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KR20240088231A - Sanguisorba officinalis Linne extracts that inhibits the activity of 3C-like protease in SARS-CoV-2 Omicron variant - Google Patents

Sanguisorba officinalis Linne extracts that inhibits the activity of 3C-like protease in SARS-CoV-2 Omicron variant Download PDF

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KR20240088231A
KR20240088231A KR1020220173760A KR20220173760A KR20240088231A KR 20240088231 A KR20240088231 A KR 20240088231A KR 1020220173760 A KR1020220173760 A KR 1020220173760A KR 20220173760 A KR20220173760 A KR 20220173760A KR 20240088231 A KR20240088231 A KR 20240088231A
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omicron
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KR1020220173760A
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Korean (ko)
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장문석
이태희
최원형
이승재
Original Assignee
주식회사 큐제네틱스
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Abstract

본 발명은 신규한 지유추출물의 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 대한 특이적 효소인 3CL 프로테아제의 활성 억제를 통해 SARS-CoV-2 오미크론 변이체에 감염을 차단 또는 억제시키는 지유추출물의 용도에 관한 것으로서, 본 발명의 지유 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스의 3CL 프로테아제의 활성을 현저히 억제함으로써, SARS-CoV-2 변이체 바이러스에 의한 감염 예방 또는 치료에 효과가 있음을 나타낸다. The present invention relates to the use of a novel oil extract to block or inhibit infection by SARS-CoV-2 omicron variants by inhibiting the activity of 3CL protease, a specific enzyme for the SARS-CoV-2 omicron variant virus. As related, the composition containing the oil extract of the present invention as an active ingredient is effective in preventing or treating infection by the SARS-CoV-2 variant virus by significantly inhibiting the activity of the 3CL protease of the SARS-CoV-2 omicron variant virus. It indicates that there is.

Description

SARS-CoV-2 오미크론 변이체의 3C-like protease의 활성을 억제시키는 지유추출 조성물{Sanguisorba officinalis Linne extracts that inhibits the activity of 3C-like protease in SARS-CoV-2 Omicron variant} Oil extract composition that inhibits the activity of 3C-like protease in SARS-CoV-2 Omicron variant {Sanguisorba officinalis Linne extracts that inhibits the activity of 3C-like protease in SARS-CoV-2 Omicron variant}

본 발명은 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스의 특이적 3CL 프로테아제 (3C-like protease)의 활성 억제를 통해 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 감염을 억제시키는 지유(Sanguisorba officinalis Linne) 추출물의 기능 및 그의 용도에 관한 것이다. The present invention relates to the function of Sanguisorba officinalis Linne extract to inhibit SARS-CoV-2 omicron variant infection by inhibiting the activity of the specific 3CL protease (3C-like protease) of the SARS-CoV-2 omicron variant virus, and It's about his use.

지유는 오이풀을 일컬으며, 장미과에 속하는 여러해살이 풀이다. 한국, 중국, 일본, 러시아 등지에 분포해 있으며, 산과 들에서 자라나는 야생초이다. 예로부터 지유는 해독, 화상, 설사, 호흡기 및 위장 질환 완화제로 이용되어 왔으며, 지유의 항알러지, 항암, 항산화 등 다양한 효능이 보고되고 있다.Jiyu refers to cucumber plant and is a perennial plant belonging to the Rosaceae family. It is distributed in Korea, China, Japan, Russia, etc. and is a wild herb that grows in mountains and fields. Since ancient times, fat oil has been used as a detoxifier, burns, diarrhea, respiratory and gastrointestinal disease reliever, and various effects such as anti-allergy, anti-cancer, and antioxidant properties have been reported.

일반적으로 식물을 추출하기 위한 용매로는 메탄올 (methanol), 에탄올 (ethanol) 또는 물을 이용하고 있는데, 지유 열수 추출물은 유용한 효능들이 보고되고 있는데, 구강암 (oralcancer)의 세포 증식을 억제하는 항암효과와 면역능 (immunopotentiation)을 강화시키는 효과가 이전의 연구들을 통해 보고되었다. 열수 추출 방식은 다른 방법들과 비교하여 쉽게 천연물질을 추출할 수 있고, 유용한 성분들을 다량으로 얻을 수 있으며, 에탄올 등과 같은 화학성분을 이용하지 않은 추출 방식이므로 독성이 낮아 추출물의 효능이 높고 식품섭취로서 안전성이 있다고 할 수 있다. 또한 지유는 산지에서 자라는 약초과로 재배가 용이하고, 자생력이 높으며 쉽게 구할 수 있다는 장점이 있다.In general, methanol, ethanol, or water are used as solvents for extracting plants, and useful effects of oil hot water extract have been reported, including anticancer effects that inhibit cell proliferation of oral cancer, The effect of enhancing immunopotentiation has been reported in previous studies. Compared to other methods, the hot water extraction method can easily extract natural substances and obtain a large amount of useful ingredients. Since it is an extraction method that does not use chemical components such as ethanol, it has low toxicity, high efficacy of the extract, and can be used in food consumption. It can be said to be safe. In addition, Jiyu is a medicinal herb that grows in mountainous areas and has the advantage of being easy to cultivate, highly self-sustaining, and easily available.

한국등록특허 제 10-17842540000 호에는 '지유 추출물을 유효성분으로 함유하는 패혈증의 예방 또는 치료용 조성물 및 건강기능식품 조성물'이 개시되어 있고 한국공개특허 제2011-0117540호에는 '지유 추출물을 유효성분으로 함유하는 헬리코박터 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강식품'이 개시되어 있으나, 현재까지 문헌상으로 지유 추출물이 신종 바이러스인 SARS-CoV-2의 변이체인 SARS-CoV-2 오미크론 변이체(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Omicron variant)의 감염 예방, 개선 또는 치료에 대한 유효함이 보고된 바 없다.Korean Patent No. 10-17842540000 discloses 'A composition for preventing or treating sepsis and a health functional food composition containing oil extract as an active ingredient', and Korean Patent Publication No. 2011-0117540 discloses 'A composition containing fat extract as an active ingredient'. 'Pharmaceutical compositions and health foods for the prevention or treatment of Helicobacter infectious diseases' containing There have been no reports of its effectiveness in preventing, improving, or treating infection with Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Omicron variant.

본 발명자들은 지유추출물(QG1)이 SARS-CoV-2의 변이체인 SARS-CoV-2 오미크론 변이체(B.1.1.529) 바이러스에 의한 감염 예방 또는 치료 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다. The present inventors completed the present invention by confirming that the oil extract (QG1) is effective in preventing or treating infection caused by the SARS-CoV-2 omicron variant (B.1.1.529) virus, a variant of SARS-CoV-2. .

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 지유추출물(QG1)의 유효성분을 포함하는 조성물이 SARS-CoV-2 오미크론 변이체(B.1.1.529) 바이러스의 생존과 분열 증식에 필수적 단백질인 3CL 프로테아제의 저해를 통해 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의해 유발된 질환을 치료 및 예방하는 것이다. The technical problem to be achieved by the present invention is that a composition containing the active ingredient of oil extract (QG1) inhibits 3CL protease, an essential protein for the survival and division and proliferation of the SARS-CoV-2 omicron variant (B.1.1.529) virus. The goal is to treat and prevent diseases caused by the SARS-CoV-2 omicron variant virus.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 지유추출물(QG1)을 유효성분으로 포함하는 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스 (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Omicron variant)에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical for preventing or treating infection caused by SARS-CoV-2 Omicron variant virus (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Omicron variant) containing oil extract (QG1) as an active ingredient. A composition is provided.

또한, 지유추출물을 유효성분으로 포함하는 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다. In addition, a health functional food composition for preventing or improving infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus containing oil extract as an active ingredient is provided.

또한, 지유를 건조하는 단계; Additionally, the step of drying the oil;

상기 건조된 지유를 30 내지 120℃에서 용매로 추출하는 단계; 및Extracting the dried fat with a solvent at 30 to 120°C; and

상기 추출된 용액을 동결건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법을 제공한다.It provides a method for producing a pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus, comprising the step of freeze-drying the extracted solution to prepare a powder.

본 발명의 지유추출물(QG1)을 유효성분으로 포함하는 조성물은 SARS-CoV-2 오미크론 변이체(B.1.1.529) 바이러스의 특이적인 3CL 프로테아제의 활성 억제를 통해 SARS-CoV-2 오미크론 변이체의 분열증식을 차단함으로써, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의해 유발되는 COVID-19에 대한 치료 효과가 있다. The composition containing the oil extract (QG1) of the present invention as an active ingredient inhibits the activity of the specific 3CL protease of the SARS-CoV-2 omicron variant (B.1.1.529) virus. By blocking division and proliferation, it has a therapeutic effect on COVID-19 caused by the SARS-CoV-2 omicron variant virus.

도 1은 in vitro assay에서 SARS-CoV-2 오미크론 변이체(B.1.1.529) 바이러스에 대한 음성 대조군, 양성 대조군 및 지유추출물(QG1)의 3CL 프로테아제의 활성 억제 결과를 나타낸 도이다. **, p < 0.01; ***, p < 0.001
도 2는 in vitro assay를 통해 SARS-CoV-2 오미크론 변이체(B.1.1.529) 바이러스에 특이적인 3CL 프로테아제의 활성 억제를 나타낸 결과로, 음성 대조군에 비해 양성 대조군 및 지유추출물(QG1)이 농도-의존적으로 3CL 프로테아제를 활성 억제하고 있음을 나타내는 결과이다.
Figure 1 is a diagram showing the results of inhibition of 3CL protease activity by negative control, positive control, and oil extract (QG1) against SARS-CoV-2 omicron variant (B.1.1.529) virus in in vitro assay. **, p <0.01; ***, p < 0.001
Figure 2 shows the results showing inhibition of the activity of 3CL protease specific to the SARS-CoV-2 omicron variant (B.1.1.529) virus through in vitro assay. The positive control and oil extract (QG1) compared to the negative control. This result indicates that the activity of 3CL protease is inhibited in a concentration-dependent manner.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 지유추출물을 유효성분으로 포함하는 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus, comprising oil extract as an active ingredient.

SARS-CoV-2는 감염에 의해 호흡기 증후 군을 일으키는 바이러스로서, 법정감염병 제1급으로 지정되어 있다. 현재 세계적 유행병 (pandemic)을 유발하고 있으며 80대 이상의 노령층에서 치사율이 25%에 이를 정도로 매우 심각한 중증을 유발하고 있는 실정이다. 공기중의 비말이나 대인 접촉 등의 경로를 통해 SARS-CoV-2의 비강내 침투가 전파의 주요 원인으로 지목되고 있다.SARS-CoV-2 is a virus that causes respiratory syndrome due to infection and is designated as a class 1 statutory infectious disease. It is currently causing a global pandemic and is causing very serious illness in people over 80, with a mortality rate of up to 25%. Invasion of SARS-CoV-2 into the nasal cavity through routes such as airborne droplets or person-to-person contact is considered the main cause of transmission.

사람 체내에 유입된 SARS-CoV-2는 세포 표면에 있는 ACE2 (Angiotensin-Converting Enzyme 2) 수용체와 결합하여 세포내로 침투하고 분열, 증식을 통해 다량의 신규 바이러스를 생성한다(Jackson CB., et al. Mechanisms of SARS-CoV-2 entry into cells. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2021, 5, 1-18.). 생성된 SARS-CoV-2는 세포 밖으로 다시 분비되어 다른 세포에 재침투하는 동일한 과정을 반복하여 증식한다. 따라서 SARS-CoV-2의 세포 감염, 세포내 복제 및 증식에 관여하는 기전은 치료제 개발의 주요 타깃이다.SARS-CoV-2 that enters the human body binds to the ACE2 (Angiotensin-Converting Enzyme 2) receptor on the cell surface, penetrates into the cell, divides and proliferates, and generates a large amount of new viruses (Jackson CB., et al Mechanisms of SARS-CoV-2 entry into Cell. 2021, 5, 1-18. The resulting SARS-CoV-2 is secreted out of the cell again and proliferates by repeating the same process of re-infiltrating other cells. Therefore, the mechanisms involved in cellular infection, intracellular replication, and proliferation of SARS-CoV-2 are major targets for therapeutic development.

SARS-CoV-2의 유전체(genome)는 약 3만개의 RNA로 구성되어 있으며, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질이 세포의 ACE2 수용체 (angiotensin converting enzyme 2)에 결합하여 SARS-CoV-2가 세포에 진입하고 바이러스 복제를 일으킨다.The genome of SARS-CoV-2 is composed of approximately 30,000 RNAs, and the spike protein of SARS-CoV-2 binds to the cell's ACE2 receptor (angiotensin converting enzyme 2), allowing SARS-CoV-2 to enter cells. enters and causes viral replication.

코로나바이러스 표면에는 왕관 모양의 스파이크(spike)가 특징적으로 발현된다. 스파이크 단백질은 약 1,200개 아미노산으로 되어 있고, 스파이크1 (S1)과 스파이크2 도메인 (S2 domain)으로 구성되어 있다. 기능적으로 S1은 세포 수용체 결합 그리고 S2는 퓨전 (fusion)에 관여하는 것으로 알려져 있다. Crown-shaped spikes are characteristically expressed on the surface of the coronavirus. Spike protein consists of approximately 1,200 amino acids and consists of Spike 1 (S1) and Spike 2 domains (S2 domain). Functionally, S1 is known to be involved in cell receptor binding and S2 is involved in fusion.

SARS-CoV-2 유전체는 스파이크 단백질 등 구조단백질뿐만 아니라 바이러스 중합효소, 단백질 분해 효소 등 바이러스 복제 및 감염에 관여하는 단백질을 코딩하는 알려져 있다.The SARS-CoV-2 genome is known to encode proteins involved in viral replication and infection, such as viral polymerase and proteolytic enzymes, as well as structural proteins such as spike proteins.

SARS-CoV-2는 오미크론 변이체를 포함한 다수의 변이체 바이러스를 발생시키고 있으며, 이들 변이 바이러스는 주로 숙주세포에 침투 역할을 하는 스파이크 도메인 (spike domain)내의 유전자 변이 (genetic mutation)에 기인한다(Harvey, W.T., et al. SARS-CoV-2 variants, spike mutations and immune escape. Nat. Rev. Microbiol. 2021, 19, 409-424.).SARS-CoV-2 is generating a number of mutant viruses, including omicron mutants, and these mutant viruses are mainly caused by genetic mutations in the spike domain, which plays a role in infiltrating host cells (Harvey , W.T., et al. SARS-CoV-2 variants, immune escape, Rev. 2021, 19, 409-424.

본원에서 SARS-CoV-2 바이러스는 그 변이체를 포함하는 것을 의미할 수 있고, 구체적으로 알파, 베타, 감마, 델타, 오미크론, 뮤 등의 변이체 바이러스를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. As used herein, SARS-CoV-2 virus may mean including its variants, and may specifically include variant viruses such as alpha, beta, gamma, delta, omicron, and mu, but is not limited thereto.

SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스(B.1.1.529)는 2021년 11월 9일 보츠와나에서 새롭게 발견된 SARS-CoV-2의 변이 바이러스이다. 11월 26일 WHO에서 오미크론이라 정식으로 명명하고 VOC(Variant of Concern)로 분류했다.SARS-CoV-2 Omicron variant virus (B.1.1.529) is a mutant virus of SARS-CoV-2 newly discovered in Botswana on November 9, 2021. On November 26, WHO officially named it Omicron and classified it as a VOC (Variant of Concern).

상기 오미크론 변이 바이러스는 퓨린 절단부 변이(P681H)가 중첩된 첫 변이 바이러스 주로, 알파 변이에서 전염성 강화를 일으킨 P681H와 C.1.2에서 관찰된 N679K 변이가 동시에 있다. 게다가 백신 회피 변이만 최소 4개(E484A, S477N, N440K, Q493R)에 이르며, 증폭 돌연변이 K417N도 포(B.1.1.529)함하고 있다. 람다 변이보다는 덜하지만 뉴클리오캡시드 단백질 2곳(N:R203K, N:G204R)에서 변이가 일어났다. 또한, SARS-CoV-2가 인간 세포로 침투할 때 이용하는 스파이크(spike) 단백질에서 A67V, Δ69-70, T95I, G142D, Δ143-145, Δ211, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, K417N, N440K, G446S, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K 및 L981F의 변이가 관찰되었다. 상기 오미크론 바이러스의 스파이크 단백질 내 돌연변이는 기존 델타 변이(B.1.617.2)보다 6배 이상 많은 것으로 알려졌다. The omicron mutant virus is mainly the first mutant virus with an overlapping purine cleavage mutation (P681H), and has both P681H, which caused enhanced infectiousness in the alpha mutation, and the N679K mutation observed in C.1.2. In addition, there are at least four vaccine evasion mutations (E484A, S477N, N440K, Q493R), and it also includes the amplification mutation K417N (B.1.1.529). Although less common than the lambda mutation, mutations occurred in two nucleocapsid protein locations (N:R203K, N:G204R). Additionally, the spike protein used by SARS-CoV-2 to infiltrate human cells includes A67V, Δ69-70, T95I, G142D, Δ143-145, Δ211, L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, K417N. , N440K, G446S, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K and L Mutation 981F was observed. It is known that the number of mutations in the spike protein of the Omicron virus is more than six times that of the existing delta mutation (B.1.617.2).

SARS-CoV-2 오미크론 변이체(B.1.1.529) 바이러스는 지금까지 발견된 변이들 중 약물에 저항성이 높으며, 최소 5중 변이, 최대 9중 변이로 추정된다. 남아프리카 공화국 보건부의 연구 결과에 의하면 RNA의 58군데에서 기존과 차이를 보이고 있으며, 이 중 스파이크 단백질에서 발생한 변이는 32개로 확인되었다. The SARS-CoV-2 Omicron variant (B.1.1.529) virus has the highest drug resistance among the mutations discovered so far, and is estimated to have at least 5 mutations and up to 9 mutations. According to the research results of the South African Ministry of Health, 58 places in the RNA showed differences from the existing ones, of which 32 mutations occurred in the spike protein.

본원에서 SARS-CoV-2 오미크론 변이체(B.1.1.529)는 다양한 하위 변이체(subvariants)를 포함할 수 있으며, 구체적으로 BA.1, BA.1.1, BA.2, BA.2.12.1, BA.4, BA.5, BF.7, BQ.1, BQ.1.1, BA.2.75, BN.1, 또는 XBB 등의 하위변이체를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. As used herein, the SARS-CoV-2 omicron variant (B.1.1.529) may include various subvariants, specifically BA.1, BA.1.1, BA.2, BA.2.12.1, It may include sub-variants such as BA.4, BA.5, BF.7, BQ.1, BQ.1.1, BA.2.75, BN.1, or XBB, but is not limited thereto.

표 1은 SARS-CoV-2 오미크론 변이체(B.1.1.529) 및 하위변이체를 나타낸 것이다. 현재 공식적으로 오미크론 우려변이(VOC)로 지정된 첫 번째 계보는 BA.1이다. 스파이크 단백질 영역에서 69/70 결실이 없는 BA.2의 사례는 인도, 남아프리카, 덴마크 및 영국과 같은 여러 국가에서 증가하고 있다. BA.1.1은 다른 Omicron 계통에는 없는 추가 R346K 돌연변이를 가지고 있으며, BA.3의 스파이크 단백질에는 돌연변이가 적고 BA.3에 대한 시퀀스 모니터링 데이터는 제한적이지만, 여전히 바이러스의 전염을 통한 질환을 유발하고 있다. Table 1 shows the SARS-CoV-2 omicron variant (B.1.1.529) and subvariants. The first lineage currently officially designated as an omicron variant of concern (VOC) is BA.1. Cases of BA.2 without the 69/70 deletion in the spike protein region are increasing in several countries such as India, South Africa, Denmark and the United Kingdom. BA.1.1 has an additional R346K mutation that is not present in other Omicron strains, and although BA.3 has fewer mutations in its spike protein and sequence monitoring data for BA.3 is limited, it still causes disease through viral transmission.

WHO labelWHO label Omicron 하위 변이체Omicron subvariants SARS-CoV-2 오미크론 변이체(B.1.1.529)SARS-CoV-2 Omicron variant (B.1.1.529) BA.1BA.1 BA.1.1BA.1.1 BA.2BA.2 BA.2.12.1BA.2.12.1 BA.3BA.3 BA.4BA.4 BA.5BA.5 BA.7BA.7 BQ.1BQ.1 BQ.1.1BQ.1.1 BA2.75BA2.75 BN.1BN.1 XBBXBB

SARS-CoV-2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2)는 2019년에 처음 알려진 급성 중증 호흡기 질환 코로나바이러스 2로써 양성 방향(Positive-sense)의 단일 사슬 RNA 바이러스(positive-sense single-stranded RNA virus)로 분류된다. 이 바이러스에 의해 감염된 질환을 코로나바이러스감염증-19(Coronavirus disease 2019)로 명명하였으며, 줄여서 COVID-19라고 부르고 있다. SARS-CoV-2 (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2) is an acute severe respiratory disease coronavirus 2 first known in 2019 and is a positive-sense single-stranded RNA virus. are classified. The disease caused by this virus was named coronavirus disease 2019 (Coronavirus disease 2019), and is abbreviated as COVID-19.

상기 SARS-CoV-2에 의한 질환은 코로나바이러스감염증-19 일 수 있다. 상기 코로나바이러스감염증-19는 호흡기 질환일 수 있으며, 상기 호흡기 질환은 폐렴일 수 있다. 상기 코로나바이러스감염증-19의 증상은 발열, 권태감, 기침, 호흡곤란, 가래, 인후통, 두통, 객혈, 오심 및 설사 중 적어도 하나일 수 있다. The disease caused by SARS-CoV-2 may be coronavirus infection-19. The coronavirus infection-19 may be a respiratory disease, and the respiratory disease may be pneumonia. The symptoms of COVID-19 may be at least one of fever, malaise, cough, difficulty breathing, phlegm, sore throat, headache, hemoptysis, nausea, and diarrhea.

상기 SARS-CoV-2 오미크론 바이러스는 그 변이체를 포함할 수 있다.The SARS-CoV-2 omicron virus may include variants thereof.

상기 변이체는 SARS-CoV-2 바이러스의 스파이크 단백질 (spike protein)에 변이가 발생한 것을 특징으로 할 수 있다.The variant may be characterized by a mutation occurring in the spike protein of the SARS-CoV-2 virus.

상기 지유추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 SARS-CoV-2 오미크론 변이체에 특이적인 3CL 프로테아제(3C-like protease)의 활성을 저해 또는 억제시키는 것을 특징으로 할 수 있다. A composition containing the oil extract as an active ingredient may be characterized by inhibiting or inhibiting the activity of 3CL protease (3C-like protease) specific to SARS-CoV-2 omicron variants.

상기 3CL 프로테아제는 papain-like protease와 더불어 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 유전자에 코딩 되어 있으며 SARS-CoV-2 오미크론 변이체의 체내 증식에 필요한 기능성 단백질 생성에 필수적인 단백질이며 또한, SARS-CoV-2가 코딩하는 증식에 필요한 기능성 단백질들은 숙주세포의 단백질 합성 체계를 이용하여 하나의 폴리펩타이드 형태로 발현된다. 특이한 점은, 이 폴리펩타이드 내에 공유 결합으로 연결된 각각의 단백질들은 그의 고유 기능을 발휘하지 못하나, protease에 의해 절단되어 독립적으로 존재할 시 기능을 획득할 수 있다(Anirudhan V., et al. Targeting SARS-CoV-2 viral proteases as a therapeutic strategy to treat COVID-19. J. Med. Virol. 2021, 93(5), 2722-2734.). The 3CL protease, along with papain-like protease, is encoded in the SARS-CoV-2 omicron variant gene and is an essential protein for the production of functional proteins required for the in vivo proliferation of the SARS-CoV-2 omicron variant. The functional proteins required for proliferation encoded by are expressed in the form of a single polypeptide using the protein synthesis system of the host cell. What is unique is that each protein covalently linked within this polypeptide does not perform its own function, but can acquire function when it exists independently by being cleaved by protease (Anirudhan V., et al. Targeting SARS- CoV-2 viral proteases as a therapeutic strategy to treat COVID-19. J. Med. 2021, 93(5), 2722-2734.

3CL 프로테아제는 폴리펩타이드에 존재하는 11개의 cleavage site에 작용하여 기능성 단백질을 생성시키는 반면, papain-like protease는 3개의 cleavage site에 작용하여 기능성 단백질을 생성시키는 것으로 알려져 있다. 따라서 3CL protease를 억제할 시 papain-like protease 비해 다수의 기능성 단백질의 생성을 억제할 수 있기에 본 효소는 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스 치료제 개발을 위한 주요 타깃일 수 있다. 3CL protease is known to produce functional proteins by acting on 11 cleavage sites present in polypeptides, while papain-like protease is known to produce functional proteins by acting on 3 cleavage sites. Therefore, when inhibiting 3CL protease, the production of multiple functional proteins can be inhibited compared to papain-like protease, so this enzyme may be a major target for the development of SARS-CoV-2 omicron variant virus therapeutics.

본 발명자들은 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스 치료 및 예방제 개발을 위해 223종의 생약 열수추출물을 이용하여 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 특이적인 3CL 프로테아제와 RdRp protein을 억제하는 물질을 스크린 하여 본 발명을 완성하였다. The present inventors screened for substances that inhibit the 3CL protease and RdRp protein specific to the SARS-CoV-2 omicron variant virus using hot water extracts of 223 herbal medicines to develop treatments and preventive agents for the SARS-CoV-2 omicron variant virus. Thus, the present invention was completed.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서, 지유를 이용하여 지유 추출물을 제조하였고, 제조된 추출물을 인비트로(in vitro) 시험에 사용하였다. 그 결과, 지유추출물을 사용하지 않은 음성대조군에 비하여 3CL 프로테아제의 활성 억제를 통해 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스의 분열증식을 저해하는 효과를 나타냄으로써 (도 1 내지 도 2), 본 발명의 지유추출물이 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인하였다. In a specific example of the present invention, an oil extract was prepared using fat oil, and the prepared extract was used in an in vitro test. As a result, compared to the negative control group that did not use oil extract, it showed the effect of inhibiting the division and growth of the SARS-CoV-2 omicron variant virus through inhibition of the activity of 3CL protease (Figures 1 and 2), according to the present invention. It was confirmed that the oil extract can be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing or treating infection caused by the SARS-CoV-2 omicron variant virus.

또한, 하기 실시예 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 본 실험을 위해 사용한 3CL glow assay kit (Montana Molecular, 미국)는 3CL 프로테아제에 의해 절단되는 도메인 (domain)이 GFP(green fluorescent protein) 단백질의 c-terminal에 부착되어 있는 GFP 융합 단백질(GFP fusion protein)을 기반으로 한다. GFP 융합 단백질은 형광을 나타내지 않는 반면, C-terminal 융합 도메인(C-terminal fusion domain)이 3CL 프로테아제에 의해 절단된 순수 GFP 단백질은 형광을 나타낸다. 즉, 3CL 프로테아제의 활성을 억제하면 GFP 융합 단백질로부터 형광 생성 역시 감소하게 된다. 따라서, 형광 생성의 감소를 통해 지유추출물에 의해 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스의 3CL 프로테아제의 활성 억제를 확인할 수 있었다(도 1). In addition, as can be seen in Example 2 below, in the 3CL glow assay kit (Montana Molecular, USA) used for this experiment, the domain cleaved by 3CL protease is c- of the GFP (green fluorescent protein) protein. It is based on the GFP fusion protein attached to the terminal. While GFP fusion protein does not show fluorescence, pure GFP protein whose C-terminal fusion domain has been cleaved by 3CL protease shows fluorescence. In other words, if the activity of 3CL protease is inhibited, fluorescence generation from the GFP fusion protein is also reduced. Therefore, it was confirmed that the activity of the 3CL protease of the SARS-CoV-2 omicron variant virus was inhibited by the oil extract through the decrease in fluorescence production (Figure 1).

본 발명의 일 실시예에 따르면, in vitro 모델에서 음성 대조군(H2O)에 비해 지유추출물에 의해 3CL 프로테아제의 활성이 억제됨으로써 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스의 생존 및 분열 증식 억제 효능이 효과적으로 나타나고 있음을 확인할 수 있었다(실시예 2).According to one embodiment of the present invention, the activity of 3CL protease is inhibited by oil extract compared to the negative control (H2O) in an in vitro model, thereby effectively inhibiting the survival and division and proliferation of the SARS-CoV-2 omicron variant virus. It was confirmed that there was (Example 2).

그러므로 본 발명의 지유추출물은 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인하였다. Therefore, it was confirmed that the oil extract of the present invention can be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing or treating infection by the SARS-CoV-2 omicron variant virus.

상기 지유추출물은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물인 용매로 추출되는 것을 특징으로 할 수 있다.The oil extract may be extracted with a solvent that is water, alcohol, or a mixture thereof.

상기 용매는 물, 에탄올, 탄소수 1 내지 5의 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 저급 알코올 수용액일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. The solvent may be water, ethanol, a lower alcohol having 1 to 5 carbon atoms, or an aqueous solution of a lower alcohol having 1 to 5 carbon atoms, but is not limited thereto.

상기 용매를 통한 추출 시 추출 온도는 20℃ 내지 130℃, 30℃ 내지 120℃ 인 것이 바람직하고, 90℃ 내지 110℃인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. The extraction temperature during extraction using the solvent is preferably 20°C to 130°C, 30°C to 120°C, and more preferably 90°C to 110°C, but is not limited thereto.

상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 발명의 용어 "약학적으로 허용 가능한"이란 상기 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다. 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 생리식염수, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜 및 리퀴드 파라핀으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용 가능하다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 지유 추출물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다. The pharmaceutical composition may include a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, or diluent. The term "pharmaceutically acceptable" in the present invention means that the composition exhibits non-toxic properties to cells or humans exposed to the composition. The composition containing a pharmaceutically acceptable carrier may be in various oral or parenteral dosage forms. When formulated, it can be prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. The carriers, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, It may be one or more selected from the group consisting of polyvinyl pyrrolidone, physiological saline, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil, dextrin, calcium carbonate, propylene glycol, and liquid paraffin. It is not limited, and all common carriers, excipients, or diluents can be used. The ingredients may be added independently or in combination to the active ingredient, oil extract.

상기 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다. The pharmaceutical composition may be any selected from the group consisting of tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, oral solutions, emulsions, syrups, sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. It can have one dosage form.

상기 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 60, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.As a base for the suppository, witepsol, macrogol, tween 60, cacao, laurin, glycerogenatin, etc. may be used.

상기 약학적 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제 및 액체 형태로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.The pharmaceutical composition may have any one dosage form selected from the group consisting of powder, granule, tablet, capsule, and liquid form.

상기 추출물의 약학적 투여 형태는 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. The pharmaceutical dosage form of the extract can be used alone or in combination with other pharmaceutically active compounds, as well as in appropriate combinations.

상기 약학적 조성물은 경구로 투여될 수 있으며, 고형 제제 또는 액상 제제일 수 있다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브오일과 같은 식물성 기름, 에틸 올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition may be administered orally and may be a solid formulation or a liquid formulation. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc. These solid preparations include the extract with at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, and sucrose. ) or prepared by mixing lactose, gelatin, etc. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, oral solutions, emulsions, and syrups. In addition to the commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. there is. Preparations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. Non-aqueous solvents and suspensions include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate.

본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다. 그 투여 용량에 특별한 제약은 없고, 체내 흡수도, 체중, 환자의 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 유효량 범위를 고려하여 제조하도록 하며, 이렇게 제형화된 단위 투여형 제제는 필요에 따라 약제의 투여를 감시하거나 관찰하는 전문가의 판단과 개인의 요구에 따라 전문화된 투약법을 사용하거나 일정 시간 간격으로 수회 투여할 수 있다. 상기 투여는 바람직하게는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수 회 나누어 투여할 수도 있다. The pharmaceutical composition of the present invention can be administered in a pharmaceutically effective amount. There are no particular restrictions on the administered dose, and it may vary depending on body absorption, body weight, patient's age, gender, health condition, diet, administration time, administration method, excretion rate, and severity of disease. The pharmaceutical composition of the present invention is manufactured taking into account the effective dose range, and the unit dosage form formulated in this way can be prepared according to the judgment of an expert who monitors or observes the administration of the drug as needed and a specialized dosing method according to the individual's needs. It can be used or administered several times at regular time intervals. The above administration may preferably be administered once a day, or may be administered several times.

상기 지유추출물은 오이풀 (Sanguisorba officinalis L.)의 뿌리 및 긴오이풀 (Sanguisorba longifolia) 뿌리로 이루어진 그룹에서 선택된 어느하나 이상에서 추출되는 것을 특징으로 할 수 있다. The oil extract may be extracted from one or more selected from the group consisting of the roots of Sanguisorba officinalis L. and the roots of Sanguisorba longifolia.

또한, 본 발명은 지유추출물을 유효성분으로 포함하는 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염 또는 이로 인한 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다. 상기 식품은 건강기능식품 또는 음료 중 어느 하나 이상인 것을 특징으로 할 수 있다. In addition, the present invention provides a food composition for preventing or improving infection by or disease caused by SARS-CoV-2 omicron variant virus, comprising oil extract as an active ingredient. The food may be characterized as being one or more of health functional foods or beverages.

상기 지유추출물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 지유 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 추출물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.When using the fat extract as a food additive, the fat extract can be added as is or used together with other foods or food ingredients, and can be used appropriately according to conventional methods. The mixing amount of the active ingredient can be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention, health, or therapeutic treatment). Generally, when producing a food or beverage, the extract of the present invention may be added in an amount of 15 parts by weight or less, preferably 10 parts by weight or less, based on the raw material. However, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or health control, the amount may be below the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount above the above range.

상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 지유추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함할 수 있다. There are no particular restrictions on the types of health functional foods. Examples of foods to which the oil extract can be added include meat, sausages, bread, chocolate, candies, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea, and drink preparations. , alcoholic beverages and vitamin complexes, etc., and can include all health functional foods in the conventional sense.

본 발명의 건강기능음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. The health functional beverage composition of the present invention may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients, like ordinary beverages. The above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As a sweetener, natural sweeteners such as thaumatin and stevia extract or synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame can be used.

상기 건강기능식품 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 2 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above health functional food, the health functional food of the present invention includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, and preservatives. , glycerin, alcohol, carbonating agents used in carbonated drinks, etc. Additionally, it may contain pulp for the production of natural fruit juice, fruit juice drinks, and vegetable drinks. These ingredients can be used independently or in combination. The ratio of these additives is not very important, but is generally selected in the range of 0.01 to 2 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.

상기 지유추출물은 하기의 단계를 포함하는 제조방법으로 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:The oil extract is preferably prepared by a manufacturing method including the following steps, but is not limited thereto:

1) 지유를 건조하는 단계;1) Drying the oil;

2) 상기 건조된 지유를 30 내지 120℃에서 용매로 추출하는 단계; 및2) extracting the dried fat with a solvent at 30 to 120°C; and

3) 상기 추출된 용액을 동결건조하여 분말을 제조하는 단계3) Freeze-drying the extracted solution to produce powder.

본 발명은 1) 지유를 건조하는 단계; The present invention includes the steps of 1) drying fat oil;

2) 상기 건조된 지유를 30 내지 120℃에서 용매로 추출하는 단계; 및2) extracting the dried fat with a solvent at 30 to 120°C; and

3) 상기 추출된 용액을 동결건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 제조방법을 제공한다.3) It provides a method for manufacturing a pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus, comprising the step of freeze-drying the extracted solution to prepare a powder.

또한, 본 발명은 1) 지유를 건조하는 단계;In addition, the present invention includes the steps of 1) drying fat oil;

2) 상기 건조된 지유를 30 내지 120℃에서 용매로 추출하는 단계; 및2) extracting the dried fat with a solvent at 30 to 120°C; and

3) 상기 추출된 용액을 동결건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물 제조방법을 제공한다. 3) It provides a method for manufacturing a health functional food composition for preventing or improving infection by the SARS-CoV-2 omicron variant virus, comprising the step of freeze-drying the extracted solution to produce a powder.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 지유는 오이풀 또는 긴오이풀을 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있으며, 잎, 뿌리, 줄기 및 가지 등 어느 것도 이용가능하고, 이에 한정하지 않으나 본 발명의 바람직한 실시 예에 의하면 오이풀의 뿌리 또는 긴오이풀 뿌리를 이용하는 것이 가장 바람직하다.In the above method, the oil of step 1) can be used without limitation, such as cultivated or commercially available cucumber grass or long cucumber grass, and any leaves, roots, stems, and branches can be used, but are not limited to these, but are used according to the present invention. According to a preferred embodiment, it is most desirable to use the roots of cucumber grass or the roots of long cucumber grass.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 추출 용매는 물, 알코올, 주정 또는 이들의 혼합물 및 유기 용매를 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 탄소수1 내지 탄소수5의 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 열수 추출, 진탕 추출, 속실렛(Soxhlet) 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 용매를 건조된 지유의 총 중량에 5 내지 30배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 20배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출 온도는 20℃ 내지 130℃ 인 것이 바람직하고, 90℃ 내지 110℃인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출 시간은 2 내지 48시간인 것이 바람직하며, 15 내지 30시간인 것이 더욱 바람직하고, 24시간인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. In the above method, the extraction solvent in step 1) is preferably water, alcohol, alcohol, or a mixture thereof and an organic solvent. It is preferable to use a lower alcohol having 1 to 5 carbon atoms as the alcohol, and it is preferable to use ethanol or methanol as the lower alcohol. The extraction method is preferably, but not limited to, hot water extraction, shaking extraction, Soxhlet extraction, or reflux extraction. It is preferable to extract by adding 5 to 30 times the total weight of the dried oil, and more preferably by adding 20 times the extraction solvent to the total weight of the dried fat. The extraction temperature is preferably 20°C to 130°C, and more preferably 90°C to 110°C, but is not limited thereto. In addition, the extraction time is preferably 2 to 48 hours, more preferably 15 to 30 hours, and most preferably 24 hours, but is not limited thereto. In addition, the number of extractions is preferably 1 to 5 times, more preferably 3 to 4 times, and most preferably 3 times, but is not limited thereto.

상기 지유추출물은 30 내지 95% 주정 추출물인 것이 바람직하고, 40 내지 90% 주정 추출물인 것이 보다 바람직하며, 50 내지 80% 주정 추출물인 것이 가장 바람직하고, 상기 30% 미만 주정 추출물의 경우에는 추출 효율이 낮아져 목적으로 하는 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료효과를 나타내지 못할 수 있고, 95% 초과 주정 추출물의 경우, 지유 추출물의 생산 단가를 높이게 되어 좋지 않다. The oil extract is preferably 30 to 95% alcohol extract, more preferably 40 to 90% alcohol extract, and most preferably 50 to 80% alcohol extract. In the case of less than 30% alcohol extract, the extraction efficiency This is lowered and may not show the intended prevention or treatment effect of infection by the SARS-CoV-2 omicron variant virus, and in the case of alcohol extract exceeding 95%, it is not good because it increases the production cost of the oil extract.

상기 제조방법을 통해 제조된 지유 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 3CL 프로테아제를 억제함으로써, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료에 효과를 나타내는 것을 특징으로 할 수 있다.A composition containing fat extract as an active ingredient prepared through the above manufacturing method may be effective in preventing or treating infection by the SARS-CoV-2 omicron variant virus by inhibiting 3CL protease.

이하, 본 발명을 실시 예 및 실험 예에 의해 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail through examples and experimental examples.

다만, 하기 실시 예 및 실험 예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시 예 및 실험 예에 의하여 한정되는 것은 아니다. However, the following examples and experimental examples are merely illustrative of the present invention, and the content of the present invention is not limited by the following examples and experimental examples.

실시예 1. 지유추출물의 제조Example 1. Preparation of oil extract

건조된 지유(오이풀 (Sanguisorba officinalis Linne)의 뿌리)에 건조 지유 총 중량의 20배 무게의 증류수를 첨가하여 1시간 30분동안 냉침하였다. 그 후 대형 전탕기를 이용하여 100℃에서 1시간 30분 동안 리플럭스(reflux)하여 용액을 추출했다. 추출된 용액을 감압 여과하여 불순물을 제거한 뒤, -20℃에서 동결건조하여 분말을 제조하였다. 상기 동결건조된 0.2 g 지유 분말을 10 mL 증류수에 넣어 지유 추출물 함유 용액 (20 mg/ml)을 제조하여 시험에 사용하였다. 더불어, 상기 감압 여과하여 불순물을 제거한 추출용액을 분무건조하여 분말을 제조하였다. 상기 분무건조된 0.2 g 지유 분말을 10 mL 증류수에 넣어 지유 추출물 함유 용액 (20 mg/ml)을 제조하여 실험에 사용하였다.Distilled water 20 times the weight of the total weight of dried oil was added to dried oil (root of Sanguisorba officinalis Linne) and cold soaked for 1 hour and 30 minutes. Afterwards, the solution was extracted by refluxing at 100°C for 1 hour and 30 minutes using a large water boiler. The extracted solution was filtered under reduced pressure to remove impurities, and then freeze-dried at -20°C to prepare powder. 0.2 g of the freeze-dried oil powder was added to 10 mL of distilled water to prepare a solution containing oil extract (20 mg/ml), which was used in the test. In addition, the extraction solution from which impurities were removed by filtering under reduced pressure was spray dried to prepare powder. 0.2 g of the spray-dried oil powder was added to 10 mL of distilled water to prepare a solution containing oil extract (20 mg/ml), which was used in the experiment.

실시예 2. 지유추출물에 의한 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스의 특이적 3CL 프로테아제 활성 억제 및 바이러스 증식 억제 Example 2. Inhibition of specific 3CL protease activity and virus proliferation of SARS-CoV-2 omicron variant virus by oil extract

3CL 프로테아제 인비트로(in-vitro) 측정 및 분석은 하기와 같이 시험관 수준에서 수행되었다. 이는, 지유추출물에 따른 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스의 분열 및 증식의 억제 여부를 확인하기 위해 3CL 프로테아제(B.1.1.529, Omicron Variant)의 활성도를 분석하는 실험이다.3CL protease in-vitro measurement and analysis were performed at the in vitro level as follows. This is an experiment to analyze the activity of 3CL protease (B.1.1.529, Omicron Variant) to determine whether the oil extract inhibits the division and proliferation of the SARS-CoV-2 Omicron variant virus.

본 실험은 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스의 3CL 프로테아제(3C-like protease) inhibitor assay kit (BPS bioscience, 미국)를 이용하였다. 3CL 프로테아제의 활성 부위와 결합하면 형광을 나타내는 기질(substrate)과 테스트 시료를 반응시킨 후, 공지의 방법으로 형광을 측정하여 시료의 3CL 프로테아제(B.1.1.529, Omicron Variant) 활성 억제 효능을 확인하였다. 음성 대조군으로 H2O를 시료와 같은 부피로 사용하였고, 3CL 프로테아제 활성 억제 양성 대조군으로 GC376을 각각 0.1, 1, 10 μM 사용하였다. 반응 부피는 50 μl, 처리된 지유 추출물은 각각 2, 20, 200 μg/ml이다. This experiment used the 3CL protease (3C-like protease) inhibitor assay kit (BPS bioscience, USA) of the SARS-CoV-2 omicron variant virus. After reacting the test sample with a substrate that fluoresces when combined with the active site of 3CL protease, the fluorescence is measured using a known method to confirm the efficacy of the sample in inhibiting 3CL protease (B.1.1.529, Omicron Variant) activity. did. As a negative control, H2O was used in the same volume as the sample, and as a positive control for inhibiting 3CL protease activity, GC376 was used at 0.1, 1, and 10 μM, respectively. The reaction volume was 50 μl, and the treated oil extract was 2, 20, and 200 μg/ml, respectively.

측정 결과, 도 1에 나타난 것과 같이 음성 대조군에 비해 지유 추출물 처리군이 양성 대조군과 동등 이상으로 3CL 프로테아제의 활성을 억제하고 있으며, 농도-의존적으로 3CL 프로테아제의 활성을 효과적으로 억제함을 확인할 수 있었다.As a result of the measurement, as shown in Figure 1, it was confirmed that compared to the negative control group, the oil extract treatment group inhibited the activity of 3CL protease to an equal or greater extent than the positive control group, and effectively inhibited the activity of 3CL protease in a concentration-dependent manner.

또한, 도 2에 나타난 것과 같이 음성 대조군에 비해 동결건조 지유추출물군 및 분무건조한 지유추출물군 모두 다 양성 대조군과 동등 이상으로 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스의 3CL 프로테아제의 활성을 현저히 억제하고 있으며, 농도-의존적으로 3CL 프로테아제의 활성을 효과적으로 억제하고 있음을 알 수 있었다.In addition, as shown in Figure 2, compared to the negative control group, both the freeze-dried fat extract group and the spray-dried fat extract group significantly inhibited the activity of the 3CL protease of the SARS-CoV-2 omicron variant virus to an equal or higher level than the positive control group. , it was found that the activity of 3CL protease was effectively inhibited in a concentration-dependent manner.

이러한 결과를 통해 지유추출물이 SARS-CoV-2 오미크론 변이체의 3CL 프로테아제 작용을 억제 및 차단함으로써 바이러스의 분열 및 증식을 효과적으로 억제하고 있다는 것을 확인할 수 있었다.These results confirmed that the oil extract effectively inhibits the division and proliferation of the virus by inhibiting and blocking the 3CL protease action of the SARS-CoV-2 omicron variant.

Claims (17)

지유추출물을 유효성분으로 포함하는 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스 (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Omicron variant)에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. A pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 Omicron variant virus (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Omicron variant) containing oil extract as an active ingredient. 1항에 있어서,
상기 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스는 그 하위변이체(subvariants)를 포함하는 것을 특징으로 하고, 상기 하위변이체는 BA.1, BA1.1, BA.2, BA.2.12.1, BA.3, BA.4, BA.5, BF.7, BQ.1, BQ1.1, BA.2.75, BN.1, 또는 XBB를 포함하는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
In paragraph 1,
The SARS-CoV-2 omicron variant virus is characterized in that it includes subvariants, and the subvariants include BA.1, BA1.1, BA.2, BA.2.12.1, and BA.3. , BA.4, BA.5, BF.7, BQ.1, BQ1.1, BA.2.75, BN.1, or XBB. Pharmaceutical composition for preventing or treating infection.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 SARS-CoV-2 오미크론 변이체의 특이적 3CL 프로테아제 (3C-like protease)를 저해시키는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
According to clause 1,
The composition is a pharmaceutical composition for preventing or treating infection by the SARS-CoV-2 omicron variant virus, characterized in that it inhibits the specific 3CL protease (3C-like protease) of the SARS-CoV-2 omicron variant. .
제 1항에 있어서,
상기 지유추출물은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물인 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
According to clause 1,
A pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus, characterized in that the oil extract is extracted with a solvent that is water, alcohol, or a mixture thereof.
제 1항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
According to clause 1,
The pharmaceutical composition is a pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus, characterized in that it contains a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent.
제 1항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가지는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
According to clause 1,
The pharmaceutical composition is any one dosage form selected from the group consisting of tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, oral solutions, emulsions, syrups, sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. A pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus, characterized in that it has.
제 1항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제 및 액체 형태로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가지는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
According to clause 1,
The pharmaceutical composition is for the prevention or treatment of infection by the SARS-CoV-2 omicron variant virus, characterized in that it has any one formulation selected from the group consisting of powder, granule, tablet, capsule, and liquid form. Pharmaceutical composition.
제 1항에 있어서,
상기 지유추출물은 오이풀 (Sanguisorba officinalis L.)의 뿌리 및 긴오이풀 (Sanguisorba longifolia) 뿌리로 이루어진 그룹에서 선택된 어느하나 이상에서 추출되는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
According to clause 1,
The oil extract is characterized in that it is extracted from one or more selected from the group consisting of the roots of Sanguisorba officinalis L. and the roots of Sanguisorba longifolia, for infection by the SARS-CoV-2 omicron variant virus. Pharmaceutical composition for prevention or treatment.
지유추출물을 유효성분으로 포함하는 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Omicron variant)에 의한 감염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물. A health functional food composition for preventing or improving infection by SARS-CoV-2 Omicron variant virus (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Omicron variant) containing oil extract as an active ingredient. 제 9항에 있어서,
상기 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스는 그 하위변이체(subvariants)를 포함하는 것을 특징으로 하고, 상기 하위변이체는 BA.1, BA1.1, BA.2, BA.2.12.1, BA.3, BA.4, BA.5, BF.7, BQ.1, BQ1.1, BA.2.75, BN.1, 또는 XBB를 포함하는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
According to clause 9,
The SARS-CoV-2 omicron variant virus is characterized in that it includes subvariants, and the subvariants include BA.1, BA1.1, BA.2, BA.2.12.1, and BA.3. , BA.4, BA.5, BF.7, BQ.1, BQ1.1, BA.2.75, BN.1, or XBB. Health functional food composition for preventing or improving infection.
제 9항에 있어서,
상기 조성물은 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 특이적 3CL 프로테아제 (3C-like protease)를 저해시키는 것을 특징으로 하는 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
According to clause 9,
The composition is a health functional food composition for preventing or improving infection by the SARS-CoV-2 omicron variant virus, characterized in that it inhibits the SARS-CoV-2 omicron variant-specific 3CL protease (3C-like protease).
지유를 건조하는 단계;
상기 건조된 지유를 30 내지 120℃에서 용매로 추출하는 단계; 및
상기 추출된 용액을 동결건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법.
drying the oil;
Extracting the dried fat with a solvent at 30 to 120°C; and
A method for producing a pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus, comprising the step of freeze-drying the extracted solution to prepare a powder.
제 12항에 있어서,
상기 SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스는 그 하위변이체(subvariants)를 포함하는 것을 특징으로 하고, 상기 하위변이체는 BA.1, BA1.1, BA.2, BA.2.12.1, BA.4, BA.5, BF.7, BQ.1, BQ1.1, BA.2.75, BN.1, 또는 XBB를 포함하는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법.
According to clause 12,
The SARS-CoV-2 omicron variant virus is characterized in that it includes subvariants, and the subvariants include BA.1, BA1.1, BA.2, BA.2.12.1, and BA.4. , BA.5, BF.7, BQ.1, BQ1.1, BA.2.75, BN.1, or XBB, preventing infection by SARS-CoV-2 omicron variant viruses, or Method for preparing a therapeutic pharmaceutical composition.
제 12항에 있어서,
상기 용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법.
According to clause 12,
A method for producing a pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus, wherein the solvent is at least one selected from the group consisting of water, alcohol, or mixtures thereof.
제 12항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법.
According to clause 12,
A method of producing a pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus, wherein the pharmaceutical composition contains a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, or diluent.
제 12항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가지는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법.
According to clause 12,
The pharmaceutical composition is any one dosage form selected from the group consisting of tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, oral solutions, emulsions, syrups, sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. A method for producing a pharmaceutical composition for preventing or treating infection by SARS-CoV-2 omicron variant virus, characterized in that it has.
제 12항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제 및 액체 형태로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가지는 것을 특징으로 하는, SARS-CoV-2 오미크론 변이체 바이러스에 의한 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법.
According to clause 12,
The pharmaceutical composition is for the prevention or treatment of infection by the SARS-CoV-2 omicron variant virus, characterized in that it has any one formulation selected from the group consisting of powder, granule, tablet, capsule, and liquid form. Method for preparing pharmaceutical compositions.
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