MXPA97007310A - Microesferas novedosas de poli-(lactida/glicolida) de liberacion sostenida sin estallamiento - Google Patents

Abstract

Microcápsulas novedosas biocompatibles y biodegradables de liberación sostenida sin estallamiento que pueden ser programadas para liberar su núcleo activo en duraciones variables que varían de 1 a 100 días en un ambiente fisiológico acuoso;las microcápsulas comprenden un núcleo de polipéptido u otro agente biológicamente encápsulado en una matriz de copolímero de poli(láctida/glicólida) como de forma no bloqueadas (grupo extremo carboxilo libre) y formas bloqueadas en el extremo que varían en relaciones de 100/0 a 1/99.

Description

HICR0E5FERAS NOVEDOSAS DE POLI- (LACTICIDA-GLICOLIDA) DE LIBERACIÓN "SIN ESTALLArtlENTO" INTERESES GUBERNAMENTALES La invención descrita en la presen+e puede ser fabricada, autorizada y usada por o para propósitos gubernamentales sin el pago de ninguna regalía a los autores de la presente. IU REFERENCIA CRUZADA Esta solicitud es una continuación en parte de la solicitud de Patente de los E.U.A. 'Lene No. 08/446,149, 15 presentada el 22 de mayo de 1995.

CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a la provisión de 0 microesferas biocornpatibles y biodegradables novedosas para liberación sostenida prograrnable sin estallido de agentes biológicamente activos, incluyendo polipeptidos, durante un periodo de hasta 100 días en un medio acuoso fisiológico.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN e encuentran disponibles varias publicaciones y patentes para liberación sostenida de agentes activos a parti de polímeros biodegradables, par icularmente ?ol?( lactida/glicolidas) (PLGA). Los usos anteriores de PLGA para .liberación controlada de polipeptidos habían incluido relaciones molares de lactida/glicolida (L/G) de 75/25 a 100/0 para pesos moleculares > 20, 000. Otras preparaciones de PLGA de la técnica anterior utilizaron rellenos o aditivos en la capa acuosa interna para mejorar la estabilidad y la eficiencia de encapsulacion y/o para aumentar la viscosidad de la capa acuosa, modulando con ello la hidrólisis del polímero y la liberación del polipep+ido o agente biológicamente activo. Ademas, los copolimeros de PLGA usados en la técnica anterior son de extremos bloqueados, en los cuales están bloqueados los grupos del extremo terminal de carboxilo. En estos copolírneros de extremos bloqueados, las preparaciones de microcapsulas exhiben una liberación de estallido bajo a moderado, liberando de 10 a 40% del polipeptido atrapado en el transcurso de las primeras 24 horas después de colocarlas en un medio acuoso fisiológico. En parte, estas caracter ticas se deben al uso de rellenos en la fase acuosa interna. Ademas, se conoce una liberación de polipeptido de 1 mes con el uso de un copolimero 75/25 de PLGA de PM < 20, (300. Las investigaciones en el campo de la liberación controlada han procedido especialmente para obtener un sistema de liberación de 1 a 2 meses para poJ ipeptidos o agentes biológicamente activos usando polímeros de ?ol?( lactida/glicolida) . Sin embargo, la mayoría de estos sistemas tienen uno o rnas de los siguientes problemas: Inadecuada eficiencia de encapsulacion y gran "liberación en for a de estallido", seguida por una "falta de liberación" o "fase de retraso" intermedia hasta que se degrada el polímero. En general, la liberación a partir de estos polímeros ocurre durante un periodo de aproximadamente 4 semanas a aproximadamente varios meses. Ademas, para lograr esta liberación, se emplea un copolirnero 50/50 de PM > 30, 000 o un copolírnero 75/25 de PM > 10, 000, lo cual origina frecuentemente polímero residual que permanece en el sitio de administración mucho tiempo después de la liberación del núcleo activo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención provee microesferas biocornpatibles y biodegradables que se han diseñado para liberación novedosa sostenida programable sin estallido, de agentes biológicamente activos, incluyendo polipeptidos, durante un periodo de hasta LOO días en un medio acuoso fisiológico. A diferencia de los sistemas de liberación disponibles actualmente, que usan rellenos/aditivos tales como gelatina, albúmina, dextrano, pectma, polivinilpirrolidona, pol eti lenglicol , azucares, etc., y son todavía propensos ef-i ciencias bajas de encapsulacion y "efectos de estallido", est invención logra una encapsul ación superior y liberación "sin estallido" nin el uso de ningún aditivo. En esta invención, se logra la liberación sostenida prograinable sin estallido mediante ol uso de una mezcla nica de formas "no bloqueadas" y de extremos bloqueados de polímero de pol?( lactida/glicolida) en la escala de pesos moleculares de 2,000 a 60,000 daltone. En general, las microesferas descritas en esta invención son producidas por medio de una técnica de ernulsificacion única en donde una emulsión agua en aceite (w/o) interna es estabilizada dispersándola en una fase acuosa saturada de solvente que contiene un estabilizador de emulsión. Se forrna después una emulsión ternaria w/o/w, emulsifi cando las emulsiones w/o anteriores en una fase externa acuosa previamente enfriada que contiene un ernulsificador o/w. Lsencialrnente, la emulsión w/o interna esta comprendida de una capa acuosa que contiene de 2 a aproximadamente 20% (p/p) del agente activo por atrapar y una capa oleosa que contiene copolirnero de polidactida/glicolida) en concentraciones que vanan de 5 a aproximadamente 50% (p/p de fase oleosa). El copol rnero incluye pesos moleculares que vanan de 2,000 a aproximadamente 60,000 en daltons, con composición molar de lactida/glicólida de 90/10 a 40/60 y una mezcla de sus formas no bloqueada y bloqueada en sus extremos en una relación de LUO/U a 1/99. be logran eficiencias muy altas de encapsulacion de aproximadamente BO a 100%, dependiendo del peso molecular y la forma estructural del polímero. Se logra La liberación programable del núcleo activo en duraciones variables entre L-LOO días mediante una selección juiciosa de los parámetros del procedimiento tales como concentración de polímero, concentración de peptido y la reLacion de la fase acuosa/oleosa. Esta invención es particularmente adecuada para eficiencias superiores de encapsulacion y liberación programable continua, sin estallido, de polipeptidos de pesos moleculares que vanan de 1,000 a aproximadamente 250,000 daltons, y también otros agentes biológicamente activos durante un periodo de 1-100 días. Una singularidad de la invenci n es que cuando se usa una mezcla 100/0 de polímero no bloqueado/bloqueado, la fase final de liberación del núcleo activo es concurrente con la solubilizacion completa del polímero, transformándose en componentes inocuos, tales como ácidos láctico y glicolico. Esto es una ventaja significativa sobre los sistemas de liberación de 30 días disponibles actualmente, sobre los cuales existe una gran preocupación de regulación por la toxicidad del polímero residual en el sitio de administración mucho tiempo después de la liberación del núcleo activo. Las microcapsulas descritas en esta invenci n son adecuadas para administración mediante vanas rutas tales corno rutas parenteral (intramuscular-, subcutánea), oral, tópica, nasal, rect L y vaginal.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra una comparación de liberación de fármaco de un sistema convencional contra un sistema de Liberación controlada. Se muestran niveles de cresta y valle a partir* de administraciones convencionales, en contraste con los niveles terapéuticos constantes de la administración de liberación controlada. La figura 2 muestra una rnicrografia de escudriñamiento electrónico de rnicroe eras de PLGA preparadas por medio del procedimiento descrito en la invenci n, usando polímero no bloqueado 50/50 de PM 8-12 t-- daltons y muestra morfología superior de esferas, integridad de esferas, y distribución reducida de tamaño. La figura 2a muestra una rnicrografia de escudriñamiento electrónico de esferas de PLGA preparadas por el método convencional de evaporación de solvente usando un polímero no bloqueado 50/50 12k de PM 8-12 kdaltons. La figura 3 muestra liberación acumulativa de Histatma a partir de rnicroesferas de PLGA, en las cuales se prepararon perfiles de liberación de vanos lotes usando polímero no bloqueado 50/50 (de PM 8-12 kdaltons) y en donde se varían los parámetros del procedimiento para modular la Liberación entre 1 y 35 días. La figura 4 muestra una icrogra fia de escudriñamiento electrónico de superficies esféricas lisas solidas de microesferas de PLGA preparadas por el método de la invención usando polímero de extremos bloqueados 50/50 (de PM -40 daltons). La figura 5 muestra liberación acumulativa de Histatma a partir de rnicroesferas de PLGA, en donde los perfiles de liberación son de varios lotes preparados usando polímero 50/50 no bloqueado y bloqueado en sus extremos de PM 30-40 kdaltons, y en donde se vanan los par metros del procedimiento para modular la liberación entre 28 a 60 días. La figura 6 muestra liberación acumulativa de Histatma a partir de rnicroesferas de PLGA, en donde los perfiles de liberación combinada son de vanos lotes preparados usando polímero 50/50 no bloqueado y bloqueado en sus extremos de PM 8-40 kdaltons, variando los parámetros del procedimiento para modular la liberación entre 1 y 60 días. La figura 7 muestra un porcentaje de liberación acumulativa de LHRH a partir de microesferas de PLGA usando polímero no bloqueado de PM 8-12 kdaltons.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE Lfl INVENCIÓN Esta invención se refiere al diseño de microesferas biocornpatibles y biodegradables para liberación sostenida prograina le novedosa de agentes biológicamente activos, incluyendo polipept idos, durante un periodo de hasta 100 días en un medio acuoso fisiológico con poca o ninguna liberación de es al lido. A diferencia de los sistemas de liberación disponibles actualmente, que usan rellenos/aditivos tales como gelatina, albúmina, dextrano, pectina, polivinilpirrolidona, polietilenglicol, azucares, etc., y son todavía propensos a eficiencias bajas de encapsulacion y "efectos de estallido", esta invención logra eficiencia de encapsulacion superior y liberación "sin estallido" sin el uso de ningún aditivo. En esta invención, se logra la liberación sostenida programable sin estallido mediante el uso de una mezcla única de formas "no bloqueadas" y de extremos bloqueados de polímero de poli ( lactida/glicolida) . La forrna "no bloqueada" se refiere a "poli ( lactida/glicolida) con grupos de extr-emo de carboxilo libre" que hacen al polímero rnas hidrofilico en comparación con la forrna bloqueada en los extremos usada rutinariamente. El polímero "bloqueado en sus extremos" usado actualmente se hidrata entre 4 y 12 semanas, dependiendo del peso molecular, originando una "falta de liberación" o una "fase de retraso" intermedia. El polímero no bloqueado se hidrata típicamente en el transcurso de 5 a 60 días, dependiendo del peso molecular, liberando así su núcleo continuamente sin una fase de retraso. Una mezcla cuidadosa de las dos formas, y pesos moleculares y relaciones L/G apropiados dan corno resultado una liberación continua entr-e 1 a 100 días. Ademas, la liberaci n en el transcurso de este tiempo es programable mediante una selección juiciosa de los parámetros del procedimiento tales corno concentración de polímero, concentración de peptido y la relación de la fase acuosa/oleosa. El copolimero en esta invenci n incluye pesos moleculares de 2,000 a 60,000 daltons, una relación de lactida/glicolida de 90/10 a 40/60 y una mezcla de las formas no bloqueada/bloqueada en relación de 100/0 a 1/99. El peso molecular del polipeptido puede estar en la escala de 1000 a 250,000 daltons, mientras el de otros agentes biológicamente activos puede variar de 100 a 100,000 daltons. Las rnicrocapsulas descritas en esta invención se preparan por medio de una técnica única de ernulsi i cacion acuosa que se ha desarrollado para usarse con el polímero no bloqueado para proveer morfología superior de esfera, integridad de esfera y distribución reducida de tamaño. Esto se logra preparando primero una emulsión interna agua en aceite (w/o), mezclando las soluciones de polímero en un solvente orgánico tal corno cloruro de rnetileno y el agente biológicamente activo en agua. Esto se continua con la estabilización de la emulsión w/o en una solución acuosa saturada de solvente que contiene un ernulsificador o/w tal corno alcohol polivirulico. Se forma después una emulsión ternaria emulsificando la emulsión w/o en una fase acuosa externa que 1U cont Lene ol mis o ernulsi ncador anterior a concentraciones que vanan de U.25 a 1% p/v. Las microcapsulas se endurecen por rernocion del solvente mediante evaporación, se enjuagan para remover el residuo de einulsi icador-, y se liofilizan,. Se usa temperatura baja tanto al tiempo de la ernulsificacion primaria (formación de la emulsión w/o), corno durante la formación de la emulsión w/o/w final para lograr una emulsión estable y características superiores de esfera. En el contexto íe la invención, un agente biológicamente activo es cualquier fármaco de hormona, antibiótico, agente antiturnor, agente antn nflarnatopo, antipirético, analgésico, antitusivo, expectorante, sedante, relajante muscular*, antiepileptico, agente antiulceroso, antidepresivo, fármaco antialergico, cardiotonico, fármaco antiarritrnico, vasodilatador, antihipertensivo, diurético, anticoagulante, antinarcotico, etc. solubles en agua. Mas precisamente, los solicitantes han descubierto una composición y procedimiento farmacéutico con las siguientes características detalladas: 1. Una composición farmacéutica de ricrocapsulas de liberación controlada para liberación prograrnable, sostenida, sin estallido, de un agente biológicamente activo por una duración de 1-100 días, comprendiendo un agente activo y una mezcla de poli ( glicolida/lactida) biodegradable no bloqueado y bloqueado en sus extremos. 2. La composición farmacéutica del párrafo 1, en la cual el pol i (lactida/gLicoli da) biodegradabLe es una mezcla de formas no bloqueadas y bloqueadas, en relaciones que varían de 100/0 a L/99. 3. Las icrocapsulas de los p rrafos L o 2 en las cuales la relación (lactida a glicolida, L/G) del copolirnero para el polímero no bloqueado y bloqueado en sus extremos es de 52/48 a 48/52. 4. Las rnicrocapsulas de los párrafos l o 2 en las cuales la relación L/G del copolirnero para el polímero no bloqueado y bloqueado en sus extremos es de 90/10 a 40/60. 5. Las icrocapsulas de los párrafos 1 o 2 o 3 o 4, en las cuales el peso molecular del copolimero es de entre 2,000 a 60,000 daltons. 6. Las rnicrocapsulas de los párrafos l o 2 o 3 o 4 o 5, en las cuales el agente biológicamente activo es un peptido o polipeptido. 7. Las rnicrocapsulas del párrafo 6, en las cuales dicho polipeptido es histatma que consiste de 12 aminoácidos y tiene un peso molecular de 1563. 8. Las microcápsulas de los párrafos 1 O 2 O 3 O 4 O , o 6, caracterizadas por su capacidad para liberar cornpletamente histatma en un medio acuoso fisiológico de 1-35 días con una mezcla 100/0 de ?ol?( láctida/glicolida) no bloqueado y bloqueado en sus extremos que tiene una relación L/G de 48/52 a 52/48, y un peso molecular de < 15,000. 9. Las microcápsulas de los párrafos l o 2 o 3 o 4 o 5, o 6, caracterizadas por su capacidad para liberar completamente histatma en un medio acuoso fisiológico de 18-40 días con una mezcla 100/ü de poli ( lactida/glicolida) no bloqueado y bloqueado en sus extremos que tiene una relación L/G de 48/52 a 52/48 y un peso molecular que varia de 28,000 a 40, UOO. 10. Las rni crocapsulas de los párrafos 1 O 2 O 3 O 4 O 5, o 6, caracterizadas por su capacidad para liberar hasta 90% de la histatma en un medio acuoso fisiológico de 28-70 días con una mezcla 0/100 de poli ( lactida/glicolida) no bloqueado y bloqueado en sus extremos que tiene una relación L/G de 48/52 a 52/48 y un peso molecular que vana de 10,000 a 40,000 daltons. 11. Las rni crocapsulas de los párrafos 1 O 2 O 3 O 4 O 5, o 6, caracterizadas por su capacidad para liberar hasta 80% de histatina en un medio acuoso fisiológico de 56-100 días con una mezcla 0/100 de polidactida/glicolida) no bloqueado y bloqueado en sus extremos que tiene una relación L/G de 75/25 y un peso molecular de < 15, 000 daltons. 12. Las icrocapsulas de los párrafos 7 u 8 o 9 o 10 u 11, que tienen análogos de histatma con longitudes de cadena de 11 a 24 aminoácidos de pesos moleculares de 1,500 a 3000 daltons y están caracterizados por las siguientes estructuras: 1. D S H A K R H H G Y K R K F H E K H H S H R G Y 2. K R H H G Y K R K F H E K H H S H R G Y R 3. K R H H G Y K R K F H E K H H S H R 4. R K F H E K H H S H R G Y R 5. A K R H H G Y K R K F H 6. * K R H H G Y K R K F H 7. K R H H G Y K R K F * D-arninoacido 13. Las micr-ocapsulas de Los párrafos l o 2 o 3 o 4 o 5, en las cuales el agente biológicamente activo es un polipeptido de hormona liberadora de hormona luteinizante (LHRH) que es una decapeptido de peso molecular 1182 en su for-rna de acetato, y tiene la estructura: p- E H U S Y G L R P G 14. La rnicrocápsula de los párrafos 6 o ? u 8 o 9 o 10 u 11 o 12 o 13, que tiene un peso molecular de 1,000 a 250,000 daltons. 15. Las rni crocapsulas de los párrafos 6 o 7 u 8 o 9 o 10 u 11 o 12 o 13 o 14, en las cuales se logran los perfiles de liberación de velocidades y duraciones variables mezclando i croes fe ras no bloqueadas y bloqueadas corno una mezcla en cantidades variables. 16. Las rnicrocapsulas de los p rrafos 6 o 7 u 8 o 9 o 10 u 11 o 12 o 13 o 14, en las cuales se logra liberación de perfiles de velocidades y duración variable mezclando polímero no bloqueado y bloqueado en diferentes relaciones dentro de las mismas rnicroesferas. 17. Las rnicrocapsulas de los párrafos 6 o 7 u 8 o 9 o 10 u 11 o 12 o L3 o 14 o 15 o 16, en las cuales el polipep+ido atrapado es cualquiera de los agentes de vacuna contra E. Coll (ETEC) en erotoxigemca tales co o CFA/I , CFA/II, CSl, CS3, CS6 y CS17 y otras enterotoxinas relacionadas con ETEC. 18. Las microcapsulas de los párrafos 6 o 7 u 8 o 9 o u Ll o 12 o 13 o 14 o 15 o 16 o 17, en las cuales el polipeptido atrapado consiste de antigenos de pepti o de peso molecular que varía de aproximadamente 800 a 5000 daltons para inmunización contra E. coli enteroto igenica (ETEC). 19. Las rnicrocapsulas de los párrafos l o 2 o 3 o 4 o , en las cuales dichos agentes biológicamente activos se seleccionan del grupo que consiste de fármacos de hormona, antibióticos, agentes antiturnor, agentes antunflarnatopos, antipiréticos, analgésicos, antitusivos, expectorantes, sedantes, relajantes musculares, antiepilepticos, agentes antiulcerosos, antidepresivos, fármacos antialergicos, cardiotónicos, fármacos antiarritrnicos, vasodilatadores, an ihipertensivos, diuréticos, anticoagulantes y antmarcoticos solubles en agua, en la escala de peso molecular de 100 a 100,000 daltons. 20. Las microcápsulas de los párrafos l o 2 o 3 o 4 o 5 0 6 o 7 u 8, en las cuales dicho pol?( lactida/glicolida) biodegradable esta en una fase oleosa y esta presente en aproximadamente 1-50% (p/p). 21. Las rnicrocapsulas de los párrafos 1 O 2 O 3 O 4 O o 6 u 8 o 9 o 10 u 11 o 12 o 13 o 14 o 15 o 16 o 17, en las cuales la concen ración del agente activo esta en la escala de ü.l a aproximadamente 60% (p/p). 22. Las rnicrocapsulas de los párrafos l o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 u 8 o 9 o 10 u 11 o 12 o 13 o 14 o 15 o 16 o 17 , en las cuales una relación de las fases internas acuosa a oleosa es de aproximadamente 1/4 a 1/40 (v/v). 23. Un procedimiento para preparar formulaciones de icrocapsulas de liberación controlada caracterizadas por liberacion prograrnable, sostenida, sin estallido, de agentes biológicamente activos, que comprende disolver en cloruro de rnetileno, pol?( lactida/glicolida) biodegradable en forma no bloqueada, y disolver en agua un agente biológicamente activo o un núcleo activo; agregar la capa acuosa a la solución de polímero y ernulsificar para proveer una emulsión interna de agua en aceite (w/o); estabilizar la emulsión w/o en una fase acuosa saturada de solvente que contiene un einulsificador de aceite en agua (o/w); agregar dicha emulsión w/o a una capa acuosa externa que contiene ernulsificador de aceite en agua para formar una emulsión ternaria; y agitar la emulsión r-esultante agua en aceite en agua (w/o/w) durante un tiempo suficiente para remover dicho solvente, y enjuagar con agua las rnicrocapsulas endurecidas y liofilizar dichas microcapsulas endurecidas. 24. Un procedimiento para preparar formulaciones de microcapsulas de liberación controlada caracterizadas por liberacion programable, sostenida, sin estallido, de agentes biológicamente activos, que comprende: Disolver, en cloruro de rnetiieno, polidactida/glicolida) biodegradable en forrna bloqueada en sus extremos, y disolver en agua un agente biológicamente activo o un núcleo activo; agregar la capa acuosa a la solución de polímero y ernulsificar para proveer una emulsión interna de agua en aceite (w/o); estabilizar la emulsión w/o en una fase acuosa saturada de solvente que contiene un ernulsificador de aceite en agua (o/w); agregar dicha emulsión w/o a una capa acuosa externa que contiene ernulsificador de aceite en agua para formar una emulsión ternaria; y agitar la emulsión resultante agua en aceite en agua (w/o/w) durante un tiempo suficiente para remover dicho solvente, y enjuagar con agua las rnicrocapsulas endurecidas y liofilizar dichas microcapsulas endurecidas. 25.- El procedimiento de los párrafos 23 o 24, en el cual se agrega una fase acuosa externa saturada de solvente para emul i ficar la emulsión interna w/o antes de la adición de la capa acuosa externa, para proveer microcápsulas de distribución reducida de tamaño de entre 0.05 y 500 |jrn. 26. El procedimiento de los párrafos 23 o 24, en el cual se provee una temperatura baja de aproximadamente 0-4 °C durante la preparación de la emulsión interna w/o, y se provee una temperatura baja de aproximadamente 4-20 °C durante la preparación de la emulsi n w/o/w para proveer una emulsi n estable y eficiencia superior de encapsulación. 27. til procedimiento e los párrafos en el cual se usa una mezcla LOO/0 de polímero no bloqueado y bloqueado en sus extremos para proveer- liberación del núcleo activo de manera continua y sostenida sin una fase de retraso. 28. Las microcápsulas del párrafo 6, en las cuales, cuando el polipeptido atrapado es activo a pH ba o, tal corno LHRH, hormona adrenocorticotropica, factor de crecimiento epidérmico, el polipeptido liberado es bioactivo . 29. Las rnicrocapsulas de los párrafos 6 o 7 u 8 o o 10 u 11, en las cuales, cuando el peptido atr-apado, tal como histatma, es inactivo a un pH bajo, se agrega un agente de sales inorgánicas estabilizador de pH a la fase acuosa interna para mantener la actividad biológica del peptido liberado. 30. Las rnicrocapsulas de los p rrafos 6 o 7 u 8 o 9 o 10 u 11, en las cuales, cuando el peptido atrapado, tal corno histatma, es inactivo a un pH ba o, se agrega un agente tensioactivo no iónico tal corno esteres de acido graso de polioxietilensorbitan (Tween 80, Tween 60 y Tween 20) y copolirneros en bloque de polioxietileno-polioxipropileno (Pluronics), a la fase acuosa interna para mantener la actividad biológica del polipéptido liberado. 31. Las microcapsulas del párrafo 29, en las cuales se administran conjuntamente esferas de placebo cargadas con los agentes estabilizadores de pH con esferas cargadas de polipeptido para mantener el pH de la solución alrededor del de las microcápsulas y conservar la actividad biológica del peptido liberado en casos en los cuales la adición de agentes estabilizadores de pH en la fase acuosa interna es inconveniente par-a la encapsulacion exitosa del polipeptido sensible al pH acido. 32. Las rnicrocapsulas del p rrafo 30, en las cuales se administran conjuntamente esferas de placebo cargadas con un agente tensioactivo no iónico y esferas cargadas de polipep ido para mantener la actividad biológica del peptido liberado cuando la adición de tensioactivos no iónicos en la fase acuosa interna es inconveniente para la encapsulacion exitosa del polipeptido sensible al pH acido. 33. Las rnicrocapsulas de los p rrafos l o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 u 8 o 9 o 10 u 11 o 12 o 13 o 14 o 15 o 16 o 17, que comprenden una mezcla de polímero no bloqueado y bloqueado, en las cuales la solubilizacion completa del copolirnero no de a polímero residual en el sitio de administración y ocurre concurrentemente con la liberación completa del agente atrapado. 34. Un procedimiento para usar las rnicrocapsulas de los párrafos I o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 o 7 u 8 o 9 o l0 u ll o l2 o 13 o 14 o 15 o 16 o 17 o 18 o 19 o 20, para su administración en humano mediante rutas parenterales tales corno íntrarnuscular y subcutánea. 35. Un procedimiento para usar las ricrocapsulas de los párrafos I o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 o 7 u 8 o 9 o l0 u ll o l2 o 13 o 14 o 15 o 16 o 17 o 18 o 19 o 20, para su administración en humano mediante ruta tópica. 36. Un procedimiento para usar las microcapsulas de los párrafos I o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 o 7 u 8 o o l0 u ll o l2 o 13 o 14 o 15 o L6 o 17 o 18 o 19 o 20, para administración en humano mediante rutas orales. 37. Un procedimiento para usar las rnicrocapsulas de los párrafos I o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 o 7 u 8 o 9 o l0 u ll o l2 o 13 o 14 o 15 o 16 o 17 o 18 o 19 o 20, par-a administración en humano mediante las rutas nasal, transdernica, rectal y vaginal .

Conservación de la bioactividad de los polipeptidos Como el polímero se degrada rápidamente, hay una caída acelerada en el pH, acompañada por la liberación de oligorneros solubles en el micrornedio que puede afectar la actividad biológica de peptidos y proteínas sensibles al pH acido. En estos casos, la actividad biológica puede mantenerse mediante el uso de sales inorgánicas y/o agentes reguladores de pH en la fase acuosa interna disueltos conjuntamente con el péptido. Las siguientes ventajas únicas son características de esta invención: 1. Liberación sostenida prolongada sin estallido de polipeptidos y otras rnicrocapsulas biocornpatibles y biodegradables, de hasta 100 días en un medio acuoso fisiológico sin el uso de aditivos en el núcleo.

O 2. LU-ei aci n progra abLe del núcleo activo para duraciones variables dur-ante 1-100 días, usando una mezcla de polímero no bloqueado y bloqueado de pesos moleculares y relaciones de copolirnero diferentes, y manipulando los parámetros del procedimiento., 3. La liberación completa del núcleo activo es concurrente con la solubilizacion y transformación completa del polímero vehículo en componentes inocuos, tales co o ácidos láctico y glicolico, especialmente cuando se usa una mezcla 100/0 de polímero no bloqueado/bloqueado. Esto es de un gran significado, ya que la mayoría de los polímeros biodegradables usados actualmente para liberación de 1 a 30 días, no se degradan completamente al final de la duración pretendida de la liberación, ocasionando con ello una seria preocupación de las autoridades reguladoras sobre los efectos de polímero residual en el sitio de la administración. 4. Facilidad de administración de las rnicrocapsulas en diferentes formas dosificadas mediante vanas rutas, tales corno parenteral (intramuscular y subcutánea), oral, tópica, nasal, vaginal, etc. Los horno- y copolirneros hi rofilíeos a base de D,L-lactida y glicolida contienen horno- y copolírneros ajustados hidrofílicos con grupos de extremo carboxilico libre, y están caracterizados por la formula: A. -i.

Poli (co-í),L-Lact?da-gl?colida) 50:50 (C3H4O2)., (C2H202 )m n : in = 1:1 En donde Z = Peso Molecular/130; por ejemplo Z = 92 para PM 12,000 y 262 para PM 34,000. Aunque puede variar la relación molar de láctida a glicolida, se prefiere que la relación de lactida a glicolida del copoli ero sea de 50:50. A continuación se hace referencia a la figura 1 que r-epresenta una gráfica de concentración de fármaco en sangre contra el tiempo; muestra la administración convencional del fármaco usando una sene de dosificaciones en comparación con un sistema ideal de liberación controlada. Desafortunadamente, muchos fármacos tienen una escala terapéutica por arriba de la cual son tóxicos y por abajo de la cual no son efectivos. Los niveles oscilantes de fármaco que se observan comunmente después de la administración general ocasionan períodos ? ? alternantes de inefectividad y toxicidad. Idealmente, una preparación de polipeptido o agente biológicamen e activo encapsulado de 1 Lbei ación sos-tenida, mantiene el fármaco dentro de la escala -terapéutica deseada por medio de una dosis individual, como esta representado en la Escala Terapéutica en la figura 1, en donde se muestra el caso ideal para liberación controlada. En la figura 2, se muestra una ricrografia de escudriñamiento electrónico de rnicroesferas de PLGA preparadas usando polímero no bloqueado 50/50 de PM 8-12 kdaltons. El polímero no bloqueado tiene superficies esféricas lisas solidas, y es adecuado para proveer un sistema de liberación "sin estallido" . El cuadro I es un resumen de la descripción del procedimiento de icroesfera para preparar un sistema de peptido (peptido de Histatma) que tiene una liberación controlada en el curso de 1 a 100 días. Los perfiles de liberación pueden modificarse por medio de una mezcla juiciosa de polímeros no bloqueados y bloqueados, ya sea en rnicroesferas separadas o en ias mismas rnicroesferas. La liberación a partir de las formulaciones de rnicrocapsulas 1 a 21, enlistadas en el cuadro 1, ocurre independientemente una de otra, y por lo tanto es aditiva la liberación acumulativa a partir de las mezclas de estas formulaciones. Mezclando vanas formulaciones de microesferas no bloqueadas y bloqueadas en sus extremos, pueden ajustarse las curvas de liberación a cualquier duración deseada. Ademas, en base a las caracte io icas de los polímeros no bloqueados y bloqueados en sus extremos, la mezcla de las dos formas en una sola formulación que comprende diferentes relaciones de polímero no bloqueado a bloqueado, influye significativamente en la hidratacion del polímero y por lo tanto en la liberación del núcleo activo, proveyendo con ello curvas de liberaci n de cualquier patrón deseado. La manipulación de la hidratacion y degradación del polímero que da corno resultado la modulaci n de la liberación del núcleo activo, se logra mediante la adición de polímero no bloqueado al polímero bloqueado en sus extremos en cantidades tan bajas como 1% hasta 100%.

CUADRO 1 Composiciones de microcápsulas que contienen polipéptido de Histatina Acronirnos Relación L/G: Composición lactida/glicolida del copolimero.

CM: Cloruro de Metileno PM: Peso Molecular en daltons A : Ernulsi ficación w/o/w sin un paso intermedio para la estabilización de la emulsión B: Emulsificacion w/o/w con un paso intermedio para la estabilización de la emulsión NB: Polímero no bloqueado Al l feprse al cuadro 1 en conjunto con la figura 3, puede verse que la liberación acumulativa de Histatina a partir-de rnicroesferas de PLGA de varios lotes preparados usando polímeros 50/50 y 75/25 no bloqueados y bloqueados en sus extremos, esta modulada entre 1 a 100 variando los parámetros del procedimiento. Con polímero no bloqueado 50/50, 1-35 días; con polímero bloqueado 50/50, 18-56 días; y con polímero bloqueado 75/25, 56-100 días. Haciendo referencia a la figura 4, se provee una vista a través de una rnicrografia de escudriñamiento electrónico de nicroesferas de PLGA diseñadas para un sistema de liberación de uno a dos meses, preparado usando un polímero bloqueado en sus extremos de PM de 30-40 kdaltons. La figura 5 representa la liberación acumulativa de Histatina a partir de microesferas de PLGA, en donde los perfiles de liberación son de varios lotes preparados usando polímero no bloqueado y bloqueado 50/50, y variando los parámetros del procedimiento para modular la liberación entre 28 a 60 días. La figura 6 representa liberación acumulativa de Histatina a partir de rnicroesferas de PLGA -estos perfiles combinados de liberación son de varios lotes preparados usando polímero no bloqueado y bloqueado 50/50, y variando los parámetros del procedimiento para modular la liberaci n entre 1 y 60 días. En el contexto de la invención, un agente biológicamente activo es cualquier antibiótico, agente antitunor, antipirético, analgésico, agente antunfiarnatopo, antitusivo, expectorante, sedante, relajante muscular-, an iepi leptico, agente antiulceroso, antidepresivo, fármaco antialergico, cardiotonico, fármaco antiarntrnico, vasodilatador, antihipertensivo, diurético, anticoagulante, fármaco de hormona, antinarcotico, etc., solubles en agua. En general , la liberación sostenida "sin estallido" de agentes biológicamente activos a partir de rnicroesf ras de PLGA se logra en el contexto de esta invención usando relaciones molares de 90/10 a 40/60, y relaciones de polímero no bloqueado a polímero bloqueado en sus extremos de 100/0 a 1/99. En términos generales, los enfoques para diseñar los agentes biológicamente activos encapsulados en las rnicroesferas de PLGA no bloqueadas y la combinación de no bloqueadas/bloqueadas en sus extremos y las características de estos encapsuladores se indican brevemente corno sigue a continuación: 1. Proveer- rnicroesferae de PLGA de morfologías de superficie usando polímeros no bloqueados y bloqueados 50/50 de PM z 8-40 kdaltons, corno se muestra en las figuras 2 y 4. 2. Proveer liberación m vitro de un polipeptido, Histatina, a partir de rnicroesferas de PLGA, corno se muestra en las figuras 3 y 5, usando polímero no bloqueado y bloqueado de PM -í 8-40 kdaltons y relaciones molares tales co o 50/50 y ^5/25. Por- ejemplo, se logra el diseño de un sistema de Liberación de un compuesto bioactivo de 1-12 semanas usando PLGA con las siguientes especificaciones: 1. Peso molecular del polímero: z 2-60 kdaltons. 2. Relación molar del copolinero (L/G): -90/10 a 40/60 3. Grupos de extremo del polímero: -no bloqueado y/o bloqueado en sus extremos. y combinado juiciosamente dentro de los siguientes parámetros: 4. Concentración de polímero -de 5 a 50%. 5. Relación de la fase interna acuosa a oleosa : -1:5 a 1:20 (v/v). 6. Cargas de peptido: -de 2 a aproximadamente 40% (p/p de polímero) y usando el método único de e ulsificacion acuosa descrito en la invención. La singularidad y novedad de la invención puede resumirse en términos generales de una manera breve como sigue: 1. El uso de polidactida/glicolida) no bloqueado para lograr liberación programable sostenida continua, sin estallido, de agentes biológicamente activos durante 1-100 días. 2 . Fl uso de un sistema único de ernulsificacion acuosa para lograr características superiores de microesfera tales como morfología uniforme de la esfera y distribución reducida de tamaño. 3. Liberación sostenida prolongada, sin estalLido, de hasta 100 días, de polipéptidos y otros agentes biológicamente activos a partir de rnicrocapsulas biocornpatibles y biodegradables en un medio acuoso fisiológico sin el uso de aditivos en el núcleo interno. 4. Liberación programable del núcleo activo para duraciones variables en el transcurso de 1-100 días usando una mezcla de polímero no bloqueado y bloqueado para diferentes pesos moleculares y relaciones de copolírnero, y manipulando los parámetros del procedimiento. 5. Liberación completa del núcleo activo concurrentemente con la solubilizacion completa del polímero vehículo que se transforma en componentes inocuos tales corno ácidos l ctico y glicolico, especialmente cuando se usa una mezcla 100/0 de polímero no bloqueado/bloqueado. Esto es de un gran significado, ya que la mayoría de los polímeros biodegradables usados actualmente para liberación de 1-30 días, no se degradan completamente al final de la duración pretendida de la liberación, causando una sena preocupación a las autoridades reguladoras sobre los efectos del polímero residual en el sitio de su administración. 6. Facilidad de administración de las rnicrocápsulae en diferentes formas dosificadas mediante vanas rutas, tales corno parenteral (intramuscular y subcutánea), oral, tópica, nasal, vaginal, etc. Los siguientes ejemplos son ilustrativos pero no limitativos de las composiciones de rnicrocapsuLas que pertenecen a esta invención.

EJEMPLO 1 Se prepararon microcapsulas de polidactida/glicolida) (PLGA) por medio de una técnica única de e ulsificacion acuosa que ha sido desarrollada para usarse con el polímero no bloqueado para proveer morfología superior-de esfera, integridad de esfera y distribución reducida de tamaño (ver figuras la y Ib). Esto se logra disolviendo el polímero en un solvente de hidrocarburo clorado tal como clorur-o de rnetileno, y disolviendo el agente biol gicamente activo en agua. Se forma después una emulsión w/o mezclando las soluciones del polímero y el agente activo por medio de sonificacion, seguido por estabilización de la emulsión en un solvente -solución acuosa saturada que contiene alcohol polivinilico. Se forrna después una emulsión ternaria ernulsificando la emulsión w/o en una fase acuosa externa enfriada previamente que contiene alcohol polivimlico (0.25-1% p/v). Las rnicrocapsulas se endurecen por remoción de solvente mediante evaporación, se enjuagan para remover cualquier emulsificador residual, y después se liofilizan. El cuadr-o 1 enlista las composiciones de microcapsulas, Nos. 1-21 preparadas de esta manera, que consisten de un polipeptido biológicamente activo, Histatina (compuesta de 12 aminoácidos y un peso molecular de 1563) y mezclas de polímero no bloqueado y bloqueado en relaciones 100/0 a 1/99, y que tienen una relación lactida/gli colida de 90/10 a 40/60, y un peso molecular que varia entre 2000 y 60,000 daltons.

EJEMPLO 2 Se prepararon composiciones de rni crocapsulas como se describió en el ejemplo 1, en las cuales la relación L/G del copolirnero es 48/52 a 52/48, y la relación de polímero no bloqueado/bloqueado es de 100/0. El núcleo activo es Histatina (PM 1563), el peso molecular del polímero es < 15, 000 y las concentraciones de polímero vanan de 7% a 40% p/p. Las composiciones 1, 2, 4, 12-14 y 16-18 se enlistan en el cuadro 1. Los perfiles de liberación del núcleo activo de las composiciones en un medio acuoso fisiológico, tal corno solución salina fisiológica regulada a pH 7.0 con fosfato, mantenida a 37 ± 1 °C, se grafican como porcentaje acumulativo de liberación contra tiempo, y se presenta en la figura 2. Se logra liberación variable sin estallido de 1-35 .2 días variando la concentración de polímero de 7 a aproximadamente 40% p/p en la fase oleosa.

EJEMPLO 3 Se prepararon composiciones de microcapsulas co o se describió en el ejemplo 2, en las cuales la relación acuosa/oleosa se vario de 1/4 a 1/20 (v/v). Las composiciones L, 2, 4 y 12 se enlistan en el cuadro 1. Los perfiles de liberación del núcleo activo de las composiciones en un medio acuoso fisiológico descritas en el ejemplo 2 se gráficaron corno porcentaje acumulativo de liberación contra tiempo, y se presentan en la figura 2. Se logro liberación continua sin estallido de 1-35 días, con diferentes tiempos de inicio y terminación, seleccionando diferentes relaciones w/o en el núcleo interno.

EJEMPLO 4 Se prepararon composiciones de rnicrocapsulas como se describió en el ejemplo 2, en las cuales el peso molecular del polímero es de 28,000-40,000 y las concentraciones de polímero vanan de 5% a ~ 15% p/p. Las composiciones 19-21 se enlistan en el cuadro 1. Los perfiles de liberación del núcleo activo de las composiciones en un medio acuoso fisiológico se describen en el ejemplo 2 y se graficaron como porcentaje acumulativo de liberación contra tiempo, y se presentan en la figura 3. Se logro liberación variable sin estallido de 18-40 días, variando la concentración de polímero.

EJEMPLO 5 Se prepararon composiciones de rni crocápsul s corno se describió en el ejemplo 2, en las cuales la relación de polímero no bloqueado/bloqueado es de 1/99 y las concentraciones de polímero vanan entre 5% a ~ 12% p/p. Las composiciones 10 y 11 se enlistan en el cuadro 1. Los perfiles de liberación del núcleo activo de las composiciones en un medio acuoso fisiol gico se describen en el ejemplo 2 y se gráficaron como porcentaje acumulativo de Liberación contra tiempo, y se presentan en la figura 3. Se logro liberación variable sin estallido de 28-70 días, variando la concentración de polímero en la fase oleosa.

EJEMPLO 6 Se prepararon composiciones de microcapsulas como se describió en el ejemplo 5, en las cuales el peso molecular del polímero es de 28,000-40,000 y las concentraciones de polímero vanan entre 5% a ;; 12% p/p. Las composiciones 5 y 6 se enlistan en el cuadro 1.

Los per i Les de liberación del núcleo activo de las composiciones en un medio acuoso fisiológico se describen en el ejemplo 2 y se gráficaron corno porcentaje acumulativo de liberación contra tiempo, y se presentan en la figura J. Se logro liberación variable sin estallido de 28-70 días, variando la concentración de polímero.

EJEMPLO 7 Se prepararon composiciones de inicrocapsulas como se describió en el ejemplo 6, en las cuales la relación acuosa/oleosa varia entre 1/5 a 1/25 (v/v). Las composiciones 3 y 7 se enlistan en el cuadro 1. Los perfiles de liberación del n cleo activo de las composiciones en un medio acuoso fisiológico se describen en el ejemplo 2 y se gráficaron corno porcentaje acumulativo de liberación contra tiempo, y se presentan en la figura 3. Se logro liberación variable sin estallido de 28-70 días, variando las relaciones acuoso/oleoso.

EJEMPLO ß Se prepararon composiciones de microcápsulas corno se describió en el ejemplo 5, en las cuales la relación de copolímero es 75/25, y las concentraciones de polímero varían entre 5% a ~ 25% p/p. Las composiciones 8 y 9 se enlistan en el cuadro 1. Los perfiles de liberación del núcleo activo de las composiciones en un medio acuoso fisiológico se describen en el ejemplo 2 y se gr f caron corno porcentaje acumulativo de liberación contr-a tiempo, y se presentan en la figura 2. Se Logro liberación variable sin estallido de 56- >90 días, variando la concentración de polímero en la fase oleosa.

EJEMPLO 9 En el ejemplo 2 se describieron composiciones de rnicrocápsulas en las que el núcleo activo es hormona liberadora de hormona luteimzante (LHRH, un decapéptido de peso rnolecular 1182) y la concentración de polímero es de s 40% p/p. Los perfiles de liberación del núcleo activo de la composición en un medio acuoso fisiológico se describieron en el ejemplo 2, y se graficarón corno porcentaje acumulativo de liberación contra tiempo, y se presentan en la figura 4. Se logro liberación continua y completa, sin estallido, en el transcurso de 35 días, similar al acetato de hi tatma.

EJEMPLO 10 Se prepararon composiciones de microcapsulas como se describió en el ejemplo 2 , en las cuales se agregó un aditivo J6 tal corno sal de sodio (carbonato o bicarbonato) a la fase acuosa interna a concentraciones de 1-10% p/p par-a mantener- la actividad biológica del polipeptido liberado. Se logro liberaci n variable sin estallido de 1-28 días, si ilarmente a los ejemplos 2 y 3, y el polipeptido liberado es biológicamente activo hasta los 30 días, debido a la presencia de La sal de sodio.

EJEMPLO 11 Se prepararon composiciones de inicrocapsulas corno se describió en el ejemplo 2, en las cuales se agrego un aditivo tal co o agente tensioactivo no iónico, copoli ero en bloque de polioxietileno/polioxipropileno (Pluronics F68 y F127), ya sea a la fase oleosa interna o a la fase acuosa, a concentraciones de 10-100% p/p, para mantener la actividad biológica del polipeptido liberado. Se Logro liberación continua sin estallido de 1-35 días, sirnilarrnente a los ejemplos 2 y 3, y el polipeptido liberado es bioactivo debido a la presencia del agente tensioactivo.

EJEMPLO 12 La liberación acumulativa de histatma a partir de las composiciones de microcápsulas descritas en los ejemplos 1 ll y Los perfiles de liberación graficados en las figura 2 y 3 muestran la liberación de pep ido prograrnable sin estallido en duración variable de 1-100 días. Virtualrnente cualquier patron de liberación acumulativa es alcanzable en una duración de 100 días mediante una mezcla juiciosa de vanas composiciones, como se muestra en estas figuras.

Claims (5)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1.- Una formulación farmacéutica de rnicrocapsulas de liberación controlada para liberación programable, sostenida, sin estallido, de un agente biológicamente activo, en una duración de 1-100 días, comprendiendo un agente activo y una mezcla de poli ( glicólida/lactida) biodegradable no bloqueado y bloqueado en sus extremos. 2.- La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el polidactida/glicolida) biodegradable es una mezcla de formas no bloqueadas y bloqueadas, en relaciones que vanan de 100/0 a 1/99. 3.- Las microcapsulas de conformidad con las reivindicaciones 1 o 2, en las cuales la relación (lactida a glicolida, L/G) del copolirnero para el polímero no bloqueado y bloqueado en sus extremos es de 52/48 a 48/52. 4.- Las rnicrocapsulas de conformidad con las reivindicaciones 1 o 2, caracterizadas ademas porque la relación L/G de copolirnero para el polímero no bloqueado y bloqueado en sus extremos es de 90/10 a 40/60. 5.- Las microcapsulas de conformidad con la reivindicación 3, caracterizadas ademas porque el peso molecular del copolímero es de entre 2,000 a 60,000 daltons. 6.- Las microcapsulas de conformidad con la reivindicación 1, caracterizadas ademas porque el agente biológicamente activo es un peptido o polipéptido. ? . - Las rnicrocapsulas de conformidad con la reivindicación 6, caracterizadas ademas porque dicho polipeptido es histatina que consiste de 12 aminoácidos y tiene un peso molecular de 1563. 8.- Las rnicrocapsulas de conformidad con la reivindicación 7 , caracterizadas por su capacidad para liberarcompletamente histatina en un medio acuoso fisiol gico dur-ante 1-35 días con una mezcla 100/0 de poli (lactida/glicolida) no bloqueado y bloqueado en sus extremos que tiene una relación L/G de 48/52 a 52/48, y un peso molecular de < 15, 000. 9.- Las rnicrocapsulas de conformidad con la reivindicación 7, caracterizadas por su capacidad para liberar completamente histatina en un medio acuoso fisiológico durante 18-40 días con una mezcla 100/0 de pol ?( lactida/glicolida) no bloqueado y bloqueado en sus extremos que tiene una relación L/G de 48/52 a 52/48 y un peso molecular que vana de 28,000 a 40,000. 10.- Las microcapsulas de conformidad con la reivindicación 7, caracterizadas por su capacidad para liberar hasta 90% de la histatma en un medio acuoso fisiológico durante 28-70 días con una mezcla 0/100 de poli áctida/glicólida) no bloqueado y bloqueado en sus extremos que tiene una relación L/G de 48/52 a 52/48 y un peso rnoLecular que varia de 10,000 a 40,000 daltons. Ll.- Las rnicrocapsulas de conformidad con la reivindicación 7, caracterizadas por su capacidad para liberar hasta 80% de histatma en un medio acuoso fisiológico durante 56-100 días con una mezcla 0/100 de poli ( lactida/glicol ida) no bloqueado y bloqueado en sus extremos que tiene una relación L/G de 75/25 y un peso molecular de < 15, 000 daltons. 12.-- Las icrocapsulas de conformidad con las reivindicaciones 7 u 8 o 9 o 10 u 11, que tienen análogos de histatma con longitudes de cadena de 11 a 24 aminoácidos de pesos moleculares de 1,500 a 3000 daltons y están caracterizados por las siguientes estructuras: l.- D S H A K R H H G Y K R K F H E K H H S H R G Y; 2.- K R H H G Y K R K F H E K H H S H R G Y R; 3.- K R H H G Y K R K F H E K H H S H R; 4.- R K F H E K H H S H R G Y R 5.- A K R H H G Y K R K F H; 6.- *A K R H H G Y K R K F H; 7.- K R H H G Y K R K F (* D-arní noací do) . 13.- Lae nicrocápsulas de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada ademas porque el agente biológicamente activo es un polipeptido de hormona liberadora de hormona luteinizante (LHRH) que es un decapeptido de peso molecular 1182 en su forrna de acetato, y tiene la estructura: p-E H U S Y G L R P G. 14.- La microcápsula de conformidad con la reivindicación 6, que tiene un peso molecular de 1,000 a 250,000 daltons. 15.- Las icrocapsulas de conformidad con las reivindicaciones 6 o 7 u 8 o 9 o 10 u 11 o 13 o 14, caracterizadas ademas porque se logran los perfiles de liberación de velocidades y duraciones variables mezclando rni croes fe ras no bloqueadas y bloqueadas corno una mezcla en cantidades variables. 16.- Las rnicrocapsulas de conformidad con lae rei indicaciones 6 o 7 u 8 o 9 o l0 u ll o l3 o l4, caracterizadas ademas porque se logra liberación de perfiles de velocidades y duración variable mezclando polímero no b Loqueado y bloqueado en diferentes relaciones dentro de las mismas rnicroesferas. 17.- Las rnicrocapsulas de conformidad con las reivindicaciones 6 o 7 u 8 o 9 o 10 u 11 o 13 o 14, caracterizadas ademas porque el polipeptido at rapado es cualquiera de los agentes de vacuna contra E. Coll enterotoxigenica (ETEC) tales corno CFA/I, CFA/II, CSl, CS3, CS6 y CSl y otras enterotoxinas relacionadas con ETEC. 18.- Las rnicrocapsulas de conformidad con las reivindicaciones 6 o 7 u 8 o 9 o l0 u 11 o 13 o 14, caracterizadas ademas porque ei polipeptido atrapado consiste de anti genos de peptido de peso molecular que vana de aproximadamente 800 a 5000 daltons para inmunización contra E. coll enterotoxigénica (ETEC). 19.- Las microcápsulas de conformidad con las reivindicaciones l o 2 o 3 o 4 o 5, caracterizadas además porque dichos agentes biológicamente activos se seleccionan del grupo que consiste de fármacos de hormona, antibióticos, agentes antitumor, agentes antunflarnatorios, antipiréticos, analgésicos, antitusivos, expectorantes, sedantes, relajantes musculares, antiepilepticos, agentes antiulcerosos, antidepresivos, fármacos antialergicos, cardiotonicos, fármacos antiarntrnicos, vasodilatadores, antihipertensivos, diuréticos, anticoagulantes y antinarcoticos solubles en agua, en la escala de peso molecular- de 100 a 100,000 daltons. 20.- Las microcapsulas de conformidad con las reivindicaciones l o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 o 7 u 8, caracterizadas ademas por-que dicho poli (lactida/glicolida) biodegradable está en una tase oleosa y esta presente en aproximadamente 1-50% (p/p) . 21.- Las rnicrocapsulas de conformidad con las reivindicaciones I o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 u 8 o 9 o l0 u ll o l3 o 14, caracterizadas ademas porque la concentración del agente activo esta en la escala de 0.1 a aproximadamente 60% (p/p). 22.- Las rnicrocapeulas de conformidad con las reivindicaciones I o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 u 8 o 9 o l0 u ll o l3 o 14, caracterizadas ademas porque una relación de las fasee internas acuosa a oleosa es de aproximadamente 1/4 a 1/40 (v/v) . 23.- Un procedimiento para preparar formulaciones de microcápsulas de liberación controlada caracterizadas por liberación programable, sostenida, sin estallido, de agentes biológicamente activos, que comprende disolver en cloruro de met leno poli (lactida/glicolida) biodegradable, en forrna no bloqueada, y disolver- en agua un agente biológicamente activo o un núcleo activo; agregar la capa acuosa a la solución de polímero y emulsificar para proveer- una emulsión interna agua en aceite (w/o); estabilizar la emulsión w/o en una fase acuosa saturada de solvente que contiene un ernulsificador- de aceite en agua (o/w); agregar dicha emulsión w/o a una capa acuosa exter-na que contiene ernulsificador de aceite en agua para formar una emulsión ternaria; y agitar- la emulsión resultante agua en aceite en agua (w/o/w) durante un tiempo suficiente para remover dicho solvente, y enjuagar con agua las rnicrocapsulas endurecidas y liofilizar dichas icrocapsulas endurecidas. 24.- Un procedimiento para preparar formulaciones de microcápsulas de liberación controlada caracterizadas por liberación programable, sostenida, sin estallido, de agentes biológicamente activos, que comprende: disolver en cloruro de rnetileno pol?( lactida/glicolida) biodegradable, en forma bloqueada en sus extremos, y disolver en agua un agente biológicamente activo o un núcleo activo; agregar la capa acuosa a la solución de polímero y ernulsificar para proveer una emulsión interna agua en aceite (w/o); estabilizar la emulsión w/o en una fase acuosa saturada de solvente que contiene un ernulsificador de aceite en agua (o/w); agregar dicha emulsión w/o a una capa acuosa externa que contiene un ernulsi ficador de aceite on agua para formar una emulsLon terna na; y agitar la emulsión resultante agua en aceite en agua (w/o/w) durante un tiempo suficiente para remover dicho solvente, y enjuagar con agua Las rnicrocaps?lae endurecidas y liofilizar dichas rnicrocapsulas endurecidas. 25.- El procedimiento de conformidad con las reivindicaciones 23 o 24, caracterizado porque se agrega una fase acuosa externa saturada de solvente para ernulsificar la emulsi n interna w/o antes de la adición de la capa acuosa externa, para proveer microcapsulas de distribución reducida de tamaño entre 0.05 y 500 µrn. 26.- El procedimiento de conformidad con las reivindicaciones 23 o 24, caracterizado porque se provee una temperatura baja de aproximadamente 0-4 °C durante la preparación de la emulsión interna w/o, y se provee una temperatura ba a de aproximadamente 4-20 °C durante la preparación de la emulsión w/o/w para proveer- una emulsión estable y eficiencia superior de encapsulacion. 27.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque se usa una mezcla 100/0 de polímero no bloqueado y bloqueado en sus extremos para proveer liberación del núcleo activo de manera continua y sostenida sin una fase de retraso. 28.- Las rnicrocapeulae de conformidad con la reivindicación 6, caracterizadas además porque, cuando el polipeptido atr-apado es activo a pH ba o, tal corno LHRH, hormona adrenocorticotropica, factor de crecimiento epidérmico, calcitonina, el polipeptido liberado es bioactivo. 29.- Las icrocapsulas de conformidad con las reivindicaciones 6 o 7 u 8 o 9 o 10 u 11 , caracterizadas ademas porque cuando el peptido atrapado, tal co o histatma, ee inactivo a un pH bajo, se le agrega un agente de sales inorgánicas estabilizador- de pH a la fase acuosa interna para mantener la actividad biológica del peptido liberado. 30.- Las microcapsulas de conformidad con las reivindicaciones 6 o 7 u 8 o 9 o l0 u ll, caracterizadas además porque cuando el peptido atrapado, tal corno histatina, es inactivo a un pH bajo, se le agrega a la fase acuosa interna un agente tensioactivo no iónico tal corno esteres de acido graso de polioxietiiensorbitan (Tween 80, Tween 60 y Tween 20) y copolirneros en bloque de polioxietileno-polioxipropileno (Pluronics), para mantener la actividad biológica del polipeptido liberado. 31.- Las rnicrocapsulas de conformidad con la reivindicación 29, caracterizadas ademas porque se administran conjuntamente esferas de placebo cargadas con los agentes estabilizadores de pH con esferas cargadas de polipeptido para mantener el pH de la solución alrededor de las rnicrocapsulas y conservar- la actividad biológica del peptido liberado en casos en los cuales la adición de agentes estabilizadores de pH en la fase acuosa interna es inconveniente para la encapsulaci?n exitosa del polipeptido sensible al pH ácido. 32.- Las icrocapsulas de conformidad con la rei indicación JO, caracterizadas ademas porque se administran conjuntamente esferas de placebo cargadas con un agente tensioac ivo no iónico y esferas cargadas de polipeptido para mantener la actividad biológica del peptido liberado cuando la adición de tensioactivos no iónicos en la fase acuosa interna es inconveniente para la encapsulacion exitosa del polipeptido eensible a pH acido. 33.- Las rnicrocapsulas de conformidad con las reivindicaciones I o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 u 8 o 9 o l0 u ll o l2 o 13 o 14, que comprenden una mezcla de polímero no bloqueado y bloqueado, caracterizadas ademas porque la solubi lizacion completa del copolirnero no deja polímero residual en el sitio de administración y ocurre concurrentemente con la liberación completa del agente atrapado. 34.- Un procedimiento para usar las rnicrocapsulas de conformidad con las reivindicaciones 1 o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 o 7 u 8 o 9 o 10 o 13 o 14, para su administración en humano mediante rutas parenterales tales corno intramuscular y subcutánea. 35.- Un procedimiento para usar las rnicrocapsulas de conformidad con las reivindicaciones 1 o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 o 7 u 8 o 9 o 10 u 11 o 13 o L4, para su administración en humano mediante ruta tópica. 36.- Un procedimiento para usar las rnicrocapsulas de conformidad con lae reivindicaciones 1 o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 o 7 4? u 8 o 9 o 10 u 11 o 13 o L4, para administración en humano me iante r ut a s o ra le . 37.- Un procedimiento para usar las microcapsul s de conformidad con las reivindicaciones 1 o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 o 7 u 8 o 9 o lO u 11 o 13 o !4, para administración en humano mediante las rutas nasal, transdermica, rectal y vaginal.