KR20210003614A - A composition for the improving, preventing and treating of influenza virus infection comprising polysaccharide fraction isolated from persimmon leaf - Google Patents
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Abstract
본 발명은 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유함으로써 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하거나 치료하는 효과가 우수하므로, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물 및 식품 등으로 유용하게 활용할 수 있다.The present invention relates to a composition for improving, preventing or treating influenza virus infectious diseases, and is excellent in preventing or treating influenza virus infection by containing a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient, and thus preventing or treating influenza virus infectious diseases It can be usefully used as a pharmaceutical composition and food for.
Description
본 발명은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유함으로써 인플루엔자 바이러스 감염 질환을 개선, 예방하거나 치료하는 효과가 우수한 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition having an excellent effect of improving, preventing or treating influenza virus infection diseases by containing a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
인플루엔자 바이러스는 급성 호흡기 감염질환인 독감의 원인체로 공중보건학적으로 매우 중요하게 여겨지는 병원체 중의 하나이다.Influenza virus is one of the most important pathogens in public health as a cause of flu, an acute respiratory infection.
H1N1과 H3N2 아형의 A형 인플루엔자 바이러스와 Victoria와 Yamagata lineage의 B형 인플루엔자 바이러스로 구성되는 계절성 인플루엔자 바이러스(seasonal influenza virus)는 매년 겨울철 유행하며 사람들에게 큰 피해를 입히고 있다. 세계보건기구(WHO)에 따르면, 매년 전세계적으로 약 3백만~5백만 명의 사람들이 계절성 인플루엔자 바이러스에 감염되어 심각한 병증을 겪고, 그 중 약 25만~50만 명의 사람들이 사망하는 것으로 알려져 있다.The seasonal influenza virus, consisting of the H1N1 and H3N2 subtypes of influenza A virus and the Victoria and Yamagata lineage B type influenza virus, is a winter epidemic every year and causes great damage to people. According to the World Health Organization (WHO), about 3 million to 5 million people worldwide each year become infected with the seasonal influenza virus and suffer serious illnesses, of which 250,000 to 500,000 people die.
인플루엔자 바이러스의 대유행(pandemic)은 더욱 큰 피해를 초래한다. 1918년 발생한 인플루엔자 바이러스 대유행 시 약 5천만 명의 사람이 사망하였으며 1957년과 1968년에 발생한 인플루엔자 바이러스 대유행 시에는 의해 약 백만명의 사람이 사망한 것으로 알려져 있다. 인류는 지난 2009년 신종 인플루엔자 바이러스에 의해 발생한 대유행 시에도 심각한 인적 피해와 경제적 피해 그리고 사회적 혼란을 경험한 바 있었다.The pandemic of the influenza virus causes even more damage. About 50 million people died during the 1918 influenza virus pandemic, and about 1 million people died during the 1957 and 1968 influenza virus pandemics. Humanity experienced serious human damage, economic damage, and social turmoil even during the pandemic caused by the new influenza virus in 2009.
조류인플루엔자 바이러스(avian influenza virus) 역시 심각한 위협으로 여겨지고 있다. 현재까지도 조류인플루엔자 바이러스의 지속적인 사람감염 사례가 보고되고 있다. 특히, 고병원성 H5N1 조류인플루엔자 바이러스의 경우 약 59%, H7N9 조류인플루엔자 바이러스의 경우 약 32%의 높은 치사율을 나타내는 것으로 분석되고 있어 WHO에서 예의주시하고 있는 상황이다.The avian influenza virus is also considered a serious threat. Even today, cases of continuous human infection of the avian influenza virus have been reported. In particular, the highly pathogenic H5N1 avian influenza virus is analyzed to have a high mortality rate of about 59%, and the H7N9 avian influenza virus is analyzed to have a high mortality rate of about 32%.
이러한 인플루엔자 바이러스를 예방하기 위한 가장 효과적인 방법은 백신접종으로 알려져 있지만 백신만으로 인플루엔자 바이러스에 의한 피해를 조절하기에는 한계가 있다. 현재 계절성 인플루엔자 바이러스에 대한 백신을 접종하고 있음에도 불구하고 전세계적으로 매년 25만~50만 명의 사망자가 발행하고 있다.The most effective method for preventing such influenza virus is known as vaccination, but there is a limit to controlling the damage caused by influenza virus only with vaccine. Despite being vaccinated against the seasonal influenza virus, 250,000 to 500,000 deaths are issued annually worldwide.
인플루엔자 백신의 경우, 인플루엔자 바이러스가 갖는 항원성 변이 특성 때문에 그 해 겨울에 유행할 바이러스를 연초에 예측한 뒤 이에 대한 백신을 생산하는 생산체계에 따라 제작된다. 따라서 제작된 백신이 그 해 겨울 유행하는 인플루엔자 바이러스의 항원과 일치하지 않는 상황이 발생할 수 있으며, 이러한 경우 사람을 인플루엔자 바이러스 감염으로부터 효과적으로 보호하지 못할 수도 있다. 또한 예측하지 못한 시기에 신종인플루엔자 바이러스가 갑작스럽게 유행할 경우 백신으로는 신속한 초기대응이 어렵다.In the case of influenza vaccines, due to the antigenic mutation characteristics of the influenza virus, it is produced according to a production system that predicts a virus that will pandemic in the winter of that year at the beginning of the year and then produces a vaccine against it. Therefore, a situation may arise where the manufactured vaccine does not match the antigen of the influenza virus that is pandemic that winter, and in this case, it may not be able to effectively protect humans from influenza virus infection. In addition, if the swine flu virus suddenly outbreaks at an unexpected time, it is difficult to respond quickly with a vaccine.
항바이러스제의 사용은 이러한 백신의 한계점을 극복할 수 있었다. 실제로 지난 2009년 발생한 신종인플루엔자 바이러스 대유행 시, 충분한 도즈(dose)의 백신이 준비되기 전, 인플루엔자 바이러스 표면 당단백질 중 하나인 neuraminidase(NA)를 억제하는 항바이러스제(NA inhibitor, NAI)인 oseltamivir(상품명 Tamiflu)가 효과적인 신종 인플루엔자 바이러스 조절 수단으로 널리 처방되었다. 최근 연구에 따르면, 2009년 당시 oseltamivir의 처방은 신종인플루엔자 바이러스로부터 효과적으로 사람들을 보호한 것으로 분석되었다.The use of antiviral agents was able to overcome the limitations of these vaccines. In fact, in the case of the 2009 swine flu virus pandemic, oseltamivir (trade name), an antiviral agent (NA inhibitor, NAI) that inhibits neuraminidase (NA), one of the surface glycoproteins of influenza virus, before a sufficient dose of vaccine is prepared. Tamiflu) has been widely prescribed as an effective means of controlling the swine flu virus. According to a recent study, it was analyzed that the prescription of oseltamivir at the time of 2009 effectively protected people from the swine flu virus.
우리나라 역시 국내 기술로 새로운 항바이러스제를 개발해야 할 필요성이 매우 높게 요구되고 있으며, 항바이러스제 개발에 대한 국내 고유의 기술을 축적하고 해외 의존도를 낮추기 위해서 우리나라만의 전통 약제나 식품에서 새로운 항바이러스제 후보물질을 탐색발굴하는 연구가 시급히 요구되고 있다.Korea is also highly required to develop new antiviral drugs with domestic technology, and new antiviral candidates in Korean traditional drugs or foods to accumulate domestic unique technology and reduce dependence on foreign countries for antiviral drug development. There is an urgent need for research to explore and discover.
본 발명의 목적은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는데 있다.An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of influenza virus infection disease containing a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
또한, 본 발명의 다른 목적은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는데 있다.In addition, another object of the present invention is to provide a food composition for preventing or improving influenza virus infectious diseases containing a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 치료를 위한 인간을 제외한 동물용 약학 조성물을 제공하는데 있다.In addition, another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for animals other than humans for the prevention or treatment of influenza virus infection diseases containing a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공하는데 있다.In addition, another object of the present invention is to provide a feed composition for preventing or improving influenza virus infection diseases containing a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제 조성물을 제공하는데 있다.In addition, another object of the present invention is to provide a feed additive composition for preventing or improving influenza virus infectious diseases containing a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유할 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating influenza virus infection diseases of the present invention for achieving the above object may contain a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
상기 감잎 유래 다당 분획물은 전체 다당 분획물 대비 중성 다당(neutral sugar) 60 내지 80 중량%, 우론산(uronic acid) 18 내지 39 중량%, KDO 유사 물질 0.5 내지 10 중량%를 포함할 수 있다.The polysaccharide fraction derived from persimmon leaves may include 60 to 80% by weight of neutral sugar, 18 to 39% by weight of uronic acid, and 0.5 to 10% by weight of a KDO-like substance relative to the total polysaccharide fraction.
상기 중성 다당은 아라비노오스, 람노오스, 갈락토오스, 푸코스, 글루코오스 및 람노갈락투로난(Rhamnogalacturonan)-II 지표 중성당류를 포함할 수 있으며; 상기 우론산은 갈락투로닉산(galacturonic acid) 및 글루쿠로닉산(glucuronic acid)으로 이루어진 것일 수 있다.The neutral polysaccharide may include arabinose, rhamnose, galactose, fucose, glucose, and Rhamnogalacturonan-II indicator neutral saccharide; The uronic acid may be made of galacturonic acid and glucuronic acid.
상기 KDO 유사 물질은 DHA(3-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaric acid) 및 KDO(3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid)를 포함할 수 있다.The KDO-like substance may include 3-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaric acid (DHA) and 3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid (KDO).
상기 약학적 조성물은 뉴라미니다아제, 바람직하게는 H1N1, H3N2, H4N2, H5N2, H6N2 및 H7N2에 대한 뉴라미니다아제 활성을 억제할 수 있다.The pharmaceutical composition can inhibit neuraminidase activity against neuraminidase, preferably H1N1, H3N2, H4N2, H5N2, H6N2 and H7N2.
상기 인플루엔자 바이러스 감염으로 인한 질환은 독감, 감기, 인후염, 기관지염 및 폐렴으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.The disease caused by the influenza virus infection may be at least one selected from the group consisting of flu, cold, sore throat, bronchitis, and pneumonia.
상기 독감은 조류독감, 돼지독감 및 신종플루로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.The flu may be at least one selected from the group consisting of bird flu, swine flu and swine flu.
상기 다당 분획물은 (a) 감잎 분말에 펙틴 가수분해 효소를 처리 하는 단계; 및 (b) 상기 효소 처리된 감잎 분말에서 분자량 30 kDa 이상의 분획물을 회수하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.The polysaccharide fraction comprises the steps of: (a) treating persimmon leaf powder with pectin hydrolase; And (b) recovering a fraction having a molecular weight of 30 kDa or more from the enzyme-treated persimmon leaf powder.
또한, 상기한 다른 목적을 달성하기 위한 본 발명의 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유할 수 있다.In addition, the food composition for preventing or improving influenza virus infectious diseases of the present invention for achieving the other object described above may contain a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
또한, 상기한 또 다른 목적을 달성하기 위한 본 발명의 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 치료를 위한 인간을 제외한 동물용 약학 조성물은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유할 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition for animals other than humans for the prevention or treatment of influenza virus infection diseases of the present invention for achieving the above-described another object may contain a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
상기 동물용 인플루엔자 바이러스 감염 질환은 변이형 감염성 조류독감, 뉴캣슬병 바이러스(newcastle disease virus)로 인한 조류 파라믹소바이러스(Avian paramyxoovirus) 감염증, 개 디스템퍼(Canine distemper) 감염증, 닭 전염성 기관지염 바이러스(infectious broncheitis virus)로 인한 칠면조 코로나 바이러스(Turkey coronavirus) 감염증, 조류 뉴모바이러스(avian pneumovirus)로 인한 조류 뉴모바이러스 감염증, 돼지 생식기 및 호흡 증후군 바이러스(porcine reproductive and respiratory syndrome virus)로 인한 돼지 생식기 및 호흡 증후군 바이러스 감염증, 콕사키 바이러스(coxsakie virus)로 인한 구제역 (Foot-and-mouth disease), 세망내피증 바이러스(reticuloendotheliosis virus)로 인한 조류 백혈병(Avian leukosis), 오제스키 바이러스(aujeszky's disease virus)로 인한 닭 전염성후두기관염(Chicken infectious laryngotrachitis), 아데노 바이러스(adeno virus)로 인한 호흡기 감염증 및 산란저하증(Egg drop syndrome)을 유발하는 동물 아데노바이러스 감염증으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.The animal influenza virus infectious diseases include mutant infectious bird flu, Avian paramyxoovirus infection caused by newcastle disease virus, Canine distemper infection, chicken infectious broncheitis virus. Turkey coronavirus infection caused by avian pneumovirus, avian pneumovirus infection caused by avian pneumovirus, pig genital and respiratory syndrome virus infection caused by porcine reproductive and respiratory syndrome virus, Cock Foot-and-mouth disease due to coxsakie virus, Avian leukosis due to reticuloendotheliosis virus, Chicken infectious laryngeal tracheitis due to aujeszky's disease virus infectious laryngotrachitis), respiratory infections caused by adenovirus, and animal adenovirus infections that cause egg drop syndrome.
또한, 상기한 또 다른 목적을 달성하기 위한 본 발명의 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유할 수 있다.In addition, the feed composition for preventing or improving influenza virus infection diseases of the present invention for achieving the another object described above may contain a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
또한, 상기한 또 다른 목적을 달성하기 위한 본 발명의 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제 조성물은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유할 수 있다.In addition, the feed additive composition for preventing or improving the influenza virus infection disease of the present invention for achieving the another object described above may contain a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
본 발명의 감잎 유래 다당 분획물을 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물은 인플루엔자 바이러스의 뉴라미니다아제 효소 활성을 억제함으로써 인플루엔자 바이러스 감염 질환을 개선, 예방 또는 치료하는 효과가 우수하므로, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 개선, 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물, 식품, 사료 조성물, 사료 첨가제 조성물 등으로 유용하게 활용할 수 있다.The composition for improving, preventing or treating influenza virus-infected diseases containing the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves of the present invention is excellent in improving, preventing or treating influenza virus-infected diseases by inhibiting the neuraminidase enzyme activity of the influenza virus. , It can be usefully utilized as a pharmaceutical composition, food, feed composition, feed additive composition, etc. for the improvement, prevention or treatment of influenza virus infection.
도 1은 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물 및 비교예 1의 분확물의 저해활성을 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물의 동물 및 사람에서 유래한 다양한 아형의 인플루엔자 바이러스(H3N2, H4N2, H5N2, H6N2, H7N2)에 대한 뉴라미니데이즈 활성억제를 나타낸 도면이다.
도 3은 각 그룹별 마우스의 폐 병변지수을 나타낸 그래프이다.
도 4는 각 그룹별 마우스의 폐내에 잔존하는 바이러스의 함량을 역가로 나타낸 그래프이다.1 is a view showing the inhibitory activity of the crude polysaccharide fraction prepared according to Example 1 of the present invention and the fraction of Comparative Example 1.
FIG. 2 is a diagram showing the inhibition of neuraminidase activity against various subtypes of influenza viruses (H3N2, H4N2, H5N2, H6N2, H7N2) derived from animals and humans of crude polysaccharide fractions prepared according to Example 1 of the present invention. .
3 is a graph showing the lung lesion index of mice for each group.
4 is a graph showing the titer of the virus remaining in the lungs of each group of mice.
본 발명은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유함으로써 인플루엔자 바이러스 감염 질환을 개선, 예방하거나 치료하는 효과가 우수한 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition having an excellent effect of improving, preventing or treating influenza virus infection diseases by containing a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 인플루엔자 바이러스에 대한 감염 질환을 개선, 예방 또는 치료할 수 있는 조성물은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유한다.The composition capable of improving, preventing or treating infectious diseases against influenza virus of the present invention contains a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
상기 감잎 유래 다당 분획물의 원재료로 사용되는 감잎은 레몬의 약 20배 분량수준으로 비타민 C가 100 mg% 정도 함유되어 괴혈병, 고혈압, 빈혈에 뚜렷한 효과가 있다고 알려져 있다. Persimmon leaves, which are used as a raw material for the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves, are known to have a distinct effect on scurvy, hypertension, and anemia because they contain about 20 times the amount of vitamin C and about 100 mg% of lemon.
본 발명의 감잎 유래 다당 분획물은 전체 다당 분획물 대비 중성 다당(neutral sugar) 60 내지 80 중량%, 우론산(uronic acid) 18 내지 39 중량%, KDO(3-deoxy-D-manno-2- octulosonic acid) 유사 물질 0.5 내지 10 중량%를 포함한다. 또한, 단백질 0.5 내지 20 중량%를 더 포함할 수 있다.The polysaccharide fraction derived from persimmon leaves of the present invention comprises 60 to 80% by weight of neutral sugar, 18 to 39% by weight of uronic acid, and 3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid (KDO) relative to the total polysaccharide fraction. ) 0.5 to 10% by weight of similar substances. In addition, it may further contain 0.5 to 20% by weight of protein.
상기 우론산은 갈락투론산(galacturonic acid) 및 글루쿠론산(glucuronic acid)으로 이루어지며; 상기 중성 다당은 아라비노오스(arabinose), 람노오스(rhamnose), 갈락토오스(galactose), 푸코스(fucose), 글루코오스(glucose) 및 람노갈락투로난(Rhamnogalacturonan)-II 지표 중성당류를 포함한다.The uronic acid is composed of galacturonic acid and glucuronic acid; The neutral polysaccharide includes arabinose, rhamnose, galactose, fucose, glucose, and Rhamnogalacturonan-II indicator neutral saccharide.
바람직하게, 상기 중성당류는 상기 감잎 유래 다당 분획물을 구성하는 전체 중성 다당 대비 아라비노오스 20 내지 40 mole%, 람노오스 10 내지 40 mole%, 갈락토오스 10 내지 40 mole%, 푸코스 1 내지 10 mole%, 글루코오스 1 내지 10 mole% 및 람노갈락투로난-II 지표 중성당류 0.4 내지 26 mole%인 다당을 포함한다. Preferably, the neutral saccharide is arabinose 20 to 40 mole%,
또한, 상기 KDO 유사 물질은 DHA(3-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaric acid) 및 KDO(3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid)로 이루어진 것이다.In addition, the KDO-like substance is composed of 3-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaric acid (DHA) and 3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid (KDO).
본 발명의 감잎 유래 다당 분획물은 (a) 감잎 분말에 펙틴 가수분해 효소를 처리 하는 단계; 및 (b) 상기 효소 처리된 감잎 분말에서 분자량 30 kDa 이상의 고분자 다당 분획물을 회수하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 제조된다. The polysaccharide fraction derived from persimmon leaves of the present invention comprises the steps of: (a) treating persimmon leaf powder with pectin hydrolase; And (b) recovering a polymer polysaccharide fraction having a molecular weight of 30 kDa or more from the enzyme-treated persimmon leaf powder.
먼저, 상기 (a)단계에서는 감잎 분말에 펙틴 가수분해 효소를 처리한다.First, in step (a), persimmon leaf powder is treated with pectin hydrolase.
펙틴 가수분해 효소는 감잎 분말 중량 대비 1 내지 10 중량%로 첨가되며, 바람직하게는 1 내지 5 중량%로 첨가되고, 더욱 바람직하게는 1 내지 3 중량%로 첨가될 수 있다. The pectin hydrolase is added in an amount of 1 to 10% by weight, preferably 1 to 5% by weight, and more preferably 1 to 3% by weight based on the weight of persimmon leaf powder.
본 발명에서 감잎은 건조되지 않은 것 또는 건조된 것을 사용할 수 있으며, 분쇄된 것 또는 분말화된 것을 사용할 수 있다. 바람직하게 효소를 처리하는 상기 감잎 분말은 증류수로 10배 내지 30배(w/v) 정도로 현탁하여 사용할 수 있다. In the present invention, persimmon leaves may be undried or dried, and pulverized or powdered may be used. Preferably, the persimmon leaf powder treated with the enzyme may be used by suspending it in distilled water about 10 to 30 times (w/v).
상기 가수분해 효소 처리는 1 내지 5일 동안 처리하는 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 2 내지 4일 일 수 있다. The hydrolytic enzyme treatment is preferably performed for 1 to 5 days, more preferably 2 to 4 days.
상기 (a) 단계는 효소 처리 후에 잔존 펙틴 가수분해 효소를 90 내지 110 ℃에서 10 내지 60분 동안 가열하여 효소를 불활성화시키는 공정을 추가로 수행할 수 있다. 상기 가열로 인해 가용성 다당 성분의 용출을 증가시키며, 일부 불순물로 포함되어 있는 고분자 단백질을 변성 및 침전시킴으로써 원심분리에 의한 다당 추출물 획득 및 순도를 증진시킨다.The step (a) may further perform a process of inactivating the enzyme by heating the remaining pectin hydrolase at 90 to 110° C. for 10 to 60 minutes after the enzyme treatment. Due to the heating, the elution of the soluble polysaccharide component is increased, and the polysaccharide extract obtained by centrifugation and purity is improved by denaturing and precipitating a polymer protein included as some impurities.
또한, 상기 (a) 단계는 효소 처리 전에 감잎 분말을 탈색하는 공정을 포함할 수 있다. 탈색하기 위한 용매로는 인체에 무해하여 그 사용이 허가된 탈색 용매라면 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 에탄올, 아황산칼륨, 아황산나트륨, 이산화황 및 과산화벤조로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 들 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 들 수 있다.In addition, the step (a) may include a process of decolorizing the persimmon leaf powder before the enzyme treatment. The solvent for decolorization is not particularly limited as long as it is harmless to the human body and its use is permitted, but preferably at least one selected from the group consisting of ethanol, potassium sulfite, sodium sulfite, sulfur dioxide, and benzoic peroxide. , Preferably, ethanol is used.
다음으로, 상기 (b)단계에서는 상기 효소처리된 감잎에서 원심분리, 용매분획 또는 여과 등의 방법으로 잔사를 제거하여 다당 추출물을 수득한 후 이로 부터 분자량 30 kDa 이상의 고분자 다당 분획물을 회수한다. Next, in step (b), residues are removed from the enzymatically treated persimmon leaves by centrifugation, solvent fractionation, or filtration to obtain a polysaccharide extract, and a polymer polysaccharide fraction having a molecular weight of 30 kDa or more is recovered therefrom.
상기 분획물을 수득하는 방법은 분자량을 기준으로 정제하는 방법이라면 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 한외여과, 용매분획 또는 겔 여과 크로마토그래피를 들 수 있고, 더욱 바람직하게는 한외여과를 들 수 있다. 또한, 최종 다당 분획물의 형태는 추출물, 농축물 또는 분말일 수 있다.The method of obtaining the fraction is not particularly limited as long as it is a method of purifying on the basis of molecular weight, but preferably, ultrafiltration, solvent fractionation or gel filtration chromatography may be used, and more preferably, ultrafiltration may be used. In addition, the form of the final polysaccharide fraction may be an extract, concentrate or powder.
구체적으로, 본 발명은 상기 펙티나아제(Pectinase)로 처리하여 얻은 감잎 유래 분획물을 상기와 같은 방법을 이용하여 분자량 30 kDa 미만의 것을 제거하여 감잎 유래 조다당 분획물(PLE-0)을 수득하였다.Specifically, in the present invention, the persimmon leaf-derived fraction obtained by treatment with the pectinase was removed with a molecular weight of less than 30 kDa using the same method as described above to obtain a crude polysaccharide fraction (PLE-0) derived from persimmon leaf.
상기 수득된 감잎 유래 조다당 분획물(PLE-0)의 구성당을 기체 크로마토그래피로 분석한 결과, 전체 다당 대비 중성 다당 71.3 중량%, 우론산 26.2 중량%, 단백질 0.7 중량%, KDO 유사 물질 1.8 중량%이며; 상기 중성 다당의 성분을 분석한 결과, 전체 중성 다당 대비 2-메틸퓨코오스 1.6 mole%, 람노오스 15.6 mole%, 퓨코오스 2.4 mole%, 2-메틸자일로오스 2.0 mole%, 아라비노오스 26.3 mole%, 자일로오스 6.7 mole%, 아피오스 4.5 mole%, 아세릭산 1.4 mole%, 만노오스 2.1 mole%, 갈락토오스 32.3 mole%, 글루코오스 5.1 mole%인 것을 확인하였다. 상기 중성 다당 중 2-메틸퓨코오스, 2-메틸자일로오스, 아피오스, 아세릭산은 람노갈락투로난(Rhamnogalacturonan)-II(RG-II) 지표 물질이다([표 2] 참조). 또한, KDO 유사 물질인 3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid(KDO) 및 3-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaricacid (DHA)도 RG-II의 지표 물질이다. As a result of analyzing the constituent sugars of the obtained persimmon leaf-derived crude polysaccharide fraction (PLE-0) by gas chromatography, 71.3% by weight of neutral polysaccharide, 26.2% by weight of uronic acid, 0.7% by weight of protein, 1.8% by weight of KDO-like substances %; As a result of analyzing the components of the neutral polysaccharide, 1.6 mole% of 2-methylfucose, 15.6 mole% of rhamnose, 2.4 mole% of fucose, 2.0 mole% of 2-methylxylose, 26.3 mole of arabinose compared to the total neutral polysaccharide. %, xylose 6.7 mole%, apiose 4.5 mole%, aceric acid 1.4 mole%, mannose 2.1 mole%, galactose 32.3 mole%, glucose 5.1 mole%. Among the neutral polysaccharides, 2-methylfucose, 2-methylxylose, apiose, and aceric acid are Rhamnogalacturonan-II (RG-II) indicator substances (see Table 2). In addition, 3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid (KDO) and 3-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaricacid (DHA), which are KDO-like substances, are also indicators of RG-II.
펙틴물질(pectic substance)들은 고등식물의 1차 세포벽과 중엽(middle lamella)에 주로 존재하는 다당류로써 매우 복잡한 구조를 가지고 있다고 보고되어 있다. 상기 펙틴은 전체 분자의 많은 부분이 호모갈락투로난(homogalacturonan)으로 구성되어 있지만(Kwon MH et al., Food Sci. Ind.;30:30-43,1997), 여기에 다양한 올리고-(oligo-) 및 다당류(polysaccharide)로 분지된 람노갈락투로난(rhamnogalacturonan)-I(RG-I) 및 람노갈락투로난(rhamnogalacturonan)-II(RG-II)가 공유적으로 결합되어 있는 것으로 알려져 있다(Kim JM et al., Biochem. Bioph. Res. Co.;344:765-771,2006).Pectic substances are polysaccharides mainly present in the primary cell wall and middle lamella of higher plants, and have been reported to have a very complex structure. The pectin is composed of homogalacturonan in a large part of the total molecule (Kwon MH et al., Food Sci. Ind.; 30:30-43, 1997), but various oligo-(oligo) here. It is known that -) and rhamnogalacturonan-I (RG-I) and rhamnogalacturonan-II (RG-II) branched into polysaccharides are covalently bound. (Kim JM et al., Biochem. Bioph. Res. Co.; 344:765-771, 2006).
또한, 상기 최종 다당 분획물에 50~100%의 탄소수 1 내지 4의 알코올을 첨가하여 저분자 물질 및 불순물을 제거하는 다당 정제 단계를 추가할 수 있다.
In addition, a polysaccharide purification step of removing low molecular weight substances and impurities may be added by adding alcohol having 1 to 4 carbon atoms of 50 to 100% to the final polysaccharide fraction.
상기 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 조성물로는 인플루엔자 바이러스 감염을 예방 또는 치료할 수 있는 약학 조성물, 인플루엔자 바이러스 감염을 예방 또는 개선할 수 있는 식품 조성물, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 치료를 위한 인간을 제외한 동물용 약학 조성물, 사료 조성물 또는 사료 첨가제 조성물일 수 있다. 상기 조성물은 뉴라미니다아제 억제활성을 갖는 인플루엔자 바이러스의 혈청형에서는 H1N1, H3N2 또는 H5N1이 포함되며, 바람직하게는 H1N1이나, 이에 제한되지 않는다.Compositions containing the persimmon leaf-derived polysaccharide fraction as an active ingredient include pharmaceutical compositions capable of preventing or treating influenza virus infection, food compositions capable of preventing or improving influenza virus infection, and human for preventing or treating influenza virus infection diseases Except for animals, it may be a pharmaceutical composition, a feed composition, or a feed additive composition. The composition includes H1N1, H3N2, or H5N1 in the serotype of the influenza virus having neuraminidase inhibitory activity, preferably H1N1, but is not limited thereto.
또한, 상기 인플루엔자 바이러스 감염으로 인한 질환은 독감, 감기, 인후염, 기관지염 및 폐렴으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 구체적으로 상기 독감으로는 조류독감, 돼지독감 및 신종 플루로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In addition, the disease caused by the influenza virus infection may include at least one selected from the group consisting of flu, cold, sore throat, bronchitis, and pneumonia, but is not limited thereto. Specifically, the flu may include at least one selected from the group consisting of bird flu, swine flu, and swine flu, but is not limited thereto.
본 명세서에서 감잎을 언급하면서 사용되는 용어 '분획물'은 추출용매를 처리하여 얻은 분획물뿐만 아니라 감잎 유래 다당 분획물의 가공물도 포함한다. 예를 들어, 감잎 유래 다당 분획물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.The term'fraction' used while referring to persimmon leaves in the present specification includes not only a fraction obtained by treatment with an extraction solvent, but also a processed product of a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves. For example, the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves may be prepared in a powder state by additional processes such as distillation under reduced pressure and freeze drying or spray drying.
또한, 본 발명의 감잎 유래 다당 분획물은 광의로는 감잎을 동물에게 투여할 수 있도록 제형화된 감잎의 가공물, 예컨대, 감잎 분말도 포함하는 의미를 갖는다. 비록 본 발명에서 감잎 유래 다당 분획물로 실험을 진행하긴 하였으나, 감잎의 가공물과 같은 형태로도 목적하는 효과를 달성할 수 있음은 당업자라면 예상 가능할 것이다.In addition, the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves of the present invention has a meaning including a processed product of persimmon leaves formulated so that persimmon leaves can be administered to animals, for example, persimmon leaf powder. Although the experiment was conducted with the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves in the present invention, it will be expected by those skilled in the art that the desired effect can be achieved even in the same form as the processed product of persimmon leaves.
한편, 본 명세서에서 용어 '유효성분으로 함유하는'이란 감잎 유래 다당 분획물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 일예로, 상기 감잎 유래 다당 분획물은 1 내지 20 mg/kg, 바람직하게는 3 내지 10 mg/kg의 농도로 사용된다. 감잎 유래 다당 분획물은 천연물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 본 발명의 조성물 내에 포함되는 감잎 유래 다당 분획물의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.Meanwhile, in the present specification, the term "containing as an active ingredient" means including an amount sufficient to achieve the efficacy or activity of the polysaccharide fraction derived from persimmon leaf. For example, the persimmon leaf-derived polysaccharide fraction is used at a concentration of 1 to 20 mg/kg, preferably 3 to 10 mg/kg. Since the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves is a natural product and does not have side effects on the human body even if administered in excess, the upper limit of the quantity of the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves included in the composition of the present invention can be selected and carried out within an appropriate range by a person skilled in the art.
본 발명의 약학 조성물 또는 동물용 약학 조성물은 상기 유효 성분 이외에 약학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.The pharmaceutical composition or veterinary pharmaceutical composition of the present invention may be prepared using a pharmaceutically suitable and physiologically acceptable adjuvant in addition to the active ingredient, and the adjuvant includes excipients, disintegrants, sweeteners, binders, coating agents, Expanding agents, lubricants, lubricants or flavoring agents may be used.
상기 약학 조성물 또는 동물용 약학 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.The pharmaceutical composition or the pharmaceutical composition for animals may be preferably formulated into a pharmaceutical composition including at least one pharmaceutically acceptable carrier in addition to the above-described active ingredient for administration.
상기 약학 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피부 외용제, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태(경구제)로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다.The formulation of the pharmaceutical composition may be granules, powders, tablets, external preparations for skin, capsules, suppositories, solutions, syrups, juices, suspensions, emulsions, drops, or injectable solutions. For example, for formulation in the form of a tablet or capsule (oral preparation), the active ingredient may be combined with an oral, non-toxic pharmaceutically acceptable inert carrier such as ethanol, glycerol, water, and the like. In addition, if desired or necessary, suitable binders, lubricants, disintegrants and coloring agents may also be included in the mixture. Suitable binders are, but are not limited to, natural sugars such as starch, gelatin, glucose or beta-lactose, corn sweeteners, natural and synthetic gums such as acacia, lacquercanth or sodium oleate, sodium stearate, magnesium stearate, sodium Benzoate, sodium acetate, sodium chloride, and the like. Disintegrants include, but are not limited to, starch, methyl cellulose, agar, bentonite, xanthan gum, and the like.
액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.As acceptable pharmaceutical carriers for compositions formulated as liquid solutions, sterilization and biocompatible, saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injection solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol, and One or more of these components may be mixed and used, and other conventional additives such as antioxidants, buffers, and bacteriostatic agents may be added as necessary. In addition, diluents, dispersants, surfactants, binders, and lubricants may be additionally added to prepare injectable formulations such as aqueous solutions, suspensions, emulsions, etc., pills, capsules, granules, or tablets.
더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.Furthermore, it can be preferably formulated according to each disease or ingredient using a method disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA as an appropriate method in the field.
본 발명의 약학 조성물 또는 동물용 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여이다.The pharmaceutical composition or veterinary pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally, and in the case of parenteral administration, it can be administered by intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, transdermal administration, etc., preferably Is oral administration.
본 발명의 약학 조성물 또는 동물용 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자(또는 치료 대상 동물)의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 0.001-10 g/kg이다.Suitable dosages of the pharmaceutical composition or veterinary pharmaceutical composition of the present invention include formulation method, mode of administration, age, weight, sex, pathological condition, food, administration time, route of administration, excretion rate and response of the patient (or animal to be treated). It varies depending on factors such as sensitivity, and usually a skilled physician can easily determine and prescribe an effective dosage for the desired treatment or prophylaxis. According to a preferred embodiment of the present invention, the daily dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is 0.001-10 g/kg.
본 발명의 약학 조성물 또는 동물용 약학 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition or veterinary pharmaceutical composition of the present invention may be prepared in unit dosage form by formulation using a pharmaceutically acceptable carrier and/or excipient, or may be prepared by incorporating it into a multi-dose container. At this time, the formulation may be in the form of a solution, suspension, or emulsion in an oil or aqueous medium, or may be in the form of an extract, powder, granule, tablet or capsule, and may additionally include a dispersant or a stabilizer.
또한, 본 발명은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a food composition for preventing or improving influenza virus infection containing a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
본 발명에 따른 식품 조성물은 상기 약학 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 알코올 음료류, 과자류, 다이어트바, 유제품, 육류, 초코렛, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 등이 있다.The food composition according to the present invention may be formulated in the same manner as the pharmaceutical composition to be used as a functional food or added to various foods. Foods to which the composition of the present invention can be added include, for example, beverages, alcoholic beverages, confectionery, diet bars, dairy products, meat, chocolate, pizza, ramen, other noodles, gum, ice cream, vitamin complexes, health supplements. Etc.
본 발명의 식품 조성물은 유효성분으로서 감잎 유래 다당 분획물뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제와 음료류로 제조되는 경우에는 본 발명의 감잎 유래 다당 분획물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 및 각종 식물 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.The food composition of the present invention may include not only a polysaccharide fraction derived from persimmon leaf as an active ingredient, but also an ingredient commonly added during food production, for example, protein, carbohydrate, fat, nutrients, seasoning and flavoring agents. do. Examples of the aforementioned carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose, and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose, oligosaccharides, and the like; And polysaccharides, for example, common sugars such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As flavoring agents, natural flavoring agents [taumatin, stevia extract (eg, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.]) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be used. For example, when the food composition of the present invention is made of drinks and beverages, in addition to the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves of the present invention, citric acid, liquid fructose, sugar, glucose, acetic acid, malic acid, fruit juice, and various plant extracts may be additionally included. have.
본 발명은 상기 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물이 함유된 건강기능식품을 제공한다. 건강기능식품이란, 감잎 유래 다당 분획물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다. 이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 건강기능식품은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 매우 유용하다. 이와 같은 건강기능식품에 있어서의 감잎 유래 다당 분획물의 첨가량은, 대상인 건강기능식품의 종류에 따라 달라 일률적으로 규정할 수 없지만, 식품 본래의 맛을 손상시키지 않는 범위에서 첨가하면 되며, 대상 식품에 대하여 통상 0.01 내지 50 중량%, 바람직하기로는 0.1 내지 20 중량%의 범위이다. 또한, 환제, 과립제, 정제 또는 캡슐제 형태의 건강기능식품의 경우에는 통상 0.1 내지 100 중량% 바람직하기로는 0.5 내지 80 중량%의 범위에서 첨가하면 된다. 한 구체예에서, 본 발명의 건강기능식품은 환제, 정제, 캡슐제 또는 음료의 형태일 수 있다.The present invention provides a health functional food containing a food composition comprising the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient. Health functional foods are foods prepared by adding a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves to food materials such as beverages, teas, spices, gums, confectionery, or encapsulating, powdering, and suspending, and when ingested, they have specific health effects. It means coming, but unlike general drugs, it has the advantage of not having side effects that may occur when taking the drug for a long time by using food as a raw material. The health functional food of the present invention obtained in this way is very useful because it can be consumed on a daily basis. The amount of polysaccharide fraction derived from persimmon leaves in such health functional foods cannot be uniformly regulated depending on the type of health functional food to be targeted, but can be added within the range that does not damage the original taste of the food. It is usually 0.01 to 50% by weight, preferably 0.1 to 20% by weight. In addition, in the case of health functional foods in the form of pills, granules, tablets or capsules, it is usually added in the range of 0.1 to 100% by weight, preferably 0.5 to 80% by weight. In one embodiment, the health functional food of the present invention may be in the form of a pill, tablet, capsule or beverage.
또한, 본 발명은 인플루엔자 바이러스 감염의 개선, 예방 또는 치료용 의약 또는 식품의 제조를 위한 감잎 유래 다당 분획물의 용도를 제공한다. 상기한 바와 같이 감잎 유래 다당 분획물은 인플루엔자 바이러스 감염의 개선, 예방 또는 치료를 위한 용도로 이용될 수 있다.In addition, the present invention provides a use of a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves for the manufacture of pharmaceuticals or foods for improving, preventing or treating influenza virus infection. As described above, the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves can be used for improvement, prevention or treatment of influenza virus infection.
또한, 본 발명은 포유동물에게 유효량의 감잎 유래 다당 분획물을 투여하는 것을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 개선, 예방 또는 치료방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for improving, preventing or treating influenza virus infection, comprising administering an effective amount of a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves to a mammal.
여기에서 사용된 용어 '포유동물'은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다.The term'mammal' as used herein refers to a mammal that is the subject of treatment, observation or experiment, and preferably refers to a human.
또한, 상기 '인간을 제외한 동물'은 돼지, 소, 염소 등의 포유류: 잉어, 금붕어 등의 어류: 및 꿩, 닭, 오리, 칠면조 등의 가금류를 포함한다.In addition, the'animals other than humans' include mammals such as pigs, cows and goats: fish such as carp and goldfish: and poultry such as pheasants, chickens, ducks, and turkeys.
본 발명은 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.The present invention provides a feed composition for preventing or improving influenza virus infectious diseases comprising a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
상기 '사료 조성물'은 유효성분으로 감잎 유래 다당 분획물 이외에, 식품의 기준 및 규격(식품공전)에 기재된 식품으로 사용가능한 식품 원료, 식품첨가물 공전에 기재된 식품첨가물을 사용할 수 있고, 식품으로 사용가능한 식품 원료 또는 식품첨가물이 아니더라도 '사료 등의 기준 및 규격' 별표 1의 단미사료의 범위에 해당하는 원료, 별표 2의 보조사료의 범위에 해당하는 원료를 사용할 수 있다.In addition to the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves, the'feed composition' can use food ingredients and food additives listed in the Food Additives Code, as well as polysaccharide fractions derived from persimmon leaves, as described in the food standards and standards (Food Code), and foods that can be used as food. Even if it is not a raw material or food additive, raw materials that fall within the range of sweet feeds in
상기 '사료 조성물'은 사료 등의 기준 및 규격에 따른 보조사료 중 추출제일 수 있고, 상기 보조사료를 포함하는 배합사료일 수 있다.The'feed composition' may be an extractant among auxiliary feeds according to standards and standards such as feed, and may be a blended feed including the auxiliary feed.
상기 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 사료 조성물을 제조하는 경우 감잎 유래 다당 분획물은 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선 효능을 나타내는 함량이면 특별히 한정할 필요는 없으나, 예를 들어 0.1 내지 99 중량%, 0.5 내지 95 중량%, 1 내지 90 중량%, 2 내지 80 중량%, 3 내지 70 중량%, 4 내지 60 중량%, 5 내지 50 중량%로 포함될 수 있다.In the case of preparing a feed composition using the persimmon leaf-derived polysaccharide fraction as an active ingredient, the persimmon leaf-derived polysaccharide fraction is not particularly limited as long as it has an effect of preventing or improving influenza virus infection diseases, but, for example, 0.1 to 99% by weight, 0.5 It may be included in to 95% by weight, 1 to 90% by weight, 2 to 80% by weight, 3 to 70% by weight, 4 to 60% by weight, 5 to 50% by weight.
상기 사료 조성물에서 유효성분인 감잎 유래 다당 분획물은 섭취 동물의 상태, 체중, 질병의 유무나 정도 및 기간에 따라 다르지만, 통상의 기술자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예들 들어 1일 투여량을 기준으로 1 내지 5,000 mg, 바람직하게는 5 내지 2,000 mg, 더욱 바람직하게는 10 내지 1,000 mg, 더더욱 바람직하게는 20 내지 800 mg, 가장 바람직하게는 50 내지 500 mg일 수 있고, 투여 횟수는 특별히 한정할 필요는 없으나 1일 3회 내지 1주일에 1회의 범위 내에서 통상의 기술자가 조절할 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있다.The polysaccharide fraction derived from persimmon leaves, which is an active ingredient in the feed composition, varies depending on the condition, weight, and the presence or absence of disease, the degree and duration of the ingested animal, but may be appropriately selected by a skilled person. For example, it may be 1 to 5,000 mg, preferably 5 to 2,000 mg, more preferably 10 to 1,000 mg, even more preferably 20 to 800 mg, most preferably 50 to 500 mg based on the daily dosage. In addition, the number of administrations does not need to be particularly limited, but can be adjusted by a person skilled in the art within the range of 3 times a day to once a week. In the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or for the purpose of health control, it may be less than the above range.
여기에서 사용된 용어 "유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 해당 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 유효량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 수 있다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 예방, 치료 또는 개선 방법에 있어서, 성인의 경우, 조성물을 1일 1회 내지 수회 투여시, 0.001 g/kg 내지 10 g/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.The term "effective amount" as used herein refers to the amount of an active ingredient or pharmaceutical composition that induces a biological or medical response in a tissue system, animal or human, which is considered by a researcher, veterinarian, doctor or other clinician, Includes an amount that induces relief of symptoms of the disease or disorder. The effective amount and the number of administrations for the active ingredient of the present invention may vary depending on the desired effect. Therefore, the optimal dosage to be administered can be easily determined by those skilled in the art, and the type of disease, the severity of the disease, the amount of active ingredients and other ingredients contained in the composition, the type of formulation, and the age, weight, and general health of the patient. It can be adjusted according to various factors including condition, sex and diet, time of administration, route of administration and secretion rate of the composition, duration of treatment, and drugs used simultaneously. In the prevention, treatment or improvement method of the present invention, in the case of an adult, it is preferable to administer the composition at a dose of 0.001 g/kg to 10 g/kg when administered once to several times a day.
본 발명의 치료방법에서 감잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 경구, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 경피, 국소, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.
In the treatment method of the present invention, the composition comprising the polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient is a conventional oral, rectal, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, intrasternal, transdermal, topical, intraocular or intradermal route. It can be administered in a manner.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다.Hereinafter, a preferred embodiment is presented to aid the understanding of the present invention, but the following examples are only illustrative of the present invention, and it is obvious to those skilled in the art that various changes and modifications are possible within the scope and spirit of the present invention, It is natural that such modifications and modifications fall within the appended claims.
실시예Example 1. 감잎 유래 1. Origin of persimmon leaves 조다당Joe Dadang 분획물Fraction (( PLEPLE -0)-0)
감잎(persimmon leaf)은 (주)백장생에서 시판하는 감잎(감잎, 경북영천)을 분말화하여 사용하였다. 90% 에탄올을 건조분말 중량의 10배(w/v)가 되도록 건조분말에 첨가하여 48시간 동안 교반시키고, 여과 및 건조 과정을 거쳐 탈색을 완료하였다. 경우에 따라 탈색과정은 생략하여도 무방하다. Persimmon leaf was used by powdering persimmon leaves (persimmon leaves, Yeongcheon, Gyeongbuk) sold by Baekjangsaeng Co., Ltd. 90% ethanol was added to the dry powder to be 10 times (w/v) of the dry powder weight, stirred for 48 hours, filtered and dried to complete decolorization. In some cases, the bleaching process may be omitted.
상기 탈색 건조분말을 증류수 20배(w/v), pH 4에 현탁하여 pectinase(Rapidase C80MAX, 비전비이오켐)를 원료당 3 중량%로 첨가한 후 50 ℃ 순환 또는 교반반응기에서 3일간 효소 처리하였다. 그 후 상기 효소 처리 반응액을 90~100 ℃에서 30분간 가열처리하여 가용성 다당의 추출 및 잔존 pectinase를 불활성화시켰다.The bleached dry powder was suspended in distilled
상기 효소 처리를 마친 상기 시료를 4 ℃에서 6,500Xg로 15분 동안 원심분리를 수행하여 잔사를 제거하고, 한외여과로 여과시켜 분자량이 30 kDa 이상의 고분자 분획물을 회수하여 효소처리 조다당 분획물(PLE-0)을 얻었다.
The enzyme-treated sample was centrifuged at 4°C at 6,500Xg for 15 minutes to remove the residue, filtered through ultrafiltration to recover a polymer fraction having a molecular weight of 30 kDa or more, and the enzyme-treated crude polysaccharide fraction (PLE- 0) was obtained.
비교예 1. 감잎 유래 조다당 분획물(PLW-0)_비효소처리(열수추출)Comparative Example 1. Persimmon leaf-derived crude polysaccharide fraction (PLW-0)_non-enzyme treatment (hot water extraction)
탈색한 감잎 건조분말은 상기 실시예 1의 것과 동일한 것을 사용하였다. 상기 탈색한 건조분말을 증류수(20배(w/v))에 현탁하여 100 ℃에서 3시간 동안 가열처리하여 열수 추출물을 수득하였다. 상기 열수 추출믈을 4 ℃에서 6,500Xg으로 15분 동안 원심분리한 후 상등액을 분리하여 상등액의 4배 부피(v/v)의 에탄올을 가하여 24시간 동안 정치함으로써 다당을 침전시켰다. 상기 침전된 다당을 투석(분자량 cut-off : 6,000~8,000)시켜 열수추출 조다당 분획물(PLW-0)을 수득하였다.
The bleached persimmon leaf dry powder was the same as in Example 1. The bleached dry powder was suspended in distilled water (20 times (w/v)) and heated at 100° C. for 3 hours to obtain a hot water extract. After centrifuging the hot water extract at 4° C. at 6,500Xg for 15 minutes, the supernatant was separated, added with 4 times the volume of the supernatant (v/v) ethanol, and allowed to stand for 24 hours to precipitate polysaccharide. The precipitated polysaccharide was dialyzed (molecular weight cut-off: 6,000 to 8,000) to obtain a hot water-extracted crude polysaccharide fraction (PLW-0).
<시험예><Test Example>
시험예 1. 분획물의 구성당 분석Test Example 1. Analysis per composition of fractions
구성당 분석은 Albersheim 등의 방법을 일부 변형하여 가수분해 후 각 구성당을 알디톨 아세테이트(alditol acetate)로 유도체화하여 GC(Gas Chromatography)로 분석하였다. 실시예 1의 다당 시료를 2 M TFA(trifluoroacetic acid) 중에서 121 ℃로 1.5시간 동안 반응시켜 가수분해한 후, 그 가수분해물을 Dowex-1(acetate form) resin에 의해 중성당과 산성당으로 분리하였다. 1 mL의 1 M NH4OH(Ammonia solution)에 용해하여 10 mg의 NaBH4로 4시간 환원시켰다. 아세트산을 적당량 가하여 잔존 NaBH4를 제거한 후 메탄올을 가하며 반복 건조함으로써 과량으로 가해진 아세트산을 제거함으로써 각 구성당에 상당하는 알디톨(alditol)로 전환하였다. 이 후 각각의 알디톨에 1 mL의 아세트산 무수물(acetic anhydride)을 가하여 121 ℃에서 30분 동안 반응시켜 알디톨 아세테이트(alditol acetate)로 전환시켰으며, 이를 클로로포름/H2O2상 용매계로 분리하여 추출하고, 상기 추출물은 건조 후 소량의 아세톤에 용해하여 GC 분석용 시료로 사용하였다.For the analysis of constituent sugars, a method of Albersheim et al. was partially modified to derivatize each constituent sugar with alditol acetate after hydrolysis, and analyzed by Gas Chromatography (GC). The polysaccharide sample of Example 1 was hydrolyzed by reacting in 2 M TFA (trifluoroacetic acid) at 121° C. for 1.5 hours, and the hydrolyzate was separated into neutral sugar and acidic sugar using Dowex-1 (acetate form) resin. . It was dissolved in 1 mL of 1 M NH 4 OH (Ammonia solution) and reduced with 10 mg of NaBH 4 for 4 hours. An appropriate amount of acetic acid was added to remove residual NaBH 4 , followed by repeated drying with methanol to remove excess acetic acid, thereby converting to alditol corresponding to each constituent sugar. After that, 1 mL of acetic anhydride was added to each alditol and reacted at 121° C. for 30 minutes to convert to alditol acetate, which was separated into a chloroform/H 2 O 2 phase solvent system. After extraction, the extract was dried and dissolved in a small amount of acetone to be used as a sample for GC analysis.
알디톨 아세테이트(alditol acetate) 유도체의 GC분석 조건은 하기 [표 1]과 같으며, 각 구성당의 mole%는 각 유도체의 파크(peak)면적, 분자량 및 FID(Flame ionization detector)에 대한 molecular response factor를 각각 산출하여 계산하였다.The GC analysis conditions of the alditol acetate derivative are as shown in Table 1 below, and the mole% of each component is the peak area, molecular weight and molecular response factor for the FID (Flame ionization detector) of each derivative. Each was calculated and calculated.
(Young-Lin Co. Ltd., Anyang, Korea)Flame ionization detector(FID)
(Young-Lin Co. Ltd., Anyang, Korea)
30 ℃/min 8 ℃/min60 ℃ (1 min) 220 ℃ (12 min) 250 ℃ (15 min)
30 ℃/min 8 ℃/min
하기 [표 2]에서 KDO-liked material은 3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid(KDO) 및 3-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaricacid(DHA)를 지칭하는 것이고; Uronic acid는 Galacturonic acid, Glucuronic acid를 지칭하는 것이다. 중성당을 구성하는 당들은 전체 중성 다당을 기준으로 성분의 함량을 표시한 것이다.
In the following [Table 2], the KDO-liked material refers to 3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid (KDO) and 3-deoxy-D-lyxo-2-heptulosaricacid (DHA); Uronic acid refers to Galacturonic acid and Glucuronic acid. The sugars that make up neutral sugar are expressed in terms of the total amount of neutral polysaccharides.
위 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 효소처리 조다당 분획물(PLE-0)은 비교예 1의 열수추출 조다당 분획물(PLW-0)과 달리, 단백질을 함유하며 중성 다당의 함량이 높은 것을 확인하였다.
As shown in Table 2 above, the enzyme-treated crude polysaccharide fraction (PLE-0) prepared according to Example 1 of the present invention contains protein, unlike the hot water-extracted crude polysaccharide fraction (PLW-0) of Comparative Example 1. It was confirmed that the content of neutral polysaccharide was high.
시험예Test example 2. in vitro 2. in vitro 항인플루엔자Anti-influenza 효능 측정 Measuring efficacy
인플루엔자 바이러스 H1N1에 대한 항바이러스 효과를 측정하기 위해 개의 신장세포주인 MDCK(Madin-Darby canine kidney, ATCC: CCL-34)를 이용하여 다음과 같은 in vitro 실험을 수행하였다. 96 well microplate에 MDCK 세포를 각 well 당 1X105/well이 되도록 넣고 배지 EMEM(penicillin 100 units, streptomycin 100 ㎍, 10% FBS)로 배양하였다. MDCK 세포가 monolayer가 되면 항생제만 포함된 EMEM 배지로 2회 세척하였다. H1N1주를 100TCID50이 되도록 희석하여 EP 튜브에 담아 두고, 여기에 희석한 다당 분획물을 튜브에 넣은 후 4 ℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 1시간 후 상기 반응액을 미리 세척한 MDCK 세포에 한 농도 당 3 well씩 각각 접종하여 35 ℃에서 1시간 동안 배양하였다. 1시간 후 플레이트의 배지를 모두 제거하고 PBS로 1회 세척한 다음 항생제와 10 ㎍/mL 트립신이 첨가된 EMEM 배지를 각 well에 100 ㎕씩 분할하고 37 ℃에서 48-72시간 배양하였다. 감염+비투여 대조군에서 완전히 세포변성효과(Cytopathic effect, CPE)가 나올 때까지 48~72시간 배양하였고, 도립현미경으로 매일 세포 상태를 관찰하였다. 일반적으로 대조군에 비해 바이러스 방출이 50% 감소되는 농도는 EC50(50% effective concentration), 세포의 생존이 50% 감소되는 농도는 CC50(50% cytotoxic concentration)이다. SI(selectivity index, 선택지수)는 CC50/EC50로서 SI 값이 클수록 바이러스 증식억제 효과가 크다.In order to measure the antiviral effect on influenza virus H1N1, the following in vitro experiments were performed using a dog kidney cell line, MDCK (Madin-Darby canine kidney, ATCC: CCL-34). MDCK cells were placed in a 96 well microplate at 1×10 5 /well per well, and cultured with medium EMEM (
위 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물은 비교예 1의 조다당 분획물에 비하여 SI 값이 크므로 H1N1 바이러스의 증식 억제 활성이 우수한 것을 확인하였다.
As shown in Table 3 above, since the crude polysaccharide fraction prepared according to Example 1 of the present invention has a higher SI value than the crude polysaccharide fraction of Comparative Example 1, it was confirmed that the H1N1 virus has excellent proliferation inhibitory activity.
시험예Test example 3. 뉴라미니다아제( 3. Neuraminidase ( neuraminidaseneuraminidase ) 저해활성 측정) Inhibitory activity measurement
조다당 분획물의 인플루엔자 억제효능을 나타내는 기전을 연구하였다. Neuraminidase 활성억제시험은 인플루엔자 바이러스와 같이 바이러스의 증식에 바이러스 표면의 neuraminidase(NA) 단백질 시스템을 이용하는 바이러스들에 대한 항바이러스 활성을 측정하는 한 가지의 지표로써 사용된다. Neuraminidase 활성억제시험은 WHO(Standard operating procedure WHO-025)에서 추천하는 방법에 준하여 실시하였다. 본 실험에서 사용할 바이러스는 사람 유래 바이러스(H1N1)의 IC50으로 사용하여 농도별로 효소억제활성을 조사하였다. 농도별 시료액와 바이러스액과 실온에서 45분간 반응한 후 MUNANA 기질(Methylumbellifery1)-α-D-N-acetylneuraminic acid; sigma)을 첨가한 후 37 ℃, 1시간 반응시킨 다음, 정지액을 첨가한 후 spectrofluorophotometer(ABI/Perkin Elmer Biosystems)로 Ex. 360nm/Em. 440nm에서 fluorescence를 측정하여 효소활성억제 여부를 조사하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군으로 측정한 fluorescence 값을 100%로 산정하였다. The mechanism of influenza inhibitory effect of crude polysaccharide fraction was studied. Neuraminidase activity inhibition test is used as an index to measure antiviral activity against viruses that use the neuraminidase (NA) protein system on the surface of the virus to proliferate, such as influenza virus. Neuraminidase activity inhibition test was conducted according to the method recommended by WHO (Standard operating procedure WHO-025). The virus to be used in this experiment was used as the IC50 of human-derived virus (H1N1), and the enzyme inhibitory activity was investigated by concentration. MUNANA substrate (Methylumbellifery1)-α-D-N-acetylneuraminic acid after reacting with each concentration sample solution and virus solution at room temperature for 45 minutes; sigma) was added and reacted at 37° C. for 1 hour, and then the stop solution was added, and then Ex. 360nm/Em. Fluorescence was measured at 440 nm to investigate the inhibition of enzyme activity. The fluorescence value measured as a control without adding a sample was calculated as 100%.
[수학식 1][Equation 1]
저해활성 (%) = [(샘플 + 바이러스 처리군(O.D) 값) - (샘플 + 바이러스 비처리군(blank O.D) 값)] / (샘플 + 바이러스 비처리군(O.D) 값) - (샘플 비처리 + 바이러스 비처리군(blank O.D) 값)] X 100 Inhibitory activity (%) = [(sample + virus treated group (OD) value)-(sample + virus non-treated group (blank OD) value)] / (sample + virus non-treated group (OD) value)-(sample ratio Treatment + virus non-treatment group (blank OD value)]
위 표 4 및 도 1 에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물은 비교예 1의 조다당 분획물에 비하여 우수한 뉴라미니다아제 효소 저해활성을 나타냄을 확인하였다.As shown in Table 4 and FIG. 1 above, it was confirmed that the crude polysaccharide fraction prepared according to Example 1 of the present invention exhibits superior neuraminidase enzyme inhibitory activity compared to the crude polysaccharide fraction of Comparative Example 1.
이는 본 발명 실시예 1의 감잎 조다당 분획물이 인플루엔자 바이러스의 활성을 억제함으로써 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료에 사용될 수 있음을 의미한다.This means that the crude polysaccharide fraction of persimmon leaves of Example 1 of the present invention can be used for prevention or treatment of influenza virus infection by inhibiting the activity of influenza virus.
도 2는 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물의 동물 및 사람에서 유래한 다양한 아형의 인플루엔자 바이러스(H3N2, H4N2, H5N2, H6N2, H7N2)에 대한 뉴라미니데이즈 활성억제를 나타낸 도면이다. 2 is a diagram showing the inhibition of neuraminidase activity against various subtypes of influenza viruses (H3N2, H4N2, H5N2, H6N2, H7N2) derived from animals and humans of the crude polysaccharide fraction prepared according to Example 1 of the present invention. .
도 2에 도시된 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물은 농도 의존적으로 모든 인플루엔자 바이러스(H3N2, H4N2, H5N2, H6N2, H7N2)에 대한 뉴라미니데이즈 활성억제를 나타냄을 확인하였다.
As shown in FIG. 2, it was confirmed that the crude polysaccharide fraction prepared according to Example 1 of the present invention exhibits inhibition of neuraminidase activity against all influenza viruses (H3N2, H4N2, H5N2, H6N2, H7N2) in a concentration-dependent manner. I did.
시험예 4. 동물실험Test Example 4. Animal test
실험동물Experimental animals
Balb/c 마우스 7주령 암컷을 사용하였고, 투여된 바이러스의 경우 안전성이 확보되어 있으나, 다른 설치류의 감염을 우려하여 네거티브(negative) 사육 시스템을 사용해 다른 동물과의 접촉을 차단하였다. 바이러스의 분리, 동정, 역가계산 및 투여는 그 안전성을 확보하기 위하여 준비된 특수 클린벤치(clean bench)에서 실시하였으며, 바이러스 소독을 위한 특수 소독제를 이용하여 실험 전·후 소독을 실시하였다. 체중에 직접적인 영향을 줄 수 있는 사료급여 관리는 매일 사료의 양을 판단하여 급여함으로써 급식에 제한이 발생하지 않도록 하였다. 체중에 영향을 줄 수 있는 요소를 최대한 통제한 상태에서 주단위로 일정한 시간에 개체별 체중을 측정하였다. 측정된 개체별 결과의 비교를 통한 처리군별 증체에 미치는 효과 판단은 처리군별 평균값을 대상으로 실시하였다. 조명은 12시간 교체하였고, 물과 사료를 자유롭게 먹도록 하였다. 기타 동물 사육과 관련되는 사항은 전북대학교 동물실험 윤리위원회(National Association of Laboratory Animal Care) 규정에 의거하여 동물실험을 수행하였다.Balb/
실시예 1의 항인플루엔자 효능을 평가하기 위해서 실시예 1의 분획물을 농도별(25 mg/kg/d, 50 mg/kg/d 및 100 mg/kg/d)로 14일간 경구로 투여하였다. 인플루엔자 바이러스 공격접종은 에테르를 이용하여 마취를 한 뒤, 인플루엔자 바이러스 H1N1을 비치사량 감염모델(LD0 : 임상증상 100%, 폐사율 0%)로 비강을 통해 접종을 실시하였다. 본 실험에서 사용된 음성 대조군(negative control)은 phosphate-buffered saline (PBS) 투여 + H1N1 비감염 그룹이고, 바이러스 대조군(virus control)은 phosphate-buffered saline (PBS) 투여 + H1N1 감염 그룹이다.In order to evaluate the anti-influenza efficacy of Example 1, the fractions of Example 1 were administered orally for 14 days by concentration (25 mg/kg/d, 50 mg/kg/d and 100 mg/kg/d). Influenza virus attack vaccination was performed by nasal inoculation with influenza virus H1N1 in a non-dose infection model (LD 0 :
-5개 군의 마우스--5 groups of mice-
1군(음성 대조군): PBS 투여 + H1N1 바이러스 비감염 Group 1 (negative control): PBS administration + H1N1 virus non-infection
2군(바이러스 대조군): PBS 투여 + H1N1 바이러스 감염 Group 2 (virus control): PBS administration + H1N1 virus infection
3군(PLEO-25): 조다당 분획물(PLE-0) 25 mg/kg 투여 + H1N1 바이러스 감염 Group 3 (PLEO-25): 25 mg/kg of crude polysaccharide fraction (PLE-0) + H1N1 virus infection
4군(PLEO-50): 조다당 분획물(PLE-0) 50 mg/kg 투여 + H1N1 바이러스 감염Group 4 (PLEO-50): 50 mg/kg of crude polysaccharide fraction (PLE-0) + H1N1 virus infection
5군(PLEO-100): 조다당 분획물(PLE-0) 100 mg/kg 투여 + H1N1 바이러스 감염
Group 5 (PLEO-100): 100 mg/kg of crude polysaccharide fraction (PLE-0) + H1N1 virus infection
시험예 4-1. 체중측정Test Example 4-1. Weighing
실시예 1의 분획물을 농도별(25 mg/kg/d, 50 mg/kg/d 및 100 mg/kg/d)로 14일간 투여한 후 H1N1 바이러스 공격접종하였다. 공격접종 후 10일 동안의 마우스의 체중(%)를 측정하였다.The fractions of Example 1 were administered at different concentrations (25 mg/kg/d, 50 mg/kg/d, and 100 mg/kg/d) for 14 days and then inoculated with H1N1 virus. The weight (%) of the mice for 10 days after challenge vaccination was measured.
(단위: %)division
(unit: %)
위 표 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물은 바이러스 대조군에 비하여 몸무게가 증가한 것을 확인하였다.
As shown in Table 5 above, it was confirmed that the crude polysaccharide fraction prepared according to Example 1 of the present invention had an increase in body weight compared to the virus control group.
시험예 4-2. 폐병변지수Test Example 4-2. Lung lesion index
마우스를 희생시킨 후 마우스의 폐의 무게를 측정하여 폐병변지수를 측정하였다. 각 마우스의 체중을 측정한 후 마우스의 폐를 분리하여 체중대비 폐의 무게를 비교하였다. After the mice were sacrificed, the lung lesion index was measured by measuring the weight of the lungs of the mice. After measuring the weight of each mouse, the lungs of the mice were separated and the weight of the lungs compared to the body weight was compared.
도 3은 각 그룹별 마우스의 폐병변지수를 나타낸 그래프이다.3 is a graph showing the lung lesion index of mice for each group.
[수학식 2][Equation 2]
폐병변지수 (%) = (폐의 무게 / 체중) X 100 Lung lesion index (%) = (Lung weight / weight)
도 3에 도시된 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물(PLE-0)을 급이한 그룹이 농도별로 폐 병변지수가 유의성 있게 감소한 것을 확인하였다.
As shown in Figure 3, it was confirmed that the group fed with the crude polysaccharide fraction (PLE-0) prepared according to Example 1 of the present invention significantly decreased the lung lesion index by concentration.
시험예 4-3. 폐내 바이러스 역가Test Example 4-3. Viral titer in the lungs
마우스를 희생시킨 후 마우스의 폐내에 잔존하는 바이러스의 함량을 측정하였다. MDCK 세포주를 이용한 바이러스 역가시험을 위해서 폐조직은 항생제를 포함한 PBS 용액 1ml에 폐조직 1g을 넣고 분쇄기를 이용하여 유제하고 원심분리하여 상등액을 확보한 다음 항생제를 포함한 용액으로 단계별로 희석하였다. 희석된 약을 미리 준비된 세포주에 감염시킨 후, 37 ℃, 5% CO2 항온기에서 72시간 동안 배양하였다. 세포병변효과가 관찰되면 세포주의 배양액을 취하여 바이러스 증식여부를 확인한 후, Reed-Muench 방법에 기초하여 역가(log10 TCID50/mL)을 산출하였다(참조 문헌 : Reed, L, J,. Muench, H. : A simple method of estimating fifty per cent endpoints. Am. J. Hyg. 27, 493-497(1938)).After the mice were sacrificed, the amount of virus remaining in the lungs of the mice was measured. For the viral titer test using the MDCK cell line, 1 g of lung tissue was added to 1 ml of PBS solution containing antibiotics, emulsified using a grinder, centrifuged to obtain a supernatant, and then diluted step by step with a solution containing antibiotics. After infecting the diluted drug with a previously prepared cell line, it was incubated for 72 hours in a 37°C, 5% CO 2 incubator. When the cytopathic effect was observed, the culture medium of the cell line was taken to check whether the virus was proliferated, and the titer (log 10 TCID 50 /mL) was calculated based on the Reed-Muench method (Reference: Reed, L, J,. Muench, H.: A simple method of estimating fifty per cent endpoints.Am. J. Hyg. 27, 493-497(1938)).
도 4는 각 그룹별 마우스의 폐내에 잔존하는 바이러스의 함량을 나타낸 그래프이다.4 is a graph showing the amount of virus remaining in the lungs of mice for each group.
도 4에 도시된 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물(PLE-0)을 급이한 그룹이 농도별로 폐내의 바이러스 함량이 유의성 있게 감소한 것을 확인하였다.
As shown in Figure 4, it was confirmed that the group fed with the crude polysaccharide fraction (PLE-0) prepared according to Example 1 of the present invention significantly decreased the virus content in the lungs by concentration.
시험예 5. 복귀돌연변이 독성시험Test Example 5. Reverse mutation toxicity test
상기 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물(PLE0)의 복귀돌연변이 시험에 의한 독성을 확인하기 위하여 하기와 같이 문헌에 기재된 Maron과 Ames(1983)이 제시한 방법을 일부 수정하여 실험하였다(Maron, D.M. and Ames B.N. (1983) Revised methods for the Salmonella mutagenicity test, Mutat. Res. 113: 173-215).In order to confirm the toxicity by the reversion mutation test of the crude polysaccharide fraction (PLE0) prepared according to Example 1, the method suggested by Maron and Ames (1983) described in the literature was partially modified and tested as follows (Maron, DM and Ames BN (1983) Revised methods for the Salmonella mutagenicity test, Mutat. Res. 113: 173-215).
특정성분들에 대한 돌연변이 유발성 검색을 위해서 균주(Salmonella typhimurium) TA98, TA100, TA1535, TA1537 균주를 사용하였다. 시험물질의 처리는 대사활성 효소계(S-9 mix)가 적용 또는 미적용된 직접 플레이트 삽입(direct plate incorporation) 방법으로 하였다. 복귀돌연변이 시험에 사용한 Salmonella typhimurium TA98 균주는 Molecular Toxicology Inc.(USA)에서 구입하였다. 균주는 냉동 보관 되어있는 시험균주 용액 50 uL를 25 mL의 액체배지(2.5 % Oxoid Nutrient broth No. 2)에 접종해 진탕 배양기(shaking incubator, VS-8480SFN, (주) 비젼과학)를 이용하여 37 ℃에서 약 10 시간 배양한 후 사용하였다. 최소배지 (minimal glucose agar plate)는 1.5% Bacto agar(214010, BD Difco)와 Vogel-Bonner medium E 및 2% glucose를 함유해서 만들었고 톱 아가(top agar)는 0.6% agar와 0.5% NaCl로 조제하였으며, 톱 아가(top agar)에는 0.05 mM의 histidine(43011, Fluka)-biotin(47868, Supelco)을 첨가하였다.To search for mutagenicity for specific components, strains (Salmonella typhimurium) TA98, TA100, TA1535, and TA1537 were used. Treatment of the test substance was performed by a direct plate incorporation method in which metabolic active enzyme system (S-9 mix) was applied or not applied. Salmonella typhimurium TA98 strain used in the reversion mutation test was purchased from Molecular Toxicology Inc. (USA). For the strain, 50 uL of the test strain solution stored frozen was inoculated into 25 mL of liquid medium (2.5% Oxoid Nutrient broth No. 2), and then 37 After incubation for about 10 hours at ℃ was used. The minimal glucose agar plate was prepared with 1.5% Bacto agar (214010, BD Difco), Vogel-Bonner medium E and 2% glucose, and the top agar was prepared with 0.6% agar and 0.5% NaCl. , 0.05 mM histidine (43011, Fluka)-biotin (47868, Supelco) was added to the top agar.
고압증기 멸균한 톱 아가(top agar)를 건조 배쓰(dry bath, 11-718-4, Fisher Scientific)에서 45 ℃로 예열한 멸균 tube에 2 mL 씩 분주한 다음, 시험물질 용액 0.1 mL과 균배양액 0.1 mL을 톱 아가에 혼합하고 즉시 진탕 혼합기(vortex mixer, 37600, Thermolyne)로 2~3초간 진탕하여 최소배지(minimal glucose agar plate)에 부어 여러 방향으로 기울여 고루 퍼지게 하여 굳게 하였다. 부형제군(음성대조군)은 시험물질 용액 대신 부형제 0.1 mL을, 양성대조군은 양성대조물질 용액(2-Aminoanthracene (2AA), 규격 : Sigma A1381)을 같은 방법으로 가하여 실시하였다. 톱 아가가 굳은 후 플레이트 뚜껑을 닫은 상태에서 플레이트를 뒤집어 37 ℃에서 약 48 시간 배양 후 집락을 계수하였다.Dispense 2 mL each of the autoclaved top agar into a sterilized tube preheated to 45°C in a dry bath (11-718-4, Fisher Scientific), and 0.1 mL of the test substance solution and bacterial culture solution. 0.1 mL was mixed with a top agar, and immediately shaken with a vortex mixer (37600, Thermolyne) for 2-3 seconds, poured into a minimal glucose agar plate, tilted in various directions, and then solidified. For the excipient group (negative control), 0.1 mL of the excipient was added instead of the test material solution, and the positive control solution (2-Aminoanthracene (2AA), standard: Sigma A1381) was added in the same manner to the positive control group. After the top agar was hardened, the plate was turned over and incubated at 37° C. for about 48 hours with the plate lid closed, and then colonies were counted.
효소계Metabolic activity
Enzyme system
위 표 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물(PLE-0)은 본 시험 조건하에서 사용한 균주에 대해 복귀돌연변이를 유발하지 않는 것으로 확인되었다.
As shown in Table 6 above, it was confirmed that the crude polysaccharide fraction (PLE-0) prepared according to Example 1 of the present invention did not induce a return mutation for the strain used under this test condition.
시험예Test example 6. Chinese Hamster Lung( 6.Chinese Hamster Lung( CHLCHL ) 세포를 이용한 체외 염색이상시험) In vitro staining abnormality test using cells
상기 실시예 1에 따라 제조된 조다당 분획물(PLE0)이 배양한 Chinese Hamster Lung(CHL) 세포의 염색체에 구조적 혹은 수적 이상을 유발하는지 확인하는 실험으로서, Chinese hamster lung (CHL) 세포를 이용하여 대사활성계 적용 및 비적용 하에 염색체이상시험을 수행하였다. 대사활성계로는 Aroclor-1254로 유도한 랫드의 간균질액에 보효소(cofactor)를 첨가한 것을 사용하였다.As an experiment to confirm whether the crude polysaccharide fraction (PLE0) prepared according to Example 1 causes structural or numerical abnormalities in chromosomes of cultured Chinese Hamster Lung (CHL) cells, metabolism using Chinese hamster lung (CHL) cells A chromosomal abnormality test was performed with and without the active system. As a metabolic activity system, a cofactor was added to the rat liver homogenate induced by Aroclor-1254.
시험물질은 생리식염 주사액에 현탁하여 처리하였다. 최고농도는 Relative Increased Cell Count(RICC)를 세포독성의 지표로 하여 결정하였다. 음성(부형제)대조군 및 양성대조군을 포함하여 다음 표와 같이 농도군을 설정하였으며, 농도군당 1 개의 플라스크를 사용하였다.The test substance was suspended and treated in a physiological saline injection solution. The highest concentration was determined using Relative Increased Cell Count (RICC) as an index of cytotoxicity. The concentration group was set as shown in the following table, including the negative (excipient) control group and the positive control group, and one flask per concentration group was used.
활발히 증식 중인 세포를 분리하여, 배양면적 25 cm2의 플라스크에 5 x 104 세포를 5 mL의 배양액에 파종하여 약 3 일간 배양한 후 시험물질을 처리하였다. 처리개시로부터 24시간 후에 염색체 검체를 제작하여, 농도군당 150 개의 중기상으로부터 염색체이상을 계수하였다. Actively proliferating cells were isolated, 5 x 10 4 cells were seeded in 5 mL of culture medium in a flask with a culture area of 25
대사활성계 적용 6시간 처리6 hours treatment with metabolic activation system
플라스크로부터 세포를 분리, 계수하여 얻은 세포 수로 다음 수식에 의해 Relative Increased Cell Count (RICC)를 산출하여 세포독성의 지표로 하였다.Relative Increased Cell Count (RICC) was calculated by the following equation from the number of cells obtained by separating and counting cells from the flask and used as an index of cytotoxicity.
[수학식 3][Equation 3]
(g/mL)density
(g/mL)
(%)Abnormal medium weather
(%)
시험물질 500 ug/mL 이상 농도군에서 혼탁이 관찰되었다.Cloudiness was observed in the concentration group of 500 ug/mL or more of the test substance.
위 표 7에 나타낸 바와 같이, 구조적 이상중기상의 빈도(이하 gap 제외)는 음성대조군, 시험물질 400, 500, 550, 600, 700 및 800 ㎍/mL 순으로 0.00, 0.00, 0.00, 0.00, 0.00, 0.00, 및 0.00%로, 시험물질을 처리한 모든 농도군에서 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 나타내지 않았고, 용량상관성이 없었다. 수적이상을 가진 중기상의 빈도는 음성대조군 및 모든 시험물질 처리군에서 모두 0.00%로, 시험물질을 처리한 모든 농도군에서 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 나타내지 않았고, 용량상관성이 없었다.As shown in Table 7 above, the frequency of structural abnormal intermediate phases (excluding gaps below) was negative control, test substances 400, 500, 550, 600, 700 and 800 ㎍/mL in the order of 0.00, 0.00, 0.00, 0.00, 0.00, At 0.00, and 0.00%, there was no statistically significant increase in all concentration groups treated with the test substance compared to the negative control group, and there was no dose correlation. The incidence of mid-phase phase with a number of abnormalities was 0.00% in both the negative control group and all test substance treatment groups, and there was no statistically significant increase in all concentration groups treated with the test substance compared to the negative control group, and there was no dose correlation.
양성대조군에서는 구조적 이상을 가진 중기상의 빈도(31.33%)에서 통계학적으로 유의한 증가가 관찰되었다(P<0.01).
In the positive control group, a statistically significant increase was observed in the frequency of metaphase (31.33%) with structural abnormalities (P<0.01).
대사활성계
(g/mL)density
(g/mL)
(%)Abnormal medium weather
(%)
위 표 8에 나타낸 바와 같이, 구조적 이상중기상의 빈도는 음성대조군, 시험물질 200, 250, 300, 330, 350 및 400 ㎍/mL 순으로 0.00, 0.00, 0.00, 0.00, 0.67, 0.00 및 0.00% 로서, 시험물질을 처리한 모든 농도군에서 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 나타내지 않았고, 용량상관성이 없었다. 수적이상을 가진 중기상의 빈도는 음성대조군 및 모든 시험물질 처리군에서 모두 0.00%로서, 시험물질을 처리한 모든 농도군에서 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 나타내지 않았고, 용량상관성이 없었다.As shown in Table 8 above, the frequency of structural abnormal intermediate phases is 0.00, 0.00, 0.00, 0.00, 0.67, 0.00 and 0.00% in the order of negative control, test substances 200, 250, 300, 330, 350 and 400 ㎍/mL. , There was no statistically significant increase in all concentration groups treated with the test substance compared to the negative control group, and there was no dose correlation. The incidence of mid-phase phase with a number abnormality was 0.00% in both the negative control group and all test substance treatment groups, and there was no statistically significant increase in all concentration groups treated with the test substance compared to the negative control group and there was no dose correlation.
양성대조군에서는 구조적 이상을 가진 중기상의 빈도(14.67%)에서 통계학적으로 유의한 증가가 관찰되었다(P<0.01).
In the positive control group, a statistically significant increase was observed in the frequency of metaphase (14.67%) with structural abnormalities (P<0.01).
대사활성계Metabolic activation system 비적용 24시간 처리 24-hour processing without application
(㎍/mL)density
(㎍/mL)
(%)Abnormal medium weather
(%)
위 표 9에 나타낸 바와 같이, 구조적 이상중기상의 빈도는 음성대조군, 시험물질 50, 80, 100, 120, 130 및 150 ㎍/mL 순으로 0.67, 0.67, 0.00, 0.00, 0.00, 0.00 및 0.00%로서, 시험물질을 처리한 모든 농도군에서 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 나타내지 않았고, 용량상관성이 없었다. 수적이상을 가진 중기상의 빈도는 음성대조군 및 모든 시험물질 처리군에서 모두 0.00%로서, 시험물질을 처리한 모든 농도군에서 음성대조군에 비해 통계학적으로 유의한 증가를 나타내지 않았고, 용량상관성이 없었다. As shown in Table 9 above, the frequency of structural abnormal intermediate phases was 0.67, 0.67, 0.00, 0.00, 0.00, 0.00 and 0.00% in the order of negative control,
양성대조군에서는 구조적 이상을 가진 중기상의 빈도(12.00%)에서 통계학적으로 유의한 증가가 관찰되었다(P<0.01).In the positive control group, a statistically significant increase was observed in the frequency of metaphase (12.00%) with structural abnormalities (P<0.01).
염색체이상을 계수한 결과, 처리 방법에 상관없이 모든 시험물질 처리군에서 염색체의 이상을 가진 중기상의 출현빈도가 음성대조군에 비해 증가하지 않았으며, 이 결과는 양성판정 기준을 만족시키지 못하였다.As a result of counting chromosomal abnormalities, the appearance frequency of the intermediate phase with chromosomal abnormalities in all test substance treatment groups did not increase compared to the negative control group, regardless of the treatment method, and this result did not satisfy the positive criteria.
따라서, 시험물질인 조다당 분획물(PLEO)은 본 시험 조건 하에서 CHL 세포에 염색체이상을 유발하지 않는 것을 확인하였다.
Therefore, it was confirmed that the test substance, crude polysaccharide fraction (PLEO), did not induce chromosomal abnormalities in CHL cells under this test condition.
하기에 본 발명의 분말을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Hereinafter, examples of the formulation of the composition containing the powder of the present invention will be described, but the present invention is not intended to limit this, but is intended to be described in detail.
제제예 1. 산제의 제조Formulation Example 1. Preparation of powder
실시예 1에서 얻은 감잎 유래 조다당 분획물 500 mg500 mg of crude polysaccharide fraction derived from persimmon leaves obtained in Example 1
유당 100 mg100 mg lactose
탈크 10 mg10 mg of talc
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
The above ingredients are mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
제제예 2. 정제의 제조Formulation Example 2. Preparation of tablet
실시예 1에서 얻은 감잎 유래 조다당 분획물 300 mg300 mg of crude polysaccharide fraction derived from persimmon leaves obtained in Example 1
옥수수전분 100 mg100 mg corn starch
유당 100 mg100 mg lactose
스테아린산 마그네슘 2 mg2 mg of magnesium stearate
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
After mixing the above ingredients, tablets are prepared by tableting according to a conventional tablet preparation method.
제제예 3. 캅셀제의 제조Formulation Example 3. Preparation of Capsule
실시예 1에서 얻은 감잎 유래 조다당 분획물 200 mg200 mg of crude polysaccharide fraction derived from persimmon leaves obtained in Example 1
결정성 셀룰로오스 3 mg3 mg of crystalline cellulose
락토오스 14.8 mg14.8 mg lactose
마그네슘 스테아레이트 0.2 mgMagnesium stearate 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
According to a conventional capsule preparation method, the above ingredients are mixed and filled into gelatin capsules to prepare a capsule.
제제예Formulation example 4. 주사제의 제조 4. Preparation of injection
실시예 1에서 얻은 감잎 유래 조다당 분획물 600 mg600 mg of crude polysaccharide fraction derived from persimmon leaves obtained in Example 1
만니톨 180 mgMannitol 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg2974 mg of sterile distilled water for injection
Na2HPO4 ,12H2O 26 mgNa 2 HPO 4 , 12H 2 O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당 상기의 성분 함량으로 제조한다.
It is prepared with the above ingredients per ampoule according to a conventional injection preparation method.
제제예Formulation example 5. 5. 액제의Liquid 제조 Produce
실시예 1에서 얻은 감잎 유래 조다당 분획물 4 g4 g of crude polysaccharide fraction derived from persimmon leaves obtained in Example 1
이성화당 10 g10 g of isomerized sugar
만니톨 5 g5 g of mannitol
정제수 적량Purified water appropriate amount
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100g으로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
According to the usual preparation method of liquid preparation, add each ingredient to purified water to dissolve it, add lemon zest, mix the above ingredients, add purified water and add purified water to adjust the total to 100g, then fill in a brown bottle for sterilization. To prepare a solution.
제제예Formulation example 6. 과립제의 제조 6. Preparation of granules
실시예 1에서 얻은 감잎 유래 조다당 분획물 1,000 mg1,000 mg of crude polysaccharide fraction derived from persimmon leaves obtained in Example 1
비타민 혼합물 적량Vitamin mixture right amount
비타민 A 아세테이트 70 Vitamin A Acetate 70
비타민 E 1.0 mg1.0 mg of vitamin E
비타민 B1 0.13 mgVitamin B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mgVitamin B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg0.5 mg of vitamin B6
비타민 B12 0.2 Vitamin B12 0.2
비타민 C 10 mg
비오틴 10
니코틴산아미드 1.7 mg1.7 mg of nicotinic acid amide
엽산 50
판토텐산 칼슘 0.5 mg0.5 mg of calcium pantothenate
무기질 혼합물 적량Suitable amount of inorganic mixture
황산제1철 1.75 mg1.75 mg ferrous sulfate
산화아연 0.82 mgZinc oxide 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mgMagnesium carbonate 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mgPotassium monophosphate 15 mg
제2인산칼슘 55 mgDicalcium phosphate 55 mg
구연산칼륨 90 mg90 mg of potassium citrate
탄산칼슘 100 mg100 mg of calcium carbonate
염화마그네슘 24.8 mgMagnesium chloride 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 과립제에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 과립제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
The composition ratio of the vitamin and mineral mixture is relatively suitable for granules, but it is possible to arbitrarily modify the mixing ratio. After mixing the above ingredients according to a conventional granule preparation method, granules And can be used to prepare a health functional food composition according to a conventional method.
제제예Formulation example 7. 기능성 음료의 제조 7. Manufacturing of functional beverages
실시예 1에서 얻은 감잎 유래 조다당 분획물 1,000 mg 1,000 mg of crude polysaccharide fraction derived from persimmon leaves obtained in Example 1
구연산 1,000 mg1,000 mg citric acid
올리고당 100 g100 g oligosaccharides
매실농축액 2 g2 g of plum concentrate
타우린 1 g1 g taurine
정제수를 가하여 전체 900 mLTotal 900 mL with purified water
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 기능성 음료 조성물 제조에 사용한다. After mixing the above ingredients according to the normal health drink manufacturing method, stirring and heating the mixture at 85°C for about 1 hour, the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed and sterilized, and stored in a refrigerator. It is used to prepare the functional beverage composition of the invention.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
The composition ratio is composed of ingredients suitable for a relatively preferred beverage in a preferred embodiment, but the mixing ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences, such as the demand class, the country of demand, and the purpose of use.
Claims (18)
(b) 상기 효소 처리된 감잎 분말에서 분자량 30 kDa 이상의 분획물을 회수하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 제조된 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.The method of claim 1, wherein the polysaccharide fraction comprises the steps of: (a) treating persimmon leaf powder with pectin hydrolase; And
(b) recovering a fraction having a molecular weight of 30 kDa or more from the enzyme-treated persimmon leaf powder; a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of an influenza virus infection disease, characterized in that prepared by a manufacturing method comprising.
Feed additive composition for preventing or improving influenza virus infection disease containing a polysaccharide fraction derived from persimmon leaves as an active ingredient.
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|---|---|---|---|
| KR1020190079636A KR20210003614A (en) | 2019-07-02 | 2019-07-02 | A composition for the improving, preventing and treating of influenza virus infection comprising polysaccharide fraction isolated from persimmon leaf |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102508944B1 (en) * | 2022-04-14 | 2023-03-14 | 한국 한의학 연구원 | Composition for preventing, ameliorating or treating coronavirus infectious disease comprising herbal medicine extract as effective component |
Citations (2)
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| KR101468015B1 (en) | 2013-04-02 | 2014-12-03 | 한국식품연구원 | Polysaccharide fraction isolated from persimmon leaf with immune-enhancing activity, anti-tumor activity and method for producing the same |
| KR101846425B1 (en) | 2016-04-21 | 2018-04-06 | 전북대학교 산학협력단 | Composition for preventing or treating of influenza virus infection comprising the extract of Glaziella splendens and Compound isolated from the extract |
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2019
- 2019-07-02 KR KR1020190079636A patent/KR20210003614A/en not_active Ceased
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| KR101846425B1 (en) | 2016-04-21 | 2018-04-06 | 전북대학교 산학협력단 | Composition for preventing or treating of influenza virus infection comprising the extract of Glaziella splendens and Compound isolated from the extract |
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