NL1026028C2 - Cannabinoïdreceptorliganden en toepassingen daarvan. - Google Patents

Description

5 CANNABINOÏDRECEPTORLIGANDEN EN TOEPASSINGEN DAARVAN

GEBIED VAN DE UITVINDING

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op bicy-clische pyrazolyl- en imidazolylverbindingen als cannabi-10 noïdreceptorligandeh, in het bijzonder als CB1-receptorantagonisten, en het gebruik daarvan voor de behandeling van ziekten, aandoeningen en/of stoornissen die worden gemoduleerd door cannabinoidreceptorliganden.

15 ACHTERGROND

Zwaarlijvigheid is een belangrijk volksgezondheidsprobleem vanwege het toenemend vóórkomen ervan en de ermee verband houdende gezondheidsrisico's. Zwaarlijvigheid en overgewicht worden in het algemeen gedefinieerd aan de 20 hand van de lichaamsmassaindex (BMI), die gecorreleerd is aan de totale hoeveelheid lichaamsvet. BMI wordt berekend als het gewicht in kg gedeeld door het kwadraat van de lengte in meter (kg/m2) . Overgewicht wordt gewoonlijk gedefinieerd als een BMI van 25-29.9 kg/m2, en zwaarlijvigheid 25 wordt gewoonlijk gedefinieerd als een BMI van 30 kg/m2. Zie bv. National Heart,. Lung, én Blood Institute, Clinical Guidelines on the Identification, Evaluation, en Treatment of Overweight en Öbesity in Adults, The Evidence Report, Washington, DC: U.S. Department of Health en Human Servi-30 ces, NIH publication no. 98-4083 (1998).

Het toenemend vóórkomen van zwaarlijvigheid is een bron van zorg vanwege de ernstige gezondheidsrisico's die verband houden met zwaarlijvigheid, waaronder coronaire hartziekte, hartaanvallen, hypertensie, diabetes mellitus 35 type 2, dyslipidemie, slaapapneu, osteoarthritis, galblaasziekte, depressie, en bepaalde vormen van kanker (bv., endometriale, borst-, prostaat-, en colonkanker). De 1026028 2 negatieve gezondheidsgevolgen van zwaarlijvigheid maken het de op één na belangrijkste oorzaak van vermijdbaar overlijden en hebben een aanzienlijk economisch en psychosociaal effect op de maatschappij. Zie, McGinnis M, Foege 5 WH., "Actual Causes of Death in the United States", JAMA, 270,2207-12 (1993).

Zwaarlijvigheid wordt momenteel erkend als een chronische ziekte die behandeling behoeft om de ermee verband houdende gezondheidsrisico's te verminderen. Hoewel ge-10 wichtsverlies een belangrijk behandelingsresultaat is, is één van de belangrijkste doelen van zwaarlijvigheidsbehan-deling het verbeteren van cardiovasculaire en metabolische parameters om zwaarlijvigheidgerelateerde morbiditeit en mortaliteit te verminderen. Er is aangetoond dat een ge-15 wichtsvermindering van 5-10% metabolische parameters zoals bloedglucosegehalte, bloeddruk, en lipideconcentraties aanzienlijk kan verbeteren. Derhalve wordt aangenomen dat een doelbewuste verlaging van het lichaamsgewicht van 5-10% de morbiditeit en mortaliteit kan verminderen.

20 Momenteel beschikbare receptgeneesmiddelen voor het behandelen van zwaarlijvigheid leiden in het algemeen tot gewichtsverlies door verzadigdheid te induceren of absorptie van vet uit het voedsel te verminderen. Verzadigdheid wordt bewerkstelligd door verhoging van synaptische ni-25 veaus van norepinefrine, serotonine, of beide. Stimulatie van serotoninereceptorsubtypen 1B, 1D, en 2C en 1- en 2-adrenerge receptoren vermindert bijvoorbeeld de voedselin-name door regulatie van verzadigdheid. Zie, Bray GA, "The New Era of Drug Treatment. Pharmacalogic Treatment of Obe-30 sity: Symposium OverView", Obes Res., 3(suppl. 4), 415s-7s (1995). Adrenerge middelen (bv., diethylpropion, benzphe-tamine, phendimetrazine, mazindol, en phentermine) werken door modulatie van centrale norepinefrine- en dopami.nere-ceptoren door middel van de bevordering van cathecolamine-35 afgifte. Oudere adrenerge gewichtsverliesgeneesmiddelen (bv., amfetamine, methamfetamine, en phenmetrazine), die sterk ingrijpen in dopamineroutes, worden niet langer aan- 1 02 6028 3 bevolen vanwege het risico op misbruik ervan. Fenfluramine en dexfenfluramine, twee serotonerge middelen die zijn gebruikt om de eetlust te reguleren, zijn niet langer beschikbaar voor gebruik. . .

5 Meer recent zijn CB1- cannabinoidreceptorantagonisten/inverse agonisten gesuggereerd als potentiële eetlustonderdrukkers. Zie bv., Arno-ne, M., et al., "Selective.Inhibition of Sucrose eh Ethanol Intake by SR141716, an Antagonist of Central Cannabi-10 noid (CB1) Receptors", Psychopharmacol, 132,104-106 (1997); Calombo, G., et al., "Appetite Suppression and Weight Loss after the Cannabinoid Antagonist SR141716", Life Sci., 63, PL113-PL117 (1998); Simiand, J., et al., "SR141716, a CB1 Cannabinoid Receptor Antagonist, Selecti-15 vely Reduces Sweet Food Intake in Marmose", Behav. Pharma-col., 9, 179-181 (1998); en Chaperon, F., et al., "Invol-vement of Central Cannabinoid (CB1) Receptors in the Establishment of Place Conditioning in Rats", Psychopharmaco-logy, 135, 324-332 (1998). Voor een overzicht van cannabi-20 noid-CBl- en cB2-receptormodulatoren, zie Pertwee, R.G., "Cannabinoid Receptor Ligands: Clinical and Neuropharmaco-logical Considerations, Relevant to Future Drug Discovery en Development," Exp. Opin. Invest. Drugs, 9(7), 1553-1571 (2000).

25 Hoewel het onderzoek voortgaat, bestaat er nog steeds behoefte aan een effectievere en veilige therapeutische behandeling voor het verminderen of verhinderen van gewicht s toename .

Naast zwaarlijvigheid, betaat er ook een nog onver-30 vulde behoefte aan behandeling van alcoholmisbruik. Alcoholisme treft ongeveer 10,9 miljoen mannen en 4,4 miljoen vrouwen in de Verenigde Staten. Ongeveer 10Ó.000 doden per jaar zijn toegeschreven aan alcoholmisbruik of afhankelijkheid. Gezondheidsrisico's die verband houden met. alco-35 holisme zijn onder meer aangetaste motorische controle en besluitvorming, kanker, leverziekten, geboorteafwijkingen, hartziekten, geneesmiddel/geneesmiddel-wisselwerkingen, 1026028 4 .: ' pancreatitis en interpersoonlijke problemen. Studies hebben gesuggereerd dat endogene cannabinoldconcentraties een cruciale rol spelen bij de controle van ethanolconsumptie.

. Er is aangetoond dat. de endogene CBl-receptorantagonist 5 SR-141716A de vrijwillige ethanolconsumptie bij ratten en muizen blokkeert. Zie, Arnone, M., et al., "Selective In-hibitión of Sucrose en Ethanol Intake by SR141716, an Antagonist of Central Cannabinoid (CB1) Receptors", Psychop-harmacol, 132, 104-106 (1997). Voor een overzicht, zie 10 Hungund, B.L en B.S. Basavarajappa, "Are Anandamide and Cannabinoid Receptors involved in Ethanol Tolerance? A Re-view of the Evidence", Alcohol & Alcoholism. 35(2) 126- 133, 2000.

Huidige behandelingen voor alcoholmisbruik of - 15 afhankelijkheid hebben, in het algemeen te kampen met non-compliantie of potentiële hepatotoxiciteit; derhalve bestaat er een grote onvervulde behoefte aan effectievere behandeling van alcoholmisbruik/afhankelijkheid.

20 SAMENVATTING

De onderhavige uitvinding verschaft verbindingen met de Formule (I) of (II) die werken als cannabinoïdreceptor-liganden (in het bijzonder CBl-receptorantagonisten) 25 Ó IJÓa-r· Oo>-R°

', iHvS

30 Ra R R3· R1 1026028 (II) waarbij 35 A staat voor stikstof en B voor koolstof, of A staat voor koolstof en B voor stikstof; 5 · R° staat voor een aryl, eventueel gesubstitueerd .met één of meer substituenten, of een heteroaryl, eventueel gesubstitueerd met één of meer substituenten (bij voorkeur staat R° voor een gesubstitueerd fenyl, meer bij voorkeur 5 een fenyl gesubstitueerd met één tot drie substituenten, die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit de groep bestaande uit halo (bij voorkeur chloor of fluor), (Ci-C4)alkoxy, (C1-C4) alkyl, halogesubstitueerd (Ci-C4) alkyl (bij voorkeur fluorgesubstitueerd alkyl), en cyanó, meest 10 bij voorkeur staat R° voor 2-chloorfenyl, 2-fluorfenyl, 2,4-dichloorfenyl, 2-fluor-4-chloorfenyl, 2-chloor-4-fluorfenyl, of 2,4-difluorfenyl); R1 staat voor aryl, eventueel gesubstitueerd met één of meer substituenten, heteroaryl, eventueel gesubstitu-15 eerd met één of meer substituenten, tCH=CH-Ru, of -CH2CH2-Rla, waarbij Rla staat voor waterstof of een chemische groep gekozen uit (Ci-C8j alkyl, 3- tot 8-ledige gedeeltelijk of geheel verzadigde carbocyclisché ring(en), 3- tot 6-ledige gedeeltelijk of geheel verzadigde heteroring, aryl, hete-20 roaryl, waarbij de chemische groep eventueel is gesubstitueerd met één of meer substituenten; X staat voor een binding of -C (R2a) (R2b), waarbij R2a en R2b onafhankelijk van elkaar staan voor waterstof, (Ci-C4) alkyl, of halogesubstitueerd (Ci-C4) alkyl (bij voorkeur 25 zijn R2a en R2b beide waterstof); R3a en R3b onafhankelijk van elkaar staan voor waterstof, (Ci~C4) alkyl, of halogesubstitueerd (Ci-C4) alkyl; en R4 staat voor een chemische groep gekozen uit (Ci-C8)alkyl, aryl, heteroaryl; aryl(Ci-C4)alkyl, een 3- tot 8-30 ledige gedeeltelijk of geheel verzadigde carbocyclisché ring (en), heteroaryl (C1-C3) alkyl, 5-6-ledig lacton, 5- tot 6-ledig lactam, én een 3- tot 8-ledig gedeeltelijk of geheel verzadigde heteroring, waarbij de chemische groep eventueel is gesubstitueerd met één of meer substituenten; 35 een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, een voorloper van de verbinding of het zout, of een solvaat of hydraat van de verbinding, het zout of de voorloper.

1 0? 6028 6 . In een voorkeursuitvoéringsvorm van de onderhavige uitvinding wordt een verbinding met de Formule (III) of (IV) verschaft 5 9 pOa ft-

Rn„JLn ^ d* R

r^x^b' R36'^X^b'A'Yv r3' X (R>" R-

<rvO . . (R’vQ

R,C ' ' R’° 15 · (III) (IV) waarbij A, B, X, R2a> R2b, R3a, R3b, en R4 zijn zoals hierboven gedefinieerd; 20 R0a, R0b, Rlb, en Rlc onafhankelijk van elkaar staan voor halo, (C1-C4) alkoxy, (C1-C4) alkyl, halo-substituted (Ci-C4) alkyl, of cyano; en n en m onafhankelijk van elkaar 0, 1 of 2 zijn; een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, een 25 voorloper van de verbinding of het zout, of een solvaat of hydraat van de verbinding, het zout of de voorloper.

In voorkeursuitvoeringsvormen van de onderhavige uitvinding is R4 een chemische groep gekozen uit (Ci-Ce) alkyl, aryl, heteroaryl, aryl (Ci-C4) alkyl, en 3- tot 8-ledige ge-30 deeltelijk of geheel verzadigde carbocyclische ring(en), waarbij de chemische groep eventueel is gesubstitueerd met één of meer substituenten.

Meer bij voorkeur is R4 (Ci-Ce) alkyl, halogesubstitueerd (Ci-C8)alkyl, cyclopentyl, cyclohexyl, piperidine-l-yl, 35 pyrrolidine-l-yl, of morpholine-l-yl.

Bij voorkeur zijn R° en Rl elk onafhankelijk van elkaar een fenyl gesubstitueerd met 1 tot 3 substituenten 1 Q26028 7 onafhankelijk van elkaar gekozen uit de groep bestaande uit halo, (C1-C4)alkoxy, (C1-C4)alkyl, halogesubstitueerd (C1-C4)alkyl, en cyano;

Meer bij voorkeur zijn R° en R1 elk onafhankelijk van 5 elkaar een fenyl gesubstitueerd met 1 tot 2 substituenten onafhankelijk van elkaar gekozen uit de groep bestaande uit chloor, fluor, (C1-C4)alkoxy, (C1-C4)alkyl, halogesubstitueerd (C1-C4)alkyl, en cyano;

Meest bij voorkeur is R° 2-chloorfenyl, 2-fluorfenyl, 10 2,4-dichloorfenyl, 2-fluor-4-chloörfenyl, 2-chloor-4- fluorfenyl, of 2,4-difluorfenyl; en is Rl 4-chloorfenyl, 4-cyanofenyl of 4-fluorfenyl.

Voorkeursverbindingen met de Formule (I) , waarbij A staat voor stikstof, B voor koolstof, en X voor een bin-15 ding zijn onder meer: 2-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-3- (3,4,5-trifluorfenyl)-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 2,3-bis-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo [3,4-c]py.razool-6-on; 2-(2-chloorfenyl)- 5- isopropyl-3-(4-methoxymethyl-fenyl)-4,5-dihydro-2H- 20 pyrrolo(3,4-c]pyrazool-6-on; 2-(2-chloorfenyl)-3-(2- fluorfenyl)-5-isoprópyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 2-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-3-(6- methoxy-pyridine-3-yl)-4, 5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4- c]pyrazool-6-on; 3-(3-chloor-4-fluorfenyl)-2-(2- 25 chloorfenyl)-5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4- c]pyrazool-6-on; 2-(2-chloorfenyl)-3-<4-fluor-3-methyl-fenyl)-5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool- 6- on; 3-(4-chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 3-(4-chloorfenyl)- 30 2-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-4-methyl-4,5- dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 4-benzyl-3-(4- chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazóol-6-on; 5-tert-butyl-3-(4- chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-35 c]pyrazool-6-on; 3-(4-chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-5- cyclobutyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 3-(4-chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-5-cyclopentyl-4,5- 1026028 • 8 dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 3-(4-chloorfenyl)-2~(2-chloorfenyl)-5-cyclohexyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 3-(4-chloorfenyl)-2-(2,4-dichlo.orfenyl)- 5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 5-5 tert-butyl-3-(4-chloorfenyl)-2-(2,4-dichloorfenyl)-4,5- dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 3-(4-chloorfenyl)- 5-cyclopentyl-2-(2,4-dichloorfenyl)-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 3-(2-chloorfenyl)-2-(4- chloorfenyl)-5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3, 4-10 c]pyrazool-6-on; 3-(2-chloorfenyl)-2-(4-chloorfenyl)-5- cyclopentyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 3-(2-chloorfenyl)-2 -(4-chloorfenyl)-5-cyclohexyl-4,5- .

dihydro-2H-pyrrölo[3,4-c]pyrazool-6-on; 5- bicyclo[2.2.1]hept-2-yl-3-(2-chloorfenyl)-2-(4-15 chloorfenyl)-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 2-(4-chloorfenyl)-5-cyclopentyl-3-(2- fluorfenyl)-4,5- dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-ón; en 2-(4- chloorfenyl)-5-cyclohexyl-3-(2-fluorfenyl)-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; een farmaceutisch aanvaard-20 baar zout daarvan, of een sol vaat of hydraat van de ver binding of het zout.

Meer de voorkeur genietende verbindingen zijn onder meer: 3-(4-chlóorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-4,5- dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 3-(4-chloorfenyl)-25 2-(2-chloorfenyl)-5-(2,2,2-trifluorethyl)-4,5-dihydro-2H- pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; en 4-[2-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-6-oxo-2,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazool3-yl]-benzonitril; . een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van de ver- 30. binding of het zout.

Voorkeursverbindingen met de Formule (I) waarbij A staat voor stikstof, B voor koolstof en X voor -C(R2®) Rozijn onder meer: 3-(4-chloorfenyl)-2-(2-chlóorfenyl)-6- isopröpyl-2,4,5,6-tetrahydro-pyrazólo[3,4-c]pyridine-7-on; 35 3-(4-chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-6-(2,2,2-trifluoro- ethyl)-2,4,5,6-tetrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-7-on; 3-(4-chloorfrenyl)-2-(2-chloorfenyl)-6-(2,2-difluorethyl)- 1026028 9 2,4,5, 6-tetrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-7-on; en 3-(4-chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-6-(2-fluorethyl)-2,4,5,6-tetrahydro-pyrazolo[3,4-c]pyridine-7-on; een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van 5 de verbinding of het zout.

Voorkeursverbindingen met de Formule (I) waarbij A staat voor koolstof, B voor stikstof en X voor een binding zijn ónder meer: 2-(4-chloorfenyl)-5-cyclopentyl-l-(2- fluorfenyl)-5,6-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; 10 2-(4-chloorfenyl)-5-cyclopentyl-l-(2,4-dichloorfenyl)-5,6-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; 2-(4-chloörferiyl)-5-cyclohexyl-l-(2,4-dichloorfenyl)-5,6-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; 2-(4-chloorfenyl)-l-{2,4-dichloorfenyl)-5-(2,2,2-15 trifluo.rethyl)-5,6-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; 2-(4-chloorfenyl)-l-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-5,6-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; 2-(4-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-5-cyclopentyl-5,6-20 dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; 2-(4-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-5-cyclohexyl-5,6-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; 2-(2-chloorfenyl)-1-(4-chloorfenyl)-5-cyclohexyl-5,6-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; 25 2-(4-chloorfenyl)-5-cyclohexylmethyl-l-(2-fluorfenyl)-5,6- dihydro-lH-pyrrólo[3,4-d]imidazool-4-on; 5-cyclopentyl-2-(4-fluorfenyl)-l-(2-fluorfenyl)-5,6-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; 1- (2-chloorfenyl)-5-cyclopentyl-2-(4-fluorfenyl)-5,6-30 dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; 2- (2-chloorfenyl)-l-(4-chloorfenyl)-5-cyclopentyl-56-dihydro-lH-pyrrólo[3,4-d]imidazool-4-on; 2-(2-chloorfenyl)-l-(4-chloorfenyl)-5-cyclohexyl-5,6-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; en 35 .1-(4-chloorfenyl)-5-cyclohexyl-2-(2,4-dichloorfenyl)-5,6- dihydro-lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; een farmaceutisch 1026028 1° aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van de verbinding of het zout.

Een meer de voorkeur genietende verbinding is 2 —{4— chloorfenyl)-5-cyclopentyl-l-(2-fluorfenyl)-5,6-dihydro-.5 lH-pyrrolo[3,4-d]imidazool-4-on; een farmaceutisch aan vaardbaar zout daarvan, of een sol vaat of hydraat van de verbinding of het zout.

Een voorkeursverbinding met de Formule (I) waarbij A staat voor koolstof, B voor stikstof en X voor -C(R2a) (R21*)-10 is 2-(4-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-5-cyclopentyl- 1,5,6,7-tetrahydro-imidazo[4,5-c]pyridine-4-on; een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van de verbinding of het zout.

Voorkeursverbindingen met de Formule (I) waarbij R1 15 staat voor -CH=CH-Rla zijn onder meer: 2-(2-chloorfenyl)-3-[2-(4-chloorfenyl)-vinyl]-5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 2-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-3“Vinyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 20 2-(2-chloorfenyl)-3-[2-(4-chloorfenyl)-vinyl]-5-(2,2,2- trifluoro-ethyl)-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; 2-(2-chloorfenyl)-3-[2-(4-chloorfenyl)-vinyl]-5-(2,2-dif luorethyl)-4,5^-dihydro-2H-pyrrolo [3,4-c] pyraz.ool-6-on; 25 en 2-(2-chloorfenyl)-3-[2-(4-chloorfenyl)-vinyl)-5-(2-fluorethyl)-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on; een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van. de verbinding of het zout.

30 Voorkeursverbindingen met de Formule (II) zijn onder meer: 2-(4-.chioorfenyl)-5-cyclohexyl-3-(2-fluorfenyl)-2,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazool; 3-(4-chloorfenyl)-5-cyclopentyl-2-(2,4-dichloorfenyl)-2,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazool; en 3-(4-chloorfenyl)-2-(2- 35 chloorfenyl)-5-isopropyl-2,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-,c]pyrazool; een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, . of eén solvaat of hydraat van de verbinding of het zout.

1026028 11 .

Sommige van de hier beschreven verbindingen . bevatten mogelijk ten minste één chiraal centrum; bijgevolg zal de vakman begrijpen dat alle stereoisomeren (bv. enantiomeren en diasteroisomeren) van de hier beschreven en bediscussi-5 eerde verbindingen binnen de strekking vallen van de onderhavige uitvinding. Daarnaast vallen ook tautomere vormen van de verbindingen binnen de strekking van de onderhavige uitvinding. De vakman zal onderkennen dat chemische groepen zoals een alfa-aminoether of een alfa-chlooramine 10 mogelijk te onstabiel zijn om te isoleren; derhalve maken dergelijke groepen geen deel uit van de onderhavige uitvinding.

Er is aangetoond dat verbindingen van de onderhavige uitvinding bruikbare cannabinoïdreceptorliganden zijn (in 15 het bijzonder CBl-receptorantagonisten). Dienovereenkomstig is een ander aspect van de onderhavige uitvinding een farmaceutisch preparaat dat (1) een verbinding van de onderhavige uitvinding en (2) een farmaceutisch aanvaardbare excipiënt, verdunningsmiddel of.drager bevat.. Bij voorkeur 20 bevat het preparaat een thèrapeutisch effectieve hoeveelheid van een verbinding van de onderhavige uitvinding. Het preparaat kan ook ten minste één aanvullend (hier beschreven) farmaceutisch middel bevatten. Voorkeursmiddelen zijn onder meer partiële nicotinereceptoragonisten, opioïdanta-25 gonisten (bv., naltrexone en nalmefene), dopaminerge middelen (bv., apomorphine), middelen tegen aandachtstekört-stoornis (ADD inclusief aandachtstekortstoornis met hyperactiviteit (ADHD) ) (bv., · Ritalin*", Strattera™, Concerta™ en Adderall™), én anti-zwaarlijvigheidsmiddelen (hieronder 30 beschreven).

In nog een andere uitvoeringsvorm van de onderhavige uitvinding, een werkwijze voor het behandelen van een ziekte, aandoening of stoornis gemoduleerd door een canna-binoïdreceptor-^ (bij voorkeur een CBl-receptor) antagonis-35 ten in dieren, dat de stap omvat van toediening, aan een dier dat een dergelijke bestanddeel nodig heeft, van een therapeutisch werkzame hoeveelheid van een verbinding van 1026028 . 12 de onderhavige uitvinding (of een farmaceutisch preparaat daarvan).

In nog een andere uitvoeringsvorm van de onderhavige uitvinding, een werkwijze voor het behandelen van een 5 ziekte, aandoening of stoornis gemoduleerd door een· canna-binoïdreceptor- (bij voorkeur, een CBl-receptor) antagonisten in dieren, dat de stap omvat van toediening, aan een dier dat een dergelijke bestanddeel nodig heeft, van een therapeutisch werkzame hoeveelheid van een verbinding van 10 de onderhavige uitvinding (of een farmaceutisch preparaat daarvan).

Ziekten, aandoeningen en/of stoornissen die worden gemoduleerd door cannabinoïdreceptorliganden zijn onder meer eetstoornissen (bijvoorbeeld vreetluchtaanvallen, 15 anorexie en boulimie), gewichtsverlies of -controle, (bv. reductie in calorie- of voedselinname, en/of eetlustonder-drukking), zwaarlijvigheid, depressie, atypische depressie, bipolaire stoornissen, psychoses, schizofenie, ge-dragsverslavingen, onderdrukking van beloningsgerelateerd 20 gedrag (bijvoorbeeld geconditioneerde plaatsvermijding, zoals onderdrukking van cocaïne- of morfinegeïnduceerde plaatsvoorkeur), stofmisbruik, verslavingsstoornissen, impulsiviteit, alcoholisme (bv. alcoholmisbruik, -verslaving en/of -afhankelijkheid inclusief behandeling voor onthou-25 ding, verlangenvermindering en preventie van terugval tot alcoholconsumptie), tabaksmisbruik (bv. rookverslaving, beëindiging en/of afhankelijkheid inclusief behandeling voor verlangenvermindering. en preventie van terugval tot tabaksroken), dementie (inclusief geheugenverlies, ziekte 30 van Alzheimer, ouderdomsdementie, vasculaire dementie, milde cognitieve zwakte, oudérdomsgerelateerde cognitieve achteruitgang en milde neurocognitieve stoornis), sexuele dysfunctie bij mannen (bv. erectieproblemen), stuipaanval-len, epilepsie, ontsteking, gastrointestinale stoornissen 35 (bv. dysfunctie van gastrointestinale motiliteit of intestinale propulsie), aandachtstekortstoornis (ADD/ADHD), ziekte van Parkinson:, en type II diabetes. In een voor- 1026028 13 keursuitvoeringsvorm. wordt de werkwijze gebruikt bij de behandeling van gewichtsverlies/ zwaarlijvigheid, boulimie, ADD/ADHD, ziekte van Parkinson, dementie, alcoholisme, en/of tabaksmisbruik.

5 Verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen worden toegediend in combinatie met andere farmaceutische middelen. Voorkeur genietende farmaceutische; middelen zijn onder meer partiële nicotinereceptoragonisten, opioïdanta-gonisten (bv., naltrexone (waaronder naltrexone-depot), 10 antabuse, en nalmefene), dopaminerge middelen (bv., apo- morphine),ADD/ADHD-middelen (bv. methylphenidaat- hydrochloride (bv. Ritalin" en Concerta**), atomoxetine (bv. Strattera*") en amfetaminen (bv. Adderall**·) ) en anti-zwaarlijvigheidsmiddelen zoals apo-B/MTP-remmers, 11β-15 hydroxysteroiddehydrogenase-1- (Ιΐβ-HSD type 1) remmers, peptideYY3_36 of analogen daarvan, MCR-4-agonisten, CCK-A-agonisten, monoamineheropnameremmers, sympathomimetische middelen, β3-adrenerge receptoragonisten, dopaminerecep-toragonisten, melanocyt-stimulerend- 20 hormoonreceptoranalogen, 5-HT2c-receptoragonisten, melani- ne-concentrerend-hormoon-receptorantagonisten, .leptine, leptineanalogen, leptinereceptoragonisten, galaninerecep-torantagonisten, lipaseremmers, bombesine- receptoragonisten, neuropeptide-Y-recèptorantagonisten 25 (bv. NPY-Y5-receptorantagonistën zoals de hieronder be schrevene) , thyromimetische middelen, dehydroepiandroste-ron of analogen daarvan, glucocor.ticoidreceptorantagonis-ten, orexinereceptorantagonisten, glucagon-achtig-peptide- 1-receptoragonisten, ciliaire neurotrofe factoren, humaan-30 agouti-gerelateerd-eiwit-antagonisten, ghrelinereceptoran- tagonisten, histamine-3-recèptor-antagonisten of inverse agonisten, en neuromedine-U-recëptoragonisten, en dergelijke.

De combinatietherapie kan worden toegediend als (a) 35 een enkelvoudig farmaceutisch preparaat dat éen verbinding van dé onderhavige uitvinding, ten minste één ander hier beschreven farmaceutisch middel, en een farmaceutisch aan- 1 026028 14' vaardbare excipiënt* verdunningsmiddel of drager; of (b) twee afzonderlijke farmaceutische preparaten omvattende (i) een eerste preparaat omvattende een verbinding van de onderhavige uitvinding en een farmaceutisch aanvaardbare 5 excipiënt, verdunningsmiddel of drager, en (ii) een tweede préparaat omvattende ten minste één ander hier beschreven . farmaceutisch middel en een farmaceutisch aanvaardbare excipiënt, verdunningsmiddel of drager. De farmaceutische preparaten kunnen simultaan of sequentieel worden toege-10 diend; en in elke volgorde.

In nog een ander aspect van de onderhavige uitvinding wordt een farmaceutische kit verschaft voor gebruik door een consument ter behandeling, van ziekten, aandoeningen of , stoornissen die worden gemoduleerd door cannabinoldrecep-15 torantagonisten in een dier. De kit omvat a) een geschikte doseringsvorm omvattende een verbinding van de onderhavige uitvinding; en b) aanwijzingen die een werkwijze beschrijven voor gebruik van de doseringsvorm voor het behandelen van ziekten, aandoeningen of stoornissen die worden gemo-20 duleerd door cannabinoidreceptor- (in het bijzonder de CBl-receptor) antagonisten.

In nog een andere uitvoeringsvorm van de onderhavige uitvinding is een farmaceutische kit omvattende: a) een eerste doseringsvorm omvattende (i) een verbinding van. de 25 onderhavige uitvinding en (ii) een farmaceutisch aanvaardbare drager, excipiënt of verdunningsmiddel; b) een tweede doseringsvorm omvattende (i) een ander hier beschreven farmaceutisch middel en (ii) een farmaceutisch aanvaardbare drager, excipiënt of verdunningsmiddel; en c) een hou-30 der.

: DEFINITIES

Zoals hier gebruikt heeft de term "alkyl betrekking op een koolwaterstofradicaal met de algemene formule 35 CnH2n+i. Het alkaanradicaal kan onvertakt of vertakt zijn.

De term " (Ci-Cö) alkyl'' heeft bijvoorbeeld betrekking op een monovalente onvertakte of vertakte alifatische groep die 1 1 02 6028 15 tot 6 .koolstofatomen bevat (bv. methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl', n-butyl, i-butyl, s-butyl, i-butyl, .n-pentyl, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, neopentyl, 3,3-dimethylpropyl, hexyl, 2-methylpentyl, en dergelijke). Op 5. vergelijkbare wijze heeft het alkylgedeelte (i.e., de alkylgroep) van een alkoxy-, acyl- (bv., alkanoyl-), alky-lamino-, dialkylamino-, en alkylthiogroep dezelfde definitie als hierboven. Wanneer aangeduid als zijnde "eventueel gesubstitueerd", kan het alkaanradicaal of de alkylgroep 10 ongesubstitueerd of met één of meer substituenten gesubstitueerd zijn (in het algemeen één tot drie substituenten behalve in het geval van halogeensubstituenten zoals per-chloor- of perfluoralkylgroepen) die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit de groep substituenten die hieronder 15 is weergegeven in de definitie van "gesubstitueerd". "Ha-logesubstitueerd alkyl" heeft betrekking op een alkylgroep die is gesubstitueerd met één of meer halogeenatomen (bv., fluormethyl, difluormethyl, trifluormethyl, perfluorethyl, en dergelijke). Wanneer ze zijn gesubstitueerd, zijn de .

20 alkaanradicalen of alkylgroepen bij voorkeur gesubstitueerd met 1 tot 3 floursubstituénten, of 1 tot 2 substitu-enten die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit (Ci-C3) alkyl, (C3-C6) cycloalkyl, (C2-C3) alkenyl, aryl, heteroa-ryl, 3- tot 6-ledige heteroring, chloor, cyano, hydroxy, 25 (Ci-C3) alkoxy, aryloxy, amino, (Ci-C6) alkylamino, (di-(Ci- C4)alkyl)amino, aminocarboxylaat (i.e., (C1-C3)alkyl-0- C(O) -NH-), hydroxy (C2-C3) alkylamino, of keto (oxo), en meer bij voorkeur 1 tot 3 fluorgroepen, of 1 substituent gekozen uit (C1-C3) alkyl, (C3-C6) cycloalkyl, (Ce)aryl, 6-ledige-30 heteroaryl, 3- tot 6-ledige heteroring, (C1-C3) alkoxy, (Ci-, C4) alkylamino of (di- (C1-C2) alkyl) amino.

De termen "gedeeltelijk of volledig verzadigde carbo-cyclische ring" (ook aangeduid als gedeeltelijk of volledig verzadigde cycloalkyl") heeft betrekking op nonaroma-35 tische ringen die hetzij gedeeltelijk of geheel zijn gehy-drogeneerd en de vorm kunnen hebben van een enkelvoudig ring, bicyclische ring of spiro-ring. Tenzij anders aange- 1026020 .·' 16 geven is de carbocyclische ring in het algemeen een 3- tot 8-ledige ring. Gedeeltelijk of volledig verzadigde carbocyclische ringen (of. cycloalkyl) omvatten bijvoorbeeld groepen zoals cyclopropyl, cyclopropenyl, cyclobutyl, cy-5 clobutenyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclopentadienyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, norbornyl (bi-cyclo[2.2.1]heptyl), norborrienyl, bicyclo[2.2.2]octyl, en dergelijke. Wanneer aangeduid als zijnde "eventueel gesubstitueerd", kan het alkaanradicaal of de alkylgroep onge-10 substitueerd of met één of meer substituenten gesubstitueerd zijn (typischerwijs één tot drie substituenten) die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit de groep substituenten die hieronder is weergegeven in de definitie van "gesubstitueerd". Een gesubstitueerde carbocyclische ring 15 omvat ook groepen waarbij de carbocyclische ring is gefuseerd aan een fenylring (bv., indanyl). De carbocyclische groep kan aan de chemische verbinding of groep zijn verbonden via elk van de koolstofatomen in het carbocyclische ringsysteem. Wanneer hij gesubstitueerd is, is de carbocy-20 clische groep gesubstitueerd met 1 of 2 substituenten die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit (C1-C3)alkyl, (¢2-03) alkenyl, (Ci-C6)alkylidenyl, aryl, heteroaryl, 3- tot 6-ledige heteroring, chloor, fluor, cyano, hydroxy, (Cj-C3)alköxy, aryloxy, amino, (Ci-Ce) alkyl amino, (di-(Ci-25 C4) alkyl) amino, aminocarboxylaat (i.e., (C1-C3) alkyl-O- C(O)-NH-), hydroxy(C2-C3)alkylamino, of keto (oxo), en meer bij voorkeur 1 of 2 substituenten onafhankelijk van elkaar gekozen uit (C1-C2) alkyl, 3- tót 6-ledige heteroring, fluor, (C1-C3) alkoxy, (C1-C4) alkylamino of (di-(Ci-30 C2)alkyl)amino. Op vergelijkbare wijze heeft elk cycloalky- lgedeelte van een groep (bv. cycloalkylalkyl, cycloalkyla-mino, enz.) dezelfde definitie als hierboven.

De term "gedeeltelijk of volledig verzadigde heterocyclische ring" (ook aangeduid als gedeeltelijk.of volle-35 dig verzadigde heteroring") heeft betrekking öp nonaroma-tische ringen die hetzij gedeeltelijk of geheel zijn gehy-drogeneerd en de vorm kunnen hebben van een enkelvoudig 1026028 17 ring, bicyclische ring of spiro-ring. Tenzij anders aangegeven is de heterocyclische ring in het algemeen een 3-tot 6-ledige ring die 1 tot 3 heteroatomen bevat (bij voorkeur 1 of 2 heteroatomen) welke onafhankelijk van el-5 kaar zijn gekozen uit zwavel, zuurstof, en/of stikstof. Gedeeltelijk of volledig verzadigde heterocyclische ringen omvatten groepen zoals epoxy, aziridinyl, tetrahydrofura-nyl, dihydrofuranyl, dihydropyridinyl, pyrrolidinyl, N-methylpyrrolidinyl* imidazolidinyl, imidazolinyl, piperi-10 dinyl, piperazinyl, pyrazolidinyl, 2H-pyranyl, 4H-pyranyl, 2H-chromenyl, oxazinyl, morpholino, thiomorpholino, te-trahydrothienyl, tetrahydrothienyl 1,1-dioxide, en dergelijke. Wanneer aangeduid als zijnde "eventueel gesubstitueerd", kan de gedeeltelijk of volledig verzadigde hetero-15 cyclische groep ongesubstitueerd of met één of meer substituenten gesubstitueerd zijn (typischerwijs één tot drie substituenten) die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit de groep substituenten die hieronder is weergegeven in de definitie van "gesubstitueerd". Een gesubstitueerde he-20 terocyclische ring omvat ook groepen waarbij de heterocyclische ring is gefuseerd aan een aryl- of heteroarylring (bv. 2,3,-dihydrobenzofuranyl, 2,3-dihydroindolyl, 2,3-dihydrobenzothiofenyl, 2,3-dihydrobenzothiazolyl, enz.). Wanneer hij gesubstitueerd is, is de heterocyclische groep 25 bij voorkeur gesubstitueerd met 1 of 2 substituenten die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit (C1-C3) alkyl, (C3—C6) cycloalkyl, (C2-C4) alkenyl, aryl, heteroaryl, 3- to β-ledige heteroring, chloor, fluor, cyano, hydroxy, (Ci-C3)alkoxy, aryloxy, amino, (C1-C6) alkylamino, (di— (Ci— 30 C«) alkyl) amino, . aminocarboxylaat . (i.e., CC1-C3) alkyl-O- C(Ó.) -NH-), of keto (oxo) , en meer bij voorkeur 1 of 2 substituenten onafhankelijk van elkaar gekozen uit (Ci— C3)alkyl, (C3-C6)cycloalkyl, (C6)aryl, 6-ledige heteroaryl, 3- tot 6-ledige heteroring, of fluor. De heterocyclische 35 groep kan aan de chemische verbinding of groep zijn verbonden via elk van de koolstofatomen in het heterocyclische ringsysteem. Op vergelijkbare wijze heeft elk hetero- 1026028 18 ringgedeelte van een groep (bv. met een heteroring gesubstitueerd alkyl, heteroringcarbonyl, enz.) dezelfde definitie als hierboven. .

De term "aryl" of "aromatische carbocyclische ring" 5 heeft betrekking op aromatische groepen met een enkelvoudig (bv. fenyl) óf een gefuseerd ringsysteem (bv. nafta-leen, antraceen, f.enantreen, enz.). Een typische arylgroep . is een . 6- tot 10-ledige aromatische carbocyclische ring(en). Wanneer aangeduid als zijnde "eventueel gesub-10 stitueerd", kan de arylgroep ongesubstitueerd of met één of meer substituenten gesubstitueerd zijn (bij voorkeur niet meer dan drie substituenten) die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit de groep substituenten die hieronder is weergegeven. in de definitie van "gesubstitueerd". 15 Gesubstitueerde arylgroepen zijn onder meer ook een keten van aromatische groepen (bv. bifenyl, terfenyl, fenylnaf-talyl, enz.)., Wanneer. zij gesubstitueerd zijn, zijn de aromatische groepen bij voorkeur gesubstitueerd met 1 of 2 substituenten die. onafhankelijk van elkaar zijn gekozen 20 uit (Ci-C4) alkyl, {C2-C3) alkenyl, aryl, heteroaryl, 3- tot 6-ledigë heteroring, broom, chloor, fluor, jood, cyano, hydroxy, (C1-C4) alkoxy, aryloxy, amino, (Ci-Ce) alkylamino, (di-(C1-C3) alkyl) amino, of aminocarboxylaat (i.e., (Οχ-C3)alkyl-O-C(O)-NH-), en meer bij voorkeur 1 of 2 substitu-25 enten onafhankelijk van elkaar gekozen uit (C1-C4) alkyl, chloor, fluor, cyano, hydroxy, of (C1-C4) alkoxy. De arylgroep kan aan de chemische verbinding of groep zijn verbonden via elk van de kool stof at omen in het aromatische ringsysteem. Op vergelijkbare wijze heeft het arylgedeelte 30 (i.e. aromatische groep) van een aroyl of aroyloxy (i.e.

(aryl)-C(O)-0-) dezelfde definitie als hierboven.

De term "héteroaryl" of "heteroaromatische ring" heeft betrekking op aromatische groepen met ten minste één heteroatoom (bv. zuurstof, zwavel, stikstof of combinaties 35 daarvan) binnen een 5- tot 10-ledig aromatisch ringsysteem (bv. pyrrolyl, pyridyl, pyrazolyl, indolyl, indazolyl, thienyl, füranyl, benzofuranyl, oxazolyl, imidazolyl, 1026026’ 19 tetrazolyl,. triazinyl, pyrimidyl, pyrazinyl, thiazolyl, purinyl, benzimidazolyl, chinolinyl, isochinolinyl, ben-zothiofeny.1, benzoxazolyl enz.). De heteroaromatische groep kan bestaan uit een enkelvoudig of een gefuseerd 5 ringsysteem. Een typische enkelvoudige heteroarylring is' een 5- tot 6-ledige ring met één tot drie heteroatomen die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit zuurstof, zwavel en stikstof, en een typisch gefuseerd heteroarylringsys-teem is een 9- tot 10-ledige ring met één tot vier hetero-10 atomen die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit zuurstof, zwavel en stikstof. Wanneer aangeduid als zijnde "eventueel gesubstitueerd", kan de heteroarylgroep ongesubstitueerd of met één of meer substituenten gesubstitueerd zijn (bij voorkeur niet meer dan drie substituenten) 15 die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit de groep substituenten die hieronder is weergegeven in de definitie van "gesubstitueerd". Wanneer zij gesubstitueerd zijn, zijn de heteroaromatische groepen bij voorkeur gesubstitueerd met 1 of 2 substituenten die onafhankelijk van elkaar 20 zijn gekozen uit (C1-C4) alkyl, (C2-C3) alkenyl, aryl, hetero-aryl, 3- to 6-ledige heteroring, broom, chloor, fluor, jood, cyano, hydroxy, (C1-C4) alkoxy, aryloxy, amino, (Ci-Ce) alkylamino, (di- (C1-C3) alkyl) amino, of aminocarboxylaat (i.e., (Ci-C3)alkyl-0-C(0)-NH-), en meer bij voorkeur 1 of 25 2 substituenten onafhankelijk van elkaar gekozen uit (Ci~ C4)alkyl, chloor, fluor, cyano, hydroxy, (C1-C4)alkoxy, (Ci-C6) alkylamino of (di- (C1-C2) alkyl) amino. De heteroarylgroep kan aan de chemische verbinding of groep zijn verbonden via elk van de koolstofatomen in het aromatische ringsys-30 teem (bv. imidazool-l-yl,imidazool-2-yl, imidazool-4-yl, imidazool-5-yl, pyrid-2-yl, pyrid-3-yl, pyrid-4-yl, pyrid- 5-yl, of pyrid-6-yl). Op vergelijkbare wijze heeft het he-teroarylgedeelte (i.e. heteroaromatische groep) van een heteroaroyl of heteroaroyloxy (i.e. (heteroaryl)-C(O)-0-) 35 dezelfde definitie als hierboven.

De term acyl heeft betrekking op met waterstof, alkyl,. gedeeltelijk of volledig verzadigd cycloalkyl, ge- 1026023 20 deeltelijk of volledig verzadigde heteroring, aryl en he-teroraryl gesubstitueerde carbohylgroepen. Acyl omvat bijvoorbeeld groepen zoals (C1-C6) alkanoyl (bv. formyl, ace-tyl, propionyl, butyryl, valeryl, caproyl, t-butylacetyl, 5 enz.), (C3-C6)cycloalkylcarbonyl (bv. cyclopropylcarbonyl, cyclobutylcarbonyl, cyclopentylcarbonyl, cyclohexylcarbo-nyl, enz.), heterocyclisch carbonyl (bv. pyrrolidinylcar-bonyl, pyrrolid-2-on-5-carbonyl, piperidinylcarbonyl, pi-perazinylcarbonyl, tetrahydrofuranylcarbonyl, enz.), aroyl 10 (bv. benzoyl) en heteroaroyl (bv. thiofenyl-2-carbonyl, thiofenyl-3-carbonyl, furanyl-2-carbonyl, furanyl-3-carbonyl, lH-pyrroyl-2-carbonyl, lH-pyrroyl-3-carbonyl, benzo[b]thiofenyl-2-carbdnyl, enz.). Daarnaast, kunnen het alkyl-, cycloalkyl-, heteroring-, aryl- en heteroarylge-15 deelte van de acylgroep elk van de groepen zijn zoals ge definieerd in de bovenstaande definities. Wanneer aangeduid als zijnde "eventueel gesubstitueerd", kan de acylgroep ongesubstitueérd of met één of meer substituenten gesubstitueerd zijn (typischerwijs één tot drie substitu-20 enten) die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit de groep substituenten die hieronder is weergegeven in de definitie van "gesubstitueerd", of kan het alkyl-, cycloalkyl-, heteroring-, aryl- en heteroarylgedeelte van de acylgroep zijn gesubstitueerd zoals hierboven beschreven 25 in de opsommingen van respectievelijk de voorkeur en meer de voorkeur genietende substituenten.

De term "gesubstitueerd" omvat en bedoelt specifiek één of meer substituties die gebruikelijk zijn in het vakgebied. Door deskundigen in het vakgebied wordt echter al-30 . gemeen begrepen dat de substituenten zodanig dienen te worden gekozen dat de zij de farmacologische eigenschappen van de verbinding niet nadelig beïnvloeden of nadelig interfereren met het gebruik van het geneesmiddel. Geschikte substituenten voor de hierboven gedefinieerde groepen zijn 35 onder meer (Ci-C6) alkyl, (C3-C7) cycloalkyl, (C2-C6) alkenyl, (Ci-Ci)alkylidenyl, aryl, heteroaryl, 3- tot 6-ledige heteroring, halo (bv. chloor, broom, jood en fluor), cyano, 1026028 21 hydroxy, (Ci-Ce)alkoxy, aryloxy, sulfhydryl (mercapto), (Cl-C6)alkylthio, arylthio, amino, mono- of di-(Οχ- Οβ) alkylamino, quaternaire ammoniumzouten, amino(Οχ- C6)alkoxy, aminocarboxylaat (i.e. (Οχ-Οβ)alkyl-O-C(O)-NH-), · 5 hydroxy (C2-C6) alkylamino, amino (C1-C6) alkylthio, cyanoamino, nitro, (0χ-06) carbamyl, keto {oxo), acyl, (Οχ-Οβ) alkyl-C02-, glycolyl, glycyl, hydrazino, guanyl, sulfamyl, sulfonyl, sulfinyl, thio (Ci—C6) alkyl-C (O)thio (Οχ-Οβ) alkyl-C02“f en combinaties daarvan. In het geval van gesubstitueerde com-10 binaties zoals "gesubstitueerd aryl (C1-C6) alkyl", kan hetzij de aryl- of de alkylgroep gesubstitueerd zijn, of kunnen zowel de aryl als de alkylgroepen worden gesubstitueerd met één of meer substituenten (typischerwijs één tot drie substituenten behalve in het geval van perhalosubsti-15 tuties). Eén met aryl of heteroaryl gesubstitueerde carbo-cyclische of heterocyclische groep kan een gefuseerde ing zijn (bv. indanyl, dihydrobenzofuranyl, dihydroindolyl, enz.) .

De term "solvaat" heeft betrekking op een moleculair 20 complex van een verbinding weergegeven dor Formule (I) of (II) (inclusief voorlopers en farmaceutisch aanvaardbare zouten daarvan) met één of meer oplosmiddelmoleculen. Dergelijke oplosmiddelmoleculen zijn die welke gebruikelijk zijn in farmaceutische vakgebied, die bekend staan als on-25 schadëlijk voor de ontvanger, bv. water, ethanol, en dergelijke. De term hydraat heeft betrekking op het complex waarbij het oplosmiddelmolecuul water is.

De tem "beschermende groep" of "Pg" heeft betrekking op een substituent die gewoonlijk wordt gebruikt om een 30 bepaalde functionaliteit te blokkeren of beschermen terwijl men andere functionele groepen van de verbinding laat reageren. Zo is bijvoorbeeld een "aminobeschermende groep" een aan een aminogroep gebonden substituent die de amino-functionaliteit in de verbinding blokkeert of beschermt. 35 Geschikte aminobeschermende groepen zijn onder meer ace-tyl, trifluoracetyi, t-butoxycarbonyl (BOC), benzyloxycar-bonyl (CBz) en 9-fluor-enylmethylenoxycarbonyl (Fmoc) . Op 1 02 6028 : 22 vergelijkbare wijze heeft een "hydroxybeschermende groep" betrekking op een substituent. van een hydroxygroep die de hydroxyfunctionaliteit beschermt. Geschikte hydroxybeschermende groepen zijn onder meer acetyl en silyl. Een 5 . "carboxybeschermende groep" heeft betrekking op een substituent van een carboxygroep die de carboxyfunctionali-teit beschermt. Veelgebruikte carboxybeschermende groepen zijn onder meer -Ci^C^SC^Ph, cyanoethyl, 2-(trimethylsilyl)ethyl, 2-(trimethylsilyl)ethoxymethyl, 2-10 (p-tolueensulfonyl)ethyl, 2-(p-nitrofenylsulfenyl)ethyl, 2-(difenylfosfino)-ethyl, nitroethyl en dergelijke. Zie voor een algemene beschrijving van beschermende groepen en toepassingen daarvan T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

15 De uitdrukking "therapeutisch werkzame hoeveelheid" betekent een hoeveelheid van een verbinding van de onderhavige uitvinding die (i) de betreffende ziekte, aandoening of stoornis die hier wordt beschreven behandelt of voorkómt; (ii) één of meer symptomen verzwakt, verlicht of 20 elimineert van de betreffende ziekte, aandoening of stoornis die hier wordt beschreven, of (iii) het optreden van één of meer symptomen verhindert of vertraagt van de betreffende ziekte, aandoening of stoornis die hier wordt beschreven.

25 De term "dier" heeft betrekking op mensen (mannelijk öf vrouwelijk), huisdieren (bv. honden, katten en paarden) , landbouwhuisdieren, dierentuindieren, zeedieren, vogels en andere vergelijkbare diersoorten. "Eetbare dieren" heeft betrekking óp landbouwhuisdieren zoals koeien, var-30 kens, schapen en pluimvee.

De uitdrukking "farmaceutisch aanvaardbaar" geeft aan dat de stof of het preparaat chemisch en/of toxicologisch compatibel moet zijn met de andere ingrediënten waaruit een formulering bestaat, en/of met het daarmee behandelde 35 zoogdier.

1026028 23 . De termen "behandelen" of "behandeling" omvatten zowel. preventieve, i.e. profylactische, en palliatieve behandeling.

De termen "gemoduleerd door een cannabinoïdreceptor" 5. of "modulering van een cannabinoïdreceptor" hebben betrekking op dè activering of inactivering van een canhabinoïd-receptör. Een ligand kan bijvoorbeeld werken als een ago-nist, partiële agonist, inverse agonist, antagonist, of partiële antagonist.

10 De term antagonist" omvat zowel volledige antagonis ten als partiële antagonisten, evenals inverse agonisten.

De.. :term "CB-l-receptor" heeft betrekking op de G-eiwit-gekoppelde cannabinoïdreceptor van type 1.

De term "verbindingen van de onderhavige uitvinding" 15 (tenzij specifiek anders geïdentificeerd) heeft betrekking op verbindingen van Formules (I), (II), (III), en (IV), voorlopers daarvan, farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbindingen, en/of voorlopers, en hydraten of solvaten . van de verbindingen, zouten, en/of voorlopers, evenals al-20 le stereoisomeren (inclusief diastereoisomeren en enantio-meren), tautomeren en isotoopgelabelde verbindingen.

Zoals hier gebruikt geven met cirkels in een ring getekende structuren aromaticiteit weer. De navolgende chemische groep geeft bijvoorbeeld een pyrazoolring weer wan-25 neer A staat voor stikstof en B voor koolstof; en een imi-dazool wanneer A staat voor koolstof en B voor stikstof.

.. XK Xh R1 R1 R1 1 026028- :

35 GEDETAILLEERDE BESCHRIJVING

De onderhavige uitvinding verschaft verbindingen en farmaceutische formuleringen daarvan, die bruikbaar zijn 24 bij de behandeling van ziekten, aandoeningen en/of stoornissen die worden gemoduleerd door cannabinoldreceptoran-tagonisten.

Verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen 5 worden gesynthetiseerd via synthetische routes die processen omvatten die analoog zijn aan die welke welbekend zijn in het vakgebied van de chemie, in het bijzonder in het licht van de onderhavige beschrijving. De uitgangsmaterialen zijn in het algemeen beschikbaar uit commerciële bron-10 nen zoals Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) of zijn eenvoudig te bereiden volgens in het vakgebied bekende werkwijzen (bv. té bereiden·volgens werkwijzen die in algemene zin zijn beschreven in Louis F. Fieser en Mary Fieser, Reaqents for Orqanic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York 15 (1967-1999 ed.), of Beilsteins Handbuch der organischen

Chemie, 4e ed. Springer-Verlag, Berlin, inclusief supplementen (ook beschikbaar via de Beilstein-online-databank).

Ter illustratie tonen, de hieronder weergegeven reac-tieschema's potentiële routes voor het synthetiseren van 20 de verbindingen van de onderhavige Uitvinding evenals cruciale tussenproducten. Voor een gedetailleerder beschrijving van de afzonderlijke reactiestappen wordt verwezen naar de onderstaande Voorbeelden. De vakman zal begrijpen dat andere synthetische routes kunnen worden gebruikt om 25 de verbindingen van de onderhavige uitvinding te synthetiseren. Hoewel specifieke uitgangsmaterialen en reagentia zijn weergegeven in de schema's en hieronder worden beschreven, kunnen andere uitgangsmaterialen en reagentia eenvoudig worden gesubstitueerd om zo een verscheidenheid 30 aan derivaten en/of reactieomstandigheden te verschaffen. Daarnaast kunnen vele van de volgens de hieronder beschreven werkwijzen verbindingen verder worden, gemodificeerd in het licht van de onderhavige beschrijving, met behulp van in het vakgebied welbekende conventionele chemie.

35 Bij dé bereiding van verbindingen van de onderhavige uitvinding, kan bescherming van verdere functionaliteiten (bv. primair, of secundair amine) van tussenproducten nood- i 02 6028- 25 zakelijk zijn.-. .-De noodzaak van een dergelijké bescherming zal variëren afhankelijk van de aard van de verdere functionaliteit en de omstandigheden van de bereidingswijzen. Geschikte amino-beschermende groepen (NH-Pg) zijn onder 5 meer acetyl, trifluoracetyl, t-butoxycarbonyl (BOC), ben-zyloxycarbonyl (CBz) en 9-fluorenylmethyleenoxycarbonyl (Fmocj . De noodzaak van een dergelijke bescherming kan door de vakman eenvoudig worden vastgesteld. Zie voor een algemene beschrijving van beschermende groepen en toepas-10 singen daarvan T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

Schema I geeft de algemene werkwijze aan die men zou kunnen gebruiken om. de verbindingen van de onderhavige uitvinding te verschaffen waarbij A staat voor stikstof, B 15 voor koolstof, X voor een binding en R3a en R3b beide voor waterstof. co2R

Λη2 + R°2C^-C02R -- HO-Öi R° 20 - (Ma)

γ r\ I

YvsO.· . Y f?

\_f \_/C°ïR H“\ .COjR

25 6rJ^i — b --— VlT

^N'N BrVN Bi—Ν,.'Ν . (Md> (1-10 (Mb) 30 \ - R4 \ A^o· -

N

35 ‘Λ,. R° d-A)

Schema I

1026028 26

Het pyrazooltussenproduct I-la kan worden bereid door het gewenste hydrazine te cyclisèren met acetyleendicarbo-naat in aanwezigheid van een zwakke base (bv. alkalime-taalcarbonaat, zoals kaliumcarbonaat). Tussenproduct I-lb 5 kan vervolgens worden geproduceerd door het pyrazooltussenproduct I-la te behandelèn met fosforoxybromide in aanwezigheid van Ν,Ν-dimethylformamide (DMF) in een aprotisch . oplosmiddel (bv. 1,2-dichloorethaan) onder verwarmen. De aminogroep (R4-NH) kan vervolgens in het molecuul worden 10 geïntroduceerd door de formylverbiniding I-lb te behandelen met het gewenste amine (R4-NH). in aanwezigheid van na-triumtriacetoxyboorhydride en een zwak zuur (bv. azijnzuur) . Een verscheidenheid aan geschikte amineverbindingen is commercieel verkrijgbaar of eenvoudig synthetiseerbaar 15 volgens in de literatuur beschreven werkwijzen. Het lactam kan vervolgens worden gevormd door de esterzijgroep te hy-drolyseren en de aminozijgroep te condenseren met de car-bonzuurfunctie om zo de amidebinding te vormen. De lactam-vorming kan worden bewerkstelligd met behulp van in het 20 vakgebied welbekende werkwijzen. Het carboxylaatestertus-senproduct I-lc kan worden gehydrolyseerd met behulp van een sterke base (bv. alkalimetaalhydroxi.de) in een polair oplosmiddel (bv. ethanol) onder verwarmen. De amidebinding kan vervolgens worden gevormd door het resulterende car-25 bonzuur te behandelen met 1-propaanfosforzuur-cyclisch-anhydride in aanwezigheid van een niet-reactieve base (bv. triethylamine). Tenslotte kan de R1-groep worden geïntrodu-. ceerd door de broomgroep te vervangen met de gewenste R1-groep. Dit kan worden bewerkstelligd door het.broomtussen-30 product I-ld te behandelen met hetzij het gewenste boor-zuur (^Β{ΟΗ>2) of tinreagens (RiSnR3) in aanwezigheid van cesiumfluoride en tetrakis-(trifenylfosfine)palladium(0) in een polair oplosmiddel (1,2-dimethoxyethaan) bij verhoogde temperaturen (bv. 100°C).

35 Anderzijds kunnen verbindingen van de onderhavige uitvinding waarbij A staat voor stikstof, B voor koolstof en X voor een binding, worden bereid volgens de hieronder 1026020 27 in Schema II weergegeven werkwijzen. Schema II illustreert ook de introductie van een Vinylgroep op de ^-positie die verder kan worden gemodificeerd door de olefinefunctiona-liteit. te reduceren.

-5 ff ? 10 h-A co2r, hA.C02r C cq2r '"Y—— «’Λ? R° R° h° b) ^'2a) (l-2b) .15 ' R?· r4 .

I · 9 R* (V° A^o (^° 20 r1* NxN R1= vinyl R1— r0 (UC) (l*B) . (I-A) 25

Schema II

In Schema II wordt de Rugroep vroeger in het synthetische schema geïntroduceerd. Met behulp van dezelfde basiswerkwijzen als hierboven beschreven voor de vervanging 30 van de broomgroep in tussenproduct I-ld, kan tussenproduct I-lb worden behandeld met het juiste boorzuur- of tinrea-gens om zo tussenproduct I-2a te produceren. De gewenste aminefunctionaliteit kan vervolgens worden geïntroduceerd, gevolgd door hydrolyse tot het bijbehorende carbonzuur, en .35 vervolgens cyclisatie tot het lactam, volgens dezelfde algemene werkwijzen, als hierboven in Schema I bediscussieerd. Wanneer R1 van Verbinding I-A een vinylgroep is kan 1026028 28 de verbinding verder worden gemodificeerd door de vinyl-groep te laten reageren met het gewenste arylhalide (bv. -bromide of -jodide) of heteroarylhalide (bv. -bromide of -jodide) in aanwezigheid van palladiumacetaat. Verbinding 5 I-B kan verder worden gemodificeerd door de dubbele binding in de zijgroep (Rla-CH=CH-) van Verbinding I-B te reageren met behulp van standaard reductiewerkwijzen, zoals degene beschreven in J. Amer. Chem. Soc., 91, 5769 (1969). Verbinding I-B' wordt bijvoorbeeld gerefluxt in 2- 10 ethoxyethanol in aanwezigheid van p- tolueensulfonylhydrazine.

Schema III hieronder illustreert de bereiding van verbindingen van de onderhavige uitvinding waarbij A staat voor stikstof, B voor koolstof en X voor -(C(R2®) (R2b))-.

15 Q (CH3)3Si(CH2)2<X n^f0

C°2R *L.C02R . k__^C°2R

Jci ' ^ " r1-^vn 20 ie r° * ; (l-2a) (l-3a) {,’3b) / . / X R4hn>..

/ \=0 l CÓjR

„jr\ ___ oiv --R \

R° R

30 (i-D) m

Schema III

Een extra methyleen wordt in het molecuul geïntroduceerd door tussehproduct I—2a eerst te laten reageren met 35 (2-(trimethylsilyl)ethoxymethyl)trifenyl-fosfoniümchloride in aanwezigheid van natriumhydrideom zo het siloxytussen-product I-2b te vormen. De siloxygroep kan vervolgens wor- 1026028 29 den verwijderd door tussenproduct. te behandelen met een sterk zuur (bv. geconcentreerde waterstoffluoride). De gewenste aminofunctionalitêit kan vervolgens worden geïntro- . duceerd door tussenproduct I-2c te behandelen met het 5 juiste amine . (R^Nfo) met gebruikmaking van werkwijzen die hierboven zijn bediscussieerd (bv. behandeling met natri-umtriacetoxyboorhydride en azijnzuur in 1,2-dichloorethaan). Cyclisatie tot het lactam kan worden bewerkstelligd door de ester eerst te hydrolyseren tot het 10 carbonzuur en vervolgens te cycliseren tot het lactam met gebruikmaking van werkwijzen analoog aan de hierboven bediscussieerde (bv. (1) behandeling met KOH, EtOH, warmte, . vervolgens aanzuring; en (2) behandeld met 1-propaanfosforzuur-cyclisch-anhydride en triethylamine in 15 dichloormethaan).

Schema IV verschaft een alternatieve route voor de synthese van. verbindingen van de onderhavige uitvinding waarbij A staat voor stikstof, B voor koolstof en X voor een binding.

20

H3Cx yCQ2R Br—\.C02R R4HN—y /C02R

,1$ —. ,¾ ^ ,¾ I! ^ * * (l-4a) . (l-4b) (l-4c) I?4 R4 p3b I, I ·

30 R3®-L /nn^O

Ren/of ·.; \ / R4HN-x CO.H

ft u R3h-L h Ü \—/ ρ’Λ?Ν - R’-^y1 —— R” h' 35 0-A) (l-4d)

Schema IV

102 6028 - 30

Uitgangsmateriaal I-4a kan worden bereid volgens werkwijzen beschreven door Barth et al., in Europees oc-trooischrift EP656354. De halogroep (bv. broom) kan op de methylzijgroep worden geïntroduceerd met béhulp van werk-5 wijzen analoog aan die beschreven door Barth, et al., in PCT-octrooiaanvrage WO 97/19063. Uitgangsmateriaal I-4a kan bijvoorbeeld worden behandeld met 2,2'-azobisisobutyronitrïl (AIBN) in koolstoftetrachloride bij verhoogde temperaturen. De broomgroep in I-4b kan vervol-10 gens wórden vervangen met de gewenste aminofunctionaliteit met behulp van dezelfde algemene werkwijzen als hierboven bediscussieerd^ Verbinding I-A kan worden gevormd door de estergroep van I-4c eerst te hydrolyseren, gevolgd door vorming van de amidebinding met behulp van de eerder be-15 discussieerde algemene werkwijzen. Verbinding I-A kan verder worden gemodificeerd tot Verbinding I-C door één of twee zijgroepen te hechten aan de koolstof naast de lac-tamstikstof, door Verbinding I-A te behandelen met de gewenste reagentia (R2a-L en/of R2a-L, waarbij L een vertrek-20 kende groep is zoals een halogroep (bv. broom)) in aanwezigheid van een base zoals kaliumhexamethyldisilazide (KHMDSi) zoals beschreven in Tet. Lett. (1998), 39, 2319-2320.

Schema V illustreert een synthetische route voor de 25 bereiding van verbindingen van de onderhavige uitvinding waarbij A staat voor koolstof, B voor stikstof en X voor een binding, evenals de introductie van R3a en/of R3b.

30 35 1026028 31 r β,Λ“· ώΧ*· S'-NH* * R^CN -- r“Anh -:-2— R’-Nji 5 R’ X ' •W (.-5b) .p o n · - - 10 ΗΛ X Br ^ ?v i °Et V-X^OEt ^Χορ.

R—N,. N ni »; t P===\

. τ —- R~VN -—· «V

> ί . X ", 1S . (l'5e) : ««> ww··-.

I^HR< o NHR4 o ^ 20 , V==\ °Et \==/^oh: cr° R~Hr- —^ ri~vn — r~nCn * ί · x

. 0-¾) R

. (I-F) 25 r4 .

R\ N

R

R-yN

»°

30 R

(l-G)

Schema V

Tussenproduct I-5a wordt bereid door een geschikt amine dat de gewenste Rx-groep heeft te behandelen met tri-35 methylaluminium onder inerte atmosferische omstandigheden, gevolgd door condensatie met een geschikt cyanide dat de gewenste R°-groep heeft. Geschikte amines zijn onder meer 102602a 32 gesubstitueerde fenylamines (bv. 4-chloorfenylamine, 4-fluorfenylamine, 4-broomfenylamine, 4-joodfenyiamine, 4-cyanofenylamine, en dergelijke), pyridine-2-ylamine, pyri-dine-3-ylamine, pyridine-4-ylamine, gesubstitueerde pyri-5 dinylamines (bv. 2-dimethylaminopyfidine-5-ylamine, 2-methoxypyridine-5-ylamine, 5-chloorpyridine-2-ylamine, 5-methylpyridine-2-yl, 5-methoxypyridiné-2-ylamine, 3-chloorpyridine-4-ylamine, 2-N-morfolinylpyridine-5-yl, en dergelijke), en andere commercieel beschikbare of eenvou-10 dig te synthetiseren gesubstitueerde of ongesubstitueerde aryl- en heteroarylamines. Geschikte cyanoverbindingen zijn onder meer gesubstitueerde benzonitrillen (bv. 2-chloorbenzonitril, 2-fluorbenzonitrii, 2- methoxybenzonitril, 2-methylbenzonitril, 2,4- 15 dichloorbenzonitril, 2,4-difluorbenzonitril, 2-chloor-4-fluorbenzonitril, 2-chloor-4-methylbenzonitril, 2,4-dimethoxybenzonitril, 2-methyl-4-chloorbenzonitril, en dergelijke), cyanogesubstitüeerde pyridines (bv. 4-cyano- 3-chloorpyridine) en andere commercieel beschikbare of 20 eenvoudig te synthetiseren gesubstitueerde of ongesubstitueerde aryl- en heteroarylnitrillen.

Tussenproduct I-5a kan vervolgens worden gecondenseerd met een 3-broom-2-oxo-propionzuurester om de gecy-cliseerde 4-hydroxy-4,5-dihydro-lH-imidazoolester I-5b te 25 produceren met behulp van werkwijzen analoog aan die beschreven door Khanna, I.K., et al., in J. Med. Chem., 40, 1634 (1997) . Het amidinetussenproduct I-5a kan bijvoor beeld worden gerefluxt in een polair oplosmiddel (bv. is-opropanol) in aanwezigheid van een milde base (bv. natri-30 umbicarbonaat). In het algemeen verloppt de reactie (i.e. cyclisatie gevolgd door dehydratie) direct naar het gewenste imidazoolestertussenproduct I5-c. In sommige gevallen kan het noodzakelijk zijn om het aanvankelijke carbi-nolcondensatieproduct l-5b te dehydrateren met een zure 35 katalysator (bv. tolueensulfonzuur in refluxende tolueen) om de gewenste imidazoolester I-5c te verschaffen.

'102 6028 - 33

De imidazoolester, I-5c kan uit het 4-hydroxy-4,5-dihydro-tussenproduct.I-5b worden bereid met behulp van in het vakgebied, welbekende :standaarddehydratatiewerkwijzen. Tussenproduct . I-^5b kan bijvoorbeeld worden behandeld met 5 p-tolueensulfonzuur-monohydraat in refluxende tolueen. Anderzijds kan tussenproduct I-5b worden behandeld met me-thaansulfohylchloride in aanwezigheid van een base (bijvoorbeeld triéthylamine) . De bro.omgroep kan in tussenproduct I>5c worden geïntroduceerd door behandeling met broom 10 volgens een werkwijze beschreven in J. Het. Chem., 34(3), 765-771 (1997). De broomgroep van I-5c kan vervolgens worden omgezet tot een formylgroep om zo tussenproduct I-5d te produceren door tussenproduct I-5c eerst te behandelen met eèn sterke base (bv. n-butyllithium) gevolgd door be-15 handeling met DMF. De aminofunctionaliteit kan vervolgens worden geïntroduceerd volgens werkwijzen analoog aan de eerder voor de pyrazoolverbindingen bediscussieerde. Men kan bijvoorbeeld tussenproduct i-5d laten reageren met het gewneste amine (R4-NH2) in aanwezigheid van NaBH(OAc)3 om 2Q zó tussenproduct I-5e te produceren. Het aminotussenpro-duct ï-5e kan vervolgens worden gecycliseerd om zo de lac-tam te vormen door eerst de estergroep te hydrolyseren tot het bijbehorénde carbonzuur, gevolgd door de vorming van de amidebinding volgens werkwijzen analoog aan de eerder 25 voor de pyr.azoolderivaten bediscussieerde. Verbinding I-F kan verder worden gemodificeerd door aanhechting van R3a-en/bf R3b-zij groepen volgens werkwijzen analoog aan de hierboven bediscussieerde. Behandeling van Verbinding I-F met de gewenste reagentia (R2a-L en /of R2a-L, waarbij L een 30 vertrekkende groep is zoals een halogroep (bv. broom)) in aanwezigheid van een base zoals KHMDSi.

Schema VI. illustreert de bereiding van verbindingen van de onderhavige uitvinding waarbij A staat voor koll-stof, N voor stikstof (imidazool) en X voor -C(R2a) (R2b)-.

35 1026028 34 ό η CHS\ Η^Ο J? \ // Ο ^ Ο Η /=\^OEt Vw^OEt V-j/^OÊt Κΐ""ΝγΝ . '' ' ' -**' ^-ΝγΝ . —-- rUOn 5 R° R° R° C'5e) 0-6a) (l«6b) 10 4 4 R« r4hn r4hn /—\ ) °v / °\ 'W/'0 V^/OEt R1—N^N -- R1—n^n . —- R—n^Jn 15, R° R° R° .

(I-H) (1*6(3) (1-6?)

Schema VI

De imidazoolverbinding I-H kan worden bereid volgens 20 werkwijzen analoog aan de hierboven voor de bereiding van de pyrazoolderivaat (I-D) beschrevene. Een extra methyleen wordt in het molecuul geïntroduceerd door tussenproduct 5e eerst te laten reageren met het ylide gevormd uit li-thiumhexamethyldisilazide en (methoxyme- 25 thyl)trifenylfosfoniumchloride om zo de vinylether I-6a te produceren. De vinylether wordt omgezet tot het bijbehorende aldehyde door het vinylethertussenproduct in zuur milieu te verhitten. De aminofunctionaliteit (R4-NH) kan vervolgens worden geïntroduceerd en de lactamring kan wor-30 den gevormd met behulp van werkwijzen analoog aan de hierboven bediscussieerde. Zoals hierboven bediscussieerd kan de lactam worden gevormd door eerst de ester te hydrolyse-ren, gevolgd door vorming van de amidebinding om zo Verbinding I-H te produceren. .

35 Verbindingen met de Formule I waarbij R4 staat voor een eventueel gesubstitueerde pyperidinyl- of pyrrolidi- 1026028 35 nylgroep kunnen worden bereid zoals weergegeven in Schema VII.

5 I9 3 ? rV . Λ .. r^i . (Oyn^JOyn (CHjJn^fCHjJn (CHJn^JcHJn

Rv^o —- RV V° —- *\JLo 10 pi^wN · R’^Vn r ^ R^n' > *° έ- (l-E) (l-l) (W) 15

Schema VII

Verwijdering van de beschermende groep in Verbinding I-E kan worden bewerkstelligd met behulp van in het vakge-20 bied bekende werkwijzen, voor het verkrijgen van bicycli-sche aminoderivaten zoals I-I die men vervolgens kan laten reageren,met alkylhaliden in aanwezigheid van een geschikte base. zoals kaliumcarbonaat in een oplosmiddel zoals ,. DMF, of. kan behandelen met zuurchloriden of sulfonylchlo-25 riden in aanwezigheid van een base zoals triethylamine in een niet-polair oplosmiddel zoals CH2CI2 om verbindingen zoals I-J te verkrijgen. Verbinding I-E kan ook worden behandeld met een aldehyde- of ketonderivaat in aanwezigheid van een reductiemiddel zoals NaBH(OAc)3 om tussenproduct I^ 30 J te produceren.

Verbindingen met de formules II-A en II-B kunnen worden bereid zoals weergegeven in Schema VIII.

102.60.28- 36 R4 R4 p» I · 3h ?

Vnn^0 ·.. R \ λ R3a) T R3a \ 7 5 ~~ ' ,Jï\

R N R’^XN'-N

R° R» c-E) (H-A) : 10 R4 ' 4 CN v

r,Jq~ —. W

: *“ ' t° ,

{,-D) n,.BV

Schema VIII ' 20 De pyrazoolverbinding I-E wordt behandeld met een ge schikt reductiemiddel zoals lithiumaluminiumhydridé of bo-raan (BH3) in een polair, aprotisch oplosmiddel zoals THF bij temperaturen tussen ongeveer 0°C en ongeveer 100eC om verbindingen zoals ÏI-A te verkrijgen. Verbinding II-B kan 25 worden bereid uit I-D met behulp van een vergelijkbare re-ductiewerkwijze. De imidazoolverbindingen van formule II {A is koolstof en B is stikstof) kunnen ook wórden bereid met behulp van analoge werkwijzen.

Conventionele werkwijzen eri/of technieken voor schei-30 ding en zuivering die de vakman bekend zijn kunnen worden gebruikt om de verbindingen van de onderhavige uitvinding en ook de verscheidene tussenproducten die daarmee verband houden te isoleren. Dergelijke technieken zijn welbekend aan de vakman en omvatten bijvoorbeeld alle typen chroma-35 tografie (hoge-druk-vloeistofchromatografie (HPLC), kolom-chromatografie met behulp van gebruikelijke adsorbentia zoals silicagel, en dunne-laag-chrbmatografie), herkris- 1 02 6028 - 37 tallisatie, en differentiële (i.e. vloeistof-vloeistof-) extractietechnieken.

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen als zodanig wórden geïsoleerd en gebruikt, of in de vorm 5 van het farmaceutisch aanvaardbare zout, solvaat en/of hy-draat ervan. De term "zouten” heeft betrekking op anorganische en organische zouten van een verbinding van de onderhavige uitvinding.: Deze zouten kunnen in situ worden bereid tijdens de uiteindelijke isolatie en zuivering van 10 een verbinding, of door de verbinding of de voorloper te laten reageren met een geschikt organisch of anorganisch zuur of base en het· aldus gevormde zout te isoleren. Representatieve zouten zijn onder meer de hydrobromide-, hy-drochloride-, hydrojodide-, sulfaat-, bisulfaat-, nitraat-15 , acetaat-, trifluoroacetaat-, oxalaat-, besylaat-, palmi- taat-, pamoaat-, malonaat-, stearaat-, lauraat-, malaat-, boraat-, benzoaat-, lactaat-, fosfaat-, hexafluorfosfaat-, benzeensulfonaat-, tosylaat-, formaat-, citraat-, maleaat-, fumaraat-, succinaat-,; tartraat-, naftylaat-, mesylaat-, 20 glucoheptonaat-, lactobionaat-, en laurylsulfonaatzouten, en dergelijke. Deze kunnen kationen bevatten gebaseerd op de alkali- en aardalkalimetalen, zoals natrium, lithium, kalium, calcium, magnesium, èn dergelijke, evenals niet-toxische ammonium- quaternaire ammonium- en aminekationen 25 zoals onder meer ammonium, tetramethylammonium, tetra-ethylammonium, methylamine, dimethylamine, trimethylamine, triethylamine, ethylamine, en dergelijke. Zie bv. Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977). De term "voorloper" betekent een verbinding die in vivo wordt ge-30 transformeerd tot een verbinding van Formule (I) of een farmaceutisch aanvaardbaar zout, hydraat of solvaat van de verbinding. De transformatie kan verlopen via verscheidene mechanismen, zoals door middel van hydrolyse in bloéd. Een discussie van het gebruik van voorlopers wordt verschaft 35 door T. Higuchi en W. Stella, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems," Vol. 14 van de A.C.S. Symposium Series, en in Bioreversible Carriers in Drug Design, red. Edward B. Ro- 1026028 38 che, American Pharmaceutical Association en Pergamon Press, 1987.

Indien een verbinding van de onderhavige uitvinding bijvoorbeeld een carbonzuürgroep als functionele groep be-5 vat, dan kan een voorloper een ester zijn die wordt gevormd door de vervanging van het waterstofatoom vari de zuurgroep met een groep zoals (Ci-Ce) alkyl, (C2-C12) alkanoyloxymethyl, 1-(alkanoyloxy)ethyl met 4 tot 9 koolstofatomen, 1-methyl-l-(alkanoyloxy)-ethyl met 5 tot 10 10 koolstofatomen, alkoxycarbonyloxymethyl met 3 tot 6 koolstofatomen, 1-(alkoxycarbonyloxy)ethyl met 4 tot 7 koolstofatomen, 1-methyl-l-(alkoxycarbonyloxy)ethyl met 5 tot 8 koolstofatomen, N-(alkoxycarbonyl)aminomethyl met 3 tot 9 koolstofatomen, 1-(N-(alkoxycarbonyl)amino)ethyl met 15 4 tot 10 koolstofatomen, 3-ftalidyl, 4-crotonolactonyl, gamma-butyrolacton-4-yl, di-N,N- (C1-C2) alkylamino (C2- C3)alkyl (zoals β-dimethylaminoethyl), carbamoyl-(Ci-C2) alkyl, N,N-di (C1-C2) alkylcarbamoyl-(C1-C2) alkyl en pipe-ridino-, pyrrolidino- of morfolino (C2-C3) alkyl.

20 Evenzo kan, indien een verbinding van de onderhavige uitvinding een alcoholgroep als functionele groep bevat, een voorloper worden gevormd door de vervanging van het waterstofatoom van de alcoholgroep met een groep zoals (Ci-Ce) alkanoyloxymethyl, 1-((C1-C6) alkanoyloxy) ethyl, 1-25 methyl-1-((C1-C6) alkanoylóxy) ethyl, (Ci-

Ce)alkoxycarbonyloxymethyl, N-(Ci- Cö) alkoxycarbonylaminomethyl, succinoyl, (Ci-Ce) alkanoyl, a-amino (C1-C4) alkanoyl, arylacyl en α-aminoacyl, of a-aminoacyl-a-aminoacyl, waarbij de α-aminoacylgroepen onaf-30 hankelijk van elkaar zijn gekozen uit. de L-aminozuren, P(O) (OH)2, P(O) (O(C1-C6)alkyl)2/ of glycosyl (het radicaal dat het resultaat is van verwijdering van een hydroxyl-groep van de hemiacetaalvorm van een koolhydraat).

Indien een verbinding van de onderhavige Uitvinding 35 een aminogroêp als functionele gfroep bevat, dan kan een voorloper worden gevormd door de vervanging van een waterstofatoom in de aminogroêp met een groep zoals R-carbonyl, 1026028- ' 39 RO-carbonyl, NRR'-carbonyl waarbij R en R' onafhankelijk van elkaar staan voor (C1-C10) alkyl;. (C3-C7) cycloalkyl, ben-zyl, of R-carbonyl voor een natuurlijk α-aminoacyl of natuurlij k-a-aminoacyl-natuurlij k-a-aminoacyl, -C(0H)C(0)0Y' 5 waarbij Y' staat voor H, (C1-C6) alkyl of benzyl, -C(OYO)Yi waarbij Yo staat voor (C1-C4) alkyl en Yx voor (Ci-Ce) alkyl, carboxy(Ci-Cö)alkyl, amino (Ci~C4) afkyl of mono-N- of di-N,N-(Ci-C6) alkylaminoalkyï, -C(Y2)Y3 waarbij Y2 staat voor H of methyl en Y3 voor mono-N- of di-N,N-(Ci-Ce) alkylamino, mor-10 folino, piperidine-l-yl of pyrrolidine-l-yl. De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen asymmetrische of chirale centra bevatten en derhalve voorkomen in verschillende stereoisomere vormen. Er zij begrepen dat alle ste-reoisomere vormen van de verbindingen van de onderhavige 15 uitvinding, evenals mengsels daarvan, inclusief racemische mengsels, deel uitmaken van de onderhavige uitvinding. Daarnaast omvat de onderhavige uitvinding alle geometrische en positionele isomeren. Indien een verbinding van de onderhavige uitvinding bijvoorbeeld een dubbele binding of 20 eèn gefuseerde ring omvat, vallen zowel de cis- als trans-vormen binnen de strekking van de uitvinding.

Diastereomere mengsels kunnen worden gescheiden in afzonderlijke diastereoisómeren op basis van hun fysisch-chemische verschillen mét behulp van in het vakgebied wel-25 bekende werkwijzen, zoals chromatografie én/of fractionele destillatie. Enantiomeren kunnen worden gescheiden door het enantiomere mengsel om te zetten in een diasteromeer mengsel door middel van reactie met een geschikte optisch actieve verbinding (bv. een chirale hulpstof zoals een 30 chirale alcohol of Mosher's zuurchloride), scheiding van dé diastereoisómeren en . omzetting (bv. hydrolyse) van de afzonderlijke diastereoisómeren in de bijbehorende pure enantiomeren. Sommige van de verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen ook atropisoraeren zijn (bv,. gesub-35 stitueerde biarylen) en worden beschouwd als deel van de onderhavige uitvinding. Enantiomeren kunnen ook worden gescheiden . door middel van een chirale HPLC-kolom.

1026028 40

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen voorkomen in zowel ongesolvateerde als gesolvateerde vormen, met farmaceutisch aanvaardbare oplosmiddelen zoals water, ethanol en dergelijke, en er zij begrepen dat de 5 uitvinding zowel gesolvateerde als ongesolvateerde vormen omvat.

Het is ook mogelijk dat de tussénproducten en verbindingen van de onderhavige uitvinding voorkomen in verschillende tautomere vormen, en al dergelijke vormen val-10 len binnen de strekking van de uitvinding. De term "tauto-meer" of "tautomere vorm" heeft betrekking op structurele isomeren met verschillende energieën die in elkaar omzet-baar zijn via een lage energiebarriëre. Protontautomereri (ook bekend als prototrope tautomeren) bijvoorbeeld omvat-15 ten wederkerige omzettingen via migratie van een proton, zoals keto-enol- en imine-enamine-isomerisaties. Een specifiek voorbeeld van een protontautomeer is de imidazool-groep waarbij het proton kan migreren tussen de twee stikstoffen. Valentietautomeren omvatten wederkerige omzettin-20 gen door middel van reorganisatie van enkele van de bin-dingselektronen. De onderhavige uitvinding omvat ook iso-toopgelabelde verbindingen van de onderhavige uitvinding die identiek zijn aan de hierin genoemde, op het feit na dat één of meer atomen zijn vervangen door een atoom met 25 een atoommassa of massagetal dat verschilt van de atoom-massa of van het massagetal dat gewoonlijk in de natuur wordt aangetroffen. Voorbeelden van isotopen die kunnen worden ingebouwd in verbindingen van de uitvinding zijn onder meer isotopen van waterstof, koolstof, stikstof, 30 zuurstof, fosfor, zwavel, fluor, jood, en chloor, zoals respectievelijk 2H, 3H, UC, 13C, 14C, 13N, 15N,1?0, 170, 180, 31P, 32P, 35S, ieF, 123I, 125I, en 36C1.

Bepaalde isotoopgelabelde verbindingen van de onderhavige uitvinding (bv. degene die gelabeld zijn met 3H of 35 14C) zijn bruikbaar in verbinding- en/of substraat- weefseldistributiëassays. Getritieerde (i.e. 3H-) en kool-stof-14- (i.e. 14C-) isotopen hebben in het bijzonder de 1 02 6028- 41 voorkeur vanwege dé eenvoudige bereiding en detecteerbaar-heid ervan. Voorts kan substitutie met zwaardere isotopen zoals deuterium (i.e. 2H) bepaalde therapeutische voordelen opleveren die het gevolg zijn van grotere metabole stabi-5 liteit (bv. langere halfwaardetijd in vivo, of verlaagde doseringsvereisten) en kan derhalve in sommige gevallen de voorkeur hebben. Positron-emitterende isotopen zoals 150, 13N, uCr en 18F zijn bruikbaar voor positronemissietomogra-fie- (PET-) onderzoek om substraatreceptorbezetting te on-10 derzoeken. Isotoopgelabelde verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen in het algemeen worden bereid volgens werkwijzen, die analoog zijn aan de in de Schema's of in de onderstaande Voorbeelden beschrevene, door een isotoopge-labeld reagens te gebruiken in plaats van een niet-15 isotoopgelabeld reagens.

Verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn bruikbaar voor het behandelen van ziekten, aandoeningen èn/of stoornissen die worden gemoduleerd door cannabinoïd-receptorantagonisten; derhalve is eert andere uitvoerings-20 vorm van de onderhavige uitvinding een farmaceutisch preparaat dat een therapeutisch werkzame hoeveelheid van een verbinding van de onderhavige uitvinding en een farmaceutisch aanvaardbare excipiënt, verdunningsmiddel of drager bevat.

25 Een typische formulering wordt bereid door een ver binding van de onderhavige uitvinding en een drager, ver-.dunningsmiddel of excipiënt, te mengen. Geschikte dragers, verdunningsmiddelen en excipiënten zijn in het vakgebied bekend en. omvatten materialen zoals koolhydraten, wassen, 30 wateroplosbare en/of -zwelbare polymeren, hydrofiele of hydrofobe materialen, gelatine, oliën, oplosmiddelen, water , en dergelijke. Welke drager, verdunningsmiddel of excipiënt wordt gebruikt zal afhangen van het doel waartoe de verbinding van de onderhavige uitvinding wordt toege-35 past. Oplosmiddelen worden in het algemeen gekozen uit oplosmiddelen die door de vakman worden beoordeeld als veilig (GRAS) voor toediening aan een zoogdier. Veilige op- ' o26028- 42 losmiddelen zijn in het algemeen niet-toxische waterige oplosmiddelen zoals water en andere niet-toxische oplosmiddelen die oplosbaar zijn in of mengbaar met water. Geschikte waterige oplosmiddelen zijn onder meer water, 5 ethanol, propyleenglycol, polyethyleenglycolen (bv.

PEG400, PEG300), enz., en mengsels daarvan. De formuleringen kunnen ook één of meer buffers, stabilisatoren, sur-factanten, bevochtigingsmiddelen, smeermiddelen, emulgato-ren, suspenderingsmiddelen, conserveermiddelen, antioxi-10 danten, ondoorzichtigmakende middelen, glijmiddelen, ver-werkingshulpstoffen, kleurstoffen, zoetstoffen, geurstof-

... I

fen, smaakstoffen en ander bekende additieven om een elegante presentatie van het geneesmiddel (i.e. een verbinding van de onderhavige uitvinding of een farmaceutisch 15 preparaat daarvan) te verschaffen.

De formuleringen kunnen worden bereid met behulp van conventionele oplos- en mengwerkwijzen. Bijvoorbeeld kan de bulk-geneesmiddelstof (i.e. verbinding van de onderhavige uitvinding of gestabiliseerde vorm van de verbinding ! 20 (bv. complex met een cyclodextrinederivaat of ander bekend . complexeringsmiddel)) worden opgelost in een geschikt oplosmiddel in aanwezigheid van één of meer. van de hierboven beschreven excipiënten. De verbinding van de onderhavige uitvinding wordt typischerwijs geformuleerd in farmaceuti-25 sche doseringsvormen om zo een eenvoudig controleerbare dosering van het geneesmiddel te verschaffen en om de patiënt een elegant en eenvoudig hanteerbaar product te geven .

Het farmaceutische preparaat (of formulering) voor 30 toepassing kan op verscheidene wijzen worden verpakt, afhankelijk van de werkwijze die wordt gebruikt voor toediening van het geneesmiddel. In het algemeen omvat een artikel voor distributie een houder met daarin de farmaceutische formulering in een geschikte vorm. Geschikte houders 35 zijn in het vakgebied welbekend en omvatten materialen zoals flessen (plastic én glas), sachets, ampullen, plastic zakken, metalen cylinders., en dergelijke. De houder kan 1 02 6028- 43 ook een veiligheidsluiting omvatten om ongewenste en onzichtbare toegang tot de inhoud van de verpakking te verhinderen. Daarnaast is op de houder een label geplaatst dat de inhoud van de houder beschrijft. Het label kan ook .5 toepasselijke waarschuwingen bevatten.

De onderhavige uitvinding verschaft voorts een werkwijze voor het behandelen van ziekten, aandoeningen en/of stoornissen die wordén. gemoduleerd door carinabinoidrecep-torantagonisten in een dier, omvattende het toedienen aan 10 een dier dat behoefte heeft aan een dergelijke behandeling, van een therapeutisch werkzame hoeveelheid van een verbinding van de onderhavige uitvinding of een farmaceutisch preparaat dat een werkzame hoeveelheid van een verbinding van de onderhavige uitvinding en een farmaceutisch 15 aanvaardbare excipiënt, verdunningsmiddel of drager bevat. De werkwijze is in het bijzonder bruikbaar voor het behandelen van ziekten, aandoeningen en/of stoornissen die worden gemoduleerd door cannabinoldreceptor- (in het bijzonder, CBl-receptor-) antagonisten.

20 Preliminair onderzoek heeft uitgewezen dat de navol gende ziekten, aandoeningen en/of stoornissen worden gem-moduleerd door cannabinoïdreceptorantagonisten: eetstoor nissen (bv. vreetzuchtaanvallen, anorexie en boulimie), gewichtsverlies of -controle, (bv. reductie in calorie- of 25 voedselconsumptie, en/of eetlustonderdrukking), zwaarlijvigheid, depressie, atypische depressie, bipolaire stoornissen, psychoses, schizofenie, gedragsverslavingen, onderdrukking van beloningsgerelateerd gedrag (bijvoorbeeld geconditioneerde plaatsvermijding, zoals onderdrukking van 30 cocaïne- of morfinegelnduceerde plaatsvoorkeur), stofmis-bruik, verslavingsstoornissen, impulsiviteit, alcoholisme (bv. alcoholmisbruik, -verslaving en/of -afhankelijkheid inclusief behandeling voor onthouding, verlangenverminde-ring en preventie van terugval tot alcoholconsumptie), ta-35 baksmisbruik (bv. rookvérslaving, beëindiging, eri/of afhankelijkheid inclusief behandeling voor verlangenverminde-ring en preventie Van terugval tot tabaksroken), dementie 1 026028 - 44 (inclusief geheugenverlies, ziekte van Alzheimer, ouder-.domsdementie, vasculaire dementie, milde cognitieve zwakte, ouderdomsgerelateerde cognitieve achteruitgang en milde neurocognitieve stoornis), sexuele dysfunctie bij man-5 nen (bv. erectieproblemen), stuipaanvallen, epilepsie, ontsteking, gastrointestinale stoornissen (bv. dysfunctie van gastrointestinale motiliteit of intestinale propul-sie), aandachtstekortstoornis (ADD inclusief aandachtste-kortstoornis met hyperactiviteit (ADHD)), ziekte van Park-10 inson, en type II diabetes.

Dienovereenkomstig zijn de hier beschreven verbindingen van de onderhavige uitvinding bruikbaar voor het behandelen van ziekten, aandoeningen en/of stoornissen die worden gemoduleerd door cannabinoïdreceptorantagonisten.

15 Bijgevolg kunnen de verbindingen van de onderhavige uit vinding (inclusief de daarbij gebruikte preparaten en werkwijzen) worden gebruikt voor de vervaardiging van een geneesmiddel voor de hier beschreven therapeutische toepassingen.

20 Andere ziekten, aandoeningen en/of stoornissen waar bij cannabinoldreceptorantagonisten werkzaam kunnen zijn, zijn onder meer: premenstrueel syndroom of laat-luteale-fase-syndroom, migraines, paniekaanvallen, angst, post-, traumatisch syndroom, sociale fobie, cognitieve zwakte in 25 niet-démehterende individuen, niet-amnestische milde cog nitieve zwakte, postoperatief cognitief verval, stoornissen die verband houden met impulsief gedrag (zoals disrup-tieve gedragsstoornissen (bv. angst/depressie, uitvoe-ringsfunctieverbetering, ticstoornissen, gedragsstoornis 30 en/of oppositionele trotseringsstoornis) , persoonlijk- ’·.· .heidsstoornissen bij volwassenen (bv. borderline persoonlijkheidsstoornis en antisociale persoonlijkheidsstoornis), ziekten die verband houden met impulsief gedrag (bv. stofmisbruik, parafilie en zelfverminking), en impulscon-35 trolestoornissen (bv. uitbarstingsaanvallenstoornis, klep- tomanie,. pyromanie, pathologische goklust, en trichotillo-manie)), obsessieve-compulsieve stoornis, chronisch ver- ]'0 2-6028-.

•45 ' moeidheidssyndroom, sexuele dysfunctie bij mannen (bv. voortijdige ejaculatie), sexiiele dysfunctie bij vrouwen, slaapstoornissen (bv. siaapapneu), autisme, mutisme, neu-rodegeneratieve bewegingsstoornissen, ruggemergschade, be-5 schadiging van het cèntrale zenuwstelsel (bv. trauma), beroerte, neurodegeneratieve ziekten of toxische of infectueuze CNS-ziekten (bv. encefalitis of meningitis), cardiovasculaire stoornissen (bv. trombose), en diabetes.

De verbindingen van dè onderhavige uitvinding kan aan 10 een patiënt worden toëgediend in doseringsniveaus die liggen tussen ongeveer 0,7 mg tot ongeveer 7000 mg per dag. Voor een normaal volwassen mens met een lichaamsgewicht van ongeveer 70 kg is een dosering tussen ongeveer 0,01 mg en ongeveer 100 mg per kg lichaamsgewicht gewoonlijk vol-15 doende. Enige variabiliteit in het algemene doseringsbe-reik kan echter .noodzakelijk zijn afhankelijk van de leeftijd en het gewicht van de behandelde persoon, de beoogde toedieningsroute, de specifieke toegediende verbinding, en dergelijkë. De bepaling van doseringsbereiken en optimale 20 doseringen voor een bepaalde patiënt ligt in het vermogen van de vakman dié de beschikking heeft over de onderhavige beschrijving. Ook zij opgemerkt dat de verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen worden gebruikt in gedurige-afgifte-, gecontroleerde-afgifte-; en vertraagde-afgifte-25 formuleringen, welke vormen ook bekend zijn aan de vakman.

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen ook worden gebruikt in samenhang met andere farmaceutische middelen voor de behandeling van de hier beschreven ziekten, aandoeningen en/öf stoornissen. Derhalve worden ook 30 behandelingswijzen verschaft die toediening van verbindingen van de onderhavige uitvinding in combinatie met andere farmaceutische middelen omvatten. Geschikte farmaceutische middelen die kunnen worden gebruikt in combinatie met de verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn onder meer 35 anti-zwaarlijvigheidsmiddelen zoals apolipoprotelne-B- secretie/microsomaal-triglyceride-overdrachtseiwit- (apo-B/MTP-) remmers, Ιΐβ-hydroxysteroïddehydrogenase-l- (11β- 1 026028 - 46 HSD type 1) remmers, peptide-YY3-36 of analogen daarvan, MCR-4-agonisten, cholecystokinine-A- (CCK-A-) agonisten, monoamineheropnameremmers (zoals sibutramine), sympathomi-metische middelen, P3-adrenerge receptoragonisten, dopami-5 neagonisten (zoals. bromocriptine), melahocyt-stimulerend-hormoonrecëptoranalogen, 5-HT2c-agonisten, melanirte-concentrerend-hormoon-receptorantagonisten, leptine (het OB-eiwit), leptineanalogen, leptinereceptoragonisten, ga-lanineantagonisten, lipaseremmers (zoals tetrahydrolipsta-10 tine, i.e. orlistat), anorectische middelen (zoals een bombesine-agonist), neuropeptidë-Y-antagonisten (bv. NPY-Y5-rëceptor -antagonisten zoals de spiroverbindingen beschreven in Amerikaanse octrooischriften 6,566,367; 6,649,624; 6,638,942; 6,605,720; 6,495,559; 6,462,053; 15 6,388,077; 6,335,345; en 6,326,375; Amerikaanse octrooi aanvragen 2002/0151456 en 2003/036652; en PCT-octrooischriften WO 03/010175, WO 03/082190 en WO 02/048152), thyromimètische middelen, dehydroepiandroste-ron of een analoog daarvan, glucocorticoidreceptoragonis-20 ten of -antagonisten, orexinereceptorantagonisten, glu-cagon-achtig-peptide-l-receptoragonisten, ciliaire neu-rptrpfe factpren (zoals Axokine1" beschikbaar bij. Regeneron Pharmaceuticals, Ine., Tarrytown, NY en Procter & Gamble Company, Cincinnati, OH), humaan-agouti-gerelateerd-25 eiwitten (AGRP), ghrelinereceptorantagonisten, histamine- 3-receptor-antagonisten of inverse agonisten, neuromedine-U-receptoragonisten, en dergelijke. Andere anti-zwaarlijvigheidsmiddelen, waaronder de hieronder beschreven voorkeursmiddelen zijn de vakman welbekend of zullen 30 voor de hand liggen in het licht van de onderhavige beschrijving.

Speciaal de voorkeur genieten anti- zwaarlijvigheidsmiddelen gekozen uit de groep bestaande . uit orlistat, sibutramine, bromocriptine, efedrine, lepti-35 ne, pseudoefedrine, PYY3-36 of een analoog daarvan, en 2-oxo-N-(5-fenylpyrazinyl)spiro-[isobenzofuran-1(3H),4'-. pipëridine]-11-carboxamide.. Bij voorkeur worden verbindin- 1 02 6 028-r • . 47 gen van de onderhavige uitvinding en combinatietherapieën toegediend in samenhang met lichaamsbeweging en een verstandig dieet. :

Representatieve anti-zwaarlijvigheidsmiddelen die 5 kunnen worden gebruikt in de combinaties, farmaceutische preparaten, en werkwijzen van de uitvinding kunnen worden bereid met behulp van in het vakgebied bekende werkwijzen, subitramine kan bijvoorbeeld worden bereid zoals beschre-. ven in Amerikaanse octrooischriften 5,274,143; 5,420,305; 10 5,540,917; en 5,643,874; PYY3-36 (inclusief analogen) kan worden bereid zoals beschreven in Amerikaanse octrooiaanvrage 2002/0141985 en WO 03/027637; en de NPY-Y5-receptorantagonist 2-oxo-N-(5-fenyl- pyrazinyl) spiro [isobenzofuran-1 (3H) , 4 ' -piperidine] -1 ' -15 carboxamide kan worden bereid zoals beschreven in Amerikaanse octrooiaanvrage 2002/0151456. Andere bruikbare NPY-Y5-receptorantagonisten zijn onder meer degene gepubliceerd in PCT-octrooiaanvrage 03/082190, zoals 3-oxo-N-(5-fenyl-2-pyrazinyl)-spiro[isobenzofuran-1(3H),4'-20 piperidine]-1'-carboxamide; 3-oxo-N-(7-trifluoromethylpyrido[3,2-b]pyridin-2-yl)-spiro-[isobenzofuran-1(3H),4'-piperidine]-1'-carboxamide; N-[5-(3-fluorfenyl)-2-pyrimidinyl]-3-oxospiro-[isobenzofuran-1(3H),[4'-piperidine]-1'-carboxamide; 25 trans-3'-oxo-N-(5-fenyl-2-pyrimidinyl)]spiro[cyclohexane-1,1'(3'H)-isobenzöfuran]-4-carboxamide. trans-31-oxo-N-[1-(3-quinolyl)-4- imidazolyl]spiro[cyclohexane-1,1'(3Ή)-isobenzofuran]-4-carboxamide; 30 trans-3-oxo-N-(5-fenyl-2-pyrazinyl)spiro[4-azaiso-benzofuran-1(3H),1'-cyclohexaan]-4'-carboxamide; trans-N-[5-(3-fluorfenyl)-2-pyrimidinyl]-3-oxospiro[5-azaisobenzofuran-1(3H),1'-cyclohexaan]-4'-carboxamide; trans-N-[5-(2-fluorfenyl)-2-pyrimidinyl]-3-oxospiro[5-35 azaisobenzofuran-1(3H),1'-cyclohexaan]-4-carboxamide; trans-N-[l-(3,5-difluorfenyl)-4-imidazolyl]-3-oxospiro[7-azaisobënzofuran-1(3H),1'-cyclohexaan]-4'-carboxamide; 1026020 ; .

48 trans-3-oxo-N-(l-fenyl-4-pyrazolyl)spiro[4-azaisobenzofuran-1(3H),1'-cyclohexaan]-4'-carboxamide; trans-N-[1-(2-fluorfenyl)-3-pyrazolyl]-3-oxospiro[6-azaisobenzofuran-1(3H),11-cyclohexaan]-4'-carboxamide; 5 trans-3-oxo-N-(l-fenyl-3-pyrazolyl)spiro[6- . azaisobenzofuran-1(3H),1'-cyclohexaan]-4'-carboxamide; trans-3-oxo-N-(2-fenyl-l,2,3-triazool-4-yl)spiro[6-azaisobenzofuran-1(3H),1’-cyclohexaan]-4'-carboxamide; en farmaceutisch aanvaardbare zouten en esters daarvan. Alle 10 hierboven aangehaalde Amerikaanse octrooischriften en oc-• ; trooiaanvragen worden hier bij referentie opgenomen.

Andere, geschikte farmaceutische middelen die kunnen worden toegediend in combinatie met de verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn onder meer middelen die zijn 15 bedoeld om tabaksmisbruik te behandelen (bv. partiële ni-cotinereceptoragonisten, bupropion-hypochloride (ook bekend onder .de handelsnaam Zyban*") en nicotinevervangings-therapieën); middelen om erectiesroornissen te behandelen (bv. dopaminerge middelen, zoals apomorfine), ADD/ADHD-20 middelen (bv. Ritalin”, Strattera**, Concerta*" en Ad-derall1*), en middelen om alcoholisme, te behandelen, zoals opioïdantagonisten (bv. naltrexone (ook bekend onder de handelsnaam ReViam) en nalmefene), disulfiram (ook bekend onder de handelsnaam Antabuse**), en acamprosate (ook be-25 kend onder dé handelsnaam Campral9*. Daarnaast kunnen ook middelen voor het verminderen van alcoholonthoudingssymp-tomen worden co-toegediend, zoals benzodiazepines, beta-blockers, clonidine, carbamazepine, pregabalin, en gaba-pentin (Neurontin®*) . Behandeling voor alcoholisme wordt .30 bij voorkeur toegediend in combinatie met gedragstherapie die onderdelen omvat zoals motievatieversterkingstherapie, cognitieve gedragstherapie, en verwijzing naar zelfhulpgroepen, waaronder Alcohol Anonymous (AA).

Andere farmaceutische middelen die bruikbaar kunnen 35 zijn, zijn onder meer. antihypertensiemiddelen; onstekings-remmende middelen (bv. COX-2-remmers); antidepressiva (bv. fluoxetine-hydrochloride (Prozac**)); cognitieverbeterin.gs- 1026028 - 49 middelen (bv. donepezil-hydrochloride (Aircept™) en andere acetylcholinesteraseremmers); neuroprotectieve middelen (bv. memantine); antipsychotische geneesmiddelen (bv. ziprasidone (Geodonw), risperidone . (Risperda®*), en olanza-5 pine (Zyprexa")); insuline en insulineanalogen (bv.

LysPro-insuline); GLP-l(7-37) (insulinotropine) en GLP- l(7-36)-NH2; sulfonylureums en analogen daarvan: chlorpropamide, gli-benclamide, tolbutamide, tolazamide, acetohexamide, Glypi-10 zide®, glimepiride, repaglinide, meglitinide; biguanides: metformin, phenformin, buformin; a2-antagonisten en imida-zolines: midaglizole, isaglidole, deriglidolef idazoxan, efaroxan, fluparoxan; andere insulinesecretagogen: linog-liride, A-4166; glitazones: ciglitazone, Actos® (pioglita-15 zone), englitazone, troglitazone, darglitazone, Avandia® (BRL49653); vetzuuroxidatieremmers: clomoxir, etomgxir?. a-glucosidaseremmers: acarbose, miglitol, emiglitaat, vogli-bose, MOL-25,637, camiglibose, MOL-73,945; β-agonisten: BRL 35135, BRL 37344, RO 16-8714, ICI 07114, CL 316,243; 20 fosfodiesteraseremmers: L-386,398; lipideverlagende middelen: benfluorex: fenfluramine; vanadaat en vanadiumcom-

plexen (bv. Naglivan®) en peroxovanadivimcomplexen; amyli-nantagonisten; glucagonantagonisten; gluconeogeneserem-mers; somatostatine-analogen; antilipolytische middelen: 25 nicotinezuur, acipimox> WAG 994, pramlintide (Symlin®*), AC

2993, nateglinide, aldosereductaseremmers (bv. zopolres-tat), glycogeenfosforylaseremmers, sorbitoldehydrogenaser-emmers, natriumium-waterstof-uitwisselaar-type-1- (NHE-1) remmers en/of cholesterolbiosynthesisremmers of cholèste-30 rolabsorptieremmers, speciaal een HMG-CoA-rèductaseremmer, of een HMG-CoA-synthaseremmer, of een HMG-CoA-reductase-of -synthasegenexpressiéremmer, een CETP-remmer, een gal-zuursequesterant, een fibraat, een ACAT-remmer, een squa-leensynthetaseremmer, een. anti-oxidant of niacine. De ver-35 bindingen van de onderhavige uitvinding kunnen ook worden toegediend in combinatie met een natuurlijk vóórkomende verbinding dié plasma-cholesterolniveaus verlaagt. Derge- 1 02 6028- .-50 lijke natuurlijk vóórkomende stoffen worden gewoonlijk nutraceütica genoemd en omvatten bijvoorbeeld knoflookex-tract, Jïoodia-plantenextracten, en niacine.

De dosering van het aanvullende farmaceutische middel 5 is in het algemeen afhankelijk van een aantal factoren zoals de gezondheid van de behandelde persoon, de gewenste mate van behandeling, de soort en aard van eventuele gelijktijdige therapie, en de behandelingsfrequentie en de aard van het gewenste effect. In het algemeen ligt het do-10 seringsbereik van het aanvullende farmaceutische middel tussen ongeveer 0,001 en ongeveer 100 mg per kilogram lichaamsgewicht van het individu per dag, bij voorkeur tussen ongeveer 0,1 mg tot ongeveer 10 mg per kilogram lichaamsgewicht van het individu per dag. Enige variabili-15 teit in het algemene doseringsbereik kan echter noodzakelijk zijn afhankelijk van de leeftijd en het gewicht van de behandelde persoon, de beoogde toedieningsroute, de specifieke toegediende verbinding, en dergelijke. De bepaling van doseringsbereiken en optimale doseringen voor een 20 bepaalde patiënt ligt in het vermogen van de vakman die de beschikking heeft over de onderhavige beschrijving.

Volgens de werkwijzen van de uitvinding wordt een verbinding van de onderhavige uitvinding of een combinatie van een verbinding van de onderhavige uitvinding en ten 25 · minste één ander farmaceutisch middel toegediend aan een subject dat behoefte heeft aan een dergelijke behandeling, bij voorkeur in dé vorm van een farmaceutisch preparaat. In het combinatieaspect van de uitvinding kunnen de verbinding van de onderhavige uitvinding en ten minste één 30 . ander farmaceutisch middel. (bv. anti- zwaarlijvigheidsmiddel, partiële nicotinereceptoragonist, dopaminerg middel, of opióïdantagonist) hetzij afzonderlijk worden toegediend of in het farmaceutische preparaat dat ze beide bevat. Het heeft in het algemeen de voorkeur 35 dat een dergelijke toediening oraal geschiedt. Indien het te behandelen subject echter niet in staat is om te slikken of orale toèdiening anderszins moeilijk of ongewenst '· i 02 6028- . 51 is, kan parenterale of transdermale toediening de voorkeur verdienen. Volgens de werkwijzen van de uitvinding kan, wanneer een combinatie van een verbinding van de onderhavige uitvinding en ten.minste één ander farmaceutisch mid-5 del wordt toegediend> een dergelijke toediening sequentieel of. simultaan zijn, waarbij de simultane wijze in het algemeen de voorkeur heeft. In geval van sequentiële toediening kunnen een verbinding van de onderhavige uitvinding en het aanvullende sequentiële middel in elke gewens-10 te volgorde worden toégediehd. Het heeft in het algemeen de voorkeur dat een dergelijke toediening oraal geschiedt. Het heeft speciaal de voorkeur dat een dergelijke toediening oraal en simultaan geschiedt. Wanneer een verbinding van de onderhavige uitvinding en het aanvullende farmaceu-15 tische preparaat sequentieel worden toegediend, kan de toediening van élk ervan via dezelfde of verschillende werkwijzen geschieden.

Volgens de werkwijzen van de uitvinding wordt een verbinding van de onderhavige uitvinding of een combinatie 20 van een verbinding van de onderhavige uitvinding en ten minste één ander farmaceutisch middel bij voorkeur toegediend in de vorm van een farmaceutisch preparaat. In over-eenstemming hiermee kan een verbinding van de onderhavige uitvinding of een combinatie afzonderlijk of tezamen aan 25 een patiënt worden toegediend in elke mogelijke conventionele orale, rectale, transdermale, parenterale, (bijvoorbeeld intraveneuze, intramusculaire of subcutane), intra-cisternale, intravaginale, intraperitoneale, intravesica-le, lokale (bijvoorbeeld poeder-, zalf- of druppel-), of 30 buccale, of nasale doseringsvorm.

Preparaten die geschikt zijn voor parenterale injectie omvatten in het algemeen farmaceutisch aanvaardbare steriele waterige of niet-waterige oplossingen, dispersies, suspensies, of emulsies, en steriele poeders voor 35 reconstitutie in steriele injecteerbare oplossingen of dispersies.. Geschikte waterige en niet-waterige dragers of . verdunningsmiddelén (waaronder oplosmiddelen en vehikels) 1026028 52 zijn onder meer water, ethanol, polyolen, (propyleengly-col, polyethyleenglycol, glycerol en dergelijke), geschikte mengsels daarvan, plantaardige oliën (zoals olijfolie) en injecteerbare organische esters zoals ethyloleaat. Een 5 goede vloeibaarheid kan bijvoorbeeld worden bewerkstelligd door gebruik van een deklaag zoals lecithine, door handhaving van de vereiste deeltjesgrootte in geval van dispersies, en door gebruik van surfactanten.

Deze preparaten kunnen ook excipiënten bevatten zoals 10 conserverings-, bevochtigings-, emulgeer-, en dispergeer-middelen. Preventie van mcrobiële verontreiniging van de preparaten kan wordne bewerkstelligd met behulp van verscheidene antibacteriële en antifungale middelen, bv. pa-rabenen, chloorbutanol, fenol, sorbinezuur, en dergelijke. 15 Het kan ook wenselijk zijn om isotone middelen toe te voegen zoals suikers, natriumchloride, en dergelijke. Langduriger absorptie van injecteerbare farmaceutische preparaten kan worden bewerkstelligd door gebruik te maken van middelen die in staat zijn adsorptie te vertragen, bij-20 voorbeeld aluminiummonostearaat en gelatine.

Vaste doseringsvormen voor orale toediening zijn onder meer capsules, tabletten, poeders, en granulaten. In dergelijke vaste doseringsvormen wordt een verbinding van de onderhavige uitvinding of een combinatie gemengd met 25 ten minste één inerte excipiënt, verdunningsmiddel of drager. Geschikte excipiënten, verdunningsmiddelen of dragers zijn onder meer materialen zoals natriumnitraat of dical-ciumfosfaat of (a) vulstoffen of extenders (bv. zetmelen, lactose, mannitol, silicaat en dergelijke); (b) bindmidde-30 len (bv. carboxymethylcellulose, alginaten, gelatine, po-lyvinylpyrrolidon, sucrose, acacia en dergelijkej; (c) hu-mectanten. (bv. glycerol en dergelijke); (d) desintegre-ringsmiddelen (bv. agar-agar, calciumcarbonaat, aardappel-of tapiocazetmeel, alginaat, bepaalde complexe silicaten, 35 natriumcarbonaat en dergelijke); (e) oplosvertragers (bv. Paraffine en dergelijke); (f) absorptieversnellers (bv. quaternaire ammoniumverbindingen en dergelijke); (g) be- 1026028- 53 vochtigingsmiddelen (bv. cetylalcohol, glycerolmonostea-raat en dergelijke); (h) adsorptiemiddelen (bv. kaolien, bentoniet en dergelijke); en/of (i) smeermiddelen (bv. talk, calciumstearaat, magnesiutastearaat, vaste polyethy-5 leenglycolen, natriumlaurylsulfaat en dergelijke). In het geval van capsules en tabletten kan de doseringsvorm ook buffers bevatten. Vaste preparaten van een vergelijkbaar type kunnen ook worden gebruikt als vulstoffen in zachte of harde gevulde gelatinecapsules, mèt gebruikmaking van 10 excipiënten zoals lactose of melksuiker, evenals polyethy-leenglycolen met een hoog molecuulgewicht, en dergelijke.

Vaste doseringsvormen zoals tabletten, dragees, capsules, en granulaten kunnen worden bereid met deklagen en hulzen, zoals enterische deklagen en andere die in het 15 vakgebied bekend zijn. Zij kunnen ook ondoorzichtigmakende middelen bevatten en kunnen ook een zodanige samenstelling hebben dat zij de verbinding van de onderhavige uitvinding . en/of het aanvullende farmaceutische middel op een vertraagde wijze afgeven. Voorbeelden van inbeddingsprepara-20 ten die kunnen worden gebruikt zijn polymere stoffen en wassen. Het geneesmiddel kan, indien van toepassing, ook een micro-ingekapselde vorm hebben met één of meer van de hierboven genoemde excipiënten.

Vloeibare doseringsvormen voor orale toediening zijn 25 onder meer farmaceutisch aanvaardbare emulsies, oplossingen, suspensies, siropen, en elixers. Naast de verbinding van de onderhavige uitvinding of de combinatie kan de vloeibare doseringsvorm ook bepaalde inerte verdunnings-middelen bevatten die gebruikelijk zijn in hét vakgebied, 30 zoals water of andere oplosmiddelen, solubiliseringsmidde-len en emulgatoren, zoals bijvoorbeeld ethylalcohol, is-opropylalcohol, ethylcarbonaat, ethylacetaat, benzylalco-hol, benzylbenzoaat, propyleenglycol, 1,3-butyleenglycol, dimethylformamide, oliën (bv. katoenzaadolie, aardnoot-35 olie, maiskiemolie, olijfolie, castórolie, sesamzaadolie en dergelijkë), glycerol, tetrahydrofurfurylalcohol, póly- . 1 026028- 54.

ethyleenglycolen en vetzuuresters van sorbitan, of mengsels van deze stoffen, en dergelijke.

Naast dergelijke inerte verdunningsmiddelen kan het preparaat ook excipiënten zoals bevochtigingsmiddelen, .5 emulagtoren en suspenderingsmiddelen, zoet-, smaak-, en geurstoffen.

Suspensies kunnen naast de verbinding van de onderhavige uitvinding of de combinatie voorts dragers bevatten zoals suspenderingsmiddelen, bv. geëthoxyleerde isostea-10 rylalcoholen, polyoxyethyleensorbitol en sorbitanesters, microkristallijne cellulose, aluminiummetahydroxide, ben-tóniet, ·agar-agar, en tragacanth, of mengsels van deze stoffen, en dergelijke.

Preparaten voor rectale of vaginale toediening hebben 15 bij voorkeur de vorm van zetpillen die kunnen worden bereid door een verbinding van de onderhavige uitvinding of een combinatie te mengen met geschikte niét^-irriterende excipiënten of dragers, zoals cacaoboter, polyethyleengly-col of een zetpilwas, die vast zijn bij normale kamertem-20 peratuur maar vloeibaar bij lichaamstemperatuur en derhalve smelten in het rectum of de vaginale holte en zo het(de) actieve bestandde(e)1(en) afgeven.

Doseringsvormen voor topicale toediening van de verbindingen van de onderhavige uitvinding en combinaties van 25 de verbindingen van de onderhavige uitvinding met anti- zwaarlijvigheidsmiddelen zijn onder meer zalven, poeders, sprays en inhaleringsmiddelen. De geneesmiddelen worden onder steriele omstandigheden gemengd met een farmaceutisch aanvaardbare excipiënt, verdunningsmiddel of drager, 30 en alle mogelijke conserveringsmiddelen, buffers of drijfmiddelen die nodig zouden kunnen zijn. Oftalmische formuleringen, oogzalven, poeders en oplossingen vallen ook binnen de strekking van de onderhavige uitvinding.

De vólgende paragrafen beschrijven voorbeeldformule-35 !'· ringen, doseringen, enz. die bruikbaar zijn voor niet-menselijke dieren. De toediening van de verbindingen van de onderhavige uitvinding en combinaties van de verbindin- .

1026028 • . 55 gen van de. onderhavige uitvinding met antizwaarlijvig-heidsmiddelen kan oraal of niet-oraal (bv. door middel van injectie) geschieden.

Een hoeveelheid van een verbinding van de onderhavige 5 uitvinding of combinatie van een verbinding van de onderhavige uitvinding met een antizwaarlijvigheidsmiddel wordt zodanig toegediend dat een werkzame dosis wordt ontvangen. In het algemeen ligt een dagelijkse dosis die oraal aan een dier wordt toegediend tussen ongeveer 0,01 en ongeveer 10 1000 mg/kg lichaamsgewicht, bij voorkeur tussen ongeveer 0,01 en ongeveer 300 mg/kg lichaamsgewicht.

Handigerwijs kan een, verbinding van de onderhavige uitvinding (of combinatie) aan het drinkwater worden toegevoegd zodat een therapeutische dosis van de verbinding 15 wordt ingenomen met het dagelijks gedronken water. De verbinding kan rechtstreeks worden toegevoegd aan drinkwater, bij voorkeur in de vorm van een vloeibaar, wateroplosbaar concentraat (zoals een waterige oplossing van een wateroplosbaar zout) .

20 Handigerwijs kan een verbinding van de onderhavige uitvinding (of combinatie) Ook rechtstreeks aan het voeder worden toegvoegd, als zodanig. of in de vorm van een dier-voedersupplement, ook aangeduid als ëen voormengsel of concentraat. Een voormengsel of concentraat van de verbin-25 ding in een excipiënt* verdunningsmiddel of drager is meer gebruikelijk voor toevoeging van het middel aan het voeder. Geschikte dragers zijn naar wens vloeibaar of vast, zoals water, verschillende melen zoals alfalfameel, soja-; meel, katoenzaadoliemeel, lijnzaadoliemeel, maiskolfmeel 30 en maïsmeel, melasse, ureum, beendermeel, en mineraalmeng-sels zoals gewoonlijk worden gebruikt in pluimveevoeders. Een bijzonder effectieve drager is het respectievelijke diervoeder zelf; dat wil zéggen een klein gedeelte van een dergelijk voeder. Dé drager bevordert uniforme distributie 35 van de verbinding in het üiteindelijké voeder waarmee het voormengsel wordt gemengd. Bij voorkeur wordt de verbinding grondig door het voormengsel gemengd, en vervolgens : 1026028 _ 56 door het voeder. Hiertoe kan de verbinding worden gedis-pergeerd of opgelost in een geschikt olieachtig vehikel zoals sojaolie, maïsolie, katoenzaadolie, en dergelijke, of in een vluchtig organisch oplosmiddel en vervolgens 5 worden gemengd met de drager. Het zal duidelijk zijn dat de verhoudingen van verbinding in het concentratie sterk kunnen variëren, aangezien de hoeveelheid van de verbinding in het uiteindelijke voeder kan worden bepaald door de juiste verhouding voormengsel te mengen met het voedsel 10 teneinde een gewenste concentratie van de verbinding te verkrijgen.

Sterke concentraten kunnen door de voederfabrikant worden gemengd met een eiwitbevattende drager zoals so- jaoliemeel en andere melen, zoals hierboven beschreven, om 15 geconcentreerde supplementen te produceren, die geschikt zijn voor rechtstreekse voeding aan dieren. In dergelijke gevallen kunnen de dieren het gebruikelijke dieet nuttigen. Anderzijds kunnen dergelijke geconcentreerde supplementen rechtstreeks aan het voeder worden toegevoegd om 20 een qua voedingswaarde gebalanceerd, gebruiksklaar voeder te produceren dat een therapeutisch werkzaam gehalte van een verbinding van de onderhavige uitvinding bevat. De mengsels worden grondig gemengd met behulp van standaardwerkwijzen, zoals in een dubbelschaalmenger, om homogeni-25 teit te verzekeren.

Indien het supplement wordt gebruikt als een top-strooisel voor het voeder helpt dit evenzo om een gelijklijke verdeling van de verbinding over de top van het overstrooide voeder te verzekeren.

30 Drinkwater en voeder, welke effectief zijn voor het verhogen van de vorming van mager vlees en verbetering van de verhouding mager vlees ten opzichte van vet, worden in algemene zin bereid door een verbinding van de onderhavige uitvinding te mengen met een hoeveelheid diervoeder die 35 voldoet om eén hoeveelheid van ongeveer 10"3 tot ongeveer 500 ppm van de verbinding in het voeder of water te ver schaffen.

1 026026 _ 57

De voorkeur genietende, van geneesmiddel voorziene, varkens-, runder-, schapen- en geitenvoeders bevatten in het algemeen tussen ongeveer 1 tot ongeveer 400 gram van een verbinding van de onderhavige uitvinding (of combina-5 tie) per ton voeder, waarbij de optimale hoeveelheid voor deze dieren gewoonlijk ligt tussen ongeveer .50 tot ongeveer 300 gram per ton voeder. Voorkeurs-pluimvee- en -huisdiervoeders bevatten gewoonlijk ongeveer 1 tot ongeveer 400 gram en bij voorkeur ongeveer 10 tot ongeveer 400 10 gram van een verbinding van de onderhavige uitvinding (of combinatie) per ton voeder.

Voor parenterale toediening in dieren kunnen de verbindingen van de onderhavige uitvinding (of combinatie) worden bereid in de vorm van een pasta of een pellet en 15 toegediend als een implantaat, gewoonlijk onder de huid van het hoofd of oor van het dier waarin verhoging van vorming van mager vlees en verbetering van de verhouding mager vlees ten opzichte van vet wordt gewenst.

In het algemeen omvat parenterale toediening injectie 20 van een hoeveelheid van een verbinding van de onderhavige uitvinding (of combinatie) die voldoet om het dier te voorzien van ongeveer 0,01 tot ongeveer 20 mg geneesmid-del/kg lichaamsgewicht/dag. De voorkeursdosering voor pluimvee, varkens, rundvee, schapen, geiten en huisdieren 25 ligt tussen ongeveer 0,05 en ongeveer 10 mg geneesmiddel/kg lichaamsgewicht/dag.

Pastaformuleringen kunnen worden bereid door het geneesmiddel te dispergeren in een farmaceutisch, aanvaardbare olie zoals pindaolie, sesamolie, maïsolie, en dergelij-30 ke.

Pellets die een effectieve hoeveelheid van een verbinding van de onderhavige uitvinding, farmaceutisch preparaat, of combinatie, kunnen worden bereid door een ver-. binding van de. onderhavige uitvinding of combinatie te 35 mengen met een verdunningsmiddel zoals carbowas, carnauba-was, en dergelijke, en een smeermiddel, zoals magnesium- . 1 02 6028 - 58 of calciumstearaat, kan worden toegevoegd om het pellete-ringsproces te verbeteren;

Uiteraard zij begrepen dat meer dan één pellet kan. worden toegediend aan een dier om het gewenste dosisniveau 5 te bereiken dat de gewenste verhoging van vorming van mager vlees en verbetering van de verhouding mager vlees ten opzichte van vet zal bewerkstelligen. Bovendien kunnen implantaties ook periodiek plaatsvinden tijdens de behande-lingsperiode van het dier, teneinde het juiste gèneesmid-10 delniveau in het lichaam van het dier te handhaven.

De onderhavige uitvinding heeft verscheidene voordelige vétérinaire kenmerken. Voor de huisdiereigenaar of dierenarts die slankheid wil verhogen en/of ongewenst vet wil verwijderen bij huisdieren, verschaft de onderhavige 15 uitvinding een wijze waarop dit kan worden bewerkstelligd. Voor pluimvee-, rundvee- en varkensfokkers resulteert gebruik van de werkwijze van de onderhavige uitvinding in magerder dieren die hogere marktprijzen opbrengen in de vleesverwerkende industrie.

20 Uitvoeringsvormen van de onderhavige uitvinding wor den geïllustreerd aan de hand van de navolgende Voorbeelden. Er zij echter begrepen dat dé uitvoeringsvormen van de uitvinding niet beperkt zijn tot de specifieke details van deze Voorbeelden, daar andere variaties daarop de vak-25 man bekend zullen zijn of voor de hand zullen liggen in het licht van de onderhavige beschrijving.

VOORBEELDEN

Tenzij anders aangegeven zijn uitgangsmaterialen in 30 het algemeen verkrijgbaar bij commerciële bronnën zoals Aldrich Chemicals Cö.(Milwaukee,WI), Lancaster Synthesis,' Ine. (Windham, NH), Acros Organics. (Fairlawn, NJ), May-bridge Chemical Company, Ltd. (Cornwall, Engeland), Tyger Scientific (Princetori, NJ), en AstraZeneca Pharmaceuticals 35 (Londen, Engeland).

De hieronder weergegeven afkortingen hebben de volr gende bijbehorende betekenissen: 1 026028 - 59'

LiN(TMS)2 - lithiumhexamethyldisilazide PS-DIEA - polystyreengebonden diisopropylethylamine AIBN - 2,2'-azobisisobutyroiiitril HOAt - l-hydroxy-7-azabenzotriazoql 5 EDC ^ 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide- hydrochloride

Algemene experimentele werkwijzen NMR-spectra werden opgenomen op een Varian ünity"· 400 10 of 500 (verkrijgbaar bij Varian Ine., Palo Alto, CA) bij kamertemperatuur bij respectievelijk 400 en 500 MHz Chemische verschuivingen zijn uitgedrukt in delen per miljoen (δ) ten opzichte van.residuaal oplosmiddel als interne referentie. De piekvormen zijn als volgt aangeduid: s, 15 singulet; d, doublet; t, triplet; q, kwartet; m, multi-plet; br. s, breed singulet; v br. s, zeer breed singulet; br m, breed multiplet; 2s, twee singuletten. In sommige gevallen worden alleen representatieve xH-NMR-pieken opgenoemd.

20 Massaspectra werden opgenomen door middel van directe stroomanalyse met gebruikmaking van positieve en negatieve chemische ionisatie bij atmosferische druk (APcI) als scanmodi. Een Waters APci/MS model ZMD massaspectromèter uitgerust met Gilson 215 vloeistofhanteringssysteem werd 25 gebruikt om de experimenten uit te voeren..

Massaspectrometrieanalyse geschiedde ook met behulp van RP-HPLC-gradiëntwerkwijze voor chromatografische scheiding. Molecuulgewichtidentificatie werd opgenomen met positieve en négatiéve electrosprayionizatie (ESI) als scan-30 modi. Een Waters/Micromass ESI/MS model ZMD of LCZ massa-spectrometer uitgerust met Gilson 215 vloeistofhanteringssysteem werd gebruikt om de experimenten uit te voeren.

Ih gevallen waar de intensiteiten van chloor- of broombevattende ionen worden beschreven, werd de verwacht-35 te intensiteitsverhouding waargenomen (ongeveer 3:1 voor ^Cl/^ClT-bevattende ionen en .1:1 voor 79Br/8lBr-bevattende 1 026028 - 6° ionen). en wordt alleen de laagste massa opgegeven. Voor alle voorbeelden worden MS-pieken gerapporteerd.

Optische rotaties werden bepaald op een PerkinElmer"· 241 polarimeter (verkrijgbaar bij PerkinElmer Ine., Welle-5 sley, MA) met gebruikmaking van de natrium-D-lijn (A = 589 nm) bij de aangegeven temperatuur en zijn als volgt weergegeven [a]Dteinpf concentratie (c = g/100 ml), en oplosmid-del..

Kolomchromatografie wérd uitgevoerd met hetzij Baker"· 10 silicagel (40 pm; J.T. Baker, Phillipsburg, NJ) of Silica Gel 50 (EM Sciences"·, Gibbstown, NJ) in glaskolommen of in Bi otage"1-kolommen (ISC, Ine., Shelton, CT) onder lage stikstofdruk. Radiale chromatografie werd uitgevoerd met behulp van een Chromatotron™ (Harrison Research).

15

Bereiding van cruciale tussenproducten

Berèidinq van het tussenproduct 1-(2-Chloorfenyl)-5- . hydroxy-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-la) 20

Eto V\ 25 ; I-la

Aan een geroerde oplossing van 2-30 chioorfenylhydrazine-hydrochloride (22,4 g) en kaliumcar-bonaat (34,5 g) in ethanol (250 ml) werd diethylacetyleen-dicarboxylaat (20 ml) toegevoegd en het resulterende mengsel werd 18 uur tot refluxen verhit. Het reactiemengsel werd gekoeld, waarna achtereenvolgens 6 N zoutzuur (75 ml) 35 en water (500 ml) werd toegevoegd. Het reactiemengsel werd geëxtraheerd met ethylacetaat, de organische laag werd gewassen met water, pekel, gedroogd (Na2S0«) en in vacuo 1 026028ó- 61 geoncéntreerd. De resulterende gom werd geroerd met is-opropylether (250 ml) wat de titelverbinding (I-la) opleverde als een bruinachtige vaste stof (23 g) na filtratie en drogen in vacuo.

5

Bereiding van het tussenproduct 5-Broom-l-(2-chloorfenyl)-4-formyl-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-lb)

10 >H

\ Br O Cl

J “VN

15 . KJ

I-lb 20 Aan een geroerde oplossing van 1-(2-chloörfenyl)-5- hydroxy-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-la) (18,2 g) en fosforoxybromide (39 g) in 1,2-dichloorethaan (200 ml) werd dimethylformamide (10,5 ml) toegevoegd in een periode van 15 minuten. Het resulterende mengsel werd 3 uur 25 tot refluxen verhit, gekoeld, waarna nog een portie fosforoxybromide (98 g) werd toegevoegd en nog 20 uur werd gerefluxt. Het zwarte reactiemengsel werd gekoeld, over ijs (150 g) uitgeschonken eri 30 minuten geroerd. Het mengsel werd geëxtraheerd met dichloormethaan (2x), de samen-30 gevoegde organische lagen werden gedroogd over magnesium-sulfaat en in vacuo geoncentreerd wat een donkere olie opleverde. Dë olie werd door een bed van 200 g silicagel geleid, onder elutie met 30% hexanen:dichloormethaan, wat de titelverbinding (I-lb) opleverde als een gele vaste stof, 35 8,3 g.

1 026028 - 62

Bereiding van het tussenproduct 5-Broom-l-(2-chloorfenyl)-4-(isopropylamino-methyl)-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-lcj 5 " · ' . .

CH, ’ 10 N— G~c: I-lc

Aan' een geroerde oplossing van 5-broom-l-(2- 20 chloorfenyl)-4-formyl-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester . . (2 g), isopropylamine (0,95 ml) en azijnzuur (0,4 ml) in 1,2-dichloorethaan (16 ml) werd natriumtriacetoxyboorhy-dride (1,8 g) toegevoegd en de resulterende dispersie werd 18 uur geroerd. Het reactiemengsel werd verdund in ethyla- 25 cetaat, gewassen met een verzadigde oplossing van natriumbicarbonaat in water, pekel, gedroogd (Na2S04) en in vacuo geoncentreerd wat de titelverbinding (I-lc) opleverde als een gouden olie, 2,5 g.

30 Bereiding van het tussenproduct 3-Broom-2-(2- chloorfenylj-5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on (I-ld) 1 02 60 28 - 35 .

.63 O Cl

Hs<\ /=% /”N / h3c . : 10 ' . . ' Br ' I-ld

Een oplossing van 5-broom-l-(2-chloorfenyl)-4-15 (isopropylamino-methyl)-lH-pyrazool-3-carbonzuur- ethylester (2,2 g) en en 1 N natriumhydroxide in water(33 ml) in ethanol (55 ml) werd 2 uur tot 50°C verwarmd. Het reactiemengsel werd gekoeld, aangezuurd tot pH~2 met geconcentreerd zoutzuur en in vacuo tot een vaste stof ge-20 concentreerd. Het vaste; materiaal werd opgenomen in etha nol (50 ml), gefiltreerd, en het filtraat werd in vacuo geconcentreerd wat een witte vaste stof opleverdë, 2,1 g.

Aan een geroerde oplossing van de hierboven genoemde vaste stof (2,0 g), triethylamine (3 ml) in dichloorme-25 thaan (22 ml) werd 1-propaanfosforzuur-cyclisch-anydride (5 ml van een 50%-ige oplossing in ethylacetaat) en de re-.. sulterende oplossing werd 20 uur geroerd. Het reactiemeng-, sel werd verdund in ethylacetaat, gewassen met 1 N zoutzuur, een verzadigde oplossing van natriumbicarbonaat in 30 water, pekel, en gedroogd (Na2S04) wat de titelverbinding (I-ld) opleverde als een bruinachtige vaste stof, 2,0 g.

Bereiding van het .tussenproduct 5-(4-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-4-[2-(2-trimethylsylanyl-ethoxy)-vinyl]-35 lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-3a) 102 602®- 64 ci OEt Cl I-3a 15 Een dispersie van natriumhydride (45 mg van 60% in olie) in dimethylsulfoxide (2 ml) werd 45 minuten bij 75®C geroerd, gekoeld tot kamertemperatuur, waarna 2-(trimethylsilyl)-ethoxymethyl)trifenylfosfoniumchloride (480 mg) toegevoegd in één portie, wat resulteerde in een 20 rode oplossing; Na 10.minuten werd een oplossing van 4-(4-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-4-formyl-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (218 mg) in dimethylsulfoxide druppelsgewijs toegevoegd en de resulterende oplossing werd 1 uur geroerd. Een verzadigde oplossing van ammoniumchloride 25 in water werd. toegevoegd en het reactiemengsel werd gepar-• titionéerd tussen diethylether en water. De organische fa-. se werd gedroogd (Na2S04) en in vacuo geconcentreerd wat een paarse olie. opleverde. Silicagelchromatografie (30% ethylacetaat/hexanen) leverde de titelverbinding (I-3a) op 30 ..als een gouden olie, 210 mg.

Bereiding van het tussenproduct 5-(4-chloorfenvl)-1-(2-chloorfenyl)-4-(2-oxoethyl)-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (ï-3b) 35 , 1 026028 - 65

Et0Y° HVO

ci /'v-x y~\ q

Cl 15 I-3b

Een oplossing van 5-(4-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-4-[2-(2-trimethylsylanyl-ethoxy)-vinyl]-1H-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-3a) (210 mg) in 95:5 acetonitril:geconcentreerd waterstoffluoride (3 ml) werd 2 20 uur geroerd. Het reactiemengsel werd gepartitioneerd tussen een verzadigde oplossing van natriumwaterstofcarbonaat in water en ethylacetaat. De organische fase werd gewassen met pekel, gedroogd (Na2S04) en in vacuo geconcentreerd wat de titelverbinding (I-3b) opleverde, die meteen in de vol-25 gende reactie werd gebruikt.

Bereiding van het tussenproduct 1-(2-Chloorfenyl)-5-(4-chloorfenyl)-4-methyl-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-4a) 30 ..35 102 6 Ö 28 - 66 ci—( }—< ii - 10 \=/ V^N^OEt

H,C I

3 o Λ 15 I-4a

Een oplossing van 4-chloorpropiofenon (16,9 g, 100 mmol). in diethylether (20 ml werd toegevoegd aan een oplossing van LiN(TMS)2 (1 M oplossing in THF, 100 ml, 100 mmol) in diethylether (20 ml werd toegevoegd aan een op- 20 lossing van LiN(TMS)2 (1 M oplossing in THF, 100 ml, 100 mmol) in diethylether (400 ml) bij -78eC. Het reactiemeng-sel werd 0,75 uur geroerd bij -78°C, waarna druppelsgewijs diethyloxalaat (15 ml, 110 mmol) werd toegevoegd. Het re-actiémengsel kreeg de gelegenheid langzaam op kamertempe-25 ratuur te komen onder roeren gedurende 17 uur. De diethy-. lether werd onder vacuüm verwijderd en het residu werd verdund met diethylether. Een lichtgele vaste stof precipiteerde uit de oplossing en werd verzameld door filtratie (9,9 g, 36%). Deze vaste stof, die werd gebruikt zonder 30 verdere zuivering, werd opgelost in isopropylalcohol (200 ml), en 2-chloorfenylhydrazine (5,9 g, 36,1 mmol) en ge-coiic. H2SO4 (0,4 ml) werd toegevoegd. Het reactiemengsel werd 17 uur onder refluxen verhit. Na afkoeling tot kamera temperatuur werd NaHCCV (l g) toegevoegd. Het reactiemeng-35 sel werd geconcentreerd onder vacuüm. Het residu werd verdund met EtOAc en de organische oplossing werd gewassen met verzadigd. NaHC03 in wateren verzadigd NaCl in water, 1 02 60 28,- ' 67 gedroogd, gefiltreerd en in vacuo geconcentreerd. Het residu werd getritureerd met cyclohexaan wat. Ma opleverde als een vuilwitte vaste stof (9,5 g, .25%)’: +APCI-MS (M+l) 375,0.

.5 ·

Bereiding van het tussenproduct 4-Broommethyl-l- (2-chloorfenyl)-5-(4-chloorfenyl)-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-4b) 10 /-CH,

Br—\ /~0 15 o^V·'Tg 20 I-4b

Een mengsel van 1-(2-chloorfenyl)-5-(4-chlobrfenyl)- 4-methyl-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-4a) (2,8 25 ' g, 1,46 mmol), N-broomsuccinimide (1,6 g 8,95 mmol), AIBN. (245 mg, 1,49 mmol) in CC14 (60 ml) werd 17 uur onder re-fluxen verhit. Het reactiemengsel werd afgekoeld tot ka^ mertemperatuur, gefiltreerd om. eventuele vaste stoffen te filtreren, en onder vacuüm geconcentreerd. Het ruwe residu 30 werd gezuiverd via silicagelchromatografie (Flash 40) met behulp van een oplosmiddelgradiënt van 10% EtOAc/hexanen tot 20% EtOAc/hexanen wat het gewenste product (l-4b) opleverde als een amorfe vaste stof (2,2 g, 64%) : +APCI-MS (M+l) 455,0.

35 ’.· i 0 2 6 0 2 8 '5 68

Bereiding van het tussenproduct 1-(2-Chloorfenyl)-5-(4-chloorfenyl)-4-(isopropylamino-methyl)-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-4c) PH 3 · ' h3c-\ °s\ N--vy--0 10 15

Een mengsel van 4-broommethyl-1-(2-chloorfenyl)-5-(4-chloorfenyl)-lH-pyrazool-3-carbonzuur-ethylester (I-4b) (200 mg,. 0,44 mmol), K2CO3 (182 mg, 1,32 mmol) in CH3CN (5 20 ml) werd 17 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het reactie-mengsel werd gefiltreerd om onoplosbaar materiaal te verwijderen. en onder vacuüm geconcentreerd. Het residu werd verdund met EtOAc en de organische oplossing werd gewassen met H2O en verzadigd NaCl in water, gedroogd, en in vacuo 25 geconcentreerd. Het ruwe residu werd gezuiverd op S1O2-gelchromatografie met behulp van een oplosmiddelgradiênt van 20% EtOAc/hexanen tot 75% EtOAc/hexanen wat het product (l-4c) opleverde als een amorfe vaste stof (40 mg, 21%): +APCI-MS (M+l) 432,2.

30

Bereiding van het tussenproduct l-(2-Chloorfenyl)-5-(4-chloorfenyl)-4-(isopropylamino-methyl)-lH-pyrazool-3-carbonzuur (I-4d) · 35 :02 6028 - 69 ,CH3 · H3C \ \

N—\ /~0H

jQrC

JL Vijr ci "V-» ï^ci 10 ^ I-4d

Een oplossing van 1-(2-chloorfenyl)-5-(4-chloorfenyl)-4-(isopropylamino-methyl)-lH-pyrazool-3-15 carbonzuur-ethylester (I-4c) (32 mg, 0f074 mmol) in een 1:4 oplossing van 1 M KOH/EtOH (10 ml) werd 6 uur bij 50eC verwarmd en 72 uur bij 37°C. Het reactiemengsel werd behandeld met geconc. HC1 tot de pH van de oplossing, ongeveer 1 was, en vervolgens in vacuo geconcentreerd. Het re-20 sidu werd verdund met EtOH eri gefiltreerd. Het filtraat werd onder vacuüm geconcentreerd wat (l-4d) opleverde als een witte vaste stof (40 mg, 100%): +APCI-MS (M+l) 404,1.

Bereiding van het tussenproduct 2-Chloor-N-(4-25 chloorfenyl)-benzamidine (I-5a) (jf I-5a 35 Trimethylaiuminiüm (2 M in hexanen, 100 ml, 200 mmol) werd druppelsgewijs toegevoegd aan een oplossing van 4- chloörfenylamine (18,2 g, 143 mmol) in tolueen (550 ml) 1 02 6028 _ 70 onder een N2-atmosfeer bij 0°C. Het reactiemengsel werd op-gewarnd tot kamertemperatuur en 3,5 uur geroerd. Een oplossing van 2-chioorbenzonitril (23,6 g, 171 mmol) in tolueen (140 ml) werd toegevoegd en het reactiemengsel werd 5 17 uur tot 80°C verhit, waarbij het homogeen werd. Het re actiemengsel werd vervolgens afgekoeld tot kamertemperatuur en uitgeschonken over een dispersie van silicagel in CHCla/methanol (2:1) . Na filtratie werd de filterkoek gewassen met een mengsel van CH2Cl2/MeOH (2:1). De samenge-10 voegde filtraten werden in vacuo geconcentreerd, en het vaste gele . residu werd getritureerd met hexanen/ether (2:1):. Het product I-5a (25,1. g, 66%) werd zonder verder zuivering gebruikt in de volgende reactie.

15 Bereiding van het tussenproduct 1-(4-chloorfenyl)-2- (2-chloorfenyl)-4-hydroxy-4,5-dihydro-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylestér (I-5b) .

P02Et 20

rv0H

W ~fN

y~c 25 . . - . ; I-5b

Een mengsel van 2-chloor-N-(4-chloorfenyl)-30 benzamidine (I-5a), (25,1 g, 95 mmol) en NaHC03 (84 g, 189 mmol) in 2-propanol (473 ml) werd behandeld met 3-broom-2-oxo-propionzuur-ethylester (14,3 ml, 22 g, 113 mmol). Het reactiemengsel werd 17 uur tot 80eC verhit. Na afkoelen tot kamertemperatuur werd het oplossing in vacuo verwij-, 35 derd. Het residu werd verdund met CH2CI2 en de organische oplossing werd gewassen met H2O, verzadigd NaCl in water, gedroogd over MgS04 en geconcentreerd in vacuo wat het pro- 1 02 6028-: 71 duet. 1-(4-chioorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-4-hydroxy-4,5-dihydro-lH-imidazöol-4-carbonzuur-ethylester I-5b opleverde als een donkerrood residu (36 g) .

5 Bereiding van 1-(4-Chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-1H- imidazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5c) 10 co2a jQT 'iL* 15 I-5c

Het ruwe in de vórige stap verkregen l-(4-20 chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-4-hydroxy-4,5-dihydro-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5b, 36 g, 94,7 inmol) en p-tolueensulfonzuur-monohydraat (4,5 g, 24 mmol) in tolueen (630 ml) werd 17 uur onder reluxen verhit. Het reac-tiemengsel werd gekoeld tot kamertemperatuur en geconcen-25 treerd in vacüo. Het ruwe residu werd gezuiverd door bed-filtratie door silicagel met behulp van een gradiënt van 2% EtOAc/CH2Cl2 tot 10% EtOAc/CH2Cl2. De fracties met het product werden geconcentreerd, en het olieachtige residu werd verduund met 1:3 EtOAc/hexanen (200 ml). Na 1 uur 30 precipiteerde een vaste stof uit de oplossing, en deze werd verzameld door middel van filtratie wat 1— (4— chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester I-5c opleverde (18,63 g, 69,7%).

35 Bereiding_van_5-Broom-l-(4-chloorfényl)-2-(2- chloorfenyl)-lH-imidazooi-4-carbonzuur-ethylester (I-5d) 1 026028 - 5 72 CO,Et

Br_7 2

\ S

10 I-5d

Broom (3,6 ml, 0,07 mol) werd toegevoegd aan een oplossing van 1-(4-chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-1H-imidazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5c, 3,6 g, 0,01 mol) 15 in ijsazijnzuur (50 ml) bij kamertemperatuur. Het reactie-mengsel werd 17 uur geroerd, uitgeschonken in ijswater, en behandeld met 25% NaOH in water tot de oranje oplossing geel werd. De waterige oplossing werd geëxtraheerd met CH2CI2 (3x) en de gecombineerde extracten werden gedroogd 20 en in vacuo geconcentreerd wat de gewenste verbinding I-5d oplevèrde als een olie (4,7 g) : +APCI-MS (M+l) 441,1; lH-NMR (CD3CI) δ 1,41. (3H, t), 4,43 (2H, q), 7,08-7,12 (2H, .

m), 7,20-7,40 (7H, m).

25 Bereiding van tussenproduct l-(4-Chloorfenyl)-2-(2- chloorfenyl)-5-formyl-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5e) . 9 CO-jEt 30 ^ Πν ... 35 1 02.6028 -· 73 I-5e

Aan een oplossing van 5-broom-l-(4-chloorfenyl)-2-(2-ehloorfenyl)-lH-imijdazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5d, 4,4 g, 0,01 mol) in watervrij THF (100 ml) en onder een N2-5 atmosfeer bij -78°C werd langzaam tert-butyllithium (13 ml 1,7 M in pentaan, 0,22 mol). Na 1 uur bij -78°C, werd druppelsgewijs DMF (7,7 ml, 0,1 mmol) toegevoegd. Het re-actiemengsel werd 2,5 uur bij -78eC geroerd, gestopt met verzadigd NH4CI (10 ml) in water, langzaam op kamertempera-10 tuur gebracht, en tenslotte in verzadigd NaCl in water gegoten. De waterige oplossing werd geëxtraheerd met Et20 (3x) en de samengevpegde organische extracten werden gedroogd (Na2S04) en in vacuo geconcentreerd. Het ruwe residu werd gezuiverd door middel van flash-chromatografie met 15 behulp van een oplosmiddelgradiënt van 1:3 EtOAc/hexanen tot 1:1 EtOAc/hexanen wat het gewenste product I-5e opleverde.als een bleekgeel amorf glas (2,0 g): +APCI-MS (M+l) 389,2; . 1H-NMR (CD2C12) δ1,41 (3H, t), 4,45 (2H, q), 7,09- 7,14 (2H, m), 7,24-7,39 (7H, m), 10,50 (1H, s).

20 De volgende twee tussenproducten werden bereid vol gens analoge werkwijzen als de hierboven voor de synthese van 1-(4-chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-5-formyl-lH- imidazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5e) beschrevene: 2-(4-chloorfenyl)-1-(2-fluorfenyl)-5-formyl-lH-25 imidazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5e-2); 2-(4r-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-5-formyl-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5e-3).

Bereiding van tussenproduct 2-(4-Chloorfenyl)-5- 3Ó cyclopentylaminomethyl-1-(2-fluorfenyl)-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5f) 35 102 6028 - 74 ·α·: -·;· I λ,Ν ίο Π α I“5f · 15 Een oplossing van 2-(4-chloorfenyl)-1-(2-fluorfenyl)- 5-formyl-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester I-5e-2 (1000 mg, 2,68 mmol), cyclopentylamine (251 mg, 2,95 mmol), NaBH(OAc)3 (796 mg, 3,76 mmol) in dichloorethaan werd 17 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd 20 in vacuo geconcentreerd en het residu werd verdund met CH-Cl3. De organische oplossing werd gewassen met verzadigd NaHC03 in water én verzadigd NaCl in water, gedroogd, en onder vacuüm geconcentreerd. Het ruwe residu werd gezuiverd op Si02-gel (Flash 4Os) met behulp van een oplosmid-25 delgradiënt van 30% EtOAc/hexanen tot 80% EtOAc/hexanen wat het gewenste product (I-5f) opleverde als een gele olie (680 mg, 57%): +APCI-MS (M+l) 442,2.

Bereiding van tussenproduct 2-(4-Chloorfenyl)-1-(2-30 . chloorfenyl)-5-(2-methoxy-vinyl)-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5q) 35 1 02 6028- 75 \ o^rr 10

Cl hla

Aan een oplossing van (methoxyme- 15. thyl) trifenylfosfoniumchlóride (533 mg, 1,55 mmol) in THF (10 ml) bij 0°C werd lithiumhexamethyldisilazide (1,55 ml, 1 M oplossing, .1,55 mmol) toegevoegd. Het reactiemengsel werd 0,5 h geroerd en gekoeld tot -78°C. Een oplossing van

2-(4-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-5-formyl-lH-imidazool-20 4-carbonzuur-ethylester (I-5e) (408 mg, 1,05 mmol) in THF

(5 ml) werd langzaam toegevoegd via een canule. Het reactiemengsel werd 5 min bij -78°C geroerd, en kón vervolgens op kamertemperatuur komen gedurende 3 uur roeren. Het reactiemengsel werd gestopt met H2O en verdund met EtOAc. De 25 organische oplossing werd afgescheiden en de waterlaag werd eenmaal geëxtraheerd met EtOAc. De samengevoegde EtOAc-extracten werden gewassen met verzadigd NaCl in water, gedroogd, en in vacuo geconcentreerd. Het ruwe residu werd gezuiverd op 4 mm chromatotronplaten met behulp van 30 1:1 EtOAc/hexanen wat het product (I-5q) opleverde als twee isomere verbindingen (148 mg, 34%, en 157 mg, 36%) : +APCI-MS (M+l). 417,2.

Bereiding van tussenproduct 2-(4-Chloorfenyl)-1-(2-35 chloorfenyl)-5-(2-oxo-ethyl)-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester (I-5hj .

1026028 76 f

Cl 10 I-5h

Een oplossing van 2-(4-chloorfenyl)-l-(2-chloorfenyl)-5- (2^-methoxy-vinyl) -lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester I-5g (275 mg, 0,659 mmol)en H2SO4 (200 μΐ) in THF/H20 . (18 ml) werd 3 uur op 70°C verhit. Het 15 reactiemengsel werd tot kamertemperatuur gekoeld en behandeld met 1 M K2CO3 tot de pH van het reactiemengsel ~6 was. De waterige oplossing werd geëxtraheerd met CH2CI2 en dè samengevoegde organische extracten werden gewassen met verzadigd NaiCl in water, gedroogd, en in vacuo geconcen-20 treerd wat een mengsel van uitgangsmateriaal en product (I-5h) opleverde: +APCI-MS (M+l) 403,3.

Bereiding van tussenproduct 2-(4-Chloorfenyl)-1- (2-chloorfenyl)-5-(2-cvclopentvlamino-ethyl)-lH-imidazool-4-25 carbönzuur-ethylëstër (I-5i) : >9.: HN * o 30 y v° 35 ^ I-5i 1 02 6028- 77

Natriumtriacetoxyboorhydride (32 mg, 0,152 mmol) werd toegevoegd aan een oplossing van 2-(4-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-5-(2-oxo-ethyl)-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester I-5h (34 mg, 0,084 mmol), cyclopentyïamine (12 . 5 μΐ, 0,118 mmol), en azijnzuur (5 μΐ, 0,09 mmol) in 1,2-dichloorethaan (2 ml) bij kamertemperatuur. Het reactie-mengsel werd gestopt met 1 N NaOH en geëxtraheerd met. CH2CI2 (3x) . De samengevoegde CH2Cl2-extracten werden gewassen met verzadigd NaCl in water, gedroogd, en in vacuo ge-10 concentreerd. Het ruwe residu werd gezuiverd pp een 1 mm chromatotronplaat met behulp van 100% EtOAc wat I-5i ople-. verde als een kleurloze olie (22 mg) : +APCI-MS (M+l) 472,2.

15 Bereiding van tussenproduct 2-(4-Chloorfenyl)-1- (2- chloorfenyl)-5-(2-cyclopentylamino-ethyl)-lH-imidazool-4-carbonzuur (1-5j) 9 o.

Cl 30 . 1^51

Aan een oplossing van 2-(4-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-5-(2-cyclopentylamino-ethyl)-lH-imidazool-4-carbonzuur-ethylester I-5i (22 mg, 0,46 mmol) in absolute EtOH (2 ml) werd 1 N KOH (500 μΐ) toegevoegd. Het reactie-35 mengsel werd 4 uur op 85°C verhit . en werd vervolgens gè-concentréerd tot een kwart van het oorspronkelijke volume. De pH van de oplossing werd op ongeveer 3,5 gebracht, met 1 026028 - 78 10% HC1. De waterige ethanolische oplossing werd droogge-concentreerd wat I-5i opleverde als een vaste stof (20 mg): +APCI-MS (M+l) 444,4.

5 Bereiding van tüssenproduct 2-(4-Chloorfenyl)-5- (cyclopentylamiiiomethyl-l-(2-fluorfenyl)-lH-imidazool-4-carbonzuur (I-5k) nh co h C( l j* <Xk 15 α I-5k

Een oplossing van 2-(4-chloorfenyl)-5- cyclopentylaminomèthyl-1-(2-fluorfenyl)-lH-imidazool-4-20 carbonzuur-ethylester I-5f (1,2 g, 2,68 mmol) in 1:2 1M KOH/THF werd 17 uur bij 55eC geroerd. Het reactiemengsel werd geconcentreerd onder vacuüm en aangezuurd tot pH~l met geconcentreerd zoutzuur. Het residu werd gedispergeerd in EtOH en gefiltreerd om KC1 te. verwijderen. Het fil-25 treerd werd geconcentreerd onder vacuüm wat I-5k opleverde als een vuilwitte vaste stof (1,26 g, 97%): +APCI-MS (M+l) 414,0.

Voorbeeld 1 illustreert de bereiding van verbindingen 30 van de onderhavige uitvinding waarbij A staat voor stikstof, B voor koolstof en X voor een binding.

Voorbeeld 1. Bereiding van 2-(2-Chloorfenyl)-5-isopropyl-3-(3,4,5-trifluorfenyl)-4,5-dihydro-2H-35 pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on (1A-1) 102602Ö- 79 h3cv . v-ch,

10 F

1A-1 15 Een met stikstof doorborrelde oplossing van 3-broom- 2- (2-chloorfenyl.) -5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c] pyrazooi-6-on I-ld (100 mg), cesiumfluoride (85 mg), 3, .4,5-trifluorfenylboorzuur (74 mg) en tetra- kis(triphènylfosfine)palladium(0) (32 mg) in 1,2- 20 dimethoxyethaan (1 ml) werd 6 uur bij 80eC geroerd in een verzegeld flesje. Het reactiemengsel werd afgekoeld en ge-partitioneerd tussen ethylacetaat/water, de organische fase wérd. gedroogd (Na2S04), en in vacuo geconcentreerd wat een olie opleverde. Reverse-fase-HPLC (gradiënt van 40% 25 naar 100% acetonitril:0,01% ammoniümhydroxide in water) leverde de titelverbinding (1A-1) op als een vuilwit schuim, 19 mg. XH-NMR in CDCI3 (ppm) : δ 7,6-7,4- (m,; 4H), 6,78-6, 65 (m, 2H), 4,76-4,64 (m, 1H), 4,40 (br s, 2H), 1,36 (d, 6H); ms (LCMS) m/z = 406,3 (M+l)+.

30 De in Tabel 1 hieronder opgenoemde verbindingen wer den bereid; volgens werkwij zen analoog aan de hierboven beschrevene voor de synthese van Verbinding lft-1, met gebruikmaking van de juiste uitgangsmaterialen die commercieel verkrijgbaar zijn, of te bereiden volgens in het vak-35 gebied welbekende werkwijzen, of op een wijze ainaldog aan de hierboven voor andere tussenproducten beschreven rou-tes.

iO26Q28- ·'. 80 - Tabel 1 ?4 5 .N °

. N

R° 10

Exp. R° R1 R4 ... LCMS m/.z nr.__' ’ · - ' ._____.__(M+l) * IA-2 2- 2-chloorfenyl -CH(CH3)2 386,3 __chloorfenyl ______ IA-3 2- .4- (methoxy- -CH(CH3)2 396,4 __chloorf enyl methyl )f enyl____ 1A-4 2- 2-fluorfenyl -CH(CH3)2 370,3 _chloorfenyl___ lA-*5 2- 2-methoxy- -CH(CH3)2 383,4 _chloorfenyl pyridyl-5yl__ IA-6 2- 3-chloor-4- -CH(CH3)2 404,2 __chloorfenyl fluorfenyl_____ IA-7 2- 4-fluor-3- -CH(CH3)2 384,3 __chloorfenyl methylfenyl____ IA-8 2- vinyl -CH(CH3)2 302,3 ___chloorfenyl__- ._· .__·.__ IA-9 2- 4-(trifluor- 2,2,2- 460,4 _chloorfenyl methyl)fenyl trifluorethyl__ IA-10 2- . 4-(trifluor- isopropyl 420,4 ·__chloorfenyl methyl) fenyl _____ IA-11 2- . 4-chloorfenyl ethyl 372,4 chloorfenyl ________ 1A-12 2- 2-chloorfenyl isopropyl 386,3 : ___ chloorfenyl__' '' .__'___ IA-13 2- 4-(methoxy- isopropyl 396,4 __chloorfenyl methyl)fenyl ____ , 026028- ·. ··' · . · ;_. 81 _, 1A-14 2- 2-fluorfenyl isopropyl 370,3 chloor fenyl ___' _· _ IA-15 2- 4-chloorfenyl 2-fluorethyl 390,3 chloorfenyl_____ 1A-16 2- 4-chloorfenyl 2,2- 408,1 chloorfenyl___difluorethyl _ 1A-17 2- 4-chloorfenyl 2,2,2- 426,3 • ·__chloorfenyl__ trifluorethyl__ 1A-18 2- 4-ethoxyfenyl t-butyl 410,4 chloorfenyl_____ 1A-19 2- 4-ethoxyfenyl i-butyl 410,4 • _ chloorfenyl___.

1A-20 2- 4-ethoxyfenyl ethyl 382.4 __chloorfenyl__'____ 1A-21 2- 4-ethoxyfenyl isopropyl 396,4 __chloorfenyl___ 1A-22 2- 4-ethoxyfenyl 2,2,2- 436,4 .__chloorfenyl__trifluorethyl__ 1A-23 2- 4-ethylfenyl t-butyl 394,5 .__chloorfenyl___ 1A-24 2-, 4-ethylfenyl i-butyl 394,5 _ chloorfenyl____ 1A-25 2- 4-ethylfenyl ethyl 366,4 chloorfenyl__.______ 1A-26 2- 4-ethylfenyl isopropyl 380,4 '__chloorfenyl____'__' 1A-27 2- 4-ethylfenyl 2,2,2- 420,4 - ' ·__chloorfenyl___ trifluorethyl__ 1A-28 2- 4-ethylfenyl 2,2- 416,5 • __chloorfenyl___difluorpropyl__ IA-2 9 2- 4-isopropoxy- t-butyl 424,3 ____ chloorfenyl _fenyl___ IA-30 2- 4-isopropoxy- i-butyl. 424,3 chloorfenyl__fenyl_______ 1A-31 2- 4-isopropoxy- ethyl 396,2 chloorfenyl__fenyl___ 1A-32 1 . . 2-__4-isopropoxy- isopropyl__410,2 : ! 02 6028 - 82 ___chloorfenyl fenyl · ._. ___________ 1A-33 2- 4-isopropoxy- '2,2,2- 450,2 __chloorfenyl__fenyl trifluorethyl__ 1A-34 2- 4-isopropoxy- 2,2- 446,3 __chloorfenyl fenyl difluorpropyl__ IA-3 5 2- 4-t- 2,2,2- 448,5 __chloorfenyl butylfenyl trifluorethyl__ IA-3 6 2- 4-t- 2,2- 444,5 __chloorfenyl butylfenyl difluorpropyl__ IA-3 7 2- 4-i- 2,2,2- 434,5 _chloorfenyl propylfenyl trifluorethyl__ IA-3 8 2- 4-i- 2,2- 430,5 __chloorfenyl propylfenyl difluorpropyl__

Bereiding van 2-(2-Chloorfenyl)-3-[2-(4-chloorfenyl)-vinyl]-5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-5 6-on (1A-39) 10 Ί /-\ CH,

v N=VNV

15 H \ : O CH3 1A-39 '

Aan een geroerde oplossing van 2-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-3-vinyl-4,5-dihydro-2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6- 20 on 1A-8 (42 mg), palladiumacetaat (3 mg) en 4- chloorjoodbenzeen (300 mg) werd 18 uur gëroerd. Het reac-tiemengsel werd geconcentreerd en gechromatografeerd op silicagel (gradiënt 30% tot 60% ethylacetaat/hexanen) wat de titelverbinding (1A-39), 44 mg, opleverde. 1H-NMR in de-

1 026028- V

83 .

DMSO (ppm); δ 7,78 (d, 1H), 7,63-7,38 (m, 5H), 7,13 (d, 1H) , 6,61 (d, lH), 4,62 (s, 2H), 4,40 (Μ, 1H), 1,23 (d, 6H); ms (LCMS) m/z =412,3 (M+l)+.

Voorbeeld 2 illustreert de bereiding van verbindingen 5 van de onderhavige uitvinding waarbij A staat voor stikstof, B vooir koolstof en X voor een binding.

Voorbeeld 2. Bereiding van 3-(4-Chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-6-isopropyl-2,4,5,6-tetrahydro-pyrazolo[3,4-10 c]pyridine-7-on (2A-1) V ' ( /=0 15 20 ^ 2A-1

Aan een geroerde oplossing van I-3b (157 mg),. isopro-25 pylaitiine (66 μΐ), azijnzuur (27 μΐ) in 1,2-dichloorethaan (0,5 ml) werd natriumtriacetoxyboorhydride (124 mg) toegevoegd. Na 1,5 uur werd het reactiemengsel verdund in ethylacetaat, gewassen met verzadigd natriumbicarbonaat in water, pekel, gedroogd (Na2SO«), en in vacuo geconcentreerd 30 wat een gouden schuim opleverde, welke zonder verdere zuivering in de volgende stap werd gebruikt.

Het product van de bovenstaande stap en 1 N natriumhydroxide in water (2,5 ml) werd 2,5 uur bij 50°C verwarmd. De reactieoplossing werd gekoeld, aangezuurd tot 35 pH-2 met geconcentreerd zoutzuur, en in vacuo geconcentreerd. Het resulterende vaste residu werd gedispergeerd in ethanol (10 ml), gefiltreerd, de vaste stoffen werden .

1 02 6028- 84 gewassen met ethanol/ en de samengevoegde filtraten werden in vacuo geconcentreerd wat een witte vaste stof opleverde / die zonder verdere zuivering in de volgende stap werd gebruikt.

5 Aan. een geroerde, oplossing van de in de bovenstaande

stap bereide vaste stof en triethylamine (0,2 ml) in dichloormethaan (3 mi), werd 1-propaanfosforzuur-cyclisch anhydride (0,34 ml van een 50%-opiossing in ethylacetaat) toegevoegd en het resulterende mengsel werd 2 uur geroerd. 10 Het reactiemengsel werd verdund met ethylacetaat, gewassen met 1 N zoutzuur, verzadigd natriumbicarbonaat in water, pekel, en gedroogd (Na2S04) wat een gouden olie opleverde. Silicagelchromatografie (60% ethylacetaat/hexanen) leverde de titelverbinding (2A-1) op als een witte; vaste stof, 103 15 mg. ^-NMR in CDC13 (ppm) : δ 7,50-7,23 (m, 6H), 7,03 (d, 2H), 5,17 (m, 1H), 3,57 (m, 2H), 2,84 (br s, 2H), 1,20 (d, 6H); ms (LCMS) m/z = 400,3 (M+1)V

De in Tabel 2 hieronder opgenoemde verbindingen werden bereid volgens werkwijzen analoog aan de hierboven be-20 schrevene voor de synthese van Verbinding 2A-1, met ge bruikmaking van de juiste uitgangsmaterialen die commercieel verkrijgbaar zijn, of te bereiden volgens in het vakgebied welbekende werkwijzen, of op een wijze analoog aan de hierboven voor andere tussenproducten beschreven rou-25 tes.

Tabel 2

, K

/-N

30 ·.

. Exp. R° R1 R4 ' LCMS m/z nr, · ' .·; ·. ___(M+l)^ 2A-2 2- 4-chloorfenyl , 2,2,2-__440,2 1 02 6028 - 85_ chloorfenyl . .__trifluorethyl__ 2A-3 2- 4-chloorfenyl 2,2- 422,3 chloorfenyl__difluorethyl__ 2A-4 2- 4-chloorfenyl 2-fluorethyl 404,3 chloorfenyl____' 2A-5 2- 4-(trifluor- isopropyl 434,4 _ chloorfenyl methyl)fenyl___ 2A-6 2- 4-chloorfenyl ethyl 386,4 __chloorfenyl___ 2A-7 2- 4-chloorfenyl 426,4 chloorfenyl 2A-8 2- 4-chloorfenyl 412,4 chloorfenyl I 1 2A-9 2- 4-chloorfenyl t-butyl 414,4 chloorfenyl___.__ 2A-10 2- 4-chloorfenyl i-butyl 414,4 _ chloorfenyl_____ 2A-11 2- 4-chloorfenyl 2,2- 436,3 _ chloorfenyl__:_.__dif luorpropyl__ 2A-12 2- 4-chloorfenyl 454,5 chloorfenyl Tl 2A-13 2- 4-chloorfenyl 2-methoxy- 444,4 __chloorfenyl _.__2methylpropyl__ 2A-14 2- 4-ethylfenyl 2,2- 430,5 chloorfenyl____difluorpropyl__ 2A-15 2- 4-ethylfenyl isopropyl 394,5 . chloorfenyl___·__ 2A-16 2- 4-ethylfenyl t-butyl 408,5 __chloorfenyl________ 2A-17 2- 4-ethylfenyl i-butyl 408,4 ' chloorfenyl ! '___:__ 2A-18 2- 4-ethylfenyl 2,2,2- 434,4 ___chloorfenyl__trifluorethyl _ 2A-19 2- '··; 4-ethylfenyl__ethyl__380,4 ; r’7 6028 _ ' 86 __chloorfenyl___________ 2A-20 2- 4-isopropyl- 2,2- 444,5 chloorfenyl__fenyl__difluorpropyl__' 2A-21 2- 4-isopropyl- 2,2,2- 448,5 • __chloorfenyl__fenyl trifluorethyl__' 2A-22 2- 4-chloorfenyl 2,2,2- 420,4 __chloorfenyl__trifluorethyl__ 2A-23 2- 4-chloorfenyl .2,2- 416,4 __chloorfenyl__difluorpropyl__

Voorbeeld 3. Bereiding van 3-(4-Chloorfenyl)-2-(2-chloorfêhyl)-5-isopropyl-4,5-dihydro-pyrrolo[3,4- . c]pyrazool-6-on (3A-1) 5

H3C

10 )n 0\^\J I^CI.

15 3A-1

Een mengsel van l-(2-chloorfenyl)-5-(4-chloorfenyl)- 4-(isopropylamino-methyl)-lH-pyrazool-3-carbonzuur I-4d (40 mg, 0,074 mmol), EDC (28 mg, 0,148 mmol), HOAt (20 mg, 0,148 mmol), en triethylamine (0,02 ml, 0,148 mmol) in 20 CH2CI2 (10 ml) werd 17 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd gewassen met verzadigd NaHC03 in water, verzadigd NaCl in water, gedroogd en in vacuo geconcentreerd. Het ruwe residu werd verdund met cyclohexaan en 17 uur geroerd. Een vaste stof precipiteerde uit de op-25 lossing en werd verzameld door middel van filtratie wat 3A-1 (11 mg, 38%) opleverde: +APCI-MS (M+l) 386,1; 1H-NMR (CDCI3) : δ 7,50-7,38 (m, 4H), 7>26 (d, 2H, J = 9,6 Hz) , 7,06 (d, 2H), 4,69 (m, 1H), 1,3 (d, 6H, j » 6,65 Hz).

,1:026028- 87 Dé in Tabel 3 hieronder opgenoemde verbindingen werden bereid volgens werkwijzen analoog aan de hierboven beschrevene voor de synthese van Verbinding 3A-1, met gebruikmaking van de juiste uitgangsmaterialen dié commerci- . 5. eel verkrijgbaar zijn, of te bereiden volgens in het vakgebied welbekende werkwijzen, of op een wijze analoog aan de hierboven voor andere tussenproducten beschreven routes.

Tabel 3 iO 4 .

λ f Λί

15 . Λ : I

Exp. R° . . R1 R3a R3b R4 +APCI

nr. MS

. '____________ (M+l) 3A-2 2-chioor- 4-methoxy- Η H __ 408,2 fenyl fenyl y^>y 3A-3 2-chloor- 4-methoxy- Η H 422,4

fenyl . fenyl JL J

3A-4 2-chloor- 4-chloor- Η H 400,0 fenyl . fenyl 3A-5 2-chloor- 4-chloor- Η. H 398,2 fenyl ' fenyl y^~^ 3A-6 2-chloor- 4-chloor- Η H ^_. 412,3 fenyl fenyl 3A-7 . 2,4- . 4-chlóor- Η. H 420,0 dichloor- fenyl y^ fenyl_____;__|___;_;__.

102 6028- 88 3A-8 2,4- 4-chloor- Η Η. 434,1 dichloor- fenyl J/' . _ fenyl _____'___._.__ 3A-9 4-chloor- 2-chloor- Η H 386,1 '

fenyl fenyl Λ , M

3A- 4-chloor- 2-chloor- Η H 412,4 10 fenyl fenyl x> 3A- 4-chloor- 2-chloor Η H 426,4 11 fenyl fenyl ; 3A- 4-chloor- 2-chloor- Η H 438,1 12 fenyl fenyl fTj 3A- 4-chloor- 2-fluor- Η H _. 396,4 13 fenyl fenyl 3A- 4-chloor- 2-fluor- Η H 410,5

14 fenyl fenyl JLJ

3A- 4-chloor . 2-Chloor- Η' H 427,3 15 fenyl fenyl ^J^yBoc 3A- 2-chloor 4-chloor- Η H 427,3 \ NBoc 16 fenyl fenyl 1^1 (M+l- ___. __. ·' ._____Boe) 3A- 4-chloor 2-chloor- Η H 527,1 Π fenyl fenyl 3A- 4-chloor- 2-chloor- Η H .. 513,1 18 fenyl fenyl JZyNBoc

Voorbeeld 4 illustreert , de bereiding van verbindingen van de onderhavige uitvinding waarbij A staat voor kool- 1 02 6028.’ 89 stof, B voor stikstof (imidazóolderivaten) en X voor een binding.

Voorbeeld 4. Bereiding· van 2-(4-Chloorfenyl)-5-5 cyclopentyl-1-(2-fluorfenyl)-5,6-dihydro-lH-pyrrolo[3,4-c] imidazool-4--on (4A-1) ' - ς> .

15

Cl 4A-1 20 Een mengsël van 2-(4-chloorfenyl)-5- cyclopentylaminomethyl-1-(2-fluorfenyl)-lH-imidazool-4-carbonzuur I-5k (1,2 g, 2,59 mmol), EDC (994 mg, 5,18 mmol), HOAt (704 mg, 5,18 mmol), en triethylamine (1,1 ml, 7,76 mmol) in CH2CI2 (200 ml) werd 17 uur bij kamertempera-25 tuur geroerd. Het reactiemengsel werd gewassen met verzadigd NaHC03 in water, verzadigd NaCl in water, gedroogd en in vacuo geconcentreerd. Het ruwe residu werd gezuiverd op Si02-gel met behulp van een oplosmiddelgradiënt van 30% EtOAc/hexanen tot 60% EtOAc/hexanen wat 4A-1 (752 mg, 73%) 30 opleverde als een witte vaste stof: +APCI-MS (M+l) 396,2; XH-NMR (CDCI3) : 5 7,61-7,59 (m, 2H), 7,42-7,37 (m, 6H), 4,60 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 2,0 (m, 2H), 1,8-1,65 (m, 6H).

De in Tabel 4 hieronder opgenoemde verbindingen werden bereid vólgens werkwijzen analoog aan de hierboven be-35 schrevene voor de synthese . van Verbinding 4A-1, met. gebruikmaking van de juiste ..uitgangsmaterialen die commercieel verkrijgbaar zijn, of te bereiden volgens in het vak- 102 6020 - 90 gebied welbekende werkwijzen, of op een wijze analoog aan de hierboven voor andere tussenproducten beschreven routes. De hieronder opgenoemde verbindingen werden aanvankelijk geïsoleerd als de vrije base en vervolgens omgezet 5 tot het bijbehorende hydrochloridezout voorafgaand aan testen in vivo (indien in vivo getest).

Tabel 4 10 R4 ir R1 15 R°

Exp. R° R1 . R4 +ES-MS

nr.______ (M+l) 4A-2 4-chloorfenyl 2,4-dichloor- 446,0 feny1 4A-3 4-chloorfenyl 2,4-dichloor- 460,0 £enyl 4A-4 4-chloorfenyl 2,4-dichloor- . -CH2CF3 460,0 . ___fenyl____.__’ 4A-5 4-chloorfenyl 2-chloorfenyl 386,3 4A-6 4-chloorfenyl 2-chloorfenyl 412,2 4A-7 4-chloorfenyl 2-chloorfenyl 426,0 1 02 6028 - ... 91. . , ·· _ 4A-8 . 4-chloorfenyl’ 2-flüorfenyl 41^,2 4A-9 4-chloorfenyl 2-fluorfenyl .. 424,3 Ü 4A-10 4-fluorfenyl 2-fluorfenyl 380,2 x> 4A-11 4-fluorfenyl 2-chloorfenyl ___ 396,2 4A-12 2-chloorfenyl 4-chloorfenyl 412,2 4A-13 2-chloorfenyl 4-chloorfenyl yi^y} 4^6,2 4A-14 2,4- 4-chloorfenyl ^ 460,2

dichloorfenyl X J

Voorbeeld 5 illustreert de bereiding van verbindingen van de onderhavige uitvinding waarbij A staat voor koolstof, B voor stikstof, en X voor -C(R2e) (R2b) .

5

Voorbeeld 5. Bereiding van 2-(4-Chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-5-cyclopentyl-l,5,6,7-tetrahydro-imidazo[4,5-c]pyridine-4-on (5A-1) 10 3.5 ’ r 0260.28-·,.

92 : ν: £ 10 ** 5A-1

Een mengsel van 2-(4-chloorfenyl)-1-(2-chloorfenyl)-15 5-(2-cyclopentylamino-ethyl)-lH-imidazool-4-carbonzuur 1> 5j (20 mg, 0,046 mmol)., EDC (19 mg, 0,1 mmol), HOAt (13 mg, 0,1 mmol), en triethylamine (14 μΐ, 0,1 mmol) in 1,2-dichloorethaan (20 ml) werd 17 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd gewassen met verzadigd 20 NaHC03 in water en de bicarbonaatoplossing werd eenmaal te- . ruggeëxtraheerd met CH2CI2. De gecombineerde CH2CI2-extracten werden gedroogd en in vacuo geconcentreerd. Het residu werd opgelost in diethylether (1 ml) en meerdere druppels 4 M HC1 in dioxaan werden toegevoegd. De organi-25 sche oplossing werd afgeschonken en extra ether werd toe-gevoegd. Het mengsel werd een aantal minuten geroerd en het oplosmiddel werd weer afgeschonken. Het residu werd gedroogd onder vacuüm wat het gewenste product 5A-1 opleverde als een kleurloze vloeistof: +APCI-MS (M+l) 426,3; 30 1H-NMR (CDCI3) : δ 7, 62-7,57 (m, lH) , 7,53-7>47 (m, 1H), 7,44-7,39. (m, 1H), 7,37-7,33 (m, 2H), 7,32-7,28 (m, 1H), 7,24-7,19 (m, 2H), 5,16-5,06 (m, 1H), 3,56-3,50 (m, 2H), 3,26-3,17 (m, 2H), 2,71-2,56 (m, 2H), 1,92-1,83 (m, 2H), 1,76-1,46 (m, 4H).

.35

Voorbeeld 6 illustreert de.bereiding van verbindingen van de onderhavige uitvinding waarbij A staat voor stik- . 1 02 6028 r 93 . stof, B voor koolstof, X voor een bnding en R3a en R3b voor waterstof, alkyl, en arylalkyl.

Voorbeëld 6. Bereiding van 3-(4-Chloorfenyl)-2-(2-5 chloorfenyl)-5-isopropyl-4-methyl-4,5-dihydro-2H- pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on (6A-1)

V

10 : ''VV0 • u 20 6A-1

Aan een oplossing van 3-(4-chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-5-isopropyl-4,5-dihydro-pyrrolo[3,4-c)pyrazbol-6-on 3A-1 (19 mg, 0,05 mmol) in THP (0,5 ml) bij -78PC werd LiHMDSi (55 μΐ, 0,055 mmol) toegevoegd. Een 25 diep blauwzwarte oplossing werd gevormd. Het reactiemeng-sel werd 0,17 uur geroerd en vervolgens werd druppelsgewijs joodmethaan (4,4 μΐ, 0,07 mmol) toegevoegd. Het reac-tiemengsel werd 0,25 uur bij -78eC geroerd (tot zich een gele kleur vormde) en 2 uur bij kamertemperatuur, gestopt 30 met verzadigd NH«C1 in water, en geëxtraheerd met EtOAc. De organische oplossing werd gewassen met verzadigd NaCl in water, gedroogd, en in vacuo geconcentreerd. Het residu werd gezuiverd op 1 mm chromatotronplatén met behulp van een 1:1 EtOAc-oplóssing wat 6A-1 opleverde als een witte 35 vaste stóf (3,2 mg, 14%): +ES-MS (M+l) 400,3; 1H-NMR (CD-CI3) : δ 7,4-7,3 (m, 4H), 7,28-7,24 (m, 2H), 7,1-7,06 (m, ‘ * .· * · * j 1026023j 94 2H), 4,84-4,77- (m, 1H), 4,37-4,27 (m, 1H), 1,48-1,4 (m, 9H) .

De in Tabel 6 hieronder opgenoemde verbindingen wer- . den bereid volgens werkwijzen analoog aan de hierboven be-5 schrevene voor dè synthese van Verbinding 6A-1, met gebruikmaking van de juiste uitgangsmaterialen die commercieel verkrijgbaar zijn, of te bereiden volgens in het vakgebied welbekende werkwijzen, of op een wijze analoog aan de hierboven voor andere tussenproducten beschreven rou- 10 tes.

Tabel 6 R4 15 K \ / R° 20 ___, _

Exp. R° R1 R3· R3b R4 +APCI

nr. MS

________ (M+D

6A-2 2-chloor- 4-chloor- H 476,3 f enyl fényl 6A-3 2-chloor- 4-chloor- J 566,4 fenyl fenyl

Voorbeeld 7 illustreert de bereiding van verbindingen van de onderhavige uitvinding waarbij.A staat voor stikstof, B voor koolstof, X voor eèn bnding en R4 voor pyrro-25 lidine-3-yl, piperidine-3-yl, piperidine-4-yl.

1026028- 95

Voorbeeld 7. Bereiding 'van 3-(4-Chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-5-(l-isópropylpiperidine-4-yl)-4,5-dihydro- . 2H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-6-on (7A-1) 5 , . io < 7A-1 ,

Een oplossing van 4-[3- (4-chloorfenyl)-2-(2-chloorfenyl)-6-oxo-2,6-dihydro-4H-pyrrolo[3,4-c]pyrazool-20 5-yl]-pipèridine-lr-carbonzuur-tert-butylester 3A-17 (80 mg, 0,152 mmol) in 1:5 geconc. HCl/EtOH (6 ml) werd 2 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd in vacuo geconcentreerd wat een witte vaste stof opleverde.

Een mengsel van hét in de voorgaande stap verkregen 25 product (30 mg, 0,065 mmol), 2-*broompropaan (24 mg, 0,194 mmol), K2C03 (45 mg, 0,323 mmol) in DMF (2 ml) werd 17 uur. bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd 0,17 uur geroerd en vervolgens werd druppelsgewijs joodmethaan (4,4 μΐ, 0,07 mmol) toegevoegd. Het reactiemengsel wérd 30 verdund met EtOAc en gewassen met H20 en verzadigd NaCl in water, gedroogd en in vacuo geconcentreerd. Het residu werd eenmaal azeotroop gedestilleerd mét heptaan om alle DMF te verwijderen en gezuiverd via Si02-gelchromatografie met behulp van 5% Et2NH/EtOAc wat een olie opleverde: ΧΗ-35 NMR (CDC13) : δ 7,62-7,45 (m, 4H), 7,39-7,32 (d, 2H), 7,23- 7,2 (d, 2H), 4,60 (s, 2H), 4,18 (m, 1H), 3,10-3,03 (m, 1026028-’ 96 1H), 1,96-1/ 90 (m, 4H), 1,30-1,25 (m, 4H), 1,09-1,07 (d, • 6H) . '·

Het product van de bovenstaande reactie Werd 0,25 uur geroerd in 4 M HCl/dioxaan (1 ml) en onder vacuüm gecon-5 centréerd wat 7A-1 opleverde als een amorfe vaste stof (2 mg, 6%).

De in Tabel 7 hieronder opgenoemde verbindingen werden bereid volgens werkwijzen analoog aan de hierboven beschrevene voor de synthese van Verbinding 7A-1, met ge-10 bruikmaking van de juiste uitgangsmaterialen die commercieel verkrijgbaar zijn, of te bereiden volgens in het vakgebied welbekende werkwijzen, of op een wijze analoog aan de hierboven voor andere tussenproducten beschreven routes . De hieronder öpgenoemde verbindingen werden aanvanke-15 lijk geïsoleerd als de vrije base en vervolgens omgezet tot het bijbehorende hydrochloridezout voorafgaand aan testen in vivo (indien in vivo getest).

Tabel 7 20 R4

R3bv I

w4A*o·.·.

25 N

R°

Exp. R° R1 R3* R3b R4 +ES-

nr. MS

___· ___ (M+l)' 7A-2 4rchloor- 2-chloor- Η Η ^ 1 469,2 f N ^ ·.

fenyl fenyl I J

7A-3 4-chloor- 2-chloor- Η H 455,2

fenyl fenyl JL-J

1 02 602Ö-: I . ' . 97 _. .

7A-4 4-chloor- 2-chloor- Η Η 469,1 fenyl ... fenyl 7A-5 4-chlóor- 2-chloor- Η H. 455,1 fenyl fenyl 7A-6 4-chloor- 2-chloor- Η H ___ , 455,3 fenyl fenyl JkyN \

Voorbeeld 8 illustreert de bereiding van verbindingen van. de ondèrhavige uitvinding met de Formule (II) of (IV).

5 Voorbeeld 8. Bereiding van 3-(4-Chloorfenyl)-2-(2- chloorfenyl)-5-isopropyl-2,4,5,6-tetrahydro-2H-pyrrolo[3,4-c3pyra2Qol (8A-1) 10 · Y ·

15 : . jpV^CI

··' 8A-1 20 Een oplossing van 3-(4-chloorfenyl)-2-(2- chloorfenyl)-5-isopropyl-4,5-dihydro-2H-pyrroloI3,4-c]pyrazool-6-ón 3A-1 (7 mg, 0,018 mmol) en BH3*THF (166 ml, 166 mmol) werd ,1 uur bij kamertemperatuur geroerd en 17 uur bij 5Ö°C. Nadat het reactiemengsel was afgekoeld tot 25 kamertemperatuur werd MeOH (5 ml) toegevoegd. Het reactiemengsel. werd 2 uur onder refluxen verhit, afgeloeid tot kamertemperatuur, en in vacuo geconcentreerd. Het residu werd verdund met 4 M HCl/dioxanen (1 ml) en onder vacuüm 1 02 6028.

98 cëconcentreerd. Het residu werd opgelost in CH2CI2 en hexa-nen werden toegevöegd waardoor 8A-1 precipiteerde als een kleurloze vaste stof (2 mg, 27%):+APCI-MS (M+H) 372,5; ’lH-NMR (CD3OD) : 6 7,59-7,43 (m, 4H), 7,38 (d, 2H), 7,20 (d, 5 2H), 4,80-4,65 (m, 2H), 3,91^3,82 (m, 1H), 3,68-3,55 (m, 2H), 1,52 (d, 6H).

De in Tabel 8 hieronder opgenoemde verbindingen werden bereid volgens werkwijzen analoog aan de hierboven beschrevene voor de synthese van Verbinding 8A-1, met ge-10 bruikmaking van de juiste uitgangsmaterialen die commercieel verkrijgbaar zijn, of te bereiden volgens in het vakgebied welbekende werkwijzen, of. op een wijze analoog aan de hierboven voor andere tussenproducten beschreven routes . De hieronder opgenoemde verbindingen werden aanvanke-15 lijk geïsoleerd als de vrije base en vervolgens omgezet tot het bijbehorende hydrochloridezout voorafgaand aan testen in vivo (indien in vivo getest).

Tabel 8 20 *?4 N.

• N

25 ; - ί*

Exp. R° R1 R4 MS (MH) + nr. ·' '__, __·__ 8A-2 4-chloorfenyl 2-fluorfenyl 396'5 8A-3 2,4- 4-chloorfenyl 434,4

dichloorfenyl JO

FARMACOLOGISCHE TESTEN

102 6020- 99

De bruikbaarheid van de verbindingen van de onderhavige uitvinding in de uitoefening van de onderhavige uitvinding kan worden aangetoönd door activiteit in ten minste één van de hieronder beschreven werkwijzen. De volgen-5 de afkortingen worden gebruikt in de hieronder beschreven werkwijzen.

BSA - runderserumalbumine DMSO - dimethylsulfoxide .

EDTA - ethyleendiamine-tetra-azijnzuur 10 PBS- fosfaatgebufferde zoutoplossing EGTA - ethyleenglycol-bis(β-aminoethylether)-N,N,N' , N'-rtetra-azijnziiur GDP - guanosinedifosfaat sc - subcutaan 15 po - oraal ip - intraperitonea'al icv - intracerebroventriculair iv - intraveneus [3H]SR141716A - radiogelabeld N-(piperidin-l-yl)-5-(4-20 chloorfenyl)-1-(2,4-dichloorfenyl)-4-methyl-lH-pyrazool-3-carboxamide-hydrochloride verkrijgbaar bij Amersham Bios-ciences, Piscataway, NJ.: [3H]CP-55940 - radiogelabeld 5-(1,1-dimethylheptyl)-2-[5-hydroxy-2-(3-hydroxypropyl)-cyclohexyl]-fenol verkrijg-25 baar bij NEN Life Science Products/ Boston, MA.

AM251 - N-(piperidine-l-yl)-l-(2,4-dichloorfenyl)-5-(4-joodfenyl)-4-methyl-lH-pyrazool-3-carboxamide verkrijgbaar bij Tocris1H/ Ellisville, MO. .

Alle in de Voorbeeldensectie hierboven genoemde ver-30 bindingen werden getest in het hieronder beschreven CB-1-receptorbindingsassay. De verbindingen vertoonden bin-dingsactiviteiten liggend tussen 0,6 nM en 2500 nM.

Verbindingen met een activiteit <20 nM werden vervolgens getest met het CB-l-GTPy-[3SS]-bindingsassay en het 35 CB-2-bindingsassay, die hieronder in de sectie Biologische Bind.ingsassays zijn beschreven. Geselecteerde verbindingen worden vervolgens in vivo getest met behulp van één of 1 02 6028-· ' 100 meer van de hieronder in. de sectie Biologische Functionele

Assays beschreven functionele assays.

Biologische Assays In Vitro 5 Bioassaysystemen voor het bepalen van de CB-1- en CB- 2-bindingse.igenschappen en de farmacologische activiteit van cannabinoïdreceptorliganden worden beschreven door Rö-ger G. Pertwee in "Pharmacology of Cannabinoid Receptor Ligarids", Current Medicinal Chemistry, 6, 635-664 (1999) 10 en in WO 92/02640 (Amerikaanse octrooiaanvrage 07/564,075 ingediend op 8 augustus, 1990, hier bij referentie opgenomen ) .

De volgende assays werden ontworpen om verbindingen te detecteren die de binding van [3H]SR141716A (selectief 15 radiogelabelde CB-l-ligand) en [3H] 5-(1,1-dimethylheptyiJ.) - 2-[5-hydroxy-2-(3-hydroxypropyl)-cyclohexyl]-fenol; radio-gelabeld CB-l/CB-2-ligand) aan hun respectievelijke receptoren remmen.

Ratten-CB-l-Receptorbindingsprotocol 20 PelFreeze hersenen (verkrijgbaar bij Pel Freeze Bio- logicals, Rogers, Arkansas) werden in stukjes gesneden en in weefselbereidingsbuffer (5 mM Tris-HCl, pff = 7,4. en 2 mM EDTA) geplaatst, bij hoge snelheid gepolytrond en 15 minutèn op ijs gehouden. Het homogenisaat werd vervolgens 25 5 minuten bij 4°C afgedraaid bij 1000 X g. Het supernatant werd 1 uur bij 4°C gecentrifugeerd bij 100000 X g. De resulterende pellet werd vervolgens geresuspendeerd in 25 ml TME (25 nM Tris, pH = 7,4, 5 mM MgCl2, en 1 mM EDTA) per gebruikte hersenen. Een eiwitassay werd uitgevoerd en 200 30 μΐ weefsel, overeenkomend met 20 ug, werd aan het assay toegevoegd.

De testverbindingen werden verdund in geneesmiddel-buffer (0,5% BSA, 10% DMSO en TME) en vervolgens werd 25 μΐ óvergebracht in een polypropyleenplaat met diepe put-35 jes. [3H]SR141716A werd verdund in een ligandbuffer (0,5% BSA plus TME) en 25 μΐ werd toegevoégd aan de plaat. Een BCA-eiwitassay werd gebruikt om de juiste weefselconcen- 102 6028 - 101 tratie te bepalen en vervolgens werd 200 μΐ rattenhersenweefsel met de juiste concentratie toegevoegd aan de plaat. De platen werden bedekt en 60 minuten bij 20eC in een incubator geplaatst. Aan het èinde van de incubatiepe-5 riode werd 250 μΐ stopbuffer. (5% BSA plus TME) toegevoegd aan de reactieplaat. De platen werden vervolgens met behulp van een Skatron geoogst öp GF/B-filtermatten die waren voorgeweekt in BSA (5 mg/ml) plus TME. Elk filter werd tweemaal gewassen. De filters werden overnachts gewassen. 10 De volgende ochtend werden de filters geteld op een Wallac Betaplate**-teller (verkrijgbaar bij Perkin Elmer Life Sciences**, Boston, MA).

Humane-CB-l-Receptorbindingsprotocol

Humane embryonale nier-293 (HEK 293) cellen getrans-15 fecteerd met .CB-l-receptör-cDNA (verkregen van Dr. Debra Kendall, üniversity of Conriecticut) werden geo'ogst in ho-mogenisatiebuffer (10 mM EDTA, 10 mM EGTA, 10 mM natriumbicarbonaat, proteaseremmers; pH = 7,4), en gehomogeniseerd net een Dounce homogenisator. Het homogenisaat werd 20 vervolgens 5 minuten bij 4eC afgedraaid bij 1000 X g. Het supernatant werd 20 minuten bij 4°C gecentrifugeerd bij 25000 X g. De resulterende pellet werd vervolgens geresus-pendeerd in 1 ml TME (25 mM Tris buffer (pH « 7,4) met 5 mM MgCl2 en 1 mM EDTA) . Een eiwitassay werd uitgevoerd en 25 200 μΐ weefsel, overeenkomend met 20 pg, werd aan het as- say toegevoegd. .·'

De testverbindingen werden verdund in geneesmiddel-buffer (0,5% BSA, 10% DMSO en TME) en vervolgens werd 25 μΐ' ovèrgebracht in een polypropyleenplaat met diepe put-30 jes. [3H]SR141716A werd verdund in een ligandbuffer (0,5% BSA plus TME) en 25 μΐ werd toegevoegd aan de plaat. De platen werden bedekt en 60 minuten bij 30eC in een incubator geplaatst. Aan het einde van de incubatieperiode werd 250 μΐ stopbuffer (5% BSA plus TME) toegevoegd aan de re-35 actieplaat. De platen werden vervolgens met behulp van een Skatron.geoogst op GF/B-filtermatten die waren voorgeweekt in BSA (5 mg/mlj plus TME. Elk filter werd tweemaal gewas- - . :1 02 6028 - - 102 sen. De filters werden overnachts gewassen. De volgende ochtend werden de filters geteld op een Wallac Betaplate™-teller (verkrijgbaar bij Perkin Elmer Life Sciences™, Boston, MA) .

5 CB-2-Receptorbindinqsprotocol

Chinese-hamster-ovarium-Kl- (CHO-K1) cellen getrans-fecteérd met CB-2-cDNA (verkregen van Dr. Debra Kendall, University of Connecticutj werden geoogst in weefselberei-dingsbuffer (5 mM Tris-HCl-buffer (pH = 7,4) met 2 mM 10 EDTA), bij hoge snelheid gepolytrond en 15 minuten op ijs gehouden. Het homogenisaat werd vervolgens 5 minuten bij 4 °C afgedraaid bij 10.00 X g. Het supernatant . werd 1 uur bij 4eC gecentrifugeerd bij 100000 X g. De resulterende pellet werd vervolgens geresuspendeerd in 25 ml TME (25 mM 15 Tris (pH = 7,4) met 5 mM MgCl2, en 1 mM EDTA) per gebruikte hersenen. Een eiwitassay werd uitgevoerd en 200 μΐ weefsel, overeenkomend met 10 pg, werd aan het assay toegevoegd .

De testverbindingen werden verdund in geneesmiddel-20 buffer (0,5% BSA, 10% DMSO en 80,5% TME) en vervolgens werd 25 μΐ ovérgebracht in een polypropyleenplaat met diepe putjes. [3H]5-(l,l-Dimethyl-heptyl)-2-[5-hydroxy-2-(3- . hydroxy-propyl)-cyclohexyl]-fenol werd verdund in een li-gandbuffer (0,5% BSA en 99,5% TME) en 25 μί werd toege-25 voegd aan elk putje in een concentratie van 1 nM. Een BCA-eiwitassay werd gebruikt om de juiste weefselconcentratie te bepalen en vervolgens werd 200 μί weefsel met de juiste concentratie toegevoegd aan de plaat. De platen werden bedekt en 60 minuten bij 30°C in een incubator geplaatst.

30 Aan het einde van de incubatieperiode werd 250 μί stopbuf-fer (5% BSA plus TME) toegevoegd aan de reactieplaat. De platen werden vervolgens met behulp van een Skatron geoogst op GF/B-filtermatten die waren voorgeweekt in BSA (5 mg/ml) plus TME. Elk filter werd tweemaal gewassen. De 35 filters werden overnachts gewassen. De volgende ochtend werden de filters geteld op een Wallac Betaplate™-teller.

CB-l-GTPy[35S] Bindinqsassay 1 02 6020- 103

Membranen werden bereid uit CHO-Kl-cellen die stabiel wa-ren getransfecteerd met humaan-CB-l-receptor-cDNA. Membranen werden bereid uit cellen zoals beschreven door Bass et al, in "Identification and characterization of novel soma-5 tostatin antagonists," Molecülar Pharmacology, 50, 709-715 (1996). GTPy[35S]-bindingsassays werden uitgevoerd in een 96-puts-FlashPlate”‘-formaat in duplo met gebruikmaking van 100 pM GTPy[35S] en 10 pg membraan per putje in assaybuffer bestaande uit 50 mM Tris-HCl, pH 7,4, 3 mM MgCl2, pH 7,4, 10 10 mM MgCl2, 20 mM EGTA, 100 mM NaCl, 30 μΜ GDP, 0,1 % run de rserumalbumine en de volgende proteaseremmers: 100 pg/ml bacitracine, 100 pg/ml benzamidine, 5 pg/ml aprotinine, 5 pg/ml leupeptine. Het assaymengsel werd vervolgens 10 minuten gelncubeèrd met toenemende concentraties aan antago-15 nist (10"10 M tot ΙΟ-5 M) en getest met de canabinoïde ago-nist 5-(l,l-dimethyl-heptyl)-2-[5-hydroxy-2-(3-hydroxy-propyl)-cyclohexyl]-fenol (10 μΜ) . Assays werden bij 30°C uitgevoerd gedurende één uur. De FlashPlates"· werden vervolgens 10 minutén gecentrifugeerd bij 2000 X g. Stimula-20 tie van GTPy[35S]-binding werd vervolgens gekwantificeerd met behulp van een Wallac Microbeta. ECso-berekeningen werden uitgevoerd met Prism*“ van Graphpad.

Inverse agonisme werd gemeten in afwezigheid van ago- nist.

25 CB-l-FLIPR-gebaseerd Functioneel Assayprotocol

Voor dit assay werden met humaan CB-l-receptor-cDNA (verkregen van Dr. Debra Kendall, University of Connecti-cut) en het promiscue G-eiwit G16 gecotransfecteerde CHO-Kl-cellen gebruikt. Cellen werden 48 uur van te voren uit-30 geplaat bij een concentratie van 12500 cellen per putje op met collageen bedekte 384-puts-zwart-helder-assayplaten. Dé cellen werden gedurende één uur geïncubeerd met 4 μΜ Fluo-4 AM (Molecülar Probes) in DMEM (Gibco) met 2,5 mM probenecide en pluronzuur (0,04%). De platen werden ver-35 volgens driemaal gewassen met HEPES-gebufferde zoutoplossing (met probenecide; 2,5.mM) om overmaat kleurstof te verwijderen. Na 20 min werden de platen afzonderlijk aan 102 6028- 104 het FLIPR toegevoegd en fluorescentieniveaus werden continu gevolgd gedurende een periode van 80 s. Toevoegingen van verbindingen werden simultaan uitgevoerd aan alle 384 putjes na 20 s achtergrondmeting. Assays werden in triplo 5 uitgevoerd en uit 6 punten bestaande concentratie-respons-curves. werden gegenereerd. Antagonistische verbindingen werden vervolgens getest met 3 μΜ WIN55212-2 (agonist).

. Gegevens werden geanalyseerd mét Graph Pad Prism.

Dëtectie van inverse agonisten 10 Het volgende cyclisch-AMP-assayprotocol waarbij in tacte cellen worden gebruikt werd gebruikt om inverse ago-nistactiviteit te bepalen.

Cellen werden uitgeplaat in een 96-putsplaat bij een uitplaatdichtheid van 10000-14000 cellen per putje in een 15. volume van 100 μΐ per putje. De platen werden 24 uur geïncubeerd in een incubator van 37°C. Het medium werd verwijderd en medium zonder serum (100 μΐ) werd toegevoegd. De platen werden vervolgens .18 uur bij 37eC geïncubeerd.

Serumvrij medium met 1 mM IBMX werd aan elk putje 20 toegevoègd gevolgd door 10 μΐ testverbinding (1:10 stock-oplossing (25 mM verbinding in DMSO) in 50% DMSO/PBS) 10 X verdund in PBS met 0,1% BSA. Na 20 minuten incubatie bij 37 °C, werd 2 μΜ Forskoline toegevoegd waarna nog 20 minuten werd geïncubeerd bij 37eC. Het medium werd verwijderd, 25 100 μΐ 0,01 N HG1 werd toegevoegd waarna 20 minuten werd geïncubeerd bij kamertemperatuur. Cellysaat (75 μΐ) plus 25 μ! assaybuffer (geleverd in de FlashPlate*· cAMP-assaykit verkrijgbaar bij NEN Life Science Products Boston, MA) in een FlashPlate. cAMP-standaarden en cAMP-30 tracer werden toegevoegd volgens de werkwijze van de kit. De FlashPlate werd vervolgens 18 uur bij 4°C geïncubeerd. De inhoud van de putjes werd af gezogen en geteld in een Scintillatieteller.

35 Biologische Assays Iii Vivo

Er is aangetoönd dat annabinoïde agonisten zoals Δ9-tetrahydrocannabinol (A9-THC) en 5-(1,1-dimethyl-heptyl)- .1 02 60280 105 ; .2-[5-hydroxy-2-(3-hydroxy-propyl)-cyclohexyl]fenol vier karakteristieke gedragingen in muizen beïnvloeden, die gezamenlijk bekend staan als de Tretrade. Zie voor een beschrijving van deze gedragingen: Smith, P.B., et al. in 5 "The pharmacological activity o.f. anandamide, a putative endogenous cannabinoid, in mice", J. Pharmacol. . Exp. Ther., 270(1),. 219-227 (1994) en Wiley, J., et al. in "Discriminative stimulus effects of anandamide in rats", Eur. J. Pharmacol., 276(1-2), 49-54 (1995). Reversie . van 10 deze activiteiten in de hieronder, beschreven Locomotorac-tiviteit-, Cataiepsie-, Hypothermie-, en Hete- Plaat-assays vormt een test op in vivo activiteit van CB-1-antagonisten.

Alle data zijn weergegeven als % reversie ten opzich-15 te van alleen agonist, met gebruikmaking van de volgende formule: (5-(1,1-dimethylheptyl)-2-[5-hydroxy-2-(3- hydroxy-propyl)-cyclohexyl]fenol/agonist - vehi- cle/agonist)/(vehicle/vehicle - vehicle/agonist). Negatieve getallen duiden op een versterking van de agonistacti-20 viteit of non-antagonist-activiteit. Positieve getallen duiden op een reversie van de activiteit voor die specifieke test.

Locomotoractiviteit

Mannelijke ICR-muizen (n=6) (17-19 g, Charles River 25 Laboratories, Ine., Wilmington, MA) werden voorbehandeld met testverbinding (sc, po, ip, of icv). Vijftien minuten later, werden de muizen beproefd met 5-(l,l-dimethyl-heptyl)-2-[5-hydroxy-2-(3-hydroxypropyl)-cyclohexyl]-fenol (sc). Vijfentwintig minuten ria de agonist-injectie, werden 30 de muizen, in doorzichtige acrylaatkooien (431,8 cm x 20,9 cm x 20,3. cm) met schoon zaagsel geplaatst. De subjecten kregen in totaal ongeveer 5 minuten de gelegenheid om de omgeving te verkenen en de activiteit werd vastgelegd met behulp van infrarood-beweginsgdetectoren (verkrijgbaar bij 35 Coulboürn Instruments*’·, Allentown, PA) die bovenop de kooien waren geplaatst'. De gegevens werden met behulp van 1 02 6028-' 106 de computer verzameld en uitgedrukt als "bewegingseenhe-den". ·.' ' . . . Catalepsie

Mannelijke ICR-muizen (n=6) (17-19 g bij aankomst) 5 werden voorbehandeld met testverbinding (sc, po, ip, of icv). Vijftien minuten later, werden de muizen beproefd met 5-(l,l-dimethylheptyl)-2-[5-hydroxy-2-'(3- hydroxypropyl)-cyclohexyl]-fenol (sc). Negentig minuten na . injectie, werden de muizen op een stalen ring van 6,5 cm 10 geplaats, die was gekoppeld aan een ringstandaard op een hoogte van ongeveer 12 inch. De ring was in een horizontale oriëntatie geplaatst en de muis. werd in de holte van de ring gehangen waarbij de voor en achterpootjes de omtrek vastgreperi. De tijdsduur dat de mius volledig bewegings-15 loos bleef (met uitzondering van ademhalingsbewegingen) werd vastgelegd gedurende een periode van 3 minuten. De gegevens werdén gepresenteerd als een procentuele immobi-liteitswaarde. De waarde werd berekend door het aantal seconden dat de muis bewegingsloos blijft te delen door de 20 totale tijdsduur van de observatiepreiode en het resultaat te vermenigvuldigen met 100. Een percentage reversie van de agonist werd vervolgens berekend.

Hypothermie

Mannelijke ICR-muizen (n=5) (17-19 g bij aankomst) 25 werden voórbehandeld met testverbinding (sc, po, ip, of icv). Vijftien minuten later, werden de muizen beproefd met de cannabinoïde agonist 5-(l,l-dimethylheptyl)-2-[5-hydroxy-2-(3-hydroxypropyl)-cyclohexyl]-fenol (sc). Vijfenzestig minuten na agonistinjectie, werden rectale li-30 chaamstemperaturen gemeten. Dit werd gedaan door een kleine thermostaatsonde ongeveer 2-2,5 cm in het rectum te in-serteren. Temperaturen werden vastgelegd met een nauwkeurigheid van eentiende graad.

Hete Plaat 35 Mannelijke ICR-muizen (n=7) (17-19 g bij aankomst) worden voorbehandeld met testverbinding (sc, po, ip, of icv). Vijftien minuten later, werden de muizen beproefd 1 026020.

107 met een cannabinoïde agonist 5-(l,l-dimethyl-heptyl)-2-.[5-hydroxy-2-(3-hydrgxypropyl)-cyclohexyl)-fenol (sc). Vijfenveertig minuten later werd elke muis getest op reversie van analgesie met behulp van een standaard hete-plaat-5 meter (Columbus Instruments) . De hete plaat was 10" x 10" x 0,75" met èen omringende doorzichtige acrylaatwand. Latentie in trappen met, likken aan of schudden met de achterpoten of van het platform te springen werd vastgelegd met een nauwkeurigheid van eentiende seconde. De tijdmeter 10 werd door de experimentator geactiveerd en elke test had een afbreekwaarde van 40 seconden. Data werden weergegeven als percentage reversie van de door de agonist geïnduceerde analgesie.

Voedselconsumptie 15 De volgende screening werd gebruikt om de efficiëntie van testverbindingen voor het remmen van voedselconsumptie in Sprague-Dawley-ratten na overnachte vasten te evalueren.

Mannelijke Sprague-Dawley-ratten werden verkregen van 20 Charles River Laboratories, Ine. (Wilmingtoh, MA). De rat-tenw erden individueel gehuisvest en gevoed met poedervor-ming voeder. Zij werden in een 12 uur licht/donkercyclus gehouden en ontvingen voedsel en water ad libitvun. De dieren werden gedurende een preiode van één wek voorafgaand 25 aan testen aan het vivaruim geacclimatiseerd. Testen werden uitgevoerd tijdens het lichtgedeelte van de cyclus.

Om de voedseliname-efficiëntiescrèening uit te voeren werden ratten de middag voorafgaand aan het testen overgebracht in individuele testkooien zonder voedsel, en werden 30 de ratten övernachts onderworpen aan vasten. Na het over-nachtse vasten werd aan de ratten de volgende morgen vehikel of testverbindingen toegediend. Een bekende antagonist (3 mg/kg) werd toegediend als een positieve controle, en een controlegroep ontving alleen vehikel (geen verbin-35 ding). De testverbindingen werden gedoseerd in het bereik tussen 0,1 en 100 mg/kl afhankelijk van de verbinding. Het standaardvehikel was 0,5% (w/v) methylcellulose in water.

1 026028- 108 en de standaardtoedieningsroute was oraal. Indien nodig werden echter verschillende vehikels en toedieningsroutes gebruikt om verschillende verbindingen te accomoderen. Voedsel werd 30 minuten na toediening aan de'ratten ver-5 schaft en het Oxymax geautomatiseerd voedselconsumptiesys-teem (Columbus. Instruments, Columbus, Ohio) werd gestart. Voedselconsumptie van individuele ratten werd continu vastgelegd met een interval van 10 minuten gedurende een periode van twee uur. Indien nodig werd voedselconsumptie 10 handmatig geregistreerd met behulp van een elektronische weegschaal; het voedsel werd iedere dertig minuten gewogen nadat het voedsel was verschaft tot vier uur nadat het voedsel was verschaft. Effectiviteit van de verbindingen werd bepaald door het voedselinamepatroon van met verbin-15 ding behandelde ratten te vergelijken met ratten behandeld met vehikel en met de standaard positieve controle.

Alcoholconsumptie

Het volgende protocol evalueert het effect van alcoholconsumptie in alcoholprefererende (P) vrouwelijke rat-20 ten rats (gekweekt aan de Indiana University) met een langdurige geschiedenis van drankgebruik. De navolgende referenties verschaffen gedetailleerde beschrijvingen van P-ratten: Li, T.-K., et al., "Indiana selection studies on alcohol rèlated behaviors", in Development of Ahimal Mo-25 dels as Pharmacogenetic Tools (red. McClearn C. E., Dei-•trich R.A. en Erwin V. G.), Research Monograph 6, 171-192 (1981) NIAAA, ADAMHA, Rockville, MD; Lumeng, L, et al., "New strains of rats with alcohol preference and nonprefe-rence", Alcohol And Aldehvde Metabolizing Systems, 3, Aca-30 demic Press, New York; 537-544 (1977); en Lumeng, L, ét al., "Different ! sensitivities to ethanol in alcohol-preferring and -non preferring rats", Pharmacol. Biochem. Behav., 16, 125-130 (1982).

Vrouwelijke ratten kregen dagelijks bij het begin van 35 de donkercyclus 2 uur toegang tot alcohol (10% v/v en water, 2-flessen-keuze). De ratten werden gehouden bij een reverse cyclus om- experimentatorwisselwerkingen te vereen- · 1026028- ·.'·'· : · 109.

voudigen. De dieren' werden aanvankelijk ingedeeld in vier groepen met een vergelijkbare alcoholconsumptie: Groep 1 -vehikel (n = 8); Groep 2 - positieve controle (bv. 5,6 mg/kg AM251; n = 8); Groep 3. - lage dosis testverbinding 5 (n = 8); en Groep 4 - hoge dosis testverbinding (η e 8). Testverbindingen werden.in het algemeen gemengd in een vehikel van 30% (w/v). β-cyclodextrine in gedestilleerd water met eén volume van 1-2 ml/kg. Vehikelinjecties werden aan alle groepen gegeven gedurende de eerste twee dagen van 10 het experiment. Dit werd gevolgd door twee dagen van geneesmiddelen j eet ie (aan de betreffende groepen) en een afsluitende dag van vehikelinjectie. Op dé geneesmiddelin-jectiedagen, werden geneesmiddelen sc toegediend 30 minuten voorafgaand . aan een 2-urige periode van toegang tot 15 alcohol. Alcoholconsumptie voor alle dieren werd gemeten tijdens de testperiode en er werd een vergelijking gemaakt tussen met geneesmiddel en met vehikel behandelde dieren om de effecten van de verbindingen op alcoholdrinkgedrag te bepalen.

20 Verder drinkonderzoek werd gedaan met behulp van vrouwelijke C57BI/6-muizen (Charles River). Verschillende onderzoeken hebben aangetoond dat deze stam graag alcohol consumeert zonder, dat enige manipulatie noodzakelijk is (Middaugh et al., "Ethanol Consumption by C57BL/6 Mice: 25 Influence of Gender and Procedural Variables", Alcohol, 17 (3), 175-183, 1999; Lé et al., "Alcohol Consumption by C57BL/6> BALA/c, and DBA/2 Mice in a Limited Access Para-digm", Pharmacology Biochemistry and Behavior, 47, 375- 378, 1994).

30 Voor ónze doeleinden werd muizen (17-19 g) bij aan komst afzonderlijk gehuisvest en kregen zij onbeperkte toegang tot poedervormig rattenvoer, water en een 10% (w/v) alcoholoplossing. Na 2-3 weken onbeperkte toegang werd water dagelijks gedurende 10 uur beperkt en werd al-35 cbhol beperkt tot slechts 2 uur toegang per dag. Dit werd op zodanige wijze gedaan dat. de toegangsperiode bestond 1 02602® - 110 uit de laatste twee uur van het donkere deel van de licht-cyclus....

.Zodra.het drinkgedrag gestabiliseerd was, werd begonnen met de testen. Muizen werden stabiel beschouwd wanneer 5 de gemiddelde alcoholconsumptie gedurende 3 dagen ± 20% van het gemiddelde van alle drie dagen bedroeg. Dag 1 van de test bestond eruit dat alle muizen een vehikelinjectie (sc of ip) ontvingen. Dertig tot 120 minuten na injecte werd toegang gegeven tot alcohol en water. Alcoholconsump-10 tie voor die dag werd berekend (g/kg) en groepen werden zodanig samengesteld dat alle groepen een gelijkwaardige alcoholconsumptie hadden. Op dag 2 en 3 werden de muizen geïnjecteerd met vehikel of geneesmiddel en werd hetzelfde protocol gevolgd als de vorige dag. Dag 4 was een wash-out 15 en werden er geen injecties gegeven. Data werden geanalyseerd met gebruikmaking van herhaalde-meting-ANOVA. Verandering in water- of alcoholconsumptie werd vergeleken terug naar vehikel gedurende elke dag van de test. Positieve resultaten zou worden geïnterpreteerd als een verbinding 20 die in staat was de alcoholconsumptie significant te reduceren zonder effect te hebben op water.

'.··. Zuurstofverbruik Werkwijzen:

Zuurstofverbruik door het hele lichaam wordt gemeten 25 met behulp van een indirecte calorimeter (Oxymax van Colu-mus Instruments, Columbus, OH) in mannelijke Sprague-Dawley-ratten (indien een andere rattenstam of vrouwelijke ratten zijn gebruikt zal dit worden aangegeven). Ratten (300-380 g lichaamsgewicht) worden in de calorimeterkamers 30 geplaatst en·dé kamers worden in activiteitsmonitoren geplaatst . Dit onderzoek wordt gedaan gedurende de lichtcy-clus. Voorafgaand aan de meting van zuurstofverbruik worden de ratten ad libitum gevoederd met standaardvoeder. Tijdens de meting van zuurstofverbruik staat geen voedsel 35 ter beschikking. Basaal pre-dosis-zuurstofverbruik en loopactiviteiten worden elke 1Ö minuten gemeten gedurende 2,5 tot 3 uur. Aan het einde van de basale predoseringspe- 1 02,8028 ·

UI

riode worden de kamers geopend en wordt aan de dieren een enkelvoudige dosis verbinding toegediend (het gebruikelijke dosisbereik is 0,001 tot 10 mg/kg) door middel van orale gavage (of andere toedieningsroute zoals aangegeven, 5 ie. s.c., i.p., i.v.) Geneesmiddelen worden bereid in me-thylcellulose, water of een ander aangegeven vehikel (voorbeelden zijn onder meer PEG400, 30% beta-cyclo- dextran en propyleenglycol). Zuurstofverbruik en loopacti-viteiten worden nog 1-6 na dosering iedere 10 minuten ge-10 meten.

De Oxymax-calorimeterprogrammatuur berekent het zuurstofverbruik (ml/kg/h) gebaseerd op de stroomsnelheid van lucht door de kamers en het verschil in zuurstofgehalte aan de inlaat- en . uitlaatpoorten. De activiteitmonitoren 15 hebben 15 infrarode lichtstralen met een tussen ruimte van één inch op elke as, loopactiviteit wordt geregistreerd wanneer twee opeenvolgende stralen worden verbroken én de . resultaten worden geregistreerd als tellingen.

Zuurstofverbruik in rust, rijdens pre- en post-20 dosering, wordt berekend door de 10-min 02-verbruikswaarden te middelen, met uitsluiting van perioden van hoge loopactiviteit (loopactiviteitstelling > 100) en met uitsluiting van de eerste 5 waarden van de pre-dosis-periode en de eerste waarde van. de post-dosis-periode. Verandering in 25 zuurstofverbruik is weergegeven als percentage en wordt berekend door het post-dosering-zuurstofverbruik in rust te delen door het pre-dosering-zuurstofverbruik. in rust *100. Experimenten worden typischerwijs gedaan met n = 4-6 ratten en gerapporteerde resultaten zijn gemiddelden ± 30. SEM.

Interpretatie:

Een toename in zuurstofverbruik van >10% wordt beschouwd als een positief resultaat. Uit eerdere metingen is gebleken dat met vehikel behandelde ratten geen veran-35 dering in zuurstofverbruik vertonen ten opzichte van de pre-dosis-basiswaarde.

1 026023-

Claims (12)

1. Verbinding met de Formule (I) of (II) O 10 "SAv-n rvk,/^.n 1 x»-R I jo:a-r" r*^* n; r*-t:x^l'b R3" R1 R3* R1 (·) (“1 15 waarbij A staat voor stikstof en B voor koolstof, of A staat voor koolstof en B voor stikstof; R° staat voor een aryl, eventueel gesubstitueerd met 20 één of meer substituenten, of een heteroaryl, eventueel gesubstitueerd met één of meer substituenten; R1 staat voor aryl, eventueel gesubstitueerd met één of meer substituenten, heteroaryl, eventueel gesubstitueerd met één of meer substituenten, -CH=CH-Rla, of -CH2CH2-25 Rla, waarbij Rla staat voor waterstof of een chemische groep gekozen uit (Ci-Ce)alkyl, 3- tot 8-ledige gedeeltelijk of geheel verzadigde carbocyclische ring(en), 3- tot 8-ledige gedeeltelijk of geheel verzadigde heteroring, aryl, heteroaryl, waarbij de chemische groep eventueel is gesubsti-30 tueerd met één of meer substituenten; X staat voor een binding of -C (R2a) (R2b), waarbij R2a en R2b onafhankelijk van elkaar staan voor waterstof, (Ci-C4) alkyl, of halogesubstitueerd (C1-C4)alkyl (bij voorkeur zijn R2a en R2b beide waterstof);

35 R3a en R3b onafhankelijk van elkaar staan voor water stof, (C1-C4)alkyl, of halogesubstitueerd (C1-C4)alkyl; en 1026028“ R4 staat voor een chemische groep gekozen uit (Ci-Ce) alkyl, aryl, heteroaryl, aryl (C1-C4) alkyl, een 3- tot 8-ledige gedeeltelijk of geheel verzadigde carbocyclische ring(en), heteroaryl(C1-C3)alkyl, 5-6-ledig lacton, 5- tot 5 6-ledig lactam, en een 3- tot 8-ledige gedeeltelijk of geheel verzadigde heteroring, waarbij de chemische groep eventueel is gesubstitueerd met één of meer substituenten; een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, een voorloper-geneesmiddel van de verbinding of het zout, of 10 een solvaat of hydraat van de verbinding, het zout of het voorloper-geneesmiddel.

2. Verbinding volgens conclusie 1, waarbij R4 staat voor een chemische groep gekozen uit de groep bestaande 15 uit (Ci-Ce)alkyl, aryl (C1-C4) alkyl, en 3- tot 8-ledige gedeeltelijk of geheel verzadigde carbocyclische ring(en), en 3- tot 8-ledige gedeeltelijk of geheel verzadigde heteroring, waarbij de chemische groep eventueel is gesubstitueerd met één of meer substituenten; 20 een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van de verbinding of het zout.

3. Verbinding volgens conclusie 2, waarbij R4 staat voor (Ci-Ce) alkyl, halogesubstitueerd (C1-C0) alkyl, cyclo- 25 pentyl, cyclohexyl, piperidine-l-yl, pyrrolidine-l-yl, of morfoline-l-yl; een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van de verbinding of het zout.

4. Verbinding volgens conclusie 1, 2, of 3, waarbij A staat voor stikstof en B staat voor koolstof; een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van de verbinding of het zout.

5. Verbinding volgens conclusie 1, 2, of 3, waarbij A staat voor koolstof en B staat voor stikstof; 1026028" een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van de verbinding of het zout.

5 -CONCLUSIES-

6. Verbinding volgens conclusie 4 of 5, waarbij X 5 staat voor een binding; een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van de verbinding of het zout.

7. Verbinding volgens conclusie 4 of 5, waarbij X 10 staat voor -C(R2a) (R2b)-; een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van de verbinding of het zout.

8. Verbinding volgens één van de voorgaande conclu- 15 sies, waarbij R° en R1 onafhankelijk van elkaar staan voor een fenyl gesubstitueerd met 1 tot 3 substituenten die onafhankelijk van elkaar zijn gekozen uit de groep bestaande uit halo, (C1-C4) alkoxy, (Ci-CJalkyl, halogesubstitueerd {C1-C4) alkyl, en cyano; 20 een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, of een solvaat of hydraat van de verbinding of het zout.

9. Verbinding die is 3-(4-chloorfenyl)-2-(2-chloor-fenyl)-6-(2,2-difluorpropyl)-2,4,5,6-tetrahydropyrazolo- 25 [3,4-c]pyridine-7-on.

10. Farmaceutisch preparaat omvattende (1) een verbinding volgens één van voorgaande conclusies, of een solvaat of hydraat van de verbinding of het zout; en (2) een 30 farmaceutisch aanvaardbare excipiënt, verdunningsmiddel, of drager.

11. Preparaat volgens conclusie 10, voorts omvattende ten minste één ander farmaceutisch middel. 35

12. Gebruik van een verbinding volgens conclusie 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 of 9 bij de vervaardiging van een ge- 1028028- neesmiddel voor het behandelen van een ziekte, aandoening of stoornis die wordt gemoduleerd door een cannabinoïdre-ceptorantagonist. 5 -o-o-o- 1026028-