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KR910004800A - 효모로 부터 인간 혈청 알부민 및 그밖의 이형 단백질을 미생물적으로 제조하는 방법 - Google Patents

효모로 부터 인간 혈청 알부민 및 그밖의 이형 단백질을 미생물적으로 제조하는 방법 Download PDF

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KR910004800A
KR910004800A KR1019890011197A KR890011197A KR910004800A KR 910004800 A KR910004800 A KR 910004800A KR 1019890011197 A KR1019890011197 A KR 1019890011197A KR 890011197 A KR890011197 A KR 890011197A KR 910004800 A KR910004800 A KR 910004800A
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히로시 후꾸하라
예 빠뜨리스
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롱-뿌랑 쌍뜨
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Abstract

내용 없음.

Description

효모로 부터 인간 혈청 알부민 및 그 밖의 이형 단백질을 미생물적으로 제조하는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 인간의 간으로 부터 분리된 폴리(A)-mRNA로 부터 유도된 3개의 cDNA 클론으로 부터 수득된, Met-HSA코드화 전서열을 함유하는 플라스미드 PXL276의 작제도,
제2도는 4가지의 합성 올리고데옥시 뉴클레오타이드로 부터 알부민의 프리프로(prepro)-서열의 재구성을 나타내는 도면 : 플라스미드 PXL290의 작제도,
제3도는 플라스미드 PXL 299의 작제도.

Claims (33)

  1. 형질전환된 효모에 대한 적어도 하나의 선별 가능한 마커, 및 HSA 또는 그의 변형체의 효모내에서의 발현 및, 경우에 따라, 그의 유전자에 의해 코드화된 단백질의 성장 배지내로의 배설을 가능하게 하는 서열의 조절하의 HSA 또는 그의 변형체에 대한 구조 유전자의 DNA를 함유하는 발현 카셋트를 안정하게 유지시킬수 있는 효모를 성장시킴을 특징으로 하여, 인간 혈청알부민(HSA) 또는 그의 변형체중의 하나를 미생물적으로 제조하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 발현 카셋트가 효모 게놈내에 통합되는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 발현 카셋트가, 호모내에서 작용성이며 이효모내에서 카셋트의 안정한 유지를 제공하는 복제 시스템을 함유하는 플라스미드의 부분을 형성하는 방법.
  4. 제1항, 2항 또는 3항에 있어서, 효모가 사카로마이세스(Saccharomyces) 및 클로이베로마이세스(Kluyveromyes)속의 효모중에서 선택되는 방법.
  5. 제1항, 2항 또는 3항에 있어서, 효모가 클루이베로마이세스속 중에서 선택되는 방법.
  6. 제1항, 2항 또는 3항에 있어서, 효모가 클루이베로마이세스 마르시아누스(Kluyveromyces maxianus)의 모든 변종중에서 선택되는 방법.
  7. 제1항, 2항 또는 3항에 있어서, 효모가 클루이베로마이세스 마르시아누스 바르, 락티스(Kluyveromyces markianusvar. lactis)의 방법.
  8. 제3항 내지 7항중의 어느 하나에 있어서, 효모내에서 작용성인 복제 시스템이 클루이베로마이세스 마르시아 누스바르, 드로소필라룸 (Kluyveromyces marxianusvar, drosophilarum)으로 부터 최초로 분리된 플라스미드 pKD 1의 전부 또는 일부이거나, 사카로마이세스 세르비지애(Saccharomyces cerevisiae)로 부터 분리된 2μ플라스미드의 전부 또는 일부이거나, 플라스미드 pKD 1으로 부터 유도된 요소와 2μ플라스미드로 부터 유도된 요소의 배합물인 방법.
  9. 제3항, 6항, 7항 또는 8항에 있어서, 효모내에서 작용성인 복제 시스템이 pKD 1 서열의 전부 또는 일부인 방법.
  10. 플라스미드 pKD 1의 유전자 A, B 및 C; 플라스미드 PKD 1의 연적 반복물; 플라스미드 PKD 1의 안정성 부위; PKD 1의 복제원 및 클루이 베로마이세스속의 효모내에서 해당 단백질의 발현을 가능하게 하는 서열의 조절하에서 해당 단백질에 대한 구조 유전자를 코드화한 DNA를 함유하는 발현 카셋트; 형질전환된 효모에 대한 설별가능한 마커; 및 임의로, 에스케리카아 콜라이(Escherichia coli)에 대한 복제원 및 선별가능함 마커를 함유하는 발현 플라스미드에 의해 형질전환된 클루이베로마이세스 속의 효모를 성장 배지에서 배양함을 특징으로 하여 특정 단백질을 제조하는 방법.
  11. 제8항 내지 10항 중의 어느 하나에 있어서, 발현 카셋트 및 선별가능한 마커가 PKD 1의 EcoRI 부위에 삽입되는 방법.
  12. 제8항 내지 11항중의 어느 하나에 있어서, 발현 카셋트 및 선별가능한 마커가 PKD 1의 Sac I 및 Mst Ⅱ부위에 의해 정의된 197개의뉴클레오타이드의 영역 또는 PKD 1의 Sph I 부위에 삽입되는 방법.
  13. 제1항 내지 제12항중의 어느 하나에 있어서, 구조 유전자의 발현을 가능하게 하는 서열이 사카로마이세스 또는 클루이베로마이세스속의 효모의 유전자로 부터 유도된 프로모터 중에서 선택되는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 이들 프로모터가 사카로마이세스 또는 클루이베로 마이세스속의 효모의 당분해서 유전자로 부터 유도되는 방법.
  15. 제13항에 있어서, 구조 유전자의 발현을 가능하게 하는 서열이 포스포글리세레이트 키나제(PGK), 글릿세르일데히드-3-포스페이트 데하이드로게나제(GPD), 에놀라제(ENO), 알콜데하이드로게나제(ADH), 락타제(LAC 4) 또는 산 포스파타제(PHO 5)를 코드화한 유전자 중에서 선택되는 방법.
  16. 제13항에 있어서, 구조 유전자의 발현을 가능하게 하는 서열이 포스포글리세레이트 키나제(PGK) 또는 산 포스파타제(PHO 5)를 코드화한 유전자중에서 선택되는 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중의 어느 하나에 있어서, 언급한 단백질을 코드화된 서열이 언급된 단백질의 천연 N-말단 리더 중에서 선택된 단백질-송출 서열 다음에 오는 방법.
  18. 제1항 내지 제17항중에 어느 하나에 있어서, 언급한 단백질을 코드화한 서열이 천연서열과는 상이한 송출서열 다음에 오는 방법.
  19. 제18항에 있어서, 언급된 단백질의 송출을 코드화된 서열이 알파 페로몬 또는 킬러 독소를 코드화한 효모 유전자로 부터 수득된 서열인 방법.
  20. 제1항 제19항중의 어느 하나에 있어서, 단백질이 인터로이킨, 알부민, tPA 및 TIMP중에서 선택되는 방법.
  21. 제20항에 있어서, 특정 단백질을 코드화한 서열이 IL-1β, 프리프로-HSA, Met-HSA, 프리프로-tPA, Met-tPA 및 TIMP를 코드화한 서열중에서 선택되는 방법.
  22. 제1항 내지 제19항중의 어느 하나에 있어서, HSA의 배설을 가능하게 하는 서열이 알부민의 프리프로 천연 말단 리더인 방법.
  23. 제1항 내지 제22항중의 어느하나에 있어서, 형질전환된 효모에 대한 선별가능한 마커가 항생물질 또는 구리이온에 대한 내용을 제공하는 유전자 중에서 선택되는 방법.
  24. 제23항에 있어서, 선별 가능한 서열이 G418에 대한 내성을 제공하는 유전장인 방법.
  25. 제24항에 있어서, 선별 가능한 서열이 케이. 락틱스의 선형 플라스미드 k1의 ORF 1 프로모터와 트랜스포손 Tn 903의 아미노글리코사이드 포스포트랜스훼라제 사이의 융합부인 방법.
  26. 제1항 내지 제25항중의 어느하나에 있어서, 선별 가능한 마커가 영양요구성을 보충하는 유전자인 방법.
  27. 제1항에 있어서, 스트레인이 플라스미드 PKD 1, 프리프로-HSA DNA, 포스포글리세레이트 키나제를 코드화한 유전자의 전사개시 및 종결서열 및 케이, 마르시아누스 바르, 락티스의 선형 플라스미드 k1의 ORF 1 프로모터와 Tn 903의 3′-아미노글리코사이트 포스포트랜스훼라제 유전자 사이의 합부의 서열을 함유하는 플라스미드에 의해 형질전환 되는 방법.
  28. 제1항에 있어서, 스트레인이 플라스미드 PKD 1, Met-HSA DNA, 포스포글리세레이트 키나제를 코드화한 전사 개시 및 종결 서열 및 케이, 마르시아누스 바르, 락티스의 선형 플라스미드 k1의 ORF 1 프로모터와 Tn 903의 3′아미노글리코사이드 포스포트랜스훼라제 유전자 사이의 융합부의 서열을 함유하는 플라스미드에 의해 형질전환되는 방법.
  29. 제1항 내지 제28항중의 어느 하나에 있어서, 스트레인이 케이. 마르시아누스, 케이 위커함이(K. wicherhamii) 또는 케이. 왈티(K. waltii)종의 스트레인인 방법.
  30. 제29항에 있어서, 스트레인이 케이. 블가리쿠스(K.bulgaricus), 케이. 마르시아누스 바르. 드로소필라룸, 케이. 마르시아누스 바르, 마르시아누스 또는 케이. 마르시아누스 바르. 락티스 종의 스트레인인 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중의 어느하나에 있어서, 효모를 락토스가 중대수성장기와 성장 정지기 사이에 첨가되는 글루코즈-함유 배지에서 배양하는 방법.
  32. 제1항 내지 제30항중의 어느 하나에서 청구된 방법에 의해 수득되는 인간 혈청 알부민.
  33. 제31항에서 청구된 인간 혈청 알부민의 의약품으로 사용하는 용도.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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