KR20210138033A

KR20210138033A - 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체

Info

Publication number: KR20210138033A
Application number: KR1020217031687A
Authority: KR
Inventors: 라즈쿠마르 가네산; 이크발 에스. 그루얼; 마누엘 알렌한드로 세풀베다
Original assignee: 얀센 바이오테크 인코포레이티드
Priority date: 2019-03-11
Filing date: 2020-03-11
Publication date: 2021-11-18
Also published as: JP2022523442A; WO2020183245A2; MX2021010857A; WO2020183245A3; US20220127359A1; BR112021017801A2; EP3937977A2; US12264197B2; AU2020235475A1; CA3132916A1; MA55305A; CN113874400A; CN113874400B; JP2024170426A; JP7566766B2; IL286147A

Abstract

항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 기재된다. 또한, 상기 항체를 인코딩하는 핵산, 상기 항체를 포함하는 조성물, 상기 항체의 생성 방법, 및 상기 항체의 사용 방법이 기재된다.

Description

항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체

관련 출원과의 상호 참조

본 출원은 2019년 3월 11일자로 출원된 미국 가출원 제62/816,464호에 대한 우선권을 주장하며, 이 출원의 개시내용은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.

기술분야

본 발명은 단일클론 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체, 상기 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 상기 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 상기 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 항체의 제조 방법, 및 상기 항체를 사용하여 암 세포를 사멸하는 방법이 또한 제공된다.

전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조

본 출원은 파일명이 "PRD4012WOPCT Sequence Listing"이고, 작성일이 2020년 3월 11일이며, 크기가 85 kb인 ASCII 포맷 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-웹을 통해 제출된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.

세포독성 T 세포(예를 들어, CD8⁺ T 세포)는 암 세포를 직접 사멸하는 데 이용될 수 있다. 세포독성 T 세포를 암 세포로 유도하는 방법을 찾는 것은 그러한 세포의 사멸 및 암 세포 전파의 억제로 이어질 수 있다. 세포독성 T 세포는 암-관련 항원을 발현하는 암 세포에 대해 활성화될 수 있는 것으로 입증되어 왔는데, 이는, 상기 세포독성 T 세포를 세포독성 T 세포 및 암 세포 둘 모두에 결합하는 이중특이성 항체를 사용하여 장기간 동안 암 세포에 근접시킴으로써 이루어진다. 암 세포를 사멸하는 이러한 접근법에 대한 다양한 잠재적인 복잡한 문제가 존재하는데, 이에는, 예를 들어, T 세포, 및 T 세포 활성화를 매개하는 암 세포 항원의 선택, 이중특이성 항체와 관련하여 결합을 매개하기에 충분한 친화도를 갖게 될 모 항체(parental antibody)의 선택, 및 비특이적 T 세포 활성화를 유도하기보다는, 암 세포에 대해 특이적으로 작용하는 T 세포를 활성화하게 될 암 세포 항원의 선택이 있다. 이들 복잡한 문제는 동물 대상체에서 암 세포를 파괴하기 위해 T 세포를 활성화하기 위해 시도하는 상황에서만 더 심각해진다.

T 세포와 관련된 항원인 Vβ17, 및 암 세포와 관련된 항원인 CD123에 결합할 수 있는 이중특이성 항체가 본 명세서에 제공된다. 세포독성 T 세포는 ®- 및 β-사슬로 이루어진 T 세포 수용체, 예컨대 Vβ17을 발현한다. Vβ17 및 암-관련 항원, 예컨대 CD123에 결합하는 이중특이성 항체는 세포독성 T 세포를 항원-발현 암 세포로 유도할 수 있는 것으로 가정된다. 이러한 종류의 이중특이성 항체를 이용하여 세포독성 T 세포를 항원-발현 암 세포로 동원하거나 재유도함으로써 T 세포가 암 세포를 사멸할 수 있게 할 수 있다.

일반적인 일 태양에서, 본 발명은 Vβ17 및 CD123에 결합하는 단리된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.

단리된 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공된다. 단리된 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은

a. 제1 중쇄(HC1);

b. 제2 중쇄(HC2);

c. 제1 경쇄(LC1); 및

d. 제2 경쇄(LC2)를 포함하며,

HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 소정 실시 형태에서, 제1 항원에 대한 결합 부위는 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포의 표면 상에 존재하는 Vβ17에 결합한다. 소정 실시 형태에서, 제2 항원에 대한 결합 부위는 암 세포의 표면 상에 존재하는 종양 항원에 결합한다.

소정 실시 형태에서, CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포의 표면 상에 존재하는 Vβ17 및 암 세포의 표면 상에 존재하는 종양 항원에 대한 이중특이성 항체의 결합은 암 세포의 사멸을 가져온다.

소정 실시 형태에서, HC2 및 LC2는 CD123에 결합한다.

소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG 동종형(isotype), 예컨대 IgG4이다.

소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 0.2 pM 미만의 EC₅₀으로 시험관내(in vitro)에서 암 세포의 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T-세포 의존성 세포독성을 유도한다.

단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 또한 제공된다. 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은

a. 제1 중쇄(HC1);

b. 제2 중쇄(HC2);

c. 제1 경쇄(LC1); 및

d. 제2 경쇄(LC2)를 포함하며,

HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, Vβ17에 특이적으로 결합하는 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2는 각각 서열 번호 34, 서열 번호 35, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC2는 각각 서열 번호 37, 서열 번호 38, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, CD123에 특이적으로 결합하는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 소정 실시 형태에서, HC1은 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하고 LC1은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하고 LC2는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 소정 실시 형태에서, Vβ17은 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, CD123은 암 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 0.2 pM 미만의 EC₅₀으로 시험관내에서 암 세포의 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T-세포 의존성 세포독성을 유도한다.

소정 실시 형태에서, 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 키메라, 부분 인간화, 또는 완전 인간화 형태이다.

단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 또한 제공된다. 단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 28의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함한다.

본 명세서에 개시된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이 또한 제공된다.

본 명세서에 개시된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터가 또한 제공된다.

본 명세서에 개시된 단리된 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다.

Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 본 명세서에 개시된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함한다. Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계는 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 암 세포로 유도할 수 있다.

암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 암 세포를 본 명세서에 개시된 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 암 세포를 본 기재된 항체와 접촉시키는 단계는, 예를 들어, 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하거나, 또는 암 세포의 T 세포-매개 사멸을 촉진시킬 수 있다.

본 명세서에 개시된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생성 방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 이중특이성 항체의 하나의 중쇄와 경쇄 쌍을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 중쇄 및 경쇄 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 조건 하에서 배양하는 단계, 및 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 세포 또는 배양물로부터 회수하는 단계를 포함한다. 이중특이성 항체의 양쪽 아암(arm)을 위한 중쇄 및 경쇄의 수집 후에, 자기-조립(self-assembly)을 가능하게 하기에 적합한 조건에서 중쇄와 경쇄 쌍을 혼합하며, 이후에 자기-조립된 이중특이성 항체를 수집한다.

본 명세서에 개시된 이중특이성 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 조성물, 예컨대 완충 조성물 또는 정제된 조성물 등을 생성하는 방법이 또한 제공된다. 예를 들어, 상기 방법은 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을, 이중특이성 항체의 저장 및 사용을 위해 허용가능한 완충액과 배합하는 단계를 포함할 수 있다.

본 명세서에 개시된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트가 또한 제공된다.

전술한 개요뿐만 아니라, 본 출원의 바람직한 실시 형태의 하기의 상세한 설명도 첨부 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 그러나, 본 출원은 도면에 나타낸 정확한 실시 형태로 제한되지 않음이 이해되어야 한다.
도 1은 항-Vβ17/항-종양 항원 이중특이성 항체의 결합이 T-세포를 암 세포로 동원하여 암 세포 사멸을 유도하는 것을 보여주는 개략도를 나타낸다.
도 2a 및 도 2b는 Vβ17⁺ CD8⁺ T 세포가 건강한 대상체에 존재하며 M1 펩티드와 함께 배양 시에 이들 세포는 시험관내에서 증폭될 수 있음을 보여준다. 도 2a는 건강한 대상체로부터의 세포 표면 상에서 Vβ17을 발현하는(Vβ17+) CD8+ T 세포에 대한 게이팅된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 FACS 히스토그램을 나타낸다. 도 2b는 다양한 공여자의 HLA 아형, 및 일수 0에서, 그리고 14일 동안 M1 펩티드에 의한 시험관내 증폭 후(일수 14)에 확인되는 % Vβ17⁺ CD8⁺ T 세포의 존재를 나타낸다.
도 3은 Vβ17⁺ CD8⁺ T 세포가 살해 세포독성 세포의 특징을 가짐을 나타낸다. 막대 그래프는 일수 0(M1 없음)에서 그리고 M1 펩티드에 의한 자극 후 일수 14(+M1)에서 세포 표면 상에서 Vβ17을 발현하는(Vβ17⁺) CD8⁺ T 세포에 대한 게이팅된 PBMC 상에서의 CD107a, CD69, 그랜자임 B(Gzb) 및 인터페론-γ(IFNγ)의 발현을 나타낸다.
도 4는 CD8⁺ T 세포에 대한 VB11[항-Vβ17/항-CD123] 이중특이성 항체뿐만 아니라 VB13[Vβ17 널 대조 이중특이성] 항체의 결합을 나타낸다. 데이터는 3명의 상이한 공여자(D203517, HPU09381 및 HPU08694)로부터의 PBMC로부터 단리된 CD8⁺ T 세포로부터 제시되었다. 각각의 그래프 아래에 있는 표는 결합에 대한EC₅₀ 값(단위: nM)을 나타낸다.
도 5는 AML 암 세포주에 대한 Vβ17 및 CD123 이중특이성 항체(VB11)뿐만 아니라 Vβ17 널 대조 이중특이성 항체(VB13)의 결합을 나타낸다. 제시된 데이터는 Kasumi3 AML 세포주에 대한 이중특이성 항체의 결합을 나타낸다. 그래프 아래에 있는 표는 결합에 대한EC₅₀ 값(단위: nM)을 나타낸다.
도 6은 AML 암 세포의 효율적인 사멸을 유도하는 이중특이성 항체에 의한 Vβ17⁺ T 세포의 재유도를 나타낸다. 좌측 그래프의 데이터는 이펙터 대 표적(E:T) 비 0.5:1 및 이중특이성 항체의 용량 적정에서의 Kasumi3 암 세포의 사멸을 나타낸다. 중간 그래프의 데이터는 E:T 비 1:1 및 이중특이성 항체의 용량 적정에서의 Kasumi3 암 세포의 사멸을 나타낸다. 우측 그래프의 데이터는 E:T 비 5:1 및 이중특이성 항체의 용량 적정에서의 Kasumi3 암 세포의 사멸을 나타낸다. 그래프의 아래에 있는 표는 상기 그래프로부터 계산된 EC₅₀ 값(단위: pM으로 제공됨)을 나타낸다.
도 7a 및 도 7b는 PBMC로부터 단리된 CD8⁺ T 세포에 대한 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체(VB11) 및 Vβ17 널 이중특이성 항체(VB13)의 특이적 결합을 나타낸다. 도 7a는 건강한 대상체로부터의 세포 표면 상에서 Vβ17을 발현하는(Vβ17⁺) CD8⁺ T 세포에 대한 게이팅된 PBMC의 FACS 히스토그램(좌측 그래프, Vβ17이 고갈되지 않음) 및 음성 선택을 사용하여 Vβ17⁺ T 세포가 고갈된 PBMC로부터의 히스토그램(우측 그래프, Vβ17이 고갈됨)을 나타낸다. 도 7b는 도 7a로부터의 CD8⁺ T 세포에 대한 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체(VB11) 및 Vβ17 널 이중특이성 항체(VB13)의 특이적 결합을 나타낸다. 이중특이성 항체의 용량 반응이 이 도면에 나타나 있다. 그래프의 아래에 있는 표는 상기 그래프로부터 계산된 결합에 대한 EC₅₀ 값(단위: pM으로 제공됨)을 나타낸다.
도 8은 Kasumi3 암 세포의 사멸을 위한 Vβ17-이중특이성 항체에 의한 Vβ17 T 세포의 특이적 동원을 나타낸다. 좌측 도면은 이펙터 세포가 세포 표면 상에서 Vβ17을 발현하는(Vβ17⁺) CD8⁺ T 세포(접촉되지 않은 CD8 T 세포)를 함유하는 PBMC로부터 단리되었을 때의 Kasumi3 AML 세포주의 사멸을 나타낸다. 삽입도는 이펙터 세포 집단에서의 10.1% Vβ17⁺ CD8 T 세포의 존재를 나타낸다. 우측 도면은 이펙터 CD8⁺ T 세포가 PBMC로부터 단리되었지만 Vβ17⁺ T 세포가 음성 선택에 의해 고갈되었을 때의 Kasumi3 AML 세포주의 사멸을 나타낸다. 삽입도는 이펙터 세포 집단에서의 소집단(0.086%) Vβ17⁺ CD8⁺ T 세포의 존재를 나타낸다.
도 9a 및 도 9b는 Vβ17 이중특이성 항체를 사용할 때 T 세포의 pan 활성화가 없음을 나타낸다. 도 9a는 Vβ17⁺ 및 Vβ17^- 게이팅된 CD8⁺ T 세포의 FACS 플롯을 나타낸다. T 세포가 Vβ17 이중특이성 항체에 의해 활성화되었을 때, Vβ17^- CD8⁺ T 세포(1.80%)와 대비하여 Vβ17⁺ CD8⁺ T 세포 상에서의 CD69의 고수준의 상향조절(62.5%)이 있었다. 도 9b는 Vβ17 이중특이성 항체를 사용하여 활성화되었을 때 Vβ17⁺ 및 Vβ17^- 게이팅된 CD8⁺ T 세포 상에서의 CD69의 상향조절에 대한 막대 그래프를 나타낸다.
도 10은 HLA A2 음성 공여자로부터의 Vβ17⁺ T 세포가 또한 이펙터 살해 세포이고 Vβ17⁺ 세포의 사전자극을 필요로 하지 않음을 나타낸다. Kasumi3 암 세포의 Vβ17 이중특이성 항체에 의해 매개되는 효율적인 세포독성이 HLA A2 음성 공여자(HPU 09381)로부터의 Vβ17⁺ T 세포를 함유하는 PBMC로부터 확인된다.

본 명세서에 포함된 문헌, 행동, 재료, 디바이스, 물품 등에 대한 논의는 본 발명에 대한 상황을 제공하는 것을 목적으로 한다. 그러한 논의는 이들 대상 중 임의의 것 또는 모든 것이 개시되거나 청구된 임의의 발명에 대하여 종래 기술의 일부를 형성하는 것을 인정하는 것은 아니다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 그렇지 않으면, 본 명세서에 사용되는 소정의 용어는 본 명세서에 제시된 바와 같은 의미를 갖는다.

달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치 값은 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 수치 값은 전형적으로 인용된 값의 ±10%를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1% 내지 10% (w/v)의 농도 범위는 0.9% (w/v) 내지 11% (w/v)를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 문맥이 명백히 달리 지시하지 않는 한, 수치 범위의 사용은 모든 가능한 하위범위, 그 범위 내의 모든 개별 수치 값, 예를 들어 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분율을 명시적으로 포함한다.

달리 지시되지 않는 한, 일련의 요소 앞의 용어 "적어도"는 일련 내의 각각의 모든 요소를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 당업자는 단지 일반적인 실험을 사용하여, 본 명세서에서 설명된 본 발명의 구체적인 실시 형태에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 그러한 등가물은 본 발명에 의해 포함되도록 의도된다.

본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태(부정 관사 및 정관사)는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하다", "포함하는", "구비하다", "구비하는", "갖는다", "갖는", "함유하다" 또는 "함유하는", 또는 이들의 임의의 다른 변형은 언급된 정수 또는 정수들의 군의 포함을 내포하지만 임의의 다른 정수 또는 정수들의 군의 배제를 내포하지 않는 것으로 이해될 것이며, 비배타적 또는 개방형(open-ended)인 것으로 의도된다. 예를 들어, 요소들의 목록을 포함하는 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품, 또는 장치는 반드시 그러한 요소들만으로 제한되지는 않고, 그러한 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품, 또는 장치에 고유하거나 명시적으로 열거되어 있지 않은 다른 요소들을 포함할 수 있다. 또한, 명시적으로 반대로 기재되어 있지 않는 한, "또는"은 배타적 '또는'이 아니라 포괄적 '또는'을 지칭한다. 예를 들어, 조건 A 또는 B는 하기 중 어느 하나에 의해 만족된다: A가 참(또는 존재함)이고 B가 거짓(또는 존재하지 않음)임, A가 거짓(또는 존재하지 않음)이고 B가 참(또는 존재함)임, A 및 B 둘 모두가 참(또는 존재함)임.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 다수의 언급된 요소들 사이의 접속 용어 "및/또는"은 개별 선택지 및 조합된 선택지 둘 모두를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 2개의 요소들이 "및/또는"에 의해 결합되는 경우, 제1 선택지는 제2 요소 없이 제1 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제2 선택지는 제1 요소 없이 제2 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제3 선택지는 제1 요소와 제2 요소가 함께 적용가능함을 지칭한다. 이들 선택지 중 어느 것이든 하나는 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 본 명세서에 사용되는 바와 같이 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다. 이들 선택지 중 하나 초과의 동시 적용가능성 또한 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다.

또한, 본 명세서에서 바람직한 발명의 구성요소의 치수 또는 특성을 언급할 때 사용되는 용어 "약", "대략", "대체로", "실질적으로" 및 유사한 용어들은 기재된 치수/특성이 엄격한 경계 또는 파라미터가 아니고, 그로부터 기능적으로 동일하거나 유사한 사소한 변동은 배제하지 않음을 나타낸다는 것이 이해되어야 하며, 이는 당업자에 의해 이해되는 바와 같을 것이다. 최소한으로, 수치 파라미터를 포함하는 그러한 언급은 당업계에서 허용되는 수학적 및 산업적 원리(예를 들어, 반올림, 측정 오차 또는 다른 계통 오차, 제조 공차 등)를 사용하여, 최소 유효 숫자를 변화시키지 않게 될 변형을 포함할 것이다.

2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열(예를 들어, 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 및 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, Vβ17 폴리펩티드 및 이를 인코딩하는 Vβ17 폴리뉴클레오티드, CD123 폴리펩티드 및 이를 인코딩하는 CD123 폴리뉴클레오티드)과 관련하여, 용어 "동일한" 또는 퍼센트 "동일성"은, 시각적 검사에 의해, 또는 하기 서열 비교 알고리즘들 중 하나를 사용하여 측정되는 바와 같이, 최대 일치도(maximum correspondence)에 대해 비교되고 정렬될 때, 동일하거나, 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 명시된 백분율을 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다.

서열 비교를 위하여, 전형적으로 하나의 서열이 시험 서열의 비교 대상이 되는 참조 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 시험 서열 및 참조 서열을 컴퓨터에 입력하고, 필요에 따라 하위서열 좌표를 지정하고, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터를 지정한다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 파라미터에 기초하여, 참조 서열과 대비하여 시험 서열(들)에 대한 퍼센트 서열 동일성을 계산한다.

비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 예를 들어 스미스 및 워터만 (문헌[Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)])의 국부 상동성 알고리즘에 의해, 니들만 및 분쉬 (문헌[Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)])의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 피어슨 및 립만 (문헌[Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)])의 유사성 검색 방법에 의해, 이들 알고리즘의 전산화 구현 (미국 위스콘신주 매디슨, 575 사이언스 드라이브 소재의 Genetics Computer Group의 Wisconsin Genetics Software Package의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의해, 또는 시각적 검사(전반적으로, 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., (1995 Supplement) (Ausubel)] 참조)에 의해 수행될 수 있다.

퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사성을 결정하기에 적합한 알고리즘의 예는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이며, 이들은 각각 문헌[Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410] 및 문헌[Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402]에 기재되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information)를 통해 공개적으로 입수가능하다. 이 알고리즘은 먼저, 데이터베이스 서열에서 동일한 길이의 단어와 정렬될 때 일부 양성-값의 임계치 점수 T와 일치하거나 이를 만족하는, 질의 서열에서 길이 W의 짧은 단어를 식별함으로써 높은 점수의 서열 쌍(HSP: high scoring sequence pair)을 식별하는 단계를 수반한다. T는 이웃 단어 점수 임계치(상기 문헌[Altschul 등])로 지칭된다. 이들 초기 이웃 단어 히트는 검색을 개시하여 이들을 함유하는 더 긴 HSP를 찾기 위한 종자로서 작용한다. 이어서, 누적 정렬 점수가 증가될 수 있는 한, 각각의 서열을 따라 양 방향으로 단어 히트를 연장한다.

뉴클레오티드 서열의 경우, 누적 점수를 파라미터 M(일치하는 잔기 쌍에 대한 보상 점수; 항상 >0) 및 N(일치하지 않는 잔기에 대한 페널티 점수; 항상 <0)을 사용하여 계산한다. 아미노산 서열의 경우, 점수 매트릭스를 사용하여 누적 점수를 계산한다. 각 방향으로의 단어 히트의 연장은, 누적 정렬 점수가 이의 달성된 최대 값으로부터 X의 양만큼 떨어질 때; 누적 점수가 하나 이상의 음성-점수 잔기 정렬의 집적으로 인해 0 또는 그 아래가 될 때; 또는 서열의 말단에 도달할 때 중단된다. BLAST 알고리즘 파라미터 W, T 및 X는 정렬의 감도와 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램(뉴클레오티드 서열용)은 디폴트로 11의 단어 길이(W), 10의 기대치(E), M=5, N=-4 및 두 가닥의 비교를 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 디폴트로 3의 단어 길이(W), 10의 예상치(E) 및 BLOSUM62 점수 매트릭스(문헌[Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)] 참조)를 사용한다.

퍼센트 서열 동일성을 계산하는 단계에 더하여, BLAST 알고리즘은 또한 2개의 서열 사이의 유사성의 통계적 분석을 수행한다(예를 들어, 문헌[Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993)] 참조). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 일 척도는 최소 합계 확률(P(N))이며, 이는 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 일치가 우연히 발생할 확률의 지표를 제공한다. 예를 들어, 참조 핵산에 대한 시험 핵산의 비교에서 최소 합계 확률이 약 0.1 미만, 더욱 바람직하게는 약 0.01 미만, 가장 바람직하게는 약 0.001 미만인 경우, 핵산은 참조 서열과 유사한 것으로 간주된다.

2개의 핵산 서열 또는 폴리펩티드가 실질적으로 동일하다는 추가의 지표는, 하기에 기재된 바와 같이, 제1 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드가 제2 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드와 면역학적으로 교차 반응성이라는 것이다. 따라서, 폴리펩티드가 전형적으로 제2 폴리펩티드와 실질적으로 동일한 경우는, 예를 들어 이들 2개의 펩티드가 보존적 치환에 의해서만 상이한 경우뿐이다. 2개의 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 다른 지표는 2개의 분자가 엄격한 조건 하에서 서로 혼성화되는 것이다.

항체

단리된 항-Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 상기 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 상기 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 상기 항체를 포함하는 조성물이 본 명세서에 기재된다. 본 발명은 추가로, 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 상기 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 상기 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 상기 이중특이성 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 항체의 제조 방법, 및 상기 항체를 사용하여 암을 포함한 질병을 치료하기 위한 방법이 또한 제공된다. 본 명세서에 개시된 항체는 Vβ17 및/또는 CD123에 대한 높은 친화도 결합, Vβ17 및/또는 CD123에 대한 높은 특이성, 및 단독으로 또는 다른 항암 요법과 병용하여 투여될 때 암을 치료하거나 예방하는 능력을 포함하지만 이로 한정되지 않는 하나 이상의 바람직한 기능적 특성을 보유한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항체"는 넓은 의미로 사용되며, 단일클론 또는 다중클론인 인간 항체, 인간화 항체, 복합 항체 및 키메라 항체 및 항체 단편을 포함한 면역글로불린 또는 항체 분자를 포함한다. 일반적으로, 항체는 특정 항원에 대하여 결합 특이성을 나타내는 단백질 또는 펩티드 사슬이다. 항체 구조는 잘 알려져 있다. 면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라, 5개의 주요 분류(즉, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM)로 정해질 수 있다. IgA 및 IgG는 동종형 IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 추가로 하위분류된다. 척추동물 종의 항체 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 2개의 명확하게 구별되는 유형, 즉 카파 및 람다 중 하나로 정해질 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체는 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인을 함유할 수 있다. 특정 실시 형태에 따르면, 본 명세서에 개시된 항체는 마우스 또는 인간 항체로부터의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 더하여, 항체는 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역으로 구성된 항원-결합 영역을 함유하며, 이들 영역 각각은 3개의 도메인(즉, 상보성 결정 영역 1 내지 3; CDR1, CDR2, 및 CDR3)을 함유한다. 경쇄 가변 영역 도메인은 대안적으로 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3으로 지칭되며, 중쇄 가변 영역 도메인은 대안적으로 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3으로 지칭된다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체들이 실질적으로 없는 항체를 지칭한다(예를 들어, Vβ17에 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 Vβ17에 결합하지 않는 항체가 실질적으로 없으며; CD123에 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 CD123에 결합하지 않는 항체가 실질적으로 없다). 게다가, 단리된 항체에는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체들의 집단으로부터 획득된 항체를 지칭하는데, 즉 집단을 구성하는 개별 항체들이, 소량으로 존재할 수 있는 천연 발생 돌연변이의 가능성을 제외하고는 동일하다. 본 명세서에 개시된 단일클론 항체는 하이브리도마 방법, 파지 디스플레이 기술, 단일 림프구 유전자 클로닝 기술에 의해, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 단일클론 항체는 인간 중쇄 도입유전자 및 경쇄 도입유전자를 포함하는 게놈을 갖는 유전자도입 비인간 동물, 예컨대 유전자도입 마우스 또는 래트로부터 획득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생성될 수 있다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항원-결합 단편"은 항체 단편, 예컨대 다이아바디(diabody), Fab, Fab', F(ab')₂, Fv 단편, 이황화물 안정화된 Fv 단편(dsFv), (dsFv)₂, 이중특이성 dsFv(dsFv-dsFv'), 이황화물 안정화된 다이아바디(ds 다이아바디), 단일쇄 항체 분자(scFv), 단일 도메인 항체(sdab), scFv 이량체(2가 다이아바디), 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 일부분으로부터 형성된 다중특이성 항체, 낙타화(camelized) 단일 도메인 항체, 나노바디, 도메인 항체, 2가 도메인 항체, 또는 항원에 결합하지만 완전한 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 다른 항체 단편을 지칭한다. 항원-결합 단편은 모 항체 또는 모 항체 단편이 결합하는 것과 동일한 항원에 결합할 수 있다. 특정 실시 형태에 따르면, 항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역, 경쇄 불변 영역, 및 중쇄의 Fd 세그먼트를 포함한다. 다른 특정 실시 형태에 따르면, 항원-결합 단편은 Fab 및 F(ab')을 포함한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인간화 항체"는 인간 항체와의 서열 상동성을 증가시키도록 변형되어, 항체의 항원-결합 특성은 유지되지만, 인간 체내에서의 이의 항원성은 감소되도록 한 비-인간 항체를 지칭한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "다중특이성 항체"는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열들을 포함하는 항체를 지칭하며, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열들의 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 가지며, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열들의 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는다. 일 실시 형태에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않거나 실질적으로 중첩되지 않는다. 일 실시 형태에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체 단백질의 상이한 하위단위) 상에 있다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 제3, 제4, 또는 제5 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 이중특이성 항체 분자, 삼중특이성 항체 분자, 또는 사중특이성 항체 분자이다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "이중특이성 항체"는 2개 이하의 에피토프 또는 2개 이하의 항원에 결합하는 다중특이성 항체를 지칭한다. 이중특이성 항체는 제1 에피토프(예를 들어, Vβ17 항원 상의 에피토프)에 대한 결합 특이성을 갖는 제1 면역글로불린 중쇄와 경쇄 쌍, 및 제2 에피토프(예를 들어, CD123 항원 상의 에피토프)에 대한 결합 특이성을 갖는 제2 면역글로불린 중쇄와 경쇄 쌍을 특징으로 한다. 일 실시 형태에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체 단백질의 상이한 하위단위) 상에 있다. 일 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 하프 항체(half antibody) 또는 이의 단편 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 하프 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편을 포함한다. 일 실시 형태에서, 제1 에피토프는 Vβ17 상에 위치하고, 제2 에피토프는 CD123 상에 위치한다. 일 실시 형태에서, 제1 에피토프는 Vβ17 상에 위치하고, 제2 에피토프는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD3 및/또는 다른 종양 관련 면역 억제인자 또는 표면 항원 상에 위치한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "하프 항체"는 하나의 면역글로불린 중쇄가 하나의 면역글로불린 경쇄와 회합된 것을 지칭한다. 예시적인 하프-항체가 서열 번호 28에 제시되어 있다. 당업자는 하프 항체가 이의 단편을 포함할 수 있고, 또한, 예를 들어 낙타과에서 기원되는 단일 가변 도메인으로 이루어진 항원 결합 도메인을 가질 수 있음을 용이하게 이해할 것이다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "Vβ17"은 세포독성 T 세포에 대한 면역 반응에 반응하여 발현되는 T 세포 수용체를 지칭한다. Vβ17-발현 CD8⁺ T 세포는 대상체에서 A형 인플루엔자 바이러스 노출에 반응하여 일반적으로 생성된다. Vβ17-발현 CD8⁺ T 세포는 대상체에서 인플루엔자 노출에 반응하여 큰 회상을 제공한다. 용어 "Vβ17"은 임의의 Vβ17 변이체, 아이소형(isoform), 및 종 상동체를 포함하는데, 이는 세포(T 세포를 포함함)에 의해 천연 발현되거나 또는 그러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있다. 언급되지 않는 한, 바람직하게는 Vβ17은 인간 Vβ17이다. 인간 Vβ17 아미노산 서열은 GenBank 수탁 번호 AAB49730.1에 의해 제공된다.

용어 "CD123"은 면역 시스템에서 중요한 가용성 사이토카인인 인터류킨-3의 신호를 전달하는 데 도움을 주는 세포 상에서 발견되는 분자를 지칭한다. CD123은 "인터류킨-3 수용체"로도 지칭될 수 있다. 이 수용체는 I형 사이토카인 수용체 패밀리에 속하며, 공통 베타 하위단위(베타 c 또는 CD131)와 쌍이 형성된 특유의 알파 사슬을 갖는 이종이량체이다. CD123 수용체는 만능성 선조 세포(pluripotent progenitor cell) 상에서 발견될 수 있고, 세포 내에서 티로신 인산화를 유도하고 조혈 세포주 내에서의 증식 및 분화를 촉진시킬 수 있다. CD123은 또한 급성 골수성 백혈병(AML) 아형에서 발현될 수 있다. 용어 "CD123"은, 달리 기재되지 않는 한, 임의의 CD123 변이체, 아이소형, 및 종 상동체를 포함하는데, 이는 세포(T 세포를 포함함)에 의해 천연 발현되거나 또는 그러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있으며, 바람직하게는 "CD123"은 인간 CD123이다. 인간 CD123 아미노산 서열은 GenBank 수탁 번호 AY789109.1에 의해 제공된다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "Vβ17에 특이적으로 결합하는" 항체는 1×10-⁷ M 이하, 바람직하게는 1×10-⁸ M 이하, 더 바람직하게는 5×10-⁹ M 이하, 1×10-⁹ M 이하, 5×10-¹⁰ M 이하, 또는 1×10-¹⁰ M 이하의 KD로 Vβ17, 바람직하게는 인간 Vβ17에 결합하는 항체를 지칭한다. 용어 "KD"는 해리 상수를 지칭하며, 이는 Kd 대 Ka의 비(즉, Kd/Ka)로부터 구해지고, 몰농도(M)로 표현된다. 항체에 대한 KD 값은 본 발명을 고려하여 당업계의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 항체의 KD는 표면 플라즈몬 공명을 사용함으로써, 예컨대 바이오센서 시스템, 예를 들어 Biacore® 시스템을 사용함으로써, 또는 바이오층(bio-layer) 간섭법 기술, 예컨대 Octet RED96 시스템을 사용함으로써 결정될 수 있다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "CD123에 특이적으로 결합하는" 항체는 1×10^-7 M 이하, 바람직하게는 1×10^-8 M 이하, 더 바람직하게는 5×10^-9 M 이하, 1×10^-9 M 이하, 5×10^-10 M 이하, 또는 1×10^-10 M 이하의 KD로 CD123, 바람직하게는 인간 CD123에 결합하는 항체를 지칭한다. 용어 "KD"는 해리 상수를 지칭하며, 이는 Kd 대 Ka의 비(즉, Kd/Ka)로부터 구해지고, 몰농도(M)로 표현된다. 항체에 대한 KD 값은 본 발명을 고려하여 당업계의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 항체의 KD는 표면 플라즈몬 공명을 사용함으로써, 예컨대 바이오센서 시스템, 예를 들어 Biacore® 시스템을 사용함으로써, 또는 바이오층 간섭법 기술, 예컨대 Octet RED96 시스템을 사용함으로써 결정될 수 있다.

항체의 KD 값이 작을수록, 항체가 표적 항원에 결합하는 친화도는 더 높다.

특정 태양에 따르면, 본 발명은 단리된 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것으로, 상기 단리된 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 제1 중쇄(HC1); (b) 제2 중쇄(HC2); (c) 제1 경쇄(LC1); 및 (d) 제2 경쇄(LC2)를 포함한다. HC1은 LC1과 회합될 수 있고, HC2는 LC2와 회합될 수 있다. HC1은 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함할 수 있고, LC1은 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함할 수 있다.

HC1과 LC1은 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 예로서, 제1 항원에 대한 결합 부위는 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포 상의 Vβ17에 결합할 수 있고, 제2 항원에 대한 결합 부위는, 예를 들어 암 세포의 표면 상에 존재하는 종양 항원에 결합할 수 있다. CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포의 표면 상에 존재하는 Vβ17 및 암 세포의 표면 상에 존재하는 종양 항원에 대한 Vβ17 이중특이성 항체의 결합은, 예를 들어 암 세포의 사멸을 가져올 수 있다.

항-Vβ17 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 항-CD123 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 또한 제공된다. 소정 실시 형태에서, 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 제1 중쇄(HC1); (b) 제2 중쇄(HC2); (c) 제1 경쇄(LC1); 및 제2 경쇄(LC2)를 포함한다. HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합된다. 소정 실시 형태에서, HC1은 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 소정 실시 형태에서, HC2는 각각 서열 번호 34, 서열 번호 35, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC2는 각각 서열 번호 37, 서열 번호 38, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.

소정 실시 형태에서, HC1은, 예를 들어 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은, 예를 들어 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하여, Vβ17에 특이적으로 결합하는 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성할 수 있다. HC2는, 예를 들어 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는, 예를 들어 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하여, CD123에 특이적으로 결합하는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성할 수 있다.

소정 실시 형태에서, Vβ17은 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포의 표면 상에 존재한다. 소정 실시 형태에서, CD123은 암 세포(예를 들어, 백혈병 세포)의 표면 상에 존재한다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 이중특이성 항체는 다이아바디, 크로스-바디(cross-body), 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 제어된 Fab 아암 교환을 통해 획득된 이중특이성 항체의 형태를 취할 수 있다.

일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 이종이량체화를 촉진시키는 상보적 CH3 도메인을 갖는 IgG-유사 분자; 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자 - 여기서는, 분자의 2개의 측 각각이 적어도 2개의 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부를 함유함 -; IgG 융합 분자 - 여기서는, 전장 IgG 항체가 추가 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부에 융합됨 -; Fc 융합 분자 - 여기서는, 단일쇄 Fv 분자 또는 안정화된 다이아바디가 중쇄 불변-도메인, Fc-영역 또는 이들의 일부에 융합됨 -; Fab 융합 분자 - 여기서는, 상이한 Fab-단편들이 함께 융합됨 -; ScFv- 및 다이아바디-기반 및 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디) - 여기서는, 상이한 단일쇄 Fv 분자들 또는 상이한 다이아바디들 또는 상이한 중쇄 항체들(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)이 서로 또는 다른 단백질 또는 담체 분자에 융합됨 - 를 포함한다.

일부 실시 형태에서, 상보적 CH3 도메인 분자를 갖는 IgG-유사 분자는 Triomab/Quadroma (Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인투-홀(Knob-into-Hole) (Genentech), CrossMAb (Roche) 및 정전기적으로 일치된 항체(electrostatically-matched) (Amgen), LUZ-Y (Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 바디(Strand Exchange Engineered Domain body)(SEEDbody) (EMD Serono), Biclonic (Merus) 및 DuoBody (Genmab A/S)를 포함한다.

일부 실시 형태에서, 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자는 이중 표적화(Dual Targeting)(DT)-Ig (GSK/Domantis), 투-인-원 항체(Two-in-one Antibody) (Genentech), 가교결합된(Cross-linked) Mab (Karmanos Cancer Center), mAb2 (F-Star) 및 CovX-바디 (CovX/Pfizer)를 포함한다.

일부 실시 형태에서, IgG 융합 분자는 이중 가변 도메인(Dual Variable Domain, DVD)-Ig (Abbott), IgG-유사 이중특이체 (InnClone/Eli Lilly), Ts2Ab (MedImmune/AZ) 및 BsAb (Zymogenetics), HERCULES (Biogen Idec) 및 TvAb (Roche)를 포함한다.

일부 실시 형태에서, Fc 융합 분자는 ScFv/Fc 융합체 (Academic Institution), SCORPION (Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS), 이중 친화성 재표적화 기술(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART) (MacroGenics) 및 이중(Dual)(ScFv)₂-Fab (National Research Center for Antibody Medicine--China)를 포함할 수 있다.

일부 실시 형태에서, Fab 융합 이중특이성 항체는 F(ab)2 (Medarex/AMGEN), 이중-작용체(Dual-Action) 또는 Bis-Fab (Genentech), 독-앤드-록(Dock-and-Lock, DNL) (ImmunoMedics), 2가 이중특이체(Bivalent Bispecific) (Biotecnol) 및 Fab-Fv (UCB-Celltech)를 포함한다. ScFv-, 다이아바디-기반 및 도메인 항체는 이중특이성 T 세포 인게이저(BiTE) (Micromet), 탠덤 다이아바디(Tandab) (Affimed), 이중 친화성 재표적화 기술(DART) (MacroGenics), 단일쇄 다이아바디(Academic), TCR-유사 항체(AIT, ReceptorLogics), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합체(Merrimack) 및 COMBODY(Epigen Biotech), 이중 표적화 나노바디(Ablynx), 이중 표적화 중쇄 단독 도메인 항체를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.

본 명세서에 개시된 전장 이중특이성 항체는, 예를 들어 2개의 단일특이성 2가 항체들 사이에서의 Fab 아암 교환(또는 하프 분자 교환)을 사용하여 생성될 수 있는데, 이는 공발현을 사용하거나 또는 무세포 환경에서의 시험관내에서, 각각의 하프 분자 내의 중쇄 CH3 계면에 치환을 도입하여 별개의 특이성을 갖는 2개의 항체 하프 분자의 이종이량체 형성을 유리하게 함으로써 행해진다. Fab 아암 교환 반응은 이황화-결합 이성질화 반응 및 CH3 도메인의 해리-회합의 결과이다. 모 단일특이성 항체의 힌지 영역 내의 중쇄 이황화물 결합은 환원된다. 모 단일특이성 항체들 중 하나의, 생성된 유리 시스테인은, 제2 모 단일특이성 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화물 결합을 형성하고, 동시에 모 항체의 CH3 도메인이 해리-회합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 아암의 CH3 도메인은 동종이량체화에 비하여 이종이량체화에 유리하도록 조작될 수 있다. 생성된 산물은, 각각이 별개의 에피토프, 즉 Vβ17 상의 에피토프 및 종양 항원 상의 에피토프에 결합하는 2개의 Fab 아암 또는 하프 분자를 갖는 이중특이성 항체이다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체화"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체화"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.

"노브-인-홀" 전략(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 2006/028936호 참조)이 전장 이중특이성 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 간략하게 말해서, 인간 IgG 내에 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산이 CH3 도메인 상호작용에 영향을 주는 위치에서 돌연변이화되어 이종이량체 형성을 촉진할 수 있다. 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입되고, 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입된다. 2개의 항체의 공발현 후에, "홀"을 갖는 중쇄와 "노브"를 갖는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로서 이종이량체가 형성된다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S_L368A_Y407V.

하나의 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기를, 그리고 제2 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이는 미국 특허 출원 공개 제2010/0015133호; 미국 특허 출원 공개 제2009/0182127호; 미국 특허 출원 공개 제2010/028637호 또는 미국 특허 출원 공개 제2011/0123532호에 기재된 바와 같다. 다른 전략에서는, 미국 특허 출원 공개 제2012/0149876호 또는 미국 특허 출원 공개 제2013/0195849호에 기재된 바와 같이 하기의 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)에 의해 이종이량체화가 촉진될 수 있다: L351Y_F405AY407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W.

전술된 방법에 더하여, 본 명세서에 개시된 이중특이성 항체는, 2개의 단일특이성 동종이량체성 항체의 CH3 영역 내에 비대칭 돌연변이를 도입시키고, 이황화물 결합 이성질화를 가능하게 하는 환원성 조건에서 2개의 모 단일특이성 동종이량체성 항체로부터 이중특이성 이종이량체성 항체를 형성함으로써 무세포 환경에서 시험관내에서 생성될 수 있는데, 이는 국제 특허 출원 공개 W02011/131746호에 기재된 방법에 따른 것이다. 이들 방법에서, 제1 단일특이성 2가 항체(예를 들어, 항-CD33 항체) 및 제2 단일특이성 2가 항체(예를 들어, 항-CD3 항체)는 CH3 도메인에서 이종이량체 안정성을 촉진하는 소정의 치환을 갖도록 조작되며; 이들 항체는 힌지 영역 내의 시스테인이 이황화물 결합 이성질화를 거칠 수 있게 하기에 충분한 환원성 조건 하에서 함께 인큐베이션되고; 그럼으로써 Fab 아암 교환에 의해 이중특이성 항체를 생성한다. 인큐베이션 조건은 선택적으로 비환원성 조건으로 회복될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 환원제는 2-메르캅토에틸아민(2-MEA), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), 글루타티온, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), L-시스테인 및 베타-메르캅토에탄올이며, 바람직하게는 환원제는 2-메르캅토에틸아민, 다이티오트레이톨 및 트리스(2-카르복시에틸)포스핀으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예를 들어, pH 5 내지 8에서, 예를 들어 pH 7.0에서 또는 pH 7.4에서 적어도 25 mM 2-MEA의 존재 하에서 또는 적어도 0.5 mM 다이티오트레이톨의 존재 하에서 20℃ 이상의 온도에서 90분 이상 동안의 인큐베이션이 사용될 수 있다.

소정 실시 형태에서, 항-Vβ17 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기의 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고:

a. 각각 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 및 6;

항-CD123 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기의 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:

1. 각각 서열 번호 34, 35, 36, 37, 38, 및 39.

다른 특정 태양에 따르면, 본 발명은 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC)을 유도하는 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어 시험관내에서 ADCC를 유도할 수 있다. 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 1 pM 미만의 EC₅₀으로 ADCC를 유도할 수 있다. 소정 실시 형태에서, EC₅₀은 약 1 pM 미만, 약 0.9 pM 미만, 약 0.8 pM 미만, 약 0.7 pM 미만, 약 0.6 pM 미만, 약 0.5 pM 미만, 약 0.4 pM 미만, 약 0.300 pM 미만, 약 0.2 pM 미만, 약 0.19 pM 미만, 약 0.18 pM 미만, 약 0.17 pM 미만, 약 0.16 pM 미만, 약 0.15 pM 미만, 약 0.14 pM 미만, 약 0.13 pM 미만, 약 0.12 pM 미만, 약 0.11 pM 미만, 약 0.1 pM 미만, 약 0.09 pM 미만, 약 0.08 pM 미만, 약 0.07 pM 미만, 약 0.06 pM 미만, 약 0.05 pM 미만, 약 0.04 pM 미만, 약 0.03 pM 미만, 약 0.02 pM 미만, 또는 약 0.01 pM 미만이다. 소정 실시 형태에서, 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 골격을 포함한다. 그러한 일 실시 형태에서, 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG4 동종형의 항체 골격을 갖는다.

본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체의 면역 이펙터 특성이 당업자에게 알려진 기법에 의해 Fc 변형을 통해 향상되거나 또는 침묵될 수 있다. 예를 들어, Fc 이펙터 기능, 예컨대 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC), 항체-의존성 세포-매개 식세포작용(ADCP), 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등이, 이들 활성을 담당하는 Fc 내의 잔기를 변형시킴으로써 제공 및/또는 제어될 수 있다.

"항체-의존성 세포-매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 Fc 수용체(FcR)를 발현하는 비특이적 세포독성 세포(예를 들어, 천연 살해(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)가 표적 세포 상에 결합된 항체를 인식하고 후속적으로 표적 세포의 용해를 야기하는 세포-매개 반응을 지칭한다.

ADCC를 유도하는 항체의 능력은 그의 올리고당 성분을 조작함으로써 향상될 수 있다. 인간 IgG1 또는 IgG3은 잘 알려진 바이안테나리(biantennary) G0, G0F, G1, G1F, G2 또는 G2F 형태의 글리칸의 대부분에 의해 Asn297에서 N-글리코실화된다. 조작되지 않은 CHO 세포에 의해 생성된 항체는 전형적으로 약 85% 이상의 글리칸 푸코스 함량을 갖는다. Fc 영역에 부착된 바이안테나리 복합형(complex-type) 올리고당으로부터의 코어(core) 푸코스의 제거는, 항원 결합 또는 CDC 활성을 변경시키지 않고서, 개선된 FcγRIIIa 결합을 통해 항체의 ADCC를 향상시킨다. 그러한 Ab는 바이안테나리 복합형의 Fc 올리고당을 담지하는 비교적 고도로 탈푸코실화된 항체의 성공적인 발현으로 이어지는 것으로 보고된 상이한 방법들을 사용하여 달성될 수 있는데, 이러한 방법에는, 예컨대 하기와 같은 것이 있다: 배양물 오스몰랄 농도(osmolality)의 제어(문헌[Konno et al., Cytotechnology 64:249-65, 2012]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO 세포주 Lec13의 적용(문헌[Shields et al., J Biol Chem 277:26733-26740, 2002]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO 세포주 EB66의 적용(문헌[Olivier et al., MAbs; 2(4), 2010; Epub ahead of print; PMID:20562582]), 숙주 세포주로서의 래트 하이브리도마 세포주 YB2/0의 적용(문헌[Shinkawa et al., J Biol Chem 278:3466-3473, 2003]), 특이적으로 α-1,6-푸코실트랜스퍼라제(FUT8) 유전자에 대한 짧은 간섭(small interfering) RNA의 도입(문헌[Mori et al., Biotechnol Bioeng 88:901-908, 2004]), 또는 β-1,4-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III과 골지(golgi) α-만노시다제 II 또는 강력한 알파-만노시다제 I 억제제인 키푸넨신(kifunensine)의 공발현(문헌[Ferrara et al., J Biol Chem 281:5032-5036, 2006], 문헌[Ferrara et al., Biotechnol Bioeng 93:851-861, 2006]; 문헌[Xhou et al., Biotechnol Bioeng 99:652-65, 2008]).

본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체에 의해 유도되는 ADCC는 또한 항체 Fc 내에서의 소정의 치환에 의해 향상될 수 있다. 예시적인 치환은, 예를 들어 미국 특허 제6,737,056호에 기재된 바와 같은 아미노산 위치 256, 290, 298, 312, 356, 330, 333, 334, 360, 378 또는 430(잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따름)에서의 치환을 포함한다.

다른 특정 태양에 따르면, 본 발명은 Vβ17-발현 세포 및/또는 CD123-발현 세포에서 T-세포 의존성 세포독성을 유도할 수 있는 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어, 약 2 nM 미만의 EC₅₀ 값으로 시험관내에서 Vβ17-발현 세포 및/또는 CD123-발현 세포에서 T-세포 의존성 세포독성을 유도할 수 있다. 소정 실시 형태에서, EC₅₀은 약 2.0 nM 미만, 약 1.9 nM 미만, 약 1.8 nM 미만, 약 1.7 nM 미만, 약 1.6 nM 미만, 약 1.5 nM 미만, 약 1.4 nM 미만, 약 1.3 nM 미만, 약 1.2 nM 미만, 약 1.1 nM 미만, 약 1.0 nM 미만, 약 0.9 nM 미만, 약 0.8 nM 미만, 약 0.7 nM 미만, 약 0.6 nM 미만, 약 0.5 nM 미만, 약 0.4 nM 미만, 약 0.3 nM 미만, 약 0.2 nM 미만, 및 약 0.1 nM 미만이다.

다른 특정 태양에 따르면, 본 발명은 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것으로, 상기 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 키메라 형태이다.

다른 특정 태양에 따르면, 본 발명은 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것으로, 상기 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 또는 인간화 형태이다.

다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 28의 아미노산 서열과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 더 바람직하게는 95% 또는 그 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함한다.

다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산에 관한 것이다. 다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산에 관한 것이다. 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않으면서 단백질의 코딩 서열을 변화시킬(예를 들어, 대체, 결실, 삽입 등을 할) 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 따라서, 본 명세서에 개시된 단일클론 항체 및/또는 이중특이성 항체를 인코딩하는 핵산 서열을 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않으면서 변경시킬 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다.

다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 단리된 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 플라스미드, 코스미드, 파지 벡터, 또는 바이러스 벡터와 같은, 본 발명을 고려하여 당업자에게 알려진 임의의 벡터가 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 벡터는 재조합 발현 벡터, 예컨대 플라스미드이다. 벡터는 발현 벡터의 통상적인 기능을 확립하기 위한 임의의 요소, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 요소, 종결자, 인핸서, 선택 마커, 및 복제 기점을 포함할 수 있다. 프로모터는 구성적, 유도성 또는 억제성 프로모터일 수 있다. 세포에 핵산을 전달할 수 있는 다수의 발현 벡터가 당업계에 알려져 있으며, 세포에서의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생성을 위해 본 발명에 사용될 수 있다. 통상적인 클로닝 기법 또는 인공 유전자 합성이 본 명세서에 개시된 실시 형태에 따른 재조합 발현 벡터를 생성하는 데 사용될 수 있다. 그러한 기법은 본 발명을 고려하여 당업자에게 잘 알려져 있다.

다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 단일클론 항체 및/또는 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명을 고려하여 당업자에게 알려진 임의의 숙주 세포가 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 재조합 발현에 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 숙주 세포는 E. 콜라이(E. Coli) TG1 또는 BL21 세포(예를 들어, scFv 또는 Fab 항체의 발현용), CHO-DG44 또는 CHO-K1 세포 또는 HEK293 세포(예를 들어, 전장 IgG 항체의 발현용)이다. 특정 실시 형태에 따르면, 재조합 발현 벡터는 통상적인 방법, 예컨대 화학적 형질감염, 열 충격, 또는 전기천공에 의해 숙주 세포 내로 형질전환되며, 여기서 그것은 재조합 핵산이 효과적으로 발현되도록 숙주 세포 게놈 내로 안정하게 통합된다.

다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본 명세서에 개시된 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 조건 하에서 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하는 단계, 및 (예를 들어, 상층액으로부터의) 세포 또는 세포 배양물로부터 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하는 단계를 포함한다. 발현된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 세포로부터 수집되고, 당업계에 알려져 있고 본 명세서에 기재된 바와 같은 통상적인 기법에 따라 정제될 수 있다.

사용 방법

다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 암 세포의 표면 상에 존재하는 CD123을 표적화하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 상기 암 세포를 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 노출시키는 단계를 포함한다.

Vβ17 및/또는 CD123에 결합하는 이중특이성 항체 및 이의 항원-결합 단편의 기능적 활성은 당업계에 알려져 있고 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법에 의해 특성화될 수 있다. Vβ17 및/또는 CD123에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하기 위한 방법은 Biacore, ELISA, 및 OctetRed 분석을 포함한 친화성 및 특이성 검정; FACS에 의해 암 세포 상의 CD123에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 결합 검정; CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포에서 Vβ17에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 결합 검정을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 특정 실시 형태에 따르면, Vβ17 및/또는 CD123에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하기 위한 방법은 하기에 기재된 것들을 포함한다.

다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하며, 항체 또는 항체 단편은 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 표면 상에 CD123을 갖는 암 세포로 유도한다.

다른 일반적인 태양에서, 본 발명은 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 Vβ17-발현 CD8⁺ T 세포를 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하며, 암 세포를 항체 또는 항체 단편과 접촉시키는 단계는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제한다.

본 발명의 실시 형태에 따르면, 본 기재된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 저장 또는 사용을 위해 완충 조성물로 제공될 수 있다. 본 기재된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 저장에 적합한 완충액은 저장되는 동안 항체 또는 항체 단편의 응집을 촉진시키지 않으면서 열화를 최소화함으로써, 또는 저장 베셀(vessel)에 대한 접착을 최소화함으로써 항체 또는 항체 단편의 안정성을 유지하는 역할을 할 것이다.

실시 형태

본 발명은 하기의 비제한적인 실시 형태를 제공한다.

실시 형태 1은 단리된 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 단리된 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은

a. 제1 중쇄(HC1);

b. 제2 중쇄(HC2);

c. 제1 경쇄(LC1); 및

d. 제2 경쇄(LC2)를 포함하며,

HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다.

실시 형태 2는, 실시 형태 1에 있어서, 상기 제1 항원에 대한 결합 부위는 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포 상의 Vβ17에 결합하는, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 3은, 실시 형태 1 또는 실시 형태 2에 있어서, 상기 제2 항원에 대한 결합 부위는 암 세포의 표면 상에 존재하는 종양 항원에 결합하는, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 4는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 3 중 어느 하나에 있어서, HC1 및 LC1은 인간화 형태인, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 5는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 4 중 어느 하나에 있어서, HC2 및 LC2는 CD123에 결합되는, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 6은, 실시 형태 1 내지 실시 형태 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG 동종형인, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 7은, 실시 형태 1 내지 실시 형태 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG4 동종형인, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 8은, 실시 형태 1 내지 실시 형태 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 0.2 pM 미만의 EC₅₀으로 시험관내에서 암 세포의 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T-세포 의존성 세포독성을 유도하는, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 9는 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 중 어느 하나의 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HC1 및 LC1을 인코딩하는 단리된 핵산이다.

실시 형태 10은 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 중 어느 하나의 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HC2 및 LC2를 인코딩하는 단리된 핵산이다.

실시 형태 11은 실시 형태 9 또는 실시 형태 10의 단리된 핵산을 포함하는 벡터이다.

실시 형태 12는 실시 형태 11의 벡터를 포함하는 숙주 세포이다.

실시 형태 13은 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 중 어느 하나의 단리된 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 완충 용액을 포함하는 완충 조성물이다.

실시 형태 14는 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은

a. 제1 중쇄(HC1);

b. 제2 중쇄(HC2);

c. 제1 경쇄(LC1); 및

d. 제2 경쇄(LC2)를 포함하며,

HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, Vβ17에 특이적으로 결합하는 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2는 각각 서열 번호 34, 서열 번호 35, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC2는 각각 서열 번호 37, 서열 번호 38, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, CD123에 특이적으로 결합하는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성한다.

실시 형태 15는, 실시 형태 14에 있어서, HC1은 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하고 LC1은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하고 LC2는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-Vb17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 16은, 실시 형태 14 또는 실시 형태 15에 있어서, 상기 Vβ17은 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포의 표면 상에 존재하는, 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 17은, 실시 형태 14 내지 실시 형태 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 CD123은 암 세포의 표면 상에 존재하는, 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 18은, 실시 형태 14 내지 실시 형태 17 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 0.2 pM 미만의 EC₅₀으로 시험관내에서 암 세포의 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T-세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 19는 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HC1 및 LC1을 인코딩하는 단리된 핵산이다.

실시 형태 20은 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HC2 및 LC2를 인코딩하는 단리된 핵산이다.

실시 형태 21은 실시 형태 19 또는 실시 형태 20의 단리된 핵산을 포함하는 벡터이다.

실시 형태 22는 실시 형태 21의 벡터를 포함하는 숙주 세포이다.

실시 형태 23은 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 완충 용액을 포함하는 완충 조성물이다.

실시 형태 24는 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법으로서, 상기 방법은 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 또는 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 상기 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계는 상기 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 표면 상에 CD123을 갖는 암 세포로 유도한다.

실시 형태 24(a)는, 실시 형태 24에 있어서, 상기 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포는 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 또는 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체와 접촉되는, 방법이다.

실시 형태 24(b)는, 실시 형태 24에 있어서, 상기 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포는 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 또는 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 단편과 접촉되는, 방법이다.

실시 형태 25는 표면 상에서 CD123을 발현하는 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 상기 암 세포를 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 또는 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 단편과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 암 세포를 상기 항체 또는 항체 단편과 접촉시키는 단계는 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제한다.

실시 형태 25(a)는, 실시 형태 25에 있어서, 상기 CD123-발현 암 세포는 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 단편과 접촉해 있는 동안에 Vβ17-발현 CD8⁺ T 세포의 존재 하에 있는, 방법이다.

실시 형태 25(b)는, 실시 형태 25 또는 실시 형태 25(a)에 있어서, 상기 CD123-발현 암 세포는 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 또는 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체와 접촉되는, 방법이다.

실시 형태 25(c)는, 실시 형태 25 또는 실시 형태 25(a)에 있어서, 상기 CD123-발현 암 세포는 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 또는 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 단편과 접촉되는, 방법이다.

실시 형태 26은 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 중 어느 하나의 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트이다.

실시 형태 27은 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트이다.

실시 형태 28은 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 조건 하에서 실시 형태 12의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하는 단계를 포함한다.

실시 형태 29는 실시 형태 14 내지 실시 형태 18 중 어느 하나의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 조건 하에서 실시 형태 22의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하는 단계를 포함한다.

실시 형태 30은 단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 28의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

실시 형태 31은, 실시 형태 30에 있어서, 상기 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

실시 형태 32는 실시 형태 30 또는 실시 형태 31의 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이다.

실시 형태 33은 실시 형태 32의 단리된 핵산을 포함하는 벡터이다.

실시 형태 34는 실시 형태 33의 벡터를 포함하는 숙주 세포이다.

실시 형태 35는 실시 형태 30 또는 실시 형태 31의 단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 완충 조성물이다.

실시예

하기 실시예는 인플루엔자 바이러스 유래 펩티드 M1이 T 세포들의 선택 세트를 증폭시킬 수 있다는 전제에 기초한다. 이들 세포는 TCR-하플로타입(haplotype)-Vβ17을 발현하고, 이들 세포의 대부분은 종양 표적 세포의 효율적인 세포독성을 나타낸다. 이어서, 이러한 능력은, 하나의 아암은 Vβ17 구조에 결합하고 다른 하나의 아암은 암 세포에 의해 발현되는 항원에 결합하도록 작제된 이중특이성 항체를 사용하여 이용된다. 따라서, 이중특이성 항체는 이펙터와 표적 세포를 함께 가교하여 암 세포 사멸을 가져온다. 이러한 작용 기전은 도 1에 개략적으로 설명된 개략도에 나타나 있다.

후속 실시예들은 하기 카테고리로 세분될 수 있다:(1) CTL 상의 T-세포 수용체(TCR)의 Vβ17 아암에 결합할 수 있는 이중특이성 항체의 생성(실시예 1 및 실시예 2); 및 (2) 시험관내에서 증폭된 CTL에 의한 이중특이성 항체-가능(bispecific antibody-enabled) 표적 세포 사멸에 대한 증거(실시예 3).

실시예 1: 항-Vβ17 mAb E17.5F의 인간 프레임워크 적응화

마우스 IgG1 항-인간 T 세포 수용체 Vβ17 클론 E17.5F를 BeckmanCoulter, Inc.(미국 캘리포니아주 브레아 소재)로부터 입수하였다. 샘플 제조 및 LC/MSMS 분석을 Protea Bioscience Inc.(미국 웨스트 버지니아주 모건타운 소재)에서 수행하였다. 샘플을 환원시키고 알킬화하고, 7개의 분취물로 나누고, 트립신/LysC, 키모트립신, LysC, 펩신, 및 AspN, 엘라스타제, 및 프로테이나제 K 효소로 단백질 분해적으로 분해시켰다. 생성된 펩티드를 ZipTip C18 피펫 팁을 사용하여 탈염하고, 역상 크로마토그래피를 사용하여 온라인으로 분리하였다. HCD 단편화를 사용하여 Thermo Q-Exactive 분광계에서 질량 분석을 수행하였다. 드 노보(de novo) 서열 태그를 IMGT-기반 항체 서열 데이터베이스에 매칭시킴으로써, MS 데이터 세트를 PEAKS 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 서열 내의 갭(gap)을 드 노보로 확인된 펩티드의 콘티그(Contig) 서열 어셈블리를 사용하여 배정하였다. 모든 CDR 및 초돌연변이(hyper-mutation)를 MS/MS 스펙트럼을 조사함으로써 확인하였다.

획득된 서열이 표 1 및 표 2에 나타나 있다.

[표 1]

[표 2]

이중특이성 항체의 제조를 위한 서열에서 변화가 이루어졌다(표 3). 변화는 하기를 포함한다: (1) 중쇄의 프레임워크 돌연변이 Asn1은 보존되지 않았으며, 이에 따라 서열은 DVQLW 서열을 갖도록 변형되었으며; (2) Fc에서 확인된 다른 돌연변이, K337Y는 특징적이지 않는 것으로 여겨졌으며, 이에 따라 이 돌연변이가 없는 작제물을 합성하였으며; (3) 중쇄 상의 잠재적인 2차 글리코실화 부위가 관찰되었으며, 이에 따라 N-연결 부위(N82a, 초티아 넘버링에 기초함)를 갖는 것과 갖지 않는 것의 mAb의 2가지 버전을 합성하였다.

[표 3]

2개의 항체(B17B1 및 B17B2)를 HEK293Expi 세포에서 발현시켰다. 상층액을 Vβ17 결합(B17B1 및 B17B2)에 대해 시험하였으며, 단지 B17B1만이 결합을 보여주었다. 따라서, Fc 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 갖는 B17B1을 발현시켰다.

항-인간 TCR Vβ17 마우스 mAb B17B1을 인간 프레임워크 적응화(HFA) 방법을 사용하여 인간화하였다(문헌[Fransson J, et al. J. Mol. Biol. 2010; 398:214-231]). 인간화 중쇄 및 경쇄의 최상의 조합을 찾기 위하여, 몇몇 인간 V-영역 서열을 시험을 위해 선택하였다(표 4). 인간 생식세포계열의 선택은 프레임워크(FR) 영역에서의 마우스 항체와의 전체 서열 유사성에만 오로지 기초하였다. CDR 서열도, 그의 길이 또는 표준 구조도 이들 어느 것도 이 선택에서는 고려하지 않았다.

HFA에 사용된 CDR 정의는 문헌[Fransson J, et al. J. Mol. Biol. 2010; 398:214-231]에 기재되어 있으며, 마틴(Martin)의 정의에 상응한다(문헌[Abhinandan KR and Martin AC. Mol. Immunol. 2008; 45:3832-3839]). CDR(표 1)은 하기에 기재된 바와 같이 정의되었다(초티아 넘버링 체계를 사용함(문헌[Chothia C, and Lesk A. J. Mol. Biol. 1987; 196:901-917]):

HCDR1(서열 번호 1) 26 내지 35

HCDR2(서열 번호 2) 50 내지 58

HCDR3(서열 번호 3) 95 내지 102

LCDR1(서열 번호 4) 24 내지 34

LCDR2(서열 번호 5) 50 내지 56

LCDR3(서열 번호 6) 89 내지 97

선택된 인간 생식세포계열은 (IMGT 표기로) 표 4에 제공되어 있다.

[표 4]

몇몇 변이체에서의 "복귀 돌연변이"는 VL/VH 쌍형성 및 CDR 입체구조에 있어서 중요한 것으로 알려진 FR 위치에 도입되었다. 선택된 인간 생식세포계열은 (IMGT 표기로) 표 5에 제공되어 있으며, 여기에는 복귀 돌연변이가 표기되어 있다.

[표 5]

3개의 중쇄 및 3개의 경쇄의 모든 9개의 쌍별 조합의 아미노산 서열을 DNA로 역번역하고, cDNA를 유전자 합성 기법을 사용하여 제조하였다(미국 특허 제6,670,127호; 미국 특허 제6,521,427호). 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터를 사용하여 인간 IgG4 불변 영역 상에 중쇄(HC) 가변 영역을 하위클로닝하였다. 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터를 사용하여 인간 람다(λ) 불변 영역 상에 경쇄(LC) 가변 영역을 하위클로닝하였다. 생성된 플라스미드를 HEK EXPI 세포(LifeTechnologies; 미국 캘리포니아주 칼스배드 소재) 내로 형질감염시키고, mAb를 발현시켰다. 단백질 A 컬럼(HiTrap MabSelect SuRe 컬럼)을 사용하여 표준 방법에 의해 정제하였다. 용출 후, 풀들을 D-PBS(pH 7.2) 내로 투석하였다.

[표 6]

인간화 항체를 ELISA에 의해 TCRVβ17(서열 번호 27)/Va10.2-Fc(서열 번호 44) 융합 단백질에 대한 결합에 대해 스크리닝하였다. 비오티닐화 TCRVβ17/Va10.2-Fc 융합 단백질을 스트렙타비딘-코팅된 ELISA 플레이트에 첨가하였다. 결합되지 않은 단백질을 씻어내고, mAb를 일정 범위의 농도(0.01 내지 10 ㎍/mL)로 첨가하였다. 플레이트를 세척하고, 항-카파:HRP 검출 항체를 첨가하였다. 플레이트를 세척하고, 화학발광 검출 시약을 첨가하고. Perkin Elmer EnVision 플레이트 판독기 상에서 발광에 대해 플레이트를 판독하였다. B17B20 및 B17B21은 TCR-Vβ17 단백질에 대해 양성 결합을 나타내었다. B17B22는 이 단백질에 대해 약한 결합을 나타내었다. 이어서, 이들 항체를 추가의 연구를 위해 전술된 바와 같이 정제하였다. B17B21은 재조합 TCR-Vβ17 단백질 및 M1-자극된 T-세포에 대한 최상의 결합을 입증하였으며, 이에 따라 추가의 기능적 연구를 위한, 구체적으로는 이중특이성 항체로서 T-세포 재유도 암 세포 사멸을 위한 분자로서 선택되었다.

따라서, B17B21(항-Vβ17) 및 I3RB217(항-CD123 항체)의 가변 영역 서열을 사용하여 급성 골수성 백혈병(AML) 세포의 T-세포 재유도 사멸에 대해 시험될 이중특이성 항체를 생성하였다.

실시예 2. 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체의 제조

VB11(항-Vβ17/항-CD123) 및 VB13(Vβ17 x 널) 이중특이성 항체를 앞서 기재된 바와 같이 인간 IgG4로서 노브-인투-홀 포맷으로 전장 항체로서 생성하였다(문헌[Atwell et al. J. Mol. Biol. 270: 26-35, 1997]). 가변 영역을 인코딩하는 핵산 서열을 표준 PCR 제한 효소 기반 클로닝 기법을 사용하여 IgG4 발현 카세트의 불변 영역을 함유하는 맞춤형 포유류 발현 벡터 내로 하위클로닝하였다. 이중특이성 항체를 중국 햄스터 난소 세포주에서 일시적 형질감염에 의해 발현시켰다. 항체를 초기에 Mab Select SuRe 단백질 A 컬럼(미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 GE healthcare)으로 정제하였다(문헌[Brown, Bottomley et al. 1998]). 컬럼을 인산염 완충 식염수(PBS)(pH 7.2)로 평형화시키고, 2 mL/분의 유량으로 발효 상층액을 로딩하였다. 로딩 후에, 컬럼을 PBS(4 CV)로 세척한 후, 30 mM 소듐 아세테이트(pH 3.5) 중에 용리시켰다. Akta Explorer(GE Healthcare)에서 280 nm에서의 흡광도에 의해 모니터링된 바와 같은 단백질 피크를 함유하는 분획들을 함께 풀링하고, 1%의 3 M 소듐 아세테이트(pH 9.0)를 첨가함으로써 pH 5.0으로 중화시켰다. 폴리싱 단계로서, 항체를 Superdex 200 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 분취용 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 상에서 정제하였다. 환원성 조건 및 비환원성 조건 하에서 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 및 내독소 측정에 의해 샘플의 완전성을 평가하였다. 최종 단백질 농도는 항-Vβ17/항-CD123에 대해서는 0.48 mg/ml이었고, Vβ17 x 널에 대해서는 0.24 mg/mL이었다. 이들 단백질 농도를 기준으로 항-Vβ17/항-CD123 및 Vβ17 x 널의 최종 EU 수준은 각각 2.053 EU/mg 및 4.219 EU/mg이었다.

[표 7]

[표 8]

실시예 3. Kasumi-3 세포 및 인간 CD8 ⁺ T 세포를 사용하여 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체의 결합 특성 및 세포독성 특성의 평가

총 PBMC로부터의 Vβ17 ⁺ CD8 ⁺ T 세포의 자극 및 증폭

Vβ17⁺ CD8⁺ T 세포를 증폭시키기 위하여, HLA-A2 공여자(HPU-08694)로부터의 전체 PBMC를 1 ㎍/mL의 FLU MP 58 펩티드(DMSO 중)로 자극하였다. 총 CD8⁺ T 세포 중 Vβ17⁺ 세포의 빈도를 배양 기간의 일수 8 및 14에서 결정하였다. 총 CD8⁺T 세포 중 Vβ17⁺ 세포의 빈도를 계수하기 위하여, 총 살아있는 PBMC를 초기에 게이팅하고, 이중체를 제외시키고, 총 CD8⁺T 세포를 게이팅하고, 이어서 Vβ17⁺ 세포를 게이팅하였다(도 3a). 일수 0에서 총 CD8⁺ T 세포 중 Vβ17⁺ 세포의 빈도와 대비하여, 이들 세포의 실질적인 증폭이 배양 기간의 일수 8에서 관찰되었다(도 3b). 일수 8에서 CD8⁺ T 세포의 더 큰 분율은 이 공여자에서 Vβ17⁺ 세포였다(도 3b).

항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 결합 검정

Kasumi-3 세포 상에서

항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체의 결합 속도론을 이해하기 위하여, Kasumi-3 세포를 다양한 농도(5 ㎍/mL 내지 0 ㎍/mL의 농도 범위)의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 및 Vβ17X널 아암 대조군과 함께 인큐베이션하였다. 세포-결합된 이중특이성 항체를 마우스 항-인간 IgG4 Fc-PE 2차 항체를 사용하여 검출하였다. 표 9는 상이한 농도의 이중특이성 항체로 처리되었을 때 PE(2차 항체)에 대해 양성인 Kasumi-3 세포의 빈도를 나타낸다. 항-Vβ17/항-CD123 및 널XCD123에 대한 EC₅₀은 각각 6 및 42.7 nM로 결정되었다(표 9).

[표 9]

Kasumi-3 세포에 대한 이중특이성 항체 결합 친화도는 유세포측정법에 의해 결정되었다. 반수 최대 유효 농도(EC₅₀) 값은 최대 결합(PE 양성 세포)의 50%를 발생시키는 이중특이체 농도로서 계산되었다. ND: 결정되지 않음.

풍부화된 CD8 ⁺ T 세포 상에서

(배양 일수 14로부터의) 풍부화된 FLU MP 58 펩티드 자극된 CD8⁺T 세포를 다양한 농도의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 및 Vβ17X널 아암 대조군 항체와 함께 인큐베이션하였다. 마우스 항-인간 IgG4 Fc-PE 2차 항체를 사용하여 이중특이성 항체를 검출하였다. 표 10은 상이한 농도의 이중특이성 항체로 처리되었을 때 PE(2차 항체)에 대해 양성인 CD8⁺ 세포의 빈도를 나타낸다. 항-Vβ17/항-CD123, Vβ17X널에 대한 EC₅₀은 각각 9.0 nm, 18.7 nm로 결정되었다(표 10).

[표 10]

CD8⁺T 세포에 대한 이중특이성 항체 결합 친화도는 유세포측정법에 의해 결정되었다. 반수 최대 유효 농도(EC₅₀) 값은 최대 결합(PE 양성 세포)의 50%를 발생시키는 항체 농도로서 계산되었다. ND: 결정되지 않음

이중특이성 항체-매개 세포독성 검정

항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 매개 세포독성의 효력을 분석하기 위하여, CFSE 표지된 표적(Kasumi-3) 세포를 다양한 농도의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 및 Vβ17X널 아암 대조 항체와 함께, 0.5:1, 1:1, 5:1의 이펙터 대 표적(ET) 비로 배양 일수 14로부터의 자극된 CD8⁺T 세포(이펙터)와 14시간 및 24시간 동안 공동배양하였다. 표적 Kasumi-3 세포 상에서의 CD123 발현을 구매가능한 항-CD123 항체를 사용하여 확인하였다. 유세포측정법 분석 동안 CFSE⁺로서 확인하기 위하여, 표적 세포(Kasumi-3)를 CFSE로 표지하였다. 공동배양 기간 후, 7-AAD를 첨가하여 세포독성의 척도로서 7-AAD⁺ CFSE⁺ 세포의 백분율을 분석하였다. 이중특이성 항체의 부재 하에서 관찰된 기저 세포독성을 차감하여 이중특이성 항체에 반응하여 나타난 특이적 세포독성을 구하였다. 이 검정은 단일 공여자(HPU-08694)를 사용하여 1회 수행하였다. 14시간 시점에 대한 0.5:1, 1:1 및 5:1 ET 비에서의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체에 대한 EC₅₀은 각각 3.7, 0.1 및 0.133 pM이었다(표 11).

[표 11]

24시간 시점에 대한 0.5:1, 1:1 및 5:1 ET 비에서의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체에 대한 EC₅₀은 각각 0.4, 0.2 및 1.0 pM이었다(표 12).

[표 12]

유사하게, 항-Vβ17/항-CD123 이중특이체 매개 비자극된 CD8⁺ T 세포 세포독성을 14시간(표 13) 및 24시간(표 14) 동안 ET 비 0.5:1, 1:1, 5:1로 시험하였다. 5 ng/ml의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이체 농도 및 14시간 시점에서, 0.5:1 및 1:1 ET 비의 비자극된 CD8⁺ T 세포는 각각 2.8% 및 9.8%의 표적 세포 세포독성을 나타내었는데(표 13), 이와 비교하여 자극된 CD8⁺ T 세포에 의한 세포독성은 77% 및 73%였다. 5:1 ET 비에서, 비자극된 CD8⁺ T 세포는 31.65%의 표적 세포독성을 나타내었는데, 이와 대비하여 자극된 CD8⁺ T 세포에 의한 세포독성은 70.9%였다. 24시간 시점으로부터 유사한 결과를 얻었다(표 12, 표 15, 표 16, 및 표 17). 시험된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이체의 최고 농도(5 ng/ml)에서, 비자극된 CD8⁺ T 세포는 더 높은 ET 비에서 표적 세포에 대해 더 높은 세포독성을 나타내었다.

[표 13]

[표 14]

[표 15]

반수 최대 유효 농도(EC₅₀) 값은 최대 세포독성(CFSE⁺7AAD⁺) 세포의 50%를 발생시키는 항체 농도로서 계산되었다. ND: 결정되지 않음.

[표 16]

반수 최대 유효 농도(EC₅₀) 값은 최대 세포독성(CFSE⁺7AAD⁺) 세포의 50%를 발생시키는 항체 농도로서 계산되었다. ND: 결정되지 않음

[표 17]

반수 최대 유효 농도(EC₅₀) 값은 최대 세포독성(CFSE⁺7AAD⁺) 세포의 50%를 발생시키는 항체 농도로서 계산되었다. UD: 검출 불가능.

당업자는 광범위한 본 발명의 개념으로부터 벗어나지 않고서 전술된 실시 형태에 변경이 이루어질 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 본 발명은 개시된 특정 실시 형태로 제한되는 것이 아니라, 본 명세서에 의해 한정되는 바와 같은 본 발명의 사상 및 범주 내의 변형들을 포함하도록 의도됨이 이해된다.

SEQUENCE LISTING <110> Janssen Biotech, Inc. <120> Anti-VB17/Anti-CD123 Bispecific Antibodies and Uses Thereof <130> PRD4012WOPCT <150> US62/816,464 <151> 2019-03-11 <160> 44 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B17B01 HCDR1 <400> 1 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Phe Trp Asn 1 5 10 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B17B01 HCDR2 <400> 2 Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn 1 5 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B17B01 HCDR3 <400> 3 Pro Ser Pro Gly Thr Gly Tyr Ala Val Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B17B01 LCDR1 <400> 4 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B17B01 LCDR2 <400> 5 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B17B01 LCDR3 <400> 6 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Phe Thr 1 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Gly Glu Asn Leu Thr Val Tyr Cys Asn Ser Ser Ser Val Phe Ser 35 40 45 Ser Leu Gln Trp Tyr Arg Gln Glu Pro Gly Glu Gly Pro Val Leu Leu 50 55 60 Val Thr Val Val Thr Gly Gly Glu Val Lys Lys Leu Lys Arg Leu Thr 65 70 75 80 Phe Gln Phe Gly Asp Ala Arg Lys Asp Ser Ser Leu His Ile Thr Ala 85 90 95 Ala Gln Pro Gly Asp Thr Gly Leu Tyr Leu Cys Ala Gly Ala Gly Ser 100 105 110 Gln Gly Asn Leu Ile Phe Gly Lys Gly Thr Lys Leu Ser Val Lys Pro 115 120 125 Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys 130 135 140 Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr 145 150 155 160 Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr 165 170 175 Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala 180 185 190 Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser 195 200 205 Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly

Claims

단리된 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
a. 제1 중쇄(HC1);
b. 제2 중쇄(HC2);
c. 제1 경쇄(LC1); 및
d. 제2 경쇄(LC2)를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성하는, 단리된 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항에 있어서, 상기 제1 항원에 대한 결합 부위는 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포 상의 Vβ17에 결합하는, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 제2 항원에 대한 결합 부위는 암 세포의 표면 상에 존재하는 종양 항원에 결합하는, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, HC1 및 LC1은 인간화 형태인, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, HC2 및 LC2는 CD123에 결합되는, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG 동종형(isotype)인, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG4 동종형인, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 0.2 pM 미만의 EC₅₀으로 시험관내(in vitro)에서 암 세포의 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T-세포 의존성 세포독성을 유도하는, Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HC1 및 LC1을 인코딩하는 단리된 핵산.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HC2 및 LC2를 인코딩하는 단리된 핵산.
제9항 또는 제10항의 단리된 핵산을 포함하는 벡터.
제11항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
a. 제1 중쇄(HC1);
b. 제2 중쇄(HC2);
c. 제1 경쇄(LC1); 및
d. 제2 경쇄(LC2)를 포함하며,
HC1은 LC1과 회합되고, HC2는 LC2와 회합되고, HC1은 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC1은 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, Vβ17에 특이적으로 결합하는 제1 항원에 대한 결합 부위를 형성하고, HC2는 각각 서열 번호 34, 서열 번호 35, 및 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고, LC2는 각각 서열 번호 37, 서열 번호 38, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하여, CD123에 특이적으로 결합하는 제2 항원에 대한 결합 부위를 형성하는, 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제13항에 있어서, HC1은 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하고 LC1은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하고 LC2는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 Vβ17은 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포의 표면 상에 존재하는, 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD123은 암 세포 또는 CD34⁺ 줄기 세포의 표면 상에 존재하는, 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 0.2 pM 미만의 EC₅₀으로 시험관내에서 암 세포의 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T-세포 의존성 세포독성을 유도하는, 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제13항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HC1 및 LC1을 인코딩하는 단리된 핵산.
제13항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HC2 및 LC2를 인코딩하는 단리된 핵산.
제18항 또는 제19항의 단리된 핵산을 포함하는 벡터.
제20항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
제13항 내지 제17항 중 어느 한 항의 단리된 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 완충 조성물.
Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 암 세포로 유도하는 방법으로서,
Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 제13항의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 상기 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계는 상기 Vβ17-발현 CD8⁺ 또는 CD4⁺ T 세포를 암 세포로 유도하는, 방법.
암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법으로서,
상기 암 세포를 제13항의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 암 세포를 상기 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계는 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는, 방법.
제23항 또는 제24항에 있어서, 상기 암 세포는 CD123-발현 암 세포인, 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
제13항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 방법으로서,
제12항의 숙주 세포를 배양하여 상기 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 단계, 및 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 Vβ17 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 방법으로서,
제21항의 숙주 세포를 배양하여 상기 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 단계, 및 상기 세포 또는 배양물로부터 상기 항-Vβ17/항-CD123 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
서열 번호 28의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제30항에 있어서, 상기 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제30항 또는 제31항의 단리된 인간화 Vβ17 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산.
제32항의 단리된 핵산을 포함하는 벡터.
제33항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.