MXPA03002049A - Genes de mamiferos: reactivos y metodos relacionados. - Google Patents

Abstract

Acidos nucleicos que codifican genes, proteínas purificadas y fragmentos de los mismos, de mamífero, v.gr., primate o roedor;también se proveen anticuerpos, tanto policlonales como monoclonales;se proveen métodos para usar las composiciones tanto para uso de diagnóstico como terapéuti

Description

GENES DE MAMIFEROS; REACTIVOS Y METODOS RELACIONADOS CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a composiciones y métodos para ejercer efecto sobre la fisiología de mamíferos, incluyendo la morfogénesis o función del sistema inmune. En particular, provee ácidos nucleicos, proteínas y anticuerpos que regulan el desarrollo y/o el sistema inmune. También se describen usos de diagnóstico y terapéutico de estos materiales.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La tecnología de ADN recombinante se refiere generalmente a técnicas para integrar información genética de una fuente donadora en vectores para procesamiento subsecuente, tal como mediante la introducción en un hospedero, por lo que la información genética transferida es copiada y/o expresada en el ambiente nuevo. Comúnmente, la información genética existe en forma de ADN complementario (ADNc) derivado de ARN mensajero (ARNm) que codifica un producto de proteína deseado. El portador frecuentemente es un plásmido que tiene la capacidad de incorporar ADNc para posterior replicación en un hospedero, y en algunos casos, para controlar realmente la expresión del ADNc y dirigir así la síntesis del producto codificado en el hospedero. Véase, por ejemplo, Sambrook, et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2a ed.) vols. 1 -3, CSH Press, NY. Por algún tiempo, se ha sabido que la respuesta inmune de los mamíferos se basa en una serie de interacciones celulares complejas denominadas "red inmune". Investigaciones recientes han provisto nuevas perspectivas en los mecanismos de esta red. Aunque sigue siendo claro que gran parte de la respuesta inmune de hecho tiene que ver con las interacciones en forma de red de los linfocitos, macrófagos, granulocitos y otras células, los inmunólogos ahora generalmente sostienen la opinión de que las proteínas solubles, conocidas como linfocinas, citocinas o monocinas, juegan papeles críticos en el control de estas interacciones celulares. De esta manera, hay un interés considerable en el aislamiento, caracterización y mecanismos de acción de factores moduladores de células, cuya comprención conducirá a avances importantes en el diagnóstico y terapia de muchas anormalidades módicas, por ejemplo, trastornos del sistema inmune. Las linfocinas aparentemente son mediadoras de las actividades celulares en una variedad de formas. Véase, por ejemplo, Paul (de. 1996) Fundamental Inmunology 3a ed., Lippincott; y Thomson (de. 1998) The Cytokine Handbook 3a de., Academic Press, San Diego. Se ha mostrado que soportan la proliferación, crecimiento, y/o diferenciación de células madre hematopoyéticas pluripotenciales, en un gran número de progenitores que comprenden linajes celulares diversos que constituyen un sistema inmune complejo. Las interacciones apropiadas y equilibradas entre los componentes celulares son necesarias para una respuesta inmune sana. Los linajes celulares diferentes a menudo responden de una manera diferente cuando se administran linfocinas junto con otros agentes. Linajes celulares especialmente importantes para la respuesta inmune incluyen dos clases de linfocitos: células B, que pueden producir y secretar inmunoglobulinas (proteínas con la capacidad de reconocer y unirse a material extraño para efectuar su remoción), y células T de varios subconjuntos que secretan linfocinas e inducen o suprimen a las células B y varias otras células (incluyendo otras células T) constituyendo la red inmune. Estos linfocitos interactúan con muchos otros tipos de células. Un medio para modular el efecto de una citosina al unirse a su receptor, y por lo tanto, potencialmente útil en el tratamiento de respuestas inmunes apropiadas, v.gr., situaciones autoinmunes, de inflamación, sepsis y cáncer, es inhibir la transducción de señal de receptor. A fin de caracterizar las propiedades estructurales de un receptor de citosina en mayor detalle y de entender el mecanismo de acción a nivel molecular, el receptor purificado es muy útil. Los receptores que aquí se proveen, en comparación con otros receptores o al combinar componentes estructurales, proveerá el entendimiento adicional de la transducción de señal inducida por unión de ligando. Un gen de receptor aislado debe proveer medios para generar una fuente económica del receptor, permitir la expresión de más receptores sobre una célula conduciendo a sensibilidad de prueba incrementada, promover la caracterización de varios subtipos y variantes de receptores, y permitir la correlación de actividad con estructuras receptoras. Además, fragmentos del receptor pueden ser útiles como agonistas o antagonistas deunión de ligando. Véase, v.gr., Harada et al., (1992) J. Biol. Chem, 267:22752-22758. A menudo, hay por lo menos dos subunidades en el receptor funcional. Véase, por ejemplo, Gonda y D'Andrea (1997) Blood 89:355-369; Presky, et al. (1996) Proc. Nati Acad. Sci. E.U.A. 93:14002-14007; Drachman y Kaushansky (1995) Curr, Opin. Hematol. 2:22-28; Theze (1994) Eur. Cytokine Netw. 5:353-368; y Lemmon y Schlessinger (1994) Trends Biochem. Sci. 19: 459-463. Otros tipos de receptores, v.gr., similares a TLR, serán similarmente útiles. De manera similar, la identificación de ligandos novedosos serán útiles. Los miembros de la familia de ligandos del factor de necrosis tumoral (FNT) y el factor de crecimiento de transformación (TGF) tiene efectos fisiológicos identificados. Finalmente, los genes que presentan patrones de expresión asociada con la enfermedad serán útiles en el diagnóstico u otros usos. La utilidad de diagnóstico molecular puede aplicarse para identificar pacientes que responderán a terapias particulares, o para predecir la respuesta al tratamiento. A partir de lo anterior, es evidente que el descubrimiento y desarrollo de nuevas proteínas y receptores, incluyendo aquellos similares a las linfocinas, deben contribuir a nuevas terapias para una amplia gama de condiciones degenerativas o anormales que involucran directa o indirectamente el desarrollo, diferenciación o función, v.gr., del sistema inmune y/o células hematopoyéticas. Además, los marcadores novedosos serán útiles en los métodos de diagnóstico y terapéutico moleculares. En particular, el descubrimiento y entendimiento de nuevos receptores para moléculas similares a las linfocinas que incrementan o potencian las actividades benéficas de otras linfocinas serían altamente ventajosas. La presente invención provee estos y compuestos relacionados, y métodos para su uso.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS Las figuras 1A-1 C muestran una alineación de secuencia de miembros de la familia de receptor de IFN relacionados. El factor de tejido es SEQ ID NO: 4; hlFNabR es SEQ ID NO: 5; CFR2-4 es SEQ ID NO: 6; cytor x es SEQ ID NO: 7; y cytor7 es SEQ ID NO: 8. La figura 2 muestra una alineación de polipéptidos de FNTx y FNTy (SEQ ID NO: 9, 11 y 13); p es primate, r es roedor. Las figuras 3A-3F muestran una alineación de secuencias de proteína de tipo TLR de primate y roedor. La figura 4 muestra una alineación de secuencias de polipóptido 5685C6 de primate y roedor. Las figuras 5A-5B muestra una alineación de homólogos de claudina: D2 (SEQ ID NO: 34); D8 (SEQ ID NO: 37); D17 (SEQ ID NO: 39); D7.2 (SEQ ID NO: 41 ). Las figuras 6A-6F muestran una alineación de homólogos de schlafen B (SEQ ID NO: 43); schlafen C (SEQ ID NO: 45); schlafen D (SEQ ID NO: 47); schlafen E (SEQ ID NO: 49) y schlafen F (SEQ ID NO: 51 ).

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención está dirigida a nuevos genes, v.gr., modalidades de primates. Estos genes incluyen receptores relacionados con receptores de citocina, por ejemplo, estructuras moleculares similares a receptor de citosina, designadas como subunidad 4 de receptor similar a interferón DNAX (DIRS4); citocinas relacionadas con FNT designadas como FNTx y FNTy; moléculas de tipo receptor de tipo Toll designadas como TLR-L1 , TLR-L2, TLR-L3, TLR-L4 y TLR-L5; una molécula relacionada con TGF designada como TGFx; una entidad producida por células Th2 designada como 5685C6; un grupo de genes relacionados con aquellos cuyos patrones de expresión se correlacionan con condiciones médicas designadas como claudina, de aquí en adelante referidas como claudinas D2, D8, D17 y D7.2; y un segundo grupo de genes relacionadas con aquellas cuyos patrones de exprersión se correlacionan con condiciones médicas designadas sachalfens, aquí referidas como sachalfens B, C, D, E y F. En particular, la presente invención provee una composición de material seleccionado de: polipéptido substancialmente puro o recombinante que comprende: por lo menos tres segmentos no traslapables distintos de por lo menos cuatro aminoácidos idénticos a segmentos de SEQ ID NO: 2 (DIRS4); SEQ ID NO: 9, 1 1 , 13 ó 53 (FNTx o FNTy); SEQ ID NO: 15, 17, 19, 21 , 23, 25 ó 27 (TLR-L1 a TLR-L5); SEQ ID NO: 29 (TGFx); SEQ ID NO: 31 ó 33 (5685C6); SEQ ID NO: 35, 37, 39 ó 41 (claudinas); SEQ ID NO: 43, 45, 47, 49 ó 51 (schlafens). En modalidades preferidas, los segmentos no traslapables distintos de identidad incluyen: uno de por lo menos ocho aminoácidos; uno de por lo menos cuatro aminoácidos y un segundo de por lo menos cinco aminoácidos; por lo menos tres segmentos de por lo menos cuatro, cinco y seis aminoácidos; o uno de por lo menos doce aminoácidos. En ciertas modalidades, el polipéptido es no glicosilado; es de primate; tal como un humano; comprende por lo menos diecisiete aminoácidos contiguos de la SEQ ID NO; presenta por lo menos cuatro segmentos no traslapables de por lo menos siete aminoácidos de la SEQ ID NO; tiene una longitud de por lo menos aproximadamente 30 aminoácidos; tiene un peso molecular de por lo menos 30 kD con glicosilación natural; es un polipéptido sintético; está unido a un sustrato sólido; es conjugado a otra porción química; o comprende una etiqueta de detección o purificación, incluyendo una secuencia de FLAG, His6, o Ig. En otras modalidades, la composición comprende: un polipéptido substancialmente puro; un polipéptido estéril; o el polipéptido y un vehículo, en donde el vehículo es: un compuesto acuoso, incluyendo agua, solución salina y/o regulador de pH; y/o formulado para administración oral, rectal, nasal, tópica o parenteral. Las modalidades de equipo incluyen aquellas que comprenden dicho polipéptido, y un compartimiento que comprende el polipéptido; o instrucciones para usar o desechar reactivos en el equipo. Las modalidades de compuesto de unión incluyen aquellas que comprenden un sitio de unión de antígeno a partir de un anticuerpo, que se une específicamente a un polipéptido descrito, en donde el compuesto de unión es un contenedor; el polipéptido es de un ser humano; el compuesto de unión es un fragmento Fv, Fab, o Fab2; el compuesto de unión se conjuga a otra porción química; o el anticuerpo es generado contra un polipéptido recombinante; es generado contra un polipéptido purificado; es inmunoseleccionado; es un anticuerpo policlonal; se une a un antígeno desnaturalizado; presenta un Kd para antígeno de por lo menos 30µ?; está unido a un substrato sólido, incluyendo una membrana de plástico o un glóbulo; está en una composición estéril; o está detectablemente marcado, incluyendo un marcador radioactivo o fluorescente. Los equipos incluyen aquellos que comprenden el compuesto de unión y un compartimiento que comprende el compuesto de unión; o instrucciones para usar o desechar los reactivos en el equipo. Se proveen métodos, v.gr., para producir un complejo antígeno:anticuerpo, que consisten en poner en contacto bajo condiciones apropiadas un polipéptido de primate con el anticuerpo descrito, permitiendo así que se forme el complejo. También se prefieren métodos para producir un complejo antígeno:anticuerpo, que consisten en poner en contacto bajo condiciones apropiadas un polipéptido con un anticuerpo que se une al mismo, permitiendo así que se forme el complejo. Y se proveen métodos para producir un compuesto de unión que consisten en: inmunizar un sistema inmune con un polipéptido descrito; introducir un ácido nucleico que codifica el polipéptido descrito a una célula bajo condiciones que conducen a una respuesta inmune, produciendo así el compuesto de unión; o seleccionar para una genoteca de despliegue de fagos para aquellos fagos que se unen al polipéptido deseado. Se proveen composiciones adicionales, v.gr., que comprenden un compuesto de unión estéril, o el compuesto de unión y un vehículo, en donde el vehículo es: un compuesto acuoso, incluyendo agua, solución salina y/o regulador de pH; y/o formulado para administración oral, rectal, nasal, tópica o parenteral. Se proveen modalidades de ácido nucleico, v.gr., un ácido nucleico aislado o recombinante que codifica un polipéptido descrito en donde el polipéptido es de un primate; o el ácido nucleico: codifica una secuencia de polipéptido antigónico; codifica una pluralidad de secuencias de poliéptido antigénico de SEQ ID NO: 2, 9, 1 1 , 13, 15, 17, 19, 21 , 23, 25, 27, 29, 31 , 33, 35, 37, 39, 41 , 43, 45, 47, 49, 51 ó 53; presenta identidad sobre por lo menos trece nucléotidos a un ADNc natural que codifica el segmento; es un vector de expresión; comprende además un origen de replicación; es de una fuente natural; comprende un marcador detectable; comprende una secuencia de nuclóotidos sintética; es menor que 6 kb; preferiblemente menor que 3 kb; es una sonda de hibridación para un gen que codifica el polipóptido; o es un iniciador de PCR, producto de PCR o iniciador de mutagénesis. Varias modalidades también incluyen células que comprenden ácidos nucleicos recombinantes, particularmente en donde la célula es: una célula procariótica; una célula eucariótica; una célula bacteriana; una célula de levadura; una célula de insecto; una célula de mamífero; una célula de ratón; una célula de primate o una célula humana. Las modalidades de equipo incluyen aquellas que comprenden un ácido nucleico descrito y un compartimiento que comprende el ácido nucleico; un compartimiento que comprende además un polipóptido de primate; o instrucciones para usar o desechar los reactivos en el equipo. Se proveen otros ácidos nucleicos que Incluyen aquellos que: hibridan bajo condiciones de lavado de 30 minutos a 37°C y menos de 2 de sal a la porción codificadora de SEQ ID NO: 1 , 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28. 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50 ó 52; o que presentan identidad en una extensión de por lo menos aproximadamente 30 nucleótidos a una SEQ ID NO: 1 , 8, 10. 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50 ó 52. Preferiblemente, las condiciones de lavado son: a 45°C y/o 500 mM de sal; a 55°C y/o 150 mM de sal; o la extensión es por lo menos de 55 a 75 nucleótidos. Se proveen métodos, v.gr., para hacer: un ácido nucleico dúplex que consiste en poner en contacto: un ácido nucleico descrito con un ácido nucleico complementario, bajo condiciones apropiadas, dando así por resultado la hibridación para formar el complejo; o un ácido nucleico complementario a un ácido nucleico descrito con su ácido nucleico complementario, bajo condiciones apropiadas, dando así por resultado la hibridación para formar el complejo; o un polipóptido que consiste en cultivar una célula que comprende un ácido nucleico descrito bajo condiciones que resultan en la expresión del ácido nucleico. También se provee: modular la fisiología o desarrollo de una célula que consiste en poner en contacto la célula con un polipóptido que comprende SEQ ID NO: 9, 1 1 , 13, 29, 31 ó 33; modular la fisiología o desarrollo de una célula que consiste en poner en contacto la célula con un compuesto de unión que se une a SEQ ID NO: 9, 1 1 , 13, 29, 31 , 33 ó 53, bloqueando así la señalización mediada por una proteína que comprende SEQ ID NO; marcar una célula que consiste en poner en contacto la célula con un compuesto de unión que se une a SEQ ID NO: 15, 17, 19, 21 , 13, 15 ó 37; o diagnosticar una condición módica que comprende un paso de evaluación de la expresión de ácido nucleico que comprende en poner en contacto la célula con un compuesto de unión que se une a SEQ ID NO: 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 ó 50.

DESCRIPCION DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS I. Aspectos generales La presente invención provee las secuencias de aminoácidos y las secuencias de ácidos nucleicos de genes de mamífero, aquí de primate. Entre ellas está la molécula de subunidad de tipo receptor de interferón, una designada subunidad 4 de la familia de receptor de interferón DNAX (DIRS4), que tienen propiedades definidas particulares, tanto estructurales como biológicas. Otras incluyen moléculas designadas FNTx y FNTy; moléculas de tipo receptor de tipo Toll TLR-L1 , TLR-L2, TLR-L3, TLR-L4 y TLR-L5; TGFx; 5685C6; claudinas D2, D8, D17 y D7.2; y sachalfens B, C, D, E y F. Varios ADNc que codifican estas moléculas se obtuvieron de genotecas de secuencias de ADNc de primate, por ejemplo, humano. Otras contrapartes de primates u otros mamíferos también serían deseables. En ciertos casos, también están disponibles variantes de empalme alternativos. Algunos de los métodos estándares aplicables se describen o se hace referencia a los mismos, por ejemplo, en Maniatis, et al. (1982) Molecular Cloninq. A Laboratorv Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press; Sambrook, et al. (1989) Molecular Cloninq:A Laboratorv Manual, (2a de.), vols. 1-3, CSH Press, NY; Ausubel, et al., Bioloqv, Greene Publishing Associates, Brooklyn, NY; o Ausubel, et al. (1987 y suplementos periódicos) Current Protocols in Molecular Bioloqv, Greene/Wiley, New York; cada uno de los cuales se incorpora aquí por referencia.

Un nucleótido y secuencia de aminoácidos correspondiente para un primate, v.gr., segmento de codificación de DIRS4 humano se muestra en SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente. El DIRS4 carece de un segmento de transmembrana, que sugiere que la subunidad actúa como una subunidad soluble, y por lo tanto sería una subunidad de receptor alfa. Alternativamente, o además, existiría una variante de empalme que contendría un segmento de transmembrana. Esto es consistente con la observación de que dos transcripciones se encuentran en muchos tipos de células. Las subunidades de tipo receptor de interferón pueden ser receptores para la familia de ligandos IL-10, v.gr., IL-10, AK155, IL-19, IL-20/mda-7, AK155, IL-D1 10, IL-D210, etc. Véase, v.gr., base de datos de secuencia de patente de Derwent. También se proveen secuencias de nucleótidos (SEQ ID NO: 8, 10, 12 y 52) y de aminoácidos correspondientes (SEQ ID NO: 9, 1 1 , 13 y 53) para formas de FNTx de primates y roedores y para formas FNTy de primates y roedores. Las características para FNTx de primate incluyen: sitios AMPc PK de alrededor de 38, 74, 79, 205; sitios Cas Phos de alrededor de 41 ,61 ; sitio Cyt_c-Me de alrededor de 43; sitio Histona-Me de alrededor de 35; sitios Myristoly de alrededor de 5, 57, 220, 232, sitio N-GL YCOSYL de alrededor de 229; sitios PHOS2 de alrededor de 38-41 ,79-82, 134-136; sitios PKC ph de alrededor de 77, 142. También los segmentos 119-250, y 209- 221 son notables. Para FNTx de roedores, las características incluyen: Una señal 1-19 prdicha; madura estando a alrededor de 20. Otras características: sitios cAMP PK de alrededor de 34,93, 132, 229, 248, 263; sitios Cas Phos de alrededor de 1 19, 232, 251 ; sitios Cyt-c- e de alrededor de 26, 90, 172; sitio Histona-Me de alrededor de 82; sitios Myristoly de alrededor de 278,290,303; N-GLYCOSYL: 3 sitios de alrededor de 39, 287, 297; sitios PHOS2 de alrededor de 26-29, 34-37, 90-92, 93-96, 138-140, 192-194, 248-251 ; y sitios PKC ph de alrededor de 43, 51 , 80, 81 , 152; sitio TyKin de alrededor de 154. El sitio de corte de señal predicho entre las posiciones 19 y 20: AGA-GA. Otros segmentos importantes incluyen de alrededor de 74-132, 94-1 18, 168-308, y 193-201 . Las secuencias de nucleotidos y aminoácidos correspondientes para TLR-L1 a través de nR-L5 se proveen en SEQ ID NO: 14-27. La distribución de EST para TLR1 sugiere expression de ARNm se restringe a tejido cerebral; cromosoma Xq27. La región de codificación de 1 -28 está en un solo exón. Las características para primates TLR1 (SEQ ID NO: 15) incluyen: sitio Tyr Kin de alrededor de 704 (KEGDPV AY); sitios Tyr Kin de alrededor de 713 (RNLQEFSY), 825(KPQSEPDY); sitios N-GL YC-SYL de alrededor de 84 (NYS), 219 (NCT), 294 (NPT), 366 (NIS), 421 (NLT), 583 (NLS); probablemente una protelna de membrana de tipo la; una posible secuencia de señal N-terminal no digerible; y una predicción de transmembrana de alrededor de 618-634 <612-646>. Para roedor TLR-L1 (SEQ ID NO: 17), las características incluyen: Un segmento de transmembrana predicho de alrededor de los residuos 56-75; y sitios TyKin predichos a alrededor de los residuos 136 y 145.

Para primate TLR-L2 (SEQ ID NO: 19) las características incluyen: sitios N-glicosilo de alrededor de 82 (NYT), 217 (NCS), 623 (NST), 674 (NQS); sitios TyKin de alrededor de 889 (RLREPVL Y), 450 (RLSPELFY), 91 7 (KLNVEPDY); sitio TyKin de alrededor de 889 (RLREPVL Y), 917 (KLNVEPDY). Estructuralmente esta molécula tiene homología al tipo de las proteínas de membrana. TLR-L3 (SEQ ID NO:23) de primate tiene las siguentes características: SIGNAL 1 -26; TRANS 30 14-34; Pfam:LRRNT43-73; Pfam:LRR78-101 ; LRR_TYP 100-123; Pfam:LRR 102-125. LRR_TYP 124-147; Pfam:LRR 126-149; LRR_TYP 148-171 ; Pfam:LRR 150-173; LRR_TYP 1 72-195; LRR_PS 172-194; Pfam:LRR 174-197; LRR_TYP 196-219; LRRCT 232-282; Pfam:LRRCT 232-282 con SEG 331 -349 o SEG 365-379; Pfam:LRRNT 372-405; LRRNT 372-410; Pfam:LRR 409-432; LRR_TYP 431 -454; Pfam:LRR 433-456; LRR_PS 455-477; LRR_TYP 455-478; Pfam:LRR 457-480; LRR_TYP 479-502; Pfam:LRR 481 -504 con SEG 502-519; LRR_TYP 503-526; LRR_PS 503-525; Pfam:LRR 505-528; Pfam:LRRCT 562-612; LRRCT 562-612; TRANS 653-673; SEG 653-676; SEG 712-723; SEG 760-776; SEG 831 -855. Estructuralmente esta molécula tiene homología al tipo de las proteínas de membrana. Distribuciones de EST de TLR-L4 (SEQ m NO:25) de primate sugiere que la expresión de RNAm están restringidas a tejido cerebral; Xq26.3-28 de cromosoma humano; las características predichas a aproximadamente, v.gr., SIGNAL 1 -18; SEG 22-38; Pfam:LRR 60-83; LRR_TYP 82-105; Pfam:LRR 84-107; LRR_PS 106-128; LRR_TYP 106-129; Pfam:LRR 108-131 ; LRR_TYP 130-153; Pfam:LRR 132- 55; LRR_SD22 154-1 74; L-PS 154-176; LRR_TYP 154-177; Pfam:LRR 156-178; LRR_SD22 177-198; LRR_PS 177-198; LRR_TYP 178-201 ; Pfam:LRR 179-200; Pfam:LRRCT213-263; LRRCT 213-263; LRRNT 341 -379; Pfam:LRRNT 341 -374; Pfam:LRR 378-401 ; LRR_TYP, 400-423; LRR_SD22 400-421 ; Pfam RR 402-425; LRR_TYP 424-447; LRR_SD22 424-450; LRR_PS 424-447; Pfam:LRR 426-449; LRR_TYP 448-471 ; LRR_PS 448-470; Pfam:LRR 450-473; LRR_TYP 472-495; LRR_PS 472-494; Pfam:LRR 474-497; SEG 474-488; LRRCT 531 -581 ; Pfam:LRRCT 531 -581 ; SEG 617-643; TRANS 623-643; sitios de N-GLICOSILO de alrededor de 81 (NFS), 216 (NCS), 308 (NPS), 325 (NLS), 423 (NLT); cromosoma Xq26.3-28; la región de codificación está en un solo exón. Estructuralmente esta molécula parece ser una protetna de membrana de tipo la. Para TLR-L5 (SEQ m NO:27) de primate la región de codificación entera radica en un solo exón en un cromosoma 13 humano; las características predichas a aproximadamente, v.gr., SIGNAL 1 -20; Pfam:LRR 65-88; 25 LRR_TYP 87-1 10; Pfam:LRR 89-1 12; LRR_TYP 1 1 1 -134; Pfam:LRR 1 13-136; LRR_PS 135-157; LRR SD22 135-156; LRR TYP 35-1 58; Pfam:LRR 137-160; LRR TYP 159-182; LRR_SD22 159-177; LRR_PS 1 59-181 ; PfamlRR 161 -184; LRR_SD22 182-203; LRR_TYP 185-206; Pfam:LRR 185-205; LRRCT 218-268; Pfam:LRRCT 218-268; Hybhd:LRRNT 328-364; Pfam:LRRNT 328-360; LRR SD22 386-407; PfamlRR 388-4 1 ; LRR TYP 389-409; LRR_PS 410-432; LRR_TYP 410-433; LRR_SD22 410-428; Pfam:LRR412-435; LRR_SD22 434-453; LRR_PS 434-457 LRR TYP 434-457; Pfam:LRR 436-459; SEG 436-445; LRR_PS 458-480; LRR_SD22 458-484; LRR_TYP 458-481 ; SEG 459-476; Pfam:LRR 460-483; SEG 503-516; LRRCT 517-567; PfanrLRRCT 517-567; SEG 585-596; TRANS 607-627; SEG 701 -710; 3 sitios N-GLICOSILO de alrededor de 292 (NDS), 409 (NL T), 572 (NPS); sitio TyKin de alrededor de 798 (KLMETLMY). Las secuencias de nucleotidos y aminoácidos correspondientes para un segmento codificador de TGFx de primate, v.gr., humano, están representadas por SEQ ID NO:28 y 29, respectivamente. TGFx humano mapea al cromosoma 5 (clon CITB-H1_2319M24). Las características predichas (SEQ ID NO: 29) incluyen: dominio de TGFB 1 15_212; Pfam:TGF-beta 1 15-167; Pfam:TGF-beta 205-212; residuos de Cys TGF-beta conservados en las posiciones 1 15, 144, 148, 177, 209, 21 1 . Las secuencias de nucleotidos y aminoácidos correspondientes para segmentos codificadores de 5685C6 se presentan en SEQ ID NO:30-33. El clon de primate mapea al cromosoma 21 q22.1 . Las características de 5685C6 (SEQ ill NO:31 ) de primate incluyen: sitios de N-GLICOSILO de alrededor de 10 (NST), 23 (NCS), 76 (NFT), 169 (NVT), 191 (NKS); el más probable sitio de digestión predicho entre las posiciones 19 y 20: VFA-LN. La proteína secretada producida por las células YH2. El polipéptido de roedor correspondiente (SEQ ill NO:33) tiene las siguientes características predichas: sitios de N-GLICOSILO de alrededor de 6 (NNT), 19 (NCS), 159 (NRS); el sitio de digestión más probable entre las posiciones 26 y 27: TKA-QN. Las moléculas 5685C6 parecen ser entidades solubles que se expresan en clones Th2. Las entidades son marcadores útiles en células Th2, y serán útiles en la caracterización de dichos tipos de células. Las secuencias de nucleotidos y aminoácidos correspondientes para claudinas D2, D8, D17, y D7.2 son SEQ ID NO:34-41 (Véase, v.gr., Simón, et al. (1999) Science 285: 103-106). Las secuencias de nucleotidos y aminoácidos correspondientes para schiafens B, C, D, E, y F (Véase, v.gr, Schwarz, et al. (1998) Immunity 9:657-668) son SEQ ID NO:42-51. Como se usa aquí, el término DIRS4 se debe usar para describir una proteína que comprende un segmento de proteína o péptido que tiene o comparte las secuencias de aminoácidos mostradas en SEQ ID NOs anteriormente indicadas, o un fragmento sustancial de las mismas. La invención también incluye una variación de proteína de los alelos DIRS4 respectivos cuya secuencia se provee, v.gr., una muteína o construcción extracelular soluble. Típicamente, dichos agonistas o antagonistas presentarán menos que aproximadamente 10% de diferencias de secuencia, y por lo tanto a menudo tendrán entre sustituciones de 1- y 1 1 -veces, v.gr., 30 2-, 3-, 5-, 7-veces, y otras. También abarca variantes alélicas y otras variantes, v.gr., naturals, polimórficas, de la proteína descrita. Típicamente, se unirá a su ligando biológico correspondiente, quizás en un estado dimerizado con una segunda subunidad de receptor, con alta afinidad, v.gr., por lo menos aproximadamente 100 nM, usualmente mejor que aproximadamente 30 nM, preferiblemente mejor que aproximadamente 10 nM, Y muy preferiblemente major que aproximadamente 3 nM. El término también se usará aquí para referirse a formas relacionadas que ocurren naturalmente, v.gr., alelos, variantes polimórficas, y variantes metabólicas de la proteína de mamífero. Asimismo, se hará referencia a los otros genes descritos aquí. Las descripciones generales dirigidas a los métodos para hacer características estructurales con frecuencia serán aplicables a las otras entidades que aquí se proveen, v.gr., FNTx, FNTy, TLR-LI, TLR-L2, TLR-L3, TLR-L4, TLR-L5, TGFx, 5685C6, claudinas D2, D8, D 17, D7.2, y schlafens B, C, D, E, y 10 F. Los anticuerpos para los mismos, ácidos nucleicos que los codifican, etc., serán de manera similar aplicables a las diferentes entidades. Esta invención también comprende proteínas o péptidos que tienen una identidad de secuencia de aminoácidos substancial con las secuencias de aminoácidos. Incluirán variantes de secuencia con relativamente pocas sustituciones, por ejemplo, preferiblemente menos de aproximadamente 3-5. Un "fragmento" o "segmento" de polipéptido sustancial es una extensión de residuos de aminoácidos de por lo menos aproximadamente 8 aminoácidos, generalmente de por lo menos 10 aminoácidos, muy generalmente de por lo menos 12 aminoácidos, a menudo de por lo menos 14 aminoácidos, típicamente de por lo menos 16 aminoácidos, típicamente por lo menos 18 aminoácidos, muy típicamente de por lo menos 20 aminoácidos, por lo general de por lo menos 22 aminoácidos, muy generalmente de por lo menos 24 aminoácidos, preferiblemente de por lo menos 26 aminoácidos, muy preferiblemente de por lo menos 28 aminoácidos y en modalidades particularmente preferidas, por lo menos aproximadamente 30 o más aminoácidos. Las secuencias de segmentos de diferentes proteínas se pueden comparar unos con otras sobre extensiones de longitud apropiadas, típicamente entre motivos conservados. Los fragmentos tienen extremos que son y/o terminan virtualmente en todas las posiciones, v.gr., que empiezan en los residuos 1 , 2, 3, etc., y que terminan en, v.gr., el carboxi-terminal (N), N-1 , N-2, etc., en todas las combinaciones prácticas de diferentes longitudes. Los polipéptidos particularmente interesantes tienen uno o ambos extremos correspondientes a limites de motivo o dominio estructural, como se describe, o de las longitudes designadas con uno adyacente de los límites descritos. En las modalidades de ácidos nucleicos, a menudos los segmentos que codifican tales polipéptidos serían de particular interés. La homología de secuencia de aminoácidos, o identidad de secuencia, se determina optimizando coincidencias de residuos. En algunas comparaciones se pueden introducir espacios según se requiera. Véase, por ejemplo, Needleham, et al., (1970) J. Mol. Biol. 48:443-453; Sankiff, et al., (1983) capítulo uno en Time Warps, String Edits, y Macromolecules: The Theory y Practica of Sequence Comparíson, Addison-Wesley, Reading, A; y paquetes de software IntelliGenetics, Mountain View, CA; y the University of Wisconsin Genetics Computer Group (GCG; Grupo de Computación en Genética de la Universidad de Wisconsin), Madison, Wl; cada uno de los cuales se incorpora aquí por referencia. Este análisis es especialmente importante cuando se consideran substituciones conservativas como coincidencias. Las sustituciones conservativas típicamente incluyen sustituciones dentro de los siguientes grupos: glicina, alanina; valina, isoleucina, leucina; ácido aspártico, ácido glutámico; asparagina, glutamina; serina, treonina; Usina, arginina; y fenilalanina, tirosina. Se pretende que las secuencias de aminoácidos homologas incluyan variaciones alélicas naturales y de interespecies en la secuencia de citocina. Las proteínas o péptidos homólogos típicos tendrán una homología de 50 a 100% (si se puede introducir espacios), a una homología de 60 a 100% (si se incluyen sustituciones conservativas) con un segmento de secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos anteriormente indicadas. Las mediciones de homología serán por lo menos de aproximadamente 70%, generalmente por lo menos de 76%, muy generalmente por lo menos de 81 %, a menudo por lo menos de 85%, muy a menudo por lo menos de 88%, típicamente por lo menos de 90%, muy típicamente por lo menos de 92%, usualmente por lo menos de 94%, muy usualmente por lo menos de 95%, preferiblemente por lo menos de 96% y muy preferiblemente por lo menos de 97%, y en modalidades particularmente preferidas, por lo menos 98% o más. El grado de homología variará con la longitud de los segmentos comparados. Las proteínas o póptidos homólogos, tales como las variaciones alólicas, compartirán la mayoría de las actividades biológicas con las modalidades descritas individualmente, v.gr., en los diversos cuadros. Tal como se usa aquí, el término "actividad biológica" se usa para describir, sin limitación, efectos sobre respuestas inflamatorias, inmunidad innata y/o desarrollo morfogénico por ligandos en forma de citocina. Por ejemplo, estos receptores mediarían las actividades de la fosfatasa o fosforilasa, dichas actividades son fácilmente medidas mediante procedimientos estándares. Véase, por ejemplo, Hardie, et al. (eds. 1995) The Protein Kinase FactBook vols. I y II, Academic Press, San Diego, CA; Hanks, et al. (1991 ) Meth. Enzymol. 200:38-62; Hunter, et al. (1992) Cell 70:375-388; Lewin (1990) Cell 61 :743-752; Pines, et al. (1991 ) Coll Spring Harbor Symp. Quant. e o/. 56:449-463; y Parker, et al. (1993) Natura 363:736-738. Los receptores, o porciones de los mismos, pueden ser útiles como enzimas marcadoras de fosfato para marcar substratos generales o específicos. Los términos ligando, agonista, antagonista y análogo de, por ejemplo, una DIRS4, incluyen moléculas que modulan las respuestas celulares características a proteínas de ligando de citocina, así como moléculas que poseen las características de competencia de unión estructural más estándares de interacciones de receptor de ligando, por ejemplo, en donde el receptor es un receptor natural o un anticuerpo. Las respuestas celulares probablemente son típicamente mediadas a través de las vías del receptor tirosina cinasa.

También, un ligando es una molécula que sirve ya sea como un ligando natural al cual se une dicho receptor o un análogo del mismo o una molécula que es un análogo funcional del ligando natural. El análogo funcional puede ser un ligando con modificaciones estructurales, o puede ser una molécula completamente no relacionada que tenga una forma molecular que interactúe con los determinantes de unión del ligando apropiados. Los ligandos pueden servir como agonistas o antagonistas, véase, por ejemplo, Goodman, et al. (eds. 1990) Goodman & Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics, Pergamon Press. New York. El diseño de fármaco racional se puede basar también en estudios estructurales de las formas moleculares de un receptor o anticuerpo y otros efectores o ligandos. Véase, por ejemplo, Herz, et al. (1997) J. Recept. Signal Transduct. Res. 17:671-776; y Chaiken, et al. (1996) Trends Biotechnol. 14:369-375. Los efectores pueden ser otras proteínas que son mediadoras de otras funciones en respuesta a la unión de ligando, u otras proteínas que normalmente interactúan con el receptor. Un medio para determinar qué sitios interactúan con otras proteínas específicas es una determinación de estructura física, por ejemplo, cristalografía de rayos X o técnicas de R N bidimensionales. Estas proveerán una guía mediante la cual los residuos de aminoácidos forman regiones de contacto molecular. Para una descripción detallada de la determinación estructural de proteína, véase, por ejemplo, Blundell y Johnson (1976) Protein Crystallography, Academic Press, New York, que se incorpora aquí por referencia.

II. Actividades Las proteínas similares a receptor de citocina tendrán muchas actividades biológicas diferentes, por ejemplo, modulación de la proliferación de células, o en el metabolismo de fosfato, añadiéndose o removiéndose de substratos específicos, típicamente proteínas. Esto generalmente dará por resultado la modificación de una función inflamatoria, otra respuesta inmune innata o un efecto morfológico. La subunidad probablemente tendrá una baja afinidad específica al ligando. Los diferentes receptores pueden mediar señales diferentes. Los receptores de TLR-L pueden enviar señales de biología similar a los TLR, que median las respuestas inmunes o de desarrollo inatas fundamentales. Véase, v.gr., Aderem y Ulvetich (2000) Nature 406:782-787. Los FNTs y TGF probablemente envían señales como citocinas, como puede ser el 5685C6, que aparentemente es expresada por células TH2. Los genes 5685C6 parecen ser proteínas secretadas, que presentan una secuencia de señales. Las claudinas parecen ser proteínas de membrana que presentan 4 segmentos de transmembrana, y parecen estar asociadas con uniones herméticas y/o transporte paracelular. También adectan la permeabilidad epitelial o conductancias, v.gr., iones a través de membranas. El miembro claudina-D2 de la familia de claudinas se encuentra que tiene una expresión que se correlaciona con la enfermedad de Crohn. Los otros miembros de la familia presentan regulación diferencial en estados de enfermedad, v.gr., en enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa y varias enfermedades pulmonares intersticiales. Esto es consistente con un papel importante en estos procesos de enfermedad. Un papel importante en las uniones herméticas/transporte paracelular es consistente con problemas en la fisiología intestinal. Las claudinas definen una familia de multigenes relacionados de proteínas 4 TM con distintos patrones de distribución de tejido. Las claudina son proteínas estructurales importantes de uniones herméticas (TJs) y pueden promover su formación. Su expresión es necesaria pero no suficiente para la formación de unión hermética. Cuando se expresa en fibroblastos, la claudina-1 es capaz de inducir una asociación continua de células adyacentes, dando por resultado un patrón en forma de adoquín. Sin embargo, esta barrera continua no es una unión hermética. Las claudinas se pueden encontrar fuera de la unión hermética en ciertas células. La claudina-3 y la claudina-4 son receptores para enterotoxina de Clostrisium prefrinqens, un agente causante de acumulación de fluido en el tracto iontestinal, causando diarrea. La claudina-5 es eliminada en el síndrome Velo-cardio-facial (VCFS). La claudina-5 sólo se expresa en células endoteliales, y en algunos tejidos es incluso restringida a las arterias. Las mutaciones en Paracelina-1 , un miembro de la familia de la claudina y una proteína de unión hermética renal importante, causa desperdicio de magnesio renal con nefrocalcínosis. Por lo tanto, las claudinas pueden jugar papeles importantes en conductancia paracelular selectiva al determinar la permeabilidad de diferentes epitelios.

Los schafelns son miembros de la familia de proteínas cuyos miembros son gener reguladores del crecimiento. Véase, v.gr., Schwarz, et al. (1998) Immunity 9:657-668. Estas secuencias humanas novedosas están relacionadas con el gen Schafeln2 de ratón. Se observó que es diferencialmente regulado en IBD de ratón: Rag Hb+ (tratado con IL-10) fue mayor que Rag Hb+ solo y simuló la expresión de Rag Hb-. Las DIRS4 tienen motivos característicos de un receptor que dan señalización a través de la vía JAK. Véase, v.gr., Ihle et al. (1997) Stem Cells 1 5 (suplemento 1 ): 105-1 1 1 ; Silvennionen et al., (1997) APMIS 105:497-509, Levy (1997) Cytokine Growth Factor Review 8:81 -90; Winston y Hunter (1996) Current Biol. 6:668-671 ; Barret (1996) Bailieres Clin. Gastroenterol 10:1 -15; y Briscoe et al. (1996) Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 351 : 167-171 . Las actividades biológicas de las subunidades de receptor de citosina u otras subunidades de receptor estarán relacionadas con la adición o remoción de porciones de fosfato a los substratos, típicamente de una manera específica, pero ocasionalmente de una manera no específica. Los substratos se pueden identificar, o las condiciones para actividad enzimática se pueden probar mediante métodos estándares, por ejemplo, como se describe en Hardie, et al. (eds. 1995) The Protein Kinase FactBook vols. I y II, Academic Press, San Diego, CA; Hanks, et al. (1991 ) Meth. Enzymol. 200:38-62; Hunter, et al. (1992) Cell 70:375-388; Lewln (1950) Cell 61 :743-752; Pines, et al. (1991 ) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 56:449-463; y Parker, et al. (1993) Nature 363:736-738.

III. Acidos nucleicos Esta invención contempla el uso de ácidos nucleicos aislados o fragmentos, por ejemplo, que codifiquen estas proteínas o proteínas estrechamente relacionadas, o fragmentos de las mismas, por ejemplo, para codificar un polipéptido correspondiente, preferiblemente uno que sea biológicamente activo. Además, esta invención cubre ADN aislados o recombinantes que codifican combinaciones de dichas proteínas o polipéptidos que tienen secuencias características de las DIRS4 o los otros genes. Típicamente, el ácido nucleico es capaz de hibridar, bajo condiciones apropiadas, con un segmento de secuencia de ácidos nucleicos mostrado en la SEQ ID Nos. Apropiados anteriormente indicados, pero preferiblemente no con otros genes. Dicha proteína o polipéptido biológicamente activo puede ser una proteína de longitud completa, o fragmento, y típicamente tendrá un segmento de secuencia de aminoácidos altamente homóloga, por ejemplo, presentando extensiones de identidad significativas, a las descritas. Además, esta invención cubre el uso de ácido nucleico aislado o recombinante, o fragmentos del mismo, que codifica proteínas que tienen fragmentos que son equivalentes a las proteínas descritas. Los ácidos nucleicos aislados pueden tener las secuencias reguladoras activas en los flancos 5' y 3', por ejemplo, promotores, incrementadores, señales de adición poly-A y otros del gen natural. Un ácido nucleico "aislado" es un ácido nucleico, por ejemplo, ARN, ADN o un polímero mixto, que es substancialmente puro, por ejemplo, separado de otros componentes que naturalmente acompañan a una secuencia nativa, tales como ribosoma, polimerasas y secuencias genómicas flanqueadoras de las especies originadoras. El término abarca una secuencia de ácidos nucleicos que ha sido removida de su ambiente natural e incluye aislados de ADN recombinante o clonado, que son por lo tanto distinguibles de las composiciones que ocurren en forma natural, y análogos químicamente sintetizados o análogos biológicamente sintetizados por sistemas heterólogos. Una molécula substancialmente pura incluye formas aisladas de la molécula, ya sea completamente o substancialmente pura. Un ácido nucleico aislado generalmente será una composición homogénea de moléculas, pero en algunas modalidades obtendrá heterogeneidad, preferiblemente menor. Esta heterogeneidad se encuentra típicamente en los extremos del polímero o porciones no críticas para una función o actividad biológica deseada. Un ácido nucleico "recombinante" se define típicamente ya sea por su método de producción o su estructura. En referencia a su método de producción, por ejemplo, un producto hecho por un procedimiento, este procedimiento utiliza técnicas de ácido nucleico recombinante, por ejemplo, implicando la intervención humana en la secuencia de nucleótidos. Típicamente esta intervención implica manipulación in vitro, aunque bajo ciertas circunstancias pueden implicar técnicas de reproducción de animales más clásicas. Alternativamente, puede ser un ácido nucleico hecho generando una secuencia que comprenda la fusión de dos fragmentos que no sean naturalmente contiguos uno a otro, pero pretende excluir productos de la naturaleza, por ejemplo, mutantes que ocurren en forma natural, como se encuentra en su estado natural. Por lo tanto, por ejemplo, se contemplan productos hechos transformando células con un vector que ocurre en forma natural, como lo son los ácidos nucleicos que comprenden una secuencia derivada usando cualquier procedimiento de oligonucleótido sintético. Dicho procedimiento a menudo se hace para reemplazar un codón por un codón redundante que codifique el mismo o un aminoácido conservador, aunque típicamente introduciendo o removiendo un sitio de reconocimiento de secuencia de enzima de restricción. Alternativamente, el procedimiento se realiza para unir entre si segmentos de ácido nucleico de funciones deseadas para generar una identidad genética individual que comprenda una combinación deseada de funciones no encontrada en las formas naturales comúnmente disponibles, por ejemplo, que codifique una proteína de fusión. Los sitios de reconocimiento de enzima de restricción a menudo son el objetivo de dichas manipulaciones artificiales, pero otros objetivos específicos de sitio, por ejemplo, promotores, sitios de replicación de ADN, secuencias de regulación, secuencias de control u otras características útiles se pueden incorporar por diseño. Un concepto similar se pretende para un recombinante, por ejemplo, polipóptido. Este incluirá una repetición dimérica. Se incluyen específicamente ácidos nucleicos sintéticos que, por redundancia del código genético, codifican polipóptidos equivalentes a fragmentos de de las secuencias descritas y fusiones de secuencias de varias moléculas relacionadas diferentes, por ejemplo, otros miembros de la familia de receptores de citocina. Un "fragmento" en un contexto de ácido nucleico es un segmento contiguo de por lo menos aproximadamente 17 nucleótidos generalmente por lo menos 21 nucleótidos, muy generalmente por lo menos 25 nucleótidos, ordinariamente por lo menos 30 nucleótidos, muy ordinariamente por lo menos 35 nucleótidos, a menudo por lo menos 39 nucleótidos, muy a menudo por lo menos 45 nucleótidos, típicamente por lo menos 50 nucleótidos, muy típicamente por lo menos 55 nucleótidos, usualmente por lo menos 60 nucleótidos, muy usualmente por lo menos 66 nucleótidos, preferiblemente por lo menos 72 nucleótidos, muy preferiblemente por lo menos 79 nucleótidos y en modalidades particularmente preferidas será por lo menos 85 o más nucleótidos. Típicamente, los fragmentos de secuencias genéticas diferentes se pueden comparar unos con otros en extensiones de longitud apropiadas, segmentos particularmente definidos tales como los dominios que se describen más adelante. Un ácido nucleico que codifica para, v.gr., un DIRS4 será particularmente útil para identificar genes, especies de ARNm y ADNc que codifican para sí mismas o proteínas estrechamente relacionadas, así como ADNs que codifican para variantes polimórficas, alélicas u otras variantes genéticas, por ejemplo, a partir de diferentes individuos o especies relacionadas. Otros genes serán útiles como marcadores para tipos de células particulares, o el diagnóstico de varias condiciones fisiológicas. Sondas preferidas para dichas selecciones, en ciertas circunstancias, pueden ser aquellas regiones del gen que se conservan entre las diferentes vanantes polimórficas o que contienen nucleótidos que carecen de especificidad, y preferiblemente son de longitud completa o casi completa. En otras situaciones, las secuencias específicas de variantes polimórficas serán más útiles. Esta invención cubre además moléculas de ácido nucleico recombinante o fragmentos que tienen una secuencia de ácido nucleico idéntica a o altamente homóloga al ADN aislado que aquí se expone. En particular, las secuencias a menudo se enlazarán operativamente a segmentos de ADN que controlan la transcripción, la traducción y la replicación de ADN. Alternativamente, los clones recombinantes derivados de las secuencias genómicas, v.gr., que contienen intrones, serán útiles para estudios transgénicos, incluyendo, v.gr., células y organismos transgénicos, y para terapia gónica. Véase, v.gr., Goodnow (1992) "Transgenic Animáis" en Roitt (ed.) Enciclopedia of Immunoloqy Academic Press, San Diego, pp. 1502-1504; Travis (1992) Science 256:1392-1394; Kuhn et al. (1991 ) Science 254:707-710; Capecchi (1989) Science 244:1288; Robertson (1987) (ed) Teratocarcinomas and Embrionic Stem Cells: A Practical Approach IRL Press, Oxford; y Rosenberg (1992) J. Clinical Oncology 10:180-199. También se provee la asociación operable de los promotores heterólogos con secuencias de genes, como lo son los vectores que codifican, v.gr., el DIRS4 con una pareja de receptor. Véase, v.gr., Treco et al. WO/29411 o USSN 08/406,030.

Secuencias de ácidos nucleicos altamente idénticas u homologas, cuando se comparan con otras, por ejemplo secuencias de DIRS4, presentan similitud significativa. Los estándares para homología en ácidos nucleicos son ya sea mediciones para homología generalmente usadas en la técnica por comparación de secuencias o basadas en condiciones de hibridación. Las condiciones de hibridación comparativas se describen con mayor detalle más adelante. La identidad substancial en el contexto de comparación de secuencia de ácidos nucleicos significa ya sea que los segmentos, o sus hebras complementarias, cuando se comparan, son idénticos cuando se alinean en forma óptica, con inserciones o deleciones apropiadas, en por lo menos aproximadamente 60% de los nucleótidos, generalmente por lo menos 66%, ordinariamente por lo menos 71 %, a menudo por lo menos 76%, muy a menudo por lo menos 80%, usualmente por lo menos 84%, muy usualmente por lo menos 88%, típicamente por lo menos 91%, muy típicamente por lo menos aproximadamente 93%, preferiblemente por lo menos aproximadamente 95%, muy preferiblemente por lo menos aproximadamente 96 a 98% o más, y en modalidades particulares, tan alto como 99% aproximadamente o más de los nucleótidos, incluyendo, por ejemplo, segmentos que codifican dominios estructurales tales como los segmentos que se describen más adelante. En forma alternativa, la identidad substancial existirá cuando los segmentos se hibriden bajo condiciones de hibridación selectiva, a una hebra o su complemento, típicamente usando una secuencia descrita. Típicamente, la hibridación selectiva ocurrirá cuando haya por lo menos 55% de homología sobre una extensión de por lo menos aproximadamente 14 nucleótidos, muy típicamente por lo menos aproximadamente el 65%, preferiblemente por lo menos aproximadamente 75% y muy preferiblemente por lo menos aproximadamente 90%. Véase, Kanehisa (1984) Nucí. Acids Res. 12:203-213, que se incorpora aquí por referencia. La longitud de comparación de homología, como se describe, puede ser sobre extensiones más largas y en algunas modalidades será sobre una extensión de por lo menos aproximadamente 17 nucleótidos, generalmente por lo menos de aproximadamente 20 nucleótidos, ordinariamente por lo menos aproximadamente 24 nucleótidos, usualmente por lo menos aproximadamente 28 nucleótidos, típicamente por lo menos aproximadamente 32 nucleótidos, muy típicamente por lo menos aproximadamente 40 nucleótidos, preferiblemente por lo menos aproximadamente 50 nucleótidos y muy preferiblemente por lo menos aproximadamente 75 a 100 o más nucleótidos. Esto incluye, por ejemplo, 125, 1 50, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 400, 500, 700, 900, y otras longitudes. Condiciones astringentes, en referencia a homología en el contexto de hibridación, serán condiciones combinadas astringentes de sal, temperatura, solventes orgánicos y otros parámetros típicamente controlados en reacciones de hibridación. Las condiciones de temperatura astringentes usualmente incluirán temperaturas en exceso de aproximadamente 30°C, muy usualmente en exceso de aproximadamente 37°C, típicamente en exceso de aproximadamente 45°C, muy típicamente en exceso de aproximadamente 55°C, preferiblemente en exceso de aproximadamente 65°C, y muy preferiblemente en exceso de aproximadamente 70°C. Las condiciones de sal astringentes ordinariamente serán de por lo menos aproximadamente de 500 mM, usualmente por lo menos de 400 mM, muy usualmente por lo menos de aproximadamente 300 mM, típicamente menos de aproximadamente 200 mM, preferiblemente menos de aproximadamente 100 mM y muy preferiblemente menos de aproximadamente 80 mM, incluso hasta menos de aproximadamente 20 mM. Sin embargo, la combinación de parámetros es más importante que la medición de cualquier parámetro individual. Véase, por ejemplo, Wetmur y Davidson (1968) J. Mol. Biol. 31 :349-370, que se incorpora aquí por referencia. El ADN aislado se puede modificar fácilmente mediante substituciones de nucleótidos, deleciones de nucleótidos, inserciones de nucleótidos e inversiones de extensiones de nucleótidos. Estas modificaciones dan por resultado secuencias de ADN novedosas que codifican esta proteína o sus derivados. Estas secuencias modificadas se pueden usar para producir proteínas mutantes (muteínas) o para incrementar la expresión de especies variantes. La expresión incrementada puede implicar amplificación de genes, transcripción incrementada, traducción incrementada y otros mecanismos. Dichos derivados mutantes incluyen mutaciones predeterminadas o específicas de sitio de la proteína o sus fragmentos, incluyendo mutaciones silenciosas usando degeneración de código genético. "DIRS4 muíante", tal como se usa aquí, abarca un polipéptido que cae de otra manera dentro de la definición de homología del DIRS4 como se expuso anteriormente, pero que tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de otras proteínas similares a receptor de citocina como se encuentra en la naturaleza, ya sea a manera de deleción, substitución o inserción. En particular "DIRS4 mutante especifico de sitio'' comprende una proteína que tiene una identidad de secuencia substancial con una proteína de SEQ ID NO: 2, y típicamente comparte la mayoría de las actividades biológicas o efectos biológicos de las formas que aquí se describen. Aunque los sitios de mutaciones específicos de sitio son predeterminados, los mutantes no necesitan ser específicos de sitio. La mutagénesis de DIRS4 en mamíferos se puede lograr haciendo inserciones o deleciones en el gen, acopladas con la expresión. Las sustituciones, deleciones, inserciones o muchas combinaciones se pueden generar para llegar a una construcción final. Las inserciones incluyen fusiones amino-terminal o carboxi terminales. La mutagénesis aleatoria se puede conducir en un codón objetivo y los mutantes de DIRS4 en mamíferos expresados pueden ser seleccionados para la actividad deseada, proveyendo algún aspecto de una relación estructura-actividad. Los métodos para hacer mutaciones de sustitución en sitios predeterminados en el ADN que tienen una secuencia conocida son bien conocidas en la técnica, por ejemplo, por mutagénesis de iniciador de 13. Véase también Sambrook, et al. (1989) y Ausubel, et al. (1987 y suplementos periódicos).

Las mutaciones en el ADN normalmente no colocarían secuencias codificadoras fuera de los marcos de lectura y preferiblemente no crearían regiones complementarias que pudieran hibridar para producir estructura de ARNm secundaria tales como lazos o pasadores. El método de fosforamidita descrito por Beaucage y Carruthers (1981 ) Tetra. Letts. 22:1859-1862, producirá fragmentos de ADN sintéticos adecuados. Un fragmento de doble hebra a menudo se obtendrá ya sea sintetizando la hebra complementaria y templando la hebra bajo condiciones apropiadas o añadiendo la hebra complementaria usando ADN polimerasa con una secuencia de iniciador apropiada. Las técnicas de reacción de cadena de polimerasa (PCR) a menudo se pueden aplicar en mutagónesis. Alternativamente, los iniciadores de mutagónesis se usan comúnmente en métodos para generar mutaciones definidas en sitios predeterminados. Véase, por ejemplo., Innis, et al. (eds. 1990) PCR Protocols: A Guido to methods and Applications Academic Press, San Diego, CA; y Dieffenbach y Dveksler (1995; eds.) PCR Primer: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Press, CSH, NY. La tecnología de antisentido y otras tecnologías para bloquear la expresión de estos genes también están disponibles. Véase, v.gr., Mosquita y Paterson (1999) Proa Nat'l Acad. Sci. E.U.A. 96:1451-1456.

IV. Proteínas, péptidos Como se describió anteriormente, la presente invención comprende DIRS4 de primate, v.gr., cuyas secuencias se describen en SEQ ID NO; 2, y que se describieron anteriormente. También se contemplan variantes alélicas y otras variantes, por ejemplo, proteínas de fusión que combinan porciones de dichas secuencias con otras, incluyendo, por ejemplo, etiquetas de epítope y dominios funcionales. La presente invención también provee proteínas recombinantes, v.gr., proteínas heterólogas usando segmentos de esas proteínas. Una proteína de fusión heteróloga es una fusión de proteínas o segmentos que naturalmente no están normalmente fusionadas de la misma manera. Por lo tanto, v.gr., el producto de fusión de DIRS4 con otro receptor de citocina es una molécula de proteína continua que tiene secuencias fusionadas en un enlace peptídico típico, típicamente hecho como un solo producto de traducción y que presenta propiedades, v.gr., secuencia y antigenicidad, derivadas de cada péptido de fuente. Un concepto similar se aplica a secuencias de ácidos nucleicos heterólogos. Además, se pueden hacer nuevas construcciones combinando dominios funcionales o estructurales similares de otras proteínas relacionadas, por ejemplo, receptores de citocina o genes similares a receptores de tipo Toll, incluyendo variantes de especie. Por ejemplo, la unión de ligandos u otros segmentos se pueden "intercambiar" entre diferentes polipóptidos o fragmentos de fusión nuevos. Véase, por ejemplo, Cunningham, et al. (1989) Science 243: 330-1336; y O'Dowd, et al. (1988) J. Biol. Chem. 263:15985-15992, cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia. Por lo tanto, nuevos polipóptidos quiméricos que presentan nuevas combinaciones de especificidades resultarán de la unión funcional de especificidades de la unión de receptor. Por ejemplo, los dominios de unión de ligando de otras moléculas receptoras relacionadas se pueden añadir o pueden sustituir a otros dominios de estas proteínas o proteínas relacionadas. La proteína resultante a menudo tendrá función y propiedades híbridas. Por ejemplo, una proteína de fusión puede incluir un dominio de dirección a un objetivo que puede servir para proveer el secuestro de la proteína de fusión a un organelo subcelular particular. Parejas y secuencias de fusión candidatas se pueden seleccionar de varias bases de datos de secuencias, por ejemplo, GenBank, c/o IntelliGenetics, Mountain View, CA; y BCG, University of Wisconsin Biotechnology Computing Group, Madison, Wl., que se incorporan cada una aquí por referencia. La presente invención particularmente provee muteínas que se unen al ligando en forma de citocina y/o que son afectadas en la transducción de señal. La alineación estructural de DIRS4 de humano con otros miembros de la familia de receptor de citocina muestra características/residuos conservados. La alineación de la secuencia de DIRS4 de humano con otros miembros de la familia de receptor de citocina indica varias características estructural y funcionalmente compartidas. Véase también Bazan, et al. (1996) Nature 379:591 ; Lodi, et al. (1994) Science 263: 762- 766; Sayle y Milner-White (1995) TIBS 20:374-376; y Gronenberg, et al. (1991 ) Protein Engineering 4:263-269. De manera similar, los otros genes tienen miembros de familia relacionados. Se prefieren particularmente sustituciones ya sea con secuencias de ratón o secuencias humanas. Por el contrario, sustituciones conservativas lejanas de las regiones de interacción de unión de ligando probablemente conservarán la mayoría de las actividades de señalización; y sustituciones conservativas lejanas de los dominios intracelulares probablemente conservarán la mayoría de las propiedades de la unión del ligando. "Derivados" de las diversas proteínas incluyen mutantes de secuencia de aminoácidos, variantes de glicosilación, derivados metabólicos y conjugados covalentes o agregativos con otras porciones químicas. Los derivados covalentes se pueden preparar por enlace de funcionalidades a grupos que se encuentran en las cadenas laterales de aminoácidos o en los grupos N-terminal o C-terminal, por ejemplo, por medios que son conocidos en la técnica. Estos derivados pueden incluir, sin limitación, ásteres alifáticos o amidas alifáticas del carboxilo terminal, o de residuos que contienen cadenas laterales de carboxilo derivados O-acilo de residuos que contienen grupo hidroxilo, y derivados N-acilo de los residuos que contienen aminoácidos amino terminal o que contienen grupo amino, por ejemplo, lisina o arginina. Los grupos acilo se seleccionan del grupo de porciones alquilo, incluyendo alquilo normal de C3 a C18, formando así especies alcanoil aroilo. En particular, se incluyen alteraciones de glicosilación, por ejemplo, hechas al modificar los patrones de glicosilación de un polipéptido durante su síntesis y procesamiento, o en pasos de procesamiento posteriores. Medios particularmente preferidos para lograr esto son exponiendo el polipéptido a enzimas de glicosilación derivadas de células que normalmente proveen dicho procesamiento, por ejemplo, enzimas de glicosilación en mamíferos. También se contemplan enzimas de desglicosilación. También se incluyen versiones de la misma secuencia de aminoácidos primaria que tienen otras modificaciones menores, incluyendo residuos de aminoácido fosforilado, por ejemplo, fosfotirosina, fosfoserina o fosfotreonina. Un grupo importante de derivados es los conjugados covalentes de los receptores o fragmentos de los mismos con otras proteínas de polipéptidos. Estos derivados se pueden sintetizar en cultivo recombinante, tal como fusiones en N-terminal o C-terminal o mediante el uso de agentes conocidos en la técnica por su utilidad en proteínas de entrelazamiento a través de grupos laterales reactivos. Los sitios de derivación preferidos con agentes de entrelazamiento son en grupos amino libres, porciones carbohidrato y residuos de cisteína. También se proveen polipéptidos de fusión entre los receptores y otras proteínas homólogas o heterólogas. Los polipéptidos homólogos pueden ser fusiones entre diferentes receptores, dando por resultado, por ejemplo, una proteína híbrida que presente especificidad de unión para múltiples ligandos de citocina diferentes, o un receptor que pueda tener especificidad ampliada o debilitada de efecto de substrato. Asimismo, se pueden construir fusiones heterólogas que presenten una combinación de propiedades o actividades de las proteínas derivadas. Ejemplos típicos son fusiones de un polipéptido reportero, por ejemplo, luciferasa, con un segmento o dominio, de un receptor, un segmento de unión de ligando, por lo que la presencia o ubicación de un ligando deseado puede ser fácilmente determinada. Véase, por ejemplo, Dull, et al., Patente de E.U.A. No. 4,859,609, que se incorpora aquí por referencia. Otras parejas de fusión de genes incluyen glutation-S-transferasa (GST), ß-galactosidasa bacteriana, trpE, proteína A, ß-lactamasa, alfa amilasa, alcohol deshidrogenasa y factor de coincidencia alfa de levadura. Véase, por ejemplo, Godowski, et al. (1988) Science 241 :812-816. El método de fosforamidita descrito por Beaucage y Carruthers (1981 ) Tetra. Letts. 22:1859-1862, producirá fragmentos de ADN sintéticos adecuados. Un fragmento de doble cadena a menudo se obtendrá ya sea sintetizando la hebra complementaria y templando la hebra bajo condiciones apropiadas o añadiendo la hebra complementaria usando ADN polimerasa con una secuencia de iniciador apropiada. Dichos polipéptidos también pueden tener residuos de aminoácidos que han sido químicamente modificados por fosforilación, sulfonación, biotinilación, o la adición o remoción de otras porciones, particularmente aquellas que tienen formas moleculares similares a grupos fosfato. En algunas modalidades, las modificaciones serán reactivos marcadores útiles, o sirven como objetivos de purificación, por ejemplo, ligandos de afinidad. Las proteínas de fusión típicamente se harán ya sea por métodos de ácido nucleico recombinante o por métodos de polipóptido sintético. Técnicas para manipulación y expresión de ácidos nucleicos se describen generalmente, por ejemplo, en Sambrook, et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2a de.), Vols. 1 -3, Cold Spring Harbor Laboratory, y Ausubel, et al. (eds. 1987 y suplementos periódicos) Current Protocols in Molecular Biology, Greene/Wiley, New York, que se incorporan aquí por referencia. Las técnicas para síntesis de polipéptidos se describen, por ejemplo, en Merrifield (1963) J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-2156; Merrifield (1986) Science 232:341-347; y Atherton, et al. (1989) Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press, Oxford; que se incorporan aquí por referencia. Véase también Dawson, et al. (1994) Science 266:776-779 para métodos para hacer polipéptidos más grandes. Esta invención también contempla el uso de derivados de estas proteínas distintos a variaciones en la secuencia de aminoácidos o glicosilación. Dichos derivados pueden implicar asociación covalente o agregativa con porciones químicas. Estos derivados generalmente caen en tres clases: (1 ) sales, (2) modificaciones covalentes de residuos de cadena lateral y terminales, y (3) complejos de adsorción, por ejemplo con membranas celulares. Dichos derivados covalentes o agregativos son útiles como inmunógenos, como reactivos en inmunoensayos, o en métodos de purificación tales como para purificación de afinidad de un receptor u otra molécula de unión, por ejemplo, un anticuerpo. Por ejemplo, un ligando de citocina puede ser inmovilizado por unión covalente a un soporte sólido tal como Sepharose, activada con bromuro de cianógeno, por métodos que son bien conocidos en la técnica, o adsorbida sobre superficies de poliolefina con o sin entrelazamiento de glutaraldehído, para usarse en la prueba o purificación de un receptor de citocina, anticuerpos u otras moléculas similares. El ligando también se puede marcar con un grupo detectable, por ejemplo radioyodado por el procedimiento de cloramina T, covalentemente unida a quelatos de tierras raras o conjugado a otra porción fluorescente para usarse en pruebas de diagnóstico. Un polipéptido de esta invención se puede usar como un inmunógeno para la producción de antisueros o anticuerpos. Estos pueden ser específicos, v.gr., capaces de detectar o distinguir entre otros miembros de la familia relacionados o varios fragmentos de los mismos. Las proteínas purificadas pueden usarse para seleccionar anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión de antígenos preparados por inmunización con varias formas de preparaciones impuras que contienen la proteína. En particular, el término "anticuerpos" también comprende fragmentos de unión al antlgeno de anticuerpos naturales, por ejemplo, Fab, Fab2, Fv, etc. Las proteínas purificadas también se pueden usar como un reactivo para detectar anticuerpos generados en respuesta a la presencia de niveles elevados de expresión, o trastornos inmunológicos que conducen a la producción de anticuerpos al receptor endógeno. Además, los fragmentos también pueden servir como inmunógenos para producir los anticuerpos de la presente invención. Por ejemplo, esta invención contempla anticuerpos que tienen afinidad de unión a secuencias de aminoácidos o que son generados contra las secuencias de aminoácidos mostradas en el cuadro 1 , fragmentos de las mismas, o varios póptidos homólogos. En particular, esta invención contempla anticuerpos que tienen afinidad de unión a, o que han sido generados contra, fragmentos específicos que se predice que son o que realmente son expuestos a las superficies de proteína exteriores. El bloqueo de respuesta fisiológica a los ligandos de receptor puede resultar de la inhibición de ligando al receptor, probablemente a través de inhibición competitiva. Los anticuerpos para los ligandos pueden ser antagonistas. Por lo tanto, las pruebas ¡n vitro de la presente invención con frecuencia usarán anticuerpos o segmentos de unión de antígeno de estos anticuerpos, o fragmentos unidos a substratos de fases sólidos. Estas pruebas también permitirán la determinación de diagnóstico de los efectos de mutaciones y modificaciones de región de unión a ligando, u otras mutaciones y modificaciones, por ejemplo, que afectan la función de señalización o la función enzimática. Esa invención también contempla el uso de pruebas de selección de fármaco competitivas, v.gr., en donde anticuerpos neutralizantes para el receptor o fragmentos compiten con un compuesto de prueba para unirse a un ligando o a otro anticuerpo. De esta manera, los anticuerpos neutralizantes o fragmentos se pueden usar para detectar la presencia de un polipéptido que comparta uno o más sitios de unión a un receptor y que también se pueda usar para ocupar sitios de unión sobre un receptor que de otra manera pudiera unirse a un ligando.

V. Producción de ácidos nucleicos y proteína ADN que codifica a la proteína o fragmentos de la misma se pueden obtener mediante síntesis química, selección de genotecas de ADNc o seleccionando genotecas genómicas preparadas a partir de una amplia variedad de líneas celulares o muestras de tejido. Secuencias naturales se pueden aislar usando métodos estándares y las secuencias que aquí se proveen. Otras contrapartes de especie se pueden identificar mediante técnicas de hibridación, o por varias técnicas de PCR, o combinadas con o buscando bases de datos de secuencias, v.gr., GenBank (banco de genes). Este ADN se puede expresar en una amplia variedad de células hospedero que a su vez, por ejemplo, se pueden usar para generar anticuerpos policlonales o monoclonales; para estudios de unión; para construcción y expresión de construcciones modificadas; y para estudios de estructura/función. Variantes o fragmentos se pueden expresar en células hospedero que son transformadas o transfectadas con vectores de expresión apropiados. Estas moléculas pueden ser substancialmente libres de proteína o contaminantes celulares, distintos a aquellos derivados del hospedero recombinante, y por lo tanto son particularmente útiles en las composiciones farmacéuticas cuando se combinan con un vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptable. La proteína, o porciones de la misma se pueden expresar como fusiones con otras proteínas. Los vectores de expresión son típicamente construcciones de ADN o ARN de autorreplicación que contienen el gen receptor deseado o sus fragmentos, por lo general operablemente enlazados a elementos de control genético adecuados que son reconocidos en una célula hospedero adecuada. Estos elementos de control son capaces de efectuar expresión dentro de un hospedero adecuado. El tipo específico de elementos de control necesarios para efectuar la expresión dependerá de la célula hospedero final usada. En general, los elementos de control genético pueden incluir un sistema de promotor procariótico o un sistema de control de expresión de promotor eucariótico, y típicamente incluyen promotor transcripcional, un operador opcional para controlar el inicio de la transcripción, incrementadores de transcripción para elevar el nivel de expresión de ARNm, una secuencia que codifica un sitio de unión a ribosoma adecuado, y secuencias que terminan la transcripción y traducción. Los vectores de expresión también contendrán generalmente un origen de replicación que permite que el vector se replique independientemente de la célula hospedero. Los vectores de esta invención incluyen aquellos que contienen ADN que codifica una proteína, como se describe, o un fragmento de la misma que codifica un péptido equivalente biológicamente activo. El ADN puede estar bajo el control de un promotor viral y puede codificar un marcador de selección. Esta invención contempla además el uso de dichos vectores de expresión, que son capaces de expresar ADNc eucarióticos que codifican para dichas proteínas en un hospedero procariótico o eucariótico, en donde el vector es compatible con el hospedero y en donde el ADNc eucarióticos que codifica para el receptor se inserta en el vector de tal manera que el crecimiento del hospedero que contiene el vector expresa los ADNc en cuestión. Por lo general, los vectores de expresión están diseñados para replicación estable en sus células hospederas o para amplificación para incrementar en gran medida el número total de copias del gen deseable por célula. No siempre es necesario requerir que un vector de expresión se replique en una célula hospedero, v.gr., es posible efectuar expresión transitoria de la protelna o sus fragmentos en varios hospederos usando vectores que no contienen un origen de replicación que es conocido por la célula hospedero. También es posible usar vectores que produzcan integración de las porciones codificadoras de protelna o sus fragmentos en el ADN del hospedero por recombinación. Tal como se usan aquí, los vectores comprenden plásmidos, virus, bacteriófagos, fragmentos de ADN integrables y otros vehículos que permiten la integración de fragmentos de ADN en el genoma del hospedero. Los vectores de expresión son vectores especializados que contienen elementos de control genético que efectúan la expresión de genes operablemente enlazados. Los plásmidos son la forma más comúnmente usada de vector pero todas las otras formas de vectores que tienen una función equivalente y que son o llegan a ser conocidos en la técnica son adecuados para usarse aquí. Véase, por ejemplo, e. g., Pouwels, et al., (1985 and Supplements) Cloning Vectores: A Laboratoty Manual, Elsevier, N.Y., and Rodríguez, et al., (eds 1988) Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectores and Their Uses, Butherswoth, Boston, que se incorporan aquí por referencia. Las células transformadas son células, preferiblemente de mamífero, que han sido transformadas o transfectadas con vectores construidos usando técnicas de ADN recombinante. Las células hospedero transformadas por lo general expresan la proteína deseada, pero para propósitos de clonación, amplificación y manipulación de su ADN, no necesitan expresar las proteínas de la presente invención. Esta invención contempla además el cultivo de células transformadas en un medio de nutrientes, permitiendo así que se acumulen las proteínas. Las proteínas pueden ser recuperadas, ya sea del cultivo o, en algunos casos, del medio de cultivo. Para propósitos de esta invención, las secuencias de ácidos nucleicos están operablemente enlazadas cuando están relacionadas funcionalmente unas con otras. Por ejemplo, el ADN para una pre-secuencia o líder secretor es operablemente enlazado a un polipéptido si se expresa como una proteína o participa en la dirección del polipéptido a la membrana celular o en la secreción del polipéptido. Un promotor es operablemente enlazado a una secuencia codificadora si controla la transcripción del polipéptido; un sitio de unión al ribosoma es operablemente enlazado a una secuencia codificadora si está ubicado para permitir la traducción. Por lo general, los medios operablemente enlazados son contiguos y en marco de lectura, sin embargo, ciertos elementos genéticos tales como genes represores no están contiguamente enlazados pero se unen a secuencias de operador que a su vez controlan la expresión. Las células hospedero adecuadas incluyen procariotes, eucariotes inferiores y eucariotes superiores. Los procariotes incluyen organismos gram negativos y gram positivos, por ejemplo, E. coli y ß. subtilis. Los eucariotes inferiores incluyen levaduras, por ejemplo, S. cerevisiae y Pichia, y especies del género Dictyostelium. Los eucariotes superiores incluyen líneas de cultivo de tejido establecidas de células animales, tanto de origen no mamífero, v.gr., células de insectos, y aves, como de origen mamífero, por ejemplo, humanos, primates y roedores. Los sistemas de hospedero procariótico-vector incluyen una amplia variedad de vectores para muchas especies diferentes. Tal como se usa aquí, E. coli y sus vectores se usarán genéricamente para incluir vectores equivalentes usados en otros eucariotes. Un vector representativo para amplificar ADN es pBR 322 o muchos de sus derivados. Los vectores que se pueden usar para expresar el receptor o sus fragmentos incluyen, pero no se limitan a vectores tales como aquellos que contienen el promotor lac (serie pUC); promotor trp (pBR322); promotor Ipp (la serie pIN); promotores lambda-pP o pR (pOTS) o promotores híbridos tales como ptac (pDR540). Véase Brosius, et al. (1988) "Expression Vectores Employing Lambda-, tpr-, lac-, and Ipp-derived Promoters", in Vectors: A. Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, (eds Rodríguez y Denhardt), Buttersworth, Boston, Charter 10, pp. 205-236, que se incorpora aquí por referencia Los eucariotes inferiores, por ejemplo, levaduras y Díctyostelum, se pueden transformar con vectores que contienen secuencia DIRS4. Para los propósitos de la invención, la mayoría de los hospederos eucarióticos más comunes es la levadura para hornear, Saccharomycas ceravisiaa. Se usará para representar genéticamente eucariotes inferiores aunque también están disponibles muchas otras cepas y especies. Los vectores de levadura típicamente consisten de un origen de replicaciones (excepto el tipo integrador), un gen de selección, un promotor, ADN que codifica el receptor o sus fragmentos, y secuencias para terminación de traducción, poliadenilación y terminación de transcripción. Los vectores de expresión adecuados para levadura incluyen los promotores constitutivos tales como 3-fosfogliserato cinasa y algunos otros promotores de gen de enzima glicolitica o promotores inducibles como el promotor de la alcohol deshidrogenasa 2 o promotor de metalotionina. Vectores adecuados incluyen derivados de los siguientes tipos: número de copia bajo de auto-replicación (tal como la serie YRp), número de copia alto de auto-replicación (tal como la serie Yep); tipos de integración (tales como la serie Yip); o mini cromosomas (tales como la serie YCp). Las células de cultivo del tejido eucarióticas superiores son normalmente las células hospedero preferidas para expresión de las proteínas receptoras o de interleucina funcionalmente activas. En principio, muchas líneas de células de cultivo de tejido euca ótico superior son útiles, v.gr., sistemas de expresión de baculovirus de insecto, ya sea de una fuente de invertebrados o de vertebrados. Sin embargo, se prefieren las células de mamífero. La transformación o transfección y propagación a dichas células se ha convertido en un procedimiento de rutina. Ejemplos de líneas de células útiles incluyen las células HeLa, líneas celulares de ovario de hámster Chino (CHO), líneas celulares de riñón de rata bebé (BRK), líneas celulares de insecto, líneas celulares de ave, y líneas celulares de mono (COS). Los vectores de expresión para dichas líneas celulares por lo general incluyen un origen de replicación, un promotor, un sitio de iniciación de traducción, sitios de empalme de ARN (si se usa ADN genómico), un sitio de poliadenilación, y un sitio de terminación de transcripción. Esos vectores también contienen generalmente un gen de selección o gen de amplificación. Los vectores de expresión adecuados pueden ser plásmidos, virus o retrovirus que portan promotores derivados, por ejemplo, de fuentes tales como adenovirus, SV40, parvovirus, virus de vaccinia o citomegalovirus. Ejemplos representativos de vectores de expresión adecuados incluyen pCDNAl ; pCD. Véase Okayama, et al., (1985) Mol. Cell Biol. 5:1 136-1 142; pMCI neo PoIyA, véase Thomas, et al., (1987) Cell. 51 :503-512; y un vector de baculovirus tal como paC 373 o paC 610. Para proteínas secretadas, un marco de lectura abierto generalmente codifica un polipóptido que consiste de un producto maduro o secretado cova lente mente enlazado en su N-terminal, a un péptido de señal. El péptido de señal es digerido antes de la secreción del polipóptido maduro, o activo. El sitio de digestión se puede predecir con un alto grado de precisión a partir de reglas empíricas, por ejemplo, von-Heijne (1986) Nucleic Acids Research 14: 4683-4690 y Nielsen, et al., (1997) Protein Eng. 10: 1 -12, y la composición precisa de aminoácidos del péptido de señal a menudo no parece ser crítico para su función, v.gr., Randall et al., (1989) Science 243:1 156-1 159; Kaiser et al., (1987) Science 235: 312-317. Con frecuencia se deseará expresar estos polipéptidos en un sistema que provea un patrón de glicosilación específico o definido. En este caso, el patrón usual será aquel provisto naturalmente por el sistema de expresión. Sin embargo, el patrón será modificable exponiendo el polipóptido, por ejemplo, una forma no glicosilada, a proteínas glicosilantes apropiadas introducidas en un sistema de expresión heterólogo. Por ejemplo, el gen receptor puede ser cotransformado con uno o más genes que codifican enzimas glicosilantes de mamífero o de otro tipo. Usando este enfoque, ciertos patrones de glicosilación de mamífero se lograrán en células procarióticas u otras células. La fuente de proteína puede ser un hospedero eucariótico o procariótico que exprese gen recombinante, tal como se describió antes. La fuente también puede ser una línea celular tal como fibroblastos de ratón Swiss 3T3, pero otras líneas celulares de mamíferos también se contemplan en esta invención, siendo la línea celular preferida de la especie humana.

Ahora que se conocen las secuencias, la proteína, fragmentos de primate, o derivados de los mismos se pueden preparar mediante procedimientos convencionales para sintetizar péptidos. Estos incluyen procedimientos tales como los que se describen en Stewart and Young (1984) Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford IL; Bodanszky and Bodanszky (1984) The Practise of Peptide Synthesis, Springer Verlag, New York; and Bodanszky (1984) The Principies of Peptide Synthesis, Springer Verlag, Nueva York; todas las cuales se incorporan aquí por referencia. Por ejemplo, un procedimiento de azida, un procedimiento de cloruro ácido, un procedimiento de anhídrido ácido, un procedimiento de anhídrido mixto, un procedimiento de éster activo (por ejemplo, éster p-nitrofenílico, éster de N-hidroxisuccinimida o éster de cianometilo), un procedimiento de carbodiimidazol, un procedimiento oxidativo-reductivo, o un procedimiento de diciclohexilcarbidimida (DCCD)/aditivo se pueden usar. La síntesis de fase sólida o de fase de solución son ambas aplicables a los procedimientos anteriores. Se pueden usar técnicas similares con secuencias de polipóptidos parciales. Las diversas proteínas, fragmentos o derivados se preparan adecuadamente de acuerdo con los procedimientos anteriores como se emplea típicamente en la síntesis de péptidos, generalmente ya sea por un procedimiento denominado por pasos que consiste en condensar un aminoácido al aminoácido terminal, uno por uno en secuencia, o por acoplamientos de péptidos al aminoácido terminal. Los grupos amino que no se están usando en la reacción de acoplamiento típicamente deben ser protegidos para evitar el acoplamiento en un sitio incorrecto. Si se adopta una síntesis de fase sólida, el aminoácido C-terminal está unido a un vehículo o soporte insoluble a través de su grupo carboxilo. El vehículo insoluble no está particularmente limitado mientras tenga una capacidad de unión a un grupo carboxilo reactivo. Ejemplos de muchos vehículos insolubles incluyen resinas de halogenometilo, tales como resinas de clorometilo o resina de bromometilo, resinas de hidroximetilo, resinas fenólicas, resinas de ter-alquiloxicarbonilohidrazidadas y similares. Un aminoácido protegido con grupo amino se une en secuencia a través de la condensación de su grupo carboxilo activado y el grupo amino reactivo del péptido o cadena previamente formada, para sintetizar el péptido paso por paso. Después de sintetizar la secuencia completa, el péptido es retirado del vehículo insoluble para producir el péptido. Este enfoque de fase sólida generalmente se describe en Merrifield, et al., (1963) in J. Am. Chem Soc. 85: 2149-2156, que se incorpora aquí por referencia. La proteína preparada y fragmentos de la misma se pueden aislar y purificar a partir de la mezcla de reacción por medio de separación de póptidos, por ejemplo, por extracción, precipitación, electroforesis, varias formas de cromatografía y similares. Las proteínas de esta invención se pueden obtener en grados variables de pureza dependiendo de los usos deseados. La purificación se puede lograr mediante el uso de técnicas de purificación de proteína que aquí se describen, véase más adelante, o mediante el uso de los anticuerpos que se describen en métodos de cromatografía de afinidad inmunoabsorbente. Esta cromatografía inmunoabsorbente se lleva a cabo primero enlazando los anticuerpos a un soporte sólido y después poniendo en contacto los anticuerpos enlazados con lisados solubilizados de células apropiadas, lisados de otras células que expresan el receptor, o lisados o sobrenadantes de células que producen la proteína como resultado de técnicas de ADN, véase más adelante. En general, la proteína purificada será por lo menos aproximadamente 40% pura, ordinariamente por lo menos aproximadamente 50% pura, usualmente por lo menos aproximadamente 60% pura, típicamente por lo menos aproximadamente 70% pura, muy típicamente por lo menos aproximadamente 80% pura, preferiblemente por lo menos aproximadamente 90% pura, y muy preferiblemente por lo menos aproximadamente 95% pura, y en modalidades particulares, 97%-99% o más. La pureza será generalmente sobre una base de peso, pero también será sobre una base molar. Se aplicarán diferentes pruebas según sea apropiado.

VI. Anticuerpos Se pueden generar anticuerpos para los diversos mamíferos, por ejemplo, proteínas DIRS4 de primate y fragmentos de las mismas, tanto en formas nativas que ocurren naturalmente como en sus formas recombinantes, siendo la diferencia que es más probable que los anticuerpos para el receptor activo reconozcan epítopes que están presentes sólo en conformaciones nativas. La detección de antigeno desnaturalizado también puede ser útil, por ejemplo, en análisis de Western. También se contemplan anticuerpos anti-idiotípicos, que serían útiles como agonistas o antagonistas de un receptor natural o un anticuerpo. Los anticuerpos, incluyendo fragmentos de unión y versiones de cadena individuales, contra fragmentos predeterminados de proteína, pueden generarse por inmunización de animales con conjugados de los fragmentos con proteínas inmunogénicas. Los anticuerpos monoclonales se preparan a través de células que secretan el anticuerpo deseado. Estos anticuerpos se pueden seleccionar uniéndose a proteína normal o defectuosa, o seleccionándose para actividad agonística o antagonística. Estos anticuerpos monoclonales usualmente se unirán a por lo menos un KD de aproximadamente 1 mlvl, muy usualmente por lo menos de aproximadamente 300 µ?, típicamente por lo menos de aproximadamente 100 µ?, muy típicamente por lo menos aproximadamente 30 µ?, preferiblemente por lo menos aproximadamente 10 µ?, y muy preferiblemente por lo menos aproximadamente 3 µ?, o mejor. Los anticuerpos, incluyendo fragmentos de unión a antígeno, de esta invención pueden tener un valor de diagnóstico o terapéutico significativo. Pueden ser antagonistas potentes que se unen al receptor e inhiben la unión al ligando o inhiben la capacidad del receptor para inducir una respuesta biológica, v.gr., actúan sobre su sustrato. También pueden ser útiles como anticuerpos no neutralizantes y se pueden acoplar toxinas o radionúclidos para unirse a células productoras, o células localizadas hacia la fuente de la interleucina. Además, estos anticuerpos se pueden conjugar a fármacos u otros agentes terapéuticos, ya sea en forma directa o indirecta por medio de un enlazador. Los anticuerpos de esta invención también pueden ser útiles en aplicaciones de diagnóstico. Como anticuerpos de captura o no neutralizantes, se pueden unir al receptor sin inhibir v.gr., unión al ligando o substrato. Como anticuerpos neutralizantes, pueden ser útiles en pruebas de unión competitivas. También pueden ser útiles para detectar o cuantificar ligando. Pueden ser útiles como reactivos para análisis de Western blot, o para inmunoprecipitación o inmunopurificación de proteína respectiva. Los fragmentos de proteína se pueden unir a otros materiales, particularmente polipóptidos, como polipéptidos fusionados o covalentemente unidos para usarse como inmunógenos. Los receptores de citosina de mamífero, citocinas, proteínas marcadoras y fragmentos de los mismos se pueden fusionar o enlazarse covalentemente a una variedad de inmunógenos, tales como hemocianina de lapa, albúmina de suero de bovino, toxoide tetánico, etc. Véase Microbiology, Hoeber Medical División, Harper and Row, 1969; Landsteiner (1962) Specificity of Serological Reactions, Dover Publications New York; and Williams, et al., (1967) Methods in Immunology and Immunochemistry, Vol 1 , Academic Press, New York; cada uno de los cuales se incorpora aquí por referencia, para descripciones de métodos de preparación de antisueros policlonales. Un método típico permite la hiper- inmunización de un animal con un antígeno. La sangre del animal se recoge poco después de las inmunizaciones repetidas y se aisla la gamma globulina. En algunos casos, es conveniente preparar anticuerpos monoclonales a partir de varios hospederos mamíferos, tales como ratones, roedores, primates, humanos, etc. La descripción de técnicas para la preparación de dichos anticuerpos monoclonales se puede encontrar, por ejemplo, en Stites et al., (eds.) Basic and Clinical Immunology (4* ed.), Lange Medical Publications, Los Altos, CA, y referencias citadas en el mismo, Harlow y Lañe (1988) Antibodies: A Laboratiry Manual, CSH Press; Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principies and Practice (2* ed.) Academic Press New York y particularmente en Kohler y Milstein (1975) en Nature 256: 495-497, que describen un método para generar anticuerpos monoclonales En resumen, este método implica la inyección de un inmunógeno a un animal. El animal después es sacrificado y las células se recogen de su bazo, las cuales después de fusionan con células de mieloma. El resultado es una célula híbrida o "hibridoma" que es capaz de reproducirse in vitro. La población de hibridomas después se selecciona para aislar clones individuales, cada uno de los cuales secreta una especie de anticuerpo individual al inmunógeno. De esta manera, las especies de anticuerpo individuales obtenidas son los productos de células B individuales inmortalizadas y clonadas del animal inmune generadas en respuesta a un sitio específico reconocido sobre la sustancia inmunogénica. Otras técnicas adecuadas implican la exposición in vitro de linfocitos a los polipéptidos antigénicos o alternativamente a la selección de genotecas de anticuerpos en fagos o vectores similares. Véase Huse, et al, (1989) "Generation of a Large Combinatorial Library of The Immunoglobulin Repertoire in Phage Lambda," Science 246:1275-1281 ; y Ward, et al. (1989) Nature 341 : 544-546. Los polipéptidos y anticuerpos de la presente invención se pueden usar con o sin modificación, incluyendo anticuerpos quiméricos o humanizados. Frecuentemente, los polipéptidos y anticuerpos serán marcados uniendo, ya sea en forma covalente o no covalente, una substancia que provee una señal detectable. Una amplia variedad de marcadores y técnicas de conjugación se conocen y se reportan en forma extensiva tanto en la literatura científica como de patentes. Los marcadores adecuados incluyen radionúclidos, enzimas, substratos, cofactores, inhibidores, porciones fluorescentes, porciones quimioluminiscentes, partículas magnéticas y sismilares. Las patentes que enseñan el uso de dichos marcadores incluyen las patentes de E.U.A. números 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149 y 4,366,241. También se pueden producir inmunoglobulinas recombinantes o quiméricas, véase Cabilly, patente de E.U.A. no. 4,816,567; o hechos en ratones transgénicos, véase Méndez et al., (1997) Nature Genetics 15: 146-156. Los anticuerpos de esta invención también se pueden usar para cromatografía de afinidad en el aislamiento de proteínas o péptidos. Se pueden preparar columnas en donde los anticuerpos se enlacen a un soporte sólido, por ejemplo, partículas, tales como agarosa, Sephadex, o similares, en donde un lisado de células se hace pasar a través de la columna, la columna se lava, seguida de concentraciones cada vez mayores de un desnaturalizador ligero, por lo que se liberará la proteína purificada. Por el contrario, la proteína se puede usar para purificar el anticuerpo por inmunoselección. Los anticuerpos también se pueden usar para seleccionar genotecas de expresión para productos de expresión particulares. Usualmente, los anticuerpos usados en dicho procedimiento serán marcados con una porción que permita la fácil detección de la presencia del antígeno mediante unión con el anticuerpo. Los anticuerpos generados contra una proteína también se usarán para generar anticuerpos anti-idiotípicos. Estos serán útiles en la detección o el diagnóstico de varias condiciones inmunológicas relacionadas con la expresión de la proteína o células que expresan la proteína. También serán útiles como agonistas o antagonistas del ligando, que pueden ser inhibidores competitivos o sustitutos para ligandos que ocurren naturalmente. Una proteína receptora de citocina que se une específicamente a, o que es específicamente inmunoreactiva con un anticuerpo generado contra un inmunógeno definido, tal como un inmunógeno que consiste de la secuencia de aminoácidos, se determina típicamente en un inmunoensayo. El inmunoensayo típicamente utiliza un antisuero policlonal que se generó, por ejemplo, para una proteína de SEQ ID NO: 2. Este antisuero se selecciona para tener reactividad cruzada baja contra otros miembros de la familia de receptores de citocina, por ejemplo, subunidad alfa de receptor de IFN, preferiblemente de la misma especie y cualquier actividad cruzada es removida por la inmunoabsorción antes de usarse en el inmunoensayo. Para producir antisuero para usarse en un inmunoensayo, la proteína, por ejemplo de SEQ ID NO: 2, se aisla como se describe aquí. Por ejemplo, la proteina recombinante se puede producir en una linea celular de mamíferos. Un hospedero apropiado, por ejemplo, una cepa endogámica de ratón tal como Balb/c, es inmunizado con la proteína seleccionada, típicamente usando un adyuvante estándar, tal como el adyuvante de Freund, y un protocolo de inmunización estándar (véase Harlow y Lañe, antes citados) Alternativamente, un péptido sintético derivado de las secuencias que aqui se describen y conjugado a una proteína portadora se puede usar como un inmunógeno. Los sueros policlonales se recogen y se titulan contra la proteína inmunogónica en un inmunoensayo, por ejemplo, un inmunoensayo de fase sólida con el inmunógeno inmovilizado sobre un soporte sólido. Los antisueros policlonales con un título de 104 o mayor se seleccionan y se prueban para su reactividad contra otros miembros de la familia de receptores de citocina usando un inmunoesnsayo de unión competitivo tal como el que se describe en Harlow y Lañe, antes mencionado, en las páginas 570-573. Preferiblemente dos miembros de la familia del receptor de citocina se usan en esta determinación. Estos miembros de la familia del receptor de citocina se pueden producir como proteínas recombinantes y se pueden aislar usando técnicas de biología molecular y química de proteínas estándares como se describe aquí. Los inmunoensayos en el formato de unión competitiva se pueden usar para las determinaciones de reactividad cruzada. Por ejemplo, la proteína de SEQ ID NO: 2 puede ser inmovilizada a un soporte sólido. Las proteínas añadidas a la prueba compiten con la unión de los antisueros al antígeno inmovilizado. La capacidad de las proteínas anteriores para competir con la unión de los antisueros a la proteína inmovilizada se compara con las otras proteínas. El porcentaje de reactividad cruzada para las proteínas anteriores se calcula usando cálculos estándares. Aquellos antisueros con menos de 10% de reactividad cruzada con cado una de las proteínas anteriormente listadas se seleccionan y se depositan en una reserva. Los anticuerpos de reacción cruzada son después removidos de los antisueros de reserva por inmunoabsorción con las proteínas anteriormente listadas. Los antisueros inumunoabsorbidos y almacenados en reserva se usan después en un inmunoensayo de unión competitiva como se describió anteriormente para comparar una segunda proteína con la proteína de inmunógeno. Para hacer esta comparación, las dos proteínas se probaron cada una en un intervalo de comparaciones y se determinó la cantidad de cada proteína requerida para inhibir 50% de la unión de los antisueros a la proteína inmovilizada. Si la cantidad de la segunda proteina requerida es menor que dos veces la cantidad de la proteína de la proteína o proteínas seleccionadas que requiere, entonces se dice que la segunda proteína se une específicamente a un anticuerpo generado para el inmunógeno.

Se entiende que estas proteínas receptoras de citocina son miembros de la familia de proteínas homologas. Para un producto de gen particular, como DIRS4, el término se refiere no sólo a las secuencias de aminoácidos que aquí se describen, sino también a otras proteínas que son variantes alólicas, no-alólicas o variantes de especies. También se entiende que los términos incluyen mutaciones no naturales introducidas por mutación deliberada usando tecnología recombinante convencional tal como mutación de sitio individual, o cortando secciones cortas de ADN que codifican las proteínas respectivas, o sustituyendo nuevos aminoácidos, o añadiendo nuevos aminoácidos. Dichas alteraciones menores típicamente mantendrán sustancialmente la inmunoidentidad de la molécula original y/o su actividad biológica. Por lo tanto, estas alteraciones incluyen proteínas que son específicamente inmunorreactivas con proteína DIRS4 que ocurre naturalmente diseñada. Las propiedades biológicas de las proteínas alteradas se pueden determinar expresando la proteína en una línea celular apropiada y midiendo el efecto apropiado, por ejemplo, en lifocitos transfectados. Las modificaciones de proteína particulares consideradas menores incluirían sustitución conservativa de aminoácidos con propiedades químicas similares, como se describió anteriormente para la familia de receptor de citocina como un todo. Alineando una proteína en forma óptima con la proteína de los receptores de citocina y usando los inmunoensayos convencionales que aquí se describen para determinar la inmunoidentidad, se pueden determinar las composiciones de proteína de la invención.

VII. Equipos y cuantificación Tanto las formas que ocurren naturalmente como las recombinantes de las moléculas similares al receptor de citocina de esta invención son particularmente útiles en equipos y métodos de prueba. Por ejemplo, estos métodos también se aplicarían a la selección para actividad de unión, por ejemplo, ligandos para estas proteínas. En años recientes se han desarrollado varios métodos de pruebas automatizadas para permitir la selección de decenas de miles de compuestos por año. Véase, por ejemplo, BIOMEK automated workstation, Beckman Instruments, Palo Alto, California, and Fodor et al., (1991 ) Science 251 : 767-773, que se incorporan aquí por referencia. Esta última describe medios para probar la unión por una pluralidad de polímeros definidos sintetizados sobre un sustrato sólido. El desarrollo de pruebas adecuadas para seleccionar un ligando o proteínas homologas agonistas/antagonistas se pueden facilitar en gran medida mediante la disponibilidad de grandes cantidades de receptores de citocina solubles purificados en un estado activo tal como se provee en esta invención. Alternativamente, la producción de grandes cantidades de ligandos será útil en la selección para receptor. Los marcadores también estarán disponibles en grandes cantidades para generar reactivos específicos. La proteína purificada, v.gr., DIRS4, se puede revestir directamente sobre placas para usarse en técnicas de selección de ligandos antes mencionadas. Sin embargo, los anticuerpos no neutralizantes para estas proteínas se pueden usar como anticuerpos de captura para inmovilizar el receptor respectivo sobre la fase sólida útil, por ejemplo, en usos de diagnóstico. Esta invención también contempla el uso de, v.gr., DIRS4, fragmentos del mismo, póptidos y sus productos de fusión en una variedad de equipos y métodos de diagnóstico para detectar la presencia de la proteína o su ligando. Alternativamente, o adicionalmente, anticuerpos contra las moléculas se pueden incorporar en los equipos y métodos. Típicamente, el equipo tendrá un compartimento que contenga ya sea un péptido o un segmento de gen o un reactivo que reconozca uno o el otro. Típicamente, los reactivos de reconocimiento, en el caso de péptidos serían un receptor o anticuerpo, o en el caso de un segmento de gen, por lo general serían una sonda de hibridación. Las aplicaciones de diagnóstico serán útiles para los marcadores, como se describe. Un equipo preferido para determinar la concentración, v.gr., DIRS4, en una muestra típicamente comprendería un compuesto marcado, v.gr., ligando o anticuerpo, que tenga afinidad de unión conocida para DIRS4, una fuente de DIRS4 (que ocurre naturalmente o recombinante) como un control positivo, y un medio para separar la unión del compuesto marcado libre, por ejemplo una fase sólida para inmovilizar el DIRS4 en la muestra de prueba. Normalmente se proveerán compartimentos que contienen reactivos e instrucciones. Los anticuerpos, incluyendo fragmentos de unión a antígeno, específicos para claudinas o schafelns de mamífero o un fragmento de péptido, o fragmentos de receptor son útiles en aplicaciones de diagnóstico para detectar la presencia de niveles elevados del ligando y/o sus fragmentos. Las pruebas de disgnóstico pueden ser homogéneas (sin un paso de separación entre reactivo libre y complejo anticuerpo-antígeno) o heterogéneas (con un paso de separación). Existen varias pruebas comerciales tales como radioinmunoensayo (RIA), ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA), inmunoensayo de enzima (EIA), técnica de inmunoensayo multiplicado de enzima (EMIT), inmunoensayo fluorescente marcado con sustrato (SLFIA) y similar. Por ejemplo, se pueden emplear anticuerpos no marcados usando un segundo anticuerpo que sea marcado y que reconozca el anticuerpo para un receptor de citocina o para un fragmento particular del mismo. Estas pruebas también se han discutido en forma extensa en la literatura. Véase, por ejemplo, Hriow y Lañe (1988) Antibodies A Laboratory Manual, CSH, and Coligan (ed. 1991 y complementos periódicos) Current Protocols In Immunology Greene/Wiley, New York. Los anticuerpos anti-idiotlpicos pueden tener uso similar para servir como agonistas o antagonistas de receptores de citocina. Estos serían útiles como reactivos bajo circunstancias apropiadas. Frecuentemente, los reactivos para pruebas de diagnóstico son suministrados en equipos, para optimizar la sensibilidad de la prueba. Para la presente invención, dependiendo de la naturaleza de la prueba, el protocolo y el marcador, se provee ya sea anticuerpo marcado o no marcado o ligando marcado. Por lo tanto, en general, junto con otros aditivos tales como reguladores de pH, estabilizadores, materiales necesarios para la producción de señales tales como substratos, enzimas y similares. Preferiblemente, el equipo también contendrá instrucciones para el uso apropiado y desecho de los contenidos después del uso. Típicamente, el equipo tiene compartimentos para cada reactivo útil, y contendrá instrucciones para el uso apropiado y desechos de los reactivos. De manera deseable, los reactivos se proveen como un polvo liofilizado seco, en donde los reactivos se pueden reconstituir en un medio acuoso que tenga concentraciones apropiadas para llevar a cabo la prueba. Los constituyentes antes mencionados de las pruebas de diagnóstico se pueden usar sin modificación o pueden ser modificados en una variedad de formas. Por ejemplo, el mareaje se puede lograr uniendo covalentemente o no covalentemente una porción que provea en forma directa o indirecta una señal detectable. En muchas de estas pruebas, un compuesto de prueba, receptor de citocina, o anticuerpos para el mismo se pueden marcar ya sea en forma directa o indirecta. Las posibilidades para el mareaje directo incluyen grupos de marcadores: radiomarcadores tales como 125l, enzimas (patente de E.U.A. número 3,645,090) tales como preroxidasa y fosfatasa alcalina, y marcadores fluorescentes (patente de E.U.A. número 3,940,475) capaces de monitorear el cambio en la intensidad de fluorescencia, desplazamiento de longitud de onda o polarización de fluorescencia. Ambas patentes se incorporan aquí por referencia. Las posibilidades para mareaje indirecto incluyen biotinilación de un constituyente seguido de unión para avidina acoplada a uno de los grupos de mareaje anteriores. También existen muchos métodos de separación de la unión del ligando libre, o alternativamente la unión del compuesto de prueba libre. El receptor de citocina se puede inmovilizar sobre varias matrices seguidas por lavado. Las matrices adecuadas incluyen plástico tal como una placa de ELISA, filtros y glóbulos. Los métodos de inmovilización del receptor a una matriz incluyen, sin limitación, adhesión directa a plástico, uso de un anticuerpo de captura, acoplamiento químico y biotina-avidina. El último paso en este método implica la precipitación del complejo anticuerpo/antígeno por cualquiera de varios métodos incluyendo aquellos que utilizan, v.gr., un solvente orgánico tal como polietilenglicol o una sal tal como sulfato de amonio. Otras técnicas de separación adecuadas incluyen, sin limitación, el método de partícula magnetizable de anticuerpo de fluoresceína descrito en Rattle et al., (1984) Clin. Chem. 30 (9): 1457-1461 , y la separación de partícula magnética de anticuerpo doble como se describe en la patente de E.U.A. número 4,659,678, cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia. Los métodos para enlazar proteína o fragmentos a varios marcadores se han reportado en forma extensiva en la literatura y no requieren discusión detallada aquí. Muchas de las técnicas implican el uso de grupos carboxilo activados ya sea mediante el uso de carbodiimida o ésteres activos para formar enlaces peptídicos, la formación de tioóteres por reacción de grupo mercapto con un halógeno activado tal como cloroacetilo, o una olefina activada tal como maleimida, para enlace, o similar. En estas aplicaciones también se usarán proteínas de fusión. Otro aspecto de diagnóstico de esta invención implica el uso de secuencias de oligonucleótidos o polinucleótidos tomadas de la secuencia de un receptor de citocina. Estas secuencias se pueden usar como sondas para detectar niveles de los genes o transcritos respectivos en pacientes que se sospecha que tienen un trastorno inmunológico u otro trastorno médico. La preparación de secuencias de nucleótidos tanto de ARN como de ADN, el mareaje de las secuencias y el tamaño preferido de las secuencias ha recibido una amplia descripción y discusión en la literatura. Normalmente, una sonda de oligonucleótidos debe tener por lo menos aproximadamente 14 nucleótidos, usualmente por lo menos aproximadamente 18 nucleótidos y las sondas de polinucleótidos pueden ser hasta de varias kilobases. Se pueden emplear varios marcadores, muy comúnmente radionúclidos, particularmente 32P. Sin embargo, también se pueden emplear otras técnicas tales como el uso de nucleótidos modificados con biotina para la introducción en un polinucleótido. La biotina sirve entonces como el sitio para unirse a la avidina o anticuerpos, que pueden ser marcados con una amplia variedad de marcadores, tales como radionúclidos, fluorescentes, enzimas o similares. Alternativamente, se pueden emplear anticuerpos que pueden reconocer dúplex específicos incluyendo dúplex de ADN, dúplex de ARN, dúplex híbridos de ARN-ARN o dúplex de ADN-proteína. Los anticuerpos a su vez se pueden marcar y la prueba se puede llevar a cabo en donde el dúplex es unido una superficie, de modo que bajo la formación de dúplex sobre la superficie, la presencia de unión de anticuerpo dúplex se puede detectar. El uso de sondas para el ARN antisentido novedoso se puede llevar a cabo en técnicas convencionales tales como hibridación de ácidos nucleicos, selección de más y menos, sonda de recombinación, traducción liberada de híbrido (HRT) y traducción detenida de híbrido (HART). Esto también incluye técnicas de amplificación tales como reacción de cadena de polimerasa (PCR). También se contemplan equipos de diagnóstico que se utilizan como prueba para la presencia cualitativa o cuantitativa de otros marcadores. El diagnóstico o pronóstico puede depender de la combinación de indicaciones múltiples tales como marcadores. Por lo tanto, los equipos pueden probarse para combinación de marcadores. Véase, v.gr., Viallet et al., (1989) Progress in Growth Factor Res. 1 :89-87.

VIII . Utilidad terapéutica Esta invención provee reactivos con valor terapéutico significativo, véase, por ejemplo, Levitzki (1996) Curr. Opin. Cell. Biol. 8:239-244. Los receptores de citocina (que ocurren naturalmente o recombinantes), fragmentos de los mismos, receptores de muteína y anticuerpos, junto con compuestos identificados como que tienen afinidad de unión a los receptores o anticuerpos, deben ser útiles, en el tratamiento de condiciones que presentan expresión anormal de los receptores de sus ligandos. Dicha anormalidad típicamente se manifestará por trastornos inmunológicos. Además, esta invención debe proveer bajo valor terapéutico en varias enfermedades o trastornos asociados con expresión anormal o activación anormal de respuesta del ligando. La biología de los interferones, IL-10, FNT y TGF está bien descrita. Por el contrario, los TLR también han sido tema de mucho interés, y los homólogos descritos aquí también serán de interés similar. Asociaciones con condiciones médicas importantes para las claudinas y schafelns se describen más adelante. Las proteínas recombinantes, muteínas, anticuerpos agonistas o antagonistas para los mismos, o anticuerpos se pueden purificar y después administrar a un paciente. Estos reactivos se pueden combinar para uso terapéutico con ingredientes activos adicionales, por ejemplo, en vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables, junto con estabilizadores y excipientes fisiológicamente inocuos. Estas combinaciones pueden ser estériles, por ejemplo se pueden filtrar y colocar en formas de dosis por liofilización en frascos de dosis o almacenamiento en preparaciones acuosas estabilizadas. Esta invención también contempla el uso de anticuerpos o fragmentos de unión de los mismos que no son unión de complemento. La selección del ligando que usa receptor de citocina o fragmentos del mismo se puede realizar para identificar moléculas que tengan afinidad de unión a los receptores. Después se pueden usar pruebas biológicas subsecuentes para determinar si un ligando putativo puede proveer unión competitiva, que pueda bloquear la actividad estimulante intrínseca.

Fragmentos de receptor se pueden usar como un bloqueador o antagonista ya que bloquea la actividad del ligando. Asimismo, un compuesto que tiene actividad estimulante intrínseca puede activar el compuesto y por lo tanto es un agonista ya que estimula la actividad del ligando, v.gr., induciendo la señalización. Esta invención contempla además el uso terapéutico de anticuerpos para receptores de citocina como antagonistas. Por el contrario, la selección de receptores para peceptores para ligandos se puede llevar a cabo. Sin embargo, los ligandos también se pueden seleccionar para funcionar usando pruebas biológicas, que típicamente son simples debido a la naturaleza soluble de los ligandos. Las cantidades de reactivos necesarias para terapia efectiva dependerán de muchos factores diferentes, incluyendo medios de administración, sitio objetivo, vida fisiológica del reactivo, vida farmacológica, estado fisiológico del paciente y otros medicamentos administrados. Por lo tanto, las dosis de tratamiento se deben titular para optimizar la seguridad y eficacia. Típicamente, las dosis usadas ¡n vitro pueden proveer una guía útil en las cantidades útiles para administración ¡n situ de estos reactivos. La prueba de dosis efectiva en animales para el tratamiento de transtornos particulares poveerá indicación predictiva adicional de dosis humana. Se describen varias consideraciones, por ejemplo, en Gilman, et al., (eds. 1990) Goodman and Gilman's: de Pharmacological Bases of Therapeutics, 8". Ed., Pergamon Press; and Remington's Pharmaceutical Sciences, 17*. Ed. (1990) Marck Publishing Co., Easton Penn; cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia. Los métodos de administración se describen en éstas y más adelante, por ejemplo, para administración oral, intravenosa, intraperitoneal o intramuscular, difusión transdórmica y otros. Vehículos farmacéuticamente aceptables incluirán agua, solución salina, reguladores de pH y otros compuestos descritos, v.gr., en el Merck Index, Merck & Co., Rahway, New Jersey. Se esperaría ordinariamente que los intervalos de dosis alcanzaran concentraciones de menos de 1 mM, típicamente de menos de aproximadamente 10 µ? usualmente menos de aproximadamente 100 nM, preferiblemente menos de 10 pM (pico molar), y muy preferiblemente aun menos de 1 fM (femtomolar), con un vehículo apropiado. Las formulaciones de liberación lenta o un aparato de liberación lenta a menudo se utilizará para administración continua. Los receptores de citocina, fragmentos de los mismos y anticuerpos o sus fragmentos, antagonistas y agonistas se pueden administrar directamente al hospedero que se va a tratar o, dependiendo del tamaño de los compuestos, puede ser conveniente conjugarlos para portar proteínas tales como ovalbúmina o albúmina de suero antes de su administración. Las formulaciones terapéuticas se pueden administrar en muchas formulaciones de dosis convencionales. Aunque es posible que el ingrediente activo sea administrado solo, es preferible presentarlo como una formulación farmacéutica. Las formulaciones comprenden por lo menos un ingrediente activo, como se definió antes, junto con uno o más vehículos aceptables del mismo. Cada vehículo debe ser farmacéuticamente y fisiológicamente aceptable en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes y no dañino para el paciente. Las formulaciones incluyen aquellas adecuadas para administración oral, rectal, nasa! o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica). Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosis unitaria y se pueden preparar por métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. Véase, v.gr., Gilman et al., (eds. 1990) Goodman and GHman's: The Farmacological Bases of Therapeutics, 8a. Ed. Pergamon Press; and Remington's Farmacéutica! Science, 17a. Ed. (1990), Marck Publishing, Co., Easton Penn.; Avis et al., (eds 1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications Dekker, New York; Lieberman, et al., (eds. 1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets Dekker N.Y., y Lieberman, et al., (eds. 1990). Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, N.Y. La terapia de esta invención se puede combinar o usar junto con otros agentes terapéuticos, particularmente agonistas o antagonistas de otros miembros de la familia del receptor de citocina.

IX. Selección La selección de fármacos usando DIRS4, receptores TLR-L o fragmentos de los mismos se puede realizar para identificar compuestos que tiene afinidad de unión a la subunidad de receptor, incluyendo aislamiento de compuestos asociados. Véase, v.gr., Emory y Schlegel (1996) Cost-Effective Strateqies for Automated and Accelerated Hiqh-Throuqhput Screening IBC, Inc, Southborough, MA. Entonces pueden usarse pruebas biológicas subsecuentes para determinar si el compuesto tiene actividad estimulante intrínseca y por lo tanto es un bloqueador o antagonista ya que bloquea la actividad del ligando. Asimismo, un compuesto que tiene actividad estimuladora intrínseca puede activar al receptor y por lo tanto es un agonista ya que estimula la actividad de un ligando de citocina. Esta invención contempla también el uso terapéutico de anticuerpos para el receptor, agonistas o antagonistas de citocina. Por el contrario, para ligandos, se pueden seleccionar receptores. Subunidades de receptor huérfano, o prueba de subunidades de receptor desconocido en apareamientos conocidos o novedosos se pueden realizar. Un método de selección de fármaco utiliza células hospedero euca óticas o procarióticas que son establemente transformadas con molécula de ADN recombinante que expresa los receptores DIRS4 o TLR-L. Se pueden aislar células que expresen un receptor en aislamiento de otros receptores funcionales o en combinación con las otras subunidades específicas. Dichas células, ya sea en forma viable o fija, se pueden usar para pruebas de unión estándares de ligando/receptor. Véase también, Parce et al., (1989) Science 246:243-247; y Owicki, et al., (1990) Proc. Nati Acad. Sci. U.S.A. 87:4007-401 1 , que describe métodos sensibles para detectar respuestas celulares. Pruebas competitivas son particularmente útiles, en donde las células (fuente de ligando putativo) están en contacto y son incubadas con un receptor marcado o anticuerpo marcado que tiene una afinidad de unión conocida al ligando, tal como 125l-anticuerpo, y una muestra de prueba cuya afinidad de unión a la composición de unión está siendo medida. La unión y las composiciones de unión marcadas libres son después separadas para evaluar el grado de unión del ligando. La cantidad de unión del compuesto de prueba es inversamente proporcional a la cantidad de unión del receptor marcado a la fuente conocida. Se puede usar cualquiera de muchas técnicas para separar la unión de ligando libre para evaluar el grado de unión del ligando. Este paso de separación podría implicar típicamente un procedimiento tal como adhesión a filtros seguido del lavado, adhesión a plástico seguido de lavado, o centrifugación de las membranas celulares. Las células viables también podrían usarse para seleccionar los efectos de los fármacos sobre las funciones mediadas por citocina, por ejemplo, segundos niveles de mensajero, v.gr., Ca++; proliferación celular; cambios en reserva de fosfato de inositol; y otros. Algunos métodos de detección permiten la eliminación de un paso de separación, por ejemplo, un sistema de detección sensible a proximidad. Los colorantes sensibles al calcio serán útiles para detectar los niveles de Ca++, con un fluorímetro o un aparato de dispersión de células con fluorescencia.

X. Liqandos Las descripciones de DI S4 y TLR-L en la presente proveen medios para identificar ligandos, como se describió antes. Dicho ligando debe unirse específicamente al receptor respectivo con afinidad razonablemente alta. Se hacen disponibles varias construcciones que permiten el mareaje del receptor para detectar su ligando. Por ejemplo, marcando directamente el receptor de citocina, fusionando sobre el mismo marcadores para mareaje secundario, por ejemplo, FLAG u otras etiquetas de epítope, etc, permitirá la detección del receptor. Este puede ser histológico, como un método de afinidad para purificación bioquímica o mareaje o selección en un método de clonación de expresión. Un sistema de selección de dos híbridos también se puede aplicar haciendo construcciones apropiadas con las secuencias de receptor de citocina disponibles. Véase, por ejemplo, Fields, and Song (1989) Nature 340: 245-246. Generalmente, descripciones de receptores de citosina serán análogamente aplicables a modalidades específicas individuales dirigidas a reactivos y composiciones de DIRS4 o TLR-L. Por el contrario, los ligandos solubles, v.gr., FNT y TGF, se caracterizarán para actividad biológica. El amplio alcance de esta invención se entenderá mejor con referencia a los siguientes ejemplos, que no pretenden limitar las invenciones a las modalidades específicas.

EJEMPLOS I. Métodos generales Algunos de los métodos generales se describen o se hace referencia a los mismos, por ejemplo, en Maniatis, et al. (1982) Molecular Cloning. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press; Sambrook, et al. (1989) Molecular Cloniing: A Laboratory Manual, (2a de.) vols. 1-3, CSH Press, NY; o Ausubel, et al. (1987 y suplementos) Current Protocols in Molecular Biology, Greene/Wiley, New York. Los métodos para purificación de proteínas incluyen métodos tales como precipitación de sulfato de amonio, cromatografía en columna, electroforesis, centrifugación, cristalización y otros. Véase, por ejemplo, Ausubel, et al. (1987 y suplementos periódicos); Coligan, et al. (de. 1996) y suplementos periódicos, Current Protocols in Protein Science Greene/Wiley, New York; Deutscher (1990) "Guide to Protein Purification" en Methods in Enzymology, vol. 182, y otros volúmenes en esta serie; y la literatura del imbricante sobre el uso de productos de purificación de proteínas, por ejemplo, Pharmacia, Piscataway, N.J., o Bio-Rad, Richmond, CA. La combinación con técnicas recombinantes permiten la fusión a segmentos apropiados, por ejemplo, a una secuencia de FLAG o un equivalente que se puede fusionar mediante una secuencia removible con proteasa. Véase, por ejemplo, Hochuli (1990) "Purification of Recombinant Proteins with Metal Chelate Absorbent" en Setlow (de.) Genetic Engineering, Principie and Methods 12:87-98, Plenum Press, N.Y.; y Crowe, et al. (1992) OIAexpress: The High Level Expression & Protein Purification System QUIAGEN, Inc., Chatsworth, CA. Se realiza análisis de secuencia por computadora, por ejemplo, usando programas de software disponibles, incluyendo aquellos de fuentes de GCG (U. Wisconsin) y GenBank sources. Las bases de datos de secuencia únicas también se usan, por ejemplo, de GenBank y otros. Muchas técnicas aplicables a receptores de IL-10 o IL-12 se pueden aplicar al DIRS4, como se describe, por ejemplo, en USSN 08/1 10,683 (receptor de IL-10), que se incorpora aquí por referencia.

II. Análisis computacional Las secuencias humanas se identificaron a partir de una base de datos de secuencia genómica usando, por ejemplo, el servidor BLAST (AltschuI, et al. (1994) Nature Genet. 6:1 19-129). Se pueden usar programas de análisis estándares para evaluar la estructura, por ejemplo, PHD (Rost y Sander (1994) Proteins 19:55-72) y DSC (King y Sternberg (1996) Protein Sci. 5:2298-2310). El sotfware de comparación estándar incluye, por ejemplo, AltschuI, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10; Waterman (1995) Introduction to Computational Biology: Maps, Sequences, and Genomes Chapman & Hall; Lander y Waterman (eds. 1995) Calculating the Secrets of Life; Applications of the Mathematical Sciences in Molecular Biology National Academy Press; y Speed y Waterman (eds. 1996) Genetic Mapping and DNA Sequencing (IMA Volumes in Mathematics and Its Applications, Vol 81 ) Springer Verlag.

III. Clonación de ADNc de longitud completa; localización cromosómica Se usan iniciadores de PCR derivados de las secuencias para sondear una genoteca de ADNc humana. Los ADNs de longitud completa para primates, roedores u otras especies DIRS4 se clonan, por ejemplo, mediante selección de hibridación de ADN del fago gtf Q. Las reacciones de PCR se conducen usando ADN polimerasa Taqplus de T. acuaticus (Stratagene) bajo condiciones apropiadas. Se hacen preparaciones de cromosomas. Se realiza hibridación in situ sobre preparaciones de cromosomas obtenidas de linfocitos humanos estimulados con fitohemaglutinina cultivados durante 72 horas. Se añade 5-bromodeoxiuridina durante las 7 horas finales de cultivo (60 µ9/pp? de medio), para asegurar una formación de bandas cromosómicas de posthibridación de buena calidad. Un fragmento de PCR, amplificado con la ayuda de iniciadores, se clona en un vector apropiado. El vector se marca por traducción nick 3H. La sonda radiomarcada se híbrida a preparaciones de metafase a una concentración final de 200 ng/ml de solución de hibridación como se describe en Mattei, et al. (1985) Hum. Genet. 69:327-331. Después de revestirse con emulsión de rastreo nuclear (KODAK NTB2), se exponen las diapositivas. Para evitar cualquier deslizamiento de granos de plata durante el procedimiento de formación de bandas, las preparaciones de cromosomas primero se tiñen con solución de Giemsa con su pH regulado y se fotografían en la metafase. La formación de bandas R se realiza después por el método de fluorocromo-fotólisis-Giemsa (FPG) y se vuelven a fotografía en la metafase antes del análisis. Alternativamente, etiquetas de secuencia mapeada se pueden buscar en una base de datos. Se usan métodos apropiados similares para otras especies.

IV. Localización de ARNm Tejido múltiple humano (Cat # 1 , 2) y manchas de líneas celulares de cáncer (Cat # 7757-1 ), que contienen aproximadamente 2 µ? de ARN de poly(A)+ por franja, se compran de Clontech (Palo Alto, CA). Las sondas se radiomarcan con [a-32p] dATP, por ejemplo, usando el equipo de mareaje de iniciador aleatorio Amersham Rediprime (RPN1633). Se realiza prehibridación e hibridaciones, por ejemplo, a 65°C en Na2HP0 0.5 M, SDS al 7%, EDTA 0.5 M (pH 8.0). Se llevan a cabo lavados de alta astringencia, por ejemplo, a 65°C con dos lavados iniciales en 2 x SSC, SDS al 0.1 % durante 40 minutos seguido de un lavado subsecuente en 0.1 x SSC, SDS al 0.1 % durante 20 minutos. Las membranas después se exponen a -70°C a película de rayos X (Kodak) en presencia de tamices intensificadores. Estudios más detallados realizados por cDNA Library Southems se llevan a cabo con clones de DCRS3 humano apropiados para examinar su expresión en subconjuntos de células hemopoyéticas u otras células.

En forma alternativa, se seleccionan dos iniciadores apropiados, v.gr., a partir de los cuadros. Se usa RT-PCR en una muestra de ARNm apropiada seleccionada para la presencia de mensaje para producir un ADNc, por ejemplo, una muestra que exprese el gen. Los clones de longitud completa se pueden aislar por hibridación de genotecas de ADNc a partir de tejidos apropiados preseleccionados por señal de PCR. Se pueden realizar Nothern Blots. El mensaje para genes que codifican DCRS se probarán mediante tecnología apropiada, por ejemplo, PCR, inmunoensayo, hibridación u otras tecnologías. Preparaciones de ADNc de tejidos y órganos están disponibles, por ejemplo, de Clontech, ountain View, CA. Es útil la identificación de fuentes de expresión natural, como se describió. Y la identificación de apareamientos de subunidades de receptor funcional permitirán la predicción de qué células expresan la combinación de subunidades de receptor que darán por resultado una respuesta fisiológica a cada uno de los ligandos de citocina. Para distribución en ratón, por ejemplo, se puede realizar el análisis de Southern: ADN (5 µ ) de una genoteca de ADNc amplificado primario se digiere con enzimas de restricción apropiadas para liberar insertos, que se hacen correr en un gel de agarosa al 1 % y se transfieren a una membrana de nylon (Schleicher y Schuell, Keene, NH). Muestras para aislamiento de ARNm de ratón pueden incluir: línea de células L fibrolásticas de ratón en reposo (C200); células transfectadas de Braf:ER (fusión de Braf para receptor de estrógeno), control (C201 ); células T, polarizadas con TH1 ( el14 brillante), células CD4+ de bazo, polarizadas durante 7 días con IFN-? y anti IL-4; T200); células T, polarizadas con TH2 (Mel14 brillante, CD4+ células de bazo, polarizadas durante 7 días con IL-4 y anti-IFN-?; T201 ); células T, altamente polarizadas con TH1 (véase Openshaw, et al. (1995) J. Exp. Med. 182:1357-1367; activadas con anti-CD3 durante 2, 6, 16 horas en reserva; T202); células T, altamente polarizadas con TH2 (véase Openshaw, et al. (1995) J. Exp. Med. 182:1357-1367; activado con anti-CD3 durante 2, 6, 16 horas en reserva; T203); CD44- CD25+ células pre T, almacenadas del timo (T204); clon de células T TH1 D1 .1 , en reposo durante 3 semanas después de la última estimulación con antigeno (T205); clon de células T TH 1 D1.1 , 10 de ConA estimulada durante 15 horas (T206); clon de células T TH2 CDC35, en reposo durante 3 semanas después de la última estimulación con antígeno (T207); clon de células T TH2 CDC35, 10 µg ml de ConA estimulada durante 1 5 horas (T208); Mel14+ células T intactas de bazo, en reposo (T209); Mel14+ células T, polarizadas a TH 1 con I F ?-?/? L-12/anti-l L-4 durante 6, 12, 24 horas en reserva (T210); Mel14+ células T, polarizadas a Th2 con IL-4/anti-IFN-y durante 6, 13, 24 horas en reserva (T21 1 ); línea de células de leucemia de células B maduras estimuladas A20 (B200); línea de células B no estimuladas CH12 (B201 ); células B grandes no estimuladas de bazo (B202); células B de bazo total, activadas con LPS (B203); células dendríticas enriquecidas con metrizamida de bazo, en reposo (D200); células dendríticas de médula ósea, en reposo (D201 ); línea de células de monocito RAW 264.7 activadas con LPS durante 4 horas (M200); macrófagos de médula ósea derivados con GM y -CSF ( 201 ); línea de células de macrófago J774, en reposo (M202); línea de células de macrófago J774 + LPS + anti-IL-10 a 0.5, 1 , 3, 6, 12 horas en reserva (M203); línea de células de macrófago J774 + LPS + IL-10 a 0.5, 1 , 3, 5, 12 horas en reserva (M204); tejido pulmonar de ratón tratado con aerosol, iniciadores Th2, OVA tratadas con aerosol 7, 14, 23 horas en reserva, (véase, Garlisi, et al. (1995) Clinical Immunology and Immunopathology 75: 75-83; X206; tejido pulmonar infectado con Nippostrongulus (véase Coffman, et al. (1989) Science 245: 308-310; X200); pulmón de adulto total, normal (0200); pulmón total, rag-1 (véase Schwarz, et al. (1993) Immunodefíciency 4:249-252; 0205); bazo IL-10 K.O. (véase Kuhn, et al. (1991 ) Cell 75:263-274; X201 ); bazo de adulto total, normal (0201 ); bazo total rag-1 (0207); parches de Peyer K.O. IL-10 (0202); parches de Peyer total, normal (0210); nudos linfáticos mesentéricos K.O. de IL-10 (X203); nudos linfáticos mesentéricos total, normal (021 1 ); colon K.O. IL-10 (X203); colon total, normal (0212); páncreas de ratón NOD (véase Makino, et al. (1980) Jikken Dobutsu 29:1-13; X205); timo total, rag-1 (0208); riñón total, rag-1 (0209); corazón total, rag-1 (0202); cerebro total, rag-1 (0203); testículos total, rag-1 (0204); hígado total, rag-1 (0206); tejido de articulación normal de rata (0300); y tejido de articulación artrítica de rata (X300). Muestras para aislamiento de ARNm humano pueden incluir: células mononucleares de sangre periférica (monocitos, células T, células NK, granulocitos, células B), en reposo (T100); células mononucleares de sangre periférica, activadas con anti-CD3 durante 2, 6, 12 horas en reserva (T101 ); célula T, clon de THO Mot 72, en reposo (T102); células T, clon de THO Mot 72, activado con anti-CD28 y anti-CD3 durante 3, 6, 12 horas en reserva (T103); célula T, clon de THO Mot 72, anórgico tratado con péptido específico durante 2, 7, 12 horas en reserva (T104); célula T, clon TH1 de HY06, en reposo (T107); célula T, clon TH1 de HY06, activado con anti-CD28 y anti-CD3 durante 3, 6, 12 horas en reserva (T108); célula T, clon TH1 de HY06, anérgico tratado con péptido específico durante 2, 6, 12 horas en reserva (T109); célula T, clon TH2 de HY935, en reposo (T110); célula T, clon TH2 de HY935, activado con anti-CD28 y anti-CD3 durante 2, 7, 12 horas en reserva (T1 1 ); células T Cd4+CD45RO- células T polarizadas 27 dfas en anti-CD28, IL-4, y anti IFN-?, polarizado con TH2, activado con anti-CD3 y anti-CD28 durante 4 horas (T1 6); líneas de tumor de célula T Jurkat y Hut78, en reposo (T1 7); clones de célula T, en reserva AD130.2, Tc783.12, Tc783.13, Tc783.58, Tc782.69, en reposo (T1 18); clones de células T ?d aleatorias de células T, en reposo (T1 19); esplenocitos, en reposo (B100); esplenocitos, activados con anti-CD40 y IL-4 (B101 ); líneas de EBV de célula B en reserva WT49, RSB, JY, CVIR, 721.221 , RM3, HSY, en reposo (B102); línea de células B JY, activadas con PMA y ionomicina durante 1 , 6 horas en reserva (B103); clones NK 20 en reserva, en reposo (K100); clones NK 20 en reserva, activados con PMA y ionomicina durante 6 horas (K101 ); clon NKL, derivado de sangre periférica de un paciente con leucemia LGL, tratado con IL-2 (K106); clon citotóxico NK 640-A30-1 , en reposo (K107); línea de precursor hematopoyético TF1 , activado con PMA y ionomicina durante 1 , 6 horas en reserva (C100); línea premonocítica U937, en reposo (M100); línea premonocítica U937, activada con PMA y ionomicina durante 1 , 6 horas en reserva (M101); monocitos elutriados, activados con LPS, IFNy, anti-IL-10 durante 1 , 2, 6, 12, 24 horas en reserva (M102); monocitos elutriados, activados con LPS, IFNy, IL-10 durante 1 , 2, 6, 12, 24 horas en reserva (M103); monocitos elutriados, activados con LPS, IFNy, IL-10 durante 4, 16 horas en reserva (M106); monocitos elutriados, activados con LPS, IFNy, IL-10 durante 4, 16 horas en reserva (M107); monocitos elutriados, activados con LPS durante 1 hora (M 08); monocitos elutriados, activados con LPS durante 6 horas (M109); DC 70% CD1 a+, de CD34+ GM-CSF, FNTa 12 días, en reposo (D101 ); DC 70% CD1 a+, de CD34+ GM-CSF, FNTa 12 días, activado con PMA y ionomicina durante 1 hora (D102); DC 70% CD1 a+, de CD34+ GM-CSF, FNTa 12 días, activado con PMA y inomicina durante 6 horas (D103); DC 95% CD1 a+, de CD34+ GM-CSF, FNTa 12 días FACS distribuido, activado con PMA y ionomicina durante 1 , 6 horas en reserva (D104); DC 95% CD14+, ex CD34+ GM-CSF, FNTa 12 días FACS distribuido, activado con PMA y ionomicina 1 , 6 horas en reserva (D105); DC CD1a+ CD86+, de CD34+ GM-CSF, FNTa 12 días FACS distribuido, activado con PMA y ionomicina durante 1 , 6 horas en reserva (D106); DC de monocitos GM-CSF, IL-4 durante 5 días (107); DC de monocitos GM-CSF, IL-4 5 días, en reposo (D108); DC de monocitos GM-CSF, IL-4 5 días, activado con LPS durante 4, 16 horas en reserva (D109); DC de monocitos G -CSF, IL-4 5 días, FNTa activado, monocito supe durante 4, 16 horas en reserva (D1 10); tumor benigno L1 1 de leiomioma (X101 ); miometrium normal M5 (01 15); leiomisarcoma maligno GS1 (X103); línea de sarcoma de fibroblasto de pulmón MRC5, activado con PMA y ionomicina durante 1 , 6 horas en reserva (C101 ); línea de célula de carcinoma epitelial de riñón CHA, activadas con PMA y ionomicina durante 1 , 6 horas en reserva (C102); riñón fetal de sexo masculino de 28 semanas (0100); pulmón fetal de sexo masculino de 28 semanas (0101 ); hígado fetal de sexo masculino de 28 semanas (0102); corazón fetal de sexo masculino 28 semanas (0103); cerebro fetal de sexo masculino 28 semanas (0104); vesícula biliar fetal sexo masculino de 28 semanas (0106); intestino delgado fetal masculino 28 semanas (0107); tejido adiposo fetal masculino 28 semanas (0108); ovario fetal femenino 25 semanas (0109); útero fetal femenino 25 semanas (0110); testículos fetal masculino 28 semanas (01 1 ); bazo fetal masculino 28 semanas (01 12); placenta adulta 28 semanas (01 13); y amígdalas inflamadas, de 12 años de edad (X100). Para el DIRS4, el análisis de southern blot reveló expresión en varias genotecas de ADNc incluyendo MOT72 en reposo (clon TH0); HY06 en reposo, activado y anti-péptido (clon Th1 ); células T activadas CD4+, Th2 polarizadas; clones de células T de reserva en reposo; esplenocitos en reposo y activados; células B EBv en repsoso; JY (línea de células B) activadas ; células NK citotóxicas; células U937 en reposo y activadas; monocitos tratados con anti-IL-10; monocitos (anti-IL-10 e IL-10 no estimulados); monocitos activados; células dendrlticas (activadas y en reposo); MRC5 (línea de sarcoma de fibroblasto de pulmón); CHA (línea de carcinoma epitelial de riñón); pulmón de mono normal y asmático; pulmón normal y de fumador; colon normal; pulmón fetal; hígado; vesícula biliar; e intestino delgado. Hay dos tamaños de transcripciones, bandas de alrededor de 500 pb y de aproximadamente 1.8 kb. Lo que sugiere dos transcripciones diferentes, posiblemente formas soluble y de membrana. La expresión de FNTx de primate, v.gr., de humano, por PCR, es alta en pulmón alérgico y pulmón normal; mucho más bajo en placenta de adulto, bazo fetal y piel normal. Esencialmente no hay expresión en muestras de intestino y órganos fetales. En las células, se detectó expresión elevada en células HY06 en reposo y TF-1 ; inferior en células HY06 y células JY activadas, y no se detectó expresión significativa en otras muestras humanas probadas, v.gr., la mayoría en la lista anterior. El cuadro 1 muestra datos de expresión de Taiman adicionales para FNTx de humano.

CUADRO 1 GENOTECA Ct gen GENOTECA Ct_gen PBMC en reposo 44.64 mono + anti-EL- 10 22.47 PB C activado 40.48 mono + IL-10 21.04 Mot 72 en reposo 26.29 M 1 40.52 Mot 72 activado 24.51 M 6 21.75 Mot 72 anti-póptido 20.72 70% DC en reposo 26.27 HY06 en reposo 15.86 D 1 37.94 HY06 activado 18.3 D6 25.05 HY06 anti-péptido 24.27 CDIa+ 95% 26.87 HY935 en reposo 25.97 CD14+ 95% 35.17 HY935 activado 25.03 CDIa+ CD86+ 27.48 B21 en reposo 26.3 DC/GMAL-4 32.33 B21 activado 24.53 DC LPS 27.81 Te gamma delta 45 DC mezcla 27.32 Jurkat en reposo pSPORT 45 riñón fetal 26.41 Jurkat activado pSPORT 28.09 pulmón fetal 31.16 Esplenocitos en reposo 23.51 hígado fetal 26.28 Esplenocitos activado 26.19 corazón fetal 34.28 Be 23.88 cerebro fetal 25.02 JY 19.29 intest. delgado fetal 37.89 NK en reserva 38.21 tejido adiposo fetal 26.41 NY, en reserva activado 3 7.54 ovario fetal 37.49 NKA6 pSPORT 34.39 útero fetal 26.03 NKL/IL-2 25.71 Testículos fetales 36.65 NK citotóxico 23.28 bazo fetal 23.2 NK no citotóxico 26.35 Placenta de adulto 24.06 U937/CDO04 en reposo 28.18 Anginas inflamadas 26.21 U937 activado 26.21 TF 1 23.48 C- 27 RC5 33.99 C+ 23.13 CHA 28.27 célula cebada pME 28.65 Taq_control_genómico-2 50 TC1080 CD28- pWT7 38.1 Colon de Crohns 28.32 403242A RV-C30 TR1 p ET7 24.97 pulmón 080698-2 27.42 DC en reposo 28.12 18 hr. Pulmón con 28.06 mono-derivada Ascaris DC CD40L activada 27.07 pulmón EL-4 dosis alta 34.01 mono-derivada DC en reposo 28.9 Colon normal #22 44.6 CD34-derivada DC FNT/TGFb act 36.74 colitis ulcerativa de colon 38.12 CD34-der. #26 pulmón alérgico #19 20.21 Tiroides normal 28.14 Pneumocystis carnii pulmón 36.33 Tiroiditis de Hashimoto 36.88 #20 RA synovium. En reserva 28 PieL normal 24.12 Piel con psoriasis 32.37 Colon de Crohns 30.31 4003197a pulmón normal 35.68 pulmón 121897-1 36.25 4 hr. Pulmón con Ascaris 31.45 Colon de Crohns 27.49 9609C144 24 hr. Pulmón con Ascaris 26.34 A549 no eestim. 28.03 pulmón normal en reserva 22.21 A549 activado 24.1 Taq_control_genómico_1 50 Taq_control-agua 50 El FNTx de roedor, v.gr., ratón, es altamente expresado en aorta de ratón ApoE KO de 5 meses; células Th1 polarizadas de 3 semanas C57B6; y células Th2 polarizadas de 3 semanas C57B6. Es menos altamente expresado en células Th2 polarizadas de 3 semanas Balb/c, bazo tratado con LPS y algunas otras poblaciones de Th2 polarizadas. En tejidos, por PCR, se expresa altamente en bazo de TNK KO, bazo de NZB/W, riñon de NZB/W, bazo de NZB/W, orejas/piel de GF; testículos de rag-1 , bazo de w.t. C57B6, páncreas de w.t. C57B6, y pulmón de 2 meses. Se expresa a niveles más bajos en pulmón con influenza, pulmón de rag-1 , bazo de rag-1 , muestras de médula espinal, muestras de pulmón, estómago y nodos linfáticos. El cuadro 2 muestra datos de expresión de TaqMan adicionales para FNTx de ratón.

CUADRO 2 GENOTECA Ct gen GENOTECA Ct gen Célula L 26 rag-1 cerebro 24.47 TH1 7 días 26.63 rag- 1 testículos 38.4 TH2 7 días 24.56 rag-1 pulmón 22.81 TH1 3 semanas Balb/C 39.09 rag-1 hígado 36.69 TH2 3 semanas Balb/C 24.48 rag- 1 bazo 24.23 preT 36.92 rag-1 timo 23.91 D1.1 en reposo 32.74 rag- 1 riñón 22.32 D1.1 con A estim. 37.76 w.t. Peyers parches 25.48 CDC35 en reposo 30.8 w.t. nodos linfáticos 25.59 mesentéricos CDC35 con A estim. 41.92 w.t colon 28.7 Mel 14+ naive T 28.16 Braf:ER (-) oligo dT 38.53 Mel 14+ THI 29.2 TH1 3 semanas C57 B1/6 23.12 Mel 14+ TH2 25.02 TH2 3 semanas C57 B1/6 22.54 A20 37.61 TH1 3 semanas Balb/C fresco 28.02 CH12 25.29 TH2 3 semanas Balb/C fresco 37.73 1g. Célula B 30.34 b.m. DC (YJL) en reposo 27.99 LPS bazo 24.04 b.m. DC (YJL) aCD40 estim. 40.47 macrófago 28.6 b.m. mf + LPS + alL-10R 29.74 J774 en reposo 39.73 b.m. mf + LPS + IL-10 27.67 J774 +LPS + anti-IL-10 36.51 pehtoneal mf 37.02 J774 +LPS + IL-10 40.53 C-9/MCP- 2 pMET7 39.68 Pulmón-Nippo-infectado 25.87 EC 40.13 IL-10 K.O. bazo 24.18 EC + TNFa 40.54 IL-10 K.O. colon 36.97 bEnd3 + TNFa 41.26 pulmón asmático 26.61 bEnd3 + TNFa + IL-I 0 38.35 w.t. pulmón 24.06 ApoE aorta 5 meses 21.03 w.t. bazo 28.87 ApoE aorta 12 meses 34.28 rag-1 corazón 26.48 NZ B/W riñón 21.02 Nippo IL-4 K.O. pulmón 28.59 NZ B/W bazo 21.2 Nippo anti IL-5 pulmón 25.73 pulmón tolerado y desafiado 27.17 Pulmón con Influenza 23.93 Pulmón con Aspergillus 23.32 pulmón común b de 2 24.53 Taq_control-agua 50 meses IL-10 K.O. estómago 29.87 Taq_control_genómico-1 50 IL-10K.O.MLN alL-12 26.58 Taq_control_genómico-2 50 IL-10 K.O. MLN +IL- 0 25.89 w.t. d17 médula espinal EAE 22.87 modelo Rag-2 Hh- colon 29.2 FNT K.O. d17 médula espinal 22.84 EAE modelo Modelo Rag-2 Hh+ colon 27.1 FNT K.O. médula espinal 23.27 IL-7 K.O./Rag-2 Hh-colon 40 FNT K.O. bazo 20.78 IL-7 K.O./Rag-2 Hh+ 40 G.F. orejas (piel) 20 7 colon modelo de transferencia 28.1 w.t. médula espinal 22.74 IBD w.t. C57 B1/6 aorta 39.38 w.t. C57 B1/6 bazo 22.15 w.t. timo 27.05 w.t. C57 B1/6 páncreas 24.75 w.t. estómago 26.49 MM2/MM3 activado. PME 37.67 MM2/ M3 en reposo 37.62 pME El FNTy de primate, v.gr., humano, es expresado en tejido adiposo detal y ovario fetal. Se expresa a un nivel más bajo en cerebro fetal, tiroiditis de Hashimoto, reserva de sinovio con RA, placenta de adulto y útero fetal. Se expresa en niveles más bajos en riñón fetal, tiroides normal y detectable en colon de Crohn, piel con psoriasis y pulmón detal. Es esencialmente detectable en otros órganos evaluados, incluyendo varias muestras de pulmón desafiadas con áscaris. En genotecas de células, se expresa en células TF-1 y mucho más bajo en células CHA, y no se expresa significativamente en otras líneas de células probadas. El cuadro 3 provee datos de expresión de TaqMan adicionales para FNTy humano CUADRO 3 GENOTECA | Ct_gen | GENOTECA | Ct_gen PBMC en reposo 45 mono + IL-IU 42.96 PBMC activado 44.16 M 1 41.25 Mot 72 en reposo 42.47 M 6 45 Mot 72 activado 28.59 70% DC en reposo 40.37 Mot 72 anti-péptido 42.47 D1 28.94 HY06 en reposo 43.19 D6 28.38 HY06 activado 41 .48 CD1a+ 95% 25.63 HY06 anti-péptido 43.28 CD14+ 95% 28.36 HY935 en reposo 45 CD1a+ CD86+ 28.67 HY935 activado 43.62 DC/GM/IL-4 45 B21 en reposo 41 .73 DC LPS 38.8 B21 activado 44.35 DC mezcla 26.53 Te gamma delta 43.21 Hígado fetal 27.98 Jurkat en reposo pSPORT 23.44 pulmón fetal 30.57 Jurkat activado pSPORT 25.19 hígado fetal 43.92 Esplenocitos en reposo 38.72 corazón fetal 40.84 Esplenocitos activados 44.09 cerebro fetal 26.02 Be 44.83 intest. delgado fetal 40.05 JY 43.05 tejido adiposo fetal 23.63 NK en reserva 39.09 ovario fetal 25.85 NK en reserva activado 44.32 útero fetal 27.57 NKA6 pSPORT 42.8 testículos fetales 45 NKLJIL-2 45 bazo fetal 39.08 NK citotóxico 44.79 Placenta de adulto 28.05 NK no citotóxico. 45 Anginas inflamadas 45 U937/CD004 en reposo 24.17 TF 1 22.09 U937 activado 24.41 MRC5 26.18 C- 40.38 CHA 19.22 C+ 41 .17 célula cebada pME 43.93 mono + anti-IL-10 45 TC1080 CD28- pMET7 41.62 DC en reposo mono- 45 RV-C30 TRI pMET7 42.76 derivado DC CD40L activ. mono- 45 4 hr. Pulmón con 45 deriv. ascaris DC en reposo CD34- 45 24 hr. Pulmón con 45 derivado Ascaris DC FNT/TGFb act CD34- 39.71 pulmón normal en 45 der. reserva pulmón alérgico #19 43.22 Piel normal 42.69 pulmón con Pneumocystis 43.81 Colon de Crohns 29.82 carinü #20 4003197A colon normal #22 43.66 Pulmón 121897-1 45 colitis ulcerativa de colon 45 Colon de Crohns 41.86 426 9609CI44 Tiroides normal 27.71 A549 no estim. 27.09 Tiroiditis de Hashimoto 27.4 A549 activado 29.01 RA synovium en reserva 28 Taq_control-agua 50 Piel con psoriasis 31.49 Taq_control_genómico 50 I Pulmón normal 45 Taq_control_genómico 50 9 Colon de Crohns 403242A 33.18 18 hr. Pulmón con 44.16 Ascaris pulmón 080698-2 30.01 pulmón UA dosis alta 43.59 El cuadro 4 provee datos de expresión de TaqMan para FNTy de roedor, v.gr., ratón.

CUADRO 4 GENOTECA Ct_gen GENOTECA Ct gen Célula L 40 rag-1 pulmón 40 TH1 7 días 40 rag-1 hígado 40 TH2 7 días 27.1 1 rag-1 bazo 23.97 TH1 3 semanas Balb/C 40 rag-1 timo 26.29 TH2 3 semanas Balb/C 26.95 rag-1 hígado 40 preT 40 w.t. Peyers parches 27.04 D1.1 en reposo 40 w.t nodos linfáticos 40 mesentéricos D1.1 con A estim. 40 w.t. colon 26.63 CDC35 en reposo 40 Braf:ER(-) oligo dT 40 CDC35 con A estim. 39.83 TH1 3 semanas C57 26.78 B1/6 Mel 14+ naive T 40 TH2 3 semanas C57 40 B1/6 ?T1 14+ THI 40 TH1 3 semanas 40 Balb/C fresco Mel 14+ TH2 31.22 TH2 3 semanas 40 Balb/C fresco A20 27.39 b.m. DC (YJL) en 40 reposo CH12 28.18 b.m. DC (YJL) aCD40 40 estim. Ig. Célula B 26.35 b.m. mf + LPS + alL- 40 10R LPS bazo 21.58 b.m. mf + LPS + IL-10 40 Macrófago 40 Mf peritoneal 40 J774 en reposo 24.99 MC-9/MCP-12 pMET7 40 J774 +LPS + anti-IL-10 28.41 EC 40 J774 +LPS + IL-10 27.57 EC + TNFa 40 Nippo-pulmón infectado 26.98 bEnd3 + TNFa 40 IL-10 K.O. bazo 25.43 bEnd3 + TNFa + IL-10 40 IL-10 K.O. colon 23.68 ApoE aorta 5 meses 35.16 Pulmón asmático 37.45 ApoE aorta 12 meses 35.47 w.t. pulmón 40 NZ B/W hígado 37.17 w.t. bazo 39.95 NZ B/W bazo 25.25 rag-1 corazón 40 Pulmón tolerado y 40 desafiado rag-1 cerebro 40 Pulmón con 39.26 Aspergillus rag-1 testículos 40 Nippo-pulmón con IL-4 26.13 K.O. pulmón con influenza 37.13 Nippo-pulmón con anti 34.73 IL-,5 pulmón común b de 2 39.33 w.t. timo 40 meses IL-10 K.O. estómago 27.3 w.t. estómago 30.14 IL-10 K.O.MLN alL-12 40 MM2/MM3 en reposo 40 pME IL-10 K.O. MLN +IL-10 37.97 MM2/MM3 40 activado. pME Rag-2 Hh- colon 26.95 Taq_control-agua 50 Rag-2 Hh+ colon 22.94 Taq_control_genómico 50 — 1 IL-7 K.O/Rag-2 Hh-colon 26.77 Taq_control_genómico 50 IL-7 K.0./Rag-2 Hh+colon 24.24 w.t, d1 médula 40 espinal EAE modelo modelo modelo de transferencia de 23.01 FNT K.O. d17 médula 40 IBD espinal EAE modelo w.t. C57 B1/6 aorta 40 FNT K.O. médula 27.99 espinal w.t médula espinal 38.8 FNT K.O. bazo 24.93 w.t. C57 B1/6 bazo 26.38 G.F. orejas (piel) 40 w.t. C57 B1/6 páncreas 40 TLR-LI de primate, v.gr., humano, s e expresa en células TF-1 , células D6 y apenas detectable en células U937 en reposo, células de Jurkat en reposo, y células NK de reserva. En tejidos, se encuentra en útero fetal, ovario fetal, pulmón alérgico y testículos fetales. Se encuentran niveles más bajos en riñón fetal, intestino delgado fetal, cerebro fetal, tejido adiposo fetal, reserva de pulmón normal y pulmón fetal. TLR-L2, TLR-L3 y TLR-L4 de primate, v.gr., humano parecen expresarse en tejido de cerebro. TLR-L5 de primate, v.gr., humano parece expresarse en líneas de células A549 no estimulado, A549 activada, MRC5 y Be. Entre los tejidos, es más altamente expresado en útero fetal, intestino delgado fetal y menor en pulmón fetal, riñón fetal, hígado fetal y ovario fetal. Es apenas detectable en cerebro fetal, tejido adiposo fetal, testículos fetales, piel con psoriasis y varias muestras intestinales. Las sondas 5685C6 muestran hibridación positiva a genotecas de substracción de células polarizadas Th2 minus Th1 , y ausencia de hibridación a genotecas de células polarizadas Th1 minus Th2. Esto sugiere que la sonda está presente en células polarizadas Th2, y puede servir como un marcador para dicho tipo de células. Las técnicas de PCR deben confirmar el perfil de expresión. Estructu raímente, esta protefna presenta similitudes con otras proteínas que poseen un pliegue de tio-redoxina, incluyendo una protefna peroxidasa, por ejemplo, glutation peroxidasa. Véase Choi, et al, (1998) Nature Structural Biol. 5:400-406. La tio-redoxina se ha reportado que presenta ciertas actividades quimioatrayentes. Véase, Bertini et al. (1999) Expt'l Med. 189:1783- 789. Los iniciadores TaqMan fueron diseñados para todos los cuatro transcritos de claudina novedosos. Estos conjuntos de iniciadores se usaron para seleccionar un panel de genotecas humanas que representaron diferentes tipos de células, tejidos y estados de enfermedad, y dos paneles de ADNc extendidos. Los paneles de ADNc estaban compuestos de muestras derivadas de pulmón o intestino humano normal o enfermo. Los genes de claudina son algunos de los genes más altamente regulados detectados. Además, la claudina D8 muestra la regulación reciproca más grande entre muestras de Crohn y colitis ulcerativa, haciendo de ésta un buen candidato en paneles de diagnóstico futuros para estas enfermedades. Claudina-D2: En southerns de genoteca, la expresión es más alta en colon de Crohn, el intestino fetal y dos líneas de células epiteliales, la expresión de nivel inferior en pulmón, riñón, ovario y testículos fetales. En paneles de ADNc humano, esto es altamente regulado ascendentemente en 8/9 de enfermedad de Crohn, tanto con tratamiento de esteroides como sin el mismo (inducción promedio = 53x, n=9). Además, la claudina-D2 es también inducida en 9/12 muestras de colitis ulcerativa (inducción promedio =8.2x), pero esta inducción es significativamente menor que la observada en las muestras de enfermedad de Crohn. También regulada ascendentemente (inducción promedio = 29x) en 12/13 de muestras de pulmón intersticial (fibrosis pulmonar idiopática), neumonitis hipersensible y granuloma eosinofílico). Claudina-D8: En southerns de genoteca, la expresión es más alta en riñón fetal y colon normal. También, se expresa en colon de colitis ulcerativa, tiroides y pulmón fetal. No se observa expresión en las células en el panel. En los paneles de ADNc humano, hay expresión de alto nivel en el intestino. Poca o nada de expresión en todas las muestras de enfermedad de Crohn (reducción promedio 130 x, n=9). Algunas muestras de colitis ulcerativa también tienen expresión reducida de claudina-D8, pero el patrón es heterogéneo. Por el contrario, claudina-D8 es regulada ascendentemente en varias muestras de enfermedad pulmonar intersticial (inducción promedio 12/15, = 9x), pero el nivel de expresión en estas muestras es del orden de diez veces menor que en el colon normal. También es inducida en células epiteliales bronquiales humanas primarias por I-309. Claudina-D17: En southerns de genoteca, en general el nivel de expresión medido es bajo en relación con las altas claudinas que aquí se describen, del orden de 100 veces más bajo. No está claro si el nivel de expresión es realmente menor o si los iniciadores para este gen son insensibles (no óptimos). La expresión es más alta en uno de los pulmones de asma y en piel psoriática. No se observa expresión en las líneas celulares en el panel. En los paneles de ADNc humanos, la expresión se incrementa en 8/1 1 muestras de colitis ulcerativa (inducción promedio = 13x), mientras que la expresión es invariable en muestras de enfermedad de Crohn. Se expresa a nivel bajo en línea celular epitelial bronquial primaria, inducida por I-309. De otra manera, el nivel es demasiado bajo para ser detectado excepto en muestras esporádicas. Claudina-D7.2: En southerns de genoteca, se expresa al nivel más alto en pulmón fetal humano y adulto humano, pulmones de mono y en una muestra de colon de Crohn. La expresión del nivel inferior en las dos líneas de células epitelial (A549 y CHA) y fibroblástica (MRC5) en el otro panel. En paneles de ADNc humano, expresado a un nivel alto en el intestino y a un nivel incluso mayor en el pulmón. Regulado ascendentemente en muestras de enfermedad de Crohn de pacientes que no han sido tratados con esteroides (inducción promedio = 3.7x, n=4). No hay modulación consistente de este gen en alguna de las enfermedades pulmonares examinadas en este panel. Estructura de familia de claudina: Si la organización estructural genómica de los miembros de la familia de claudina se basa en la de Paracelfina-1 , entonces las proteínas serían codificadas todas por 5 exones. Los sitios de empalme putativos y números de exones son predecibles, correspondientes a los residuos de D2 aproximadamente: 2 codones corriente arriba de M 1 ; A43, A75, G129, y C182; y segmentos de transmembrana correspondientes a aproximadamente G17-V36, M83-C104, V1 17-H141 , y L164-Q188. La paracelina tiene 60 aminoácidos adicionales en su N-terminal, que está localizado en el lado citoplásmico de la membrana. Asociación de enfermedad: Claudina-D2 ascendentemente regulado en 8/9 de enfermedad de Crohn en relación con las muestras de control, mientras que claudina-D8 está descendentemente regulado. Todas las claudinas descritas en la descripción de esta invención, muestran asociación de enfermedad como se describió antes. Las claudinas pueden formar parte de un panel de genes de diagnóstico que podrían distinguir la enfermedad de Crohn de colitis ulcerativa o ayudar en la determinación de la severidad de la enfermedad en cualquiera o en ambas enfermedades. Por ejemplo, claudina-D2 se expresa a niveles superiores en enfermedad de Crohn que en colitis ulcerativa. Por el contrario, la claudina-D8, agrupación 1645577, se expresa a niveles muy bajos en muestras de enfermedad de Crohn, y es menos drásticamente reducida en la mayoría de las muestras de colitis ulcerativa. Véase, v.gr., Simón, et al. (1999) Science 285: 103-106; Hirano, et al. (19xx) Genome Research 10:659-663; Morita, et al. (1999) Proa Nat'l Acad. Sci. USA 96:51 1 -516; Anderson y Van Itallie (1999) Current Bioloqy 9:R922-R924; y Furuse, et al. (1999) J. Cell Biol. 147:891-903. La introducción de un adenovirus u otro vector de expresión que expresa el ortólogo de claudina-D8 en los intestinos de pacientes con enfermedad intestinal inflamatoria pueden mejorar la función de la barrera intestinal y aliviar la enfermedad. Por el contrario, los anticuerpos para una de las claudinas que aquí se describen puede ser capaz de: inducir una señal intracelular que podría promover formación de unión hermética y conducir a una función de barrera intestinal mejorada; bloquear la entrada de agentes patógenos, que pudiera jugar un papel causal en el inicio o mantenimiento de la enfermedad de Crohn o colitis ulcerativa; promover la migración de células mieloides a través de uniones herméticas y permitir el aclaramiento de agentes patógenos antes de la infección del epitelio. La expresión de los miembros de la familia de schlafen en fibroblastos/células de timoma retrasa o detiene el crecimiento celular. Guían el crecimiento celular y el desarrollo de células T, y son un componente integral de la maquinaria que mantiene la quiescencia de células T. Pueden tener funciones importantes en el desarrollo o mantenimiento de trastornos autoinmunes. Los schlafens de ratón participan en la regulación del ciclo celular. Esta familia se caracteriza por dos variantes de empalme: una forma corta y una forma larga. Schlafen B: 748 aa; ORF, el análisis de PCr cuantitativo revela en células T, DC de reposo, panel de células de macrófagos 1 . Inducido en tiroiditis de Hashimoto, riñón fetal, útero fetal y bazo fetal. Ligeramente inducido en colon de Crohn. Schiafen C: 891 aa, ORF completo. Los datos de PCR cuantitativos revelan que este es significativamente regulada ascendentemente en todas las muestras de Crohn, pulmón asmático, pulmón con áscaris, tiroiditis de Hashimoto y tejidos fetales en comparación con el control. Schiafen D: 578 aa, ORF completo. Los datos de PCR cuantitativos para schiafen D humano revelan que es significativamente regulado de manera diferencial en enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa en comparación con colon normal. También parece ser altamente expresado en muchos tejidos en desarrollo (fetal) y estado de enfermedad (alérgica, pulmones con áscaris y pneumocystis carnii, colon de Crohn, colitis ulcerativa y piel psoriática) en comparación con las líneas de célula. Schiafen E: 897 aa, ORF completo. El análisis de PCR cuantitativo revela la expresión en el colon, hígado fetal, pulmón fetal, ovario fetal y útero fetal, y es significativamente regulado ascendentemente en una muestra de Crohn y altamente inducido en tiroiditis de Hashimoto. Schiafen F: 358 aa; ORF completo. El análisis de distribución no es completo. Muestras similares pueden ser aisladas en otras especies para evaluación.

V. Clonación de contrapartes de especies Se usan varias estrategias para obtener contrapartes de especies de, v.gr., DIRS4, preferiblemente de otros primates o roedores. Un método es por hibridación cruzada usando sondas de ADN de especies estrechamente relacionadas. Puede ser útil ir en especies evolutivamente similares como pasos intermediarios. Otro método es mediante el uso de iniciadores de PCR específicos basados en la identificación de bloques de similitud o diferencia entre genes, por ejemplo, áreas de secuencia de polipéptido o nucleótido altamente conservadas o no conservadas.

VI. Producción de proteína de mamífero Una construcción de fusión apropiada, v.gr., GST, es manipulada genéticamente para expresión, v.gr., en E. coli. Por ejemplo, un plásmido IGIF pGex de ratón se construye y se transforma en E. coli. Células recién transformadas se hacen crecer, por ejemplo, en un medio de LB que contiene 50 µg/ml de ampicilina e inducido con IPTG (Sigma, St. Louis, O). Después de inducción durante la noche, las bacterias se cosechan y las pastillas que contienen la proteína apropiada se aislan. Las pastillas se homogenizan, por ejemplo, en regulador de pH de TE (tris 50 mM-base pH 8.0, EDTA 10 mM y pefabloc 2 mM) en 2 litros. Este material se hace pasar a través de un microfluidizador (Microfluidics, Newton, MA) tres veces. El sobrenadante fluidizado se hace girar en un rotor Sorvall GS-3 durante 1 hora a 13,000 rpm. El sobrenadante resultante que contiene la proteína receptora de citocina se filtra y se hace pasar sobre una columna de glutation-SEPHAROSE en Tris 50 mM-base pH 8.0. Las fracciones que contienen la proteína de fusión DCRS8-GST se guardan en reserva y se digieren, por ejemplo, con trombina (Enzyme Research Laboratories, Inc., South Bend, IN). La reserva digerida después se hace pasar sobre una columna de Q-SEPHAROSE equilibrada en Tris 50 mM-base. Fracciones que contienen DI S4 se guardan en reserva y se diluyen en H20 destilada fría, para reducir la conductividad, y se hacen pasar de nuevo sobre una columna de Q-Sepharose fresca, sola o en sucesión con una columna de anticuerpo inmunoafinidad. Las fracciones que contienen la proteína DIRS4 se guardan en reserva, se forman alícotas con las mismas y se almacenan en un congelador a -70°C. Una comparación del espectro de CD con proteína receptora de citocina puede sugerir que la proteína está correctamente doblada. Véase Hazuda, et al. (1969) J. Biol. Chem. 264:1689-1693. Para otros genes, v.gr., proteínas de membrana, la proteína puede ser expresada mejor en superficies celulares. Esas pueden estar en sistemas de expresión de procariote, o eucariotes. Las formas expresadas en la superficie muy probablemente tendrán conformaciones existentes con la interacción natural con lípidos.

VI I. Determinación de formas fisiológicas de receptores Las formas celulares de receptores para ligandos se pueden probar con los diversos ligandos y subunidades de receptor provistas, v.gr., con secuencias relacionadas con IL-10. En particular, se han identificado ligandos en forma de receptor de citocina múltiples, véase, v.gr., USSN 60/027,368, 08/934,959, y08/842,659, que se incorporan aquí por referencia. La cotransformación del DIRS4 con otras subunidades de receptor putativas se pueden realizar. Dichas células se pueden usar para seleccionar ligandos de citocina putativos tales como AK155, para señalización. Se puede usar una prueba de proliferación de células. Además, se ha sabido que muchos receptores de citocina funcionan como heterod (meros, v.gr., una subunidad alfa soluble, y una subunidad beta de transmembrana. Las combinaciones de subunidades se pueden probar ahora con los reactivos provistos. En particular, construcciones apropiadas se pueden hacer para la transformación o transfección de subunidades en células. Transfecciones de combinación de transformaciones pueden hacer células que expresen subunidades definidas que puedan ser probadas para respuesta a los ligandos predichos. Se pueden usar tipos de células apropiados v.gr., células T 293, con, v.gr., una construcción de reportero de NF_b. Las pruebas biológicas para receptores generalmente estarán dirigidas a la característica de unión de ligando de la protelna o a la actividad de cinasa/fosfatasa del receptor. La actividad típicamente será reversible, como lo son muchas otras reacciones enzimáticas, y puede mediar las actividades de fosfatasa o fosforilasa, dichas actividades son fácilmente medidas por procedimientos estándares. Véase, v.gr., Hardie, et al. (eds. 1995) The Protein Kinase FactBook vols. I y II, Academic Press, San Diego, CA; Hanks, et al. (1991 ) Meth. Enzvmol. 200:38-62; Hunter, et al. (1992) Cell 70:375-388; Lewin (1990) Cell 61 :743-752; Pines, et al. (1991 ) Cold Sprinq Harbor Svmp. Quenat. Biol. 56:449-463; y Parker, et al. (1993) N ature 363:736-738. La familia de citocinas contiene moléculas que son mediadores importantes de hematopoyesis o enfermedad inflamatoria. Véase, v.gr. , Nelson y Martin (eds. 2000) Cytokines in Pulmonary Disease Dekker, NY; Ganser y Hoelzer (eds. 1999) Cytokines in the Treatment of Hematopoietic Failure Dekker, NY: Remick y Friedland (eds. 1997) Cytokines in Health and Disease Dekker, NY; Dinarello (1966) Blood 87:2095-2147; y Thomson (ed. 1994) The C tokine Handbook Academic Press, San Diego. El ligando y los receptores son muy importantes en el proceso de señalización.

VI II. Anticuerpos específicos para proteínas Ratones Balb/c endogámicos son inmunizados intraperitonealmente con formas recombinantes de la proteína, v.gr., DIRS4 purificado o células NIH-3T3 transfectadas. Los animales son reforzados en momentos apropiados con proteína, con o sin adyuvante adicional, para estimular más la producción de anticuerpo. Se recoge el suero, o hibridomas producidos con bazos cosechados. Alternativamente, ratones Balb/c son inmunizados con células transformadas con el gen o fragmentos del mismo, ya sea células endógenas o exógenas, o con membranas aisladas enriquecidas para expresión del antígeno. El suero es recogido en el tiempo apropiado, típicamente después de varias administraciones adicionales. Pueden ser útiles varias técnicas de terapia de genes, por ejemplo, en la producción de proteína in situ, para generar una respuesta inmune. El suero o preparaciones de anticuerpo se pueden absorber en forma cruzada o inmunoseleccionada para preparar anticuerpos substancialmente purificados de especificidad definida y afinidad alta. Se pueden hacer anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, los esplenocitos se fusionan con una pareja apropiada y los hibridomas se seleccionan en el medio de crecimiento mediante procedimientos estándares. Los sobrenadantes de hibridoma se seleccionan para la presencia de anticuerpos que se unen a la DIRS4, por ejemplo, por ELISA u otra prueba. También se pueden seleccionar o preparar anticuerpos que reconocen específicamente modalidades de DIRS4 específicas. En otro método, póptidos sintéticos o proteína purificada se presentan a un sistema inmune para generar anticuerpos monoclonales o policlonales. Véase, por ejemplo, Coligan (ed. 1991 ) Current Protocols in Inmunology Wiley/Greene; y Harlow y Lañe (1989) Antibodies: A Laboratoiy Manual Cold Spring Harbor Press. En situaciones apropiadas, el reactivo de unión es ya sea marcado como se describió antes, por ejemplo, fluorescencia u otro, inmobilizado a un substrato para métodos panorámicos. Los ácidos nucleicos también se pueden introducir en células en un animal para producir el antígeno, que sirve para inducir una respuesta inmune. Véase, por ejemplo, Wang, et al. (1993) Frac. Nat'l. Acad. Sci. 90:4156-4160; Barry, et al. (1994) BioTechniques 16:616-619; y Xiang, et al. (1995) Immunity 2:129-135. Además, se pueden generar anticuerpos que pueden ser útiles para determinar la combinación de DIRS4 con una subunidad alfa funcional. Por lo tanto, v.gr., epítopes característicos de una combinación alfa/beta funcional particular se pueden identificar con anticuerpos apropiados.

IX. Producción de proteínas de fusión Varias construcciones de fusión se hacen con DIRS4. Una porción del gen apropiado se fusiona a una etiqueta de epítope, por ejemplo, una etiqueta FLAG, o a una construcción de sistema de dos híbridos. Véase, por ejemplo, Fields y Song (1989) Natum 340:245-246. La etiqueta de epítope se puede usar en un procedimiento de clonación de expresión con detección con anticuerpos anti-FLAG para detectar una pareja de unión, por ejemplo, un ligando para el receptor de citocina respectivo. El sistema de dos híbridos también se puede usar para aislar proteínas que se unen específicamente a DIRS4.

X. Relación de actividad de estructura Información sobre el carácter crítico de los residuos particulares se determina usando procedimientos y análisis estándares. El análisis de mutagénesis estándar se realiza, por ejemplo, generando muchas variantes diferentes en posiciones determinadas, por ejemplo, en las posiciones anteriormente identificadas, y evaluando actividades biológicas de las variantes. Esto se puede realizar al grado de determinar posiciones que modifiquen la actividad, o para enfocarse en posiciones específicas para determinar los residuos que puedan ser sustituidos ya se para retener, bloquear o modular la actividad biológica. Alternativamente, el análisis de variantes naturales puede indicar qué posiciones toleran las mutaciones naturales. Esto puede resultar del análisis poblacional de variación entre individuos o a través de cepas o especies. Las muestras de individuos seleccionados se analizan, por ejemplo, por análisis de PCR y secuenciación. Esto permite la evaluación de polimorfismos de población.

XI. Aislamiento de un ligando para receptor Un receptor de citocina se puede usar como un reactivo de unión especifico para identificar su pareja de unión, sacando ventaja de su especificidad de unión, como se usaría un anticuerpo. Típicamente, el receptor de unión es un heterodfmero de subunidades de receptor. Un reactivo de unión es marcado como se describió antes, por ejemplo, fluorescencia u otro, o se puede inmobilizar a un substrato para métodos panorámicos. La composición de unión se usa para seleccionar una genoteca de expresión hecha a partir de una linea celular que expresa una pareja de unión, es decir, ligando, preferiblemente asociado con membrana. Se usan técnicas de tinción estándares para detectar o clasificar ligandos expresados en la superficie, o células transformadas que se expresan en la superficie son seleccionadas mediante acción panorámica. La selección de expresión intracelular se realiza por varios procedimientos de tinción o inmunofluorescencia. Véase también McMahan, et al. (1991 ) EMBO J. 10:2821 -2832. Por ejemplo, el día 0, se recubren previamente portaobjetos permanox de 2 cámaras con 1 mi por cámara de fibronectina, 10 ng/ml en PBS, durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se enjuagan una vez con PBS. Después de colocan en placas células COS a 2-3 x 105 células por cámara en 1 .5 mi del medio de crecimiento. Se incuban durante la noche a 37°C. El día 1 para cada muestra, se preparan 0.5 mi de una solución de 66 µg/ml de DEAE-dextran, 66 µ? de cloroquina, y 4 µg de ADN en DME libre de suero. Para cada conjunto, se prepara un control positivo, por ejemplo, ADNc de DIRS4-FLAG a una dilución de 1 y 1 /200, y un simulador negativo. Se enjuagan las células con DME libre de suero. Se añade la solución de ADN y se incuba durante 5 horas a 37°C. Se remueve el medio y se añade a 0.5 mi de DMSO al 10% en DME durante 2.5 minutos. Se remueve y se lava una vez con DME. Se añade 1 .5 mi de medio de crecimiento y se incuba durante la noche. El día 2, se cambia el medio. Los días 3 y 4, las células se fijan y se tiñen. Se enjuagan las células dos veces con solución salina de Hank con pH regulado (HBSS) y se fijan en 4% de paraformaldehído (PFA)/de glucosa durante 5 minutos. Se lavan 3 veces con HBSS. Los portaobjetos se pueden almacenar a -80°C después de que se ha removido todo el líquido. Para cada cámara, se realizan incubaciones de 0.5 mi de la siguiente manera. Se añade HBSS/saponina (0.1 %) con 32 µ?/ml de NaN3 1 M durante 20 minutos. Las células después se lavan con HBSS/saponina una vez. Se añade DIRS4 apropiado o complejo de DIRS4/anticuerpo a las células y se incuban durante 30 minutos. Se lavan las células dos veces con HBSS/saponina. Si es apropiado, se añade el primer anticuerpo durante 30 minutos. Se añade el segundo anticuerpo, por ejemplo, anticuerpo anti-ratón del vector, a una dilución de 1/200 y se incuba durante 30 minutos. Se prepara una solución de ELISA, por ejemplo, solución de peroxidasa de rábano Vector Elite ABC, y se preincuba durante 30 minutos. Se usa, por ejemplo, 1 gota de solución A (avidina) y 1 gota de solución B (biotina) por cada 2.5 mi de HBSS/saponina. Se lavan las células dos veces con HBSS/saponina. Se añade solución de ABC HRP y se incuba durante 30 minutos. Se lavan las células con HBSS, segundo lavado durante 2 minutos, y cierra las células. Después se añade ácido diaminobenzoico (DAB) del vector durante 5 a 10 minutos. Se usan 2 gotas de regulador de pH más 4 gotas de DAB más 2 gotas de H202 por 5 mi de agua destilada en vidrio. Se remueve cuidadosamente la cámara y se enjuaga en agua. Se seca con aire durante unos cuantos minutos y después se añade 1 gota de montaje de cristal y un cubreobjetos. Se hornea durante 5 minutos a 85-90°C. Se evalúa la tinción positiva de las reservas y se subclona progresivamente para aislar genes individuales responsables de la unión. Alternativamente, se usan reactivos de receptor para purificación por afinidad o clasificación de células que expresan un ligando putativo, por ejemplo, Sambrook, et al. O Ausubel, et al. Otra estrategia consiste en seleccionar un receptor de unión de membrana mediante acción panorámica. El ADNc receptor se construye como se describió antes. El ligando se puede inmovilizar y usar para inmovilizar células de expresión, La inmovilización se puede lograr mediante el uso de anticuerpos apropiados que reconocen, v.gr., una secuencia FLAG de la construcción de fusión DIRS4, o mediante el uso de anticuerpos generados contra los primeros anticuerpos. Ciclos recursivos de selección y amplificación conducen al enriquecimiento de clones apropiados y al aislamiento final de clones de expresión de receptor. Genotecas de expresión de fago pueden ser seleccionadas por DIRS4 de mamífero. Las técnicas de mareaje apropiadas, por ejemplo anticuerpos anti-FLAG, permitirán el mareaje específico de clones apropiados. Todas las citas de la presente invención se incorporan aquí por referencia al mismo grado que si cada publicación o solicitud de patente individual se indicara específicamente en forma individual para incorporarse por referencia. Se pueden hacer muchas modificaciones y variaciones de esta invención sin apartarse de su espíritu y alcance, como será evidente para los expertos en la técnica. Las modalidades específicas que aquí se describen se ofrecen a manera de ejemplo únicamente y la invención estará limitada por los términos de las reivindicaciones anexas, junto con el alcance completo de equivalentes a los cuales califican dichas reivindicaciones; y la invención no debe limitarse por las modalidades específicas que se han presentado aquí a manera de ejemplo.

NUMEROS DE IDENTIFICACION DE SECUENCIA SEQ ID NO: 1 es una secuencia de nucleótido de DIRS4 de primate. SEQ ID NO: 2 es una secuencia de polipéptido de DIRS4 de primate. SEQ ID NO: 3 es una secuencia de polipéptido de factor tisular. SEQ ID NO: 4 es una secuencia de polipéptido de IFNa R de primate. SEQ ID NO: 5 es una secuencia de polipéptido de CRF1-4. SEQ ID NO: 6 es una secuencia de polipéptido de cytor x. SEQ ID NO: 7 es una secuencia de polipéptido de cytor 7. SEQ ID NO: 8 es una secuencia de ácido nucleico de FNTx de primate. SEQ ID NO: 9 es una secuencia de polipéptido de FNTx de primate. SEQ ID NO: 10 es una secuencia de ácido nucleico de FNTx de roedor. SEQ ID NO: 1 1 es una secuencia de polipéptido de FNTx de roedor. SEQ ID NO: 12 es una secuencia de ácido nucleico de FNTy de primate SEQ ID NO: 13 es una secuencia de polipéptido de FNTy de primate.

SEQ ID NO: 14 es una secuencia de ácido nucleico de TLR-L1 de primate.

SEQ ID NO: 15 es una secuencia de polipéptido de TLR-L1 de primate.

SEQ ID NO: 16 es una secuencia de ácido nucleico de TLR-L1 de roedor.

SEQ ID NO: 17 es una secuencia de polipóptido de TLR-L1 de roedor.

SEQ ID NO: 18 es una secuencia de ácido nucleico de TLR-L2 de primate.

SEQ ID NO: 19 es una secuencia de polipéptido de TLR-L2 de primate.

SEQ ID NO: 20 es una secuencia de ácido nucleico de TLR-L2 de roedor.

SEQ ID NO: 21 es una secuencia de polipóptido de TLR-L2 de roedor.

SEQ ID NO: 22 es una secuencia de ácido nucleico de TLR-L3 de primate.

SEQ ID NO: 23 es una secuencia de polipéptido de TLR-L3 de primate.

SEQ ID NO: 24 es una secuencia de ácido nucleico de TLR-L4 de primate.

SEQ ID NO: 25 es una secuencia de polipéptido de TLR-L4 de primate.

SEQ ID NO: 26 es una secuencia de ácido nucleico de TLR-L5 de primate.

SEQ ID NO: 27 es una secuencia de polipóptido de TLR-L5 de primate.

SEQ ID NO: 28 es una secuencia de ácido nucleico de TGFx de primate.

SEQ ID NO: 29 es una secuencia de polipéptido de TGFx de primate. SEQ ID NO: 30 es una secuencia de ácido nucleico de 5685C6 de primate.

SEQ ID NO: 31 es una secuencia de polipóptido de 5685C6 de primate.

SEQ ID NO: 32 es una secuencia de ácido nucleico de 5685C6 de roedor.

SEQ ID NO: 33 es una secuencia de polipéptido de 5685C6 de roedor.

SEQ ID i NO: 34 es una secuencia de ácido nucleico de claudina-D2 primate. SEQ ID NO: 35 es una secuencia de polipóptido de claudina-D2 de primate.

SEQ ID NO: 36 es una secuencií 3 de ácido nucleico de claudina-D8 de primate. SEQ ID NO: 37 es una secuencia de polipóptido de claudina-D8 de primate, SEQ ID NO: 38 es una secuencia de ácido nucleico de claudina-D17 de primate. SEQ ID NO: 39 es una secuencia de polipóptido de claudina-D17 de primate, SEQ ID NO: 40 es una secuencia de ácido nucleico de claudina-D7.2 de primate. SEQ ID NO: 41 es una secuencia de polipéptido de claudina-D7.2 de primate, SEQ ID NO: 42 es una secuencia de ácido nucleico de schiafen B de primate, SEQ ID NO: 43 es una secuencia de polipéptido de schiafen B de primate, SEQ ID NO: 44 es una secuencia de ácido nucleico de schiafen C de primate, SEQ ID NO: 45 es una secuencia de polipóptido de schiafen C de primate, SEQ ID NO: 46 es una secuencia de ácido nucleico de schiafen D de primate, SEQ ID NO: 47 es una secuencia de polipóptido de schiafen D de primate, SEQ ID NO: 48 es una secuencia de ácido nucleico de schiafen E de primate, SEQ ID NO: 49 es una secuencia de polipéptido de schiafen E de primate, SEQ ID NO: 50 es una secuencia de ácido nucleico de schiafen F de primate, SEQ ID NO: 51 es una secuencia de polipóptido de schiafen F de primate, SEQ ID NO: 52 es una secuencia de ácido nucleico de FNTy de roedor, SEQ ID NO: 53 es una secuencia de polipéptido de FNTy de roedor.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> schering Corporation <120> GENES DE MAMIFEROS; REACTIVOS Y METODOS RELACIONADOS <130> DX01169K <150> 60/231,267 <151> 08-09-2000 <160> 53 <170> Patentln Ver. 3.1 <210> 1 <211> 704 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 1 atggcggggc ccgagcgctg gggccccctg ctcctgtgcc tgctgcaggc cgctccaggg 60 aggccccgtc tggcccctcc ccagaatgtg acgctgctct cccagaactt cagcgtgtac 120 ctgacatggc tcccagggct tggcaacccc caggatgtga cctattttgt ggcctatcag 180 agctctccca cccgtagacg gtggcgcgaa gtggaagagt gtgcgggaac caaggagctg 240 ctatgttcta tgatgtgcct gaagaaacag gacctgtaca acaagttcaa gggacgcgtg 300 cggacggttt ctcccagctc caagtccccc tgggtggagt ccgaatacct ggattacctt 360 tttgaagtgg agccggcccc acctgtcctg gtgctcaccc agacggagga gatcctgagt 420 gccaatgcca cgtaccagct gcccccctgc atgcccccac tggatctgaa gtatgaggtg 480 gcattctgga aggagggggc cggaaacaag gtgggaagct cctttcctgc ccccaggcta ggcccgctcc tccacccctt cttactcagg ttcttctcac cctcccagcc tgctcctgca cccctcctcc aggaagtctt ccctgtacac tcctgaactt ctggcagtca gccctaataa aatctgatca aagtaaaaaa aaaaaaaaag ggcggccgcc gact <210> 2 <211> 211 <212 PRT <213> Homo sapiens <:400¾ 2 Met Ala Gly Pro Glu Arg Trp Gly Pro Leu Leu Leu Cys Leu Leu Gln 1 5 10 15 Ala Ala Pro Gly Arg Pro Arg Leu Ala Pro Pro Gln Asn Val Thr Leu 20 25 30 Leu Ser Gln Asn Phe Ser Val Tyr Leu Thr Trp Leu Pro Gly Leu Gly 35 40 45 Asn Pro Gln Asp Val Thr Tyr Phe Val Ala Tyr Gln Ser Ser Pro Thr 50 55 60 Arg Arg Arg Trp Arg Glu Val Glu Glu Cys Ala Gly Thr Lys Glu Leu 65 70 75 80 Leu Cys Ser Met Met Cys Leu Lys Lys Gln Asp Leu Tyr Asn Lys Phe 85 90 95 Lys Gly Arg Val Arg Thr Val Ser Pro Ser Ser Lys Ser Pro Trp Val 100 105 110 Glu Ser Glu Tyr Leu Asp Tyr Leu Phe Glu Val Glu Pro Ala Pro Pro 115 120 125 Val Leu Val Leu Thr Gln Thr Glu Glu lie Leu Ser Ala Asn Ala Thr 130 135 140 Tyr Gln Leu Pro Pro Cys Met Pro Pro Leu Asp Leu Lys Tyr Glu Val 145 150 155 160 Ala Phe Trp Lys Glu Gly Ala Gly Asn Lys Val Gly Ser Ser Phe Pro 165 170 175 Ala Pro Arg Leu Gly Pro Leu Leu His Pro Phe Leu Leu Arg Phe Phe 180 185 190 Ser Pro Ser Gln Pro Ala Pro Ala Pro Leu Leu Gln Glu Val Phe Pro 195 200 205 Val His Ser 210 <210> 3 <211> 295 <212> PRT <213> Homo sapiens <400? 3 Met Glu Thr Pro Ala Trp Pro Arg val Pro Arg Pro Glu Thr Ala val 1 5 10 15 Ala Arg Thr Leu Leu Leu Gly Trp Val Phe Ala Gln Val Ala Gly Ala 20 25 30 Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys 35 40 45 Thr Asn Phe Lys Thr lie Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln 50 55 60 Val Tyr Thr Val Gln lie Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys 65 70 75 80 Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu lie Val T5 90 95 Lya Agp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala 100 105 110 Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn 115 120 125 Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr 130 135 140 lie Gln Ser Phe Glu Qln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu 145 150 155 160 Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg 165 170 175 Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu lie Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys 180 185 190 Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu 195 200 205 lie Asp Val Asp Lys Gly Qlu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val 210 215 220 lie Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu 225 230 235 240 Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu lie Phe Tyr lie lie 245 250 255 Gly Ala Val Ala Phe Val Val lie lie Leu Val lie lie Leu Ala lie 260 265 270 Ser Leu His Lys Cys Arg Lys Ala Gly Val Gly Gln Ser Trp Lys Glu 275 280 285 Asn Ser Pro Leu Asn Val Ser 290 295 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Leu Leu Ser Gln Asn Ala Phe lie Phe Arg Ser Leu Asn Leu Val 1 5 10 15 Leu Met Val Tyr lie Ser Leu Val Phe Gly lie Ser Tyr Asp Ser Pro 20 25 30 Asp Tyr Thr Asp Glu Ser Cys Thr Phe Lys lie Ser Leu Arg Asn Phe 35 40 45 Arg Ser lie Leu Ser Trp Qlu Leu Lys Asn His Ser lie Val Pro Thr 50 55 60 His Tyr Thr Leu Leu Tyr Thr lie Met Ser Lys Pro Glu Asp Leu Lys 65 70 75 80 Val Val Lys Asn Cys Ala Asn Thr Thr Arg Ser Phe Cys Asp Leu Thr 85 90 95 Asp Glu Trp Arg Ser Thr His Glu Ala Tyr Val Thr Val Leu Glu Gly 100 105 110 Phe Ser Gly Asn Thr Thr Leu Phe Ser Cys Ser His Asn Phe Trp Leu 115 120 125 Ala lie Asp Met Ser Phe Glu Pro Pro Glu Phe Glu lie Val Gly Phe 130 135 140 Thr Asn His lie Asn Val Val Val Lys Phe Pro Ser lie Val Glu Glu 145 150 155 160 Glu Leu Gln Phe Asp Leu Ser Leu Val lie Glu Glu Gln Ser Glu Gly 165 170 175 lie al Lys Lys His Lys Pro Glu lie Lys Gly Asn Met Ser Gly Asn 180 185 190 Phe Thr Tyr lie lie Asp Lys Leu lie Pro Asn Thr Asn Tyr Cys Val 195 200 205 Ser Val Tyr Leu Glu Hia Ser Asp Glu Gln Ala Val lie Lys Ser Pro 210 215 220 Leu Lys Cys Thr Leu Leu Pro Pro Gly Gln Glu Ser Glu Ser Ala Glu 225 230 235 240 Ser Ala Lys lie Gly Gly lie lie Thr Val Phe Leu lie Ala Leu Val 245 250 255 Leu Thr Ser Thr lie Val Thr Leu Lys Trp lie Gly Tyr lie Cys Leu 2S0 265 270 Arg Asn Ser Leu Pro Lys Val Leu Asn Phe His Asn Phe Leu Ala Trp 275 280 285 Pro Phe Pro Asn Leu Pro Pro Leu Glu Ala Met Asp Met Val Glu Val 290 295 300 lie Tyr lie Asn Arg Lys Lys Lys Val Trp Asp Tyr Asn Tyr Asp Asp 305 310 315 320 Glu Ser Asp Ser Asp Thr Glu Ala Ala Pro Arg Thr Ser Gly Gly Gly 325 330 335 Tyr Thr Met His Gly Leu Thr Val Arg Pro Leu Gly Gln Ala Ser Ala 340 345 350 Thr ser Thr Glu ser Gln Leu lie Asp Pro Glu ser Glu Glu Glu Pro 355 360 365 Asp Leu Pro Glu Val Asp Val Glu Leu Pro Thr Met Pro Lys Asp 370 375 380 Pro Gln Gln Leu Glu Leu Leu Ser Gly Pro Cys Glu Arg Arg Lys 385 390 395 Pro Leu Gln Asp Pro Phe Pro Glu Glu Asp Tyr Ser Ser Thr Glu Gly 405 410 415 Ser Gly Gly Arg lie Thr Phe Asn Val Asp Leu Asn Ser Val Phe Leu 420 42S 430 Arg Val Leu Asp Asp Glu Asp Ser Asp Asp Leu Glu Ala Pro Leu Met 435 440 445 Leu Ser Ser His Leu Glu Glu Met Val Asp Pro Glu Asp Pro Asp Asn 450 455 460 Val Gln Ser Asn His Leu Leu Ala Ser Gly Glu Gly Thr Gln Pro Thr 465 470 475 480 Phe Pro Ser Pro Ser Ser Glu Gly Leu Trp Ser Glu Asp Ala Pro 485 490 495 Asp Gln Ser Asp Thr Ser Glu Ser Asp Val Asp Leu Gly Asp Gly Tyr 500 505 510 Met Arg 515 210> 5 <211> 325 <212> PRT <213s Homo sapiens <400> 5 Met Ala Trp Ser Leu Gly Ser Trp Leu Gly Gly Cys Leu Leu Val 1 5 10 15 Ala Leu Gly Met Val Pro Pro Pro Glu Asn Val Arg Met Asn Ser Val 20 25 30 Asn Phe Lys Asn lie Leu Gln Trp Glu Ser Pro Ala Phe Ala Lys Gly 35 40 45 Asn Leu Thr Phe Thr Ala Gln Tyr Leu Ser Tyr Arg lie Phe Gln Asp 50 55 60 Lya Cys Met Asn Thr Thr Leu Thr Glu Cys Asp Phe Ser Ser Leu 65 70 75 Lys Tyr Gly Asp Hia Thr Leu Arg Val Arg Ala Glu Phe Ala Asp Glu 85 90 95 His Ser Asp Trp Val Asn lie Thr Phe Cys Pro Val Asp Asp Thr lie 100 105 110 lie Gly Pro Pro Gly Met Gln Val Glu Val Leu Ala Asp Ser Leu His 115 120 125 Met Arg Phe Leu Ala Pro Lys lie Glu Asn Glu Tyr Glu Thr Trp Thr 130 135 140 Met Lya Aan Val Tyr Asn Ser Trp Thr Tyr Asn Val Gln Tyr Trp Lys 145 150 155 160 Asn Gly Thr Asp Glu Lys Phe Gln lie Thr Pro Gln Tyr Asp Phe Glu 165 170 175 Val Leu Arg Asn Leu Glu Pro Trp Thr Thr Tyr Cys Val Gln Val Arg 180 185 190 Gly Phe Leu Pro Asp Arg Asn Lys Ala Gly 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Gly 65 70 75 80 Thr Gln Glu Leu Ser Cys Asp Leu Thr Ser Glu Thr Ser Asp lie Gln 85 90 95 Glu Pro Tyr Tyr Gly Arg Val Arg Ala Ala Ser Ala Gly Ser Tyr Ser 100 105 110 Glu Trp Ser Met Thr Pro Arg Phe Thr Pro Trp Trp Glu Thr Lys lie 115 120 125 Asp Pro Pro Val Met Asn lie Thr Gln Val Asn Gly Ser Leu Leu Val 130 135 140 lie Leu His Ala Pro Asn Leu Pro Tyr Arg Tyr Gln Lys Glu Lys Asn 145 150 155 160 Val Ser lie Glu Aap Tyr Tyr Glu Leu Leu Tyr Arg Val Phe lie lie 165 170 175 Asn Asn Ser Leu Glu Lys Glu Gln Lys Val Tyr Glu Gly Ala His Arg 180 185 190 Ala Val Glu lie Glu Ala Leu Thr Pro His Ser Ser Tyr Cys Val Val 195 200 205 Ala Glu lie Tyr Gln Pro Met Leu Asp Arg Arg Ser Gln Arg Ser Glu 210 215 220 Glu Arg Cys Val Glu lie Pro 225 230 <210> 7 <211> 553 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_CARACTERISTICA <222> (522) .. (522) <223> amino desconocido <400 7 Met Arg Ala Pro Gly Arg Pro Ala Leu Arg Pro Leu Pro Leu Pro Pro 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Pro Trp Gly Arg Ala Val Pro Cys 20 25 30 Val Ser Gly Gly Leu Pro Lys Pro Ala Asn lie Thr Phe Leu Ser lie 35 40 45 Asn Met Lys Asn Val Leu Gln Trp Thr Pro Pro Glu Gly Leu Gln Gly 50 55 60 Val Lys al Thr Tyr Thr Val Gln Tyr Phe lie Tyr Gly Gln Lys Lys 65 70 75 80 Trp Leu Asn Lys Ser Glu Cys Arg Asn lie Asn Arg Thr Tyr Cye Asp 85 90 95 Leu Ser Ala Glu Thr Ser Asp Tyr Glu His Gln Tyr Tyr Ala Lys Val 100 105 110 Lys Ala lie Trp Gly Thr Lys Cys Ser Lys Trp Ala Glu Ser Gly Arg 115 120 125 Phe Tyr Pro Phe Leu Glu Thr Gln lie Gly Pro Pro Glu Val Ala Leu 130 135 140 Thr Thr Asp Glu Lys Ser lie Ser Val Val Leu Thr Ala Pro Glu Lys 145 150 155 160 Trp Lys Arg Asn Pro Glu Asp Leu Pro Val Ser Met Gln Gln lie Tyr 165 170 175 Ser Asn Leu Lys Tyr Asn Val Ser Val Leu Asn Thr Lys Ser Asn Arg 180 185 190 Thr Trp Ser Gln Cys Val Thr Asn His Thr Leu Val Leu Thr Trp Leu 195 200 205 Glu Pro Asn Thr Leu Tyr Cys Val His Val Glu Ser Phe Val Pro Gly 210 215 220 Pro Pro Arg Arg Ala Gln Pro Ser Glu Lys Gln Cys Ala Arg Thr Leu 225 230 235 240 Lys Asp Gln Ser Ser Glu Phe Lya Ala Lys lie lie Phe Trp Tyr Val 245 250 255 Leu Pro lie Ser lie Thr Val Phe Leu Phe Ser Val Met Gly Tyr Ser 260 265 270 lie Tyr Arg Tyr lie His Val Gly Lys Glu Lys His Pro Ala Asn Leu 275 280 285 lie Leu lie Tyr Gly Asn Glu Phe Asp Lys Arg Phe Phe Val Pro Ala 290 295 300 Glu Lys lie Val lie Asn Phe lie Thr Leu Asn lie Ser Asp Asp Ser 305 310 315 320 Lys lie Ser His Gln Asp Met Ser Leu Leu Gly Lys Ser Ser Asp Val 325 330 335 Ser Ser Leu Asn Asp Pro Gln Pro Ser Gly Asn Leu Arg Pro Pro Gln 340 345 350 Glu Glu Glu Glu Val Lys His Leu Gly Tyr Ala Ser His Leu Met Glu 355 360 365 lie Phe Cys Asp Ser Glu Glu Asn Thr Glu Gly Thr Ser Leu Thr Gln 370 375 380 Gln Glu ser Leu ser Arg Thr lie Pro Pro Asp Lys Thr Val lie Glu 385 390 395 400 Tyr Glu Tyr Asp Val Arg Thr Thr Asp lie Cys Ala Gly Pro Glu Glu 405 410 415 Gln Glu Leu Ser Leu Gln Glu Glu Val Ser Thr Gln Gly Thr Leu Leu 420 425 430 Glu Ser Gln Ala Ala Leu Ala Val Leu Gly Pro Gln Thr Leu Gln Tyr 435 440 445 Ser Tyr Thr Pro Gln Leu Gln Asp Leu Asp Pro Leu Ala Gln Glu His 450 455 460 Thr Asp Ser Glu Glu Gly Pro Glu Glu Glu Pro Ser Thr Thr Leu Val 465 470 475 480 Aap Trp Asp Pro Gln. Thr Gly Arg Leu Cys lie Pro Ser Leu Ser Ser 485 490 495 Phe Asp Gln Asp Ser Glu Gly Cys Glu Pro Ser Glu Gly Asp Gly Leu 500 505 510 Gly Glu Glu Gly Leu Leu Ser Arg Leu Xaa Glu Glu Pro Ala Pro Asp 515 520 525 Arg Pro Pro Gly Glu Asn Glu Thr Tyr Leu Met Gln Phe Met Glu Glu 530 535 540 Trp Gly Leu Tyr Val Gln Met Glu Aan 545 550 210> 8 211> 687 2 12 > ADN 213 Homo sapiens 220> 221> CDS 222 > (1) .. (684) 223> <400> 8 atg gct gaa ctt tgt ccg gcg gcc gga cga cgg cgc ctt aag gaa gcg Met Ala Glu Leu Cys Pro Ala Ala Gly Arg Arg Arg Leu Lys Glu Ala 1 5 10 15 gtg cgg aag cag gga caá gaa gcc gcg gga tct ctt cgg tcc ccc agg val Arg Lys Gln Gly Gln Glu Ala Ala Gly Ser Leu Arg Ser Pro Arg 20 25 30 acc tcc agg tgc aga agt gac cgc gga gac tct gct tea cga gtt tea Thr Ser Arg Cys Arg Ser Asp Arg Gly Asp Ser Ala Ser Arg Val Ser 35 40 45 gga gct gct gaa aga ggc cae gga gcg ccg gtt etc agg gct tct gga Gly Ala Ala Glu Arg Gly His Gly Ala Pro Val Leu Arg Ala Ser Gly 50 55 60 ccc gct gct gcc cea ggg gcg ggc ctg cgg ctg gtg ggc gag gcc ttt Pro Ala Ala Ala Pro Gly Ala Gly Leu Arg Leu Val Gly Glu Ala Phe 65 70 75 80 cae tgc cgg ctg cag ggt ccc cgc cgg gtg gac aag cgg acg ctg gtg His Cys Arg Leu Gln Gly Pro Arg Arg Val Asp Lys Arg Thr Leu Val T5 90 95 gag ctg cat ggt tt cag gct ect gct gcc caá ggt gcc ttc ctg cga Glu Leu His Qly Phe Gln Ala Pro Ala Ala Gln Gly Ala Phe Leu Arg 100 105 110 ggc tcc ggt ctg age ctg gcc tcg ggt cgg ttc acg gcc ccc gtg tcc Gly Ser Gly Leu Ser Leu Ala Ser Gly Arg Phe Thr Ala Pro Val Ser 115 120 125 ggc ate ttc cag ttc tet gcc agt ctg cae gtg gac cae agt gag ctg Gly lie Phe Gln Phe Ser Ala Ser Leu His Val Asp His Ser Glu Leu 130 135 140 cag ggc aag gcc cgg ctg cgg gcc cgg gac gtg gtg tgt gtt etc ate Gln Gly Lys Ala Arg Leu Arg Ala Arg Asp Val Val Cys Val Leu lie 145 150 155 160 tgt att gag tcc ctg tgc cag cgc cae acg tgc ctg gag gcc gtc tea Cys lie Glu Ser Leu Cys Gln Arg His Thr Cys Leu Glu Ala Val Ser 165 170 175 ggc ctg gag age aac age agg gtc ttc acg cta cag gtg cag ggg ctg Gly Leu Glu Ser Aan Ser Arg Val Phe Thr Leu Gln Val Gln Gly Leu 1T0 185 190 ctg cag ctg cag gct gga cag tac gct tet gtg ttt gtg gac aat ggc Leu Gln Leu Gln Ala Gly Gln Tyr Ala Ser Val Phe Val Asp Asn Gly 195 200 205 tcc ggg gcc gtc etc acc ate cag gcg ggc tcc age ttc tcc ggg ctg Ser Gly Ala Val Leu Thr lie Gln Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly Leu 210 215 220 etc ctg ggc acg tga Leu Leu Gly Thr 225 <210> 9 <211> 228 <212> PRT <:213> Homo sapiens <400> 9 et Ala Glu Leu Cys Pro Ala Ala Gly Arg Arg Arg Leu Lya Glu Ala 1 5 10 15 Val Arg Lys Gln Gly Gln Glu Ala Ala Gly Ser Leu Arg Ser Pro Arg 20 25 30 Thr Ser Arg Cys Arg Ser Asp Arg Gly Asp Ser Ala Ser Arg Val Ser 35 40 45 Gly Ala Ala Glu Arg Gly His Gly Ala Pro Val Leu Arg Ala Ser Gly 50 55 60 Pro Ala Ala Ala Pro Gly Ala Gly Leu Arg Leu Val Gly Glu Ala Phe 65 70 75 80 His Cys Arg Leu Gln Gly Pro Arg Arg Val Asp Lys Arg Thr Leu Val 85 90 95 Glu Leu His Gly Phe Gln Ala Pro Ala Ala Gln Gly Ala Phe Leu Arg 100 105 110 Gly Ser Gly Leu Ser Leu Ala Ser Gly Arg Phe Thr Ala Pro Val Ser 115 120 125 Gly lie Phe Gln Phe Ser Ala Ser Leu His Val Asp His Ser Glu Leu 130 135 140 Gln Gly Lya Ala Arg Leu Arg Ala Arg Asp Val Val Cys Val Leu lie 145 150 155 160 Cys lie Glu Ser Leu Cys Gln Arg His Thr Cys Leu Glu Ala Val 165 170 175 Gly Leu Glu Ser Asn Ser Arg Val Phe Thr Leu Gln Val Gln Gly Leu 180 185 190 Leu Gln Leu Gln Ala Gly Gln Tyr Ala Ser Val Phe Val Asp Asn Gly 195 200 205 Ser 31y Ala Val Leu Thr lie Gln Ala Gly Ser Ser Phe Ser Gly Leu 210 215 220 Leu Leu Gly Thr 225 <211> 1232 <212> ADN <:213> Mus musculus <220> <221 CDS <222> (241) .. (1104) <223 <400> 10 gggaggccta gggagaaagt agttctcttt cggtggcagg gttgctgtcg agggcaccga gcaggagata ggtcgacaga gacgaggagt tctggctcct cctgcagaca tgcaccagcg gctgctgggc tcgtccctgg gcctcgcccc cgcgcggggg ctctgaatgc ctgccgccgc ccccatgaga gcaccggcct gggctcccgc ccctaagcct ctgctcgcgg agactgagcc atg tgg gcc tgg ggc tgg gcc gct gca gcg ctc ctc tgg cta cag act Met Trp Ala Trp Gly Trp Ala Ala Ala Ala Leu Leu Trp Leu Gln Thr 1 5 10 15 gca gga gcc ggg gcc cgg cag gag ctc aag aag tct cgg cag ctg ttt Ala aiy Ala Gly Ala Arg Gln Glu Leu Lys Lys Ser Arg Gln Leu Phe 20 25 30 gcg cgt gtg gat tcc ccc aat att acc acg tcc aac cgt gag gga ttc Ala Arg Val Asp Ser Pro Asn lie Thr Thr Ser Asn Arg Glu Gly Phe 35 40 45 cea ggc tcc gtc aag ccc ceg gaa gcc tct gga ect gag ctc tea gat Pro Gly Ser Val Lys Pro Pro Glu Ala Ser Gly Pro Glu Leu Ser Asp 50 55 60 gcc cae atg acg tgg ttg aac ttt gtc cga cgg cea gat gat ggg tcc Ala His Met Thr Trp Leu Asn Phe Val Arg Arg Pro Asp Asp Gly Ser 65 70 75 80 ccc cea gga ect ect ggc ect ect ggt ccc ect ggc tcc ect ggt gtg Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ser Pro Gly Val 85 90 95 ggc gtt acc cea gag gcc tta ctg cag gaa ttt cag gag ata ctg aaa Gly Val Thr Pro Glu Ala Leu Leu Gln Glu Phe Gln Glu lie Leu Lys 100 105 110 gag gcc acá gaa ctt cga ttc tea ggg cta cea gac acá ttg tta ecc Glu Ala Thr Glu Leu Arg Phe Ser Gly Leu Pro Asp Thr Leu Leu Pro 115 120 125 cag gaa ecc age caá cgg ctg gtg gtt gag gcc ttc tac tgc cgt ttg Gln Glu Pro ser Gln Arg Leu Val Val Glu Ala Phe Tyr Cys Arg Leu 130 135 140 aaa ggc ect gtg ctg gtg gac aag aag act ctg gtg gaa ctg ca gga Lys Gly Pro Val Leu Val Aap Lys Lys Thr Leu Val Glu Leu Gln Gly 145 150 155 160 ttc caá gct ect act act cag ggc gcc ttc ctg cgg gga tet ggc ctg Phe Gln Ala Pro Thr Thr Gln Gly Ala Phe Leu Arg Gly Ser Gly Leu 165 170 175 age ctg tec ttg ggc cga ttc acá gcc cea gtc tet gcc ate ttc cag Ser Leu Ser Leu Gly Arg Phe Thr Ala Pro Val Ser Ala lie Phe Gln 180 185 190 ttt tet gcc age ctg cae gtg gac cae agt gaa ctg cag ggc aga ggc Phe Ser Ala Ser Leu His Val Asp His Ser Glu Leu Gln Gly Arg Gly 195 200 205 cgg ttg cgt acc cgg gat atg gtc cgt gtt etc ate tgt att gag tec Arg Leu Arg Thr Arg Asp Met al Arg Val Leu lie Cys lie Glu Ser 210 215 220 ttg tgt cat cgt cat acg tec ctg gag gct gta tea ggt ctg gag age Leu Cys His Arg His Thr Ser Leu Glu Ala Val Ser Gly Leu Glu Ser 225 230 235 240 aac age agg gtc ttc acá gtg cag gtt cag ggg ctg ctg cat cta cag Aan Ser Arg Val Phe Thr Val Gln Val Gln Gly Leu Leu His Leu Gln 245 250 255 tet gga cag tat gtc tet gtg ttc gtg gac aac agt tet ggg gca gtc Ser Gly Gln Tyr Val Ser Val Phe Val Asp Asn Ser Ser Gly Ala Val 260 265 270 etc acc ate cag aac act tec age ttc teg gga atg ctt ttg ggt acc Leu Thr lie Gln Asn Thr Ser Ser Phe Ser Gly Met Leu Leu Gly Thr 275 280 285 tagcggagct gaagaaacga ttgtggattg aggaaccaac accttgcttc ttagaggagc tgaaaaggac tactcactcc ccttttaata gttttcatag caataaagaa ctccaaactt cttcatct <210> 11 211=. 288 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 11 Met Trp Ala Trp Gly Trp Ala Ala Ala Ala Leu Leu Trp Leu Gln Thr 1 5 10 15 Ala Gly Ala Gly Ala Arg Gln Glu Leu Lys Lys Ser Arg Gln Leu Phe 20 25 30 Ala Arg Val Asp Ser Pro Asn lie Thr Thr Ser Asn Arg Glu Gly Phe 35 40 45 Pro Gly Ser Val Lys Pro Pro Glu Ala Ser Gly Pro Glu Leu Ser Asp 50 55 60 Ala HÍB Met Thr Trp Leu Asn Phe Val Arg Arg Pro Asp Asp Gly Ser 65 70 75 80 Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ser Pro Gly Val 85 90 95 Gly Val Thr Pro Glu Ala Leu Leu Gln Glu Phe Gln Glu lie Leu Lys 100 105 110 Glu Ala Thr Glu Leu Arg Phe Ser Gly Leu Pro Asp Thr Leu Leu Pro 115 120 125 Gln Glu Pro Ser Gln Arg Leu Val Val Glu Ala Phe Tyr Cys Arg Leu 130 135 140 Lys Gly Pro Val Leu Val Asp Lys Lys Thr Leu Val Glu Leu Gln Gly 145 150 155 160 Phe Qln Ala Pro Thr Thr Gln Gly Ala Phe Leu Arg Gly Ser Gly Leu 165 170 175 Ser Leu Ser Leu Gly Arg Phe Thr Ala Pro Val Ser Ala lie Phe Gln 180 185 190 Phe Ser Ala Ser Leu His Val Asp His Ser Glu Leu Gln Gly Arg Gly 195 200 205 Arg Leu Arg Thr Arg Asp Met Val Arg Val Leu lie Cys lie Glu Ser 210 215 220 Leu Cys His Arg His Thr Ser Leu Glu Ala Val Ser Gly Leu Glu Ser 225 230 235 240 Asn Ser Arg Val Phe Thr Val Gln Val Gln Gly Leu Leu His Leu Gln 245 250 255 Ser Gly Gln Tyr Val Ser Val Phe Val Asp Asn Ser Ser Gly Ala Val 260 265 270 Leu Thr lie Gln Asn Thr Ser Ser Phe Ser Gly Met Leu Leu Gly Thr 275 280 2T5 <210> 12 <211> 477 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> 221> CDS <222> (1) .. (474) <223> <400> 12 gcg ccg cgc gtg gag gcc gct ttc ctc tgc cgc ctg cgc cgg gac gcg Ala Pro Arg Val Glu Ala Ala Phe Leu Cys Arg Leu Arg Arg Asp Ala 1 5 10 15 ttg gt a c c c gcg ctg cae gag ctt ggc gtc tac tac ctg ecc Leu Val Glu Arg Arg Ala Leu His Glu Leu Gly Val Tyr Tyr Leu Pro 20 25 30 gac gcc gag ggt gcc ttc cgc cgc ggc ccg ggc ctg aac ttg acc agc Asp Ala Glu Gly Ala Phe Arg Arg Gly Pro Gly Leu Asn Leu Thr Ser 35 40 45 ggc cag tac agg gcg ccc gtg gct ggc ttc tac gct ctc gcc gcc acg Gly Gln Tyr Arg Ala Pro Val Ala Gly Phe Tyr Ala Leu Ala Ala Thr 50 55 60 ctg cae gtg gcg ctc ggg gag ccg ccg agg agg ggg c g ccg cgc ccc Leu His Val Ala Leu Gly Glu Pro Pro Arg Arg Gly Pro Pro Arg Pro 65 70 75 80 cgg gac cae ctg cgc ctg ctc ate tgc ate cag tec cgg tgc cag cgc Arg Asp His Leu Arg Leu Leu lie Cys lie Gln Ser Arg Cys Gln Arg 85 90 95 aac acg tec ctg gag gcc ate atg ggc ctg gag age age agt gag ctc Asn Thr Ser Leu Glu Ala lie Met Gly Leu Glu Ser Ser Ser Glu Leu 100 105 110 ttc acc ate tet gtg aat ggc gtc ctg tac ctg cag atg ggg cag tgg Phe Thr lie Ser Val Aan Gly Val Leu Tyr Leu Gln Met Gly Gln Trp 115 120 125 acc tec tgg gcg tgt gag cgg cea cea cag gcc ctt ect ctc agg ggc Thr Ser Trp Ala Cya Glu Arg Pro Pro Gln Ala Leu Pro Leu Arg Gly 130 135 140 aaa tgg age ac gat cta gac aat gtg tgg acá gtg tea gag tag Lys Trp Ser Thr Asp Leu Asp Asn Val Trp Thr Val Ser Glu 145 150 155 <210> 13 <211> 158 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Ala Pro Arg Val Glu Ala Ala Phe Leu Cys Arg Leu Arg Arg Asp Ala 1 5 10 15 Leu Val Glu Arg Arg Ala Leu His Glu Leu Gly Val Tyr Tyr Leu Pro 20 25 30 Asp Ala Glu Gly Ala Phe Arg Arg Gly Pro Gly Leu Asn Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Gln Tyr Arg Ala Pro Val Ala Gly Phe Tyr Ala Leu Ala Ala Thr 50 55 60 Leu His Val Ala Leu Gly Glu Pro Pro Arg Arg Gly Pro Pro Arg Pro 65 70 75 80 Arg Asp His Leu Arg Leu Leu lie Cys lie Gln Ser Arg Cys Gln Arg 85 90 95 Asn Thr Ser Leu Glu Ala lie Met Gly Leu Glu Ser Ser Ser Glu Leu 100 105 110 Phe Thr lie Ser Val Asn Gly Val Leu Tyr Leu Gln Met Gly Gln Trp 115 120 125 Thr Ser Trp Ala Cys Glu Arg Pro Pro Gln Ala Leu Pro Leu Arg Gly 130 135 140 Lys Trp Ser Thr Asp Leu Asp Asn Val Trp Thr Val Ser Glu 145 150 155 <210> 14 <211> 3180 <212> ADN <213> Homo sapiens <220s <221> CDS <222> (143) .. (2677) <223> <400 14 gctggaagca gcgtcttatt ttaccttgtt ctcccacttc ctgaagatgc taaactcctg gtggactgca gaggagaggg attcagtctt ctcctgatgt gtttgcctgt aggtacctga gttgacaccg aagctcctaa ag atg ctg age ggc gtt tgg ttc ctc agt gtg Met Leu Ser Gly Val Trp Phe Leu Ser Val 1 5 10 tta acc gtg gcc ggg ate tta cag acá gag agt cgc aaa act gee aaa 220 Leu Thr Val Ala Gly lie Leu Gln Thr Glu Ser Arg Lys Thr Ala Lys 15 20 25 gac att tgc aag ate cgc tgt ctg tgc gaa gaa aag gaa aac gta ctg 268 Asp lie Cys Lys lie Arg Cys Leu Cya Glu Glu Lya Glu Asn Val Leu 30 35 40 aat ate aac tgt gag aac aaa gga ttt acá acá gtt age ctg etc cag 316 Asn lie Aan Cys Glu Asn Lys Gly Phe Thr Thr Val Ser Leu Leu Gln 45 50 55 ecc ecc cag tat cga ate tat cag ctt ttt etc aat gga aac etc ttg 364 Pro Pro Gln Tyr Arg lie Tyr Gln Leu Phe Leu Asn Gly Asn Leu Leu 60 65 70 acá aga ctg tat cea aac gaa ttt gtc aat tac tec aac gcg gtg act 412 Thr Arg Leu Tyr Pro Asn Glu Phe Val Asn Tyr Ser ??? Ala Val Thr 75 80 85 90 ctt cae cta ggt aac aac ggg tta cag gag ate cga acg ggg gca ttc 460 Leu His Leu Gly Asn Asn Gly Leu Gln Glu lie Arg Thr Gly Ala Phe 95 100 105 agt g c ct aaa ac etc aaa aga ctg cat etc aac aac aac aag ctt 508 Ser Gly Leu Lys Thr Leu Lys Arg Leu His Leu Asn Asn Asn Lys Leu 110 115 120 gag ata ttg agg gag gac acc ttc cta ggc ctg gag age ctg gag tat 556 Glu lie Leu Arg Glu Aap Thr Phe Leu Gly Leu Glu Ser Leu Glu Tyr 125 130 135 etc cag gcc gac tac aat tac ate agt gcc ate gag gct ggg gca ttc 604 Leu Gln Ala Asp Tyr Asn Tyr lie Ser Ala lie Glu Ala Gly Ala Phe 140 145 150 age aaa ctt aac aag etc aaa gtg etc ate ctg aat gac aac ctt ctg 652 Ser Lys Leu Asn Lys Leu Lys Val Leu lie Leu Asn Asp Asn Leu Leu 155 160 165 170 ctt tea ctg ecc age aat gtg ttc cgc ttt gtc ctg ctg acc cae tta 700 Leu Ser Leu Pro Ser Asn Val Phe Arg Phe Val Leu Leu Thr His Leu 175 180 185 gac etc agg ggg aat agg cta aaa gta atg ect ttt gct ggc gtc ctt Asp Leu Arg Gly Asn Arg Leu Lys Val Met Pro Phe Ala Gly Val Leu 190 195 200 gaa cat att gga ggg ate atg gag att cag ctg gag gaa aat cea tgg 796 Glu His lie Gly Gly lie Met Glu lie Gln Leu Glu Glu Asn Pro Trp 205 210 215 aat tgc act tgt gac tta ctt ect etc aag gcc tgg cta gac acc ata 844 Aan Cya Thr Cya Asp Leu Leu Pro Leu Lys Ala Trp Leu Asp Thr lie 220 225 230 act gtt ttt gtg gga gag att gtc tgt gag act ecc ttt agg ttg cat 892 Thr Val Phe Val Gly Glu lie Val Cys Glu Thr Pro Phe Arg Leu His 235 240 245 250 ggg aaa gac gtg acc cag ctg acc agg caá gac etc tgt ecc aga aaa 940 Gly Lys Asp Val Thr Gln Leu Thr Arg Gln Asp Leu Cys Pro Arg Lys 255 260 265 agt gcc agt gat tcc agt cag agg ggc age cat g t gac acc cae gtc 988 Ser Ala Ser Asp Ser Ser Gln Arg Gly Ser His Ala Asp Thr His val 270 275 280 caá agg ctg tea ect acá atg aat ect gct etc aac cea acc agg gct 1036 Gln Arg Leu Ser Pro Thr Met Aan Pro Ala Leu Asn Pro Thr Arg Ala 28S 290 295 ceg aaa gcc age cgg ceg ecc aaa atg aga aat cgt cea act ecc cga 1084 Pro Lys Ala Ser Arg Pro Pro Lys Met Arg Asn Arg Pro Thr Pro Arg 300 305 310 gtg act gtg tea aag gac agg caá agt ttt gga ecc ate atg gtg tac 1132 Val Thr Val Ser Lya Aap Arg Gln Ser Phe Gly Pro lie Met Val Tyr 315 320 325 330 cag acc aag tet ect gtg ect etc acc tgt ecc age age tgt gtc tgc 1180 Gln Thr Lys Ser Pro Val Pro Leu Thr Cys Pro Ser Ser Cys Val Cys 335 340 345 acc tet cag age tea gac aat ggt ctg aat gta aac tgc caá gaa agg 1228 Thr Ser Gln Ser Ser Asp Asn Gly Leu Asn Val Asn Cys Gln Glu Arg 350 355 360 aag ttc act aat ate tet gac ctg cag ecc aaa ceg acc agt cea aag 1276 Lys Phe Thr Asn lie Ser Asp Leu Gln Pro Lys Pro Thr Ser Pro Lys 365 370 375 aaa etc tac cta ac ggg aac tat ctt ca act gtc tat aag aat gac 1324 Lys Leu Tyr Leu Thr Gly Asn Tyr Leu Gln Thr Val Tyr Lys Asn Aap 380 385 390 etc tta gaa tac agt tet ttg gac tta ctg cae tta gga aac aac agg 1372 Leu Leu Glu Tyr Ser Ser Leu Asp Leu Leu His Leu Gly Aan Asn Arg 395 400 405 410 att gca gtc att cag gaa ggt gcc ttt acá aac ctg acc agt tta cgc 1420 lie Ala Val lie Gln Glu Gly Ala Phe Thr Asn Leu Thr Ser Leu Arg 415 420 425 aga ctt tat ctg aat ggc aat tac ctt gaa gtg ctg tac cct tct atg 1468 Arg Leu Tyr Leu Asn Gly Asn Tyr Leu Glu Val Leu Tyr Pro Ser Met 430 435 440 ttt gat gga ctg cag age ttg caá tat etc tat tta gag tat aat gtc 1516 Phe Asp Gly Leu Gln Ser Leu Gln Tyr Leu Tyr Leu Glu Tyr Asn Val 445 450 455 att aag gaa att aag cct ctg acc ttt gat gct ttg att aac cta cag 1564 lie Lys Glu lie Lys Pro Leu Thr Phe Asp Ala Leu lie Asn Leu Qln 460 465 470 cta ctg ttt ctg aac aac aac ctt ctt cgg tec tta cct gat aat ata 1612 Leu Leu Phe Leu Asn Asn Asn Leu Leu Arg Ser Leu Pro Asp Asn lie 475 480 4B5 490 ttt ggg ggg acg gee cta acc agg ctg aat ctg aga aac aac cat ttt 1660 Phe Gly Gly Thr Ala Leu Thr Arg Leu Asn Leu Arg Asn Asn His Phe 495 500 505 tct cae ctg ecc gtg aaa ggg gtt ctg gat cag etc ceg gct tt ate 1708 Ser His Leu Pro Val Lys Gly Val Leu Asp Gln Leu Pro Ala Phe lie 510 515 520 cag ata gat ctg cag gag aac ecc tgg gac tgt acc tgt gac ate atg 1756 Gln lie Asp Leu Gln Glu Asn Pro Trp Asp Cys Thr Cys Asp lie Met 525 530 535 ggg ctg aaa gac tgg acá gaa cat gee aat tec cct gtc ate att aat 1804 Gly Leu Lya Asp Trp Thr Glu His Ala Asn Ser Pro Val lie lie Asn 540 545 550 gag gtg act tgc gaa tct cct gct aag cat gca ggg gag ata cta aaa 1T52 Glu Val Thr Cys Glu Ser Pro Ala Lys His Ala Gly Glu lie Leu Lys 555 560 565 570 ttt ctg ggg agg gag gct ate tgt cea gac age cea aac ttg tea gat 1900 Phe Leu Gly Arg Glu Ala lie Cys Pro Asp Ser Pro Asn Leu Ser Asp 575 580 585 gga acc gtc ttg tea atg aat cae aat ac gac acá cct cgg teg ctt 1948 Gly Thr Val Leu Ser Met Asn His Asn Thr Aap Thr Pro Arg Ser Leu 590 595 600 agt gtg tct cct agt tec tat cct gaa cta cae act gaa gtt cea ctg 1996 Ser Val Ser Pro Ser Ser Tyr Pro Glu Leu His Thr Glu Val Pro Leu 605 610 615 tct gtc tta att ctg gga ttg ctt gtt gtt ttc ate tta tct gtc tgt 2044 Ser Val Leu lie Leu Gly Leu Leu Val Val Phe lie Leu Ser Val Cys 620 625 630 ttt ggg gct ggt tta ttc gtc ttt gtc ttg aaa cgc cga aag gga gtg 2092 Phe Gly Ala Gly Leu Phe Val Phe Val Leu Lys Arg Arg Lys Gly Val 635 640 645 650 ccg age gtt ccc agg aat acc aac aac tta gac gta agc tcc ttt caa Pro Ser Val Pro Arg Asn Thr Asn Asn Leu Asp Val Ser Ser Phe Gln 655 660 665 tta cag tat ggg tet tac aac act gag act cae gat aaa acá gac ggc Leu Gln Tyr Gly Ser Tyr Asn Thr Glu Thr His Asp Lys Thr Asp Gly 670 675 680 cat gtc tac aac tat ate ccc cea cct gtg ggt cag atg tgc caa aac His Val Tyr Asn Tyr He Pro Pro Pro val Gly Gln Met Cys Gln Asn 685 690 695 ccc ate tac atg cag aag gaa gga gac cea gta gee tat tac cga aac Pro lie Tyr Met Gln Lys Glu Gly Asp Pro Val Ala Tyr Tyr Arg Asn 700 705 710 ctg caa gag ttc age tat age aac ctg gag gag aaa aaa gaa gag cea Leu Gln Glu Phe Ser Tyr Ser Asn Leu Glu Glu Lys Lys Glu Glu Pro 715 720 725 730 gee acá cct gct tac acá ata agt gee act gag ctg cta gaa aag cag Ala Thr Pro Ala Tyr Thr lie Ser Ala Thr Glu Leu Leu Glu Lys Gln 735 740 745 gee acá cea aga gag cct gag ctg ctg tat caa aat att gct gag cga Ala Thr Pro Arg Glu Pro Glu Leu Leu Tyr Gln Asn lie Ala Glu Arg 750 755 760 gtc aag gaa ctt ccc age gca ggc cta gtc cae tat aac ttt tgt acc Val Lys Glu Leu Pro Ser Ala Gly Leu Val His Tyr Asn Phe Cys Thr 765 770 775 tta cct aaa agg cag ttt gee cct tcc tat gaa tet cga cgc caa aac Leu Pro Lys Arg Gln Phe Ala Pro Ser Tyr Glu Ser Arg Arg Gln Asn 780 785 790 caa gac aga ate aat aaa acc gtt tta tat gga act ccc agg aaa tgc Gln Asp Arg lie Asn Lys Thr Val Leu Tyr Gly Thr Pro Arg Lys Cys 795 800 805 810 ttt gtg ggg cag tea aaa ccc aac cae cct tta ctg caa gct aag ccg Phe Val Gly Gln Ser Lys Pro Asn His Pro Leu Leu Gln Ala Lys Pro 815 820 825 caa tea gaa ccg gac tac etc gaa gtt ctg gaa aaa caa act gca ate Gln Ser Glu Pro Asp Tyr Leu Glu Val Leu Glu LyB Gln Thr Ala lie 830 835 840 agt cag ctg tgaagggaaa tcatttacaa ccctaaggca tcagaggatg Ser Gln Leu 845 ctgctccgaa ctgttggaaa caaggacatt agcttttgtg tttgtttttg ttctcccttt cccagtgtta atgggggact ttgaaaatgt ttgggagata ggatgaagtc atgattttgc ttttgcaagt tttcctttaa attatttctc tctcgctctc ctcccctcct tttttttttt tttttttttt tctttttccc ttctcttctt aggaaccatc agtggacatg aatgtttcta caatgcattt cttcatagat tttgtttatg gttttgtttc ttttttcttc tttgtttttc a9t9tggga9 tgggaagagg agattatagt gactgaagaa agaataggca aacttttcaa atgaaaatgg atatttagtg tattttgtag aagatctcca aagatctttt gtgactacaa cttcttttgt aaataatgat atatggtatt tccatcgtca gtt <210> 15 <211> 845 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Met Leu Ser Gly Val Trp Phe Leu Ser Val Leu Thr Val Ala Gly lie 1 5 10 15 Leu Gln Thr Glu Ser Arg Lys Thr Ala Lys Asp lie Cys Lys lie Arg 20 25 30 Cys Leu Cys Glu Glu Lys Glu Asn Val Leu Asn lie Asn Cys Glu Asn 35 40 45 Lys Gly Phe Thr Thr Val Ser Leu Leu Gln Pro Pro Gln Tyr Arg 50 55 60 Tyr Gln Leu Phe Leu Asn Gly Asn Leu Leu Thr Arg Leu Tyr Pro Asn 65 70 75 80 Glu Phe Val Asn Tyr Ser Asn Ala Val Thr Leu His Leu Gly Asn Asn 85 90 95 Gly Leu Gln Glu lie Arg Thr Gly Ala Phe Ser Gly Leu Lys Thr Leu 100 105 110 Lys Arg Leu His Leu Asn Asn Asn Lys Leu Glu lie Leu Arg Glu Asp 115 120 125 Thr Phe Leu Gly Leu Glu Ser Leu Glu Tyr Leu Gln Ala Asp Tyr Asn 130 135 140 Tyr lie Ser Ala lie Glu Ala Gly Ala Phe Ser Lys Leu Asn Lys Leu 145 150 155 160 Lys Val Leu lie Leu Asn Asp Asn Leu Leu Leu Ser Leu Pro Ser Asn 165 170 175 Val Phe Arg Phe Val Leu Leu Thr His Leu Asp Leu Arg Gly Asn Arg 180 185 190 Leu Lys Val Met Pro Phe Ala Gly Val Leu Glu His lie Gly Gly lie 195 200 205 Met Glu lie Gln Leu Glu Glu Asn Pro Trp Asn Cys Thr Cys Asp Leu 210 215 220 Leu Pro Leu Lys Ala Trp Leu Asp Thr lie Thr Val Phe Val Gly Glu 225 230 235 240 lie Val Cys Glu Thr Pro Phe Arg Leu His Gly Lys Asp Val Thr Gln 245 250 255 Leu Thr Arg Gln Asp Leu Cys Pro Arg Lys Ser Ala Ser Asp Ser Ser 260 265 270 Gln Arg Gly Ser His Ala Asp Thr His Val Gln Arg Leu Ser Pro Thr 275 2T0 285 Met Asn Pro Ala Leu Asn Pro Thr Arg Ala Pro Lys Ala Ser Arg Pro 290 295 300 Pro Lys Met Arg Asn Arg Pro Thr Pro Arg Val Thr Val Ser Lys Asp 305 310 315 320 Arg Gln Ser Phe Gly Pro lie Met Val Tyr Gln Thr Lys Ser Pro Val 325 330 335 Pro Leu Thr Cys Pro Ser Ser Cys Val Cys Thr Ser Gln Ser Ser Asp 340 345 350 Asn Gly Leu Asn Val Asn Cys Gln Glu Arg Lys Phe Thr Asn lie Ser 355 360 365 Asp Leu Gln Pro Lys Pro Thr Ser Pro Lys Lys Leu Tyr Leu Thr Gly 370 375 380 Asn Tyr Leu Gln Thr Val Tyr Lya Asn Asp Leu Leu Qlu Tyr Ser Ser 385 390 395 400 Leu Asp Leu Leu His Leu Gly Asn Asn Arg lie Ala Val lie Gln Glu 405 410 415 Gly Ala Phe Thr Asn Leu Thr Ser Leu Arg Arg Leu Tyr Leu Asn Gly 420 425 430 Asn Tyr Leu Glu Val Leu Tyr Pro Ser Met Phe Asp Gly Leu Gln Ser 435 440 445 Leu Gln Tyr Leu Tyr Leu Glu Tyr Asn Val lie Lys Glu lie Lys Pro 450 455 460 Leu Thr Phe Asp Ala Leu lie Asn Leu Gln Leu Leu Phe Leu Asn Asn 465 470 475 480 Asn Leu Leu Arg Ser Leu Pro Asp Asn lie Phe Gly Gly Thr Ala Leu 485 490 495 Thr Arg Leu Asn Leu Arg Asn Asn His Phe Ser His Leu Pro Val Lys 500 505 510 Gly Val Leu Asp Gln Leu Pro Ala Phe lie Gln lie Asp Leu Gln Glu 515 520 525 Asn Pro Trp Asp Cys Thr Cys Asp lie Met Gly Leu Lys Asp Trp Thr 530 535 540 Glu His Ala Asn Ser Pro Val lie lie Asn Glu Val Thr Cys Glu Ser 545 550 555 560 Pro Ala Lys Hia Ala Gly Glu lie Leu Lys Phe Leu Gly Arg Glu Ala 565 570 575 lie Cyg Pro Asp Ser Pro Asn Leu Ser Asp Gly Thr Val Leu Ser Met 580 585 590 Asn His Asn Thr Asp Thr Pro Arg Ser Leu Ser Val Ser Pro Ser Ser 595 600 605 Tyr Pro Glu Leu His Thr Glu val Pro Leu ser val Leu lie Leu Gly 610 615 620 Leu Leu Val Val Phe lie Leu Ser Val Cys Phe Gly Ala Gly Leu Phe 625 630 635 640 Val Phe Val Leu Lys Arg Arg Lys Gly Val Pro Ser Val Pro Arg Asn 645 650 655 Thr Aen Asn Leu Asp Val Ser Ser Phe Gln Leu Gln Tyr Gly Ser Tyr 560 665 670 Aan Thr Glu Thr His Asp Lys Thr Asp Gly His Val Tyr Asn Tyr lie 675 680 685 Pro Pro Pro Val Gly Gln Met Cys Qln Asn Pro lie Tyr Met Gln Lys 690 695 700 Glu Gly Asp Pro Val Ala Tyr Tyr Arg Asn Leu Gln Glu Phe Ser Tyr 705 710 715 720 Ser Asn Leu Glu Glu Lys Lys Glu Glu Pro Ala Thr Pro Ala Tyr Thr 725 730 735 lie Ser Ala Thr Glu Leu Leu Glu Lys Gln Ala Thr Pro Arg Glu Pro 740 74S 750 Glu Leu Leu Tyr Gln Asn lie Ala Glu Arg Val Lys Glu Leu Pro Ser 755 760 7S5 Ala Gly Leu Val His Tyr Asn Phe Cys Thr Leu Pro Lys Arg Gln Phe 770 775 780 Ala Pro Ser Tyr Glu Ser Arg Arg Gln Aan Gln Aap Arg lie ?e? 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lie Gln Asp lie Glu Thr Gly Ala Phe 90 95 100 cat ggg cta cgg ggt ttg agg aga ttg cat cta aac aat aat aaa ctg 448 His Gly Leu Arg Gly Leu Arg Arg Leu His Leu Asn Asn Asn Lys Leu 105 110 115 120 gaa ctt ctg cga gat gat acc ttc ctt ggc ttg gag aac ctg gag tac 496 Glu Leu Leu Arg Asp Asp Thr Phe Leu Gly Leu Glu Asn Leu Glu Tyr 125 130 135 cta cag gtc gat tac aac tac ate age gtc att gaa ecc aat gct ttt 544 Leu Gln Val Asp Tyr Asn Tyr lie Ser Val lie Glu Pro Asn Ala Phe 140 145 150 ggg aaa ctg cat ttg ttg cag gtg ctt ate ctc aat gac aat ctt ttg 592 Gly Lys Leu His Leu Leu Gln Val Leu lie Leu Asn Asp Asn Leu Leu 155 160 165 tec agt tta ecc aac aat ctt ttc cgt ttt gtg ecc tta acg cae ttg 640 Ser Ser Leu Pro Asn Asn Leu Phe Arg Phe Val Pro Leu Thr Hia Leu 170 175 180 gac ctc cgg ggg aac cgg ctg aaa ctt ctg ccc tac gtg ggg ctc ttg 688 Asp Leu Arg Gly Asn Arg Leu Lys Leu Leu Pro Tyr Val Gly Leu Leu 185 190 195 200 cag cae atg gat aaa gtt gtg gag cta cag ctg gag gaa aac ect tgg 736 Gln His Met Asp Lys Val Val Glu Leu Gln Leu Glu Glu Asn Pro Trp 205 210 215 aat tgt tet tgt gag ctg ate tet cta aag gat tgg ttg gac age ate 784 Asn Cys Ser Cys Glu Leu lie Ser Leu Lys Asp Trp Leu Asp Ser lie 220 225 230 tec tat tea gee ctg gtg ggg gat gta gtt tgt gag acc ccc ttc cgc 832 Ser Tyr Ser Ala Leu val Gly Asp val val Cys Glu Thr Pro Phe Arg 235 240 245 tta cae gga agg gac ttg gac gag gta tec aag cag gaa ctt tgc cea 880 Leu His Gly Arg Asp Leu Asp Glu Val Ser Lys Gln Glu Leu Cys Pro 250 255 260 a9.J a9a ctt att tet gac tac gag atg agg ceg cag acg ect ttg age 928 Arg Arg Leu lie Ser Asp Tyr Glu Met Arg Pro Gln Thr Pro Leu Ser 265 270 275 280 acc acg ggg tat tta cae acc acc ceg gcg tea gtg aat tet gtg gee 976 Thr Thr Gly Tyr Leu His Thr Thr Pro Ala Ser Val Asn Ser Val Ala 285 290 295 act tet tec tet gct gtt tac aaa ccc ect ttg aag ccc ect aag ggg 1024 Thr Ser Ser Ser Ala Val Tyr Lys Pro Pro Leu Lys Pro Pro Lys Gly 300 305 310 act cgc caá ccc aac aag ccc agg gtg cgc ccc acc tet cgg cag ccc 1072 Thr Arg Gln Pro Asn Lys Pro Arg Val Arg Pro Thr Ser Arg Gln Pro 315 320 325 tet aag gac ttg ggc tac age aac tat ggc ccc age ate gee tat cag 1120 Ser Lys Asp Leu Gly Tyr Ser Asn Tyr Gly Pro Ser lie Ala Tyr Gln 330 335 340 acc aaa tec ceg gtg ect ttg gag tgt ccc acc gcg tgc tet tgc aac 1168 Thr Lys Ser Pro Val Pro Leu Qlu Cys Pro Thr Ala Cys Ser Cys Asn 345 350 355 360 ctg cag ate tet gat ctg ggc ctc aac gta aac tgc cag gag cga aag 1216 Leu Gln lie Ser Asp Leu Gly Leu Asn Val Asn Cys Gln Glu Arg Lys 365 370 375 ate gag age ate gct gaa ctg cag ccc aag ccc tac aat ccc aag aaa 1264 lie Glu Ser lie Ala Glu Leu Gln Pro Lys Pro Tyr Asn Pro Lys Lys 380 385 390 atg tat ctg acá gag aac tac ate gct gtc gtg cgc agg acá gac ttc 1312 Met Tyr Leu Thr Glu Asn Tyr lie Ala Val Val Arg Arg Thr Asp Phe 395 400 40S ctg gag gcc acg ggg ctg gac ctc ctg cae ctg ggg aat aac cgc ate 1360 Leu Glu Ala Thr Gly Leu Asp Leu Leu His Leu Gly Asn Asn Arg lie 410 415 420 teg atg ate cag gac cgc gct ttc ggg gat ctc acc aac ctg agg cgc 1408 Ser Met lie Gln Asp Arg Ala Phe Gly Asp Leu Thr Asn Leu Arg Arg 425 430 435 440 ctc tac ctg aat ggc aac agg ate gag agg ctg age ceg gag tta ttc 14S6 Leu Tyr Leu Asn Gly Asn Arg lie Glu Arg Leu Ser Pro Glu Leu Phe 445 450 455 tat ggc ctg cag age ctg cag tat ctc ttc ctc cag tac aat ctc ate 1504 Tyr Gly Leu Gln Ser Leu Gln Tyr Leu Phe Leu Gln Tyr Asn Leu lie 460 465 470 cgc gag att cag tet gga act ttt gac ceg gtc cea aac ctc cag ctg 1552 Arg Glu lie Gln Ser Gly Thr Phe Asp Pro Val Pro Asn Leu Gln Leu 475 480 485 cta ttc ttg aat aac aac ctc ctg cag gcc atg ecc tea ggc gtc ttc 1600 Leu Phe Leu Asn Asn Asn Leu Leu Gln Ala Met Pro Ser Gly al Phe 490 495 500 tet ggc ttg acc ctc ctc agg cta aac ctg agg agt aac cae ttc acc 1648 Ser Gly Leu Thr Leu Leu Arg Leu Asn Leu Arg Ser Asn His Phe Thr 505 510 515 520 tec ttg cea gtg agt gga gtt ttg gac cag ctg aag tea ctc ate ca 1696 Ser Leu Pro Val Ser Gly Val Leu Asp Gln Leu Lys Ser Leu lie Gln 525 530 535 ate gac ctg cat gac aat 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ctg ctg gtt ttc ate atg tec gtc ttc gtg gee gee ggg ctc ttc 2080 Leu Leu Leu Val Phe lie Met Ser Val phe Val Ala Ala Gly Leu Phe 650 655 660 gtg ctg gtc atg aag cgc agg aag aag aac cag age gac cae acc age 2128 Val Leu Val Met Lys Arg Arg Lys Lys Asn Gln Ser Asp Hia Thr Ser 665 670 675 680 acc aac aac tec gac gtg age tec ttt aac atg cag tac age gtg tac 2176 Thr Asn Asn Ser Asp Val Ser Ser Phe Asn Met Gln Tyr Ser Val Tyr 6B5 690 695 ggc ggc ggc ggc ggc acg ggc ggc cae cea cae gcg cae gtg cat cae 2224 Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly His Pro His Ala His Val Hia Hia 700 705 710 cgc ggg ccc gcg ctg ccc aag gtg aag acg ccc gcg ggc cae gtg tat 2272 Arg Gly Pro Ala Leu Pro Lys Val Lys Thr Pro Ala Gly His Val Tyr 715 720 725 gaa tac ate ccc cae cea ctg ggc cae atg tgc aaa aac ccc ate tac 2320 Glu Tyr lie Pro His Pro Leu Gly His Met Cys Lys Asn Pro lie Tyr 730 735 740 cgc tec cga gag ggc aac tec gta gag gat tac aaa gac ctg cae gag 236B Arg Ser Arg Glu Gly Asn Ser Val Glu Asp Tyr Lys Asp Leu His 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catagattet actcttcctc ttttgcttcc tccccctccc ccgcccctgc cccacctctc tttctcccct tttaagecat gggtgggtct aactggcttt tgtggagaaa ttagcacacc ccaactttaa taggaaattt gttctctttt tcc <21Q> 19 <211> 937 <212> P T <213> Homo sapiens <400> 19 Met Leu Gln Thr Leu Ala Phe Ala Val Thr Ser Leu Val Leu Ser Cys 1 5 10 15 Ala Glu Thr lie Asp Tyr Tyr Gly Glu lie Cys Asp Asn Ala Cys Pro 20 25 30 Cys Glu Glu Lys Asp Gly lie Leu Thr Val Ser Cys Glu Asn Arg Gly 35 40 45 lie lie Ser Leu Ser Glu lie Ser Pro Pro Arg Phe Pro lie Tyr His 50 55 60 Leu Leu Leu Ser Gly Asn Leu Leu Asn Arg Leu Tyr Pro Asn Glu Phe 65 70 75 80 Val Asn Tyr Thr Gly Ala Ser lie Leu His Leu Gly Ser Asn Val lie 85 90 95 Gln Asp lie Glu Thr Gly Ala Phe His Gly Leu Arg Gly Leu Arg Arg 100 105 110 Leu His Leu Asn Asn Agn Lys Leu Glu Leu Leu Arg Asp Asp Thr Phe 115 120 125 Leu Gly Leu Glu Asn Leu Glu Tyr Leu Gln Val Asp Tyr Asn Tyr lie 130 135 140 Ser Val lie Glu Pro Asn Ala Phe Gly Lys Leu His Leu Leu Gln Val 145 150 155 160 Leu lie Leu Asn Asp Asn Leu Leu Ser Ser Leu Pro Asn Asn Leu Phe 165 170 175 Arg Phe Val Pro Leu Thr His Leu Asp Leu Arg Gly Asn Arg Leu Lys 180 185 190 Leu Leu Pro Tyr Val Gly Leu Leu Gln His Met Asp Lys Val Val Glu 195 200 205 Leu Gln Leu Glu Glu Asn Pro Trp Asn Cys Ser Cys Glu Leu lie Ser 210 215 220 Leu Lys Asp Trp Leu Asp Ser lie Ser Tyr Ser Ala Leu Val Gly Asp 225 230 235 240 Val Val Cys Glu Thr Pro Phe Arg Leu His Gly Arg Asp Leu Asp Glu 245 250 255 Val Ser Lys Gln Glu Leu Cys Pro Arg Arg Leu lie Ser Asp Tyr Glu 260 265 270 Met Arg Pro Gln Thr Pro Leu Ser Thr Thr Gly Tyr Leu His Thr Thr 275 280 285 Pro Ala Ser Val Asn Ser Val Ala Thr Ser Ser Ser Ala Val Tyr Lys 290 295 300 Pro Pro Leu Lys Pro Pro Lys Gly Thr Arg Gln Pro Asn Lys Pro Arg 305 310 315 320 Val Arg Pro Thr Ser Arg Gln Pro Ser Lys Asp Leu Gly Tyr Ser Asn 325 330 335 Tyr Gly Pro Ser lie Ala Tyr Gln Thr Lys Ser Pro Val Pro Leu Glu 340 345 350 Cys Pro Thr Ala Cys Ser Cys Asn Leu Gln lie Ser Asp Leu Gly Leu 355 360 365 Asn Val Asn Cys Gln Glu Arg Lys lie Glu Ser lie Ala Glu Leu Gln 370 375 380 Pro Lys Pro Tyr Asn Pro Lys Lys Met Tyr Leu Thr Glu Asn Tyr lie 385 390 395 400 Ala Val Val Arg Arg Thr Asp Phe Leu Glu Ala Thr Gly Leu Asp Leu 405 410 415 Leu His Leu Gly Asn Asn Arg lie Ser Met lie Gln Asp Arg Ala Phe 420 425 430 Gly Asp Leu Thr Asn Leu Arg Arg Leu Tyr Leu Asn Gly Asn Arg 435 440 445 Glu Arg Leu Ser Pro Glu Leu Phe Tyr Gly Leu Gln Ser Leu Gln Tyr 450 455 460 Leu Phe Leu Gln Tyr Asn Leu lie Arg Glu lie Gln Ser Gly Thr Phe 465 470 475 480 Asp Pro val Pro Asn Leu Gln Leu Leu Phe Leu Asn Asn Asn Leu Leu 485 490 495 Gln Ala Met Pro Ser Gly Val Phe Ser Gly Leu Thr Leu Leu Arg Leu 500 505 510 Asn Leu Arg Ser Asn His Phe Thr Ser Leu Pro Val Ser Gly Val Leu 515 520 525 Asp Gln Leu Lys Ser Leu lie Gln lie Asp Leu His Asp Asn Pro Trp 530 535 540 Asp Cys Thr Cys Asp lie Val Gly Met Lys Leu Trp Val Glu Gln Leu 545 550 555 560 Lys Val Gly Val Leu Val Asp Glu Val lie Cys Lys Ala Pro Lys Lys 565 570 575 Phe Ala Glu Thr Asp Met Arg Ser lie Lys Ser Glu Leu Leu Cys Pro 580 585 590 Asp Tyr Ser Asp Val Val Val Ser Thr Pro Thr Pro Ser Ser lie Gln 595 600 605 Val Pro Ala Arg Thr Ser Ala Val Thr Pro Ala Val Arg Leu Asn Ser 610 615 620 Thr Gly Ala Pro Ala Ser Leu Gly Ala Gly Gly Gly Ala Ser Ser Val 625 630 635 640 Pro Leu Ser Val Leu lie Leu Ser Leu Leu Leu Val Phe lie Met Ser 645 650 655 Val Phe Val Ala Ala Gly Leu Phe Val Leu Val Met Lys Arg Arg Lys 660 665 670 Lys Asn Gln Ser Asp His Thr Ser Thr Asn Asn Ser Asp Val Ser Ser 675 680 685 Phe Asn Met Gln Tyr Ser Val Tyr Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly 690 695 700 His Pro Hia Ala His Val His His Arg Gly Pro Ala Leu Pro Lys Val 705 710 715 720 Lys Thr Pro Ala Gly His Val Tyr Glu Tyr lie Pro His Pro Leu Gly 725 730 735 His Met Cys Lys Asn Pro lie Tyr Arg Ser Arg Glu Gly Asn Ser Val 740 745 750 Glu Asp Tyr Lys Asp Leu Hia Glu Leu Lys Val Thr Tyr Ser Ser Asn 755 760 765 His His Leu Gln Gln Gln Gln Gln Pro Pro Pro Pro Pro Gln Gln Pro 770 775 780 Gln Gln Gln Pro Pro Pro Gln Leu Gln 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tacagcgtca gcaccatcga gccccgagag 240 gacctactgt cgccggtgca ggacgctgat cgcttttaca ggggcatttt agagccagac 300 aaacactgct ccactacccc tgcgggcagc agcctcccag aataccctaa attcccatgc 360 agcccggctg cttacacttt ctccccaaac tatgaccgtt cggccg 406 <210> 21 <211> 135 <212 PRT <213> Mus musculus <400> 21 Lys Asn Pro lie Tyr Arg Ser Arg Glu Gly Asn Ser Val Glu Asp Ty: 1 5 10 15 Lys Asp Leu His Glu Leu Lys Val Thr Tyr Ser Ser Asn His His Leu 20 25 30 Gln Gln Gln Pro Pro Pro Pro Pro Gln Gln Pro Gln Gln Gln Pro Pro 35 40 45 Pro Gln Met Gln Met Gln Pro Gly Glu Glu Glu Arg Arg Glu Ser His 50 55 60 Hig Leu Arg Ser Pro Ala Tyr Ser Val Ser Thr lie Glu Pro Arg Glu 65 70 75 80 Asp Leu Leu Ser Pro Val Qln Asp Ala Asp Arg Phe Tyr Arg Gly lie 85 90 95 Leu Glu Pro Asp Lys His Cya Ser Thr Thr Pro Ala Gly Ser Ser Leu 100 105 110 Pro Glu Tyr Pro Lys Phe Pro Cys Ser Pro Ala Ala Tyr Thr Phe Ser 115 120 125 Pro Asn Tyr Asp Arg Ser Ala 130 135 <210> 22 <211> 3545 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (112) .. (3042) .223> <400> 22 ctgatggatt tgcattcagg ttccagccct gcgtttccta tattgactcc ttatacacga cctggcgctc cagtttagga ggagacgttg ttttgtaatc aaccacgaac g atg aaa Met Lys cct tcc ata gct gag atg ctt cae aga gga agg atg ttg tgg ata att 165 Pro Ser lie Ala Glu Met Leu His Arg Gly Arg Met Leu Trp lie lie 5 10 15 ctt cta age acá att gct cta gga tgg act acc ceg att ecc cta ata 213 Leu Leu Ser Thr lie Ala Leu Gly Trp Thr Thr Pro lie Pro Leu lie 20 25 30 gag gac tea gag gaa ata gat gag ecc tgt ttt gat cea tgc tac tgt 261 Glu Asp Ser Glu Glu lie Asp Glu Pro Cys Phe Asp Pro Cys Tyr Cys 35 40 45 50 gaa gtt aaa gaa age etc ttt cat ata cat tgt gac agt aaa gga ttt 309 Glu Val Lys Glu Ser Leu Phe His lie His Cys Asp Ser Lys Gly Phe 55 60 65 acá aat att agt cag att acc gag ttc tgg tea aga ect ttt aaa ctg 357 Thr Asn lie Ser Gln lie Thr Glu Phe Trp Ser Arg Pro Phe Lys Leu 70 75 T0 tat ctg cag agg aat tct atg agg aaa tta tat acc aac agt ttt ctt 405 Tyr Leu Gln Arg Asn Ser Met Arg Lys Leu Tyr Thr Asn Ser Phe Leu 85 90 95 cat ttg aat aat gct gtg tct att aat ctt ggg aac aat gca ttg cag 453 His Leu Asn Asn Ala Val Ser lie Asn Leu Gly Asn Asn Ala Leu Gln 100 105 110 gac att cag act gga gct ttc aat ggt ctt aag att tta aag aga cta 501 Asp lie Gln Thr Gly Ala Phe Asn Gly Leu Lys lie Leu Lys Arg Leu 115 120 125 130 tat cta cat gaa aac aaa cta gat gtc ttc aga aat gac acc ttc ctt 549 Tyr Leu His Glu Asn Lys Leu Asp Val Phe Arg Asn Asp Thr Phe Leu 135 140 145 ggc ttg gaa agt cta gaa tat ctg cag gca gat tac aat gtc att aaa 597 Gly Leu Glu Ser Leu Glu Tyr Leu Gln Ala Asp Tyr Asn Val lie Lys 150 155 160 cgt att gag agt ggg gca ttt cgg aac cta agt aaa ttg agg gtt ctg 645 Arg lie Glu Ser Gly Ala Phe Arg Asn Leu Ser Lys Leu Arg Val Leu 165 170 175 att tta aat gat aat etc ate ecc atg ctt cea acc aat tta ttt aag 693 lie Leu Asn Asp Asn Leu lie Pro Met Leu Pro Thr Asn Leu Phe Lys 180 185 190 gct gtc tct tta acc cat ttg gac cta cgt gga aat agg tta aag gtt 741 Ala Val Ser Leu Thr His Leu Asp Leu Arg Gly Asn Arg Leu Lys Val 195 200 205 210 ctt ttt tac cga gga atg cta gat cae att ggc aga age ctg atg gag 789 Leu Phe Tyr Arg Gly Met Leu Asp His lie Gly Arg Ser Leu Met Glu 215 220 225 etc cag ctg gaa gaa aac ect tgg aac tgt ac tgt gaa att gta caá 837 Leu Gln Leu Glu Glu Asn Pro Trp Asn Cys Thr Cys Glu lie Val Gln 230 235 240 ctg aag agt tgg ctg gaa cgc att cct tat act gcc ctg gtg gga gac 885 Leu Lys Ser Trp Leu Glu Arg lie Pro Tyr Thr Ala Leu Val Gly Asp 245 250 255 att acc tgt gag acc cct ttc cae ttc cat gga aag gac cta cga gaa 933 lie Thr Cya Glu Thr Pro Phe Hia Phe Hia Gly Lys Asp Leu Arg Glu 260 265 270 ate agg aag ac gaa ctc tgt ccc ttg ttg tct gac tct gag gta gag 981 lie Arg Lys Thr Glu Leu Cys Pro Leu Leu Ser Agp Ser Glu Val Olu 275 280 285 290 gct agt ttg gga att cca cat tcg tca tca agt aag gag aat gca tgg 1029 Ala Ser Leu Gly lie Pro Hia Ser Ser Ser Ser Lys Glu Asn Ala Trp 295 300 305 cca act aag cct tec tca atg cta tec tct gtt cat ttt act gct tct 1077 Pro Thr Lys Pro Ser Ser Met Leu Ser Ser Val His Phe Thr Ala Ser 310 315 320 tct gtc gaa tac aag tec tca aat aaa cag cct aag ccc acc aaa cag 1125 Ser Val Glu Tyr Lys Ser Ser Asn Lys Gln Pro Lya Pro Thr Lys Gln 325 330 335 cct cga acá cca agg cca ccc tec acc tec ca gct tta tat cct ggt 1173 Pro Arg Thr Pro Arg Pro Pro Ser Thr Ser Gln Ala Leu Tyr Pro Gly 340 345 350 cea aac cag cct ccc att gct cct tat cag acc aga cca cca ate ccc 1221 Pro Asn Gln Pro Pro lie Ala Pro Tyr Gln Thr Arg Pro Pro lie Pro 355 360 365 370 att ata tgc ccc act ggg tgt acc tgt aat ttg cae ate aat gac ctt 1269 lie lie Cys Pro Thr Gly Cya Thr Cys Asn Leu His lie Asn Asp Leu 375 380 385 ggc ttg act gtc aac tgc aaa gag cga gga ttt aat aac att tct gaa 1317 Gly Leu Thr Val Asn Cys Lys Glu Arg Gly Phe Aan Aan lie Ser Glu 390 395 400 ctt ctt cca agg ccc ttg aat gcc aag aaa ctg tat ctg agt age aat 1365 Leu Leu Pro Arg Pro Leu Asn Ala Lys Lys Leu Tyr Leu Ser Ser Asn 405 410 415 ctg att cag aaa ata tac cgt tct gat ttt tgg aat ttt tct tec ttg 1413 Leu lie Gln Lys lie Tyr Arg Ser Asp Phe Trp Asn Phe Ser Ser Leu 420 425 430 gat ctc ttg cat ctg ggg aac aat cgt att tec tat gtc ca gat ggg 1461 Asp Leu Leu His Leu Gly Aan Aan Arg lie Ser Tyr Val Gln Asp Gly 435 440 445 450 gcc ttt ate aac ttg ccc aac tta aag age ctc ttc ctt aat ggc aac 1509 Ala Phe lie Asn Leu Pro Aan Leu Lya Ser Leu Phe Leu Aan Gly Aan 455 460 465 gat ata gag aag ctg acá cea ggc atg ttc cga ggc cta cag agt ttg Asp lie Glu Lys Leu Thr Pro Gly Met Phe Arg Gly Leu Gln Ser Leu 470 475 480 cae tac ttg tac ttt gag ttc aat gtc ate cgg gaa ate cag ect gca His Tyr Leu Tyr Phe Glu Phe Asn Val lie Arg Glu lie Gln Pro Ala 485 490 495 gee ttc age etc atg ecc aac ttg aag ctg cta ttc etc aat aat aac Ala Phe Ser Leu Met Pro Asn Leu Lys Leu Leu Phe Leu Asn Asn Asn 500 505 510 tta ctg agg act ctg cea acá gac gee ttt gct ggc ac tec ctg gee Leu Leu Arg Thr Leu Pro Thr Asp Ala Phe Ala Gly Thr Ser Leu Ala 515 520 525 530 cgg etc aac ctg agg aag aac tac ttc etc tat ctt ecc gtg gct ggt Arg Leu Asn Leu Arg Lys Asn Tyr Phe Leu Tyr Leu Pro Val Ala Gly 535 540 545 gtc ctg gaa cae ttg aat gee att gtc cag ata gac etc aat gag aat Val Leu Glu His Leu Agn Ala lie Val Gln lie Asp Leu Asn Glu Asn 550 555 560 ect tgg gac tgc acc tgt gac ctg gtc ecc ttt aaa cag tgg ate gaa Pro Trp Asp Cys Thr Cys Asp Leu Val Pro Phe Lys Gln Trp lie Glu 565 570 575 acc ate age tea gtc agt gtg gtt ggt gat gtg ctt tgc agg age ect Thr lie Ser Ser Val Ser Val Val Gly Asp Val Leu Cys Arg Ser Pro 580 585 590 gag aac etc acg cae cgt gat gtg cgc act att gag ctg gaa gtt ctt Glu Asn Leu Thr His Arg Asp Val Arg Thr lie Glu Leu Glu Val Leu 595 600 605 610 tgc cea gag atg ctg cae gtt gca cea gct gga gaa tec cea gee cag Cys Pro Glu Met Leu His Val Ala Pro Ala Gly Glu Ser Pro Ala Gln 615 620 625 ect gga gat tet cae ctt att ggg gca cea acc agt gca tea ect tat Pro Gly Asp Ser His Leu lie Gly Ala Pro Thr Ser Ala Ser Pro Tyr 630 635 640 gag ttt tet ect ect ggg ggc ect gtg cea ctt tet gtg tta att etc Glu Phe Ser Pro Pro Gly Gly Pro Val Pro Leu Ser Val Leu lie Leu 645 650 655 age ctg ctg gtt ctg ttt ttc tea gca gtc ttt gtt gct gca ggc etc Ser Leu Leu Val Leu Phe Phe Ser Ala Val Phe Val Ala Ala Gly Leu 660 665 670 ttt gee tac gtg etc cga agg cgt cga aag aag ctg ecc ttc aga age Phe Ala Tyr Val Leu Arg Arg Arg Arg Lys Lys Leu Pro Phe Arg Ser 675 680 685 690 aag cgg cag gaa ggt gtg gac ctt act ggc ate ca atg caa tgc cac 2229 Lys Arg Gln Glu Gly Val Asp Leu Thr Gly lie Gln Met Gln Cys His 695 700 705 agg ctg ttt gag gat ggt gga ggt ggt ggt ggc gga agt ggg ggt ggt 2277 Arg Leu Phe Glu Asp Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 710 715 720 ggt cga cea act ctt tec tet cea gag aag gee ect ecc gtg ggt cat 2325 Gly Arg Pro Thr Leu Ser Ser Pro Glu Lys Ala Pro Pro Val Gly His 725 730 735 gtg tat gag tac ate ecc cac ceg gtt acc caa atg tgc aac aac ecc 2373 Val Tyr Glu Tyr lie Pro His Pro Val Thr Gln Met Cys Asn Asn Pro 740 745 750 ate tac aag ect cgt gag gag gag gag gtg gct gtt tea tea gee caa 2421 lie Tyr Lys Pro Arg Glu Glu Glu 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Val Val Leu Phe Pro Pro Gly Gly Gly Cys Gly Ser Gly Ser 870 875 880 atg cta cta gat cga gag agg cea cag ect gee ecc tgc acá gtg gga 2805 Met Leu Leu Asp Arg Glu Arg Pro Gln Pro Ala Pro Cys Thr Val Gly 885 890 895 ttt gtg gac tgt etc tat gga acá gtg ecc aaa tta aag gaa ctg cac 2853 Phe Val Asp Cys Leu Tyr Gly Thr Val Pro Lys Leu Lys Glu Leu His 900 905 910 gtg cae cct cct ggc atg caa tac cea gac tta cag cag gat gee agg 2901 Val His Pro Pro Gly Met Gln Tyr Pro Asp Leu Gln Gln Asp Ala Arg 915 920 925 930 ctc aaa gaa acc ctt ctc ttc teg gct gaa aag ggc ttc acá gac cae 2949 Leu Lys Glu Thr Leu Leu Phe Ser Ala Glu Lys Gly Phe Thr Asp His 935 940 945 caa acc caa aaa agt gat tac ctc gag tta agg gee aaa ctt caa acc 2997 Gln Thr Gln Lys Ser Asp Tyr Leu Glu Leu Arg Ala Lys Leu Gln Thr 950 955 960 aag ccg gat tac ctc gaa gtc ctg gag aag acá acá tac agg ttc 3042 Lys Pro Asp Tyr Leu Glu Val Leu Glu Lys Thr Thr Tyr Arg Phe 965 970 975 taacagagag aagaaaatat attagtgctt tttttttttc aaaagaaaag gaaaataaaa 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Ala Ala Phe Ser Leu Met Pro Asn Leu Lys Leu Leu Phe Leu Asn 500 505 510 Asn Asn Leu Leu Arg Thr Leu Pro Thr Asp Ala Phe Ala Gly Thr Ser 515 520 525 Leu Ala Arg Leu Asn Leu Arg Lys Asn Tyr Phe Leu Tyr Leu Pro Val 530 535 540 Ala Gly Val Leu Glu His Leu Asn Ala lie Val Gln lie Asp Leu Asn 545 550 555 560 Glu Asn Pro Trp Asp Cys Thr Cys Asp Leu Val Pro Phe Lys Gln Trp 565 570 575 lie Glu Thr lie Ser Ser Val Ser Val Val Gly Asp Val Leu Cys Arg 580 585 590 Ser Pro Glu Asn Leu Thr His Arg Asp Val Arg Thr lie Glu Leu Glu 595 600 605 Val Leu Cys Pro Glu Met Leu His Val Ala Pro Ala Gly Glu Ser Pro 610 615 620 Ala Gln Pro Gly Asp Ser His Leu lie Gly Ala Pro Thr Ser Ala Ser 625 630 635 640 Pro Tyr Glu Phe Ser Pro Pro Gly Gly Pro Val Pro Leu Ser Val Leu 645 650 655 lie Leu Ser Leu Leu Val Leu Phe Phe Ser Ala Val Phe Val Ala Ala 660 665 670 Gly Leu Phe Ala Tyr Val Leu Arg Arg Arg Arg Lys Lya Leu Pro Phe 675 680 685 Arg Ser Lyg Arg Gln Glu Gly Val Asp Leu Thr Gly lie Gln Met Gln 690 695 700 Cya His 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Phe Leu Glu Ser Lys Lys Glu 755 760 76B Tyr Asn Ser lie Gly Val Ser Gly Phe Glu lie Arg Tyr Pro Glu Lys 770 775 780 Gln Pro Asp Lys Lys Ser Lys Lys Ser Leu lie Gly Gly Asn His Ser 785 790 795 800 Lyg lie Val Val Glu Gln Arg Lys Ser Glu Tyr Phe Glu Leu Lys Ala 805 810 815 Lys Leu Gln Ser Ser Pro Asp Tyr Leu Gln Val Leu Glu Glu Gln Thr 320 825 B30 Ala Leu Asn Lys lie 835 <210> 26 <211> 1694 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 26 tcactctatg aacagcacat ggtgagcccc atggttcatg tctatagaag tccatccttt ggtccaaagc atctggaaga ggaagaagag aggaatgaga aagaaggaag tgatgcaaaa catctccaaa gaagtctttt ggaacaggaa aatcattcac cactcacagg gtcaaatatg aaatacaaaa ccacgaacca atcaacagaa tttttatcct tccaagatgc cagctcattg tacagaaaca ttttagaaaa agaaagggaa cttcagcaac tgggaatcac agaataccta aggaaaaaca ttgctcagct ccagcctgat atggaggcac attatcctgg agcccacgaa gagctgaagt taatggaaac attaatgtac tcacgtccaa ggaaggtatt agtggaacag acaaaaaatg agtattttga acttaaagct aatttacatg ctgaacctga ctatttagaa gtcctggagc agcaaacata gatggagagt ttgagggctt tcgcagaaat gctgtgattc tgttttaagt ccataccttg taaataagtg ccttacgtga gtgtgtcatc aatcagaacc 600 taagcacagc agtaaactat ggggaaaaaa aaagaagaag aaaagaaact cagggatcac 660 tgggagaagc catggcatta tcttcaggca atttagtctg tcccaaataa aataaatcct 720 tgcatgtaaa tcattcaagg gttatagtaa tatttcatat actgaaaagt gtctcatagg 780 agtcctcttg cacatctaaa aaggctgaac atttaagtat cccgcaattt tcttgaattg 840 ctttccctat agattaatta caattggatt tcatcattta aaaaccatac ttgtatatgt 900 agttataata tgtaaggaat acattgttta taaccagtat gtacttcaaa aatgtgtatt 960 gtcaaacata cctaactttc ttgcaataaa tgcaaaagaa actggaactt gacaattata 1020 aatagtaata gtgaagaaaa aatagaaagg ttgcaattat ataggccatg ggtggctcaa 1080 aactttgaac atttgagctt aaacaaatgc cactctcatg cattctaaat taaaaagtta 1140 aaatgattaa tagttcaggt ggaagaaata agcatacttt ttgggttttc tacacatttt 1200 gtgtagacaa ttttaatgtc agtgctgctg tgaactaaag tatgtcattt atgctcaaag 1260 tttaattctt cttcttggga tattttaaaa atgctactga gattctgctg taaatatgac 1320 tagagaatat attgggtttg ctttatttca taggcttaat tctttgtaaa tctgaatgac 1380 cataatagaa atacatttct tgtggcaagt aattcacagt tgtaaagtaa ataggaaaaa 1440 ttattttatt tttattgatg tacattgata gatgccataa atcagtagca aaaggcactt 1500 ctaaaggtaa gtggtttaag ttgcctcaag agagggacaa tgtagcttta ttttacaaga 1560 aggcatagtt agatttctat gaaatattta ttctgtacag ttttatatag ttttggttca 1620 caaaagtaat tattcttggg tgcctttcaa gaaaattaaa aatactactc actacaataa 1680 aactaaaatg aaaa 1694 <210> 27 <211> 841 <212> PRT <213> ??p? sapiens <400> 27 Met Lys Leu Trp lie His Leu Phe Tyr Ser Ser Leu Leu Ala Cys lie 1 5 10 15 Ser Leu His Ser Gln Thr Pro Val Leu Ser Ser Arg Gly Ser Cys Asp 20 25 30 Leu Cys Asn Cys Glu Glu Lys Asp Gly Thr Met Leu lie Asn Cys 35 40 45 Glu Ala Lys Gly lie Lys Met Val Ser Glu lie Ser Val Pro Pro Ser 50 55 60 Arg Pro Phe Gln Leu Ser Leu Leu Asn ?ß? Gly Leu Thr Met Leu His 65 70 75 80 Thr Asn Asp Phe Ser Gly Leu Thr Asn Ala lie Ser lie His Leu Gly 85 90 95 Phe Asn Asn lie Ala Asp lie Glu lie Gly Ala Phe Asn Gly Leu Gly 100 105 110 Leu Leu Lys Gln Leu His lie Asn His Asn Ser Leu Glu lie Leu Lys 115 120 125 Glu Asp Thr Phe His Gly Leu Glu Asn Leu Glu Phe Leu Qln Ala Asp 130 135 140 Asn Asn Phe lie Thr Val lie Glu Pro Ser Ala Phe Ser Lys Leu Asn 145 150 155 160 Arg Leu Lys Val Leu lie Leu Asn Asp Asn Ala lie Glu Ser Leu Pro 16S 170 175 Pro Asn lie Phe Arg Phe Val Pro Leu Thr His Leu Asp Leu Arg Gly 180 185 190 Asn Gln Leu Gln Thr Leu Pro Tyr Val Gly Phe Leu Glu His lie Gly 195 200 205 Arg lie Leu Asp Leu Gln Leu Glu Asp Asn Lys Trp Ala Cys Asn Cys 210 215 220 Asp Leu Leu Gln Leu Lys Thr Trp Leu Glu Asn Met Pro Pro Gln ser 225 230 235 240 lie lie Gly Asp Val Val Cya Asn Ser Pro Pro Phe Phe Lys Gly Ser 245 250 255 Leu Ser Arg Leu Lys Lys Glu ser lie Cya Pro Thr Pro Pro Val 260 265 270 Tyr Glu Glu His Glu Asp Pro Ser Gly Ser Leu His Leu Ala Ala Thr 275 280 285 Ser Ser lie Aan Asp Ser Arg Met Ser Thr Lys Thr Thr Ser lie Leu 290 295 300 Lys Leu Pro Thr Lys Ala Pro Gly Leu lie Pro Tyr lie Thr Lys Pro 305 310 315 320 Ser Thr Gln Leu Pro Gly Pro Tyr Cys Pro lie Pro Cys Asn Cys Lys 325 330 335 Val Leu Ser Pro Ser Gly Leu Leu lie Hia Cys Gln Glu Arg Asn 340 345 350 Glu Ser Leu Ser Asp Leu Arg Pro Pro Pro Gln Asn Pro Arg Lys Leu 355 360 365 lie Leu Ala Gly Asn lie lie His Ser Leu Met Lys Ser Asp Leu Val 370 375 380 Glu Tyr Phe Thr Leu Glu Met Leu His Leu Gly Asn Asn Arg lie Glu 385 390 395 400 Val Leu Glu Glu Gly Ser Phe Met Asn Leu Thr Arg Leu Gln Lys Leu 405 410 415 Tyr Leu Asn Gly Asn His Leu Thr Lys Leu Ser Lys Gly Met Phe Leu 420 425 430 Gly Leu His Asn Leu Glu Tyr Leu Tyr Leu Glu Tyr Asn Ala lie Lys 435 440 445 Glu lie Leu Pro Gly Thr Phe Asn Pro Met Pro Lys Leu Lys Val Leu 450 455 460 Tyr Leu Asn Asn Asn Leu Leu Gln Val Leu Pro Pro His lie Phe Ser 465 470 475 480 Gly Val Pro Leu Thr Lys Val Asn Leu Lys Thr Asn Gln Phe Thr His 4T5 490 495 Leu Pro Val Ser Asn lie Leu Asp Asp Leu Asp Leu Leu Thr Gln lie 500 505 510 Asp Leu Glu Asp Asn Pro Trp Asp Cys Ser Cys Asp Leu Val Gly Leu 515 520 525 Gln Gln Trp lie Gln Lys Leu Ser Lys Asn Thr Val Thr Asp Asp 530 535 540 Leu Cys Thr Ser Pro Gly His Leu Asp Lys Lys Glu Leu Lys Ala Leu 545 550 555 560 Asn Ser Glu lie Leu Cys Pro Gly Leu Val Asn Asn Pro Ser Met Pro 565 570 575 Thr Gln Thr Ser Tyr Leu Met Val Thr Thr Pro Ala Thr Thr Thr Asn 580 585 590 Thr Ala Asp Thr lie Leu Arg Ser Leu Thr Asp Ala Val Pro Leu 595 600 605 Val Leu lie Leu Gly Leu Leu lie Met Phe lie Thr lie Val Phe Cys 610 615 620 Ala Ala Gly lie Val Val Leu Val Leu His Arg Arg Arg Arg Tyr Lys 625 630 635 640 Lys Lys Gln Val Asp Glu Gln Met Arg Asp Asn Ser Pro Val His Leu 645 650 655 Gln Tyr Ser Met Tyr Gly His Lys Thr Thr His His Thr Thr Glu Arg 660 565 670 Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Glu Gln His Met Val Ser Pro Met Val His 675 680 685 Val Tyr Arg Ser Pro Ser Phe Gly Pro Lys His Leu Glu Glu Glu Glu 690 695 700 Glu Arg Asn Glu Lys Glu Gly Ser Asp Ala Lys His Leu Gln Arg Ser 705 710 715 720 Leu Leu Glu Qln Glu Asn His Ser Pro Leu Thr Gly Ser Asn Met Lys 725 730 735 Tyr Lys Thr Thr Asn Gln Ser Thr Glu Phe Leu Ser Phe Gln Asp Ala 740 745 750 Ser Ser Leu Tyr Arg Asn lie Leu Glu Lys Glu Arg Glu Leu Gln Gln 755 760 765 Leu Qly lie Thr Glu Tyr Leu Arg Lys Asn lie Ala Gln Leu Gln Pro 770 775 780 Asp Met Glu Ala His Tyr Pro Gly Ala His Glu Glu Leu Lys Leu Met 785 790 795 800 Glu Thr Leu Met Tyr Ser Arg Pro Arg Lys Val Leu Val Glu Gln Thr 805 810 815 Lys Asn Glu Tyr Phe Glu Leu Lys Ala Asn Leu Hia Ala Glu Pro Asp 820 825 830 Tyr Leu Glu Val Leu Glu Gln Gln Thr 835 840 210> 28 211> 639 212> ADN 213> Homo sapiens 220> 221> CDS 222> (1) .. 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P T <213> Homo sapiens <400> 29 Met Val Leu Pro Ser Tyr Ser Lys Ser Glu Gly Gly Ser Leu Leu Asp 1 5 10 15 lie Tyr Cys Leu Leu Thr Tyr Trp Met Glu Val Val Pro Thr Leu Leu 20 25 30 Ala Glu Thr Lys lie Pro Ala Thr Asp Val Ala Asp Ala Ser Leu Asn 35 40 45 Glu Cys Ser Ser Thr Glu Arg Lys Gln Asp Val Val Leu Leu Phe Val 50 55 60 Thr Leu Ser His Thr Gln Pro Pro Leu Phe His Leu Pro Tyr Val Gln 65 70 75 80 Lys Pro Leu lie Ser Asn Val Glu Gln Leu lie Leu Gly lie Pro Gly 85 90 95 Gln Asn Arg Arg Glu lie Gly His Gly Gln Asp lie Phe Pro Ala Glu 100 105 110 Lys Leu Cys His Leu Gln Asp Arg Lys Val Asn Leu His Arg Ala Ala 115 120 125 Trp Gly Glu Cys lie Val Ala Pro Lys Thr Leu Ser Phe Ser Tyr Cys 130 135 140 Gln Gly Thr Cys Pro Ala Leu Asn Ser Glu Leu Arg His Ser Ser Phe 145 150 155 160 Cys Tyr Lys Arg Ala Val Pro Thr Cya Pro Trp Leu Phe Gln Thr 165 170 175 Cys Arg Pro Thr Met Val Arg Leu Phe Ser Leu Met Val Gln Asp Asp 1T0 185 190 Glu His Lys Met Ser Val His Tyr Val Asn Thr Ser Leu Val Glu Lys 195 200 205 Gly Cys Ser 210 <210> 30 <211> 1061 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222? 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Thr Ser Ala Leu Gly His Leu Leu Asn Phe 85 90 95 Thr Leu Val Gln Asp Leu Lys Leu Ser Leu Cys Ser Thr Asn Thr Leu 100 105 110 Pro Thr Glu Tyr Leu Ala lie Cys Gly Leu Lys Arg Leu Arg lie Asn 115 120 125 Met Glu Ala Lys His Pro Phe Pro Glu Gln Ser Leu Leu lie His Ser 130 135 140 Gly Gly Asp Ser Asp Ser Arg Glu Lys Pro Met Trp Leu His Lys Gly 145 150 155 160 Trp Gln Pro Cys Met Tyr lie Ser Phe Leu Asp Met Ala Leu Phe Asn 165 170 175 Arg Aap Ser Ala Leu Lys Ser Tyr Ser lie Glu Asn Val Thr Ser lie 180 185 190 Ala Asn Asn Phe Pro Asp Phe Ser Tyr Phe Arg Thr Phe Pro Met Pro 195 200 205 Ser Asn Lys Ser Tyr Val Val Thr Phe lie Tyr 210 215 <210> 32 <211> 921 <212> ADN <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (255) .. 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ADN <213> Homo sapiens <220> 221> CDS <222> (1) .. (690) <222> <400> 34 atg gcc tct ctt ggc ctc caa ctt gtg ggc tac ate cta ggc ctt ctg Met Ala Ser Leu Gly Leu Gln Leu Val Gly Tyr lie Leu Gly Leu Leu 1 5 10 15 ggg ctt ttg ggc ac ctg gtt gcc atg ctg ctc ecc age tgg aaa acá Gly Leu Leu Gly Thr Leu Val Ala Met Leu Leu Pro Ser Trp Lys Thr 20 25 30 agt tct tat gtc ggt gcc age att gtg acá gca gtt ggc ttc tec aag Ser Ser Tyr Val Gly Ala Ser lie Val Thr Ala Val Gly Phe Ser Ly~ 3 35 40 45 ggc ctc tgg atg gaa tgt gcc acá cae age ac ggc ate acc cag tgt Gly Leu Trp Met Glu Cys Ala Thr His Ser Thr Gly lie Thr Gln Cya 50 55 60 gac ate tat age acc ctt ctg ggc ctg ecc gct gac ate cag ggt gcc Asp lie Tyr Ser Thr Leu Leu Gly Leu Pro Ala Asp lie Gln Gly Ala 65 70 75 80 cag gcc atg atg gtg ac tec agt gca ate tec tec ctg gcc tgc att Gln Ala Met Met Val Thr Ser Ser Ala lie Ser Ser Leu Ala Cya lie 85 90 95 ate tct gtg gtg ggc atg aga tgc acá gtc ttc tgc cag gaa tec cga lie Ser Val Val Gly Met Arg Cya Thr Val Phe Cys Gln Glu Ser Arg 100 105 110 gcc aaa gac aga gtg gcg gta gca ggt gga gtc ttt ttc ate ctt gga Ala Lys Asp Arg Val Ala Val Ala Gly Gly Val Phe Phe He Leu Gly 115 120 125 ggc ctc ctg gga ttc att ect gtt gcc tgg aat ctt cat ggg ate cta Gly Leu Leu Gly Phe lie Pro Val Ala Trp Asn Leu His Gly lie Leu 130 135 140 cgg gac ttc tac tea cea ctg gtg ect gac age atg aaa ttt gag att Arg Asp Phe Tyr Ser Pro Leu Val Pro Asp Ser Met Lys Phe Glu lie 145 150 155 160 gga gag gct ctt tac ttg ggc att att tet tec ctg ttc tec ctg ata Gly Glu Ala Leu Tyr Leu Gly lie lie Ser Ser Leu Phe Ser Leu lie 165 170 175 gct gga ate ate etc tgc ttt tec tgc tea tec cag aga aat cgc tec Ala Gly lie lie Leu Cys Phe Ser Cys Ser Ser Gln Arg Asn Arg Ser 180 185 190 aac tac tac gat gee tac ca gee caá ect ctt gee acá agg age tet Asn Tyr Tyr Asp Ala Tyr Gln Ala Gln Pro Leu Ala Thr Arg Ser Ser 195 200 205 cea agg gct ggt ca ect ecc aaa gtc aag agt gag ttc aat tec tac Pro Arg Ala Gly Gln Pro Pro Lys Val Lys Ser Glu Phe Aen Ser Tyr 210 215 220 age ctg acá ggg tat gtg tga Ser Leu Thr Gly Tyr Val 225 230 <210> 35 <211> 230 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Met Ala Ser Leu Qly Leu Gln Leu Val Gly Tyr lie Leu Qly Leu Leu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Gly Thr Leu Val Ala Met Leu Leu Pro Ser Trp Lys Thr 20 25 30 Ser Ser Tyr Val Gly Ala Ser lie Val Thr Ala Val Gly Phe Ser Lys 35 40 45 Gly Leu Trp Met Glu Cys Ala Thr His Ser Thr Gly lie Thr Gln Cys 50 55 60 Asp lie Tyr Ser Thr Leu Leu Gly Leu Pro Ala Asp lie Gln Gly Ala 65 70 75 80 Gln Ala Met Met Val Thr Ser Ser Ala lie Ser Ser Leu Ala Cys lie 85 90 95 lie Ser Val Val Gly Met Arg Cys Thr Val Phe Cys Gln Glu Ser Arg 100 105 110 Ala Lys Asp Arg Val Ala Val Ala Gly Gly Val Phe Phe lie Leu Gly 115 120 125 Gly Leu Leu Gly Phe lie Pro Val Ala Trp Asn Leu His Gly lie Leu 130 135 140 Arg Asp Phe Tyr Ser Pro Leu Val Pro Asp Ser Met Lys Phe Glu lie 145 150 155 160 Gly Glu Ala Leu Tyr Leu Gly lie lie Ser Ser Leu Phe Ser Leu lie 165 170 175 Ala Gly lie lie Leu Cys Phe Ser Cys Ser Ser Gln Arg Asn Arg Ser 180 185 190 Asn Tyr Tyr Asp Ala Tyr Gln Ala Gln Pro Leu Ala Thr Arg Ser Ser 195 200 205 Pro Arg Ala Gly Gln Pro Pro Lys Val Lys Ser Glu Phe Asn Ser Tyr 210 215 220 Ser Leu Thr Gly Tyr Val 225 230 <210> 36 <211> 1002 <212> AUN <213> Homo sapiens <220=- 221> misc_caracter£st <222> (998) .. (998) <223> amino desconocido <400> 36 tgggttccga gttcattact acaggaaaaa ctgttctctt ctgtggcaca gagaaccctg 60 cttcaaagca gaagtagcag ttccggagtc cagctggcta aaactcatcc cagaggataa 120 tggcaaccca tgccttagaa atcgctgggc tgtttcttgg tggtgttgga atggtgggca 180 cagtggctgt cactgtcatg cctcagtgga gagtgtcggc cttcattgaa aacaacatcg 240 tggtttttga aaacttctgg gaaggactgt ggatgaattg cgtgaggcag gctaacatca 300 ggatgcagtg caaaatctat gattccctgc tggctctttc tccggaccta caggcagcca 360 gaggactgat gtgtgctgct tccgtgatgt ccttcttggc tttcatgatg gccatccttg 420 gcatgaaatg caccaggtgc acgggggaca atgagaaggt gaaagctcac attctgctga 480 cggctggaat caatctcatc atcacgggca tggtgggggc caaccctgtg aacctggttt 540 ccaatgccat catcagagat ttttttaccc caatagtgaa tgttgcccaa aaacgtgagc 600 ttggagaagc tctctactta ggatggacca cggcactggt gctsattgtt ggaggagctc 660 tgttctgctg cgttttttgy tgcaacgaaa agagcagtag ctacagatac tcgatacctt 720 cccatcgcac aacccaaaaa agttatcaca ccggaaagaa gtcaccgagc gtctactcca 7T0 gaagtcagta tgtgtagttg tgtatgtttt tttaacttta ctataaagcc atgcaaatga 840 caaaaatcta tattactttc tcaaaatgga ccccaaagaa actttgattt actgttctta 900 actgcctaat cttaattaca ggaactgtgc atcagctatt tatgattcta taagctattt 960 cagcagaatg agatattaaa tccaatgctt tgattgtnct ag 1002 <=210> 37 <211> 225 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Met Ala Thr His Ala Leu Qlu lie Ala Gly Leu Phe Leu Gly Gly Val 1 5 10 15 Gly Met Val Gly Thr Val Ala Val Thr Val Met Pro Gln Trp Arg Val 20 25 30 Ser Ala Phe lie Glu Asn Asn lie Val Val Phe Glu Asn Phe Trp Glu 35 40 45 Gly Leu Trp Met Asn Cys Val Arg Gln Ala Asn lie Arg Met Gln Cys 50 55 60 Lys lie Tyr Asp Ser Leu Leu Ala Leu Ser Pro Asp Leu Gln Ala Ala 65 70 75 80 Arg Gly Leu Met Cys Ala Ala Ser Val Met Ser Phe Leu Ala Phe Met 85 90 95 Met Ala lie Leu Gly Met Lya Cya Thr Arg Cys Thr Gly Asp Asn Glu 100 105 110 Lys Val Lys Ala His lie Leu Leu Thr Ala Gly lie Asn Leu lie lie 115 120 125 Thr Gly Met Val Gly Ala Asn Pro Val Asn Leu Val Ser Asn Ala 130 135 140 Arg Asp Phe Phe Thr Pro lie Val Asn Val Ala Gln Lys Arg Glu 150 155 160 Leu Gly Glu Ala Leu Tyr Leu Gly Trp Thr Thr Ala Leu Val Leu lie 165 170 175 Val Gly Gly Ala Leu Phe Cys Cys Val Phe Cys Cys Asn Glu Lys Ser 180 185 190 Ser Ser Tyr Arg Tyr Ser lie Pro Ser His Arg Thr Thr Gln Lys Ser 195 200 205 Tyr His Thr Gly Lys Lys Ser Pro Ser Val Tyr Ser Arg Ser Gln Tyr 210 215 220 Val 225 210> 38 211> 833 212> ADN 213 Homo sapiens 220> 221> CDS 222s- (159) .. (830) 223> <400> 38 ccaagttcag tcacagctac tgatttggac taaaacgtta tgggcagcag ccaaggagaa 60 catcatcaaa gacttctcta gactcaaaag gcttccacgt tctacatctt gagcatcttc 120 taccactccg aattgaacca gtcttcaaag taaaggca atg gca ttt tat ccc ttg 176 Met Ala Phe Tyr Pro Leu 1 5 ca att gct ggg ctg gtt ctt ggg ttc ctt ggc atg gtg ggg act ctt 224 Gln lie Ala Gly Leu Val Leu Gly Phe Leu Gly Met Val Gly Thr Leu 10 15 20 gcc acá acc ctt ctg cct cag tgg aga gta tea gct ttt gtt ggc age 272 Ala Thr Thr Leu Leu Pro Gln Trp Arg Val Ser Ala Phe Val Gly Ser 25 30 35 aac att att gtc ttt gag agg etc tgg gaa ggg etc tgg atg aat tgc 320 Asn lie lie Val Phe Glu Arg Leu Trp Glu Gly Leu Trp Met Aan Cys 40 45 50 ate cga caá gcc agg gtc cgg ttg caá tgc aag ttc tat age tec ttg 368 lie Arg Gln Ala Arg Val Arg Leu Gln Cys Lys Phe Tyr Ser Ser Leu 55 60 65 70 ttg gct etc ceg cct gcc ctg gaa acá gcc cgg gcc etc atg tgt gtg 416 Leu Ala Leu Pro Pro Ala Leu Glu Thr Ala Arg Ala Leu Met cys al 75 80 85 gct gtt gct etc tec ttg ate gcc ctg ctt att ggc ate tgt ggc atg 464 Ala Val Ala Leu Ser Leu lie Ala Leu Leu lie Gly lie Cys Gly Met 90 95 100 aag cag gtc cag tgc ac ggc tet aac gag agg gcc aaa gca tac ctt 512 Lys Gln Val Gln Cys Thr Gly Ser Asn Glu Arg Ala Lys Ala Tyr Leu 105 110 115 ctg gga act tca gga gtc ctc ttc atc ctg acg ggt atc ttc gtt ctg 560 Leu Gly Thr Ser Gly Val Leu Phe lie Leu Thr Gly lie Phe Val Leu 120 125 130 att ccg gtg age tgg acá gee aat ata atc atc aga gat ttc tac aac 60B lie Pro Val Ser Trp Thr Ala Asn lie lie lie Arg Asp Phe Tyr Asn 135 140 145 150 cea gee atc cae ata ggt cag aaa cga gag ctg gga gca gca ctt ttc 656 Pro Ala lie His lie Gly Gln Lys Arg Glu Leu Gly Ala Ala Leu Phe 155 160 165 ctt ggc tgg gca age gct gct gtc ctc ttc att gga ggg ggt ctg ctt 704 Leu Gly Trp Ala Ser Ala Ala Val Leu Phe lie Gly Gly Gly Leu Leu 170 175 180 tgt gga ttt tgc tgc tgc aac aga aag aag caá ggg tac aga tat cea 752 Cys Gly Phe Cys Cys Cys Asn Arg Lys Lys Gln Gly Tyr Arg Tyr Pro 185 190 195 gtg cct ggc tac cgt gtg cea cae acá gat aag cga aga aat acg acá 800 Val Pro Gly Tyr Arg Val Pro His Thr Asp Lys Arg Arg Asn Thr Thr 200 205 210 atg ctt agt aag acc tcc acc agt tat gtc taa 833 Met Leu Ser Lys Thr Ser Thr Ser Tyr Val 215 220 <210> 39 <211> 224 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Met Ala Phe Tyr Pro Leu Gln lie Ala Gly Leu Val Leu Gly Phe Leu 1 5 10 15 Gly Met Val Gly Thr Leu Ala Thr Thr Leu Leu Pro Gln Trp Arg Val 20 25 30 Ser Ala Phe Val Gly Ser Asn lie lie Val Phe Glu Arg Leu Trp Glu 35 40 45 Gly Leu Trp Met Asn Cya lie Arg Gln Ala Arg Val Arg Leu Gln Cys 50 55 60 Lys Phe Tyr Ser Ser Leu Leu Ala Leu Pro Pro Ala Leu Glu Thr Ala 65 70 75 80 Arg Ala Leu Met Cys Val Ala Val Ala Leu Ser Leu lie Ala Leu Leu 85 90 95 lie Gly lie Cys Gly Met Lys Gln Val Gln Cys Thr Gly Ser Asn Glu 100 105 110 Arg Ala Lys Ala Tyr Leu Leu Gly Thr Ser Gly Val Leu Phe lie Leu 115 120 125 Thr Gly lie Phe Val Leu lie Pro Val Ser Trp Thr Ala Asn lie lie 130 135 140 lie Arg Asp Phe Tyr Asn Pro Ala lie His lie Gly Gln Lys Arg Glu 145 150 155 160 Leu Gly Ala Ala Leu Phe Leu Gly Trp Ala Ser Ala Ala Val Leu Phe 165 170 175 Gly Gly Gly Leu Leu Cys Gly Phe Cys Cys Cys Asn Arg Lys Lys 180 185 190 Gln Gly Tyr Arg Tyr Pro Val Pro Gly Tyr Arg Val Pro His Thr Asp 195 200 205 Lys Arg Arg Asn Thr Thr Met Leu Ser Lys Thr Ser Thr Ser Tyr Val 210 215 220 <210> 40 <211> 393 <212> ADN < 13> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1) .. (390) <223> <400> 40 atg gcc gtg act gcc tgt cag ggc ttg ggg ttc gtg gtt tea ctg att 48 Met Ala Val Thr Ala Cys Gln Gly Leu Gly Phe Val Val Ser Leu lie 1 5 10 15 ggg att gcg ggc atc att gct gcc acc tgc atg gcc cag tgg age acc 96 5 Gly lie Ala Gly lie lie Ala Ala Thr Cys Met Ala Gln Trp Ser Thr 20 25 30 caa gac ttg tac aac aac ccc gta aca gct gtt ttc aac tac cag ggg 144 Gln Asp Leu Tyr Aan Asn Pro Val Thr Ala Val Phe Asn Tyr Gln Gly 35 40 45 ctg tgg cgc tec tgt gtc cga gag age tet ggc ttc acc gag tg cgg 192 Leu Trp Arg Ser Cys Val Arg Glu Ser Ser Gly Phe Thr Qlu Cys Arg 50 55 60 ggc tac ttc acc ctg ctg ggg ctg cea ggt aag ggc cag gtg tet ggc 240 [0 Gly Tyr Phe Thr Leu Leu Gly Leu Pro Gly Lys Gly Gln Val Ser Gly 65 70 75 80 tgg ctg gag gga gag att gga ggt gga gag gaa act gca ggc tet gtc 288 Trp Leu Glu Gly Glu lie Gly Gly Gly Glu Glu Thr Ala Gly Ser Val 85 90 95 tgg gca cea cga cag gga ctg ctg ggg agg gag gaa ctg cga ttc gtg 336 Trp Ala Pro Arg Gln Gly Leu Leu Gly Arg Glu Glu Leu Arg Phe Val 100 105 110 ttt gac agg ggc aac age cae ctg cae cag ggt gga ata gga gga cgg 384 [5 Phe Asp Arg Gly Asn Ser His Leu His Gln Gly Gly lie Gly Gly Arg 115 120 125 gaa ect tag 393 Glu Pro 130 <210> 41 <211> 130 0 <212> PRT c 13 Homo sapiens <400> 41 Met Ala Val Thr Ala Cys Gln Gly Leu Gly Phe Val Val Ser Leu lie 1 5 10 15 Gly lie Ala Gly lie lie Ala Ala Thr Cya Met Ala Gln Trp Ser Thr 20 25 30 Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Pro Val Thr Ala Val Phe Aan Tyr Gln Gly 35 40 45 Leu Trp Arg ser Cys Val Arg Glu Ser Ser Gly Phe Thr Glu Cys Arg 50 55 60 Gly Tyr Phe Thr Leu Leu Gly Leu Pro Gly Lys Gly Gln Val Ser Gly 65 70 75 80 Trp Leu Glu Gly Glu lie Gly Gly Gly Glu Glu Thr Ala Gly Ser Val 85 90 95 Trp Ala Pro Arg Gln Gly Leu Leu Gly Arg Glu Glu Leu Arg Phe Val 100 105 110 Phe Asp Arg Gly Asn Ser His Leu His Gln Gly Gly lie Gly Gly Arg 115 120 125 Glu Pro 130 <210> 42 <211> 2247 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> misc_caracterlstica < 222 > (742) .. (742) 223> amino desconocido <220> <221> misc_caracterlstica <222> (747) .. (747) <223> amino desconocido <220> <221> mi9c_caracteristica <222> (793) .. (793) <223> amino desconocido 220 <221> misc_caracteristica <222> (814) .. (814) <223> amino desconocido <220> <221> misc_caracteristica <222> (828) .. (828) <223 amino desconocido <220> <221> misc_característica < 222 > (850) .. (850) <223> amino desconocido <220> <221> misc_caracter£stica <;222> (906) .. (906) <223> amino desconocido <220> <221> CDS <222> (1) .. (2244) <223> <400> 42 atg gag gca aat cag tgc ccc ctg gtt gtg gaa cea tct tac cea gac 48 Met Glu Ala Asn Qln Cys Pro Leu Val Val Glu Pro Ser Tyr Pro Asp 1 5 10 15 ctg gtc ate aat gta gga gaa gtg act ctt gga gaa gaa aac aga aaa 96 Leu Val lie Aan Val Gly Glu Val Thr Leu Gly Glu Glu Asn Arg Lys 20 25 30 aag ctg cag aaa att cag aga gac caá gag aag gag aga gtt atg cgg 144 Lys Leu Gln Lys lie Gln Arg Asp Gln Glu Lys Glu Arg Val Met Arg 35 40 45 gct gca tgt gct tta tta aac tea gga gga gga gtg att cga atg gee 192 Ala Ala Cys Ala Leu Leu Asn Ser Gly Gly Gly Val lie Arg Met Ala 50 55 60 aag aag gtt gag cat ccc gtg gag atg gga ctg gat tta gaa cag tct 240 Lya Lys Val Glu His Pro Val Glu Met Gly Leu Asp Leu Glu Gln Ser 65 70 75 80 ttg aga gag ctt att cag tct tea gat ctg cag gct ttc ttt gag acc 288 Leu Arg Glu Leu lie Gln Ser Ser Asp Leu Gln Ala Phe Phe Glu Thr 85 90 95 aag ca ca gga agg tgt ttt tac att ttt gtt aaa tct tgg age agt 336 Lys Gln Gln Gly Arg Cys Phe Tyr lie Phe Val Lys Ser Trp Ser Ser 100 105 110 ggc ect ttc ect gaa gat cgc tct gtc aag ccc cgc ctt tgc age etc 384 Gly Pro Phe Pro Glu Asp Arg Ser Val Lys Pro Arg Leu Cys Ser Leu 115 120 125 agt tct tea tta tac cgt aga tct gag acc tct gtg cgt tec atg gac 432 Ser Ser Ser Leu Tyr Arg Arg Ser Glu Thr Ser Val Arg Ser Met Asp 130 135 140 tea aga gag gca ttc tgt ttc ctg aag acc aaa agg aag cea aaa ate 480 Ser Arg Glu Ala Phe Cys Phe Leu Lys Thr Lya Arg Lys Pro Lys lie 145 150 155 160 ttg gaa gaa gga ect ttt cae aaa att cae aag ggt gta tac caá gag 528 Leu Glu Glu Gly Pro Phe His Lya lie His Lys Gly Val Tyr Gln Glu 165 170 175 etc ect aac teg gat ect gct gac cea aac teg gat ect gct gac cta 576 Leu Pro Asn Ser Asp Pro Ala Asp Pro Asn Ser Aap Pro Ala Asp Leu 180 185 190 att ttc caá aaa gac tat ctt gaa tat ggt gaa ate ctg ect ttt ect 624 lie Phe Gln Lys Asp Tyr Leu Glu Tyr Gly Glu lie Leu Pro Phe Pro 195 200 205 gag tet cag tta gta gag ttt aaa cag ttc tet ac aaa cae ttc caá 672 Glu Ser Gln Leu Val Glu Phe Lya Gln Phe Ser Thr Lys His Phe Gln 210 215 220 gaa tat gta aaa agg acá att cea gaa tac gtc ect gca ttt gca aac 720 Glu Tyr Val Lys Arg Thr lie Pro Glu Tyr Val Pro Ala Phe Ala Asn 225 230 235 240 act gga gga ggc tat ctt ttt ntt ggn gtg gat gat aag agt agg gaa 768 Thr Gly Gly Gly Tyr Leu Phe Xaa Gly Val Asp Asp Lys Ser Arg Glu 245 250 255 gtc ctg gga tgt gca aaa gaa aat ntt gac ect gac tet ttg aga ngg 816 Val Leu Gly Cys Ala Lys Glu Asn Xaa Asp Pro Asp Ser Leu Arg Xaa 260 265 270 aaa ata gaa can gee ata tac aaa cta ect tgt ntt cat ttt tgc caá 864 Lys lie Glu Thr Ala lie Tyr Lys Leu Pro Cys Xaa His Phe Cys Gln 275 230 285 ecc caá cgc ceg ata acc ttc acá etc aaa att gtg gat gtn tta aaa 912 Pro Gln Arg Pro lie Thr Phe Thr Leu Lys lie Val Asp Val Leu Lys 290 295 300 agg gga gag etc tat ggc tat gct tgc atg ate aga gta aat ecc ttc 960 Arg Gly Glu Leu Tyr Gly Tyr Ala Cys Met lie Arg Val Asn Pro Phe 305 310 315 320 tgc tgt gca gtg ttc tea gaa gct ecc aat tea tgg ata gtg gag gac 1008 Cys Cys Ala Val Phe Ser Glu Ala Pro Asn Ser Trp lie Val Glu Asp 325 330 335 aag tac gtc tgc age ctg acá acc gag aaa tgg gta ggc atg atg ac 1056 Lys Tyr Val Cys Ser Leu Thr Thr Glu LyB Trp Val Gly Met Met Thr 340 345 350 gac acá gat cea gat ctt cta cag ttg tet gaa gat ttt gaa tgt cag 1104 Asp Thr Asp Pro Asp Leu Leu Gln Leu Ser Glu Asp Phe Glu Cys Gln 355 360 365 ctg agt cta tct agt ggg cct ccc ctt age aga cea gtg tac tcc aag 1152 Leu Ser Leu Ser Ser Gly Pro Pro Leu Ser Arg Pro Val Tyr Ser Lys 370 375 380 aaa ggc ctg gaa cat aaa aag gaa ctc cag caá ctt tta ttt tea gtc 1200 Lys Gly Leu Glu His Lys Lys Glu Leu Gln Gln Leu Leu Phe Ser Val 385 390 395 400 cea cea gga tat ttg cga tat act cea gag tea ctc tgg agg gac ctg 1248 Pro Pro Gly Tyr Leu Arg Tyr Thr Pro Glu Ser Leu Trp Arg Asp Leu 405 410 415 ate tea gag cae aga gga cta gag gag tta ata aat aag caá atg ca 1296 lie Ser Glu His Arg Gly Leu Glu Glu Leu lie Asn Lys Gln Met Gln 420 425 430 cct ttc ttt cgg gga att gtg ate ctc tct aga age tgg gct gtg gac 1344 Pro Phe Phe Arg Gly lie Val lie Leu Ser Arg Ser Trp Ala Val Asp 435 440 445 ctg aac ttg cag gag aag cea gga gtc ate tgt gat gct ctg ctg ata 1392 Leu Asn Leu Gln Glu Lys Pro Gly Val lie Cys Asp Ala Leu Leu lie 450 455 460 gca cag aac ag acc ccc att ctc tac acc att ctc agg gag cag gat 1440 Ala Gln Asn Ser Thr Pro lie Leu Tyr Thr lie Leu Arg Glu Gln Asp 465 470 475 480 gca gag ggc cag gac tac tgc act cgc acc gcc ttt act ttg aag cag 1488 Ala Glu Gly Gln Asp Tyr Cys Thr Arg Thr Ala Phe Thr Leu Lys Gln 485 490 495 aag cta gtg aac atg ggg ggc tac acc ggg aag gtg tgt gtc agg gcc 1536 Lys Leu Val Asn Met Gly Gly Tyr Thr Gly Lys Val Cys Val Arg Ala 500 505 510 aag gtc ctc tgc ctg agt cct gag age age gca gag gcc ttg gag gct 1584 Lys Val Leu Cys Leu Ser Pro Glu Ser Ser Ala Glu Ala Leu Glu Ala 515 520 525 gca gtg tct ceg atg gat tac cct gcg tcc tat age ctt gca ggc acc 1632 Ala Val Ser Pro Met Asp Tyr Pro Ala Ser Tyr Ser Leu Ala Gly Thr 530 535 540 cag cae atg gaa gcc ctg ctg cag tcc ctc gtg att gtc tta ctc ggc 1680 Gln His Met Glu Ala Leu Leu Gln Ser Leu Val lie Val Leu Leu Gly 545 550 555 560 ttc agg tct ctc ttg agt gac cag ctc ggc tgt gag gtt tta aat ctg 1728 Phe Arg Ser Leu Leu Ser Asp Gln Leu Gly Cys Glu Val Leu Asn Leu 565 570 575 ctc acá gcc cag cag tat gag ata ttc tcc aga age ctc cgc aag aac 1776 Leu Thr Ala Gln Gln Tyr Glu lie Phe Ser Arg Ser Leu Arg Lys Asn 580 5T5 590 aga gag ttg ttt gtc cae ggc tta cct ggc tea ggg aag acc ate atg 1824 Arg Glu Leu Phe Val His Gly Leu Pro Gly Ser Gly Lys Thr lie Met 595 600 605 gcc atg aag ate atg gag aag ate agg aat gtg ttt cae tgt gag gca 1872 Ala Met Lys lie Met Glu Lya lie Arg Asn Val Phe His Cya Qlu Ala 610 615 620 cae aga att etc tac gtt tgt gaa aac cag cct ctg agg aac ttt ate 1920 His Arg lie Leu Tyr Val Cys Glu Asn Gln Pro Leu Arg Asn Phe lie 625 630 635 640 agt gat aga aat ate tgc cga gca gag acc cgg aaa act ttc cta aga 1968 Ser Asp Arg Asn lie Cys Arg Ala Glu Thr Arg Lys Thr Phe Leu Arg 645 650 655 gaa aac ttt gaa cae att caá cae ate gtc att gac gaa gct cag aat 2016 Qlu Asn Phe Glu His lie Gln His lie Val lie Asp Qlu Ala Gln Asn 660 665 670 ttc cgt act gaa gat ggg gac tgg tat ggg aag gca aaa age ate act 2064 Phe Arg Thr Glu Asp Gly Asp Trp Tyr Gly Lya Ala Lya Ser lie Thr 675 680 685 cgg aga gca aag ggt ggc cea gga att etc tgg ate ttt ctg gat tac 2112 Arg Arg Ala Lys Gly Gly Pro Gly lie Leu Trp lie Phe Leu Asp Tyr 690 695 700 ttt cag acc age cae ttg gat tgc agt ggc etc cct cct etc tea gac 2160 Phe Gln Thr Ser His Leu Asp Cys Ser Gly Leu Pro Pro Leu Ser Asp 705 710 715 720 caá tat cea aga gaa gag etc acc aga ata gtt cgc aat gca gat cea 2208 Gln Tyr Pro Arg Glu Glu Leu Thr Arg lie Val Arg Asn Ala Asp Pro 725 730 735 ata gcc aag tac tta caá aaa gaa aat gca agt aat tag 2247 lie Ala Lys Tyr Leu Gln Lys Glu Asn Ala Ser Aan 740 745 210> 43 211> 748 212> PRT 213> Homo sapiens <220> <221> mise característica < 222 > (248) .. (248) <223? El 'Xaa' en el sitio 248 representa lie, Val, Leu, o Phe . <220> <221> misc_característica <222 (265) .. (265) <223:> El 'Xaa' en el sitio 265 representa lie, Val, Leu, o Phe. <220:> <221> misc_característica <222> (272) .. (272) <223 El 'Xaa' en el sitio 272 representa Arg, Gly, o Trp. <220> 221> misc_característica 222 > (284) (284) <223> El 'Xaa' en el sitio 284 representa lie, Val, Leu, o Phe. <220> <221> misc_característica <222> (742) .. (742) <223> amino desconocido <220> <221> misc_caracter£stica <222> (747) .. (747) <223> amino desconocido <220¾ <221> misc_característica <222> (793) .. (793) <223> amino desconocido <220> <22l> mise característica < 2 2 2 > (814) . , (814) <223> amino desconocido <220> < 2 2 1 > misc_caracteristica <222> (T2?) .. (828) •=223=· amino desconocido <220> <221> miac_caracteríatica <222> (850) .. (850) <223> amino desconocido <220s <221 misc_característica <222> (906) .. (906) <223> amino desconocido <400> 43 Met Olu Ala Asn Gln Cys Pro Leu Val al Glu Pro Ser Tyr Pro Aep 1 5 10 15 Leu Val lie Asn Val Gly Glu Val Thr Leu Gly Glu Glu Asn Arg Lys 20 25 30 Lys Leu Gln Lys He Gln Arg Asp Gln Glu Lys Glu Arg Val Met Arg 35 40 45 Ala Ala Cya Ala Leu Leu Asn Ser Gly Gly Gly Val lie Arg Met Ala 50 55 60 Lys Lys Val Glu His Pro Val Glu Met Gly Leu Asp Leu Glu Gln Ser 65 70 75 80 Leu Arg Glu Leu lie Gln Ser Ser Asp Leu Gln Ala Phe Phe Glu Thr 85 90 95 Lys Gln Gln Gly Arg Cys Phe Tyr lie Phe Val Lys Ser Trp Ser Ser 100 105 110 Gly Pro Phe Pro Glu Asp Arg Ser Val Lys Pro Arg Leu Cys Ser Leu 115 120 125 Ser Ser Ser Leu Tyr Arg Arg Ser Glu Thr Ser Val Arg Ser Met Asp 130 135 140 Ser Arg Glu Ala Phe Cys Phe Leu Lys Thr Lys Arg Lys Pro Lys lie 145 150 155 160 Leu Glu Glu Gly Pro Phe His Lys lie His Lys Qly Val Tyr Gln Glu 165 170 175 Leu Pro Asn Ser Asp Pro Ala Asp Pro Asn Ser Asp Pro Ala Asp Leu 1T0 185 190 Phe Gln Lys Asp Tyr Leu Glu Tyr Gly Glu lie Leu Pro Phe Pro 195 200 205 Glu Ser Gln Leu Val Glu Phe Lys Gln Phe Ser Thr Lys His Phe Gln 210 215 220 Glu Tyr Val Lys Arg Thr lie Pro Glu Tyr Val Pro Ala Phe Ala Asn 225 230 235 240 Thr Gly Gly Gly Tyr Leu Phe Xaa Gly Val Asp Asp Lys Ser Arg Glu 245 250 255 Val Leu Gly Cys Ala Lys Glu Asn Xaa Asp Pro Asp Ser Leu Arg Xaa 260 265 270 Lys lie Glu Thr Ala lie Tyr Lys Leu Pro Cys Xaa His Phe Cys Gln 275 280 285 Pro Gln Arg Pro lie Thr Phe Thr Leu Lys lie Val Asp Val Leu Lys 290 295 300 Arg Gly Glu Leu Tyr Gly Tyr Ala Cys Met lie Arg Val Asn Pro Phe 305 310 315 320 Cy3 Cys Ala Val Phe Ser Glu Ala Pro Asn Ser Trp lie Val Glu Asp 325 330 335 Lys Tyr Val Cys Ser Leu Thr Thr Glu Lys Trp Val Gly Met Met Thr 340 345 350 Asp Thr Asp Pro Asp Leu Leu Gln Leu Ser Glu Asp Phe Glu Cys Gln 3S5 360 365 Leu Ser Leu Ser Ser Gly Pro Pro Leu Ser Arg Pro Val Tyr Ser Lys 370 375 380 Lys Gly Leu Glu His Lys Lys Glu Leu Gln Gln Leu Leu Phe Ser Val 385 390 395 400 Pro Pro Gly Tyr Leu Arg Tyr Thr Pro Glu Ser Leu Trp Arg Asp Leu 405 410 415 lie Ser Glu His Arg Gly Leu Glu Glu Leu lie Asn Lys Gln Met Gln 420 425 430 Pro Phe Phe Arg Gly lie Val lie Leu Ser Arg Ser Trp Ala Val Asp 435 440 445 Leu Asn Leu Gln Glu Lys Pro Gly Val lie Cys Asp Ala Leu Leu lie 450 455 460 Ala Gln Asn Ser Thr Pro lie Leu Tyr Thr lie Leu Arg Glu Gln Asp 465 470 475 4T0 Ala Glu Gly Gln Asp Tyr Cys Thr Arg Thr Ala Phe Thr Leu Lys Gln 485 490 495 Lys Leu Val Asn Met Gly Gly Tyr Thr Gly Lys Val Cys Val Arg Ala 500 505 510 Lys Val Leu Cys Leu Ser Pro Glu Ser Ser Ala Glu Ala Leu Glu Ala 515 520 525 Ala Val Ser Pro Met Asp Tyr Pro Ala Ser Tyr Ser Leu Ala Gly Thr 530 535 540 Gln His Met Glu Ala Leu Leu Gln Ser Leu Val lie Val Leu Leu Gly 545 550 555 560 Phe Arg Ser Leu Leu Ser Asp Gln Leu Gly Cys Glu Val Leu Asn Leu 565 570 575 Leu Thr Ala Gln Gln Tyr Glu lie Phe Ser Arg Ser Leu Arg Lys Asn 580 5T5 590 Arg Glu Leu Phe Val His Gly Leu Pro Gly Ser Gly Lys Thr lie Met 595 600 605 Ala Met Lys lie Met Glu Lys lie Arg Asn Val Phe His Cys Glu Ala 610 615 620 His Arg lie Leu Tyr Val Cys Glu Asn Gln Pro Leu Arg Asn Phe lie 625 630 635 640 Ser Asp Arg Asn lie Cys Arg Ala Glu Thr Arg Lys Thr Phe Leu Arg 645 650 655 Glu Asn Phe Glu His lie Gln His lie Val lie Asp Glu Ala Gln Asn 660 665 670 Phe Arg Thr Glu Asp Gly Asp Trp Tyr Gly Lys Ala Lys Ser lie Thr 675 6B0 685 Arg Arg Ala Lys Gly Gly Pro Gly lie Leu Trp lie Phe Leu Asp Tyr 690 695 700 Phe Gln Thr Ser His Leu Asp Cys Ser Gly Leu Pro Pro Leu Ser Asp 705 710 715 720 Gln Tyr Pro Arg Glu Glu Leu Thr Arg lie Val Arg Asn Ala Asp Pro 725 730 735 lie Ala Lys Tyr Leu Gln Lys Glu Asn Ala Ser Asn 740 745 <210> 44 ¿211=> 2676 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1) .. (2673) <223> <400> 44 atg agt ctt agg att gat gtg gat aca aac ttt cct gag tgt gtt gta 48 Met Ser Leu Arg lie Asp Val Asp Thr Asn Phe Pro Glu Cya Val Val 1 5 10 15 gat gca gga aaa gtc acc ctt ggg act cag cag agg cag gag atg gac 96 Asp Ala Gly Lys Val Thr Leu Gly Thr Gln Gln Arg Gln Glu Met Asp 20 25 30 cct cgc ctg cgg gag aaa cag aat gaa ate ate ctg cga gca gta tgt 144 Pro Arg Leu Arg Glu Lys Gln Asn Glu lie lie Leu Arg Ala Val Cys 35 40 45 gct ctg ctg aat tet ggt ggg ggc ata ate aag gct gag att gag aac 192 Ala Leu Leu Asn Ser Gly Gly Gly lie lie Lys Ala Glu lie Glu Asn 50 55 60 aaa ggc tac aat tat gaa cgt cat gga gta gga ttg gat gtg cct cea 240 Lys Gly Tyr Asn Tyr Glu Arg His Gly Val Gly Leu Asp Val Pro Pro 65 70 75 80 att ttc aga age cat tta gat aag atg cag aag gaa aac cae ttt ttg 2B8 lie Phe Arg Ser His Leu Asp Lys Met Gln Lys Glu Asn His Phe Leu T5 90 95 att ttt gtg aaa tea tgg aac aca gag gct ggt gtg cea ctt gct acc 336 lie Phe Val Lys Ser Trp Asn Thr Glu Ala Gly Val Pro Leu Ala 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210 215 220 gga tat gta ttt ttt ggt gtg cat gat gag act tgt ca gtg att gga Gly Tyr Val Phe Phe Gly Val His Asp Glu Thr Cys Gln Val lie Gly 225 230 235 240 tgt gaa aaa gag aaa ata gac ctt acg age ttg agg gct tet att gat Cys Glu Lys Glu Lys lie Asp Leu Thr Ser Leu Arg Ala Ser lie Asp 245 250 255 ggc tgt att aag aag cta cct gtc cat cat ttc tgc acá cag agg cct Gly Cys lie Lya Lys Leu Pro Val His His Phe Cys Thr Gln Arg Pro 260 265 270 gag ata aaa tat gtc ctt aac ttc ctt gaa gtg cat gat aag ggg gcc Glu lie Lys Tyr Val Leu Asn Phe Leu Glu Val His Asp Lys Gly Ala 275 280 285 ctc cgt gga tat gtc tgt gca ate aag gtg gag aaa ttc tgc tgt gcg Leu Arg Gly Tyr Val Cys Ala lie Lys Val Glu Lys Phe Cys Cys Ala 290 295 300 gtg ttt gcc aaa gtg cct agt tcc tgg cag gtg aag gac aac cgt gtg Val Phe Ala Lys Val Pro Ser Ser Trp Gln Val Lys Asp Asn Arg Val 305 310 315 320 aga caá ttg ecc acá aga gaa tgg act gct tgg atg atg gaa gct gac Arg Gln Leu Pro Thr Arg Glu Trp Thr Ala Trp Met Met Glu Ala Asp 325 330 335 cea gac ctt tcc agg tgt cct gag atg gtt ctc cag ttg agt ttg tca Pro Asp Leu Ser Arg Cys Pro Glu Met Val Leu Gln Leu Ser Leu Ser 340 345 350 tet gcc acg ecc cgc age aag cct gtg tgc att cat aag aat t g gaa Ser Ala Thr Pro Arg Ser Lys Pro Val Cys lie His Lys Asn Ser Glu 355 360 365 tgt ctg aaa gag cag cag aaa cgc tac ttt cea gta ttt tca gac aga Cys Leu Lys Glu Gln Gln Lys Arg Tyr Phe Pro Val Phe Ser Asp Arg 370 375 380 gtg gta tat act cea gaa age ctc tac aag gaa ctc ttc tca caa cat Val Val Tyr Thr Pro Glu Ser Leu Tyr Lys Glu Leu Phe Ser Gln His 385 390 395 400 aaa gga ctc aga gac tta ata aat acá gaa atg cgc cct ttc tct caa Lys Gly Leu Arg Asp Leu lie Asn Thr Glu Met Arg Pro Phe Ser Gln 405 410 415 gga ata ttg att ttt tct caa age tgg gct gtg gat tta ggt ctg caa Gly lie Leu lie Phe Ser Gln Ser Trp Ala Val Asp Leu Gly Leu Gln 420 425 430 gag aag cag gga gtc ate tgt gat gct ctt cta att tec cag aac aac Glu Lys Gln Gly Val lie Cys Asp Ala Leu Leu lie Ser Gln Asn Asn 435 440 445 acc cct att ctc 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ctt cgc aag acc aga gag ttg ttt gtt Tyr Glu Leu Leu Ser Lys Asn Leu Arg Lys Thr Arg Glu Leu Phe Val 565 570 575 cat ggc tta cct gga tca ggg aag act ate ttg gct ctt agg ate atg His Gly Leu Pro Gly Ser Gly Lys Thr lie Leu Ala Leu Arg lie Met 580 565 590 gag aag ate agg aat gtg ttt cae tgt gaa ceg gct aac att ctc tac Glu Lys lie Arg Asn Val Phe His Cys Glu Pro Ala Asn lie Leu Tyr 595 600 605 ate tgt gaa aac cag ecc ctg aag aag ttg gtg agt ttc age aag aaa 1872 lie Cys Glu Asn Gln Pro Leu Lys Lys Leu Val Ser Phe Ser Lys Lys 610 615 620 aac atc tgc cag cea gtg acc cgg aaa acc ttc atg aaa aac aac ttt 1920 Asn lie Cys Gln Pro Val Thr Arg Lya Thr Phe Met Lys Asn Asn Phe 625 630 635 640 gaa cae atc cag cae att atc att gat gac gct cag aat ttc cgt act 1968 Glu His lie Gln His lie lie lie Asp Asp Ala Gln Asn Phe Arg Thr 645 650 655 gaa gat ggg gac tgg tat ggg aaa gca aag ttc atc act cga cag caa 2016 Glu Asp Gly Asp Trp Tyr Gly Lys Ala Lys Phe lie Thr Arg Gln Gln 660 665 670 agg gat ggc cea gga gtt 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tet ceg aag gat att gct gtg ctt ttc acc aaa gca agt gaa gtg 2400 Tyr Ser Pro Lys Asp lie Ala Val Leu Phe Thr Lys Ala Ser Glu Val 785 790 795 800 gaa aaa tat aaa gac agg ctt cta acá gca atg agg aag aga aaa Ctg 2448 Glu Lys Tyr Lys Asp Arg Leu Leu Thr Ala Met Arg Lys Arg Lya Leu 805 810 815 tet cag etc cat gag gag tet gat ctg tta cta cag atc ggt gat gcg 2496 Ser Gln Leu His Glu Glu Ser Aap Leu Leu Leu Gln lie Gly Asp Ala 820 825 830 tcg gat gtt cta acc gat cac att gtg ttg gac agt gtc tgt cga ttt Ser Asp Val Leu Thr Asp His lie Val Leu Asp Ser Val Cys Arg Phe 835 840 845 tea ggc ctg gaa aga aat ate gtg ttt gga ate aat cea gga gta gcc Ser Gly Leu Glu Arg Aan lie Val Phe Gly lie Asn Pro Gly Val Ala 850 855 860 cea ccg gct ggg gcc tac aat ctt ctg ctc tgt ttg gct tct agg gca Pro Pro Ala Gly Ala Tyr Aen Leu Leu Leu Cys Leu Ala Ser Arg Ala 865 870 875 880 aaa aga cat ctg tat att ctg aag gct tct gtg tga Lys Arg His Leu Tyr lie Leu Lys Ala Ser Val 885 890 <210> 45 <211> 891 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Met Ser Leu Arg lie Asp Val Asp Thr Asn Phe Pro Glu Cys Val Val 1 5 10 15 Asp Ala Gly Lys Val Thr Leu Gly Thr Gln Gln Arg Gln Glu Met Asp 20 25 30 Pro Arg Leu Arg Glu Lys Gln Asn Glu lie lie Leu Arg Ala Val Cys 35 40 45 Ala Leu Leu Asn Ser Gly Gly Gly lie lie Lys Ala Glu lie Glu Asn 50 55 60 Lys Gly Tyr Asn Tyr Glu Arg His Gly Val Gly Leu Asp Val Pro Pro 65 70 75 80 lie Phe Arg Ser His Leu Asp Lys Met Gln Lys Glu Asn His Phe Leu 85 90 95 lie Phe Val Lys Ser Trp Asn Thr Glu Ala Gly Val Pro Leu Ala Thr 100 105 110 Leu Cys Ser Asn Leu Tyr Hia Arg Glu Arg Thr Ser Thr Asp Val Met 115 120 125 Asp Ser Gln Glu Ala Leu Ala Phe Leu Lys Cys Arg Thr Gln Thr Pro 130 135 140 Thr Asn lie Asn Val Ser Asn Ser Leu Gly Pro Gln Ala Ala Gln Gly 145 150 155 ISO Ser Val Gln Tyr Glu Gly Asn lie Asn Val Ser Ala Ala Ala Leu Phe 165 170 175 Asp Arg Lys Arg Leu Gln Tyr Leu Glu Lys Leu Asn Leu Pro Glu Ser 180 185 190 Thr His Val Glu Phe Val Met Phe Ser Thr Asp Val Ser His Cys Val 195 200 205 jys Asp Arg Leu Pro Lys Cys Val Ser Ala Phe Ala Asn Thr Glu Gly 210 215 220 Gly Tyr Val Phe Phe Gly Val His Asp Glu Thr Cys Gln Val lie Gly 225 230 23S 240 Cys Glu Lys Glu Lys lie Asp Leu Thr Ser Leu Arg Ala Ser lie Asp 245 250 255 Gly Cys lie Lys Lys Leu Pro Val His His Phe Cys Thr Gln Arg Pro 260 265 270 Glu lie Lys Tyr Val Leu Asn Phe Leu Glu Val Hia Asp Lys Gly Ala 275 280 285 Leu Arg Gly Tyr Val Cys Ala lie Lys Val Glu Lys Phe Cys Cys Ala 290 295 300 Val Phe Ala Lys Val Pro Ser Ser Trp Gln Val Lys Asp Asn Arg Val 305 310 315 320 Arg Gln Leu Pro Thr Arg Glu Trp Thr Ala Trp Met Met Glu Ala Asp 325 330 335 Pro Aap Leu Ser Arg Cys Pro Glu Met Val Leu Gln Leu Ser Leu Ser 340 345 350 Ser Ala Thr Pro Arg Ser Lys Pro Val Cya lie His Lys Asn Ser Glu 355 360 365 Cya Leu Lys Glu Gln Gln Lys Arg Tyr Phe Pro Val Phe Ser Asp Arg 370 375 380 Val val Tyr Thr Pro Glu Ser Leu Tyr Lys Glu Leu Phe Ser Gln His 385 390 395 400 Lys Gly Leu Arg Aap Leu lie Asn Thr Glu Met Arg Pro Phe Ser Gln 405 410 415 Gly 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Gln Pro Val Thr Arg Lys Thr Phe Met Lys Asn Asn Phe 625 630 635 640 Glu His lie Gln His lie lie lie Asp Asp Ala Gln Asn Phe Arg Thr 645 650 655 Glu Asp Gly Asp Trp Tyr Gly Lys Ala Lys Phe lie Thr Arg Gln Gln 660 665 670 Arg Asp Gly Pro Gly Val Leu Trp lie Phe Leu Asp Tyr Phe Gln Thr 675 680 685 Tyr His Leu Ser Cys Ser Gly Leu Pro Pro Pro Ser Asp Gln Tyr Pro 690 695 700 Arg Glu Glu lie Asn Arg Val Val Arg Asn Ala Gly Pro lie Ala Asn 705 710 715 720 Tyr Leu Gln Gln Val Met Gln Glu Ala Arg Gln Asn Pro Pro Pro Asn 725 730 735 Leu Pro Pro Gly Ser Leu Val Met Leu Tyr Glu Pro Lys Trp Ala Gln 740 745 750 Gly Val Pro Gly Asn Leu Glu lie lie Glu Asp Leu Asn Leu Glu Glu 755 760 765 lie Leu lie Tyr Val Ala Asn Lys Cys Arg Phe Leu Leu Arg Asn Gly 770 775 780 Tyr Ser Pro Lys Asp lie Ala Val Leu Phe Thr Lys Ala Ser Qlu Val 785 790 795 800 Glu Lys Tyr Lys Asp Arg Leu Leu Thr Ala Met Arg Lys Arg Lys Leu 805 810 815 Ser Gln Leu Hig Glu Glu Ser Asp Leu Leu Leu Gln lie Gly Asp Ala 820 825 830 Ser Asp Val Leu Thr Asp His lie Val Leu Asp Ser Val Cys Arg Phe 835 840 845 Ser Gly Leu Glu Arg Asn lie Val Phe Gly lie Asn Pro Gly Val Ala 850 855 860 Pro Pro Ala Gly Ala Tyr Asn Leu Leu Leu Cys Leu Ala Ser Arg Ala 865 870 875 880 Lys Arg His Leu Tyr lie Leu Lys Ala üer Val 885 890 <210> 46 <211> 1737 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1) .. (1734) 223> <400> 46 atg aac ate agt gtt gat ttg gaa acg aat tat gcc gag ttg gtt cta Met Asn lie Ser Val Asp Leu Glu Thr Asn Tyr Ala Glu Leu Val Leu 1 5 10 15 gat gtg gga aga gtc act ctt gga gag aac agt agg aaa aaa atg aag Asp Val Gly Arg Val Thr Leu Gly Glu Asn Ser Arg Lys Lys Met Lys 20 25 30 gat tgt aaa ctg aga aaa aag cag aat gaa agg gtc tea cga gct atg Asp Cys Lys Leu Arg Lys Lys Gln Asn Glu Arg Val Ser Arg Ala Met 35 40 45 tgt gct ctg etc aat tet gga ggg gga gtg ate aag gct gaa att gag Cys Ala Leu Leu Asn Ser Gly Gly Gly Val lie Lys Ala Glu lie Glu 50 55 60 aat gaa gac tat agt tat acá aaa gat gga ata gga cta gat ttg gaa Asn Glu Asp Tyr Ser Tyr Thr Lys Asp Gly lie Gly Leu Asp Leu Glu 65 70 75 80 aat tet ttt agt aac att ctg tta ttt gtt ect gag tac tta gac tt Asn Ser Phe Ser Asn lie Leu Leu Phe Val Pro Glu Tyr Leu Asp Phe 85 90 95 atg cag aat ggt aac tac ttt ctg att ttt gtg aag tea tgg age ttg Met Gln Asn Gly Asn Tyr Phe Leu lie Phe Val Lys Ser Trp Ser Leu 100 105 110 aac acc tet 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(2691) <223 <400> 48 atg gag gca aat cae tgc tec ctg ggt gtg tat cea tet tac cea gac Met Glu Ala Asn His Cys Ser Leu Gly Val Tyr Pro Ser Tyr Pro Asp 1 5 10 15 ctg gtc ate gat gtc gga gaa gtg act ctg gga gaa gaa aac aga aaa Leu Val lie Asp Val Gly Glu Val Thr Leu Gly Glu Glu Asn Arg Lys 20 25 30 aag cta cag aaa act cag aga gac ca gag agg gcg aga gtt ata cgg Lys Leu Gln Lys Thr Gln Arg Asp Gln Glu Arg Ala Arg Val lie Arg 35 40 45 gcc gcg tgt gct tta tta aac tea gga gga gga gtg att cag atg gaa Ala Ala Cys Ala Leu Leu Asn Ser Gly Gly Gly Val lie Gln Met Glu 50 55 60 atg gcc aac agg gat gag cgt ccc acá gag atg gga ctg gat tta gaa Met Ala Asn Arg Asp Glu Arg Pro Thr Glu Met Gly Leu Asp Leu Glu 65 70 75 80 gaa tcc ttg aga aag ctt att cag tat cca tat ttg cag gct ttc ttt Glu Ser Leu Arg Lys Leu lie Gln Tyr Pro Tyr Leu Gln Ala Phe Phe 85 90 95 gag act aag caá cae gga agg tgt ttt tat att ttt gtt aaa tct tgg Glu Thr Lys Gln His Gly Arg Cys Phe Tyr lie Phe Val Lys Ser Trp 100 105 110 agt ggt gat 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lie Val Leu Asp Ser Val Arg Arg Phe Ser Gly Leu Glu Arg Ser lie 850 855 860 Val Phe Gly lie His Pro Arg Thr Ala Asp Pro Ala lie Leu Pro Asn 865 870 875 880 lie Leu lie Cys Leu Ala Ser Arg Ala Lys Gln His Leu Tyr lie Phe 885 890 895 Leu <210> 50 <211> 1074 <212 > ADN c2l3 Homo sapiens 220> <221> CDS <222> (1) .. (1071) <223> <400 50 atg gag agt ctc aag act gat act gaa atg ccg tat cct gag gta ata Met Glu Ser Leu Lys Thr Asp Thr Glu Met Pro Tyr Pro Glu Val lie 1 5 10 15 gta gat gtg ggc aga gtg att ttt gga gaa gaa aac agg aag aag atg Val Asp Val Gly Arg Val lie Phe Gly Glu Glu Aen Arg Lys Lys Met 20 25 30 acc aac age tgt ttg aaa aga tct gag aat tct aga att ate cgg gct Thr Asn Ser Cys Leu Lys Arg Ser Glu Asn Ser Arg lie lie Arg Ala 35 40 45 ata tgt gca ctg tta aat tct gga ggt ggt gtg ate aaa gca gag att lie Cys Ala Leu Leu Asn Ser Gly Gly Gly Val lie Lys Ala Glu lie 50 55 60 gat gat aaa acc tat agt tac ca tgc cat ggg ctg gga cag gat ttg Asp Asp Lys Thr Tyr Ser Tyr Gln Cys His Gly Leu Gly Gln Asp Leu 65 70 75 80 gaa act tct ttt caá aag ctc ctt cct tea ggt tea cag aaa tac ctt 288 Glu Thr Ser Phe Gln Lys Leu Leu Pro Ser Gly Ser Gln Lys Tyr Leu 85 90 95 gac tac atg cag cag ggg cac aat ctc ctg att ttt gtg aag tca tgg 336 Asp Tyr Met Gln Gln Gly His Asn Leu Leu lie Phe Val Lys Ser Trp 100 105 110 age cea gat gtt ttc age ctt cea cta agg att tgc age ttg cgc tec 384 Ser Pro Asp Val Phe Ser Leu Pro Leu Arg lie Cys Ser Leu Arg Ser 115 120 125 aat ttg tat cgg aga gat gtg act tet gct ate aac ttg agt gct age 432 Asn Leu Tyr Arg Arg Asp Val Thr Ser Ala lie Aan Leu Ser Ala Ser 5 130 135 140 agt gee ctg gag ctt ctc aga gag aag ggg ttt aga gee caá aga gga 480 Ser Ala Leu Glu Leu Leu Arg Glu Lyg Gly Phe Arg Ala Gln Arg Gly 145 150 155 160 aga cea agg gtg aag aag ttg cat ect cag cag gtt ctc aat aga tgc 528 Arg Pro Arg Val Lys Lya Leu His Pro Gln Gln Val Leu Asn Arg Cys 165 170 175 att cag gaa gag gaa gat atg agg ata ttg gee tca gaa ttt ttt aaa 576 lie Gln Glu Glu Glu Asp Met Arg lie Leu Ala Ser Glu Phe Phe Lys \0 180 185 190 aag gac aaa ctc atg tat aag gag aaa ctc aac ttt act gag tca acá 624 Lys Asp Lya Leu Met Tyr Lys Glu Lys Leu Asn Phe Thr Glu Ser Thr 195 200 205 cat gtt gaa ttt aaa agg ttc acc acc aaa aaa gtc ata ect cgg att 672 His Val Glu Phe Lys Arg Phe Thr Thr Lys Lys Val lie Pro Arg lie 210 215 220 aag gaa atg ctg ect cat tat gtt tet gca ttt gee aac act caá ggg 720 Lys Glu Met Leu Pro His Tyr Val Ser Ala Phe Ala Asn Thr Gln Gly JÍ¡ 225 230 235 240 gga tat gtc ctc att ggg gtg gat gat aag age aaa gaa gtg gtt gga 768 Gly Tyr Val Leu lie Gly Val Asp Asp Lys Ser Lys Glu Val Val Gly 245 250 255 tgt aag tgg gaa aaa gtg aat ect gac tta cta aaa aaa gaa ate gaa 816 Cys Lys Trp Glu Lys Val Asn Pro Asp Leu Leu Lys Lys Glu lie Glu 260 265 270 aac tgc ata gaa aaa ttg ect acá ttc cac ttc tgc tgt gag aag cea 864 Asn Cys lie Glu Lys Leu Pro Thr Phe His Phe Cys Cys Glu Lys Pro 275 280 285 20 aag gta aat ttc act ac aaa ate ctg aat gtg tac caá aaa gat gtc 912 Lys al Asn Phe Thr Thr Lys lie Leu Asn Val Tyr Gln Lys Asp Val 290 295 300 ctg gat ggt tat gtc tgt gtg att caá gtg gag ecc ttc tgt tgc gtg 960 Leu Asp Gly Tyr Val Cys Val lie Gln Val Glu Pro Phe Cys Cys Val 305 310 315 320 gtg ttt gca gag gcc cca gat tcc tgg atc atg aaa gac aat tct gtc Val Phe Ala Glu Ala Pro Asp Ser Trp lie Met Lys Asp Asn Ser Val 325 330 335 acá cgg ctg acá gct gag cag tgg gtg gtc atg atg ctg gat act cag Thr Arg Leu Thr Ala Glu Gln Trp Val Val Met Met Leu Asp Thr Gln 340 345 350 tea ggt aaa ggg aag tga Ser Oly Lys Gly Lys 355 <210> 51 <211> 357 <212> PRT < 13> Homo sapiens <400> 51 Met Glu Ser Leu Lys Thr Asp Thr Glu Met Pro Tyr Pro Glu Val lie 1 5 10 15 Val Asp Val Gly Arg Val lie Phe Gly Glu Glu Asn Arg Lys Lys Met 20 25 30 Thr Asn Ser Cys Leu Lys Arg Ser Glu Asn Ser Arg lie lie Arg Ala 35 40 45 lie Cys Ala Leu Leu Asn Ser Gly Gly Gly Val He Lys Ala Glu lie 50 55 60 Asp Asp Lys Thr Tyr Ser Tyr Gln Cys His Gly Leu Gly Gln Asp Leu 65 70 75 80 Glu Thr Ser Phe Gln Lys Leu Leu Pro Ser Gly Ser Gln Lys Tyr Leu 85 90 95 Asp Tyr Met Gln Gln Gly His Asn Leu Leu lie Phe Val Lys Ser Trp 100 105 110 Ser Pro Asp Val Phe Ser Leu Pro Leu Arg lie Cys Ser Leu Arg Ser 115 120 125 Asn Leu Tyr Arg Arg Asp Val Thr Ser Ala lie Asn Leu Ser Ala Ser 130 135 140 Ser Ala Leu Glu Leu Leu Arg Glu Lys Gly Phe Arg Ala Gln Arg Gly 145 150 155 160 Arg Pro Arg Val Lya Lya Leu Hia Pro Gln Gln Val Leu Asn Arg Cya 165 170 175 lie Gln Glu Glu Glu Asp Met Arg lie Leu Ala Ser Glu Phe Phe Lys 180 185 190 Lys Asp Lys Leu Met Tyr Lys Glu Lys Leu Asn Phe Thr Glu Ser Thr 195 200 205 His Val Glu Phe Lys Arg Phe Thr Thr Lys Lys Val lie Pro Arg lie 210 215 220 Lys Glu Met Leu Pro His Tyr Val Ser Ala Phe Ala Asn Thr Gln Gly 225 230 235 240 Gly Tyr Val Leu lie Gly Val Asp Asp Lys Ser Lys Glu Val Val Gly 245 250 255 Cys Lys Trp Glu Lys Val Asn Pro Asp Leu Leu Lys Lys Glu lie Glu 260 265 270 Asn Cys lie Glu Lys Leu Pro Thr Phe His Phe Cys Cys Glu Lys Pro 275 280 285 Lys Val Asn Phe Thr Thr Lys lie Leu Asn Val Tyr Gln Lys Asp Val 290 295 300 Leu Asp Gly Tyr Val Cys Val lie Gln Val Glu Pro Phe Cys Cys Val 305 310 315 320 Val Phe Ala Glu Ala Pro Asp Ser Trp lie Met Lys Asp Asn Ser Val 325 330 335 Thr Arg Leu Thr Ala Glu Gln Trp Val Val Met Met Leu Asp Thr 340 345 350 Ser Gly Lys Gly Lys 355 <210> 52 <211> 807 <212> ADN <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1) .. (804) <223> 400> 52 atg ctg ttc gtc aag cag agt gac aag ggg ate aac agt aag agg agg Met Leu Phe Val Lya Gln Ser Aap Lys Gly lie Asn Ser Lys Arg Arg 1 5 10 15 age aaa g c agg agg ctg aag ctt ggc ctg cea gga ecc cea ggg cea Ser Lys Ala Arg Arg Leu Lys Leu Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Pro 20 25 30 cea ggt ect cag ggc ecc cea ggc ecc ttt ate cea tet gag gtt ctg Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Pro Phe lie Pro Ser Glu Val Leu 35 40 45 ctg aag gag ttc cag ctg ttg ctg aaa ggc gca gta cgg cag cga gag Leu Lys Glu Phe Gln Leu Leu Leu Lys Gly Ala Val Arg Gln Arg Glu 50 55 60 age cat ctg gag cae tgc acc agg gat etc act acá cea gcc teg ggt Ser His Leu Glu His Cye Thr Arg Asp Leu Thr Thr Pro Ala Ser Gly 65 70 75 80 age ect tec cgt gtc cea gcc gcc cag gag ctt gat age cag gac cea Ser Pro Ser Arg Val Pro Ala Ala Gln Glu Leu Asp Ser Gln Asp Pro 85 90 95 ggg gca ttg tta gct ctg ctg gct gcg acc ttg gcc cag ggc ccg cgg Gly Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala Ala Thr Leu Ala Gln Gly Pro Arg 100 105 110 gca cea cgt gtg gag gcc gca ttc cae tgt cgc ttg cgc cgg gat gtg 384 Ala Pro Arg Val Glu Ala Ala Phe Hia Cys Arg Leu Arg Arg Asp Val 115 120 125 cag gtg gat cgg cgt gcg ttg cac gag ctt ggg atc tac tac ctg ccc 432 Gln Val Asp Arg Arg Ala Leu His Glu Leu Gly lie Tyr Tyr Leu Pro 130 135 140 gaa gtt gag gga gcc ttc cac cgg ggc cea ggc ttg aat ctg acc age 480 Glu Val Glu Gly Ala Phe His Arg Gly Pro Gly Leu Asn Leu Thr Ser 145 150 15S 160 ggc cag tac acc gca ect gtg gct ggc ttc tat gcg ctt gct gcc act 52B Gly Gln Tyr Thr Ala Pro Val Ala Gly Phe Tyr Ala Leu Ala Ala Thr 165 170 175 ctg cae gtg gca etc acc gag cag cea aga aag gga cea acá cga ccc Leu His Val Ala Leu Thr Glu Gln Pro Arg Lya Gly Pro Thr Arg Pro 180 185 190 cgg gat cgt ctg cgc ctg ctg atc tgc atc cag tet etc tgt cag cac 624 Arg Aap Arg Leu Arg Leu Leu lie Cys lie Gln Ser Leu Cys Gln His 195 200 205 aat gcc tec ctg gag act gtg atg ggg ctg gag aac age age gag etc 672 Asn Ala Ser Leu Glu Thr Val Met Gly Leu Glu Asn Ser Ser Glu Leu 210 215 220 ttc acc atc tea gta aat ggt gtc etc tat cta cag gca gga cac tac 720 Phe Thr lie Ser Val Asn Gly Val Leu Tyr Leu Gln Ala Gly His Tyr 225 230 235 240 act tet gtc ttc ttg gac aat gcc age ggc tec tec etc acg gta cgc 768 Thr Ser Val Phe Leu Asp Asn Ala Ser Gly Ser Ser Leu Thr Val Arg 245 250 255 agt ggc tet cac ttc agt gct atc etc ctg ggc ctg tga 807 Ser Gly Ser His Phe Ser Ala lie Leu Leu Gly Leu 260 265 <21Q> 53 <211s 268 <212> PRT 212> Mus muaculua <400> 53 Met Leu Phe Val Lys Gln Ser Asp Lys Gly lie Asn Ser Lys Arg Arg 1 5 10 15 Ser Lys Ala Arg Arg Leu Lya Leu Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Pro 20 25 30 Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Pro Phe lie Pro Ser Glu Val Leu 35 40 45 Leu Lya Glu Phe Gln Leu Leu Leu Lys Gly Ala Val Arg Gln Arg Glu 50 55 60 Ser His Leu Glu His Cys Thr Arg Aap Leu Thr Thr Pro Ala Ser Gly 65 70 75 80 Ser Pro Ser Arg Val Pro Ala Ala Gln Glu Leu Asp Ser Gln Asp Pro 85 90 95 Gly Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala Ala Thr Leu Ala Gln Gly Pro Arg 100 105 110 Ala Pro Arg Val Glu Ala Ala Phe Hia Cya Arg Leu Arg Arg Aap Val 115 120 125 Gln Val Asp Arg Arg Ala Leu Hia Glu Leu Gly lie Tyr Tyr Leu Pro 130 135 140 Glu Val Glu Gly Ala Phe His Arg Gly Pro Gly Leu Asn Leu Thr Ser 145 150 155 160 Gly Gln Tyr Thr Ala Pro Val Ala Gly Phe Tyr Ala Leu Ala Ala Thr 165 170 175 Leu His Val Ala Leu Thr Glu Gln Pro Arg Lys Gly Pro Thr Arg Pro 180 185 190 Arg Asp Arg Leu Arg Leu Leu lie Cys lie Gln Ser Leu Cys Gln His 195 200 205 Asn Ala Ser Leu Glu Thr Val Met Gly Leu Glu Asn Ser Ser Glu Leu 210 215 220 Phe Thr lie Ser Val Asn Gly Val Leu Tyr Leu Gln Ala Gly His Tyr 225 230 235 240

Claims (23)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- Un polipóptido substancialmente puro o recombinante que comprende: por lo menos tres segmentos no traslapables distintos de por lo menos cuatro aminoácidos idénticos a segmentos de SEQ ID NO: 2 (DIRS4); SEQ ID NO: 9, 1 1 , 13 6 53 (FNTx o FNTy); SEQ ID NO: 15, 17, 19, 21 , 23, 25 ó 27 (TLR-L1 a TLR-L5); SEQ ID NO: 29 (TGFx); SEQ ID NO: 31 ó 33 (5685C6); SEQ ID NO: 35, 37, 39 ó 41 (claudinas); SEQ ID NO: 43, 45, 47, 49 ó 51 (schlafens).

2. - El polipéptido antigénico substancialmente puro o aislado de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque dichos segmentos de identidad no traslapables distintos: a) incluyen uno de por lo menos ocho aminoácidos; b) incluyen uno de por lo menos cuatro aminoácidos y un segundo de por lo menos cinco aminoácidos; c) incluyen por lo menos tres segmentos de por lo menos cuatro, cinco y seis aminoácidos; o d) incluyen uno de por lo menos doce aminoácidos.

3. - La composición de material de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque dicho polipóptido: a) es no glicosilado; b) es de primate; tal como un humano; c) comprende por lo menos diecisiete aminoácidos contiguos de la SEQ ID NO; d) presenta por lo menos cuatro segmentos no traslapables de por lo menos siete aminoácidos de la SEQ ID NO; ?) tiene una longitud de por lo menos aproximadamente 30 aminoácidos; f) tiene un peso molecular de por lo menos 30 kD con glicosilación natural; g) es un polipéptido sintético; h) está unido a un sustrato sólido; i) es conjugado a otra porción química; o j) comprende una etiqueta de detección o purificación, incluyendo una secuencia de FLAG, His6, o Ig.

4. - Una composición que comprende: a) un polipéptido substancialmente puro de conformidad con la reivindicación 1 ; b) un polipéptido estéril de conformidad con la reivindicación 1 ; o c) el polipéptido de conformidad con la reivindicación 1 y un vehículo, en donde el vehículo es: i) un compuesto acuoso, incluyendo agua, solución salina y/o regulador de pH; y/o ii) formulado para administración oral, rectal, nasal, tópica o parenteral.

5. - Un equipo que comprende un polipéptido de la reivindicación 1 , y a) un compartimiento que comprende el polipéptido; o b) instrucciones para usar o desechar reactivos en el equipo.

6.- Un compuesto de unión que comprende un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo, que se une específicamente a un polipéptido de conformidad con la reivindicación 1 , en donde a) el compuesto de unión es un contenedor; b) el polipéptido es de un ser humano; c) el compuesto de unión es un fragmento Fv, Fab, o Fab2; d) el compuesto de unión se conjuga a otra porción química; o e) el anticuerpo i) es generado contra un polipéptido recombinante; ii) es generado contra un polipéptido purificado; iii) es inmunoseleccionado; iv) es un anticuerpo policlonal; v) se une a un antígeno desnaturalizado; vi) presenta un Kd para antígeno de por lo menos 30 µ?; vii) está unido a un substrato sólido, incluyendo una membrana de plástico o un glóbulo; viii) está en una composición estéril; o ix) está detectablemente marcado, incluyendo un marcador radioactivo o fluorescente.

7. - Un equipo que comprende el compuesto de unión de conformidad con la reivindicación 6, y: a) un compartimiento que comprende el compuesto de unión; o b) instrucciones para usar o desechar los reactivos en el equipo.

8. - Un método para producir un complejo antígeno:anticuerpo, que consiste en poner en contacto bajo condiciones apropiadas un polipóptido de primate con el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 7, permitiendo así que se forme el complejo.

9. - Un método para producir un complejo antígeno:anticuerpo, que consiste en poner en contacto bajo condiciones apropiadas un polipóptido de conformidad con la reivindicación 1 , con un anticuerpo que se une al mismo, permitiendo así que se forme el complejo.

10. - Un método para producir un compuesto de unión que consiste en: a) inmunizar un sistema inmune con un polipóptido de conformidad con la reivindicación 1 ; o b) introducir un ácido nucleico que codifica el polipóptido de conformidad con la reivindicación 1 a una célula bajo condiciones que conducen a una respuesta inmune, produciendo así el compuesto de unión; o c) seleccionar para una genoteca de despliegue de fagos para aquellos fagos que se unen al polipóptido de conformidad con la reivindicación 1 .

11 . - Una composición que comprende: a) un compuesto de unión estéril de conformidad con la reivindicación 7, o b) el compuesto de unión de conformidad con la reivindicación 7 y un vehículo, en donde el vehículo es: i) un compuesto acuoso, incluyendo agua, solución salina y/o regulador de pH; y/o ¡i) formulado para administración oral, rectal, nasal, tópica o parenteral.

12. - Un ácido nucleico aislado o recombinante que codifica el polipéptido de conformidad con la reivindicación 1 , en donde: a) el polipéptido es de un primate; o b) el ácido nucleico: i) codifica una secuencia de polipéptido antigónico; ii) codifica una pluralidad de secuencias de políóptido antigénico de SEQ ID NO: 2, 9, 1 1 , 13, 15, 17, 19, 21 , 23, 25, 27, 29, 31 , 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51 ó 53; iii) presenta identidad sobre por lo menos trece nucléotidos a un ADNc natural que codifica el segmento; iv) es un vector de expresión; v) comprende además un origen de replicación; vi) es de una fuente natural; vii) comprende un marcador detectable; viii) comprende una secuencia de nucléotido sintética; ix) es menor que 6 kb; preferiblemente menor que 3 kb; x) es una sonda de hibridación para un gen que codifica el polipéptido; o xi) es un iniciador de PCR, producto de PCR o iniciador de mutagénesis.

13. - Una célula que comprende ácido nucleico recombinante de conformidad con la reivindicación 12.

14. - La célula de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada además porque la célula es: a) una célula procariótica; b) una célula eucariótica; c) una célula bacteriana; d) una célula de levadura; e) una célula de insecto; f) una célula de mamífero; g) una célula de ratón; h) una célula de primate o i) una célula humana.

15. - Un equipo que comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 12, y: a) un compartimiento que comprende el ácido nucleico; b) un compartimiento que comprende además un polipóptido de primate; o c) instrucciones para usar o desechar los reactivos en el equipo.

16. - Un ácido nucleico que: a) híbrida bajo condiciones de lavado de 30 minutos a 37°C y menos de 2M de sal a la porción codificadora de SEQ ID NO: 1 , 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50 ó 52; o b) presenta identidad en una extensión de por lo menos aproximadamente 30 nucleótidos a una SEQ ID NO: 1 , 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50 ó 52.

17. - El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque: a) las condiciones de lavado son: a 45°C y/o 500 mM de sal; o b) la extensión es por lo menos de 55 nucleótidos.

18. - El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque: a) las condiciones de lavado son: a 55°C y/o 1 50 mM de sal; o b) la extensión es por lo menos de 75 nucleótidos.

19. - Un método para hacer: a) un ácido nucleico dúplex que consiste en poner en contacto: i) un ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 12 con un ácido nucleico complementario, bajo condiciones apropiadas, dando así por resultado la hibridación para formar el complejo; o ii) un ácido nucleico complementario a un ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 12 con su ácido nucleico complementario, bajo condiciones apropiadas, dando así por resultado la hibridación para formar el complejo; o b) un polipóptido que consiste en cultivar una célula que comprende un ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 12 bajo condiciones que resultan en la expresión del ácido nucleico.

20. - El uso de un polipéptido que comprende SEQ ID NO: 9, 1 1. 13, 29, 31 , 33 o 53, para preparar un medicamento para modular la fisiología o desarrollo de una célula.

21 . - El uso de un compuesto de unión de la reivindicación 6, para preparar un medicamento para modular la fisiología o desarrollo de una célula, en donde dicho compuesto se une a las SEQ ID NO: 9, 11 , 13, 29, 31 o 33, por lo que bloquea una señalización mediada por una proteína que comprende dichas SEQ ID NO.

22. - Un método para marcar una célula que comprende el contacto con dicha célula con un compuesto de unión que se une a la SEQ ID NO: 2, 15, 17, 19, 21 , 23, 25 o 27.

23. - Un método para diagnosticar un condición médica que comprende un paso para evaluar la expresión de un ácido nucleico que comprende las SEQ ID NO: 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 o 50.