MX2011011036A - Metodos de tratamiento para tumores solidos. - Google Patents

Abstract

La invención proporciona métodos que se refieren a una estrategia terapéutica novedosa para el tratamiento de malignidades hematológicas y. enfermedades inflamatorias. En particular, el método comprende administración de un compuesto de la fórmula I, (ver fórmula (I)) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que comprende tal compuesto mezclado con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Description

MÉTODOS DE TRATAMIENTO PARA TUMORES SÓLIDOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención está en el campo de terapéuticos y química medicinal. En particular, la invención concierne a métodos de tratamiento para ciertos tumores sólidos que incluye administración de ciertos derivados de quinazolinona .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La señalización celular por medio de fosfoinositidas 3'-fosforiladas se ha implicado en na variedad de procesos celulares, por ejemplo, transformación maligna, señalización del factor de crecimiento, inflamación, e inmunidad. La enzima responsable de generar estos productos de señalización fosforilados , fosfatidilinositol 3-cinasa (PI 3-cinasa; PI3K) , se identificó originalmente como una actividad asociada con oncoproteínas víricas y tirosina cinasa del receptor de factor de . crecimiento que fosforilan fosfatidilinositol (PI) y sus derivados fosforilados en el 3'-hidroxilo del anillo inositol.

La activación de PI 3-cinasa, se considera que está involucrada en un intervalo de respuestas celulares que incluyen crecimiento celular, diferenciación, y apoptosis. La Figura 1 muestra algunas trayectorias celulares por las cuales PI3K (representado por pllO y p85) participa en la activación de tumor sólido.

La purificación inicial y clonación molecular de PI3-cinasa revela que fue un heterodimero que consiste de las subunidades p85 y pllO. Se han identificado cuatro PI3K de Clase I distintas, designadas PI3K , ß, d, y ?, cada una de las cuales consiste de una subunidad catalitica pllO distinta y una subunidad reguladora. Más específicamente, tres de las subunidades catalíticas, es decir, ???? , ????ß y ????d, cada una interactúa con la misma subunidad reguladora, p85; mientras que ????? interactúa con una subunidad reguladora distinta, plOl. Los patrones de expresión de cada una de estas PI3K en células y tejidos humanos también son distintos .

La identificación de la isoforma ????d de PI 3-cinasa se describe en Chantry et al., ¦ J. Biol . Chem. , 272:19236-41 (1997) . Se observó que la isoforma ????d humana se expresa en una manera restringida al tejido. Se expresa en niveles altos en linfocitos y tejidos linfoides, lo que sugiere que la proteína puede jugar un papel en la señalización mediada por Pl3-cinasa en el sistema inmunitario. La isoforma ????ß de PI3K también puede jugar un papel en la señalización mediada por PI3K en ciertos cánceres. La Figura 2 ilustra las cantidades relativas de estas isoformas de pllO en un número de diferentes lineas de célula de cáncer. Algunos tumores sólidos exhiben poco' o nada de pllOa, y muchos tienen bajos niveles de ????d, pero todos los probados muestran niveles importantes de ????ß.

Hay una necesidad para un tratamiento de trastornos mediados · por PI3K relacionados a cánceres, enfermedades inflamatorias, y enfermedades autoinmunitarias . Los compuestos de quinazolinona se han descrito como útiles generalmente para tratamiento principalmente de cánceres hematológicos que expresan niveles relativamente altos de ????d, debido a que las quinazolinonas son más activas como inhibidores de ????d. Otros inhibidores de PI3K están bajo desarrollo para el tratamiento de · tumores sólidos, pero parecen ser inhibidores no selectivos de varias isoformas de pllO, o inhibidores principalmente de pllOa. Por ejemplo, XL-147 inhibe pllOa y ????d y ????? con IC-50 similares de acuerdo a Exelixis, y tiene lOx menos actividad en ????ß; BEZ235 se describe como un inhibidor pan-PI3K que también actúa en mTOR; y GDC-0941 se describe como un inhibidor pllOa. Los inhibidores con selectividad inferior, o con niveles más altos de actividad pllOa, pudieran esperarse que tangán actividades fuera del objetivo; pllOa, por ejemplo, está involucrado en la regulación de niveles de glucosa e insulina. La presente invención proporciona un isómero específico de un compuesto de quinazolinona que es particularmente útil para el tratamiento de tumores sólidos. Aunque es más activo en ????d que otras isoformas de PI3K, esta capacidad del compuesto para tratar tumores sólidos se considera que se debe a su actividad relativamente alta como un inhibidor de ????ß combinado con un alto nivel de biodisponibilidad oral, y exhibe niveles relativamente bajos de actividad funcional contra pllOa.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La invención proporciona métodos novedosos para tratar ciertos tumores sólidos, usando un compuesto de la fórmula (I) . En un aspecto, la invención proporciona un método para tratar cáncer en un sujeto que comprende administrar al sujeto un compuesto ópticamente activo de la fórmula I:, O N, N' ^ N —NH o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El compuesto ópticamente activo es predominantemente el isómero S mostrado aquí, aunque puede contener como un componente menor alguna proporción del enantiómero R. Preferiblemente el compuesto usado en los métodos de la invención consiste primariamente del isómero S como se discute además en la presente.

Los métodos de la invención incluyen el suministro de este compuesto por varias vías de administración, pero preferiblemente el compuesto se administra oralmente.

El sujeto puede ser cualquier mamífero; en modalidades preferidas el sujeto es un humano.

Sin enlazarse por la teoría, la actividad antitumor de este compuesto se considera que resulta de su inhibición de ????ß más que de la inhibición de ????d o pllOa. Exhibe actividad en una variedad de líneas de célula de cáncer que expresa poco ????d, y algunos que no expresan cantidades importantes de pllOa; pero todas las líneas celulares probadas expresan ????ß.

Por otro lado, el compuesto I exhibe actividad funcional comparativamente baja en pllOa en un sistema de transformación de célula diseñado para medir la actividad funcional de estas cinasas, pero es un inhibidor potente de tanto ????ß como ????d en tal ensayo. Ver Ejemplo 1. Este sistema de transformación de fibroblasto de embrión de pollo (CEF) se ha reportado como una manera útil para evaluar la actividad funcional de la trayectoria de señalización PI3K. d Denley, et al., "Oncogenic signaling of class 1 PI3K isoforms," Oncogene, vol. 27(18), 2561-74 (2008). Transíormation of CEF cells in the assay dependí upon functional kinase activity. Kang, et al., Proc . Nat' 1 Acad . Sci. USA, vol. 103(5), 1289-94 (2006). Similarmente como otros ensayos basados en célula funcional, el Compuesto I es más activo en ????d y ????ß, con actividad relativamente más baja contra pllOa.

Como la Figura 4 ilustra, el Compuesto l a 10 micromolares inhibe la fosforilación de Akt, que es un mediador cadena abajo de la activación PI3 (Ver Figura 1), en dos lineas de célula de cáncer, T47D (cáncer de mama) y OVCAR-3 (cáncer de ovario) . Es importante, también, que T47D tenga una mutación que active pllOa, aunque no reduce significativamente el efecto del Compuesto I contra esta linea celular, lo que sugiere además que la actividad antitumor de este compuesto debiera residir en su efecto en otras isoformas en vez de en pllOa. Esto distingue el compuesto I de los otros inhibidores PI3K conocidos en desarrollo para tratamiento de tumores sólidos, que se consideran que actúan primariamente en la isoforma pllOa o en pllOa más otras isoformas, o aún en todas las PI3Ks más mTOR .

El Compuesto I es útil para tratar ciertos cánceres. En algunas modalidades el cáncer es un cáncer no hematopoyético .

En algunas modalidades, el cáncer es un tumor sólido seleccionado de cáncer pancreático; cáncer de vejiga; cáncer colorrectal; cáncer de mama; cáncer de próstata; cáncer renal; cáncer hepatocelular ; cáncer de pulmón; cáncer de ovario; cáncer cervical; cáncer gástrico; cáncer del esófage-cáncer de cabeza y cuello; meianoma; cánceres neuroendocrinos ; cánceres del SNC; tumores cerebrales; cáncer óseo; y sarcoma de tejido suave. En algunas modalidades este es cáncer de pulmón (cáncer de pulmón de célula no pequeña, cáncer de pulmón de célula pequeña) , cáncer de colon, cáncer del SNC, meianoma, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata o cáncer de mama..

En algunas modalidades, el método comprende administrar una cantidad efectiva del compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto I, a un sujeto que padece de uno de estos cánceres. En modalidades preferidas, el compuesto se administra oralmente. El compuesto puede administrarse solo o en la forma de una composición farmacéutica que comprende el compuesto I mezclado con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En modalidades particulares', el cáncer es cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer renal, o cáncer de ovario. En una modalidad particular, el método comprende administrar al paciente a tratarse, además del compuesto de la fórmula I, una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un agente terapéutico adicional y/o un procedimiento terapéutico adicional seleccionado para tratar el cáncer.

La invención proporciona de esta manera un método para tratar un tumor sólido en un sujeto que comprende administrar al sujeto un compuesto ópticamente activo de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que comprende un compuesto ópticamente activo de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde la cantidad del compuesto de la fórmula I o su sal es una cantidad efectiva para tratar el tumor sólido.

En ciertas modalidades, el tumor sólido es seleccionado del grupo que consiste de cáncer pancreático; cáncer de vejiga; cáncer colorrectal; cáncer de mama; cáncer de próstata; cáncer renal; cáncer hepatocelular ; cáncer de pulmón; cáncer de ovario; cáncer cervical; cáncer gástrico; cáncer del esófago; cáncer de cabeza y cuello; melanoma; cánceres neuroendocrinos ; cánceres del SNC; tumores cerebrales; cáncer óseo; and sarcoma de tejido suave. En algunas modalidades, el tumor sólido es seleccionado de cáncer de pulmón de célula no pequeña, cáncer de pulmón de célula pequeña, cáncer de colon, cáncer del SNC, melanoma, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata y cáncer de mama .

Para métodos de la invención, el Compuesto I es ópticamente activo. Preferiblemente, el enantiómero S predomina sobre el enantiómero R por una relación de al menos alrededor de 9:1. En modalidades especificas, el enantiómero S predomina sobre el enantiómero R por una relación de al menos alrededor de 19:1.

En modalidades preferidas, el Compuesto I se administra oralmente. Típicamente, este se administra en una forma sólida, y comúnmente este es mezclado con un diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

El método 'es aplicable al tratamiento de una variedad de tipos de tumor. En algunas modalidades, el cáncer es cáncer de ovarios, renal, mama, pulmón, colon o de próstata.

El sujeto es un mamífero, y es típicamente un humano. En algunas modalidades, el sujeto es refractario al tratamiento de quimioterapia, o está en recaída después de tratamiento con quimioterapia. Los métodos de la invención también son útiles para reducir el nivel de actividad de ????ß en el sujeto.

El compuesto de la fórmula I puede administrarse a una dosis de 20-500 mg/día. En algunas modalidades, el compuesto de la fórmula I se administra al menos dos veces al día- En modalidades específicas, este se administra a una dosis de 50-250 mg/día. En algunas modalidades, este se administra a una dosis de 50-150 mg dos veces por día.

En algunas modalidades, la dosis del Compuesto I es seleccionada para proporcionar una concentración del compuesto I en la sangre que alcanza un punto entre 40 y 10,000 ng/mL durante un periodo de 12 horas desde el tiempo de administración. En algunas modalidades, la dosificación proporciona una concentración del compuesto I en la sangre que es entre alrededor de 100 ng/mL y 6000 ng/mL en el sujeto tratado. En algunas modalidades, la dosificación es seleccionada para producir un Cmax (nivel de plasma pido) del compuesto I entre 1000 ng/mL y 8,000 ng/mL.

El compuesto I puede administrarse oralmente, transdérmicamente , o- por inyección o inhalación. En algunas modalidades, este se administra oralmente.

En otro aspecto, la invención proporciona una terapia de combinación para tratar el cáncer, que comprende administrar el Compuesto I a un sujeto quien recibe concurrentemente tratamiento con un agente terapéutico adicional, o una terapia de cáncer adicional.

En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional a usarse junto con el Compuesto I es seleccionado del siguiente grupo que consiste de Docetaxel, Mitoxantrona , Prednisona, Estramust ina , Ant raciclinas , ( doxorubicina (Adriamicina) , epirubicina (Ellence) , y doxorubicina liposomal (Doxil)), Taxanos (docetaxel (Taxotere), paclitaxel (Taxol), y paclitaxel enlazado a la proteína (Abraxano) ) , Ciclofosfamida (Citoxan) , Capecitabina (Xeloda) y 5 fluorouracil (5 FU), Gemcitabina (Gemzar) , metotrexato, Vinorelbina (Navelbina), un inhibidor EGFR tal como erlotinib, Trastuzumab, Herceptina, Avastina, Platinas (cisplatina, carboplatina ) , Temazolamida, Interferon alfa, e IL-2. En algunas modalidades, este es seleccionado del grupo que consiste de un inhibidor EGFR, un inhibidor mTOR, una platina, y un taxano.

En algunas modalidades, el procedimiento terapéutico a usarse junto con El compuesto I es seleccionado del grupo que consiste de trasplante de mastocitos de sangre periférica, trasplante de mastocitos hematopoyéticos autólogos, trasplante de médula ósea autóloga, terapia de anticuerpo, terapia biológica, terapia de inhibidor de enzima, radiación corporal total, infusión de mastocitos, ablación de médula ósea con soporte de mastocitos, trasplante de mastocitos de sangre periférica tratados in vitro, trasplante de sangre del cordón umbilical, técnica' de inmunoenzima , método de teñido inmunohistoquímico, estudio farmacológico, terapia de rayos gamma de cobalto 60 de bajo LET, bleomicina, cirugía convencional, terapia de radiación, quimioterapia de alta dosis y trasplante de mastocitos hematopoyéticos alogénicos no mieloablativos .

En algunas modalidades, los métodos de la invención comprenden además obtener una muestra biológica del paciente; y analizar la muestra biológica con un procedimiento analítico seleccionado del grupo que consiste de análisis de química sanguínea, análisis de transubicación cromosomal, biopsia de aguja, hibridación in situ fluorescente, análisis de biomarcador de laboratorio, método de teñido inmunohistoquímico, citometría de flujo o una combinación de los mismos. El análisis proporciona información que puede usarse para determinar si se ajusta la dosis del compuesto I arriba o abajo, o para terminar el tratamiento con el Compuesto I, o para agregar un agente terapéutico adicional o procedimiento terapéutico a los métodos de tratamiento usando el Compuesto I.

En algunas modalidades, el Compuesto I se administra dos veces al día por alrededor de 28 días, y se descontinúa entonces por al menos 7 días.

La siguiente descripción detallada es para auxiliar en el entendimiento y empleo de los métodos de la invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra parte de la trayectoria de señalización PI3K asociada. con activación de tumor sólido.

La Figura 2 muestra los niveles relativos de las isoformas alfa, beta, delta y gamma de pllO en seis diferentes lineas de célula de cáncer, junto con niveles de Akt y pAkt.

La Figura 3 muestra la lectura de un ensayo de transformación CEF funcional para la actividad relativa de varias isoformas de pllO.

La Figura 4 muestra cómo el Compuesto I, a concentraciones desde 0.01 uM · hasta 10 uM, afecta la fosforilación de Akt, GSKp, y S6 en dos lineas de célula de cáncer, comparado con cómo GDC-0941, que se describe como un inhibidor pllOalfa afecta las mismas fosforilaciones.

La Figura 5 ilustra un esquema de reacción para síntesis del compuesto I.

La Figura 6 muestra niveles en plasma del compuesto I en ratones que reciben una dosis oral sencilla del compuesto, comparado con los niveles en plasma de otro compuesto de quinazolinona (Compuesto B) con una estructura similar, para ilustrar la alta biodisponibilidad oral proporcionada por el Compuesto I.

La Figura 7 muestra la inhibición dependiente- de la dosis del crecimiento de cultivos de célula de tumor para dos lineas de tumor diferentes.

La Figura 8 muestra que el Compuesto I a 30 mg/kg BID inhibe completamente el crecimiento de un xenoinjerto de tumor durante un periodo de cinco semanas, mientras que los xenoinjertos correspondientes en animales de control no tratados más del doble en volumen durante el mismo periodo de tiempo.

La Figura 9 muestra que el Compuesto I a 30 mg/kg BID inhibe significativamente el crecimiento de un xenoinjerto de tumor durante un periodo de tres semanas, aunque los xenoinjertos correspondientes en animales de control no tratados se expande mucho más rápidamente durante el mismo periodo de tiempo.

La Figura 10 muestra el perfil de concentración en plasma para . el Compuesto I en los ratones que portan el xenoinjerto de las Figuras 8 y 9, cuando se administra como una dosis sencilla de 30 mg/kg.

La Figura 11 muestra el perfil de concentración en plasmas en los primeros y últimos días de prueba de días múltiples del compuesto I en ratones saludables que reciben 60 mg/kg, 120 mg/kg, o 240 mg/kg por día. La dosis de 60 mg/kg fue bien tolerada, lo que demuestra que la dosis de tratamiento (30 mg/kg BID) es tanto tolerada como efectiva en ratones .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN A menos que se defina de otra manera, todos los términos del arte, notas y otros términos o terminología científica usada en la presente se pretenden que tengan los significados comúnmente entendidos por aquellos de habilidad en la técnica a los cuales está invención concierne. En algunos casos, los términos con significados comúnmente entendidos se definen en la presente para claridad y/o para referencia fácil, y la inclusión de tales definiciones en la presente no debiera necesariamente construirse para representar una diferencia sustancial sobre la que se entiende generalmente en la técnica. Muchas de las técnicas y procedimientos descritos o que se hace referencia en la presente están bien entendidos y se emplean comúnmente usando metodología convencional por aquellos expertos en la técnica. Como sea apropiado, los procedimientos que involucran el uso de kits y reactivos comercialmente disponibles se llevan a cabo generalmente de acuerdo con los protocolos y/o parámetros definidos por el fabricante a menos que se note de otra manera.

La discusión de los métodos generales dados en la presente se pretende sólo para propósitos ilustrativos. Otros métodos y modalidades alternativas serán aparentes para aquellos de experiencia, en la técnica durante la revisión de esta descripción.

El grupo de puntos ligados con la conjunción "o" no debiera leerse como que requiere exclusividad mutua entre tal grupo, sino al contrario debiera también leerse como "y/o" a menos que se establezca expresamente de otra manera. Aunque los puntos, elementos, o componentes de la invención pueden describirse o reivindicarse en singular, se contempla el plural para estar dentro del alcance del mismo a menos que la limitación al singular se establezca explícitamente.

La invención proporciona métodos que se refieren a un método terapéutico novedoso para el tratamiento de cáncer y particularmente tumores sólidos. La invención comprende administrar al sujeto un compuesto de la fórmula I: 0 (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, mezclado opcionalmente con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

El compuesto I para uso en los métodos descritos en la presente es ópticamente' activo, lo que significa que consiste de predominantemente uno de dos enantiómeros . El compuesto tiene un centro quiral sencillo, en el grupo de ligadura no cíclico entre la porción quinazolinona y la porción purina . El centro quiral del enantiómero preferido del compuesto de la fórmula (I) es el isómero S descrito arriba1. El compuesto se usa en una forma ópticamente activa, que contiene predominantemente el enantiómero S. Este compuesto puede sintetizarse en forma ópticamente activa, 01 puede prepararse en forma racémica (que contiene cantidades iguales de isómeros R y S) , y entonces los isómeros pueden separarse. Una síntesis quiral del compuesto I que proporcibna el enantiómero S en pureza óptica muy alta se describe en la presente. Ver Figura 5. Aunque es preferible éxcluir sustancialmente el isómero R enantiomérico del compuesto de la fórmula (I) para propósitos de la invención, los métodos pueden practicarse con mezclas de isómeros R ' y S, proporcionan el isómero S es el componente principal de la mezcla. Típicamente tal mezcla contendrá no más de alrededor de 10% del isómero R, lo que significa que la relación de isómeros S a R es' al menos alrededor de 9:1, y preferiblemente menos de 5% del isómero R, lo que significa que la relación de enantiómeros S a R es al menos alrededor de 19:1. En algunas modalidades el compuesto usado tiene menos de 2% de enantiómero R, lo que significa que tiene un exceso enantiomérico de al menos alrededor de 96%.

Los métodos de la invención utilizan una forma ópticamente activa del compuesto I (el compuesto de la fórmula I) , lo que significa que en cada caso, el Compuesto es ópticamente activo y contiene predominantemente el enantiómero S, aunque puede contener el enantiómero R del compuesto I como un componente menor. Para claridad, donde una dosificación de un compuesto de la fórmula I, o una dosificación del compuesto I se describen en la presente, la dosificación se refiere al peso del compuesto de la fórmula I, incluyendo cada enantiómero que está presente. De esta manera una dosificación de 100 mg del compuesto I como se usa en la presente, por ejemplo, se refiere al peso de la mezcla de enantiómeros en vez del peso del enantióméro S específicamente. Pudiera por ejemplo, referirse a 100 mg de una mezcla 9:1 de enantiómeros S y R, que contendría alrededor de 90 mg del enantiómero S, o hasta 100 mg de una mezcla 19:1 de enantiómeros S y R, que contendría alrededor de 95 mg del enantiómero S.

Los métodos de la invención son útiles para tratar cánceres, particularmente tumores sólidos. En algunas modalidades, el cáncer es un tumor sólido seleccionado de cáncer pancreático; cáncer de vejiga; cáncer colorrectal; cáncer de mama; cáncer de próstata; cáncer renal; cáncer hepatocelular ; cáncer de pulmón; cáncer de ovario; cáncer cervical; cáncer gástrico; cáncer del esófago; cáncer de cabeza y cuello; melanoma; cánceres neuroendocrinos; cánceres del SNC; tumores cerebrales; cáncer óseo; y sarcoma de tejido suave. En algunas modalidades este es cáncer de pulmón (cáncer de pulmón de célula no pequeña, cáncer de pulmón de célula pequeña) , cáncer de colon, cáncer del SNC, melanoma, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata o cáncer de mama .

La eficacia del compuesto I se considera que resulta de su inhibición in vivo de primariamente la actividad ????ß, aunque también inhibe la actividad ????d. El compuesto I es selectivo para inhibición de ????ß y ????d sobre pllOa, y es selectivo para estas dos cinasas sobre otras cinasas contra las cuales se ha probado. Su selectividad se ilustra por su actividad en un ensayo celular de actividad funcional, donde inhibe ????ß con un EC-50 de alrededor de 150 nM, y ????d con un EC-50 de alrededor de 15 nM, mientras que muestra mucho menos actividad en pllOa (EC-50 fue arriba de 2000 nM) .

Aunque su actividad contra ????ß es más baja que su actividad en ????d, debido a que ????ß es la isoforma dominante de pllO que se observa en tumores sólidos, se considera que la actividad en la isoforma delta es menos importante para su actividad de tumor sólido' que su actividad en ????ß. Esto también es consistente con la observación de que el Compuesto I exhibe actividad contra tumores que expresan poco o nada de ????d (lo que sugiere que no depende de este), y contra lineas de célula de · tumor donde pllOa se activa (ver discusión de T47D arriba), lo que sugiere que los altos niveles de la isoforma alfa no reducen la sensibilidad al Compuesto I.

La selectividad con respecto a pllOa es importante para el perfil de seguridad del Compuesto I: pllOa juega un papel esencial en la señalización de insulina y metabolismo de glucosa. Los inhibidores PI3K no selectivos que también inhiben la actividad pllOa se espera que causen efectos colaterales o efectos adversos fuera de objetivo al afectar la señalización de insulina y/o el metabolismo de glucosa, lo que no se aprecia que ocurre con el Compuesto I. Se considera que contribuye a la reducción de efectos fuera de objetivo para el Compuesto I.

El Compuesto I también es selectivo para estas isoformas PI3K sobre otras lipido cinasas, incluyendo otras cinasas PI3K, ADN-PK (otra serina-treonina cinasa) , y mTOR. Esta tabla proporciona los IC-50 para inhibición de actividad de cinasa de estas otras cinasas de lípido: PIKC3 2500 nM ADN-PK 13,000 nM mTOR 100,000 nM Por otro lado, . el Compuesto I tiene actividad comparativamente baja en pllO en un sistema de transformación de células diseñado para medir actividad funcional de estas cinasas, pero es un inhibidor potente de tanto ????ß como ????d en tal ensayo. Ver Ejemplo 1. Este sistema de transformación de fibroblasto de embrión de pollo (CEF) se ha reportado como una manera útil para evaluar la actividad funcional de la trayectoria de señalización PI3K. Denley, et al., "Oncogenic signaling of class I PI3K isoforms," Oncogene, vol . 27(18), 2561-74 (2008). La transformación de las células CEF en el ensayo dependé de la actividad de cinasa funcional. Kang, et al., Proc Nat ' 1 Acad. Sci. USA, vol. 103(5), 1289-94 (2006). La lectura de este ensayo se basa en la frecuencia de transformación de células CEF expuestas a vectores virales que portan una isoforma pllO específica de interés. Ver Figura 3.

En este sistema, un EC-50 para actividad funcional de pllOa no se alcanzó en la concentración más alta del compuesto I probada (2000 nM) ; el EC-50 para inhibición de actividad funcional de ????ß por el Compuesto I fue alrededor de 150 nM; y el EC-50 para inhibición de actividad funcional de ????d por el Compuesto I fue alrededor de 15 nM.

Similarmente, otros ensayos funcionales de inhibición de isoformas especificas en pruebas basadas en células muestran el compuesto I que tiene actividad más alta en las isoformas delta y beta de pllO en vez de en pllOa. El ensayo pHOa usa células SW3T3 estimuladas por PDGF, y actividad de cinasa pllO se midió por fosforilación Akt . La actividad ????ß se midió por estimulación . de ácido lisofosfatidico de fosforilación Akt en fibroblastos embriónicos de ratón. La actividad de ????d se midió por estimulación cruzada de anticuerpo anti-FcsRl del movimiento CD63 a la superficie de los basófilos. Finalmente, the actividad de ????? se midió por estimulación fMLP del movimiento de antigeno CD63 a la superficie celular de basófilos. De nuevo, el Compuesto I muestra poca inhibición de la isoforma alfa, y fue el más activo en las isoformas delta y beta. p1 10a >20,000 Ensayo basado en ?1 10ß 1 ,200 células FB/WB EC50 (nM) ?1 10d 8.4/19 ?1 10? 3,000/5,400 Como ilustra la Figura 4, el Compuesto I a 10 micromolar inhibe la fosforilación de Akt, ' que es un mediador cadena abajo de la activación PI3K (Ver Figura 1), en dos líneas de célula de cáncer, T47D (cáncer de mama) y OVCAR-3 (cáncer de ovario) . Es importante notar que T47D tiene una mutación que activa pllOa, aún el compuesto I proporciona buena actividad contra esta línea- celular, lo que demuestra además que la actividad antitumor de este compuesto reside más posiblemente en este efecto en otras isoformas en vez de en pllOa.

La biodisponibilidad del compuesto I durante la administración oral es especialmente buena, aún comparado con otras quinazolinonas de estructuras similares. Por ejemplo, la Figura 6 ilustra ¦ que el Compuesto I produce concentraciones de plasma más altas de fármaco que otro compuesto de quinazolinona que tiene una estructura $imilar (Compuesto B) . Notar que el Compuesto I se administró oralmente a ratones a la mitad de la dosificación del Compuesto B, pero produce un nivel de plasma pico más alto. El grado de diferencia en biodisponibilidad oral entre el Compuesto I y el Compuesto B observado en esta prueba es sorprendente .

Compuesto B Los tratamientos de la invención típicamente involucran administración del compuesto I a un sujeto que necesita del tratamiento en una base diaria por al menos una semana o más de una semana, a menudo por 2-4 semanas, y algunas vedes por 1-3 meses o más. La vida media del compuesto I in vivo en ratones y ratas es de varias horas — ver Figura 6. Ésto es algunas veces deseable para administrar el compuesto I en dosis múltiples cada día, con objeto de mantener niveles en plasma eficaces durante un periodo de tiempo prolongado. La administración puede darse en dos dosis por día, o tres dosis por día, o en algunas modalidades, cuatro dosis por día o más, particularmente cuando el Compuesto I se administra oralmente. Alternativamente, el Compuesto I puede administrarse intravenosamente a una relación que mantiene un nivel de plasma eficaz por un periodo de tiempo prolongado. De forma apropiada, se administraría a una relación para alcanzar un nivel de plasma de al menos alrededor de 1 micromolar, o al menos 3 micromolar, o al menos 5 micromolar. La Figura 6 muestra que los niveles en plasma de alrededor de 500 ng/mL (sobre 1 micromolar) pueden mantenerse por varias horas después de una dosis oral sencilla de 20 mg/kg del compuesto I; esto demuestra que los altos niveles en plasma del compuesto I, por ejemplo, concentraciones consistentes con los niveles mostrado para ser efectivos en ensayos funcionales, pueden alcanzarse con dosis toleradas del compuesto I .

El compuesto I ha mostrado que induce la apoptosis de una variedad de células de tumor sólido. La Figura 7 muestra esta inhibición dependiente de la dosis de crecimiénto en cultivo de célula de tumor, medido por densidad óptica a 459 nm, para una linea celular de cáncer de mama (T47D) y una linea celular de cáncer de ovario (OVCAR-3) . Esto demuestra que la exposición a 5-10 niveles micromolares del compuesto I proporciona una fuerte inhibición del crecimiento en cultivos celulares .

La Figura 8 muestra una inhibición dependiente de la dosis del crecimiento de un tumor de xenoinjerto de cáncer de ovario, como se juzga al medir el volumen del tumor, durante el tratamiento con el Compuesto I. El volumen de tumor reduce actualmente durante el tratamiento mantenido durante 30 días en animales tratados que reciben 30 mg/kg del Compuesto I, BID, mientras que el volumen del tumor es de más del doble en los animales de control no tratados durante el mismo periodo de tiempo, esto demuestra que el Compuesto I es efectivo para tratar un tumor sólido in vivo.

Similarmente, la Figura 9 muestra la eficacia del Compuesto I para tratar otro xenoinjerto de tumor sólido (A498, una linea celular de cáncer renal humano) . Como se muestra en la Figura, el .tratamiento de ratones que portan tumores A498 con el Compuesto I a 30 mg/kg BID por 20 días produce una actividad antitumor efectiva in vivo. Aunque el volumen del tumor es de aproximadamente el doble durante este tiempo en los animales .tratados, se reduce más de 5 veces en los animales no tratados. De nuevo, esto muestra que el compuesto I es efectivo para tratar un tumor sólido in vivo.

La Figura 10 muestra concentraciones en plasma del compuesto I en los ratones que portan cada uno de los xenoinjertos de tumor usados por' las Figuras 8 y 9, después de una dosis oral sencilla del compuesto I a 30 mg/kg. En este intervalo, que fue la dosificación efectiva usada en las pruebas mostradas en las Figuras 8 y 9, la concentración en plasma del compuesto I alcanza alrededor de 5000-7000 ng/mL.

La Figura 11 muestra los perfiles de concentración en plasma en el primero y último días de prueba d$ días múltiples del compuesto I en ratones saludables que reciben 60 mg/kg, 120 mg/kg, o 240 mg/kg por día. La dosis 60 mg/kg fue bien tolerada, lo que demuestra que la dosis de tratamiento (30 mg/kg BID) es tanto tolerada como efectiva en ratones.

El compuesto I también se ha probado en una batéria de ensayos de célula de tumor conocido como el panel CI. Se demuestra la inhibición del crecimiento sustancial .. de la mayoría de líneas de célula de cáncer en el panel, y fue generalmente más activa en estas líneas de célula de cáncer que el Compuesto B, que se incluyó para comparación. La siguiente Tabla muestra el GI-50 (concentración que proporciona 50% de inhibición de crecimiento, en µ?) para cada compuesto en estos ensayos' de cultivo celular.

GI-50 de Gl-50de Tipo de Tumor Línea celular Compuesto B Compuesto I (µ?) (µ?) A549 50.4 20.7 EKVX 28.2 16.7 HOP-62 39.7 14.8 Cáncer de HOP-92 34.8 0.3 pulmón de NCI-H226 100 100 célula no NCI-H23 100 100 pequeña NCI-H322M 32.2 10.5 NCI-H460 34.7 25.7 NCI-H522 52.7 51 .8 COLO 205 30.1 33.8 Cáncer de HCC-2998 53.3 32.4 colon HCT-116 54.3 37.9 HCT-15 48.4 30.3 HT29 39.1 16.5 KM 12 54.1 2 SW-620 86.4 69.3 SF-268 29.8 1 .89 SF-295 8.18 1 .81 Cáncer del SF-539 28.6 15.9 SNC SNB-19 54.8 19.3 SNB-75 2.96 0.0594 U251 70.4 59.6 LOX IMVI 31 .1 36.1 MALME-3M 31 .6 4.58 M14 58.4 88.9 SK-MEL-2 100 100 Melanoma SK-MEL-28 38.6 12.8 SK-MEL-5 32.9 31 .3 UACC-257 33.5 17.4 UACC-62 4.2 1.43 IGROV1 3.54 2.7 OVCAR-3 15.5 0.316 OVCAR-4 100 100 Ovarios OVCAR-5 40.1 27.7 OVCAR-8 96 44.6 SK-OV-3 13.8 4.02 786-0 5.48 1.99 A498 2.38 0.615 ACHN 24.4 10.7 CAKI-1 13.4 1 .01 Renal RXF 393 74.2 1 .14 SN12C 1 1 22.5 TK-10 31 .7 1 .24 UO-31 5.32 2.01 PC-3 12 0.647 Próstata DU-145 43.8 1.35 MCF7 7.08 2.54 Cáncer de ADR-RES 77.9 58.6 mama MDA-MB-231 100 100 HS 578T 6.91 2.24 MDA-MB-435 16.4 43.1 BT-549 14.3 0.538 T-47D 3.18 0.571 MDA-MB-468 13.6 Como un medio para comparar la actividad general de estos dos compuestos en diversos tipos de célula de tumor sólido, los números e las lineas celulares que tienen valores GI50 de 2 micromolares o menos se determinaron para cada compuesto; estas lineas celulares se consideraron particularmente sensibles. Usando esta medición, 1.8% de las lineas celulares fueron particularmente sensibles al Compuesto B en este nivel, aunque el 39% fueron particularmente sensibles- al Compuesto 1 en la misma concentración. ? pesar de la similitud estructura al Compuesto B, es aparente que el Compuesto I es mucho más activo en tumores sólidos que el compuesto B.

A continuación está una tabla del número de lineas celulares para cada tipo de tumor que se encontraron para tener valores GI50 de menos de 2 micromolar para el Compuesto 1.

Tipo de Tumor Número de línea celular % EC50 < 2 µ? NSCLC 1 /9. 1 1 % Colon 1/7 14% SNC 3/6 50% Melanoma 1/8 12% Ovarios 2/6 33% Próstata 2/2 100% Renal 6/8 75% Mama 5/8 62% En una modalidad particular, el cáncer es un tumor sólido tal como cáncer de pulmón (cáncer de pulmón de célula no pequeña, cáncer de pulmón de célula pequeña), cáncer de colon, cáncer del SNC, melanoma, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata' o cáncer de mama. Como indica la tabla de arriba, cánceres de mama, renal, próstata y del SNC son particularmente sensibles al compuesto I, de manera que en algunas modalidades, el método se usa para tratar un sujeto que tiene cualquiera de estos cánceres. una modalidad particular,, el cáncer no es un cáncer hematológico, por ejemplo, este no es un linfoma o leucemia mieloma múltiple. Los tumores sólidos ejemplares que pueden tratar por los métodos descritos en la presente incluyen cáncer de mama, pulmón, colon, ovarios, renal y próstata .

En una modalidad particular, un compuesto de la fórmula I se administra en una cantidad terapéuticamente efectiva, a un sujeto diagnosticado con al menos un cáncer descrito como que se puede tratar por los métodos en la presente.

La cantidad terapéuticamente efectiva puede determinarse por alguien de experiencia ordinaria con base en' la salud, edad, peso corporal, y condición del sujeto. En algunas modalidades, la cantidad se normaliza al peso corporal del sujeto. Por ejemplo, una dosificación puede expresarse cómo un número de miligramos del Compuesto I por kilogramo del peso corporal del sujeto (mg/kg) . Las dosificaciones de entre alrededor de 0.1 y 100 mg/kg a menudo son apropiadas, y en algunas modalidades una dosificación de entre 0.5 y 60 mg/kg se usa. La normalización de acuerdo al peso corporal del sujeto es particularmente útil cuando se ajustan dosificaciones entre sujetos de pesos ampliamente dispares, tal como cuando se convierte una dosificación efectiva en un perro a una dosificación apropiada para un sujeto humano.

En otras modalidades, la dosificación diaria puede describirse como una cantidad total del compuesto I administrada por dosis o por día. La dosificación diaria del compuesto I es típicamente entre alrededor de 10 mg y 1000 mg. Cuando se administra oralmente, la dosificación diaria total para un sujeto humano es típicamente entre alrededor de 50 mg y 750 mg.

En una modalidad particular, un compuesto de la fórmula I se administra a una dosis de 20-500 mg/día.

En una modalidad particular, un compuesto de la fórmula I se administra a una dosis de 50-250 mg/dia.

En una modalidad particular, un compuesto de la fórmula I se administra a una dosis de 25 hasta 150 mg por dosis, y se administran dos hasta cuatro dosis por día (por ejemplo, BID dosificado con dosis de 25 hasta 150 mg, o TID dosificado con dosis entre 25 y 150 mg, o QID dosificado con dosis entre 25 y 150 mg) . En una modalidad preferida, un sujeto se trata con dosis de 50 mg hasta 100 mg del compuesto I dos veces por día, o dosis de 50-100 mg tres veces por día, o dosis de 50-100 mg cuatro veces por día.

El tratamiento con los compuestos de la invención son frecuentemente continuos por un número de días; por ejemplo, comúnmente el tratamiento pudiera continuar por al menos 7 días, alrededor de 14 días, o alrededor de 28 días, por un ciclo de tratamiento. Los ciclos de tratamiento son bien conocidos en la guimioterapia de cáncer, y se alternan frecuentemente con periodos de descanso de 1-28 días, comúnmente 7 días o 14 días, entre ciclos.

En una modalidad particular, el método comprende administrar al paciente una dosis diaria inicial de 20-500 mg de un compuesto de la fórmula I y se incrementa la dosis por incrementos hasta que se alcanza la eficacia clínica. Pueden usarse incrementos de alrededor de 25, 50, o 100 mg para incrementar la dosis. La dosificación puede incrementarse diariamente, cada otro día, dos veces por semana, o una vez por semana.

En una modalidad- particular, este método comprende continuar tratando al paciente al administrar el compuesto de la fórmula I a una dosificación donde la eficacia clínica se alcanza por una semana o más, o reducir la dosis por incrementos hasta un nivel en el cual puede mantenerse la eficacia. La eficacia puede monitorearse por métodos convencional tales como evaluación del tamaño o extendido del tumor (metástasis) .

En una modalidad particular, el método comprende administrar al paciente una dosis diaria inicial de 20-500 mg de un compuesto de la' fórmula I y se incrementa la dosis hasta una dosificación total de 50-400 mg por día durante al menos 6 días. Opcionalmente, la dosificación puede incrementarse además hasta alrededor de 750 mg/día.

En una modalidad particular, un compuesto de la fórmula I se administra al menos dos veces al día. En algunas modalidades el compuesto se administra tres veces por día. En algunas modalidades el compuesto se administra cuatro veces por día, o más de cuatro veces por día.

En una modalidad particular, el método comprende reducir el nivel de actividad ?13?ß en el paciente.

En una modalidad particular, el sujeto es un sujeto humano. Típicamente el sujeto es un humano diagnosticado como que tiene un cáncer descrito en la presente como que se puede tratar por el Compuesto I.

En una modalidad particular, el Compuesto se administra a una relación seleccionada para producir una concentración del compuesto en la sangre entre alrededor de 40 ng/mL y 3,000 ng/mL, y mantener tal concentración durante un periodo de 4-12 hora después de la administración. En otra modalidad particular, el tamaño y frecuencia de dosis son seleccionados para alcanzar una concentración del compuesto en la sangre que es entre 75-2,000 ng/mL y mantener tal concentración durante un periodo de 4-12 horas desde el tiempo de administración. En algunas modalidades, el tamaño y frecuencia de dosis son seleccionados para alcanzar una concentración del compuesto en la sangre que es entre 100-1,000 ng/mL después de la administración. En algunas modalidades, el tamaño y frecuencia de dosis son seleccionados para alcanzar una concentración del compuesto en la sangre que es entre 100-500 ng/mL durante un periodo de 12 horas desde el tiempo de administración. De forma deseable, el tamaño y frecuencia de dosis son seleccionados para alcanzar un Cmax, nivel en plasma del compuesto I que es al menos alrededor de 500 ng/mL y no excede alrededor de 10,000 ng/mL.

En ciertas modalidades, el Compuesto I se administra oralmente, intravenosamente, transdérmicamente, o por inhalación. Preferiblemente, el Compuesto se administra oralmente. En algunas modalidades, se administra oralmente en una dosis de alrededor de 25 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 75 mg, o 100 mg, 125 mg, 150 mg, o 200 mg por dosis, y la dosis puede administrarse a una frecuencia de una vez por día, dos veces por día, tres veces por día, o cuatro veces por día.

En una modalidad particular, el método comprende administrar además a un compuesto de la fórmula I al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un agente terapéutico adicional y/o un procedimiento terapéutico seleccionado para tratar el cáncer o enfermedad autoinmunitaria en el paciente.

En una modalidad particular, el agente terapéutico es seleccionado del siguiente grupo que consiste de Docetaxel, Mitoxantrona , Prednisona, Estramustina , Antracicünas , (doxorubicina (Adriamicina) , epirubicina (Ellence) , y doxorubicina liposomal (Doxil)), Taxanos (docetaxel (Taxotero) , paclitaxel (Taxol) , y paclitaxel enlazado a la proteína (Abraxane) ) , Ciclofosfamida (Citoxan) , Capecitabina (Xeloda) y 5 fluorouracilo (5 FU), Gemcitabina (Gémzar) , metotrexato, Vinorelbina (Navelbina) , un inhibidor EGFR tal como erlotinib, Trastuzumab (Herceptina, este fármaco sólo es de uso en mujeres cuyos cánceres de mama tienen el gen HER-2), Avastina, Platinas (cisplatina, carboplatina) , Temazolamida, Interferon alfa, e IL-2.

En una modalidad particular, el agente terapéutico es seleccionado del grupo que consiste de un inhibidor EGFR, un inhibidor mTOR, y un taxano.

En una modalidad particular, el procedimiento terapéutico es seleccionado del grupo que consiste de trasplante de mastocitos de sangre periférica, trasplante de mastocitos hematopoyéticos autólogos, trasplante de médula ósea autóloga, terapia de anticuerpo, terapia biológica, terapia de inhibidor de enzima, radiación corporal total, infusión de mastocitos, ablación de médula ósea con soporte de mastocitos, trasplante' de mastocitos de sangre periférica tratados in vitro, trasplante de sangre del cordón umbilical, técnica de inmunoenzima , método de teñido inmunohistoqüimico, estudio farmacológico, terapia de rayos gamma de cobalto 60 de bajo LET, bleomicina, cirugía convencional, terapia de radiación, quimioterapia de alta dosis y trasplante de mastocitos hematopoyéticos alogénicos no mieloablativos .

En una modalidad particular, el método comprenden además obtener una muestra biológica del paciente; y analizar la muestra biológica con un procedimiento analítico seleccionado del grupo que consiste de análisis de química sanguínea, análisis de transubicación cromosomal, biopsia de aguja, hibridación in situ fluorescente, análisis de biomarcador de laboratorio, método de teñido inmunohistoquímico, citometría de flujo o una combinación de los mismos. El análisis proporciona información acerca del progreso del tumor o del tratamiento, y es útil para determinar las dosificaciones a administrarse, para ajustar dosificaciones durante el, ciclo de tratamiento, y para decidir si se continúan o descontinúan los tratamientos de la invención.

En ciertas modalidades, el Compuesto ópticamente activo usado los métodos descritos en la presente se enriquece con el enantiómero S mostrado aquí, y preferiblemente este es al menos 90% enantiómero S, que contiene no más de alrededor de 10% del isómero R enantiomérico : HN N. (enantiómero S) NH En algunas modalidades, el Compuesto de la fórmula I usado en los métodos descritos en la presente es al meilos 80% el enantiómero S, que contiene menos de 20% de este isómero R enantiomérico . En algunas modalidades el compuesto tiene un exceso enantiomérico (e.e.) de al menos 90% o al menos 95% que favorece el isómero S.

En ciertas modalidades, el Compuesto está compuesto primariamente del enantiómero S, en donde este isómero comprende al menos 66-95%, o alrededor de 85-99% del isómero S, en exceso sobre cualquier enantiómero R presente. En ciertas modalidades, el Compuesto comprende al menos 95% del enantiómero S. En los experimentos de paciente y celulares proporcionados en la sección de Ejemplos, la muestra del compuesto I usada fue arriba del 99% el enantiómero S, con menos de 1% del enantiómero R.

El término "inhibidor PI3K5 selectivo" o "inhibidor ??3 ß selectivo", etc., como se usa en la presente, se refiere .al compuesto que .inhibe la isozima PI3K5 o ??3?ß, respectivamente, más efectivamente que al menos otra isozima de la familia PI3K. El inhibidor selectivo también puede inhibir otras isozimas de PI3K, pero requiere concentraciones más altas para alcanzar el mismo grado de inhibición de las otras isozimas. "Selectivo" también puede usarse para describir el compuesto que inhibe una cinasa PI3 particular más que un compuesto comparable. Un compuesto "inhibidor PI3K5 selectivo" se entiende que es más selectivo para PI3K5 que los compuestos convencionalmente y genéricamente designados inhibidores' PI3K, por ejemplo, wortmanina o LY294002, que se consideran inhibidores PI3K no selectivos.

"Tratar" como se usa en la presente se refiere a inhibir un trastorno, es decir, detener su desarrollo; aliviar el trastorno, es decir, causar su regresión; o aminorar el trastorno, es decir, reducir la severidad de al menos uno de los síntomas asociados con el trastorno. En algunas modalidades, "tratar" se refiere a prevenir que un trastorno ocurra en un animal que puede estar predispuesto al trastorno, pero que aún no se ha diagnosticado como que lo tiene. "Trastorno" sé pretende que abarque trastornos médicos, enfermedades, afecciones, síndromes, y similares sin limitación .

En ciertas modalidades, la invención proporciona métodos para tratar un tumor sólido, típicamente un carcinoma no hematopoyético . En algunas modalidades, el cáncer es un tumor sólido seleccionado de cáncer pancreático; cáncer de vejiga; cáncer colorrectal; cáncer de mama; cáncer de próstata; cáncer renal; cáncer hepatocelular; cáncer de pulmón; cáncer de ovario; cáncer cervical; cáncer gástrico; cáncer del esófago; cáncer de cabeza y cuello; melanoma; cánceres neuroendocrinos ; cánceres del SNC; tumores cerebrales; cáncer óseo; y sarcoma de tejido suave. En algunas modalidades este es cáncer de pulmón (cáncer de pulmón de célula no pequeña, cáncer de pulmón de célula pequeña) , cáncer de colon, cáncer del SNC, melanoma, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata o cáncer de mama. En algunas modalidades, el cáncer es cáncer de mama, pulmón, colon, renal, ovarios, o próstata.

En ciertas modalidades, la invención proporciona métodos para tratar un tumor sólido que está asociado con actividad de señalización celular anormal o indeseable mediada por ??3?ß. En ciertas modalidades, el tumor sólido es seleccionado del grupo que consiste de cáncer pancreático; cáncer de vejiga; cáncer colorrectal ; cáncer de mama, incluyendo cáncer de mama metastático; cáncer de próstata, incluyendo cáncer de próstata dependiente del andrógeno e independiente del andrógeno; cáncer renal, incluyendo, por ejemplo, carcinoma de célula renal metastática; cáncer hepatocelular ; cáncer de pulmón, incluyendo, por ejemplo, cáncer de pulmón de célula · no pequeña (NSCLC) , carcinoma bronquioloalveolar (BAC) , y adenocarcinoma del pulmón; cáncer de ovario, incluyendo, por . ejemplo, cáncer peritoneal epitelial o primario progresivo; cáncer cervical; cáncer gástrico; cáncer del esófago; cáncer de cabeza y cuello, incluyendo, por ejemplo, carcinoma de célula escamosa' de la cabeza y cuello; melanoma; cáncer neuroendocrino, incluyendo tumores neuroendocrinos metastáticos ; tumores cerebrales, incluyendo, por ejemplo, glioma, oligodendroglioma anaplástico, glioblastoma multiforme de adulto, y astrocitoma anaplástico de adulto; cáncer óseo; y sarcoma de tejido suave .

En una modalidad, el cáncer a tratarse con los métodos descritos en la presente es un tumor sólido que exhibe una pérdida funcional de actividad PTEN (fosfatasa y homólogo de tensina, la fosfatasa que actúa como un supresor de tumor) . La pérdida de actividad PTEN a menudo ocurre en cánceres, y aumenta la sensibilidad de un tumor a inhibidores PÍ3K. El panel NCI contiene un número de líneas celulares conocidas por tener mutaciones en PTEN, y 70% de aquellas líneas celulares se inhibieron por el Compuesto I, y dos de aquellas que no fueron sensibles al Compuesto I prueban que no tienen pérdida funcional de actividad PTEN. La siguiente tabla resume las líneas celulares encontradas para ser sensibles al Compuesto I y las mutaciones conocidas en aquellas líneas celulares. De estas mutaciones, sólo PTEN se encontró que se correlaciona significativamente con la eficacia del Compuesto I (p < 0.036) .

Tipo de Tumor CD N2 ???53 PTEN 1 PI3k'CA BftA F I 1 KAS SMAD4 BRCA 1 l-lrtp-02 \ \ i 1 .

K I 2 X X í ' X SF-26S X X SI--295 — X X SNB-75 X I UACC-62 X x 1 X 1G OV- 1 X x 1 OVCAR-3 - --—— X i 786-0 X X X¦ ! ?498 X ! , ! —„.— C.VKI-l X l XF-393 X X X TK-10 X UO-3 1 X PC-3 X X l )tJ-145(R»n X X -————· MCF7 X E545 HS-578T X X BT-545) (HBi) X 47D X H 1047U 50% 75% 35% 10% 5% 5% 5% 10% En consecuencia, los tumores sólidos con actividad de fosfatasa PTEN significativamente reducida son particularmente apropiados, para tratamiento con el compuesto I. El Instituto Wellcome Trust Sanger recientemente ha publicado información en la incidencia de mutaciones PTEN en tejidos de tumor primarios, que indica que los tumores de mama, SNC, cérvico, endometrial , riñon, ovarios, próstata, piel,, testículos, y tracto urinario frecuentemente incluyen mutaciones PTEN. En consecuencia, en algunas modalidades, los métodos de la invención se usan para tratar un sujeto que padece de uno o más de estos cánceres particulares, o un cáncer deficiente en PTEN seleccionado tumores de mama, SNC, cérvico, endometrial, riñon, ovarios, próstata, piel, testículos, y tracto urinario.

En ciertas modalidades, el método descrito en la presente es útil en fosforilación Akt mediada por células objetivo, debido a que el compuesto I inhibe la fosforilación Akt como se ilustra en la Figura 4.

Para el tratamiento de un tumor sólido, es ventajoso que el Compuesto de la fórmula I exhiba buena actividad contra ????ß, ya que los tumores sólidos a menudo utilizan esta isozima en vez de o más de ????d. De esta manera en algunas modalidades, el tumor sólido es uno que expresa ????ß a un nivel más alto que su nivel de expresión de ????d. En algunas modalidades, el tumor sólido es uno con un nivel inferior de actividad ????d, tal cómo uno que expresa menos de alrededor de 20% tanto de ????d como de ????ß.

En algunas modalidades, el sujeto para los tratamientos descritos en la presente es uno quien se ha diagnosticado con al menos uno de los cánceres descritos en la presente como que se puede tratar por el uso de un compuesto de la fórmula I . En algunas modalidades, el sujeto se ha diagnosticado con un cáncer nombrado en la presente, y ha probado ser refractario al tratamiento con al menos un agente quimioterapéutico convencional. De esta manera en una modalidad, los tratamientos de la invención se dirigen a pacientes quienes han recibido uno o más de tal tratamiento y mantienen en necesidad de tratamiento más efectivo.

En una modalidad, el método descrito en la presente comprende administrar a un sujeto un compuesto de la fórmula I descrito en la presente, en combinación con una terapia usada para tratar cáncer. La "terapia" usada para tratar cáncer, como se usa en la presente, es cualquier forma experimental o bien conocida de tratamiento usada para tratar cáncer que no incluye el uso de un compuesto de la fórmula I . En ciertas modalidades, la combinación de un compuesto de la fórmula I con una terapia convencional o experimental usada para tratar cáncer proporciona resultados de tratamiento benéficos y/o deseables superiores a los resultados obtenidos por el tratamiento sin la combinación. En ciertas modalidades, las terapias usadas para tratar cáncer son bien conocidas para una persona que tiene habilidad ordinaria en la técnica y se describen en la literatura. Las térapias incluyen, pero no se limitan a, quimioterapia, combinaciones de quimioterapia, terapias biológicas, inmunoterapia, radioinmunoterapia , y el uso de anticuerpos monoclonales , y vacunas. En ciertas modalidades, el método de combinación que proporciona un compuesto de la fórmula I se administra simultáneamente o durante el periodo de administración de la terapia. En ciertas modalidades, el método de combinación que proporciona un compuesto de la fórmula I se administra antes de o después de la administración de la terapia. Los detalles exactos con respecto a la administración de la combinación pueden determinarse experimentalmente . El refinamientó de la secuencia y la coordinación de la administración del compuesto de la fórmula I con una terapia seleccionada se confeccionará al sujeto individual, la naturaleza de la afección a tratarse en el sujeto, y generalmente, el juicio del practicante que atiende.

Los agentes terapéuticos adicionales para combinaciones con el Compuesto I incluyen aquellos usados rutinariamente en el tratamiento de tumores sólidos, particularmente Doc$taxel, Mitoxantrona , Prednisona, Estramustina , Antraciclinas , (doxorubicina (Adriamicina ) , epirubicina (Ellence) , y doxorubicina liposomal (Doxil)), Taxanos (docetaxel (Taxotero) , paclitaxel (Taxol) , y paclitaxel enlazado a la proteina (Abraxane)), Ciclofosfamida (Citoxan) , Capecitabina (Xeloda) y 5 fluorouracil (5 FU), Gemcitabina (Gemzar) , metotrexato, Vinorelbina (Navelbina) , un inhibidor EGFR tal como erlotinib, Trastuzumab (Herceptina, este fármaco es sólo de uso en mujeres cuyos cánceres de mama tienen el gen HER-2), Avastina, Platinas (c.isplatina , carboplatina) , Temazolamida, Inferieron alfa, e IL-2.

En ciertas modalidades, el método comprende administrar al paciente, además de una cantidad efectiva del compuesto I, al menos un agente terapéutico y/o procedimiento terapéutico seleccionado para tratar el cáncer en el paciente. En ciertas modalidades, el método comprende administrar además del compuesto de I al paciente, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente terapéutico adicional seleccionado de Docetaxel, Mitoxantrona, Prednisona, Estramustina , Antraciclinas , (doxorubicina (Adriamicina ) , epirubicina (Ellence) , y doxorubicina liposomal (Doxil)), Taxanos (docetaxel (Taxotere), paclitaxel (Taxol), y paclitaxel enlazado a la proteína (Abraxane) ) , Ciclofosfamida (Citoxan) , Capecitabina (Xeloda) y 5 fluorouracil (5 FU) , Gemcitabina (Gemzar) , metotrexato, Vinorelbina (Navelbina) , un inhibidor EGFR tal como erlotinib, Trastuzumab (Herceptina, este fármaco es sólo de uso en mujeres cuyos cánceres de mama tienen el gen HER-2), Avastina, Platinas (cisplatina, carboplatina ) , Temazolamida, Interferon alfa, e IL-2.

Los compuestos de la invención pueden formularse para administración a un sujeto animal usando técnicas de formulación comúnmente entendidas bien conocidas en el arte. Las formulaciones que son apropiadas para modos particulares de administración y para los compuestos de la fórmula I puede encontrarse en Remington' s Pharmaceutical Sciences, última edición, Mack Publishing Company, Easton, PA.

El compuesto de la presente invención puede administrarse como el químico puro, pero es preferible típicamente administrar el .compuesto en la forma de una composición farmacéutica o formulación. En consecuencia, la presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula I y un portador, adyuvante, o vehículo farmacéutico biocompatible . La composición puede incluir el agente Como la única porción activa o en combinación con otros agentes, tal como oligo- o polinucleótidos , oligo- o polipéptidos , fármacos, u hormonas mezcladas con excipientes u otros portadores farmacéuticamente aceptables. Los portadores y otros ingredientes pueden juzgarse farmacéuticamente aceptables en la medida en que son compatibles con otros ingredientes de la formulación y no perjudiciales para el receptor de los mismos.

Las composiciones farmacéuticas se formulan para contener portadores farmacéuticamente aceptables apropiados, y pueden opcionalmente comprender excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden usarse farmacéuticamente. La modalidad de administración generalmente determinará la naturaleza del portador. Por ejemplo, las formulaciones para administración parenteral pueden comprender soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Los portadores apropiados para administración parenteral pueden seleccionarse de entre solución salina, solución salina amortiguada, dextrosa, agua, y otras soluciones fisiológicamente compatibles. Los portadores preferidos para administración parenteral son soluciones amortiguadoras fisiológicamente compatibles tales como solución de .Hank, solución de Ringer, o solución salina fisiológicamente amortiguada. Para administración al tejido o parenteral, lo penetrantes apropiados para la barrera particular a permearse se usan en la formulación. Tales penetrantes son generalmente conocidos en el arte: Para preparaciones que comprenden proteínas, la formulación puede incluir materiales estabilizantes, tales como polioles (por ejemplo, sacarosa) y/o tensoactivos (por ejemplo, tensoactivos no iónicos) , y similares.

Alternativamente, las formulaciones para uso parenteral pueden comprender dispersiones o suspensiones de los compuestos activos preparados como suspensiones de inyección aceitosa apropiadas. Los. solventes o vehículos lipofílicos apropiados incluyen aceites grasos, tales como aceite de ajonjolí, y ésteres de ácido graso sintéticos, tal como oleato de etilo o triglicéridos ,· o liposomas. Las suspensiones de inyección acuosas pueden contener sustancias que incrementan la viscosidad de la suspensión, tal como carboxi-metilcelulosa de sodio, sorbitol, o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizantes apropiados o agentes que incrementan la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas. Los polímeros acuosos que proporcionan solubilización sensible al pH y/o liberación sostenida del agente activo pueden también usarse como recubrimiento o estructuras de matriz, por ejemplo, poliméricos metacrílieos , · tal como la serie EUDRAGIT™ disponible de Rohm America Inc. (Piscataway, N.J.). Las emulsiones, por ejemplo, dispersiones aceite en agua y agua en aceite, también pueden usarse, estabilizando opcionalmente por un agente emulsif.icante o dispersante (materiales de superficie activa; tensoactivos ) . Las suspensiones pueden contener agentes de suspensión tales como alcoholes isostearílieos etoxilados, polioxietilen sorbitol y esteres de sorbitan, celulosa microcristalina , metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar, goma de tragacanto, y mezclas de los mismos.

Las liposomas que contiene el agente activo · también pueden emplearse para administración parenteral. Las liposomas generalmente se derivan de fosfolipidos u otras sustancias de lipido. Las composiciones en forma de liposoma también pueden contener otros ' ingredientes, tales como estabilizantes, conservadores, excipientes, y similares. Los lipidos preferidos incluyen fosfolipidos y fosfatidil colinas (lecitinas), tanto naturales como sintéticas. Los métodos para formar liposomas se conocen en la técnica. Ver, por ejemplo, Prescott (Ed. ) , METHODS IN CELL BIOLOGY, Vol. XIV, p. 33, Academic Press, New York (1976).

Las composiciones farmacéuticas que comprenden el agente en dosificaciones apropiadas para administración oral pueden formularse usando portadores farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica. Las prepa aciones formuladas para administración oral pueden estar en forma de comprimidos, pildoras, cápsulas, saquitos, grageas, pastillas para chupar, líquidos, geles, jarabes, mezclas espesas, elíxires, suspensiones, o polvos. Para ilustrar, las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden obtenerse al combinar los compuestos activos con un excipiente sólido, moliendo opcionalmente la mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, después agregar auxiliares apropiados si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Las formulaciones orales pueden emplear portadores líquidos similares en tipo a aquellos descritos para uso parenteral, por ejemplo, soluciones acuosas amortiguadoras, suspensiones, y similares.

Las formulaciones orales preferidas incluyen comprimidos, grageas, y cápsulas de gelatina. Estas preparaciones pueden contener ' uno o excipientes, que incluyen, sin limitación: a) diluyentes, tal como azucares, incluyendo lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, o sorbitol; b) aglutinantes, tal como silicato de magnesio aluminio, almidón de maíz, trigo, . arroz , papa, etc.; •c) materiales de celulosa, tal como metilcelulosa, hidroxipropilmetil celulosa, y carboximetilcelulosa de sodio, polivinilpirrolidona , gomas, tal como goma arábica y goma de tragacanto, y proteínas, tal como gelatina y colágeno; d) agentes desintegrantes o solubilizantes tal como polivinil pirrolidona reticulada, almidones, agar, ácido algínico o una sal de los mismos, tal como alginato de sodio, o composiciones efervescentes; e) lubricantes, tal como sílice, talco, ácido esteárico o su sal de magnesio o calcio, y polietilen glicol; f) aromatizantes y edulcorantes; g) colorantes o pigmentos, por ejemplo, para identificar el producto o para caracterizar la cantidad (dosificación) de compuesto activo; y h) otros ingredientes, tal como conservadores, estabilizadores, agentes expansores, agentes emulsifi antes, promotores de solución, sales para regular la presión osmótica, y soluciones amortiguadoras.

En algunas formulaciones orales preferidas, la composición farmacéutica comprende al menos uno de los materiales del grupo (a) de arriba, o al menos un material del grupo (b) de arriba, o. al menos un material del grupo (c) de arriba, o al menos un material del grupo (d) de arriba, o al menos un material del grupo (e) de arriba. Preferiblemente, la composición comprende al menos un material de cada uno de dos grupos seleccionados de grupos ( a ) - ( e ) de arriba .

Las cápsulas de gelatina incluyen cápsulas de ajuste a presión hechas de gelatina, asi como cápsulas suaves, selladas hechas de gelatina y un recubrimiento tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste a presión pueden contener los ingredientes activos mezclados con rellenadores , aglutinantes, lubricantes, y/o estabilizadores, etc. En las cápsulas suaves, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en fluidos adecuados, tal como aceites grasos, parafina liquida, o polietilen glicol liquido con o sin estabilizadores.

Los núcleos de las grageas pueden proporcionarse con recubrimientos adecuados . tal como soluciones de azúcar concentrada, que también pueden contener goma arábica, talco, polivinil pirrolidona, ' gel de carbopol, polietilen glicol, y/o dióxido de titanio, soluciones de laca, y solventes orgánicos adecuados o mezclas de solventes.

La composición farmacéutica puede proporcionarse como una sal del agente activo. Las sales tienden a ser más solubles en solventes acuosos u otros solventes protónicos que las formas de base o ácido libres correspondientes. Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en la técnica. Los compuestos que contienen porciones ácidas pueden formar sales farmacéuticamente aceptables con cationes adecuados. Los cationes farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen, por ejemplo, cationes metal alcalino (por ejemplo, sodio o potasio) y alcalinotérreo (por ejemplo, calcio o magnesio) .

Los compuestos de la fórmula estructural (I) que contienen porciones básicas pueden formar sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables con ácidos adecuados. Por ejemplo, Berge, efc al., describe sales farmacéuticamente aceptables en detalle en . J. Pharm. Sci . , 66:1 (1977). Las sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento y purificación final de 'los compuestos de la invención o de forma separada al hacer reaccionar una función base libre con un ácido adecuado.

Las sales de adición ácida representativas incluyen, pero no se limitan a, acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforolsulfonato, digluconato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietansulfonato ( isotionato) , lactato, maleato, metansulfonato o sulfato, nicotinato, 2-naftalensulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, fosfato o fosfato de hidrógeno, glutamato, bicarbonato, p-toluensulfonato, y undecanoato. Los ejemplos de ácidos que pueden emplearse para formar sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables incluyen, sin limitación, tales ácidos inorgánicos como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, y ácido' fosfórico, y tales ácidos orgánicos como ácido oxálico, ácido maleico, ácido succínico, y ácido cítrico.

Los grupos que contienen nitrógeno básico pueden cuaternizarse con tales agentes como haluros de alquilo inferior tal como cloruros, bromuro y yoduros de metilo, etilo, propilo, y butilo; sulfato de dialquilo tipo sulfatos dimetilo, dietilo, dibutilo, y diamilo; haluros de alquilo de cadena larga tal como cloruros, bromuros, y yoduros de decilo,. laurilo, miristilo, y estearilo; halurós de arilalquilo tal como bromuros de bencilo y fenetilo; y otros. Los productos que tienen solubilidad o dispersabilidad modificada por ello se obtienen.

Las composiciones que comprende un compuesto de la invención formulado en un portador farmacéuticamente aceptable pueden . prepararse, colocarse en un recipiente apropiado, y etiquetarse para tratamiento de una afección indicada. En consecuencia, también se contempla un articulo de fabricación, tal como un recipiente que comprende una forma de dosificación de un compuesto de la invención y una etiqueta que contiene instrucciones para uso del compuesto. Los kits también se contemplan bajo la invención. Por ejemplo, el kit puede comprender una forma de dosificación de una composición farmacéutica y un inserto de paquete que contiene instrucciones para uso de la composición en el tratamiento de una afección medica. En cualquier casó, las afecciones indicadas en la etiqueta pueden incluir tratamiento de trastornos inflamatorios, cáncer, etc.

Métodos de Administración Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula I pueden administrarse al sujeto por cualquier método convencional, incluyendo técnicas parenterales y entéricas. Las modalidades de administración parenteral incluyen aquellas en las cuales la composición se administra por una ruta diferente a través del tracto gastrointestinal, por ejemplo, inyección intravenosa, intraarterial, intraperitoneal , intramedularmente, intramuscular, intraarticular, intratecal, e intraventricular . Las modalidades de administración entérica incluyen, por ejemplo, administración oral (incluyendo bucal y sublingual) y rectal'. Las modalidades de administración transepitelial incluyen, por ejemplo, administración transmucosal y administración transdérmica . La administración transmucosal incluye, por ejemplo, administración entérica asi como administración nasal, inhalación, y de pulmón profunda; administración vaginal; y administración rectal. La administración transdérmica incluye modalidades transdérmicas o transcutáneas pasivas o activas, incluyendo, por ejemplo, parches y dispositivos iontoforesis , asi como aplicación tópica de pastas, bálsamos, o ungüentos. La administración parenteral también puede realizarse usando una técnica de presión alta, por ejemplo, PO DERJECT™.

Las técnicas quirúrgicas incluyen implantación de composiciones de depósito ( reservorio) , bombas osmóticas, y similares. Una ruta preferida de administración para tratamiento de inflamación puede ser suministro local O tópico para trastornos localizados tal como artritis, o suministro sistémico para trastornos distribuidos, por ejemplo, suministro intravenoso para lesión por reperfusión o para afecciones sistémicas tal como septicemia. Para otras enfermedades, incluyendo aquellas que involucran el ' tracto respiratorio, por ejemplo, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, y enfisema, la administración puede realizarse por inhalación o administración pulmonar profunda de rocíos, aerosoles, polvos, y similares.

El compuesto de la fórmula T puede administrarse antes, durante, o después de la administración de quimioterapia, radioterapia, y/o cirugía. La formulación y vía de administración elegida se confeccionará para el sujeto individual, la naturaleza de la afección a tratarse en el sujeto, y generalmente, el juicio del médico que atiende.

El índice terapéutico del compuesto de la fórmula I puede potenciarse al modificar o derivar los compuestos para suministro dirigido a células de cáncer que expresan un marcador que .identifica las células como tales. Por ejemplo, los compuestos pueden ligarse a un anticuerpo que reconoce un marcador que es selectivo o específico para células de cáncer, de manera que los compuestos son atraen en la vecindad de las células para ejercer sus efectos localmente, como se describe previamente (Ver por ejemplo, Pietersz, et al., Immunol. Rev.,. 129:57 (1992); Trail et al., Science, 261:212 (1993); y Rowlinson-Busza, et al., Curr, Opin. Oncol . , 4: 1142 ' (1992) ) . El suministro dirigido al tumor de estos compuestos potencia el beneficio terapéutico por, inter alia, minimizando las toxicidades no especificas potenciales que pueden resultar de tratamiento por radiación o quimioterapia. En otro aspecto, el compuesto de la fórmula I y radioisótopos o agentes quimioterapéuticos pueden conjugarse al mismo anticuerpo anti-tumor.

Las características del agente por sí mismo y la formulación del agente pueden influir en el estado físico, estabilidad, velocidad de liberación in vivo, y velocidad de depuración in vivo del agente administrado. Tal información farmacocinética y farmacodinámica puede recolectarse a través de estudios in vitro e in vivo preclínicos, después confirmado en humanos durante el curso de los ensayos clínicos. De esta manera, para Cualquier compuesto usado en el método de la invención, una dosis terapéuticamente efectiva puede estimarse inicialmente de ensayos basados en células y/o bioquímicos.

La toxicidad y eficacia terapéutica de tales compuestos puede determinarse . por procedimientos farmacéuticos estándares en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar el LD5o (la dosis letal hasta 50% de la población) y el ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en- 50% de la población) '. La relación de dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el "índice terapéutico," que típicamente se expresa como la relación LD50/ED50. Los compuestos que muestran índices terapéuticos grandés, es decir, la dosis tóxica es sustancialmente superior que la dosis efectiva, se prefieren.. Los datos obtenidos de tales ensayos de cultivo celular y estudios de animal adicionales pueden usarse al formular un intervalo de dosificación para uso humano. La dosificación de tales compuestos está preferiblemente dentro de un intervalo de concentraciones circulantes que incluyen el ED50 con poco o sin toxicidad.

Para los métodos de la invención, cualquier régimen de administración efectivo que regula el tiempo y secuencia de dosis puede usarse. Las dosis del agente preferiblemente incluyen unidades de dosificación farmacéuticas que comprenden una cantidad efectiva del agente. Como se usa en la presente, "cantidad efectiva" se refiere a una cantidad suficiente para modular la expresión o actividad PI3Kbeta y/o derivar un cambio medible en el parámetro fisiológico del sujeto a través de la administración de una o más de las unidades de dosificación farmacéuticas. "Cantidad efectiva" también puede referirse a la cantidad requerida para aliviar una enfermedad o trastorno en un sujeto.

Los intervalos de dosificación adecuados para los compuestos de la fórmula I varían de acuerdo a estas consideraciones, pero en general, los compuestos se administran en el intervalo de 10.0 g/kg-15 mg/kg de peso corporal; 1.0 pg/kg-10 mg/kg de peso corporal, c 0.5 mg/kg-5 mg/kg de peso corporal. Para un sujeto humano de 70 kg típico, de esta manera, el intervalo de dosificación es desde 700 pg-1050 mg; 70 g-700 mg; o 35mg-350 mg por dosis, y dos o más dosis pueden administrarse por día. Las dosificaciones pueden ser superiores cuando los compuestos se administran oralmente o transdérmicamente como se compara con, por ejemplo, administración i.v. En ciertas modalidades, el tratamiento de cánceres comprende administración oral de hasta 750 mg/día del compuesto I. La toxicidad reducida de este compuesto permite la administración terapéutica de dosis relativamente altas. Para tratamiento de muchos tumores sólidos, una dosificación de alrededor de 50-100 mg por dosis, administrado oralmente una vez o preferiblemente al menos dos veces por día, a menudo es adecuado. En algunas modalidades, el compuesto I se administra oralmente, en tres hasta cinco dosis por día, usando 20-150 mg por dosis para una dosis diaria total entre alrededor de 60 y 750 mg. En algunas modalidades , . la dosis diaria total es entre 100 y 500 mg, y en algunas modalidades la dosificación diaria normalizada (ajustada para peso corporal del sujeto) es hasta alrededor de 60 mg por kg del peso corporal del sujeto tratado .

Los compuestos pueden administrarse como una dosis de bolo sencilla, una dosis con el paso del tiempo, como en administración i.v. o. transdérmica, o en dosificaciones múltiples. Para suministro IV o transdérmico, una dosificación puede suministrarse durante un periodo de tiempo prolongado, y puede ser seleccionado o ajustado para producir un nivel de plasma deseado del compuesto activo. En algunas modalidades, el nivel deseado será al menos alrededor de 1 micromolar, o al menos alrededor de 10 micromolares .

Cuando el compuesto se administra oralmente, e$te se administra preferiblemente en dos o más dosis por día. En algunas modalidades, tres dosis por día se administran. En algunas modalidades cuatro dosis por día se administran.

La dosificación puede continuarse durante un día o por días múltiples, tal como alrededor de 7 días. En algunas modalidades, la dosificación diaria se continua por alrededor de 14 días o alrededor de 28 días. En algunas modalidades, la dosificación se continua por alrededor de 28 días y luego se descontinúa por alrededor de 7 días; la eficacia del tratamiento puede evaluarse durante la interrupción, cuando el tratamiento con el compuesto I se ha detenido, y si la evaluación muestra que el tratamiento alcanza una efecto deseado, otro ciclo de 7-28 días de tratamiento con el compuesto I puede iniciarse.

Dependiendo de la vía de administración, una dosis adecuada puede calcularse de acuerdo al peso corporal, área de superficie corporal, o tamaño del órgano. El régimen de dosificación final se determinará por el médico que atiende en vista de la buena práctica médica, considerando varios factores que modifican la acción de fármacos, por ejemplo, la actividad especifica del agente, la identidad y severidad del estado de enfermedad, la sensibilidad del paciente, la edad, afección, peso corporal, sexo, y dieta del paciente, y la severidad de cualquier infección. Los factores adicionales que pueden tomarse en cuenta incluyen tiempo y frecuencia de administración, combinaciones de fármaco, sensibilidades de reacción, y tolerancia/respuesta a la terapia. El refinamiento adicional de la dosificación apropiada para tratamiento que involucra cualquiera de las formulaciones mencionadas en la presente se hace de forma rutinaria por el médico experimentado sin experimentación indebida, especialmente en luz de la información de dosificación y ensayos descritos, asi como los datos farmacocinéticos observados en ensayos clínicos humanos. Las dosificaciones apropiadas pueden establecerse a través del uso de ensayos establecidos para determinar la concentración del agente en un fluido corporal u otra muestra junto con los datos de respuesta de dosis.

La frecuencia de dosificación dependerá de los parámetros farmacocinéticos del agente y la vía de administración. La dosificación y administración se ajustan para proporcionar niveles suficientes de la porción activa o para mantener el efecto deseado. En consecuencia, las composiciones farmacéuticas pueden administrarse en una dosis sencilla, dosis discretas múltiples, infusión continua, depósitos de liberación sostenida, o combinaciones de los mismos, como se requiera para mantener el nivel ' mínimo deseado del agente. Las composiciones farmacéuticas de acción corta (es decir, vida media corta) pueden administrarse una vez al día o más de una vez al día (por ejemplo, dos, tres, o cuatro veces al día).. Las composiciones farmacéuticas de acción larga pueden administrarse cada 3 hasta 4 días, cada semana, o una vez cada dos semanas. Las bombas, tal como bombas subcutáneas, intraperitoneales , o subdurales, pueden preferirse para infusión continua.

Los sujetos que responderán favorablemente al método de la invención incluyen sujetos médicos y veterinarios generalmente, incluyendo pacientes humanos. Entre, otros sujetos para quienes los métodos de la invención es útil son gatos, perros, animales grandes, aves tal como pollos, y similares. En general, cualquier sujeto que debe beneficiarse de un compuesto de la fórmula I es apropiado para administración del. método de la invención.

Los datos biológicos descritos en la presente se produjeron usando una muestra del compuesto I que contiene menos de 1% del isómero R y >99% del enantiómero s, como se determinar por HPLC quiral usando una columna Chiralcel OD-H de 4.6 x 250 mm operada a 40°C, usando una velocidad de flujo de 1 mL/min de 90:10 hexanos/etanol . Este material se preparó como se resume en la Figura 9. El material se caracterizó por HPLC para ser más de 99% puro (de acuerdo a tanto detección UV 214 nm como 254 nm) , y también se caracterizó por rmn . y espectroscopia de masa por electrorocio . Fue un polvo blanco.

O (enantiómero S) El material usado en los Ejemplos tiene las siguientes características : Prueba Resultado de la prueba Apariencia Polvo blanco iH-RMN Consistente con la estructura Ensayo HPLC 99+ % Pureza quiral (HPLC) 99.2 %ee (relación 99.6:0.4 de isómeros S:R) Ejemplo 1 Ensayo de Transformación de Fibroblasto de Embrión de Pollito Se transdujeron fibroblastos de embrión de pollito (CEF, por sus siglas en inglés) con reservas víricas con versiones de los genes humanos para las isoformas PI3K individuales pllOa, ????ß, ????d y ?????. Estas líneas CEF translúcidas luego se colocaron en placas en un medio de crecimiento donde las células oncogénicamente transformadas forman el enfoque que luego puede teñirse' y contarse. El compuesto 1 inhibe la formación del enfoque transformado en células CEF que se han transducido con ????ß con un EC50 de 150 nM . En contraste el compuesto 1 no inhibe las células CEF transducidas con pllOa significativamente en la concentración más alta probada (2000 nM) . Denley A, Kang S, Karst U y Vogt P , Oncogenic signaling of class 1 PI3K isoforms." Oncogene (2008) 27: 2561-2574. La Figura 3 ilustra la lectura de este ensayo.

Ejemplo' 2 Preparación del compuesto I El compuesto I se sintetizó por la ruta descrita en la Figura 5, usando métodos conocidos en la técnica incluyendo adaptaciones de métodos descritos en Zhichkin, et al., Orqanic Letters, vol . - 9(7), 1415-18 (2007), y Patente de E.U.A. No. 6,800,620.

Ejemplo 3 Efecto del Compuesto I en Xenoinjertos de Célula de Cáncer de Ovario Ratones nu/nu hembra' que portan xenoinjertos QVCAR-3 (células de cáncer de ovario humanas) se mantuvieron hasta que el volumen del tumor midió alrededor de 100 mm3. En tal punto, el tratamiento inició con el compuesto I a una tasa de 30 mg/kg administrado dos veces por día. Los resultados de las mediciones del volumen del tumor durante un periodo de 36 días se muestran en la Figura 8, y demuestran que no sólo se inhibió el crecimiento del tumor, sino el tamaño del tumor existente se redujo actualmente por el tratamiento con el compuesto I .

Ejemplo 4 Efecto del Compuesto I en Xenoinjertos de Cáncer Renal Ratones nu/nu hembra que portan xenoinjertos A498 (células de cáncer renal humanas) se mantuvieron hasta que el volumen del tumor medió alrededor de 100 mm3. En tal, punto, el tratamiento inició el compuesto I a una tasa de 30 mg/kg administrado dos veces por día. Los resultados de las mediciones del volumen del tumor durante un periodo 20 días se muestran en la Figura 9, que demuestran que este nivel de dosificación proporciona una reducción importante en el crecimiento de tumor in vivo.

Ejemplo 5 Niveles en Plasma del Compuesto I en Ratones que Portan Xenoinjertos de Tumor Los niveles en plasma del compuesto I se observaron en ratones nu/nu hembra que portan uno de los xenoinjertos de célula de cáncer usados en los dos ejemplos precedentes. El compuesto I se administró en una dosis sencilla a una tasa de 30 mg/kg para cada sujeto, de prueba, y los niveles en plasma se vigilaron durante 12 horas posteriores. Los nivel.es en plasma del compuesto I incrementan alrededor 2-4 horas después de la administración en cada caso, y esencialmente ha regresado a cero 8 horas después de la dosis sencilla en esta tasa, como se muestra en la Figura 10. La concentración de plasma incrementada para estos sujetos, después de una inyección sencilla en la dosis mostrada para ser efectiva para inhibir el crecimiento del tumor de cada xenoinjerto (Ver los ejemplos precedentes, y Figuras 8-9) fueron generalmente debajo de alrededor de 7000 ng/mL.

Ejemplo 6 Farmacocinética y Toxicocinética del Compuesto I en Ratas El compuesto I se dosificó en 60, 120, o 240 mg/kg/dia administrado como una dosis sencilla durante hasta 14 días en ratas saludables. La Figura 11 muestra los niveles de sangre medidos del compuesto I durante un periodo de 24 horas para cada sujeto de prueba durante el primer día de tratamiento (líneas punteadas) y el último día de tratamiento (líneas sólidas) para las dosis toleradas. La concentración incrementada del compuesto I (Cmax) y el área bajo la curva (AUC) para dosis toleradas fueron superiores que aquellas observadas con dosis efectivas del compuesto I en los tumores del modelo de xenoinjerto en ratones. Por ejemplo, la dosificación de 60 mg/kg por día produce una Cmax de 7300 ng/mL, mientras que la' Cmax para las dosis antitumor efectivas en la prueba de xenoinjerto fueron 2800 y 5600 ng/mL. De manera similar, el AUC para la dosificación de 60 mg/kg/día en este estudio fue 58,000 ng-h/mL, mientras que el AUC correspondiente en el xenoinjerto produce ratones que reciben dosis de tratamiento efectivas fueron 15,000 y 18,000 ng-h/mL.

Ejemplo 7 Modalidades de la invención Lo siguiente es una descripción de varias modalidades enumeradas de la invención. 1. En una modalidad la descripción proporciona un compuesto ópticamente activo de la fórmula I o (I), una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que comprende un compuesto ópticamente activo de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; para uso como un medicamento para tratar el tumor sólido en un sujeto. 2. En una modalidad la descripción proporciona un compuesto ópticamente activo de la fórmula I O F- (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que comprende un compuesto ópticamente activo de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; para uso al tratar un tumor sólido en un sujeto; en donde la cantidad del compuesto de la fórmula I o su sal es una cantidad efectiva para tratar el tumor sólido. 3. En una modalidad de la modalidad 2, el tumor sólido es seleccionado del grupo que consiste de cáncer pancreático; cáncer de vejiga; cáncer colorrectal; cáncer de mama; cáncer de próstata; cáncer renal; cáncer hepatocelular ; cáncer de pulmón; cáncer de ovario; cáncer cervical; cáncer gástrico; cáncer del esófago; cáncer de cabeza y cuello; melanoma; cánceres neuroendocrinos ; cánceres del SNC; tumores cerebrales; cáncer óseo; y sarcoma de tejido suave. 4. En una modalidad de la modalidad 2, el tumor sólido es seleccionado de cáncer de pulmón de célula no pequeña, cáncer de pulmón de célula pequeña, cáncer de colon, cáncer del SNC, melanoma, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata y cáncer de mama. 5. En una modalidad de la modalidad 2, el enantiómero S predomina sobre el enantiómero R por una relación de al menos alrededor de 9:1. 6. En una modalidad de la modalidad 2, el enantiómero S predomina sobre el enantiómero R por una relación de al menos alrededor de 19:1. 7. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades 2-6, el compuesto se administra oralmente al sujeto. 8. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades 2-6, el compuesto se administra al sujeto en forma sólida. 9. En una modalidad de la modalidad 8, la forma sólida comprende el compuesto ópticamente activo de la fórmula I mezclado con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable . 10. En una modalidad de la modalidad 9, el tumor sólido es cáncer de ovarios, renal, mama, pulmón, colon o de próstata. 11. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades 2-6, el sujeto es refractario al tratamiento de quimioterapia, o en recaída después de tratamiento con quimioterapia . 12. En una modalidad .de cualquiera de una de las modalidades, el compuesto de la fórmula I se administra a una dosis de 20-500 mg/día. 13. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades, el compuesto de la fórmula I se administra a una dosis de 50-250 mg/día. 14. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades 2-6, el compuesto de la fórmula I se administra a una dosis de 50-150 mg dos veces por día. 15. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades 2-6, un compuesto de la fórmula I se administra al menos dos veces al día. 16. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades 2-6, el compuesto reduce además el nivel de actividad PI3K5 en el paciente. 17. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades 2-6, el sujeto es un sujeto humano. 18. En una modalidad de la modalidad 17, la concentración del compuesto en la sangre está entre 40-3000 ng/mL durante un periodo de 12 horas desde el tiempo de administración. 19. En una modalidad de la modalidad 17, la concentración del compuesto en la sangre está entre alrededor de 100 nM y 2000 nM en el sujeto tratado. 20. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades 2-6, el agente se administra oralmente, intravenosamente o por inhalación. 21. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades 2-6, además' de un compuesto de la fórmula I, una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un agente terapéutico y/o procedimiento terapéutico seleccionado para tratar el tumor sólido se administra en el paciente. 22. En una modalidad de la modalidad 21, el agente terapéutico es seleccionado del siguiente grupo que consiste de Docetaxel, Mitoxantrona , Prednisona, Estramustina , Antraciclinas , (doxorubicina (Adriamicina ) , epirubicina (Ellence), y doxorubicina liposomal (Doxil)), Taxanos (docetaxel (Taxotero) , paclitaxel (Taxol), y paclitaxel de enlace a la proteina (Abraxano) ) , Ciclofosfamida (Citoxano) , Capecitabina (Xeloda) y 5 fluorouracil (5 FU), Gemcitabina (Gemzar) , metotrexato, Vinorelbina (Navelbina), un inhibidor EGFR tal como erlotinib, Trastuzumab, Herceptina, Avastina, Platinas (cisplatina, carboplatina) , Temazolamida, Intérferon alfa, e IL-2. 23. En una modalidad de la modalidad 21, el agente terapéutico es seleccionado del grupo que consiste de un inhibidor EGFR, un inhibidor mTOR, una platina, y un taxano. 24. En una modalidad de la modalidad 21, el procedimiento terapéutico es seleccionado del grupo que consiste de trasplante de mastocitos de sangre periférica, trasplante de mastocitos hematopoyéticos autólogos, trasplante de médula ósea autóloga, terapia de anticuerpo, terapia biológica, terapia' de inhibidor de enzima, radiación corporal total, infusión de mastocitos, ablación de médula ósea con soporte de mastocitos, trasplante de mastocitos de sangre periférica tratados in vitro, trasplante de sangre del cordón umbilical, técnica de inmunoenzima , compuesto de tinción de inmunohistoquimica, estudio farmacológico, terapia de rayos gamma de cobalto 60 de bajo LET, bleomicina, cirugía convencional, terapia de radiación, quimioterapia de alta dosis y trasplante de mastocitos hematopoyéticos alogénicos no mieloablativos . 25. En una modalidad de cualquiera de una de las modalidades 2-6, que comprende además obtener una muestra biológica del sujeto; y analizar la muestra biológica con un procedimiento analítico seleccionado del grupo que consiste de análisis de química¦ sanguínea , análisis de transubicación cromosomal, biopsia de aguja, hibridación in situ fluorescente, análisis de biomarcador de laboratorio, compuesto de tinción de inmunohistoquimica, citometiria de flujo o una combinación de los mismos. 26. En una modalidad de la modalidad 25, el cornpuesto se administra dos veces al día por alrededor de 28 días, y se descontinúa entonces por al menos 7 días.

Claims (26)

NOVEDAD DE LA INVENCION Habiendo descrito la- presente invención, se considera como novedad, y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Un compuesto ópticamente activo de la fórmula I (I) una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica caracterizado porque comprende un compuesto ópticamente activo de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; para uso como un medicamento para tratar' un tumor sólido en un sujeto.

2. Un compuesto ópticamente activo de la fórmula I HN; N. (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que comprende un compuesto ópticamente activo de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; para uso al tratar un tumor sólido en un sujeto; caracterizado porque la cantidad del compuesto de la fórmula I o su sal es una cantidad efectiva para tratar el tumor sólido.

3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el tumor sólido es seleccionado del grupo que consiste de cáncer pancreático; cáncer de vejiga; cáncer colorrectal; cáncer de mama; cáncer de próstata; cáncer renal; cáncer hepatocelular ; cáncer de pulmón; cáncer de ovario; cáncer cervical; cáncer gástrico; cáncer del esófago; cáncer de cabeza y cuello; melanoma; cánceres neuroendocrinos ; cánceres del SNC; tumores cerebrales; cáncer óseo; y sarcoma de tejido suave.

4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el tumor sólido es seleccionado de cáncer de pulmón de célula no pequeña, cáncer de pulmón de célula pequeña, cáncer de colon, cáncer del SNC, melanoma, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer de próstata y cáncer de mama .

5. El compuesto 'de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el enantiómero S predomina sobre el enantiómero R por una relación de al menos alrededor dé 9:1.

6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el enantiómero S predomina sobre el enantiómero R por una relación de al menos alrededor dé 19:1.

7. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque el compuesto se administra oralmente al sujeto.

8. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque el compuesto se administra al sujeto en forma sólida.

9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la forma sólida comprende el compuesto ópticamente activo de la fórmula I mezclado con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el tumor sólido es cáncer de ovarios, renal, mama, pulmón, colon o de próstata.

11. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque el sujeto es refractario al tratamiento de quimioterapia, o está en recaída después de tratamiento con quimioterapia.

12. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque el compuesto de la fórmula I se administra a una dosis de 20-500 mg/día.

13. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque el compuesto de la fórmula I se administra a una dosis de 50-250 mg/día.

14. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque el compuesto de la fórmula I se administra a una dosis de 50-150 mg dos veces por día.

15. El compuesto de' conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque un compuesto de la fórmula I se administra al menos dos veces al día.

16. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque además comprende reducir el nivel de activad PI3K5 en el sujeto.

17. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque el sujeto es un sujeto humano.

18. El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la concentración del compuesto en la sangre esté entre 40-3000 ng/mL durante un periodo de 12 horas desde el tiempo de administración.

19. El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la concentración del compuesto en la sangre está entre alrededor de 100 nM y 2000 nM en el sujeto tratado.

20. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque el agente se administra oralmente, intravenosamente o por inhalación a un sujeto.

21. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque además comprende administrar además de un compuesto de la fórmula I al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un agente terapéutico y/o procedimiento terapéutico seleccionado para tratar el cáncer en el paciente.

22. El compuesto de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el agente terapéutico es seleccionado del siguiente grupo que consiste de Docetaxel, Mitoxantrona, Prednisona, Estramustina, Antraciclinas , (doxorubicina (Adriamicina ) , epirubicina (Ellence) , y doxorubicina liposomal (Doxil)), Taxanos (docetaxel (Taxotero) , paclitaxel (Taxol), y paclitaxel enlazadó a la proteina (Abraxano) ) , Ciclofosfamida (Citoxano) , Capecitabina (Xeloda) y 5 fluorouracil (5 FU), Gemcitabina (Getnzar) , metotrexato, Vinorelbina (Navelbina) , un inhibidor EGFR tal como erlotinib, Trastuzumab, Her.ceptina, Avastina, Platinas (cisplatina, carboplatina ) , Temazolamida, Interferon alfa, e IL-2.

23. El compuesto de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el agente terapéutico es seleccionado del grupo que consiste de un inhibidor EGFR, un inhibidor mTOR, una platina, y un taxano.

24. El compuesto de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el procedimiento terapéutico es seleccionado del grupo qué consiste de trasplante de mastocitos de sangre periférica, trasplante de mastocitos hematopoyéticos autólogos, trasplante de médula ósea autóloga, terapia de anticuerpos, terapia biológica, terapia de inhibidor de enzimas, radiación corporal total, infusión de mastocitos, ablación de médula ósea con soporte de mastocitos, trasplante de mastocitos de sangre periférica tratados in vitro, trasplante de sangre del cordón umbilical, técnica de inmunoenzimas, compuesto de tinción de inmunohistoquímica , estudio farmacológico, terapia de rayos gamma de cobalto 60 de bajo LET, bleomicina, cirugía convencional, terapia de radiación, quimioterapia de alta dosis y trasplante de mastocitos hematopoyéticos alogénicos no mieloablativos .

25. El compuesto de conformidad con cualquiera.de las reivindicaciones 2-6, caracterizado porque además comprende obtener una muestra biológica del sujeto; y analizar la muestra biológica con un procedimiento analítico seleccionado del grupo que consiste de análisis de química sanguínea, análisis de transubicación cromosomal, biopsia de aguja, hibridación in situ fluorescente, análisis de biomarcador de laboratorio, compuesto de tinción de inmunohistoquímica, citometría de flujo o una combinación de los mismos.

26. El compuesto de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el compuesto se administra al sujeto dos veces al día por alrededor de 28 días, y se descontinúa entonces por al menos 7 días.