Opis patentowy opublikowano: 15.07.1977 87546 MKPC07g 11/00 Int. CI.2 • — ¦¦•¦; C07G ii/oa Twórcy wynalazku: Edward Borowski, Malgbinzata Gumiendak, Maciej Smulikowski, Haona Wojciechowska, Wojciech Giruszeoki Uprawniony z patentu: Politechnika Gdanska, Gdansk (Polska) Sposób otrzymywania N-acylowych pochodnych dezalanylotetainy Piraedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywa¬ nia N-acylowych pochodnych dezalanylotetainy.Antybiotyk 'tetaina, wytwarzany przez szczep V Bacillus pumilus, wykazuje szereg interesujacych wlasnosci biologicznych. Cechuje sie bardzo duza aktywnoscia przeciwdrobnoustrojowa, obejmujac za¬ kresem swego dzialania liczne bakterie grammdo- datnie i gramnuujemne, jaik tez i szereg innych mi¬ kroorganizmów.Szczególnie cenna cecha tetainy jest niska toksycz¬ nosc dla organizmów zwierzecych ,wynikajaca z me¬ chanizmu jej dzialania, który polega na hamowa¬ niu syntezy mureiny sciany komórkowej drobno¬ ustroju ;poprzez zahamowanie inkorporacji pierw¬ szego aminokwasu — alaniny do reszty kwasu N- acetylomuiraimlinowego. Dotychczas nie sa znane an¬ tybiotyki, które hamuja ten proces enzymatyczny.Zbadanie nowego mechanizmu hamowania synte¬ zy mureiny otwiera nowe mozliwosci uzyskiwania nietoksycznych chemoterapeutyków na drodze syn¬ tezy analogów strukturalnych tetainy. Otrzymanie takich analogów jest celowe równiez i ze wzgledu na to, ze sama tetaina jest podatna na dzialanie szeregu enzymów, laitwo powodujacych jej umiie- czynnienie w organizmach zywych. Enzymy te z je- ctaeij sforony powoduja hydiroliize wiazania pepltytdo- wago w czasteczce tetainy, uitworzonegio miiedizy gru¬ pe jkatiboksyllowa L-iailainiiiny, a igirupa aminowa po¬ zostalej dzesdi czajsteczfoi tetainy, jaka jest diezalany- lotetaina. Powsitala w ten sposób wolna dezailanylote- Z taina jest biologicznie niecizynna^ Z drugiej slrbny (te enzymy katalizuja szereg niekorzystnych reakcji, zachodzacych we fragmencie dezalanylotetainówym antybiotykiu, prowadzac równiez do powstania sub- stancji biologicznie nieczynnych.Dotychczas nie sa znane N-acylowe pochodne dezalanylotetainy, jak równiez sposób ich otrzy¬ mywania.Celem wynalazku jest opracowanie sposobu otrzy- io mywania N-acylowych pochodnych dezalanyloteta¬ iny.Sposób otrzymywania N-acylowych pochodnych dezalanylotetainy wedlug wynalazku polega na tym, ze grupe aminowa dezalanylotetainy lub jej po~ !5 chodnych rop. peptydów, jak tetaina acyluje Sie N-chronionymd aminokwasami lub peptydami, wzglednie innymi zwiazkami, zdolnymi dó utworze¬ nia wiazania peptydowego i ewentualnie usuwa znanymi sposobami ochrony grup funkcyjnych z uzyskanego produktu koncowego.Dezalanylotetaina w skrócie DAT jest mieszanina dwóch izomerycznych subsatncji nazwanych dezala¬ nylotetaina A i B, otrzymywanych z tetainy, która równiez jest mieszanina dwóch izomerycznych zwiazków zwanych tetaina A i B. Oba skladniki mieszanin posiadaja te same grupy funkcyjne i wy¬ kazuja podobna reaktywnosc chemiczna. Pólsynte- tyczne pochodne mozna otrzymac w identyczny spo¬ sób zarówno ze sklaidników A i B, jak tez • i' z ich so mieszaniny. 87 54887 546 3 Zaleta sposobu wedlug wynalazku jest wysoka czystosc produktu koncowego, który charakteryzuje sie zwiekszona odpornoscia na dzialanie wspomnia¬ nych wyzej enzymów imieczynniajacych oraz wy- eliminowanie-powstawania produktów ubocznych.Przyklad I. 15 mg dezalanylotetainy A w po¬ staci ^liofilizowanego proszku zawiesza sie w 1 ml suchego dwumetyloformamidu i po wymieszaniu dziala sie 15 mg chlorowodorku chlorku kwasu D-C—)-a-aminofenylooctowego. Reagenty miesza sie przez godzine, nastepnie dodaje sie 5 ml eteru i sa¬ czy wytracany osad zawierajacy glównie D-a-amino^ fenyloacetylodezalanylotetaine.Analiza po krystalizacji z acetonu i wody: N zna¬ lezione: 8,21; N obliczone: 8,429. Jon masowy, uzy¬ skany w widmie spektrometrii masowej technika ^ „field desorption"— 332* , i^r^fyift nrtt 11. 15 mg dezalanylotetainy A -.a««rte»zoAei w 0,1 ml dwumetyloformamidu reaguje z 10 ^m£ N-karbc*sytezWodnika kwasu D-<(—)-a- -aminofenylooctowego, w obecnosci N-metylomorfo- lmy, utrzymujacej pH roztworu w granicach 9. Po godzinie mieszania odparowuje sie prózniowo roz¬ puszczalnik i otrzymuje jako glówny produkt B-a- -aminofenyloacetylodezalanylotetaine.Analiza po krystalizacji z acetonu i wody: N zna¬ lezione: 8,25; N obliczone: 8,429. Jon masowy na widmie spektrometrii masowej, wykonany technika „field desorption" — 332.Przyklad. IU. Do 3,7 mg dezalanylotetainy B rozpuszczonej w 0,5 ml wody, dodaje sie roztwór za¬ wierajacy 1,5 mg N-toariboksyfbezwodniika L-ailaniiny w 0,5 ml telrahydrofuranu. Po 20 godzinach reakcji w 'temperaturze 0°C mieszanine odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem i otrzymuje jako glówny produkt surowa tetaine *B.Analiza po krystalizacji z acetonu i wody: N zna¬ lezione: 10,18; N obliczone: 10,306. Jon masowy na widmie spektrometrii masowej, wykonany technika „field desorption" — 270.Przyklad IV. Do 3,7 mg dezalanylotetainy rozpuszczonej w 0,5 ml wody, dodaje sie roztwór* za¬ wierajacy 2,4 mg N-karboksybezwodnika. L-fenyló- alaniny w 0,5 ml dwumelyioiflormamidu. Po 20 go¬ dzinach reakcji w temperaturze 0°C mieszanine od¬ parowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem i otrzy¬ muje jako glówny produkt L-fenyloalanylodezalany- lotetaine.Analiza po krystalizacji z acetonu i wody: N zna¬ lezione: 8,01; N obliczone: 8,088. Jon masowy na Widmie spektrometrii masowej, wykonany technika „field desorption" — 346.Przyklad V. Do 37 mg dezalanylotetainy, rozpuszczonej w 5 ml ibuforu Michaelisa o pH 8,2 w temperaturze 0°C dodaje sie przy silnym miesza¬ niu roztwór zawierajacy 21,2 mg N-karboksybez- wodnika L-alaniny w 5 ml tetrahydrofuranu. Po godzinach reakcji w temperaturze 0°C miesza¬ nine odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem, a otrzymana surowa tetaine oczyszcza na kolumnie chromatograficznej, wypelnionej zelem krzemionko¬ wym . w dkfcacbie ohloroform/metanol/woda 16 :4 : : 0,5. Wydajnosc reakcji wynosi 70%.Analrza po Ikrystallizacji z acetonu i wody: N zna¬ lezione: 10,31; N obliczone: 10,366. Jon masowy na ;; 4 widmie spektrometrii masowej, wykonanej technika „field desorption" — 270.Przyklad VI. Do 37 mg dezalanylotetainy B rozpuszczonej w 5 ml buforu o pH 10, w tempera- turze 0°C dodaje sie przy intensywnym mieszaniu 21,2 mg N-kiaii1x)lksylbeizwodnilka L-alanliny. Po 5 mi¬ nutach doprowadza sie pH do 7 i wydziela otrzy¬ mana tetadne B, jak w przykladzie V. Wydajnosc reakcji wynosi 78%. io Analiza po krystalizacji z acetonu i wody: N zna¬ lezione: 10,25; N obliczone: 10,366. Jon masowy na "' widmie spektrometrii masowej, wykonany technika „field desorption" — 270.Przyklad VII. Do 10 mg liofilizatu tetai- ia ny B rozpuszczonego w 1 ml wody dodaje sie roz¬ twór zawierajacy 3 mg N-karboksybezwodnika L- alaniny W 1 ml tetrahydrofuranu. Po 20 godzinach reakcji w temperaturze 0°C mieszanine odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem i jako glówny produkt otrzymuje I^alanylotetaine B.Analiza po krystalizacji z acetonu i wody: N zna¬ lezione: 12,10; N obliczone: 12,312. Jon masowy na Widmie spektrometrii masowej, wykonany technika „field desorption" — 341.Przyklad VIII. Do 10 mg Mofilizatu teta- iny A rozpuszczonego w 3 ml dwumetyloformamidu dodaje sie roztwór zawierajacy 4,4 mg NHkarboksy- bezwodniika kwasu D-a-aminofenylooctowego w 1 ml dwumetyloformamidu. Po 20 godzinach reakcji m w temperitilsnae 0°C mieszanine odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem i jako glówny produkt Otrzymuje sie D-aHaminofenyloaoe^yilotetaiine A.Analiza po krystalizacji z acetonu i wody: N zna¬ lezione: 10y22; N obliczone: 10,417. Jon masowy na widmie spektrometrii masowej, wykonany technika „field desorption" — 405.Przyklad IX. Do 10 mg liofilizatu tetainy w 1 ml buforu MichaeDisa o pH 8,2 dodaje sie roz¬ twór zawierajacy 4,8 mg N-karboksyfoezwodnika L- 40 fenyloalaniny w 1 ml tetrahydrofuranu. Po 20 go¬ dzinach reakcji w temperaturze 0°C mieszanine od¬ parowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem i jako glówny produkt otrzymuje sie L-fenyloalanylote- taine. 45 Analiza po krystalizacji :z acetonu i wody: N zna¬ lezione: 10,01; N obliczone: 10,067. Jon masowy na widmie spektrometrii masowej, wykonany technika „field desorption" — 417.Przyklad X. 500 mg benzoiloglicylofenylo- 50 alanyloalaniny zawiesza sie w 10 ml tetrahydrofu¬ ranu i dodaje 0,11 ml N-metylomorfoliny, a po schlodzeniu do temperatury —10°C dodaje sie 0,134 ml chloromrówczanu izobutylowego. Po 15 mi¬ nutach intensywnego mieszania w tej temperaturze 55 wkrapla sie roztwór 200 mg dezalanylotetainy w 5 ml buforu Michaelisa o pH 8,2 i prowadzi reak¬ cje przez 3 godziny w temperaturze 0°C. Po tym czasie odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem tetrahydrofuran i po doprowadzeniu pH do 6 60 ekstrahuje produkt reakcji octanem etylu. Nastepnie rozpuszczalnik odparowuje sie pod zmniejszonym cLaniienaiem, a pozosltalotsc izawiesea w (buforze fosfo¬ ranowym o pH 7,6 z dodatkiem 25" mg chymótryp- 65 syny. Mieszanine reakcyjna miesza 6ie w tempera- turze 30°C badajac chromatograficznie przebieg8? 546 6 Nr przy* kladu XI XII XIII XIV XV XVI XVII XVIII XIX XK xpa XXII XXIII XXIV xxv XXVI mvii XXVIII XXIX xxx XXXI XXXII XXXIII XXXIV XiXXV XXXVI X2CXVII XiXKVIII XXXIX XL , XLI XLII XLIII XLIV XLV XLVI | Pochodzenie dezalanylotetainy D-fenyloalanylodezalanylotetaina D-alanylodezalanylotetaina Glicylodezalanylotetaiaia I1yrozylodezalanylotetaina L-walilodezalanylotetaima L-norwaHlodezaianyloitetaina L-leucylodezalanylotetaiina L-izoleucylodezalanyloitetalna LHnorleucylodezalainylotetaina jff-alanylodezalanylotetaina a-aminoizobutyiylodezalanylotetaina L-a-aminobutyrylodezalanylotetaina I^a-aoiiiinofenyloacetylodezalanylotetaina O^jenzyloseaylodezalanylotetaiLna S-beoizylocystóinylodezalanylotetaim sarkozylodezalainyiotetaioa L-NHmetyloalanylodezalanylotetaina N-fenyloglicylodezalanylotetaina D-fenyloalanylotetaima D-alanylotetaina glicylotetaina L-tyrozylotetaina L-walilotetaiina L-norwalilotetaina L-leucylotetaina D-izoleucylotetaina L-norleucylotelaina ^-alanylotetaina a-amtooizobutyaylotetaina L-aHamipobutyrylotetoina L-a^amioiofenyloacetylotetaina O-bemzyloserylotetaiina S-benzylocysteinylotetaina sairkozylotetaina L-N-metyloalanylotetaina N-fenyloglicylotetaina | Sposób otrz.IV V III III III III IV IV IV III III IV IV IV IV III III IV VII VIII VII IX IX IX IX IX IX IX IX IX VIII VIII VIII IX IX VIII | N znal. 8,05 ,25 ,85 7,62 9,19 9,25 8,92 8,85 8,71 ,15 9,67 9,72 8,21 7,25 7,02 ,31 1 9,76 8,27 9,98 12,30 12,81 9,59 11,25 11,19 ,76 ,70 ,69 12,30 11,82 11,69 ,38 9,49 8,98 12,12 11,63 ,23 | N obi. 8,088 ,366'" ,933 7,731 9,39 9,39 8,969 8,969 8,969 101,366 9,854 9,894 8,429 7,443 7,138 ,366 9,854 8,429 ,067 12,312 1 12,838 9,695 11,376 11,376 ,96 ,96 ,96 12,312 11,825 11,825 ,417 9,74 9,066 12,312 11,825 ,417 1 Jon masowy 346 270 .256 362 298 298 312 312 312 270 284 284 332 376 392 270 284 332 „ 417 341 327 433 369 369 383 383 383 312 355 355 403 431 463 341 395 417 1 reakcji. Po calkowitym zaniku substratu roztwór oraz biochromatografiii. Ponadto, przy pomocy chro- doprowadza sie do pH 5, odwirowuje osad i prze- 35 mafografii cienkowarstwowej i bibulowej wobec prowadza sorbcje surowej tetainy na weglu dezak- wzorców badano produkty enzymatycznego rozszcze- tywowym tyrozyna, a nastepnie desorbuje 6% wod- piania otrzymanych zwiazków na skladowe amino- nym roztworem butanolu. Ekstrakt nateza sie pod kwasy, wykonane zgodnie z publikacja (Roczniki zmniejszonym cisnieniem i oczyszcza na kolumnie Chemii 40, 1195 (1966). chromatograficznej wypelnionej zelem krzemionko- 40 wym w ukladzie butanol/woda/metanol 10 :10 :1 — górna faza. Wydajnosc reakcji rzedu 40%. PLThe patent description was published: 07/15/1977 87546 MKPC07g 11/00 Int. CI.2 • - ¦¦ • ¦; C07G ii / oa Inventors: Edward Borowski, Malgbinzata Gumiendak, Maciej Smulikowski, Haona Wojciechowska, Wojciech Giruszeoki Patent holder: Politechnika Gdanska, Gdansk (Poland) The method of obtaining N-acyl derivatives of desalanylotetaine Piraed The subject of the invention is the method of obtaining N-acyl derivatives desalanyltetaine. The antibiotic tetaine, produced by the Bacillus pumilus strain V, has a number of interesting biological properties. It is characterized by a very high antimicrobial activity, including in its range of action numerous grammopositive and gram-negative bacteria, as well as a number of other microorganisms. A particularly valuable feature of tetaine is its low toxicity to animal organisms, resulting from its mechanisms of action. which consists in inhibiting the synthesis of murein of the cell wall of the microbial organism by inhibiting the incorporation of the first amino acid - alanine into the residue of N-acetylomirimlinic acid. Antibiotics that inhibit this enzymatic process are not known so far. The study of a new mechanism of inhibition of murein synthesis opens up new possibilities for obtaining non-toxic chemotherapeutic agents by synthesizing the structural analogs of tetaine. Obtaining such analogs is also expedient due to the fact that tetaine itself is susceptible to the action of a number of enzymes, which easily make it active in living organisms. These enzymes with even phosphorons cause the hydro-lysis of peptide bonds in the molecule of tetaine, the boundary between the catiboxyl group of L-iailainine, and the amino igi-group of the rest of the lotion molecule, which is diethainaine, which is the tetainine. This way, free deailanylote - Taina is biologically inactive ^ On the other hand, it is sluggish (these enzymes catalyze a number of unfavorable reactions occurring in the desalanylotetaine fragment of the antibiotic, also leading to the formation of biologically inactive substances. So far, no known N-acyl de- tails, as well as a method of obtaining them. The object of the invention is to develop a method for the preparation of N-acyl derivatives of dealanylotetaine. A method for the preparation of N-acyl derivatives of dealanylotetaine according to the invention consists in the fact that the amino group of dealanylotetaine or its oil derivatives are Peptides, such as tetaine, acylate themselves with N-protected amino acids or peptides, or other compounds, capable of forming a peptide bond and possibly remove functional groups from the final product obtained by known methods. DAT is a mixture of two isomeric subsatations called desala. nyltetaine A i B, obtained from tetaine, which is also a mixture of two isomeric compounds called tetaine A and B. Both components of the mixtures have the same functional groups and exhibit similar chemical reactivity. Semi-synthetic derivatives can be obtained in an identical manner from both components A and B, and also from mixtures thereof. 87 54887 546 3 The advantage of the process according to the invention is the high purity of the final product, which is characterized by an increased resistance to the action of the above-mentioned non-inactive enzymes and the elimination of the formation of by-products. Example 1 15 mg of dealanyltetaine A in the form of a freeze-dried powder it is suspended in 1 ml of dry dimethylformamide, and after stirring, 15 mg of DC-) - α-aminophenylacetic acid chloride hydrochloride are treated. The reactants are stirred for one hour, then 5 ml of ether are added and the precipitate is soaked, which contains mainly D-α-amino-phenylacetyl-desaly-tetaine. Analysis after crystallization from acetone and water: N found: 8.21; N calculated: 8.429. The mass ion obtained in the mass spectrometry by the technique of "field desorption" - 332 *, and "fyift nrt" 11. 15 mg of A -.a "rte" zoAe dealanyltetaine in 0.1 ml of dimethylformamide reacts with 10 ° C. m? N-carbc * Hydride system of D - <(-) - a-aminophenylacetic acid, in the presence of N-methylmorphol, keeping the pH of the solution within 9. After one hour of stirring, the solvent is vacuum evaporated and the main product is Ba - -aminophenylacetyldesalanyltetaine. Analysis after crystallization from acetone and water: N found: 8.25; N calculated: 8.429. Mass ion on the mass spectrometry spectrum, performed by field desorption technique - 332. Example. IU. To 3.7 mg of desalanyltetaine B dissolved in 0.5 ml of water, a solution of 1.5 mg of L-ailanine N-tariboxifanhydride in 0.5 ml of telrahydrofuran is added. After 20 hours of reaction at 0 ° C., the mixture is evaporated in vacuo and the main product is obtained crude tetaine. B. Analysis after crystallization from acetone and water: N found: 10.18; N calculated: 10.306. Field desorption mass ion mass spectrometry 270. Example IV. To 3.7 mg of desalanyltetaine dissolved in 0.5 ml of water, a solution * containing 2.4 mg of N-carboxyanhydride is added. L- phenylalanine in 0.5 ml of dimelioiflormamide. After 20 hours of reaction at 0 ° C., the mixture is evaporated under reduced pressure and the main product is obtained L-phenylalanyl desalate-lotetaine. Analysis after crystallization from acetone and water: N found: 8.01; N calculated: 8.088. Mass Ion on Mass Spectrometry, Field Desorption - 346. Example 5. Up to 37 mg of desalanyltetaine, dissolved in 5 ml of Michaelis buffer at pH 8.2 W at 0 ° C., a solution containing 21.2 mg of L-alanine N-carboxy anhydride in 5 ml of tetrahydrofuran is added with vigorous stirring. After hours of reaction at 0 ° C., the mixture is evaporated under reduced pressure, and the crude tetaine obtained is purified by column chromatography filled with silica gel. in dkfcacbie ohloroform / methanol / water 16: 4:: 0.5. The yield of the reaction is 70%. Anal after crystallization from acetone and water: N found: 10.31; N calculated: 10.366. Mass ion on ;; 4 spectrometry of mass spectrometry, performed using the "field desorption" technique - 270. Example VI. To 37 mg of desalanyltetaine B dissolved in 5 ml of a pH 10 buffer, at 0 ° C 21.2 mg of N-kiaii1x is added with intensive stirring ) L-alanline lxylbenzohydrate After 5 minutes, the pH is adjusted to 7 and the resultant B is isolated, as in Example V. The yield of the reaction is 78%. and Analysis after crystallization from acetone and water: N found: 10 , 25; N calculated: 10.366. Mass ion on the "" field desorption spectrum "- 270. Example 7. To 10 mg of tetaiin B lyophilisate dissolved in 1 ml of water is added a solution containing 3 mg of L-alanine N-carboxyanhydride in 1 ml of tetrahydrofuran After 20 hours of reaction at 0 ° C, the mixture is evaporated under reduced pressure and the main product is I-alanylotetaine B. Analysis after crystallization from acetone and water: N found: 12.10, calculated N: 12.312. Mass ion on Spectrum Spect mass measurement, field desorption technique performed - 341. Example VIII. A solution containing 4.4 mg of D-α-aminophenylacetic acid NHcarboxy anhydride in 1 ml of dimethylformamide is added to 10 mg of Theta-A Mophilisate dissolved in 3 ml of dimethylformamide. After a reaction time of 20 hours at 0 ° C., the mixture is evaporated under reduced pressure and the main product is D-αHaminophenylamine. A. Analysis after crystallization from acetone and water: N found: 10-22; N calculated: 10.417. Mass ion on the mass spectrometry spectrum, made by field desorption technique - 405. Example IX. To 10 mg of tetaine lyophilisate in 1 ml of MichaeDis buffer at pH 8.2 is added a solution containing 4.8 mg of L-40 N-carboxyphohydride phenylalanine in 1 ml of tetrahydrofuran. After 20 hours of reaction at 0 ° C., the mixture is evaporated under reduced pressure and the main product is L-phenylalanyltaetaine. 45 Analysis after crystallization: from acetone and water: N known Leaned: 10.01; N calculated: 10.067. Mass ion on the mass spectrometry by field desorption - 417. Example X. 500 mg of benzoylglycylphenylalanylalanine is suspended in 10 ml of tetrahydrofuran and 0.11 ml is added. N-methylmorpholine, and after cooling to -10 ° C, 0.134 ml of isobutyl chloroformate is added. After 15 minutes of vigorous stirring at this temperature, a solution of 200 mg of dealanyltetaine in 5 ml of Michaelis buffer pH 8.2 is added dropwise and the reaction is carried out for 3 hours at 0 ° C. After this time, the tetrahydrofuran is evaporated under reduced pressure and, after adjusting the pH to 6, the reaction product is extracted with ethyl acetate. Then the solvent is evaporated off under reduced sodium chloride and the salt is suspended in (phosphate buffer, pH 7.6 with 25 "mg of chymotripine. The reaction mixture is stirred at 30 ° C and chromatographically examined the course of at * clade XI XII XIII XIV XV XVI XVII XVIII XIX XK xpa XXII XXIII XXIV xxv XXVI mvii XXVIII XXIX XXIX XXXI XXXII XXXIII XXXIV XiXXV XXXVI X2CXVII XiXKVIII XXXIX XL, XLI XLII XLIII XLIV XLV XLVI XLIV XLV XLVI | I1yrozylodezalanylotetaina walilodezalanylotetaima L-L-L-norwaHlodezaianyloitetaina leucylodezalanylotetaiina L-.beta.-izoleucylodezalanyloitetalna LHnorleucylodezalainylotetaina alanylodezalanylotetaina a-La-aminoizobutyiylodezalanylotetaina aminobutyrylodezalanylotetaina I ^ a ^ O-aoiiiinofenyloacetylodezalanylotetaina jenzyloseaylodezalanylotetaiLna S-beoizylocystóinylodezalanylotetaim sarkozylodezalainyiotetaioa L-NHmetyloalanylodezalanylotetaina fenyloglicylodezalanylotetaina N-D-D-fenyloalanylotetaima alanylotetaina glicylotetaina tyrozylotetaina L-L-L-walilotetaiina norwalilotetaina leucylotetaina L-D-L-izoleucylotetaina norleucylotelaina -alanylotetaina ^ a-L-amtooizobutyaylotetaina aHamipobutyrylotetoina amioiofenyloacetylotetaina La ^ O-S-bemzyloserylotetaiina benzylocysteinylotetaina sairkozylotetaina LN-methylalanyltetaine N-phenylglycyltetaine | Method of opening IV V III III III III IV IV IV III III IV IV IV IV III III IV VII VIII VII IX IX IX IX IX IX IX IX VIII VIII VIII IX IX VIII | N found. 8.05, 25, 85 7.62 9.19 9.25 8.92 8.85 8.71, 15 9.67 9.72 8.21 7.25 7.02, 31 1 9.76 8, 27 9.98 12.30 12.81 9.59 11.25 11.19, 76, 70, 69 12.30 11.82 11.69, 38 9.49 8.98 12.12 11.63, 23 | N obi. 8.088, 366 '", 933 7.731 9.39 9.39 8.969 8.969 8.969 101.366 9.854 9.894 8.429 7.443 7.138, 366 9.854 8.429, 067 12.312 1 12.838 9.695 11.376 11.376, 96, 96, 96 12.312 11.825 11.825, 46617 9.74 9.0 12.312 11.825.417 1 Mass ion 346 270 .256 362 298 298 312 312 312 270 284 284 332 376 392 270 284 332 417 341 327 433 369 369 383 383 383 312 355 355 403 431 463 341 395 417 1 reaction. The substrate disappears, the solution and biochromatography. Moreover, by means of chromatography, the pH is adjusted to 5, the sediment is centrifuged, and the thin-layer and blotting paper is centrifuged, and crude tetaine is sorbed on carbon displacement standards. % of watering of the obtained compounds on the constituent elements with an amine solution of butanol. The extract is concentrated under acids, prepared in accordance with the publication (Annals by reduced pressure and purified on a column of Chemistry 40, 1195 (1966), chromatographic column filled with silica gel in the system. e butanol / water / methanol 10: 10: 1 - upper phase. The reaction yield is 40%. PL