PT2230253E - Anticorpos contra um homólogo da glicoproteína p de mdr no cromossoma 7p15-21 e suas utilizações - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "ANTICORPOS CONTRA UM HOMÓLOGO DA GLICOPROTEÍNA P DE MDR NO CROMOSSOMA 7P15-21 E SUAS UTILIZAÇÕES"

Campo da Invenção A invenção refere-se a sequências genéticas que codificam proteínas que apresentam particularidades estruturais e funcionais características de membros da família da glicoproteína P associadas a resistência de cancros a múltiplos fármacos, funções imunorreguladoras e funções únicas em células estaminais pluripotentes humanas e outras células progenitoras de tecido. A invenção abrange proteínas consideravelmente puras, tratamentos terapêuticos e utilizações em diagnóstico relacionadas com estas proteínas.

Antecedentes da Invenção A glicoproteína P, uma bomba de efluxo de fármacos dependente de adenosina trifosfato (ATP), está sobre-expressa em células tumorais resistentes a múltiplos fármacos (MDR). Ela reduz a concentração intracelular de xenobióticos citotóxicos, diminuindo deste modo a eficácia de muitos regímenes quimioterapêuticos contra o cancro. A glicoproteína P pertence à superfamília ABC (cassete de ligação a ATP) de transportadores activos e é codificada por uma família de múltiplos genes em eucariotas superiores. Os membros da família da glicoproteína P de mamíferos podem ser divididos em três classes. As glicoproteínas P de classe I e classe II conferem resistência a múltiplos fármacos enquanto as proteínas de classe III não. 2

Nos humanos, a glicoproteína P é codificada por dois genes ligados ("MDR1" e "MDR3") no cromossoma 7q21.1. 0 MDR3 funciona como uma translocase de lipidos e mutações neste gene estão associadas a colestase intra-hepática familiar. 0 MDR1 confere resistência a fármaco em determinadas células cancerosas. Além de estar sobre-expressa em células cancerosas, a glicoproteína P de MDR1 é expressa de modo disseminado em tecidos humanos, predominantemente secretores e absortivos, normais onde actua em vários processos fisiológicos incluindo diferenciação celular, proliferação celular e sobrevivência celular. Nestes tipos de células normais, a glicoproteína P actua na libertação ou captação transmembranar de xenobióticos e determinados fármacos terapêuticos, moléculas de péptido pequeno, determinados compostos esteróides e fosfolipidos. A glicoproteína P também é expressa por populações de células linfóides da medula óssea humana e de sangue periférico. Especificamente, foi demonstrado que a glicoproteína P é expressa na membrana de células estaminais pluripotentes, monócitos, células dendríticas, linfócitos T CD4+ e CD8+, células assassinas naturais e linfócitos B. Nas células imunes, a glicoproteína P actua no transporte de citocinas e outras moléculas pequenas, as quais são críticas para que ocorram as respostas fisiológicas imunes. 0 bloqueio específico da glicoproteína P pode suprimir a resposta imunológica a aloantigénios e antigénios nominais. No entanto, existe um grau de redundância para a função da glicoproteína P nestes tipos de células, que aponta para a existência de outras moléculas relacionadas, até agora não identificadas. 3

As células estaminais pluripotentes e outras células progenitoras de tecido também possuem uma actividade tipo glicoproteína P única, caracterizada pela menor acumulação intracelular de corantes fluorescentes, o que permite o isolamento especifico deste tipo de células para utilizações terapêuticas. No entanto, julga-se que esta função não seja mediada pela glicoproteína P MDR1, mas antes por um membro relacionado com a família da glicoproteína P, até agora não identificado.

Apesar do papel irrefutável da glicoproteína P MDR1 na resistência de cancros a múltiplos fármacos, tentativas para melhorar a quimioterapia inibindo esta proteína tem sido conseguida apenas com um sucesso limitado. Assim, pode inferir-se que existem proteínas homólogas que, como a MDR1, são capazes de tornar as células resistentes aos agentes terapêuticos. Além disso, pode deduzir-se que as proteínas homólogas de MDR1 desempenham funções tipo glicoproteína P em tecidos fisiológicos humanos, em particular em células do sistema imunitário, células estaminais pluripotentes e células progenitoras de tecido, onde há redundância da função da glicoproteína P MDR1 ou onde se sabe que a glicoproteína P MDR1 não promove a actividade associada a glicoproteína P observada.

Sumário da Invenção A invenção é definida nas reivindicações apensas. A invenção baseia-se num novo membro da família de genes da glicoproteína P humana localizado no cromossoma 7pl5-2, que codifica proteínas as quais conferem o fenótipo multirresistente a células tumorais e/ou servem funções fisiológicas críticas em tecidos humanos normais. 4

Um exame da estrutura do novo gene indica que ele codifica duas metades homólogas semi-autónomas, cada uma com os seus próprios dominios transmembranares e de ligação a ATP. Através da expressão diferencial de genes e excisão-união alternativa e/ou modificações pós-transcrição e pós-tradução, o novo gene de glicoproteina P pode codificar várias glicoproteinas P distintas: A proteina de SEQ ID N0:1 (aminoácidos 1-659) é codificada por 14 exões (SEQ ID NO:9) de ADN genómico humano do clone AC005060 no cromossoma 7pl5-21 e é constituida por 5 dominios transmembranares e um domínio de ligação a ATP. A proteína de SEQ ID N0:2 (aminoácidos 1-812) é codificada por 19 exões (SEQ ID NO: 10) de ADN genómico humano dos clones contíguos AC002486 e AC005060 (AC002486 é o clone sequenciado à esquerda do clone AC005060) no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 5 domínios transmembranares e dois domínios de ligação a ATP, dos quais o primeiro está localizado no lado N-terminal do domínio transmembranar #1, e o segundo no lado C-terminal do domínio transmembranar #5 da proteína, do lado oposto da membrana do plasma. A proteína de SEQ ID NO: 2 também pode ser expressa como um resultado de trans-excisão-união do ARNm (SEQ ID NO: 9) que codifica a proteína de SEQ ID NO:l e do ARNm (SEQ ID NO:11) que codifica a proteína de SEQ ID NO: 3 descrita a seguir. Além disso, a proteína de SEQ ID NO:2 pode ser expressa como o resultado de processamento pós-tradução das proteínas de SEQ ID NO:l e NO: 3. A proteína de SEQ ID NO:3 (aminoácidos 1-131) é codificada por 6 exões (SEQ ID NO:11) de ADN genómico humano do clone 5 AC002486 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por um domínio de ligação a ATP e sem domínios transmembranares. A proteína de SEQ ID N0:4 (aminoácidos 1-1058) é codificada por 20 exões (SEQ ID NO: 12) de ADN genómico humano dos clones contíguos AC002486 e AC005060 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 8 domínios transmembranares e dois domínios de ligação a ATP, dos quais o primeiro está localizado entre os domínios transmembranares #3 e #4, e o segundo no lado C-terminal dos domínios transmembranares #8, do lado oposto da membrana do plasma. A proteína de SEQ ID NO:5 (aminoácidos 1-1222) é codificada por 23 exões (SEQ ID NO: 13) de ADN genómico humano dos clones contíguos AC002486 e AC005060 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 12 domínios transmembranares e dois domínios de ligação a ATP, dos quais o primeiro está localizado entre os domínios transmembranares #7 e #8, e o segundo no lado C-terminal do domínio transmembranar # 12, do lado oposto da membrana do plasma. A proteína de SEQ ID NO:6 (aminoácidos 1-1195) é codificada por 24 exões (SEQ ID NO: 14) de ADN genómico humano dos clones contíguos AC002486 e AC005060 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 11 domínios transmembranares e dois domínios de ligação a ATP, dos quais o primeiro está localizado entre os domínios transmembranares #6 e #7, e o segundo no lado C-terminal do domínio transmembranar #11, do lado oposto da membrana do plasma. A proteína de SEQ ID NO:7 (aminoácidos 1-541) é codificada por 10 exões (SEQ ID NO:15) de ADN genómico humano do clone AC002486 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 7 6 domínios transmembranares e um domínio de ligação a ATP no lado C-terminal do domínio transmembranar #7. A proteína de SEQ ID NO:8 (aminoácidos 1-514) é codificada por 11 exões (SEQ ID NO:16) de ADN genómico humano do clone AC002486 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 6 domínios transmembranares e um domínio de ligação a ATP no lado C-terminal do domínio transmembranar #6. A resistência de cancros a múltiplos fármacos pode resultar da expressão de qualquer uma das proteínas de SEQ ID N0:1, N0:2, N0:3, N0:4, N0:5, N0:6 N0:7 e N0:8. As proteínas codificadas pelo gene 7pl5-21 da glicoproteína P da presente invenção podem ser utilizadas como marcadores para identificar células que é provável que apresentem resistência a múltiplos fármacos e podem servir como alvos na concepção de novas terapias para doentes com cancro. Entender-se-á que, salvo indicação em contrário, a referência à glicoproteína P da presente invenção inclui também qualquer uma das proteínas de SEQ ID N0:1, NO: 2, NO:3, NO:4, N0:5, NO: 6, N0:7 e também N0:8. A glicoproteína P do 7pl5-21 confere quimiorresistência a múltiplos agentes quimioterapêuticos, incluindo cisplatina, através da mediação do efluxo celular do fármaco. Por isso, o bloqueio específico desta função de efluxo, por exemplo por meio da inibição específica de anticorpo monoclonal, pode aumentar a acumulação intracelular de fármaco e, em consequência, a toxicidade do fármaco e a morte de células tumorais. Além disso, uma vez que a glicoproteína P do 7pl5-21 está funcional na proliferação celular de tumores, o crescimento tumoral pode ser inibido terapeuticamente pela administração de anticorpos monoclonais específicos de 7 bloqueio, mesmo na ausência de agentes quimioterapêuticos simultâneos. De entre as proteínas codificadas pelo gene 7pl5-21 da glicoproteina P, as proteínas de SEQ ID N0:1, N0:2, N0:3, N0:4, N0:5 e N0:6 são distintas das proteínas de SEQ ID NO: 7 e NO: 8 pelo facto de serem expressas selectivamente em determinadas células cancerosas mas não em tecidos não cancerosos, normais. Além disso, as proteínas de SEQ ID N0:1, N0:2, N0:3, N0:4, N0:5 e N0:6 são expressas preferencialmente naqueles cancros que exibem os graus mais elevados de quimiorresistência a fármacos quimioterapêuticos, como por exemplo o melanoma maligno humano. Devido à sua expressão selectiva em determinados cancros mas não nos tecidos normais, as proteínas de SEQ ID N0:1, N0:2, N0:3, N0:4, NO: 5 e N0:6 podem ser terapeuticamente visadas não só através da inibição do efluxo do fármaco citotóxico ou inibição da proliferação do tumor por anticorpos monoclonais específicos, mas também por meios adicionais, incluindo a morte celular específica de tumores mediada por anticorpos monoclonais específicos conjugados com toxinas celulares, ou pela administração terapêutica a doentes afectados de preparações de vacina específicas para antigénios de tumores. outras

As proteínas de SEQ ID NO: 7 e NO: 8 codificadas pelo gene 7pl5-21 também podem ser expressas em determinados tecidos humanos normais, não cancerosos. Assim, a invenção proporciona utilizações adicionais no que se refere à função destas proteínas seleccionadas em tecidos fisiológicos. Entre os tecidos normais, as proteínas de SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8 são preferencialmente expressas em níveis elevados em células estaminais pluripotentes e outras células progenitoras de tecido, onde actuam no transporte transmembranar de xenobióticos e 8 moléculas pequenas. Assim, a invenção proporciona meios para detectar especificamente e enriquecer estas células estaminais e células progenitoras de misturas e preparações de células nas quais elas estão contidas, por detecção das células com anticorpos monoclonais específicos marcados.

As proteínas de SEQ ID NO:7 e NO:8 também são expressas em certa medida na maioria dos outros tecidos humanos normais, incluindo nas células do sistema imunitário tais como células T, monócitos e células apresentadoras de antigénio diferenciadas, onde elas funcionam no efluxo de citocinas e na captação de moléculas pequenas incluindo péptidos e antigénio, desempenhando desse modo um papel crítico para a integridade das respostas imunológicas normais. Quando estas funções são inibidas, por exemplo por bloqueio com anticorpos monoclonais específicos, a resposta imunológica normal pode ser modulada, o que pode ser utilizado na prevenção e/ou terapia da rejeição de aloenxerto no transplante clínico de órgãos, e também em várias doenças autoimunes como artrite reumatóide e esclerose múltipla. Além disso, quando expressa em células imunitárias humanas e noutros tecidos humanos como o endotélio da barreira hematoencefálica e os epitélios do aparelho gastrointestinal e do rim, o bloqueio da proteína pode ser ainda utilizado terapeuticamente para alterar selectivamente a captação e secreção, e desse modo a distribuição farmacológica, farmacocinética e eficácia terapêutica dos fármacos terapêuticos administrados exogenamente que são substratos das referidas proteínas.

Num primeiro aspeto, a divulgação é dirigida a proteínas substancialmente puras consistindo essencialmente da sequência de aminoácidos de SEQ ID N0:1, SEQ ID NO: 2, SEQ 9 ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 ou SEQ ID NO:8. O termo "consistindo essencialmente de" tem a intenção de incluir proteínas possuindo exactamente as mesmas sequências de aminoácido, assim como proteínas com sequências insubstancialmente diferentes, como evidenciado por possuírem as mesmas propriedades funcionais básicas. Uma isoforma "substancialmente purificada" é aquela que foi separada de outros componentes biológicos concomitantes e compreenderá tipicamente pelo menos 85% de uma amostra, sendo preferidas percentagens maiores. Estão disponíveis muitos meios para avaliar a pureza de uma proteína numa amostra, incluindo análise por electroforese em gel de poliacrilamida, cromatografia e centrifugação analítica. Um método preferido para avaliar a pureza é por transferência de Western utilizando um anticorpo dirigido contra epítopos da glicoproteína P do 7pl5-21 de SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID NO:7 ou SEQ ID N0:8. A divulgação também abrange "péptidos MDR" os quais são aqui definidos como consistindo de um elemento de sequência de SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7 ou SEQ ID NO: 8, de pelo menos 10 e preferencialmente pelo menos 15 ou 20 resíduos. Estes podem ser utilizados na produção de anticorpos. É estipulado que um péptido MDR não pode ter uma sequência que seja a mesma que qualquer conjunto de 10 a 15 resíduos contíguos na sequência LSGGQKQRIAIARAL (SEQ ID NO:17). Estas proteínas e péptidos MDR também podem ser administrados terapeuticamente a doentes com cancro afectados por tumores que expressam glicoproteína P do 7pl5-21, como uma vacina para o tumor para desencadear uma resposta imunológica endógena dirigida contra estes tumores, para resultar em morte celular específica para tumores. 10

Noutra forma de realização, a divulgação é dirigida a um anticorpo preparado por um processo compreendendo o passo de administração, a um hospedeiro animal, de uma proteína codificada pela SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO:8, ou um péptido MDR como descrito acima. A proteína ou péptido deveria ser administrado ao animal a uma dosagem suficiente para induzir a formação de anticorpo. Os anticorpos podem ser monoclonais ou policlonais. No último caso, os anticorpos são preferencialmente produzidos injectando uma preparação farmaceuticamente aceitável num ratinho, seguida da fusão de células de baço de ratinho com células de mieloma utilizando técnicas conhecidas na arte. Os anticorpos obtidos deveriam ligar-se selectivamente às proteínas de SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 ou SEQ ID NO:8. Neste contexto, inibição selectiva significa que um anticorpo tem pelo menos uma afinidade 100 vezes maior para uma ou mais destas proteínas do que para qualquer outra proteína normalmente encontrada em células humanas. A divulgação também é dirigida a um polinucleótido substancialmente puro consistindo essencialmente de uma sequência de nucleótidos que codifica as proteínas de SEQ ID NO: 1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO:8, ou um péptido MDR. Preferencialmente, o polinucleótido consiste essencialmente da sequência de nucleótidos de SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:ll, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 ou SEQ ID NO:16. A divulgação inclui vetores de expressão compreendendo um elemento de codificação distinto que consiste destes polinucleótidos; e células hospedeiras transformadas com tais vectores. Um 11 "elemento de codificação distinto" refere-se à porção de um vector de expressão responsável por determinar a sequência de aminoácidos de uma proteína expressa. A divulgação compreende todos esses elementos que produzem proteínas correspondentes às sequências de aminoácidos mostradas nas SEQ ID NO:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO: 8, bem como outras proteínas possuindo essencialmente a mesma estrutura e função. A divulgação inclui uma proteína recombinante produzida por células hospedeiras transformadas por um vetor de expressão como discutido acima. A proteína recombinante pode ser isolada utilizando técnicas correntes, incluindo cromatografia de afinidade com anticorpos contra epítopos de glicoproteína P do 7pl5-21. Preferencialmente, o polinucleótido utilizado nos vectores para expressão, como uma glicoproteína P recombinante, consiste essencialmente da sequência de nucleótidos de SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 ou SEQ ID NO:16. Podem ser utilizados como inibidores oligonucleótidos antimensageiros complementares a SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:ll, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 ou SEQ ID NO:16 e com pelo menos 15 nucleótidos de comprimento. Estes podem ser administrados a doentes submetidos a quimioterapia contra o cancro para aumentar a eficácia de fármacos citotóxicos. A transfecção in vivo de células é conhecida há muitos anos e pode ser efectuada utilizando vectores virais (ver por exemplo, U.S. 6,020,191); lipossomas (ver por exemplo, Nicolau, Meth. Enzymol 149:157-176 (1987)); ADN complexado com agentes que facilitam a captação celular (ver por exemplo, U.S. 5,264, 618; WO 98/14431); ou ainda 12 injectando simplesmente ADN nu (ver por exemplo, U.S. 5,693,622). Qualquer um destes procedimentos pode ser utilizado para administrar os oligonucleótidos antimensageiros da presente invenção. A divulgação é também dirigida a um método para determinar se uma célula cancerosa responderá a terapias que têm como objetivo a inversão da resistência a múltiplos fármacos medindo a expressão dos genes que codificam as proteínas de SEQ ID NO: 1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 ou SEQ ID NO:8. Este método pode ser utilizado para detectar a existência do fenótipo resistente a múltiplos fármacos em células cancerosas ou para seguir o desenvolvimento de resistência a múltiplos fármacos ao longo do tempo, monitorizando alterações na expressão do gene em células cultivadas.

Noutra forma de realização, a divulgação proporciona um método para determinar se um composto de ensaio inibe a resistência a múltiplos fármacos nas células provocada por um gene que codifica as proteínas de SEQ ID N0:1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID N0:3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO: 8. Este método compreende a expressão de um gene que codifica um ou mais destes polipéptidos em células que, de outro modo, não são resistentes a múltiplos fármacos e a exposição destas células a um ou mais fármacos citotóxicos na presença de um composto de ensaio. A sobrevivência celular é medida após exposição e os resultados obtidos são comparados com aqueles de incubações realizadas essencialmente do mesmo modo mas na ausência do composto de ensaio. Concluiu-se que o composto de ensaio inibe a resistência a múltiplos fármacos se a sobrevivência celular for diminuída numa 13 extensão significativa em incubações realizadas na presença do composto de ensaio relativamente à observada na sua ausência.

Descrição Detalhada da Invenção A divulgação é dirigida a um novo membro da família da glicoproteína P de proteínas relacionadas com resistência a fármacos, a sequências genéticas que codificam esta proteína, a métodos para determinar se uma célula cancerosa responderá a terapias que têm como objetivo a inversão da resistência a fármacos mediada pela glicoproteína P, e a um método de pré-seleção de compostos de ensaio quanto à sua aptidão para inibir a resistência a múltiplos fármacos. 0 novo gene de glicoproteína P pode codificar as proteínas de SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID NO:7 ou SEQ ID NO:8.

Entender-se-á que a divulgação abrange não só sequências idênticas às mostradas mas também sequências que são essencialmente iguais como evidenciado pela sua conservação das mesmas características estruturais e funcionais básicas. Por exemplo, podem ser utilizadas técnicas como a mutagénese de um locus específico para introduzir variações na estrutura de uma proteína. São abrangidas pela divulgação variações na glicoproteína P introduzidas por este ou por outros métodos semelhantes na condição de que a proteína resultante retenha as suas propriedades biológicas básicas, particularmente em relação à indução de resistência a múltiplos fármacos nas células de mamíferos.

As sequências de ADN que codificam as proteínas da divulgação podem ser obtidas a partir de qualquer tecido ou 14 fonte celular no qual são expressas. Por exemplo, linhas de células cultivadas podem ser manipuladas para expressar o gene de glicoproteina P utilizando técnicas recombinantes ou por exposição continua a agentes quimioterapêuticos. Alternativamente, as sequências podem ser isoladas de células primárias obtidas de tumores.

Estão disponiveis muitos métodos para isolar sequências de ADN e podem ser adaptados para o isolamento do gene da glicoproteina P do cromossoma 7pl5-21 (doravante "cromossoma 7p") (ver, por exemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Press (1989)). Por exemplo, um método consiste em rastrear uma biblioteca de ADNc que foi preparada por transcrição inversa de ARNm isolado de tecidos ou células que expressam o gene. A biblioteca pode ser preparada, por exemplo, de melanócito ou de tecido de testículo humano e as sondas para rastreio podem ser sintetizadas com base nas sequências mostradas na Listagem de Sequências. As sondas têm preferencialmente pelo menos 14 nucleótidos de comprimento e são seleccionadas, de modo óptimo, de uma região que se julgue que seja única ao gene de glicoproteina P do cromossoma 7 p.

Como uma alternativa, a amplificação de uma sequência desejada pode ser conseguida pela reacção em cadeia da polimerase ("PCR") de ARN transcrito inversamente. Os iniciadores para PCR podem ser construídos utilizando as sequências mostradas na SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 ou SEQ ID NO:16, e a confirmação da presença de ADNc da glicoproteina P do cromossoma 7p pode ser conseguida pela sequenciação de produtos de amplificação. 15 A expressão de proteína recombinante pode ser induzida numa célula hospedeira transformando-a com um vector de expressão apropriado. 0 vector deveria conter sinais de transcrição e tradução reconhecíveis pelo hospedeiro em conjunto com a sequência estrutural desejada, preferencialmente na forma de cadeia dupla, numa ligação operável. Por exemplo, a sequência de ADN da glicoproteína P deveria ser posicionada de modo a que as sequências reguladoras presentes no vector controlem a síntese de ARNm e produzam a proteína possuindo a sequência desejada.

Preferencialmente, o ácido nucleico que codifica a glicoproteína P da divulgação é expresso em células eucariotas, especialmente células de mamíferos. Tais células são capazes de promover as modificações pós-tradução necessárias para garantir que a proteína recombinante é estrutural e funcionalmente semelhante à proteína isolada, por exemplo, de células tumorais resistentes a múltiplos fármacos. Exemplos de células de mamíferos que se sabe que proporcionam modificação pós-tradução apropriada de proteínas clonadas incluem, inter alia, células NIH-3T3, células CHO, células HeLA, células LM(tk-) e semelhantes. São preferencialmente utilizados promotores eucariotas que se sabe que controlam a expressão de genes recombinantes para conduzir a transcrição de ADN da glicoproteína P do cromossoma 7p e podem incluir aqueles do gene de metalotioneína I de ratinho, o promotor TK do vírus de Herpes, o promotor precoce de CMV e o promotor precoce de SV40. A transcrição também pode ser orientada por promotores procariotas, como aqueles capazes de reconhecer a polimerase T4, os promotores PR e PL de 16 bacteriófago lambda, e os promotores trp, recA, choque térmico e lacZ de E. coli.

Os vectores de expressão podem ser introduzidos nas células hospedeiras por métodos como a precipitação com fosfato de cálcio, microinjecção, electroporação ou transferência virai e as células que expressam a sequência da proteína recombinante podem ser seleccionadas por técnicas conhecidas na arte. A confirmação da expressão pode ser obtida através de amplificação por PCR das sequências de glicoproteína P utilizando iniciadores seleccionados das sequências mostradas na SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID NO:15 ou SEQ ID N0:16. A proteína recombinante pode ser purificada utilizando técnicas correntes bem conhecidas na arte. Tais técnicas podem incluir filtração, precipitação, cromatografia e métodos electroforéticos. A pureza pode ser avaliada realizando electroforese em gel de poliacrilamida e visualizando as proteínas utilizando metodologias de revelação corrente. Também se pode efectuar a transferência de Western utilizando um anticorpo contra a glicoproteína P do cromossoma 7p. A invenção é dirigida a anticorpos gerados contra a glicoproteína P do cromossoma 7p como definidos nas reivindicações apensas. 0 processo de produção de tais anticorpos pode envolver a injecção da própria glicoproteína P do 7p num animal apropriado ou a injecção de péptidos antigénicos curtos feitos para corresponder a diferentes regiões da proteína. Estes péptidos deveriam ter pelo menos 5 aminoácidos de comprimentos e deveriam ser, 17 preferencialmente, seleccionados de regiões que se julga que sejam únicas à glicoproteína P do 7p. Os métodos para gerar e detectar anticorpos são bem conhecidos na arte, e são ensinados por referências como: Harlow, et ai., Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, NY (1988); Klein, Immunoloqy: The Science of Self-Nonself Discrimination, (1982); Kennett et al., Monoclonal Antibodies and Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, (1980); e Campbell, "Monoclonal Antibody Technology", in Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, (1984) . O termo "anticorpo", como aqui utilizado, tem a intenção de incluir moléculas intactas, assim como fragmentos que conservem a sua capacidade para ligar o antigénio, como os fragmentos Fab e F(ab')2· O termo "anticorpo" também é aqui definido como se referindo a anticorpos monoclonais e anticorpos policlonais. Os anticorpos policlonais são derivados dos soros de animais imunizados com um antigénio da glicoproteína P do cromossoma 7p. Os anticorpos monoclonais contra a proteína podem ser preparados utilizando tecnologia de hibridoma, como ensinado por referências como: Kohler, et al., Nature 256:495 (1975); e Hammerling, et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, Elsevier, N.Y., pp. 563-681 (1981). De uma maneira geral, esta tecnologia envolve a imunização de um animal imunocompetente, tipicamente um ratinho, com glicoproteína P do cromossoma 7p intacta ou com um fragmento derivado daquele. Os esplenócitos são então extraídos do animal imunizado e são fundidos com células de mieloma adequadas, como células SP20. Depois disso, as células de hibridoma resultantes são selectivamente mantidas em meio HAT e depois clonadas por diluição 18 restringida (Wands, et al., Gastroenterology 8 0:225-232 (1981)). As células obtidas através desta selecção são depois avaliadas para identificar clones que segregam anticorpos capazes de ligar a glicoproteina P do cromossoma 7p ·

Os anticorpos ou fragmentos de anticorpos da invenção podem ser utilizados para detectar a presença de glicoproteina P do cromossoma 7p em qualquer um de uma variedade de imunoensaios. Por exemplo, os anticorpos podem ser utilizados em radioimunoensaios ou em ensaios imunométricos, também conhecidos como ensaios "dois sítios" ou "sanduíche" (ver Chard, "An Introduction to Radioimmune Assay and related Techniques," in: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, North Holland Publishing Co., NY (1978)). Num ensaio imunométrico típico, uma quantidade de anticorpo não marcado é ligada a um suporte sólido que é insolúvel no fluido a ser testado, como sangue, linfa, extractos celulares e semelhantes. Após a ligação inicial de antigénio ao anticorpo imobilizado, é adicionada uma quantidade do segundo anticorpo marcado de modo detectável (o qual pode ser o mesmo ou não ser o mesmo que o primeiro) para permitir a detecção e/ou quantificação de antigénio ligado (ver, por exemplo Radioimmune Assay Method, Kirkham, et al., Ed. pp. 199-206, E&S Livingstone, Edinburgh (1970)). Na técnica são conhecidas muitas variantes destes tipos de ensaios e podem ser utilizadas para a detecção de glicoproteina P de 7p.

Os anticorpos contra a glicoproteina P do cromossoma 7p também podem ser utilizados em procedimentos de purificação (ver, em termos gerais, Dean et al., Affinity

Chromatography, A Practical Approach, IRL Press (1986)). 19

Tipicamente, o anticorpo é imobilizado numa matriz cromatográfica tal como Sepharose, 4B. A matriz é depois empacotada numa coluna e a preparação contendo a glicoproteina P do cromossoma 7p é feita passar através daquela em condições que promovem a ligação, por exemplo, condições de baixo teor de sal. A coluna é então lavada, a proteina é eluida utilizando tampão que promove a dissociação do anticorpo, por exemplo, tampão possuindo um pH ou concentração de sal alterado. A proteina eluida pode ser transferida para um tampão, por exemplo via diálise, e subsequentemente conservada ou utilizada directamente. Os anticorpos também podem ser utilizados na transferência de Western para a detecção de glicoproteina P do cromossoma 7p numa amostra. Para estes tipos de ensaio, pode utilizar-se anticorpo que foi especificamente desenvolvido para reagir com a glicoproteina P do cromossoma 7p ou que reage com um epitopo da proteina. A detecção da glicoproteina P do cromossoma 7p pode ser utilizada para determinar se as células tumorais são resistentes a múltiplos fármacos. Analogamente, a detecção de alterações na expressão de glicoproteina P pode ser útil para prever o desenvolvimento de resistência a múltiplos fármacos em células. 0 ADNc desta glicoproteina P pode ser útil na concepção de iniciadores para PCR de diagnóstico, concepção de sondas para transferência de Northern de diagnóstico, ensaios de protecção de RNase e para a concepção de oligonucleótidos antimensageiros complementares ao ADNc previsto para utilização em estratégias de abordagem selectiva de genes para a inversão da resistência a múltiplos fármacos. São idealizadas utilizações de diagnóstico e terapêuticas in vitro e in 20 vivo para sequências de nucleótidos antimensageiros relativamente à glicoproteina P do cromossoma 7p. A sequência primária de aminoácidos e a estrutura proteica da glicoproteina P do cromossoma 7p podem ser utilizadas na produção de anticorpos monoclonais (mAbs) que podem ser utilizados no diagnóstico e terapia de cancro resistente a múltiplos fármacos. Por exemplo, péptidos sintéticos semelhantes às sequências de aminoácidos nativas de dominios extracelulares particulares como determinado por previsão de tipologia de membrana podem ser úteis para desenvolver mAbs inibidores orientados contra epitopos extracelulares da glicoproteina P do cromossoma 7p. Além disso, sequências sintéticas peptídicas de 10-20meros derivadas da sequência de aminoácidos primária não incluídas nas sequências de ansa extracelulares supramencionadas podem ser úteis no desenvolvimento de anticorpos monoclonais de diagnóstico específicos. Podem ser utilizados mAbs específicos em análise de diagnóstico por FACS, transferência de Western e imuno-histoquímica. Tais mAbs também podem ser usados em utilizações de diagnóstico in vivo, onde podem ser empregues mAbs conjugados com etiquetas para avaliar a carga tumoral, localização do tumor ou massa tumoral residual após quimioterapia ou terapia cirúrgica de tumores que expressam glicoproteina P do 7pl5-21.

Também podem ser utilizados mAbs específicos para fins terapêuticos em doentes com cancro. Em particular, eles podem ser administrados para inverter a resistência de cancros a múltiplos fármacos em doentes administrados com agentes quimioterapêuticos que são substratos para efluxo pela glicoproteina P do 7p, por exemplo, cisplatina. Além 21 disso, mAbs específicos podem ser terapeuticamente utilizados em doentes com cancro para provocar a morte celular específica de tumores, quer administrados numa forma não conjugada, resultando em morte tumoral mediada imunologicamente, quer numa forma conjugada com uma toxina celular (por exemplo conjugado com iodo radioactivo ou com toxinas químicas), resultando na morte celular directa e específica de tumores.

Também podem ser utilizados mAbs específicos para fins terapêuticos diferentes da resistência de cancros a múltiplos fármacos. Com base na função imunorreguladora prevista da glicoproteína P do 7p, estes mAbs podem ser administrados a doentes para prevenir e/ou tratar a rejeição do transplante de órgãos e também várias doenças autoimunes como artrite reumatóide e esclerose múltipla. Além disso, uma vez que as glicoproteínas P funcionam na captação, excreção e distribuição específica em relação ao tecido de uma diversidade de compostos farmacológicos e químicos, e têm sido implicadas em mecanismos de biodisponibilidade oral, função da barreira hematoencefálica e em mecanismos de excreção renal, hepática e biliar de vários fármacos, os mAbs específicos podem ser administrados terapeuticamente para alterar a farmacocinética e disponibilidade daqueles fármacos terapêuticos os quais são substratos da função de transporte mediada pela glicoproteína P do 7p.

Os anticorpos da presente invenção podem ter um número de utilizações além das descritas acima. Por exemplo, sabe-se que as células estaminais pluripotentes e células progenitoras de tecido como as células estaminais hematopoiéticas, células neuroprogenitoras e células 22 progenitoras de músculo possuem actividades de efluxo tipo glicoproteina P para moléculas pequenas e corantes fluorescentes. A glicoproteina P do cromossoma 7p pode desempenhar um papel no transporte de tais substratos, e podem assim servir como um marcador para o isolamento de tais células estaminais e células progenitoras via, por exemplo, análise de FACS. Além disso, uma vez que a glicoproteina P MDR1 parece estar envolvida na diferenciação celular, proliferação celular, sobrevivência celular e determinadas respostas imunológicas, é esperado que a glicoproteina P do cromossoma 7p, devido à sua homologia com a glicoproteina P MDR 1, também desempenhe um papel em tais funções fisiológicas. Assim, o gene da glicoproteina P do cromossoma 7p e as sequências proteicas podem ser úteis na modulação das rupturas fisiopatológicas destas funções relacionadas com o MDR.

Exemplos estrutura

Uma vez que está presentemente a ser produzida informação nova de sequências genómicas a um ritmo elevado através do projecto do genoma humano, bases de dados contendo essa informação genómica contêm potencialmente sequências de membros da família de glicoproteina P não identificados até à data. Os membros da família da glicoproteina P mamífera partilham sequências de aminoácidos e epítopos de proteína característicos, e assumem conformações semelhantes. Assim, foi realizada uma pesquisa com base em homologia de proteína numa tentativa para identificar novos genes que codificam glicoproteina P. Foram utilizadas ferramentas bioinformáticas de análise de genes e análise de proteínas para caracterizar melhor a sequência de ácidos nucleicos e prever a estrutura proteica de genes candidatos 23 identificados. Especificamente, foi utilizada a aplicação tblastn do National Center for Biotechnology Information (NCBI) para comparar as sequências de aminoácidos conservadas derivadas da estrutura conhecida da glicoproteína P MDR1 humana com a base de dados não redundante de seguências de nucleótidos de homo sapiens da NCBI traduzida dinamicamente em todas as grelhas de leitura. A seguência assinatura comum aos membros da família de transportadores ABC, uma seguência de aminoácidos 15mero LSGGQKQRIAIARAL (SEQ ID NO:17), foi utilizada para identificar sequências de ADN genómico humano que codificam estruturas de proteínas homólogas. Também foram utilizadas sequências de aminoácidos hexaméricas conhecidas de três epítopos de ligação ao anticorpo monoclonal (mAb) específico contra a glicoproteína P.

Os clones de ADN genómico humano identificados do modo descrito acima foram examinados quanto à contaminação por vectores utilizando o programa VecScreen. Além disso, estes clones foram submetidos a mapeamento sistemático de homologia utilizando sequências de aminoácidos 20-meros contíguas sobrepostas derivadas da estrutura da proteína MDR1 humana e o programa de pesquisa tblastn. As sequências de ADN genómico candidatas que codificam sequências homólogas de aminoácidos foram comparadas em relação às sequências da grelha de leitura aberta (ORF) em cada clone de ADN utilizando o programa ORF Finder de NCBI (Altschul, et al., Nucleic Acids Res. 25_:3389-402 (1997)). As ORFs genómicas contendo sequências de ADN homólogas foram então analisadas utilizando o pacote de software NetGene2 para prever sítios intrão de excisão-união nos genes candidatos (Brunak et al., J. Mol. Biol. 220:49-65 (1991)). 24

Uma sequência de ADNc foi gerada por transcrição linear conceptual de estruturas previstas de exão de ADN adjacentes. Utilizando esta abordagem foram identificados dois clones genómicos humanos adjacentes sobrepostos, CTA-367017 (AC002486, 79611 pares de bases de comprimento) e CTB-86D3 (AC005060, 120169 pares de bases de comprimento, sequenciados à direita) como fazendo parte de uma ilha desancorada de orientação desconhecida no cromossoma 7pl5-21. Constatou-se que estes clones de sobreposição continham uma sequência genética que codificava um novo membro da família da glicoproteína P humana.

Para determinar se a estrutura prevista do gene era expressa em tecidos humanos, a sequência de ADNc gerada foi comparada com a base de dados não redundante de etiquetas de sequências humanas expressas (EST) dbest da NCBI como descrito por Altschul et al, e foram identificadas várias ESTs complementares a exões previstos do clone genómico AC002486. Foram então concebidos iniciadores da reacção em cadeia da polimerase (PCR) com base na informação de sequência disponível na base de dados no National Center for Biotechnology Information (NCBI) e na análise bioinformática como descrito acima. Utilizando estes iniciadores oligonucleotídicos específicos para o gene e a técnica de PCR em ARN mensageiro total (ARNm) transcrito inversamente isolado de várias linhas de células humanas e tecidos humanos normais, incluindo a linha de células de melanoma humano G3361, a linha de células de cancro da mama MCF-7, a linha de células de carcinoma de células escamosas SCC25, a linha de células de leucemia U937 e células mononucleares de sangue periférico normal (PBMC), foram amplificadas as sequências de ADNc derivadas do novo gene 25 7pl5-21 da glicoproteína P e os produtos de PCR foram subsequentemente sequenciados utilizando o método didesoxilo de terminação de cadeia em ambas as cadeias. A estrutura intrão-exão de vários produtos genéticos codificados pelo gene 7pl5-21 da glicoproteína P foi determinada por comparação dos clones previstos e sequenciados de ADNc com informação da sequência genómica do locus do gene 7pl5-21 da glicoproteína P (clones AC002486 e AC005060), como se mostra nas SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO:10, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:12, SEQ ID N0:13, SEQ ID N0:14, SEQ ID N0:15 e SEQ ID N0:16. As estruturas proteicas codificadas pelo novo gene 7pl5-21 foram depois geradas por tradução conceptual de aminoácidos das sequências oligonucleotídicas previstas de SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 e SEQ ID NO:16, como se mostra nas SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 e SEQ ID NO:8. Estas sequências de aminoácidos foram então comparadas com a sequência peptídica não redundante de NCBI em relação à homologia de sequência utilizando o programa blastp da NCBI. As sequências de aminoácidos previstas de SEQ ID NO:l, SEQ ID NO: 2, SEQ. ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8. também foram classificadas utilizando o Sistema Internacional de Classificação de Família de Proteínas PIR (Barker, et al., Nucleic Acids Res. 2_8:41-4 (2000); Huang et al., Nucleic Acids Res. 28:273-6 (2000)). As características funcionais potenciais das proteínas previstas foram determinadas por análise comparativa da composição primária de aminoácidos e utilizando o pacote de software TMHMM1.0 para prever a 26 formação de hélices transmembranares em proteínas mamíferas (Sonnhammer et al., Ismb 6:175-82 (1998)). 0 novo gene 7pl5-21 da glicoproteína P pode codificar várias isoformas distintas da glicoproteína P as quais apresentam 68% de homologia de sequência com os MDR1 e MDR3 humanos. Um grau semelhante de homologia foi encontrado com as isoformas de ratimho e hamster destes genes humanos. A análise da sequência primária de aminoácidos sugere que a glicoproteína P do cromossoma 7pl5-21 pode expressar o epítopo C32 e o epítopo de ligação ao mAB anti-glicoproteína P, mas não o epítopo C219 conservado em todas as outras isoformas conhecidas de glicoproteína P (Georges, et al., Proc. Natl Acad Sei USA 87:152-6 (1990)). A previsão estrutural revelou que o gene 7pl5-21 da glicoproteína P codifica isoformas de glicoproteína P que apresentam semelhanças estruturais mas também diferenças distintivas em comparação com membros conhecidos da família da glicoproteína P, como descrito por Georges et al. Por exemplo, a proteína de SEQ ID NO:2 contém dois domínios de ligação a ATP que estão localizados em lados opostos da membrana do plasma, proporcionando um domínio extracelular de ligação a ATP único que se prevê que ligue ATP extracelular. Com base nestas diferenças distintivas, prevê-se que a glicoproteína P do 7pl5-21 esteja não só envolvida no efluxo de moléculas pequenas, mas que algumas das suas isoformas também são funcionais na captação dependente de energia de moléculas pequenas. O sistema de classificação PIR confirmou que a glicoproteína P do cromossoma 7pl5-21 descoberta era um membro da família de proteínas de resistência a múltiplos fármacos e da família de superfamílias de homologia da cassete de ligação a ATP. 27 A análise por PCR utilizando iniciadores específicos para o gene demonstrou que o ADNc que codifica as proteínas de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6, o qual em cada caso envolve exões codificados no clone genómico AC005060, era preferencialmente expresso em células de melanoma humano mas não na maioria dos outros cancros testados, ao contrário dos ADNcs que codificam as proteínas de SEQ ID N0:7 e SEQ ID N0:8, os quais se constatou que eram expressos na maioria dos cancros examinados e também em tecidos fisiológicos humanos. Isto realça que um subconjunto de produtos do gene da glicoproteina P do 7pl5-21 pode ser selectivamente visado em determinados cancros que apresentam graus particularmente elevados de quimiorresistência, como o melanoma humano.

Para avaliar a expressão e função da glicoproteina P do 7pl5-21 e o efeito da modulação especifica na função de transporte e quimiorresistência, gerou-se anticorpos policlonais contra os péptidos MDR CGTSLILNGEPGYTI (SEQ ID NO:18) e RFGAYLIQAGRMTPEGC (SEQ ID NO:19), correspondendo a epitopos distintos da ansa extracelular da glicoproteina P do 7pl5-21, injectando ratinhos com estes péptidos antigénicos conjugados com a substância veiculo KLH. Para avaliar a expressão superficial da glicoproteina P do 7pl5-21 em células tumorais humanas foi realizada imunorrevelação indirecta da superfície e citometria de fluxo monocromática de células colhidas de fresco. Para avaliar os efeitos da inibição da gp-P do 7pl5-21 no efluxo de corante fluorescente mediado por gp-P, células tumorais foram incubadas com Ab policlonal anti-glicoproteína P do 7pl5-21 seguido da adição de calceína-AM e medições 28 subsequentes em série da fluorescência celular por citometria de fluxo.

Estes estudos demonstraram que a glicoproteina P é expressa em células tumorais, e que o epitopo RFGAYLIQAGRMTPEGC (SEQ ID NO: 19) contido nas proteinas de SEQ ID N0:1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5 e SEQ ID N0:6, é preferencialmente expresso em melanoma humano em niveis elevados, enquanto o epitopo CGTSLILNGEPGYTI (SEQ ID NO:18), também contido na SEQ ID NO:7 e SEQ ID NO:8, também é expresso noutros tipos de cancro e em células humanas normais. Os anticorpos contra o epitopo CGTSLILNGEPGYTI (SEQ ID NO:18) inibiram tanto a captação de corante como também o efluxo de corante em função do tipo de célula, indicando uma função dupla dos vários produtos do gene da glicoproteina P do 7pl5-21 nestes processos distintos. Estes anticorpos também aumentam a citotoxicidade celular da cisplatina em ensaios de morte celular especifica em melanoma e também em cancro da mama entre outros, indicativo da sua utilidade terapêutica potencial no tratamento de doentes com cancro.

Sabe-se que determinados tipos de cancro exibem rearranjo cromossómico na região 7pl5-21 e tais mutações podem estar associadas com o aparecimento do fenótipo MDR. Isto levanta a possibilidade de que o rearranjo de genes nestes cancros resulta potencialmente de formação de epissoma e cromossoma minúsculo duplo (DM) durante o processo de amplificação de gene da glicoproteina P do 7pl5-21 sob stresses mutagénicos como a quimioterapia. Sabe-se que as células que expressam resistência a múltiplos fármacos mediada por MDR1 sofrem esses tipos de rearranjos cromossómicos e formação de cromossoma DM (Scehoenlein et al., Mol. Biol. Cell 3:507-20 29 (1992); Mickley et al., J. Clin. Invest. 99:1947-57 (1997); Knutsen et al., Genes Chromosomes Câncer 23:44-54 (1998)).

Assim, os produtos do gene da glicoproteína P do cromossoma 7pl5-21 de SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4, SEQ ID NO:5 e SEQ ID NO:6 podem estar selectivamente sobre-expressos em determinadas células cancerosas, contribuindo desse modo para a resistência adquirida ao fármaco dessas células cancerosas enquanto permanecem silenciosos em células normais. Este padrão de expressão diferencial pode ser utilizado na detecção e inversão da resistência a múltiplos fármacos de células mamiferas tumorigénicas.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> The Brigham and Women1s Hospital, Inc. <120> Um Gene que Codifica um Homólogo de Glicoproteina P Humana de Resistência a Múltiplos Fármacos, situado no Cromossoma 7pl5-21 e Suas Utilizações <130> 81994/268511 <160> 19

<170> Patentln versão 3.0 <210> 1 <211> 659 <212> PRT <213> Homo sapiens 30 <4 0 0> 1

Met 1 Leu Ala Glu Lys 5 Gly Ala His Ala Glu 10 Leu Met Ala Lys Arg Gly 15 Leu Tyr Tyr Ser 20 Leu Vai Met Ser Gin 25 Asp Ile Lys Lys Ala 30 Asp Glu Gin Met Glu 35 Ser Met Thr Tyr Ser 40 Thr Glu Ar g Lys Thr 45 Asn Ser Leu Pro Leu 50 His Ser Vai Lys Ser 55 Ile Lys Ser Asp Phe 60 Ile Asp Lys Ala Glu 65 Glu Ser Thr Gin Ser 70 Lys Glu Ile ser Leu 75 Pro Glu val Ser Leu 80 Leu Lys Ile Leu Lys 85 Leu Asn Lys Pro Glu 90 Trp Pro Phe Val Val 95 Leu Gly Thr Leu Ala 100 Ser Vai Leu Asn Gly 105 Thr val His Pro Val 110 Phe Ser Ile Ile Phe 115 Ala Lys Ile Ile Thr 120 Met Phe Gly Asn Asn 125 Asp Lys Thr Thr Leu 130 Lys His Asp Ala Glu 135 Ile Tyr Ser Met Ile 140 Phe Val Ile Leu Gly 145 Vai Ile Cys Phe Vai 150 Ser Tyr Phe Met Gin 155 Gly Leu Phe Tyr Gly 160 31

Arg Ala Gly Glu Ile 165 Leu Thr Met Arg Leu Arg 170 His Leu Ala Phe 175 Lys Ala Met Leu Tyr 180 Gin Asp Ile Ala Trp 185 Phe Asp Glu Lys Glu 190 Asn Ser Thr Gly Gly 195 Leu Thr Thr Ile Leu 200 Ala Ile Asp Ile Ala 205 Gin Ile Gin Gly Ala 210 Thr Gly Ser Arg Ile 215 Gly Val Leu Thr Gin 220 Asn Ala Thr Asn Met 225 Gly Leu Ser Vai Ile 230 Ile Ser Phe Ile Tyr 235 Gly Trp Glu Met Thr 240 Phe Leu Ile Leu Ser 245 Ile Ala Pro Val Leu Ala 250 Val Thr Gly Met 255 Ile Glu Thr Ala Ala 260 Met Thr Gly Phe Ala 265 Asn Lys Asp Lys Gin 270 Glu Leu Lys His Ala 275 Gly Lys Ile Ala Thr 280 Glu Ala Leu Glu Asn 285 Ile Arg Thr Ile Vai 290 Ser Leu Thr Arg Glu 295 Lys Ala Phe Glu Gin 300 Met Tyr Glu Glu Met 305 Leu Gin Thr Gin His 310 Arg Asn Thr Ser Lys 315 Lys Ala Gin Ile Ile 320 Gly Ser Cys Tyr Ala 325 Phe Ser HiS Ala Phe ile 330 Tyr Phe Ala Tyr 335 Ala Ala Gly Phe Arg 340 Phe Gly Ala Tyr Leu 345 Ile Gin Ala Gly Arg 350 Met Thr Pro Glu Gly 355 Met Phe Ile vai Phe 360 Thr Ala Ile Ala Tyr 365 Gly Ala Met Ala Ile 370 Gly Lys Thr Leu Vai 375 Leu Ala Pro Glu Tyr 380 ser Lys Ala Lys Ser Gly 385 Ala Ala His Leu 390 Phe Ala Leu Leu Glu 395 Lys Lys Pro Asn Ile 400 Asp Ser Arg Ser Gin 405 Glu Gly Lys Lys Pro Asp 410 Thr Cys Glu Gly 415 Asn Leu Glu Phe Arg 420 Glu Vai Ser Phe Phe 425 Tyr Pro Cys Arg Pro 430 Asp val Phe Ile Leu 435 Arg Gly Leu Ser Leu 440 Ser Ile Glu Arg Gly 445 Lys Thr Val Ala Phe 450 Vai Gly Ser Ser Gly 455 Cys Gly Lys Ser Thr 460 Ser Val Gin Leu Leu 465 Glu Arg Leu Tyr Asp 470 Pro Val Gin Gly Gin 475 Val Leu Phe Asp Gly 480 Vai Asp Ala Lys Glu 485 Leu Asn Vai Glu Trp Leu 490 Arg Ser Gin Ile 495 Ala 32 Ile Vai Pro Gin 500 Glu Pro Vai Leu Phe 505 Asn cys Ser Ile Ala 510 Glu Asn Ile Ala Tyr 515 Gly Asp Asn Ser Arg 520 Vai Vai Pro Leu Asp 525 Glu Ile Lys Glu Ala 530 Ala Asn Ala Ala Asn 535 Ile HÍS Ser Phe Ile 540 Glu Gly Leu Pro Glu 545 Lys Tyr Asn Thr Gin 550 Vai Gly Leu Lys Gly Ala 555 Gin Leu Ser Gly 560 Gly Gin Lys Gin Arg 565 Leu Ala Ile Ala Arg Ala 570 Leu Leu Gin Lys 575 Pro Lys Ile Leu Leu 580 Leu Asp Glu Ala Thr 585 Ser Ala Leu Asp Asn 590 Asp Ser Glu Lys Vai 535 Vai Gin His Ala Leu Asp 600 Lys Ala Arg Thr 605 Gly Arg Thr Cys Leu 610 Vai Vai Thr His Arg 615 Leu Ser Ala Ile Gin 620 Asn Ala Asp Leu Ile 625 Vai Vai Leu His Asn 630 Gly Lys Ile Lys Glu 635 Glu Gly Thr His Gin 640 Glu Leu Leu Arg Asn 645 Arg Asp Ile Tyr Phe Lys 650 Leu Vai Asn Ala 655 Gin Ser Vai Gin <210> 2 <211> 812 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 2

Met Vai Asp Glu Asn Asp Ile Arg Ala Leu Asn Vai Arg 15 1D Asp His Ile Gly Vai Vai Ser Gin Glu Pro Vai Leu Phe 20 25 lie Ser Asn Asn Ile Lys Tyr Gly Arg Asp Asp Vai Thr 35 40 45 Met Glu Arg Ala Ala Arg Glu Ala Asn Ala Tyr Asp Phe 50 55 60 Phe Pro Asn Lys Phe Asn Thr Leu Vai Gly Glu Lys Gly 65 70 75 ser Gly Gly Gin Lys Gin Arg Ile Ala ile Ala Arg Ala 85 90

His Tyr Arg 15 Gly Thr Thr 30 Asp Glu Glu

Ile Met Glu

Ala Gin Met 80 Leu Vai Arg 95 33

Asn Pro Lys Ile 100 Leu Ile Leu Asp Glu Ser Lys 115 Ser Ala Vai Gin Ala 120 Arg Thr 130 Thr Ile Vai Vai Ala 135 His Asp Leu 145 lie vai Thr Leu 150 Lys Asp Hís Ala Glu Leu Met 165 Ala Lys Arg Ser Gin Asp Ile 180 Lys Lys Ala Asp Ser Thr Glu 195 Arg Lys Thr Asn Ser 200 Ile Lys 210 Ser Asp Phe Ile Asp 215 Lys Glu 225 Ile Ser Leu Pro Glu 230 Vai Ser Lys Pro Glu Trp Pro 245 Phe Vai Vai Asn Gly Thr Vai 260 His Pro Vai Phe Thr Met Phe 275 Gly Asn Asn Asp Lys 280 Ile Tyr 220 Ser Met Ile Phe Vai 295 Ile Tyr 305 Phe Met Gin Gly Leu 310 Phe Tyr Met Arg Leu Arg His 325 Leu Ala Phe Ala Trp Phe Asp 340 Glu Lys Glu Asn Leu Ala Ile 355 Asp Ile Ala Gin Ile 360 Gly Vai 370 Leu Thr Gin Asn Ala 375 Thr ser 385 Phe Ile Tyr Gly Trp 390 Glu Met Pro Vai Leu Ala vai 405 Thr Gly Met Phe Ala Asn Lys 420 Asp Lys Gin Glu

Glu 10S Ala Thr Ser Ala Leu 110 Asp Ser Ala Leu Glu Lys Ala 125 Ser Lys Gly Arg Leu Ser Thr 140 Ile Arg Ser Ala Gly Met Leu 155 Ala Glu Lys Gly Ala 160 Gly Leu 170 Tyr Tyr Ser Leu Vai 175 Met Glu 185 Gin Met Glu Ser Met 190 Thr Tyr Leu Pro Leu His Ser 205 Vai Lys Ser Ala Glu Glu Ser 220 Thr Gin Ser Lys Leu Leu Lys 235 Ile Leu Lys Leu Asn 240 Leu Gly Thr 250 Leu Ala Ser Vai 255 Leu Ser 265 Ile Ile Phe Ala Lys 270 Ile Ile Thr Thr Leu Lys HÍS 285 Asp Ala Glu Leu Gly Vai Ile 300 Cys Phe Vai Ser Gly Arg Ala 315 Gly Glu Ile Leu Thr 320 Lys Ala 330 Met Leu Tyr Gin Asp 335 Ile Ser 345 Thr Gly Gly Leu Thr 350 Thr Ile Gin Gly Ala Thr Gly 365 Ser Arg Ile Asn Met Gly Leu 380 Ser Vai Ile Ile Thr Phe Leu 395 Ile Leu Ser xi© Ala 400 Ile Glu 410 Thr Ala Ala Met Thr Gly 415 Leu 425 Lys His Ala Gly Lys 430 Ile Ala 34

Thr Glu Ala 435 Leu Glu Asn X le Arg 440 Lys Ala 450 Phe Glu Gin Met Tyr 455 Glu Asa 465 Thr Ser Lys Lys Ala 470 Gin Ile His Ala Phe lie Tyr 485 Phe Ala Tyr Tyr Leu Ile Gin 500 Ala Gly Arg Met Phe Thr Ala 515 Ile Ala Tyr Gly Ala 520 Leu Ala 530 Pro Glu Tyr Ser Lys 535 Ala Ala 545 Leu Leu Glu Lys Lys 550 Pro Asn Lys Lys Pro Asp Thr 565 Cys Glu Gly Phe Phe Tyr Pro 580 Cys Arg Pro Asp Leu Ser Ile 595 Glu Axg Gly Lys Thr 600 Cys Gly 610 Lys Ser Thr Ser Vai 615 Gin Vai 625 Gin Gly Gin Vai Leu 630 Phe Asp Vai Gin Trp Leu Arg 645 Ser Gin Ile Leu Phe Asn Cys 660 Ser Ile Ala Glu Arg Vai Vai 675 Pro Leu Asp Glu Ile 680 lie His 690 Ser Phe Ile Glu Gly 695 Leu Gly Leu 705 Lys Gly Ala Gin 710 Leu Ser Ile Ala Arg Ala Leu 725 Leu Gin Lys Ala Thr Ser Ala 740 Leu Asp Asn Asp Leu Asp Lys 755 Ala Arg Thr Gly Arg 760

Thr Ile Vai Ser Leu 445 Thr Arg Glu Glu Met Leu Gin 460 Thr Gin His Arg Ile Gly Ser 475 Cys Tyr Ala Phe Ser 480 Ala Ala 490 Gly Phe Arg Phe Gly 495 Ala Thr 505 Pro Glu Gly Met Phe 510 Ile Vai Met Ala Ile Gly Lys 52.5 Thr Leu Vai Lys Ser Gly Ala 540 Ala His Leu Phe Ile Asp Ser 555 Arg Ser Gin Glu Gly 560 Asn Leu 570 Glu Phe Arg Glu Vai 575 Ser Vai 585 Phe Ile Leu Arg Gly 590 Leu Ser Vai Alâ Phe Vai Gly 605 Ser Ser Gly Leu Leu Gin Arg 620 Leu Tyr Asp Pro Gly Vai Asp 635 Ala Lys Glu Leu Asn 640 Ala Ile 650 Vai Pro Gin Glu Pra 655 Vai Asn 665 Ile Ala Tyr Gly Asp 670 Asn Ser Lys Glu Ala Ala Asn 685 Ala Ala Asn Pro Glu Lys Tyr 700 Asn Thr Gin Vai Gly Gly Gin 715 Lys Gin Arg Leu Ala 720 Pro Lys 730 Ile Leu Leu Leu Asp 735 Glu Ser 745 Glu Lys Vai Vai Gin 750 His Ala Thr Cys Leu Vai Vai 765 Thr His Arg 35

Leu Ser Ala Ile Gin Asn Ala Asp Leu Ile Vai Vai Leu Hls Asn GlV 770 775 780

Lys Ile Lys Glu Gin Gly Thr His Gin Glu Leu Leu Arg Asn Arg Asp 785 790 795 800

Ile Tyr Phe Lys Leu Vai Asn Ala Gin Ser Vai Gin 805 810

<210> 3 <211> 131 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3

Met X Vai Asp Glu Asn 5 Asp ile Arg Ala Leu 10 Asn Val Arg His Tyr 15 Arg Αερ His Xle Gly 20 Vai Vai Ser Gin Glu 25 Pro Val Leu Phe Gly 30 Thr Thr Ile Ser Asn 35 Asn Ile Lys Tyr Gly 40 Arg Asp Asp Val Thr 45 Asp Glu Glu Met Glu 50 Arg Ala Ala Arg Glu 55 Ala Asn Ala Tyr Asp 60 Phe Ile Met Glu Phe 65 Pro Asn Lys Phe Asn 70 Thr Leu Val Gly Glu 75 Lys Gly Ala Gin Met 80 Ser Gly Qly Gin Lys 85 Gin Arg Ile Ala Ile 90 Ala Arg Ala Leu Val 95 Arg Asn Pro Lys Ile 100 Leu ile Leu Asp Glu 105 Ala Thr Ser Ala Leu 110 Asp Ser Glu Ser Lys 115 Ser Ala Val Gin Ala 120 Ala Leu Glu Lys Asp 125 Thr Pro Arg

Tyr Ser Phe 130

<210> 4 <211> 1058 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> Nota <222> (66)..(66) 36 <223> Xaa na posição 66 representa qualquer L-aminoácido <400> 4

Met 1 Val Xle Ser Leu 5 Thr Ser Lys Gly Ala Val Ala 20 Glu Glu Val Leu Phe Arg Ala 35 Gin Glu Lys Glu Leu 40 Thr Arg 50 Tyr Ala Trp Phe Tyr 55 Phe Leu 65 Xaa Phe Val Arg Tyr 70 Thr Gin Gly lie Lys Arg Thr 85 Ile Ala Ser Phe Phe Met Asn 100 Gly Thr Tyr Gly Leu Ile Leu 115 Asn Gly Glu Pro Gly 120 Val Phe 13 0 Phe Ser Val Ile His 135 Ser Pro 145 His Phe Glu Thr Phe 150 Ala ile Phe Gin Val Ile Asp 165 Lys Lys Pro Gly Tyr Lys Pro 180 Glu Ser Ile Glu Ser Phe Asn 195 Tyr Pro Ser Arg Pro 200 Asn Leu 210 Arg Ile Lys Ser Gly 215 Glu Gly 22 S Ser Gly Lys Ser Thr 230 Val Val Pro Asp Asp Gly Phe 245 Ile Met Val Asn Val Arg His 260 Tyr Arg Asp His Val Leu Phe 275 Gly Thr Thr lie Ser 280 Asp Val 290 Thr Asp Glu Glu Met 295 Glu

Glu Leu 10 Ser Ala Tyr Ser Lys 15 Ala Ser 25 Ser Ile Arg Thr Val 30 Ile Ala Gin Arg Ser Phe Leu 45 Leu Asn Ile Pro Gin Trp Leu 60 Leu Ser Cys Val Asn Leu Lys 75 Asp Ala Lys Asp Phe 80 Lys Val 90 Ser Leu Gly Ala Val 95 Tyr Leu 105 Ala Phe Trp Tyr Gly 110 Thr Ser Tyr Thr Ile Gly Thr 125 Val Leu Ala Ser Tyr Cys Ile 140 Gly Ala Ala Val Ala Arg Gly 155 Ala Ala Phe His Ile 160 Ser Ile Asp 170 Asn Phe Ser Thr 175 Ala Gly 185 Thr Val Glu Phe Lys 190 Asn val Ser Ile Lys Ile Leu 205 Lys Gly Leu Thr Val Ala Leu 220 Val Gly Leu Asn Gin Leu Leu 235 Gin Arg Leu Tyr Asp 240 Asp Glu 250 Asn Asp Ile Arg Ala 255 Leu Ile 265 Gly Val Val Ser Gin 270 Glu Pro Asn Asn Ile Lys Tyr 285 Gly Arg Asp Arg Ala Ala Arg 300 Glu Ala Asn Ala 37

Tyr 305 Asp Phe Ile Met Glu 310 Phe Pro Asn Lys Phe 315 Asn Thr Leu Val Gly 320 Glu Lys Gly Ala Gin 325 Met Ser Gly Gly Gin 330 Lys Gin Arg ile Ala 335 Ile Ala Arg Ala Leu 340 Vai Arg Asn Pro Lys 345 Ile Leu ile Leu ASp 350 Glu Ala Thr Ser Ala 355 Leu Asp Ser Glu Ser 360 Lys Ser Ala Val Gin 365 Ala Ala Leu Glu Lys 370 Ala Ser Lys Gly Arg Thr 375 Thr ile Val val 380 Ala His Arg Leu Ser 385 Thr Ile Arg Ser Ala 390 Asp Leu Ile Val Thr 395 Leu Lys Asp Gly Met 400 Leu Ala Glu Lys Gly 405 Ala His Ala Glu Leu 410 Met Ala Lys Arg Gly 415 Leu Tyr Tyr Ser Leu 420 Vai Met Ser Glu Asp 425 Ile Lys Lys Ala Asp 430 Glu Gin Met Glu Ser 435 Met Thr Tyr Ser Thr 440 Glu Arg Lys Thr Asn 445 Ser Leu Pro Leu His 450 Ser Vai LyS Ser Ile Lys 455 Ser Asp Phe Ile 460 Asp Lys Ala Glu Glu 465 Ser Thr Gin Ser Lys 470 Glu Ile Ser Leu Pro 475 Glu Val Ser Leu Leu 480 Lys Ile Leu Lys Leu 485 Asn Lys Pro Glu Trp 490 Pro Phe Val Val Leu 495 Gly Thr Leu Ala Ser 500 vai Leu Asn Gly Thr 505 Val His Pro Val Phe 510 Ser Ile Ile Phe Ala 515 Lys Ile Ile Thr Met 520 Phe Gly Asn Asn Asp 525 Lys Thr Thr Leu Lys 530 His Asp Ala Glu Ile Tyr 535 Ser Met Ile Phe 540 Val Ile Leu Gly Vai 545 Ile Cys Phe Vai Ser 550 Tyr Phe Met Gin Gly 555 Leu Phe Tyr Gly Arg 560 Ala Gly Glu ile Leu 565 Thr Met Arg Leu Arg 570 His Leu Ala Phe Lys 575 Ala Met Leu Tyr Gin 580 Asp Ile Ala Trp Phe 585 Asp Glu Lys Glu Asn 590 Ser Thr Gly Gly Leu 595 Thr Thr Ile Leu Ala 600 Ile Asp Ile Ala Gin 605 Ile Gin Gly Ala Thr 610 Gly Ser Arg Ile Gly Vai 615 Leu Thr Gin Asn 620 Ala Thr Asn Met Gly 625 Leu Ser Vai Ile lie 630 Ser Phe Ile Tyr Gly 635 Trp Glu Met Thr Phe 640 38

Leu Ile Leu Ser Ile 645 Ala Pro Val Leu Ala 650 Val Thr Gly Met Ile 655 Glu Thr Ala Ala Met 660 Thr Gly Phe Ala Asn 665 Lys Asp Lys Gin Glu 670 Leu Lys HÍS Ala Gly 675 Lys Ile Ala Thr Glu 680 Ala Leu Glu Asn Ile Arg 685 Thr Ile Vai Ser 690 Leu Thr Arg Glu Lys 695 Ala Phe Glu Gin Met Tyr Glu 700 Glu Met Leu 705 Gin Thr Gin His Arg Asn 710 Thr Ser Lys Lys 715 Ala Gin Ile Ile Gly 720 Ser cys Tyr Ala Phe 725 Ser His Ala Phe Ile 730 Tyr Phe Ala Tyr Ala 735 Ala Gly Phe Arg Phe 740 Gly Ala Tyr Leu Ile 745 Gin Ala Gly Arg Met 750 Thr Pro Glu Gly Met 755 Phe Ile Val Phe Thr 760 Ala Ile Ala Tyr Gly Ala 765 Met Ala Ile Gly 770 Lys Thr Leu Val Leu 775 Ala Pro Glu Tyr Ser Lys Ala 780 Lys Ser Gly Ala 785 Ala His Leu Phe Ala 790 Leu Leu Glu Lys 795 Lys Pro Asn Ile Asp 800 Ser Arg Ser Gin Glu 805 Gly Lys Lys Pro Asp 810 Thr Cys Glu Gly Asn 815 Leu Glu Phe Arg Glu 820 val Ser Phe Phe Tyr 825 Pro Cys Arg Pro Asp 830 Val Phe Ile Leu Arg 835 Gly Leu Ser Leu Ser 840 Ile Glu Arg Gly Lys Thr 845 Val Ala Phe Vai 850 Gly Ser Ser Gly Cys 855 Gly Lys Ser Thr Ser Val Gin 860 Leu Leu Gin Arg 865 Leu Tyr Asp Pro Val 870 Gin Gly Gin Val 875 Leu Phe Asp Gly Val 880 Asp Ala Lys Glu Leu 885 Asn Val Gin Trp Leu 890 Arg Ser Gin ile Ala 895 Ile Vai Pro Gin Glu 900 Pro Val Leu Phe Asn 905 Cys Ser Ile Ala Glu 910 Asn Ile Ala Tyr Gly 915 Asp Asn Ser Arg Val 920 Val Pro Leu Asp Glu Ile 925 Lys Glu Ala Ala 930 Asn Ala Ala Asn Ile 935 His Ser Phe Ile Glu Gly Leu 940 Pro Glu Lys 945 Tyr Asn Thr Gin Val Gly 950 Leu Lys Gly Ala 955 Gin Leu Ser Gly Gly 960 Gin Lys Gin Arg Leu 965 Ala Ile Ala Arg Ala 970 Leu Leu Gin Lys Pro 975 Lys 39

Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Asn Asp Ser Glu 980 985 990

Lys Vai Vai Gin His Ala Leu Asp Lys Ala Arg Thr Gly Arg Thr Cys 995 1000 1005

Leu Val Vai Thr His Arg Leu Ser Ala Ile Gin Asn Ala Asp Leu 1010 1015 1020

Ile Val Val Leu His Asn Gly Lys Ile Lys Glu Gin Gly Thr His 1025 1030 1035

Gin Glu Leu Leu Arg Asn Arg Asp Ile Tyr Phe Lys Leu Val Asn 1040 1045 1050

Ala Gin Ser Val Gin 1055 <210> 5 <211> 1222 <212> PRT <213> Homo sapiens <22 0> <221> Nota <222> (230).. (230) <223> Xaa na posição 230 representa qualquer L-aminoácido <400> 5

Met 1 Ile Leu Gly Ile Leu S Ala Ser Leu Val 10 Asn Gly Ala Cys Leu 15 Pro Leu Met Pro Leu Val Leu 20 Gly Glu Met Ser 25 Asp Asn Leu Ile 30 Ser Gly cys Leu Val 35 Gin Thr Asn Thr Tyr 40 Ser Phe Phe Arg Leu 45 Thr Leu Tyr Tyr Val 50 Gly Ile Gly Val Ala Ala 55 Leu ile Phe Gly Tyr 60 Ile Gin Ile Ser 65 Leu Trp Ile Ile Thr 70 Ala Ala Arg Gin Thr Lys Arg 75 Ile Arg Lys 80 Gin Phe Phe His Ser Val 85 Leu Ala GIel Asp 90 Ile Gly Trp Phe Asp 95 Ser Cys Asp Ile Gly Glu Leu 100 Asn Thr Arg Met 105 Thr Asp Ile Asp 110 Lys Ile Ser Asp Gly Ile Gly Asp 115 Lys Ile 120 Ala Leu Leu Phe Gin 125 Asn Met Ser 40

Thr Phe Ser ile Gly Leu AJLct val Gly Leu Val Lys Gly Trp Lys Leu 130 13S 140 Thr Leu Vai Thr Leu Ser Thr Ser Pro Leu Ile Met Ala Ser Ala Ala 145 150 155 160 Ala Cys Ser Arg Met Vai Ile Ser Leu Thr Ser Lys Glu Leu Ser Ala 165 170 175 Tyr Ser Lys Ala Gly Ala Vai Ala Glu Glu Val Leu Ser Ser Ile Arg 180 185 190 Thr Vai Ile Ala Phe Arg Ala Gin Glu Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe 195 200 205 Leu Leu Asn Ile Thr Arg Tyr Aiâ Trp Phe Tyr Phe Pro Gin Trp Leu 210 215 220 Leu Ser Cys Vai Leu Xcicl Phe Val Arg Tyr Thr Gin Asn Leu Lys Asp 225 230 235 240 Ala Lys Asp Phe Gly Ile Lys Arg Thr Ile Ala Ser Lys Val Ser Leu 245 250 255 Gly Ala Vai Tyr Phe Phe Met Asn Gly Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Trp 260 265 270 Tyr Gly Thr Ser Leu Ile Leu Asn Gly Glu Pro Gly Tyr Thr Ile Gly 275 280 285 Thr Vai Leu Ala Vai Phe Phe Ser Val Ile His Ser Ser Tyr Cys Ile 290 295 300 Gly Ala Ala Vai Pro His Phe Glu Thr Phe Ala Ile Ala Arg Gly Ala 305 310 315 320 Ala Phe His Ile Phe Gin Vai Ile Asp Lys Lys Pro Ser ile Asp Asn 325 330 335 Phe Ser Thr Ala Gly Tyr Lys Pro Glu Ser Ile Glu Gly Thr Val Glu 340 345 350 Phe Lys Asn Vai Ser Phe Asn. Tyr Pro Ser Arg Pro Ser Ile Lys Ile 355 360 365 Leu Lys Gly Leu Asn Leu Arg Ile Lys Ser Giy Glu Thr Val Ala Leu 370 375 380 Vai Gly Leu Asn Gly Ser Gly Lys Ser Thr Val Val Gin 1j£U Leu Gin 385 390 395 400 Arg Leu Tyr Asp Pro Asp Asp Gly Phe Ile Met Val Asp Glu Asn Asp 405 410 415 Ile Arg Ala Leu Asn Vai Arg His Tyr Arg Asp His Ile Gly Val Val 420 425 430 Ser Gin Glu Pro Vai Leu Phe Gly Thr Thr Ile Ser Asn Asn Ile Lys 435 440 445 Tyr Gly Arg Asp Asp Vai Thr Asp Glu Glu Met Glu Arg Ala Ala Arg 450 455 460 41

Glu Ala 4 65 Asn Ala Tyr Asp 470 Phe Ile Met Glu Phe 475 Pro Asn Lys Phe Asn 480 Thr Leu Vai Gly Glu 485 Lys Gly Ala Gin Met Ser 490 Gly Gly Gin Lys 495 Gin Arg Ile Ala Ile Ala 500 Arg Ala Leu Vai 505 Arg Asn Pro Lys Ile 510 Leu Ile Leu Asp Glu 515 Ala Thr Ser Ala Leu Asp 520 Ser Glu Ser Lys 525 Ser Ala val Gin Ala 530 Ala Leu Glu Lys Ala Ser Lys 535 Gly Arg Thr 540 Thr Ile Val Val Ala His 545 Arg Leu Ser Thr 550 Ile Arg Ser Ala Asp 555 Leu Ile Val Thr Leu 560 Lys Asp Gly Met Leu 565 Ala Glu Lys Gly Ala His 570 Ala Glu Leu Met 575 Ala Lys Arg Gly Leu Tyr 580 Tyr Ser Leu Vai 585 Met Ser Gin Asp Ile 590 Lys Lys Ala Asp Glu 595 Gin Met Glu Ser Met Thr 600 Tyr Ser Thr Glu 605 Arg Lys Thr Asn Ser 610 Leu Pro Leu His Ser Vai Lys 615 Ser Ile Lys 620 Ser Asp Phe Ile Asp Lys 625 Ala Glu Glu Ser 630 Thr Gin Ser Lys Glu 635 Ile Ser Leu Pro Glu 640 Vai Ser Leu Leu Lys 645 Ile Leu Lys Leu Asn Lys 550 Pro Glu Trp Pro 655 Phe Vai Vai Leu Gly Thr 660 Leu Ala Ser Vai 665 Leu Asn Gly Thr val 670 His Pro Vai Phe Ser 675 Ile Ile Phe Ala Lys Ile 680 Ile Thr Met Phe 685 Gly Asn Asn Asp Lys 690 Thr Thr Leu Lys His Asp Ala 695 Glu ile Tyr 700 Ser Met Ile Phe Vai Ile 705 Leu Gly Vai Ile 710 Cys Phe Vai Ser Tyr 715 Phe Met Gin Gly Leu 720 Phe Tyr Gly Arg Ala 725 Gly Glu Ile Leu Thr Met 730 Arg Leu Arg His 735 Leu Ala Phe Lys Ala Met 740 Leu Tyr Gin Asp 745 Ile Ala Trp Phe Asp 750 Glu Lys Glu Asn Ser 755 Thr Gly Gly Leu Thr Thr 760 Ile Leu Ala Ile 765 Asp Ile AXs. Gin Ile 770 Gin Gly Ala Thr Gly Ser Arg 775 Ile Gly Val 780 Leu Thr Gin Asn Ala Thr 785 Asn Met Gly Leu 790 Ser Vai Ile Ile Ser 795 Phe Ile Tyr Gly Trp 800 42

Glu Met Thr Phe Leu 805 Ile Leu Ser Ile Ala 810 Pro Val Leu Ala Val 815 Thr Gly Met Ile Glu 820 Thr Ala Ala Met Thr 825 Gly Phe Ala Asn Lys 830 Asp Lys Gin Glu Leu 835 Lys His Ala Gly Lys 840 Ile Ala Thr Glu Ala 845 Leu Glu Asn Ile Arg 850 Thr Ile Val Ser Leu 855 Thr Arg Glu Lys Ala 860 Phe Glu Gin Met Tyr Glu 865 Glu Met Leu Gin 870 Thr Gin His Arg Asn 875 Thr Ser Lys Lys Ala 880 Gin Ile Ile Gly Ser 885 Cys Tyr Ala Phe Ser 890 His Ala Phe Ile Tyr S9S Phe Ala Tyr Ala Ala 900 Gly Phe Arg Phe Gly 905 Ala Tyr Leu Ile Gin 910 Ala Gly Arg Met Thr 915 Pro GlU Gly Met Phe 920 ile Val Phe Thr Ala 925 Ile Ala Tyr Gly Ala 930 Met Ala lie Gly Lys 935 Thr Leu Val Leu Ala 940 Pro Glu Tyr Ser Lys 945 Ala Lys Ser Gly Ala 950 Ala His Leu Phe Ala 955 Leu Leu Glu Lys Lys 960 Pro Asn Ile Asp Ser Arg 965 Ser Gin Glu Gly 970 Lys Lys Pro Asp Thr 975 Cys Glu Gly Asn Leu 980 Glu Phe Arg Glu Val 985 Ser Phe Phe Tyr Pro 990 Cys Arg

Pro Asp Val Phe Ile Leu Arg Gly Leu Ser Leu Ser Ile Glu Arg Gly 995 1000 1005

Lys Thr 1010 Val Ala Phe Val Gly 1015 Ser Ser Gly Cys Gly 1020 Lys Ser Thr Ser Val 1025 Gin Leu Leu Gin Arg 1030 Leu Tyr Asp Pro Val 1035 Gin Gly Gin Val Leu 1040 Phe Asp Gly Val Asp 1045 Ala Lys Glu Leu Asn 1050 Val Gin Trp Leu Arg 1055 Ser Gin Ile Ala Ile 1060 Val Pro Gin Glu Pro 1065 Val Leu Phe Asn Cys 1070 Ser Ile Ala Glu Asn 1075 Ile Ala Tyr Gly Asp 1080 Asn Ser Arg Val val 1085 Pro Leu Asp Glu ile 1090 Lys Glu Ala Ala Asn 1095 Ala Ala Asn Ile His 1100 Ser Phe Ile Glu Gly 1105 Leu Pro Glu Lys Tyr 1110 Asn Thr Gin

Val Gly Leu Lys Gly Ala Gin Leu Ser Gly Gly Gin Lys Gin Arg 1115 1120 1125 43

Leu Ala 1110 "lie Ala Arg Ala Leu 1135 Leu Gin Lys Pro Lys 1140 Ile Leu Leu Leu Asp 1145 Glu Ala Thr Ser Ala 1150 Leu Asp Asn Asp Ser 1155 Glu Lys Val Vai Gin 1160 His Ala Leu Asp Lys 1165 Ala Arg Thr Gly Arg 1170 Thr Cys Leu Vai Val 1175 Thr His Arg Leu Ser 1180 Ala Ile Gin Asn Ala 1185 Asp Leu Ile Val Val 1190 Leu His Asn Gly Lys 1195 Ile Lys Glu Gin Gly 1200 Thr His Gin Qlu Leu 1205 Leu Arg Asn Arg Asp 1210 Ile Tyr Phe Lys Leu 1215 Val Asn Ala Gin Ser 1220 val Gin <2 Λ o \—1 6 <2 11> 1195 <2 12> PRT <2 13> Homo <4 Λ o o 6

Met 1 Ile Leu Gly Ile 5 Leu Ala Ser Leu Val 10 Asn Gly Ala Cys Leu 15 Pro Leu Met Pro Leu 20 Val Leu Gly Glu Met 25 Ser Asp Asn Leu Ile 30 Ser Gly Cys Leu Val 35 Gin Thr Asn Thr Tyr 40 Ser Phe Phe Arg Leu 45 Thr Leu Tyr Tyr Val 50 Gly Ile Gly Val Ala 55 Ala Leu Ile Phe Gly 60 Tyr ile Gin Ile Ser 65 Leu Trp Ile ile Thr 70 Ala Ala Arg Gin Thr 75 Lys Arg ile Arg Lys 80 Gin Phe Phe His Ser 85 Val Leu Ala Gin Asp 90 Ile Gly Trp Phe Asp 95 Ser Cys Asp Ile Gly 100 Glu Leu Asn Thr Arg 105 Met Thr Asp Ile Asp 110 Lys Ile Ser Asp Gly 115 Ile Gly Asp Lys Ile 120 Ala Leu Leu Phe Gin 125 Asn Met Ser Thr Phe 130 Ser Ile Gly Leu Ala 135 Val Gly Leu Val Lys 140 Gly Trp Lys Leu Thr 145 Leu Val Thr Leu Ser 150 Thr Ser pro Leu Ile 155 Met Ala Ser Ala Ala 160 44

Ala Cys Ser Arg Tyr Ser Lys Ala 180 Thr Vai Ile 195 Ala Gin Asn 210 Leu Lys Ser Lys 225 Vai Ser Gly Leu Ala Phe Gly Tyr Thr Ile 260 Ser Ser Tyr 275 Cys Ile Ala 290 Arg Gly Fro 305 Ser Xle Asp Gin Gly Thr Vai Pro Ser Xle Lys 340 Glu Thr vai 355 Ala Vai Gin 370 Leu Leu Vai 385 Asp Glu Asn HÍS Ile Gly Vai Ser Asn Asn Ile 420 Gin Arg Ala 435 Ala Pro Asn 450 Lys Phe Gly Gly 4S5 Gin Lys Pro Lys Ile Leu

Met 165 vai Ile Ser Gly Ala Vai Ala Phe Arg Ala Gin 200 Asp Ala Lys 215 Asp Leu Gly 230 Ala Vai Trp 245 Tyr Gly Thr Gly Thr Vai Leu Ile Gly Ala Ala 280 Ala Ala Phe 295 Bis Asn Phe 31Q Ser Thr Glu 325 Phe Lys Asn Ile Leu Lys Gly Leu Vai Gly Leu 360 Gin Arg Leu 375 Tyr Asp Ile 390 Arg Ala Vai 405 Ser Gin Glu Lys Tyr Gly Arg Arg Glu Ala Asn 440 Asn Thr Leu 455 Vai Gin Arg 470 Ile Ala Ile Leu Asp Glu

Leu Thr 170 Ser Lys Glu 185 Glu Vai Leu Glu Lys Glu Leu Phe Gly Ile Lys 220 Xyr Phe Phe 235 Met Ser Leu 250 Ile Leu Ala 265 Vai Phe Phe Vai Pro His Phe Ile Phe Gin Vai 300 Ala Gly Tyr 315 Lys Vai Ser 330 Phe Asn Leu 345 Asn Leu Arg Asn Gly Ser Gly Asp Pro Asp Asp 380 Leu Asn Vai 395 Arg Pro Vai 410 Leu Phe Asp 425 Asp Vai Thr Ala Tyr Asp Phe Gly Glu Lys Gly 460 Ile Ala Arg 475 Ala Ala Thr 490 Ser Ala

Glu Leu Ser 175 Ala Ser Ser 190 Ile Arg Gin 205 Arg Tyr Thr Arg Thr Ile Ala Asn Gly Thr Tyr 240 Asn Gly Glu 255 Pro Ser Val 270 Ile His Glu 285 Thr Phe Ala Ile Asp Lys Lys Pro Glu Ser Ile 320 Tyr Pro Ser 335 Arg Ile Lys 350 Ser Gly Lys 365 Ser Thr Val Gly Phe Ile Met His Tyr Arg Asp 400 Gly Thr Thr 415 Ile Asp Glu 430 Glu Met Ile 445 Mefc Glu Phe Ala Gin Met Ser Leu Val Arg Asn 480 Leu Asp Ser 495 Glu 485 45

Ser Lys Ser Ma Vai Gin Ma Ala Leu Glu Lys Ala Ser Lys Gly Arg 500 SOS 510 Thr Thr Ile Vai Vai Ala His Arg Leu Ser Thr Ile Arg Ser Ala Asp 515 520 525 Leu Ile vai Thr Leu Lys Asp Gly Met Leu Ala Glu Lys Gly Ma His 530 535 540 Ma Glu Leu Met Ala Lys Arg Gly Leu Tyr Tyr Ser Leu Vai Met Ser 545 550 555 560 Gin Asp Ile Lys Lys Ala Asp Glu Gin Met Glu Ser Met Thr Tyr Ser 565 570 575 Thr Glu Arg Lys Thr Asn Ser Leu Pro Leu His Ser Vai Lys Ser Ile 580 585 590 Lys Ser Asp Phe Ile Asp Lys Ala Glu Glu Ser Thr Gin Ser Lys Glu 595 SOO 605 Ile Ser Leu Pro Glu Vai Ser Leu Leu Lys Ile Leu Lys Leu Asn Lys 610 615 620 Pro Glu Trp Pro Phe Vai Vai Leu Gly Thr Leu Ma Ser vai Leu Asn 625 630 635 640 Gly Thr Vai His Pro Vai Phe Ser Ile Ile Phe Ma Lys Ile Ile Thr 645 650 655 Met Phe Gly Asn Asn Asp Lys Thr Thr Leu Lys His Asp Ala Glu Ile 660 665 670 Tyr Ser Met Ile Phe Vai Ile Leu Gly Vai Ile Cys Phe Vai Ser Tyr 675 680 685 Phe Met Gin Gly Leu Phe Tyr Gly Arg Ala Gly Glu Ile Leu Thr Met 690 695 700 Arg Leu Arg His Leu Ala Phe Lys Ala Met Leu Tyr Gin ASp Ile Ala 705 710 715 720 Trp Phe Asp Glu Lys Glu Asn Ser Thr Gly Gly Leu Thr Thr Ile Leu 725 730 735 Ala Ile Asp Ile Ala Gin Ile Gin Gly Ala Thr Gly Ser Arg Ile Gly 740 745 750 Vai Leu Thr Gin Asn Ala Thr Asn Met Gly Leu Ser Vai Ile Ile Ser 755 760 765 Phe Ile Tyr Gly Trp Glu Met Thr Phe Leu Ile Leu Ser Ile Ma Pro 770 775 780 Vai Leu Ala Vai Thr Gly Met Ile Glu Thr Ma Ma Met Thr Gly Phe 785 790 795 800 Ala Asn Lys Asp Lys Gin Glu Leu Lys His Ma Gly Lys Ile Ma Thr 805 810 815 Glu Ala Leu Glu Asn Ile Arg Thr Ile Vai Ser Leu Thr Arg Glu Lys 820 825 830 46

Ala Phe Glu 835 Gin Met Tyr Glu Glu 840 Met Leu Gin Thr Gin 845 His Arg Asn Thr Ser 850 Lys Lys Ala Gin Ile 855 Ile Gly Ser Cys Tyr 860 Ala Phe Ser His Ala 865 Phe Ile Tyr Phe Ala 870 Tyr Ala Ala Gly Phe 875 Arg Phe Gly Ala Tyr 880 Leu lie Gin Ala Gly 885 Arg Met Thr Pro Glu 890 Gly Met Phe Ile Vai 895 Phe Thr Ala Ile Ala 900 Tyr Gly Ala Met Ala 905 Ile Gly Lys Thr Leu 910 Vai Leu Ala Pro Glu 915 Tyr Ser Lys Ala Lys 920 Ser Gly Ala Ala His 925 Leu Phe Ala Leu Leu 930 Glu Lys Lys Pro Asn 935 Ile Asp Ser Arg Ser 940 Gin Glu Gly Lys Lys 945 Pro Asp Thr Cys Glu 950 Gly Asn Leu Glu Phe 955 Arg Glu Vai Ser Phe 960 Phe Tyr Pro Cys Arg 965 Pro Asp Vai Phe Ile 970 Leu Arg Gly Leu Ser 975 Leu Ser Ile Glu Arg Gly 980 Lys Thr Vai Ala 985 Phe Vai Gly Ser Ser 990 Gly Cys

Gly Lys Ser Thr Ser Vai Gin Leu Leu Gin Arg Leu Tyr Asp Pro Vai 995 1000 1005

Gin Gly 1010 Gin Vai Leu Phe Asp 1015 Gly vai Asp Ala Lys 1020 Glu Leu Asn Vai Gin 1025 Trp Leu Arg Ser Gin 1030 Ile Ala Ile Vai Pro 1035 Gin Glu Pro Vai Leu 1040 Phe Asn Cys Ser Ile 1045 Ala Glu Asn Ile Ala 1050 Tyr Gly Asp Asn Ser 1055 Arg Vai Vai Pro Leu 1060 Asp Glu Ile Lys Glu 1065 Ala Ala Asn Ala Ala 1070 Asn Ile His Ser Phe 1075 Ile Glu Gly Leu Pro 1080 Glu Lys Tyr Asn Thr 1085 Gin Vai Gly Leu Lys 1090 Gly Ala Gin Leu Ser 1095 Gly Gly Gin Lys Gin 1100 Arg Leu Ala Ile Ala 1105 Arg Ala Leu Leu Gin 1110 Lys Pro Lys Ile Leu 1115 Leu Leu Asp Glu Ala 1120 Thr Ser Ala Leu Asp 1125 Asn Asp Ser Glu Lys 1130 Vai Vai Gin His Ala 1135 Leu Asp Lys Ala Arg 1140 Thr Gly Arg Thr Cys 1145 Leu Vai Vai Thr His 1150 Arg Leu Ser Ala Ile 1155 Gin Asn Ala 47

Asp Leu Ile Vai Vai Leu His Asn Gly Lys Ile Lys Glu Gin Gly 1160 1165 1170

Thr His Gin Glu Leu Leu Arg Asn Arg Asp Ile Tyr pfae Lys Leu

117S 1180 118B

Vai Asn Ala Gin Ser Vai Gin 1190 1195 <210> 7 <211> 541 <212> PRT <213> Homo sapiens <22 0> <221> Nota <222> (230)..(230) <223> Xaa na posição 230 representa qualquer L-aminoácido <400> 7

Met Ile Leu Gly Ile Leu Ala Ser Leu Val Asn Gly Ala Cys Leu Pro 1 5 10 15 Leu Met Pro Leu vai Leu Gly Glu Met Ser Asp Asn Leu Ile Ser Gly 20 25 30 Cys Leu Vai Gin Thr Asn Thr Tyr Ser Phe Phe Arg Leu Thr Leu Tyr 35 40 45 Tyr Vai Gly Ile Gly Val Ala Ala Leu Ile Phe Gly Tyr Ile Glu Ile 50 55 60 Ser Leu Trp Ile Ile Thr Ala Ala Arg Gin Thr Lys Arg Ile Arg Lys 65 70 75 80 Gin Phe Phe His Ser Val Leu Al& Glu ASp Ile Gly Trp Phe Asp Ser 85 90 95 Cys Asp Ile Gly Glu Leu Asn Thr Arg Met Thr Asp Ile Asp Lys Ile 100 105 110 Ser Asp Gly Ile Gly Asp Lys Ile Ala Leu Leu Phe Gin Asn Met Ser 115 120 125 Thr Phe Ser Ile Gly Leu Ala Val Gly Leu Val Lys Gly Trp Lys Leu 130 135 140 Thr Leu Vai Thr Leu Ser Thr Ser Pro Leu Ile Met Ala Ser Ala Ala 145 150 155 160 Ala Cys ser Arg Met Val Ile Ser Leu Thr Ser Lys Glu Leu Ser Ala 165 170 175 48

Tyr ser Lys Ala Gly Ala Vai Ala Glu Glu Vai Leu Ser Ser Ile Arg 180 185 190 Thr Vai Ile Ala Phe Arg Ala Gin Glu Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe 195 200 205 Leu Leu Asn Ile Thr Arg Tyr Ala Trp Phe Tyr Phe Pro Gin Trp Leu 210 215 220 Leu Ser Cys Vai Leu Xaa Phe Vai Arg Tyr Thr Gin Asn Leu Lys Asp 225 230 235 240 Ala Lys Asp Phe Gly Ile Lys Arg Thr Ile Ala Ser Lys Vai Ser Leu 245 250 255 Gly Ala Vai Tyr Phe Phe Met Asn Gly Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Trp 260 265 270 Tyr Gly Thr Ser Leu Ile Leu Asn Gly Glu Pro Gly Tyr Thr Ile Gly 275 280 285 Thr Vai Leu Ala Vai Phe Phe Ser Vai Ile His Ser Ser Tyr Cys Ile 290 295 300 Gly Ala Ala Vai Pro His Phe Glu Thr Phe Ala Ile Ala Arg Gly Ala 305 310 315 320 Ala Phe His Ile Phe Gin Vai Ile Asp Lys Lys Pro Ser Ile Asp Asn 325 330 335 Phe Ser Thr Ala Gly Tyr Lys Pro Glu Ser Ile Glu Gly Thr Vai Glu 340 345 350 Phe Lys Asn Vai Ser Phe Asn Tyr Pro Ser Arg Pro Ser ile Lys Ile 355 360 365 Leu Lys Gly Leu Asn Leu Arg Ile Lys Ser Gly Glu Thr Vai Ala Leu 370 375 380 Vai Gly Leu Asn Gly Ser Gly Lys Ser Thr Vai Vai Gin Leu Leu Gin 385 390 395 400 Arg Leu Tyr Asp Pro Asp Asp Gly Phe Ile Met Vai Asp Glu Asn Asp 405 410 415 Ile Arg Ala Leu Asn Vai Arg His Tyr Arg Asp His Ile Gly Vai Vai 420 425 430 Ser 61» Glu Pro Vai Leu Phe Gly Thr Thr Ile Ser Asn Asn Ile Lys 435 440 445 Tyr Gly Arg Asp Asp Vai Thr Asp Glu Glu Met Glu Arg Ala Ala Arg 450 455 460 Glu Ala Asn Ala Tyr Asp Phe Ile Met Glu Phe Pro Asn Lys Phe Asn 465 470 475 480 Thr Leu Vai Gly Glu Lys Gly Ala Gin Met Ser Gly Gly Gin Lys Gin 485 490 495 Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Leu Vai Arg Asn Pro Lys Ile Leu Ile 500 505 510 49

Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ser Glu Ser Lys Ser Ala Vai SIS 520 525

Gin Ala Ala Leu Glu Lys Asp Thr Pro Arg Tyr Ser Phe 530 535 540 <210> 8 <211> 514 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8

Met 1 Ile Leu Gly Ile 5 Leu Ala Ser Leu Vai 10 Asn Gly Ala Cys Leu 15 Pro LeU Met Pro Leu 20 Vai Leu Gly Glu Met 25 Ser Asp Asn Leu Ile Ser Gly 30 Cys Leu Vai 35 Gin Thr Asn Thr Tyr 40 Ser Phe Phe Arg Leu Thr Leu 45 Tyr Tyr Vai 50 Qiy Ile Gly Vai Ala 55 Ala Leu Ile Phe Gly 60 Tyr Ile Gin Ile Ser 65 Leu Trp Ile Ile Thr Ala 70 Ala Arg Gin Thr 75 Lys Arg Xle Arg Lys 80 Gin Phe Phe Bis Ser 85 Vai Leu Ala Gin Asp 90 Ile Gly Trp Phe Asp 95 Ser Cys Asp Ile Gly 100 Glu Leu Asn Thr Arg 105 Met Thr Asp Ile Asp Lvs 110 Ile Ser Asp Gly 115 Ile Gly Asp Lys Ile 120 Ala Leu Leu Phe Gin Asn Met 125 Ser Thr Phe 130 Ser XI e Gly Leu Ala 135 Vai Gly Leu Vai Lys 140 Gly Trp Lys Leu Thr 145 Leu Vai Thr Leu Ser Thr 150 Ser Pro Leu Xle 155 Met Ala Ser Ala Ala 160 Ala Cys Ser Arg Met 165 Vai lie Ser Leu Thr 170 Ser Lys Glu Leu Ser 175 Ala Tyr Ser Lys Ala ISO Gly Ala vai Ala Glu 185 Glu Vai Leu Ser Ser Ile 190 Arg Thr Vai Ile 195 Ala Phe Arg Ala Gin 200 Glu Lys Glu Leu Gin Arg Tyr 205 Thr Gin Asn 23.0 Leu Lys Asp Ala Lys 215 Asp Phe Gly Ile Lys 220 Arg Thr Ile Ala Ser 225 Lys Vai Ser Leu Gly Ala 230 Vai Tyr Phe Phe 235 Met Asn Gly Thr Tyr 240 50

Gly Leu Ala Phe Trp Tyr Gly 245 Thr Ser Leu 250 ile Leu Asn Gly Glu 255 Pro Gly Tyr Thr Ile 260 Gly Thr Vai Leu Ala 265 Vai Phe Phe Ser Vai 270 Ile His Ser Ser Tyr 275 Cys Ile Gly Ala Ala 280 Vai Pro His Phe Glu 285 Thr Phe Ala Ile Ala 290 Arg Gly Ala Ala Phe 235 His Ile Phe Gin Vai 300 Ile Asp Lys Lys Pro Ser 305 He Asp Asn Phe Ser 310 Thr Ala Gly Tyr 315 Lys Pro Glu Ser Ile 320 Glu Gly Thr Vai Glu Phe Lys 325 Asn Vai Ser 330 Phe Asn Tyr Pro Ser 335 Arg Pro ser He Lys 340 Ile Leu Lys Gly Leu 345 Asn Leu Arg Ile Lys 350 Ser Gly Glu Thr Vai 355 Ala Leu Vai Gly Leu 360 Asn Gly Ser Gly Lys 365 Ser Thr Vai Vai Gin 370 Leu Leu Gin Arg Leu 375 Tyr Asp Pro Asp Asp 380 Gly Phe Ile Met Vai Asp 385 Glu Asn Asp Ile Arg 330 Ala Leu Asn Vai 395 Arg Kis Tyr Arg Asp 400 His Xle Gly Vai Vai Ser Gin 405 Glu Pro Vai 410 Leu Phe Gly Thr Thr 415 Ile Ser Asn Asn Ile 420 Lys Tyr Gly Arg Asp 425 Asp Vai Thr Asp Glu 430 Glu Met Glu Arg Ala 435 Ala Arg Glu Ala Asn 440 Ala Tyr Asp Phe Ile 445 Met Glu Phe Pro Asn 450 Lys Phe Asn Thr Leu 455 Vai Gly Glu Lys Gly 460 Ala Gin Met Ser Gly Gly Gin 465 Lys Gin Arg Ile 470 Ala Ile Ala Arg 475 Ala Leu Vai Arg Asn 480 Pro Lys Ile Leu Ile Leu Asp 485 Glu Ala Thr 490 Ser Ala Leu Asp Ser 495 Glu Ser Lys Ser Ala 500 Vai Gin Ala Ala Leu SOS Glu Lys Asp Thr Pro 510 Arg Tyr

Ser Phe <210> 9 <211> 2066

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 9 51 cgagcaaagg tcggactaca atcgtggtag cacaccgact ttctactatt cgaagtgcag 60 atttgattgt gaccctaaag gatggaatgc tggcggagaa aggagcacat gctgaactaa 120 tggcaaaacg aggtctatat tattcacttg tgatgtcaca ggatatfcaaa aaagotgatg 180 aacagatgga gtcaatgaca tattctactg aaagaaagac caaGtcactt cctctgcact 240 ctgtgaagag catcaagtca gacttcattg acaaggctga ggaatccacc caatctaaag 300 agataagtct tcctgaagtc tctctattaa aaattttaaa gttaaacaag cctgaafcggc 360 cttttgtggt tctggggaca ttggcfctctg ttctaaatgg aactgttcafc ccagfcafcttt 420 ccatcatctt tgcaaaaatt ataaccatgt ttggaaataa tgataaaacc acattaaagc 480 atgatgcaga aafcfcfcafcfccc atgatattcg tcattttggg tgttatttgc tttgtcagtt 540 atttcatgca gggattattt tacggcagag caggggaaat tttaacgatg agattaagac 600 acttggcctt caaagccatg ttatatcagg atattgcctg gtttgatgaa aaggaaaaca 660 gcacaggagg cttgacaaca atattagcca tagatatagc acaaattcaa ggagcaacag 720 gttccaggat tggegtctta acacaaaafcg caactaacat gggactttca gttateattt 780 cctttatata tggatgggag atgacattcc tgattctgag tattgctcca gtacttgccg 840 tgacaggaat gattgaaacc gcagcaatga ctggatttgc caacaaagat aagcaagaac 900 tta&gcatgc tggaaagata gcaactgaag ctttggagaa tatacgtact atagtgtcat 960 taacaaggga aaaagccttc gagcaaatgt atgaagagat gcttcagact caacacagaa 1020 ataoctcgaa gaaagcacag attattggaa gctgttatgc attcagccat gcctttatat 1080 attttgccta tgcagcaggg tttcgatttg gagcctattt aattcaagct ggacgaatga 1140 ccccagaggg catgtfccata gtttttactg caattgcata tggagctatg gccatcggaa 1200 aaacgctcgt tttggctcct gaatattcca aagccaaatc gggggctgcg catctgtttg 1260 ccttgttgga aaagaaacca aatafcagaca gccgcagtca agaagggaaa aagccagaca 1320 catgtgaagg gaatttagag tttcgagaag tctctttctt ctatccatgt cgcccagatg 1380 ttttcatcct ccgtggctta tccctcagta ttgagcgagg aaagacagta gcatttgtgg 1440 ggagcagcgg cfcgtgggaaa agcacttctg ttcaacttct gcagagactt tatgacoccg 1500 tgcaaggaca agtgctgttt gatggtgtgg atgcaaaaga attgaatgta cagtggctcc 1560 gttcccaaat agcaatcgtt cctcaagagc ctgtgctctt caactgcagc attgctgaga 1620 acatcgecfca tggtgacaae agccgtgtgg tgccattaga tgagatcaaa gaagccgcaa 1680 atgcagcaaa tatccattct tttattgaag gtctccctga gaaatacaac acacaagttg 1740 gactgaaagg ageacagctt tctggcggcc agaaacaaag actagctatt gcaagggctc 1800 ttctccaaaa acccaaaatt ttattgttgg atgaggccac ttcagccctc gataatgaca 1860 52 gtgagaaggt ggttcagcat gcccttgata aagccaggac gggaaggaca tgcctagtgg 1920 tcactcacag gctctctgca attcagaacg cagatttgat agtggttctg cacaatggaa 1980 agataaagga acaaggaact catcaagagc tcctgagaaa tcgagacata tattttaagt 2040 tagtgaatgc acagtcagtg cagtga 2066 <210> 10 <211> 2856 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 10 cctaattcct ctaatatctc tctgtgagcc taaaccaata attatatatt acattctatt 60 gtctttctta tataactgca gaaagataaa tafccactttg tttgtfccctg taggttttct 120 ttagtgtaat ceatagcagt fcattgcattg gagcagcagt cccticattat tgataagaaa 180 cccagtatag ataacttttc cacagctgga tataaacctg aatccataga aggaactgtg 240 gaatttaaaa atgtttcttt caattatcca tcaagaccat ctatcaagat tctgaaaggt 300 ctgaatctca gaattaagtc tggagagaca gtcgccttgg tcggtctcaa tggcagtggg 360 aagagtacgg tagtccagct tctgcagagg ttatatgatc cggatgatgg ctttatcatg 420 gtggatgaga atgacatcag agctttaaafc gtgcggcatt atcgagacca tattggagtg 480 gttagtcaag agcctgtttt gttcgggacc accatcagta acaatatcaa gtatggacga 540 gatgatgtga ctgatgaaga gatggagaga gcagcaaggg aagcaaatgc gtatgatttt 600 atcafcggagt ttcctaataa atttaataca ttggtagggg aaaaaggagc tcaaatgagt 660 ggagggcaga aacagaggat cgcaattgct cgtgccttag ttcgaaaccc caagattct.g 720 attttagatg aggcfcacgtc tgccctggat tcagaaagca agtcagctgt tcaagctgca 780 ctggagaagg cgagcaaagg tcggacfcaca atcgtggtag cacaccgact tfccfcaefcatt 840 cgaagtgcag atfctgattyt gaccctaaag gatggaatgc tggcggagaa ã99agcacat 900 gctgaactaa tggcaaaacg aggtctatat tattcacttg tgafcgtcaca ggatattaaa 960 aaagctgatg aacagatgga gtcaatgaca tattcfcaetg aaagaaagac caactcactt 1020 cctctgcact ctgtgaagag catcaagtca gacttcattg acaaggctga ggaatecacc 1080 caatctaaag agataagtet tcctgaagtc tctctattaa aaatttfcaaa gttaaacaag 1140 cctgaatggc cttttgtggt totggggaca ttggcttctg ttctaaatgg aactgttcat 1200 ccagtatttt ccatcatctt tgcaaaaatt ataaccatgt ttggaaataa tgataaaácc 1260 acattaaagc atgatgcaga aatttattcc atgatattcg tcattttggg tgttatttgc 1320 53 tttgtcagtt atttcatgca gggattattt tacggcagag caggggaaat tttaacgatg 1380 agattaagac acttggcctt caaagccatg ttatatcagg atattgcctg gtttgatgaa 1440 aaggaaaaca gcacaggagg cttgacaaca atattagcca fcagatatagc acaaattcaa 1500 ggagcaacag gttccaggat tggcgtctta acacaaaatg caactaaçat gggactttca 1560 gttatcattt cctttatata tggatgggag atgacattcc tgattcfcgag tattgctcca 1620 gtacttgccg fcgacaggaafc gattgaaacc gcagcaatga ctggatttgc caacaaagat 1680 aagcaagaac ttaagcatgc tggaaagata gcaacfcgaag ctttggagaa tatacgtact 1740 atagtgtcat taacaaggga aaaagccttc gagcaaatgt atgaagagat gcttcagact 1800 caacacagaa atacctcgaa gaaagcacag atfcattggaa gctgttatgc attcagccat 1860 gcctttatat attttgccta fcgcagcaggg ttfccgatttg gagcctattt aattcaagct 1920 ggacgaatga ccccagaggg catgttcata gttttfcaetg caattgcata fcggagctatg 1980 gccatcggaa aaacgctcgt tttggctcct gaatattcca aagccaaatc gggggctgcg 2040 catctgtttg ccttgttgga aaagaaacca aatatagaca gccgcagtca agaagggaaa 2100 aagccagaca catgtgaagg gaatttagag tttcgagaag tctctttctt ctatccatgt 2160 cgcccagatg ttttcatcct ccgtggctta tccctcagta ttgagcgagg aaagacagtâ 2220 gcatttgtgg ggagcagcgg ctgtgggaaa agcacttctg ttcaacttct gcagagacfct 2280 tatgaccecg tgcaaggaea agtgctgttt gatggtgtgg atgcaaaaga attgaatgta 2340 cagtggctcc gttcccaaat agcaatcgtt cctcaagagc ctgtgctctt caactgcagc 2400 attgctgaga acatcgccta tggtgacaac agccgtgtgg tgccattaga fcgagatcaaa 2460 gaagccgcaa atgcagcaaa tatocattct tttattgaag gtctccctga gaaatacaac 2520 acacaagttg gactgaaagg agcacagctt tctggcggcc agaaacaaag actagctatt 2580 gcaagggctc ttctccaaaa acccaaaatt ttattgttgg atgaggccac ttcagccctc 2640 gataatgaca gtgagaaggfc ggttcagcat gcccttgata aagccaggac gggaaggaca 2700 tgcctagtgg tcactcacag gctctctgca attcagaacg cagatttgat agtggttctg 2760 cacaatggaa agataaagga acaaggaact catcaagagc tcetgagaaa tcgagacata 2820 tattttaagt tagfcgaatgc acagtcagtg cagtga 2856

<210> 11 <211> 1175 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 11 54 cctaattcct ctaatatctc tctgtgagcc taaaccaata attatatatt acattctatt 60 gtctttctta tataactgca gaaagataaa tatcactttg tttgttcctg taggttttct 120 ttagtgtaat ccatagcagt tattgcattg gagcagcagt ccctcattat tgataagaaa 180 cccagtatag ataactttfcc cacagctgga tataaacctg aatccataga aggaactgtg 240 gaatttaaaa atgtttcttt caattatcca tcaagaccat ctatcaagat tctgaaaggt 300 ctgaatctca gaattaagtc tggagagaca gtcgccttgg tcggtctcaa tggcagtggg 360 aagagtacgg tagtccagct tctgcagagg ttatatgatc cggatgatgg ctttatcatg 420 gtggatgaga atgacatcag agetttaaat gtgcggcatt atcgagacca tattggagtg 480 gttagfceaag agectgtttt gttcgggacc acaatcagta acaatatcaa gtatggacga 540 gatgatgtga ctgatgaaga gatggagaga gcagcaaggg aagcaaatgc gtatgatttt 600 atcatggagt fctcctaataa atttaataca ttggtagggg 3. St 3 S § ^ B. 5 tcaaatgagt 660 ggagggcaga aacagaggat cgcaattgct cgtgccttag ttcgaaaccc caagattctg 720 attttagatg aggctacgtc tgccctggat tcagaaagca agtcagctgt tcaagctgca 780 ctggagaagg atacccccag gtattcattt tgacctaatt tcacctcaag tggagaatcg 840 ctgaccttga accagcgccc ttcgacagct ctggcccctc aaacctcacc ctgacctcct 900 gctgcctatg agctactgca eatacctcaa ggccatatgc agttgtggcc ctgcaccaaa 960 ttacactgaa tctaggaggg gagttggcag tggcggtatg aaaaaccatt gaacagtttt 1020 ctcgatggcc tgactccctt ataaaccaga gccttcagac cccttacaag gcttaatggc 1080 acattttact ttgcatttgc ttggaagtga gttaagcgtt tttttttctc taagaaaatc 1140 gcaggcttct ttttttaaaa tgctgacttt atgga 1175

<210> 12 <211> 3177 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0> <221> Nota <222> (198)..(198) <223> η na posição 198 representa qualquer nucleótido (A, T, C ou G) 55 <4 Ο 0> 12 atggtcafcet cattgaccag taaggaatta agtgcctatt ccaaagctgg ggctgtggca 60 gaagaagtct tgtcatcaat ccgaacagtc atagccttta gggcccagga gaaagaactt 120 caaaggtctt tccttttaaa tataacaaga tatgcttggt tttattttcc ccagtggeta ISO ctaagttgtg ttctgttntt tgtaaggtat acacagaatc tcaaagatgc aaaggatttt 240 ggcataaaaa ggactatagc ttcaaaagtg tctcttggtg etgtgtactt ctttatgaat 300 ggaacctatg gacttgcttt ttggtatgga acctccttga ttcttaatgg agaacctgga 3 60 tataccatcg ggactgttct tgotgttttc tttagtgtaa fcccatageag ttattgcatt 420 ggagcagcag tccctcactt tgaaaccttc gcaatagccc gaggagctgc ctttcatatt 460 ttccaggtta ttgataagaa acccagfcata gataacfcttt ccaeagctgg atataaacct 540 gaatccatag aaggaactgt ggaatttaaa aatgtttctt tcaattatcc atoaagacca 600 tctatcaaga ttctgaaagg tctgaatctc agaattaagt ctggagagac agtcgccttg 660 gtcggfcctca atggcagtgg gaagagtacg gtagtccagc ttctgcagag gttatatgat 720 ccggatgatg gctttatcat ggtggatgag aatgacatca gagctttaaa tgtgcggcat 780 tatcgagacc atattggagt ggttagtcaa gagcctgttC tgttcgggac caccatcagt 840 aacaatatca agtatggacg agatgatgtg actgatgaag agatggagag agcagcaagg 900 gaagcaaatg cgtatgattt tatcatggag tttcctaata aafcfctaatac attggtaggg 960 gaaaaaggag ctcaaatgag tggagggcag aaacagagga tcgcaattgc tcgtgcctta 1020 gttcgaaacc ccaagattct gattttagat gaggctacgt ctgccctgga ttcagaaagc 1080 aagtcagctg ttcaagctgc actggagaag gcgagcaaag gtcggactac aatcgtggta 1140 gcacaccgac tttotactat tcgaagtgca gatttgattg tgaccctaaa ggatggaatg 1200 etggcggaga aaggagcaca tgctgaacta atggcaaaac gaggtctata ttattcactt 1260 gtgatgtcac aggatatfcaa aaaagctgat gaacagatgg agtcaatgac atattctact 1320 gaaagaaaga ccaactcact tcctctgcac tctgtgaaga gcatcaagtc agacttcatt 1380 gacaaggctg aggaatccac ccaatctaaa gagataagte ttccfcgaagt ctctctatta 1440 aaaattfcfcaa agttaaacaa gcctgaatgg ccttttgtgg ttctggggac atfcggcttct 1500 gttctaaatg gaactgttca tccagtattt tccatcatct ttgcaaaaat tataaccatg 1560 tttggaaata atgataaaac cacattaaag catgatgcag aaatttattc catgatatto 1620 gtcattttgg gtgttatttg ctttgtcagt tatttcatgc agggattatt ttacggcaga 1680 gcaggggaaa ttttaacgat gagattaaga cacttggcct tcaaagccat gttatatcag 1740 gatattgcct ggtttgatga aaaggaaaac agcacaggag gcttgacaac aatattagcc 1800 atagatatag caeaaattca a-Sgagcaaca ggttceagga ttggcgtctt aacacaaaat 1860 56 gcaactaaca tgggactttc agttafccatt tcctttatat atggatggga gatgacatfec 1920 ctgattctga gtattgctcc agtacttgcc gtgacaggaa tgattgaaac cgeagcaatg 1980 acfcggattfcg ccaacaaaga taagcaagaa cttaagcatg ctggaaagat agcaactgaa 2040 gctttggaga atatacgtac tatagfcgfcca ttaacaaggg aaaaagcctt cgageaaatg 2100 tatgaagaga tgcttcagac tcaacacaga aatacctcga agaaagcaca gattattgga 2160 agctgttatg eattcagcca tgcctttata tattttgcct atgcagcagg gtttcgattt 2220 ggagcctatt taattcaagc tggacgaatg accccagagg gcatgfctcat agfcttttact 2280 gcaattgeat atggagctat ggccatcgga aaaacgctcg ttttggctce tgaatattcc 2340 aaagccaaafc cgggggcfcgc gcatctgttt gocttgttgg aaaagaaacc aaatatagac 2400 agcogcagtc aagaagggaa aaagccagae acatgtgaag ggaatttaga gtttcgagaa 24SQ gtctctttct tctatccatg tcgcccagat gttttcatcc fcecgtggctt atcecteagfc 2520 attgagcgag g&aagacagt agcatttgtg gggagcagog gctgtgggaa aagcacttct 2580 gtfccaacttc tgcagagact ttafcgacccc gtgçaaggac aagtgctgtfc tgatggfcgtg 2640 gatgcaaaag aattgaatgt acagtggctc cgtteccaaa tagcaatcgt tcctcaagag 2700 cctgtgctct tcaactgcag cattgctgag aacatcgcct atggtgacaa. cagccgtgtg 2760 gtgccafctag atgagafccaa agaagecgca aatgcagcaa atatccattc ttttattgaa 2820 ggtctccctg agaaataeaa cacacaagtt ggactgaaag gagcacagct ttctggcggc 2880 eagaaacaaa gactagctat tgcaagggct cfctctccaaa aacçeaaaat tttattgttg 2940 gatgaggcca cttcagccct cgataatgac agtgagaagg tggtteagca tgcccttgat 3000 aaagccagga cgggaaggac atgcctagtg gteacfccaca ggctctctgc aattcagaac 3060 gcagattfcga tagtggttcfc gcaoaatgga aagataaagg aacaaggaac fccatcaagag 3120 ctcctgagaa atcgagacat atattfcfcaag ttagtgaatg cacagtcagt gcagtga 3177 <210> 13 <211> 3702 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0> <221> Nota <222> (723)..(723) <223> η na posição 723 representa qualquer nucleótido (A, T, C ou G) <400> 13 57 ttccgctttg ctgatggact ggacatcaca ctcatgatcc tgggtatact ggcatcactg €0 gtcaatggag cctgccttcc tttaatgcca ctggttttag gagaaatgag fcgataacctt 120 attagtggat gtctagtcca aactaacaca tactctttct tcaggttgac cctgtattat 180 gttggaatag gtgttgctgc cttgattttt ggttacatac agatttcctt gtggattata 240 actgeagcac gacagaccaa gaggattcga aaacagtttt ttcattcagt tttggcacag 300 gacatcggct ggtttgatag ctgtgacatc ggtgaactta aeaetcgcat gacagacatt 360 gacaaaatca gtgatggtat tggagataag attgctctgfc tgtttcaaaa catgtctact 420 ttttcgattg gcctggcagt tggtttggtg aagggctgga aactcaccct agtgactcta 480 tccacgtctc ctettataat ggcttcagcg gcagcatgtt ctaggatggt catctcattg 540 accagfcaagg aattaagtgc ctattccaaa gctggggctg tggcagaaga agtcttqtca 600 tcaatccgaa oagtcatagc ctttagggcc caggagaaag aacttcaaag gtcttfccctt 660 ttaaatataa caagatatgc ttggttttat tttccccagt ggctactaag ttgtgttctg 720 ttntttgtaa ggtatacaca gaatctcaaa gatgcaaagg attttggcat aaaaaggact 780 atagcttcaa aagtgtctct tggtgctgtg tacfctcttta tgaatggaac ctatggactt 840 gctttttggt atggaacctc cttgattctt aatggagaac ctggatatac catcgggact 900 gttcttgctg ttttctttag tgtaatccat agcagttatt gcattggagc agcagtccct 960 cactttgaaa ccttcgcaat agcccgagga gctgcctttc atattttcca ggttattgat 1020 aagaaaccca gtatagataa cttttccaca gctggatata aacctgaatc catagaagga 1080 actgtggaat ttaaaaatgt ttctttcaat tatccafccaa gaccatctat caagattctg 1140 aaaggtctga atctcagaat fcaagtctgga gagacagtcg ccttggtcgg tctcaatggc 1200 agtgggaaga gtacggtagt ccagcttctg cagaggfctat atgatccgga tgatggcttt 1260 atcatggtgg atgagaatga catcagagct ttaaatgtgc ggcattatcg agaccatatt 1320 ggagtggtta gfccaagagec tgtfcttgttc gggaccacca fcçagtaacaa tatcaagtat 1380 ggacgagatg atgtgactga tgaagagatg gagagagcag caagggaagc aaatgcgtat 1440 gafctttatca tggagtttcc taataaattt aatacattgg taggggaaaa aggagctcaa 1500 atgagtggag ggcagaaaca gaggatcgca attgctcgtg ccttagttcg aaaccccaag 1560 attctgattt tagatgaggc tacgtctgcc ctggattcag aaagcaagtc agctgttcaa 1620 gctgcactgg agaaggcgag caaaggtcgg actacaatcg tggtagcaca ccgactttct 1680 actattcgaa gtgcagattt gattgtgacc ctaaaggatg gaatgctggc ggagaaagga 1740 geacatgctg aaetaatggc aaaacgaggt ctatattatt cacttgtgat gtcacaggat 1800 attaaaaaag ctgatgaaoa gatggagtca atgacatatt ctactgaaag aaagaccaac 1860 58 tcacttcctc tgcactctgt gaagagcatc tccacccaat ctaaagagat aagtcttcct aacaagcctg aatggccttt tgtggttctg gttcafcccag tattttccat catctttgea aaaaccacat taaagcafcga tgcagaaatt atttgctttg tcagttattt catgcaggga acgatgagat taagacactt ggccttcaaa gatgaaaagg aaaacagcac aggaggcttg attcaaggag caacaggttc caggafctggc ctttcagtta fccatttcctt tatatatgga gctccagtac tfcgccgtgac aggaatgatt aaagataagc aagaacttaa gcatgctgga cgtactatag tgtcafctaac aagggaaaaa cagactcaac acagaaatac ctcgaagaaa agccatgcct ttatatattt tgcctatgca caagctggac gaatgacccc agagggcatg gctatggcca tcggaaaaac gctcgfcttfcg gctgcgcatc tgtttgcctt gttggaaaag gggaaaaagc cagacacatg tgaagggaat ccatgtcgcc cagatgtfctt catcctccgt acagtagcat ttgtggggag cagcggctgt agactttatg accccgtgca aggacaagtg aatgfcacagt ggctccgttc ccaaatagca tgcagcattg ctgagaacat cgcctatggt atcaaagaag ccgcaaatgc agcaaatatc tacaacacac aagttggact gaaaggagca gctattgcaa gggetcttct ccaaaaaccc gcectcgata atgacagtga gaaggtggtt aggacatgcc tagtggtcac tcacaggctc gttctgcaca atggaaagat aaaggaacaa gacatatatt ttaagttagt gaatgcacag aagtcagact tcattgacaa ggctgaggaa gaagtctctc tattaaaaat tttaaagtta gggacattgg cttctgttct aaatggaact aaaattataa ccatgtttgg aaataatgat tattccatga tattcgtcat tttgggtgtt ttattttacg gcagagcagg ggaaatttta gccatgttat atcaggatat tgcctggttt acaacaatat tagccataga tatagcacaa gtcttaacac aaaatgcaac taacatggga tgggagatga cattcctgat tctgagtatt gaaaccgcag caatgactgg atttgccaac aagatagcaa ctgaagcttt ggagaatata gccttcgagc aaatgtatga agagatgctt gcaeagatta ttggaagctg ttatgcattc gcagggtttc gatttggagc ctatttaatt ttcatagttt ttactgcaat tgcatatgga gctcctgaat attccaaagc caaatcgggg aaaccaaata tagacagccg cagtcaagaa ttagagtttc gagaagtctc tttcttctat ggcttatccc tcagtattga gcgaggaaag gggaaaagca cttctgttca acfcfcctgcag ctgtttgatg gtgfcggatgc aaaagaattg atcgttcctc aagagcctgt gctcttcaac gacaacagcc gtgtggtgcc attagatgag cattctttta ttgaaggtct ccctgagaaa cagctttctg gcggccagaa acaaagacta aaaattttat tgttggatga ggccacttea cageatgccc ttgataaage caggacggga tctgcaattc agaacgcaga tttgatagtg ggaactcatc aagagctcct gagaaatcga tcagtgcagt ga 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 354 0 3600 3660 3702 59

<210> 14 <211> 3621 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 14 ttccgctttg ctgatggact ggacatcaca cfccatgatcc tgggtatact ggcatcactg €0 gtcaatggag cctgccttcc tttaatgcca ctggttttag gagaaatgag tgataacctt 120 attagtggat gtctagtcca aactaacaca tactctttct tcaggttgao cctgtattat 180 gttggaatag gtgttgetgc cttgattttt ggttacatac agatttcctt gtggattata 24 0 actgcagcac gacagaccaa gaggattcga aaacagtttt ttcattcagt tttggcacag 300 gacatcggct ggtttgatag ctgtgacatc ggtgaactta acaotcgcat gacagacatt 360 gacaaaatca gtgatggtat tggagataag attgctctgt tgtfctcaaaa catgtctact 420 ttttcgattg gcctggcagt tggtttggtg aagggctgga aactcacccfc agtgactcta 480 tccacgtctc ctcttataat ggcttcagcg gcagcatgtt ctaggatggt catctcattg 540 aecagtaagg aattaagtgc ctattccaaa gctggggctg tggcagaaga agtcttgtca 600 tcaatccgaa cagtcafcagc cfcfctagggcc caggagaaag aacttcaaag gtatacaeag 660 aatctcaaag atgcaaagga ttttggcata aaaaggacta tagcttcaaa agtgtctctt 720 ggtgctgtgt acttctttat gaatggaacc tatggacttg ctttttggta tggaacctcc 780 ttgattctta atggagaacc tggatatacc atcgggactg tfccfctgçtgt tfctctttagt 840 gtaatccata gcagttatfcg cattggagca gcagtccefcc actttgaaac cttcgcaata 900 gcocgaggag ctgcctttca tattttccag gttattgata agaaacccag tatagataac 960 ttttccacag ctggatataa acctgaatcc atagaaggaa ctgtggaatt taaaaatgtt 1020 tctttcaatt atccatcaag accatctatc aagattctga aaggtctgaa tctcagaatt 1080 aagtctggag agacagtcgc cttggtcggt ctcaatggca gtgggaagag tacggtagtc 1140 cagcttctgc agaggttata tgatccggat gatggcttta tcatggtgga tgagaatgac 12 00 atcagagctt taaatgtgcg gcattatcga gaccatattg gagtggttag tcaagagcct 1260 gttttgttcg ggaccaccat cagtaacaat atcaagtatg gacgagatga tgtgactgat 1320 gaagagatgg agagagcagc aagggaagca aatgcgtatg attttatcat ggagtttcct 1380 aataaattta atacattggt aggggaaaaa ggagctcaaa tgagtggagg gcagaaacag 1440 aggatcgcaa ttgctcgtgc cttagttcga aaccccaaga ttctgatttt agatgaggct 1500 acgtctgccc tggattcaga aagcaagtca gctgttcaag ctgcactgga gaaggcgagc 1560 60 aaaggtcgga ctacaatcgt ggtagcacac cgactfctcta ctattcgaag tgcagatttg 1620 attgtgaccc taaaggatgg aatgctggcg gagaaaggag cacatgctga actaatggca 1680 aaacgaggtc fcatattattc acttgtgatg tcacaggata ttaaaaaage tgatgaacag 1740 atggagtcaa tgacatattc tactgaaaga aagaccaact cacttcctct gcactctgtg 1800 aagagcatca agtcagaefcfc cattgacaag gctgaggaat ccacccaatc taaagagata 1860 agtcttcctg aagtctctct attaaaaatt ttaaagttaa acaagcctga atggcctttt 1920 gtggttctgg ggacattggc ttctgttcta aatggaactg ttcatccagt attttccatc 1580 atctttgcaa aaattataac catgtttgga aataatgata aaaccacatt aaagcatgat 2040 gcagaaattt attccatgat attcgtcatt ttgggtgtta tttgctttgt cagttatttc 2100 atgcagggat fcattttacgg cagagcaggg gaaattttaa cgatgagatt aagacacttg 2160 gccttcaaag ccatgttata tcaggatatt gcctggtttg atgaaaagga aaacagcaca 2220 ggaggcttga caacaatatt agccatagat afcagcacaaa ttcaaggagc aacaggttcc 2280 aggattggcg tcttaacaca aaatgcaact aacatgggac tttcagttat catttccfctfc 2340 atatatggat gggagatgac atfccctgatt ctgagtattg ctccagtact tgccgtgaca 2400 ggaatgattg aaaccgcagc aatgactgga tttgccaaca aagataagca agaacttaag 2460 catgctggaa agatagcaac tgaagcfcttg gagaatafcac gtactatagt gtcattaaca 2520 agggaaaaag ccttcgagca aatgtatgaa gagatgcttc agactcaaca cagaaatacc 2580 tcgaagaaag cacagattat tggaagctgt tatgcattca gccatgcctt tatatatttt 2640 gcctatgcag eagggtttcg atttggagcc tatttaattc aagctggacg aatgacccca 2700 gagggcatgt tcatagtttt tactgcaatt gcatatggag ctatggccat cggaaaaacg 2760 ctcgttttgg ctcctgaata ttccaaagcc aaatcggggg ctgcgcatct gtttgccttg 2820 ttggaaaaga aaccaaatat agacagccgc agtcaagaag ggaaaaagcc agacacatgt 2880 gaagggaatt tagagtttcg agaagtctct ttcttctatc catgtcgcec agatgttttc 2940 atcctccgtg gcttatccct cagtattgag cgaggaaaga cagtagcatt tgtggggagc 3000 agcggctgtg ggaaaagcac ttctgttcaa cttctgcaga gactttatga ccccgtgcaa 3060 ggacaagtgc tgtttgatgg tgtggatgca aaagaattga atgtacagtg gctccgttcc 3120 caaatagcaa tcgttcctca agagcctgtg ctctfccaact gcagcattgc tgagaacatc 3180 gcctatggtg acaacagccg tgtggtgcca ttagatgaga tcaaagaagc cgcaaatgca 3240 gcaaatatcc attcttttat tgaaggtctc cctgagaaat acaacacaca agttggactg 3300 aaaggagcac agctttctgg cggccagaaa caaagactag ctattgcaag ggctcttctc 3360 caaaaaccca aaattttatt gttggatgag gccacttcag ccctcgataa tgacagtgag 3420 61 61 aggacgggaa ggacatgcct agtggtcact 3480 ttgatagtgg ttctgcacaa tggaaagata 3540 agaaatcgag acatatattt taagttagtg 3600 362a aaggtggttc agcatgccct tgataaagcc cacaggctct ctgcaattca gaacgcagat aaggaacaag gaactcatca agagctcctg aatgcacagt cagtgcagtg a

<210> 15 <211> 2021 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0> <221> Nota <222> (723)..(723) <223> n na posição 723 representa qualquer nucleótido (A, T, C ou G) <4 0 0> 15 ttccgctfctg ctgatggact ggacatcaca ctcatgatcc tgggtstaet ggcafccactg 60 gteaatggag cctgccttcc tttaatgcca ctggttttag gagaaatgag tgataaccfct 120 actagtggac gtctagtcca aactaacaca tactocttct tcaggttgac cctgfcattat xao gttggaatag gtgttgctgc cfcfcgattttt ggtcacatac agatttcctt gtggattata 240 actgcagcac gacagaccaa gaggattcga aaacagtttt ttcafctcagt tttggcacag 300 gacafccggct ggtttgatag ctgtgacate ggfcgaactta acactcgcat gacagaeatt 360 gacaaaatca gtgatggtat tggagataag attgctcCgt tgtttcaaaa catgtctact 420 ttttegattg gcctggcagfc tggtttggtg aagggctgga aaotcaccct agtgactcta 48Q tccacgtctc ctcfct&taat ggcttcagcg gcageatgtt ctaggatggt catctcattg 540 accagtaagg aattaagtgc ctafctccaaa gctggggctg tggcagaaga agtcttgtca 600 tcaatccgaa cagtcatagc ctttagggco caggagaaag aacttcaaag gtctttcctt 660 ttaaatataa caagatatgc ttggctttat fcttccccagfc ggctactaag ttgtgttctg 720 ttntttgtaa ggt&tacaea gaatctcaaa gatgcaaagg attttggcat aaaaaggact 760 atagcttcaa aagtgtctct tggtgctgfcg tacttcttta tgaatggaac ctatggactt 640 gctttttggt atggaacctc cttgattctt aatggagaac ctggatatac catcgggact 900 gttcfctgetg ttttctttag tgtaatccat agcagttatt gcattggagc agcaçrtccct 960 cactttgaaa ccttcgcaat agcccgagga gctgoctttc atattttcca ggttattgat 1020 aagaaaccca gtatagataa cttttccaca gctggatata aaccfcgaatc catagaaggs 1080 62 62 acfcgtggaat ttaaaaatgt ttctttcaat tatccatcaa gaceatctat caagattctg 1140 aaaggtctga afcatcagaat taagtctgga gagacagtog ccttggtcgg tctcaatggc 1200 agtgggaaga gtacggtagt ccagcttctg cagaggttat atgatccgga tgatggcttt 1260 atcatggtgg atgagaatga catcagagcfc tfcaaatgtgc ggcattatcg agaccatatt 1320 ggagtggcta gtcaagagcc fcgnttttgttc gggaccacca tcagfcaacaa tafccaagtat 138 0 ggacgagatg afcgtgactga tgaagagatg gagagagcag caagggaagc aaatgcgtat 1440 gattfctatca tggagtttcc taataaattfc aatacattgg taggggaaaa aggagctcaa 1500 atgagtggag ggcagaaaca gaggatcgca attgctcgtg ccttagttcg aaaccccaag 1560 attctgattt tagatgaggc tacgtctgcc ctggattcag aaagcaagtc agctgttcaa 1620 gctgcactgg agaaggatac ccccaggtat tcattttgac ctaatttcac ctcaagtgga 1680 gaatcgotga CCttgaacca gegcccttcg acagetctgg cccctcaaac ctcaccctga 1740 cctcctgctg cctatgagcfc actgcacata cctcaaggcc atatgcagtt gtggccctgc 1800 accaaattac acfcgaatcta sgaggsgagt tggcagtggc ggtatgaaaa accattgaac 1860 agttttctcg atggcctgac tcccttataa accagagcct tcagaccoct taeaaggctt 1S20 aatggcacat tttactttgc atttgcttgg aagtgagtta agcgtttttt tfctctctaag 1980 aaaatcgcag gcttctfcfctt ttaaaatgct gactttatgg a 2021

<210> 16 <211> 1940 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 16 ttccgctttg ctgatggact ggacatcaca ctcatgatcc tgggtatact ggcatcactg 60 gtcaatggag cctgccttcc tttaatgcca ctggttttag gagaaatgag tgataacett 120 atfcagtggat gtctagtcca aactaacaca tactctttct tcaggttgae cctgtattat 180 gttggaatag gtgttgctgc cttgafctttt ggttacatac agattfccctt gtggattata 240 actgcagcac gacagaccaa gaggattcga aaacagtttt ttcattcagt tttggcacag 300 gacatcggct ggtttgatag ctgtgacatc ggtgaactta acactcgcat gacagacatt 360 gacaaaatca gtgatggtat tggagataag attgctctgt fcgtttcaaaa catgtctact 420 ttttcgattg gcctggcagt tggtttggtg aagggctgga aactcaccct agtgactcta 480 tccacgtctc ctcttataat ggcttcagcg gcagcatgfct ctaggatggfe catctcattg S40 600 accagtaagg aattaagtgc ctattccaaa gctggggctg tggcagaaga agtcttgfcca 63 tcaatccgaa cagtcatagc ctttagggcc caggagaaag aacttcaaag gtataeacag €60 aatctcaaag atgcaaagga ttttggcata aaaaggacta tagcttcaaa agtgtctctt 720 ggtgcfcgtgt acttctttat gãatggaacc tatggacttg etttttggta tggaacctcc 780 ttgatfcctta atggagaacc tggatatacc atcgggactg ttcttgctgt tttetttagt 840 gtaatccata gcagttattg cattggagca gcagtccctc actttgaaac cttcgcaata 800 gcccgaggag ctgccfctfcca tattttccag gttattgata agaaacccag tatagataac 960 ttttccacag ctggatataa acctgaatcc atagaaggaa ctgtggaatt taaaaatgtt 1020 totttcaatt atccatcaag accatctatc aagattctga aaggtetgaa tctcagaatt 1080 aagtctggag agacagtcgc cttggtcggt cteaatggca gtgggaagag tacggtagtc 1140 cagcfctctge agaggttata tgatccggat gatggcttta tcatggtgga tgagaafcgac 1200 atcagagctt taaatgtgcg gcattatcga gaccatattg gagtggttag tcaagagccfc 12 60 gttttgttcg ggaeeaccat cagtaacaat atcaagtatg gacgagatga tgtgactgat 1320 gaagagatgg agagagcagc a-ãSGSâagca aatgcgtatg attttatcat ggagtttcet 13 80 sataaattta atacattggt aggggaaaaa ggagctcaaa tgagtggagg gcagaaacag 1440 aggatcgcaa ttgcfcegtgc cttagttcga aaccccaaga ttctgafcttt agatgaggct 1500 acgtctgccc tggattcaga aagcaagtca gctgttcaag ctgcactgga gaaggatacc 1560 cccaggtatt cattttgacc taatttcacc fccaagtggag aafccgctgac cttgaaccag 1620 cgcccttcga cagctctggc ccctcaaacc teaccctgac ctcctgctgc ctatgagcta 1680 ctgcacatac ctcaaggcca tatgcagttg tggccctgca ccaaattaca ctgaatctag 1740 gaggggagtt ggcagtggcg gtatgaaaaa ccattgaaca gttttctcga tggcctgact 1800 cccttataaa ccagagcctt cagacccett acaaggctta atggcacatt ttactttgca 1860 tttgcttgga agtgagttaa gcgttttttt ttctctaaga aaatcgcagg ctfcctttttt 1920 taaaatgctg actttatgga 1940 <210> 17 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 17

Leu Ser Gly Gly Gin Lys Gin Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Leu 15 10 15 64 <210> 18 <211> 15 <212> PRT <213> péptido sintético <4 0 0> 18

Cys Gly Thr Ser Leu Ile Leu Asn Gly Glu Pro Gly Tyr Thr Ile 15 10 15 <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> péptido sintético <4 0 0> 19

Arg Phe Gly Ala Tyr Leu Ile Gin Ala Gly Arg Met Thr Pro Glu Gly 1 Cys 5 10 15

Lisboa, 04 de Novembro de 2013

Claims (5)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Anticorpo isolado especifico para uma glicoproteína P de 7pl5-21, em que a glicoproteína P de 7pl5-21 compreende a SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID N0:5, ou SEQ ID NO:6.

2. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 1, em que o anticorpo está conjugado com uma toxina.

3. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 2, em que a toxina compreende iodo radioativo ou uma toxina química.

4. Anticorpo isolado específico para uma glicoproteína P de 7pl5-21, em que a glicoproteína P de 7pl5-21 compreende a SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, ou SEQ ID NO: 6, para ser utilizado na inibição do crescimento de tumores e/ou na morte celular específica de tumores, ou para ser utilizado no tratamento de quimiorresistência de um tumor, quando é também utilizado um agente quimioterapêutico; e em que o referido tumor compreende melanoma maligno.

5. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 4, em que o agente quimioterapêutico é cisplatina. Lisboa, 04 de Novembro de 2013