KR20180100375A

KR20180100375A - 인플루엔자 바이러스 감염에서 사용하기 위한 아릴 치환 피리미딘

Info

Publication number: KR20180100375A
Application number: KR1020187022179A
Authority: KR
Inventors: 팀 휴고 마리아 욘커스; 고완 데이비드 크레이그 맥; 제롬 에밀 조르쥬 길레몽; 베르너 콘스탄트 제이 엠브레흐츠; 기욤 장 모리스 머시; 크리스토프 프란시스 로버트 네스토르 뷕; 벤디 미아 알버트 발레만스; 피에르 쟝-마리 베르나르 라보이송
Original assignee: 얀센 사이언시즈 아일랜드 유씨
Priority date: 2016-01-20
Filing date: 2017-01-19
Publication date: 2018-09-10
Also published as: JP2019507119A; AU2017209925B2; US20190047989A1; BR112018014794A2; CN108473477A; ES2850575T3; JP6989509B2; HUE053078T2; EP3405466A1; EA201891666A1; CL2018001960A1; US11117887B2; SI3405466T1; AU2017209925A1; CN108473477B; CO2018007669A2; CA3010327A1; LT3405466T; MX381314B; DK3405466T3

Abstract

본 발명은 인플루엔자 감염의 또는 이에 대한 치료에 사용될 수 있는 화학식 I의 구조를 갖는 화합물에 관한 것이다.
[화학식 I]

Description

인플루엔자 바이러스 감염에서 사용하기 위한 아릴 치환 피리미딘

인플루엔자는 인간 집단에서 높은 발병률로 잦은 대규모 이환율 및 사망률을 초래하는 심각한 공중 보건 문제이다. 이는 급성 열병(acute febrile illness)을 야기하는 고도로 접촉전염성인 공기매개 질병(highly contagious airborne disease)이다. 전신 증상은 중증도에 있어서 경미한 피로부터 호흡 부전 및 사망에 이르기까지 다양하다. WHO에 따르면, 매년 발생되는 유행병의 평균 전세계 부담은 약 10억 건 정도의 사례일 수 있으며, 3백만 내지 5백만 건의 사례는 심각한 병(severe illness)이고, 300,000 내지 500,000건의 사망건수가 해마다 발생되고 있다. 해마다, 인플루엔자 바이러스는 인간에서 순환하여, 전형적으로 모든 연령 그룹 내에 있는 인구의 5 내지 20%에 영향을 주는데, 이 숫자는 대유행기에는 최대 30%까지 상승한다. 심각한 병 및 사망의 비율은 65세 초과의 사람, 2세 미만의 어린이, 및 인플루엔자로부터 합병증에 대한 증가 위험에 놓이게 하는 의학적 질환, 예컨대 만성 심장, 폐, 신장, 간, 혈액 또는 대사성 질병, 또는 약화된 면역 시스템을 갖는 임의의 연령의 사람 사이에서 가장 높다. 사망이 어린이 사이에서 드물기는 하지만, 입원율은 동반이환(co-morbid) 상태의 존재 또는 부재에 따라, 5세 미만의 어린이의 경우 100,000건당 대략 100 내지 500건의 범위이다. 24개월 미만의 어린이의 입원율은 65세 초과의 사람에서 보고된 입원율과 비견된다.

미국에서, 매년 발생되는 인플루엔자 유행병은 대략 3000만 외래환자 내원을 초래하며, 그 결과 해마다 100억 달러의 의료 비용이 들게 된다. 병 및 사망으로 인한 상실 수익액(lost earning)은 해마다 150억 달러를 초과하는 비용을 나타내고, 매년 발생되는 인플루엔자 유행병에 대한 미국의 총 경제적 부담은 850억 달러를 초과하기에 이른다.

인플루엔자를 야기하는 병원체는, 오르토믹소바이러스과(family of Orthomyxoviridae)에 속하는, 네거티브 센스 단일-가닥 RNA 바이러스이다. A형, B형 및 C형 3가지 유형의 인플루엔자 바이러스가 있다. A형 인플루엔자 바이러스는 가장 일반적인 형태로, 이는 포유동물 및 조류에서 확산될 수 있다. A형 인플루엔자의 아형은 표면 단백질인 혈구응집소(H) 및 뉴라미니다제(N)의 유형에 따라 명명된다. 18개의 상이한 혈구응집소 및 11개의 알려진 뉴라미니다제가 있다. 현재 인간에서 발견되는 계절성 인플루엔자 바이러스는 주로 H1N1 및 H3N2 아형이다. B형 인플루엔자 바이러스는 통상 인간에게서만 발견된다. 이것은 아형으로 세분되지 않지만, 상이한 바이러스주(strain)로 추가로 나누어질 수 있다. 순환성 인플루엔자 바이러스는 매년마다 매우 변동되기 쉬우며, A형 및 B형 인플루엔자 둘 모두 전세계에 걸쳐 계절성 유행병을 야기한다. C형 인플루엔자 바이러스는 훨씬 더 경미한 증상을 나타내며, 이는 유행병을 야기하지 않는다.

3가지 유형의 바이러스는 모두 유사한 게놈 구조를 갖는다. 게놈은 유형에 따라 9 내지 11개의 단백질을 인코딩하는 8개의 절편을 포함한다. A형 인플루엔자는 11개의 단백질을 인코딩하는데, 이에는 표면 단백질(혈구응집소(HA) 및 뉴라미니다제(NA)), 중합효소 복합체(PA, PB1 및 PB2), 핵단백질(NP), 막 단백질(M1 및 M2), 및 기타 단백질(NS1, NS2, NEP)이 포함된다. 3가지 인플루엔자 바이러스 유형 중에서, A형 인플루엔자가 가장 높은 돌연변이율을 갖는다. B형 인플루엔자는 A형보다는 더 느리게, 그러나 C형보다는 더 빠르게 진화한다. 절편화된 게놈은 유전자가 상이한 바이러스주 사이에서 교환될 수 있게 하며, 이는 인플루엔자 바이러스의 신종 변이체를 발생시킨다.

인플루엔자 바이러스는 감염된 개인 또는 바이러스-오염된 물질과의 직접 접촉에 의해 인간들 사이에서 전파될 수 있다. 사람들은 또한 공기 중에 떠다니는 바이러스 비말(droplet)의 흡입에 의해 감염될 수 있다. 비말은 감염자의 기침, 재채기에 의해 또는 말할 때 발생된다. 계절성 인플루엔자는 고열, 기침(통상 마른 기침), 두통, 근육 및 관절 통증, 심각한 권태감(찌뿌듯한 느낌), 인후염 및 콧물의 갑작스러운 발생에 의해 특징지어진다. 기침은 심각할 수 있어서 2주 이상 지속될 수 있다. 대부분의 사람들은 의학적 치료에 대한 필요 없이 1주 이내에 열 및 기타 증상으로부터 회복한다. 그러나, 인플루엔자는, 특히 상기 언급된 바와 같은 고위험에 처한 사람들에서 심각한 병 또는 사망을 야기할 수 있다. 잠복기(incubation period)로 알려진, 감염으로부터 병에 이르기까지의 시간은 약 2일이다.

그러한 병으로부터의 질병 및/또는 심각한 결과를 방지하는 가장 효과적인 방법은 백신 접종(vaccination)이다. 안전하고 효과적인 백신이 입수가능하고, 60년이 넘는 기간 동안 사용되어 왔다. 건강한 성인들 사이에서, 인플루엔자 백신은 합리적인 보호를 제공할 수 있다. 그러나, 백신 접종은 몇몇 제한을 갖는다. 먼저, 인플루엔자 백신은 고령자들 사이에서 병을 예방하는 데 덜 효과적일 수 있고, 단지 질병의 중증도 및 합병증 및 사망의 발생률을 감소시킬 수 있을 뿐이다. 게다가, 인플루엔자 백신 접종은 순환성 바이러스가 백신 바이러스와 잘 매칭될 때 가장 효과적이어서, 백신 접종의 성공은 그 계절의 가장 우세한 바이러스 유형의 우수한 예측에 대체로 좌우된다. 현재의 인플루엔자 백신에 대한 백신-유도 면역 반응의 단수명 성질과 결합된, 항원 소변이(antigenic drift)를 통한 인플루엔자 바이러스주의 신속하고 계속적인 진화는, 계절적으로 적절한 바이러스주에 의한 백신 접종이 예방을 위해 해마다 필요함을 의미한다.

인플루엔자의 현재 치료는 직접적인 항바이러스 약물, 또는 인플루엔자-유도 증상을 해소시키는 의약을 사용한다. 시장에서 이용 가능한 인플루엔자 항바이러스 약물에는 뉴라미니다제 억제제 및 M2 채널 억제제의 2가지 클래스가 있다. 뉴라미니다제 억제제인 오셀타미비르(oseltamivir) 또는 자나미비르(zanamivir)는 인플루엔자의 예방 및 치료를 위해 권장되는 1차 항바이러스제이다. 이들은 A형 및 B형 인플루엔자 바이러스 둘 모두에 대해 효과적이다. 이들 항바이러스 약물에 대한 내성의 발생이 계절성 인플루엔자의 치료 동안에, 그리고 산발성 오셀타미비르-내성 2009 H1N1 바이러스에서 확인되었지만, 공중 보건 영향은 지금까지 제한되어 있다. M2 채널 억제제, 예컨대 아만타딘 및 리만타딘(아만타단)은 A형 인플루엔자 바이러스주에 대해서는 활성이지만, B형 인플루엔자 바이러스주에 대해서는 비활성이다. 순환성 A형 인플루엔자 바이러스에서의 아만타단 내성은 2003~2004년 동안에 시작해서 세계적으로 급격히 증가하였다. 따라서, 아만타민 및 리만타딘은 현재 순환성 A형 인플루엔자 바이러스주의 항바이러스 치료 또는 예방화학요법을 위해 권장되지 않는다.

2009년에, 신종 돼지(swine) H1N1 바이러스주는 인간, 피그(pig), 및 조류의 H1N1 바이러스로부터의 유전자의 재편성(reassortment)의 결과로서 예기치 않은 인플루엔자 범유행(pandemic)을 야기하였다. 고병원성 조류 H5N1 바이러스주의 계속 진행 중인 순환, 및 중국에 격리되어 있고 40% 사망률을 갖는 심각한 호흡기 질병(이는 잠재적으로 인간-대-인간 전파에 대해 적응될 수 있음)과 관련된 조류 기원의 신종 재편성체인 H7N9 바이러스의 최근의 출현과 함께, 이러한 과거의 범유행은 신종 인플루엔자 바이러스주에 대한 전세계 인구의 취약성을 강조하였다. 백신 접종이 인플루엔자 감염을 제어하기 위한 주요 예방 전략을 유지하고 있지만, 신종 백신이 입수가능해지기 전의 기간으로 이어주고 중증 인플루엔자 사례를 치료할 뿐만 아니라 바이러스 내성의 문제에 대응하기 위해, 항-인플루엔자 약물의 더 넓은 선택권이 요구되고 있다. 따라서, 신규한 인플루엔자 항바이러스제의 개발은 다시 높은 우선사항이 되었으며 의학적 필요성이 충족되지 않았다.

본 발명은 바이러스 인플루엔자 감염의 또는 이에 대한 치료에 사용될 수 있는 화학식 I의 화합물, 이의 입체 이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체에 관한 것이다:

[화학식 I]

식 중,

X는 -CF 또는 N으로부터 선택되며;

Y는 N, -CF, -C-Cl, -C-CN 또는 -C-CH₃으로부터 선택되고;

R₁은 -H, -CH₃, -COOH, -CF_3, -사이클로프로필, -CONH₂, -CONH(C_1-3알킬), 또는 -CON(C_1-3알킬)₂로부터 선택되고;

Q는 N 또는 O로부터 선택되고;

R₂는 할로겐, 시아노, C_1-3알킬, 하이드록실, 아미노, 메톡시, -COOH, -CF₃ 또는 사이클로알킬에 의해 임의 치환되는 헤테로사이클이다.

본 발명에 따른 바람직한 하나의 화합물은 다음 구조를 갖는다:

또한, 본 발명의 일부는, 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체를 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약학 조성물이다.

약학 조성물은 또한 추가 치료제, 예컨대 또 다른 항바이러스제 또는 인플루엔자 백신, 또는 둘 모두를 포함할 수 있다.

또한, 약제로서 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체, 또는 약학 조성물이 본 발명에 속한다.

추가적으로, 본 발명은 인플루엔자의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체, 또는 약학 조성물에 관한 것이다.

상기 용도는 또한 추가 치료제의 공동-투여를 포함할 수 있으며, 상기 추가 치료제는 항바이러스제 또는 인플루엔자 백신, 또는 둘 모두로부터 선택된다.

본 발명의 일부는 생물학적 샘플 또는 환자에서 인플루엔자 바이러스(들)의 복제를 억제하기 위한, 하기 구조식 I로 나타내는 화합물, 이의 입체 이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체의 용도이다:

[화학식 I]

식 중,

X는 -CF 또는 N으로부터 선택되며;

Y는 N, -CF, -C-Cl, -C-CN 또는 -C-CH₃으로부터 선택되고;

R₁은 -H, -CH₃, -COOH, -CF_3, -사이클로프로필, -CONH₂, -CONH(C_1-3알킬), 또는 -CON(C_1-3 알킬)₂로부터 선택되고;

Q는 N 또는 O로부터 선택되고;

용어 “알킬”은 지정된 수의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 지방족 탄화수소를 말한다.

용어 "사이클로알킬"은 지정된 수의 탄소 원자를 함유하는 카보사이클릭 고리를 말한다.

용어 "헤테로사이클"은 N, O 또는 S, 특히 N 및 O로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 포화 또는 불포화 분자를 말한다. 상기 헤테로사이클은 4, 5, 6 또는 7개의 고리 원자를 가질 수 있고, 또 다른 고리 시스템에 임의로 융합될 수 있다.

화학식 I의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염은 이의 산 부가염 및 염기 염을 포함한다. 적합한 산 부가염은 비독성 염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 적합한 염기 염은 비독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다.

본 발명의 화합물은 또한 비용매화 형태 및 용매화 형태로 존재할 수 있다. 본원에서 용어 “용매화물”은 본 발명의 화합물과 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 용매 분자, 예를 들어, 에탄올을 포함하는 분자 복합체를 기술하는데 사용된다.

용어 “다형체”는 1개 초과의 형태 또는 결정 구조로 존재하는 본 발명의 화합물의 능력을 말한다.

본 발명의 화합물은 결정질 생성물 또는 비결정질 생성물로서 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 침전, 결정화, 동결 건조, 분무 건조 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해, 예를 들어 고체 플러그, 분말 또는 필름으로서 얻어질 수 있다. 본 발명의 화합물은 단독으로 투여될 수 있거나, 본 발명의 하나 이상의 다른 화합물과 조합되어 또는 하나 이상의 다른 약물과 조합되어 투여될 수 있다. 일반적으로 본 발명의 화합물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 연합되어 제형으로서 투여될 것이다. 본원에서 용어 “부형제”는 본 발명의 화합물(들) 이외의 임의의 성분을 기술하는 데 사용된다. 부형제의 선택은 주로 특정 투여 방식, 용해도와 안정성에 대한 부형제의 영향, 및 투약형의 성질과 같은 요인에 의존한다.

본 발명의 화합물 또는 이의 임의의 하위군(subgroup)은 투여 목적에 따라 다양한 약학 형태로 제형화될 수 있다. 적절한 조성물로는, 전신 투여 약물용으로 통상적으로 사용되는 모든 조성물이 언급될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물을 제조하기 위하여, 활성 성분으로서 특정 화합물(선택적으로 부가염 형태)의 유효량이 약제학적으로 허용되는 담체와의 친밀한 혼합물로 조합되며, 이러한 담체는 투여에 요망되는 제제의 형태에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 이러한 약학 조성물은 바람직하게는, 예를 들어 경구 투여, 직장 투여 또는 경피 투여에 적합한 단일 투약형이다. 예를 들어, 조성물을 경구 투약형으로 제조함에 있어서, 현탁액, 시럽, 엘릭서, 에멀젼 및 용액과 같은 경구 액체 제제의 경우, 예를 들어 물, 글리콜, 오일, 알코올 등과 같은 임의의 일반적인 약제학적 매질이; 또는 산제, 환제, 캡슐 및 정제의 경우, 전분, 당, 카올린, 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제 등과 같은 고체 담체가 사용될 수 있다. 이의 투여 용이성 때문에, 정제 및 캡슐이 가장 유리한 경구 단위 투약형을 나타내며, 이 경우에는 분명히 고체 약제학적 담체가 사용된다. 사용 직전에 액체 형태로 전환될 수 있는 고체 형태 제제도 포함된다. 경피 투여에 적합한 조성물에서, 담체는 피부에 유의한 유해 영향을 끼치지 않는 임의의 성질의, 작은 비율의 적합한 첨가제와 임의 배합된, 침투 향상제 및/또는 적합한 습윤제를 임의로 포함한다. 상기 첨가제는 피부로의 투여를 용이하게 할 수 있고/있거나 원하는 조성물을 제조하는 데 도움을 줄 수 있다. 이러한 조성물은 다양한 방식으로, 예를 들어 경피 패치로서, 스팟온(spot-on)으로서, 연고로서 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 흡입 또는 통기를 통한 투여에 대한 당업계에서 사용되는 방법 및 제형을 사용하여 흡입 또는 통기를 통해 투여될 수 있다. 따라서, 일반적으로 본 발명의 화합물은 용액, 현탁액 또는 건조 분말의 형태로 폐에 투여될 수 있다.

투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 상기 약학 조성물을 단위 투약형으로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 바와 같은 단위 투약형은 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 말하며, 각 단위는 필요한 약제학적 담체와 연합되어 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 활성 성분을 함유한다. 이러한 단위 투약형의 예로는 정제(분할(scored) 또는 코팅 정제를 포함), 캡슐, 환제, 산제 패킷, 웨이퍼, 좌제, 주사가능한 용액 또는 현탁액 등, 및 이들의 분리형 멀티플(segregated multiple)이 있다.

감염성 질병의 치료 분야의 당업자는 이하에 제시되는 시험 결과로부터 유효량을 결정할 수 있을 것이다. 일반적으로 1일 유효량은 체중 1 ㎏ 당 0.01 ㎎ 내지 50 ㎎, 더욱 바람직하게는 체중 1 ㎏ 당 0.1 ㎎ 내지 10 ㎎일 것으로 고려된다. 요구되는 용량을 하루 동안 적절한 간격에 2, 3, 또는 4회 이상의 하위-용량(sub-dose)으로서 투여하는 것이 적절할 수 있다. 상기 하위-용량은, 예를 들어 단위 투약형 당 1 내지 1000 ㎎, 그리고 특히 5 내지 200 ㎎의 활성 성분을 함유하는 단위 투약형으로서 제형화될 수 있다.

당업자에게 잘 알려진 바와 같이, 정확한 투여 빈도 및 투여량은 사용되는 화학식 I의 특정 화합물, 치료받는 특정 질환, 치료받는 질환의 중증도, 특정 환자의 연령, 체중 및 일반적인 신체 상태뿐 아니라 개인이 복용하고 있을 수 있는 다른 약제에 의존한다. 더욱이, 유효량은 치료받는 대상체의 반응에 따라, 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 평가에 따라 저하 또는 증가될 수 있음이 명백하다. 따라서, 위에 언급된 유효량 범위는 단지 지침일 뿐이고, 본 발명의 범위 또는 용도를 임의의 정도로 제한하려는 것이 아니다.

본 개시는 또한 본 발명의 화합물에 존재하는 원자의 임의의 동위원소를 포함하고자 한다. 예를 들어, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함하고 탄소의 동위원소는 C-13 및 C-14를 포함한다.

본 발명에 사용되는 본 화합물은 또한, 동일한 결합 순서에 의해 결합된 동일한 원자로 구성되지만 상호교환될 수 없는 상이한 3차원 구조를 갖는 모든 가능한 화합물을 정의하는, 이들의 입체화학적 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 달리 언급되거나 표시되지 않는 한, 화합물의 화학적 명칭은, 상기 화합물이 보유할 수 있을 모든 가능한 입체화학적 이성질체 형태의 혼합물을 포괄한다.

상기 혼합물은 상기 화합물의 기본 분자 구조의 모든 부분입체 이성질체 및/또는 거울상 이성질체를 함유할 수 있다. 임의의 라세미 혼합물 또는 라세미체를 비롯하여 순수한 형태이거나 상호 혼합물 형태인 본 발명에 사용되는 화합물의 모든 입체화학적 이성질체 형태는 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.

본원에 언급되는 화합물 및 중간체의 순수한 입체 이성질체 형태는, 상기 화합물 또는 중간체와 동일한 기본적 분자 구조인 다른 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체 형태가 실질적으로 없는 이성질체로서 정의된다. 특히, 용어 '입체 이성질체로서 순수한'은 적어도 80%의 입체 이성질체 과잉률(즉, 최소 90%의 한 이성질체 및 최대 10%의 다른 가능한 이성질체) 내지 100%까지의 입체 이성질체 과잉률(즉, 한 이성질체가 100%이고 다른 것은 없음)을 갖는 화합물 또는 중간체, 더욱 구체적으로는 90% 내지 100%까지의 입체 이성질체 과잉률을 갖는, 한층 더 구체적으로는 94% 내지 100%까지의 입체 이성질체 과잉률을 갖는, 그리고 가장 구체적으로는 97% 내지 100%까지의 입체 이성질체 과잉률을 갖는 화합물 또는 중간체와 관련된다. 용어 '거울상 이성질체로서 순수한' 및 '부분입체 이성질체로서 순수한'은 유사한 방식으로, 그러나 각각 해당 혼합물의 거울상 이성질체 과잉률, 부분입체 이성질체 과잉률과 관련된 것으로 이해되어야 한다.

본 발명에서 사용되는 화합물 및 중간체의 순수한 입체 이성질체 형태는 당업계에 공지된 절차의 적용에 의해 얻어질 수 있다. 예를 들어, 거울상 이성질체는 광학 활성 산 또는 염기로 이들의 부분입체 이성질체 염의 선택적 결정화에 의해 서로 분리될 수 있다. 이의 예로는 타르타르산, 디벤조일타르타르산, 디톨루오일타르타르산 및 캄포설폰산이 있다. 대안적으로, 거울상 이성질체는 키랄 고정상을 사용하여 크로마토그래피 기법에 의해 분리될 수 있다. 상기 순수한 입체화학적 이성질체 형태는 또한, 반응이 입체특이적으로 일어난다면, 적절한 원료의 상응하는 순수한 입체화학적 이성질체 형태로부터 유도될 수 있다. 바람직하게는, 특정 입체 이성질체가 요망될 경우, 상기 화합물은 입체특이적 제조 방법에 의해 합성될 것이다. 이들 방법은 유리하게는 거울상 이성질체로서 순수한 원료를 사용할 것이다.

실시예

반응식 1.

(3)의 제조.

반응식 1: i) TBAHS, NaOH, 톨루엔 ii) NBS, DMF iii) 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이-1,3,2-디옥사보롤란, Pd(dppf)Cl₂, KOAc, 1,4-디옥산, 90℃

반응식 2. 화학식 I의 산물에 대한 일반 반응식.

(10)의 제조.

반응식 2: i) PhCH₂OH, DPPA, Et₃N, 톨루엔, 100℃, 12 h ii) HCl, CH₂Cl₂, CH₃OH, rt, 48 h iii) DIPEA, CH₃OH, THF, rt, 12 h iv) Na₂CO₃, Pd(PPh₃)₄, H₂O, 1,4-디옥산, 80℃, 12h v) Pd/C, H₂, THF, vi) DIPEA, CH₃OH, THF, 80~90℃, 2 d vii) LiOH, 1,4-디옥산, H₂O, 환류

(1)의 제조

톨루엔(500 ㎖) 중 5,7-디플루오로-1H-인돌(30 g, 195.91 mmol) 용액을 질소 하에 교반하였다. TBAHS(5 g, 14.7 mmol)를 첨가한 후, NaOH(H₂O 중 50%)(105 ㎖)를 첨가하고, 혼합물을 격렬하게 교반하였다. p-톨루엔설포닐 클로라이드(63.5 g, 333 mmol)를 첨가하고 혼합물을 rt에서 12 h 동안 교반하였다. 생성된 용액을 250 ㎖의 톨루엔으로 희석하고 물로 2회 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 미정제물을 메탄올 중에 분쇄하고 rt에서 12 h 동안 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고 진공 중에 건조시켜, 5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌(1)을 수득하였다.

(2)의 제조

DMF(330 ㎖) 중 5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌(1)(50.85 g, 165.46 mmol) 용액에 일부씩 NBS(35.34 g, 198.56 mmol)를 첨가하였다. 교반을 1시간 동안 50℃에서 계속하였다. 혼합물을 빙수(1 ℓ) 중 NaOH(1 N, 200 ㎖)의 교반 용액에 적가하고 하룻밤 동안 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고 진공 중에 건조시켜, 3-브로모-5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌(2)을 수득하였다.

(3)의 제조

1,4-디옥산(1.5 ℓ) 중 3-브로모-5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌(2)(60 g, 155.35 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이-1,3,2-디옥사보롤란(118.35 g, 466.06 mmol), Pd(dppf)Cl₂(22.74 g, 31.07 mmol) 및 KOAc(45.74 g, 466.06 mmol)의 혼합물을 N₂ 하에 하룻밤 동안 90℃까지 가열하였다. 여과 및 농축 후, 미정제물을 CH₂Cl₂에서 헵탄으로의 구배를 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 순수한 산물을 함유하는 분획을 모으고, 용매를 감압 하에 제거하여 5,7-디플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌(3)을 수득하였다.

(4)의 제조

트리에틸아민(35 ㎖, 251.6 mmol) 및 디페닐포스포릴 아지드(39 ㎖, 181 mmol)를 톨루엔(600 ㎖) 중 시스-3-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]사이클로헥산카복실산(39 g, 160.25 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 3 h 동안 실온에서 교반하였다. 벤질 알코올(33.167 ㎖, 320.51 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 100℃까지 가열하였다. 12 h 후, 반응 혼합물을 rt까지 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 염수로 세척하고, 건조시키고(Na₂SO₄), 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 진공 중에서 농축하였다. 순상 키랄 분리(정지상: Daicel Chiralpak AD 2 ㎏, 이동상: 80% 헵탄, 20% 에탄올에서 80% 헵탄, 20% 에탄올로의 구배)를 통해 정제를 수행하여 (+)-벤질 t-부틸 ((시스)-사이클로헥산-1,3-디일)디카바메이트를 수득하였다, [α]_D ²⁰+10.9(c 0.52, DMF)(4b) 및 (-)-벤질 t-부틸 ((시스)-사이클로헥산-1,3-디일)디카바메이트, [α]_D ²⁰-10.9(c 0.47, DMF)(4a).

(5)의 제조

자기 교반 막대가 구비된 500 ㎖ 둥근 바닥 플라스크 내로 (4a)(10 g, 28.7 mmol), CH₂Cl₂(100 ㎖), 및 메탄올(100 ㎖)을 첨가하였다. 48 시간 동안 실온에서 교반하면서 이소프로판올 중 6 M HCL을 느리게 첨가하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 미정제물을 디이소프로필에테르 함유 이소프로판올 중에 교반하였다. 흰색 침전물을 여과에 의해 단리하고 진공 중에 건조시켜 ((-)5)를 수득하였다. ¹H NMR (360 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.01 - 1.13 (m, 1 H) 1.16 - 1.36 (m, 3 H) 1.66 - 1.80 (m, 2 H) 1.86 - 1.99 (m, 1 H) 2.14 (m, 1 H) 2.95 - 3.17 (m, 1 H) 3.28 - 3.51 (m, 1 H) 4.95 - 5.08 (m, 2 H) 7.27 - 7.45 (m, 5 H) 8.21 (s, 3 H). LC-MS ES⁺ m/z = 249.3; Rt: 1.48분, 방법 C.

(6)의 제조

(5)(40 g, 140.46 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(DIPEA, 72.61 ㎖, 421.37 mmol)의 용액을 CH₃OH(100 ㎖) 및 THF(400 ㎖) 중 실온에서 교반하며 두었다. 2,4-디클로로-5-플루오로피리미딘(23.5 g, 141 mmol)을 반응 혼합물로 일부씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 주말 동안 교반하면서 잔류물을 약 5% 아세토니트릴 함유 디이소프로필에테르 중에 결정화하였다. 결정을 여과에 의해 수집하고, 진공 중에 건조시켜, (6)을 수득하였다. ¹H NMR (DMSO-d ₆ ) δ: 7.99-8.14 (m, 2H), 7.24-7.45 (m, 6H), 5.01 (s, 2H), 3.82-3.99 (m, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.67-1.85 (m, 3H), 1.17-1.44 (m, 3H), 1.00-1.15 (m, 1H). LC-MS ES⁺ m/z = 379.2; Rt: 1.94분, 방법 C.

(7)의 제조

자기 교반 막대가 구비된 250 ㎖ 둥근 바닥 플라스크에 H₂O(10 ㎖) 중 (3)(5 g, 11.54 mmol), (6)(3.64 g, 9.62 mmol) 및 Na₂CO₃(1.70 g, 16.03 mmol)의 혼합물을 넣고 1,4-디옥산(80 ㎖)을 10분 동안 N₂ 기류로 탈기하였다. Pd(PPh₃)₄(463 ㎎, 0.40 mmol)를 첨가하고 혼합물을 12시간 동안 80℃에서 가열하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하고 CH₂Cl₂ 중에 녹였다. 침전물을 여과에 의해 제거하고 여과액을 CH₂Cl₂에서 CH₂Cl₂/CH₃OH로의 구배를 사용해서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 최적 분획의 용매를 감압 하에 제거하여 (7)을 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 650.2; Rt: 2.55분, 방법 C.

(8)의 제조

Pd/C(10%)(2.90 g, 2.71 mmol)를 N₂ 하에 CH₃OH(240 ㎖) 및 THF(240 ㎖)의 혼합물에 첨가하였다. 이후, ((-)-7)(11.75 g, 18.09 mmol)을 첨가하고 1당량의 수소가 소비될 때까지 반응 혼합물을 H₂ 하에 rt에서 교반하였다. 촉매를 디칼라이트(Dicalite)로 여과하여 제거하였다. 여과액을 감압 하에 농축하였다. 미정제물을 CH₂Cl₂ 중에 용해시키고 이소프로판올 중 6 N HCl로 처리하였다. 침전물을 진공 중에 건조시켜 (8)을 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 516.1; Rt: 2.10분, 방법 C.

(9)의 제조

CH₃OH(1 ㎖) 중 (8)(250 ㎎, 0.49 mmol) 및 DIPEA(0.25 ㎖, 1.46 mmol) 용액을 실온에서 교반하였다. 4-클로로-2-메틸피리미딘(62 ㎎, 0.49 mmol)을 반응 혼합물에 일부씩 첨가하고 80℃에서 18 h 동안 교반하였다. 추가 당량의 4-클로로-2-메틸피리미딘(62 ㎎, 0.49 mmol)을 첨가하고 전체 혼합물을 24 h 동안 90℃에서 가열하였다. 혼합물을 증발시키고 미정제물(9)을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 607.7; Rt: 2.38분, 방법 D.

(10)의 제조

100 ㎖ 플라스크에서, (9)(300 ㎎, 0.26 mmol)를 60℃에서 1,4-디옥산(9 ㎖) 중에서 교반하였으며, 이 동안에 물(1 ㎖) 중 LiOH(62 ㎎, 2.61 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 환류시키고, 상온에서 하룻밤 교반하며 두었다. 용매를 증발시키고 잔류물을 CH₃OH(30 ㎖) 중에 취해, 교반하고, 진한 HCl로 중화시켰다. 용액을 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 ㎛, 30 × 250 ㎜, 이동상: 0.25% NH₄HCO₃ 수용액, CH₃OH)에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켰다. CH₃OH의 첨가 후, 용액을 두 번째로 농축하여 (10)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.14 - 1.42 (m, 3 H) 1.48 - 1.59 (m, 1 H) 1.80 - 1.92 (m, 1 H) 1.94 - 2.09 (m, 2 H) 2.24 (s, 3 H) 2.26 - 2.31 (m, 1 H) 4.05 - 4.30 (m, 2 H) 6.22 - 6.30 (m, 1 H) 7.02 - 7.08 (m, 1 H) 7.20 (m, 1 H) 7.50 (m, 1 H) 7.88 (m, 1 H) 8.04 (m, 1 H) 8.12 - 8.17 (m, 2 H) 12.17 (s, 1 H). LC-MS ES⁺ m/z = 453.8; Rt: 1.86분, 방법 D.

(13)의 제조

(8)(65 ㎎, 0.40 mmol)을 10 ㎖ DMF 중에 분배하고, DBU(0.12 ㎖, 0.81 mmol) 및 PYBOP(252 ㎎, 0.49 mmol)을 첨가하였다. 균질한 용액을 얻을 때까지 혼합물을 rt에서 교반하였다. 2-아미노퀴나졸린-4-올(250 ㎎, 0.49 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 rt에서 16시간 동안 교반하였다. 추가 당량의 DBU, PYBOP 및 2-아미노퀴나졸린-4-올을 첨가하고 전체 혼합물을 상온에서 주말에 걸쳐 교반하였다. 용매를 증발시키고 미정제물을 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 ㎛, 30 × 250 ㎜, 이동상: 0.25% NH₄HCO₃ 수용액, CH₃OH)에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켰다. CH₃OH의 첨가 후, 용액을 두 번째로 농축하여 (13)을 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 505.5; Rt: 1.80분, 방법 D.

(17)의 제조

(9)를 제조하는 방법에 따라 (17)을 제조하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 627.9; Rt: 1.82분, 방법 C.

(18)의 제조

Pd/C(10%)(0.02 g, 0.18 mmol)를 N₂ 하에 CH₃OH(5 ㎖)의 혼합물에 첨가하였다. 이후, (17)(183 ㎎, 0.29 mmol)을 첨가하고 1당량의 H₂가 소비될 때까지 반응 혼합물을 H₂ 하에 rt에서 교반하였다. 촉매를 디칼라이트로 여과하여 제거하였다. 여과액을 감압 하에 농축하였다. 용매를 증발시키고 미정제물을 50%[25 mM NH₄HCO₃]-50%[MeCN:CH₃OH 1:1]에서 25%[25 mM NH₄HCO₃]-75%[MeCN:CH₃OH 1:1]로의 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켰다. CH₃OH의 첨가 후, 용액을 두 번째로 농축하여 (18)을 수득하였다. ¹H NMR (300 MHz, 메탄올-d ₄) δ ppm 1.23 - 1.55 (m, 3 H) 1.59 - 1.82 (m, 1 H) 1.89 - 2.64 (m, 4 H) 3.96 - 4.19 (m, 1 H) 4.26 - 4.39 (m, 1 H) 6.47 (br d, J=6.0 Hz, 1 H) 6.76 - 6.86 (m, 1 H) 7.89 - 8.00 (m, 2 H) 8.04 - 8.11 (m, 2 H) 8.31 (s, 1 H). LC-MS ES⁺ m/z = 440.1; Rt: 1.98분, 방법 C.

(20)의 제조

ACN(2 ㎖) 중 (8)(76 ㎎, 0.21 mmol), 6-클로로피리미딘-4-카복실산(0.05 g, 0.31 mmol) 및 TEA(0.06 ㎖, 0.421 mmol)의 혼합물을 12시간 동안 100℃에서 교반하였다. 6-클로로피리미딘-4-카복실산(0.05 g, 0.315 mmol)의 첨가를 3일의 기간에 걸쳐 3회 반복하고 100℃에서 가열하였다. 용매를 증발시키고 미정제물을 역상 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜 (20)을 수득하였다. ¹H NMR (300 MHz, 메탄올-d ₄) δ ppm 1.24 - 1.73 (m, 4 H) 1.90 - 2.52 (m, 4 H) 3.97 - 4.21 (m, 1 H) 4.23 - 4.45 (m, 1 H) 6.66 - 6.93 (m, 1 H) 7.04 (s, 1 H) 7.99 (d, J=4.1 Hz, 1 H) 8.04 (br d, J=12.1 Hz, 1 H) 8.08 (s, 1 H) 8.21 (s, 1 H). LC-MS ES⁺ m/z = 483.9; Rt: 2.10분, 방법 C.

(21)의 제조

5-브로모-7-플루오로-1H-인돌(4 g, 18.68 mmol), 아연 시아나이드(1.31 g, 11.21 mmol), Pd₂(dba)₃(0.86 g, 0.93 mmol), Zn(0.31 g, 4.67 mmol) 및 dppf(1.04 g, 1.87 mmol)의 혼합물을 DMA(60 ㎖) 중에 용해시키고 N₂ 하에 12시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 실온까지 냉각하고, 여과한 다음, 여과액을 진공 중에 농축하였다. 미정제물을 EtOAc로 추출하고 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에 제거하였다. 미정제 물질을 n-헵탄에서 에틸 아세테이트로의 구배를 사용하여 실리카 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 감압 하에 농축하여 (21)을 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 161.0; Rt: 0.579분, 방법 C.

(22)의 제조

(21)(1.9 g, 11.86 mmol)을 질소 흐름 하에 교반하면서 톨루엔(30 ㎖)에 첨가하였다. TBAHS(402 ㎎, 1.19 mmol)를 첨가한 후, NaOH(H₂O 중 10%)(10 ㎖)를 첨가하고, 혼합물을 격렬하게 교반하였다. 톨루엔(30 ㎖) 중 p-톨루엔설포닐 클로라이드(3.39 g, 17.80 mmol)의 용액을 첨가하고, 전체 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 미정제물을 n-헵탄에서 EtOAc로의 구배를 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 순수한 산물을 함유하는 분획을 모으고 용매를 감압 하에서 제거하여 (22)를 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 315.0; Rt: 1.01분, 방법 C.

(23)의 제조

CH₂Cl₂(15 ㎖) 중 (22)(1.7 ㎎, 5.41 mmol)의 용액에 브롬(0.33 ㎖, 6.49 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 30분 동안 0℃에서 교반한 후 실온에서 1시간 더 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃ 수용액으로 처리하였다. 유기 층을 분리하고 수성 Na₂S₂O₃, 물, 및 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에 제거하여 (23)을 수득하고, 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 394.0; Rt: 1.15분, 방법 C.

(24)의 제조

용매 1,4-디옥산(10 ㎖)을 10분 동안 탈기하였다. (23)(1.10 g, 2.80 mmol), 비스(피나콜레이토)디보론(2.13 g, 8.39 mmol), Pd(dppf)Cl₂(204 ㎎, 0.28 mmol) 및 KOAc(1.24 g, 12.59 mmol)를 불활성 분위기 하에 rt에서 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 가열하고 16 h 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 냉각하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여과 및 농축 후, 미정제물을 n-헵탄에서 EtOAc로의 구배를 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 순수한 산물을 함유하는 분획을 모으고 용매를 감압 하에서 제거하여 (24)를 수득하였다.

(25)의 제조

Pd/C(10%)(3.05 g, 2.87 mmol)를 질소 기체 하에 CH₃OH(350 ㎖)에 첨가하였다. (4)(10 g, 28.70 mmol)를 첨가하였다. 1당량의 H₂가 소비될 때까지 반응 혼합물을 H₂ 하에 rt에서 교반하였다. 촉매를 N₂ 흐름 하에 디칼라이트로 여과하여 제거하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 (25)를 수득하고, 이를 정제 없이 추가로 사용하였다.

(26)의 제조

EtOH(130 ㎖) 및 THF(130 ㎖) 중 (25)(6.15 g, 28.70 mmol), 2,4-디클로로-5-플루오로-피리미딘(4.79 g, 28.70 mmol), DIPEA(29.7 ㎖, 172.2 mmol)의 혼합물을 17시간 동안 70℃에서 교반하고 가열하였다. 반응 혼합물의 용매를 감압 하에 증발시켰다. 생성된 잔류물을 물 중에 흡수시키고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 미정제물을 CH₂Cl₂에서 CH₂Cl₂/CH₃OH로의 구배를 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 순수한 산물을 함유하는 분획을 모으고 용매를 감압 하에서 제거하여 (26)을 얻었다. LC-MS ES⁺ m/z = 345.0; Rt: 1.97분, 방법 C.

(27)의 제조

1,4-디옥산(3 ㎖) 및 H₂O(0.3 ㎖) 중 (24)(1.10 g, 2.50 mmol), (26)(0.86 g, 2.50 mmol), Pd(dppf)Cl₂(162 ㎎, 0.25 mmol), 및 KOAc(1.59 g, 7.50 mmol)의 혼합물을 N₂로 탈기하고 마이크로파 조사 하에 30분 동안 100℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 농축하였다. 이어서, 혼합물을 CH₂Cl₂ 중에 용해시키고 물로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 미정제물을 n-헵탄에서 EtOAc로의 구배를 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 순수한 산물을 함유하는 분획을 모으고 용매를 감압 하에서 제거하여 (27)을 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 623; Rt: 1.34분, 방법 C.

(28)의 제조

(27)(400 ㎎, 0.64 mmol)을 1,4-디옥산(2.5 ㎖) 중에 용해시킨 후, 1,4-디옥산(2.41 ㎖, 9.64 mmol) 중 4 M HCl을 천천히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 하룻밤 동안 60℃에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 포화 NaHCO₃ 수용액의 첨가로 켄칭하고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에 제거하여 (28)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 정제 없이 사용하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 523; Rt: 0.89분, 방법 C.

(29)의 제조

ACN(5 ㎖) 중 (28)(0.2 g, 0.38 mmol), 2,4-디클로로피리미딘(0.10 g, 0.70 mmol) 및 DIPEA(0.2 ㎖, 1.15 mmol)의 혼합물을 12시간 동안 120℃에서 교반하였다. 반응 혼합물의 용매를 감압 하에 제거하고, 미정제물을 CH₂Cl₂로 추출하고, H₂O로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에 제거하여 (29)를 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 634.9; Rt: 1.78분, 방법 C.

(30)의 제조

(19)를 제조하는 방법에 따라 (30)을 제조하였다. ¹H NMR (300 MHz, 메탄올-d ₄) δ ppm 1.29 - 1.49 (m, 3 H) 1.66 - 1.84 (m, 1 H) 1.93 - 2.16 (m, 2 H) 2.19 - 2.30 (m, 1 H) 2.49 - 2.61 (m, 1 H) 3.96 - 4.18 (m, 1 H) 4.19 - 4.37 (m, 1 H) 6.42 - 6.53 (m, 1 H) 7.24 - 7.32 (m, 1 H) 7.87 - 7.95 (m, 1 H) 7.97 - 8.03 (m, 1 H) 8.15 - 8.24 (m, 2 H) 8.82 (s, 1 H). LC-MS ES⁺ m/z = 446.7; Rt: 2.05분, 방법 C.

(31)의 제조

(6)을 제조하는 방법에 따라 (31)을 제조하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 393.2; Rt: 2.02분, 방법 C.

(32)의 제조

(7)을 제조하는 방법에 따라 (32)를 제조하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 664.3; Rt: 1.05분, 방법 A.

(33)의 제조

(8)을 제조하는 방법에 따라 (33)을 제조하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 496.2; Rt: 0.89분, 방법 A.

(34)의 제조

자기 교반 막대가 구비되고 질소가 살포된 20 ㎖ 시험관에 (33)(350 mg, 0.66 mmol), ACN(7 ㎖), DIPEA(0.29 ㎖, 1.65 mmol) 및 2,4-디클로로-6-(트리플루오로메틸)피리미딘(150.6 ㎎, 0.70 mmol)을 넣었다. 플라스크를 밀봉하고 혼합물을 18 h 동안 75℃에서 교반하며 두었다. (34)를 함유하는 미정제 용액을 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 710.3; Rt: 2.65분, 방법 C.

(35)의 제조

(34)를 함유하는 미정제 반응 혼합물에 1,4-디옥산(8 ㎖), 물(1 ㎖) 및 LiOH(10당량)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃까지 가열하고, 2일 동안 교반하였다. 용액을 진한 HCl로 중화시킨 후 용매를 감압 하에 제거하였다. 미정제물을 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 ODB 5 ㎛, 30 × 250 ㎜, 이동상: 0.25% NH₄HCO₃ 수용액, CH₃OH)를 통해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켰다. CH₃OH의 첨가 후, 용액을 두 번째로 농축하여 (35)를 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 556.2; Rt: 2.31분, 방법 C.

(43)의 제조

자기 교반 막대가 구비되고 질소가 살포된 20 ㎖ 시험관에 ((-)33)(0.3 g, 0.465 mmol), ACN(5 ㎖), DIPEA(0.24 ㎖, 1.39 mmol) 및 2,4-디클로로-5-시아노피리미딘(162 ㎎, 0.93 mmol)을 넣었다. 플라스크를 밀봉하고 혼합물을 18 h 동안 70℃에서 교반하며 두었다. 용매를 감압 하에 제거하고 미정제물을 실리카 겔 크로마토그래피(헵탄/AcOEt 75/25에서 50/50으로의 이동상 구배)에 의해 정제하여 240 ㎎의 흰색 고체, 2-클로로-4-(((시스)-3-((2-(5,7-디플루오로-1-토실-1H-인돌-3-일)-5-플루오로-6-메틸피리미딘-4-일)아미노)사이클로헥실)아미노)피리미딘-5-카보니트릴을 수득하였다. 이 흰색 고체에 물(0.54 ㎖), LiOH(0.72 g, 3.0 mmol), 및 THF(1.6 ㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 72 h 동안 60℃에서 교반하였다. 에틸 아세테이트를 첨가하고 혼합물을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에 제거하였다. 미정제 산물을 실리카 겔 크로마토그래피(CH₂Cl₂/CH₃OH 98/2에서 94/6으로의 이동상 구배)를 통해 정제하였다. 순수한 분획을 모으고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 흰색 고체를 에테르 중에서 분쇄한 후 여과에 의해 단리하여 흰색 고체(43)를 수득하였다. [α]_D ²⁰ -219.2 (c 0.25, DMF).

(48)의 제조

DBU(2.58 ㎖, 17.2 mmol)를 DMF(10 ㎖) 중 5-플루오로오로트산 용액(3 g, 17.2 mmol) 용액에 첨가하였다. 30분 동안 교반 후, 요오도에탄(2.69 ㎎, 17.2 mmol)을 용액에 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 60℃까지 가열하였다. 물(100 ㎖)을 혼합물에 첨가하고, 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 건조시켜 에틸 5-플루오로오로테이트(48)를 얻었다. LC-MS ES^- m/z = 200.9; Rt: 0.91분, 방법 D.

(49)의 제조

에틸 5-플루오로오로테이트(48)(2.13 g, 10.54 mmol)를 90℃에서 N,N-디에틸아닐린(1.09 ㎖, 7.16 mmol) 및 POCl₃(2.64 ㎖, 28.45 mmol)의 혼합물에 첨가하고 혼합물을 4시간 동안 환류시켰다. 용액을 빙수에 부은 뒤, 나트륨 바이카보네이트를 pH 8까지 첨가하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고 5% 수성 칼륨 바이설페이트, 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 나트륨 설페이트로 건조시키고 진공 중에 농축하였다. 미정제물을 n-헵탄에서 n-헵탄/EtOAc, 8/2로의 구배를 사용하여 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 분획을 모으고 증발 건조시켜 에틸 2,6-디클로로-5-플루오로피리미딘-4-카복실레이트(49)를 수득하였다.

(50)의 제조

(34)를 제조하는 방법에 따라 (50)을 제조하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 451.2; Rt: 1.09분, 방법 A.

(51)의 제조

(32)를 제조하는 방법에 따라 (51)을 제조하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 722.4; Rt: 2.56분, 방법 B.

(52)의 제조

250 ㎖ 플라스크에서, (51)(1 g, 1.56 mmol)을 rt에서 1,4-디옥산(45 ㎖) 중에 교반하였으며, 이 동안에 물(5 ㎖) 중 LiOH(374 ㎎, 15.63 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 약 4시간 동안 80 내지 90℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 HCl 37%로 중화시키고 용매를 감압 하에 제거하였다. 수층을 EtOAc로 추출하고, MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액의 용매를 감압 하에서 제거하여 (52)를 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 540.2; Rt: 0.83분, 방법 A.

(53)의 제조

Pd/C(10%)(172 ㎎, 0.16 mmol)를 N₂ 하에 CH₃OH(15 ㎖) 및 THF(15 ㎖)의 혼합물에 첨가하였다. 이후, (52)(580 ㎎, 1.08 mmol)를 첨가하고 1당량의 H₂가 소비될 때까지 반응 혼합물을 H₂ 분위기 하에 실온에서 교반하였다. 촉매를 디칼라이트로 여과하여 제거하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 (53)을 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 406.3; Rt: 1.03분, 방법 B.

(54)의 제조

(34)를 제조하는 방법에 따라 (54)를 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.07 - 1.63 (m, 4 H) 1.93 (m, 3 H) 2.14 (s, 3 H) 2.17 - 2.26 (m, 1 H) 3.86 - 4.04 (m, 1 H) 4.12 - 4.30 (m, 1 H) 6.22 (br s, 1 H) 6.96 - 7.14 (m, 1 H) 7.54 - 7.69 (m, 1 H) 7.75 (br s, 1 H) 8.06 (br d, J=11.9 Hz, 1 H) 8.18 (s, 1 H) 12.18 (br s, 1 H) LC-MS ES⁺ m/z = 532.1; Rt: 1.41분, 방법 B.

(55)의 제조

DMF(350 ㎖) 중 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(11.5 g, 73.92 mmol)의 교반 용액에 DMF(50 ㎖) 중 브롬(11.8 g, 73.84 mmol) 용액을 0℃에서 첨가하였다. 냉각조를 제거하고 반응물을 8 h 동안 20℃에서 교반한 후, 반응 혼합물을 빙수에 붓고 Na₂CO₃으로 염기성화하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 10% Na₂S₂O₃ 수용액, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 감압 하에서 농축하여, 황색 고체로서 5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(55)을 수득하였으며, 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 7.84 (s, 1 H), 8.84 (s, 1 H), 8.92 (s, 1　H), 12.57 (br, 1 H).

(56)의 제조

THF 중 5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(12.8 g, 55.11 mmol)의 교반 용액에 질소 하에서 0℃에서 NaH(4.48 g, 112.01 mmol)를 일부씩 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 5℃에서 교반하고, 이어서 p-톨루엔설포닐 클로라이드(11.6 g, 60.85 mmol)를 일부씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃까지 가온되게 하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 교반하면서 얼음 및 1 M 수성 HCl의 혼합물에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 감압 하에서 농축하였다. 미정제물을 에틸 아세테이트로부터의 결정화에 의해 정제하여, 흰색 고체로서 5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(56)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.36 (s, 3 H), 7.47 (d, J=8.0 Hz, 2 H), 8.06 (d, J=8.0 Hz, 2 H), 8.31 (s, 1　H), 9.03 (s, 1 H), 9.06 (s, 1 H). LC-MS ES⁺ m/z = 351.8; Rt: 2.02분, 방법 D.

(57)의 제조

1,4-디옥산(170 ㎖, 질소로 탈기됨) 중 5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(10 g, 28.39 mmol), 비스(피나콜레이토)디보론(14.42 g, 56.79 mmol), 칼륨 아세테이트(8.36 g, 85.18 mmol), Pd(dppf)Cl₂(1 g, 1.37 mmol)의 혼합물을 환류 응축기가 구비된 500 ㎖ 둥근 바닥 플라스크에서 질소 하에 16시간 동안 80℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하고, 패킹된 셀라이트(packed Celite)를 통해 여과하고, 고체를 에틸 아세테이트로 헹구었다. 여과액을 감압 하에서 농축하고 미정제물을 n-헵탄에서 에틸 아세테이트로의 구배를 사용하여 실리카 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 감압 하에서 농축하여 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(57)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.33 (s, 12 H) 2.37 (s, 3　H) 7.47 (d, J=8.36 Hz, 2 H) 8.11 (d, J=8.58　Hz, 2 H) 8.14 (s, 1 H) 9.00 (s, 1 H) 9.10 (s, 1　H). LC-MS ES⁺ m/z = 318.1; Rt: 0.74분, 방법 A.

(58)의 제조

밀봉 튜브에, DME(24 ㎖) 중 (57)(1.525 g, 3.82 mmol), (31)(1.6 g, 4.07 mmol), 및 K₂CO₃(5.73 ㎖, 2 M, 11.46 mmol)의 용액을 5분 동안 N₂로 퍼징한 후 Pd(dppf)Cl₂.CH₂Cl₂(313 ㎎, 0.38 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60분 동안 110℃에서 오토클레이브에서 교반하고 가열한 후 디칼라이트로 여과하고 여과액을 감압 하에 농축하였다. 미정제물을 n-헵탄에서 n-헵탄 중 25% EtOAc로의 구배를 사용하여 실리카 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 최적 분획의 용매를 감압 하에 제거하여 (58)을 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 630.2; Rt: 1.28분, 방법 A.

(59)의 제조

Pd/C(10%)(173 ㎎, 0.16 mmol)를 N₂ 하에 CH₃OH(15 ㎖) 및 THF(15 ㎖)의 혼합물에 첨가하였다. 이후, (58)(410 ㎎, 0.65 mmol)을 첨가하고 1당량의 H₂가 소비될 때까지 반응 혼합물을 H₂ 하에 rt에서 교반하였다. 촉매를 디칼라이트로 여과하여 제거하였다. 여과액을 감압 하에 농축하였다. 미정제물을 CH₂Cl₂ 중에 용해시키고 IPA 중 6 N HCl 혼합물로 처리하였다. 형성된 침전물을 여과에 의해 단리한 후 진공 중에 건조시켜 (59)를 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 496.2; Rt: 0.89분, 방법 A.

(60) 및 (61)의 제조

DMF(15 ㎖) 중 2,4-디클로로-6-메틸피리미딘(303 ㎎, 1.86 mmol) 및 DIPEA(0.53 ㎖, 3.10 mmol) 용액을 질소 하에 실온에서 교반하였다. 이어서 (59)(330 ㎎, 0.62 mmol)를 첨가하고 60℃에서 4시간 동안 계속 교반하였다. 혼합물을 빙수에 붓고 하룻밤 동안 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고 진공 중에 건조시켜 (60) 및 (61)의 혼합물을 수득하였다.

(62) 및 (63)의 제조

Pd/C(10%)(102 ㎎, 0.10 mmol)를 N₂ 분위기 하에 CH₃OH(30 ㎖) 및 THF(15 ㎖)의 혼합물에 첨가하였다. 이후, (60) 및 (61)의 혼합물(240 ㎎, 0.39 mmol)을 첨가하고 1당량의 수소가 소비될 때까지 반응 혼합물을 H₂ 분위기하에 rt에서 교반하였다. 촉매를 디칼라이트로 여과하여 제거하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 (62) 및 (63)의 혼합물을 수득하였다.

(64) 및 (65)의 제조

100 ㎖ 플라스크에서, (62) 및 (63)의 혼합물(110 ㎎, 0.19 mmol)을 85℃에서 1,4-디옥산(18 ㎖) 중에 교반하였으며, 이 동안에 물(2 ㎖) 중 LiOH(90 ㎎, 3.74 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 환류시키고, 상온에서 하룻밤 교반하며 두었다. 1,4-디옥산을 증발시키고 미정제물을 에틸 아세테이트(20 ㎖) 중에 재구성하고, 교반하고, 진한 HCl로 중화시켰다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 미정제물을 분취용 HPLC(정지상: RP XBridge Prep C18 ODB 5 ㎛, 30 × 250 ㎜, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 증발 건조시켜 (64)를 수득하였다. ¹H NMR (400　MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.10 - 1.45 (m, 3 H) 1.50 - 1.59 (m, 1 H) 1.81 - 1.92 (m, 1 H) 1.93 - 2.07 (m, 2　H) 2.16 (s, 3 H) 2.29 - 2.37 (m, 1 H) 2.33 (d, J=3.2 Hz, 3 H) 3.84 - 4.03 (m, 1 H) 4.07 - 4.31 (m, 1 H) 6.33 (s, 1 H) 7.00 (br d, J=7.3 Hz, 1 H) 7.12 - 7.33 (m, 1 H) 8.09 (s, 1 H) 8.29 (s, 1 H) 8.78 (s, 1 H) 9.66 (s, 1 H) 12.19 (br s, 1 H). LC-MS ES⁺ m/z = 434.3; Rt: 0.72분, 방법 A. 그리고 (65) ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.15 - 1.43 (m, 3 H) 1.43 - 1.57 (m, 1 H) 1.81 - 1.88 (m, 1 H) 1.90 - 2.01 (m, 2 H) 2.17 (s, 3 H) 2.27 (m, 1 H) 2.33 (d, J=2.9 Hz, 3 H) 3.84 - 4.00 (m, 1 H) 4.08 - 4.22 (m, 1 H) 6.39 (d, J=5.0 Hz,1 H) 7.00 (br d, J=7.7 Hz, 1 H) 7.36 (m, 1 H) 8.08 (d, J=5.0 Hz,1 H) 8.14 (s, 1 H) 8.80 (s, 1 H) 9.66 (s, 1 H). LC-MS ES⁺ m/z = 434.3; Rt: 1.64분, 방법 B.

(66)의 제조

적절히 건조된 불활성 조건에서 건조 THF(20 ㎖) 중 t-부틸 (3-하이드록시사이클로헥실) 카바메이트(3.0 g, 16.5 mmol)의 혼합물에, 2,4-디클로로-6-메틸피리미딘(2.781 g, 16.72 mmol)을 질소 분위기 하에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15~20분 동안 교반한 후 0℃에서 칼륨 t-부톡사이드를 적가하였다. 1 h 후, 반응물을 0℃에서 냉수로 켄칭하고 수성물을 EtOAc로 추출하고 염수로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 농축하여 미정제 물질을 얻었다. 미정제물을 n-헵탄에서 EtOAc로의 구배를 사용하여 실리카 컬럼 크로마토그래피를 통하여 정제하였다. 최적 분획의 용매를 감압 하에 제거하여 (66)을 수득하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 342.2; Rt: 2.14분, 방법 C.

(67)의 제조

Pd/C(10%)(934 ㎎, 0.88 mmol)를 N₂ 하에 THF(80 ㎖)의 혼합물에 첨가하였다. 이후, (66)(3 g, 8.78 mmol)을 첨가하고 1당량의 수소가 소비될 때까지 반응 혼합물을 H₂ 하에 실온에서 교반하였다. 촉매를 디칼라이트로 여과하여 제거하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 (67)의 혼합물을 산출하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 308.2; Rt: 0.96분, 방법 A.

(68)의 제조

자기 교반 막대가 구비된 100 ㎖ 둥근 바닥 플라스크 내로 1,4-디옥산(25 ㎖) 중 (67)(3 g, 9.76 mmol)을 첨가하였다. 18 시간 동안 실온에서 교반하면서 1,4-디옥산(12 ㎖) 중 4 M HCL을 느리게 첨가하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 미정제물(68)을 다음 단계에서 사용하였다.

(69)의 제조

CH₃CN(20 ㎖) 중 2,4-디클로로-5-플루오로-6-메틸피리미딘(0.78 g, 4.31 mmol) 및 DIPEA(1.77　mL, 10.26 mmol) 용액을 N₂ 하에 rt에서 교반하였다. 이어서 (68)(1 g, 4.10 mmol)을 첨가하고 실온에서 16시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 미정제물을 n-헵탄에서 에틸 아세테이트로의 구배를 사용하여 실리카 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 원하는 분획을 수집하고 감압 하에 농축하여 (69)를 수득하였다.

(70)의 제조

(7)을 제조하는 방법에 따라 (70)을 제조하였다. LC-MS ES⁺ m/z = 623.2; Rt: 2.73분, 방법 D.

(71)의 제조

(64)를 제조하는 방법에 따라 (71)을 제조하였다. 분취용 SFC(고정상: Chiralpak Diacel AD-H 20 ㎜ × 250 ㎜, 이동상: CO₂, 이소프로판올 + 0.4% 이소프로필아민)를 통해 정제를 수행하여 (71)을 수득하였다. ¹H NMR (600 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.33 - 1.42 (m, 1 H) 1.34 - 1.42 (m, 1 H) 1.51 - 1.59 (m, 2H) 1.89 (m,1H) 2.03 (m, 1　H) 2.15 (m, 1 H) 2.27 (m, 1 H) 2.32 (d, J=2.8 Hz, 3 H) 2.46 - 2.53 (m, 1 H) 4.20 (m, 1 H) 5.20 (m,1 H) 6.76 (s, 1 H) 7.04 (m, 1 H) 7.34 (d, 1 H) 8.06 (m, 1 H) 8.14 (s, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.18 (br s, 1 H). LC-MS ES⁺ m/z = 469.2; Rt: 2.30분, 방법 D. 분석용 SFC-MS Rt: 3.79분, m/z = 469.1 (분석용 SFC 조건: 정지상: Chiralpak Diacel AD-H 4.6 ㎜ × 250 ㎜, 이동상 A: CO₂, B: EtOH + 0.2% 이소프로필아민, 구배: 25% B 4분 유지, 이어서 1분 내에 50% B까지, 2분 유지. 유속은 5 ㎖/분이었고 컬럼 온도는 40℃였다).

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 측정은 LC 펌프, 다이오드-어레이(DAD) 또는 UV 검출기 및 각각의 방법에 지정된 컬럼을 사용하여 수행하였다. 필요한 경우, 추가 검출기를 포함시켰다(하기의 방법에 대한 표를 참조).

컬럼으로부터의 유동물을 대기압 이온 공급원과 함께 구성된 질량 분광계(MS)로 가져왔다. 화합물의 공칭 단일동위원소(monoisotopic) 분자량(MW)의 확인을 가능하게 하는 이온을 얻기 위하여 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 유지 시간(dwell time) 등)를 설정하는 것은 숙련자의 지식 내에 있다. 적절한 소프트웨어로 데이터 획득을 수행하였다.

화합물은 이의 실험적 체류 시간(R_t) 및 이온에 의해 기술된다. 데이터의 표에 상이하게 명시되어 있지 않다면, 보고된 분자 이온은 [M+H]⁺(양성자화된 분자) 및/또는 [M-H]^-(탈양성자화된 분자)에 해당한다. 화합물이 직접 이온화 불가능한 경우에는, 부가생성물의 유형이 지정된다(즉, [M+NH₄]⁺, [M+HCOO]^- 등). 다수의 동위원소 패턴을 갖는 분자(Br, Cl 등)에 있어서, 보고된 값은 최저 동위원소 질량에 대하여 얻어진 것이다. 모든 결과는 사용된 방법과 일반적으로 연관되어 있는 실험적 불확실성을 포함하여 입수되었다.

"SQD" 단일 사중극 검출기, "RT" 실온, "BEH" 가교된 에틸실록산/실리카 하이브리드, "HSS" 고강도 실리카, "DAD" 다이오드 어레이 검출기. 유량은 ㎖/분으로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃로 표현되고; 실행 시간은 분으로 표현된다.

화학식 I의 화합물의 생물학적 활성

세포-기반 항바이러스 검정을 사용하여 화합물의 시험관내 항바이러스 활성을 결정하였다. 이 검정에서는, 인플루엔자 바이러스 A/타이완(Taiwan)/1/86(H1N1)에 의해 감염된 마딘-다비 개 신장(Madin-Darby canine kidney, MDCK) 세포에서의 세포변성 효과(cytopathic effect, CPE)를 화합물의 존재 또는 부재 하에서 모니터링하였다. 흰색 384웰 미세적정 검정 플레이트(Greiner사)를 에코 액체 핸들러(echo liquid handler)(미국 캘리포니아주 서니베일 소재의 Labcyte사)를 사용하여 음향 액적 분사(acoustic drop ejection)를 통해 충전하였다. 200 나노리터의 화합물 스톡 용액(100% DMSO)을 검정 플레이트에 전달하였다. MDCK 세포를 25,000 또는 6,000개 세포/웰의 최종 밀도로 플레이트에 분배하였다. 이어서, A형 인플루엔자/타이완/1/86(H1N1) 바이러스를 각각 0.001 또는 0.01의 감염 다중도로 첨가하였다. 웰은 부피당 0.5% DMSO를 함유한다. 바이러스- 및 모의(mock)-감염된 대조군을 각각의 시험에 포함시켰다. 플레이트를 5% CO₂ 중에서 37℃에서 인큐베이션하였다. 바이러스 노출 후 3일째에, ATPlite™ 키트(벨기에 자벤템 소재의 PerkinElmer사)를 제조업체의 사용설명서에 따라 사용하여 ATP 수준의 감소를 측정함으로써 세포변성 효과를 정량화하였다. IC₅₀을 50% 억제 농도로서 정의하였다. 이와 동시에, 흰색 384웰 미세적정 플레이트에서 3일 동안 화합물을 인큐베이션하고, MDCK 세포에서의 화합물의 시험관내 세포독성을, ATPlite™ 키트(벨기에 자벤템 소재의 PerkinElmer사)를 제조업체의 사용설명서에 따라 사용하여 세포의 ATP 함량을 측정함으로써 결정하였다. 세포독성을 세포 생존력의 50% 감소를 야기하는 농도인 CC₅₀으로 기록하였다.

화학식 I의 화합물의 생물학적 활성.

화합물 번호	A형 인플루엔자/타이완/1/86 IC₅₀ μM	TOX MDCK CC₅₀ μM
10	0.02	2.88
11	0.008	5.97
12	0.006	>1
13	0.02	11.55
14	0.008	3.15
15	0.075	3.19
16	0.008	2.17
17	0.009	5.57
18	0.008	8.34
19	0.14	>25
29	0.008	3.05
35	0.03	0.89
36	0.002	>25
37	0.011	>25
38	0.001	>25
39	0.003	>25
40	0.024	>25
41	0.039	>25
42	0.041	>25
43	0.0006	>25
44	0.01	>25
45	0.036	>25
46	0.002	>25
47	0.0007	11
54	0.061	>25
64	0.008	>25
65	0.007	>25
71	0.013	2.2

Claims

하기 화학식 I의 화합물, 이의 입체 이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체:
[화학식 I]

(식 중,
X는 -CF 또는 N으로부터 선택되며;
Y는 N, -CF, -C-Cl, -C-CN 또는 -C-CH₃으로부터 선택되고;
R₁은 -H, -CH₃, -COOH, -CF_3, -사이클로프로필, -CONH₂, -CONH(C_1-3알킬), 또는 -CON(C_1-3 알킬)₂로부터 선택되고;
Q는 N 또는 O로부터 선택되고;
R₂는 할로겐, 시아노, C_1-3알킬, 하이드록실, 아미노, 메톡시, -COOH, -CF₃ 또는 사이클로알킬에 의해 임의 치환되는 헤테로사이클이다).
제1항에 있어서, 다음 구조식을 갖는 화합물:

.
제1항 또는 제2항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체를 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약학 조성물.
약제로서 사용하기 위한, 제1항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체 또는 제3항에 따른 약학 조성물.
인플루엔자의 치료에 사용하기 위한, 제1항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체, 또는 제3항에 따른 약학 조성물.
생물학적 샘플 또는 환자에서 인플루엔자 바이러스(들)의 복제를 억제하기 위한, 다음 화학식 I로 나타내는 화합물, 또는 이의 입체 이성질체 형태, 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 다형체의 용도:
[화학식 I]

(식 중,
X는 -CF 또는 N으로부터 선택되며;
Y는 N, -CF, -C-Cl, -C-CN 또는 -C-CH₃으로부터 선택되고;
R₁은 -H, -CH₃, -COOH, -CF_3, -사이클로프로필, -CONH₂, -CONH(C_1-3알킬), 또는 -CON(C_1-3 알킬)₂로부터 선택되고;
Q는 N 또는 O로부터 선택되고;
R₂는 할로겐, 시아노, C_1-3알킬, 하이드록실, 아미노, 메톡시, -COOH, -CF₃ 또는 사이클로알킬에 의해 임의 치환되는 헤테로사이클이다).
제6항에 있어서, 추가 치료제의 공동-투여를 추가로 포함하는 용도.
제7항에 있어서, 추가 치료제가 항바이러스제 또는 인플루엔자 백신, 또는 둘 모두로부터 선택되는 용도.