KR20240135660A - 향상된 단백질 조성물 - Google Patents
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Abstract
기재된 본 발명은 단리된 폴리펩티드 - 예를 들어 그 자체에 또는 다른 폴리펩티드에 결합할 수 있는 폴리펩티드와 같은 진단용, 예후용, 및 치료용 폴리펩티드를 포함함 - 를 교시하고, 상기 단리된 폴리펩티드는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, (His)6(즉, HHHHHH(서열 번호 26)), SLSLSPGK(서열 번호 36), AS, 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 카르복시-말단("C-말단")을 포함한다. 기재된 본 발명은 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 및/또는 발현 벡터; 상기 폴리펩티드, 핵산, 및/또는 발현 벡터를 함유하는 세포; 및 상기 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 추가로 교시한다. 상기 폴리펩티드의 제조 방법, 및 상기 폴리펩티드의 사용 방법이 또한 교시된다.
Description
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2022년 1월 27일로 출원된 미국 가특허 출원 제63/303,921호의 이익을 주장하며, 이 출원은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
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기술분야
기재된 본 발명은 특히 단리된 폴리펩티드 - 예를 들어 그 자체에 또는 다른 폴리펩티드 또는 분자에 결합할 수 있는 폴리펩티드와 같은 진단용, 예후용, 및 치료용 폴리펩티드를 포함함 - 를 교시하고, 상기 단리된 폴리펩티드는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, (His)6(즉, HHHHHH(서열 번호 26)), SLSLSPGK(서열 번호 36), AS, 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 카르복시-말단("C-말단")을 포함한다. 기재된 본 발명은 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 및/또는 발현 벡터; 상기 폴리펩티드, 핵산, 및/또는 발현 벡터를 함유하는 세포; 및 상기 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 추가로 교시한다. 상기 폴리펩티드의 제조 방법, 및 상기 폴리펩티드의 사용 방법이 또한 교시된다.
다른 분자 - 다른 폴리펩티드를 포함함 - 와의 폴리펩티드 상호작용은 잘 알려져 있다. (예를 들어, 문헌[Titeca, Kevin; Lemmens, Irma; Tavernier, Jan; Eyckerman, Sven (29 June 2018), "Discovering cellular protein―protein interactions: Technological strategies and opportunities," Mass Spectrometry Reviews. 38 (1): 79―111. doi:10.1002/mas.21574. ISSN 0277-7037. PMID 29957823]; 및 문헌[Herce HD, Deng W, Helma J, Leonhardt H, Cardoso MC (2013), "Visualization and targeted disruption of protein interactions in living cells," Nature Communications. 4: 2660] 참조). 그러한 상호작용적 폴리펩티드는 시험관내(in vitro) 및 생체내(in vivo)에 존재할 수 있다. (예를 들어, 문헌[Jones S, Thornton JM (January 1996), "Principles of protein-protein interactions," Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (1): 13―20. Bibcode:1996PNAS...93...13J. doi:10.1073/pnas.93.1.13. PMC 40170. PMID 8552589] 참조). 다른 분자와 상호작용하는 폴리펩티드의 한 예는 단백질과 상호작용하는 폴리펩티드이며, 이에는 항원-결합 단백질, 예컨대 항체가 포함된다. (예를 들어, 문헌[Curr Drug Metab. 2011 May; 12(4): 313―328, "Characterization of Drug Interactions with Serum Proteins by Using High-Performance Affinity Chromatography," David S. Hage, Jeanethe Anguizola, Omar Barnaby, Abby Jackson, Michelle J. Yoo, Efthimia Papastavros, Erika Pfaunmiller, Matt Sobansky, and Zenghan Tong] 참조). 단백질은 단리된 폴리펩티드에 결합하고 일부 경우에는 항-폴리펩티드 항체 반응을 이끌어내는 것으로 보고되어 있는데, 이는 그들의 사용, 예컨대 요법에서의 사용에 영향을 미칠 수 있다. (예를 들어, 문헌["Studies of drug interactions with glycated human serum albumin by high-performance affinity chromatography," Ryan Matsuda, So-Hwang Kye, Jeanethe Anguizola and David S. Hage, Reviews in Analytical Chemistry] 참조).
이러한 배경 하에서, 본 발명의 발명자들은 분자와의 폴리펩티드 상호작용의 예방 또는 개선을 위한 방법 및 조성물을 알아내었다.
일 태양에서, 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 폴리펩티드가 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 폴리펩티드는 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단리된 폴리펩티드와 참조물의 상호작용에 비해 상기 참조물과의 감소된 상호작용을 나타낸다. 캡 도메인은 노출된 C-말단에 대해 이종성이고, 하나 이상의 아미노산 잔기(예를 들어, 히스티딘)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37), 또는 His 캡 도메인으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈청이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈장을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈장이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및 인간 혈장)을 포함한다.
일 태양에서, 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 폴리펩티드가 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 폴리펩티드는 상기 His 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단리된 폴리펩티드와 참조물의 상호작용에 비해 상기 참조물과의 감소된 상호작용을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈청이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈장을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈장이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및 인간 혈장)을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 TKLTVL(서열 번호 39), TKVTVL(서열 번호 38), NGLVYAG(서열 번호 43), NGLLYAG(서열 번호 44), 또는 TRLTVL(서열 번호 45)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 표 1에 제공된 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 참조물과의 상호작용은 면역검정에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, 참조물과의 상호작용은 시험관내에서 평가된다. 일부 실시 형태에서, 참조물과의 상호작용은 생체내에서 평가된다.
다른 태양에서, 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 폴리펩티드가 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 폴리펩티드는 상기 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 상기 단리된 폴리펩티드와 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 나타낸다.
일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 37℃에서 약 5 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 40℃에서 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 40℃에서 약 2 내지 약 7일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 40℃에서 약 2 내지 약 5일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 4℃에서 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 25℃에서 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 25℃에서 약 2 내지 약 7일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 25℃에서 약 2 내지 약 5일 동안의 인큐베이션을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 상호작용은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가된다.
다른 태양에서, 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 폴리펩티드가 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 폴리펩티드는 동일한 조건 하에서 상기 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 상기 단리된 폴리펩티드에 의해 나타나는 자기-응집(self-aggregation)에 비해 감소된 자기-응집을 나타낸다.
일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 자기-응집은 고농도 액체 제형(high concentration liquid formulation, HCLF)에서 감소된다. 일부 실시 형태에서, HCLF 농도는 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL의 상기 단리된 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 열 스트레스 하에서 감소된다. 일부 실시 형태에서, 열 스트레스는 약 2주 동안 40℃에서의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가된다.
다른 태양에서, 단리된 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 단백질은 (a) 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하며, 상기 단리된 단백질은 상기 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 상기 단리된 단백질과 참조물의 상호작용에 비해 상기 참조물과의 감소된 상호작용을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 존재는, 단백질의 중화가, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 감소되게 한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 존재는, 단백질 안전성이, 참조물에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 향상되게 한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 존재는, 단백질의 약동학적 특성이, 참조물에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 개선되게 한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 존재는, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용이, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 단백질과 참조물의 상호작용에 비해 감소되게 한다.
일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인이다.
일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 다중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 다중특이성, 예컨대 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이종이량체성이다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 폴리펩티드 또는 본 명세서에 제공된 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 서열이 본 명세서에 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 폴리펩티드 또는 본 명세서에 제공된 단백질을 발현하는 단리된 세포가 본 명세서에 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 폴리펩티드 또는 본 명세서에 제공된 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터가 본 명세서에 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 폴리펩티드 또는 본 명세서에 제공된 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 본 명세서에 제공된 폴리펩티드 또는 본 명세서에 제공된 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 단리된 세포가 본 명세서에 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 폴리펩티드 또는 본 명세서에 제공된 단백질을 생성하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 폴리펩티드 또는 단백질을 단리하는 단계를 추가로 포함한다.
추가의 태양에서, 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 이중특이성 또는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체는 상기 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 상기 항체와 항-약물 항체의 상호작용에 비해 상기 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타난다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 면역검정에서 His 캡 도메인이 결여되어 있는 항체와 항-약물 항체의 상호작용에 비해, 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 적어도 하나의 항체 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체를 포함한다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열이 본 명세서에 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터가 본 명세서에 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 본 명세서에 제공된 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 단리된 세포가 본 명세서에 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 항체를 발현하는 단리된 세포가 본 명세서에 제공된다.
다른 태양에서, 본 명세서에 제공된 항체를 생성하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 항체를 단리하는 단계를 추가로 포함한다.
다른 태양에서, 단리된 폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈청이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈장을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈장이다.
일부 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 참조물과의 상호작용은 면역검정에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, 참조물과의 상호작용은 시험관내에서 평가된다. 일부 실시 형태에서, 참조물과의 상호작용은 생체내에서 평가된다.
다른 태양에서, 생물학적 물질 내에서의 단리된 폴리펩티드의 응집을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈청이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈장이다.
일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 37℃에서 약 5 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 37℃에서 약 2 내지 약 7일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 37℃에서 약 2 내지 약 5일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 40℃에서 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 40℃에서 약 2 내지 약 7일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 40℃에서 약 2 내지 약 5일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 4℃에서 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 4℃에서 약 2 내지 약 7일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 4℃에서 약 2 내지 약 5일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 25℃에서 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 25℃에서 약 2 내지 약 7일 동안의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 인큐베이션은 25℃에서 약 2 내지 약 5일 동안의 인큐베이션을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 생물학적 물질과의 상호작용은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가된다.
다른 태양에서, 단리된 폴리펩티드의 자기-응집을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 자기-응집은 고농도 액체 제형(HCLF)에서 감소된다. 일부 실시 형태에서, HCLF 농도는 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL의 상기 단리된 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 열 스트레스 하에서 감소된다. 일부 실시 형태에서, 열 스트레스는 약 2주 동안 40℃에서의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가된다.
다른 태양에서, 단리된 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 단백질은 (a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하며, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 노출된 C-말단의 단부에 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단의 단부에 융합시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드는 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제1 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제2 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단의 단부에 융합시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 제3 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 다중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이종이량체성이다.
다른 태양에서, 단리된 폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청(예를 들어, 인간 혈청)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈장(예를 들어, 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 및 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 표 1에 제공된 아미노산 서열로 이루어진다.
다른 태양에서, 단리된 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 단백질은 (a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이종이량체성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이중특이성 또는 다중특이성이다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 단백질은 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 및 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질 내의 분자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
다른 태양에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 적어도 하나의 항체 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질 내의 분자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
다른 태양에서, 단리된 폴리펩티드, 및 상기 단리된 폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈장을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 및 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 표 1에 제공된 아미노산 서열로 이루어진다.
다른 태양에서, 단리된 단백질, 및 상기 단리된 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단리된 단백질은 (a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이종이량체성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이중특이성 또는 다중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 단백질은 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질 내의 분자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
다른 태양에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체, 및 상기 단리된 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 적어도 하나의 항체 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이종이량체성이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질 내의 분자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
일 실시 형태에서, 진단 검정에서 사용하기 위한, 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 실시 형태에서, 단백질은 항체(예를 들어, 이중특이성 또는 다중특이성 항체)이다. 일부 실시 형태에서, 항체는 신경교종-관련 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토프로테인(AFP), B-세포 성숙 항원(BCMA), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CAIX, 인간 텔로머라제 역전사효소, GPRC5D, RU1, RU2(AS), 위장 카르복실에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, HER2/neu, 서비빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), CD70, CD20, MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체, 또는 메소텔린에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 병원체의 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 또는 기생충이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 생물학적 물질 내의 분자의 존재를 검출하기 위한 진단 검정에 사용된다. 일부 실시 형태에서, 분자는 항원이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 진단 검정은 시험관내 또는 생체내에서 수행된다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 및 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다.
일 실시 형태에서, 요법에서 사용하기 위한, 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 치료용 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 사이토카인 또는 항체(예를 들어, 이중특이성 또는 다중특이성 항체)이다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-12, IL-23, IL-1β, IL-6, IL-15, IL-2, IL-5, TNF-알파, IL-9, 또는 IL-17이다. 일부 실시 형태에서, 항체는 신경교종-관련 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토프로테인(AFP), B-세포 성숙 항원(BCMA), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CAIX, 인간 텔로머라제 역전사효소, GPRC5D, RU1, RU2(AS), 위장 카르복실에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, HER2/neu, 서비빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), CD70, CD20, MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체, 또는 메소텔린에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 병원체의 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 또는 기생충이다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 및 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다.
일 실시 형태에서, 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 노출된 C-말단은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어지고, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 항체(예를 들어, 이중특이성 또는 다중특이성 항체)이다. 일부 실시 형태에서, 항체는 신경교종-관련 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토프로테인(AFP), B-세포 성숙 항원(BCMA), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CAIX, 인간 텔로머라제 역전사효소, GPRC5D, RU1, RU2(AS), 위장 카르복실에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, HER2/neu, 서비빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), CD70, CD20, MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체, 또는 메소텔린에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 병원체의 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 또는 기생충이다.
일 실시 형태에서, 요법에 사용하기 위한, 2개 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 치료용 이중특이성 또는 다중특이성(예를 들어, 삼중특이성) 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열이다. 일부 실시 형태에서, 2개 이상의 표적-결합 영역은 2개 이상의 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 항원은 신경교종-관련 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토프로테인(AFP), B-세포 성숙 항원(BCMA), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CAIX, 인간 텔로머라제 역전사효소, GPRC5D, RU1, RU2(AS), 위장 카르복실에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, HER2/neu, 서비빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), CD70, CD20, MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체, 및 메소텔린으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 항체는 병원체의 항원에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 또는 기생충이다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다.
다른 태양에서, 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 조성물은 요법에서의 사용을 위한, 노출된 C-말단 및 캡 도메인을 포함하는 단백질(예를 들어, 이중특이성 또는 다중특이성 항체), 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 일 실시 형태에서, 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 조성물은 요법에서의 사용을 위한, 본 명세서에 기재된 단백질, 본 명세서에 기재된 이중특이성 항체, 또는 본 명세서에 기재된 다중특이성(예를 들어, 삼중특이성) 항체, 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
다른 태양에서, 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 조성물은 요법에서의 사용을 위한, 노출된 C-말단 및 캡 도메인을 포함하는 단백질(예를 들어, 이중특이성 또는 다중특이성 항체), 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 조성물은 진단 검정에서의 사용을 위한, 본 명세서에 기재된 단백질, 본 명세서에 기재된 이중특이성 항체, 또는 본 명세서에 기재된 다중특이성(예를 들어, 삼중특이성) 항체, 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
다른 태양에서, 항-약물 항체와 단백질 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡 도메인의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개의 히스티딘으로 이루어진 His 캡 도메인이다.
다른 태양에서, 생물학적 물질 내에서의 응집을 감소시키기 위한 캡 도메인의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개의 히스티딘으로 이루어진 His 캡 도메인이다.
다른 태양에서, 자기-응집을 감소시키기 위한 캡 도메인의 용도가 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인으로 이루어지거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개의 히스티딘으로 이루어진 His 캡 도메인이다.
일 실시 형태에서, 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 HHHHHH(서열 번호 26), SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 AS, TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 생물학적 물질 내의 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 요법 또는 진단 검정에서의 사용을 위한 것이다.
전술한 개요뿐만 아니라, 본 출원의 실시 형태의 하기의 상세한 설명도 첨부 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 그러나, 본 출원은 도면에 나타낸 정확한 실시 형태로 제한되지 않음이 이해되어야 한다.
도 1은 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc 도메인 및 2개의 scFv를 포함하는 예시적인 항체 구조(예를 들어, Fc-scFv 항체)를 나타낸다.
도 2는 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc 도메인 및 Fc 도메인에 scFv 이종이량체화된 scFv를 포함하는 예시적인 항체 구조(예를 들어, Fc-scFv x Fc 항체)를 나타낸다.
도 3은 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, 중쇄, 및 Fc 도메인에 이종이량체화된 scFv, 및 scFv를 포함하는 예시적인 삼중특이성 항체 구조(예를 들어, HC-scFv x Fc-scFv 삼중특이성 항체)를 나타낸다.
도 4는 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc와 이종이량체화된 중쇄 및 2개의 scFv를 포함하는 예시적인 항체 구조(예를 들어, HC x scFv-Fc-scFv)를 나타낸다.
도 5는 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc 도메인, 및 Fc와 이종이량체화된 2개의 scFv, 및 2개의 scFv를 포함하는 예시적인 이중특이성 항체 구조(예를 들어, scFv-Fc-scFv 이중특이성 항체)를 나타낸다.
도 6은 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, 가변 중쇄 도메인-Fc 도메인 융합체를 포함하는 예시적인 항체 구조(예를 들어, Fc-VHH 융합체)를 나타낸다.
도 7은 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc 도메인, scFv, 및 중쇄와 이종이량체화된 가변 중쇄 도메인 및 가변 중쇄 도메인을 포함하는 예시적인 다중특이성 항체 구조(예를 들어, scFv-Fc-VHH x HC-VHH)를 나타낸다.
도 8은 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc 도메인과 이종이량체화된 중쇄, 및 2개의 scFv를 갖는 예시적인 다중특이성 항체(예를 들어, HC x scFv-Fc-scFv)를 나타낸다.
도 9a 및 도 9b는 삼중특이성 항체의 항원-결합 영역의 C-말단에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 갖지 않거나(도 9a) 또는 이를 갖는(도 9b) 예시적인 삼중특이성 항체를 나타낸다.
도 10a 및 도 10b는 삼중특이성 항체의 항원-결합 영역의 C-말단에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 갖는 예시적인 삼중특이성 항체를 나타낸다.
도 1은 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc 도메인 및 2개의 scFv를 포함하는 예시적인 항체 구조(예를 들어, Fc-scFv 항체)를 나타낸다.
도 2는 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc 도메인 및 Fc 도메인에 scFv 이종이량체화된 scFv를 포함하는 예시적인 항체 구조(예를 들어, Fc-scFv x Fc 항체)를 나타낸다.
도 3은 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, 중쇄, 및 Fc 도메인에 이종이량체화된 scFv, 및 scFv를 포함하는 예시적인 삼중특이성 항체 구조(예를 들어, HC-scFv x Fc-scFv 삼중특이성 항체)를 나타낸다.
도 4는 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc와 이종이량체화된 중쇄 및 2개의 scFv를 포함하는 예시적인 항체 구조(예를 들어, HC x scFv-Fc-scFv)를 나타낸다.
도 5는 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc 도메인, 및 Fc와 이종이량체화된 2개의 scFv, 및 2개의 scFv를 포함하는 예시적인 이중특이성 항체 구조(예를 들어, scFv-Fc-scFv 이중특이성 항체)를 나타낸다.
도 6은 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, 가변 중쇄 도메인-Fc 도메인 융합체를 포함하는 예시적인 항체 구조(예를 들어, Fc-VHH 융합체)를 나타낸다.
도 7은 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc 도메인, scFv, 및 중쇄와 이종이량체화된 가변 중쇄 도메인 및 가변 중쇄 도메인을 포함하는 예시적인 다중특이성 항체 구조(예를 들어, scFv-Fc-VHH x HC-VHH)를 나타낸다.
도 8은 본 발명(예를 들어, 하나 이상의 캡 도메인(들)의 부가)에 사용하기에 적합한, Fc 도메인과 이종이량체화된 중쇄, 및 2개의 scFv를 갖는 예시적인 다중특이성 항체(예를 들어, HC x scFv-Fc-scFv)를 나타낸다.
도 9a 및 도 9b는 삼중특이성 항체의 항원-결합 영역의 C-말단에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 갖지 않거나(도 9a) 또는 이를 갖는(도 9b) 예시적인 삼중특이성 항체를 나타낸다.
도 10a 및 도 10b는 삼중특이성 항체의 항원-결합 영역의 C-말단에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 갖는 예시적인 삼중특이성 항체를 나타낸다.
부분적으로, 본 발명은 노출된 C-말단 단백질에서 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))으로 변형된 단백질, 예컨대 치료용 단백질(예를 들어, 호르몬, 사이토카인, 효소, 융합 단백질, 또는 항체, 또는 다른 항원-결합 단백질)에 관한 것이다. 특정 태양에서, 본 발명은 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 단백질에 관한 것이다. 구체적인 실시 형태에서, 그러한 단백질은, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 상기 단백질과 참조물의 상호작용에 비해 상기 참조물과의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 그러한 단백질은, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 상기 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 그러한 단백질은, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 상기 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 감소된 자기-응집을 나타낸다.
구체적인 태양에서, 본 발명은 항-약물 항체(ADA) 반응을 감소 또는 예방하는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))으로 변형된 단백질, 예컨대 치료용 단백질(예를 들어, 호르몬, 사이토카인, 효소, 융합 단백질, 또는 항체, 또는 다른 항원-결합 단백질)에 관한 것이다. 특정 태양에서, 본 발명은 비자연 발생 C-말단 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 갖는 단백질, 예컨대 치료용 단백질에 관한 것이며, (His)n(서열 번호 25) 서열의 존재는 ADA 반응을 감소 또는 예방한다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 그렇지 않으면, 본 명세서에 사용되는 소정의 용어는 본 명세서에 제시된 바와 같은 의미를 갖는다. 본 명세서에 인용된 모든 특허, 공개된 특허 출원 및 간행물은 마치 본 명세서에 완전히 기재되어 있는 것처럼 참고로 포함된다. 본 명세서를 해석하려는 목적으로, 하기의 용어 설명이 적용될 것이며, 적절한 경우에는 언제든지, 단수로 사용되는 용어는 또한 복수형을 포함할 것이고, 역으로도 성립할 것이다. 제시된 용어의 임의의 설명이 본 명세서에 참고로 포함된 임의의 문헌과 상충되는 경우에는, 하기에 제시된 용어의 설명이 우선할 것이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 유전적으로 인코딩된 아미노산에 대한 약어는 통상적이며 다음과 같다:
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태(부정 관사 및 정관사)는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약" 및 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 9% 이내, 8% 이내, 7% 이내, 6% 이내, 5% 이내, 4% 이내, 3% 이내, 2% 이내, 1% 이내, 또는 그 미만을 의미한다.
"A와 B 사이의" 또는 "A-B 사이의"와 같은 어구에 사용되는 바와 같이, 용어 "사이의"는 A 및 B 둘 모두를 포함하는 범위를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항-약물 항체" 또는 "ADA"는 단백질, 예컨대 치료용 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)과 상호작용할 수 있는 항체를 지칭한다. 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 중에 이미 존재하고 있다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈장 중에 이미 존재하고 있다. 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, 항원-결합 단백질, 예컨대 항체) 또는 다른 단백질에 결합하거나 교차-반응하고, 폴리펩티드 또는 다른 단백질을 중화시킨다. 소정 실시 형태에서, 항-약물 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, 항원-결합 단백질, 예컨대 항체) 또는 다른 단백질의 약동학적 특성 및/또는 안전성 프로파일을 변화시킨다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, 항원-결합 단백질, 예컨대 항체) 또는 다른 단백질(예를 들어, 치료용 단백질)의 기능을 억제한다. 소정 실시 형태에서, 항-약물 항체는 하나 이상의 표적(예를 들어, 하나 이상의 항원)에 대한 하나 이상의 표적-결합 영역을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, 항원-결합 단백질, 예컨대 항체)의 결합을 방해한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "표적-결합 영역"은 표적의 존재 하에서 그러한 표적, 예컨대 항원에 결합할 수 있는 폴리펩티드 내의 복수의 연속 또는 불연속 아미노산 잔기들을 의미한다. 구체적인 실시 형태에서, 표적-결합 영역은 항원-결합 영역을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "노출된 C-말단"은 폴리펩티드(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성, 삼중특이성 또는 다른 다중특이성 항체)의 C-말단을 지칭하며, 여기서 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 부재하는 그러한 C-말단을 갖는 폴리펩티드는 (1) 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 갖는 동일한 폴리펩티드보다 참조물과의 더 큰 상호작용; (2) 생물학적 물질과의 더 큰 응집; (3) 더 큰 자기-응집; 또는 이들의 조합을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 단지 비자연 발생 폴리펩티드(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성, 삼중특이성 또는 다른 다중특이성 항체) 내에만 존재한다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 자연 발생 폴리펩티드(예를 들어, 표준 면역글로불린 작제물)에서 일반적으로 매립되어 있거나 아니면 노출되지 않은 서열이다. 소정 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은, 예를 들어 https://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/index.php#B에서 확인되는 임의의 종의 카파 경쇄, 람다 경쇄, 또는 가변 중쇄 영역의 4 내지 6개의 C-말단 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은, 예를 들어 https://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/index.php#B에서 확인되는 임의의 종의 카파 경쇄, 람다 경쇄, 또는 가변 중쇄 영역의 4 내지 6개의 C-말단 아미노산 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 종은 인간, 원숭이, 닭, 또는 소이다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 https://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/index.php#B에서 IGKJ, IGLJ, 또는 IGHJ 아래에서 확인되는 서열의 4 내지 6개의 C-말단 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 https://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/index.php#B에서 IGKJ, IGLJ, 또는 IGHJ 아래에서 확인되는 서열의 4 내지 6개의 C-말단 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 표 1에 제공된 것들 중 하나의 C-말단 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 https://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/index.php#B에서 IGKJ, IGLJ, 또는 IGHJ 아래에서 확인되는 서열의 4 내지 6개의 C-말단 아미노산 잔기로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 표 1에 제공된 것들 중 하나의 C-말단 서열로 이루어진다.
[표 1]
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비자연 발생 C-말단"은 자연에서 발견되는 폴리펩티드 또는 단백질, 예컨대 치료용 단백질 또는 진단용 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 C-말단으로서 통상적으로 존재하지 않는 C-말단을 일반적으로 지칭한다. 단백질의 비자연 발생 C-말단의 한 예는 야생형 서열로부터 조작되거나 변형된 단백질(예를 들어, 항원-결합 도메인)의 C-말단이다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 비자연 발생 C-말단은 참조물(예를 들어, 생물학적 물질 또는 ADA)과의 상호작용 때문에 일반적으로는 자연적으로 노출되지 않은 단백질의 C-말단이다. 구체적인 실시 형태에서, 비자연 발생 C-말단은 노출된 C-말단이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 노출된 C-말단과 관련하여 사용될 때 용어 "단부에서"는 노출된 C-말단 또는 비자연 발생 C-말단 또는 C-말단 ADA 에피토프의 마지막 아미노산 잔기를 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 종결되고, C-말단의 단부에 융합된 His 캡 도메인을 갖는 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖게 될 수 있다. 유사하게, 일부 실시 형태에서, 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22)로 종결되고, C-말단의 단부에 융합된 His 캡 도메인을 갖는 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖게 될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 아미노산 서열 VEIKR(서열 번호 23)로 종결되고, C-말단의 단부에 융합된 His 캡 도메인을 갖는 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖게 될 수 있다. 추가의 실시 형태에서, 아미노산 서열 VEIKRT(서열 번호 24)로 종결되고, C-말단의 단부에 융합된 His 캡 도메인을 갖는 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖게 될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 아미노산 서열 TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 종결되고, C-말단의 단부에 융합된 His 캡 도메인을 갖는 노출된 C-말단은 아미노산 서열 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 갖게 될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 아미노산 서열 TKLTVL(서열 번호 39), TKVTVL(서열 번호 38), NGLVYAG(서열 번호 43), NGLLYAG(서열 번호 44), 또는 TRLTVL(서열 번호 45)로 종결되고, C-말단의 단부에 융합된 His 캡 도메인을 갖는 노출된 C-말단은 아미노산 서열 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 갖게 될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "캡 도메인"은 폴리펩티드(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성, 삼중특이성 또는 다른 다중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 일부가 아닌 아미노산 잔기를 지칭한다. 다시 말하면, 캡 도메인은 폴리펩티드(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성, 삼중특이성 또는 다른 다중특이성 항체)의 노출된 C-말단에 대해 이종성이다. 구체적인 실시 형태에서, 캡 도메인은 (His)6(즉, HHHHHH(서열 번호 26)), SLSLSPGK(서열 번호 36), AS, TVAPTESS(서열 번호 37), 또는 His 캡 도메인으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 (His)6(즉, HHHHHH(서열 번호 26)) 또는 AS로 이루어지지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인으로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 캡 도메인은 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 기법에 의해 평가될 때 단백질의 기능들 중 하나, 둘, 셋, 또는 그 이상, 또는 모든 기능을 방해하지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 캡 도메인은 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 기법에 의해 평가될 때 단백질의 구조를 방해하지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "캡핑 수단"은 (His)6(즉, HHHHHH(서열 번호 26)), SLSLSPGK(서열 번호 36), AS, 또는 TVAPTESS(서열 번호 37), 또는 His 캡 도메인으로 이루어진 아미노산 서열의 존재 또는 부가를 지칭한다. 구체적인 실시 형태에서, 캡핑 수단은 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37), 또는 His 캡 도메인으로 이루어진 아미노산 서열의 존재 또는 부가를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 캡핑 수단은 (His)6(즉, HHHHHH(서열 번호 26)) 또는 AS의 아미노산 서열로 이루어진 아미노산 서열의 존재 또는 부가를 지칭하지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "His 캡 도메인"은 폴리펩티드(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성, 삼중특이성 또는 다른 다중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 일부가 아닌 하나 이상의 히스티딘 아미노산 잔기를 지칭한다. 다시 말하면, His 캡 도메인은 폴리펩티드(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성, 삼중특이성 또는 다른 다중특이성 항체)의 노출된 C-말단에 대해 이종성이다. 구체적인 실시 형태에서, His 캡 도메인은 (His)n(서열 번호 25)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)으로 이루어진다. 다른 구체적인 실시 형태에서, His 캡 도메인은 단일 His로 이루어진다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, His 캡 도메인은 (His)6(즉, HHHHHH(서열 번호 26))를 함유하지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, His 캡 도메인은 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 기법에 의해 평가될 때 단백질의 기능들 중 하나, 둘, 셋, 또는 그 이상, 또는 모든 기능을 방해하지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, His 캡 도메인은 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 기법에 의해 평가될 때 단백질의 구조를 방해하지 않는다.
본 발명에 비추어 볼 때, 당업자는 "His 캡핑 수단"이 (His)n(서열 번호 25)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)으로 이루어진다는 것을 이해할 것이다. 구체적인 실시 형태에서, His 캡핑 수단은 단일 His로 이루어진다. 따라서, His 캡핑 수단은 (His)6(즉, HHHHHH(서열 번호 26))를 함유하지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항-약물 항체 에피토프"는 ADA에 의해 인식되는 복수의 연속 또는 불연속 아미노산들을 지칭한다. 소정 실시 형태에서, 항-약물 항체 에피토프는 하나 이상의 표적-결합 영역(예를 들어, 항체) 또는 다른 단백질을 포함하는 폴리펩티드의 C-말단에 있는 네오에피토프 또는 네오에피토프-유사 구조이다. 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체 에피토프는 단지 비자연 발생 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체) 또는 다른 단백질에만 존재한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "참조물"은 노출된 C-말단을 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성, 삼중특이성 또는 다른 다중특이성 항체)가 결합하는 물질 또는 분자를 지칭한다. 구체적인 실시 형태에서, 폴리펩티드에 결합할 때, 참조물은 노출된 C-말단과 접촉한다. 예를 들어, 소정 실시 형태에서, 참조물은 항원-결합 영역을 포함하며, 예를 들어 항-약물 항체이고, 참조물은 노출된 C-말단을 포함하는 폴리펩티드의 에피토프에 결합한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 하기에 기재된 바와 같이, 예를 들어 단일클론 항체(효능제(agonist), 길항제(antagonist), 중화 항체, 전장 또는 온전한 단일클론 항체를 포함함), 폴리에피토프 또는 모노에피토프 특이성을 갖는 항체 조성물, 다중클론 항체, 1가 항체, 다가 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이중특이성, 삼중특이성 항체)를 구체적으로 망라하며, 이에는 융합 분자(예를 들어, IgG-scFv, scFv-Fc-scFv, VHH-Fc, Fc-VHH, Fc-scFv, HC-VHH, scFv-Fc-VHH, HC-scFv), 단일쇄 항체, 및 이들의 단편(예를 들어, 도메인 항체)이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 항체는 인간, 인간화, 키메라, 및/또는 친화성 성숙될 수 있을 뿐만 아니라 다른 종, 예를 들어 마우스, 래트, 라마 등으로부터의 항체일 수 있다. 용어 "항체"는 특이적 분자 항원에 결합할 수 있고 2개의 동일한 폴리펩티드 사슬의 쌍으로 구성된 폴리펩티드의 면역글로불린 부류 내의 B 세포의 폴리펩티드 생성물을 포함하도록 의도되며, 여기서 각각의 쌍은 하나의 중쇄(약 50 내지 70 kDa) 및 하나의 경쇄(약 25 kDa)를 갖고, 각각의 사슬의 각각의 아미노-말단 부분은 약 100 내지 약 130개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하며, 각각의 사슬의 각각의 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Antibody Engineering (Borrebaeck, ed., 2d ed. 1995)]; 및 문헌[Kuby, Immunology (3d ed. 1997)]을 참조한다.
항체는 또한 합성 항체, 나노항체, 재조합적으로 생성된 항체, 낙타과 종(Camelidae species)(예를 들어, 라마 또는 알파카)으로부터의 항체 또는 이들의 인간화 변이체, 인트라바디, 및 항-이디오타입(항-Id) 항체, 및 상기 중 임의의 것의 기능성 단편(예를 들어, 항원-결합 단편) - 이는 단편의 유래가 된 항체의 결합 활성의 일부 또는 전부를 유지하는 항체 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드의 일부분을 지칭함 - 을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 기능성 단편(예를 들어, 항원-결합 단편)의 비제한적인 예는 단일-사슬 Fv(scFv)(예를 들어, 단일특이성, 이중특이성 등을 포함함), Fab 단편, F(ab') 단편, F(ab)2 단편, F(ab')2 단편, 다이설파이드-연결된 Fv(dsFv), Fd 단편, Fv 단편, 다이아바디, 트라이아바디, 테트라바디, 및 미니바디를 포함한다. 특히, 본 명세서에 제공된 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부분, 예를 들어, 항원에 결합하는 항원-결합 부위를 함유하는 항원-결합 도메인 또는 분자(예를 들어, 항체의 하나 이상의 상보성-결정 영역(CDR))를 포함한다. 그러한 항체 단편은, 예를 들어, 문헌[Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (1989)]; 문헌[Mol. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers, ed., 1995)]; 문헌[Huston, et al., 1993, Cell Biophysics 22:189-224]; 문헌[Plㆌckthun and Skerra, 1989, Meth. Enzymol. 178:497-515]; 및 문헌[Day, Advanced Immunochemistry (2d ed. 1990)]에서 확인할 수 있다. 본 명세서에 제공된 항체는 임의의 부류(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA), 또는 임의의 하위부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2)의 면역글로불린 분자일 수 있다. 항체는 효능적 항체 또는 길항적 항체일 수 있다. 항체는 효능적 항체 또는 길항적 항체 어느 것도 아닐 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항체는 변형을 가질 수 있으며, 여기서 변형은 가교결합제, 글리코실화, 접합된 약물, 또는 티오-조작된 티올-결합을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항원"은 당업계에서의 이의 통상적인 의미를 갖는다. "항원"은 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체)이 결합할 수 있는 구조를 포함한다. 항원은 폴리펩티드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐, 또는 다른 자연 발생 또는 합성 화합물일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항원은 폴리펩티드이다. 소정 실시 형태에서, 항원은 세포와 회합되며, 예를 들어, 세포 상에 또는 세포 내에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 항원은 암 세포와 회합되며, 예를 들어, 암 세포 상에 또는 암 세포 내에 존재한다. 소정 실시 형태에서, 항원은 병원체, 예컨대 바이러스, 세균, 진균, 또는 기생충과 관련되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항원-결합 단백질"은 항원에 결합하는 단백질을 지칭한다. 항체는 항원-결합 단백질의 한 예이다. 항원-결합 단백질은, 예를 들어 단일쇄 항체, 나노바디, 멀티도메인 항체, scFv, Fab, 및 다이아바디를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
용어 "결합한다" 또는 "결합하는"은, 예를 들어 복합체를 형성하는 것을 포함한 분자들 사이의 상호작용을 지칭한다. 상호작용은, 예를 들어 비공유 상호작용일 수 있으며, 이에는 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호작용, 및/또는 반데르 발스 상호작용이 포함된다. 복합체는 또한 공유 또는 비공유 결합, 상호작용, 또는 힘에 의해 함께 유지된 2개 이상의 분자의 결합을 포함할 수 있다. 단일 항원-결합 부위, 예컨대 항체 상의 항원-결합 부위와 표적 분자, 예컨대 항원의 단일 에피토프 사이의 총 비공유 상호작용의 강도는 그 에피토프에 대한 항체의 친화도이다. 1가 항원에 대한 결합 분자(예를 들어, 항체)의 해리 속도(koff) 대 결합 속도(kon)의 비(koff/kon)는 해리 상수 KD이며, 이는 친화도와 역상관된다. KD 값이 낮을수록, 항체의 친화도는 더 높다. KD의 값은 항체와 항원의 상이한 복합체들에 대해 달라지며, kon 및 koff 둘 모두에 좌우된다. 본 명세서에 제공된 항체에 대한 해리 상수 KD는 본 명세서에 제공된 임의의 방법 또는 당업자에게 잘 알려진 임의의 다른 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 하나의 결합 부위에서의 친화도는 항체와 항원 사이의 상호작용의 진정한 강도(true strength)를 항상 반영하는 것은 아니다. 다수의 반복되는 항원 결정기를 함유하는 복합 항원, 예컨대 다가 항원이 다수의 결합 부위를 함유하는 항체와 접촉되는 경우, 하나의 부위에서의 항원과 항체의 상호작용은 제2 부위에서의 반응의 확률을 증가시킬 것이다. 다가 항체와 항원 사이의 그러한 다수의 상호작용의 강도를 결합력이라 칭한다.
항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원-결합 단백질은, 예를 들어 면역검정(예를 들어, ELISA, 방사면역검정, 및 전기화학발광 면역검정), Octet®, 표면 플라즈몬 공명(예를 들어, BiacoreBIACore®), 또는 당업자에게 알려진 다른 기법에 의해 확인될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 방사면역검정(RIA) 및 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)과 같은 실험 기법을 사용하여 결정될 때 임의의 교차-반응성 항원보다 더 높은 친화도로 항원에 결합하는 경우에, 결합 단백질은 항원에 특이적으로 결합한다. 전형적으로, 특이적이거나 선택적인 반응은 백그라운드 신호 또는 노이즈의 적어도 2배일 것이며 백그라운드의 10배 초과일 수 있다. 결합 특이성에 관한 논의에 대해서는, 예를 들어 문헌[Fundamental Immunology 332-36 (Paul, ed., 2d ed. 1989)]을 참조한다. 소정 실시 형태에서, 예를 들어 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석 또는 RIA에 의해 결정될 때, "비표적" 단백질에 대한 항원-결합 단백질의 결합의 정도는 그의 특정 표적 항원에 대한 항원-결합 단백질의 결합의 약 10% 미만이다. 항원에 결합하는 항원-결합 단백질에는, 항원-결합 단백질이, 예를 들어 항원을 표적화하는 데 치료제 및/또는 진단제로서 유용하도록 충분한 친화도로 항원에 결합할 수 있는 것이 포함된다. 소정 실시 형태에서, 항원에 결합하는 항원-결합 단백질은 1 μM, 800 nM, 600 nM, 550 nM, 500 nM, 300 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM 이하의 해리 상수(KD)를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 상이한 종으로부터의 항원간에 보존되는 항원의 에피토프에 결합한다.
소정 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 "키메라" 서열을 포함할 수 있는데, 여기서는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분은 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 반면, 사슬(들)의 나머지 부분은, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 다른 종으로부터 유래되거나 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체뿐만 아니라, 그러한 항체의 단편 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동이다(미국 특허 제4,816,567호 및 문헌[Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-55] 참조). 키메라 서열은 인간화 서열을 포함할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은, 천연 CDR 잔기가, 원하는 특이성, 친화도, 및 능력(capacity)을 갖는 낙타과, 마우스, 래트, 토끼, 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종의 상응하는 CDR(예를 들어, 공여자 항체)로부터의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(예를 들어, 수용자 항체)으로부터의 서열을 포함하는 비인간(예를 들어, 낙타과, 뮤린, 비인간 영장류) 항체의 "인간화" 형태의 부분을 포함할 수 있다. 일부 경우에는, 인간 면역글로불린 서열의 하나 이상의 FR 영역 잔기가 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 더욱이, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서는 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 추가로 개선하도록 이루어진다. 인간화 항체의 중쇄 또는 경쇄는 적어도 하나 이상의 가변 영역의 실질적으로 전부를 포함할 수 있으며, 여기서 CDR의 전부 또는 실질적으로 전부는 비인간 면역글로불린의 것들에 상응하고, FR의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 소정 실시 형태에서, 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부분을 포함할 것이다. 추가의 세부사항에 대해서는, 문헌[Jones et al., Nature 321: 522-25 (1986)]; 문헌[Riechmann et al., Nature 332: 323-29 (1988)]; 문헌[Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-96 (1992)]; 문헌[Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 4285-89 (1992)]; 미국 특허 제6,800,738호; 제6,719,971호; 제6,639,055호; 제6,407,213호; 및 제6,054,297호를 참조한다.
소정 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 "완전 인간 항체" 또는 "인간 항체"의 일부분을 포함할 수 있으며, 여기서 이들 용어는 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용되고 인간 가변 영역 및, 예를 들어, 인간 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 항원-결합 단백질은 항체 서열을 포함할 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 이들 용어는 인간 기원의 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 소정 실시 형태에서, "완전 인간" 항체는 또한, 폴리펩티드에 결합하고 인간 생식세포계열 면역글로불린 핵산 서열의 자연 발생 체세포 변이체인 핵산 서열에 의해 인코딩되는 항체를 포함할 수 있다. 용어 "완전 인간 항체"는 카바트(Kabat) 등에 의해 기재된 바와 같은 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열에 상응하는 가변 영역 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함한다(문헌[Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). "인간 항체"는 인간에 의해 생성된 항체의 것에 상응하고/하거나 인간 항체를 제조하기 위한 기법 중 임의의 것을 사용하여 제조된 것에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 명확히 배제한다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리(문헌[Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227: 381 (1991)]; 문헌[Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581 (1991)]) 및 효모 디스플레이 라이브러리(문헌[Chao et al., Nature Protocols 1: 755-68 (2006)])를 포함하는 당업계에 알려진 다양한 기법을 사용하여 생성될 수 있다. 또한, 인간 단일클론 항체의 제조를 위해, 문헌[Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77 (1985)]; 문헌[Boerner et al., J. Immunol. 147(1): 86-95 (1991)]; 및 문헌[van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001)]에 기재된 방법이 이용가능하다. 인간 항체는, 항원 시험접종(antigenic challenge)에 반응하여 그러한 항체를 생성하도록 변형되었지만 그의 내인성 유전자좌가 불능화된 유전자도입 동물, 예를 들어, 마우스에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다(예를 들어, 문헌[Jakobovits, Curr. Opin. Biotechnol. 6 (5) : 561-66 (1995)]; 문헌[
and Taussing, Curr. Opin. Biotechnol. 8 (4) : 455-58 (1997)]; 및 XENOMOUSE™ 기술에 관한 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호 참조). 또한, 예를 들어, 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관한 문헌[Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103: 3557-62 (2006)]을 참조한다.
소정 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 "재조합 인간 항체"의 일부분을 포함할 수 있으며, 여기서 이 어구는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 인간 항체, 예컨대 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 인간 면역글로불린 유전자에 대해 유전자도입되고/되거나 염색체도입된 동물(예를 들어, 마우스 또는 소)로부터 단리된 항체(예를 들어, 문헌[Taylor, L. D. et al., Nucl. Acids Res. 20: 6287-6295 (1992)] 참조) 또는 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 스플라이싱하는 것을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 항체를 포함한다. 그러한 재조합 인간 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역 및 불변 영역을 가질 수 있다(문헌[Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). 그러나, 소정 실시 형태에서는, 그러한 재조합 인간 항체에 시험관내 돌연변이생성(또는 인간 Ig 서열에 대해 유전자도입된 동물이 사용되는 경우, 생체내(in vivo) 체세포 돌연변이생성)을 적용하며, 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식세포계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이에 관련되지만 생체내에서 인간 항체 생식세포계열 레퍼토리 내에 천연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
소정 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은 "단일클론 항체"의 일부를 포함할 수 있으며, 여기서 이 용어는 본 명세서에 사용되는 바와 같이 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 얻어진 항체를 지칭하고, 예를 들어, 집단을 구성하는 개별 항체는 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이 또는 잘 알려진 번역 후 변형, 예컨대 아미노산 이성질화 또는 탈아미드화, 메티오닌 산화 또는 아스파라긴 또는 글루타민 탈아미드화를 제외하고는 동일하며, 각각의 단일클론 항체는 전형적으로 항원 상의 단일 에피토프를 인식할 것이다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 사용되는 바와 같이 "단일클론 항체"는 단일 하이브리도마 또는 다른 세포에 의해 생성된 항체이다. 용어 "단일클론"은 항체를 제조하기 위한 임의의 특정 방법으로 제한되지 않는다. 예를 들어, 본 발명에 유용한 단일클론 항체는 문헌[Kohler et al., Nature 256: 495 (1975)]에 의해 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 세균 또는 진핵 동물 또는 식물 세포에서 재조합 DNA 방법을 사용하여 제조될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참조). "단일클론 항체"는 또한, 예를 들어, 문헌[Clackson et al., Nature 352: 624-28 (1991)] 및 문헌[Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-97 (1991)]에 기재된 기법을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 클론 세포주의 제조 및 이에 의해 발현되는 단일클론 항체의 제조를 위한 다른 방법이 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. eds., 5th ed. 2002)]을 참조한다.
전형적인 4-사슬 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄(L 사슬) 및 2개의 동일한 중쇄(H 사슬)로 구성된 이종사량체성(heterotetrameric) 당단백질이다. IgG의 경우에, 4-사슬 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 사슬은 하나의 공유적 이황화물 결합에 의해 H 사슬에 연결되는 반면에, 2개의 H 사슬은 H 사슬 동종형에 따라 하나 이상의 이황화물 결합에 의해 서로 연결된다. 각각의 H 사슬 및 L 사슬은 또한 규칙적으로 이격된 사슬내 이황화물 가교를 갖는다. 각각의 H 사슬은 N-말단에 가변 도메인(VH)에 이어서 α 및 γ 사슬 각각에 대한 3개의 불변 도메인(CH) 및 μ 및 ε 동종형에 대한 4개의 CH 도메인을 갖는다. 각각의 L 사슬은 N-말단에 가변 도메인(VL)에 이어서 불변 도메인(CL)을 그의 다른 단부에 갖는다. VL은 VH와 정렬되고, CL은 중쇄(CH1)의 제1 불변 도메인과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기가 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이에 계면을 형성하는 것으로 여겨진다. VH와 VL이 함께 쌍을 이루는 것은 단일 항원-결합 부위를 형성한다. 상이한 부류의 항체의 구조 및 특성에 대해서는, 예를 들어, 문헌[Basic and Clinical Immunology 71 (Stites et al. eds., 8th ed. 1994)]; 및 문헌[Immunobiology (Janeway et al. eds., 5th ed. 2001)]을 참조한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "Fab" 및 "Fab 영역"은 당업계에서의 이들의 통상적인 의미를 갖는다. 전형적으로, 용어 "Fab" 또는 "Fab 영역"은 항원에 결합하는 항체 영역을 지칭한다. 통상적인 IgG는 통상적으로 2개의 Fab 영역을 포함하며, 각각은 Y형 IgG 구조의 2개의 아암 중 하나 상에 존재한다. 각각의 Fab 영역은 전형적으로 중쇄 및 경쇄 각각의 하나의 가변 영역 및 하나의 불변 영역으로 구성된다. 더 구체적으로는, Fab 영역 내의 중쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VH 및 CH1 영역이고, Fab 영역 내의 경쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VL 및 CL 영역이다. Fab 영역 내의 VH, CH1, VL, 및 CL은 본 발명에 따른 항원 결합 능력을 부여하도록 다양한 방식으로 배열될 수 있다. 예를 들어, 통상적인 IgG의 Fab 영역과 유사하게, VH 및 CH1 영역은 하나의 폴리펩티드 상에 존재할 수 있고, VL 및 CL 영역은 별도의 폴리펩티드 상에 존재할 수 있다. 대안적으로, VH, CH1, VL, 및 CL 영역은 모두 동일한 폴리펩티드 상에 존재할 수 있고, 하기 섹션에 더 상세히 기재된 바와 같이 상이한 순서로 배향될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 항체와 관련하여 용어 "가변 영역" 및 "가변 도메인"은 당업계에서의 이들의 통상적인 의미를 갖는다. 전형적으로, 용어 "가변 영역", "가변 도메인", "V 영역", 또는 "V 도메인"은, 경쇄 또는 중쇄의 아미노-말단에 일반적으로 위치하며 길이가 중쇄에서는 약 120 내지 130개의 아미노산이고 경쇄에서는 약 100 내지 110개의 아미노산이고, 그의 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용되는, 항체의 경쇄 또는 중쇄 부분을 지칭한다. 중쇄의 가변 영역은 "VH"로 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 영역은 "VL"로 지칭될 수 있다. 용어 "가변"은 가변 영역의 소정 세그먼트가 항체들 사이에서 서열이 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 영역은 항원 결합을 매개하고 특정 항체의 그의 특정 항원에 대한 특이성을 한정한다. 그러나, 가변성은 가변 영역의 110-아미노산 스팬에 걸쳐 균일하게 분포되지 않는다. 그 대신에, V 영역은 길이가 각각 약 9 내지 12개의 아미노산인 "초가변 영역"이라고 칭하는 더 큰 가변성(예를 들어, 극단적 가변성)의 더 짧은 영역에 의해 분리된 약 15 내지 30개의 아미노산의 프레임워크 영역(FR)이라고 칭하는 덜 가변성인(예를 들어, 비교적 불변성) 구간으로 이루어진다. 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 영역은, 대체로 β-시트 입체구조를 채택하는 4개의 FR 영역을 포함하며, 이들 FR 영역은 3개의 초가변 영역에 의해 연결되며, 이들 초가변 영역은 β-시트 구조를 연결하는 루프를 형성하고, 일부 경우에는 이의 일부를 형성한다. 각각의 사슬 내의 초가변 영역은 FR에 의해 매우 근접하여 함께 유지되며, 다른 사슬로부터의 초가변 영역은 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (5th ed. 1991)] 참조). 불변 영역은 항체를 항원에 결합하는 데에는 직접 관여하지 않지만, 다양한 이펙터 기능, 예컨대 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC) 및 보체-의존성 세포독성(CDC)에 있어서의 항체의 참여를 나타낸다. 가변 영역은 상이한 항체들 사이에서 서열이 광범위하게 상이하다. 구체적인 실시 형태에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다.
용어 "카바트에 따른 가변 영역 잔기 넘버링" 또는 "카바트에서와 같은 아미노산 위치 넘버링", 및 이의 변형 형태는 문헌[Kabat et al., 상기 문헌]에서의 항체 편집의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역에 사용되는 넘버링 체계를 지칭한다. 이러한 넘버링 체계를 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축, 또는 이들 내로의 삽입에 상응하는 더 적거나 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 잔기 52 뒤에 단일 아미노산 삽입(카바트에 따른 잔기 52a) 및 잔기 82 뒤에 삽입된 3개의 잔기(예를 들어, 카바트에 따른 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카바트 넘버링은 주어진 항체에 대해 "표준" 카바트 넘버링 서열과 해당 항체 서열의 상동성 영역에서의 정렬에 의해 결정될 수 있다. 카바트 넘버링 체계는 일반적으로 가변 도메인 내의 잔기(대략 경쇄의 잔기 1 내지 107 및 중쇄의 잔기 1 내지 113)를 지칭하는 경우에 사용된다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., 상기 문헌]). "EU 넘버링 체계" 또는 "EU 인덱스"는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역 내의 잔기를 지칭하는 경우에 사용된다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., 상기 문헌]에 보고된 EU 인덱스). "카바트에서와 같은 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 다른 넘버링 체계는, 예를 들어, AbM, 초티아(Chothia), Contact, IMGT, 및 AHon에 의해 기재되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 항체와 관련하여 용어 "중쇄"는 당업계에서의 이의 통상적인 의미를 갖는다. 전형적으로, 항체에 관련하여 사용될 경우에, 용어 "중쇄"는 약 50 내지 70 kDa의 폴리펩티드 사슬을 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부분은 약 120 내지 130개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 불변 영역은 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열에 기초하여 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ), 및 뮤(μ)로 지칭되는 5개의 별개의 유형(예를 들어, 동종형) 중 하나일 수 있다. 별개의 중쇄들은 크기가 상이하다: α, δ, 및 γ는 대략 450개의 아미노산을 함유하는 반면에, μ 및 ε은 대략 550개의 아미노산을 함유한다. 경쇄와 조합되는 경우에, 이러한 별개의 유형의 중쇄는, IgG의 4개의 하위부류, 즉, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하는 5개의 잘 알려진 부류(예를 들어, 동종형)의 항체, IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM을 각각 생성한다. 다양한 종으로부터의 중쇄의 서열은 당업계에 알려져 있다(예를 들어, IMGT®, the international ImMunoGeneTics information system®, imgt.org 참조).
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 항체와 관련하여 용어 "경쇄"는 당업계에서의 이의 통상적인 의미를 갖는다. 전형적으로, 항체에 관련하여 사용될 경우에, 용어 "경쇄"는 약 25 kDa의 폴리펩티드 사슬을 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부분은 약 100 내지 약 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 경쇄의 대략적인 길이는 211 내지 217개의 아미노산이다. 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파(κ) 또는 람다(λ)로 지칭되는 2개의 별개의 유형이 존재한다. 다양한 종으로부터의 경쇄의 서열은 당업계에 알려져 있다(예를 들어, IMGT®, the international ImMunoGeneTics information system®, imgt.org 참조). 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 항체와 관련하여 용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은 당업계에서의 이의 통상적인 의미를 갖는다. 전형적으로, 용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은, 항원에 대한 항체의 결합에 직접적으로 관여하지는 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 이펙터 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카르복시 말단부를 지칭한다. 전형적으로, 이 용어는 항원-결합 부위를 함유하는 면역글로불린의 다른 부분, 즉 가변 영역에 비하여 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 일부분을 지칭한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2, 및 CH3 영역 및 경쇄의 CL 영역을 함유할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 항체와 관련하여 용어 "프레임워크" 또는 "FR"은 당업계에서의 이의 통상적인 의미를 갖는다. 전형적으로, 용어 "프레임워크" 또는 "FR"은 CDR을 플랭킹하는 가변 영역 잔기이다. FR 잔기는, 예를 들어 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 도메인 항체, 다이아바디, 선형 항체, 및 이중특이성 항체 내에 존재한다. FR 잔기는 초가변 영역 잔기 또는 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 항체와 관련하여 용어 "Fc 영역"은 당업계에서의 이의 통상적인 의미를 갖는다. 전형적으로, 용어 "Fc 영역"은, 예를 들어 천연 서열 Fc 영역, 재조합 Fc 영역, 및 변이체 Fc 영역을 포함한, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 한정하는 데 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 변동될 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 종종 위치 Cys226에서의 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230으로부터 이의 카르복실-말단까지 신장되도록 한정된다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 넘버링 체계에 따라 잔기 447)은, 예를 들어 항체의 생성 또는 정제 동안에, 또는 항체의 중쇄를 인코딩하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 있거나 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. "기능성 Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역의 "이펙터 기능"을 갖는다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식세포작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향조절 등을 포함한다. 그러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 영역 또는 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 영역 또는 도메인)과 조합되는 것을 필요로 하며, 당업자에게 알려진 다양한 검정을 사용하여 평가할 수 있다. "변이체 Fc 영역"은 하나 이상의 아미노산 변형(예를 들어, 치환, 부가, 또는 결실)에 의해 천연 서열 Fc 영역의 것과는 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 또는 모(parent) 폴리펩티드의 Fc 영역과 대비하여 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들어, 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역 내에 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 또는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본 명세서의 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 적어도 약 80%의 상동성, 또는 이들과 적어도 약 90%의 상동성, 예를 들어, 이들과 적어도 약 95%의 상동성을 보유할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 상동성은 서열 유사성에 의해 결정된다. 현대의 단백질 서열 데이터베이스는 매우 포괄적이다. 널리 사용되는 유사성 검색 프로그램, 예컨대 BLAST(문헌[Altschul et al. (1997), units 3.3 and 3.4]), PSI-BLAST(문헌[Altschul et al., 1997]), SSEARCH(문헌[Smith and Waterman (1981)]; 문헌[Pearson (1991), unit 3.10]), FASTA(문헌[Pearson and Lipman (1988), unit 3.9]) 및 HMMER3(문헌[Johnson et al., 2010]) 프로그램은 정확한 통계학적 추정량을 생성하며, 이는 단백질 서열들이 유의한 유사성을 공유하며, 또한 유사한 구조를 갖는다는 것을 보장한다.
항체 또는 다른 항체-결합 단백질과 관련하여, 용어 "특이성"은 항원의 특정 에피토프에 대한 항원-결합 단백질의 선택적 인식을 지칭한다. 천연 항체는, 예를 들어 단일특이성이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "다중특이성"은 항원-결합 단백질이 2개 이상의 항원-결합 부위를 가지며, 이들 중 적어도 2개가 상이한 항원에 결합함을 나타낸다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이중특이성"은 항원-결합 단백질이 2개의 상이한 항원-결합 특이성을 가짐을 나타낸다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단일특이성" 항체는, 하나 이상의 결합 부위를 가지되 이들 각각은 동일한 항원에 결합하는 항원-결합 단백질을 나타낸다.
용어 "폴리펩티드" 및 "펩티드" 및 "단백질"은 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용되며, 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭한다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있으며, 그것은 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 그것에는 비-아미노산이 개재될 수 있다. 이 용어는 또한 천연적으로 변형되었거나, 또는 개입에 의해, 예를 들어 이황화물 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다. 예를 들어, 아미노산의 하나 이상의 유사체 - 이는 비천연 아미노산을 포함하지만 이로 한정되지 않음 - 를 함유하는 폴리펩티드뿐만 아니라 당업계에 알려진 다른 변형이 정의 내에 또한 포함된다. 본 발명의 폴리펩티드는 면역글로불린 슈퍼패밀리의 항체 또는 다른 구성원에 기반할 수 있기 때문에, 소정 실시 형태에서, "폴리펩티드"는 단일쇄로서 또는 2개 이상의 회합된 사슬로서 발생할 수 있음이 이해된다.
본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용되는 바와 같이, "폴리뉴클레오티드", "뉴클레오티드 서열", 또는 "핵산 서열"은 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체를 지칭하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 이들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해, 또는 합성 반응에 의해 중합체 내로 도입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화된 뉴클레오티드 및 이들의 유사체를 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "올리고뉴클레오티드"는 일반적으로 길이가 약 200개 미만의 뉴클레오티드이지만 반드시 그러하지는 않은, 일반적으로 단일-가닥인 짧은 합성 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 용어 "올리고뉴클레오티드"와 "폴리뉴클레오티드"는 상호 배타적이지 않다. 폴리뉴클레오티드에 대한 상기 설명은 올리고뉴클레오티드에 동일하고 완전하게 적용가능하다. 본 발명의 항원-결합 단백질을 생성하는 세포는 모 하이브리도마 세포뿐만 아니라, 항체를 인코딩하는 핵산이 도입된 세균 및 진핵 숙주 세포를 포함할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에 개시된 임의의 단일-가닥 폴리뉴클레오티드 서열의 좌측 단부는 5' 단부이고; 이중-가닥 폴리뉴클레오티드 서열의 좌측 방향은 5' 방향으로 지칭된다. 신생(nascent) RNA 전사체의 5'으로부터 3'으로의 부가의 방향은 전사 방향으로 지칭되고; RNA 전사체의 5' 단부에 대해 5'에 있는 RNA 전사체와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥 상의 서열 영역은 "상류 서열"로 지칭되며; RNA 전사체의 3' 단부에 대해 3'에 있는 RNA 전사체와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥 상의 서열 영역은 "하류 서열"로 지칭된다.
"단리된" 폴리뉴클레오티드, 뉴클레오티드 서열, 핵산 분자, 또는 핵산 서열은 다른 게놈 DNA 서열, 게놈 DNA 서열뿐만 아니라 단백질 또는 복합체, 예컨대 리보솜 및 폴리머라제 - 이들은 천연적으로 천연 서열을 수반함 - 로부터 실질적으로 분리된, 핵산 서열, 예를 들어 RNA 서열, DNA 서열, 또는 핵산들의 조합을 함유하는 서열이다. "단리된" 핵산 분자는 핵산 분자의 천연 공급원 내에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리된 것이다. 더욱이, "단리된" 폴리뉴클레오티드, 뉴클레오티드 서열, 핵산 분자, 또는 핵산 서열, 예컨대 cDNA 분자에는, 재조합 기법에 의해 생성될 때에는 다른 세포 물질, 또는 배양 배지가 실질적으로 없을 수 있거나, 화학적으로 합성될 때에는 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 다른 항원-결합 단백질을 인코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드, 뉴클레오티드 서열, 핵산 분자, 또는 핵산 서열은 단리되거나 정제된다. 이 용어는 자연 발생 환경으로부터 제거된 폴리뉴클레오티드, 뉴클레오티드 서열, 핵산 분자, 및 핵산 서열을 포함하며, 재조합 또는 클로닝된 DNA 단리물 및 화학적으로 합성된 유사체 또는 이종성 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 유사체를 포함한다. 실질적으로 순수한 분자는 단리된 형태의 분자를 포함할 수 있다. 구체적으로는, 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단백질을 인코딩하는 "단리된" 폴리뉴클레오티드, 뉴클레오티드 서열, 핵산 분자, 또는 핵산 서열은, 확인되고 적어도 하나의 오염물 핵산 분자로부터 분리된 핵산 분자로서, 이때 오염물 핵산 분자란, 상기 분리된 핵산 분자가 생성된 환경에서 통상 그와 관련되어 있는 것이다.
달리 명시되지 않는 한, "아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열"은 서로의 축퇴된 버전인 그리고 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 모든 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 단백질 또는 RNA를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이라는 어구는 또한 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 어떤 버전에서 인트론(들)을 함유할 수 있는 정도까지 인트론을 포함할 수 있다.
용어 "벡터"는 핵산 서열을 숙주 세포 내로 도입하기 위해, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체)을 인코딩하는 핵산을 포함하는 핵산 서열을 운반하거나 포함하기 위해 사용되는 물질을 지칭한다. 사용에 적용가능한 벡터는, 예를 들어, 발현 벡터, 플라스미드, 파지 벡터, 바이러스 벡터, 에피솜, 및 인공 염색체를 포함하며, 이들은 숙주 세포의 염색체 내로의 안정한 통합을 위해 작동가능한 선택 서열 또는 마커를 포함할 수 있다. 또한, 벡터는 하나 이상의 선택가능한 마커 유전자 및 적절한 발현 제어 서열을 포함할 수 있다. 포함될 수 있는 선택가능한 마커 유전자는, 예를 들어, 항생제 또는 독소에 대한 저항성을 제공하거나, 영양요구성 결핍을 보충하거나, 배양 배지 내에 없는 중요한 영양소를 공급한다. 발현 제어 서열은 당업계에 잘 알려진 구성적 및 유도성 프로모터, 전사 인핸서, 전사 종결자 등을 포함할 수 있다. 2개 이상의 핵산 분자가 공발현되어야 하는 경우에(예를 들어, 항체 중쇄 및 경쇄 또는 항체 VH 및 VL 둘 모두), 예를 들어, 단일 발현 벡터 내로, 또는 별도의 발현 벡터 내에 둘 모두의 핵산 분자가 삽입될 수 있다. 단일 벡터 발현의 경우에, 인코딩 핵산은 하나의 공통 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결되거나, 상이한 발현 제어 서열, 예컨대 하나의 유도성 프로모터 및 하나의 구성적 프로모터에 연결될 수 있다. 숙주 세포 내로의 핵산 분자의 도입은 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 확인할 수 있다. 그러한 방법은, 예를 들어, mRNA의 노던 블롯 또는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 증폭과 같은 핵산 분석, 유전자 생성물의 발현에 대한 면역블로팅, 또는 도입된 핵산 서열의 발현 또는 그의 상응하는 유전자 생성물을 시험하기 위한 다른 적합한 분석 방법을 포함한다. 당업자는 핵산 분자가 원하는 생성물을 생성하기에 충분한 양으로 발현됨을 이해하며, 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 충분한 발현을 얻기 위해 발현 수준을 최적화할 수 있음을 추가로 이해한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는"은 미연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되어 있거나 미국 약전, 유럽 약전, 또는 동물에서의, 그리고 더 구체적으로는 인간에서의 사용에 대해 일반적으로 승인된 기타 약전에 열거되어 있음을 의미한다.
"부형제"는 물질, 조성물, 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 용매, 또는 캡슐화 재료를 의미한다. 부형제는, 예를 들어, 캡슐화 재료 또는 첨가제, 예컨대 흡수 촉진제, 산화방지제, 결합제, 완충제, 담체, 코팅제, 착색제, 희석제, 붕해제, 유화제, 증량제, 충전제, 향미제, 보습제, 윤활제, 향료, 보존제, 추진제, 이형제, 살균제, 감미제, 가용화제, 습윤제, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 용어 "부형제"는 또한 희석제, 애쥬번트(adjuvant)(예를 들어, 프로인트(Freund) 애쥬번트(완전 또는 불완전)), 또는 비히클을 지칭할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 부형제는 약제학적으로 허용되는 부형제이다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 예는 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기산; 산화방지제(아스코르브산을 포함함); 저분자량(예를 들어, 약 10개 미만의 아미노산 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌, 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함한 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당 알코올, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 소듐; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 TWEEN™, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 및 PLURONICS™를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 다른 예는 문헌[Remington and Gennaro, Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed. 1990)]에 기재되어 있다.
일 실시 형태에서, 약제학적 제형의 다른 성분과 상용성이고, 과도한 독성, 자극, 알레르기성 반응, 면역원성, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직 또는 장기와 접촉되어 사용하기에 적합하며, 합리적인 이익/위험 비에 상응한다는 의미에서, 각각의 성분은 "약제학적으로 허용가능"하다. 예를 들어, 문헌[Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th ed.]; 문헌[Rowe et al., Eds.; The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2009]; 문헌[Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd ed.; Ash and Ash Eds.; Gower Publishing Company: 2007]; 문헌Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 2nd ed.; Gibson Ed.; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2009]을 참조한다. 일부 실시 형태에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 사용된 투여량 및 농도에서 이에 노출되는 세포 또는 포유류에 대해 비독성이다. 일부 실시 형태에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 수성 pH 완충 용액이다.
일부 실시 형태에서, 부형제는 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 낙화생유, 대두유, 광유, 참기름 등을 포함하는, 물 및 오일과 같은 멸균 액체이다. 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)이 정맥내 투여되는 경우에 물이 예시적인 부형제이다. 식염수 용액, 및 덱스트로스 및 글리세롤 수용액이 또한, 특히 주사 용액을 위한 액체 부형제로서 사용될 수 있다. 부형제는 또한 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 곡분(flour), 백악, 실리카 겔, 소듐 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 탈지분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함할 수 있다. 조성물은, 필요하다면, 미량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다. 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 알약, 캡슐, 분말, 지속-방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 제형을 포함하는 경구 조성물은 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등과 같은 표준 부형제를 포함할 수 있다.
약제학적 화합물을 포함하는 조성물은, 적합한 양의 부형제와 함께, 예를 들어, 단리되거나 정제된 형태로, 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체)을 함유할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 원하는 결과를 가져오기 충분한 본 명세서에 기재된 폴리펩티드(예를 들어, 항원-결합 단백질, 예컨대 항체), 작용제(agent)(예를 들어, 치료용 단백질 또는 다른 작용제)의 양을 지칭한다.
용어 "대상체"와 "환자"는 동물에 대해 언급할 때 상호교환 가능하게 사용될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 소정 실시 형태에서, 대상체는 포유동물, 예컨대 비영장류 또는 영장류(예를 들어, 인간)이다. 구체적인 실시 형태에서, 대상체는 인간이다. 일 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 장애로 진단된 포유동물, 예를 들어, 인간이다. 다른 실시 형태에서, 대상체는 질병 또는 장애가 발생할 위험이 있는 포유동물, 예를 들어, 인간이다. 소정 실시 형태에서, 대상체는 비인간 동물, 예컨대 애완동물 또는 농장 동물(예를 들어, 개, 고양이, 소, 돼지, 말, 당나귀 등)이다.
"투여하다" 또는 "투여"는, 예컨대 점막, 피내, 정맥내, 근육내 전달, 및/또는 본 명세서에 기재되거나 당업계에 알려진 임의의 다른 물리적 전달 방법에 의해, 신체 외부에 존재하는 물질을 환자에게 주사하거나 달리 물리적으로 전달하는 행위를 지칭한다.
본 명세서에 제공된 실시 형태들의 실시는, 달리 나타내지 않는 한, 분자 생물학, 미생물학, 및 면역학의 통상적인 기법을 사용할 것이며, 이들은 당업자의 기술 범위 내에 있다. 그러한 기법은 문헌에 상세히 설명되어 있다. 참고용으로 특히 적합한 교재의 예로는 다음과 같은 것이 포함된다: 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제3 Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, New York (2001)]; 문헌[Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, MD (1999)]; 문헌[Glover, ed., DNA Cloning, Volumes I and II (1985)]; 문헌[Freshney, ed., Animal Cell Culture: Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press, 1986)]; 문헌[Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, London)]; 문헌[Scopes, Protein Purification: Principles and Practice (Springer Verlag, N.Y., 2d ed. 1987)]; 문헌[Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed. 2009)]; 문헌[Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Albitar ed. 2010)]; 및 문헌[Antibody Engineering Vols 1 and 2 (Kontermann and eds., 2d ed. 2010)].
본 출원의 독자를 돕기 위한 시도로, 다양한 단락 또는 섹션에서 설명이 분리되어 있거나 본 출원의 다양한 실시 형태로 설명되고 있다. 이들 분리는 단락 또는 섹션 또는 실시 형태의 요지를 다른 단락 또는 섹션 또는 실시 형태의 요지로부터 분리하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 반대로, 당업자는 발명의 상세한 설명이 넓은 응용을 가지며, 고려될 수 있는 다양한 섹션, 단락, 및 문장의 모든 조합을 포함한다는 것을 이해할 것이다. 임의의 실시예의 논의는 단지 예시적인 것으로 의도되며, 청구범위를 포함하는 본 개시 내용의 범주가 이들 실시예로 제한됨을 시사하고자 의도되지 않는다. 본 출원은 특정 조합이 명시적으로 기재되었는지의 여부에 관계없이 임의의 조합으로의 임의의 적용가능한 구성요소들의 사용을 고려한다.
7.1. 단백질
캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)이 본 명세서에 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질은 치료용 단백질이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 항원-결합 단백질이다. 일부 실시 형태에서, 항원-결합 단백질은, 예를 들어 노출된 C-말단이 있는 존재하는 임의의 것이며, 예를 들어, 단백질, 예컨대 관심 항체 또는 면역글로불린 슈퍼패밀리 도메인의 C-말단 상에 있는 VHH 또는 scFv / spFv이다. 일부 실시 형태에서, 항체는 도 1 내지 도 9a 중 어느 하나에 예시된 바와 같은 포맷을 갖는다.
폴리펩티드의 노출된 C-말단에 융합된 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))은 당업계에 알려진 임의의 수단에 의해 달성될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))은 폴리펩티드의 노출된 C-말단에 직접 연결된다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))은 폴리펩티드의 노출된 C-말단에 접합된다.
구체적인 태양에서, 하기 실시예 8.1 및/또는 실시예 8.2에 기재된 것과 같은, 캡 도메인을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 캡핑된 단백질은 하기 실시예 8.1 및/또는 실시예 8.2에 기재된 캡핑된 삼중특이성 항체의 특성들 중 하나 이상을 갖는다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질은 하기 실시예 8.1 및/또는 실시예 8.2에 기재된 캡핑된 삼중특이성 항체이다.
다른 태양에서, 하나 이상의 표적-결합 영역(예를 들어, 2개, 3개 또는 그 이상의 표적-결합 영역), 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 폴리펩티드가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인(예를 들어, 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인) 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, His 캡 도메인은 (His)n(서열 번호 25)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 폴리펩티드는 단리되어 있다.
다른 태양에서, 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 (a) 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인(예를 들어, 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인) 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, His 캡 도메인은 (His)n(서열 번호 25)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 다중특이성이다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질은 단리되어 있다.
다른 태양에서, 항체의 항원-결합 영역을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 항원-결합 영역은 상기 항체-결합 영역의 노출된 C-말단, 및 상기 노출된 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 항체 가변 도메인을 포함하는 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단, 및 상기 항체 가변 도메인의 노출된 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 항체 단편을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단, 및 상기 항체 단편의 노출된 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 1이다. 소정 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 2이다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 3이다. 소정 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 4(서열 번호 27)이다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 5(서열 번호 28)이다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 구체적인 실시 형태에서, 중쇄 가변 도메인은 낙타화되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21), LTVSS(서열 번호 29), 또는 VTVSA(서열 번호 30)로 이루어진다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질은 단리되어 있다.
일부 실시 형태에서, 항체 가변 도메인을 포함하는 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단, 및 상기 항체 가변 도메인의 노출된 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인을 포함하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단, 및 상기 항체 가변 도메인의 노출된 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 단리되어 있다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 구체적인 실시 형태에서, 중쇄 가변 도메인은 낙타화되지 않는다.
중쇄 면역글로불린 가변(VH) 도메인의 C-말단 아미노산 서열은 일반적으로, 인간에서 서열 VTVSS(서열 번호 21), 그리고 마우스에서 VTVSS(서열 번호 21), LTVSS(서열 번호 29), 또는 VTVSA(서열 번호 30)를 갖는다. 경쇄 면역글로불린 가변(VL) 도메인의 C-말단 아미노산 서열은 일반적으로, 인간에서 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)를 갖는다. 표준 면역글로불린 작제물에서, VH 도메인의 C-말단 아미노산은 제1 중쇄 불변(CH1) 도메인에 의해 매립되어 비노출된 상태이고, VL 도메인의 C-말단 아미노산은 경쇄 불변(CL) 도메인에 의해 매립되어 비노출된 상태이다. 그러나, 항체 단편은 VH 도메인 또는 VL 도메인 중 어느 하나, 또는 둘 모두의 C-말단이 더 이상 비노출된 상태에 있지 않도록 조작될 수 있다. 이로 인해 VH 도메인 또는 VL 도메인의 일부분이 효과적으로 노출되며, 이는 달리 자연 발생하지 않을 것이다. 결과적으로, 노출된 C-말단을 갖는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 갖는 항체 단편은 ADA 반응을 촉발할 수 있다.
따라서, 일 태양에서, 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 C-말단 아미노산 서열을 포함하며, 상기 C-말단 아미노산 서열의 아미노산 잔기들 중 마지막 6 내지 10개는 아미노산 서열 VTVSS(H)n(서열 번호 31)(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSH(서열 번호 1)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHH(서열 번호 2)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHHH(서열 번호 3)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHHHH(서열 번호 4)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질은 단리되어 있다.
일부 실시 형태에서, 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 C-말단 아미노산 서열을 포함하며, 상기 C-말단 아미노산 서열의 아미노산 잔기들 중 마지막 6 내지 10개는 아미노산 서열 VTVSS(H)n(서열 번호 31)(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSH(서열 번호 1)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHH(서열 번호 2)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHHH(서열 번호 3)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHHHH(서열 번호 4)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 단리되어 있다.
소정 실시 형태에서, 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 C-말단 아미노산 서열을 포함하며, 상기 C-말단 아미노산 서열의 아미노산 잔기들 중 마지막 6 내지 10개는 아미노산 서열 VTVSS(H)n(서열 번호 31)(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSH(서열 번호 1)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHH(서열 번호 2)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHHH(서열 번호 3)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHHHH(서열 번호 4)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 단리되어 있다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성이다.
다른 태양에서, 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 C-말단 아미노산 서열을 포함하며, 상기 C-말단 아미노산 서열의 아미노산 잔기들 중 마지막 5 내지 11개는 아미노산 서열 VEIK(H)n(서열 번호 32), VEIKR(H)n(서열 번호 33), 또는 VEIKRT(H)n(서열 번호 34)(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKH(서열 번호 6)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHH(서열 번호 7)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHHH(서열 번호 8)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHHHH(서열 번호 9)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRH(서열 번호 11)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHH(서열 번호 12)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHHH(서열 번호 13)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHHHH(서열 번호 14)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTH(서열 번호 16)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHH(서열 번호 17)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHHH(서열 번호 18)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHHHH(서열 번호 19)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질은 단리되어 있다.
소정 실시 형태에서, 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 C-말단 아미노산 서열을 포함하며, 상기 C-말단 아미노산 서열의 아미노산 잔기들 중 마지막 5 내지 11개는 아미노산 서열 VEIK(H)n(서열 번호 32), VEIKR(H)n(서열 번호 33), 또는 VEIKRT(H)n(서열 번호 34)(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKH(서열 번호 6)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHH(서열 번호 7)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHHH(서열 번호 8)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHHHH(서열 번호 9)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRH(서열 번호 11)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHH(서열 번호 12)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHHH(서열 번호 13)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHHHH(서열 번호 14)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTH(서열 번호 16)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHH(서열 번호 17)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHHH(서열 번호 18)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHHHH(서열 번호 19)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 단리되어 있다.
일부 실시 형태에서, 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 C-말단 아미노산 서열을 포함하며, 상기 C-말단 아미노산 서열의 아미노산 잔기들 중 마지막 5 내지 11개는 아미노산 서열 VEIK(H)n(서열 번호 32), VEIKR(H)n(서열 번호 33), 또는 VEIKRT(H)n(서열 번호 34)(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)으로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKH(서열 번호 6)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHH(서열 번호 7)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHHH(서열 번호 8)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHHHH(서열 번호 9)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRH(서열 번호 11)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHH(서열 번호 12)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHHH(서열 번호 13)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHHHH(서열 번호 14)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTH(서열 번호 16)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHH(서열 번호 17)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHHH(서열 번호 18)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHHHH(서열 번호 19)로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, C-말단 아미노산 서열은 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체이다.
구체적인 태양에서, 도 10a 및 도 10b에 예시된 항체와 같은 삼중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 삼중특이성 항체는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 삼중특이성 항체는 Fc-scFv 융합체를 포함하고, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단은 scFv 융합체의 C-말단에 있다. 일부 실시 형태에서, Fc-scFv 융합체는 제1 sc-Fv와 상이한 표적-결합 영역을 갖는 제2 scFv를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc-scFv 융합체는 Fab를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 각각의 노출된 C-말단이 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 2개 이상의 노출된 C-말단을 포함하는 삼중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 삼중특이성 항체는 T 세포 상의 CD3 및 암 세포의 표면 상에 존재하는 항원과 상호작용할 수 있는 표적-결합 도메인을 포함한다. 예를 들어, 암 세포 상에 존재하는 항원에 대해서는 하기 표 2를 참조한다. 도 10a 및 도 10b에 예시된 항체는 비제한적이고 단지 예시적인 것으로 이해되어야 한다. 구체적인 실시 형태에서, 삼중특이성 항체는 단리되어 있다.
다른 태양에서, 비자연 발생 C-말단, 및 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함하는 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)이 본 명세서에 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 항체의 항원-결합 영역을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단, 및 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 항체 가변 도메인을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단, 및 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 항체 단편을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단, 및 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 1이다. 소정 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 2이다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 3이다. 소정 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 4(서열 번호 27)이다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 5(서열 번호 28)이다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질은 단리되어 있다.
일부 실시 형태에서, 항체 가변 도메인을 포함하는 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단, 및 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인을 포함하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단, 및 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 구체적인 실시 형태에서, 중쇄 가변 도메인은 낙타화되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 단리되어 있다.
소정 실시 형태에서, 항체 단편을 포함하는 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단, 및 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 단편을 포함하는 다중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단, 및 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 단리되어 있다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성이다.
다른 태양에서, C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 항체의 항원-결합 영역을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 항체 가변 영역을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 가변 영역은 C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 항체 단편을 포함하는 단백질이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 1이다. 소정 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 2이다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 3이다. 소정 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 4(서열 번호 27)이다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 5(서열 번호 28)이다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질은 단리되어 있다.
일부 실시 형태에서, 항체의 항원-결합 영역을 포함하는 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체의 항원-결합 영역을 포함하는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)가 본 명세서에 제공되며, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 단리되어 있다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성이다.
일부 실시 형태에서, 항체 가변 도메인을 포함하는 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인을 포함하는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 구체적인 실시 형태에서, 중쇄 가변 도메인은 낙타화되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 단리되어 있다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성이다.
일부 실시 형태에서, 항체 단편을 포함하는 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 단편을 포함하는 다중특이성(예를 들어, 삼중특이성) 항체가 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 상기 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 단리되어 있다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성이다.
다른 태양에서, 항체 단편을 포함하는 단백질(예를 들어, 융합 단백질 또는 항원-결합 단백질)이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단, 및 상기 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 1이다. 소정 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 2이다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 3이다. 소정 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 4(서열 번호 27)이다. 일부 실시 형태에서, (His)n 서열의 n은 5(서열 번호 28)이다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질은 단리되어 있다.
어떠한 이론에 의해서도 구애됨이 없이, 구체적인 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)) 또는 (His)n 서열의 부가는 노출된 C-말단, 비자연 발생 C-말단, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 변경시키며, 이에 따라 폴리펩티드 또는 단백질은 더 이상 참조물과 상호작용하지 않게 되거나, 참조물과의 상호작용이 감소되게 된다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자이다. 따라서, 일부 실시 형태에서, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 갖는 단백질은 생물학적 물질에 존재하는 분자와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈장을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 상호작용은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.1에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%이다. 구체적인 실시 형태에서, 상호작용은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.1에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 면역검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용을 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, 상호작용은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.1에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 면역검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용을 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, 상호작용은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.1에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 면역검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용을 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, 상호작용은 (예컨대, 섹션 7.9.1에 기재된 검정)이거나, 또는 당업자에게 알려져 있다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용을 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, 상호작용은 (예컨대, 섹션 7.9.1에 기재된 검정)이거나, 또는 당업자에게 알려져 있다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용을 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, 상호작용은 (예컨대, 섹션 7.9.1에 기재된 검정)이거나, 또는 당업자에게 알려져 있다.
일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자를 포함한다(참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자이다). 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈장을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%이다.
일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 치료용 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 당업자에게 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 전기화학발광(ECL)-기반 검정, 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는 단백질과 ADA의 상호작용을 제거한다. 당업자에게 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는 단백질과 ADA의 상호작용을 제거한다. 당업자에게 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는 단백질과 ADA의 상호작용을 제거한다. 당업자에게 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는 단백질과 ADA의 상호작용을 제거한다. 당업자에게 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는 단백질과 ADA의 상호작용을 제거한다. 당업자에게 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드, 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 자기-응집에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는 폴리펩티드, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 응집을 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질과 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 감소된 자기-응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 각각에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 감소된 자기-응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 감소된 자기-응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 감소된 자기-응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 감소된 자기-응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 감소된 자기-응집을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질에 의해 나타나는 자기-응집에 비해 자기-응집에 있어서 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%이다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는 ADA에 의한 단백질의 중화를 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는 ADA에 의한 단백질의 중화를 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는 ADA에 의한 단백질의 중화를 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는 ADA에 의한 단백질의 중화를 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는 ADA에 의한 단백질의 중화를 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 개선이다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 개선이다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 10% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 20% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 30% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 40% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 50% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 60% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 70% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 80% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 90% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 95% 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 개선이다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 개선이다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 적어도 약 10% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 적어도 약 20% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 적어도 약 30% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 적어도 약 40% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 적어도 약 50% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 적어도 약 60% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 적어도 약 70% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 80% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 적어도 약 90% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질의 안전성에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 적어도 약 95% 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 ADA에 대한 감소된 친화도를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%이다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 ADA에 대한 감소된 친화도를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 친화도에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 적어도 약 2배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 친화도에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 적어도 약 5배 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 친화도에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 적어도 약 10배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 친화도에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 적어도 약 20배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 친화도에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 적어도 약 50배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 친화도에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 적어도 약 100배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 친화도에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 적어도 약 500배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 친화도에 있어서, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 500배 초과의 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 대한 단백질의 친화도는 (섹션 7.9.1에 기재된 검정에서와 같이) 단백질과 ADA 사이의 상호작용을 측정함으로써 결정되거나, 또는 당업자에게 알려진 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질의 노출된 C-말단, 비자연 발생 C-말단, 또는 C-말단 항-약물 에피토프에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 기법에 의해 평가될 때 단백질의 기능들 중 하나, 둘, 셋, 또는 그 이상, 또는 모든 기능을 방해하지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 노출된 C-말단, 비자연 발생 C-말단, 또는 C-말단 항-약물 에피토프에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 기법에 의해 평가될 때 단백질의 기능들 중 하나, 둘, 셋, 또는 그 이상, 또는 모든 기능을 방해하지 않는다. 예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질의 노출된 C-말단, 비자연 발생 C-말단, 또는 C-말단 항-약물 에피토프에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는 표적 항원에 대한 항체 또는 다른 항원-결합 단백질의 결합을 감소 또는 억제하지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 항체의 노출된 C-말단, 비자연 발생 C-말단, 또는 C-말단 항-약물 에피토프에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.5에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 기법에 의해 평가될 때 단백질의 구조를 방해하지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단, 비자연 발생 C-말단, 또는 C-말단 항-약물 에피토프에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.5에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 기법에 의해 평가될 때 단백질의 구조를 방해하지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 치료용 단백질)은 노출된 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 치료용 단백질)은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 치료용 단백질)은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 치료용 단백질)은 노출된 C-말단 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 치료용 단백질)은 비자연 발생 C-말단, 및 비자연 발생 C-말단의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 치료용 단백질)은 C-말단 항-약물 항체 에피토프, 및 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함한다.
구체적인 실시 형태에서, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 동일한 단백질에 의해 나타나는 상호작용에 비해 참조물과의 감소된 상호작용을 나타낸다. 소정 실시 형태에서, 단백질과 참조물 사이의 상호작용은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 25%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 단백질과 참조물 사이의 상호작용은 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%만큼 감소된다. 소정 실시 형태에서, 단백질과 참조물 사이의 상호작용은 적어도 50%, 적어도 65%, 적어도 70%, 또는 적어도 85%만큼 감소된다. 소정 실시 형태에서, 단백질과 참조물 사이의 상호작용은 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%만큼 감소된다.
일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자를 포함한다(참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자이다). 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청(예를 들어, 인간 혈청)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈장(예를 들어, 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 감소를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질과 ADA의 상호작용에 비해 감소를 나타낸다. 소정 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 25%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 또는 적어도 50%만큼 감소된다. 소정 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 또는 적어도 75%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%만큼 감소된다.
구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 ADA에 의한 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 감소를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은, ADA에 의한 단백질의 중화에 있어서, 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 ADA에 의한 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 중화에 비해 감소를 나타낸다. 소정 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 25%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 또는 적어도 50%만큼 감소된다. 소정 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 또는 적어도 75%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%만큼 감소된다.
구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 개선을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은, 단백질의 약동학적 특성에 있어서, 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 약동학적 특성에 비해 개선을 나타낸다. 소정 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 25%만큼 개선된다. 일부 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 또는 적어도 50%만큼 개선된다. 소정 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 또는 적어도 75%만큼 개선된다. 일부 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%만큼 개선된다.
구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은, 단백질의 안전성에 있어서, 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 개선을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은, 단백질의 안전성에 있어서, 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질의 안전성에 비해 개선을 나타낸다. 소정 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 25%만큼 개선된다. 일부 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 또는 적어도 50%만큼 개선된다. 소정 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 또는 적어도 75%만큼 개선된다. 일부 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%만큼 개선된다.
구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은, 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 감소된 응집을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 있는 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질은, 동일한 검정에 의해 결정될 때, 동일한 조건 하에서 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질에 비해 감소된 응집을 나타낸다. 소정 실시 형태에서, 응집은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 25%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 또는 적어도 50%만큼 감소된다. 소정 실시 형태에서, 응집은 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 또는 적어도 75%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%만큼 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 자기-응집이다. 일부 실시 형태에서, 응집은 고농도 액체 제형(HCLF)에서 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, HCLF는 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL이다. 일부 실시 형태에서, 응집은 생물학적 물질(예를 들어, 혈청 및/또는 혈장) 내에서 감소된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 열 스트레스(예를 들어, 약 40℃에서의 인큐베이션) 하에서 결정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 생리학적 스트레스(예를 들어, 약 37℃에서의 인큐베이션) 하에서 결정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 2주 동안 약 40℃에서의 인큐베이션에 의해 결정된다.
본 명세서에 제공되는 바와 같이, 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는 폴리펩티드 또는 단백질의 안정성을 변경시키지 않는다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는 폴리펩티드 또는 단백질의 열안정성을 변경시키지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질의 안정성은 (예컨대, 섹션 7.9.6에 기재된 검정에서와 같은), 또는 당업자에게 알려진 단백질 안정성 검정에 의해 결정된다.
소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 사이토카인이다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-12, IL-23, IL-1β, IL-6, IL-15, IL-2, TNF-알파, IL-9, 또는 IL-17이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 효소이다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 호르몬이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 항원-결합 단백질을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 항체를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 항체이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 항체 단편을 포함한다. 항체 단편은 기능성 항체 단편일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 융합 단백질이다. 융합 단백질은 항체의 항원-결합 영역, 예컨대 가변 중쇄 도메인, 가변 경쇄 도메인, 중쇄, 또는 경쇄를 포함할 수 있다. 융합 단백질은 항체 단편을 포함할 수 있으며, 항체 단편은 기능성 단편일 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 단리되어 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 재조합적으로 생성된다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 치료용 단백질이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 이종성 단백질 또는 폴리펩티드(또는 이의 단편)에, 예를 들어 약 10, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450 또는 약 500개의 아미노산, 또는 500개 초과의 아미노산의 폴리펩티드에 재조합적으로 융합되거나 화학적으로 접합되어(공유적 또는 비공유적 접합) 융합 단백질을 생성하는 항체, 항체-결합 영역, 또는 항체 단편뿐만 아니라, 이의 용도를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체의 항원-결합 단편(예를 들어, CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3) 및 이종성 단백질을 포함하는 융합 단백질이 본 명세서에 제공된다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 링커를 통해 이종성 단백질에 연결된 항체, 항체-결합 영역, 또는 항체 단편을 포함한다. 링커는, 그러한 링커가 항체, 항체-결합 영역 또는 항체 단편, 및/또는 이종성 단백질의 기능 및/또는 구조를 방해하지 않는 한, 당업자에게 알려진 임의의 링커일 수 있다. 예를 들어, 링커는 글리신 링커((Gly)n(서열 번호 35), 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상임) 또는 글리신-세린 링커일 수 있다. 링커는 가요성 링커일 수 있다. 소정 실시 형태에서, 항체, 항체-결합 영역, 또는 항체 단편이 치료용 분자에 유전자적으로 접합되며, 이때 힌지 영역이 항체를 치료용 분자에 연결시킨다. 소정 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 또는 다중특이성이다. 소정 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성이다.
항체 단편은 항원에 결합하는 능력을 유지하는 항체 기능성 단편을 포함한다. 예시적인 기능성 단편은 하기를 포함한다: Fab 단편(예를 들어, 항원-결합 도메인을 함유하고, 이황화물 결합에 의해 가교된 중쇄의 일부와 경쇄를 포함하는 항체 단편); Fab'(예를 들어, Fab를 포함하는 단일 항원-결합 도메인 및 힌지 영역을 통한 중쇄의 추가 부분을 함유하는 항체 단편); F(ab')2(예를 들어, 중쇄의 힌지 영역 내의 사슬간 이황화물 결합에 의해 연결된 2개의 Fab' 분자; Fab' 분자들은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 이중특이성 Fab(예를 들어, 2개의 항원-결합 도메인을 갖는 Fab 분자; 이들 각각은 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); scFv로도 알려진, 가변 영역을 포함하는 단일쇄(예를 들어, 사슬(예를 들어, 10 내지 25개 아미노산)에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄와 중쇄의 가변, 항원-결합 결정 영역); 이황화물-연결된 Fv, 또는 dsFv(예를 들어, 이황화물 결합에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄와 중쇄의 가변, 항원-결합 결정 영역); 낙타화 VH(예를 들어, VH 계면에서의 일부 아미노산이 자연 발생 낙타 항체의 중쇄에서 발견되는 것들인 항체의 단일 중쇄의 가변, 항원-결합 결정 영역); 이중특이성 scFv(예를 들어, 2개의 항원-결합 도메인을 갖는 scFv 또는 dsFv 분자; 이들 각각은 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 다이아바디(예를 들어, 제1 scFv의 VH 도메인이 제2 scFv의 VL 도메인과 조립될 때 형성되고, 제1 scFv의 VL 도메인이 제2 scFv의 VH 도메인과 조립될 때 형성되는 이량체화된 scFv; 다이아바디의 2개의 항원-결합 영역은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 트라이아바디(예를 들어, 삼량체화된 scFv로서, 이는 다이아바디와 유사한 방식으로 형성되지만, 여기서는 3개의 항원-결합 도메인이 단일 복합체로 생성됨; 3개의 항원-결합 도메인은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음); 및 테트라바디(예를 들어, 사량체화된 scFv로서, 이는 다이아바디와 유사한 방식으로 형성되지만, 여기서는 4개의 항원-결합 도메인이 단일 복합체로 생성됨; 4개의 항원-결합 도메인은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 유도될 수 있음).
항체 단편의 생성을 위한 다양한 기법이 개발되어 있다. 전통적으로, 이들 단편은 온전한 항체의 단백질 분해적 분해를 통해 유도되었다(예를 들어, 문헌[Morimoto et al., 1992, J. Biochem. Biophys. Methods 24:107-17]; 및 문헌[Brennan et al., 1985, Science 229:81-83] 참조). 그러나, 이들 단편은 이제 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생성될 수 있다. 예를 들어, Fab, Fv, 및 scFv 항체 단편은 모두 E. 콜라이(E. coli) 또는 효모 세포에서 발현되고 그로부터 분비될 수 있으며, 이로써 다량의 이들 단편의 용이한 생성을 가능하게 할 수 있다. 항체 단편은 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편이 E. 콜라이로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(문헌[Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-67]). 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 단리될 수 있다. 구제 수용체(salvage receptor) 결합 에피토프 잔기를 포함하는 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편이, 예를 들어 미국 특허 제5,869,046호에 기재되어 있다. 항체 단편의 생성을 위한 다른 기법이 숙련된 실무자에게 명백할 것이다. 소정 실시 형태에서, 항체는 단일쇄 Fv 단편(scFv)이다(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 93/16185호; 미국 특허 제5,571,894호 및 제5,587,458호 참조). Fv 및 scFv는 불변 영역이 없는 온전한 결합 부위를 가지며; 따라서, 이들은 생체내 사용 동안 감소된 비특이적 결합에 적합할 수 있다. scFv 융합 단백질은 scFv의 아미노 말단 또는 카르복시 말단 중 어느 하나에서의 이펙터 단백질의 융합을 얻도록 구성될 수 있다(예를 들어, 문헌[Borrebaeck ed., 상기 문헌] 참조). 항체 단편은 또한, 예를 들어 상기 인용된 참고문헌에 기재된 바와 같은 "선형 항체"일 수 있다. 그러한 선형 항체는 단일특이성 또는 다중특이성, 예컨대 이중특이성일 수 있다.
구체적인 실시 형태에서, 항체 단편은 단일쇄 단편 가변(scFv) 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 단편은 단일쇄 단편 가변(scFv)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 단편은 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 단편은 단일쇄 단편 가변(scFv)으로 이루어진다. 소정 실시 형태에서, 항체 단편은 단일 도메인 항체로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, scFv는 화학적으로 변형되어 있다. 일부 실시 형태에서, scFv는 티오-조작된 티올-결합을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 도 1 내지 도 9a 중 어느 하나에 도시된 하나의 구조를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)은, 예를 들어 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 알려진 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해적 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 대한 결합, 또는 하나 이상의 면역글로불린 도메인(예를 들어, Fc 또는 Fc의 일부분)에 대한 접합에 의해 화학적으로 변형된다. 다수의 화학적 변형들 중 임의의 것이 특정 화학적 절단, 아세틸화, 제형화, 튜니카마이신의 대사 합성 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는 알려진 기법에 의해 수행될 수 있다. 추가적으로, 단백질은 하나 이상의 비고전적 아미노산을 함유할 수 있다.
본 명세서에 제공된 바와 같이, 일부 태양에서, 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)은 종양 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 2개, 3개, 또는 그 이상의 종양 항원에 결합하는 이중특이성 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)이다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 3개의 상이한 종양 항원에 결합하는 삼중특이성 항체이다. 종양 항원은 면역 반응, 특히 T-세포 매개 면역 반응을 유도할 수 있는 종양 세포에 의해 생성되는 단백질을 포함한다. 예시적인 종양 항원은 신경교종-관련 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토프로테인(AFP), B-세포 성숙 항원(BCMA), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CAIX, 인간 텔로머라제 역전사효소, GPRC5D, RU1, RU2(AS), 위장 카르복실에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, HER2/neu, 서비빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), CD70, CD20, MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체, 및 메소텔린을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
일부 실시 형태에서, 종양 항원은 악성 종양과 관련된 하나 이상의 항원성 암 에피토프를 포함한다. 악성 종양은 면역 공격을 위한 표적 항원으로서 작용할 수 있는 다수의 단백질을 발현한다. 이들 분자는 흑색종의 MART-1, 티로시나제 및 gp100과 같은 조직-특이적 항원 및 전립선 암의 전립선 산 포스파타제(PAP) 및 전립선-특이적 항원(PSA)을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 다른 표적 분자는 발암유전자 HER2/Neu/ErbB-2와 같은 형질전환-관련 분자의 군에 속한다. 표적 항원의 또 다른 군은 종양-태아 항원, 예컨대 암배아 항원(CEA)이다.
일부 실시 형태에서, 종양 항원은 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-관련 항원(TAA)이다. TSA는 종양 세포에 고유하고, 신체의 다른 세포 상에서 발생하지 않는다. TAA는 종양 세포에 고유하지 않으며, 대신 항원에 대한 면역학적 관용의 상태를 유도하지 못하는 조건 하에서 정상 세포 상에서 발현된다. 종양 상에의 항원의 발현은 면역 시스템이 항원에 반응할 수 있게 하는 조건 하에서 발생할 수 있다. TAA는 면역 시스템이 미성숙하고 반응할 수 없을 때에는 태아 발생 동안 정상 세포에서 발현되는 항원일 수 있거나, 이들은 정상 세포에서 훨씬 더 낮은 수준으로 존재하지만, 종양 세포에서는 훨씬 더 높은 수준으로 발현되는 항원일 수 있다.
TSA 또는 TAA의 비제한적인 예에는 하기가 포함된다: 분화 항원, 예컨대 MART-1/MelanA(MART-I), gp 100(Pmel 17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2 및 종양-특이적 다계열 항원 예컨대 MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, pl5; 과발현된 배아 항원, 예컨대 CEA; 과발현된 발암유전자 및 돌연변이된 종양-억제 유전자, 예컨대 p53, Ras, HER2/neu; 염색체 전위로부터 생성된 고유한 종양 항원; 예컨대, BCR-ABL, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR; 및 바이러스 항원, 예컨대 엡스타인-바르(Epstein Barr) 바이러스 항원 EBVA 및 인간 유두종 바이러스(HPV) 항원 E6 및 E7.
다른 큰 단백질-기반 항원은 TSP-180, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6, RAGE, NY-ESO, pl85erbB2, pl80erbB-3, c-met, nm-23HI, PSA, TAG-72, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, 베타-카테닌, CDK4, Mum-1, p 15, p 16, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 알파-페토프로테인, 베타-HCG, BCA225, BTAA, CA 125, CA 15-3\CA 27.29\BCAA, CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, CD68\P1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733\EpCAM, HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB/70K, NY-CO- 1, RCAS 1, SDCCAG16, TA-90\Mac-2 결합 단백질\사이클로필린 C-관련 단백질, TAAL6, TAG72, TLP, 및 TPS를 포함한다.
다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)은 비종양 항원, 예컨대 사이토카인(예를 들어, IL-12/23, IL-1β, IL-6), 사이토카인 수용체(예를 들어, IL-6R), 병원체(예를 들어, 바이러스, 세균, 진균 또는 기생충), 또는 질병 또는 장애를 유도하거나 촉진할 수 있는 임의의 다른 분자에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하기 표 2에 열거된 항체와 동일한 표적에 결합하는 항체가 본 발명에 사용하기에 적합하다.
다양한 구매가능한 항체가 하기 표 2에 제공되어 있으며, 온전한 항체로서, 항체 단편으로서, 또는 다이량체성(multidimeric) 항체(예를 들어, 융합 단백질)의 일부분으로서 본 발명에 사용하기에 적합하다.
표 3에 제공된 유기체의 항원에 결합하는 항체가 본 발명에 사용하기에 적합하다. 예를 들어, 유기체의 항원은 표 3에 제공된 것일 수 있다.
[표 2]
[표 3]
7.2. 폴리뉴클레오티드
일 태양에서, 본 명세서에 기재된 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열이 본 명세서에 제공된다. 본 발명의 핵산 서열은 RNA의 형태 또는 DNA의 형태일 수 있다. DNA는 cDNA, 게놈 DNA, 및 합성 DNA를 포함하고; 이중-가닥 또는 단일-가닥일 수 있으며, 단일 가닥인 경우에는 코딩 가닥 또는 비-코딩(안티-센스) 가닥일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 핵산 서열은 cDNA의 형태이다. 일부 실시 형태에서, 핵산 서열은 합성 폴리뉴클레오티드이다.
다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 핵산 서열을 포함하는 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일 실시 형태에서, 핵산 서열은 재조합 발현 벡터 내로 도입될 수 있다. 본 발명은 본 발명의 임의의 핵산 서열을 포함하는 재조합 발현 벡터를 제공한다. 구체적인 실시 형태에서, "재조합 발현 벡터"는 유전자 변형된 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 작제물을 지칭하는 것으로서, 이러한 작제물이 mRNA, 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 이러한 벡터가 숙주 세포(예를 들어, 세균, 식물, 진균, 또는 동물 세포) 내에서 발현되는 mRNA, 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드를 갖기에 충분한 조건 하에서 세포와 접촉될 때, 세포에 의한 mRNA, 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드의 발현을 가능하게 한다. 본 명세서에 기재된 벡터는 전체적으로 자연 발생하지는 않지만; 벡터의 일부는 자연 발생할 수 있다. 기재된 재조합 발현 벡터는 DNA 및 RNA를 포함하지만 이로 한정되지 않는 임의의 유형의 뉴클레오티드를 포함할 수 있으며, 이는 단일 가닥 또는 이중 가닥이거나, 합성되거나, 천연 공급원으로부터 부분적으로 획득될 수 있고, 천연, 비천연 또는 변경된 뉴클레오티드를 함유할 수 있다. 재조합 발현 벡터는 자연 발생 또는 비자연 발생 뉴클레오티드간 결합, 또는 두 결합 유형 모두를 포함할 수 있다. 비자연 발생 또는 변경된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드간 결합은 벡터의 전사 또는 복제를 방해하지 않는다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 재조합 발현 벡터는 임의의 적합한 재조합 발현 벡터일 수 있으며, 임의의 적합한 숙주(예를 들어, 세균, 식물, 진균, 또는 동물)를 형질전환시키거나 형질감염시키는 데 사용될 수 있다. 적합한 벡터는 전파 및 증폭을 위해 또는 발현을 위해 또는 둘 모두를 위해 설계된 것들, 예컨대 플라스미드 및 바이러스를 포함한다. 벡터는 pUC 시리즈(미국 메릴랜드주 글렌 버니 소재의 Fermentas Life Sciences), pBluescript 시리즈(미국 캘리포니아주 라졸라 소재의 Stratagene), pET 시리즈(미국 위스콘신주 매디슨 소재의 Novagen), pGEX 시리즈(스웨덴 웁살라 소재의 Pharmacia Biotech), 및 pEX 시리즈(미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재의 Clontech)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 박테리오파지 벡터, 예컨대 λGT10, λGT11, λEMBL4, 및 λNM1149, λZapII(Stratagene)가 사용될 수 있다. 식물 발현 벡터의 예에는 pBI01, pBI01.2, pBI121, pBI101.3, 및 pBIN19(Clontech)가 포함된다. 동물 발현 벡터의 예에는 pEUK-C1, pMAM, 및 pMAMneo(Clontech)가 포함된다. 재조합 발현 벡터는 바이러스 벡터, 예를 들어 레트로바이러스 벡터, 예를 들어 감마 레트로바이러스 벡터일 수 있다.
일 실시 형태에서, 재조합 발현 벡터는, 예를 들어 문헌[Sambrook et al., 상기 문헌], 및 문헌[Ausubel et al., 상기 문헌]에 기재된 표준 재조합 DNA 기법을 사용하여 제조된다. 원형 또는 선형인 발현 벡터의 작제물은 원핵생물 또는 진핵생물 숙주 세포에서 기능적인 복제 시스템을 함유하도록 제조될 수 있다. 복제 시스템은, 예를 들어 ColE1, SV40, 2μ 플라스미드, λ, 소 유두종 바이러스 등으로부터 유래될 수 있다.
재조합 발현 벡터는 적절한 경우에 그리고 벡터가 DNA- 또는 RNA-기반인지의 여부를 고려하여, 벡터가 도입될 숙주(예를 들어, 세균, 식물, 진균, 또는 동물)의 유형에 특이적인 조절성 서열, 예컨대 전사 및 번역 개시 및 종결 코돈을 포함할 수 있다.
재조합 발현 벡터는 형질전환된 또는 형질감염된 숙주의 선택을 가능하게 하는 하나 이상의 마커 유전자를 포함할 수 있다. 마커 유전자는 살생제 저항성, 예를 들어 항생제, 중금속 등에 대한 저항성, 영양요구성 숙주에서 원영양성을 제공하기 위한 상보성 등을 포함한다. 기재된 발현 벡터에 적합한 마커 유전자는, 예를 들어 네오마이신/G418 저항성 유전자, 히스티딘올 × 저항성 유전자, 히스티딘올 저항성 유전자, 테트라사이클린 저항성 유전자, 및 암피실린 저항성 유전자를 포함한다.
재조합 발현 벡터는 본 발명의 뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결된 천연 또는 규범적 프로모터를 포함할 수 있다. 프로모터의 선택, 예를 들어 강한, 약한, 조직-특이적, 유도성 및 발생-특이적 프로모터의 선택은 당업자의 기술 내에 있다. 유사하게, 뉴클레오티드 서열을 프로모터와 조합하는 것이 또한 당업자의 기술 내에 있다. 프로모터는 비-바이러스성 프로모터 또는 바이러스성 프로모터, 예를 들어 거대세포바이러스(CMV) 프로모터, RSV 프로모터, SV40 프로모터, 또는 뮤린 줄기 세포 바이러스의 긴 말단 반복부에서 발견되는 프로모터일 수 있다.
재조합 발현 벡터는 일시적 발현을 위해, 안정한 발현을 위해, 또는 둘 모두를 위해 설계될 수 있다. 또한, 재조합 발현 벡터는 구성적 발현을 위해 또는 유도성 발현을 위해 제조될 수 있다.
또한, 재조합 발현 벡터는 자살 유전자를 포함하도록 제조될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "자살 유전자"는 자살 유전자를 발현하는 세포가 죽게 하는 유전자를 지칭한다. 자살 유전자는, 유전자가 발현되는 세포 상에서 작용제, 예를 들어 약물에 대한 감수성을 부여하고, 세포가 작용제와 접촉되거나 그에 노출될 때 세포가 죽게 하는 유전자일 수 있다. 자살 유전자는 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어 단순 헤르페스 바이러스(HSV) 티미딘 키나제(TK) 유전자, 시토신 데아미나제, 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제, 및 니트로리덕타제를 포함한다.
소정 실시 형태에서, 핵산 서열은 단리되어 있다. 소정 실시 형태에서, 핵산 서열은 실질적으로 순수하다.
본 명세서에 기재된 핵산 서열을 포함하는 세포가 또한 제공된다. 세포는 이종 핵산 서열을 함유하는 임의의 세포일 수 있다. 이종 핵산 서열은 벡터(예를 들어, 발현 벡터)일 수 있다. 예를 들어, 세포는 그 세포에 의한 물질의 생성, 예를 들어 그 세포에 의한 유전자, DNA 또는 RNA 서열, 단백질 또는 효소의 발현을 위하여 임의의 방식으로 선택되거나, 변형되거나, 형질전환되거나, 성장되거나, 사용되거나, 조작된 임의의 유기체로부터의 세포일 수 있다. 적절한 숙주가 결정될 수 있다. 예를 들어, 세포는 벡터 골격 및 원하는 결과에 기초하여 선택될 수 있다. 예로서, 플라스미드 또는 코스미드가 몇몇 유형의 벡터의 복제를 위하여 원핵 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. DH5α, JM109, 및 KCB, SURE® 컴피턴트 세포, 및 SOLOPACK 골드 세포와 같은 그러나 이로 한정되지 않는 세균 세포가 벡터 복제 및/또는 발현을 위한 세포로서 사용될 수 있다. 추가적으로, 세균 세포, 예컨대 E. 콜라이 LE392가 파지 바이러스를 위한 세포로서 사용될 수 있다. 세포로서 사용될 수 있는 진핵 세포는 효모(예를 들어, YPH499, YPH500 및 YPH501), 곤충 및 포유동물을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 벡터의 복제 및/또는 발현을 위한 포유류 진핵 세포의 예에는 HeLa, NIH3T3, Jurkat, 293, COS, Saos, PC12, SP2/0(미국 버지니아주 머내서스 소재의 ATCC(American Type Culture Collection), CRL-1581), NS0(영국 윌트셔주 솔즈베리 소재의 ECACC(European Collection of Cell Cultures), ECACC No. 85110503), FO(ATCC CRL-1646) 및 Ag653(ATCC CRL-1580) 뮤린 세포주가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 예시적인 인간 골수종 세포주는 U266(ATCC CRL-TIB-196)이다. 다른 유용한 세포주는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 예를 들어 CHO-K1SV(미국 메릴랜드주 워커스빌 소재의 Lonza Biologics), CHO-K1(ATCC CRL-61) 또는 DG44로부터 유래되는 것들을 포함한다. 핵산 서열로 형질감염 또는 형질전환된 세포는 그러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 포함한다. 이러한 세포의 자손은 후속 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 세포 게놈 내로의 핵산 서열의 통합으로 인해 핵산 서열로 형질감염 또는 형질전환된 모세포와 동일하지 않을 수 있다.
7.3. 단백질의 생성 방법
일 태양에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)을 생성하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열로 형질감염 또는 형질전환된 세포(들)를 배양하는 단계를 포함한다. 세포는 본 명세서에(예를 들어, 이 섹션 또는 섹션 7.2에) 기재된 임의의 세포일 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 상기 방법은 세포(들)로부터 단백질을 단리하는 단계를 추가로 포함한다.
다른 태양에서, 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)을 생성하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 단백질을 인코딩하는 핵산 서열을 함유하는 벡터로 형질전환 또는 형질감염된 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 세포는 본 명세서에(예를 들어, 이 섹션 또는 섹션 7.2에) 기재되어 있거나 당업계에 알려진 임의의 세포일 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 상기 방법은 세포(들)로부터 단백질을 단리하는 단계를 추가로 포함한다.
본 발명의 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)의 폴리펩티드 성분을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 표준 재조합 기법을 사용하여 얻어질 수 있다. 원하는 폴리뉴클레오티드 서열은 단백질(예를 들어, 항체) 생성 세포, 예컨대 하이브리도마 세포 또는 B 세포로부터 단리 및 서열분석될 수 있다. 대안적으로, 뉴클레오티드 합성기 또는 PCR 기법을 사용하여 폴리뉴클레오티드가 합성될 수 있다. 일단 얻어지면, 폴리펩티드를 인코딩하는 서열이 세포에서 이종성 폴리뉴클레오티드를 복제 및 발현할 수 있는 재조합 벡터 내로 삽입된다. 이용가능하고 당업계에 알려진 많은 벡터가 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 적절한 벡터의 선택은 벡터 내로 삽입하고자 하는 핵산 서열의 크기, 및 벡터로 형질전환시키고자 하는 특정 세포에 주로 좌우될 것이다.
본 발명의 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)을 발현시키기에 적합한 세포는 원핵생물, 예컨대 고세균(Archaebacteria) 및 진정세균(Eubacteria) - 이에는 그람-음성 또는 그람-양성 유기체가 포함됨 -, 진핵 미생물, 예컨대 사상 진균 또는 효모, 무척추 세포, 예컨대 곤충 또는 식물 세포, 및 척추동물 세포, 예컨대 포유류 세포주를 포함한다. 세포는 전술된 발현 벡터로 형질전환되고, 적절한 경우에 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선택하거나, 또는 원하는 서열을 인코딩하는 유전자를 증폭시키도록 변형된 통상적인 영양소 배지 중에서 배양된다. 세포에 의해 생성된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)은 당업계에 알려진 바와 같은 표준 정제 방법을 사용하여 단리 또는 정제될 수 있다.
벡터 작제, 발현, 및 정제를 포함한 항체 생성을 위한 방법이 문헌 [Plㆌckthun et al., Antibody Engineering: Producing antibodies in Escherichia coli: From PCR to fermentation 203-52 (McCafferty et al., eds., 1996)]; 문헌[Kwong and Rader, E. coli Expression and Purification of Fab Antibody Fragments, in Current Protocols in Protein Science (2009)]; 문헌[Tachibana and Takekoshi, Production of Antibody Fab Fragments in Escherichia coli, in Antibody Expression and Production (Al- Rubeai ed., 2011)]; 및 문헌[Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed., 2009)]에 추가로 기재되어 있다.
물론, 당업계에 잘 알려진 대안적인 방법이 본 명세서에 기재된 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)을 제조하는 데 사용될 수 있다는 것이 고려된다. 예를 들어, 적절한 아미노산 서열 또는 이의 일부분이 고상 기법을 사용하여 직접 펩티드 합성에 의해 생성될 수 있다(예를 들어, 문헌[Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis (1969)]; 및 문헌[Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85: 2149-54 (1963)] 참조). 시험관내 단백질 합성이 수동 기법을 사용하여 수행되거나 자동화에 의해 수행될 수 있다. 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)의 다양한 일부분들을 화학적 또는 효소적 방법을 사용하여 개별적으로 화학적으로 합성하고 조합하여 원하는 단백질을 생성할 수 있다.
7.3.1.
원핵 세포에서의 재조합적 생성
본 명세서에 기재된 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 서열이 원핵생물 숙주에서 이종성 폴리뉴클레오티드를 복제 및 발현할 수 있는 재조합 벡터 내로 삽입될 수 있다. 이용가능하고 당업계에 알려진 많은 벡터가 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 적절한 벡터의 선택은 벡터 내로 삽입하고자 하는 핵산 서열의 크기, 및 벡터로 형질전환시키고자 하는 특정 숙주 세포에 주로 좌우될 것이다. 각각의 벡터는 그의 기능(이종성 폴리뉴클레오티드의 증폭 또는 발현, 또는 둘 모두) 및 그것이 체류하는 곳인 특정 세포와의 그의 양립가능성에 따라 다양한 성분들을 함유한다. 벡터 성분들은 일반적으로 복제 기점, 선택 마커 유전자, 프로모터, 리보솜 결합 부위(RBS), 신호 서열, 이종성 핵산 삽입물 및 전사 종결 서열을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
일반적으로, 세포와 양립가능한 종에서 유래되는 레플리콘 및 제어 서열을 함유하는 플라스미드 벡터가 사용된다. 벡터는 통상적으로 복제 부위뿐만 아니라, 형질전환된 세포에서 표현형 선택을 제공할 수 있는 마킹 서열을 보유한다. 예를 들어, E. 콜라이는 전형적으로 E. 콜라이 종으로부터 유래되는 플라스미드인 pBR322를 사용하여 형질전환된다. 특정 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)의 발현에 사용되는 pBR322 유도체의 예가 문헌[Carter et al.], 미국 특허 제5,648,237호에 상세히 기재되어 있다.
또한, 숙주 미생물과 양립가능한 레플리콘 및 제어 서열을 함유하는 파지 벡터가 이들 숙주와 관련하여 형질전환 벡터로서 사용될 수 있다. 예를 들어, GEM™-11과 같은 박테리오파지가 감수성 숙주 세포, 예컨대 E. 콜라이 LE392를 형질전환하는 데 사용될 수 있는 재조합 벡터를 제조하는 데 이용될 수 있다.
본 출원의 발현 벡터는 각각의 폴리펩티드 성분을 인코딩하는 2개 이상의 프로모터-시스트론 쌍을 포함할 수 있다. 프로모터는 시스트론에 대해 상류(5')에 위치하여 이의 발현을 조절하는 비번역 조절 서열이다. 원핵생물 프로모터는 전형적으로 2가지 부류, 즉, 유도성 부류 및 구성적 부류에 속한다. 유도성 프로모터는 배양 조건의 변화, 예를 들어 영양소의 존재 또는 부재, 또는 온도의 변화에 반응하여 시스트론의 제어 하에서 시스트론의 증가된 수준의 전사를 개시하는 프로모터이다.
다양한 잠재적인 세포에 의해 인식되는 다수의 프로모터가 잘 알려져 있다. 선택된 프로모터는, 제한 효소 분해를 통해 공급원 DNA로부터 프로모터를 제거하고 단리된 프로모터 서열을 본 출원의 벡터 내로 삽입함으로써 본 명세서에 기재된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)을 인코딩하는 시스트론 DNA에 작동가능하게 연결될 수 있다. 천연 프로모터 서열 및 많은 이종성 프로모터 둘 모두가 표적 유전자의 증폭 및/또는 발현을 유도하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 이종성 프로모터가 이용되는데, 이들은 일반적으로 천연 표적 폴리펩티드 프로모터와 대비하여, 발현된 표적 유전자의 더 큰 전사 및 더 높은 수율을 가능하게 하기 때문이다.
원핵생물 숙주와 함께 사용하기에 적합한 프로모터는 PhoA 프로모터, 갈락타마제 및 락토스 프로모터 시스템, 트립토판(trp) 프로모터 시스템 및 하이브리드 프로모터, 예컨대 tac 또는 trc 프로모터를 포함한다. 그러나, 세균에서 기능적인 다른 프로모터(예컨대, 다른 알려진 세균 프로모터 또는 파지 프로모터)가 마찬가지로 적합하다. 이들의 핵산 서열은 공개되어 있으며, 이로써 숙련된 작업자는 임의의 필요한 제한 부위를 공급하기 위해 링커 또는 어댑터를 사용하여 표적 펩티드를 인코딩하는 시스트론에 이들을 작동가능하게 라이게이션할 수 있다(문헌[Siebenlist et al., Cell 20: 269 (1980)]).
일 태양에서, 재조합 벡터 내의 각각의 시스트론은 막을 가로질러 발현된 폴리펩티드의 전위(translocation)를 유도하는 분비 신호 서열 성분을 포함한다. 일반적으로, 신호 서열은 벡터의 성분일 수 있거나, 또는 이것은 벡터 내로 삽입된 표적 폴리펩티드 DNA의 일부일 수 있다. 선택된 신호 서열은 세포에 의해 인식 및 처리되는(즉, 신호 펩티다제에 의해 절단되는) 것이어야 한다. 이종성 폴리펩티드에 고유한 신호 서열을 인식 및 처리하지 않는 원핵 세포의 경우, 신호 서열은, 예를 들어 알칼리성 포스파타제, 페니실리나제, Ipp, 또는 열안정성 장독소 II(STII) 리더, LamB, PhoE, PelB, OmpA 및 MBP로 이루어진 군으로부터 선택되는 원핵 신호 서열에 의해 치환될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명에 따른 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)의 생성은 세포의 세포질에서 일어날 수 있으며, 이에 따라 각각의 시스트론 내에서 분비 신호 서열의 존재를 필요로 하지 않는다. 소정의 균주(예를 들어, E. 콜라이 trxB- 균주)는 이황화물 결합 형성에 유리한 세포질 조건을 제공하며, 그럼으로써 발현된 폴리펩티드 또는 단백질 하위단위의 적절한 접힘 및 조립을 가능하게 한다.
본 발명의 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)을 발현하기에 적합한 원핵 세포는 고세균 및 진정세균, 예컨대 그람-음성 또는 그람-양성 유기체를 포함한다. 유용한 세균의 예에는 에스케리키아(Escherichia)(예를 들어, E. 콜라이), 바실리(Bacilli)(예를 들어, B. 수브틸리스), 장내세균(Enterobacteria), 슈도모나스 종(Pseudomonas species)(예를 들어, P. 아에루기노사(P. aeruginosa)), 살로넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium), 세라티아 마르세스칸스(Serratia marcescans), 클레브시엘라(Klebsiella), 프로테우스(Proteus), 시겔라(Shigella), 리조비아(Rhizobia), 비트레오실라(Vitreoscilla), 또는 파라콕쿠스(Paracoccus)가 포함된다. 일부 실시 형태에서, 그람-음성 세포가 사용된다. 일 실시 형태에서, E. 콜라이 세포가 숙주로서 사용된다. E. 콜라이 균주의 예에는 균주 W3110(문헌[Bachmann, Cellular and Molecular Biology, vol. 2 (Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1987), pp. 1190-1219]; ATCC 기탁 번호(Deposit No.) 27,325) 및 이의 파생물 - 유전자형 W3110 AfhuA(AtonA) ptr3 lac Iq lacL8 AompT A(nmpc-fepE) degP41 kanR을 갖는 균주 33D3이 포함됨 - (미국 특허 제5,639,635호)이 포함된다. 다른 균주 및 이의 유도체, 예컨대 E. 콜라이 294(ATCC 31,446), E. 콜라이 B, E. 콜라이 1776(ATCC 31,537) 및 E. 콜라이 RV308(ATCC 31,608)이 또한 적합하다. 이들 실시예는 제한적이라기보다는 예시적이다. 정의된 유전자형을 갖는 임의의 상기 언급된 세균의 유도체를 작제하기 위한 방법은 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어 문헌[Bass et al., Proteins, 8:309-314 (1990)]에 기재되어 있다. 일반적으로, 세균의 세포에서의 레플리콘의 복제가능성(replicability)을 고려하여 적절한 세균을 선택하는 것이 필요하다. 예를 들어, pBR322, pBR325, pACYC177, 또는 pKN410과 같은 잘 알려진 플라스미드가 레플리콘을 공급하는 데 사용될 때, E. 콜라이, 세라티아 또는 살모넬라 종이 숙주로서 적합하게 사용될 수 있다.
전형적으로, 숙주 세포는 최소량의 단백질 분해 효소를 분비해야 하고, 추가의 프로테아제 억제제가 바람직하게는 세포 배양물 중에 도입될 수 있다.
세포는 전술된 발현 벡터로 형질전환되고, 적절한 경우에 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선택하거나, 또는 원하는 서열을 인코딩하는 유전자를 증폭시키도록 변형된 통상적인 영양소 배지 중에서 배양된다. DNA를 원핵생물 숙주 내로 도입하여 DNA를 복제가능하도록 하기 위한 형질전환 수단은 염색체외 요소로서의 것이거나 염색체 구성요소에 의한 것이다. 사용되는 세포에 따라, 형질전환은 그러한 세포에 적절한 표준 기법을 사용하여 행해진다. 염화칼슘을 사용하는 칼슘 처리는 일반적으로 실질적인 세포벽 장벽을 함유하는 세균 세포에 사용된다. 형질전환을 위한 다른 방법은 폴리에틸렌 글리콜/DMSO를 사용한다. 사용된 또 다른 기법은 전기천공이다.
본 출원의 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)을 생성하는 데 사용되는 원핵 세포는 당업계에 알려져 있고 선택된 세포의 배양에 적합한 배지 중에서 성장된다. 적합한 배지의 예에는 루리아 브로쓰(luria broth, LB) + 필요한 영양소 보충제가 포함된다. 일부 실시 형태에서, 배지는 또한 발현 벡터의 작제에 기초하여 선택된 선택제를 함유하여, 발현 벡터를 함유하는 원핵 세포의 성장을 선택적으로 가능하게 한다. 예를 들어, 암피실린 저항성 유전자를 발현하는 세포의 성장을 위해 암피실린이 배지에 첨가된다.
탄소, 질소, 및 무기 인산염 공급원 이외의 임의의 필요한 보충제가 또한 단독으로 도입되거나 복합 질소 공급원과 같은 다른 보충제 또는 배지와의 혼합물로서 도입되어 적절한 농도로 포함될 수 있다. 선택적으로, 배양 배지는 글루타티온, 시스테인, 시스타민, 티오글리콜레이트, 다이티오에리트리톨 및 다이티오트레이톨로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 환원제를 함유할 수 있다. 원핵 숙주 세포는 적합한 온도 및 pH에서 배양된다.
유도성 프로모터가 본 출원의 발현 벡터에 사용되는 경우, 프로모터의 활성화에 적합한 조건 하에서 폴리펩티드 또는 단백질 발현이 유도된다. 본 출원의 일 태양에서, PhoA 프로모터가 폴리펩티드의 전사를 제어하는 데 사용된다. 따라서, 형질전환된 세포는 유도를 위해 인산염-제한 배지 중에서 배양된다. 일부 실시 형태에서, 인산염-제한 배지는 완전 라디칼 알칼리성 포스파타제(completely radical alkaline phosphatase, C.R.A.P) 배지이다(예를 들어, 문헌[Simmons et al., J. Immunol. Methods 263:133-147 (2002)] 참조). 사용된 벡터 작제물에 따라 다양한 다른 유도제가 사용될 수 있으며, 이는 당업계에 알려진 바와 같다.
본 발명의 발현된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)은 세포의 주변세포질 내로 분비되고 그로부터 회수된다. 폴리펩티드 또는 단백질 회수는 전형적으로 미생물을 파괴하는 것을 수반하는데, 이는 일반적으로 삼투 충격, 초음파 처리 또는 용해와 같은 수단에 의해 수행된다. 일단 세포가 파괴되면, 세포 잔해 또는 전세포가 원심분리 또는 여과에 의해 제거될 수 있다. 폴리펩티드 또는 단백질은, 예를 들어 친화성 수지 크로마토그래피에 의해 추가로 정제될 수 있다. 대안적으로, 폴리펩티드 또는 단백질은 배양 배지 중에 수송되고 그 안에서 단리될 수 있다. 세포를 배양물로부터 제거하고, 배양 상층액을 여과하고, 생성된 폴리펩티드 또는 단백질의 추가 정제를 위해 농축시킬 수 있다. 발현된 폴리펩티드 또는 단백질은 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(PAGE) 및 웨스턴 블롯 검정과 같은 일반적으로 알려진 방법을 사용하여 추가로 단리되고 확인될 수 있다.
대안적으로, 폴리펩티드 또는 단백질 생성은 발효 공정에 의해 대량으로 수행된다. 다양한 대규모 유가 발효(fed-batch fermentation) 절차가 재조합 폴리펩티드 또는 단백질의 생성에 이용가능하다. 본 발명의 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)의 생성 수율 및 품질을 개선하기 위해, 다양한 발효 조건이 수정될 수 있다. 예를 들어, 샤페론 단백질은 세균 세포에서 생성된 이종성 단백질의 적절한 접힘 및 용해도를 촉진하는 것으로 입증되었다. 문헌[Chen et al. J Bio Chem 274:19601-19605 (1999)]; 미국 특허 제6,083,715호; 미국 특허 제6,027,888호; 문헌[Bothmann and Pluckthun, J. Biol. Chem. 275:17100-17105 (2000)]; 문헌[Ramm and Pluckthun, J. Biol. Chem. 275:17106-17113 (2000)]; 문헌[Arie et al., Mol. Microbiol. 39:199-210 (2001)].
발현된 이종성 단백질(특히 단백질 분해에 대해 민감한 것들)의 단백질 분해를 최소화하기 위해, 단백질 분해 효소가 결핍된 소정의 숙주 균주가, 예를 들어 미국 특허 제5,264,365호; 미국 특허 제5,508,192호; 문헌[Hara et al., Microbial Drug Resistance, 2:63-72 (1996)]에 기재된 바와 같이 본 발명에 사용될 수 있다. 단백질 분해 효소가 결핍되고 하나 이상의 샤페론 단백질을 과발현하는 플라스미드로 형질전환된 E. 콜라이 균주가 본 출원의 단백질(예를 들어, 항체)을 인코딩하는 발현 시스템에서 세포로서 사용될 수 있다.
본 명세서에서 생성된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)은 추가의 검정 및 사용을 위해 실질적으로 균질한 제제를 얻기 위해 추가로 정제될 수 있다. 당업계에 알려진 표준 단백질 정제 방법이 사용될 수 있다. 하기 절차는 적합한 정제 절차의 예시이다: 면역친화성 또는 이온-교환 컬럼 상에서의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상에서의 또는 양이온-교환 수지, 예컨대 DEAE 상에서의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 황산암모늄 침전, 및 예를 들어 Sephadex G-75를 사용한 겔 여과. 예를 들어, 고상(solid phase) 상에 고정화된 단백질 A가 일부 실시 형태에서 본 발명의 결합 분자의 면역친화성 정제에 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단백질 A가 고정화되는 고상은 유리 또는 실리카 표면을 포함하는 컬럼이다. 일부 실시 형태에서, 단백질 A가 고정화되는 고상은 제어된 기공 유리 컬럼 또는 규산 컬럼이다. 일부 실시 형태에서, 컬럼은 오염물의 비특이적 접착을 방지하려는 시도에서 시약, 예컨대 글리세롤로 코팅되었다. 이어서, 고상을 세척하여 고상에 비특이적으로 결합된 오염물을 제거한다. 마지막으로, 관심 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)이 용리에 의해 고상으로부터 회수된다.
7.3.2.
진핵 세포에서의 재조합적 생성
진핵생물 발현을 위해, 벡터 성분은 일반적으로 하기 중 하나 이상을 포함하지만 이로 한정되지 않는다: 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 마커 유전자, 및 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열.
진핵생물 숙주에 사용하기 위한 벡터는 또한 성숙 단백질 또는 폴리펩티드의 N-말단에 특이적 절단 부위를 갖는 신호 서열 또는 다른 폴리펩티드를 인코딩하는 삽입물을 포함할 수 있다. 선택된 이종성 신호 서열은 바람직하게는 세포에 의해 인식 및 처리되는(즉, 신호 펩티다제에 의해 절단되는) 것이어야 한다. 포유류 세포 발현에서는, 포유류 신호 서열뿐만 아니라 바이러스 분비 리더(viral secretory leader), 예를 들어 단순 헤르페스 gD 신호가 이용가능하다. 그러한 전구체 영역에 대한 DNA는 본 출원의 항체를 인코딩하는 DNA에 리딩 프레임에서 라이게이션될 수 있다.
일반적으로, 복제 성분의 기점은 포유류 발현 벡터에 필요하지 않다(SV40 기점이 전형적으로 유일하게 사용될 수 있는데, 이는 조기 프로모터를 함유하기 때문이다).
발현 및 클로닝 벡터는 선택 유전자 - 이는 선택가능한 마커라고도 불림 - 를 함유할 수 있다. 선택 유전자는, 항생제 또는 다른 독소, 예를 들어 암피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트, 또는 테트라사이클린에 대한 저항성을 부여하거나; 영양요구성 결핍을 보충하거나; 또는 복합 배지로부터 이용가능하지 않은 중요 영양소를 공급하는 단백질을 인코딩할 수 있다.
선택 체계의 한 예는 세포의 성장을 정지시키기 위해 약물을 이용한다. 이종 유전자로 성공적으로 형질전환된 세포는 약물 저항성을 부여하는 단백질을 생성하고, 이로써 선택 계획(selection regimen)을 존속시킨다. 그러한 우세한 선택의 예는 약물 네오마이신, 마이코페놀산 및 하이그로마이신을 사용한다.
포유류 세포에 적합한 선택가능한 마커의 다른 예는 본 출원의 항체를 인코딩하는 핵산을 수용하기에 적격한 세포의 확인을 가능하게 하는 것들이다. 예를 들어, DHFR의 경쟁적 길항제인 메토트렉세이트(Mtx)를 함유하는 배양 배지 중에서 모든 형질전환체를 배양함으로써 DHFR 선택 유전자로 형질전환된 세포를 먼저 확인한다. 야생형 DHFR이 사용될 때 예시적인 적절한 세포는 DHFR 활성이 결핍된 중국 햄스터 난소(CHO) 세포주이다. 대안적으로, 폴리펩티드 인코딩-DNA 서열, 야생형 DHFR 단백질, 및 다른 선택가능한 마커, 예컨대 아미노글리코사이드 3'-포스포트랜스퍼라제(APH)로 공동형질전환되거나 형질전환된 세포(특히, 내인성 DHFR을 함유하는 야생형 숙주)가, 선택가능한 마커를 위한 선택제, 예컨대 아미노글리코사이드계 항생제를 함유하는 배지 중에서의 세포 성장에 의해 선택될 수 있다.
발현 및 클로닝 벡터는 통상, 숙주 유기체에 의해 인식되고 원하는 폴리펩티드 서열을 인코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 프로모터를 함유한다. 진핵 유전자는 전사가 개시되는 부위로부터 상류에 대략 25 내지 30개의 염기가 위치한 AT-풍부 영역을 갖는다. 많은 유전자의 전사 시작으로부터 상류에 70 내지 80개의 염기가 발견되는 다른 서열이 포함될 수 있다. 대부분의 진핵생물의 3' 단부는 코딩 서열의 3' 단부에 폴리 A 테일을 부가하기 위한 신호일 수 있다. 이들 서열 모두는 진핵생물 발현 벡터 내로 삽입될 수 있다.
포유류 숙주 세포에서의 벡터로부터의 폴리펩티드 전사는, 예를 들어, 이종성 포유류 프로모터, 예를 들어 액틴 프로모터 또는 면역글로불린 프로모터로부터, 열충격 프로모터로부터, 바이러스, 예컨대 폴리오마 바이러스, 계두(fowlpox) 바이러스, 아데노바이러스(예컨대, 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 거대세포바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스 및 시미안(Simian) 바이러스 40(SV40)의 게놈으로부터 얻어진 프로모터에 의해 제어될 수 있되, 단, 그러한 프로모터들은 숙주 세포 시스템과 양립가능해야 한다.
고등 진핵생물에 의한 본 발명의 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)을 인코딩하는 DNA의 전사는 종종 벡터 내로 인핸서 서열을 삽입함으로써 증가된다. 포유류 유전자(글로빈, 엘라스타제, 알부민, α-태아단백질, 및 인슐린)로부터의 많은 인핸서 서열이 현재 알려져 있다. 예에는 복제 기점의 후기 측에 있는 SV40 인핸서(bp 100 내지 270), 거대세포바이러스 초기 프로모터 인핸서, 복제 기점의 후기 측에 있는 폴리오마 인핸서, 및 아데노바이러스 인핸서가 포함된다. 또한, 진핵생물 프로모터의 활성화를 위한 요소를 향상시키는 것에 대해서는 문헌[Yaniv, Nature 297: 17-18 (1982)]을 참조한다. 인핸서는 폴리펩티드 인코딩 서열에 대해 위치 5' 또는 3'에서 벡터 내로 스플라이싱될 수 있지만, 바람직하게는 프로모터로부터 5'에 있는 부위에 위치한다.
진핵생물 숙주 세포(효모, 진균, 곤충, 식물, 동물, 인간, 또는 다른 다세포 유기체로부터의 유핵 세포)에 사용되는 발현 벡터는 또한 전사의 종결에 그리고 mRNA를 안정화는 데 필요한 서열을 함유할 수 있다. 그러한 서열은 일반적으로 진핵생물 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 5', 그리고 때때로 3', 비번역 영역으로부터 이용가능하다. 이들 영역은 폴리펩티드-인코딩 mRNA의 비번역 부분에서 폴리아데닐화된 단편으로서 전사된 뉴클레오티드 세그먼트를 함유한다. 하나의 유용한 전사 종결 성분은 소 성장 호르몬 폴리아데닐화 영역이다.
본 명세서에서 벡터 내의 DNA를 클로닝하거나 발현하기에 적합한 세포는 척추동물 숙주 세포를 포함한 본 명세서에 기재된 고등 진핵생물 세포를 포함한다. 배양(조직 배양)에서의 척추동물 세포의 증식은 일상적인 절차가 되었다. 유용한 포유류 세포주의 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 세포주(현탁 배양에서의 성장을 위해 하위클로닝된 293 또는 293 세포, 문헌[Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]); 새끼 햄스터 신장 세포(BHK, ATCC CCL 10); 중국 햄스터 난소 세포/-DHFR(CHO, 문헌[Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)]); 마우스 세르톨리 세포(TM4, 문헌[Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]); 원숭이 신장 세포(CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포(MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포(BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(Hep G2, HB 8065); 마우스 유선 종양(MMT 060562, ATCC CCL51); TR1 세포(문헌[Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간암종 세포주(Hep G2)이다.
세포는 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체) 생성을 위해 전술된 발현 또는 클로닝 벡터로 형질전환되고, 적절한 경우에 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선택하거나, 또는 원하는 서열을 인코딩하는 유전자를 증폭시키도록 변형된 통상적인 영양소 배지 중에서 배양될 수 있다.
본 출원의 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)을 생성하는 데 사용되는 세포는 다양한 배지 중에서 배양될 수 있다. 햄(Ham) F10(Sigma), 최소 필수 배지(MEM)(Sigma), RPMI-1640(Sigma), 및 둘베코 변형 이글 배지(DMEM)(Sigma)와 같은 구매가능한 배지가 숙주 세포를 배양하는 데 적합하다. 또한, 문헌[Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979)], 문헌[Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980)], 미국 특허 제4,767,704호; 제4,657,866호; 제4,927,762호; 제4,560,655호; 또는 제5,122,469호; 국제 특허 출원 공개 WO 90/03430호; WO 87/00195호; 또는 미국 재등록 특허 제30,985호에 기재된 배지 중 임의의 것이 숙주 세포를 위한 배양 배지로서 사용될 수 있다. 임의의 이들 배지는 필요에 따라 호르몬 및/또는 다른 성장 인자(예컨대, 인슐린, 트랜스페린, 또는 표피 성장 인자), 염(예컨대, 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘, 및 인산염), 완충액(예컨대, HEPES), 뉴클레오티드(예컨대, 아데노신 및 티미딘), 항생제(예컨대, GENTAMYCIN™ 약물), 미량 원소(마이크로몰 범위의 최종 농도로 통상 존재하는 무기 화합물로서 정의됨), 및 글루코스 또는 등가 에너지원으로 보충될 수 있다. 임의의 다른 필요한 보충제가 또한 당업자에게 알려져 있을 적절한 농도로 포함될 수 있다. 배양 조건, 예컨대 온도, pH 등은 발현을 위해 선택된 숙주 세포에 대해 이전에 사용된 것들이며, 당업자에게 명백할 것이다.
재조합 기법을 사용할 때, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)은 세포내에서 생성되거나, 주변세포질 공간에서 생성되거나, 배지 중으로 직접 분비될 수 있다. 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)이 세포내에서 생성되는 경우, 첫 번째 단계로서, 세포 또는 용해된 단편 중 어느 하나인 미립자 잔해를, 예를 들어 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거한다. 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)이 배지 중으로 분비되는 경우에는, 그러한 발현 시스템으로부터의 상층액을 일반적으로 먼저, 구매가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어 Amicon 또는 Millipore Pellicon 한외여과 유닛을 사용하여 농축시킨다. 프로테아제 억제제, 예컨대 PMSF가 단백질 분해를 억제하기 위해 임의의 전술한 단계에 포함될 수 있으며, 항생제가 우발적인 오염물의 성장을 방지하기 위해 포함될 수 있다.
세포로부터 제조된 폴리펩티드 또는 단백질 조성물은, 예를 들어 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있으며, 이때 친화성 크로마토그래피가 바람직한 정제 기법이다. 친화성 리간드가 부착되어 있는 매트릭스는 가장 흔하게는 아가로스이지만, 다른 매트릭스가 이용가능하다. 기계적으로 안정한 매트릭스, 예컨대 제어된 기공 유리 또는 폴리 (스티렌-다이비닐) 벤젠은 아가로스를 사용하여 달성될 수 있는 것보다 더 신속한 유동 속도 및 더 짧은 처리 시간을 가능하게 한다. 단백질 정제를 위한 다른 기법, 예컨대 이온-교환 컬럼 상에서의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상에서의 크로마토그래피, 헤파린 SEPHAROSE™ 상에서의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지 상에서의 크로마토그래피(예컨대, 폴리아스파르트산 컬럼), 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 및 황산암모늄 침전이 또한 회수하려는 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)에 따라 이용가능하다. 임의의 예비 정제 단계(들) 후에, 관심 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체) 및 오염물을 포함하는 혼합물은 저 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피에 적용될 수 있다.
7.4. 조성물
일 태양에서, 본 발명은 본 발명의 적어도 하나의 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에 제공된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)의 유효량 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체)의 치료적 유효량은 FDA 또는 다른 규제 기관에 의해 승인되어 있거나 당업자에게 알려진 용량일 수 있다. 예를 들어, 치료적 유효량은 FDA 또는 다른 규제 기관에 의해 승인된, 상기 표 2에 있는 단백질의 양일 수 있다.
폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)을 포함하는 약제학적 조성물이, 원하는 정도의 순도를 갖는 폴리펩티드 또는 단백질을 선택적인 생리학적으로 허용되는 부형제와 혼합함으로써(예를 들어, 문헌[Remington, Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed. 1980)] 참조) 수용액 또는 동결건조된 형태 또는 다른 건조된 형태로 저장을 위해 제조될 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)은 표적 세포/조직으로의 전달을 위한 임의의 적합한 형태로, 예를 들어, 마이크로캡슐 또는 매크로에멀젼으로서(문헌[Remington, 상기 문헌]; 문헌[Park et al., 2005, Molecules 10:146-61]; 문헌[Malik et al., 2007, Curr. Drug. Deliv. 4:141-51]), 지속-방출 제형으로서(문헌[Putney and Burke, 1998, Nature Biotechnol. 16:153-57]), 또는 리포좀으로(문헌[Maclean et al., 1997, Int. J. Oncol. 11:325-32]; 문헌[Kontermann, 2006, Curr. Opin. Mol. Ther. 8:39-45]) 제형화될 수 있다.
본 명세서에 기재된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)은 또한, 예를 들어 코아세르베이션 기법에 의해 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각, 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에, 콜로이드상 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에, 또는 매크로에멀젼 내에 봉입될 수 있다. 그러한 기법은, 예를 들어, 문헌[Remington, 상기 문헌]에 개시되어 있다.
다양한 조성물 및 전달 시스템이 알려져 있으며, 본 명세서에 기재된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)과 함께 사용될 수 있으며, 이에는 리포솜, 미세입자, 마이크로캡슐 내에의 캡슐화, 항체 또는 항체 단편을 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체-매개 엔도사이토시스(예를 들어, 문헌[Wu and Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-32] 참조), 레트로바이러스 벡터 또는 다른 벡터의 일부로서의 핵산 서열의 작제 등이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 다른 실시 형태에서, 제어-방출 또는 지속-방출 시스템으로서 조성물이 제공될 수 있다. 일 실시 형태에서는, 제어 방출 또는 지속 방출을 달성하기 위해 펌프가 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Langer, 상기 문헌]; 문헌[Sefton, 1987, Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201-40]; 문헌[Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507-16]; 및 문헌[Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:569-74] 참조). 다른 실시 형태에서는, 본 명세서에 제공된 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 항체 단편) 또는 조성물의 제어 방출 또는 지속 방출을 달성하기 위해 중합체 재료를 사용할 수 있다(예를 들어, 문헌[Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise, eds., 1974)]; 문헌[Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., 1984)]; 문헌[Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61-126]; 문헌[Levy et al., 1985, Science 228:190-92]; 문헌[During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351-56]; 문헌[Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105-12]; 미국 특허 제5,679,377호; 제5,916,597호; 제5,912,015호; 제5,989,463호; 및 제5,128,326호; PCT 특허 출원 공개 WO 99/15154호 및 WO 99/20253호 참조). 지속-방출 제형에 사용되는 중합체의 예에는 폴리(2-하이드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜리드(PLG), 폴리언하이드라이드, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락티드(PLA), 폴리(락티드-코-글리콜리드)(PLGA), 및 폴리오르토에스테르가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 일 실시 형태에서, 지속-방출 제형에 사용되는 중합체는 불활성이고, 침출가능한 불순물이 없고, 저장 시에 안정하고, 멸균 상태이고, 생분해성이다.
또 다른 실시 형태에서, 제어-방출 또는 지속-방출 시스템은 특정 표적 조직, 예를 들어, 비도(nasal passage) 또는 폐에 근접하여 배치될 수 있으며, 따라서 전신 용량의 소정 분율만을 필요로 한다(예를 들어, 문헌[Goodson, Medical Applications of Controlled Release Vol. 2, 115-38 (1984)] 참조). 제어-방출 시스템은, 예를 들어, 문헌[Langer, 1990, Science 249:1527-33]에 의해 논의되어 있다. 당업자에게 알려진 임의의 기법을 사용하여 본 명세서에 기재된 하나 이상의 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)을 포함하는 지속-방출 제형을 생성할 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,526,938호, 국제 특허 출원 공개 WO 91/05548호 및 WO 96/20698호, 문헌[Ning et al., 1996, Radiotherapy & Oncology 39:179-89]; 문헌[Song et al., 1995, PDA J. of Pharma. Sci. & Tech. 50:372-97]; 문헌[Cleek et al., 1997, Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-54]; 및 문헌[Lam et al., 1997, Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-60] 참조).
7.5. 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법
폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역(예를 들어, 2개, 3개, 또는 그 이상의 표적-결합 영역) 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청(예를 들어, 인간 혈청)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈장(예를 들어, 인간 혈장)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 참조물은 항-약물 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인이다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 다른 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 또 다른 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 또 다른 추가의 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
구체적인 실시 형태에서, 상호작용은 면역검정에 의해 결정된다.
캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 부가하기 위한 다양한 기법이 당업계에 알려져 있으며, 이를 테면 노출된 C-말단에서의 캡 도메인을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 삽입이 있다. 통상적인 분자생물학 기법이 캡 도메인을 부가하는 데 사용될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 도메인(예를 들어, scFv, 중쇄, 중쇄 가변 도메인, 경쇄, 또는 경쇄 가변 도메인)의 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인이 부가된다. 예를 들어, 캡 도메인이 어디에 부가될 수 있는지의 예에 대해 도 9b, 도 10a 및 도 10b를 참조한다.
다른 태양에서, 폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역(예를 들어, 2개, 3개, 또는 그 이상의 표적-결합 영역) 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 다른 태양에서, 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 (a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하며, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 노출된 C-말단의 단부에 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 이종이량체성이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 이중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 다중특이성이다. 다른 태양에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인이다. 구체적인 실시 형태에서, 폴리펩티드, 단백질, 항체는 단리되어 있다. 구체적인 실시 형태에서, 상호작용은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.1에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 소정 실시 형태에서, 상호작용은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 25%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 상호작용은 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 상호작용은 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 또는 적어도 65%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 상호작용은 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 또는 적어도 85%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 상호작용은 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%만큼 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질 사이의 상호작용은 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 검정에서 평가된다.
생물학적 물질 내에서의 폴리펩티드의 응집을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 또한 제공되며, 상기 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 혈장)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈청이다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈장이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질 내의 폴리펩티드는 응집이 평가되기 전에 소정 기간 동안 소정 온도에서 인큐베이션된다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 인간 혈청 및/또는 인간 혈장 내에서 약 37℃에서 약 7일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 인간 혈청 및/또는 인간 혈장 내에서 약 37℃에서 약 2 내지 약 7일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 인간 혈청 및/또는 인간 혈장 내에서 약 37℃에서 약 2 내지 약 5일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 다른 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 또 다른 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 또 다른 추가의 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
다른 태양에서, 생물학적 물질에서의 폴리펩티드의 응집을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역(예를 들어, 2개, 3개, 또는 그 이상의 표적-결합 영역) 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다. 추가의 태양에서, 단백질의 응집을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 (a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하며, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 노출된 C-말단의 단부에 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 이종이량체성이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 이중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 다중특이성이다. 다른 태양에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체의 응집을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인이다. 구체적인 실시 형태에서, 폴리펩티드, 단백질, 또는 항체는 단리되어 있다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 생물학적 물질 내에서의 폴리펩티드 또는 단백질의 응집에 있어서, 생물학적 물질 내에서의 동일한 참조물과, 각각에 대해, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 생물학적 물질 내에서의 폴리펩티드 또는 단백질의 응집에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 생물학적 물질 내에서의 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 생물학적 물질 내에서의 폴리펩티드 또는 단백질의 응집에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 생물학적 물질 내에서의 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 생물학적 물질 내에서의 폴리펩티드 또는 단백질의 응집에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 생물학적 물질 내에서의 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 생물학적 물질 내에서의 폴리펩티드 또는 단백질의 응집에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 생물학적 물질 내에서의 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 생물학적 물질 내에서의 폴리펩티드 또는 단백질의 응집에 있어서, 동일한 참조물과, 각각에 대해, 생물학적 물질 내에서의 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 응집에 비해 감소를 가져온다. 소정 실시 형태에서, 응집은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 25%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 또는 적어도 65%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 또는 적어도 85%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%만큼 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 응집 검정에서 평가된다.
본 발명은 또한 폴리펩티드의 자기-응집을 감소시키기 위한 방법을 제공하며, 상기 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 고농도 액체 제형(HCLF)에서 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, HCLF 농도는 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL이다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 생리학적 스트레스 하에서 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, 열 스트레스는 약 2주 동안 37℃에서의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 응집은 열 스트레스 하에서 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, 열 스트레스는 약 2주 동안 40℃에서의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 약 37℃에서 약 2 내지 약 5일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 약 37℃에서 약 2 내지 약 7일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 약 37℃에서 약 5 내지 약 14일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 약 40℃에서 약 2 내지 약 7일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 약 40℃에서 약 2 내지 약 5일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 약 40℃에서 약 7 내지 약 14일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 약 4℃에서 약 14일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 약 4℃에서 약 2 내지 약 7일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 약 4℃에서 약 2 내지 약 5일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 약 25℃에서 약 5 내지 약 14일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 약 25℃에서 약 2 내지 약 7일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 약 25℃에서 약 2 내지 약 5일 동안 인큐베이션 시에 감소된다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 혈장) 내에서 수행된다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 캡 도메인은 His 캡 도메인이다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 다른 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 또 다른 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 또 다른 추가의 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), NGLVYAG(His)n(서열 번호 51), NGLLYAG(His)n(서열 번호 52), 또는 TRLTVL(His)n(서열 번호 53)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열로 이루어진다.
다른 태양에서, 폴리펩티드의 자기-응집을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함한다. 추가의 태양에서, 단백질의 자기-응집을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 (a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하며, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 노출된 C-말단의 단부에 융합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 이종이량체성이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 이중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 다중특이성이다. 구체적인 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질은 단리되어 있다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.7에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 응집 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 자기-응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 자기-응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 자기-응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 자기-응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 자기-응집에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체, 예컨대, 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체))의 노출된 C-말단에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 폴리펩티드 또는 단백질의 자기-응집에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 폴리펩티드 또는 동일한 단백질의 자기-응집에 비해 감소를 가져온다. 소정 실시 형태에서, 자기-응집은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 25%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 또는 적어도 65%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 또는 적어도 85%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 자기-응집은 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%만큼 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, 자기-응집은 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 응집 검정에서 평가된다.
구체적인 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 구체적인 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업자에게 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업자에게 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 영역을 포함하고, 상기 항체 가변 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 영역을 포함하고, 상기 항체 가변 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체이다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타낸다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%이다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질과 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 치료용 단백질(예를 들어, 항원-결합 단백질)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25)이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체), 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 단일 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 단일 히스티딘의 부가는 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용을 제거한다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용을 제거한다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용을 제거한다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용을 제거한다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 있어서, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)와 ADA의 상호작용을 제거한다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 2배, 적어도 5배, 적어도 10배, 적어도 50배, 또는 적어도 100배이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 2 내지 10배, 5 내지 20배, 10 내지 50배, 또는 50 내지 100배이다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 적어도 약 2배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 적어도 약 5배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체에 비해 적어도 약 10배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 적어도 약 20배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 적어도 약 50배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 적어도 약 100배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 적어도 약 500배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 500배 초과의 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 대한 단백질의 친화도는 (섹션 7.9.1에 기재된 검정에서와 같이) 단백질과 ADA 사이의 상호작용을 측정함으로써 결정되거나, 또는 당업자에게 알려진 검정에 의해 결정된다.
일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 2배 내지 약 500배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 2배 내지 약 100배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 2배 내지 약 50배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 2배 내지 약 20배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 2배 내지 약 10배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 적어도 약 2배 내지 약 5배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 5배 내지 약 100배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 5배 내지 약 50배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 5배 내지 약 20배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 적어도 약 5배 내지 약 10배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 10배 내지 약 100배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 10배 내지 약 50배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 10배 내지 약 20배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 50배 내지 약 100배 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 대한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 친화도에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)에 비해 약 100배 내지 약 500배 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 대한 단백질의 친화도는 (섹션 7.9.1에 기재된 검정에서와 같이) 단백질과 ADA 사이의 상호작용을 측정함으로써 결정되거나, 또는 당업자에게 알려진 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 항-약물 항체에 의한 단백질(예를 들어, 항체)의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%이다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 항-약물 항체에 의한 단백질(예를 들어, 항체)의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 항-약물 항체에 의한 단백질(예를 들어, 항체)의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%이다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 항-약물 항체에 의한 단백질(예를 들어, 항체)의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 항-약물 항체에 의한 단백질(예를 들어, 항체)의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 의한 감소된 중화를 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 캡 도메인의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 캡 도메인이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%이다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 1개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 1개의 히스티딘의 부가는 ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화를 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 2개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 2개의 히스티딘의 부가는 ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 중화를 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 3개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 3개의 히스티딘의 부가는 ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화를 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 4개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 4개의 히스티딘의 부가는 ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화를 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 중화에 있어서, ADA에 의한, 각각에 대해, 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 10% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 20% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 30% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 40% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 50% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 60% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 70% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 80% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 90% 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는, ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 있어서, 각각에 대해, ADA에 의한 5개의 히스티딘이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화에 비해 적어도 약 95% 감소를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 5개의 히스티딘의 부가는 ADA에 의한 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 중화를 제거한다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 개선이다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 개선이다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 개선이다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 개선이다.
다른 태양에서, 단백질의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비천연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비천연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비천연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비천연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 기초한 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비천연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비천연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비천연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비천연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 개선이다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 개선이다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 약동학적 특성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 비해 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 10% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 20% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 30% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 40% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 50% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 60% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 70% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 80% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 90% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 약동학적 특성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 약동학적 특성에 비해 적어도 약 95% 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 개선이다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 개선이다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 노출된 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 개선이다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 개선이다.
다른 태양에서, 단백질의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비천연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비천연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비천연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비천연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 항-약물 항체에 기초한 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비자연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비천연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비천연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비천연 발생 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 비천연 발생 C-말단의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 개선이다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 개선이다.
다른 태양에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체)의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 단백질은 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 중화를 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 이중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 에피토프를 포함하고, 상기 방법은 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 상기 C-말단 항-약물 에피토프의 단부에 부가하는 단계를 포함하고, 상기 다중특이성 항체는 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체에 비해 개선된 안전성을 나타낸다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
구체적인 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 적어도 약 10% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 적어도 약 20% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 적어도 약 30% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 적어도 약 40% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 적어도 약 50% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 적어도 약 60% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 적어도 약 70% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 적어도 약 80% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 적어도 약 90% 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 노출된 C-말단의 단부, 비자연 발생 C-말단의 단부, 또는 C-말단 항-약물 항체 에피토프의 단부에 대한 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 부가는, 단백질(예를 들어, 항체), 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 각각에 대해, (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 동일한 단백질(예를 들어, 항체), 동일한 이중특이성 항체, 또는 동일한 다중특이성 항체의 안전성에 비해 적어도 약 95% 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 아미노산 잔기들은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 아미노산 서열의 마지막 아미노산 뒤에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 캡 도메인의 부가는, 상기 항-약물 항체와 상기 단백질 사이의 감소된 상호작용에 있어서, 상기 항-약물 항체와 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질 사이의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%이다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체와 상기 단백질 사이의 상호작용에 있어서, 상기 항-약물 항체와 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질 사이의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체와 상기 이중특이성 항체 사이의 상호작용에 있어서, 상기 항-약물 항체와 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체 사이의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체와 상기 다중특이성 항체 사이의 상호작용에 있어서, 상기 항-약물 항체와 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체 사이의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 당업자에게 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 아미노산 잔기들은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 아미노산 서열의 마지막 아미노산 뒤에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 캡 도메인의 부가는, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 단백질의 중화에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질의 중화에 비해 감소를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%이다. 일부 실시 형태에서, 감소는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%이다.
다른 태양에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 단백질의 중화에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질의 중화에 비해 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 이중특이성 항체의 중화에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체의 중화에 비해 감소를 가져온다. 다른 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 다중특이성 항체의 중화에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체의 중화에 비해 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 아미노산 잔기들은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 아미노산 서열의 마지막 아미노산 뒤에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 캡 도메인의 부가는, 상기 단백질의 약동학적 특성에 있어서, 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질의 약동학적 특성에 비해 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 개선이다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 개선이다.
다른 태양에서, 단백질의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 단백질의 약동학적 특성에 있어서, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질의 약동학적 특성에 비해 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 이중특이성 항체의 약동학적 특성에 있어서, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체의 약동학적 특성에 비해 개선을 가져온다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 다중특이성 항체의 약동학적 특성에 있어서, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체의 약동학적 특성에 비해 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 아미노산 잔기들은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 아미노산 서열의 마지막 아미노산 뒤에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 캡 도메인의 부가는, 상기 단백질의 안전성에 있어서, 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단백질의 안전성에 비해 개선을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 개선이다. 일부 실시 형태에서, 개선은 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 개선이다.
다른 태양에서, 단백질의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 단백질의 안전성에 있어서, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질의 안전성에 비해 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 이중특이성 항체의 안전성에 있어서, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체의 안전성에 비해 개선을 가져온다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 중쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 5개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)로 이루어지고, 상기 방법은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21)의 마지막 S 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체의 안전성에 비해 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체와 상기 단백질 사이의 상호작용에 있어서, 상기 항-약물 항체와 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질 사이의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK, VEIKR, 또는 VEIKRT로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체와 상기 이중특이성 항체 사이의 상호작용에 있어서, 상기 항-약물 항체와 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체 사이의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체와 상기 다중특이성 항체 사이의 상호작용에 있어서, 상기 항-약물 항체와 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체 사이의 상호작용에 비해 감소를 가져온다. 당업자에게 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 다양한 검정이 단백질과 ADA의 상호작용을 측정 및/또는 검출하는 데 사용될 수 있으며, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정이 있다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 ADA 사이의 상호작용은 ELISA, 표면 플라즈몬 공명 검정(예를 들어, BIACORE), 또는 본 명세서에 기재되어 있거나 당업자에게 알려진 다른 면역검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 항-약물 항체에 의한 단백질의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 단백질의 중화에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질의 중화에 비해 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 이중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 이중특이성 항체의 중화에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체의 중화에 비해 감소를 가져온다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 항-약물 항체에 의한 다중특이성 항체의 중화를 감소시키기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 다중특이성 항체의 중화에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체의 중화에 비해 감소를 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, ADA에 의한 단백질의 중화는 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.4에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 중화 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 단백질의 약동학적 특성에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질의 약동학적 특성에 비해 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 이중특이성 항체의 약동학적 특성에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체의 약동학적 특성에 비해 개선을 가져온다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 약동학적 특성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 다중특이성 항체의 약동학적 특성에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체의 약동학적 특성에 비해 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 약동학적 특성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.2에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 약동학적 검정에 의해 결정된다.
다른 태양에서, 단백질의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 단백질의 안전성에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 단백질의 안전성에 비해 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 이중특이성 항체의 안전성에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 이중특이성 항체의 안전성에 비해 개선을 가져온다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 안전성을 개선하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 경쇄 가변 도메인은 노출된 C-말단 아미노 서열을 포함하고, 상기 노출된 C-말단 아미노산 서열의 마지막 4 내지 6개의 아미노산 잔기는 아미노산 서열 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어지고, 상기 방법은 상기 VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 또는 VEIKRT(서열 번호 24) 아미노산 서열의 C-말단의 마지막 아미노산 잔기 뒤에 (His)n(서열 번호 25) 서열(여기서, n은 1, 2, 3, 4 또는 5임)을 부가하는 단계를 포함하고, 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열의 부가는, 상기 다중특이성 항체의 안전성에 있어서, 상기 항-약물 항체에 의한 상기 (His)n(서열 번호 25) 서열이 결여되어 있는 상기 다중특이성 항체의 안전성에 비해 개선을 가져온다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질의 안전성은 본 명세서에 기재된(예컨대, 섹션 7.9.3에 기재된 검정), 또는 당업자에게 알려진 안전성 검정에 의해 결정된다.
7.6. 캡핑 수단
일 태양에서, 참조물과 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 폴리펩티드, 또는 (a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하는 단리된 단백질 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이종이량체성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 다중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청(예를 들어, 인간 혈청)을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈장(예를 들어, 인간 혈장)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조물은 ADA를 포함한다. 일부 실시 형태에서, ADA는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 폴리펩티드, 또는 (a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하는 단리된 단백질의 응집을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 폴리펩티드, 또는 (a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하는 단리된 단백질의 응집을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 및 제3 폴리펩티드 각각은 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이종이량체성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 다중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드는 생물학적 물질 내에 있으며, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)이다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈장이다. 구체적인 실시 형태에서, 생물학적 물질은 인간 혈청이다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질 내의 폴리펩티드는 소정 기간 동안 소정 온도에서 인큐베이션된다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 37℃에서 약 5 내지 약 14일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 37℃에서 약 2 내지 약 7일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 37℃에서 약 2 내지 약 5일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 40℃에서 약 7 내지 약 14일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 40℃에서 약 2 내지 약 7일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 40℃에서 약 2 내지 약 5일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 4℃에서 약 7 내지 약 14일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 4℃에서 약 2 내지 약 7일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 4℃에서 약 2 내지 약 5일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 25℃에서 약 5 내지 약 14일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 25℃에서 약 2 내지 약 7일을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장) 내에서 약 25℃에서 약 2 내지 약 5일을 포함한다.
다른 태양에서, 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 폴리펩티드, 또는 (a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하는 단리된 단백질의 자기-응집을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제3 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드, 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이종이량체성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 이중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 삼중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 단백질은 다중특이성이다. 일부 실시 형태에서, 응집은 고농도 액체 제형(HCLF)에서 감소된다. 구체적인 실시 형태에서, HCLF는 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL이다. 일부 실시 형태에서, 응집은 생물학적 물질(예를 들어, 혈청) 내에서 감소된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 열 스트레스(예를 들어, 약 40℃에서의 인큐베이션) 하에서 결정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 생리학적 스트레스(예를 들어, 약 37℃에서의 인큐베이션) 하에서 결정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 2주 동안 약 40℃에서의 인큐베이션에 의해 결정된다.
구체적인 태양에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 노출된 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 항체 또는 항체 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 노출된 C-말단을 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
다른 태양에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 항체 또는 항체 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
다른 태양에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 항체 또는 항체 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 이중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 이중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 다중특이성 항체와 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)이 본 명세서에 제공되며, 상기 다중특이성 항체는 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
다른 태양에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 노출된 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 노출된 C-말단을 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 노출된 C-말단을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 항체 또는 항체 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 이중특이성 또는 다중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
다른 태양에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 항체 또는 항체 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 이중특이성 또는 다중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
다른 태양에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체의 항원-결합 영역을 포함하고, 상기 항원-결합 영역은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인은 비자연 발생 C-말단을 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 단백질, 및 상기 단백질과 항-약물 항체 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 단백질은 항체 단편을 포함하고, 상기 항체 단편은 C-말단 항-약물 항체 에피토프를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 항체 또는 항체 단편이다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항체 단편은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 단백질은 이중특이성 또는 다중특이성 항체이다. 소정 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인이다. 다른 실시 형태에서, 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인이다. 일부 실시 형태에서, 항-약물 항체는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있다.
7.7. 단백질의 용도
소정 태양에서, 본 명세서에 제공된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)(예컨대, 섹션 7.1에 기재된 단백질), 본 명세서에 제공된 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드(예컨대, 섹션 7.2에 기재된 폴리뉴클레오티드), 또는 조성물(예컨대, 섹션 7.4에 기재된 조성물)은 질병 또는 장애를 치료 및/또는 예방하는 데 사용될 수 있다. 일 실시 형태에서, 질병 또는 장애를 치료하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 캡핑된 폴리펩티드 또는 캡핑된 단백질(예를 들어, 본 명세서에 기재된 히스티딘 캡핑된 폴리펩티드 또는 히스티딘 캡핑된 단백질) 또는 이들의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 질병 또는 장애를 예방하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 캡핑된 폴리펩티드 또는 캡핑된 단백질(예를 들어, 본 명세서에 기재된 히스티딘 캡핑된 폴리펩티드 또는 히스티딘 캡핑된 단백질) 또는 이들의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 질병 또는 장애의 비제한적인 예에는 암(예를 들어, 조혈기 종양 또는 고형 종양), 겸상 세포, 건선, 골다공증, 바이러스성 질병 또는 장애(예를 들어, HIV), 세균성 질병 또는 장애, 천식, 혈우병, 자가면역 질병 또는 장애, 궤양성 결장염, 크론병, 및 이식편 대 숙주 질병이 포함된다.
다양한 구매가능한 항체가 상기 표 2에 제공되어 있으며, 온전한 항체로서, 항체 단편으로서, 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 융합 단백질)의 일부분으로서 본 발명에 사용하기에 적합하다. 시판 항체는 표 2에 기재된 적응증의 치료에 사용될 수 있다. 또한, 상기 표 2에 제공된 것과 동일한 표적에 결합하는 항체가 본 발명에 사용하기에 적합하며, 표 2에 기재된 적응증의 치료에 사용될 수 있다.
표 3에 제공된 유기체의 항원에 결합하는 항체가 본 발명에 사용하기에 적합하며, 지시된 유기체에 의해 야기되는 감염성 질병의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 질병, 장애 또는 질환의 예방은 질병, 장애 또는 질환의 하나 이상의 증상의 개시를 예방한다. 일부 실시 형태에서, 질병, 장애 또는 질환의 치료는 질병, 장애 또는 질환의 하나 이상의 증상의 중증도 및/또는 증상들의 수를 감소시킨다.
소정 태양에서, 본 명세서에 제공된, 본 명세서에 기재된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)(예컨대, 섹션 7.1에 기재된 단백질), 본 명세서에 제공된 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드(예컨대, 섹션 7.2에 기재된 폴리뉴클레오티드), 또는 조성물(예컨대, 섹션 7.4에 기재된 조성물)은 분자(예를 들어, 항원)를 검출하기 위한 검정에서 사용될 수 있다. 상기 검정은 시험관내 또는 생체내에서 수행될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 검정은 생물학적 물질에서 시험관내에서 수행된다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 예를 들어, 혈액 샘플, 혈청 샘플, 또는 혈장 샘플을 본 명세서에 기재된 캡핑된 단백질 또는 캡핑된 폴리펩티드(예를 들어, 본 명세서에 기재된 히스티딘 캡핑된 단백질 또는 히스티딘 캡핑된 폴리펩티드)와 접촉시킬 수 있으며, 분자, 예컨대 항원에 대한 캡핑된 단백질 또는 캡핑된 폴리펩티드의 결합을 검출한다. 일부 실시 형태에서, 상기 검정은 생체내에서 수행된다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 캡핑된 단백질 또는 캡핑된 폴리펩티드(예를 들어, 본 명세서에 기재된 히스티딘 캡핑된 단백질 또는 히스티딘 캡핑된 폴리펩티드)를 대상체에게 투여하고, 대상체를 이미징하여 분자, 예컨대 항원에 대한 캡핑된 단백질 또는 캡핑된 폴리펩티드의 결합을 검출한다.
소정 태양에서, 본 명세서에 제공된, 본 명세서에 기재된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)(예컨대, 섹션 7.1에 기재된 단백질), 본 명세서에 제공된 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드(예컨대, 섹션 7.2에 기재된 폴리뉴클레오티드), 또는 조성물(예컨대, 섹션 7.4에 기재된 조성물)은 진단 검정에서 사용될 수 있다. 상기 진단 검정은 시험관내 또는 생체내에서 수행될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 진단 검정은 생물학적 물질에서 시험관내에서 수행된다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 예를 들어, 혈액 샘플, 혈청 샘플, 또는 혈장 샘플을 본 명세서에 기재된 캡핑된 단백질 또는 캡핑된 폴리펩티드(예를 들어, 본 명세서에 기재된 히스티딘 캡핑된 단백질 또는 히스티딘 캡핑된 폴리펩티드)와 접촉시킬 수 있으며, 분자, 예컨대 항원에 대한 캡핑된 단백질 또는 캡핑된 폴리펩티드의 결합을 검출한다. 일부 실시 형태에서, 상기 진단 검정은 생체내에서 수행된다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 캡핑된 단백질 또는 캡핑된 폴리펩티드(예를 들어, 본 명세서에 기재된 히스티딘 캡핑된 단백질 또는 히스티딘 캡핑된 폴리펩티드)를 대상체에게 투여하고, 대상체를 이미징하여 분자, 예컨대 항원에 대한 캡핑된 단백질 또는 캡핑된 폴리펩티드의 결합을 검출한다. 분자의 검출은 질병, 장애, 또는 질환(예를 들어, 암 또는 감염성 질병)의 진단을 가져올 수 있다.
소정 태양에서, 본 명세서에 제공된, 본 명세서에 기재된 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질)(예컨대, 섹션 7.1에 기재된 단백질), 또는 조성물(예컨대, 섹션 7.4에 기재된 조성물)은 생물학적 물질 내에 저장될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 인간 혈장)을 포함한다. 어떠한 이론에 의해서도 구애됨이 없이, 단백질 또는 폴리펩티드의 캡핑은 생물학적 물질 내의 항-약물 항체와의 상호작용을 감소시키고/시키거나 응집을 억제한다.
7.8. 키트
적합한 패키징 재료 내에 패키징되는, 본 명세서에 제공된 단백질(예를 들어, 항체 또는 다른 항원-결합 단백질), 또는 이의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 포함하는 키트가 본 명세서에 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, 키트는 캡핑 수단을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 키트는 (His)n(서열 번호 25)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)으로 이루어진 히스티딘 캡핑 수단을 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 히스티딘 캡핑 수단은 단일 His로 이루어진다. 키트는 선택적으로 라벨 또는 패키징 삽입물(packaging insert)을 포함하며, 이에는 성분들에 대한 설명 또는 그 안의 성분들의 시험관내, 생체내, 또는 생체외에서의 사용을 위한 설명서가 포함된다.
용어 "패키징 재료"는 키트의 성분들을 하우징하는 물리적 구조물을 지칭한다. 패키징 재료는 성분들을 멸균 상태로 유지할 수 있으며, 그러한 목적을 위해 일반적으로 사용되는 재료(예를 들어, 종이, 파형(corrugated) 섬유, 유리, 플라스틱, 포일, 앰풀, 바이알, 튜브 등)로 제조될 수 있다.
본 명세서에 제공된 키트는 라벨 또는 삽입물을 포함할 수 있다. 라벨 또는 삽입물은 성분, 키트 또는 패킹 재료(예를 들어, 상자)와는 별개의 또는 이에 부착된, 또는, 예를 들어 키트 성분이 담긴 앰풀, 튜브, 또는 바이알에 부착된 "인쇄물", 예를 들어 종이 또는 판지를 포함한다. 라벨 또는 삽입물은 컴퓨터 판독가능 매체, 예컨대 디스크(예를 들어, 하드 디스크, 카드, 메모리 디스크), 광학 디스크, 예컨대 CD- 또는 DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, 자기 테이프, 또는 전기적 저장 매체, 예컨대 RAM 및 ROM 또는 이들의 하이브리드, 예컨대 자기/광학 저장 매체, FLASH 매체, 또는 메모리 유형 카드를 추가로 포함할 수 있다. 라벨 또는 삽입물은 제조자 정보, 로트 번호, 제조자 소재지, 및 날짜를 확인시켜 주는 정보를 포함할 수 있다.
본 명세서에 제공된 키트는 다른 성분들을 추가로 포함할 수 있다. 키트의 각각의 성분은 개별 용기 내에 봉입될 수 있고, 다양한 용기 모두가 단일 패키지 내에 있을 수 있다. 키트는 또한 저온 저장을 위해 설계될 수 있다. 키트는 추가로 본 명세서에 제공된 치료용 단백질, 또는 본 명세서에 제공된 치료용 단백질을 인코딩하는 핵산을 함유하는 세포를 수용하도록 설계될 수 있다. 키트 내의 세포는 즉시 사용가능할 때까지 적절한 저장 조건 하에서 유지될 수 있다.
7.9. 검정
7.9.1.
참조물과의 상호작용을 검출하기 위한 검정
폴리펩티드 또는 단백질과 참조물의 상호작용을 검출하기 위한 것으로 당업계에 알려진 임의의 검정이 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 검정은 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 및/또는 다른 항원-결합 단백질)과 ADA의 상호작용을 검출한다. 비제한적인 예에는 면역검정(예를 들어, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 방사면역침전 검정(RIP), 전기화학발광 면역검정(ECL 또는 ECLIA), 표면 플라즈몬 공명 면역검정(SPRIA)), 세포-기반 시험관내 바이오검정 또는 경쟁적 리간드 결합 검정이 포함되며, ADA 탐색 검출(seeking detection)의 유형에 좌우될 수 있다. 예를 들어, 관심 단백질을 미세적정 플레이트에 고정화할 수 있고, 시험 샘플(예를 들어, 대상체로부터의 생물학적 샘플, 예컨대 혈청 및/또는 혈장)을 플레이트의 웰에 첨가할 수 있다. 시험 샘플이 단백질에 결합되는 검출가능한 양의 ADA를 함유하는 경우, 검출 항체(예를 들어, 항-인간/마우스/토끼 IgG, IgM, IgA, 또는 IgE HRP 접합체, 항-인간/마우스/토끼 Fc HRP 접합체)를 사용하여 검출이 달성될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 단백질의 기능적 활성을 중화 및/또는 억제하는 ADA의 하위집단("중화 항체(NAb)"라고 함)을 섹션 7.9.4에 기재된 검정을 사용하여 검출할 수 있다. 다른 통상적인 방법이 또한 적합한 것으로서 사용될 수 있다.
7.9.2.
약동학적 검정
폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 및/또는 다른 항원-결합 단백질)의 약동학적 특성을 평가하기 위한 것으로 당업계에 알려진 임의의 검정이 사용될 수 있다. 약동학적 검정의 비제한적인 예에는 관심 단백질의 검출 및 정량화에 특화된 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA), LC-MS, 및/또는 단백질의 흡수, 분포, 대사, 및/또는 배설을 측정할 수 있는 다른 검정이 포함된다. 예를 들어, 관심 단백질을 대상체에게 투여할 수 있고, 노출된 C-말단에 대해, 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 융합된 노출된 C-말단을 포함하지 않는 단백질과 대비하여 제거 속도를 측정할 수 있다. 다른 통상적인 방법이 또한 적합한 것으로서 사용될 수 있다.
7.9.3.
안전성 검정
단백질(예를 들어, 항체 및/또는 다른 항원-결합 단백질)의 안전성을 평가하기 위한 것으로 당업계에 알려진 임의의 검정이 사용될 수 있다. 안전성 검정의 비제한적인 예에는 단백질의 독성 및/또는 면역원성을 측정하는 생체내(예를 들어, 동물 모델), 생체외(단리된 기관, 오가노이드(organoid), 또는 온전한 동물을 수반하지 않는 다른 시험 시스템), 및 시험관내(예를 들어, 세포-기반) 검정이 포함된다. 예를 들어, 생체내 기반 안전성 검정에는 급성 주입-관련 반응(예를 들어, 아나필락시스/아나필락시스양 반응), 지연형(예를 들어, T-세포 매개) 과민증, 및/또는 자가면역/단백질 교차-반응성의 평가가 수반될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 안전성 검정에는, 이를 테면 섹션 7.9.1에 기재된 검정을 사용함으로써 ADA를 검출하여 면역원성을 평가하는 것이 수반될 수 있다. 다른 통상적인 방법이 또한 적합한 것으로서 사용될 수 있다.
7.9.4.
중화 검정
단백질(예를 들어, 항체 및/또는 다른 항원-결합 단백질)의 중화를 평가하기 위한 것으로 당업계에 알려진 임의의 검정이 사용될 수 있다. 중화 검정의 비제한적인 예에는 세포-기반 바이오검정 또는 비세포 기반 검정(예를 들어, 경쟁적 리간드 결합 검정 또는 효소 활성 검정)이 포함된다. 바이오검정은 세포 반응(예를 들어, 세포내 기질의 인산화, 칼슘 동원, 증식, 및 세포 사멸)을 측정할 수 있다. 예를 들어, 바이오검정에서 생물활성의 감소 및/또는 억제에 미치는 중화의 직접적인 효과를, 세포 반응을 직접 자극하는 단백질에 대해 측정할 수 있다. 대안적으로, 단백질이 (예를 들어, 수용체-리간드 상호작용을 차단함으로써) 세포 활성에 간접적으로 영향을 미치는 경우, 바이오검정에서 생체 활성의 회복에 미치는 중화의 간접적인 효과를 측정할 수 있다. 다른 통상적인 방법이 또한 적합한 것으로서 사용될 수 있다.
7.9.5.
구조 검정
단백질(예를 들어, 항체 및/또는 다른 항원-결합 단백질)의 구조를 평가하기 위한 것으로 당업계에 알려진 임의의 검정이 사용될 수 있다. 구조 검정의 비제한적인 예에는 결정학적 분석, 예컨대 X-선 결정학적 분석이 포함된다. 구조는 또한 단백질 응집체 및/또는 단백질에 대한 변형(예를 들어, 글리코실화, 당화(glycation))을 측정함으로써 평가될 수 있다. 다른 통상적인 방법이 또한 적합한 것으로서 사용될 수 있다.
7.9.6.
단백질 안정성 검정
폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 및/또는 다른 항원-결합 단백질)의 단백질 안정성을 평가하기 위한 것으로 당업계에 알려진 임의의 검정이 사용될 수 있다. 비제한적인 예에는 원편광 이색성(CD), 동적 광 산란(DLS), 정적 광 산란(SLS), 통상적인 시차 주사 형광측정법(DSF), 나노DSF, 시차 주사 열량측정법(DSC), 크기 배제 크로마토그래피-다각 광 산란(SEC-MALS), 푸리에 변환 적외선 분광법(FTIR), 분석적 초원심분리(AUC), 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 고유 형광(IF), 또는 이들의 조합이 포함된다. 구체적인 실시 형태에서, 단백질 안정성은 열적 또는 화학적 변성 실험을 사용하여 측정된다. 열적 변성은 일정 속도로 온도를 증가시키는 것을 사용함으로써 단백질 안정성을 측정하는 데 사용될 수 있는 반면, 화학적 변성은 증가하는 농도의 화학적 변성제를 사용함으로써 단백질 안정성을 측정하는 데 사용될 수 있다. 다른 통상적인 방법이 또한 적합한 것으로서 사용될 수 있다.
7.9.7.
응집 검정
폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 및/또는 다른 항원-결합 단백질)의 응집 - 자기-응집을 포함함 - 을 평가하기 위한 것으로 당업계에 알려진 임의의 검정이 사용될 수 있다. 비제한적인 예에는 분석용 초원심분리, 크기 배제 크로마토그래피(SEC)(예를 들어, 분석용 SEC), 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC), 동적 광 산란(DLS), 겔 전기영동(예를 들어, 모세관 등전 집속), 전자 현미경법, 또는 이들의 조합이 포함된다.
응집은 다양한 조건 하에서 측정될 수 있다. 구체적인 실시 형태에서, 응집은 고농도 액체 제형(HCLF)에서 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 및/또는 다른 항원-결합 단백질)을 스트레스 조건, 예컨대 냉동-해동, 생리학적 스트레스(예를 들어, 37℃), 또는 열 스트레스(예를 들어, 40℃) 하에 놓이게 한 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 37℃에서 약 5 내지 약 14일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 37℃에서 약 2 내지 약 7일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 37℃에서 약 2 내지 약 5일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 40℃에서 약 7 내지 약 14일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 40℃에서 약 2 내지 약 7일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 40℃에서 약 2 내지 약 5일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 4℃에서 약 7 내지 약 14일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 4℃에서 약 2 내지 약 7일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 4℃에서 약 2 내지 약 5일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 25℃에서 약 7 내지 약 14일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 25℃에서 약 2 내지 약 7일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 일부 실시 형태에서, 응집은 약 25℃에서 약 2 내지 약 5일 동안 인큐베이션 후에 측정된다. 구체적인 실시 형태에서, 인큐베이션은 생물학적 물질(예를 들어, 인간 혈청 및/또는 혈장)을 수반한다. 다른 통상적인 방법이 또한 적합한 것으로서 사용될 수 있다.
7.9.8.
면역검정
폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 항체 및/또는 다른 항원-결합 단백질)의 면역원성을 평가하기 위한 것으로 당업계에 알려진 임의의 검정이 참조물과의 상호작용을 검출하는 데 사용될 수 있다. 면역검정의 비제한적인 예에는 전계화학발광(ECL) 면역검정, ELISA, 방사면역검정, 및 균질 이동도 시프트 검정이 포함된다. 다른 통상적인 방법이 또한 적합한 것으로서 사용될 수 있다.
8.
실시예
8.1. 실시예 1: 캡 도메인을 갖는 삼중특이성 항체의 안정성
도 9b에 도시된 항체 구조 및 SLSLSPGK(서열 번호 36), AS, HHHHHH(서열 번호 26), H, 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어진 C-말단 캡을 갖는 삼중특이성 항체는, 어떠한 캡도 갖지 않는 삼중특이성 항체와 대비하여, 등전 집속에 의해 평가될 때 항체의 등전점을 유지하고(예를 들어, 문헌[Isoelectric Focusing Maryvonne D.R. Brasher, Robin Thorpe, in Encyclopedia of Immunology (Second Edition), 1998] 참조), 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 평가될 때 항체의 소수성을 유지하고(예를 들어, [문헌[Hofstee BH and Otillio NF (1978). Non-ionic adsorption chromatography of proteins. J Chromatogr 159, 57―69. PMID: 649758] 참조; 또한, 문헌[Jennissen HP (1978) Multivalent interaction chromatography as exemplified by the adsorption and desorption of skeletal muscle enzymes on hydrophobic alkyl-agaroses. J Chromatogr 159, 71―83. PMID: 418077]; 문헌[Jennissen HP and Heilmeyer LM, Jr. (1975). General aspects of hydrophobic chromatography. Adsorption and elution characteristics of some skeletal muscle enzymes. Biochemistry 14, 754―760. PMID: 163642]; 문헌[Porath J et al. (1973). Salting-out in amphiphilic gels as a new approach to hydrophobic adsorption. Nature 245, 465―466. PMID: 4356152) 참조], 표면 플라즈몬 공명에 의해 평가될 때 비특이적 결합을 나타내지 않는다(예를 들어, 문헌[Methods Mol Biol. Author manuscript; available in PMC 2010 May 5, Methods Mol Biol. 2009; 493: 323―343. doi: 10.1007/978-1-59745-523-7_20, PMCID: PMC2864718, NIHMSID: NIHMS187097, PMID: 18839357, Surface Plasmon Resonance (SPR) Analysis of Binding Interactions of Proteins in Inner-Ear Sensory Epithelia Dennis G. Drescher, Neeliyath A. Ramakrishnan, and Marian J. Drescher] 참조). 또한, 도 9b에 도시된 항체 구조 및 SLSLSPGK(서열 번호 36), AS, HHHHHH(서열 번호 26), 또는 H의 아미노산 서열로 이루어진 C-말단 캡을 갖는 삼중특이성 항체는 시차 주사 열량측정법에 의해 평가될 때 63℃, 70℃, 및 74℃에서 입체구조 안정성을 유지하고(예를 들어, 문헌[J Biomol Tech. 2010 Dec; 21(4): 167―193, PMCID: PMC2977967, PMID: 21119929, Differential Scanning Calorimetry Techniques: Applications in Biology and Nanoscience, Pooria Gill,1 Tahereh Tohidi Moghadam,1 and Bijan Ranjbar] 참조), 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가될 때 약 7일 후에 인간 혈청에서 안정성을 유지한다(예를 들어, 문헌[ J Liq Chromatogr Relat Technol. 2012 Nov; 35(20): 2923―2950. Published online 2012 Nov 30. doi: 10.1080/10826076.2012.743724. PMCID: PMC3556795, PMID: 23378719, Size-Exclusion Chromatography for the Analysis of Protein Biotherapeutics and their Aggregates, Paula Hong, Stephan Koza, and Edouard S. P. Bouvier] 참조). C-말단 캡을 도 9b에 도시된 바와 같이 삼중특이성 항체의 scFv 영역의 C-말단에 부가하였다. 이 데이터는 모노히스티딘 캡이 항체의 생물물리학적 및 화학적 특성을 방해하지 않는다는 것을 보여준다.
8.2. 실시예 2: 인간의 이미 존재하는 폴리 항-약물 항체에 대한 다중특이성 항체의 결합
아미노산 서열 SLSLSPGK(서열 번호 36), AS, HHHHHH(서열 번호 26), H, 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)로 이루어진 C-말단 캡을 갖거나 갖는 도 9a에 도시된 삼중특이성 항체가 인간의 이미 존재하는 폴리 항-약물 항체에 결합할 수 있는 능력을 면역검정에서 평가한다(예를 들어, 문헌[AAPS J. 2016 Mar; 18(2): 311―320. Published online 2016 Jan 28. doi: 10.1208/s12248-016-9878-1, PMCID: PMC4779092, PMID: 26821802, Pre-existing Antibody: Biotherapeutic Modality-Based Review, Boris Gorovits, corresponding author Adrienne Clements-Egan, Mary Birchler, Meina Liang, Heather Myler, Kun Peng, Shobha Purushothama, Manoj Rajadhyaksha, Laura Salazar-Fontana, Crystal Sung, and Li Xue and Recommendations for the Assessment and Management of Pre-existing Drug-Reactive Antibodies During Biotherapeutic Development Li Xue, Adrienne Clements-Egan, Lakshmi Amaravadi, Mary Birchler, Boris Gorovits, Meina Liang, Heather Myler, Shobha Purushothama, Marta Starcevic Manning & Crystal Sung, The AAPS Journal volume 19, pages 1576―1586 (2017)] 참조). 예를 들어, C-말단 캡을 도 9b에 도시된 바와 같이 삼중특이성 항체의 scFv 영역의 C-말단에 부가하였다. 다발성 골수종을 갖거나 갖지 않는 환자로부터의 상이한 농도의 혈청을 약 15℃ 내지 25℃에서 1 내지 6시간 동안 캡 도메인들 중 하나를 갖거나 갖지 않는 관심 삼중특이성 항체와 함께 인큐베이션하였다. 삼중특이성 항체에 결합된, 혈청에 존재하는 폴리-항-약물 항체의 양은 전기화학발광을 사용하여 결정하였다. 캡 도메인을 갖지 않는 삼중특이성 항체에 결합하는 폴리-항-약물 항체의 양과 대비하여, 각각의 캡 도메인을 갖는 삼중특이성 항체에 결합하는 폴리-항-약물 항체의 양의 감소가 관찰되었다(표 4 참조). 이들 결과는 아미노산 서열 SLSLSPGK(서열 번호 36), AS, HHHHHH(서열 번호 26), H, 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)로 이루어진 캡 도메인이 환자 혈청 내의 폴리-항-약물 항체가 삼중특이성 항체에 결합하는 것을 방지한다는 것을 나타낸다.
[표 4]
9.
실시 형태
본 발명은 하기의 비제한적인 실시 형태를 제공한다.
일 세트의 실시 형태에서, 다음이 제공된다:
A1. 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하며,
상기 단리된 폴리펩티드는 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단리된 폴리펩티드와 참조물의 상호작용에 비해 상기 참조물과의 감소된 상호작용을 나타내는, 단리된 폴리펩티드.
A2. 실시 형태 A1에 있어서, 상기 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자인, 단리된 폴리펩티드.
A3. 실시 형태 A2에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A4. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A3 중 어느 하나에 있어서, 상기 참조물은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는, 단리된 폴리펩티드.
A5. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A4 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A6. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A5 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A7. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A5 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A8. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A5 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A9. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A8 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A10. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A8 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A11. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A8 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A12. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A8 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A13. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A8 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A14. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A6 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 및 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A15. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A6 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A16. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A6 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A17. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A6 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A18. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A17 중 어느 하나에 있어서, 상기 참조물과의 상호작용은 면역검정에 의해 결정되는, 단리된 폴리펩티드.
A19. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A17 중 어느 하나에 있어서, 상기 참조물과의 상호작용은 시험관내(in vitro)에서 평가되는, 단리된 폴리펩티드.
A20. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A17 중 어느 하나에 있어서, 상기 참조물과의 상호작용은 생체내(in vivo)에서 평가되는, 단리된 폴리펩티드.
A21. 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하며,
상기 단리된 폴리펩티드는 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단리된 폴리펩티드와 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 나타내는, 단리된 폴리펩티드.
A22. 실시 형태 A21에 있어서, 상기 생물학적 물질은 인간 혈청 및/또는 인간 혈장인, 단리된 폴리펩티드.
A23. 실시 형태 A22에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 37℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 5 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A24. 실시 형태 A22에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 40℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A25. 실시 형태 A22에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 4℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A26. 실시 형태 A22에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 25℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A27. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A26 중 어느 하나에 있어서, 상기 생물학적 물질은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 이미 존재하고 있는, 단리된 폴리펩티드.
A28. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A27 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A29. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A28 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A30. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A28 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A31. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A28 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A32. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A31 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A33. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A31 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A34. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A31 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A35. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A31 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A36. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A31 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A37. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A29 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 및 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A38. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A29 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A39. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A29 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A40. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A29 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A41. 실시 형태 A21 내지 실시 형태 A40 중 어느 하나에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 상호작용은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가되는, 단리된 폴리펩티드.
A42. 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하며,
상기 단리된 폴리펩티드는 동일한 조건 하에서 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단리된 폴리펩티드에 의해 나타나는 자기-응집(self-aggregation)에 비해 감소된 자기-응집을 나타내는, 단리된 폴리펩티드.
A43. 실시 형태 A42에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A44. 실시 형태 A42 또는 실시 형태 A43에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A45. 실시 형태 A42 또는 실시 형태 A43에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A46. 실시 형태 A42 또는 실시 형태 A43에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A47. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A46 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A48. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A46 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A49. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A46 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A50. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A46 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A51. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A46 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A52. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A44 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 및 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A53. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A44 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A54. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A44 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A55. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A44 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
A56. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A55 중 어느 하나에 있어서, 자기-응집은 고농도 액체 제형(high concentration liquid formulation, HCLF)에서 감소되는, 단리된 폴리펩티드.
A57. 실시 형태 A56에 있어서, 상기 HCLF 농도는 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL의 상기 단리된 폴리펩티드를 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A58. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A57 중 어느 하나에 있어서, 자기-응집은 열 스트레스 하에서 감소되는, 단리된 폴리펩티드.
A59. 실시 형태 A58에 있어서, 열 스트레스는 약 2주 동안 40℃에서의 인큐베이션을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
A60. 실시 형태 A42 내지 실시 형태 A59 중 어느 하나에 있어서, 상기 자기-응집은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가되는, 단리된 폴리펩티드.
A61. 단리된 단백질로서,
(a) 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및
(b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드
를 포함하며,
상기 단리된 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단리된 단백질과 참조물의 상호작용에 비해 상기 참조물과의 감소된 상호작용을 나타내는, 단리된 단백질.
A62. 실시 형태 A61에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 단백질.
A63. 실시 형태 A61 또는 실시 형태 A62에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는, 단리된 단백질.
A64. 실시 형태 A63에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 단백질.
A65. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A64 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있는, 단리된 단백질.
A66. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A65 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
A67. 실시 형태 A64 내지 실시 형태 A66 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
A68. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A65 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
A69. 실시 형태 A64, 실시 형태 A65, 또는 실시 형태 A68에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
A70. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A65 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
A71. 실시 형태 A64, 실시 형태 A65, 또는 실시 형태 A70에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
A72. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A71 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 단백질.
A73. 실시 형태 A64, 실시 형태 A65, 실시 형태 A67, 실시 형태 A69, 실시 형태 A71, 또는 실시 형태 A72에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 단백질.
A74. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A71 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 단백질.
A75. 실시 형태 A64, 실시 형태 A65, 실시 형태 A67, 실시 형태 A69, 실시 형태 A71, 실시 형태 A72, 또는 실시 형태 A74에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 단백질.
A76. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A71 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 단백질.
A77. 실시 형태 A64, 실시 형태 A65, 실시 형태 A67, 실시 형태 A69, 실시 형태 A71, 실시 형태 A72, 실시 형태 A74, 또는 실시 형태 A76에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 단백질.
A78. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A71 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 단리된 단백질.
A79. 실시 형태 A64, 실시 형태 A65, 실시 형태 A67, 실시 형태 A69, 실시 형태 A71, 실시 형태 A72, 실시 형태 A74, 실시 형태 A76, 또는 실시 형태 A78에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 단리된 단백질.
A80. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A71 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 단리된 단백질.
A81. 실시 형태 A64, 실시 형태 A65, 실시 형태 A67, 실시 형태 A69, 실시 형태 A71, 실시 형태 A72, 실시 형태 A74, 실시 형태 A76, 실시 형태 A78, 또는 실시 형태 A80에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 단리된 단백질.
A82. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A67 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 및 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
A83. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A67 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
A84. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A67 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
A85. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A67 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
A86. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A85 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 단리된 단백질.
A87. 실시 형태 A86에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는, 단리된 단백질.
A88. 실시 형태 A86 또는 실시 형태 A87에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 상기 제1 폴리펩티드, 상기 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있는, 단리된 단백질.
A89. 실시 형태 A86 내지 실시 형태 A88 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 단백질.
A90. 실시 형태 A86 내지 실시 형태 A89 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
A91. 실시 형태 A86 내지 실시 형태 A89 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
A92. 실시 형태 A86 내지 실시 형태 A89 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
A93. 실시 형태 A87 내지 실시 형태 A92 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 단백질.
A94. 실시 형태 A87 내지 실시 형태 A92 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 단백질.
A95. 실시 형태 A87 내지 실시 형태 A92 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 단리된 단백질.
A96. 실시 형태 A87 내지 실시 형태 A92 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 단리된 단백질.
A97. 실시 형태 A87 내지 실시 형태 A92 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 단리된 단백질.
A98. 실시 형태 A87 내지 실시 형태 A89 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, His 캡 도메인에 융합된 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 및 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
A99. 실시 형태 A87 내지 실시 형태 A89 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
A100. 실시 형태 A87 내지 실시 형태 A89 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
A101. 실시 형태 A87 내지 실시 형태 A89 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
A102. 실시 형태 A87 내지 실시 형태 A85 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이중특이성인, 단리된 단백질.
A103. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A101 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 다중특이성인, 단리된 단백질.
A104. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A101 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 삼중특이성인, 단리된 단백질.
A105. 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A104 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이종이량체성인, 단리된 단백질.
A106. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A60 중 어느 하나의 폴리펩티드 또는 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A105 중 어느 하나의 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 서열.
A107. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A60 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A105 중 어느 하나의 단백질을 발현하는 단리된 세포.
A108. 실시 형태 A106의 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터.
A109. 실시 형태 A106의 핵산 서열 또는 실시 형태 A108의 벡터를 포함하는 단리된 세포.
A110. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A60 중 어느 하나의 폴리펩티드 또는 실시 형태 A61 내지 실시 형태 A105 중 어느 하나의 단백질을 생성하기 위한 방법으로서,
실시 형태 A107 또는 실시 형태 A109의 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 방법.
A111. 실시 형태 A110에 있어서, 상기 폴리펩티드 또는 단백질을 단리하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
A112. 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 이중특이성 또는 다중특이성 항체로서,
상기 항체는 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 항체와 항-약물 항체의 상호작용에 비해 상기 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타내는, 이중특이성 또는 다중특이성 항체.
A113. 실시 형태 A112에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 항체.
A114. 실시 형태 A112 또는 실시 형태 A113에 있어서, 상기 항체는 면역검정에서 상기 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))이 결여되어 있는 상기 항체와 항-약물 항체의 상호작용에 비해 상기 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타내는, 항체.
A115. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A114 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 적어도 하나의 항체 가변 도메인을 포함하는, 항체.
A116. 실시 형태 A115에 있어서, 상기 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체.
A117. 실시 형태 A115에 있어서, 상기 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체.
A118. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A117 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 항체.
A119. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A117 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 항체.
A120. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A117 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 항체.
A121. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A117 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 항체.
A122. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A117 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 항체.
A123. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A115 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 및 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 항체.
A124. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A115 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 항체.
A125. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A115 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 항체.
A126. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A115 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 항체.
A127. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A126 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체를 포함하는, 항체.
A128. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A127 중 어느 하나의 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열.
A129. 실시 형태 A128의 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터.
A130. 실시 형태 A128의 핵산 서열 또는 실시 형태 A129의 벡터를 포함하는 단리된 세포.
A131. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A127 중 어느 하나의 항체를 발현하는 단리된 세포.
A132. 실시 형태 A112 내지 실시 형태 A127 중 어느 하나의 항체를 생성하기 위한 방법으로서,
실시 형태 A130 또는 실시 형태 A131의 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 방법.
A133. 실시 형태 A132에 있어서, 상기 항체를 단리하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
다른 세트의 실시 형태에서, 다음이 제공된다:
B1. 단리된 폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법으로서,
상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함하는, 방법.
B2. 실시 형태 B1에 있어서, 상기 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자인, 방법.
B3. 실시 형태 B2에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함하는, 방법.
B4. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B3 중 어느 하나에 있어서, 상기 참조물은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는, 방법.
B5. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B4 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 방법.
B6. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B5 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B7. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B5 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B8. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B5 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B9. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B8 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B10. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B8 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B11. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B8 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B12. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B8 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 방법.
B13. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B8 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 방법.
B14. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B6 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 및 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B15. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B6 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B16. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B6 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B17. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B6 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B18. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B17 중 어느 하나에 있어서, 상기 참조물과의 상호작용은 면역검정에 의해 결정되는, 방법.
B19. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B17 중 어느 하나에 있어서, 상기 참조물과의 상호작용은 시험관내(in vitro)에서 평가되는, 방법.
B20. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B17 중 어느 하나에 있어서, 상기 참조물과의 상호작용은 생체내에서 평가되는, 방법.
B21. 생물학적 물질 내에서의 단리된 폴리펩티드의 응집을 감소시키기 위한 방법으로서,
상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함하는, 방법.
B22. 실시 형태 B21에 있어서, 상기 생물학적 물질은 인간 혈청인, 방법.
B23. 실시 형태 B22에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 37℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 5 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함하는, 방법.
B24. 실시 형태 B22에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 40℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함하는, 방법.
B25. 실시 형태 B22에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 4℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함하는, 방법.
B26. 실시 형태 B22에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션은 약 25℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안의 인큐베이션을 포함하는, 방법.
B27. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B26 중 어느 하나에 있어서, 상기 생물학적 물질은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는, 방법.
B28. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B27 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 방법.
B29. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B28 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B30. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B28 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B31. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B28 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B32. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B31 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B33. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B31 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B34. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B31 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B35. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B31 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 방법.
B36. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B31 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 방법.
B37. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B29 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 및 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B38. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B29 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B39. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B29 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B40. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B29 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B41. 실시 형태 B21 내지 실시 형태 B40 중 어느 하나에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 상호작용은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가되는, 방법.
B42. 단리된 폴리펩티드의 자기-응집을 감소시키기 위한 방법으로서,
상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 융합시키는 단계를 포함하는, 방법.
B43. 실시 형태 B42에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 방법.
B44. 실시 형태 B42 또는 실시 형태 B43에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B45. 실시 형태 B42 또는 실시 형태 B43에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B46. 실시 형태 B42 또는 실시 형태 B43에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B47. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B46 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B48. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B46 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B49. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B46 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B50. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B46 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 방법.
B51. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B46 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 방법.
B52. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B44 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 및 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B53. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B44 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B54. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B44 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B55. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B44 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B56. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B55 중 어느 하나에 있어서, 자기-응집은 고농도 액체 제형(HCLF)에서 감소되는, 방법.
B57. 실시 형태 B56에 있어서, 상기 HCLF 농도는 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL의 상기 단리된 폴리펩티드를 포함하는, 방법.
B58. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B57 중 어느 하나에 있어서, 자기-응집은 열 스트레스 하에서 감소되는, 방법.
B59. 실시 형태 B58에 있어서, 열 스트레스는 약 2주 동안 40℃에서의 인큐베이션을 포함하는, 방법.
B60. 실시 형태 B42 내지 실시 형태 B59 중 어느 하나에 있어서, 상기 자기-응집은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가되는, 방법.
B61. 단리된 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법으로서,
상기 단리된 단백질은
(a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및
(b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드
를 포함하며,
상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 노출된 C-말단의 단부에 융합시키는 단계를 포함하는, 방법.
B62. 실시 형태 B61에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 방법.
B63. 실시 형태 B61 또는 실시 형태 B62에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 방법.
B64. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B63 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단의 단부에 융합시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
B65. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B64 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있는, 방법.
B66. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B65 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B67. 실시 형태 B64 내지 실시 형태 B66 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B68. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B65 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B69. 실시 형태 B64, 실시 형태 B65, 또는 실시 형태 B68에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B70. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B65 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B71. 실시 형태 B64, 실시 형태 B65, 또는 실시 형태 B70에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B72. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B71 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B73. 실시 형태 B64, 실시 형태 B65, 실시 형태 B67, 실시 형태 B69, 실시 형태 B71, 또는 실시 형태 B72에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B74. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B71 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B75. 실시 형태 B64, 실시 형태 B65, 실시 형태 B67, 실시 형태 B69, 실시 형태 B71, 실시 형태 B72, 또는 실시 형태 B74에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B76. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B71 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B77. 실시 형태 B64, 실시 형태 B65, 실시 형태 B67, 실시 형태 B69, 실시 형태 B71, 실시 형태 B72, 실시 형태 B74, 또는 실시 형태 B76에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B78. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B71 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 방법.
B79. 실시 형태 B64, 실시 형태 B65, 실시 형태 B67, 실시 형태 B69, 실시 형태 B71, 실시 형태 B72, 실시 형태 B74, 실시 형태 B76, 또는 실시 형태 B78에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 방법.
B80. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B71 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 상기 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 방법.
B81. 실시 형태 B64, 실시 형태 B65, 실시 형태 B67, 실시 형태 B69, 실시 형태 B71, 실시 형태 B72, 실시 형태 B74, 실시 형태 B76, 실시 형태 B78, 또는 실시 형태 B80에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 방법.
B82. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B67 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B83. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B67 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B84. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B67 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B85. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B67 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B86. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B85 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 방법.
B87. 실시 형태 B86에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 캡 도메인(예를 들어, His 캡 도메인, SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 TVAPTESS(서열 번호 37))을 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단의 단부에 융합시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
B88. 실시 형태 B86 또는 실시 형태 B87에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 상기 제1 폴리펩티드, 상기 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있는, 방법.
B89. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B88 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 방법.
B90. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B89 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B91. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B89 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B92. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B89 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
B93. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B92 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B94. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B92 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 2개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B95. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B92 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 3개의 히스티딘 잔기로 이루어지는, 방법.
B96. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B92 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27)로 이루어지는, 방법.
B97. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B92 중 어느 하나에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인은 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 방법.
B98. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B89 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, His 캡 도메인에 융합된 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), VTVSSHHHHH(서열 번호 5), TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 및 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B99. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B89 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B100. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B89 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B101. 실시 형태 B86 내지 실시 형태 B89 중 어느 하나에 있어서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이고, 상기 His 캡 도메인에 융합된 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
B102. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B85 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이중특이성인, 방법.
B103. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B101 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 다중특이성인, 방법.
B104. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B101 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 삼중특이성인, 방법.
B105. 실시 형태 B61 내지 실시 형태 B104 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이종이량체성인, 방법.
다른 세트의 실시 형태에서, 다음이 제공된다:
C1. 단리된 폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)으로서,
상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C2. 실시 형태 C1에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C3. 실시 형태 C1 또는 실시 형태 C2에 있어서, 상기 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자인, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C4. 실시 형태 C3에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C5. 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C4 중 어느 하나에 있어서, 상기 참조물은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C6. 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C5 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C7. 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C6 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 및 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C8. 단리된 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)으로서,
상기 단리된 단백질은
(a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및
(b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드
를 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C9. 실시 형태 C8에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C10. 실시 형태 C8 또는 실시 형태 C9에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C11. 실시 형태 C8 내지 실시 형태 C10 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C12. 실시 형태 C11에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C13. 실시 형태 C11 또는 실시 형태 C12에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 상기 제1 폴리펩티드, 상기 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C14. 실시 형태 C8 내지 실시 형태 C13 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이종이량체성인, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C15. 실시 형태 C8 내지 실시 형태 C14 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이중특이성 또는 다중특이성인, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C16. 실시 형태 C15에 있어서, 상기 다중특이성 단백질은 삼중특이성인, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C17. 실시 형태 C8 내지 실시 형태 C16 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C18. 실시 형태 C8 내지 실시 형태 C17 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 및 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C19. 이중특이성 또는 다중특이성 항체와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)으로서,
상기 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C20. 실시 형태 C19에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 적어도 하나의 항체 가변 도메인을 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C21. 실시 형태 C20에 있어서, 상기 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C22. 실시 형태 C20에 있어서, 상기 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C23. 실시 형태 C19 내지 실시 형태 C22 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C24. 실시 형태 C19 내지 실시 형태 C23 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체를 포함하는, 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C25. 단리된 폴리펩티드, 및 상기 단리된 폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)으로서,
상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는, 단리된 폴리펩티드 및 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C26. 실시 형태 C25에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
C27. 실시 형태 C25 또는 실시 형태 C26에 있어서, 상기 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자인, 단리된 폴리펩티드.
C28. 실시 형태 C27에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
C29. 실시 형태 C25 내지 실시 형태 C28 중 어느 하나에 있어서, 상기 참조물은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는, 단리된 폴리펩티드.
C30. 실시 형태 C25 내지 실시 형태 C29 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
C31. 실시 형태 C25 내지 실시 형태 C30 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), 및 VEIKRT(서열 번호 24)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
C32. 단리된 단백질, 및 상기 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)으로서,
상기 단리된 단백질은
(a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및
(b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드
를 포함하는, 단리된 단백질 및 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C33. 실시 형태 C32에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하는, 단리된 단백질.
C34. 실시 형태 C32 또는 실시 형태 C33에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있는, 단리된 단백질.
C35. 실시 형태 C32 내지 실시 형태 C34 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 단리된 단백질.
C36. 실시 형태 C35에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하는, 단리된 단백질.
C37. 실시 형태 C35 또는 실시 형태 C36에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 상기 제1 폴리펩티드, 상기 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있는, 단리된 단백질.
C38. 실시 형태 C32 내지 실시 형태 C37 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이종이량체성인, 단리된 단백질.
C39. 실시 형태 C32 내지 실시 형태 C38 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이중특이성 또는 다중특이성인, 단리된 단백질.
C40. 실시 형태 C39에 있어서, 상기 다중특이성 단백질은 삼중특이성인, 단리된 단백질.
C41. 실시 형태 C32 내지 실시 형태 C40 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 단백질.
C42. 이중특이성 또는 다중특이성 항체, 및 상기 이중특이성 또는 다중특이성 항체와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단)으로서,
상기 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는, 이중특이성 또는 다중특이성 항체 및 캡핑 수단(예를 들어, 히스티딘 캡핑 수단).
C43. 실시 형태 C42에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 적어도 하나의 항체 가변 도메인을 포함하는, 항체.
C44. 실시 형태 C43에 있어서, 상기 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체.
C45. 실시 형태 C43에 있어서, 상기 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체.
C46. 실시 형태 C42 내지 실시 형태 C45 중 어느 하나에 있어서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 이종이량체성인, 항체.
C47. 실시 형태 C42 내지 실시 형태 C46 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체를 포함하는, 항체.
C48. 실시 형태 C42 내지 실시 형태 C47 중 어느 하나에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 항체.
위의 설명과 청구범위에서, "~ 중 적어도 하나" 또는 "~ 중 하나 이상"과 같은 어구가 요소들 또는 특징부들의 연결 목록(conjunctive list) 다음에 나올 수 있다. 용어 "및/또는"이 또한 2개 이상의 요소들 또는 특징부들의 목록에 나올 수 있다. 그가 사용되는 문맥에 의해 달리 암시적으로 또는 명시적으로 모순되지 않는 한, 그러한 어구는 열거된 요소들 또는 특징부들 중 임의의 것을 개별적으로 또는 인용된 요소들 또는 특징부들 중 임의의 것을 다른 인용된 요소들 또는 특징부들 중 임의의 것과 조합하여 의미하도록 의도된다. 예를 들어, "A 및 B 중 적어도 하나";"A 및 B 중 하나 이상";및 "A 및/또는 B"라는 어구들은 각각 "A만, B만, 또는 A 및 B 모두"를 의미하는 것으로 의도된다. 유사한 해석이, 또한, 3개 이상의 항목을 포함하는 목록에 대해 의도된다. 예를 들어, "A, B 및 C 중 적어도 하나";"A, B 및 C 중 하나 이상";및 "A, B 및/또는 C"라는 어구들은 각각 "A만, B만, C만, A 및 B 모두, A 및 C 모두, B 및 C 모두, 또는 A 및 B 및 C 모두"를 의미하는 것으로 의도된다. 위에서 그리고 청구범위에서 "~에 기초하여"라는 용어의 사용은, 인용되지 않은 특징부 또는 요소도 허용가능하도록, "~에 적어도 부분적으로 기초하여"를 의미하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 설명되는 주제는 원하는 구성에 따라 시스템, 장치, 방법 및/또는 물품으로 구현될 수 있다. 전술한 설명에 기재된 구현예들은 본 명세서에서 설명되는 주제와 일치하는 모든 구현예를 나타내지는 않는다. 대신에, 그들은 설명된 주제와 관련된 태양과 일치하는 일부 예일 뿐이다. 몇몇 변형이 위에서 상세히 설명되었지만, 다른 수정 또는 추가가 가능하다. 특히, 본 명세서에 기재된 것에 더하여 추가의 특징부 및/또는 변형이 제공될 수 있다. 예를 들어, 위에서 설명된 구현예는 개시된 특징부들의 다양한 조합 및 하위조합 및/또는 위에 개시된 여러 추가 특징부들의 조합 및 하위조합에 관한 것일 수 있다. 게다가, 첨부 도면에 도시되고/되거나 본 명세서에서 설명되는 논리 흐름이 바람직한 결과를 달성하기 위해 반드시 도시된 특정 순서 또는 순차적인 순서를 필요로 하지는 않는다. 다른 구현예는 하기 청구범위의 범주 내에 있을 수 있다.
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Claims (200)
- 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 폴리펩티드로서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지고,
상기 단리된 폴리펩티드는 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단리된 폴리펩티드와 참조물의 상호작용에 비해 상기 참조물과의 감소된 상호작용을 나타내는, 단리된 폴리펩티드. - 제1항에 있어서, 상기 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자인, 단리된 폴리펩티드.
- 제2항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조물은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는, 단리된 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조물과의 상호작용은 면역검정에 의해 결정되는, 단리된 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조물과의 상호작용은 시험관내(in vitro) 또는 생체내(in vivo)에서 평가되는, 단리된 폴리펩티드.
- 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 폴리펩티드로서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지고,
상기 단리된 폴리펩티드는 동일한 조건 하에서 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단리된 폴리펩티드에 의해 나타나는 자기-응집(self-aggregation)에 비해 감소된 자기-응집을 나타내는, 단리된 폴리펩티드. - 제7항에 있어서, 자기-응집은 고농도 액체 제형(high concentration liquid formulation, HCLF)에서 감소되는, 단리된 폴리펩티드.
- 제8항에 있어서, 상기 HCLF 농도는 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL의 상기 단리된 폴리펩티드를 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
- 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 자기-응집은 열 스트레스 하에서 감소되는, 단리된 폴리펩티드.
- 제10항에 있어서, 열 스트레스는 약 2주 동안 40℃에서의 인큐베이션을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
- 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자기-응집은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가되는, 단리된 폴리펩티드.
- 하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 폴리펩티드로서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지고,
상기 단리된 폴리펩티드는 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단리된 폴리펩티드와 생물학적 물질의 인큐베이션 시에 나타나는 응집에 비해 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션 시에 감소된 응집을 나타내는, 단리된 폴리펩티드. - 제13항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 인간 혈청 및/또는 인간 혈장인, 단리된 폴리펩티드.
- 제14항에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션은 다음과 같은 인큐베이션을 포함하는, 단리된 폴리펩티드: (a) 약 37℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 5 내지 약 14일; (b) 약 40℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일; (c) 약 4℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일; 또는 (d) 약 25℃에서 약 7 내지 약 14일 동안.
- 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는, 단리된 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기, 2개의 히스티딘 잔기, 3개의 히스티딘 잔기, 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27), 또는 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 하기로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드:
(a) VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열;
(b) VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열;
(c) VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열;
(d) VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열; 또는
(e) TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열. - 단리된 단백질로서,
(a) 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드로서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 제1 폴리펩티드; 및
(b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드
를 포함하며,
상기 단리된 단백질은 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 단리된 단백질과 참조물의 상호작용에 비해 상기 참조물과의 감소된 상호작용을 나타내는, 단리된 단백질. - 제22항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있는, 단리된 단백질.
- 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제22항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드는 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36), TVAPTESS(서열 번호 37), HHHHHH(서열 번호 26), 또는 AS의 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
- 제27항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제27항 또는 제28항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기, 2개의 히스티딘 잔기, 3개의 히스티딘 잔기, 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27), 또는 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 단리된 단백질.
- 제27항 또는 제28항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질:
(a) VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5);
(b) VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10);
(c) VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15);
(d) VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20); 또는
(e) TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열. - 제22항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제22항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제22항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기, 2개의 히스티딘 잔기, 3개의 히스티딘 잔기, 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27), 또는 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 단리된 단백질.
- 제22항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질:
(a) VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5);
(b) VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10);
(c) VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15);
(d) VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20); 또는
(e) TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열. - 제22항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 단리된 단백질.
- 제35항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 상기 제1 폴리펩티드, 상기 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있는, 단리된 단백질.
- 제35항 또는 제36항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제35항 또는 제36항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36), TVAPTESS(서열 번호 37), HHHHHH(서열 번호 26), 또는 AS의 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
- 제39항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제39항 또는 제40항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기, 2개의 히스티딘 잔기, 3개의 히스티딘 잔기, 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27), 또는 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 단리된 단백질.
- 제39항 또는 제40항에 있어서, 상기 His 캡 도메인에 융합된 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질:
(a) VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5);
(b) VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10);
(c) VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15);
(d) VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20); 또는
(e) TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열. - 제22항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이중특이성, 삼중특이성, 또는 다중특이성인, 단리된 단백질.
- 제22항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이종이량체성인, 단리된 단백질.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 폴리펩티드 또는 제22항 내지 제44항 중 어느 한 항의 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 서열.
- 제45항의 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 폴리펩티드 또는 제22항 내지 제44항 중 어느 한 항의 단백질을 발현하는 단리된 세포.
- 제45항의 핵산 서열 또는 제46항의 벡터를 포함하는 단리된 세포.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 폴리펩티드 또는 제22항 내지 제44항 중 어느 한 항의 단백질을 생성하기 위한 방법으로서, 제47항 또는 제48항의 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제49항에 있어서, 상기 폴리펩티드 또는 단백질을 단리하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
하나 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 이중특이성 또는 다중특이성 항체로서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지고, 상기 항체는 상기 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 항체와 항-약물 항체의 상호작용에 비해 상기 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타내는, 이중특이성 또는 다중특이성 항체. - 제50항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 항체.
- 제50항 또는 제51항에 있어서, 상기 항체는 면역검정에서 상기 His 캡 도메인이 결여되어 있는 상기 항체와 항-약물 항체의 상호작용에 비해 상기 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타내는, 항체.
- 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 적어도 하나의 항체 가변 도메인을 포함하는, 항체.
- 제53항에 있어서, 상기 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체.
- 제50항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기, 2개의 히스티딘 잔기, 3개의 히스티딘 잔기, 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27), 또는 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 항체.
- 제50항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 항체:
(a) VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 또는 VTVSSHHHHH(서열 번호 5);
(b) VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 또는 VEIKHHHHH(서열 번호 10);
(c) VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 또는 VEIKRHHHHH(서열 번호 15);
(d) VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 또는 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20); 또는
(e) TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열. - 제50항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체를 포함하는, 항체.
- 제50항 또는 제57항의 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 서열.
- 제58항의 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터.
- 제58항의 핵산 서열 또는 제59항의 벡터를 포함하는 단리된 세포.
- 제50항 내지 제57항 중 어느 한 항의 항체를 발현하는 단리된 세포.
- 제50항 내지 제57항 중 어느 한 항의 항체를 생성하기 위한 방법으로서, 제60항 또는 제61항의 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제62항에 있어서, 상기 항체를 단리하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
- 단리된 폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법으로서, 상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인을 융합시키는 단계를 포함하며, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
- 제64항에 있어서, 상기 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자인, 방법.
- 제65항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함하는, 방법.
- 제64항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조물은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는, 방법.
- 제64항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조물과의 상호작용은 면역검정에 의해 결정되는, 방법.
- 제64항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조물과의 상호작용은 시험관내 또는 생체내에서 평가되는, 방법.
- 생물학적 물질 내에서의 단리된 폴리펩티드의 응집을 감소시키기 위한 방법으로서, 상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인을 융합시키는 단계를 포함하며, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
- 제70항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 인간 혈청 및/또는 혈장인, 방법.
- 제71항에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 인큐베이션은 다음과 같은 인큐베이션을 포함하는, 방법: (a) 약 37℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 5 내지 약 14일; (b) 약 40℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일; (c) 약 4℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일; 또는 (d) 약 25℃에서 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 또는 약 7 내지 약 14일 동안.
- 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는, 방법.
- 제70항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 물질과의 상호작용은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가되는, 방법.
- 단리된 폴리펩티드의 자기-응집을 감소시키기 위한 방법으로서, 상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인을 융합시키는 단계를 포함하며, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
- 제75항에 있어서, 자기-응집은 고농도 액체 제형(HCLF)에서 감소되는, 방법.
- 제76항에 있어서, 상기 HCLF 농도는 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL의 상기 단리된 폴리펩티드를 포함하는, 방법.
- 제75항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 자기-응집은 열 스트레스 하에서 감소되는, 방법.
- 제78항에 있어서, 열 스트레스는 약 2주 동안 40℃에서의 인큐베이션을 포함하는, 방법.
- 제75항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자기-응집은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 평가되는, 방법.
- 제64항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 방법.
- 제64항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
- 제64항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
- 제64항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기, 2개의 히스티딘 잔기, 3개의 히스티딘 잔기, 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27), 또는 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 방법.
- 제64항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법:
(a) VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5);
(b) VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10);
(c) VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15);
(d) VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20); 또는
(e) TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열. - 단리된 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 방법으로서, 상기 단리된 단백질은
(a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및
(b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드
를 포함하며,
상기 방법은 상기 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인을 융합시키는 단계를 포함하며, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 방법. - 제86항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있는, 방법.
- 제86항 또는 제87항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 방법.
- 제86항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
- 제86항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
- 제86항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인을 융합시키는 단계를 추가로 포함하며, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36), TVAPTESS(서열 번호 37), HHHHHH(서열 번호 26), 또는 AS의 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
- 제91항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 방법.
- 제91항 또는 제92항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기, 2개의 히스티딘 잔기, 3개의 히스티딘 잔기, 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27), 또는 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 방법.
- 제91항 또는 제92항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드의 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법:
(a) VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5);
(b) VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10);
(c) VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15);
(d) VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20); 또는
(e) TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열. - 제86항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
- 제86항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
- 제86항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기, 2개의 히스티딘 잔기, 3개의 히스티딘 잔기, 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27), 또는 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 방법.
- 제86항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 His 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법:
(a) VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5);
(b) VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10);
(c) VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15);
(d) VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20); 또는
(e) TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열. - 제86항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 방법.
- 제99항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 상기 제1 폴리펩티드, 상기 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있는, 방법.
- 제99항 또는 제100항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
- 제99항 또는 제100항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 경쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 중쇄 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 방법.
- 제99항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 방법은 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단의 단부에 캡 도메인을 융합시키는 단계를 추가로 포함하며, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36), TVAPTESS(서열 번호 37), HHHHHH(서열 번호 26), 또는 AS의 아미노산 서열로 이루어지는, 방법.
- 제103항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 방법.
- 제103항 또는 제104항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드의 His 캡 도메인은 단일 히스티딘 잔기, 2개의 히스티딘 잔기, 3개의 히스티딘 잔기, 4개의 히스티딘 잔기(서열 번호 27), 또는 5개의 히스티딘 잔기(서열 번호 28)로 이루어지는, 방법.
- 제103항 또는 제104항에 있어서, 상기 His 캡 도메인에 융합된 상기 제3 폴리펩티드의 노출된 C-말단은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 방법:
(a) VTVSSH(서열 번호 1), VTVSSHH(서열 번호 2), VTVSSHHH(서열 번호 3), VTVSSHHHH(서열 번호 4), 및 VTVSSHHHHH(서열 번호 5);
(b) VEIKH(서열 번호 6), VEIKHH(서열 번호 7), VEIKHHH(서열 번호 8), VEIKHHHH(서열 번호 9), 및 VEIKHHHHH(서열 번호 10);
(c) VEIKRH(서열 번호 11), VEIKRHH(서열 번호 12), VEIKRHHH(서열 번호 13), VEIKRHHHH(서열 번호 14), 및 VEIKRHHHHH(서열 번호 15);
(d) VEIKRTH(서열 번호 16), VEIKRTHH(서열 번호 17), VEIKRTHHH(서열 번호 18), VEIKRTHHHH(서열 번호 19), 및 VEIKRTHHHHH(서열 번호 20); 또는
(e) TKVTVL(His)n(서열 번호 46), TKLTVL(His)n(서열 번호 47), TQLIIL(His)n(서열 번호 48), TELTVL(His)n(서열 번호 49), 또는 TQLTVL(His)n(서열 번호 50)(여기서, n은 1, 2, 3, 4, 또는 5임)의 아미노산 서열. - 제86항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이중특이성, 삼중특이성, 또는 다중특이성인, 방법.
- 제86항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이종이량체성인, 방법.
- 단리된 폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단으로서, 상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는, 캡핑 수단.
- 제109항에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 캡핑 수단.
- 제109항 또는 제110항에 있어서, 상기 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자인, 캡핑 수단.
- 제111항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청을 포함하는, 캡핑 수단.
- 제109항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조물은 항-약물 항체를 포함하는, 캡핑 수단.
- 제109항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 캡핑 수단.
- 제109항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 및 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 캡핑 수단.
- 단리된 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단으로서, 상기 단리된 단백질은
(a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및
(b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드
를 포함하는, 캡핑 수단. - 제116항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하는, 캡핑 수단.
- 제116항 또는 제117항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있는, 캡핑 수단.
- 제116항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 캡핑 수단.
- 제119항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하는, 캡핑 수단.
- 제119항 또는 제120항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 상기 제1 폴리펩티드, 상기 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있는, 캡핑 수단.
- 제116항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이종이량체성인, 캡핑 수단.
- 제116항 내지 제122항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이중특이성, 삼중특이성, 또는 다중특이성인, 캡핑 수단.
- 제116항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 캡핑 수단.
- 제116항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 및 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 캡핑 수단.
- 이중특이성 또는 다중특이성 항체와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단으로서, 상기 이중특이성 또는 상기 다중특이성 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는, 캡핑 수단.
- 제126항에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 적어도 하나의 항체 가변 도메인을 포함하는, 캡핑 수단.
- 제127항에 있어서, 상기 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 캡핑 수단.
- 제126항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 캡핑 수단.
- 제126항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체를 포함하는, 캡핑 수단.
- 제109항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 캡핑 수단은 히스티딘 캡핑 수단인, 캡핑 수단.
- 단리된 폴리펩티드, 및 상기 단리된 폴리펩티드와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단으로서, 상기 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는, 단리된 폴리펩티드 및 캡핑 수단.
- 제132항에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 항체 가변 도메인 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
- 제132항 또는 제133항에 있어서, 상기 참조물은 생물학적 물질에 존재하는 분자인, 단리된 폴리펩티드.
- 제134항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
- 제132항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조물은 항-약물 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 항-약물 항체는 대상체의 혈청 및/또는 혈장 중에 이미 존재하고 있는, 단리된 폴리펩티드.
- 제132항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 폴리펩티드.
- 제132항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 및 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 폴리펩티드.
- 단리된 단백질, 및 상기 단리된 단백질과 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단으로서, 상기 단리된 단백질은
(a) 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및
(b) 표적-결합 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드
를 포함하는, 단리된 단백질 및 캡핑 수단. - 제139항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제139항 또는 제140항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드의 표적-결합 영역과 상기 제2 폴리펩티드의 표적-결합 영역은 상이한 표적에 결합할 수 있는, 단리된 단백질.
- 제139항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 표적-결합 영역을 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 단리된 단백질.
- 제142항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 노출된 C-말단을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제142항 또는 제143항에 있어서, 상기 제3 폴리펩티드는 상기 제1 폴리펩티드, 상기 제2 폴리펩티드, 또는 둘 모두와 상이한 표적에 결합할 수 있는, 단리된 단백질.
- 제139항 내지 제144항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이종이량체성인, 단리된 단백질.
- 제139항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단백질은 이중특이성, 삼중특이성, 또는 다중특이성인, 단리된 단백질.
- 제139항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제132항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 캡핑 수단은 히스티딘 캡핑 수단인, 단리된 폴리펩티드 또는 단백질.
- 이중특이성 또는 다중특이성 항체, 및 상기 이중특이성 또는 상기 다중특이성 항체와 참조물 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡핑 수단으로서, 상기 이중특이성 또는 상기 다중특이성 항체는 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하는, 이중특이성 또는 다중특이성 항체 및 캡핑 수단.
- 제149항에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 영역은 적어도 하나의 항체 가변 도메인을 포함하는, 항체.
- 제150항에 있어서, 상기 적어도 하나의 항체 가변 도메인은 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체.
- 제149항 내지 제151항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 이종이량체성인, 항체.
- 제149항 내지 제152항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다중특이성 항체는 삼중특이성 항체를 포함하는, 항체.
- 제149항 내지 제153항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 항체.
- 제149항 내지 제154항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 캡핑 수단은 히스티딘 캡핑 수단인, 항체.
- 진단 검정에서 사용하기 위한, 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 단백질로서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
- 제156항에 있어서, 상기 단백질은 항체인, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제157항에 있어서, 상기 항체는 신경교종-관련 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토프로테인(AFP), B-세포 성숙 항원(BCMA), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CAIX, 인간 텔로머라제 역전사효소, GPRC5D, RU1, RU2(AS), 위장 카르복실에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, HER2/neu, 서비빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), CD70, CD20, MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체, 또는 메소텔린에 결합하는, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제157항에 있어서, 상기 항체는 병원체의 항원에 결합하는, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제159항에 있어서, 상기 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 또는 기생충인, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제156항 내지 제160항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질은 생물학적 물질 내의 분자의 존재를 검출하기 위해 진단 검정에 사용되는, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제161항에 있어서, 상기 분자는 항원인, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제161항 또는 제162항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장인, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제156항 내지 제163항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 진단 검정은 시험관내 또는 생체내에서 수행되는, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제156항 내지 제164항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제156항 내지 제164항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 및 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 요법에서 사용하기 위한, 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 치료용 단백질로서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 치료용 단백질.
- 제167항에 있어서, 상기 단백질은 사이토카인 또는 항체인, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제168항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-12, IL-23, IL-1β, IL-6, IL-15, IL-2, IL-5, TNF-알파, IL-9, 또는 IL-17인, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제168항에 있어서, 상기 항체는 신경교종-관련 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토프로테인(AFP), B-세포 성숙 항원(BCMA), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CAIX, 인간 텔로머라제 역전사효소, GPRC5D, RU1, RU2(AS), 위장 카르복실에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, HER2/neu, 서비빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), CD70, CD20, MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체, 또는 메소텔린에 결합하는, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제168항에 있어서, 상기 항체는 병원체의 항원에 결합하는, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제171항에 있어서, 상기 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 또는 기생충인, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제167항 내지 제172항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제167항 내지 제172항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 및 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 단백질로서, 상기 노출된 C-말단은 아미노산 서열 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어지고, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
- 제175항에 있어서, 상기 단백질은 항체인, 단백질.
- 제176항에 있어서, 상기 항체는 신경교종-관련 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토프로테인(AFP), B-세포 성숙 항원(BCMA), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CAIX, 인간 텔로머라제 역전사효소, GPRC5D, RU1, RU2(AS), 위장 카르복실에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, HER2/neu, 서비빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), CD70, CD20, MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체, 또는 메소텔린에 결합하는, 단백질.
- 제176항에 있어서, 상기 항체는 병원체의 항원에 결합하는, 단백질.
- 제178항에 있어서, 상기 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 또는 기생충인, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 요법에 사용하기 위한 2개 이상의 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 치료용 이중특이성 또는 다중특이성 항체로서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열인, 치료용 이중특이성 또는 다중특이성 항체.
- 제180항에 있어서, 상기 2개 이상의 표적-결합 영역은 2개 이상의 항원에 결합하는, 상기 사용을 위한, 이중특이성 또는 다중특이성 항체.
- 제181항에 있어서, 적어도 하나의 항원은 신경교종-관련 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토프로테인(AFP), B-세포 성숙 항원(BCMA), 렉틴-반응성 AFP, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CAIX, 인간 텔로머라제 역전사효소, GPRC5D, RU1, RU2(AS), 위장 카르복실에스테라제, mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-la, p53, 프로스테인, PSMA, HER2/neu, 서비빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), CD70, CD20, MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체, 및 메소텔린으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 상기 사용을 위한, 이중특이성 또는 다중특이성 항체.
- 제180항에 있어서, 상기 항체는 병원체의 항원에 결합하는, 이중특이성 또는 다중특이성 항체.
- 제183항에 있어서, 상기 병원체는 바이러스, 세균, 진균, 또는 기생충인, 상기 사용을 위한, 단백질.
- 제180항 내지 제184항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 상기 사용을 위한, 이중특이성 또는 다중특이성 항체.
- 제180항 내지 제185항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 상기 사용을 위한, 이중특이성 또는 다중특이성 항체.
- 요법에서의 사용을 위한, 제175항 내지 제179항 중 어느 한 항의 단백질 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
- 진단 검정에서의 사용을 위한, 제175항 내지 제179항 중 어느 한 항의 단백질 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
- 항-약물 항체와 단백질 사이의 상호작용을 감소시키기 위한 캡 도메인의 용도로서, 상기 단백질은 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 용도.
- 생물학적 물질 내에서의 응집을 감소시키기 위한 캡 도메인의 용도로서, 상기 단백질은 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인이거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 용도.
- 자기-응집을 감소시키기 위한 캡 도메인의 용도로서, 상기 단백질은 하나 이상의 표적-결합 영역 및 노출된 C-말단을 포함하고, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인으로 이루어지거나, 또는 SLSLSPGK(서열 번호 36) 또는 TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 용도.
- 제190항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함하는, 용도.
- 제189항 내지 제191항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 용도.
- 제189항 내지 제191항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 캡 도메인은 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개의 히스티딘으로 이루어진 His 캡 도메인인, 용도.
- 표적-결합 영역, 및 캡 도메인에 융합된 노출된 C-말단을 포함하는 단리된 단백질로서, 상기 캡 도메인은 His 캡 도메인, 또는 HHHHHH(서열 번호 26), SLSLSPGK(서열 번호 36), 또는 AS, TVAPTESS(서열 번호 37)의 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
- 제195항에 있어서, 생물학적 물질 내의 항-약물 항체와의 감소된 상호작용을 나타내는, 단리된 단백질.
- 제196항에 있어서, 상기 생물학적 물질은 혈청 및/또는 혈장을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제195항 내지 제197항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 항-약물 항체 에피토프를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제195항 내지 제198항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출된 C-말단은 VTVSS(서열 번호 21), VEIK(서열 번호 22), VEIKR(서열 번호 23), VEIKRT(서열 번호 24), TKVTVL(서열 번호 38), TKLTVL(서열 번호 39), TQLIIL(서열 번호 40), TELTVL(서열 번호 41), 또는 TQLTVL(서열 번호 42)로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는, 단리된 단백질.
- 제195항 내지 제199항 중 어느 한 항에 있어서, 요법 또는 진단 검정에 사용하기 위한, 단리된 단백질.
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