NO800498L - Testanordning og metode for interferensresistent bestemmelse av oxyderende substanser - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår generelt diagnostiske tester, og nærmere bestemt tester som er anvendbare ved kvali-tativ og kvantitativ bestemmelse av biologiske komponenter, slik som glucose og urinsyre, i hvilke tester slike komponenter omdannes til en oxyderende substans slik som et peroxyd.

Glucose-oxydase omdanner enzymatisk glucose til glucon-syre og hydrogenperoxyd. Det således dannede hydrogenperoxyd kan reduseres til I-^O av en peroxydativt aktiv substans i. nærvær av et indikatorsystem som oxyderes under dannelse av en. respons , slik som en farveforandring. Den kromogene indikator o-tolidin er blitt anvendt en viss tid i glucosetestsy-stemer, men gir resultater som er gjenstand for reduksjon av den oxyderte indikator ved interfererende substanser, slik som ascorbinsyre. Videre er der reist spørsmålet om sikker-heten av o-tolidin.

Likeledes omdanner uricase enzymatisk urinsyre til al-lantoin og hydrogenperoxyd. Det dannede hydrogenperoxyd kan reduseres til E^ O av en peroxydativt aktiv substans i nærvær av et indikatorsystem, historisk kjent som o-dianisidin.

Nylig har Gochman og Schmitz rapportert bruk av 3-meth-yl-2-benzothiazolinonhydrazonhydroklorid med N,N-dimethylanilin under dannelse av en azo-farveindikator ved bestemmelser av urinsyre, Clin. Chem. 1_7:1154 (1971), og glucose, Clin. Chem. _18:943 (1972). Selvom det påståes at blandingen med N,N-dimethylanilin var mer resistent enn o-tolidin, har ømfintlighet overfor ascorbinsyre-interferens gitt betydelig feil i rapportert urinsyre og glucosekonsentrasjoner.

Mekanismen for oxydativ kobling av heterocycliske hydrazoner med fenoler, aromatiske aminer og andre forbindelser i den klassiske azokoblingsreaksjon er beskrevet kort i Zollinger, Azo and Diazo Chemistry, Interscience, New York, sider 215 - 217 (1961) . Et sammendrag av det opprinnelige arbeide, rettet mot dannelsen av azofarvestoffer ved oxydativ kobling, av Hunig og medarbeidere i Tyskland (1957 - 68) er beskrevet i Baer, Cationic Dyes for Synthetic Fibers, Venkataraman (ed.), The Chemistry of Synthetic Dyes, Vol. 4, Academic Press, N.Y., sider 188 - 193 (1971).

Hunziker, US patent nr. 3 .979 . 262 tilsetter en buffer av sitronsyre eller maleinsyre til blandingen kjent fra Gochman et al., supra, og åpenbarer at sammen med N,N-dimethylanilin kan andre aromatiske aminer anvendes så lenge de ikke er substituert både i ortho- og para-stillinger. Buffe^-' ren er også kritisk og opprettholder et på forhånd bestemt pH-område på fra 3,2 til 4,7 for urinsyrebestemmelse, og fra 4,7 til 5,5 for en glucose- eller cholesterolbestemmelse.

Teknikkens stand har, forsåvidt som det gjelder anvendelse av hydrazonindikatorer ved analyse av r^C^, antydet at reaksjonen mellom 3-me.thyl-2-benzothiazolinonhydr.azon (MBTH) og dimethylanilin er resistent overfor virkningene- av reduserende substanser i en prøve. Selvom dette kan være sant når det gjelder indikatorer . slik som o-tolidin, gir bruk av slike hydrazonindikatorer meget dårlige indikasjoner i nærvær av ascorbat.

Disse tidligere arbeider har derfor ikke lykkedes når det gjelder å tilveiebringe et indikatorsystem som enten er hovedsakelig fritt for ømfintlighet overfor virkningen av interfererende substanser, eller gjør bruk av indikatorer som er erkjent å være sikre.

Nylig utstedt US patentskrift nr. 4.119.405 beskriver bruken av 4,5-dihydroxy-2,7-nafthalendisulfonsyre og 1-hydr-oxy-2-nafthalensulfonsyre som hydrazonkoblere. Forskjellig fra Hunzikers koblinger er disse forbindelser ikke aminer. Selvom disse er overlegne i forhold til tidligere tilgjengeli-ge koblere, vil der fremdeles være rom for forbedring når det gjelder ascorbatfølsomhet.

Det er derfor et mål ved oppfinnelsen å tilveiebringe en forbedret test for påvisning av oxyderende substanser i kroppsvæsker.

Et annet mål ved oppfinnelsen er å tilveiebringe en for-^bedret test for de oxyderende substanser som enzymatisk omdannes fra andre klinisk signifikante kroppsvæskekomponenter.

Et ytterligere mål ved oppfinnelsen er å tilveiebringe en forbedret test for påvisningen av oxyderende substanser i kroppsvæsker som er meget resistente overfor interfererende reduserende substanser.

Et ytterligere mål ved oppfinnelsen er å tilveiebringe en forbedret test for påvisningen av oxyderende substanser hvori de ovenfor angitte fordeler oppnåes ved et nytt indikatorsystem omfattende et hydrazon og 8-amino-l-nafthol-5,7-di-sulfonsyre (Chicago-syre).

Andre mål og en nærmere forståelse av oppfinnelsen vil fremgå av den følgende beskrivelse og krav rettet mot fore-trukne utførelsesformer i forbindelse med de medfølgende teg-ninger i hvilke Fig..1 er en grafisk fremstilling av de data som er angitt i eksempel III for en MBTH/Chicago-syre ifølge oppfinnelsen, testet i nærvær av ascorbinsyre ved forskjellige pH-nivåer, erholdt ved å nedtegne optisk densitet (OD) mot tiden, og ■ Fig. 2 er en grafisk presentasjon av de data som er angitt i eksempel III for de forskjellige MBTH-koblere testet i nærvær av ascorbinsyre i Tris-Malonat buffer (pH 7) med den unntagelse at dimethylanilinhellingen er den som observeres i sitronsyrebuffer (pH 5).

Ifølge oppfinnelsen tilveiebringes der.testanordninger slik som en komposisjon og anordning, en metode for fremstilling av testanordningen, og en fremgangsmåte for bestemmelse av minst én oxyderende substans, slik som et peroxyd. Nærmere bestemt omfatter testanordningene et hydrazon og 8- r amino-l-nafthol-5,7-disulfonsyre (Chicago-syre). Videre tilveiebringes et testsystem for bestemmelse av en bestanddel i en prøve, med midler som gir respons på nærvær av angitte bestanddel i prøven under dannelse av minst én oxyderende substans, og et materiale for påvisning av minst én oxyderende substans, hvori nevnte materiale omfatter et hydrazon og .8-amino-l-naf thol-5 , 7-disulfonsyre (Chicago-syre).. Testsystemet er fortrinnsvis av den type som bestemmer peroxyder dannet av enzymatisk omdannelse av bestanddeler i biologiske væsker. Når testanordningene foreligger i form av et materiale, kan dette eventuelt innarbeides med en bærer, slik som en tablett eller matrise for å gi en testanordning. Testsystemet er meget følsomt overfor lave konsentrasjoner av kroppsvæske-bestanddeler som skal påvises, samtidig som det også er meget resistent overfor interfererende reduserende substanser slik som ascorbinsyre, som ofte er tilstede i kroppsvæsker.

I testsystemet kan anordningene som gir respons på nærvær av bestanddelen i prøven under dannelse av minst én oxyderende substans innbefatte glucoseoxydase for glucosebestemmel^se, eller uricase for urinsyrebestemmelsé og en peroxydativt aktiv substans. Typisk for slike peroxydativt aktive substan^-ser er peroxydase eller hemoglobin, anvendt når hydrogenperoxyd er den oxyderende substans.

I motsetning til kjente materialer er materialene ifølge oppfinnelsen meget følsomme overfor lave konsentrasjoner av de kroppsvæskebestanddel.er som skal påvises, samtidig som de også er sterkt resistente overfor virkningene av konkurreren-de reduserende substanser, særlig ascorbinsyre i urin. Da en karakteristisk farvereaksjon finner sted avhengig av' konsentrasjonen av den påviste oxyderende substans, er en kvantitativ påvisning av slike kroppsvæskekomponenter som glucose og urinsyre mulig.

Selvom spesifikke angivelser anvendes i den følgende beskrivelse for klarhets skyld, er disse angivelser bare beregnet på å henvise til den spesielle utførelsesform av oppfinnelsen som er valgt av illustrative grunner, og ikke beregnet på å definere eller begrense oppfinnelsens ramme.

Testanordnihgen ifølge oppfinnelsen kan anta mange fysi-kalske former og kan innbefatte mange spesifikke hydrazoner for kobling med Chicago-syren uten hensyn til den antatte form. Ytterligere materialer, slik som stabiliseringsmidler, kan anvendes. Testanordningene kan anvendes både i væskeform og

i fast form, som testsystemet, ved innarbeidelse av en sammensetning av testanordningene som eksemplifisert ved de frem-gangsmåter og utførelsesformer som er beskrevet i det etter-følgende.

De' hydrazoner som er nyttige i testanordningene er kon-densasjonsprodukter av et hydrazin med et aldehyd eller keton og inneholder gruppen ^=C=NNH2• Mange hydrazoner er istand til oxydativt å kobles med hydroxynafthalensulfonater under dannelse av en far<y>et entitet. Slike innbefatter blant andre 3-methyl-2-benzothiazolinonhydrazon, l-methyl-2-kinolinonhyd-razon, N-methyl-pyridon-4-hydrazon, N-methyl-pyridon-2-hydrazon, l-methyl-kinolinon^4-hydrazon , N-methyl-thiazolinon-2- hydrazon, N-methyl^oxazoii,n6n-2-hyd.razon, N-methy 1-benzoxazo-linon-2-hydrazon og 1,3-dimethylbenzimidazolinon-2-hydrazon.

I en foretrukken utførelsesform av materialet anvendes et 3-(C-^-C^ alkyl)-2^-benzothiazolinonhydrazonchromogen, slik som 3-methyl-2-benzothiazolinonhydrazon (MBTH), Slike hydrazoner er sterke reduserende midler.

Som anvendt her innbefatter uttrykket "hydrazon" syre-addisjonssalter derav. Ethvert konvensjonelt syreaddisjons-salt kan anvendes slik som dem som dannes av saltsyre, hydro-bromsyre, svovelsyre, salpetersyre og lignende. Disse syre-addis jonssalter kan anvendes alene, eller de kan anvendes i forbindelse med det tilsvarende hydrazon.

Molforhold mellom hydrazon og kobler varierer fra 17:1 til 1:17, hvor nærmest ekvimolare forhold foretrekkes for den optimale kombinasjon av påvisningsfølsomhet og interferens-resistens.

Materialet kan ytterligere innbefatte stabiliserings-midler, carboxymethylcellulose og polyoxyethylenethere av fettalkoholer (BRU ® fremstilt av ICI United States Inc., Wilmington, Delaware 19798) velges med fordel.

Testanordningene ifølge oppfinnelsen og testsystemer som gjør bruk av sammensetninger av nevnte testanordninger anvendes fortrinnsvis i et generelt nøytralt eller svakt, alka-r lisk pH område, selvom de forblir anvendbare selv ved en noe lavere pH. Opprettholdelsen av en generelt nøytral eller al-kalisk pH gir forbedret reaktivitet når det gjelder hastighet og resistens overfor interferens, i motsetning til hva som er angitt ifølge teknikkens stand.

Testsystemet omfatter - sammen med materialet ifølge oppfinnelsen - midler som gir en respons på. nærværet a<y>en bestanddel som skal bestemmes i en prøve under dannelse av en oxyderende substans for bestemmelse ved hjelp av materialet. Slike midler er fortrinnsvis enzymatiske a<y>natur. F.eks. når glucose skal bestemmes, er g.lucoseoxydase og peroxydase de bestanddel-ømfintlige midler (constituent responsive means). Når urinsyre skal bestemmes, er likeledes uricase og peroxydase dé bestanddel-ømfintlige midler. Konsentrasjonen og. typene av reagenser som er nyttige i de bestanddel-ømfintlige midler innbefatter dem som er kjent innen faget.

Testmidlene kan anvendes som en løsning for bestemmelse av oxydative substanser i en prøve, Videre kan testsystemet for bestemmelse av bestanddeler omdannet til slike oxydative substanser, inneholdende testmidlene i sammensatt form, anvendes i væskeform. Testsystemet anvendes fortrinnsvis for å påvise biologiske, slik som kroppsvæske-bestånddeler ved til-setning av testmidlene til en prøve slik som urin, serum, ce-rebrospinalvæske, vevkulturvæske eller lignende. For prøv-ninger under anvendelse av testsystemet i væskeform, skal peroxydasen og/eller oxydasen være adskilt fra de andre reagenser' inntil bruk. Bestemmelsen tillates å forløpe ved innfør-ing av det adskilte reagens, slik som peroxydasen.

Anvendt i oppløsning - enten i testmidlene selv, eller som en sammensetning derav i et testsystem, anvendes 8-amino-l-naf thol-5 , 7-disulfonsyre (Chicago-syre) fortrinnsvis i kon--5 -3

sentrasjoner på fra 10 molar (M) til 10 M. Likeledes an--5 vendes hydrazonet.fortrinnsvis i konsentrasjoner på fra 10 M til 10 _3 M. Når. et eller flere stabiliseringsmidler er innbefattet, er disse fortrinnsvis tilstede i totale konsentrasjoner på fra 0,5 mg/dl til 5,0 g/dl. Når peroxydase er minst en av reagensene omfattende de bestanddel-ømfintlige midler i testsystemet, er konsentrasjoner av peroxydasen fortrinnsvis fra 10 mikrogram/liter (yug/l) til 500/^g/l. Oppløs-ningsmidlet anvendt ved fremstilling av oppløsningene kan væ-re vann, fysiologiske oppløsninger, organiske oppløsningsmid-ler slik som methanol, eller blandinger derav.

Oppfinnelsen omfatter også testanordninger innbefatten-de testmidlene eller testsystemet ifølge oppfinnelsen og en metode for fremstilling av slike reagenstestanordninger, hvil-ken metode omfatter inkorporering av en bærer, slik som en matrise eller tablett, med testmidlene eller testsystemet. Når denne inkorporering foretas ved impregnering med en oppløs-ning av materialet ifølge oppfinnelsen, omfattende et testsystem, tørkes derefter den således impregnerte bærer.. I til-legg til impregnering kan anordningene ifølge oppfinnelsen fremstilles efter andre egnede teknikker slik som trykking eller sprøytning av materialet på et substrat eller, en matrise .

Tes.ta,nordningen fremstilles fortrinnsvis ved en fler-dypningsprosess«Konsentrasjonene a,v reagensene anvendt i

-r-3

impregneringsoppløsningene varierer fra 10 II opp til en mettet oppløsning. Generelt nyttigst for hydrazonet og koble-ren er en konsentrasjon på ca. 0,02 M hver. Peroxydasekonsen-trasjonen er fra 0,015 mg/ml til 2 mg/ml oppløsning.

Faste preparater innarbeides fortrinnsvis med en bærermatrise i remseformat. Uttrykket bærermatrise kan henvise til sugende og ikke-sugende matriser som er uoppløselige i - og opprettholder sin strukturelle integritet når de utsettes for vann eller fysiologiske væsker. Egnede sugende matriser som kan anvendes .innbefatter papir, cellulose, tre, syntetisk harpiksull, glassfiber, vevet og ikke-vevet dukmateriale og lignende. Ikke-sugende matriser innbefatter organo-plastmate-.riale slik som polypropylen eller lignende. Når en sugende matrise anvendes, festes matrisen fordelaktig med egnede midler slik som dobbeltklebénde tape, til en uoppløselig bærerdel, slik som en organo-plastremse, f. eks. oolys.tyren, for enklere bruk.

Alternativt kan materialene ifølge oppfinnelsen innarbeides i en bærer som tar form av en presset eller støpt tablett inneholdende konvensjonelt bærermateriale.

Testanordningen anvendes fordelaktig vedøyeblikkelig dypping i en prøve eller ved på annen måte å bringe bærermatrisen i kontakt med en prøve, hvorpå en påvisbar farveforandring oppstår hvis oxydative komponenter er tilstede i prøven. Testanordningen kan anvendes på samme måte når prøver av plas-ma, serum eller andre kroppsvæsker skal testes.

Forholdet mellom K (absorpsjonskoeffisient for prøven)-, angitt i enkelte av eksemplene, og konsentrasjonen av absorberende prøver (slik som urinsyre eller glucose) er gitt ved Kubelka-Monk ligningen som beskrevet sammen med en diskusjon om reflektans-spektrofotometri i Kortumi, G,, "Reflectånce Spectroscopy" , Springer Verlag Inc., New York, .1969 . K er definert som to ganger absorbansen/enhet veilengde (2A/b) i transmisjonsmålinger. For foreliggende formål antas K å være proporsjonal med konsentrasjonen av dannede farvede indikator-?-molekyler. I det forhold som er definert ved Kubelka-Monk- ligningen vil. prosent reflek.tans (% R,), verdien avta. eftersom konsentrasjonen a,v påyi.st oxydativ substans øker, og vice versa. Således vil avlesningene tatt omvendt korrelere ifølge ligningen, med konsentrasjonen av påviste absorberende prø-ver. I eksemplene ble avlesningene tatt ved- de angitte bøl-gelengder (A) .

Reflektansavlesninger kan erholdes fra kommersielt til-gjengelige spektrofotometere slik som Beckman DK-2 Spectro-photometer, Beckman Instruments, Inc., Fullerton, California 92634 eller Spectrocolorimeter SCF-1, Israel Electro-Optical Industry Ltd.

Pepperotoxydase og glucoseoxydase ble erholdt fra Miles Research Products, Miles Laboratories, Elkhart, Indiana 46515. En copolymer av methylvinylether og maleinsyreanhydrid ("Gantrez AN-139") og polyvinylpyrrolidin (PVP) ble erholdt fra GAF Corp., Chemical Products, N.Y., N.Y. 10020). 3-methyl-2-benzothiazolinonhydrazonhydrokloridmonohydratet, andre hyd-, razoner, l-hydroxy-3-naf thalensulf onsyre , l-hydroxy-5-.naftha-lensulfonsyre, 3-dimethylaminobenzosyre og fiolett syre (1-nafthol-3,6-disulfonsyre ble erholdt fra Aldrich Chemical Co., Inc., Milwaukee, Wisconsin 53233. Chicago-syre ble erholdt fra Pfaltz & Bauer, Inc., Stamford, Conn. 06902. Oppløsnings-midler og reagenser av standardkvalitet ble anvendt.

EKSEMPEL I

I forsøkene beskrevet i dette eksempel vises den relati-ve ascorbatresistens til forskjellige MBTH-koblersystemer og av o-tolidin.

En første impregneringsoppløsning ble fremstilt til å inneholde følgende:

Ark av "Eaton-Dikeman 204" filterpapir (E&D) ble impregnert til metning med den ovenfor fremstilte oppløsning og tørket ved 80°C.

En første porsjon av disse tørkede papirer ble mettet med 0,02 M o-tolidin i CHCl^og tørket ved 50°C under dannelse av o-tolidinanordninger. Det gjenværende eller annen porsjon av de ovenfor fremstilte tørkede papirer ble derefter impregnert til metning med en oppløsning av 50 ml methanol med 250 mg MBTH hydrokloridmonohydrat oppløst deri, og tørket ved 60°C.

I en tredje impregnering ble papirark fra den annen porsjon henholdsvis impregnert til metning med den indikerte oppløsning av en av de følgende potensielle koblere:

De således impregnerte papirer ble derefter tørket ved 60°C under dannelse av anordninger.

Disse anordninger ble henholdsvis testet med ascorbat-frie 100 mg/dl vandige glucoseoppløsninger og med 100 mg/dl vandige glucoseoppløsninger inneholdende 50 mg/dl ascorbat, og hver farveforandring ble avlest ved anvendelse av et avle-sende reflektans-spektrofotometer. Reflektansverdier ved spesifikke bølgelengder ble omdannet ved den tidligere beskrevne Kubelka-Monk ligning til ekvivalente absorbansverdier

(K) .

Et forhold mellom, K verdier ble anvendt hvori K for data tatt ved 1 minutt i nærvær av 50 mg/dl ascorbat ble dividert med K for data tatt ved 1 minutt i fravær av ascorbat. En verdi på 1 vil bety ingen ascorbatinterferens; en verdi på 0 vil bety fullstendig ascorbatinterferens. Resultatene er vist i tabell 1.

Disse data viser klart at MBTH/Chicago-syre har en ascorbatresistens som er meget bedre enn o-tolidin, og er betydelig mer ascorbatresistent enn de tidligere kjente formuleringer basert på MBTH/diethylanilin.

EKSEMPEL II

I forsøkene beskrevet i dette eksempel ble MBTH/Chicago-syretestanordninger fremstilt som i eksempel 1 og testet henholdsvis med prøver av ascorbatfri urin og/eller urin inneholdende 50 mg/dl ascorbat, begge urinprøver inneholdende 100 mg/ dl glucose. Reflektansverdiene som ble observert i de teste-de anordninger ble omdannet til ekvivalente absorbans (K) verdier, og et forhold mellom K verdier ble oppstillet som i eksempel I. Forholdet mellom aktivitet i nærvær av ascorbat sammenlignet med aktivitet ved ascorbatfri testing var .0,89.

Når disse resultater sammenlignes med dem som er angitt

i tabell 1 i eksempel I, sees det at røTH/Chicago-syreanordningene var dobbelt så ascorbatresistente når de ble anvendt ved testing av urin.

EKSEMPEL III

.Oppløsninger fremstilt som angitt nedenfor med materialer ifølge oppfinnelsen ble sammenlignet med dem tilhørende teknikkens stand med hensyn til virkningen av pH og bufferya-riasjon i oppløsninger med og uten ascorbat. Disse tester — som de tidligere beskrevne - sammenlig-ner reaksjonene av et hydrazon med forskjellige koblere i re--spons på en oxydant. I de tidligere eksempler innbefattet . materialene en oxydase som reagerte med analytten eller den substans som skulle påvises, under dannelse av en oxydant,<H>2<0>2.

Peroxydase ble innbefattet i disse materialer sammen med andre komponenter, og reaksjonen forløp ved kontakt med en prøve inneholdende analytten. I motsetning til dette ble testmaterialene i dette eksempel fremstilt til å inneholde<H>2<0>2, heller enn den analyttømfintlige oxydase, og peroxydasen ble holdt tilbake inntil tidspunktet for gjennomføring av te-sten.

Tes.toppløsninger ved en pH 5,0 ble fremstilt i 0,311 M citratbuffer. Testoppløsninger ved pH 7,0 ble fremstilt i 0,093 M Tris [Tris(hydroxymethyl)aminomethan] kombinert med 0,093 M malonat. I hvert buffersystem ble testoppløsningéne fremstilt til konsentrasjoner på 100/am MBTH, 100 ytf'M kobler, og 333 M H202. Testoppløsningéne fremstilt for hver av kob-lerne ble delt i to porsjoner. Til en porsjon av hver test— oppløsning ble tilsatt 56,8^M (1 mg/dl) ascorbinsyre.

De ovenfor angitte oppløsninger ble plasert i 3 ml stan-dardglass eller kvartskyvetter. I hvert tilfelle fikk reaksjonen forløpe ved injeksjon av peroxydase til en konsentra-. sjon på 125 nanogram (ng)/ml. Som i de tidligere eksempler resulterte dannelse av den kromogent koblede hydrazon/kobler i en forandring i optisk densitet. Forandringer i optisk densitet (^OD) ble nedtegnet med et standard absorbansspektrofo-tometer med resultatene vist i tabeller 2 og 3.

Resultatene, observert i Tris Malonat buf fersystemet ved pH 7 for Chicago-syre. yar meget bedre, enn dem for dimethylanilin og hydroxynafthalensulfonatene, Chicago-syre. er mer reak^tiv både i nærvær og fravær av ascorbat. Aktiviteten ved pH 7,0 uttrykt ved farveutvikling { AOD) pr. minutt var 3 - 4 ganger den i sitronsyre ved pH 5,0 uten ascorbat, og en enda større forskjell sees med ascorbat. Resultatene erholdt i nærvær av 56,8 yUmol/1 (1,0 mg/dl) ascorbinsyre ved forskjellige tider og deres respektive absorbans (optisk densitet)^-verdier er grafisk illustrert i Fig. 1 for MBTH/Chicao-syre i Tris Malonat (pH 7) og sitronsyre (pH 5). systemer.. En sam-menligning av resultater erholdt med de forskjellige koblere i nærvær av 56,8^mol/l (1,0 mg/dl) ascorbinsyre er grafisk illustrert i Fig. 2 for Tris Malonat (pH 7) systemet, med én merkbar unntagelse. Siden den kjente kobler, dimethylanilin, ikke engang ville reagere under disse betingelser, er dens kurve tatt fra sitronsyre (pH 5). dataene.

Således er Chicago-syre fakultativt - og optimalt funk-sjonell i et foretrukket fysiologisk pH område, og særlig viktig i enzymprøvninger.

Claims (10)

1. Testmidler for bestemmelse av .en ox <y>d erend e. substans, karakterisert ved .at de omfatter 8-amino-l-naf-thol-5,7-disulfonsyre og et hydrazon, fortrinnsvis 3-methyl-2- benzothiazolinonhydrazon.

2. Testsystem for bestemmelse av en bestanddel i en prøve, med midler som gir respons på nærvær av angitte bestanddel i prøven under dannelse av minst én oxyderende substans, og med et materiale for bestemmelse .av angitte oxyderende substans, karakterisert ved at materialet omfatter en 8-amino-l-nafthol-5,7-disulfonsyre og et hydrazon, fortrinnsvis 3- methyl-2-benzothiazolinoirhydrazon.

3. Testanordning,. karakterisert ved at den omfatter en bærermatrise og, inkorporert derved, testsystemet ifølge hvilket som helst av kravene 1 eller 2.

4. Testanordning ifølge krav 3, karakterisert ved at bærermatrisen er sugende.

5. Testanordning, karakterisert ved at- den omfatter en tablett inkorporert med testsystemet ifølge hvilket som helst av kravene 1 eller 3.

6. Fremgangsmåte for fremstilling av en anordning for be-?-stemmelse av oxyderende substanser, karakterisert ved at en bærermatrise inkorporeres med testmidlene ifølge krav 1, fortrinnsvis ved impregnering med en oppløsning av angitte testmidler, etterfulgt av tørking.

7. Fremgangsmåte for bestemmelse av en oxyderende substans i en væskeprøve, karakterisert ved at prøven bringes i kontakt med testmidlene ifølge krav 1, og at enhver resulterende respons påvises.

8. Fremgangsmåte for bestemmelse av en oxyderende substans i en yæskeprøve, k a, r a, k t e r i s. e r t ved at prøyeri bringes i kontakt med testanordningen ifølge krav 3, og at enhver farveforandring observeres.

9. Fremgangsmåte for fremstilling av en testanordning, karakterisert ved at en bærermatrise inkorpore-r res med testsystemet ifølge krav 2, fortrinnsvis ved impregnering med en oppløsning av nevnte testsystem, etterfulgt av tørking.

10. Fremgangsmåte for bestemmelse a <y> en bestanddel i. en væ-skeprøve, karakterisert ved at prøven bringes i kontaktsystemet ifølge hvilket som helst av kravene 1 eller 3, og at enhver resulterende farveforandring observeres.