invenção pode ser qualquer tipo de anticorpo, desde que se ligue a uma proteína CAPRIN-1 de forma a ser capaz de deteriorar um tumor, tais como leucemia, linfoma, cancro da mama, tumor cerebral, cancro pulmonar, cancro esofágico, cancro gástrico, cancro renal, cancro colorretal, cancro ovárico, cancro da próstata, ou fibrossarcoma.

Exemplos de um anticorpo incluem um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo sintético, urn anticorpo multiespecíf ico, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo químérícG, um anticorpo de cadeia simples, e um fragmento de anticorpo (por exemplo, Fab e Fiab'iz). Igualmente, um anticorpo pode ser uma molécula de imunoglobulina de qualquer tipo tal como IgG, IgE, IgM IgA, IgD ou IgY, ou qualquer subtipo tal como IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl, ou IgA2. 0 anticorpo pode ser ainda modificado através de, adicionalmente à glicolisaçâG, acetilação, formilação, amidação fosforilação, peguilação (PEG), ou semelhante. Vários exemplos de preparação de anticorpo são como descritos abaixo.

Quando o anticorpo é um anticorpo monoclonal, por exemplo, a linha celular de cancro da mama SK-BR-3 expressando CAPRIN-1 é administrada a um ratinho para imunização, remove-se o baço do ratinho, separam-se as células, e posteriormente fusionam-se as células e células de mieloma de ratinho. De entre as células de fusão (hibridomas) assim obtidas, seleciona-se um clone que produz um anticorpo tendo o efeito de suprimir a proliferação de células cancerígenas. Isola-se um hibridoma que produz um anticorpo monoclonal que tem efeito de suprimir a proliferação de células cancerígenas, cultivado o hibridoma, e posteriormente purifica-se um anticorpo a partir do sobrenadante da cultura através de purificação por afinidade geral, de forma a que o anticorpo possa ser preparado. 0 hibridoma que produz um anticorpo monoclonal também pode ser preparado conforme descrito abaixo, por exemplo. Em primeiro lugar, imuniza-se um animal com um antigénio sensibílizante de acordo com um métodG conhecido. Leva-se a cabo um método geral injetando um antigénio sensibilizante a um mamífero intraperitonialmente ou subcutaneamente. Especificamente, dilui-se um antigénio com PBS (solução salina tamponada com fosfato), solução salina, ou semelhante até uma quantidade adequada, seguido de suspensão. 0 resultante mistura-se então com uma quantidade adequada de um adjuvante geral conforme for necessário, tal como adjuvante completo de Freund. Após emulsificação, a solução administrou-se a um mamífero várias vezes por dia cada 4 a 21 dias. Além disso, pode utilizar-se também um 'veículo adequado após imunização com um antigénio sensíbilízante.

Imuniza-se um mamífero conforme descrito acima no presente documento. Após confirmação de um aumento do nível de anticorpos séricos desejados, recolhem-se as células imunizadas a partir do mamífero e são posteriormente submetidas a fusão celular. As células imunizadas preferidas são particularmente esplenócitos.

Utilizam-se células de mieloma de mamíferos como as outras células parentais a ser fusionadas com as células imunizadas. Como as células de mieloma, utilizam-se preferentemente várias linhas celulares conhecidas, tais como P3U1 (P3-X63Ag8Ul), P3 (P3x63Ag8. 653) (J. Immunol. (1979) 123, 1548-1550), P3x63Ag8U.l (Current Topics in Microbiology and Immunology (1978) 81, 1-7), NS1 (Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol. ¢1976) 6, 511-519), MPC-11 (Margulies, D. H. et al. , Cell (1976) 8, 405-415), SP2/0 (Shulman, M. et. al., Nature (1978) 2 76, 26 9-270), FO (deSt. Groth, S. F. et al. , J. Immunol. Methods (1980) 35, 1-21), S194 (Trowbridge, I. S. J. Exp. Med. (1978) 148, 313-323), e R210 (Galfre, G. et al. , Nature (1979) 277, 131-133). A fusão das células imunizadas e das células de mieloma pode ser levada a cabo de acordo com basicamente um método tal como a técnica de Kohler e Millstein (Kohler, G, and Milstein, C. Methods Enzymol. (1981) 73, 3-46), por exemplo.

Mais especificamente, a fusão celular acima descrita é levada a cabo, por exemplo, em presença de um acelerador de fusão celular num meio de cultura nutriente habitual . Como este acelerador de fusão, utiliza-se polietilenoglicol (PEG), vírus Sendai (HVJ), ou semelhante. Se for desejado, um agente auxiliar tal como o sulfõxido de dimetilo pode ser adicionado e utilizado com a finalidade de potenciar a eficiência da fusão. A razão entre as células imunizadas e as células de mieloma a ser utilizadas no presente documento pode ser estabelecida arbitrariamente. Por exemplo, o número de células imunizadas que são preferentemente utilizadas é de uma a dez vezes o número de células de mieloma. Como um meio de cultura a ser utilizado para a fusão celular acima mencionada, podem utilizar-se um meio de cultura RPMI 1640 adequado para a proliferação da linha celular de mieloma acima mencionada, um meio de cultura MEM, e outros meios de cultura habitualmente utilizados para cultivar este tipo de células. Além disso, pode ser utilizado conjuntamente líquido que é suplementar ao soro tal como soro bovino fetal (FCS). A fusão celular pode ser realizada misturando minuciosamente as quantidades predeterminadas das células acima imunizadas e das células de mieloma no meio de cultura acima mencionado, e uma solução de PEG (por exemplo, tendo uma massa molecular média variando desde cerca de 1000 até 6000) pré-aquecida a cerca de 37 °C é adicionada normalmente a uma concentração de 30 %-60 % (p/v) e misturada, formando assim uma cultura contendo hibridomas de interesse. A seguir, adiciona-se exitosamente um meio de cultivo adequado à cultura assim obtida, a qual é posteriormente centrifugada para remover o sobrenadante, e repete-se este procedimento para remover o agente de fusão celular ou semelhante o qual não é preferível para o crescimento de hibridomas.

Os hibridomas assim obtidos são cultivados para seleção num meio de cultura de seleção habitual (por exemplo, um meio de cultura HAT contendo hipoxantina, aminopterina e timidina) . Continua-se a cultura neste meio de cultura HAT durante um período de tempo suficiente (habitualmente de vários dias a várias semanas) para que as células (células não fusionadas) para além dos hibridomas alvo morram. Subsequentemente, são realizados o rastreio e a clonagem individual do hibridoma que produz um anticorpo de interesse utilizando o método de diluição limitante geral.

Os hibridomas acima mencionados obtêm-se a partir de um animal não humano imunizante com um antigénio. Adicionalmente a este método, os hibridomas que produzem um anticorpo humano tendo atividade desejada (por exemplo, atividade de supressão da proliferação celular) podem também ser obtidos através da sensibilização de linfócitos humanos in vitro, tais como linfócitos humanos que foram infetados com o vírus EB, com uma proteína, uma célula que expressar proteínas, ou um lisado da mesma, seguido de fusão dos linfócitos assim sensibilizados com células de mieloma derivadas de seres humanos tendo uma capacidade de divisão permanente, tais como 11266 (N.° de registo TIB 196). 0 hibridoma assim preparado que produz um anticorpo monoclonal de interesse pode ser passado num meio de cultura geral e pode ser armazenado em azoto líquido durante um longo período de tempo.

Especificamente, um hibridoma pode ser preparado por imunização através de um método geral de imunização utilizando, como agente sensibilizante, um antigénio desejado ou uma célula que expressa o antígeno desejado, fusionando a célula imunizada assim obtida com uma célula parental conhecida através de um método de fusão celular geral, e então rastreio para uma célula produtora de anticorpos monoclonais (isto é, um hibridoma) através de um método geral de rastreio.

OutrG exemplo de um anticorpo que pode ser utilizado na presente invenção ê um anticorpo policlonal. Um anticorpo policlonal pode ser obtido conforme descrito abaixo, por exemplo.

Um animai pequeno, tal como um ratinho, um ratinho produtor de anticorpos humanos, ou um coelho, é imunizado com uma proteína CAPRIN-1 natural, uma proteína recombinante CAPRIN-1 expressa num micro-organismo tal como Escherichia coli na forma de uma proteína de fusão com GST ou semelhantes, ou um péptido parcial da mesma, e então soro é obtido. Os soro é purificado por meio de precipitação de sulfato de amónio, coluna de proteína A, coluna de proteína G, cromatografia de permuta iõnica DEAE, coluna de afinidade a qual um proteína de CAPRIN-1 ou um péptido sintético foi acoplada, ou semelhantes, de modo que o anticorpo pode ser preparado.

Como um ratinho produtor de anticorpos humanos, conhecem-se um ratinho KM (Kirin Pharma/Medarex) e um ratinho Xeno (Amgen) (por exemplo, Publicações de Patente Internacional WC302/43478 e WC302/092812) , por exemplo. Quando tal ratinho é imunizado com uma proteína CAPRIN-1 ou um fragmento da mesma, pode obter-se um anticorpo policlonal humano completo a partir do sangue. Igualmente, esplenócitos são recolhidos a partir do ratinho imunizado e posteriormente um anticorpo monoclonal de tipo humano pode ser preparado através de um método para fusão com células de mieloma.

Pode ser preparado um antigénio de acordo com um método utilizando células animais (Publicação de Patente JP (Kohyo) N° 2007-530068) ou baculovírus (por exemplo, Publicação de Patente Internacional W098/46777), por exemplo. Quando um antigénio tem baixa imunogenicida.de, o antigénio pode estar ligado a uma macromolécula tendo imunogenicidade, tal como a albumina, e leva-se posteriormente a cabo a imunização.

Além disso, um gene de anticorpo ê clonado a partir do dito hibridoma e posteriormente incorporado num 'vetor adequado. 0 vetor é posteriormente introduzido num hospedeiro, e o anticorpo geneticamente recombinado produzido utilizando técnicas de recombinação génica pode ser utilizado (por exemplo, veja-se Carl, A. K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Publicado no Reino Unido por MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990) . Especificamente, o ADNc de uma região variável (região V) de um anticorpo é sintetizado a partir do ARNm do hibridoma utilizando transcriptase reversa. Quando o ADN que codifica a região V de um anticorpo de interesse pode ser obtido, este ADN está ligado a ADN que codifica a região constante (região C) de um anticorpo desejado, e então o produto de fusão resultante é incorporado num vetor de expressão. Alternativamente, o ADN que codifica a região V de um anticorpo pode ser incorporado num vetor de expressão contendo o ADN para a região C de um anticorpo. Neste momento, o ADN pode ser incorporado num vetor de expressão de modo que é expresso sob g controlo de regiões de controlo de expressão, tais como um potenciador e um promotor. A seguir, as células hospedeiras são transformadas corn o vetor de expressão, de forma a que se possa expressar o anticorpo. 0 antícGrpo anti-CAPRIN-1 da presente invenção é preferentemente um anticorpo monoclonal. Contudo, o anticorpo anti-CAPRIN-1 podem também s um anticorpo policlonal ou um anticorpo geneticamente modificado (por exemplo, um anticorpo quimérico ou anticorpo humanizado), por exemplo.

Exemplos de um anticorpo monoclonal incluem anticorpos monoclonais humanos, anticorpos monoclonais não humanos (por exemplo, um anticorpo monoclonal de ratinho, um anticorpo monoclonal de rato, um anticorpo monoclonal de coelho, e um anticorpo monoclonal de galinha), e anticorpos monoclonais quiméricos. Um anticorpo monoclonal pode ser preparado cultivando um hibridoma obtido a partir de fusão celular de um esplenócito a partir de um mamífero não humano (por exemplo, um ratinho, um ratinho produtor de anticorpos humanos, uma galinha, ou um coelho) imunizado com uma proteína de CAPRIN-1, com uma célula de mieloma. Um anticorpo quimérico prepara-se através da combinação de sequências a partir de diferentes animais, tal como um anticorpo que compreende regiões variáveis de cadeias pesadas e de cadeias leves de um anticorpo de ratinho e regiões constantes de cadeias pesadas e de cadeias leves de um anticorpo humano. Um anticorpo quimérico pode ser preparado utilizando um método conhecido. Por exemplo, um anticorpo quimérico pode ser obtido ligando ADN que codifica uma região V de um anticorpo a ADN que codificauma região C de um anticorpo humano, incorporando o prGdutG de fusão resultante num vetor de expressão, e introduzindo posteriormente o vetor num hospedeiro para produção do anticorpo quimérico.

Em Exemplos descritos posteriormente, anticorpos monoclonais tendo reatividade imunológica com um polípéptido parcial de CAPRIN-1 foram preparados, em que CAPRIN-1 é representada por qualquer das sequências de numero par das SEQ ID NOS: 2 a 30, e em que o polipéptídG parcial compreende a sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 3 7 ou uma sequência de aminoãcidos tendo 80 % ou rnais de identidade de sequência com a sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 37. Os efeitos anti-tumor dos anticorpos monoclonais foram confirmados. Estes anticorpos monoclonais compreendem uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 43, 47, ou 63 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 51 ou 67, em que: a região VH compreende CDR1 representada pela sequência de aminoãcidos da SEQ ID MO: 40, 44, ou 60, CDR2 representada pela sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 41, 45, ou 61, e CDR3 representada pela sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 42, 46, ou 62; e a região VL compreende CDR1 representada pela sequência de aminoãcidos da SEQ ID N.°: 4 8 ou 64, CDR2 representada pela sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 49 ou 65, e CDR3 representada pela sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 50 ou 66.

Exemplos de um anticorpo policlonal incluem um anticorpos obtidos por imunização de um animal produtor de anticorpo humano (por exemplo, um ratinho) com uma proteína de CAPRIN-1.

Um anticorpo humanizado é um anticorpo modificado que também se refere como um anticorpo humano remodelado. Um anticorpo humanizado pode ser construído transplantando CDRs de um anticorpo a partir de um animal imunizado nas regiões determinantes de complementaridade de um anticorpo humano. Conhecem-se também técnicas de recombinação génica gerais para tal.

Especificamente, sequências de ADN concebidas para ter cada uma das CDRs de um anticorpo de ratinho ou galinha ligadas a cada uma das regiões estruturais (FRs) de um anticorpo humano são sintetizadas pelo método da PCR a partir de vários oligonucleótidos, que sâG preparados de forma a ter pGrções sobrepostas nas suas porções terminais, por exemplo. Um anticorpo humanizado pode ser obtido ligando o ADN assim obtido a ADN que cGdifica a região constante de um anticorpo humano, incorporando o produto de fusão resultante num vetor de expressão, introduzindo o vetor num hospedeiro, e provocando como tal que o hospedeiro produza o produto génico (veja-se a Publicação de Patente Europeia N.° 239400 e a Publicação de Patente Internacional WO96/02576). Como as FRs de um anticorpo humano, que está ligado através de CDRs, FRs que permitam a formação de um sítio de ligação a antigénios com boas regiões determinantes de complementaridade são selecionadas. Se for necessário, para a formação de um sítio de ligação a antigénios tendo as regiões determinantes de complementaridade adequadas de um anticorpo humano remodelado, os aminoãcidos das regiões estruturais de uma região variável de um anticorpo podem ser substituídos (Sato, K. et ai. Cancer Research, 1993, 53: 851-856). Igualmente, os aminoãcidos das FRs podem ser substituídos por aqueles das regiões estruturais a partir de vários anticorpos humanos (veja-se Publicação de Patente Internacional W099/51743).

Como as regiões estruturais (FRs) de um anticorpo humano, que estão ligadas através das CDRs, FRs que permitem a formação de um sítio de ligaçâG a antigénios com boas regiões determinantes de complementaridade são selecionadas. Se for necessário, para a formação de um sítio de ligação a antigénios tendo as regiões determinantes de complementaridade adequadas de um anticorpo humano remodelado, os aminoãcidos das regiões estruturais de uma região variável de um anticorpo podemser substituídos (Sato K. et al., Cancer Research 1993, 53: 851-856) .

Após a preparação de um anticorpo quimérico ou de um anticorpo humanizado, os aminoãcidos de uma região variável (por exemplo, FR) ou de uma região constante podem ser substituídos por outros aminoãcidos. A substituição de aminoãcidos ê uma substituição de, pGr exemplo, menos de 15, menos de 10, 8 ou menos, 7 ou menos, 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, ou 2 ou menos aminoãcidos e é preferentemente uma substituição de 1 a 5 aminoãcidos, e mais preferentemente 1 ou 2 aminoãcidos. Um anticorpo substituído deveria ser funcionalmente equivalente a um anticorpo não substituído. A substituição é desejavelmente uma substituição de um aminoãcido conservative entre aminoãcidos tendo propriedades análogas tais como carga elétrica, cadeia lateral, polaridade, e aromaticidade. Os aminoãcidos com propriedades análogas podem classificar··se em aminoãcidos básicos (arginina, lisina, e histidina), aminoãcidos ácidos (ácido aspãrtico e ácido glutâmico), aminoãcidos polares sem carga (glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, cisterna, e tirosina), aminoãcidos nâo polares (leucina, isoleucina, alanina, valina, prolina, fenilalanina, triptofano, e metionina), aminoãcidos com cadeias laterais (treonina, valina, e isoleucina), e aminoãcidos aromáticos (fenilalanina, tirosina, triptofano, e histidina), por exemplo.

Exemplos de um produto de anticorpo modificado incluem anticorpos ligados a várias moléculas tais como o polietilenoglicol (PEG). As substâncias a ser ligadas no prGdutG de anticorpo modificado da presente invenção não estão limitadas. Tal anticorpo modificado pode ser obtido submetendo o anticorpo assim obtido a modificação química. Jã foram estabelecidos métodos para tal na técnica.

Conforme é utilizado no presente documento, o termo "funcionalmente equivalente" refere-se a que um anticorpo sujeito tenha atividade biológica ou bioquímica semelhante à do anticorpo da presente invenção, e refere-se especificamente a que um anticorpo sujeito tenha a função de prejudicar o tumor sem provocar essencialmente rejeição após a sua administração a um ser humano, por exemplo. Um exemplo de tal atividade inclui uma atividade de supressão da proliferação celular ou uma atividade de ligação.

Como um método conhecido pelos peritos na especialidade para a preparação de um polipéptido funcionalmente equivalente a um polipêptido, conhece-se um método para introduzir uma mutação num polipêptido. Por exemplo, os peritos na especialidade podem preparar um anticorpo funcionalmente equivalente ao anticorpo da presente invenção introduzindo adequadamente uma mutação no anticorpo utilizando mutagénese sítio-dirigida (Hashimoto-Gotoh, T. et ai, (1995) Gene 152, 271-275; Zoller, MJ., e Smith, M. (1983) Methods Enzymol. 100, 468-500; Kramer, W. et al. , (1984) Nucleic Acids Res. 12, 9441-9456; Kramer, W. ana Fritz, HJ., (1987) Methods Enzymol. 154, 350-367; Kunkel, TA., (1985) Proc. Natl. Acad. Sci . U.S.A. 82, 4 88-4 92; Kunkel ¢1988) Methods Enzymol. 85, 2763-2766), por exemplo .

Um anticorpo que reconhece o epítopo de uma proteína de CAPRIN-1 reconhecida pelo anticorpo anti-CAPRIN-1 acima pode ser obtido através de um método conhecido pelos peritos na especialidade. Por exemplo, tal anticorpo pode ser obtido através de um método que envolve determinar um epítopo de uma proteína de CAPRIN-1 reconhecida por um anticorpo anti-CAPRIN-1, através de um método geral (por exemplo, mapeamento de epítopos) e preparar posteriormente um anticorpo utilizando um polipêptido tendo uma sequência de aminoãcidos contida no epítopo como um imunógeno, ou um método que envolve determinar um epítopo de um tal anticorpo preparado através de um método geral, e selecionar posteriormente um anticorpo tendo g epítopo idênticG ao de um anticorpo anti-CAPRIN-1, Conforme é utilizado no presente documento, o termo '’epítopo" refere-se a, num mamífero e preferentemente num ser humano, um fragmento polipeptídico tendo antigenicidade ou imunogenicidade. A unidade de tamanho mínimo do mesmo consiste em cerca de 7 a 12 aminoãcidos, e preferentemente de 8 a 11 aminoãcidos. A constante de afinidade Ka(k0n/k0fí) do anticorpo da presente invenção é preferivelmente pelo menos IQ7 M”1, pelo menos 108 M'1, pelG menos 5 x 108 M'1, pelo menos 109 M'1, pelo menos 5 x 109 M'1, pelo menos 10LÚ M_i, pelo menos 5 x 10i& M'1, pelo menos 10i!' M‘1, pelo menos 5 x 1011 M'1, pelo menos 1018 M‘1, gu pelo menos ΙΟ13 Μ'1. 0 anticorpo da presente invenção pode ser conjugado com urn agente anti-tumoral. A conjugação do anticorpo com um agente anti-tumoral pode ser levada a cabo através de um espaçador tendo um grupG reativo com um grupo amino, um grupG carboxilo, um grupo hidroxi, um grupo tiol ou semelhantes (por exemplo, um grupo succinimidil succinato, um grupo formilo, um grupo 2-piridilditio um grupo maleimidilo um grupo alcoxi carbonilo, e um grupo hidroxilo).

Exemplos do agente anti-tumoral incluem os seguintes agentes anti-tumorais conhecidos como em literaturas do estado da técnica e semelhantes, tais como paclitaxel, doxorrubicina, daunorrubicina, ciclofosfamida, metotrexato 5-fluorouracilo, tiotepa, bussulfano, improsulfano, pipossulfan, benzodopa, carboquona, meturedopa, uredopa, altretamina, t r i e t i1enome1ami na, t r i e t i1eno fo s foramida, trietilenotiofosforamida, trimetilolomelamina, bulatacina, bulatacinona, canfotecina, briostatina, calistatina, cryptophycinl, crypt.ophyc.in8, dolastatina, duocarmicina, eleuterobina, pancratiscatina, sarcodictina, espongistatina, clorambucil, clornafazina, colofosmfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracilo, carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina, caliqueamicina, dinemicina, clodronato, esperamicina, aclacinomicina, actinomicina, autramieina, azaserina, bleomicina, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, detorbicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, adriamicina, ep i r rub i c ina, esorrufo i c i na, i darrubic i na, ma rc e1omic i na, mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozoeina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina, denopterina, pterGpterina, trimetrexato, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, androgénios (por exemplo, calusterona, propionate de dromostalonona, epitiostanol, mepitiostano, e testolactona), aminoglutetimida, mitota.no, trilostano, ácido frolinico, aceglatona, glicósido de aldofosfamida, ácido aminolevulinico, eniluracilo, amsacrina, bestrabucilo, bisantreno, edatraxato, defofamina, demecolcina, diaziquona, elfornitina, acetato de eliptínio, epotilona, etoglúcido, lentinan, lonidamina, maitansina, ansamitocina, mitoguazona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fenamet, pirarrubicina, losoxantrona, ácido podofilinico, 2-etilidrazida, procarbazina, razoxano, rizoxina, esquizofilano, espirogermânio, ácido tenuazónico, triaziquona, roridina A, anguidina, uretano, vindesina, dacarbazina manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobromano, gacitosina, docetaxel, clorambucilo, gencitabina, 6-tioguanina, mercaptopurina, cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, vinblastina etopósido, ifosfamida, mitoxantrona, vincristina, vinorelbina, novantrona, tenipósido, edatrexato, daunomicina, aminopterina, xeloda, ibandronato, irinotecano, inibidor da topoisomerase, difluorometilornitina (DMFO), ácido retinõicG, capecitabina, e sais ou derivados farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos .

Através da administração do anticorpo da presente invenção em combinação com um agente anti-tumoral, pGdem obter-se efeitos terapêuticos ainda mais elevados. Esta técnica é aplicável tanto antes como após cirurgia de um paciente de cancro com a expressão de CAPRIN-1. Particularmente após cirurgia, uma prevenção mais eficaz de reincidências de cancro ou um período de sobrevivência prolongado pode ser obtido contra cancro com a expressão da CAPRIN-1, que tenham sido tratados com um agente anti-tumoral individualmente.

Exemplos do agente anti-tumoral a ser administrado em combinação com o anticorpo da presente invenção incluem os seguintes agentes anti-tumorais conhecidos como em literaturas do estadG da técnica ou semelhantes, tais como paclitaxel, doxorrubicina, daunorrubicina, ciclofosfamida, metotrexato 5- fluorouracilo, tiotepa, bussulfano, improsulfano, pipossulfan, benzodopa, carboquona, meturedopa, uredopa, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, trimetilolomelamina, bulatacina, bulatacinona, canfotecina, briostatina, calistatina, cryptophycinl, cryptophycínS, dolastatina, duocarmicina, eleuterobina, pancratistatina, sarcodictina, espongistatina, clorambucil, clornafazina, colofosmfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novetnbi quina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracilo, carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina, caliqueamicina, dinemicina, clodronato, esperamicina, aclacinomicína, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicina, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, de t o rbi c i na, 6 -d i a z o- 5 -oxo-L-nor1eu c i na, adri amic i na, epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina, denopterina, pteropterina, trimetrexato, fludarabina, 6-mercaptopurina, namiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6- azauridina, carmofur, citarabina, didesox.iuridi.na, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, calusterona, propionato de dromostalonona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona, aminoglutetimida, mitotano, trilostano, ácido frolínico, aceglatona, glicósido de aldofosfamida, ácido aminolevulínico, eniiuracilo, amsacrina, bestrabucilG, bisantreno, edatraxato, defofamina, demecolcina, diaziquona, elfornitina, acetato de eliptínio, epotilona, etoglúcido, lentinan, lonidamina, maitansina, ansamitocina, mitoguazona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fenamet, pirarrubicina, losoxantrona, ácido podofilínico, 2-etilidrazida, procarbazina, razoxano, rizoxina, esquizofilano, espirogermânio, ácido tenuazónico, triaziquona, roridina A, anguidina, uretano, vindesina, dacarbazina manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobromano, gacitosina, docetaxel, clorambucilo, gencitabina, 6-tioguanina, mercaptopurina, cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, vinblastina etopósido, ifosfamida, mitoxantrona, vincristina, vinorelbina, novantrona, tenipósido, edatrexato, daunomicina, aminopterina, xeloda, ibandronato, irinotecano, inibidor da topoisomerase, difluorometilornitina (DMFO), ácido retinôico, capecitabina, e sais (conhecidos) ou derivados (conhecidos) farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Dos exemplos mencionados acima, utilizam·· se preferivelmente ciclofosfamida, paclitaxel, docetaxel, e vinorelbina são preferentemente utilizados.

Alternativamente, um radioisótopo conhecido conforme nas literaturas da técnica anterior ou semelhantes, tal como 211At, 13^ 125 J 90Y; 136Re; 188^ 153^ 212^ 32p; 175^ Qu Πβ·^ podem ser ligados ao anticorpo da presente invenção. Um radioisótopo desejável é eficaz para o tratamento ou diagnóstico de um tumor. 0 anticorpo da presente invenção é um anticorpo tendo reatividade imunológica com a CAPRIN-1, um anticorpo que reconhece especif icamente CAPRIN-1, ou um anticorpo que se liga especificamente à CAPRIN-1, que exibe atividade citotóxica contra o cancro ou o efeito de supressão de crescimento tumoral. 0 anticorpo deve ter uma estrutura tal que a rejeição é quase ou completamente evitada num animal sujeito ao qual é administrado o anticorpo. Exemplos de um tal anticorpo incluem, quando o animal sujeito é um ser humano, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico (por exemplo, um anticorpo quimérico ratinho-humano) , um anticorpo de cadeia simples, e um anticorpo bi-específico. Estes anticorpos são: anticorpos recombinantes tendo as regiões variáveis das cadeias pesadas e cadeias leves provêm de um anticorpo humano; anticorpos recombinantes tendo as regiões 'variáveis das cadeias pesadas e cadeias leves compostas de regiões determinantes de complementaridade (CDRs) (CDR1, CDR2, e CDR3) a partir de um anticorpo de um animal não humano e regiões estruturais a partir de um anticorpo humano; ou anticorpos recombinantes tendo as regiões variáveis das cadeias pesadas e cadeias leves de um anticorpo animai não humano, os ditos anticorpos recombinantes tendo também as regiões constantes das cadeias pesadas e cadeias leves de um anticorpo humano. Anticorpos preferíveis são os dois últimos anticorpos.

Estes anticorpos recombinantes podem ser preparados conforme segue clonando ADN codificando um anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (por exemplo, um anticorpo monoclonal humano, um anticorpo monoclonal de ratinho, um anticorpo monoclonal de rato, um antícGrpo monoclonal de coelho, ou um anticorpo monoclonal de galinha) a partir de uma célula produtora de anticorpos tal como um hibridoma, preparando ADN que codifica uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada do anticorpo através de um método RT-PCR utilizando-o como molde, e determinando posteriormente a sequência de cada região variável da cadeia leve e da cadeia pesada ou cada sequência de CDR1, CDR2, e CDR3 com base num sistema de numeração Kabat EU (Kabat et al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).

Além disso, prepara-se ADN codificando cada uma destas regiões variáveis ou ADN cGdíficando cada CDR utilizando técnicas de recombinação genética (Samhrook et al. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory

Press (1989)) ou um sintetizador de ADN, Aqui, o hibridoma produtor de anticorpos monoclonals humanos acima pode ser preparado imunizando um animal produtor de anticorpos humanos (por exemplo, um ratinho) com CAPRIN-1 humana e fusionando posteriormente esplenócitos excisados a partir do animai imunizado com células de mieloma. Alternativamente, preparam-se ADNs que codif icam uma região variável e uma região constante de cadeia pesada ou cadeia leve a partir de um anticorpo humano conforme for necessário utilizando técnicas de recombinação génica ou um sintetizador de ADN.

No caso de anticorpo humanizado, o ADN é preparado substituindo uma sequência codificante de CDR no ADN que codifica uma região variável de cadeia leve ou cadeia pesada derivada de um anticorpo humano, com uma sequência codificante de CDR correspondente ao mesmo de um anticorpo derivado de um animal não humano (por exemplo, um ratinho, um rato, ou uma galinha) e ligando posteriormente o ADN assim obtido a ADN que codifica uma região variável de cadeia leve ou de cadeia pesada derivada de um anticorpo humano. Consequentemente, pode ser preparado ADN que codifica um anticorpo humanizado.

No casG de anticorpo quimérico, o ADN que codifica um anticorpo quimérico pode ser preparado ligando ADN que codifica uma região variável de cadeia leve ou de cadeia pesada de um anticorpo de um animal náo humano (por exemplo, um ratinho, um rato, e uma galinha) a ADN que CGdífica uma região variável de cadeia leve ou de cadeia pesada de um anticorpo humano.

No caso de um anticorpo de cadeia simples, este anticorpo é um anticorpo preparado ligando linearmente uma região variável de cadeia pesada a uma região variável de cadeia leve através de um ligante. Consequentemente, o ADN que codifica um anticorpo de cadeia simples pode ser preparado ligando o ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada, ADN que codifica um ligante, e ADN que codifica uma regíâG variável de cadeia leve. No presente documento, uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve são ambas de um anticorpo humano, ou, apenas as CDRs são substituídas com CDRs de um anticorpo de um animal não humano (por exemplo, um ratinho, um rato, ou uma galinha) embora as outras regiões sejam de um anticorpo humano. Igualmente, um ligante compreende d el2 a 19 aminoãcidos, tais como ÍC4S)3 de 15 aminoácidos (G. -B. Kim et al. , Protein Engineering Design and Selection 2007, 20 (9) : 425-432) .

No caso de anticorpo bíespecífico (diacorpo), este anticorpo é capaz de se ligar especificamente a dois epítopos diferentes. Por exemplo, o ADN que codifica um anticorpo bi-especifico pode ser preparado ligando ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada A, ADN que codifica uma região variável de cadeia leve B, ADN que codifica uma regíâG variável de cadeia pesada B, e ADN que codifica uma região variável de cadeia leve A nesta ordem (aqui, o ADN que codifica uma região variável de cadeia leve B é ligado ao ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada B através de ADN que codifica o ligante acima). Aqui, uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve são ambas de um anticorpo humano, ou, um anticorpo humano em que apenas as CDRs tinham sido substituídas com CDRs de um anticorpo de um animal não humano (por exemplo, um ratinho, um rato, ou uma galinha). 0 ADN recombinante preparado acima é incorporado num ou numa pluralidade de vetores adequados, estes são introduzidos em células hospedeiras (por exemplo, células de mamíferos, células de leveduras, ou células de insetos), e provoca-se posteriormente a (co)expressão, de modo que um anticorpo recombinante possa ser preparado (P. J. Delves., ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES ., 1997 WILEY, P. Shepherd and C. Dean. , Monoclonal Antibodies: 2000 OXFORD UNIVERSITY PRESS; J. W. Coding., Monoclonal Antibodies: principles and practice., 1993 ACADEMIC PRESS).

Exemplos dG anticorpo da presente invenção preparados de acordo com o método acima incluem o seguinte anticorpo (a) , (b) , ou (c) obtido nos Exemplos abaixo: (a) um anticorpo {por exemplo, o antícGrpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 51) e uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 48, 49, e 50; e (b) um anticorpo (por exemplo, o anticorpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 47 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 51) e uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 44, 45, e 4 6 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 48, 49, e 50. (c) um anticorpo (por exemplo, o anticorpo composto pela região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 63 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 67) e uma região variável de cadeia pesada que compreende as SEQ ID NOS: 60, 61, e 62 e uma região variável de cadeia leve que compreende as SEQ ID NOS: 64, 65, e 66 .

As sequências de aminoâcidos representadas pelas SEQ ID NOS: 40, 41, e 42, SEQ ID NOS: 44, 45, e 46, e SEQ ID NO: 60, 61, e 62 são CDR1, CDR2, e CDR3, respetivamente, de regiões variáveis de cadeia pesada de anticorpo de ratinho, Igualmente, as sequências de aminoâcidos representadas pelas SEQ ID NOS: 48, 49, e 50, e SEQ ID NOS: 64, 65, e 6 6 sâo CDR1, CDR2, e CDR3, respetivamente, de regiões variáveis de cadeia leve de anticorpo de ratinho.

Igualmente, o anticorpo humanizado, o anticorpo quimérico, o anticorpo de cadeia simples, ou o anticorpo bi-específico da presente invenção é o seguinte anticorpo (exemplificado como "anticorpo (a)"), por exemplo: (i) um anticorpo em que a região variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoâcidos das SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e as sequências de aminoácídGS das regiões estruturais de um anticorpo humano, e, uma região variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoâcidos das SEQ ID NOS: 48, 49, e 50 e as sequências de aminoãcidos das regiões estruturais de um anticorpo humano {preferentemente, o anticorpo em que uma região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 43, e, a região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 51); e (ii) um anticorpo em que uma região variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoãcidos das SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e as sequências de aminoãcidos das regiões estruturais de um anticorpo humano, e, uma região constante de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoãcidos de um anticorpo humano, e, uma região variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoãcidos das SEQ ID NOS: 48, 49, e 50 e as sequências de aminoãcidos das regiões estruturais de um anticorpo humano, e uma região constante de cadeia leve compreende uma sequência de aminoãcidos de um anticorpo humano (preferentemente, o anticorpo em que uma região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoãcidos da SEQ ID MO: 43, e, uma região constante de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoãcidos de um anticorpo humano, bem como, uma região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 51, e, uma região constante de cadeia leve compreende uma sequência de aminoãcidos a partir de um anticorpo humano).

Além disso, as sequências das regiões constantes e as regiões variáveis das cadeias pesadas e das cadeias leves podem ser obtidas do NCBI (por exemplo, U.S.A.: GenBank, UniGene), por exemplo. Por exemplo, a sequência de Número de Acesso JQ0228 pode ser referida como uma região constante de cadeia pesada de IgGl humana, a sequência de Número de Acesso J00230 pode ser referida como uma região constante de cadeia pesada de IgG2 humana, a sequência de Número de Acesso XQ3604 pode ser referida como uma região constante de cadeia pesada de IgG3 humana, a sequência de Número de Acesso KQ1316 pode ser referida como uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana, as sequências de Números de Acesso V00557, X64135, X64133, e semelhantes podem ser referidas como regiões constantes κ de cadeia leve humanas, e as sequências de Números de Acesso X64132, X64134, e semelhantes podem ser referidas como regiões constantes X de cadeia leve humanas.

Os anticorpos acima mencionados têm preferivelmente atividade citotóxica e como tal podem exibir efeitos anti tumorais.

Igualmente, as sequências específicas das regiões variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve ou de CDRs nos anticorpos acima são dados para fins ilustrativos, e corno tal claramente não estão limitadas a tais sequências específicas. Um hibridoma capaz de produzir outro anticorpo humano ou de animal não humano (por exemplo, um anticorpo de ratinho9) contra a CAPRIN-1 humana é preparado, um anticorpo monoclonal que é produzido pelo hibridoma é recolhido, e determina-se posteriormente se é ou não um anticorpo alvo através da capacidade de união imunológica com a CAPRIN-1 humana e da atividade citotóxica como indicadores. Após a identificação de um hibridoma que produz o anticorpo monoclonal alvo desta forma, o ADN que codifica as regiões variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve do anticorpo alvo é preparado a partir do hibridoma conforme descrito acima, leva-se a cabo a sequenciação, e o ADN é posteriormente utilizado para a preparação de outro anticorpo.

Além disso, com relação ao anticorpo acima, a sequência de cada um dos anticorpos acima (a) a (c), e particularmente a sequência da região estrutural e/ou a sequência da região constante de cada um dos anticorpos pode ter uma substituição, uma deleçáo, ou uma adição de um ou vários aminoácidos, desde que tenha especificidade para o reconhecimento específico da CAPRIN-1. Aqui o termo "vários" refere-se preferentemente a de 2 a 5, e mais preferentemente 2 ou 3. A presente invenção proporciona adicionalmente ADN que codif ica o anticorpo da presente invenção acima mencionado, ou, ADN que cGdifica a cadeia pesada ou cadeia leve do anticorpo acima mencionado, ou, ADN que codifica a região variável de cadeia pesada ou cadeia leve do anticorpo acima mencionado. Exemplos de tal ADN incluem, no caso do anticorpo (a) , ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada que compreende as sequências nucleotídicas que codificam as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 40, 41, e 42 e ADN que codifica uma região variável de cadeia leve que compreende as sequências nucleotídicas que codificam as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 48, 49, e 50.

As regiões determinantes de complementaridade (CDRs) codificadas pelas sequências de ADN são regiões para determinar a especificidade de um anticorpo. Consequentemente, sequências que codificam regiões num anticorpo para além da CDRs (especificamente, uma região constante e uma região estrutural) podem ser a partir de outros anticorpos. Aqui, exemplos de tais "outros anticorpos" incluem anticorpos de organismos não humanos, e são preferentemente de um ser humano com vista à redução dos efeitos secundários. Consequentemente, no caso do ADN acima mencionado, as regiões que codificam cada região estrutural e cada região de contacto de cadeias pesadas e de cadeias leves compreendem preferentemente sequências nucleotídicas que codificam sequências de aminoácidos correspondentes a partir de um anticorpo humano.

Exemplos adicionais alternativos de ADN que codifica o anticorpo da presente invenção incluem, no caso do anticorpo (a) , ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência nucleotídicas que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: e 43 e ADN que codifica uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência nucleotídica que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 51. Aqui, um exemplo da sequência nucleotídica que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 ê a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 52 . Igualmente, um exemplo da sequência nucleotídica que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 51 é a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 53 . Nestes ADMs, as regiões que codificam cada região constante de cadeias pesadas e de cadeias leves compreendem preferentemente sequências nucleotídicas que codificam as sequências de aminoãcidos correspondentes a partir de um anticorpo humano.

Os ADN destes anticorpos podem ser obtidos através dos métodos acima ou pelo seguinte método, por exemplo. Em primeiro lugar, prepara·· se ARN total a partir de um hibridoma relacionado com o anticorpo da presente invenção utilizando um kit de extração de ARN disponível comercialmente, e depois o ADNc é sintetizado com transcriptase reversa utilizando iniciadores aleatórios, e semelhantes. Subsequentemente, o ADNc que codifica um anticorpo é amplificado através de um método de PCR utilizando como iniciadores os oligonucleótidos de sequências conservadas em cada região variável de genes de cadeia pesada e de cadeia leve de anticorpos de ratinho conhecidos. A sequência que codifica uma região constante pode ser obtido amplificando uma sequência conhecida através de um método de PCR. A sequência nucleotídica do ADN pode ser determinada através de um método convencional tal como a inserção num plasmídeo ou num fago para sequenciação.

Considera-se que um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção exibe os efeitos anti tumorais contra células cancerígenas que expressam CAPRIN-1 através do seguinte mecanismo: citotoxicidade dependente de anticorpo e célula efetora (ADCC) de células que expressam CAPRIN-1, e a citotoxicidade dependente de complemento (CDC) de células que expressam CAPRIN-1,

Portanto, a atividade de um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção pode ser avaliada por, conforme especificamente descrito nos Exemplos abaixo, medição da atividade ADCC ou da atividade CDC contra células que expressam CAPRIN-1 acima mencionadas.

Um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção liga-se a uma proteína CAPRIN-1 numa célula de cancro e exibe efeitos anti-tumorais devido à atividade acima mencionada, e como tal é útil para tratar ou prevenir o cancro. Específicamente, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica para o tratamentG e/ou a prevenção de um cancro, que compreende um anticorpo anti-GAPRIN-1 como um ingrediente ativo. Quando o anticorpo anti-CAPRIN-1 é utilizado para a administração do mesmo a um corpo humano (terapêutica de anticorpos), é preferentemente um anticorpo humano ou um anticorpo humanizado com a finalidade de diminuir a imunogenicidade.

Além disso, quanto mais elevada a afinidade de ligação entre um anticorpo anti-CAPRIN-1 e uma proteína CAPRIN-1 nas superfícies de células cancerígenas, mais forte é a atividade anti-tumoral do anticorpo anti-CAPRIN-1 que pode ser obtido. Portanto, quando se pode adquirir um anticorpo anti-CAPRIN-1 tendo elevada afinidade de ligação com uma proteína CAPRIN-1, efeitos anti-tumorais mais fortes podem ser esperados e torna-se possível a aplicação de tal anticorpo como uma composição farmacêutica para a finalidade do tratamento e/ou prevenção do cancro. Tal afinidade de ligação elevada é desejadamente conforme segue. Conforme descrito anteriormente, a constante de ligação (constante de afinidade) Ka (kon/koff) é preferentemente de pelo menos 107 M"1, pelo menos 108 M”1, pelo menos 5 x 108 M’1, pelo menos 109 M”1, pelo menos 5 x 109 M'1, pelo menos 1010 M'1, pelo menos 5 x IO10 M_i pelo menos 10!i M“l, pelo menos 5 x 1011 M”!, pelo menos 10!" M‘L, ou, pelo menos 1013 M"1. <Ligação a célula que expressa o antigénio> A capacidade de um anticorpo de se ligar à CAPRIN-1 pode ser especificada através de ensaio de ligação utilizando ELISA, um método de Western blot, imunofluorescência e análise de citometria de fluxo, ou semelhantes conforme descrito nos Exemplos. <Coloração imunohistoquímica>

Um anticorpo que reconhece CAPRIN-1 pode ser testado para a reatividade com CAPRIN-1 através de um método de imunohistoquímica conhecido pelos peritos na especialidade utilizando seções congeladas fixadas em paraformaldeído ou em acetona ou seções teciduais fixadas em paraformaldeído e envolvidas em parafina, que é preparada a partir de amostras teciduais obtidas a partir de um paciente durante cirurgia, ou amostras teciduais obtidas a partir de um animal tendo um tecido de heterotransplante inoculado com uma linha celular que expressa CAPRIN-1, naturalmente ou após a transfeção.

Um anticorpo reativo a CAPRIN-1 pode ser tingido através de vários métodos de coloraçâG imunohistoquímica. Por exemplo, um anticorpo de cabra anti-ratinho ou de cabra anti-galinha conjugado com peroxidase de rábano é submetido a reação, um anticorpo alvo pode ser visualizado. cComposição farmacêutica>

Um alvo da composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro da presente invenção não é particularmente limitado, desde que seja um cancro (célula) que expressa um gene da CAPRIN-1.

Os termos "tumor" e "cancro" conforme utilizados no presente documento referem-se a neoplasmas malignos e são utilizados de forma intercambiável. 0 cancro a ser submetídG à presente invenção é um cancro que expressa genes que codificam proteínas CAPRIN-1 tendo as sequências de aminoãcidos de número par das SEQ ID NOS: 2 a 30. Exemplos de tal cancro incluem preferentemente cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, cancro pulmonar, linfoma, mastocitoma, cancro renal, cancro da ciérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico, cancro colorretal, cancro ovãríco, cancro da próstata, e fíbrossarcoma.

Exemplos de tal cancro específico incluem, mas não são limitados a, adenocarcinoma da mama, adenocarcinoma da mama de tipo composto, tumor misto maligno da glândula mamária, adenocarcinoma papilar intraductal, adenocarcinoma pulmonar, carcinoma de células escamosas, carcinoma de pequenas células, carcinoma de grandes células, um glioma que é um tumor do tecido neuroepitelial, ependimoma, neurocitoma, tumor neuroectodérmico fetal, schwanoma, neurofibroma, meningioma, leucemia linfocítica crónica, linfoma, linfoma gastrointestinal, linfoma digestivo, linfoma de pequenas células a células médias, cancro do ceco, cancro do cólon ascendente, cancro do cólon descendente, cancro do cólon transversal, cancro do cólon sigmoide, cancro retal, cancro ovárico epithelial, tumor de células germinais, e tumor de células intersticiais.

Além disso, indivíduos preferíveis sâo mamíferos incluindo primatas, animais de estimação, animais domésticos, animais de corrida, e semelhantes e particularmente preferentemente seres humanos, cães, e gatos.

Quando um anticorpo a ser utilizado na presente invenção se utiliza como uma composição farmacêutica, pode ser formulado através de um método conhecido pelos peritos na especialidade. Por exemplo, o anticorpo pode ser utilizado parentericamente na forma de uma preparação de injeção tal como uma solução asséptica ou uma suspensão preparada com água ou uma solução farmacologicamente aceitável para além da água. Por exemplo, pode ser formulada através de mistura numa forma farmacêutica unitária requerida pela prática farmacêutica geralmente aceite em combinação adequada com um veículo ou meio farmacologicamente aceitável, especificamente, água estéril ou solução salina, óleo vegetal, um emulsificante, uma suspensão, um tensioativo, um estabilizante, um compGsto aromatizante, um excipiente, um veículo, um antisséptico, um aglutinante e semelhantes. As quantidades de ingredientes ativos nestas preparações são determinadas de modo que se possa Gbter uma dosagem adequada dentro do intervalo indicado.

Uma composição asséptica para injeção pode ser prescrita de acordo com a prática farmacêutica geral utilizando um veículo tal como água destilada para a injeção.

Exemplos de uma solução aquosa para injeção incluem solução salina, uma solução isotónica contendo dextrose ou outros adjuvantes, tais como D--sorbitol, D-manose, D-manitol, e cloreto de sódio. Estes exemplos podem ser utilizados em combinação com um agente solubilizante adequado tal como o álcool, especificamente etanol e poliálcool (por exemplo, propilenoglicol e polietilenoglicol), e tensioativo não iónico (por exemplo, polissorbato 80 (TM) e HCO-60).

Exemplos do óleo incluem óleo de sésamo e óleo de soja, que podem ser utilizados em combinação com um agente solubilizante tal como benzoato de benzilo ou álcool benzílico. Igualmente, um agente tampão tal como tampão fosfato ou tampão acetato de sódio, um agente suavizante tal como cloridrato de procaína, um estabilizante tal como álcool benzílico ou fenol, e um antioxídante podem ser combinados com eles. Uma ampola adequada é geralmente preenchida com a solução de injeção assim preparada. A administração é uma administração perorai ou parentérica e é preferentemente uma administração parentérica. Exemplos especifícgs da via de administração incluem injeção, administração transnasal, administração pulmonar, e administração transdérmica. Exemplos de injeção incluem injeção intravenosa, injeção intramuscular, injeção intraperitoneal, e injeção subcutânea, de forma a ser possível a administração sistémica ou local.

Igualmente, os métodos de administração podem ser selecionados adequadamente dependendo da idade de um paciente, peso corporal, sexo, sintomas, e semelhantes. A dosagem por administração de uma composição farmacêutica contendo um anticorpo ou um polinucleótido que codifica o anticorpo pode ser selecionada a partir do intervalo entre 0,0001 mg e 1000 mg por quilo de peso corporal, por exemplo. Alternativamente, por exemplo, a dosagem pode ser selecionada a partir do intervalo entre 0,001 mg/corpo e 100000 mg/corpo por paciente.

No entanto, o intervalo de dosagem não sempre está limitadG a estes valores numéricos. A dosagem e o método de administração variam dependendo do peso corporal de um paciente, idade, género, sintomas, e semelhantes, mas podem ser adequadamente selecionados pelos peritos na especialidade. A composição farmacêutica acima mencionada contendo o anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção administra-se a um indivíduo, de modo que o cancro, preferentemente, cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, cancro pulmonar, linfoma, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico, e cancro colorretal possam ser tratados e/ou prevenidos. A presente invenção abrange ainda um método para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, pela administração a um indivíduo da composição farmacêutica da presente invenção em combinação com o agente anti-tumoral ou composição farmacêutica contendo o dito agente anti-tumoral acima exemplificados. 0 anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção e um agente anti-tumoral podem ser administrados simultaneamente ou separadamente a um indivíduo. Podem ser administrados separadamente independentemente da ordem de administração. Os intervalos de administração, dosagem, a via de administração, e a frequência de administraçâG podem ser adequadamente selecionados por um especialista. Exemplos de outra formulação farmacêutica a ser administrada simultaneamente incluem composições farmacêuticas obtidas misturando o anticorpo ou um fragmento do mesmo da presente invenção com um agente anti-tumoral num veículo (ou meio) farmacologicamente aceitável seguido de formulação. Além disso, a composição acima descrita contendo um agente ou formulação anti-tumoral, explicações relativas à prescrição, formulação, a via de administração, dose, cancro, e semelhantes para administração de uma composição farmacêutica contendo o anticorpo da presente invenção e formulação são aplicáveis.

Portanto, a presente invenção proporciona também uma composição farmacêutica para tratar e/ou prevenir um cancro, compreendendo a composição farmacêutica da presente invenção, e a composição farmacêutica acima exemplificada contendo um agente anti-tumoral. Igualmente, a presente invenção proporciona urna composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, compreendendo o anticorpo ou um fragmento ao mesmo da presente invenção e um agente anti-tumoral juntamente com um veiculo farmacologicamente aceitável. <Polipéptido e ADN> A presente divulgação proporciona ainda os seguintes polipéptidos e ADNs com relação ao anticorpo acima (a), (b), ou (c) . (i) Um polipéptido compreendendo as sequências de aminoãcidos das SEQ ID NOS: 43, 47 e 63, e ADN que codifica o polipéptido, em que o ADN compreende as sequências nucleotídicas das SEQ ID NOS: 52, 70, e 68. (ii) um polipéptido que compreende as sequências de aminoãcidos das SEQ ID NOS: 51 e 67, e ADN que codifica o polipéptido, em que o ADN compreende as sequências nucleotídicas das SEQ ID MOS: 53 e 69. (iii) um polipéptido de CDR de cadeia pesada selecionado a partir cg grupG que consiste nas sequências de aminoácidos representadas nas SEQ ID NOS: 40, 41, e 42, SEQ ID NOS: 44, 45, e 46, e SEQ ID NOS: 60, 61, e 62, e ADN que codifica o polipéptido. (iv) um polipéptido de CDR de cadeia leve selecionados dentre as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOS: 48, 49, e 50, e SEQ ID NOS: 64, 65, e 66, e ADN que codifica o polipéptido.

Estes polipéptidos e ADNs podem ser preparados utilizando técnicas de recombinação genética conforme descritas acima. Exemplos A presente invenção descreve-se mais especificamente com base nos Exemplos, mas o âmbito da presente invenção não se limita a estes exemplos específicos.

Exemplo 1 Identificação da nova proteína de antigénio de cancro através do método SEREX (1) Preparação da biblioteca de ADNc 0 ARN total foi extraído a partir de tecido testicular de um cão saudável através de um método de guanidínio ácido-fenol-clorofórmio. 0 ARN PoliA foi purificado de acordo com os protocolos incluídos num kit de purificação de ARNm 01igotex-dT30 (Takara Shuzo Co., Ltd.) utilizando o kit.

Urna biblioteca de fagos de ADNc de testículos caninos foi sintetizada utilizando o ARNm assim obtido (5 pg) . Para a preparação da biblioteca de fagos de ADNc, foram utilizados um kit de síntese de ADNc, um kit de síntese ZAP-ADNc , e um kit de clonagem de ouro III gigapack ZAP-ADNc (STRATAGENE) e a biblioteca foi preparada de acordo com os protocolos incluídos no kit. 0 tamanho da biblioteca de fagos de ADNc assim preparada foi de 7,73 x 103 pfu/ml. (2) Rastreio da biblioteca de ADNc utilizando soro

Um imunorrastreio foi levado a cabo utilizando a biblioteca de fagos de ADNc de testículos caninos acima preparada. Especificamente, uma Escherichia coli hospedeira (XLl-Blue MRF') foi infetada com o fago de forma a que 2210 clones estavam presentes numa placa de agarose NZY de Φ90 x 15 mm. As células foram cultivadas a 42 °C durante 3 a 4 horas, de forma a provocar a formação de placas. A placa foi coberta com uma membrana de nitrocelulose (Hybond C Extra: GE Healthcare Bio-Sciences) impregnada com IPTG (isopropil-p-D-tiogalactósido) a 37°C durante 4 horas. As proteínas foram induzidas, expressas, e transferidas posteriormente para a membrana. Subsequentemente, a membrana foi recuperada, imersa, e agitada em TBS (Tris-HCl a 10 mM, NaCl a 150 mM pH 7,5) contendo leite em pó magro a 0,5 % a 4 °C durante a noite, para que se suprimissem as reações não específicas.

Provocou-se que o filtro reagisse com soros de cães com cancro diluído 500 vezes à temperatura ambiente durante 2 a 3 horas.

Como os soros acima mencionados a partir de cães com cancro, foram utilizados soros recolhidos de cães com cancro de mama. Os soros foram armazenados a -80 °C e fGram posteriormente submetidos a pré-tratamento imediatamente antes da sua utilização. 0 pré-tratamento para os soros foi realizado através do seguinte método. Específicamente, Escherichia coli hospedeira (XLl-Blure MRF') foi infetada com os fagos X ZAP Express nos quais não tinha sido introduzido qualquer gene exógeno, e cultivada em meio de placa NZY a 37 °C durante a noite. Subsequent emente, um tampão de NaHC03 a 0.2 M (pH 8,3) contendo NaCl a 0,5 M foi adicionado à placa e deixou-se posteriormente repousar a placa a 4 °C durante 15 horas. Os sobrenadantes foram recolhidos como extratos de Escherichia coli/fago. A seguir, passou-se o extrato de E. coli/fago recolhido através de uma coluna NHS (GE Healthcare Bio-Sciences) , de modo a imobilizar a proteína derivada de Escherichia, coli-fago. Passou-se o soro de um cão com cancro através da coluna na qual a proteína foi imobilizada para a reação, removendo assim Escherichia coli e os anticorpos adsorvidos ao fago do soro. Cada fração de soro que passou através da coluna foi diluída 500 vezes com TBS contendo leite magro em pó a 0,5%, e o resultante foi utilizado como material de imunorrastreio.

Uma membrana, à qual o soro assim tratado e a proteína de fusão foram transferidos, foi lavada 4 vezes com TBS-T (Tween20/TBS a 0,05% ) . A membrana foi feita reagir com IgG de cabra antí-cão (IgG de cabra anti-cão-h+I HRP conjugados: BETHYL Laboratories) diluído 5000 vezes como um anticorpo secundário com o TBS contendo leite magro em pó a 0,5 % a temperatura ambiente durante 1 hora. A deteção foi levada a cabo através da reação de coloração enzimãtica utilizando uma solução de reação NBT/BCIP (Roche) . As colónias correspondendo ao local positivo para a reação de cor foram recolhidas da placa de agarose NZY ¢90 x 15 mm, e depois foram dissolvidas em 500 μΐ de tampão SM (NaCl a 100 mM, MgClS04 a 10 mM, Tris-HCl a 50 mM, gelatina a 0,0 1%, pH 7,5) . Até à unificação das colónias positivas para a reação de cor, repetiram·· se rastreios secundários e terciários através de um método semelhante ao descrito acima. Consequentemente, 30940 clones de fagos que tinham reagido com IgG sérica foram rastreados de modo que foram isolados 5 clones positivos. (3) Pesquisa de homologia de gene de antigénio isolado

Um procedimento para a conversão de vetores de fagos a vetores de plasmídeos foi realizado para os 5 clones positivos isolados através do método acima mencionado com a finalidade de submeter os clones a análise de sequências nucleotídicas. Especificamente, 200 μΐ de uma solução de Escherichia coli hospedeira (XLl-Blue MRF') preparada para dar uma absorvância de ODsoo de 1,0, 2 50 μΐ de uma solução de fagos purificada, e 1 μΐ de fago auxiliar ExAssist (STRATAGENE) foram misturados e deixados a reagir a 37°C durante 15 minutos. Posteriormente, 3 ml de meio LB foram adicionados, as células foram cultivadas a 37 °C durante 2,5 a 3 horas, e depois o resultante foi imediatamente posto em banho de água a 70 °C para incubação durante 20 minutos. Levou-se a cabo uma centrifugação a 4 °C, 1000 x g durante 15 minutos, e o sobrenadante foi posteriormente recuperado como uma solução de fagemídeo. Subsequentemente,

2 00 μΐ de uma solução preparada a partir do hospedeiro de fagemídeos Escherichia colíSOLR para dar uma absorvância OD60o de 1,0 e 10 μΐ da solução de fago purificada foram misturados, seguido de 15 minutos de reação a 37°C. 50 μΐ do resultante foram colocados em placas de meio de agar LB contendo ampicilina (a uma concentração final de 50 pg/ml) e cultivados posteriormente durante a noite a 37°C. Colheu-se uma única colónia de SOLR transformada e cultivou-se posteriormente em meio LB contendo ampicilina (a uma concentração final de 50 μα/ml) a 37°C. Após a cultura, o ADN de plasmídeo portando um inserto de interesse foi purificado utilizando o Kit Miniprep plasmid QIAGEN (QIAGEN), 0 plasmídeo purificado foi submetido a análise da sequência completa do inserto através do método de primer walking utilizando o iniciador T3 da SEQ ID NO: 31 e o iniciador T7 de SEQ ID NO: 32, As sequências génícas das SEQ ID NOS: 5, 7, 9, 11, e 13 foram obtidas através da análise de sequência. Com a utilização das sequências nucleotídicas dos genes e as sequências de aminoãcidos dos mesmos (SEQ ID NOS: 6, 8, 10, 12, e 14) , uma pesquisa de homologia através do programa de pesquisa (http : //víww . ncbi . nlm. nih. gov/BLAST) foi realizada para pesquisar homologias com genes conhecidos. Como um resultado, revelou-se que todos os cinco genes obtidos eram genes que codificam a CAPRIN-1. As identidades de sequência entre os cinco genes foram de 100 % a nível de sequência nucleotídica e de 99 % a nível de sequência de aminoãcidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. As identidades de sequência entre estes genes e o gene que codifica o homólogo humano foram de 94 % a nível de sequência nucleotídica e de 98 % a nível de sequência de aminoãcidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. As sequências nucleotídicas dos homólogos humanos sâG representadas pelas SEQ ID NOS: 1 e 3 e as sequências de aminoãcidos dos mesmos são representadas pelas SEQ ID NOS: 2 e 4. Igualmente, as identidades de sequência entre os genes caninos obtidos e o gene que codifica o homólogo de gado foram de 94 % a nível de sequência nucleotídica e de 97 % a nível de sequência de aminoãcidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. A sequência nucleotídica do homólogo de gado é representada pela SEQ ID NO: 15 e a sequência de aminoãcidos do mesmo é representada pela SEQ ID NO: 16, Além dissG, as identidades de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e o gene que codifica o homólogo de gado foram de 94 % a nível de sequência nucleotídica e de 93 % a 97 % a nível de sequência de aminoãcidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. Igualmente, as identidades de sequência entre os genes caninos obtidos e o gene que codifica o homólogo de cavalo foram de 93 % a nível de sequência nucleotídica e de 97 % a nível de sequência de aminoãcidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. A sequência nucleotídica do homólogo de cavalo é representada pela SEQ ID NO: 17 e a sequência de aminoãcidos do mesmo é representada pela SEQ ID NO: 18. Além dissG, as identidades de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e o gene que codifica o homólogo de cavalo foram de 93 % a nível de sequência nucleotídica e de 96 % a nível de sequência de aminoãcidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. Igualmente, as identidades de sequência entre os genes caninos obtidos e os genes que codificam o homólogo de ratinho foram de 87 % a 89 % a nível de sequência nucleotídica e de 95 % a 97 % a nível de sequência de aminoãcidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. As sequências nucleotídicas dos homólogos de ratinho são representadas pelas SEQ ID NOS: 19, 21,23, 25, e 27 e as sequências de aminoãcidos dos mesmos são representadas pelas SEQ ID NOS : 20, 22, 24, 26, e 28 . Além disso, as identidades de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e os genes que codificam o homólogo de ratinho foram de 89 % a 91 % a nível de sequência nucleotídica e de 95 % a 96 % a nível de sequência de aminoãcidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. Igualmente, as identidades de sequência entre os genes caninos obtidos e o gene que codifica o homólogo de galinha foram de 82 % a nível de sequência nucleotídica e de 87 % a nível de sequência de aminoãcidos nas regiões a ser traduzidas em proteínas. A sequência nucleotídica do homólogo de galinha é representada pela SEQ ID N.°: 29 e a sequência de aminoãcidos do mesmo é representada pela SEQ ID NO: 30. Além dissG, as identidades de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e o gene que codifica o homólogo de galinha foram de 81 % a 82 % a nível de sequência nucleotídica e de 86 % a nível de sequência de aminoãcidos nas regiões a ser traduzidas em prGteínas. (4) Análise de expressão génica em cada tecido A expressão de genes obtidos através do método acima foi examinada em tecidos normais de cães e seres humanos e várias linhas celulares através de um método de RT-PCR. A reação da transcriptase reversa realizou-se conforme segue. Especificamente, extraiu-se ARN total a partir de 50 mg a 100 mg do tecido ou 5 a 10 x 106 células da linha celular utilizando um reagente TRIZOL (Invitrogen) de acordo cora os protocolos acompanhantes. Sintetizou-se ADNc com o ARN total utilizando um Superscript First-Strand Synthesis System para RT-PCR (Invitrogen) de acordo com os protocolos acompanhantes . Uma PCR foi realizada conforme segue utilizando os iniciadores das SEQ ID NOS: 33 e 34 específicos para os genes obtidos. Especif icamente., reagentes e um tampão acompanhante foram adicionados a 0,25 μΐ da amostra preparada através da reação de transcrição reversa até um volume total de 25 ml, de modo que o resultante continha os iniciadores acima de 2 μΜ cada um, dNTPs de 0,2 mM cada um, e 0,65 U de polimerase ExTaq (Takara Shuzo Co., Ltd.) . Uma PCR foi levada a cabo repetindo um ciclo de 94 °C durante 30 segundos, 60 °C durante 30 segundos, e 72 °C durante 30 segundos 30 vezes utilizando um aparelho Thermal Cycler (BIO RAD). Os iniciadores específicos de gene acima mencionados são capazes de amplificar a região abrangendo os nucleõtidos 206 a 632 na sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 5 (gene da CAPRIN-1 canina) e a região abrangendo os nucleõtidos 698 a 1124 na sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1 (gene da CAPRIN-l humana). Como um controlo para comparação, os iniciadores específicos de GAPDH das SEQ ID NOS: 35 e 36 foram também utilizados simultaneamente. Como um resultado, conforme é mostrado na Fig. 1, observou-se forte expressão em testículos entre tecidos normais de cão, ao passo que se observou expressão em tecidos de cancro da mama e de adenocarcinoma de cão. Além disso, a observação da expressão dos homólogos humanos a partir dos genes obtidos também foi levada a cabo. Como um resultado, à semelhança do caso do gene da CAPRIN-1 canino, só se observou expressão em testículos entre tecidos normais. No entanto, no caso de células de cancro, detetou-se expressão em vários tipos de linhas celulares, incluindo linhas celulares de cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, cancro pulmonar, e cancro do esófago. Observou-se expressão particularmente em várias linhas celulares de cancro da mama. Confirmou-se através dos resultados que a expressão da CAPRIN-1 não é observada em tecidos normais para além de testículos, ao passo que a CAPRIN-1 foi expressa em várias células de cancro e particularmente em linhas celulares de cancro da mama.

Na Fig. 1, o número de referência 1 em cada eixo vertical indica os padrões de expressão dos genes identificados acima e o numero de referência 2 indica aos padrões de expressão do gene GAPDH corno controlo. (5) Preparação de anticorpo pGliclonal contra péptido derivado de CAPRIN-1

Para obter um anticorpo que se liga a CAPRIN-1, urn péptido derivado de CAPRIN-1 representado pela SEQ ID NO: 3 7 foi sintetizado. 1 mg do péptido como um antigénio foi misturado com uma quantidade equivalente de uma solução de adjuvante de Freund incompleto (IFA). A mistura foi administrada por via subcutânea a coelhos 4 vezes a cada 2 semanas. Despois foi recolhido sangue e anti-soro contendo anticorpos policlonais foi obtido. Além disso, o anti-soro foi purificado utilizando um veículo de proteína C4 (GE Healthcare Bio-Sciences) , de modo que os anticorpos policlonais contra o péptido derivado de CAPRIN-1 fGram obtidos. Igualmente, o soro de um coelho ao qual não tinha sido administrado nenhum antigénio foi purificado utilizando um veículo de proteína G de uma maneira semelhante ao anterior, e o resultante foi utilizado como um anticorpo de controlo. (6) Análise da expressão da proteína do antigénio de células de cancro A seguir, 7 linhas de células de cancro da mama ÍMDA-MB-157, T47D, MRK-nu-1, MDA-MB-231V, BT20 SK-BR-3, e MDAMB-231T) para as quais a expressão génica de CAPRIN-1 tinha sido observada em altos níveis foram examinadas para a expressâG de proteína CAPRIN-1 nas superfícies celulares. 1Q6 células de cada linha celular de cancro da mama para a qual a expressão génica tinha sido observada acima foram centrífugadas num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. 2 p.g (5 μΐ) dos anticorpos policlonais contra o pêptido derivado de CAPRIN-1 preparado em (5) acima foi adicionado aí. Apôs a suspensão com 95 μΐ de PBS contendo soro fetal bovino a 0,1%, deixou-se repousar em gelo durante 1 nora. Após lavagem com PBS, o resultante foi suspenso em PBS contendo 5 μΐ de anticorpo IgC de cabra anti-coelho marcado com FITC (SantaCruz) e 95 μΐ de soro bovino fetal a 0,1% (FBS) e depois o resultante deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company). Entretanto, procedimentos semelhantes ao acima foram realizados utilizando o anticorpo de controlo preparado em (5) acima em vez dos anticorpos policlonais contra o péptido derivado de CAPRIN-1 de modo que um controlo foi preparado. Como um resultado, todas as células às quais o anticorpo anti-CAPRIN-1 humana tinha sido adicionado exibiram intensidade de fluorescência 30% ou maís mais forte que a do controlo. Especificamente, a intensidade de fluorescência foi potenciada até 187% no caso de MDA-MB-231V e 124% no caso de SK-BR-3 . Revelou-se através destes resultados que a proteína CAPRIN-1 era expressa nas superfícies da membrana celular das linhas celulares de cancro acima mencionadas. A percentagem de melhoria da intensidade de fluorescência acima foi expressa como percentagem de aumento na intensidade de fluorescência média (nível de MFI) em cada tipo celular e calculada a partir da seguinte fórmula.

Percentagem de aumento da intensidade de fluorescência média (percentagem de melhoria da intensidade de f luorescência) (%) = ((nível de MFI em controlos tendo reagido com anticorpo anti-CAPRIN-1 humano) - (nível de MFI do controlo)) / (nível de MFI do controlo) x 100.

Com uma técnica maneira semelhante ao mencionado acima, a expressão de CAPRIN-1 foi analisada para 3 linhas celulares de cancro renal (Caki-1,Caki-2, e A498), linha celular de cancro de ovário (SK.0V3) , linha celular de cancro de pulmão (QG56), linha celular de cancro de próstata (PC3), linha de células de cancro da cérvix uterina (Hela), linha de células de fibrossarcoma (HT1080), 2 linhas de células de tumoral cerebral (T98G e US7MG), 2 linhas de células de cancro colorretal de ratinho (CT26 e colon 26), linha de células de cancro da mama (4T1), linha de células de melanoma de ratinho (B16), e 2 linhas de células de neuroblastoma de ratinho (N1E-115 e Neuro2a) , Como urn resultado, a expressão de CAPRIN-1 foi confirmada em todas as linhas celulares. Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de utilizar o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n.° 1) compreendendo a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 51, ou o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n. 0 2) que compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 47 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 51, ou o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n. ° 3) que compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 63 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 67 (obtido no Exemplo 3). (7) Coloração imunohistoquímica (7) -1 Expressão de CAPRIN-1 em tecidos normais de ratinho e de cão

Ratinhos (Balb/e, fêmeas) e cães (beagles, fêmeas) foram exanguinados sob anestesia por éter e anestesia por cetamina/isoflurano. Após laparatomia, cada órgão (estômago, fígado, globo ocular, timo, músculo, medula óssea, útero intestino delgado, esófago, coração, rim, glândulas salivares, intestino grosso, glândulas mamárias, cérebro, pulmão, pele, glândulas supra-renais, ovário, pâncreas, baçG, e bexiga) foram transferidos a uma placa de 10 cm contendo PBS. Cada órgão foi aberto em PBS e posteriormente submetido a fixação por perfusão durante a noite em tampão fosfato a 0,1 M (pH 7,4) contendo paraformaldeído (PFA) a 4 %. Descart,ou-se a solução de perfusão, a superfície de tecido de cada órgão foi lavada com PBS, uma solução de PBS contendo sacarose a 10 % foi adicionada a um tubo de centrífuga de 50 ml, cada tecido foi adicionado ao tubo, e posteriormente o tubo foi agitado utilizando um rotor a 4 °C durante 2 horas. A solução foi substituída por uma solução de PBS contendo sacarose a 20 %, e posteriormente deixou-se repousar a 4 °C até que o tecido se afundou. A solução foi substituída por uma solução de PBS contendo sacarose a .30 % e posteriormente deixou-se repousar a 4 °C até que o tecido se afundou. 0 tecido foi removido e depois as porções necessárias foram excísadas com um bisturi cirúrgico. A seguir, um composto de OCT (Tissue Tek) foi adicionado ao tecido de forma a aplicá-lo meticulosamente à superfície tecidual. e o tecido foi posteriormente colocado num molde criogéníco. Colocou-se o molde criogênico em gelo seco para congelação rápida. Posteriormente, o tecido foi fatiado a 10 pm a 20 pm utilizando um criostato (LEICA) . As fatias foram secas ao ar em lâminas de vidro utilizando um secador de cabelo durante 3 0 minutos, para preparar o tecido fatiado montado numa lâmina de vidro. A seguir, cada amostra foi colocada num frasco de coloração preenchido com PBS-T (solução salina contendo Tween20 a 0,05%) e posteriormente submetida a substituição com PBS-T sendo repetido três vezes a cada 5 minutos. Removeu-se o excesso de água à volta das seções com KimWipes, e posteriormente as seções circundaram-se utilizando uma DAKOPEN (DAKO). Como soluções de bloqueio, um reagente de bloqueio de Ig de ratinhos MOM (VECTASTAIN) e uma solução de PBS-T contendo FBS a 10% foram sobrepostas em tecidos de ratinho e tecidos de cão, respetivamente, e posteriormente deixaram-se repousar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. A* seguir, uma solução dos anticorpos policlonais (reativos coiti as superfícies de células de cancro, e preparadas em (5) acima) contra o péptido derivado de CAPRIN-1 (SEQ ID MO: 37) de 10 pg/ml ajustada com uma solução de bloqueio foi colocada e deixada a repousar durante a noite numa câmara húmida a 4 °C, 10 minutos de lavagem com PBS-T foi realizada 3 vezes, e posteriormente colocou-se um anticorpo anti-IgG marcado com biotina de MQM (VECTASTIN) diluído 250 vezes com a solução de bloqueio e deixou-se posteriormente repousar à temperatura ambiente durante 1 hora numa câmara húmida. Depois dez (10) minutos de lavagem com PBS-T foi realizada três vezes, colocou-se um reagente ABC de avidina-biotina (VECTASTIN), e posteriormente deixou-se repousar a amostra numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 5 minutos. Depois dez (10) minutos de lavagem com PBS-T foi realizada três vezes, colocou-se uma solução de coloração de DAB (DAB 10 mg + H202 a 30 % 10 μΙ/Tris-HCl a 0,05 M (pH 7.6) 50 ml) , e posteriormente deixou-se repousar a amostra numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Após enxaguar com água destilada, colocou-se um reagente de hematoxilina (DAKO), deixou-se repousar a amostra à temperatura ambiente durante 1 minuto, e posteriormente enxaguou-se com água destilada. A lâmina de vidro foi imersa em soluções de etanol a 70 I, 80%, 90%, 95%, e posteriormente 100% em tal ordem durante 1 minuto cada e posteriormente deixou-se repousar durante a noite em xileno. Removeu-se a lâmina de 'vidro, selou-se em meio de montagem Glycergel (DAKO) , e posteriormente observou-se. Corno um resultado, observou-se ligeiramente a expressâG de CAPRIN-l dentro das células de cada tecido de glândulas salivares, rim, cólon, e estômago, mas não se observou expressão da mesma em superfícies celulares. Além disso, não se observou expressão em tecidos de outros órgãos. Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de utilizar um anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n.° 1) compreendendo a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 51, o anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n.° 2) que compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 4 7 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 51, ou o anticGrpo monoclonal anti-CAPRIN-1 (anticorpo monoclonal n.° 3) que compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 63 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 67 (obtido no Exemplo 3). (7) -2 Expressão de CAPRIN-1 em tecidos de cancro da mama de cão Lâminas de seções congeladas foram preparadas através de um método semelhante ao acima descrito utilizando 108 espécimes de tecidos de cancro da mama congelados de cães patologicamente diagnosticados como tendo cancro de mama maligno, e foi realizados coloração imunoistoquímica utilizando os anticorpos policlonais (preparados em (5) acima) contra o péptido derivado de CAPRIN-1 (SEQ ID NO: 37) . Como um resultado, observou-se a expressão de CAPRIN-1 em 100 de 108 espécimes (92,5 %) e CAPRIN-1 foi fortemente expressa nas superfícies de células de cancro com um grau particularmente elevado de atipismo. Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de usar os anticorpos monoclonais n.° 1, n° 2, ou n° 3 obtido no Exemplo 3. (7) -3 Expressão de CAPRIN-1 em tecidos de cancro da mama humanos Uma coloração imunohistoquímica foi realizada utilizando 188 espécimes de tecidG de cancro da mama numa matriz de tecidos de cancro da mama humanos envolvida em parafina (ΒΙ0ΜΆΧ) . Após 3 horas de tratamento da matriz de tecido de cancro da mama humano a 60 °C, a matriz foi colocada num frasco de coloração preenchido com xileno, seguido de substituição do xileno sendo repetida três vezes a cada 5 minutos, A seguir, realizou-se um procedimento semelhante corn etanol e PBS-T em vez de xileno. A matriz de tecido de cancro da mama humano foi colocada num frasco de coloração preenchido com tampão citrato a 10 mM (pH 6,0) contendo Tween2Q a 0,05 %. Após 5 minutos de tratamento a 125 °C, deixou-se repousar a matriz à temperatura ambiente durante 40 minutos ou maís. Removeu-se o excesso de água à volta das seções com KimWipes, circundaram-se as seções com uma DAKOPEN, e Peroxidase Block (DAKO) foi adicionada gota a gota em quantidades adequadas. Após ter sido deixada a repousar à temperatura ambiente durante 5 minutos, a matriz foi colocada num frasco de coloração preenchido com PBS-T, seguido de substituição do PSB-T sendo repetida três vezes a cada 5 minutos. Como solução de bloqueio, colocou···se uma solução de PBS-T contendo FBS a 10% na matriz, e pGSteriormente deixou-se repousar a matriz numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. A seguir, uma solução dos anticorpos policlonais contra o péptido derivado de CAPRIN-1 (SEQ ID NO: 37) preparado em (5) acima tendo uma concentração de 10 pg/ml ajustado com uma solução de PBS-T contendo FBS a 5% foi colocada, e deixou-se repousar a matriz durante a noite numa câmara húmida a 4°C. Depois dez (10) minutos de lavagem com PBS-T foi realizada 3 vezes, adicionou-se Peroxidase Labeled Polymer Conjugated (DAKO) gota a gota em quantidades adequadas e posteriormente deixou-se repousar a matriz numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Depois dez (10) minutos de lavagem com PBS-T foi realizada três vezes, colocou-se uma solução corante DAB (DAKO) e posteriormente deixou-se repousar à temperatura ambiente durante 10 minutos. Descartou-se a solução de coloração, 10 minutos de lavagem com PBS-T foi realizada três vezes, e posteriormente enxaguou-se com água destilada. A matriz foi imersa em soluções de etanol a 70 %, 80%, 90%, 95%, e posteriormente 100% em tal ordem durante 1 minuto cada, e posteriormente deixou-se repousar em xileno durante a noite. Removeu-se a lâmina de vidro, selou-se em meio de montagem Glycergel (DAKO), e posteriormente observou-se. Como um resultado, observou-se a forte expressão de CAPRIN-1 em 138 (73 %) de um total de 188 espécimes de tecido de cancro da mama. Além disso, resultados semelhantes foram Gbtidos no caso de usar os anticorpos monoclonais n.° 1, n° 2, ou n° 3 obtido no Exemplo 3. (7)-4 Expressão de CAPRIN-1 em tumores cerebrais malignos humanos

Coloração imunohistoquímica foi realizada de acordo com um método semelhante àquele utilizado em (7)-3 acima com 247 espécimes de tecido tumoral cerebral maligno numa matriz de tecido tumoral cerebral maligno humano envolvida em parafina (ΒΙΟΜΆΧ), utilizando os anticorpos policlonais (preparados em (5) acima) contra o péptído derivado de CAPRIN-1 (SEQ ID NO: 37). ComG um resultado, observou-se a forte expressão de CAPRIN-1 em 227 (92 %) de um total de 247 espécimes de tecido tumoral cerebral maligno. Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de usar os anticorpos monoclonais η. ° 1, n° 2, ou n° 3 obtido no Exemplo 3. (7) -5 Expressão de CAPRIN-1 em nódulos linfáticos com metástase de cancro da mama humanos A coloração imunohistoquímica foi realizada de acordo com um método semelhante àquele utilizadG em (7)-3 acima com 150 espécimes de tecidos de nódulos linfáticos com metástase de cancro da mama numa matriz de tecido de nódulos linfáticos com metástase de cancro da mama humanos envolvida em parafina (BIOMAX), utilizando os anticorpos policlonais contra o péptído derivado de CAPRIN-1 (SEQ ID NO: 37) preparado em (5) acima. Como um resultado, observou-se a forte expressão de CAPRIN-1 em 136 de um total de 150 espécimes de tecido de nódulos linfáticos com metástase de cancro da mama (90 %).

Especificamente, revelou-se que a CAPRIN-1 foi expressa fortemente também em tecidos de cancro que tinham metástase de cancro da mama. Além disso, resultados semelhantes foram Gbtidos no caso de usar os anticorpos monoclonais n.° 1, n° 2, ou n° 3 obtido no Exemplo 3. (7) -6 Expressão de CAPRIN-1 em vários tecidos de cancro humanos A coloração imunohistoquímica foi realizada de acordo com um método semelhante ao mencionado acima com espécimes em várias matrizes de tecidos de cancro humanos envolvidas em parafina (BIOMAX) , utilizando os anticorpos policlonais contra o péptído derivado de CAPRIN1 (SEQ ID NO: 37) preparado em (5) acima. ComG um resultado, observou-se a forte expressâG da CAPRIN-1 no cancro de esófago, cancro de cólon, cancro retal, cancro pulmonar, cancro renal, cancro da bexiga, e cancro da cérvix uterina, Além disso, resultados semelhantes foram obtidos no caso de usar os anticorpos monoclonais n„° 1, n° 2, ou n° 3 obtido no Exemplo 3.

Exemplo 2 Preparação de CAPRIN-l humana, (1) Preparação de proteína recombinante

Com base no gene da SEQ ID NO: 1 obtido no Exemplo 1, preparou-se uma proteína recombinante a partir do gene homólogo humano através do seguinte método. PCR foi realizada num volume total de 50 μΐ com 1 μΐ de ADNc, dois iniciadores (SEQ ID NOS: 38 e 39 compreendendo sequências de clivagem de enzima de restriçãoSac I e Xho I ) de 0,4 μΜ cada uma, dNTP a 0,2 mM, e 1,25 U de polimerase PrimeSTAR HS (Takara Shuzo Co., Ltd.), adicíonandG os reagentes e um tampão acompanhante. A expressão foi confirmada através de um método de PCR-RT para o ADNc utilizado no presente documento a partir de vários ADNcs derivados de tecidos ou células preparados no Exemplo 1. A PCR foi realizada repetindo um ciclo de 98 °C durante 10 segundos e 68 °C durante 2,5 minutos 30 vezes utilizando um aparelho Thermal Cycler (BIORAD). Os dois iniciadores acima mencionados são capazes de amplificar uma região que codifica a sequência de aminoâcídGS total da SEQ ID NO: 2. Após a PCR, o ADN assim amplificado foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 1 %, e posteriormente um fragmento de ADN de cerca de 2,1 kbp foi purificado utilizando o QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN). 0 fragmento de ADN assim purificado foi ligado a um vetor de clonagem PCR-Blunt (Invitrogen). Após a transformação de Escherichia coli com o mesmo, recolheu-se um plasmídeo. Verificou-se através de sequenciação que o fragmentG gênico assim amplificado tem a sequência de interesse. 0 plasmídeo tendo uma sequência coincidente com a sequência de interesse foi tratado com enzimas de restrição Sac I e Xho I e posteriormente purificado com um kit de extraçâG QIAquick Gel. A sequência génica de interesse foi inserida num vetor de expressão de Escherichia coli pET3 0a (Novagen) tratado corn as enzimas de restrição Sac I e Xho I. Uma prGteína recombinante fusionada com um marcador His pode ser produzida utilizando o vetor. 0 plasmídeo foi transformado em Escherichia coli para expressão recombinante, BL21(DE3), e posteriormente induziu-se a expressão com IPTG a 1 mM, de modo que a proteína de interesse foi expressa em Escherichia coli. (2) Purificação de proteína recombinante A Escherichia coli recombinante obtida acima expressando o gene da SEQ ID MO: 1 foi cultivada em meio LB contendo canamicina a 30 pg/ml a 37°C até a absorvância a 600 nm ter ter alcançado cerca de 0,7, adicionou-se isopropil-β-D-l-tiogalactopiranósido a uma concentração final de 1 mM, e posteriormente as células foram cultivadas a 37 °C durante 4 horas. Subsequentemente, realizou-se centrifugação a 4800 rpm durante 10 minutos e posteriormente recolheram-se as células, o sedimento celular resultante foi suspenso em solução salina tamponada com fosfato e centrifugado a 4800 rpm durante 10 minutos, e posteriormente as células foram lavadas.

As células foram suspensas em solução salina tamponada com fosfato e posteriormente rompidas através de ultrassonicação em gelo. 0 lisado resultante da Escherichia coli foi submetido a centrifugação a 6 000 rpm durante 20 minutos, e posteriormente o sobrenadante resultante considerou-se como uma fração solúvel e o precipitado considerou-se corno uma fração insolúvel. A fração solúvel foi adicionada a uma coluna de quelato de níquel ajustada de acordo com um método convencional (veículo: Chelating Sepharose™ Fast Flow (GE Healthcare); capacidade de coluna de 5 ml; e tampão de equilíbrio: tampão cloridrato a 50 mM (pH 8,0)) . As frações não adsorvidas foram lavadas com tampão cloridrato a 50 mM (pH 8,0) numa quantidade de 10 vezes a capacidade de coluna e tampão fosfato a 20 mM (pH 8,0) contendo imidazol a 20 mM. Imediatamente após a lavagem, eluíram-se 6 leitos com tampão fosfato a 20 mM (pH 8,0) contendo imidazol a 100 mM. A eluição da proteína de interesse foi confirmada através de coloração de Coomassie na fração de eluição com tampão fosfato a 20 mM (pH 8,0) contendo imidazol a 100 mM, e posteriormente a fração de eluição foi adicionada a uma coluna de permuta aniónica forte (veículo: Q Sepharose™ Fast Flow (GE Healthcare); capacidade de coluna de 5 ml; e tampão de fosfato a 20 mM (pH 8,0) como tampão de equilíbrio) . Uma fração não adsorvida foi retirada por lavagem com tampão fosfato a 20 mM (pH 7,0) numa quantidade de 10 vezes a capacidade de coluna e tampão fosfato a 20 mM (pH 7,0) contendo cloreto de sódio a 200 mM. Imediatamente após a lavagem, eluíram-se 5 leitos com tampão fosfato a 20 mM (pH 7,0) contendo cloreto de sódio a 400 mM, e assim a fração purificada da proteína tendo a sequência de aminoãcidos representada peia SEQ ID MO: 2 foi obtida. 200 ui de cada amostra purificada obtida através do método descrito acima foi dispensada em 1 ml de tampão de reação (Tris-HCl a 20 mM, , 50 mM, NaCl, CaCl2 a 2 mM, pH 7,4) , seguido de adição de 2 μΐ de enteroquinase (Novagen). Posteriormente, deixou-se o resultante repousar durante a noite â temperatura ambiente para reação de modo que o marcador His fosse clivado, e posteriormente realizou-se purificação utilizando um kit Enterokinase Cleavage Capture Kit (Novagen) de acordo com os protocolos acompanhantes. A seguir, 1,2 ml da amostra purificada obtida pelo método acima foi submetido a substituição do tampão com tampão fosfato fisiológico (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) utilizando um NANOSEP 10K OMEGA (PALL) de ultrafiltração. Além disso, realizou-se filtração estéril utilizando HT Tuffryn Acrodisc 0,22 μηι (PALL) e posteriormente o resultante utilizou-se para a seguinte experiência.

Exemplo 3 Preparação de anticorpo monoclonal de ratinho an t i - CAPRIN 1

100 pg da proteína de antigénio (CAPRIN-1 humana) representada pela SEQ ID MO: 2 preparada no Exemplo 2 foi misturada com uma quantidade equivalente de adjuvante MPL+TDM (Sigma) e depois isto foi utilizada como uma SGlução de antigénio para um ratinho. A solução de antigénio foi administrada por via intraperitoneal a ratinhos Balb/c de 6 semanas de idade (Japan SLC Inc.), e posteriormente a administração realízGu-se 7 vezes a cada semana, e assim completou-se a imunização. Excisou-se cada baço 3 dias após a imunização final, e interpôs-se entre duas lâminas de vidro esterilizadas e posteriormente esmagou-se. 0 resultante lavou-se com PBS(-) (Nissui) e posteriormente centrifugou-se a 1500 rpm durante 10 minutos para remover o sobrenadante. Este procedimento repetiu-se 3 vezes, de forma a obter-se esplenócitos. Os esplenócitos assim obtidos e células de mieloma de ratinho SP2/0 (adquirida de ATCC) foram misturados juntamente a uma razão de 10: 1. Uma solução de PEG preparada misturando 200 μΐ de meio RPMI1640 contendo FBS a 10% aquecido a 37°C e 800 μΐ de PEG1500 (Boehringer) foi adicionado à mistura, deixou-se repousar durante 5 minutos para fusão celular, e posteriormente submeteu-se a centrifugação a 1700 rpm durante 5 minutos. Após a remoção do sobrenadante, suspenderam-se as células em 150 ml de meio RPMI1640 contendo FBS a 15%, suplementado com uma solução HAT (Gibco) (2 % equivalente) (meio seletivo HAT), e depois a suspensão de células foi colocada em placa em quinze placa de 96 poços (Nunc) a 100 μΐ por poço. Cultivaram-se as células durante 7 dias a 37 °C sob condições de C02 a 5%, de mGdo que hibridomas preparados através de fusão de esplenócitos e células de mieloma de galinha foram obtidos.

Os hibridomas foram selecionados utilizando como um marcador a afinidade de ligação do anticorpo produzido pelos hibridomas preparados para a proteína CAPRIN-1. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 ug/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a uma placa de 96 poços a 100 μΐ por poço e posteriormente deixada a repousar a 4 °C durante 18 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, 400 μΐ de uma solução de Albumina Sérica Bovina (BSA) a 0,5% (SIGMA) foi adicionado por poço, e pGsteriormente deixou-se repousar a placa à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida, e posteriorrnente lavaram-se os poços três vezes com 4 00 μ.1 de PBS-T por poço. 0 sobrenadante da cultura dos híbridomas obtidos acima foi adicionado a 100 μΐ por poço, e posteriorrnente deixou-se repousar à temperatura ambiente durante 2 horas. Após lavar cada poço três vezes corn PBS-T, um anticorpo anti-IgG de ratinho marcado com HRP (H+L) (Invitrogen)diluído 5000 vezes com PBS foi adicionado a 100 μΐ por poço e o resultante deixou-se posteriorrnente repousar à temperatura ambiente durante 1 hora. Após lavar os poços três vezes com PBS-T, 100 μΐ de uma solução substrato TMB (Themo) foi adicionado por poço e posteriorrnente deixou-se repousar durante 15 a 30 minutos para reação de coloração. Após o desenvolvimento de cor, 100 μΐ de ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado por poço para parar a reação,, e posteriorrnente mediram-se as absorvâncias a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como um resultado, vários híbridomas produzindo anticorpos com elevados valores de absorvância foram selecionados.

Os híbridomas assim selecionados foram adicionados a uma placa de 96 poços a 0,5 células por poçG, e posteriorrnente cultivados. Após 1 semana, observaram-se híbridomas que formaram colónias individuais nos poços. Estas células nos poços foram adicionalmente cultivadas, e posteriorrnente selecionaram-se híbridomas utilizando como marcador a afinidade de ligação de anticorpos produzidos pelos híbridomas clonados para a proteína CAPRIN-1. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 ug/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a uma placa de 96 poços a 100 μΐ por poço, e posteriorrnente deixou-se repousar a 4 °C durante 18 horas. Lavou-se cada poço com PBS-T três vezes, 400 μ.1 e uma solução de BSA a 0,5% foi adicionado por poço, e posteriorrnente deixou-se repousar o resultante à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida, e posteriorrnente lavaram-se os poços três vezes com 400 μΐ de PBS-T por poço. 100 μΐ do sobrenadante de cada cultura dos hibridomas obtidos acima foi adicionado por poço, e posteriormente deixou-se repousar a placa à temperatura ambiente durante 2 horas. Após lavar cada poço três vezes com PBS-T, 100 μΐ de um anticorpo anti-IgG de ratinho (H+L) marcado com HRP (SIGMA) diluído 5000 vezes com PBS foi adicionado por poço e deixou-se posteriormente repousar à temperatura ambiente durante 1 hora. Após lavar os poços três vezes com PBS-T, 100 μΐ de uma solução de substrato TMB (Thermo) foi adicionado por poço, e posteriormente deixou-se repousar durante 15 a 3 0 minutos para reação de coloração. Após o desenvolvimento de cor, 100 μΐ de ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado por poço para parar a reação e posteriormente mediram-se as absorvâncias a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção.. Como um resultado, obtiveram-se 50 linhas celulares de hibridomas produzindo anticorpos monoclonais reativos com a proteína CAPRIN-1. A seguir, desses anticorpos monoclonais, anticorpos reativos com as superfícies celulares de células de cancro da mama que expressam CAPRIN-1 foram selecionados. Específicamente, submeteram-se 106 células da linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-231V a centrifugação num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml, e 100 μΐ do sobrenadante de cultura de cada um dos hibridomas acima foi adicionado ao tubo, e posteriormente o tubo deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, adicionou-se um anticorpo de cabra anti-IgG de ratinho marcado com FITC (Invitrogen) diluído 500 vezes com PBS contendo FBS a 0,1 %, e posteriormente o resultante deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um calibre FACS (Becton, Dickinson and Company). Entretanto, procedimentos semelhantes ao acima foram realizados utilizando o soro de ratinho Balb/c de 6 semanas de idade que não tinham sido tratados e tinham sido diluídos 500 vezes com o meio para cultivar hibridomas, de forma a obter uma amostra controlo. Como um resultado, três anticorpos monoclonals (anticorpos monoclonals n° 1, n° 2, e n.° 3) que tinham exibido intensidade de fluorescência mais forte que a do controlo, isto é, que reagiram com as superfícies celulares de células de cancro da mama, foram selecionados.

Exemplo 4 Caracterização dGS anticorpos selecionados (1) Clonagem de genes de regiões variáveis de anticorpo monoclonal de ratinho anti-CAPRIN-1. ARNm foi extraído de cada linha de células de hibridoma que produz qualquer um dos três anticorpos monoclonais selecionados no Exemplo 3. Para tal realizou-se um método de RT-PCR utilizando iniciadores específicos para a sequência derivada de FR1 de ratinho e a sequência derivada de FR4 de ratinho, e obtiveram-se os genes das regiões variáveis de cadeia pesada (VH) e os genes das regiões variáveis de cadeia leve (VL) de todos os anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1. Para a determinação de sequências, estes genes foram clonados num vetor pCR2.1 (Invitrogen).

(2) RT-PCR ARNm foi preparado a partir de 106 células de cada linha de células de hibridoma utilizando um kit de micropurif icaçãoa ARNm (GE Healthcare). 0 ARNm obtido deste modo foi transcrito de forma reversa e então o ADNc foi sintetizado utilizando um kiti de síntese de Ia cadeia SuperScriptII (Invitrogen) . Estes procedimentos realizaram-se de acordo com os protocolos anexos a cada kit. A amplificação do gene de anticorpo foi realizada por meio de um método de PCR utilizando o ADNc assim obtido. Para obter o gene da região VH, um iniciador (SEQ ID NO: 54) específico para a sequência FR1 de cadeia pesada de ratinho e um iniciador (SEQ ID NO: 55) específico da sequência FR4 de cadeia pesada de ratinho foram utilizados. Além disso, para obter o gene da região VL, um iniciador (SEQ ID NO: 56) específico para a sequência FR1 de cadeia leve de ratinho e um iniciadGr (SEQ ID NO: 57) específico da FR4 de cadeia leve de ratinho foram utilizados. Estes iniciadores foram concebidos em referência a Jones, S. T. and Bending, Μ. M. Bio/Technology 9, 88-89 (1991) , Ex-taq (Takara Bio Inc.) foi utilizado para a PCR. Uma amostra de ADNc foi adicionada a 5 yl de tampão 10 x EX Taq, 4 μΐ de mistura de dNTP (2,5 mM), iniciadores (1,0 μΜ) (2 μΐ cada um), e 0,25 μΐ de Ex Taq (5 U/μΙ), e então a quantidade total do mesmo foi ajustada com água estéril até 50 μΐ. A PCR foi realizada sob as condições: 2 minutos de tratamento a 94 °C, seguido de 30 ciclos de 1 minuto de desnaturação a 94 °C, 30 segundos de anelamento a 58 °C, e 1 minuto de reação de extensão a 72 °C. (3) Clonagem

Os produtos assim obtidos através de PCR foram submetidos cada uma eletroforese em gel de agarose, e excisaram-se as bandas de ADN da região VH e da região VL. Os fragmentos de ADN foram purificados utilizando um kit de purificação QIAquick Gel ÍQIAGEN) de acordo com os protocolos anexos. 0 ADN purificado foi clonado num vetor pCR2.1 utilizando um kit de clonagem TA (Invitrogen). 0 vetor ligado foi transformado em células competentes DH5a (T0Y0B0) de acordo com um método convencional. 10 clones de cada transformante foram cultivados durante a noite em meio (100 pg/ml de ampicilina) a 37°C, e posteriormente o ADN de plasmídeo foi purificado utilizando um kit Qiaspin Miniprep (QIAGEN). (4) Determinação de sequências

As sequências génicas da regíâG VH e da região VL em cada plasmídeo obtido acima foram analisadas com um iniciador direto M13 (SEQ ID NO: 58) e um iniciador reverso M13 (SEQ ID NO: 59) num sequenciador de fluorescência (sequenciador ADN 3130XL; ABI), utilizando um kit de sequenciamento em ciclo Big Dye Terminator Ver3.1 (ABI) de acordo com os protocolos anexos. Como um resultado, determinou-se cada sequência génica. As sequências foram idênticas entre os 10 clones.

As sequências assim obtidas que cGdificam as regiões variáveis de cadeia pesada do anticorpo monoclonal são mostradas pelas SEQ ID NOS: 52, 70, e 68 e as sequências de aminoãcidos das mesmas são mostradas pelas SEQ ID MOS: 43, 47, e 51; e as sequências génicas que codificam as regiões variáveis de cadeia leve são mostradas pelas SEQ ID NOS: 53 e 69, e as sequências de aminoãcidos das mesmas são mostradas pelas SEQ ID NOS: 51 e 67. Especificamente, foi revelado que o anticorpo monoclonal n.c 1 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 43 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 51, o anticorpo monoclonal n.° 2 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 4 7 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 51, e o anticorpo monoclonal n.° 3 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 63 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 67. Exemplo 5 Identificação de epítopos de CAPRIN-10 a ser reconhecidos pelos anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 n° 1, n° 2 e n° 3

Com a utilização de anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 n. 0 1 e n. °2 (obtidos no Exemplo 3) reativos com as superfícies de células de cancro, regiões de epítopo de CAPRIN-1 a ser reconhecida pelos anticorpos foram identificadas, 93 péptidos candidatos, cada um consistindo em 12 a 16 aminoãcidos na sequência de aminoãcidos da proteína de CAPRIN-1 humana, foram sintetizados, e então cada péptido foi dissolvido em DMSO a uma concentração de 1 mg/ml. Cada péptido foi dissolvido em tampão de carbonato de sódio a 0,1 M (pH 9,6) a uma concentração de 30 μα/ml, adicionado a uma placa de 96 poçGS (Nunc, N.° de produto 436006) a 100 μΐ por poço, e posteriormente deixou-se repousar durante a noite a 4 °C. A solução foi descartada, etanolamina a 10 mM/ tampão de carbonato de sõdiG a 0,1 M (pH 9,6) foi adicionado a 200 μΐ por poço, e posteriormente deixou-se repousar o resultante à temperatura ambiente durante 1 hora. Ά solução foi descartada e então a placa foi lavada duas vezes com PBS contendo Tween 20 a 0,5% (BST) , de modo que a placa sobre a qual cada péptido tinha sido imobilizado foi preparada. 0 sobrenadante da cultura celular contendo os anticorpos monoclonals de ratinho (n° 1, n° 2, e n,° 3) obtido no Exemplo 3 foi adicionado à placa a 50 μΐ por poço. e então agitado à temperatura ambiente durante 1 hora. A solução foi removida, seguido de lavagem três vezes com PBST. A seguir, urna solução de anticorpo secundário preparada através da diluição de um anticorpo anti-IgG de ratinho marcado com HRP (Invitrogen) de 3000 a 4000 vezes com PBST foi adicionado (50 μΐ cada um) aos anticorpos monoclonais de ratinho. A solução foi removida, seguido de lavagem seis vezes com PBST.

Uma solução de substrato de TMB (Thermo) foi adicionada a 100 μΐ por poço e posteriormente deixou-se repousar durante 15 a 3 0 minutos para reação de coloração. Após o desenvolvimento de cor, ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado a 100 μΐ por poço para terminar a reação, e posteriormente mediram-se as absorvâncias a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como um resultado, um polipéptido compreendendo a sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO: 37 foi identificado como sequência parcial de CAPRIN-1 reconhecida pela totalidade dos anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 n.° 1, n° 2, e n.° 3.

Portanto, revelou-se que o polipéptido da SEQ ID NO: 37 contêm regiões de epítopo para os anticorpos anti-CAPRIN-1 n. ° 1, n° 2, e n.° 3.

Exemplo 6 Expressão de CAPRIN-1 em várias superfícies de células de cancro utilizando anticorpos anti-CAPRIN-1 η.° 1 n° 2 , e n. 0 3 A seguir, 7 linhas de células de cancro da mama (MDA-MB-157, T47D, MRK-nu-1, MDA-MB-231V, BT20 SK-BR-3, e DAMB-231T) para as quais a expressão do gene de CAPRIN-1 tinha sido observada, e as outras 3 linhas celulares de cancro da mama (MDA-MB-231C, MCF-7, e ZR75-1), 5 linhas celulares de glioma ÍT98G, SNB19, U251, U87MG, e IJ373), 4 linhas de células de cancro renal (Caki-1, Caki-2, A498, eACHN), 2 linhas de células de cancro gástrico (MKN28 e MKN45), 5 linhas de células de cancro colorretal (HT29, LoVo, Caco2, SW480, e HCT116), 3 linhas de células de cancro pulmonar (A549, QG56, e PC8), 4 linhas de células de leucemia (AML5, Namalwa, BDCM, RPI1788), uma linha de células de cancro da cérvix uterina (SW756), uma linha de células de cancro da bexiga (T24) , uma linha de células de cancro do esófago (KYSE180), e uma linha celular de linfoma (Ramos) foram examinadas para a expressão da proteína CAPRIN-l nas superfícies celulares de cada linha celular utilizando os sobrenadant.es das culturas contendo n° 1 , n° 2, e n.° 3 obtido no Exemplo 3 . lí)6 células de cada linha celular foram centrifugadas num tubo de microcentrífuga de 1,5 mi. Cada sobrenadante de cultura celular (100 μΐ) contendo n° 1, n° 2, ou n° 3 foi adicionado e depois deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, um anticorpo de cabra anti-IgC de ratinho (H+L) marcado com FITC (SouthernBiotech) diluído 500 vezes com PBS contendo FBS a 0,1 % foi adicionado e posteriormente deixou-se repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company) . Uma amos submetida a uma reação com apenas um anticorpo secundário foi utilizada como um controlo negativo. Como um resultado, células às quais os anticorpos n° 1, n° 2, ou n° 3 tinham sido adicionados exibiram intensidade de fluorescência de 20 % ou mais mais forte que a do controlo negativo. Revelou-se através destes resultados que a proteína CAPRIN-l era expressa nas superfícies da membrana celular das linhas celulares de cancro acima mencionadas. A percentagem de melhoria da intensidade de fluorescência acima foi expressa como percentagem de aumento na intensidade de fluorescência média (nível de MFI) em cada tipo celular e calculada a partir da seguinte fórmula.

Percentagem de aumento da intensidade de fluorescência média (percentagem de melhoria da intensidade de fluorescência) (%) = ((nível de MFI em controlos tendo reagido com anticorpo anti-CAPRIN-l humano) - (nível de MFI do controlo)) / (nível de MFI do controlo) x 100.

Exemplo 7 Efeitos anti-tumorais (atividade ADCC e atividade CDC) de anticorpos anti-CAPRIN-l em células de cancro

Foi examinado de os anticorpos anti-CAPRIN-1 pGderiam ou não danificar células de cancro medindo em primeiro lugar a atividade ADCC. A avaliação foi realizada utilizando um anticorpo policlonal contra o péptido derivado de CAPRIN-1 humana (SEQ ID NO: 37) preparada no Exemplo 1, 106 células da linha de células de cancro da mama humano MDA-MB-157 para a qual a expressão de CAPRIN-1 tinha sido confirmado foram recolhidos num tubo de centrifugação de 50 ml, 100 \iCi crómio-51 foi adicionado, e posteriormente realizou-se incubação a 37 °C durante 2 horas. Subsequentemente, lavou-se o resultante três vezes com meio RPMI 1640 contendo soro fetal bovino a 10%. Células foram adicionadas a uma placa de fundo em V de 96 poços a 103 células por poços. 1 pg do antícGrpo policlonal contra o péptido derivado de CAPRIN-1 humana foi adicionado aos poços e então linfócitos (2 x 105 cada) separado de sangue periférico de coelho foram adicionados, seguido de 4 horas de cultura a 37°C sob condições de C02 a 5%. Após a cultura, mediu-se a quantidade de crómio (Cr)-51 libertada pelas células de cancro danificadas num sobrenadante de cultura, de modo que a atividade ADCC dos anticorpos policlonais contra a péptido derivado de CAPRIN-1 contra células de cancro foi calculado. Como um resultado, 17,8 % de atividade citotóxica contra MDA-MB-157 foi observado (veja-se a Fig. 2). Por outro lado, quando procedimentos semelhantes foram realizados utilizando um anticorpo de controlo (Exemplo 1 (5) ) preparadG a partir de sangue periférico de um coelho não imunizado com o antigénio, e quando nenhum anticorpo foi adicionado, quase nenhuma atividade foi observada (veja-se a Fig. 2) . Portanto, foi revelado que os anticorpos anti-CAPRIN-1 pode danificar as células de cancro que expressam CAPRIN-1.

No presente documento, a atividade citotóxica foi determinada como uma atividade citotóxica contra um linha de células de cancro. Especificamente, conforme descrito anteriormente, o resultado foi obtido pela mistura de um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção, um linfócito de coelho, e 103 células de cada linha de células de cancro que tinham incorporado crómio-51, cultura das células durante 4 horas, medindo a quantidade de crómio -51 libertado no meio após a cultura, e depois o cálculo da atividade citotóxica contra a linha de células de cancro pela seguinte formula*, * Fórmula: atividade citotóxica (%) = (a quantidade de crómio-51 libertada de células de cancro após a adição de um anticorpo anti-CAPRIN-1 e um linfócito de coelho) / (a quantidade de crómio-51 libertado de células alvo ao qual ácido clorídrico 1 N tinham sido adicionado) x 100. A seguir, os anticorpos monoclonaís de ratinho anti-CAPRIN-1 n° 1, n° 2, e n° 3 (obtidos no Exemplo 3) fGram avaliados para sua atividade citotóxica contra células de cancro. Cada sobrenadante da cultura de células que produz n. ° 1, nc 2, ou n° 3 foi purificado utilizando Hitrap ProteinA Sepharose FF (CE Healthcare), submetido a substituição do tampão com PBS(-) e posteriormente filtrado com um filtro de 0,22 μπι (Millipore) . Os resultantes foram utilizados como anticorpos para medir a atividade. 10b células da linha de células de cancro da mama humano MDA-MB-157 foram recolhidas num tubo de centrífuga de 50 ml, 100 pCi crómio-51 foi adicionado, e posteriormente realizou-se incubação a 37 °C durante 2 horas. Subsequentemente, lavou-se o resultante três vezes com meio RPM! 1640 contendo FBS a 10%. As células foram adicionadas a uma placa de 96 poços de fundo em V a 10J células por poço para utilização como células alvo. Os anticorpos purificados acima (1 ug cada) foram adicionados às células. 5xl04 células de esplenócitos de ratinho ísGladGS do baço de um ratinho BALB/C de 6 semanas de idade (Japan SLC Inc.) de acordo com um método convencional foram ainda adicionados e depois cultivados durante 4 horas a 37°C sob condições de C02 a 5%. Após a cultura, mediu-se a quantidade de crómio-51 libertada pelas células de tumor danificadas num sobrenadante de cultura, e calculou-se a atividade citotóxica de cada anticorpo anti-CAPRIN-1 contra células de cancro. Como amostras de controlo negativas, uma amostra preparada adicionando PBS em vez dos anticorpos e uma amostra preparada adicionando um anticorpo de controlo de isõtipos em vez de anticorpos foram utilizadas. Como um resultado, os anticorpos n.c 1, n° 2, e n° 3 exibiram mais de 26 % de atividade citotôxica contra MDA-MB-157, Em contraste, a atividade na amostra preparada pela adição de PBS como controlo negativo e a atividade na amostra preparada pela adição do anticorpo de controlo de isõtipos como controlo negativo foram de 2,0% e 2,8%, respetivamente. De forma semelhante, os anticorpos n.° I, n° 2, e n° 3 foram examinados para sua atividade citotôxica contra outras células de cancro incluindo as linhas de células de glioma T98G e U3 73, linhas de células de cancro pulmonar A54 9 e QG56, linhas celulares de cancro renal Caki-1 e ACHN, uma linha de células de cancro da cérvix uterina SW756, uma linha de células de cancro da bexiga T24, uma linha de células de cancro do esófago KYSE180, linhas de células de cancro gástrico MKN28 e MKN45, uma linha de células de cancro colorretal SW480, uma linha de células de leucemia AML5, e uma linha de células de linfoma Ramos. Como um resultado, o anticGrpo n° 1 exibiu II, 2% de atividade contra T98G (2,5% no caso do controlo de isõtipos), 13,3% de atividade contra U373 (4,3% no caso do controlo de isõtipos), 20,8% de atividade contra A549 (4,5% no caso do controlo de isõtipos), 21,3% de atividade contra QG56 (5,3% no caso do controlo de isõtipos), 15,9% de atividade contra Caki-1 (4,5% no caso do controlo de isõtipos) , 14,7% de atividade contra ACHN (3,8% no caso do controlo de isõtipos), 13,5% de atividade contra SW756 (5,1% no caso do controlo de isõtipos), 11,6% de atividade contra T24 (3,8% no caso do controlo de isõtipos), 16,2% de atividade contra KYSE1S0 (3,7% no caso do controlo de isõtipos), 12,8% de atividade contra MKN2 8 (4,2% no caso do controlo de isõtipos) , 13,4% de atividade contra MKN45 (4,6% no caso do controlo de isõtipos), 12,4% de atividade contra SW48Q (6,4% no caso do controlo de isótipos), 10,3% de atividade contra AML5 (4,7% no caso do controlo de isótipos), e 7,8% de atividade contra Ramos (2,6% no caso do controlo de isótipos), Também os anticorpos n° 2 e n° 3 exibiram resultados semelhantes. Foi demonstrado pelos resultados acima que os anticorpos anti-CAPRIN-1 assim Gbtidos n° 1, n° 2, e n° 3 danificam células de cancro expressando CAPRIN-1 através de atividade de CDC.

Foi demonstrado pelos resultados acima que os anticorpos monoclonals de ratinho anci-CAPRIN-1 assim obtidos n° 1, n° 2, e n° 3 danificam células de cancro expressando CAPRIN-1 através de atividade de CDC.

No presente documento, a atividade citotóxica foi determinada como uma atividade citotóxica contra um linha de células de cancro. Especificamente, conforme descrito anteriormente, o resultado foi obtido pela mistura de um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção, um esplenõcito de ratinho, e 103 células de cada linha de células de cancro que tinham incorporado crómio-51, cultura das células durante 4 horas, medindo a quantidade de crómio -51 libertado no meio após a cultura, e depois o cálculo da atividade citotóxica contra a linha de células de cancro pela seguinte fórmula*. * Fórmula: atividade citotóxica (%) = (a quantidade de crómio-51 libertada de células de cancro após a adição de um anticorpo anti-CAPRIN-1 e um esplenócito de ratinho) / (a quantidade de crómio-51 libertado de células alvo ao qual ácido clorídrico 1 N tinham sido adicionado) x 100. A seguir, os anticorpos monoclonais de ratinho anti-CAPRIN-1 obtídGS n° 1 e n° 2 foram avaliados para a atividade citotóxica (atividade de CDC) contra células de cancro. Adicionou-se sangue recolhido de um coelho a um tubo Eppendorf, deixou-se repousar à temperatura ambiente durante 60 minutos, e pGSteriormente submeteu-se durante 5 minutos a centrifugação a 3000 rpm. Consequentemente, preparou-se soro para a medição da atividade de CDC. 10b células da linha de células de cancro da mama humano MDA-MB-231V foram recolhidas num tubo de centrífuga de 50 ml, 100 μΟί crómio-51 foi adicionado, e posteriormente realizou-se incubação a 37 °C durante 2 horas. Lavou-se o resultante três vezes com meio RPMI contendo FBS a 10%. Subsequentemente, suspenderam-se as células em meio RPMI contendo o soro de coelho preparado acima (50 %) , e posteriormente adicionaram-se a uma placa de 96 poços de fundo em V a 103 células por poço. 1 \ig de cada um do anticorpos monoclonais de ratinho n° 1 e n° 2 foi adicionado às células e então as células foram cultivadas durante 4 horas a 37°C sob condições de C02 a. 5%. Após a cultura, mediu-se a quantidade de crómio-51 libertada pelas células de tumor danificadas num sobrenadante de cultura, e posteriormente a atividade CDC de cada anticorpo contra MDA-MB-231V foi calculada. Como um resultado, os anticorpos n° 1 e n° 2 ambos exibiram mais de 21% de atividade de CDC. Igualmente, nenhuma atividade citotóxica foi observada num grupo de controlo negativo ao qual nenhum anticorpo tinha sido adicionado. Portanto, revelou-se que os anticorpos n° 1 e n° 2 podem danificar células tumorais expressando CAPRIN-1 também através de atividade de CDC.

No presente documento, a atividade citotóxica foi determinada como uma atividade citotóxica contra um linha de células de cancro. Especificamente, conforme descrito anteriormente, o resultado foi Gbtido pela mistura de um anticorpo anti-CAPRIN-1 a ser utilizado na presente invenção, soro, e 10J células de cada linha de células de cancro que tinham incorporado crómio-51, cultura das células durante 4 horas, medindG a quantidade de crómio -51 libertado no meiG após a cultura, e depois o cálculo da atividade citotóxica contra a linha de células de cancro pela seguinte fórmula*. * Fórmula: atividade citotóxica (%) = (a quantidade de crómio-51 libertada de células de cancro após a adição de um anticorpo anti-CAPRIN-1 e soro) / (a quantidade de crõmio-51 libertado de células alvo ao qual ácido clorídrico 1 N tinham sido adicionado) x 100. A seguir, os anticorpos monoclonais de ratinho anti-CAPRIN-1 n° 1 e n° 2 assim obtidos foram avaliados para os seus efeitos anti-tumorais their in vivo ratinhos portadores de tumor. Os anticorpos utilizadGS no presente documento fGram preparados através de purificação por meio de coluna do sobrenadante de cultura de cada célula produzindo η. ° 1 ou n. ° 2 da mesma forma conforme descrito acima.

Os efeitos anti-tumorais dos anticorpos η. ° 1 e n. ° 2 foram examinados utilizando ratinhos portadores de tumor nos quais urna linha celular de cancro derivada de ratinhos expressando CAPRIN-1 tinha sido transplantada. Células 4T1 (adquiridas de ATCC) foram transplantadas subcutaneamente na regíâG dorsal de 30 ratinhos Balb/c (Japan SLC Inc.) a 5xlOb células/ratinho. Permitiu-se o crescimento dos tumores até alcançares um tamanho de cerca de 5 mm de diâmetro. Os anticorpos n° 1 e n° 2 foram administrados intraperitonealmente a 20 ratinhos portadores de tumor de entre 30 ratinhos portadores de tumor numa quantidade de 200 pg (200 μΐ)/ratinho (cada anticorpo foi administrado a 10 ratinhos). Subsequentemente, administrou-se a mesma quantidade do anticorpo intraperitonealmente a cada ratinho portador de tumor 3 vezes em total no espaço de 2 dias. Os tamanhos dos tumores foram medidos a cada dia e examinaram-se os efeitos anti-tumorais através de observação. Entretanto, como um grupo controlo, administrou-se PBS (-) em vez dGS anticorpos aos restantes 10 ratinhos portadores de tumor. 0 tamanho tumoral foi calculado como um volume utilizando a fórmula: comprimento do eixo maior x comprimento do eixo menor x comprimento do eixo menor x 0,5.

Como um resultado da observação dos efeitos anti-tumorais, no grupo de exame ao qual foi administrado os anticorpos monoclonais de ratinho anti-CAPRIN-1 n° 1 e n° 2 tinham sido administrados, encontrou-se que os tumores tinham regredido quase completamente até o dia 16 após a administração dos anticorpos. Por outro lado, no grupo controlo ao qual PBS (-) tinha sidG administrado, constatou-se que os tumores tinham regredido a cerca de 820% no dia 12. Foi demonstrado por estes resultados que os anticorpos monoclonals de ratinho anti-CAPRIN-1 obtidos n° 1 e n° 2 exibiram fortes efeitos antitumoral in vivo em células de cancro que expressam CAPRIN-1.

Ap1i c ab i1i dade Industria1

Os anticorpos da presente invenção são úteis para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro.

Lista de sequências de texto livre SEQ ID NO: 31: iniciador de T3 SEQ ID NO: 32: iniciador de T7 SEQ ID NOS: 33 e 34: iniciadores SEQ ID NOS: 35 e 36: iniciadores de GAPDH SEQ ID NOS: 38 e 39: iniciadores

LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> Toray Industries, Inc. <120> Composição farmacêutica para o tratamento e/ou prevenção de cancro

<130> PH-4603-PCT <160> 70 <150> JP 2010-023453 <151> 04-02-2010 <150> JP 2010-183161 <151> 18-08-2010 <170> Patentln versão 3.1

< 210 > 1 <211> 5562 < 212 > ADN <213> Homo sapiens < 2 2 Ο >

<221> CDS <222> (190) . . (2319) < 2 2 3 > < 4 0 0 > 1 eagagggetg ctggctggct aagtceetcc cgotcccggc tetegeetea ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg ccfegcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggaec gccacectfcg cceccfccagc tgcecacfccg tgatttccag cggcctccgc 180 gcgcgcacg atg ccc tog goo acc age cac age ggg age ggc age aag tog 231

Met Pro Ser Ala Thr Set His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Set 15 10 tec gga ccg cca ccg ccg teg ggt tee tec ggg agt gag geg gee geg 279 S®sr Gly Pro Pro Pro Pro Sesr Gly Sesr Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gcc ggg gcc gcc geg ccg get tet cag cac ccc gca acc ggc acc 327

Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Set.' Gin His Pro Ala Thr Gly Thr 35 40 45 ggc got gtc cag aoc gag gcc atg aag cag afct etc ggg gtg ate gac 375

Gly A*Ia Val Gin Thr Gin Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp 50 55 60 aag aaa ett egg aac etg gag aag aaa aag ggt aag ett gat gat tac 423

Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr 65 70 ’ 75 cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett aat caa gat cag ctg gat 471

Gin Glu Arc; Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp

80 ~ 85 SO gcc gtfc tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aaa 519

Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys 95 100 105 110 gaa fcfca sag agg agt ttc atg gca eta agt caa gafc att cag aaa aca 567

Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lya Thr 115 120 125 ata aag sag aca gca cgt egg gag cag ett atg aga gaa gaa get gaa 615

Lie Lys Lya Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gta ett gag eta sag tat gtt ttg gac aaa 663

Gin Lys Arg Leu Lya Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg egg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711

Leu Gly Asp Asp Gin Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Giv Leu JLsn Giy 160 165 170 gtg cca ata ttg tea gaa gag gag ttg tea ttg ttg gat gaa ttc tat 759

Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 3.75 130 185 190 aag cfca gta gac cct gaa egg gac atg age ttg agg ttg aat gaa cag 807

Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg· Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin 195 £00 205 tat gaa cat gsc tcc att eac ctg tgg gas ctg ctg gaa ggg aag gaa 355

Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga ace acc tat aaa gtt eta aag gaa att gtt gag 303

Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu 225 230 235 cgt gtt ttt cag tea aac tac ttt gac age acc cac aac cac cag aat 953.

Arg val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gee tea gca cct gca gtt gaa gac 939

Gly Leu Cys Glu Glu Giu Glu Ala Ala Set Ala Pro Ala Val Glu Asp

255 260 265 27Q cag gta cct gaa get gaa cot gag cca gca gaa gag tac act gag caa 1047

Gin Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin 275 280 28b agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga cag ttc. atg gca gaa 1095

Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Atg Gin Pile Met Ala Glu 290 295 300 aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag- tgg aca gtt 13.43

Thr Gin Phe Thr Ser Giy Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val 305 310 315 gaa aeg gtt gag gtg gta. aat tea etc cag cag caa cct cag get gca 3.131

Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala 320 325 330 tcc cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag gea 1233

Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin A_la 335 340 345 350 gafc ccc ett gtg aga aga cag ega gta caa gac cfct atg gca caa atg 1287

Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met 355 360 365 eag ggt cce tat aat ttc at a cag gat tea atg ctg gat ttt gaa aat. 1335

Gin Sly Pr;o Tyr Aara Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 3S0 eag aca ett gat. cct gee att gta tet gca eag cot atg aat oca aca 1383

Gin Thr Lau Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr 385 390 395 csi! aac atg gac atg ooc cag ctg gtt tgc cct cca gtt eat tet gaa 1-331

Gin Asa Met -Asp Met Pro Gin Lea Val Cys Pro Pro val mis 3er Glu 400 405 41.0 tet aga ett get cag cct aat caa gtt cct gta eaa cca gaa geg aea 1479

Ser Ary Leu Ala Gin Pro Am Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 43ΰ cag gtt cct ttg gta tea tcc aca agt gag ggg tac aca gaa tet caa 1527

Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr See Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin 435 440 445 ccc ttg tac cag cot fcet cat got aca gag caa cga. cca cag aag gaa 1575

Pro Leu Tyr Glri Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu 450 455 460 cca att gat cag att cag gca aca ate tet tta aat aca gac cag act 1623

Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asm Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gca tea tea tcc ett cct get geg tet eag cct caa gta ttt cag 1671

Thr Al,a Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Ph© Gin 480 485 490 get ggg aca ago aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta aat gca 1719

Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val ash Ala 495 500 505 510 get aca tta caa tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat gee cca gtt 1767

Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cot act gtt aat. gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815

Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin. Tyr Gin 530 535 540 gee agt tat aac cag age ttt tet agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863

Ala Ser Tyr Asn Gin Eier Phe Ser Ser Gin Pro Eis Gin Val Glu Gin 545 550 555 aca gag ett cag caa gaa cag ett caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911

Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr Hi.s 560 565 570 ggt tcc cca gac cag tcc cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1359

Gly Ser Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro 575 580 585 590 cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag cc.c tat tac aat. 2007

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt egt ggt gtg tet cgt gga ggc tcc cgt ggt get aga ggc ttg atg 2055

Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tac egg ggc cct gee aat gga ttc aga gga gga tat gat. ggt. 2103 .ftsn Gly T'yr Are Gly Pro A3.a Asn G1 y Phe Arg Gly Gly tyr Asp Gly 62 5 630 6.35 tac ege cat tea ttc tet aac act cca aac agt ggt tat aca cag tet 2151

Tyr Arg Pro Ser Ph® Ser Asa Thr Pro Asn S®r Gly Tyr Thr Gin Ssr €40 645 650 cag ttc agt get ccc egg gat tac tet ggc tat caa egg gat gga tat 2199

Gin Eha Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg eag agt gga cca egg gga gee 2247

Gin Gin Asn Phs Lys Arg Gly Sar Gly Gin Sar Gly Pro Arg Gly Ala 675 " 6S0 " 685 cca ega ggt cgt gga ggg ccc cea aga ccc aac aga ggg atg ecg caa 2295

Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Fro Gin 690 695 700 atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt ttaalcgcea 2349 Met Asn rhr Gin Gin val Asn 705 aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaceagaag agttattate tatttgttct 2-109 ccctttcagg aooottattg taaagggact gttttcatcc eataaagaca ggaetacaat 2169 tgtcagcttfc ct.attacctg gatatggaag gaaaetattt ttactctgca tgttctortcc 2529 taagcgtcafc ettgageett geacatgafca ctcagattcc tcacccttgc ttaggagtaa 2569 .aacaatatac tttacagggt; gataataatc tccaragtta t.ttgaagtgg cttgaaaaag 2649 geaagatfcga cttfctatgac attggataaa atctacaaat cagecctcga gttattcaat 2709 gataactgac aaactaaatt atttccctag aaaggaagat gaaaggagtg gagtgtggtt 2769 tggeagaaea actgeatttc acagcttttc eagttaaatt ggagcaetga acgttcagat 2S29 gcataeoaaa ttatgcatgg grtcctaatca oaeatataag gctggctaec agetttgaca 2889 cagcaetgtfc catctggoca aacaaetgtg gttaaaaaoa eatgtaaaat gctttttaae 2949 a get gat. a at. gtataagaca aagccaagat gca.aaat.tag getttgattg gcactttttg 3009 aaaaatatgc aacaaatatg ggatgtaatc cggatggccg cttctgtact taatgtgaaa 3069 tatttagata cctttttgaa cacttaacag tttcttfcgag acaatgactt ttgtaaggat 3129 tggtactatc tatcattcct tatgacatgt acattgtctg tcactaatcc ttggattttg 31S9 atgtattgtc acctaaattg gtacaggtac tgatgaaaat etetagtgga taatcataac 3249 actetcggtc aoatgttttt ccttcagctt gaaagctttt ttttaaaagg aaaagatacc 3309 aaatgectgc tgctaccacc cttttcaatt gctatctttt gaaaggcacc agtatgtgtt 3369 ttagattgafc ttcectgttt cagggaaafce acggacagta gtttcagtte tgatggtata 3129 agcaa&aeaa ataaaacgtt tafc&aaagtt gtatefctgaa acactggtgt tcaacageta 3169 gcagcttatg tgattcaccc catgccaegt tagtgtcaca aattttatgg tttatctcca 3549 gcaacatttc tctagtactt gcacttatta tcttttgtct aatttaacct taactgaatt 3609 etcegtttct cetggaggca tttatattea gtgataattc cttecettag atgcataggg 3 669 agagtcteta aatttgatgg aaatggacac ttgagtagtg acttagcctt atgtactotg 3729 ttggaatttg tgctagcagt ttgagcacta gttctgtglg cataggaagt taatgctgct 3789 tattgtctca ttctgacttc atggagaatt aatcccacct ttaagcaaag gctactaagt 3849 ta.atggta.tt ttctgtgcag aa.atta.aatt ttattttcag catttagecc aggaattctt 3 909 ccagtaggtg ctcagctatt taaaaacaaa actattctca aacattcatc attagacaac 3969 tggagttttt gctggttttg taacetacca aaatggatag gctg-ttgaac attccacatt 4 029 caaaagtttt gtagggtggt gggaa&tggg ggatcttcaa tgtttatttt aaaataaaat 4089 aaaataagtt cttgactttt ctcatgtgtg gttgtggtac atcatattgg aagggttaae 4149 ctgttacttt ggcaaatgag tatttttttg ctagcacctc cccttgcgtg ctttaaatga 4209 catctgcctg ggatgfcacca caaccatatg tt.acct.gtat cttaggggaa tggataaaat. 4269 atttgrtggtt tactgggtaa tccctagatg atgtatgctt gcagtcctat at.aaaactaa 4 329 atttgctatc tgtgtagaaa ataatttcat gacatttaca atcaggactg aagtaagttc 4389 ttcacacagt gacctctgaa tcagt-ttcag aqaagggatcr qgqgagãaaa hgccttefcag 4449 gt,t.t,tgaact. tctatgcatt agtgcagatg ttgtgaafcgt gtaaaggtgt. tcatagtttg 4509 actgtttcta tgtatgtttt ttcaaagaat tgttcctttt tttgaactat aatttttctt 4569 tttttggtta ttttaccatc acagtttaaa tgtatatctt ttatgtctct actcagacca 4629 tatttttaaa ggggtgc.ctc attafcggggc agagaacfctt. tcaataagtc tcattaagat 4 689 ctgaatcttg gttctaagca ttctgtafcaa tatgtgattg cfctgtcctag ctgcagaagg 4749 ccttttgttt ggtcaaatgc atattttagc agagtttcaa ggaaatgatt gtcacacatg 4 809 tcactgtagc ctcttggtgt agcaagctca catacaaaat acttttgtat at.gcat.aata 4869 taaatcatct catgtggata tgaaacttct tttttaaaac ttaaaaaggt agaatgttafc 4929 tgattacctt gattagggca. gtttta.tt.tc cagatcctaa taattcctaa aaaatatgga 4 989 aaagtttttt ttcaatcatt g+.accttgat attaaaacaa atatccttta agtatttcta 5 049 atcagttagc ttctacagtt ettttgtctc cttttatatg cagctcttac gtgggagact 5109 tttccactta aaggagacat agaatgtgtg cttattctca gaaggttcat taactg3ggt 5169 gatgagttaa caactagttg agcagtcagc ttcctaagtg tfcttaggsca tttgfctcatt 5229 atattttccg tcatataact agaggaagtg gaatgcagat aagtgccgaa tteaaaecct 5289 tcattttatg tttaagctcc tgaatctgca t.tccact.tgg gt.tgtt.ttta agcattctaa 5349 attttagttg attataagtt agatttcaca gaateagtat tgcccttgat cttgtccttt 5409 tfcatggagtt aacggggagg aagacccctc aggaaaacga aagtaaattg ttaaggctca 5469 fcstteatace tttttccatt ttgaatccta eaaaaataet gcaaaagact agtgaatgtt 5529 taaaattaca ctagattaaa taatatgaaa gtc 5562

< 210 > 2 <211> 709 <212> PRT <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 2

Met Pro Ser Ala Thr Ser Hts Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys 50 55 60

Leu Arg Asa Leu Glu Lye Lys Lys Gly Lye Leu Asp Asp Tyr Gin Gly.

65 70 75 SO

Arg Met Asn Lys Gly Gly Arg Leu Asn Gin Asp Gin Lets Asp Ala Val 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110

Gin Arg Sar Phe Met Ala Leu Ser Girt Asp lie Gin Lys Thr lie Lys 115 120 125

Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Lau Lys Gin Gly Leu Asa Gly Val Pro 165 170 175 lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Val Asp Pro Glu Arg Asp Mat Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser II© His Leu Xrp Asp Leu Leu Glu Gly 3-yΐ Gin Lys Pro 210 215 220

Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn. Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala val Glu Asp Gin val 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Fro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285

Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320 val Glu val val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 360 365

Pro Tyr Asn Phe lie Glrk Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn GIei Thr 370 375 380

Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Mat Asn Fro Thr Gin Asn 385 330 335 400

Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val 420 425 430

Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Fro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie 450 455 460

Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 480

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510

Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu. Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 585 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 5S5 600 605

Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620

Tyr Arg Sly Pro Ala Asn Sly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 S35 640

Pro Ser Phe Ser Aan Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 665 “ 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685

Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn 690 695 700

Thr Gin Gin Val Asn 705

< 210 > 3 <211> 3553 <212> ADN <213> Homo sapiens < 2 2 0 >

< 2 21> CDS <22z > (190 j . , {2.zlA } <223 > < 4 0 0 > 3 cagagggctg ctggctgget aagtccctec cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttccag cggectccgc 180 gcgcgcacg atg ccc teg gee ace age eae age ggg age ggc age aag teg 231

Met Pro See Ala Thr Ser Kis Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 15 10 tee gga cog cca ecg ccg teg ggt tee tee ggg agt gag geg gee geg 273

Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gee ggg gee gee geg ecg get tet eag eae ccc gca ace ggc acc 327

Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Glu His Pro Ala Xhr Gly Thr 35 40 45 gge get gte eag acc gag gee atg aag eag att etc ggg gtg ate gae 375

Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gift lie Leu Gly Val lie Asp 50 55 60 aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ett gat gat tac 423

Ly3 LyS Leu Arg Asti Leu Glu LyS LyS LyS Gly LyS Leu Asp Asp Tyr 65 70 75 eag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett aat eaa gat eag etg gat 471

Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp SO ‘ 85 90 gee gtt tet aag tac eag gaa gte aca aat aat ttg gag fctt gea aaa 519

Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys 95 100 105 110 gaa tta eag agg agt ttc atg gca eta agt, eaa gat att eag aaa aca 567

Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr 115 120 ‘ 125 at» aag aag aca gca cgt egg gag eag ett atg aga gaa gaa get gaa 615 lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Glu Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 ' 135 " 140 eag aaa cgt tta aaa act gta ett gag eta eag tat gtt ttg gae aaa 663

Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg egg act gao ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711

Leu Ely Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Ely Leu Asn Ely 160 165 * 170 gtg eca ata ttg tea gaa gag gag ttg tea ttg ttg gat gaa ttc tat 753

Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Sen Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 175 ISO 185 190 aag eta gta gae ect gaa egg gac atg age ttg agg ttg aat gaa cag 807

Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin 195 200 205 tat, gaa eat gee tee att cae efcg tgg gae efcg ctg gaa ggg aag gaa 655

Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa ect gta tgt gga acc acc tat aaa gtt eta aag gaa att gtt gag 903

Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu 225 230 235 egt gtt ttt cag tea aac tae tt,t gac age ace cac aae eac cag aat 951

Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn 230 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea gca cct gca gtt gaa gae 999

Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp 255 260 265 270 cag gta ect gaa get gaa cct gag eca gca gaa gag tac act gag caa 1047

Gin Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin 275 280 * 285 agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1035

Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu 290 295 300 aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143

Thr Gin Phe Thr Ser Gly Glu Lys Gin Girt Val Asp Glu Trp Thr Val 305 310 315 gaa aeg gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct cag get gca 1131

Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala 320 325 330 tcc cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag gca 1239

Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Girt Ala 335 340 345 350 gat ccc ett gtg aga aga cag ega gta caa gac ett atg gca caa atg 1287

Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Let! Met Ala Gin Met 355 360 365 cac ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg etc gat ttt gaa aat 1335

Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ett gat cct. gcc att gta tet gca cag cct atg aat cca aca 1333

Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr 385 390 335 caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tet gaa 1431

Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu 400 405 410 tet aga ctt get cag cct aat caa gtt cat gta caa cca gaa geg aca 1479

Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asri Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct tt.g gta tea tee aca agt gag ggg tac aca gca tet caa 1527

Gin Val Pro Leu Val Ser Sar Thr Sar Glu Gly Tyr Thr Ala Sar Gin 435 440 445 ccc fctg tac cag cct tet cat get aca gag caa ega coa eag aag gaa. 1575

Pro Letu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lye Glu 450 455 460 eca att gat cag att cag gca aca ate tet tea aat aca gac cag act 1623

Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gca tea tea toe ctt cct get geg tet cag cc.t caa gta ttt cag 1671

Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Pile Gin 4S0 485 490 get ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta aat gca 1719

Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn. Ala 495 500 505 510 get eca tta caa tee atg caa aeg gtg tta aat ate aat gac aca gtt 1767

Ala Pro Phe Gin Ser Met. Gin Thr Val Phe Aan Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815

Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin 530 535 540 gee agt tat aac cag age ttt tet agt cag cet cac caa gta gaa caa 1863

Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin 545 550 555 aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act tac eat 1911

Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr Hie 560 565 570 ggt tee cca gac cag tec cat caa gtg act ggt aac cac cag eag ect 1959

Gly Ser Pro Asp Gin Set His Gin Val The Gly Asn His Gin Gin Pro 575 580 585 590 cct cag cag aac. act gga ttt cca ogt age aat cag ccc tat tac aat 2007

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 ” 600 605 agt egt ggt gtg tet cgt gga ggc tee egt ggt get aga gge ttg atg 2055

Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tac egg ggc cct gee aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt. 2103

Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 ’ 635 tac ege cct tea ttc tet aac act cca aac agt ggt tat aca cag tet £151

Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Glri Ser 640 645 650 cag ttc agt get ccc egg gat tac tet ggc tat caa egg gat gga tat £199

Gin ΡΙί* Sex: Ala Pro Arg Asp Tyr Sar Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr €55 660 665 €70 cag cag a at tte aag ega ggc tct egg eag agt gga eca egg gga gee 2247

Gin Gin Asn Ffce Lys Arg Gly Sax: Gly Gin Sax: Gly Pro Arg Gly Ala €75 ' 6$0 " 685 cca ega ggt. aat att fctg tgg tgg tga tccfcagctcc taagtggagc 2294

Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 ttctgtfcctg geettggaag agcfcgttaafc agtatgcafcg tfcaggaatac atttatcett 2354 tccagacttg tfcgct&ggga ttaaatgaaa tgcfcefcgttfc ctaaaactta atcttggace 2414 caaattfctaa tttttgaatg atttaatttt ecetgttact atataaactg tcttgaaaac 2474 fcagaaeatat tctcttctca gaaaaagtgt fcltteaaaet gaaaattatt tttcaggfcce 2534 fcaaaaccfcgc ta-aatgfcfctfc feaggaagtac fctacfcgaaac atttttgfcaa gaeatfctfctg 2594 gaatgagatt gaacafctfcafc afcaaatttafc tattcatctt te&fcttfctfct gaaacatgcc 2654 fc.attafcafc.tt tagggocaga oaccctttaa fcggecggata agocafcagtfc aacatfctaga 2714 qaaceattta gaagtgatag aactaatgga attfcgcaafcg ccfctttggac ctctattagt 2774 gatataaata tcaagfctatt tctgaeittt aaacaaaact cccaaattcc taacttafctg 2834 agetataefct aaaaaaaatt aeaggtttag agagtfctttt gtttfcettt taefcgfctgga 2894 aaactacfcfcc ccattttggc aggaagtt,aa cctatfctaac aatfcagagcfc agcatfctcafc 2954 gfcagtctgaa afctctaaatg gttefccfcgafc fctgagggagg fcfcsaacatca aaeaggtfcte 3014 cfcctatfcggc c&t&acatgt ataaaatgtg tgttaaggag gaattacaac gtactfctgat 3074 fcfcgaafcacfca gfcagaa.aetg geeaggaaaa aggfcaoatfcfc Ifcetaaaaat. fcaafcggafcca 3134 efctgggaafct actgacttga ctagaagtat eaaaggafcgt ttgeatgtga atgtgggfcta 3194 tgttetttce caeettgfcag eatattegat gaaagttgag ttaaetgata getaaaaate 3254 fcgfcfcfcfcAACA goafcgfc.ssss agtfcat-fcfcfca xiefcgfcfcaaaa gtoafcfcafcae agfcfcfcfcgsafc 3314 gttatgfc&gt ttcfctfcttaa cagtttaggt aataaggtet gttttcattc tggtgctfctt 3374 afctaafcfcfcfcg at agt a tga t gttacttact actgaaatgt aagetagagt. gtacaotaga 3434 atgtaagctc eatgagagea ggfcaeettgt etgtettete tgefcgtatet afcteeeaacg 3494 ettgatgatg gtgeetggca eatagtagge aeteaataaa tatttgttga atgaatgaa 3553 < 210 > 4 < 211> 6 94

<212> PRT <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 4

Met Pro Ser Ala Xhr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys 50 55 60

Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu 65 70 ” 75 80

Arg Met Asn. Lye Gly Glu Arg Lets Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala lys Glu Leu 1O0 105 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr He Lys 115 120 125

Lvs Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 ' 160

Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro 165 170 175

He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gin Val 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Gin Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285

Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320

Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Val Arg Arg Gin Arg val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 360 365

Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 380

Leu Asp Pro Ala He Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn 385 390 395 400

Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val 420 425 430

Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro He 450 455 460

Asp Gin He Gin Ala Thr He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 480

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

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Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asm. Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Val Asn Glu Pro Gla Thr Lau Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro Hie Gin Val Glu Gin Thr Glu 545 550 555 500

Lau Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 535 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn. Gin Pro Tyr Tvr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 £20

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 * 640

Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 665 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 635

Gly Asn He Lau Tr.p T.rp 690

< 210 > 5 <211> 1605 <212> ADN <213> Canis familiaris < 2 2 0 >

< 2 21> CDS <222> (46) . . (1392) <223 > < 4 0 0 > 5 gtcacaaata acttggagtt tgcaaaagsa ttacagagga gfcttc atg gca tta agt 57

Met Ala Lsu Ser 1 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 105

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Gin Gin Leu 5 10 15 20 atg aga gag gaa geg gaa eaa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 153

Met Arg Giu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 25 30 35 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 201

Gin Tyr Val Leu Aap Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 40 45 50 aag eaa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 249

Lys Gin. Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 55 60 65 ttg ttg gat gaa. ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 297

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser

70 75 ' SO ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tea att cac ctg tgg gac 345

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 85 90 35 100 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca ace tat aaa gca 393

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 105 1.10 11.5 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 441

Leu Lys Glu lie val Glu Arg val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Sex' 120 125 130 act cac aae cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea 489

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 135 140 145 gca cct aca gtt gaa gac. cag gta get gaa get gag ect gag cca gca. 537

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 150 1.55 160 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 585

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 165 170 175 130 aga eaa. ttt atg gca gaa aca cag ttc ago agt ggt gaa aag gag cag 633

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lya Glu Glu 185 130 195 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 681.

Val Aap Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin £00 205 210 cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 729

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Fro Glu Pro His Ser Leu 215 220 225 act. ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gtc cag 777

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 230 235 240 gac ett atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 825

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 245 250 255 260 atg ctg gat. ttt gaa aat cag aca etc gat cet gee atfc gta. tet gca 373

Mat Leu Asp Phe Glu Aen Sin The Lea Asp Pro Ala lla val Sar Ala 265 270 275 cag cet atg aat ecg aca caa aae atg gac atg cec cag ctg gtt tgc 921

Gin Pro Met Asn Pro Thr Glri Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 280 285 290 cet cea gtt cat tet gaa tet ags c.tt get caa cet aat caa gtt cct 969

Pro Pro Vs3. His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 295 300 305 gta caa eea gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca. agt gag 101.7 val Sin Pro Glu Ala The Sin val Pro Lea val Ser Ser Thr Sor Gla 310 315 320 ggg tat aca gca tet caa cec ttg tac cag cct tet. cat get aea gag 1065

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Gin 325 330 335 340 caa ega oca caa aag gaa cea att gac cag att cag gca aca ate tet 1113

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 345 350 355 tta aat aca gac cag act aea geg tea tea tee ett ecg get get tet 1161

Lens Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 360 365 370 cag cet cag gta tte cag get ggg aca age aaa cea tta cat age agt 1209

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Sar Lys Pro Leu His Ssr Ser 375 380 385 gga ate aat gta aat gea get aca tto caa tec atg c,aa aeg gfcg tta 1257

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 390 395 400 aat atg aat gee e«a gtt cet cet gtt aat gaa eca gaa act ttg aaa 1305

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr L*u Lye 405 410 415 420 caa caa aat eag tac cag gee agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1353

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 425 430 435 cct eac caa gta gaa caa aea gag gga tgc ege aaa tga aeactcagca 1402

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Gly Cys Arg Lys 440 445 agtgaafctaa tetgatteae aggattatgt ttaaaegeea aaaaeaeaet ggeeagtgta 1462 eeataatatg ttaceagaag agttattate tatttgttet eeetttcagg aaaettattg 1522 taaagggaet gttttcatec eataaagaca ggactaeaat tgtcagettt atattaeetg 15S2 gaaaaaaaaa aaaaaaaa&a aaa 1€05 < 2 1 0 > 6 <211> 448

< 212 > PRT <213> Canis familiaris < 4 0 0 > 6

Met Ma Leu Ser Gin Asp Ele Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg 15 10 15

Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr 20 25 30

Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val 35 40 45*

Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu 50 55 60

Glu Glu Leu Ser Leu leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu 65 70 75 80

Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie 35 SO 35

His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser val Cys Gly Thr 100 105 110

Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn 115 120 125

Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn. His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu 130 135 140

Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu 145 150 155 160

Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr 165 ’ 170 175

Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly 180 ” 185 190

Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val 195 " 200 205

Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu 210 215 220

Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala. Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg 225 230 235 240

Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe 245 250 255 II* Gin Asp Ser Met Leu A»p Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala 260 265 270 lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro 275 230 285

Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro 290 295 300

Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu -Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser 305 310 315 320

Ser Thr Ser Glu Gly Tvr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser 325 330 335

His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin Lie Gin 340 345 350

Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu 355 3S0 365

Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Glr. Ala Giy Thr Ser Lys Pro 370 375 380

Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asa Ala Ala Pro Phe Gin Ser Mat 365 390 395 400

Gin Thr val Phe Asn Met Asn Ala Pro val Pro Pro val Asn Glu Pro 405 410 415

Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser 420 425 430

Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Gly Cys Arg Lys 435 440 445 < 2 1 0 > 7 <211> 4154

< 212 > ADK <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222> (1) . . (2154) <223 > < 4 0 0 > 7 atg cog teg geo ace ago etc ago gga age ggc age aag teg teg ggc 48

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 * 15 ccg ccg ccc ccg teg ggt tcc tcc ggg age gag geg geg geg geg geg 96

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ale Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg geo ggg geg get geg ccc gee tec eag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg aec ggc ace ggc get gtc eag ace gag gee atg aag eag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc egg aac ctg gag aag aaa aag 240 lie Leu Gly Val He Asp Lys Lys Leu Arg Asn. Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 ggc aag ett gat gat tac eag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Glu Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 SO 95 aat caa gat eag ctg gat gee gta tet aag tac eag gaa gtc aca aat 336

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala val Ser Lys Tyr Gin Glu val Thr Asn 100 105 110 aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta eag agg agt ttc atg gca tta agt 384

Asn. Leu Glu The Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Pbe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att eag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag eag ett 432

Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 480

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160 eag t&t gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa. egg gac, atg age. 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Fro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag eag tat gaa cat get tee att eae ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc eag tea aat tae ttt gao age 768

Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Pile Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gee tea 816

The His Asn His GLn Asa Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270 gca ccl ?xa gtt. gaa gar; cag gta get. gaa get gag cct gag cca gea 864

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285 gaa gaa tae act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 812

Glu Glu Tyr The Glu Glu Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300 aga caa ttt atg gea gaa aca eag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 960

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Sen Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 1008

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct eag get geg tet cct tea gta cea gag cce car tet ttg 1056

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro Kis Ser Leu 340 345 350 act eeg gtg get cag gea gat caa ett gtg aga aga eag ega gtc cag 1104

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Glu Arg Val Gin 355 360 365 gae ett atg geg cag atg eag ggg cec tat aat ttc ata cag gat tea 1152

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Glu Asp Ser 370 375 380

atg ctg gat ttt gaa aae eag aca etc gat cct gee att gta tet gea 12QQ

Mat Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala He Val Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat ecg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt fcgc 1248

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415 cct cea gtt cat tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt cct 1296

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tcc aca agt gag 1344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tae cag cct tet cat get aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

eaa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 144Q

Gin Arg Pro C-ln Lys Glu Pro lie Asp Gin He Gin Ala Thr lie Ser 465 ” 470 ' 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tcc ett ccg get get tet 1488

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr See Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cea ttc caa tec atg caa aeg gtg ttc 1584

Gly lie Asm Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin rhr val Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act. ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac cag gcc agt. tat aac cag age ttt tet agt cag 1680

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 54b 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ett cag caa gaa cag ett caa aca 1728

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Gin Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc act. tac cat ggt tcc cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 530 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1824

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tet cgt ggt ggt tec cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttc 1320

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tet aac act cca aac 1368

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655 agt ggt tat aca cag tet cag ttc agt get ccc egg gac tac tet ggc 2016

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag 2064

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 " 680 685 agt gga cca egg gga gcc cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc 2112

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 630 6S5 700 aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2L54

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggeeagtgta ccataatatg 2214 fctaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact 2274 gtttteat.ee eataaagaca ggaetaeaat. t.gtoagcttt atattacetg gat.atggaag 2334 gaaactattt ttattctgca tgttcttcct aagegteate ttgagccttg cacatgatac 2334 tcagattoet eaeeettgct t.aggagta&a aeataataca etttaeaggg tgatatetcc 2454 atagfctatfct gaagtggctt ggaaaaagca agatfcaactt ctgacat.tgg ataaaaatca 2514 acaaatcagc cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aactaaaata tttcccttcg 2574 agaaggagtg gaafcgtggtfc tggcagaaca actgcafctfcc acagcfct.tt;c cggfctaas“t 2634 ggageaetaa aegtttagat geataeeaaa ttatgeatgg geeettaata taaaaggctg 2694 gctaccagct ttgacacagc aetattcate ctctggccaa acaaotgtgg ttaaaeaaca 2754 eatgtaaafct gctttttaac agctgataefc ataataagae aaagccaaaa tgeaaaaatt 2814 gggcfctfcgat tggcacfcttt tgaaaaatafc gcaacaaafca tgggatgtaa tctggatggc 2874 cgcttctgta cttaatgtga agtatttaga tacetttttg aacacttaac agtttcttct 2934 gacaatgact tttgtaagga ttggtaofcat ctatcattcc ttataatgta cattgtctgt 2994 eaetaafcest cagatcttgc tgtat.tgtca cctaaafctgg tacaggtaet gatgaaaata 3054 tctaatggat aatcataaca ctcttggtca catgttttte ctgcagcctg aaggttttta 3114 aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaatfcgetat cttttgaaaa 3174 gcaeaagfcat gtgtttfcaga t.tgattfccee fcattfctaggg aaatgaeaga eaqrtagfcttc 3234 sgfcfccfcgafeg gfcafeaagcas aacasataaa acafcgtfct.at. aaaagfctgfca tctfcgaaaca 3294 cfcggtgttca acagctagca gcttatgtgg cteaccccat gcattgfctag tgttfccagat 3354 fcttatggtta tctccagcag ctgtttctgt agtacttgca tttatctttv. gtctaaccet 3414 aatattetca cggaggcatt tatattcaaa gfcggtgatcc cttcacttag acgcataggg 3474 agagtcacaa gtttgatgaa gaggacagfcg tagtaattta tatgctgttg gaatttgtgc 3534 tagcagttfcg agcactagtt ctgtgtgcct atgaacttaa tgotgcttgt. catatfcccac 3594 fct.tgacttca fcggagaafcta «"cccatcta efceagcaaag gctatactaa tactaagt.t.a 3654 atggfcafctfct ct.gt.gcagaa attgaattt.fc gtttfcafctag catttagct.a aggaattttt 3714 ccagtaggtg ctcagctact aaagaaaaac aaaaacaaga cacaaaacta ttctoaaaca 3774 ttcattgtta gaeaaetgga gfcttttgetg gttfctgtaae etactaaaat ggafcaggctg 3834 ttgaaeatte caeattcaaa agttttttgt agggtggtgg ggaagggggg gtgfcetteaa 3894 tgtttattfct aaaataaaat aagttcfctga cttttofccat gtgfcggfctgt ggtacatcat 3954 attggaaggg ttafcetgfctfc acttttgcaa atgagfcattt ctcttgctag cacctcccgt 4014 fcgtgcgotfct aaatgacatc t.gcctgggat yt a cc a c a a c eafc.afcgt.tag ctqrtatttta 4074 tgqggaatag ataaaatatt cgtggtttat tgggtaafcce ctagatgtgt atgcttacaa 4134 tcctatatat aaaactaaat 4154 <210> 8 <211> 717

< 212 > PRT <213> Canis fami1iaris < 4 0 0 > 8

Met Pro Ser Ala Thr Ser leu Ser Gly Ser Gly Ser lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Set Gin 35 40 45

Bis Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met lys Gin 50 55 60 II® Leu Gly Val II® Asp Lys Lys Leu Arg Asη Leu Glu Lys Lys Ly® 65 70 " 75 80

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Sly Glu Arg Leu 85 30 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp II® Gin Lys Thr II® Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin L*u 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 ” 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser ISO 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 L®u Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 ’ 233 ” 240

Leu Lys Glu He vai Glu Arg val she Gin S®r Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr Bis Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 * 265 270

Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tvr Vai Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Vai Asp Glu rrp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu Gin 325 330 335 urin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin 355 360 " 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn. Pro Thr Gin Asn Met, Asp Met Pro Gin Leu val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin val Pro Leu val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser Kie Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin Tie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 430 435

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Fro Leu His Sen Ser 500 505 510

Gly lie Asii Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gift Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro val Asn Glu Fro Glu Thr Leu Lys 530 535 5-30

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Sec Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Lev Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr Hia Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 S35 " 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 ‘ 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 ’ 6S5

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Fro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 " 695 " 700

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 < 2 1 0 > 9 <211> 4939

< 212 > ADM < 213 > Can i s fa m i 1 i a ri s <220>

<221> CDS < 2 2 2 > (1) . . (2109) <223 > < 4 Ο Ο > 9 atg ccg teg gee ace age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Sly Ser Glv Ser Lys Ser Ser Giy

1 5 10 IS ccg ceg ccc ecg teg ggt tec tec ggg age gag geg geg geg geg geg 96

Pro Pro Pro Pro Ser Glv Ser Ser Sly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 ” 25 30 355 5cg geg ggg geg geg ggg gee ggg geg get geg eee gee tcc cag 144

Gly Ais. Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gry Ala Ala Ala Pro Aua Set Gin 35 40 45 eae ccc geg ace ggc acc ggc get gte eag acc gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Slv Ala Veil Gin Thr Glu Ala Het Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc egg aac ctg gag aag aaa aag 240

He Leu Sly Val He Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 30 ggc aag ett gat gat tae eag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 283

Gly Lys Law Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Atg Leu S5 90 95 aat eaa gat eag ctg gat gee gta tet aag tae eag gaa gte aea aat 336

Asa Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110 aac ttg gag ttt gea aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 334

Asn Leu Glu Pha Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Fhe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa. gat att cag aaa aca ata aag aag act gca egt egg gag cag ett 432

Gin Asp He Gin Lys Thr He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa eaa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 480

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 ’ 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cea ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tae aaa tta gca gac eet gaa egg gac atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tcc att cac ctg fcgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser He His Leu Ttp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 23Q 235 2-30 eta aag gas att gtt gag cgt gtt tte cag tea aat tae ttt gac age 768 I.eLys GÍ u lie Val Glu Arg Val Phe Gin $ή-r A?.i Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea B16

Thr His Aen Hie Gin Asa Gly Leu Cws Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 2SQ 265 270 gca cct aca gtt gaa gac cag gta get gaa get gag cct gag cca gca 864

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 912

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300 aga caa ttt atg gca gaa aea cag tte age agt ggt gaa aag gag cag 960

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lya Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 1008

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Set Leu Gin 325 330 335 cag' caa cct cag get gag tet cct tea gta eca gag coo cae tet ttg 1056

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 34Q 345 350 act ceg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gtc cag 1104

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365 gac ett atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat tte ata cag gat tea 1152

Aap Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gcc att gta tet gca 1200

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 335 400 cag cct atg aat cog aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415 cct. cca gtt cat tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt cct 1296

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag 1344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tac cag act tet cat get aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala Ser Girt Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 1440

Gin Arg Pro Gin lys Glu Pro 11¾ Asp Gin He Gin Ala Thr He Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ett ccg get get tet 1488

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Sen Sen Sen Leu Pro Ala Ala Sen 485 490 495 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta eat age agt 1536

Gin Pro Gin. Val Fhe Gin Ala Gly Thr San Lye Pro Leu His Sen Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cea tte caa tec atg caa aeg gtg ttc 1534

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cet gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Mat Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lye 530 535 540 caa caa aat cag tae cag gcc agt tat aac cag age ttc tet agt cag 16B0

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ett cag caa gaa cag ett caa aca 1728

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gt.t ggc act tac cat ggt tcc cag gac cag cct cac caa gtg act 1776

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 5S0 585 590 ggt aac cat cag cag cct ttc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1824

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tet cgt ggt ggt tcc cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttc 1920

Gly Ala Arg Gly Lev Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 €30 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege set tea ttc tet aac act cca aac 1968

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser A§n Thr Pro Asn 645 650 6.55 agt ggt tat aca sag tet cag ttc agt get ccc egg gac tac tet ggc 2016

Sar Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag 2064

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 6S0 ' 685 agt gga cca egg gga gcc cca ega ggt aat att. fctg tgg tgg tga 2109

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 ’ ’ 695 ’ ’ 700 fceetagetee taagtggagc ttctgttctg geettggaag agetgticea tagtetgeat 2169 gtaggtiaca tgttaggaat acatttatca ttaccagact tgttgctagg gattaaatga 2529 aatgctetgt ttctaaaact tetettgaaa ecaaatttaa ttttttgaat gactttccet 22B9 gttactatat aaattgtctt gaaaactaga acatttctcc tcctcagaaa aagtgttttt 2349 ccaactgcaa attatttttc aggtcctaaa acctgctaaa tgtttttagg aagtacttac 2409 tgaaacattt ttgfcaaga.cs. tttttggaafc gagattgaac atttatataa atttattatt 2469 atfcectcttt catttttgaa catgcatatt atattttagg gtcagaaatc ctttaatggc 2529 caaataagcc atagttacat ttagagaacc atttagaagt gatagaacta actgaaattt 2539 caatgccttt ggafccatfcaa tagcgatata aatttcaaat tgtttctgac ttttaaataa 2649 aaeateeaaa atcctaacta acttectgaa etatatttaa aaattacagg tttaaggagt 2709 ttetggttfct ttttctctta. ccataggaaa actgtttccfc gtttggccag gaagtcaacc 2769 tgtgtaataa ttagaagtag catttcatat gatctgaagt tctaaatggfc tctctgattt 2829 aagggaagtt aaattgaata ggtttcctot agttattggc cataacatgt ataaaatgta 28B9 tattaaggag gaatacaaag tactttgatt tcaatgctag tagaaactgg ccagcaaaaa 2949 ggtgeatttt atttttaaat taatggafcca cttgggaatfc actgacttga agtatcaaag 3009 gatatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc tttctcacct tgtagcatat tctatgaaag 3069 ttgagttgac fcggtagctaa aaatotgttt taacagcatg taaaaagtta ttttatotgt 3129 tacaagtcat tatacaattt tgaatgttat gtagtttctt tttaaoagtt tagçrtaacaa 3189 ggtctgtttt toattctggt gcttttatta attttgatag tatgatgtta cttacstaetg 3249 aaatgtaagc tagagtgtac actagaatgt aagctccatg agagcaggta ccttgtctgt 3309 ctfccaetgcfc gtatctattt ccaacgcctg atgacagtge ctgacacata gtaggcactc 3369 aataaatact tgttgaatga atgaatgaat gagtactggfc ggaatactcc attagctcta 3429 ctcttctttt agctagagaa catgagcaaa tttgcgcatg acaaetteca ggacaggtga 3489 aoaotgaaga attgaoctct taaacctaat aatgtggtga caagctgocc acatgottct 3549 tgaetteaga tgaaaatctg cttgaaggca aa.gcaaat.aa tatttgaaag aaaaaccaaa 3509 tgccattttt gtcttctagg tcgtggaggg cccccaagac ccaacagagg gatgccgcaa 3669 atgaacactc agcaagtgaa ttaatctgat tcacaggatt atgtttaaac gccaaaaaca 3729 caetggccag fcgtaccat.aa tatgttacca gaagagtt.at tatctatt.tg ttctcccttt 3789 caggaaactt attgtaaagg gactgttttc atcccataaa gacaggacta caattgtcag 3849 ctttatatta cctggatatg gaaggaaact atttttattc tgcatgttct tcetaagcgt 3909 catcttgage ettgcacatg atactcagat tcctcacccfc tgcttaggag taaaacataa 3369 tacactttac agggtgatat ctceatagtt atttgaagtg gcttggaaaa agcaagatta 4029 acfctctgaea ttggataaaa atoaacaaat cageeetaga gttattcaaa tggtaattga 4089 caaaaacfcaa aatatttccc ttcgagaagg agtggaatgt ggtfctggcag aacaactgca 4149 tfctcacaget tttccggtta aattggagca ctaaacgttt agatgcatac caaattatgc 4209 atgggccctt aatataaaag gctggctacc agetttgaea cagcactatt catcctctgg 4269 ccsaacaact. gtggttaaac «acac&tgt.& *afctgct.fctt taacagctgs. t&ctata-sstci 4323 sgacaasgcc aaaatgcaaa aattgggcut tgattggcac tttttgaaaa auatgcaaca 43S9 aatatgggafc gtaatctgga tggccgcttc tgtacttaat gtgaagtatt tagatacctt 4443 tttgaacact fcaacagtttc fctctgacaat gacttttgta aggafctggta ctatcfcatca 4509 ttccttataa tgtacattgt ctgtcactaa tcctcagatc ttgctgtatt gtcacctaaa 4563 ttggtacagg tactgatgaa aatatckaat ggataatcat aacactcttg gtcacatgtt 4629 tttcctgcag cctgaaggtt ttkaaaagaa aaagatatca aatgcckgct gctaccaccc 46S9 ttttaaatbg ctaccttfctg aaaagcacca gtatgtgctt tagattgatt tccotatttt 4749 agggaaatga cagacagtag tttcagttct gatggtataa gcaaaacaaa taaaacatgt 4803 ttafcaaaagfc tgtafccttga aacaofcggtg ttcaacagct agcagcfctat; gtggttcacc 4863 ccatgcattg ttagtgtttc agattttatg gttatctcca gcagctgttt ctgtagtact 4929 tgcacttatc 4933

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Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lye Ser Ser Gly 1 5 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gira 35 40 ’ 45

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Gly Lye Leu Asp Asp Tyr Sirs Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 30 35

Aan Girt Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Aars 100 105 110

Asa Leu Glu Phe Ala Lys GLu Leu Glu Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Ays Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser ISO 185 130

Leu Leu Asp Gl-u Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met. Ser 135 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser He His Leu Trp Asp 21Ó 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 " 230 235 240

Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn. 230 295 300

Arg Gin Phe Met Ara Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Glu Gin Pro Gin Ala Ala Ser Fro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

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Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala He Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro He Asp Gin He Gin Ala Thr He Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Le\i His Ser Ser 500 505 510

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Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Girt Val Glu Girt Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr Hi® Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arq Gly Gly Ser Arq 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 525 530 635 ’ 640

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Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 - 68s

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 695 * 700 < 210 > 11 <211> 3306 < z. 12 > ΔΟΝ <213> Canis familiaris < 2 2 0 >

< 2 21> CDS <222 > (1) . . (2040) <223 > < 4 0 0 > 11 atg ecg teg gcc acc age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

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Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg gee ggg geg get geg ecc gee tec cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ecc geg acc ggc acc ggc get gtc cag acc gag gcc atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc egg aac ctg gag aag aaa aag 240 lie Leu Gly Val He Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70* 75 00 ggc aag ett gat gat tac cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 35' 30 35 aat caa gat cag ctg gat gcc gta tet aag tac cag gaa gtc. aca aat 336

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Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat at a eag aaa aea ata aag a ag act gca cgt egg gag sag ett 432

Gin. Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 4B0

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 ” 150 155 160 eag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528

Gin Tyr Val Leu Asp Lya Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag saa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser ISO 1S5 130 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tcc att eac ctg tag gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Γηο Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 768

Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Pile Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 ” 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea S16

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Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 ' 295 300 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 960

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Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 33.5 cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag cce cac tet ttg 1056

Gin. Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350 act ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gte eag 1104

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Met leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 330 395 400 cag cet atg aat ccg aca eaa aac atg gac atg ecc cag ctg gtt tge 1248

Gin Pro Met. Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415 cct cca gtt cat tet gaa tot aga ett get caa cct aat caa gtt cct 1236

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Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca egt age 1824

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Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 *9« 99* 99« tat gat ggt tac ege cot tea ttc tet aae act eea aae 1363

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Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

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Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

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Glv Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tot aac act cca aac 1368

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Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

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Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin 110 115 120 aaa aca ata aag aag aca gca cgt egg gag eag ett atg aga gag gaa 495

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Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu 140 145 150 gac aaa eta gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg aag caa ggt ttg 591

Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu 155 160 165 170 aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gag gag ttg teg ttg tta gat gag 639

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Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Sen Ala Pro Thr Val 255 260 265 gas gae cag gca get gaa get gaa cc,t gag cca gtg gaa gaa tat. act 827

Gin Asp Gin Ala Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Val Glu Glu Tyr Thr 270 275 280 gaa caa aat gag gtt gaa tea aea gag tat gta aat aga caa ttt atg 975

Gin Gin Asn Glu Val Glu Sar Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Pha Mat 285 290 295 gca gaa aea cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag gta gat gat tgg 1023

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Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arq Val Gin Asp Leu Mat Ala 350 355 ‘ 360 caa atg cag ggg cec tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt 1215

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Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn 380 385 390 cca gca cag aac atg gac ata ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt. cat 1311

Pro Ala Gin Asn Met Asp lie Pro Glu Leu Val Cys Pro Pro Val Hrs 395 400 405 410 tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt tet gta cag cca gaa 1359

Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Ser Val Gin Pro Glu 415 420 425 get aca cag gtt cet ttg gtt tea tec aca agt gag gga tat aea gca 1407

Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala 430 435 440 tet caa ccc ttg tac caa cct tet cat get act gae caa ega cca caa 1455

Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin 445 450 455 aag gaa ccg att gat cag att cag geg aeg ate tet tta aat aca gac 1503

Lys Glu Pro He Asp Gin lie Gin Ala Thr rle Ser Leu Asn Thr Asp 460 465 470 cag act aca gca tea tea tee ett cct get get tet cag cct caa gtg 1551

Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin val 475 48Q 4S5 490 ttc cag get ggg aca age aaa cet tta eat age agfc gga ate aat gta 1539

Phe Gin Ala Sly Thr Set Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val 495 500 505 aat gca get eea ttc caa tee atg caa aeg gta ttc aat atg aat gee 1547 Αβπ Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asm Ala 510 515 520 eea gtt ect ect gt.t aat gaa cca gas act tta aaa cag caa aat cag 1695

Pro val Pro Pro val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin 525 530 535 tae cag gee agfc tae aac cag age ttt tee agt cag cet cae caa gta 1743

Tyr Gin Ala Ser Fyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val 540 545 550 gaa caa aea gag ett cag eaa gaa cag ett eaa aca gtg qrtt ggc act 1791

Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin G1u Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr 555 560 565 570 tat cat ggt tet cag gac cag etc cat caa gtg act ggt aac cac cag 1839

Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr Gly Asn His Gin 575 580 585 cag ect cet cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ecc tat 1887

Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr 590 595 600 tae aae agt cgt ggt gtg tet egt gga ggt tee cgt ggt get aga ggc 1335

Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly 605 610 615 ttg atg aat gga tae aga gga cet get aat gga ttc aga gga gga tat 1983

Leu Met Asn Sly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr 620 625 630 gat ggt tac ege act tea ttc tet act, aac act cca aac agt ggt tat 2031

Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 635 640 645 650 aca caa tet caa ttc agt get ecc egg gac tae tet ggc tat cag egg 2073

Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 655 660 665 gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca 2127

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 670 675 680 egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg ecc eea aga ccc aac aga ggg 2175

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 685 690 ’ 695 atg ocg caa atg aac act cag caa gtg aat. taa tctgattcac aggatfcatgt 2228

Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 700 705 ttaatcgcca aaaacacaet ggecagtgta ccataatatg ttaccagaag agt.tattatc 2288 tatttgttct cccttteagg aaactfcattg taaagggact. gttttcatcc eataaagaca 2348 ggaetacaat tgteagcttt atattacctg gatatggaag gaaactattt ttaetctgca 2408 tgttctgtcc taagcgtcat cttgagcctt gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc 2468 ttaggagtaa aacat&atat actttaatgg ggtgatatct ccatagttat ttgaagtggc 2528 fctggataaag e&agaefcgac fcfcetgaeatfc ggataaaate tacaaatc&g ccctagagtc 2588 attcagtggt aactgacaaa actaaaatat ttcccttgaa aggaagatgg aaggagtgga 2648 gtgtggtttg gcagaacaac tgcatttcac agcttttcca cttaaattgg agoactgaac 2708 atttagatge ataccgaatt atgcatgggc ectaateaoa eagacsaggc tggtgceagc 2768 cttaggcttg acacggcagt gttcacccte tggceagacg actgtggttc aagaeacatg 2828 taaattgctt ttfcaacagct gatactgtat aagacaaagc caaaatgcaa aattaggcfct 2888 fcgattggcae ttttcgaaaa atafcgeaaca attaagggat ataatctgga tggccgcttc 2 848 tgtacttaat gtgaaatatt tagatacett tcaaacactt aacagtttct ttgacaatga 3008 gttttgtaag gattggtagt aaatatcatt ccttatgacg tacattgtct gtoactaato 3068 cttggatctt gctgtattgt caectaaatt ggtacaggta ctgatgaaaa tctaatggat 3128 aatcataaca ctcttggtta catgtttttc ctgcagcctg aaagttttta taagaaaaag 3188 acatcaaatg cctgctgctg ccaccotttt aaattgctat cttttgaaaa gcaccagtat 3248 gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacagt cagtagtttc acttctgatg 3308 gtataagcaa acaaataaaa oatgtttata aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3368 aaaaaaaaaa aaaaaaaa 3386 < 210 > 16 <211> 708 <212> PRT <213> Bos taurus < 4 0 0 > 16

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Glv Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Glv Asn Glu Ala Gly Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Met Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val He Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Lsu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asm Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Glv Asp Asp 145 150 155 ' 160

Glu val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly val Pro lie Leu 165 ' 170 ’ 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser He His Leu rrp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Glr. Ala Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Val Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Asn Glu Val Glu 275 230 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Glv Glu Lys Glu Gin Val Asp Asp Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Aan Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro Hie Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn, Phe lie Gin Asp Ser M®t leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn. Met Asp 385 330 335 400 lie Pro Gin Lau Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Pro Asn Gin Val Ser Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin 450 455 4SQ lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin. Pro His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser &sn Gin Pro Tyr Tyr Asra Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leas Met Asa Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asm Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Thr Asa Thr Pro Asa Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser 645 650 655

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Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly 675 680 685

Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr 690 695 700

Gin Gin Val Asn 705 <210> 17 <211> 3150

< 212 > ADN <213 > Eguus cabal1us < 2 2 0 >

<221> CDS < 2 2 2 > (1) , . (1917) < 2 2 3 > < 4 0 0 > 17 atg gag ggc sag etc gat gat tae aaa gag ega atg aac aaa gga gaa 48

Met Glu Gly Ays Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu 1 5 10 ” 15 agg ett aat cag gat eag ctg gat get gfcg tet aag tac cag gaa gtc 96

Arg Leu Asm Gin Asp Gin Leu Asp Ala val Ser Lys Tyr Gin Glu val 20 25 30 aca aat aac ttg gag ttt geg aaa gaa ttg cag agg agt ttc atg geg 144

Thr Asn. Asn ten Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala 35 40 45 ttg agt cag gat att cag aaa aca afca aag aag aeg gca cgfc egg gag 192

Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu 50 55 60 cag ett atg aga gaa gaa get gaa cag aaa cgt tta aaa act gta ett 240

Gin Leu Met Arg- Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr val Leu

65 70 75 SO gag ctg eag tat gtt. ttg gac aaa ttg gga gat gaa gaa gtg cga act 288

Glu Leu Gin Tyr val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Glu Gin val Arg Thr 85 90 95 gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga gtg cca ata etc tet gaa gaa gag 336

Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu 100 105 110 ttg teg ctg ttg gat. gag ttc tae aag tta gca gac cct gta egg gac 384

Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro val Arg Asp 115 120 125 atg ago ttg agg ttg aat gag cag tat gag cat gee too att eac ctg 432

Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu 1.30 ’ 135 140 tgg gac ttg ctg gaa ggg aag gaa aaa tot gtc tgt gga aca aec tat 480

Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr 145 150 155 160 aaa get ctg agg gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tcc aae tac ttt 528

Lys Ala Leu Arg Glu lie Val Glu Arg Val Pile Gin Ser Asn Tyr Fhe 165 170 175 gac age ace cac aac eac cag aat ggg etc tgt gag gag gaa gag get 576

Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala 180 185 190 acc tea get cca aca get gaa gac cag gga get gaa get gaa cct gag 624

Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gin Gly Ala Glu Ala Glu Pro Glu 195 200 205 eca gea gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat 672

Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr 210 215 220 gta aat, aga cag ttt. atg gea gaa gag cag ttc agt ggt gag aag gag 720 val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Ale Gin Fhe Ser Gly Glu Lys Glu 225 230 235 240 eag gtg gat gag tgg aca gtc gag sag gtc gag gtg gta aat tea etc 768

Gin val Asp Glu Trp Thr val Glu Thr val Glu val val Asn ser leu 245 250 255 cag cag caa cct cag get gca tet cct tea gta ccg gag ecc cac tet 816

Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser 260 265 270 ttg act cca gtg get. eag gea gat ecc ett gtg aga aga eag cga gta 864

Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 275 280 285 eag gac. ett atg geg caa atg cag ggg ecc tat aat ttc. ata. eag gat 912

Gin Asp Leu Mat Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp 2S0 295 300 tea atg ctg gat ttt. gaa a.ac cag aca. ett gat cct gcc att gta tet 960 $sr M§t Lsu Asp Phs Glu Asn Gin Thr lsu Asp Pro Ala He val Ser 305 31.0 315 320 gca eag cct atg aat. cca gea cag aat atg gac atg cec eag ctg gtt 1008

Ala. Gin. Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp Met Pro Gin lev: Val 325 330 335 tgc act cca gtt cat get gaa tot aga ett get caa act aat aaa gtt 1056

Cys Pro Pro Val His Ala Glu 3er Arg Leu Ala Gin. Pro Asn Gin Val 340 345 350 cc.t gta aaa cca gaa get aca cag gtt cot ttg gtt tea tee aca agt 1104

Pro Val Gin Pro Glu Ala Tbr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 355 360 365 ggg tat aca gca tet cag ccc ttg tac cag cct tc.t cat get aca 1152

Glii Gly ryr Thr Ala Ser Gin Pro Lew Tyr Gin Pro Ser His Ala Th.r .370 375 ” 380 gag caa ega ccg caa aag gaa ccg act gac cag ate cag gca aca ate 1200

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Asp Gin lie Gin Ala Thr lie 385 390 335 400 tet tta aat aca gac cag act aca gca tea tea tee ett cct get get 1248

Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala 405 410 415 tet cag cct cag gtg ttc cag get ggg aca age aaa cct tta nac age 1296

Ser Gin Pro Gin Val Fhe Gin Ala Sly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser 420 425 430 agt ggg ate aat gta aat gca geg cca ttc cag tee atg caa aeg gtg 1344

Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 435 440 445 ttc aae atg aat gee ccg gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta 1392

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu 450 455 460 aaa cag caa aat cag tac cag gee ago tat aae cag age ttt tee agt 1440

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser 465 470 475 4S0 ccg cct caa caa gta gag cag aca gag ett ccg caa gag cag ett cag 1488

Pro Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Pro Gin Glu Gin Lets Gin 435 490 495 aeg gtg gtt ggt act tac cat get tee eaa gac cag aae cat aaa gtg 1536

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Ala Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val 500 505 510 acc ggt aae cac cag cag cct ccc cag cag aae act ggg ttt cca cgt 1584

Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg .515 520 525 age agt cag ccc tat tac aae agt cgt. ggt gtg tet egt gga ggc tee 1632

Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asm Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 530 535 540 cgt ggt get aga ggc ttg atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga 1680

Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 545 550 555 560 ttc aga gga gga tat gat ggt tac ege cat teg ttc tet aae act cca 1728

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 565 570 575 aac age ggt tao aoa sag tet cag tte agt get cec egg gae tac tet 1776

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Pha Sar Ala Pro Arg Asp Tyr Sbs 580 585 590 ggc tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tot ggg 1824

Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Pha Lys Arg Gly Ser Gly 595 600 605 cag agt gga ccc egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg cec cca aga 1872

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 610 615 620 ccc aae aga ggg atg eeg eaa atg aae act cag caa gtg aat taa 1917

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin val &sn 625 630 635 tctgattcac aggattatet ttaatcgcca aaacacaetg gceagtgtac cataatatgt 1977 taccagaaga gttatfcatct atttgtfccfcc cctttcagga aacfctattgt aaagggactg 2037 ttttcatccc ataaagacag gactacagfct gtcagcttta tattacctgg atatggaagg 2097 aaaetatttt tactetgeat gttctgtcct aagegteatc ttgagccttg cacatgafcac 2157 teagatteet tteccttget taggagtaaa acataatata etttatgggg tgataatatc 2217 tccatagtta tttgaagtgg cttggaaaaa gcaagattga cttttgacat tggataaaat 2277 ctacaaatea gecetagagt tteatggtea tteacaaaae taaaatattt ccettgaaag 2337 gaagatggaa ggactggagt gtggtttggc agaacaacfcg cattfccacag cttttectat 2397 taaatfcggag c act gas t gt taaatgcata ccaaattatg catgggccct taatcacaca 2457 tacatggeta ocagctttga cacagc&cta ttcatcctct ggecaaacga ctgtggttaa 2517 aaacacgtgt aaattgcttt ttaacagctg atactgtaaa agacaaagct aaaatgcaaa 2577 attaggettt cattggcact tttcgaaaaa tatgcaacaa atttgggatg taatctggat 2637 ggooacttct gtacttaatg tgaagtattt agataccttt ttgaaeaett aacagtttct 2697 tegseaatgs cttttgtaag gattggtagt atatatcatt ccttatgaca tacattgtct 2757 gttgetaate ettggatett gctgtattgt ca.ccfcaaa.tfc ggtacaggta efcgafcgaaaa 2817 tctctcatgg ataaacctaa cactctfccgt cacatgtttt tcct.geagcc tgaaggtttt 2877 taaaaggaaa agatatcaaa tgcctgetgc taccaccctt ttaaattgct atcttttgaa 2937 aagcaccagt atgtgttttt agattgattt ccctatttta gggaaatgae agtcagtagt 2997 ttcagttetg atggtataag eaaagcaaat aaaaegtgtt tataaaagtt gtatcttgaa 3057 acactggtgt tcaacagcta gcagcfcfccfcg fcggtfceaecc ectgcefetgt, tagtgfctacc 3117 catttatggt tatctccagc agcaatttct eta 3150 < 210 > 18 < 211> 63 8

< 212 > PRT <213> Equus caballus < 4 Ο Ο > 18

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Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Glu Glu Val Arg Thr 85 90 95

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Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro val Arg Asp 115 120 125

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Trp Asp Leu Leu Giu Gly Lys Giu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr 145 150 155 160

Lys Aia Leu Arg Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe 165 170 175

Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala 180 185 190

Thr Ser Aia Pro Thr Aia Giu Asp Gin Gly Aia Giu Ala Glu Pro Glu 195 200 205

Pro Ala Giu Giu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr 210 215 220

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Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn See Leu 245 250 255

Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser 260 265 270

Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 275 280 285

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp 290 295 300

Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 305 310 315 320

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val 325 330 335

Cys Pro Pro Val His Ala Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 340 345 350

Fro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 355 3SO 365

Glu Gly Tyr rhr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr 370 375 380

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Asp Gin lie Gin Ala Thr lie 385 390 395 400

Ser Leu Ass'. Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala 405 410 415

Sar Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser 420 425 430

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 435 440 445

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu 450 455 460

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Glu Ser Phe Ser Ser 465 470 475 480

Pro Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Pro Gin Glu Gin Leu Gin 485 490 495

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Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 515 520 525

Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 530 535 540

Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 545 550 555 560

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 565 570 575

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 580 585 590

Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 595 600 605

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 610 615 620

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 625 630 635 < 210 > 19 <211> 6181

< 212 > ADN <213> Mus musculus < 2 2 0 >

<221> CDS <222> (179) . . (2302) <223 > < 4 0 0 > 19 gctggetggc taagtccctc ccgcgccgcc tcttgtccca etaggageag cteagagccg 60 cggggacagg gcgaagcggc ctgcgeceae ggagcgcacg tctctgfctct caacgcagca 120 ccacccfctgc ccccctcggc tgcccactcc agacgtceag cggctccgcg cgcgcacg Π8 atg coc teg gee ace age eac age gga age gge ago aaa teg teg gga 226

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Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser S®r Gly Ser Git Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30 get geg ccg get tet cag cat ccg gca ace ggc acc ggc gcc gtc cag 322

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45 aco gag gcc atg aag cag afct etc ggc gta ate gac aag aaa ett egg 370

Thr Gin Ala Met Lys Gin lie leu Gly Vai He Asp Lys lys Leu Arg 50 55 €0 aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gafc tac cag gaa ega atg 418

Asn Leu Glu Lye Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met

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Asn Lys Gly Glu Arg leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vs.1 3er lys 85 30 ’ 95 tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aag gaa tta cag agg 514

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110 agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa aca ata aag aag aca 562

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr He Lys Lys Thr 115 120 125 gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca gaa cag aag ega tta 610

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg leu 130 ” 135 140 aaa act gta ett. gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat. 658

Lvs Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val leu Asp Lys Leu Gly Asp Aap 145 150 155 160 gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg cca ata ttg 706

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Glii Gly Leu Ser Gly val Pro He Leu 165 170 175 tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc tac aag etc gta gat 754

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190 cat gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gcc 802

Pro Glu Arg Asp Met, Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205 tea. att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cct gtg tgt 850

Ser He His leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220 gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag 898

Sly Thr Thr Tyr Lys Ala leu Lys Glu Tie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240 tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255 gag gaa gag gc.g get tea geg ccc aca gtg gag gac cag gta get gaa 994

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Aap Gin Val Ala Glu 260 265 * 270 get gaa ect gag cca geg gaa gaa tac aca gag caa agt gag gtt gaa 1042

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285 tea aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gea gaa aca eag ttc age 1090

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Atg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Pha Sat 290 295 300 agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca gtt. gaa ana gtt gag 1138

Ser Gly Gin Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Gin Thr Val Glu 305 310 315 320 gtt gta aac tea etc cag cag eaa cot cag get geg tee cot tea gtc 1186

Val Val &sn Ser Leu Girt Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335 cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get eag' tea gat cca ett gtg 1.234

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 34S 350 aga agg cag cgt gta eaa gat ett atg gca caa atg eaa ggg ccc tat 1282

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365 aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa aat cag aeg ett gat 1330

Asr. Fhe ! 3.¢.- Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Gin Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380 cat geo att gta tee gea eag eet atg aac cot aec cag aae atg gat 1378

Pro Ala He Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Aen Met Asp 385 390 395 400 atg cct eag ctg gtt tgc eet. oag gtt cat tet gaa tet aga ett gee 1426

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val Hrs Ser Glu Ser Arg Leu Ala 40b 410 415 caa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gee aca eag gtt cct ttg 1474

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430 gtt tea tee aca agt gag ggg tat aca gca tet cag cco ttg tac cag 1522

Val Ser Ser Thr Ser Giu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445 cca tet cat get aeg gag cag egg cog cag aaa gag cca atg gat cag 1570

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag act aca gca tcc tea 1618 lie Gin Ala Thr He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480 tcc ett cct get get. tet cag cct caa gtg ttc cag get ggg aca agt 1666

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 435 aaa cot ttg cac age agt gga ate aat gta aat gca get cca ttc cag 1714

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510 tcc atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca gtc cct cct get aat 1762

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525 gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac cag gee act tat aac 1810

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540 cag agt ttt tcc agt cag cat esc esa gtg gaa caa sea gag ett caa 1358

Girt Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 550 caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac cat gga tee cag gac 1306

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Giy Ser Gin Asp 565 570 575 cag act cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac 1354

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 530 535 550 act ggc ttt cca cgt age agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta 2002

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605 feet ega gga ggg tet cgt ggt gee aga ggc ttg atg aat gga tac agg 2050

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620 ggc cct gee aat gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea 2098

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640 ttc teg aac act cca aac agt ggt tat tea cag tet cag ttc act get 2146

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Set' Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655 cec egg gac tac tet ggt tac cag egg gat gga tat cag cag aat ttc 2194

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg' Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670 aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gee cca ega ggt cgt 2242

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 6BG 685 gga ggg cec cca aga eeo aac aga ggg atg cag aaa atg aac act cag 2290

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 635 700 caa gtg aat taa tgtgataeac aggattatgt ttaatcgcea aaaacacact 2342

Gin Val Asn 7 05 ggceagtgta ccataatatg ttaecagaag agttattate tatttgttet cectttcagg 2402 aaaettattg taaagggact gttttcatce cataaagaea ggactgcaat tgtcagctfct 2462 aeattacctg gatatggaag gaaactattt ttattetgca tgttctgtcc taagegteat 2522 ettgageett gcacacaata caatactcag attcctcaec ettgettagg agtaaaacat 2532 catataetta tgggyLg&ta atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg 2642 caagatfcgaa ttfcttgacet tggafcaaaat. etaeaateag coctagaaot attcagtggt 2702 aattgacaaa gttaaagcat tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta 2762 gcaaaactge atttcatagc tttcccatta aattggagea ccgacagatt aaaagcatae 2822 caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca 2382 cte&etagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattge tctttagtag 2942 tggatactgt gtaagaeaaa gceaaattge aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa 3002 atatgcatca aataiggggg ataatctgga tgggetgctg ctgtgctcaa tgtgaaotat 3062 ttagatacat fctggaacact fcaacagttte tctgaacaat gacttaeatg gggattggtc 3122 ctgtttgtca ttoctcacoa taattgcatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat 31.82 tgttactcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca 3242 cttttggtca c.at.gt.fcfct,ct, cctgcagcat gaaagttott aaagaaaaag atatcaaatg 3302 cctgctgcta ccacccfcfcfcfc aaatfcgctat ctbtagaaaa gcaccggtat gtgttttaga 3362 ttcatttcce tgttttaggg aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa 3422 taaaaaaatg tttctaaaag ttgtatcttg aaacaotggt gttcaaoagc fcagcagotaa 3482 agtaattcaa occatgcatt gctagtgtca cagcctttgg ttatgtctag tagctgtttc 3542 tgaagtattt tcatt-tatct tttgtcaaat ttaacootgt ttgaattctc tcctttcctc 3602 aaggagacac ttatgttcaa agtgrttgatt ctttgcctta ggtgeataga gsgtagacag 3662 tttggagatg gaaaggtbag eagtgaetta gecstatgtt etgtgttgga atttgtgcta 3722 gcagtttgag oactagotot gegtgeetat gaactgaatg otgcttgtcc cattcoattt 3782 tatgtcatgg agaaataatt caaGttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg 3842 tacagaaatt aaattttact tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttccaagccg 3902 gtatcagcta ctcaaaacaa ttctcagata ttcatoafcta gacaactqga g-tfctfctgctg 3962 gttttgtage ctactaaaac tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta 4022 gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg 4082 acttttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc 41.42 aagactattt tgccagcace tacacttgtg tgetttaaaa gacaactacc tgggatgtae 4202 cacaaocata tgttaattgt attttattgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat 4262 aatccotaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa 4322 ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agfctctgaag tgaattcagg gaatgtctca 4382 cgtttcgggc ttotacccaa agtgtaggge agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac 4442 ttgtttattt tttaagttgc ttattecttt caaeagcaae atatcattag etgteattct 4502 accattgcag ttctagtgag ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc 4562 actggacaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtate 4622 ttctataata tgcaaatgct tgtctagagg cagaagacct tttgtttggt caagtgtgta 4682 ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtcc: tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa 4742 aatcttttgt acatgc3oaa ttcaoagtat gtttagatao oacgtgtata atgcoccooc 4S02 etseeeeagg tagcatgcca ttgatgactt tttgcttagg gccattttat taccagggcc 4862 ttaatattec taaaaagatg attttttttc ateetttete ctcttttgat cattgtatct 4922 tgatattaaa aacatgacct tcoaatgatt gtagtaaatt aacfctctafca gttcfctfctgt 4982 ctctatatgfc at.fccatat.at atgcfcattgfc atagagactt caaggagaca tggagatgca 5842 tgcttattcfc caggtfccatfc caataaggtg cttggcagac aaecagfctfce taagtgaaga 5102 atgtagttaa gcagcttcat atatgtgoca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac 5162 ttaaggaaat agggfcattgt agcttagget gatcataccc tfceatfctcaa ccttaagctc 5222 tcaacctgca fcceatecgae ttgagatatt aagtacttta gfctttatcga gtataagtta 5282 acagaaaaag taaattaagc tttgcctfcta ctatfcttgaa tttatataca ttctggaaaa 5342 aettagaaac fcgfctgtafcafc fctcatfcagafc taaatfcatat gaaaatgtga tfcgtttstag 5402 caaagccfcgfc gagttgcata caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga 5462 agaaacaatt ctgggtctgg fcctttttaag aacaaagcta gactactgta tgtfcagcact 5522 çtaoatcaat agtctgttgfc gaagefctgag eaattv.ecig catagcctfcg atesttsaee 5582 gttggeattg sasatagcag tatccctaat gt&ettaaaa cttaaagtca ggttttggta 5642 tatttatttg taagtcttsa tttcctctaa atactatatc tetttagcga gacaacctga 5702 aatttatfcag caeatfctggg tatctattgo ttggcafctat ggcoagtgtt aactatfccag 5762 tggtgaaaaa attacccctc aagacactgg agtgacccca gstgtgtgta gtaagtggca 5822 tggfctcaacfc gtgtggtfcaa tgataaatafc atgactfcagt cggtatgafce tggaaagact 5882 tgafctgaaag ataattcagc tgaeafcaagg atgagtgagg agtggcaaac tggataaaag 5942 agtcaagaga cctgtattcc agtgactcet gttttgttta agcattagca agatctgtct 6002 ggggaaactg gatagggeag ttttcfcteea tgtttagttt tfcgtcteaac atttggaagc 6062 tattgaaggt ttfcaaaatgg tgtgfc&fcfcgfc ttfctttfctgg ggggggggtg gccagaatag 6122 tgggfccafccfc aafcaaaacfcg ccattfcaaaa gatca&aaaa a&aa&aaaaa aaaaaasaa 6181

<210> 20 <211> 707 <212> PRT <213> Mas musculus <4 00> 20

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Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Sar Gly Sar Glis Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala sar Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala val Gin 35 40 45

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Asn Lya Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Lau Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

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Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp

145 150 155 ISO

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Sar Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

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Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Gin 275 280 285

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Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp rhr Val Gin Thr Val Glu 305 310 315 320

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Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Girt Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

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Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met. Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

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Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser rhr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 lie Glu Ala Thr lie Ser Leu Asn. Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

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Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin ryr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Fro His Gin Val Gin Gin Thr Gin Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Agn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Lev Met Asn Gly Xyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670 hys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 " 680 685

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700

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< 2 21> CDS <222 > (139) . . (2262) <223 > < 4 0 0 > 21 cccaccgcçc gcgcgcgrtag ccgccigcce gcecgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60 tctccccgtc cgtctcctga attgctggte ttgtacttcc ctcccgcttt tttcctctca 120 tctcttctcg gtctaaag atg ccc teg gee ace age cac age gga age ggc Π1

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Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu IS 20 25 geg geg gee ggg gca get geg ceg get tct. eag oat ceg gca ace gge 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin. Hia Pro Ala Thr Gly 30 35 40 acc ggc gee gtc cag acc gag gcc atg aag cag att etc ggc gta ate 315

Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie lea Gly Val lie 45 50 55 gac aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag got aaa ett gat gat 363

Asp Lys lys Leu A:: g Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Lau Asp Asp 60 ” 65 70 75 tac cag gas. ega atg aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac eag ctg 411

Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu 30 85 30 gat gcc gta tct aag tac cag gaa gtc aea aat aat ttg gag ttt gca 453

Asp Ala Val Set Lys Tyr Gin Glu V31 Thr Asn Asn leu Glu Phe Ala. 35 100 105 aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys 110 115 120 aca at a aag aag aoa gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca 555

Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Aia 125 130 135 gaa cag aag ege tta aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat S03

Glu Gin Lye Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Ejeu Asp 140 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651

Lys Leu Gly Asp Asp Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser 160 165 170 gga gtg cca ata ttg tct gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc S99

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 180 135 tac aag etc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Tvr Lys Leu val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 190 195 200 cag tat gaa cat gcc tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys 205 210 215 gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt 843

Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val 220 225 230 235 gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891

Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg get tea geg gcc aca gtg gag 939

Asn Sly Leu Cys Glu Giu Giu Glu Ala Ala Ser Ala Fro Thr Val Gin 255 260 265 gac cag gta get gaa get gaa ect gag cca geg gaa gaa tac aca gag 387

Asp Gin Val Ala Glu Ala Giu Pro Glu Pro Ala Giu Glu Tyr Thr Giu 270 275 280 caa agt gag gtt gaa tea aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca 1035

Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 31.5 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tea ate cag cag caa cot cag get 1131

Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 geg tee ccfc tea gtc cca gag ecc cae tet ttg act cca gtg get cag 1179

Ala Ser Pro Ser Val Pro Giu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin 335 340 345 tea gat cca ett gtg aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gca caa 1227

Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin 350 355 360 atg caa ggg ecc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu 365 370 375 aat cag aeg ett gat cct gee att gta tee gca cag cct atg aac cet 1323

Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro M®t Asn Pro 380 385 390 395 ace cag aac atg gat atg cct cag atg gtt tgc cct aag gtt cat tet 1371

Thr Glu Aan Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin val His Ser 40Q 405 410 gaa tet aga ett gee caa tet aat caa gtt ect gta caa cca gaa gee 1419

Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala 415 420 425 aea cag gtt cet ttg gtt tea tee aea agt gag ggg tat aca gca tet 1467

Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser 43(1 435 440 cag ccc ttg tac cag cca tet cat get aeg gag cag egg ccg cag aaa 1515

Gin Pre Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys 445 450 455 gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag 1563

Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin 460 465 470 475 act aca gca tec tea tee ett cet get get tet cag cat caa gtg ttc 1611

Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe 480 485 490 cag get ggg aca agt aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat 1659

Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn 435 500 5Q5 gca get oca ttc cag tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca 1707

Ala Ala Pro Phe Glr. Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro

510 515 S2Q gte cot cat get aat gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac 1755

Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Gin rbr Ίου Lys Gin Gin Sor Gin Tyr 525 530 535 cag gee act tat aac cag agt tfct tec agt cag act eae caa gtg gaa 1803

Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu 540 545 550 555 caa aca gag ett caa caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac 1851

Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Giy Thr Tyr 560 565 570 eat gga tee cag gae cag ect cat caa gtg eet ggt aac cac cag caa 1899

His Giy Ser Gin Asp Gin Pro His Glr. Val Pro Gly Asn His Gin Gin 575 580 585 ccc cca eag cag aae act gge ttt cca cgt age agt cag cot tat tac 1947

Pro Pro Gin Gin Asn Thr Giy Phe Pro Arg Sar Sar Gin Pro Tyr Tyr 590 595 600 sac agt cgt ggg gta tet ega gga ggg tet egt ggt gcc aga ggc ttg 1995

Asn Ser Arg Giy Val Ser Arg Giy Giy Ser Arg Giy Ala Arg Giy Leu 605 610 615 atg aat gga tac agg ggc cet gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat 2043

Mat Asn Giy Tyr Arg Giy Pro Ala Asr. Giy Phe Arg Giy Giy Tyr Asp 620 625 630 635 ggt tac ege cct tea ttc teg aac act cca sa:: agt ggt tat tea cag 2091

Giy Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Giy Tyr Ser Gin 640 645 650 tet cag ttc act get ccc egg gac tac tet ggt tac cag egg gat gga 2139

Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Giy Tyr Gin Arg Asp Giy 655 660 665 tat cag eag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga 21S7

Tyr Gin Gin Asn Phe Lyss Arg Giy Ser Giy Gin Ser Giy Pro Arg Giy 670 675 630 gcc cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg 2235

Ala Pro Arg Giy Arg Giy Giy Pro Pro Arg Pro Asn Arg Giy Met Pro 5S5 690 635 caa atg aac act cag caa gtg aat taa tgtgatacac aggattatgt 2282

Gin Mat Asn Thr Gin Glri Val Asn 700 705 ttaatcgcca aaaacacact ggecagtgta ceataatatg ttascagaag agttattatc 2342 tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca 2402 ggaetgcaat tgtcagottt acattacctg gatatggaag gaaaetattt ttafctctgoa 2462 tgttctgtcc taagegteat ettgageett gcacacaata caatactcag attcctcacc 2522 ctfcgcttagg agtaaaacat tatataetta tggggtgata atatctccat agttagttga 2582 agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacet tggataaaat ctaeaateag 2642 cc.clagaa.ct attcagtggt aattgacaaa gttaaagcat tttctttgaa aggaagatgg 2702 aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc atfcteatagc tttcocatta aattggagca 2762 ccgacagatt aaaagcatac, caaafetatgc atgggtcetfc aotcacacaa gtgaggctgg 2852 ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca 2832 tgtaaattgc tctttagtag tggataotgt gtaagacaaa gccaaattgc aaatcaggot 2342 ttgattggct cttctggaaa atatgcatca aatatggggg a'aatctgga tgggctgctg 3002 ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacet ttggaacact taaeagtttc tctgaacaat 3062 gactt.aoa.tg gggattggtc ctgtttgtca. ttcctcacca taattgcatt gtcatcacta 3122 atecttggat cttgctgtat tgttactcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta 3182 atggatggat aatcataaca cttttggtca catgttttct cctgcagcct gaaagttctt 3242 aa&gaaaaag atatoaaatg cctgctgcta ccaccctttt, aaattgctat ctttagaaaa 3302 gcaaeggtat gtgttttaga tteatttcce tgttttaggg aaatgaeagg cagtagtttc 3362 agttctgatg gcaaaacaaa fcaaaaacatg tttctaaaag fctgtatafctg aaacactggt 3422 gttcaaoagc tagcagctaa agtaattcaa cccatgoatt gctagtgtca eaycctttgg 3482 ttatgtctag tagctgtttc tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat ttaacectgt 3542 ttgaattctc tcctttcctc aaggagacac ttafcgttcaa agtgttgatt ctttgcctta 3602 ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag cagtgactta gccatatgtt 3662 ctgigfctgga atfcfcgfcgcta gcagtttgag eaefcagcfccfc gcgtgcctat gaactgaatg 3722 ctgcttgtcc oattooattt tatgtcatgg agaaataatt ccacttggta aeacaaaggc 3782 taaqtfcaatg fcfcafctfctctg tacagaaafcfc aaafctttact fcdagcdfcfc tgtaa.acfc.fcfc 3342 tttttttttt ttccaagecg gtafccagcta otcaaaaoaa t'cctcagata tteatcatta 3502 gacaactgga gtfcttfcgctg gttttgtagc ctactaaaac tgctgaggct gttgaacatt 3362 coacattoaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa gottcaatgt ttattttaaa 4022 ataaataaaa taagttcttg acttttctca tgtgtggtta tggfcacatca tattggaagg 4082 gttatctgtt tacttttgcc aagactattt tgccagca.cc tacacttgtg tgctttaaaa 4142 gacaactacc tgggatgtac cacaaceata tgttaattgt attttattgg gatggataaa 4202 atgt.ttgtgg tttattggat aatccctaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt 4262 atgatagtaa gaaageaaaa ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag 4322 tqaattcagg gaafcgfcctca cgtfcfccgggc ttctacccaa agtgtagggc agaaqgfcgfca 4382 aaagttgttt gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc toattccttt caacagcaac 4442 atatcattag etgfccattct accattgcag ttctagtgag ttttaacgtc tgcattcaag 4502 actgt-fcfctaa aagcaaactc actggacaga gaaefcgctaa agtcti-ttcc ttaagatctg 4562 agtcfcttgfcfc acfccagfcatc fctcfcataata -tgcaaatgct tgtctagagg cagaagacct 4622 tttgtttggfc caagfcgfcgta ttttaccaga gtacagggaa efcgatggtcc tac&fcgfcctc 4632 tlagtgtagfc aagactataa aatctttfcgt. aeatgcacaa ttcacagtat gtttagatac 4742 caogtgtata atgoccaccc etcacccagg tagcatgcca ttgatgactt tttgcttagg 4802 gecattttat taccagggcc ttaatattoc taaaaagatg atttttttto atcetttefcc 4862 ctcttttgat. cattgtatcfc tgatattaaa aacatgaccfc tccaatgatt gtagtaaatt 4922 aacttctata gtfccfctfctgt cfccfcatafcgfc attcatatat atgctattgt atagacraefct 4982 aaaggagaca tggagatgca tgcfctatfcct caggttaatt cacfcaaggtg cttggcagaa 5042 aaccagttto taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat atatgtgcca ggcaatfctgt 5102 t.itgttaaat tttoatotao ttaaggaaafc agggtattgt agottaggot gatoatacco 5162 tlcatttcaa ccttaagotc tcaacctgoa Iccatccgac ttgagctatt aagtacttta 5222 gttttatcga gtafcaagtta aoagaaaaag taaattaagc tfcfcgccttta otattttgaa 5232 tttatatacs. ttotggaaaa acttagaaac tgttgtats.t ttcattagat. ta.aattatat 5342 gaaaatgtga ttgfcttatag caaagcctgt gagttgcata cacccfcaagg aaaactccfcfc 5402 aagtgctecfc tgaagagaga agaaacaatt ctgggtetgg tattv.ttaag aaoaaagcta 5462 gacfcactgta tgfctagcact gtacattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttcctg 5522 catagccttg atccfctcacc gttagcattg aaaatagcag tatccctgat gtacttaaaa 5582 cttaaagtca ggfcfcttggfca tatttatttg taagtcttaa ttfcoctctaa ataotatatc 5642 tctttagcga. gaoaacctga aatttattag cacatttggg tatcfcctfcge ttggcattat 5702 ggccagtgtfc aactattcag tggfcgaaa&a attacccetc aagacactgg agfcgacccca 5762 gatgtgtgta gtaagtggca tggttcaact gtgtggttaa tgataaatat atgacttagt 5822 eggtatgate tggaaagact tgattgaaag ataattcagc tgaeataagg atgagtgagg 5882 agtggcaaaa tggataaaag agtaaagaga cctgtattao agtgactcct gttttgfctfca 5942 ageattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggcag tt.tt<rttcca tgtttagtfct. 6002 ttgfcctcaaa atfctggaagc fcatfcgaaggt, tttaaaatgg tgtgtattgt ttfctttttgg 6062 ggggggggtg gccagaatag tgggtcafcct aataaaaetg ocatttaaaa gafccaaaaaa 6122 aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6141 <21Q> 22 <211> 707

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Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin Hie Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Gin Ala Met Lys Gin lie Leu Gly val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Aan Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 SQ 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Giu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 113

Ser Phe Met Ala Leu Sec Gin Asp lie Gin Lys Xhr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg rhr Asp leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Xyr lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu ivs Pro val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lyg Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Sar Asm Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Ph« Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Tip Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 34D 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin. Met Gin Gly Pro Tyr 355 ' 360 365

Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala He Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lye Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460

Tie Gin Ala Thr He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 4S0

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

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Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asη 515 520 525

Gin Pro Glu Thr Leu Lye Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro Hi.& Gin Val Gin Gin Thr Gin Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Lew Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arçr Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Ag Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 “ 650 655

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Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 635

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Aan Thr Gin 690 695 700

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Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Sly Ser Glu 15 20 " 25 geg geg gee ggg gca get geg eeg get tet cag cat seg gca ace gge 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin Hi® Pro Ala Thr Gly 30 35 40 acc ggc gcc gtc cag acc gag gcc atg aag cag att etc ggc gta ate 315

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Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Glv Glu Arg Leu Asn Gin Asp Glu Leu 80 ” 85 90 gat gcc gta tot aag tac cag gaa gtc aaa aat aat ttg gag ttt gca 459

Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala 95 100 105 aag gaa tta cag agg agt tfcc atg gca tfca agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys 110 115 120 aca ata aag aag aca gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca 555

Thr lie Lye Lye Thr Ala Arg Arg Glu Glu Leu Met Arg Glu Glu Ala 125 130 135 gaa cag aag ego tta aaa aot gta ett gag tta cag tat gta ttg gat 603

Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp 140 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651

Ly® Leu Gly Asp Asp Asp val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser 160 165 170 gga gtg cca ata ttg tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc 699

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Ph® 375 180 185 tac aag etc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 130 135 200 cag tat gaa cat gcc tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

Gin Tyr Glu His A.la Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lye 205 210 215 gaa aag cet gtg tgt gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt 843

Glu Lys Pro Val Cvs Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Giu lie Val 220 " 225 230 235 gag cgt gtt ttc nag tea aac tao ttt gat age act cac aat cat caa 831

Glu Arg Val Phe Gin Ser Aen Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg get tea geg ccc aca gtg gag 339

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Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu

270 275 2BQ caa agt gag gtt gaa tea aca gag tat gtc aat agg eag ttc atg gca 1035

Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asti Arg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca eag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 315 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tea etc eag eag eaa cet eag get 1131

Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin. Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 geg tee cet tea gtc cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get eag 1179

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Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin

350 355 36Q atg caa ggg ccc tat aat ttc ata eag aeg ett gat cet gee att gta 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val 365 370 375 tee gca eag cet atg aac cet acc eag aae atg gat atg cet eag etg 1323

Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro rhr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu 380 385 390 395 gi*t tgc cet eag gti* cat tet gaa tet aga ett gee eaa tet aac caa 1371

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Val Pro Val Gin Pro Glu Ala rhr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr 415 420 425 agt gag ggg tat aca gca tet eag ccc ttg tac eag caa tet cat get 1467

Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Glr. Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala 430 435 440 aeg gag eag egg ccg eag aaa gag cca atg gat eag att eag gca aca 1515

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Ser Ser Glv- lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr 495 500 505 gtg ttc aat atg aat get cca gtc cct cct get aat gaa cea. gaa aeg 1707

Val Phe Asn. Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Assn Glu Pro GIu Thr 510 515 520 tta aaa caa cag agt cag tac cag gcc act tat aac cag agt ttt tcc 1755

Leu Lys Gin Gin Ssr Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser 525 530 535 agt cag cct eac caa gtg gaa caa aea gag ett caa caa gac caa ctg IB03

Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu 540 545 550 555 caa aeg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac cag cct cat caa IB51

Gin Thr Val Val Glv Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin 560 565 570 gtg cct ggt aac cac cag caa coc cca cag cag aac act ggc ttt cca IB93

Val Pro Gly Asa His Gin Girt Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro 575 580 5S5 cgt age agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta tet ega gga ggg 1947

Rrg 3er Ser Gin Pro Tyr Tyr Ran Set Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly

590 595 6GG tot cgt ggt gcc aga gga ttg atg aat gga tac agg ggc cct gac aat 1995

Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn 605 ” 610 615 gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc teg aac act 2043

Gly Pbe Arg Gly Glv Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr 620 625 630 635 cca aac agt ggt tat tea cag tet cag ttc act get ccc egg gac tac 2091

Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr 640 645 650 tet ggt tac cag egg gat gga tat cag eag aat ttc aag ega ggc tet 2139

Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser 655 660 665 ggg cag agt. gga cca egg gga gcc cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca 2187

Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly A-la Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro 670 675 680 aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2235

Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 685 630 695 tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcea aaaaeacact ggccagtgta coataatatg 2295 ttaccagaag agttattatc tatttgttct ecctttcagg aaacttattg taaagggact 2355 gtttteatec cataaagaca ggaetgeaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag 2415 gaaacfcatfct ttattctgca tgfctofcgtc.c fc&agcgtc.afc cfcfcgagcett gcacacaata 2475 caataatcag attcctcacc cttgcttagg agtaaaacat tatafc.aaf.ta tggggtgafca 2535 atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaafcg aaagattgaa tttttgacct 2595 tggataaaat ctacsatcag ccctagaact attcagtggt aattgacaaa gttaaageat 2655 fcttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta gcaaaaatgc atttcatagc 2715 tttcccatfca aatfcggagca ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt 2775 ac.tcacacaa gtgaggctgg ctaccagoct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa 2835 acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tctttagtag tggafcacfcgt gtaagacaaa 2895 gcoaaattgc aaatcaggct ttgattggct ctfcctggaaa afcatgeafcca aatatggggg 2955 ataatctgga fc.gggct.gGtg ctgtgctcaa tgtgaactat ttagataccfc. tfc.ggaacac.t 3015 taacagtttc tctgaacaat gacttacatg gggattggtc cfcgtttgtca ttcctcacca 3075 taattgcatt gfccafccacta atccttggat ctfcgctgtafc tgttactcaa attggtaata 3135 ggtactgatg gaa&tegcta atggatggat aatcataaca cttttggtca catgttttct 3195 cctgcagcct gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgeta ccaccctttt 3255 aaafctgctat cfcttagaaaa gcaccggtat gtgttfcfcaga. tfccafcttccc tgttttaggg 3315 aaatgacagg cagtagtttc agfctctgatg goaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag 3375 ttgtatcttg aaacactggt gttcaacage tageagctaa agtaattcaa cccatgcatt 3435 gctagfcgtca cagccttfcgg ttatgtctag tagctgtttc tgaagtattt teat::.tatct 3495 tttgtcaaat ttaaccctgt ttgaattctc tcctfctcctc aaggagacac ttatgttcaa 3555 agtgttgatt etttgeetta ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag 3615 cagtgactta gocatatgtt etgtgttgga atfctgtgcta gcagfcttgag caetagctct 3675 gcgtgcctat gaaetgaafcg ctgcttgtcc cattccattt tatgtcatgg agaaataatt 3735 ccacfctggt.a acanaaaggc taagttaatg ttattttctg tacagaaatt aaatfcttact 3735 tttagccttt tgtaaacttt ttfctttttfct ftccaagccg gfcatcagcta ctcaaaacaa 3355 fc.tctca.gata ttcatcatta gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac 3915 tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagfc.ttt,gta gggtggtgga taafcggggaa 3975 gcttcaatgt fctattttaaa ataaataaaa taagttcttg acttttctca tgtgtggtta 4035 tggtacatea tatfcggaagg gttatctgtt taettttgcc aagaetafctt tgecagcacc 4095 taeaetfcgtg fcgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac cacaaecata tgttaattgt 4155 attttattgg gatggataaa atgtttgtgg ttfcattggat aatecctaga tggtgtgtta 4215 egfcgfcgfcaga atataafcttt etgatagtaa gaaagcaaaa ttgaagaaaa taagtttagt 4275 attgaatttg agttctgaag tgaatteagg gaatgt-ctca cgtttcgggc ttctacccaa 4335 agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc 4395 fctattccttt caacagcaac atatcattag etgteattct accattgcag ttetagtgag 4455 ttttaacgte tgcattcaag actgttttaa aageaaeetc aetggaeaga gaactgctaa 4515 agtctttt.ee ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct, 4575 tgtcfcagagg cagaagacct tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa 4635 ctgatggtcc tacatgtetc ttagtgtagt aagactataa aatcttfctgt acatgcacaa 4695 ttoacagtat gtttagatac oacgtgtata atgcccceec ctcecceagg tagcatgcca 4755 ttgatgactt. tt.tget.tagg ge.eatttt.at taecagggee ttaatattee taaaaagatg 4815 attttttttc atcetttetc ctottttgat cattgtatet tgatattaaa aaeatgacct 4875 tccaatgatt gtagtsaatt a&cttctata gttcttttgt ctctst&tgt attcatstat 4 935 atgcfcattgt atagagactt caaggagsea tggagatgca tgcttattct caggfctcatt 4995 cactaaggtg cttggcagac aaecagttte taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat 5055 atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat ttteatctac ttaaggaaat agggtattgt 5115 agettaggct gatcatacec ttcattteaa ccttaagctc t.caacefcgca tecatcegac 5175 ttgagctatt aagtaettta gttttatega gtataagtta aeagaaaaag taaattaagc 5235 tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa acttagaaac. tgttgtatat 5295 ttcattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata 5355 caccctaagg aaaactectt aagtgctect tgaagagaga agaaaeaatt ctgggtctgg 5415 tctttttaag aacaaageta gaetactgta tgttagcaet gtacattaat agtetgtfcgt 5475 gaagcttgag aagtttectg oatagcottg atcattaacc gt.tggc.att.g aaaat.agc.ag 5535 tateectgat gtaettaaaa cttaaagtea ggttttggta tatttatttg taagtettaa 5595 tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga aatttattag caeatttggg 5655 tatetcttgc ttggcattat ggccagtgfct aactattcag tggtgaaaaa attacccctc 5715 aagaeaetgg agtgacccca gatgtgtgta qrtaagtggca tggttcaact gtgtggttaa 5775 tgataaatat atgaettagt cggtatgatc tggaaagact tgattgaaag ataatfccagc 5835 tgaeataagg atgagtgagg agtggcaaae tggataaaag agtcaagaga ectgtattec 5895 agtgactcet gttttgttta agcattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggcag 5955 ttttctteca tgttt&gttt ttgtctcaac atttggaagc tattgaaggt tttaaaatgg 6015 tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggig gecagaatag tgggtcatct aataaaactg 6075 ccattt&aaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6114

<210> 24 <211> 698 <212> PRT <213> Mus musculus < 4 0 Q > 24

Mat Pro Ser Ala Thr Sar His Ser Gly Ser Gly Sar Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Gin Ala Met. Lys Gin He 7.,Gly val He Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 " 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lye Lea Asp Asp Tyr Gin Gin Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Sar Phe Met Ala Leu Sar Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Lau Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro He Leu 165 " 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Kis Ala 195 200 205

Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asm Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn Hia Gin Asn Gly Leu Cys GI13 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Gin Asp Gin Vai Ala Giu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu 275 2BQ 285

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Glu Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Glu Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ser Asp Pro Leu Vai 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met. 370 375 380

Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Vai Cys Pro Gin Vai 385 3SD 395 400

His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Vai Pro Vai Gin Pro 405 410 415

Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr 420 425 430

Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro 435 440 445

Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr 450 455 460

Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro A.la Ala Ser Gin Pro Gin 465 470 475 480

Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn 485 490 495

Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin. Thr Val Phe Asn Met Asn 500 505 510

Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser 515 520 525

Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin 530 535 540

Val Gin Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly 545 550 ‘ 555 560

Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro Hrs Gin val Pro Gly Asn His 565 570 575

Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro 580 585 590

Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg 5.95 600 605

Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly 610 615 620

Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 625 630 635 640

Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 645 650 655

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Axg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro S6Q 665 670

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 675 ... 68-o · egs

Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 690 695

<210> 25 <211> 3548 < 212 > ADM <213 > Mus museu 1 us <22 Ο >

<221> CDS <222> (179) . . (2257) < 2 2 3 > < 4 Ο Ο > 25 getggetggc teagtcsctc ccgcgecggc tettgteeea etaggagcag etcagagceg 60 cggggaeagg gcgaagcggc ctgegeceae ggagcgeaeg tctctgttct caacgcagca 120 ccacccttgc ccccctcggc tgcccactcc agacgtccag cggctccgcg cgcgcacg 178 atg ccc teg gee ace age cac age gga age ggc age aaa teg teg gga 226

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly sir Lys Sec Ser Gly 15 10 15 ecg ecg cog cog tec ggt tec tec ggg agt gag gcg gcg gee ggg gca 274

Pro Pro Pro Pro $er Gly Ser Ser Gly $er Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30 get gcg ccg get tet cag cat ecg gca ace ggc acc ggc gee gtc cag 322

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45 acc gag gcc atg aag cag att etc ggc gta ate gae aag aaa ett egg 370

Thr Glu Ala Met Lys Gin He Leu Gly Val He Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60* aac atg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat tac cag gaa ega atg 418

Asm Leu Glu Lye Lye Lye Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Atg Met 65 70 75 80 aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg gat gcc gta tet aag 466

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 SO 95 tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aag gaa tta cag agg 514

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Fhe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110 agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa aca ata aag aag aca 562

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr He Lys Lys Thr 115 120 125 gca egt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca gaa cag aag ege tta 610

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140 aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 653

Lvs Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160 gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg eca ata ttg 706

Asp val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly val Pro He Leu 165 170 175 feet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc tac aag etc gta gat 754

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190 cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat. gag cag tat gaa cat gcc 802

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205 tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cct gtg tgfc 850

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu. Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 ’ 220 gga aca aac tat aaa get eta aag gaa att gtt gag egt gtt ttc cag 898

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240 tea aac tac ttt gat age act eae aat eat caa aat ggg ttg tgt gag 946

Ser Asa Tyr Phe Asp Ser Thr His Asa His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255 gag gaa gag gag get tea gag caa aca gtg gag gac aag gta get gaa 994

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270 get gaa cct gag cca geg gaa gaa tac aca gag caa agt gag gtt gaa 1042

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 235 tea aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca gaa aca cag ttc age 1090

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300 agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca gtt gaa aca gtt gag 1138

Ser Gly Glu Lys Glu Gin V'al Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320 gtt gta aac tea etc cag cag caa ect cag get geg tee cct tea gte 1186

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335 cca gag ccc cac tet. ttg act cca gtg get cag tea gat eca ett gtg 1234

Fro Glu Fro His Ser Leu Thr Fro Val Ala Gin Ser Asp Fro Leu Val 340 345 350 aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gca caa atg caa ggg ccc tat 1282

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380 cct gee att. gta tcc gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat 1378

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400 atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet gaa tet aga ett gcc 1426

Met. Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415 caa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcc aca cag etc cct tug 1474

Gin Ser A-sri Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430 gtt tea tcc aaa agt. gag ggg tat aca gaa tet aag acc ttg tac aag 1522

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 * 440 445 cca tet. cat get aeg gag cag egg ccg cag aaa gag cca atg gat cag 1570

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 att cag gca aca ata tct ttg aat aca gac cag act aca gca tcc tea 1618

He Gin ala Thr He Ser Leu Asn Thr asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480 tcc ett cat get get tct eag cct caa gtg tte cag get ggg aca agt 1666

Sec Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin. Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495 aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat gca get cca tte cag 1714

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510 tee atg caa aeg gtg tte aat atg aat get oca gte cct cct get aat 1762

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525 gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac cag gcc act tat aac 1810

Gin Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Fvr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540 cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ett caa 1858

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560 caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac cat gga tec cag gac 1906

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr Ills Gly Ser Gin Asp 565 570 575 cag cct eat caa gtg cct ggt aac cae cag caa ccc cca cag cag aac 1954

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590 act ggc ttt cca cgt. age agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta 2002

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605 tct ega gga ggg tct cgt ggt gcc aga ggc ttg atg aat gga tac agg 2050

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Mat Asn Gly Tyr Arg 610 615 620 ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea 2098

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Xvr Arg Pro Ser 625 630 635 “ 640 tte teg aac act cea aac agt ggt feat tea cag tct cag tte act get 2146

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655 ccc egg gac tac tct ggt tac cag egg gat gga tat cag cag aat tte 2194

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Aap Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670 aag ega ggc tct ggg cag agt gga cca egg gga gcc cca ega ggt aat 2242

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 ata ttg tgg tgg tga tcetagctcc tatgfcggage ttctgttctg geettggaag 2297

He Leu Trp Trp 690 aactgttcat agtecgcatg taggttaeat gttaggaata catttatctt ttccagactt 2357 gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt. cabcttgaat ccaaatttta 2417 atttttgaat gactttceet gctçfctgtet tcaaaatcag aacattttct ctgcctcaga 2477 aaagcgtttt tccaactgga aatttafcttt tcaggtctta aaaootgcfca aatgttttta 2537 ggaagtaeet astgaaaett tttgtaagas atttttggaa egagcttgaa eatttatata 2597 aattt.at.tac cctctttgat ttfctgaaaca tgcatafctat atttaggctg agaagcecfct 2€57 eaaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccafc ttagaattga cataactaat 2717 ctaaaefctga, aaacttttag g&acaafcgtt agtgttctaa ataccaacat atttctgatg 2777 tttaaaeaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat taaaatttag aatgaeaagc 2837 ttaagagget ttagttteat ttgttfcttea agtaafcgaaa aataatttet tacatgggca 2897 gatagttaat ttgttgaaca attaoaggta gcattfccatg taatotgatg ttctaaatgg 2957 ttctcttatt gaaggaggtt aaagaafctag gttfccttaca gfcttttggc.t ggccatgaca 3017 tgtataaaafc gtatattaag gaggaattafc aaagtaettt aattfcgaatg ctagtggeaa 3077 ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg gtcatctggg aaaaatactg 3137 aagtatcaaa ggtatttgea tgfcgaatgfcg ggttatgtte tfcetateece ccttgtagca 3197 tattctatga aagttgagtt aaatgatagc taaaatatct gtttcaacag catgtaaaaa 3257 gttattttaa etgttaeaag teattataca attttgaatg ttctgtagtt tetttttaae 3317 agtttaggfca caaaggtctg ttttcafctct ggtgcfcfcttt afctaatfctfcg atagtatgat. 3377 gtoacttcot attgaaatgt aagctagcgt gtaoettaga atgtgagctc catgagagca 3437 ggtaeettgfc fctgtettcac tgctgtafcct attcccaacg cctcatgaca gtgeetggea 3497 catagtaggc acteaataaa tacttgttga atgaatgaaa aaaaaaaaaa a 3548

<210> 26 <211> 692 < 212 > PRT <213 > Mus museu 1us <4G0> 26

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Vai Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Vai lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu. Arg Leu Asn Gin. Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Gli3 Leu Glu Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin. Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin. Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Vai Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Vai Asp ISO 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Vai Glu Arg Vai Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu 275 280 295

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320 vai vai Asn Ser Lev Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ser Asp Pro Leu Vai 330 345 350

Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe rie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala Ila Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 330 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 ~ 410 415

Gin Ser Aan Gin val Pro val Gin Pro Glu Ala Thr Gin val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin. 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 430 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin. 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Glu Pro His Gin Val Glu Glu Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Ph® Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro S®r 625 630 " 635 ~ €40

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 lie Leu Trp Trp 690 < 210 > 27 <211> 3508

< 212 > ADN <213> Mus musculus < 2 2 0 >

<221> CDS <222> (139) . . ¢2217) <223 > <4Q0> 27 cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgccfcgccc gcocgcocgc tgcgcgtfctfc gtocogogtc 60 teteeeegte egteteetga cttgctggtc ttgtccttcc etecegetfct tttcctctcc 120 tctcttotog gtetaaag atg ccc teg gee ace age eae age gga age gge n1

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga eeg eeg eeg eeg tee ggt tee tee ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 geg geg gee ggg gea get gog cog got tot cag cat cog goa aoc ggc 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin Kis Pro Ala Thr Gly 30 35 40 ace gge gee gfce eag ace gag gee atg aag eag att etc gge gta ate 315

Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin He Leu Gly Val He 45 50 55 gac aag aaa ctt egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat 363

Asp Lys Lya 1.61'. ft re As;' Lau Glu Lys Lys LyA Gly Lys L@u Asp Asp 60 65 70 75 tac cag gaa aga atg aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac sag ctg 411

Tyr Gin Glu Atg Met Asn Lys Gly Glu Atg Let Asn Gin Asp Girt Leu 80 85 30 gat gee gta tet aag tae cag gaa gte aea aat aat ttg gag ttt gea 459

Asp Ala val Set Lys Tyr Gin Glu val The Asr* Asn Leu Glu Ph.e Ala 35 100 105 aag gaa tta cag agg agt ttc atg gea tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Glii Arg Set Phe Met Ala Leu Set Gin Asp lie Gin Lys 110 115 120 aea ata aag aag aea gea cgt egg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gea 555

Thr He Lys Lys Thr Ala Atg Arg Glu Glri Leu Met Atg Glu Glu Ale 125 130 135 gaa cag aag ege tta aaa act gta ctt gag tta cag tat gta ttg gat 603

Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp 140 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aea gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651

Lys Leu Gly Asp Asp Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser 160 165 170 gga gtg cca ata ttg tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc 699

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Fhe 175 180 185 tac aag etc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 190 195 200 cag tat gaa cat gcc tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

Gin Tyr Glu His Ala Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys 205 210 215 gaa aag cct gtg tgt gga aea acc tat aaa get eta aag gaa att gtt 843

Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr tyr Lys Ala Leu Lys Glu He val 220 225 230 235 gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891

Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asm His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg get tea geg cec aea gtg gag 333

Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr val Glu 255 260 265 gac cag gta get gaa get gaa cct gag cea geg gaa gaa tac aea gag 387

Asp Gin val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu 270 275 280 caa agt gag gtt gaa tea aea gag tat gte aat agg aag ttc atg gea 1035

Gin Ser Glu val Glu Ser Thr Glu Tyr val Asn Arg Gin Phe Met Ala 2Θ5 290 285 gaa aea cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aea 1083

Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 315 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tea etc cag cag eaa cct cag get 1131

Val Glu Thr val Glu Val val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 geg tee cct tea gtc cca gag ccc eae tet ttg act cca gtg get cag 1179

Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin 335 340 345 tea gat cca ett gtg aga agg cag cgt gta eaa gat. ett atg gca eaa 1227

Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin 350 355 360 atg eaa ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa 1275

Met Glri Gly Pro Tyr Asn Phe He Sirs Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu 365 370 375 aat cag aeg ett gat cct gee att gta tee gca cag cct atg aac cot 1323

Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro 380 335 390 335 ace cag aac atg gat atg cct cag cfcg gtfc fcge cct cag gtt cat tet 1371

Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser 400 405 410 gaa tet aga ett gee eaa tet aat eaa gtt cct gta eaa cca gaa gee 1419

Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala 415 420 425 aca cag gtt cot ttg gtt tea tee aca agt gag ggg tat aea gca tet 1467

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Gin Pro Leu Tyr Gin Fro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin lys 445 450 455 gag cca atg gat oag att cag gaa aca ata tet ttg aat aea gac cag 1563

Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser leu Asn Thr Asp Gin 460 465 470 475 act aea gca tee tea tec ett eet, get get tet cag eat eaa gtg ttc 1611

Thr Thr Ala Ser Ser Ser leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe 480 485 490 cag get. ggg aca agt. aaa cct ttg eae age agt gga ate aat gta aat 1659

Gin Ala Gly Thr Ser Lya Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Aan 495 500 505 gca get cca ttc cag tee atg eaa aeg gtg ttc aat atg aat get cca 1707

Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro 510 515 520 gtc eet cat get aat gaa cca gaa aeg tta aaa eaa cag agt cag tac 1755

Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr 525 530 535 cag gee act tat aac cag agt ttt tec agt eag cct eae eaa gtg gaa 1803

Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu 540 545 550 555 caa aca gag ctt eaa caa gae caa ctg eaa acg gtg gtt ggc act tac 1851

Gin Thai Glu Leu Gift Gin Asp Gin Leu Gin Thr val val Gly rhr Tyr 560 565 570 cat gga tec cag gae cag ect cat caa gtg cct ggt aac cac eag caa 1899

His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asm His Gin Gin 575 580 585 ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca cgt age agt cag cot tat tac 1847

Pro Pro Gin. Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr 590 595 600 aac agt cgt ggg gta tot ega gga ggg tet cgt ggt gcc aga ggc ttg 1995

Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly lee 605 610 615 atg aat gga tac agg ggc ect gee aat gga ttt aga gga gga tat gat 2043

Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Pile Arg Gly Gly Tyr Asp 620 625 630 635 ggt tac ege cct tea fcte teg aac act cca aac agt ggt tat tea cag 2091

Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tvr Ser Gin 640 645 650 tet cag ttc act get ccc egg gae tac tet ggt tac cag egg gat gga 2139

Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly 655 660 665 tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg- gga 2187

Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly 670 675 680 gee eca ega ggt aat ata ttg tgg tgg tga fceetagetee tatgtggagc 2237

Ala Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 685 690 ttetgttctg geettggaag aaetgtteat agteegeatg taggttaeat gttaggaata 2297 catttatctt ttccagactt gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt 2357 catcttgaat ccaaatttta atttttgaat gactttccct gctgi.tgt.ct teaaa&tcag 2417 aacattttet etgcctcaga aaagcgtttt teeaaetgga aatttatttt teaggtetta 2477 aaacctgcta aatgttttta ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa 2537 egagettgaa catttatata aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat 2597 atttaggetg agaagccctt eaaatggcca gataagccac agttttagct agagaaecat 2657 ttagaattga cat.aae.taat ctaa.actt.ga ae.acttt.tag gaccaatgtt agtgttctaa 2717 ataceaaeat atttctgafcg tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat 2777 taaaafcttag aatgacaage ttaagagget ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa 2837 aataatttct tacatgggca gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg 28.97 taatctgatg ttctaaatgg ttetettatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca 2557 gtttttggct ggceatgaca tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt 3017 aatttgaatg ctagbggcaa ttgatcatta agaaagtaet ttaaagcaaa aggttaatgg 3077 gtcatctggg aaaaatactg aagtatcaaa ggtatttgoa tgtgaatgtg ggttatgfctc 313? tfcctatccca cettgtagoa fcattetatga aagtfcgagtt aaatgatagc taaaatatct 3137 gtttoaacag catgtaaaaa gttatttfcaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg 3257 ttetgtagifc tctttttaac agtttaggta caaaggtctg ttttcattct ggtgettttt 3317 attaafctttg atagtatgat gtcactt.ccfc attgaaatgfc aagctagcgt gtacctfcaga 3377 atgtgagetc eatgagagca ggtaeettgt fctgtetteae tactgtatct attcccaacg 3437 cctcafegaca gtgacfcggca catagtaggc actca.5f,aaa tacfctgttga atgaafcgaaa 3437 aaaaaaaaaa a 3503

< 210 > 28 <211> 692 < 212 > PRT <213> Mus musculus <400> 28

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Her Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Her Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Sar Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala ¥al Gin 35 40 45

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Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 " 70 75 30

Asn Lys Gly Glu Arg Lets Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Yal Ser Lys 35 SO 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 155

Ala Arg Arg Glu Gin Lets Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Va1 Pro lie Leu l€5 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp ISO 135 130

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 230 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn See Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser val 325 330 335

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Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin val Pro Leu 420 425 430

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460

He Gin Ala Thr He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Pbe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Fro Val Fro Fro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asm 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Aan His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Fro Tyr Tyr Asn Ser Axg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 S30 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Fhe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Fro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asti 675 S80 685 lie Leu Trp Trp 690 < 210 > 2 9 <211> 2109

< 212 > ADN <213> Gallus gallus <220>

<221> CDS <222> (1) . . (2109) <223 > <400> 29 atg coo teg get acc aac ggc ace atg gag age age age ggg aag geg 43

Met Pro Ser Ala Thr Asm Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala 15 10 15 ggc ccg ggc ggc aae gag cag gee ceg geg geg gea geg geg gee ccg 96

Gly Pro Gly Gly Asm Glu Glm Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30 eag geg teg ggc ggc age ate acc teg gtt cag acc gag gee atg aag 144

Glm Ala Ser Gly Gly Ser lie Xhr Ser Val Glm Thr Glm Ala Met Lys 35 40 45 cag ate ttg gga gtg ate gac aaa aag etc ege aac etc gag aag aaa 192

Glm lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asm Lem Glu Lys Lys 50 55 60 aag age aaa ett gac gat tac eag gaa ega atg aac aag ggg gaa egt 240

Lys Ser Lys Lew Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asm Lys Gly Glu Arg 65 70 75 8θ" eta aat caa gat caa ctg gat gca gtg tea aaa tac eag gaa gtg aca 283

Lem Asm Gin Asp Glm Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr 85 90 95 aat aac ctg gaa ttc get aaa gaa ctg eag agg age ttt atg gca ctg 336

Asm Asm Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 100 105 110 age caa gat ate cag aaa aca ata aaa aag aeg get ege agg gag cag 384

Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125 ctg Atg aga gaa gag gat gag cag aag egt tta aag act gtg ata gag 432

Leu Met Are Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu 130 135 140 ctg cag ttc att ttg gac aag ttg ggt gac gat gaa gtg ege agt gac 480

Leu Gin Phe lie Leu Asp Lye Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Ser Asp 145 150 155 ’ 160 ttg aas asa gga tea aat gga gfca ccg gta atg aca gag gag gaa ctg 528

Leu Lys Gin Glv Ser Asn Gly Val Pro Val Leu Thr Giu Giu GIu Leu 165 170 175 aca atg ctg gat gaa ttt tac aag eta gtt tac cct gaa agg gac atg 576 rhr Met Leu asp Giu Fhe Tyr Lys Leu val Tyr Fro Giu Arg Asp Met 180 185 190 aac atg agg ttg aat gag cag tat gag caa gca tot gtt cac ctg tgg 624

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Ala Leu Lys Giu Val Val Giu Arg lie Leu Gin Thr Ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240 age aec cat aac eat cag aac ggg tta tgt gag gaa gaa gag gca gca 768

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Ala Giu Giu Phe Thr Giu Pro Thr Giu Val Giu Ser Thr Giu Tyr Val 275 280 285 aac aga caa ttc atg gca gag act cag ttc age agt agt gag aag gaa 912

Asn Arg Gin Fhe Met Ala Giu Thr Gin Fhe Ser Ser Ser Giu Lys Giu 290 295 300 cag gta gat gag tgg aca gtt gaa aeg gtt gag gtt gta aat tea ctg 960

Gin Val Asp Giu Trp Thr Val Giu Thr Val Giu Val Val Asn Ser Leu 305 310 315 320

cag caa caa aca caa get aca tet cct cca gtt cct gaa cct cat aca 1QQB

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Giu Pro Has Thr 325 330 335 etc act act gtg get caa gca gat cct ett gtt aga aga cag aga gta 1056

Leu Thr Thr Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 340 345 350 cag gac ett atg gcc cag atg cag ggt cca tat aac ttc atg cag gac 1104

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gin Asp 355 360 365 tet atg atg gag ttt gag aaa cag aca ett gat act gca att gta tat 1152

Ser Mat Leu Giu Phe Giu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala He Val Ser 370 375 380 gca cag ccc atg aat cca gca cag aat ttg gac atg ccg caa atg gtc 1200

Ala Gin Pro Met Aan Pro Ala i^ln Aan Leu Asp Met Pro Gm Met Val 385 390 395 400 tgc cct aca gtt cat act gag tea aga ett gcc cag cct aat caa gtt 1248

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Pro Val Gin. Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 420 -125 430 gag gga tat aca gee tec cag ccc atg tat cag cct tet cat ace aca 1344

Glu Sly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser His Thr Thr 435 440 445 gag caa egg cea cag aag gaa tee att gac cag att cag get tea atg 1392

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Ser lie Asp Gin lie Gin Ala Ser Met 450 455 * 460 tea ctg aat gca gac cag acc ccg tea tea tea tea ett cec act gea 1440

Ser Leu Asn Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 470 475 480 tec cag ccg caa gtt ttc caa get gga tet age aaa cct ttg cat age 1483

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu Kia Ser 485 ’ 490 ’’ 495 age gga ate aat gtt aat gca get cca ttc caa tee atg caa aca gta 153£

Ser Gly lie Asn Val &sn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 500 505 510 ttc aac atg aat gca cct gtt cct cct gtt aat gag cca gaa gee ett 1584

Phe Asm Met Aan Ala Pro Val Pro Pro Val Aan Gin Pro Glu Ala Leu 515 520 525 aag caa caa aat cag tae cag gee agt tac aac cag agt ttc tee aat 1632

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540 cag eca cac caa gta gaa caa tea gat ett cag caa gaa cag etc cag 1630

Gin Pro His Gin Val Glu Gin Sar Asp Leu Gin Gin Glu Gin Lau Gin 545 550 555 560 aca gtg gtt ggt act tac cat ggt tet ccg gac cag acc cat caa gtg 1723

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Val 565 570 575 gca gga aac cac cag caa cct ccc cag cag aat act gga ttt cca ege 1776

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590 aac agt cag cct tat tac aac agt egg gga gtg tet cgt ggt gga tea 1824

Aan Ser Gin Pro Tyr Tyr Aar. Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605 cgt ggg act cgt gga ttg atg aat ggt tac agg gga cct gca aat gga 1S72

Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620 ttt aga gga gga tat gat gga tac cgt cat tea ttt tee aac act cag 1920

Phe Are Gly Gly Tyr As® Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro S25 630 É35 640 aac agt. ggt tac aeg cag ccc caa ttt aat get cct ega gat tat tea 1968

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 ’ 655 aac tac cag egg gat gga tat cag cag aae ttc aaa cgt ggt tet gga 2016

Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670 caa agt ggg cct egg gga get, get ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga 2064

Gin Ser Giv Pro Arg Gly Ala Pro Are Gly Arg Giv Giv Pro Pro Arg 675 680 ...... 685 cca aac aga ggg atg cct caa atg aac get cag caa gtg aat taa 2103

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<211> 702 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 30

Met Pro Ser Ala Thr Asn Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala 15 10 15

Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gin Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30

Gin Ala Ser Gly Gly Ser He Thr Ser val Gin Thr Glu Ala Met lys 35 40 45

Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys 50 55 60

Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80

Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr 85 90 95

Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala leu 100 105 110

Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125

Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg leu Lys Thr Val leu Glu 130 135 * 140

Leu Gin Phe LI© Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arq Ser Asp 145 150 155 160 leu Lys Gin Gly Ser Asn Gly Val Pro Val leu Thr Glu Glu Glu leu 165 170 175

Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Tyr Pro Glu Arg Asp Met 180 185 190 .«.sei Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Glr. Ala Ser Vai His Leu Trp 195 200 205

Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys 210 ” 215 220

Ala Leu Lys Glu Vai Vai Glu Arg lie Leu Gin Thr Ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 250 255

Pro Thr Pro Ala Vai Glu Asp Thr Vai Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270

Ala Glu Glu Fhe Thr Glu Pro Thr Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val 275 280 285

Asn Arg Gin Fhe Met Ala Glu Thr Gin Fhe Ser Ser Ser Glu Lys Glu 290 295 300

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 305 310 315 320

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Thr 325 330 335

Leu Thr Thr Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 340 345 350

Gin Asp leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asm Phe Met Gin Asp 355 360 365

Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 370 375 380

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Lev. Asp Met Pro Gin Met Val 385 390 395 400

Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 405 ' 410 415

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 420 425 430

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser His Thr Thr 435 440 445

Glu Gin Arg Pro Gin lys Glu Ser lie Asp Gin lie Gin Ala Ser Met 450 455 460

Ser Leu Asn Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 470 475 480

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser 485 490 495

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 500 505 510

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Ala Leu 515 520 525

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540

Gin Pro His Gin Val Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin 545 550 555 560

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Val 565 570 575

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590

Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605

Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 " 630 635 640

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655

Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 675 680 685

Pro Asn Arg Qly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Val Asa 690 695 700 <210> 31 <211> 20 < 212 > ADN <213> Artificial < 2 2 0 > <223> Iniciador T3 < 4 0 0 > 31 aattaaccct cactaaaggg 20 <210> 32 <211> 19 <212> ADN <213> Artificial < 2 2 0 > <223> Iniciador T7 <40Q> 32 taatacgact cactatagg 19 <210> 33 < 211> 18 < 212 > ADN <213> Artificial <220> <223> Iniciador <400> 33 aaggtttgaa tggagtgc 18 <21Q> 34 <211> 18 < 212 > ADN <213> Artificial <220> <223> Iniciador <400> 34 tgctcctttt caccactg 18 < 210 > 3 5 <211> 18 < 212 > ADN <213> Artificial < 2 2 Q > < 2 2 3 > Ini c i ado r GAPDH <4G0> 35 gggctgcttt taactctg 18 <210> 36 < 211> 18 < 21 δ > ADINj <213> Artificial < 2 2 Q > <223> Iniciador GAPDH <400> 36 ccaggaaatg agcttgac 18 <210> 37 <211> 25

< 212 > PRT <213 > Homo sapiens < 4 0 0 > 3 7

Gin Xla "Leu Gly V&l Xla Asp Lys Lys Leu Arg Asn Lea Glu lys Lys 15 10 15

Lys Gly Lys Lau Asp Asp Tyr Glu Gla 20 25 <210> 38 <211> 22 <212> ADN <213> Artificial < 2 2 0 > <223> Iniciador <40Q> 38 aggtsharct gcagsagtcw gg 22 <210> 39 <211> 23 < 212 > ADN <213> Artificial <220> <223> Iniciador <400> 39 ctcgagttaa ttcacttgct gag 23 <210> 40

< 211 > 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 40

Sss Tyr Trp lie Glu 1 5 < 210 > 41 < 211 > 1 /

< 212 > PRT <213> Mus musculus < 4 0 0 > 41

Glu 11® Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Asn Glu. Lys Plus Ly® 15 10 15

Gly < 210 > 4 2 < 211> 11

< 212 > PRT <213> Mus musculus <400> 42

Tyr Tys: Trp Tyr Phe Asp Yal Trp Ala Gin Asp 15 10 <210> 43 <211> 111

< 212 > PRT <213> Mus musculus < 4 0 Q > 4 3

Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Vai Lys lie Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Trp He Glu Trp Vai Lys Gin Arg Pro Gly hie Gly Leu Glu Trp Ile 35 4θ” -45

Gly Glu lie Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr Cya 85 30 ' 95

Ala Ser Tyr Tyr Trp Tyr Phe Asp Vai Trp Ala Gin. Aap His Vai 100 105 110 <210> 44 < 211 > 5

< 212 > PRT <213> Mus musculus <400> 44

Ser Phe Gly Met His 1 5

<210> 45 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus < 4 0 0 > 4 5

Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Thr Vai Lys 15 10 15

Gly

< 210 > 4 6 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <4ΟQ> 46 lie Gly Thr Thr Thr Gly Pro Arg His His Phe 15 10 <210> 47 < 211> 113

< 212 > PRT <213> Mus musculus <40Q> 47

Asp Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15~

Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Glu lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Tyr Lie Ser Ser Gly Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Pro lys Asn Thr leu Phe 65 70 75 80

Leu Gin Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Ser Thr lie Gly Thr Thr Thr Gly Pro Arg His His Phe Thr Leu 100 105 ’ 110

Arg < 210 > 4 8

< 211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48

Ser Ser Lys Asn Leu Leu Hís Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr 15 10 15

<210> 49 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <4 00> 49

Arg Vai Ser Asri lets Ala Ser 1 5 <21Q> 50

< 211 > 9 <212> PRT <213> Mus musculus < 4 0 0 > 50

Ala Gin leu Leu Glu Leu Pro Tyr Thr 1 5 < 21Q > 51 < 211> 109

< 212 > PRT <213 > Mus museu 1us <4Q0> 51 ile ¥al Thr Gift &Xa Ais. Pfte Ser As;'. pro Yel Thr Leu Gly Thr 15 10 15

Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Asn Leu Leu His Ser Asn 20 25 30

Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gin Arg Pro Gly Gin Ser Pro 35 40 "45

Gin Leu Lera lie Tyr Arg Val Ser Asn Leu Ala Ser Gly Vai Pro Asn 50 55 60

Arg Pile Ser Gly Ser Gin Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg lie Ser 65 * 70 75 80

Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gin Lew Lew 85 " 90 95

Glu Leu Pro Tyr Thr Ser Glu Gly Thr Lys Arg Trp Glu 100 105 <210> 52 <211> 333

< 212 > ADK < 213 > Mus muscu1 us <4G0> 52 eaggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60 tectgeaagg ctactggcta cacattcagt agctactgga tagagtgggt aaagcagagg 120 cctggacatg gccttgagtg gattggagag attltacctg gaagtggtag tac.taact.ac. 130 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattc actgcagata catcctccaa cacagcctac 240

atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgccgbct attaatgtgc aagttactac 30Q tggtacttcg atgtcc.gggc gcaggaceac gta 333 <210> 53 <211> 327

< 212 > ADK <213 > Mus muscu1 us <400> 53 attgtgatga egeaggetge cttctccaat coagtcactc ttggaacatc agcttccatc 60 teetgeaggt ctagtaagaa tctectaeat agtaatggca tcacttattt gtattggtat 120 «tgcagagge caggccagtc tcctcagctc efcgatatate gggfcgtccaa tctggcctca 180 ggagtcGcaa acaggtfceag tggsagtgag tcaggaaefcg atfcfccacact gagaateagc 2410 agagtggagg ctg&ggatgt gggtgtttat tsctgtgoto aactgctaga acfecccgtac 300 acsgteggagg ggaccaagcg ctgggag 327 <210> 54 '•c £ 1 i ,·* 2

< 212 > ADM <213> Artificial < 2 2 0 > <223> Iniciador <400> 54 aggtsharct gcagsagtcw gg 22 <210> 55 <211> 34 <212> ADN <213> Artificial < 2 2 0 > <223> Iniciador <40Q> 55 t9a99agac9 gtgaccgtgg tcccttggcc ccag 34 <210> 56 <211> 27 < z. 12 > ADN <213> Artificial < 2 2 0 > <223> Iniciador <400> 56 tccgatatcc: agctgaccca gtctcca 2 7 <210> 57 <211> 31 < 212 > ADN <213> Artificial <220> <223> Iniciador < 4 0 0 > 57 gtttgatctc cagcttggta cchscdccga a 31 <21Q> 58 < 211> 15 < 212 > ADN <213> Artificial < 2 2 Ο > <223> Iniciador <400> 58 agtcacgacg ttgta 15 <210> 59 < 211> 17 < Δ12 > ΔΟΝ <213> Artificial < 2 2 0 > <223> Iniciador <400> 59 caggaaacag ctatgac 17 < 21Q > 6 0 < 211 > 5

< 212 > PRT <213> Mus musculus <400> 60

Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 < 210 > 61 < 211> 17

< 212 > PRT <213> Mus musculus <400> 61

Tyr 11® Ser Ser Gly Ala Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr vai Lys 15 10 15

Sly <210> 62 < z11> 11

< 212 > PRT <213> Mus musculus <400> 62

His Phe Tyr Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 15 10 <210> 63

< 211> 109 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 63

Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser leu Lys leu Ser Gys Ala 15 10 15

Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp lie Arg Gin 20 25 30

Thr Pro Glu lye Arg leu Glu Trp Val Ala Tyr lie Ser Ser Gly Ala 35 40 45

Gly 3er Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val lys Gly Arg Phe Thr Val Ser 50 " 55 60

Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Ser Ser Leu Lys

65 70 75 SO

Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg His Phe Tyr Arg Phe 85 80 B5

Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 100 105 <210> 64

<210> 65 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <4 00> 65

Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 66 <211> 9

< 212 > PRT <213> Mus musculus < 4 Ο Ο > 66

Gin Gin Asp Asp Arg Ph® Pro L®u Thr 1 5 <210> 67

< 211> 113 <212> PRT <213> Mus musculus < 4 0 Q > 6 7

Leu Lew Leu Cys Val Ser Gly Ala Pro Sly Ser lie Val Met Thr Gin 15 10 15

Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly Asp Arg lie Thr lie Thr 20 25 30

Cys Lys Ala Ser Gin Ser Val Ser Asn Asp Val Ala Trp Tyr Gin Gin 35 40 45

Lys Pro Gly Sin Ser Pro Lys Leu Leo lie Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg 50 55 SO

Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp 65 70 75 80

Phe Thr Phe Thr lie Ser Thr val Sin Ale Gin Asp Leu Ala Val Tyr 85 30 95

Phe Cys Gin Gin Asp Asp Arg Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Sly Pro 100 105 110

Ser

< 210 > 6 8 <211> 327 < 212 > ADN <213> Mus musculus <400> 68 gggggagget tagtgaagee tggagggtcc ctgaaactct cctgtgcagc ctotggattc 60 gctttcagta. gctatgacat gtcttggatt cgccagactc cggagaagag gctggaatgg 120 gtegcataca ttagcagtgg tgctggtagc acctactatc cagacactgt gaaaggecga 180 ttcaccgtct ccagag&eaa tgccaagaac accctgtatc tgcaaatgag cagtctgaag 240 tctgaggaca cagccatgta tfcactgtgca agacatttct accgct.tt.ga ctactggggc 300 caagggaeca cggteacegt ctcctca 327 < 210 > 69 <211> 339

< 212 > ADN <213> Mus musculus <400> 69 ctactgctct gtgtgbebgg tgctccbggg agrtattgtga tgacccagac kcccaaattc 60 ctgcttgtafc. cagcaggaga caggattacc atcacctgca aggccagtca gagtgtgagt 120 aatgatgtag cttggfcacca acagaagcca gggcagtctc Gtaaacfcact gatatacfcat 130 gcãt.^cââtc gctacactgg agteccfcgat egctfceaetg geagtggata fcgggaeggat 540 ttcaebttca ccatcagcac kgtgcaggct gaagacctgg cagtltabtt, cbgfccagcag 300 gatgataggt. ttcctcteae gttcggtgct. ggaccaagc 333 <210> 70 <211 > .339

< 212 > ADN <213> Mus musculus < 4 0 0 > 7 0 gatgtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc ccggaaactc 60 tectglgeag cctctggatt cactttcagt agctttggaa tgcactgggt tcgtcaggct 120 ccagagaagg ggcfcggagtg ggtcgcatae attagtagtg geagtagtac eatetaetat 180 gcagacacag tga&gggceg attcaccatc tccagagaca atcccaagaa caccctgttc 240 ctgcaaatga ccagtctaag gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagtacfcata 300 ggt.acgact.3 ctgggccaag gcaccacttc acgctccgc 339

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, ο IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões,

Documentos de patente referidos na descrição ® US 5698396 A [0007] ® US 20080075722 A [0007] • WO 2005100998 A [0007] • WO 02078524 A [0009] • WO 0243478 A [0060] • WO 02092812 A [0060] • JP 2007530068 A [0061] • WO 9846777 A [0061] • EP 239400 A [0068] • WO 9602576 A [0068] • WO 9951743 A [0068] • JP 2010023453 A [0178] • JP 2010183161 A [0178]

Documentos de não patente citados na descrição • TSUYOSHI AKIYOSHI. Gan To Kagaku-Ryoho, Cancer and Chemotherapy Publishers, Inc, 1997, vol. 24, 551-519 [0008] • BRUGGEN P. et al. Science, 1991, vol. 254, 1643-1647 [0008] • Proc, Natl. Acad. Sei. U.S.A, 1995, vol. 92, 11810-11813 [0008] • Int. J. Cancer, 1997, vol. 72, 965-971 [0008] • Cancer Res., 1998, vol. 58, 1034-1041 [0008] • Int. J. Cancer, 1998, vol. 29, 652-658 [0008] • Int. J. Oncol., 1999, vol. 14, 703-708 [0008] • Cancer Res., 1996, vol. 56, 4766-4772 [0008] • Hum. Mol. Genet, 19 97, vol. 6, 33-39 [0008] • J. Biol. Chem., 1995, vol. 270, 20717-20723 [0008] ® J. Immunol., 2004, vol. 172, 2389-2400 [0008] ® KOLOBOVA et al. Exp. Cell. Res. , 2009, vol. 315 (3), 542-555 [0010] • Proc. Nat 1. Acad. Sci. U.S.A., 1993, vol. 90, 5873-5877 [0029] • ALTSCHUL et al. Nucleic Acids Res., 1997, vol. 25, 3389-3402 [0029] • Protein Chemistry IV. Chemical Modification and Peptide Synthesis. TOKYO KAGAKU DOZIN, 1981 [0032] • Current Protocols in Molecular Biology. SAMBROQK et al. Molecular Cloning. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 [0032] • A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular

Biology. AUSUBEL et al. Short Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, 1995 [0032] [0033] • Current Protocols in Molecular Biology. SAMBROOK ; AUSBEL et al. Molecular Cloning. 1989 [0034] • J. Immunol., 1979, vol. 123, 1548-1550 [0049] • Current Topics in Microbiology and Immunology, 1978, vol. 81, 1-7 [0049] • KOHLER. G. I MXLSTEJN, C. Bur. J. Immunol., 1976, vol. 6, 511-519 [0049] • MARGULIES. D. H. et al. Cell, 1976, vol. 8, 405-415 [0049] • SHULMAN, M. et al. Nature, 1978, vol. 276, 269-270 [0049] • GRGTH, S. F. et al. J. Immunol. Methods, 1980, vol. 35, 1-21 [0049] • TROWBRIDGE, I. S. J. Exp. Med., 1978, vol. 148, 313-323 [0049] • GALFRE, G. et al. Nature, 1979, vol. 277, 131-133 [0049] • KOHLER, G. I MJLSTEXN, C. Methods Enzymol., 1981, vol. 73, 3-46 [0050] • CARL, A. K. BORREBAECK ; JAMES, W. LARRICK. THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES. MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990 [0062] • SATO, K. et al. Cancer Research, 1993, vol. 53, 851-856 [0068] • SATO K. et al. Cancer Research, 1993, vol. 53, 851-856 [0069] • HASHIMOTO-GOTOH, T. et al. Gene, 1995, vol. 152, 271-275 [0074] ® ZGLLER, MJ. ; SMITH, M, Methods Enzymol., 1983, vol . 100, 468-500 [0074] • KRAMER, W. et al. Nucleic Acids Res. , 1984, vol. 12, 9441-9456 [0074] • KRAMER, W. ; FRITZ, HJ. Methods Enzymol., 1987, vol. 154, 350-367 [0074] • KUNKEL, TA. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1985, vol. 82, 488-492 [0074] • KUMKEL. Methods Enzymol., 1988, vol. 85, 2763-2766 [0074] • RABAT at al. Sequences of Proteins of Immunological Interest. National Institute of Health, 1991 [0083] • SAMBROOK et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 [0084] • G. -B. KIM et al. Protein Engineering Design and Selection, 2007, vol. 20 (9), 425-432 [0087] • P. J. DELVES. ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES. WILEY, 1997 [0089] • P. SHEPHERD ; C. DEAN. Monoclonal Antibodies. OXFORD UNIVERSITY PRESS, 2000 [0089] • J. W. CODING. Monoclonal Antibodies : principles and practice. ACADEMIC PRESS, 1993 [0089] • JONES, S. T. ; BENDING, Μ. M. Bio/Technology, 1991, vol. 9, 88-89 [0156]

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. um anticorpo ou fragmento do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento tem uma atividade citotõxica contra uma célula de cancro que expressa uma prGteína de CAPRIN-1 e: (a) liga-se a um polipéptido que consiste na sequência de aminoâcidos representada pela SEQ ID MO: 37; ou (b) reconhece um fragmento que consiste em 7 a 12 aminoâcidos da sequência de aminoâcidos da SEQ ID NO:37, com a condição de que o anticorpo ou fragmento do mesmo não se liga a um polipéptido que consiste na sequência de aminoâcidos Arg-Asn-Leu-Glu-Lys-Lys-Lys-Gly-Lys-Leu-Asp-Asp-Tyr-Gln ou um fragmento que consiste em 7 a 12 aminoâcidos da mesma, 2. 0 anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com a reivindicação 1, em que o anticorpo ou fragmento do mesmo é monoclonal, 3. 0 anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com a reivindicação 1, em que o anticorpo ou fragmento do mesmo é policlonal. 4. 0 anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, que é um anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo quimérico, anticorpo de cadeia simples, ou anticorpo bi-específico.
5. Uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores como um ingrediente ativo.
6. A composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5, que compreende ainda um agente anti-tumoral.
7. Uma composição farmacêutica, que compreende a composição farmacêutica da reivindicação 5 e uma composição farmacêutica contendo um agente anti -tumoral. 8 . 0 anticorpo ou fragmento do mesmo acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5 ou reivindicação 6 ou a combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 7, para utilização num método para tratar e/ou prevenir um cancro. 9. 0 anticorpo, fragmento ou composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 8, em que o método compreende administrar a um indivíduo o anticGrpo ou fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 ou a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5 e um agente anti -tumoral.
10. Um agente anti-tumoral para utilização num método para o tratamento e/ou a prevenção de um cancro, em que o método compreende administrar a um sujeito o agente anti tumoral e um anticorpo ou fragmento do mesmo de acordG com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 ou a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5. 11. 0 anticorpo, fragmento, composição farmacêutica, combinação farmacêutica ou agente anti-tumoral para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 10, em que o cancro é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro pulmonar, mastocitoma, cancro renal, cancro da cérvix uterina, cancro da bexiga, cancro esofágico, cancro gástrico, ou cancro colorretal.