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KR20220144888A - 최적화된 다기능 t 세포를 포함하는 키메라 수용체 t 세포를 사용하는 치료 - Google Patents

최적화된 다기능 t 세포를 포함하는 키메라 수용체 t 세포를 사용하는 치료 Download PDF

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KR20220144888A
KR20220144888A KR1020227035816A KR20227035816A KR20220144888A KR 20220144888 A KR20220144888 A KR 20220144888A KR 1020227035816 A KR1020227035816 A KR 1020227035816A KR 20227035816 A KR20227035816 A KR 20227035816A KR 20220144888 A KR20220144888 A KR 20220144888A
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cells
cell
lymphoma
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antigen
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KR1020227035816A
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존 엠. 로시
아드리안 아이. 보트
Original Assignee
카이트 파마 인코포레이티드
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Publication date
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Abstract

개시내용은 유효 용량의 키메라 수용체 (예를 들어, CAR 또는 TCR) 유전자 변형된 T 세포 면역요법을 투여하는 것을 포함하는 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다. 개시내용의 일부 측면은 환자에게 투여하기 전에 다기능 T 세포를 포함하는 T 세포 면역요법의 유효 용량을 결정하는 방법에 관한 것이다.

Description

최적화된 다기능 T 세포를 포함하는 키메라 수용체 T 세포를 사용하는 치료 {TREATMENT USING CHIMERIC RECEPTOR T CELLS INCORPORATING OPTIMIZED POLYFUNCTIONAL T CELLS}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2017년 4월 3일에 출원된 미국 가출원 62/481,003에 대한 우선권을 주장하며, 이는 그 전문이 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자 제출된 서열 목록을 포함하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 2018년 4월 3일에 작성된 상기 ASCII 카피의 명칭은 KPI-019WO_ST25.txt이고, 크기는 564 바이트이다.
인간 암은 그의 속성상, 유전적 또는 후성적 전환을 겪어 비정상적인 암 세포가 된 정상 세포로 구성된다. 이로서, 암 세포는 정상 세포에 의해 발현되는 것과 구분되는 단백질 및 다른 항원을 발현하기 시작한다. 이들 이상 종양 항원은 신체의 선천성 면역계에 의해 사용되어 암 세포가 특이적으로 표적화되고 사멸될 수 있다. 그러나, 암 세포는 면역 세포, 예컨대 T 및 B 림프구가 성공적으로 암 세포를 표적화하는 것을 막기 위해 다양한 메카니즘을 사용한다.
인간 T 세포 요법은 환자에서 암 세포를 표적화하고 사멸시키기 위해, 풍부화되거나 변형된 인간 T 세포에 의존한다. T 세포가 특정한 암 세포를 표적화하고 사멸시키는 능력을 증가시키기 위해, T 세포를 특정한 표적 암 세포로 지시하는 구축물을 발현하도록 T 세포를 조작하는 방법이 개발되어 왔다. 특정한 종양 항원과 상호작용할 수 있는 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 조작된 T 세포 수용체 (TCR)는 T 세포가 특정한 종양 항원을 발현하는 암 세포를 표적화하고 사멸시키는 것을 가능하게 한다.
다중 면역 프로그램을 활용할 수 있는 개별 T 세포를 포함하는, 주입-전 생성물 중의, CAR T 세포의 하위세트는 CAR T 세포 효력을 조직한다. CD19+ 표적 세포에 의해 자극된 CD4+ 및 CD8+ T 세포 둘 다에 대한 다기능 프로파일은 선택 이펙터 분자 (그랜자임 B), 자극/면역 조절 시토카인 (IFNγ, IL-5) 및 케모카인 (IL-8, MIP-1α)으로 구성된다. CD8+ T 세포와 대조적으로, CD4+ T 세포 하위세트는 또한 IL-17A-분비 다기능 세포를 포함하였다. CD4+ 및 CD8+ T 세포의 다양성 및 다기능 T 세포 집단에의 공동-참여는 CD28 공동-자극 도메인을 갖는 CAR 생성물과 일치한다.
본원에 기재된 바와 같이, CAR T 세포 치료로부터 발생한 임상 반응 및 독성은 키메라 수용체 T 세포, 또는 규정된 T 세포 하위집단의 다기능 강도 지수 (PSI)와 연관된다.
T 세포 다기능성과 연관되고 임상 결과와 상관되는 키메라 수용체 T 세포 (예를 들어, CAR T 세포 또는 외인성 TCR 세포)에 대한 신규한 생성물 속성이 본원에 기재된다. 강력한 T 세포 증식 능력을 갖는 시토카인인 조건화-구동된 IL-15 또는 생체내 CAR T 세포 확장과 조합된 다기능성 지수는 CAR T 세포 요법-후의 임상 결과와 연관된다.
CAR T 세포 다기능성을 모니터링하는 것은 주요 생성물 속성으로서 T 세포 증식 능력과 같은 다른 특징을 보완하는데 유용하다. 일부 실시양태에서, 다기능성은 적어도, 제조 전 T 세포의 상태에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 다기능성 및 임상 결과는 T 세포의 유전자 프로그래밍, 제조 방법, 또는 투여 전략을 최적화하는 것을 통해 조작될 수 있다.
본 개시내용은 1종 이상의 키메라 항원 수용체를 함유하는 복수의 T 세포를 수득하는 단계, 및 다기능 CAR T 세포의 유효량을 포함하는 용량의 상기 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 환자에게 유효 용량의 키메라 수용체를 투여하는 것을 포함하는 상기 환자에서 악성종양을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다기능 T 세포는, 예를 들어, CD8+ 및 CD4+ 다기능 T 세포를 포함한다.
방법은 다기능 강도 지수 백분율을 사용하여 다기능 CAR T 세포의 유효 백분율을 수득하여 목적하는 용량을 결정하는 단계를 추가로 포함한다. 다기능 강도 지수는 목적하는 퍼센트의 다기능 T 세포의 결정을 미리 결정된 시토카인 프로파일의 계산과 합체하는 것을 포함한다. 미리 결정된 시토카인 프로파일은, 예를 들어, 그랜자임 B, IFN-감마, MIP1a, 퍼포린, TNFa, TNFb, GMCSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21, CCI-11, IP-10, MIP1b, RANTES, IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-b1, SCD137, SCD40L, IL-1b, IL-6, IL-17a, IL-17f, MCP-1, 및 MCP-4 중 적어도 1종의 측정 및 선택을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD19-발현 표적 세포에 의한 자극 시 모든 생성물 세포의 20-25%가 다기능이다.
키메라 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR) 및/또는 T 세포 수용체 (TCR)일 수 있다.
개시내용은 추가로, 환자에게 키메라 항원 수용체 및 T 세포 수용체로 이루어진 군으로부터 선택된 키메라 수용체의 유효 용량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 악성종양을 치료하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 용량은 다기능 CAR T 세포의 유효 백분율을 함유한다. 본 발명은 추가로, 다기능 CAR T 세포의 백분율을 조절하는 것을 포함하는 키메라 수용체 치료에서 바람직하지 않은 부작용을 감소시키는 방법, 뿐만 아니라 다기능 CAR T 세포의 백분율을 조절하는 것을 포함하는 키메라 수용체 치료의 효력을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 1종 이상의 키메라 수용체를 포함하는 복수의 T 세포를 수득하는 단계; 및 유효 용량의 T 세포를 환자에게 투여하는 단계이며, 여기서 유효 용량은 다기능 T 세포의 미리 결정된 양을 포함하는 것인 단계를 포함하는, 환자에서 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 15% 초과, 20% 초과, 20% 초과, 25% 초과, 30% 초과의 다기능 T 세포이다.
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 다기능 강도 지수 (PSI)를 사용하여 결정된다.
일부 실시양태에서, 다기능 강도 지수 (PSI)는 다기능 세포의 백분율을 다기능 세포에 의해 분비된 단백질의 평균 강도의 합계와 곱하는 것에 의해 계산된다.
일부 실시양태에서, 다기능 강도 지수 (PSI)는 다기능 세포의 백분율을 다기능 세포에 의해 분비된 단백질의 평균 형광 강도의 합계와 곱하는 것에 의해 계산된다. 일부 실시양태에서, 다기능 강도 지수 (PSI)는 250, 350, 450, 또는 550 초과이다.
일부 실시양태에서, 다기능 강도 지수 (PSI)는 (i) 다기능 T 세포의 목적하는 백분율을 결정하는 단계; 및 (ii) 미리 결정된 시토카인 프로파일을 수득하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다.
일부 실시양태에서, 유효 용량은 다기능 강도 지수를 T 세포의 총수와 곱하는 것에 의해 수득된 PSI의 용량을 포함한다. 일부 실시양태에서, 유효 용량은 PSI x 주입된 T 세포의 단위로 적어도 3.5 x 1010 또는 적어도 7.7 x 1010개를 포함한다.
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 적어도 2.4 x 107 또는 적어도 4.2 x 107개의 다기능 T 세포를 포함한다.
일부 실시양태에서, 유효 용량은 종양 부담에 비례하여 조정된다.
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 복합 지수를 사용하여 결정된다. 일부 실시양태에서, 복합 지수는 적어도 2종의 측정 기준을 포함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 측정 기준은 각각의 측정 기준을 그의 각각의 표준 편차로 나누는 것에 의해 표준화된다.
일부 실시양태에서, 복합 지수는 다기능 강도 지수 (PSI) 및/또는 T 세포 주입 전 IL-15의 환자 혈청 수준을 포함한다. 일부 실시양태에서, 복합 지수는 다기능 강도 지수 (PSI)를 결정하는 단계 및 T 세포 주입 전 IL-15의 환자 혈청 수준을 측정하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다. 일부 실시양태에서, 복합 지수는 3 초과이다.
일부 실시양태에서, 미리 결정된 시토카인 프로파일을 수득하는 단계는 그랜자임 B, IFN-감마, MIP1a, 퍼포린, TNFa, TNFb, GMCSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21, CCI-11, IP-10, MIP1b, RANTES, IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-b1, SCD137, SCD40L, IL-1b, IL-6, IL-17a, IL-17f, MCP-1, 및 MCP-4 중 적어도 1종을 측정하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 미리 결정된 시토카인 프로파일을 수득하는 단계는 그랜자임 B, IFN-감마, MIP1a, 퍼포린, TNFa, TNFb, GMCSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21, CCI-11, IP-10, MIP1b, RANTES, IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-b1, SCD137, SCD40L, IL-1b, IL-6, IL-17a, IL-17f, MCP-1, 및 MCP-4 중 적어도 1종을 선택하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 수용체는 종양 항원을 표적화한다.
일부 실시양태에서, 키메라 수용체는 종양-연관 표면 항원, 예컨대 5T4, 알파태아단백질 (AFP), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), BCMA, B-인간 융모성 고나도트로핀, CA-125, 암배아성 항원 (CEA), 암배아성 항원 (CEA), CD123, CD133, CD138, CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD30, CD33, CD34, CD4, CD40, CD44, CD56, CD8, CLL-1, c-Met, CMV-특이적 항원, CS-1, CSPG4, CTLA-4, DLL3, 디시알로강글리오시드 GD2, 관-상피 뮤신, EBV-특이적 항원, EGFR 변이체 III (EGFRvIII), ELF2M, 엔도글린, 에프린 B2, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), 상피 세포 부착 분자 (EpCAM), 상피 종양 항원, ErbB2 (HER2/neu), 섬유모세포 연관 단백질 (fap), FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 신경교종-연관 항원, 글리코스핑고지질, gp36, HBV-특이적 항원, HCV-특이적 항원, HER1-HER2, HER2-HER3 조합, HERV-K, 고분자량-흑색종 연관 항원 (HMW-MAA), HIV-1 외피 당단백질 gp41, HPV-특이적 항원, 인간 텔로머라제 리버스 트랜스크립타제, IGFI 수용체, IGF-II, IL-11R알파, IL-13R-a2, 인플루엔자 바이러스-특이적 항원; CD38, 인슐린 성장 인자 (IGFl)-l, 장 카르복실 에스테라제, 카파 쇄, LAGA-la, 람다 쇄, 라사 바이러스-특이적 항원, 렉틴-반응성 AFP, 계통-특이적 또는 조직 특이적 항원 예컨대 CD3, MAGE, MAGE-A1, 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자, 종양-특이적 펩티드 에피토프를 제시하는 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자, M-CSF, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, 메소텔린, MN-CA IX, MUC-1, mut hsp70-2, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 호중구 엘라스타제, NKG2D, Nkp30, NY-ESO-1, p53, PAP, 프로스타제, 전립선 특이적 항원 (PSA), 전립선-암종 종양 항원-1 (PCTA-1), 전립선-특이적 항원 단백질, STEAP1, STEAP2, PSMA, RAGE-1, ROR1, RU1, RU2 (AS), 표면 부착 분자, 서바이빙 및 텔로머라제, TAG-72, 피브로넥틴의 엑스트라 도메인 A (EDA) 및 엑스트라 도메인 B (EDB) 및 테나신-C의 Al 도메인 (TnC Al), 티로글로불린, 종양 기질 항원, 혈관 내피 성장 인자 수용체-2 (VEGFR2), 바이러스-특이적 표면 항원 예컨대 HIV-특이적 항원 (예컨대 HIV gpl20), 뿐만 아니라 이들 표면 마커의 임의의 유도체 또는 변이체로부터 선택된 종양 항원을 표적화한다.
일부 실시양태에서, 키메라 수용체는 CD19를 특이적으로 표적화한다.
일부 실시양태에서, 키메라 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다.
일부 실시양태에서, 키메라 수용체는 T 세포 수용체 (TCR)이다.
일부 실시양태에서, 악성종양은 고형 종양, 육종, 암종, 림프종, 다발성 골수종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종 (NHL), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 형질전환된 여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 만성 또는 급성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), T-세포 림프종, 1종 이상의 B-세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), T-세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), 급성 림프성 백혈병 (ALL), 만성 골수 백혈병 (CML), B 세포 전림프구성 백혈병, 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모발상 세포 백혈병, 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 형질 세포 증식성 장애 (예를 들어, 무증상 골수종 (무증상 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 형질세포종 (예를 들어, 형질 세포 이혼화증, 고립 골수종, 고립 형질세포종, 수질외 형질세포종, 및 다발성 형질세포종), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, POEMS 증후군 (또한 크로우-푸카세 증후군, 다카츠키병, 및 PEP 증후군으로도 공지됨), 또는 그의 조합이다.
일부 실시양태에서, 악성종양은 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격 대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 전이성 흑색종, 형질전환된 여포성 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 및 다발성 골수종이다.
일부 실시양태에서, 악성종양은 비-호지킨 림프종이다.
일부 실시양태에서, 다기능 CAR T 세포는 적어도 2종의 단백질 또는 시토카인을 한 번에 공동-분비한다.
일부 실시양태에서, 단백질 또는 시토카인은 그랜자임 B, IFN-감마, MIP1a, 퍼포린, TNFa, TNFb, GMCSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21, CCI-11, IP-10, MIP1b, RANTES, IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-b1, SCD137, SCD40L, IL-1b, IL-6, IL-17a, IL-17f, MCP-1, 및 MCP-4 중 1종 이상을 포함한다.
일부 실시양태에서, 악성종양은 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격 대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 전이성 흑색종, 형질전환된 여포성 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 및 다발성 골수종 중 적어도 1종으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 방법은 총 용량을 조절하여 다기능 세포의 총수를 조정하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 총 용량을 조절하여 총 다기능 강도 지수 (PSI)를 조정하는 단계를 추가로 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 1종 이상의 키메라 수용체를 포함하는 복수의 T 세포를 수득하는 단계; (b) T 세포의 다기능 강도 지수 (PSI)를 측정하는 단계; (c) 다기능 T 세포의 미리 결정된 양을 포함하는 유효 용량을 제조하는 단계; 및 (d) 다기능 T 세포의 미리 결정된 양을 포함하는 유효 용량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은, 환자가 치료에 반응할 가능성을 증가시키기 위해 최적화된다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 키메라 수용체를 포함하는 복수의 T 세포를 수득하는 단계; (b) 복수의 T 세포 중 다기능 T 세포의 양을 결정하는 단계; 및 (c) 다기능 T 세포의 양에 기초하여 환자가 키메라 수용체 치료에 반응할 것인지 결정하는 단계를 포함하는, 키메라 수용체 치료에 환자가 반응할 것인지 결정하는 방법을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 1종 이상의 키메라 수용체를 포함하는 복수의 T 세포를 수득하는 단계; (b) 다기능 T 세포의 미리 결정된 양을 포함하는 유효 용량을 제조하는 단계; 및 (c) 다기능 T 세포의 미리 결정된 양을 포함하는 유효 용량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 15% 초과, 20% 초과, 20% 초과, 25% 초과, 30% 초과의 다기능 T 세포이다. 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 다기능 강도 지수 (PSI)를 사용하여 결정된다.
일부 실시양태에서, 다기능 강도 지수 (PSI)는 다기능 세포의 백분율을 다기능 세포에 의해 분비된 단백질의 평균 형광 강도의 합계와 곱하는 것에 의해 계산된다. 일부 실시양태에서, 다기능 강도 지수 (PSI)는 250, 350, 450, 또는 550 초과이다.
일부 실시양태에서, 다기능 강도 지수 (PSI)는 (i) 다기능 T 세포의 목적하는 백분율을 결정하는 단계; 및 (ii) 미리 결정된 시토카인 프로파일을 수득하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다.
일부 실시양태에서, 유효 용량은 다기능 강도 지수를 T 세포의 총수와 곱하는 것에 의해 수득된 PSI의 용량을 포함한다. 일부 실시양태에서, 유효 용량은 PSI x 주입된 T 세포의 단위로 적어도 3.5 x 1010 또는 적어도 7.7 x 1010개를 포함한다.
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 적어도 2.4 x 107 또는 적어도 4.2 x 107개의 다기능 T 세포이다.
일부 실시양태에서, 유효 용량은 종양 부담에 비례하여 조정된다.
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 복합 지수를 사용하여 결정된다. 일부 실시양태에서, 복합 지수는 적어도 2종의 측정 기준을 포함을 포함한다. 일부 실시양태에서, 측정 기준은 각각의 측정 기준을 그의 각각의 표준 편차로 나누는 것에 의해 표준화된다.
일부 실시양태에서, 복합 지수는 다기능 강도 지수 (PSI) 및/또는 T 세포 주입 전 IL-15의 환자 혈청 수준을 포함한다. 일부 실시양태에서, 복합 지수는 다기능 강도 지수 (PSI)를 결정하는 단계 및 T 세포 주입 전 IL-15의 환자 혈청 수준을 측정하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다.
일부 실시양태에서, 복합 지수는 3 초과이다. 일부 실시양태에서, 미리 결정된 시토카인 프로파일을 수득하는 단계가 그랜자임 B, IFN-감마, MIP1a, 퍼포린, TNFa, TNFb, GMCSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21, CCI-11, IP-10, MIP1b, RANTES, IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-b1, SCD137, SCD40L, IL-1b, IL-6, IL-17a, IL-17f, MCP-1, 및 MCP-4 중 적어도 1종을 측정하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 미리 결정된 시토카인 프로파일을 수득하는 단계는 그랜자임 B, IFN-감마, MIP1a, 퍼포린, TNFa, TNFb, GMCSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21, CCI-11, IP-10, MIP1b, RANTES, IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-b1, SCD137, SCD40L, IL-1b, IL-6, IL-17a, IL-17f, MCP-1, 및 MCP-4 중 적어도 1종을 선택하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 수용체는 종양 항원을 표적화한다. 일부 실시양태에서, 키메라 수용체는 종양-연관 표면 항원, 예컨대 5T4, 알파태아단백질 (AFP), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), BCMA, B-인간 융모성 고나도트로핀, CA-125, 암배아성 항원 (CEA), 암배아성 항원 (CEA), CD123, CD133, CD138, CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD30, CD33, CD34, CD4, CD40, CD44, CD56, CD8, CLL-1, c-Met, CMV-특이적 항원, CS-1, CSPG4, CTLA-4, DLL3, 디시알로강글리오시드 GD2, 관-상피 뮤신, EBV-특이적 항원, EGFR 변이체 III (EGFRvIII), ELF2M, 엔도글린, 에프린 B2, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), 상피 세포 부착 분자 (EpCAM), 상피 종양 항원, ErbB2 (HER2/neu), 섬유모세포 연관 단백질 (fap), FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 신경교종-연관 항원, 글리코스핑고지질, gp36, HBV-특이적 항원, HCV-특이적 항원, HER1-HER2, HER2-HER3 조합, HERV-K, 고분자량-흑색종 연관 항원 (HMW-MAA), HIV-1 외피 당단백질 gp41, HPV-특이적 항원, 인간 텔로머라제 리버스 트랜스크립타제, IGFI 수용체, IGF-II, IL-11R알파, IL-13R-a2, 인플루엔자 바이러스-특이적 항원; CD38, 인슐린 성장 인자 (IGFl)-l, 장 카르복실 에스테라제, 카파 쇄, LAGA-la, 람다 쇄, 라사 바이러스-특이적 항원, 렉틴-반응성 AFP, 계통-특이적 또는 조직 특이적 항원 예컨대 CD3, MAGE, MAGE-A1, 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자, 종양-특이적 펩티드 에피토프를 제시하는 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자, M-CSF, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, 메소텔린, MN-CA IX, MUC-1, mut hsp70-2, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 호중구 엘라스타제, NKG2D, Nkp30, NY-ESO-1, p53, PAP, 프로스타제, 전립선 특이적 항원 (PSA), 전립선-암종 종양 항원-1 (PCTA-1), 전립선-특이적 항원 단백질, STEAP1, STEAP2, PSMA, RAGE-1, ROR1, RU1, RU2 (AS), 표면 부착 분자, 서바이빙 및 텔로머라제, TAG-72, 피브로넥틴의 엑스트라 도메인 A (EDA) 및 엑스트라 도메인 B (EDB) 및 테나신-C의 Al 도메인 (TnC Al), 티로글로불린, 종양 기질 항원, 혈관 내피 성장 인자 수용체-2 (VEGFR2), 바이러스-특이적 표면 항원 예컨대 HIV-특이적 항원 (예컨대 HIV gpl20), 뿐만 아니라 이들 표면 마커의 임의의 유도체 또는 변이체로부터 선택된 종양 항원을 표적화한다.
일부 실시양태에서, 키메라 수용체는 CD19를 특이적으로 표적화한다. 일부 실시양태에서, 키메라 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다. 일부 실시양태에서, 키메라 수용체는 T 세포 수용체 (TCR)이다.
일부 실시양태에서, 악성종양은 고형 종양, 육종, 암종, 림프종, 다발성 골수종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종 (NHL), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 형질전환된 여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 만성 또는 급성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), T-세포 림프종, 1종 이상의 B-세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), T-세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), 급성 림프성 백혈병 (ALL), 만성 골수 백혈병 (CML), B 세포 전림프구성 백혈병, 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모발상 세포 백혈병, 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 형질 세포 증식성 장애 (예를 들어, 무증상 골수종 (무증상 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 형질세포종 (예를 들어, 형질 세포 이혼화증, 고립 골수종, 고립 형질세포종, 수질외 형질세포종, 및 다발성 형질세포종), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, POEMS 증후군 (또한 크로우-푸카세 증후군, 다카츠키병, 및 PEP 증후군으로도 공지됨), 또는 그의 조합이다.
일부 실시양태에서, 악성종양은 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격 대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 전이성 흑색종, 형질전환된 여포성 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 및 다발성 골수종이다.
일부 실시양태에서, 악성종양은 비-호지킨 림프종이다.
일부 실시양태에서, 다기능 CAR T 세포는 적어도 2종의 단백질 또는 시토카인을 한 번에 공동-분비한다.
일부 실시양태에서, 단백질 또는 시토카인은 그랜자임 B, IFN-감마, MIP1a, 퍼포린, TNFa, TNFb, GMCSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21, CCI-11, IP-10, MIP1b, RANTES, IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-b1, SCD137, SCD40L, IL-1b, IL-6, IL-17a, IL-17f, MCP-1, 및 MCP-4 중 1종 이상을 포함한다.
일부 실시양태에서, 악성종양은 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격 대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 전이성 흑색종, 형질전환된 여포성 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 및 다발성 골수종 중 적어도 1종으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 방법은 총 용량을 조절하여 다기능 세포의 총수를 조정하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 총 용량을 조절하여 총 다기능 강도 지수 (PSI)를 조정하는 단계를 추가로 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 다기능 CAR T 세포의 백분율을 조절하는 것을 포함하는, 키메라 수용체 치료의 효력을 증가시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 방법은 다기능 T 세포를 선택 및 단리하는 단계를 추가로 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 1종 이상의 키메라 수용체를 포함하는 복수의 T 세포를 포함하는 제약 조성물을 제공하며, 여기서 조성물은 다기능 T 세포의 미리 결정된 양을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 15% 초과의 다기능 T 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 20% 초과의 다기능 T 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 25% 초과의 다기능 T 세포를 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 유효 용량의 키메라 수용체 T 세포 면역요법을 환자에게 투여하는 단계이며, 여기서 유효 용량은 다기능 T 세포의 미리 결정된 양을 포함하는 것인 단계; 및 (b) 주입 후 유해 반응의 징후 및 증상에 대해 환자를 모니터링하는 단계를 포함하는, 환자에서 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같이 다기능 키메라 수용체 T 세포의 백분율을 조절하는 것을 포함하는, 키메라 수용체 치료에서 바람직하지 않는 부작용을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 중증 유해 사건을 감소시키기 위해 최적화된다. 일부 실시양태에서, 중증 유해 사건은 등급 3+ 이상의 시토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 등급 3+ 이상의 신경계 독성 (NT)이다. 일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 복합 지수를 사용하여 결정된다.
일부 실시양태에서, 복합 지수는 다기능 강도 지수 (PSI)를 결정하는 단계 및 T 세포 주입 전 IL-15의 환자 혈청 수준을 측정하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다. 일부 실시양태에서, 복합 지수는 다기능 강도 지수 (PSI)를 결정하고 T 세포 확장을 측정하는 것을 포함하는 방법에 의해 수득되는 지수를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 다기능 강도 지수 (PSI)를 사용하여 환자에서 등급 3+ 독성이 발생할 가능성을 결정하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 치료의 바람직하지 않은 부작용의 징후 및 증상에 대해 환자를 모니터링하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 바람직하지 않은 부작용은 시토카인 방출 증후군 (CRS), 신경계 독성, 과민 반응, 심각한 감염, 혈구감소증, 및 저감마글로불린혈증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 바람직하지 않은 부작용의 징후 및 증상은 열, 저혈압, 빈맥, 저산소증, 및 오한으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 심장 부정맥 (심방 세동 및 심실성 빈맥 포함), 심장 정지, 심부전, 신기능부전, 모세혈관 누출 증후군, 저혈압, 저산소증, 기관 독성, 혈구포식성 림프조직구증식증/대식세포 활성화 증후군 (HLH/MAS), 발작, 뇌병증, 두통, 진전, 어지럼증, 실어증, 섬망, 불면증 불안, 아나필락시스, 열성 호중구감소증, 혈소판감소증, 호중구감소증, 및 빈혈을 포함한다.
도면은 단지 예시 목적을 위한 것이며, 제한 목적을 위한 것이 아니다.
도 1A-1F는 T 세포 다기능성을 평가하는데 사용된 방법의 개략적 표현을 보여준다. 도 1A 및 1B는 CAR (키메라 항원 수용체) 구축물 형상 및 치료 프로토콜의 개략적 표현을 보여준다. 도 1C 및 1D는 T 세포 자극 후 각각의 단일-세포 챔버로부터의 단백질의 ELISA (효소-연결된 면역흡착 검정) 검출을 사용함으로써 평가된 생성물 T 세포 다기능성을 보여준다. 도 1E 및 1F는 주요 카테고리: 항상성/증식, 염증, 화학주성, 조절, 및 면역 이펙터에 걸친 32종의 주요 면역학적으로 관련된 분자의 사전 명시된 패널에 걸쳐 다기능성 강도 지수 (PSI)를 통해 측정된 다기능성을 보여준다. 도 1F는 단일-세포, CAR-T 다기능성 (좌측 패널), 각각의 CAR-T 세포 및 단일-세포의 분비 강도 (중심 패널), CAR-T 다기능 강도 지수 (우측 패널)를 보여준다.
도 2A-2D는 PSI와 객관적 반응 (OR), 및 치료-관련 유해 사건 (AE)의 연관성을 보여준다. 32종의 분비된 시토카인, 케모카인, 및 세포독성 분자의 패널의 SCBC 단백질체학 분석을 사용하여 20명의 환자 공여자에 대해 단일-세포 생성물 PSI를 결정하였다. 생성물을 CAR T 세포 PSI 수준에 따라 순위화하였고, PSI는 표시된 바와 같이 OR (도 2A, 2C) 또는 등급 3+ CRS (도 2B, 2D)와 연관되었다. 결과는 환자-수준 PSI (도 2A, 2B) 및 평균 ± SE PSI (도 2C, 2D)로서 제시된다. 모든 통계값은 만 휘트니 U 검정을 사용하여 산출되었다. AE, 유해 사건; CRS, 시토카인 방출 증후군; OR, 객관적 반응; SCBC, 단일-세포 바코드 칩; SE, 표준 오차.
도 3A-3F는 CAR 생성물 다기능성과 CD19 인식 및 임상 결과의 연관성을 보여준다. 도 3A는 CD19- 세포 (NGFR 형질감염됨)와 비교하여 CD19+로 생체외 자극된, CAR T 세포 단일-세포 (좌측 패널) 및 CD4+ (중심 패널) 또는 CD8+ (우측-패널) 하위세트의 PSI를 보여준다. 도 3B-3E는 객관적 반응과, 생성물 PSI, CD19+ 세포와의 생성물 공동-배양물에서 측정된 IFNγ, 또는 유동 세포측정법에 의해 규정된 주요 생성물 T 세포 하위세트 사이의 연관성을 보여준다. T 나이브, 중심 기억 (cm), 이펙터 기억 (em) 및 이펙터 세포 (eff)는 CD45RA 및 CCR7에 대한 염색에 의해 규정되었다. 도 3F는 주요 생성물 속성과 임상 반응의 연관성의 강도에 상응하는 도 3B-3E로부터의 개별 p 값 (만 휘트니 U 검정)을 보여준다.
도 4A-4D는 요법에 대한 반응자 (R)를 비반응자 (NR)와 구별시켜 주는 CD19 자극에 의해 다기능 생성물 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 구동하는 주요 시토카인을 보여준다. 도 4A (CD4+) 및 4B (CD8+)는 CAR T 세포로 처리된 20명의 환자로부터의 생성물 T 세포에 대해 수행된 32종의 분비된 시토카인, 케모카인, 및 세포독성 분자의 패널의 단일-세포 단백질체학 분석을 보여준다. 분석은 모든 생성물 세포, 또는 선택 CD4+ 및 CD8+ T 세포에 대해 수행되었다. 생성물 T 세포를 분석 전에 먼저 CD19-발현 표적 세포 또는 대조군 NGFR 세포로 자극하였다. 그래프는 개별적으로 모든 세포, 및 CD4+ 및 CD8+ 하위세트에 대한 CD19 자극의 존재 또는 부재 하의 PSI (평균 ± SE)를 보여준다. 또한 각각의 생성물 T 세포 하위집단에 대한 주요 시토카인 구동자가 제시된다. 도 4C (IL-8, IL-5, IL-17a, IFN-γ, MIP-1α) 및 4D (MIP-1α, IFN-γ, IL-8, 그랜자임 B)는 CAR T 세포 요법에 대해 반응을 갖지 않는 환자 군 및 OR을 갖는 환자 군 사이에서의, 시토카인에 의한 생성물 CD4+ (도 4C) 및 CD8+ (도 4D) T 세포 PSI 프로파일을 보여준다. 모의 자극에 비해 상향조절된 CD4 및 CD8 시토카인이 제시된다. 각각의 시토카인 PSI 수준은 다기능 단일 세포에서의 그의 평균 분비 강도를 반영한다. 다이어그램은 CD8+ 및 CD4+ T 세포 집단에서의 다기능성 지수에 기여하는 시토카인을 보여준다.
도 5A-5E는 PSI가 생체내 CAR T 세포 확장과 함께 또는 CAR T 세포 주입-전 조건화-구동된 IL-15와 함께 객관적 반응 (OR)과 상관된다는 것을 보여준다. qPCR에 의해 측정된 혈액 내의 CAR T 세포 수준은 임상 결과와 상관되었다. 전체 주입-전 생성물 PSI 단독 (도 5A), 혈액에서의 피크 주입-후 CAR 수준 단독 (도 5B), 또는 피크 CAR 수준과 조합된 생성물 PSI (도 5C)가 OR과 연관되어 제시된다. CAR T 세포 주입-전 (제0일) IL-15 혈청 수준 단독 (도 5D) 또는 생성물 PSI와 조합된 것 (도 5E)이 OR과 연관되어 제시된다. 통계값은 만 휘트니 U 검정을 사용하여 산출되었다 (P 값은 다중도에 대해 조정되지 않음).
도 6A-6B는 단일-세포 분석에 의해 규정된 다기능 CD4+ 및 CD8+ T 세포 하위집단을 보여준다. 기능 하위세트는 CD4+ (도 6A) 및 CD8+ (도 6B) T 세포 하위세트 내의 주성분 분석에 의해 결정되었다. 표현은 개별 세포에 의해 생산된 시토카인을 다차원 공간에서 대상의 2-D 표현으로서 클러스터링한 것에 기초한다. 생산된 시토카인의 유사성에 의해 규정되는 주요 다기능 하위세트가 클러스터로 제시되고, 개별 도트는 세포에 상응한다. 도트의 강도는 시토카인 생산 수준을 반영한다. 각각의 주요 집단, 각각 CD4 및 CD8 T 세포 내에서 가장 통상적으로 제시되는 주요 시토카인이 이러한 주성분 분석을 조직화하는데 사용되었고 (x 및 y 축에 표시됨), 각각의 클러스터를 규정하는 시토카인이 표시된다. 모든 면역학적으로 관련된 세포의 약 20-25%를 포함하는 다기능 세포의 빈도가 또한 제시된다.
도 7A-7B는 혈액 내의 CAR T 세포 수준과 함께 PSI 및 객관적 반응 (OR; 도 7A) 사이의 연관성을 보여주거나, 또는 혈청 내의 제0일 IL-15 수준 및 OR 사이의 연관성을 보여준다 (도 7B). 혈액 내의 CAR T 세포 수준은 qPCR에 의해 측정되었다. PSI 및 생체내 CAR T 세포 확장을 통합한 복합 지수는 반응 결과와 연관되었다 (R=반응; N=반응 없음). 전체-생성물 PSI, CD4+ PSI, 및 IL-17A PSI 지수를 모두 CAR 피크 수준과 함께 평가하였다. 공동 PSI 및 제0일 IL-15 수준 측정 기준이 유사하게 계산되었다. 통계값은 만 휘트니 U 검정을 사용하여 산출되었다 (P 값은 다중도에 대해 조정되지 않음).
도 8은 PSI가 혈액 내의 CAR T 세포 수준과 연관되지 않는다는 것을 보여준다. 혈액 내의 CAR T 세포 수준은 qPCR에 의해 측정되었고, 이는 PSI 또는 임상 결과 (OR, 등급 3+ NE 또는 CRS)와 상관되었다. 전체-생성물 PSI, CD4+ PSI, 및 IL-17A PSI를 나타낸다. 통계적 분석은 스피어만 상관관계 및 만 휘트니 U 검정을 사용하여 수행되었다.
도 9A-9F는 혈액 내의 CAR T 세포 수준과 함께 PSI, 및 등급 3+ 신경계 독성 (NT) 사이의 연관성을 보여준다. 혈액 내의 CAR T 세포 수준은 qPCR에 의해 측정되었고, 이는 등급 3+ 유해 사건과 상관되었다. PSI 및 생체내 CAR T 세포 확장을 통합한 복합 지수가 개발되었고, 이는 각각 NT 또는 CRS와 연관되었다. 통계값은 만 휘트니 U 검정을 사용하여 산출되었다. P 값은 다중도에 대해 조정되지 않았다.
도 10A-10F는 혈액 내의 CAR T 세포 수준과 함께 PSI, 및 등급 3+ 시토카인 방출 증후군 (CRS) 사이의 연관성을 보여준다. 혈액 내의 CAR T 세포 수준은 qPCR에 의해 측정되었고, 이는 등급 3+ 유해 사건과 상관되었다. PSI 및 생체내 CAR T 세포 확장을 통합한 복합 지수가 개발되었고, 이는 각각 NE 또는 CRS와 연관되었다. 전체-생성물 PSI, CD4+ PSI, 및 IL-17A PSI 지수를 모두 CAR 피크 수준과 함께 평가하였다. 통계값은 만 휘트니 U 검정을 사용하여 산출되었다. P 값은 다중도에 대해 조정되지 않았다.
도 11A-11F는 혈액 내의 처리전 IL-15 수준과 함께 PSI, 및 등급 3+ NE 사이의 연관성을 보여준다. 혈액 내의 IL-15 수준은 ELISA에 의해 측정되었고, 이는 등급 3+ AE와 상관되었다. PSI 및 IL-15 수준을 통합한 복합 지수가 개발되었고, 이는 각각 등급 3+ NE 또는 CRS와 연관되었다. 전체-생성물 PSI, CD4+ PSI, 및 IL-17A PSI는 모두 IL-15 수준과 함께 평가되었다. 통계값은 만 휘트니 U 검정을 사용하여 산출되었다. P 값은 다중도에 대해 조정되지 않았다.
도 12A-12F는 혈액 내의 처리전 IL-15 수준과 함께 PSI, 및 등급 3+ CRS 사이의 연관성을 보여준다. 혈액 내의 IL-15 수준은 ELISA에 의해 측정되었고, 이는 등급 3+ AE와 상관되었다. PSI 및 IL-15 수준을 통합한 복합 지수가 개발되었고, 이는 각각 등급 3+ NE 또는 CRS와 연관되었다. 전체-생성물 PSI, CD4+ PSI, 및 IL-17A PSI는 모두 IL-15 수준과 함께 평가되었다. 통계값은 만 휘트니 U 검정을 사용하여 산출되었다. P 값은 다중도에 대해 조정되지 않았다.
도 13은 PSI를 계산할 때 고려되는 인자의 일반적인 개략적 개관을 보여준다.
도 14는 이소플렉시스(IsoPlexis) 단일-세포, 하이 멀티플렉싱 ELISA 시스템을 사용한 주입-전 CAR T 세포 다기능성의 분석의 개략도를 보여준다.
본 개시내용은 키메라 수용체를 포함하는 다기능 조작된 T 세포의 유효 용량을 투여함으로써 환자에서 악성종양을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본원에 기재된 바와 같이, 조작된 T 세포의 다기능성은 임상 반응 및 독성의 가능성을 결정하는데 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 조작된 세포의 다기능성은 환자에서 악성종양을 치료하기 위해 유효 용량을 조절하거나 최적화하는데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 주입-전 키메라 수용체 생성물 T 세포의 다기능 프로파일은 키메라 수용체 (예를 들어, CAR 또는 TCR) T 세포 요법의 임상 결과에 영향을 미치는 유효 용량을 결정하는데 사용될 수 있다.
키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포 요법에 의한 치료 후, 인터류킨 (IL)-15 상승 및 CAR T 세포 확장은 비-호지킨 림프종 (NHL) 결과와 연관된다. 본원에 기재된 바와 같이, NHL을 갖는 환자로부터의 주입-전 CAR 생성물의 단일-세포 분석은 CAR 생성물이 시토카인 및 케모카인, 예컨대 IFNγ, IL-17A, IL-8 및 MIP1a에 의해 제시되는 다중 면역 프로그램을 활용할 수 있는 다기능 T 세포 하위세트를 함유한다는 것을 입증하였다. 주입-전 CAR 생성물에 적용된 사전-명시된 T 세포 다기능성 강도 지수 (PSI)는 임상 반응과 유의하게 연관되었고, CAR T 세포 확장 또는 치료-전 혈청 IL-15 수준과 조합된 PSI는 추가의 유의성을 부여하였다. 총 생성물 세포 집단 내에서, 임상 결과와의 연관성은 CD8+ 세포와 비교하여 다기능 CD4+ T 세포에서 더 컸다. 등급 3+ 시토카인 방출 증후군은 다기능 T 세포에 의해 영향을 받았고, 등급 3+ 신경계 독성 및 항종양 효능은 둘 다 다기능 IL-17A-생산 T 세포에 의해 영향을 받았다.
키메라 수용체 (예를 들어, CAR 또는 TCR)를 발현하게 하기 위한 T 세포의 유전자 재프로그래밍은 혈액 악성종양을 치료하기 위한 신규한 접근법을 제공한다. CD28 및 CD3ζ 신호전달 도메인으로 구성된 항-CD19 CAR로 형질도입된 T 세포는 CD19-특이적 방식으로 인터페론 (IFN)-γ를 생산하고, 원발성 백혈병 세포를 사멸시키고, CD19-표적 의존성 증식을 거친다. B 세포 악성종양의 항-CD19 CAR T 세포에 의한 치료는 유의한 수의 환자에서 지속적인 완화를 발생시킨다. 이러한 치료는 B 세포 상의 내인성 CD19 발현으로 인해 B 세포 무형성증과 연관된다. 추가적으로, 항-CD19 CAR T 세포 요법에 의한 치료는 시토카인 방출 증후군 (CRS) 및 신경계 사건 (NE)을 유발할 수 있다.
본원에 기재된 방법은 CAR T 세포가 기능적 관점에서 서로 보완적인 다중 면역 프로그램을 활용함으로써 임상 활성을 조직한다는 놀라운 발견을 기초로 한다. CAR T 세포 생성물의 기능성은 고-함량 단일-세포 멀티플렉스 시토카인 분석을 사용하는 것에 의해 결정된다. 다기능 평가는 CAR T 세포 생성물에서 다기능 T 세포의 하위세트 - 시험관내 항원에 의한 자극 시 2종 이상의 시토카인을 생산할 수 있는 것 - 를 확인 가능하게 하였다. 또한, CAR T 세포 생성물에 적용된 사전-명시된 다기능성 강도 지수 (PSI)의, 생체내 CAR T 세포 확장, 객관적 반응, 및 독성과의 연관성. CAR T 세포 생성물 내의 고도의 다기능 T 세포는 임상 반응과 유의하게 연관되고, IL-17A를 생산하는 다기능 CD4+ T 세포의 하위세트는 등급 3 이상의 NE와 연관된다.
정의
본 발명이 보다 용이하게 이해되도록, 먼저 특정 용어를 하기에 정의한다. 하기 용어 및 다른 용어에 대한 추가의 정의는 본 명세서 전반에 걸쳐 제시된다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다.
구체적으로 언급되거나 문맥으로부터 명백하지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "또는"은 "또는"과 "및" 둘 다를 포함하고 포괄하는 것으로 이해된다.
용어 "및/또는"이 본원에서 사용되는 경우 2개의 명시된 특색 또는 성분 각각을 함께 또는 따로 구체적으로 개시하는 것으로서 받아들여져야 한다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 A 및 B; A 또는 B; A (단독); 및 B (단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 하기 측면 각각을 포괄하도록 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).
본원에 사용된 용어 "예를 들어" 및 "즉"은 단지 예로서 사용되고, 제한하는 것으로 의도되지 않으며, 명세서에서 명시적으로 열거된 항목들 만을 지칭하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
용어 "또는 그 초과", "적어도", "보다 더" 등, 예를 들어, "적어도 하나"는 언급된 값보다 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 또는 그 초과를 포함하나 이에 제한되지는 않는 것으로 이해된다. 또한 임의의 더 큰 수 또는 그 사이의 분율도 포함된다.
반대로, 용어 "이하"는 언급된 값보다 적은 각각의 값을 포함한다. 예를 들어, "100개 이하의 뉴클레오티드"는 100, 99, 98, 97, 96, 95, 94, 93, 92, 91, 90, 89, 88, 87, 86, 85, 84, 83, 82, 81, 80, 79, 78, 77, 76, 75, 74, 73, 72, 71, 70, 69, 68, 67, 66, 65, 64, 63, 62, 61, 60, 59, 58, 57, 56, 55, 54, 53, 52, 51, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 및 0개의 뉴클레오티드를 포함한다. 또한 임의의 더 적은 수 또는 그 사이의 분율도 포함된다.
용어 "복수의", "적어도 2", "2 이상", "적어도 제2" 등은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 또는 그 초과를 포함하나 이에 제한되지는 않는 것으로 이해된다. 또한 임의의 더 큰 수 또는 그 사이의 분율도 포함된다.
명세서 전체에 걸쳐 단어 "포함하는" 또는 변형 예컨대 "포함한다" 또는 "포함하는"은 언급된 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군을 포함하지만, 임의의 다른 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군을 배제하지는 않는다는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 측면이 언어 "포함하는"을 사용하여 본원에 기재된 경우에, "로 이루어진" 및/또는 "로 본질적으로 이루어진"과 관련하여 기재된 다른 유사한 측면이 또한 제공되는 것으로 이해된다.
구체적으로 언급되거나 문맥으로부터 입증되지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "약"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정된 바와 같은 특정한 값 또는 조성에 대한 허용 오차 범위 내의 값 또는 조성을 지칭하며, 이는 부분적으로 값 또는 조성이 측정 또는 결정되는 방법, 즉 측정 시스템의 한계에 좌우될 것이다. 예를 들어, "약" 또는 "대략"은 관련 기술분야에서의 실시에 따라 1 또는 1 초과의 표준 편차 내에 있음을 의미할 수 있다. "약" 또는 "대략"은 최대 10%의 범위 (즉, ±10%)를 의미할 수 있다. 따라서, "약"은 언급된 값보다 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 또는 0.001% 초과 또는 미만 내인 것으로 이해될 수 있다. 예를 들어, 약 5 mg은 4.5 mg 및 5.5 mg 사이의 임의의 양을 포함할 수 있다. 또한, 특히 생물학적 시스템 또는 프로세스와 관련하여, 상기 용어는 값의 최대 한 자릿수 또는 최대 5-배를 의미할 수 있다. 특정한 값 또는 조성이 본 개시내용에서 제공되는 경우에, 달리 언급되지 않는 한, "약" 또는 "대략"의 의미는 그러한 특정한 값 또는 조성에 대한 허용 오차 범위 내에 있는 것으로 가정되어야 한다.
본원에 기재된 바와 같이, 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비 범위 또는 정수 범위는, 달리 나타내지 않는 한, 언급된 범위 내의 임의의 정수 값, 및 적절한 경우에, 그의 분율 (예컨대 정수의 1/10 및 1/100)을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본원에 사용된 단위, 접두어, 및 기호는 시스템 인터내셔날 드 유니테스(Systeme International de Unites) (SI) 허용 형태를 사용하여 나타내어진다. 수치 범위는 범위를 규정하는 수를 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 관련된 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌 [Juo, "The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology", 2nd ed., (2001), CRC Press; "The Dictionary of Cell & Molecular Biology", 5th ed., (2013), Academic Press; 및 "The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology", Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Press]은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 본 개시내용에 사용된 많은 용어에 대한 일반 사전을 제공한다.
"투여하는"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 방법 및 전달 시스템 중 임의의 것을 사용하여 작용제를 대상체에게 물리적으로 도입하는 것을 지칭한다. 본원에 개시된 제제에 대한 예시적인 투여 경로는 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 척수 또는 다른 비경구 투여 경로를 포함한다. 본원에 사용된 어구 "비경구 투여"는 통상적으로 주사에 의한, 경장 및 국소 투여 이외의 다른 투여 방식을 의미하고, 비제한적으로, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 림프내, 병변내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입, 뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제제은 비경구 경로를 통해, 예를 들어, 경구로 투여된다. 다른 비-비경구 경로는 국소, 표피 또는 점막 투여 경로, 예를 들어 비강내, 질, 직장, 설하 또는 국소 투여를 포함한다. 투여는 또한, 예를 들어 1회, 복수회, 및/또는 1회 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다.
용어 "항체" (Ab)는, 비제한적으로, 항원에 특이적으로 결합하는 당단백질 이뮤노글로불린을 포함한다. 일반적으로, 항체는 디술피드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L), 또는 그의 항원-결합 분자를 포함할 수 있다. 각각의 H 쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 VH로서 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본원에서 VL로서 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 불변 도메인, CL을 포함한다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 불리는 보다 보존된 영역 사이에 배치된 상보성 결정 영역 (CDR)으로 불리는 초가변 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단으로부터 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. Ab의 불변 영역은 이뮤노글로불린이 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적 보체계의 제1 성분 (C1q)을 포함한 숙주 조직 또는 인자에 결합하는 것을 매개할 수 있다.
항체는 예를 들어 모노클로날 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 단일특이적 항체, 다중특이적 항체 (이중특이적 항체 포함), 인간 항체, 조작된 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 이뮤노글로불린, 합성 항체, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄- 항체 중쇄 쌍, 인트라바디, 항체 융합체 (때때로 본원에서 "항체 접합체"로서 지칭됨), 이종접합체 항체, 단일 도메인 항체, 1가 항체, 단일 쇄 항체 또는 단일-쇄 Fv (scFv), 낙타화 항체, 아피바디, Fab 단편, F(ab')2 단편, 디술피드-연결된 Fv (sdFv), 항-이디오타입 (항-Id) 항체 (예를 들어 항-항-Id 항체 포함), 미니바디, 도메인 항체, 합성 항체 (때때로 본원에서 "항체 모방체"로서 지칭됨), 상기 중 임의의 것의 및 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 폴리클로날 항체 집단을 지칭한다.
"항원 결합 분자", "항원 결합 부분" 또는 "항체 단편"은 분자가 유래된 항체의 항원 결합 부분 (예를 들어, CDR)을 포함하는 임의의 분자를 지칭한다. 항원 결합 분자는 항원 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함할 수 있다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, dAb, 선형 항체, scFv 항체, 및 항원 결합 분자로 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 펩티바디 (즉, 펩티드 결합 도메인을 포함하는 Fc 융합 분자)는 적합한 항원 결합 분자의 또 다른 예이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 종양 세포 상의 항원에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 과다증식성 질환에 수반되는 세포 상의 항원 또는 바이러스 또는 박테리아 항원에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 CD19에 결합한다. 추가 실시양태에서, 항원 결합 분자는 그의 상보성 결정 영역 (CDR) 중 1개 이상을 포함하는, 항원에 특이적으로 결합하는 항체 단편이다. 추가 실시양태에서, 항원 결합 분자는 단일 쇄 가변 단편 (scFv)이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 아비머를 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
"항원"은 면역 반응을 촉발하거나 또는 항체 또는 항원 결합 분자가 결합할 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 면역 반응은 항체 생산, 또는 특정 면역학적-적격 세포의 활성화, 또는 둘 다를 수반할 수 있다. 관련 분야의 통상의 기술자는 실질적으로 모든 단백질 또는 펩티드를 포함하는 임의의 거대분자가 항원으로서의 역할을 할 수 있다는 것을 용이하게 이해할 것이다. 항원은 내인성으로 발현될 수 있고, 즉 게놈 DNA에 의해 발현될 수 있거나, 또는 재조합적으로 발현될 수 있다. 항원은 특정 조직, 예컨대 암 세포에 특이적일 수 있거나, 또는 광범위하게 발현될 수 있다. 또한, 보다 큰 분자의 단편이 항원으로서 작용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 종양 항원이다.
용어 "중화"는 리간드에 결합하여 그러한 리간드의 생물학적 효과를 막거나 감소시키는 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 그의 단편을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 그의 단편은 리간드 상의 결합 부위를 직접 차단하거나, 또는 달리 간접적 수단 (리간드의 구조적 또는 에너지적 변경)을 통해 리간드의 결합 능력을 변경한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 그의 단편은 그것이 결합하는 단백질이 생물학적 기능을 수행하는 것을 막는다.
용어 "자가"는 이후에 재-도입될 동일한 개체로부터 유래된 임의의 물질을 지칭한다. 예를 들어, 본원에 기재된 조작된 자가 세포 요법 (eACT™) 방법은 환자로부터 림프구를 수집한 후, 이를 예를 들어 CAR 구축물을 발현하도록 조작하고, 이어서 이를 다시 동일한 환자에게 투여하는 것을 수반한다.
용어 "동종"은 한 개체로부터 유래되고 이어서 동일한 종의 또 다른 개체에 도입되는 임의의 물질, 예를 들어, 동종 T 세포 이식을 지칭한다.
용어 "형질도입" 및 "형질도입된"은 외래 DNA를 바이러스 벡터를 통해 세포 내로 도입하는 방법을 지칭한다 (문헌 [Jones et al., "Genetics: principles and analysis," Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)] 참조). 일부 실시양태에서, 벡터는 레트로바이러스 벡터, DNA 벡터, RNA 벡터, 아데노바이러스 벡터, 바큘로바이러스 벡터, 엡스타인 바르 바이러스 벡터, 파포바바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 단순 포진 바이러스 벡터, 아데노바이러스 연관 벡터, 렌티바이러스 벡터, 또는 그의 임의의 조합이다.
"암"은 신체 내에서의 비정상 세포의 비제어된 성장을 특징으로 하는 다양한 질환의 광범위한 군을 지칭한다. 조절되지 않는 세포 분열 및 성장은 이웃 조직을 침습하는 악성 종양의 형성을 야기하고, 또한 림프계 또는 혈류를 통해 신체의 원위 부분으로 전이될 수 있다. "암" 또는 "암 조직"은 종양을 포함할 수 있다. 본원에 개시된 방법에 의해 치료될 수 있는 암의 예는 림프종, 백혈병, 골수종, 및 다른 백혈구 악성종양을 포함한 면역계의 암을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은, 예를 들어, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부암, 위암, 고환암, 자궁암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 다발성 골수종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종 (NHL), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 형질전환된 여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 만성 또는 급성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 소아기 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신우 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양암, 편평 세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유발된 것을 포함한 환경적으로 유발된 암, 다른 B 세포 악성종양, 및 상기 암의 조합으로부터 유래된 종양의 종양 크기를 감소시키는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다. 특정한 암은 화학요법 또는 방사선 요법에 대해 반응성일 수 있거나, 또는 암은 불응성일 수 있다. 불응성 암은 수술적 개입으로 수정될 수 없는 암을 지칭하고, 이러한 암은 처음부터 화학요법 또는 방사선 요법에 대해 비반응성이거나 또는 암이 시간의 경과에 따라 비반응성이게 된다.
본원에 사용된 "항종양 효과"는 종양 부피의 감소, 종양 세포 수의 감소, 종양 세포 증식의 감소, 전이 수의 감소, 전체 또는 무진행 생존의 증가, 기대 수명의 증가, 또는 종양과 연관된 다양한 생리학적 증상의 호전으로서 나타날 수 있는 생물학적 효과를 지칭한다. 항종양 효과는 또한 종양 발생의 방지, 예를 들어, 백신을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 "시토카인"은 특정 항원과의 접촉에 반응하여 한 세포가 방출하는 비-항체 단백질을 지칭하고, 여기서 시토카인은 제2 세포와 상호작용하여 제2 세포에서의 반응을 매개한다. 본원에 사용된 "시토카인"은 세포간 매개체로서 또 다른 세포에 대해 작용하는, 하나의 세포 집단에 의해 방출되는 단백질을 지칭하는 것으로 의도된다. 시토카인은 세포에 의해 내인성으로 발현될 수 있거나, 또는 대상체에게 투여될 수 있다. 시토카인은 대식세포, B 세포, T 세포, 및 비만 세포를 포함하는 면역 세포에 의해 방출되어 면역 반응을 전파할 수 있다. 시토카인은 수용자 세포에서 다양한 반응울 유도할 수 있다. 시토카인은 항상성 시토카인, 케모카인, 염증유발성 시토카인, 이펙터, 및 급성기 단백질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인터류킨 (IL) 7 및 IL-15를 포함하는 항상성 시토카인은 면역 세포 생존 및 증식을 촉진하고, 염증유발성 시토카인은 염증성 반응을 촉진할 수 있다. 항상성 시토카인의 예는 IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, IL-12p40, IL-12p70, IL-15, 및 인터페론 (IFN) 감마를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 염증유발성 시토카인의 예는 IL-1a, IL-1b, IL-6, IL-13, IL-17a, 종양 괴사 인자 (TNF)-알파, TNF-베타, 섬유모세포 성장 인자 (FGF) 2, 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자 (GM-CSF), 가용성 세포간 부착 분자 1 (sICAM-1), 가용성 혈관 부착 분자 1 (sVCAM-1), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), VEGF-C, VEGF-D, 및 태반 성장 인자 (PLGF)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이펙터의 예는 그랜자임 A, 그랜자임 B, 가용성 Fas 리간드 (sFasL), 및 퍼포린을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 급성기-단백질의 예는 C-반응성 단백질 (CRP) 및 혈청 아밀로이드 A (SAA)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"케모카인"은 세포 화학주성 또는 지향성 이동을 매개하는 시토카인 유형이다. 케모카인의 예는 IL-8, IL-16, 에오탁신, 에오탁신-3, 대식세포-유래 케모카인 (MDC 또는 CCL22), 단핵구 화학주성 단백질 1 (MCP-1 또는 CCL2), MCP-4, 대식세포 염증 단백질 1α (MIP-1α, MIP-1a), MIP-1β (MIP-1b), 감마-유도된 단백질 10 (IP-10), 및 흉선 및 활성화 조절 케모카인 (TARC 또는 CCL17)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "키메라 수용체"는 특정한 분자를 인식할 수 있는 조작된 표면 발현된 분자를 지칭한다. 특정한 종양 항원과 상호작용할 수 있는 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 조작된 T 세포 수용체 (TCR)는 T 세포가 특정한 종양 항원을 발현하는 암 세포를 표적화하고 사멸시키는 것을 가능하게 한다.
치료제, 예를 들어, 조작된 CAR T 세포의 "치료 유효량", "유효 용량", "유효량", 또는 "치료 유효 투여량"은 단독으로 또는 또 다른 치료제와 조합되어 사용될 때 대상체를 질환 발병으로부터 보호하거나, 또는 질환 증상의 중증도에서의 감소, 질환 무증상 기간의 빈도 또는 지속기간의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 방지에 의해 입증되는 질환 퇴행을 촉진하는 임의의 양이다. 질환 퇴행을 촉진하는 치료제의 능력은 숙련된 진료의에게 공지되어 있는 다양한 방법을 사용하여, 예컨대 임상 시험 동안 인간 대상체에서, 인간에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서, 또는 시험관내 검정에서 작용제의 활성을 검정함으로써 평가될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "림프구"는 자연 킬러 (NK) 세포, T 세포, 또는 B 세포를 포함한다. NK 세포는 선천성 면역계의 주요 성분을 대표하는 세포독성 (세포 독성) 림프구 유형이다. NK 세포는 종양 및 바이러스에 감염된 세포를 거부한다. 이는 아폽토시스 또는 프로그램화된 세포 사멸의 과정을 통해 작용한다. 이들은 세포를 사멸시키기 위해 활성화를 필요로 하지 않기 때문에 "자연 킬러"로 명명된다. T 세포는 세포-매개-면역 (어떠한 항체도 수반되지 않음)에서 주요 역할을 한다. 그의 T 세포 수용체 (TCR)가 이들을 다른 림프구 유형으로부터 구별한다. 면역계의 특수 기관인 흉선은 T 세포의 성숙을 주로 담당한다. 6가지 유형의 T-세포, 즉 헬퍼 T-세포 (예를 들어, CD4+ 세포), 세포독성 T-세포 (또한 TC, 세포독성 T 림프구, CTL, T-킬러 세포, 세포용해 T 세포, CD8+ T-세포 또는 킬러 T 세포로도 알려짐), 기억 T-세포 ((i) 줄기 기억 TSCM 세포, 예컨대 나이브 세포는 CD45RO-, CCR7+, CD45RA+, CD62L+ (L-셀렉틴), CD27+, CD28+ 및 IL-7Rα+이지만, 또한 다량의 CD95, IL-2Rβ, CXCR3, 및 LFA-1을 발현하고, 기억 세포 특유의 수많은 기능 속성을 나타냄; (ii) 중심 기억 TCM 세포는 L-셀렉틴 및 CCR7을 발현하고, IL-2를 분비하지만 IFNγ 또는 IL-4는 분비하지 않음, (iii) 그러나, 이펙터 기억 TEM 세포는 L-셀렉틴 또는 CCR7을 발현하지 않지만, 이펙터 시토카인 예컨대 IFNγ 및 IL-4를 생산함), 조절 T-세포 (Treg, 억제자 T 세포, 또는 CD4+CD25+ 조절 T 세포), 자연 킬러 T-세포 (NKT) 및 감마 델타 T-세포가 존재한다. 다른 한편으로는, B-세포는 체액성 면역 (항체가 수반됨)에서 주요한 역할을 한다. 이는 항체 및 항원을 생성하고, 항원-제시 세포 (APC)의 역할을 수행하고, 항원 상호작용에 의한 활성화 후에 기억 B-세포로 변한다. 포유동물에서, 미성숙 B-세포는 그의 명칭이 유래되는 골수에서 형성된다.
용어 "유전자 조작된" 또는 "조작된"은 코딩 또는 비-코딩 영역 또는 그의 부분을 결실시키거나 또는 코딩 영역 또는 그의 부분을 삽입하는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 세포의 게놈을 변형시키는 방법을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 변형되는 세포는 림프구, 예를 들어, T 세포이며, 이는 환자 또는 공여자로부터 수득될 수 있다. 외인성 구축물, 예컨대, 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 발현하도록 세포가 변형될 수 있고, 이는 세포의 게놈 내로 혼입된다.
"면역 반응"은 침입 병원체, 병원체로 감염된 세포 또는 조직, 암성 또는 다른 비정상 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우에 정상 인간 세포 또는 조직을 선택적으로 표적화하고/거나, 이에 결합하고/거나, 이에 대해 손상을 입히고/거나, 이를 파괴시키고/거나, 이를 척추동물의 신체로부터 제거하는, 면역계의 세포 (예를 들어, T 림프구, B 림프구, 자연 킬러 (NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상 세포 및 호중구), 및 이들 세포 중 임의의 것 또는 간에 의해 생산된 가용성 거대분자 (Ab, 시토카인, 및 보체 포함)의 작용을 지칭한다.
용어 "면역요법"은 면역 반응을 유도하거나, 증진시키거나, 억제하거나 또는 달리 변형시키는 것을 포함하는 방법에 의한, 질환을 앓고 있거나 또는 질환에 걸릴 위험이 있거나 또는 질환의 재발로 인해 고통받을 위험이 있는 대상체의 치료를 지칭한다. 면역요법의 예는 T 세포 요법을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. T 세포 요법은 입양 T 세포 요법, 종양-침윤 림프구 (TIL) 면역요법, 자가 세포 요법, 조작된 자가 세포 요법 (eACT™), 및 동종 T 세포 이식을 포함할 수 있다. 그러나, 관련 분야의 통상의 기술자는 본원에 개시된 조건화 방법이 임의의 이식된 T 세포 요법의 유효성을 증진시킬 것임을 인식할 것이다. T 세포 요법의 예는 미국 특허 공개 번호 2014/0154228 및 2002/0006409, 미국 특허 번호 7,741,465, 미국 특허 번호 6,319,494, 미국 특허 번호 5,728,388, 및 국제 공개 번호 WO 2008/081035에 기재되어 있다.
면역요법의 T 세포는 관련 기술분야에 공지된 임의의 공급원으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, T 세포는 조혈 줄기 세포 집단으로부터 시험관내 분화될 수 있거나, 또는 T 세포는 대상체로부터 수득될 수 있다. T 세포는 예를 들어, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직, 및 종양으로부터 수득될 수 있다. 또한, T 세포는 관련 기술분야에서 입수가능한 1종 이상의 T 세포주로부터 유래될 수 있다. T 세포는 또한 통상의 기술자에게 공지된 다수의 기술, 예컨대 피콜(FICOLL)™ 분리 및/또는 분리반출술을 사용하여 대상체로부터 수집된 단위 혈액으로부터 수득될 수 있다. T 세포 요법을 위한 T 세포를 단리하는 추가의 방법은 미국 특허 공개 번호 2013/0287748에 개시되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
"eACT™"로 약칭될 수 있고 또한 입양 세포 전달로도 공지되어 있는 용어 "조작된 자가 세포 요법"은 환자 자신의 T 세포를 수집하고, 후속하여 1종 이상의 특정 종양 세포 또는 악성종양의 세포 표면에서 발현된 1종 이상의 항원을 인식하고 표적화하도록 이를 유전자 변경하는 방법이다. T 세포는 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하도록 조작될 수 있다. CAR 양성 (+) T 세포는 적어도 1개의 공동자극 도메인 및 적어도 1개의 활성화 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 부분에 연결된, 특정한 종양 항원에 대한 특이성을 갖는 세포외 단일 쇄 가변 단편 (scFv)을 발현하도록 조작된다. CAR scFv는 모든 정상 B 세포, 및 달리 명시되지 않은 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격 대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종, 및 여포성 림프종으로부터 발생한 DLBCL, NHL, CLL, 및 비-T 세포 ALL을 포함하나 이에 제한되지는 않는 B 세포 악성종양을 포함한 B 세포 계통 내 세포에 의해 발현되는 막횡단 단백질인, 예를 들어, CD19를 표적화하도록 설계될 수 있다. 예시적인 CAR T 세포 요법 및 구축물은 미국 특허 공개 번호 2013/0287748, 2014/0227237, 2014/0099309, 및 2014/0050708에 기재되어 있고, 이들 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다.
본원에 사용된 "환자"는 암 (예를 들어, 림프종 또는 백혈병)을 앓고 있는 임의의 인간을 포함한다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
본원에 사용된 용어 "시험관내 세포"는 생체외 배양된 임의의 세포를 지칭한다. 특히, 시험관내 세포는 T 세포를 포함할 수 있다.
용어 "펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"은 상호교환가능하게 사용되고, 펩티드 결합에 의해 공유 연결된 아미노산 잔기로 구성된 화합물을 지칭한다. 단백질 또는 펩티드는 적어도 2개의 아미노산을 함유하고, 단백질 또는 펩티드 서열을 구성할 수 있는 아미노산의 최대 수에 대한 어떠한 제한도 존재하지 않는다. 폴리펩티드는 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 펩티드 또는 단백질을 포함한다. 본원에 사용된 용어는 통상적으로 관련 기술분야에서 예를 들어 펩티드, 올리고펩티드 및 올리고머로도 지칭되는 단쇄, 및 많은 유형이 존재하는, 일반적으로 관련 기술분야에서 단백질로 지칭되는 보다 장쇄 둘 다를 지칭한다. "폴리펩티드"는 특히, 예를 들어 생물학적 활성 단편, 실질적으로 상동인 폴리펩티드, 올리고펩티드, 동종이량체, 이종이량체, 폴리펩티드의 변이체, 변형된 폴리펩티드, 유도체, 유사체, 융합 단백질을 포함한다. 폴리펩티드는 천연 펩티드, 재조합 펩티드, 합성 펩티드, 또는 그의 조합을 포함한다.
본원에 사용된 "자극"은 자극 분자와 그의 동족 리간드의 결합에 의해 유도되는 1차 반응을 지칭하고, 여기서 결합은 신호 전달 사건을 매개한다. "자극 분자"는 항원 제시 세포 상에 존재하는 동족 자극 리간드와 특이적으로 결합하는 T 세포 상의 분자, 예를 들어, T 세포 수용체 (TCR)/CD3 복합체이다. "자극 리간드"는 항원 제시 세포 (예를 들어, APC, 수지상 세포, B-세포 등) 상에 존재할 때 T 세포 상의 자극 분자와 특이적으로 결합함으로써, 활성화, 면역 반응의 개시, 증식 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 T 세포에 의한 1차 반응을 매개할 수 있는 리간드이다. 자극 리간드는 항-CD3 항체, 펩티드가 로딩된 MHC 부류 I 분자, 초효능제 항-CD2 항체, 및 초효능제 항-CD28 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "공동자극 신호"는 1차 신호, 예컨대 TCR/CD3 라이게이션과 조합되어, T 세포 반응, 예컨대 비제한적으로, 증식 및/또는 핵심 분자의 상향조절 또는 하향 조절로 이어지는 신호를 지칭한다.
본원에 사용된 "공동자극 리간드"는 T 세포 상의 동족 공동자극 분자에 특이적으로 결합하는 항원 제시 세포 상의 분자를 포함한다. 공동자극 리간드의 결합은 증식, 활성화, 분화 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 T 세포 반응을 매개하는 신호를 제공한다. 공동자극 리간드는 자극 분자에 의해, 예를 들어, T 세포 수용체 (TCR)/CD3 복합체와 펩티드가 로딩된 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자의 결합에 의해 제공되는 1차 신호에 더하여 신호를 유도한다. 공동자극 리간드는 3/TR6, 4-1BB 리간드, 톨 리간드 수용체에 결합하는 효능제 또는 항체, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD30 리간드, CD40, CD7, CD70, CD83, 포진 바이러스 진입 매개자 (HVEM), 인간 백혈구 항원 G (HLA-G), ILT4, 이뮤노글로불린-유사 전사체 (ILT) 3, 유도성 공동자극 리간드 (ICOS-L), 세포간 부착 분자 (ICAM), B7-H3과 특이적으로 결합하는 리간드, 림프독소 베타 수용체, MHC 부류 I 쇄-관련 단백질 A (MICA), MHC 부류 I 쇄-관련 단백질 B (MICB), OX40 리간드, PD-L2, 또는 프로그램화된 사멸 (PD) L1을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 공동-자극 리간드는, 제한 없이, T 세포 상에 존재하는 공동-자극 분자, 예컨대 비제한적으로 4-1BB, B7-H3, CD2, CD27, CD28, CD30, CD40, CD7, ICOS, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1), 자연 킬러 세포 수용체 C (NKG2C), OX40, PD-1, 또는 종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14 (TNFSF14 또는 LIGHT)와 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
"공동자극 분자"는 공동자극 리간드와 특이적으로 결합함으로써 T 세포에 의한 공동자극 반응, 예컨대 비제한적으로 증식을 매개하는 T 세포 상의 동족 결합 파트너이다. "공동자극 분자"는 공동자극 리간드와 특이적으로 결합함으로써 T 세포에 의한 공동자극 반응, 예컨대 비제한적으로 증식을 매개하는 T 세포 상의 동족 결합 파트너이다. 공동자극 분자는 4-1BB/CD137, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD 33, CD 45, CD100 (SEMA4D), CD103, CD134, CD137, CD154, CD16, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD22, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD28, CD29, CD3 (알파; 베타; 델타; 엡실론; 감마; 제타), CD30, CD37, CD4, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD5, CD64, CD69, CD7, CD80, CD83 리간드, CD84, CD86, CD8알파, CD8베타, CD9, CD96 (Tactile), CDl-la, CDl-lb, CDl-lc, CDl-ld, CDS, CEACAM1, CRT AM, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, ICOS, Ig 알파 (CD79a), IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGBl, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, LIGHT, LIGHT (종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14; TNFSF14), LTBR, Ly9 (CD229), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1 (CDl la/CD18), MHC 부류 I 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX40, PAG/Cbp, PD-1, PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자, SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Lyl08), SLAMF7, SLP-76, TNF, TNFr, TNFR2, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 그의 단편, 말단절단물, 또는 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "저하시키는" 및 "감소시키는"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 원래의 것보다 낮은 임의의 변화를 나타낸다. "저하시키는" 및 "감소시키는"은 상대적인 용어이며, 측정-전 및 측정-후 사이의 비교를 필요로 한다. "저하시키는" 및 "감소시키는"은 완전한 고갈을 포함한다.
대상체의 "치료" 또는 "치료하는"은 증상, 합병증 또는 상태의 발병, 진행, 발달, 중증도 또는 재발, 또는 질환과 연관된 생화학적 지표를 역전시키거나, 경감시키거나, 호전시키거나, 억제하거나, 느리게 하거나 또는 방지할 목적으로 대상체에게 수행되는 임의의 유형의 개입 또는 프로세스 또는 대상체에의 활성제의 투여를 지칭한다. 일부 실시양태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 부분 완화를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 완전 완화를 포함한다.
본원에 사용된 "다기능 T 세포"는 생산된 각각의 단백질의 양과 커플링된 세포당 사전-명시된 패널로부터 적어도 2종의 단백질을 공동-분비하는 세포를 지칭한다 (즉, 분비되는 단백질의 수 및 강도의 조합). 일부 실시양태에서, 각각의 평가가능한 생성물에 대해 단일 세포 기능 프로파일이 결정된다. 프로파일은 이펙터 (그랜자임 B, IFN-γ, MIP-1α, 퍼포린, TNF-α, TNF-β), 자극 (GM-CSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21), 조절 (IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-β1, sCD137, sCD40L), 화학유인 (CCL-11, IP-10, MIP-1β, RANTES), 및 염증 (IL-1b, IL-6, IL-17A, IL-17F, MCP-1, MCP-4) 군으로 카테고리화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 각각의 세포의 기능 프로파일은 세포 다기능성에 따른 각각의 샘플의 파괴 (즉, 어느 정도의 백분율의 세포가 비-분비 또는 일기능 세포 대비 다중 시토카인을 분비하는지), 및 기능 군에 의한 샘플의 파괴 (즉, 샘플에서 세포에 의해 단일- 및 다기능 군이 분비되고 있는지, 및 그의 빈도)를 포함한 다른 측정 기준의 계산을 가능하게 한다.
개시내용의 다양한 측면이 하기 서브섹션에서 추가로 상세하게 기재된다.
다기능성 및 다기능 강도 지수 (PSI)
다기능 강도 지수 (PSI)는 시토카인 강도 및 다기능 세포의 백분율을 합체함으로써 다기능성을 측정한다 (도 13). 일부 실시양태에서, 다기능 강도 지수 (PSI)는 주요 카테고리: 항상성/증식, 염증, 화학주성, 조절, 및 면역 이펙터에 걸친 32종의 주요 면역학적으로 관련된 분자의 사전-명시된 패널에 걸쳐 다기능성을 측정한다. 일부 실시양태에서, 시토카인 강도는 ELISA에 의해 측정될 수 있다 (도 14).
하기 제시된 바와 같이, PSI는 다기능 세포의 백분율을 그러한 세포에 의해 분비된 단백질의 평균 형광 강도 (MFI)와 곱한 것으로 정의될 수 있다:
Figure pat00001
전체-생성물 PSI, CD4+ PSI, 및 IL-17A PSI 지수는 또한 CAR 피크 수준과 함께 평가될 수 있다. PSI 및 생체내 CAR T 세포 확장을 통합한 복합 지수가 개발되었고, 이는 객관적 반응 (OR)과 연관되었다. 복합 지수를 생성하기 위해, 측정 기준을, 각각 먼저 단위 분산을 갖도록 표준화한 후, 서로 부가하였다. 이러한 표준화는 측정 기준을 그의 각각의 표준 편차로 나누어 그것을 공통 규모/스케일이 되게 함으로써 달성되었다.
일부 실시양태에서, 객관적 반응 (OR)은 악성 림프종에 대한 개정된 IWG 반응 기준 (Cheson, 2007)에 따라 결정되고, 악성 림프종에 대한 IWG 반응 기준 (Cheson et al. Journal of Clinical Oncology 32, no. 27 (September 2014) 3059-3067)에 의해 결정된다. 반응의 지속기간이 평가된다. 루가노(Lugano) 반응 분류 기준에 따른 조사자 평가에 의해 무진행 생존 (PFS)이 평가된다.
일부 실시양태에서, 다기능 세포의 양 (예를 들어, 샘플 내의 다기능 세포의 백분율인 PSI에 의해 결정됨, 조합 지수)은 유효 용량을 결정하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, 샘플 내의 다기능 세포의 백분율은 대략 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 또는 50% 초과이다.
일부 실시양태에서, 샘플 내의 다기능 세포의 백분율은 대략 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20% 또는 15% 미만이다. 일부 실시양태에서, 샘플 내의 다기능 세포의 백분율은 대략 10-50%, 15-45%, 20-40%, 25-35%, 15-30%, 15-25%, 20-30%, 또는 20-25%의 범위이다.
일부 실시양태에서, PSI는 250 초과, 260 초과, 270 초과, 280 초과, 290 초과, 300 초과, 310 초과, 320 초과, 330 초과, 340 초과, 350 초과, 360 초과, 370 초과, 380 초과, 390 초과, 400 초과, 410 초과, 420 초과, 430 초과, 440 초과, 450 초과, 460 초과, 470 초과, 480 초과, 490 초과, 500 초과, 510 초과, 520 초과, 530 초과, 540 초과, 550 초과, 560 초과, 570 초과, 580 초과, 590 초과, 또는 600 초과이다.
일부 실시양태에서, 최대 PSI는 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 또는 600이다.
일부 실시양태에서, PSI는 대략 250-600, 250-590, 250-580, 250-570, 250-260, 250-550, 250-540, 250-530, 250-520, 250-510, 250-500, 250-490, 250-480, 250-470, 250-460, 250-450, 250-440, 250-430, 250-420, 250-410, 250-400, 250-390, 250-380, 250-370, 250-360, 250-350, 250-340, 250-330, 250-320, 250-310, 250-300, 300-600, 300-590, 300-580, 300-570, 300-560, 300-550, 300-540, 300-530, 300-520, 300-510, 300-500, 300-490, 300-480, 300-470, 300-460, 300-450, 300-400, 350-450, 450-600, 또는 550-600 범위이다.
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 적어도 2종의 측정 기준 (예를 들어, 다기능 강도 지수 (PSI) 및 T 세포 주입 전의 IL-15의 환자 혈청 수준)을 포함하는 복합 지수를 사용하여 결정된다. 일부 실시양태에서, 복합 지수는 3 초과, 4 초과, 5 초과, 또는 6 초과이다. 일부 실시양태에서, 복합 지수는 적어도 2이다. 일부 실시양태에서, 복합 지수는 대략 2-6, 3-6, 4-6, 또는 5-6의 범위이다.
키메라 항원 수용체 및 T 세포 수용체
키메라 항원 수용체 (CAR 또는 CAR-T)는 유전자 조작된 수용체이다. 이들 조작된 수용체는 관련 기술분야에 공지된 기술에 따라 T 세포를 포함한 면역 세포 내로 용이하게 삽입될 수 있고, 그에 의해 발현될 수 있다. CAR에 의해, 단일 수용체는 특정 항원을 인식하고, 뿐만 아니라 그러한 항원에 결합되었을 때 면역 세포를 활성화하여 그러한 항원을 보유하는 세포를 공격 및 파괴시키도록 프로그램화될 수 있다. 이들 항원이 종양 세포 상에 존재할 때, CAR을 발현하는 면역 세포는 종양 세포를 표적화하고 사멸시킬 수 있다. 키메라 항원 수용체에는 그의 효력을 증가시키기 위해 공동자극 (신호전달) 도메인이 혼입된다. 미국 특허 번호 7,741,465, 및 6,319,494, 뿐만 아니라 문헌 [Krause et al. and Finney et al. (supra), Song et al., Blood 119:696-706 (2012); Kalos et al., Sci. Transl. Med. 3:95 (2011); Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011), 및 Gross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59-83 (2016)]을 참조한다.
일부 실시양태에서, 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 포함하는 공동자극 도메인은 이뮤노글로불린 패밀리의 구성원의 일부 또는 모두, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgD, IgE, IgM, 또는 그의 단편을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, THD는 인간 완전 힌지 도메인 ("CHD")으로부터 유래된다. 다른 실시양태에서, THD는 공동자극 단백질의 설치류, 뮤린, 또는 영장류 (예를 들어, 비-인간 영장류) CHD로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, THD는 공동자극 단백질의 키메라 CHD로부터 유래된다.
본 발명의 CAR 또는 TCR에 대한 공동자극 도메인은 막횡단 도메인 및/또는 세포내 신호전달 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 막횡단 도메인은 CAR의 세포외 도메인에 융합되도록 설계될 수 있다. 이는 CAR의 세포내 도메인에 유사하게 융합될 수 있다. 일부 실시양태에서, CAR 내의 도메인 중 하나와 자연적으로 회합되는 막횡단 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막횡단 도메인은 이러한 도메인이 동일한 또는 상이한 표면 막 단백질의 막횡단 도메인에 결합하는 것을 피하게 하여 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하기 위해 선택되거나 또는 아미노산 치환에 의해 변형될 수 있다. 막횡단 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우에, 도메인은 임의의 막-결합 또는 막횡단 단백질로부터 유래될 수 있다. 본 발명에 특히 유용한 막횡단 영역은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 이뮤노글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD100 (SEMA4D), CD103, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD28, CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD3 제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8, CD8알파, CD8베타, CD96 (Tactile), CDl la, CDl lb, CDl lc, CDl ld, CDS, CEACAM1, CRT AM, 시토카인 수용체, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, Ig 알파 (CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극자 (ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGBl, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9 (CD229), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1; CDl-la/CD18), MHC 부류 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그램화된 사멸-1 (PD-1), PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자 (SLAM 단백질), SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Lyl08), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 그의 단편, 말단절단물, 또는 조합으로부터 유래될 수 있다 (즉, 이를 포함한다).
임의로, 짧은 링커는 CAR의 임의의 또는 일부 세포외, 막횡단, 및 세포내 도메인 사이에 연결을 형성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 글리신-글리신-글리신-글리신-세린의 반복부 (G4S)n 또는 GSTSGSGKPGSGEGSTKG (서열식별번호: 1)로부터 유래될 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 3-20개의 아미노산 및 GSTSGSGKPGSGEGSTKG (서열식별번호: 1)와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 링커는 또한 펩티드 태그로서 사용될 수 있다. 링커 펩티드 서열은 1개 이상의 관심 단백질을 연결하기 위해 임의의 적절한 길이일 수 있고, 바람직하게는 그것이 연결하는 펩티드 중 하나 또는 둘 다의 적절한 폴딩 및/또는 기능 및/또는 활성을 허용하기 위해 충분히 가요성이도록 설계된다. 따라서, 링커 펩티드는 10개 이하, 11개 이하, 12개 이하, 13개 이하, 14개 이하, 15개 이하, 16개 이하, 17개 이하, 18개 이하, 19개 이하, 또는 20개 이하의 아미노산의 길이를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 펩티드는 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 적어도 19개, 또는 적어도 20개의 아미노산 길이를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 적어도 7개 및 20개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 19개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 18개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 17개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 16개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 15개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 14개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 13개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 12개 이하의 아미노산 또는 적어도 7개 및 11개 이하의 아미노산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 15-17개의 아미노산을 포함하고, 특정한 실시양태에서, 16개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 10-20개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 14-19개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 15-17개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 15-16개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 16개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시양태에서, 스페이서 도메인이 사용된다. 일부 실시양태에서, 스페이서 도메인은 CD4, CD8a, CD8b, CD28, CD28T, 4-1BB, 또는 본원에 기재된 다른 분자로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 스페이서 도메인은 소분자의 부가 시 발현을 제어하기 위해 화학적으로 유도된 이량체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 사용되지 않는다.
본 발명의 조작된 T 세포의 세포내 (신호전달) 도메인은 활성화 도메인에게 신호전달을 제공할 수 있고, 이는 이어서 면역 세포의 정상 이펙터 기능 중 적어도 1종을 활성화한다. T 세포의 이펙터 기능은, 예를 들어, 시토카인의 분비를 포함한 세포용해 활성 또는 헬퍼 활성일 수 있다.
특정 실시양태에서, 적합한 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 이뮤노글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD100 (SEMA4D), CD103, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD28, CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8, CD8알파, CD8베타, CD96 (Tactile), CDl la, CDl lb, CDl lc, CDl ld, CDS, CEACAM1, CRT AM, 시토카인 수용체, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, Ig 알파 (CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극자 (ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGBl, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9 (CD229), Lyl08), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1; CDl-la/CD18), MHC 부류 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그램화된 사멸-1 (PD-1), PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자 (SLAM 단백질), SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A, SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 그의 단편, 말단절단물, 또는 조합을 포함하나 (즉 함유하나), 이에 제한되지는 않는다.
항원 반응성을 전달하기 위해 TCR이 도입될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 반응성은 펩티드의 MHC 제시에 의해 제한된다. TCR은 알파/베타 TCR, 감마/델타 TCR, 또는 다른 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, TCR은 뮤린 불변 쇄 (2A 연결됨)를 갖는 HPV-16 E7 TCR이다. 일부 실시양태에서, 쇄는 IRES 또는 임의의 2A 패밀리 구성원 서열 (예를 들어, P2A, T2A, E2A, F2A 등)에 의해 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, TCR은 HPV 인식 TCR, 또는 다른 바이러스 반응성 TCR (예를 들어, EBV, 인플루엔자 등)이다. 일부 실시양태에서, 암 또는 암 연관 항원 반응성 TCR이 사용될 수 있다 (예를 들어, NYESO, MART1, gp100 등).
일부 실시양태에서, TCR은 정상/건강한 펩티드 반응성 또는 다른 항원 반응성/제한의 TCR이다. 일부 실시양태에서, TCR은 뮤린 또는 다른 비-인간 MHC에 대해 반응성이다. 일부 실시양태에서, TCR은 부류 I 또는 부류 II 제한된 TCR이다.
항원 결합 분자
적합한 CAR은, 표적화된 항원과 상호작용하는 항원 결합 분자를 혼입시킴으로써 그러한 항원 (예컨대 세포-표면 항원)에 결합하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 그의 항체 단편, 예를 들어, 1개 이상의 단일 쇄 항체 단편 ("scFv")이다. scFv는 함께 연결된 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 갖는 단일 쇄 항체 단편이다. 미국 특허 번호 7,741,465, 및 6,319,494 뿐만 아니라 문헌 [Eshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136]을 참조한다. scFv는 표적 항원과 특이적으로 상호작용하는 모 항체의 능력을 보유한다. scFv는 다른 CAR 성분과 함께 단일 쇄의 일부로서 발현되도록 조작될 수 있기 때문에 키메라 항원 수용체에서 유용하다. Id. 또한, 문헌 [Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, No. 4, 1998 (619-626); Finney et al., Journal of Immunology, 1998, 161: 2791-2797]을 참조한다. 항원 결합 분자는 전형적으로, 관심 항원을 인식하고 이에 결합할 수 있도록 CAR의 세포외 부분 내에 함유되는 것으로 인지될 것이다. 1종 초과의 관심 표적에 대한 특이성을 갖는 이중특이적 및 다중특이적 CAR이 본 발명의 범주 내에서 고려된다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 THD, 및 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자를 포함하는 CAR 또는 TCR을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 종양 항원이다. 일부 실시양태에서, 항원은 종양-연관 표면 항원, 예컨대 5T4, 알파태아단백질 (AFP), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), BCMA, B-인간 융모성 고나도트로핀, CA-125, 암배아성 항원 (CEA), 암배아성 항원 (CEA), CD123, CD133, CD138, CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD30, CD33, CD34, CD4, CD40, CD44, CD56, CD8, CLL-1, c-Met, CMV-특이적 항원, CS-1, CSPG4, CTLA-4, DLL3, 디시알로강글리오시드 GD2, 관-상피 뮤신, EBV-특이적 항원, EGFR 변이체 III (EGFRvIII), ELF2M, 엔도글린, 에프린 B2, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), 상피 세포 부착 분자 (EpCAM), 상피 종양 항원, ErbB2 (HER2/neu), 섬유모세포 연관 단백질 (fap), FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 신경교종-연관 항원, 글리코스핑고지질, gp36, HBV-특이적 항원, HCV-특이적 항원, HER1-HER2, HER2-HER3 조합, HERV-K, 고분자량-흑색종 연관 항원 (HMW-MAA), HIV-1 외피 당단백질 gp41, HPV-특이적 항원, 인간 텔로머라제 리버스 트랜스크립타제, IGFI 수용체, IGF-II, IL-11R알파, IL-13R-a2, 인플루엔자 바이러스-특이적 항원; CD38, 인슐린 성장 인자 (IGFl)-l, 장 카르복실 에스테라제, 카파 쇄, LAGA-la, 람다 쇄, 라사 바이러스-특이적 항원, 렉틴-반응성 AFP, 계통-특이적 또는 조직 특이적 항원 예컨대 CD3, MAGE, MAGE-A1, 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자, 종양-특이적 펩티드 에피토프를 제시하는 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자, M-CSF, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, MN-CA IX, MUC-1, mut hsp70-2, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 호중구 엘라스타제, NKG2D, Nkp30, NY-ESO-1, p53, PAP, 프로스타제, 전립선 특이적 항원 (PSA), 전립선-암종 종양 항원-1 (PCTA-1), 전립선-특이적 항원 단백질, STEAP1, STEAP2, PSMA, RAGE-1, ROR1, RU1, RU2 (AS), 표면 부착 분자, 서바이빙 및 텔로머라제, TAG-72, 피브로넥틴의 엑스트라 도메인 A (EDA) 및 엑스트라 도메인 B (EDB) 및 테나신-C의 Al 도메인 (TnC Al) , 티로글로불린, 종양 기질 항원, 혈관 내피 성장 인자 수용체-2 (VEGFR2), 바이러스-특이적 표면 항원 예컨대 HIV-특이적 항원 (예컨대 HIV gpl20), 뿐만 아니라 이들 표면 마커의 임의의 유도체 또는 변이체로부터 선택된다.
조작된 T 세포 및 용도
본 개시내용의 세포는 대상체로부터 수득된 T 세포를 통해 수득될 수 있다. T 세포는 예를 들어, 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직, 및 종양으로부터 수득될 수 있다. 또한, T 세포는 관련 기술분야에서 입수가능한 1종 이상의 T 세포주로부터 유래될 수 있다. T 세포는 또한 통상의 기술자에게 공지된 다수의 기술, 예컨대 피콜™ 분리 및/또는 분리반출술을 사용하여 대상체로부터 수집된 단위 혈액으로부터 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, 분리반출술에 의해 수집된 세포를 세척하여 혈장 분획을 제거하고, 후속 프로세싱을 위해 적절한 완충제 또는 배지 중에 둔다. 일부 실시양태에서, 세포는 PBS로 세척된다. 인지될 바와 같이, 예컨대 반자동화된 관통 원심분리, 예를 들어, 코브(Cobe)™ 2991 세포 프로세서, 백스터 시토메이트(Baxter CytoMate)™ 등을 사용함으로써 세척 단계가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세척된 세포는 1종 이상의 생체적합성 완충제, 또는 완충제의 존재 또는 부재 하의 다른 염수 용액 중에 재현탁된다. 일부 실시양태에서, 분리반출술 샘플의 바람직하지 않은 성분은 제거된다. T 세포 요법을 위한 T 세포를 단리하는 추가의 방법은 미국 특허 공개 번호 2013/0287748에 개시되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, T 세포는 적혈구를 용해시키고 단핵구를 고갈시킴으로써, 예를 들어, 퍼콜(PERCOLL)™ 구배를 통해 원심분리를 사용함으로써 PBMC로부터 단리된다. 일부 실시양태에서, T 세포의 특정 하위집단, 예컨대 CD4+, CD8+, CD28+, CD45RA+, 및 CD45RO+ T 세포는 관련 기술분야에 공지된 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리된다. 예를 들어, 음성 선택에 의한 T 세포 집단의 풍부화는 음성 선택된 세포에 고유한 표면 마커로 지시된 항체의 조합에 의해 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 음성 선택된 세포 상에 존재하는 세포 표면 마커로 지시된 모노클로날 항체의 칵테일을 사용하는 음성 자기 면역부착 또는 유동 세포측정법을 통한 세포 분류 및/또는 선택이 사용될 수 있다. 예를 들어, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 풍부화하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 전형적으로 CD8, CD11b, CD14, CD16, CD20, 및 HLA-DR에 대한 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 유동 세포측정법 및 세포 분류는 본 개시내용에 사용하기 위한 관심 세포 집단을 단리하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, PBMC는 본원에 기재된 바와 같은 방법을 사용한 면역 세포 (예컨대 CAR)에 의한 유전자 변형을 위해 직접 사용된다. 일부 실시양태에서, PBMC의 단리 후, T 림프구가 추가로 단리되고, 둘 다의 세포독성 및 헬퍼 T 림프구가 유전자 변형 및/또는 확장 전 또는 그 후에 나이브, 기억, 및 이펙터 T 세포 하위집단으로 분류된다.
일부 실시양태에서, CD8+ 세포는 이들 CD8+ 세포 유형 각각과 연관된 세포 표면 항원을 확인함으로써 나이브, 중심 기억, 및 이펙터 세포로 추가로 분류된다. 일부 실시양태에서, 중심 기억 T 세포의 표현형 마커의 발현은 CCR7, CD3, CD28, CD45RO, CD62L, 및 CD127의 발현을 포함하고, 이는 그랜자임 B에 대해 음성이다. 일부 실시양태에서, 중심 기억 T 세포는 CD8+, CD45RO+, 및 CD62L+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 이펙터 T 세포는 CCR7, CD28, CD62L, 및 CD127에 대해 음성이고, 그랜자임 B 및 퍼포린에 대해 양성이다. 일부 실시양태에서, CD4+ T 세포는 하위집단으로 추가로 분류된다. 예를 들어, CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 확인함으로써 나이브, 중심 기억, 및 이펙터 세포로 분류될 수 있다.
일부 실시양태에서, 면역 세포, 예를 들어, T 세포는 공지된 방법을 사용하여 단리 후 유전자 변형되거나, 또는 면역 세포는 유전자 변형 전에 시험관내 활성화 및 확장된다 (또는 전구세포의 경우에 분화됨). 또 다른 실시양태에서, 면역 세포, 예를 들어, T 세포는 본원에 기재된 키메라 항원 수용체에 의해 유전자 변형되고 (예를 들어, CAR 또는 TCR을 코딩하는 1개 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 바이러스 벡터에 의해 형질도입되고), 시험관내 활성화 및/또는 확장된다. T 세포를 활성화 및 확장하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,905,874; 6,867,041; 및 6,797,514; 및 PCT 공개 번호 WO 2012/079000에 기재되어 있고, 그의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일반적으로, 이러한 방법은 적절한 시토카인, 예컨대 IL-2를 함유하는 배양 배지 중에서 PBMC 또는 단리된 T 세포를, 일반적으로 비드 또는 다른 표면에 부착된 자극제 및 공동자극제, 예컨대 항-CD3 및 항-CD28 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 동일한 비드에 부착된 항-CD3 및 항-CD28 항체는 "대용물" 항원 제시 세포 (APC)로서의 역할을 한다. 하나의 예는 인간 T 세포의 생리학적 활성화를 위한 CD3/CD28 활성화제/자극제 시스템인 더 디나비즈(The Dynabeads)® 시스템이다. 다른 실시양태에서, T 세포는 미국 특허 번호 6,040,177 및 5,827,642 및 PCT 공개 번호 WO 2012/129514에 기재된 것과 같은 방법을 사용하여, 피더 세포 및 적절한 항체 및 시토카인에 의해 활성화되고 증식하도록 자극되며, 상기 문헌의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, T 세포는 공여자 대상체로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 공여자 대상체는 암 또는 종양을 앓고 있는 인간 환자이다. 일부 실시양태에서, 공여자 대상체는 암 또는 종양을 앓고 있지 않는 인간 환자이다.
일부 실시양태에서, 조성물은 제약상 허용되는 담체, 희석제, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 부형제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 비경구 전달을 위해, 흡입을 위해, 또는 소화관를 통한, 예컨대 경구로의 전달을 위해 선택된다. 이러한 제약상 허용되는 조성물의 제조는 관련 기술분야의 통상의 기술자의 능력 내에 있다. 일부 실시양태에서, 조성물을 생리학적 pH 또는 약간 더 낮은 pH, 전형적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 내로 유지시키기 위해 완충제가 사용된다. 일부 실시양태에서, 비경구 투여가 고려되는 경우에, 조성물은 제약상 허용되는 비히클 중, 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에, 본원에 기재된 조성물을 포함하는 발열원 무함유, 비경구로 허용되는 수용액의 형태로 존재한다. 일부 실시양태에서, 비경구 주사를 위한 비히클은 멸균 증류수이고, 여기서 본원에 기재된 조성물은, 적어도 1종의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에, 적절하게 보존된 멸균, 등장성 용액으로서 제제화된다. 일부 실시양태에서, 제제는 생성물의 제어 또는 지속 방출을 제공하는 중합체 화합물 (예컨대 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드 또는 리포솜을 사용하여 목적하는 분자를 제제화하는 것을 수반하고, 이어서 이는 데포 주사를 통해 전달된다. 일부 실시양태에서, 이식형 약물 전달 장치는 목적하는 분자를 도입하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법은 T 세포 요법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 T 세포 요법은 조작된 자가 세포 요법 (eACT™)이다. 이러한 실시양태에 따르면, 방법은 환자로부터 혈액 세포를 수집하는 것을 포함할 수 있다. 단리된 혈액 세포 (예를 들어, T 세포)는 이어서 본원에 개시된 CAR 또는 TCR을 발현하도록 조작될 수 있다. 특정한 실시양태에서, CAR T 세포 또는 TCR T 세포는 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포 또는 TCR T 세포는 환자에서 종양 또는 암을 치료한다. 일부 실시양태에서 CAR T 세포 또는 TCR T 세포는 종양 또는 암의 크기를 감소시킨다.
일부 실시양태에서, T 세포 요법에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 (예를 들어, 자가 T 세포 요법을 위해) 환자로부터 수득된다. 다른 실시양태에서, T 세포 요법에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 환자가 아닌 대상체로부터 수득된다.
일부 실시양태에서, T 세포는 치료 유효량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, T 세포의 치료 유효량은 적어도 약 104개 세포, 적어도 약 105개 세포, 적어도 약 106개 세포, 적어도 약 107개 세포, 적어도 약 108개 세포, 적어도 약 109개, 또는 적어도 약 1010개일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, T 세포의 치료 유효량은 약 104개 세포, 약 105개 세포, 약 106개 세포, 약 107개 세포, 또는 약 108개 세포이다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포의 치료 유효량은 약 2 X 106개 세포/kg, 약 3 X 106개 세포/kg, 약 4 X 106개 세포/kg, 약 5 X 106개 세포/kg, 약 6 X 106개 세포/kg, 약 7 X 106개 세포/kg, 약 8 X 106개 세포/kg, 약 9 X 106개 세포/kg, 약 1 X 107개 세포/kg, 약 2 X 107개 세포/kg, 약 3 X 107개 세포/kg, 약 4 X 107개 세포/kg, 약 5 X 107개 세포/kg, 약 6 X 107개 세포/kg, 약 7 X 107개 세포/kg, 약 8 X 107개 세포/kg, 또는 약 9 X 107개 세포/kg이다.
일부 실시양태에서, CAR-양성 생존 T 세포의 치료 유효량은 kg 체중당 약 1 x 106개 및 약 2 x 106개 CAR-양성 생존 T 세포 내지 최대 약 1 x 108개 CAR-양성 생존 T 세포의 최대 용량이다.
치료 방법
본원에 개시된 방법은 대상체에서 암을 치료하거나, 종양의 크기를 감소시키거나, 종양 세포를 사멸시키거나, 종양 세포 증식을 방지하거나, 종양의 성장을 방지하거나, 환자로부터 종양을 제거하거나, 종양의 재발을 방지하거나, 종양 전이를 방지하거나, 환자에서 완화를 유도하거나, 또는 그의 임의의 조합을 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 완전 반응을 유도한다. 다른 실시양태에서, 방법은 부분 반응을 유도한다.
치료될 수 있는 암은 혈관화되지 않거나, 실질적으로 혈관화되지 않거나, 또는 혈관화되는 종양을 포함한다. 암은 또한 고형 또는 비-고형 종양을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 혈액암이다. 일부 실시양태에서, 암은 백혈구 암이다. 다른 실시양태에서, 암은 형질 세포 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 백혈병, 림프종, 또는 골수종이다. 일부 실시양태에서, 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 급성 림프성 백혈병 (ALL), 및 혈구포식성 림프조직구증식증 (HLH)), B 세포 전림프구성 백혈병, B-세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 또는 급성 육아종성 질환, 만성 또는 급성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종, 여포성 림프종 (FL), 모발상 세포 백혈병, 혈구포식성 증후군 (대식세포 활성화 증후군 (MAS), 호지킨병, 대세포 육아종, 백혈구 부착 결핍, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군 (MDS), 급성 골수성 백혈병 (AML)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 골수성 질환, 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 증식성 장애 (예를 들어, 무증상 골수종 (증상이 없는 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 형질세포종 (예를 들어, 형질 세포 이혼화증; 고립 골수종; 고립 형질세포종; 수질외 형질세포종; 및 다발성 형질세포종), POEMS 증후군 (크로우-푸카세 증후군; 다카츠키병; PEP 증후군), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, T 세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), T 세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 또는 그의 조합이다.
일부 실시양태에서, 암은 골수종이다. 일부 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다. 일부 실시양태에서, 암은 백혈병이다. 일부 실시양태에서, 암은 급성 골수성 백혈병이다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 선택된 화학요법제는 림프구고갈 (사전조건화) 화학요법제이다. 유익한 사전조건화 치료 요법은, 상관되는 유익한 바이오마커와 함께, 미국 특허 가출원 번호 62/262,143 및 62/167,750에 기재되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 이는, 예를 들어, T 세포 요법을 필요로 하는 환자에게 명시된 유익한 용량의 시클로포스파미드 (200 mg/m2/일 내지 2000 mg/m2/일) 및 명시된 유익한 용량의 플루다라빈 (20 mg/m2/일 내지 900 mg/m2/일)을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자를 조건화하는 방법을 기재한다. 하나의 이러한 용량 요법은 환자에게 치료 유효량의 조작된 T 세포를 투여하기 전 3일 동안 환자에게 약 500 mg/m2/일의 시클로포스파미드 및 약 60 mg/m2/일의 플루다라빈을 매일 투여하는 것을 포함하는, 환자를 치료하는 것을 수반한다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 분자, 형질도입된 (또는 달리 조작된) 세포 (예컨대 CAR 또는 TCR), 및 화학요법제는 각각 대상체에서 질환 또는 상태를 치료하는데 효과적인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CAR-발현 면역 이펙터 세포를 포함하는 조성물은 임의의 수의 화학요법제와 함께 투여될 수 있다. 화학요법제의 예는 알킬화제 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드 (시톡산(CYTOXAN)™); 알킬 술포네이트 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민 레주메; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제 예컨대 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼리케아미신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 5-FU; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라족산; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀 (탁솔(TAXOL)™, 브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb)) 및 도세탁셀 (탁소테레(TAXOTERE)®, 롱-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer)); 클로람부실; 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포시드; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS2000; 디플루오로메틸로미틴 (DMFO); 레티노산 유도체 예컨대 탈그레틴(Targretin)™ (벡사로텐), 판레틴(Panretin)™, (알리트레티노인); 온탁(ONTAK)™ (데니류킨 디프티톡스); 에스페라미신; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CAR- 및/또는 TCR-발현 면역 이펙터 세포를 포함하는 조성물은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대 항에스트로겐 예컨대 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타제 억제 4(5)-이미다졸, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜 (파레스톤); 및 항안드로겐 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체와 함께 투여될 수 있다. 또한, CHOP, 즉, 시클로포스파미드 (시톡산(Cytoxan)®), 독소루비신 (히드록시독소루비신), 빈크리스틴 (온코빈(Oncovin)®), 및 프레드니손을 포함하나 이에 제한되지는 않는 화학요법제의 조합이 적절한 경우에 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학요법제는 조작된 세포 또는 핵산의 투여와 동시에 또는 투여 후 1주 내에 투여된다. 다른 실시양태에서, 화학요법제는 조작된 세포 또는 핵산을 투여하고 1 내지 4주 또는 1주 내지 1개월, 1주 내지 2개월, 1주 내지 3개월, 1주 내지 6개월, 1주 내지 9개월, 또는 1주 내지 12개월 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 세포 또는 핵산을 투여하기 적어도 1개월 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 2종 이상의 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
다양한 추가의 치료제가 본원에 기재된 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 잠재적으로 유용한 추가의 치료제는 PD-1 억제제 예컨대 니볼루맙 (옵디보(OPDIVO)®), 펨브롤리주맙 (키트루다(KEYTRUDA)®), 펨브롤리주맙, 피딜리주맙 (큐어테크(CureTech))및 아테졸리주맙 (로슈(Roche))를 포함한다.
본원에 개시된 조성물 및 방법과 조합하여 사용하기에 적합한 추가의 치료제는 이브루티닙 (임브루비카(IMBRUVICA)®), 오파투무맙 (아르제라(ARZERRA)®), 리툭시맙 (리툭산(RITUXAN)®), 베바시주맙 (아바스틴(AVASTIN)®), 트라스투주맙 (헤르셉틴(HERCEPTIN)®), 트라스투주맙 엠탄신 (카드실라(KADCYLA)®), 이마티닙 (글리벡(GLEEVEC)®), 세툭시맙 (에르비툭스(ERBITUX)®), 파니투무맙 (벡티빅스(VECTIBIX)®), 카투막소맙, 이브리투모맙, 오파투무맙, 토시투모맙, 브렌툭시맙, 알렘투주맙, 겜투주맙, 에를로티닙, 게피티닙, 반데타닙, 아파티닙, 라파티닙, 네라티닙, 악시티닙, 마시티닙, 파조파닙, 수니티닙, 소라페닙, 토세라닙, 레스타우르티닙, 악시티닙, 세디라닙, 렌바티닙, 닌테다닙, 파조파닙, 레고라페닙, 세막사닙, 소라페닙, 수니티닙, 티보자닙, 토세라닙, 반데타닙, 엔트렉티닙, 카보잔티닙, 이마티닙, 다사티닙, 닐로티닙, 포나티닙, 라도티닙, 보수티닙, 레스타우르티닙, 룩솔리티닙, 파크리티닙, 코비메티닙, 셀루메티닙, 트라메티닙, 비니메티닙, 알렉티닙, 세리티닙, 크리조티닙, 아플리베르셉트, 아디포티드, 데니류킨 디프티톡스, mTOR 억제제 예컨대 에베롤리무스 및 템시롤리무스, 헷지호그 억제제 예컨대 소니데깁 및 비스모데깁, CDK 억제제 예컨대 CDK 억제제 (팔보시클립)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, CAR 면역 세포를 포함하는 조성물은 항염증제와 함께 투여된다. 항염증제 또는 약물은 스테로이드 및 글루코코르티코이드 (베타메타손, 부데소니드, 덱사메타손, 히드로코르티손 아세테이트, 히드로코르티손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 트리암시놀론 포함), 비스테로이드성 항염증 약물 (NSAID) 예컨대 아스피린, 이부프로펜, 나프록센, 메토트렉세이트, 술파살라진, 레플루노미드, 항-TNF 의약, 시클로포스파미드 및 미코페놀레이트를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 NSAID는 이부프로펜, 나프록센, 나프록센 소듐, Cox-2 억제제 및 시알릴에이트를 포함한다. 예시적인 진통제는 아세트아미노펜, 옥시코돈, 프로폭시펜 히드로클로라이드의 트라마돌을 포함한다. 예시적인 글루코코르티코이드는 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 또는 프레드니손을 포함한다. 예시적인 생물학적 반응 조절제는 세포 표면 마커 (예를 들어, CD4, CD5 등)에 대해 지시된 분자, 시토카인 억제제, 예컨대 TNF 길항제 (예를 들어, 에타네르셉트 (엔브렐(ENBREL)®), 아달리무맙 (휴미라(HUMIRA)®) 및 인플릭시맙 (레미케이드(REMICADE)®), 케모카인 억제제 및 부착 분자 억제제를 포함한다. 생물학적 반응 조절제는 모노클로날 항체 뿐만 아니라 분자의 재조합 형태를 포함한다. 예시적인 DMARD는 아자티오프린, 시클로포스파미드, 시클로스포린, 메토트렉세이트, 페니실라민, 레플루노미드, 술파살라진, 히드록시클로로퀸, 금 (경구 (아우라노핀) 및 근육내), 및 미노시클린을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 시토카인과 함께 투여된다. 시토카인의 예는 림포카인, 모노카인, 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬이다. 시토카인에는 성장 호르몬 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 당단백질 호르몬 예컨대 여포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH), 및 황체형성 호르몬 (LH); 간 성장 인자 (HGF); 섬유모세포 성장 인자 (FGF); 프로락틴; 태반 락토겐; 뮬러-억제 물질; 마우스 고나도트로핀-연관 펩티드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴 (TPO); 신경 성장 인자 (NGF) 예컨대 NGF-베타; 혈소판-성장 인자; 형질전환 성장 인자 (TGF) 예컨대 TGF-알파 및 TGF-베타; 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO, 에포젠(Epogen)®, 프로크리트(Procrit)®); 골유도 인자; 인터페론 예컨대 인터페론-알파, 베타, 및 -감마; 콜로니 자극 인자 (CSF) 예컨대 대식세포-CSF (M-CSF); 과립구-대식세포-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF); 인터류킨 (IL) 예컨대 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; IL-15, 종양 괴사 인자 예컨대 TNF-알파 또는 TNF-베타; 및 LIF 및 kit 리간드 (KL)를 포함한 다른 폴리펩티드 인자가 포함된다. 본원에 사용된 용어 시토카인은 천연 공급원으로부터의 또는 재조합 세포 배양으로부터의 단백질, 및 천연 서열 시토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다.
투여
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조작된 T 세포는 (a) 1종 이상의 키메라 수용체를 포함하는 복수의 T 세포를 수득하는 단계; 및 (b) 유효 용량의 T 세포를 환자에게 투여하는 단계이며, 여기서 유효 용량은 다기능 T 세포의 미리 결정된 양을 포함하는 것인 단계를 포함하는, 환자에서 악성종양을 치료하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, T 세포는 치료 유효량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, T 세포의 치료 유효량은 적어도 약 104개 세포, 적어도 약 105개 세포, 적어도 약 106개 세포, 적어도 약 107개 세포, 적어도 약 108개 세포, 적어도 약 109, 또는 적어도 약 1010개 세포일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, T 세포의 치료 유효량은 약 104개 세포, 약 105개 세포, 약 106개 세포, 약 107개 세포, 또는 약 108개 세포이다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포의 치료 유효량은 약 2 X 106개 세포/kg, 약 3 X 106개 세포/kg, 약 4 X 106개 세포/kg, 약 5 X 106개 세포/kg, 약 6 X 106개 세포/kg, 약 7 X 106개 세포/kg, 약 8 X 106개 세포/kg, 약 9 X 106개 세포/kg, 약 1 X 107개 세포/kg, 약 2 X 107개 세포/kg, 약 3 X 107개 세포/kg, 약 4 X 107개 세포/kg, 약 5 X 107개 세포/kg, 약 6 X 107개 세포/kg, 약 7 X 107개 세포/kg, 약 8 X 107개 세포/kg, 또는 약 9 X 107개 세포/kg이다.
일부 실시양태에서, CAR-양성 생존 T 세포의 치료 유효량은 kg 체중당 약 1 x 106개 및 약 2 x 106개 CAR-양성 생존 T 세포 내지 최대 약 1 x 108개 CAR-양성 생존 T 세포의 최대 용량이다.
일부 실시양태에서, 치료 유효량 또는 용량은 다기능 T 세포의 양에 의해 결정된다. 다기능 T 세포의 양은 적어도 약 104개 다기능 세포, 적어도 약 105개 다기능 세포, 적어도 약 106개 다기능 세포, 적어도 약 107개 다기능 세포, 적어도 약 108개 다기능 세포, 적어도 약 109개 다기능 세포, 또는 적어도 약 1010개 다기능 세포일 수 있다.
일부 실시양태에서, 유효 용량은 다기능 강도 지수를 T 세포의 총수와 곱하는 것에 의해 수득된 PSI의 용량을 포함한다. 일부 실시양태에서, 유효 용량은 적어도 3.5 x 1010개 또는 적어도 7.7 x 1010개를 포함한다. 일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 다기능 강도 지수를 세포의 총수와 곱하는 것에 의해 수득된다 (예를 들어, kg 체중당 약 2 x 106개 생존 T 세포 내지 최대 약 1 x 108개 생존 T 세포의 최대 용량). 일부 실시양태에서, 유효 용량은 대략 3.5 x 1010개 내지 7.7 x 1010개 다기능 T 세포의 범위이다. 일부 실시양태에서, PSI의 유효 용량은 PSI x 주입된 T 세포의 단위로 대략 3.5 x 1010개 내지 4.5 x 1010개, 3.5 x 1010개 내지 5.5 x 1010개, 3.5 x 1010개 내지 6.5 x 1010개, 3.5 x 1010개 내지 7.5 x 1010개, 3.5 x 1010개 내지 7.8 x 1010개, 3.5 x 1010개 내지 8.0 x 1010개, 3.5 x 1010개 내지 9.0 x 1010개, 3.5 x 1010개 내지 10.0 x 1010개, 4.5 x 1010개 내지 5.5 x 1010개, 4.5 x 1010개 내지 6.5 x 1010개, 4.5 x 1010개 내지 7.5 x 1010개, 4.5 x 1010개 내지 7.8 x 1010개, 4.5 x 1010개 내지 8.0 x 1010개, 4.5 x 1010개 내지 9.0 x 1010개, 4.5 x 1010개 내지 10.0 x 1010개, 5.5 x 1010개 내지 6.5 x 1010개, 5.5 x 1010개 내지 7.5 x 1010개, 5.5 x 1010개 내지 7.8 x 1010개, 5.5 x 1010개 내지 8.0 x 1010개, 5.5 x 1010개 내지 9.0 x 1010개, 5.5 x 1010개 내지 10.0 x 1010개, 6.5 x 1010개 내지 7.5 x 1010개, 6.5 x 1010개 내지 7.8 x 1010개, 6.5 x 1010개 내지 8.0 x 1010개, 6.5 x 1010개 내지 9.0 x 1010개, 6.5 x 1010개 내지 10.0 x 1010개, 7.5 x 1010개 내지 8.0 x 1010개, 7.5 x 1010개 내지 9.0 x 1010개, 7.5 x 1010개 내지 10.0 x 1010개 범위이다.
일부 실시양태에서, 유효 용량은 PSI x 주입된 T 세포의 단위로 적어도 대략 3.0 x 1010개, 3.1 x 1010개, 3.2 x 1010개, 3.3 x 1010개, 3.4 x 1010개, 3.5 x 1010개, 3.6 x 1010개, 3.7 x 1010개, 3.8 x 1010개, 3.9 x 1010개, 4.0 x 1010개, 4.1 x 1010개, 4.2 x 1010개, 4.3 x 1010개, 4.4 x 1010개, 4.5 x 1010개, 4.6 x 1010개, 4.7 x 1010개, 4.8 x 1010개, 4.9 x 1010개, 5.0 x 1010개, 5.1 x 1010개, 5.2 x 1010개, 5.3 x 1010개, 5.4 x 1010개, 5.5 x 1010개, 5.6 x 1010개, 5.7 x 1010개, 5.8 x 1010개, 5.9 x 1010개, 6.0 x 1010개, 6.1 x 1010개, 6.2 x 1010개, 6.3 x 1010개, 6.4 x 1010개, 6.5 x 1010개, 6.6 x 1010개, 6.7 x 1010개, 6.8 x 1010개, 6.9 x 1010개, 또는 7.0 x 1010개, 7.1 x 1010개, 7.2 x 1010개, 7.3 x 1010개, 7.4 x 1010개, 7.5 x 1010개, 7.6 x 1010개, 7.7 x 1010개, 7.8 x 1010개, 7.9 x 1010개, 8.0 x 1010개를 포함한다. 일부 실시양태에서, 유효 용량은 PSI x 주입된 T 세포의 단위로 적어도 대략 3.5 x 1010개를 포함한다. 일부 실시양태에서, 유효 용량은 PSI x 주입된 T 세포의 단위로 적어도 대략 7.7 x 1010개를 포함한다
일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 다기능 T 세포의 백분율을 세포의 총수와 곱하는 것에 의해 수득된다 (예를 들어, kg 체중당 약 2 x 106개 생존 T 세포 내지 최대 약 1 x 108개 생존 T 세포의 최대 용량). 일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 적어도 대략 1.0 x 107개, 1.1 x 107개, 1.2 x 107개, 1.3 x 107개, 1.4 x 107개, 1.5 x 107개, 1.6 x 107개, 1.7 x 107개, 1.8 x 107개, 1.9 x 107개, 2.0 x 107개, 2.1 x 107개, 2.2 x 107개, 2.3 x 107개, 2.4 x 107개, 2.5 x 107개, 2.6 x 107개, 2.7 x 107개, 2.8 x 107개, 2.9 x 107개, 3.0 x 107개, 3.1 x 107개, 3.2 x 107개, 3.3 x 107개, 3.4 x 107개, 3.5 x 107개, 3.6 x 107개, 3.7 x 107개, 3.8 x 107개, 3.9 x 107개, 4.0 x 107개, 4.1 x 107개, 4.2 x 107개, 4.3 x 107개, 4.4 x 107개, 4.5 x 107개, 4.6 x 107개, 4.7 x 107개, 4.8 x 107개, 4.9 x 107개, 또는 5.0 x 107개 다기능 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 대략 2.4 x 107개 내지 4.2 x 107개 범위이다. 일부 실시양태에서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 대략 2.0 x 107개 내지 5.0 x 107개, 2.0 x 107개 내지 4.5 x 107개, 2.0 x 107개 내지 4.0 x 107개, 및 1.0 x 107개 내지 3.5 x 107개 다기능 T 세포 범위이다.
모니터링
일부 실시양태에서, 키메라 수용체 T 세포 면역요법의 투여는 인증된 건강관리 시설에서 이루어진다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 주입 후 CRS 및 신경계 독성의 징후 및 증상에 대해 인증된 건강관리 시설에서 환자를 적어도 7일 동안 매일 모니터링하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 환자는 주입 후 적어도 4주 동안 인증된 건강관리 시설에 인접하여 머물도록 지시받는다.
중증 유해 반응의 관리
일부 실시양태에서, 방법은 유해 반응의 관리를 포함한다. 일부 실시양태에서, 유해 반응은 시토카인 방출 증후군 (CRS), 신경계 독성, 과민 반응, 심각한 감염, 혈구감소증 및 저감마글로불린혈증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 유해 반응의 징후 및 증상은 열, 저혈압, 빈맥, 저산소증, 및 오한으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 심장 부정맥 (심방 세동 및 심실성 빈맥 포함), 심장 정지, 심부전, 신기능부전, 모세혈관 누출 증후군, 저혈압, 저산소증, 기관 독성, 혈구포식성 림프조직구증식증/대식세포 활성화 증후군 (HLH/MAS), 발작, 뇌병증, 두통, 진전, 어지럼증, 실어증, 섬망, 불면증 불안, 아나필락시스, 열성 호중구감소증, 혈소판감소증, 호중구감소증, 및 빈혈을 포함한다.
시토카인 방출 증후군
일부 실시양태에서, 방법은 다기능 CAR T 세포의 백분율을 조절함으로써 키메라 수용체 치료에서 CRS의 중증도를 예방하거나 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다기능 T 세포는 환자에게 투여 후 비활성화된다.
일부 실시양태에서, 방법은 임상 제시에 기초하여 CRS를 확인하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 열, 저산소증, 및 저혈압의 다른 원인을 평가하고 치료하는 것을 포함한다. ≥ 등급 2 CRS (예를 들어, 유체에 반응하지 않는 저혈압, 또는 산소 보충을 필요로 하는 저산소증)를 겪은 환자는 연속 심장 원격측정법 및 맥박 산소측정법에 의해 모니터링되어야 한다. 일부 실시양태에서, 심각한 CRS를 겪고 있는 환자의 경우, 심장초음파를 수행하여 심장 기능을 평가하는 것이 고려된다. 중증 또는 생명을 위협하는 CRS의 경우, 집중 관리 지지 요법이 고려될 수 있다.
일부 실시양태에서, 방법은 주입 후 CRS의 징후 및 증상에 대해 인증된 건강관리 시설에서 환자를 적어도 7일 동안 매일 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 주입 후 4주 동안 CRS의 징후 또는 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 CRS의 징후 또는 증상이 어떠한 시점에 발생하더라도 즉각적인 의학적 주의를 기울이도록 환자와 상담하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 CRS의 제1 징후에 지시된 바와 같은 지지적 관리, 토실리주맙 또는 토실리주맙 및 코르티코스테로이드를 사용한 치료를 시행하는 것을 포함한다.
신경계 독성
일부 실시양태에서, 방법은 신경계 독성의 징후 및 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 신경계 증상의 다른 원인은 배제하는 것을 포함한다. ≥ 등급 2 신경계 독성을 경험한 환자는 연속 심장 원격측정법 및 맥박 산소측정법에 의해 모니터링되어야 한다. 중증 또는 생명을 위협하는 신경계 독성에 대한 집중 관리 지지 요법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 방법은 주입 후 신경계 독성의 징후 및 증상에 대해 인증된 건강관리 시설에서 환자를 적어도 7일 동안 매일 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 주입 후 4주 동안 신경계 독성의 징후 또는 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다.
속발성 악성종양
일부 실시양태에서, CD19-지정 유전자 변형된 자가 T 세포 면역요법으로 치료된 환자에서 속발성 악성종양이 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 속발성 악성종양을 평생 모니터링하는 것을 포함한다.
본 명세서에 언급된 모든 공개, 특허 및 특허 출원은, 각각의 개별 공개, 특허 또는 특허 출원이 참조로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 명시된 바와 동일한 정도로 본원에 참조로 포함된다. 그러나, 본원의 참고문헌의 인용은 이러한 참고문헌이 본 발명에 대한 선행 기술이라는 것을 인정하는 것으로서 해석되어서는 안된다. 참조로 포함된 참고문헌에 제공된 임의의 정의 또는 용어가 본원에서 제공되는 용어 및 논의와 상이한 경우에는, 본원의 용어 및 정의가 적용된다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 예시되며, 이는 추가의 제한으로 해석되어서는 안된다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참고문헌의 내용은 명백히 본원에 참조로 포함된다.
실시예
실시예 1: 환자 인구통계 및 생성물 특징화
주입-전 CAR T 세포 생성물 다기능 프로파일은 임상 반응 및 독성과 연관된다
연구 (NCT00924326) 코호트는 최근에 기재된 임상 결과를 갖는 22명의 환자를 포함하였다. 22명의 치료된 환자 중에서, 19명은 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL)을 가졌고, 2명은 여포성 림프종을 가졌고, 1명은 외투 세포 림프종을 가졌다 (표 1). DLBCL을 갖는 19명의 환자 중에서, 11명은 화학요법 불응성 림프종을 가졌다. DLBCL을 갖는 5명의 다른 환자는 프로토콜 등록 전 최종 치료로서 자가 줄기 세포 이식 (ASCT) 후 10개월 이하에 재발된 림프종을 가졌다. DLBCL을 갖는 11명의 환자는 2차 연령-조정된 국제 예후 지수에 따르면 높은 위험 상태였다 (Hamlin, P.A. et al. Age-adjusted International Prognostic Index predicts autologous stem cell transplantation outcome for patients with relapsed or primary refractory diffuse large B-cell lymphoma. Blood 102, 1989-1996). 프로토콜 등록 전에 제공받은 고유한 림프종 요법의 중앙값 횟수는 4회 (범위, 1 내지 7)였다. 객관적 반응 (OR)은 문헌 [Cheson 2014 criteria (Cheson et al. Journal of Clinical Oncology 32, no. 27 (September 2014) 3059-3067)]에 의해 정의된 부분 (PR) 또는 완전 반응 (CR)으로 정의된다. 안정 (SD) 및 진행성 질환 (PD)은 객관적 반응의 결여 (비-반응자)에 상응한다. 이러한 코호트의 20명의 환자로부터의 생성물은 단일-세포 멀티플렉스 시토카인 프로파일링에 의해 평가가능하였다. NE 및 시토카인 방출 증후군 (CRS)을 이전에 보고된 바와 같이 등급화하였다 (Kochenderfer, J.N. et al. Lymphoma remissions caused by anti-CD19 chimeric antigen receptor T cells are associated with high serum interleukin-15 levels. J Clin Oncol 35, 1803-1813 (2017). Epub 2017 Mar 14). 표 1에 제시된 바와 같이, 평가가능한 환자의 주요 인구통계 특징: 연령, 성별 및 종양 조직학 (미만성 대 B 세포 림프종 - DLBCL, 형질전환된 여포성 림프종 - TFL, 외투 세포 림프종 - MCL, 여포성 림프종 - FL); 체손(Cheson) 기준 (BRESP)에 의한 최상의 반응, 및 대상체가 등급 3+ 신경계 독성을 갖는지 (표 1에서 NT로 표시됨) 또는 등급 3+ 시토카인 방출 증후군을 갖는지 (표 1에서 CRS로 표시됨).
표 1. 환자 인구통계, 임상 반응 및 유해 사건.
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임상 반응 및 독성은 생체내 증가된 CAR T 세포 확장 및 IL-15, IL-10, 및 그랜자임 B의 상승된 혈청 수준과 연관되었다. CD19+ 표적 세포와의 생체외 공동-배양물에 반응하여, 생성물 T 세포는 광범위한 어레이의 시토카인, 케모카인, 및 면역 이펙터 분자를 신속하게 분비한다. 이들 시토카인 및 케모카인, 뿐만 아니라 T 세포의 이종 집단에서 통상적으로 사용되는 표현형 마커에 의해 규정된 T 세포 특징은 임상 결과와 유의하게 연관되지 않았다 (데이터는 제시되지 않음). 항-CD19 CAR T 세포 요법에서의 임상 결과와 연관된 파라미터를 결정하기 위해, 항상성/증식, 염증, 화학주성, 조절, 및 면역 이펙터 분자의 빈도 및 생산 수준에 기초하여 다기능성 강도 지수 (PSI)를 사용함으로써 생성물 T 세포를 단일-세포 수준에서 특징화하였다. 이러한 분석을 수행하기 위해, 단일-세포 바코드 칩 (SCBC) 플랫폼 및 사전-명시된 제제를 사용하였다 (도 14). 간략하게, 생성물 PSI는 다기능 세포의 백분율을 그러한 세포에 의해 분비된 시토카인의 평균 형광 강도 (MFI)와 곱한 것으로 정의되었다 (도 1A-1F).
단일-세포 시토카인 프로파일링 및 PSI의 계산에 의한 T 세포 다기능성 평가
유동 세포측정법에 의해 scFv의 표면 발현에 의해 측정된, 약 40-60% CAR+ T 세포를 포함하는 동결보존된 CAR T 세포 생성물을 해동시키고, IL-2 (10 ng/mL, 바이오레전드(Biolegend))를 함유하는 완전 세포 요법 시스템 (CTS) 배지에서 37℃, 5% CO2 인큐베이터 내에서 1 x 106개/mL의 밀도로 배양하였다. 밤새 회수한 후, 생존 T 세포를 피콜-파크 플러스(Ficoll-Paque Plus) 배지 (피셔 사이언티픽(Fisher Scientific))를 사용하여 풍부화하였다. CD4+/CD8+ T 세포 하위세트를 항-CD4 또는 항-CD8 마이크로비드 (밀테니 바이오텍(Miltenyi Biotec), 독일 베르기슈글라트바흐)를 사용하여 분리한 다음, 37℃, 5% CO2에서 20시간 동안 CD19 또는 신경 성장 인자 수용체 (NGFR)로 1:2의 비로 형질도입된 K562 세포로 자극하였다. 공동-배양된 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를, 항-CD19 또는 항-NGFR 접합된 자기 비드를 사용하여 CD19-K562 또는 NGFR-K562 세포를 고갈시킴으로써 추가로 풍부화하였다. CD4+ 또는 CD8+ CAR T 세포의 존재를 확인하기 위해, 샘플을 알렉사 플루오르 647 접합된 항-CD4 또는 항-CD8 항체로 실온에서 10분 동안 염색하고, 포스페이트-완충 염수 (PBS)로 1회 세정하고, 완전 CTS 배지에 1 x 106개/mL의 밀도로 재현탁시켰다. 대략 30 μL의 세포 현탁액을 단일-세포 분비체학 평가를 위해 단일-세포 바코드 칩 (SCBC) 마이크로칩 내로 로딩하였다.
각각의 샘플에 대해, 32-플렉스 검정은 2000개의 T 세포로부터의 분비된 단백질을 측정하였다 (도 1A-1F). 세포 샘플 (SCBC 상에 로딩됨)의 미가공 현미경검사 및 마이크로어레이 스캔 및 단백질 분비 데이터를 독점적 영상 처리 소프트웨어를 사용하여 분석하여 단일 세포를 함유하는 챔버의 위치 및 그의 분비 판독값의 후속 추출을 결정하였다. 비어있는 세포 챔버로부터의 데이터를 사용하여 각각의 분석된 단백질에 대해 배경 강도 수준을 측정하였다. 이어서, 배경 판독값을 사용하여 단일-세포 판독값을 정규화하여, 유의한 분비를 결정하고 검정에 걸쳐 프로파일을 비교하였다. 독점적 소프트웨어 및 R 통계적 패키지를 통계적 데이터 분석 및 시각화에 사용하였다.
각각의 평가가능한 생성물에 대해 기능 프로파일을 결정하였다. 프로파일을 이펙터 (그랜자임 B, IFN-γ, MIP-1α, 퍼포린, TNF-α, TNF-β), 자극 (GM-CSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21), 조절 (IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-β1, sCD137, sCD40L), 화학유인 (CCL-11, IP-10, MIP-1β, RANTES), 및 염증 (IL-1b, IL-6, IL-17A, IL-17F, MCP-1, MCP-4) 군으로 카테고리화하였다. 다기능 CAR 생성물 T 세포는 생산된 각각의 단백질의 양과 커플링된 세포당 사전-명시된 패널로부터 적어도 2종의 단백질을 공동-분비하는 세포로서 정의되었다 (즉, 분비되는 단백질의 수 및 강도의 조합). 임의의 주어진 시토카인에 대한 컷오프를 0개의 세포가 존재하는 웰의 배경 수준 + 3SD에 기초하여 산출하였다. 각각의 세포의 기능 프로파일을 아는 것은 세포 다기능성에 따른 각각의 샘플의 파괴 (즉, 비분비 또는 일기능 세포와 대조적으로, 어느 정도의 백분율의 세포가 다중 시토카인을 분비하는지), 및 기능 군에 의한 샘플의 파괴 (즉, 샘플에서 세포에 의해 단일- 및 다기능 군이 분비되고 있는지, 및 그의 빈도)와 같은 다양한 다른 측정 기준의 계산을 가능하게 한다.
각각의 샘플의 PSI를 산출하였다 (Ma, C. et al. Multifunctional T-cell analyses to study response and progression in adoptive cell transfer immunotherapy. Cancer Discov 3, 418-29 (2013)).
CD4+ 및 CD8+ PSI를 각각의 공여자의 상응하는 CD19-K562 또는 NGFR-K562 자극된 샘플에 대해 산출하였다. CD4+ 및 CD8+ PSI의 평균인 전체 PSI를 또한 산출하였다.
샘플의 모든 다기능 CD4+ 세포 판독값을 분석함으로써 CD4+ PSI 계산을 수행하였다. 각각의 판독값은 신호 강도 (MFI, 무작위 형광 강도)의 n-차원 벡터 (n = 분석된 시토카인의 수)였다. 각각의 시토카인의 평균 신호 강도가 다기능 세포의 세트에 걸쳐 확인되었다. 이러한 수를 다기능 세포의 분율과 곱하여 개별 시토카인 PSI 값 (예를 들어, IL-17A CD4+ PSI)을 제공하였다. 모든 개별 시토카인 PSI 값의 합계는 샘플에 대한 전체 CD4+ PSI를 제공하였다. 동일한 계산을 수행하여 CD8+ PSI 및 각각의 시토카인의 개별 CD8+ PSI를 확인하였다. CD4+ 및 CD8+ PSI를 평균하여 각각의 샘플에 대한 전체 PSI 지수를 제공하였다. 단일기능 세포의 백분율을 시토카인의 분비 강도와 곱한 것으로 정의되는 단일기능 강도 지수, 또는 MSI 측정 기준을 또한 계산하였다.
주입-전 단일-세포 CAR T 데이터 및 임상 결과 사이의 임의의 주목할 만한 통계적으로 유의한 연관성을 이들 환자의 임상 결과 (객관적 반응, CRS, 및 NT)를 인지하여 결정하였다. 보다 구체적으로, 전체 PSI, CD4+ PSI, CD8+ PSI, IL-17A CD4+ PSI, 및 임상 결과 사이의 연관성을 결정하였다. 만 휘트니 U 검정을 사용하여 이들 연관성의 P 값을 결정하였다. 또한, 이들 단일-세포 측정 기준 (예를 들어, PSI) 및 본 문서 전반에 걸쳐 기재된 다른 주입-전 및 주입-후 측정 기준 (예를 들어, 생체내 CAR T 세포 확장, IL-15 제0일 환자 수준, 공동-배양물 및 혈청 시토카인 수준, T 세포 표현형 빈도) 사이의 임의의 연관성을 이들 측정 기준 사이에서 스피어만 상관관계를 측정함으로써 결정하였다.
CD19+ 세포에 의해 자극된 CAR 생성물 T 세포의 다기능 프로파일은 이펙터 분자, 자극/증식 시토카인, 및 케모카인에 의해 우세하였다. 주성분 분석 (PCA)을 포함한 상세한 평가는 IFN-γ, IL-8, IL-5, 그랜자임 B 및/또는 (대식세포 염증성 단백질) MIP-1α를 우세하게 분비하는 다기능 CD4+ 및 CD8+ T 세포 하위세트 둘 다를 갖는, 생성물 T 세포의 복잡하고 불균질한 기능 프로파일을 보여주었다 (도 6A, 및 6B). 특히, CD4+ T 세포 집단은 IL-17A+ 다기능 T 세포를 또한 함유하였지만, CD8+ T 세포 집단은 그렇지 않았다.
도 6A 및 6B에 제시된 바와 같이, 기능 하위세트가 주성분 분석에 의해 CD4+ 및 CD8+ 생성물 T 세포 하위세트 내에서 결정되었다. 표현은 개별 세포에 의해 생산된 시토카인을 사용하여, 다차원 공간에서 대상의 2-차원 표현으로서 클러스터링한 것에 기초한다. 생산된 시토카인에서의 유사성에 의해 규정되는 주요 다기능 하위세트는 세포에 상응하는 개별 도트를 갖는 클러스터로서 제시된다. 도트의 강도는 시토카인 생산 수준을 반영한다. CD19+ 세포로 자극되지 않은 T 세포 집단의 다기능성은 대조군과 오버레이된다 (청색, NGFR). 각각의 주요 집단, 각각 CD4 및 CD8 T 세포 내에서 가장 통상적으로 제시되는 주요 시토카인이 이러한 주성분 분석을 조직화하는데 사용되었고 (x 및 y 축에 표시됨), 각각의 클러스터를 규정하는 시토카인이 표시된다. 모든 면역학적으로 관련된 세포의 단지 약 20-25%만을 구성하는 다기능 세포의 빈도가 또한 제시된다.
전반적으로, 생성물은 광범위한 PSI 값을 나타내었고; 다기능 세포는 모든 시토카인-생산 생성물 T 세포의 단지 20-25%만을 구성하였다. 전반적인 생성물 PSI는 OR과 유의하게 연관되었다 (P = 0.0119; 도 2C). 중앙값 PSI는 비-반응자 대비 반응자의 경우에 2배만큼 높았다. 보다 높은 생성물 PSI는 또한 등급 3+ 시토카인 방출 증후군 (CRS; P = 0.0174; 도 2D)과 통계적으로 연관되었다. PSI 발견과 대조적으로, 생성물 내의 단일기능 T 세포에 상응하는 유사하게 산출된 지수는 OR, 등급 3+ NT, 또는 등급 3+ CRS와 연관성을 갖지 않았다 (데이터는 제시되지 않음). 유동 세포측정법에 의해 규정된 주요 생성물 표현형 및 공동-배양물 중 IFNγ는 임상 반응과 연관되지 않았다 (도 3A-3F).
반응 환자에서 생성물 다기능 T 세포에 의해 생산된 주요 시토카인 및 케모카인은 CD4 및 CD8 T 세포 둘 다에서의 IFNγ, MIP-1α, IL-8, CD8 T 세포에서의 그랜자임 B 및 CD4 T 세포에서의 IL-17A 및 IL-5를 포함하였다 (도 4A-4D).
놀랍게도, 이들 결과는 생성물 중 다기능 T 세포의 빈도 및 시토카인 생산 수준의 조합이 CAR T 세포를 사용한 치료에 대한 임상 반응 및 독성과 연관된다는 것을 시사한다.
생체내 CAR T 세포 수준의 측정
혈액 내의 CAR T 세포 확장을 qPCR에 의해 측정하였다. 각각의 환자에 대해, 치료 전 및 치료 후 다중 시점에 수집한 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)로부터 DNA를 추출하였다. DNA는 퀴아젠 DN이지(Qiagen DNeasy) 혈액 및 조직 키트 (퀴아젠, 독일 힐덴)를 사용하여 추출하였다. 각각의 시점으로부터의 DNA를 CAR에 대해 특이적인 프라이머 및 프로브 세트 (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems), 캘리포니아주 포스터 시티)를 사용하여 이중으로 증폭시켰다. 로슈 라이트 사이클러 480(Roche Light Cycler 480) 실시간 PCR 시스템 (로슈 다이아그노스틱스 코포레이션(Roche Diagnostics Corp), 인디애나주 인디애나폴리스)을 사용하여 실시간 PCR을 수행하였다. 각각의 환자의 주입된 T 세포로부터 동일한 환자로부터의 처리전 DNA로의 DNA의 일련의 1:5 희석물을 제조하고, 이러한 DNA에 대해 qPCR을 수행함으로써 표준 곡선을 제조하였다.
멀티플렉스 분석에 의한 공동-배양물 및 혈청 내의 시토카인의 측정
CAR T 세포 생성물과 1:1 혼합된 CD19 또는 NGFR (음성 대조군)을 발현하도록 조작된 K562 세포를 사용하여 공동-배양 실험을 수행하였다. 세포 배양 배지를 후속 분석을 위해 인큐베이션 24시간-후에 수거하였다. 31개의 분석물을 메소 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery) (MSD®; 메릴랜드주 록빌), 멀티-스폿(MULTI-SPOT)®, 및 이엠디 밀리포어(EMD Millipore) (매사추세츠주 벌링턴) 루미넥스(Luminex)® xMAP® 멀티플렉스 검정에 의해 평가하였다. 혈청 IL-15를 이엠디 밀리포어 루미넥스® xMAP® 멀티플렉스 검정을 사용하여 측정하였다. 데이터 획득 및 분석을 루미넥스 200™ 기기 및 x포텐트(xPONENT)® 3.1 데이터 분석 소프트웨어를 사용하여 수행하였다.
후성적 분석에 의한 T17 및 Treg 세포의 백분율의 평가
후성적 분석을 이전에 특징화된 방법에 기초하여 수행하였다 (Baron, U. et al. DNA demethylation in the human FOXP3 locus discriminates regulatory T cells from activated FOXP3(+) conventional T cells. Eur J Immunol 37, 2378-2389 (2007)). 게놈 DNA를 배양된 동물 세포에 대한 프로토콜에 따라 DN이지 조직 키트 (퀴아젠)를 사용하여 단리하였다. 게놈 DNA의 비술파이트 처리를 수행하였다. PCR을 1x PCR 완충제, 1U Taq DNA 폴리머라제 (퀴아젠), 200 μmol/L dNTP, 12.5 pmol의 각각의 정방향 및 역방향 프라이머, 및 7 ng 비술파이트-처리된 게놈 DNA를 함유하는 25 μL의 최종 부피로, 95℃에서 15분 동안, 및 1분 동안 95℃, 45초 동안 55℃ 및 1분 동안 72℃의 40 사이클, 및 72℃에서 10분 동안의 최종 연장 단계로 수행하였다. PCR 생성물을 ExoSAP-IT (유에스비 코포레이션(USB Corp), 오하이오주 클리블랜드)를 사용하여 정제하고, PCR 프라이머 및 ABI 빅 다이 터미네이터(ABI Big Dye Terminator) v1.1-화학 (어플라이드 바이오시스템즈)을 적용한 다음 ABI 3100 유전자 분석기 상에서의 모세관 전기영동에 의해 서열분석하였다. ESME를 사용하여 AB1 파일을 해석하였다.
유동 세포측정법에 의한 생성물 T 세포 표현형의 결정
CD4, CD8, 및 중심 기억 표현형에 대해, 유동 세포측정법에 의해 결정하였다 (Kochenderfer, et al. B-cell depletion and remissions of malignancy along with cytokine-associated toxicity in a clinical trial of anti-CD19 chimeric-antigen-receptor-transduced T cells. Blood 119, 2709-20 (2012)). CAR+ CD3+ 이벤트를 게이팅하고, 기억 마커 CCR7 및 CD45RA를 발현하는 세포의 백분율을 결정하였다. 적절한 이소형 대조군 항체를 모든 실험에서 사용하였다. 사용된 기억 항체는 항-CD45RA (이바이오사이언스(eBioscience), 캘리포니아주 샌디에고, 클론 HI100) 및 항-CCR7 (알앤디 시스템즈(R&D Systems) 클론 150503)이었다.
유전자 발현 분석
동결보존에 이어 해동시킨 세포를 비-셀(Vi-CELL) 자동화 세포 계수기 (베크만 쿨터(Beckman Coulter), 캘리포니아주 브레아)를 사용하여 나열하였다. 살아있는 세포 현탁액을, 인간 면역 반응을 프로파일링하는 770-플렉스 유전자 및 30-플렉스 단백질 발현 패널인 나노스트링 밴티지 3D RNA:단백질 면역 세포 프로파일링 패널 (워싱턴주 시애틀))로의 투입물로서 사용하였다. CD19-K562 또는 NGFR-K562 샘플의 경우, 50,000개의 세포를 RNA에 대해, 및 100,000개의 세포를 단백질에 대해 사용하였다. K562 플러스 CAR T 세포 공동-배양물의 경우, 150,000개의 세포를 RNA에 대해, 및 200,000개의 세포를 단백질에 대해 사용하였다. CAR T 세포의 경우, 300,000개의 세포를 RNA에 대해, 및 200,000개의 세포를 단백질에 대해 사용하였다. 항-CD19 CAR에 특이적인 프로브를 포함한, 191개의 추가의 면역 및 대사-관련 마커의 맞춤 유전자 발현 패널을 또한 RNA:단백질 검정을 위해 제조된 세포 용해물에 대해 전개시켰다. 미가공 데이터를 MAX 디지털 분석기로부터 n솔버(nSolver) 소프트웨어 v3.0으로 읽어들였다. 영상화, 결합 밀도, 양성 대조군 선형성, 및 검출 한계를 평가하는 표준 품질 관리 체크를 수행하였다. 패널에서 내부 양성 대조군을 사용함으로써, 미가공 유전자 및 단백질 발현 데이터를 먼저 정규화하였다. 이어서, mRNA 데이터를 일련의 안정적으로 발현된 참조 유전자의 기하 평균에 의해 추가로 정규화하고, 단백질 데이터를 일련의 안정적으로 발현된 단백질의 기하 평균에 의해 정규화하였다. 배경 미만으로 발현된 mRNA 및 단백질을 음성 대조군의 평균 + 2 표준 편차 (SD) (mRNA의 경우), 및 이뮤노글로불린 G-음성 대조군의 3x 기하 평균 (단백질의 경우)의 컷오프를 사용하여 분석으로부터 필터링하였다.
실시예 2: 생성물 PSI 및 CAR T 세포 확장 또는 CAR T 세포 주입-전 IL-15의 수준의 조합 지수는 임상 반응 및 독성과 강력하게 상관된다
주입 후, CAR T 세포는 신속하게 확장하고, 피크 수준은 처음 7-14일 내에 발생한다. 주입 후 처음 1개월 동안 피크 및 누적 수준으로서 측정된 CAR T 세포 확장은 OR 및 등급 3+ NT와 연관되었지만, 등급 3+ CRS와는 연관되지 않았다.
PSI와, 혈액 중의 피크 CAR T-세포 수준 또는 제0일 IL-15 혈청 수준의 조합 지수는 파라미터 단독에 비해 임상 결과와 유의한 연관성을 가졌다. 화학요법을 조건화하는 것에 의해 상승되는 제0일 IL-15 혈청 수준을 CAR T-세포 주입 직전에 측정하였다. OR은 CD4+ PSI 플러스 제0일 IL-15, 뿐만 아니라 IL-17A PSI 플러스 제0일 IL-15 둘 다와 연관되었다. 조합 지수는, 2개의 측정 기준을 먼저 대등한 분산을 갖도록 표준화한 후, 서로 부가함으로써 산출하였다. 이러한 표준화는 측정 기준을 그의 각각의 표준 편차로 나누어 그것을 공통 규모/스케일이 되게 함으로써 달성되었다.
PSI 및 CAR T 세포 확장을 조합한 이러한 복합 지수는 각각의 공변량 단독과 비교하여 OR과의 연관성을 개선시켰다 (P = 0.0046, 다중도에 대해 조정되지 않음) (도 5A-5E). 또한, OR은 각각 CD4+ PSI 플러스 CAR 피크 수준과 연관되었지만 (P = 0.0023), CD8+ PSI 플러스 CAR 피크 수준과는 단지 미미하게 연관되었다 (P = 0.0507; 도 7A 및 7B). 도 7A 및 7B에 제시된 바와 같이, 혈액 내의 CAR T 세포 수준 또는 혈청 내의 제0일 IL-15 수준과 함께 PSI, 및 객관적 반응 사이의 연관성. 혈액 내의 CAR T 세포 수준은 qPCR에 의해 측정되었다. PSI 및 생체내 CAR T 세포 확장을 통합한 복합 지수가 개발되었고, 이는 반응 결과와 연관되었다 (R=반응; N=반응 없음). 전체-생성물 PSI, CD4+ PSI, 및 IL-17A PSI 지수를 모두 CAR 피크 수준과 함께 평가하였다. 2개의 측정 기준을 공동 측정 기준으로 조합하여 그의 환자 결과와의 연관성을 시험하였다. 측정 기준을, 각각 먼저 단위 분산을 갖도록 표준화한 후, 서로 부가하였다. 이러한 표준화는 측정 기준을 그의 각각의 표준 편차로 나누어 그것을 공통 규모/스케일이 되게 함으로써 달성되었다. 공동 PSI 및 제0일 IL-15 수준 측정 기준이 유사하게 계산되었다. 통계값은 만 휘트니 U 검정을 사용하여 산출하였다. P 값은 다중도에 대해 조정되지 않았다.
도 8에 제시된 바와 같이, CAR 피크 수준 및 PSI 사이에 명백한 연관성이 존재하지 않았다 (도 8). PSI는 혈액 내의 CAR T 세포 수준과 연관되지 않는다. 혈액 내의 CAR T 세포 수준은 qPCR에 의해 측정되었고, 이는 PSI 또는 임상 결과 (OR, 등급 3+ NE 또는 CRS)와 상관되었다. 전체-생성물 PSI, CD4+ PSI, 및 IL-17A PSI를 나타낸다. 통계적 분석은 스피어만 상관관계 및 만 휘트니 U 검정을 사용하여 수행되었다.
PSI는 CCR7 및 CD45RA 발현에 기초하여 통상적으로 평가된 생성물 표현형과 유의하게 연관되지 않았다 (도 3A-3F). CAR 유전자 발현 수준은 T 세포 하우스키핑 분자와 함께 벌크 생성물에서의 나노스트링에 의해 측정하였다. 전반적인 PSI는 CAR mRNA 카피 및 T 세포-특이적 마커 사이의 비와 연관되는 것으로 발견되었다 (표 2). 이러한 발견은 생성물 내의 CAR 발현의 수준이 생성물 T 세포 다기능성과 연관된다는 것을 시사한다.
표 2는 PSI 및 CAR 유전자 발현 / T 세포 관련 분자의 비 사이의 연관성을 보여주며, 이들은 모두 나노스트링에 의해 정량적으로 측정되었다. CAR 유전자 발현을 CD28 CD3제타 접합부 및 scFv 각각에 대한 프로브를 사용하여 측정하였다. T 세포 관련 mRNA는 CD3D, CD3E, CD3G 및 CD6에 대한 프로브를 사용하여 측정하였다. CD3E는 또한 나노스트링에 의해 항-CD3 mAb OKT3을 사용하여 단백질 수준에서 측정하였다. PSI를 또한 T 세포 분자 단독에 대해 분석하였다. 분석은 선형 회귀에 의해 행하였다. * P < 0.05. ** P < 0.005.
표 2. PSI와의 생성물 유전자 발현 상관관계.
Figure pat00003
PSI 단독과 대조적으로, 생성물 PSI 또는 CD4+ PSI를 CAR 피크 수준과 각각 조합한 것은 등급 3+ NT와 유의하게 연관되었다 (도 9A-9F). 동일한 사전-명시된 제제를 2개의 생성물 T 세포 하위세트에 개별적으로 적용함으로써 각각의 생성물에 대해 CD4+ 및 CD8+ PSI를 계산하였다. 도 9A-9F는 혈액 내의 CAR T 세포 수준과 함께 PSI, 및 등급 3+ 신경계 독성 (NT; 도 9A-9F) 사이의 연관성을 보여준다. 도 10A-10F는 혈액 내의 CAR T 세포 수준과 함께 PSI, 및 시토카인 방출 증후군 (CRS; 도 10A-10F) 사이의 연관성을 보여준다. 혈액 내의 CAR T 세포 수준은 qPCR에 의해 측정되었고, 이는 등급 3+ 유해 사건과 상관되었다. PSI 및 생체내 CAR T 세포 확장을 통합한 복합 지수가 개발되었고, 각각 신경계 사건 (NE) 또는 CRS와 연관되었다. 전체-생성물 PSI, CD4+ PSI, 및 IL-17A PSI 지수를 모두 CAR 피크 수준과 함께 평가하였다. 2개의 측정 기준을 공동 측정 기준으로 조합하여 그의 환자 결과와의 연관성을 시험하였다. 측정 기준을, 각각 먼저 단위 분산을 갖도록 표준화한 후, 서로 부가하였다. 이러한 표준화는 측정 기준을 그의 각각의 표준 편차로 나누어 그것을 공통 규모/스케일이 되게 함으로써 달성되었다. 통계값은 만 휘트니 U 검정을 사용하여 산출하였다. P 값은 다중도에 대해 조정되지 않았다.
시토카인, 예컨대 IL-17A를 생산하는 다기능 T 세포의 하위세트가 등급 3+ NT와 연관되는지 결정하기 위해, 주어진 시토카인을 분비하는 다기능 T 세포의 백분율을 그러한 시토카인에 대한 평균 신호 강도와 곱함으로써 시토카인-특이적 PSI를 산출하였다. 이들 시토카인 PSI 값을 결과와 관련하여 분석하였다. 사후 규정된 IL-17A PSI 플러스 CAR 피크 세포 수준은 등급 3+ NT와 유의한 연관성을 가졌다 (P = 0.0007; 도 9A-9F). 개별적으로, CAR 피크 세포 수준 및 IL-17A PSI는 등급 3+ NT와 연관되었다 (각각 P = 0.0015 및 P = 0.0574). IL-17A PSI는 후성적 마킹에 의해 측정된 Th17 세포의 백분율 및 생성물 공동-배양물에서의 IL-17A 생산과 강력하게 상관되었고 (둘 다의 비교의 경우 P < 0.0001), CD4/CD8 비, T 헬퍼 (Th) 세포의 백분율, 및 생성물 공동-배양물 중의 IL-6 수준과 연관되었다 (표 3). 등급 3+ CRS는 전반적인 생성물 PSI 플러스 CAR 피크 수준과 연관되었다 (도 10A-10F).
주요 생성물 특징 및 IL-17A PSI 사이의 연관을 선형 회귀에 의해 수행하였다. CD4:CD8 비는 유동 세포측정법 측정치에 기초하여 계산하였고; % T 헬퍼 및 % Th17 세포는 후성적 분석에 기초하여 측정하였고; 생성물 및 표적 세포의 공동-배양물 중 IL-17A 및 IL-6은 ELISA에 의해 측정하였고; IL-17A PSI는 본원에 기재된 바와 같이 산출하였다. * P < 0.05. ** P < 0.005. *** P < 0.0005.
표 3. 생성물 IL-17 PSI 및 생성물 T 세포 특징 사이의 연관성.
Figure pat00004
생체내 CAR T 세포 확장과 함께, 또는 CAR T 세포 주입-전 조건화-구동된 IL-15과 함께 PSI는 객관적 반응 (OR)과 상관된다 (도 5A-5D). 제0일의 IL-15 수준과 조합된 생성물 PSI는 OR과 통계적으로 유의한 연관성을 가졌다 (P = 0.0033) (도 5E). 객관적 반응은 또한 PSI (P = 0.0119) (도 5A) 및 IL-15 (P = 0.0153) (도 5D)와 연관되었다. 그러나, PSI 및 제0일의 IL-15는 서로 통계적으로 유의한 연관성을 갖지 않았다. 또한, CD4+ PSI와 함께, 또는 IL-17A PSI와 함께 제0일의 IL-15는 또한 OR과 강력하게 연관되었다 (P < 0.0004; 도 7A 및 7B). IL-15의 제0일 수준 + IL-17A PSI는 또한 등급 3+ NT (도 11A-F) 및 CRS (도 12A-12F)와 연관되었다. 생성물 PSI는 CAR T 세포 확장, 또는 CAR T 세포 주입-전 IL-15의 수준과 함께, CAR T 세포 요법 후의 임상 결과에 공동으로 기여한다. 이들 발견은 또한 CAR T 세포 요법과 연관된, 임상 결과, 특히 NT에서의 IL-17A 다기능 T 세포의 현저한 역할을 강조한다.
혈액 내의 처리전 IL-15 수준과 함께 PSI, 및 등급 3+ NE (도 11A-11F) 또는 CRS (도 12A-12F) 사이의 연관성. 혈액 내의 IL-15 수준은 ELISA에 의해 측정되었고, 이는 등급 3+ AE와 상관되었다. PSI 및 IL-15 수준을 통합한 복합 지수는 각각 등급 3+ NE 또는 CRS와 연관되었다. 전체-생성물 PSI, CD4+ PSI, 및 IL-17A PSI는 모두 IL-15 수준과 함께 평가되었다. 통계값은 만 휘트니 U 검정을 사용하여 산출되었다. P 값은 다중도에 대해 조정되지 않았다.
SEQUENCE LISTING <110> KITE PHARMA, INC. <120> TREATMENT USING CHIMERIC RECEPTOR T CELLS INCORPORATING OPTIMIZED POLYFUNCTIONAL T CELLS <130> KPI-019WO <140> US 00/000,000 <141> 2018-04-01 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> polypeptide linker <400> 1 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly

Claims (23)

  1. 유효 용량의, 1종 이상의 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 T 세포를 포함하며, 여기서 유효 용량은 다기능 T 세포의 미리 결정된 양을 포함하는 것인, 환자에서 림프종을 치료하기 위한 제약 조성물로서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 다기능 강도 지수(PSI)를 사용하여 결정되고, PSI는 단백질 강도 및 그러한 단백질을 발현하는 다기능 세포의 백분율을 합체하며, 다기능 세포는 항원에 의해 자극된 경우에 IL-17알파, IL-8, 및/또는 IFN-감마를 분비하는 CD4+ T 세포 및/또는 그랜자임 B, IFN-감마, IL-8, 및/또는 MIP-1알파를 분비하는 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 제약 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양이 15% 초과, 20% 초과, 20% 초과, 25% 초과, 30% 초과의 다기능 T 세포인 제약 조성물.
  3. 제1항에 있어서, PSI가 다기능 세포의 백분율을 다기능 세포에 의해 분비된 단백질의 평균 형광 강도의 합계와 곱하는 것에 의해 계산된 것인 제약 조성물.
  4. 제1항 또는 제3항에 있어서, PSI가 250, 350, 450, 또는 550 초과인 제약 조성물.
  5. 제1항 또는 제3항에 있어서, PSI가 (i) 다기능 T 세포의 목적하는 백분율을 결정하는 단계; 및 (ii) 미리 결정된 시토카인 프로파일을 수득하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득되는 것인 제약 조성물.
  6. 제1항 또는 제3항에 있어서, 유효 용량이 PSI x 주입된 T 세포의 단위로 적어도 3.5 x 1010개 또는 적어도 7.7 x 1010개를 포함하는 것인 제약 조성물.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양이 적어도 2.4 x 107개 또는 적어도 4.2 x 107개의 다기능 T 세포를 포함하는 것인 제약 조성물.
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 유효 용량이 종양 부담에 비례하여 조정되는 것인 제약 조성물
  9. 유효 용량의, 1종 이상의 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 T 세포를 포함하며, 여기서 유효 용량은 다기능 T 세포의 미리 결정된 양을 포함하는 것인, 환자에서 림프종을 치료하기 위한 제약 조성물로서, 다기능 T 세포의 미리 결정된 양은 PSI 및 T 세포 주입 전 IL-15의 환자 혈청 수준 측정 기준을 포함하는 복합 지수를 사용하여 결정되고, PSI는 단백질 강도 및 그러한 단백질을 발현하는 다기능 세포의 백분율을 합체하며, 다기능 세포는 항원에 의해 자극된 경우에 IL-17알파, IL-8, 및/또는 IFN-감마를 분비하는 CD4+ T 세포 및/또는 그랜자임 B, IFN-감마, IL-8, 및/또는 MIP-1알파를 분비하는 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 제약 조성물.
  10. 제9항에 있어서, PSI 및 T 세포 주입 전 IL-15의 환자 혈청 수준이 각각의 측정 기준을 그의 각각의 표준 편차로 나누는 것에 의해 표준화는 것인 제약 조성물.
  11. 제9항에 있어서, 복합 지수가 3 초과인 제약 조성물.
  12. 제5항에 있어서, 미리 결정된 시토카인 프로파일을 수득하는 단계가 그랜자임 B, IFN-감마, MIP1a, 퍼포린, TNFa, TNFb, GMCSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21, CCI-11, IP-10, MIP1b, RANTES, IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-b1, SCD137, SCD40L, IL-1b, IL-6, IL-17a, IL-17f, MCP-1, 및 MCP-4 중 적어도 1종을 측정하는 것을 포함하는 것인 제약 조성물.
  13. 제5항에 있어서, 미리 결정된 시토카인 프로파일을 수득하는 단계가 그랜자임 B, IFN-감마, MIP1a, 퍼포린, TNFa, TNFb, GMCSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21, CCI-11, IP-10, MIP1b, RANTES, IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-b1, SCD137, SCD40L, IL-1b, IL-6, IL-17a, IL-17f, MCP-1, 및 MCP-4 중 적어도 2종을 측정하는 것을 포함하는 것인 제약 조성물.
  14. 제1항 내지 제3항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체가 종양 항원을 표적화하는 것인 제약 조성물.
  15. 제1항 내지 제3항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체가 종양-연관 표면 항원, 5T4, 알파태아단백질 (AFP), B7-1, CD80, B7-2, CD86, BCMA, B-인간 융모성 고나도트로핀, CA-125, 암배아성 항원 (CEA), CD123, CD133, CD138, CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD30, CD33, CD34, CD4, CD40, CD44, CD56, CD8, CLL-1, c-Met, CMV-특이적 항원, CS-1, CSPG4, CTLA-4, DLL3, 디시알로강글리오시드 GD2, 관-상피 뮤신, EBV-특이적 항원, EGFR 변이체 III (EGFRvIII), ELF2M, 엔도글린, 에프린 B2, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), 상피 세포 부착 분자 (EpCAM), 상피 종양 항원, ErbB2, HER2/neu, 섬유모세포 연관 단백질, fap, FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 신경교종-연관 항원, 글리코스핑고지질, gp36, HBV-특이적 항원, HCV-특이적 항원, HER1-HER2, HER2-HER3 조합, HERV-K, 고분자량-흑색종 연관 항원 (HMW-MAA), HIV-1 외피 당단백질 gp41, HPV-특이적 항원, 인간 텔로머라제 리버스 트랜스크립타제, IGFI 수용체, IGF-II, IL-11R알파, IL-13R-a2, 인플루엔자 바이러스-특이적 항원, CD38, 인슐린 성장 인자 (IGFl)-l, 장 카르복실 에스테라제, 카파 쇄, LAGA-la, 람다 쇄, 라사 바이러스-특이적 항원, 렉틴-반응성 AFP, 계통-특이적 또는 조직 특이적 항원, CD3, MAGE, MAGE-A1, 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자, 종양-특이적 펩티드 에피토프를 제시하는 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자, M-CSF, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, 메소텔린, MN-CA IX, MUC-1, mut hsp70-2, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 호중구 엘라스타제, NKG2D, Nkp30, NY-ESO-1, p53, PAP, 프로스타제, 전립선 특이적 항원 (PSA), 전립선-암종 종양 항원-1 (PCTA-1), 전립선-특이적 항원 단백질, STEAP1, STEAP2, PSMA, RAGE-1, ROR1, RU1, RU2, AS, 표면 부착 분자, 서바이빙 및 텔로머라제, TAG-72, 피브로넥틴의 엑스트라 도메인 A (EDA) 및 엑스트라 도메인 B (EDB) 및 테나신-C의 Al 도메인 (TnC Al), 티로글로불린, 종양 기질 항원, 혈관 내피 성장 인자 수용체-2 (VEGFR2), 바이러스-특이적 표면 항원, HIV-특이적 항원, HIV gpl20, 뿐만 아니라 이들 표면 마커의 임의의 유도체 또는 변이체로부터 선택된 종양 항원을 표적화하는 것인 제약 조성물.
  16. 제1항 내지 제3항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체가 CD19를 특이적으로 표적화하는 것인 제약 조성물.
  17. 제1항 내지 제3항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체가 키메라 항원 수용체 (CAR)인 제약 조성물.
  18. 제1항 내지 제3항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체가 T 세포 수용체 (TCR)인 제약 조성물.
  19. 제1항 내지 제3항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 림프종이 호지킨병, 비-호지킨 림프종 (NHL), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 형질전환된 여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), T-세포 림프종, 버킷 림프종, 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 형질모구성 림프종, 또는 그의 조합인 제약 조성물.
  20. 제1항 내지 제3항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 림프종이 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격 대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 형질전환된 여포성 림프종, 여포성 림프종, 및 외투 세포 림프종인 제약 조성물.
  21. 제1항 내지 제3항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 림프종이 비-호지킨 림프종인 제약 조성물.
  22. 제17항에 있어서, 다기능 CAR T 세포가 적어도 2종의 단백질 또는 시토카인을 한 번에 공동-분비하고, 단백질 또는 시토카인이 그랜자임 B, IFN-감마, MIP1a, 퍼포린, TNFa, TNFb, GMCSF, IL-2, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12, IL-15, IL-21, CCI-11, IP-10, MIP1b, RANTES, IL-4, IL-10, IL-13, IL-22, TGF-b1, SCD137, SCD40L, IL-1b, IL-6, IL-17a, IL-17f, MCP-1, 및 MCP-4 중 1종 이상을 포함하는 것인 제약 조성물.
  23. 제1항 내지 제3항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 림프종이 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격 대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 형질전환된 여포성 림프종, 여포성 림프종, 및 외투 세포 림프종 중 적어도 1종으로부터 선택된 것인 제약 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR20250006980A (ko) * 2017-09-15 2025-01-13 카이트 파마 인코포레이티드 관리 연속성 및 신원 연속성 생물학적 샘플 추적으로 환자-특이적 면역요법 절차를 수행하기 위한 방법 및 시스템
TWI856961B (zh) 2018-06-01 2024-10-01 美商凱特製藥公司 嵌合抗原受體t細胞療法
JP7278379B2 (ja) 2018-11-29 2023-05-19 ヴィネティ インク． 集中型及び分散型の個別化医薬プラットフォーム
US11321652B1 (en) 2019-02-20 2022-05-03 Vineti Inc. Smart label devices, systems, and methods
CN111690730B (zh) * 2019-03-14 2024-02-09 中国科学院上海巴斯德研究所 Il-8阳性初始t细胞作为诊断胸腺占位性疾病的靶点的应用
CA3154819A1 (en) * 2019-10-16 2021-04-22 I. Caroline LE POOLE Materials and methods for treating vitiligo
KR102673828B1 (ko) 2020-01-23 2024-06-10 주식회사 강스템바이오텍 off-the-shelf 줄기세포 및 면역세포, 이를 포함하는 약학적 조성물
IL297442A (en) 2020-04-22 2022-12-01 Iovance Biotherapeutics Inc Systems and methods for coordinating production of cells for patient-specific immunotherapy
US11615874B1 (en) 2021-09-30 2023-03-28 Vineti Inc. Personalized medicine and therapies platform

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5728388A (en) 1989-10-03 1998-03-17 Terman; David S. Method of cancer treatment
US6319494B1 (en) 1990-12-14 2001-11-20 Cell Genesys, Inc. Chimeric chains for receptor-associated signal transduction pathways
IL104570A0 (en) 1992-03-18 1993-05-13 Yeda Res & Dev Chimeric genes and cells transformed therewith
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
US6406699B1 (en) 1999-10-05 2002-06-18 Gary W. Wood Composition and method of cancer antigen immunotherapy
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
BR0108545A (pt) 2000-02-24 2004-06-29 Xcyte Therapies Inc Estimulação e concentração simultâneas das células
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
GB0700058D0 (en) 2007-01-03 2007-02-07 Scancell Aps Anti-tumor vaccine based on normal cells
PH12013501201A1 (en) 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
KR20140004174A (ko) 2011-01-18 2014-01-10 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 암 치료를 위한 조성물 및 방법
CA2830953C (en) 2011-03-23 2023-02-28 Fred Hutchinson Cancer Research Center Method and compositions for cellular immunotherapy
EP2532740A1 (en) 2011-06-11 2012-12-12 Michael Schmück Antigen-specific CD4+ and CD8+ central-memory T cell preparations for adoptive T cell therapy
EA201490636A1 (ru) 2011-09-16 2014-08-29 Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания Сконструированные с помощью рнк t-клетки для лечения злокачественных новообразований
KR20140127816A (ko) 2012-02-22 2014-11-04 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 암의 치료에 유용한 t 세포의 지속성 집단을 생성시키기 위한 조성물 및 방법
US10117896B2 (en) 2012-10-05 2018-11-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of a trans-signaling approach in chimeric antigen receptors
DK3888674T3 (da) * 2014-04-07 2024-07-08 Novartis Ag Behandling af cancer ved anvendelse af anti-cd19-kimær antigenreceptor
ES2944962T3 (es) 2015-05-28 2023-06-27 Us Health Métodos de diagnóstico para tratamiento con linfocitos T
EA201792649A1 (ru) 2015-05-28 2018-06-29 Кайт Фарма, Инк. Способы кондиционирования пациентов для t-клеточной терапии
US20200166518A1 (en) * 2016-09-12 2020-05-28 IsoPlexis Corporation System and methods for multiplexed analysis of cellular and other immunotherapeutics

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